TW201831192A - 作為ｓｔｉｎｇ促效劑之環狀二核苷酸 - Google Patents

Abstract

揭示用於治療受到STING調節所影響的病毒感染、疾病、症候群、或病症之化合物、組成物及方法。該等化合物係由以下式(I)表示： 其中R_1A、R_1B、R_1c、B₁、R_2A、以及R_2B係如本文所定義。

Description

作為STING促效劑之環狀二核苷酸 【相關申請案之交互參照】

本申請案主張2016年11月25日申請之美國臨時專利申請案第62/426350號、2017年5月8日申請之美國臨時專利申請案第62/502,983號、以及2017年9月7日申請之美國臨時專利申請案第62/555,232號之優先權；此等據此以引用方式全文併入。

本發明有關於STING(干擾素基因刺激劑)促效劑的新穎化合物，其可用於治療受到STING蛋白質調節所影響的病症。本發明亦關於包含一或多種此類化合物之醫藥組成物、製備此類化合物及組成物之製程，以及此類化合物或醫藥組成物用於治療各式疾病、症候群及病症之用途。本發明可能涉及下游傳訊路徑之活化，進一步導致第二傳訊者與生長因子之活化，且干擾素的生產涉及先天性及適應性免疫力。更特定而言，本發明關於此類化合物或醫藥組成物用於治療各式感染、疾病、症候群、以及病症之用途，其包括但不限於黑色素瘤、結腸癌、乳癌、前列腺癌、肺癌、纖維肉瘤、以及抗病毒療法。

STING(干擾素基因刺激劑)，亦稱為TMEM173、MITA、MPYS、以及ERIS，係位於細胞內的穿膜受體且為細胞質核酸之關鍵感測器(Zhong B等人之「The Adaptor Protein MITA Links Virus-Sensing Receptors to IRF3 Transcription Factor Activation」Immunity.2008.vol.29：538-550)。近來的研究揭露STING之生物學以及其在動員先天性免疫反應導致在小鼠模型中強烈的抗腫瘤活性的角色。STING路徑之活化導致通過IRF3(干擾素調節因子3)路徑所誘導之第I型干擾素(主要是IFN-α與IFN-β)之生產。IRF3的活化被視為藉由募集並磷酸化IRF3的TBK1所介導，從而形成IRF3同源二聚物能夠進入細胞核以轉錄第I型干擾素以及其他基因(Liu S等人之「Phosphorylation of innate immune adaptor proteins MAVS,STING,and TRIF induces IRF3 activation」Science.2015：2630-2637)。經由致癌轉錄因子NF-_KB，TBK1亦活化細胞核因子活化B細胞的κ輕鏈增強子路徑導致促發炎細胞介素(IL-1α、IL-1β、IL-2、IL-6、TNF-α等)的生產。另外，STING活化STAT6(信號轉導及轉錄活化因子6)以誘導(Th2-型)、增加(IL-12)或減少(IL-10)各種細胞介素之生產，其包括趨化介素CCL2、CCL20、以及CCL26(Chen H等人之「Activation of STAT6 by STING Is Critical for Antiviral Innate Immunity」Cell.2011,vol.14：433-446)。亦已有報導，當活化時通過TBK1在Ser366上之直接磷酸化STING發生(Corrales,L.等人之「Direct activation of STING in the tumor microenvironment leads to potent and systemic tumor regression and immunity」Cell Reports,2015,vol.11：1-13；Konno,H.et al.「Cyclic dinucleotides trigger ULK1(ATG1)phosphorylation of STING to prevent sustained innate immune signaling」Cell,2013,vol.155：688-698)。

已闡明結合並活化STING的自然配體(2',3')環狀鳥苷單磷酸-腺苷單磷酸(2',3'-cGAMP)以及負責其合成的酵素(cGAS，亦稱為C6orf150或MB21D1)提供調節此路徑之機會。cGAMP係哺乳動物細胞中所產生對STING高親和力的配體，其作為內源性第二傳訊者以活化STING路徑。它係具一獨有的2’,3’鍵聯之環狀二核苷酸，在外源性雙股DNA(例如，藉由侵入的細菌、病毒、或原生動物所釋 放)或哺乳動物的自身-DNA(Wu等人，2013；Sun,L.等人之「Cyclic GMP-AMP Synthase Is a Cytosolic DNA Sensor That Activates the Type I Interferon Pathway」Science,2013,vol.339：786-791；Bhat N and Fitzgerald KA.「Recognition of Cytosolic DNA by cGAS and other STING-dependent sensors」.Eur J Immunol.2014 Mar；44(3)：634-40)存在下藉由cGAS所產生。STING的活化亦可通過與入侵細菌所釋放的外源性(3',3)環狀二核苷酸(c-di-GMP、c-di-AMP、以及3’3’-cGAMP)的結合而發生(Zhang X，等人之「Cyclic GMP-AMP Containing Mixed Phosphodiester Linkages Is An Endogenous High-Affinity Ligand for STING」Molecular Cell,2013,vol.51：226-235；Danilchanka,O and Mekalanos,JJ.「Cyclic Dinucleotides and the Innate Immune Response」Cell.2013.vol.154：962-970)。

STING路徑之活化觸發免疫反應導致特異性殺手T細胞的產生，其可縮小腫瘤並提供長效免疫力，從而使它們不再發生。STING促效劑在臨床前的模型中所獲得之顯著抗腫瘤活性已引起對於此目標的高度振奮，而可調節STING路徑之小分子化合物具有治療癌症與減少自體免疫疾病的潛力。

STING路徑之活化亦有助於抗病毒反應。無論在細胞或器官層級，功能喪失反應證明在STING缺席下無法控制病毒負荷。STING路徑之活化觸發免疫反應，導致產生抗病毒與促發炎細胞介素來打擊病毒並動員免疫系統之先天性與適應性臂。最終，發展出長效免疫力來對抗病源性病毒。STING促效劑在臨床前的模型中所獲得之顯著抗病毒活性已使此目標引起高度振奮，而可調節STING路徑之小分子化合物具有治療慢性病毒感染的潛力，諸如B型肝炎的潛力。

慢性B型肝炎病毒(HBV)感染是一個重大的全球健康問題，影響超過5%的全球人口(全世界超過3億5千萬人，美國超過125萬人)。儘管有某些HBV疫苗與療法可用，但是治療選項不盡理想，而且在大部分發展中國家有持續的新感染比率，因此慢性HBV感 染造成的負擔仍是全世界有待解決的重大醫療問題。現行治療僅限於二類藥劑：干擾素α及作為病毒聚合酶抑制劑的核苷類似物。但是，此等療法中沒有一種能治癒該疾病，而且藥物抗性、低療效、以及耐受性的問題限制了彼等的影響。HBV低治癒率的原因至少部分是因為單一抗病毒藥物難以達成完全抑制病毒生產。然而，持續抑制HBV DNA可減緩肝臟疾病進展，並且有助於預防肝細胞癌。HBV感染病患的現行治療目標是減少血清HBV DNA至低或無法被偵測到的水準，並且最終減少或預防肝硬化及肝細胞癌發生。因此，本領域需要可增加抑制病毒生產及可治療、緩解、或預防HBV感染的治療劑。以單一療法或與其他HBV治療或輔助治療組合投予此類治療劑至HBV感染病患，可能導致顯著減輕病毒負擔、改善預後、減緩疾病進展並提高血清抗體轉換率。

增強先天性與適應性免疫力之潛在治療效益讓STING成為引人注目的治療目標，其藉由自身證明令人印象深刻的活性而且亦可與其他免疫療法組合。

本發明係關於式(I)之化合物

其中 R_1A係羥基或氟基且R_1C係氫；或，R_1A係-O-且R_1C係CH₂，使得R_1A與R_1C連同彼等所附接之原子一起形成5員環；R_1B係選自由羥基、硫醇、以及BH₃ ^-所組成之群組；B₁係選自由環b1及環b2所組成之群組 R_2A係選自由羥基及甲氧基所組成之群組；R_2B係選自由羥基、硫醇、以及BH₃ ^-所組成之群組；限制條件為式(I)之化合物非(1R,6R,8R,9R,10R,15R,17R,18R)-17-(2-胺基-6-側氧基-6,9-二氫-1H-嘌呤-9-基)-8-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-9-氟-3,12,18-三羥基-2,4,7,11,13,16-六氧雜-3λ⁵,12λ⁵-二磷三環[13.2.1.0⁶,¹⁰]十八烷-3,12-二酮、雙-銨鹽；或其鏡像異構物、非鏡像異構物、或醫藥上可接受之鹽形式。

本發明亦提供一種醫藥組成物，其包含下列、由下列所組成及/或主要由下列所組成：醫藥上可接受之載劑、醫藥上可接受之賦形劑、及/或醫藥上可接受之稀釋劑與式(I)化合物或其醫藥上可接受之鹽形式。

亦提供用於製造醫藥組成物之方法，其包含下列、由下列所組成、及/或主要由下列所組成：混摻式(I)化合物與醫藥上可接受之載劑、醫藥上可接受之賦形劑、及/或醫藥上可接受之稀釋劑。

本發明進一步提供使用式(I)之化合物來治療或緩解對象(包括哺乳動物及/或人類)中之病毒感染、疾病、症候群、或病況的方法，其中該病毒感染、疾病、症候群、或病況受到STING促效影響。

本發明進一步提供使用式(I)之化合物來治療或緩解對象(包括哺乳動物及/或人類)中之病毒感染、疾病、症候群、或病況的方法。

本發明進一步提供使用式(I)之化合物來治療或緩解對象(包括哺乳動物及/或人類)中之病毒感染、疾病、症候群、或病況的方法，其中受到STING促效影響的該病毒感染、疾病、症候群或病況選自由下列所組成之群組：黑色素瘤、結腸癌、乳癌、前列腺癌、肺癌、纖維肉瘤、以及B型肝炎。

本發明進一步提供使用式(I)之化合物來治療或緩解對象(包括哺乳動物及/或人類)中選自由下列所組成之群組之病毒感染、疾病、症候群、或病況的方法：黑色素瘤、結腸癌、乳癌、前列腺癌、肺癌、纖維肉瘤、以及B型肝炎。

本發明亦關於本文中所述任何化合物於製備醫藥品之用途，其中該藥品係經製備以用於治療有治療需要之對象中受到STING促效影響的選自由下列所組成之群組的病毒感染、疾病、症候群、或病況：黑色素瘤、結腸癌、乳癌、前列腺癌、肺癌、纖維肉瘤、以及B型肝炎。

本發明亦關於本文中所述任何化合物於製備醫藥品之用途，其中該藥品係經製備以用於治療有治療需要之對象中的選自由下列所組成之群組的病毒感染、疾病、症候群、或病況：黑色素瘤、結腸癌、乳癌、前列腺癌、肺癌、纖維肉瘤、以及B型肝炎。

本發明亦有關作為選擇性STING促效劑之經取代環狀二核苷酸衍生物之製備。

舉例說明本發明係治療受到STING調節的選自由下列所組成之群組之病毒感染、疾病、症候群、或病況的方法：黑色素瘤、結腸癌、乳癌、前列腺癌、肺癌、纖維肉瘤、以及B型肝炎，該方法包含對有治療需要之對象投予治療有效量之前述任何化合物或醫藥組成物。

舉例說明本發明係治療選自由下列所組成之群組之病毒感染、疾病、症候群、或病況的方法：黑色素瘤、結腸癌、乳癌、前列腺癌、肺癌、纖維肉瘤、以及B型肝炎，該方法包含對有治療需要之對象投予治療有效量之前述任何化合物或醫藥組成物。

在另一實施例中，本發明係關於式(I)之化合物使用於治療受到STING調節的選自由下列所組成之群組之病毒感染、疾病、症候群、或病況：黑色素瘤、結腸癌、乳癌、前列腺癌、肺癌、纖維肉瘤、以及B型肝炎。

在另一實施例中，本發明係關於組成物，其包含用於治療選自由下列所組成之群組之病毒感染、疾病、症候群、或病況的式(I)之化合物：黑色素瘤、結腸癌、乳癌、前列腺癌、肺癌、纖維肉瘤、以及B型肝炎。

在提及取代基時，用語「獨立地(independently)」係指其中當可能有超過一個取代基時，該等取代基彼此可為相同或不同的情況。

用語「烷基(alkyl)」無論是單獨使用或作為取代基的部分使用，係指具有1至8個碳原子的直鏈和支鏈碳鏈。因此，碳原子之指定數目(例如C_1-8)係獨立地指在烷基部分(moiety)中的碳原子數目或是在一較大含烷基取代基之烷基部分中的碳原子數目。在具有複數個烷基之取代基如(C_1-6烷基)₂胺基-中，該二烷基胺基之C_1-6烷基可為相同或不同。

用語「烷氧基(alkoxy)」係指-O-烷基，其中用語「烷基(alkyl)」係定義如上。

用語「烯基(alkenyl)」與「炔基(alkynyl)」係指具有2至8個碳原子之直鏈與支鏈碳鏈，其中一烯基鏈含有至少一個雙鍵，而一炔基鏈含有至少一個三鍵。

用語「環烷基(cycloalkyl)」係指3至14個碳原子之飽和或部分飽和的單環或多環烴環。此類環的實例包括環丙基、環丁基、環戊基、環己基、環庚基、與金剛烷基(adamantyl)。

用語「雜環基(heterocyclyl)」係指具有3至10個環員之非芳族單環或雙環環系，該等環員包括至少1個碳原子與1至4個獨立地選自N、O與S之雜原子。用語雜環基(heterocyclyl)所包括的有5至7個環員之非芳族環狀環，其中1至2個環員為N，或者5至7個環員之非芳族環狀環，其中0、1或2個環員為N並且至多2個環員為O或S且至少一個環員必須為N、O、或S；其中，可選地，該環含有0至1個不飽和鍵，並且可選地，當該環係為6或7個環員者時，其含有至多2個不飽和鍵。形成雜環之碳原子環員可為完全飽和或部分飽和。

用語「雜環基(heterocyclyl)」亦包括兩個橋接以形成一雙環之5員單環雜環烷基。不將此類基團視為完全芳族並且不將其稱為雜芳基。當雜環為雙環時，該雜環之兩個環為非芳族並且該兩環之至少一者含有一雜原子環員。雜環基之實例包括但不限於吡咯啉基(包括2H-吡咯、2-吡咯啉基或3-吡咯啉基)、吡咯啶基、咪唑啉基、咪唑啶基、吡唑啉基、吡唑啶基、哌啶基、嗎福啉基(morpholinyl)、硫嗎福啉基(thiomorpholinyl)與哌基(piperazinyl)。除非另有說明，雜環係將其側基附接至任何會導致穩定結構之雜原子或碳原子上。

用語「芳基(aryl)」係指6至10個碳員之不飽和、芳族單環或雙環碳環。芳環之實例包括苯基與萘基。

用語「雜芳基(heteroaryl)」係指具有5至10個環員之芳族單環或雙環系，其含有碳原子及1至4個獨立地選自由N、O及S所組成的群組之雜原子。包括於用語雜芳基(heteroaryl)內者為5或 6員之芳環，其中該環由碳原子組成且具有至少一個雜原子員。合適的雜原子包括氮、氧和硫。於5員環的情況中，雜芳基環較佳地包含一個氮、氧或硫員，此外包含至多3個額外氮。在6員環的情況中，雜芳基環較佳地包含1至3個氮原子。當該6員環具有3個氮時，至多2個氮原子係相鄰。雜芳基之實例包括呋喃基、噻吩基、吡咯基、唑基(oxazolyl)、噻唑基、咪唑基、吡唑基、異唑基(isoxazolyl)、異噻唑基、二唑基(oxadiazolyl)、三唑基、噻二唑基、吡啶基、嗒基(pyridazinyl)、嘧啶基、吡基(pyrazinyl)、吲哚基、異吲哚基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、吲唑基、苯并咪唑基、苯并噻唑基、苯并唑基(benzoxazolyl)、苯并異唑基(benzisoxazolyl)、苯并噻二唑基、苯并三唑基、喹啉基、異喹啉基與喹唑啉基。除非另有說明，雜芳基係將其側基附接至任何會導致穩定結構之雜原子或碳原子上。

用語「鹵素(halogen)」或「鹵基(halo)」係指氟、氯、溴與碘原子。

當用語「烷基(alkyl)」或「芳基(aryl)」或其任一前綴字根出現於取代基名稱中時(例如芳基烷基、烷基胺基)，則該名稱應被解釋為包括前文針對「烷基(alkyl)」及「芳基(aryl)」所給予之限制。碳原子之指定數目(例如C₁-C₆)係獨立地指在一烷基部分、一芳基部分或其中烷基以前綴字根出現的一較大取代基中之烷基部分的碳原子數。對於烷基與烷氧基取代基，碳原子之指定數目包括所有涵括於一給出指定範圍中的獨立成員。例如，C_1-6烷基會包括甲基、乙基、丙基、丁基、戊基及己基各者以及其子組合(例如C_1-2、C_1-3、C_1-4、C_1-5、C_2-6、C_3-6、C_4-6、C_5-6、C_2-5等)。

一般而言，本揭露全文中所使用之標準命名規則係由指定側鏈之末端部分先開始描述，之後朝附接點描述相鄰官能性。因此，舉例來說，「C₁-C₆烷基羰基(C₁-C₆ alkylcarbonyl)」取代基係指具下式之基團：

在一立體中心上之用語「R」代表純為如所屬技術中所定義之R-組態；同樣地，用語「S」意指該立體中心純為S-組態。如本文中所使用，在一立體中心處之用語「*R」或「*S」係用以代表該立體中心為純粹但未知的組態。如本文中所使用，用語「RS」係指存在為一R-與S-組態之混合的一立體中心。同樣地，用語「*RS」或「*SR」係指存在為一R-與S-組態之混合並且相對於分子中之另一立體中心為未知組態的立體中心。

含有一個未繪出立體鍵結符號之立體中心的化合物為兩種鏡像異構物之一混合物。含有兩個皆未繪出立體鍵結符號之立體中心的化合物為四種非鏡像異構物之混合物。含有兩個皆標示「RS」之立體中心且繪出立體鍵結符號之化合物為一兩組分混合物，其相對立體化學如所繪示者。含有兩個皆標示「*RS」之立體中心且繪出立體鍵結符號之化合物為相對立體化學為未知之一兩組分混合物。未標示且未繪出立體鍵結符號的立體中心係一R-與S-組態之混合。對於未標示且繪出立體鍵結符號之立體中心，其絕對立體化學係如所繪示者。

除非另有說明，在分子中之特定位置上之任何取代基或變數的定義，係意欲為獨立於其在該分子其他位置上之定義。應理解的是，本發明化合物上之取代基與取代方式可由在該項技術領域中具有通常知識者來選用，以提供化學穩定之化合物，且該化合物可用該項技術領域中之習知技術或本文中所提出方法輕易合成。

用語「對象(subject)」係指已成為治療、觀察或實驗標的之動物，較佳為哺乳動物，最佳為人類。

用語「治療有效量(therapeutically effective amount)」係指能在組織系統、動物、或人類中引發生物或醫學反應之活性化合物或藥劑(包括本發明化合物)的量，該反應由研究者、獸醫師、醫 師、或其他臨床醫師所尋求，且包括減輕或部分減輕欲治療之疾病、症候群、病況、或病症的症狀。

用語「組成物(composition)」係指包括治療有效量之特定成分的產品，以及任何直接或間接由該特定量之特定成分的組合所導致之產品。

用語「STING促效劑(STING agonist)」係意欲涵括與STING交互作用以與其結合並誘導下游訊息傳遞之化合物，其特徵為活化與STING功能相關的分子。此包括STING、IRF3、及/或NF-_KB之直接磷酸化，亦可包括STAT6之磷酸化。STING路徑活化導致增加第I型干擾素(主要為IFN-α與IFN-β)之生產並增加干擾素刺激基因之表現(Chen H,et al.「Activation of STAT6 by STING Is Critical for Antiviral Innate Immunity」.Cell.2011,vol.14：433-446；and Liu S-Y,et al.「Systematic identification of type I and type II interferon-induced antiviral factors」Proc.Natl.Acad.Sci.2012：vol.109 4239-4244)。

用語「經STING調節(STING-modulated)」係用於指受到STING直接或經由STING路徑影響之病況，其包括但不限於病毒感染、疾病、或病況諸如黑色素瘤、結腸癌、乳癌、前列腺癌、肺癌、纖維肉瘤、以及B型肝炎感染。

如本文中所用者，除非另有說明，用語「受到STING調節之病症(disorder modulated by STING)」應意指在以STING促效劑治療時，其特徵症狀中至少一者得到舒緩或消除的任何病毒感染、疾病、病症或病況。適合之實例包括，但不限於黑色素瘤、結腸癌、乳癌、前列腺癌、肺癌、纖維肉瘤、以及B型肝炎。

如本文中所使用，除非另有註明，用語「影響(affect)」或「受到影響(affected)」(在指稱受到STING促效之影響的病毒感染、疾病、症候群、病況或病症時)包括該病毒感染、疾病、症候群、病況或病症之一或多種症狀或徵象在頻率及/或嚴重性之降 低；及/或包括預防該病毒感染、疾病、症候群、病況或病症之一或多種症狀或徵象的發展或預防該病毒感染、疾病、病況、症候群或病症的發展。

本發明之化合物可用於治療或緩解受到STING促效影響的病毒感染、疾病、症候群、病況或病症之方法。此類方法包含下列、由下列組成及/或主要由下列組成：對有該治療、緩解及/或預防需要之對象(包括動物、哺乳動物、與人類)投予治療有效量的式(I)化合物、或其鏡像異構物、非鏡像異構物、溶劑合物或醫藥上可接受之鹽。

特定而言，式(I)之化合物、或其鏡像異構物、非鏡像異構物、溶劑合物或其醫藥上可接受之鹽形式可用於治療或緩解諸如黑色素瘤、結腸癌、乳癌、前列腺癌、肺癌、纖維肉瘤、以及B型肝炎之疾病、症候群、病況、或病症。

