TWI615406B - 特異性結合ｅｒｂｂ３之抗體及其用途 - Google Patents

特異性結合ｅｒｂｂ３之抗體及其用途 Download PDF

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Abstract

提供一種特異性結合ErbB3之抗體或其抗原結合片段及其用途。該特異性結合ErbB3之抗體或其抗原結合片段可有效地用於預防或治療一種與ErbB3蛋白活化或過度表現相關的疾病。

Description

特異性結合ERBB3之抗體及其用途
相關申請案之交叉引述
此申請案主張於2015年12月7日向韓國智慧財產局提申之韓國專利申請案第10-2015-00173281號的利益，其之整體內容被併入本文中以作為參考資料。
發明領域
一或更多實例具體例係有關於一種特異性結合受體酪胺酸激酶ErbB3蛋白之抗體或該抗體的抗原結合片段，其之製備方法及其用途。
發明背景
相關技藝之說明
受體酪胺酸激酶之表皮生長因子受體(EGFR或ErbB)家族包括ErbB1(亦稱為表皮生長因子受體(EGFR))、ErbB2(亦稱為人類表皮生長因子受體(HER2))、ErbB3(亦稱為HER3)，及ErbB4(亦稱為HER4)。ErbB之受體酪胺酸激酶家族可與配體組合形成同型二聚體(homodimer)或異二聚體，以及可以使得促分裂原活化蛋白激酶(MAP2K、MEK或MAPKK)/促分裂原活化蛋白激酶 (MAPK)之訊息傳遞途徑活化，或是磷脂肌醇-3-激酶(phosphoinositide 3-kinase)(PI3K)/蛋白質激酶B(PKB或Akt)之訊息傳遞途徑活化。據報導ErbB蛋白家族與癌症的發生、進展或預後有關。
ErbB1抑制劑爾必得舒®(Erbitux®)(西妥昔單抗(Cetuximab))或得舒緩®(Tarceva®)(埃羅替尼(Erlotinib))以及ErbB2抑制劑賀癌平®(Herceptin®)(曲妥珠單抗(Trastuzumab))或泰嘉錠®(Tyverb®)(拉帕替尼(Lapatinib))，為市場上可買到的抗癌藥。然而，許多病人對此等抗癌藥反應遲鈍，並且此等抗癌藥伴隨著發展出耐藥性(resistance)。市場上尚未可買到ErbB3或ErbB4之特異性抑制劑抗體。
因此，對於可以應付癌症的遺傳多樣性及克服抗癌藥耐藥性之新的抗癌藥有需求。
發明概要
一或更多實例具體例包括一種特異性結合ErbB3之抗體或其抗原結合片段。
一或更多實例具體例包括一種用於預防或治療一種與ErbB3蛋白活化或過度表現相關的疾病之藥學組成物。
一或更多實例具體例包括一種預防或治療一個體體內與ErbB3蛋白活化或過度表現相關的疾病之方法。
隨後的說明中將部分地列舉額外的態樣，以及在某種程度上，從說明中將會顯而易見，或者可以通過實施所提出的實例具體例來學習。
從下列實例具體例之說明結合附圖，此等及/或其他的態樣會變得明顯和更容易理解，其中：圖1A及1B闡釋領導抗體(lead antibody)及其修飾抗體之重鏈(圖1A)及輕鏈(圖1B)的可變異區域之胺基酸序列及互補性決定區域(CDRs)；圖2為一圖，其顯示於抗-ErbB3抗體存在下，ErbB3蛋白及HRG之結合親和性(%)；圖3為一圖，其顯示於抗-ErbB3抗體存在下，ErbB2蛋白及ErbB3蛋白之結合親和性(%)；圖4A及4B為圖，其分別顯示於抗-ErbB3抗體存在下，ErbB3及Akt之磷酸化比率(%)；圖5為於抗-ErbB3抗體存在下，BxPC3胰腺癌細胞之相對增殖(%)的圖；圖6為BT474乳癌異種移植模型，於投與抗-ErbB3抗體之後的腫瘤體積(立方毫米(mm3))的圖；圖7為MDA-MB-468乳癌異種移植模型，於投與抗-ErbB3抗體之後的腫瘤體積(mm3)的圖；圖8為A431皮膚癌異種移植模型，於投與抗-ErbB3抗體之後的腫瘤體積(mm3)的圖；圖9為FaDu頭頸部癌異種移植模型，於投與 抗-ErbB3抗體或組合投與抗-ErbB3抗體及西妥昔單抗(Cetuximab)之後，腫瘤體積(mm3)的圖；圖10為組合投與紫杉醇(paclitaxel)、HRG及抗-ErbB3抗體之後，乳癌細胞內之半胱天冬酶3/7(caspase3/7)之活性(以相對發光強度單位(RLU)計)的圖；圖11為組合投與西妥昔單抗(Cetuximab)、HRG及抗-ErbB3抗體之後，結腸直腸癌細胞之癌細胞增殖速度(%)的圖；以及圖12為耐西妥昔單抗(Cetuximab-resistant)異種移植模型，於組合投與西妥昔單抗及抗-ErbB3抗體之後，腫瘤體積(mm3)的圖。
較佳實施例之詳細說明
現在將更詳盡地參考附圖所示的實例具體例，其中相同的參考數字始終提及相同的元件。在這方面，本實例具體例可以有不同的形式，以及不應解釋為限制本文列舉的說明內容。因此，該等實例具體例僅僅參考圖示說明如下，來解釋本說明的態樣。當使用於本文中，術語“及/或”包括一種或更多種相關列舉的項目之任一者或全體。當像是“之至少一者”之措辭在一份元件清單之前時，係修飾完整的元件清單且不是修飾清單之個別元件。
依據本揭示的一態樣，一種特異性結合ErbB3之抗體或該抗體的抗原結合片段包括： 一重鏈可變異區域，其包括選自於序列辨識編號：61至85所構成的群組之至少一胺基酸序列；一輕鏈可變異區域，其包括選自於序列辨識編號：86至101所構成的群組之至少一胺基酸序列；或是該重鏈可變異區域及該輕鏈可變異區域。
有五種類型的重鏈，用γ、δ、α、μ及ε表示。重鏈的類型定義了抗體種類。重鏈類型α及γ各鏈由大概450個胺基酸組成，而μ及ε各鏈由大概550個胺基酸組成。各個重鏈有二個區域，亦即可變異區域及恆定區域。
有二種類型的輕鏈，用λ及κ表示。各輕鏈由大概211至217個胺基酸組成。各個人類抗體只含一種類型的輕鏈。各個輕鏈含有二個連續的領域，包括一個恆定區域及一個可變異區域。
可變異區域係指抗體與抗原結合的一區域。
重鏈可變異區域可包括：一互補性決定區域-H1(CDR-H1)，其包括選自於序列辨識編號：61至68所構成的群組之胺基酸序列；一CDR-H2，其包括選自於序列辨識編號：69至77的胺基酸序列；以及一CDR-H3，其包括選自於序列辨識編號：78至85的胺基酸序列。舉例而言，該重鏈可變異區域可包括選自於序列辨識編號：1至30所構成的群組之胺基酸序列。術語"互補性決定區域(CDR)"係指一抗體的可變異區域的一個部位，該部位賦予抗體或其抗原結合片段對抗原的結合特異性。
輕鏈可變異區域可包括：一CDR-L1，其包 括選自於序列辨識編號：86及87所構成的群組之胺基酸序列；一CDR-L2，其包括選自於序列辨識編號：88至93所構成的群組之胺基酸序列；以及一CDR-L3，其包括選自於序列辨識編號：94至101所構成的群組之胺基酸序列。舉例而言，該輕鏈可變異區域可包括選自於序列辨識編號：31至60所構成的群組之胺基酸序列。
該抗體或其抗原結合片段可以包括一重鏈可變異區域，其係選自於重鏈可變異區域CDR-H1、CDR-H2及CDR-H3所構成的群組，其表示表5中列出的胺基酸序列。
Figure TWI615406BD00001
Figure TWI615406BD00002
舉例而言，該抗體或其抗原結合片段可以包括一重鏈可變異區域，其包括一含括序列辨識編號：61之胺基酸序列的CDR-H1、一含括序列辨識編號：69之胺基酸序列的CDR-H2，及一含括序列辨識編號：78之胺基酸序列的CDR-H3。
該抗體或其抗原結合片段可以包括一輕鏈可變異區域，其係選自於輕鏈可變異區域CDR-L1、CDR-L2及CDR-L3所構成的群組，其表示表6中列出的胺基酸序列。
Figure TWI615406BD00003
舉例而言，該抗體或其抗原結合片段可以包括包括一輕鏈可變異區域，其包括一含括序列辨識編號：86之胺基酸序列的CDR-L1、一含括序列辨識編號：88之胺基酸序列的CDR-L2，及一含括序列辨識編號：94之胺基酸序列的CDR-L3。
ErbB3可以為ErbB3多肽或其片段。ErbB3多肽可以為Genbank存取編號NP_001005915之人類胺基酸序列，或是Genbank存取編號NP_034283之小鼠胺基酸序列。ErbB3多肽之片段可以為一種多肽，其包括ErbB3多肽之部分胺基酸序列。ErbB3為一種表皮生長因子受體(EGFR或ErbB)家族之受體酪胺酸激酶，並且亦稱為HER3。
特異性結合ErbB3之抗體或其抗原結合片段可以具有對ErbB3多肽或其片段之親和性。
該抗體或其抗原結合片段可以抑制ErbB3蛋白與特異性結合ErbB3蛋白之材料的結合，ErbB1蛋白與ErbB3蛋白之二聚合作用，ErbB1蛋白與ErbB3蛋白之二聚合作用，ErbB2蛋白與ErbB3蛋白之二聚合作用，ErbB3或Akt之磷酸化，或其等之組合。特異性結合ErbB3蛋白之材料可以為賀瑞谷林(heregulin)(HRG)。
