TW514641B

TW514641B - Metal chelator forming peptides and use thereof

Info

Publication number: TW514641B
Application number: TW084113708A
Authority: TW
Inventors: Yoshitoshi Itaya; Ikuya Seki; Koichi Hanaoka; Yoshifumi Shirakami
Original assignee: Nihon Mediphysics Co Ltd
Priority date: 1994-12-27
Filing date: 1995-12-21
Publication date: 2002-12-21
Also published as: ZA9510850B; DE69531230T2; EP0719790A2; EP0719790B1; DK0719790T3; DE69531230D1; AU703230B2; KR100385340B1; AR001781A1; EP0719790A3; BR9506097A; ATE244726T1; CA2165228A1; NZ280694A; ES2199974T3; US5770178A; AU4049595A; KR960022558A; US5785948A

Description

經濟部中央標準局員工消費合作社印製 514641 A7 B7 五、發明説明（1 ) 發明之背景發明之範圍本發明係關於形成金屬鏊合物之肽及其用途。尤其，本發明係關於安定之形成金屬鏊合物之肽，彼可提供有用以供放射診斷及/或放射醫療劑用之金屬放射性活素標記性生理活性肽，蛋白質或其它物質。形成金屬鏊合物之肽乃結合至生理活性肽，蛋白質或其它物質諸如對哺乳類體內之病灶位具親合力之肽上以形成用以充作放射診斷及/ 或放射醫療劑之複合物。相關技藝之說明可與金屬放射性核素成形鏊合物之胺基酸序列已知爲 Lys — Cys— Thr — Cys — Cys — Aj?a ( Linda C· Knight, J· Nucl. Med., 3^(2)， 282-288， Feb. 1994)及 Cy s(Acm) —G 1 y-Cy s ( A cm) (DEAN， Richard, T·, W092/13572)等。

Lys — Cys— Thr — Cys — CYs — A1 a 在分子內含有許多具巯基團之C y s殘基，因而易輕易形成分子內或分子間之二硫鍵。因此，此肽當用以供放射診斷或放射醫療用時，需極小心地處理。

