UA128363C2

UA128363C2 - Антитіло до lag3 та його застосування

Info

Publication number: UA128363C2
Application number: UAA201803449A
Authority: UA
Inventors: Еріка Уллман; Эрика Уллман; Айнур Херманн; Елла Іоффе; Элла Иоффе; Елена Бурова; Гевін Тьюрстон; Гэвин Тьюрстон
Original assignee: Редженерон Фармасьютікалс, Інк.; Редженерон Фармасьютикалс, Инк.
Priority date: 2015-10-09
Filing date: 2016-10-07
Publication date: 2024-06-26
Also published as: US20240166740A1; TWI756187B; JP6872537B2; CL2018000908A1; JP7170691B2; EP3359571A1; JP2018536392A; MX394459B; SG10202103611VA; HK1254861A1; IL258284B1; TW201726730A; US11692032B2; US20170101472A1; CO2018003738A2; NZ741080A; JP2020189869A; JP2022174237A; CN108368178A; MX2018004362A

Abstract

Винахід стосується антитіла, яке зв'язується з LAG3. Винахід також стосується фармацевтичної композиції, полінуклеотидних молекул, вектору, клітини, способу інгібування росту пухлини, способу лікування захворювання або порушення.

Description

(54) АНТИТІЛО ДО Г ДОЗ ТА ЙОГО ЗАСТОСУВАННЯ (57) Реферат:

Винахід стосується антитіла, яке зв'язується з | АОЗ. Винахід також стосується фармацевтичної композиції, полінуклеотидних молекул, вектору, клітини, способу інгібування росту пухлини, способу лікування захворювання або порушення.

Галузь техніки, до якої належить даний винахід

ІО001| Даний винахід стосується антитіл та антигензв'язувальних фрагментів антитіл, які специфічно зв'язуються з імуномодулюючим рецептором, кодованим геном-3 активації лімфоцитів (І АС), і терапевтичним та діагностичним способам застосування таких антитіл.

Перелік послідовностей

І0002| Офіційна копія переліку послідовностей подана одночасно з даним винаходом в електронному вигляді за допомогою ЕЕ5-М/еб у вигляді переліку послідовностей у форматі

АБ5СІІ із назвою файла 2016 10 07 10176УМ001 5ЕО 1І5Т 57Т25.МХІ, дата створення 7 жовтня 2016 року, і розміром приблизно 240 кілобайт. Перелік послідовностей, який міститься в цьому документі формату АЗСІЇ, є частиною даного опису і включений в даний документ за допомогою посилання у всій своїй повноті.

Попередній рівень техніки даного винаходу

ЇО0ОЗІ Т-клітинні костимулювальні та коінгібувальні молекули (які в сукупності називаються косигнальними молекулами) відіграють ключову роль у регуляції активації Т-клітин, диференціювання у певну субпопуляцію, ефекторної функції та виживання (Степ еї а! 2013,

Маїшцге Неу. ІттипоїЇ. 13. 227-242). Після розпізнавання Т-клітинним рецептором когнатних комплексів пептид-МНО на поверхні антиген-презентувальних клітин, косигнальні рецептори спільно локалізуються із Т-клітичсними рецепторами в зоні імунного синапса, де вони діють синергічно з передачею сигналу з участю ТСК для сприяння або інгібування активації та функції

Т-клітин (Рііе5 еї а! 2011, Маїе 9. ВіоїЇ. Меа. 84. 409-421). Кінцева імунна відповідь регулюється відношенням костимулювальних та коінгібувальних сигналів ("імунологічні контрольні точки") (Рагао!! 2012, Маїште Веміємже Сапсег 12: 252-264). Білок, кодований геном-3 активації лімфоцитів (ГАСЗ), виконує функцію такої "імунологічної контрольної точки" в опосередкуванні толерантності периферичних Т-клітин. 00041 АСЗ (який також називається СО223) являє собою трансмембранний білковий рецептор розміром 503 амінокислоти, який експресується на поверхні активованих СО4 і СО8 Т- клітин, уб Т-клітин, природних Т-клітин-кілерів, В-клітин, природних клітин-кілерів, плазмоцитоїдних дендритних клітин і регуляторних Т-клітин. ГАСЗ є представником суперродини імуноглобулінів (9). Основною функцією Г(АСЗ є ослаблення імунної відповіді.

Зв'язування Г(АСЗ з молекулами МНС класу ІЇ приводить до передачі негативного сигналу клітинам, які експресують ГАЗ, і обумовлює пригнічення антигензалежних СО4 і СО8 Т- клітинних відповідей. | АСЗ здійснює негативну регуляцію здатності Т-клітин проліферувати, продукувати цитокіни і лізувати цільові клітини, що називають "виснаженням" Т-клітин.

Повідомлялось, що І АОЗ також відіграє роль у посиленні функції регуляторних Т-клітин (Тгед) (РагаосїІ 2012, Маїшге Немівемв Сапсег 12: 252-264).

ІЇООО5| Оскільки ГАСЗ відіграє важливу роль у протипухлинному імунітеті та протиіїнфекційному імунітеті, він являє собою ідеальну мішень для імунотерапії. Блокування

АОЗ антагоністами, включаючи моноклональні антитіла, вивчали в рамках лікування злоякісної пухлини і хронічних вірусних інфекцій (Тигпіз еї а! 2015, Єиг. У. Іттипої. 45. 1892-1905).

ЇО006| Моноклональні антитіла до І АСЗ відомі в даній галузі, і вони були описані, наприклад, у патенті США/публікації МоМмо 5976877, 6143273, 6197524, 8551481, 20110070238, 20110150892, 20130095114, 20140093511, 20140127226, 20140286935, і в УМО95/30750, УМО97/03695,

М/098/58059, МмоОг2004/078928, М О2008/132601, МО2010/019570, М О2014/008218,

ЕРО51007981, ЕРО75838381, ЕРО8Ф4355781, ЕРО9У7785681, ЕР189754882, ЕР21422104А1 і

ЕР232094081.

Ї0007| В рамках розробки імунотерапії для лікування людей існує необхідність в антитілах, які характеризуються певними властивостями, такими як низька імуногенність, відповідні кінетичні параметри зв'язування, перехресна реактивність із мішенню мавпи, відповідна активність іп міїго та/або відповідна активність іп мімо.

Коротке розкриття даного винаходу

ІЇО00О8| Даний винахід стосується антитіл та їх антигензв'язувальних фрагментів, які зв'язують АСЗ. Антитіла за даним винаходом придатні, між іншим, для цілеспрямованого впливу на імунні клітини, які експресують ІГАСЗ, і для модулювання активності ГАЗ. Згідно з певними варіантами здійснення антитіла за даним винаходом придатні для інгібування або нейтралізації активності | АСЗ та/або для стимулювання активації Т-клітин, наприклад, у тих випадках, коли сприятливим або бажаним є опосередковане Т-клітинами знищення. Згідно з певними варіантами здійснення антитіла придатні для інгібування регуляторної функції Т-клітин та/"або для обернення анергічного стану виснажених Т-клітин. Антитіла до |(АСЗ3З за даним винаходом або їх антигензв'язувальні частини можуть бути включені як частина поліспецифічної 60 антигензв'язувальної молекули, наприклад, для модуляції імунної відповіді та/або для націлювання антитіл на певний тип клітин, як, наприклад, пухлинну клітину або інфіковану вірусом клітину. Антитіла є придатними в лікуванні захворювання або порушення, такого як злоякісна пухлина (злоякісне новоутворення, рак) і вірусна інфекція.

І0009| Антитіла за даним винаходом можуть бути повнорозмірними (наприклад, Ідс1- або

Ідс4-антитіло) або можуть містити тільки антигензв'язувальну частину (наприклад, Раб-, Е(аб)2- або 5сЕм-фрагмент), і можуть бути модифіковані з можливістю впливу на функціональні властивості, наприклад, для усунення інших ефекторних функцій (Кедау еї аї., 2000, У. Іттипо). 164:1925-1933). Згідно з певними варіантами здійснення антитіла можуть бути біспецифічними.

ЇО0О10| Згідно з першим аспектом даний винахід стосується виділених рекомбінантних моноклональних антитіл або їхніх антигензв'язувальних фрагментів, які специфічно зв'язуються з ГАЗ. Згідно з певними варіантами здійснення антитіла є повністю людськими.

Ї0011| Ілюстративні антитіла до (АСЗ за даним винаходом наведені в таблицях 1-3 у даному документі. У таблиці 1 представлені ідентифікатори амінокислотних послідовностей варіабельних ділянок важкого ланцюга (НСУК), варіабельних ділянок легкого ланцюга (СУК), ділянок, що визначають комплементарність, важкого ланцюга (НСОКІ, НСОК2 і НОСОК), і ділянок, що визначають комплементарність, легкого ланцюга (І СОКІ, 1 СОК2 і І СО), ілюстративних антитіл до ГАСЗ3. У таблиці 2 представлені ідентифікатори послідовностей нуклеїнових кислот НСМК, ІСМК, НСОКІ, НОСОК? НСОКЗ, ІСОКтІ, 1ІСОК2 її ІСОКЗ ілюстративних антитіл до ГАС3. У таблиці З представлені ідентифікатори амінокислотних послідовностей для послідовностей важкого ланцюга і легкого ланцюга ілюстративних антитіл до І АОС.

І0012| Даний винахід стосується антитіл або їхніх антигензв'язувальних фрагментів, які містять НСМК, що містить амінокислотну послідовність, вибрану з будь-якої з наведених у таблиці 1 амінокислотних послідовностей НСУК, або в значній мірі подібну їй послідовність, яка характеризується з нею щонайменше 9095, щонайменше 9595, щонайменше 9895 або щонайменше 9995 ідентичністю послідовностей. 0013) Даний винахід також стосується антитіл або їхніх антигензв'язувальних фрагментів, які містять | СМК, що містить амінокислотну послідовність, вибрану з будь-якої з наведених у таблиці 1 амінокислотних послідовностей І СУК, або в значній мірі подібну їй послідовність, яка характеризується з нею щонайменше 9095, щонайменше 9595, щонайменше 9895 або щонайменше 9995 ідентичністю послідовностей.

Ї0014| Даний винахід також стосується антитіл або їхніх антигензв'язувальних фрагментів, які містять пару амінокислотних послідовностей НСМК і СУК (НСМК/Л СУК), яка передбачає будь-яку з наведених у таблиці 1 амінокислотних послідовностей НСМК у парі з будь-якою з наведених у таблиці 1 амінокислотних послідовностей СУК. Відповідно до певних варіантів здійснення даний винахід стосується антитіл або їхніх антигензв'язувальних фрагментів, які містять пару амінокислотних послідовностей НСМК/Л СУК, яка міститься в межах будь-якого з наведених у таблиці 1 ілюстративних антитіл до | АСЗ3. Згідно з певними варіантами здійснення пара амінокислотних послідовностей НСУМК/Л СУК вибрана з групи, що складається з 5ЕО ІЮ

МО: 2/10, 18/26, 34/42, 50/58, 66/74, 82/90, 98/106, 114/122, 130/138, 146/154, 162/170, 178/186, 194/202, 210/218, 226/234, 242/250, 258/266, 274/282, 290/298, 306/314, З22/330, 338/346,

З354/362, 370/378, 386/394, 402/410, 418/426, 434/442, 450/522, 458/522, 466/522, 4А7А4/522, 482/522, 490/522, 498/530, 506/530, 514/530, 538/546 і 554/562. Згідно з певними варіантами здійснення пара амінокислотних послідовностей НСМК/Л СМ вибрана з одної з ЗЕО ІЮО МО: 386/394 (наприклад, Ні5НІ15479Р), 418/426 (наприклад, НізНІ15482Р) або 538/546 (наприклад,

Н4а5нНІ1Т4813М). Згідно з певними варіантами здійснення даний винахід стосується антитіл до

ІГ АСЗ або їхніх антигензв'язувальних фрагментів, які містять НСМК і І СУК, причому зазначена

НОСМК містить наведену в таблиці 1 амінокислотну послідовність не більше ніж з п'ятьма амінокислотними замінами, і причому зазначена ІСМК містить наведену у таблиці 1 амінокислотну послідовність не більше ніж з п'ятьма амінокислотними замінами. Наприклад, даний винахід стосується антитіл до ГАЗ або їхніх антигензв'язувальних фрагментів, які містять НСМК і ГСМУК, причому зазначена НСМУК містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮ

МО: 418 не більше ніж з п'ятьма амінокислотними замінами, а зазначена СУК містить амінокислотну послідовність ЗЕО І МО: 426 не більше ніж з п'ятьма амінокислотними замінами. Згідно з іншим ілюстративним варіантом здійснення даний винахід стосується антитіл до ГАЗ або їхніх антигензв'язувальних фрагментів, які містять НСМК і СУК, причому зазначена НСМУК містить амінокислотну послідовність 5260 10 МО: 418 щонайменше з однією амінокислотною заміною, а зазначена І СУК містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮО МО: 426 з однією амінокислотною заміною. 60 0015) Даний винахід також стосується антитіл або їхніх антигензв'язувальних фрагментів,

які містять СОКІ1 важкого ланцюга (НСОКТІ), що містить амінокислотну послідовність, вибрану з будь-якої з наведених у таблиці 1 амінокислотних послідовностей НСОК'І, або в значній мірі подібну їй послідовність, яка характеризується щонайменше 9095, щонайменше 9595, щонайменше 9895 або щонайменше 999; ідентичністю послідовності. 0016) Даний винахід також стосується антитіл або їхніх антигензв'язувальних фрагментів, які містять СОК2 важкого ланцюга (НСОК2), що містить амінокислотну послідовність, вибрану з будь-якої з наведених у таблиці 1 амінокислотних послідовностей НСОК2, або в значній мірі подібну їй послідовність, яка характеризується щонайменше 9095, щонайменше 9595, щонайменше 9895 або щонайменше 999; ідентичністю послідовності.

ЇО017| Даний винахід також стосується антитіл або їхніх антигензв'язувальних фрагментів, які містять СОКЗ важкого ланцюга (НСОКЗ), що містить амінокислотну послідовність, вибрану з будь-якої з наведених у таблиці 1 амінокислотних послідовностей НСОКЗ, або в значній мірі подібну їй послідовність, яка характеризується щонайменше 9095, щонайменше 9595, щонайменше 9895 або щонайменше 999; ідентичністю послідовності. 0018) Даний винахід також стосується антитіл або їхніх антигензв'язувальних фрагментів, які містять СОКІ1 легкого ланцюга (ІСОКТ), що містить амінокислотну послідовність, вибрану з будь-якої з наведених у таблиці 1 амінокислотних послідовностей СОМ, або в значній мірі подібну їй послідовність, яка характеризується щонайменше 9095, щонайменше 9595, щонайменше 9895 або щонайменше 9959; ідентичністю послідовності.

Ї0О0О19| Даний винахід також стосується антитіл або їхніх антигензв'язувальних фрагментів, які містять СОК2 легкого ланцюга (І СОК2), що містить амінокислотну послідовність, вибрану з будь-якої з наведених у таблиці 1 амінокислотних послідовностей ЇСОК2, або в значній мірі подібну їй послідовність, яка характеризується щонайменше 9095, щонайменше 9595, щонайменше 9895 або щонайменше 999; ідентичністю послідовності.

І0О0О20О| Даний винахід також стосується антитіл або їхніх антигензв'язувальних фрагментів, які містять СОКЗ легкого ланцюга (І СОКЗ), що містить амінокислотну послідовність, вибрану з будь-якої з наведених у таблиці 1 амінокислотних послідовностей ЇСОМКЗ, або в значній мірі подібну їй послідовність, яка характеризується щонайменше 9095, щонайменше 9595, щонайменше 9895 або щонайменше 9959; ідентичністю послідовності.

І0021| Даний винахід також стосується антитіл або їхніх антигензв'язувальних фрагментів, які місять пару амінокислотних послідовностей НСОМКЗ і ІсСОКЗ (НСОКЗЛСОКЗ), яка передбачає будь-яку з наведених у таблиці 1 амінокислотних послідовностей НСОКЗ у парі з будь-якою з наведених у таблиці 1 амінокислотних послідовностей ЇСОМКЗ. Відповідно до певних варіантів здійснення даний винахід стосується антитіл або їхніх антигензв'язувальних фрагментів, які містять пару амінокислотних послідовностей НСОКЗ/ЛСОКЗ, яка міститься в межах будь-якого з наведених у таблиці 1 ілюстративних антитіл до ГАС3. Згідно з певними варіантами здійснення пара амінокислотних послідовностей НСОКЗ/Л СОМКЗ вибрана з групи, що складається з 5ЕО ІЮО МО: 392/400 (наприклад, Ні5НІ15479Р), 424/432 (наприклад, НізНІ15482Р) і 544/552 (наприклад, Н4зНІ1Т4813М). (0022 Даний винахід також стосується антитіл або їхніх антигензв'язувальних фрагментів, які містять НСМЕК і ГОМУЕК, причому зазначена НСМУК містить НСОК'/, що містить амінокислотну послідовність, яка відрізняється від наведеної у таблиці 1 амінокислотної послідовності на 1 амінокислоту, НСОК2, що містить амінокислотну послідовність, яка відрізняється від наведеної у таблиці 1 амінокислотної послідовності на 1 амінокислоту, і НСОКЗ, що містить амінокислотну послідовність, яка відрізняється від наведеної у таблиці 1 амінокислотної послідовності на 1 амінокислоту. Згідно з певними варіантами здійснення даний винахід стосується антитіл або їхніх антигензв'язувальних фрагментів, які містять НСМК і І СМЕ, причому зазначена /ГСМК містить ЇСОМКІ!, що містить амінокислотну послідовність, яка відрізняється від наведеної у таблиці 1 амінокислотної послідовності на 1 амінокислоту, І СОК2, що містить амінокислотну послідовність, яка відрізняється від наведеної у таблиці 1 амінокислотної послідовності на 1 амінокислоту, і ГСОКЗ, що містить амінокислотну послідовність, яка відрізняється від наведеної у таблиці 1 амінокислотної послідовності на 1 амінокислоту. Наприклад, даний винахід стосується антитіл до ГАСЗ3 або їхніх антигензв'язувальних фрагментів, які містять НСМУК і ГОМУК, причому зазначена НСМК містить

НОСОК, що містить амінокислотну послідовність ЗЕБЕО 10 МО: 420, або амінокислотну послідовність, яка відрізняється від 5ЕО ІЮ МО: 420 на 1 амінокислоту, НСОК2, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО 10 МО: 422, або амінокислотну послідовність, яка відрізняється від ЗЕО ІО МО: 422 на 1 амінокислоту, і НСОКЗ, що містить амінокислотну послідовність 560 ІЮ МО: 424, або амінокислотну послідовність, яка відрізняється від зЕО ІЮ 60 МО: 424 на 1 амінокислоту. Згідно з іншим ілюстративним варіантом здійснення даний винахід стосується антитіл або їхніх антигензв'язувальних фрагментів, які містять НСМК і ГСМК, причому зазначена І СУК містить ГСОК'І1, що містить амінокислотну послідовність ФЕО ІЮ МО: 428 або амінокислотну послідовність, яка відрізняється від 5ЕО ІЮ МО: 428 на 1 амінокислоту,

ІЇСОМК2, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО 10 МО: 430, або амінокислотну послідовність, яка відрізняється від 5ЕО ІЮ МО: 430 на 1 амінокислоту, і Ї/СОКЗ, що містить амінокислотну послідовність ЗЕО 10 МО: 432, або амінокислотну послідовність, яка відрізняється від 5ЕО ІЮО МО: 432 на 1 амінокислоту.

І0ОО23| Даний винахід стосується антитіл або їхніх антигензв'язувальних фрагментів, які містять важкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність, вибрану з будь-якої з наведених у таблиці З амінокислотних послідовностей НС, або в значній мірі подібну їй послідовність, яка характеризується з нею щонайменше 9095, щонайменше 9595, щонайменше 9895 або щонайменше 99595 ідентичністю послідовностей.

І0024| Даний винахід також стосується антитіл або їхніх антигензв'язувальних фрагментів, які містять легкий ланцюг, що містить амінокислотну послідовність, вибрану з будь-якої з наведених у таблиці З амінокислотних послідовностей ЇС, або в значній мірі подібну їй послідовність, яка характеризується з нею щонайменше 9095, щонайменше 959565, щонайменше 9895 або щонайменше 99595 ідентичністю послідовностей. (0025) Даний винахід також стосується антитіл або їхніх антигензв'язувальних фрагментів, які містять пару амінокислотних послідовностей НС іс (НС// С), яка передбачає будь-яку з наведених у таблиці З амінокислотних послідовностей НС у парі з будь-якою з наведених у таблиці З амінокислотних послідовностей І С. Відповідно до певних варіантів здійснення даний винахід стосується антитіл або їхніх антигензв'язувальних фрагментів, які містять пару амінокислотних послідовностей НС/ С, яка міститься в межах будь-якого з наведених у таблиці

З ілюстративних антитіл до ГАЗ. Згідно з певними варіантами здійснення пара амінокислотних послідовностей НСЛ.С вибрана з групи, що складається з 5БО ІЮО МО: 577/578, 579/578 і 580/581. (0026) Даний винахід також стосується антитіл або їхніх антигензв'язувальних фрагментів, які містять набір із шести СОК (тобто НСОК1-НСОВ2-НСОВЗ-І СОВ1-іСОН2-І СОКУ), який міститься в межах будь-якого з наведених у таблиці 1 ілюстративних антитіл до | АСЗ3. Згідно з певними варіантами здійснення набір амінокислотних послідовностей НСОК1-НСОН2-НОСОВЗ-

І СОВ1-іСОН2-І СОВЗ вибраний із групи, що складається з 5ЕО ІЮ МО: 388-390-392-396-398- 400 (наприклад, Н45Н15479Р), 420-422-424-428-430-432 (наприклад, На45зНІ15482Р) і 540-542- 544-548-550-552 (наприклад, Ні4зНІ14813М). (0027 Згідно з подібним варіантом здійснення даний винахід стосується антитіл або їхніх антигензв'язувальних фрагментів, які містять набір із шести СОК (тобто НСОК1І-НСОВ2- нНоеОВЗ-І СОВІ1-іСОВ2-ІСОМКЗ), який міститься в межах пари амінокислотних послідовностей

НСМКЛ СМ, як визначено для будь-якого з наведених у таблиці 1 ілюстративних антитіл до

ГАЗ. Наприклад, даний винахід включає антитіла або їхні антигензв'язувальні фрагменти, які містять набір амінокислотних послідовностей. НСОК1-НСОВН2-НОСОНЗ-І СОВІ1-І СОВ2г-І СОВЗ, який міститься в межах пари амінокислотних послідовностей НСМК/Л СУК, вибраної з групи, що складається з 5ЕО ІЮ МО: 386/394 (наприклад, НізНІ15479Р), 418/426 (наприклад, Ні45НІ15482Р) і 538/546 (наприклад, Н4і5зН14813М). Способи та методики ідентифікації СОК в межах амінокислотних послідовностей НСМК і СМАК добре відомі в даній галузі, та їх можна застосовувати для ідентифікації СОК в межах амінокислотних послідовностей певних НСУК та/або І СУК, розкритих у даному документі. Ілюстративні загальноприйняті підходи, які можна застосовувати для ідентифікації меж СОК, включають, наприклад, визначення за КаБбаї, визначення за СПпоїйіа та визначення на основі моделі антитіла. Загалом, визначення за Кабраї базується на варіабельності послідовностей, визначення за Споїйпіа базується на розташуванні ділянок структурних петель, а визначення на основі моделі антитіла є компромісом між підходами за Кабаї і Споїпіа. Див., наприклад, Кабаї, "Зедиепсез ої Ргоїеіпз ої Іттипо|одісаї

Іптегезі," Маїййопаї Іпзійшез ої Неайй, ВешШезаа, Ма. (1991); АІ-І агікапі еї а!., У. Мої. Вісі. 273:927- 948 (1997); ії Мапіп еї аї., Ргос. Май. Асад. 5сі. ОБА 86:9268-9272 (1989). Для ідентифікації послідовностей СОК в межах антитіла також можна використовувати загальнодоступні бази даних.

ІО028| Даний винахід включає антитіла до ГАЗ із модифікованим профілем глікозилювання. Згідно з деякими варіантами здійснення може бути придатна модифікація з видаленням небажаних сайтів глікозилювання або відсутність у антитіла фукозного фрагмента, присутнього в олігосахаридному ланцюзі, наприклад, з метою посилення функції, яка являє собою антитілозалежну клітинну цитотоксичність (АЮСС) (див. ЗПпієіїй еї аї. (2002) ОВС 60 277:26733). Згідно з іншими варіантами застосування, з метою модифікації комплементзалежної цитотоксичності (СОС) можна виконувати модифікацію щодо галактозилювання.

І0029| Даний винахід включає антитіла до ГАЗ, які містять Ес-домен, де Ес-домен передбачає ізотипи ЇДС01 або ІдсС4, як описано в іншому місці даного документа. Згідно з певними варіантами здійснення Ес-домен містить амінокислотну послідовність, вибрану з групи, що складається з 5ЕО ІО МО: 569, 570, 571, 572 і 573.

І0ОЗ0О)| Даний винахід також стосується антитіл та їхніх антигензв'язувальних фрагментів, які конкурують за специфічне зв'язування з Г(АСЗ з антитілом або його антигензв'язувальним фрагментом, які містять СОК НСМК і СОК ІСМК, де кожна з НСМК і ІСМК містить амінокислотну послідовність, вибрану з наведених у таблиці 1 послідовностей НСМЕК і І СМК.

Ї0О0ОЗ31| Даний винахід також стосується виділених антитіл та їхніх антигензв'язувальних фрагментів, які блокують зв'язування Г(АСЗ з МНС класу ІІ. Згідно з деякими варіантами здійснення антитіло або його антигензв'язувальний фрагмент, які блокують зв'язування І АсЗ, можуть зв'язуватися з тим же самим епітопом на ГАСЗ3, що й МНС класу ІІ, або можуть зв'язуватися з іншим епітопом на ГГ АСЗ, ніж МНС класу ІІ.

І0032| Даний винахід також стосується антитіл та їхніх антигензв'язувальних фрагментів, які специфічно зв'язуються з ГАЗ людини або іншого виду. Згідно з певними варіантами здійснення антитіла можуть зв'язуватися з ГГ АСЗ людини та/або з | АСЗ мавпи. 0033) Даний винахід також стосується антитіл та їхніх антигензв'язувальних фрагментів, які перехресно конкурують за зв'язування з І1АСЗ3З з еталонним антитілом або його антигензв'язувальним фрагментом, які містять СОК НСМК і СОК І СМК, де кожна з НСМК і

ІЇСМК містить амінокислотну послідовність, вибрану з наведених у таблиці 1 послідовностей

НСМК і СМК. 0034) Даний винахід також стосується антитіл та їхніх антигензв'язувальних фрагментів, які зв'язуються з тим же самим епітопом, що й еталонне антитіло або його антигензв'язувальний фрагмент, які містять СОК НСМУК і СОК І СУК, де кожна з НСМК і І СМЕК містить амінокислотну послідовність, вибрану з наведених у таблиці 1 послідовностей НСМК і І СМК. Згідно з певними варіантами здійснення даний винахід стосується антитіл та їхніх антигензв'язувальних фрагментів, які зв'язуються з тим же самим епітопом, що й еталонне антитіло або його антигензв'язувальний фрагмент, які містять СОК НСМК і СОК І СМК, де пара амінокислотних

Зо послідовностей НСУКЛ СМР. містить ЗЕО ІЮО МО: 418/426.

ЇООЗ5| Даний винахід також включає антитіла до ГАЗ, які взаємодіють з однією або декількома амінокислотами, які містяться в межах позаклітинного домену Г АСЗ людини (5ЕО І

МО: 588). Згідно з певними варіантами здійснення даний винахід стосується антитіл до І АСЗ та їхніх антигензв'язувальних фрагментів, які взаємодіють з амінокислотною послідовністю, вибраною з групи, що складається з (а) амінокислот 28-69 5ЕО ІО МО: 588; (Б) амінокислот 28- 71 ЗЕО ІЮ МО: 588; (с) амінокислот 31-52 5ЕО ІО МО: 588 і (д) амінокислот 32-69 5ЕО ІЮО МО: 588. Згідно з певними варіантами здійснення даний винахід стосується антитіл до | АСЗ та їхніх антигензв'язувальних фрагментів, які взаємодіють з однією або декількома амінокислотами, які містяться в межах 5ЕО ІО МО: 589, наприклад, даний винахід стосується антитіл до ГАЗ та їхніх антигензв'язувальних фрагментів, які взаємодіють щонайменше з 5 амінокислотами, щонайменше 10 амінокислотами або щонайменше 20 амінокислотами, які містяться в межах

ЗЕО ІЮО МО: 589. Згідно з певними варіантами здійснення даний винахід стосується антитіл до

ГАСЗ та їхніх антигензв'язувальних фрагментів, які взаємодіють з амінокислотною послідовністю 5ЕО ІО МО: 589 (що відповідає амінокислотам 28-71 5ЕО ІЮО МО: 588).

Ї0ООЗ6| Згідно з одним варіантом здійснення даний винахід стосується рекомбінантного моноклонального антитіла людини або його антигензв'язувального фрагмента, які володіють однією або декількома з наступних характеристик: (а) специфічно зв'язується з | АОЗ людини та/лабо ГАЗ яванського макаки; (б) блокує зв'язування (АСЗ з МНС класу ІІ; (с) блокує індуковану (АСЗ негативну регуляцію Т-клітин і забезпечує відновлення передачі сигналу з участю Т-клітини; і (4) забезпечує пригнічення росту пухлини і підвищення виживаності суб'єкта зі злоякісною пухлиною.

Ї0ОЗ7| Згідно з деякими варіантами здійснення антитіло або його антигензв'язувальний фрагмент можуть специфічно зв'язуватися з | АСЗ як агоністи, тобто вони можуть посилювати або стимулювати зв'язування та/або активність ГАЗ; згідно з іншими варіантами здійснення антитіло може специфічно зв'язуватися з |(АСЗ як антагоніст, тобто воно може блокувати зв'язування І АСЗ з його лігандом.

Ї0ООЗ8)| Згідно з певними варіантами здійснення антитіла або їхні антигензв'язувальні фрагменти за даним винаходом є біспецифічними, при цьому вони передбачають першу специфічність зв'язування щодо ГАЗ, і другу специфічність зв'язування щодо другого 60 цільового епітопа. Другий цільовий епітоп може являти собою інший епітоп на І АСЗ або іншому білку. Згідно з певними варіантами здійснення другий цільовий епітоп може знаходитися на поверхні іншої клітини, включаючи іншу Т-клітину, В-клітину, пухлинну клітину або інфіковану вірусом клітину.

І00З9| Згідно з другим аспектом даний винахід стосується молекул нуклеїнових кислот, які кодують антитіла до ГАОЗ або їхні частини. Наприклад, даний винахід стосується молекул нуклеїнових кислот, які кодують будь-яку з наведених у таблиці 1 амінокислотних послідовностей НСМЕК; згідно з певними варіантами здійснення молекула нуклеїнової кислоти містить полінуклеотидну послідовність, вибрану з будь-якої з наведених у таблиці 2 послідовностей нуклеїнових кислот, які кодують НСМК, або в значній мірі подібну їй послідовність, яка характеризується з нею щонайменше 9095, щонайменше 95965, щонайменше 9895 або щонайменше 99595 ідентичністю послідовностей. 0040 Даний винахід також стосується молекул нуклеїнових кислот, які кодують будь-яку з наведених у таблиці 1 амінокислотних послідовностей СМ; згідно з певними варіантами здійснення молекула нуклеїнової кислоти містить полінуклеотидну послідовність, вибрану з будь-якої з наведених у таблиці 2 послідовностей нуклеїнових кислот, які кодують І СУК, або в значній мірі подібну їй послідовність, яка характеризується з нею щонайменше 9095, щонайменше 9595, щонайменше 9895 або щонайменше 99595 ідентичністю послідовностей.

ІЇ0041| Даний винахід також стосується молекул нуклеїнових кислот, які кодують будь-яку з наведених у таблиці 1 амінокислотних послідовностей НСОК'І1; згідно з певними варіантами здійснення молекула нуклеїнової кислоти містить полінуклеотидну послідовність, вибрану з будь-якої з наведених у таблиці 2 послідовностей нуклеїнових кислот, які кодують НСОКІ, або в значній мірі подібну їй послідовність, яка характеризується з нею щонайменше 9095, щонайменше 9595, щонайменше 9895 або щонайменше 99595 ідентичністю послідовностей.

І0042| Даний винахід також стосується молекул нуклеїнових кислот, які кодують будь-яку з наведених у таблиці 1 амінокислотних послідовностей НСОК2; згідно з певними варіантами здійснення молекула нуклеїнової кислоти містить полінуклеотидну послідовність, вибрану з будь-якої з наведених у таблиці 2 послідовностей нуклеїнових кислот, які кодують НСОК2, або в значній мірі подібну їй послідовність, яка характеризується з нею щонайменше 9095, щонайменше 9595, щонайменше 9895 або щонайменше 99595 ідентичністю послідовностей. 0043) Даний винахід також стосується молекул нуклеїнових кислот, які кодують будь-яку з наведених у таблиці 1 амінокислотних послідовностей НСОКЗ; згідно з певними варіантами здійснення молекула нуклеїнової кислоти містить полінуклеотидну послідовність, вибрану з будь-якої з наведених у таблиці 2 послідовностей нуклеїнових кислот, які кодують НСОКЗ, або в значній мірі подібну їй послідовність, яка характеризується з нею щонайменше 9095, щонайменше 9595, щонайменше 9895 або щонайменше 99595 ідентичністю послідовностей. 0044) Даний винахід також стосується молекул нуклеїнових кислот, які кодують будь-яку з наведених у таблиці 1 амінокислотних послідовностей ЇСОКІ1; згідно з певними варіантами здійснення молекула нуклеїнової кислоти містить полінуклеотидну послідовність, вибрану з будь-якої з наведених у таблиці 2 послідовностей нуклеїнових кислот, які кодують І СОКІ, або в значній мірі подібну їй послідовність, яка характеризується з нею щонайменше 9095, щонайменше 9595, щонайменше 9895 або щонайменше 99595 ідентичністю послідовностей. 0045) Даний винахід також стосується молекул нуклеїнових кислот, які кодують будь-яку з наведених у таблиці 1 амінокислотних послідовностей ЇСОК2; згідно з певними варіантами здійснення молекула нуклеїнової кислоти містить полінуклеотидну послідовність, вибрану з будь-якої з наведених у таблиці 2 послідовностей нуклеїнових кислот, які кодують І СОК2, або в значній мірі подібну їй послідовність, яка характеризується з нею щонайменше 9095, щонайменше 9595, щонайменше 9895 або щонайменше 99595 ідентичністю послідовностей. 0046) Даний винахід також стосується молекул нуклеїнових кислот, які кодують будь-яку з наведених у таблиці 1 амінокислотних послідовностей ЇСОКЗ; згідно з певними варіантами здійснення молекула нуклеїнової кислоти містить полінуклеотидну послідовність, вибрану з будь-якої з наведених у таблиці 2 послідовностей нуклеїнових кислот, які кодують І СОКЗ, або в значній мірі подібну їй послідовність, яка характеризується з нею щонайменше 9095, щонайменше 9595, щонайменше 9895 або щонайменше 99595 ідентичністю послідовностей.

І0047| Даний винахід також стосується молекул нуклеїнових кислот, які кодують НСМК, де

НСМК містить набір із трьох СОК (тобто НСОК1І-НСОН2-НСОКЗ), де набір амінокислотних послідовностей НСОК1-НСОН2-НСОКЗ є таким, як визначено для будь-якого з наведених у таблиці 1 ілюстративних антитіл до | АС3. 0048) Даний винахід також стосується молекул нуклеїнових кислот, які кодують ГСМК, де

ЇСМК містить набір із трьох СОК (тобто !СОК1-ІСОВ82-ІСОКЗ), де набір амінокислотних 60 послідовностей І СОК1-ІСОН2-ІСОМКЗ є таким, як визначено для будь-якого з наведених у таблиці 1 ілюстративних антитіл до | АС. 0049) Даний винахід також стосується молекул нуклеїнових кислот, які кодують як НСМК, такі ССМК, де НСМУМК містить амінокислотну послідовність із будь-якої з наведених у таблиці 1 амінокислотних послідовностей НСУЕК, і де І! СМК містить амінокислотну послідовність із будь- якої з наведених у таблиці 1 амінокислотних послідовностей І СМК. Згідно з певними варіантами здійснення молекула нуклеїнової кислоти містить полінуклеотидну послідовність, вибрану з будь-якої з наведених у таблиці 2 послідовностей нуклеїнових кислот, які кодують НСМУК, або в значній мірі подібну їй послідовність, яка характеризується з нею щонайменше 9095, щонайменше 9595, щонайменше 9895 або щонайменше 9995 ідентичністю послідовностей, і полінуклеотидну послідовність, вибрану з будь-якої з наведених у таблиці 2 послідовностей нуклеїнових кислот, які кодують ЇСМК, або в значній мірі подібну їй послідовність, яка характеризується з нею щонайменше 9095, щонайменше 9595, щонайменше 9895 або щонайменше 9995 ідентичністю послідовностей. Згідно з певними варіантами здійснення відповідно до цього аспекту даного винаходу молекула нуклеїнової кислоти кодує НСМК і ГСМК, де як НСМЕК, так і ЇСМК походять з одного й того самого наведеного у таблиці 1 антитіла до

І АС.

ЇОО5О| Даний винахід стосується молекул нуклеїнових кислот, які кодують будь-яку з наведених у таблиці З амінокислотних послідовностей важкого ланцюга. Даний винахід також стосується молекул нуклеїнових кислот, які кодують будь-яку з наведених у таблиці З амінокислотних послідовностей легкого ланцюга.

ЇО0О51| Даний винахід також стосується молекул нуклеїнових кислот, які кодують як важкий ланцюг (НС), так і легкий ланцюг (І С), де НС містить амінокислотну послідовність із будь-якої з наведених у таблиці З амінокислотних послідовностей НС, і де С містить амінокислотну послідовність із будь-якої з наведених у таблиці З амінокислотних послідовностей І С.

І0052| Згідно з подібним аспектом даний винахід стосується рекомбінантних векторів експресії, здатних експресувати поліпептид, який містить варіабельну ділянку важкого або легкого ланцюгів антитіла до ГАС3. Наприклад, даний винахід включає рекомбінантні вектори експресії, які містять будь-яку з молекул нуклеїнових кислот, згаданих вище, тобто молекул нуклеїнових кислот, які кодують будь-яку з послідовностей НОСМК, ІСМК та/або СОК, представлених у таблиці 1. Даний винахід також стосується рекомбінантних векторів експресії, здатних експресувати поліпептид, який містить важкий або легкий ланцюги антитіла до І АО3.

Наприклад, даний винахід включає рекомбінантні вектори експресії, які містять будь-яку з молекул нуклеїнових кислот, згаданих вище, тобто молекул нуклеїнових кислот, які кодують будь-яку з послідовностей важкого ланцюга або легкого ланцюга, представлених у таблиці 3.

Також в обсяг даного винаходу включені клітини-хазяї, в які вводили такі вектори, а також способи одержання антитіл або їхніх частин шляхом культивування клітин-хазяїв в умовах, що забезпечують можливість продукування антитіл або фрагментів антитіл, і виділення одержаних таким чином антитіл і фрагментів антитіл. 0053 Згідно з третім аспектом даний винахід стосується фармацевтичної композиції, яка містить рекомбінантне антитіло людини або його фрагмент, які специфічно зв'язують І АСЗ, і фармацевтично прийнятний носій. Згідно з подібним аспектом у даному винаході описана композиція, яка являє собою комбінацію антитіла до ГАСЗ і другого терапевтичного засобу.

Згідно з одним варіантом здійснення другий терапевтичний засіб являє собою будь-який засіб, який з переважним результатом комбінується з антитілом до ГАЗ. Ілюстративні засоби, які можна з переважним результатом комбінувати з антитілом до ГАС3, включають без обмеження інші засоби, які зв'язують | АСЗ та/або модулюють передачу сигналу з його участю (включаючи інші антитіла або їхні антигензв'язувальні фрагменти тощо), та/або засоби, які не зв'язують

ГАЗ прямо, але при цьому модулюють активацію імунних клітин. Додаткові комбіновані терапевтичні препарати та склади, які передбачають антитіла до АСЗ за даним винаходом, розкриті в іншому місці даного документа. 00541 Згідно з четвертим аспектом даний винахід стосується способів модуляції імунної відповіді у суб'єкта, причому спосіб передбачає введення суб'єкту, який потребує цього, терапевтично ефективної кількості антитіла до | АСЗ або його антигензв'язувального фрагмента за даним винаходом. Згідно з певними варіантами здійснення даний винахід стосується способів посилення імунної відповіді у суб'єкта, причому способи передбачають введення суб'єкту ефективної кількості антитіла або його фрагмента за даним винаходом, які зв'язують

ГАЗ. Згідно з одним варіантом здійснення даний винахід стосується способу стимуляції або посилення активації Т-клітин у суб'єкта. Згідно з певними варіантами здійснення даний винахід стосується способів відновлення активності Т-клітини, які передбачають приведення Т-клітини в бо контакт з ефективною кількістю антитіла за даним винаходом, завдяки чому відбувається відновлення активності Т-клітини. Згідно з одним варіантом здійснення даний винахід стосується способів інгібування регуляторної Т-клітини (Тгтед) у суб'єкта, причому способи передбачають введення суб'єкту, який потребує цього, терапевтично ефективної кількості антитіла або його антигензв'язувального фрагмента за даним винаходом. Згідно з певними варіантами здійснення суб'єкт, який потребує лікування, може страждати на захворювання або порушення, таке як злоякісна пухлина або вірусна інфекція. Згідно з певними варіантами здійснення даний винахід стосується способів звільнення від опосередкованого ІдоЗ інгібування активності Т-клітини, які передбачають приведення Т-клітини в контакт з ефективною кількістю антитіла за даним винаходом.

Ї0ОО55І Згідно з п'ятим аспектом даний винахід стосується терапевтичних способів лікування у суб'єкта захворювання або порушення, такого як злоякісна пухлина або вірусна інфекція, із застосуванням антитіла до ГАСЗ3З або антигензв'язувальної частини антитіла за даним винаходом, де терапевтичні способи передбачають введення суб'єкту, який потребує цього, терапевтично ефективної кількості фармацевтичної композиції, яка містить антитіло або фрагмент антитіла за даним винаходом. Порушення, яке підлягає лікуванню, являє собою будь- яке захворювання або стан, які послаблюють, перебіг яких покращують, які інгібують або попереджують за допомогою стимуляції або інгібування активності І АСЗ або передачі сигналу з його участю. Згідно з певними варіантами здійснення антитіло або його антигензв'язувальний фрагмент за даним винаходом вводять суб'єкту, який потребує цього, в комбінації з другим терапевтичним засобом. Другий терапевтичний засіб може бути вибраний із групи, що складається з антитіла до іншого коінгібітора Т-клітини, антитіла до антигену пухлинної клітини, антитіла до Т-клітинного рецептора, антитіла до епітопа на інфікованій вірусом клітині, цитотоксичного засобу, протипухлинного лікарського засобу, противірусного лікарського засобу, протизапального лікарського засобу (наприклад, кортикостероїдів), хіміотерапевтичного засобу, променевої терапії, імунодепресанта та будь-якого іншого лікарського засобу або виду терапії, відомих у даній галузі. Згідно з певними варіантами здійснення другий терапевтичний засіб може являти собою засіб, який сприяє нейтралізації або зменшенню вираженості будь-якого(- их) побічного(-их) ефекту(-ів), асоційованого(-их) з антитілом або його антигензв'язувальним фрагментом за даним винаходом, якщо такий(-і) побічний(-ї) ефект(-и) раптом виникають.

Ї0056| Згідно з певними варіантами здійснення даний винахід стосується способів пригнічення росту пухлини. Наприклад, даний винахід стосується пригнічення росту пухлини у випадку первинної пухлини або метастатичної пухлини у суб'єкта. Згідно з певними варіантами здійснення даний винахід стосується способів підвищення виживаності (наприклад, виживаності без прогресування або загальної виживаності) суб'єкта зі злоякісною пухлиною. Приклади злоякісної пухлини включають без обмеження первинну та/або рецидивну злоякісну пухлину, включаючи злоякісне новоутворення кровотворної тканини (наприклад, злоякісне захворювання системи крові, таке як лімфома, мієлома або лейкоз), рак головного мозку (наприклад, мультиформну гліобластому), рак легені (наприклад, недрібноклітинний рак легені), плоскоклітинну карциному голови та шиї, гепатоцелюлярну карциному, нирково-клітинну карциному, меланому, мезотеліому, рак яєчника, рак сечового міхура, рак молочної залози, рак кістки, рак товстої та прямої кишки, рак передміхурової залози та рак товстої кишки. Згідно з певними варіантами здійснення даний винахід стосується способів інгібування або пригнічення росту пухлин, що розвинулися. Способи передбачають введення суб'єкту, який потребує цього, фармацевтичної композиції, яка містить терапевтично ефективну кількість антитіла до | АСЗ за даним винаходом. Згідно з певними варіантами здійснення антитіло вводять в комбінації з другим терапевтичним засобом, вибраним із групи, що складається з інгібітора білка-1 запрограмованої смерті клітин (РО-1) (наприклад, антитіла до РО-1, такого як ніволумаб або

КЕСМ2810), інгібітора ліганду білка-ї запрограмованої смерті клітин (РО-І1) (наприклад, антитіла до РО-І1), антагоніста фактора росту ендотелію судин (МЕСЕ) (наприклад, афліберцепту, бевацизумабу), інгібітора ангіопоетину-2 (Апд2) (наприклад, антитіла до Апод2, такого як несвакумаб), інгібітора антигена-4 цитотоксичних Т-лімфоцитів (СТІ А-4) (наприклад, іпілімумабу), біспецифічного антитіла до СО20ОхСО3, цитотоксину, хіміотерапевтичного засобу та променевої терапії. Додаткові приклади додаткових видів терапії/терапевтичних засобів, які можна застосовувати в комбінації з антитілом до | АСЗ за даним винаходом для застосування в лікуванні злоякісної пухлини, описані в іншому місці даного документа.

Ї0057| Антитіло або його фрагмент можна вводити підшкірно, внутрішньовенно, внутрішньошкірно, внутрішньочеревно, перорально, внутрішньом'язово або інтракраніально.

Антитіло або його фрагмент можна вводити в дозі від приблизно 0,1 мг/кг ваги тіла до приблизно 100 мг/кг ваги тіла суб'єкта. 60 Ї0058| Даний винахід також включає застосування антитіла до ГАЗ або його антигензв'язувального фрагмента за даним винаходом у виготовленні лікарського препарату для лікування захворювання або порушення, на яке буде чинити сприятливий вплив блокування зв'язування І АСЗ та/або передачі сигналу з його участю, таке як злоякісна пухлина.

Ї00О59| Інші варіанти здійснення будуть очевидними з огляду нижченаведеного докладного опису.

Короткий опис креслень

ІОО6ОІ На фіг. 1 представлено схематичне зображення біологічного аналізу | АСЗ на основі визначення активності люциферази, описаного в прикладі 8 у даному документі. Панель (А):

Спосіб "на основі біспецифічного антитіла": Неактивні Т-клітини, що походять із дигкаї, були активовані шляхом кластеризації Т-клітинного рецептора (ТСК) за допомогою біспецифічного антитіла до СОЗ3хСО20. Панель (В): Спосіб "з праймуванням пептидом": У цьому способі неактивні Т-клітини, що походять із шигКаї були активовані специфічним комплексом

МНС/пептид (гетеродимер ТОК клону ОБ2ЕЗ з білком МНОЇЇ, НГА-ОК2АВ, в комплексі з пептидом МВР85-99). Зв'язування ГАЗ з ОК2 послаблює відповідь активованих Т-клітин, що походять із дигкаї. Блокуюче антитіло до ГАСЗ відновлює відповідь активованих Т-клітин, що походять із Уиткаї.

І0О0О61| На фігурах 2А-2В8 наведені результати щодо іп мімо ефективності антитіла до ГАЗ миші окремо і в комбінації з антитілом до РО-1 миші щодо пухлин СоЇоп 26, що розвинулися (описано в прикладі 10). Фіг. 2А. Показники середнього об'єму пухлини (мм'я5ЕМ) у кожній групі обробки вимірювали в декількох моментах часу після імплантації пухлинних клітин. Обробку починали в день 14, коли середній об'єм пухлини досягав 50 мм3. Дні обробки позначені стрілками. Всі антитіла вводили внутрішньочеревно (і.р.) у концентрації 10 мг/кг. Фіг. 28. Окремі показники об'єму пухлини в кожній групі обробки вимірювали в день 35 після імплантації.

Статистичну значущість визначали за допомогою однофакторного дисперсійного аналізу з апостеріорним критерієм Даннетта для множинного порівняння ("р«0,05). Фіг. 2А-28. Групи обробки: ізотипові контролі Ї3052а пацюка « контрольне Ідс1-антитіло миції: (ее); антитіло до РО- 1 миші ї- контрольне ЇдДС1 миші (А); антитіло до Г(АОЗ миші ї контрольне Ідсга пацюка (п); антитіло до РО-1 миші «т антитіло до ГАЗ миші (Ж).

І0062| На фігурах ЗА-3В наведені результати щодо іп мімо ефективності антитіла до ГАЗ миші окремо і в комбінації з антитілом до РО-1 миші щодо пухлин МС38, що розвинулися (описано в прикладі 11). Фіг. ЗА. Показники середнього об'єму пухлини (мм'я5ЕМ) у кожній групі обробки вимірювали в декількох моментах часу після імплантації пухлинних клітин. Обробку починали в день 8, коли середній об'єм пухлини досягав 45 мм3. Дні обробки позначені стрілками. Фіг. ЗВ. Окремі показники об'єму пухлини в кожній групі обробки вимірювали в день 23 після імплантації. Статистичну значущість визначали за допомогою однофакторного дисперсійного аналізу з апостеріорним критерієм Даннетта для множинного порівняння (ре«0,0001). Фіг. ЗА-3В. Групи обробки: ізотипові контролі Їд)052а пацюка ї- ЇдС1 миші (ве); антитіло до РО-1 миші ї- контрольне тідс1 (А); антитіло до ГАОЗ миші ї- контрольне ІдСга пацюка (п); та антитіло до РО-1 миші «з антитіло до ГАЗ миші (Ж).

І0063| На фігурах 4А-4В показані рівні експресії генів ІЕМУу Її СО8Ь миші (нормалізовані до рівнів експресії циклофіліну В миші), визначені за допомогою аналізу Тадтап, в дренуючих лімфатичних вузлах (0І М) (А) і селезінці (В), виділених в кінці експерименту (описаного в прикладі 11) у мишей із пухлинами. "Р«0,05, "Р«0,01, и рР«О0,001.

І0064| На фігурах 5А-58 наведені результати щодо іп мімо ефективності антитіла до ГАЗ людини ("птпАбБ1") та антитіла до РО-1 людини (КЕСМ2810) щодо пухлин МСОСЗ8 (описано в прикладі 12). Фіг. БА. Показники середнього об'єму пухлини (мм3-5ЕМ) у кожній групі обробки в декількох моментах часу після імплантації пухлинних клітин. Дні обробки позначені стрілками.

Фіг. 58. Окремі показники об'єму пухлини у кожній групі відстежували протягом 24 днів.

Наведено число мишей без пухлини у кожній групі до дня 24. Фіг. БА-5В8. Групи обробки: тАб1 (антитіло до ПІ АСЗ) у концентрації 25 мг/кг (ш); КЕСМ2810 (антитіло до ПРО-1) у концентрації 10 мг/кг (А) та ізотипове контрольне антитіло людини у концентрації 25 мг/кг (е). 0065) На фігурах бА-6С наведені результати щодо іп мімо ефективності антитіла до ГАЗ людини ("тАбБ1") окремо і в комбінації з антитілом до РО-1 людини (КЕОМ2810) щодо пухлин

МСОЗ38 (описано в прикладі 13). Фіг. бА. Показники середнього об'єму пухлини (мм3-5ЕМ) у кожній групі обробки в декількох моментах часу після імплантації пухлинних клітин. Дні обробки позначені стрілками. Фіг. ЄВ. Окремі показники об'єму пухлини в кожній групі обробки вимірювали в день 22 після імплантації. Статистичну значущість визначали за допомогою однофакторного дисперсійного аналізу з апостеріорним критерієм Даннетта для множинного порівняння (750,057р«к0,01). Фігури бА-6В. Групи обробки: тАБі (антитіло до ПІ АСЗ) у 60 концентрації 25 мг/кг (9); КЕСМ2810 (антитіло до ПРО-1) у концентрації 10 мг/кг (ш); комбінація тАБІ (антитіла до ПГАСЗ3З) у концентрації 25 мг/кг і КЕСМ2810 (антитіла до ПРО-1) у концентрації 10 мг/кг (А); ізотипове контрольне антитіло людини у концентрації 25 мг/кг (е). Фіг. 6С. Відсоток виживаності без пухлини серед оброблених мишей. Статистичну значущість визначали за допомогою логарифмічного рангового критерію (Мантеля-Кокса) (""р«0,0001).

Групи обробки: тАБбі1 (антитіло до ПІ АС3) у концентрації 25 мг/кг (9); КЕСМ2810 (антитіло до

ПРО-1) у концентрації 10 мг/кг (Ж); комбінація тАбІ (антитіла до ПІ АСЗ) у концентрації 25 мг/кгі

КЕОСМ2810 (антитіла до ПРО-1) у концентрації 10 мг/кг (4); ізотипове контрольне антитіло людини у концентрації 25 мг/кг (ев). 0066) На фігурах 7А-7С наведені результати щодо іп мімо ефективності антитіла до ГАЗ людини ("пАБб1") окремо і в комбінації з антитілом до РО-1 людини (КЕСМ2810) щодо пухлин

МСЗ38 у першому експерименті (описаному в прикладі 14). Фіг. 7А. Показники середнього об'єму пухлини (мм3-5ЕМ) у кожній групі обробки в декількох моментах часу після імплантації пухлинних клітин. Дні обробки позначені стрілками. Фіг. 7В. Окремі показники об'єму пухлини в кожній групі обробки вимірювали в день 22 після імплантації. Статистичну значущість визначали за допомогою однофакторного дисперсійного аналізу з апостеріорним критерієм Даннетта для множинного порівняння ("р«0,05). фіг. 7С. Відсоток виживаності без пухлини серед оброблених мишей. Статистичну значущість визначали за допомогою логарифмічного рангового критерію (Мантеля-Кокса) Ср«0,0197). Групи обробки: тАбІ (антитіло до ПІ АСЗ) у концентрації 25 мг/кг (9); КЕСМ2810 (антитіло до ПРО-1) у концентрації 10 мг/кг (ФУКЕСМ2810 (антитіло до ПРО-1) у концентрації 1 мг/кг (4); комбінація тАБі (антитіла до ПГАСЗ3) у концентрації 25 мг/кг і

КЕСМ2810 (антитіла до ПРО-1) у концентрації 10 мг/кг (ш); комбінація тАБбІ (антитіла до ПІ АСЗ) у концентрації 25 мг/кгі КЕСМ2810 (антитіла до ПРО-1) у концентрації 1 мг/кг (Ж) та ізотипове контрольне антитіло людини у концентрації 25 мг/кг (е).

І0067| На фігурах 8А-8С наведені результати щодо іп мімо ефективності антитіла до ГАЗ людини ("пАБб1") окремо і в комбінації з антитілом до РО-1 людини (КЕСМ2810) щодо пухлин

МСЗ38 у другому експерименті (описаному в прикладі 14). Фіг. ЗА. Показники середнього об'єму пухлини (мм3-5ЕМ) у кожній групі обробки в декількох моментах часу після імплантації пухлинних клітин. Дні обробки позначені стрілками. Статистичну значущість визначали за допомогою двофакторного дисперсійного аналізу з апостеріорним критерієм Даннетта для множинного порівняння ("р«е0,05). Фіг. 88. Окремі показники об'єму пухлини у кожній групі обробки, виміряні в день 23 після імплантації. Статистичну значущість визначали за допомогою однофакторного дисперсійного аналізу з апостеріорним критерієм Даннетта для множинного порівняння ("р«е0,01). Фіг. 8С. Відсоток виживаності без пухлини серед оброблених мишей.

Статистичну значущість визначали за допомогою логарифмічного рангового критерію (Мантеля-

Кокса) з поправкою Бонфероні для множинних порівнянь (""р«0,001, ""р«0,01). Групи обробки: тТАБбБІ (антитіло до ПІ АС3З) у концентрації 25 мг/кг (9); тАБбІ1 (антитіло до ПІ АСЗ) у концентрації 5 мг/кг (Ф); КЕСМ2810 (антитіло до ПРО-1) у концентрації 10 мг/кг (А); комбінація тАбБ1 (антитіла до ПІ АСЗ) у концентрації 25 мг/кг і КЕСМ2810 (антитіла до пРО-1) у концентрації 10 мг/кг (ш); комбінація тА (антитіла до ПІ АСЗ) у концентрації 5 мг/кгі КЕСМ2810 (антитіла до

ПРО-1) у концентрації 10 мг/кг (Ж) та ізотипове контрольне антитіло людини у концентрації 25 мг/кг (в).

ІОО68І На фіг. 9 наведені показники середнього об'єму пухлини (мм3-5ЕМ) у кожній групі обробки в декількох моментах часу після імплантації пухлинних клітин в експерименті для оцінки ефективності антитіла до | АОЗ людини ("пАбБ1") окремо і в комбінації з антитілом до РО- 1 людини (КЕСМ2810) щодо пухлин МОСЗ8, що розвинулися (описано в прикладі 15 у даному документі). Дні обробки позначені стрілками.

І0О69І| На фіг. 10 наведені окремі показники об'єму пухлини у кожній групі обробки, виміряні в день 22 після імплантації в експерименті, описаному в прикладі 15. Статистичну значущість визначали за допомогою однофакторного дисперсійного аналізу з апостеріорним критерієм

Даннетта для множинного порівняння. 0070 На фіг. 11 показаний відсоток виживаності без пухлини серед оброблених мишей в експерименті, описаному в прикладі 15 у даному документі. Статистичну значущість визначали за допомогою логарифмічного рангового критерію (Мантеля-Кокса) з поправкою Бонфероні для множинних порівнянь ("ра«б0,01).

І0071| На фіг. 12 наведений графік залежності середніх (4503) концентрацій функціонального тАБІ у сироватці крові від часу після одноразової внутрішньовенної інфузії тАбБі! у самиці яванського макаки (описано в прикладі 16).

Докладне розкриття даного винаходу

І0072| Перед тим, як будуть описані способи за даним винаходом, слід розуміти, що даний бо винахід не обмежений конкретними описаними способами та умовами проведення експериментів, оскільки такі способи та умови можуть відрізнятися. Також слід розуміти, що застосовувана в даному документі термінологія призначена тільки для опису конкретних варіантів здійснення, та не призначена для обмеження, оскільки обсяг даного винаходу буде обмежуватися тільки доданою формулою винаходу.

Ї0073| Якщо не зазначено інше, всі застосовувані в даному документі технічні та наукові терміни мають те саме значення, яке зазвичай є зрозумілим середньому фахівцю в даній галузі, до якої належить даний винахід. Хоча для реалізації на практиці або тестування даного винаходу можна застосовувати будь-які способи та матеріали, подібні або еквівалентні таким, що описані в даному документі, переважними є способи та матеріали, описані в даному документі. Всі згадувані в даному документі публікації включені в даний документ за допомогою посилання у всій своїй повноті. 00741 Термін "АСЗ" стосується білка, кодованого геном-3 активації лімфоцитів, рецептора, що є частиною "імунологічної контрольної точки", або коінгібітора Т-клітини, також відомого як

Сб0р223. Амінокислотна послідовність повнорозмірного ГАСЗ представлена в СепВапкК під номером доступу МР 002277.4, і також в даному документі зазначена як 5ЕО ІО МО: 582.

Термін " АСЗ3" також включає варіанти білка | АСЗ з амінокислотною послідовністю 5ЕО ІЮ МО: 574, 575 або 576. Термін ""САб3" включає рекомбінантний (АСЗ або його фрагмент. Термін також охоплює ГАЗ або його фрагмент, з'єднані, наприклад, з гістидиновою міткою, Ес миші або людини або сигнальною послідовністю, наприклад, КОК1. Наприклад, термін включає послідовності, прикладом яких є 5ЗЕО ІО МО: 575, яка містить на С-кінці Ес миші (тідсга), приєднаний до амінокислотних залишків 29-450 повнорозмірного ГАС3. Варіанти білка, прикладом яких є 5ЕО ІО МО: 574, містять на С-кінці гістидинову мітку, приєднану до амінокислотних залишків 29-450 повнорозмірного | АОсЗ. Термін " АС3" означає ГАЗ людини, якщо не зазначено, що він походить з виду, відмінного від людини.

Ї0075|1 АСЗ є представником суперродини імуноглобулінів (9). ГАСЗ являє собою трансмембранний білок 1 типу довжиною 503 амінокислоти з чотирма позаклітинними Ід- подібними доменами 01-04, і він експресується на поверхні активованих Т-клітин, природних клітин-кілерів, В-клітин, плазмоцитоїдних дендритних клітин і регуляторних Т-клітин. Рецептор

Г АОЗ зв'язується з молекулами МН класу ІІ, присутніми на поверхні антиген-презентувальних клітин (АРС). 0076) У контексті даного документа термін "коінгібітор Т-клітини" стосується ліганду та/або рецептора, який модулює імунну відповідь шляхом активації або супресії Т-клітини. Термін "коінгібітор Т-клітини", також відомий як косигнальна молекула Т-клітин, включає без обмеження білок-1 запрограмованої смерті клітин (РО-1), антиген-4 цитотоксичних Т-лімфоцитів (СТІ А-4),

В- ї Т-лімфоцитарний атенюатор (ВТ А), СО-28, 284, І У108, Т-клітинну молекулу-3, яка містить імуноглобуліновий домен і домен муцину (ТІМ3), Т-клітинний імунорецептор "з імуноглобуліновими та ІТІМ-доменами (ТІСІТ; також відомий як М5ІС9), асоційований з лейкоцитами імуноглобулін-подібний рецептор-1 (ГАЇІК1; також відомий як СОЗ305), індуковний костимулятор Т-клітин (СбО5; також відомий як СО278), супресор активації Т-клітин, який містить У-Ід-домен (МІ5ТА) і СО160.

Ї0077| Передбачається, що в контексті даного документа термін "антитіло" стосується молекул імуноглобулінів, які складаються з чотирьох поліпептидних ланцюгів, двох важких (Н) ланцюгів і двох легких (І) ланцюгів, з'єднаних один із одним дисульфідними зв'язками (тобто "молекули повних антитіл"), а також їхніх мультимерів (наприклад, І9М) або їхніх антигензв'язувальних фрагментів. Кожний важкий ланцюг складається з варіабельної ділянки важкого ланцюга ("НСМК" або "Мн") і константної ділянки важкого ланцюга (що складається з доменів Сні, Сн2 і Сн3). Кожний легкий ланцюг складається з варіабельної ділянки легкого ланцюга (СМ або "Мі") і константної ділянки легкого ланцюга (Сі). Мн- і Мі-ділянки додатково можуть бути розділені на гіперваріабельні ділянки, які називаються ділянками, що визначають комплементарність (СОК), які перемежовуються з ділянками, що є більше консервативними, які називаються каркасними ділянками (ЕК). Кожний Мн і Мі складається з трьох СОК і чотирьох ЕК, розташованих, від аміно-кінця до карбокси-кінця, в наступному порядку: ЕКТ, СОКІ1, ЕК2, СОК2,

ЕКЗ, СОКЗ, ЕК4. Згідно з певними варіантами здійснення даного винаходу ЕЕ. антитіла (або його антигензв'язувального фрагмента) можуть бути ідентичними послідовностям зародкової лінії людини або можуть бути природним або штучним чином модифіковані. Амінокислотну консенсусну послідовність можна визначати на основі порівняльного аналізу двох або більше

СО. 0078) Також можливе здійснення заміни одного або декількох залишків СОК або видалення одного або декількох залишків СОМ. У науковій літературі були описані антитіла, в яких для 60 можливості зв'язування можна обійтися без однієї або двох СОК. Радіап еї аї. (1995 РАБЕВ 3.

9:133-139) проаналізували ділянки контакту антитіл з їхніми антигенами грунтуючись на опублікованих даних щодо кристалічних структур і зробили висновок, що в дійсності тільки від приблизно однієї п'ятої до однієї третьої частки залишків СОК контактують з антигеном. Згідно з працею Радіап, також було виявлено безліч антитіл, в яких одна або дві СОК не містили амінокислот, які контактують з антигеном (див. також Ма)доз еї аІ. 2002 У Мої Віо! 320:415-428).

Ї0079| Залишки СОЖК, які не контактують з антигеном, можуть бути ідентифіковані з урахуванням попередніх досліджень (наприклад, залишки НбО-Нб5 в СОКН2 часто не є необхідними), на основі ділянок СОК за Кабаї, що знаходяться за межами СОК за СпПоїпіа, за допомогою молекулярного моделювання та/або експериментальним шляхом. Якщо СОК або її залишок(-ки) видалені, їх, як правило, заміняють амінокислотою, яка займає відповідне положення в інший послідовності антитіла людини, або консенсусом таких послідовностей.

Положення в межах СОК, щодо яких будуть виконані заміни, і амінокислоти для заміни також можна вибирати експериментально. Експериментальні заміни можуть являти собою консервативні або неконсервативні заміни.

І0О80| Розкриті в даному документі повністю людські моноклональні антитіла до ГАЗ порівняно з відповідними послідовностями зародкової лінії можуть передбачати одну або декілька амінокислотних замін, вставок та/(або делецій у каркасних та/або СОК-ділянках варіабельних доменів важкого і легкого ланцюгів. Такі мутації легко можуть бути встановлені шляхом порівняння розкритих у даному документі амінокислотних послідовностей із послідовностями зародкової лінії, доступними, наприклад, із загальнодоступних баз даних послідовностей антитіл. Даний винахід включає антитіла та їхні антигензв'язувальні фрагменти, які походять із будь-якої з розкритих у даному документі амінокислотних послідовностей, де одну або декілька амінокислот в межах однієї або декількох каркасних та/"або СОК-ділянок піддають мутації з заміною на відповідний(-ї) залишок(-ки) послідовності зародкової лінії, з якої походить антитіло, або відповідний(-ї) залишок(-ки) іншої послідовності зародкової лінії, або підлягають консервативній амінокислотній заміні відповідного(-их) залишку(-ів) зародкової лінії (такі зміни щодо послідовності в даному документі разом називають "гермінативними мутаціями"). Фахівець у даній галузі, базуючись на розкритих у даному документі послідовностях варіабельних ділянок важкого і легкого ланцюгів, легко зможе одержати велику кількість антитіл та антигензв'язувальних фрагментів, які передбачають одну або декілька окремих гермінативних мутацій або їх комбінації. Згідно з певними варіантами здійснення всі із залишків каркасних тал"або СОК-ділянок в межах Мн- та/або Мі-доменів піддають зворотній мутації до залишків, які виявляють у вихідній послідовності зародкової лінії, з якої походить антитіло. Згідно з іншими варіантами здійснення тільки певні залишки піддають зворотній мутації до вихідної послідовності зародкової лінії, наприклад, тільки піддані мутації залишки, які виявляють в межах 8 амінокислот ЕК! або в межах останніх 8 амінокислот ЕК4, або тільки піддані мутації залишки, які виявляють в межах СОК!І, СОК2 або СОКЗ. Згідно з іншими варіантами здійснення один або декілька із залишків каркасних талабо СОК-ділянок піддають мутації з заміною на відповідний(-ї) залишок(-ки) іншої послідовності зародкової лінії (тобто послідовності зародкової лінії, яка відрізняється від послідовності зародкової лінії, з якої від самого початку походить антитіло). Крім того, антитіла за даним винаходом можуть передбачати будь-яку комбінацію двох або більше гермінативних мутацій в межах каркасних та/або СОК-ділянок, наприклад, де певні окремі залишки піддають мутації з заміною на відповідний залишок конкретної послідовності зародкової лінії, тоді як певні інші залишки, які відрізняються від таких у вихідній послідовності зародкової лінії, зберігаються, або їх піддають мутації з заміною на відповідний залишок іншої послідовності зародкової лінії. Після одержання антитіла та антигензв'язувальні фрагменти, які передбачають одну або декілька гермінативних мутацій, можна легко піддавати тестуванню щодо однієї або декількох необхідних властивостей, таких як покращена специфічність зв'язування, підвищена афінність зв'язування, покращені або посилені антагоністичні або агоністичні біологічні властивості (у відповідних випадках), знижена імуногенність тощо. Антитіла та антигензв'язувальні фрагменти, одержані таким загальним способом, охоплені обсягом даного винаходу.

ІОО81| Даний винахід також включає повністю людські моноклональні антитіла до І АСЗ, які містять варіанти будь-яких із розкритих у даному документі амінокислотних послідовностей

НСМК, ГСМК та/або СОК з однією або декількома консервативними замінами. Наприклад, даний винахід включає антитіла до І АС3, які містять амінокислотні послідовності НСУК, СУК та/або СОК, наприклад, з 10 або менше, 8 або менше, б або менше, 4 або менше тощо консервативними амінокислотними замінами порівняно з будь-якими з розкритих у даному документі амінокислотних послідовностей НСМК, І СУК та/або СОК. 60 І0082| Передбачається, що в контексті даного документа термін "антитіло людини" включає антитіла з варіабельними та константними ділянками, які походять із послідовностей імуноглобулінів зародкової лінії людини. тАб людини за даним винаходом можуть містити амінокислотні залишки, які не кодуються послідовностями імуноглобулінів зародкової лінії людини (наприклад, внаслідок мутацій, введених шляхом випадкового або сайт-специфічного мутагенезу іп міго або внаслідок соматичної мутації іп мімо), наприклад, в СОК і, зокрема, СОКЗ.

Проте передбачається, що в контексті даного документа термін "антитіло людини" не включає

ТАБ, в яких послідовності СОК, які походять із зародкової лінії іншого виду ссавців (наприклад, миші), були прищеплені на послідовності ЕК людини. Термін включає антитіла, одержані рекомбінантним шляхом у відмінного від людини ссавця або в клітинах відмінного від людини ссавця. Передбачається, що термін не включає антитіла, які виробляються в організмі суб'єкта- людини, або взяті з нього. 0083) Термін "рекомбінантний" у контексті даного документа стосується антитіл або їхніх антигензв'язувальних фрагментів за даним винаходом, створеним, експресованим, виділеним або одержаним за допомогою відомих у даній галузі технологій або способів, таких як технологія рекомбінантних ДНК, які включають, наприклад, сплайсинг ДНК і трансгенну експресію. Термін стосується антитіл, експресованих у системі експресії із застосуванням відмінного від людини ссавця (включаючи трансгенних відмінних від людини ссавців, наприклад, трансгенних мишей) або клітин (наприклад, клітин СНО), або виділених із рекомбінантної комбінаторної бібліотеки антитіл людини. 0084) Термін "поліспецифічні антигензв'язувальні молекули" у контексті даного документа стосується біспецифічних, триспецифічних або поліспецифічних антигензв'язувальних молекул та їхніх антигензв'язувальних фрагментів. Поліспецифічні антигензв'язувальні молекули можуть бути специфічними щодо різних епітопів одного цільового поліпептиду або можуть містити антигензв'язувальні домени, специфічні щодо епітопів більше ніж одного цільового поліпептиду.

Поліспецифічна антигензв'язувальна молекула може являти собою один поліфункціональний поліпептид, або вона може являти собою мультимерний комплекс із двох або більше поліпептидів, які ковалентно або нековалентно зв'язані один із одним. Термін "поліспецифічні антигензв'язувальні молекули" включає антитіла за даним винаходом, які можуть бути коекспресовані з іншою функціональною молекулою, або можуть бути з'єднані з нею, наприклад, з іншим пептидом або білком. Наприклад, антитіло або його фрагмент можуть бути функціонально зв'язані (наприклад, шляхом хімічного з'єднання, сплайсингу, нековалентного зв'язування або іншим чином) з однією або декількома іншими сполуками, такими як білок або його фрагмент, з утворенням біспецифічної або поліспецифічної антигензв'язувальної молекули із другою специфічністю зв'язування. Відповідно до даного винаходу термін "поліспецифічні антигензв'язувальні молекули" також включає біспецифічні, триспецифічні або поліспецифічні антитіла або їхні антигензв'язувальні фрагменти. Згідно з певними варіантами здійснення антитіло за даним винаходом функціонально зв'язано з іншим оантитілом або його антигензв'язувальним фрагментом з утворенням біспецифічного антитіла із другою специфічністю зв'язування. Біспецифічні та поліспецифічні антитіла за даним винаходом описані в іншому місці даного документа. 0085) Термін "специфічно зв'язує" або "специфічно зв'язується з" і таке інше означає, що антитіло або його антигензв'язувальний фрагмент утворюють з антигеном комплекс, який є відносно стабільним за фізіологічних умов. Специфічне зв'язування може характеризуватися рівноважною константою дисоціації щонайменше приблизно 1х109 М або менше (наприклад, менше значення Ко означає сильніше зв'язування). Способи визначення того, чи відбувається специфічне зв'язування двох молекул, добре відомі в даній галузі, і вони включають, наприклад, рівноважний діаліз, метод поверхневого плазмонного резонансу тощо. Як описано в даному документі, антитіла, які специфічно зв'язуються з ГАСЗ3, були ідентифіковані за допомогою методу поверхневого плазмонного резонансу, наприклад, у рамках системи ВІАСОКЕ "М. Крім того, при цьому поліспецифічні антитіла, які зв'язуються з одним доменом ГАСЗ і одним або декількома додатковими антигенами, або біспецифічні антитіла, які зв'язуються з двома різними ділянками ГАЗ, у контексті даного документа вважаються антитілами, які "специфічно зв'язують".

І0086| Термін "високоафінне антитіло" стосується таких тАр, які характеризуються афінністю зв'язування до І АСЗ, вираженою у Ко, яка становить щонайменше 103 М; переважно 109 М; більш переважно 1079 М, ще більш переважно 10-! М, ще більш переважно 10-12 М, як виміряно за допомогою методу поверхневого плазмонного резонансу, наприклад, в рамках системи ВІАСОКЕ "М, або ЕГІ5А з визначенням афінності у розчині.

І0087| Під терміном "низька швидкість дисоціації", "Кой" або "Ка" мають на увазі антитіло, 60 яке дисоціює від ГАСЗ із константою швидкості 1 х 103 с" або менше, переважно 1 х 107с7 або менше, як виміряно за допомогою методу поверхневого плазмонного резонансу, наприклад, в рамках системи ВІАСОКЕ "М.

І0088)| Терміни "антигензв'язувальна частина" антитіла, "антигензв'язувальний фрагмент" антитіла і таке інше у контексті даного документа включають будь-який поліпептид або глікопротеїн, який зустрічається в природі, одержуваний ферментативним шляхом, синтетичний або одержаний за допомогою методів генної інженерії поліпептид або глікопротеїн, який специфічно зв'язує антиген з утворенням комплексу. Терміни "антигензв'язувальний фрагмент" антитіла або "фрагмент антитіла" у контексті даного документа стосуються одного або декількох фрагментів антитіла, які зберігають здатність зв'язуватися з | АС3. 0089 Згідно з конкретними варіантами здійснення антитіло або фрагменти антитіла за даним винаходом можуть бути кон'юговані зі сполукою, такою як ліганд, або терапевтичною сполукою (імунокон'югат"), такою як цитотоксин, другим антитілом до ГАС3З, антитілом до пухлиноспецифічного антигену, протипухлинним лікарським засобом або будь-якою іншою терапевтичною сполукою, придатною для лікування захворювання або стану, включаючи злоякісну пухлину або вірусну інфекцію, зокрема хронічну вірусну інфекцію.

Ї0090| Передбачається, що у контексті даного документа "виділене антитіло" стосується антитіла, яке практично не містить інших антитіл (АБ) з іншими типами антигенної специфічності (наприклад, виділене антитіло, яке специфічно зв'язує І АСЗ, або його фрагмент, практично не містить АБ, які специфічно зв'язують антигени, відмінні від І АС3).

Ї0091| Передбачається, що у контексті даного документа "блокуюче антитіло" або "нейтралізуюче антитіло" (або "антитіло, яке нейтралізує активність Г(АСЗ3З" або "антитіло- антагоніст") стосується антитіла, зв'язування з ГАЗ якого приводить до інгібування щонайменше одного типу біологічної активності | АС3. Наприклад, антитіло за даним винаходом може запобігати або блокувати зв'язування І АСЗ з МНС класу ІІ.

І0092| Передбачається, що у контексті даного документа "активуюче антитіло" або "посилююче антитіло" (або "антитіло-агоніст") стосується антитіла, зв'язування з | АСЗ якого приводить до підвищення або стимулювання щонайменше одного типу біологічної активності

ГАЗ. Наприклад, антитіло за даним винаходом може підвищувати ступінь зв'язування І АСЗ з

МНС класу ІІ. 0093) Термін "поверхневий плазмонний резонанс" у контексті даного документа стосується оптичного явища, яке дозволяє аналізувати взаємодії біологічних молекул в режимі реального часу шляхом виявлення змін концентрацій білків на матриці у вигляді біосенсора, наприклад, із застосуванням системи ВІАСОКЕ М (Рпаптасіа Віозепзог АВ, Уппсала, Швеція, і Піскатауей,

Нью-Джерсі). 0094) Передбачається, що у контексті даного документа термін "Ко" стосується рівноважної константи дисоціації конкретної взаємодії антитіло-антиген. 0095) Термін "епітоп" стосується антигенної детермінанти, яка взаємодіє зі специфічним антигензв'язувальним центром в межах варіабельної ділянки молекули антитіла, відомим як паратоп. Один антиген може мати більше ніж один епітоп. Таким чином, різні антитіла можуть зв'язуватися з різними ділянками антигену і можуть чинити різні біологічні ефекти. Термін "епітоп" також стосується ділянки на антигені, на який реагують В- та/або Т-клітини. Він також стосується ділянки антигену, яку зв'язує антитіло. Епітопи можуть бути визначені як структурні або функціональні. Функціональні епітопи зазвичай являють собою різновид структурних епітопів, і містять такі залишки, які безпосередньо впливають на афінність взаємодії. Епітопи також можуть бути конформаційними, тобто такими, які складаються з нелінійних амінокислот.