術語"抗體"與"免疫球蛋白(Ig)"可以交替使用。整個抗體具有含括2個全長輕鏈與2個全長重鏈的結構，其等由雙硫鍵(SS)連接。抗體可以為舉例而言，IgA、IgD、IgE、IgG或IgM。抗體可以為單株抗體或多株抗體。 抗體可以為動物衍生的抗體、小鼠-人類嵌合抗體、人化的抗體，或人類抗體。
術語"抗原結合片段"係指整個抗體結構的片段，其可以為含括抗原結合位址之多肽部分。舉例而言，該抗原結合片段可以為scFv、(scFv)2、Fv、Fab、Fab'、Fv F(ab')2，或其等之組合。
該抗體或其抗原結合片段可以予以修飾。舉例而言，該抗體或其抗原結合片段可以透過複合(conjugation)或結合、醣化、標籤附接(tag attachment)或其等之組合予以修飾。該抗體可以與其他藥物複合，例如抗癌藥。舉例而言，該抗體或其抗原結合片段可以與下列複合：山葵過氧化酶(HRP)、鹼性磷酸酶、不完全抗原、生物素、鏈黴親合素(streptavidin)、螢光材料、放射性材料、量子點、聚乙二醇(PEG)、組胺酸標籤，或其等之組合。螢光材料可以為Alexa Fluor®532、Alexa Fluor®546、Alexa Fluor®568、Alexa Fluor®680、Alexa Fluor®750、Alexa Fluor®790，或Alexa FluorTM350。
依據本揭示的另一態樣，一種用於預防或治療一種與ErbB3蛋白活化或過度表現相關的疾病之藥學組成物，包括如以上所述之任一實例具體例之抗體或其抗原結合片段。
該抗體、抗原結合片段及ErbB3蛋白係與如上所述者相同。
與ErbB3蛋白活化或過度表現相關的該疾病 可以為癌症。癌症可以為實性(solid)癌症或非實性癌症。實性癌症係指癌性腫瘤發病於實體器官內，例如肝臟、肺臟、乳房或皮膚，而非實性癌症係指癌影響血液，所以稱為血癌(blood cancer)。舉例而言，癌症可以選自於下列所構成的群組：乳癌、皮膚癌、頭頸部癌、胰腺癌、肺癌、結腸癌、結腸直腸癌、胃癌、卵巢癌、前列腺癌、膀胱癌、子宮癌、肝癌、腎臟癌、明亮細胞肉瘤、黑色素瘤、腦脊髓腫瘤、腦癌、胸腺瘤、間皮瘤、食道癌、膽道癌、睪丸癌、胚癌(germinal cancer)、甲狀腺癌、副甲狀腺癌、子宮頸癌、子宮內膜癌、淋巴瘤、骨髓發育不良症候群(myelodysplastic syndrome)(MDS)、骨髓纖維化(myelofibrosis)、急性白血病、慢性白血病、多發性骨髓瘤、何杰金氏疾病(Hodgkin's disease)、內分泌癌，以及肉瘤。
術語"預防"係指藉由投與該藥學組成物，來抑止或延遲一種與ErbB3蛋白活化或過度表現相關的疾病發生之任何行為。術語"治療"係指藉由投與該藥學組成物，使一種與ErbB3蛋白活化或過度表現相關的疾病之症狀減輕的任何行為。
該藥學組成物可以包括一種藥學上可接受的載劑。載劑可以理解成意指賦形劑、稀釋劑或佐劑。舉例而言，載劑可以選自於下列所構成的群組：乳糖、右旋糖、蔗糖、山梨糖醇、甘露糖醇、木糖醇、赤藻糖醇、氫化麥芽糖、澱粉、阿拉伯膠橡膠、藻酸鹽、明膠、磷酸鈣、 矽酸鈣、纖維素、甲基纖維素、聚乙烯氫吡咯酮(polyvinylpyrrolidone)、水、生理食鹽水、緩衝液例如磷酸鹽緩衝食鹽水(PBS)、羥苯甲酸甲酯、羥苯甲酸丙酯、滑石、硬脂酸鎂、甘胺酸、組胺酸、絲胺酸、聚山梨醇酯，以及礦油。該藥學組成物可以包括填料、抗凝劑、潤滑劑、潤濕劑、調味劑、乳化劑、防腐劑，或其等之組合。
該藥學組成物可以使用本技藝任何共同方法予以調配成任何的形式。舉例而言，該藥學組成物可以予以調配成口服劑量形式(舉例而言，粉末、錠劑、膠囊、糖漿劑、藥片，或顆粒)，或是非經口的劑量形式(舉例而言注射)。該藥學組成物可以製備成供全身性投遞的調配物，或是製備成供局部投遞的調配物。
該藥學組成物可以進一步包括一種抗癌藥。抗癌藥可以為西妥昔單抗、帕尼單抗(Panitumumab)、埃羅替尼(Erlotinib)、吉非替尼(Gefitinib)、曲妥珠單抗(Trastuzumab)、T-DM1、帕妥珠單抗(Pertuzumab)、拉帕替尼(Lapatinib)、紫杉醇、他莫昔芬(Tamoxifene)、順鉑、抗-CTLA-4抗體、抗-PD-1抗體、抗-PDL-1抗體、5-氟尿嘧啶(5FU)、吉西他濱(Gemcitabine)，或其等之組合。該藥學組成物可以包括單一組成物或個別的(separate)組成物。舉例而言，該藥學組成物之抗體或其抗原結合片段可以為一種非經口的劑量形式的組成物，以及抗癌藥可以為一種口服劑量形式的組成物。
該藥學組成物可以包括有效量的該抗體或 其抗原結合片段、抗癌藥，或其等之組合。本文中使用之術語"有效量"係指足以預防或治療一種與ErbB3蛋白活化或過度表現相關的疾病的量，當投與至需要此預防或治療的一個體時。有效量可以取決於熟習此藝者選擇的細胞或個體而適當地選擇。舉例而言，有效量可以取決於下列因素而適當地選擇：疾病嚴重性、病人的年齡、體重、健康狀況、性別、病人的藥物敏感性、投與的期間、投與的途徑、排泄率、治療期間，及其他的因素，包括一藥物與該藥學組成物組合使用或同時使用，以及醫療領域已知的其他因素。有效量可以為大約0.5微克(μg)至大約2公克(g)、大約1μg至大約1g、大約10μg至大約500毫克(mg)、大約100μg至大約100mg，或是大約1mg至大約50mg的藥學組成物。
該藥學組成物之劑量當投與至一成人時，可以為舉例而言，大約0.001毫克/公斤(mg/kg)至大約100mg/kg、大約0.01mg/kg至大約10mg/kg，或是大約0.1mg/kg至大約1mg/kg。投與的數量可以為舉例而言，一天一次或多次、一週一次、二週一次、三週一次、四週一次，或是一年一次。
依據本揭示的另一態樣，一種預防或治療一個體體內與ErbB3蛋白活化或過度表現相關的疾病之方法，包括投與如以上所述之任一實例具體例之抗原或其抗原結合片段至該個體。
該抗體、抗原結合片段、ErbB3蛋白、與 ErbB3蛋白活化或過度表現相關的疾病、預防或治療，可以與如上所述者相同。
個體可以為一種哺乳動物，舉例而言人類、母牛、馬、豬、犬、綿羊、山羊或貓。個體可以為罹患與ErbB3蛋白活化或過度表現相關的疾病，或是易患該疾病的一個體，該疾病可以為癌症。
該方法可以進一步包括投與抗癌藥至該個體。抗癌藥可以與如以上所述之任一實例具體例之抗原或其抗原結合片段，同時、分開或相繼地投與。
舉例而言，該抗體或其抗原結合片段、抗癌藥或其等之組合，可以透過任一方法直接投與至該個體，舉例而言透過口服、靜脈內、肌肉內、經皮的、黏膜的、鼻內、氣管內或皮下投與。該抗體或其抗原結合片段、抗癌藥或其等之組合可以全身或局部投與。該抗體或其抗原結合片段、抗癌藥或其等之組合，可以單獨或與一種藥物活性化合物一起投與。
該抗體或其抗原結合片段、抗癌藥或其等之組合的劑量，可以取決於病人的病況、體重、疾病嚴重性、藥物調配物、投與的途徑，及投與的期間，以及可以由熟悉此藝者予以適當地選擇。舉例而言，當投與至一成人時，該抗體或其抗原結合片段、抗癌藥或其等之組合的劑量，可以為大約0.001mg/kg至大約100mg/kg、大約0.01mg/kg至大約10mg/kg，或是大約0.1mg/kg至大約1mg/kg。投與的數量可以為舉例而言，一天一次或多次、一週一次、二 週一次、三週一次、四週一次，或是一年一次。
依據本揭示的另一態樣，一種預防或治療一個體體內癌症耐藥性之方法，包括投與如請求項1至10中任一項之抗體或抗原結合片段至該個體。
本揭示的一或更多具體例現在將參照下列實施例更詳盡地說明。然而，此等實施例僅僅是作說明用途，且不打算本揭示的一或更多具體例之範疇。
實施例1.抗-ErbB3抗體之製備
1.領導抗體之篩選
為了獲得人類抗-ErbB3抗體，人類合成scFv-噬菌體展示庫(由韓國梨花女子大學之H.B.SHIM提供)對ErbB3蛋白(R&D systems)進行篩選，以獲得展示與ErbB3結合的scFv片段之噬菌體。
編碼獲得的噬菌體之scFv片段的核酸序列進行分析，以及結合ErbB3之scFv片段的VH及VL領域之胺基酸序列係藉由胺基酸序列分析予以辨識。獲得結合ErbB3之scFv片段的序列之後，VH及VL領域係使用編碼IgG1之Selexis 085載體(Selexis)予以再建構，由此組裝整個抗體基因。編碼IgG1之再建構的表現載體係予以轉形，以及小規模地表現於中國倉鼠卵巢(CHO)細胞株內。表現的抗-ErbB3抗體進行對ErbB3之結合親和性測量及細胞為基的分析，由此篩選抗-ErbB3領導抗體442P、472P及451P，其等抑制賀瑞谷林(HRG)-依賴性ErbB3訊息傳遞。
2.從領導抗體篩選修飾的抗體
Fab-噬菌體展示庫係藉由隨機突變誘發，使突變導入至實施例1.1之篩選的抗-ErbB3領導抗體442P、472P及451P之六個CDR位址予以建構。Fab-噬菌體展示庫係用(由Integrated DNA Technologies,Inc.)定做的引子以及Phusion聚合酶(New England Biolabs)，藉由聚合酶連鎖反應(PCR)予以擴增。
