UA90233C2 - Спосіб стабілізації протипухлинних засобів на основі водного розчину сполуки платини з дезоксирибонуклеїновою кислотою - Google Patents

Abstract

Винахід належить до медицини, а саме до протипухлинних засобів, які можуть бути використані при лікуванні злоякісних пухлин, зокрема до способу стабілізації протипухлинних засобів на основі водного розчину сполук платини. Як стабілізуючий агент використовують суміш основи фторурацилу з урацилом та сечовиною, при зниженні концентрації протонів в розчині до рН 8,4-9,9.

Description

ступає іон платини, координований такими ліган- Натрієва сіль фторурацилу підсилює проти- дами-носіями, які поглинаються пухлинними клі- пухлинний та послаблює токсичний ефекти осно- тинами практично так само інтенсивно, як і нор- вної речовини, так як вона має здатність виступа- мальними. Тому засоби, що містять цисплатин, ти, як в ролі модулятора фармакологічної дії характеризуються не тільки високою протипух- макромолекул РІ-ДНК в організмі, так і в ролі ста- линною активністю, але й високою токсичністю. білізатора концентрації макромолекул РІ-ДНК в

Не менш активними, але значно менш токси- водному розчині засобу. чними є протипухлинні засоби, які базуються на Проте водний розчин сполуки РІ-ДНК в відо- водному розчині полімерного комплексу платини мих засобах має рнб,5-7,5, при якому викорис- з дезоксирібонуклеїновою кислотою (РІ-ДНК). тання натрієвої солі фторурацилу дозволяє ста-

Цей комплекс представляє собою продукт реакції білізувати концентрацію РІ-ДНК в розчині при цисплатину та ДНК, в якому один із лігандів-носіїв температурі вище 35"С. Зниження температури іону платини є нуклеотидом, вбудованим в струк- сприяє виділенню з розчину макромолекул спо- туру двохнитчатих спіралей макромолекул ДНК, луки РІ-ДНК в вигляді пухкого осаду та натрієвої які інтенсивно поглинаються тільки пухлинними солі фторурацилу в вигляді кристалів основи клітинами, що швидко розмножуються і, як наслі- фторурацилу, що викликає зменшення концент- док, протипухлинні засоби, що містять сполуку Рі- рації основної речовини та стабілізуючого агенту

ДНК, з високим ступенем вибірковості вражають в розчині дозованої лікарської форми засобу і пухлинні тканини при несуттєвому враженні нор- негативно впливає на його протипухлинну актив- мальних тканин (Лечение неоперабельних опухо- ність і терапевтичну ефективність. Крім того, ви- лей органов брюшной полости. С.А.Шалимов и падання осаду обмежує умови зберігання таких др.1998, стр.1031|. препаратів і можливість їх транспортування з

Мономерний комплекс цисплатин та поліме- метою їх реалізації в аптечній мережі. До того ж рний комплекс РІ-ДНК, які є основними речови- вказаний недолік обмежує застосування водних нами в засобах, недостатньо розчинні і хімічно препаратів РІ-ДНК місцевими аплікаціями та вну- нестабільні в воді, тому в засоби, які створені на трішньоочеревинними інфузіями, виключаючи їх водних розчинах, вводять фармацевтичні до- внутрішньовенні та внутрішньоартеріальні інфу- бавки. В якості добавок використовують фарма- зії ендолімфатичні ін'єкції та інтерстиціальний кологічно прийнятні солі, регулятори рН і інші шлях введення. стабілізуючі агенти, переважно такі, які за раху- Задача винаходу полягає в створенні спосо- нок власної біологічної активності, яка виявля- бу стабілізації протипухлинних засобів на основі ється одночасно зі здатністю підвищувати роз- водного розчину комплексу РІ-ДНК. Така стабілі- чинність та хімічну стійкість основної речовини, зація забезпечить підвищену вибіркову специфі- дозволяють забезпечити ефективність лікування чну дію комплексу РІ-ДНК та його підвищену те- при кращій переносимості. рапевтичну ефективність. Також будуть