Згідно з певними варіантами здійснення епітопи можуть включати детермінанти, які являють собою хімічно активні групи на поверхні молекул, такі як амінокислоти, бічні ланцюги з цукрів, фосфорильні групи або сульфонільні групи, і, згідно з певними варіантами здійснення, можуть володіти специфічними характеристиками тривимірної структури та/або специфічними характеристиками заряду. 0096) Термін "перехресно конкурує" у контексті даного документа означає, що антитіло або його антигензв'язувальний фрагмент зв'язуються з антигеном та інгібують або блокують зв'язування іншого антитіла або його антигензв'язувального фрагмента. Термін також включає конкуренцію між двома антитілами в обох напрямках, тобто перше антитіло зв'язується і блокує зв'язування іншого антитіла, і навпаки. Згідно з певними варіантами здійснення перше антитіло і друге антитіло можуть зв'язуватися з одним і тим же самим епітопом. Як альтернатива, перше і друге антитіла можуть зв'язуватися з різними, але не такими, які перекриваються, епітопами таким чином, що зв'язування одного антитіла інгібує або блокує зв'язування іншого антитіла, наприклад, завдяки стеричній невідповідності. Перехресну конкуренцію між антитілами можна 60 виміряти за допомогою відомих у даній галузі способів, наприклад, інтерферометричного аналізу біошару в режимі реального часу без застосування мітки. Перехресна конкуренція між двома антитілами може бути виражена як зв'язування другого антитіла, показник якого менше фонового сигналу внаслідок самозв'язування (де перше і друге антитіла є одним і тим самим антитілом). Перехресна конкуренція між 2 антитілами може бути виражена, наприклад, як 90 зв'язування другого антитіла, показник якого менше вихідного фонового сигналу внаслідок самозв'язування (де перше і друге антитіла є одним і тим самим антитілом).

Ї0097| Термін "значний ступінь ідентичності" або "в значному ступені ідентичний", коли йдеться про нуклеїнову кислоту або її фрагмент, означає, що за оптимального вирівнювання, з відповідними нуклеотидними вставками або делеціями, з іншою нуклеїновою кислотою (або її комплементарною ниткою), існує ідентичність нуклеотидних послідовностей щонайменше за приблизно 9095 і більш переважно щонайменше за приблизно 9595, 9695, 9795, 9895 або 9995 нуклеотидними основами, як виміряно за допомогою будь-якого добре відомого алгоритму визначення ідентичності послідовностей, як обговорюється нижче. Молекула нуклеїнової кислоти, яка характеризується значним ступенем ідентичності з еталонною молекулою нуклеїнової кислоти, може, у певних випадках, кодувати поліпептид із аналогічною або в значному ступені подібною амінокислотною послідовністю, що й поліпептид, який кодується еталонною молекулою нуклеїнової кислоти. 0098) Ідентичність послідовностей можна розрахувати із застосуванням алгоритму, наприклад, алгоритму за Нідлманом-Вуншем (Меедіетап апа УМипвсй 1970, 9. Мої. Віої. 48. 443- 453) для глобального вирівнювання або алгоритму за Смітом-Уотерманом (Зтіїй апа Ууаї(ептап 1981, 9У. Мої. Віої. 147: 195-197) для локального вирівнювання. Інший переважний алгоритм описаний ЮОшїтезпе еї ан у Маїшге Віоїесппоїоду у 2002 році (том 20, стор. 1269-71), і він використовується в пакеті програм СепеРА5Т (50 І Ме 5сіепсев, Іпс., Бостон, Массачусетс).

Ї0099| Щодо поліпептидів термін "значна подібність" або "в значному ступені подібний" означає, що дві пептидні послідовності, за оптимального вирівнювання, наприклад, за допомогою програм САР або ВЕ5ТРЇТ із застосуванням стандартних штрафів за відкриття гепа, характеризуються щонайменше 9095 ідентичністю послідовностей, ще більш переважно щонайменше 9595, 9895 або 9995 ідентичністю послідовностей. Переважно положення залишків, які не є ідентичними, відрізняються консервативними амінокислотними замінами. "Консервативна амінокислотна заміна" являє собою заміну, за якої амінокислотний залишок замінюється на інший амінокислотний залишок з бічним ланцюгом (К-група) із подібними хімічними властивостями (наприклад, зарядом або гідрофобністю). У цілому консервативна амінокислотна заміна не буде суттєво змінювати функціональні властивості білка. У випадках, коли дві або більше амінокислотних послідовностей відрізняються одна від одної консервативними замінами, відсоток або ступінь подібності можуть бути збільшені із внесенням поправки на консервативну природу заміни. Способи внесення такої поправки добре відомі фахівцю у даній галузі. Див., наприклад, Реагзоп (1994) Меїйпод5 Мої. ВіоїЇ. 24: 307-331, яка включена в даний документ за допомогою посилання. Приклади груп амінокислот, які мають бічні ланцюги із подібними хімічними властивостями, включають 1) аліфатичні бічні ланцюги: гліцин, аланін, валін, лейцин і ізолейцин; 2) аліфатичні бічні ланцюги з гідроксильною групою: серин і треонін; 3) амідвмісні бічні ланцюги: аспарагін і глутамін; 4) ароматичні бічні ланцюги: фенілаланін, тирозин і триптофан; 5) основні бічні ланцюги: лізин, аргінін і гістидин; 6) кислі бічні ланцюги: аспартат і глутамат, і 7) сірковмісні бічні ланцюги: цистеїн і метіонін. Переважними групами для консервативних амінокислотних замін є: валін-лейцин-ізолейцин, фенілаланін- тирозин, лізин-аргінін, аланін-валін, глутамат-аспартат і аспарагін-глутамін. Як альтернатива, консервативне заміщення являє собою будь-яку зміну із позитивним значенням у логарифмічній таблиці ймовірностей РАМ250О, розкритій у Соппеї єї аї. (1992) Зсіепсе 256: 1443 45, включеній у даний документ за допомогою посилання. "Помірно консервативне" заміщення являє собою будь-яку зміну із ненегативним значенням у логарифмічній таблиці ймовірностей РАМ250О. 00100) Подібність послідовностей для поліпептидів, як правило, визначають (із застосуванням програмного забезпечення для аналізу послідовностей. Програмне забезпечення для аналізу білків дозволяє зіставляти подібні послідовності за допомогою визначення подібності з урахуванням різних замін, делецій та інших модифікацій, включаючи консервативні амінокислотні заміни. Наприклад, програмне забезпечення ССО містить програми, такі як САР ії ВЕ5ТРЇІТ, які можна застосовувати з використанням параметрів за замовчуванням для визначення гомології послідовностей або ідентичності послідовностей між спорідненими поліпептидами, такими як гомологічні поліпептиди з різних видів організмів, або між білком дикого типу і його мутантним варіантом. Див., наприклад, СО версії 6.1.

Поліпептидні послідовності також можна порівнювати із застосуванням ЕА5ТА з використанням 60 параметрів за замовчуванням або рекомендованих параметрів; програма в СО версії 6.1.

ЕАБТА (наприклад, РАБТА2 і ЕАБТАЗ) забезпечує вирівнювання і відсоток ідентичності послідовностей ділянок найкращого перекривання між заданими і шуканими послідовностями (Реагзоп (2000), вище). Іншим переважним алгоритмом у випадку порівняння послідовності за даним винаходом із базою даних, що містить безліч послідовностей із різних організмів, є комп'ютерна програма ВІ А5Т, зокрема, ВІ А5ТР або ТВІ АЗТМ, із застосуванням параметрів за замовчуванням. Див., наприклад, АїЇї5спиі еї аї. (1990) У. Мої. Віо!І. 215: 403-410 ї (1997) Мисівїс

Асіа5х Рез. 25:3389-3402, кожна з яких включена в даний документ за допомогою посилання.

ІЇ00101| Під фразою "терапевтично ефективна кількість" мають на увазі кількість, яка забезпечує необхідний ефект, для досягнення якого її вводять. Точна кількість буде залежати від мети лікування, і буде встановлена фахівцем у даній галузі із застосуванням відомих методик (див., наприклад, ІП оуд (1999) Те Ап, Зсіепсе апа Тесппоіоду ої РПНагтасеціїса!

Сотроипаїпа).

Ї00102|У контексті даного документа термін "суб'єкт" стосується тварини, переважно ссавця, який потребує ослаблення, попередження та/або лікування захворювання або порушення, такого як вірусна інфекція або злоякісна пухлина. Термін включає суб'єктів-людей, які мають ризик розвитку, або у яких спостерігають злоякісну пухлину, метастатичну злоякісну пухлину або вірусну інфекцію. 00103) У контексті даного документа "протипухлинний лікарський засіб" означає будь-який засіб, придатний для лікування, або ослаблення, або інгібування росту злоякісної пухлини, включаючи без обмеження цитотоксини і такі засоби, як антиметаболіти, алкілувальні засоби, антрацикліни, антибіотики, антимітотичні засоби, прокарбазин, гідроксисечовина, аспарагіназа, кортикостероїди, циклофосфамід, мітотан (О,Р'-Ю0О0)), біологічні препарати (наприклад, антитіла та інтерферони) і радіоактивні речовини. У контексті даного документа "цитотоксин або цитотоксичний засіб" також стосується хіміотерапевтичного засобу, і означає будь-який засіб, який є згубним для клітин. Приклади включають Тахої? (паклітаксел), темозоломід, цитохалазин

В, граміцидин О, бромистий етидій, еметин, цисплатин, мітоміцин, етопозид, тенопозид, вінкристин, вінбластин, колхіцин, доксорубіцин, даунорубіцин, дигідроксиантрациндіон, мітоксантрон, мітраміцин, актиноміцин О, 1-дигідротестостерон, глюкокортикоїди, прокаїн, тетракаїн, лідокаїн, пропранолол і пуроміцин та їх аналоги або гомологи.

Ї00104|У контексті даного документа термін "противірусний лікарський засіб" стосується будь-якого лікарського засобу або терапевтичного препарату, застосовуваного для лікування, попередження або ослаблення вірусної інфекції у суб'єкта-хазяїна. Термін "противірусний лікарський засіб" включає без обмеження зидовудин, ламівудин, абакавір, рибавірин, лопінавір, ефавіренз, кобіцистат, тенофовір, рілпівірин, анальгетики і кортикостероїди. У контексті даного винаходу вірусні інфекції включають довготривалі або хронічні інфекції, викликані вірусами, включаючи без обмеження вірус імунодефіциту людини (НІМ), вірус гепатиту В (НВМ), вірус гепатиту С (НС), вірус папіломи людини (НРУ), вірус лімфоцитарного хоріоменінгіту (-СМУ) та вірус імунодефіциту мавп (51М).

Ї00105|У контексті даного документа термін "посилювати імунну відповідь" стосується підвищення активності імунної клітини, такої як Т-клітина або МК-клітина, щодо пухлинної клітини або інфікованої вірусом клітини. У контексті даного винаходу термін включає блокування опосередкованого І АСЗ інгібування активності Т-клітин або відновлення активності або обернення стану виснаження Т-клітин. Він також включає інгібування активності регуляторних Т-клітин. Посилена імунна відповідь у контексті даного винаходу приводить до підвищеного ступеня знищення пухлинних клітин та/або інгібування росту пухлини.

І00106| Антитіла та антигензв'язувальні фрагменти за даним винаходом специфічно зв'язуються з ГАСЗ і посилюють активацію Т-клітин. Антитіла до ГАСЗ можуть зв'язуватися з

Г АСЗ із високою афінністю або із низькою афінністю. Згідно з певними варіантами здійснення антитіла за даним винаходом можуть являти собою блокуючі антитіла, де антитіла можуть зв'язуватися з І АСЗ та інгібувати передачу сигналу з участю І АС3. Згідно з деякими варіантами здійснення антитіла за даним винаходом блокують зв'язування (АСЗ з МНС класу І! та/або стимулюють або посилюють активацію Т-клітин. Згідно з деякими варіантами здійснення антитіла зв'язуються з І АСЗ і забезпечують обернення анергічного стану виснажених Т-клітин.

Згідно з певними варіантами здійснення антитіла зв'язуються з | АСЗ та інгібують активність регуляторних Т-клітин. Згідно з деякими варіантами здійснення антитіла можуть бути придатними для стимулювання або посилення імунної відповіді та/або для лікування суб'єкта, який страждає від злоякісної пухлини або вірусної інфекції. Антитіла, у випадку введення суб'єкту, який потребує цього, можуть забезпечувати пригнічення у суб'єкта хронічної інфекції, викликаної вірусом, таким як НІМ, ГСММ або НВУ. Їх можна застосовувати для інгібування росту 60 пухлинних клітин у суб'єкта. Їх можна застосовувати як монотерапію або як допоміжну терапію разом із іншими терапевтичними сполуками або способами, відомими у даній галузі для лікування злоякісної пухлини або вірусної інфекції.

Ї00107| Згідно з певними варіантами здійснення антитіла до (АСЗ можуть являти собою поліспецифічні антигензв'язувальні молекули, причому вони передбачають першу специфічність зв'язування щодо ГАЗ і другу специфічність зв'язування щодо антигену, вибраного з групи, що складається з іншого коінгібітора Т-клітини та іншого епітопа І АС3. 00108) Для одержання антитіл до | АБЗ можна застосовувати імуноген, який передбачає будь-яке із наведеного нижче. Згідно з певними варіантами здійснення антитіла за даним винаходом одержують від мишей, імунізованих повнорозмірним нативним ГАСЗ (див. номер доступу в МСВІ МР 002277.43 (5БО ІЮО МО: 582) або рекомбінантним пептидом ГАС3. Як альтернатива, (АСЗ або його фрагмент можна одержувати із застосуванням стандартних біохімічних методів і модифікувати (ЗЕО ІЮ МО: 574-576), і застосовувати як імуноген. 001091 Згідно з певними варіантами здійснення імуноген являє собою один або декілька позаклітинних доменів (ГАЗ. Згідно з одним варіантом здійснення даного винаходу імуноген являє собою фрагмент ГАЗ, який знаходиться в межах приблизно амінокислотних залишків 29-450 5ЕО І МО: 582.

ЇО0О110| Згідно з деякими варіантами здійснення імуноген може являти собою рекомбінантний пептид ГАС3, експресований у Е. соїї або в інших клітинах еукаріот або ссавців, таких як клітини яєчника китайського хом'ячка (СНО).

Ї00111| Згідно з певними варіантами здійснення антитіла, які специфічно зв'язуються з

ГАЗ, можна одержувати із застосуванням фрагментів зазначених вище ділянок або пептидів, які виступають за межі визначених ділянок на від приблизно 5 до приблизно 20 амінокислотних залишків від кожного, або від обидвох М- або С-кінця ділянок, описаних у даному документі.

Згідно з певними варіантами здійснення для одержання ГАСЗ-специфічних антитіл можна застосовувати будь-яку комбінацію зазначених вище ділянок або їхніх фрагментів. 00112) Пептиди можна модифікувати для включення додавання або заміни певних залишків для введення мітки або з метою кон'югування з молекулами-носіями, наприклад, КІН.

Наприклад, або до М-кінця, або до С-кінця пептиду можна додавати цистеїн, або можна додавати лінкерну послідовність з метою одержання пептиду для кон'югування, наприклад, з

КІН, для імунізації.

Ї00113| Певні антитіла до ГАСЗ за даним винаходом здатні зв'язуватися з ГАСЗ і нейтралізувати його активність, як визначено за допомогою іп міїго або іп мімо аналізів. Здатність антитіл за даним винаходом зв'язуватися з ГДСЗ і нейтралізувати його активність можна вимірювати із застосуванням будь-якого стандартного способу, відомого фахівцям у даній галузі, включаючи описані в даному документі аналізи зв'язування або аналізи активності. 00114) Необмежувальні ілюстративні іп мйго аналізи для вимірювання активності зв'язування представлені у розділі Приклади даного документа. Згідно з прикладом 3, показники афінності зв'язування і константи швидкості антитіл людини до ГАЗ щодо ГАСЗ людини визначали за допомогою методу поверхневого плазмонного резонансу, і вимірювання виконували на приладі Віасоге 4000 або Т200. Згідно з прикладом 4, для визначення перехресної конкуренції між антитілами до ГАС3З застосовували аналізи блокування. У прикладах 5 і 6 описують зв'язування антитіл із клітинами, які надекспресують ГАЗ. Згідно з прикладом 7, для визначення здатності антитіл до ГАСЗ блокувати здатність І АСЗ зв'язувати

МНС класу ІІ іп міго застосовували аналізи зв'язування. Згідно з прикладом 8, для визначення здатності антитіл до ГАСЗ перешкоджати передачі сигналу з участю ГАЗ у Т-клітини застосовували аналіз за активністю гена люциферази. Згідно з прикладом 9, для визначення здатності антитіл до ГАЗ зв'язуватися з активованими СО4- і СО8- Т-клітинами мавпи застосовували флуоресцентний аналіз. 00115) Згідно з певними варіантами здійснення антитіла за даним винаходом здатні посилювати або стимулювати активність Т-клітин іп міїго у суб'єкта зі злоякісною пухлиною або у суб'єкта, інфікованого вірусом, таким як І СМУ. Згідно з певними варіантами здійснення антитіла за даним винаходом застосовують у комбінації з другим терапевтичним засобом, таким як антитіло до другого коінгібітора Т-клітини, для посилення імунної відповіді та інгібування росту пухлини у суб'єкта. 00116) Специфічні щодо І АСЗ антитіла можуть не містити додаткових міток або сполук, або вони можуть містити М-кінцеву або С-кінцеву мітку або сполуку. Згідно з одним варіантом здійснення мітка або сполука являє собою біотин. В аналізі зв'язування, розташування мітки (якщо така є) може визначати орієнтацію пептиду щодо поверхні, на якій зв'язаний пептид.

Наприклад, якщо поверхня покрита авідином, пептид, який містить М-кінцевий біотин, буде 60 розташований так, що С-кінцева частина пептиду буде віддалена від поверхні. Згідно з одним варіантом здійснення мітка може являти собою радіоізотоп, рлуоресцентний барвник або мітку, яку можна виявити за допомогою МК. Згідно з певними варіантами здійснення такі мічені антитіла можна застосовувати у діагностичних аналізах, включаючи аналізи із візуалізацією.

Ілюстративні варіанти здійснення даного винаходу

Ї00117| Згідно з певними варіантами здійснення даний винахід стосується виділеного антитіла або його антигензв'язувального фрагмента, які специфічно зв'язуються з білком, кодованим геном-3 активації лімфоцитів ((АС3) людини, де антитіло або його антигензв'язувальний фрагмент володіють властивістю, вибраною з групи, що складається з: (а) зв'язують мономерний ГАЗ людини із константою дисоціації (Ко) для рівноважного зв'язування, яка становить менше ніж приблизно 10 нМ, як виміряно в аналізі на основі явища поверхневого плазмонного резонансу при 25 "С; (б) зв'язують мономерний ГАСЗ людини з Ко менше ніж приблизно 8 нМ, як виміряно в аналізі на основі явища поверхневого плазмонного резонансу при 37 "С; (с) зв'язують димерний І АСЗ людини з Ко менше ніж приблизно 1,1 нМ, як виміряно в аналізі на основі явища поверхневого плазмонного резонансу при 25 "С; (а) зв'язують димерний ГАСЗ людини з Ко менше ніж приблизно 1 нМ, як виміряно в аналізі на основі явища поверхневого плазмонного резонансу при 37 "С; (е) зв'язуються з клітиною, яка експресує ПГАСЗ3, з ЕС5о менше ніж приблизно 8 нМ, як виміряно в аналізі з використанням проточної цитометрії; (Її) зв'язуються з клітиною, яка експресує тП АСЗ, з ЕС5о менше ніж приблизно 2,3 НМ, як виміряно в аналізі з використанням проточної цитометрії; (д) блокують зв'язування ПІ АСЗ з МНС класу ІЇ людини з ІСво менше ніж приблизно 32 нМ, як визначено за допомогою аналізу клітинної адгезії; (п) блокують зв'язування ПІ АСЗ з МНС класу ІЇ миші з ІСво менше ніж приблизно 30 нМ, як визначено за допомогою аналізу клітинної адгезії; (і) блокують зв'язування ПГАСЗ з МНС класу І більше ніж на 9095, як визначено за допомогою аналізу клітинної адгезії; (Ї) забезпечують звільнення від опосередкованого І АСЗ інгібування активності

Т-клітин з ЕС5о менше ніж приблизно 9 НМ, як визначено в аналізі за репортерним геном люциферази; і (К) зв'язуються з активованими СО4- і СО8- Т-клітинами з ЕС5о менше ніж приблизно 1,2 НМ, як визначено у флуоресцентному аналізі.

ЇО0118| Згідно з певними варіантами здійснення виділене антитіло або його антигензв'язувальний фрагмент за даним винаходом містять три ділянки, що визначають комплементарність (СОК), важкого ланцюга (НСОКІ, НСОКО2 ії НСОКУЗ), які містяться в межах будь-якої з наведених у таблиці 1 послідовностей варіабельної ділянки важкого ланцюга (НСМК); і три СОК легкого ланцюга (І СОК1, І СОКа2 і І СО), які містяться в межах будь-якої з наведених у таблиці 1 послідовностей варіабельної ділянки легкого ланцюга (І СМК). Згідно з певними варіантами здійснення виділене антитіло або його антигензв'язувальний фрагмент містять НСМК з амінокислотною послідовністю, вибраною з групи, що складається з наведених у таблиці 1 послідовностей НСМК. Згідно з певними варіантами здійснення виділене антитіло або його антигензв'язувальний фрагмент містять ГСМК з амінокислотною послідовністю, вибраною з групи, що складається з наведених у таблиці 1 послідовностей І СМК.

ЇО0119|Згідно з певними варіантами здійснення виділене антитіло або його антигензв'язувальний фрагмент містять: (а) НСОКІТ-домен з амінокислотною послідовністю, вибраною з групи, що складається з 5ЕО ІЮО МО: 4, 20, 36, 52, 68, 84, 100, 116, 132, 148, 164, 180, 196, 212, 228, 244, 260, 276, 292, 308, 324, 340, 356, 372, 388, 404, 420, 436, 452, 460, 468, 476, 484, 492, 500, 508, 516, 540 ї 556; (б) НСОК2-домен з амінокислотною послідовністю, вибраною з групи, що складається з 5ЕО ІЮО МО: 6, 22, 38, 54, 70, 86, 102, 118, 134, 150, 166, 182, 198, 214, 230, 246, 262, 278, 294, 310, 326, 342, 358, 374, 390, 406, 422, 438, 454, 462, 470, 478, 486, 494, 502, 510, 518, 542 і 558; (с) НСОКЗ-домен з амінокислотною послідовністю, вибраною з групи, що складається з 5ЕО ІЮО МО: 8, 24, 40, 56, 72, 88, 104, 120, 136, 152, 168, 184, 200, 216, 232, 248, 264, 280, 296, 312, 328, 344, 360, 376, 392, 408, 424, 440, 456, 464, 472, 480, 488, 496, 504, 512, 520, 544 і 560; (4) /СОК1-домен з амінокислотною послідовністю,

БО вибраною з групи, що складається з 5ЕО ІЮО МО: 12, 28, 44, 60, 76, 92, 108, 124, 140, 156, 172, 188, 204, 220, 236, 252, 268, 284, 300, 316, 332, 348, 364, 380, 396, 412, 428, 444, 524, 532, 546 і 564; (є) ІСОВ2-домен з амінокислотною послідовністю, вибраною з групи, що складається з

ЗЕО ІЮ МО: 14, 30, 46, 62, 78, 94, 110, 126, 142, 158, 174, 190, 206, 222, 238, 254, 270, 286, 302, 318, 334, 350, 366, 382, 398, 414, 430, 446, 526, 534, 550 1 566; і () І СОКЗ-домен з амінокислотною послідовністю, вибраною з групи, що складається з 5ЕО ІЮО МО: 16, 32, 48, 64, 80, 96, 112, 128, 144, 160, 176, 192, 208, 224, 240, 256, 272, 288, 304, 320, 336, 352, 368, 384, 400, 416, 432, 448, 528, 536, 552 і 568.

І00120| Згідно з певними варіантами здійснення виділене антитіло або його антигензв'язувальний фрагмент за даним винаходом містять пару амінокислотних 60 послідовностей НСУМК/ СУК, вибрану з групи, що складається з 5ЕО ІЮ МО: 2/10, 18/26, 34/42,

50/58, 66/74, 82/90, 98/106, 114/122, 130/138, 146/154, 162/170, 178/186, 194/202, 210/218, 2268/2344, 242/250, 258/266, 274/282, 290/298, 306/314, З322/330, 338/346, 354/362, 370/378, 386/394, 402/410, 418/426, 434/442, АБО/522, 458/522, 466/522, 474А4/522, 482/522, А90/522, 498/530, 506/530, 514/530, 538/546 і 554/562.

І00121| Згідно з певними варіантами здійснення виділене антитіло або антигензв'язувальний фрагмент є таким, як заявлено в пункті 7 формули винаходу, де антитіло або його антигензв'язувальний фрагмент містять пару амінокислотних послідовностей. НСМК/Л СУК, вибрану з групи, що складається з 5ЕО ІЮО МО: 386/394, 418/426 і 538/546.

І00122| Згідно з певними варіантами здійснення даний винахід стосується виділеного антитіла або його антигензв'язувального фрагмента, які блокують зв'язування Г(АСЗ з МНС класу ІІ, які містять три СОК НСМК, де НСМК містить амінокислотну послідовність, вибрану з групи, що складається з БЕО ІО МО: 2, 18, 34, 50, 66, 82, 98, 114, 130, 146, 162, 178, 194, 210, 226, 242, 258, 274, 290, 306, 322, 338, 354, 370, 386, 402, 418, 434, 450, 458, 466, 474, 482, 490, 498, 506, 514, 538 і 554; і три СОК І СМК, де І СМК містить амінокислотну послідовність, вибрану з групи, що складається з 5ЕО ІЮО МО: 10, 26, 42, 58, 74, 90, 106, 122, 138, 154, 170, 186, 202, 218, 234, 250, 266, 282, 298, 314, 330, 346, 362, 378, 394, 410, 426, 442, 522, 530, 546 і 562. 00123) Згідно з певними варіантами здійснення виділене антитіло або антигензв'язувальний фрагмент містять пару амінокислотних послідовностей НСМУК/ЛСМК, вибрану з групи, що складається з 5ЕО ІЮ МО: 386/394, 418/426 і 538/546. 00124 Згідно з певними варіантами здійснення даний винахід стосується антитіла або його антигензв'язувального фрагмента, які конкурують за зв'язування з антитілом або його антигензв'язувальним фрагментом, які містять пару амінокислотних послідовностей

НСМКЛСМК, вибрану з групи, що складається з 5ЕО ІЮО МО: 2/10, 18/26, 34/42, 50/58, 66/74, 82/90, 98/106, 114/122, 130/138, 146/154, 162/170, 178/186, 194/202, 210/218, 226/234, 242/250, 258/266, 274/282, 290/298, 306/314, З22/330, 338/346, 354/362, 370/378, 386/394, 402/410, 418/426, 434/442, 450/522, 458/522, 4А66/522, 474/522, 482/522, 490/522, 498/530, 506/530, 514/530, 538/546 і 554/562. 001251 Згідно з певними варіантами здійснення даний винахід стосується антитіла або його антигензв'язувального фрагмента, які зв'язуються з тим же самим епітопом, що й антитіло або його антигензв'язувальний фрагмент, які містять пару амінокислотних послідовностей

НСМКЛСМК, вибрану з групи, що складається з 5ЕО ІЮ МО: 2/10, 18/26, 34/42, 50/58, 66/74, 82/90, 98/106, 114/122, 130/138, 146/154, 162/170, 178/186, 194/202, 210/218, 226/234, 242/250, 258/266, 274/282, 290/298, 306/314, З22/330, 338/346, 354/362, 370/378, 386/394, 402/410, 418/426, 434/442, 450/522, 458/522, 4А66/522, 474/522, 482/522, 490/522, 498/530, 506/530, 514/530, 538/546 і 554/562. 00126) Згідно з певними варіантами здійснення даний винахід стосується антитіла, або його антигензв'язувального фрагмента, яке являє собою антитіло людини, гуманізоване або химерне антитіло. Зазначене антитіло, або його антигензв'язувальний фрагмент, може являти собою, наприклад, Ідс1- або Ідс4-антитіло, таке як, наприклад, Ідс1- або Ідс4-антитіло людини.

Константні ділянки таких антитіл можуть відповідати константним ділянкам дикого типу або константним ділянкам, в які були внесені мутації.

І00127| Згідно з певними варіантами здійснення даний винахід стосується виділеного антитіла, яке містить важкий ланцюг і легкий ланцюг, де важкий ланцюг містить амінокислотну послідовність, вибрану з групи, що складається з 5ЕБЕО ІЮО МО: 577, 579 і 580. Згідно з певними варіантами здійснення даний винахід стосується виділеного антитіла, яке містить важкий ланцюг і легкий ланцюг, де легкий ланцюг містить амінокислотну послідовність, вибрану з групи, що складається з БЕО ІЮ МО: 578 і 581. Згідно з певними варіантами здійснення даний винахід стосується виділеного антитіла або його антигензв'язувального фрагмента, які містять пару амінокислотних послідовностей важкого ланцюга/легкого ланцюга, вибрану з групи, що складається з 5ЕО ІЮ МО: 577/578, 579/578 і 580/581.

ІОО0128| Згідно з одним аспектом даний винахід стосується поліспецифічної антигензв'язувальної молекули, яка передбачає перший антигензв'язувальний специфічний елемент, який специфічно зв'язується з ГАЗ, і другий антигензв'язувальний специфічний елемент, який специфічно зв'язується з другим цільовим епітопом.

І00129| Згідно з одним аспектом даний винахід стосується фармацевтичної композиції, яка містить антитіло до ГАСЗ або його антигензв'язувальний фрагмент відповідно до будь-якого із вищезгаданих варіантів здійснення і фармацевтично прийнятний носій або розріджувач.

ІЇ001З0| Згідно з одним аспектом даний винахід стосується виділених полінуклеотидних молекул і векторів, які містять полінуклеотидні послідовності, що кодують антитіла або їх 60 антигензв'язувальний фрагмент, розкриті в даному документі. Згідно з певними варіантами здійснення даний винахід стосується виділеної полінуклеотидної молекули та/або вектора, який містить полінуклеотидну послідовність, що кодує НСМК представленого в даному документі антитіла. Згідно з певними варіантами здійснення даний винахід стосується виділеної полінуклеотидної молекули та/або вектора, який містить полінуклеотидну послідовність, що кодує І! СУК представленого в даному документі антитіла.

ЇО0О131| Згідно з одним аспектом даний винахід стосується способів посилення імунної відповіді у суб'єкта, причому спосіб передбачає введення фармацевтичної композиції, яка містить розкриті в даному документі виділене антитіло до І АСЗ або його антигензв'язувальний фрагмент. Згідно з певними варіантами здійснення даний винахід стосується способів інгібування регуляторної Т-клітини (Тгтед) у суб'єкта, які передбачають введення фармацевтичної композиції, яка містить розкриті в даному документі виділене антитіло до | ДОЗ або його антигензв'язувальний фрагмент. Згідно з певними варіантами здійснення даний винахід стосується способів посилення активації Т-клітин у суб'єкта, причому спосіб передбачає введення фармацевтичної композиції, яка містить розкриті в даному документі виділене антитіло до ГАСЗ або його антигензв'язувальний фрагмент. Згідно з певними варіантами здійснення у суб'єкта спостерігають захворювання або порушення, вибране з групи, що складається зі злоякісного новоутворення кровотворної тканини, раку головного мозку, нирково- клітинної карциноми (наприклад, світлоклітинної карциноми нирки), раку яєчника, раку сечового міхура, раку передміхурової залози, раку молочної залози (наприклад, тричі негативного раку молочної залози), гепатоцелюлярної карциноми, раку кістки, раку товстої кишки, недрібноклітинного раку легені, плоскоклітинної карциноми голови та шиї, раку товстої та прямої кишки, мезотеліоми, лімфоми (наприклад, В-клітинної лімфоми, дифузної В- крупноклітинної лімфоми) і меланоми. Згідно з певними варіантами здійснення у суб'єкта спостерігають хронічну вірусну інфекцію, викликану вірусом, вибраним із групи, що складається з вірусу імунодефіциту людини (НІМ), вірусу гепатиту С (НСУ), вірусу гепатиту В (НВУ), вірусу папіломи людини (НРУ), вірусу лімфоцитарного хоріоменінгіту (І СМУ) і вірусу імунодефіциту мавп (5ІМ). Згідно з певними варіантами здійснення антитіло до (АСЗ вводять суб'єкту в комбінації з другим терапевтичним засобом, вибраним із групи, що складається з інгібітора РО- 1, інгібітора СТІ А, антитіла до пухлиноспецифічного антигену, антитіла до антигену інфікованої вірусом клітини, інгібітора РО-11, інгібітора СО20, біспецифічного антитіла до СО20 ії СОЗ3, дієтичної добавки, такої як антиоксидант, антагоніста МЕСЕ, хіміотерапевтичного засобу, цитотоксичного засобу, опромінення, М5ЗАЇІЮ, кортикостероїду і будь-якого іншого виду терапії, придатної для послаблення щонайменше одного симптому, асоційованого із захворюванням або порушенням. 00132) Згідно з одним аспектом даний винахід стосується способів інгібування росту пухлини або пухлинної клітини у суб'єкта, які передбачають введення суб'єкту, який потребує цього, терапевтично ефективної кількості розкритих у даному документі антитіла до ГАЗ або його антигензв'язувального фрагмента. Згідно з певними варіантами здійснення пухлина є первинною або рецидивною. Згідно з певними варіантами здійснення пухлина являє собою пухлину, що розвинулася. Згідно з певними варіантами здійснення у суб'єкта спостерігають пухлину, що метастазує, та/або його лікували із застосуванням попередньої терапії. Згідно з певними варіантами здійснення пухлина присутня у суб'єкта із захворюванням або порушенням, вибраним із групи, що складається зі злоякісного новоутворення кровотворної тканини, раку головного мозку, нирково-клітинного раку, раку яєчника, раку сечового міхура, раку передміхурової залози, раку молочної залози, гепатоцелюлярної карциноми, раку кістки, раку товстої кишки, недрібноклітинного раку легені, плоскоклітинної карциноми голови та шиї, раку товстої та прямої кишки, мезотеліоми, лімфоми і меланоми. Згідно з певними варіантами здійснення антитіло до ГАСЗ або його антигензв'язувальний фрагмент вводять у вигляді однієї або декількох доз, де кожну дозу вводять через 1-4 тижні після найближчої попередньої дози.

Згідно з певними варіантами здійснення антитіло до (АСЗ або його антигензв'язувальний фрагмент вводять у дозі від приблизно 0,1 мг/кг ваги тіла до приблизно 100 мг/кг ваги тіла суб'єкта. Згідно з певними варіантами здійснення антитіло до Г(АСЗ вводять суб'єкту в комбінації з другим терапевтичним засобом, вибраним із групи, що складається з інгібітора РО- 1, інгібітора СТІ А, антитіла до пухлиноспецифічного антигену, інгібітора РО-1І 1, інгібітора СО20, біспецифічного антитіла до СО20 і СОЗ, дієтичної добавки, такої як антиоксидант, антагоніста

МЕС, хіміотерапевтичного засобу, цитотоксичного засобу, опромінення, М5АЇО, кортикостероїду і будь-якого іншого виду терапії, придатної для послаблення щонайменше одного симптому, асоційованого із захворюванням або порушенням. Згідно з одним варіантом здійснення другий терапевтичний засіб являє собою інгібітор РО-1, де інгібітор РО-1 являє 60 собою антитіло або його антигензв'язувальний фрагмент, які специфічно зв'язуються з РО-1.

Згідно з одним варіантом здійснення інгібітором РО-1 є КЕОМ2810. Згідно з певними варіантами здійснення антитіло до Г(АСЗ або його антигензв'язувальний фрагмент вводять підшкірно, внутрішньовенно, внутрішньошкірно, внутрішньочеревно, перорально, внутрішньом'язово або інтракраніально.

ЇО0О133| Згідно з одним аспектом даний винахід стосується способів звільнення від опосередкованого ГАЗ інгібування активності Т-клітини, які передбачають приведення Т- клітини в контакт із розкритими в даному документі антитілом до ГАЗ або його антигензв'язувальним фрагментом. Згідно з одним варіантом здійснення Т-клітину приводять у контакт із антитілом до | АСЗ за даним винаходом у комбінації з антитілом до РО-1 (наприклад,

ВЕСМ2810).

Антигензв'язувальні фрагменти антитіл 00134) Якщо конкретно не зазначено інше, слід розуміти, що термін "антитіло" у контексті даного документа охоплює молекули антитіла, які містять два важкі ланцюги імуноглобуліну і два легкі ланцюги імуноглобуліну (тобто "молекули повного антитіла"), а також їхні антигензв'язувальні фрагменти. Терміни "антигензв'язувальна частина" антитіла, "антигензв'язувальний фрагмент" антитіла і таке інше у контексті даного документа включають будь-який поліпептид або глікопротеїн, який зустрічається в природі, одержуваний ферментативним шляхом, синтетичний або одержаний за допомогою методів генної інженерії поліпептид або глікопротеїн, який специфічно зв'язує антиген з утворенням комплексу. Терміни "антигензв'язувальний фрагмент" антитіла або "фрагмент антитіла" у контексті даного документа стосуються одного або декількох фрагментів антитіла, які зберігають здатність специфічно зв'язуватися з ГАСЗ. Фрагмент антитіла може включати Раб-фрагмент, Е(ар)г- фрагмент, Еум-фрагмент, ЗАбБ-фрагмент, фрагмент, який містить СОК, або виділену СОК. Згідно з певними варіантами здійснення термін "антигензв'язувальний фрагмент" стосується поліпептидного фрагмента поліспецифічної антигензв'язувальної молекули. Згідно з такими варіантами здійснення термін "антигензв'язувальний фрагмент" включає, наприклад, молекулу

МНС класу ІІ, яка специфічно зв'язується з ГАС3. Антигензв'язувальні фрагменти антитіла можуть бути одержані, наприклад, із молекул повних антитіл із застосуванням будь-яких придатних стандартних методик, таких як методики на основі протеолітичного розщеплення або методи генетичної інженерії рекомбінантних ДНК, які передбачають здійснення маніпуляцій і експресії ДНК, яка кодує варіабельні та (необов'язково) константні домени антитіл. Така ДНК відома та/або легко доступна, наприклад, із комерційних джерел, ДНК-бібліотек (включаючи, наприклад, фагові бібліотеки антитіл), або вона може бути синтезована. ДНК можна піддавати секвенуванню та хімічним маніпуляціям із застосуванням методів молекулярної біології, наприклад, щоб розмістити один або декілька варіабельних та/або константних доменів у відповідній конфігурації або для включення кодонів, внесення цистеїнових залишків, модифікації, додавання або видалення амінокислот тощо. 00135) Необмежувальні приклади антигензв'язувальних фрагментів включають: (ї) ЕРаб- фрагменти; (ії) Е(авр)2-фрагменти; (ії) Ба-фрагменти; (ім) Ем-фрагменти; (м) молекули одноланцюгових Ем (5сЕм); (мі) ЗАБбБ-фрагменти та (мії) мінімальні розпізнавальні одиниці, які складаються з амінокислотних залишків, які імітують гіперваріабельну ділянку антитіла (наприклад, виділена ділянка, що визначає комплементарність (СОК), як, наприклад, СОКЗ- пептид), або просторово обмежений пептид ЕК3-СОВЗ3-ЕКА. Інші сконструйовані молекули, такі як домен-специфічні антитіла, однодоменні антитіла, антитіла з видаленими доменами, химерні антитіла, антитіла з прищепленими СОК, діатіла, триатіла, тетратіла, мініантитіла, наноантитіла (наприклад, одновалентні нансантитіла, двовалентні наноантитіла тощо), імунофармацевтичні засоби на основі модульного білка малого розміру (З5МІР) і варіабельні домени ІДМАК акули, у контексті даного документа також охоплені виразом "антигензв'язувальний фрагмент". 00136) Антигензв'язувальний фрагмент антитіла, як правило, буде містити щонайменше один варіабельний домен. Варіабельний домен може мати будь-який розмір або амінокислотний склад, і зазвичай буде містити щонайменше одну СОК, яка примикає до однієї або декількох каркасних послідовностей або знаходиться з ними в одній рамці зчитування. В антигензв'язувальних фрагментах з Мн-доменом, асоційованим із Мі-доменом, Мн- і М-домени можуть бути розташовані відносно один одного у будь-якій придатній конфігурації. Наприклад, варіабельна ділянка може бути димерною і містити димери Мн - Мн, Мн - Мі або Мі - Мі. Як альтернатива, антигензв'язувальний фрагмент антитіла може містити мономерний Мн- або М/- домен.

І00137| Згідно з певними варіантами здійснення антигензв'язувальний фрагмент антитіла може містити щонайменше один варіабельний домен, ковалентно зв'язаний щонайменше з 60 одним константним доменом. Необмежувальні ілюстративні конфігурації варіабельних і константних доменів, які можна знайти в межах антигензв'язувального фрагмента антитіла за даним винаходом, включають: (ії) Мн-Сні1; (ії) Мн-Снае; (ії) Мн-Сна; (ім) Мн-Сн1-Снаг; (м) Мн-Сні1-Сна-

СнЗ; (мі) Мн-Сн2-Сн3З; (мії) Мн-Сі; (міїї) Мі-Сн1; (їх) Мі-Сне; (х) Мі-Сн3З; (хі) М-Сн1-Сне; (хії) Мі-Сні-

Сне-СнЗ; (хії) Мі-Сне-Сн3 і (хім) Мі-Сі. У будь-якій конфігурації варіабельних і константних доменів, включаючи будь-яку з наведених вище ілюстративних конфігурацій, варіабельні та константні домени можуть бути або безпосередньо з'єднані один з одним, або можуть бути з'єднані за допомогою повної або часткової шарнірної ділянки або лінкерної ділянки. Шарнірна ділянка може складатися щонайменше з 2 (наприклад, 5, 10, 15, 20, 40, 60 або більше) амінокислот, які забезпечують гнучке або напівгнучке з'єднання розташованих поруч варіабельних та/або константних доменів в межах однієї молекули поліпептиду. Більше того, антигензв'язувальний фрагмент антитіла за даним винаходом може передбачати гомодимер або гетеродимер (або інший мультимер) будь-якої з наведених вище конфігурацій варіабельних і константних доменів, нековалентно зв'язані один із одним та/"або з одним або декількома мономерними Ун- або Мі-доменами (наприклад, за допомогою дисульфідного(-их) зв'язку(-ів)). 00138) Як і у випадку молекул повних антитіл, антигензв'язувальні фрагменти можуть бути моноспецифічними або поліспецифічними (наприклад, біспецифічними). Поліспецифічний антигензв'язувальний фрагмент антитіла, як правило, буде містити щонайменше два різних варіабельних домени, де кожний варіабельний домен здатний специфічно зв'язуватися з окремим антигеном або іншим епітопом на одному й тому самому антигені. Будь-якій формат поліспецифічного антитіла, включаючи ілюстративні формати біспецифічного антитіла, розкриті в даному документі, можна адаптувати для застосування у контексті антигензв'язувального фрагмента антитіла за даним винаходом із застосуванням звичайних методик, відомих у даній галузі.

Одержання антитіл людини

Ї00139| Способи одержання антитіл людини в трансгенних мишах відомі у даній галузі. Будь- які з таких відомих способів можна застосовувати у контексті даного винаходу для одержання антитіл людини, які специфічно зв'язуються з І ДОЗ.

Ї00140|Із застосуванням технології МЕГОСІММИОМЕФ (див., наприклад, 5 6596541,

Кедепегоп РПІагтасеціїса, МЕГОСІММИОМЕФ) або будь-якого іншого відомого способу одержання моноклональних антитіл спершу виділяли високоафінні химерні антитіла до І АсЗ з варіабельною ділянкою людини і константною ділянкою миші. Технологія МЕГОСІММОМЕФ передбачає одержання трансгенної миші з геномом, який передбачає послідовності, що кодують варіабельні ділянки важкого і легкого ланцюгів людини, функціонально пов'язані з ендогенними локусами, які кодують константні ділянки миші, завдяки чому у миші у відповідь на стимуляцію антигеном виробляється антитіло, що містить варіабельну ділянку людини і константну ділянку миші. ДНК, що кодує варіабельні ділянки важких і легких ланцюгів антитіла, виділяють і функціонально зв'язують з ДНК, що кодує константні ділянки важких і легких ланцюгів людини. Потім забезпечують експресію ДНК в клітині, здатній експресувати повністю людське антитіло.

ІЇ00141| У загальному випадку, одержану за допомогою технології МЕГОСІММОМЕФ мишу імунізують антигеном, що становить інтерес, і виділяють лімфоцити (такі як В-клітини) із організму мишей, у яких експресуються антитіла. Лімфоцити можна зливати з клітинною лінією мієломи з одержанням безсмертних ліній клітин гібридоми, і такі лінії клітин гібридоми піддають скринінгу і відбору для ідентифікації ліній клітин гібридоми, які продукують антитіла, специфічні щодо антигену, що становить інтерес. ДНК, що кодує варіабельні ділянки важкого ланцюга і легкого ланцюга, можна виділяти і зв'язувати з необхідними ізотиповими константними ділянками важкого ланцюга і легкого ланцюга. Такий білок-антитіло може продукуватися в клітині, такій як клітина СНО. Як альтернатива, ДНК, що кодує антигенспецифічні химерні антитіла або варіабельні домени легких і важких ланцюгів, можна виділяти безпосередньо із антигенспецифічних лімфоцитів. 00142) Спершу виділяють високоафінні химерні антитіла з варіабельною ділянкою людини і константною ділянкою миші. Як описано нижче у розділі з експериментами, визначають характеристики антитіл і відбирають їх щодо необхідних характеристик, включаючи афінність, вибірковість, епітоп тощо. Константні ділянки миші заміщують необхідною константною ділянкою людини з одержанням повністю людського антитіла за даним винаходом, наприклад,

ЇІЯО1 або ІдсС4 дикого типу або модифікованих Їдс1 або Ідсб4. Тоді як вибрана константна ділянка може варіювати відповідно до конкретних застосувань, характеристики високоафінного зв'язування антигену і специфічності щодо мішені властиві варіабельній ділянці.

Біоеквіваленти 60 Ї00143| Антитіла до ГАСЗ і фрагменти антитіл за даним винаходом охоплюють білки з амінокислотними послідовностями, які відрізняються від таких у описаних антитіл, але при цьому зберігають здатність зв'язувати ГАС3. Такі варіантні антитіла і фрагменти антитіл передбачають одне або декілька додавань, делецій або замін амінокислот порівняно з вихідною послідовністю, але характеризуються біологічною активністю, яка, по суті, еквівалентна такій у описаних антитіл. Аналогічно, послідовності ДНК за даним винаходом, які кодують антитіло, охоплюють послідовності, які передбачають одне або декілька додавань, делецій або замін нуклеотидів порівняно з розкритою послідовністю, але які кодують антитіло або фрагмент антитіла, які, по суті, є біоеквівалентами антитіла або фрагмента антитіла за даним винаходом. 00144) Два антигензв'язувальних білка або антитіла вважаються біоеквівалентними, якщо, наприклад, вони є фармацевтичними еквівалентами або фармацевтичними варіантами, швидкість і ступінь абсорбції яких не характеризується значущою відмінністю при введенні в однаковій молярній дозі в аналогічних умовах проведення експерименту, як у вигляді одноразової дози, так і у вигляді багаторазових доз. Деякі антитіла будуть вважатися еквівалентами або фармацевтичними варіантами, якщо вони є еквівалентними за ступенем їх абсорбції, але не за швидкістю їх абсорбції, і все ще можуть вважатися біоеквівалентними, оскільки такі відмінності в швидкості абсорбції є навмисними і відображені в інструкції із застосування лікарського препарату, не є суттєвими для досягнення ефективних концентрацій лікарського засобу в організмі, наприклад, у випадку тривалого застосування, і не вважаються значущими з медичної точки зору для конкретного досліджуваного лікарського препарату.

Ї001451| Згідно з одним варіантом здійснення два антигензв'язувальних білка вважаються біоеквівалентними, якщо клінічно значущі відмінності в їх безпеці, чистоті або ефективності відсутні.

Ї00146| Згідно з одним варіантом здійснення два антигензв'язувальних білка є біоеквівалентними, якщо пацієнта можна переводити один або декілька разів з лікування референтним препаратом на лікування біологічним препаратом, і навпаки, без очікуваного підвищення ризику виникнення небажаних ефектів, включаючи клінічно значущу зміну імуногенності або зменшену ефективність, у порівнянні з триваючої терапією без такого переведення.

Ї00147|Згідно з одним варіантом здійснення два антигензв'язувальних білка є біоеквівалентними, якщо вони обидва функціонують за загальним механізмом або механізмами дії щодо стану або станів, за умови, що такі механізми є відомими. 00148) Біоеквівалентність може бути продемонстрована за допомогою іп мімо та/або іп мйго способів. Визначення біоеквівалентності включає, наприклад, (а) іп мімо тест у людей або інших тварин, в якому вимірюють концентрацію антитіла або його метаболітів у крові, плазмі крові, сироватці крові або біологічній рідині в залежності від часу; (Б) іп міго тест, результати якого корелювали з даними щодо біодоступності іп мімо у людини, і який є досить прогностичним щодо таких даних; (с) іп мімо тест у людей або інших тварин, в якому відповідний негайний фармакологічний ефект антитіла (або його мішені) вимірюється в залежності від часу; і (а) клінічне випробування у строго контрольованих умовах, в якому встановлюють безпеку, ефективність або біодоступність або біоеквівалентність антитіла. 00149) Біоеквівалентні варіанти антитіл за даним винаходом можуть бути сконструйовані, наприклад, шляхом виконання різних замін залишків або послідовностей або видалення кінцевих або внутрішніх залишків або послідовностей, які не є необхідними для біологічної активності. Наприклад, цистеїнові залишки, які не є необхідними для біологічної активності, можна видаляти або заміщувати іншими амінокислотами для запобігання утворенню зайвих або недоцільних внутрішньомолекулярних дисульфідних містків при ренатурації. В інших випадках біоеквівалентні антитіла можуть включати варіанти антитіл, які передбачають зміни за амінокислотою, які модифікують характеристики глікозилювання антитіл, наприклад, мутації, які виключають або усувають глікозилювання.

Антитіла до І АСЗ, які передбачають варіанти Ес 00150) Відповідно до певних варіантів здійснення даного винаходу передбачені антитіла до

ІГАСЗ, які містять Ес-домен, який передбачає одну або декілька мутацій, що посилюють або послаблюють зв'язування антитіла з ЕсКп-рецептором, наприклад, за кислого рн, у порівнянні з нейтральним рН. Наприклад, даний винахід включає антитіла до ГАСЗ, які передбачають мутацію Снг- або СнЗ-ділянки Ес-домену, де мутація(-ї) підвищує(-ють) афінність Ес-домену до

ЕсКп у кислому середовищі (наприклад, в ендосомі, де рН знаходиться в діапазоні від приблизно 5,5 до приблизно 6,0). Такі мутації можуть приводити до збільшення часу напівжиття антитіла в сироватці крові при введенні тварині. Необмежувальні приклади таких модифікацій

Ес включають, наприклад, модифікацію у положенні 250 (наприклад, Е або 0); 250 і 428 60 (наприклад, І. або РЕ); 252 (наприклад, І /У/ЕЛМ або Т), 254 (наприклад, 5 або Т) і 256 (наприклад,

З/К/О/Е/О або Т); або модифікацію у положенні 428 та/або 433 (наприклад, Н/Л/К/5/Р/О або К) та/або 434 (наприклад А, МУ, Н, Е або У |М4А34А, М434МуУ, М434Н, М434Е або М434У1); або модифікацію у положенні 250 та/або 428; або модифікацію у положенні 307 або 308 (наприклад

ЗО8Е, МОВ) і 434. Згідно з одним варіантом здійснення модифікація передбачає модифікацію 4281. (наприклад, М4281І) і 4345 (наприклад,М4345); модифікацію 4281, 2591 (наприклад, М2591) і

ЗО8Е (наприклад, уУЗО8Е); модифікацію 43З3К (наприклад, Н4АЗЗК) і модифікацію 434 (наприклад, 434У); модифікацію 252, 254 і 256 (наприклад,252У, 2541 і 256ЄЕ); модифікацію 2500 і 4281 (наприклад, Т2500 і М4281));; і модифікацію 307 та/або 308 (наприклад, ЗО8Е або ЗО8Р). Згідно із ще одним варіантом здійснення модифікація передбачає модифікацію 265А (наприклад, 0265А) та/або 297А (наприклад, М297А).

ІЇ00151| Наприклад, даний винахід включає антитіла до ГАЗ, які містять Ес-домен, який передбачає одну або декілька пар або груп мутацій, вибраних із групи, що складається з: 2500 і 2481 (наприклад, Т2500 і М2481І); 252УЇ, 2541 і 256Е (наприклад, М252У, 52541 і Т256Е); 4281 і 4345 (наприклад, М4281 і М4345); 2571 ії 3111 (наприклад, Р257І ї 03111); 2571 і 434Н (наприклад,

Р257І ї М434Н); 376М і 434Н (наприклад, Ю376М і М434Н); 307А, З80А і 434А (наприклад, Т307А,

ЕЗВ8ВОА і М434А); і 433К і 434Е (наприклад, Н4ЗЗК і М434Р). Згідно з одним варіантом здійснення даний винахід включає антитіла до І АСЗ, які містять Ес-домен, який передбачає мутацію 5108Р у шарнірній ділянці Ід4 для сприяння стабілізації димера. Всі можливі комбінації вищезгаданих мутацій Ес-домену та інших мутацій в межах розкритих у даному документі варіабельних доменів антитіла включені в обсяг даного винаходу. 00152) Даний винахід також включає антитіла до І АСЗ, які містять химерну константну (Сн) ділянку важкого ланцюга, де химерна Сн-ділянка містить сегменти, які походять із Сн-ділянок більше ніж одного ізотипу імуноглобулінів. Наприклад, антитіла за даним винаходом можуть містити химерну Сн-ділянку, яка містить частину або всі з Сн2-доменів, що походять із молекули

ЇІДС1 людини, Ідс2 людини або Ідс4 людини, в комбінації з частиною або всіма з СнЗ-доменів, що походять із молекули ЇдДС1 людини, Їдб2 людини або Ід054 людини. Відповідно до певних варіантів здійснення антитіла за даним винаходом містять химерну Сн-ділянку з химерною шарнірною ділянкою. Наприклад, химерний шарнір може містити амінокислотну послідовність "верхнього шарніра" (амінокислотні залишки, які відповідають положенням 216-227 відповідно до ЕМ-нумерації), що походить із шарнірної ділянки ЇДО1 людини, 952 людини або Ідс4 людини, в комбінації з послідовністю "нижнього шарніра" (амінокислотні залишки, які відповідають положенням 228-236 відповідно до ЕМО-нумерації), що походить із шарнірної ділянки ІдДс1 людини, Ідс2 людини або Ідс4 людини. Відповідно до певних варіантів здійснення химерна шарнірна ділянка містить амінокислотні залишки, що походять із верхнього шарніра

ЇД01 людини або Ідсб4 людини, та амінокислотні залишки, що походять із нижнього шарніра

Ід02 людини. Антитіло, яке містить описану в даному документі химерну Сн-ділянку, згідно з певними варіантами здійснення може проявляти ефекторні функції модифікованого Ес без негативного впливу на терапевтичні або фармакокінетичні властивості антитіла. (Див., наприклад, публікацію заявки на патент США Мо 20140243504, розкриття якої включено в даний документ за допомогою посилання у всій своїй повноті). Згідно з певними варіантами здійснення

Ес-ділянка містить послідовність, вибрану з групи, що складається з 5БЕО ІЮО МО: 569, 570, 571, 572 і 573.

Біологічні характеристики антитіл 00153) У цілому, функція антитіл за даним винаходом полягає у зв'язуванні І АОЗ. Даний винахід включає антитіла до ГАЗ та їхні антигензв'язувальні фрагменти, які з високою афінністю зв'язують розчинні молекули мономерного або димерного ГАсС3. Наприклад, даний винахід включає антитіла та антигензв'язувальні фрагменти антитіл, які зв'язують мономерний

ГАСЗ (наприклад, при 25 "С або при 37 "С) з Ко менше ніж приблизно 10 нМ, як виміряно за допомогою методу поверхневого плазмонного резонансу, наприклад, із застосуванням формату аналізу, визначеного в прикладі З у даному документі. Згідно з певними варіантами здійснення антитіла або їхні антигензв'язувальні фрагменти зв'язують мономерний ГАСЗ з Ко менше ніж приблизно 5 НМ, менше ніж приблизно 2 НМ, менше ніж приблизно 1 нМ, менше ніж приблизно 0,5 нМ, менше ніж приблизно 0,1 нМ, менше ніж приблизно 0,05 нМ або менше ніж приблизно 0,04 нМ, як виміряно за допомогою методу поверхневого плазмонного резонансу, наприклад, із застосуванням формату аналізу, визначеного в прикладі З у даному документі, або в значній мірі подібного аналізу. 00154) Даний винахід також включає антитіла та їхні антигензв'язувальні фрагменти, які зв'язують димерний ГАЗ (наприклад, при 25 С або при 37 "С) з Ко менше ніж приблизно 1,1 нМ, як виміряно за допомогою методу поверхневого плазмонного резонансу, наприклад, із 60 застосуванням формату аналізу, визначеного в прикладі З у даному документі. Згідно з певними варіантами здійснення антитіла або їхні антигензв'язувальні фрагменти зв'язують димерний

ГАСЗ з Ко менше ніж приблизно 0,5 НМ, менше ніж приблизно 0,25 нМ, менше ніж приблизно 0,1 НМ, менше ніж приблизно 0,05 НМ або менше ніж приблизно 0,01 М, як виміряно за допомогою методу поверхневого плазмонного резонансу, наприклад, із застосуванням формату аналізу, визначеного в прикладі З у даному документі, або в значній мірі подібного аналізу. 00155) Даний винахід також включає антитіла та їхні антигензв'язувальні фрагменти, які зв'язують І АСЗ із напівперіодом дисоціації (2) більше ніж приблизно 1,6 хвилини, як виміряно за допомогою методу поверхневого плазмонного резонансу при 252С або 372С, наприклад, із застосуванням формату аналізу, визначеного в прикладі З у даному документі, або в значній мірі подібного аналізу. Згідно з певними варіантами здійснення антитіла або антигензв'язувальні фрагменти за даним винаходом зв'язують І АСЗ з 25 більше ніж приблизно

Бхвилин, більше ніж приблизно 10 хвилин, більше ніж приблизно 30 хвилин, більше ніж приблизно 50 хвилин, більше ніж приблизно 60 хвилин, більше ніж приблизно 70 хвилин, більше ніж приблизно 80 хвилин, більше ніж приблизно 90 хвилин, більше ніж приблизно 100 хвилин, більше ніж приблизно 200 хвилин, більше ніж приблизно 300 хвилин, більше ніж приблизно 400 хвилин, більше ніж приблизно 500 хвилин, більше ніж приблизно 600 хвилин, більше ніж приблизно 700 хвилин, більше ніж приблизно 800 хвилин, більше ніж приблизно 900 хвилин, більше ніж приблизно 1000 хвилин або більше ніж приблизно 1100 хвилин, як виміряно за допомогою методу поверхневого плазмонного резонансу при 2592С або 372С, наприклад, із застосуванням формату аналізу, визначеного в прикладі З у даному документі (наприклад, формату з іммобілізацією тАбБ або іммобілізацією антигену), або в значній мірі подібного аналізу. 00156) Даний винахід також включає антитіла або їхні антигензв'язувальні фрагменти, які зв'язуються з клітиною, яка експресує ГАСЗ людини, з ЕС5о менше ніж приблизно 8 нМ, як виміряно за допомогою аналізу з використанням проточної цитометрії, визначеного в прикладі 5 у даному документі, або в значній мірі подібного аналізу. Згідно з певними варіантами здійснення антитіла або їхні антигензв'язувальні фрагменти зв'язуються з клітиною, яка експресує ПГАСЗ, з ЕС5о менше ніж приблизно 5 НМ, менше ніж приблизно 2 нМ, менше ніж приблизно 1 НМ або менше ніж приблизно 0,5 НМ, як виміряно за допомогою аналізу з використанням проточної цитометрії, наприклад, із застосуванням формату аналізу із прикладу 5 у даному документі або в значній мірі подібного аналізу.

Ї0О0157| Даний винахід також включає антитіла або їхні антигензв'язувальні фрагменти, які зв'язуються з клітиною, яка експресує Г(АСЗ яванського макаки, з ЕСзо менше ніж приблизно 2,5 НМ, як виміряно за допомогою аналізу з використанням проточної цитометрії, визначеного в прикладі 5 у даному документі, або в значній мірі подібного аналізу. Згідно з певними варіантами здійснення антитіла або їхні антигензв'язувальні фрагменти зв'язуються з клітиною, яка експресує пП АС3, з ЕСоо менше ніж приблизно 2 НМ або менше ніж приблизно 1 нМ, як виміряно за допомогою аналізу з використанням проточної цитометрії, наприклад, із застосуванням формату аналізу, визначеного в прикладі 5 у даному документі, або в значній мірі подібного аналізу.

ЇО0158) Даний винахід також включає антитіла або їхні антигензв'язувальні фрагменти, які блокують зв'язування Г(АСЗ з МНС класу ІЇ (НГІА-ЮОК2 людини) з ІСзо менше ніж приблизно

З2 НМ, як визначено із застосуванням аналізу клітинної адгезії, наприклад, представленого в прикладі 7, або в значній мірі подібного аналізу. Згідно з певними варіантами здійснення антитіла або їхні антигензв'язувальні фрагменти блокують зв'язування І АСЗ з МНС класу ЇЇ людини з ІС5о менше ніж приблизно 25 нМ, менше ніж приблизно 20 нМ, менше ніж приблизно 10 НМ або менше ніж приблизно 5 НМ, як виміряно за допомогою аналізу клітинної адгезії, наприклад, із застосуванням формату аналізу, визначеного в прикладі 7 у даному документі, або в значній мірі подібного аналізу. 00159) Даний винахід також включає антитіла або їхні антигензв'язувальні фрагменти, які блокують зв'язування І АСЗ з МНС класу ІІ (НГА-ОК2 миші) з ІСхо менше ніж приблизно 30 нМ, як визначено із застосуванням аналізу клітинної адгезії, наприклад, представленого в прикладі 7, або в значній мірі подібного аналізу. Згідно з певними варіантами здійснення антитіла або їхні антигензв'язувальні фрагменти блокують зв'язування ГАСЗ миші з МНС класу ІІ людини з ІС5о менше ніж приблизно 25 нМ, менше ніж приблизно 20 нМ, менше ніж приблизно 10 нМ або менше ніж приблизно 5 нМ, як виміряно за допомогою аналізу клітинної адгезії, наприклад, із застосуванням формату аналізу, визначеного в прикладі 7 у даному документі, або в значній мірі подібного аналізу. 00160) Даний винахід також включає антитіла або їх антигензв'язувальний фрагмент, які 60 блокують зв'язування І АОЗ з МНС класу ІІ людини або миші більше ніж на 9095, як виміряно за допомогою аналізу клітинної адгезії, визначеного в прикладі 7 у даному документі, або в значній мірі подібного аналізу.

Ї0О0161| Даний винахід також включає антитіла або їхні антигензв'язувальні фрагменти, які блокують індуковану ГАС негативну регуляцію Т-клітин з ЕСхо менше ніж 9 нМ, як виміряно за допомогою аналізу за репортерним геном люциферази з використанням Т-клітин/АРС, визначеного в прикладі 8 у даному документі, або в значній мірі подібного аналізу. Згідно з певними варіантами здійснення антитіла або їхні антигензв'язувальні фрагменти блокують індуковану ГАСЗ негативну регуляцію Т-клітин з ЕС5о менше ніж приблизно 5 нМ, менше ніж приблизно 1 нМ, менше ніж приблизно 0,5 нМ або менше ніж приблизно 0,1 нМ, як виміряно за допомогою аналізу за репортерним геном люциферази з використанням Т-клітин/АРС, наприклад, із застосуванням формату аналізу, визначеного в прикладі 8 у даному документі, або в значній мірі подібного аналізу. 00162) Даний винахід також включає антитіла або їхні антигензв'язувальні фрагменти, які зв'язуються з активованими СО4- і СО8- Т-клітинами яванського макаки з ЕС5о менше ніж приблизно 1,2 НМ, як виміряно за допомогою флуоресцентного аналізу, визначеного в прикладі 9 у даному документі, або в значній мірі подібного аналізу. Згідно з певними варіантами здійснення антитіла або їхні антигензв'язувальні фрагменти зв'язуються з активованими СО4ч |і

СОв8-- Т-клітинами яванського макаки з ЕСхо менше ніж приблизно 1,1 нМ, менше ніж приблизно 1 нМ, менше ніж приблизно 0,5 НМ, менше ніж приблизно 0,2 нНМ або менше ніж приблизно 01 НМ, як виміряно за допомогою флуоресцентного аналізу, наприклад, із застосуванням формату аналізу, визначеного в прикладі 9 у даному документі, або в значній мірі подібного аналізу. 00163) Згідно з певними варіантами здійснення функція антитіл за даним винаходом може полягати у блокуванні або інгібуванні активності зв'язування МНС класу ЇЇ, асоційованого з

ГАСЗ, шляхом зв'язування з будь-якою іншою ділянкою або фрагментом повнорозмірного білка, амінокислотна послідовність якого представлена 5ЕО ІО МО: 582. 00164 Згідно з певними варіантами здійснення антитіла за даним винаходом є придатними для інгібування росту пухлини або затримки прогресування злоякісної пухлини при профілактичному введенні суб'єкту, який потребує цього, і можуть забезпечити підвищення виживаності суб'єкта. Наприклад, введення антитіла за даним винаходом може приводити до зменшення первинної пухлини і може попередити метастазування або розвиток вторинних пухлин. Згідно з певними варіантами здійснення антитіла за даним винаходом є придатними для інгібування росту пухлини при терапевтичному введенні суб'єкту, який потребує цього, і можуть забезпечити підвищення виживаності суб'єкта. Наприклад, введення суб'єкту терапевтично ефективної кількості антитіла за даним винаходом може приводити до зменшення та зникнення у суб'єкта пухлини, що розвинулася.

Ї00165| Згідно з одним варіантом здійснення даний винахід стосується виділеного рекомбінантного моноклонального антитіла або його антигензв'язувального фрагмента, які зв'язуються з ГАСЗ3, де антитіло або його фрагмент володіють однією або декількома із наступних характеристик: (ії) містять НСМУК з амінокислотною послідовністю, вибраною з групи, що складається з 5ЕО ІЮ МО: 2, 18, 34, 50, 66, 82, 98, 114, 130, 146, 162, 178, 194, 210, 226, 242, 258, 274, 290, 306, 322, 338, 354, 370, 386, 402, 418, 434, 450, 458, 466, 474, 482, 490, 498, 506, 514, 538 і 554, або в значній мірі подібною їй послідовністю, яка характеризується щонайменше 9095, щонайменше 9595, щонайменше 9895 або щонайменше 9995 ідентичністю послідовностей; (ї) містить ГСМК з амінокислотною послідовністю, вибраною з групи, що складається з ЗЕО ІЮ

МО: 10, 26, 42, 58, 74, 90, 106, 122, 138, 154, 170, 186, 202, 218, 234, 250, 266, 282, 298, 314, 330, 346, 362, 378, 394, 410, 426, 442, 522, 530, 546 і 562, або в значній мірі подібною їй послідовністю, яка характеризується щонайменше 9095, щонайменше 9595, щонайменше 9895 або щонайменше 9995 ідентичністю послідовностей; (її) містить НСОКЗ-домен з амінокислотною послідовністю, вибраною з групи, що складається з 5ЕБЕО ІЮО МО: 8, 24, 40, 56, 72, 88, 104, 120, 136, 152, 168, 184, 200, 216, 232, 248, 264, 280, 296, 312, 328, 344, 360, 376, 392, 408, 424, 440, 456, 464, 472, 480, 488, 496, 504, 512, 520, 544 і 560, або в значній мірі подібною їй послідовністю, яка характеризується щонайменше 9095, щонайменше 9595, щонайменше 9895 або щонайменше 9995 ідентичністю послідовностей; і ЇСОКЗ-домен з амінокислотною послідовністю, вибраною з групи, що складається з 5ЕО ІЮО МО: 16, 32, 48, 64, 80, 96, 112, 128, 144, 160, 176, 192, 208, 224, 240, 256, 272, 288, 304, 320, 336, 352, 368, 384, 400, 416, 432, 448, 528, 536, 552 і 568, або в значній мірі подібною їй послідовністю, яка характеризується щонайменше 9095, щонайменше 9595, щонайменше 9895 або щонайменше 9995 ідентичністю послідовностей; (ім) містить НСОК1-домен з амінокислотною послідовністю, бо вибраною з групи, що складається з 5ЕО ІЮО МО: 4, 20, 36, 52, 68, 84, 100, 116, 132, 148, 164,

180, 196, 212, 228, 244, 260, 276, 292, 308, 324, 340, 356, 372, 388, 404, 420, 436, 452, 460, 468, 476, 484, 492, 500, 508, 516, 540 і 556, або в значній мірі подібною їй послідовністю, яка характеризується щонайменше 9096, щонайменше 9595, щонайменше 9895 або щонайменше 9995 ідентичністю послідовностей; НСОК2-домен з амінокислотною послідовністю, вибраною з групи, що складається з 5ЕО ІЮО МО: 6, 22, 38, 54, 70, 86, 102, 118, 134, 150, 166, 182, 198, 214, 230, 246, 262, 278, 294, 310, 326, 342, 358, 374, 390, 406, 422, 438, 454, 462, А70, 478, 486, 494, 502, 510, 518, 542 і 558, або в значній мірі подібною їй послідовністю, яка характеризується щонайменше 9095, щонайменше 9595, щонайменше 9895 або щонайменше 9995 ідентичністю послідовностей; І! СОМКІ-домен з амінокислотною послідовністю, вибраною з групи, що складається з 5ЕО ІО МО: 12, 28, 44, 60, 76, 92, 108, 124, 140, 156, 172, 188, 204, 220, 236, 252, 268, 284, 300, 316, 332, 348, 364, 380, 396, 412, 428, 444, 524, 532, 548 і 564, або в значній мірі подібною їй послідовністю, яка характеризується щонайменше 9095, щонайменше 9595, щонайменше 9895 або щонайменше 9995 ідентичністю послідовностей; і ГСОК2-домен з амінокислотною послідовністю, вибраною з групи, що складається з 5ЕО ІЮО МО: 14, 30, 46, 62, 78, 94, 110, 126, 142, 158, 174, 190, 206, 222, 238, 254, 270, 286, 302, 318, 334, 350, 366, 382, 398, 414, 430, 446, 526, 534, 550 і 566, або в значній мірі подібною їй послідовністю, яка характеризується щонайменше 9096, щонайменше 9595, щонайменше 9895 або щонайменше 9995 ідентичністю послідовностей; (м) зв'язують мономерний ГАСЗ людини з константою дисоціації (Ко) для рівноважного зв'язування, яка становить менше ніж приблизно 10 нМ, як виміряно в аналізі на основі явища поверхневого плазмонного резонансу при 25 "С; (мі) зв'язують мономерний І АСЗ людини з Ко менше ніж приблизно 8 НМ, як виміряно в аналізі на основі явища поверхневого плазмонного резонансу при 37 "С; (мії) зв'язують димерний (ДОЗ людини з Ко менше ніж приблизно 1,1 нМ, як виміряно в аналізі на основі явища поверхневого плазмонного резонансу при 25 "С; (мії) зв'язують димерний ГАЗ людини з Ко менше ніж приблизно 1 нМ, як виміряно в аналізі на основі явища поверхневого плазмонного резонансу при 37 "С; (їх) зв'язуються з клітиною, яка експресує ПІ АСЗ, з ЕС5о менше ніж приблизно 8 нМ, як виміряно в аналізі з використанням проточної цитометрії; (х) зв'язуються з клітиною, яка експресує ті! АСЗ, з ЕС5о менше ніж приблизно 2,3 нМ, як виміряно в аналізі з використанням проточної цитометрії; (хі) блокують зв'язування ПІ АСЗ з МНС класу ІІ людини з ІСзо менше ніж приблизно 32 НМ, як визначено за допомогою аналізу клітинної адгезії; (хії) блокують зв'язування ПГАСЗ з МНС класу ІЇ миші з ЇС5о менше ніж приблизно 30 нМ, як визначено за допомогою аналізу клітинної адгезії; (хії) блокують зв'язування ПІ АСЗ з МНС класу ІІ більше ніж на 9095, як визначено за допомогою аналізу клітинної адгезії; (хім) забезпечують звільнення від опосередкованого ІГАСЗ інгібування активності Т-клітин з ЕС5о менше ніж приблизно 9 нМ, як визначено в аналізі за репортерним геном люциферази; (ху) зв'язуються з активованими СО4ч і

Сова Т-клітинами з ЕС»о менше ніж приблизно 1,2 НМ, як визначено у флуоресцентному аналізі; (хмі) забезпечують пригнічення росту пухлини і підвищення виживаності суб'єкта зі злоякісною пухлиною і (хмії) є повністю людськими.

Ї0016б|Антитіла за даним винаходом можуть володіти однією або декількома із вищезгаданих біологічних характеристик або будь-якою їх комбінацією. Інші біологічні характеристики антитіл за даним винаходом будуть очевидними для фахівця у даній галузі із огляду даного розкриття, включаючи демонстраційні приклади у даному документі.

Міжвидова вибірковість і міжвидова перехресна реактивність

І00167| Відповідно до певних варіантів здійснення даного винаходу антитіла до ГАЗ зв'язуються з | АОЗ людини, але не з І АОЗ інших видів. Як альтернатива, антитіла до | АСЗ за даним винаходом згідно з певними варіантами здійснення зв'язуються з | АСЗ людини і з ГАЗ одного або декількох відмінних від людини видів. Наприклад, антитіла до (АСЗ за даним винаходом можуть зв'язуватися з | АСЗ3 людини, і можуть зв'язувати або не зв'язувати, у відповідних випадках, один або декілька із ГГ АСЗ миші, пацюка, мурчака, хом'яка, піщанки, свині, кішки, собаки, кролика, кози, вівці, корови, коня, верблюда, яванського макаки, мартишки, макаки-резуса або шимпанзе. Згідно з певними варіантами здійснення антитіла до ГАСЗ за даним винаходом можуть зв'язуватися з | АСЗ людини і яванського макаки з аналогічними показниками афінності або з різними показниками афінності, але не зв'язуються з | АСЗ пацюка та миші.

Картування епітопів і пов'язані технології 00168) Даний винахід включає антитіла до І АС3З, які взаємодіють з однією або декількома амінокислотами, які знаходяться в межах одного або декількох доменів молекули ГАЗ, включаючи, наприклад, позаклітинні домени 01-04, трансмембранний домен «і внутрішньоклітинний домен. Епітоп, з яким зв'язуються антитіла, може складатися з однієї 60 неперервної послідовності з З або більше (наприклад, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16,

17, 18, 19, 20 або більше) амінокислот, розташованих в межах будь-якого з вищезгаданих доменів молекули ГАЗ (наприклад, лінійний епітоп домену). Як альтернатива, епітоп може складатися з багатьох амінокислот, які перериваються (або амінокислотних послідовностей), розташованих в межах будь-якого з або всіх вищезгаданих доменів молекули І АСЗ (наприклад, конформаційний епітоп).

Ї00169| Для визначення того факту, що антитіло "взаємодіє з одним або декількома амінокислотами" в межах поліпептиду або білка, можна застосовувати різні методики, відомі фахівцям у даній галузі. Ілюстративні методики включають, наприклад, стандартні епітоп- перехресні конкурентні аналізи, як, наприклад, описані в Апііродіе5, Нагіож/ апа ІГапе (Соїй

Зргіпд Нагрог Ргезз, Колд Спрінг Харбор, Нью-Йорк). Інші способи включають мутаційний аналіз зі скануванням аланіном, блот-аналіз пептидів (КеіпеКе (2004) Меїйодз Мої. Віої. 248. 443-63), кристалографічні дослідження з аналізом розщеплення пептидів і ЯМР-аналіз. Крім того, можна використовувати такі способи, як метод вирізання епітопа, метод виділення епітопа та хімічна модифікація антигенів (Тотег (2000) Ргої. сі. 9. 487-496). Іншим способом, який можна застосовувати для ідентифікації амінокислот в межах поліпептиду, з яким взаємодіє антитіло, є гідроген-дейтерієвий обмін, який можна виявити за допомогою мас-спектрометрії. Загалом, спосіб гідроген-дейтерієвого обміну передбачає мічення білка, який становить інтерес, дейтерієм, із подальшим зв'язуванням антитіла з міченим дейтерієм білком. Потім комплекс білок/"антитіло переносять у воду, і здатні до обміну протони в амінокислотах, закриті перебуваючи в комплексі з антитілом, піддаються зворотньому обміну дейтерію на гідроген повільніше, ніж здатні до обміну протони в амінокислотах, які не є частиною зони контакту. У результаті амінокислоти, які утворюють частину зони контакту білок/антитіло, можуть зберігати в своєму складі дейтерій і, таким чином, характеризуватися відносно більшою масою порівняно з амінокислотами, не включеними в зону контакту. Після дисоціації антитіла цільовий білок піддають розщепленню протеазою і мас-спектрометричному аналізу, з виявленням таким чином мічених дейтерієм залишків, які відповідають специфічним амінокислотам, з якими взаємодіє антитіло. Див., наприклад, Енгіпд (1999) Апа/|уїіса! Віоспетівігу 267: 252-259; Епдеп апа 5тійн (2001) Апаї. Спет. 73: 256А-265А. 001701) Термін "епітоп" стосується ділянки на антигені, на який реагують В- та/або Т-клітини.