建構的Fab-噬菌體展示庫對重組型人類ErbB3蛋白(R&D systems)進行篩選，以篩選與領導抗體比較，對重組型人類ErbB3具有改善的結合親和性之抗體。篩選的抗體係如實施例1.1中所述對IgG予以再建構，以及轉形且小規模地表現於CHO細胞株內。
抗ErbB3抗體之結合親和性係利用Octet® QK384系統(Pall Life Sciences)予以測量。根據結果來篩選與領導抗體比較之下，具有改善的結合親和性之抗體，並且進行細胞為基的分析以驗證效能。分析抗ErbB3領導抗體及修飾抗體的可變異區域之胺基酸序列，以及根據Kabat定義來判定互補性決定區域(CDRs)。圖1A及1B中呈現篩選的抗體之重鏈及輕鏈的各種區域之胺基酸序列(序列辨識編號：1至60)，以及表1及2中分別顯示重鏈及輕鏈的CDRs內之胺基酸序列。
Figure TWI615406BD00004
Figure TWI615406BD00005
實施例2.抗-ErbB3抗體之活體外效應
1.抗-ErbB3抗體對人類ErbB3蛋白之結合親和性
測量篩選的抗體(實施例1.2)對ErbB3蛋白(抗原)之結合親和性。
特別地，抗-ErbB3抗體對重組型人類ErbB3蛋白(R&D systems)之結合親和性，以及抗原-抗體相互作用動力學係利用Octet® QK384系統(Pall Life Sciences)予以測量。於AR2G感測器(ForteBio)上之20毫莫耳(mM)的1-乙基-3-(3-二甲基胺基丙基)碳化二亞胺鹽酸鹽(EDC)及40mM的N-羥基磺基琥珀醯亞胺(磺基-NHS)溶液的羧基活化之後，添加用10mM的醋酸鈉(pH 4.0)(ForteBio)稀釋的10微克/毫升(μg/mL)人類ErbB3蛋白溶液以使人類ErbB3蛋白固定於AR2G感測器上。使人類ErbB3蛋白固定至AR2G感測器以及用1M的乙醇胺(ForteBio)處理以去活性剩餘未反應的羧基。12.5納莫耳(nM)、25nM及50nM抗體溶液各自添加至AR2G感測器上，然後觀察反應產物的結合相大約900秒。接著，添加1x動力學緩衝液(ForteBio)至反應產物，以及觀察反應產物的解離相大約1200秒，繼而用Octet®分析軟體(Pall Life® Sciences)判定各類抗體的締合常數(ka)、解離常數(kd)及平衡解離常數(KD)。
Figure TWI615406BD00006
參見表3，發現選擇的抗體具有大約0.1nM至大約0.1微微莫耳(pM)之平衡解離常數(KD)，表示對重組型人類ErbB3蛋白高的結合親和性。
2.抗-ErbB3抗體之ErbB3蛋白-HRG結合抑制能力
調查實施例1.2之選擇的抗體是否抑制ErbB3蛋白與作為其配體的HRG之結合。
特別地，HRG(R&D systems)對人類ErbB3蛋白(R&D systems)之結合親和性係利用Octet® QK384系統(Pall Life Sciences)予以測量。以如實施例2.1中使用的相同方法使10μg/mL的HRG蛋白固定於AR2G感測器上以後，使用1M乙醇胺(ForteBio)以去活性剩餘未反應的羧基。接著，添加5μg/mL的人類ErbB3蛋白(R&D systems)及10nM或100nM的抗-ErbB3抗體之混合溶液至有HRG蛋白固定於其上的Ar2G感測器之上，然後觀察結合相大約900秒。使用沒有添加抗-ErbB3抗體之反應產物作為陰性對照組。測量固定於AR2G感測器之HRG蛋白所結合之剩餘的人類ErbB3蛋白的量。計算ErbB3蛋白及HRG於抗-ErbB3抗體存在下，相對於陰性對照組之結合親和性(%)。結果顯示於圖2內，其中Y軸表示相對於陰性對照組之結合親和性(%)，以及X軸表示不同濃度0nM、10nM及100nM的抗體。
參見圖2，發現選擇的抗體根據抗體的濃度會抑制人類ErbB3蛋白與HRG蛋白之結合，而hIgG對照組 顯示出對於ErbB3與HRG之結合沒有效應。
3.抗-ErbB3抗體之ErbB2-ErbB3二聚合抑制能力
進行調查以評估實施例1.2之選擇的抗體抑制ErbB2蛋白與ErbB3蛋白二聚合之能力。
特別地，將100微升(μl)的重組型人類ErbB2蛋白(1μg/mL)施用至一種多陣列96孔平盤(Thermo scientific)，以及於4℃孵育歷時大約16小時以使ErbB2蛋白塗覆至多陣列96孔平盤上。將200μl的5%(w/v)BSA/PBS溶液施用至塗覆的平盤，以及於37℃孵育歷時大約1小時。將50μl重組型人類ErbB3蛋白(0.6μg/mL)及50μl選擇的抗-ErbB3抗體(0.2μg/mL)的混合物施用至平盤，以及反應混合物係於37℃孵育歷時大約2小時。產生的平盤係用0.05%(v/v)妥文(Tween)/PBS溶液來清洗三次。將100μl的山羊-抗-ErbB3多株抗體(1μg/mL，R&D systems)施用至清洗的平盤，以及於37℃孵育歷時大約1小時。接而用0.05%(v/v)妥文/PBS溶液清洗平盤三次。將用5%(w/v)BSA/PBS溶液以1：5000稀釋的100μl的抗-山羊Fc-山葵過氧化酶(HRP)(Jackson Immunoresearch)施用至平盤，然後於37℃孵育歷時大約1小時。平盤繼而用0.05%(v/v)妥文/PBS溶液來清洗三次。將作為基質之100μl的3,3',5,5'-四甲基聯苯胺(TMB)施用至各孔，以及於室溫下孵育歷時大約5分鐘，繼而用100μl的2N硫酸溶液使反應終止。使用沒有添加抗-ErbB3 抗體之反應混合物作為陰性對照組。測量平盤於450奈米(nm)波長之吸光度。從測得的吸光度計算ErbB2蛋白及ErbB3蛋白於抗-ErbB3抗體存在下之結合親和性。使用不會與ErbB3結合的人類IgG作為另一陰性對照組。
計算ErbB2蛋白及ErbB3蛋白於抗-ErbB3抗體存在下，相對於陰性對照組之結合親和性(%)。結果顯示於圖3內，其中Y軸表示相對於陰性對照組之結合親和性(%)，以及hIgG表示人類IgG。
參見圖3，發現選擇的抗體會抑制ErbB2蛋白與ErbB3蛋白之二聚合，而hIgG對照組沒有展現出任何的二聚合抑制。
4.抗-ErbB3抗體之ErbB3或Akt磷酸化抑制的能力
進行調查以評估實施例1.2之選擇的抗體抑制ErbB3蛋白及Akt磷酸化的能力。
特別地，使大約5x105個MCF7乳癌細胞(來自國立衛生研究院(National Institutes of Health))接種至24孔平盤之上，以及添加含括青黴素-鏈黴素抗生素(Invitrogen)及10%(v/v)胎牛血清(FBS)之羅斯威爾公園紀念研究所(Roswell Park Memorial Institute)(RPMI)-1640培養基(Invitrogen)，至24孔平盤上的細胞，以及於5% CO2條件下、在37℃孵育歷時大約24小時。接著，把培養基換成新鮮的RPMI-1640培養基，以及於血清饑餓條件下培養細胞歷時大約24小時。接著， 將選擇的抗-ErbB3抗體添加至細胞，以及於5% CO2條件下、在37℃孵育歷時大約2小時。抗體442P抗體及472P係以大約67nM、13nM、3nM、534pM、107pM、21pM及4pM的濃度各自添加至細胞，而抗體442S1、442S5、442M6及472S2係以13nM、3nM、834pM、208pM、52pM及13pM的濃度添加至細胞。在1小時45分鐘之後，添加HRG至細胞，以及於5% CO2條件下、在37℃下孵育歷時大約15分鐘以刺激細胞(總抗體處理時間：2小時)。細胞係用冷的PBS來清洗，以及添加細胞溶解溶液(Cell Signaling Technology)，以由此收集細胞。在選擇的細胞內的蛋白質以BCA分析法執行定量之後，分析ErbB3或Akt的磷酸化位準。
ErbB3的磷酸化位準係使用一種Phospho-ErbB3偵測套組(Cell Signaling Technology)予以分析。在細胞蛋白質結合至ErbB3抗體-塗覆的ELISA平盤之後，使ELISA平盤上的磷酸酪胺酸(phosphotyrosine)小鼠偵測抗體及HRP-複合的抗小鼠抗體顯影(developed)。接著，添加四甲基聯苯胺(TMB)基質至反應產物，用套組的反應終止溶液停止反應，以及用平盤讀數器測量吸光度。
Akt1的磷酸化位準係利用一種Phospho-Akt1偵測套組(Cell Signaling Technology)予以分析。在細胞蛋白質結合至抗-磷酸絲胺酸(phosphoserine)-塗覆的ELISA平盤之後，使ELISA平盤 上的Akt1-特異性偵測抗體及HRP-複合抗體顯影。接著，在以TMB基質反應之後，用套組的反應終止溶液停止反應，以及用平盤讀數器測量吸光度。
