WO1991010431A1

WO1991010431A1 - Emulsion grasse

Info

Publication number: WO1991010431A1
Application number: PCT/JP1991/000006
Authority: WO
Inventors: Junzo Seki; Kouichi Ushimaru; Makoto Sugiyama
Original assignee: Nippon Shinyaku Co Ltd
Current assignee: Nippon Shinyaku Co Ltd
Priority date: 1990-01-11
Filing date: 1991-01-09
Publication date: 1991-07-25
Anticipated expiration: 1992-07-11
Also published as: TW211015B; EP0510197A4; EP0510197A1

Description

明細害 '

脂肪乳剤技術分野

本発明は、抗癌活性を有するマイトマイシン C誘導体の製剤に関する。さらに詳しくは、マイトマイシン C誘導体単純脂質、リン脂質および水を含有してなる抗痛剤医薬組成物に闋する。

背景技術

マイトマイシン Cは優れた抗癌作用を示し、広く臨床に用いられている。しかし、多くの深刻な副作用を有し、この製剤の臨床使用は、著しく制限され十分な薬物療法を行うことができない難点を有しており、マイトマイシン Cの腫瘙部位への移行性の改善および副作用の軽減が望まれていた。

これまで、マイトマィシン Cの種々の誘導体についてスクり一二ングが行われるとともに、マイトマイシン cのプロドラッグである一般式〔 I〕で表されるマイトマイシン c誘導体（例えばノニルォキシカルボニルマイトマイシン C ) について、リボソーム等に代表される製剤学的手法により上記の問題を解決すぺぐ種々の努力がなされてきた。上記マイトマイシン c誘導体の yポソ一ム製剤は、投与後リポソームより薬物が速やかに遊離し、容易に代謝されることなどにより満足な抗癌活性の改善効果は得られず、より一眉の改善が望まれていた。

また、薬物の血液中又は適用部位から病変組織への移行性を改善するための製剤学的工夫に闋する研究はこれまで種々行われてきているが、上記のリン脂質で調製したリポソームに薬物を包含させて利用する方法では、 ①永層を脂質二重層で包含するリポソ一ムには保存時の安定性に簡題が多いこと、 ②上記マイトマイシン C誘導体はきわめて脂溶性が高くリポソーム製剤とした場合リン脂質二分子膜中に存在するのでリボソーム膜構造に損傷を与え、薬物を安定に保持できないこと、等の欠点を有していた。

これは、りポソー厶がリン脂質二分子胰によって内外の永層を隔てる構造を有しているため種々の力に対して安定ではないためであると考えられ、凝集による粒子怪の増大も又、保存時の欠点として知られていた。

発明の開示

本発明者らは、上記マイトマイシン C誘導体を安定に保持し、また腫瘍部位への移行性をも改善し、安全で有効な新規の製剤を提供することを目的に検討し続けた結果、ようやく本発明を完成させることに成功したものである。通常、投与された薬物は、その薬物分子の持つ面有の性質により生体内を移動分布する。そして作用部位に到達し薬効を発現する。このとき薬効発現に必要な部位にのみ薬物が集中することが好ましいが、一般には身侓全体に薬物は分布し、不要な部位にも薬物が移動する。時にこれが副作用の原因となる。そこで、薬物の钵内動態を改善することの重要性及び必要性が生じる。

本発明者らは、上記の事情に鑑み、 ①薬物の薬理作用そのものに影響を与えることなく、 ②薬物の効率的な病巣組編内への選択的移行を可能たらしめ、 ③薬物の血中濃度を持続させることができる、安全で一層有効なマイトマイシン C誘導体の新規の製剤を検討し続けた結果、ついに本発明を完成させることに成功したものである。

本発明の要旨は、マイトマイシン C誘導体を主成分とする脂肪乳剤を製造するにあたって、単钝脂質、リン脂質および永のそれぞれの構成成分の組成比を限定したところにめ 0

本発明に係るマイトマイシン C誘導体としては、次の一般式〔 I〕

C I )

〔式中、 Xは、一（CH₂)n—0 又は、

(CH₂)_n— NHCOO— を表し、 n は、 0〜 4の整数を表し、 Rは、炭素数 3〜25の、直鎖又は分咹した、鎖扰又は退欤の、飽和又は不飽和の炭化永素を表す。〕で表わされる化合物を挙げることができる。