Епітопи для В-клітин можуть бути утворені як неперервними амінокислотами, так і амінокислотами, які перериваються, розташованими поряд завдяки згортанню білка у третинну структуру. Епітопи, утворені з неперервних амінокислот, як правило, зберігаються у разі впливу денатуруючих розчинників, тоді як епітопи, утворені завдяки згортанню у третинну структуру, як правило, втрачаються у разі обробки денатуруючими розчинниками. Епітоп, як правило, включає щонайменше 3, і, частіше, щонайменше 5 або 8-10 амінокислот в унікальній просторовій конформації.

Ї00171| Аналіз на основі модифікацій (Модійсайфоп-Аввівієй Ргойїпоу, МАР), також відомий як аналіз антитіл на основі структури антигенів (Апіїдеп Зігисіиге-базей Апіїбоду Ргоїййпо, АБАР), являє собою спосіб, який дозволяє класифікувати великі кількості моноклональних антитіл (тАБ), спрямованих проти одного і того ж самого антигену, базуючись на схожості профілів зв'язування кожного антитіла з хімічно або ферментативно модифікованими поверхнями антигенів (див. О5 2004/0101920, включену в даний документ за допомогою посилання у всій своїй повноті). Кожна категорія може відповідати унікальному епітопу, який або явно відрізняється від епітопа, який відповідає іншій категорії, або частково перекривається з ним.

Така технологія дозволяє виключати генетично ідентичні антитіла, завдяки чому визначення характеристик може бути сфокусовано на генетично відмінних антитілах. У випадку застосування для скринінгу гібридом, МАР може спростити ідентифікацію рідкісних клонів гіоридом, які продукують тАБб з необхідними характеристиками. МАР можна застосовувати для розподілу антитіл за даним винаходом на групи антитіл, які зв'язують різні епітопи.

ІЇ00172| Згідно з певними варіантами здійснення антитіла до 1АСЗ3 або їхні антигензв'язувальні фрагменти зв'язують епітоп в межах будь-якої однієї або декількох ділянок, представлених в І АСЗ, або в природній формі, представленій ЗЕО ІЮО МО: 582, або одержаній рекомбінантним шляхом, представленій 5ЕО ІЮО МО: 574-576, або їхнього фрагмента. Згідно з деякими варіантами здійснення антитіла за даним винаходом зв'язуються з позаклітинною ділянкою, яка містить одну або декілька амінокислот, вибраних із групи, що складається з амінокислотних залишків 29-450 І АОЗ. Згідно з деякими варіантами здійснення антитіла за даним винаходом зв'язуються з позаклітинною ділянкою, яка містить одну або декілька амінокислот, вибраних із групи, що складається з амінокислотних залишків 1-533 ІдИЗ яванського макаки, представленого 5ЕО ІЮ МО: 576. 60 00173) Згідно з певними варіантами здійснення даний винахід включає антитіла до Г АсЗ та їхні антигензв'язувальні фрагменти, які взаємодіють з одним або декількома епітопами, що знаходяться в межах позаклітинної ділянки ГАЗ (5ЕБО ІЮО МО: 588). Епітоп(-и) можуть складатися з однією або декількох неперервних послідовностей із З або більше (наприклад, 3, 4,5,6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 або більше) амінокислот, розташованих в межах позаклітинної ділянки ГАСЗ3. Як альтернатива, епітоп може складатися з багатьох амінокислот, які перериваються (або амінокислотних послідовностей), розташованих в межах позаклітинної ділянки ГАЗ. Як показано в прикладі 18 у даному документі, епітоп І АСЗ, з яким взаємодіє ілюстративне антитіло за даним винаходом Н4і5зНІ15482Р, визначений амінокислотною послідовністю

ГАВАОМТУМОНОРОБОРРАААРОНРІ АРОРНРААРЗБЗУМОРКРАККУ (5ЕБЕО 10 МО: 589), яка відповідає амінокислотам 28-71 5ЕО ІО МО: 588. Отже, даний винахід включає антитіла до

АС3, які взаємодіють з однією або декількома амінокислотами, які містяться в межах ділянки, що складається з амінокислот 28-71 5ЕБЕО ОО МО: 588 (тобто послідовність

ГАВАСМГМОНОРОБОРРАААРОНРІ АРОРНРААРБЗБУХОаРЕРЕНУ |5ЕО ІО МО: 5891). 00174) Даний винахід включає антитіла до ГАЗ, які зв'язуються з тим же самим епітопом, або частиною епітопа, що й будь-яке із специфічних ілюстративних антитіл, описаних у даному документі в таблиці 1, або антитіло з послідовностями СОК із будь-якого з ілюстративних антитіл, описаних у таблиці 1. Аналогічно, даний винахід також включає антитіла до | АСЗ3, які конкурують за зв'язування з ГАСЗ або фрагментом ГАЗ з будь-яким із специфічних ілюстративних антитіл, описаних у даному документі в таблиці 1, або антитілом із послідовностями СОК із будь-якого з ілюстративних антитіл, описаних у таблиці 1. Наприклад, даний винахід включає антитіла до ГАЗ, які перехресно конкурують за зв'язування з ГАЗ з одним або декількома антитілами, визначеними в прикладі 4 у даному документі (наприклад,

На5зн1Т5482Р, На5ЗН1І5479Р, На5знНІ4813М, НАНІ4813М, НаАНІ5479Р, НАНІТ5482Р, НАНІ5483Р,

На5нН15498Р, НАН15498Р, НАН17828Р2, НАНІ17819Р ії НАНІ1Т7823Р).

Ї00175|Із застосуванням відомих у даній галузі стандартних способів можна легко визначити, чи зв'язується антитіло з тим же самим епітопом, що й еталонне антитіло до І АСЗ, або чи конкурує з ним за зв'язування. Наприклад, для визначення того, чи зв'язується тестоване антитіло з тим же самим епітопом, що й еталонне антитіло до ГАСЗ за даним винаходом, забезпечують зв'язування еталонного антитіла з білююм або пептидом ГАЗ в умовах насичення. Потім оцінюють здатність тестованого антитіла зв'язуватися з молекулою ІАоЗ3.

Якщо тестоване антитіло здатне зв'язуватися з ГАСЗ після насичувального зв'язування з використанням еталонного антитіла до (ГАСЗ, можна зробити висновок, що тестоване антитіло зв'язується з іншим епітопом, ніж еталонне антитіло до ГАСЗ. Навпаки, якщо тестоване антитіло не здатне зв'язуватися з білююм ГАСЗ після насичувального зв'язування з використанням еталонного антитіла до ГАСЗ, то тестоване антитіло може зв'язуватися з тим же самим епітопом, що й епітоп, зв'язаний еталонним антитілом до | АОЗ за даним винаходом. 00176) Для визначення того, чи конкурує антитіло за зв'язування з еталонним антитілом до

Г АСЗ, здійснюють описаний вище метод на основі зв'язування у двох напрямках: При здійсненні методу в першому напрямку забезпечують зв'язування еталонного антитіла з білком І АСЗ в умовах насичення з подальшою оцінкою зв'язування тестованого антитіла з молекулою І АОЗ3.

При здійсненні методу в другому напрямку забезпечують зв'язування тестованого антитіла з молекулою ГАЗ в умовах насичення з подальшою оцінкою зв'язування еталонного антитіла з молекулою ГАЗ. Якщо, при здійсненні методу в обох напрямках, тільки перше (насичувальне зв'язування) антитіло здатне зв'язуватися з молекулою ГАСЗ3, то роблять висновок, що тестоване антитіло та еталонне антитіло конкурують за зв'язування з І АО3. Як буде зрозуміло фахівцю у даній галузі, антитіло, яке конкурує за зв'язування з еталонним антитілом, необов'язково повинне зв'язуватися з епітопом, ідентичним такому для еталонного антитіла, але може стерично блокувати зв'язування еталонного антитіла завдяки зв'язуванню епітопа, який перекривається, або суміжного епітопа.

Ї00177|Два антитіла зв'язуються з одним і тим самим епітопом, або епітопом, який перекривається, якщо кожне конкурентним чином інгібує (блокує) зв'язування іншого з антигеном. А саме, 1-, 5-, 10-, 20- або 100-кратний надлишок одного антитіла інгібує зв'язування іншого щонайменше на 5095, а переважно 7595, 9095 або навіть 9995, як виміряно в конкурентному аналізі зв'язування (див., наприклад, Уипднапз еї аї., Сапсег Ке5. 1990 50:1495- 1502). Як альтернатива, два антитіла зв'язують один і той самий епітоп, якщо практично всі мутації за амінокислотами в антигені, які знижують або виключають зв'язування одного антитіла, знижують або виключають зв'язування іншого. Два антитіла зв'язують епітопи, які перекриваються, якщо деякі мутації за амінокислотами, які знижують або виключають 60 зв'язування одного антитіла, знижують або виключають зв'язування іншого.

00178) Потім можна здійснювати додаткові стандартні експерименти (наприклад, мутування пептидів і аналізи зв'язування) для підтвердження того, чи дійсно спостережувана відсутність зв'язування тестованого антитіла обумовлена зв'язуванням з тим же самим епітопом, що й епітоп для еталонного антитіла, або ж за відсутність спостережуваного зв'язування відповідає стеричне блокування (або інше явище). Експерименти такого типу можна здійснювати із застосуванням ЕГІ5А, КІА, методу поверхневого плазмонного резонансу, проточної цитометрії або будь-якого іншого відомого із даної галузі кількісного або якісного аналізу зв'язування антитіл.

Імунокон'югати

Ї00179| Даний винахід охоплює моноклональне антитіло людини до ГАСЗ, кон'юговане з терапевтичною сполукою ("імунокон'югат"), такою як цитотоксин або хіміотерапевтичний засіб для лікування злоякісної пухлини. У контексті даного документа термін "імунокон'югат" стосується антитіла, яке хімічно або біологічно зв'язано з цитотоксином, радіоактивною речовиною, цитокіном, інтерфероном, націленою або репортерною сполукою, ферментом, токсином, пептидом або білком або терапевтичним засобом. Антитіло може бути зв'язано з цитотоксином, радіоактивною речовиною, цитокіном, інтерфероном, націленою або репортерною сполукою, ферментом, токсином, пептидом або терапевтичним засобом у будь- якому місцезнаходження уздовж всієї молекули за умови, що воно зберігає здатність зв'язувати свою мішень. Приклади імунокон'югатів включають кон'югати антитіла і лікарського засобу і злиті білки антитіло-токсин. Згідно з одним варіантом здійснення засобом може бути друге відмінне антитіло до ГАС3. Згідно з певними варіантами здійснення антитіло може бути кон'юговане із засобом, специфічним щодо пухлинної клітини або інфікованої вірусом клітини.

Тип терапевтичної сполуки, яка може бути кон'югована з антитілом до І АС3, буде залежати від стану, який підлягає лікуванню, та від необхідного терапевтичного ефекту, який повинен бути досягнутий. Приклади придатних засобів для утворення імунокон'югатів відомі в даній галузі; див., наприклад, М/О 05/103081.

Поліспецифічні антитіла

І00180| Антитіла за даним винаходом можуть бути моноспецифічними, біспецифічними або поліспецифічними. Поліспецифічні антитіла можуть бути специфічними щодо різних епітопів одного цільового поліпептиду або можуть містити антигензв'язувальні домени, специфічні щодо більше ніж одного цільового поліпептиду. Див., наприклад, Тий еї аї., 1991, 9. Іттипої. 147:60- 69; Киїег еї а!., 2004, Тгтепаз Віоїесппої. 22:238-244.

І0О0181| Згідно з одним аспектом даний винахід включає поліспецифічні антигензв'язувальні молекули або їхні антигензв'язувальні фрагменти, де один специфічний елемент імуноглобуліну є специфічним щодо позаклітинного домену ГАЗ, або його фрагмента, а інший специфічний елемент імуноглобуліну є специфічним щодо зв'язування за межами позаклітинного домену

ГАЗ, або другої мішені для терапевтичного впливу, або кон'югований із терапевтичною сполукою. 00182) Будь-яка із поліспецифічних антигензв'язувальних молекул за даним винаходом або її варіантів може бути сконструйована із застосуванням стандартних методів молекулярної біології (наприклад, технології рекомбінантних ДНК і білкової інженерії), як буде відомо фахівцю в даній галузі. 00183) Згідно з деякими варіантами здійснення ГАсСЗ-специфічні антитіла одержують у біспецифічному форматі ("біспецифічні", в якому варіабельні ділянки, які зв'язуються з відмінними доменами ГГ АС, з'єднані разом для забезпечення специфічності щодо двох доменів в межах однією зв'язувальної молекули. Сконструйовані відповідним чином біспецифічні молекули можуть посилювати загальну ефективність щодо інгібування ГАЗ завдяки підвищенню як специфічності, так і авідності зв'язування. Варіабельні ділянки зі специфічністю щодо окремих доменів (наприклад, сегментів М-кінцевого домену), або які можуть зв'язуватися з різними ділянками в межах одного домену, об'єднують у пару на структурному каркасі, що дозволяє кожній ділянці зв'язуватися одночасно з окремими епітопами або з різними ділянками в межах одного домену. Згідно з одним прикладом біспецифічні варіабельні ділянки важкого ланцюга (Мн) зв'язувальної молекули зі специфічністю щодо одного домену рекомбінують із варіабельними ділянками легкого ланцюга (Мі) ряду зв'язувальних молекул зі специфічністю щодо іншого домену з метою ідентифікації неспоріднених партнерів Мі, які можна об'єднувати в пару з вихідним Мн без порушення вихідної специфічності для такого Мн. Таким чином, один сегмент Мі (наприклад, МІ 1) можна комбінувати з двома різними Ун-доменами (наприклад, Мн! і

Мнг) з одержанням біспецифічної молекули, яка складається зі зв'язувальних "плечей" (Мні-мі1 і Мн2а-Мі1). Застосування одного сегмента Мі спрощує систему і, таким чином, полегшує 60 здійснення застосовуваних для одержання біспецифічної молекули процесів клонування,

Зо експресії та очищення і підвищує їх ефективність (див., наприклад, 0О555413/022759 і

О52010/0331527). 00184) Як альтернатива, антитіла, які зв'язують більше ніж один домен і другу мішень, таку як, без обмеження, наприклад, друге відмінне антитіло до ГАСЗ, можуть бути одержані у біспецифічному форматі із застосуванням описаних у даному документі методик або інших відомих фахівцям у даній галузі методик. Варіабельні ділянки антитіла, які зв'язуються з відмінними ділянками, можуть бути з'єднані разом з варіабельними ділянками, які зв'язуються з відповідними ділянками, наприклад, позаклітинного домену ГАЗ, для забезпечення специфічності щодо двох антигенів в межах однієї зв'язувальної молекули. Сконструйовані відповідним чином біспецифічні молекули такого типу виконують подвійну функцію. Варіабельні ділянки зі специфічністю щодо позаклітинного домену комбінують із варіабельною ділянкою зі специфічністю щодо зв'язування за межами позаклітинного домену, і об'єднують їх у пару на структурному каркасі, що дозволяє кожній варіабельній ділянці зв'язуватися з окремими антигенами. 00185) Ілюстративний формат біспецифічного антитіла, який можна застосовувати в контексті даного винаходу, передбачає застосування першого СнЗ-домену імуноглобуліну (Ід) та другого Сн3З3-домену ІД, де перший і другий СнЗ-домени Ід відрізняються один від одного щонайменше за однією амінокислотою, і де відмінність щонайменше за однією амінокислотою обумовлює зниження здатності зв'язування біспецифічного антитіла з білком А порівняно із біспецифічним антитілом, що не характеризується такою відмінністю за амінокислотою. Згідно з одним варіантом здійснення перший СнЗ-домен Ід зв'язує білок А, а другий СнЗ-домен Ід передбачає мутацію, яка обумовлює зниження або усунення здатності зв'язування з білком А, як, наприклад, модифікація НО5К (згідно з ІМОТ-нумерацією мутацій в екзонах; Н4З5К згідно з

Е-нумерацією). Другий Сн3 може додатково передбачати модифікацію У96Е (згідно з ІМСТ;

У4ЗбЕ згідно з ЕО)). Додаткові модифікації, які можна знайти в межах другого Сн3, включають:

Б16Е, І18М, М445, К52М, М57М ії М821І (згідно з ІМСТ; ЮЗ3З56Е, І 358М, М3845, К392М, М397М і

МУ4221 згідно з Е)) у випадку ІдО1-антитіл; М445, К52М і М82І (ІМОТ; М3845, КЗ392М і М4221І згідно з Е)) у випадку Ідс2 антитіл; і О15К, М445, К52М, М57М, КбОК, Е790 і М821 (згідно з ІМОТ;

О355К, М3845, К392М, М397М, К409К, Е4190 і М422І згідно з ЕО) у випадку Ідс4-антитіл.

Варіації описаного вище формату біспецифічного антитіла включені в обсяг даного винаходу. 00186) Інші ілюстративні біспецифічні формати, які можна застосовувати в контексті даного винаходу, включають без обмеження, наприклад, біспецифічні формати на основі зсЕм або у вигляді діатіла, біспецифічні формати у вигляді продуктів злиття Ідс-5сЕм, Їд з подвійними варіабельними доменами (СМ), Оцаагота, антитіла зі структурою "виступ у впадину", антитіла із загальним легким ланцюгом (наприклад, антитіла із загальним легким ланцюгом зі структурою "виступ у впадину" тощо), Стоз5Маб, Сто55Рар, одержаного на основі технології 5ЕЕО антитіла (ЗЕЕО)роду), антитіла, одержаного шляхом опосередкованої лейциновою застібкою димеризації, Опободу, ІдДс1/Лдо2, ІдсС з Рар подвійної дії (ОАЕ) і біспецифічні формати Мар? (див., наприклад, Кіеєїп еї а). 2012, тАре 4:6, 1-11 і цитовані в ній посилання, для огляду перерахованих вище форматів). Біспецифічні антитіла також можуть бути сконструйовані із застосуванням кон'югування пептид/нуклеїнова кислота, наприклад, де застосовують амінокислоти не природного походження з перехресною хімічною активністю для одержання сайт-специфічних кон'югатів антитіло-олігонуклеотид, які потім самозбираються в мультимерні комплекси з певним складом, валентністю та геометрією. (Див., наприклад, Калапе еї аї., 9. Ат.

Сет. 5ос. (Ерир: Оеєс. 4, 20121).

Терапевтичне введення і склади

І00187| Даний винахід стосується терапевтичних композицій, які містять антитіла до ГАЗ або їхні антигензв'язувальні фрагменти за даним винаходом. Терапевтичні композиції відповідно до даного винаходу будуть вводити з придатними носіями, інертними наповнювачами та іншими засобами, які включають у склади для забезпечення поліпшеного перенесення, доставки, переносимості тощо. Велику кількість придатних складів можна знайти в довіднику, відомому всім хімікам-фармацевтам: Кетіпдіоп'є РНагптасеціїса! Зсіепсе5, Маск

Рибіїзпіпд Сотрапу, Істон, Пенсильванія. Такі склади включають, наприклад, порошки, пасти, мазі, желе, воски, масла, ліпіди, везикули, що містять ліпід (катіонний або аніонний) (наприклад,

ПРОРЕЕСТІМ М), ДНК-кон'югати, безводні абсорбуючі пасти, емульсії типу "масло у воді" і "вода в маслі", Сагрожах у вигляді емульсій (поліетиленгліколі з різними молекулярними масами), напівтверді гелі та напівтверді суміші, що містять Сагроулах. Див. також РоуеїЇ еї а). "Сотрепаїйцт ої ехсіріепів їог рагепієга! Топтиїайопв" РОА (1998) У Рпапт 5сі Теснпої! 52:238-311. 00188) Доза антитіла може варіюватися в залежності від віку та розміру суб'єкта, якому його бо будуть вводити, цільового захворювання, станів, шляху введення тощо. Якщо антитіло за даним винаходом застосовують для лікування захворювання або порушення у дорослого пацієнта, або для попередження такого захворювання, доцільно вводити антитіло за даним винаходом зазвичай у вигляді одноразової дози, що становить від приблизно 0,1 до приблизно 60 мг/кг ваги тіла, більш переважно від приблизно 5 до приблизно 60, від приблизно 20 до приблизно 50, від приблизно 10 до приблизно 50, від приблизно 1 до приблизно 10 або від приблизно 0,8 до приблизно 11 мг/кг ваги тіла. Залежно від тяжкості стану частоту і тривалість лікування можна коригувати. Згідно з певними варіантами здійснення антитіло або його антигензв'язувальний фрагмент за даним винаходом можна вводити у вигляді початкової дози, що становить щонайменше від приблизно 0,1 мг до приблизно 800 мг, від приблизно 1 до приблизно 500 мг, від приблизно 5 до приблизно 300 мг або від приблизно 10 до приблизно 200 мг, до приблизно 100 мг або до приблизно 50 мг. Згідно з певними варіантами здійснення після початкової дози можна здійснювати введення другої або декількох наступних доз антитіла або його антигензв'язувального фрагмента в кількості, яка може бути приблизно такою ж або меншою, ніж кількість у випадку початкової дози, де введення наступних доз розділено проміжком часу, що становить від щонайменше 1 дня до З днів; щонайменше один тиждень, щонайменше 2 тижні; щонайменше З тижні; щонайменше 4 тижні; щонайменше 5 тижнів; щонайменше б тижнів; щонайменше 7 тижнів; щонайменше 8 тижнів; щонайменше 9 тижнів; щонайменше 10 тижнів; щонайменше 12 тижнів або щонайменше 14 тижнів.

І00189| Відомі різноманітні системи доставки, і їх можна застосовувати для введення фармацевтичної композиції за даним винаходом, наприклад, включення у ліпосоми, мікрочастинки, мікрокапсули, рекомбінантні клітини, здатні експресувати мутантні віруси, опосередкований рецепторами ендоцитоз (див., наприклад, Ми еї аїЇ. (1987) 9. ВіоЇ. Сет. 262:4429-4432). Способи введення включають без обмеження внутрішньошкірний, черезшкірний, внутрішньом'язовий, внутрішньочеревний, внутрішньовенний, підшкірний, інтраназальний, епідуральний і пероральний шляхи введення. Композиція може бути введена будь-яким придатним шляхом, наприклад, за допомогою інфузії або болюсної ін'єкції, за рахунок абсорбції через епітеліальні або шкірно-слизові вистилки (наприклад, слизову оболонку порожнини рота, слизову оболонку прямої кишки і тонкої кишки тощо), і може бути введена разом з іншими біологічно активними засобами. Введення може бути системним або місцевим.

Фармацевтичну композицію також можна доставляти у складі везикули, зокрема, ліпосоми (див., наприклад, Іапдег (1990) Зсіепсе 249:1527-1533).

Ї00190| Застосування наночастинок для доставки антитіл за даним винаходом також включено в даний документ. Кон'юговані з антитілом наночастинки можна використовувати як для терапевтичних, так і для діагностичних застосувань. Кон'юговані з антитілом наночастинки і способи їх одержання і застосування детально описані в АгІтиеро, М., еї аіІ. 2009 ("Апіібоду- сопіцдаїей папорагпіїсіез Тог Біотеаїсаї! арріїсайопв" іп у). Мапотаї. Моїште 2009, Апісіє ІЮ 439389, 24 радев, адої: 10.1155/2009/439389), включеній у даний документ за допомогою посилання.

Наночастинки можуть бути розроблені і ккон'юговані з антитілами, які містяться у фармацевтичних композиціях, для націлювання на пухлинні клітини, або аутоїмунні клітини тканини, або інфіковані вірусом клітини. Наночастинки для доставки лікарських засобів також були описані, наприклад, в 05 8257740 або 05 8246995, кожна з яких включена в даний документ у всій своїй повноті. 00191) В певних випадках фармацевтична композиція може бути доставлена за допомогою системи контрольованого вивільнення. Згідно з одним варіантом здійснення можна застосовувати насос. Згідно з іншим варіантом здійснення можна застосовувати полімерні речовини. Згідно з ще одним варіантом здійснення система контрольованого вивільнення може бути поміщена поблизу мішені композиції, завдяки чому потрібна лише частина системної дози. 00192) Ін'єкційні препарати можуть передбачати лікарські форми для внутрішньовенних, підшкірних, внутрішньошкірних, інтракраніальних, внутрішньочеревних і внутрішньом'язових ін'єкцій, крапельних інфузій тощо. Такі ін'єкційні препарати можна одержувати за допомогою загальновідомих способів. Наприклад, ін'єкційні препарати можна одержувати, наприклад, шляхом розчинення, суспендування або емульгування описаного вище антитіла або його солі в стерильному водному середовищі або масляному середовищі, зазвичай застосовуваних для ін'єкцій. У вигляді водного середовища для ін'єкцій існують, наприклад, фізіологічний сольовий розчин, ізотонічний розчин, що містить глюкозу та інші допоміжні речовини тощо, які можна застосовувати у поєднанні з відповідним солюбілізуючим засобом, таким як спирт (наприклад, етанол), багатоатомний спирт (наприклад, пропіленгліколь, полієтиленгліколь), неіоногенна поверхнево-активна речовина (наприклад, полісорбат 80, НСО-50 (поліоксиетиленовий (50 молів) аддукт гідрогенізованої касторової олі)| тощо. Як масляне середовище бо використовують, наприклад, кунжутну олію, соєву олію тощо, які можна застосовувати у поєднанні з солюбілізуючим засобом, таким як бензилбензоат, бензиловий спирт тощо.

Одержаним таким чином ін'єкційним розчином переважно заповнюють відповідну ампулу.

Ї00193| Фармацевтична композиція за даним винаходом може бути доставлена підшкірно або внутрішньовенно за допомогою стандартних голки та шприца. Крім того, що стосується підшкірної доставки, для доставки фармацевтичної композиції за даним винаходом легко можна застосовувати пристрій для доставки у вигляді шприц-ручки. Такий пристрій для доставки у вигляді шприц-ручки може бути багаторазовим або одноразовим. В багаторазовому пристрої для доставки у вигляді шприц-ручки зазвичай використовується замінний картридж, який містить фармацевтичну композицію. Після того, як вся фармацевтична композиція з картриджа була введена, і картридж став порожнім, порожній картридж легко можна викинути і замінити на новий картридж, який містить фармацевтичну композицію. Після цього пристрій для доставки у вигляді шприц-ручки можна застосовувати повторно. В одноразовому пристрої для доставки у вигляді шприц-ручки немає змінного картриджа. Замість цього одноразовий пристрій для доставки у вигляді шприц-ручки випускається попередньо заповненим фармацевтичною композицією, що міститься в резервуарі всередині пристрою. Після того як в резервуарі вичерпується фармацевтична композиція, пристрій повністю викидають. 00194) Для підшкірної доставки фармацевтичної композиції за даним винаходом можна застосовувати велику кількість пристроїв для доставки у вигляді шприц-ручки і автоінжектора багаторазового використання. Приклади включають без обмеження АШТОРЕМ"М (Омжеп

Мипттіога, Іпс., Вудсток, Великобританія), шприц-ручку РІЗЕТКОМІСтМ (Бівеїгопіс Медісаї

Зузіт5, Бургдорф, Швейцарія), шприц-ручку НОМАГОС МІХ 75/25"М, Шшприц-ручку

НИОМАГОС м, шприц-ручку НОМАГСІМ 70/30 м (Е|ї І Шу ї Со., Індіанаполіс, Індіана), МОМОРЕМ "М І,

Пї ШІ (Момо Могаї5К, Копенгаген, Данія), МОМОРЕМ ЗОФОМІОК "М (Момо Могаї5К, Копенгаген, Данія), шприц-ручку ВОМ (Весіоп бОісКіпзоп, Франклін Лейкс, Нью-Джерсі), ОРТІРЕМ"М, ОРТІРЕМ

РКО"М, ОРТІРЕМ ЗТАКІГЕТ"М ії ОРТІСИІК "М (Запой-Амепіїз, Франкфурт, Німеччина) і багато інших. Приклади одноразових пристроїв для доставки у вигляді шприц-ручки, які можна застосовувати для підшкірної доставки фармацевтичної композиції за даним винаходом, включають без обмеження шприц-ручку ЗОГО5БТАК"М (Запой-Амепіїз), Б'ЕХРЕМ"М (Момо

Могаїзк) ії КУМІКРЕМ М (Еїї Су), автоїнжектор ФЗОКЕСГІСК "М (Атдеп, Таузанд-Окс, Каліфорнія),

РЕМГЕТ "мМ (Навзеїтеїег, Штутгарт, Німеччина), ЕРІРЕМ (Оєеу, С.Р.) ї шприц-ручку НОМІКА М (Аррой І арх, Ебботт-Парк, Іллінойс) і багато інших.

Ї00195| Переважно описані вище фармацевтичні композиції для перорального або парентерального застосування складають у лікарські форми з разовою дозою, що підходить для коригування дози активних інгредієнтів. Такі лікарські форми з разовою дозою включають, наприклад, таблетки, пігулки, капсули, ін'єкційні розчини (ампули), супозиторії тощо. Кількість антитіла, що в них міститься, зазвичай становить від приблизно 5 до приблизно 500 мг на лікарську форму з разовою дозою; зокрема, у випадку форми для ін'єкцій переважним є, щоб антитіло містилося у кількості від приблизно 5 до приблизно 100 мг, і від приблизно 10 до приблизно 250 мг для інших лікарських форм.

Терапевтичні застосування антитіл

ІЇ00196| Антитіла за даним винаходом придатні, між іншим, для лікування, попередження та/або ослаблення будь-якого захворювання або порушення, асоційованого з експресією, передачею сигналу або активністю ГАСЗ3, або обумовленого вищезазначеним, або яке піддається лікуванню за допомогою блокування взаємодії між І АСЗ і лігандом ГАЗ МНС класу

ЇЇ або іншого способу інгібування активності (АСЗ та/або передачі сигналу з його участю.

Наприклад, даний винахід стосується способів лікування злоякісної пухлини (інгібування росту пухлини) та/або вірусних інфекцій шляхом введення описаного в даному документі антитіла до

ГАЗ (або фармацевтичної композиції, яка містить антитіло до І АСЗ) пацієнту, який потребує таке лікування, і до антитіл до ГАЗ (або фармацевтичної композиції, яка містить антитіло до

ГАЗ) для застосування в лікуванні злоякісної пухлини (інгібування росту пухлини) та/або вірусних інфекцій. Антитіла за даним винаходом придатні для лікування, попередження та/або ослаблення захворювання, або порушення, або стану, такого як злоякісна пухлина або вірусна інфекція, талабо для ослаблення щонайменше одного симптому, асоційованого з таким захворюванням, порушенням або станом. У контексті описаних у даному документі способів лікування антитіло до (АСЗ можна вводити як монотерапію (тобто як єдиний терапевтичний засіб) або в комбінації з одним або декількома додатковими терапевтичними засобами (приклади яких описані в іншому місці даного документа).

І00197| Згідно з деякими варіантами здійснення даного винаходу описані в даному документі антитіла придатні для лікування суб'єктів, які страждають від первинної або рецидивної 60 злоякісної пухлини, включаючи без обмеження злоякісне новоутворення кровотворної тканини,

рак головного мозку (наприклад, мультиформну гліобластому), нирково-клітинну карциному (наприклад, світлоклітинний рак нирки), рак яєчника, рак сечового міхура, рак передміхурової залози, рак молочної залози (наприклад, тричі негативний рак молочної залози), гепатоцелюлярну карциному, рак кістки, рак товстої кишки, недрібноклітинний рак легені, плоскоклітинну карциному голови та шиї, рак товстої та прямої кишки, мезотеліому і меланому.

ЇО0198|У контексті даного документа термін "злоякісне новоутворення кровотворної тканини" включає злоякісне захворювання системи крові, яке уражує кров, кістковий мозок, лімфу або лімфатичну систему. Таким чином, термін включає злоякісні новоутворення з клітин лімфоїдної та мієлоїдної ліній диференціювання клітин. З клітин мієлоїдної лінії диференціювання зазвичай утворюються гранулоцити, еритроцити, тромбоцити, макрофаги і мастоцити; з клітин лімфоїдної лінії диференціювання утворюються В-, Т-, МК- і плазматичні клітини. Таким чином, термін включає злоякісні новоутворення із вищезгаданих клітин, а саме форми лімфоми, форми мієломи, форми лімфоїдного лейкозу і форми мієлоїдного лейкозу.

Приклади включають без обмеження гострий лімфобластний лейкоз, гострий мієлоїдний лейкоз, хронічний лімфоцитарний лейкоз, хронічний мієлоїдний лейкоз, гострий моноцитарний лейкоз, форми лімфоми Ходжкіна, форми неходжкінської лімфоми (наприклад, В-клітинну лімфому, дифузну В-крупноклітинну лімфому) і мієлому (включаючи множинну мієлому).

І00199| Антитіла можна застосовувати для лікування симптомів злоякісної пухлини на ранній стадії або на пізній стадії. Згідно з одним варіантом здійснення антитіло або його фрагмент за даним винаходом можна застосовувати для лікування злоякісної пухлини на пізній стадії або метастатичної злоякісної пухлини. Антитіла є придатними для зниження темпів, або інгібування, або зменшення ступеня росту пухлини як у випадку солідних пухлин, так і у випадку злоякісного новоутворення кровотворної тканини. Згідно з певними варіантами здійснення лікування за допомогою антитіла або його антигензв'язувального фрагмента за даним винаходом забезпечує більше ніж 4095 регресію, більше ніж 5095 регресію, більше ніж 6095 регресію, більше ніж 7095 регресію, більше ніж 8095 регресію або більше ніж 9095 регресію пухлини у суб'єкта. Згідно з певними варіантами здійснення антитіла можна застосовувати для попередження рецидиву пухлини. Згідно з певними варіантами здійснення антитіла є придатними для підвищення виживаності без прогресування або загальної виживаності суб'єкта зі злоякісною пухлиною. Згідно з деякими варіантами здійснення антитіла є придатними для зниження токсичності, пов'язаної з хіміотерапією або променевою терапією, з підтриманням при цьому довготривалої виживаності пацієнта, який страждає від злоякісної пухлини. 00200 Згідно з певними варіантами здійснення суб'єктом є пацієнт, який страждає від злоякісної пухлини, і який: е раніше не одержував терапію із застосуванням антитіл до РО-1/РО-І11, але є потенційним кандидатом на одержання терапії на основі антитіл до РО-1, та/або е раніше одержував терапію на основі антитіл до РО-1/РО-11, і у нього була підтверджена об'єктивна відповідь (СК або РК) або 50 протягом щонайменше 3 місяців у процесі терапії із застосуванням антитіл до РО-1/РО-11, але потім спостерігали прогресування в процесі такої терапії або в якості найкращої відповіді спостерігали ЗО або РЕК з подальшою стійкою відповіддю протягом 6 місяців; та/або е не є кандидатом на стандартну терапію, або у випадку якого передбачається, що доступна терапія не буде забезпечувати клінічну користь, і підходить для монотерапії тАб1; та/або е страждає від М5СІ С стадії ПВ або ІМ, або без попередньої терапії метастатичного захворювання, або з прогресуванням/повторною появою захворювання після здійснення схеми лікування з препаратом платини, яку не піддавали лікуванню антитілами до РО-1/РО-11; та/або е страждає від МЗСІ С стадії ПІВ або ІМ не більше ніж з 2 попередніми видами терапії метастатичного захворювання, яку піддавати лікуванню антитілами до РО-1/РО-11; та/або е страждає від ссКСС на пізній стадії або метастатичної ссКСС зі світлоклітинним компонентом, яку не піддавали лікуванню антитілами до РО-1/РО-11, та який одержував 1-2 попередні схеми лікування антиангіогенним терапевтичним препаратом; та/або е страждає від ссКСС на пізній стадії або метастатичної ссКСС зі світлоклітинним компонентом, яку піддавали лікуванню антитілами до РО-1/РО-11, та який одержував 1-2 попередні схеми лікування антиангіогенним терапевтичним препаратом; та/або е страждає від метастатичної ТМВС (негативної за рецепторами естрогену, прогестерону і рецептором 2 епідермального фактора росту людини), яку не піддавали лікуванню антитілами до РО-1/РО-11, та який одержував 5 або менше попередніх ліній терапії; та/або е страждає від меланоми на пізній стадії або метастатичної меланоми, яку не піддавали лікуванню антитілами до РО-1/РО-І1, та який одержував не більше ніж 2 попередні схеми лікування метастатичного захворювання; та/або е страждає від меланоми на пізній стадії або метастатичної меланоми, яку піддавали лікуванню антитілами до РО-1/РО-І1, та який одержував не більше ніж 2 попередні схеми лікування метастатичного захворювання; та/або е страждає від рецидивної/рефрактерної ОІ ВСІ, яку не піддавали лікуванню антитілами до

РО-1/РО-І1, та у якого або спостерігали прогресування після трансплантації аутологічних стовбурових клітин, або він не є кандидатом на її проведення; та/або е страждає від рецидивної/рефрактерної І ВСІ, яку піддавали лікуванню антитілами до РО- 1/РО-Ї1, та у якого або спостерігали прогресування після трансплантації аутологічних стовбурових клітин, або він не є кандидатом на її проведення.

І00201| Згідно з певними варіантами здійснення антитіла за даним винаходом є придатними для лікування суб'єктів, які страждають від хронічної вірусної інфекції. Згідно з деякими варіантами здійснення антитіла за даним винаходом є придатними для зниження титрів вірусів в організмі хазяїна та/або відновлення активності виснажених Т-клітин. Згідно з певними варіантами здійснення антитіло або його фрагмент за даним винаходом можна застосовувати для лікування хронічної вірусної інфекції, викликаної вірусом лімфоцитарного хоріоменінгіту (І СММ). Згідно з деякими варіантами здійснення антитіло або його антигензв'язувальний фрагмент за даним винаходом можна вводити в терапевтичній дозі пацієнту з інфекцією, викликаною вірусом імунодефіциту людини (НІМ), або вірусом папіломи людини (НРУ), або вірусом гепатиту В/С (НВМ/НСМ). Згідно з подібним варіантом здійснення антитіло або його антигензв'язувальний фрагмент за даним винаходом можна застосовувати для лікування інфекції, викликаної вірусом імунодефіциту мавп (5ІМ), у суб'єкта-мавпи, такої як яванський макака. (00202 Згідно з певними варіантами здійснення блокуюче антитіло за даним винаходом можна вводити в терапевтично ефективній кількості суб'єкту, який страждає від злоякісної пухлини або вірусної інфекції.

І0ОО20О3| Одне або декілька антитіл за даним винаходом можна вводити для полегшення, або попередження, або зменшення тяжкості одного або декількох із симптомів або станів захворювання або порушення. (002041) Згідно з даним документом також передбачається профілактичне застосування одного або декількох антитіл за даним винаходом для пацієнтів із ризиком розвитку захворювання або порушення, такого як злоякісна пухлина і вірусна інфекція. 00205) Згідно з додатковим варіантом здійснення даного винаходу антитіла за даним винаходом застосовують для одержання фармацевтичної композиції для лікування пацієнтів, які страждають від злоякісної пухлини або вірусної інфекції. Згідно з іншим варіантом здійснення даного винаходу антитіла за даним винаходом застосовують як допоміжну терапію разом з іншим відомим фахівцям у даній галузі засобом або іншим видом терапії, придатним для лікування злоякісної пухлини або вірусної інфекції.

Комбіновані терапевтичні препарати і склади 00206) Комбіновані терапевтичні препарати включають антитіло до ГАСЗ3 за даним винаходом і будь-який додатковий терапевтичний засіб, який можна з переважним результатом комбінувати з антитілом за даним винаходом або з біологічно активним фрагментом антитіла за даним винаходом.

І00207| Антитіла за даним винаходом можна комбінувати, з одержанням синергічного ефекту, з одним або декількома протипухлинними лікарськими засобами або видом терапії, застосовуваними для лікування або інгібування злоякісної пухлини, включаючи, наприклад, злоякісне новоутворення кровотворної тканини, рак головного мозку (наприклад, мультиформну гліобластому), нирково-клітинну карциному, рак яєчника, рак сечового міхура, рак передміхурової залози, рак молочної залози, гепатоцелюлярну карциному, рак кістки, рак товстої кишки, недрібноклітинний рак легені, плоскоклітинну карциному голови та шиї, рак товстої та прямої кишки, мезотеліому і меланому. Згідно з даним документом передбачається застосування антитіл до ГАСЗ за даним винаходом в комбінації з імуностимулюючими та/або імунозамісними видами терапії для інгібування росту пухлини та/або підвищення виживаності пацієнтів зі злоякісною пухлиною. Імуностимулюючі види терапії включають імуностимулюючі види терапії прямої дії для посилення активності імунних клітин або способом "відпускання гальма" щодо імунних клітин з пригніченою активністю, або "натискання на газ" для активації імунної відповіді. Приклади включають націлювання на інші рецептори, що є частиною імунологічних контрольних точок, вакцинацію та ад'юванти. Способи імунозамісного впливу можуть забезпечити підвищення антигенності пухлини завдяки стимуляції імуногенної загибелі 60 клітин, запалення, або чинять інші опосередковані ефекти, які стимулюють протипухлинну імунну відповідь. Приклади включають опромінення, хіміотерапію, антиангіогенні засоби та хірургічне втручання. 00208) Згідно з різними варіантами здійснення одне або декілька антитіл за даним винаходом можна застосовувати в комбінації з інгібітором РО-1 (наприклад, антитілом до РО-1, таким як ніволумаб, пембролізумаб, піділізумаб, ВОВ-АЗ17 або КЕОСМ2810), інгібітором РО-Ї 1 (наприклад, антитілом до РО-1 1, таким як авелумаб, атезолізумаб, дурвалумаб, МОХ-1105 або

КЕСМ3504), інгібітором СТІ А-4 (наприклад, іпілімумабом), інгібітором ТІМ3, інгібітором ВТІА, інгібітором ТІСІ, інгібітором СО047, інгібітором СІТК, антагоністом іншого коінгібітора Т-клітини або ліганду (наприклад, антитілом до СО-28, 284, І М108, ГАІК1, ІСО5, СО160 або МІ5ТА), інгібітором індоламін-2,3-діоксигенази (00, антагоністом фактора росту ендотелію судин (МЕСБЕ) (наприклад, "білком-пасткою для МЕСЕ", таким як афліберцепт, або іншим злитим білком, що інгібує МЕСЕ, як викладено в 5 7087411, або антитілом до МЕСЕ або його антигензв'язувальним фрагментом (наприклад, бевацизумабом або ранібізумабом) або низькомолекулярним інгібітором кінази МЕСЕ-рецептора (наприклад, сунітинібом, сорафенібом або пазопанібом)), інгібітором Апд2 (наприклад, несвакумабом), інгібітором трансформуючого фактора росту бета (ТОЕВД), інгібітором рецептора епідермального фактора росту (ЕСЕК) (наприклад, ерлотінібом, цетуксимабом), інгібітором СО20 (наприклад, антитілом до СО20, таким як ритуксимаб), антитілом до пухлиноспецифічного антигену (наприклад, САУ, СА125, асоційованого з меланомою антигену З (МАСЕЗ), ембріонального пухлинного антигену (СЕА), віментину, пухлинної М2-РК, простат-специфічного антигену (РБА), муцину-1, МАНТ-1 і СА19-9), вакциною (наприклад, бацилою Кальмета-Герена, протипухлинною вакциною), ад'ювантом для посилення презентування антигену (наприклад, гранулоцитарно-моноцитарним колонієсєтимулюючим фактором), біспецифічним антитілом (наприклад, біспецифічним антитілом до СО3хСО20 або біспецифічним антитілом до РеМАхХСЮЗ3), цитотоксином, хіміотерапевтичним засобом (наприклад, дакарбазином, темозоломідом, циклофосфамідом, доцетакселом, доксорубіцином, даунорубіцином, цисплатином, карбоплатином, гемцитабіном, метотрексатом, мітоксантроном, оксаліплатином, паклітакселом і вінкристином), циклофосфамідом, променевою терапією, інгібітором 1Ї/-6К (наприклад, сарілумабом), інгібітором 1 -4К (наприклад, дупілумабом), інгібітором 1-10, цитокіном, таким як ЇЇ--2, ІІ -7, ІІ -21 і 11-15, кон'югатом антитіла і лікарського засобу (АОС) (наприклад, АОС антитіло до СО19-ОМА і

АОС о антитіло до 056-0ОМ4), протизапальним лікарським засобом (наприклад, кортикостероїдами і нестероїдними протизапальними лікарськими засобами), дієтичною добавкою, такою як антиоксиданти, або будь-якою іншою терапією для лікування злоякісної пухлини. Згідно з певними варіантами здійснення антитіла до ГАЗ за даним винаходом можна застосовувати в комбінації з протипухлинними вакцинами, включаючи вакцини на основі дендритних клітин, онколітичні віруси, вакцини на основі пухлинних клітин тощо, для посилення протипухлинної відповіді. Приклади протипухлинних вакцин, які можна застосовувати в комбінації з антитілами до Г(АСЗ за даним винаходом, включають вакцину проти МАСЕЗ для меланоми і раку сечового міхура, вакцину проти МОСТІ для раку молочної залози, ЕСЕКхХЗ (наприклад, ріндопепімут) для раку головного мозку (включаючи мультиформну гліобластому) або А МАС-СЕА (для СЕА» форм злоякісної пухлини). 00209) Згідно з певними варіантами здійснення антитіла до | АСЗ за даним винаходом можна застосовувати в комбінації з променевою терапією в способах забезпечення довготривалих протипухлинних відповідей та/або підвищення виживаності пацієнтів зі злоякісною пухлиною. Згідно з деякими варіантами здійснення антитіла до Г(АСЗ за даним винаходом можна застосовувати для пацієнта зі злоякісною пухлиною до, після застосування променевої терапії або паралельно з нею. Наприклад, променеву терапію можна застосовувати в одній або декількох дозах щодо вогнищ пухлини, з подальшим введенням однієї або декількох доз антитіл до | АОЗ за даним винаходом. Згідно з деякими варіантами здійснення променеву терапію можна застосовувати локально щодо вогнища пухлини для посилення локальної імуногенності пухлини пацієнта (опромінення, яке виконує функцію ад'юванта) та/або для знищення пухлинних клітин (абляційна променева терапія) з подальшим системним введенням антитіла до ГДОЗ за даним винаходом. Наприклад, інтракраніальне опромінення можна застосовувати для пацієнта зі злоякісною пухлиною головного мозку (наприклад, мультиформною гліобластомою) в комбінації з системним введенням антитіла до ГАСЗ за даним винаходом. Згідно з певними варіантами здійснення антитіла до Г(АСЗ за даним винаходом можна застосовувати в комбінації з променевою терапією і хіміотерапевтичним засобом (наприклад, темозоломідом) або антагоністом МЕСЕ (наприклад, афліберцептом). (00210 Згідно з певними варіантами здійснення антитіла до | АСЗ за даним винаходом бо можна вводити в комбінації з одним або декількома противірусними лікарськими засобами для лікування хронічної вірусної інфекції, викликаної ГСММ, НІМ, НРУ, НВМ або НСУ. Приклади противірусних лікарських засобів включають без обмеження зидовудин, ламівудин, абакавір, рибавірин, лопінавір, ефавіренз, кобіцистат, тенофовір, рілпівірин і кортикостероїди.

І00211| Додаткові терапевтично активні засоби/компоненти можна вводити до, після введення антитіла до (АСЗ за даним винаходом, або одночасно з ним. Для цілей даного розкриття такі схеми введення передбачають введення антитіла до І АСЗ "в комбінації з" другим терапевтично активним компонентом. (00212) Додатковий(-ї) терапевтично активний(-ї) компонент(-и) можна вводити суб'єкту до введення антитіла до (АОЗ за даним винаходом. Наприклад, можна вважати, що перший компонент вводять "до" введення другого компонента, якщо перший компонент вводять за 1 тиждень до, за 72 години до, за 60 годин до, за 48 годин до, за 36 годин до, за 24 години до, за 12 годин до, за Є годин до, за 5 годин до, за 4 години до, за З години до, за 2 години до, за 1 годину до, за 30 хвилин до, за 15 хвилин до, за 10 хвилин до, за 5 хвилин до або менше ніж за 1 хвилину до введення другого компонента. Згідно з іншими варіантами здійснення додатковий(-ї) терапевтично активний(-ї) компонент(-и) можна вводити суб'єкту після введення антитіла до

АОЗ за даним винаходом. Наприклад, можна вважати, що перший компонент вводять "після" введення другого компонента, якщо перший компонент вводять через 1 хвилину після, через 5 хвилин після, через 10 хвилин після, через 15 хвилин після, через 30 хвилин після, через 1 годину після, через 2 години після, через З години після, через 4 години після, через 5 годин після, через 6 годин після, через 12 годин після, через 24 години після, через 36 годин після, через 48 годин після, через 60 годин після, через 72 години після введення другого компонента.

Згідно з ще одними варіантами здійснення додатковий(-і) терапевтично активнийс-і) компонент(- и) можна вводити суб'єкту одночасно з введенням антитіла до (АСЗ за даним винаходом. "Одночасне" введення, для цілей даного винаходу, включає, наприклад, введення антитіла до

ГАЗ і додаткового терапевтично активного компонента суб'єкту в єдиній лікарській формі (наприклад, у вигляді комбінованого складу), або в окремих лікарських формах, що вводяться суб'єкту з різницею в приблизно 30 хвилин або менше один від одного. При введенні в окремих лікарських формах, кожну лікарську форму можна вводити одним і тим самим шляхом (наприклад, як антитіло до | АСЗ, так і додатковий терапевтично активний компонент можна вводити внутрішньовенно, підшкірно тощо); як альтернатива, кожну лікарську форму можна вводити іншим шляхом (наприклад, антитіло до ГАЗ можна вводити внутрішньовенно, а додатковий терапевтично активний компонент можна вводити підшкірно). Для цілей даного розкриття будь-який із випадків, введення компонентів в єдиній лікарській формі, в окремих лікарських формах одним і тим самим шляхом або в окремих лікарських формах різними шляхами, вважають "одночасним введенням". Для цілей даного розкриття введення антитіла до

ГАЗ "до", "одночасно з" або "після" (як ці терміни визначені в даному документі вище) введення додаткового терапевтично активного компонента вважають введенням антитіла до

ГАСЗ "в комбінації з" додатковим терапевтично активним компонентом. 00213) Даний винахід включає фармацевтичні композиції, в яких антитіло до ГАсСЗ за даним винаходом складено разом із одним або декількома із додаткових терапевтично активних компонентів, описаних в іншому місці даного документа, із застосуванням ряду комбінацій дозувань. (00214 Згідно з ілюстративними варіантами здійснення, в яких антитіло до ГАСЗ за даним винаходом вводять в комбінації з інгібітором РО-1 (наприклад, антитілом до РО-1, розкритим у 5 2015/0203579, включеному в даний документ за допомогою посилання у всій своїй повноті), включаючи введення комбінованих складів, які містять антитіло до ГАСЗ та інгібітор РО-1, суб'єкту можна вводити окремі компоненти та/або їх можна складати разом із застосуванням ряду комбінацій дозувань. Таким чином, даний винахід включає комбінацію (ї) антитіла до ГАЗ за даним винаходом та (ії) інгібітора РО-1 (наприклад, антитіла до РО-1, розкритого в 5 2015/0203579, включеному в даний документ за допомогою посилання у всій своїй повноті) для спільного, роздільного та/або послідовного застосування в лікуванні злоякісної пухлини або вірусних інфекцій. Наприклад, кожне з антитіла до І АСЗ та інгібітора РО-1 (наприклад, антитіла до РО-1) можна вводити суб'єкту та/лабо вони можуть міститися в комбінованому складі в кількості, вибраній із групи, що складається з 0,01 мг, 0,02 мг, 0,03 мг, 0,04 мг, 0,05 мг, 0,1 мг, 0,2 мг, 0,3 мг, 0,4 мг, 0,5 мг, 0,6 мг, 0,7 мг, 0,8 мг, 0,9 мг, 1,0 мг, 1,5 мг, 2,0 мг, 2,5 мг, 3,0 мг, 3,5 мг, 4,0 мг, 4,5 мг, 5,0 мг, 6,0 мг, 7,0 мг, 8,0 мг, 9,0 мг ї 10,0 мг. Комбінації/комбіновані склади можна вводити суб'єкту відповідно до будь-якої із схем введення, розкритих в іншому місці даного документа, включаючи, наприклад, введення два рази в тиждень, один раз в тиждень, один раз в 2 тижні, один раз в З тижні, один раз в місяць, один раз в 2 місяці, один раз в З 60 місяці, один раз в 4 місяці, один раз в 5 місяців, один раз в 6 місяців і так далі. Антитіло до | АСЗ за даним винаходом можна вводити, наприклад, у дозі, що становить від приблизно 0,8 до приблизно 11, від приблизно 1 до приблизно 10, від приблизно З до приблизно 10, приблизно 1, приблизно З або приблизно 10 мг/кг, разом з інгібітором РО-1 (наприклад, антитілом до РО-1, розкритим в 05 2015/0203579), у дозі, що становить від приблизно З до 5 або приблизно 3,0 мг/кг. Спільне введення можна здійснювати, наприклад, кожні 14 днів, 21 день або 28 днів. (00215 Згідно з ілюстративними варіантами здійснення, в яких антитіло до | АСЗ за даним винаходом вводять в комбінації з антагоністом МЕСЕ (наприклад, білком-пасткою для МЕСБЕ, таким як афліберцепт), включаючи введення комбінованих складів, які містять антитіло до ГАЗ та антагоніст МЕСЕ, суб'єкту можна вводити окремі компоненти та/або їх можна складати разом із застосуванням ряду комбінацій дозувань. Наприклад, антитіло до (АСЗ3 можна вводити суб'єкту та/"або воно може міститися в комбінованому складі в кількості, вибраній із групи, що складається з 0,01 мг, 0,02 мг, 0,03 мг, 0,04 мг, 0,05 мг, 0,1 мг, 0,2 мг, 0,3 мг, 0,4 мг, 0,5 мг, 0,6 мг, 0,7 мг, 0,8 мг, 0,9 мг, 1,0 мг, 1,5 мг, 2,0 мг, 2,5 мг, 3,0 мг, 3,5 мг, 4,0 мг, 4,5 мг, 5,0 мг, 6,0 мг, 7,0 мг, 8,0 мг, 9,0 мг ї 10,0 мг; і антагоніст МЕСЕ (наприклад, білок-пастка для МЕСЕ, такий як афліберцепт) можна вводити суб'єкту та/або він може міститися в комбінованому складі в кількості, вибраній із групи, що складається 30,1 мг, 0,2 мг, 0,3 мг, 0,4 мг, 0,5 мг, 0,6 мг, 0,7 мг, 0,8 мг, 0,9 мг, 1,0 мг, 1,1 мг, 1,2 мг, 1,3 мг, 1,4 мг, 1,5 мг, 1,6 мг, 1,7 мг, 1,8 мг, 1,9 мг, 2,0мг, 2,1мг, 22мг, 2,3мг, 24 мг, 2,5мг, 26бмг, 2,/мг, 28мг, 2,ж9мг і 3,0 мг.

Комбінації/комбіновані склади можна вводити суб'єкту відповідно до будь-якої із схем введення, розкритих в іншому місці даного документа, включаючи, наприклад, введення два рази в тиждень, один раз в тиждень, один раз в 2 тижні, один раз в З тижні, один раз в місяць, один раз в 2 місяці, один раз в З місяці, один раз в 4 місяці, один раз в 5 місяців, один раз в Є місяців і так далі.

Схеми введення (00216) Відповідно до певних варіантів здійснення даного винаходу багаторазові дози антитіла до ГАЗ (або фармацевтичної композиції, яка містить комбінацію антитіла до І АСЗ і будь-якого з додаткових терапевтично активних засобів, згадуваних у даному документі) можна вводити суб'єкту протягом певного проміжку часу. Способи відповідно до такого аспекту даного винаходу передбачають послідовне введення суб'єкту багаторазових доз антитіла до І АСЗ за даним винаходом. У контексті даного документа "послідовне введення" означає, що дозу антитіла до ГАСЗ суб'єкту вводять в різні моменти часу, наприклад, в різні дні, розділені заданим інтервалом (наприклад, у години, дні, тижні або місяці) Даний винахід включає способи, які передбачають послідовне введення пацієнту одиничної початкової дози антитіла до ГАСЗ, з подальшим введенням однієї або декількох доз другої черги антитіла до ГАС, і необов'язково з подальшим введенням однієї або декількох доз третьої антитіла до | АОЗ3.

Антитіло до | АСЗ можна вводити в дозі від 0,1 мг/кг до 100 мг/кг ваги тіла суб'єкта.

І00217| Терміни "початкова доза", "дози другої черги" і "дози третьої черги" стосуються послідовності у часі введення антитіла до ГАСЗ за даним винаходом. Таким чином, "початкова доза" являє собою дозу, яку вводять на початку курсу лікування (також називається "вихідної дозою"); "дози другої черги" являють собою дози, які вводять після початкової дози; і "дози третьої черги" являють собою дози, які вводять після доз другої черги. Початкова доза, дози другої і третьої черги можуть містити однакову кількість антитіла до І АСЗ, але в цілому можуть відрізнятися один від одного з урахуванням частоти введення. Однак згідно з певними варіантами здійснення кількість антитіла до | АСЗ, що міститься в початковій дозі, дозах другої і третьої черги, відрізняються одна від одної (наприклад, за необхідності скориговані у напрямку зростання або спадання) в ході курсу лікування. Згідно з певними варіантами здійснення дві або більше (наприклад, 2, 3, 4 або 5) доз вводять на початку курсу лікування як "навантажувальні дози", з наступними дозами, які вводять рідше (наприклад, "підтримувальні дози"). (002181) Згідно з певними варіантами здійснення кількість антитіла до ГАСЗ, що міститься в початкової дозі, дозах другої та/або третьої черги, може бути субоптимальною або субтерапевтичною. У контексті даного документа терміни "субтерапевтичний" або "субоптгимальний" стосуються дози антитіла, яку вводять на рівні, занадто низькому для забезпечення терапевтичного ефекту, або на рівні нижче необхідного для лікування захворювання, такого як злоякісна пухлина.

І00219| Згідно з певними ілюстративними варіантами здійснення даного винаходу кожну дозу другої та/або третьої черги вводять через 1-26 (наприклад, 1,152,2,25,3,352,4,4, 5, 55,6,65,7,7»,8,8и,9, 97, 10,10, 11, 112, 12, 127,13, 137, 14, 1475, 15, 1575, 16, 167, 17, 1725, 18, 185, 19, 195, 20,20, 21, 215, 22, 22, 23, 23, 24, 245, 25, 25, 26, 265 або більше) тижнів після найближчої попередньої дози. Фраза "найближча попередня доза" у бо контексті даного документа означає, у випадку послідовності багаторазових введень, дозу антитіла до ГАСЗ, яку вводять пацієнту до введення наступної дози, у випадку послідовності без проміжних доз.

І00220| Способи відповідно до цього аспекту даного винаходу можуть передбачати введення пацієнту будь-якого числа доз другої та/або третьої черги антитіла до ГАЗ.

Наприклад, згідно з певними варіантами здійснення пацієнту вводять тільки одну дозу другої черги. Згідно з іншими варіантами здійснення пацієнту вводять дві або більше (наприклад, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 або більше) доз другої черги. Аналогічно, згідно з певними варіантами здійснення пацієнту вводять тільки одну дозу третьої черги. Згідно з іншими варіантами здійснення пацієнту вводять дві або більше (наприклад, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 або більше) доз третьої черги. (002211 Згідно з варіантами здійснення, які передбачають багаторазові дози другої черги, кожну дозу другої черги можна вводити з тією ж частотою, що й інші дози другої черги.

Наприклад, кожну дозу другої черги можна вводити пацієнту через 1-2 тижні або 1-2 місяці після найближчої попередньої дози. Аналогічним чином, згідно з варіантами здійснення, які передбачають багаторазові дози третьої черги, кожну дозу третьої черги можна вводити з тією ж частотою, що й інші дози третьої черги. Наприклад, кожну дозу третьої черги можна вводити пацієнту через 2-12 тижнів після найближчої попередньої дози. Згідно з певними варіантами здійснення даного винаходу частота, з якою дози другої та/або третьої черги вводять пацієнту, може варіюватися протягом курсу лікування. Частота введення також може бути скоригована лікарем у ході курсу лікування в залежності від потреб окремого пацієнта, який бере участь у клінічному дослідженні.

Діагностичне застосування антитіл (00222) Антитіла до І АСЗ за даним винаходом можна застосовувати для виявлення та/або вимірювання ГАЗ у зразку, наприклад, у діагностичних цілях. Згідно з деякими варіантами здійснення передбачається застосування одного або декількох антитіл за даним винаходом в аналізах виявлення захворювання або порушення, такого як злоякісна пухлина, аутоімунне захворювання або вірусна інфекція. Ілюстративні діагностичні аналізи для ГАСЗ можуть передбачати, наприклад, приведення зразка, одержаного від суб'єкта (наприклад, пацієнта), в контакт з антитілом до ГАСЗ за даним винаходом, де антитіло до ГАЗ мітять за допомогою детектовної мітки або репортерної молекули або застосовують як ліганд захоплення для вибіркового виділення І АСЗ зі зразків від суб'єкта. Як альтернатива, немічене антитіло до | АОЗ можна використовувати для діагностичних застосувань у комбінації з вторинним антитілом, яке є міченим для можливості виявлення. Детектовна мітка або репортерна молекула може являти собою радіоіїзотоп, такий як ЗН, 110, 32Р, 855 або 1251; флуоресцентну або хемілюмінесцентну речовину, таку як ізотіоціанат флуоресцеїна або родамін; або фермент, такий як лужна фосфатаза, В-галактозидаза, пероксидаза хріну або люцифераза. Конкретні ілюстративні аналізи, які можна застосовувати для виявлення або вимірювання ГАСЗ у зразку, включають ферментний імуносорбентний аналіз (ЕГІ5ЗА), радіоїмунологічний аналіз (КІА) і сортування клітин з активованою флуоресценцією (ЕАС5). (002231 Зразки, які можна застосовувати в діагностичних аналізах щодо І АОЗ відповідно до даного винаходу, включають будь-який зразок тканини або рідини організму, який можна одержати від суб'єкта, який містить кількості, що можна виявити, або білка ГАСЗ, або його фрагментів, за нормальних або патологічних станів. У загальному випадку, рівні Г(АСЗ у конкретному зразку, одержаному від здорового пацієнта (наприклад, пацієнта, який не страждає від злоякісної пухлини або аутоімунного захворювання), вимірюватимуть спочатку для встановлення вихідного, або стандартного, рівня Г(АСЗ3. Такий вихідний рівень Г(АСЗ потім можна зіставляти з рівнями ГАСЗ, вимірюваними в зразках, одержаних від індивідуумів з підозрою на наявність стану, пов'язаного із злоякісною пухлиною, або симптомами, асоційованими з таким станом. (00224) Специфічні щодо І АСЗ антитіла можуть не містити додаткових міток або сполук, або вони можуть містити М-кінцеву або С-кінцеву мітку або сполуку. Згідно з одним варіантом здійснення мітка або сполука являє собою біотин. В аналізі зв'язування, розташування мітки (якщо така є) може визначати орієнтацію пептиду щодо поверхні, на якій зв'язаний пептид.

Наприклад, якщо поверхня покрита авідином, пептид, який містить М-кінцевий біотин, буде розташований так, що С-кінцева частина пептиду буде віддалена від поверхні. (00225) Аспекти даного винаходу стосуються застосування розкритих антитіл як маркерів для виконання передбачень щодо злоякісної пухлини або вірусної інфекції у пацієнтів. Антитіла за даним винаходом можна застосовувати в діагностичних аналізах для прогностичної оцінки щодо злоякісної пухлини у пацієнта і для передбачення показників виживаності.

Приклади 60 (00226) Наступні приклади наведені з метою надання фахівцям у даній галузі повного розкриття і опису того, як виконувати і застосовувати способи і композиції за даним винаходом, і не призначені для обмеження обсягу того, що автори даного винаходу розглядають як свій винахід. Були зроблені зусилля для забезпечення точності щодо застосовуваних значень (наприклад, кількостей, температури тощо), однак слід враховувати наявність деяких похибок і відхилень в експериментах. Якщо не зазначено інше, частини є частинами за вагою, молекулярна маса є середньою молекулярною масою, температура наведена в градусах

Цельсія, кімнатна температура становить приблизно 252С і тиск є атмосферним або близьким до атмосферного.

Приклад 1. Одержання антитіл людини до ГАЗ. (00227| Антитіла людини до Г(АСЗ одержували із застосуванням фрагмента | АСЗ, який знаходиться в межах приблизно амінокислотних залишків 29-450 послідовності під номером доступу в СепВапк МР 002277.4 (5БО ІО МО: 582), з'єднані з Ес-ділянкою миші. Імуноген, з ад'ювантом для стимуляції імунної відповіді, безпосередньо вводили одержаній за допомогою технології МЕГОСІММОМЕФ миші (тобто сконструйованій миші, яка містить ДНК, що кодує варіабельні ділянки важкого ланцюга і легкого каппа-ланцюга імуноглобуліну людини), як описано в Ше 8502018 В2, або одержаній за допомогою технології МеіосіттипеФф гуманізованій миші з універсальним легким ланцюгом (Опімегза! Гідні Саїп, ПОС), як описано в

МО 2013022782. Гуморальну імунну відповідь відстежували із застосуванням І АсЗ- специфічного імунологічного аналізу. Коли необхідна імунна відповідь була досягнута, спленоцити збирали і зливали з клітинами мієломи миші для збереження життєздатності перших і для одержання ліній клітин гібридоми. Лінії клітин гібридоми піддавали скринінгу та відбору для ідентифікації клітинних ліній, які продукують І АсСЗ-специфічні антитіла. Із застосуванням такої методики, і описаного вище імуногену, були одержані декілька химерних антитіл до ГАСЗ (тобто антитіл, які мають варіабельні домени людини і константні домени миші); ілюстративні антитіла, одержані таким чином у одержаних за допомогою технології

МЕГОСІММИМЕФ мишей, були позначені як НЯІМ14985М, НІМ14987М, Н2М14811М, НагМ14885М,

Н2М14926М, Н2М14927М, Н2М14931М, Н2М18336М, Н2М18337М і НАН14813М. (00228) Антитіла до І АСЗ також виділяли безпосередньо із антиген-позитивних В-клітин (від кожної з імунізованих мишей) без злиття з клітинами мієломи, як описано в заявці на патент

США Мо 7582298, включеній у даний документ за допомогою посилання у всій своїй повноті. Із застосуванням такого способу були одержані декілька повністю людських антитіл до ГАЗ (тобто антитіл, які мають варіабельні домени людини і константні домени людини); ілюстративні антитіла, одержані таким чином, були позначені як НА4НІ15477Р, Н4АНІ15483Р, Н4АНІ15484Р,

НаАНІТ5491Р, НАНІ7823Р, На4НІ1І7826Р2, НаАНІ17828Р2, На5НІ5460Р, НаЗНІ15462Р, На45ЗНІ15463Р,

На5нНІБ464Р, Наб5нНІ5а46ббР, Наб5нНІі5467Р, НабЗзНІ5б470Р, НабЗзНІ5475Р, На5знН15479Р,

На5нНІБ5480Р, Наб5нНІ5482Р, На5н1І5488Р, На5нН1іІБ496Р2, На5знНІ5498Р2, На5Н1Т5505Р2,

Н4а5зН15518Р2, На5Н15523Р2, Н4і5Н15530Р2, Н4і5ЗНІ15555Р2, На5Н15558Р2, Н4а5знН15567Р2 і

НаАНІТ7819Р.

І00229| Ілюстративні антитіла Ні5НІ15496Р2, Н4а5зНІ1Т5498Р2, На45НІ15505Р2, Наз5Н155188Р2,

На5Н15523Р2, Н4і5ЗНІ15530Р2, Н4зНІ15555Р2, Н45НІ15558Р2 і Ні5НІ15567Р2 були одержані із В- клітин від одержаних за допомогою технології Меїосіттипе? мишей з ЦІ С. 002301 Біологічні властивості ілюстративних антитіл, одержаних відповідно до способів у цьому прикладі, детально описані в представлених нижче прикладах.

Приклад 2. Амінокислотні і нуклеотидні послідовності для варіабельних ділянок важкого і легкого ланцюгів.

ІОО231|У таблиці 1 представлені ідентифікатори амінокислотних послідовностей варіабельних ділянок важкого і легкого ланцюгів і СОК вибраних антитіл до ГАОЗ за даним винаходом. Відповідні ідентифікатори послідовностей нуклеїнових кислот представлені у таблиці 2.

Таблиця 1

Ідентифікатори амінокислотних послідовностей 1111 ввоютМо 77777711 німії9вб6М | 2 | 4 | 6 | 8 | 710 | 12 | 14 16

Таблиця 1

Ідентифікатори амінокислотних послідовностей 11111180 юМ: 71 оонамія885М | 50 | 52 | 54 | 56 | 58 | 60 | 62 | 64 оонамі49906м | 66 | 68 | 70 | 72 | 74 | 76 | 78 | во оонамі4927М | 82 84 / 86 | 88 | 90 | 92 / 94 | 96 оонамі4931М | 98 | 100 | 702 | 704 | 106 | лов | 110 | 112

Таблиця 2

Ідентифікатори послідовностей нуклеїнових кислот 1111111 8БО0ЮМО 77711111 онІіМІ9В5М 1 ЇЇ з | 5 | 7 | 9 | 71 | 713 | 5

Таблиця 2

Ідентифікатори послідовностей нуклеїнових кислот 1111111 8БО0ЮМО 77711111 о Намі4996м | 65 | 67 | 69 | 7 | 73 | 75 | 77 | 7 о Намі4927М | 81 | 83 | 85 | 87 | 89 | 91 | 93 | 55 о Ннамі4931М 97 | 99 | 101 | ло3 | 105 | 107 | 7109 | 11 (00232) Антитіла, як правило, названі в даному документі відповідно до наступної системи позначень: префікс, який відповідає Ес (наприклад, "НІМ", "На4в5зН", "Н4Н" тощо), далі йде числовий ідентифікатор (наприклад, "14813",17828" тощо, як показано в таблиці 1), далі йде суфікс "Р", "Р2" або "М". Таким чином, відповідно до такої системи позначень антитіло в даному документі може бути названо, наприклад, "Ні5НІ14813М", "Н4НІ17819Р", "Н4НІ17828Р2" тощо.

Префікси НазнН ї НАН у застосовуваних в даному документі позначеннях антитіл вказують на конкретний ізотип за Ес-ділянкою антитіла. Наприклад, антитіло "Н45Н" містить Ес Ідб4 людини з 2 або більше змінами за амінокислотою, як розкрито в Ш520140243504 (включеній в даний документ у всій своїй повноті), антитіло "Н4Н" містить Ес Ід0б4 людини з мутацією у вигляді заміни серину на пролін у шарнірній ділянці (5108Р), антитіло "НІМ" містить Ес ІдДС1 миші, а антитіло "Н2М" містить Ес ІдсС2 миші (всі варіабельні ділянки є повністю людськими, на що вказує перша "Н" у позначенні антитіла). Як буде зрозуміло фахівцю в даній галузі, антитіло з Ес конкретного ізотипу можна перетворити на антитіло з Ес іншого ізотипу (наприклад, антитіло з

Ес ІдД01 миші можна перетворити на антитіло з Ес Їдс4 людини і так далі), але, в будь-якому випадку, варіабельні домени (включаючи СОК) - які позначені числовими ідентифікаторами,

показаними в таблиці 1, - залишатимуться такими ж, а властивості зв'язування з антигеном, як очікується, будуть ідентичними або в значному ступені подібними, незалежно від походження

Ес-домену. 00233) Згідно з певними варіантами здійснення вибрані антитіла з Ес Ід051 миші перетворювали на антитіла з Ес Ідс4 людини. Згідно з певними варіантами здійснення антитіло містить Ес ІдбС4 людини з 2 або більше змінами за амінокислотою, як розкрито в 0520100331527 (включеній у даний документ у всій своїй повноті). Згідно з одним варіантом здійснення Ес-домен Ідс4 передбачає мутацію у вигляді заміни серину на пролін у шарнірній ділянці (5108Р) для сприяння стабілізації димера. Згідно з певними варіантами здійснення Ес- ділянка антитіл за даним винаходом містить амінокислотні послідовності ЗЕО ІЮ МО: 569, 570, 571, 572 або 573. У таблиці З представлені ідентифікатори амінокислотних послідовностей для послідовностей важкого ланцюга і легкого ланцюга вибраних антитіл до | АСЗ з Ес ІдДС4 людини.

Таблиця З

Ідентифікатори амінокислотних послідовностей важкого ланцюга і легкого ланцюга

Позначення антитіла с ся 00234) Кожна послідовність важкого ланцюга у таблиці З утворює варіабельну ділянку (Мн або НСМК, які містять НСОКІ, НСОК2 і НСОКЗ) і константну ділянку (яка містить Сн1-, Снаг- і

СнЗ-домени). Кожна послідовність легкого ланцюга у таблиці З утворює варіабельну ділянку (Мі або І!СМК, які містять ЇСОМКІ, 1 СОК2 і І СОКЗ) і константну ділянку (Сі). 5ЕО ІЮО МО: 577 утворює НСМРЕ, яка містить амінокислоти 1-123, і константну ділянку, яка містить амінокислоти 124-449. 5Е6ЕО ІЮО МО: 578 утворює І СМК, яка містить амінокислоти 1-107, і константну ділянку, яка містить амінокислоти 108-214. 5ЕО ІЮ МО: 579 утворює НСМРЕ, яка містить амінокислоти 1-- 123, і константну ділянку, яка містить амінокислоти 124-450. 5ЕО ІЮО МО: 580 утворює НСУК, яка містить амінокислоти 1-119, і константну ділянку, яка містить амінокислоти 120-445. 5ЕО ІО МО: 581 утворює ІСМК, яка містить амінокислоти 1-107, і константну ділянку, яка містить амінокислоти 108-214.

Контрольні конструкції, застосовувані в наступних прикладах

ІЇ00235| З метою порівняння в наступні експерименти були включені дві контрольні конструкції (антитіла до ГАЗ): "препарат порівняння 1", моноклональне антитіло людини до

ГАОЗ з послідовностями Мн/Мі антитіла "25Е7" відповідно до М/О2010/019570; і "препарат порівняння 2", моноклональне антитіло людини до ГАСЗ з послідовностями МУн/Мі антитіла "У3.5" відповідно до Ш52014/0093511.

Приклад 3. Зв'язування антитіла з Г(АОЗ, визначене за допомогою методу поверхневого плазмонного резонансу. (00236) Константи швидкості асоціації і дисоціації (відповідно Ка і Ка) при зв'язуванні, рівноважні константи дисоціації і напівперіоди дисоціації (відповідно Ко і їх) для зв'язування антигенів з очищеними антитілами до Г(АСЗ визначали із застосуванням аналізу на основі явища поверхневого плазмонного резонансу в режимі реального часу з використанням біосенсора на приладі ВіаСоге 4000 або ВіаСоге Т200. На сенсорній поверхні ВіаСоге іммобілізували або поліклональне антитіло кролика до антитіла миші (ЗЕ, Мо ВА-1008-38), або моноклональне антитіло миші до Ес людини (СЕ, Мо ВА-1008-39), для захоплення приблизно 50-85 ВО моноклональних антитіл до І АСЗ, експресованих відповідно або з Ес миші, або з Ес людини. Реагенти ГАСЗ, тестовані щодо зв'язування з антитілами до ГАСЗ, включали рекомбінантний І АСЗ людини, експресований з С-кінцевою іпус-птус-гексагістидиновою міткою (ПАСЗ-тті; ЗЕО І: 574), і рекомбінантний І АОЗ людини, експресований з С-кінцевою міткою, яка являє собою тЕс Ідс2а миші (пі АСЗ-тЕс; 5ЕО ІВ: 575). Різними концентраціями (50, 25, 12,5 ії 6,25 НМ) реагентів ГАЗ шляхом вприскування покривали поверхню з захопленим моноклональним антитілом до ГАЗ за швидкості потоку 50 мкл/хв на ВіаСоге 1200.

Зв'язування реагентів ГАЗ із захопленими моноклональними антитілами відстежували протягом 4 хвилин, а їх дисоціацію від антитіл відстежували протягом 8 хвилин, у рухомому

БО буфері НВЗТ (0,01 М НЕРЕБ5 рН 7,4, 0,15 М МасіІ, ЗмМ ЕОТА, 0,0595 об./06. поверхнево- активної речовини Р20). Експерименти проводили при 25" і 37 "С. Кінетичні константи швидкості асоціації (Ка) та дисоціації (Ка) визначали шляхом обробки та апроксимації даних до моделі зв'язування 1:1 із застосуванням програмного забезпечення для апроксимації кривих

Зегиббег 2.0с. Константи дисоціації (Ко) для рівноважного зв'язування і напівперіоди дисоціації (н») потім розраховували на основі кінетичних констант швидкості як: Ко (М) - Ка/Ка і б» (хв.) -

Пп2/бо"Ка)|.

І00237| Параметри кінетики зв'язування для зв'язування різних моноклональних антитіл до

ГАЗ з мономерними (міченими ттнН) або димерними (міченими тЕс) реагентами ГАСЗ при 2576 і 37 "С зведені в таблицях 4-7.

Таблиця 4

Параметри кінетики зв'язування для зв'язування моноклональних антитіл до ГАСЗ з | АбЗ3-тті людини при 2570 рр "МВ означає, що в умовах проведення експерименту реагент (АСЗ не зв'язувався із захопленим моноклональним антитілом до І АС3.

І00238| Із таблиці 4 видно, що при 25 "С всі антитіла до (АСЗ за даним винаходом зв'язуються з ПІ АСЗ-тті зі значеннями Ко в діапазоні від 49 пМ до 10 нМ, тоді як препарати порівняння зв'язуються зі значеннями Ко 0,58 НМ і 0,8 нМ.

