UA43822C2 - Циклопептиди як інгібітори інтегрину, спосіб їх одержання, фармацевтична композиція і спосіб її одержання, спосіб лікування - Google Patents

Abstract

Циклопептиди як інгібітори інтегрину можуть використовуватися для профілактики і лікування захворювань контуру кровообігу і для терапії пухлин. Розглядаються спосіб одержання циклопептидів, фармацевтична композиція на основі зазначених сполук і спосіб її одержання, а також спосіб лікування захворювань, пов'язаних з інгібуванням інтегрин-рецепторів з лігандами.

Description

Изобретение относится к новьім циклопептидам формульі (1): цикло-/А-8В-С-Х-Ага/ (1) где

А и В каждьй независимо друг от друга, обозначают Аїа, Азп, Аго, Суз, СіІп,сіІМ, СУ, Ні, НЕ, Геи, Гуз,

Меї, Рпе, Рго, Зег, ТПг, Тгр, Туг, или Маї;

С обозначаєт Азр или Авр(О-С,-С4-алкил);

Х обозначаєт Су или Аа; причем по меньшей мере два из указанньїх аминокислотньїх остатков находятся в О-форме, а также к их солям.

Подобньсе соединения известнь из РПпагтахіє 40 (8), 532-535 (1985).

В основу изобретения положена задача нахождения новьїх соединений с ценньіми свойствами, в особенности таких, которне можно применять для получения лекарственньх средств.

Найдено, что соединения формульі (1) и их соли обладают очень ценньіми свойствами. Прежде всего, они действуют как ингибиторьї интегрина, причем в особенности они ингибируют взаймодействия Дз - интегрин-рецепторов с лигандами. Зто действие можно обнаружить, например, методом, которьй указан 9.М/.Зтійй и др. в 9. Віої. Спет 265, 12267-12271 (1990). Дополнительно они обладают противовоспалительньми зффектами. Все зти действия можно обнаружить с помощью известньїх из литературь! методов.

Соединения можно использовать в качестве лекарственньїх биологически активньїх веществ в медицине и ветеринарии, в особенности для профилактики и лечения заболеваний круга кровообращения, тромбозов, инфаркта сердца, артериосклероза, воспалений, апоплексии, стенокардии, опухолей, остеолитических заболеваний, в особенности, остеопороза, ангиогенеза и рестеноза после ангиопластии.

Вьше- и нижеприведеннье сокращения аминокислотньїх остатков имеют значения остатков следующих аминокислот:

АІахаланин, Авп:аспарагин; Авзр (ОК):аспарагиновая кислота (р - зфир); Аго:аргинин;

Сувз-цистеин; Сіп-глутамин; Сійи-глутаминовая кислота; Сіу-глицин; Ніз-гистидин; Пе-зизолейцин;

І еи-лейцин; Гуз-лизин; Ме(-метионин; Рпе-фенилаланин; Рго-пролин; Зег-сериин; Тиг-треонин;

Тір-триптофан; Туг-тирозин; Уаі-валин.

Далее, нижеприведеннье сокращения имеют следующие значения: ВОС-трет.-бутоксикарбонил;

Св бензилоксикарбонил;ї РОСідициклогексилкарбодиимид; ЮМФ-диметилформамид; ЕОСІ-М- зтил М'-(З-диметиламинопропил)-карбодиимодгидрохлорид; Егеотил; ЕМОС-9- флуоренилметоксикарбонил; НОВІ-1-гидроксибензотриазол; Ме:метил; Міг -4-метокси- 2,3,6-триметилфенил-сульфонил; Овиї-трет.-бутиловьій сложньій зфир; ОМе-сложньй метиловьй зфир; ОБі-сложньй зтиловьй зфир; РОА-феноксиацетил; ТФК-трифторуксусная кислота.

Поскольку вьшеуказаннье аминокислотьі могут находиться в нескольких знантиомерньх формах, то вьше и далее, например, в качестве составной части соединений формуль! (1), включень все зти формьі и так же их смеси (например, Бі-формьі).

Предметом изобретения, далее, является способ получения соединения формульі (1) по п.1 или одной из его солей, отличающийся тем, что его висвобождают из одного из его функциональньх производньх путем обработки сольволизирующим или гидрогенолизирующим средством, или пептид формуль (І): Н-2-ОН (ІІ), где 2 обозначает: -А-В-С-Х-А о-; -8-С-Х-Агд-А-; -С-Х-Аго-А-В-; Х-Агд-А-В-С- или-Агд-А-В-С-Х-, или реакционноспособное производное такого пептида обрабатьвшвают циклизирующим средством, и/или основное или кислое соединение формульїі (1) путем обработки кислотой или основанием переводят в одну из его солей.