Rとして例えば、ィソプチル、ノニル、セチル、ゲラニル、コレステリル等を挙げることができるが、これらに跟定されるものではない。

本発明に係る一般式〔 I〕で表される化合物のうち、ァルキルォキシカルポニルマイトマイシン C (一般式〔 I 〕で Xがー（C H ₃) n— 0— かつ π が Dの化合物）及びがコレステリルであるマイトマイシン C誘導体（例えば、 N- コレステリルォキシカルボニルダリシルマイトマイシン C、コレステリルォキシァセチルマイトマイシン C等）を除く化合物は文献未記載の新規化合物であって、本発明者らが- 初めて見出したものである。

本発明に係るマイトマイシン C誘導体は、生体内で既知のマイトマイシン C誘導体とは異なる速度でマイトマイシン Cへと代謝されるため、マイトマイシン Cのプロドラッグとして有用なものである。

一般式〔 I〕で表される化合物は特に、人の血漿ゃ腫疡細胞での遊雜のマイトマイシン C生成に便れている。マイトマイシン C誘導体は、それ自体は活性を有さずに腫瘍中を初めとした体内で活性型であるマイトマイシン Cへと代謝されることによりその効力を発現するものである。

本発明においては、マイトマイシン C誘導体は全体の脂肪乳剤に対して 10% (w/v) 以下が望ましい。

本発明においては、単純脂質は全体の脂肪乳剤に対して 0. 5〜30% (w/v) 含有するようにする。

本発明においては、りン脂質は上記の単純脂荧に対して重量比にして 0. 05 〜 2倍量舍有するようにする。

これより少ない量では、粗大粒子の混入が避けられず、薬物を含有した安定な脂肪乳剤とすることができない。これより多い量のリン脂質を用いた場合は、リボソーム粒子の混入が避けられず、均一な脂肪乳剤が得られない。

本発明の構成成分である永は、適当量含有するようにする o

これらの成分構成により、安定な微粒子化乳剤が得られ、このものがきわめて優れた特徴を有する医薬組成物であり、新規のマイトマイシン C誘導体製剤として利用できることが本発明により初めて明かとなった。

本発明の脂肪乳剤は、乳剤粒子中にマイトマイシン C誘導体を安定に保持することができる。

本発明の脂肪乳剤の平均粒子痊は 0. 5 以下である。本発明の脂肪乳剤は 1 以上の乳剤粒子を含まないきわめて微細で安定なものである。

本発明の脂肪乳剤の乳剤粒子は、 ①腫疡に起 Sする炎症及び生体防御反応により局所に集合するマク口ファージ等の貪食性細胞や腫瘍細胞に移行するため、 ②腫瘍血管は血管透過性が亢進しているので、腫瘍部位で血管内から病巣 - 組織内に選択的に容易に漏出するため、等の理由により効率的な病巣部位への薬物移行が達成されるからである。

また、約 1(30 £1下の乳剤粒子は、肝臓等の钿網内皮系による非特異的な取り込みが回避され、薬物の血中濃度がいっそう髙く保たれる効果を得ることができる。こは、より多くの本発明乳剤粒子の腫瘍組織内移行につながる。乳剤粒子の病巣内移行にともない乳剤粒子に包含されている薬物も病巣内に移行する。このことにより、薬物が容易にそして選択的に病巣部に移行するから、病巣部位での薬物濃度が髙まりその効果を増大させることができる。

本発明によれば、マイトマイシン C誘導体は脂質の油滴中にあるため、周囲の環境から遮断された钛態で存在するので、酵素的又は非酵素的な分解を抑制することができ、投与後においても薬物の安定倥を改善することができる。

これらの結果、本発明に適応するマイトマイシン C誘導体より遊雜する活性型のマイトマイシン Cが病巣組織内において持続的に作用することとなる。

本発明の脂肪乳剤に使用される単純脂質としては、例えば、精製大豆油、綿実油、菜種油、胡麻油、コーン油、落花生油、サフラワー油、トリオレイン、トリリノレイン、トリノルミチン、トリステアリン、トリミリスチン、トリァラキドニン等の中性脂質を挙げることができる。また、コレステリルォレート、コレステリルリノレート、コレステリルミリステート、コレステリルパルミテート、コレス _? テリルァラキデート等のステロール誘導体をも挙げることができる。これは、血管内皮等に存在する種々のリパーゼ類により中性脂質は比較的容易に分解されるのに対し、コレステロール誘導体はこれらの酵素による分解を受けにくいため、体内での安定性が更に増すからである。