更特定而言，式(I)之化合物、或其鏡像異構物、非鏡像異構物、溶劑合物或其醫藥上可接受之鹽形式可用於治療或緩解黑色素瘤、結腸癌、乳癌、前列腺癌、肺癌、纖維肉瘤、以及B型肝炎，包含對有治療或緩解需要之對象投予治療有效量的式(I)之化合物、或其鏡像異構物、非鏡像異構物、溶劑合物或其醫藥上可接受之鹽形式(如本文中所定義者)。

在本文中揭示之一些實施例關於緩解及/或治療病毒感染的方法，所述病毒感染包括受到肝炎病毒科所引起的感染，諸如B型肝炎病毒或HBV。該方法可包括對經識別為罹患病毒感染之對象投予有效量的一或多種式(I)之化合物、或其醫藥上可接受之鹽形式、或包括一或多種式(I)之化合物、或其醫藥上可接受的鹽形式之醫藥組成物。

在本文中揭示之其他實施例關於緩解及/或治療病毒感染之方法，其可包括使感染病毒之細胞與有效量的一或多種在本文中描述之化合物(例如式(I)之化合物、或其醫藥上可接受的鹽形式)、或 包括一或多種在本文中描述之化合物、或其醫藥上可接受的鹽之醫藥組成物接觸。在本文中描述之仍其他實施例關於使用一或多種式(I)之化合物、或其醫藥上可接受之鹽形式於製造用於緩解及/或治療病毒感染的藥品。

在本文中描述之又仍其他實施例關於一或多種式(I)之化合物、或其醫藥上可接受的鹽形式、或包括一或多種式(I)之化合物、或其醫藥上可接受的鹽形式之醫藥組成物，其可用於緩解及/或治療病毒感染。在本文中揭示之一些實施例關於抑制病毒複製之方法，其可包括使感染病毒之細胞與有效量的一或多種式(I)之化合物、或其醫藥上可接受之鹽形式、或包括一或多種在本文中描述之化合物、或其醫藥上可接受的鹽形式之醫藥組成物接觸。

在本文中描述之其他實施例關於使用一或多種式(I)之化合物、或其醫藥上可接受的鹽形式於製造用於抑制病毒複製的藥品。在本文中描述之仍其他實施例關於一或多種在本文中描述之化合物(例如式(I)之化合物、或其醫藥上可接受的鹽形式)、或包括一或多種在本文中描述之化合物、或其醫藥上可接受的鹽形式之醫藥組成物，其可用於抑制病毒複製。

在一些實施例中，病毒感染可以係B型肝炎病毒感染。該方法可包括對經識別為罹患HBV之對象投予有效量的一或多種式(I)之化合物、或其醫藥上可接受之鹽形式、或包括一或多種式(I)之化合物、或其醫藥上可接受的鹽形式之醫藥組成物。

在本文中揭示之其他實施例關於緩解及/或治療病毒感染之方法，其可包括使感染HBV之細胞與有效量的一或多種式(I)之化合物、或其醫藥上可接受的鹽形式、或包括一或多種式(I)之化合物、或其醫藥上可接受的鹽形式之醫藥組成物接觸。在本文中描述之仍其他實施例關於使用一或多種式(I)之化合物、或其醫藥上可接受鹽形式於製造用於緩解及/或治療HBV的藥品。

在本文中描述之又仍其他實施例關於一或多種式(I)之化合物、或其醫藥上可接受的鹽形式、或包括一或多種式(I)之化合物、或其醫藥上可接受的鹽形式之醫藥組成物，其可用於緩解及/或治療HBV。在本文中揭示之一些實施例關於抑制HBV複製之方法，其可包括使感染病毒之細胞與有效量的一或多種式(I)之化合物、或其醫藥上可接受的鹽形式、或包括一或多種式(I)之化合物、或其醫藥上可接受的鹽形式之醫藥組成物接觸。

在本文中描述之其他實施例關於使用一或多種式(I)之化合物、或其醫藥上可接受的鹽於製造用於抑制HBV複製的藥品。在本文中描述之仍其他實施例關於一或多種式(I)之化合物、或其醫藥上可接受的鹽、或包括一或多種式(I)之化合物、或其醫藥上可接受的鹽形式之醫藥組成物，其可用於抑制HBV複製。

本發明之實施例包括本文所定義之式(I)化合物或其鏡像異構物、非鏡像異構物、溶劑合物或醫藥上可接受之鹽形式，其中選自本文所定義之變數中的一或多個之該等取代基(例如R_1A、R_1B、R_1C、B₁、R_2A、R_2B)是獨立地選自下表1所舉例列示的任何個別取代基或任何取代基子集。

本發明之一實施例係關於式(I)化合物 式(I)

其中R_1A係羥基或氟基且R_1C係氫；或，R_1A係-O-且R_1C係CH₂，使得R_1A與R_1C連同彼等所附接之原子一起形成5員環；R_1B係選自由羥基、硫醇、以及BH₃ ^-所組成之群組；B₁係b2 R_2A係選自由羥基及甲氧基所組成之群組；R_2B係選自由羥基、硫醇、以及BH₃ ^-所組成之群組；限制條件為式(I)之化合物非(1R,6R,8R,9R,10R,15R,17R,18R)-17-(2-胺基-6-側氧基-6,9-二氫-1H-嘌呤-9-基)-8-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-9-氟-3,12,18-三羥基-2,4,7,11,13,16-六氧雜-3λ⁵,12λ⁵-二磷三環[13.2.1.0⁶,¹⁰]十八烷-3,12-二酮、雙-銨鹽；或其鏡像異構物、非鏡像異構物、或醫藥上可接受之鹽形式。

本發明之進一步實施例係關於式(I)化合物，其選自化合物1至23， 或其醫藥上可接受之鹽形式。

使用於醫藥中時，式(I)化合物之鹽係指無毒性「醫藥上可接受之鹽」。然而，其他鹽類可用於製備式(I)化合物或其醫藥上可接受之鹽形式。式(I)化合物之合適醫藥上可接受鹽包括酸加成鹽(acid addition salt)，其可藉由例如將化合物之溶液與醫藥上可接受酸溶液混合而形成，該酸諸如氫氯酸、硫酸、反丁烯二酸、順丁烯二酸、琥珀酸、乙酸、苯甲酸、檸檬酸、酒石酸、碳酸或磷酸。再者，當式(I)化合物帶有一酸性分子部分(moiety)時，其合適醫藥上可接受之鹽類可包括鹼金屬鹽，例如鈉或鉀鹽；鹼土金屬鹽，例如鈣或鎂鹽；以及用合適有機配位基形成之鹽，例如四級銨鹽。因此，代表性之醫藥上可接受鹽類包含乙酸鹽、苯磺酸鹽、苯甲酸鹽、碳酸氫鹽、硫酸氫 鹽、酒石酸氫鹽、硼酸鹽、溴化物、依地酸鈣(calcium edetate)、樟腦磺酸鹽(camsylate)、碳酸鹽、氯化物、棒酸鹽(clavulanate)、檸檬酸鹽、二鹽酸鹽、依地酸鹽(edetate)、乙二磺酸鹽(edisylate)、丙酸酯十二烷硫酸鹽(estolate)、乙磺酸鹽(esylate)、反丁烯二酸鹽、葡萄庚酸鹽(gluceptate)、葡萄糖酸鹽(gluconate)、麩胺酸鹽、對羥乙醯胺基苯砷酸鹽(glycollylarsanilate)、己基間苯二酚鹽(hexyl resorcinate)、海巴明鹽(hydrabamine)、氫溴酸鹽、氫氯酸鹽、羥基萘甲酸鹽(hydroxynaphthoate)、碘化物、2-羥乙磺酸(isothionate)、乳酸鹽、乳糖酸鹽、月桂酸鹽、蘋果酸鹽、順丁烯二酸鹽、苦杏仁酸鹽、甲磺酸鹽、溴甲烷、甲基硝酸鹽、甲基硫酸鹽、焦黏酸鹽、萘磺酸鹽(napsylate)、硝酸鹽、N-甲基還原葡糖胺(N-methylglucamine)銨鹽、油酸鹽、巴摩酸鹽(pamoate(embonate))、棕櫚酸鹽、泛酸鹽、磷酸鹽/二磷酸鹽、聚半乳糖酸鹽、柳酸鹽、硬脂酸鹽、硫酸鹽、次乙酸鹽、琥珀酸鹽、單寧酸鹽、酒石酸鹽、茶氯酸鹽(teoclate)、甲苯磺酸鹽、三乙碘化物(triethiodide)與戊酸鹽。

可用於製備醫藥上可接受鹽之代表性酸與鹼中，酸包括乙酸、2,2-二氯乙酸、乙醯化胺基酸、己二酸、藻酸、抗壞血酸、L-天冬胺酸、苯磺酸、苯甲酸、4-乙醯胺基苯甲酸、(+)-樟腦酸(camphoric acid)、樟腦磺酸、(+)-(1S)-樟腦-10-磺酸、癸酸、己酸、辛酸、桂皮酸、檸檬酸、環己基胺基磺酸(cyclamic acid)、十二烷基硫酸、乙烷-1,2-二磺酸、乙磺酸、2-羥基-乙磺酸、甲酸、反丁烯二酸、半乳糖二酸、龍膽酸、葡萄庚酸(glucoheptonic acid)、D-葡萄糖酸(D-gluconic acid)、D-葡萄糖醛酸(D-glucoronic acid)、L-麩胺酸、α-側氧-戊二酸、乙醇酸、馬尿酸(hippuric acid)、氫溴酸、氫氯酸、(+)-L-乳酸、(±)-DL-乳酸、乳糖醛酸(lactobionic acid)、順丁烯二酸、(-)-L-蘋果酸、丙二酸、(±)-DL-苦杏仁酸、甲磺酸、萘-2-磺酸、萘-1,5-二磺酸、1-羥基-2-萘甲酸、菸鹼酸、硝酸、油酸、乳清酸、草酸、棕櫚酸、巴摩酸(pamoic acid)、磷酸、L-焦麩胺酸(L- pyroglutamic acid)、柳酸、4-胺基-柳酸、癸二酸、硬脂酸、琥珀酸、硫酸、丹寧酸、(+)-L-酒石酸、硫氰酸、對甲苯磺酸及十一烯酸；以及鹼包括氨、L-精胺酸、本沙明(benethamine)、本札辛(benzathine)、氫氧化鈣、膽鹼、二甲胺基乙醇(deanol)、二乙醇胺、二乙胺、2-(二乙胺基)-乙醇、乙醇胺、乙二胺、N-甲基-還原葡糖胺、海巴明(hydrabamine)、1H-咪唑、L-離胺酸、氫氧化鎂、4-(2-羥乙基)-嗎啉、哌(piperazine)、氫氧化鉀、1-(2-羥乙基)-吡咯啶、氫氧化鈉、三乙醇胺、胺丁三醇與氫氧化鋅。

本發明實施例包括式(I)之化合物的前藥。一般而言，此等前藥將為化合物的功能性衍生物，其可於體內輕易轉換為所需之化合物。因此，在本發明的治療或預防實施例方法中，用語「投予(administering)」涵括以該特定揭露的化合物，或是以一可能未被具體揭露，但在投予病患後可在體內轉換成該特定化合物的化合物，來治療或預防各種所述的疾病、病症、症候群及病症。選擇及製備合適前藥衍生物之習知程序係描述於例如「Design of Prodrugs」,ed.H.Bundgaard,Elsevier,1985。

當根據本發明實施例之化合物具有至少一個掌性中心時，它們可因此存在為鏡像異構物。當化合物具有二或更多個掌性中心時，它們可額外存在為非鏡像異構物。應理解的是所有此類異構物以及其混合物皆涵括於本發明的範疇中。再者，化合物之某些結晶形式可存在為多形體，而意欲將此類形式包括於本發明中。此外，某些化合物可與水或一般有機溶劑形成溶劑合物(與水即水合物)，而亦意欲將此類溶劑合物涵括於本發明之範疇中。熟習技藝人士會理解本文中所用之化合物用語，係意指包括式(I)之溶劑合化合物。

若用於製備根據本發明某些實施例之化合物的方法產生立體異構物之混合物，則這些異構物可藉由習用技術諸如製備型層析法來分離。化合物可經製備為外消旋形式，或是個別之鏡像異構物可藉由鏡像特定合成(enantiospecific synthesis)或離析法(resolution)來製 備。化合物可藉由例如標準技術來離析為其組分鏡像異構物，諸如藉由與光學活性酸(諸如(-)-二-對甲苯甲醯基-d-酒石酸及/或(+)-二-對甲苯甲醯基-1-酒石酸)進行鹽形成以形成非鏡像異構物對，接著進行分段結晶(fractional crystallization)與游離鹼再生。化合物亦可藉由形成非鏡像異構酯或醯胺，接著使用層析法分離並移除掌性助劑而離析。或者，化合物可使用掌性HPLC管柱來離析。

本發明的一個實施例係關於組成物(包括一醫藥組成物)，其包含下列、由下列所組成、及/或主要由下列所組成：一式(I)之化合物之(+)-鏡像異構物，其中該組成物實質上不含該化合物的(-)-異構物。在本上下文中，實質上不含意指小於約25%，較佳為小於約10%，更佳為小於約5%，再更佳為小於約2%，且再更佳為小於約1%的(-)-異構物，其計算如下：

本發明的另一實施例係關於組成物(包括一醫藥組成物)，其包含下列、由下列所組成、及/或主要由下列所組成：一式(I)之化合物之(-)-鏡像異構物，其中該組成物實質上不含該化合物的(+)-異構物。在本上下文中，實質上不含意指小於約25%，較佳為小於約10%，更佳為小於約5%，再更佳為小於約2%，且再更佳為小於約1%的(+)-異構物，其計算如下：

在任何製備本發明之多個實施例化合物的方法中，對於任何相關分子上的敏感或反應性基團加以保護可能為必要及/或所欲的。此可以藉由現有的保護基來達成，諸如描述於Protective Groups in Organic Chemistry,Second Edition,J.F.W.McOmie,Plenum Press,1973；T.W.Greene & P.G.M.Wuts,Protective Groups in Organic Synthesis,John Wiley & Sons,1991；及T.W.Greene & P.G.M.Wuts,Protective Groups in Organic Synthesis，第三版，John Wiley & Sons,1999中者。保護基可在便利的後續階段中利用該項技術習知的方法去除。

即使本發明實施例的化合物(包括其醫藥上可接受的鹽類及醫藥上可接受的溶劑合物)可以被單獨投予，一般會根據擬給藥途徑及標準製藥或動物醫藥常規，將它們選擇與醫藥上可接受的載體、醫藥上可接受的賦形劑及/或醫藥上可接受的稀釋劑混合投予。因此，本發明的特定實施例係關於醫藥及動物醫藥組成物，其包含式(I)化合物及至少一種醫藥上可接受的載劑、醫藥上可接受的賦形劑及/或醫藥上可接受的稀釋劑。

舉例而言，在本發明實施例的醫藥組成物中，式(I)之化合物可與任何合適的(多種)黏合劑、(多種)潤滑劑、(多種)懸浮劑、(多種)塗布劑、(多種)溶解化劑及上述者之組合混摻。

含有本發明化合物的固體口服劑型，諸如錠劑或膠囊，可視適用情形一次投予至少一種劑型。也可能將化合物以緩釋配方投予。

可用來投予本發明化合物的其他口服形式包括酏劑(elixir)、溶液、糖漿及懸浮液；各者可選地含有調味劑及著色劑。

或者，式(I)之化合物可藉由吸入(氣管內或鼻內)，或是以栓劑或子宮托(pessary)的形式投予，或者以乳液、溶液、乳膏、軟膏或塵粉的形式局部投予。例如，可將該等結合至包含下列、由下列所組成、及/或主要由下列所組成之乳膏中：聚乙二醇水性乳液或液體石蠟。該等亦可以約1%至約10%之濃度(以乳膏重量計)結合至軟膏中，該軟膏包含下列、由下列組成、及/或主要由下列組成：蠟或 軟石蠟基底，連同任何可能需要的安定劑和防腐劑。替代性投予手段包括使用皮膚或經皮貼劑來經皮投予。

本發明的醫藥組成物(以及單獨的本發明化合物)也可經由腸胃外注射，例如海綿體注射、靜脈注射、肌肉注射、皮下注射、皮內注射或脊髓內注射。在這種情況中，組成物也將包括適合的載劑、適合的賦形劑及適合的稀釋劑中的至少一者。

對於非經腸投予，本發明的醫藥組成物最好是以可能含有其他物質的無菌水溶液形式使用，該其他物質例如足夠的鹽和單醣以使該溶液與血液等張。

除了用於治療癌症的上述投予途徑，該等醫藥組成物可適合以腫瘤內或腫瘤外圍注射投予。以此方式活化免疫系統來殺死遠端腫瘤係常稱為遠位效應且已在以多重治療模式的動物中得到證實(van der Jeught等人之Oncotarget,2015,6(3),1359-1381)。局部或腫瘤內或腫瘤外圍投予的進一步優點為以遠較低的劑量達成同等效能的能力，從而使在遠較高的劑量下可能觀察到的不良事件減至最少或消除(Marabelle,A.等人之Clinical Cancer Research,2014,20(7),1747-1756)。

對於經頰或舌下投予，本發明的醫藥組成物可以錠劑或含錠(lozenge)的形式投予，其可用現有方式製成。

以進一步的實例說明之，含有至少一種式(I)之化合物作為活性成分的醫藥組成物可根據現有製藥合成技術，藉由將(多種)化合物與醫藥上可接受的載劑、醫藥上可接受的稀釋劑及/或醫藥上可接受的賦形劑混合而製備。載劑、賦形劑與稀釋劑可有廣泛各式不同形式，取決於所欲的投予途徑(例如口服、非經腸等)。因此針對液體口服製劑如懸浮液、糖漿、酏劑與溶液而言，適合的載體、賦形劑與稀釋劑包括水、乙二醇、油、醇、調味劑、防腐劑、穩定劑、著色劑與類似者；對於固體口服製劑如粉劑、膠囊與錠劑而言，合適載劑、賦形劑與稀釋劑包括澱粉類、糖類、稀釋劑、造粒劑、潤滑劑、黏結 劑、崩散劑與類似者。固體口服製劑亦可選擇性地以物質如糖塗佈，或是經腸溶衣塗佈以調節吸收和崩解的主要位置。針對腸胃外投予，載劑、賦形劑及稀釋劑通常將包括無菌水，並且可加入其他成分以增加組成物的溶解度及保存性。可注射懸浮液或溶液也可利用水性載劑以及適當的添加劑(像是溶解化劑及防腐劑)製備。

在一個平均(70kg)人類之每日約1至約4次的治療方案中，治療有效量的式(I)化合物或其醫藥組成物所包括的活性成分的劑量範圍如下：約0.01mg至約3000mg，或其中任何的特定量或範圍，特別是約0.05mg至約1000mg，或其中任何的特定量或範圍，或更特別是約0.05mg至約250mg，或其中任何的特定量或範圍；雖然對於本發明所屬技術領域中具有通常知識者而言，顯然式(I)之化合物的治療有效量將會隨著待治療的疾病、症候群、病況及病症的變化而改變。

關於口服投予，醫藥組成物較佳係以錠劑形式提供，該錠劑形式含有約1.0、約10、約50、約100、約150、約200、約250及約500毫克的式(I)化合物。

有利的是，式(I)化合物可以單一每日劑量投予，或將每日總劑量分成每日兩次、三次或四次的分次劑量投予。

可輕易決定待投予之式(I)之化合物的最佳劑量，並會根據使用的特定化合物、投予模式、製劑強度及病毒感染、疾病、症候群、病況或病症的進展而改變。除此之外，與接受治療之特定對象相關的因素(包括對象性別、年齡、體重、飲食和投予時間)將使得劑量需要調整以達到適當的治療程度與所欲的治療效果。因此，上述劑量為平均情況的示例。當然，個別情況下需要較高或較低劑量範圍皆為可行的，該等範圍也包含於本發明之範疇中。

當有式(I)之化合物使用需求的對象需要時，式(I)之化合物可用任何上述組成物及劑量療程，或藉由本發明所屬技術領域中所建立的那些組成物和劑量療程來投予。

作為STING蛋白質促效劑，式(I)之化合物可用於治療或預防對象的病毒感染、疾病、症候群、病症或病症的方法，該對象包括動物、哺乳動物與人類，其中該病毒感染、疾病、症候群、病況或病症受到STING蛋白質調節(包括促效)的影響。該等方法包含下列、由下列組成及/或主要由下列組成：對需要該治療或預防之對象(包括動物、哺乳動物、及人類)投予治療有效量的式(I)之化合物、鹽或溶劑合物。

