UA45962C2 - Похідні пептидів, фармацевтична композиція,спосіб стимулювання секреції гормону росту з гіпофізу - Google Patents

Abstract

Запропоновано синтетичні пептиди загальної формули A-B-C-D-E-(F)p, де p дорівнює 0 чи 1, з підвищеною стійкістю до протеолітичної деградації під дією ферментів внаслідок заміщення амідного зв'язку (-З-NH-) амінометиленового (-СН2NH-) або шляхом введення N-аралкилгліцину, і фармацевтична композиція для стимулювання секреції гормону росту з гіпофізу.

Description

Опис винаходу

Настоящее изобретение относится к новьім производньм пептидов, содержащим их композициям и их 2 применению для лечения медицинских нарушений, являющихся результатом дефицита гормона роста.

Гормон роста является гормоном, которьій стимулирует рост всех способньїх расти тканей. Кроме того, известно, что гормон роста обладает рядом действий на метаболические процессьі, например, стимуляцию синтеза белков и мобилизацию свободньїх жирньїх кислот, и вьізьваєт переключение в знергетическом метаболизме из метаболизма углеводов в метаболизм жирньх кислот. Дефицит гормона роста может приводить к ряду тяжельїх медицинских нарушений, например карликовости.

Гормон роста секретируется из гипофиза. Секреция проийсходит под строгим контролем ряда гормонов и нейромедиаторов непосредственно или косвенно. Секрецию гормона роста можно стимулировать гормоном, вьісвобождающим гормон роста (СНКН), и ингибировать соматостатином. В обоих случаях гормонь секретируются из гипоталамуса, но их действие связано гласньм образом через специфические рецепторь, 72 локализованньєе в гипофизе. Описаньї также другие соединения, которне стимулируют секрецию гормона роста из гипофиза. Например, аргинин 1.-3,4-дигидроксифенилаланин (1,-Дола), глюкагон, вазопрессин, РАСАР (пептид, активирующий аденилилциклазу гипофиза), агонистьі мускариновьїх рецепторов и синтетических пептид, СНКР (пептид, вьісвобождающий гормон роста) вьісвобождают зндогенньій гормон роста путем непосредственного действия на гипофиз или путем воздействия на вьісвобождение СВДІ1Н и/или соматостатина из гипоталамуса.

В заболеваниях или состояниях, где желателен повьішенньй уровень гормона роста, природа белка гормона роста делает невозможньм любье пути введения кроме парантерального введения. Кроме того, другие непосредственно действующие природнье усиливающие секрецию средства, например СНКН и РАСАР, являются более длинньіми пептидами, по зтой причине пероральное введение их невозможно. с 29 Применение более коротких пептидов для повьішения уровня гормона роста у млекопитающих ранее Го) описано, например в ЕР 18 072, ЕР 83 864, УМО 89/07110, МО 89/1711, УМО 89/10933, МО 88/9780, УМО 83/02272,

МО 91/18016, УМО 92/01711 и УМО 93/04081.

Строение пептидов или производньїх пептидов, вбісвобождающих гормон роста, важно для их активности по вьісвобождению гормона роста, а также их биологической доступности. Позтому целью настоящего изобретения с являєтся предложение пептидов со свойствами вьісвобождения гормона роста, которне обладают Ге) улучшенньїми свойствами по сравнению с известньіми пептидами зтого типа.

Краткое изложение существа изобретения о

Настоящее изобретение относится к соединению общей ю формульї 1

АвВсоєБ(Бр З где р принимаєт значения 0 или 1;

А представляет собой имидазолил -С у бс-алкановую кислоту, имидазолил-Сі 6с-алкеновую кислоту, амино -С в-алкановую кислоту или амино -С; 6в-алкеновую кислоту или ЇЇ - или О-у, - аминокислоту, вьібранную из « дю группьї, состоящей из Н-Ніз, Н-АІа, Н-О-Аїа, Н-(р-аланина), Н-АЇБ, саркозина и Су; з

В представляет собой О-Тгр, О-2Маї или О-РНе; с С представляєт собой Аа, Зег или Су; :з» О представляет собой Тгр, РНе, р -(2-тиенил) аланин или - аралкилглицин;

Е, когда р равно 1, представляет собой, О-РМпе, или, когда р равно 2, Е представляєт собой 45. «МНАСН(СН.-ВУ)-СО-87 или -«МНА-СН(СН2-КЗ)-СН2-В, где т. ВЗ представляєт собой фенил, с и В? представляєт собой пиперазино, морфолино, пиперидиногруппу, -ОН или -М(В УР, где каждьй из

К5 и 5 независимо представляєт собой водород или низший алкил;

Ф Р, когда р принимаєт значение 1, представляєт собой -МН-СН (8793 - (Сно)у -87)3- где у является 0 или (22) 50 цельім числомот дов и

Із В" представляет собой имидазолил, пиперазино, морфолино, пиперидиногруппу или П-(р8)-ро, где каждьй из ЕЗ и КЗ независимо представляет собой водород или низший алкил, или продукт перегруппировки Амадори из аминогруппь и гексапиранозьі или гексапиранозилгексапиранозь! формуль!:

Ф) іме) 60 б5 на он , ке о о ко й ан І 70 но о ча ян 1 р х н и В'9 представляет собой -Н, -«СООН, -СО-В 7, СНо-К!! или -СН2-ОН, где Б"! представляет собой пиперазино-, морфолино-, пиперидиногруппу или -М(2 123-873, где каждьй из К/2 и В'З независимо является водородом или низшим алкилом; с условием, что по меньшей мере, одна амидная связь межхдули д, В и С, С и 0,0 и Е или, когда р является 1, БЕ и Р замешена аминометиленовой, или что, когда р является ОО, Є представляет собой -МН-СН(СН -КЗ)-СНо-В", или что, когда р является 1, В 19 представляет собой СНО-К!; или фармацевтически приемлемой соли зтого соединения. сч ре Полагают, что производнье пептидов формуль! 1 обладают повьішенной устойчивостью к протеолитической деградации ферментами желудочно-кишечного тракта или плазмь! вследствие замещения амидной связи (о) (-СОМН-) аминометиленовой (-СНОМН-) или путем введения М- аралкилглицина, Предполагается, что повьішенная устойчивость к протеолитической деградации производньїх пептидов настоящего изобретения повьішает их биологическую доступность по сравнению с биологической доступностью пептидов, предложенньх сч зо В предшествующей литературе.