りン脂質としては、例えば、卵黄、大豆、牛、豚等由来のリン脂質または、純あるいは半合成的に得られる 'J ン脂荧が挙げられる。即ち、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールァミン、ホスファチジルセリン、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジルグリセロール等が挙げられる。例えば、卵黄ホスフアチジルコリン、大豆ホスファチジルコリン、ジパルミトイルホスファチジルコリン、ジミリストイルホスファチジルコリン、ジステアロイルホスファチジルコりン、ジォレオイルホスファチジルコ

U ン、ジパルミトイルホスファチジルグリセロール等が挙げられる。それらの水素添加物も用いることができる。なかでも好ましい代表例として、精製卵黄レシチンを挙げることができる。また、乳剤粒子に表面荷電を賦与するためにステアリル了ミン、ジセチルホスフヱート、ホスファチジン酸、ホスファチジルグリセ口ール等の荷電を有する脂質をも用いることができる。

本発明の脂肪乳剤及びこれを使用した製剤の製造にあたつては、従来から行われてきた種々の乳剤製造法をそのまま応用することができる。例えば、薬物を含めた全構成成分をマントン一ガウリン型等の加圧璜射式ホモジナイザー、ミクロフルイダイザ一、超音波ホモジナイザー等により充分に微細化して形成せしめる方法が一般的である。この時、一般に知られる乳化補助剤または安定化剤として生理的に受け入れられるステ σ ール類、脂肪酸あるいはそれらの誘導体等を加えることもできる。これらの代表例としては、コレステロール、ォレイン酸等があげられる。

本発明の脂肪乳剤の形妆ゃ粒子径は、電子顕微鏡、光散乱方式の粒子径分析装置、メンブレンフィルターによる據過等により容易に確認することができる。

本発明の脂肪乳剤の製剤には、本発明の必須構成成分のほかにその他の成分として、一般に注射剤に用いられる添加剤及び補助物質などを添加することができる。例えば、酸化防止剤、防腐剤、安定化剤、等張化剤、暧衝剤等を添加することができる。これらの添加剤、補助物質等の要求量及び最適量は、その目的に応じて変化させることができ 0

上記のようにして得られる本発明の医薬組成物は、必要に応じて滅菌（例えば濾過滅菌や高圧蒸気滅菌等）し、窒素ガスとともに了ンプル中に封入することができる。又、必要に応じて凍結乾燥することができる。凍結乾燥させた本発明医薬組成物は、適当な溶液の添加によって復元することができる。本発明の脂肪乳剤は、各種悪性腫疡等の治療を目的としてヒトまたは種々の動物の静脈内に投与するのが一般的である。この場合、乳剤粒子の粒子 S等の管理を十分に行う必要がある。なぜならば、一般に 1 上の粒子が混在す - ると、種々の毒性発現が知られるからである。

また本発明の脂肪乳剤は、必要に応じて勖脈内、筋肉内、及び皮下等に注射剤として投与することもできる。また、本発明に係る医薬組成物は、点眼剤、点暴剤、経口投与剤、吸入剤、膀胱注入剤または坐剤や軟骨等としても製剤化し使用することができる。この場合においても、医薬上許容される基剤、賦形剤等の添加剤を任意の成分として挙げることができる。

本発明の脂肪乳剤よりなる製剤の投与量は、投与ルート、剤形、症状、目的によって異なるが、乳剤として一般に、

1 〜1000«£/回である。

効果

本発明によれば、マイトマイシン C誘導体の臨床上の利用価植を著しく高めることができる。本発明の効果は、前記した従来の問題点を克服し、抗腫瘍効果の改善および、臨床上の最大の問題である副作用（毒性）を著しく軽減したことなどにより、安全で一層有劲なマイトマイシン Cの新規な製剤化を達成したことに集約することができる。これらの効果は、本発明により初めて成されたものである。本発明の脂肪乳剤の構成成分は、従来から医療現場において医療用として用いられてきた医療上許容される脂質を主とするため、極めて安全に使用することができる。

