UA120252C2 - Гібридна рослина brassica - Google Patents

Abstract

Винахід стосується рослини Brassica napus або Brassica juncea, що містить в своєму ядерному геномі принаймні одну копію елітної події MS-B2, причому елітна подія MS-B2 містить чужорідну ДНК, що містить ген барнази під контролем специфічного промотору тапетуму та принаймні одну копію елітної події RF-BN1, причому елітна подія RF-BN1 містить чужорідну ДНК, що містить ген барстар під контролем ТА29 промотору. Винахід також стосується клітини або тканини, або насіння рослини; пари рослин Brassica napus або Brassica juncea для застосування для одержання гібридного насіння; геномної ДНК рослини Brassica napus або Brassica juncea та рослини, клітини або насіння рослини Brassica juncea, що містить елітну подію RF-BN1.

Description

Галузь техніки

Винахід стосується трансгенних рослин Вгазвзіса, матеріалу рослин та насіння, зокрема рослин олійного рапсу, який відрізняється тим, що в цих рослинах відбувається поєднання двох явищ специфічної трансформації, зокрема за наявності гена чоловічої стерильності, локалізованого у специфічному місці геному Вгавтвзіса, та гена відновлення фертильності, локалізованого у специфічному місці геному Вгавзвзіса. Винахід також стосується пари трансгенних рослин Вгазвзіса, зокрема рослин олійного рапсу, спеціально пристосованих для одержання гідридного насіння. Конкретніше, одна з рослин характеризується тим, що вона є чоловічо-стерильною, завдяки наявності в її геномі гена чоловічої стерильності, а друга - тим, що несе ген відновлення фертильності, здатного перешкоджати активності гена чоловічої стерильності. Пара рослин Вгаззіса за винаходом поєднує здатність формувати гідридне насіння з оптимальними загальними агрономічними характеристиками, генетичною стабільністю та адаптивністю до різних генетичних фонів.

Рівень техніки

Фенотипічна експресія трансгена в рослині визначається як структурою самого гена, так і його розміщенням в геномі рослини. В той же час наявність трансгена (в чужому ДНК) в різних місцях генома буде по-різному впливати на загальний фенотип рослини. Агрономічно або промислово успішне надання комерційно цікавої характеристики рослині шляхом генетичної маніпуляції може бути довгою процедурою, що залежить від декількох факторів. По-суті, трансформація та регенерація генетично трансформованих рослин є лише першими кроками з цілої низки кроків, що потребуються для селекції, та включають екстенсивну генетичну характеризацію, виведення та оцінку рослин в польових випробуваннях.

Термін «насіння рапсу» охоплює все насіння різновиду Вгазвзіса. Вгазвіса вирощують в різних країнах - від Китаю та Індії до Фінляндії та Канади - як одну з найцінніших олійних культур. Більшість видів Вгавзвзіса належать до сімейства Стгисіїегає. Вони виникли як диплоїдні види, в яких наявні анеуплоїдні хромосоми в кількості, що лежить в діапазоні від 7 (Вгавзвіса тпийсшовза) до 12 (біпарзів аіІба). Вид Вгазвзіса, що росте в Канаді найекстенсивніше, відомий як ріпак олійний або Вгаззіса сатрезігів (аа, п-10). Вгазвіса оіегасеєа (сс, п-9) урізноманітнилась за останній період історії еволюції у принаймні шість основних садових видів, в тому числі броколі,

Зо цвітну капусту та капусту. Вгазвіса підга (Б, п-8) або чорна гірчиця є комерційно менш важлива сільськогосподарська культура і більш відома своїм насінням, з якого вперше гірчиця була одержана. З цих основних видів за останні стадії еволюції шляхом схрещування одержали амфіплоїдні гібриди. Найбільш важливою з них є Вгазвзіса париз (аасс), зимові види яких в північній Європі забезпечують найбільший врожай насіння рапсу, та Вгазвзіса /ипсєа (аарь) або коричнева гірчиця, що є однією з основних олійних культур Індійського субконтиненту. Хоча схрещування різних різновидів Вгавзв5іса (зокрема тих, що мають сумісні геноми) можливе і його часто здійснюють для виведення культур, не всі характеристики (або гени) можуть бути перенесені з одного різновиду до іншого або, при перенесенні до різних різновидів, зберігають ідентичні характеристики (або профілі експресії генів). Таким чином, генетичний локус, що забезпечує оптимальну експресію природного або химерного гена в одному різновиді Вгавзвіса не буде обов'язково мати аналогічний ефект в іншому.

Різновиди Вгаззіса є двополими та зазвичай на 60-7095 самозапильними. Одержання гібридів та введення генетичної варіації, в якості основи для селекції, традиційно залежало від адаптації таких природніх феноменів як самонесумісність та цитоплазматична чоловіча стерильність. Способи регулювання штучного запилення, такі як ручну емаскуляцію або застосування речовини, що руйнує гамети, не часто застосовують при виведенні Вгазвзіса через їх лімітовану практичність та високу ціну, відповідно.

Трансгенні способи розроблювали для одержання рослин з чоловічою або жіночою стерильністю, що забезпечують цікаві альтернативи традиційним методикам.

Патентний документ ЕР 0344029 описує систему досягнення ядерної чоловічої стерильності, за якої трансформують рослини, що мають ген чоловічої стерильності, який містить, наприклад,

ДНК, що кодує молекулу барнази, під контролем специфічного промотора ТА29 тапетума, який, при включенні у рослину, забезпечує селективну деструкцію клітин тапетума. Трансформація рослин тютюну та олійного рапсу за допомогою гена, одержаного з рослини, в якій повністю запобігали утворенню пилку (Маїіапі еї а). 1990, Маште 347: 737-741).

Цитохімічний та гістохімічний аналіз іншого способу одержання рослин Вгаззіса парив, що містять химерний ген барнази РТА29, описаний Ое ВіосК та Ое Вгошмег (1993, Ріапіа 189:218- 225).

Для того щоб відновити фертильність потомства з чоловічою стерильністю, була 60 розроблена система, за якої рослину з чоловічою стерильністю схрещують з трансгенною рослиною, що несе ген, що відновлює фертильність, який при експресії здатний пригнічувати або перешкоджати активності гена чоловічої стерильності (05 5,689,041; 05 5,792,929; ЮОе Віоск апа Ое Вгошмег, зирга). Застосування корегулюючих генів при одержанні рослин з чоловічою стерильністю для збільшення частотності трансформантів, що мають хороші агрономічні характеристики, описано в УМО 96/26283. Зазвичай, коли ДНК стерильності кодує барназу, корегулююча ДНК кодуватиме барстар.

Елітна подія М5-В2 та рослини з чоловічою стерильністю, що містять таку елітну подію, що забезпечує чоловічу стерильність, широко розкриті в документі М/О001/31042 (включеному сюди шляхом посилання) та включають характеристику трансгена та послідовностей ДНК рослин, що прилягають безпосередньо до вставленого гена.

Еталонне насіння, що містить елітну подію М5-В2, задепоноване в АТСС (10801 Опімегейу

Віма., Мапаззав, МА 20110-2209) 14 жовтня 1999р. під номером доступу АТС РТА-850. Інший зразок аналогічного насіння задепоноване під номером доступу РТА-2485. Альтернативною назвою М5-82 є М5 11.

Елітна подія ВЕ-ВМІ та рослини, що містять таку елітну подію, що забезпечує чоловічу стерильність, широко розкриті в документі МУО01/41558 (включеному сюди шляхом посилання) та включають характеристику трансгена та послідовностей ДНК рослин, що прилягають безпосередньо до вставленого гена.

Еталонне насіння, що містить елітну подію АЕ-ВМ1, задепоноване в АТСС (10801 Опімегейу

Віма., Мапабзза5, МА 20110-2209) 20 вересня 1999р. під номером доступу АТОС РТА-730.

Альтернативною назвою НЕ-ВМІ є ВІ 3.

МУО001/41558 описує також елітну подію М5-ВМ1, рослини з чоловічою стерильністю, що містять таку подію, а також способи ідентифікації таких рослин та їх потомства.

Альтернативною назвою М5-ВМІ1 є М5 8.

Події М5-ВМІ та ВЕ-ВМ1 містяться в гібридних рослинах В. парих, що продаються під брендом Іпмідог? Сапоїа.

Вищезазначені документи не описують, ані конкретне поєднання М5-82 та ВЕ-ВМІ в рослинах Вгаззіса, ані їх застосування при одержанні гібридного насіння. ВЕ-ВМІ в Вгавзвіса /ипсеа та застосування М5-В2 з метою збільшення врожаю олійних рослин Вгавзвіса також не

Зо описується у вищезазначених документах.

Суть винаходу

В одному варіанті здійснення винахід пропонує спосіб одержання гібридного насіння з рослин олійного рапсу, таких як Вгазвзіса парих або Вгаззіса (ипсеа, що включає стадії забезпечення материнської особини рослини олійного рапсу з чоловічою стерильністю, що містить елітну подію М5-В2, причому еталонне насіння, що містить вказану елітну подію, задепоноване в АТСС під номером депонування АТСС РТА 2485 або АТСС РТА-850; забезпечення батьківської особини рослини олійного рапсу з чоловічою фертильністю, що містить елітну подію АЕ-ВМ1, переважно в гомозиготній формі, причому еталонне насіння, що містить вказану елітну подію, задепоноване в АТСС під номером депонування АТСС РТА-730; забезпечення запилення вказаної материнської особини рослини олійного рапсу пилком вказаної батьківської особини рослини олійного рапсу; збирання врожаю гібридного насіння зі вказаної материнської особини рослини.

В іншому варіанті здійснення винахід пропонує рослину олійного рапсу, таку як Вгазвіса пари або Вгазвіса |нпсєа, що містить у своєму ядерному геномі принаймні одну копію елітної події М5-В2, причому еталонне насіння, що містить вказану елітну подію, задепоноване в АТОС під номером депонування АТСС РТА 2485 або АТСС РТА-850 та принаймні одну копію елітної події ВЕ-ВМ1, причому еталонне насіння, що містить вказану елітну подію, задепоноване в

АТСС під номером депонування АТСС РТА-730. Також пропонуються клітини або тканини, або насіння таких рослин олійного рапсу.

В ще одному варіанті здійснення винаходу пропонується пара рослин олійного рапсу для застосування при одержанні гібридного насіння, де одна з рослин олійного рапсу містить елітну подію М5-8В2, причому еталонне насіння, що містить вказану елітну подію, задепоноване в

АТСС під номером депонування АТОС РТА 2485 або АТСС РТА-850, а інша з цих рослин олійного рапсу містить елітну подію ВЕ-ВМІ, причому еталонне насіння, що містить вказану елітну подію, задепоноване в АТСС під номером депонування АТОС РТА-730.

Також завданням винаходу є забезпечення геномного ДНК рослини олійного рапсу, такої як

Вгаззіса парих або Вгаззіса |ппсєа, що містить у своєму ядерному геномі принаймні одну копію елітної події М5-В2, причому еталонне насіння, що містить вказану елітну подію, задепоноване в АТСС під номером депонування АТОС РТА 2485 або АТОС РТА-850 та принаймні одну копію елітної події АЕ-ВМІ, де еталонне насіння, що містить вказану елітну подію, задепоноване в

АТСС під номером депонування АТОС РТА-730.

Також винахід пропонує Вгаззіса пари або Вгаззіса |ипсєа, що містить у своєму ядерному геномі принаймні одну копію елітної події М5-В2, причому еталонне насіння, що містить вказану елітну подію, задепоноване в АТСС під номером депонування АТОС РТА 2485 або АТОС РТА- 850, та принаймні одну копію елітної події ВЕ-ВМІ1, причому еталонне насіння, що містить вказану елітну подію, задепоноване в АТСС під номером депонування АТОС РТА-730.

Також винахід пропонує Вгавзвзіса |ппсєа, а також його клітини та насіння, що містять елітну подію ВЕ-ВМІ1, де еталонне насіння, що містить вказану елітну подію, задепоноване в АТСС під номером депонування АТСС РТА-730. Такі рослини можуть додатково містити елітну подію М5-

В2, де еталонне насіння, що містить вказану елітну подію, задепоноване в АТСС під номером депонування АТСОС РТА 2485 або АТСС РТА-850.

Винахід додатково пропонує застосування елітної події М5-В2, де еталонне насіння, що містить вказану елітну подію, задепоноване в АТСС під номером депонування АТСС РТА 2485 або АТСС РТА-850, для збільшення врожаю насіння в трансгенній рослині олійного рапсу, такій як Вгазвіса |ппсеа.

В ще іншому варіанті здійснення винаходу пропонується спосіб збільшення врожаю рослин олійного рапсу, що включає стадію забезпечення рослини олійного рапсу елітною подією М5-

В2, причому еталонне насіння, що містить вказану елітну подію, задепоноване в АТСС під номером депонування АТСС РТА 2485 або АТСС РТА-850.