在一實施例中，本發明關於使用於治療癌症、與癌症疾病以及病況或病毒感染之式(I)之化合物或其醫藥上可接受之鹽形式。

對式(I)之化合物，或其醫藥上可接受之鹽或溶劑合物可能具有潛在有益的抗腫瘤效應之癌症疾病與病況實例包括，但不限於肺癌、骨癌、胰臟癌、皮膚癌、頭癌、頸癌、子宮癌、卵巢癌、胃癌、結腸癌、乳癌、食道癌、小腸癌、腸癌、內分泌系統癌、甲狀腺癌、副甲狀腺癌、腎上腺癌、尿道癌、前列腺癌、陰莖癌、睪丸癌、輸尿管癌、膀胱癌、腎臟癌、或肝癌；直腸癌；肛門區癌；輸卵管癌、子宮內膜癌、子宮頸癌、陰道癌、陰門癌、腎盂癌、腎細胞癌；軟組織肉瘤；黏液瘤；橫紋肌瘤；纖維瘤；脂瘤；畸胎瘤；膽管癌；肝母細胞瘤；血管肉瘤；血管瘤；肝腫瘤；纖維肉瘤；軟骨肉瘤；骨髓瘤；慢性或急性白血病；淋巴球性淋巴瘤；原發性CNS淋巴瘤；CNS的腫瘤；脊柱腫瘤；鱗狀細胞癌；滑膜肉瘤；惡性胸膜間皮瘤；腦幹膠質瘤；垂體腺瘤；支氣管腺瘤；軟骨性錯構瘤；間皮瘤；霍奇金氏病或一或多種上述癌症之組合。本發明關於適合地治療或減輕選自由下列所組成之群組的癌症嚴重程度之方法：腦瘤(膠質瘤)、成膠質細胞瘤、星形細胞瘤、多形性成膠質細胞瘤、班-左(Bannayan-Zonana)症候群、考登(Cowden)病、萊爾米特-杜克洛(Lhermitte-Duclos)病、威姆(Wilm)氏腫瘤、尤因(Ewing)氏肉瘤、橫紋肌肉瘤、室管膜瘤、神經管胚細胞瘤、頭頸部癌、腎臟癌、肝癌、黑色素瘤、卵巢癌、胰腺癌、腺癌、導管腺癌(ductal madenocarcinoma)、腺鱗狀 癌、腺泡細胞癌、胰高血糖素瘤、胰島素瘤、前列腺癌、肉瘤、骨肉瘤、骨巨細胞瘤(giant cell tumor of bone)、甲狀腺癌、淋巴細胞性T細胞白血病(lymphoblastic T cell leukemia)、慢性骨髓性白血病、慢性淋巴性白血病、毛細胞白血病、急性淋巴細胞性白血病(acute lymphoblastic leukemia)、急性骨髓性白血病、慢性嗜中性粒細胞白血病、急性淋巴細胞性T細胞白血病(acute lymphoblastic T cell leukemia,plasmacytoma)、漿細胞瘤、免疫母細胞性大細胞白血病、套細胞白血病、多發性骨髓瘤、巨核細胞性白血病、多發性骨髓瘤、急性巨核細胞白血病、前髓細胞白血病(pro myelocytic leukemia)、紅血球性白血病、惡性淋巴瘤、霍奇金氏淋巴瘤、非霍奇金氏淋巴瘤、淋巴細胞性T細胞淋巴瘤、伯基特(Burkitt)淋巴瘤、濾泡性淋巴瘤、神經母細胞瘤、膀胱癌、尿路上皮癌、外陰癌、子宮頸癌、子宮內膜癌、腎癌、間皮瘤、食道癌、唾液腺癌、肝細胞癌、胃癌、鼻咽癌、頰癌、口腔癌、GIST(胃腸道基質瘤)以及睾丸癌。

在另一實施例中，本發明係關於式(I)之化合物或其醫藥上可接受之鹽形式使用於治療選自由下列所組成之群組之受到STING促效影響的病症：由黑色素瘤、結腸癌、乳癌、前列腺癌、肺癌、纖維肉瘤、以及B型肝炎。

揭示式(I)之化合物可與一或多種有用於治療HBV感染的額外化合物組合使用。這些額外化合物可包含其他揭示化合物及/或已知可治療、預防、或減少HBV感染之症狀或效應之化合物。該等化合物包括但不限於HBV聚合酶抑制劑、干擾素、病毒進入抑制劑、病毒成熟抑制劑、文獻描述之殼體組裝調節劑、反轉錄酶抑制劑、免疫調節劑、TLR促效劑、及其他具有影響HBV生命週期或影響HBV感染後果之不同或未知機制的藥劑。

在非限制性實例中，揭示化合物可與一或多種選自包含下列之群組的藥物(或其鹽)組合使用： HBV反轉錄酶抑制劑、及DNA及RNA聚合酶抑制劑包括但不限於拉米夫定(lamivudine)(3TC、Zeffix、Heptovir、Epivir、及Epivir-HBV)、恩替卡韋(entecavir)(Baraclude、Entavir)、阿德福韋酯(adefovir dipivoxil)(Hepsara、Preveon、bis-POM PMEA)、替諾福韋雙索酯富馬酸鹽(tenofovir disoproxil fumarate)(Viread、TDF或PMPA)；干擾素包括但不限於干擾素α(IFN-α)、干擾素β(IFN-β)、干擾素λ(IFN-λ)、及干擾素γ(IFN-γ)；病毒進入抑制劑；病毒成熟抑制劑；殼體組裝調節劑，例如，但不限於BAY 41-4109；反轉錄酶抑制劑；免疫調節劑例如TLR促效劑；及具有不同或未知機制之藥劑，例如，但不限於AT-61((E)-N-(1-氯-3-側氧基-1-苯基-3-(哌啶-1-基)丙-1-烯-2-基)苯甲醯胺)、AT-130((E)-N-(1-溴-1-(2-甲氧基苯基)-3-側氧基-3-(哌啶-1-基)丙-1-烯-2-基)-4-硝基苯甲醯胺)、及其類似物。

在一實施例中，額外治療劑係干擾素。用語「干擾素(interferon)」或「IFN」係指抑制病毒複製及細胞增生且調節免疫反應之高度同源、物種特異性蛋白質家族的任何成員。舉例來說，人類干擾素分成三個類別：第I型包括干擾素-α(IFN-α)、干擾素-β(IFN-β)、及干擾素-ω(IFN-ω)，第II型包括干擾素-γ(IFN-γ)，及第III型包括干擾素-λ(IFN-λ)。已開發並有市售品之重組形式干擾素涵蓋於本文中所使用之用語「干擾素(interferon)」中。干擾素亞型，例如經化學修飾或突變之干擾素，亦涵蓋於本文中所使用之用語「干擾素(interferon)」中。化學修飾干擾素可包括聚乙二醇化干擾素及糖化干擾素。干擾素之實例亦包括但不限於干擾素-α-2a、干擾素-α-2b、干擾素-α-n1、干擾素-β-1a、干擾素-β-1b、干擾素-λ-1、干擾素-λ-2、及干 擾素-λ-3。聚乙二醇化干擾素之實例包括聚乙二醇化干擾素-α-2a及聚乙二醇化干擾素α-2b。

因此，在一實施例中，式(I)之化合物可與選自由干擾素α(IFN-α)、干擾素β(IFN-β)、干擾素λ(IFN-λ)、及干擾素γ(IFN-γ)所組成之群組之干擾素組合投予。在一特定實施例中，干擾素係干擾素-α-2a、干擾素-α-2b、或干擾素-α-n1。在另一特定實施例中，干擾素-α-2a或干擾素-α-2b係經聚乙二醇化。在一較佳實施例中，干擾素-α-2a係聚乙二醇化干擾素-α-2a(PEGASYS)。在另一實施例中，額外治療劑係選自免疫調節劑或免疫刺激劑療法，其包括屬於干擾素類別之生物劑。

另外，額外治療劑可為干擾HBV複製或持續存在所需之其他必要(多種)病毒蛋白質或宿主蛋白質之功能的藥劑。

在另一實施例中，額外治療劑係阻斷病毒進入或成熟、或靶向HBV聚合酶例如核苷或核苷酸或非核苷(酸)聚合酶抑制劑之抗病毒劑。在組合療法之一進一步實施例中，反轉錄酶抑制劑或DNA或RNA聚合酶抑制劑係齊多夫定(Zidovudine)、去羥肌苷(Didanosine)、紮西他濱(Zalcitabine)、ddA、司他夫定(Stavudine)、拉米夫定(Lamivudine)、阿巴卡韋(Abacavir)、恩曲他濱(Emtricitabine)、恩替卡韋(Entecavir)、阿立他濱(Apricitabine)、阿替韋拉平(Atevirapine)、利巴韋林(ribavirin)、阿昔洛維(acyclovir)、泛昔洛韋(famciclovir)、伐昔洛韋(valacyclovir)、更昔洛韋(ganciclovir)、纈更昔洛韋(valganciclovir)、替諾福韋(Tenofovir)、阿德福韋(Adefovir)、PMPA、西多福韋(cidofovir)、依法韋侖(Efavirenz)、奈韋拉平(Nevirapine)、地拉韋啶(Delavirdine)、或依曲韋林(Etravirine)。

在一實施例中，額外治療劑係誘導自然、有限免疫反應導致誘導對抗非相關病毒之免疫反應的免疫調節劑。換言之，免疫調 節劑可影響抗原呈現細胞成熟、T細胞增生及細胞介素釋放(例如，IL-12、IL-18、IFN-α、-β、及-γ及TNF-α等其他者)。

在一進一步實施例中，額外治療劑係TLR調節劑或TLR促效劑，例如TLR-7促效劑或TLR-9促效劑。在組合療法之進一步實施例中，TLR-7促效劑係選自由SM360320(9-苄基-8-羥基-2-(2-甲氧基-乙氧基)腺嘌呤)及AZD 8848(甲基[3-({[3-(6-胺基-2-丁氧基-8-側氧基-7,8-二氫-9H-嘌呤-9-基)丙基][3-(4-嗎啉基)丙基]胺基}甲基)苯基]乙酸酯)所組成之群組。

在本文提供之任何方法中，該方法可進一步包含向個體投予至少一種HBV疫苗、核苷HBV抑制劑、干擾素、或其任何組合。在一實施例中，HBV疫苗係RECOMBIVAX HB、ENGERIX-B、ELOVAC B、GENEVAC-B、或SHANVAC B之至少一者。

在一實施例中，本文所述之方法進一步包含投予至少一種選自由核苷酸/核苷類似物、進入抑制劑、融合抑制劑、及這些或其他抗病毒機制之任何組合所組成之群組的額外治療劑。

在另一態樣中，在本文中提供在有需要之個體中治療HBV感染之方法，其包含藉由向該個體單獨投予治療有效量的揭示化合物或與反轉錄酶抑制劑組合投予；及進一步向該個體投予治療有效量的HBV疫苗，以減少HBV病毒負荷。反轉錄酶抑制劑可為齊多夫定(Zidovudine)、去羥肌苷(Didanosine)、紮西他濱(Zalcitabine)、ddA、司他夫定(Stavudine)、拉米夫定(Lamivudine)、阿巴卡韋(Abacavir)、恩曲他濱(Emtricitabine)、恩替卡韋(Entecavir)、阿立他濱(Apricitabine)、阿替韋拉平(Atevirapine)、利巴韋林(ribavirin)、阿昔洛維(acyclovir)、泛昔洛韋(famciclovir)、伐昔洛韋(valacyclovir)、更昔洛韋(ganciclovir)、纈更昔洛韋(valganciclovir)、替諾福韋(Tenofovir)、阿德福韋(Adefovir)、PMPA、西多福韋(cidofovir)、依法韋侖(Efavirenz)、奈韋拉平(Nevirapine)、地拉韋啶(Delavirdine)、或依曲韋林(Etravirine)之至少一者。

在另一態樣中，在本文中提供在有需要之個體中治療HBV感染之方法，其包含藉由向該個體單獨投予治療有效量的揭示化合物或與靶向HBV核酸之反股寡核苷酸或RNA干擾劑組合投予；及進一步向該個體投予治療有效量的HBV疫苗，以減少HBV病毒負荷。反股寡核苷酸或RNA干擾劑對靶向HBV核酸具有足夠互補性，以抑制病毒基因體複製、病毒RNAs轉錄、或病毒蛋白質轉譯。

在另一實施例中，揭示化合物及至少一種額外治療劑係共同調配。在又一實施例中，揭示化合物及至少一種額外治療劑係共同投予。對於本文所述之任何組合療法而言，協同效應可例如使用合適方法計算，例如Sigmoid-E_max方程式(Holford & Scheiner,19981,Clin.Pharmacokinet.6：429-453)、Loewe相加方程式(Loewe & Muischnek,1926,Arch.Exp.Pathol Pharmacol.114：313-326)及中效方程式(Chou & Talalay,1984,Adv.Enzyme Regul.22：27-55)。上述各方程式可應用於實驗數據產生對應圖形，以幫助評估藥物組合的效應。與上述方程式相關之對應圖形分別是濃度-效應曲線、等效線圖曲線及組合指數曲線。

在本文提供之投予組合療法的任何方法的一實施例中，該方法可進一步包含監測或偵測對象的HBV病毒負荷，其中該方法係進行一段時間包括直到HBV病毒無法被偵測到的時間。

本說明書中所使用之縮寫，特別是使用於方案與實例中者，係如下所示：

具體實例

實例1

步驟1：製備化合物1e

在3'-O-甲基-鳥苷1d(CAS 10300-27-3,1.0g,3.36mmol)於吡啶(20mL)中之溶液中，於室溫下逐滴添加三級丁基氯二甲基矽烷(3.2mL,25.2mmol)。1h之後，在室溫下逐滴添加異丁醯氯(1.08g,10.1mmol)。最終混合物在室溫下攪拌2h。將混合物於0℃下用水(30mL)淬滅並於0℃下逐滴添加NH₄OH(6mL)。10分鐘之後，將混合物於rt下攪拌0.5h，然後濃縮混合物。藉由FCC(DCM：MeOH=10：1)純化粗製產物以得到呈白色固體之1e(790mg，63.9%)。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)12.08(s,1H),11.67(s,1H),8.27(s,1H),5.81(d,J=6.0Hz,1H),5.51(d,J=6.0Hz,1H),5.10(t,J=5.2Hz,1H),4.59-4.57(m,1H),4.01-3.99(m,1H),3.86-3.84(m,1H),3.65-3.57(m,2H),3.41(s,3H),3.17(d,J=5.2Hz,1H),2.79-2.76(m,1H),1.14(s,3H),1.12(s,3H)。ESI-MS：m/z=368.0[M+1]⁺。

步驟2：製備化合物1f

將化合物1e(790mg,2.15mmol)與DMTrCl(0.765g,2.26mmol)於吡啶(10mL)中之溶液在室溫下攪拌整夜。添加DMTCl(0.765g,2.26mmol)並將反應在室溫下攪拌2h。將混合物用水(10mL)淬滅並用DCM(10mL×4)萃取。將合併之有機層以Na₂SO₄乾燥，過濾並濃縮濾液。藉由快速層析法(DCM：MeOH=15：1,R _f=0.5)純化殘餘物以得到呈淡黃色固體之化合物1f(1.28g,88.9%)。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)11.87(s,1H),7.68-7.66(m,2H),7.57(d,J=7.6Hz,2H),7.44(t,J=9.2Hz,4H),7.31-7.29(m,2H),7.22-7.19(m,1H),6.87-6.81(m,4H),5.70(d,J=7.2Hz,1H),5.30-5.27(m,1H),5.05-5.03(m,1H),4.19-4.18(m,1H),4.09-4.07(m,1H),3.78(s,3H),3.77(s,3H),3.58-3.55(m,1H),3.47(s,3H),3.05-3.03(m,1H),1.47-1.40(m,1H),0.85(d,J=6.8Hz,3H),0.55(d,J=6.8Hz,3H)；ESI-MS：m/z=670.2[M+1]⁺。

步驟3：製備化合物1g

在化合物1f(1.28g,1.91mmol)與DIPEA(741.0mg,5.73mmol)於THF(5mL)中之溶液中，於室溫下添加3-((氯(二異丙基胺基)膦基)氧基)丙腈(1.36g,5.73mmol)。該混合物在室溫下攪拌1h。然後將反應用MeOH淬滅。將混合物用EtOAc萃取並將合併之有機層用鹽水洗滌兩次。將有機層以Na₂SO₄乾燥，過濾並濃縮濾液。藉由快速層析法(DCM：MeOH=10：1,R _f=0.6)純化殘餘物以得到化合物1g(1g,60.1%)。¹H NMR(400MHz,CD₃CN)7.88(d,J=9.0Hz,1H),7.48-7.41(m,2H),7.35-7.24(m,7H),6.88-6.79(m,4H),6.02-5.89(m,1H),5.19-4.95(m,1H),4.28-4.20(m,1H),4.07-4.04(m,1H),3.78(d,J=1.6Hz,7H),3.67-3.48(m,4H),3.44(d,J=15.6Hz,3H),3.33(td,J=2.8,10.8Hz,1H),2.72-2.65(m,1H),2.61-2.53(m,1H),2.51(t,J=6.0Hz,1H),1.26-1.24(m,4H),1.18-1.12(m,12H),0.91(d,J=6.8Hz,3H)；³¹P NMR(162MHz,CD₃CN)150.90(s,1P),150.81(s,1P),13.80(s,1P)；ESI-MS：m/z 787.2[M+1]⁺。

步驟4：製備化合物1b

在化合物1a(4.3g,4.51mmol)與水(156.8mg,8.7mmol)於乾燥CH₃CN(16mL)中之溶液中，於室溫下添加三氟乙酸吡啶鎓(1.0g,5.2mmol)。1分鐘之後，添加三級丁基胺(4mL)。所得之混合物於15℃下攪拌20分鐘。將混合物濃縮2h以得到呈白色固體之粗製產物1b(4.0g)。粗製產物直接用於下一步驟。

步驟5：製備化合物1c

在化合物1b(4.05g,4.35mmol)與水(832.0mg,46.2mmol)於DCM(40mL)中之溶液中，於室溫下添加二氯乙酸(2.1g, 16.3mmol)作用50分鐘。10分鐘之後，添加吡啶(730.6mg,9.24mmol)。濃縮混合物並藉由快速層析法(CH₂Cl₂：MeOH=5：1,R _f=0.4)純化殘餘物以得到呈白色固體之化合物1c(2.45g,89.5%)。

ESI-MS：m/z=449.9[M+1]⁺。

步驟6：製備化合物1i

將化合物1c(300mg,0.48mmol)與4Å分子篩於乾燥CH₃CN(20mL)中之溶液，於室溫在N₂下攪拌10分鐘，然後添加1H過氯酸咪唑(imidazole perchlorate)(1.5g,8.8mmol)。10分鐘之後，添加化合物1g(0.54g,0.62mmol)於乾燥CH₃CN(5mL)中。將混合物在室溫下攪拌50分鐘，然後添加三級丁基過氧化氫(0.43mL,2.39mmol)。在室溫下攪拌所得之混合物1小時並濃縮。將混合物濃縮並藉由製備級HPLC(水(10mM NH₄HCO₃)-CH₃CN)純化殘餘物以得到呈白色固體之化合物1i(168mg,34.1%)。¹H NMR(400MHz,CD₃OD)8.89(s,1H),8.79(s,1H),8.36(s,1H),8.16(d,J=7.5Hz,2H),7.73-7.67(m,1H),7.62(t,J=7.0Hz,2H),6.27-6.18(m,2H),5.38-5.30(m,1H),4.81(m,2H),4.44(s,1H),4.29(s,1H),4.26-4.15(m,3H),3.92-3.85(m,1H),3.75(d,J=12.4Hz,1H),3.61-3.57(m,3H),2.74(td,J=6.6,13.1Hz,1H),1.21(dd,J=6.8,15.2Hz,6H),0.85(s,9H),0.12(s,3H),-0.04(s,3H)；³¹H NMR(162MHz,DMSO-d₃)δ=3.61(s,1P),-1.68(s,1P)；ESI-MS：m/z=1033.2[M+1]⁺。

步驟7：製備化合物1k

在化合物1i(160mg,0.16mmol)與4Å分子篩於吡啶(40mL)中之溶液中，於室溫下添加DMOCP(87.0mg,0.47mmol)。將混合物在室溫下攪拌1h。添加碘(199.4mg,0.79mmol)與水(28.3mg,1.57mmol)。1h之後，將混合物過濾然後逐滴添加Na₂SO₃之飽 和溶液直到該濾液顏色變成淡黃色。將混合物過濾，然後將濾液濃縮。藉由製備級HPLC(水(10mM NH₄HCO₃)-CH₃CN從23%至53%)純化殘餘物以得到呈白色固體之標的產物1k(48mg,31.3%)。ESI-MS：m/z 977.5[M+1]⁺。

步驟8：製備化合物1l

將化合物1k(40.0mg,0.041mmol)用甲胺於EtOH(33%,10mL)中之溶液處理，於室溫下攪拌1h。將反應混合物濃縮以給出粗製化合物1l(32.9mg,100%)並將其直接用於下一步驟。ESI-MS：m/z 803.4[M+1]⁺。

步驟9：製備化合物2

將化合物1l(32.86mg,0.041mmol)、Et₃N(248.5mg,2.46mmol)、以及三氫氟化三乙胺(198.0mg,1.2mmol)於吡啶(5mL)中之溶液，於50℃下攪拌5h。將混合物用THF(10mL)稀釋並於室溫下添加異丙氧基三乙基矽烷(541.5mg,4.1mmol)作用1.5h。濃縮該混合物並藉由製備級HPLC(水(0.05% NH₄OH v/v)-CH₃CN，從0%至15%)純化殘餘物以得到呈白色固體之目標產物2(呈其銨鹽，6.7mg)。¹H NMR(400MHz,D₂O)δ=8.18-8.16(d,J=10Hz,2H),7.74(s,1H),6.06(s,1H),5.79-5.77(d,J=8.8Hz,1H),5.62-5.56(m,1H),4.99-4.94(m,1H),4.45(m,1H),4.39-4.34(m,2H),4.15-4.03(m,4H),3.46(s,3H)；³¹P NMR(162MHz,D₂O)-1.28(s,1P),-2.65(s,1P)；ESI-MS：m/z 689.5[M+1]⁺。

步驟9：製備(Cpd 2,Na鹽)