発明実施するための最良の形想

以下に本発明の脂肪乳剤の製造に藺する実施例をあげて本発明をさらに詳しく銳明するが、本発明がこれらのみに限定されるものではないことは明白である。

製造例 1

ノニルォキシカルボニルマイトマイシン Cの 3 nig、精製大豆油 0. 5g 及び精製卵黄レシチン 0. 5g をクロ口ホルム

Zメタノール（ 1 / 1 , v/v)混液 lOOmi中で混合溶解した後、 rj一タリーエバポレーターで滅圧下溶媒を完全に除去する。これに 0. 24Mグリセリン水溶液を 8 m£加え、ホモジナイザーで撹拌し、粗乳化液とする。 0. 24Mグりセリン水溶液を加えて 10m£に定容した後、氷冷下超音波ホモジナイザ一（ブランソンモデル 1 8 5 ) で 60分簡乳化し、極めて微細なマイトマイシン C誘導体を舍有する脂肪乳剤を得ん 0

製造例 2

ノニルォキシカルボニルマイトマイシン Cの 2 g 、精製大豆油 50g 及び精製卵黄レシチン 6 g を約 60 ¾で加温混合し、これに、 Q. 24Mグリセリン永溶液を 500 ^加え、ホモミキサーで撹拌し、粗乳化液とする。粗乳化液をマントン一ガウりン型ホモジナイザーにより高圧乳化し、きわめて微細なマイトマイシン C誘導体を含有する脂肪乳剤を得た。 1 J 製造例 3

ノニルォキシカルボニルマイトマイシン Cの 40mg、精製大豆油 0.5g 及び精製卵黄レシチン 0.5g をクホルム Ζメタノール（ 1 / 1、 ν/ν)混液 100m£中で混合溶解した後、口一タリーエバポレーターで減圧下溶媒を完全に除去する。これに、等張リン酸緩衝液 8 miを加え、ホモジナイザ一で攪拌し、粗乳化液とする。等張リン酸緩衝液を加えて 10m£に定容した後、氷冷下、超音波ホモジナイザー（ブランソンモデル 1 8 5 ) で 60分間乳化し、極めて微細なマイトマイシン C誘導体を含有する脂肪乳剤を得た。

製造例 4

N— （コレステリルォキシカルボニル）グリシルマイトマイシン Cの 2 g 、精製大豆油 20g 及び精製卵黄レシチン 25g を約 60でで加温混合し、これに、 0.24Mグリセリン水溶液を 100m£加え、ホモミキサーで撹拌し、粗乳化液とする。粗乳化液をマイク πフルイダィザ一により髙圧乳化し、きわめて激細なマイトマイシン C誘導体を含有する脂肪乳剤を得た。

製造例 5

ノニルォヰシカルボニルマイトマイシン Cの l mg、コレステリルォレート 0.5g 及び精製卵黄レシチン 0.5g をク η ホルム Zメタノール（ 1 / 1 , ν/ν)混液 100m£中で混合溶解した後、ロータリーエバポレーターで減圧下溶媒を完全に除去する。これに、 0.24Mグリセリン永溶液 8 m£を丄

加え、ホモジナイザーで撹拌し、粗乳化液とする。 0.24M ダリセリン氷溶液を加えて 10m£に定容した後、超音波ホモジナイザー（ブランソンモデル 1 8 5 ) で 60分間乳化し、極めて微細なマイトマイシン C誘導体を舍有する脂肪乳剤を得た。

製造例 6

コレステリルォキシァセチルマイトマイシン Cの 3 mg、精製大豆油 0.5g 及び精製卵黄レシチン 0.4g 、ジミリストイルホスファチジルグリセロール 0, lg をク 13口ホルム

/メタノール（ 1 / 1 , v/v)混液 100m£中で混合溶解した後、 ϋ一タリーエバポレーターで滹圧下溶媒を完全に除去する。これに、 9 %ラクトース水溶液 8 J ^を加え、ホモジナイザーで撹拌し、粗乳化液とする。 9 %ラクトース永溶液を加えて 10m£に定容した後、超音波ホモジナイザー（ブランソンモデル 1 8 5 ) で 60分間乳化し、極めて微細なマイトマイシン C誘導体を含有する脂肪乳剤を得た。