Если не указано ничего другого, вьіше- и нижеприведеннье остатки А, В, С, Х и 7 имеют указанньсе в случає формул (1) и (Ії) значения.

В вьиішеприведенньїх формулах "алкил" предпочтительно обозначаєт метил, зтил, изопропил или трет.-бутил.

Группой "А" предпочтительно является Ма, в особенности О-МаІ. "В" представляєт собой предпочтительно Ріє, в особенности Ю-Рпе. "С" обозначаєт предпочтительно Авр, в особенности О-

Авр. Х предпочтительно является (Фіу.

Соответственно зтому, предметом изобретения в особенности являются такие соединения формульі (1), в которьїх по меньшей мере один из указанньїх остатков имеет одно из виішеуказанньх предпочтительньх значений.

Предпочтительная группа соединений может характеризоваться частичной формулой (а), которая обьічно соответствует формуле (1), но где:

А обозначаєт О-мМаї;

В обозначаєт РПе;

С обозначаєт Авр;

Х обозначаєт Сіу или Аа.

Соединения формуль! (1) и также исходнье вещества для их получения получают, впрочем, известньми способами, которье описаньії в литературе (например, в стандартньїх работах, как

Губен-Вейл "Методь органической химии", изд. (зеогд-Тпієте, Штутгарті, а именно при реакционньх условиях, которье известньії и пригодньї для указанньїх превращений. При зтом также можно использовать известньсе, здесь подробно не упомянутье варианть!.

Исходнье вещества, если желательно, можно получать также іп зіш, так что их не вьіделяют из реакционной смеси, а тотчас вводят во взаймодействие далее с получением соединений формуль!

Соединения формуль (1) получают тем, что их вьсвобождают из их функциональньмх производньх путем сольволиза, в особенности гидролиза, или гидрогенолиза.

Предпочтительньми исходньмми веществами для сольволиза, соответственно, гидрогенолиза являются такиеє, которне вместо одной или нескольких свободньмх амино- и/или гидроксильньх групп содержат соответствующие защищеннье амино- и/или гидроксильнье группьії, предпочтительно такие, которне вместо Н-атома, которьйй связан с М-атомом, содержат защитную для аминогруппь группу, например, такие, которье соответствуют формуле (1), но вместо МН"-группьї содержат МНВ'- группу (где В" - обозначаєт защитную для амино-группь! группу, например, ВоСилиС В).

Далее, предпочтительно исходнье вещества, которье вместо Н-атома гидроксильной группь! содержат защитную для гидроксильной группь! группу, например, такие, которне соответствуют формуле (1), но вместо гидроксифенильной группьі содержат В"О-фенильную группу (где В" обозначаєт защитную для гидроксильной группь! группу).

В молекуле исходного вещества может бьть также несколько - одинаковьх или разньх - защищенньх амино- и/или гидроксильньїх групп. Если имеющиеся защитньсе группь! отличнь! друг от друга, то во многих случаях их можно отщеплять селективно.

Вьіражение "защитная для амино-группь! группа" общеизвестно и относится к группами, которье пригодньї защищать амино-группу от химических превращений (блокировать ее), однако, которье легко отщепляются, после того, как била осуществлена желательная химическая реакция в других местах молекуль. Типичньми для таких групп являются в особенности незамещенньюе или замещеннье ацильньсе, арильнье, аралоксиметильнье или аралкильнье группьі. Так как защитнье для аминогрупп группьї после желательной реакции (или последовательности реакций) удаляются, то их вид и величина, впрочем, не критические; однако, предпочтительньюе группь! с 1 - 20, в особенности 1 - 8 С-атомами. Виражение "ацильная группа" в связи в настоящим способом нужно понимать в самом широком смьсле. Оно охватьшваєт производимье от алифатических, аралифатических, ароматических или гетероциклических карбоновьїх кислот или сульфокислот ацильнье группьі, а также в особенности алкоксикарбонильнье, арилоксикарбонильнье и прежде всего аралкоксикарбонильнье группьі. Примерами такого рода ацильньїхх групп являются алканоил, как ацетил, пропионил, бутирил; аралканоил, как фенилацетил; ароил, как бензоил или толуийил; арилоксиалканоил, как РОА; алкоксикарбонил, как метоксикарбонил, зтоксикарбонил, 2,2,2- трихлорзотоксикарбонил, воОс 2-иодзтоксикарбонил; аралкилоксикарбонил; как (9574 ("карбобензокси"), 4-метоксибензилоксикарбонил, РОС; арилсульфонил, как Міг. Предпочтительньіми защитньми для аминогрупп группами являются ВОС и Міг; далее, СВ2, ЕМОС, бензил и ацетил.