Таблиця 5

Параметри кінетики зв'язування для зв'язування моноклональних антитіл до ГАСЗ з ПГАОСЗ-тті при 37 "С р др

Таблиця 5

НАНІТ7819Р 1,59Е-06 8,76Е-04 5,Б2Е-10

НАНІ5483Р 7,74Е--05 1,11Е-03 1,43Е-09

НазН1і5482Р 2,81Ег-05 5,12Е-04 1,82Е-09

НаНІТ7828Р2 1,10Е--06 2,07Е-03 1,89Е-09

НАНІБ5482Р 2,92Е-05 5,70Е-04 1,96Е-09

НаНІТ7826Р2 1,07Е--06 2,14Е-03 1,99Е-09

НАНІБ4ваР 1,08Е: 4-06 6,26Е-03 5,80Е-09

НазнН1і54в2Р 1,01 --06 7,72Е-03 7,66Е-09

Препарат порівняння 1 1,231: 406 3,74Е-0О3 3,03Е-09

Препарат порівняння 2 1,10Е--06 2,31Е-0О3 2,10Е-09 "МВ означає, що в умовах проведення експерименту реагент ГАСЗ не зв'язувався із захопленим моноклональним антитілом до І АС3.

І00О239| Із таблиці 5 видно, що при 37 "С всі антитіла до (АСЗ за даним винаходом зв'язуються з ПІ АСЗ3-тті зі значеннями Ко в діапазоні від 32 пМ до 7,66 нМ, тоді як препарати порівняння зв'язуються зі значеннями Ко 2,1 НМ і 3,0 нм.

І00240| Дані в таблицях 4 і 5 вказують на те, що всі антитіла до ГАСЗ зв'язуються з мономерним ПІ АСЗ-тті із дуже схожими показниками афінності як при 25 "С, так і при 37 "С.

Таблиця 6

Параметри кінетики зв'язування для зв'язування моноклональних антитіл до І АСЗ з димером ПІ АОЗ (ПІ АОЗ-тЕс) при 2570 'яь со)

НанІ5479Р 2.30Е--06 1,00Е-05 4,35Б-12 21155,0

Назн1і5а79рР 3,05Е-06 1,00Е-05 3,28Е-12 21155,0

Нантоавзв 1,34Е--06 1,00Е-05 7. АБЕ-12 21155,0

Нантавтзм 9,58»: 05 1,00Е-05 1,04Б-11 21155,0

Назн1т4813М 1,80Е--06 1,90Е-05 1,06Б-11 606,6 нНантоаваР 7,58Е--05 1,00Е-05 1,32Е-11 21155,0

Назн15а482Р 7,09Е-05 1,00Е-05 1,41 Е-11 21155,0

Нантоазврг 3,63Ег--05 1,00Е-05 2,76Б-11 21155,0

Назн15а498р2 2,84Е--05 1,00Е-05 З,Б2Б-11 21155,0 нНант7вт9Р 145ЕНО6 1,80Е-04 1,24Б-10

НаНІ7823Р 1,26Е:06 2,18Е-04 1,74Е-ДЛО нНант7в2врг 1,88Е-06 4,60Е-04 2АБЕ-10

НазнІ5абаР 2,34Е 06 1,90Е-03 84-10 нНант78в26рг 6,91Е-05 5,в4Е-04 8,17Е-10 нНанітБаваР 2,02Е-06 2,03Е-03 1,01Е-09

Таблиця 6

Параметри кінетики зв'язування для зв'язування моноклональних антитіл до І АСЗ з димером ПІ АОЗ (ПІ АОЗ-тЕс) при 2570

Препарат порівняння 1 2,89Е06 4,50Е-04 1,67Е-10

Препарат порівняння 2 3,09Е06 3,00Е-04 9,68Е-11 "МВ означає, що в умовах проведення експерименту реагент ГАЗ не зв'язувався із захопленим моноклональним антитілом до І АС3.

І00241|Із3 таблиці б видно, що при 25 "С всі антитіла до (АСЗ за даним винаходом зв'язуються з димерними білками ПІ АСЗ зі значеннями Ко в діапазоні від 4,3 ПМ до 1,0 нМ, тоді як препарати порівняння зв'язуються зі значеннями Ко 97 пМ і 0,16 нм.

Таблиця 7

Параметри кінетики зв'язування для зв'язування моноклональних антитіл до І АСЗ з димером ПІ АОЗ (п АОЗ-тЕс) при 37 7 др

І АБ (1/с)

Нан1тб5а479Р 2,50Е--06 1,00Е-05 3,99Е-12 21155,0

Назн1і5479Р 2,92Е--06 1,00Е-05 342Б-12 21155,0

Назн1і5498Р2 5,15Е--05 1,00Е-05 1,94-11 21155,0 нНан1то5498Р2 4,60Е--05 1,00Е-05 2,17Е-11 21155,0

НАНІ4813М 4,27Е--06 1,17Е-04 2,714Б-11

Назн1і4813М 3,42Е--06 1,01Е-04 2,95Б-11 114,4

НазН1і5482Р 5,19Е--06 1,84Е-04 3,16Б-11 нНан1ібоаваР 1,01Е-06 9,01Е-05 8,91 Б-11 128,1

НАНІ5483Р 1,38Е--06 2,98Е-04 2,15Е-10

НанІ7826Ра2 1,98Е--06 5,АТЕ-04 2,77Е-10

НАНІ7819Р 1,66Е--06 5,27Е-04 3,17Е-10

НаНІТ7828Р2 1,73Е--06 7.18Е-04 4 15Е-10

НАНІБ4ваР 2,16Е-06 8,95Е-04 4,15Е-10

НАНІТ782г3Р 1,34Е--06 5,85Е-04 4,37Е-10

НазнН1і54в2Р 1,80Е--06 1,57Е-03 8,76БЕ-10

Препарат порівняння 1 3,44Е-06 1,56Е-03 4,БАЕ-10

Препарат порівняння 2 4,36Е-06 1,13Е-03 2,58Е-10 "МВ означає, що в умовах проведення експерименту реагент ГАСЗ не зв'язувався із захопленим моноклональним антитілом до ГАЗ

І00242|І3 таблиці 7 видно, що при 37 "С всі антитіла до (АСЗ за даним винаходом зв'язуються з димерними білками ПІ АСЗ зі значеннями Ко в діапазоні від 4,0 ПМ до 0,9 нМ, тоді як препарати порівняння зв'язуються зі значеннями Ко 0,26 нМ і 0,45 НМ. 00243) Дані в таблицях б і 7 вказують на те, що всі антитіла до ГАСЗ зв'язуються з димерами ПІ АСЗ в якості реагентів із дуже схожими показниками афінності як при 25 "С, такі при 37 76.

Приклад 4. Перехресна конкуренція між антитілами до І АСЗ в системі Осіеї.

І00244|Для оцінки того, чи конкурують два антитіла один із одним за зв'язування з мономерним ГАЗ людини (пІГАСЗ.тті), конкуренцію за зв'язування між моноклональними антитілами до ГАСЗ визначали із застосуванням інтерферометричного аналізу біошару в режимі реального часу без застосування мітки на біосенсорі Осієї КЕО384 (Раї! РопевВіо Согр.).

Експеримент щодо перехресної конкуренції проводили при 25 "С в 0,01 М НЕРЕ5, рН 74, 0,15 М Масі, 0,0595 об./06. поверхнево-активної речовини Туееп-20, 0,1 мг/мл ВЗА (буфер НВ5З-

Р для Осіе)) зі струшуванням планшетів за швидкості 1000 об./хв. Всі тестовані розчини антитіла до Г(АСЗ і Пп АСЗ складали в буфері НВ5-Р для Осієї. Для оцінки того, чи здатні 2 антитіла конкурувати один із одним за зв'язування з ПН АСЗ, спершу приблизно -«-0,6-0,85 нм

ПГАСЗ.ттй захоплювали на покритих антитілом до Ні кінчиках біосенсорів Осівї із лунок, які містять 5 мкг/мл ПІ АСЗ, протягом 75 секунд. Кінчики біосенсорів Осієї із захопленими ПІ АСЗ насичували шляхом занурення на бБхвилин у лунки, які містять 50 мкг/мл першого моноклонального антитіла до І АСЗ (яке називається в даному документі тАбБ-1), з подальшим зануренням у лунки, які містять друге моноклональне антитіло до Г(АСЗ (яке називається в даному документі тАбБ-2). У проміжках між кожною стадією кінчики біосенсорів Осієї промивали в буфері НВ5-Р протягом 30 секунд. (00245) Відповідь щодо зв'язування в режимі реального часу відстежували протягом експерименту і в кінці кожної стадії відповідь щодо зв'язування реєстрували. Відповідь щодо зв'язування ПІ АСЗ з тАБ-1, а потім з блокуючим тАб, коректували з поправкою на фонове зв'язування, порівнювали і визначали конкурентний/неконкурентний характер зв'язування різних моноклональних антитіл до і ад. (00246) У таблиці 8 явно визначені взаємозв'язки антитіл, що конкурують в обох напрямках, незалежно від порядку зв'язування.

Таблиця 8

Перехресна конкуренція антитіл до | АОЗ за зв'язування з мономерним ПІ Аз

Перше тАБ (тАБ-1), захоплене із застосуванням Антитіла тАрб-2, для яких була показана конкуренція з тАбБ-1" біосенсорів АНС Осівї

На5зн1і5479Р, На5зНІТ4813М, НАНІТ4813М, НАНІТ5479Р, НАНІТ5482Р,

Назн1і15482Р НАНІБВЗР

Назн1і5482Р, На5зНІТ4813М, НаАНІТ4813М, НАНІТ5479Р, НАНІТ5482Р,

Назн1і5479Р НАНІБВОР

Назн1і5482Р, На5зНІТ5479Р, НаНІТ4813М, НаНІТ5479Р, НАНІ5482Р,

Назн1і4813М НАНІБВОР

Назн1і5482Р, На5зНІ15479Р, НазНІ4813М, НАН15479Р, НАНІ15482Р,

Нантав81змМ НАНІБВЗР

Назн1і5482Р, На5зНІ15479Р, НазНІТ4813М, НаНІ1Т4813М, НаНІТ5а482Р,

НантьаТвр НАНІБАВЗР,

Назн1і5482Р, На5зНІ15479Р, НазНІТ4813М, НаН1Т4813М, НаНІТ5479Р,

Нан1ітб5ав2Р НАНІБВОР

Нан1т5авзР НаАНІБВОР

Назн1і5498Р2 Нан1т5498Р2, НанНІТ7828Р2, НаНІ7819Р, НАНІТ7в823Р нНан1то5498Р2 Назн1і5498Р2, Н4НІ 7828Р2, На4НІ7819Р, НАНІ7823Р нНант7вагврРа2 Назн1і5498Р2, Н4нНІТ5498Р2, Н4НІ7819Р, НАНІ7823Р

Нан1т7819Р Назн1і5498Р2, НанНІ15498Р2, НаНнІТ7828Р2, ННІ 7823Р

Нант7вагзР Назн1і5498Р2, НанНІТ5498Р2, Н4НнІТ7828Р2, Н4НІТ7819Р

НазнІі5а4бвар нНаніБавар нант7вабре ("тАба, які конкурують самі з собою, не наведені)

Приклад 5. Зв'язування антитіл із клітинами, що надекспресують ГАСЗ, визначене за допомогою проточної цитометрії.

І00247| Були одержані стабільні лінії клітин НЕК293 (НЕК293; АТСС, ЯСКІ-1573), які експресують рекомбінантний ПГАСЗ (номер доступу в МСВІ МР 002277.4) або | АСЗ3 мавпи (п АСЗ) |послідовність яванського макаки з номером доступу в МСВІ ХР 005570011.1 додатково модифікована з заміною "Х" у положенні амінокислоти 74 на пролін відповідно до послідовності макаки-резуса (Масаса тиїада) з номером доступу в МСВІ ХР. 001108923.1) (ЗЕО

ІЮ МО: 576) на клітинній поверхні, та їх застосовували для визначення специфічності зв'язування моноклональних антитіл до (АСЗ за даним винаходом за допомогою аналізу з використанням проточної цитометрії. 00248) Зв'язування антитіл до ГАСЗ оцінювали наступним чином: Стабільні клітини

НЕК?293, які експресують або ПІ АСЗ, або тії АСЗ, промивали 1х О-РВ5 (Ігліпе бсіепійс, номер за каталогом 9240), трипсинізували (Зресіайу Медіа, номер за каталогом З5М-2004-С) і блокували із застосуванням середовища для культивування клітин НЕК293 (ОМЕ -- 1095 ЕВ5

Р/5/5 «ж замінні амінокислоти). Після центрифугування клітини ресуспендували у концентрації 2,0х106 клітин/мл в буфері для фарбування (0О-РВ5 т 295 ЕВ5). Антитіла до ГАСЗ та ізотипові контролі серійно розводили в буфері для фарбування з дозою в діапазоні від 5 пМ до 100 нм, включаючи тільки буфер без антитіла як контроль. Серійно розведені антитіла додавали до суспензії клітин і інкубували протягом 15-30 хвилин на льоду. Клітини центрифугували і осади промивали буфером для фарбування для видалення антитіл, які не зв'язалися. Потім клітини інкубували протягом 15-30 хвилин на льоду із вторинним кон'югованим з алофікоціаніном

К(ав)2, що розпізнає Ес людини (даскбвоп ІттипоКезеатсі, Мо 109-136-170). Клітини центрифугували, і осади промивали буфером для фарбування для видалення вторинного

К(аьв)2, що не зв'язалося, фіксували протягом ночі із застосуванням Суїоїйїх (ВО Віозсіепсев,

Мо 554655) у розведенні 1:11 і буфера для фарбування. На наступний день фіксовані клітини центрифугували і осади промивали буфером для фарбування, ресуспендували і фільтрували.

Результати вимірювань флуоресценції одержували на цитометрі НурегСукю і аналізували в

ЕогеСуї м (ІпіейіСує Альбукерке, Нью-Мексико) для визначення середніх значень інтенсивності флуоресценції (МЕЇ). Значення ЕСзо розраховували на основі рівняння чотирьохпараметричної логістичної моделі за кривою відповіді з 11 точок із застосуванням СгарпРай Рігізт. ЕСво визначено як концентрація антитіла, за якої виявляють 5095 від максимального сигналу зв'язування. Відношення МЕ! для кожного антитіла розраховували шляхом ділення МРЕЇ при 100 нМ на МРЇ при 0 нМ концентрації антитіл.

Таблиця 9

Зв'язування антитіл до Г АОЗ з клітинами НЕК293 дикого типу (У), визначене за допомогою ЕАС5 11111101 РАС5ЗдляНЕКООЗ3М//:СССС

РІОЖ АБ Відношення МЕЇ вом ом

Ізотиповийконтроль йідеЯ | 77777776 навнівдвбар//////С/ ЇЇ -1111111111171Ї111111111108с1 нанівдвбаг////С1Ї7111111111171-1111111111171Ї11111111111весс1 навнівдТЯв С Їм нанівятв Г///С/Ї111111111171-111111111С11111111111и навнівяваїГ/////С/Ї7111111111171-1111111111Ї11111111111тв нанівдвагГ////С/Ї711111111171-111111111171Ї111111111481 навнівдевРаГ////С/Ї7111111111171-111111111Ї111111111 нанівдевРаГ/////С/Ї7111111111171-111111111Ї1111111 навніївІЗ3МГ/////// Ї7771111111171-111111111С111111111115 нантавіІЗМ С! нантявавРаГГ////С/ Їм нантявавбРаГ////С/ ЇЇ 25СсС нантявагз3РГГ///С1СЇ111111111171-111111111171Ї1111111111125СсС2С нанівяв3Р СС! -1111111111171Ї11111111111126сс2с нантуявіягГ///С1СЇ1111111111-1111С1111м

Препаратпорівняння?ї//-/:////Ї 777777777717-1111111111Ї11111111111с1 (Препаратпорівняння2.д//-/://.//// | 7777-1111 Ї11111111111116ССсСсС 00249) Як показано в таблиці 9, у ЕАС5-аналізі для препаратів порівняння та ізотипових контролей не було продемонстровано будь-якого вимірюваного зв'язування з вихідними клітинами НЕК293 дикого типу. Розраховані відношення МЕРЇ знаходились в діапазоні від 1,0 до 1,6х. Для декількох антитіл до | АСЗ були показані вищі відношення у випадку клітин дикого типу, що вказує на неспецифічне зв'язування, з розрахованими показниками МРЇїЇ, що знаходяться в діапазоні від 0,9 до 8,2х. За таких умов фарбування значення ЕСбхо для антитіл до

І АСЗ, а також препаратів порівняння, не визначали.

Таблиця 10

Зв'язування антитіл до ГАОЗ з клітинами НЕК29З/ЛІІ ад3, визначене за допомогою ЕАС5 11111111 РАСбдляНЕК2ОЗНАСІЇ/////:/:///: КЛ: ЛНС:(

РІОЖ АБ Відношення МЕЇ п рвоюмо 1 мому

Ізотиповийконтроль йідеЯ -/-://1777777777111111-11111111Ї111111111118сС1С

І00250| Як показано в таблиці 10, для ізотипових контролей не було продемонстровано будь-якого вимірюваного зв'язування з клітинами НЕК29З/!І ад3. Для всіх 15 антитіл до І АОЗ за даним винаходом було показано значне зв'язування з клітинами НЕК29З/І ад3 зі значеннями

ЕСобо в діапазоні від 300 пМ до 7,9 нМ. Розраховані відношення МЕЇ знаходились в діапазоні 62- 414х. В аналізі зв'язування значення ЕСв5о для препаратів порівняння становили 0,65нМ і 0,75 нМ, а відношення МЕЇ становили менше 200х для обох антитіл.

Таблиця 11

Зв'язування антитіл до ГАОЗ з клітинами НЕК293З/тії ад3, визначене за допомогою ЕАС5 11111101 РАСЗдляНЕКООУТПАЄСІЇ 9

РІОЖ АБ Відношення МЕЇ п воюм 0 мому

Ізотиповийконтрольйдсї | 77777771 навнівдвбарГ/////СЇ711111111171-11111111Ї1111111 нанівдвбаг////117Ї1111111111171-111111111111111111112981

Таблиця 11

Зв'язування антитіл до ГАОЗ з клітинами НЕК293З/тії ад3, визначене за допомогою ЕАС5 (Препаратпорівняння2.д//-/:/ | ///// онМ7 ЇЇ 77777777 86сСсСсС2шС

І00251| Як показано в таблиці 11, для ізотипових контролей не було продемонстровано будь-якого вимірюваного зв'язування з клітинами НЕК293/тії ад3. Загалом для 13 із 15 антитіл до ГАОЗ за даним винаходом було показано значне зв'язування з клітинами НЕК293/тпіїЇ АСЗ зі значеннями ЕСхо в діапазоні від 900 пМ до більше ніж 10 нМ. Розраховані відношення МРЕЇ знаходились в діапазоні від 8,8х до 21,5х. Значення ЕСзхо для препаратів порівняння становили більше ніж 10 нМ, а розраховані відношення МРЇ становили 6, 7х і 8,6 х.

Приклад 6. Зв'язування антитіл із клітинами, що надекспресують ГАСЗ, визначене за допомогою електрохемілюмінесцентного імунологічного аналізу.

І00252|Для вивчення здатності панелі моноклональних антитіл до ГАЗ зв'язувати експресований на клітинній поверхні ГАСЗ був розроблений іп міїго аналіз зв'язування, в якому використовують клітинні лінії, які експресують ГАСЗ людини і мавпи, із застосуванням платформи для детектування на основі електрохемілюмінесценції |Мезо Зсаїе Оіадповіїсв,

Роквіль, Меріленд - (М50О)|.

І00253| За допомогою лентивірусної трансдукції були одержані стабільні клітинні лінії

НЕК293 (АТС, ЯСВІ-1573) для експресії рекомбінантного НГАСЗ (номер доступу в МСВІ

МР 002277.4) або | АСЗ мавпи (тії АСЗ) (послідовність яванського макаки (Масаса Газсісціагів) з номером доступу ХР. 005570011.1, модифікована з заміною "Х" у положенні амінокислоти 74 на пролін відповідно до послідовності макаки-резуса (Масаса тиага) з номером доступу в МСВІ

ХР 001108923.1| (5ЕО ІО МО: 576). Вихідна клітинна лінія НЕК293, для якої при сортуванні клітин з активованою флуоресценцією (БАС5) не спостерігали експресію ГАЗ, що можна виявити, була включена в експеримент як контроль фонового зв'язування. Неспоріднені Ід4 людини і пПІдс4 були включені як ізотипові контрольні антитіла. (00254) Експерименти проводили відповідно до наступної процедури. Клітини із трьох описаних вище клітинних ліній один раз промивали в 1х буфері РВ5 без Са"/Мд?: з подальшою 10-хвилинною інкубацією при 37 "С із розчином для дисоціації клітин, що не містить ферментів.

Клітини, які відкріпилися, один раз промивали 1хРВ5 з Са»/Мад": і підраховували за допомогою лічильника клітин СеПотеїе" М Ащшо Т4 (Мехсеот Віозсіепсе). Приблизно 10000 клітин на лунку в буфері для промивки клітин висівали в 9б-лункові планшети з вугільними електродами (планшет із високою зв'язувальною здатністю МОЇ ТІ-АККАМУ, М5О) та інкубували протягом 1 години при 37 "С для забезпечення прикріплення клітин. Сайти неспецифічного зв'язування блокували за допомогою 295 В5БА (маса/об'єм) в РВ5 протягом 1 години за кімнатної температури. До прикріплених у планшеті клітин у двох повторах додавали розчини антитіл до

ГАЗ у серійних розведеннях у діапазоні від 1,7 ПМ до 100 НМ і розчини без антитіла, і планшети інкубували протягом 1 години за кімнатної температури. Потім планшети промивали для видалення антитіл, що не зв'язалися, із застосуванням пристрою відмивання імунологічних планшетів АдиаМах2000 (МО5 Апаїуйса! ТесппоЇІодіе5). Зв'язані в планшеті антитіла детектували за допомогою кон'югованого з ЗІ ЕО-ТАСМ антитіла до (дб людини (М50) протягом 1 години за кімнатної температури. Після здійснення промивок вміст планшетів проявляли за допомогою буфера для зчитування (М5О) відповідно до рекомендованої виробником процедури, і за допомогою приладу БЕСТОК Ітадег 6000 (М50) реєстрували сигнали люмінесценції. Сигнали прямого зв'язування (у відносних світлових одиницях - НІГ) аналізували в залежності від концентрації антитіла, і дані апроксимували за допомогою сигмоїдальної (чотирьохпараметричної логістичної) моделі доза-відповідь із застосуванням програмного забезпечення СгарипРай Р'гізт"Мм. Ефективність кожного антитіла визначали шляхом розрахунку ЕС»о. ЕСво для зв'язування клітин НЕК293-ПГАСЗ і НЕК293-ті! АСЗ визначено як концентрація антитіла, за якої виявляють 5095 від максимального сигналу зв'язування. Відношення сигналу, який виявляють у випадку зв'язування 100 нМ антитіла з клітинами НЕК293-пПГАСЗ або НЕК293-пП АСЗ, порівняно з вихідними клітинами НЕК293, реєстрували як показник специфічності зв'язування ГАСЗ. Для відношень нижче 2-кратних за найвищої концентрації антитіла (100 нМ) робили висновок, що антитіло є неспецифічним (М). 00255) Результати щодо зв'язування наведені у таблиці 12. 5О0

Таблиця 12

Зв'язування антитіл із клітинами, що надекспресують ПІ АСЗ або ті! АСЗ

ІО АБ Е . Відношення Відношення . фективність й ;

Ефективність клітинного зв'язування зв'язування клітинного ; 100 нМ антитіл з |100 нМ антитіл з ,; зв'язування для : . зв'язування для : НЕК2О9З- клітинами клітинами клітин НЕК293- тя дез вСБО | НЕК293-ПІ.АСЗ і|НЕК293-ті! АСЗ пПГАСЗ ЕС5О (М) т М клітинами і клітинами (М) НЕК29З НЕК29З нагнівдвбаР | 85ЗЕЛО | мМ5 | 68 2 щЩ | м Ф нантавізмМ | 199208 | Мм5 | 89 | м Ф нантвавРа | 122409, | 131608 | 87 | 6 нанівяв3Р | 172208 | мМ5 | 66 | м Ф

М5 - неспецифічне зв'язування - відношення при 100 нм аб «2 (00256) Як показано у таблиці 12, ефективність антитіл варіювала в діапазоні значень ЕСво від 690пМ до 52 НМ для зв'язування з клітинами НЕК293-пПГАСЗ, причому всі антитіла характеризувались специфічним зв'язуванням з »2-кратним перевищенням зв'язування з клітинами, які експресують ГАЗ людини, порівняно з вихідними клітинами НЕК293 при зв'язуванні 100 нМ антитіла. Тільки сім із антитіл специфічно зв'язуються з клітинами НЕК293- ті АСЗ зі значеннями ЕсС»зо в діапазоні від 7,9 нМ до 74 нМ. Значення ефективності зв'язування препарату порівняння щодо клітин НЕК293-пі ад3 становили приблизно 4,0 НМ і 7,0 нМ. Для препаратів порівняння не було показано специфічне зв'язування з клітинами НЕК293-пії ад3.

Зв'язування нерелевантних контролей з клітинами НЕК293-пПГАОЗ і НЕК293-ті АСЗ, як і очікувалося, було неспецифічним, зі зв'язуванням ізотипового контролю НАН та ізотипового контролю Н45Н з відношеннями в діапазоні значень, які в 0,7-1,1 раз перевищують зв'язування з вихідними клітинами НЕК293.

Приклад 7. Блокування зв'язування І АСЗ з МНС класу ІІ в аналізі клітинної адгезії.

І00257| Аналіз клітинної адгезії використовували для вимірювання здатності моноклональних антитіл до І АСЗ блокувати адгезію клітин, які експресують або МНСЇЇ людини, або МНОЇЇ миші (клітин КАХ ї А20 відповідно), до клітин НЕК293, які експресують ПІ АСЗ, прикріплених на мікротитрувальному планшеті (базуючись на аналізі, описаному в Еиг /

Ітітипої. 1995, 25: 2718-21 ру Ниаго, еї аї.).

І00258| За допомогою лентивірусної трансдукції були одержані стабільні клітинні лінії

НЕК293 (АТС, ЯСВІ-1573) для експресії рекомбінантного ПНГАСЗ (номер доступу в МеСВІ

МР 002277.4) або | АОЗ миші (ті АСЗ) (номер доступу в СепВапк МР 032505.1). Для вихідної клітинної лінії НЕК293 не спостерігали експресію Г(АСЗ людини, що можна виявити, у разі використання технології сортування клітин із активованою флуоресценцією (ЕБАС5), і її застосовували для того, щоб продемонструвати необхідність | АСЗ для адгезії клітин КА) і А20, які експресують МНС.

І00259| Експерименти проводили відповідно до наступної процедури. Субконфлюентні клітини НЕК293, які експресують ПІ АСЗ, один раз промивали їХ РВ5, трипсинізували і центрифугували при 1200 об./хв. протягом 5 хвилин. Клітинні осади ресуспендували в 1Х РВ5, а потім підраховували для визначення числа клітин. Відповідне число клітин відбирали і ресуспендували у повному середовищі (ОМЕ «я 1095 ЕВ5 «з пеніцилін/стрептоміцин/глутамін) так, щоб кожна лунка містила 1,274 клітин в 100 мкл. Клітини висівали в стерильні чорні планшети з лунками з прозорим дном Мипсіоп'ї ЮеМКа 96-УМеї! МісгоумейтМ (Тпегто 5сіепійс). Лунки по периметру планшета не включали в аналіз, щоб уникнути крайових ефектів. В лунки по периметру замість клітин додавали 100 мкл їхРВ5. Висіяні на планшеті клітини НЕК293-НІ ДСЗ інкубували протягом ночі при 37 "С, при 595 СО». Після інкубації ці клітини обробляли антитілами до ГАСЗ та ізотиповими контролями.

І00260| В день лікування всі антитіла серійно (1:3) розводили в середовищі КРМІ (без додавання ЕВ5 або добавок). Концентрації у випадку 9У-точкового розведення знаходились у діапазоні від 45 ПМ до 300 НМ, причому остання точка розведення не містила тАб. Для тестування антитіл Н4а5нН в аналізі адгезії із застосуванням клітин КАЛІ концентрації у випадку 9- точкового розведення знаходились у діапазоні від 23 ПМ до 150 нМ, причому остання точка розведення не містила тАБ. До клітин НЕК293-ПІ АСЗ додавали антитіла до І АСЗ або ізотипові контролі в кінцевому об'ємі 50 мкл і інкубували протягом 1 години при 37 "С, при 595 СО». У той час як висіяні на планшеті клітини НЕК293-І АСЗ інкубували з тестованими або контрольними антитілами, неадгезивні В-клітини (КАЛ або А20) мітили кальцеїном-АМ із застосуванням наступної процедури. Суспензію клітин КАХІ і А20 збирали і центрифугували при 1200 об./хв. протягом 5 хвилин. Клітинні осади ресуспендували в їХ РВ5 і підраховували. Клітини промивали РРМІ і ресуспендували в ЕРМІ у концентрації 109 клітин на 1 мл. Клітини мітили шляхом додавання 5 мкл кальцеїну-АМ на 1 мл суспензії клітин та інкубували протягом 30 хв. при 37 "С, при 595 СО». Мічені клітини промивали їх за допомогою КРМІ, центрифугували, промивали 1Х РВЗ5 і ресуспендували в РВ5 у концентрації 5х1059 клітин на 1 мл. Потім додавали 10 мкл блокуючих Ес антитіл ВО Ріпаптіпдеп Ес ВіоскК (0,5 мг/мл) на 1 мл мічених кальцеїном-АМ клітин, які інкубували при КТ протягом 10 хвилин. Пофарбовані кальцеїном-АМ, блоковані за Ес клітини БАЛІ або А20 ресуспендували в ЕРМІ до досягнення кінцевої концентрації 3х109 клітин на 1 мл, а потім застосовували в аналізі адгезії. 00261) Наприкінці обробки клітин НЕК293-І| АСЗ антитілом до ГАСЗ протягом однієї години, в кожну лунку додавали 50 мкл мічених клітин КАШІ або А20 при щільності 1,5х105 клітин/лунку.

Суспензію мічених клітин інкубували з моношаром НЕК293 протягом 1 години при 37 "С, при 595

Со». Неадгезивні клітини змивали шляхом акуратної промивки лунок 4х КРМІ, промокування планшетів після кожної промивки паперовими серветками, з подальшою 2х промивкою РВ5. У кожну лунку додавали РВ5 у кінцевому об'ємі 200 мкл і зчитували флуоресценцію кальцеїну-АМ при довжині хвилі збудження/випромінювання 485 нм/535 нм на багатофункціональному планшет-рідері МІСТОК" Х5. Значення ІСво розраховували на основі рівняння чотирьохпараметричної логістичної моделі за кривою відповіді з 9 точок із застосуванням

СтарпРай Ргіїзт. ІСво було визначено як концентрація антитіла, за якої спостерігали 5095 блокування адгезії клітин НЕК до клітин КАШІ або А20. (002621 Здатність антитіл до Г(АСЗ блокувати зв'язування ГАСЗ з МНЄОЇЇ як людини, так і миші, оцінювали із застосуванням клітинного аналізу адгезії. В аналізі використовувався формат зі зв'язуванням мічених флуоресцентною міткою клітин, які ендогенно експресують

МНОЇЇ МНС людини (КАЛ) або МНС миші (А20)|), з клітинами, сконструйованими для експресії ГАЗ людини. Оцінювали здатність антитіл до | АСЗ3 блокувати таку взаємодію, і результати представлені у таблиці 13.

Таблиця 13

Значення ІСбхо для антитіл до ГАЗ щодо блокування адгезії клітин КА) і А2О до клітин НЕК293- пГАсЗ 11111111 Аналізадтезї/:/ ///:ГОГ

Б2

Таблиця 13

Значення ІСбхо для антитіл до ГАЗ щодо блокування адгезії клітин КА) і А2О до клітин НЕК293- пГАсЗ 11111111 Аналізадтезї/:/ 0 :ИО

Пзотиповийконтроль/////| 77777771 00263) Як показано у таблиці 13, для ізотипового контролю не було продемонстровано будь-якого вимірюваного блокування зв'язування клітин КАЛ або А20 з клітинами

НЕК29З/Г АСЗ. Всі антитіла до | АСЗ за даним винаходом блокували 92-98595 адгезії клітин КАЛІ або А20О до клітин НЕК293-ПІ АСЗ за максимальної концентрації антитіла, зі значеннями ІС50О в діапазоні від 2,5 НМ до 31 нМ для адгезії клітин КА і від 3,6 нМ до 30 нМ для адгезії клітин А20 до клітин НЕК293-ПІ АОЗ. Значення ІС5О для препаратів порівняння становили 3,4 НМ і 7,2 нм для адгезії клітин КАМ і 5,1 нМ і 9,6 нМ для адгезії клітин А2О до клітин НЕК293-І адз.

Приклад 8. Блокування індукованої ГАЗ негативної регуляції Т-клітин в аналізі за репортерним геном люциферази з використанням Т-клітин/АРС. (00264) Активація Т-клітин забезпечується стимулюванням рецепторів Т-клітин (ТСК), які розпізнають певні пептиди, презентовані білками головного комплексу гістосумісності класу або ІЇ (МНСЇ або МНОЇІЇ) на антиген-презентувальних клітинах (АРС) (Соїагаїйй єї аї. 1999, Машге 402, 255-262). Активовані ТОК в свою чергу ініціюють події в рамках сигнального каскаду, які можна відстежувати за репортерними генами під контролем транскрипційних факторів, таких як активаторний білок 1 (АР-1), ядерний фактор активованих Т-клітин (МЕАТ) або ядерний фактор енхансера гена легкого ланцюга каппа активованих В-клітин (МЕкВ). Т-клітинна відповідь оптимізується шляхом залучення корецепторів, експресованих на Т-клітинах або конститутивно, або індуковно. Одним із таких рецепторів є ГАЗ, негативний регулятор активності Т-клітин.

ГАСЗ взаємодіє з його лігандом, МНОЇІЇ, який експресується на цільових клітинах, включаючи

АРС або клітини злоякісної пухлини, та інгібує активацію Т-клітин шляхом пригнічення позитивних сигналів, ініційованих сигналосомою ТОК (УуоїКтанп еї а. 2002, У Іттипої! 169:5392- 5395).

І00265)| Для опису здатності антитіл до ГАЗ перешкоджати опосередкованій ГАСЗ передачі сигналу в Т-клітини, був розроблений репортерний аналіз із використанням Т-клітин, які експресують ГАСЗ/АРС для дослідження передачі сигналу з участю Т-клітини, індукованої взаємодією АРС і Т-клітин, з використанням змішаної культури, що походить із двох клітинних ліній ссавців: Т-клітини, що походять із Оигкаї (клон УКТЗ3.13.5, як описано нижче), і сконструйовані АРС в оточенні НЕК293 (як описано нижче) (фіг. 1).

І00266)| Що стосується першого компонента, лінія Т-клітин для репортерного біологічного аналізу з використанням Т-клітин, які експресують І АСЗ/АРС була створена наступним чином:

Клон Т-клітин, що походить із УигКаї, УКТ3.13.5 (АТСС, Мо ТІВ-153), спершу трансдукували із застосуванням лентивірусної конструкції з репортерною системою АР-1-Ї ис Сідпаї! (Сідпаї І епії

АР-1 ис теропег) (Оіадеп - ЗаБбіозсіепсе5, МоСі 5-0111) згідно з інструкціями виробника.

Лентивірус кодує ген люциферази світляка під контролем мінімального промотора СММУ, тандемні повтори ТРА-індуковного транскрипційного елемента відповіді (ТКЕ) і ген стійкості до пуроміцину. Після селекції з використанням антибіотика стійкі до пуроміцину пули репортерних клітин додатково трансдукували конструкціями, що кодують СО28 людини (МР 006130.1), альфа і бета субодиниці ТОК клону ОБ2ЕЗ (альфа АСА9У2550.1, бета ААДАб1026.1), химеру

І|АСЗ людини (яка містить опозаклітинний домен ГАСЗ людини (МР 0022774) і трансмембранний/цитоплазматичний домен СОЗОб0а людини (амінокислоти 181-299; номер доступу МР 009192.2) і РО-1 людини (номер доступу МР 005009.2). Експресію білків підтверджували за допомогою ЕАСб-аналізу після кожного раунду трансдукції. Потім одержували один клон УКТЗ3.Т3/АР1-І ис/СО2в/химера ПІ АСЗ3-СОЗ300алРО-1, клон 202, і застосовували в біологічному аналізі з використанням Т-клітин/АРС. Клітинну лінію підтримували в КРМІ ї- 1095 ЕВ5 їж пеніцилін/стрептоміцин/глутамін (Р/5/5), доповненому 100 мкг/мл гігроміцину ї- 500 мкг/мл (5418 ї- 1 мкг/мл пуроміцину, яке в даному документі називається середовищем для селекції. Ці клітини в даному документі називають репортерними

Т-клітинами.

І00267| Що стосується іншого компонента, лінія клітин АРС для репортерного біологічного аналізу з використанням Т-клітин, які експресують ГАСЗ/АРС була одержана наступним чином:

Стабільну клітинну лінію НЕК293 (АТСС, Мо САІ-1573), що експресує СО20 людини (номер

МР 068769.2), трансдукували конструкціями, які кодують субодиниці МНУЇЇ людини, НІ А-ОН2А (МР 061984.2) ії НГА-ОН2В (МР 002115). НІГ А-ОН2-позитивні клітини виділяли за допомогою

ЕАСЗ5Б, і одержану клітинну лінію, НЕК293/СО020/НІ А-ОК2, підтримували в ОМЕ я 1095 ї- Р/5/5 ж замінні амінокислоти, доповненому 100 мкг/мл гігроміцину ї- 500 мкг/мл 5418, яке в даному документі називається середовищем для селекції. Ці клітини в даному документі називають клітинами АРС.

І00268) Для забезпечення взаємодії Т-клітини і АРС з метою ініціації передачі сигналу з участю ТСК застосовували два підходи: (1) спосіб на основі біспецифічного антитіла; і (2) спосіб із праймуванням пептидом. У цьому біологічному аналізі антитіла до ГАСЗ3 блокували взаємодію ГАСЗ/МНСЇЇ і відновлювали активність Т-клітин шляхом порушення передачі інгібувального сигналу за допомогою цитоплазматичного хвоста молекули СОЗО00ба, з подальшим підвищенням щодо передачі сигналу АР1-ІГ ис. Активацію Т-клітин відстежували шляхом зчитування показників люциферази.

І0ОО269| Спосіб на основі біспецифічного антитіла. У цьому способі використовували біспецифічне антитіло, що складається із одного Баб-плеча, яке зв'язується з СОЗ на Т- клітинах, та другого Раб, яке зв'язується з СО20 на клітинах НЕК293 (біспецифічне антитіло до сОр3хСОр20; наприклад, розкрите в 0520140088295). Присутність біспецифічної молекули приводить до утворення імунного синапса та активації ТСК-комплексу завдяки кластеризації молекул СОЗ на сконструйованих Т-клітинах.

І00270|За день до скринінгу сконструйовані репортерні Т-клітини культивували в середовищі для селекції до досягнення концентрації 5х105 клітин/мл, а на наступний день тестували в біологічному аналізі. Значення ЕСво антитіл до ГАСЗ визначали у присутності фіксованої концентрації біспецифічного антитіла до СЮОЗ3хСО20 (100 пМ). Реагенти додавали в наступному порядку. Антитіла до І ад З та ізотипові контролі серійно розводили в КРМІ1640, доповненому 1095 ЕВ5 і пеніциліном/стрептоміцином/глутаміном (середовище для аналізу).

Концентрації у випадку 10-точкового розведення знаходились у діапазоні від 15 пМ до 100 нМ, причому кінцева точка розведення не містила тАБр (тільки буфер як контроль). Серійно розведені антитіла додавали у відповідні лунки 9б-лункових білих планшетів із лунками з плоским дном, які містять фіксовану концентрацію (100 ПМ) біспецифічного антитіла.

Культивовані протягом ночі репортерні Т-клітини ресуспендували у концентрації 2х10б/мл в середовищі для аналізу, додавали в планшети, які містять антитіла до ГАЗ і біспецифічне антитіло, та інкубували протягом 30 хвилин при 37 "С/595 СО2. Кінцева концентрація репортерних Т-клітин становила 5х1074 на лунку.

І00271| Потім клітини АРС промивали 1х О-РВ5 (Ігуіпе 5сіепіййс, номер за каталогом 9240), трипсинізували (спеціалізоване середовище (Зресіайу Медіа), номер за каталогом 5М-2004-С) і блокували середовищем для аналізу. Після центрифугування клітини ресуспендували до досягнення концентрації 4х10»/мл в середовищі для аналізу і додавали в планшети, які містять репортерні Т-клітини, інкубовані з антитілами до ГАСЗ і біспецифічним антитілом. Кінцева концентрація клітин АРС становила 1х107 на лунку. Планшети інкубували протягом 4-6 годин при 37"С, 595 02. Після додавання реагенту ОМЕ-Сіо"м (Рготеда, Мо ЕбЄО51) виявляли активність АР1-І ис, і збирали дані у відносних світлових одиницях (КІ) на люмінометрі Місіог.

Всі зразки тестували в двох повторах.

І00272| Спосіб із праймуванням пептидом із застосуванням МВР85-99. ТСК розпізнають специфічний комплекс МНС/пептид і забезпечують активацію Т-клітин. Повідомлялось, що застосовуваний у цьому аналізі гетеродимер ТОК клону ОБ2ЕЗ взаємодіє з білком МНеЇІЇ, НІ А- регАВ, у комплексі з пептидом МВР85-99 (основний білок мієліну, МР 001020272; 5ЕО ІЮО МО: 583). 60 І00273| За день до скринінгу одержували сконструйовані репортерні Т-клітини, як описано вище для способу на основі біспецифічного антитіла. Клітини АРС праймували протягом ночі 0,2 мМкМ пептиду МВР85-99 (Сепек НГА-ОВ2 МВРВ85-99 в ЮОМ50, ЕК-15, партія Мо 140411, молекулярна маса 1797,1 г/моль) у відповідному середовищі для культивування клітин, яке містить антибіотик, при 37 "С/595 СО2. Значення ЕСзо антитіл до | АСЗ визначали у присутності 1х107 праймованих АРС. Реагенти додавали в наступному порядку. Антитіла до ГАСЗ і контролі серійно розводили в середовищі для аналізу. Концентрації антитіл до ГАЗ у випадку 10- точкового серійного розведення знаходились у діапазоні від 15 пМ до 100 нМ, причому остання точка розведення не містила тАБб. Антитіла додавали у відповідні лунки 9б-лункового білого планшета з лунками з плоским дном. Культивовані протягом ночі репортерні Т-клітини ресуспендували до досягнення концентрації 2х10б/мл в середовищі для аналізу, додавали в планшети та інкубували протягом 30 хвилин при 37 "С при 595 СО». Кінцева концентрація репортерних Т-клітин становила 5х107 Т-клітин на лунку. Потім праймовані пептидом МВР85-99 клітини АРС промивали їх О-РВ5 (Ігуіпе Зсіепійс, номер за каталогом 9240), трипсинізували (спеціалізоване середовище (Зресіайу Медіа), номер за каталогом ЗМ-2004-С) і блокували середовищем для аналізу. Після центрифугування клітини ресуспендували до досягнення концентрації 4х105/мл в середовищі для аналізу і додавали в планшети з антитілами до Г АСЗ і праймованими пептидом репортерними Т-клітинами. Кінцева концентрація клітин АРС становила 1х10" на лунку. Планшети для аналізу інкубували протягом 4-6 годин при 377С/595

Со». Після додавання реагенту ОМЕ-Сіо м (Рготеда, Мо Еб6О51) виявляли активність АР'1-Ї цс, і збирали дані у відносних світлових одиницях (КІ) на люмінометрі Місіог. Всі зразки тестували в двох повторах.

І00274| Значення ЕСво визначали на основі рівняння чотирьохпараметричної логістичної моделі за кривою відповіді з 10 точок із застосуванням СгарпРай Рііїзт. Значення КІ для кожного підданого скринінгу антитіла нормалізували, приймаючи останнє серійне розведення як контроль, яке не містить тАБ, за 10095, що теоретично повинно відображати максимальну АР1-

Ї ис відповідь, обумовлену або біспецифічною молекулою (у способі на основі біспецифічного антитіла), або праймованими пептидом МВРУ85-99 АРС. Результати наведені у таблиці 14.

Таблиця 14

Залежна від антитіл до | АСЗ активація передачі сигналу АР'1-І ис у біологічному аналізі з використанням Т-клітин, які експресують ГАСЗ/АРС 10000000 пептидом біспецифічного антитіла пзотипйяЯЯ 71111111 (00275) Як показано у таблиці 14, всі тАбБ до Їад3 за даним винаходом, які тестували в біологічному аналізі з використанням Т-клітин/АРС, забезпечували звільнення від опосередкованого ГАСЗ/НІ А-ОК2 інгібування зі значеннями ЕСхо в діапазоні від 135 пМ до 8,83 нМ у способі аналізу з праймуванням пептидом, і з ЕСзо в діапазоні від 87 пМ до більше ніж

100 НМ в способі аналізу на основі біспецифічного антитіла, тоді як препарати порівняння характеризувались значеннями ЕСвзо 280 пМ їі 350 пМ. Для тестованих ізотипових контролей не було показано значуще відновлення активності в біологічному аналізі У додатковому експерименті додавання антитіла до РО-1 (КЕСМ 2810; описане в прикладі 12 у даному документі) не посилювало відновлення активації Т-клітин. (00276) У другому експерименті клітинну лінію НЕК293/С0О20/НІ А-ОК2 трансдукували геном

РО-І1 людини (амінокислоти 1-290 білка з номером доступу МР 054862.1), який був клонований в лентивірусну векторну систему (рі МХ). Як описано вище, Т-клітини, що походять із Уигкаї, які експресують ПІГАС-3 і репортерну люциферазу під контролем АР-1, інкубували з РОЮО-Ї1- позитивними антиген-презентувальними клітинами, які експресують комплекс МНС І людини/пептид. У цьому аналізі антитіла до ГАС-3 забезпечували відновлення активності Т- клітин тільки у присутності антитіла до РО-1 (КЕСМ2810; описане в прикладі 12 у даному документі), а не за відсутності антитіла до РО-1. Таким чином, у цьому аналізі з використанням

Т-клітин антитіла до ГАС-3 забезпечували відновлення активації Т-клітин шляхом блокування передачі інгібувального сигналу І АС-3/МНЄ ІІ і діяло синергічно з антитілом до РО-1.

Приклад 9. Антитіла до ГАЗ характеризуються зв'язуванням з СО4- і Сов стимульованими Т-клітинами яванського макаки.

І00277|У цьому прикладі за допомогою РАС5 оцінювали здатність вибраних антитіл до

Г АСІЗ зв'язуватися з СО4-- та/або СО8-- Т-клітинами яванського макаки, що експресують І АС3. (00278) Спершу із цільної крові яванського макаки (Віогесіатайоп, Вестбері, Нью-Йорк) виділяли Т-клітини. Коротко, цільну кров від двох донорів-яванських макак розводили 1:1 в РВ5 і нашаровували на 8595 розчин РісоіїІ-Радшие. Відповідно до стандартних процедур, еритроцити відділяли від мононуклеарних клітин і Т-клітини виділяли із застосуванням набору для виділення загального пула Т-клітин (раптТ сеї5 ізоЇайоп Кі) (МікКепуї Віотесп). (002791 Виділені Т-клітини активували із застосуванням набору для активації/розмноження

Т-клітин (Т-сеїЇ Асіїмайоп/Ехрапвзіоп КІ) для відмінного від людини примата (МіМКепуї Віоїесп).

Суміш клітин із гранулами ресуспендували у концентрації 1х106 клітин/мл у повному середовищі. Через 72 год інкубації гранули видаляли, і активовані Т-клітини розмножували у повному середовищі протягом 96 год.

І00280| Потім стимульовані Т-клітини яванського макаки від кожного донора, як описано вище, фарбували барвником ГІМЕ/ОЕАО (Моїесшаг Ргобез) для розрізнення живих і мертвих клітин за допомогою ЕАС5. Потім клітини разом інкубували з кон'югованими з РЕ антитілами до

СО8 і кон'югованими з РІТС антитілами до СО4 протягом 15 хв на льоду для забезпечення можливості виявлення СО4- і СО8-позитивних і негативних популяцій клітин.

І00281| Для оцінки зв'язування антитіл до ГАЗ з раніше виділеними СО4- і Сов тТ- клітинами яванського макаки антитіла до ГАСЗ та ізотипові контролі серійно розводили у блокуючому буфері і висівали в 96-лунковий планшет із лунками з М-подібним дном із кінцевими дозами в діапазоні від 100 нМ до 50 пМ. Потім серійно розведені антитіла безпосередньо мітили із застосуванням 2епоп АїЇІеха-РіІшог 647 (МоіІесціаг Ргобевз) і інкубували з суспензією СО4-4/С08--

Т-клітин яванського макаки протягом 15-30 хв на льоду. Клітини центрифугували, і осади промивали буфером для фарбування для видалення антитіл, що не зв'язалися, і фіксували протягом 12 год Суїоїїх (ВО Віозсіеєпсе5) у розведенні 1:11 і буфері для фарбування. Після завершення періоду інкубації буфер для фіксації видаляли, а осади ресуспендували в буфері для фарбування, фільтрували, і застосовували для вимірювань флуоресценції. (00282) Результати вимірювань флуоресценції одержували на Еогіезза (Весіоп ОіскКіп5оп) і дані аналізували в Еіомо для визначення середніх значень інтенсивності флуоресценції (МЕЇ).

Значення ЕСво розраховували на основі рівняння чотирьохпараметричної логістичної моделі за кривою відповіді з 11 точок із застосуванням СгарпРай Ргізт. Відношення МЕЇ для кожного антитіла розраховували шляхом ділення МРЇ при 11,1 нМ на МРЕЇ при 0 нМ концентрації антитіл (негативний контроль).

Таблиця 15

ЕСвхоі відношення МЕРЇ для зв'язування вибраних антитіл до | АОЗ з СО4- і СОв8.-- Т-клітинами яванського макаки від декількох донорів

Доспіджувано за допомогою АСВ Відно- Відно- Відно- Відно- зв'язування щодо популяції ЕСьо шення шення ЕСоо шення ЕСво шення стимульованих Т-Ї (М) МЕЇ ЕСзво (МІ МЕЇ ТМ) МЕЇ ІМ) МЕЇ клітин (11 нм/ (11 нм/ (11 нм/ (11 нм/ о НМ) о нм) о НМ) о НМ) 1 ниишшшнннІИШЬЖЖЬБИТИТЛИНН Шиннниннншшш порівняння 1

Ізотиповий

МВ: зв'язування відсутнє

І00283| Як було показано раніше, антитіла до ГАЗ Н4аі5зНІ5482Р і Назн14813М характеризувались зв'язуванням із сконструйованими клітинними лініями ГАОСЗ3-НЕК29З3 яванського макаки. У цьому прикладі для Н4ізНІ15482Р і Н4зНІТ4813М було продемонстровано специфічне зв'язування з СО4- і СО8-- Т-клітинами яванського макаки, що експресують ГГ АСЗ, з

ЕСбхо в діапазоні від 1,1 НМ до 85 пМ (таблиця 15). Таким чином, описані в цьому прикладі вибрані антитіла до ГАЗ зв'язуються, проявляючи перехресну реактивність, з І АБЗ, експресованим на активованих СО4-- і СО8-- Т-клітинах яванського макаки. На відміну від цього, для препарату порівняння 1 було продемонстровано зв'язування тільки з СО8- Т-клітинами яванського макаки.

Приклад 10. Іп мімо ефективність антитіл до ГАЗ щодо пухлин Соїоп 26. (00284 Іп мімо ефективність антитіл миші до ГАЗ окремо і в комбінації з антитілами до РО-1 миші досліджували на доклінічній моделі сингенної пухлини СоїЇоп 26.

І00285| Миші ВАЇВ/с були придбані у Тасопіс Віозсіепсе5. Сооп 26, клітинна лінія аденокарциноми миші, яка походить із штаму мишей ВАГ В/с, була одержана із Американської колекції типових культур (АТСС). В день 0 п'ятдесятьом мишам ВАГ В/с підшкірно імплантували 1х105 клітин Соїоп 26 (лінія аденокарциноми миші, яка походить із штаму ВАГ В/с). В день 8 вибирали сорок мишей із середнім об'ємом пухлини 50 мм: і рандомізували їх у 4 групи обробки (М-10/групу). У дні 14, 17, 21, 24 і 28 мишам вводили дози антитіл наступним чином: група 1, ізотипові контрольні Ідо2а-антитіла пацюка (клон 2АЗ, ВіоХсСеїІ, номер за каталогом ВЕ00О89) та ізотипові контрольні тідс1-антитіла (клон МОРС-21, ВіоХСеїІ, номер за каталогом ВЕО0083); група 2, антитіла до РО-1 миші (дсбС2а пацюка для антитіла до РО-1 миші, клон КРМІ-14,

ВіоХСеїІ, номер за каталогом ВЕО0089) та ізотипові контрольні тідс1-антитіла; група 3, антитіла до ГАЗ миші (91 пацюка для антитіла до ГАЗ миші, клон СОВ7М, ВіоХсСеїЇ, номер за каталогом ВЕО174) та ізотипові контрольні Ідс2а-антитіла пацюка; група 4, антитіла до РО-1 миші і до ГАОЗ миші. Всі антитіла вводили шляхом внутрішньочеревної ін'єкції у концентрації 10 мг/кг. Показники об'єму пухлини відстежували шляхом вимірювання за допомогою штангенциркуля два рази в тиждень протягом всього експерименту (42 дні). (00286) Значне пригнічення росту пухлини спостерігали у мишей, яких обробляли антитілом до РО-1 миші (фігури 2А-В), причому в кінці експерименту у 5 із 10 мишей до дня 45 пухлина зникала. Пригнічення росту пухлини також спостерігали в підгрупі мишей, оброблених антитілом до ГАОЗ миші, причому у З із 10 мишей до дня 45 пухлина зникала. З разючою відмінністю, комбінована обробка антитілами до ГАСЗ3 і до РО-1 перевершувала будь-якій монотерапевтичний препарат, причому в кінці експерименту у 8 із 10 мишей пухлина зникала, що свідчить про сильний адитивний ефект обробки антитілом до ГАсЗ і антитілом до РО-1. У контрольній групі в кінці експерименту мишей без пухлини не спостерігали. До дня 35 спостерігали статистично значуще зменшення показників об'єму пухлини у мишей, оброблених комбінованим терапевтичним препаратом (р«х 0,05, фіг. 28), але не будь-яким із монотерапевтичних препаратів. Не зважаючи на ефективне усунення пухлини, жодних симптомів втрати ваги тіла не спостерігали (не показано). Таким чином, у моделі пухлини СоЇоп 26, що розвинулася, схема з комбінацією антитіл до РО-1 і до ГАЗ була значуще більш ефективною, ніж з відповідними монотерапевтичними препаратами.

І00287| Іп мімо активність антитіл до РО-1 миші і до ГАСЗ миші також вивчали на доклінічних моделях сингенних пухлин 471, КЕМСА і А20. Комбінована обробка обома антитілами забезпечувала щонайменше адитивний протипухлинний ефект порівняно з обробкою будь-яким із антитіл окремо (дані не наведені).

Приклад 11. Іп мімо ефективність антитіл до ГГ АОЗ миші щодо пухлин МОЗ8.

І00288| Ефект подвійного блокування РО-1 і ГАСЗ3 вивчали щодо пухлин МСЗ38, що розвинулися, у мишей С57ВІ/6б із застосуванням блокуючих антитіл до РО-1 миші і до ГГ АОСЗ миші.

І00289|Миші С578ВІ/6 були придбані у Тасопіс Віозсіепсе5. МСЗ38, клітинна лінія аденокарциноми миші, яка походить із штаму мишей С57ВІ /б, була одержана із депозитарію

Національних інститутів охорони здоров'я. Антитіла до Г АСЗ і до РО-1, а також контролі, були одержані як описано в прикладі 10.

ІО0О290| В день 0 п'ятдесятьом мишам С57ВІ/6 підшкірно у бік імплантували 3х105 клітин

МОЗ38. В день 8 вибирали сорок мишей із середнім об'ємом пухлини 45 ммзЗ і рандомізували їх у 4 групи обробки (М-10/групу). У дні 8, 12, 15, 19 і 23 мишам вводили дози антитіл наступним чином: група 1, контрольні ізотипові |дс2а-антитіла пацюка та тідс1-антитіла; група 2, антитіла до РО-1 миші та тідс1-антитіла; група З, антитіла до ГАЗ миші та ІдСг2а-антитіла пацюка; група 4, антитіла до РО-1 миші та антитіла до | АСЗ миші. Всі антитіла вводили у концентрації 10 мг/кг шляхом внутрішньочеревної ін'єкції. Показники об'єму пухлини відстежували шляхом вимірювання за допомогою штангенциркуля два рази в тиждень протягом всього експерименту (28 дні). 00291) Терапія антитілом до РО-1 забезпечувала значуще пригнічення росту пухлини в підгрупі мишей (р«е0,0001; день 23) (фігури ЗА-В), причому в кінці експерименту пухлина зникала у 2 із 10 мишей. У випадку монотерапії антитілом до Г(АСЗ не було показано будь-якого значущого протипухлинного ефекту (в кінці експерименту у 0/10 мишей зникала пухлина), тоді як комбінація антитіл до І АСЗ і до РО-1 перевершувала терапію антитілом до РО-1 окремо, що свідчить про наявність синергічного ефекту.

І00292| Для тестування імуномодулюючих властивостей антитіл до РО-1 і до ГАСЗ в комбінації, вивчали Т-клітинні маркери в селезінках і дренуючих лімфатичних вузлах (0І М) оброблених мишей (фіг. 4). Селезінки і дренуючі лімфатичні вузли мишей із пухлиною видаляли під час препарування і поміщали в 15 мл середовища КРМІ1640 СіІшатах І (Іпийгодеп).

Виділяли загальну РНК і здійснювали КТ-РСВ-аналіз Тадтап із застосуванням суміші праймер/зонд, специфічної для СО8В миші (зонд: АСЄСАОСТСТОСССТСАТ (5ЕО ІЮО МО: 584), прямий праймер: ССТСТООСТООТСТІСАСТАТО (5БО ІО МО: 585), зворотній праймер:

ТТ ОосССОТАТООСТТОСТТТОААС (5БО ІО МО: 586)| і ІЕМу миші (Мт01168134 т!', Аррігєа

Віозувіетв). Зразки нормалізували до рівнів експресії транскрипту, що кодує циклофілін В миші.

В аналізі ТадМап було продемонстровано розмноження СО8- Т-клітин як в ОІМ, так і в селезінках мишей у групі комбінованої обробки, а також підвищена продукція ефекторної молекули ІЕМу Т-клітин у тварин, оброблених як комбінацією, так і тільки антитілом до РО-1, що свідчить про те, що блокування РО-1 і ГАЗ забезпечує підвищення щодо проліферації та ефекторної функції Т-клітин.

Приклад 12. Іп мімо ефективність антитіл до ГАЗ людини щодо пухлин МОСЗ8.

І00293|У цьому експерименті вивчали ефективність ілюстративного антитіла до ГАЗ людини за даним винаходом щодо пухлин МСЗ8. тАБ до ГАСЗ людини не зв'язуються з | ДОЗ миші. Отже, для вивчення протипухлинних властивостей таких антитіл у мишей іп мімо застосовували мишей, гуманізованих для експресії білюа (АСЗ людини. Для експериментів згідно з даним документом, із застосуванням технології МеІосісепеФф були створені гуманізовані за двома генами миші, у яких експресується позаклітинна частина РО-1 людини і | АСЗ людини і трансмембранна і внутрішньоклітинна частини мишачих версій цих білків (МаІеп2иеїа єї а! 2003;

Маї. ВіотесНпої. 21. 652-659). (00294) Гуманізовані за двома генами миші ГАСЗ/РО-1 були сконструйовані із застосуванням технології МеІосізепеФ для заміщення ділянок генів Расаї і Гад3З3 миші, що кодують позаклітинні домени, на відповідні ділянки генів РО-ї- людини і ГАЗ людини (публікація заявки на патент США з серійним номером 62/258181, подана 20 листопада 60 2015 року). Експресію гуманізованих РО-1 і ГАЗ підтверджували шляхом вивчення експресії білків РО-1 і ГАСЗ на Т-клітинах гуманізованої миші після стимуляції антитілом до СОЗ/СО28.

Взаємодія білків РО-1 і ГАЗ людини з відповідними лігандами миші перевіряли шляхом тестування зв'язування І АСЗ людини з МНС ІІ миші в аналізі клітинної адгезії, а зв'язування РО- 1 людини з РО-І 1 миші перевіряли у дослідженні зв'язування 5РЕ-Віасоге.

І00295)| Ілюстративне антитіло до ГАСЗ, застосовуване для цього дослідження, є повністю людським антитілом, яке специфічно зв'язується з (АСЗ людини і містить НСОК1-НСОН2- неОовВЗ- СОВІ1- СОВ82г- СОАЗ 5ЕО ІЮ МО: 420-422-424-428-430-432 і НСМК/Л СУК ЗЕО ІО МО: 418/426 (також відоме як Н4зНІ15482Р, та як "тАбБІ1" далі в даному документі).

І00296| Антитіла до РО-1 людини розкриті в публікації заявки на патент США

О0520150203579, включеній у даний документ за допомогою посилання у всій своїй повноті.

Застосовуване у цьому прикладі антитіло до РО-1 являє собою Н4іН7798М (розкрите в 0520150203579; також відоме як КЕСМ2810). Більш конкретно, Н4Н7798М містить послідовність важкого ланцюга 5ЕО ІЮО МО: 330 і легкого ланцюга 5ЕО І МО: 331 (розкриті в

О520150203579). КЕСМ2810 (антитіло до ПРО-1) з високою афінністю зв'язується з РО-1 людини і блокує взаємодію РО-1 з РО-І 1 і РО-І1 2.

І00297| Клітини аденокарциноми товстої кишки миші (МС38.Ома) були сконструйовані з можливістю експресії альбуміну курячого яйця з метою підвищення імуногенності пухлини.

ІО0298|В день 0 мишам Гдозгатиптрр)-1питлит дідшкірно імплантували 1,5х109 клітин

МО38.Ома і рандомізували їх у три групи обробки (М-7/групу). У дні 3, б, 10, 14 і 17 мишам шляхом внутрішньочеревної ін'єкції вводили ІттАБ1 (антитіло до ПІ АСЗ) (25 мг/кг), КЕСМ2810 (антитіло до ПРО-1) (10 мг/кг) або ізотипове контрольне антитіло (25 мг/кг). Показники об'єму пухлини відстежували шляхом вимірювання за допомогою штангенциркуля два рази в тиждень протягом всього експерименту (24 дні).

ІО0299| В день 0 гуманізованим за двома генами мишам ІдосдЗгит/птр(р)-1питилит вводили клітини МОЗ8.Ома, а в дні З, 6, 10, 14 ії 17 внутрішньочеревним шляхом вводили дози тАбі1 (антитіла до ПІ АСЗ3) (25 мг/кг), КЕСМ2810 (антитіла до НПРО-1) (10 мг/кг) або ізотипового контролю (25 мг/кг). Для КЕСМ2810 (антитіла до ПРО-1) було показано часткове інгібування росту пухлини (фіг. 5), причому регресію пухлини спостерігали у 2 із 7 мишей, тоді як в групі, що одержувала ізотиповий контроль, не було жодної миші без пухлини. Для монотерапії тАбБ1 (антитілом до ПГАСЗ) у концентрації 25 мг/кг не було показано будь-якого значущого ефекту щодо росту пухлини, причому в кінці експерименту пухлина зникала тільки у 1 із 7 мишей. На показники ваги тіла мишей тАБ1і (антитіло до ПГАСЗ3), КЕСМ2810 (антитіло до ПРО-1) або ізотиповий контроль не впливали.

Приклад 13. Іп мімо ефективність комбінації антитіл до | АСЗ людини і до РО-1 людини щодо пухлин МОЗ8.

І0ООЗО0| У цьому експерименті вивчали ефективність тАБІ (антитіла до ПІ АСЗ) в комбінації з

КЕОСМ2810 (антитілом до ПРО-1) щодо пухлин МСОС38.Ома у гуманізованих за двома генами мишей Гдозгпт/питрр)-1пит/лит, Гуманізовані за двома генами миші описані в прикладі 12 у даному документі.

І00301| Ілюстративне антитіло до ГАСЗ, застосовуване для цього дослідження, є повністю людським антитілом, яке специфічно зв'язується з (АСЗ людини і містить НСОК1-НСОН2- неОовВЗ- СОВІ1- СОВ82г- СОАЗ 5ЕО ІЮ МО: 420-422-424-428-430-432 і НСМК/Л СУК ЗЕО ІО МО: 418/426 (також відоме як Н4зНІ15482Р, та як "тАбБІ1" далі в даному документі).

І00302| Застосовуване у цьому прикладі антитіло до РО-1 являє собою Н4Н7798М (розкрите в 0520150203579; також відоме як КЕСМ2810). КЕСМ2810 (антитіло до ПРО-1) з високою афінністю зв'язується з РО-1 людини і блокує взаємодію РО-1 з РО-І1 і РО-І 2.

ІООЗОЗ| В день 0 мишам підшкірно імплантували 1х105 клітин МС38.Ома і рандомізували їх у чотири групи обробки (М-7 у контрольній групі і М-12 у кожній із груп обробки тАБбБІ1 (антитілом до ПГАСЗ3), КЕОМ2810 (антитілом до ПРО-1) і комбінацією тАБі (антитіло до ПГАСЗ) ж

КЕСМ2810 (антитіло до ПРО-1)). У дні З, 7, 10, 14 і 17 мишам шляхом внутрішньочеревної ін'єкції вводили тАБбІ1 (антитіло до ПІ АОЗ) (25 мг/кг), КЕСМ2810 (антитіло до пПРО-1) (10 мг/кг), комбінацію тАБбІ1 (антитіла до НІ АСЗ) (25 мг/кг) і КЕСМ2810 (антитіла до ПРО-1) (10 мг/кг) або ізотиповий контроль (25 мг/кг). Показники об'єму пухлини відстежували шляхом вимірювання за допомогою штангенциркуля два рази в тиждень протягом експерименту (32 дня), і за тваринами без пухлини спостерігали щодо відсутності повторної появи пухлини протягом періоду тривалістю до 80 днів. 00304) Монотерапіяї КЕСМ2810 (антитілом до ПРО-1) приводила до інгібування росту пухлини (фігури бА-В), з регресією пухлини у 2 із 12 (1795) тварин, тоді як тАБбІ (антитіло до

ПГАСЗ) не було значуще ефективним, що підтверджує висновок із попереднього експерименту. 60 Регресію пухлини спостерігали тільки у 1 із 12 мишей, оброблених тАБбБІ1 (антитілом до НІ АС).

У групі, що одержувала ізотиповий контроль, до дня 32 не було мишей без пухлини. На відміну від цього, для комбінації тАбБі (антитіла до ПГАОЗ) і КЕСМ2810 (антитіла до ПРО-1) було продемонстровано сильне інгібування росту пухлини МО38.Ома, у результаті чого в кінці експерименту було 5 із 12 (4295) мишей без пухлини. У жодної з мишей без пухлини не спостерігали повторної появи пухлини протягом 80 днів після імплантації, що свідчить про довготривалі ефекти комбінованої імунотерапії. За допомогою однофакторного дисперсійного аналізу з апостеріорним критерієм Тьюкі для множинного порівняння була виявлена значуща різниця за показниками об'єму пухлини між групами комбінованої обробки тАБІ1 (антитілом до

ПГАСЗ) і КЕОМ2810 (антитілом до ПРО-1) і групами, що одержували монотерапевтичний препарат тАбБІі (антитіло до п АСЗ3) (р«0,05) або ізотиповий контроль (р«е0,01) в день 22 (фіг. 6В). Для монотерапевтичного препарату КЕСМ2810 (антитіла до ПРО-1) також було показано значуще пригнічення росту пухлини (р«0,05). Комбінована обробка тАбБІ1 (антитілом до ПГАОЗ) і КЕОМ2810 (антитілом до ПРО-1) також приводила до значущого покращення щодо відсотка виживаності тварин (р«0,0001), згідно з аналізом за допомогою логарифмічного рангового критерію (Мантеля-Кокса) (фіг. 6С). Незважаючи на покращену ефективність комбінованої терапії, симптомів втрати ваги тіла не спостерігали (дані не наведені). Таким чином, комбінація тАбі1 (антитіла до ПГАСЗ) і КЕСМ2810 (антитіла до ПРО-1) забезпечувала покращену ефективність, включаючи пригнічення росту пухлини, покращене усунення пухлини і підвищену виживаність порівняно з монотерапевтичними препаратами КЕСМ2810 (антитілом до

ПРО-1) або тА! (антитілом до ПІ АС).

Приклад 14. Дослідження з визначення оптимальної дози комбінації антитіл до ГАСЗ ї до

РО-1 щодо пухлин МОЗ8.

Ї00305| У цьому прикладі описана серія експериментів з визначення оптимальної дози з вимірюванням іп мімо ефективності комбінації антитіл до РО-1 людини і до ( АСЗ людини щодо пухлин МО38.Ома у гуманізованих за двома генами мишей І ДОЗ поттитр|)-1 пот/пит, Гуманізовані за двома генами миші описані в прикладі 12 у даному документі. 00306) Ілюстративне антитіло до ГАСЗ, застосовуване для цього дослідження, є повністю людським антитілом, яке специфічно зв'язується з (АСЗ людини і містить НСОК1-НСОН2- неОовВЗ- СОВІ1- СОВ82г- СОАЗ 5ЕО ІЮ МО: 420-422-424-428-430-432 і НСМК/Л СУК ЗЕО ІО МО: 418/426 (також відоме як Н4зНІ15482Р, та як "тАбБІ1" далі в даному документі).

Ї00307| Застосовуване у цьому прикладі антитіло до РО-1 являє собою Н4Н7798М (розкрите в 0520150203579; також відоме як КЕСМ2810). КЕСМ2810 (антитіло до ПРО-1) з високою афінністю зв'язується з РО-1 людини і блокує взаємодію РО-1 з РО-І1 і РО-І 2.

І00308)| У першому експерименті КЕОМ2810 (антитіло до ПРО-1) титрували і тестували при рівнях дози 10 мг/кг і 1 мг/кг, причому в обох дозових групах його тестували і як окремий засіб, і в комбінації з тАбБ1 (антитілом до ПІ АС) (25 мг/кг). Результати для обох груп комбінованої обробки порівнювали з результатами монотерапії КЕСМ2810 (1 мг/кг або 10 мг/кг) або тАбБІ1 (25 мг/кг) для того, щоб визначити, чи спостерігається адитивний/синергічний протипухлинний ефект. Також тестували обробку ізотиповим контрольним антитілом (25 мг/кг). В день 0 мишам

ГАС-Зпит/пит"РО-1пит/пит вводили клітини МС38.Ома і рандомізували їх у шість груп обробки (М-6 в групі, що одержує ізотиповий контроль, і М-12 в групах обробки тАбБ1, КЕСМ2810 або

КЕОСМ2810 ї- тАБІ). Мишам вводили: тАбІ (25 мг/кг); КЕСМ2810 (10 мг/кг); КЕОМ2810 (1 мг/кг); тА (25 мг/кг) - КЕСМ2810 (10 мг/кг); тАБ1 (25 мг/кг) - КЕОМ2810 (1 мг/кг); або ізотиповий контроль (25 мг/кг) шляхом внутрішньочеревної ін'єкції в дні 3, 7, 10, 14 і 17. Показники об'єму пухлини відстежували протягом 36 днів, а за тваринами без пухлини спостерігали протягом періоду тривалістю 80 днів.

ІЇ0ООЗО9| У таблиці 16 наведені показники середнього об'єму пухлини в різні моменти часу дослідження, а в таблиці 17 наведено число мишей без пухлини до дня 36.

Таблиця 16

Таблиця 16

Таблиця 17

Число мишей без пухлини до дня 36

Миші без пухлини (день 36) вЕСМ2810 (1 мг/кг) 5 тАбрІ (25 мг/кг)

РЕСМ2810 (10 мг/кг) - тАБІ (25 мг/кг) ап/М: число мишей без пухлини/загальне число мишей на групу 00310) Для монотерапії КЕСМ2810 у концентрації тільки 1 мг/кг була показана мінімальна регресія пухлини за період часу 36 днів, подібно до результатів для групи обробки ізотиповим контролем (фіг. 7А-В). До дня Зб у групах, що одержували КЕОМ2810 (1 мг/кг) і ізотиповий контроль, відповідно було 2/12 (1695) ії 0/6 (095) мишей без пухлини. На відміну від цього, в групах обробки тАБбІ1 (25 мг/кг), КЕСМ2810 (10 мг/кг) і КЕСМ2810 (1 мг/кг) ї- тАбІ1 (25 мг/кг) були продемонстровані подібні показники пригнічення росту пухлини за період часу 22 дні (фіг. 7А). В день 36 у результаті обробки тАбІ1 (25 мг/кг) було 1/12 (7895) мишей без пухлини, тоді як в групі, що одержувала КЕСМ2810 (10 мг/кг), і групі, що одержувала КЕОМ2810 (1 мг/кг) - тАбБІ1 (25 мг/кг), відповідно було 4/12 (-3395) і 3/12 (2595) мишей без пухлини. У цілому, для тАБ1 (25 мг/кьу ї- КЕСМ2810 (10 мг/кь; було продемонстровано найсильніше пригнічення росту пухлини МО38.Ома, причому у 6 із 12 (5095) мишей до дня 36 пухлина зникала. У жодної з мишей без пухлини не спостерігали повторної появи пухлини протягом 80 днів після імплантації, незважаючи на припинення обробки, що свідчить про довготривалі ефекти комбінованої імунотерапії. Обробка тАб1 (25 мг/кг) - КЕОМ2810 (10 мг/кг) також приводила до значущого покращення щодо відсотка виживаності тварин (р - 0,0197), згідно з аналізом за допомогою логарифмічного рангового критерію (Мантеля-Кокса) (фіг. 7С). Також не спостерігали будь-яких симптомів втрати ваги. 00311 У другому експерименті тАБб1 (антитіло до ПІ АСЗ) титрували і тестували при рівнях дози 25 мг/кг і 5 мг/кг, причому в обох дозових групах його тестували і як окремий засіб, і в комбінації з КЕСМ2810 (антитілом до ПРО-1) (10 мг/кг). Результати для обох груп комбінованої обробки порівнювали з результатами монотерапії тАБбІ1 (5 мг/кг або 25 мг/кгу або КЕСМ2810 (10 мг/кг) для того, щоб визначити, чи спостерігається адитивний/синергічний протипухлинний ефект. Також тестували обробку ізотиповим контрольним антитілом (25 мг/кг). В день 0 мишам

КЕСМ2810 ї- тАБІ). Мишам вводили: тАбБ1 (5 мг/кг); тАбБ1 (25 мг/кгу; КЕСМ2810 (10 мг/кг); тАБІ (5 мг/кг) - КЕОМ2810 (10 мг/кг); тАбБ1 (25 мг/кг) - КЕСМ2810 (10 мг/кг); або ізотиповий контроль (25 мг/кг) шляхом внутрішньочеревної ін'єкції в дні 3, 7, 10, 14 і 17. Показники об'єму пухлини відстежували протягом З1 дня.

ІЇ00312| Для монотерапії тАбБі у концентрації 5 мг/кг була показана мінімальна регресія пухлини, подібно до результатів для групи обробки ізотиповим контролем. Для комбінації тАб1 (25 мг/кг) - КЕСМ2810 (10 мг/кг) було показано найсильніше пригнічення пухлини (фіг. вА).

Сильний ефект у результаті комбінування також був продемонстрований для групи обробки тА (5 мг/кг) - КЕСМ2810 (10 мг/кг). Показники об'єму пухлини, виміряні в день 23, наведені на фіг. 88. Для комбінації антитіла до ГАС-3 і КЕСОМ2810 також було показано значуще покращення щодо виживаності тварин (р«е0,001, згідно з аналізом за допомогою логарифмічного рангового критерію Мантеля-Кокса) (фіг. 8). Із результатів видно, що сильний ефект у результаті комбінування спостерігали навіть при низьких дозах антитіла до ГАС3. Згідно з представленими у даному документі результатами, для курсів лікування пухлин може не знадобитися застосування високих доз антитіл до І АСЗ в комбінації з антитілами до РО-1. 00313) Таким чином, для комбінації КЕСМ2810 (антитіла до ПРО-1) і тАБІ1 (антитіла до

ПГАСЗ) у моделі пухлини МОЗ8.ома у гуманізованих за двома генами мишей ІГАСЗ/РО-1, яка дозволяє виконувати тестування придатних для лікування антитіл, які не зв'язуються перехресно з рецепторами миші, була продемонстрована покращена дозозалежна ефективність, включаючи пригнічення росту пухлини і підвищену виживаність порівняно з такими у випадку монотерапевтичних препаратів КЕСМ2810 (антитіло до ПРО-1) і тАбБ1 (антитіло до ПГАСЗ). Стійка протипухлинна ефективність комбінації КЕСМ2810 (антитіла до

ИРО-1) ї тАБІ1 (антитіла до ПН АСЗ) у доклінічних умовах дає привід для проведення для неї клінічних досліджень як комбінованої імунотерапії злоякісної пухлини.