將體積3mL的Dowex 50W×8，200-400(H型)添加至燒杯中(對於6.7mg的化合物5銨鹽)並用去離子水(2x)洗滌。接著向樹脂添加15% H₂SO₄於去離子水(50mL)中之溶液，將混合物 攪拌15分鐘，並傾析(1x)。用15% H₂SO₄(於去離子水中)把樹脂轉移至一管柱中並用15% H₂SO₄(至少4CV)洗滌，然後用去離子水予以洗滌直到其呈中性。將樹脂轉移回燒杯中，然後添加15% NaOH(於水溶液中，50mL)，然後將混合物攪拌15分鐘，並傾析(1x)。將樹脂轉移至管柱中並用15% NaOH於水中之溶液(至少4CV)洗滌，然後用水洗滌直到其呈中性(至少4CV)。將化合物5(6.7mg)溶解在去離子水中(6.7mg於1mL中)並加至管柱的頂端，然後用去離子水洗提。藉由TLC(UV)偵測，化合物在早期餾份中洗提出來。將產物冷凍乾燥以給出呈白色發泡體之目標化合物2 Na鹽(6.4mg,94.2%)。¹H NMR(400MHz,D₂O)8.16(s,1H),8.13(s,1H),7.74(s,1H),6.04(s,1H),5.78(d,J=8.8Hz,1H),5.61-5.56(m,1H),4.98-4.93(m,1H),4.65(s,1H),4.44-4.35(m,3H),4.15-4.05(m,4H),3.46(s,3H)；³¹P NMR(162MHz,D₂O)-1.26,-2.64；ESI-MS：m/z 689.0[M+1]⁺。

實例2

步驟1：製備化合物2b

在DMT-2'-OMe-Bz-腺苷-CE亞磷醯胺(phosphoramidite)2a(1.0g,1.13mmol)與水(40.6mg,2.25mmol)於 乾燥CH₃CN(4mL)中之溶液中，於15℃下添加三氟乙酸吡啶鎓(261.0mg,1.35mmol)。然後在反應混合物中添加三級丁基胺(4mL)。將混合物濃縮以得到呈白色固體之1g的粗製化合物2b，將其與DCM(3x)共蒸發並直接用於下一步驟。ESI-MS：m/z=450.0[M+1]⁺。(DMT=4,4'-二甲氧基三苯甲基)。

步驟2：製備化合物2c

在化合物2b(930.0mg,1.12mmol)與水(0.2g,11.2mmol)於CH₂Cl₂(10mL)中之溶液中，於15℃下添加二氯乙酸(0.51g,4.0mmol)作用0.5h。10分鐘之後，添加吡啶。將混合物濃縮並藉由快速層析法(CH₂Cl₂：MeOH=5：1,R _f=0.5)純化殘餘物以得到呈白色固體之化合物2c(400mg,0.76mmol，產率67.6%)。³¹P NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ 0.05；ESI-MS：m/z=450.0(M+1)。

步驟3：製備化合物2f

將化合物2c(860.0mg,1.63mmol)與4Å分子篩(1g)於乾燥CH₃CN(16mL)中之溶液，於15℃在N₂下攪拌10分鐘，然後添加1H過氯酸咪唑(5.16g,30.26mmol)。10分鐘之後，添加DMT-3'-O-TBDMS-G(iBu)-CE亞磷醯胺2d(2.05g,8.11mmol，於乾燥CH₃CN(4mL)中)。將混合物在室溫下攪拌50分鐘，然後添加三級丁基過氧化氫溶液(TBHP，1.48mL，8.14mmol，5.5M，於已烷中)。所得之混合物於15℃下攪拌1h，濃縮混合物並藉由製備級HPLC(水(10mM NH₄HCO₃)-CH₃CN)純化殘餘物以得到呈白色固體之化合物2f(600mg，0.58mmol，產率35.7%)。¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δ 8.61(d,J=5.2Hz,1H),8.41-8.30(m,1H),8.24-8.17(m,1H),8.04-7.90(m,2H),7.61-7.49(m,2H),7.48-7.40(m,2H),6.11-6.03(m,1H),6.02-5.98(m,1H),5.36-5.12(m,1H),4.55-4.43(m,2H),4.41-4.32(m,1H),4.30-4.19(m,2H),4.13- 4.02(m,1H),3.99-3.85(m,2H),3.75-3.65(m,1H),3.63-3.53(m,1H),3.37(s,3H),2.70-2.69(m,1H),2.60-2.52(m,2H),1.10-1.03(m,6H),0.82-0.77(m,9H),0.04-0.00(m,6H)；³¹P NMR(162MHz,CD₃OD)δ 3.17,3.13,-2.58,-2.69；ESI-MS：m/z=517.1[M/2+1]⁺及1032.3[M+1]⁺。

步驟4：製備化合物2i+化合物2j

在化合物2g(280.0mg,0.27mmol)與4Å分子篩(1g)於吡啶(60mL)中之溶液中，於16℃下添加5,5-二甲基-2-側氧基-2-氯-1,3,2-二氧雜-磷(DMOCP,150.2mg,0.81mmol)。將混合物在16℃下攪拌1h。添加碘(344.3mg,1.36mmol)與水(48.9mg,2.71mmol)。1h之後，將反應用Na₂SO₃飽和溶液淬滅。將混合物過濾，然後將濾液濃縮。藉由製備級HPLC(水(10mM NH₄HCO₃)-CH₃CN)純化殘餘物以得到呈白色固體之化合物2i與化合物2j(170mg，0.17mmol，產率60.8%)混合物。ESI-MS：m/z=1030.4[M+H]⁺。

步驟5：製備化合物2j

將化合物2i與化合物2j(170mg,0.17mmol)之混合物用甲胺於EtOH(15mL,33%)中之溶液處理，且所得之溶液在15℃下攪拌1h。將粗製產物2j(134.3mg)直接用於下一步驟。

步驟6：製備化合物1

將化合物2j(134.3mg，粗製)、Et₃N(1.0g,10.0mmol)、以及三氫氟化三乙胺(Et₃N-3HF,807.4mg,5.00mmol)於吡啶(10mL)中之溶液，於50℃下攪拌5h。將混合物用THF(10mL)稀釋並添加異丙氧基三甲基矽烷(2.2g,16.7mmol)。在15℃攪拌1h之後，將混合物於15℃下濃縮並藉由製備級HPLC(水(0.05% NH₄OH v/v)-CH₃CN)純化殘餘物，冷凍乾燥後得到呈白色固體之化合物1(呈其銨鹽，19.5mg，0.028mmol)。

¹H NMR(400MHz,D₂O)δ 8.26(s,1H),8.15(s,1H),7.78(s,1H),6.116(s,1H),5.87(d,J=8.4Hz,1H),5.66(s,1H),4.95(s,1H),4.48(d,J=4.4Hz,1H),4.24(m,5H),3.97(d,J=11.7Hz,1H),3.83(d,J=12.0Hz,1H),3.69(s,3H)；³¹P NMR(162MHz,D₂O)δ-1.57,-3.38；ESI-MS：m/z=688.9[M+H]⁺。

製備化合物1，鈉鹽

將Dowex 50W×8,200-400(25mL，H型)添加至燒杯中並用去離子水洗滌(60mL)。接著向該樹脂添加15% H₂SO₄(於去離子水中)，將混合物輕輕地攪拌5分鐘，並傾析(50mL)。用15% H₂SO₄(於去離子水中)把樹脂轉移至管柱中並用15% H₂SO₄(至少4CV)洗滌，然後用去離子水洗滌直到其呈中性。將樹脂轉移回燒杯中，然後添加15% NaOH(於去離子水溶液中)，且將混合物輕輕地攪拌5分鐘，並傾析(1x)。將樹脂轉移至管柱中並用15% NaOH(於H₂O中，至少4CV)洗滌，然後用去離子水洗滌直到其呈中性。將化合物1，銨鹽(16mg)溶解在最少量的去離子水中，加至管柱的頂端，然後用去離子水洗提。將CDN基於UV之適當餾份倒在一起並經冷凍乾燥以得到化合物1(13.5mg)之鈉鹽型式。¹H NMR(400MHz,D₂O)δ 8.17(s,1H),8.14(s,1H),7.73(s,1H),6.14(s,1H),5.83(d,J=8.8Hz,1H),5.58-5.52(m,1H),5.01(s,1H),4.98-4.90(m,1H),4.04-4.51(m,5H),4.04(d,J=11.7Hz,1H),3.78(d,J=12.0Hz,1H),3.69(s,3H)；31P NMR(162MHz,D₂O)δ-1.63,-2.29；ESI-MS：m/z=689[M+H]+。

實例3

步驟1：製備化合物3a

在DMT-3'-O-TBDMS-G(iBu)-CE亞磷醯胺化合物2d(1g,1.03mmol)與水(37.1mg,2.06mmol)於乾燥CH₃CN(4mL)中之溶液中，於室溫下添加三氟乙酸吡啶鎓(238.9mg,1.2mmol)。在反應混合物中添加三級丁基胺(4mL)。所得之混合物於室溫下攪拌20分鐘。將混合物濃縮以得到呈白色固體之化合物3a(941.1mg)，將其與DCM(3x)共蒸發並直接用於下一步驟。

步驟2：製備化合物3b

在化合物3a(941.1mg,1.03mmol)與水(0.19g,10.0mmol)於CH₂Cl₂(30mL)中之溶液中，於室溫下添加二氯乙酸(0.47g,3.62mmol,6%於DCM中)之溶液作用0.5h。然後添加吡啶(0.163g,2.06mmol)。10分鐘之後，濃縮混合物並藉由快速層析法(DCM：MeOH=5：1,R _f=0.5)純化殘餘物以得到呈白色固體之化合物3c(515mg,0.84mmol)。ESI-MS m/z 532.1[M+1]⁺。

步驟3：製備化合物3ea+化合物3eb

將化合物3b(500mg,0.82mmol)與4Å MS(0.5g)於乾燥CH₃CN(10mL)中之溶液，於室溫在N₂下攪拌3分鐘。然後添加1H過氯酸咪唑(IMP,2.54g,15.1mmol)。10分鐘之後，添加LNA- dA(Bz)-CE亞磷醯胺、化合物3c(943mg，1.06mmol)於CH₃CN(5mL)中。將混合物在室溫下攪拌50分鐘，然後添加三級丁基過氧化氫溶液(TBHP，5.5M於已烷中，0.74mL，4.09mmol)。所得之混合物於室溫下攪拌1h，濃縮該混合物並藉由製備級HPLC(水(10mM NH₄HCO₃)-ACN)純化殘餘物以得到呈白色固體之化合物3ea與化合物3eb(135.7mg,0.132mmol)之混合物。將產物混合物直接用於下一步驟。ESI-MS m/z 1030.1[M+1]⁺。

步驟4：製備化合物3g

在化合物3ea與化合物3eb(135.7mg,0.132mmol)以及4Å分子篩(0.5g)於吡啶(30mL)中之溶液中，於29℃下添加DMOCP(72.6mg,0.39mmol)，將混合物在29℃下攪拌1h。然後添加碘(166.3mg,0.66mmol)與水(23.6mg,1.31mmol)。1h之後，將反應用Na₂SO₃飽和溶液淬滅。將混合物過濾，然後將濾液濃縮。藉由製備級HPLC(水(10mM NH₄HCO₃)-CH₃CN，從35%至65%)純化殘餘物以得到呈白色固體之化合物3g(22mg,0.021mmol)。ESI-MS：m/z=514.5[M/2+1]⁺與1029.3[M+1]⁺。

步驟5：製備化合物3h

將化合物3g(22mg,0.021mmol)用甲胺於EtOH中(33%,10mL)之溶液處理，於室溫下攪拌1h。將反應混合物濃縮以給出粗製化合物3h，將其與吡啶(3x)共蒸發並直接用於下一步驟。

步驟6：製備化合物6銨鹽

將化合物3h、Et₃N(176.7mg,1.75mmol)、以及三氫氟化三乙胺(Et₃N-3HF,140.7mg,0.87mmol)於吡啶(10mL)中之溶液，於50℃下攪拌5h。將混合物用THF(10mL)稀釋並於15℃下添加異丙氧基三甲基矽烷(384.9mg,2.91mmol)作用1h，將殘餘物藉由 製備級HPLC(水(0.05% NH₄OH v/v)-CH₃CN，從0%至15%)純化，冷凍乾燥後得到呈白色固體之目標產物6(呈其銨鹽，6.1mg，0.009mmol)。¹H NMR(400MHz,D₂O)8.30(s,1H),8.11(s,1H),7.83(brs,1H),6.19(s,1H),5.96(d,J=6.8Hz,1H),4.98(s,1H),4.57(s,1H),4.36-4.30(m,3H),4.16(d,J=6.0Hz,3H),4.04(d,J=7.6Hz,1H),3.86(d,J=11.6Hz,2H)；³¹P NMR(162MHz,D₂O)-1.73,-3.40；ESI-MS m/z 687.0[M+1]⁺。

製備化合物6鈉鹽

將Dowex 50W×8,200-400(2mL，H型)添加至燒杯中並用去離子水洗滌(15mL)。接著向該樹脂添加15% H₂SO₄(於去離子水中)，將混合物輕輕地攪拌5分鐘並傾析(10mL)。用15% H₂SO₄(於去離子水中)把樹脂轉移至管柱中並用15% H₂SO₄(至少4CV)洗滌，然後用去離子水洗滌直到其呈中性。將樹脂轉移回燒杯中，然後添加15% NaOH(於去離子水溶液中)，且將混合物輕輕地攪拌5分鐘，並傾析(1x)。將樹脂轉移至管柱中並用15% NaOH(於水中，至少4CV)洗滌，然後用去離子水洗滌直到其呈中性。將化合物6，銨鹽(3.5mg)溶解在最少量的去離子水中並加至管柱的頂端，然後用去離子水洗提。將CDN基於UV之適當餾份倒在一起並經冷凍乾燥以得到化合物6之鈉鹽(3.02mg)。¹H NMR(400MHz,D₂O)：δ 8.11(s,1H),7.88(s,1H),7.74(s,1H),6.02(s,1H),5.85(d,J=8.4Hz,1H),5.65-5.58(s,1H),4.91(d,J=3.2Hz,1H),4.83(s,1H),4.50(d,J=4.8Hz,1H),4.35-4.28(m,1H),4.26-4.19(m,2H),4.13-4.01(m,3H),3.90(d,J=8Hz,1H),3.76(d,J=12.4Hz,2H)；³¹P-NMR(162MHz,D₂O)δ-1.64,-1.91。

實例4

步驟1：製備化合物4ba及化合物4bb

將化合物1c(300mg,0.57mmol)與4Å分子篩(0.5g)於乾燥CH₃CN(10mL)中之溶液，於29℃在N₂下攪拌3分鐘，然後添加1H過氯酸咪唑(1.76g,10.5mmol)。10分鐘之後，添加化合物1g(500mg,0.58mmol)於乾燥CH₃CN(10mL)中之溶液。將混合物在室溫下攪拌50分鐘，然後添加三級丁基過氧化氫(TBHP,0.52mL,2.84mmol)。所得之混合物於29℃下攪拌1h，濃縮該混合物並藉由製備級HPLC(水(10mM NH₄HCO₃)-CH₃CN)純化殘餘物以得到呈白色固體之化合物4ba與化合物4bb(100mg,0.114mmol)之混合物。³¹P NMR(162MHz,DMSO)-0.66,-2.44；ESI-MS：m/z 932.3(M+1)。

步驟2：製備化合物4da及化合物4db

在化合物4ba與化合物4bb(100.0mg,0.11mmol)以及4Å分子篩(0.5g)於吡啶(30mL)中之懸浮液中，於28℃下添加DMOCP(59.4mg,0.32mmol)，將混合物在28℃下攪拌1h。然後添加碘(136.2mg,0.54mmol)與水(19.3mg,1.1mmol)。1h之後，將反應用Na₂SO₃飽和溶液淬滅。將混合物過濾，然後將濾液濃縮。藉由製備級HPLC(水(10mM NH₄HCO₃)-ACN，從1%至28%)純化殘餘物 以得到呈白色固體之化合物4da與化合物4db(50mg,0.057mmol)之混合物。將產物直接用於下一步驟。

步驟3：製備化合物3，銨鹽

將化合物4da與4db(50mg,0.057mmol)之混合物用甲胺於EtOH(33%,20mL)中之溶液處理且將混合物於室溫下反應2h。將反應混合物濃縮以給出粗製化合物3，其藉由製備級HPLC(水(0.05% NH₄OH v/v)-CH₃CN，從0%至10%)純化以給出呈白色固體之化合物3銨鹽(16mg,0.023mmol)。³¹P NMR(162MHz,D₂O)-1.53,-3.41。

該產物進一步藉由製備級HPLC(水(0.05% NH₄OH v/v)-CH₃CN，從0%至10%)純化以得到呈白色固體之化合物3(呈其銨鹽)。

步驟4：製備化合物3，鈉鹽

將化合物3銨鹽在高度真空下乾燥以給出白色固體(12mg)。將50W×8,200-400(H型，3mL)添加至燒杯中(對於12mg的化合物6)並用去離子水(2x)洗滌。然後向樹脂添加15% H₂SO₄(於去離子水中，50mL)，並將混合物攪拌15分鐘並傾析(1x)。用15% H₂SO₄(於去離子水中)把樹脂轉移至管柱中並用15% H₂SO₄(至少4CV)洗滌，然後用去離子水洗滌直到其呈中性。將樹脂轉移回燒杯中，然後添加15% NaOH(於去離子水溶液中，50mL)，並將混合物攪拌15分鐘並傾析(1x)。然後用15% NaOH(於去離子水中，至少4CV)把樹脂轉移至管柱中並洗滌，然後用去離子水洗滌直到其呈中性(至少4CV)。將化合物3溶解在去離子水中(12mg於1mL中)，並加至管柱的頂端，然後用去離子水洗提。藉由TLC(UV)偵測，經轉換的鈉鹽在早期餾份中洗提出來。將產物冷凍乾燥以給出化合物3，鈉鹽(7.4mg,0.010mmol)。¹H NMR(400MHz,D₂O)δ ppm 8.17(s,1H),8.14(s,1H),7.74(s,1H),6.14(s,1H),5.79(d,J=8.8Hz,1H),5.65-5.59(m,1H),5.02-5.00(m,1H),4.44(s,1H),4.36-4.29(m,3H),4.15-4.11(m,3H),4.04-4.01(m,1H),3.66(s,3H),3.46(s,3H)；³¹P NMR(162MHz,D₂O)-1.53,-2.62；ESI-MS m/z 702.5(M+1)。

實例5

步驟1：製備化合物5b

在DMT-2'-F-dA(Bz)-CE亞磷醯胺5a(2.20g,2.51mmol)於CH₃CN(12.0mL)中之溶液中，添加水(90.5mg,5.02mmol,2.0eq)與三氟乙酸吡啶鎓(582.1mg,3.01mmol,1.2eq)。該混合物於25℃下攪拌5分鐘。然後添加三級丁基胺(12.0mL)並將反應混合物於25℃下攪拌15分鐘。將混合物在減壓下濃縮以給出發泡體，其經溶解於CH₃CN(10.0mL)中並再次濃縮以得到呈白色發泡體之化合物5b(1.69g，2.29mmol，產率91.0%)。ESI-MS：m/z 740.2[M+H]⁺。

步驟2：製備化合物5c

在化合物5b(1.69g,2.29mmol)於CH₂Cl₂(24.0mL)中之溶液中，緩慢地添加水(411.8mg,21.9mmol,10.0eq)與2,2-二氯乙酸(6%，於DCM中，24mL)溶液。將混合物於25℃下攪拌0.5h。反應用吡啶(2mL)淬滅並將反應混合物濃縮以得到殘餘物，其可藉由管柱層析法在矽膠上(DCM/MeOH=10/1至5/1)純化以得到呈白色發泡體之化合物5c(856mg,1.62mmol，產率70.9%)。

步驟3：製備化合物5e

在化合物5c(380mg,0.70mmol)於CH₃CN(12.0mL)中之溶液中，添加4Å分子篩(0.5g)，所得之混合物於25℃下攪拌10分鐘。然後添加1H過氯酸咪唑(IMP,356.7mg,2.1mmol,3.0eq)並且在DMT-3'-O-TBDMS-G(iBu)-CE亞磷醯胺2d((J.Am.Chem.Soc.2001,123,8165-8176),811.6mg,0.84mmol,1.2eq)添加之前，將該混合物額外攪拌10分鐘。將混合物於25℃下攪拌1h以得到化合物5d之溶液(於CH₃CN中之溶液)，然後將N,N-二甲基-N'-(5-亞硫烷基-1,2,4-二噻唑-3-基)甲脒(DDTT,715.7mg,3.49mmol,5eq.)於25℃下添加至上述反應混合物中並在相同溫度下攪拌1h。過濾反應 混合物，並將濾液在減壓下濃縮以得到殘餘物，其藉由製備級HPLC(H₂O-CH₃CN)純化以得到呈白色固體之化合物5e(130.0mg,0.125mmol，兩步驟之產率為18.0%)。ESI-MS：m/z 1036.1[M+H]⁺。

步驟4：製備化合物5f

在化合物5e(130.0mg,0.125mmol)於吡啶(24mL)中之溶液中，於25℃下添加2-氯-5,5-二甲基-1,3,2-二氧雜磷2-氧化物(DMOCP,69.5mg,0.38mmol,3.0eq)，將混合物於25℃下攪拌1h以得到化合物5f(127.7mg，0.125mmol，產率100%，於吡啶中之溶液)，其無需進一步純化即用於下一步驟。

步驟5：製備化合物5ga+化合物5gb

在化合物5f(127.7mg,0.125mmol)於吡啶中之溶液中，於25℃下添加3H-苯并[c][1,2]二硫醇-3-酮(211.1mg，1.26mmol，10eq)，並將所得之混合物於25℃下攪拌1h。過濾反應混合物並將濾液在減壓下濃縮以得到殘餘物，其藉由製備級HPLC(水(0.225%甲酸)-CH₃CN)純化以得到呈白色固體之化合物5ga(22.0mg，0.021mmol，兩步驟之產率為18.1%)與呈白色固體之化合物5gb(55.0mg，0.052mmol，兩步驟之產率為45.2%)。ESI-MS：m/z 1050.2[M+H]⁺,525.8[M/2+H]⁺(化合物5ga)。ESI-MS：m/z 1050.2[M+H]⁺,525.6[M/2+H]⁺(化合物5gb)。