製造例 7

ノニルォキシカルボニルマイトマイシン Cの 5 og、精製大豆油 0.5g 及び永素添加卵黄レシチン 0.4g 、コレステール 0. lg をクロ口ホルム Zメタノール（ 1 Z 1 , v/v) 混液 100m£中で混合溶解した後、ロータリーエバポレータ一で滅圧下溶媒を完全に除去する。これに、 9 %ラクトース永溶液 8 m£を加え、ホモジナイザーで撹拌し、粗乳化液とする。 9 %ラクトース氷溶液を加えて 10m£に定容した後、超音波ホモジナイザー（ブランソンモデル 1 8 5 ) で 60 分簡乳化し、極めて微細なマイトマイシン C誘導体を含有する脂肪乳剤を得た。

製造例 8

N— （ノニルォキシカルボニル）グリシルマイトマイシン Cを以下に示す合成方法により得た。

氷 3 m2にグリシン 300ig、トリヱチルァミン 808ingを加えた溶液に、ノニルクロロカルポネートの 824m をジォキサン 20m£に溶解した溶液を 0 tにて滴下する。 3時間撹拌した後、反応液を滅圧濃縮に付し、残渣に 1 N塩酸 10m£を加え析出した沈澱をクロ口ホルム 20m£で抽出する。有機層を氷 10m で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥した後、滹圧濃縮に付すと白結晶（N— （ノエルォキシカルボニル）グリシン） 570ngが得られる。この結晶をジォキサン 10miとクロ口ホルム 2 m£の混液に溶解し、 0でにて、 N—ヒドロキシサクシンィミドの 270m とジシク oへキシルカルボジィミドの 470mgを加える。 4 tで 12時藺放置した後、析出した沈濺を狳過して除き、攄液を減圧港縮し無色の油拔残渣 772mgを得る。

マイトマイシンじの 150mgを N, N-ジメチルホルムアミドの 5 ί ^に溶解した溶液に上記の油状残渣 150mgとピリジン 36mgを室温下で加え、 4時間携拌する。反応液を減圧 '濃縮後、残渣をクロ σホルム 20m£に溶解し、水 15m£で洗淨する。有機層を硫酸マグネシウムで乾燥後、滅圧澳縮に付すと赤紫色の残渣を得る。この残渣をシリカゲルカラムに付しクロロホルムメタノール混液で溶出した赤紫色の面分を減圧濃綰すると赤紫色の結晶（N— （ノニルォキシカルボ二ル）グリシルマイトマイシン C) 225mg (収率 8 9 %) が得られる（融点 250t以上（分解））。

このものの FAB— MSスぺクトルは m/z ; 5 6 3

(M+ 2 ) を示し、 'Η— NMRスペクトルは以下のビークを示し、その構造が確認できる。

δ ： 5.36 〜5·08(3Η, ra, -COCH2NHCDO-, NH₂)

4.43 (1H, d, J=13.5Hz, 3-H)

4.16 〜3.89(4H， m, -CDCH₂NH-_f -C00CH₂-)

3.7K1H, dd, J=10.8， 10.8Hz 10 - H)

3.59 (1H, d, J= 4.6Hz 10-H)

3.57(1H, dd, J= 1.6, 13.5Hz 3， -H)

3.48(1H, dd, J= 1.6， 4.6Hz 2 -H)

3.18 (3H, s, 0CH₃)

1.78(3H, s, -C=C-CH₃)

1.66 〜1.48(2H, ra， -C00CH_aCH₂-)

1.42 〜1·16 2Η, m, -CH₂ (CH₂) ₆CH₃)

0.88(3H， t， J=7Hz, -(CH₂)₈CH₃)