В настоящем контексте термин "низший алкил" предназначен для обозначения алкила с 1 - 6 атомами (Се) углерода, конкретно, метила, зтила, пропила, изопропила, бутила, пентила или гексила. Фу

Подробное описание изобретения

В предпочтительном варианте соединения формульї! 1, р является 1. В другом предпочтительном варианте Іс)

З5 боединения формульй 1 А представляет собой Ніз, Ю -АіІа или имидазолилпропионовую кислоту. В « предпочтительно представляєет собой -ТТр р или О-2МА1. С предпочтительно представляєт собой Аа. О в значений М-аралкилглицин предпочтительно представляет собой М-бензилглицин. ОО предпочтительно представляет собой Тгр. ЕЕ предпочтительно представляет собой РНпе. В пределах значения Р, у предпочтительно являєтся числом 3 - 6, и БК / предпочтительно являєтся -ПН Ор предпочтительно « представляет собой -СОМН»,-СНоОН. - с Примерами конкретньїх соединений изобретения являются ц Н-Нівзе (СНоМН)-О-Тгр-Аїа-Ттр-О-РНе-Тугз-МН» ,» Н-Ніз-О-ТтРЧУ(СНОМН)-Ага-Ттр-О-Рпе-Туз-МН»о

Н-Ніз-О-Ттр-АїІач(СНоМН)-Ттр-О-Р пе-Тугз-МН»о

Н-Нів-О-Тгр-Аіа-ТтРІ(СН2МН)-О-Рпе-1ув-МН » т- Н-Ніз-О-Ттр-АІа-Ттр-Ю-Рпеч(СНЬМН)-Туз-МНо с Н-0-АІіІа-0-2Ма1 Я«СНоМН)-Тгтр-О-Рпе-Туз-МН» со Н-0-АІа-0О-2Ма1-АЇіа-Ттр-О-Рпеч(«СНоМН)-Туг-МН» (3--4-имидазолил) пропионил)-0-2Ма1-АїІа-Ттр-О-Рпнеє(«СНОМН)-Туз-ОН (о) 20 (3--4-имидазолил) пропионил)-0-2Ма1-Аїа-Ттр-0О-Рпеч(СМ»о МН)-Туз-МН» кз (3--4-имидазолил) акрилоил)-0-2Ма1-АІа-Ттр-0О-Рпечт(СНЬМН)-Туз-МН»о

Н-0-АІа-Рпе-АІа-Ттр-Ю-Рпечт(СНоМН)-Туз-МН2 (2кК)-(Н-0-АІа-О-РПпе-АЇІа-Ттр-МН)-3-фенилпроиламин (25)-(Н-0-АІа-0-2Ма1-АІа Ч«СНЬМН)-Ттр-О-Тпе-МН)-6-аминогексанол

Н-0-АІа-0-2Ма1-АіІат(СНОМНІОІ-Тгтр-О-Рпе-МН » о 4-(Н-0-Аіа-0О-2Ма1-АіІат(СМ2МНІО-Ттр-О-Рпе-пи)бутиламин їмо) (2К)-(Н-0-АІа-0-2Ма1-Ттр-МН)-3-фенилпропиламин (2кК)-Н-0-АІа-О0-2Ма1-Аїа-Ттр-МН)-3-фенилпропиламино) гексилами 60 (2к)-(Н-0-2Ма1-АІа-М-В21-С1уУ-МН)-3-фенилпропиламин (2к-)-Н-0О-АІа-О0-2Ма1-АїІа-М-В2І-СІ1уУ-МН)-З-фенилпропиламин

Н-АївБ-0-2Ма1-АїІа-м-В2І-С1Іу-0О-Рпеч(«СНоМН)-Туз-МН»о (25)-((3--4-имидазолил) пропионил) У«СНоМН)-О-РНе-АїІа-Ттр-О-Рпе-МН)-6-аминогексанол (25)-((3- (4-имидазолил) пропионил) -0-Рпеє(СНоМН)-АїІа-Ттр-О-Рпе-МН) -6-аминогексанол б5 (25)-((3- (4-имидазолил) пропионил) -0-Рпе-АїІац(СНОМН)-Ттр-О-Рпе-МН)-6-аминогексанол

(25)-((3- (4-имидазолил) пропионил) -О0-Рпе-АІа- ТТРЧФСНОМНІО)-Рпе-МН)-6-аминогексанол (25)-(2К)-) (3--4-имидазолил) пропионил) -О-РПе-АЇІа-Ттр-МН) -3-фенилпропиламино)-6-аминогексанол 3-(3-(4-имидазолил) пропионил) -О-ТтрАїат(СНЬМН)-Ттр-О-Рпе-МН) пропиламин (25)-((3--4-имидазолил) пропионил) -О-Рпе-АІа-Ттр-Ю-Рпегу(СНоОМН)ВН)-6б-аминогексанол (25)-((3--4-имидазолил) пропионил) -О-Ттр-АїІач«СНоМН)-Ттр-О-Рпе-МН)-6б-аминогексанол 3-(3--4-имидазолил) пропионил) -О-Ттр-АїІа-Ф(СНЬОМН)-Ттр-О-Рпе-МН) пропиламин

Н-0-АІа-0О-2Ма1-АїІа-М-В21-С1У-0-Рпеч(СНОМНІ)-Туз-МН»

Н-АЇБ-0-2Ма1-АїІа-м-В21-С1уУ-0О-Рпеч(СНоМН»).

Применяемая аббревиатура: р-2Ма!: О-2-нафтилаланин

М-В2і: М-бензилглицин

Н-АЇвБ: Н-аминоизомасляная кислота

Соединения формуль! 1 можно получить обьічньми способами синтеза пептидов в растворе или твердой 75 фазе. Например, твердофазньй синтез можно проводить по существу, как описано Зіежмагй апа Мопо, Зоїїа

Рпазе Реріїйй Зупіпевзів 2пй. Ед, КосКога, ІШіпоїв, ОБА. 1976. Синтез пептидов в растворе можно, например, проводить способом, описанньїм ВодапзекКу ейа!ї, Реріїде Зупіпезів, 2пй. Ед, Мем" МогК, Мем/. Хогк, 1976.

Аминометиленовую связь в качестве замещения амидной связи можно ввести в соответствии со способом, описанньм У.

Зазакі апа О.Н. Соу, Реріідез 8(1) 1987, рр. 119-121. Производнье пептидов, содержащие моно- или дигексапиранозолзамещенную аминогруппу, можно получить перегруппировкой Амадори при помощи способа, описанного К. АЇрегії ей аЇ., Ше Зсіепсе5. 53 1993, рр. 517-525. примерами подходящими моно- или дигексапираноз являются глюкоза, галактоза, мальтоза, лактоза или целлобиоза. Производнье, применяемьсе в качестве исходньїх соединений синтеза, можно получить коммерческим путем, и в них, если требуется, можно с 29 ввести подходящие защитнье группьі. Фармацевтически приемлемьсе соли соєдинений формуль! 1 с кислотами Ге) включают соли, полученнье реакцией пептида с неорганическими или органическими кислотами, например, соляной, бромистоводородной, серной, уксусной, фосфорной, молочной, малеийновой, фталевой, лимонной, глутаровой, глюконовой, метансульфокислотой, салициловой, янтарной, винной, толуолсульфокислотой, трифторуксусной, сульфаминовой и фумаровой кислотой. с

В другой особенности настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей в «я качестве активного компонента соединение общей формульП 1 или его фармацевтически приемлемую соль вместе с фармацевтически приемлемь!м носителем или разбавителем. Ме.

Фармацевтические композиции, содержащие соединение настоящего изобретения , можно получить ю обьічньми методиками, например, как описано в Кетіпдіоп'з Рпаптасеціїса| Зсіепсез, 1985. Композиции могут бить в обьічньїх лекарственньїх формах, например, в форме капсул, таблеток, азрозолей, растворов, суспензий - или местньїх аппликаций.

Применяемьй фармацевтический носитель или разбавитель может бьіть обьічньм твердьм или жидким носителем. Примерь! твердьїй носителей включают лактозу, (ета аїІра сахарозу, циклодекстрин, тальк, желатин, « агар, пектин, аравийскую камедь, стеарат магния, стеариновую кислоту или низшие алкиловье зфирь! целлюлозь. Примерами жидких носителей являются сироп, арахисовое масло, оливковое масло, в с фосфолипидь, жирньсе кислоть, амидь! жирньїх кислот, полиоксизтилен и вода. "» Подобньм образом носитель или разбавитель может включать любой известньй в настоящей области " материал, постепенно вьісвобождающий активньй компонент, например, глицерилмоностеарат или глицерилдистеарат, возможно в смеси с воском.