圖4A及4B為基於測得的吸光度繪製的圖，其分別為相對於抗體濃度，ErbB3及Akt之磷酸化比率。計算抗體之半最大抑制濃度(IC50)。結果顯示於表4內。
Figure TWI615406BD00007
參見圖4A及4B以及表4，發現選擇的抗體會抑制ErbB3及Akt之磷酸化。
同樣地，也發現到選擇的抗體會抑制下列之內的ErbB3及Akt之磷酸化：乳癌細胞株MDA-MB-468與BT474、皮膚癌細胞株A431、胰腺癌細胞株BxPC3、頭頸部癌細胞株FaDu、肺癌細胞株A549、結腸直腸癌細胞 株LoVo、黑色素瘤細胞株MALME-3M、卵巢癌細胞株OVCAR-8，以及前列腺癌細胞株DU145。
5.抗-ErbB3抗體之胰腺癌細胞株BxPC3增殖抑制能力
進行調查以評估實施例1.2之選擇的抗體抑制BxPC3胰腺癌細胞增殖之能力。
特別地，使大約1x104個BxPC3胰腺癌細胞(美國菌種保存中心(American Type Culture Collection))接種至96孔平盤之上，以及添加含括10% FBS之RPMI-1640培養基(Invitrogen)至96孔平盤的細胞上，並且於5% CO2條件下、在37℃下孵育歷時大約24小時。接著，把培養基換成含括0.1%(v/v)FBS的RPMI-1640培養基。添加0.02μg/mL、0.2μg/mL、2μg/mL，及20μg/mL的442S1抗體或442M6抗體至孵育的細胞，以及於5% CO2條件下、在37℃下培養歷時大約2小時。進一步添加50奈克/毫升(ng/mL)的HRG至培養的細胞，以及於5% CO2條件下、在37℃下孵育歷時大約120小時。使用沒有添加抗體之培養的細胞作為陰性對照組。活細胞的數目係利用一種CellTiter-Glo發光細胞生存力分析法(CellTiter-Glo Luminescent Cell Viability Assay)(Promega)予以測量。根據測得的結果來計算相對增殖速度。結果顯示於圖5。
參見圖5，發現選擇的抗體係以濃度依賴性的方式抑制BxPC3胰腺癌細胞之增殖。
實施例3.抗-ErbB3抗體之活體內效應
1.使用BT474乳癌異種移植模型之腫瘤生長抑制
進行調查以評估實施例1.2之選擇的抗體抑制乳癌細胞異種移植動物模型之腫瘤生長。
特別地，於人類乳癌BT474細胞(美國菌種保存中心)係培養於含括10% FBS之杜貝可氏改良的依格氏培養基(Dulbecco's Modified Eagle's medium)培養基(Hyclone)內。於癌細胞接種前一天將17 β-雌二醇-緩釋小丸(0.36mg/60天，美國創新研究(Innovative Research of America))皮下接種至雌性NOD/SCID小鼠(HFK Bio-Technology Co.Ltd.)內，以維持血液的雌激素(estrogen)位準。使大約1x107個BT474癌細胞懸浮於含50%基底膜基質(Matrigel)之100μl的PBS內，以及將懸浮的癌細胞注射至每隻小鼠乳頭下的脂肪組織內。一週測量小鼠的重量二次，以及利用"0.5 a x b 2 "的方程式來計算腫瘤體積，a與b分別為腫瘤的長及短徑。當癌細胞接種7天之後腫瘤體積達到大約210mm3時，將小鼠隨機分配成7組，每組包括10隻小鼠。以10mg/kg體重的劑量，將PBS(陰性對照組)、抗體442P、442S1、442S5、442M6、472S2及472M1投與至各組小鼠的尾靜脈一週二次歷時4週。於接種癌細胞之後，投與抗體然後計算腫瘤體積。結果顯示於圖6內。
參見圖6，發現相對於陰性對照組而言，投 與抗體會使腫瘤體積減小，以及選擇的抗體會抑制腫瘤生長。
2.使用MDA-MB-468乳癌異種移植模型之腫瘤生長抑制
人類乳癌細胞MDA-MB-468(美國菌種保存中心)係於含括10% μl胎牛血清之L-15培養基(Hyclone)內孵育。使大約5x106個癌細胞懸浮於含50%基底膜基質之100μl的PBS內，以及皮下注射至雌性Nu/Nu小鼠(Vital River laboratories,Ltd)的腹脇區內。一週測量小鼠的重量二次，以及利用"0.5 a x b 2 "的方程式來計算腫瘤體積，a與b分別為腫瘤的長及短徑。當癌細胞注射7天之後腫瘤體積達到大約210mm3時，將小鼠隨機分配成7組，每組包括10隻小鼠。以10mg/kg體重的劑量，將PBS(陰性對照組)、抗體442P、442S1、442S5、442M6、472S2及472M1投與至各組小鼠的尾靜脈一週二次歷時4週。於接種癌細胞之後，投與抗體然後計算腫瘤體積。結果顯示於圖7內。
參見圖7，發現相對於陰性對照組而言，投與抗體會使腫瘤體積減小，以及選擇的抗體會抑制腫瘤生長。
3.使用A431皮膚癌異種移植模型之腫瘤生長抑制
人類皮膚癌A431細胞(美國菌種保存中心)係於含括10% FBS之DMEM培養基(Hyclone)內孵育。使大約5x106個癌細胞懸浮於含50%基底膜基質之100μl的 PBS內，以及皮下注射至雌性Balb/c裸鼠(HFK Bio-Technology Co.Ltd.)的腹脇區內。一週測量小鼠的重量二次，以及利用"0.5 a x b 2 "的方程式來計算腫瘤體積，a與b分別為腫瘤的長及短徑。當癌細胞接種7天之後腫瘤體積達到大約160mm3時，將小鼠隨機分配成7組，每組包括10隻小鼠。以10mg/kg體重的劑量，將PBS(陰性對照組)、抗體442P、442S1、442S5、442M6、472S2及472M1投與至各組小鼠的尾靜脈一週二次歷時4週。於接種癌細胞之後，投與抗體然後計算腫瘤體積。結果顯示於圖8內。
參見圖8，發現相對於陰性對照組而言，投與抗體會使腫瘤體積減小，以及選擇的抗體會抑制腫瘤生長。
4.使用腫瘤異種移植模型之腫瘤生長抑制
以實施例2.1至2.3內所述相同的方式，將抗體442S1投與至FaDu頭頸部癌、胰腺癌或是肺癌動物模型內，以及將抗體442P或472P抗體投與至胃癌動物模型。結果，發現相對於陰性對照組而言，投與抗體會使腫瘤體積減小，以及選擇的抗體會抑制腫瘤生長。
實施例4.抗癌藥及抗-ErbB3抗體之組合投與的效應
進行調查以評估抗體442S1及西妥昔單抗之組合使用，於FaDu頭頸部癌模型內改善抗癌效應之能力。
人類頭頸部癌FaDu細胞(Shanghai Institutes for Biological Sciences)係於含括10% FBS之EMEM培養基(Hyclone)內孵育。使大約5x106個癌細胞懸浮於含50%基底膜基質之100μl的PBS內，以及皮下注射至雌性NOD/SCID小鼠(HFK Bio-Technology Co.Ltd)的腹脇區內。一週測量小鼠的重量二次，以及利用"0.5 a x b 2 "的方程式來計算腫瘤體積，a與b分別為腫瘤的長及短徑。當癌細胞接種7天之後腫瘤體積達到大約150mm3時，將小鼠隨機分配成7組，每組包括10隻小鼠。以5mg/kg體重的劑量，將PBS(陰性對照組)、抗體442S1及西妥昔單抗(Merck)投與至各組小鼠的尾靜脈內一週二次歷時4週。於組合使用治療組中，抗體442S1及西妥昔單抗係以5mg/kg體重的劑量，投與至小鼠的尾靜脈一週二次歷時4週。繼而，一週不投與抗體。一週測量腫瘤尺寸二次。計算抗體投與或組合投與之後的腫瘤體積。結果顯示於圖9內，其中向下箭頭(↓)表示注射癌細胞的時間，以及***表示單因子變異數分析(one-way ANOVA)後之塔基多重比較檢定(Tukey’s multiple comparisontest)的結果(p<0.001)。
參見圖9，於抗體442S1及西妥昔單抗之組合使用治療組中，腫瘤體積從起始的投與階段下降，以及在測試結束時為平均大約68mm3(n=10/組)。因此，發現選擇的抗體與西妥昔單抗之組合投與會改善抗癌效能。
實施例5.抗-ErbB3抗體之抗癌藥耐藥性的改善效應
1. 乳癌的紫杉醇耐藥性的改善效應
紫杉醇於乳癌細胞株ZR-75-30之細胞凋亡效應，可以於HRG存在下、由於ErbB3訊息傳遞途徑之活化而下降(Wang S等人，Oncogene,29,4225-4236,2010)。進行調查以評估篩選的抗體使對於使用作為抗癌藥之紫杉醇的耐藥性改善之能力，且賦予抗癌效應之能力。
使大約1x104個ZR-75-30細胞(美國菌種保存中心)接種於一平盤上，以及於5% CO2條件下、在37℃下於含括10%(v/v)FBS之RPMI 1640培養基(Invitrogen)內孵育歷時大約24小時。接著把培養基換成含括0.1%(v/v)FBS之新鮮的培養基(添加100ng/mL HRG)，以及於5% CO2條件下、在37℃下執行進一步的孵育歷時大約24小時。添加10nM的紫杉醇(Bristol-Myers Squibb)與25μg/mL的抗體442S1至培養的細胞，以及於5% CO2條件下、在37℃下予以孵育歷時大約72小時。收集培養的細胞，以及使用半胱天冬酶3/7基質分析法(Promega)來測量作為細胞凋亡標誌之半胱天冬酶3/7的活性。圖10顯示測得的半胱天冬酶3/7活性，其中RLU表示相對發光強度單位，以及**表示t檢定的結果(p<0.01)。