Приклад 15. Іп мімо ефективність комбінації антитіл до | АСЗ людини і до РО-1 людини щодо пухлин МОЗ8, що розвинулися. 00314) У цьому експерименті вивчали ефективність тАБІ (антитіла до ПІ АСЗ) в комбінації з

КЕСМ2810 (антитілом до ПРО-1) щодо пухлин МОЗ38.Ома, що розвинулися, у гуманізованих за двома генами мишей Ідозгпот/питрр)-1пит/ит, Гуманізовані за двома генами миші описані в прикладі 12 у даному документі. 00315) Ілюстративне антитіло до ГАСЗ, застосовуване для цього дослідження, є повністю людським антитілом, яке специфічно зв'язується з (АСЗ людини і містить НСОК1-НСОН2- неОовВЗ- СОВІ1- СОВ82г- СОАЗ 5ЕО ІЮ МО: 420-422-424-428-430-432 і НСМК/Л СУК ЗЕО ІО МО: 418/426 (також відоме як Н4зНІ15482Р, та як "тАбБІ1" далі в даному документі). 00316) Застосовуване у цьому прикладі антитіло до РО-1 являє собою Н4Н7798М (розкрите в 0520150203579; також відоме як КЕСМ2810). КЕСМ2810 (антитіло до ПРО-1) з високою афінністю зв'язується з РО-1 людини і блокує взаємодію РО-1 з РО-І1 і РО-І 2.

І00317| В день О мишам ГАС-3 пот/лют рГ)-1 пит/лит дідшкірно вводили клітини МС38.Ома. В день 10 вибирали мишей із середнім об'ємом пухлини 100 мм: і рандомізували їх у чотири групи обробки. У дні 10, 14, 17, 22 мишам шляхом ІР ін'єкції вводили тАБІ1 (25 мг/кг; М-9), КЕСМ2810 (10 мг/кг; М-10), комбінацію тАБі (25 мг/кг) - КЕСМ2810 (10 мг/кг) (М-11) або ізотипове контрольне антитіло (25 мг/кг; М-7). Показники об'єму пухлини відстежували протягом 28 днів після імплантації пухлинних клітин. 00318) Обробка гуманізованих мишей із пухлиною МСОСЗ8.ома комбінацією антитіл до НРО-1 і до ПГАО-3 викликала активацію внутрішньопухлинних і периферичних Т-клітин. Монотерапія

КЕСМ2810 приводила до часткового інгібування росту пухлини, а для монотерапії тАБІ1 не було показано зменшення середнього об'єму пухлини порівняно з таким у мишей, оброблених ізотиповим контролем (фіг. 9). На відміну від цього, для комбінації тАБбІ1 (25 мг/кг) і КЕСМ2810 (10 мг/кьу було продемонстровано сильне інгібування росту пухлини МС38.Ома. В однофакторному дисперсійному аналізі (АМОМА) з апостеріорним критерієм Бонфероні для множинного порівняння була виявлена значуща різниця за показниками середнього об'єму пухлини між групою, що одержувала комбінацію тАбБ!і і КЕСМ2810, і монотерапією тАбБ1 (ре0,01) або ізотиповим контролем (р«0,05) (фіг. 10). У випадку порівняння комбінованої терапії з монотерапією КЕСМ2810 в цілому показники середнього об'єму пухлини протягом всього експерименту були нижче у випадку комбінованої терапії, однак ця різниця не досягала статистичної значущості. Комбінація антитіла до ГАС-3 і КЕСМ2810 також забезпечувала значуще підвищення виживаності, а також збільшення тривалості виживання тварин (р«0,01, згідно з аналізом за допомогою логарифмічного рангового критерію Мантеля-Кокса). До дня 25 вижило 5095 оброблених комбінованим терапевтичним препаратом мишей, порівняно з контролем і монотерапією (фіг. 11). Згідно з результатами, комбінована обробка чинила адитивний, дозозалежний протипухлинний ефект порівняно З відповідними монотерапевтичними препаратами.

Приклад 16. Фармакокінетика антитіла до (Г АО-3 у яванського макаки.

І00319| Фармакокінетику (РК) антитіла до ГАОЗ тАбБІ1 описували після введення самицям яванських макак (5 тварин на дозову групу) одноразової внутрішньовенної (ІМ) дози, що становить 1,0, 5,0 або 15,0 мг/кг. Для визначення концентрації функціонального тАбІ1 у всіх тварин в різні моменти часу збирали зразки крові. Концентрації функціонального тАбБі в сироватці крові визначали із застосуванням ферментного імуносорбентного аналізу (ЕГІ5А). 60 Антитіла до тАбБ1 в сироватці крові аналізували із застосуванням місткового імунологічного аналізу на основі електрохемілюмінесценції. РК-параметри оцінювали із застосуванням некомпартментного аналізу (МСА). Профілі середня концентрація-час характеризуються початковою короткочасною фазою розподілу з наступною лінійною бета-фазою виведення (фіг. 12). Протягом дослідження тривалістю 8 тижнів фази мішень-опосередкованого кліренсу не спостерігали. Середнє АШСім о підвищувалося залежним від дози чином, як було продемонстровано за схожими значеннями АОсС;м/доза серед тестованих рівнів доз. Відповідно до цього висновку, середні значення загального кліренсу (СІ) були схожими для З дозових груп.

Крім того, періоди напіввиведення в бета-фазі (2) для З дозових груп були порівнюваними, в діапазоні від 10,8 до 11,5 днів. Зважаючи на результати, як максимальна доза, що не призводить до розвитку явних небажаних ефектів (МОАЕЇ), могло бути прийнято аж до 50 мг/кг.

Ці результати вказують на те, що для тАбБ1 була продемонстрована лінійна кінетика в умовах даного дослідження.

Приклад 17. Токсикологічна оцінка антитіла до | АСЗ у яванських макак. (00320) Іп мімо токсикологічні та токсикокінетичні профілі тАбБІ1 оцінювали в ході 4-тижневого, токсикологічного дослідження, яке відповідає правилам СІ Р, з повторним введенням доз у самців і самиць яванських макак. Мавпам (5 тварин кожної статі на групу) шляхом ІМ інфузії вводили 0, 2, 10 або 50 мг/кг/ тиждень тАбБ1і. Оцінка токсичності базувалась на показниках смертності, передсмертного стану, клінічних спостережень, ваги тіла, споживання їжі, офтальмологічних оглядів, ЕСб-досліджень, частоти дихання, пульсової оксиметрії, температури тіла і визначення кров'яного тиску і неврологічних оглядів. Також оцінювали параметри в рамках лабораторної діагностики (загальний аналіз крові, коагуляція, клінічна біохімія та аналіз сечі) та імунофенотипування. Також проводили макроскопічні дослідження при розтину, вимірювання показників ваги органів і гістопатологічні дослідження. Повний розтин проводили після закінчення періоду введення доз або після закінчення 8-тижневого періоду без введення доз. Вибрані органи зважували, і тканини піддавали макроскопічному і мікроскопічному дослідженню.

І0ОЗ21| тАбБІ добре переносилось у всіх рівнях дози, оцінюваних при введенні яванським макакам шляхом ІМ інфузії. Оскільки тАБб1 добре переносилося і не спостерігали пов'язаних з тАБІі змін за будь-якими оцінюваними параметрами безпеки, максимальною дозою, що не призводить до розвитку явних небажаних ефектів (МОАЕЇ), для даного дослідження вважалася доза 50 мг/кг, найвища доза, що вводять у даному дослідженні.

Приклад 18. Картування епітопів на основі гідроген-дейтерієвого обміну (Н/О) для антитіла до ГАЗ Н4зНІ15482Р, яке зв'язується з позаклітинним доменом ПІ АС. (00322) Експерименти проводили для визначення амінокислотних залишків позаклітинного домену ГАЗ людини (амінокислоти Гецй23-ен450 ГДЗ людини, номер доступу в ОпіРгої

Р18627, одержані з Ес-міткою ЇдС1 людини на с-кінці ("пі адз3.Ес") (КО бузіетв5, Міннеаполіс,

Міннесота) (ЗЕО ІО МО: 587), з якими взаємодіє антитіло до ГАЗ Н4зНІ15482Р. З цією метою використовували картування епітопів на основі гідроген-дейтерієвого (Н/О0О) обміну з мас- спектрометрією (НОХ-М5). Загальний опис способу НОХ викладений у Епгіпод (1999) Апа/|уїїсаї

Віоспетівігу 267(2):252-259; і Епдеп апа тій (2001) Апаї. Спет. 73:256А-265А.

Процедура експерименту

І00323| Експерименти НОХ-М5 здійснювали із застосуванням інтегрованої платформи

Маїет5 НОХ/М5 (У/аїег5 Согрогайоп, Мілфорд, Массачусетс), що складається з системи І еаріес

НОХ РАЇ для мічення дейтерієм, МУМаїег5 Асдийу М-Сіаз5 (А!ихіПагу 5оЇмепі тападег) для розщеплення і завантаження зразка, УМаїег5 Асдийу М-Сіаз5 (нНВіпагу зомепі тападег) для створення градієнта в аналітичній колонці і мас-спектрометра 5упарі 52-51 для вимірювання маси розщеплених пепсином пептидів. 003241 Розчин для мічення готували в 10 мМ буфері РВ5 в 02О при рО 7,0. Для мічення дейтерієм 3,8 мкл ПІ АСЗ.Ес (5 пмоль/мкл) або ПІ АСЗ.Ес, попередньо змішаного з антитілом до

ГАЗ Н45НІ15482Р у молярному відношенні 1: 1, інкубували з 56,2 мкл розчину для мічення на основі Юг6О протягом різних проміжків часу (наприклад, недейтерований контроль - 0 сек, мічення дейтерієм: 1 хв і 20 хв). Дейтерування зупиняли шляхом перенесення 50 мкл зразка в 50 мкл попередньо охолодженого буфера для зупинки реакції (0,02 М ТСЕР, 6 М хлорид гуанідину в 100 мМ фосфатному буфері, рН 2,5), і суміш інкубували при 1,0 "С протягом 4 хв.

Зразок, у якому зупиняли реакцію, потім вводили в Умаїесє НОХ Мападег для розщеплення пепсином/протеазою ХІІ з можливістю відстеження в режимі реального часу. Розщеплені пептиди захоплювали на передколонці АСОШІТУ ОРІ С ВЕН С18 1,7-мкм, 2,1 х 5 мм Мапспиага (Умаїег Согрогайоп) при 0 "С та елюювали в аналітичну колонку АСОШІТМ ОРІ С ВЕН С18 1,7- мкм, 1,0 х 50 ММ для 9-хвилинного розділення в градієнті 5950-4095 В (рухома фаза А: 0,195 60 мурашина кислота у воді, рухома фаза В: 0,195 мурашина кислота в ацетонітрилі). На мас-

спектрометрі налаштовували наступні параметри: напруга на конусі 37 В, час сканування О,5 с і діапазон відношень маса/заряд 50-1700 томсон (Ті). 00325) Для ідентифікації залишків пептиду ГАЗ людини, з якими взаємодіє Н4зН15482Р, дані ГО-М5Є для недейтерованого зразка обробляли і виконували пошук у базі даних, яка включала послідовності (АСЗ людини, пепсину і випадкові послідовності, із застосуванням програмного забезпечення Ргоїеїпі упх Сіобаї бегуег (РІ 5) від М/а(ег5. Ідентифіковані пептиди імпортували у програму бупатхХ і фільтрували за двома критеріями: 1) мінімальна кількість продуктів на амінокислоту - 0,2 і 2) граничне число повторів у файлі - 3. Потім програма

БупатХ автоматично визначає поглинання дейтерію кожним із пептидів на основі часу утримання і точного визначення маси («10 ррт) в декількох моментах часу з З повторами для кожного моменту часу.

Результати

І00З26| Із застосуванням колонки з пепсином/протеазою ХП з можливістю відстеження в режимі реального часу, у поєднанні зі збором даних Ме, всього було відтворювано ідентифіковано 123 пептиди із (АСЗ людини за відсутності або в присутності антитіла, які характеризуються 78,3956 перекриванням послідовностей. Чотири пептиди 1 ад-З характеризувались значно зниженим поглинанням дейтерію (дельта значень центроїдів » 0,8 дальтон з р-значеннями « 0,05) при зв'язуванні з Н4зНІ15482Р. Зареєстрована маса пептиду відповідає середньому значенню центроїдів маси МН" із трьох повторів. Ці пептиди, що відповідають амінокислотам 34-77 ПІ ДОЗ.Рс, (5ЕБЕО ІО МО: 587), характеризувались меншими швидкостями дейтерування при зв'язуванні з НізНІ15482Р. Ці ідентифіковані залишки також відповідають залишкам 28-71 ГАСЗ людини, визначеним у записі Опіргої Р18627 (ГАЗ НОМАМ, 5ЕО ІО МО: 588), і наведеним у таблиці 18.

Таблиця 18

Пептиди ГАЗ людини зі зміненими швидкостями дейтерування після зв'язування НізНІ15482Р

Амінокиспотні залишки ЗЕО| уд ооМНне | МАСУ А АСЗРСМН" НАБНІВАВОР; А

ІЮ МО: 588 З.гс; назні5482Р; МН" З.ге; шин 28-89 | 4352,305003 43501450,06 (Г215| 4352,33.0,20 | 4351,4320,12 | -0,90

Приклад 19. Клінічне випробування антитіла до (АСЗ з участю пацієнтів зі злоякісними новоутвореннями на пізній стадії.

Ї0ОЗ27|У цьому прикладі описано клінічне випробування з метою оцінки безпеки, переносимості і протипухлинної активності антитіла до ГАСЗ як монотерапевтичного препарату і в комбінації з антитілом до РО-1 у пацієнтів зі злоякісними новоутвореннями на пізній стадії. (00328) Ілюстративне антитіло до ГАСЗ, застосовуване для цього дослідження, є повністю людським антитілом, яке специфічно зв'язується з (АСЗ людини і містить НСОК1-НСОН2- неОовВЗ- СОВІ1- СОВ82г- СОАЗ 5ЕО ІЮ МО: 420-422-424-428-430-432 і НСМК/Л СУК ЗЕО ІО МО: 418/426 (також відоме як Н4зНІ15482Р, та як "тАбБІ1" далі в даному документі).

І0ОЗ29| Застосовуване для цього дослідження антитіло до РО-1 являє собою НАН7798М (розкрите в О5З20150203579; також відоме як КЕСОМ2810). КЕСМ2810 (антитіло до ПРО-1) з високою афінністю зв'язується з РО-1 людини і блокує взаємодію РО-1 з РО-І1 1 і РО-1 2.

Цілі клінічного дослідження

І00ЗЗ0| Первинні цілі дослідження є наступними:

ЇООЗЗ1|У фазі з підвищенням дози: оцінити безпеку і фармакокінетику (РК) з метою визначення для 2 фази дози тАБб1 як монотерапевтичного препарату і в комбінації з КЕСМ2810 у пацієнтів зі злоякісними новоутвореннями на пізній стадії, включаючи лімфому. Кінцеві точки включають частоту випадків токсичності, що лімітує дозу, (ОТ), небажані явища (АЕ) (включаючи небажані явища, пов'язані з імунітетом), серйозні небажані явища (5АЕ), випадки смерті та відхилення лабораторних показників від норми (3 ступінь або вище згідно із загальними термінологічними критеріями небажаних явищ ІСТСАЕЇ) і фармакокінетику.

І00З32|У фазі підвищення дози до максимально переносимої: попередньо оцінити протипухлинну активність тАбБІ1 окремо і в комбінації з КЕОМ2810 (окремо в окремих когортах),

яку вимірюють за ОКК. Кінцеві точки включають загальну частоту відповіді (ОКК) на основі критеріїв оцінки відповіді солідних пухлин (КЕСІЗТ) 1.1 (Еізеппапег еї а! 2009, Еиг. У. Сапсег 45: 228-247) (солідні пухлини) і критеріїв за Гидапо (Спезоп еї а! 2014, 9. Сііп. Опсої. 32. 3059-3068) (лімфома). 00333) Вторинні цілі є наступними: (а) попередньо оцінити протипухлинну активність тАбБ1 окремо і в комбінації з КЕСМ2810 (окремо в окремих когортах), яку вимірюють за ОК на основі критеріїв оцінки відповіді солідних пухлин при імунотерапії (гКЕСІБ5Т) (УуоїЇсноКк еї а! 2009, Сііп.

Сапсег Вев5. 15: 7412-7420; Мівзніпо еї аі 2013, Сіп. Сапсег Рез. 19: 3936-3943), найкращою загальною відповіддю (ВОК), тривалістю відповіді (ОК), частотою контролю захворювання і

РЕ5 на основі критеріїв КЕСІЗТ, ігКкЕСІ5Т і Гидапо (Спезоп еї а! 2014, 9. Сііп. Опсої. 32: 3059- 3068); (5) охарактеризувати профіль безпеки в кожній когорті з підвищенням дози до максимально переносимої, що визначають у фазі з підвищенням дози; (с) охарактеризувати РК тАбБІ1 як монотерапевтичного препарату і тАбБ!і та КЕСМ2810 при введенні в комбінації; і (а) оцінити імуногенність, вимірювану із застосуванням антитіл до лікарського засобу (АВА) для тА ії КЕСМ2810.

Ї00334| Пошукові цілі дослідження є наступними: (а) оцінити об'єм пухлини; (Б) вивчити фармакодинамічні ефекти КЕСМ2810 в сироватці крові, плазмі крові, мононуклеарних клітинах периферичної крові (РВМС) і в зразках пухлинної тканини (включаючи архівний зразок тканини), одержаних напочатку, під час лікування і в період прогресування від пацієнтів, яких лікували тАБІ як монотерапевтичним препаратом або в комбінації з КЕСМ2810; і (с) оцінити передбачувальний потенціал і кореляцію з клінічною відповіддю для біомаркерів, що становлять інтерес, які можуть включати без обмеження: (і) нуклеїнові кислоти, що циркулюють у крові, із пухлинних клітин; (її) розподіл субпопуляції РВМС та експресію молекул, що є частиною імунологічної контрольної точки, та інших біомаркерів, що становлять інтерес; (її) експресію РНК із пухлинних клітин; (ім) число і розподіл лімфоцитів, що інфільтрують пухлину (СО8в- Т-клітин, СО4- Т-клітин, регуляторних Т-клітин та інших підтипів, що проникають у тканини, таких як В-клітини, клітини мієлоїдного ряду, МК-клітини тощо); (м) рівні експресії (матричної РНК та/або білка) РО-1, РО-І1, ГАСЗ і можливих інших модуляторів контрольних точок; (мії) мутації у відомих онкогенах і потенційних пухлинних неоантигенах; і (мії) мутаційне навантаження пухлини.

Дизайн дослідження 00335) Дослідження являє собою дослідження фази 1, яке передбачає перше застосування препарату у людей (РІН), є відкритим, багатоцентровим, з підвищенням дози, дослідженням безпеки, переносимості, активності і РК тАБбІ, що вводять як монотерапевтичний препарат і в комбінації з КЕСМ2810 пацієнтам зі злоякісними новоутвореннями на пізній стадії.

Досліджували три рівня дози тАбІ1 (1,0, 3,0 ї 10 мг/кг) як монотерапевтичного препарату і в комбінації з КЕСМ2810 у дозі 3,0 мг/кг. 00336) Після закінчення скринінгового періоду тривалістю до 28 днів, пацієнти проходили до сімнадцяти циклів 21-денного лікування (протягом всього до 51 тижня лікування) з наступним 24--мжневим періодом спостереження. Кожний пацієнт одержував тАбБі (ї/- КЕОМ2810) у кожному 21-денному циклі.

Ї00337| Лікування тривало до тих пір, поки не був завершений 51-тижневий період лікування, або до моменту настання прогресування захворювання, неприйнятної токсичності, відкликання згоди або появи критерію виключення із дослідження. Відповідь оцінювали кожні б тижнів протягом перших 24 тижнів, потім кожні 9 тижнів протягом наступних 27 тижнів, незалежно від відстрочення введення доз досліджуваних лікарських засобів. Після завершення мінімум 24 тижнів лікування (мінімум 8 циклів лікування) пацієнти з підтвердженою повною ремісією (СК) могли прийняти рішення припинити лікування, але продовжити участь щодо проведення всіх відповідних оцінок в рамках дослідження. Аналогічним чином, після консультації з лікарем пацієнти, які одержували лікування протягом мінімум 24 тижнів, зі стабілізацією захворювання (50) або частковою відповіддю (РК), які зберігалися протягом 3 наступних оцінок пухлини, могли прийняти рішення припинити лікування, але продовжити участь щодо проведення всіх відповідних оцінок в рамках дослідження. У випадку пацієнтів, у яких спостерігали відповідь і подальше прогресування, вимагалось проведення біопсії пухлини в період прогресування. У пацієнтів, які переносили 4 дози монотерапевтичного препарату тАбБІі, і в яких під час первинної оцінки пухлини спостерігали щонайменше ЗО, але у яких потім спостерігали прогресування захворювання (РО), допускалося додавання КЕСМ2810 3,0 мг/кг до найвищої дози тАбБ1, що безпечно вводиться до певного моменту (якщо відомо) з метою "відновлення" відповіді шляхом комбінованого блокування білка, кодованого геном-3 активації лімфоцитів 60 (ГАС-3), і білка-1 запрограмованої смерті клітин (РО-1). Оцінки безпеки проводили під час кожного візиту для введення досліджуваного лікарського засобу.

Підвищення дози

ІЇ00338| Було заплановано включення трьох когорт, які одержують монотерапевтичний препарат і комбінований терапевтичний препарат із підвищенням дози (1,0, 3,0 і 10 мг/кг птАбІ1 з або без Змг/кг КЕСМ2810). Перша когорта, що підлягала включенню, одержувала монотерапевтичний препарат тАбБІ1 у дозі 1,0 мг/кг. Подальше включення кожних додаткових когорт може бути обмежено числом випадків токсичності, що лімітує дозу (0ІТ), яку спостерігали в попередніх когортах. За необхідності були включені когорти зі зменшенням дози (0,9 мг/кг тАбБІ з або без З мг/кг КЕСМ2810).

Правила підвищення дози

Ї0ОЗЗ39| Для оцінки всіх рівнів доз для обох когорт, що одержують монотерапевтичний препарат тАБбІ і тАбБ1 ї- КЕСМ2810, застосовують модифікацію класичного дизайну 3-3 ("4-37").

Хоча необхідно, щоб мінімум для З пацієнтів на кожний рівень дози проводили оцінку щодо ОІТ, з метою максимізації ефективності підвищення дози на 1 фазі, зі збереженням при цьому безпеки пацієнта, включають 4 пацієнта на кожний рівень дози на випадок, якщо пацієнт припинить лікування до проведення оцінки щодо ОТ. Тривалість оцінки ОТ становить 28 днів.

Переносимість рівня дози досягається тільки в тому випадку, коли всі пацієнти, які потенційно підлягають оцінці ОТ, завершують 28-денний період оцінки ОТ без ОІ Т (0/3 або 0/4). Якщо З пацієнта завершують період оцінки СТ без перенесення ОТ, але в період оцінки ОТ включений четвертий пацієнт, переносимість рівня дози досягається тільки в тому випадку, коли четвертий пацієнт завершує період оцінки ОТ або припиняє лікування до проведення оцінки щодо ОТ. Якщо присутній 1 випадок 01 Т у З або 4 пацієнтів, які підлягають Оі Т-оцінці, тоді включають (відповідно) 4 або З додаткових пацієнта для досягнення загальної кількості, що становить 7 пацієнтів. Аналогічно, 1/6 або 1/7 випадків СТ вважається прийнятним. Два випадки СІЛ у 2-7 пацієнтів, які підлягають 0 Т-оцінці, будуть вважатися перевищенням максимальної переносимої дози (МТО). При найвищому переносимому рівні, для додаткової оцінки безпеки будуть включені додаткові 3-4 пацієнта для досягнення загальної кількості, що становить 6-10 пацієнтів, які підлягають Обі Т-оцінці. 0-1 із 6-8 або 2 із 9-10 випадків ОІ Т будуть вважатися прийнятними. Для додаткової оцінки безпеки можуть бути включені З додаткових пацієнта для будь-якого рівня дози на розсуд спонсора (із консультацією з дослідниками).

Ї00340| Якщо 1,0 мг/кг тАбБІ1 (рівень дози 1; 01) вважається безпечним (за результатами для 3-7 пацієнтів), включення почнуть при 3,0 мг/кг тАбБ1 (012). Після включення 4 пацієнтів в ріг, може бути розпочато включення в першу когорту, яка одержує комбінацію (1,0 мг/кг тАбБІ1 їх 3,0 мг/кг КЕСМ2810; 01 3). Підвищення дози до 10 мг/кг тАбБ1 (014) може бути розпочато, коли 3,0 мг/кг тА (012) вважатимуть безпечним. Другу когорту, яка одержує комбінацію (3,0 мг/кг тАБІ - 3,0 мг/кг КЕОМ2810; 015), набирають тільки після того, як обидва 012 і ІЗ вважатимуть безпечними. Третю когорту, яка одержує комбінацію (10 мг/кг тАбБ'і «ж 3,0 мг/кг

КЕСМ2810; 0І 6), набирають тільки після того, як обидва 0 4 і БІ 5 вважатимуть безпечними.

Якщо одночасно доступні для подальшого включення декілька когорт, перевагу віддають когорті з меншим числом (тобто 02 переважніше БІ З або 0 З переважніше БІ 4).

Токсичність, що лімітує дозу

Ї00341| Період спостереження ОІТ для визначення безпеки щодо підвищення дози або початку нової комбінованої терапії визначений як 28 днів, починаючи з циклу 1, день 1, з метою контролю безпеки і переносимості перших 2 доз досліджуваного(досліджуваних) лікарського(лікарських) засобу(засобів) (тА з або без КЕСМ2810 у відповідних випадках). Для оцінки рІт пацієнт повинен одержати щонайменше перші 2 дози досліджуваного(досліджуваних) лікарського(лікарських) засобу(засобів) (тобто день 1 і день 22), і спостерігатися протягом щонайменше 28 днів після першого введення, і щонайменше 7 днів після другого введення, або перенести ІТ (визначено нижче) до завершення періоду оцінки

ПІТ. Відстрочки введення другої дози досліджуваного(досліджуваних) лікарського(лікарських) засобу(засобів) за межі 35 дня та/або припинення прийому досліджуваного лікарського засобу вважаються ОТ, якщо вони пов'язані з досліджуваним лікарським засобом. Тривалість періоду спостереження ОТ, таким чином, збільшується для пацієнтів, у яких відстрочено введення другої дози, і для пацієнтів, які перенесли АЕ, для яких тривалість повинна бути оцінена для визначення того, чи було явище ПІ Т. 003421 Окрім неможливості введення (через токсичність досліджуваного лікарського засобу) дози Мо 2 в межах певного інтервалу, ОТ у цілому визначена як будь-яка із наступних пов'язаних із досліджуваним лікарським засобом видів токсичності: 00343) Токсичність окрім гематологічної: 60 е Увеїт ступеня 22 е Будь-яка токсичність окрім гематологічної ступеня 23 (за винятком відхилень лабораторних показників від норми, які не є значущими з медичної точки зору, таких як показники амілази або ліпази без прояву симптомів) 00344) Гематологічна токсичність: е Нейтропенія 4 ступеня тривалістю » 7 днів е Тромбоцитопенія 4 ступеня е Тромбоцитопенія З ступеня з кровотечею еФебрильна нейтропенія ступеня 23 або нейтропенія ступеня 23 із підтвердженою інфекцією (00345) Як ігАЕ, так і АЕ, що не є ігАЕ, які відповідають визначенню ОІ Т, вважаються ПІ т.

Максимальна переносима доза

Ї00346)| МТО визначають як рівень дози, безпосередньо нижче рівня, за якого введення дози припиняють через наявність 2 або більше ОІТ із 6-7 пацієнтів, які підлягають оцінці, і буде визначений окремо для монотерапевтичного препарату і комбінованого терапевтичного препарату. Однак, через відомі випадки АЕ, обумовлених монотерапією КЕСМ2810 та іншими антитілами до РО-1/РО-І1, для когорт, що одержують комбінацію, ступінь прояву, частота і відсутність відомих даних токсичності комбінації можуть бути враховані при визначенні МТО і прийнятті рішення щодо додавання додаткових пацієнтів на рівень дози. Якщо підвищення дози ще не припинене для ОТ, вважатиметься, що МТО не визначена. Будуть включені додаткові З пацієнта в кожну із когорт, що одержують монотерапевтичний препарат і комбінацію, які ймовірно переносять найвищі рівні доз (тобто 6-10 пацієнтів у кожній із цих когорт). Якщо підвищення дози для монотерапевтичного препарату тАБ1 або комбінованого терапевтичного препарату з КЕСМ2810 припиняють на рівні 1,0 мг/кг через наявність ОТ, включають когорту, що одержує дозу 0,3 мг/кг. Якщо підвищення дози для монотерапевтичного препарату тАбБ1 або комбінованого терапевтичного препарату припиняють через наявність бі Т на рівні дози 3,0 або 10 мг/кг, дозу тАБб1 знижують до раніше тестованого рівня дози для нових включених пацієнтів (у когортах, що одержують монотерапевтичний препарат або комбінований терапевтичний препарат відповідно). Жоден пацієнт не може почати приймати комбінований терапевтичний препарат з дозою тАБбБІ, яка не переноситься як монотерапевтичний препарат.

Рекомендована доза для 2 фази

Ї00347| КР2О для когорт з підвищенням дози до максимально переносимої не буде перевищувати МТО або найвищу тестовану дозу, і може відрізнятися для когорт, що одержують монотерапевтичний препарат і комбінований терапевтичний препарат. Визначення КР2О буде базуватися на даних щодо безпеки та РК. 003481) У пацієнтів в когортах, що одержують монотерапевтичний препарат, які переносили 4 дози тА, і в яких під час первинної оцінки пухлини спостерігали щонайменше 50, але у яких потім спостерігали РО, допускалось додавання КЕСМ2810 3,0 мг/кг до найвищої дози тАб1, що безпечно вводиться до певного моменту (якщо відомо) з метою "відновлення" відповіді шляхом комбінованого блокування І АС-3 і РО-1.

Когорти з підвищенням дози до максимально переносимої

Ї00З349| Після того, як переносимість тАБі була встановлена, окремо і в комбінації з

КЕОМ2810, декілька когорт з підвищенням дози до максимально переносимої, які застосовують монотерапевтичний препарат або комбінований терапевтичний препарат у випадку вибраних показань Інедрібноклітинний рак легені (М5СІ С), світлоклітинний рак нирки (сскСс), тричі негативний рак молочної залози (ТМВС), меланома і дифузна В-крупноклітинна лімфома (0ІВСуЦ)), набирають для додаткової оцінки безпеки та одержання попередніх даних щодо протипухлинної активності у випадку пухлин, за яких, як відомо, експресується або надекспресується ГАСЗ3; протипухлинна активність тАбБ! може спостерігатися при введенні окремо або в комбінації з КЕСМ2810. Включення в когорти з підвищенням дози до максимально переносимої починається після завершення підвищення дози. Додаткові 10 когорт з підвищенням дози до максимально переносимої (таблиця 19), з використанням 2-ступінчастого дизайну Саймона (бітоп 1989, СопігоЇІєй Сіїпіса! ТгіаІвє 10: 1-10), набирали після підтвердження

КР2О. Пацієнта назначають у когорту, що одержує конкретне лікування, грунтуючись на типі пухлини пацієнта, наявності або відсутності попередньої терапії антитілами до РО-1/антитілами до ліганду білка-1 запрограмованої смерті клітин (РО-І 1), оцінці дослідника щодо доцільності курсу лікування для такого пацієнта і наявності вакантних місць серед пацієнтів у назначеній когорті, що одержує лікування. Якщо в ході ступеня 1 2-ступінчастого дизайну Саймона з'являються побоювання щодо безпеки в окремій когорті з підвищенням дози до максимально переносимої, включення може бути призупинено. Після обговорення між дослідниками та 60 представниками компанії Кедепегоп включення може бути відновлено у тій самій або нижчій дозі тАбБ1. Побоювання щодо безпеки, які слугують приводом для припинення, можуть включати ранні або пізні події, пов'язані з безпекою. Пацієнти проходять лікування монотерапевтичним препаратом тАБбБІ (доза, визначена за результатами підвищення дози) або комбінацією тАБІ і КЕСМ2810 З мг/кг ОЗМУ протягом періоду тривалістю до 51 тижня.

Включення в стадію 2 для кожної когорти з підвищенням дози до максимально переносимої відбувається тільки в тому випадку, якщо на стадії 1 спостерігається мінімальне число відповідей пухлини.

Таблиця 19

Таблиця когорт з підвищенням дози до максимально переносимої

Когорта з Яку не . підвищенням піддавали Яку піддавали й лікуванню . дози до Тип пухлини лікуванню й Лікування максимально антитілами до Ол переносимої РО-1/РО-11 - - обо! хо одюе легені ВЕСМ2810 тонни 1х водо легені ВЕСМ2810 з рен хо родюи нирки ВЕСМ2810 орех вдо нирки ВЕСМ2810 з ше 110 молочної залози ВЕСМ2810

Комбінація тАб! і ворення | х 10000 ввоювют

Комбінація тАб! і 7 дмеянюня 1701 х воюють з вежею! 51000 крупноклітинна лімфома препарат тАбБ1 з нею! 50101 крупноклітинна лімфома ВЕСМ2810

Се дено! 001050 1БЕВ крупноклітинна лімфома ВЕСМ2810

Досліджувана популяція 003501 У фазі з підвищенням дози: пацієнти зі злоякісними новоутвореннями на пізній стадії, які не одержували попередню терапію лікарським засобом у вигляді антитіл до | АСЗ та/або інгібітором РО-1/РО-І1, та які не є кандидатами на стандартну терапію, або у випадку яких передбачається, що доступна терапія не буде забезпечувати клінічну користь, і пацієнти зі злоякісними новоутвореннями, які не піддаються лікуванню і для яких не спостерігали відповіді або було показано прогресування пухлини незалежно від наявності стандартної терапії.

Ї0ООЗ511| У когортах з підвищенням дози до максимально переносимої: пацієнти з вибраними злоякісними новоутвореннями, які не одержували попередню терапію лікарським засобом у вигляді антитіл до І АС, та які: ераніше не одержували терапію із застосуванням антитіл до РО-1/РО-Ї71, але є потенційними кандидатами на одержання терапії на основі антитіл до РО-1 (когорти 1, 3, 5,6 і 9) або е раніше одержували терапію на основі антитіл до РО-1/РО-11, і у них була підтверджена об'єктивна відповідь (СК або РК) або 50 протягом щонайменше 3 місяців у процесі терапії із застосуванням антитіл до РО-1/РО-11, але потім спостерігали прогресування в процесі такої терапії або в якості найкращої відповіді спостерігали ЗО або РЕК з подальшою стійкою відповіддю протягом 6 місяців (когорти 2,4, 7 і 10) або е не є кандидатами на стандартну терапію, або у випадку яких передбачається, що доступна терапія не буде забезпечувати клінічну користь, і підходять для монотерапії тАБІ (когорта 8). 00352 Критерії включення. Щоб підходити для включення в дослідження, пацієнт повинен відповідати наступним критеріям. 1. Чоловіки і жінки у віці 218 років. 2. Когорти з підвищенням дози: пацієнти з гістологічно або цитологічно підтвердженим діагнозом злоякісне новоутворення (включаючи лімфому), зі спостережуваним прогресуванням пухлини, для яких не існує альтернативного стандартного способу лікування, або не існує альтернативного стандарту лікування з терапевтичним потенціалом (тобто у яких не спостерігали відповіді або у яких розвивалося прогресування пухлини незалежно від наявності стандартної терапії), і які раніше не проходили лікування інгібітором РО-1/РО-11. Для таких пацієнтів не є необхідним, щоб захворювання являло собою вимірювану за розміром пухлину за критеріями КЕСІЗТ 1.1 або І идапо. 3. Когорти з підвищенням дози до максимально переносимої: пацієнти з гістологічно або цитологічно підтвердженим діагнозом 1 із наступних пухлин, які являють собою вимірювані за розміром пухлини за критеріями КЕСІ5Т 1.1 або І идапо, що відповідають наступним критеріям: і. страждають від М5СІ С стадії ПВ або ІМ, або без попередньої терапії метастатичного захворювання, або з прогресуванням/повторною появою захворювання після здійснення схеми лікування з препаратом платини, яку не піддавали лікуванню антитілами до РО-1/РО-І 1 (когорта 1) і. страждають від М5СІ С стадії ПІВ або ІМ не більше ніж з 2 попередніми видами терапії метастатичного захворювання, яку піддавати лікуванню антитілами до РО-1/РО-11 (когорта 2) ії. страждають від ссСС на пізній стадії або метастатичної сскКСсС зі світлоклітинним компонентом, яку не піддавали лікуванню антитілами до РО-1/РО-І1, та які одержували 1-2 попередні схеми лікування антиангіогенним терапевтичним препаратом (когорта 3) їм. страждають від ссКСС на пізній стадії або метастатичної ссКСсС зі світлоклітинним компонентом, яку піддавали" лікуванню антитілами до РО-1/РО-1І1, та які одержували 1-2 попередні схеми лікування антиангіогенним терапевтичним препаратом (когорта 4) м. страждають від метастатичної ТМВС (негативної за рецепторами естрогену, прогестерону і рецептором 2 епідермального фактора росту людини), яку не піддавали лікуванню антитілами до РО-1/РО-11, та які одержували 5 або менше попередніх ліній терапії (когорта 5) мі. страждають від меланоми на пізній стадії або метастатичної меланоми, яку не піддавали лікуванню антитілами до РО-1/РО-І1, та які одержували не більше ніж 2 попередні схеми лікування метастатичного захворювання (когорта б) мії. страждають від меланоми на пізній стадії або метастатичної меланоми, яку піддавали" лікуванню антитілами до РО-1/РО-І1, та які одержували не більше ніж 2 попередні схеми лікування метастатичного захворювання (когорта 7) мії. страждають від рецидивної/рефрактерної ОІВСІ, яку не піддавали лікуванню антитілами до РО-1/РО-11, та у яких або спостерігали прогресування після трансплантації аутологічних стовбурових клітин, або вони не є кандидатами на її проведення (когорти 8 і 9) їх. страждають від рецидивної/рефрактерної ОЇ ВСІ, яку піддавали" лікуванню антитілами до РО-1/РО-І1, та у яких або спостерігали прогресування після трансплантації аутологічних стовбурових клітин, або вони не є кандидатами на її проведення (когорта 10)

ПРИМІТКА: "якого піддавали лікуванню антитілами до РО-1/РО-/1 визначений як такий, що переніс або переносить на теперішній час терапію антитілами до РО-1/РО-І1 (тобто не припинив через токсичність), і у якого в рамках контролю захворювання спостерігали одне із двох: а. СЕ/РК, підтверджена після повторної діагностичної візуалізації або 50 протягом щонайменше 12 тижнів починаючи від введення першої дози, до прогресування захворювання.

Прогресування захворювання мало спостерігатися або під час терапії антитілами до РО-1/РО-

Ї1, або в межах 12 тижнів від останньої дози. р. 50 або РЕ в якості найкращої відповіді з подальшою стійкою відповіддю (не більше ніж 7095 нижче вихідного рівня) протягом 6 місяців під час терапії антитілами до РО-1/РО-11. 4. Функціональний статус 0 або 1 за шкалою Східної Об'єднаної Онкологічної групи 5. Очікувана тривалість життя щонайменше З місяці б. Адекватна функція органів і кісткового мозку відповідно до наступного: (а) гемоглобін 29,0 г/дл; (б) абсолютне число нейтрофілів 21,5 х 109/л; (с) число тромбоцитів 275 х 109/л; (4) креатинін сироватки крові в «1,5 х перевищує верхню межу нормального діапазону (ЇМ) або встановлена швидкість клубочкової фільтрації 250 мл/хв/1,73 ме; (є) загальний білірубін в «1,5 х перевищує ЇМ; () аспартатамінотрансфераза та аланінамінотрансфераза (АТ) в х3 х перевищує ЦІМ або в «5 х перевищує ЦІМ, за наявності метастазів у печінку; та/або (д) лужна фосфатаза в «х 2,5 х перевищує ШІ М (або в «х 5,0 х перевищує ЦІМ, за наявності метастазів у 60 печінку або кістки)

7. Готовність і здатність виконувати вимоги щодо візитів у клініку і процедур, пов'язаних із дослідженням 8. Надають підписану форму інформованої згоди.

Ї00ОЗ53| Критерії виключення. Пацієнт, який відповідає будь-якому з наступних критеріїв, буде виключений із дослідження. 1. На теперішній час одержує лікування в рамках іншого дослідження, або брав участь у дослідженні експериментального засобу і одержував лікування, або використовував експериментальний виріб протягом 4 тижнів від застосування першої дози досліджуваної терапії, або одержував лікування із застосуванням схваленої системної терапії протягом З тижнів від застосування першої дози досліджуваної терапії, або одержував будь-яку попередню системну терапію протягом 5 періодів напіввиведення першої дози досліджуваної терапії (в залежності від того, що тривало довше). Тільки у випадку когорт з підвищенням дози до максимально переносимої 2, 4, 7, 10 (які піддавали лікуванню антитілами до РО-1/РО-І 1) не допускалося одержання попередньої терапії антитілами до РО-1/РО-11 протягом З тижнів від застосування першої дози досліджуваної терапії, незалежно від періоду напіввиведення або статусу лікарського засобу як схваленого. 2. Попереднє лікування будь-яким біологічним препаратом або низькомолекулярною молекулою, націленими на ГАс-3. 3. Променева терапія протягом 2 тижнів до рандомізації і відсутність відновлення до початкового рівня після будь- якого АЕ, викликаного опроміненням. 4. Тільки когорти з підвищенням дози до максимально переносимої: Інше злоякісне новоутворення, яке прогресує або потребує інтенсивного лікування, за винятком злоякісної пухлини шкіри, яка не належить до меланоми, яка піддавалася потенційно радикальній терапії або іп зїш карциноми шийки матки, або будь-яка інша пухлина, яка піддавалася імовірно ефективному лікуванню за допомогою радикального локального контролю пухлини протягом щонайменше 2 років до моменту включення. 5.

Метастази в центральну нервову систему, які не піддавали лікуванню або є активними.

Пацієнти з метастазами в центральну нервову систему, які раніше піддавали лікуванню, можуть брати участь за умови, що вони є стабільними (тобто немає даних щодо прогресування після діагностичної візуалізації за період щонайменше б тижнів до застосування першої дози досліджуваного лікування, і будь-які неврологічні симптоми повернулися до вихідного рівня), і немає даних щодо нових метастазів, або метастазів, що поширюються у центральну нервову систему, і пацієнт не потребує застосування будь-яких системних кортикостероїдів для контролю метастазів у центральну нервову систему протягом 4 тижнів до застосування першої дози КЕСМ2810. 6. Енцефаліт, менінгіт або неконтрольовані лихоманки за рік до інформованої згоди. 7. Поточні або недавні (протягом 5 років) дані про значуще аутоїмунне захворювання, яке потребує лікування системними імунодепресантами, що може передбачати ризик розвитку ігАЕ.

Наступне не є параметрами виключення: вітіліго, дитяча астма, яка була усунена, гіпотиреоз, що потребує тільки гормон-замісної терапії, діабет 1 типу або псоріаз, який не потребує системного лікування. 8. Терапія кортикостероїдами (210 мг преднізону/день або еквівалентним препаратом) протягом 1 тижня до застосування першої дози досліджуваного лікарського засобу.

Не підлягають виключенню пацієнти, для яких є необхідним короткий курс прийому стероїдів. 9.

Відомо з анамнезу, або є будь-які інші дані щодо інтерстиціального захворювання легенів або активної неінфекційної пневмонії (за останні 5 років). 10. Неконтрольована інфекція, викликана вірусом імунодефіциту людини, інфекція, викликана вірусом гепатиту В або гепатиту С; або діагностований імунодефіцит. 11. Активна інфекція, яка потребує системної терапії. 12.

Одержання живої вакцини в межах 30 днів до запланованого початку досліджуваного лікування. 13. Серйозна хірургічна процедура, операційна біопсія або значне травматичне пошкодження в межах 4 тижнів до скринінгу. 14. Інфаркт міокарда в межах 9 місяців до застосування першої дози досліджуваної терапії. 15. Попередня алогенна трансплантація стовбурових клітин. 16.

Будь-який медичний стан, який, на думку дослідника, буде сприяти тому, що участь у дослідженні не буде максимально відповідати інтересам пацієнта. Задокументована алергічна реакція або гостра реакція гіперчутливості, приписувана лікарським препаратам на основі антитіл. 18. Відома алергія на доксициклін або інші антибіотики тетрациклінового ряду. 19.

Відомі психічні розлади або розлади, викликані зловживанням наркотичних речовин, які будуть перешкоджати участі із вимогами в рамках дослідження. Чоловіки або жінки репродуктивного віку, які ведуть активне статеве життя, що не бажають застосовувати засоби контрацепції під час дослідження. Жінки, які є вагітними, годують грудьми або очікують вагітність, або чоловіки, які планують зачати дитину, в межах передбачуваної тривалості дослідження (скринінговий візит через 180 днів після застосування останньої дози досліджуваного лікарського засобу). 21.

Чоловіки або жінки репродуктивного віку, які ведуть активне статеве життя, які не бажають застосовувати засоби контрацепції, що відповідають вимогам, перед початком першого 60 лікування, під час дослідження і протягом щонайменше 6 місяців після введення останньої дози досліджуваного лікарського засобу.

Досліджувані варіанти лікування 00354) Монотерапія: тАбБ1 вводять в амбулаторних умовах шляхом внутрішньовенної (ІМ) інфузії протягом 30 хвилин кожні 21 день протягом періоду тривалістю до 51 тижня в наступних дозах монотерапевтичного препарату: е 0І 1: ІМ інфузія 1,0 мг/кг тАбБ1 протягом 30 хвилин кожні 21 день протягом 51 тижня е 012: ІМ інфузія 3,0 мг/кг тАб1 протягом 30 хвилин кожні 21 день протягом 51 тижня е ОРІ 4: ІМ інфузія 10 мг/кг тАБбІ1 протягом 30 хвилин кожні 21 день протягом 51 тижня е ОЇ -Тт: ІМ інфузія 0,3 мг/кг тАБб1 протягом 30 хвилин кожні 21 день протягом 51 тижня (за необхідності)

Ї0О355| Комбінована терапія. У випадку комбінованої терапії послідовність введення досліджуваного лікарського засобу включає спершу введення тАБб1, а потім КЕСМ2810 у той самий день. Досліджувані лікарські засоби вводять в амбулаторних умовах шляхом ІМ-інфузії протягом 30 хвилин кожні 21 день протягом періоду тривалістю до 51 тижня. Плановані схеми з комбінацією, які повинні бути назначені, включають: е 0 3: ІМ-інфузія 1,0 мг/кг тАбБІ1 ї 3,0 мг/кг КЕСМ2810 протягом 30 хвилин кожні 21 день протягом 51 тижня е 0 5: ІМ-інфузія 3,0 мг/кг тАбБІ1 ї 3,0 мг/кг КЕСМ2810 протягом 30 хвилин кожні 21 день протягом 51 тижня е 0 6: ІМ-інфузія 10 мг/кг тАбБІ ї 3,0 мг/кг КЕСМ2810 протягом 30 хвилин кожні 21 день протягом 51 тижня е 0 -1с: ІМ-інфузія 0,3 мг/кг тАбІ1 ї 3,0 мг/кг КЕСМ2810 протягом 30 хвилин кожні 21 день протягом 51 тижня (за необхідності)

Кінцеві точки дослідження

Первинні кінцеві точки

Ї0ОЗ356Ї У фазі з підвищенням дози: частота випадків 0 Т, небажані явища (АЕ; включаючи небажані явища, пов'язані з імунітетом), серйозні небажані явища (ЗАЕ), випадки смерті та відхилення лабораторних показників від норми (3 ступінь або вище згідно із загальними термінологічними критеріями небажаних явищ ІСТСАЕЇ) і РК.

Ї00З357| У фазі підвищення дози до максимально переносимої: доля пацієнтів з об'єктивною відповіддю (ОКК) на основі критеріїв КЕСІЗТ 1.1 (солідні пухлини) і Г идапо (лімфома).

Вторинні кінцеві точки 00358) ОКК на основі критеріїв оцінки відповіді солідних пухлин при імунотерапії (ігКЕСІЗТ); найкраща загальна відповідь (ВОК), тривалість відповіді (СООК), частота контролю захворювання і виживаність без прогресування (РЕ5) на основі критеріїв КЕСІ5Т, ігкЕСІ5Т і

Гидапо; АЕ, включаючи АЕ, пов'язані з імунітетом, 5АЕ, випадки смерті та відхилення лабораторних показників від норми (З ступінь або вище згідно з СТСАЕ); РК і АБА.

Процедури та оцінки

Ї00ОЗ59| Безпеку і переносимість тАБІ1 окремо або в комбінації з КЕСМ2810 контролювали із застосуванням клінічної оцінки АЕ і повторюваних вимірювань у рамках клінічного обстеження, включаючи основні фізіологічні показники (температура, кров'яний тиск, частота серцевих скорочень і частота дихальних рухів), фізикальні обстеження (повне і обмежене), електрокардіограму у 12 відведеннях (ЕСО) і лабораторне дослідження, включаючи стандартний загальний аналіз крові, біохімію та аналіз сечі.

Ї0ОЗ60ОЇ Збирали зразки крові для визначення функціонального тАбБі і функціонального

КЕСМ2810 в сироватці крові і АБА (антитіла до тАБ!і або антитіла до КЕСМ2810). Зразки сироватки крові і плазми крові збирали для аналізу додаткових біомаркерів. Розглянуті фармакодинамічні, передбачувальні і прогностичні біомаркери, пов'язані з впливом лікування тАбІ і КЕСМ2810, клінічною активністю або супутнім захворюванням, досліджували в сироватці крові, плазмі крові, мононуклеарних клітинах периферичної крові (РВМС) і пухлинній тканині.

Протипухлинну активність оцінювали за допомогою СТ і МЕ. У пацієнтів, які погодилися на необов'язкову участь у субдослідженні фармакогеноміки, збирали зразок геномної ДНК.

Результати

Ї0ОЗ61| Очікується, що введення тАБбБі у рамках дослідження є безпечним і добре переноситься пацієнтами зі злоякісними новоутвореннями на пізній стадії. Очікується, що комбінація з З мг/кг КЕСМ2810 забезпечує регресію пухлини, яку оцінюють за ОКК у пацієнтів із солідними пухлинами, такими як недрібноклітинний рак легені, меланома, світлоклітинний рак нирки, В-клітинна лімфома або рак молочної залози.

Ї00362| Обсяг даного винаходу не обмежений конкретними варіантами здійснення, 60 описаними в даному документі. Фактично, різні модифікації даного винаходу на додаток до тих,

які описані в даному документі, будуть очевидні для фахівців у даній галузі з попереднього опису та доданих креслень. Передбачається, що такі модифікації охоплені обсягом доданої формули винаходу.

ПЕРЕЛІК ПОСЛІДОВНОСТЕЙ

«1105 Регенерон Фармасьютікалз, Інк. «120» Антитіла до ІАСЗ3 та їх застосування «1305» 10176Жж001 «150» 62/239524 «1515 2015-10-09 «1505» 62/257791 «1515 2015-11-20 «150» 62/315119 «1515 2016-03-30 «150» 62/359921 «1515 2016-07-08 «150» 62/365006 «1515 2016-07-21 «1605 589

Зо «1705 гавЕеБ5ЕО для Міпдомже версія 4.0 «2105 1 «2115 372 «212» ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 1 чаддеЕдсадс єЕДдссдддадеіс Сдоадддаддс сСсддасасадс седдддддЕс сседадасеіс 60

ЄссЕЧ9сдЕЯдуд сссстдддаєє сасссстадс асстасдсса ЕдадеЕєддде ссдссаддсе 120 ссададаєду дассддадед ддЕсссааді ассадсдудна деЕддЕсдсаа сасасассає 180 дсадасеєссуд Єдаадддссуд дЕссассаєс Ессададаса асессаадаа сасуасЕдевс 240 сЕссаааєда асадсссдад адссдаддас асуддссуЕвс аєсаседсдс дааададесс 300

Чдсаассддаа сеЕссуєсста стассасуддЕі дсддасудеєссі доаддссаадда дассасудсс 360 ассдєсесся с 372 «2105 2 «2115 124 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 2 сій Уаі1 сіп Гец Гец біц Бек б1у сбіу б1і1у Ггец Уаі сбіп Рго сіу с01У бо 1 З 10 15 зек Гей Агуд Гей Бек Сув Уа1і Аїа Бек сбіу Рпе ТПг Рпе Бек ТПг тТукг

20 25 30

А1їа Меє Бек Тгр Маі Агу біп А1а Рго бі1у Меє с1у ІТей бій Тер Уаї1ї 35 40 45 зек Бек Іїе Бек сіу Бек б1у Агуд АвБп о ТПг Тук Туг Аїа Авр Бек Уаї зо 55 бо пув б1у Агуд Рпе ТПг Іїе Бег Агуд Авр Ап Бек Пув Ап о ТПг Гец РПе 65 70 75 80 тей біп Мес Ап о бБег Гец Агуд Аїа біц Авр ТПг Аза Уаї Тук Тук Сув 85 90 935

А1а пув сій Бек Уаї ТПг с1у ТПг Бек Бек Тук Тук Тук б1у Уаї Авр 100 105 110 уаї Тер б1у біп сб1у ТПг ТПг Уа1і ТПг Уаї бек 5ег 115 120 «2105 З «2115 24 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 З чддаєеєсассо Есадсасста Сдсс 24 «2105 4 «2115 8 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність

Зо «2205 «223» синтетична «4005 4 с1у Рпе ТПг Рре Бек ТПг Туг А1а 1 5 «2105 5 «2115 24 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 5 ассадсддсєа деЕддЕсСдсаа саса 24 «2105 6 «2115 8 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 6

І1е Бек б1у Бек б1у Агдд АБп ТПпг 1 5 60 «2105 7

«2115 51 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 7 чсдааачаде ссдєаасєдуд аасеЕссудєсс бассассасоа дсдсодасає с зі «2105 8 «2115 17 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 8

А1а пув сій Бек Уаї ТПг с1у ТПг Бек Бек Тук Тук Тук б1у Уаї Авр 1 З 10 15 чуаї «2105 9 «2115 321 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність

Зо «2205 «223» синтетична «4005 9 часаєссада гдасссадес Сссасссссс сгдЕСсСсдсає седсаддада сададссасс 60 аєсасеЕєдсс доадсаадеЕса дадсаєсадс адеЕсасєсаа асєддаєбаєса сСсадааасса 120 чоадааадссс сааадсссст даєссаєдсе дсаєссадес гдсаааасудуа ддеЕсссаєса 180 аддеЕєсадед дсадеддаєс Сдоддасадає ссСсасссеса ссассадсад СсеЕдсаасся 240 чаачасєсєвєуд сассеєвсаста сеЕдссаасад адссасадаа ссссудсссас СЕЕСддсдда 300 чдадассаадд гддадаєсаа а зЗ21 «2105 10 «2115 107 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 10

АБвр ч11е с1іп Меє ТтТПг осіп Бек Рго Бек Бек Гей Бек Аїа Бек уУа1і -.Щ1У 1 З 10 15

Авр Ага Маї ТПг І1е ТПпг Сув Агу Аза Бек біп Бек І1е бБег Бек Туг 20 25 Зо

Тец АБп Тер Тує Нів біп пув Рго сіу Ппув Аїа Рго Куб Іецп Іецй Ії1е 35 40 45 тТук Аїа Аїа бек бек Гей сбіп Авп сбіу Маії Рго бБег Агуд Рпе бБег ШУ зо зо бо зек біу Бек сіу ТПг Авр Рпе ТПг Гец ТПг І1е Бек Бек Гец сбіп Рго 65 70 75 8о бо бі АБр Рпе Аїа б5Бег Туг Туг Сув сбіп біп Бек Туг Агуд ТПг Рго Гей 85 90 535

ТПЕ Рпе сіу сіу сіу ТПг пув Маї сій І1е Ппув 100 105 «2105 11 «2115 18 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 11 сададсаєса дсадеЕсає 18 «2105 12 «2115 6 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 12 сіп Бек Іїе Бек Бек Тукг 1 5 «2105 13 «2115 9 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 13 дсЕдсаєсс З «2105 14 «2115 З «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 14

Аза Аза 5екг 1 «2105 15 «2115 27 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 15 саасададес асадаасссс дсесасе 27 бо «2105 16

«2115 9 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 16 сбіп біп Бек Туг Агуд ТПг Рго Гец ТІПг 1 З «2105 17 «2115 387 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 17 саддеЕдсадс гддаддадес Сдоадддаддс деЕддЕссадс седддаддес сседадасеіс 60

ЕссеЕдсдсад сдасстддаєє сасссссаде єддрасдудса гдсаседддЕ ссдссаддсе 120 ссаддсаадуд дассддадед ддеЕддсасссї асаєддсаєд аєддаассаа Сааааадсає 180 чдадассссуд гдаадддссуд асссассассї сссададаса аєсссаадаа сасуддеЕдсає 240 сЕдсаааєда асадсссдад адссдаддас асоддсєсдеєдЕ асвтасесдсдс дададаєєує 300 чддасасадед дсаасдаєсу ддддасеЕсас бастассасс асоддтаєсдда сдуЕссддддсес 360 саадддасса сддісассує сеЕсстсса 387 «2105 18

Зо «2115 129 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 18 сіп Уаі1 сбіп Ге сбіц сіц Бек сіу сіу сіу Уаї Уаї біп Рго с01у Агд 1 З 10 15 зек гей Агд Гей бБег Сув Аїа Аїа бек с1іу Рпе ТПг Рпе Бек Тгр Туг 20 25 Зо сі1у Меє Нів Тер уаї Агу сбіп Аза Рго сіу туз бі1у теп бій Тер Уаї 35 40 45

А1ї1а гей І1е Тер Ту Авр б1у ТПг Авп о гув Гув Тук б1у Авр Бек Уаї1ї зо зо бо пув б1у Агуд Рпе ТПг Іїе Бег Агуд АвБр Ап Бек Пув Ап о ТПг Уаї Туг 65 70 75 8о тей біп Мес Ап о бБег Гец Агуд Аїа біц Авр ТПг Аза Уаї Тук Тук Сув 85 90 535

Аза Агуд Авр о Сув б1у Нів Бек с1у АБп АБр Агуд с1у ТБг Тук Тук тус 100 105 110

Тук Тук сі1у Меє Авр Уаі Тгр с1у біп б1у ТПг ТПг Уаї ТпПг Уаї б5ег 115 120 125 зег «2105 19 «2115 24 «2125 ДНК 60 «213» Штучна послідовність

«223» синтетична «4005 19 чддавєсассс ЕсадеЕєддна дос 24 «2105 20 «2115 8 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 20 сіу Рпе ТПг Рпе Бек Тер Ту Щ1У 1 5 «2105 21 «2115 24 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 21 асаєддасаєд аєддаассаа Сааа 24

Зо «2105 22 «2115 8 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 22

І1е Тер Туг Авр б1у ТПг АБп Гуз 1 5 «2105 23 «2115 66 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 23 чдсдачачаєс деддасасад Сддсаасдає сдддддасеЕс ассаєсаста стасуддсаєу 60 часдЕс 66 «2105 24 «2115 22 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 бо «223» синтетична

«4005 24

Аза Агуд Авр Сув біу Нів Бек б1у АвБп Авр Агуд с1у ТПг Тук Тук Туг 1 З 10 15

Тук Тук сі1у Меє Авр Уаї 20 «2105 25 «2115 324 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 25 часаєссада гдасссадес Сссасссссс сгдЕСсСсдсає седсаддада сададссасс 60 ассасссдсс доадсаадсса дадсаєтадс адстасстаа аєсдудраєса дсадааасса 120 чадааадссс сеЕаадсссст даєссаєдсе дсаєссадес гдсааадсудуа ддеЕсссаєса 180 аддеЕєсадед дсадеддаєс Сдоддасадає ссСсасссеса ссассадсад СсеЕдсаасся 240 чаачаєєсвєуд саассвтасса седеЕсаасад адесасадста ссссеЕссдає сассеЕєсддс 300 саадддасас дассддадає Сааа 324 «2105 26 «2115 108 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична

Зо «4005 26

Авр чІ1е біп Меє ТПг обіп Бек Рго Бек бБег Іей Бек Аза Бек Уаі1і Щ1У 1 З 10 15

Те АБп Тер Тук сбіп сіп Ппув Рго сбіу Ппув Аїа Рго Пув Гец Гей Іїе 35 40 45 тТук Аїа Аїа бек бек Гей біп Бек б1і1у Маії Рго Бег Агуд Рпе бБег ШУ зо зо бо

Зек біу Бек б1у ТПг Авр Рпе ТПг Гей ТПг І1е Бек Бек Гей с1іп Рго 65 70 75 8о сій Авр Рпе Аїа ТПг Тук Тук Сув біп біп Бек Тук Бек ТПгЕ Рго Рго 85 90 535

І1е ТПг Рпе б1у біп б1у ТПпг Агд ей бій Іїе Гув 100 105 «2105 27 «2115 18 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 27 сададсаєса дсадстає 18 «2105 28 «2115 6 60 «212» БІЛОК «213» Штучна послідовність

«223» синтетична «4005 28 сіп Бек Іїе Бек Бек Тукг 1 5 «2105 29 «2115 9 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 29 дсЕдсаєсс З «2105 30 «2115 З «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 30

Аза Аза 5екг 1 «2105 31 «2115 30 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 31 саасададес асадгтасссс Сссдаєсасс зо «2105 32 «2115 10 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 32 сіп біп Бек Тук Бек ТПг Рго Рго ІчІ1е ТПг 1 5 10 «2105 33 «2115 357 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність бо «2205 «223» синтетична

«4005 33 саддеЕдсадс гасадсадед доддсдсадда ссдЕсдаадс сЕсСсоуддадас ссеЕдссссес 60 ассеЕдсдсвд Ессаєдуаєдуа дЕСССєЄСсСадеі ддеЕвтассасоі ддааседдає ссдссадссс 120 ссаддчдаадуд дасеЕдчдадсд ддЕсєдоаддадаа ассадссаєба даддаассас саассасаас 180 ссдЕсссЕса ададісдадеі сассасбаєса ссддасасує ссаадаасса дЕсссссстуд 240 ааасєдасссї сеЕдсдассудс сдсддасасу дсеЕдЕДдсаєс ассдеЕєсдад адасдаддаа 300 сЕддаасєсс дЯдЕЄЕСЕЄєєЧда сеасєдддоас садоадаассс бдоадссассЯяє сессеса 357 «2105 34 «2115 119 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 34 сіп Уаі1 сбіп Ге сіп сіп Тер сС1у Аїа сіу Гец Гец Ппув Рго Бек біц 1 З 10 15

ТПг гей бек гей ТПг Сув Аїа Уаї Ту с1у б1у Бек Рпе Бек с1у Туг 20 25 Зо

Тук Тгр АвБп о Тгр ч11е Агуд сіп Рго Рго сіу Ппув сі1у Гей бій Тгр Уаї 35 40 45 сі1у бій чІ1е Бек Нів Акуд біу ТП ТПг о Авп Туг Авп о Рго Бек Геч Гув зо зо бо век Агуд Уа1 ТПг Іїе Бек Гец Авр ТПг Бек Ппув АвБп о біп Рпе бек Гей 65 70 75 8о пув Гей ТПг Бек Уа1і ТПг Аїа Аїа Ар ТПг Аїа Уаї Тук Тук Сув бБег

Зо 85 90 535

Ага Авр бій бій гей бій Рбе Агуд Рпе Рпе Авр Туг Тгр 01у б1п Щ1Уу 100 105 110

ТПг пе Уаї ТПг Уаї Бек 5Бег 115 «2105 35 «2115 24 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 35 дагддЯЧЕссЕ ЕсадеЕддеЕсба ссас 24 «2105 Зб «2115 8 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 36 сіу сіу Бек Рпе Бек с1у Тук Тукг 1 З «2105 37 60 «2115 21 «2125 ДНК

«213» Штучна послідовність «223» синтетична «4005 37 ассадссаба даддаассас с 21 «2105 38 «2115 7 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 38

І1е Бек Нів Агд б1у ТПпг тТПпс 1 З «2105 39 «2115 39 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 39

Есдададасуд аддаассдда асєссЯдєєсс єсСЄЧчасстас 9 «2105 40 «2115 13 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 40 век Агуд АБвр біц сіц Гец сбіц Рпе Агуд Рпе РпПе Ар Тукг 1 З 10 «2105 41 «2115 321 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 41 чаааєсдеЕдс єдасасадеіс Сссадссасс сЕдЕсЕсЕЕрдс сессаддудда аададссасс 60 сЕсЕССЄдса доададссадсса дадедеЕсадс адстасстад сссддбасса асааааассе 120 дассаддсес ссаддессссе суєсстаєсдуде дсасссааса дддссассдуд сассссадсс 180 аддеЕєсадед дсадедддЕс Сдуддасадас сЄсСсасссеса ссассадсад сстададссе 240 чаачасєсєву сасстєвсаєста сеЕдссадсад сдсадсаассі ддссдсссас СЕЕСддсддда 300 чдадассаадд гддадаєсаа а зЗ21 60 «2105 42 «2115 107

«2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 42 сій Іїе Уаі1ї Гец ТПг біп Бек Рго Аїа ТПг Ггец бек Гей бек Рго с01Уу 1 5 10 15 бі Агуд Аза ТПпгс о Гей б5Бег Сув Агуд Аїа бБег біп Бек Уаї Бек Бек Туг 20 25 30

Тен Аза Тер Тук сбіп сіп Ппув Рго біу біп Аїа Рго Агд Гецй Гей Уаї 35 40 45

Тук б1у Аїа 5Бек Авп Агуд Аїа ТПг с1у І1е Рго А1ї1а Агуд Рпе бБег ШУ 50 55 бо зек біу Бек сіу ТПг Авр Рпе ТПг Гец ТПг І1е Бек Бек Ггец біц Рго 65 70 75 80 сій Авр Рпе Аїа Рпе Туг Тук Сув біп біп Агуд Бек Ап Тгр Рго Гей 85 90 935

ТЕ Рпе с1у с1у бі1у ТПг пув Маї сій І1їе Гув 100 105 «2105 43 «2115 18 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична

Зо «4005 43 сачадсдеЕса дсадстає 18 «2105 44 «2115 6 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 44 сіп Бек Уаі1ї Бек Бек Тукг 1 5 «2105 45 «2115 9 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 45 даєдсаєсс З «2105 46 «2115 З «2125 БІЛОК 60 «213» Штучна послідовність в2

«223» синтетична «4005 46 сіу А1а бБег 1 «2105 47 «2115 27 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 47 садсадсудба дсаасеєддсс дсесасе 27 «2105 48 «2115 9 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 48 сіп біп Агуд Бег АвБп Тер Рго Гец ТІПг 1 З

Зо «2105 49 «2115 357 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 49 садсєдсадс Єдсаддадсс дддсссадда ссддЕдаадс сЕєСсддадас сседсссстс 60 ассеЕдсасвд ЕСсСсСсСтдудсєда сеЕссаєсаєс адсаасадеЕс аєсаседддау сеЕддаєссдс 120 садсссссад даааддддсеЕ ддадсддасєї ддсаассєсс єссасассдуа ддссасстас 180 басаасссусЄ сссісаадад Ссдадеісасс асаєссудсвд асасудессаа дааєссадесс 240

Ессседаадс ЕдадсеЕссдЕ дассдссдса дасасддсеєс гдсаєтаєту СдсдадеЕсає 300 аасаддааєс ассддЕссда ссссгдодддс саддадаассс гддЕсассує сеЕсссса 357 «2105 50 «2115 119 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 50 сіп Гей біп Ге сіп сіц Бек с1іу Рго сбіу Гец Уаї Ппув Рго Бек біц 1 З 10 15

ТПг гей бек Гей ТПг Сув ТПг о Уаї Бек б1у Авр Бек І1е І1е 5Бег Авп 20 25 Зо бо зек Тук Туг Тер б1у Тер чІ1ї1е Агуд сіп Рго Рго б1у пув с1у Ге с1и 35 40 45

Тер чІ1е сіу Авп Рпе Рпе Туг ТПг с1у Аїа ТПг Туг Туг АвБп Рго бБег 50 55 бо теп Ппув бБег Агуд Уаі ТПг І1їе Бек Аїа Авр ТПг Бек Гпув АБп біп РПе 65 70 75 80 зек гецп пув Гей бБег бБег Уаі1! ТПг Аїа Аїа Авр ТПг А1т1а Іеци Туг Туг 85 90 935

Сув Аїа Бек Туг АвБп Агуд АвБп оТуг Агуд Рпе Ар Рго Тгр с1іу сіп с1Уу 100 105 110

ТПг гец Уаї ТПг Уаї Бек 5ег 115 «2105 51 «2115 30 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «400551 чдаєЕдасеєсса Есаєссадсаа Садессаєсас зо «2105 52 «2115 10 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична

Зо «4005 52 сіу Авр Бек Іїе Іїе Бек Авп Бек Тук Тукг 1 5 10 «2105 53 «2115 21 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 53

ЕсССЕЄсСсава сеЕддддссасо с 21 «2105 54 «2115 7 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 54

Рпе Рпе Туг ТПг с1у Аїа ТЕПг 1 5 «2105 55 «2115 33 60 «212» ДНК «213» Штучна послідовність

«223» синтетична «4005 55 чдсдадессаса асаддаасста ссудсссдас ссес з «2105 56 «2115 11 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 556

А1їа Бек Туг АвБп Агуд АБп Туг Агуд Рпе АБр РгО 1 З 10 «2105 57 «2115 324 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 57 часаєссада гдасссадес Сссасссссс сгдЕСсСсдсає седсаддада сададссасс 60 аєсасеЕєдсс доадсаадеЕса дадсаєсадс адссасєсаа асєддаєбаєса дсадааасса 120 чадааадссс сеЕаадсссст даєссаєдсе дсаєссадес гдсааадсудуа ддеЕсссаєса 180 аддеЕєсадед дсадеддаєс Сдоддасадає ссСсасссеса ссассадсад СсеЕдсаасся 240 чаачдасєсєвуд саасеЕврасеє сеЕдссаасад адссасадса ссссессдає сассесссддс 300 саадддасас дассддадає Сааа 324 «2105 58 «2115 108 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 58

Те АБп Тер Тук сбіп сіп Ппув Рго сбіу Ппув Аїа Рго Пув Гец Гей Іїе 35 40 45 тТук Аїа Аїа бек бек Гей біп Бек б1і1у Маії Рго Бег Агуд Рпе бБег ШУ зо зо бо зек біу Бек сіу ТПг Авр Рпе ТПг Гец ТПг І1е Бек Бек Гец сбіп Рго 65 70 75 8о сі Авр Рпе Аїа ТПг Тук Рпе Сув біп сбіп бек Туг Бек ТіПг Рго Рго 85 90 535

І1е ТПг Рпе б1у біп б1у ТПпг Агд ей бій Іїе Гув 100 105 60 «2105 59 «2115 18

«2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 59 сададсаєса дсадстає 18 «2105 60 «2115 6 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 60 сіп Бек Іїе Бек Бек Тукг 1 5 «2105 61 «2115 9 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 61 дсЕдсаєсс З «2105 62 «2115 З «212» БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 62

Аза Аза 5екг 1 «2105 63 «2115 30 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 63 саасададес асадгтасссс Сссдаєсасс зо «2105» 64 «2115 10 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність бо «2205

«223» синтетична «4005 64 сіп біп Бек Тук Бек ТПг Рго Рго ІчІ1е ТПг 1 З 10 «2105 65 «2115 381 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 65 саддеЕдсадс гасадсадед доддсдсадда ссдЕсдаадс сЕсСсоуддадас ссеЕдссссес 60 ассеЕдсдсвд Ессаєдуєдуа дЕСССєЄСсСадеі асетассасоі ддадседдає ссдссадссс 120 ссадддаадуд дассдчдадед даєсддадад ассаассаба деЕддааасудс сдассасаас 180 ссдЕсссЕСса ададесдадеі сеЕссабаєса дсддасасує ссаадаасса дЕссСсссстуд 240 аддсєдадсє сеЕдеЕдассдс сдсддасаса дстаєстаєє аседедсдад адсодддстає 300

Едеадсадес ссасседста СЕСССассас басеЕсєсддна гддасудєстд дддссааддуа 360 ассасддеЕса ссудссесстс а зв1 «2105 66 «2115 127 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205

Зо «223» синтетична «4005 66 сіп Уаі1 сбіп Ге сіп сіп Тер сС1у Аїа сіу Гец Гец Ппув Рго Бек біц 1 З 10 15

ТПг Гецп Бек Гей ТПг Сув Аїа Маї Тук с1у с1у Бек РбПе Бек ТПг тТуг 20 25 Зо

Тук Тер 5ек Тгр чІ1е Агуд сіп Рго Рго сіу пув сіу Гей бій Тгр І1е 35 40 45 с1у б1п1 чІ1е АвБп Нів Бек с1у АвБп Аза Авр Туг АБп о Рго Бек Гей Гув зо зо бо век Агуд Уаі1 Бек Іїе Бек Уаі1і Авр ТПг Бек Ппув АвБп о біп Рпе Бек Гей 65 70 75 8о

Ага пей Бек Бек Маі ТПг Аз1а Аза АвБр ТПг Аза І1е Туг Туг Сув Аза 85 90 535

Аг Аїа с1у Тук Сув Бек Бек Рго ТПг Сув Туг Бек Тук Тук Тук РПе 100 105 110 сіу Меєсє Авр Уаі1 Тер сіу сбіп сіу ТПг ТПг Уаї ТПг Уаї Бек 5Бег 115 120 125 «2105 67 «2115 24 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 67

ЧдаєдаддЕСсСсСС Есадтасетвта стас 24 60 «2105 68

«2115 8 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005» 68 сіу сіу Бек Рпе Бек ТПг Тук Тукг 1 5 «2105 69 «2115 21 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 69 ассаассаба деЕддааасдс с 21 «2105 70 «2115 7 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 70

І1е АвБп Нів Бек б1у АБп Аа 1 5 «2105 71 «2115 63 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 71 дсдададсдуд дссаєєдсад сСадссссасс бдсвтасеєссс ассассасес соуддсаєддасєс 60 чЧЕс 63 «2105 72 «2115 21 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 72

Аза Аг Аза с1у Тук Сув Бек Бек Рго ТПг Сув Туг Бек Туг Тугк Туг 1 5 10 15

Рпе с1у Меє Авр Уаї 20 бо «2105 73

«2115 324 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 73 чаааєсдеЕде єдасудсадеіс Сссаддсасс сЕдЕсСЕсЕЕрдс сеЕссаддудда аададссасс 60 сЕСЕССєДдса доадссадеЕСса дчадеЕдеЕсаєс адсадсеЕсєсеє бадсссддбра ссадсадааа 120 ссеЕддссадд сеЕсссаддсесе ссеЕсаєссає ддсдсаєсса дсадддссас Сддссєсссса 180 часаддеЕєса деЕддсадсдуд дЕСсдуддаса дасессасес гсассаєссу садассддад 240 ссеЕдаадаєс єЕєдсадесдста Стассдесад садгтасдудса асссассстуд дасудсєссддс 300 саадддасса аддсддадає сааа 324 «2105 74 «2115 108 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 74 січ І1е Уаї Гей ТПг біп Бек Рго с1у ТПг ІТей Бек Гей Бек Іецп С1Уу 1 З 10 15 сій Агуд Аїа ТпПг Гей бБег Сув Агуд Аїа Бек біп Бек Уаї І1ї1е Бек 5Бег 20 25 Зо

Рпе ей Аїа Тер Ту біп біп ув Рго б1у біп Аза Рго Агу Іецй Іецй

І1е Тук б1у А1їа Бек Бек Агуд А1їа ТПпг б1у Рпе Рго АБр Агуд РПпе 5ег зо зо бо сіу Бек сіу Бек сіу ТПг Авр Рпе ТПг Гец ТПг І1е Агуд Агд Гец с1ц 65 70 75 8о 35 Рго бій Авр Рпе А1ї1а Уаї Туг Тук Сув бі1іп біп Тук с1у Авп Бек Рго 85 90 535

Тер ТПгЕ Рпе сіу сіп сіу ТПг пув Маї бій тІ1е пув 100 105 40 «2105 75 «2115 21 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність 45 «2205 «223» синтетична «4005 75 сачдадсдеЕса Есадсадсею с 21 «2105 76 «2115 7 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 76 бо сіп Бек Уаї ІчІ1е Бек Бек РПе 1 З

«2105 77 «2115 9 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 77 чаєЕдсаєссс З «2105 78 «2115 З «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 78 сіу Аїа 5ег 1 «2105 79 «2115 27 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність

Зо «2205 «223» синтетична «4005 79 садсадстаєд деаасеєсасс сгддасд 27 «2105 80 «2115 9 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 80 сіп б1іп тує б1у Авп Бек Рго Тгр ТтіПг 1 З «2105 81 «2115 387 «212» ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 81 саддеЕсасссї Едааддадеіс СддЕссЕдсд ссддсєдааас ссасададас ссесасуссу 60 ассеЕдсассу ЕсСЕссСтдуддЕЄ сеЕСасесадс аасудссдодада гододЕдЧеЕдад сеЕдддЕссддє 120 садсссссвуд ддааддсссе ддадсддссс дсасасарфес єеєсСсддааєсда сдадаадесс 180 бо басадсасає сеЕсЕдаддас садасесасс асссссаадда асасссссаа аадссаддєд 240 дЕссЕсСассуд Єдассаасе ддассстдсд дасасадсса сасаєєсстд Сдсасуддасба 300 ссададеЕєса ссадсесудЕєс дЕДдддсЕсССссС бастасеЕєсс асоддтаєсдда сдЕссддддсес 360 саадддасса сддісассує сеЕсстсса 387 «2105» 82 «2115 129 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005» 82 сіп Уа1 ТПпг Ггецшп пув сіц Бек с1іу Рго Уаї Ггец Уаї Ппув Рго ТПг с1ц 1 5 10 15

ТЕ пецп ТпПс о Гей ТПг о Сув Тс оУаї Бек бі1у Рпе Бек Гей бБег АБп А1а сіу Меє сіу Уаі1і Бек Тер Уаі1і Агуд біп Рго Рго сіу Ппув Аїа Гец сіц