Вьгражение "защитная для гидроксильной группь! группа" также общеизвестно и относится к группам, которнье пригодньї защищать гидроксильную группу от химических превращений, однако, которне легко отщепляются после того, как била осуществлена химическая реакция в других местах молекульі. Типичньмми для таких групп являются вьішеуказаннье незамещеннье или замещеннье арильньсе, аралкильньсе или ацильньсе группь!; далее, также алкильнье группьі. Природа и величина защитньйх для гидроксильной группь групп не критическиеє, так как их после желательной химической реакции или последовательности реакции снова удаляют; предпочтительнь! группь! с 1 - 20, в особенности 1-10 С-атомами. Примерами защитньїх для гидроксильной группь! групп являются, между прочим, бензил, п-нитробензоил, п-толуолсульфонил и ацетил, причем особенно предпочтительньї бензил и ацетил. СООН-группь! в аспарагиновой кислоте и глутаминовой кислоте предпочтительно защищаются в форме их трет.-бутиловьїх сложньїх зфиров (например, Азр (ОВий).

Используемье в качестве исходньїх веществ функциональнье производнье соединений формуль! (1) можно получать обьічньми способами синтеза аминокислот и пептидов, которье описань, например, в указанньїх стандартньх работах и патентах, например, также согласно твердо- фазному способу по Мегтійеїіа |В.Р. Сувіп и А.В.Мегійеєїа ОУ.Ат.Спет. 5ос.94, 3102 и последующие (1972)).

Вьісвобождение соединений формуль (1) из их функциональньх производньїх удаєется осуществить в зависимости от используемой защитной группьї - например, с помощью сильньх кислот, целесообразно с помощью ТФК или хлорной кислоть!; однако, также с помощью других сильньїх неорганических кислот, как соляная кислота или серная кислота; сильньїх органических карбоновьїх кислот, как трихлоруксусная кислота, или сульфокислота, как бензол- или п- толуолсульфокислота. Наличие дополнительного инертного растворителя возможно, но не всегда необходимо. В качестве инертньх растворителей предпочтительно пригодньі органические, например, карбоновье кислотьї, как уксусная кислота; простье зфирьі, как тетрагидрофуран или диоксан; амидьї, как ДМФ, галогенированнье углеводродь, как дихлорметан; далее, также спирть, как метанол, зтанол или изопропанол, а также вода. Далеє, принимают во внимание смеси вьішеуказанньїх растворителей. ТФК применяют предпочтительно в избьтке без добавки другого растворителя; хлорную кислоту применяют в виде смеси из уксусной кислоть! и 7095-ной хлорной кислоть! в соотношений 9:1. Температурь! реакций отщепления целесообразно составляют примерно 0 - 50"С, предпочтительно работают при температуре 15 - 30"С (комнатная температура).

Группльї ВОС, ОВ72 и Міг предпочтительно можно отщеплять, например, с помощью ТФК в дихлорметане или с помощью примерно 3 -5 н НСІ в диоксане при 15 - 30"С; ЕМОС-группу можно отщеплять с помощью примерно 5 - 5095-ного раствора диметиламина, дизтиламина или пиперидина в ДМФ при 15 - 30"С.

Гидрогенолитически удаляемье защитнье группьі (например, СВ или бензил) можно отщеплять, например, путем обработки водородом в присутствии катализатора (например, катализатора на основе благородного металла, как палладий, целесообразно на носителе, как уголь). В качестве растворителей при зтом пригодньї! вьиішеуказаннье, в особенности, например,

спирть, как метанол или зтанол, или амидь, как ДМФ. Гидрогенолиз осуществляют, как правило, при температурах примерно 0 - 100"С и давлениях примерно 1 - 200бар, предпочтительно при 20 - ЗО'С и 1 - 10бар. Гидрогенолиз СВ2-группьі хорошо протекаєт, например, в присутствиий 5 -1095-ного палладия-на-угле в метаноле или с помощью формиата аммония (вместо водорода) на Ра-С в смеси метанола с ДМФ при 20 - 3070.

Соединения формульі (1) можно также получать путем циклизации соединений формуль! (ІЇ) в условиях синтеза пептидов. При зтом работают целесообразно обьічньми способами синтеза пептидов, которнье описаньї, например, в (Губен-Вейл, "Методьі органической химии", т. 15/П, с.1 - 806 (1974)).

Реакцию осуществляют предпочтительно в присутствии дегидратирующего средства, например, карбодиимида, как ОССІ или ВОСІЇ, далее, ангидрида пропанфосфоновой кислоть! (см.