Если твердьйй носитель применяют для перорального введения препарат можно таблетировать, помещать в т- виде порошка или шариков в твердье желатиновье капсульі или препарат может бьїть в форме пастилки или «сл лепешки. Количество твердого носителя будет широко изменяться, но обьічно оно будет от около 25 мг до около 1 г. іс, Типичная таблетка, которую можно получить обьічньіми техниками таблетирования, может содержать: б 50

Сердцевина:

І» Активньій компонент (в виде свободного соединения или его соли). 100 мг

Коллоидньй диоксид кремния (Аеговії) 1,5мг

Целлюлозу, микрокристаллическую (Амісе!) 70 мг оо Модифицированную целлюлозную смолу (Ас-Оі-Бої) 7,5мМг

ГФ) Стеарат магния

Оболочка: де НРМС (около) 9мг

Мумжасей 9-40 Т (около) 0,9мг 60

Ацилированньійй моноглицерид, применяемьсе в качестве пластификатора для пленочной оболочки.

Бели применяют жидкий носитель, препарат может бьїть в форме сиропа, змульсии, мягкой желатиновой капсульь или стерильной иньецируемой жидкости, например, водной или неводной жидкой суспензии или раствора. 65 Для назального введения в виде азрозоля препарат может содержать соединение формульї! 1, растворенное или суспендированное в жидком носителе, в частности водном носителе. Носитель может содержать добавки,

такие как солюбилизирующие агентьї, например пропиленгликоль, поверхностно-активнье вещества, например соли желчньх кислот или полиоксизтилированнье вьісшие спиртьї, средства повьшающие поглощение, например лецитин (фосфатидилхолин) или циклодекстрин, или консервантьї, например парабень!.

Обьічно соединения настоящего изобретения готовят в виде унифицированной лекарственной формьї, содержащей 0,0001-100 мг активного компонента вместе с фармацевтически приемлемь!м носителем в каждой унифицированной дозе.

Подходящая доза соединений в соответствии с настоящим изобретением составляєт 71 - 500 мг/день, например около 100 мг на дозу, при введений пациентам, например людям, в качестве лекарственного 7/о средства.

Показано, что соединения общей формуль 1 обладают способностью вьісвобождать зндогенньій гормон роста іп мімо, Следовательно, зти соединения можно применять для лечения состояний, для которьїх требуется повьішенньїй уровень гормона роста в плазме крови, например, у имеющих дефицит гормона роста людей или пожильх пациентов или домашнего скота.

Таким образом, в конкретной особенности настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции для стимулирования секреции гормона роста из гипофиза, причем данная композиция содержит в качестве активного компонента соединение общей формульП 1 или его фармацевтически приемлемую соль вместе с фармацевтически приемлемь!м носителем или разбавителем.

В следующей особенности настоящее изобретение относится к способу стимулирования секреции гормона го роста из гипофиза, причем данньй способ предусматриваєт введение субьекту, нуждающемуся в зтом, зффективного количества соединения общей формуль! 1 или его фармацевтически приемлемой соли.

Еще в одной особенности настоящее изобретение относится к применению соединения общей формульї 1 или его фармацевтически приемлемой соли для получения лекарственного средства для стимулирования секреции гормона роста из гипофиза. с

Тем, кто является специалистом настоящей области, хорошо известно, что современное и возможное применение гормона роста для людей разнообразно и многочисленно. Предполагается, что соединения і) формуль! 1 можно вводить для целей стимулирования секреции гормона роста из гипофиза, и они в таком случаеє могли бьі иметь действия или применения, аналогичнье тем, которне имеет сам гормон роста.

Применения гормона роста можно суммировать следующим образом: стимулирование секреции гормона роста су зо У пожильх пациентов; предотвращение катаболических побочньх зффектов глюкокорикоидов, лечение остеопороза, стимулирование иммунной системьї, ускорение заживления ран, ускорение заживления перелома ікс, костей, лечение задержки роста, лечение почечной недостаточности или недостаточности, являющейся б результатом задержки роста, лечение физиологического маленького роста, включая дефицит гормона роста у детей и маленький рост, связанньй с хроническим заболеванием, лечение ожирения и задержки роста, о связанной с ожирением, лечение задержки роста, связанной с синдромом Прадера-Вилли и синдромом «г

Татегв;Оускорение вьіздоровления и уменьшение госпитализации обожженньх пациентов; лечение внутриутробной задержки роста, скелетной десплазии, гиперкортизолизма и синдрома Кушинга; индуцирование пульсирующей секреции гормона роста; восполнение гормона роста у пациентов со стрессовьім состоянием, лечение остеохондродисплазий, синдрома Нунана, шизофрении депрессий, болезни Альцгеймера, « замедленного заживления рань и психосоциальной депривации, лечение легочной дисфункции и зависимости 7-3) с от искусственной вентиляции легких, ослабление белковьїх катаболических реакций после "большой" операции, снижение кахексий и белковой потери вследствие хронического заболевания, например, рака или СПиИдДа; ;» лечение гиперинсулинемии, включая гиперплазию панкреатических островков, адьювантное лечение для индуцироваяия овуляции; стимулирование развития тимуса и предупреждения связанного с возрастом снижения Функции тимуса, лечение пациентов с иммунодепрессией, укреплениє повьішения подвижности ї5» мьшуц, поддерживание толщинь кожи, метаболического гомеостаза, почечного гомеостаза у ослабленньх пожильїх людей, стимулирование остеобластов, костной коррекции и роста хрящей, стимулирование иммунной о системь! у домашних животньїх и лечение нарушения из-за старения у домашних животньх, стимулятора роста со у скота и стимулирование роста шерсти у овец.

Для указанньїх вьіше показаний дозировка будет изменяться в зависимости от применяемого соединения

Ме. формульї! 1, способа введения и желаемой терапии. Однако, обьічно пациентам и животньім вводят дозу между

Ге 0.0001 и 100 мг/кг массьї тела ежедневно для достижения зффективной секреции зндогенного гормона роста.

Обьічно лекарственнье формьі, пригоднье для перорального или назального введения содержит от около 0,0001 мг до около 100 мг, предпочтительно от около 0,001 мг до около 50 мг соединений формульї! 1 в смеси с фармацевтически приемлемь/м носителем или разбавителем.

Соединения формуль! 1 можно вводить в форме фармацевтически приемлемой соли с кислотой или в тех (Ф, случаях, когда целесообразно, соли щелочного металла или щелочноземельного металла или (низший ка алкил)аммония. Считают, что такие соли обладают приблизительно такой же степенью активности, как и свободнье основания. 60 Фармацевтическая композиция изобретения может содержать соединение формуль! 1 в сочетаний с одним или несколькими согдинениями: обладающими другой активностью, например, антибиотической или другими фармакологически активньми материалами. Им может бьіть другоеге усиливающее секрецию средство, например

СНЕР (1 или 6) или СНЕН или его аналоги, гормон роста или его аналог, или соматомединьі, например 1ОР-1 или 16Р2. 65 Способ введения может бьть вьібран тот, с помощью которого переносится активное соединение в подходящее или желаемое место действия, например, пероральньїм, назальньмм или парентеральнь!м путем.

Предпочтителен пероральньй путь. Кроме фармацевтического применения соединений формуль 1 можно использовать іп мімо в способах исследования регуляции секреции гормона роста.