Тер геш Ата Нів І1ї1е Рпе Бек АБп Авр сій пув Бек Тук Бек ТПг 5Бег 20 зо 55 бо

Те Агуд ТпПг Агуд Гец ТПг о І1е Бек Ппув Авр ТПг Бек Ппув Бек біп Уаї 65 70 75 80

Ууаї гец ТПг Уаї ТП Абзп о гец Авр Рго Уаі Авр ТПг Аза ТПг Тугк РіПе 85 90 935 25 сув Аї1а Агд чІ1ї1е Рго бій Рпе ТПг б5ег Бек Бек Тгр А1ї1а Іеи Туг Туг 100 105 110

Рпе Ту с1у Меє Авр Маії Тер б1у біп б1у ТпПг ТПпг Уа1ї ТпПг Уаї 5ег 115 120 125 зег

Зо «2105 83 «2115 30 «2125 ДНК 35 «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична 40 «4005 83 чадЕєсЕсас Есадсааєдс Сдоадаєдадве зо «2105» 84 «2115 10 45 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005» 84 сіу Рпе Бек Гей бБег АБп Аїа сіу Месє щЩ1У 1 5 10 «2105 85 «2115 21 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність 60 «2205 «223» синтетична

«4005 85 ас сссда аєдасддадаа д 21 «2105» 86 «2115 7 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 86

І1е Рпе Бек АвБп АвБр бі Гуз 1 З «2105 87 «2115 63 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 87 дсасддаєтас сададеЕссас садсссуєсу СдуддсссеЕсс ассасесста суддсаєддасєс 60 чЧЕс 63 «2105 88

Зо «2115 21 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 88

Аза Аг І1е Рго бій Рпе ТПг бБег бБег Бек Тгр Аї1а Іей Тук Тук РПе 1 З 10 15 тук 61у Ме Авр Уаї 20 «2105 89 «2115 324 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 89 чаааєсдеЕде єдасудсадеіс Сссаддсасс сЕдЕсЕсЕрдс сессаддудда аадсдссасс 60 сЕсЕССсдса ддададссадсса дадсаєтасс адсассстасо гсдсседдсра ссадсадааа 120 ссеЕддссадд сеЕсссаддсесе ссеЕсаєстсає дссасаєссса дсадддссас СддсдЕссса 180 часаддеЕєсєса деЕддсадеЕдд дЕСЕєдддасд дассєсасес єсассаєсад садасєддад 240 ссеЕдаєдаєс єЕєдсадесдбта Стассдесад саагасддса дадссассссуд дасудсєсєсддс 300 саадддасса аддеддааде сааа 324 «2105 90 60 «2115 108 «2125 БІЛОК

«213» Штучна послідовність «223» синтетична «4005 90 сій Іїе Уаі1ї Гец ТПг біп Бек Рго біу ТПг Ггец бек Гей бек Рго с01Уу 1 5 10 15 сій Бек Аїа ТПг Гей бБег Сув Агуд Аїа Бек біп Бек Іч1І1е ТПг Бек ТПг 20 25 30

Тук Рпе Аїа Тгр Туг сіп біп пув Рго бі1у біп Аз1а Рго Агуд Іецй Іецй 35 40 45

І1е Туг А1їа ТПг Бек Бек Агуд А1ї1а ТпПг бі1у Уаі1і Рго АБр Агуд РПпе 5ег 50 55 бо сі1іу Бек сб1у Бек с1у ТПг Авр Рпе ТПг Гей ТПг І1е 5ек Агд Гей с1ци 65 70 75 80

Рго АБр АБр Рпе А1їа Маї Туг Туг Сув біп біп Тук с1у Агуд Бек Рго 85 90 935

Тер ТПгЕ Рпе сіу сіп сіу ТПг пув Маї сій Уаї пув 100 105 «2105 91 «2115 21 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична

Зо «4005 91 сададсаєста ссадсасста с 21 «2105 92 «2115 7 «212» БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 92 сіп Бек Іїе ТПг Бек ТПг тТукг 1 5 «2105 93 «2115 9 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 93 дссасаєсс З «2105 94 «2115 З «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність 60 «2205

«223» синтетична «4005 94

Азїа ТтПг 5ег 1 «2105 95 «2115 27 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 95 садсаасаєд деаддеЕсасс сгддасд 27 «2105 96 «2115 9 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 96 сіп біп Ту с1у Агуд Бек Рго Тер ТПг 1 З

Зо «2105 97 «2115 363 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 97 саддеЕссадс гддсдсадеіс Сддадсеєдад дседаадаадс седдддссЕс адедааддес 60

ЄссеЕдсаадуд СЕСССоддЕсСа сассеєєсасс адеЕсаєдудбеа єсадссдудді дсдасаддес 120 ссгЕддасаад доассєдадед дчаєддвчдаєдуда ассадсудсес асааєдасєсаа сасааасстає 180 дсасадаадс гссадддсад адссассасуд ассудсадаса сасссасдаа Сасадсссас 240 асддадстаа ддадсссдад ассєдасдас асдуддссаєес аєсаседсдеЕ дсдасддаає 300

Едоддассссу ЕСсСаседдра сЕєСЯдаєссіс єддддссудєд дсасссвдудає саседеЕсьсс 360 са З63 «2105 98 «2115 121 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 98 сіп Уаі1 сбіп Гец Уаі сіп Бек с1у Аїа сбіц Уаї Ппув пув Рго с01у Аї1а 1 З 10 15 зек Уаі1 Ппув Уаі1і Бек Сув Ппув Аїа Бек біу Тук ТПг Рпе ТПг Бек Тукг 20 25 Зо бо с1у І1ї1е бек Тер Маї Акуд біп А1а Рго с1у с1іп сб1у ге бі Тер Меє 35 40 45 сіу Тер Іїе Бек Аїа Туг АвБп АвБр Ап о ТПг Ап Туг Аїа сіп Ппув Гей 50 55 бо сіп б1у Агуд Уаі1 ТпПг Мес ТПг АТа Авр ТПг Бек ТПг АБп ТПг Аїа тТуг 65 70 75 80 мес бій гей Агуд бБег Гей Агуд бБег АБр АБр ТПг Аїа чІ1е Туг Тугк Сув 85 90 935 уаї Агуд Тер АвБп Тер біу Бек Маі Тук Тер Тук Рпе Авр Гей Тгр с1У 100 105 110

Ага сб1у ТПг Гей УМаї ТПг Уаї бБег б5Бег 115 120 «2105 99 «2115 24 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 99 ддЕсасассс ЕсассадеЕта соддЧе 24 «2105 100 «2115 8 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична

Зо «4005 100 сіу Тук ТПг Рпе ТПг Бек Ту Щ1У 1 5 «2105 101 «2115 24 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 101 ассадсдсес асааєдаєбаа саса 24 «2105 102 «2115 8 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 102

І1е Бек Аїа Туг АБп Авр Авп ТЕГ 1 5 «2105 103 «2115 42 60 «212» ДНК «213» Штучна послідовність

«223» синтетична «4005 103

ЧЕЧдсЧчаєддча ассєдчоадЧаєєс сЯаєстассодд басессдчаєс сс 42 «2105 104 «2115 14 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 104 уаї Агуд Тер АвБп Тер біу Бек Уа1і Тук Тгр Тук Рпе Авр Гей 1 З 10 «2105 105 «2115 324 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 105 чаааєсдеЕде єдасудсадеіс Сссаддсасс сЕдЕсЕсЕрдс сессаддудда аададссасс 60 сЕСЕССєДдса доадссадеЕСса даєсаєсадс адсадстасе єсдсссддна ссадсадааа 120 ссеЕддссадд сеЕсссаддсесе ссеЕсаєстсає ддсдсдссса дсадддссас Сддсаєссса 180 часаддеЕєса деЕддсадсдеЕ дЕСєдддаса дасессасес гсассаєсад садассддад 240 ссеЕдаадаєс єЕсдсаасдра СЕЕССсдЕсад садтасддбса асссассстуд дасудсєссддс 300 саадддасса аддсддааає сааа 324 «2105 106 «2115 108 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 106 січ І1е Уаї Гей ТПг біп Бек Рго с1у ТПг ІТей Бек Гей Бек Рго с1Уу 1 З 10 15 сій Агуд Аїа ТпПг Гей бБег Сув Агуд Аїа Бек біп І1І1е І1І1е Бек Бек Бег 20 25 Зо

І1е Тук б1у А1ї1а Бек Бек Агуд Аїа ТпПг б1у І1е Рго АБр Агуд РПпе 5ег зо зо бо сіу Бек Уаі1 Бек сіу ТПг Авр Рпе ТПг Гец ТПг І1е Бек Агд Гец с1ц 65 70 75 8о

Рго бій Авр Рпе А1ї1а Меє Туг Рпе Сув бі1іп біп Тук с1у Авп Бек Рго 85 90 535

Тер ТПгЕ Рпе сіу сіп сіу ТПг пув Маї бій тІ1е пув 100 105 60 «2105 107 «2115 21

«2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 107 садаєсаєса дсадсадста с 21 «2105 108 «2115 7 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 108 сіп І1е Іїе Бек Бек Бек Тукг 1 5 «2105 109 «2115 9 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 109

ЧдаєдсдЕсс З «2105 110 «2115 З «212» БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 110 сіу Аїа 5ег 1 «2105 111 «2115 27 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 111 садсадстаєд деаасеєсасс сгддасд 27 «2105 112 «2115 9 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність бо «2205

«223» синтетична «4005 112 сіп біп Ту сб1у Авп Бек Рго Тер ТІПг 1 З «2105 113 «2115 351 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 113 садаєсасссї гдааддадеіс Сддссстрасу ссддсдааас ссасасадас ссесасуссу 60 асеЕєдсассс ЕссстдуддЕЄ сеЕСасесаас асссасадад ЄдододЕЧдсадд сеЕддаєссоду 120 садсссссад даааддсссе ддадсддссс дсасеєсаєеєс аєдддааєсда СдЕсаадаас 180 басадсссає сеЕСссуддадас саддссісасс ассдссаадд асассессаа ааассаддесд 240 дЕссЕсасаа Сдассаасає ддассссдсд дасасадсса саваєсєсьуд сЕСдсасава 300 асдддддаадч чааєдсасвд доддссадодада ассссддеса ссадссесстс а з51 «2105 114 «2115 117 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична

Зо «4005 114 сіп І1їе ТПпг Гецшп Ппув сіц Бек с1іу Рго ТПг Гец Уаї Ппув Рго ТПгЕ сіп 1 З 10 15

ТП Гей ТП Гей ТПг о Сув ТП Ре Бек б1у Рпе Бек Гей Ап ТПг Нів 20 25 Зо

Ага Маї с1у Маї с1у Тер І11е Агу біп Рго Рго б1у їув Аїа Іей б1ц 35 40 45

Тер гец Аїа гей І1е Ту с1у АвБп Авр Маї гув Авп Туг Бек Рго бег зо зо бо пе бій ТПг Агуд Гей ТБг о чІ1е Аза Гпув Авр ТПг обБек пув Авп о сіп Уаї 65 70 75 8о

Ууаї гецшц ТПпг Мес ТП Азп Мес Авр Рго Уаі Авр ТПг Аза ТПг Тугк РіПе 85 90 535

Сув Бек Туг Іїе ТПг сіу сіц сіу Мес Тук Тер б1у біп с1у ТПг Гец 100 105 110

Ууаї ТтПпг Уаї Бек 5ег 115 «2105 115 «2115 30 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 115 чадЕєсЕсас саасассса Сададедоаде зо 60 «2105 116 «2115 10

«2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 116 с1у Рпе Бек Гей Авп ТпПг Нів Агд Уаї1ї 01У 1 5 10 «2105 117 «2115 21 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 117 анЕсаєддда аєдаєдеваа д 21 «2105 118 «2115 7 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 118

І1е Тук б1у АвБп Авр Уаї пув 1 5 «2105 119 «2115 27 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 119

Есдрасаєаа сдоддддаадд ааєдсас 27 «2105 120 «2115 9 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 120 зек Туг Іїе ТПгЕ с1у сбіц с1у Меєс тукг 1 5 «2105 121 «2115 333 «2125 ДНК 60 «213» Штучна послідовність

«223» синтетична «4005 121 чаєдеЕєдеда Єдасссадесс Ессасесьсс сеЕдсссуєсса сссеЕєддаса дссоддссЕсс 60 асссседна ддасстадсса ааассісаєсуд басадсдаєд дааасасста сеЕЕдааєсду 120 всссассада ддссаддсса ассесссаадуда сдеЕсєааєес аєааддесєс Саассдудадас 180

ЕсеЕддддЕсс садасадаєє садсддсаді дддЕсаддса седаєєссас асеЕдааааєс 240 адсадддеЕдо аддсєЕдадда СЯєсддЧЧЧЕє састассдса гдсааддсас асассддсасєс 300 асаєєсдудсс аддддассаа дседдачаєсс агаа зз3 «2105 122 «2115 111 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 122

Авр Маї Уаї Меє ТПг біп Бек Рго Іей бБег Іей Бек Уаі ТПпг їІешй Щ1Уу 1 З 10 15 сіп Рго Аїа Бек Іїе Бек Сув Агуд Бек Бек біп Авп Гец Мес Тукг Бег 20 25 Зо

Авр с1у Авп ТПг Тукг еп Авп Тер Рбе Нів сбіп Агуд Рго сбіу сіп 5Бег 35 40 45

Рго Агуд Агд Гей І1е Туг пув Ма1і Бек АвБп Агу АвБр Бек с1у Уа1і1 РгОо зо зо бо

Авр Ага Рпе Бек біу Бек біу Бек бі1у ТПпг Авр Рпе ТПг Іей Гув Ше 65 70 75 8о зек Агуд Уаі1 сбіц Аїа біц Авр Уаї сіу Маї Тук Тук Сув Меє сіп с01Уу 85 90 535

ТП Нів Тер Тук ТПг Ррпе с1у біп б1у ТПпг пув гейш бій ч11е Гу 100 105 110 «2105 123 «2115 33 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 123 сааавассеса гдсасадсда Соддааасасс бас з «2105 124 «2115 11 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 124 сіп АвБп о Гей Мес Тук Бек Авр б1у АвБп ТПг Туг 1 З 10 «2105 125 60 «2115 9 «2125 ДНК

«213» Штучна послідовність «223» синтетична «4005 125 ааадеЕсссь З «2105 126 «2115 З «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 126 пув Уа1ї1 б5ег 1 «2105 127 «2115 24 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 127 аєдсааддбра сасассддса саса 24 «2105 128 «2115 8 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 128

Меє сбіп с1у ТпПгЕ Нів Тер Тук ТЕП 1 З «2105 129 «2115 357 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 129 саддеЕдсадс гдсадсадед доддсдсадда ссаєсдаадс сеЕсСсоуддадас ссеЕдссссес 60 ассеЕдсдсвд Ессаєдуєдуа дЕСЕСЕСсСадеі ддєтассасоі ддадседдає ссдссадссс 120 ссадддаадуд дЕСЕддчаасєд чаєєддаддаа ассаассаєба даддааасас саассасаас 180 ссдЕсссЕса ададісдадеі сассасбаєса сссдасасусє ссаадаааса дЕссСсссстуд 240 аассеєдадеЕс седсдассудс сдсддасасу дсстаєдсаєс ассдіасдад адасдаадаа 300 саддаасвтас дчЕсЕссеЕєда сеасєдддоас садоадаассс бдоадссассЯяє сессеса 357 60 «2105 130 «2115 119

«2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 130 сіп Уаі1 сбіп Ге сіп сіп Тер сС1у Аїа сіу Гец Гец Ппув Рго Бек біц 1 5 10 15

ТПг Гецп Бек Гей ТПг Сув Аїа Маї Тук с1у с1у Бек Рпе Бек с1у Туг 20 25 30

Тук Тер 5ек Тгр чІ1е Агуд сіп Рго Рго сіу пув сіу Гей бій Тгр І1е 35 40 45 с1у 611 чІ1е АвБп Нів Агуд с1у Авп ТБ АвБп о Туг АБп оРго Бек ГІец Гув 50 55 бо век Агуд Уа1 ТПг Іїе Бек Гец Авр ТПг Бек Ппув Ппув біп Рпе Бек Гей 65 70 75 80

Авп опе Бек Бек Маі ТПг А1ї1а Аза АвБр ТПпг Аза Меє Туг Туг Сув ТПпг 85 90 935

Агуд Ар сій бій б1п б1іш Гей Агуд Рбе Гей Авр Ту Тер С1у б1п Щ1У 100 105 110

ТПг пе Уаї ТПг Уаї Бек 5Бег 115 «2105 131 «2115 24 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність

Зо «2205 «223» синтетична «4005 131 чдасЕЧадЕСЕС ЕСадеЕдддеєта Стас 24 «2105 132 «2115 8 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 132 с1іу б1у Бек Рпе Бек с1у Туг Туг 1 5 «2105 133 «2115 21 «212» ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 133 ассаассаба даддааасас с 21 «2105» 134 60 «2115 7 «2125 БІЛОК

«213» Штучна послідовність «223» синтетична «4005 134

І1е АБп Нів Агд б1у АБп ТПпс 1 З «2105 135 «2115 39 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 135 асчачадчасуд аадаасадда ассасаєссєс сесдассас 9 «2105 136 «2115 13 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 136

ТПпгЕ Агуд Авр бі бій бі1іп бій Гей Агуд Рбе Гей Авр Туг 1 З 10 «2105 137 «2115 321 «212» ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 137 чачаєсдеЕдс Едасасадеіс Сссадссасс сЕдЕсЕсЕрдс сессаддудда аададссасс 60 сЕсЕССЄдса ддададссадсса ддасаєтадс асстасссад сссддрасса асадададсе 120 дадссаддсес ссаддсєссе саєссаєддеі дсЕЕссааса дддссассдуда саєрсссадсс 180 аддЕєсадед дсадсдуддаєс єдддасадас ЕсСсассссса ссаєсадсад сссададссє 240 чаачасєсєву сасстєвсаєста седссаасад сдсадсаасоі ддссдсссас СЕЕСддсддда 300 чадассдадд єддадаєсаа а зЗ21 «2105 138 «2115 107 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 138 сій Іїе Уаі1ї Гец ТПг біп Бек Рго Аїа ТПг Ггец бек Гей бек Рго с01Уу 1 З 10 15 бо січ Агуд Азїа ТбПс о Гей бек Сув Агуд Аїа Бек сб1іп Авр Іч1І1е Бек ТПгс Туг 20 25 Зо

Те Аза Тер Ту сбіп сіп Агуд Аїа сіу біп Аза Рго Агд Гей Гей Іїе 35 40 45

Тук б1у Аїа 5Бек Авп Агуд Аїа ТПг с1у І1е Рго А1ї1а Агуд Рпе бБег ШУ 50 55 бо зек б1у Бек б1іу ТПг Авр Рпе ТПг Гпецп ТПг І1е Бек Бек Гей бій Рго 65 70 75 80 сій Авр Рпе Аїа Рпе Туг Тук Сув біп біп Агуд Бек Ап Тгр Рго Гей 85 90 935

ТПЕ Рпе сіу сіу сіу ТПпг сій Уаї сій І1е Ппув 100 105 «2105» 139 «2115 18 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 139 саддасаєса дсасстбас 18 «2105» 140 «2115 6 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична

Зо «4005» 140 сбіп АвБр чІ1е Бек ТПг тТукг 1 5 «2105 141 «2115 9 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 141 дасдсессс З «2105 142 «2115 З «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 142 сіу А1а бБег 1 «2105» 143 «2115 27 60 «212» ДНК «213» Штучна послідовність

«223» синтетична «4005 143 саасадсдса дсаасеєддсс дсесасе 27 «2105 144 «2115 9 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 144 сіп біп Агуд Бег АвБп Тер Рго Гец ТІПг 1 З «2105 145 «2115 З6б6 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 145 саддеЕдсадс гасадсадед доддсдсадда ссдЕсдаадс сЕсСсоуддадас ссеЕдссссес 60 ассЕдсдеЕвєд ЄссасодудеЕдд дЕсСсЕЕсадеі ддЕсСастасе ддаассддає ссдссадссс 120 ссадддаадуд дассдчдадед даєсдддадаа ассаассасба даддааасас саассасаас 180 ссдЕсссЕса ададісдадеі сассудсртаєса даадасасусє ссаадаасса дЕсСсССссстуд 240 аадсєдадсс сеЕссдассудс сдсддасасу дсеЕдеЕдсаєс ассдеЕдсдад аддададдає 300 басчасєєєс доаадедаєста Сстасааєдас сбаседдддсесс адддаассся ддеЕсассуєс 360

Сссеса 366 «2105» 146 «2115 122 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 146 сіп Уаі1 сбіп Ге сіп сіп Тер сС1у Аїа сіу Гец Гец Ппув Рго Бек біц 1 З 10 15

ТПг ге Бек гец ТПг о Сув Уаї Уаї Нів сіу сб1у Бек Рпе Бек с1у Туг 20 25 Зо

Тук Тер АвБп Тер ч11е Агуд біп Рго Рго б1у Ппув б1у Гей бій Тер І1е 35 40 45 с1у 611 чІ1е АвБп Нів Агуд с1у Авп ТБ АвБп о Туг АБп оРго Бек ГІец Гув зо зо бо век Агуд Уаі1 ТПг Уаі1і Бек біц Авр ТПг Бек Ппув АвБп о біп Рпе бек Гей 65 70 75 8о пув Гей Бек Бек Гец ТПг Аїа Аза Ар ТПг Аїа Уаї Тук Тук Сув Уаї 85 90 535

Ага сб1у бій Авр Туг Авр Рпе Тгр бБег Авр Туг Туг АвБп Авр Туг Тер 100 105 110 бо сіу біп б1у ТПг Гей Уа1! ТПг Уаї Бек бБег 115 120

«2105 147 «2115 24 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005» 147

ЧдаєдадЕСсСсСС ЕсадеЕддеєта стас 24 «2105» 148 «2115 8 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005» 148 сіу сіу Бек Рпе Бек с1у Тук Тукг 1 5 «2105» 149 «2115 21 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005» 149 ассаассаба даддааасас с 21 «2105 150 «2115 7 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 150 чІ1е АвБп Нів Агуд б1у Авп ТЕГ 1 5 «2105 151 «2115» 48 «212» ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 151 чЧЕЧачадчад адчаєсасча єсеЕссодадеі чаєсаєсаєа асдассас 48 «2105 152 бо «2115 16 «2125 БІЛОК

«213» Штучна послідовність «223» синтетична «4005 152 уаї Акуд б1у біц Авр Тук Авр Рпе Тгр бек Авр Тук Туг Авп Авр Туг 1 З 10 15 «2105 153 «2115 321 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 153 чаааєсдеЕдс єдасасадеіс Сссадссасс сЕдЕсЕсЕЕрдс сессаддудда аададссасс 60 сЕСЕССєДдса доадссадеЕСса дасвсаєсадс адссасеЕсад сседдсасса асадааассє 120 дадссаддсес ссаддссссе саєссаєдає дсаєссаааа дддссасуддд саєсссадсс 180 аддеЕєсадед дсадедддЕс Сдуддасадас сЄсСсасссеса ссассассад сстададссе 240 чаачасєєву садесеєвтаєста сеЕдссадсад сдсадсаассі ддссЕсссас СЕЕСсСддсддда 300 чдадассаадд гддадаєсаа а зЗ21 «2105 154 «2115 107 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність

Зо «2205 «223» синтетична «4005 154 січ І1е Уаї Гей ТПг біп бек Рго Аїа ТПг ІТей бек Гей Бек Рго с1Уу 1 З 10 15 сій Агуд Аїа ТпПг Гей бБег Сув Агуд Аїа Бек біп ТПг ч1І1е Бек Бек Тукг 20 25 Зо

Ттец А1а Тер Нів сбіп біп пув Рго сіу біп А1їа Рго Агд Іецй Іецй Іїе 35 40 45

Тук Авр Аїа бек пуб Агуд Аїа ТПг с1у І1е Рго А1ї1а Агуд Рпе бБег ШУ зо зо бо зек біу Бек сіу ТПг Авр Рпе ТПг Гец ТПг І1е ТПг Бек Ггец біц Рго 65 70 75 8о бі АБр Рпе Аїа Уаї Туг Тук Сув сбіп біп Агуд Бек АБп Тгр Рго Гей 85 90 535

ТПЕ Рпе сіу сіу сіу ТПг пув Маї сій І1е Ппув 100 105 «2105 155 «2115 18 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 155 садассаєса дсадсвсас 18 60 «2105 1556

«2115 6 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 1556 сіп ТПпг І1е Бек Бек Тукг 1 5 «2105 157 «2115 9 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 157 чаєдсаєсс З «2105 158 «2115 З «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 158

Авр Аа 5ег 1 «2105 159 «2115 27 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 159 садсадсудбєа дсаасеєддсесс Ссесасе 27 «2105 160 «2115 9 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 160 сіп б1іп Агуд Бек Авп Тер Рго Гей ТіПг 1 5 «2105 161 «2115 372 60 «212» ДНК «213» Штучна послідовність

«223» синтетична «4005 161 саддеЕдсадс гасадсадед доддсдсадда седеЕсдссдс сеЕсСсоуддадас ссеЕдссссес бо ассеЕдсдсвдд Ессаєдуаєдуа дЕСССєЄСсСадеі ддеЕвтассасоі ддадседдає ссдссадссс 120 ссадддаадуд дассдчдадед даєсдддадаа ассаассасба даддаадсас саассасаас 180 ссдЕсссЕса ададісдадс сассасбаєса дссдасасує ссаадаасса дЕссССсссстуд 240 аадсєдадсє сеЕдеЕдассдс сдсддасаса дсЕдЕдтаєє асеЕдеЕссдад аддсдадчає 300 бастаєдаєа деадеЕддеєта сеЕСдсассас Єседассасоі доаддссадудуд аассстддсс 360 ассдЕєсеЕсся са 372 «2105 162 «2115 124 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 162 сіп Уаі1 сбіп Ге сіп сіп Тер сС1у Аїа сіу Гец Гец Рго Рго Бек біц 1 З 10 15

ТПг Гецп Бек Гей І1е Сув Аїа Маї Тук с1у с1у Бек Рпе Бек с1у Туг 20 25 Зо

Тук Тер 5ек Тгр чІ1е Агуд сіп Рго Рго сіу пув сіу Гей бій Тгр І1е 35 40 45 с1у 611 чІ1е АвБп Нів Агуд с1іу Бек ТПг АвБп о Туг АБп о Рго Бек Гей Гув зо зо бо век Агуд Аїа ТПг Іїе Бек Уаі1і Авр ТПг Бек Ппув АвБп о біп Рпе Бек Гей 65 70 75 8о пув Гей Бек Бек Уаі1і ТПг Аїа Аза Ар ТПг Аїа Уаї Тук Тук Сув бБег 85 90 535

Акуд с1у бі Авр Туг Туг Авр Бек Бек б1у Туг Бек Тук Тук Ропе Авр 100 105 110

Тук Тер б1у біп сіу ТПг Гей Уаї ТПг Уаї Бек 5ег 115 120 «2105 163 «2115 24 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 163

ЧдаєдадЕСсСсСС ЕсадеЕддеєта стас 24 «2105 164 «2115 8 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 164 бо с1іу б1у Бек Рпе Бек с1у Туг Туг 1 З

«2105 165 «2115 21 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 165 ассаассаба даддаадсас с 21 «2105 166 «2115 7 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 166

І1е АБп Нів Агуд б1у Бек ТПг 1 З «2105 167 «2115 54 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність

Зо «2205 «223» синтетична «4005 167

Есдадчадодсуд адчаєсасста Єдчасадчсаде доассасссуає ассасессда стсас 54 «2105 168 «2115 18 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 168 зек Агд б1у бій Авр Туг Туг Авр бек Бек біу Тук Бек Туг Тук РПе 1 З 10 15

Авр Тукг «2105 169 «2115 321 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 169 чаааєсдеЕдс єдасасадеіс Сссадссасс сЕдЕсЕсЕЕрдс сессаддудда аададссасс 60 бо сЕСЕССєДдса доадссадеЕСса чадеЕдеЕсадс адссасеЕсад сседдсасса асадааассє 120 дадссаддсес ссаддссссе саєссаєдає дсаєссааса дддссассдуда саєсссадсс 180 аддеЕєсадед дсадедддЕс Сдуддасадас сЄсСсасссеса ссассадсад сстададссе 240 чаачасєєву садесеєвтаєста сеЕдссадсад сдсадсаассі ддссдсссас СЕЕСддсддда 300 чдадассаадд гддадаєсаа а зЗ21 «2105 170 «2115 107 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 170 сій Іїе Уаі1ї Гец ТПг біп Бек Рго Аїа ТПг Ггец бек Гей бек Рго с01Уу 1 З 10 15 сій Агуд Аїа ТпПг Гей бБег Сув Агуд Аїа Бек біп Бек Уаї Бек Бек Тукг

Те Аза Тер Тук сбіп сіп Ппув Рго біу біп Аїа Рго Агд Гей Гей Іїе 20 тТук Авр Аїа Бек АБп Агуд Аза ТПг с1у чІ1е Рго Аїа Акд Рбе бек Щ1У бо зек біу Бек сіу ТПг Авр Рпе ТПг Гец ТПг І1е Бек Бек Ггец біц Рго 65 70 75 80 сій Авр Рпе Аїа Уа1 Тук Тук Сув біп біп Агуд Бек Ап Тгр Рго Гей 25 85 90 935

ТПЕ Рпе сіу сіу сіу ТПг пув Маї сій І1е Ппув 100 105 «2105 171

Зо «2115» 18 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 35 «223» синтетична «4005 171 сачдадсдеЕса дсадстсас 18 40 «2105 172 «2115 6 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність 45 «2205 «223» синтетична «4005 172 сіп Бек Уаі1ї Бек Бек Тукг 50 1 5 «2105 173 «2115 9 «2125 ДНК 55 «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична 60 «4005 173 чаєдсаєсс З

«2105 174 «2115 З «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 174

Авр Аа 5ег 1 «2105 175 «2115 27 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 175 садсадсудба дсаасеєддсс дсесасе 27 «2105 176 «2115 9 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність

Зо «2205 «223» синтетична «4005 176 сіп біп Агуд Бег АвБп Тер Рго Гец ТІПг 1 5 «2105 177 «2115 З6б6 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 177 саддеЕдсадс гасадсадед доддсдсадда седеЕсдаддс сЕсСсоуддадас ссеЕдссссес 60 ассеЕдсдсвд Ессаєдуаєдуа дЕСССЕСсСадеі ддеЕвтассасоі ддаааєєддає ссдссадесс 120 ссадддасдуд дассддадед даєсдддадаа ассаассаба дадддаасає саассссаас 180 ссдЕсссЕса ададісдадеі сассасбаєса даддасасусє ссааааасса асссссстуд 240 аддсєдаасеї сеЕдеЕдассдс сдсддасаса дсЕдЕдтаєє аседедсдад аддададчає 300 басчасаєєс ддадедудєста Ссасадддад баседдддсесс адддаассся ддеЕсассуєс 360 ссеса Зоб «2105 178 «2115 122 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 60 «223» синтетична

«4005 178 сіп Уаі1 сбіп Ге сіп сіп Тер сС1у Аїа сіу Ггец Гец Агуд Рго Бек біц 1 5 10 15

ТПг гей бек гей ТПг Сув Аїа Уаї Ту с1у б1у Бек Рпе Бек с1у Туг 20 25 30

Тук Тгр Авп о Тгр ч11е Агуд сіп бек Рго сіу ТПг сі1у Гей бій Тгр І1е 35 40 45 с1у 611 чІ1е АвБп Нів Агуд с1у Авп о І11е АБп о Рбе АБп о Рго бБекг Гей Гув 50 55 бо зек Агуд Уаї ТПг І1їе Бек бій Авр ТПг Бек пув АБп обіп Рпе Бек Гей 65 70 75 80

Ага гей АвБп Бек Маі ТПг А1ї1а Аза Авр ТПпг Аза Уаі1ї Туг Тук Сув Аза 85 90 935

Ага сб1у бій Авр Туг Авр І1е Тгр Бек б1у Туг Туг Агкуд бій Туг Тер 100 105 110 сіу біп сіу ТПг Гец Уаї ТПг Уаї Бек Бек 115 120 «2105 179 «2115 24 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 179

ЧдаєдадЕСсСсСС ЕсадеЕддеєта стас 24

Зо «2105» 180 «2115 8 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 180 сіу сіу Бек Рпе Бек с1у Тук Тукг 1 5 «2105 181 «2115 21 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 181 ассаассаба дадддаасає с 21 «2105 182 «2115 7 «212» БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична 60 «4005 182

І1е АБп Нів Агуд б1у АБп т11е 1 З «2105 183 «211» 48 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 183 чсдачадчад адчаєсасча саєєсєсдодаде доассаєсаєа ддодадсас 48 «2105 184 «2115 16 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 184

Аза Акад с1у бій Авр Туг АБвр І1е Тгр Бек б1у Туг Туг Аг бій Туг 1 З 10 15 «2105 185 «2115 321 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 185 чаааєсдеЕдс єдасасадеіс Сссадссасс сЕдЕсСЕЕрдс сессаддудда аададссасе 60 сЕсЕССЄдса доададссадсса дадедеЕсадс адстасссад сссддрасса дсадааассе 120 дадссаддсес ссаддссссе саєссаєдає дсаєссаада доддссассдуда саєсссадсс 180 аддеЕєсадед дсадедддЕс Сдуддасадас сЄсСсасссеса ссассадсад сстададссе 240 чаачасєєєсвуд сеЕдеЕстаєса седесадсад сдеЕадсаасе ддссЕсСЕСсСдс СЕсССОЯДсоЯда 300 чдадассаадд гддадаєсаа а зЗ21 «2105 186 «2115 107 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 186 сій Іїе Уаі1ї Гец ТПг біп Бек Рго Аїа ТПг Ггец бек Гей бек Рго с01Уу 1 З 10 15 сій Агуд Аїа ТпПг Гей бБег Сув Агуд Аїа Бек біп Бек Уаї Бек Бек Тукг 20 25 Зо

Те Аза Тер Тук сбіп сіп Ппув Рго біу біп Аїа Рго Агд Гей Гей Іїе 35 40 45

Тук Авр Аїа бек пуб Агуд Аїа ТПг с1у І1е Рго А1ї1а Агуд Рпе бБег ШУ зо зо бо бо Зек біу Бек б1у ТПг Авр Рпе ТПг Гей ТПг І1е Бек Бек Ггецп 1 Рго 65 70 75 8о сій Авр Рпе Аїа Уа1 Тук Тук Сув біп біп Агуд Бек Ап Тгр Рго Гей в5 90 935

Аза Рпе с1у с1у с1у ТПг пув Маї бій І1е пув 100 105 «2105 187 «2115 18 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 187 сачадедсва дсадстас 18 «2105 188 «2115 6 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 188 сіп Бек Уаі1ї Бек Бек Тукг 1 5 «2105 189

Зо «2115 9 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005» 189 чаєдсаєсс З «2105 190 «2115 З «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 190

Авр Аа 5ег 1 «2105 191 «2115 27 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична бо «4005 191 садсадсудбєа дсаасеєддсесс СсеЕсдсе 27

«2105 192 «2115 9 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 192 сіп біп Агуд Бег АвБп Тер Рго ГІец Аї1а 1 З «2105 193 «2115 357 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 193 саддеЕдсадс гасадсадед доддсдсадда ссдЕсдаадс сЕсСсоуддадас ссеЕдссссес 60 ассеЕдсдсвд Ессаєдуаєдуа дЕСССєЄСсСадеі дадеЕєсстасоі ддааседдає ссдссадссс 120 ссададаадуд дссеЕдчадсд чаєєддаддаа ассаассаєс дсддааасас саассасаас 180 ссдЕсссЕса ададісдадеі сассасбаєса дсадасаєудс ссаадаасса дЕссСсссстуд 240 садсєдаасс сеЕдсдассудє сдсддасасу дсЕСЕдсаьс ассдеЕдсдЕє Сддссасддає 300 гЕєСоодадеє сеЕсаєдчадда сдєсЕдоаддоас сааддадасса соддесассЯяє сесссеса 357

Зо «2105 194 «2115 119 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 194 сіп Уаі1 сбіп Ге сіп сіп Тер сС1у Аїа сіу Гец Гец Ппув Рго Бек біц 1 З 10 15

ТПг гей бек гей ТПг Сув Аїа Уаї Тук сіу сіу Бек Рпе Бек бій РПе 20 25 Зо

Тук Тгр АвБп о Тгр 11е Агуд сіп Рго Рго сій пув сі1у Гей бій Тгр І1е 35 40 45 сі1у бій ч1І1е Авп Нів Акуд б1у АБп Тс Авп Туг Авп о Рго Бек Геч Гув зо зо бо зек Агуд Уа1 ТПг Іїе Бек Уаі1і Авр Мес Бек Ппув АвБп о біп Рпе бек Гей 65 70 75 8о сіп Гей АвБп о Бек Уаі ТПг Уаї Аїа Авр ТПг Аїа Гец Тук Тук Сув А1а 85 90 535

Рпе с1у Туг Авр Рпе Агуд Бек Бек Туг бій Авр Уаі Тер 0Ш1у бі1іп Щ1У 100 105 110

ТПг ТПг Уаї ТПг Уаї Бек 5Бег 115 «2105 195 «2115 24 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність 60 «2205

«223» синтетична «4005 195

ЧаєдадЕСсСС ЕСсадеЕЧдадьєс стас 24 «2105 196 «2115 8 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 196 с1іу б1у Бек Рпе Бек сій РПе Туг 1 5 «2105 197 «2115 21 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 197 ассаассаєс деЕддааасасєс с 21 «2105 198

Зо «2115 7 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 198

І1е АБп Нів Агд б1у АБп ТПпс 1 5 «2105 199 «2115 39 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 199 дсЯсЕгддсЕ асчаєєсєєстсу дадеЕсєсьває даддасдес 39 «2105 200 «2115 13 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична бо «4005 200

Аза Рпе с1у Туг Авр Рпе Агуд Бек Бек Туг бій Авр Уаї1ї

1 З 10 «2105 201 «2115 321 «212» ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 201 чаааєсдеЕдс єдасасадеіс Сссадссасс сЕдЕсЕсЕЕрдс сессаддудда аададссасс 60 сЕсЕССЄдса ддададссадсса ддасаєтадс асстасссад сссддсасса асадааассе 120 ддссадссес ссаддссссе саєссаєдді ссаєссааса дддссассдуда саєрсссадсс 180 аддЕєсадед дсадсдуддаєс єдддасадас ЕсСсассссса ссаєсадсад сссададссє 240 чаачасєєву садесеєвтаєста сеЕдссадсад сдсадсаассі ддссЕсссас СЕЕСсСддсддда 300 чдадассаадд гддадаєсаа а зЗ21 «2105 202 «2115 107 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 202 сій Іїе Уаі1ї Гец ТПг біп Бек Рго Аїа ТПг Ггец бек Гей бек Рго с01Уу 1 З 10 15 січ Агуд Азїа ТбПс о Гей бек Сув Агуд Аїа Бек сб1іп Авр Іч1І1е Бек ТПгс Туг 20 25 Зо

Ттец А1а Тер Нів сбіп біп пув Рго сіу біп Рго Рго Агд Іецй Іецй Іїе

Тук біу Бек бек Авп Агуд Аїа ТПг с1у І1е Рго А1ї1а Агуд Рпе бБег ШУ 35 зо зо бо зек біу Бек сіу ТПг Авр Рпе ТПг Гец ТПг І1е Бек Бек Ггец біц Рго 65 70 75 8о сій Авр Рпе Аїа Уа1 Тук Тук Сув біп біп Агуд Бек Ап Тгр Рго Гей 85 90 535 40 ТЕ Рпе с1у с1у бі1у ТПг пув Маї сій І1їе Гув 100 105 «2105 203 «2115 18 45 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 203 саддасаєса дсасстбас 18 «2105 204 «2115 6 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 60 «223» синтетична

«4005 204 сбіп АвБр чІ1е Бек ТПг тТукг 1 5 «2105 205 «2115 9 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 205 дадЕЕсСаєсс З «2105 206 «2115 З «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 206 с1іу Бек бБег 1 «2105 207 «2115 27 «212» ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 207 садсадсудбєа дсаасеєддсесс Ссесасе 27 «2105» 208 «2115 9 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 208 сіп біп Агуд Бег АвБп Тер Рго Гец ТІПг 1 5 «2105» 209 «2115 372 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 209 бо чаддєдсадс ЄдсЕддаадесс єдддддаддс ЕсодЕасадс содддаддддЕс сседадассс 60

ЕссеЕдсдсад сссстуддаєє сасссссада адстасдсса єдадеЕєддде ссдссаддсе 120 ссадддаадуд дассддадед ддЕсссадес ассадсдудед деЕЧддЕддсад дасасассас 180 асадассссуд гдаадддссуд дЕєсассаєс сссададаса аєсссаадад саєдсеєдсає 240 сгдсаааєда асадсссдад адссдаддас асддссаєес аєсаседсдс дааадададуа 300

Чдсаассддаа бадассаста стассасуддЕ дсддасудеєссі доаддссаадда дассасудсс 360 ассдЕсеЕсся са 372 «2105» 210 «2115» 124 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 210 сій Уаі1 сіп Гец Гец біц Бек б1у сбіу б1і1у Ггец Уаі сбіп Рго сіу с01У 1 З 10 15 зек Гей Агуд Гей бБег Сув Аїа Аїа Бек сбіу Рпе ТПг Рпе Агуд Бек Тукг

Зо 20 А1ї1а Ме Бек Тгр Уаї Агуд сіп Аїа Рго с1у Ппув с1у теп бій Тер Уаї 35 40 45 зек Уа1 Іїе Бек сіу сіу с1і1у б1у Агуд ТПг Тук Тук ТПг Авр бек Уаї зо зо бо пув б1у Агуд Рпе ТПг Іїе Бег Агуд АвБр Ап Бек Пув Бек Мес Гец Туг 25 65 70 75 8о тей біп Мес Ап бБег Гец Агуд Аїа біц Авр ТПг Аза чІ1е Тук Тук Сув 85 90 535

Аза пув сіц Агуд Уаї Тс о б1у ч1І1е Авр Нів Тук Тук Тук с1і1у Уаї АБвр 100 105 110

Маі1 Тер 61у біп с1у ТПг ТПг Уаї ТПг Уаї Бек б5ег 115 120 «2105 211 «2115 24 «212» ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 211 чддаєеєсассо Есадаадста Сдсс 24 «2105 212 «2115 8 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 212 сіу Рпе ТПг Рпе Агуд Бек Туг А1а 1 З «2105» 213 «2115 24 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність 60 «2205

«223» синтетична «4005 213 ассадсддєд деЕддЕддсад даса 24 «2105 214 «2115 8 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 214

І1е Бек с1у б1у 61у С1у Агд ТПг 1 З «2105 215 «2115 51 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 215 чсдааачадча доаодеаасєдд аасадассас бассассасоа дсдсодасає с зі «2105 216

Зо «2115 17 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 216

Аза пув сіц Агуд Уаї Тс о б1у ч1І1е Авр Нів Тук Тук Тук с1і1у Уаї АБвр 1 З 10 15 чаї «2105 217 «2115 321 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 217 часаєссада гдасссадес Сссасссссс сгдЕСсСсдсає седсаддада сададссасс 60 ассасссдсес доадсаадсса дадсаєтадеі адстассстаа аєсдудраєса дсадааасса 120 чадааадссс сеЕаадсссст даєссаєудсс асаєссадес гдсааадсудуа ддеЕсссаєса 180 сддЕєсадед дсадсдсаєс єддаасадає єссасссссуд ссаєсадсад Сссдсаассє 240 чаачдасєєвєд саасевсаста сеЕдссаасад адссасасва ссссссесас СЕЕСсСддсддда 300 чдадассаадд гддадаєсаа а зЗ21 «2105 218 60 «2115 107 «2125 БІЛОК

«213» Штучна послідовність «223» синтетична «4005 218

Авр чІ1е біп Меє ТПг обіп Бек Рго Бек бБег Іей Бек Аза Бек Уаі1і Щ1У 1 5 10 15

Авр Ага Маї ТПг І1е ТПпг Сув Агу Аза Бек біп Бек І1е бБег Бек Туг 20 25 30

Те АБп Тер Тук сбіп сіп Ппув Рго сбіу Ппув Аїа Рго Пув Гец Гей Іїе 35 40 45

Тук Аїа ТПг бек бек Гей біп Бек б1у Маії Рго Бег Агуд Рпе бБег ШУ 50 55 бо зек Аїа бек б1у ТПг Авр Рпе ТПг Ггец Аїа І1е Бек б5Бек Гей с1іп Рго 65 70 75 80 сій Авр Рпе Аїа ТПг Тукг Тук Сув біп біп Бек Тук ТПг ТПг Рго Гец 85 90 935

ТПЕ Рпе сіу сіу сіу ТПг пув Маї сій І1е Ппув 100 105 «2105» 219 «2115 18 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична

Зо «4005» 219 сададсаєса деадсває 18 «2105 220 «2115 6 «212» БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 220 сіп Бек Іїе Бек Бек Тукг 1 5 «2105 221 «2115 9 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 221 дссасаєсс З «2105 222 «2115 З «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність 60 «2205

«223» синтетична «4005 222

Азїа ТтПг 5ег 1 «2105 223 «2115 27 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 223 саасададес асастасссс ссесасе 27 «2105 224 «2115 9 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 224 сбіп біп Бек Тук ТПг ТПг Рго Гец ТІПг 1 З

Зо «2105 225 «2115 390 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 225 чаддеЕдсадс гдодсддадеЕс Сдоадддаддс сСсдудсасаас ссддадддес сседадасеє 60

ЄссеЕДДєдсад ссеЕссдддасє басаєєсадс адесаєсєдааа єдаассдуддс ссдссаддсее 120 ссадддаадуд дассддадеЕд ддЕссСсасає ассадсадна деЕддсаасас сааадассас 180 чдсаддсЕсьд єдаадддссуд адссассасєс сссададаса асдссаадаа сеЕсаседсає 240 сгдсаааєда асадсссдад адссдаддас асуддссдЕєс аєсаседсдс дададаєдда 300 чадсаєсєсасу агасєєсдасєс СоддеЕсСссаєд Єсстассасо ассасуасесеєе ддасдессду 360 чддссааддда ссасуддессас сдсссссса 390 «2105 226 «2115 130 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 226 сі Уаі1 сіп Гец Уаї сіц Бек б1у сбіу б1у Ггец Уаі сбіп Рго сіу с01У 1 З 10 15 зек Гей Агуд Гей бБег Сув Аїа Аїа Бек сбіу Рпе ТПг Рпе Бек Бек Тукг 20 25 Зо бо сі Меє АБп Тер УМаї Акуд біп Аза Рго с1у Ппув бі1у Ггеш бій Тер Уаї 35 40 45 зек Туг Іїе Бек Бек Бек сб1іу Ап ТПг Ппув Авр Туг Аїа сіу Бек Уаї 50 55 бо пув б1у Агуд Уаі1 ТПг Іїе Бег Агуд АвБр АвБп Аза Пув Ап Гец Гец Туг 65 70 75 80 пе біп Мес Авп Бек Гей Агуд А1а біц Авр ТБПг Атїа Уаї Тук Нів Сув 85 90 935

Аза Агуд Авр сбіу біу Нів Тук Авр ІчІ1е Гей ТПг сіу Бек Меєсє Бек Туг 100 105 110

Тук Тук Ту Аїа гей Авр Уаії Тгр сі1у сбіп с1у ТПг ТПг Уаї ТПг Уаї 115 120 125 зек вБег 130 «2105 227 «2115 24 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 227 чдчдаєсєсасає єсадсадета Єдаа 24 «2105» 228 «2115 8 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність

Зо «2205 «223» синтетична «4005 228 сіу Рпе ТПг Рпе Бек Бек Тук с1ци 1 5 «2105 229 «2115 24 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005» 229 ассадсадса деЕддсаасас сааа 24 «2105 230 «2115 8 «212» БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 230

І1е Бек Бек Бек б1у Авп ТПг Гуз 1 5 60 «2105 231 «2115 69

«2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 231 дсдадчачаєд дадддсаєта сдасаєєссу аседдссєсса Едсссстаста стастасдсе 60

ЕсддасдаЕс 6 «2105 232 «2115 23 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 232

Аз1а Агуд Авр о б1іу б1у Нів Тук Авр І1їе Ге ТПг с1у Бек Меєсє бек тус 1 З 10 15

Тук Тук Ту Аїа Гей Авр Уаї 20 «2105 233 «2115 324 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність

Зо «2205 «223» синтетична «4005 233 часаєссада гдасссадес Сссасссссс сгдЕСсСсдсає седсаддада сададссасс 60 аєсасеЕєдсс доадсаадеЕса дадсаєсадс адссасєсаа асєддаєбаєса дсадааасса 120 чадааадссс сеЕаадсссст даєссаєдсе дсаєссадес гдсааадсудуа ддеЕсссдеЕса 180 аддеЕєсадед дсадеддаєс Сдоддасадає ссСсасссеса ссассадсад СсеЕдсаасся 240 чаачдасєєвєд саасесаста сеЕдссаасад адссасадса ссссессдає сассесссддс 300 саадддасас дассддадає Сааа 324 «2105 234 «2115 108 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 234

Те АБп Тер Тук сбіп сіп Ппув Рго сбіу Ппув Аїа Рго Пув Гец Гей Іїе 35 40 45 тТук Аїа Аїа бек бек Гей біп Бек б1і1у Маії Рго Бег Агуд Рпе бБег ШУ зо зо бо зек біу Бек сіу ТПг Авр Рпе ТПг Гец ТПг І1е Бек Бек Гец сбіп Рго 65 70 75 8о бо сі Авр Рпе Аїа ТПг Туг Тук Сув біп біп Бек Туг Бек ТПг Рго Рго 85 90 535

І1е ТПг Рпе б1у біп б1у ТПпг Агд ей бій Іїе Гув 100 105 «2105 235 «2115 18 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 235 сададсаєса дсадстає 18 «2105 236 «2115 6 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 236 сіп Бек Іїе Бек Бек Тукг 1 5 «2105 237 «2115 9 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 237 дсЕдсаєсс З «2105 238 «2115 З «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 238

Аза Аза 5екг 1 «2105 239 «2115 30 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 239 саасададес асадгтасссс Сссдаєсасс зо бо «2105» 240

«2115 10 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 240 сіп біп Бек Тук Бек ТПг Рго Рго ІчІ1е ТПг 1 З 10 «2105 241 «2115 363 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 241 чаддеЕдсадс гдодсддадеЕс Сдоадддаддс сСсддасасадс седдддддЕс сседадасеіс 60

ЕссеЕдсдсад сссстуддаєє сасссстааа асстасдсса гдадседддеЕ ссдссаддсе 120 ссаддададад дассддадед ддЕсссадде ассадсдудна деЕддтадсас сеЕСсасассас 180 чдсадассссуд гдаадддссуд дЕєсассаєс сссададаса аєсасаадаа дасудседесе 240 сЕдсаааєда асадсссдад адссдаддас асуддсесуєєЕє асвтаседсдс дссддаєсава 300 асддсаасудд гаддаддесеЕ сЕЕсаасаас сддддссадуда даассссдуде сассдесьсс 360 са З63 «2105 242

Зо «2115 121 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 242 сі Уаі1 сіп Гец Уаї сіц Бек б1у сбіу б1у Ггец Уаі сбіп Рго сіу с01У 1 З 10 15 зек Гей Агуд Гец Бек Сув Аїа Аза Бек с1у Рпе ТПг Рпе пув ТПгс Туг 20 25 Зо

А1їа Меє Бек Тгр УМаі Агуд біп Аза Рго б1у Агку с1у ІТей бій Тер Уаї1ї 35 40 45 зек біу Іїе Бек сіу Бек сіу Бек ТПг Бек Тук Туг Аїа Авр Бек Уаї зо зо бо пув б1у Агуд Рпе ТПг Іїе Бег Агуд АвБр Ап о Тук Ппув Ппув ТПг Гец 5ег 65 70 75 8о тей біп Мес Ап о бБег Гец Агуд Аїа біц Авр ТПг Аза Уаї Тук Тук Сув 85 90 535

А1а гей Авр чІ1е Мес Аїа ТПг о Уаї сі1у б1у Геш Рпе Авп АБп Тгр 01У 100 105 110 сіп с1іу ТПг Гец Уаї ТПг Уаї Бек Бек 115 120 «2105 243 «2115 24 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність 60 «2205 «223» синтетична

«4005» 243 чддаєеєсассс Есаааасста Сдсс 24 «2105» 244 «2115 8 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005» 244 сіу Рпе ТПг Рпе Ппув ТПг Туг А1а 1 5 «2105» 245 «2115 24 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005» 245 ассадсддєа деЕддкадсас сьса 24 «2105» 246 «2115 8

Зо «212» БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «400» 246

І1е Бек б1у Бек бі1у Бек ТПпПг б5ег 1 5 «2105» 247 «2115» 42 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005» 247 чЧдсасЕддаєа єааєддсаас доасадчдададє сЕсЕссааса ас 42 «2105» 248 «2115 14 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «400» 248 бо А1а гей Авр чІ1е Мес Аїа ТПг о Уаї сі1у с1у Гей Робе Авп Авп 1 5 10

«2105 249 «2115 324 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 249 чаааєсдеЕде єдасудсадеіс Сссаддсасс сЕдЕсЕсЕрдс сессаддудда аададссасс 60 сЕсЕССсдса доададссадсса дадедеЕсадс адсадссасс гадсседдра ссадсадааа 120 ссеЕддссадд сеЕсссаддсесе ссеЕсаєстсає ддсдсаєсса дсадддссас Сддсаєссса 180 часаддеЕєса деЕддсадсдуд дЕСсдуддаса дасессасес гсассаєсад садассддад 240 ссєдаадаєє сеЕдсадсдса Есасєдссад садсаєсдуда дсеєсассеєвуд дасдєсєсддс 300 саадддасса аддсддааає сааа 324 «2105 250 «2115 108 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 250 сій Іїе Уаі1ї Гец ТПг біп Бек Рго біу ТПг Ггец бек Гей бек Рго с01Уу 1 З 10 15 сій Агуд Аїа ТпПг Гей бБег Сув Агуд Аїа Бек біп Бек Уаї Бек Бек Бег

Зо 20 25 Зо

Тук гей Аїа Тгр Ту сіп біп пув Рго бі1у біп Аз1а Рго Агуд Іецй Іецй

І1е Тук б1у А1ї1а Бек Бек Агуд Аїа ТпПг б1у І1е Рго АБр Агуд РПпе 5ег зо зо бо 35 сі1іу Бек сб1у Бек с1у ТПг Авр Рпе ТПг Гей ТПг І1е 5ек Агд Гей с1ци 65 70 75 8о

Рго бій АвБр Рпе А1їа Маї Туг Туг Сув біп біп Тук с1у Бек Бек Рго 85 90 535

Тер ТПгЕ Рпе сіу сіп сіу ТПг пув Маї бій тІ1е пув 40 100 105 «2105 251 «2115 21 «2125 ДНК 45 «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 251 сачдадсдЕса дсадсадсста с 21 «2105 252 «2115 7 «212» БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична 60 «4005 252 сіп Бек Уаії Бек Бек Бек Тукг 1 З «2105 253 «2115 9 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 253 чаєЕдсаєссс З «2105 254 «2115 З «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 254 сіу Аїа 5ег 1 «2105 255 «2115 27 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 255 садсадстаєд деадсеєсасс сгддасд 27 «2105 2556 «2115 9 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична

«4005 255 сіп біп Ту сіу Бек Бек Рго Тер ТПг 1 З «2105 257 «2115 360 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 257 саддеЕдсадс гддЕдсадеЕс СдоаддсеЕдад дсЕдаадаадс седддЕссеЕсС даєдааддес 60 бо ЄссеЕдсаадд сЕсссдддадд сассеєєсадс адасасаста єсадссдуддс дсдасаддес 120 ссгЕддасаад доассєдадед даєддададдад ассаєссста ЕСсСЕсСтдудсас адсааассас 180 дсасасаадс гссадддсад адссасдассї ассасуддасуд аасссасдад сасадсстас 240 асддадсеЕда дсадсссдад ассєдаддас асддссудтає аєсаєєдсдс дададссссе 300 басасссдас аддддеасеЕє сдаєсєссду ддссудєбдудса ссстддссас судЕссссеса 360 «2105» 258 «2115 120 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 258 сіп Уаі1 сбіп Гец Уаі сіп Бек с1іу Аїа сіц Уаї Ппув Ппув Рго б1у Бег 1 З 10 15 зек уаї пув уаї Бек Сув пув Аза Бек біу бі1у ТПг Рпе бБег Агуд Нів

Зо

ТПгЕ І1е Бек Тгр Уаі Агуд сіп Аїа Рго сіу сіп сі1у Гей бій Тгр Меє 20 сіу б1у чІ1е чІ1е Рго І1е Рбе с1у ТПг АТа Ап Туг Аїа Нів Ппув РІе зо зо бо сіп б1у Агуд Уаі1 ТПг І1їе ТПг ТПг Авр біц Бек ТПг Бек ТПг Аїа тТукг 65 70 75 8о

Мес біц Ггец бек бек Ггец Агуд Бек сій Авр ТПг Аїа Уаї Туг Тук Сув 25 85 90 935

Аза Агуд Аза Рго Туг ТПг Агуд біп б1у Туг Рпе Авр Тей Тгр 01у Аг4д 100 105 110 сіу ТпПг Гец Уаї ТПг Уаї Бек Бег 115 120

Зо «2105» 259 «2115 24 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність 35 «2205 «223» синтетична «4005 259 40 ддаддсассе Есадсадаса баси 24 «2105» 260 «2115 8 «2125 БІЛОК 45 «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005» 260 сі1у б1у ТпПг Рпе бек Агуд Нів ТЕГ 1 З «2105» 261 «2115» 24 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 60 «223» синтетична

«4005 261 ассаєссста ЕСсСЕСЕгЕдудбас адса 24 «2105 262 «2115 8 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 262

І1е чІ1е Рго І1е Рпе с1у ТПг А1а 1 З «2105 263 «2115 39 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 263 чдсдададссс сЕСаєтасссу асадддудєас єсСсддассьс 9 «2105 264 «2115 13 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 264

Аза Агуд Аза Рго Туг ТПг Агуд біп б1у Туг Рпе АвБвр Іецй 1 З 10 «2105 265 «2115 339 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 265 часаєсдеЕда Едасссадес Сссадасссс сгддссдеЕдсЕ сеЕссдддсда дадддссасс 60 ассаассдса адсссадсса дадеЕдеЕєсса сбасадсссса асаасаадаа сгтассстадсе 120 бддбассадс адааассадд асадсссєсст аадстасєса єЕсвассдддс аєстасссддуа 180 чааєссдудадд Ессстдассу асесадеддс адсудддеЕсьуд ддасадасєє сасесесасс 240 ассадсадсс гдсаддсєда адаєдеЕддса деЕстассасоі деісадсаада Сгтасадтасе 300 ссдЕддасдс Есддссаадда дассааддсд даааєсааа 339 «2105» 266 «2115 113 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність 60 «2205 «223» синтетична

«4005» 266

Авр І1е УМаї Меє ТПг біп Бек Рго Авр Бек Іей Аза Уаї Бек їешй Щ1Уу 1 5 10 15 бі Агуд Аза ТПгс о чІ1е Ап о Сув Ппув бБег Бек біп Бек Уаї Іеи Туг 5ег 20 25 30 век АвБп АвБп оГпув Ап о Туг Гец Аїа Тер Тук біп сбіп Ппув Рго с1у сіп 35 40 45

Рго Рго пуб Гей тей І1е Туг Тгр А1ї1а Бек ТПг Агуд бій Бек сіу Уаї1ї 50 55 бо

Рго АБр Агуд Рпе Бек біу Бек бі1іу Бек б1у ТПпг АвБр Рпе ТПг Іецй ТПг 65 70 75 80

І1е Бек Бек гей біп А1ї1а б1й Авр Уаії Аза Уаї Туг Тугк Сув біп сбіп 85 90 935

Авр Тук Бек ТПг Рго Тер ТПг Рпе сіу бі1іп с1у ТПг пув Уаї сб1ш т1е 100 105 110

Туз «2105» 267 «2115 36 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 267 сачадеЕдеЕєє бєаєсасадсес саасаасаад аассас Зб

Зо «2105» 268 «2115 12 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005» 268 сіп Бек Уаї Гей Туг Бек Бек АБп Авп Гув Авп о Туг 1 5 10 «2105» 269 «2115 9 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005» 269

Едддсаєссь З «2105 270 «2115 З «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 60 «223» синтетична

«4005 270

Тгр Аїа 5ег 1 «2105 271 «2115 27 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 271 садсаадаєс асадтасссс деЕддасд 27 «2105 272 «2115 9 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 272 сіп б1іп Авр Туг Бек ТПг Рго Тгр тТіПг 1 З «2105 273 «2115 354 «212» ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 273 саддеЕдсадс гддЕдсадеЕс СдоаддсеЕдад дсдаадаадс седдддссЕс адедааддеЕє 60

ЕссеЕдсаадуд сасєстддаєта сасссссасс аастассаєба басасеєдддЕ дсдасаддсс 120 ссгЕддасаад доассєдастд даєдддаассї ассаасссвд деЕддЕддсаа сасааассас 180 дсасадаадсї СссеЕдддсад адссассаєд ассадддаса сдеЕссасдас сасадеЕСтТас 240 асддадсеЕда дсадсссдад ассєдаддас асддссатає аєєсаседсдс дададаааас 300 гддаасеЕсеЕє асеЕсєєдасаа седдддссад ддаассстдд Єсассодссес ссса 354 «2105 274 «2115 118 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 274 сіп Уаі1 сбіп Гец Уаі сіп Бек с1у Аїа сбіц Уаї Ппув пув Рго с01у Аї1а 1 З 10 15

Зек Ма1! Ппув Маї Бек Сув пув А1ї1а Бек с1у Ту ТПг Рпе ТПг Авп Туг 20 25 Зо

Ту І1е Ні Тер Уаії Агуд біп Азїа Рго сб1у сіп с1у Гей Авр Тер Меє 35 40 45 сіу І1їе Іїе АБп Рго сіу сіу с1у АвБп ТПг Ап Туг Аїа біп Гпув РПе бо зо зо бо теп б1у Агуд Уаі1 ТПг Мес ТПг Агуд Авр о ТПг Бек ТПг ТП Тс Уаї тукг

65 70 75 во

Мес біц Ггец бек бек Ггец Агуд Бек сій Авр ТПг Аїа ч11е Туг Тук Сув в5 90 935

Аза Агд бій АБп Тер Авп о бБег Туг Рпе Авр АБп Тгр б1у біп с1у ТПпг 100 105 110 пеп Уаї ТПг Уаї Бек Бег 115 «2105 275 «2115 24 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 275 чддасасассс Есассааста стає 24 «2105 276 «2115 8 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 276 сіу Тук ТПг Рпе ТПг Авп о Тук Тукг 1 5 «2105 277 «2115 24 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 277 ассаасссвд деЕддЕддсаа саса 24 «2105 278 «2115 8 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 278

І1е АБп Рго б1у б1у б1у АБп ТПпг 1 5 «2105 279 «2115 33 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність 60 «2205 «223» синтетична

«4005 279 чдсдададааа асеєддаасес єсасеЕссдас аас з «2105 280 «2115 11 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 280

Аза Агд бій АБп Тер Авп бБег Туг Рпе АБвБр Авп 1 З 10 «2105 281 «2115 339 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 281 часаєсдеЕда Едасссадес Сссадасссс сгддссдеЕдсЕ сеЕссдддсда дадддссасс 60 ассаассдса адсссадсса дадеЕдеЕєсса сбасадсссса асаасаадаа сЕЕсСсСтадсе 120

ЕддЕассадс адааассадуд асадссессї аадсеєдсеЕса ЕЕсСаседддс асссасссдду 180 чааєссдудадд Ессстдассу асесадеддс адсудддеЕсьуд ддасадасєє сасесесасс 240 аєссадсадсс ЄдсаддсеЕда адаєдеддса сеєсастасе дессадсааса Стаєддєдсее 300 ссдЕддасдс Есддссаадда дассааддсд даааєсааа 339 «2105 282 «2115 113 «212» БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 282

Авр І1е УМаї Меє ТПг біп Бек Рго Авр Бек Іей Аза Уаї Бек їешй Щ1Уу 1 З 10 15 сій Агуд Аїа ТпПг І1е АвБп о Сув Ппув Бек Бек біп Бек Уаї Ггец Тук Бег 20 25 Зо век АвБп АвБп оГпув Ап о Рпе Гец Аїа Тер Тук біп сбіп Ппув Рго с1у сіп 35 40 45

Рго Рго пуб Гей тей І1е Туг Тгр А1ї1а Бек ТПг Агуд бій Бек сіу Уаї1ї зо зо бо

Рго Авр Агкуд Рпе бек с1іу Бек с1у Бек б1у ТПг Авр Рпе ТПг Гей ТіПг 65 70 75 8о

І1е Бек Бек гей біп А1ї1а б1й Авр Уаї Аза їей Туг Туг Сув біп сбіп 85 90 535

Тук Тук бі1у Аїа Рго Тгр ТПг Рпе сіу сіп сіу ТПг пув Уаї сій І1е 100 105 110

Туз «2105 283 бо «2115 36 «2125 ДНК

«213» Штучна послідовність «223» синтетична «4005 283 сачадеЕдеЕєє бєаєсасадсес саасаасаад аасесс Зб «2105» 284 «2115 12 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005» 284 сіп Бек Уаі1і Ггец Тук Бек Бек АвБп Авп о ГПув Ап РІПе 1 5 10 «2105 285 «2115 9 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005» 285

Єдадсаєсь З «2105» 286 «2115 З «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «400» 286

Тгр Аїа 5ег 1 «2105 287 «2115 27 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 287 садсаастаєс аєддеЕдсссс дЕддасд 27 «2105» 288 «2115 9 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність бо «2205 «223» синтетична

«4005 288 сіп біп Туг Ту с1у Аза Рго Тер ТПг 1 З «2105 289 «2115 357 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 289 саддеЕссадс ЄддеЕдсадесс єддддсЕдад дсдаадаадс сЕдддЕссеЕс даєсдааддес 60

ЕссеЕдсаадд сЕсСстддадд сасссссадс адстасасвта гсааседддЕ дсдасаддсс 120 ссгЕддасаад доассєдадед даєддададдад ассаєссста ЕСЕсСтдудсає адсааассас 180 дсасадаадс гссадддсад адессасдассї ассасуддасуд аасссасдаа сасадссстас 240 асддадсеЕда дсадсссдад ассєдаддас асдддссаєес аєсаседсдс дададсдада 300 баєдчуаєєсод дчадеЕсаєда стассдодддс саддадаассс гддЕсассує сеЕсссса 357 «2105 290 «2115 119 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична

Зо «4005 290 сіп Уаі1 сбіп Гец Уаі сіп Бек с1іу Аїа сіц Уаї Ппув Ппув Рго б1у Бег 1 З 10 15 зек Уаі1 Ппув Уаі1і Бек Сув Ппув Аїа Бек сбіу сбіу ТПг Рпе Бек Бек Тукг 20 25 Зо

ТПг І1І1е Авп Тер Уа1 Агуд біп Аїа Рго сіу бі1іп с1у Гей сі Тгр Мес 35 40 45 сіу с1у Іїе Іїе Рго Іїе Рпе сС1іу І1їе Аїа Ап Туг Аїа сбіп Гпув РПе зо зо бо сіп б1у Агуд Уаі1 ТПг І1їе ТПг ТПг Авр біц Бек ТПг АБп ТПг Аїа тТуг 65 70 75 8о

Мес біц Ггец бек бек Ггец Агуд Бек сій Авр ТПг Аїа ч11е Туг Тук Сув 85 90 535

Аза Агуд Аза Агуд Туг б1у Бек б1у Бек Туг Авр Туг Тер 01у б1п Щ1Уу 100 105 110

ТПпг гец Уаї ТіПг Уаї бек 5Бег 115 «2105 291 «2115 24 «212» ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 291 чддаддсасссї Есадсадста басес 24 «2105 292 60 «2115 8 «2125 БІЛОК

«213» Штучна послідовність «223» синтетична «4005 292 сіу сб1і1у ТПг Рпе Бек Бек Тук ТІПг 1 5 «2105 293 «2115 24 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 293 ассаєссста ЕСЕ ддсає адса 24 «2105 294 «2115 8 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 294 чІ1е І1їе Рго І1їе Рбе сС1у І1е А1а 1 5 «2105 295 «2115 36 «212» ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 295 чдсдадчадсда часаєдаєєс доаддчадеЕсає дассас Зб «2105 296 «2115 12 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005» 296

Аза Агуд Аїа Агуд Ту б1у Бек бі1у Бек Туг Авр Туг 1 5 10 «2105 297 «2115 339 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність бо «2205

«223» синтетична «4005 297 часаєсдеЕда Едасссадес Сссадасссс сгддссдеЕдсЕ сеЕссдддсда дадддссасс 60 аєсаасєдса адсссадсса дадеЕдеЕсєса гасассесса асааєсаадаа стасеєтадсее 120

ЕддЕассадс адааассадуд асадссессї аадсеєдсеЕса ЕЕсСаседддс асссасссдду 180 чааєссдудадд Ессстдассу асесадеддс адсудддеЕсьуд ддасадасєє сасесесасс 240 ассадсадсс гдсаддсєда адаєдеЕддса деЕстассасоі деЕсадсаата Сгасаарасе 300 ссаєддасдє гсддссаадда дассааддсд даааєсааа 339 «2105 298 «2115 113 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 298

АБвр чІ1е Маї Меє тТПг о сіп Бек Рго Авр бек Ггецш Аїа Уа1ї Бек теп 0Щ1Уу 1 З 10 15 сій Агуд Аїа ТпПг І1е АвБп о Сув Ппув Бек Бек біп Бек Уаї Ггец Тук Тс 20 25 Зо век АвБп АвБп оГпув Ап о Туг Гец Аїа Тер Тук біп сбіп Ппув Рго с1у сіп 35 40 45

Рго АБр Агуд Рпе Бек біу Бек бі1іу Бек б1у ТПпг АвБр Рпе ТПг Іецй ТПг 65 70 75 8о

І1е Бек Бек тей біп Аїа сій Авр Уаї А1ї1а Уаї Тує Тук Сув бі1іп сіп 85 90 535

Тук Тук Авп о ТПг Рго Тгр ТПг Рпе сіу сіп сіу ТПг пув Уаї сій І1е 100 105 110

Туз «2105 299 «2115 Зб «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 299 сачадеЕдеЕєє баєсасассеєс саасаасаад аассас Зб «2105 300 «2115 12 «212» БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 300 сіп Бек Уаі1 Гецшц Тук ТПг Бек АвБп Авп о Пув Ап о Туг 1 З 10 60 «2105 301 «2115 9

«2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 301

Едддсаєссь З «2105 302 «2115 З «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 302

Тгр Аїа 5ег 1 «2105 303 «2115 27 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична

Зо «4005 303 садсаастаєс асаасасссс агддасд 27 «2105 304 «2115 9 «212» БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 304 сіп біп Тук Тук АвБп о ТПг Рго Тер ТП 1 З «2105 305 «2115 360 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 305 садаєсасссї гдааддадеіс Сддссстрасу ссддсдааас ссасасадас ссесасуссу 60 ассеЕдсассє ЄсессоддЧаєЕ сесасеєсадс асеЕааєддад єдоадЕдеЕдад сЕдчаєссує 120 садсссссад даааддсссе ддадсддссєс ддааєсаєеєс аєсдддааєда Сдаєсаадсдс 180 басадсссає сеЕссдаддад садасссасс ассассаадуд асассессаа ааассаддесд 240 дЕссЕсСасаа сдассаасає ддассстдсд дасасадсса сасаєстастід Сдсасасада 300 дассЕСЕЕСсСу даддеЕсддеЕє сдассссвду ддссадддаа сссіддссас судЕссссеса 360 60 «2105 306

«2115 120 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 306 сіп І1їе ТПпг Гецшп Ппув сіц Бек с1іу Рго ТПг Гец Уаї Ппув Рго ТПгЕ сіп 1 5 10 15

ТПг гей ТПг гей ТПг о Сув ТПг Ре Бек б1і1у Рпе бБег Гей Бек ТПг Авп 20 25 30 сіу Уаі1 с1у Уаі1 с1у Тер І1ї1е Агуд біп Рго Рго сіу Ппув Аїа Гец с1іц 35 40 45

ТЕр печш с1у Іїе І1їе Тук Тер АБп Авр Авр пубвБ Агуд Туг Бек Рго 5Бег 50 55 бо тей Агуд Бек Агуд Гец ТПг о І1е ТПг о пув Авр ТПг Бек Ппув Ап сіп Уаї 65 70 75 80 уаї гец ТПг Мес ТП Азп Мес Авр Рго Уаі Авр ТПг Аза ТПг Тугк Туг 85 90 935

Сув А1а Нів Акуд с1у гейш Рпе сіу сіу Тгр Рпбе АвБр Рго Тер СШ1у Ссіп 100 105 110 сіу ТпПг Гец Уаї ТПг Уаї Бек Бег 115 120 «2105 307 «2115 30 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність

Зо «2205 «223» синтетична «4005 307 дадЕЕсЕсас Есадсастаа Еддадесдаді 30 «2105 308 «2115 10 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 308 сіу Рпе Бек Гей Бек ТПг Ап сіу Уаі1і щЩ1У 1 5 10 «2105 309 «2115 21 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 309 асстасєссдда аєдаєдаєаа д 21 60 «2105» 310 «2115 7

«2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 310

І1е Ту Тер АБп Авр Авр ув 1 З «2105 311 «2115 Зб «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 311 дсасасадад дссЕсЕсССсдуд аддсєсдЧдеєсс дасссос Зб «2105 312 «2115 12 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична

Зо «4005 312

Аза нів Агуд с1і1у тей Рпе сб1у с1у Тер Рпе Авр Рго 1 З 10 «2105 313 «2115 321 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 313 часаєссада гдасссадес Сссасссссс сгдЕСсСсдсає седсаддада сададссасс 60 ассасссдсс доадсаадсса дадсаєтадс аддртассстаа аєсдудраєса дсадааасса 120 чдадааадссс сгаассссст дассеЕєсдсе дсаєсссадеЕє єдсааадсдуд ддссссаєса 180 аддеЕєсадед дсадеддаєс Сдоддасадає ссСсасссеса ссассадсад СсеЕдсаасся 240 чаачдасєсєвуд саасеЕврасеє сеЕдссаасад адссасааса ссссудсссас СЕЕСддсдда 300 чдадассаадд гддадаєсаа а зЗ21 «2105 314 «2115 107 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 314

Авр чІ1е біп Меє ТПг обіп Бек Рго Бек бБег Іей Бек Аза Бек Уаі1і Щ1У бо 1 З 10 15

Авр Ага Маї ТПг І1е ТПпг Сув Агу Аз1а Бек біп Бек І1е бБег Агудд Туг

20 25 30

Те АБп Тер Тук сбіп сіп Ппув Рго біу Ппув Аза Рго Ап Гей ГІец Іїе 35 40 45

Рпе А1їа А1їа Бек Бек гей біп Бек бі1у Ма1і Рго Бег Агуд Рпе бБег ШУ зо 55 бо зек біу Бек сіу ТПг Авр Рпе ТПг Гец ТПг І1е Бек Бек Гец сбіп Рго 65 70 75 80 сій Авр Рпе Аїа ТПг Тук Рпе Сув біп біп Бек Тукг АвБп о ТПг Рго Гей 85 90 935

ТЕ Рпе с1у с1у бі1у ТПг пув Маї сій І1їе Гув 100 105 «2105» 315 «2115 18 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 315 сададсаєса дсаддаеає 18 «2105 316 «2115 6 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 316 сіп Бек Іїе Бек Агдщ Тукг 1 5 «2105» 317 «2115 9 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 317 дсЕдсаєсс З «2105» 318 «2115 З «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 318

А1їа Аза 5ег 1 «2105» 319 60 «2115 27 «2125 ДНК

«213» Штучна послідовність «223» синтетична «4005 319 саасададес асаагасссс дсесасе 27 «2105 320 «2115 9 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 320 сбіп біп Бек Туг АвБп о ТПг Рго Гец ТІПг 1 З «2105 321 «2115 З6б6 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 321 чаддєдсадс ЄддЕддадесс єдддддаддс ЕсоддЕасадс содддддддЕсС ссеЕдадассс 60

ЕссЕдсдсаа ЕСсССсСтуддаєє сасссєстадуа адесстасдсса ЕдасседддЕ ссдссаддсе 120 ссадддаадуд соассддадед ддЕсссадессї ассадсдудна дсоддеЕддсаа сасасассас 180 чдсадассссуд гдаадддссуд дЕєсассудсс сссададаса аєсссаддаа сасдсеєдсає 240 сгдсаааєда асадсссдад адссдаддас асдуддссудртає арЕссседесєс дааадеЕєдса 300 дсадстєааса аєєсастаєса судсеЕсвсддас дсЕссддадсес аадддассас ддассассуєс 360 ссеса Зоб «2105 322 «2115 122 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 322 сі Уаі1 сіп Гец Уаї сіц Бек б1у сбіу б1у Ггец Уаі сбіп Рго сіу с01У 1 З 10 15 зек Гей Агуд Гей Бек Сув Аїа Іїе Бек біу Рпе ТПг Рпе Агуд Бек Тукг 20 25 Зо

Аза Меє ТПг Тер УМаі Агуд біп Аза Рго б1у ув Аза ІТей бій Тер Уаї1ї 35 40 45 зек Уаі1 Іїе Бек сіу Бек сбіу сб1у Авп ТПг Тук Туг Аїа Авр Бек Уаї зо зо бо пув б1у Агд Рпе ТПг Уаї 5Бег Агуд Авр Авп бБег Агуд АБп оТПг Гец Туг 65 70 75 8о тей біп Мес Ап о бБег Гец Агуд Аїа біц Авр ТПг Аза Уаї Тук Ропе Сув 85 90 535 зек пув Уаі1і Аїа Аїа Аїа Авп Ап Тук Тукг Туг Аїа Ггец Авр Уаї Тгр бо 100 105 110 сіу біп сіу ТПг ТПг Уаї ТПг Уаї Бек Бек