Апдемж.Спет.92, 129(1980)); дифенилфосфорилазида или /2-зтокси-М-зтоксикарбонил-1,2- дигидрохинолина, в инертном растворителе, например, галогенированном углеводороде, как дихлорметан; простом зфире, как тетрагидрофуран или диоксан, амиде, как ДМФф или диметилацетамид; нитриде, как ацетонитрил, или смеси зтих растворителей, при температурах примерно от -107С до 40"С, предпочтитетльно при 0" - 30"С. Для того, чтобь! способствовать внутримолекулярной циклизации перед внутримолекулярньм пептидньм связьіванием, целесообразно работать в разбавленньх растворах (принцип разбавления).

Вместо соединений (Ії) таюже можно использовать в реакции пригодньіе реакционноспособнье производньсе зтих веществ, например, такие, в которьїх реакционноспособнье группьї промежуточно блокированьі защитньмми группами. Аминокислотнье производнье формуль! (Ії) можно применять, например, в форме их активированньїх сложньїх зфиров, которне целесообразно получают іп віш, например, путем добавки НОВІ или М-гидроксисукцинимида.

Исходнье вещества формуль (Ії), как правило, являются новьми. ИхХ можно получать известньми способами, например, вишеописанньми методами пептидного синтеза и отщепления защитньх групп.

Как правило, сначала синтезируют защищеннье пентапептиднье сложнье зфирьї формуль! В'-2-

ОР", например, ВОС-2-ОМе или ВОС-2-ОЕЇ, которне прежде всего омьіляют до кислот формуль! В'- 7-ОН, например, ВОС-2-ОН; от последних отщепляют защитную группу В", благодаря чему получают свободнье пептидь! формуль! Н-2-ОН (І).

Основнье формуль (1) с помощью кислотьї можно переводить в соответствующую соль присоединения кислотьі. Для зтого превращения принимают во внимание в особенности кислоть, которне дают физиологически приемлемье соли. Так, можно применять неорганические кислоть, например, серную кислоту, азотную кислоту; галогенводороднье кислоть, как соляная или бромводородная кислота; фосфорнье кислоть, как ортофосфорная кислота; сульфаминовую кислоту; далее, органические кислотьї, в особенности алифатическиє, алициклическиеє, аралифатические, ароматические или гетероциклические одно- или многоосновнье карбоновиье, сульфоновье или сернье кислотьї, например, как муравьиная кислота, уксусная кислота, пропионовая кислота, пивалиновая кислота, дизтилуксусная кислота, малоновая кислота, янтарная кислота, пимелиновая кислота, фумаровая кислота, мапеиновая кислота, молочная кислота, винная кислота, яблочная кислота, бензойная кислота, салициловая кислота, 2- или З-фенилпропионовая кислота, лимонная кислота, глюконовая кислота, аскорбиновая кислота, никотиновая кислота, изоникотиновая кислота, метан- или зтансульфокислота, зтандисульфокислота, -(:2- гидроксизтансульфокислота, бензолсульфокислота, п-толуолсульфокислота, нафталин-моно- и -ди- сульфокислотьі, лаурилсерная кислота. Соли с физиологически небезопасньми кислотами, например, пикратьї, можно применять для вьіделения и/или очистки соединений формульі (1).

С другой сторньії, кислоту формуль! (1) путем введения ее во взаймодействие с основанием можно переводить в ее физиологически приемлемье соли металлов или аммония. В качестве солей при зтом принимают во внимание в особенности соли натрия, калия, магния, кальция и аммония; далее, замещеннье аммониевне соли, например, соли диметил-, дизтил или диизопропиламмония; соли монозтанол-, дизтанол- или тризтанол-аммония; соли дициклогексил-, циклогексил-аммония; соли дибензилотилен-диаммония; далее, например, соли с М-метил-О-глюкамином или с аргинином.

Новье соединения формуль! (1) и их физиологически приемлемье соли можно применять для получения фармацевтических препаратов, тем, что их вместе по меньшей мере с одним носителем или вспомогательньм веществом и, если желательно, вместе с одним или несколькими другими биологически активньми веществами доводят до пригодной дозировочной формьі. Таким образом полученнье композициийи можно использовать в качестве лекарственньїх средств в медицине или ветеринарии. В качестве носителей принимают во внимание органические или неорганические вещества, которье пригодньі для кишечного (например, орального или ректального), паректарального (например, внутривенной иньекции) или локального (например, тонического, кожного глазного или через нос) введения или для введения в форме пульверизуемьх препаратов для ингаляций и не реагируют с новьіми соединениями, например, воду или водньйй изотонический раствор хлорида натрия, низшие спирть, растительнье масла, бензиловье спирть, полизтиленгликоли, триацетат глицерина и другие глицеридь! жирньїх кислот, желатину, лецитин сои, углеводь, как лактоза или крахмал, стеарат магния, тальк, целлюлоза, вазелин. Для орального применения служат в особенности таблетки, драже, капсуль, сиропь, соки или капли; представляют интерес лакированнье таблетки и капсульь с резистентньми к желудочному соку покрьтиями, соответственно оболочками капсул. Для ректального применения служат свечи; для перентерального введения служат растворьї, предпочтительно маслянье или воднье растворь; далее, суспензии, змульсий или имплантанть. Для тонического применения пригодньї, например,