Відомий спосіб стабілізації протипухлинного забезпечені розширені умови зберігання засобів засобу на основі водного розчину цисплатину з та розширений діапазон їх застосування, при концентрацією 0,1-1,0мг/мл, в якому використо- яких макромолекули вказаного комплексу не ви- вують натрій хлористий в кількості 1-20мг/мл, діляються з розчину в вигляді осаду при темпе- соляну кислоту до рнН2г,0-3,0 та маніт (діуретик) в ратурах нижче 3576. кількості 2-150мг/мл (Пат. СССР 1192596 А, публ. Поставлена задача вирішується за рахунок 15.11.85). використання в якості стабілізатора суміші осно-

Відомі водні розчини сполуки РІ-ДНК, стабілі- ви фторурацилу, урацилу та сечовини, а також за зовані натрієм хлористим та натрієм лимонноки- рахунок використання розчину з пониженою кон- слим (засобом, що попереджує згортання крові) в центрацією протонів. кількостях, які відповідають мольному співвідно- В відповідності з винаходом для стабілізації шенню платини, фосфору ДНК, натрію хлористо- протипухлинних засобів на основі водного розчи- го та натрію лимоннокислого 4:6:30:3 (Пат. Украї- ну сполуки платини з дезоксирібонуклеїновою ни 60597, публ.15.07.05; 61543, публ. 15.08.05; кислотою, які додатково можуть вміщувати натрій 66476 А, публ. 17.05.04). хлористий, натрій лимоннокислий та амоній хло-

Найбільш ефективні і найменш токсичні з ві- ристий або будь-які інші прийнятні розчинники та домих протипухлинних засобів на основі водного наповнювачі, в якості стабілізуючого агенту вико- розчину сполуки РІ-ДНК стабілізують натрієм ристовують суміш основи фторурацилу з ураци- хлористим, натрієм лимоннокислим, амонієм лом та сечовиною в мольному співвідношенні Рі- хлористим (засобом, що викликає відхаркуючу ДНК, основи фторурацилу, урацилу та сечовини, дію і підсилює дію діуретиків) та додатково стабі- що складає 1:(6-12):(0,6-1,2):(0,6-1,2), при зни- лізуючим агентом, який являє собою натрієву женні концентрації протонів в розчині до рна,4- сіль фторурацилу, при співвідношенні компонен- 9,9. тів в розчині, мас.9ю. В складі засобу макромолекули РІ-ДНК мо- сполука РІ-ДНК 0,130-0,153 жуть вміщувати одну з ДНК, виділену з природних натрій хлористий 0,080-0,090 джерел або синтезованих методами генної інже- натрій лимоннокислий 0,040-0,053 нерії з молекулярною масою, не обмежуючись амоній хлористий 0,015-0,018 цим, 0,3-20млн. дальтон. натрієва сіль фторурацилу 0,025-0,370. Для доведення рН розчину в засобах до 8,4- (Пат. України 70456, публ. 15.10.0511. 9,9 використовують обо гідроксид натрію, або гідроксид калію, або гідроксид амонію, або який- основи фторурацилу, урацилу та сечовини, що небудь інший фармакологічно прийнятний регу- складає 1:(6-12):(0,6-1,2):(0,6-1,2). Інтервали кон- лятор рН. центрації регулятора рН обмежені знизу значен-

Відоме використання основи фторурацилу як нями, які виключають можливість кристалізації структурного фрагменту тегафуру - попередника основи фторурацилу, а зверху - фармацевтични- фторурацилу в організмі - для виготовлення про- ми вимогами. типухлинної композиції, яка вміщує тегафур та Запропонований спосіб стабілізації не дозво- урацил в мольному співвідношенні 1:4 (Пат. США ляє виділятися з розчину макромолекулам Рі- 5534513). ДНК та молекулам основи фторурацилу, що в

Відоме використання сечовини як діуретика, свою чергу забезпечує отримання протипухлин- кератолітика, засобу, що знижує внутрішньочере- них засобів з такими концентраціями компонен- пний та внутрішньочний тиск (М.М. Туркевич. Фа- тів, які не змінюються в їх дозованих лікарських рмацевтична хімія, 1973, стор.45), а також як екс- формах при температурі витримування готового ціпієнта, який добавляють в тверді дозовані продукту в інтервалі 25-57С при тривалому збері- лікарські форми для перорального введення. ганні.