Соединения формульї 1 могут бьіть пригодньї іп мімо в способах оценки способности гипофиза секретировать

Гормон роста. Например, пробь сьіворотки крови, взятье до и после введения зтих соединений людям, можно анализировать на гормон роста. Сравнение содержания гормона роста в каждой пробе сьіворотки позволит непосредственно определить способность гипофиза пациентов секретировать гормон роста.

Соединения формульй 1 можно вводить имеющим коммерческое значение животньм для увеличения скорости степени их роста и для повьішения надоя молока. 70 Фармакологические методь!

Соединения формуль! 1 можно оценить іп мйго на их зффективность и активность для секреции гормона роста в первичньїх соматотрофньх клетках крьс.

Первичнье сомототрофньсе клетки крьіс можно получить , как описано ранее (Спеп еї а), Епдосгіпоїоду 1991, 129, 3337 - 3342 и СНеп еї аї, Епдосгіпоїоду 1989, 124, 2791-2798). Кратко, крьіс убивают декапитацией. Бьістро 7/5 Уудаляют гипофиз. Гипофиз ферментируют 0,295 коллагеназь и 0,295 гуалуриназь в сбалансированном солевом растворе Хзнка. Клетки ресуспендируют в модифицированной по способу Дульбекко среде Игла, содержащей 0,379 Мансо»з 1095 лошадиной сьіворотки, 2,596 фетальной телячьей сьюворотки, 196 не являющихся незаменимьми аминокислот, 196 глитамина и 1906 пенициллина/стрептомицина, и доводят содержание из до 1,5х105 клеток/мл. Один ил зтой суспензий помещают в каждую лунку планшетов из 24 лунок и оставляют на 2 -

З дня до проведения зкспериментов по секреции.

В первьій день зкспериментов клетки промьвают два раза указанной вьіше средой, содержащей 25 мМ

НЕРЕ 5, рН 7,4. Секрецию гормона роста инициируют путем добавления средьі, содержащей 25 ММ НЕРЕ 5 и испьітьіваемое соединение. Инкубирование проводят в течение 15 мин при 277"С. После инкубирования гормон роста, секретированньй в среду, измеряют стандартньм радисиммуноанализом (РИА). с

Соединения формуль 1 можно оценить на их влияние на секрецию гормона роста у анестезированньх пентобарбиталом самок крьіс, как описано ранее (Вегсиейа).,, Епдосгіпоїюсду 1991, 129, 2592-2598). Коротко, і) половозрельх самцов крьіс Зргадие Юамжміеу анестезируют 50 мг/кг пентобарбитала внутрибрюшинно. После достижения полной анестезии крьісам имплантируют трахотомическую трубку, катетерьі в сонную артерию и яремную вену. После 15 минутного восстановления нормального состояния крьіс, отбирают пробу крови во с зо время О. Внутренно вводят средства, усиливающее секрецию гормона роста из гипофиза, и пробь артериальной крови помещают на лед на 15 мин и затем центрифугируют 2 мин при скорости вращения 12000 х ісе)

С. Сьіворотку декантируют и количество гормона роста определяют стандартньм РИА. Изобретение далее б иллюстрируется следующими примерами, которье не ограничивают обьема изобретения.

В тексте описания применяют следующую аббревиатуру: Аббревиатура для аминокислотньїх остатков: о

Щ «

М-Вгі- Оу; 2маї!: лів: - й сн, ч ю тр З нов с о й ВУЖ МН г» Фі н.с ку о , І) їз іє сл Аббревиатура, применяемая для замещения пептидной связи, се) го щ(Сн.МН)

Сн -ЖО 8 ря ФІ Н. ц й М Н ?

Ф) іме) г Аббревиатура, применяемая для защитньх групп: б5

Вос- Етос- СІ-2- й -о о о

Ок Х. де ох З о а 70 н: кора о.

Ф

Вст-

Адос- - ог. 0 ТК

Сто у; о ' | Й / В ' 0-7 І сч еф / х а о / х Ан

З сч й А--ї шо (22)

Пример 1 ю

Н-Ніз-О-ТтРЧУ(СНОМН)-Ага-Ттр-О-Рпе-Туз-МН»о Й

Пептид на смоле формуль! Н-АїІа-Ттр-О-Рпе-1и5 -смола синтезировали в соответствии с Етос- стратегией на синтезаторе пептидов Арріїей Віозувіете 431 А в количестве 0,25 м моля с использованием поставляемьх производителем протоколов ЕРавіМос ОМ которье применяют медиированнье Нв « 2-(1Н-бензотриазол-1-ил)-1,1,3,3-тетраметилуронигексафторофосфат) связьшания (соединения) в ММР (Н-метилпирролидоне) и УФ- удаления Етос-защитной группь. В качестве исходной для синтеза смольі ші с применяли 470 мг 4-(2''4"-диметоксифенил-ЕРтос-аминометил) феноксисмоль! (Момаріоспет АС Бм/йгепагпга, саї. м 01-64-0013), имеющей замещение 0,53 ммоля/г. Применяемьми защищенньми производньми аминокислот я бьіли Б-тос-1у (Вос)-ОН, -Гтос-О-Рпе-ОН, Етос-Тгтр-ОН или Етос-Аїа-ОН.

Изостер -СНОМН-пептидной связи вводили в соответствии с Завзакі, У. апа Соу, О.Н., Реріідез 8(1) 119-121, (1987) т. Етос-О-Ттр- альдегид получали из 399 мг соответствующего п,о-диметилгидроксамата в соответствии с с Еенгепії, А. апа Савіго, В., ХУМТЕ5ІЗ 676-678. 1983. Неочищенньй альдегид растворяли в 8 мл 195-ной уксусной кислотьї в ДМФ (Диметилфомамид) и разделяли на две порции. Первую порцию добавляли в перемешиваемую со суспензию 400 мг (приблизительно 0,2 ммоля) Н-АІа-Ттр-О-РНе-Туз (Вос) -смоль! в 8 мл 195-ной уксусной кислоть б 20 в ДМФ при комнатной температуре. Затем 40 мг ПаспвВнН» (чистота 8595), растворенного в 1 мл ДМФ добавляли в течение 60 мин и перемешивание продолжали еще 60 мин. После зтого смолу вьіделяли и промьівали 195-ной о) уксусной кислотой в ДМФ на фильтровальной воронке. Смолу снова суспендировали в 5 мл 195-ной уксусной кислотьі в ДМФ и в суспензию добавляли вторую порцию Етос-АІа-альдегида. Снова добавляли 40 мг ПасСпПВН»з (чистота 85905), растворенного в 1 мл ДМФ/ при комнатной температуре в течение 60 мин и смесь перемешивали го в течение 18 час. о После стадии восстановительного алкилирования продукт пептид-смола вьіделяли и промьівали 195-ной уксусной кислотой в ДМФ на фильтровальной во .ронке и удлинение цепи завершали с использованием о синтезатора пептидов в соответствии с описанньіми вьіше методиками, применяя защищенное аминокислотное производное ЕтокК-Нів(Тгр)-ОН. бо Пептид отщепляли от 240 мл продукта пептид-смола путем перемешивания в течение 240 мин при комнатной температуре со смесью З мл ТРА (трифторуксусной кислоть/), 225 мг фенола, 75 мкл зтандитиола, 150 мкл тисанизола и 150 мкл Н»О. Смесь после расщепления фильтровали, и фильтрат концентрировали до образования масла с применением струи азота. Неочищенньй пептид осаждали из зтого масла 45 мл дизтилового зфира и промьівали З раза 45 мл дизтилового зфира. 65 Неочищенньій пептид очищали полупрепаративной ЖХВР на колонке 25 мм х 250 мм, заполненной

С-18-диоксидом кремния, 7 мк. Колонку уравновешивали 2190-ньім раствором СНзСМ в 0,05 М (МН 5)25045. рн которого устанавливал 2,5 при помощи 4 М

НьЗО, сушки неочищенньй пептид растворяли в 5 мл 7095. СНЗСМ/О,18 ТРА в НьоО и разбавляли водой до достижения 50 мл. 20 мл зтого раствора разбавляли до 90 мл и вводили в колонку/ которую затем злюировали при градиенте 2195-3196 СНЗСМ в 0,05 М (МНА)»ЗО,Х рН 2,5 и скорости 10 мл/мин в течение 47 мин при 407С.