115 120 «2105 323 «2115 24 «212» ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 323 чддаєєсассс ЕсаддадеЕта Сдсс 24 «2105 324 «2115 8 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 324 сіу Рпе ТПг Рпе Агуд Бек Туг А1а 1 5 «2105 325 «2115 24 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 325 авсадеЕддра дсддєддсаа саса 24 «2105 326 «2115 8 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 326

І1е Бек б1у Бек б1у б1у АБп ТПпг 1 5 «2105 327 «2115 45 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 327

Есдааадеєєд садсадссаа Єааєсассає сасоасеєссоод асаєс 45 бо «2105 328 «2115 15

«2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 328 зек пув Уаі1і Аїа Аїа Аза Авп Ап Туг Тук Туг Аїа Ггецй Авр Уаї 1 З 10 15 «2105» 329 «2115 336 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 329 часаєєдеЕда Єдасссадсс Ессасесьсс сеЕдсссуєса сссседдада дссоддссЕсс 60 ассЕСстсдса ддсстадсса дадссесссд сасадсааєд дасасаадста СЕєОдаєсду 120 бассеєдсада адссадддса деЕсСЕссасаа сСссеЕдаєсо аЕгссуудеЕєєс саассдддсес 180

ЕссддддеЕсс сеЕдасаддеє садсддсаді ддаєсаддса садаєєссас асеЕдааааєс 240 адсадчадеду аддсєЕдадда СЯєсддЧЧЕє састассдса гдсаадссстя асааасессу 300

Єасасссєсєєд дссаддддас саадсєддад ассааа 336 «2105 330 «2115 112 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 330

Авр І1е УМаї Меє ТПг біп Бек Рго Іеий Бек тей Рго Уаі ТПпг Рго Щ1У 1 З 10 15 б1п Рго А1їа Бек І1їе Бек Сув Агуд Бек Бек біп Бек Іец Іецй Нів бБег 20 25 Зо

Авп ос1іу Тук Ппув Тук теп Авр Тгр Туг Гей біп Ппув Рго с1у біп 5ег 35 40 45

Рго біп пей гей І1е Туг тей Уа1ї Бек АвБп Агуд Аїа Бек с1іу Уа1і1 РгОо зо зо бо

Авр Ага Рпе Бек біу Бек біу Бек бі1у ТПпг Авр Рпе ТПг Іей Гув Ше 65 70 75 8о век Агуд Уаі1 сбіц Аїа сіц Авр Уаї сіу Уаї Тук Тук Сув Мес сіп А1а 85 90 535 тей біп ТПг Рго Тук ТПг Рпе с1у біп сбіу ТПг Ппув Гецш біц І1е Гув 100 105 110 «2105» 331 «2115 з3 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005» з31 бо сададссєсс гдсагадсаа Єддасасаач бас 33

«2105 332 «2115 11 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 332 сіп Бек Ггец Ггецп Нів Бек Авп о с1у Тук Ппув Туг 1 5 10 «2105 333 «2115 9 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 333

ЕСЯадЕСЕСЕ З «2105 334 «2115 З «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 334 пе Уаї Бег 1 «2105 335 «2115 27 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 335 абдсаадсес басааасесс дсасасе 27 «2105 336 «2115 9 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 336

Мес сбіп Аза Гец біп ТПг Рго Тук ТІПг 1 5 «2105 337 бо «2115 381 «2125 ДНК

«213» Штучна послідовність «223» синтетична «4005 337 саддеЕдсадс гдодсддадеЕс Сдоадддаддс деЕддЕссадс седддаддес сседадасеіс 60

ЕссЕЧдсдЕад сдсстдддаєє сасссссаді аастасдудса гдсаседддЕ ссдссаддсе 120 ссаддсаадуд дассддачадед ддєддсадссї асаєддааєд аєддаадсаа Сааасассає 180 дсадасеєссуд Єдаадддссуд аєссассаєс Ессададаса асєссаадаа сасудсеЕдбає 240 сеЕссаадеда дсадсссдад адссдаєдас асдуддсєдтає аєєсаседсдс дадддасдда 300 чаддЕсдЧдаасє асадсадсес дааєсасаас бастасудеЕсС гддаєдестд дддссааддуа 360 ассасддеЕса ссудссесстс а зв1 «2105 338 «2115 127 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 338 сіп Уаі1 сбіп Гец Уаі сіц Бек сі1у сіу сіу Уаї Уаї біп Рго с01у Агд 1 З 10 15 зек Гей Агуд Гей Бек Сув Уа1і Аїа Бек сбіу Рпе ТПг Рпе Бек Ап Тукг 20 25 Зо сі1у Меє Нів Тер уаї Агу сбіп Аза Рго сіу туз бі1у теп бій Тер Уаї 35 40 45

А1їа уаї чІ1е Тгр АБп АБр бі1у Бек Авп Ппув Туг Туг Аїа Авр Бек Уаї зо зо бо пув б1у Агуд Рпе ТПг Іїе Бег Агуд АвБр Ап Бек Пув Ап о ТПг Гец Туг 65 70 75 8о тей біп Уаі1 Бек Бек Ггец Агуд Аїа Авр Авр ТПг Аїа Уаї Тук Тук Сув 85 90 535

А1ї1а Агд Авр сб1у бій Маї бій Туг Бек бБег Бек Авп Туг Авп о Туг Туг 100 105 110 сіу Гей Авр Уаі1 Тер сіу сіп сіу ТПг ТПг Уаї ТПг Уаї Бек 5Бег 115 120 125 «2105 339 «2115 24 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 339 ддасеєсассе Есадеаасста Єддс 24 «2105 340 «2115 8 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична 60 «4005 340 сіу Рпе ТПг Рпе Бег Ап Ту Щ1У

1 З «2105 341 «2115 24 «212» ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 341 асаєддааєд аєддаадсаа Сааа 24 «2105 342 «2115 8 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 342

І1е Тер АБп Авр б1у Бек Авп Гуз 1 З «2105 343 «2115 60 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність

Зо «2205 «223» синтетична «4005 343 дсдадддасуд дададдєсда асасадсадс Есдаастаса ассассасдд Єссодасуєс 60 «2105 344 «2115 20 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 344

А1ї1а Агд Авр сб1у бій Маї бій Туг Бек бБег Бек Авп Туг Авп о Туг Туг 1 З 10 15 сіу Гей Авр Уаї1ї 20 «2105 345 «2115 321 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 345 бо чдасаєссада Єдасссадесс Ессаєссвсс сеЕдсссдсає сеЕдсаддада сададеЕсасс 60 ассасссдсс аддсдадсса ддасаєтадс аастассстаа аєсдудраєса дсадааасса 120 чоадааадссс срааасссст даєссасдає дсаєссааєс гддааасадда ддеЕсссаєса 180 аддеЕєсадед даадесддаєс Сдддасадає сссасессса ссассадсад ссеЕдсадссе 240 чаачасаєєд саасавгаєста седссаасад басєдаєдаєс Есссдаєсас сЕЕСддссаа 300 чдадасасдас гддадаєсаа а зЗ21 «2105» 346 «2115 107 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005» 346

Авр Ага Маї ТПг І1е ТПг Сув біп А1а Бек бі1іп Авр І1е б5Бег Авп Туг

Зо

Те АБп Тер Тук сбіп сіп Ппув Рго сбіу Ппув Аїа Рго Пув Гец Гей Іїе 20 35 40 45

Тук Авр Аїа бек Авп Гей сій ТПг о біу Маї Рго бБег Агуд Рпе бБег ШУ зо зо бо зек біу Бек сіу ТПг Авр Рпе ТПг Рпе ТПг І1е Бек Бек Гец сбіп Рго 65 70 75 8о 25 січ Авр ч11е Маї ТПс Тук Тук Сув біп сб1іп Туг Авр АвБр Гей Рго І1е 85 90 535

ТПЕ Рпе сіу сіп сіу ТПг Агд Гей бій І1е Гуз 100 105

Зо «2105» 347 «2115 18 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005» 347 саддасаєса дсаастає 18 «2105» 348 «2115 6 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005» 348 сіп Авр ч11е Бек Авп Туг 1 З «2105» 349 «2115 9 «212» ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична 60 «4005» 349 чаєдсаєсс З «2105 350 «2115 З «212» БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 350

Авр Аа 5ег 1 «2105 351 «2115 27 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 351 саасадстаєд аєдаєссссс даєсасс 27 «2105 352 «2115 9 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність

Зо «2205 «223» синтетична «4005 352 сіп б1іп Ттук Авр Авр ей Рго І1е ТПг 1 З «2105 353 «2115 375 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 353 чаддеЕдсадс гдодсддадеЕс Сдоадддаддс сСсддасасадс седдддддЕс сседадасеіс 60

ЕссеЕдсдсад ссесстуддаєє сеЕСсССЕЕСсСає аасссдсса гдааседдде ссдссаддсе 120 ссадддаадуд дассддадед ддЕсссадессї ассассдудна деЕддсассад сасасассас 180 дсадасеєссуд Єдаадддссуд дЕссассаєс Ессададаса асєссаадаа аасудстасає 240 сгдсаааєда асадсссдад адссдаддас асддссудтає аєєсаседсдс дааадаєсду 300 частаєдаєс агадеЕддеЕєс сСтассасаас сєддЕссдасс сссддддсса дддаасссстуд 360 дЕсассдЕсе ссеса 375 «2105 354 «2115 125 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність 60 «2205 «223» синтетична

«4005» 354 сі Уаі1 сіп Гец Уаї сіц Бек б1у сбіу б1у Ггец Уаі сбіп Рго сіу с01У 1 5 10 15 зек Гей Агуд Гецш Бек Сув Аїа Аза Бек с1у Рпе Бек Рпе Нів Авп Ріє 20 25 30

Аза Меє АБп Тгр УМаі Агуд біп Аза Рго б1у Ппув с1у Гей бій Тер Уаї1ї 35 40 45 зек уаї чІ1е тТПпг сі1іу Бек с1у ТПг Бек ТПг Нів Туг Аза Авр Бек Уаї зо 55 бо пув б1у Агуд Рпе ТПг Іїе Бег Агуд АвБр Ап Бек Пув Пув ТПг Гец Туг 65 70 75 80 тей біп Мес Ап о бБег Гец Агуд Аїа біц Авр ТПг Аза Уаї Тук Тук Сув 85 90 935

А1їа пув Авр Агуд б1у Туг Авр Туг Бек б1у Бек Туг Туг Авп Тгр РПе 100 105 110

Авр Рго Тгр б1у біп б1у ТПг тей Уа1ї ТПпг Уаї Бек бБег 115 120 125 «2105 355 «2115 24 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 355 чдчавЕєсєсеЕссс ЕсСаєаастє сдесс 24

Зо «2105 356 «2115 8 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 356 с1у Рпе Бек Рпе Нів Авп РіПе А1а 1 5 «2105 357 «2115 24 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 357 ассассддбєа деЕддсассад саса 24 «2105» 358 «2115 8 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 60 «223» синтетична

«4005 358

І1е ТПг с1у Бек б1у ТпПг Бек ТпПг 1 З «2105 359 «2115 54 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 359 чдсдааачаєс доаодоастаєчдча Єсасадесдудеє єсеЕсассаса ассддеєссдда ссесс 54 «2105 З60 «2115 18 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 360

А1їа пув Авр Агуд б1у Туг Авр Туг Бек б1у Бек Туг Туг Авп Тгр РПе 1 З 10 15

Авр Рго

Зо «2105 З61 «2115 327 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 З61 часаєссада гдасссадес Сссасссссс сгдЕСсСсдсає седсаддада садааєссасс 60 аєсасеЕєдсс дадсаадеЕса чадсаєсадс адссасєсаа асєддаєбаєса дсадааасса 120 чадааадссс сргааасссст дарссєвдсс дсаєсаааєс гдсааадсудуа ддеЕсссаєса 180 аддеЕєсадед дсадеддаєс Сдоддасадає сссасссеса ссассадсад СсеЕдсаасся 240 чаачдасєсєвєд саасесаста сеЕдссаасад адесстасадса ссссарсстт агрсасеєсс 300 ддссссдудда ссааадсдда Саєсааа 327 «2105 362 «2115 109 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 362

Авр Ага І1е ТПг І1е ТПпг Сув Агу Аза Бек біп Бек І1е бБег Бек Туг 20 25 Зо

Те АБп Тер Тук сбіп сіп Ппув Рго сбіу Ппув Аїа Рго Пув Гец Гей Іїе 60 35 40 45

Рпе А1їа А1їа Бек АвБп гей біп Бек бі1у Ма1і Рго Бег Агуд Рпе бБег ШУ

50 55 6о зек біу Бек сіу ТПг Авр Рпе ТПг Гец ТПг І1е Бек Бек Гец сбіп Рго 65 70 75 во сій Авр Рпе Аїа ТПг Тук Тук Сув біп біп Бек Тук Бек ТПг Рго 5ег 85 90 935 тей Рпе ТПг Рпе сіу Рго сб1іу ТПг Ппув Маії Авр І1е Гувг 100 105 «2105 363 «2115 18 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 363 сачдадсаєса дсадсває 18 «2105 364 «2115 6 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005» 364 сіп Бек Іїе Бек Бек Тукг 1 5 «2105 365 «2115 9 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 365 дсЕдсаєса З «2105 366 «2115 З «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005» 366

Аза Аза 5екг 1 «2105 367 «2115 33 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність 60 «2205 «223» синтетична

«4005 367 саасададес асадстасссс асссттаєссс асе з «2105 З68 «2115 11 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 368 сбіп біп Бек Тук Бек ТПг Рго Бек Гец РПпе ТІПг 1 З 10 «2105 369 «2115 384 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 369 чаддеЕдсадс гдодсддадеЕс Сдоадддаддс сСсддсасадс седдадддЕс сседадасес 60

ЕссЕдсдсад ЕСсСсСтдддаєє сасссссаді адссасудада ЄдааседддеЕ ссдссаддсе 120 ссадддаадуд дассддааєуд ддеЕссСсасас ассадсадна деЕддаадсас сагасассас 180 чдсадасєсьд єдаадддссуд асссассасуд сссададаса асдссаадаа сеЕсасеєдбає 240 сЕдсаааєда асадсссдад адссдаддас асддсєсдЕєеє асвтассдсдс дададаєддадд 300 аасаєссдда деЕддЕсаєта Сдссдссстас басеЕєсстасу деасддасудє сеЕддддссаа 360 чдддассасдудд Есассудссес сеса 384 «2105 370 «2115 128 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 370 сі Уаі1 сіп Гец Уаї сіц Бек б1у сбіу б1у Ггец Уаі сбіп Рго сіу с01У 1 З 10 15 зек гецп Агд Гей бБег Сув Аїа Уа1ї бек с1у Рпе ТПг Рпе бБег б5Бег Туг 20 25 Зо сій Месє АвБп Тер Уаі Агуд біп Аза Рго сбіу Ппув б1у Гецш біц Тгр Уаї 35 40 45 зек Нів І1е Бек Бек Бек сіу Бек ТПг І1е Туг Туг Аза Авр Бек Уаї зо зо бо пув б1у Агуд Рпе ТПг Мес Бег Агуд Авр АвБп Аїа пуб Ап Бек Гец Туг 65 70 75 8о тей біп Мес Ап о бБег Гец Агуд Аїа біц Авр ТПг Аза Уаї Тук Тук Сув 85 90 535

Аз1а Агуд Авр о б1у АБп о чІ11е Тер бек сіу Туг Туг Аїа Аїа Тук Тук Ріе 100 105 110

Тук б1у Меє Авр Уаії Тгр с1у біп с1у ТПг ТПг Уаї ТПпг Уаї Бек бБег 115 120 125 60 «2105 371 «2115 24

«2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 371 чдчдаєєсассс ЕсадтадеЕта сад 24 «2105 372 «2115 8 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 372 сіу Рпе ТПг Рпе Бек Бек Тук с1ци 1 5 «2105 373 «2115 24 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 373 ассадсадса деддаадсас саєба 24 «2105 374 «2115 8 «212» БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 374

І1е Бек Бек Бек біу Бек ТПг І1е 1 5 «2105 375 «2115 63 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 375 дсдадчачаєд ддаастаєстд дадсдудеєсає саєдссудсесос ассасеєсста суддсаєддасєс 60 чЧЕс 63 «2105 376 «2115 21 «2125 БІЛОК 60 «213» Штучна послідовність

«223» синтетична «4005 376

Аза Агуд Авр б1іу АБп о ч11е Тгр Бек б1іу Туг Туг Аїа Аїа Тук Тук РПе 1 З 10 15

Тук б1у Месє Авр Уаї 20 «2105 377 «2115 336 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 377 часаєсдеЕда єдасссадас Сссасесссс ссассідеса сссеЕгддаса дссддсессссс 60 аєсЕСссьдса дасссадеЕса аадссесдсба сасадсдаєд дааааасста сЕсЧдадеЕєд 120 сЕссадсада ддссаддсса дссеЕссаада ссссеааєєес аєаадассєс СаассудеЕєсс 180

ЕсеЕддддЕсс садасадаає садсддсаді додддсаддда садаєєссас асеЕдааааєс 240 адсадддеЕд аадсеєдадда СдЕсддадеЕє сбастассдса гдсаадссуду асаасеєссяе 300 сддасдеЕєссуд дссаадддас сааддеддаа ассааа 336 «2105 378 «2115 112 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність

Зо «2205 «223» синтетична «4005 378

АБвр чІ1е Маї Меє тТпг осіп ТПг Рго тей бек Бек Рго Уа1 ТПг теп 0Щ1У 1 З 10 15 біп Рго А1їа бБег І1їе Бек Сув Агуд Бек Бек біп Бек Іец Уаї Нів бБег 20 25 Зо

Авр с1у Ппув ТПг Тугк Гей Бек Тгр тей біп бі1іп Агу Рго сС1у біп Рго 35 40 45

Рго Агд Пец гей І1е Туг пуб І1е Бек АвБп Агу Рпе бек сі1у Уа1і1 РгОо зо зо бо

Авр Ага І1е Бек б1у Бек б1у А1ї1а б1у ТПпг Авр Рпе ТПг Іей Гув Ше 65 70 75 8о век Агуд Уаї бі Аа сій Авр Уаї с1у Маї Тук Тук Сув Меє сіп А1а 85 90 535 уаї біп Рпе Рго Агуд ТПг Рпе сіу сіп сіу ТПг пув Маї бій І1е пув 100 105 110 «2105 379 «2115 33 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 379 сааадссеєсд басасадєда Єддааааасс бас з 60 «2105 380

«2115 11 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 380 сіп Бек Гей Уаї Нів Бек Авр с1у Ппув ТПг Туг 1 5 10 «2105 381 «2115 9 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 381 аачаєсессь З «2105 382 «2115 З «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 382 гув І1е 5ег 1 «2105 383 «2115 27 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 383 асдсаадсвєд гасааєсссс ссодасд 27 «2105 384 «2115 9 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 384

Меє б1п Аза Уаї с1іп Рбе Рго Агдщ тТіПг 1 5 «2105 385 «2115 366 60 «212» ДНК «213» Штучна послідовність

«223» синтетична «4005 385 саддеЕдсадс гасадсадед доддсдсадда ссдеЕсдаасс сЕсСсоуддадас ссеЕдссссес 60 ассеЕдсдсвд Ессаєдуаєдуа ддсссєсадеі дасєтассасс ддааєєддає ссдссадссс 120 ссадддаадуд дассдчдадед даєсдддадаа ассаассаєс дсддаадсас саассасаас 180 ссдЕсссЕСсСа ададесудсдеЕ сассаєєсса дссдасасує ссаадаасса дЕсСсССссстд 240 аддаєдадсеї сеЕдеЕдассдс сдсддасоадса дсЕдЕЯДтаєє аседедсдад аддададчає 300 басчасаєєс доааєдудсевта Ссассаддаа аааєддддасс адддаассся ддеЕсассуєс 360 ссеса Зоб «2105 З86 «2115 122 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 З86 сіп Уаі1 сбіп Ге сіп сіп Тер сС1у Аїа сіу Гец Гец Ап Рго Бек сбіц 1 З 10 15

ТПг Гецп Бек Гей ТПг Сув Аїа Маї Тук сб1у б1у Аїа РібПе Бек АБвр Туг 20 25 Зо

Тук Тгр АвБп о Тгр ч11е Агуд сіп Рго Рго сіу пув сіу Гей бій Тгр І1е 35 40 45 с1у 611 чІ1е АвБп Нів Агуд с1іу Бек ТПг АвБп о Туг АБп о Рго Бек Гей Гув зо зо бо зек Агуд Уа1 ТПг Іїе Бек Уаі1і Авр ТПг Бек Ппув АвБп о біп Рпе Бек Гей 65 70 75 8о

Ага Меє Бек Бек Маі ТПг А1ї1а А1а АвБр А1ї1а Аза Уа1ї Туг Тук Сув Аза 85 90 535

Агуд с1у бі Авр Туг АБр чІ1е Тер АБп б1у Туг Тук сбіп біц Гув Тгр 100 105 110 сіу біп сіу ТПг Гец Уаї ТПг Уаї Бек Бек 115 120 «2105 387 «2115 24 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 387 чаєЕдадддссе ЕсадеЕдаєта стас 24 «2105 388 «2115 8 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 388 бо сі1у б1у А1а Рпе Бек Авр Туг Туг 1 З

«2105 389 «2115 21 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 389 ассаассаєс дсддаадсас с 21 «2105 390 «2115 7 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 390

І1е АБп Нів Агуд б1у Бек ТПг 1 З «2105 391 «2115 48 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність

Зо «2205 «223» синтетична «4005 391 чсдачадчад адчаєсасдча саєєсєсдддаає дассаєсаєс аддааааа 48 «2105 392 «2115 16 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 392

Аза Акуд с01у бій Авр Тук Авр чІ1е Тгр АБп б1у Туг Тук б1п 6б1ц Гуз 1 З 10 15 «2105 393 «2115 321 «212» ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 393 чаааєсдеЕдс єдасасадеіс Сссадссасс сЕдЕсЕсЕЕрдс сессаддудда аададссасс 60 сЕсЕССЄдса ддададссадсса дадсаєтадс асстасссад сссддрасса асадаадссе 120 дадссаддсес ссаддссссе саєссаєдає дсаєссаада доддссассдуда саєсссадсс 180 бо аддЕєсадед дсадсдуддаєс єдддасадас ЕсСсассссса ссаєсадсад сссададссє 240 чдаачасєєву гадеевтаєста седссассад сдсадсаассі ддссЕсссас СЕЕСсСддсодда 300 чдадассаадд гддадаєсаа а зЗ21 «2105 394 «2115 107 «212» БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 394 сій Іїе Уаі1ї Гец ТПг біп Бек Рго Аїа ТПг Ггец бек Гей бек Рго с01Уу 1 5 10 15 сій Агуд Аїа ТпПг Гей бБег Сув Агуд Аїа Бек біп Бек чІ1е Бек ТПг Тукг

Те Аза Тер Тук сбіп сіп Ппув Рго біу біп Аїа Рго Агд Гей Гей Іїе

Тук Авр Аїа бек пуб Агуд Аїа ТПг с1у І1е Рго А1ї1а Агуд Рпе бБег ШУ бо 20 Зек біу Бек б1у ТПг Авр Рпе ТПг Гей ТПг І1е Бек Бек Ггецп 1 Рго 65 70 75 80 бі АвБр Рпе Уаї Уаї Тук Тук Сув Нів біп Агд Бек АБп Тер Рго Іецй 85 90 935

ТПЕ Рпе сіу сіу сіу ТПг пув Маї сій І1е Ппув 25 100 105 «2105 395 «2115 18 «2125 ДНК 30 «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична 35 «4005 395 сададсаєса дсассвас 18 «2105 396 «2115 6 40 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична 45 «4005 396 сіп Бек Іїе Бек ТПг Тукг 1 5 50 «2105» 397 «2115 9 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність 55 «2205 «223» синтетична «4005 397 чаєдсаєсс З 60 «2105» 398

«2115 З «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 398

Авр Аа 5ег 1 «2105 399 «2115 27 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 399 сассадсудба дсаасеєддсесс Ссесасе 27 «2105 400 «2115 9 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична

Зо «4005 400

Нів біп Агуд Бек АвБп о Тгр Рго Іецй ТПг 1 З «2105 401 «2115 351 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 401 саддеЕдсадс гдсаддадеіс додддссадда ссддсдаадс сеЕсСсоуддадас ссеЕдссссес 60 ассЕдсасьуд ЄсЕсСсодЕЧДУЧ ЕЄССсСЕєСадеЕ адеЕсастасе ддадеЕсддсес ссуддсадссс 120 ссаддааадуд дассддчадед даєсддасає ассЕсєссаса деЕдддадсас сдассасаас 180 сссЕСсСссЕСсСа ададессдадеі сассаєєсса дсадасасує ссаадаадса дЕссСсссстуд 240 аадсєдасссї сеЕдсдассудс Сдсддасасу дссудєстаєс ассдеЕдсдсуд аасаасаадеі 300 асчеЕддеЕддЕ Еєсдсссссвд доддссадодада ассссддеса ссоассесстс а з51 «2105 402 «2115 117 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 402 бо сіп Уа1ї бі1іп Гешп сіп сій Бек с1у Рго с1у Геп Уа1! Ппув Рго Бек с01ци 1 З 10 15

ТПг гей бек Гей ТПг Сув ТПг о Уаї Бек б1у б1у Бек Рпе бБег бек Туг 20 25 30

Тук Тер 5Бек Тер гей Агуд сіп Рго Рго сіу пув сіу Гей бій Тгр І1е 35 40 45 сі1у Тук І1е Рпе Туг Бек сіу Бек ТПг Авр Туг АБп о Рго Бек Геч Гув 50 55 бо зек Агуд Уа1 ТПг Іїе Бек Уаі1і Авр ТПг Бек Ппув Ппув біп Рпе Бек Гей 65 70 75 80 пув Гей ТПг Бек Уаі ТПг Аїа Аїа Ар ТПг Аїа Уаї Тук Тук Сув А1а 85 90 935

Ага ТПг о ч1І1е Бек ТПг Тер Тгр Рпе А1а Рго Тгр б1у біп б1у ТПг Іецй 100 105 110 уаї тПгЕ Уаї Бек Бек 115 «2105» 403 «2115 24 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 403 дагдЧЯєсссЕ ЕсадтадеЕса ссас 24 «2105» 404 «2115 8 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «400» 404 сіу сіу Бек Рпе Бек Бек Тук Тукг 1 5 «2105» 405 «2115 21 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 405 ассЕєссаса деЕдддадсасєс с 21 «2105» 406 «2115 7 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 406

І1е Рпе Туг Бек бі1у Бек ТПг 60 1 5

«2105 407 «2115 33 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 407 дсдсдаасаа гаадстасуєд дЕЧддсЕсСдсс сес з «2105 408 «2115 11 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 408

Аза Аг ТПг о І1е Бек ТПпг Тгр Тер Рпе Аза РгОо 1 З 10 «2105 409 «2115 318 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205

Зо «223» синтетична «4005 409 чаааєсадеда гдасасадеіс Сссадссасс седЕСсСсдеЕдІ сессаддуддуд аададссасс 60 сЕсЕССсдса ддададссадсса дадесдеЕсадс аасаасуєбад сссддбасса дсадааассе 120 дассаддсес ссаддсессссе саєсстаєдуде дсасссасса дддссассдуд сСассссаддс 180 аддеЕєсадед дсадедддЕс Сддаасадад ЄсСсасссеса ссассадсад ссеЕдсадесе 240 чаачасєєву садееєвасеєс сеЕдссадсад басаасаассі ддсссасеЕсє сддсддаддаду 300 ассааддедд адаєссааа 318 «2105 410 «2115 106 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 410 сій Іїе Уа1 Мес ТПг сбіп Бек Рго Аїа ТПг Ггец бек Уаі бек Рго с01Уу 1 З 10 15 сіу Агуд Аїа ТПг Гей бБег Сув Агуд Аїа Бек біп Бек Уаї Бек Авп АвпП 20 25 Зо уаї Аїа Тер Тук біп біп пув Рго сіу сіп Аїа Рго Агуд Гей Гей І1е 35 40 45 тук 61у Аїа Бек ТПг Агуд Аїа ТПг с1у чІ1е Рго с1у Акд Рбе бек Щ1У зо зо бо зек біу Бек сіу ТПг сіц Рпе ТПг Гец ТПг І1е Бек Бек Гец сбіп 5ег 65 70 75 8о сій Авр Рпе Аїа Уа1 Тук Бек Сув біп біп Туг АвБп АвБп Тер Гец ТІПг 60 85 90 535

Рпе с1у с1у с1у ТПпг пув Маї бій І1е Гуз

100 105 «2105 411 «2115 18 «212» ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична

«4005 411 сададсдеЕса дсаасаас 18 «2105 412 «2115 6 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 412 сбіп Бек Уаї Бек Авп Авп 1 5

«2105» 413 «2115 9 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність

«2205 «223» синтетична «4005» 413 даєдсаєсс З «2105» 414 «2115 З «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005» 414 сіу Аїа 5ег 1 «2105» 415 «2115 24 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005» 415 садсадсаєса асаасеєддсе сасе 24 бо «2105» 416 «2115 8

«2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 416 сіп біп Туг АвБп Авп Тер Гец ТІПг 1 З «2105 417 «2115 369 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 417 саддєдсадс ЄддеЕддадесс єдддддаддс дЕддЕсСсадс сеЕдддаддеЕс сседадассс 60

ЕссЕЧдсдЕад содсстддаєє сасеЕсессадеі адестасдудса гдсаседддЕ ссдссаддсе 120 ссаддсаадуд дассддадед ддєддсаассї асаєддсаєд аєддаадсаа Сааасассає 180 чдсадассссуд гдаадддссуд асссассаса сссададаса аєсссаадаа сасасадсає 240 ссдсаааєда асадсссдад адссдаддас асуддссдеЕде аєсаседсдс дЕСадсадсе 300 асдЕСсЕдддуд ассєСсдасса свбасуддсаєд дасдЕСсєддуд дссаадддас сасуддеЕсасс 360 дЕсЕСсСсєгса 369 «2105 418 «2115 123

Зо «212» БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 418 сіп Уаі1 сбіп Гец Уаі сіц Бек сі1у сіу сіу Уаї Уаї біп Рго с01у Агд 1 З 10 15 зек Гей Агуд Гей Бек Сув Уа1і Аїа Бек сбіу Рпе ТПг Рпе Бек Бек Тукг 20 25 Зо сі1у Меє Нів Тер уаї Агу сбіп Аза Рго сіу туз бі1у теп бій Тер Уаї 35 40 45

Аза ч11е чІ1е Тер Туг Авр б1у Бек Авп Гпув Туг Туг Аза Авр Бек Уаї1ї зо зо бо пув б1у Агд Рпе ТПг І1їе 5Бег Агу Авр АвБп Бек їув АБп ТПг біп Туг 65 70 75 8о тей біп Мес Ап о бБег Гец Агуд Аїа біц Авр ТПг Аза Уаї Тук Тук Сув 85 90 535

А1ї1а Бек Маії А1їа ТПг Бек б1у Авр Рпе Авр Туг Тук сіу Меєс Авр Уаї1ї 100 105 110

Тер б1у біп сіу ТПг ТПг о Уаї ТПг Уаї бек б5Бег 115 120 «2105 419 «2115» 24 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 60 «223» синтетична

«4005» 419 чддаєеєсасеЕс ЕсадтадеЕта сддас 24 «2105 420 «2115» 8 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005» 420 сіу Рпе ТПг Рпе Бек Бек Ту Щ1Уу 1 5 «2105 421 «2115 24 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 421 агасдоаєаєд аєддаадсаа бааа 24 «2105 422 «2115 8 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 422

І1е Тер Туг Авр с1у Бек Авп Гуз 1 5 «2105 423 «2115» 48 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 423 чЧдсдЕСадеад срасчдєстдуа ддасеЕсєсдас сбассасоадса содасаєс 48 «2105 424 «2115 16 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005» 424

А1ї1а Бек Маії А1їа ТПг Бек б1у Авр Рпе Авр Туг Тук сіу Меєс Авр Уаї1ї бо 1 З 10 15

«2105 425 «2115 321 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 425 чаааєєдеЕдЕ Єдасасадсс Ессадссасс сЕдсссЕсудЄ сЕССадддда аадаассасс 60 сЕсЕССсдса ддадссадсса дадааєтадс асстасстад сссддраєса асадааассе 120 дадссаддсес ссаддссссе саєссаєдає дсаєссаааа дддссассдуда саєсссадсс 180 аддеЕєсадед деадедддЕс Сдддасаддс ЄсСсасссеса ссассадсад сстададссе 240 чаачасєєву садесеєвтаєста седссадсад сдсадсаассі ддссеЕсссас СЕЕСсСддсддда 300 дададассаадд гддадаєсаа а 321 «2105 426 «2115 107 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 426 сій Іїе Уаі1ї Гец ТПг біп Бек Рго Аїа ТПг Ггец бек Гей бек Рго с01Уу 1 З 10 15 сій Агуд ТПг Тпг Гей бБег Сув Агуд Аїа Бек біп Агуд ч11е Бек ТПг тТуг 20 25 Зо те Аїа Тер Тук сіп б1іп Ппув Рго сб1у біп Аїа Рго Агд Гецй Гечцп І1е

Тук Авр Аїа бек пуб Агуд Аїа ТПг с1у І1е Рго А1ї1а Агуд Рпе бБег ШУ зо зо бо зек біу Бек сіу ТПг сіу Рпе ТПг Гец ТПг І1е Бек Бек Ггец біц Рго 35 65 70 75 8о сій Авр Рпе Аїа Уа1 Тук Тук Сув біп біп Агуд Бек Ап Тгр Рго Гей 85 90 535

ТПЕ Рпе сіу сіу сіу ТПг пув Маї сій І1е Ппув 100 105 40 «2105 427 «2115 18 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність 45 «2205 «223» синтетична «4005 427 сачдадааста дсасстас 18 «2105 428 «2115 6 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична 60 «4005 428 сбіп Агуд чІ1е Бек ТПг тТукг

1 З «2105 429 «2115 9 «212» ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 429 чаєдсаєсс З «2105 430 «2115 З «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 430

Авр Аа 5ег 1 «2105 431 «2115 27 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність

Зо «2205 «223» синтетична «4005 431 садсадсудба дЕаассддсс ЕсеЕсасе 27 «2105 432 «2115 9 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 432 сіп біп Агуд Бег АвБп Тер Рго Гец ТІПг 1 З «2105 433 «2115 357 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 433 чаддеЕдсадс гддсдсадеіс Сддадсадад дсдадааадс ссдддададес ЕсеЕдаадаєс 60

ЕссЕЧДсаадуд ДдЕССтдддаєта садссеєвтасе аастассдда єсдссьддачЕ дсдссадаєуд 120 бо сссдддааад дссеЕддчадсд чаєддддаєс асссассстд дедассссда сСассадасас 180 адсссдЕссо Ессааддсса ддесассасєс ссадссдаса адсссаєссад сассдсстас 240 сегдсадсдда дсадсссдаа ддссссоуддас ассдссаєудє аєсаседсдс дадасдддадає 300 асчавєсєсєєсс сеЕєЄССтТаєсс ссЕСЕдоддоадс садоадаассс бдоадссассЯяє сессеса 357 «2105» 434 «2115 119 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005» 434 сій Уаі1 сбіп Гец Уаі сіп Бек с1у Аїа сбіц Уаї Агуд Пув Рго с1у с1ц 1 5 10 15 зек гецшп пув Іїе Бек Сув Ппув сіу Бек біу Тук Бек Рпе ТПг Авп Туг

Тгр чІ1е Уаії Тгр Уаі Агуд сіп Меє Рго сіу пув сіу Гей бій Тгр Меє сіу Іїе Іїе Тук Рго сіу Авр Бек Авр ТПг Агуд Туг Бек Рго Бек РПе 20 зо зо бо сіп б1у біп Уа1 ТПг Іїе Бек Аїа Авр Ппув Бек Іїіе Бек ТПг Аїа Тукг 65 70 75 80 тей біп Тер Бек Бек Гец Ппув Аїа Бек Авр ТПг Аїа Мес Тук Тук Сув 85 90 935 25 А1а Агуд Агуд Авр ОТГ І1е Рпе Рго Бек Туг Рго Гей Тер С1у б1п Щ1У 100 105 110

ТПг пе Уаї ТПг Уаї Бек 5Бег 115

Зо «2105» 435 «2115 24 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність 35 «2205 «223» синтетична «4005» 435 чддасасадсес Есастааста стд9д9 24 40 «2105» 436 «2115 8 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність 45 «2205 «223» синтетична «4005» 436 сіу Тук Бек Рпе ТПг Авп Туг Тгр 1 5 «2105» 437 «2115 24 «212» ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична 60 «4005» 437 асстасєссвд деЕдасеєссєда сСасс 24 «2105 438 «2115 8 «212» БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 438

І1е Тук Рго б1у Авр бБег АБр ТПг 1 З «2105 439 «2115 Зб «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 439 чдсдачасоддуд асасчасєсєє сссеЕссстає ссссес Зб «2105 440 «2115 12 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність

Зо «2205 «223» синтетична «4005 440

Аз1а Агуд Агу Авр о ТПг о І11е Рбе Рго Бек Тук Рго Гей 1 З 10 «2105 441 «2115 336 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 441 часаєсдеЕда Едасесадес СссссеЕсссс сгдсссудеса ссссгддада дссддсессссс 60 ассЕСстсдса ддсстадсса дадссесссуд аасадсааєд дасасаасеЕє сеЕєдОдаєсддуу 120 бассеєдсада адссадддса деЕсСЕссасаа сСссеЕдаєсо аЕгссуудеЕєєс саассдддсес 180

ЕссодддадеЕсс сеЕдасаддеє садеддсадеі ддаєссаддса садаєсєсас ассдааааєс 240 адсадчадеду аддсєЕдадда Сасгссдудуауєє састассдса гдсаадссст ссааасессу 300 ассассеЕссу дссаадддас асдассддад ассааа 336 «2105 442 «2115 112 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 60 «223» синтетична

«4005» 442

Авр І1е УМаї Меє ТПг біп Бек Рго Іеий Бек тей Рго Уаі ТПпг Рго Щ1У 1 5 10 15 бій Рго Аїа Бек Іїе Бек Сув Агуд Бек Бек біп Бек Ггец Гец Ап Бег 20 25 30

Авп осіу Ту Авп Рпе Гей Авр Тер Туг Гей біп Гув Рго б1у біп б5ег 35 40 45

Рго біп пей гей І1е Туг тей Уа1ї Бек АвБп Агуд Аїа Бек с1іу Уа1і1 РгОо 50 55 бо

АБвр Агу Рпе Бек с1і1іу Бек с1у Бек біу ТПг Авр Рпе ТПг ТІецй пув І1е 65 70 75 80 век Агуд Уаі1і сбіц Аза сіц Ар чІ1е сіу Уаї Тук Тук Сув Мес сіп А1а 85 90 935 тей біп ТПг Рго Іїе ТПг Рпе с1у сбіп сбіу ТПг Агд Гецш біц І1е Гув 100 105 110 «2105» 443 «2115 33 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005» 443 сададссеЕсс Едаасадсаа Сддасасаас СЕ з «210» 444 «2115 11

Зо «212» БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005» 444 сбіп Бек Гец Гец Ап бБег АвБп о сб1у Тук Ап РіПе 1 5 10 «2105» 445 «2115 9 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005» 445

ЕСЯадЕСЕСЕ З «210» 446 «2115 З «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005» 446 бо їеч Ууаї Бег 1

«2105 447 «2115 27 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 447 асдсаадсеєс Ессааасссс даєсасс 27 «2105 448 «2115 9 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 448 мес біп Аїа Гей сіп ТПг Рго І1е ТЕГ 1 З «2105 449 «2115 360 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність

Зо «2205 «223» синтетична «4005 449 садаєсасссї гдааддадеіс Сддссстрасу ссддсдааас ссасасадас ссесасуссу 60 ассеЕдсассє ЄсессоддЧаєЕ сесасеєсадс асеЕааєддад єдоадЕдеЕдад сЕдчаєссує 120 садсссссад даааддсссе ддадсддсесс асасеєсаєрес аєсдудааєсда ааасаадсас 180 басадсссає сеЕссдааааа саддаєсасс ассассаадд асассессаа ааассаддесд 240 дЕссЕсСасаа Єдассаасе ддассстдсд дасасадсса сеЕсаєтастд Сдрасасадуч 300 ччаєддєєдуа дадсаассеЕє Сдсссассду ддссадуддаа сссгддссас судЕссссеса 360 «2105 450 «2115 120 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 450 сіп чІ1е тТПг гецшп пув бій Бек с1у Рго ТПг Гей Уа1ї! пув Рго ТПг с1іп 1 З 10 15

ТПг гей ТПг гей ТПг о Сув ТПг Ре Бек б1і1у Рпе бБег Гей Бек ТПг Авп 20 25 Зо сіу Уаі1 с1у Уаі1 с1у Тер І1ї1е Агуд біп Рго Рго сіу Ппув Аїа Гец с1іц 35 40 45

Тер геш ТП Ггец І1е Тук ТЕр АБп бій Авп о гпув Нів Тукг Бек Рго бБег зо зо бо теп пув АБп Агуд І1е ТПг о І1е ТПг о пув Авр ТПг Бек Ппув Ап сіп Уаї 65 70 75 8о бо ма1і1 Ггецп ТПпг Меє ТПг АвБп Ге Авр Рго Уа1і Авр ТПг Аза ТПг Туг Туг 85 90 535

Сув Ммаї Нів Акуд с1у Тер гейш сС1іу Аїа І1е Рпе Аза Туг ТЕр СШ1у Ссіп 100 105 110 сіу ТпПг Гец Уаї ТПг Уаї Бек Бег 115 120 «2105 451 «2115 30 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 451 дадЕЕсЕсас Есадсастаа Еддадесдаді 30 «2105 452 «2115 10 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 452 сіу Рпе Бек Гей Бек ТПг Ап сіу Уаі1і щЩ1У 1 5 10 «2105 453

Зо «2115 21 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 453 асстасєссдда аєдааааєсаа д 21 «2105 454 «2115 7 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005» 454

І1е Ту Тегр АБп бій Авп Гув 1 5 «2105 455 «2115 36 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична бо «4005 455

ЧдЕасасададд чаєдЧдеЕєсдоад адсаассеЕсс дсстас Зб

«2105 456 «2115 12 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 456 уаї Нів Агуд с1у Тер гїецш сС1у Аїа І1е Рпе А1а Туг 1 З 10 «2105 457 «2115 378 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 457 чаддеЕдсадс гдодсддадеЕс Сдоадддаддс сСсддасасадс седдддддЕс сседадасеіс 60

ЕссеЕдсдсад ссесстуддаєє сассссєвтасе адестасдсса ЕдасседддеЕ ссдссаддсе 120 ссаддчаадд дасеЕдчдадсд ддЕсСЕсадає асєадсодуда деЕддеЕдасад аасасаєсас 180 чдсадассссуд гдаадддссуд дЕєсассаєс сссададаса аєсссаадаа Саєрдсеєдсає 240 сгдсаааєда асассссдад адссдаадас асддссудтає аєсаєєдсдс даадддааса 300 дадссадсадуд Еддассєста саассассас басдсссводуд асдісьддадд ссаадддасс 360 асддеЕсассд Ессссеса 378

Зо «2105 458 «2115 126 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 458 сі Уаї бі1п Геп УМаї сбіц бек сб1у с1у с1у теп Уаї сбіп Рго С1у С1Уу 1 З 10 15 зек Гей Агуд Гей бБег Сув Аїа Аїа Бек сбіу Рпе ТПг Рпе ТПг Бек Тукг 20 25 Зо

Аза Меє ТПг Тер УМаі Агуд біп Аза Рго б1у Ппув с1у Гей бій Тер Уаї1ї 35 40 45 век Авр Іїе Бек сіу Бек сбіу сб1у Агуд ТПг Тук Туг Аїа Авр Бек Уаї зо зо бо пув б1у Агуд Рпе ТПг Іїе Бег Агуд АвБр Ап Бек Пув Ап Мес Гец Туг 65 70 75 8о пе біп Мес Авп І1е Гей Агуд А1а сбіц Авр ТБПг Атїа Уаї Тук Нів Сув 85 90 535

Аза пув с1у ТПг с1у біп бі1іп Маі1ї Авр Гей Туг АвБп Туг Туг Туг Аза 100 105 110

Те Авр Уаі1 Тер с1у сіп сіу ТПг ТПг Уаї ТПг Уаї Бек 5Бег 115 120 125 «2105 459 «2115 24 «2125 ДНК 60 «213» Штучна послідовність

«223» синтетична «4005» 459 чддавєсассс ЕсастадеЕва Єдсс 24 «2105» 460 «2115 8 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005» 460 сіу Рпе ТПг Рпе ТПг Бек Туг А1а 1 5 «2105» 461 «2115 24 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005» 461 ассадсддеєа деЕддЕддсад ааса 24 «2105» 462 «2115 8 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005» 462

І1е Бек б1у Бек б1у 01у Агдд ТпПг 1 5 «2105» 463 «2115 57 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005» 463 чсдаадддаа саддссадса додсєддассеЕсє сасаассасе ассасдсеЕсс додасаєс з7 «2105» 464 «2115 19 «212» БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична бо «400» 464

Аза пув с1у ТПг с1у біп бі1іп Маі1ї Авр Гей Туг АвБп Туг Туг Туг Аза 1 З 10 15 теп Авр Уаї1ї «2105 465 «2115 387 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 465 саддєдсадс ЄддеЕддадесс єдддддаддс дЕддЕсСсадс сеЕдддаддеЕс сседадассс 60

ЕссеЕдсдсад сдсстддаєє сасссссаде бастасдудса гдсаседддЕ ссдссаддсе 120 ссаддсаадуд дассддачадед додєддсадссї асаєддсаєд аєддаадсаа Сааасассає 180 чдсадассссуд гдаадддссуд асссассаєс сссададаса аєсссаадаа сасдсеєдсає 240 ссдсаааєда асадсссдад адссдасдас асуддссдеЕсс аєсаседсдс дададаєаад 300 дасєаєаадед дааєсаадудаау дуддЕссЕвас гассастасе асдссаєдда сдссєддддс 360 саадддасса сддісассує сеЕсстсса 387 «2105» 466 «2115 129 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична

Зо «4005» 466 сіп Уаі1 сбіп Гец Уаі сіц Бек сі1у сіу сіу Уаї Уаї біп Рго с01у Агд 1 З 10 15 зек Гей Агуд Гей бБег Сув Аїа Аїа Бек сбіу Рпе ТПг Рпе Бек Тук Тукг 20 25 Зо сі1у Меє Нів Тер уаї Агу сбіп Аза Рго сіу туз бі1у теп бій Тер Уаї 35 40 45

А1їа Маї чІ1е Тер Туг Авр бі1у Бек Авп пув Нів Туг Аза Авр Бек Уаї зо зо бо пув б1у Агд Рпе ТПг І1їе 5Бег Агу Авр АвБп Бек їув АБп о ТПг Гец Туг 65 70 75 8о тей біп Мес Ап о бБег Гец Агуд Аїа Ар Ар ТПг Аїа Уаї Тук Тук Сув 85 90 535

Аза Агд АБвр пув с1у І1е Бек б1у І1е пув б1у бі1у Бек Туг Тук Туг 100 105 110

Тук ТтТук Аїа Меє Авр Уаі Тгр с1у біп б1у ТПг ТПг Уаї ТпПг Уаї б5ег 115 120 125 зег «2105 467 «2115 24 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 467 бо ддасеєсассе ЕсадеЕсасста єЄддс 24

«2105» 468 «2115 8 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «400» 468 с1у Рпе ТПг Рпе бБег Туг Ту 1У 1 5 «2105» 469 «2115 24 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «400» 469 асаєддасєаєд аєддаадсаа Сааа 24 «2105» 470 «2115 8 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005» 470

І1е Тер Туг Авр с1у Бек Авп Гуз 1 5 «2105 471 «2115 66 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 471 дсдададаєа адддасасаад єддааєсаад ЧдчдадасЕСЕЄ ассассасвта сгаєдссаєдд 60 часдЕс 66 «2105 472 «2115 22 «212» БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 472

Аза Агд АБвр пув с1у І1е Бек б1у І1е пув б1у бі1у Бек Туг Тук Туг 1 5 10 15

Тук Ту Аїа Меє Авр Уаї бо 20

«2105 473 «2115 360 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 473 чаддєдсадс ЄддЕддадесс єдддддаддс ЕсодЕааадс сЕддддддЕС ссегадассс 60

ЕссеЕдсдсад сссстуддаєє сасеЕсссадеі аасусссдда єдасседддеЕ ссдссаддсе 120 ссадддаадуд дассддадед ддЕсддссудЕ ассаааааса ааасєсдаєдд Сдоддасааса 180 частасудсвд сасссудєдаа аддсадаєсс ассаєсссаа дадаєдассс аааааасасу 240 дЕсвассвдс ааасдаасад сседаааасс даддасасад ссудсеЕраєта сеЕдессссасу 300 дЧдЕддасвтаса аєсодрасесє сддаєсєсьдоа ддссудєддса ссседдеЕсас СдссеЕссеса 360 «2105 474 «2115 120 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 474 сі Уаі1 сіп Гец Уаї сіц Бек б1у сбі1у б1у Ггецшц Уаії пув Рго сіу с01У 1 З 10 15 зек Гей Агуд Гей Бек Сув Аїа Аїа Бек біу Рпе ТПг Рпе 5Бег Ап Аї1а 20 25 Зо

Тер Меє ТПг Тер Уа1 Агуд біп Аїа Рго сіу Ппув б1у Гей сій Тгр Уаї сіу Агуд Іїе Ппув АвБп о Ппув І1ї1е АвБр сіу сбіу ТПг ТПг Ар Туг Аїа Аї1а зо зо бо

Рго Маї Ппув б1у Агуд Рпе ТПг І1е бБег Агуд Авр АБр бБег Гув АБп о ТПг 35 65 70 75 8о уаї тТук гец біп Мес Абзп бек Ггец Ппув ТПг сій Авр ТПг Атїа Уаї Ттуг 85 90 535

Тук Сув Бек ТПг Маії Авр Туг Авп Тгр Тує Рпе АвБр Рпе Тгр С01у Аг4д 100 105 110 40 сі1у ТПг Ггец Маї ТПг Уаї Бек б5ег 115 120 «2105 475 «2115 24 45 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 475 чдчдаєеєсасеЕс єЕсадеаасдс стд9д 24 «2105 476 «2115 8 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 60 «223» синтетична

«4005 476 сіу Рпе ТПг Рпе 5Бег Ап Аїа Тгр 1 5 «2105 477 «2115 30 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 477 ассаааааса ааассдаєда Сдддасааса зо «2105» 478 «2115 10 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 478

І1е пув АвБп Гув І1е Авр с1у с1у ТПг трос 1 5 10 «2105» 479 «2115 33 «212» ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 479

ЕссасддеЕдуд ассасааєтсу дсассссдає сс з «2105» 480 «2115 11 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005» 480 век ТПпгЕ Уаі1і Авр Туг Авп Тер Тук Рпе Ар РПе 1 5 10 «2105» 481 «2115 387 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 481 бо саддєдсадс ЄддеЕддадесс єдддддаддс дЕддЕсСсадс сеЕдддаддеЕс сседадассс 60

ЕссеЕдсдсад сдсстдддаєє сасссссадеі ЄсСсСЕЄсСддудса гдсаседддеЕ ссдссаддсе 120 ссаддсаадуд дассддадед ддєддсасссї асаєддсаєд аєддаассаа Сдаааассає 180 чдсадассссуд гдаадддссуд асссассаєс сссададаса аєсссаадес сасдсеєдсає 240 сгдсаааєда асадеіссдад адссдаддас асуддссдЕєс ассаседсдс дададаєаду 300 ччдадеЕддсда сасстасдад ддддааєсас бастасаассі асоддтаєсдда сдуЕссддддсес 360 саадддасса соуддеЕсассує сеЕсссса 387 «2105» 482 «2115 129 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 482 сіп Уаі1 сбіп Гец Уаі сіц Бек сі1у сіу сіу Уаї Уаї біп Рго с01у Агд 1 З 10 15 зек Гей Агуд Гей Бек Сув Аїа Аїа Бек біу Рпе ТПг Рпе Бек Рпе РПе

Зо 20 сі1іу Меє Нів Тер Маї Акуд біп А1а Рго с1у Ппув бі1у Ггеш бій Тер Уаї 35 40 45

А1ї1а гей І1е Тер Ту Авр б1у ТПг АвБп бій АвБп Туг Аза Авр Бек Уаї1ї зо зо бо пув б1у Агуд Рпе ТПг Іїе Бег Агуд АвБр Ап Бек Пув Бек ТПг Гец Туг 25 65 70 75 8о тей біп Мес Ап о бБег Гец Агуд Аїа біц Авр ТПг Аза Уаї Тук Тук Сув 85 90 535

Аза Агд АБр Агуд сб1у Маії Аза ТПг РПе ТПпг Агуд б1у АБп Туг Туг Туг 100 105 110

АБпоТтук с1у Меє Авр Маї Тер с1у біп сб1у ТПг ТПг Уаї ТіПг Уаї 5Бег 115 120 125 зег «2105 483 «2115 24 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005» 483 дчдаєссассс ЕсадеЕсссья сдос 24 «2105» 484 «2115 8 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «400» 484 с1у Рпе ТПг Рпе Бек Рпбе Рпе 1У 1 З «2105» 485 «2115 24 60 «212» ДНК «213» Штучна послідовність

«223» синтетична «4005 485 асаєддасєаєд аєддаассаа Єдаа 24 «2105 486 «2115 8 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 486

І1е ТеЕр Туг АвБр б1у ТПпг АБп б1и 1 З «2105 487 «2115 66 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 487 чдсдададаєа доаоддадсддс дасасєсасу адддддаасс ассассасаа стасуддсаєу 60 часдЕс 66 «2105 488 «2115 22 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 488

Аза Агд АБр Агуд сб1у Маії Аза ТПг РПе ТПпг Агуд б1у АБп Туг Туг Туг 1 З 10 15

Авп отук с1у Меє АБвр Уаї 20 «2105 489 «2115 387 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 489 саддєдсадс ЄддеЕддадесс єдддддаддс дЕддЕсСсадс сеЕдддаддеЕс сседадассс 60

ЕссеЕдсдсад сдасстдддаєє сасссссаде ЄсСстасдудса гдсаседддеЕ ссдссаддсе 120 ссаддсаадд дассддаддд додєЕддсадссї асаєддсаєд аєддаадсаа Сааасассає 180 чдсадассссуд гдаадддссуд асссассаса сссададаса аєсссаадаа саєдсеєдсає 240 ссасаааєда ссадсссдад адссдаддас асуддссдеЕдеЕ аєсаседсдс дададаєссу 300 бо дасаааасьд даассдудчає аасєдддрас Есссастасе асоддраєдда сдссєддддс 360 саадддасса сддісассує сеЕсстсса 387

«2105» 490 «2115 129 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005» 490 сіп Уаі1 сбіп Гец Уаі сіц Бек сі1у сіу сіу Уаї Уаї біп Рго с01у Агд 1 5 10 15 зек Гей Агуд Гей бБег Сув Аїа Аїа Бек сбіу Рпе ТПг Рпе Бек РПпе Тукг 20 25 30 сі1іу Меє Нів Тер Маї Акуд біп А1а Рго с1у Ппув б1і1у геш бі с1у Уаї 35 40 45

А1їа Ммаї чІ1е Тер Ту Авр б1у Бек Авп Гпув Туг Туг Аза Авр Бек Уаї1ї 50 55 бо пув б1у Агуд Рпе ТПг Іїе Бег Агуд АвБр Ап Бек Пув Ап Мес Гец Туг 65 70 75 80 тей біп Месє ТПг Бек гец Агуд Аїа біц Авр ТПг Аза Уаї Тук Тук Сув 85 90 935

Аза Аг Авр Бек с1у Ппув ТПг б1у ТпПг б1у І1е ТпПг с1у Туг Бек Туг 100 105 110

ТтТук Тук с1у Меє Авр Уаї Тер с1у біп сб1у ТПг ТПг Уаї ТіПг Уаї 5Бег 115 120 125 зег

Зо «2105» 491 «2115 24 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 491 чддаєеєсассс ЕсадеЕєсста сддас 24 «2105» 492 «2115 8 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 492 с1у Рпе ТПг Рпе Бек Рпе Тує Щ1У 1 5 «2105» 493 «2115 24 «212» ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична 60 «4005 493 асаєддасєаєд аєддаадсаа Сааа 24 «2105 494 «2115 8 «212» БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 494

І1е Тер Туг Авр с1у Бек Авп Гуз 1 З «2105 495 «2115 66 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 495 чдсдачачдаєс содддіаааас Сддааседдуу асаассдуддс асссссаста стасуддсаєу 60 часдЕс 66 «2105» 496 «2115 22 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 496

Аза Аг Авр Бек с1у Ппув ТПг б1у ТпПг б1у І1е ТпПг с1у Туг Бек Туг 1 З 10 15

Тук Тук сі1у Меє Авр Уаї 20 «2105 497 «2115 354 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 497 садсєдсадс Єдсаддадсс дддсссадда ссддЕдаадс сЕєСсддадас сседсссстс 60 ассеЕдсасвд ЕСсСсСтдудєду сеЕсСсаєсаєс ассаасадеЕс аєсаседддау сеЕддаєссдс 120 садсссссад дааадддєсеЕ ддадсддасєї додсадсаєсс аєсасадсдча даддассстас 180 басаасссуєЄ сссісдадад Ссдадеісасс асаєссудєдуда асасудессаа даассадесс 240

Ессседаадс ЕдассессдЕ дассдссдса дасасддсвра басаєтастд Сдсдадддаа 300 чадчаєсссасє соудсссдассс сгддддссад ддаассстдд Есассуєстс сьса 354 «2105 498 «2115 118 «2125 БІЛОК 60 «213» Штучна послідовність

«223» синтетична «4005» 498 сіп Гей біп Гей біп бій Бек с1і1у Рго біу пецш Уаї пув Рго Бек б1и 1 5 10 15

ТПг гей бек Гей ТПг Сув ТПг Уаії Бек б1у б1у Бек І1е І1е ТПг Авп 20 25 30 зек Тук Туг Тер с1у Тер І1ї1е Агуд біп Рго Рго сіу Ппув с1у Гец с1ц 35 40 45

Тер чІ1е сіу бек І1е Туг Туг Бек б1у Агуд ТПг Туг Туг АвБп Рго бБег 50 55 бо теп бій Бек Агуд Уа1і ТПг І1їе Бек Уаї Авр ТПг Бек Гпув АБп біп РПе 65 70 75 80 зек Гей пув Гецп ТПг бек Уа! ТПг Аза Аїа Авр ТПг АтТа І1е Тук Туг 85 90 935

Сув Аїа Агуд біц сб1у Авр Рго Бек Гец Ар Рго Тер б1у біп с1у ТПг 100 105 110

Тїец Уаї ТПг Уаї 5Бег 5ег 115 «2105» 499 «2115 30 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична

Зо «4005» 499 даЕддсЕсса Есаєссассаа Садессаєсас зо «2105 500 «2115 10 «212» БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 500 сіу сіу Бек Іїе І1ї1е ТПг Авп Бек Тук Тукг 1 5 10 «2105 501 «2115 21 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 501 асстаєссава деЕдддаддасєс с 21 «2105 502 «2115 7 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність 60 «2205

«223» синтетична «4005 502

І1е Ту Ту Бек б1у Агдд ТпПг 1 З «2105 503 «2115 30 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 503 чсдчадоадаадч доадаєссадєс дсесдасссс зо «2105 504 «2115 10 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 504

Аза Агд сій сб1у Авр Рго Бек Гей АБвр Рго 1 З 10

Зо «2105 505 «2115 363 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 505 чаддеЕдсадс гдодсддадеЕс Сдоадддадас сСсддсасадс седдддддЕс сседадасеіс 60

ЄссеЕДДєдсад ссеЕссдддасє сассеєєсадс асссасдсса єЄдаассдуддс ссдссаддсее 120 ссадддаадуд дассддадед ддЕсссасає ассадсдудна деЕддЕддсаа СеЕсасасесс 180 чдсадассссуд гдаадддссуд дЕєсассаєс сссададаса аєсссаадаа сасудстасбає 240 сгдсаааєда асадсссдсуд адссдаддас асддссатає аєрсасеЕдесеєс дсеЕддатаса 300 асддссасад гаддсддЕсеЕ сЕЕсдссвас єддддссадуда даассссдуде сассдесссс 360 са З63 «2105 506 «2115 121 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 506 сі Уаі1 сіп Гец Уаї сіц Бек б1у б1у Авр Ггец Уаі сіп Рго сіу с01У 1 З 10 15 зек Гей Агуд Гей бБег Сув Аїа Аїа Бек сбіу Рпе ТПг Рпе Бек ТПг тТукг 20 25 Зо бо А1а Меє Авп Тгр Уаї Агуд сіп Аїа Рго с1у Ппув с1у теп бій Тер Уаї 35 40 45 зек Нів І1е Бек с1у Бек с1у с1іу Авп Бек Туг Бек Аза Авр Бек Уаї 50 55 бо пув б1у Агуд Рпе ТПг Іїе Бег Агуд АвБр Ап Бек Пув Ап о ТПг Гец Туг 65 70 75 80 еп біп Меє АвБп б5ег Гей Агуд Аїа сіц Авр ТПг Аза І1е Тук Тугк Сув 85 90 935 зек Ггецп АвБр І1їе Мес Аїа ТПг Уаї сіу с1у Ггешп Рпе Аїа Туг Тгр 1У 100 105 110 сіп с1іу ТПг Гец Уаї ТПг Уаї Бек Бек 115 120 «2105 507 «2115 24 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 507 чддаєеєсассо Есадсасста Сдсс 24 «2105 508 «2115 8 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична

Зо «4005 508 сіу Рпе ТПг Рпе Бек ТПг Туг А1а 1 5 «2105 509 «2115 24 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 509 ассадсддєа деЕддЕддсаа сЕсСа 24 «2105 510 «2115 8 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 510

І1е Бек с1у Бек б1у С1у Авп бБег 1 5 «2105 511 «2115 42 60 «212» ДНК «213» Штучна послідовність

«223» синтетична «4005 511

Есдсєддаєа єааєдодасстас адсададсдуає сеЕсеЕссосся ас 42 «2105 512 «2115 14 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 512 зек Гей Авр Іїе Мес Аїа ТПг Уаї сіу сб1у Гец Рпе Аїа Туг 1 З 10 «2105 513 «2115 393 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 513 саддеЕдсадс гдодсддадеЕс Сдоадддаддс деЕддЕссадс седддаддес сседадасеіс 60

ЄссЕДЕДсад соаєсссоодасе саєсеєсаде єсссасддса єдсассдуддеі ссдссаддсее 120 ссадасаадуд дассддачадед додєддсадссї асаєддсаєд аєддаадсаа Сдаасассає 180 чдсадассссуд гдаадддссуд асссассаєс сссададаса аєсссаадаа сасдсеєдсає 240 ссдсаааєда асадсссдад адссдаддас асуддссдеЕдеЕ аєсаседсдуа дададаєсаа 300 чдабаєсєсєсує аєсасддасає СЕєЧЧдаседде аастасаасоі аєсасвтасудд СдЕддасудєс 360

Еддоддссаад ддассасуддеЕ сассдЕсссс са з9з «2105 514 «2115 131 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 514 сіп Уаі1 сбіп Гец Уаі сіц Бек сі1у сіу сіу Уаї Уаї біп Рго с01у Агд 1 З 10 15 зек Гей Агуд Гей Бек Сув Уа1і Аїа Бек сбіу Рпе І1ї1е Рпе Бек РПпе Тукг 20 25 Зо сі1іу Меє Нів Тер Маї Акуд біп А1а Рго Авр пув біу Ггеш бій Тер Уаї 35 40 45

А1ї1а Ммаї чІ1е Тер Ту Авр б1у Бек АвБп бій Туг Туг Аза Авр Бек Уаї1ї зо зо бо пув б1у Агуд Рпе ТПг Іїе Бег Агуд АвБр Ап Бек Пув Ап о ТПг Гец Туг 65 70 75 8о тей біп Мес Ап о бБег Гец Агуд Аїа біц Авр ТПг Аза Уаї Тук Тук Сув 85 90 535 сі1у Агуд Авр біп сіу Іїе Бек Тук Туг АвБр Іїе Гец ТПг 01у Ап Тукг 100 105 110 бо АБвпоТук Туг Тук б1у Маї Авр Уаї Тер б1у біп с1у ТПг ТіПг Ууаї трс 115 120 125

Ууа1ї Бек Бег «2105 515 «2115 24 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 515 чдчдаєеєсаєсі ЕсадеЕєсста сддас 24 «2105 516 «2115 8 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 516 сіу Рпе Іїе Рпе Бек Рпе Тукє Щ1Уу 1 5 «2105 517 «2115 24 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 517 асаєддаєаєд аєддаадсаа Єдаа 24 «2105 518 «2115 8 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 518

І1е Тер Туг Авр б1у Бек АБп б1и 1 5 «2105 519 «2115 72 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 519 чадададаєс ааддтассєс деассасддає асєссдассуд дсааєсаєаа стасстассас бо бо чдаєЕдЕоддасд с 72

«2105 520 «2115 24 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 520 с1у Агуд АвБр біп с1у І1е Бек Тук Тук Авр І1е тей ТПг с1у Авп Туг 1 З 10 15

АвпотТуг Туг Ту с1у Маї Авр Уаї 20 «2105 521 «2115» 324 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 521 часаєссада гдасссадес Сссасссссс сгдЕСсСсдсає седсаддада сададссасс 60 аєсасеЕєдсс доадсаадеЕса дадсаєсадс адссасєсаа асєддаєбаєса дсадааасса 120 чадааадссс сеЕаадсссст даєссаєдсе дсаєссадес гдсааадсудуа ддеЕсссдеЕса 180 аддеЕєсадед дсадеддаєс Сдоддасадає ссСсасссеса ссассадсад СсеЕдсаасся 240 чаачдасєєвєд саасесаста сеЕдссаасад адссасадса ссссессдає сассесссддс 300 саадддасас дассддадає Сааа 324

Зо «2105 522 «2115» 108 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 522

Те АБп Тер Тук сбіп сіп Ппув Рго сбіу Ппув Аїа Рго Пув Гец Гей Іїе 35 40 45 тТук Аїа Аїа бек бек Гей біп Бек б1і1у Маії Рго Бег Агуд Рпе бБег ШУ зо зо бо зек біу Бек сіу ТПг Авр Рпе ТПг Гец ТПг І1е Бек Бек Гец сбіп Рго 65 70 75 8о сі Авр Рпе Аїа ТПг Туг Тук Сув біп біп Бек Туг Бек ТПг Рго Рго 85 90 535

І1е ТПг Рпе б1у біп б1у ТПпг Агд ей бій Іїе Гув 100 105 «2105 523 «2115 18 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність 60 «2205 «223» синтетична

«4005 523 сададсаєса дсадстає 18 «2105 524 «2115 6 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 524 сіп Бек Іїе Бек Бек Тукг 1 5 «2105 525 «2115 9 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 525 дсЕдсаєсс З «2105 526 «2115 З «212» БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 526

Аза Аза 5екг 1 «2105 527 «2115 30 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 527 саасададес асадгтасссс Сссдаєсасс зо «2105 528 «2115 10 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 528 бо сіп б1іп Бек Тук Бек ТПг Рго Рго І1е ТЕПг 1 5 10

«2105 529 «2115 324 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 529 чаааєсдеЕде єдасудсадеіс Сссаддсасс сЕдЕсЕсЕрдс сессаддудда аададссасс 60 сЕсЕССсдса доададссадсса дадедеЕсадс адсадссасс гадсседдра ссадсадааа 120 ссеЕддссадд сеЕсссаддсесе ссеЕсаєстсає ддсдсаєсса дсадддссас Сддсаєссса 180 часаддеЕєса деЕддсадсдуд дЕСсдуддаса дасессасес гсассаєсад садассддад 240 ссєдаадаєє сеЕдсадсдса Есасєдссад садсаєсдуда дсеєсассеєвуд дасдєсєсддс 300 саадддасса аддсддааає сааа 324 «2105 530 «2115 108 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 530 сій Іїе Уаі1ї Гец ТПг біп Бек Рго біу ТПг Ггец бек Гей бек Рго с01Уу 1 З 10 15 сій Агуд Аїа ТпПг Гей бБег Сув Агуд Аїа Бек біп Бек Уаї Бек Бек Бег

Зо 20 25 Зо

Тер ТПгЕ Рпе сіу сіп сіу ТПг пув Маї бій тІ1е пув 40 100 105 «2105 531 «2115 21 «2125 ДНК 45 «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 531 сачдадсдЕса дсадсадсста с 21 «2105 532 «2115 7 «212» БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична 60 «4005 532 сіп Бек Уаії Бек Бек Бек Тукг 1 З «2105 533 «2115 9 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 533 чаєЕдсаєссс З «2105 534 «2115 З «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 534 сіу Аїа 5ег 1 «2105 535 «2115 27 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 535 садсадстаєд деадсеєсасс сгддасд 27 «2105 536 «2115 9 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична

«4005 536 сіп біп Ту сіу Бек Бек Рго Тер ТПг 1 З «2105 537 «2115 357 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 5:37 саддеЕдсадс гасадсадед доддсдсадда ссдЕсдаадс сЕсСсоуддадас ссеЕдссссес 60 бо ассеЕдсдсвд ЄссасоудеЕдд дЕСсСЕєСсСадеі ддЕсСастасе ддаассддає ссдссадссс 120 ссадддаадуд дассддадед ддаєсдододдаа ассадссаса даддаадсас саассасаас 180 ссдЕсссЕса ададісдадеі сассасбаєса ссддасасує ссаадаасса дЕсссссстуд 240 аадсєдасссї сеЕдсдассудс сдсддасасу дсеЕдЕДдсаєс ассдеЕєсдад адасдаддаа 300 сЕддаасєсс дЯдЕЄЕСЕЄєєЧда сеасєдддоас садоадаассс бдоадссассЯяє сессеса 357 «2105 538 «2115 119 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 538 сіп Уаі1 сбіп Ге сіп сіп Тер сС1у Аїа сіу Гец Гец Ппув Рго Бек біц 1 З 10 15

ТПг гей бек гей ТПг Сув Аїа Уаї Ту с1у б1у Бек Рпе Бек с1у Туг

Зо

Тук Тгр АвБп о Тгр ч11е Агуд сіп Рго Рго сіу Ппув сі1у Гей бій Тгр Уаї 20 сі1у бій І1е Бек Нів Акуд біу Бек ТПг Авп Туг Авп о Рго Бек Геч ув зо зо бо век Агуд Уа1 ТПг Іїе Бек Гец Авр ТПг Бек Ппув АвБп о біп Рпе бек Гей 65 70 75 8о пув Гей ТПг Бек Уа1і ТПг Аїа Аїа Ар ТПг Аїа Уаї Тук Тук Сув бБег 25 85 90 535

ТПг пе Уаї ТПг Уаї Бек 5Бег 115

Зо «2105 539 «2115 24 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність 35 «2205 «223» синтетична «4005 539 40 дагддЯЧЕссЕ ЕсадеЕддеЕсба ссас 24 «2105 540 «2115 8 «2125 БІЛОК 45 «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 540 сіу сіу Бек Рпе Бек с1у Тук Тукг 1 З «2105 541 «2115 21 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 60 «223» синтетична

«4005 541 ассадссаба даддаадсас с 21 «2105 542 «2115 7 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 542

І1е Бек Нів Агд б1у Бек ТПг 1 З «2105 543 «2115 39 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 543

Есдададасуд аддаассдда асєссЯдєєсс єсСЄЧчасстас 9 «2105 544 «2115 13 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 544 век Агуд АБвр біц сіц Гец сбіц Рпе Агуд Рпе РпПе Ар Тукг 1 З 10 «2105 545 «2115 321 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 545 чаааєсдеЕдс єдасасадеіс Сссадссасс сЕдЕсЕсЕЕрдс сессаддудда аададссасс 60 сЕсЕССЄдса доададссадсса дадедеЕсадс адстасстад сссддбасса асааааассе 120 дассаддсес ссаддессссе суєсстаєсдуде дсасссааса дддссассдуд сассссадсс 180 аддеЕєсадед дсадедддЕс Сдуддасадас сЄсСсасссеса ссассадсад сстададссе 240 чаачасєсєву сасстєвсаєста сеЕдссадсад сдсадсаассі ддссдсссас СЕЕСддсддда 300 чдадассаадд гддадаєсаа а зЗ21 «2105 546 «2115 107 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність 60 «2205 «223» синтетична

«4005 546 сій Іїе Уаі1ї Гец ТПг біп Бек Рго Аїа ТПг Ггец бек Гей бек Рго с01Уу 1 5 10 15 бі Агуд Аза ТПпгс о Гей б5Бег Сув Агуд Аїа бБег біп Бек Уаї Бек Бек Туг 20 25 30

ТЕ Рпе с1у с1у бі1у ТПг пув Маї сій І1їе Гув 100 105 «2105 547 «2115 18 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 547 сачадсдеЕса дсадстає 18 «2105» 548

Зо «2115 6 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 548 сіп Бек Уаі1ї Бек Бек Тукг 1 5 «2105» 549 «2115 9 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 549 даєдсаєсс З «2105 550 «2115 З «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична 60 «4005 550 сіу Аїа 5ег

«2105 551 «2115 27 «212» ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 551 садсадсудба дсаасеєддсс дсесасе 27 «2105 552 «2115 9 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 552 сіп біп Агуд Бег АвБп Тер Рго Гец ТІПг 1 З «2105 553 «2115 372 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність

Зо «2205 «223» синтетична «4005 553 чаддєдсадс ЄддЕддадесс єдддддаддс ЕсодЕасадс сЕддддддЕс ссеЕдадассс 60

ЄссеЕЧдсдвад ссесстуддаєє сассссвтадс ссстасдсса ЕдасседддЕ ссдссаддеє 120 ссадддаадуд дассддааєуд ддЕсссаасі ассадсдудна деЕддЕдЧаєду сасасассас 180 асадассссуд Ебаадддссуд дЕєсассаєс сссададаса аєсссаадаа сасасеєдбає 240 сгдсаааєда асадсссдад адссдасдас асуддссдЕвс єєсСаседсас дааадададеі 300 асаасєддаа сеЕсСасеЕссса сЕсссасододеі асоддасудєсеЕ ддддссаадуд дассасуддеЕс 360 ассдЕєсеЕсся са 372 «2105 554 «2115 124 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 554 сі Уаі1 сіп Гец Уаї сіц Бек б1у сбіу б1у Ггец Уаі сбіп Рго сіу с01У 1 З 10 15 зек Гей Агуд Гей Бек Сув Уа1і Аїа Бек сбіу Рпе ТПг Рпе Бек Гец Тукг 20 25 Зо

Аза Меє ТПг Тер УМаі Агуд біп Уаї Рго б1у Ппув с1у Гей бій Тер Уаї1ї 35 40 45 зек ТПпПг Іїе Бек сіу Бек сбіу с1і1у с1і1у ТП Тук Тук ТПг Авр бек Уаї зо зо бо бо пув б1у Агд Рпе ТПг І1їе 5Бег Агу Авр АвБп Бек їув АБп о ТПг Гец Туг 65 70 75 8о тей біп Мес Ап о бБег Гец Агуд Аїа Ар Авр ТПг Аза Уаї Рпе Тук Сув в5 90 935

ТПгЕ пув бій Бек ТПг ТПг о сіу ТПг Тук Бек Ту Рпе Туг с1у Меє Авр 100 105 110 уаї ТЕр 61у біп с1у ТПг ТПг Уаї ТПг Уаї Бек 5ег 115 120 «2105 555 «2115 24 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 555 чддаєеєсассс Есадссеста Сдсс 24 «2105 556 «2115 8 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 556 сіу Рпе ТПг Рпе Бек Гец Туг А1а 1 5 «2105 557 «2115 24 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 557 авггадеЕддса ЧдЕддЕддеЕдда саса 24 «2105 558 «2115 8 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 558

І1е Бек б1у Бек б1у б1у 01уУу ТПпг 1 5 «2105 559 «2115 51 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 бо «223» синтетична

«4005 559 асчдааачада деасаасєдуд аасеєсасесс басеЕсссасоа дсасодасає с зі «2105 560 «2115 17 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 560

ТПгЕ пув бій Бек ТПг ТПг о сіу ТПг Тук Бек Ту Рпе Туг с1у Меє Авр 1 З 10 15 чаї «2105 561 «2115 321 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 5561 часаєссада гдасссадес Сссасссссс сгдЕСсСсдсає седсаддада сададссасс 60 ассасссдсс доадсаадсса дассаєтадс адстасстаа аєсдудраєса дсадааасса 120 чадааадссс сеЕаадсссст даєссаєдсе дсаєссадес гдсааадсудуа ддеЕсссаєса 180 аддЕєсадед дсадсддаєс єдддасадає єссассссса сссесадсдд Сссссаассє 240 чаачдасєєвєд саасесаста сеЕдссаасад адссасадста ссссудсссас СЕЕСсСддсдда 300 чдадассаадд гддадаєсаа а зЗ21 «2105 5562 «2115 107 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 5562