Cys (Acm)— Gly — Cys (Acm)由於以乙醯胺基甲基團來保護锍基團，因而獲改善以避免含锍基團之C y s殘基間之分子內或分子間二硫鍵之形成。另一方面，然而由於此官能基團之保護作用使C y s殘基之本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 514641 A7 B7 五、發明説明（2 ) 反應力受壓制’因而必需另行加熱處理以使肽標記上金屬放射性活素諸如丁 c — 9 9m。而且’這些肽類將遭遇的問題爲金屬放射性 '活素標記性肽類易於哺乳類體內之腎內造成非專一性累積。亦已述及之可與金屬放射性活素形成鏊合複合物之其它胺基酸序列爲 G 1 y — G 1 y — Cy s (S.J· Mather et a 1. , Eur. J. Nuc 1. Med. ( 1 9 94 )，21，Suppl· S46) 及 Cys— Gly — Hi s ，Asp — Gly — Cys ， Glu — Gly-Cys ，Gly — Asp — Cys ， Gly—Glu-Cys 等（DUNN, T·， Jeffrey, W094/ 26295)。這些胺基酸序列乃設計成A s p及G 1 y彼此相連，G 1 y及G 1 y彼此相連，或G 1 u及G 1 y彼此相連。經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 有鑒於前述之技藝狀態，本發明乃提供形成金屬鏊合物之肽，彼不必任何特殊之處理諸如加熱，即可輕易將生理活性肽，蛋白質或其它物質予以標記以於試管內及活體內安定地形成標記試劑，其當投服至哺乳類體內時，不會導致活體內之非專一性累積。本發明亦提供使用此形成金屬鏊合物之肽於放射診斷及放射醫療上之用途。發明之略要說明本發明業已對供放射性活素之金屬配位體所需之胺基酸序列之性質進行深入之研究，結果發現含有C y s殘基之特定胺基酸序列可輕易結合至金屬上以形成安定標記之本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210'〆297公釐） _ -5 — 514641 A7 B7_ 五、發明説明（3 ) 複合物而不需任何特殊處理諸如加熱等。因此本發明之目的係提供具有以X 1 — Χ2 — Cy s 代表之胺基酸序列之形成金屬鏊合物之肽，其中X 1代表除Cy s殘基以外之胺基酸殘基；X2代表除Cy s殘基及P r 〇殘基以外之胺基酸殘基；N端，C端及側鏈之官能基團可任彼保護基團取代；且每個胺基酸殘基可任爲D 形式及L形式。本發明之目的係提供形成金屬鏊合物之肽與生理活性肽，蛋白質或其它物質之複合物。本發明之另一目的係提供金屬放射性核素標記試劑，其中金屬放射性核素乃配價至形成金屬鏊合物之肽或上述複合物上。本發明之另一目的係提供放射診斷組成物，其包含有效成分金屬放射性核素標記試劑，其中Tc 一 9 9m， I η — 1 1 1及Ga — 67中之任一者乃配價至形成金屬鏊合物之肽或上述複合物上。經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 本發明之另一目的係提供放射醫療組成物，其包含有效成分金屬放射性核素標記試劑，其中Y - 90，Re -1 8 6及R e — 1 8 8中之任一者乃配價至形成金屬繁合物之肽或上述複合物上。本發明之另一目的係提供診斷方法，其包含下列之化合物：將有效劑量之上述金屬放射性核素標記試劑（其中已有丁 c — 99m，In-111 ，及 Ga — 67 中之任一本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 514641 A7 B7 五、發明説明（4 ) 者已配價）投服至哺乳類體內；再檢定試劑於哺乳類體內之座落位置。本發明之另一目的係提供使用形成金屬鏊合物之肽以將生理活性肽，蛋白質或其它物質標記上金屬放射性核素之用途。本發明之另一目的係提供形成金屬鏊合物之肽之製法，其包含下列之步驟：將半胱胺酸或其經保護衍生物結合至胺基酸X 2或其經保護衍生物上以形成X2 — Cy s之二肽；再將所形成之二肽結合至胺基酸X1或其經保護衍生物本發明之另一目的係提供複合物之製法，其包含將生理活性肽，蛋白質或其它物質結合至形成金屬鏊合物之肽上之步驟。本發明之另一目的係提供金屬放射性核素標記試劑之製法，其包含將金屬放射性核素配價至形成金屬鏊合物之肽或上述複合物之步驟。經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 本發明之另一目的係提供放射診斷組成物之製法，其包括將金屬放射性核素標記試劑（其中T c 一' 9 9 m， I η — 1 1 1及Ga — 67中任一者已配價）與製藥學上可接受性載體混合之步驟。本發明之另一目的係提供放射醫療組成物之製法，其包括將金屬放射性核素標記試劑（其中Y — 9 0，R e -1 8 6及R e — 1 8 8中之任一者已配價）與製藥學上可本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -7 - 514641 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 ______B7____ 五、發明説明（5 ) 接受性載體混合之步驟。整個專利說明書中，胺基酸係以單字母簡寫或三字母簡寫表示。胺基酸序列中，N端乃示於左側，C端則於右側。除非另有指定，否則胺基酸簡寫後之括弧內之簡寫意指供側鏈用之保護基團，專利申請書中，D —胺基酸殘基乃用以意指D形式之胺基酸殘基。附圖之簡要說明圖1爲標記上Tc 一 9 9m之Ac — KYCAREP PTRTFAYWGQG — NH2之放射活性 HPLC 圖〇圖2爲標記上Tc — 9 9m之Ac— KYCAREP PTRTFAYWGQG — NH2之放射活性 HPLC 圖 ο 圖3爲與1 〇〇〇倍量DTPA混合後之Tc — 9 9 m之Ac-KYCAREPPTRTFAYWGQG之放射活性Η P L C圖。圖 4 爲將 Tc 一 9 9m — KYCAREPPTRTN AYWG Q G投服至腫瘤鼷鼠體內之5分鐘後，此模型鼷鼠全身之閃爍圖照片。圖 5 爲將 Tc — 9 9m — KYCAREPPTRTN AYWGQG投服至腫瘤鼷鼠體內之2 0分鐘後，此模型鼷鼠全身之閃爍圖照片。圖 6 爲將 Tc — 99m — KYCGGKTKPREQ 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（21〇X297公釐） " '—' (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 4 項再填· 裝· 訂 514641 A7 B7 五、發明説明（6) QYNSTYRVV — NH2投服至炎症鼠體內之3 0分鐘後，此模型鼠全身之閃爍圖照片。圖 7 爲將 Tc 一 9 9m — KYCGGKTKPREQ QYNSTYRVV — NH2投服至炎症鼠體內之1 20 分鐘後，此模型鼠全身之閃爍圖照片。發明之詳細說明本發明形成金屬鏊合物之肽乃包含具有X 1 — X 2 — C y s胺基酸序列之三個胺基酸殘基，其中X 1代表除 Cy s殘基以外之胺基酸殘基；X2代表除Cy s殘基及 P r 〇殘基以外之胺基酸殘基；N端，C端及側鏈之官能基團可任被保護基團取代；且每個胺基酸殘基可任爲D形式或L形式。經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 形成金屬鏊合物之肽中，Cy s殘基不適於供XI或 X 2殘基所用，此乃因C y s殘基中之巯基團易形成分子內或分子間二硫鍵，故不安定之故。當X2爲P r 〇殘基時，肽形成鏊合物之能力受到阻礙使得肽標記上金屬放射性核素之效力不期望地降低。除了 Cy s及P r 〇殘基之外，所有其它胺基酸包括D及L形式之疏水胺基酸殘基，極性胺基酸殘基及可帶電胺基酸殘基（包括酸性及鹼性）均可供X 1及X 2胺基酸殘基所用。形成金屬鏊合物之肽之N端，C端及側鏈上之官能基團可被保護基團取代。此保護基團之代表性實例爲B 〇 c ，Fm 〇 c及慣以供保護胺基團及羧基基團之酯基團。本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Μ規格（210X297公釐） 514641 A7 __ΒΊ____ 五、發明説明（7 ) 形成金屬鏊合物之肽中之胺基酸序列X I — X 2中’ 最好避免As ρ殘基與G 1 y殘基彼此相連，G 1 y殘基與G1y殘基彼此相連，或G1y殘基與G1y殘基彼此相連之序列。此乃因側鏈具有羧基團之肽當投服至哺乳類體內時，已知會於器官包括腎內快速分解，因此於哺乳類體內不安定之故。此外，當胺基酸序列X 1 — X 2爲 G 1 y — G 1 y時，序列具有大的空間範圍，因此易於肽中折疊，導致肽形成金屬鏊合物之能力降低。胺基酸序列X1最好爲在其α位置具有游離胺基團之胺基酸殘基。由於X 1之α位置之游離胺基團之存在，形成金屬鏊合物之肽及此肽與生理活性肽，蛋白質或其它物質之複合物之金屬鏊合力可較爲增強。特別理想之具體實施例爲在其α位置具有作爲游離胺基團之一級胺基團（-ΝΗ2)之胺基酸殘基XI。根據本發明，形成金屬鏊合物之肽：XI — Χ2 — 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) C y s之理想實例爲具有下列X 1及X 2結合序列之肽類 :As ρ及Ty r殘基，As ρ及Ly s殘基，Ty r及 Gly殘基，Tyr及Tyr殘基，Tyr及Lys殘基，Lys殘基及Gly殘基，Lys及Tyr殘基，及 Ly s殘基及Ly s殘基。最好由疏水胺基酸諸如A1 a ，I 1 e ，Leu ， Me t ，Phe及Va 1等；極性胺基酸殘基As η， Gin，Hi s，Ser，Thr，Trp 及 Tyr 等；可帶電胺基酸（包括酸性及鹼性）諸如Arg，Asp，本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 514641 A7 B7__ 五、發明説明（8 ) G 1 u及Ly s等胺基酸中選擇XI或X2胺基酸殘基。藉選擇適當X 1及X 2殘基，則當將金屬放射性核素標記試劑（藉將形成金屬鏊合物之肽與生理活性肽，蛋白質或其它物質結合，繼而以金屬放射性核素配價而製得）投服至哺乳類體內時，此試劑之代謝物之主要路徑可予控制以局限在腎或胃腸道內。特別當適當選擇供X 1用之特定胺基酸殘基時，代謝物乃選擇性地由期望器官中排泄出。例如，當選擇A s p或Ly s作爲XI之胺基酸殘基時，最終所得金屬放射性核素標記試劑之代謝物排泄之主要路徑可選擇性地控制以局限在腎內。當選擇Ty r殘基作爲 X 1胺基酸殘基時，則代謝物排泄之主要路徑可予控制以局限在胃腸道內。經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 本發明之形成金屬鏊合物之肽乃結合至生理活性肽，蛋白質或其它物質上以形成複合物。當形成複合物時，形成金屬鏊合物之肽可結合至生理活性肽或蛋白質之C端或 N端上，或可插至介於C及N端間所任擇定之位置上。複合物亦可藉將形成金屬鏊合物之肽之N或C端結合至其它生理活性物質上而形成。當將形成金屬鏊合物之肽結合至生理活性肽，蛋白質或其它物質上時，彼等可經由一或更多胺基酸殘基之間隔基，官能基團或交聯劑而彼此鍵結。生理活性肽，蛋白質及其它物質之典型實例爲干擾素，細胞活素諸如腫瘤壞死因子（TNF)等；各種不同之荷爾蒙及抗體，補體，黏合分子及酵素。生理活性肽亦包括由抗體或黏合分子序列中所擇定之活性中央序列肽類。本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210Χ297公釐） " ' 514641 A7 B7 五、發明説明（9 ) 其它生理活性物質實例爲神經遞質諸如多巴胺，乙醯膽鹼及血清素等；抗生素諸如鏈黴素及頭孢菌素等；以及前列腺素。生理活性肽類最好亦爲對哺乳類體內之病灶位具親合力之肽類，例如對腫瘤位具親合力之肽，對發炎及/或感染位具親合力之肽，對血栓位具親合力之肽，及對腦病灶位具親合力之力之肽。在對病灶位具有親合力之肽方面，已知之肽類可本身使用而不需任何改良。對腫瘤位具親合力之肽實例包括具有下列胺基酸序列之肽：

AREPPTRTFAYWGQG 上示肽中，E P P T之胺基酸序列爲對腫瘤位具親合力之主要序列。因此，只要保留E P P T序列，則胺基酸序列經過置換，刪除或添加改良後之任何肽亦適用以作爲對腫瘤位具親合力之肽。經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 對發炎及/或感染位具親合力之肽之代表性實例爲具有下列胺基酸序列之肽：