Короткий опис креслень

Фіг. 1: Порівняння активності після гербіцидного застосування ліній гібридного В. париз з

М5/АЕ. Секція А: без застосування глюфосинату амонію. Секція В: одноразове застосування глюфосинату амонію. Секція С: дворазове застосування глюфосинату амонію. Квадрати: рослини з М5-ВМ1/АЕ-ВМІ1; точки: рослини з М5-В2/АЕ-ВМІ1.

Фіг. 2: Порівняння врожаю після гербіцидного застосування ліній гібридного 8. пари з

М5/АЕ. Секція А: без застосування глюфосинату амонію. Секція В: одноразове застосування глюфосинату амонію. Секція С: дворазове застосування глюфосинату. Темно-сірі стовпчики: рослини з М5-ВМ1/АЕ-ВМІ1; світло-сірі стопчики: рослини з М5-В2/ВЕ-ВМІ. І ос. 1 - І ос. 5:

Зо місцезнаходження польових випробувань; АМ(ї: о середнє означення оз усіх пунктів (місцезнаходжень); Врожайність представлена у 95 в порівнянні з рослинами, що містять М5-

ВМ1/АБ-ВМ'І як 10090.

Докладний опис винаходу

Даний винахід описує нову комбінацію події чоловічої стерильності М5-82 та події відновлення фертильності АР-ВМІ в рослинах олійного рапсу, зокрема Вгаззіса париб5 та

Вгазвіса |псеа.

Даний винахід базується іпієг аійа на неочікуваному відкритті того, що елітна подія ВЕ-ВМІ1, що забезпечує відновлення фертильності, є достатньо ефективною для відновлення фертильності рослинами олійного рапсу Вгаззіса, якщо вказана рослина також додатково містить елітну подію М5-В2, що забезпечує чоловічу стерильність. Хоча ВЕ-ВМІ ще раніше успішно використовували для відновлення фертильності в рослинах олійного рапсу, що містять елітну подію М5-ВМІ1, не можливо було спрогнозувати чи можна використовувати НЕ-ВМІ для відновлення фертильності в рослинах олійного рапсу, що містять М5-В2. Різна чоловіча стерильність, що містить елітні події, має різні рівні експресії продукту барнази, експресованого трансгенним геном чоловічої стерильності, а тому було неможливо спрогнозувати, що рівні інгібітора барнази, барстар, одержаного за допомогою трансгенного гена відновлення фертильності, в ВЕ-ВМІ1 відповідатимуть експресії барнази в інших окремих подіях чоловічої стерильності. Як зазначено у прикладах нижче, поєднання за даним винаходом дозволяє досягти значно більшого врожаю, ніж при поєднанні тієї ж події чоловічої стерильності М5-82 з іншими подіями відновлення фертильності.

Більш того, як описано вище, ВЕ-ВМІ розташована на С геномі (див. МО 01/31042; див. також, наприклад, ммлм.адріоз-.сот/дразе.рпр"?асіоп-5помРгодедата-М58хАЕЗ. Відповідно, введення ВЕ-ВМІ з В. пари (аасс) у В. їшпсєа (аарр), що не містить С геном, не буде розглядатись спеціалістом в даній галузі однозначно. Однак, матеріали даної заявки передбачають, що ВЕ-ВМІ1 розташовують на А геномі, що дозволяє введення в В. |псєа шляхом схрещування.

Крім того, польові випробування показали, що присутність М5-В2 збільшує середній врожай (врожай зерна), якщо порівнювати його з ізогенною лінією рослин, що не містять М5-В2.

Таким чином, в одному варіанті здійснення винаходу пропонується спосіб одержання гібридного насіння з рослин олійного рапсу, такого як Вгазвзіса париз або Вгазвзісаїипсеа, що включає стадії: - забезпечення материнської особини рослини олійного рапсу з чоловічою стерильністю, яка містить елітну подію М5-В2, що містить ген чоловічої стерильності; - забезпечення батьківської особини рослини олійного рапсу з чоловічою фертильністю, що містить елітну подію ВЕ-ВМІ, що містить ген відновлення фертильності, переважно в гомозиготній формі; - забезпечення запилення вказаної материнської особини рослини олійного рапсу пилком вказаної батьківської особини рослини олійного рапсу; - збирання врожаю гібридного насіння зі вказаної материнської особини рослини. Як він тут використовується, термін «ген» стосується будь-якої послідовності ДНК, що містить декілька функціонально пов'язаних фрагментів ДНК, таких як промотор та нетрансльовану ділянку 5' (5'

НТД), яка разом з промоторною ділянкою, кодуючою ділянкою (яка може кодувати або не кодувати білок) та нетрансльовану ділянку ділянку 3 (3 НТД) що містить сайт поліаденілювання. Зазвичай в клітинах рослин 5 НТД, кодуючи ділянка та 3 НТД транскрибуються в РНК, що у випадку гена, який кодує білок, транслюється в білок. Ген може містити додаткові фрагменти ДНК, такі як, наприклад, інтрони. Як він тут використовується, генетичний локус - це позиція наданого гена в геномі рослини.

Термін «химерний», коли він стосується гена або послідовності ДНК, використовується для того, щоб зазначити, що ген або послідовність ДНК містить принаймні два функціонально релевантні фрагменти ДНК (такі як промотори, 5' НТД, кодуююча ділянка, З' НТД, інтрон), що зазвичай не стосуються один одного та походять, наприклад, з різних джерел. Термін «чужий», коли він стосується гена або послідовності ДНК відносно різновиду рослин, використовують для того, щоб показати, що ген або послідовність ДНК не має місце в природі, ані самого різновиду рослин, ані в генетичному локусі різновиду. Термін «чужа ДНК» буде використовуватись тут як така, що стосується послідовності ДНК, коли вона включена в геном рослини в результаті трансформації. Як він тут використовується, термін «трансформуюча ДНК» стосується рекомбінантної молекули ДНК, що використовується для трансформації. Трансформуюча ДНК

Зо зазвичай містить принаймні один «ген, що представляє інтерес» (наприклад, химерний ген), здатний забезпечувати трансформовану рослину однією або більше специфічною характеристикою. Термін «рекомбінантна молекула ДНК» використовується в якості прикладу і, таким чином, може включати ізольовану молекулу нуклеїнової кислоти, що може бути ДНК і може бути одержаною за допомогою рекомбінантних або інших процесів.

Використовуваний тут термін «трансген» стосується гена, що представляє інтерес, включеного в геном рослини. Термін «трансгенна рослина» стосується рослини, що містить принаймні один трансген в геномі усіх її клітин.

Чужа ДНК, присутня в рослинах за даним винаходом, переважно матиме два гена, що представляють інтерес, конкретніше - або ген чоловічої стерильності та ген стійкості до гербіцидів, або ген відновлення фертильності та ген стійкості до гербіцидів.

Як він тут використовується, термін «ген чоловічої стерильності» стосується гена, який під час експресії в рослині відтворює рослину, що нездатна створювати фертильний, життєдайний пилок. Прикладом гена чоловічої стерильності є ген, що містить послідовність ДНК, яка кодує барназу, під контролем промотора, що спрямовує експресію в клітинах тапетума. Конкретніше, відповідно до даного винаходу, геном чоловічої стерильності є «ТА29-барназа», описана в матеріалах даної заявки.

Як він тут використовується, термін «ген відновлення фертильності» стосується гена, який під час експресії в рослині, що містить ген чоловічої стерильності, здатний перешкоджати фенотипній експресії гена чоловічої експресії, відновлюючи фертильність в рослині.

Конкретніше, вказаний ген відновлення фертильності міститиме ДНК, що кодує білок або поліпептид, здатний попереджати фенотипну експресію гена чоловічої стерильності, під контролем промотора, що спрямовує експресію принаймні в клітини, в яких експресується ДНК з чоловічою стерильністю. Більш конкретно, відповідно до даного винаходу, геном відновлення фертильності є «ТА29-барстар», описаний в матеріалах даної заявки.

Включення рекомбінантної молекули ДНК в геном рослини зазвичай спричиняється трансформацією клітини або тканини (або іншою генетичною маніпуляцією). Конкретний сайт включення визначається випадково або знаходиться в попередньо визначеному положенні (якщо використовується процес спрямованої інтеграції).

Чужа ДНК може характеризуватись місцем та конфігурацією в сайті включення бо рекомбінантної молекули ДНК в геном рослини. Сайт в геномі рослини, куди було вставлено рекомбінантну ДНК, також називають «сайтом вставки» або «цільовим сайтом». Вставка трансгена в геном рослини може бути пов'язана з делецією ДНК рослини, що має назву «делеція в цільовому сайті». Термін «фланкуюча ділянка» або «фланкуюча послідовність», як він тут використовується, стосується послідовності, що становить принаймні 20 рр, переважно принаймні 50 Бр та до 5000 рр генома рослини, розташованої або безпосередньо вище та суміжно або безпосередньо нижче та суміжно з чужою ДНК. Процеси трансформації, що ведуть до випадкової інтеграції чужої ДНК, призведуть до утворення трансформантів з різними фланкуючими ділянками, особливими та унікальними для кожного трансформанта. Якщо трансген вводять в рослину за допомогою традиційного схрещування, його сайт вставки в геном рослини, або його фланкуюча ділянка зазвичай не змінюються. Як він тут використовується, термін «ділянка вставки» стосується ділянки, що відповідає ділянці, яка становить принаймні 40 рр, переважно принаймні 100 рр, та навіть вище 10000 рр, охопленої верхньою та нижньою фланкуючими ділянками трансгена в (нетрансформованому) геномі рослини, та включає сайт вставки (та можливу делецію в цільовому сайті) Беручи до уваги незначні відмінності спричинені мутаціями в межах різновиду, ділянка вставки зберігатиме принаймні 85 95, краще 90 95, ще краще 95 95 та найкраще 100 95 ідентичність послідовності з послідовністю, що містить верхню та нижню фланкуючі ділянки чужої ДНК в наданій рослині того різновиду.

Експресія гена, що становить інтерес, стосується того факту, що ген забезпечує одне або більше фенотипне випробування (наприклад, толерантність до гербіциду) на рослині, що , як передбачалось, забезпечуватиметься шляхом введення рекомбінантної молекули ДНК - трансформуючої ДНК - що використовується впродовж трансформації (на основі структури та функції частини або всіх генів, що становлять інтерес).

Термін «подія» визначають як (штучний) генетичний локус, що в результаті генетичної маніпуляції, несе чужу ДНК, що містить принаймні одну копію гена(ів), що становить інтерес.

Звичайними аллельними станами події є наявність або відсутність чужої ДНК. Як вони тут використовуються, терміни подія «Мб» та подія «ВЕ» стосуються подій, що несуть відповідно трансгени «ТА29-барназу» та «ТА29-барстар». Подія фенотипно характеризується експресією одного або більше трансгенів. На генетичному рівні подія є частиною генетичної моделі рослини. На молекулярному рівні подія характеризується рестрикційною картою (наприклад, як

Зо визначено Саузерн-блоттингом) та/або верхніми та/або нижніми фланкуючими послідовностями трансгена, та/або молекулярною конфігурацією трансгена. Зазвичай трансформація рослини за допомогою трансформуючої ДНК, яка містить принаймні один ген, що становить інтерес, призводить до утворення великої кількості подій, кожна з яких є унікальною.

Як він тут використовується, термін «елітна подія» є подією, що вибирається з групи подій, одержаних шляхом трансформації тією ж трансформуючою ДНК або шляхом зворотнього схрещування з рослинами, одержаними в результаті такої трансформації, на основі експресії та стабільності трансгена та його сумісності з оптимальними агрономічними характеристиками рослини, що його містить. Таким чином, критерієм відбору елітної події є один або більше, переважно два або більше, краще всі з наступних: а) наявність трансгена не пригнічує інші необхідні характеристики рослини, такі, що стосуються агрономічної поведінки або комерційної цінності рослини; р) подія характеризується добре визначеною молекулярною конфігурацією, що постійно унаслідується, та для якої з метою визначення контролю, можна розробити придатні інструменти діагностики; с) ген(и), що становить інтерес, демонструє в трансгені правильну, придатну та стабільну просторову та тимчасову фенотипну експресію, як в гетерозиготних (або гемізиготних), такі в гомозиготних умовах події, за комерційно прийнятного рівня в діапазоні умов навколишнього середовища, в яких рослини, що несуть подію, схоже розкриваються при звичайному (нормальному) агрономічному використанні.

Краще, якщо чужа ДНК пов'язана з позицією в геномі рослини, що забезпечує інтрогресію в необхідні комерційні фонові генотипи.

Статус події як елітної підтверджується інтрогресією вказаної елітної події в різні релевантні фонові генотипи та спостереженні відповідності одному, двом або всім критеріям, наприклад, вищезазначеним критеріям а), Б) та с).