このようにして得た N- (ノニルォキシカルボニル）グりシルマイトマイシン Cの 3og、精製大豆油 0.5g 及び精製卵黄レシチン 0.5g をクロ口ホルム/メタノール（ 1Z1, v/v)混液 ΙΟΟπώ中で混合溶解した後、ロータリーエバポレ一ターで減圧下溶媒を完全に除去す。これに、 0. 24Mグリセリン永溶液を 8 mi加え、ホモジナイザーで撹拌し、粗乳化液とする。 0. 24Mグリセ 'J ン水溶液を加えて 10m£に定容した後、氷冷下、超音波ホモジナイザー（ブランソンモデル 1 8 5 ) で 60分間乳化し、極めて微細なマイトマイシン C誘導体を舍有する脂肪乳剤を得た。

製造例 9

N- (ィソブチルォキシカルボニル）グ II シルマイトマイシン Cを以下に示す方法により得た。

水 3 m£にグリシン 300mg、トリエチルァミン 808mgを加えた溶液にィソブチルクロロカルポネート 544m をジォキサン 20ιη2に溶解した溶液を 0でで滴下する。 3時簡攪拌した後、反応液を滅圧濃縮に付し、残渣に 1 N塩酸 10m£を加え、析出した沈澱をクロ口ホルム 20m£で抽出する。有機層を水 lOrn^で洗浄し硫酸マグネシウムで乾燥した後、減圧濃縮に付すと白結晶（N- (ィソブチルォキシカルボニル）グ

U シン） 409ngが得られる。

この結晶をジォキサン 10m£とクロホルム 2 m£の混液に溶解し、 0でにて、 N-ヒドロキシサクシンィミド 270i とジシクロへキシルカルポジイミド 470mgを加える。 4 でで 12時 ¾放置した後、析出した沈澱を通過して除き、據液を減圧濃緒し、無色の油状残渣 772mgを得る。

マイトマイシン C 150in を、 Ν, Ν -ジメチルホル厶ァミド

5 m に溶解した溶液に上記の油状残渣 150ngとピリジン 36 mgを室温下で加え、 4時間撹拌する。反応液を滅圧濃縮後. 残渣をクロ口ホルムに溶解し、永 15 ^で洗浄する。有機層を硫酸マグネシウムで乾燥後、减圧濃縮に付すと赤紫色の残渣を得る。この残渣をシリカゲルカラムに付し、クロロホルム/メタノール混液で溶出した赤紫色の画分を滅圧濃縮すると赤紫色の結晶（N- (イソブチルォキシカルボニル）グリシルマイトマイシン C ) 161mg (収率？ 3 % ) が得られる（融点 2 5 O t:以上（分解））。

このようにして得た N- (ィソブチルォキシカルボニル）グリシルマイトマイシン Cの 3 mg、精製大豆油 0. 5g 及び精製卵黄レシチン 0. 5g をクロ口ホルム/メタノール（ 1 / 1 , v/v)混液中で混合溶解した後、一タリーェバポレーターで圧下溶媒を完全に除去する。これに、

0. 24Mグリセリン永溶液を 8 m2加え、ホモジナイザーで攒拌し、粗乳化液とする。 0. 24Mグリセリン永溶液を加えて 10m£に定容した後、氷冷下、超音波ホモジナイザー（ブランソンモデル 1 8 5 ) で 60分間乳化し、極めて微細なマィトマイシン C誘導体を舍有する脂肪乳剤を得た。

製造例 10

セチルォキシァセチルマイトマイシン Cを以下に示す合成方法により得た。

セチルアルコール（ 1. 2g ) とエチレングリコール（10 id ) をベンゼン（ 100m£ ) 中に加え、さらに p—トルエンスルホン酸一水和物（ lOOmg ) を加えて 8時間還流する。反応物を滅圧濃縮に付し、残渣をエーテル抽出後、飽和炭酸水素ナトリゥム溶液で洗浄し、有機層を硫酸マグネシゥムで乾燥後、減圧濃縮に付すと残渣が得られる。水酸化リチウム了ルミニゥム（ 0· 5 g ) と塩化アルミニウム（ 2 g ) を乾燥エーテル（50 ）に溶解し、上記残渣のエーテル溶液を滴下し、 4時間撹拌を続ける。希硫酸を若干加えた後、不溶物を攄過し、エーテル層を氷及び 5 %炭酸永素ナトリゥムで洗狰し、硫酸マグネシゥムで乾燥後、減圧濃縮に付すと残澄が得られる。この油状残渣をジヨーンズ試薬で酸化するとセチルォキシ齚酸が得られる。