步驟6：製備化合物5hb

將化合物5gb(55.0mg,0.052mmol,1.00eq)用甲胺(3.00mL，35%於EtOH中)之溶液處理並將混合物於25℃下反應12h。將反應混合物在減壓下濃縮以得到化合物5hb(39.0mg，0.047mmol，產率90.5%)，其無需進一步純化即用於下一步驟。ESI-MS：m/z 823.1[M+H]⁺。

步驟7：製備化合物4，銨鹽

在化合物5hb(44.0mg,0.053mmol)於吡啶(13.0mL)中之溶液中，於25℃下添加Et₃N(324.7mg,3.2mmol,60eq)與三氫氟化三乙胺(258.6mg,1.6mmol,30eq)並將混合物於50℃下攪拌5h，然後於15℃下添加異丙氧基三甲基矽烷(707.4mg,5.3mmol,100eq)並攪拌1h。於15℃下濃縮混合物並將殘餘物藉由製備級HPLC(水(0.05% NH₄OH v/v)-CH₃CN)純化以得到呈白色固體之化合物4(呈其銨鹽，6.0mg，0.008mmol，產率15.8%)。¹H NMR(400MHz,D₂O)δ 8.33(s,1H),8.25(s,1H),7.85(s,1H),6.45(d,J=14.3Hz,1H),5.92(d,J=8.5Hz,1H),5.77(s,1H),5.51(s,0.5H),5.38(s,0.5H),5.23(d,J=21.5Hz,1H),4.53-4.42(m,5H),4.10(d,J=11.3Hz,1H),3.99(d,J=12.8Hz,1H)；¹⁹F NMR(376MHz,D₂O)δ-122.94(br,s,1F)，³¹P NMR(162MHz,D₂O)δ 55.99(brs,1P),51.19(brs,1P)；ESI-MS：m/z 708.9[M+H]⁺。

步驟6a：製備化合物5ha

將化合物5ga(13.0mg,0.012mmol,1.00eq)用甲胺(1.00mL，35%於EtOH中)之溶液處理且將溶液於25℃下反應12h。將反應混合物在減壓下濃縮以得到化合物5ha(9.0mg，0.011mmol，產率88.4%)，其無需進一步純化即用於下一步驟。ESI-MS：m/z 823.3[M+H]⁺。

步驟7a：製備化合物5，銨鹽

在化合物5ha(39.0mg,0.047mmol)於吡啶(7.0mL)中之溶液中，於25℃下添加Et₃N(287.8mg,2.84mmol,60eq)與三氫氟化三乙胺(229.2mg,1.42mmol,30eq)並將混合物於50℃下攪拌5h，然後於15℃下添加異丙氧基三甲基矽烷(627.0mg,4.74mmol,100 eq)並攪拌1h。於15℃下濃縮混合物並將該殘餘物藉由製備級HPLC(水(0.05% NH₄OH v/v)-CH₃CN)純化以得到呈白色固體之化合物5(呈其銨鹽，6.60mg，0.009mmol，產率19.6%)。¹H NMR(400MHz,D₂O)δ 8.54(s,1H),8.25(s,1H),7.84(s,1H),6.46(d,J=13.8Hz,1H),5.94(d,J=8.3Hz,1H),5.81-5.75(m,1H),5.54(d,J=2.8Hz,0.5H),5.41(d,J=3.0Hz,0.5H),5.30-5.23(m,1H),4.54-4.40(m,5H),4.09-4.04(m,2H)；¹⁹F NMR(376MHz,D₂O)δ-201.92(brs,1F)；³¹P NMR(162MHz,D₂O)δ 55.97(s,1P),53.90(brs,1P)，MS：m/z 708.9[M+H]⁺。

步驟8：製備化合物4，鈉鹽

將Dowex 50W×8,200-400(3mL，H型)添加至燒杯中並用去離子水洗滌(15mL)。接著向該樹脂添加15% H₂SO₄(於去離子水中)，將混合物輕輕地攪拌5分鐘並傾析(10mL)。用15% H₂SO₄(於去離子水中)把樹脂轉移至管柱中並用15% H₂SO₄(至少4CV)洗滌，然後用去離子水洗滌直到其呈中性。將樹脂轉移回燒杯中，然後添加15% NaOH(於去離子水溶液中)，且將混合物輕輕地攪拌5分鐘，並傾析(1x)。將樹脂轉移至管柱中並用15% NaOH(於水中，至少4CV)洗滌，然後用去離子水洗滌直到其呈中性。將化合物4，銨鹽(6.9mg)溶解在最少量去離子水中，然後加至管柱的頂端，然後用去離子水洗提。將CDN基於UV之適當餾份倒在一起並經冷凍乾燥以得到化合物4(6.45mg)之鈉鹽型式。¹H NMR(400MHz,D₂O)δ 8.41(s,1H),8.12(s,1H),7.73(s,1H),6.35(d,J=13.6Hz,1H),5.83(d,J=8.4Hz,1H),5.72-5.68(m,1H),5.43(d,J=2.8Hz,0.5 H),5.30(d,J=2.8Hz,0.5 H),5.18-5.10(m,1H),4.65-4.29(m,5H),4.05-3.93(m,2H)；¹⁹F NMR(376MHz,D₂O)δ-201.76；³¹P NMR(162MHz,D₂O)δ 55.88,53.91。

步驟9：製備化合物5，鈉鹽

將Dowex 50W×8,200-400(3mL，H型)添加至燒杯中並用去離子水洗滌(15mL)。接著向該樹脂添加15% H₂SO₄(於去離子水中)，將混合物輕輕地攪拌5分鐘並傾析(10mL)。用15% H₂SO₄(於去離子水中)把樹脂轉移至管柱中並用15% H₂SO₄(至少4CV)洗滌，然後用去離子水洗滌直到其呈中性。將樹脂轉移回燒杯中，然後添加15% NaOH(於去離子水溶液中)，且將混合物輕輕地攪拌5分鐘，並傾析(1x)。將樹脂轉移至管柱中並用15% NaOH(於水中，至少4CV)洗滌，然後用去離子水洗滌直到其呈中性。將化合物5，銨鹽(6.0mg)溶解在最少量去離子水中，然後加至管柱的頂端，然後用去離子水洗提。將CDN基於UV之適當餾份倒在一起並經冷凍乾燥以得到化合物5(5.12mg)之鈉鹽型式。¹H NMR(400MHz,D₂O)δ 8.15(s,1H),8.12(s,1H),7.72(s,1H),6.34(d,J=14.4Hz,1H),5.81(d,J=8Hz,1H),5.65-5.58(m,1H),5.45(d,J=3.2Hz,0.5H),5.32(d,J=3.6Hz,0.5H),5.20-5.05(m,1H),4.65-4.29(m,5H),3.90-4.04(m,2H)；¹⁹F NMR(376MHz,D₂O)δ-201.92；³¹P NMR(162MHz,D₂O)δ 55.74,53.23；MS：m/z 709.00[M+H]+。

實例6

步驟1：製備化合物6d

將核苷化合物6a(1.63g,2.12mmol)與無水甲苯：無水乙腈(1：1,v/v,3×20mL)之混合物共蒸發，然後溶解於無水乙腈(50mL)與亞磷醯胺6b(2.1gr,2.12mmol)中。將4Å分子篩粉末(4.0gr)添加至此混合物中。所得之非均質混合物以氬氣鼓泡4分鐘。然後在此混合物於rt下攪拌30分鐘之後，於rt下添加0.45M四唑(於乙腈中，30mL,12.72mmol)。在混合物攪拌45分鐘之後，過濾反應混合物然後用飽和NaHCO₃水溶液(1×20mL)與飽和NaCl水溶液(1×20mL)洗滌，以MgSO₄乾燥並將濾液蒸發至乾燥以得到亞磷酸鹽化合物6c，其不經進一步純化直接用於下一步驟。

將粗製亞磷酸鹽化合物6c溶解於無水CH₂Cl₂(40mL)中，然後將4Å分子篩粉末(4.0gr)添加至此混合物中。所得之非均質混合物以氬氣鼓泡4分鐘。在rt下將此混合物攪拌30分鐘之後，於0℃下經5分鐘緩慢地添加硼烷-二甲基硫醚複合物溶液(2.0M於THF中，BH₃-DMS，3.49mL，6.99mmol)。在反應於rt下攪拌20分鐘之後，快速過濾反應混合物，然後以EtOAc(120mL)稀釋，用水(20mL)淬滅。分離各相並將有機相用水(1×20mL)、飽和NaCl水溶液(1×20mL)洗滌，然後將水相用EtOAc(1×20mL)反萃取。將合併之有機相蒸發至乾燥，並將所得之粗製材料藉由快速管柱層析法在矽膠(0至85%的EtOAc，於己烷中，v/v)上純化，以得到硼烷磷酸酯二聚物6d(980mg)。ESI-MS：m/z 1670.30[M+H]⁺。

步驟2：製備化合物6e

將Di-DMTr-硼烷磷酸酯二聚物6d(2.3gr,1.37mmol)溶解於80% aq.AcOH：CH₃CN(3：1,v/v,13mL)中。在反應混合物於37℃下攪拌16h之後，用EtOAc(70mL)稀釋混合物，然後用飽和NaHCO₃水溶液(3×20mL)與飽和NaCl水溶液(1×15mL)依序洗滌。將有機相蒸發至乾燥，並將所得到之粗製殘餘物藉由快速管柱層析法在矽膠(20至100%丙酮於己烷中，v/v)上純化，以得到二元醇-硼烷磷酸酯二聚物6e(0.9g)。ESI-MS：m/z 1066.45[M+H]⁺。

步驟3：製備化合物6f

將二元醇核苷化合物6e(0.55g,0.516mmol)與無水甲苯：無水乙腈(1：1,v/v,3×20mL)之混合物共蒸發，然後溶解於無水乙腈(20mL)中並將4Å分子篩粉末(1.0g)添加至此混合物中。將所得之非均質混合物以氬氣鼓泡4分鐘。然後在此混合物於rt下攪拌30分鐘之後，於rt下添加0.45M四唑(於乙腈中，7mL,3.09mmol)，將反應攪拌75分鐘之後，過濾混合物，並將濾液以飽和NaHCO₃水溶液(1×20mL)與飽和NaCl水溶液(1×20mL)依序洗滌，並以MgSO₄(攪拌5分鐘後接著過濾)乾燥並蒸發至乾燥以得到化合物6f。所得之混合物不經進一步純化直接用於下一步驟。將粗製亞磷酸鹽6f溶解於無水CH₂Cl₂(20mL)中，然後將4Å分子篩粉末(1.0g)添加至此混合物中。將所得之非均質混合物以氬氣鼓泡4分鐘。然後將此混合物於rt下攪拌30分鐘之後，於0℃下經5分鐘緩慢地添加硼烷-二甲基硫醚複合物溶液(2.0M於THF中，BH₃-DMS，0.93mL，1.84mmol)。在反應於rt下攪拌之後，將反應混合物快速過濾，然後用EtOAc(80mL)稀釋，並用水(20mL)淬滅。分開各相並將有機相用飽和NaCl水溶液(1×20mL)洗滌，然後將水相用EtOAc(1×20mL)反萃取。將合併之有機相蒸發至乾燥，所得到之粗製材料藉由快速管柱 層析法在矽膠(0至10%的MeOH，於二氯甲烷中，v/v)上純化，以得到完全經保護之環狀硼烷磷酸酯6f(480mg，純度75%)。ESI-MS：m/z 1179.73[M+H]⁺。

步驟4：製備化合物6g

將3’-矽基-G(iBu)-2’-矽基-A(Bz)-2’,3’-環狀二核苷酸-硼烷磷酸酯6f(437mg，純度約75%)溶解於aq.氨：EtOH(7mL,3：1,v/v)之混合物中。在反應混合物於50℃下攪拌16h之後，將反應混合物濃縮至乾燥並與EtOH(2×10mL)及甲苯(2×20mL)共蒸發。所得之粗製固體以二氯甲烷(40mL)洗滌並且藉由過濾收集沉澱物，以得到經二-TBS保護之環狀二聚物6g(ESI-MS：m/z 896.20[M-H]^-)，其不經進一步純化即用於下一步驟。

為移除TBS基團，將環狀二聚物化合物6g(350mg，粗製品)溶解於無水DMSO(5.5mL)中並向其中添加三氫氟化三乙胺(HF.3TEA,2.8mL與三乙胺0.6mL)。在反應混合物於50℃下攪拌3.5h之後，其用三乙胺中和並藉由製備級HPLC(緩衝液A：50mM乙酸三乙銨於H₂O中；緩衝液B：50mM乙酸三乙銨於CH₃CN中；梯度：0至30%的B，歷經30分鐘；流速為24mL/min)以得到呈白色固體之硼烷磷酸酯6i(9mg)與6j(4mg)(呈其三乙銨鹽型式)的兩個異構物。ESI-MS：m/z 668.6[M-H]^-。

步驟5：製備化合物7及化合物8(呈鈉鹽)。

將Dowex 50W×8,200-400(3mL，H型)添加至燒杯中並用去離子水洗滌(20mL)。接著向該樹脂添加15% H₂SO₄(於去離子水中)，將混合物輕輕地攪拌5分鐘並傾析(10mL)。用15% H₂SO₄(於去離子水中)把樹脂轉移至管柱中並用15% H₂SO₄(至少4CV)洗滌，然後用去離子水洗滌直到其呈中性。將樹脂轉移回燒杯中，然後添加15% NaOH(於去離子水溶液中)，且將混合物輕輕地攪 拌5分鐘，並傾析(1x)。將樹脂轉移至管柱中並用15% NaOH(於水中，至少4CV)洗滌，然後用去離子水洗滌直到其呈中性。將環狀硼烷磷酸酯的兩個異構物之三乙銨型式6i(9mg)與6j(4mg)溶解於最少量的去離子水中，然後加至管柱的頂端，然後用去離子水洗提。將CDN基於UV之適當餾份倒在一起並經冷凍乾燥以分別得到化合物7(8.2mg)與化合物8(3.3mg)之鈉鹽型式。

化合物7： ¹H NMR(400MHz,D₂O)：δ 8.15(s,1H),8.09(s,1H),7.99(s,1H),6.01(s,1H),5.93(d,J=8.7Hz,1H),4.98-4.93(m,1H),4.87-4.80(m,1H),4.74-4.60(m,1H),4.42-4.37(m,2H),4.31(s,1H),4.24-4.15(m,2H),3.92-3.82(m,2H),0.5至-0.5(非常寬峰，6H)；³¹P NMR(162MHz,D₂O)94.70(非常寬峰)；ESI-MS：m/z 668.6[M-1]^-。

化合物8： ¹H NMR(400MHz,D₂O)：δ 8.12(s,1H),8.10(s,1H),7.95(s,1H),5.99(d,J=2.4Hz,1H),5.92(d,J=8.4Hz,1H),5.22-5.15(m,1H),4.83-4.76(m,1H),4.75-4.71(m,1H),4.50(d,J=4Hz,1H),4.40-4.30(m,1H),4.31(s,1H),4.25-4.18(m,1H),4.15-4.10(m,1H),4.02-3.96(m,1H),3.90-3.84(m,1H),-0.2至0.9(非常寬峰，6H)；³¹P NMR(162MHz,D₂O)δ 93.75(非常寬峰)；ESI-MS：m/z：668.7[M-1]^-。

實例7

化合物9 化合物10

步驟1：製備化合物7c

將核苷化合物1f(2.3g,3.43mmol)與無水甲苯/無水乙腈(1：1,v/v,3×50mL)之混合物共蒸發，然後溶於無水乙腈(80mL)中。將4Å分子篩粉末(4.0g)與四唑(於乙腈中，61mL,0.45M,27.44mmol)添加至反應混合物中。將所得到之非均質混合物以Ar_(g)鼓泡吹掃4分鐘。然後在rt下攪拌10分鐘之後，於rt下添加亞醯胺7a(3.0g,3.43mmol,ChemGenes Corp.)於無水乙腈(15mL)中之溶液。在rt下攪拌1h 45分鐘之後，將反應混合物用乙酸乙酯(250mL)稀釋，過濾並將濾液用飽和NaHCO₃(1×40mL)水溶液與鹽水(1×40mL)洗滌。然後將濾液乾燥(MgSO₄)，攪拌5分鐘，過濾並將濾液濃縮至乾燥，以得到亞磷酸鹽7b(ESI-MS：m/z 1444.45[M+1]⁺ _-)。

粗製的亞磷酸鹽化合物7b無需進一步純化即用在下一步驟中。將粗製化合物7b溶解於無水吡啶(100mL)中並於rt下添加(E)-N,N-二甲基-N'-(3-硫酮基-3H-1,2,4-二噻唑-5-基)甲脒(DDTT,2.12 g,10.29mmol)。在rt下攪拌1h之後，將反應混合物用乙酸乙酯(250mL)稀釋，用飽和NaHCO₃(1×40mL)水溶液與鹽水(1×40mL)依序洗滌，並濃縮至乾燥。用乙酸乙酯(1×20mL)萃取水相。將合併之有機相於減壓下濃縮至乾燥，以得到粗製材料，其藉由快速管柱層析法在矽膠(0至8% MeOH，於CH₂Cl₂中，v/v)上純化以得到二-DMTr-硫代磷酸酯二聚物7c(4.6g，~92%，純度約90%)。ESI-MS：m/z 1476.90[M+H]⁺。

步驟2：製備化合物7d

將二聚物7c(4.5g,3.05mmol)溶解於80% AcOH水溶液：乙腈(90mL,8：2,v/v)中。在反應混合物於45℃下攪拌20h之後，用乙酸乙酯(400mL)稀釋該混合物，然後用飽和NaHCO₃(3×80mL)水溶液與鹽水(1×50mL)依序洗滌。分離水相並用乙酸乙酯(1×20mL)萃取水相。將合併之有機相於減壓下濃縮至乾燥，並將所得到之粗製殘餘物藉由快速管柱層析法在矽膠(0至15% MeOH，於CH₂Cl₂中，v/v)上純化以得到二聚物7d(1.65g,63%)。ESI-MS：m/z 872.10[M+H]⁺。

步驟3：製備化合物7f

二聚物化合物7d(275mg,0.315mmol)與無水甲苯/無水乙腈(1：1,v/v,3×10mL)之混合物共蒸發，然後溶解於無水乙腈中(20mL，用超音波處理5分鐘，以使cpd 7d完全溶解)。然後添加4Å分子篩粉末(0.6g)與四唑(於乙腈中，5.6mL，0.45M，2.52mmol)。將所得之非均質混合物以Ar_(g)鼓泡吹掃4分鐘。於rt下將反應物攪拌10分鐘之後，將2-氰基乙基N,N-二異丙基氯亞磷醯胺(142mg,0.473mmol,1.5eq)於rt下在20分鐘內分成五份加入混合物中，在rt下攪拌90分鐘之後，將反應混合物用乙酸乙酯(60mL)稀釋，過濾並將濾液以飽和NaHCO₃(1×20mL)水溶液與鹽水(1×20mL)依 序洗滌。然後將濾液乾燥(MgSO₄)同時攪拌5分鐘，過濾並將濾液於減壓下濃縮至乾燥，以得到化合物7e(ESI-MS：m/z 971.10[M+1]⁺ _-)。所得之殘餘物無需進一步純化即用在下一步驟中。

將粗製化合物7e溶解於無水二氯甲烷(25mL)中，並向其添加4Å分子篩粉末(0.5g)。將所得之非均質混合物以Ar_(g)鼓泡吹掃4分鐘。在rt下攪拌混合物10分鐘時，將混合物冷卻至0℃。並於0℃下經5分鐘緩慢地添加硼烷二甲基硫醚複合物溶液(2.0M，於THF中，BH₃-DMS，550μL，3.5eq)，然後將反應混合物於rt下攪拌12分鐘。將混合物快速過濾，用乙酸乙酯(80mL)稀釋，並用水(20mL)淬滅。將有機相用鹽水(1×20mL)洗滌，且水層用乙酸乙酯(1×20mL)萃取。將合併之有機層於減壓下濃縮至乾燥，以得到粗製殘餘物，其藉由快速管柱層析法在矽膠(0至10% MeOH，於二氯甲烷中，v/v)上純化以得到非鏡像異構物7f(130mg，於兩步驟純度為~42%)之混合物。ESI-MS：m/z 984.95[M+H]⁺。

步驟4：製備化合物7g及化合物7h

將非鏡像異構物7f(130mg)之混合物溶解於氨/乙醇(7mL,3：1,v/v)水溶液之混合物中。在反應物於50℃下攪拌18h之後，將反應混合物濃縮至乾燥並與乙醇(2×10mL)及甲苯(2×20mL)共蒸發。將所得到之粗製固體用二氯甲烷(15mL)洗滌，經由過濾收集，並藉由製備級逆相HPLC(管柱：Synergi 4μ,Hydro RP,250mm×30mm，移動相：緩衝液A：50mM乙酸三乙銨於H₂O中；緩衝液B：50mM乙酸三乙銨於CH₃CN中，梯度：0至30%的B，歷經30分鐘，流速24mL/min)純化以得到第一次要的硼烷硫代磷酸酯異構物7g(8.7mg)與第二主要的硼烷硫代磷酸酯異構物7h(13.1mg)(呈乙酸三乙銨(TEAA)鹽型式)。ESI-MS：m/z：703.1[M-1]^-。

步驟5：製備化合物9及化合物10

將Dowex 50W×8,200-400(5mL，H型)添加至燒杯中並用去離子水洗滌(30mL)。接著向樹脂添加15% H₂SO₄(於去離子水中)，將混合物輕輕地攪拌5分鐘，然後傾析(30mL)。用15% H₂SO₄(於去離子水中)把樹脂轉移至管柱中並用15% H₂SO₄(至少4CV)洗滌，然後用去離子水洗滌直到達到中性pH 7。將該樹脂轉移回燒杯中，然後添加15% NaOH(於去離子水中)，將混合物輕輕地攪拌5分鐘，然後傾析(1x)。將該樹脂轉移至管柱中並用15% NaOH(於水中，至少4CV)洗滌，然後用去離子水洗滌直到達到中性pH 7。將各硼烷硫代磷酸酯異構物7g(8.7mg)與7h(13.1mg)TEAA鹽溶解在最少量的去離子水中，加至管柱的頂端，然後用去離子水洗提。將化合物9與10之適當餾份合併並經冷凍乾燥以分別得到化合物10(7.8mg)與化合物9(12.4mg)(呈其鈉鹽)。