Крім того, для трансгенів, що кодують чоловічу стерильність та відновлення фертильності, описаних в даній заявці, вибір елітних подій також визначається з огляду на сумісність між цими подіями, а конкретніше, з огляду на те, що потомства, що з'являються завдяки схрещуванню рослини, що несе подію чоловічої стерильності, з рослиною, що несе подію відновлення фертильності, де обидві наявні події мають такі характеристики:

а) адекватну фенотипну експресію фенотипу з відновленою фертильністю, тобто чоловічою фертильністю; та

Б) фенотипну експресію при комерційно доступному рівні в такому діапазоні умов навколишнього середовища, в якому рослини, що несуть дві події, схоже розкриваються при звичайному (нормальному) агрономічному використанні.

Таким чином, «елітна подія» стосується генетичного локуса, що містить трансген, який відповідає вищенаведеним критеріям. Рослина, рослинний матеріал або потомство, таке як насіння, можуть містити одну або більше елітних подій в своєму геномі.

Елітна подія М5-В2 детально охарактеризована відповідно до того як її описано в МО 01/31042 (див., зокрема, приклади 1 та 3). Трансформуюча ДНК описана в прикладі 1.

Фланкуючі послідовності ДНК рослини після вставки трансгена ізолюють та ідентифікують (див

МО 01/31042, зокрема приклади 3.2 та 5ЕО ІО Мо 1 та 2). Діагностична ПЛР, що дозволяє ідентифікувати елітну подію М5-В2 в біологічному матеріалі, також описана в М/О 01/31042, зокрема в прикладі 5. Якщо в рослинах, клітинах, насінні або тканинах Вгаззіса присутня елітна подія М5-В2, їх геномний ДНК можна використовувати для розширення фрагмента ДНК, що становить 160-200 Бр, зокрема приблизно 183 рр, застосовуючи полімеразну ланцюгову реакцію з двома праймерами, що мають нуклеотидну послідовність ЕС ІЮО Мо З та 5ЕО ІО Мо 4, відповідно. Еталонне насіння задепоноване в АТСС під номером депонування АТС РТА-850 або РТА-2485. Альтернативною назвою елітної події М5-В2 є М511.

Елітна подія ВЕ-ВМ1 детально охарактеризована відповідно до того як її описано в МО 01/41558 (див. зокрема приклади 16 та 4.2.2). Трансформуюча ДНК описана в прикладі 16.

Фланкуючі послідовності ДНК рослини після вставки трансгена ізолюють та ідентифікують (див

МО 01/31042, зокрема приклади 4.2.2 та 5ЕО ІО Мо 5 та 6). Діагностична ПЛР, що дозволяє ідентифікувати елітну подію ВЕ-ВМІ1 в біологічному матеріалі, також описана в М/О 01/41558, зокрема в прикладі 5.2. Якщо в рослинах, клітинах, насінні або тканинах Вгазвзіса присутня елітна подія КЕ-ВМТ1, їх геномний ДНК можна використовувати для розширення фрагмента ДНК, що становить 195-235 рр, зокрема приблизно 215 рр, застосовуючи полімеразну ланцюгову реакцію з двома праймерами, що мають нуклеотидну послідовність 5ЕО ІЮ Мо 7 та 5ЕО ІЮО Мо 8, відповідно. Еталонне насіння задепоноване в АТСС під номером депонування АТСС РТА- 730. Альтернативними назвами події ВЕ-ВМ1 є ВЕЗ або АС5-ВМО03-6.

Рослини, що містять ВЕ-ВМІ1 або М5-82, можуть бути одержані, наприклад, з насіння, депонованого в АТСС. Такі рослини можуть далі розмножуватись та/або застосовуватись в звичайній схемі виведення з метою введення елітної події за винаходом в інші сорти аналогічних різновидів рослин. Депоноване насіння належить до різновидів Вгазвіса пари5. Тим не менш, способи введення аллелів або трансгенів, розташованих на А-геномі від В. паривє до

В. /ипсеа добре відомі в рівні техніки та включають повторне зворотнього схрещування.

Винахід вперше пропонує рослини, насіння, клітини та тканини В. /ипсеа, які містять в своїх ядерних геномах елітну подію НЕ-ВМ1, що містить геном відновлення фертильності. Раніше в доступній інформації зазначалось, що елітна подія ВЕ-ВМ1 присутня на С геномі; однак, згідно інформації, розкритій в даній заявці, вставка ВЕ-ВМІ1 міститься в А геномі, що забезпечує перенесення елітної події до В. /ипсеа.

Рослини Вгавзвзіса, що містять М5-82 та/або ВЕ-ВМІ, також характеризуються своєю толерантністю до глюфосинату, що в контексті даного винаходу означає те, що рослини є толерантними до гербіциду Іірепу"м. Толерантність до І іІрбепу"М визначається тим критерієм, що обприскування листя рослин в 3-4 стадії (3У-4М) принаймні 200 г активного інгредієнта на гектар (г.а.і./га), переважно 400 г.а.і./га та можливо до 1600 г.а.і./га, не вбиває рослини. Згідно з дослідженнями РАТ, рослини, що містять М5-82 та/або ВЕ-ВМ1І можуть додатково характеризуватись наявністю в своїх клітинах фосфінотріцин ацетил трансферази (Ое Віоск єї аї, 1987, ЕМВО 4). 6: 2513-2518).

Рослини Вгаззіса за даним винаходом можна вирощувати традиційним способом. Наявність гена 355-раг гарантує те, що вони є толерантними до глюфосинату. Таким чином, бур'ян на полях, де вирощують такі рослини Вгаззіса можна контролювати шляхом застосування гербіцидів, що містять глюфосинат в якості активнадого інгредієнта (таких як, І ірепу М).

Польові випробування додатково показали, що присутність М5-В2 в рослинах Вгазвзіса забезпечує збільшення врожаю насіння або зерна, порівняно з ізогенною лінією рослин без М5-

В2. Відповідно, варіантом здійснення даного винаходу є спосіб збільшення врожаю насіння в рослинах олійного рапсу, що включає стадію забезпечення рослини олійного рапсу елітною М5- вг.

Згідно з формулою винаходу нижче, поки чітко не вказано інше, термін «рослина» призначений охоплювати тканини рослин на будь-якій стадії зрілості, а також будь-які клітини, тканини або органи, взяті з або, що походять від будь-якої такої рослини, включаючи без обмежень, будь-яке насіння, листя, стебло, квітки, коріння, одинокі клітини, гамети, культури клітин, культури тканин або протопласти. Клітини рослин, як вони тут використовуються, охоплюють клітини рослин, що не регенеруються.

Термін рослини «Вгазвзіса», як він тут використовується, стосується рослин сімейства

Вгазвісасеа, переважно рослин, що містять А геном. Переважно, рослина Вгаззіса належатиме до одного з різновидів Вгаззіса париз, Вгазвіса гара (або сатрезвігів), або Вгаввіса |ипсеа.

Альтернативно, вказана рослина може належати до різновидів, що виникли в результаті перехресного запилення цих різновидів Вгазвзіса, таких як В. паросатрезііз або штучного схрещування одного з цих різновидів Вгазвзіса з іншими різновидами Стис/егасеєа. Як він тут використовується, термін «олійна рослина» стосується будь-якого різновиду Вгавзвзіса парив,

Вгазвзіса гара (або сатревігіз) або Вгазвіса (ипсеа.

Олійні рослини за винаходом також можуть обробляти гербіцидами, включаючи Клопіралід,

Диклофоп, Флуазифоп, Глюфосинат, Гліфосат, Метазахлор, Трифлуралін, Етаметсульфурон,

Квінмерак, Квізалофоп, Клетодим, Тепралоксидим; фунгіцидами включаючи Азоксистробін,

Карбендазим, Флудиоксоніл, Іпродіон, Прохлораз, Вінклозолін або інсектицидами, включаючи

Карбофуран, Органофосфати, Піретроїди, Тіаклоприд, Делтаметрин, Імідаклоприд, Клотіанідин,

Тіаметоксам, Ацетаміприд, Динетофуран, бета-Цифлутрин, гама- та лямбда- Цигалотрин, тау-

Флувалериат, Етипрол, Спиносад, Спиноторам, Флубендиамід, Ринаксипір, Циазипір або 4-((6- хлорпіридин-3-іл)метилІ|(2,2-дифторетил)аміно|фуран-2(5Н)-он.

Як він тут використовується, термін «що містить» повинен розглядатись як такий, що уточнює наявність наведених ознак, систем, стадій або компонентів, яких вони стосуються, але не попереджує наявність або додавання однієї або більше їх ознак, систем, стадій або компонентів, або груп. Таким чином, наприклад, нуклеїнова кислота або білок, що містить послідовність нуклеотидів або амінокислот, може містити більше нуклеотидів або амінокислот, ніж фактично зазначено, тобто, бути вбудованими в більшу нуклеїнову кислоту або білок.

Химерний ген, що містить послідовність ДНК, яка функціонально або структурно визначена, може містити додаткові послідовності ДНК, і т.д.

Наступні приклади описують характеристики рослин олійного рапсу, що мають елітні події

М5-82 та ВЕ-ВМІ1.

Поки не вказано інше, всі методики з рекомбінантною ДНК здійснюють згідно зі стандартними протоколами, описаними в батргоок еї а!. (1989) Мо/есшаг Сіопіпад: А І арогайгу

Мапиаї!, бЗесопа Еайіоп, Сода 5ргіпд Наїбоиг І арогаїогу Ргез5, МУ та в томах 1 та 2 А!й5иБеї еї аї. (1994) Ситепі Ргоїосої!в іп Мо!Іесшаг Віооду, Сцитепі Ргоїюсоів, ОБА. Стандартні матеріали та способи для роботи з рослинами на молекулярному рівні описані В.0.О. Стоу в роботі Ріапі

Моїесшіаг Віоіоду І абтах (1993), опублікованій ВІО5 бсієпіййс Рибіїсайопе Ца (ОК) та ВіасКмуєїЇ

Зсіепійіс Рибріісайопв, ОК.

В описі та прикладах є посилання на такі послідовності:

ЗЕО ІО Мо 1: 5 фланкуюча послідовність М5-В2

ЗЕО ІЮ Мо 2: 3 фланкуюча послідовність М5-В2

ЗЕО ІЮО Мо 3: олігонуклеотидний праймер 1 для детекії М5-В2

ЗЕО ІО Мо 4: олігонуклеотидний праймер 2 для детекції М5-В2

ЗЕО ІО Мо 5: 5 фланкуюча послідовність ВЕ-ВМІ1

ЗЕО ІО Мо 6: 3 фланкуюча послідовність ВЕ-ВМІ1

ЗЕО ІО Мо 7: олігонуклеотидний праймер 1 для детекції ВЕ-ВМ!1

ЗЕО ІЮО Мо 8: олігонуклеотидний праймер 2 для детекії ВЕ-ВМ1

ЗЕО ІЮО Мо 9: плазмідний РТНУУ118

ЗЕО ІЮ Мо 10: плазмідний РТСО113

Вищенаведений опис винаходу призначений для ілюстрації, а не обмеження. Різноманітні зміни або модифікації в описаних варіантах здійснення можуть бути здійснені фахівцем в даній галузі без відходження від суті або об'єму винаходу.

ПРИКЛАДИ

Приклад 1. Короткий опис М5-В2 та ВЕ-ВМ1 1.1. Елітна подія М5-В2

Елітна подія М5-В2 була одержана шляхом опосередкованої агробактеріями трансформації рослин В. парих з химерною ДНК, що містить ген барнази під контролем специфічного промотора тапетума (ртСО113).

Плазмідний рТСО113 по-суті походив від проміжного вектора равзм1. Сам вектор равзм! походить від равст1700 (Согпеїїззеп апа Мапаємлеїе, 1989), але містить штучну Т-ділянку, що складається з лівої та правої граничних послідовностей ТІ-ДНК з ртів653 та клонуючі сайти з мультилінкерами, що забезпечують вставку химерних генів між граничними повторами Т-ДНК.

Вектор разм1 має ген барстар на основі плазміди з регуляторними сигналами для експресії в

Е. сої.

Повний опис ДНК, що міститься між граничними повторами рТтСО113, наведений в Таблиці 1 (ЗЕО ІЮ Мо 10):

Таблиця 1. Нуклеотидні позиції ДНК; що містяться. між граничними повторами Т-

ДНК рТСОо113

Нуклвютидні Орієнтація Ії дбпиє та посилання 1-95 77771 Правийтраничний повтор від ТІ-ДНІЗ рТІВБО (Вісієп "ег а. 1984) Тпе ЕМВО оопта! 3: 835-546). 28-53 Послідовності, що походять від синтетичного 0000 й попілінкера

Ба-9О С Залишкова послідовністьз ТОДНК в правому 00000 : граничному повторі 81-57 | | Послідовності, що походять від синтетичного ! і /"полілінкара | Й 309-968 Проти Нетрансльований кінець 3 з гена Т.-ДНК У (37) годинникової | ртіВВОЗ (мейелапа Зспей, 11985) Мисівіс Асід5 ; стріпки Невватей 13: 5981-6998; Юбасва еї а... 1983) Те

ЕМО Зойта! 3: 835-846).