KTKPREQQYNSTYRVV 此肽可藉由胺基酸序列之置換，刪除或添加而改良，只要無損於其對發炎及/或感染位之親合力即可。本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 514641 A7 B7 五、發明説明（10) 將形成金屬鏊合物之肽：Xl—X2-Cys結合至上述生理活性肽，蛋白質或其它物質上，而後將所得複合物與金屬放射性核素共同形成鏊合複合物。此鏊合複合物有利於作爲診斷或醫療組成物中之活性劑❶ 如爲形成金屬鏊合物之肽與生理活性肽之複合物，則此複合物可根據已詳知之B 〇 c法或Fmo c法，使用自動化肽合成器（例如Applied Biosystems公司之自動化肽合成器）輕易合成。待複合物已於合成器中之固態樹脂上製得後，將保護基團由複合物中移除，且於同時將複合物由固態樹脂中裂解。繼而複合物可藉於逆相柱上進行高效能液體色層分離法（HP L C )予以純化。複合物亦可藉液相肽合成法製得，或可由各種不同之動物來源中收集。經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 本發明含有三個胺基酸殘基之形成金屬鏊合物之肽本身亦可藉由與上述相同之方法合成。例如，肽可藉將半胱胺酸或其經保護衍生物結合至固相樹脂上，再將胺基酸 X 2或其經保護衍生物結合入，而後將胺基酸X 1或其經保護衍生物結合入，最後將所製得之肽X 1 -X 2 -C y s由樹脂中裂解出而製得。故，形成金屬鏊合物之肽可以簡易之方法製得。當製備本發明形成金屬鏊合物之肽與生理活性蛋白質或其它物質之複合物時，形成金屬鏊合物之肽中之N端或 C端胺基酸殘基乃以慣用方法鍵結至生理活性蛋白質之終端胺基酸殘基或至生理活性其它物質之官能基團上。結合作用或鍵結作用係經由一或多種胺基酸殘基之間隔基，官本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210 X 297公釐） ~ -13 - 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 514641 A7 B7 五、發明説明（11 ) 能基團或交聯劑而完成。如同上文所述，本發明形成金屬鏊合物之肽（彼乃複合物之一部份）最好位在複合物N端上，且複合物中形成金凰鏊合物之肽之N端胺基酸殘基中之α -胺基團必需保持游離態。此複合物具有高度形成鏊合物之能力。具有較高度形成鏊合物能力之複合物可以安定之形式，特別是藉選擇在α位置具有游離一級胺基團之胺基酸殘基作爲形成金屬鏊合物之肽中之Ν端胺基酸殘基而得。金屬放射性核素標記試劑（其係藉將金屬放射性核素配價至本發明形成金屬鏊合物之肽上，或至此肽與生理活性肽，蛋白質或其它物質之複合物上，最好至複合物上而得）可用以作爲放射診斷或放射醫療劑。金屬放射性核素標記試劑可於試管內藉令形成金屬鏊合物之肽或複合物溶於生理食鹽水或水性緩衝溶液中，而後令肽或複合物與金屬放射性核素起反應而安定地製得。供放射診斷用方面，乃將形成金屬鏊合物之肽或複合物，最好爲複合物，結合至金屬放射性核素諸如T c 一 99m，In — 111 ，或Ga - 67上，所得之金屬放射性核素標記試劑有利於作爲診斷劑。供放射醫療用方面，乃將形成金屬鏊合物之肽或複合物，最好爲複合物，結合至金屬放射性核素諸如Y - 9 0 ，R e - 1 8 6及R e - 1 8 8上，所得之金屬放射性核素標記試劑乃期望用以作爲放射醫療劑。當標記上金屬放射性核素諸如Tc 一 9 9m，Re — 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) ^^衣· -14 - 514641 A7 ____B7__ 五、發明説明（I2) 1 8 6或R e — 1 8 8時，標記試劑可以慣用方法藉令形成金屬鏊合物之肽或此肽與生理活性肽，蛋白質或其它物質之複合物溶於生理食鹽水或水性緩衝溶液中，將具有充分還原電位之還原劑諸如氯化亞錫加入，再將所得混合物與過鍀酸鈉（T c — 9 9m)溶液或過銶酸鈉（R e -1 8 6及Re — 1 8 8)溶液混合而製得。如爲I η -1 1 1之標記，則標記試劑可藉將肽或複合物與含有I η 一 1 1 1離子之弱酸性水性溶液混合而製得。如爲G a — 6 7或Y - 9 0之標記，則標記試劑可藉將肽或複合物加至含G a - 6 7離子或Y — 9 0離子之弱酸性或弱鹼性水性溶液中而製得。當金屬放射性核素標記試劑係備以供放射診斷或放射醫療組成物用時，則依上述方法所製之標記試劑可藉高效能液體色層分離法予以純化以移去雜質及未反應之過銲酸鹽離子，過銶酸鹽離子，In - 111離子，Ga - 67 離子及Y — 9 0離子，再備以供組成物所用。經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 本發明之放射標記試劑可與製藥學上可接受性載體混合以得放射診斷組成物或放射醫療組成物。載體之典型實例包括安定劑諸如抗壞血酸及對位胺基苯甲酸等；Ρ Η控制劑諸如水性緩衝溶液等；賦形劑諸如D -甘露糖醇等；放射化學純度增強劑諸如檸檬酸，酒石酸，丙二酸，葡糖酸鈉及葡庚糖酸鈉等。本發明之放射診斷或放射醫療劑亦可與這些載體備成立即可用之組套形式供應。本發明之放射診斷或放射醫療組成物（最好包含藉將本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（2!0Χ297公釐） ' 一 514641 A7 __B7 五、發明説明（i3) 形成金屬鏊合物之肽與生理活性眛，蛋白質或其它物質之結複合物標記上金屬放射性核素而得之金屬放射性核素標記試劑）可經由慣用之非經腸部路徑，例如藉由靜內注射來投服。劑量可依各種不同之狀況諸如體重，病患之年齢及病況，及所用之放射活性顯像裝置等而變。考慮這些狀況後，再決定適於供顯像及治療之放射反應劑量。當投服至人類時，含T c - 9 9 m標記試劑之診斷組成物劑量對Tc_9 9m放射活性而言，爲3 7MB q至 IIIOMBq，最好爲 185MBQ 至 lllOMBq ’如爲含Re - 186或Re - 188標記試劑之放射醫療組成物，劑量對放射活性而言，爲3 7 Μ B (1至 1 8 500MBQ，最好爲 370MBQ 至 7 4 0 0MB q。當投服含有Υ— 9 0標記試劑之醫療組成物時，則劑量對放射活性而言，爲3 7 Μ B q至 3700MBQ ，最好爲 37MBq 至 lllOMBq。經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 如同上文所述，本發明形成金屬鏊合物之肽，X 1 — X2 - Cy s中之XI或X2胺基酸殘基最好由疏水胺基酸殘基諸如 Ala，I le，Leu，Met ，Phe 及 V a 1等；極性胺基酸殘基諸如a s η，G 1 Ίι，H i s ，Ser ，Thr，Trp及Tyr等；可帶電胺基酸（包括酸性及鹼性）諸如Ar g，As p，G 1 u及Ly s 中所擇定。藉適當選擇X 1之X 2之胺基酸殘基，則金屬放射性核素標記試劑之代謝物之主要路徑可予控制以局限在腎內或胃腸道內。亦即，藉選擇A s ρ或L y s殘基作本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（2L0X297公麓）經濟部中央標準局員工消費合作社印製 514641 A7 B7 五、發明説明（14) 爲X 1 ，則代謝物排泄之主要路徑可予控制以局限在腎內，藉選擇Ty r殘基作爲X 1 ，則局限在胃腸道內。此選擇性局限化作用導致診斷位之不必要代謝物快速排泄，因而使對病患所可能之不必要暴靈降至最小，且同時，選擇性局限化作用可消除顯像中背景之噪音而達成診斷位之快速顯像。本發明含有三個胺基酸殘基之形成金屬鏊合物之肽並不具生理活性。因此，當複合物形成時，此肽本身不會損及複合物中生理活性肽，蛋白質或其它物質固有之活性。此特性乃適於供放射診斷或放射醫療組成物使用。其後，本發明更以下列實例（但不限定之）特別加以說明。實例 1 至 8 中，PCT/W09218534 — A 所揭示之複合物：KYCAREPPTRTFAYWGQ G (其係藉將含有對腫瘤位具親合力之EPPT之肽結合至形成金屬鏊合物之肽（KY C )之C端上而得）乃用以作爲基本序列。此序列中，座落於N端位之兩個胺基酸殘基乃被各種不同之胺基酸殘基替代，而所得複合物之丁 c - 9 9 m。標記速率乃予測定以用以作爲每一形成金屬鏊合物之肽之金屬鏊合物指數。