Содержащие пептид фракции собирали и разбавляли З обьемами водь и пропускали через патрон Зер-Рас С18 (Умаїеге рагп ж: 51910) которьій уравновешивали 0,1956-ной ТРА. Патрон затем злюировали 70956-ньімм СНзСМ, содержащим 0,195 ТРА, и очищенньій пептид вьіделяли лиофилизацией после разбавления злюата водой.

Вьход биьл 6,55 мг. 70 Полученньій конечньй продукт характеризовали аминокислотньм анализом (содержание пептида и аминокислотньй состав ), аналитической КР-ЖХВР (время удерживания) и РОМ5 (плазменная десорбционная масс-спектрометрия) (молекулярная масса). Результатьї аминокислотного анализа и РОМ5 бьли в согласии с предполагаемьм строением в пределах зкспериментальной ошибки методики (РОМ: 10,9 атомной единиць массьї, аминокислотньй анализ: 10965).

Анализ РР-ЖХВР проводили с применением УФ-детектора при 214 нм и колонки 4,6 мм х 250 мм, Мудае- 218ТРБ4, с С18-диоксидом кремния, 5 мк, (Те Зерагайопе Сгоир, Незрегіа, ОБА). Злюирование проводили со скоростью 1 мл/мин при 42"С. Применяли два различньїх условия злюирования:

А1: Уравновешивание колонки 590-ньій СНзМН в буфере, содержащем 0,1 М (МНА)»5О) рН которого устанавливали 2,5 при помощи концентрированной М»5О),и злюирование с градиентом 5956-6095 СНЗСМ в том же буфере в течение 50 мин.

В1: Уравновешивание колонки 595 СНзСМ/0,195 ТРА/НЬО и злюирование с градиентом от 596 СНУСМ/О,190

ТЕА/НЬО до 609565 СНзСМ/О,195 ТРА/Н2»О в течение 50 минут.

Время удерживания с использованием условий злюирования Аї и ВІ бьло 22,02 мин и 23,08 мин соответственно. с

Пример 2

Н-Ніз-О-Ттр-АІа-Ттр-Ю-Рпеч(СНЬМН)-Туз-МНо і)

Продукт П-Ту (2-СІ-2) -смола синтезировали из 6бО мг смольі 4-метил-ВНА (Віззепаоп Віоспетісаї!5,

Наппомег, Сегтапу,саї. 2:КМІ 5 50), имеющей замещение 0,72 ммоля/г и ВОС-Іу (СІ-) -ОН в соответствии с ВОС- стратегией на синтезаторе пептидов Арріїеі Віозувіетз 43ОА в количестве 0,5 ммоля с использованием Га зо поставляемьх производителем протоколов отдельньх связьшваний (соединений), которье применяют отдельнье связьивания с предварительно полученньми симметричньми ангидридами в ДМФ. Протоколь ее, модифицировали для достижения времени связьівания 60 мин. МИзостер связи -СН 2МН-пептид вводили с о 0/ ду использованием методики, аналогичной описанной в примере 1. Применяли 1,675 мг Н-Тувз (СІ-7) -смоль и вОоС-0р-Рне - альдегид, полученньй из 616 мг соответствующего П,О-диметилгидроксамата. юю

После зтой стадии восстановительного алкилирования смолу вьіделяли и промьівали 195-ной уксусной «І кислотой в ДМФ на фильтровальной воронке и удлинение цепи завершали с использованием синтезатора пептидов в соответствий с описанньми вьіше методиками с применением защищенньїх аминокислотньх производньїх Вос-Ттр(Рог)ОН, Вос-АІа-ОН, Вос-О-Тгтр(Бог)-ОН и Вос-Ніб(Вот)-ОН.

Пептид отщепляли от 391 мг продукта пептид-смола перемешиванием его в течение 75 мин со смесью 5 мл «

НР и 500 мкл м-крезола. НР испаряли при 0"С струей азота. Пептид осаждали из оставшегося масла вместе со Пд) с смолой 50 мл дизтилового зфира и промьівали 2 раза 50 мл дизтилового зфира и зкстрагировали из смоль 2 х й 2 мл ТРА и осаждали из обьединенного зкстракта в ТРА 50 мл дизтилового зфира и промьівали 2 раза 50 мл "» дизтилового зфира.

После сушки формильнье группьі у триптофановьх остатков отщепляли путем растворения и перемешивания пептида в 64 мл б М гидрохлорида гуанидиния, содержащего 4 мл зтаноламина, при 0"С в ї» течение 5 мин. После зтого смесь нейтрализовали добавлением 4 мл уксусной кислоть и затем разбавляли 140 мл Необ. і-й Неочищенньй пептид очищали полупрепаративной ЖХВР непосредственньім введением реакционной смеси

Ге) в колонку с применением методики, аналогичной описанной в примере 1. Вьїход бьл 20,6 мг.

Конечньій продукт хара ктеризовали, как описано в примере 1. Анализ РР-ЖХВР в условиях АЇ и ВІ дал

Фо время удерживания продукта 21,28 мин и 23,17 мин соответственно. з Примерь 3-5

Пример Пептид Получение способом аналогичнь!м примером Время удерживания АР-ЖХВР. (пр.1) (пр.1) о

МН)-Ттув-МН2 з о внолеотелетьогтетснянума 00001220» » 65 Пример 6 (2к)-Н-0-АІа-Ю0-2Ма1-АІаТгтр-МН) -3-фенилпропиламин

Етос-Рпе-альдегид получали из 385 мг соответствующего Н,О-диметилгидроксамата в соответствии с (Регепі 9.-А. апа Савзіго,8., ЗММТНЕЗІЗ 676-678, 1983). Неочищенньій альдегид растворяли в 20 мл 195-ной уксусной кислоть! в ДМФ и разделяли на две порции.

С 580 мг 4-(2'-4-диметоксифенил-Етос-аминометил) феноксисмоль! (Момабіоспет Ас Зм/йгепапа, саї, я: 01-64-0013), имеющей замещение 0,43 ммоля бьіла снята защита обработкой 2095-ньім пиперидином в ДМФ в течение 20 мин и последующей промьвшвкой ДМФ и 190-ной уксусной кислотой в ДМФ. Первую порцию

Етос-О-Рпе-альдегида и 58 мг ПаспВвнНз (чистота 8595), растворенного в 1 мл ДМФ, добавляли в освобожденную от защитной группь! смолу, и суспензию перемешивали при комнатной температуре в течение 7/0 75 мин. После зтого смолу отделяли на фильтровальной воронке и промьвали 190-ной уксусной кислотой в

ДМФ. Вторую порцию Етос-О-рпе- альдегида вместе с 58 мг ПасМВН» (чистота 8595) , растворенного в 1 мл

ДМФ, добавляли в смолу, смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 18 час, смолу отделяли на фильтровальной воронке и промьівали 195-ной уксусной кислотой в ДМФ, ДМФ, смесью ДХМ/метанол (6:4) и

ДХМ (дихлорметан) . С применением зтой смоль! удлинение цепи завершали, используя синтезатор пептидов в 7/5 соответствии с методикой, описанной в примере 1, и защищеннье аминокислотнье производнье Етос-Тгр-ОН,

Етос-АІа-ОН, Етос-02Ма1-ОН и Етос-О-АІа-АІіа-ОН.