得られたセチルォキシ齚酸を製造例 8の方法と同様に N- ヒドロキシサクシンィミドを用いてマイトマイシン Cに結合させることで、セチルォキシ了セチルマイトマイシン C を得た（融点 110〜： L20 t (分解））。

このようにして得たセチルォキシァセチルマイトマイシン Cの 3 mg、精製大豆油 0. 5g 及び精製卵黄レシチン 0. 5 g をク口口ホルム Ζメタノール（ 1 / 1 , ν/ν)混液 100m£ 中で混合溶解した後、ロータリーエバポレーターで滅圧下溶媒を完全に除去する。これに、 0. 24Mグリセリン氷溶液を 8 J ^加え、ホモジナイザーで撹拌し、粗乳化液とする。

0. 24Mグリセリン氷溶液を加えてに定容した後、氷冷下、超音波ホモジナイザー（ブランソンモデル 1 8 5 ) で 60分間乳化し、極めて微細なマイトマイシン C誘導体を舍有する脂肪乳剤を得た。製造例 11

製造例 8において用いたノニルクロロカルポネートの代わりにゲラニルクロ σ力ルポネートを同モル用いて製造例 8と同様に操作し、 Ν- (ゲラエルォキシカルボニル）グリシルマイトマイシン Cを合成した（融点 250 t以上（分解 ) ) 。このマイトマイシン C誘導体 40mg、精製大豆油 0. 5 g 及び精製卵黄レシチン 0. 5g をクロホルム/メタノール（ 1 Z 1 , v/v)混液 100^中で混合溶解した後、ロータリーエバポレーターで滅圧下溶媒を完全に除去する。これに、等張！；ン酸緩衝液 8 を加え、ホモジナイザーで撹拌し、粗乳化液とする。等張リン酸緩衝液を加えて 10m£に定容した後、氷冷下、超音波ホモジナイザー（ブランソンモデル 1 8 5 ) で 60分間乳化し、極めて微細なマイトマイシン C誘導体を含有する脂肪乳剤を得た。

製造例 12

製造例 1、 5、 6及び 8で得られた脂肪乳剤にアルブミン 0. 5g を加え、その後凍結乾燥処理を行い、乾煶製剤を得た。

本発明の脂肪乳剤の特性評価試験結果を以下に記す。試験例 1、試験例 2および試験例 3においては、製造例 3で得られた本発明の脂肪乳剤を検体試料とした。試験例 4においては、製造例 4で得られた本発明の脂肪乳剤を検体試料とした。

比较のために対照試料として市販のマイトマイシン C注射用製剤（マイトマイシン協和 S (登綠商標）、協和発藓 ) を用いた。

試験例 1 ：毒性評価試験

実験動物として d d Y菜雄性マウス（体重約 30g ) を用い、検体試料又は対照試料を尾静脈より静脈内投与した。投与量は遊雜のマイトマイシン C換算として 5 ng / kgとした。投与は隔日実施し、計 3回行った。最終投与 4 曰後のマウスの平均体重を表 1 に示した。

検体試料を投与したマウスは、無処置群と同様に正常に体重が増加し、毒性は観察されなかったが、対照試料を投与したマウスは、著しく ft重が減少し、重篤な消化管の損傷も認められた。

表 1 体重変化による毒性評価

(平均值 τι = 10)

本発明の脂肪乳剤は従来知られるマイトマイシン C製剤に比べ顕著な毒性の低下が認められ、よ,り安全な薬物療法が達成されることが明白である。

試験例 2 ：抗腫瘍活性の評価

実験動物として C D F 1系雄性マウス（体重約 20g ) を用い、 P 3 8 8腫癀細胞を腹腔内投与（移植）した後、 2 曰後及び 4 日後の計 2 '回、検体試料又は対照試料を尾静脈より静脈内投与して治療した。投与量は遊雜のマイトマイシン C換算として S mg / kg/回とした。コントロール群は生理食塩水を同様に静脈内投与した。コントロール群との比較により求めたそれぞれの延命効果（ I L S % ) を表 2 に示した。