растворь, которье могут применяться в виде глазньх капель; далее, например, суспензии, змульсии, кремь, мази или прессованнье препарать. Для введения в виде пульверизуемьх препаратов для ингаляциий можно применять пульверизаторь, которне содержат биологически активное вещество либо растворенньім, либо суспендированньїм в рабочем газе или смеси рабочих газов (например, СО или фторхлоруглеводородь). Целесообразно при зтом применяют биологически активное вещество в микронизированной форме, причем могут бьіть добавлень! один или несколько дополнительньїх физиологически приемлемьїх растворителей, например, как зтанол.

Растворь! для ингаляций можно вводить с помощью обьічньїх ингаляторов. Новне соединения можно таюке лиофилизировать и полученнье лиофилизатьї применять, например, для приготовления препаратов для иньекций Иньекции при зтом можно осуществлять в виде большой пилюли либо в виде непрерьшвного вливания (например, внутривенно, внутримьшечно, подкожно или внутриликворно).

Указаннье композиции могут бьть стерилизованьі и/или могут содержать вспомогательнье вещества, как консерванть!, стабилизаторь, и/или смачиватели, змульгаторь, соли для влияния на осмотическое давление, буфернье вещества, красители, и/или ароматизирующие вещества. Если желательно, они могут содержать также одно или несколько других биологически активньхх веществ, например, один или несколько витаминов.

Предлагаємьсе согласно изобретению вещества, как правило, вводят по аналогии с другими известньми, имеющимися в продаже пептидами, в особенности, однако, по аналогии с описанньіми в патенте США А-4 472 305 соединениями, предпочтительно в дозах примерно 0,05 - 500, в особенности 0,5 - 100мг на дозировочную единицу. Суточная доза составляет предпочтительно примерно 0,01 - 2мг/кг веса тела. Специальная доза для каждого определенного пациента, однако, зависит от самьх различньїх факторов, например, от зффективности используемого специального соединения, возраста, веса, общего состояния здоровья, пола, стоимости, момента и пути введения, скорости вьіделения, лекарственной комбинации и тяжести соответствующего заболевания, которье имеют значение для терапии. Предпочтительно парентеральное введение.

Как вьіше, так и нижеуказаннье, все температурьі дань в "С. В нижеследующих примерах "обьічная обработка" обозначаєт: добавляют, если желательно, воду, нейтрализуют, зкстагируют зфиром или дихлорметаном, отделяют, вьісушивают над сульфатом натрия органическую фазу, отфильтровьшают, вьпаривают и очищают путем хроматографии на силикагеле и/или путем кристаллизации. Н2-время удерживания (минуть) в случае ВЗЖХ на колонке с дихросорбом ВАВ, веїесі в (250 - 254,7мкм); растворитель: 0,390 ТФК в воде; изопропанольньй градиент 0-80 обьемн.Оо за 50 минут при скорости Тмл/мин. Вьделение и детектирование при 215нм.М обозначает молекулярньй пик в масс-спектре, получаемом по методу "бомбардировки бьістрими атомами".

ПРИМЕР 1.

Раствор ЗОмг цикло (0- Ма!І-І-Рпе-О-Агр-ІОВицЦ-сіу-0-Аго-ІМИ (получен путем циклизации Н-О-

Ага-ІМ1-О-Ма1!-І-Рпе-О-Азр-ІОВицЦ-Стіу-ОН согласно указанному в примере 2 способу в 840мкл ТФК, 170мкл дихлорметана и 85мкл тиофенола оставляют стоять в течение 2-х часов при 20"С, затем концентрируют при 37"С при пониженном давлений и после разбавления водой подвергают сушке вьімораживанием. После гель-фильтрации на Сефадексе (310 в смеси уксусной кислоть! с водой в соотношениий 1:11 и последующей очистки с помощью препаративной ВОЖХ на колонке с фазой дихросорб АРВ8 с изопропанольньмм градиентом в смеси 0,395 ТФК/вода, получают цикло-/О-Маї!-І -

РПе-О-Азр-Спіу-О-Ага/, В 17,9; 4575.