實例1 含K Y CD — KYC，DYC或YYC之肽之合成將含KYC，D — KYC，DYC或YYC之肽以其 N端根據Fmo c法，使用肽合成器4 3 1 A型（八0口116(16丨〇373161113公司）於預加料之樹脂上合成。將所本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格(210X297公釐） ' -17 - (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 514641 A7 B7 五、發明説明（is) 合成之肽由預加料之樹脂中裂解，再藉將9. 5毫升三氟乙酸（TFA) ，0. 5毫升乙烷二硫赶（EDT), 1. 0毫升硫茴香醚，0. 75克酚及1. 0毫升純化水之混合物以冰冷卻，將10毫升混合物加至〇. 1 — 〇· 2克已合成之肽中，再令彼等於室溫下反應1. 5小時而予以去保護。繼而將所得肽藉高效能液體色層分離法於下列狀況下純化：色層分離法·· YMC-Pack R & S-0DS-5-ST, 2 0 X 1 5 0 毫米洗提速率：8毫升/分鐘檢定波長：230毫微米洗提液A : 〇 . 1 %三氟乙酸/純化水洗提液B:〇.1%三氟乙酸/乙睛濃度梯度：0分鐘（10%洗提液B)— 15 分鐘（1 0%洗提液B) — 7 5分鐘（5 0%洗提液B) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 將所得主要尖峰溶離份低壓凍乾，再將依高效能液體色層分離法測知具9 5 %純度之溶離份進行胺基酸分析以測定胺基酸組成物。純度係藉高效能液體色層分離法於下列狀況下測定。色層分離法：YMC-Pack 0DS-0DS-A, 4 . 6 X 1 5 0 毫米洗提速率：1毫升/分鐘檢定波長：215毫微米洗提液A : 〇 . 1 %三氟乙酸/純化水本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210 X 297公釐） -18 - 514641 A7 B7 五、發明説明（l6) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製洗提液 Β • 0 1 % 三氟乙酸 / 乙腈濃度梯度 ·· 0 分鐘 ( 5 % 洗提液 Β ) —> 3 0 分鐘 ( 4 0 % 洗提液 B ) 胺基酸分析係使用 Ρ I C 〇 / T A G 一 T Μ 工作站 ( W a t e r s 公司 ) 進行〇因爲 T r P 殘基被氫氣酸分解作用所降解且 C y S 殘基中之疏基團形成二硫鍵 > 故不可能精確測量 T r P 及 C y S 殘基〇所得肽之胺基酸組成物之分析資料係以每個肽分子中之胺基酸殘基數表示結果乃示於下〇結果中括弧內之數字意指每個肽分子中之胺基酸殘基數之理論值〇 K Y C A R E P P T R T F A Υ W G Q G = G 1 X : 2 0 ( 2 ) G 1 y ： 2 • 4 ( 2 ) > A r g : 2 0 ( 2 ) j T h r 2 3 ( 2 ) A 1 a ： 1 • 9 ( 2 ) P r 0 ： 2 2 ( 2 ) T y r : 2 1 ( 2 ) P h e ： 0 9 ( 1 ) j L y s ： 0 9 ( 1 ) 贅 C y S — ( 1 ) T r P 一 ( 1 ) 0 D 一 K Y C A R E P Ρ T R T F A Y W G — D 一 Q G = G 1 X » 2 0 ( 2 ) G 1 y ： 2 2 ( 2 ) A r g ： 1 9 ( 2 ) T h r 2 0 ( 2 ) » A 1 a 2 1 ( 2 ) > P r 0 ： 2 1 ( 2 ) T y r ； 1 8 ( 2 ) P h e ·· 1 1 ( 1 ) ϊ L y S ； 1 0 ( 1 ) C y S ； — ( 1 ) T Γ P : 一 ( 1 ) 〇 D Υ C A R E P P T R T F A Y W G Q G = A S P : 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) .9. 訂經濟部中央標準局員工消費合作社印製 514641 A7 B7 五、發明説明（1?) 1· 0(1) ，Glx:2. 0(2) ，Gly:2. 1 (2) > A r g ： 2 . 0(2)，丁 hr:l. 9(2) ，Ala:2. 0(2) ，Pro:2. 0(2)， T y r ： 2 . 1(2) ，Phe:l· 0(1) ，Cys (1)，Trp :-(l)。 YYCAREPPTRTFAYWGQG = G1 x ： 2. 〇(2) ，Gly:2· 1(2) ，Arg:2. 0 (2) ，Thr:l. 9(2) ，Ala:2. 0(2) ^10:2.1(2)^^71:2. 9(3) ^ P h e ： 1 . 1(1) ，Lys:l. 0 (1) ，Cys :—(1 ) ，T r p : -（ 1 )、實例2 含 KYC，D - KYC，DYC 或 YYC 之肽以 Tc 一 9 9 m谁行之放射標記作用將40. 3微莫耳/300微升葡庚糖酸鹽及130 毫微莫耳/5 0微升氯化亞錫之混合物裝入低壓凍乾管瓶中，再將1. 1至1. 5GBq過鍀酸鈉（Tc 一 99m )溶液加入使總量爲1 . 0毫升，令反應於室溫下進行 3 0分鐘，同時偶爾鼓轉管瓶。將一整份之反應混合物於乙酸纖維素膜上進行電泳以證實葡庚糖酸鹽是否放射標記上Tc 一 9 9m達9 5%或更多。其後，將實例1所得之四種肽稀釋成0· 25至12. 5毫微莫耳/200微升俗種不同濃度。將每一種稀釋液與2 0 0微升T c 一本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（21.0X297公釐）_ ' -20 - (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 514641 A7 ___ B7_ 五、發明説明（18) (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 9 9 m標記性葡庚糖酸鹽溶液混合以令彼等於室溫下反應 6 0分鐘。繼而令反應混合物冷卻。再將一整份反應混合物藉於下列狀況下進行高效能液體色層分離法以檢定T c 一99m之放射標記率。色層分離法：Millipore puresil 5 微米 C 1 8， 4. 6x150毫米洗提速率：1毫升/分鐘檢定波長：220毫微米放射活性檢定器：碘化鈉單一管道分析器洗提液A : 0 . 1 %三氟乙酸/純化水洗提液B : 0. 1%三氟乙酸/乙睛濃度梯度·· 0分鐘（1 0 %洗提液B ) — 5 分鐘（1 0%洗提液B) — 3 5分鐘（5 0%洗提液B) —45分鐘（75%洗提液B) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製所得四種T c - 9 9 m -標記性肽類之放射標記率乃示於表1中。表1之結果證貧即使當具有2 5微克/毫升低濃度之肽類於室溫下放射標記時，亦能達到9 0 %或更多之Tc一99m放射標記作用。本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210x297公釐） 514641 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（l9) 表1:含KYC，D-KYC，DYC或YYC之肽以Tc-99_行之放射標記記(％)(n=3,平均值土標準偏差) 形成金屬鏊合樣品之濃度物之肽微克/毫升微克/毫升微克/毫升微克/毫升微克/毫升 KYC 97.8±0. 69 96. 4±0.32 92.2±1.39 79.6±6. 62 39.1±1.59 D-KYC 99.8±0.11 — 97.7±0. 33 - 10.5±0. 43 DYC 100+0.00 98.1±0. 45 90.6±1.95 88·9±2·82 28. 7±6. 34 YYC 99. 4±0. 39 97. 9±0. 57 93. 4±2. 51 79.4±1.71 29·2±17·2 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐）一 22 - 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 514641 A7 B7 五、發明説明（20) 實例3