化合物9(主要的異購物)：¹H NMR(400MHz,D₂O)：δ 8.07(s,1H),7.97(s,1H),7.86(s,1H),6.25(d,J=16.4Hz,1H),5.86(d,J=8.4Hz,1H),5.52(d,J=3.6Hz,0.5H),5.40(d,J=3.6Hz,0.5H)5.16-5.19(m,1H),4.83-4.89(m,1H),4.41-4.45(m,2H),4.25-4.32(m,2H),4.06-4.17(m,2H),3.88-3.94(m,1H),3.46(s,3H),-0.1至0.65(非常寬峰，3H)；³¹P NMR(162MHz,D₂O)：δ 94-95(非常寬峰，硼烷磷酸酯),52.59(硫代磷酸酯)；¹⁹F NMR(379MHz,D₂O)：δ-201.7(多重峰)；ESI-MS：m/z：703.1[M-1]^-。

化合物10(次要的異購物)：¹H NMR(400MHz,D₂O)：δ 8.18(s,1H),8.13(s,1H),8.07(s,1H),6.31(d,J=15.6Hz,1H),5.91(d,J=8.4Hz,1H),5.65(d,J=2.8Hz,0.5H),5.50(d,J=2.8Hz,0.5H)5.07-5.30(m,1H),4.40-4.48(m,1H),4.20-4.35(m,2H),4.10-4.14(m,2H),3.96-4.00(m,2H),3.83-3.88(m,1H),3.48(s,3H),0.2至0.8(非常寬峰，3H)；³¹P NMR(162MHz,D₂O)：δ 94-95 (非常寬峰，硼烷磷酸酯，57.79(硫代磷酸酯)；¹⁹F NMR(379MHz,D₂O)：δ-202.4(多重峰)；ESI-MS：m/z：703.1[M-1]^-。

實例8

步驟1：製備化合物8a

在化合物7b(8g,5.538mmol)於CH₂Cl₂(80mL)中之溶液中，添加4Å分子篩粉末(8g)並將所得之非均質混合物以氬氣鼓泡吹掃4分鐘。在rt下攪拌30分鐘之後，於0℃下經5分鐘緩慢地添加硼烷二甲基硫醚複合物溶液(2.0M，於THF中，BH₃-DMS,9.138mL,18.277mmol)，於rt下將反應攪拌2h，然後將反應混合物快速過濾，用CH₂Cl₂(40mL)稀釋並用水(50mL)淬滅。分離各相並將有機層接續地用水(1×50mL)、鹽水(1×50mL)洗滌，然後將水層用CH₂Cl₂(1×50mL)反萃取。將合併之有機層於減壓下濃縮至乾燥，並將所得之粗製材料藉由快速管柱層析法在矽膠(石油醚/EtOAc=1/0~0/1)上純化以給出呈淡黃色油之化合物8a(7.5g,5.143mmol)。

步驟2：製備化合物8b

將化合物8a(7.5g,5.143mmol)添加至CH₃CN(20mL)於80%乙酸(60mL)水性溶液中之溶液中(CH₃CN/乙酸水溶液=1/3，乙酸係48mL、H₂O係12mL、CH₃CN係20mL)。在反應混 合物於25℃下攪拌整夜之後，添加三乙基矽烷並將反應物於25℃下額外攪拌1h。然後將反應混合物快速過濾，用EtOAc(50mL)稀釋並用水(20mL)淬滅。用飽和NaHCO₃水溶液將pH值調整到7至8。分離各相並將有機層接續地用水(1×100mL)、鹽水(1×100mL)洗滌，然後在減壓下濃縮至乾燥。將殘餘物藉由快速管柱層析法在矽膠(石油醚/EtOAc=0/1，然後CH₂Cl₂/MeOH=1/0至20/1)上純化以給出呈白色固體之化合物8b(6.5g,7.126mmol)。ESI-MS：m/z=854.1[M+1]⁺；¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ 12.07(br d,J=13.5Hz,1H),11.56(d,J=9.7Hz,1H),11.22(br d,J=7.1Hz,1H),8.72(d,J=3.1Hz,1H),8.56-8.41(m,1H),8.27-8.18(m,1H),8.02(br d,J=6.2Hz,2H),7.65-7.60(m,1H),7.56-7.50(m,2H),6.35(br t,J=19.0Hz,1H),6.00(d,J=6.4Hz,1H),5.95(t,J=6.5Hz,1H),5.65-5.43(m,1H),5.34-5.20(m,2H),4.75-4.55(m,1H),4.16-3.97(m,6H),3.92-3.82(m,1H),3.67-3.49(m,2H),3.14(d,J=5.1Hz,3H),2.81-2.66(m,3H),1.08(br d,J=6.8Hz,6H),0.59--0.18(m,3H)；³¹P NMR(162MHz,DMSO-d₆)115.80(br s,1P)。

步驟3：製備化合物8c

將化合物8b(1g,1.096mmol)與CH₃CN(3×20mL)共蒸發並溶解於無水CH₃CN(44mL)中。然後它被添加至4Å分子篩粉末(1000mg)中並在混合物攪拌30分鐘之後，於rt下添加四唑(於CH₃CN中，0.45M，14.6mL，6eq)。所得之溶液在rt下攪拌15分鐘。然後將3-((雙(二異丙基胺基)磷基)氧基)丙腈(495.647mg,1.644mmol)於無水CH₃CN(5.0mL)中之溶液經20分鐘逐滴添加至該溶液。在攪拌混合物1h之後，於rt下將額外的四唑於CH₃CN(0.45M,9.7mL,4eq)中之溶液添加至此混合物中。將反應混合物過濾且將濾液用EtOAc(3×400mL)萃取。將合併之有機層接續地用NaHCO₃(3×200mL)水溶液、鹽水(3×200mL)洗滌，然後以無水Na₂SO₄乾 燥，過濾，並在減壓下濃縮。將殘餘物藉由快速管柱層析法在矽膠(CH₂Cl₂：MeOH 100：0至CH₂Cl₂：MeOH 90：10)上純化以得到呈白色固體之化合物8c(600mg,0.63mmol)。

步驟4：製備化合物8d

在化合物8c(600mg 0.63mmol)於CH₂Cl₂(15mL)中之溶液中，於0℃下經5分鐘緩慢添加2M硼烷-二甲基硫醚複合物於THF(1039.276μL,2.079mmol)中之溶液。反應混合物於0℃攪拌下15分鐘之後，將反應於0℃下用MeOH(20mL)淬滅，然後在減壓下濃縮。使用相同的規模重複該反應第二次。將兩個粗製批次合併並藉由快速管柱層析法在矽膠(洗提梯度：CH₂Cl₂：MeOH 100：0至CH₂Cl₂：MeOH 90：10)上純化以得到呈白色固體之化合物8d(合併批次為1g，1.035mmol)。ESI-MS：m/z=966.4[M+1]⁺。

步驟5：製備化合物11及化合物12

將化合物8d(1.0g,1.035mmol)用MeNH₂於EtOH(33%,10mL)中之溶液處理。在室溫下攪拌3h之後，將反應混合物在減壓下濃縮並藉由製備級高效液相層析(Prep HPLC條件：管柱：Phenomenex Kinetex XB-C18 150mm×30mm，5μm；條件：H₂O(A)-CH₃CN(B)；開始B：0；結束B：20；流速：25mL/分鐘)純化。收集純的餾份並經凍乾至乾燥以給出呈白色固體之粗製化合物11(0.11g,0.160mmol)與粗製化合物12(0.14g,0.204mmol)。

該粗製化合物11與12進一步藉由製備級高效液相層析(Prep HPLC條件：管柱：DuraShell 150×25mm×5um；條件：水(10mM NH₄HCO₃)(A)-CH₃CN(B)；開始B：0；結束B：15；流速：35mL/分鐘)純化。收集純的餾份並凍乾至乾燥以得到各呈白色固體之化合物11(0.08g,0.117mmol)與化合物12(0.04g,0.058mmol)。

化合物11：¹H NMR(400MHz,D₂O)δ 8.21(d,J=13.2Hz,2H),8.05(s,1H),6.36(d,J=16.3Hz,1H),5.93(d,J=8.2Hz,1H),5.73-5.55(m,1H),5.19-5.02(m,2H),4.55-4.48(m,2H),4.34-4.24(m,2H),4.16(d,J=4.4Hz,1H),4.05-3.94(m,2H),3.57(s,3H),0.76-0.13(m,3H),-0.32(br s,3H)；ESI-MS：m/z=686.9[M+1]⁺；¹⁹F NMR(376MHz,D₂O)-202.02(td,J=20.0,50.3Hz,1F)；³¹P NMR(162MHz,D₂O)δ ppm-94.42(br s,1P)。

化合物12：¹H NMR(400MHz,D₂O)δ 8.31(s,1H),8.23(s,1H),7.86(br s,1H),6.40(br d,J=15.4Hz,1H),5.89(br d,J=8.6Hz,1H),5.64-5.47(m,1H),5.35(br s,1H),5.00-4.86(m,1H),4.54-4.45(m,2H),4.38(br d,J=11.7Hz,1H),4.20(br d,J=17.0Hz,2H),4.07(br d,J=8.2Hz,1H),3.96(br d,J=10.1Hz,1H),3.53(s,3H),0.24(br s,6H)；ESI-MS：m/z=686.9[M+1]⁺；¹⁹F NMR(376MHz,D₂O)-200.77--202.57(m,1F)；³¹P NMR(162MHz,D₂O)99.68-84.67(m,1P)。

步驟6：製備化合物11鈉鹽及化合物12鈉鹽

化合物11鈉鹽。將Dowex 50W×8,200-400(H型，50g)添加至燒杯(對於45mg的cpd 11)中並用去離子水(2x)洗滌，然後將15% H₂SO₄(於去離子水中，50mL)添加至樹脂中。將混合物攪拌15分鐘並傾析(1x)。用15% H₂SO₄(於去離子水中)把樹脂轉移至管柱中並用15% H₂SO₄(至少4倍管柱體積)洗滌，然後用去離子水洗滌直到樹脂呈中性。將該樹脂轉移回燒杯中，並添加NaOH溶液(15% NaOH於水溶液中，50mL)。將混合物攪拌15分鐘並傾析(1x)。將樹脂轉移至管柱中並用15% NaOH(於水中，至少4倍管柱體積)洗滌然後用水洗滌直到其呈中性(至少4倍管柱體積)。將化合物11溶解在去離子水中(50mg，於40mL中)，並加至管柱的頂端，然後用去離子水洗提。藉由TLC(UV)偵測，化合物11 在早期餾份中自管柱洗提出來。將產物冷凍乾燥以給出呈白色固體之化合物11鈉鹽(24.3mg,0.033mmol)。ESI-MS：m/z=686.9[M+1]⁺；¹H NMR(400MHz,D₂O)δ 7.81(2 H,d,J=3.6Hz),7.71(1 H,s),5.99(1 H,d,J=15.6Hz),5.61(1 H,d,J=8.2Hz),5.16-5.32(1 H,m),4.65-4.84(2 H,m),4.19-4.28(2 H,m),3.96-4.11(2 H,m),3.88(1 H,d,J=4.2Hz),3.69-3.80(2 H,m),3.31(3 H,s),-1.07-0.45(6 H,m)；¹⁹F NMR(377MHz,D₂O)-202.06(1 F,s)；³¹P NMR(162MHz,D₂O)94.39(1 P,br s)。

化合物12鈉鹽。將Dowex 50W×8,200-400(H型，50g)添加至燒杯(對於50mg的cpd 12)中並以去離子水(2x)洗滌，然後將15% H₂SO₄(於去離子水中，50mL)添加至樹脂中。將混合物攪拌15分鐘並傾析(1x)。用15% H₂SO₄(於去離子水中)把樹脂轉移至管柱中並用15% H₂SO₄(至少4倍管柱體積)洗滌，然後用去離子水洗滌直到樹脂呈中性。將該樹脂轉移回燒杯中，並添加NaOH溶液(15% NaOH於水溶液中，50mL)。將混合物攪拌15分鐘並傾析(1x)。將樹脂轉移至管柱中並用15% NaOH(於水中，至少4倍管柱體積)洗滌然後用水洗滌直到其呈中性(至少4倍管柱體積)。將化合物12溶解在去離子水中(50mg，於40mL中)，並加至管柱的頂端，然後用去離子水洗提。藉由TLC(UV)偵測，化合物12在早期餾份中自管柱洗提出來。將產物冷凍乾燥以給出呈白色固體之化合物12 Na鹽(43.3mg,0.059mmol)。ESI-MS：m/z=686.9[M+1]⁺；¹H NMR(400MHz,D₂O)δ 8.11(s,1 H),8.06(s,1H),7.94(s,1H),6.28(d,J=16.06Hz,1H),5.89(d,J=8.53Hz,1H),5.44-5.60(m,1H),5.27(td,J=8.97,4.39Hz,1H),4.86-5.00(m,1H),4.46-4.55(m,2H),4.37(br d,J=11.80Hz,1H),4.19-4.28(m,1H),4.19-4.28(m,1H),4.15(br dd,J=11.67,2.13Hz,1H),4.02(br d,J=12.30Hz,1H),3.54(s,3H),-0.01-0.75(m,6H)；¹⁹F NMR (377MHz,D₂O)-201.59(s,1 F)；³¹P NMR(162MHz,D₂O)94.01(br s,1 P)。

實例9

步驟1：製備化合物8a

將化合物7b(10.46g,7.241mmol)溶解於無水CH₂Cl₂(100mL)中，然後將4Å分子篩粉末(4.0g)添加至此溶液中。將該非均質混合物在減壓下脫氣並以氬氣吹掃數次。將此混合物於25℃下攪拌30分鐘之後，於0℃下經5分鐘緩慢地添加硼烷二甲基硫醚複合物溶液(2.0M於THF中，BH₃-DMS，11.948mL，23.897mmol)。於25℃下將反應攪拌20分鐘之後，將反應混合物快速過濾，用CH₂Cl₂(120mL)稀釋，並用水(20mL)淬滅。將有機相接續地用水(50mL)與鹽水(50mL)洗滌。將水層用EtOAc(50mL)反萃取。將合併之有機層於減壓下濃縮，並將所得之粗製材料藉由快速管柱層析法在矽膠(CH₂Cl₂/MeOH=100/1至10/1)上純化以給出呈黃色固體之化合物8a(11.1g,7.612mmol)。

步驟2：製備化合物8b

將化合物8a(11.1g,7.612mmol)溶解於80% AcOH/CH₃CN/Et₃SiH水溶液(3/1/1,v/v,200mL)中。在混合物於37℃下攪拌16h之後，將反應混合物用EtOAc(500mL)稀釋，然後用飽和NaHCO₃水溶液中和。將有機層接續地用水(500mL)與鹽水(2×250mL)洗滌，然後以Na₂SO₄乾燥，過濾，並將濾液蒸發至乾燥以給出殘餘物。將殘餘物藉由快速管柱層析法在矽膠(CH₂Cl₂/MeOH=100/1至10/1)上純化以給出呈白色發泡體之化合物8b(3.6g,4.218mmol)。ESI-MS：m/z 854.2[M+H]⁺；¹⁹F NMR(376MHz,CD₃CN)δ-203.09(s,1F),-203.36(s,1F)；³¹P NMR(162MHz,CD₃CN)δ 116.95-116.34(m,1P)。

步驟3：製備化合物8c

將化合物8b(1.5g,1.757mmol)與無水甲苯/CH₃CN(1：1,v/v,3×20mL)之混合物共蒸發以給出白色固體。將固體溶解於無水CH₃CN(80mL)中，然後將4Å分子篩粉末(2.0g)添加至此溶液中。在混合物於25℃下攪拌30分鐘之後，將四唑於CH₃CN(0.45M,31.242mL,14.059mmol)中之溶液於25℃下添加至該溶液，讓反應混合物於25℃下攪拌20分鐘，將2-氰基乙氧基雙-(N,N-二異丙基胺基)膦(794.519mg,2.636mmol)經20分鐘(分成五份)添加至該溶液中。在攪拌60分鐘之後，將另一部分的四唑於CH₃CN(0.45M,10mL)中之溶液添加至此溶液中。在攪拌另1h之後，將反應物用EtOAc(100mL)稀釋並過濾。將有機層用飽和NaHCO₃(50mL)水溶液，鹽水(50mL)洗滌，以MgSO₄(在攪拌5分鐘之後接著過濾)乾燥，並將濾液蒸發至乾燥以給出呈白色固體之化合物8c(1.76g，粗製)。所得之固體不經進一步純化直接用於下一步驟。步驟3係使用相同的規模重複該反應第二次。

步驟4：製備化合物9a及9b

在化合物8c(1.76g,1.848mmol)於MeCN(30mL)中之溶液中，於25℃下添加3H-苯并[c][1,2]二硫醇-3-酮1,1-二氧化物(1.85g,9.238mmol)，在25℃下攪拌1h之後，將反應混合物過濾，並將所得之塊體用CH₂Cl₂/MeOH(10/1,20mL×3)洗滌。將合併的濾液在減壓下濃縮以給出殘餘物。將殘餘物藉由快速管柱層析法在矽膠(CH₂Cl₂/MeOH=100/1至10/1)上純化以給出呈黃色發泡體之化合物9a(652mg)與呈黃色發泡體之化合物9b(660mg)。

將化合物9a藉由製備級逆相HPLC(管柱：Phenomenex Gemini C18 250×50 10μm；移動相：水(10mM NH₄HCO₃)-ACN，開始B：30；結束B：60；流量：25mL/min；梯度時間：15分鐘)再純化以給出呈白色固體之化合物9a(225mg,0.229mmol)。化合物9b藉由製備級逆相HPLC(管柱：Waters Xbridge 150×25 5μm；移動相：水(10mM NH₄HCO₃)-ACN，開始B：37；結束：67；流速：25mL/min；梯度時間：8分鐘)再純化以給出呈白色固體之9b(351mg，0.356mmol，產率19.294%)。ESI-MS：m/z 985.5[M+H]⁺。

步驟5：製備化合物13，銨鹽

將化合物9a(100mg,0.102mmol)以MeNH₂(33%，於EtOH中，5mL)處理並於25℃下攪拌12h。反應混合物在減壓下濃縮以給出殘餘物。將殘餘物藉由製備級逆相HPLC(管柱：Agela Durashell C18 150×25 5μm；移動相：水(10mM NH₄HCO₃)-ACN，開始B：0，結束B：15%，流速：35mL/min，梯度時間：10分鐘)純化以給出呈白色固體之化合物13銨鹽(56mg,0.08mmol)。ESI-MS：m/z 704.8[M+H]⁺。¹H NMR(400MHz,D₂O)δ 8.30(br,s,1H),7.93(br s,2H),6.41(br,d,J=15.8Hz,1H),5.98-5.68(m,2H),5.57(br,s,1H),5.24-4.95(m,1H),4.62-4.35(m,3H),4.29-4.12(m, 3H),4.02(br d,J=9.3Hz,1H),3.60(s,3H),-0.48(br,s,3H)；¹⁹F NMR(376MHz,D₂O)-199.64--201.37(m,1F)；³¹P NMR(162MHz,D₂O)91.37(s,1P),91.31(s,1P),90.52(s,1P),89.94(s,1P),52.36(s,1P),52.26(s,1P)。

步驟6：製備化合物13鈉鹽

將Dowex 50W×8,200-400(H型，50g)添加至燒杯(對於56mg的cpd 13)中並用去離子水(2x)洗滌，然後將15% H₂SO₄(於去離子水中，50mL)添加至樹脂中。將混合物攪拌15分鐘並傾析(1x)。用15% H₂SO₄(於去離子水中)把樹脂轉移至管柱中並用15% H₂SO₄(至少4倍管柱體積)洗滌，然後用去離子水洗滌直到樹脂呈中性。將該樹脂轉移回燒杯中，並添加NaOH溶液(15% NaOH於水溶液中，50mL)。將混合物攪拌15分鐘並傾析(1x)。將樹脂轉移至管柱中並用15% NaOH(於水中，至少4倍管柱體積)洗滌然後用水洗滌直到其呈中性(至少4倍管柱體積)。將化合物12溶解在去離子水中(50mg，於40mL中)，並加至管柱的頂端，然後用去離子水洗提。藉由TLC(UV)偵測，化合物12在早期餾份中自管柱洗提出來。將化合物13溶解在去離子水中(56mg於30mL中)，並加至管柱的頂端，然後用去離子水洗提。藉由TLC(UV)偵測，產物在早期餾份中自管柱洗提出來。將產物冷凍乾燥以得到呈白色固體之化合物13鈉鹽(45.4mg,0.064mmol)。¹H NMR(400MHz,D₂O)δ 8.25(s,1H),8.21(s,1H),7.95(s,1H),6.42(d,J=14.8Hz,1H),5.91-5.84(m,1.5H),5.76(d,J=3.8Hz,0.5H),5.60-5.51(m,1H),5.19-5.04(m,1H),4.61-4.53(m,2H),4.52-4.44(m,1H),4.27-4.18(m,3H),4.07(dd,J=4.0,12.0Hz,1H),3.60(s,3H),0.47--0.89(m,3H)；¹⁹F NMR(377MHz,D₂O)-201.93(s,1F)；³¹P NMR(162MHz,D₂O)δ 92.47(br dd,J=26.4,73.4Hz,1P),91.98(s,1P),91.71(s, 1P),91.24(s,1P),91.19(s,1P),91.10(s,1P),90.97(s,1P),52.78(s,1P),52.64(s,1P)；ESI-MS：m/z 704.8[M+H]⁺。