Відоме застосування високих концентрацій Спосіб стабілізації, що заявляється, був за- сечовини і підвищення рН більше, ніж до 11, для стосований в технології одержання протипухлин- розкручування спіралізованих нитей природної них засобів, перелікованих в таблиці 1, які відріз- двох-ланцюгової ДНК |(А.Ленинджер. Биохимия. нялися один від одного природою ДНК, що 1976, стр.7З371. передувала сполуці РІ-ДНК.

Про використання основи фторурацилу, ура- На практиці спосіб стабілізації протипухлин- цилу та сечовини окремо або в вигляді суміші, а них засобів здійснювали наступним чином. В во- також про використання регуляторів рН в якості дний розчин, який вміщував сполуку РІ-ДНК, на- агентів, які перешкоджають виділенню з розчину трій хлористий, натрій лимоннокислий, амоній макромолекулярних сполук металів з ДНК в ви- хлористий, вводили водний розчин додаткового гляді осаду, в рівні техніки відомості відсутні. Та- стабілізуючого агенту, що містив суміш основи кож не відомо про використання сечовини в до- фторурацилу, урацилу та сечовини. Одночасно зованих лікарських формах для панентерального разом з водним розчином стабілізуючого агенту введення. додатково вводили водний розчин регулятора

Ефективні інтервали концентрацій і співвід- рН, який вміщує натрію гідроксид до рН11-12, ношення основної речовини і солей в водному яким в розчині цільового засобу рН доводили до розчині, стабілізованому за способом, що заяв- 8,4-9,9. ляється, відповідають концентраціям і співвідно- Конкретні умови способу стабілізації проти- шенням, встановленим при розробці відомого пухлинних засобів, наведених в таблиці 1, із за- способу одержання сполуки РІ-ДНК в водному значенням кількості вихідних компонентів в роз- розчині для внутрішньо-очеревинних, внутріш- чині основної речовини, в розчині додаткового ньовенних та внутрішньо артеріальних інфузій, стабілізуючого агенту і в розчині регулятора рн які мають рнеб,6-7,5 і видержуються при темпера- наведені в таблиці 2, де приклади 1-9 стосуються турі 35-40"С. Інтервали концентрацій основи способу, що заявляється, а приклади 10 і 11 - фторурацилу, урацилу та сечовини детерміновані відомого способу. мольним співвідношенням нуклеотиду РІ-ДНК,

Таблиця 1

Мепротипухлинного Співвідношення / Молекулярна засобу Походження ГЦ маса, млн. даль- тон 1116 |Пухлинапечнкилюдини.///77777717171717171717171717111111111111 154 | 18-20 8 |Селезінкавеликоїрогатотхудоби маркиА /-:/ | 1,496 | 774 КИ() 111119 |СепезіннапоросятимаржмА./-/-:/ 77777 | 143 | 12-16

Позначення в таблиці: А - аденін, Т - тімін, Г - гуанін, Ц - цитозін.

Таблица 2

Меприклад Мепротипухлинного Я - в розчині стабілізуючого аге- | в розчині ре- нта гулятора рн 71777771 130 | 0831 053 |017| щ |275|0236|10127| 075 ( 72. .юЮюЮюрйю2е | 1531087) 050 |015| 323 |0255|0149| 073 3 | юЮющюКкхзЗз | 748 |080 046 |о018| |Ззле|бога|оза| 080 74 ЮюЮюжюфющ4 | 501090 048 |015| |238|0205|0122| 063 ( | БЮжф5 | 30 |0851 045 |016| |гобіотвв|олоє| 068 6 | юЮюж 6 | 030 |080 040 |о05| |137|018|0063| 060 ( 77 | .юЮюЮю77 | 40 |085) 046 |о0л16| 1470147 |0080| 070 78 ЇЇ юю 8 | 531090 053 |о018| |ї62|0139|10099| 080 ( 79 ЇЇ Бюжкм'9 | 148 |088 042 |017| |234|0157|0108| 075 | юЮюЮЙнх/8 | 05о 1090 050 |01811ї89 71777719 | 48 |080| 053 |0л5| тва | | ЇЇ

Позначення в таблиці: масі - натрій хлористий; МазСуї - натрій лимоннокислий; МНАСІ - амоній хлорис- тий; Маги - натрієва сіль фторурацилу; Ри - основа фторурацилу; Ога - урацил; Огеа - сечовина; Ммаон - натрію гідроксид.