Ac-KVrARRPPTRTFAYWGOG-NmKYCAREPPTRTFAYWrm 之金屬鏊合力__ 吾人乃估測下列兩種肽類之金屬鏊合力。

Ac - KYCAREPPTRTFAYWGQG -N Η 2 ：其中Ν端賴胺酸（Κ)殘基之α —胺基團乃予乙醯化，且終端羧基團乃予醯胺化（ΝΗ2)。 KYCAREPPTRTFAYWGQG — ΝΗ2: 其中Ν端賴胺酸（Κ)殘基之α —胺基團爲游離態，且終端羧基團乃予醯胺化（Ν Η 2 )。吾人係檢定這兩種肽與金屬放射性活素之金屬鏊合力。亦即將兩種肽之金屬鏊合力相比較，其中一種肽中之Ν 端胺基酸殘基內之α -胺基團保持游離態（未經保護），另一種肽中之α —胺基團則經乙醯化。以丁 c - 9 9 m進行放射標記作用及肽類之純化作用係依類同於實例2之方法進行，惟係使用醯胺化之樹脂（ P A L樹脂，Millipore)來取代預先加料之樹脂。所得之肽類之胺基酸組成物之分析資料係以每個肽分子中之胺基酸殘基數表示，結果乃示於下。結果中，括弧內之數字意指每個肽分子中之胺基酸殘基數之理論值。 Ac-KYCAREPPTRTFAYWGQG - 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210 X297公釐） " 一 23 - (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 衣· 訂 514641 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 Α7 Β7 五、發明説明（21) N H 2^= G 1 X : 2 . 1(2) ，Gly:2. 5(2) ,Arg:2· 0(2) ，Thr:l. 5(2) ’ A 1 a * 1 . 8(2) ，Pro:2. 1(2) ，Tyr :1. 9(2) ，Phe:l. 2(1) ，Lys: 1 · 0(1) ，C y s : — ( 1 ) ，T r p : — ( 1 ) 〇 KYCAREPPTRTFAYWGQG — NH2 = G 1 x ： 2 . 1(2) ，Gly:2· 2(2) ，Arg :2.1(2)，Thr:1.6(2) ，Ala: 1. 9(2) ，Pro:2. 1(2) ，Tyr:l· 7 (2) ，Phe:l. 3(1) ，Lys :1.0 (1) ，Cys: -（l)，Trp: — (1)0 標記肽藉高效能液體色層分析所得之結果乃示於圖1 及2中。在N端之胺基酸殘基仍保留未乙醯化之游離α — 胺基團之肽乃顯示單一放射活性尖峰（逗留時間： 17. 0 8分鐘，如同圖2所示）。另一方面，在Ν端之胺基酸殘基具有乙醯化α -胺基團之另一種肽則顯示兩個放射活性尖峰（逗留時間：1 7 . 1 9分鐘及'1 8 . 0 1 分鐘，如同圖1所示）。這兩種肽證實具有與金屬放射性核素諸如 T c 一 9 9 m之金屬鏊合力。然而，在N端之胺基酸殘基具有乙醯化α -胺基團之肽被認爲在結構安定性及標記純度上不夠優良，此乃因其本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（21.0X297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂經濟部中央標準局員工消費合作社印製 514641 A7 _B7______ 五、發明説明（22 ) 放射活性圖顯示兩個放射活性尖峰所致。另一方面’另一個肽則顯示單一之放射活性尖峰，此表示N端胺基酸殘基具有游離及一級胺基團作爲α -胺基團之肽在結構安定性及標記純度上均具高度優良性。實例4 含KGC，KPC，D — KPC或YKC之肽之合成含KGC，KPC，D - KPC或YKC之肽係依類同於實例1之方法合成及純化，所得之肽類之胺基酸組成物之分析資料係以每個肽分子中之胺基酸殘基數表示，結果乃示於下。結果下，括弧內之數字意指每個肽分子中之胺基酸殘基數之理論值。 KGCAREPPTRTFAYWGQG = G1 x ： 2 . 0(2)，Gly;3· 2(3)，Arg:2_ 1 (2) ，Thr:l. 8(2) ，Ala:l. 8(2) ，P r o : 2 · 0(2)，T y r ·· 1 . 0(1)，

Phe: l. 1(1)，Lys:l. 0(1)，Cys :一（1) ，Trp: -（1) 〇 * KPCAREPPTRTFAYWGQG = G1 x ·· 2 · 〇(2)，Gly:2. 1(2)，Arg:2. 0 (2)，丁 hr:2. 0(2)，Ala:l. 9(2) ’ p r 〇 ·· 3 · 1(3)，丁 y r ·· 1 . 0(1)，