З Послідовності, що походять від синтетичного ші і полілінкера ва-33е ГАроти що "Кодуюча послідовність гема стійкості де бізлафосу і годинникової ба) зіперютусев пудтозсорісня (ппоптрвоп ее, стрінки (1957) Те ЕМВО доштіа! 6: 2519-2523). М-термінальні ' два кодони кодуючої ділянки дикого типу баг замічена п с кодонами АТС та САС, відповідно: овов-яВа Проти ГПромотор з-гена маленької субчастинки аІЗТА і годинникової рибуплозо-1 5-біфосфаткарбохсилази з Агарійоювів істріпки Ірайспа (Рз5иАга) (Ктебрега гг а. (1988) Ріапі

Моівсціаг Віоюду 11::745-759). ря В І Послідовності, що походять від синтатичного ші ! | попілінкера і ! 2920-2860 | Проти Фрагмент 280 Бр Таці з нетрансвьованого: кінця : тва годинникової синтази нопаліна (З'пов) з Т-ДНК рТІТ37 та такий, що : | стріяки містить сигнапи паліаденілювання рослини хбепеке? : : ета... (1982) Збигпа! ої Моїесцівг апа Аррієя сепейсв у 561-573). свавіеяв 01000100 Моспідовмості, що походять від синтетичного 0000 ' полілінкера 303823 | Нетранслвована ділянка 3 нижче від барнази, що кодує поспідовність В. атуойдивтасівпя ! зави-3053 Проти Кодуюча діпянка гена барнази з Васійив годинникової З атптуюлоцетасівпв (Напшеу (19883 доцгва!ої Мови і стрілки і Віоіоду 202: 9185915), 4878-3369 | Проти Ділянка промотера специфічного до пиляків гена ТАЗУ годинникової з Місопапа їайасців Промотор містить 1,5 Ко стрілки послідовності вище початкового кодона АТС(Зецтнск ен... 11990) Мусівіс Асі Незеатсп 18: 3403), зв79-я5о4 щ Послідовності, що походять від синтетичного 0000 ! попілінкера

Гавов вет За 7 ГПромотр тенасинтази нопаліназ ДНК 3У 00000 і | годинниковою АдтюовВасенит ішлтегасівпз (Р Мов). Нуклеотидна і стрілкою послідовність прамотора РМоз описана Оеріскег ев. с (1982) в Зоцштаї ої Моївсшаг ару Аррієд Сепейсв і: 5601- 578. кЕдудтддт ;

І 52165217 Послідовності, що походять від синтетичного попілінкера 218-590 і За Кодуюча діпянка гена барстар Васі атуюлйуейасівте годинниковою І (Напієу (1988) доита! ої Моївсчіаг Віооду 202: 913-915).

Шо стрілкою 5911-5530 | Послідовність з нетрансльованого кінця З гена барстаю ! Васшйнь атуюпйомзетасювтв

ББЗІ-яВБА ' Поспідовності. що походять відсинтетичного о | | попілінкера: | | : 5555-5766 За Метрансльований кінець З гена ТІАДНК 7 (53'г7) ТІВО5З ! годинниковою | (Мейеп'апе Зелені. (19853 Мисівіс Асідз Везевтсй 13: й стрілкою І 6981-6998; Опасве сі а... (1983) Тне ЕМО доцтаї З: 835-846). НИ

БУВ и 1 Вослідовність, що походить від синтетичного

ПИ ПК пас о ІНН 5Уга-БВ1О | Залишкові послідовності 3. Р-ДНК в правому ! граничному повторі:

БВІЯ-5ВЯО : Послідовність, що походить від синтетичного 000000 с полілінкера

ГЕБАТ ВЕ: ши 77 Лівий граничний повтор від 1-ДНК з р ПОЗІ (Спвієп

МИ вн 1 зі. 1984) Тпе ЕМБО двута! 8. 835-846).

Фланкуючі послідовності виділяли відповідно до того, як описано в МО 01/31042.

Права фланкуюча ділянка (57)

Фланкуючу ділянку 5 розширили як са. фрагмент 415 рр, повна послідовність якого була визначена (5ЕО ІЮ Мо 1). Послідовність між нуклеотидом 1 і 234 відповідає ДНК рослини, а послідовність між нуклеотидом 235 і 415 - Т-ДНК.

Ліва фланкуюча ділянка (3)

Вказану фланкуючу ділянку 3' розширили як са. фрагмент 416 рр, повна послідовність якого була визначена (5ЕО ІЮ Мо 2). Послідовність між нуклеотидом 1 і 193 відповідає Т-ДНК, а послідовність між нуклеотидом 194 та 416-ДНК рослини.

Ідентифікація М5-В2 за допомогою ПЛР

Відповідно до МО 01/31042, М5-82, що містить біологічний матеріал, може бути ідентифікована застосовуючи описаний в документі протокол ідентифікації за допомогою ПЛР.

Наступні праймери, що специфічно розпізнають чужу ДНК та фланкуючу послідовність М5-

Вг2, можуть бути застосовані: во: У"ДАА АТС САТатАААЯ СА САдЯ ЗУ (БЕО І Мо. 3) (ціле: ДН ВОослИНи)

Во: 5-аСТ. Тева. АСТ.АТААТА СТАС (ЗБОЮ. Мо. 4) (ціль: Т-ДНК)

Очікуваними розширеними Фрагментами реакції ПЛР є: для пари праймерів ВО1-ВО02 183 Бр (елітна подія М5-В2) 1.2. Елітна подія ВЕ-ВМІ

Елітна подія ВЕ-ВМІ була одержана шляхом опосередкованої агробактеріями трансформації рослин В. парих з химерною ДНК, що містить ген барнази під контролем промотора ТА29 (рТНМУ/118).

Плазмідний РТНМУ118 також по-суті походив від проміжного вектора рамі (описаного вище). Повний опис ДНК, що міститься між граничними повторами рІНМУУ118 наведений в таблиці 2 (5ЕО ІО Мо. 9).

Таблиця 7. Т-ДНК плазмідного ВТНУУТІВ

Нуклеотидні Орієнтація ) Опис та посилання позиції | ин А 1-25 Правий годничний повтор від ТІ.-ДНК з рГІВОЗЗ (Сівівп ві 8 (1984) Тре ЕМВО децгта! 3; 835-846). 26-53 п Послідовності, що походять від синтетичного полілінкера 54-90. ни Залишкова послідовність з ТНК В правому граничному : повторі Ї " Поспідовності, що походять від синтетичного полілінкера 09-98 Проти Нетрансльований шнець З зтена ТАДНК 74377) вТІВБ53 ! часової | (Увцев апа Бспей, 1985) Мисівїс Асібв Чевеагой 13: 6981- р ютрілки 169598; ОНасво сї зві. (1983) Тне ЕМВО доштпа! 3: 835-848).

І 310-330 І | Послідовності, що паходять від синтетичного полілінкера 83331 00 Проти 00 Кодуюча послідовність гена стійкості до біапафосу (баг) часової | Зверіотусев Вудговсорісив (Тпотреоп ер ай. 987) Тве стрілки Ії ЕМБВО Чопа! 6: 2518-2523). М-термінальні два кодони кодуючої дійянки дикого типу Баг замінена коданами АТО і та САС, відповідно. о

ВВОВ-ВЯЗ 000 Проти 00 Промотор з гена маленької субчастинки аі51А вибулозо- часової І 1: біросфаткарбоксилази з Агайіборвів паналпа стрілки (РявцАга) (Кееррегв єї ді. 11988) Ріапе Меіесціве Віводу.Д/ 11: 745-759). 2609-2658 І Поспідовності, що лоходять від синтетичного полілінкера ваі9-2659 і Проти Гфрагмент 260 бо Таді з нетрансльованого кінця З гена часової синтази нопапіна (пов) з Т-ДНрТІТЗ? та такий, що стрілки | містить сигнали поліаденілювання рослини (Меріскег ей аг. (1989) УЗоигозі ої Моївоціат апа Арріїво Сепенов ї: 561-573), ШИ 2490-2540 ШИ Щ ! Послідсвності, що походять від синтетичного поліпінкера вана 1 нет ранспьована ділянка З нижче від барстар. що кодує і | послідовність Васіия атуюваценвасістя ч253-е981 Проти (о "Кодуюча діпянкатенабарстар з Вести щ часової | атуювдивнасіств (Намеу (1988) доцлта!ї ої Мовочіаг стрілки Віоісду 202: 813-915. 47Б2-3254 Проти Ділянка промотора специфічного до пиляків гена ТА2У з ! часової Місобапа габасит. Промотор містить 1,5 КВ послідовності стрілки вище початкового кодона АТО (бЗецгтск ваг... 11990)

Мисієчо Адосіав Незеатсп 18: 3803). !

Уб3ВОЯ 71717 Послідовності, що походять від синтетичного полілінкера

САВОВ-Я4832 Лівий граничний повтор від ТІ-ДНК з РТІВбОВ (Сівієп ві аі (1984) Тре ЕМВО очгла! З: 835-848). сш

Фланкуючі послідовності виділяли відповідно до того, як описано в МО 01/41558.

Права фланкуюча ділянка (57)

Фланкуючу ділянку 5" розширили як са. фрагмент 1077 рр, повна послідовність якого була визначена (5ЕО ІЮ Мо 5). Послідовність між нуклеотидом 1 і 881 відповідає ДНК рослини, а послідовність між нуклеотидом 882 і 1077 - ТАДНК.

Ліва фланкуюча ділянка (3)

Вказану фланкуючу ділянку 3 розширили як са. фрагмент 1500 рр, повна послідовність якого була визначена (5ЕО ІО Мо 6). Послідовність між нуклеотидом 1 та 166 відповідає Т-ДНК, а послідовність між нуклеотидом 167 та 1441 -ДНК рослини.

Ідентифікація ВЕ-ВМІ1 за допомогою ПЛР

Відповідно до МО 01/41558, ВЕ-ВМІ, що містить біологічний матеріал, може бути ідентифікована застосовуючи описаний в документі протокол ідентифікації за допомогою ПЛР.

Для того, щоб ідентифікувати матеріал рослини, що містить ВЕ-ВМІ1, використовують наступні праймери, що специфічно розпізнають трансген і фланкуючу послідовність ВЕ-ВМ1:

ВМАОЗ: 5-ТСАЛСТ. АС ВОК АТО ТАС САДІВ (ЗЄС О (ціль: транеген) вмАо: 5-Тад АСОС. ОСТ Апо- ТАКА АтТа СОУ (ЗБОЮ 8) (ціль: ДНК рослини)

Очікуваними розширеними фрагментами реакції ПЛР є;

Для пари праймерів ВМАОЗ-ВМАОХ: 215:Бр (епітна подія НЕ-ВМІ

Приклад 2. Ідентифікація генома, на якому розташований локус НЕ-ВМІ, та введення в

Вгазвіса |нпсєа

Для того, щоб визначити де знаходиться локус НЕ-ВМІ - чи на А геномі, чи на С геномі

Вгаззіса парих - проаналізували спільне успадкування або зчеплення ВЕ-ВМІ з відомими маркерами на геномі Вгазвзіса в 4 різних популяціях В. лариз ВСІ, що розщеплюються, одержаних в результаті схрещування донорської лінії, що містить трансген НЕ-ВМІ1 в гомозиготному стані, з рекурентною батьківською особиною, що не містить трансгена. Для утворення генетичних маркерів використовували спосіб поліморфізму довжини ампліфікованих фрагментів (АКІ Р). Аналіз АРІ Р адаптували від Моз 6ї аї. (1995, МАВ 23:4407-4414, ЕРО534858 та 005 6,045,994). Для того, щоб ідентифікувати зв'язані з ВЕ-ВМ1 маркери АРІ Р, здійснювали масовий сегрегаційний аналіз (В5А) відповідно до Місне!/тоге еї аї. (1991, Ргос. Маї!. Асай. 5сі.

ИБА 88:9828-9823).

Усі генетичні маркери АРІ Р, що показали різну ампліфікацію між пулами АЕ-ВМІ1 позитивних рослин (що містять видимий маркер АРІ Р) та АЕ-ВМІ негативних рослин (де аналогічний маркер є невидимим) були проаналізовані на принаймні 46 окремих зразках популяції ВСІ, де вказаний маркер АРІ Р при проведенні аналізу В5А показав потенційне зчеплення. Залишили лише ті маркери, що показали значну косегрегацію з маркером КЕ-ВМ1 ПЛР, потенційні інші маркери, що не відповідали цьому критерію, були відкинуті з аналізу ВЗА як псевдо позитивні.