Пептид отщепляли от 600 мг полученного продукта пептидсмола. Полученньй неочищенньй пептид растворяли в 50 мл Н 20 и 25 мл раствора очищали полупрепаративной ЖХВР и характеризовали с применением методик, аналогичньїх описанньім в примере 1. Вьїход бьіл 10,9 мг. Анализ продукта КР-ЖХВР в условиях АТ и В2 дал время удерживания 27,98 мин и 29.45 мин соответственно.

Примерь 7-12

Пример Пептид Получен способом аналогичного вІВремя удерживания КР-ЖХВР ре (пр.1) (прю!) о 81000001 нретлелатрорвечсномютемня 00111111 2202мо

В НН ОО ПОН зо пропионил-0О-2Ма1-АІа-Ттр-0-Рпе «СН2МН)-Тув-МН 2 о акрилоил-0О-2Ма1-Аіа-Ттр-О-Рпе щ«СНоМНн)-Тувз-МН 2 Ф тевднолероммлетьортемнуєзмиюттсилами| 52533, обов, ю «

Пример 13 (25) - ((3- (4-имидазолил) пропионил) ОТгр-Аїат(СНЬОМН)-Ттр-О-Рпе-МН)-6-аминогексанол

Продукт пептида и смоль! 3-(1-Адос-4-имидазолил) пропионил- Ттр-АїІат(СНьОМН)-Ттр-О-РНе-Тувз-(Вос) -смола

Завгіп (Адос является аббревиатурой 1-адамантилоксикарбонила) синтезировали в количестве 1 ммоля по « 740 методике, аналогичной описанной в примере 1, за исключением того, что применяли 1020 мг смоль; Завгіп шщ с (смола 2-метокси-4-алкоксибензилово-го спирта) (Васпет, Вибрепао!п, Зм/йгепапа саї. Ж 0-1295) со способностью й замещения 0,87 ммоля/г и что протокол, применяемьй для взаймодействия первого аминокислотного остатка со "» смолой бьіл поставляемьм изготовителем протоколом катализируемого 4-диметиламинопиридином взаймодействия предварительно полученного симметричного ангидрида и последующей защить! остаточньх гидроксигрупп на смоле бензойньмм ангидридом. «їз» Защищенньій пептид, (25) --(3- (1-Адос-4-имидазолил) пропионил) -Тгр-Аїач(«СНомМН)-Ттр-О-Рпе-МН) -6- (Вос-амино) гексанол, отщепляли от 1800 МГ 3-(1-Адос-4-имидазолил)пропионил) й -0-Ттр-Аїац«СНОМН)-Ттр-О-РПе-Туз (Вос) -смоль! Завзгіп путем перемешивания зтого продукта в течение 24 час се) при комнатной температуре со смесью 10,8 мл ТГФ (тетрагидрофурана), 1,8 мл зтанола, 211 мг ІІВг и 92 мг

Фу 50 Мавн. Затем по каплям добавляли 2 мл НоО и 2 мл уксусной кислотьі. Шарики смольі удаляли фильтрованием и промьівали 25 мл зтанола. Фильтрат концентрировали в вакууме и полученное масло разбавляли 50 мл Нр20 и що) лиофилизовали. Полученньій порошок подвергали расщеплению при помощи ТРА: как описано в примере 1. 1/5 часть полученного неочищенного пептида очищали, как описано в примере 1. Вьіход биьіл 28,54 мг.

Конечньїйй продукт характеризовали, как описано в примере 1. Время удерживания его в условиях А1 бьло 204 мин. о Пример 14 3-( (3--4-Имидазолил)пропионил)-О-Ттр-Аїат(СН2МН)-Ттр-О-Рпе-МН)-пропиламин. де Продукт пептида и смоль, 3-(1-Адос-4-имидазолил) пропионил) -О-Ттр-АіїІащ«СНаМН)-Ттр-О-Рпе-смола синтезировали в количестве 1 ммоля по методике, аналогичной описанной в примере 1, за исключением того, 60 что применяли 1000 мг смоль! Завгіп (смола 2-метокси-4-алкоксибензилового спирта) Васпет,Вибрепоадог,

Змїгепапа саї й -1295) со способностью замещения 0,87 ммоля/г и что протокол, применяемьй для взаймодействий первого аминокислотного остатка со смолой бьл поставляемьм изготовителем протокол катализируемого 4-диметиламинопиридном взаймодействия предварительно полученного симметричного ангидрида и последующей защить остаточньїх гидроксигрупп на смоле бензойньім ангидридом. бо Пептид, 3-((-3-(1-Адос-4-имидазолил) пропионил)-) 0-Ттр-АїІат«СНоМН)-Ттр-О-Рпе-МН)-пропиламин,

отщепляли от 1000 мг (3-(1-Аоос-4-имидазолил) пропионил)- О-Ттр-Аїачт(«СНьОМН)-Ттр-О-Рпе смоль! зазгіп путем перемешивания зтого продукта в течение 20 час при комнатной температуре с 10 мл 1,3-диаминопропана.

Отработанную смолу фильтровали и зкстрагировали 5 мл ДМФ. Обьединеннье фильтрат и зкстракт медленно добавляли в 240 мш 1 М соляной кислотьі при перемешиваний. Смесь затем разбавляли 500 мл Н 20 и фильтровали.

Неочищенньій продукт очищали полупрепаративной ЖХВР в 9 пробегах (последовательньїх операциях) путем непосредственного введения в колонку 9х1/9 зтого фильтрата с использованием методики, аналогичной описанной в примере 1. Вьіход бьл 73,53 мг. 70 Конечньїй продукт характеризовали, как описано в примере 1. Вроемя удерживания его в условиях АТ и В1 бьіло 21,5 мин и 22,7 мин соответственно.

Примернь 15 - 18

Пример Пепцтид Получен способом аналогичним вІВремя удерживания АР-ЖХВР примере Мо Условия А1 Условия (пр.1) В1(пр.1) 16 (28)-(Н-О-Аа-О-2Ма1-Аїа-М-В21-С1у-МН)-3- 29,А 3171 фенилпропиламин 2 (Ст) (НАЮ-ОоМатсАа МВА су МНуЗ. фенилпропиламин| 71711116 виго

Представленнье соединения изобретения имеют следующее строение: 3-(3--4-Имидазолил) пропионил) -О-Ттр-АїІат(«СНоОМН)-Ттр-Орпе-МН)-пропиламин с ил о ее , : ' ' |; і. І , | Ї щі щ рака с зо ТМ з не о : о

ОЇ. кнод кран и Ф

Ш-я Мн пе ши мно м : І ю о Ба о М рі

Ми / / : « - ші с чі з 415 (2к)-(2к) -( (3--4-Имидазолил) пропионил)-О-РНе-АїІа-Ттр-МН)-3-фенилпропиламино)-6-аминогеесанол

ЧК» 1 М , о у (22)

НЯ о нс О є

Що чн : МН

Мн мн дпа

Е Е о о Ь

Ф) тен ща Мн 60 чн,

Н-АїБ-0-2Ма1-АїІа-м-В21-С1У-0О-Рпеч(«СНоМН») б5 й ро нс о не о нм МН ри 70 ! уки т МН н,

Нео о щі в. 20

Пример 19

Для изучения влияния различньїх средств, усиливающих секрецию гормона роста, бьіл разработан анализ іп міго с применением клеток гипофиза крьіс. Смешанную клеточную культуру гипофиза вьіделяли из передней дозь! гипофиза самцов крьіс и культивированьі в течение З дней. После промьзвания клетки стимулировали в с оре течение 15 мин и в супернатанте культурь! измеряли количество секретированного гормона роста.