Phe:l· 0(1)，Lys:l_ 0(1)，Cys 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 -25 - 514641 A7 B7 五、發明説明（23) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 ( 1 ) Τ r Ρ ( 1 ) 〇 D .— κ Ρ C A R E Ρ P τ R T F A Υ W G Q G G 1 X ; 1 9 ( 2 ) j G 1 y ； 2 3 ( 2 ) A r g ： 1 9 ( 2 ) > T h r ： 1 8 ( 2 ) > A 1 a ： 1 9 ( 2 ) y Ρ r 0 ： 3 4 ( 3 ) T y r ； 1 0 ( 1 ) Ρ h e ； 1 1 ( 1 ) 5 L y S ： 0 7 ( 1 ) C y S ·· 一 ( 1 ) Τ r Ρ ·· — ( 1 ) 〇 Y K C A R E P P Τ R τ F A Y W G Q G = G 1 X ·· 2 0 ( 2 ) G 1 y ·· 2 • 2 ( 2 ) A r g : 2 • 1 ( 2 ) j Τ h r : 1 8 ( 2 ) ， A 1 a ： 1 • 8 ( 2 ) > P r 0 : 2 0 ( 2 ) T y r ·· 2 0 ( 2 ) Ρ h e 1 1 ( 1 ) 9 L y s ： 1 0 ( 1 ) 贅 C y S ; 一 ( 1 ) T r P ： — ( 1 ) 〇實例 5 盒 K G C > Y K C > κ Ρ C 或 D 一 Κ Ρ C 之肽以 T C 一 9 9 m 進行之放射標記作用將實例 4 所得之四種肽類以類同於實例 2 之方法標記上 T c — 9 9 m j 所得 τ c 一 9 9 m 標記性肽類以及實例 2 所得之 Τ c — 9 9 m 標記肽乃共同示於表 2 中〇與具有 1 0 0 微克 / 毫升濃度之樣品相比之下 j 表 2 結果顯示具有以丁 y r 殘基 j G 1 y 殘基或 L y S 殘基作爲 X 2 之肽可達到 9 8 % 或更多之放射標記率然而具有以 P r 0 殘基作爲X 2之肽則僅達5 0至7 0 %之放射標記率。 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -26 - 514641 A7 B7 五、發明説明（24) 表2含KYC，KGC, YKC，KPC及D-KPC之肽類以Tc-99ra^行之放射標記記(％)(n=3,平均值土標準偏差) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製形成金屬鏊合樣品之濃度物之肽微克/毫升微克/毫升微克/毫升 KYC 97.8±0. 69 96.4±0.32 92.2±1.39 KGC 98.2±0.11 93.2+1.77 91.9±4. 73 YKC* 98.1 97.6 96.9 KPC 53.6±0.81 51.0±0·13 - D - KPC 69·1±1·86 67.1 ±0.06 - 氺η=1 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Μ規格（210X297公釐） -27 - 514641 A7 B7 經濟部中央標準局員工消費合作社印製五、發明説明 ( 25； 1 實例 6 1 T C 9 9 m 標記件 K Y C A R E P P T R Τ F A Y W G__ 1 I Q G 之安定性 X--V 1 1 I 請 1 I 丁 c 一 9 9 m 標記性 K Y C A R E P P Τ R Τ F A Y 先閱 1 I 讀 1 1 W G Q G 係根據實例 1 及 2 之方法製得〇將標記肽與背 1· 1 之 1 1 0 0 0 倍量之 D T P A 溶液混合 y 再令混合物於室溫下注素 1 事 Γ 靜置一小時 0 而後檢定 T C — 9 9 m 轉鏊合成 D Τ P A 之項 Έ. 1 f 比率以測知鏊合物之安定性〇轉鏊合率係藉實例 1 所述之 ^rr 填寫本如頁 1 高效能液體色層分離法測量所得結果乃示於圖 3 中〇 "—^ 1 同圖 3 所示其證實即使當 D T P A 以 1 0 0 0 倍之量加 1 1 入時亦未觀察到除單一尖峰 ( 逗留時間 : 1 7 • 0 8 分 1 1 鐘 ) 之外之任何放射活性尖峰，因此 T C — 9 9 m 一訂 I K Y C 於標記肽中仍保持安定性 0 1 1 I 實例 7 1 1 % 含 K Y C D Y C 或 Y Y C 之 T C 一 9 9 m 標記肽之生物 W I 髒分佈 1 1 將重 1 4 0 至 2 0 0 克之 S D 型鼠 ( 史培格 — 達利 ) 1 以戊硫代巴比妥酸鈉麻醉，再將實例 2 所得之三種 T C — 1 I 9 9 m 標記肽類 1 T C — 9 9 m — K Y C A R E P P 丁 R 1 1 I T F A Y W G Q G » T C — 9 9 m — D Y C A R E P P T 1 1 R T F A Y W G Q G 及 T C 一 9 9 m — Y Y C A R E P P 1 1 T R T F A Y W G Q G 以 3 • 0 至 3 7 Μ B Q 之劑量由 1 1 尾静脈內投服至鼠體內 0 5 ， 3 0 6 0 及 1 8 0 分鐘後 1 1 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -28 - 514641 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（26 ) ，將鼠隻宰殺以令每個器官用碘化鈉單一管道分析器進行放射活性分佈分析。結果乃示於表3，4及5中。 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 衣. 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） -29 - 514641 A7 B7 五、發明説明（27) 表3: Tc-99m-DYC肽之生物體分佈 (高值:％ID/器官，低值:％ID/克） (n=3,平均值土標準偏差）經濟部中央標準局員工消費合作社印製器官 5分鐘後 30分鐘後 60分鐘後 180分鐘後肝 2.31±0.06 1.20±0.11 0. 56±0.17 0.16±0. 02 0. 33±0.05 0.19±0.01 0.10±0. 03 0·03±0·00 小腸 2·42±0·18 2.83±0. 53 4.18±1.35 4. 54±0. 59 0.33±0. 03 0.44±0.10 0. 66±0.14 0. 85±0.12 大腸 1·53±0.21 0. 58±0.16 0.28±0.06 0. 26±0. 03 0.21 ±0.02 0.09±0.03 0.04±0.01 0.03±0·01 胃 0.83±0.06 0. 71±0. 09 0. 67±0. 07 0. 60±0. 20 0·20±0·03 0.16±0.01 0.13±0.01 0.16±0. 06 脾 0.15±0·00 0. 05±0.01 0.02±0.01 0.01±0. 00 0.32±0. 03 0·14±0·03 0. 07±0. 02 0. 02±0. 00 肺 1.14±0.12 0. 47±0. 03 0·22±0·03 0.07±0.01 1.16±0.04 0.52±0·01 0. 28±0. 02 0. 09±0. 02 心 0.33±0·03 0.10±0.01 0.04±0.01 0.00±0.00 0.53±0.06 0.17±0. 02 0. 07±0. 01 0.01±0. 00 腎 7. 60±0.90 3. 93±0. 07 2.09+0.53 0.69+0.29 5.28±0.35 2. 87±0.03 1·67±0·48 0.58±0.25 全血 16. 55±0.89 4. 78±0. 56 2. 29±1.01 0. 29±0.18 1.51±0.08 0.46±0.06 0.24±0.12 0.03±0. 02 屍體 54. 28±3. 30 22. 95±2. 87 8. 24±2. 44 3.18±2. 67 0.43±0.03 0.19±0. 02 0.07±0.02 0.03±0. 02 尿 19.15±2. 74 64. 22±3. 06 82. 35±4.19 90. 32±3. 59 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 衣. 訂本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐）一 30 - 514641 A7 B7 五、發明説明（28 ) 表4: Tc-99m-KYC肽之生物體分佈 (高值:％ID/器官，低值:％ID/克） (n=3,平均值土標準偏差）器官 5分鐘後 30分鐘後 60分鐘後 180分鐘後肝 3. 63±1.75 2.88±0.56 1.77±0.68 0. 99±0. 50 0.58+0.28 0.43±0.05 0.27±0.12 0.15±0. 07 小腸 2. 75±0. 78 3.14±0.65 3·69±0.16 2. 09±0.48 0.40±0.09 0. 48±0.12 0.53±0. 02 0. 29±0. 09 大腸 1.63±0.38 0.56±0.08 0.24±0.01 3. 55±1.22 0.23±0.03 0.10±0. 03 0. 04±0.00 0·51±0·16 胃 0.65±0.22 0.45±0.14 0. 36±0. 23 0. 06±0. 04 0.27±0.06 0.16±0. 05 0.13±0. 08 0. 02±0.01 脾 0.33±0.20 0.14±0. 06 0.09±0·05 0. 06±0. 04 0.82±0.51 0.34+0.15 0.20±0.12 0·16±0.10 肺 1.09±0.52 0. 45±0.09 0.19±0.08 0·07±0·04 1.10±0. 45 0.48±0.07 0.22±0.10 0·08±0·04 心 0.29±0.08 0.12±0.01 0.04±0.01 0·01±0·00 0.49±0.11 0. 20±0.02 0. 06±0.01 0.01±0. 00 腎 9. 65±1.99 6. 80±0.84 5. 22±0.93 4. 75±1.08 8. 06±2. 66 5. 36±0. 31 3. 97±0. 64 3. 69±0. 54 全血 17. 38±1.58 6. 85±1.68 2. 06±0. 33 0.37±0·14 1.56±0.07 0.62±0.14 0.18±0. 03 0. 03±0.01 屍體 50.31±2.82 25. 57+2. 55 8.39±1.12 2. 20+1.51 0.39±0.03 0.20±0.03 0.18±0.03 0. 20±0.01 尿 19. 46±8.85 55. 55±4. 91 78. 81 ±0.99 86. 01 ±3. 07 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 衣. 訂經濟部中央標準局員工消費合作社印製本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（21ΌΧ 297公釐）一 31 - 514641 A7 B7 五、發明説明（29 ) 表5: Tc-99m-YYC肽之生物體分佈 (高值:％ID/器官，低值:％ID/克） (n=3,平均值士標準偏差）器官 5分鐘後 30分鐘後 60分鐘後 180分鐘後肝 7. 46±0.52 3. 97±0. 23 1.99±0. 37 0.59±0.06 1.05±0.08 0.56±0. 03 0.28±0.06 0. 09±0.01 小腸 4. 23+0.63 25.03^5.42 27. 35±3. 38 23. 28±4.42 0. 50+0.05 3. 00±0.88 4.81 ±0.70 3. 00 ±0.41 大腸 1.70±0.25 0.49±0.18 0.19±0. 05 20.66±6.82 0.22±0.02 0.07±0.01 0. 03±0.01 2.12±0. 72 胃 0.87±0.02 0.61±0. 67 0·18±0·08 0.04±0. 00 0.13±0.01 0. 09±0.09 0.03±0.02 0.10±0.00 脾 0.03±0.04 0.15±0.01 0.11±0.02 0.03±0.01 0.70±0.00 0.36±0.07 0. 25±0.06 0.06±0.01 肺 2. 82±0.27 1.34±0.10 0.99±0.21 0. 36±0. 06 3. 20±0. 37 1.48±0.31 1.02±0.18 0.37±0.07 心 0.33±0.02 0.09±0. 02 0. 04±0.01 0.00±0.00 0. 59±0.05 0.15±0.03 0.06±0. 03 0.01+0. 00 腎 5. 76±0.64 2. 38±0.51 1.86±0. 79 0.87±0. 73 4. 94±0.79 1.87±0.27 1.40±0.60 0. 68±0. 62 全血 17. 63±2. 89 4. 65±1.30 1.61±0. 95 0.10±0. 04 1.63±0.33 0.41±0.09 0.14±0.08 0.01±0.00 屍體 54. 57±2. 67 22. 78±4. 44 8.46±2. 68 2. 08±1.87 0.44±0.03 0.17±0·03 0·06±0·02 0. 02±0.01 尿 11.63±3. 99 40.29±1.70 47. 88±1.42 52. 01 ±3. 89 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