Характеристики способу, що заявляється, в таблиці 3, де приклади 1-9 стосуються способу, що залежності від умов виконання та температури заявляється, а приклади 10 і 11 - відомого спосо- витримування засобу порівнювали з характеристи- бу. ками відомого способу по даним, наведеним в

Таблица З

Мепроти- гтемпература| концентрація компонентів в розчині засобу,мг/мл |Мольне співвід-

Меприкладупухлинногої витри- РЕ Ммаон до|ношення нукле- засобу мування днк Масі | МазСуї | МНАаСІ | МагБи ги досяг- | отиду РІ-ДНК, засобу, С нення рНі Ри, Ога і Огеа 71 7 71 1 25 |1301087| 053 | 017| |275| 95 | їпололе 2 | 2 1 юю щю20 |1531083| 05О | о015| |8322| 94 | їлолите 73 | з | го 148 |080| 046 |018| |З3л12 98 | їпгили 74 | 4 1 15 |1501090| 048 /015| |237| 87 | 190910 75 | 5 1 юЮюфюкмло |13010851| 045 /016| |205| 88 | 1ї9:0810 6 | 6 | 5 |ї301080| 040 /о015| |7,37| 85 | 160606 77 | 7 1 5 |ї1401084| 045 /017| |147| 89 | 160707 8 | 20 |1531090| 05Зз3 |олв| |762| 99 / 6068 8 | 15 |1531087| 051 |о016| /|162| 99 | 60608 8 | 10 1531 090| 052 |017| |162| 98 | 60608 9 | 15 (1481088) 042 |о016| |232| 92 | 90709 9 | 10 |1ї48|1087| 040 |о15| |232| 93 | 90709 9 | 5 |1481088| 041 |о06| |232| 91 | 90709 лю -- - 5 -Ж 25 - - - Я оз о оо о ел а--- 8 | 15 |ї04|090| 050 |018/|147| | 68 6 -- ААУ --3 9 | ло Щ|0631085| 053 |ои5|л1ля| | 76

Відмінності в характеристиках способу, що за- відомому способі, підтверджуються в прикладах являється і відомого, підтверджуються різними таблиці зменшенням концентрації сполуки РІ-ДНК інтервалами значень рн, виміряними потенціомет- від 1,50мг/мл до 1,04мг/мл, тобто на 30,795, а МаРи ричне, та відсутністю температурної залежності від 1,89мг/мл до 1,47мг/мл, тобто на 2295 в водно- концентрацій основної речовини і додаткового му розчині засобу, витриманому при 1570. При стабілізуючого агенту, які контролюються метода- витримуванні засобу біля 107"С концентрація зме- ми кількісного аналізу. Відмінності в концентраці- ншується для РІ-ДНК від 1,48мг/мл до 0,6Змг/мл, ях, які виникають при температурі нижче 357С в тобто уже на 57,495, а для МагРи від 1,82мг/мл до

1,19мг/мл, тобто на 34,495. Концентрації основної рольної культури обробляли фізіологічним розчи- речовини і додаткового стабілізуючого агенту в ном, а клітини експериментальних культур- прикладах способу, що заявляється, відповідають розчинами засобів, стабілізованих по способу, що концентраціям в розчинах, витриманих при темпе- заявляється, і по відомому способу, які поперед- ратурах вище 35"С, що підтверджує можливість ньо витримували при температурі 107С. Протипух- способу забезпечити умови, при яких макромоле- линну активність оцінювали по цитотоксичності, кули РІ-ДНК та молекули основи фторурацилу не яку характеризували відносною по відношенню до виділяються з розчину при витримуванні цільового контролю кількістю клітин, що загинули через 24 продукту в інтервалі температур 25-56. години після обробки засобами. Результати підра-