步驟7：製備化合物9c

在化合物9b(311mg,0.316mmol)於MeCN/EtOH(1/1,5mL)中之溶液中，添加三級丁基胺(5mL)。在攪拌2h之後，將反應混合物在減壓下濃縮以給出殘餘物。將殘餘物藉由製備級逆相HPLC(管柱：Waters Xbridge 150×25 5μm；移動相：水(10mM NH₄HCO₃)-ACN，開始B：8；結束B：38；流速：25mL/min；梯度時間：8分鐘)純化以給出呈白色固體之化合物9c(243mg,0.277mmol)。

步驟8：製備化合物14銨鹽

將化合物9c(243mg,0.277mmol)用MeNH₂(33%，於EtOH中，10mL)處理並於25℃下攪拌12h。接著將反應混合物在減壓下濃縮以給出殘餘物。將殘餘物藉由製備級逆相HPLC(管柱：Agela Durashell C18 150×25 5μm；移動相：水(10mM NH₄HCO₃)-ACN，開始B：0，結束B：15%，流速：35mL/min，梯度時間：10分鐘)純化以得到呈白色固體之化合物14銨鹽(125mg,0.177mmol)。¹H NMR(400MHz,D₂O)δ 8.23(d,J=2.5Hz,2H),8.01(s,1H),6.43(d,J=15.1Hz,1H),5.95-5.76(m,2H),5.56(dt,J=4.3,8.9Hz,1H),5.21-5.05(m,1H),4.64-4.46(m,3H),4.33-4.15(m,4H),3.56(s,3H),0.96--0.39(m,3H)；¹⁹F NMR(377MHz,D₂O)δ-201.77(s,1F)；³¹P NMR(162MHz,D₂O)δ 93.50(s,1P),92.44(s,1P),52.51(s,1P)；ESI-MS：m/z 704.8[M+H]⁺。

步驟9：製備化合物14鈉鹽

將Dowex 50W×8,200-400(H型，50g)添加至燒杯(對於125mg的cpd 14)中並用去離子水(2x)洗滌，然後將15% H₂SO₄(於去離子水中，50mL)添加至樹脂中。將混合物攪拌15分鐘並傾析(1x)。用15% H₂SO₄(於去離子水中)把樹脂轉移至管柱中並用15% H₂SO₄(至少4倍管柱體積)洗滌，然後用去離子水洗滌直到樹脂呈中性。將該樹脂轉移回燒杯中，並添加NaOH溶液(15% NaOH於水溶液中，50mL)。將混合物攪拌15分鐘並傾析(1x)。將樹脂轉移至管柱中並用15% NaOH(於水中，至少4倍管柱體積)洗滌然後用水洗滌直到其呈中性(至少4倍管柱體積)。將化合物14溶解在去離子水中(125mg，於40mL中)，並加至管柱的頂端，然後用去離子水洗提。藉由TLC(UV)偵測，產物在早期餾份中洗提出來。將產物冷凍乾燥以得到呈白色固體之化合物14鈉鹽(105.4mg,0.141mmol)。¹H NMR(400MHz,D₂O)δ 8.21(br,d,J=9.0Hz,2H),7.89(s,1H),6.38(d,J=15.3Hz,1H),5.89-5.72(m,2H),5.67(br,s,1H),5.19-5.02(m,1H),4.62-4.42(m,3H),4.27-4.17(m,3H),4.07(br d,J=9.8Hz,1H),3.57(s,3H),0.36(br,s,3H)；¹⁹F NMR(377MHz,D₂O)δ-201.25(s,1F)；³¹P NMR(162MHz,D₂O)δ 92.42-90.93(m,1P),52.35(s,1P)；ESI-MS：m/z 704.8[M+H]⁺。

實例10

步驟1：製備化合物7b

在化合物1f(5.0g,7.47mmol)於乙腈(180mL)中之溶液中，於25℃下添加1H-四唑(0.45M,132.7mL)。在25℃下攪拌該溶液10分鐘之後，逐滴添加化合物7a(6.87g,7.84mmol)於乙腈(20 mL)中之溶液。在25℃下攪拌2小時之後，該溶液無需進一步純化即用於下一步驟。

步驟2：製備化合物10a

在先前化合物7b(332.7mL,7.44mmol)於乙腈中之溶液中，於25℃下添加三級丁基過氧化氫(3.35g,37.22mmol)。在25℃下攪拌1.5h之後，將溶液用EA(100mL)稀釋並用飽和NaHCO₃(2×100mL)水溶液與鹽水(2×100mL)洗滌。將有機層接續地以無水Na₂SO₄乾燥、過濾並將溶劑在減壓下蒸發以給出呈白色固體之化合物10a(10g)。

步驟3：製備化合物10b

在化合物10a(10g，粗製)於乙腈(50mL)中之溶液中，於25℃下添加三乙基矽烷(40mL)及80%乙酸(200mL，於乙腈中)。在50℃下將溶液攪拌12小時之後，將混合物用飽和NaHCO₃水溶液中和至pH 8。將混合物用EtOAc(500mL)稀釋並將有機層接續地用飽和NaHCO₃(100mL)水溶液、鹽水(100mL)洗滌，然後在減壓下蒸發至乾燥。該水層用EtOAc(2×200mL)萃取並在減壓下蒸發至乾燥。將合併的粗製料料藉由快速管柱層析法在矽膠上(0-9% MeOH，於CH₂Cl₂中，v/v)純化以給出呈白色固體之化合物10b(5g)。ESI-MS：m/z 856.2[M+H]⁺。

步驟4：製備化合物10c

在化合物10b(1.5g,1.4mmol)於四氫呋喃(2mL)與乙腈(75mL)中之溶液中，於25℃下添加1H-四唑(0.45M,15.58mL,7.01mmol)。然後於25℃下添加3-((雙(二異丙基胺基)膦基)氧基)丙腈(845.34mg,2.8mmol)於乙腈(5mL)中之溶液。在25℃下攪拌1.5h之後，將溶液用飽和NaHCO₃(50mL)水溶液、鹽水(50mL)洗滌並在 減壓下蒸發至乾燥以給出呈黃色固體之化合物10c(1.8g)，其無需進一步純化即用於下一步驟。ESI-MS：m/z 955.5[M+H]⁺。

製備化合物15

步驟5：製備化合物10d+10e

在化合物10c(1.5g,1.57mmol)於DCM(100mL)中之溶液中，於0℃下以2分鐘添加硼烷二甲基硫醚(2.36mL,4.71mmol)。在25℃下將混合物攪拌15分鐘之後，添加水(30mL)。將所得之溶液過濾並且將濾液在減壓下濃縮以給出黃色固體。將固體用DCM(100mL)稀釋並將有機層接續地用水(2×100mL)、鹽水(3×100mL)洗滌並在減壓下濃縮以給出殘餘物。將粗製固體藉由快速管柱層析法在矽膠上(0至9% MeOH，於CH₂Cl₂中，v/v)純化以給出呈黃色固體之化合物10d與10e(500mg，粗製)的混合物。ESI-MS：m/z 969.3[M+H]⁺

步驟6：製備化合物化合物15

將化合物10d與10e(500mg，粗製)於乙醇(14mL)與NH₄OH(42mL)的混合物中之溶液，於50℃下攪拌12小時。溶液在減壓下濃縮以給出黃色固體。將黃色固體藉由製備級逆相HPLC(管柱：Synergi Polar-RP 100×30 5μM；條件：水(10mM NH₄HCO₃)-ACN；開始B：0，結束B：20；梯度時間(min)：12；流速(ml/min)：25)純化以得到呈白色固體之化合物15(110mg)。將化合物15藉由製備級逆相HPLC(管柱：Phenomenex Kinetex XB-C18 150mm×30mm，5μM；條件：水(10mM NH4HCO3)-ACN；開始B：0，結束B：5；梯度時間(min)：7；流速(ml/min)：30)純化第二次以給出呈白色固體之化合物15銨鹽(45mg)。¹H NMR(400MHz,D₂O)δ 8.31(br,s,1H),8.15(s,1H),7.94(br,s,1H),6.43(br,d,J=16.3Hz,1H),5.98(br,d,J=7.7Hz,1H),5.67-5.47(m,1H),5.28 (br,s,1H),4.93(br,s,1H),4.61-4.49(m,2H),4.43(br,d,J=9.7Hz,1H),4.26(br,s,2H),4.18(br,s,1H),4.05(br s,1H),3.60(s,3H),0.33(br s,3H)。¹⁹F NMR(376MHz,D₂O)δ-201.82(s,1F)。³¹P NMR(162MHz,D₂O)δ 96.09(br,s,1P),-2.40(s,1P)。ESI-MS：m/z 688.9[M+H]⁺。

步驟7：製備化合物15鈉鹽

將Dowex 50W×8,200-400(H型，5mL)添加至燒杯(對於45mg的cpd 15銨鹽)中並用去離子水(2x)洗滌，然後將15% H₂SO₄(於去離子水中，50mL)添加至樹脂中。將混合物攪拌15分鐘並傾析(1x)。用15% H₂SO₄(於去離子水中)把樹脂轉移至管柱中並用15% H₂SO₄(至少4倍管柱體積)洗滌，然後用去離子水洗滌直到樹脂呈中性。將該樹脂轉移回燒杯中，並添加NaOH溶液(15% NaOH於水溶液中，50mL)。將混合物攪拌15分鐘並傾析(1x)。將樹脂轉移至管柱中並用15% NaOH(於水中，至少4倍管柱體積)洗滌然後用水洗滌直到其呈中性(至少4倍管柱體積)。將化合物15銨鹽溶解在去離子水中(45mg，於5mL中)，並加至管柱的頂端，然後用去離子水洗提。藉由TLC(UV)偵測，產物在早期餾份中洗提出來。將產物冷凍乾燥以得到呈白色固體之化合物15鈉鹽P1(42.6mg)。¹H NMR(400MHz,D₂O)δ 8.21(s,1H),8.09(s,1H),7.97(s,1H),6.39(br,d,J=16.1Hz,1H),6.00(br,d,J=8.3Hz,1H),5.70-5.52(m,1H),5.23(dt,J=4.5,8.3Hz,1H),5.04-4.88(m,1H),4.63-4.51(m,3H),4.44(br,d,J=11.8Hz,1H),4.31-4.19(m,3H),4.06(br,d,J=10.8Hz,1H),3.59(s,3H),0.67-0.12(m,3H)。¹⁹F NMR(376MHz,D₂O)δ-201.80(s,1F)。³¹P NMR(162MHz,D₂O)δ 95.45(s,1P),-2.26(s,1P)。ESI-MS：m/z 688.8[M+H]⁺

製備化合物15及化合物16

步驟5：製備化合物10d+10e

在化合物10c(2.3g,2.41mmol)於DCM(100mL)中之溶液中，於0℃下以2分鐘添加硼烷二甲基硫醚(3.61mL,7.23mmol)。在25℃下將混合物攪拌15分鐘之後，添加水(20mL)。將所得之溶液過濾並且將濾液在減壓下濃縮以給出黃色固體。將固體用DCM(100mL)稀釋並將有機層接續地用水(2×100mL)、鹽水(3×100mL)洗滌並在減壓下濃縮以給出黃色殘餘物。將粗製固體藉由製備級逆相HPLC(管柱：Agela Durashell C18 150×25 5μM；條件：水(10mM NH₄HCO₃)-ACN；開始B：25，結束B：55；梯度時間(min)：12；流速(ml/min)：25)純化以給出呈白色固體之化合物10d與10e(65mg)的混合物。¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δ 8.81-8.71(m,1H),8.50(d,J=6.2Hz,1H),8.08(br,d,J=8.4Hz,2H),7.69-7.54(m,3H),6.59-6.50(m,1H),6.37-6.26(m,2H),6.02-5.86(m,1H),5.26-5.04(m,2H),4.77-4.68(m,1H),4.63-4.54(m,3H),4.43(br,d,J=6.2Hz,2H),4.34-4.27(m,2H),3.86-3.69(m,2H),2.98-2.90(m,3H),2.71(br,dd,J=5.8,13.1Hz,1H),2.61-2.49(m,1H),1.22(td,J=3.3,6.7Hz,7H)。ESI-MS：m/z 969.3[M+H]⁺。

步驟6：製備化合物15及化合物16

將化合物10d與10e(65mg，粗製)於乙醇(4mL)與NH₄OH(12mL)的混合物中之溶液於50℃下攪拌12小時。將溶液在減壓下濃縮以給出殘餘物。殘餘物藉由製備級逆相HPLC(管柱：Synergi Polar-RP 100×30 5μM；條件：水(10mM NH₄HCO₃)-ACN；開始B：0，結束B：20；梯度時間(min)：12；流速(ml/min)：25)純化以得到呈白色固體之化合物15(37mg)與化合物16(17mg)。

化合物15銨鹽：¹H NMR(400MHz,D₂O)δ 8.41(br,s,1H),8.23(br,s,1H),7.98(br,s,1H),6.46(br,d,J=16.3Hz,1H), 5.99(br,s,1H),5.74-5.46(m,1H),5.27(br,s,1H),5.07-4.91(m,1H),4.61-4.50(m,2H),4.42(br,s,1H),4.26(br,s,2H),4.16(br,s,1H),4.05(br,s,1H),3.61(s,3H),0.71-0.07(m,2H)。¹⁹F NMR(376MHz,D₂O)δ-75.63(s,1F)。³¹P NMR(162MHz,D₂O)δ 94.56(s,1P),-3.69(s,1P)。ESI-MS：m/z 688.9[M+H]⁺

化合物16銨鹽：¹H NMR(400MHz,D₂O)δ 8.37(br s,1H),8.24(br s,1H),7.85(s,1H),6.42(d,J=14.1Hz,1H),5.91-5.88(m,1H),5.8(br s,1H),5.51(br s,1H),5.38(br s,1H),5.32-5.20(m,1H),4.56-4.48(m,2H),4.45-4.36(m,1H),4.28-4.17(m,3H),4.09(br d,J=11.0Hz,1H),3.59(s,3H),0.61-0.10(m,3H)。¹⁹F NMR(376MHz,D₂O)δ-202.9(s,1F)。³¹P NMR(162MHz,D₂O)δ 96.67(m,1P),-3.02(s,1P)。ESI-MS：m/z 689.2[M+H]⁺

步驟7：製備化合物15鈉鹽

將Dowex 50W×8,200-400(H型，5mL)添加至燒杯(對於37mg的cpd15銨鹽)中並用去離子水(2x)洗滌，然後將15% H₂SO₄(於去離子水中，50mL)添加至樹脂中。將混合物攪拌15分鐘並傾析(1x)。用15% H₂SO₄(於去離子水中)把樹脂轉移至管柱中並用15% H₂SO₄(至少4倍管柱體積)洗滌，然後用去離子水洗滌直到樹脂呈中性。將該樹脂轉移回燒杯中，並添加NaOH溶液(15% NaOH於水溶液中，50mL)。將混合物攪拌15分鐘並傾析(1x)。將樹脂轉移至管柱中並用15% NaOH(於水中，至少4倍管柱體積)洗滌然後用水洗滌直到其呈中性(至少4倍管柱體積)。將化合物15銨鹽溶解在去離子水(37mg，於5mL中)中，並加至管柱的頂端，然後用去離子水洗提。藉由TLC(UV)偵測，產物在早期餾份中洗提出來。將產物冷凍乾燥以得到呈白色固體之化合物15鈉鹽P1(28.4mg)。¹H NMR(400MHz,D₂O)δ 8.25(s,1H),8.12(s,1H),7.99(s,1H),6.42(br,d,J=15.8Hz,1H),6.02(br,d,J=8.3Hz,1H),5.70-5.52(m,1H), 5.30-5.21(m,1H),5.06-4.91(m,1H),4.62-4.54(m,2H),4.44(br,d,J=12.8Hz,1H),4.30(br,d,J=4.3Hz,2H),4.21(br,d,J=12.0Hz,1H),4.06(br,d,J=11.8Hz,1H),3.60(s,3H),0.71-0.09(m,3H)。¹⁹F NMR(376MHz,D₂O)δ-75.62(s,1F),-201.89(s,1F)。³¹P NMR(162MHz,D₂O)δ 96.08(s,1P),-2.24(s,1P)。ESI-MS：m/z 688.8[M+H]⁺

實例11

步驟1：製備(11a)

在8b(100mg,0.11mmol)於CH₃CN/THF(1：1,v/v,4.4mL)中之溶液中，添加4Å分子篩(1g)與1H-四唑(於CH₃CN中，1.94mL，0.9mmol)。在混合物於25℃下攪拌15分鐘之後，將2-氰基乙基N,N,N',N'-四異丙基亞磷醯胺(49.56mg,0.16mmol，於CH₃CN中)添加至混合物。將混合物於25℃下攪拌2h並將1H-四唑(於CH₃CN中，0.49mL,0.22mmol,0.45M)添加至混合物。在混合物於25℃下攪拌0.5h之後，將0.5M的I₂於THF：Py：H₂O(8：1：1；V/V/V)(0.66mL,0.33mmol)中之溶液添加至該反應。在混合物於25℃下攪拌2h之後，添加飽和硫代硫酸鈉水溶液(2mL)；將所得之混合物過濾，並將濾液在減壓下濃縮以乾燥。殘留物藉由製備級逆相HPLC(Agela Durashell C18 150×25 5μM；條件：水(10mM NH₄HCO₃)-CAN A：水(10mM NH₄HCO₃)B：MeCN；開始B：25%，結束B：55%；梯度時間(min)：12；100%B維持時間(min)為2.2；流速(ml/min)：25)。收集純的餾份，將溶劑於減壓下濃縮並將水層冷凍乾燥至乾燥以給出呈白色固體之11a(20mg)。ESI-MS：m/z 969.3[M+1]+。

步驟2：製備17及18

在11a(20mg 0.017mmol)於EtOH(1.5mL)中之溶液中，添加NH₃.H₂O(1.5mL,25%)。在混合物於50℃下攪拌3d之後，將反應混合物過濾並將濾液在減壓下濃縮以乾燥。將殘留物藉由製備級逆相HPLC(Syneri Polar-RP 100×30 5μM；條件：水(10mM NH₄HCO₃)-MeCN；A：水(10mM NH₄HCO₃)；B：MeCN；開始B：0%至B：20%；梯度時間(min)：12；100%B維持時間(min)2.2；流速(ml/min)：25)純化。收集純的餾份並將溶劑於減壓下蒸發以得到呈白色固體之17(25mg)與18(20mg)。

類似物17銨鹽：ESI-MS：m/z 688.8[M+1]+。¹H NMR(400MHz,D₂O)δ 8.26(br s,1 H)8.18(s,1 H)7.77(br s,1 H)6.38(br d,J=14.31Hz,1 H)5.77(br d,J=8.03Hz,1 H)5.64(br s,1 H)5.30-5.52(m,1 H)4.95-5.13(m,1 H)4.50(br d,J=9.03Hz,1 H)4.34-4.44(m,2 H)4.07-4.25(m,3 H)3.99(br d,J=11.04Hz,1 H)3.52(s,3 H)-0.92-0.05(m,3 H)。

類似物18銨鹽：ESI-MS：m/z 688.8[M+1]+。¹HNMR(400MHz,D₂O)δ 8.29(s,1 H)8.18(s,1 H)7.75(s,1 H)6.35(d,J=14.05Hz,1 H)5.76(s,2 H)5.30-5.52(m,1 H)4.99-5.20(m,1 H)4.35-4.50(m,3 H)4.09-4.22(m,3 H)3.94-4.03(m,1 H)3.47(s,3 H)0.05(s,3 H)。

步驟3：製備17鈉鹽

將Dowex 50W×8,200-400(H型，25g)添加至燒杯(對於33mg的cpd 17)中並用去離子水(2×10mL)洗滌，然後將15% H₂SO₄(於去離子水中，80mL)添加至樹脂中。將混合物攪拌15分鐘並傾析(1×10mL)。用15% H₂SO₄(於去離子水中)把樹脂轉移至管柱中並用15% H₂SO₄(至少4倍管柱體積)洗滌，然後用去 離子水洗滌直到樹脂呈中性。將該樹脂轉移回燒杯中，並添加NaOH溶液(15% NaOH於水溶液中，50mL)。將混合物攪拌15分鐘並傾析(1×10mL)。將樹脂轉移至管柱中並用15% NaOH(於水中，至少4倍管柱體積)洗滌然後用水洗滌直到其呈中性(至少4倍管柱體積)。將化合物17銨鹽溶解在去離子水(33mg，於5mL中)中，並加至管柱的頂端，然後用去離子水洗提。藉由TLC(UV)偵測，產物在早期餾份中洗提出來。將產物冷凍乾燥以得到呈白色固體之化合物17鈉鹽(12.4mg)。ESI-MS：m/z=688.8[M+1]⁺。¹H NMR(400MHz,D₂O)δ 8.08-8.05(m,1H),7.97(s,1H),7.37-7.36(m,1H),6.41-6.33(m,1H),5.88(d,J=8.0Hz,1H),5.64(d,J=4.4Hz,1H),5.44-5.27(m,2H),4.48(d,J=2.4Hz,1H),4.38-4.30(m,2H),4.20-4.11(m,2H),3.50(s,3H),3.46(d,J=13.6Hz,1H),3.22-3.18(m,1H)；¹⁹F NMR(376MHz,D₂O)δ-196.87(s,1F)；³¹P NMR(162MHz,D₂O)δ 7.80(s,1P),-1.22(s,1P)。