Аналогичньїм образом получают: из цикло (О-МаІ-0-Рпе-0О-Азр(ОВий)-Сту-О-Ага (М)); цикпо (О-МаІ-0-Рпе-О-Авр-аіу-О-Аго), НЯ 18,5; М'575; из цикло (О-МаІ-0-Рпе-0О-Азр(ОВий)-Сту-О-Ага (М)); цикло (О-МаІ-0-Рпе-О-Авр-Стіу-О-Ага), НЯ 19,3; М'575; из цикло (О-МаІ-0-Рпе-О-Азр-(ОВийб-1 - АІа-Аго (Мі); цикло (0-МаІ-О-Рпе-О-Авр-І -АІа- О-Аго), В 20,3; М'589; из цикло (О-МаІ-0-Рпе-О-Азр(ОМе)-Сс1у-І -Аго (Мі)); цикло (О-МаІ-0-Рпе-0-Азр(ОМе)-а1у-І -Аго), НЯ 21,4; М'589; из цикло (О-МаІ-0-РПпе-І -Азгр(ОВий)-с1у-І -Агу (МЕ); цикло (О-МаІ-О-РНе-Ї -Азр-СТу-І -Ага); из цикло (І -МаІ-О-Рпе-0О-Азр(ОВий)-с1у-І -Агу (МІ); цикло (І -МаІ-0-Рнпе-О-Авр-Сту-І -Ага); из цикло (О-МаІ-І-Рпе-0О-Азр(ОВий)-с1у-І -Агу (МІ); цикло (О-Ма!-І-Рпе-О-Авр-СТу-І -Ага); из цикло (І -МаІ-О-Рпе-І -Агр(ОВий-сСп1у-О-Аго (МІ); цикло (І -МаІ-О-РНе-Ї -Азр-Спіу-О-Ага); из цикло (О-Ма!І-І-Рпе-І -Агр(ОВий-сСп1у-О-Аго (МІ); цикло (О-Ма!-І-РНе-ЇІ -Авр-Спу-О-Ага); из цикло (І -МаІ-Ї-Рне-0О-Азр(ОВий-сСтіу-О-Аго (МІ); цикло (І -МаІ-І-Рне-О-Авр-СпІу-О-Ага); из цикло (І -МаІ-О-Рпе-І -Агр(ОВий)-О-Аїа-І -Агу (МК); цикло ((-МаІ-0-РПпе-І--Авр-О-Аїа-І -Аго); из цикло (О-Ма1І-І-Рпе-Ї -Агр-«"ОВи)-О-Аїа-І -Агу (Мі)); цикло (О-Ма1І-І-РПе-І--Авр-О-Аїа-І -Аго); из цикло (І -МаІ-Ї-Рне-0О-Агр(ОВий)-О-Аїа-І -Агу (МК); цикло (--МаІ-І-Рпе-О-Авр-О-Аїа-І -Аго);

из цикло (І -МаІ-І -Рне-І -Агр(ОВи)-О-АІа-О-Ага (МіК)); цикло (І--Ма1І-І-Рпе-І-Азр-О-АІа-О-Ага).

ПРИМЕР 2

Раствор 8Омг Н-І-Ага-0-МаІ-0-Рне-0О-Азр-«"ОМе)-Сіу-ОМа (получен путем отщепления ЕМОС- группьї от ЕМОС-1І-Ага-О-МаІ-0-Рпе-О-Авзр-(ОМе)-Сіу-С)-МУМапд (причем О-Мапд обозначаєт применяеємьй при синтезе по Ме!тійеій остаток -4-оксиметилфенокси-метил-полистирола, которьй сшит до 1956 с помощью п-дивинилбензола) с помощью морфолина и отщепления пентапептида от полимера с помощью.ТФК (дихлорметана в соотношений 1:11) в дмл ДМФ разбавляют с помощью 72мл дихлорметана и смешивают с З4мг мелкопорошкового МанСОз. После охлаждения в смеси сухого льда с ацетоном добавляют ЗА4мкл дифенилфосфорилазида. После вьідерживания в течение 16 часов при 20"С дихлорметан удаляют при 37"С. Оставшийся раствор подвергают гель- фильтрации колонка с сефадексом СІО, в смеси изопропанола с водой в соотношениий 8:2) и затем хроматографируют на колонке с полимером (Міїзирізпі МС! СНР-2ОР) с изопропанольньм градиентом в воде. Получают цикло-(О-МаІ-0-Рпе-0-Азр(ОМе)-Ссту-І -Аго), Н2М'589.

Нижеследующие примерь относятся к фармацевтическим композициям.