Протипухлинну активність, яку здатні забезпе- хунку відносної кількості клітин, що загинули, по- чити засобам спосіб стабілізації, що заявляється, даного в відсотках, наведені в таблиці 4, де під та відомий спосіб, досліджували в тесті цитотокси- Мої приведені показники контрольної культури чності на моделі адаптованих для культивування клітин, оброблених фізіологічним розчином, під клітин злоякісної астроцитоми головного мозку МоМе2-5 - показники експериментальних культур, людини. Клітини підтримували в поживному сере- оброблених розчинами засобів, стабілізованих по довищі Ігла з додаванням ембріональної телячої способу, що заявляється, під Моб - показники екс- сироватки, глюкози та інсуліну при постійному ре- периментальної культури, оброблених розчином жимі газового складу і температурі 36,57С в інку- засобу, стабілізованого по відомому способу. баторі. В період інтенсивного росту клітини конт-

Таблица 4

Темпе- Кількість млІКонцентрація

Відсоток

Культура! ратура ви- засобу на РІ-ДНК в й клітин три- Засіб 1л середо- | середовищі клітин,

МоМеп/п | мування вища куль- культи- що заги- о нули засобу, "С ти-вування вування 11117110 |Фізіолоїчнийрозчин.///////7777777777777717171717171711111110002 | | 17 і 6 | ло |Засіб Мео, стабілізованийпо способу вприкладія| 0,02 | 126 | з22

Дані таблиці 4 свідчать про те, що при порів- транспортування та розширює можливості викори- нянні кількісної оцінки протипухлинної активності в стання. тесті цитотоксичності спосіб стабілізації, що заяв- Протипухлинні засоби, стабілізовані по спосо- ляється, суттєво перевищує відомий. Витримані бу, що заявляється, можуть бути використані в при однаковій температурі 10"С та застосовані в різних дозованих формах. однакових об'ємах 0,02мл з однаковими кількос- Досвід клінічного застосування протипухлин- тями 1 ,48мг/мл РІ-ДНК при температурі вище 3570 них засобів, стабілізованих по способу, що заяв- водні розчини засобу, стабілізованого по відомому ляється, показав, що їх використання в дозованих способу, після введення в середовище культиву- формах, як для внутрішньо очеревинного і місце- вання об'ємом 1л створюють-в ній концентрацію вого шляхів введення, так і для внутрішньовенно- основної речовини всього 12,бмг/л, яка викликає го, внутрішньо артеріального, ендолімфатичного загибель тільки 32,290, тоді як водні розчини засо- та інтерстиціального, підвищує ефективність тера- бу, стабілізованого по способу, що заявляється, пії первинних та метастатичних пухлин, локалізо- після введення в середовище культивування ство- ваних в області голови, шиї, легень, нирок, органів рюють в ній концентрацію РІ-ДНК 29,бмг/л, яка травлення та опорно-рухового апарату. Підвищен- викликає загибель 80,4-82,190 клітин. ня ефективності виражається в збільшенні трива-

Таким чином, запропонований спосіб стабілі- лості життя хворих та покращання якості їх життя, зації зберігає високу протипухлинну активність та як під час проведення курсів лікування, так і в від- терапевтичну ефективність засобів на основі вод- далений після лікування період часу. При цьому ного розчину сполуки РІ-ДНК навіть при темпера- яких-небудь тяжких клінічних або лабораторних турах 25-57С, що значно спрощує його зберігання, проявів побічних ефектів у хворих не було виявле- но.

ОС Комп'ютернаверстка Т.Чепелева.д 00000000 Підписне (00000000 Тиражобоприм, ////000С0С

Міністерство освіти і науки України

Державний департамент інтелектуальної власності, вул. Урицького, 45, м. Київ, МСП, 03680, Україна

ДП "Український інститут промислової власності", вул. Глазунова, 1, м. Київ - 42, 01601