步驟4：製備18鈉鹽

將Dowex 50W×8,200-400(H型，15g)添加至燒杯(對於30mg的cpd 18)中並以去離子水(2×10mL)洗滌，然後將15% H₂SO₄(於去離子水中，80mL)添加至樹脂中。將混合物攪拌15分鐘並傾析(1×10mL)。用15% H₂SO₄(於去離子水中)把樹脂轉移至管柱中並用15% H₂SO₄(至少4倍管柱體積)洗滌，然後用去離子水洗滌直到樹脂呈中性。將該樹脂轉移回燒杯中，並添加NaOH溶液(15% NaOH於水溶液中，50mL)。將混合物攪拌15分鐘並傾析(1×10mL)。將樹脂轉移至管柱中並用15% NaOH(於水中，至少4倍管柱體積)洗滌然後用水洗滌直到其呈中性(至少4倍管柱體積)。將化合物18銨鹽溶解在去離子水中(30mg，於5mL中)，並加至管柱的頂端，然後用去離子水洗提。藉由TLC(UV)偵測，產物在早期餾份中洗提出來。將產物冷凍乾燥以得到呈白色固體之化合物 18鈉鹽(13.2mg)。ESI-MS：m/z=688.8[M+1]⁺；¹H NMR(400MHz,D₂O)δ 8.22(s,1 H)8.14(s,1 H)7.76(s,1 H)6.34(d,J=14.05Hz,1 H)5.77(d,J=8.28Hz,1 H)5.60-5.69(m,1 H)5.30-5.48(m,1 H)4.94-5.11(m,1 H)4.49(br d,J=9.29Hz,1 H)4.35-4.45(m,2 H)4.17-4.23(m,1 H)4.12-4.17(m,1 H)4.09(br d,J=4.52Hz,1 H)3.99(br dd,J=12.05,4.52Hz,1 H)3.52(s,3 H)-0.87-0.01(m,3 H)。³¹P NMR(162MHz,D₂O)δ 92.38(br s,1 P)-1.31(s,1 P)。¹⁹F NMR(376MHz,D₂O)δ-75.64(s,1 F)-202.91(br s,1 F)。

藉由實例3之方法，替換適當的試劑，下列之化合物可由本發明所屬技術領域中具有通常知識者所製備。

生物實例

試管試驗

生物實例1

STING SPA結合試驗

人類STING SPA結合試驗測量在生物素化STING蛋白質上之經氚化標記之2’,3’ cGAMP(環狀(鳥苷-(2'->5')-單磷酸-腺苷-(3'->5')-單磷酸)的置換。於E.coli中所表現的重組STING之可溶型式，其缺乏四個跨膜結構域並含有Q86WV6之殘基139至379(在位置232(H232R)處具有一個R)。基於該族群之對偶基因頻率為58%，H232R被視為野生型(Yi，等人之「Single Nucleotide Polymorphisms of Human STING can affect innate immune response to cyclic dinucleotides」PLOS ONE.2013,8(10),e77846)。該STING構築體具一N端HIS標籤，接著為一TEV蛋白酶切割位點以及一AVI標籤以允許藉由BirA生物素接合酶(Beckett等人之A分鐘imal peptide substrate in biotin holoenzyme synthetase-catalyzed biotinylation.(1999)Protein Science 8,921-929)定向生物素化作用。該HIS標籤係於純化之後與生物素化作用之前切除。

添加於試驗緩衝液[25mM HEPES(Corning 25-060-C1)pH 7.5,150mM NaCl(Sigma S5150),0.5mg/mL BSA(Gibco 15260-037),0.001% Tween-20(Sigma P7949)，分子等級(Corning 46-000-CM)]中之8nM的[³H]-2’3’-cGAMP與40nM的生物素STING蛋白質，該試驗在1536孔盤中以每孔8μL之總體積進行。用聲學分配器(EDC Biosystems)添加於100% DMSO中之測試化合物(80nL)，使最終試驗濃度為1% DMSO。將盤離心1分鐘並於室溫下培養60分鐘。最後，添加(2μL)聚苯乙烯鏈親合素SPA珠粒(PerkinElmer RPNQ0306)並將盤密封且於室溫下離心1分鐘。盤係經暗調適2h並在ViewLux(Perkin Elmer)上對每盤讀取12分鐘。相較於自然配體之報告值(Zhang等人之Cyclic GMP-AMP containing mixed phosphodiester linkages is an endogenous high-affinity ligand for STING)，[³H]-2’3’-cGAMP之飽和結合曲線顯示與STING結合之K_D為3.6±0.3nM。

其他自然配體包括環狀-二-GMP亦在此試驗預期的範圍內返回值。參考化合物係cGAMP而結果記錄為抑制百分比與IC₅₀值。使用一個類似於上述的構築體與小鼠STING結合，該構築體含有Q3TBT3之殘基138至378。

全長人類STING結合試驗

來自Q86WV6(在位置232(H232R)處具有一R)之殘基1至379，具有N端6HIS標籤、接著為FLAG標籤、TEV蛋白酶切割位點、以及用於生物素化作用之AVI標籤的人類STING係經重組地表現於HEK293-EXPI細胞中。從此等細胞製備經純化的膜並藉由免疫墨點法(immunoblot)確認與定量STING的表現。將含有STING的膜與測試化合物在Greiner 384孔試驗板中合併並在使用於 STING SPA結合試驗之相同緩衝液中於室溫下培養一小時。接下來，添加[³H]-2’3’-cGAMP並將盤於室溫下培養30分鐘。將反應轉移至預先洗滌好之Pall 5073過濾培養盤中且每個孔用50μL試驗緩衝液洗滌3次。將過濾培養盤於50℃下乾燥1h。向每個孔添加10μL的Microscint閃爍液且將盤密封並在TopCount(Perkin Elmer)上對各孔讀取1分鐘。

STING SPR結合試驗

將化合物在S200 biacore SPR儀器(GE Healthcare)上分析。E.coli所產生之截短的STING蛋白質經生物素捕捉(GE Healthcare #BR100531)被固定在S系列鏈親合素晶片上。將化合物於操作緩衝液(10mM HEPES，pH 7.4，150mM NaCl，0.005% P20，1mM TECEP)中以1：2稀釋，濃度從100uM至0.195uM來篩選。並使用1：1結合模型(將STING視為二聚物)執行穩定狀態親和力與動力學的評估。操作參數如下：對IFM化合物為60sec開(on)、300sec關(off)；環狀-二-GMPj(60sec開(on)/60sec關(off))；硫醇異構物1(60sec開(on)/300sec關(off))；以及cGAMP(60sec開(on)/1200sec關(off))，流速為50μL/min且於25℃、40Hz下收集數據。

STING人類細胞報導子試驗

在人類THP1單核球細胞系所衍生的THP1-ISG細胞(Invivogen,cat #thp-isg)中，藉由穩定整合的干擾素調節因子(IRF)誘導SEAP報導子構築體來評估人類STING路徑之促效。THP1-Blue ISG細胞在ISG54最小啟動子與5個干擾素(IFN)刺激之反應元素的控制下表現分泌型胚胎鹼性磷酸酶(SEAP)報導子基因。因此，THP1-Blue ISG細胞允許藉由檢測SEAP之活性來監測IRF之活化。在細胞培養的上清液中，IRF誘導的SEAP之水準可輕易以鹼性磷酸酶偵測 培養基，即SEAP檢測試劑來評估。此等細胞對吉歐黴素(Zeocin)具有抗性。在此試驗中，2’3’cGAMP使用作為陽性對照。為進行該試驗，60,000個細胞經分配在30μL/孔之白色、不透明底部經組織培養處理的384孔盤中。

添加體積為10μL(最終濃度為1% DMSO)之測試化合物。化合物最初在100% DMSO中製備，點在中間體稀釋盤(intermediate dilution plate)上，然後於轉移前在培養基中稀釋。將試驗於37℃、5% CO₂下培養24h，然後將盤以1200rpm(120x g)離心5分鐘。在最終培養之後，將90μL的鹼性磷酸酶檢測培養基-基質添加至新的384孔透明盤之各孔中，隨後使用Biomek FX將10μL的細胞上清液從試驗盤轉移至新的鹼性磷酸酶檢測培養基盤並混合4次。將盤於RT下培養20分鐘，然後以Tecan Safire2檢測在655nm之吸光度。

STING小鼠細胞報導子試驗

在小鼠RAW-264.7單核球細胞系所衍生的RAW Lucia細胞(Invivogen,cat # rawl-isg)中，藉由穩定整合的干擾素誘導Lucia螢光素酶報導子構築體，評估小鼠STING路徑之促效。RAW Lucia細胞在ISG54最小啟動子與5個干擾素(IFN)刺激之反應元素的控制下表現分泌型螢光素酶報導子基因。因此，RAW Lucia細胞允許藉由檢測螢光素酶之活性來監測IRF之活化。在細胞培養的上清液中IRF誘導的螢光素酶之水準可輕易以QUANTI-Luc^TM，即螢光素酶偵測試劑評估。此等細胞對吉歐黴素(Zeocin)具有抗性。在此測定中，2’3’cGAMP使用作為陽性對照。為進行該試驗，100,000個細胞經分配在90μL/孔之透明、平坦底部組織培養處理的96孔盤中。添加體積為10μL之測試化合物。將試驗於37℃、5% CO2下培養24與48小時。在培養之後，將20μL的細胞上清液從試驗盤轉移至新的96孔的白色盤中並添加50uL的QUANTI-Luc基質。該盤於RT下培養、 搖動5分鐘，然後以0.1s之積分時間在EnVision 2104上讀取發光信號。

人類干擾素β誘導試驗

THP1-Blue ISG細胞係用於測量在STING路徑活化後，IFN-β進入培養上清液之分泌。為進行該測定，將抗IFN-β捕捉抗體塗佈於96孔MultiArray盤(Mesoscale Discovery)上。在培養一小時之後，洗滌盤並將STING人類細胞報導子試驗盤之上清液50μL或IFN-β標準品與20μL的Sulfotag接合偵測抗體於該塗佈盤中混合。將該盤培養、搖動2h，洗滌並加入讀取緩衝液。在SectorImager上測量電致化學發光信號。

STING細胞傳訊路徑評估

以磷酸化-STING(S366)、磷酸化-TBK1(S172)、以及磷酸化-IRF3(S396)之西方墨點，測量在THP1 BLUE ISG細胞中STING路徑之促效。簡言之，將於90μL核轉染(nucleofection)緩衝液中之5百萬細胞與10μL測試化合物混合。將此等混合物使用程式V-001電穿孔在Amaxa Nucleofector(Lonza)上，。接著將細胞轉移至具有新鮮培養基之12孔盤中並允許在37℃、5% CO₂下恢復一小時。然後將細胞以冷HBSS洗滌並裂解在RIPA緩衝液中。將樣本總蛋白標準化並用ProteinSimple樣本緩衝液或LDS載入緩衝液稀釋。樣本於95℃下熱變性5分鐘，然後使用PeggySue(ProteinSimple)測量磷酸化STING、總STING以及磷酸化IRF3、總IRF3；同時使用NuPAGE(Invitrogen)系統測量TBK1。分別使用Compass或Licor Odyssey軟體分析數據。

STING體內活性

所有的研究中，Balb/c雌小鼠自Charles River Labs(Wilmington,MA)獲得並在它們6至8週齡時使用且重約為20g。在實驗使用之前，允許所有動物適應環境並自任何運輸相關壓力中恢復最少5天。提供逆滲透氯化水與輻照食物(Laboratory Autoclavable Rodent Diet 5010,Lab Diet)自由攝食，而動物們係供養於12h亮與暗的週期。籠子與墊草在使用前係經高壓蒸氣滅菌並且每週更換。所有實驗遵照實驗動物照護與使用指南並由Janssen R & D,Spring House的動物照護與使用委員會核准。各實驗群組包含8隻小鼠。將500,000 CT26結腸癌腫瘤細胞經皮下植入Balb/c小鼠中以測定小鼠CT26腫瘤模型之體內效能，並允許腫瘤建立至100至300mm³。將化合物以磷酸鹽緩衝鹽水調製，以每次注射體積0.1ml的方式腫瘤內注射。小鼠係每三天投予0.05mg，總共三次給藥。當所有對照組動物仍在研究中時，效能按腫瘤生長抑制(TGI)百分比來測量，其藉由治療組腫瘤體積(T)之減少的尺寸除以對照組腫瘤體積(C)，依據下列公式：((C-T)/(C))*100來計算。治癒被定義為在最後一次投予劑量之後10個腫瘤體積倍增時間(TVDT)期間沒有偵測到可測量的腫瘤之動物數目。

所得數據係列於表2。

ND-未測定，人類IFN-β的排序值藉由在THP-1細胞中於測試的劑量範圍(0.78至50uM)內總累積IFN-β誘導判定的排序值來判定。

* IC₅₀與EC₅₀至少為三個數值之平均。

生物實例2

STING初代人類PBMC細胞介素誘導試驗

在人類全血所衍生的初代人類周邊血液單核細胞(PBMC)中評估人類STING路徑之促效。將1品脫(約420ml)的新鮮供體血液(AllCells Inc.,Alameda,CA)層疊於淋巴細胞分離液(1.077-1.080g/ml,Corning,Manassas,VA)上，然後於RT下以500g離心20min不用間斷。在血清與淋巴細胞分離液之間的界面收集的PBMC係經採集，洗滌，然後計數。PBMC由淋巴細胞亞型與單核球細胞(諸如B細胞、T細胞等)所組成，且在文獻中已表徵此等亞型表現不同水準的STING蛋白質。對STING促效劑(諸如2’3’-cGAMP)的反應上，此等細胞變得活化並係經誘導以表現各種促發炎與抗病毒細胞介素。同樣，以STING促效劑刺激時，此等細胞向上調節活化標誌。而細胞介素誘導的水準可藉由包括ELISA、Luminex、以及MSD之各種的方法測量。活化標誌之向上調節的水準可藉由流動式細胞測量術測量。

為進行該試驗，將1,000,000個細胞分配在225μL/孔之平底、經組織培養處理的96孔盤中。添加體積為25μL、10x濃度之測試化合物。將一些化合物溶解於100% DMSO中且在接收此等化 合物的培養物中DMSO之最終濃度係1%。將試驗於37℃、5% CO₂下培養48h。採集上清液200μl而不擾動盤底之細胞，然後於-20℃下冷凍直到Luminex測量的時候。使用G-CSF、IFNα2、IFNγ、IL-1b、IL-6、IL-10、IL-12(p40)、IL-12(p70)、TNFa(來自MILLIPLEX MAP Human Cytokine/Chemokine Magnetic Bead Panel-Immunology Multiplex Assay試劑組)與IFNβ1分析物(來自MILLIPLEX MAP Human Cytokine/Chemokine Magnetic Bead Panel IV kit(EMD Millipore,Billerica,MA)，遵照製造商的規程來施行Luminex分析。細胞介素誘導則使用Luminex FlexMAP 3D®儀器(Luminex Corporation,Radnor,PA)來測量。所收集的Luminex數據用MILLIPLEX分析軟體(EMD Millipore)施行分析。

PHH細胞中HBV病毒的抑制(使用來自STING活化初代人類PBMC的條件培養基)

初代人類肝細胞可被B型肝炎病毒感染，且於建立感染期間將產生諸如HBsAg與HBeAg之病毒蛋白質，其可藉由ELISA偵測。用化合物(諸如恩替卡韋(entecavir))治療處理可抑制HBV的繁殖，其可藉由減少病毒蛋白質的生產來測量。(細胞#)4×10⁵的細胞/孔之初代人類肝細胞(BioReclamation,Westbury,NY)係經分配在500μL/孔的平底、經組織培養處理之24孔盤中。24h過後，細胞感染30至75moi的HBV。在隔天，將PHH洗滌3x並將新鮮維持培養基添加至細胞。同時地，如前述單離PBMC。為刺激PBMC，10,000,000個細胞係經分配在400μL/孔之平底、經組織培養處理之24孔盤中。添加體積為100μL之測試化合物，然後將培養物在37℃、5% CO₂下培養48h。採集上清液。使用流動式細胞測量術測量細胞的活化標誌之向上調節。簡言之，將細胞用針對CD56、CD19、CD3、CD8a、CD14、CD69、CD54、CD161、CD4、以及CD80的螢光標記抗體染 色。樣本於Attune NxT流式細胞儀(Thermo Fisher,Carlsbad,CA)上分析。

從經刺激的PBMC培養物中保留部分上清液，藉由如前述之Luminex技術，用在細胞介素之偵測。其餘的上清液分成兩半，且將一個等分試樣儲存於4℃中以用在d8的試驗。將另一個等分試樣用2X PHH培養基以1：1稀釋，然後添加至d4經感染的PHH細胞中。96h之後，更換用過的培養基並添加上清液與2X PHH培養基1：1的稀釋液。在此時，使用HBsAg ELISA試劑組(Wantai Bio-pharm,Beijing,China)進行HBsAg的中期測量。接下來的96h後，收集培養基並測量HBsAg。

表3：細胞介素在PBMC培養物中之誘導倍數(以CDN化合物刺激)。誘導倍數係藉由測量約20μM的化合物於48h之後所誘導的細胞介素之濃度，然後除以用PBS培養的細胞之細胞介素生產的基線水平來計算。數據是超過三個實驗中多個供體的平均。nt=未測試。

表4：細胞介素在PBMC培養物中之誘導倍數(以較高濃度之CDN化合物刺激)。誘導倍數係藉由測量指定濃度之化合物於48h之後所誘導的細胞介素之濃度，然後除以用PBS培養的細胞之細胞介素生產的基線水平來計算。數據是超過三個實驗中多個供體的平均。nt=未測試。

表5.用CDN刺激的PBMCs之條件培養基可抑制經HBV感染的PHH細胞之病毒載量。將PBMCs用指定的CDN以20、4、0.8μM的濃度刺激48h，將上清液與新鮮培養基以1：1的比例混合，然後添加至經HBV感染的PHH細胞。8天後測量HBsAg的生產。數據為兩個獨立供體之平均。

表6.CDN活化PBMC。將PBMCs用20μM的CDN刺激48h。細胞藉由流動式細胞測量術評估在單核球細胞上CD54之向上調節。平均螢光強度增加的倍數係相對於休眠細胞的水平來計算。數據為兩個獨立供體之平均。

雖然上述說明書教示本發明的理論並提供實例以作說明之用，但應理解本發明之實際運用涵蓋所有通常之變化、改變及/或修改，上述皆落入於下列申請專利範圍及其均等物之範疇內。

Claims (18)

1. 一種式(I)之化合物 其中R _1A係羥基或氟基且R _1C係氫；或，R _1A係-O-且R _1C係CH ₂，使得R _1A與R _1C連同彼等所附接之原子一起形成5員環；R _1B係選自由羥基、硫醇、以及BH ₃ ^-所組成之群組；B ₁係選自由環 b1及環 b2所組成之群組 R _2A係選自由羥基及甲氧基所組成之群組；R _2B係選自由羥基、硫醇、以及BH ₃ ^-所組成之群組；限制條件為式(I)之化合物非(1 R,6 R,8 R,9 R,10 R,15 R,17 R,18 R)-17-(2-胺基-6-側氧基-6,9-二氫-1 H-嘌呤-9-基)-8-(6-胺基-9 H-嘌呤-9-基)-9-氟-3,12,18-三羥基-2,4,7,11,13,16-六氧雜-3λ ⁵,12λ ⁵-二磷三環[13.2.1.0 ⁶, ¹⁰]十八烷-3,12-二酮，雙-銨鹽；或其鏡像異構物、非鏡像異構物、或醫藥上可接受之鹽形式。
2. 如請求項1所述之化合物，其中B ₁係 b2
3. 一種式(I)之化合物 其係選自由下列所組成之群組： 或其醫藥上可接受之鹽形式。
4. 一種醫藥組成物，其包含如請求項1至3中任一項所述之化合物以及醫藥上可接受之載劑、醫藥上可接受之賦形劑、與醫藥上可接受之稀釋劑中之至少一者。
5. 如請求項4所述之醫藥組成物，其中該組成物為固體口服劑型。
6. 如請求項4所述之醫藥組成物，其中該組成物為糖漿、酏劑或懸浮液。
7. 一種醫藥組成物，其包含如請求項3所述之化合物以及醫藥上可接受之載劑、醫藥上可接受之賦形劑、與醫藥上可接受之稀釋劑中之至少一者。
8. 一種治療有效量的如請求項1所述之化合物之用途，其用於製備治療STING調節之疾病、症候群、或病況之醫藥品。
9. 一種治療有效量的如請求項1所述之化合物之用途，其用於製備治療疾病、症候群、或病況之醫藥品，其中該疾病、症候群、或病況受到STING促效的影響。
10. 如請求項9所述之用途，其中該疾病、症候群、或病況係癌症。
11. 如請求項10所述之用途，其中該癌症係選自由下列所組成之群組：黑色素瘤、結腸癌、乳癌、前列腺癌、肺癌、以及纖維肉瘤。
12. 如請求項9所述之用途，其中該疾病、症候群、或病況係病毒感染。
13. 如請求項11所述之用途，其中該病毒感染係B型肝炎。
14. 一種治療有效量的如請求項4所述之組成物之用途，其用於製備治療選自由下列所組成之群組之疾病、症候群、或病況的醫藥品：病毒感染、黑色素瘤、結腸癌、乳癌、前列腺癌、肺癌、以及纖維肉瘤。
15. 一種如請求項1所定義之化合物用於製備藥品之用途，該藥品用於治療有治療需要之對象的選自由下列所組成之群組的疾病、症候群、或病況：病毒感染、黑色素瘤、結腸癌、乳癌、前列腺癌、肺癌、以及纖維肉瘤。
16. 一種如請求項1所定義之化合物之用途，其係使用於治療有治療需要之對象的選自由下列所組成之群組的疾病、症候群、或病況的方法中：病毒感染、黑色素瘤、結腸癌、乳癌、前列腺癌、肺癌、以及纖維肉瘤。
17. 如請求項13至15中任一項所述之用途，其中該病毒感染係B型肝炎。
18. 如請求項17所述之用途，其包含對有治療需要之對象投予治療有效量的如請求項3所述之化合物。