АБвр Агуд Маї ТПг оч11е ТтПг о Сув Агуд Аїа Бек біп ТПг І1е Бек Бек Туг 20 25 Зо

Те АБп Тер Тук сбіп сіп Ппув Рго сбіу Ппув Аїа Рго Пув Гец Гей Іїе 35 40 45 тТук Аїа Аїа бек бек Гей біп Бек б1і1у Маії Рго Бег Агуд Рпе бБег ШУ зо зо бо зек біу Бек сіу ТПг Авр Рпе ТПг Гец ТПг Гец Бек б1у Ге сбіп Рго 65 70 75 8о сій Авр Рпе Аїа ТПг Тук Тук Сув біп біп Бек Тук Бек ТПг Рго Гец 85 90 535

ТЕ Рпе с1у с1у бі1у ТПг пув Маї сій І1їе Гув 100 105 «2105 553 «2115 18 60 «212» ДНК «213» Штучна послідовність

«223» синтетична «4005 553 садассаєса дсадстає 18 «2105 564 «2115 6 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 564 сіп ТПпг І1е Бек Бек Тукг 1 5 «2105 5565 «2115 9 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 5565 дсЕдсаєсс З «2105 566 «2115 З «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 5566

А1їа А1т1а 5ег 1 «2105 567 «2115 27 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 567 саасададес асадтасссс дсесасе 27 «2105 568 «2115 9 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 бо «223» синтетична

«4005 568 сбіп біп Бек Тук Бек ТПг Рго Гец ТІПг 1 5 «2105» 569 «2115 327 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 569

А1їа Бек ТПг пув б1у Рго Бек Ма1і Рпе Рго Іїей Аза Рго Сув бБег Аг4д 1 5 10 15 век ТПпПг Бек біц Бек ТПг Аїа Аїа Гец сіу Сув Гец Уаї Ппув Авр Тукг

Рпе Рго бій Рго Маії ТПг Уаї Бек Тгр АвБп Бек б1у Аї1а Іей ТПпПг 5ег 20 с1іу Ма1ї Нів ТПг Рпе Рго Аїа Уаї Ггецш сіп бек Бек с1у Ге Тук бБег бо тей Бек Бек Уа1 Уа1ї ТПг Уа1ї Рго Бек Бек Бек Гец с1у ТПг Ппув ТПг 65 70 75 80

Тук ТП Сув Авп оУаї Авр Нів Кгув Рго Бек Авп ТПг пув Уа1 Авр Гув 25 85 90 935

Ага Маї сій Бек пув Тук б1у Рго Рго Суб Рго Рго Сув Рго Аїа РгОо 100 105 110 сій Рпе Гец сіу сіу Рго Бек Уаії Рпе Гецш Рпе Рго Рго Пув Рго Гу 115 120 125 30 АБвр ТтТПг Гей Меє І1е Бек Акуд ТПг Рго сб1іц Уаї ТПг Сув Уаї Маї Уаї 130 135 140

Авр Маії Бек біп бій Авр Рго бій Уаі1і бі1іп Рпе АвБп Тгр Туг Уа1і1 Авр 145 150 155 160 сі1у Уаї бій Ууаї Нів Авп Аза пуб ТПг о пув Рго Агд бій бій сбіп РБПе 35 165 170 175

Ап обБек ТПг Туг Агуд Уаї Уаї Бек Уаї гей ТПг Уа1! Ггец Нів сбіп Авр 180 185 190

Тер гей Авп о сіу пув сій Ту пув Сув пув Ма1ї Бек Авп Гув о1Уу Іецй 195 200 205 40 Рго Бек Бек І1їе б1цш Ппув ТПг І1ї1е Бек пув Аїа пув С1у б1п Рго Агд 210 215 220 бій Рго біп Уаі1і Тук ТПг Гец Рго Рго Бек біп біц біц Мес тТПг Гув 225 230 235 240

Авп обіп Маї Бек гей ТПг Сув тей Маї пув б1у Рпе Туг Рго б5Бег Авр 45 245 250 255

І1е А1їа Уаї бій Тгр бій Бек Авп б1у біп Рго бій АБп АвБп о Туг Гув 260 265 270

ТПЕ ТП Рго Рго Маії Гей Авр Бек Авр бі1іу Бек Рпе Рпе Іей Туг б5ег 275 280 285 50 Агуд Гей Тпг оУа1ї1ї Авр пув Бек Агуд Тер бі1іп біц с1у Авп Уаї РПе 5ег 290 295 300

Сув Бек Ууаї Меє Нів бій Аїа гей Нів АвБп о Нів Туг ТПпг біп Гпув бБег 305 310 315 320

Тецй Бек Гей Бек Гей с1Уу Гув 55 325 «2105 570 «2115 326 «2125 БІЛОК 60 «213» Штучна послідовність

«223» синтетична «4005 570

А1їа бек ТПг Ппув б1у Рго Бек Уаії Рпе Рго Гей Аїа Рго Сув 5Бег Агд 1 5 10 15 век ТПпПг Бек біц Бек ТПг Аїа Аїа Гец сіу Сув Гец Уаї Ппув Авр Тукг 20 25 30

Рпе Рго бій Рго Маії ТПг Уаї Бек Тгр АвБп Бек б1у Аї1а Іей ТПпПг 5ег 35 40 45 сі1у уаї Нів ТПпг Рпе Рго Аїа Уа1! Ггец сСіп Бек Бек б1у Іецп Туг бБег 50 55 бо тей Бек Бек Уа1 Уа1ї ТПг Уа1ї Рго Бек Бек Бек Гец с1у ТПг Ппув ТПг 65 70 75 80 тТук ТПпг Сув Авп Уа1 Авр Нів Ппув Рго Бек АвБп ТПг Ппув Уаі1ї! Авр Гувг 85 90 935

Ага Маї сій Бек пув Тук б1у Рго Рго Суб Рго Рго Сув Рго Аїа РгОо 100 105 110

Рго Маії А1їа с1у Рго Бек Ма1і Рпе Іїей Рпе Рго Рго Гув Рго Гув Авр 115 120 125

ТПг гец Месє І1е б5Бек Агуд ТПг Рго сій Уаї ТПг Сув Уаї Уаї Уаї Авр 130 135 140 уаї Бек біп біц Авр Рго біц Уаі сбіп Рпе Абзп Тгр Туг Уаі АвБр с01У 145 150 155 160 ма1 біц Маї Нів Авп Аїа пув ТПг о пув Рго Агуд 61 бій сб1п РбБе Авп 165 170 175 зек ТПпг Туг Агку Уаї Уа1ї Бек Уаі1! Ггец ТПг Уаї Іец Нів бі1п Авр Тгр 180 185 190

Те АвБп о сіу Ппув сбіц Тук Ппув Сув Ппув Уаї Бек АвБп Гпув с1у Гей Рго

Зо 195 200 205 зек Бек Іїе сіц Ппув ТПг Іїе Бек пув Аїа Ппув б1у біп Рго Агд б1іц 210 215 220

Рго біп Маї Тук ТПг Гей Рго Рго Бек біп бій бій Меє ТПпг Гув Авп 225 230 235 240 сіп Уа1ї бек гешп ТПг Сув теп Уаї пув с1у Рпе Туг Рго Бек Авр І1е 245 250 255

А1ї1а уаї бій Тегр бій Бек АвБп б1у біп Рго бій Авп Авп о Туг Гув ТПг 260 265 270

ТПЕ Рго Рго Маї Гей Авр Бек Авр біу Бек Рпе Рпе Іеи Туг бБег Аг4д 275 280 285 тей ТпПг Уаі1 Авр Ппув Бек Агуд ТЕр біп біц б1у Авп Уаії Рпе бек Сув 290 295 300 зек уаї Меє Нів сій АТа гейш Нів Авп о Нів Тук ТПг біп Гув бБекг Іецй 305 310 315 320 век Гей бек Ггецп с1Уу Гуз 325 «2105 571 «2115 326 «212» БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 571

А1їа Бек ТПг пув б1у Рго Бек Ма1і Рпе Рго Іїей Аза Рго Сув бБег Аг4д 1 5 10 15 век ТПпПг Бек біц Бек ТПг Аїа Аїа Гец сіу Сув Гец Уаї Ппув Авр Тукг 60 20 25 30

Рпе Рго бій Рго Маії ТПг Уаї Бек Тгр АвБп Бек б1у Аї1а Іей ТПпПг 5ег

35 40 45 сі1у уаї Нів ТПпг Рпе Рго Аїа Уа1! Ггец сСіп Бек Бек б1у Іецп Туг бБег 50 55 бо тей Бек Бек Уа1 Уа1ї ТПг Уа1ї Рго Бек Бек Бек Гец с1у ТПг Ппув ТПг 65 70 75 80

Тук ТП Сув Авп оУаї Авр Нів Кгув Рго Бек Авп ТПг пув Уа1 Авр Гув 85 90 935

Рго Уаї Аїа с1у Рго Бек Уаії Рпе Гей Рпе Рго Рго Ппув Рго їув Авр 115 120 125

ТПг гец Месє І1е б5Бек Агуд ТПг Рго сій Уаї ТПг Сув Уаї Уаї Уаї Авр 130 135 140 уаї Бек біп біц Авр Рго біц Уаі сбіп Рпе Абзп Тгр Туг Уаі АвБр с01У 145 150 155 160 уаї бі уаї Нів Авп Аза пуб ТПг о Тув Рго Агд бій бі біп Рпе Авгп 165 170 175 зек ТПпг Туг Агку Уаї Уа1ї Бек Уаі1! Ггец ТПг Уаї Іец Нів бі1п Авр Тгр 180 185 190

Тїец АБп о б1у Ппув бі Тук Ппув Сув Пув Маї Бек АБп Гпув б1у Геч Рго 195 200 205 зек Бек Іїе сіц Ппув ТПг Іїе Бек пув Аїа Ппув б1у біп Рго Агд б1іц 210 215 220

Рго біп Маї Тук ТПг Гей Рго Рго Бек біп бій бій Меє ТПпг Гув Авп 225 230 235 240 сіп Уаі1 Бек Гей ТПг Сув Гец Уаї Ппув б1у Рпе Тук Рго Бек АБр Іе 245 250 255

ТПг Рго Рго Уаї Ппецш Авр Бек Авр сіу Бек Рпе Рпе Гей Туг б5Бег Агд 275 280 285 тей ТпПг Уаі1 Авр Ппув Бек Агуд ТЕр біп біц б1у Авп Уаії Рпе бек Сув 290 295 300 зек уаї Меє Нів сій АТа гейш Нів Авп Агуд Рпе ТПг о біп Гув бБекг Іецй 305 310 315 320 век Гей Бек Рго с1у Гув 325 «2105 572 «2115 326 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 572

А1їа Бек ТПг пув б1у Рго Бек Ма1і Рпе Рго Іїей Аза Рго Сув бБег Аг4д 1 5 10 15

Зек ТПг Бек біц Бек ТПг АТїа Аза Ггецш с1у Сув тей Уаї пув Авр Туг 20 25 30

Рпе Рго бій Рго Маії ТПг Уаї Бек Тгр АвБп Бек б1у Аї1а Іей ТПпПг 5ег 35 40 45 сі1у уаї Нів ТПпг Рпе Рго Аїа Уа1! Ггец сСіп Бек Бек б1у Іецп Туг бБег зо зо бо тей Бек Бек Уа1 Уа1ї ТПг Уа1ї Рго Бек Бек Бек Гец с1у ТПг Ппув ТПг 65 70 75 80

Тук ТП Сув Авп оУаї Авр Нів Кгув Рго Бек Авп ТПг пув Уа1 Авр Гув 85 90 935 бо Акгуд Ууаї сій Бек пув Тук б1у Рго Рго Сув Рго Рго Сув Рго Аїа Рго 100 105 110 сіу б1у сі1у сіу Рго Бек Уаії Рпе Гец Рпе Рго Рго Пув Рго Пув Авр 115 120 125

ТПг гец Месє І1е б5Бек Агуд ТПг Рго сій Уаї ТПг Сув Уаї Уаї Уаї Авр 130 135 140

Ууаї Бек біп бійц Авр Рго сіц Уаї біп Рбе АБп Тгр Туг Уаі АБр 1У 145 150 155 160 уаї бі уаї Нів Авп Аза пуб ТПг о Тув Рго Агд бій бі біп Рпе Авгп 165 170 175 зек ТПпг Туг Агку Уаї Уа1ї Бек Уаі1! Ггец ТПг Уаї Іец Нів бі1п Авр Тгр 180 185 190

Те АвБп о сіу Ппув сбіц Тук Ппув Сув Ппув Уаї Бек АвБп Гпув с1у Гей Рго 195 200 205 зек Бек Іїе сіц Ппув ТПг Іїе Бек пув Аїа Ппув б1у біп Рго Агд б1іц 210 215 220

Рго біп Ма1 Тук ТПг Гей Рго Рго Бек біп бій сі Меє Тс пув Авп 225 230 235 240 сіп Уаі1 Бек Гей ТПг Сув Гец Уаї Ппув б1у Рпе Тук Рго Бек АБр Іе 245 250 255

ТПЕ Рго Рго Маї Гей Авр Бек Авр біу Бек Рпе Рпе Іеи Туг бБег Аг4д 275 280 285 тей ТпПг Уаі1 Авр Ппув Бек Агуд ТЕр біп біц б1у Авп Уаії Рпе бек Сув 290 295 300

Зек Маї Мес Нів сій АТїа тей Нів Авп о Нів Туг ТПг сбіп пув Бек Іец 305 310 315 320 век Гей Бек Гец с1Уу Гув 325

Зо «2105 573 «2115 326 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 573

А1їа Бек ТПг пув б1у Рго Бек Ма1і Рпе Рго Іїей Аза Рго Сув бБег Аг4д 1 З 10 15 век ТПпПг Бек біц Бек ТПг Аїа Аїа Гец сіу Сув Гец Уаї Ппув Авр Тукг 20 25 30

Рпе Рго бій Рго Маії ТПг Уаї Бек Тгр АвБп Бек б1у Аї1а Іей ТПпПг 5ег 35 40 45 с1іу Ма1ї Нів ТПг Рпе Рго Аїа Уаї Ггецш сіп бек Бек с1у Ге Тук бБег бо тей Бек Бек Уа1 Уа1ї ТПг Уа1ї Рго Бек Бек Бек Гец с1у ТПг Ппув ТПг 65 70 75 80

Тук ТП Сув Авп оУаї Авр Нів Кгув Рго Бек Авп ТПг пув Уа1 Авр Гув 50 85 90 935

Ага Маї сій Бек пув Тук б1у Рго Рго Суб Рго Рго Сув Рго Аїа РгОо 100 105 110 сіу б1у сі1у сіу Рго Бек Уаії Рпе Гец Рпе Рго Рго Пув Рго Пув Авр 115 120 125 55 ТПг пец Меє І1е Бек Агу ТПг Рго сій Уа! ТПг Сув Маї Уаї Уа1ї Авр 130 135 140 уаї Бек біп біц Авр Рго біц Уаі сбіп Рпе Абзп Тгр Туг Уаі АвБр с01У 145 150 155 160 уаї бі уаї Нів Авп Аза пуб ТПг о Тув Рго Агд бій бі біп Рпе Авгп 60 165 170 175 зек ТПпг Туг Агку Уаї Уа1ї Бек Уаі1! Ггец ТПг Уаї Іец Нів бі1п Авр Тгр

180 185 190

А1а Маї сій Терр біц Бек Авп с1у біп Рго б1іц Авп Авп Туг пув ТПг 260 265 270

ТПЕ Рго Рго Маї Гей Авр Бек Авр біу Бек Рпе Рпе Іеи Туг бБег Аг4д 275 280 285 тей ТпПг Уаі1 Авр Ппув Бек Агуд ТЕр біп біц б1у Авп Уаії Рпе бек Сув 290 295 300 зек уаї Меє Нів сій АТа гейш Нів Авп Агуд Рпе ТПг о біп Гув бБекг Іецй 305 310 315 320 век Гей Бек Рго с1у Гув 325 «2105 574 «2115» 450 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» аа 1-478: гадЗ людини (аа 29-450

МР 002277.4) аа 451-478: шус-шус-гексагістидинова мітка

Зо «4005 574 уаї Рго Уаї Уаї Тгр Аїа сіп сій сіу Аза Рго Аїа сіп Гей Рго Сув 1 5 10 15 век Рго ТПг Іїе Рго Гец біп Авр Гец бек гей Гей Агуд Агуд Аїа с1Уу 20 25 30 уаї тТпПг Тер біп Нів сбіп Рго Авр Бек б1і1у Рго Рго Аїа Аїа Аа Рго 35 40 45 сі1у Нів Рго гейш АТа Рго с1іу Рго Нів Рго Аї1а Аза Рго Бек бБег Тгр 50 55 бо с1у Рго Агуд Рго Агуд Акуд Туг Тс Уаї Гей Бек Уаї С1у Рго С1у с1У 65 70 75 80

Те Агуд Бек с1у Агуд Гец Рго Гец біп Рго Агуд Уаї сіп Гец Ар б1ц 85 90 935

Ага сб1у Агд біп Агуд б1у Авр Рпе бБег Іей Тгр ей Агуд Рго Азїа Аг4д 100 105 110

Агуд Аза АвБр Аа с1і1у б1іц Ту Агуд Аза Аїа Уа1ї Нів гей Агуд АБр Агд 115 120 125

А1їа гей Бек Сув Агд Гей Агуд тей Агуд тей б1у біп А1ї1а Бек Меє ТпПг 130 135 140

А1їа Бек Рго Рго біу Бек Гей Агуд Аза б5Бег Авр Тер Уаї І1їе Гец Авп 145 150 155 160

Сув Бек Рпе Бек Агуд Рго Авр Агуд Рго Аїа Бек Уаії Нів Тер Рпе Аг4д 165 170 175

Авп о Агуд с1у біп б1у Агд Уаї Рго Ууаії Агу бій Бек Рго Нів Нів Нів 180 185 190

Те Аїа бій Бек Рпе Гец Рпе Гец Рго біп Уаї Бек Рго Мес Авр 5ег 195 200 205 сіу Рго Тер сіу Сув Іїе Гец ТПг Туг Агуд Авр б1іу Рпе Ап Уаї 5ег 210 215 220 бо І1е Меє Туг Авп Ге ТПг о Уаї Гей с1у Ггеш бій Рго Рго ТПг Рго Гей 225 230 235 240

ТПг Маї Тук Аїа сіу Аїа сіу Бек Агуд Маї с1у Гей Рго Субв Аг Іецй 245 250 255

Рго Аї1а с1у Маї сб1у ТПг Агуд Бек Рпе їей ТПпПг Аза Гув Тер ТПг РгО 260 265 270

Рго с1і1у біу б1у Рго АБр Гей Гей Уаї ТПг с01у Авр АвБп б1у АБр РПе 275 280 285

ТПг гей Агд гей сій Авр Уаї Бек біп Аї1а біп А1ї1а с1у ТпПг Туг ТПпг 290 295 300

Сув Нів І1е Нів гейш біп біш сбіп сбіп Гец АБп Азїа ТПг о Уаї ТпПг Гей 305 310 315 320

Аїа ч11е чІ1е ТПг УМаї ТПг Рго пуб Бек Рпе бі1іу Бек Рго біу бБекг Іец 325 330 335 сіу Ппув Гешп Гецп Сув біц Уаї ТПг Рго Уаї Бек б1у біп біц Агд РПе 340 345 350

Ууаї Тер бек Бек Гей Авр ТПг Рго Бек біп Агд Бек РПпе 5Бег с01у Рго 355 360 365

Тер гец біц Аїа сіп сій Аїа сіп Гей Гей бек біп Рго Тгр сіп Сув 370 375 380 сіп Гей Ту біп сіу сіц Агуд Гец Гец сіу Аїа Аїа Уаї Тук Рпе ТПг 385 390 395 400 сій Гей Бек Бек Рго сіу Аїа сбіп Агуд Бек б1у Агд Аїа Рго с1у Аї1а 405 410 415

Тец Рго Аї1а сі1іу Нів гейш біш сіп пув Гец І1е Бек б1п 61 АвБр Іецй 420 425 430 сіу б1у бі1іш біп пув Гей І1е бек б1іц сій Авр тей Нів Нів Нів Нів 435 440 445

Нів нів 450

Зо «2105 575 «2115» 655 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» аа 1-683: ГадЗ людини (аа 29-450

МР 002277.4) аа 451-683: юІдсгавЕс «4005 575 уаї Рго Уаї Уаї Тгр Аїа сіп сій сіу Аза Рго Аїа сіп Гей Рго Сув 1 5 10 15 век Рго ТПг Іїе Рго Гец біп Авр Гец бек гей Гей Агуд Агуд Аїа с1Уу 20 25 30 ма1і1 тп Тер біп Нів біп Рго Авр Бек с1у Рго Рго Аїа Аїа Аїа Рго 35 40 45 сі1у Нів Рго гейш АТа Рго с1іу Рго Нів Рго Аї1а Аза Рго Бек бБег Тгр бо сіу Рго Агуд Рго Агуд Агуд Тугк ТпПг Уаї Ггец бек Уаі с1у Рго сі1у с1У 50 65 70 75 80

Ага сб1у Агд біп Агуд б1у Авр Рпе бБег Іей Тгр ей Агуд Рго Азїа Аг4д 100 105 110 55 Агуд Аза Авр Аїа с1у сіц Ту Агуд Аїа Аза Уаї Нів Гей Агуд АБр Агд 115 120 125

А1їа Бек Рго Рго біу Бек гей Агуд Аза бБег Авр Тгр Уа1ї І1їе ей Авп бо 145 150 155 160

Сув Бек Рпе Бек Агуд Рго Авр Агуд Рго Аїа Бек Уаії Нів Тер Рпе Аг4д

165 170 175

Те Аїа бій Бек Рпе Гец Рпе Гец Рго біп Уаї Бек Рго Мес Авр 5ег 195 200 205 сіу Рго Тер сіу Сув Іїе Гец ТПг Туг Агуд Авр б1іу Рпе Ап Уаї 5ег 210 215 220

І1е Меє Туг АвБп тей ТПг Уаї тей б1у Гей бій Рго Рго ТПг РгГО Іей 225 230 235 240

ТПпг Маї Ту Аїа с1у А1а сіу Бек Акуд Уаї с1у Гей Рго Сув Агуд Гей 245 250 255

Рго сі1у с1у б1у Рго Авр тей Іїей Уа1і ТПпг б1у АБр АБп б1у Авр РПе 275 280 285

А1ї1а І11е чІ1е ТПг Уаї ТП Рго Ппув Бек Рпе с1іу Бек Рго біу Бек Гей 325 330 335 сіу Ппув Гешп Гецп Сув біц Уаї ТПг Рго Уаї Бек б1у біп біц Агд РПе 340 345 350 уаї Тер Бек Бек Ггецш Авр ТПг Рго бек сбіп Агуд Бек Рпе бек с01у Рго 355 360 365

Тер гец біц Аїа сіп сій Аїа сіп Гей Гей бек біп Рго Тгр сіп Сув 370 375 380 сіп Гей Ту біп сіу сіц Агуд Гец Гец сіу Аїа Аїа Уаї Тук Рпе ТПг 385 390 395 400 січ Гей бек Бек Рго с1у Аїа сбі1іп Агуд Бек С1у Агуд Аї1а Рго с1у А1а 405 410 415

Тец Рго Аї1а сі1іу Нів гейш сій Рго Агуд біу Рго ТПг І1е Гпув Рго Сув 420 425 430

Рго Рго Сув пув Сув Рго Аза Рго АБп Тей Гей с1іу с1іу Рго Бек Уаї1ї 435 440 445

Рпе І1е Рпе Рго Рго пув І1е Гув Авр Уаії Ітейи Меєсє І1їе б5Бег Іецй б5ег 450 455 460

Рго І1е Маї ТПпг Сув Маї Уаї Уаї Авр Уа1ї Бек бій АвБр АвБр Рго Авр 465 470 475 480 мМма1 б1п І1е Бек Тер Рпбе Уаї Авп Авп Уа1! сі Уаї Нів ТПг Аїа с1п 485 490 495

ТП біп ТБ Нів Агуд б1ш Авр Туг Авп о бБег ТПг Гей Агуд Уаї Уаї 5ег 500 505 510

Аза тей Рго І1е біп Нів біп Авр Тер Меє Бек с1у Ппув біц РПе Гувг з15 520 525

Сув пув Уаі1 АвБп АвБп о пув Авр Гец Рго Аїа Рго І1ї1е біц Агуд ТПг пе 530 535 540 век Ппув Рго Ппув сіу Бек Уаі Агуд Аїа Рго сбіп Уаї Тук Уаї Ггец Рго 545 550 555 560

Рго Рго біц бій біш Меє ТПг о пув Ппув біп Уаї ТПг теп ТПг Сув Меє 565 570 575 уаї тПпгЕ Авр Рпе Мес Рго біц Авр І1е Тук Уаії сій Тгр ТПг Авп Авп 580 585 590 сіу Ппув ТПпгЕ біц Гец Авп о Тук Ппув Авп о ТПг біц Рго Уаї Ггец Авр 5ег 95 6оо 605

Авр с1і1у Бек Тук Рпе Меє Туг Бек губ Те Агуд Уа1і бій Гпув Гув Авп 610 615 620

Тер уа1 сій Агуд Авп Бек Туг Бек Сув Бек уа1 Уа1 Нів сіц сС1у Іей 625 630 635 640 бо Нів Авп о Нів Нів ТПг ТП о пув Бек Рпе Бек Агуд ТПг Рго с1у Гув 645 650 655

«2105 576 «2115 516 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» аа 1-533 (аа 18-533 ХР 005570011.1 яванського макаки, модифікована з заміною амінокислоти в положенні 74 на Р відповідно до

ХР 001108923.1 макаки-резуса «4005 576

Аза Рго Маї Ппув Рго Рго біп Рго б1у А1ї1а бій І1ї1е Бек Уа1ї Уа1ї Тгр 1 5 10 15

А1а сбіп сіц б1у Азїа Рго Аїа сіп Гей Рго Сув Бек Рго ТПг І1е Рго

Тец біп Авр Гей бек Ггец гей Агуд Агуд Аїа сіу Уаї ТПпг Тер сіп Нів біп Рго Авр Бек с1у Рго Рго Аза Рго Аза Рго біу Нів Рго Рго Уаї 20 зо 55 бо

Рго сіу Нів Агд Рго А1ї1а Аза Рго Туг Бек Тер с1у Рго Агд Рго Агд 65 70 75 80

Ага Тук ТПг Маї Гей Бек Маї б1у Рго б1у б1у їей Агуд Бек 01уУу Аг4д 85 90 935 25 їецп Рго Гей біп Рго Агуд Уаі1і сіп Гей Авр біц Агуд б1у Агд біп Агд 100 105 110 сіу Авр Рпе Бек Гец Тер Гец Агуд Рго Аїа Агуд Агуд Аїа Авр Аза с1Уу 115 120 125 сі ту Агуд Аїа ТПг оУуаї Нів гей Агуд АвБр Агуд Аза Іец бек Сув Агд 30 130 135 140

Те Агуд Ге Агуд Уаії сіу біп Аїа Бек Мес ТПг Аза б5Бег Рго Рго с1Уу 145 150 155 160 зек Гей Агуд ТПг о Бег Авр Тер Уаї Іїе Ггец Ап Сув Бек РПпе 5Бег Агд 165 170 175 35 Рго Авр Агуд Рго А1ї1а Бек Уа1і Нів Тер Рпбе Агуд Бек Акуд с1у б1іп Щ1У 180 185 190

Агуд Маі1 Рго Уаї бсіп б1у Бек Рго Нів Нів Нів гей Аїа сбіц Бек РПе 195 200 205

Тецшп Рпе Гей Рго Нів Уа1 с1у Рго Мес Авр Бек б1у тей Тегр С1Уу Сув 40 210 215 220

І1е пейп ТПг Туг Агуд Авр б1у Рпе Авп Уаії Бек І1е Меє Туг АвБп Іецй 225 230 235 240

ТПгЕ Уаї Ггец сіу Гей сій Рго Аїа ТПг Рго тей ТПпг Уаї Туг Аї1а щЩ1Уу 245 250 255 45 А1а с1іу Бек Акуд Уаї біц Гей Рго Сув Агуд Гей Рго Рго Аїа Уа1і! Щ1У 260 265 270

ТПг біп Бек Рпе Гей ТПг Аїа пу5 Тгр Аїа Рго Рго сі1у с1у 1уУу Рго 275 280 285

Авр Гей гей Маії Аїа с1у АвБр АБп б1у АБр Рпе ТПг Іей Агуд Іей б1ц 290 295 300

Авр Маі1 Бек біп Аїа біп А1а сі1іу ТПг Туг І1е СувБ Нів І1е Агд Іей 305 310 315 320 сіп б1у біп сбіп Гец Авп Аїа ТПг оУаї ТПг ге Аза чІ1ї1е І1е ТПг Уаї 325 330 335

ТПг Рго Ппув Бек Рпе біу Бек Рго біу Бек Ге біу Ппув Гей Гей Сув 340 345 350 сі Уаї ТПпг Рго Аїа Бек с1у сбіп сіц Нів Рпе Уаї Тер бек Рго Іецй 355 360 365

АвпоТтТПг Рго Бек біп Агуд Бек Рпе Бек б1у Рго Тгр тей бій Аз1а сіп бо 370 375 380 бі А1а сбіп гей гей Бек біп Рго Тер біп Сув біп Гей НівБ біп .Щ1У

385 390 395 400 сій Агуд Гей Ге сіу Аїа Аїа Уаї Тук Рпе ТПг біц Гец бек Бек Рго 405 410 415 с1у А1ї1а сбі1іп Агуд Бек б1у Агуд Аза Рго сі1у Аїа тей Агд Аза сС1у Нів 420 425 430 тей Рго Гец Рпе Гец Іїе Гец сіу Уаї Ггецш Рпе Гецш Гецп Гецй Гей Уаї 435 440 445

ТП б1у Аа Рпе с1у Рпе Ні тей Тгр Агуд Агуд біп Тер Агуд Рго Агд 450 455 460

Агуд Рпе Бек Аїа теп сіц сіп с1у І1е Нів Рго Рго сбіп Аїа с1і1п 5Бег 465 470 475 480 пув І1е бі сбіц Ге сіц сіп сіц Рго біц Гец біц Рго біц Рго сі1ц 485 490 495

Те бій Агуд біц Гец сіу Рго біц Рго біц Рго б1іу Рго біц Рго сб1іц

З0о 505 510

Рго сі біп ей 515 «2105 577 «211» 449 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 577 сіп Уаі1 сбіп Гец Уаі сіц Бек сі1у сіу сіу Уаї Уаї біп Рго с01у Агд 1 5 10 15 зек гецп Агд Гей бБег Сув Уаі1 Аїа бек с1у Ропе ТПг Рпе бБег б5Бег Туг 20 25 30 сі1у Меє Нів Тер уаї Агу сбіп Аза Рго сіу туз бі1у теп бій Тер Уаї

Аза ч11е чІ1е Тер Туг Авр б1у Бек Авп Гпув Туг Туг Аза Авр Бек Уаї1ї 35 зо зо бо пув б1у Агуд Рпе ТПг Іїе Бег Агуд АвБр Ап Бек Пув АБп ТПг сбіп Туг 65 70 75 80 тей біп Мес Ап о бБег Гец Агуд Аїа біц Авр ТПг Аза Уаї Тук Тук Сув 85 90 935 40 А1а Бек Ммаї Аїа тТПг Бек с01у Авр Рпе Авр Тугк Тук с1у Мес АБвр Уаї 100 105 110

Тер б1у біп сіу ТПг ТПг оУаї ТПг оУаї Бек Бек Аза Бек ТПпг ув Щ1Уу 115 120 125

Рго Бек Маі Рпе Рго тей Аза Рго Суб Бек Агуд Бек ТПг бек бій б5Бег 45 130 135 140

ТПг Аїа Аїа гей сіу Сув Гей Маї Ппув Авр Туг Рпе Рго бій Рго Уаї 145 150 155 160

ТпПг Маї Бек Тер Авп Бек бі1у А1їа Іїецй ТПг Бек с1іу Ма1 Нів ТПг Ріе 165 170 175

Рго Аїа Уаї Гецш біп Бек Бек сіу Гей Туг Бек Гей бек Бек Уаї Уаї 180 185 190

ТПг Маї Рго Бек бек бек Гей с1у ТПг пуб ТПг о Туг ТПг Сув Авп Уаї 195 200 205

Авр Нів Пув Рго Бек АвБп о ТПг пув Ууа1ї Авр пуб Агуд Уаї сі Бек Гув 210 215 220

Тук б1у Рго Рго Сув Рго Рго Суб Рго Аїа Рго Рго Уаі Аїа с01у Рго 225 230 235 240 зек Уа1 Рпе Гей Рпе Рго Рго Пув Рго Пув Авр ТПг Гец Мес Іїе 5ег 245 250 255 бо Агуд Тс о Рго бі Уаї ТПпг о Сув Уаї Уаї Уаї Авр Уаї Бек б1п 610 Авр 260 265 270

Рго сіц Уаї сбіп Рпбе АБп Тер Туг Уаї Авр с1у Уаі1 сіц Уаї Нів Авп 275 280 285

Аза пув ТПг пуб Рго Агуд бій бій біп Рпе АвБп Бек ТПг Туг Агуд Уаї1ї 290 295 300

Мма1 бек Маї Гей ТПг Уаї Ггецш Нів сбіп Авр Тер Гей Авп с1у їув 1 305 310 315 320

Тук пув Сув пув Маї бек Авп пуб сіу Гей Рго Бек Бек І1е бі Гпув 325 330 335

ТПгЕ І1е 5ек пуб Аїа пув с1у біп Рго Агуд бій Рго біп Уаі1ї Туг ТПпг 340 345 350

Те Рго Рго Бек сбіп сіц сіц Мес ТПг о пув Авп о біп Уаї Бек Гец ТІПг 355 360 365

Сув Гешп Уаі1 Ппув с1іу Рпе Тукг Рго Бек АвБр Іїе Аїа Уаї сбіц Тер б1ц 370 375 380 зек АБп о бі1іу біп Рго бій Авп Авп о Туг пув ТПг ТК Рго Рго Уаї Іецй 385 390 395 400

Авр Бек Авр сі1у Бек Рпе Рпе Іей Туг Бек Агу Гей ТПг Уа1і Авр Гув 405 410 415 зек Агд Тер сбіп бі б1у Авп Уа1 РПе Бек Сув Бек Уаї Меє Нів сС1и 420 425 430

Аза тей Нів АБп о Нів Туг ТПпг біп пув Бек Гей Бек Гей Бек теп 01У 435 440 445

Туз «2105 578 «2115» 214 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність

Зо «2205 «223» синтетична «4005 578 січ І1е Уаї Гей ТПг біп бек Рго Аїа ТПг ІТей бек Гей Бек Рго с1Уу 1 5 10 15 сій Агуд ТПг Тпг Гей бБег Сув Агуд Аїа Бек біп Агуд ч11е Бек ТПг тТуг 20 25 30

Тук Авр Аїа бек пуб Агуд Аїа ТПг с1у І1е Рго А1ї1а Агуд Рпе бБег ШУ 50 55 бо зек біу Бек сіу ТПг сіу Рпе ТПг Гец ТПг І1е Бек Бек Ггец біц Рго 65 70 75 80 бі АБр Рпе Аїа Уаї Туг Тук Сув сбіп біп Агуд Бек АБп Тгр Рго Гей 85 90 935

ТПЕ Рпе сіу сіу сіу ТПг пув Маї сій ч1І1е пув Агуд ТПг Уаї Аї1а А1а 100 105 110

Рго Бек Маі Рпе І1е Рпе Рго Рго Бек АвБр бій біп їей Гпув Бек У 115 120 125

ТПг Атїа бек Уаї Уаї Сув гей Гей Авп Авп Рпе Туг Рго Агуд сій А1а 130 135 140 пув Уа1 біп Тер пув Уаі1і АвБр АБп Аїа Гец біп Бек б1у Ап Бек сіп 145 150 155 160 бі Бек Уаї ТПг бій біп Авр бБег Пув Авр Бек ТПг Туг Бек Гец 5ег 165 170 175 зек ТПпг Гей ТПг о Ггец Бек пув Аза Авр Тук біц туз Нів Кгув Уаї Туг 180 185 190

Аза Сув сіц Уаї ТП Нів біп с1у Гей Бек Бек Рго Уа1! ТПг Ппув бБег 60 195 200 205

Рпе АБп Агуд с1у бі Сув

«2105 579 «2115» 450 «212» БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 579 сіп Уаі1 сбіп Гец Уаі сіц Бек сі1у сіу сіу Уаї Уаї біп Рго с01у Агд 1 5 10 15 зек Гей Агуд Гей Бек Сув Уа1і Аїа Бек сбіу Рпе ТПг Рпе Бек Бек Тукг сі1у Меє Нів Тер уаї Агу сбіп Аза Рго сіу туз бі1у теп бій Тер Уаї

Аза ч11е чІ1е Тер Туг Авр б1у Бек Авп Гпув Туг Туг Аза Авр Бек Уаї1ї бо 20 пув б1у Агд Рпе ТПг І1їе 5Бег Агу Авр АвБп Бек їув АБп ТПг біп Туг 65 70 75 80 тей біп Мес Ап о бБег Гец Агуд Аїа біц Авр ТПг Аза Уаї Тук Тук Сув 85 90 935

А1ї1а Бек Маії А1їа ТПг Бек б1у Авр Рпе Авр Туг Тук сіу Меєс Авр Уаї1ї 25 100 105 110

Рго Бек Маі Рпе Рго тей Аза Рго Суб Бек Агуд Бек ТПг бек бій б5Бег 130 135 140 30 ТПпг Аза Ата Гей сіу Сув гешп Маї пув Авр Тук Рпе Рго сій Рго Уаї1ї 145 150 155 160

Рго А1їа Маї Гей біп Бек Бек бі1іу Гей Туг Бек Гей бБег Бек Уа1ї1 Уаї1ї 35 180 185 190

Авр Нів Пув Рго Бек АвБп о ТПг пув Ууа1ї Авр пуб Агуд Уаї сі Бек Гув 210 215 220 40 Тук 61у Рго Рго Сув Рго Рго Сув Рго Аїа Рго бій Рпе Гей с1у 0Щ1У 225 230 235 240

Рго Бек Маії Рпе Гей Рпе Рго Рго пуб Рго Гув АБр ТПг Гей Меє Ше 245 250 255 век Агуд ТПг Рго сіц Уа1 ТПг Сув Уаї Уаї Уаї Авр Уаї Бек біп с1ц 45 260 265 270

Авр Рго сіц Уаї біп Рпе АвБп Тер Ту Уаі1 Авр сіу Уаї сіц Уаї Нів 275 280 285

Авп о Аїа пув ТПг пуб Рго Агуд бій бій бі1іп Рпбе Авп Бек ТПг Туг Агд 290 295 300 50 Уа1т1 уУаї Бек Маї пеп ТПг Уаї Ггешп Нів біп Авр Тер Гей Авп с1у Гув 305 310 315 320 сій Тук Ппув Сув Ппув Уаі1і Бек АвБп Ппув сіу Гец Рго Бек Бек Ії1е с1ц 325 330 335

Кпув ТпПг Іїе Бек пув Аїа Ппув с1у біп Рго Агуд біц Рго сіп Уаї Тукг 55 340 345 350

ТПгЕ Гей Рго Рго Бек сіп бій бій Меє ТПпг гув Авп біп Уаі1ї бБекг Іец 355 360 365

ТПгЕ Сув гец УМаї Ппув сіу Рпе Туг Рго Бек Авр ч1І1е Аїа Уаї сій Тгр 370 375 380 бо сій Бек АвБп б1іу біп Рго бій АБп о Авп о Туг Пув Тс ТОК Рго Рго Уаї1ї 385 390 395 400 тей Авр Бек Авр сіу Бек Рпе Рпе Гец Туг Бек Агуд Гец ТПг Уаї Авр 405 410 415 пув Бек Агуд Тер біп бі с1у Авп Уаї РіПе Бек Сув Бек Уаї Меє Нів 420 425 430 сі Атїа Ггец Нів Авп Нів Тукг ТПг біп Ппув Бек тей Бек Ггец Бек Іецй 435 440 445 сіу Гув 450 «2105 580 «211» 445 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 580 сіп Уаі1 сбіп Ге сіп сіп Тер сС1у Аїа сіу Гец Гец Ппув Рго Бек біц 1 З 10 15

Тук Тгр АвБп о Тгр ч11е Агуд сіп Рго Рго сіу Ппув сі1у Гей бій Тгр Уаї 35 40 45 сі1у бій І1е Бек Нів Акуд біу Бек ТПг Авп Туг Авп о Рго Бек Геч ув 50 55 бо век Агуд Уа1 ТПг Іїе Бек Гец Авр ТПг Бек Ппув АвБп о біп Рпе бек Гей 65 70 75 80 пув Гей ТПг Бек Уа1і ТПг Аїа Аїа Ар ТПг Аїа Уаї Тук Тук Сув бБег

Зо 85 90 935

ТПг гец Уаї ТПг Уаї бек бек Аїа бек ТПг пув с1іу Рго Бек Уаї РПе 115 120 125

Рго пеп Аїа Рго Сув Бек Агуд Бек ТПг бБег бій бек ТПг Аїа Аїа ей 130 135 140 сіу Сув Гешп Уаі1і Ппув Авр Тук Рпе Рго біц Рго Уаї ТПг Уаї Бек Тгр 145 150 155 160

Ап обБек сі1у Аїа Іец ТПг Бек сі1у Ууаї Нів ТПг Рпе Рго Аїа Уаї Іей 165 170 175 сіп Бек Бек сіу Гец Тукг Бек Гец Бек Бек Уаї Уаї ТПг Уаї Рго 5ег 180 185 190 зЗзек Бек Гей сіу ТПг пув ТПг Тук ТПг Сув Авп Уаї Авр Нів пув Рго 195 200 205 зек АБвп ТПг о пув Маії Авр пув Агуд Уаї біц Бек пув Тук б1у Рго Рго 210 215 220

Сув Рго Рго Сув Рго Аїа Рго Рго Уаі Аїа сіу Рго Бек Уаї РПе Гец 225 230 235 240

Рпе Рго Рго Ппув Рго пуб АБр ТПг тей Меє І1е бБег Агу ТПг Рго б1ц 245 250 255 уаї тПг Сув уаї Уаї Уаї Авр Уаії Бек біп сій Авр Рго сій Уаї сіп 260 265 270

Рпе Авп о Тгр Тук УМаї АвБр с1у уаї сі Ма1 Нів АвБп Аїа пув ТПг Гув 275 280 285

Рго Акд бі бій бі1п Рбе Ап бек ТПг Туг Агуд Уаї Уа1ї Бек Уаї Гей 290 295 300

ТП Маї гейш Нів сіп Авр Тер тец АБп об1у Ппув бі Тук Ппув Сув Гу 305 310 315 320

Ууаї Бек Авп пув б1у Ггецп Рго Бек бек чІ1ї1е сій пув ТПг І1е Бек Гпув 60 325 З3о 335

Аза пув с1у біп Рго Агуд бій Рго біп УМаї Туг ТПпг Тей Рго Рго 5ег

340 345 350 сіп біц біц Месє ТпПг о Ппув Авп о біп Уаї Бек Ггецш ТПг Сув Гецп Уаї Гув 355 360 365 сіу Рпе Тукг Рго Бег Авр Іїе Аїа Уаї біц Тер біц Бек АБп с01у сіп 370 375 380

Рго бій АБп АБп о Туг пуб ТПг Тс Рго Рго Уаі Іей Авр бБег АБр Щ1У 385 390 395 400 зек Рпе Рпе Гей Туг Бек Агуд Гец ТПг Уаї Авр Ппув Бек Агд Тер сіп 405 410 415 сі б1у Авп Ма1ї Рпе Бек Сув Бек Маї Меє Нів бій А1їа Ггец Нів АвпП 420 425 430

Нів Тук ТП сіп пуб Бек Іец Бек Іец бек Гей сС1Уу Гув 435 440 445 «2105 581 «2115» 214 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 581 сій Іїе Уаі1ї Гец ТПг біп Бек Рго Аїа ТПг Ггец бек Гей бек Рго с01Уу 1 З 10 15 сій Агуд Аїа ТпПг Гей бБег Сув Агуд Аїа Бек біп Бек Уаї Бек Бек Тукг 20 25 30

Тен Аза Тер Тук сбіп сіп Ппув Рго біу біп Аїа Рго Агд Гецй Гей Уаї 35 40 45 тук 61у Аїа Бек АБп Агуд Аза ТПг с1у ІчІ1е Рго Аїа Акд Рбе бек Щ1У 50 55 бо зек біу Бек сіу ТПг Авр Рпе ТПг Гец ТПг І1е Бек Бек Ггец біц Рго 65 70 75 80 сій Авр Рпе Аїа Рпе Туг Тук Сув біп біп Агуд Бек Ап Тгр Рго Гей 85 90 935

ТПг Азїа Бек Ма1ї Уа1ї1ї Сув геш Гей Авп Авп Рпе Туг Рго Агд сій А1а 130 135 140 пув Уа1 біп Тер пув Уаі1і АвБр АБп Аїа Гец біп Бек б1у Ап Бек сіп 145 150 155 160 сій Бек Уаі1 ТПпгЕ сіц сіп Авр Бек Ппув Авр Бек ТПг Тук Бек Гец 5ег 165 170 175 зек ТПпг Гей ТПг о Ггец Бек пув Аза Авр Тук біц туз Нів Кгув Уаї Туг 180 185 190

Аза Сув сіц Уаї ТП Нів біп с1у Гей Бек Бек Рго Уа1! ТПг Ппув бБег 195 200 205

Рпе АвБп Акуд б1у 6б1и Сув 210 «2105 582 «2115 525 «212» БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична 60 «4005 582

Мес Тер біц Аїа сбіп Рпе гецш сіу Ггецй Гей Рпе Гей сіп Рго Гей Тгр 1 5 10 15 уаї Аїа Рго уаї Ппув Рго Гей біп Рго сіу Аїа сій УМаї Рго Уаї Уаї 20 25 30

ТЕр Аїа сіп сіц с1у Аїа Рго Аїа біп Гей Рго Субв бБег Рго ТПг І1е 35 40 45

Рго пе біп Авр тей Бек тей їей Агу Агуд А1ї1а бі1у Уа1 ТПпг Тер сі1п 50 55 бо

Нів біп Рго Авр Бек біу Рго Рго Аза Аїа Аїа Рго сіу Нів Рго Іей 65 70 75 80

Аза Рго сі1у Рго Нів Рго А1ї1а Азїа Рго Бек Бек Тер с1у Рго Агд Рго 85 90 935

Ага Ага Туг ТПг о УМаї Гей Бек Маї б1у Рго б1у б1у Іїей Агд Бек Щ1Уу 100 105 110

Агуд гей Рго пецш біп Рго Агуд Уаї сбіп Гей Авр бій Агуд с1у Агудуд сіп 115 120 125

Ага сб1у АБвр Рпе Бек тей Тгр тей Агуд Рго Аї1а Агуд Агуд Аза АБр Аза 130 135 140 с1у бій Тук Агуд Аза АТїа Уа1 Нів Гец Агуд АБр Агуд Аза Іецй бек Сув 145 150 155 160

Ага гей Агд Гей Агуд тей б1у біп А1а Бек Меєсє ТпПг Аза бек Рго РгО 165 170 175 сіу Бек Гей Агуд Аїа Бек Авр Тер Уаї Іїе Ггец Ап Сув Бек РПе 5ег 180 185 190

Агуд Рго Авр Агуд Рго Азїа Бек Ма1і Нів Тгр Рпбе Агд АвБп Агуд с1у сіп 195 200 205 с1у Акд Уаї Рго уаї Агу бій Бек Рго Нів Нів Ні Іец А1ї1а сі 5бег 210 215 220

Рпе пей Рпе гей Рго біп Маї Бек Рго Меєс Авр Бек б1у Рго Тер Щ1У 225 230 235 240

Сув Іїе Гей ТПг Туг Агуд Авр сб1у Рпе Ап Уаї Бек ІчІ1їе Мес Тук Авп 245 250 255 тей ТПпПг Уаі1 Ггецшц сіу Гец біц Рго Рго ТПг Рго Гец ТПг Уаї Туг А1а 260 265 270 с1у Аїа с1у Бек Акуд Уа1 сіу Ггеш Рго Сув Акд тей Рго Аїа с1у Уаї1ї 275 280 285 сіу ТПпг Агуд Бек Рпе Гец ТПг Аїа Ппув Тер ТПгЕ Рго Рго сіу сіу с1У 290 295 300

Рго АБвр Гей гей Маї ТПпг б1у Авр Авп б1у АвБр Рпе ТПг Іей Агу Іецй 305 310 315 320 сб1п АвБр Уаї Бек сбіп АТїа сіп Аза сіу ТПг Тук Тпг Сув Нів т11е Нів 325 330 335 еп біп бій біп біп Гей Авзп Аїа ТПг Уаї ТПг їеш Аза І1е 11 ТПг 340 345 350

Ууаї ТтТПпг Рго Ппув Бек Рпе сіу Бек Рго біу Бек Гешп сі1у Ппув Геч Гей 355 360 365

Сув бій Уаі1 ТПг Рго Уаі1і Бек с1у біп біц Агуд Рпе Уаї Тер Бек 5ег 370 375 380

Те Авр ТПг Рго Бек сбіп Агуд Бек Рпе Бек біу Рго Тер Гец сбіц Аї1а 385 390 395 400 сіп бій Аза сіп Гец Гей Бек біп Рго Тер сбіп Сув біп Гец Тук сіп 405 410 415 сіу бій Агуд Гешп Ге сСіу Аїа Аїа Уаї Тук Рпе ТПг біц Гец Бек 5Бег 420 425 430

Рго с1у Аїа біп Агуд Бек с1у Акуд Аїа Рго с1у Аїа Гей Рго Аї1а Щ1У 435 440 445

Нів гейш гей гец Рбе Іец І1е Іецйп сіу Уаї Гей Бек Гей Ггец Іец Іей 450 455 460 уаї тп с1у АТїа Рпе сіу Рбе Нів Іец Тгр Агд Агуд біп Тер Агд Рго бо 465 470 475 480

Агуд Агуд Рпе Бек Аїа їец бій сбіп с1у І1е Нів Рго Рго сбіп Аїа сіп

485 490 495 зек пув Іїе бі сіц Ге сбіц сбіп біц Рго біц Рго біц Рго біц Рго 500 505 510 бій Рго бій Рго бій Рго бій Рго бі Рго бій сіп Гей з15 520 525 «2105 583 «2115 15 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 583 бі АБп о Рго Уаї Ууаї Нів Рпе Рбе пуб АвБп І11е Уаї ТПг Рго Аг4д 1 5 10 15 «2105 584 «2115 17 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 584 адсадсеєсвд сссесає 17 «2105 585 «2115 22 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005 585 дсЕСЕДдсСвдд дЕСЕЕСадта 9 22 «2105 586 «2115 22 «2125 ДНК «213» Штучна послідовність «2205 «223» синтетична «4005» 586

Єгдссубаєд ЧЕсСООЧЯЧЕсвда ас 22 «2105 587 «2115» 665 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» ПІАдАОЗ.Ес бо «4005 587 тей біп Рго сіу Аїа сіц Уаї Рго Уаї Уаї Тгр Аїа сбіп сбіц с1у А1а

1 5 10 15

Рго Аї1а сіп Гей Рго Сув Бек Рго ТПг І1е Рго Те біп АБр Іецй 5ег 20 25 30

Ттец тей Агуд Агу Аїа с1і1у Уа1! ТПг Терр біп Нів бі1іп Рго АвБр Бек щу 35 40 45

Рго Рго Аїа Аїа Аза Рго с1у Нів Рго гейш АТїа Рго сіу Рго Нів Рго 50 55 бо

А1ї1а А1їа Рго Бек Бек Тгр б1у Рго Агуд Рго Агу Агу Туг Тпг Уаї Іец 65 70 75 80 зек Уаї б1у Рго бі1у б1у Гей Агуд Бек б1у Агд їецй Рго Іецй сбіп Рго 85 90 935

Ага Маії сбіп гей Авр бій Агуд б1у Агуд бі1іп Агу б1у Авр Рпе б5ег Іецй 100 105 110

Тер гей Агуд Рго Аїа Агуд Агуд Аїа Авр Аїа сіу сій Туг Агуд Аза А1а 115 120 125 уаї Нів еп Агуд Авр Агуд Аїа тец Бек Сув Агд Гей Агуд Гей Агуд Іецй 130 135 140 сіу біп Аїа Бек Мес ТПг Аїа Бек Рго Рго сбіу Бек Ггец Агуд Аїа 5Бег 145 150 155 160

Авр Тер Уаї І1їе теп АБп Сув Бек РПпе 5ег Агуд Рго Авр Агуд Рго А1а 165 170 175 зек уаї Нів Тер Рпе Агуд Авп Агуд с1у біп б1у Агуд Уаї Рго Уаї Агд 180 185 190 сі Бек Рго Нів Нів Нів тей А1ї1а сій Бек РпПе тей РпПе Гей Рго сіп 195 200 205

Ууаї Бек Рго Мес Авр Бек с1у Рго Тгр сіу Сув чІ1е Гей ТПг Туг Аг4д 210 215 220

Авр с1у Рпе АвБп УМаії Бек І1е Меє Туг АвБп Гей ТПг Уаї Іейш с1Уу Іецй 225 230 235 240 сій Рго Рго ТПг Рго пеп ТПг о Уаї Тук Аїа сС1у Аїа с1у Бек Ага Уаї1ї 245 250 255 сіу Гей Рго Сув Агуд Гец Рго Аїа сіу Уаї сіу ТПг Агуд Бек РПе Гец 260 265 270

ТПгЕ Атїа пув Тер ТПг Рго Рго с1у с1і1у б1у Рго Авр Іїей Іей Уа1ї ТпПг 275 280 285 сіу Авр АвБп осбіу Авр Рпе ТПг Гец Агуд Гец біц Ар Уаї Бек сбіп А1а 290 295 300 сбіп А1ї1а сі1у ТПг Тує ТпПг Сув Нів І1е Нів теп біп бі1іц біп сіп Гей 305 310 315 320

АБп Аза ТПг оУаї! ТтТПпг еп Аїа чІ1е чІ1е ТПг Уаї ТПг Рго пув Бек Ріе 325 330 335 сіу Бек Рго сіу Бек Гец сіу Ппув Гец Гец Сув біц Уаії ТПг Рго Уаї 340 345 350 зек б1і1у біп біц Агуд Рпе Уаі1ї Тер Бек Бек Ггец Авр ТПг Рго Бек сіп 355 360 365

Ага Бек Рпе Бек б1у Рго Тгр тей бій Азї1а бі1іп бій Аза біп Іецй Іей 370 375 380 зек біп Рго Тер сбіп Сув біп Гец Тук біп сбі1у бій Агд Гей Гей с01Уу 385 390 395 400

А1а А1їа Маї Тук Рпе ТПг сій Гей Бек Бек Рго с1у Аїа сб1п Агуд 5Бег 405 410 415 с1у Агд Аза Рго с1у АТїа Гей Рго Аїа сСіу Нів Іешп І1е б1п с1у Агд 420 425 430

Мек АвБр Рго пув Бек Сув Авр пув ТПг Нів ТПг о Сув Рго Рго Сув Рго 435 440 445

Аза Рго бій гей гей б1у б1у Рго Бек Уа1і Рпе Гей Рпе Рго Рго Гув 450 455 460

Рго пув Авр ТПг тей Меє І1е Бек Агу ТПг Рго бій Уа1 ТПпПг Сув Уаї1ї 465 470 475 480 бо ма1 Уаї Авр Уаї Бек Нів бі1ц Авр Рго сій Уаї пув Рпе Авп Тгр Туг 485 490 495 уаї Авр с1у Ма1ї сіц Уа1! Нів АБп Аїа Гув ТПг пув Рго Агуд бій с1и 500 505 510 сбіп Тук Авп бБег ТПг Туг Агуд Уа1! Уаї Бек Уаї Іец ТПпг Уаї Гей Нів 515 520 525 сб1п АвБр Тер Гей Авп о с1у Ппув сій Тук пув Сув пув Уаї Бек Авп Гув 530 535 540

А1їа гей Рго Аза Рго І1е бій пув ТПг І1е Бек їув Аї1а пув Ш1у біп 545 550 555 560

Рго Агд бій Рго біп Маї Туг ТПг тей Рго Рго Бек Агуд АБр біц Іецй зЗ65 570 575

ТПгЕ пув Авп обіп Уаї бек гей ТПг Сув Гей Уаї пув с1у Рпе Туг Рго 580 585 590 век Авр І1їе Аїа Уаі сіц Тер біц Бек АвБп б1іу біп Рго біц Ап АП 595 6оо 605

Тук пув ТПг ТПг Рго Рго Уаії Гей Авр 5Бег Авр сіу Бек РпПе РПе Ієй 610 615 620

Тук Бек Ппув Гей ТПг Уаії Авр пув бек Агд Тгр біп біп с1у Авп Уаї 625 630 635 640

Рпе Бек Сув Бек Уаї Меє Нів сій АтТа гейш Нів Авп о Нів Тук ТПг сіп 645 650 655 пув Бек Гец Бек Гец Бек Рго с01Уу Гувг бо 665 «2105» 588 «2115» 422 «2125 БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205

Зо «223» позаклітинний домен ПІАдАСЗ РІ8627 «4005 588 уаї Рго Уаї Уаї Тгр Аїа сіп сій сіу Аза Рго Аїа сіп Гей Рго Сув 1 5 10 15 век Рго ТПг Іїе Рго Гей сіп Авр Гец Бек Іїец Гей Агд Агд Аїа щ1У 20 25 30 уаї тТпПг Тер біп Нів сбіп Рго Авр Бек б1і1у Рго Рго Аїа Аїа Аа Рго 35 40 45 сі1у Нів Рго гейш АТа Рго с1іу Рго Нів Рго Аї1а Аза Рго Бек бБег Тгр зо 55 бо сіу Рго Агуд Рго Агуд Агуд Тугк ТпПг Уаї Ггец бек Уаі с1у Рго сі1у с1У 65 70 75 80

Агуд с01у Агуд біп Агуд б1у АБвр Рбпе 5Бег Гей Тер Гей Агуд Рго Аїа Агд 100 105 110

А1їа Бек Рго Рго біу Бек гей Агуд Аза бБег Авр Тгр Уа1ї І1їе ей Авп 145 150 155 160

АБп оАгуд с1у біп б1у Агуд Уаї Рго Уаії Агуд бій Бек Рго Нів Нів Ні 180 185 190

Те Аїа бій Бек Рпе Гец Рпе Гец Рго біп Уаї Бек Рго Мес Авр 5ег 195 200 205 сіу Рго Тер сіу Сув Іїе Гец ТПг Туг Агуд Авр б1іу Рпе Ап Уаї 5ег бо 210 215 220

І1е Меє Туг АвБп тей ТПг Уаї тей б1у Гей бій Рго Рго ТПг РгГО Іей

225 230 235 240

ТПг гей Агд гей сій Авр Уаї Бек біп Аї1а біп А1ї1а с1у ТпПг Туг ТПпг 290 295 оо

Сув Нів І1е Нів Гей сб1іп бій б1п біп Гей Азп Аїа ТПг Уаї ТПс Гей зо05 10 315 320

Аїа ч11е чІ1е ТПг УМаї ТПг Рго пуб Бек Рпе бі1іу Бек Рго біу бБекг Іец 325 ззо 335 сіу Ппув Гешп Гецп Сув біц Уаї ТПг Рго Уаї Бек б1у біп біц Агд РПе 340 345 з50 уаї Тер Бек Бек Ггецш Авр ТПг Рго бек сбіп Агуд Бек Рпе бек с01у Рго 355 зво 365

Тер гец біц Аїа сіп сій Аїа сіп Гей Гей бек біп Рго Тгр сіп Сув 370 375 зво сіп Гей Ту біп с1у бі Агуд Гец геш с1у Аїа Аїа Уаї Тук Рпе ТПг 385 90 395 400 сій Гей Бек Бек Рго сіу Аїа сбіп Агуд Бек б1у Агд Аїа Рго с1у Аї1а 405 410 415 тей Рго АТа сС1Уу Нів Іецй 420 «2105 589 «2115 44 «212» БІЛОК «213» Штучна послідовність «2205 «223» епітоп ПІАДОСЗ «4005 589 теп Агд Агуд Аза сіу Ма1 ТПг Тер сіп Нів біп Рго АБр Бек сС1у Рго 1 З 10 15

Рго Аїа Аїа А1Тїа Рго б1у Нів Рго гейш Аїа Рго сіу Рго Нів Рго А1а 20 25 зо

А1з1а Рго Бек Бек Тгр б1у Рго Агд Рго Агуд Агд Тугс

Claims

ФОРМУЛА ВИНАХОДУ

1. Виділене антитіло або його антигензв'язувальний фрагмент, що специфічно зв'язується з білком, кодованим геном-3 активації лімфоцитів (АСЗ3) людини, де антитіло або його антигензв'язувальний фрагмент містить варіабельну ділянку важкого ланцюга (НСМУК), яка містить амінокислотну послідовність ЗХЕО ІЮО МО: 418, і варіабельну ділянку легкого ланцюга (ГОМ), яка містить амінокислотну послідовність 5ЕО ІЮО МО: 426.

2. Виділене антитіло або його антигензв'язувальний фрагмент за п. 1, де антитіло або його антигензв'язувальний фрагмент має одну або декілька властивостей, вибраних з групи, що складається з: (а) зв'язують мономерний ГАЗ людини з константою дисоціації (КО) для рівноважного зв'язування 1,5 НМ, як виміряно в аналізі на основі явища поверхневого плазмонного резонансу при 25 27С; (Б) зв'язують мономерний ГАСЗ людини з КО 2 нМ, як виміряно в аналізі на основі явища поверхневого плазмонного резонансу при 37 "С; 60 (с) зв'язують димерний Г(АОЗ людини з КО 20 пМ, як виміряно в аналізі на основі явища поверхневого плазмонного резонансу при 25 С;

(4) зв'язують димерний ГАЗ людини з КО 90 пМ, як виміряно в аналізі на основі явища поверхневого плазмонного резонансу при 37 "С; (є) зв'язуються з клітиною, яка експресує ПІ АСЗ, з ЕС50 менше ніж приблизно 2 нМ, як виміряно в аналізі з використанням проточної цитометрії; (0 зв'язуються з клітиною, яка експресує пПАС3, з ЕС5О менше ніж приблизно 2,3 НМ, як виміряно в аналізі з використанням проточної цитометрії; (9) блокують зв'язування ПІ АСЗ з МНС класу ІІ людини з ІС50 менше ніж приблизно 20 нМ, як визначено за допомогою аналізу клітинної адгезії; (п) блокують зв'язування ПІ АСЗ з МНС класу ІЇ миші з ІС50 менше ніж приблизно 15 нМ, як визначено за допомогою аналізу клітинної адгезії; () блокують зв'язування ПІ АСЗ з МНС класу ІІ більше ніж на 90 95, як визначено за допомогою аналізу клітинної адгезії; () забезпечують звільнення від опосередкованого І АСЗ інгібування активності Т-клітин з ЕС5О менше ніж приблизно 2,5 НМ, як визначено в аналізі за репортерним геном люциферази; і (К) зв'язуються з активованими СО4- ії СО8- Т-клітинами з ЕС5О менше ніж приблизно 1,2 нМ, як визначено у флуоресцентному аналізі.

3. Виділене антитіло або його антигензв'язувальний фрагмент за п. 1, де виділене антитіло містить важкий ланцюг і легкий ланцюг, та де важкий ланцюг містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО: 577.

4. Виділене антитіло або його антигензв'язувальний фрагмент за п. 1, де виділене антитіло містить важкий ланцюг і легкий ланцюг, та де легкий ланцюг містить амінокислотну послідовність ЗЕО ІЮ МО: 578.

5. Виділене антитіло або його антигензв'язувальний фрагмент за п. 1, де виділене антитіло містить пару амінокислотних послідовностей важкого ланцюга/легкого ланцюга ЗЕО ІЮО МО: 577/578.

6. Фармацевтична композиція, яка містить виділене антитіло або його антигензв'язувальний фрагмент за будь-яким із пп. 1-5 і фармацевтично прийнятний носій або розріджувач.

7. Набір виділених полінуклеотидних молекул, що кодують антитіло або його антигензв'язувальний фрагмент за будь-яким із пп. 1-5, який містить першу полінуклеотидну молекулу, що кодує НОСМК антитіла або його антигензв'язувальний фрагмент та другу полінуклеотидну молекулу, що кодує І СУК антитіла або його антигензв'язувальний фрагмент.

8. Вектор, який містить набір полінуклеотидних молекул за п. 7.

9. Клітина, яка експресує вектор за п. 8.

10. Виділена клітина ссавця, що експресує набір виділених полінуклеотидних молекул за п. 7.

11. Спосіб інгібування росту пухлини або пухлинної клітини у суб'єкта, який передбачає введення суб'єкту, який потребує цього, терапевтично ефективної кількості антитіла або його антигензв'язувального фрагмента за будь-яким із пп. 1-5.

12. Спосіб за п. 11, в якому пухлина являє собою первинну або рецидивну пухлину.

13. Спосіб за п. 11, в якому пухлина являє собою пухлину, що розвинулася.

14. Спосіб за будь-яким із пп. 11-13, в якому пухлина присутня у суб'єкта із захворюванням або порушенням, вибраним із групи, що складається зі злоякісного новоутворення кровотворної тканини, раку головного мозку, нирковоклітинного раку, раку яєчника, раку сечового міхура, раку передміхурової залози, раку молочної залози, гепатоцелюлярної карциноми, раку кістки, раку товстої кишки, недрібноклітинного раку легені, плоскоклітинної карциноми голови та шиї, раку товстої та прямої кишки, мезотеліоми, В-клітинної лімфоми і меланоми.

15. Спосіб за будь-яким із пп. 11-14, в якому антитіло або його антигензв'язувальний фрагмент вводять у вигляді початкової дози, потім у вигляді однією або декількох доз другої черги, в якому кожну дозу другої черги вводять через 1-4 тижні після найближчої попередньої дози.

16. Спосіб за п. 15, в якому антитіло або антигензв'язувальний фрагмент вводять у дозі від приблизно 0,1 до приблизно 10 мг/кг ваги тіла суб'єкта.

17. Спосіб за будь-яким із пп. 11-16, в якому антитіло або його антигензв'язувальний фрагмент вводять суб'єкту в комбінації з другим терапевтичним засобом.

18. Спосіб за п. 17, в якому другий терапевтичний засіб вибраний із групи, що складається з інгібітора СТІ А4, антитіла до пухлиноспецифічного антигену, антитіла до антигену інфікованої вірусом клітини, інгібітора РО-11, інгібітора СО20, біспецифічного антитіла до СО20 ії СОЗ3, дієтичної добавки, такої як антиоксидант, антагоніста МЕСЕ, хіміотерапевтичного засобу, цитотоксичного засобу, опромінення, М5ЗАЇІЮ, кортикостероїду і будь-якого іншого виду терапії, придатної для послаблення щонайменше одного симптому, асоційованого із захворюванням або порушенням. бо 19. Спосіб за п. 17, в якому другий терапевтичний засіб являє собою інгібітор РО-1.

20. Спосіб за п. 19, в якому інгібітор РО-1 являє собою КЕСМ2810, ніволумаб або пембролізумаб.

21. Спосіб за п. 19 або 20, в якому інгібітор РО-1 вводять у дозі 1, З або 10 мг/кг ваги тіла суб'єкта.

22. Спосіб за будь-яким із пп. 11-21, в якому антитіло або його антигензв'язувальний фрагмент вводять підшкірно, внутрішньовенно, внутрішньошкірно, внутрішньочеревно, перорально, внутрішньом'язово або інтракраніально.

23. Спосіб лікування захворювання або порушення, яке піддається лікуванню за допомогою антагоністичного впливу на ГАСЗ, який передбачає введення суб'єкту, який потребує цього, терапевтично ефективної кількості антитіла або його антигензв'язувального фрагмента за будь- яким із пп. 1-5.

24. Спосіб за п. 23, в якому захворювання або порушення являє собою хронічну вірусну інфекцію, викликану вірусом, вибраним із групи, що складається з вірусу імунодефіциту людини (НІМ), вірусу гепатиту С (НСУ), вірусу гепатиту В (НВМУ), вірусу папіломи людини (НРУ), вірусу лімфоцитарного хоріоменінгіту (ГСОММУ) і вірусу імунодефіциту мавп (51М).

25. Спосіб за п. 23, в якому захворювання або порушення вибрано з групи, що складається зі злоякісного новоутворення кровотворної тканини, раку головного мозку, нирковоклітинного раку, раку яєчника, раку сечового міхура, раку передміхурової залози, раку молочної залози, гепатоцелюлярної карциноми, раку кістки, раку товстої кишки, недрібноклітинного раку легені, плоскоклітинної карциноми голови та шиї, раку товстої та прямої кишки, мезотеліоми, В- клітинної лімфоми і меланоми.

26. Фармацевтична композиція, що містить виділене антитіло за п. 5 та фармацевтично прийнятний носій або розріджувач. : шк | ч : ве а : ї ТОЖ ік у дввцю з ВАЄ, ; х У СВ й : ; ЯК ЕК Я Як Ко жк и - х пра С ще : парами чі со оз | : су довдд КО Бетевтньеянке и ЯВКОКЗ ; ї век 00 й і іо соавСВМм АК всоге й . Ї х деки й ї Е й7 ск .

у . ; : їн: : М ; Я : ож ко Ка ; КЛЕН КЕ ВВ ВКМ ЕВ ДТ ВЕНУ ЗМУ МКК

Фіг. 14

ДК Кос ое ооо ї ооо ; Х ЕТ тк З з Я . їх я т . З КІ К 5 асо. й . Х ххх кока ск ча Фх. ІЗ і ТОЖ (- іч ма х - с ХЕ З о в з сек КЯ М: я СЮ я ї ВЕВЯ еко швх і з Хо оюшох з Я сок У їх ОоБаКЯ ї ; щі З ; й ї КУ З у Ж х х З й Я х ї Ж З Х х ї шия Ж т маеражав у . КУ ї я . Ч їх вера 7, й 3 н х ; 5 З з ї х Ме вний ї ух ве ї су х й ія ; / х ї у і Її і дю У х . нку | ; і ! ; Х : х ї ! ї ! х я я І - я . пеггодсооооооооооооодооо од ВВ ооо кн КВУ зу каруніквачевн аж зузукакем

Фіг. 16

ІГ.

Соіоп2б І контрольне об» - о 42ддя о антитіло до АС х | ж антитіло до РВ-1 7 40004 ж антитіло до МА С-Я - Е о антитіло до РІОМІ що до лей ш 4004 Ти и у Кок 0 5 10 а 20 25 30 35 40 Днів після введення

Фіг. 2А

День 35 22001, | ся - КН. ш ШИ, щ 18004 а мк ТАС Жана 4200. м «вав о ш ше Т й - щ бої Ї тт 2 4004 є х о о" Бо о вав С ВИШ сс с м щі ж я « м С. ся 5 и щи « го а з а є ХО КО Я й КАМИ Ф хе Ку хх КИ а як г

Фіг. 28

Мез8 14004 «в контрольне їв - Т о Я зитнтла ло бен - 1200. : | я ОТ з антитіло до РІМІ М Ш 40004 2» антитіло ло МАСУ Ї Е і антитізо де РІЇ -ії тк ї й з і - 1 он Я ж Пі; КК к кни 0 Б 10 15 720 Д25 з0 Анів після введення фіг. ЗА

День 23 16005 рення ВИК свт Кен неннннннннй ВИЙ - 1400 е ш Та . Ж ання я ; х 1000. « - я во їх --- пи т» : " Ше К ОМ єве -х 2. - а й в я я 2 «к а ч 200 я в ше сс. или пот сов. пкектнн ле. зак - ще лк х 2 «а ї а щи Не Я | її я Ж и | с я чі Я « Ка за і ас - я лах я фіг. ЗВ арену кни ліфт чНЕ вує г п ж " ї жк | ; Ж ; Е К К Я Ж ; 7 ! щ | в ! -е я ж й - у к в ж уд ке й їй Ж ж є Ф є м | е и я и?

Фіг. 4Д Келезнкя - 8 ж . - Ва ж І Ж - ЕЕ я 5 і | це 8 і й ЖЕ є ж фони і ЕТ 7 Є Я. п - щ ! ек : Е: - ї Х уз о ящюх і й сер | : : Я знкеіннню | ! й фран ! і : - Щі | Щі ше В ДА нує нон кеоноррено нн нарив неон , а Гдоіснетунем соні екиврині нонох Ах рю ий нонххртнн ще зе к х я я ь » зи т шк о У х вх «у ее ее о в Ж -к гу ек ках ї а у й Гу У я? ж АК «У х? я як Ж і Кс ще м я Ж ЖЕ т . У

Фіг. 48

(як контрольне вівса г чан г - рок отАБі і т во) ж ВЕСМ2В10 і ш ; й - І Що сла Її ке БО. ; ве Я Е | / ж я ГИ з а Ї ДГ м Ь Днів після імплянтації

Фіг. 5А День 24 З Ка - я | і Борова є Бо

9 . е а? ШУ. а а у. ; дует чт ппнннннненнс Янко Вв кА. зе ю «ех «с Як ж ьеШ ще

Фіг. 58 че як Ботвнповий контроль ян ТА во -е КЕСНЯВІВ ? би 4 павізнЕОМОВІо і 8 и, у ПИ ій ки Й во ов Анів після імплантації

Фіг. А День 22 ж

КН . фанннннтннттнтютюнюнтнтюнснннтнн ДЕ феннннооооооогововоовоооаснняй ЗЕ зоба ва БО Е ч40о ! а." КЕ НВ їж і їоай - ВО А.

фо . : | ; ; г дало те а 200 попосоотою Дооврнноо» ай й Е -- - . ' 5 у. ЗБ. ж Сх. й ов « Я ще й а. ї « ща б и ди «к я - я - я Фе

Фіг. 6Е

Я ВН пунененеоегевовосгоовососогсвво» пооподреневневонекок Я ізинновнй кентрель

88. фонем кота с, рено С ВЕОН2ВЮ що 803 Яни ченЕСМОВ : т "ж. тво) ше 504 | | трхє ВОДОЮ з 4 | - ча зо в в ще

19. | фон ке хе зве зас фЕ в о 20 кт 40 що КН везе вера ий

Фіг. С як Ізотнповий контроль (25 хнукг -е пАБІ(25 мг/кт) -к ВЕСНОЮ мг/кг) я КЕСОМОВОЙ мкг) «ке ВЕСМОВТОКІ мкг)? тА 5 мік «чашок КЕОМОНОС1О зиукгі» тАВТ(25 мок) - 8004 х : Ж 5 ї Шо вою. І як ї д Є ) ш- Я Ед ! ки У я зх З о Іа й Є Її Е й і Е З и Б Докнеюхюкянк в М кумкен пін джжютююкетеикакх кжжеюкьчкяжких в бат у, вою зв Днів після імплантанії

Фіг. 7А

І День 22 . х | А я Е йо; . ч ж :

шк . і Е Шк зак Х мою . во за Т ; | Фе х г ша іні : Вони ее к-т ще ще зо на ну 8 с Де Ко мА нн А НН а иа ме як я : ще ле І я «В : й - «а а ву и і-й ак ща Я Фо «У Є

Фіг. 76 зей Йо бершювий вера 125 веж Би і і й ВЕБ СН аю х т | фо Як Бокові ох мивг; ом я | як ВБЕОМОВІ Я зекє) ев (23 меж Ж ідчнв З ї що» ння ! ОО ї і Е за ннфеннрнннннннноЙ в що рчаааривтеривевеввеввененанннній, | вав ча о Б 0 5 20 55 30 65 40 46 Днів після інвлантації

Фіг. 7С оре Іотиповий контраль (25 мг/ку) 15004 «ік античіло зо РОЗ СО никг че ватитіло до БАС ЇХ вику 14004 «ее антитіло до МАС (Ж мгіко) - Я «ке аититько де БІ ГНН нет е итизтіза за БАНЯ 5 вик 42004 «де зититізо де РІ БО меті антитіла АНЯ (СХ мкг х 1000. 1

5. ОО ; / -6 4 а С с сгллг- Й М х і сан Й сення о Ка , Ка 20 25 Днів після імплантації «ве

Фіг. Дд

День 24 з і я Бе я Ж яння т о ї . ш і ж ЗНМ В Що. ». ще З в , ен ї ; з м Ж впли Ж "г

19. й - Бі в о я К Е- . т ж . 33 - нення ккзхєхиєвис ся ВЕ... | . й Я Р Кк ж. ке й ее З й аж я Ка ос о АКВА А Кай . я Ф Ем в У я Я тт реб, "ре Я в Ка а Аа ак м У Я аа Кома Ж КК чЕ У є

Фіг. ЗЕ

Я Вотиповий контроль (25 мг/ке) антитіло ло САС (5 мог «в зититіло ло САС ОХ моки «і зитиізо ло РО По чок «Ше зилаеєгою ло РОЇ я зититіло ло АС (5 мг/кг антитіло ло РО. я антитіло ло АС 5 мок в БО -- --- З зо ! ! ек д 204 шжжх 104 Шнннняя Днів після імплантації зкжр«О 01, ред,

Фіг. С контрольне Вів тА Х мок а ВЕСМІВТО ПО мкг) я ВЕСКОВТО ПО мг/кгі неайві а мг/кг 15005 4005 Е - 1200» /Ї Ж 10005 Ді Е | /, і ж ВІН І т Ж вової Щ/ / - а й /й / 200» ша в 5 т , 20 , 28 нів після змихантацй

Фіг. 2

День 22 . аг Ж | а зо жеваочижок ча г -- т т ЕКО | шк шо г птн З Ж ще Ж т а ; т," я хе ще Ме о я Ок Я я ки Ку Кк що «Ж це Ми У зе кю че КЗ - Кк. е « «т К-я зх а ше о є

Фіг. 10

Ф контрольне Моб (25 мг/кг «ее знититіло ло АС б ме кр «ее антитіло ло РМ СО мук чі антитіло ло РОЇ з антитіло до Г.Я НИ ше ОО Тю док 000 жЖ х щі нн ж 40 тв 20 25 КІВ Днів після імилантанії ве, фіг: 11