Аналіз груп зчеплення здійснювали використовуючи версію доіптар 3.0 (Мап Оої|Їеп апа Мотір5 (2001) ЧдоіїпМар Мегзіоп 3.0, Боїймаге ог Ше саїЇсшайоп ої депеїйс ПпКаде тарз, Ріапі Незвєагсіп

Зо Іптетаїййопаї!, Мадепіпдеп, Тпе МеїШепапав), застосовуючи дані, одержані від маркерів АРІ Р, які залишили, та дані щодо маркерів НЕ-ВМ1 ПЛР, що виникли на окремих рослинах для кожної популяції ВСІ окремо. Оскільки 4 окремі карти навколо локуса ВЕ-ВМІ1 показали багато спільного, ці 4 карти ВС1 можна було поєднати в одну карту, що показувала б ділянку навколо локуса ВЕ-ВМ1, із застосуванням аналогічного програмного забезпечення, уможливлюючи місцеву локалізацію локуса НЕ-ВМ1.

Потім одержану місцеву карту ділянки ВЕ-ВМІ порівнювали з генетичною еталонною картою, що представляє всі хромосоми 8. ларив. Для такої хромосомної карти вже були визначені номера хромосом відповідно до ЗГагре еї аї. (1995, сбепоте 38:112-1121) та Ражіп єї аі. (1995, Сбепоте 38:1122-1131). МО1-МІО0 є А геномними хромосомами, а М11-М19 - С геномними. Було виявлено дуже чіткий взаємозв'язок між картою ділянки НЕ-ВМІ та хромосомою МО7 еталонної карти, яка, як відомо, є А геномною хромосомою. ВЕ-ВМ1 розміщена на А геномі В. ларив.

Подію АЕ-ВМІ вводили за допомогою повторного зворотнього схрещування різновидів рослин Огаккаг, що містять подію АЕ-ВМ'І, в таку культуру як Вгаззіса /ипсеа.

Через принаймні 4 покоління прискорених зворотніх схрещувань рослини В. /ипсеа проаналізували і виявили, що: а) Наявність чужих ДНК не послаблювала інші необхідні характеристики рослини, такі як ті, що стосуються її агрономічної поведінки або комерційної цінності;

р) подія характеризувалася добре визначеною молекулярною конфігурацією, що постійно унаслідувалась; та с) ген(и), що становить інтерес, в чужому ДНК демонстрував правильну, придатну та стабільну просторову та тимчасову фенотипну експресію, як в гетерозиготних (або гемізиготних), так і в гомозиготних умовах події, за комерційно прийнятного рівня в діапазоні умов навколишнього середовища, в яких рослини, що несуть подію, схоже розкриваються при звичайному (нормальному) агрономічному використанні. Більш того, рослини проаналізували з точки зору їхніх агрономічних характеристик та поведінки у порівнянні з різновидами дикої

Вгазвіса /|ипсеа.

Широкомаштабні випробування в польових умовах показали, що ВЕ-ВМІ1 в Вгазвзіса /(ипсеа призвели до одержання рослин, що показали адекватну експресію генів, що становлять інтерес, в чужих ДНК, тобто фенотип з чоловічою стерильністю, у поєднанні з оптимальними агрономічними характеристиками. Таким чином, незважаючи на те, що спочатку НЕ-ВМ!1 виявлили в 8. пларивз, було несподівано виявлено, що вона також є в Вгазвіса /(ипсеа. Більш того,

ВЕ-ВМІ можна було ефективно застосовувати для відновлення фертильності в рослинах В. /ипсеа, що містять М5-В2.

Приклад 3. Агрономічна поведінка рослин з М5-В2/ВЕ-ВМІ1

Проводили польові випробування над рослинами олійного рапсу Вгазвзіса, що містять події

М5-В2/ВАЕ-ВМІ, та рослинами, що містять М5-В2 та інші події-відновлювачі, разом з ізогенними нетрансгенними контрольними перевірками. Відповідні дані щодо врожаю підсумовані в наведених нижче таблицях. Слід зауважити, що в аналіз, для обчислення середнього значення, значущості і т.д. були включені дані польових випробувань над додатковими лініями рослин.

Стане ясно, що врожай, одержаний від ліній рослин, що містять М5-В2 та ВЕ-ВМ'І1, значно вищий від врожаю, одержаного від ліній рослин, що містять М5-В2 та інші події-відновлювачі, такі як ВЕ-ВМ2.

Крім того, стане зрозуміло, що врожай, одержаний від ліній рослин, що містять М5-82, вищий від врожаю, одержаного від ізогенних, нетрансгенних ліній рослин.

Таблиця З. Польові випробування на географічному попоженні ї

Й Опис варіабельності ши шен п КЕ ги мн | ! | | Середнє а щи

ІІзогенна лінія пенннннД ння 0.188945 00 ЛОЮ сІогенналіняїу 00000001 55057000 ОВ. " Ізотенна лінія (7596 щільність: ! ; | ; : "Ізогенна лінія (509 щільність (| | св: / Ізогенна лінія (5095 щільність : ' ї 4

Ізогенна лінія (7595 щільність. : | ща в : ; мМеаВавВся 00777700 ИВВВБОЄ ЗАВ

М-ВО вСАахХ ВЕ ВМі асо | птн нн ВВ нен ВМ ння

МевовсяхАеаМа 00000010 01362100 108

М511 ВСЯ хпЕВМітассвоЗ | лавбу | 4023.

Мел вСехВЕВМа ВСЯ ро 1 оМе1ї8вС4 хАРЯМІ рассвся Її 07777700 Ба | 1068 4 (МетівСа хНЕВКеІВОВ 00031000 1837а 00311830

М8і1ї ВСЯ хвАЕеВМі: асо. 07777771 156597. 09585... май всях ВЕ ВМаЄВОЇ 0010311 17608 00108201

Д--доереднєзначення 222 ОНА В ! Середнє значення за дак і 00 перевіркою 00000001

С 0оЗначущієть: 1 вв 79,76 71111111 БА і сова 00000 БАВОВ 00 ЗА?

Мово Ро запишкове стандартне здо з ! 2059 : нн ВІДКИЛВННЯ 0000 тн поп

Таблиця 4. Польові випробування на географічному положенні 2 ! Опис варіабельності --Вре ожесвють 8). вишитлин ! зрхоижень | Середнє о» ; 00000 Походження значення перевір омавався 07757310 9358

Ізогенна лінія (5095 щільність | 1874 .Вв ваз9 1 Ізоганна лінія (7555 щільність ! ! зе і яп й : насінні 00000000

М5-В2ВСЯА хв ВМІТассВОоЗ 00000000 16600300 10568 іме вався хнеаМаВоЯ 00000000 еВВИО 78401

МБвеВСЯ хАЕВМІрассвоя 0000000 1й1ВЯВ 00000000 ЛОВ оМевВевсСі хе ВМеЮВОВЇ 0000/1101 те ЯЯВІ

М5-В2 ВСЯ х НР-ВМІ НРЕ-ВМІ | | М сс ---. береднєзначення.д/////00701111110000000015865701000001849А

Середнє значення за 168217 | 100.00 юн 0 ЛО Я ОО ВНКОКУ 00800000ооооонннннннннднтнтннтнттнннн он пненннн оонениненвудянянннянннннттнннтннннй пн ЗМачущість 01

Св важ я 07000000 86830017 п 001100 рев ви діодні п ЦСБО 274.59 и - Б сш нн ІВ нн 20329831 ВАВ ши З нини нин ! залишкове стандартне 4 ; і щи !

Со відхилення в бой ш---н маш і проаналізованіповтори.д пог з ПО ЗМ:

Таблиця 5. Польові випробування на географічному положенні З 1 удюдьо | Врожайність "ГВрожайність ! Опис варіабальності ПОІзМЗийои ниннх сх; ВАН нн «5 ДАН

ПОН в НИ Я: ЛИН НИНІ Кг 00 Варіабельнийкод,о 00000000 000. МЮходження 00 Значення 0 Значення б перевірки сменевся 01 лвзотю 003

Ізогенна лінія (5095 щільність: : ше | ! Е росенна ля ст п ..1788.08 8588 у Ізогенна лінія 175765 щільність Ї й , | за Е пі !

Насіння нн шк ве 1

Ізогенна лічія (5095 щільність ! | з 88 : ів1ї53 а7 33

МЗваВСя ВО рова! о М3в2ВСЯ хе ВМає вся. 0083000. 18908 19088

М-ва ВСЯ хв ВМа ВСЯ 00000000 ВИЯВ шк о МеВ2ВСЯ ХВ ВМаЮВОВ 0000/0000 БО ВВ

Ме Вася ХАР ВМІ;ассвся 1 588 ВБР 0000501

Прави х ВЕЕ-ВМІ ВЕ-ВІ | | в27 ; 198555 | 1056о

М5ВавсСях ВЕ ВМ асвоя 000160 вис сла ЗШ

ОМ8В2ВСЯ хАР-ВМієассвоЯї 0001551 0000 2ОбаЯ? 100 МОВ

І М85-82ВС4 хАРВМІВЕВМІ | ШІ

С о береднезначенняїд 0010101010101000000.583. 18536 00400008961 і : | !

Середнє значення за бя! ї0 явбаюя 00000 30000 сш МерЕВІВКОЮ 00000 000000 0000 птн нн нн ВН УЩІЄТЬ 0000 дн ння рвав МОБ ВЯ ооо ов БУ 56 нших и: шшшшшшшшшаиш ЩЕ ШЕССО спон

Те. 063 -Е-- 95008 шк ЄМ... ВЛИбЛИю залишкове стандартне па 1887 : «15 :

ПО відхидення 00/01 нн 000 рн і..проаналізованіповториїд я

Табливзя 8. Підсумок польових випробувань 2.1. СЕРЕДНЄ ЗНАЧЕННЯ (Мей зн пкт « « « « ООЖАЙНІЮТЬСЯЇ 00. ПОХОДЖЕННЯ 3... МАСА 222 МБВЕХВЕВМ ОВ

ТЯ. ме тн тт

МВА. 2 ВЕВМІ 00318515 Я.

Ії РІВЕНЬ СТАНДАРТНОГО | | ше

Коня ВІДХИЛЕННЯ нн

Приклад 4. Агрономічна поведінка рослин 8. ларих з М5-В2/ВЕ-ВМІ у порівнянні з рослинами 8. плпаризз М5-ВМ1/АЕ-ВМ1

Польові випробування здійснювали в 5 місцях (4 реплікації/повні ділянки) для того, щоб підтвердити відновлення та оцінити толерантність до гербіцида та агрономічну поведінку гібридів В. пари з М5-В2/ВЕ-ВМІ в порівнянні з гібридами, що містять М5-ВМ1/АЕ-ВМІ, в тому ж генетичному фоні.

Врожайність та активність визначали без спрею на основі глюфосинату або за допомогою одноразової (В) або дворазової (С) обробки при традиційному застосуванні глюфосинату

Пбепуф).

Результати підсумовані у Фігурі 1. Активність гібридів, що містять М5-В2/ВЕ-ВМІ1, завжди вища за активність М5-ВМ1/АЕ-ВМІ - чи то без обробки (А), чи то з одноразовою обробкою (В) чи дворазовою обробкою глюфосинатом амонію.

В цілому, гібриди з М5-В2/АЕ-ВМІ були схильними квітнути (починати та закінчувати) та дозрівати раніше, ніж гібриди з М5-ВМ1/АЕ-ВМІ.

Врожайність також визначали для польових випробувань описаного вище типу А, В, С і підсумовували результати у фігурі 2. Гібриди з М5-В2/АЕ-ВМ1 мають на 2-595 вищий показник врожайності ніж гібриди з М5-ВМ1/АЕ-ВМІ1.

Також помітили, що відновлення щодо М5-В2/ВЕ-ВМІ1 було повним з огляду на всі генотипи та місцезнаходження.

Як висновок, винахід спрямований на варіанти здійснення, описані в наступних пронумерованих параграфах. 1. Спосіб одержання гібридного насіння з рослин олійного рапсу, що включає стадії: а. забезпечення материнської особини рослини олійного рапсу з чоловічою стерильністю, що містить елітну подію М5-В2, причому еталонне насіння, що містить вказану елітну подію, задепоноване в АТСС під номером депонування АТОС РТА 2485 або АТОС РТА-850; р. забезпечення батьківської особини рослини олійного рапсу з чоловічою фертильністю, що містить елітну подію АЕ-ВМ1, переважно в гомозиготній формі, причому еталонне насіння, що містить вказану елітну подію, задепоноване в АТСС під номером депонування АТСС РТА-730; с. забезпечення запилення вказаної материнської особини рослини олійного рапсу пилком вказаної батьківської особини рослини олійного рапсу; а. збирання врожаю гібридного насіння зі вказаної материнської особини рослини. 2. Спосіб відповідно до параграфу 1, в якому вказані рослини олійного рапсу належать до різновидів Вгазвзіса пари або Вгазвіса/їипсеа.