參見圖10，紫杉醇降低半胱天冬酶3/7的活性，但是與紫杉醇單獨治療(n=3)相比，紫杉醇與抗體442S1之組合治療會改善半胱天冬酶3/7的活性。因此，發現到紫杉醇之凋亡標誌效應可於HRG存在下而降低，但會由於投與抗體442S1而恢復。
2.結腸直腸癌的西妥昔單抗耐藥性之改善效應
西妥昔單抗於抑止DiFi結腸直腸癌細胞之癌細胞增殖是有效的，但是於HRG存在下、由於ErbB3訊息傳遞途徑之活化而喪失其效能。進行調查以評估篩選的抗體克服對西妥昔單抗耐藥性之能力，以及賦予癌細胞增殖的抑止效應之能力。
特別地，DiFi結腸癌細胞係以含括抗生素(青黴素-鏈黴素，Invitrogen)及10% FBS之RPMI-1640培養基(Invitrogen)予以孵育。使大約1x104個DiFi細胞接種於96孔平盤之上，以及於5% CO2條件下、在37℃下予以孵育歷時大約24小時。西妥昔單抗及抗-ErbB3抗體係以200μg/mL的等濃度一起混合，以獲得西妥昔單抗/抗-ErbB3抗體溶液，其繼而與等量的HRG(40ng/mL)混合。將西妥昔單抗/抗-ErbB3抗體/HRG溶液施用至96孔平盤，以及於5% CO2條件下、在37℃下予以孵育歷時大約72小時。沒有抗體及HRG培養的細胞係用作為陰性對照組。活細胞的數目係利用一種CellTiter-Glo發光細胞生存力分析法(Promega)予以測量。根據測得的結果來計算細胞增殖速度。結果顯示於圖11內，其中***表示t檢定的結果(p<0.001)。
參見圖11，西妥昔單抗之細胞增殖的抑止效應於HRG存在下而降低，但於接受西妥昔單抗及442S1抗體組合之治療組會恢復。因此，發現到西妥昔單抗細胞增 殖的抑止效應可以於HRG，即ErbB3配體存在下而降低，但是可以透過442S1抗體封阻HRG-ErbB3傳訊途徑而恢復。
3.耐西妥昔單抗(Cetuximab resistant)異種移植模型中對西妥昔單抗耐藥性的改善
FaDu人類頭頸部癌細胞(Shanghai Institutes of Biological Sciences)係於EMEM培養基(Hyclone)內孵育，EMEM培養基含括10% FBS(Invitrogen)、0.01mM NEAA(非必需胺基酸，Hyclone)，以及2mM左旋麩醯胺酸(Invitrogen)。使大約5x106個FaDu癌細胞懸浮於100μl的PBS內，然後皮下注射至雌性NOD SCID小鼠(HFK Bio-Technology Co.,Ltd.)的腹脇區內。一週測量小鼠的重量二次，以及利用"0.5 a x b 2 "的方程式來計算腫瘤體積，a與b分別為腫瘤的長及短徑。當癌細胞接種8天之後腫瘤體積達到大約165mm3時，隨機選擇小鼠。以5mg/kg重量的劑量，將PBS(陰性對照組)或西妥昔單抗投與至各組小鼠的尾靜脈一週二次歷時6.5週。當西妥昔單抗沒有維持腫瘤生長的抑止效應，而使腫瘤體積增加至大約840mm3時，從各組隨機選擇10隻小鼠，並且將5mg/kg的西妥昔單抗、10mg/kg的抗體442S1或是5mg/kg的西妥昔單抗及10mg/kg的抗體442S1之組合投與至小鼠一週二次歷時2週。一週測量腫瘤體積二次。結果顯示於圖12內。
參見圖12，發現到於接受抗體442S1單獨或 是抗體442S1及西妥昔單抗組合之治療組，與接受西妥昔單抗單獨之治療組相比，觀察到顯著的腫瘤抑止效應，表示抗體442S1可以克服對西妥昔單抗的耐藥性並且抑止腫瘤生長。
如上所述，依據一或更多實例具體例，提供一種特異性結合ErbB3之抗體或其抗原結合片段及其用途。該特異性結合ErbB3之抗體或其抗原結合片段可有效地用於預防或治療一種與ErbB3蛋白活化或過度表現相關的疾病。
應該瞭解到本文所述的實例具體例應被認為僅僅是描述性的意義，以及不是為了限制的目的。每個實例具體例中特徵或態樣之說明典型地認為可用於其他的具體例之其他相似的特徵或態樣。
縱然已經參照附圖來說明一或更多實例具體例，熟悉此藝者會明瞭在不背離下列申請專利範圍所定義之本發明構思的精神與範疇之下，其可以做出各種形式及細節的變化。
<110> 梨樹愛博思股份有限公司
<120> 特異性結合ERBB3之抗體及其用途
<130> PX-53072-PCT
<160> 101
<170> KopatentIn 2.0
<210> 1
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗體442P之重鏈可變異區域
<400> 1
Figure TWI615406BD00008
<210> 2
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗體442S1之重鏈可變異區域
<400> 2
Figure TWI615406BD00009
Figure TWI615406BD00010
<210> 3
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗體442S2之重鏈可變異區域
<400> 3
Figure TWI615406BD00011
<210> 4
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗體442S4之重鏈可變異區域
<400> 4
Figure TWI615406BD00012
Figure TWI615406BD00013
<210> 5
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗體442S5之重鏈可變異區域
<400> 5
Figure TWI615406BD00014
<210> 6
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗體442S6之重鏈可變異區域
<400> 6
Figure TWI615406BD00015
Figure TWI615406BD00016
<210> 7
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗體442S9之重鏈可變異區域
<400> 7
Figure TWI615406BD00017
<210> 8
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗體442S10之重鏈可變異區域
<400> 8
Figure TWI615406BD00018
Figure TWI615406BD00019
<210> 9
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗體442M3之重鏈可變異區域
<400> 9
Figure TWI615406BD00020
<210> 10
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗體442M4之重鏈可變異區域
<400> 10
Figure TWI615406BD00021
Figure TWI615406BD00022
<210> 11
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗體442M5之重鏈可變異區域
<400> 11
Figure TWI615406BD00023
<210> 12
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗體442M6之重鏈可變異區域
<400> 12
Figure TWI615406BD00024
Figure TWI615406BD00025
<210> 13
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗體442M7之重鏈可變異區域
<400> 13
Figure TWI615406BD00026
<210> 14
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗體442M8之重鏈可變異區域
<400> 14
Figure TWI615406BD00027
Figure TWI615406BD00028
<210> 15
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗體442M10之重鏈可變異區域
<400> 15
Figure TWI615406BD00029
<210> 16
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗體442M11之重鏈可變異區域