ПРИМЕР А: Стеклянньсе емкости для иньекционньїх препаратов

В растворе 100г циклопептида формуль (1) и 5г динатрийгидрофосфата в Зл дваждь перегнанной водьії с помощью 2н соляной кислоть! устанавливают рН-б,5, стерильно фильтруют, заполняют стекляннье емкости для иньекционньїх препаратов, лиофилизируют в стерильньх условиях и стерильно закрьвают. Каждая стеклянная емкость для иньекционньїх препаратов содержит 5мг биологически активного вещества.

ПРИМЕР Б: Свечи

Расплавляют смесь 20г биологически активного вещества формульі (1) со 100г соевого лецитина и 1400г масла какао, разливают в формь! и оставляют охлаждаться. Каждая свеча содержит 20мг биологически активного вещества.

ПРИМЕР В: Раствор

Готовят раствор из 1г биологически активного вещества формуль! (1), 9,38г МанНгРоОх х 2Н2О, 28,48г МагНРО х 12 Нг2О и 0,1г бензальконийхлорида в 940мл дваждь перегнанной водь!.

Устанавливают рн -6,8, доливают до їл и стерилизуют путем облучения. Зтот раствор можно применять в форме глазньх капель.

ПРИМЕР Г: Мазь 500мг биологически активного вещества формуль! (1) смешивают с 90,5г вазелина при асептических условиях.

ПРИМЕР Д: Таблетки

Смесь 100г циклопептида формуль! (1), їкг лактозьї, б600г микрокристаллической целлюлочзь, ббОг кукурузного крахмала, 100г поливинилпирролидона и 10г стеарата магния обьічньім образом прессуют в таблетки, так, чтобьії каждая таблетка содержала 10мг биологически активного вещества.

ПРИМЕР Е: Драже

Прессуют таблетки, как указано в примере Д, и затем обьічньм образом покрьвают их покрьїтием из сахарозь, кукурузного крахмала, талька, траганта и красителя.

ПРИМЕР Ж: Капсуль!

Обьічньім образом твердье желатиновье капсуль! заполняют биологически активньїм веществом формульі (1), так, чтобьії каждая капсула содержала 5мг биологически активного вещества.

ПРИМЕРЗ: Ингаляционньсе пульвелизаторь!. 14г биологически активного вещества формуль! (1) растворяют в 10л изотонического раствора

МасСі и раствором заполняют стандартнье сосудьй для пульверизациийи с насосньм механизмом.

Раствор можно пульверизировать в рот или в нос. Одна порция пульверизуемого раствора (примерно 0,Тмл) соответствует дозе примерно 0,14мг. слеесу ПОННН НЯ 111 сюотюльл свомкнюол тот 105- 5 575/18,5 Цикло-(ОМаІ-ВРпе-Юавр-с1у-Ага) 1 - 0,001 00006 »5 " спу-Ага лита |шжерунеесюесьокі 10010 025500005 вт | цжжрнтеоююанн! 10100519

Для демонстрации промьшленной применимости и пригодности соединений прилагаєтся фармакологический отчет.

Что касаєтся результатов, то клиническую возможность соединений обобщили следующим образом: 1. Различнье заболевания, проявляющие основной патологический коррелят повьішенной агрегации тромбоцитов, то есть образования тромбов, являются потенциальньми клиническими показаниями для применения сурз- антагонистов.

К их числу относятся инфаркт миокарда и апоплексия. Оба зтих угрожающих жизни заболевания изначально вьізваньї окклюзиями агрегатов тромбоцитов в сердечной коронарной системе или в мозговом кровообращении, соответственно. 2. Атеросклеротический синдром, включающий образование атеросклеротических бляшек в поврежденньїх сосудах, разрьшв бляшек, а также рестеноз сосудов после, например, ЧККП (чрескожная катетерная коронаропластика) в вьісокой: степени опосредуется адгезией и агрегацией тромбоцитов. Позтому, как бьіло показано, зти антагонистьї имеют потенциальную терапевтическую пользу в зтих клинических назначениях.

Кроме того, бьіло постулировано предотвращение метастаз опухолевьх клеток с помощью срз- антагонистов, в соответствий со следующими наблюдениями.

Циркулирующие опухолевье клетки могут образовьвать микроагрегать! с тромбоцитами и в зтой форме могут прилипать к стенке сосуда.

Посредством зтого механизма облегчаєтся адгезия и доследующее проникновение опухолевьх клеток в ткань.

Кроме того, в микроагрегате опухолевье клетки зкранируются и защищаются от опознания клетками иммунной системь!.

Таким образом, посредством ингибирования образования тромбоцитов сурз-антагонисть должнь бьіть зффективнь! при предотвращениий адгезии опухолевьїх клеток и образований метастаз.

Материаль; и методь!.