З. Рослина олійного рапсу, що містить в своєму ядерному геномі принаймні одну копію елітної події М5-В2, причому еталонне насіння, що містить вказану елітну подію, задепоноване в АТСС під номером депонування АТОС РТА 2485 або АТОС РТА-850 та принаймні одну копію елітної події ВЕ-ВМІ1, причому еталонне насіння, що містить вказану елітну подію, задепоноване в АТСС під номером депонування АТСС РТА-730. 4. Рослина олійного рапсу відповідно до параграфу 3, причому вказані рослини олійного рапсу належать до різновидів Вгазвзіса пари або Вгаззісаїипсеа. 5. Клітина або тканина, або насіння рослини олійного рапсу відповідно до параграфу 3. 6. Пара рослин олійного рапсу для застосування при одержанні гібридного насіння, де одна з вказаних рослин олійного рапсу містить елітну подію М5-В2, причому еталонне насіння, що містить вказану елітну подію, задепоноване в АТСС під номером депонування АТС РТА 2485 або АТСС РТА-850, а інша з цих рослин олійного рапсу містить елітну подію ВЕ-ВМІ1, причому еталонне насіння, що містить вказану елітну подію, задепоноване в АТСС під номером депонування АТОС РТА-730.

7. Геномна ДНК рослини олійного рапсу відповідно до параграфу 2. 8. Рослина або клітина рослини Вгазвіса /(ипсєа, що містить елітну подію ВЕ-ВМ1, причому еталонне насіння, що містить вказану елітну подію, задепоноване в АТСС під номером депонування АТОС РТА-730. 9. Насіння рослини Вгаззіса /(ипсеа відповідно до параграфу 5, що містить елітну подію НЕ-

ВМ, причому еталонне насіння, що містить вказану елітну подію, задепоноване в АТСС під номером депонування АТОС РТА-730. 10. Рослина або клітина відповідно до параграфу 8, яка додатково містить елітну подію М5-

В2, причому еталонне насіння, містить вказану елітну подію, задепоноване в АТСС під номером депонування АТСОС РТА 2485 або АТСС РТА-850. 11. Застосуванння елітної події М5-В2, причому еталонне насіння, що містить вказану елітну подію, задепоноване в АТСС під номером депонування АТСС РТА 2485 або АТСС РТА-850, для збільшення врожаю насіння в трансгенній рослині олійного рапсу. 12. Застосування відповідно до параграфу 11, в якому вказаною рослиною олійного рапсу є

Вгазвіса /|ипсеа. 13. Спосіб збільшення врожаю рослин олійного рапсу, що включає стадію забезпечення вказаної рослини олійного рапсу елітною подією М5-82, причому еталонне насіння, що містить вказану елітну подію, задепоноване в АТСС під номером депонування АТСС РТА 2485 або

АТСС РТА-850. 14. Спосіб одержання гібридного насіння та гібридних рослин В. /упсеа, що включає а. щільну посадку рослин В. |ппсеа, що містять елітну подію М5-В2, з рослинами В. |ппсеа, що містять елітну подію НЕ-ВМІ1; р. забезпечення перехресного запилення рослин; с збирання врожаю насіння з рослин В. /упсєа, що містять елітну подію М5-В2. 15. Застосування рослини 8. /ипсеа, що містить елітну подію АЕ-ВМ1І для одержання потомств-рослин або насіння. 16. Застосування ВЕ-ВМ1І для відновлення чоловічої фертильності по відношенню до рослини В. /ипсєа, що містить М5-В2. 17. Геномна ДНК В. /ипсєа, що містить НЕ-ВМ1. 18 Геномна ДНК відповідно до параграфу 17, що додатково містить М5-В2. 19. Клітина рослини, рослина або насіння 8. /ипсеа, яка містить в своєму геномі послідовність з нуклеотидною послідовністю 5ЕС ІО Мо 5 та послідовність з нуклеотидною послідовністю 5ЕО ІО Мо 6, що додатково містить послідовність, що кодує інгібітор барстар, між вказаними послідовностями. 20. Клітина рослини, рослина або насіння відповідно до параграфу 19, що додатково містить в своєму геномі послідовність з нуклеотидною послідовністю 5ЕО ІО Мо 1 та послідовність з нуклеотидною послідовністю 5ЕО ІЮ Мо 2, що додатково містить послідовність, що кодує інгібітор барнази, між вказаними послідовностями. 21. Спосіб одержання гібридного насіння та гібридних рослин 8. ларих, що включає а. щільну посадку рослин В. парив, що містять елітну подію М5-В2, з рослинами В. плариз, що містять елітну подію НЕ-ВМІ1; р. забезпечення перехресного запилення рослин; с. збирання врожаю насіння з рослин 8. ларив, що містять елітну подію М5-В2. 22. Геномна ДНК В. ларив, що містить ВЕ-ВМІ, і яка додатково містить М5-В2. 23. Клітина рослини, рослина або насіння 8. лариз, що містить в своєму геномі послідовність з нуклеотидною послідовністю 5ЕО ІО Мо 5 та послідовність з нуклеотидною послідовністю ЕС)

ІЮ Мо 6, що додатково містить послідовність, що кодує інгібітор барстар, між вказаними послідовностями, а також послідовність з нуклеотидною послідовністю 5ЕС ІО Мо 1 та послідовність з нуклеотидною послідовністю ЕС ІО Мо 2, що додатково містить послідовність, що кодує інгібітор барнази, між вказаними послідовностями.

ПЕРЕЛІК ПОСЛІДОВНОСТЕЙ

«1В0з ВАЙБТ ЕВОПСАЄНО. МВ «0» ГІБРИДНІ РОСЛИНИ БЕАБІСА ТА СПОСОБИ ЇХ ОДЕРЖАННЯ -К3ох сво 13-59 «ЩО» 310 «10 Патент, вевсія 33 «010» 1 «7112 415 «212» дик «2135 ЕтУчна сито «а» гранична ппанкУЮча ділянка Б' елітної події МБ-В2 «40002 1 чісцачьсса деосьсаєаа Сеча суасксстьса осаєсасава Седваастсе Беж

Еасччатчач засаастісас запсаєсває сакєчєєсаса свавсарася бСасабвакас 120 чеабасасас водсакасаа збаябадсда адваасссає чевавасаце аадчдоадсаєс ІНО вечзчгексва деаксасвка астасзакта савстатузс аудаєдсаса Єдассдаєеа: 2450 чааазочсав їКбогадако бЕаатбссса Єстбдазвача забакацеси: ааасатеває зай кчаїсавваса всавзєсезч басесвгтазесс сваосавава сасадаєкка сгізасасава збо

ЕЕксвзавсса дааасассєс васзастчзає басаксзуоє дусасессус сзбад 5 «вів й ктії» 5156 кіз ДН «2135» Штучна «Ех «паЗ- рораничзна ФфиазнкуУуЮТЧЯ ділянка 3 елітної педтї М-ва «00» 5 стасєтусаає птассвоаска вптакавссац ббасесчанатє аеррсковає бкаадосвіує во ассзагапаю» ссзічіЕЕрЕ Чдосссчааста Еавасвовеча сія кКавтюь бабсвзатавза 179

Бакєсазаст ака сеовоаабздчава всбвасаєсе асазавеєдсес вЕвроєсаєс 180 чзапсаєчеас асостассвх аввсасавсї аблаєтатає забасссава ссакочеасе а сесссдсЕчсЕ Біасаєсудве Косососаста сбасссябєак асостусасає зкассабаса зай впсочсасабсавє вашксасаєца асасзаєсва суссбокаво гЕчсвсвсає ссзваащаєе 369 тксазасяіЧЕ вабоуксаво ачесаававос свазаєсаєа аасаєсссвав стедає 418 важкі Ку «2115 73 «13» МНК 8135 Штучна «вах хай» олісовуУєлвотидний праймер 1 для датежкії М8е-В2 ка з чачаєссвзву печацусСасса че 23 «105 й «вії» ві «іа» ДНК «213 штучна «20 «її» одігтовуклеазтидний праймер 2 дип детекії М3-В? «4008 8 чЧескучаска тайтастков о. 21 «2105 5 «ії» 654 «212» йНК к213» Штучна «аа» «й23» фланкуюча діпямнкха З ВЕ-ВМі «води 5 чек ксоуа чЧасссчадао чазіїовзада акасавеїєа сасвавакає веккрсавака 6БО

Бтахкатасаєз баєвасатто влазаческсча вугрласквсяє вздапокувес баввЕжЕесе 120

БсассвайвЕ сттасвавсв звавекскбв ватсасуавс взазавчсатя аашеЕкагаве 1850 акзваасасай зчасасваає кжЕжксатєча сасатссаєа десзсвада зеачеаввкох о їацдавестав васквасевЕв збаавсотаєа гаїбстадаве абтвсававь єетатсавве 300 ссісаєаває аїдказааєва аажеставсте вЕВвсевЕавєв вааадзачає бвасавацає БО сапгватасек зсвакЕскк адвастазаа свісакаце ктбаєскаавз асасацсаава 20 аасчассаса авсстівабьв стієвассад васіссавее сазаабсааа бЄваавабаав 5 зассвассса ззазайсдсз ссСавестаоса сасававуєа вет ЕсетсвЯ тавсказааа вад сесідаважЕ сабасававе бгбецдасссст адчбааввсас сескеєсаєс содсовсаву ов е«аваччеваж сссогачасує саавтсосаї сосуавачав арасаЗзсЕвса айсавекаве 55 асааавтай свачесауязе ассаєвуєсо аадес 594 ка» б «211 Т2ла стій» МНЕ

«-віЗе лучна «аа» «223 вланкуюча ділянка 3 КЕ-вМі1 «пох в дачачеьЕвк шссстсаасс автвасіска єкпочосттаАк ЗзУуєсчакєаво савсусаво во

Бетчасзоасв сасоставак ястаєвеесс гастваавцє сссазанакса вЕстсвпаку їй чаавссвзаце сазксстаао вчравевцчає заувасвате вачеавсозвасв асзаваєаує 180 ачеваєтою аксеєєпсаєєс чЧесваасако азасватава чЧессайвдаза азагассайс о песдасазксв ацдастечосу чачасачЕцо сусасцаазуц ссжксачатя босоавцасаа зав чеЕжсагаває авсасіскаса саасзваєт Євсасакаса басасеаєвса бзасавсива ЗБ вазсссааас басбсасасвза пс ссра айсостоввс ассаваєеое басваассва 220 заскЕсссаав ссасовасвна заазсастчаа сКкусаатах авасесавазу згасає 280 тЕзакесчааа Басрчсвачо суєсавеава чбіаваїсвва чвасєттаває Бавставасі ЗО агвастакаста ссчавзаїсак савсагавкех табссзавскс ссазбазаїтає збсазазтава 50 тессазсвсає аосасасвай зачааоаваесв аєчкучаєске вавсагєвас ач вац вай зачтатдайсс вЕтасадзеоь сазЕксвзанає ахсадсаваза баассасава сесачекасе 720 їтавссводва пжссаавіса аавксадата аазатавайа бсесавссзава азаахатоаєх тво азсбассаєву савзауваве срІсЕстУєа вссачаавис стуаваєссво сасавааоте во зчзаасессіва зтбаваєіссо базавазтає ссбассачосо хосчасавасєь ч«есдсосака 00 теж ЕКсСтеєс бекаєсЕках зссасасаст авзвгаказада чаєчаєссяв кавсеасес ЗБ асвжессатус бацстсанаїьс вадевазача завазавстЕ аккасстава себакасхсо 020 зусвасаєст соддауаєзво адцабабсаєд ссассваєда Боско двас вБсасобсУса то8а авасссакскЕо ссатозскта сацосасазла часссоввассс сосок сва ссатасвкоа т149 чиаарасвав асазасачає за сдачса басабчосає сквасасваа сов сасавоа 1209 ївадацддацес дсаваєсубск ауфссасоссе асазавеєдчадс асдассасує акевесваак 12655 завчвасаче сафошевех 1279 «їм 7 «ії» ті київ? диЕ «2135 Штучна кап «435 Олігонуклестидний праймер 3) для дажтектх» КЕ-ВКІ кап» 7 тсатствосоа свзаїусасосв З 3

«ід» 8 ке1її» 20 «12 дик «сеї3» Штучна ква» «8938 озлпігопуклесотидний праймер й для детекіх ДЕ-ВМІ «бом В