<400> 16
Figure TWI615406BD00030
Figure TWI615406BD00031
<210> 17
<211> 127
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗體472P之重鏈可變異區域
<400> 17
Figure TWI615406BD00032
<210> 18
<211> 127
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗體472S1之重鏈可變異區域
<400> 18
Figure TWI615406BD00033
Figure TWI615406BD00034
<210> 19
<211> 127
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗體472S2之重鏈可變異區域
<400> 19
Figure TWI615406BD00035
<210> 20
<211> 127
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗體472S3之重鏈可變異區域
<400> 20
Figure TWI615406BD00036
Figure TWI615406BD00037
<210> 21
<211> 127
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗體472S4之重鏈可變異區域
<400> 21
Figure TWI615406BD00038
<210> 22
<211> 127
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗體472M1之重鏈可變異區域
<400> 22
Figure TWI615406BD00039
Figure TWI615406BD00040
<210> 23
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗體451P之重鏈可變異區域
<400> 23
Figure TWI615406BD00041
<210> 24
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗體451M1之重鏈可變異區域
<400> 24
Figure TWI615406BD00042
Figure TWI615406BD00043
<210> 25
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗體451M2之重鏈可變異區域
<400> 25
Figure TWI615406BD00044
<210> 26
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗體451M3之重鏈可變異區域
<400> 26
Figure TWI615406BD00045
Figure TWI615406BD00046
<210> 27
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗體451M4之重鏈可變異區域
<400> 27
Figure TWI615406BD00047
<210> 28
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗體451M5之重鏈可變異區域
<400> 28
Figure TWI615406BD00048
Figure TWI615406BD00049
<210> 29
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗體451M6之重鏈可變異區域
<400> 29
Figure TWI615406BD00050
<210> 30
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗體451M7之重鏈可變異區域
<400> 30
Figure TWI615406BD00051
Figure TWI615406BD00052
<210> 31
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗體442P之輕鏈可變異區域
<400> 31
Figure TWI615406BD00053
<210> 32
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗體442S1之輕鏈可變異區域
<400> 32
Figure TWI615406BD00054
Figure TWI615406BD00055
<210> 33
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗體442S2之輕鏈可變異區域
<400> 33
Figure TWI615406BD00056
<210> 34
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗體442S4之輕鏈可變異區域
<400> 34
Figure TWI615406BD00057
<210> 35
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗體442S5之輕鏈可變異區域
<400> 35
Figure TWI615406BD00058
<210> 36
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗體442S6之輕鏈可變異區域
<400> 36
Figure TWI615406BD00059
<210> 37
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗體442S9之輕鏈可變異區域
<400> 37
Figure TWI615406BD00060
<210> 38
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗體442S10之輕鏈可變異區域
<400> 38
Figure TWI615406BD00061
<210> 39
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗體442M3之輕鏈可變異區域
<400> 39
Figure TWI615406BD00062
Figure TWI615406BD00063
<210> 40
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗體442M4之輕鏈可變異區域
<400> 40
Figure TWI615406BD00064
<210> 41
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗體442M5之輕鏈可變異區域
<400> 41
Figure TWI615406BD00065
Figure TWI615406BD00066
<210> 42
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗體442M6之輕鏈可變異區域
<400> 42
Figure TWI615406BD00067
<210> 43
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗體442M7之輕鏈可變異區域
<400> 43
Figure TWI615406BD00068
<210> 44
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗體442M8之輕鏈可變異區域
<400> 44
Figure TWI615406BD00069
<210> 45
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗體442M10之輕鏈可變異區域
<400> 45
Figure TWI615406BD00070
<210> 46
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗體442M11之輕鏈可變異區域
<400> 46
Figure TWI615406BD00071
<210> 47
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗體472P之輕鏈可變異區域