、1T 經濟部中央標準局員工消費合作社印製本紙張尺度適用中國國家標準（CNS )八4規格（210Χ297公釐） -32 - 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 514641 A7 ____B7_ 五、發明説明（3〇) 表3，4及5之結果證實Tc-9 9m標記肽於正常鼠體內之活體內分佈乃隨著標記肽之間僅有之X1胺基酸殘基之差異而顯著變化。特別是當標記肽具有A s p殘基或L y s殘基作爲X 1時，肽乃由腎中快速排泄，且即使於投服之6 0分鐘後，亦以8 0 %之放射活性排泄至尿中。相反地，當肽具有T y r殘基作爲X 1時，則投服6 0 分鐘後，小腸中乃累積3 7 %放射活性之肽。其後，肽乃經由胃腸道排泄至糞便中。實例8 使用 Tc — 99m — KYCAREPPTRTNAYWG Q G之腫瘤之顯像在KYCAREPPTRTNAYWGQG之N端含有K Y C之肽係根據實例1之方法予以合成及純化。以 T c 一 9 9 m進行之放射標記係依與實例2相同之方法進行，繼而進行高效能液體色層分離分析。所得肽： KYCAREPPTRTNAYWGQG之胺基酸組成物之分析資料係以每個肽分子中之胺基酸殘基數表示，結果乃示於下。結果中’括弧內之數字爲每個肽分子中之胺基酸殘基數之理論值。 KYCAREPPTRTNAYWGQG = Asn ： 1 1(1) ，Glx:2. 0(2) ，Gly:2. 1 (2) ，Arg:l· 9(2) ，Thr:2· 0(2) ,A 1 a ： 1 . 9(2) ，Pro:2. 1(2)，本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐）— (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 514641 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 Α7 Β7 五、發明説明（31) T y r ： 2 . 0(2) ，Lys:〇· 9(1) ，Cys ：-(l) ，T r ρ : _ ( 1 ) 0 將腫瘤細胞HEp2 (5x1 06個細胞，人類表皮樣癌瘤；ATCC No· CCL23)懸浮於1_ 0毫升培養基（含伊格氏B S S，9 0%胎牛血清，1 0%之最小基本培養基（伊格氏））中’再將1 〇〇微升懸浮液由皮下注射至BALB/C裸鼷鼠（6星期大）之體側內 ^注射之兩星期後’將移植之腫瘤已長成約〇. 3克大小之鼷鼠以戊硫代巴比妥酸鈉麻醉’再將3 5至4 0MB Q 劑量之T c 一 9 9 m標記肽由尾靜脈注入。注射之5及 2 0分鐘後，使用r照相機令動物顯像。所得結果乃示於圖4及5中。、顯像後立即將動物宰殺，並使用碘化鈉單一管道分析器來檢定每一器官內放射活性之分佈以測知腫瘤位之放射活性與肌肉位之放射活性之比率（T / B比）。注射T c —99m標記肽之20分鐘後，T/B比顯示爲4. 50 ±0. 71 (n = 3，平均值土標準偏差），且腫瘤位乃明顯顯像。此結果證實本發明形成金屬鏊合物之肽K Y C 乃有用以安定地將對腫瘤位具親合力之肽：AREPPT RTFAYWGQG (PCT/W09218534-A )放射標記上T c 一 9 9 m，且仍保持肽之藥學活性。實例9 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Μ規格（210X 297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂經濟部中央標準局員工消費合作社印製 514641 A7 B7___ 五、發明説明（32)