Кедассоеста часбаваес КЗ «й З «1125 4835 «в1йх ЛНК «213» Штучна «ад» «23» Плазміда фвРНИІ1В «00» а зазсасавоя чбасававсс бассвуєаєє сзусвецьсуча асвсочесує савауєсасаво 50 чесчасавава авачтсазіє сопвачаєуєює васбсосаїто сбсдазачава хабачсскав: 120 зтаквваєка асазаавсзас азарсазушка краса Бсса зодсавадаса гадасекатви і8в0 чаєсосваднк Базавксвзча авсаєсссва савстдаєта саєсачесод васаєкусеу 20 тзЧчаєдаава ассуачтосЯ акавтасчед сбвабасавав веЕсаассаєв сачесвцее зпа ачасстсаксач чоазчакестач авсосчкзача поазасевсча чкзасцоачса зчассовасо 350 чучеловасо часазоскза водкосачеся ссачавассо асзссаєуєс ачерескуєв 429 стєчавудссп десосссуса збсатсососо адачосаває ссозазосстсюЕ спідсасасо 180 сасчевезач сечо уса зчессуавчас ачоедчассасо сбсстчаачс сота ве чо сачучасьвс аусачовоча Собсазазояє дчадсссвує сссоєсстоє есте то вОй зЗаачасцчьас астчесавеєї садссаЯавсса чьсЯсачося сасцуеве кесадчоацес БО спбасзочет авоссучева ссісебосуве бассречаса всчачесачу засачецове 72 ссасачасчеа ассазцсяас ссасссассс стзсчуаессс сеасачсеоча расозаатУє 78О зассчсчетгк дЕсксовнкар ассзчЕсчає часччсочсва ассусеччев дБосЯасико 840 ччепасасчу сучдабсссзоа сосоадоасоєсч кова єс абеустотис евастсте 00 чЕзЕдаседа ччеесчцчевие ачсшесевач срврасстаставє зказевзасай савовавєоея ва авсдацчевес ччадгсзасесч чзачучсекеч часасаєчау астсазаься скачать 1520 асассоєкоу абікссдачса содавтакаєо соедоєтаве КебвВоєсУдеє васудоесаєв ОБО авздасставо чачаяопвавь сауассвкса сосок ова седеводчаас закоассвсд 4 чччачасвак Сесаєзавоо ббвссуєстає стасодвуєда ааєєогукча садсетацьо 1250 чсасЕсосто абсствасетоя сесудкзове стодсесовеЕ: ссктаєсаячя васекаваєє 12650 ксасжЕЕвста казаусєсвкс зкассжкессе сесассувая ассстауєьав бабасавад 1320 таєчасссає Чїаасаазває зузавасссє козасесуся ссасрагасу сасаасаєса 1380 ччаеєцаавасте гузазтетає астсеесЕса кссадазчса аазежецсої ЄскасЕвова ія ксажєвавтає асаваазакає всвзасаєтса васваазака сзаваесвазчаа сррксаааве 1590 асачавасьвЕ збБсваєшея сазвачайєєсвноа ссосавовєса задбсасевов басавті вує їз тасвасаває сахавассса асавачссає сасосстсава Саваставас азсесасвав 1528 засассасва вісасдаусєс свгасавазкт асезассвааа аавзвадаває доссавсзав че зчзстааасааа чьосаавваа вастросвоаа дЕстссався Бестсвасая асагтдадав та стапасасаа васавцьсач пгадассвсв ЕЕстсодсся чеЕсвЕсссвпа согсптасах. ї80о савсжессста єсуЗаєксцаа це Есасве чеасобЕккс осчЕвасвасу асасєдасат тве0 стабабесасеа павастйаста чес вавсза ссчавоссав пдуавтсаеасода сво ссва 1320 зассекссяа чазевевска чеачаваадес саксассача васскастає каавататає 1980 сассавежач ЯдсЕКевснЕе асзкчссава сксаакаєва кабаданаче басвсєваве 204й чаавасоаває чавєчетаве заказаваЗк сазадбваваас зітазазава постасатсов 2100 часасссвас сСсвававсє сзабсвачбаЄ зоваєсуєас ававаєсвов чЧесссастах 21659 асасабсаєаа боссьсасаа сассводась ее соЗза оуссазааве сбуваєскас ай акабсбавке бззсосасоура сосвасьтсавЕ с сачсяба абасткіда сссзрсаває 2580 агасчєуєсс чкасаксаст: укасвасткає сіссссоасс скабасасає возсаратає 2340 агеатасаєавє акавасвата габваєсчеве БЕссаасрЕдча ваававвава Сетвабабаса 2400 хтазсусаввв сбЕБскажена сбакабаєчюв госовссчає сеосвазаах асбоссачає 2460 ставсчаваава сабзассках сеассдчааавь зЕсссечасу Сбавчаєвсв себадвавчева 5529 астсЕувЕсСявй ВЕКЕЕадеБа авачссстує даєвастааа чассвдеєаса савкоекодчес 258 сасччавйваса вадовсяьоа бавасжсчайа ЕБЕсЗвосоо ЗЯЕвоссодеа акеодазсве 25640

Зчсасссучу часовссссод ассбасдеіває акаовезЗаса седодецеуа баавЕсаксс 2759

Басітсасас пставатьою ФесЕссеакс псабаїсааа собаєааєто седачаєтоста 780 акбабазава сссавсесаб аваєзаєсєдЕс акусагбаса соккавсває тасаєдосва вай аєсєвтзаєстоа всадалатса тасчаєбзаєс асСсусвазає саздсавсазу абссавесье 2880 азчаазсквії агбоосааає чек звассча бесчсвосчя асоссстача соевассовце 90 ачасссасоє віссасаєса кесвестсосов ассзассаста ссаазчдлаває асчдасовесва. ЗМ саєсачсвасс вБесдсвЕсо Зогтсасоса аадсоїчава сасасуссся цодесанв з9650 садтсвуєсу сесуссЕеУЄ ссзавссасе їссабсссаз засуаясодуу касуссассо 4129 акссдассво асзаєсссяв азасоЗзвоса зав всзсс збадьаєксс ооавзаддусва 3180

ЧеБоосвСЄ слаба суучаччсяс сзуабаєсвьст засстуєісо ссускааєца. зай сечо саєсодваче савсбссвек пвасававає БЕБаасссЗа чбаавчаках 3300 гесастсуєса сасбозодсос асавоцдасає агагадвоса сайачасвсає зсазававоссух зо чесайайства сЕЕсЕЗоКоУ вопсавкксза Уузаваакочо зачсадсвац стваєсьуву зо чусавсаєта подеессаво євЕсаавукя сбдсазасахє одаствачкя єдасчавава 5480 чЧчЕассваває сьсшкоссас сесоавеєвса чдекасоцуава Брасавсваїєс авадсвасоас зай ачзачайцчаса кттастстсаз Сесазссасс саєстскасає аачесессЕе кевчссЕчає 3600

Жїсвааваєся аввтааєсса сасбцстваа Кдсораєсаоє ходадестає вросзсесевда З6Ба їссзачсачу втплраїатає сзосасабава азаакєсаєтху ссЧааксаксо сш сававао 3729 тчасазарса васбавосссосвЕ сСЕЕЧессвс астатаєтса збсстаєтаах чзсававесаве зво садссасась Бадсбасара ссеваббьо пасававаба зстсбБЧасс азсаавосоу зва абачсдасав зуссомсовкаї сезбеавасе бебаЗезско зеуасхкаває бобзавосдеє 500 акчдззчссах анессаавсЕ зууасасаєса аабсзоасстає скуєасаває стсоссакоу зв ававесчасва астууєтаєве зодвавасава вадсосьстч аївуавакся сазачУєасси по сааєтьсова цечачачака зассуаваца вокосацчава восчубсаас Сода 4085 сасвацчуєеє аваєссааста сабссуєтаа сбававачьш асвасвстсс сосаоцчеіссас 150 аавгтаавачєсав ЕЕ цесс СІ расоа ЧЕссавааєсав аусзачеесє стазаєстсоа 3290 авазвкааєсЕ завкахксто Евсрасачу Чесоєвоваз базвакчуєве бооввасує 4250 чесадазаєу сЕсавуєтаа дазевачеава аоддєкавтає чабсаавкке астасюакее 1326 заєчесвава бобсзавЕеес Єскаєсвсасу суаавасавос азчаваєсає Басюк це 335 ссечззачавад басасазата сасасєказа адсзастаав автааваст сссасаєта 2440

Касунассоса агаавсозасає весуєавзьсоє стачочдайо вазссаста заассзвЕва 4550 зачазчевас вадтаксавії: йсесакцаєк тасассуєса засасочаваєс бедсававає 4550 їїаабасавс ваззавьїаа сосгаввацо стоссасосе зЕКкасссава сезаазаавав 4629 ссадечаата всаксаває дбакавквка вБасассаває зсарасваєс авкчваваавно зво звагасагалє стевуєвває час тадазава адкдайсявмо кватакацеє доставку 4740 чеайаваассо стаавабаво сосавезчавї сосодоадчцває єссодучавя сесСвуавсса 180 їосадесзЕо їасваєтсува батавоство се 45372 «2105 10 211» 5865 «212з ДЕК -2 135 ЦеУчНА «вв «233» РАДНК ллазміди розії3 «а 15 а«ссаскасоя чЕасрасавоо сСоссачсасе будосчксое естісучесує счадкасаєя 65 чесчававса ааацусвеке сдрачаєувь авгжєсссаєс тбсаавсвав ГасадЕввай 159 збабібассч абаазабсвас звубссасава стасасчьсов зоасазааасв радаєеваке 189 часзсавчЕс саазвкксача забасстсва бавесоаатса сасвачесвая свсассосея КВ) саззасчавзву ассзвозова зраєвасуєа бестасараз астчасовзва саодстадчев 350 вачстрсассяу чзоЧчасестес засугтоавзчаї стсаЧчаксрс собдасозус адсассавас 360 заччасодсаєв ссодсяауаєтЯ вачесеаЯдоє десадаваасс сасчрсаєас сачеЕвсосує 420 чсесдааваос з9ссусєссос восабоссос зЗчаоаодсаба ссосаадесцєс Єсуєасаєус 480 чсасеасточа чес ачов васссзаїдча сачеосвссає Ядоїссвоавач состав аесх 51Ю тсачачавес сачовоачеза чЧЕчкваазец Коуачессву боссуєсеае соадсауєзчо вой чстчасчассоса сасччсочЧас ссоздосавсс вобозчсазос ЗесчиЧеоос соосаачацОо БО зечестаччс здакцесзуса авсосхсасосас ссасстсоддс часчацеосва зчабачсос т» сесусачаєсу сасчачакеч сосавссаст сетосадчеес сбосуцосся драсоовацчиь во талсосубоасії єцбевсазсоа тассчЗссова счакзабоса пасесдссчодє абабсвосох ас счасодсасч осочасчеса чссуччеоо чЕссБачое сабсувесЕє ссЕпасвовї 0 сасчуєцасву засво качедссско чЕсасстаса багбвасчата асазсваєсда 5 чазсвачеве буЗазечас саадууєова Ззасасаєча часссазачья дассачовьс 1029 тасавссуєта дажевкковує обосавасує дкувудеваа Єеекасевоз савсузчоває ї0во ззачацсстіза чававоаспвах бзасасссве ассазчсствса вссостучаа вазсуссвося 1140 скЗчаачасаа сбссавідавЕ сісатсабса себасзечвЯ вазу тоавч агучеоваче 1700

Ядуєастеоех сасєскаєсє чссідевауа сеБодесове босктаєоча Чаакктавсає 1780 кЕкастваст збачадевив барасевЕЕе ЄеЕвБЕаоство часввачеса бабака ї35О

Чеаєчаквса бЧаасавпава фуодлазайес іа кЯв аседетаває чдсаївачаєх 1350 зачсзаавстї чсяазчазсаса тасскесвес асесаззацє ааваєсесосс сесвассеаа 1440 вссасаваса падавазиаспаса пБасСвараскс азаєаавазі. увзазсваца асоєроваав БО авасадчадоса бас савакає чсааачаєса чеспусасаєс авуєсаєссЯ єбасавкасо 1550 бсатгавсавЯ Ссабайоєсс аасззачеса Чеасуєсвда акаваставйа даціссасца 185820 звабассзса забсзсазас ссодасавечі бабссуассаа заззавазає суссбваасаа 1680 ачссвадасда аЗсссавааа авастєстов апрбобсовес соска васабссцдчайа 170 ассакасаса азасавоакоа чарадватско кврсвадаси Сассксосссв асессскаса і809 жесаствссоев ажсцзоааєтав асяссксасе єдевасостЕве ссзккочсаве чатах 1859 чсасдтЕвсх чвазвастаат апозутааса вксчавасса гачвасасод акесочкесса 1920 вазБЕККсССсЯ зЧчазсКЕвсВ вагацчаазоє ссабовосау заавткаєва сбаалавада 19850 їсвосавіса чассессас сасдедссаа зтозасасв аЕбаїачачу асасесосгвав 2040 їдаавасуєв бозаєсчекає саосааасча севзодсваза саббазааав абсстасяєєс 21600 азатаєсрсав ставав ссдчаїевчея бччавасксава сзавазеесу зУаестасьва 2150 їасасакаєса абосЕстаса асаскЕкучає сестру асчустадчавак крав ва 2224 сасасткаси крздсосатос ассейсїтсає са сстаєтяє азтасескєечЧа стссєсвва 2289 хатасаеав: счвчтасасє сзЕвеЕаасва сЕБовЕруас сегаграсаса сасасатаха 2350 кахтасавата сасаєазеєває атаксабрасе оБЕскавсКЯ вазавзаєсває акзбасаєає 2а0о зрастсасякЕ ст сбаса ассаєасаєс ссчезавсца бстосайава басрастваа 2460 чивабчааза збасвасєста Беповссааає бабстсяча чЧегравачаєсь совсаааака 3520 закбсьсьсяа заскссвасЕ асазчісссу свасвассвза зазасавсас асавестсяЯв 580 ссасзчдаваа аазасвсава абсазвасствоа авссчассоя сачтасссуа аассочачех 26540 сачсасссач спаасевтессспдасетачкаа сагазаєзає асесчсЯсоася аєвавєеЕкаєс ато стачессуєу суєсаватев вУусвевеває сасабаєєза абдтатавЕє чсзЗддастеє 2760 заєсахаава асессаєсксоса тазакавсзк сабусаєтас з кваєсса сбасасаокх виго авсціааскс васацалаєє акаєсзаєаває сабсосазада седчсаасає часхспатом 2880 тавуазасве басечеєсваз бос казася авсеоаствсо засосістад вуссовзаває 2540 кчазаксзчас счассацачЕ ссзЗаазавва астсактаса састссасст заасеЧаве 919 вавасачест ссусадаваз соч ве суєсасєсєса бсссбабавза чдаЕссдаєає 3055