Витронектин (Уаюподо И др. 1988) и фибриноген (Калаї и др. 1963) из плазмь! крови человека, суДз из плаценть! человека (тій, и Спегезп, 1938) ий ог» из тромбоцитов человека (Руївїа и др. 1986), очищали так, как бьло описано вьше. МЙспьмтание с конкурирующими лигандами с использованием иммобилизованного интегрина и обработанньх биотипом лигандов (оба при 1мкг/мл) подробно описано тій, и др. 1990, за тем исключением, что используемая концентрация марганца бьіла 10мкМ.

Полученьї следующие результать! (см. таблицу).

Описьваемье соединения могут бьть использованьь при онкологических заболеваниях.

Соединения формульй | блокируют взаймодействие интегриновьїх рецепторов и лиганд, как например, фибриногена и фибриногенового рецептора, препятствуют распространению опухолевьх клеток с образованием метастаз, что подтверждено проведенньіми исследованиями.

Кроме зтого соединения формуль | могут ингибировать связьвание металлпротейиназь! интегрином: и препятствовать использованию клетками знзиматической активности протеиназь!.

Пример замедления связьвания ММР-2 (матриць! металлпротеиназьі 2) витронектиновьм рецептором сурз через цикло-А-бО-пептид описан |Р.С. Вгоокз еї аї,, Сеї! 85, 683 - 693 (1996).

Распространение клеток локальной опухоли в васкулярную систему происходят путем образования микроагрегатов (микротромбов) путем взаймодействия опухолевьх клеток с тромбоцитами. Опухолевье клетки защищень в микроагрегатах и не распознаются иммунной системой.

Микроагрегатьь могут фиксироваться на поверхности стенок сосудов, в результате чего происходит дальнейшее проникновение опухолевьх клеток в ткань. Так как образование микроагрегатов путем связьшвшания фибриногена рецепторами фибриногена влияєт на активированнье тромбоцить, СР Па/иППр-антагонисть! могут использоваться в качестве действенного замедлителя метастаз.

Claims (6)

1. Циклопептидьі формульі І цикло -І(А-В - С - 0 - (І-или О-) Ага), где А-ЮО-Маї; В: Ї- или О-РНе; С т 1 -Авр, О-Авр или О-Авр (0 - Сі-С.-алкил); О - слу или Апа, при зтом, по меньшей, мере два из указанньїх аминокислотньх остатков находятся в О-форме, а также их соли.

2. Циклопептидьі формульі І по п. 1, представляющие собой: цикло - (О-Маї - Ї -Рпе - О-Агр - Су - О-Ага); цикло - ІО-Маї - О-РНе - О-Авр - Слу - І -Ага); цикло - (О-Маї - О-РНе - І -Авр - слу - О-Ага); цикло - (О-Маї - О-РНе - О-Авр - І - Аа - О-Ага), цикло - (О-Маї - О-Рпе - О-Азр (ОМе) - Сашу - І -Ага).

3. Способ получения циклопептидов формуль! | по п. 1: цикло -ІА-В- С - 0 - (І- или 0-) Ага), где А х О-Маї; В: Ї- или О-РНе; С - С -Авр, О-Авр или О-Азр (0 - Сі-Са-алкил); О - ау или Айа, при зтом, по меньшей мере, два из указанньїх аминокислотньх остатков находятся в О-форме, а также их соли, заключающийся в том, что пептид формульі ЇЇ Н-2- ОН, где 7 обозначает -А-В- С - 0 - (І- или О-Аго) -;- В - С - 0 - (І-или О-Аго) - А -;- С - 0 - (І- или О-Аго) - А-В-0 - (І- или О-Аго) -А - В - С -; - (І- или О-Аго) -А-В-С-0-, или реакционноспособное производное такого пептида обрабатьшвают циклизующим средством, и/или основное или кислое соединение формульі І переводят в одну из его солей.

4. Способ получения фармацевтической композиции, ингибирующей связьшвание интегрин-рецепторов с лигандами, отличающийся тем, что соединение формуль і! по п. 1 и/или одну из его физиологически приемлемьх солей вместе, по меньшей мере, с одним твердьм, жидким или полужидким носителем или вспомогательньїм веществом доводят до пригодной дозировочной формь!.

5. Фармацевтическая композиция, ингибирующая связьівание интегрин-рецепторов с лигандами, отличающаяся тем, что она содержит, по меньшей мере, одно соединение общей формульЛ ! по п. 1 или одну из его физиологически приемлемьїх солей в дозе 0,05-500 мг и носитель или вспомогательное вещество.

6. Способ лечения заболеваний, связанньїх с ингибированием связьшвания интегрин-рецепторов с лигандами, отличающийся тем, что применяют соединение формульї І по п. 1 или их физиологически приемлемье соли в суточной дозе 0,01-2,0 мг/кг веса тела.