Вьіделение клеток гипофиза крьіс проводили по модификации з5агіог, 0., еї аІ., Епдостгіпоїоду 116, 1985, рр. і) 952-957. Гипофиз оотделяли у самцов крьс Зргадцие. Юаміеу массой 250 г после декапитации.

Нейропромежуточнье доли удаляли и оставшуюся часть помещали в среду Грейса, дополненную 0.259060 глюкозьі, двумя не являющимися незаменимьми аминокислотам 195 В ЗА (буфер вьіделения). Железьї делили с зо чна небольшие кусочки и переносили в пробирку, содержащую З мл буфера вьіделения « 11,5 мг трипсина и 1000 мкг ДНК-азь, и инкубировали в течение 35 мин при 37"С и атмосфере 9595 02 и вращений 70 оборотов в мин. ікс,

Фрагменть! промьівали З раза путем седиментации в буфере вьіделения и аспирировали в отдельнье клетки б при помощи пипетики Пастера. После диспергировали клетки фильтровали через найлоновьій фильтр (160 мкм) для удаления непереваренной ткани. Клетки промьівали З раза буфером вьіделения, дополненньім ингибитором о зв трипсина (0,75 мг/мл) и снова суспендировали в культуральной среде (МЕМ, дополненньйй 25 мМ НЕРЕ5, 4 мМ «Е глутамина, 0,7595 бикарбоната натрия, 2,596 РС (фетальная телячья сьіворотка), 390 конской сьіворотки, 1090 крьісиной сьіворотки, 1 НМ Тз и 40 мкг/л дексаметазона) до плотности 2х105 клеток/мл. Клетки засевали в титрационньїх микропланшетах, 200 мкл/лунку, и культивировали в течение З дней при 37"С и 895 СО». «

После периода культивирования кьетки промьшвали два раза буфером стимулирования (НВ.55, 70 дополненньй 195 ВЗА, 0,2595 ЮО-глюкозьі и 25 ММ НЕРЕЗ) и преинкубировали в течение 1 часа. - с Буфер затем удаляли и добавляли новьій буфер стимулирования, содержащий соединение изобретения, и ц микропланшеть! инкубировали 15 мин при 37"С и 595 2020 Буфер собирали и анализировали на содержание "» гормона роста крьс ( гГОН) сцинтилляционньім проксимальним анализом (5РА, по существу как описано в 2 4 568 649, Най апа Огеепмжай, Мое Іттипої. 16, 1979, рр 265-269, или Опаепгіепа еї аїЇ., Ргос. Май). Асад. Зеї, ОБА, 82, 1985, рр. 8672-8676). «г» Анализ СН проводили в Орії - планшетах (планшеть! с 96 лунками), пригодньіми для непосредственного подсчета в Раскагаз Тор Сопі (счетчик д -сцинтилляции). Протокол анализа: й 40 мкл б уфера (се) 10 мкл пробьї (инкубированньій буфер стимуляции) 50 мкл 1251-ГН

Ф 50 мкл кроличьего ант-гоН

Що) 50 мкл ЗРА-реагента (антикроличьи антитела, соединеннье с флуомикросферами)

Планшеть герметизировали и помещали на планшетньій шейкер на 30 мин, затем проводили инкубирование в течение 10 час, осаждение при 10 - 157С и подсчет.

В БРА гОН, связанньй с кроличьими антителами (первичньми антителами) против ОН (первичнье антитела), реагирует со вторичньми антителами, связанньми с флуомикросферами (ЗРА Туре 11 РИА,

ІФ) доступньій от Атегзпат). Любой радиомеченьй гОЗН, которьій связан с первичньмми антителами, будет іме) иммобилизован на флуомикросферах, которье будут затем продуцировать свет. Мзмерения в счетчике р -сцинтилляции делают возможньім подсчет количества радиомеченого ЛОН. Количество радиомеченого гОН бо связанного с флуомикросферами, снижается с повьішением содержания гОнН в пробе.

Соединение 65 Н-О-Аіа-О-2Ма1-Аіа-Тгр-О-Рпе-1ув-МН 2). 1,8 85

00001111 нолеромессутроОртелуємна о8//7т5) (25)-(3-(4-Имидазолил) пропионил)-0-Рпе-Аіа-Ттр-Рпец(СНоМнН))-6-аминогексанол Бво)

Claims (1)

1. Формула винаходу 70 1. Производнье пептидов общей формуль! А-В-О-Е-(БР) р, где р принимает значение 0 или 1, А представляет собой имидазолил-С --Св-алкановую кислоту, имидазолил-Сі-Св-алкеновую кислоту, амино-С.і-Св-алкановую кислоту, амино-С--Св-алкеновую кислоту, Ї- или О- дк -аминокислоту, вьібранную из группьї, состоящей из Н-Нів, Н-АІа, Н-О-Аїа, Н- й -аланина, Н-аминомасляной кислоть, саркозина и су, В представляет собой О-Тгр, О-2Маї или О-РНе, С представляєт собой Аа, Зег или Су, О представляєт собой Тгр, Ре, й -(2-тиенил)-аланин или М-аралкилглицин, Е, когда р равно 1, представляєт собой О-Рпе или, когда р равно 0, Е представляет собой - МН-СН(СН 5-К3)-СО-В7 или МН-сН(СН.-К)-СНо-К", где КЗ представляет собой фенил, а В" представляєт собой пиперазино-, морфолино-, пиперидиногруппу, «ОН или -ЩЕ УА, где каждьй из В? сч и ВЗ независимо представляєт собой водород или низший алкил, Е, когда р равно 1, представляет собой мНн-сн(в 79)-(сНоХ-В З-, где м равно 0 или целому числуот 1 до8, и о) В представляєт собой имидазолил-, пиперазино-, морфолино-, пиперидиногруппу или -М(В З, где каждьй из КЗ и КО независимо представляєт собой водород, низший алкил или продукт перегруппировки Амадори из аминогруппь и гексапиранозьї или гексапиранозилгексапиранозь! формуль! сі (Се) но ан о Ге) о ОН о н но он Н «Її он но о о « то нн З с 1 нн І» т и ВО представляєт собой -Н, -«СООН, СО-В 7, СснНо-В'! или СНо-ОН, где К/! представляєт собой гч 75 пиперазино-, морфолино-, пиперидиногруппу или -МЩ(В12)-В73, где каждьй из В? и КЗ независимо является водородом или низшим алкилом, с условием, что между Ли В, Вис, Си 0, О и Е присутствует по меньшей с мере одна амидная связь, или, когда р равно 1, Е и Е замещеньї аминометиленовой группой, или, когда р равно со 0, Е представляет собой -МН-СН(СНо-К2)-СН»-В, или, когда р равно 1, КУ представляет собой СНо-В!, или их фармацевтически приемлемая соль. (о) 2. Производное пептидов по п. 1, отличающееся тем, что р имеет значение 1. Кз З. Производное пептидов по п. 17, отличающееся тем, что А представляет собой Нів, О-АЇїа или имидазолилпропионовую кислоту.