КкаЧсочеву ВСУ єааді споссвавсЯ сЕБзавьава сзатосоаувс хсавеексева 3120 айуєстсчасз сасачускаас абссочесвоа сассаваєто аессчсевкеє дессуузЗаце 385

Ехассккесс сакхсавова давуєсєсся ссчасусесю боссседачо часясСеспев зрав зач сссте сСтЧчакдосаєс ссдчесчачяЯ чосслсЯсвЄе сбазесткє закувавсе в: 3300

ЕсадоубєаЧчеє сасчаватає сспавацатва єссусавссе сссавасаь чебсаававсс 336 часассаєочш бадестаасЕе стксвзазтва айкассєєсоаь свозУсчасо «се ссасасиі 3450 чЕсасасєстЯд саосасзадча чесаїатасад восасаавцас втїасасайса асевосавав заво севасекеко ткудадсаєє ссдздодвааа БЧчсочачказ сазуставьо їчезрусаве 3550 аїсазчяксе савстіабваа сет Яастуєая зсатодчасеєс згабсоагоааода вазастаєса, зво заажжЕскавс бсассстуце сссадетава авзаваєтасеає сахчааясса єастачваза зе часчестеась стадсссазс своосассво вбасласчісї соссжеЕзУусу сзасссадад Зо агссуассбва Єсеасаєвзс брезабоїодса сасевбосаос ссавусезеє сіваїсссвд зва сачдчакакає ажаєезчвас асдавдаавкс абавБЕсозаеє сасеевЕсає ваваєзасай зва) чисваскЗко ссЕксвсЯве Сазсастака єсбаасссає сСавсоасваве Євбосачсах 3053 бтасссачеса дасаєссовзає Ес Завїаав васадссев дасєсацбьадла соочаєва са 3969 асавадьсас акакесаюсяа аесеесові пстодеЗасе аачекскаве счасасчоча 4630 жЕраваатсвса гассусодаса сасвавсаче сбавссУсує вайсстісосо йссоававасо 1080 асачаєваєв: асакочаайда седазацісс ссбаавачал Чдкососвааує абсасаавеее 14 тосассчача зчесачаєсча дазавосоаса чусавусчУє бавоссодаас аквасасває ещо чЕставаєса асбзсаєссЗ сгавссаава ачтотастає бесстосає оссасавесдасі тео

ЕтаєжесЕка дссотееек кагоацзіссаа забава с:дач СЕТ аАЧчаї Беєсваввавеу 2390 асттазттсах ст Естасса сзскосостЕ Ззааскалаку зкассвзазб акУуєевсаца аза авсуєстаєє бузацазваєса чесвавоЧчЕса весзбуассва Есббовсвосе вЕшжавасУуюь 44450 заватосава їх сттавкс сУубсзсуаава саассавава вссасссавєе звапассоаа «500 чазачкасає ваасахзакає сспавачеча стававатєав ассесюстов тассасасов 4550 асссовазаає воасаканзає ас соссазу чдавсссваве сасєаазат вабадавтав ав2о цевасаацба сесзаєвасабса асскасас саїсавасає зчаватвтсята накаже 4580 вбваасагазча абсававосвпа зісбеспесся абсссаєвас екааассваайа авебдвсстом 745 чааєчсасає бБававодсвка ат сасасає савгасабата євавкЕсасуєа глдассавесче іп вкгааксватаа барабодека саадааатав асазевзава гадосЯавете шесакзвава ан заєссстівав аказісусча сочассссся зазавьссзЗ узаауєстад асссасасвя 4526 ассгсчассас чачсачачав ссавоозазє сасассаєча сесессосуз здасасоваа 1ї950 савуссеуєсє засуєстоба асбцасадаа сесусаасЯає сдаадуауєс зсбсаЗссує 5049 зчассссЕде ачссжааєча усваацеаса свсоссадав зссекраєтя сусуєксада 5 аЧесодссраа Чаєсасваєс ачсіасваав бавєсЕовваь сзазавкуєь ссассзасує зіво

Ессабаваєє сесстсчеса ссозаїтсаца отоїсабасє сассоісває ссааассаєд зе апааавоасвЯа Есажсвасуу ччаасаавсо ачавукаєса чоовссесса сезувсавеа 52БО зазгавацаше тіЧдсссстес зааасастас чоаобсдвавасо тодасосебе асдодавьо 1340 сіуассозчатє зчсаславззва сеочебсаєе гтіодааєода сусавоєведа асаавосвач 36400 свацеказсту аавасчасос сдачвакуву сісозвасЕс сосабавадо звавасадва зава ччссасзаса ссассасвав ассвЕсвсає Бассавсази ЗУузасвавува свасасоуай зай всабааасос свачеввоо собадаоцає ссбссааєча чебазодсквна сбаєаввеовее за заїксаєута сіІасасабва сазесспсасес все ссває стасцасваах чсасевасто бло акакзаєсач єтасвоваає абскосдайь сбаазсвсЯс аббааєсаввь сваковнекв 5700 чевЕучаста саасвостча ссбцеваус баєсзатєаай басттааасї акавтсссвкх 5769 сазлазьсеза ассвасаєсв асазатстсос сосСтствакс сассакчкає акеуачстеє ВІЙ ссссачаєст Чсасапдадссо абЕбасавьї дЧчайваєзвксо счесУ ВВ

Claims (7)

ФОРМУЛА ВИНАХОДУ

1. Рослина Вгаззіса парих або Вгазвіса /їипсеа, що містить в своєму ядерному геномі принаймні одну копію елітної події М5-В2, причому елітна подія М5-В2 містить чужорідну ДНК, що містить ген барнази під контролем специфічного промотору тапетуму, 5ЕО ІЮ МО: 1 ї БЕО ІО МО: 2, та де елітну подію М5-В2 можна ідентифікувати в полімеразній ланцюговій реакції з двома праймерами, що мають нуклеотидну послідовність 5ЕО ІО МО: З та 5ЕО ІО МО: 4, з одержанням фрагмента 183 Бр; та принаймні одну копію елітної події АЕ-ВМІ1, причому елітна подія АЕ-ВМІ1 містить чужорідну ДНК, що містить ген барстар під контролем ТА29 промотору, ЗЕО ІО МО: 5 та 5ЕО ІО МО: 6, та де елітну подію РЕ-ВМІ1 можна ідентифікувати в полімеразній ланцюговій реакції з двома праймерами, що мають нуклеотидну послідовність ФЕО ІЮО МО: 7 та ЗЕО І МО: 8, з одержанням фрагмента 215 Бр.

2. Клітина або тканина, або насіння рослини за пунктом 1, де вказана клітина або тканина або насіння містить в своєму ядерному геномі принаймні одну копію елітної події М5-В2, причому елітна подія М5-В2 містить чужорідну ДНК, що містить ген барнази під контролем специфічного промотору тапетуму, ЗЕО І МО: 1 ї 5ЕО ІО МО: 2, та де елітну подію М5-В2 можна ідентифікувати в полімеразній ланцюговій реакції з двома праймерами, що мають нуклеотидну послідовність ФЕО ІЮО МО: З та 5ЕО ІО МО: 4, з одержанням фрагмента 183 Бр; та принаймні одну копію елітної події АЕ-ВМІ, причому елітна подія АЕ-ВМІ містить чужорідну ДНК, що містить ген барстар під контролем ТА29 промотору, 5ЕО ІЮО МО: 5, та БЕО ІО МО: 6, та де елітну подію ВЕ-ВМ1 можна ідентифікувати в полімеразній ланцюговій реакції з двома праймерами, що мають нуклеотидну послідовність ФЕО ІО МО: 7 та 5ЕО І МО: 8, з одержанням фрагмента 215 Бр.

3. Пара рослин Вгазвзіса пари або Вгазвзіса (ипсеа для застосування для одержання гібридного насіння, в якій одна з вказаних рослин Вгаззіса пари або Вгазвзіса /(ипсеа містить елітну подію М5-82, причому елітна подія М5-В2 містить чужорідну ДНК, що містить ген барнази під контролем специфічного промотору тапетуму, ЗЕО ІО МО: 1 ї БЕО ІЮО МО: 2, та де елітну подію Зо М5-82 можна ідентифікувати в полімеразній ланцюговій реакції з двома праймерами, що мають нуклеотидну послідовність ФЕО ІО МО: З та 5БЕО ІО МО: 4, з одержанням фрагмента 183 Бр; а інша з цих рослин Вгаззіса парих або Вгазвіса (ипсеа містить елітну подію ВЕ-ВМІ1, причому елітна подія ВЕ-ВМІ містить чужорідну ДНК, що містить ген барстар під контролем ТА29 промотору, ЗЕО ІОЮО МО: 5 та 5ЕО ІО МО: 6, та де елітну подію ВЕ-ВМІ можна ідентифікувати в полімеразній ланцюговій реакції з двома праймерами, що мають нуклеотидну послідовність ЗЕО І МО: 7 та БЕО ІО МО: 8, з одержанням фрагмента 215 Бр.

4. Геномна ДНК рослини Вгаззіса пари або Вгазвіса (ипсеа за пунктом 1, де вказана геномна ДНК містить елітну подію М5-В2, причому елітна подія М5-В2 містить чужорідну ДНК, що містить ген барнази під контролем специфічного промотору тапетуму, «ЕО ІО МО: 1 ї 5ЕО ІО МО: 2, і містить елітну подію ВЕ-ВМІ1, причому елітна подія ВЕ-ВМІ1 містить чужорідну ДНК, що містить ген барстар під контролем ТА29 промотору, 5ЕО ІО МО: 5 та 5ХЕО ІЮО МО: 6.

5. Рослина або клітина рослини Вгазвзіса (ипсеа, що містить елітну подію ВЕ-ВМІ1, причому елітна подія ВЕ-ВМІ містить чужорідну ДНК, що містить ген барстар під контролем ТА29 промотору, ЗЕО ІОЮО МО: 5 та 5ЕО ІО МО: 6, та де елітну подію ВЕ-ВМІ можна ідентифікувати в полімеразній ланцюговій реакції з двома праймерами, що мають нуклеотидну послідовність БЕОІЮО МО: 7 та БЕО ІЮ МО: 8, з одержанням фрагмента 215 рр.

6. Насіння з рослини Вгаззіса (ипсеа за пунктом 5, що містить елітну подію НЕ-ВМ1, причому елітна подія ВЕ-ВМІ містить чужорідну ДНК, що містить ген барстар під контролем ТА29 промотору, ЗЕО ІОЮО МО: 5 та 5ЕО ІО МО: 6, та де елітну подію ВЕ-ВМІ можна ідентифікувати в полімеразній ланцюговій реакції з двома праймерами, що мають нуклеотидну послідовність

15. БЕОІЮО МО: 7 та БЕО ІЮ МО: 8, з одержанням фрагмента 215 рр.

7. Рослина або клітина за пунктом 5, яка додатково містить елітну подію М5-В2, причому елітна подія М5-В2 містить чужорідну ДНК, що містить ген барнази під контролем специфічного промотору тапетуму, ЗЕО ІЮО МО: 1 ії 5ЕО ІЮ МО: 2, та де елітну подію М5-В2 можна ідентифікувати в полімеразній ланцюговій реакції з двома праймерами, що мають нуклеотидну послідовність хЕО ІЮ МО: З та 5ЕО ІО МО: 4, з одержанням фрагмента 183 рр. гі флосилиителсис о сек вени НО и нн ШЕ Нв ОО МО я о ОКО ЩО КО о ЕВ ОВ В й В ОК ВН о п ов й ЕОМ ОО І о с я В в оо В В КО С МЕ ни Ох м М оо Ов ОБ В ОВ М 5 НЕ екдк «дж жд пжжх тк КЕ о в В и В В й сс ПО о В В ПО ен а ж що жа те Бк Фіг 1