99m-KYCGG K T K P R E 0 0 Y N S T Y v — Ν Η 9之製備

肽：KYCGGKTKPREQQYNSTYRVV 一 NH 2係依與實例1相同之方法合成及純化，惟係使用醯胺化樹脂（P A L樹脂，Mi 1 1 ipore )取代預先加料之樹脂。而後，再依與實例2相同之方法，將已合成之肽標記上T c - 9 9 m及藉高效能液體色層分離分析。所得之肽之胺基酸組成物之分析資料係以每個肽分子中之胺基酸殘基數表示，結果乃示於下〇結果中括弧內之數字意指每個肽分子中之胺基酸殘基數之理論值〇 K Y C G G K T K P R E Q Q Y N S Τ Y R V V - Ν Η 2 = A s P : :] L · ] L (1 .) 丨G ] L ί r : 丨 C J . 0(3) S e r ： 0 . 9 ( 1 ) G 1 y : 2 1 ( 2 )， A r g ；2 .0 ( 2 ) ，丁 h r :2 2 ( 2 )，P r 〇 :1.0(l)，Tyr:3.2(3)，Val: 1. 5(2) ，：Lys:3. 0(3) ，Cys: — (1 )° 將40· 3微升/300微升葡庚糖酸鹽及1 3 0毫微米/5 0微升氯化亞錫溶液之混合物裝入低壓凍乾管瓶中，再將1. 5至1. 8MBq過鍀酸鈉（Tc一99m )溶液加入使總量爲.1 . 0毫升。令反應於室溫下進行 3 0分鐘，同時偶爾鼓轉管瓶。將一整份之反應混合物於乙醯纖維素膜上進行電泳以證實葡庚糖酸鹽是否放射標記本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210X297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 514641 A7 B7 經濟部中央標準局員工消費合作社印製五、發明説明 ( 33； 1 I 上 T C 一 9 9 m 達 9 5 % 或更多 0 其後贅將 4 0 毫微莫耳 1 1 / 5 0 0 微升之肽與 5 0 0 微升 T C — 9 9 m 標記性葡庚 1 1 糖酸鹽溶液混合〇再令反應於沸水浴上進行 2 0 分鐘〇而 1 I 請 1 1 後令反應混合物冷卻〇再令 —‘ 整份反應混合物進行薄層色閲 1 I 讀 1 ! 層分離 ( 薄膜色層分離板〇 D S 贅延展劑 : 0 1 % 二背 1 之 1 氟乙酸 / 6 0 % 乙睛 / 純化水 ) 以測知 Τ C — 9 9 m 之放注意 Μ. 1 1，射標記率〇結果得知肽之放射標記率爲 9 0 % 〇 Ψ 項 1 1 丹填馬本百螫 I 實例 1 0 Ά 、^〆 1 1 用 T C 一 9 9 m 一 Κ Υ C G G K Τ Κ Ρ R E Q Q Y Ν S 1 I T Y R V V N Η 之炎症位之顯像 1 1 I 令 1 0 8個金黃色蔔萄球菌細胞懸浮於] L毫升生理食 1 訂 I 鹽水中再將 1 0 0 微升懸浮液由肌內投服至重約 2 2 0 1 1 I 克之 S D 鼠之右小腿內〇 2 4 小時後將明顯觀察到發炎 1 1 1 之鼠隻以戊硫代巴比妥酸鈉麻醉再將 3 7 至 7 4 Μ Β Q 1 % 實例 9 所得之 T C — 9 9 m 標記肽 ·· Κ Υ C G G K Τ Κ P 1 R E Q Q Y N S Τ Υ R V V — N Η 2由尾靜脈注入£ •注射 I 之 3 0 及 1 2 0 分鐘後 j 使用 r 照相機令動物顯像〇所得 1 I m 結果乃示於圖 6 及 7 中 > 所論及之區域係由所得顯像中所 1 1 I 擇定以測知炎症位 ( Τ ) 之放射活性與正常位 ( B ) 之放 1 1 射活性之比率丁 / Β 〇 Τ / B 比顯示爲 3 2 6 土 1 1 0 1 8 ( η = 6 平均值土標準偏差 ) 且炎症位乃明 1 1 顯顯像〇所得結果證實本發明之 Τ C — 9 9 m 一 K Υ C 乃 1 1 有用以安定地將對炎症位具親合力之肽 : G G K T Κ Ρ R 1 1 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（21.0X 297公釐） -36 - 514641 A7 B7 五、發明説明（34) EQQYNSTYRVV — NH2放射標記上 Tc-9 9 m，且仍保持肽之藥學活性。如同上文所詳述，本發明含有特定三個胺基酸X 1 — X2 — Cy s之形成金屬鏊合物之肽之優點爲此肽可輕易處理而不必有先前技藝中不期望分子內及.分子間二硫鍵形成之任何特殊考量；此肽可結合至生理活性肽，蛋白質或其它物質上以形成複合物而不會破壞生理活性肽等之活性，此肽於試管內及活體內均可與金屬放射性核素安定地形成放射活性鏊合複合物；此肽可提供放射活性而不會使最終所製之標記試劑於活體內造成非專一性之累積分佈，且可依所需及目的而投計供標記試劑排泄用之代謝物路徑。 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 衣· 訂經濟部中央標準局員工消費合作社印製本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（21.0X 297公釐）

Claims

514641 A8 B8 C8 D8 申請專利範圍

修正補充經濟部智慧財產局工消費合作社印製第84 1 1 37G8號專利申請案中文申請專利範圍修正本民國9 0年1 2月修正 1 . 一種形成金屬鏊合物之肽，其具有選自KG C， YKC，DYC及YYC之胺基酸序列，其位在N端，C 端及側鏈之官能基團可被保護基團所取代；且每個胺基酸殘基可爲D形式及L形式。 2. 如申請專利範圍第1項之形成金屬鏊合物之肽，其係用於將生理活性肽，蛋白質或其它物質標記上金屬放射性核素。 3. 如申請專利範圍第2項之形成金屬鏊合物之肽，其係用於標記對哺乳類身體病灶位置具親合力之肽。 4. 如申請專利範圍第3項之形成金屬鏊合物之肽，其中該具親合力之肽係選自對腫瘤位置具親合力之肽，對血栓位置具親合力之肽，及對腦病症位置具親合力之肽。 5. 一種金屬放射性核素標記試劑，其中金屬放射性核素係配價至申請專利範圍第1至4項中任一項之形成金屬鏊合物之肽上，且該金屬放射性核素爲T c 一 9 9 I η - 1 1 1 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) G 一 6 7 ，Υ — 9 0 R -186 或 Re-188 6 . —種放射診斷組成物，其包含作爲有效成分之申請專利範圍第5項之金屬放射性核素標記試劑且其中有 T c — 9 9m配價至其上本纸張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 514641 A8 B8 C8 D8 __ 六、申請專利範圍 7 . —種製備如申請專利範圍第5項之金屬放射性核素標記試劑之方法，其包含一步驟將金屬放射性核素配價至申請專利範圍第1至4項中任一項之形成金屬鏊合物之肽上，且該金屬放射性核素爲T c 一 9 9 in * In — 111， Ga - 67，Y-90，Re - 186 或 Re — 188 〇 8· —種製備如申請專利範圍第6項之放射診斷組成物之方法，其包含一步驟將申請專利範圍第5項之金屬放射性核素標記試劑（其中已有T c 一 9 9 m配價至其上）與製藥學上可接受之載劑混合。 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部智慧財產局員工消費合作社印製本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 2