<400> 47
Figure TWI615406BD00072
<210> 48
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗體472S1之輕鏈可變異區域
<400> 48
Figure TWI615406BD00073
Figure TWI615406BD00074
<210> 49
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗體472S2之輕鏈可變異區域
<400> 49
Figure TWI615406BD00075
<210> 50
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗體472S3之輕鏈可變異區域
<400> 50
Figure TWI615406BD00076
Figure TWI615406BD00077
<210> 51
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗體472S4之輕鏈可變異區域
<400> 51
Figure TWI615406BD00078
<210> 52
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗體472M1之輕鏈可變異區域
<400> 52
Figure TWI615406BD00079
Figure TWI615406BD00080
<210> 53
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗體451P之輕鏈可變異區域
<400> 53
Figure TWI615406BD00081
<210> 54
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗體451M1之輕鏈可變異區域
<400> 54
Figure TWI615406BD00082
<210> 55
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗體451M2之輕鏈可變異區域
<400> 55
Figure TWI615406BD00083
<210> 56
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<223> 抗體451M3之輕鏈可變異區域
<400> 56
Figure TWI615406BD00084
<210> 57
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗體451M4之輕鏈可變異區域
<400> 57
Figure TWI615406BD00085
<210> 58
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗體451M5之輕鏈可變異區域
<400> 58
Figure TWI615406BD00086
<210> 59
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗體451M6之輕鏈可變異區域
<400> 59
Figure TWI615406BD00087
Figure TWI615406BD00088
<210> 60
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 抗體451M7之輕鏈可變異區域
<400> 60
Figure TWI615406BD00089
<210> 61
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重鏈CDR1
<400> 61
Figure TWI615406BD00090
<210> 62
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重鏈CDR1
<400> 62
Figure TWI615406BD00091
<210> 63
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重鏈CDR1
<400> 63
Figure TWI615406BD00092
<210> 64
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重鏈CDR1
<400> 64
Figure TWI615406BD00093
<210> 65
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重鏈CDR1
<400> 65
Figure TWI615406BD00094
<210> 66
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重鏈CDR1
<400> 66
Figure TWI615406BD00095
<210> 67
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重鏈CDR1
<400> 67
Figure TWI615406BD00096
<210> 68
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重鏈CDR1
<400> 68
Figure TWI615406BD00097
<210> 69
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重鏈CDR2
<400> 69
Figure TWI615406BD00098
<210> 70
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重鏈CDR2
<400> 70
Figure TWI615406BD00099
<210> 71
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重鏈CDR2
<400> 71
Figure TWI615406BD00100
<210> 72
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重鏈CDR2
<400> 72
Figure TWI615406BD00101
<210> 73
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重鏈CDR2
<400> 73
Figure TWI615406BD00102
<210> 74
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重鏈CDR2
<400> 74
Figure TWI615406BD00103
<210> 75
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重鏈CDR2
<400> 75
Figure TWI615406BD00104
<210> 76
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重鏈CDR2
<400> 76
Figure TWI615406BD00105
<210> 77
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重鏈CDR2
<400> 77
Figure TWI615406BD00106
<210> 78
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重鏈CDR3
<400> 78
Figure TWI615406BD00107
<210> 79
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重鏈CDR3
<400> 79
Figure TWI615406BD00108
<210> 80
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重鏈CDR3
<400> 80
Figure TWI615406BD00109
<210> 81
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重鏈CDR3
<400> 81
Figure TWI615406BD00110
<210> 82
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重鏈CDR3