   4. Производное пептидов по п. 1, отличающееся тем, что В представляет собой О-Тгтр или Ю-2мМаї.

   5. Производное пептидов по п. 1, отличающееся тем, что С представляет собой Аа.

   6. Производное пептидов по п. 1, отличающееся тем, что О представляет собой М-бензилглицин или Ттгр. ГФ) 7. Производное пептидов по п. 1, отличающееся тем, что Е представляет собой О-РНе. ко 8. Производное пептидов по п. 1, отличающееся тем, что м равно б, а в' равно -МН».

   9. Производное пептидов по п. 1, отличающееся тем, что в'я представляет собой -СОМН», -СНЬООН. во 10. Производное пептидов по любому из пп. 1-9, отличающееся тем, что оно вьібрано из группьії, состоящей из: Н-Нів дя (СНОМН)О-Ттр-АїІа-Ттр-О-РНе-Ї уз-МН», Н-нів-О-Тгтр дя (СНОМН)Аа-Ттр-О-РНе-І уз-МН», 65 Н-Нів-О-Тгр-Ава гри (СНЬОМН)Ттр-О-РПе-І уг-МН»,

   Н-Нів-О-Тгр-Аїа-Тгр цх (СНОМН)О-Рпе-І угз-МН», Н-нів-О-Тгр-Аза-Тгтр-О-Р пе де (СНЬМН)уз-МН», Н-О-Аіа-0-2Маї!-Аїіа ця (СНЬМН)Ттр-0О-РПе-І ув-МН», Н-О-Аза-0-2Маї!-Аіа-Ттр-О-Рпе ди (СНЬМН) уз-МН», (3--4-имидазолил)пропионил)-О-2МаїІ-АІа-Тгтр-О-Рпе цх (СНЬМН)Гуз-ОН, 70 (3--4-имидазолил)пропионил)-О-2МаїІ-АІа-Тгтр-О-Рпе цх (СНЬМНІ увз-МН», (3--4-имидазолил)акрилоил)-О-2Маї!-АІа-Тгтр-О-Рпе це (СНЬМН)увз-МН», Н-О-Аза-О-Рне-Аіа-Ттр-О-Рпе ци (СНЬМН)уз-МН», (2кК)-(Н-0О-АІа-0О-РНе-АїІа-Ттр-МН)-3З-фенилпропиламин, (25)-(Н-О-Аіа-0-2Маї-Аа гри (СНОМН)Ттр-О-Рпе-МН)-6-аминогексанол, Н-О-Аіа-О-2Ма/!-Ага зр" (СНоМН)Ттр-О-Рпе-МН 2», 4-(Н-О-Ага-0-2Ма!-Аїа ди (СНЬМН)Ттр-О-Рпе-МН)бутиламин, (2К)-(Н-0-АІа-0-2Ма!1-АІа-Ттр-МН)-3-фенилпропиламин, (2кК)-(Н-0-АІа-0-2Маї!-АІа-Ттр-МН)-3-фенилпропиламино)гексиламин, (2Кк)-(Н-0-2Маї!-АїІа-М-В2І-С1уУ-МН)-3-фенилпропиламин, (2К)-(Н-0-АІа-0-2Ма1-АїІа-М-В 21-С1уУ-МН)-3-фенилпропиламин, сч Н-АЇБ-0-2МаїІ-АІа-М-В21-СІуУ-О-Рпе ця (СНЬМН)уз-МН», о (25)-(3-«4-имидазолил)пропионил) це (СНОМН)О-Рпе-АїІа-Ттр-0О-РНе-МН)-6-аминогексанол, (25)-(3--4-имидазолил)пропионил)-О-Рпе цх (СНЬМН)Аїа-Ттр-О-Рпе-МН)-6б-аминогексанол, зо (25)-((3--4-имидазолил)пропионил)-О-РПе-Аїа це (СНОМ) Ттр-О-Рпе-МН)-6-аминогексанол, см (Се) (25)-(3--4-имидазолил)пропионил)-О-РПе-АїІа-Тгр це (СНОМН)О-РПпе-МН)-6б-аминогексанол, (22) (25)-(2К)-(3--4-имидазолил)пропионил)-О-РНе-АїІа- Ттр-МН)-3-фенилпропиламино)-6б-аминогексанол, 3-(3--4-имидазолил)пропионил)-О-Тгр-АїЇа- це (СНОМ) Ттр-О-Рпе-МН)пропиламин, о Зо (25)-(3--4-имидазолил)пропионил)-О-РПпе-АІа-Ттр-О-Рпе це (СНЬМН)-6-аминогексанол, М (25)-(3--4-имидазолил)пропионил)-О-Тгр-О-Аїа цх (СНЬМН)Ттр-0О-Рпе-МН)-6б-аминогексанол, 3-(3--4-имидазолил)пропионил)-О-Тгр-Аїа це (СНОМН)Ттр-О-Рпе-МН)пропиламин, « Н-О-Ава-0-2Ма!-Аіа-М- вгі-с1у-О-Р пе ди (СНЬМН)уз-МН», З с з» Н-АЇБ-0-2МаїІ-АІа-М-В21-СІуУ-О-Рпе ця (СНЬМН»). " 11. Фармацевтическая композиция, содержащая активньй компонент вместе с фармацевтически приемлемьм носителем или разбавителем, отличающаяся тем, что в качестве активного компонента она їз 15 содержит фармакологически зффективное количество производного пептидов общей формуль і или его фармацевтически приемлемой соли. 1 12. Фармацевтическая композиция по п. 11, отличающаяся тем, что она представляет собой со унифицированную лекарственную форму, которая содержит от около 10 до около 200 мг производного пептидов общей формуль І или его фармацевтически приемлемой соли. (22) 20 13. Фармацевтическая композиция для стимулирования секреции гормона роста из гипофиза, содержащая "з активньій компонент вместе с фармацевтически приемлемьм носителем или разбавителем, отличающаяся тем, что в качестве активного компонента она содержит фармакологически зффективное количество производного пептидов общей формуль І или его фармацевтически приемлемой соли. ря 14. Способ стимулирования секреции гормона роста из гипофиза, включающий введение пациенту, нуждающемуся в стимулирований, активного соединения, отличающийся тем, что в качестве активного ГФ) соединения вводят зффективное количество производного пептидов общей формульй | или его 7 фармацевтически приемлемой соли.

   15. Способ по п. 14, огличающийся тем, что зффективное количество соединения общей формуль І или его во фармацевтически приемлемой соли или зфира находится в интервале приблизительно от 0,0001 до 100 мг/кг массьї тела в день, предпочтительно приблизительно от 0,001 до 50 мг/кг массь тела в день.

   16. Производное пептидов по п. І, отличающееся тем, что оно или его фармацевтически пригмлемая соль представляют собой активньійй компонент для получения фармацевтической композиции для стимулирования секреции гормона роста из гипофиза. бо Офіційний бюлетень "Промислоава власність". Книга 1 "Винаходи, корисні моделі, топографії інтегральних мікросхем", 2002, М 5, 15.05.2002. Державний департамент інтелектуальної власності Міністерства освіти і науки України.

   с о с «со (22) ІС) « ші с ;»

   щ» 1 се) б 50 Ко)

   Ф) іме) 60 б5