<400> 82
Figure TWI615406BD00111
<210> 83
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重鏈CDR3
<400> 83
Figure TWI615406BD00112
<210> 84
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重鏈CDR3
<400> 84
Figure TWI615406BD00113
<210> 85
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重鏈CDR3
<400> 85
Figure TWI615406BD00114
<210> 86
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 輕鏈CDR1
<400> 86
Figure TWI615406BD00115
<210> 87
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 輕鏈CDR1
<400> 87
Figure TWI615406BD00116
<210> 88
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 輕鏈CDR2
<400> 88
Figure TWI615406BD00117
<210> 89
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 輕鏈CDR2
<400> 89
Figure TWI615406BD00118
<210> 90
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 輕鏈CDR2
<400> 90
Figure TWI615406BD00119
<210> 91
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 輕鏈CDR2
<400> 91
Figure TWI615406BD00120
<210> 92
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 輕鏈CDR2
<400> 92
Figure TWI615406BD00121
<210> 93
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 輕鏈CDR2
<400> 93
Figure TWI615406BD00122
<210> 94
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 輕鏈CDR3
<400> 94
Figure TWI615406BD00123
<210> 95
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 輕鏈CDR3
<400> 95
Figure TWI615406BD00124
<210> 96
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 輕鏈CDR3
<400> 96
Figure TWI615406BD00125
<210> 97
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 輕鏈CDR3
<400> 97
Figure TWI615406BD00126
<210> 98
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 輕鏈CDR3
<400> 98
Figure TWI615406BD00127
<210> 99
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<223> 輕鏈CDR3
<400> 99
Figure TWI615406BD00128
<210> 100
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<223> 輕鏈CDR3
<400> 100
Figure TWI615406BD00129
<210> 101
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<223> 輕鏈CDR3
<400> 101
Figure TWI615406BD00130

Claims (18)

  1. 一種特異性結合ErbB3之抗體或其抗原結合片段，其包含下表中所列之重鏈互補性決定區域(CDR-Hs)與輕鏈互補性決定區域(CDR-Ls)： 。
  2. 如請求項1之抗體或抗原結合片段，其中之重鏈可變異區域進一步包含選自於序列辨識編號：1至30所構成的群組之胺基酸序列。
  3. 如請求項1之抗體或抗原結合片段，其中之輕鏈可變異區域進一步包含選自於序列辨識編號：31至60所構成的群組之胺基酸序列。
  4. 如請求項1之抗體或抗原結合片段，其中該抗體或該抗原結合片段抑制ErbB3蛋白與特異性結合ErbB3蛋白之材料的結合、ErbB1蛋白與ErbB3蛋白之二聚合作用、ErbB2蛋白與ErbB3蛋白之二聚合作用、ErbB3或Akt之磷酸化，或其等之組合。
  5. 如請求項4之抗體或抗原結合片段，其中 特異性結合該ErbB3蛋白之該材料為賀瑞谷林(heregulin)(HRG)。
  6. 如請求項1之抗體或抗原結合片段，其中該抗體為IgA、IgD、IgE、IgG或IgM；其中該抗體為單株抗體或多株抗體；或其中該抗原結合片段為scFv、(scFv)2、Fv、Fab、Fab'、F(ab')2，或其等之組合；或其中該抗體或其抗原結合片段係透過複合(conjugation)或結合、醣化、標籤附接(tag attachment)或其等之組合予以修飾。
  7. 一種用於預防或治療與ErbB3蛋白活化或過度表現相關的疾病之藥學組成物，該藥學組成物包含如請求項1至6中任一項之抗體或抗原結合片段。
  8. 如請求項7之藥學組成物，其中與該ErbB3蛋白活化或過度表現相關的該疾病為癌症。
  9. 如請求項8之藥學組成物，其中該癌症係選自於下列所構成的群組：乳癌、皮膚癌、頭頸部癌、胰腺癌、肺癌、結腸癌、結腸直腸癌、胃癌、卵巢癌、前列腺癌、膀胱癌、子宮癌、肝癌、腎臟癌、明亮細胞肉瘤、黑色素瘤、腦脊髓腫瘤、腦癌、胸腺瘤、間皮瘤、食道癌、膽道癌、睪丸癌、胚癌(germinal cancer)、甲狀腺癌、副甲狀腺癌、子宮頸癌、子宮內膜癌、淋巴瘤、骨髓發育不良症候群(myelodysplastic syndromes)(MDS)、骨髓纖維化(myelofibrosis)、急性白血病、慢性白血病、多發性骨 髓瘤、何杰金氏疾病(Hodgkin's disease)、內分泌癌，以及肉瘤。
  10. 如請求項7之藥學組成物，其進一步包含一抗癌藥。
  11. 如請求項10之藥學組成物，其中該抗癌藥為西妥昔單抗(Cetuximab)、帕尼單抗(Panitumumab)、埃羅替尼(Erlotinib)、吉非替尼(Gefitinib)、曲妥珠單抗(Trastuzumab)、T-DM1、帕妥珠單抗(Pertuzumab)、拉帕替尼(Lapatinib)、紫杉醇、他莫昔芬(Tamoxifene)、順鉑、抗-CTLA-4抗體、抗-PD-1抗體、抗-PDL-1抗體、5-氟尿嘧啶(5FU)、吉西他濱(Gemcitabine)，或其等之組合。
  12. 如請求項10之藥學組成物，其中該藥學組成物進一步包含一單一組成物或個別的(separate)組成物。
  13. 一種如請求項1至6中任一項之抗體或抗原結合片段之用途，其係用於製造一藥物以供預防或治療與ErbB3蛋白活化或過度表現相關的疾病。
  14. 如請求項13之用途，其中該藥物進一步包含抗癌藥。
  15. 如請求項14之用途，其中該抗癌藥與如請求項1至6中任一項之抗體或抗原結合片段，係同時、分開或相繼地投與。
  16. 如請求項14之用途，其中該抗體、其抗原結合片段、該抗癌藥或其等之組合係透過口服、靜脈內、 肌肉內、經皮的、黏膜的、鼻內、氣管內、皮下投與及其等之組合投與至個體。
  17. 如請求項14之用途，其中該抗體、其抗原結合片段、該抗癌藥或其等之組合係全身地或局部地投與。
  18. 一種如請求項1至6中任一項之抗體或抗原結合片段之用途，其係用於製造一藥物以供預防或治療癌症耐藥性(cancer drug resistance)。
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