表 2 抗腫瘍効果

抗腫瘙効果（延命率）は、検体試料は対照試料より著しく優れることが認められる。

本発明の脂肪乳剤は従来知られるマイトマイシン C製剤に比べ、顕著な抗腫瘍効果（延命率）を示し、より有効で安全な薬物療法が達成されることが明白である。

試験例 3 ：血中瀵度推移

実験 ¾物として C D F 1系雄性マウス（体重約 25g ) を用い、検体試料及び対照試料を尾静脈より静脈内投与した。投与量は遊雜のマイトマイシン C換算として 5 mg Z kgとした。投与後、 1分後、 30分及び 60分において少量採血した。血中のマイトマイシン C濃度は髙速液体クマトグラフィ一にて測定した。その結果を表 3に示した。表 3 血中濃度（ g / r )

(平均値 n = 3 )

検体試料を投与した場合の血中マイトマイシン C濃度推移は、対照試料より髙く持続することが示された。

本発明の脂肪乳剤は従来知られるマイトマイシン C製剤に比べ、マイトマイシン Cの血中濃度の持続が達成されることが明白である。

また、対照試料を投与した直後の極めて高いマイトマイシン C濃度は検体試料では観察されず、毒性の発現という観点でも望ましいものであった。

試験例 4 ：腫瘙部位への薬物移行性

実験動物として d d Y系雄性マウス（体重約 25 g ) を用い、 S— 1 8 0腫瘍細胞を皮下投与した後約 1 0 日後、検体試料または対照試料を尾静脈より静脈内投与した。投与量は遊離のマイトマイシン C換算として 5 mgZ kgとした。 30分後面形腫癍摘出しボモジナイズし、腫 ¾中の総マイトマイシン C澳度（マイトマイシン C換算）を髙速液体ク！□ マトグラフィ一にて測定した。その結果を表 4に示した。

(以下次頁）表 4 腫瘍中の総マイトマイシン C濃度

(平均土標準偏差 τι = 3 )

検体試料を投与した場合の腫瘙中マイトマイシン C瀵度は、対照試料よりも髙いことが示された。

本発明の脂肪乳剤は従来知られるマイトマイシン C製剤に比べ、顕著な腫瘙部位への集積性を有し、より有効で安全な薬物療法が達成されることが明白である。

試験例 5 ：マイトマイシン C誘導体からのマイトマイシン Cの生成 '

ノ二ルォキシカルポニルマイトマイシン C (誘導体 1 ) ， N- (ノニルォキシカルボニル）グリシルマイトマイシン C (誘導体 2 ) 、及び、 N- (コレステ ϋルォキシカルボニル ) グリシルマイトマイシン C (誘導体 3 ) からのマイトマィシン Cの生成を表 5 に示した。

d d Y系マウスの皮下で増殖させた S— 1 8 0固形腫瘍およびヌードマウスの皮下で増殖させた人由来の固形腫瘍細胞（M X— 1 ) を摘出し等張燐酸緩街生理食塩氷を用いてそれぞれ 10%ホモジネートを作製した。これに、それぞれのマイトマイシン C誘導体を最終翁度としてとなるように加え、 37 :で 60分間ィンキュペートした後、遊雜したマイトマイシン Cを高速液体クロマトグラフィ一にて測定した。

いずれのマイトマイシン C誘導体も腫瘍中で活性型である遊雜のマイトマイシン Cを生成することが明かである。またこれらの遊離のマイトマイシン Cの生成は、添加.した誘導体の分解と量的関係が完全に対応していた。

これらの誘導体は、マイトマイシン Cのプロドラッグとしての性質を備えていることが確かめられた。

また、遊雜のマイトマイシン Cの生成速度は、個々の誘導体によって異なり、 N- (ノエルォキシカルボニル）グリシルマイトマイシン C (誘導体 2 ) が誘導体 1及び誘導体 3に比べ速やかにマイトマイシン Cを遊雜した。人由来の腫瘍細胞においても同様であった。

表 5 マイトマイシン Cの生成（％)

試験例 6 ：粒子怪の測定

製造例 2及び製造例 3の乳剤粒子の粒子径について、レ一ザ一光による動的光散乱粒子径測定装置を用いその粒子痊について評価した。

その結果、製造例 2の平均粒子径は、約 150〜 250nraであり、 1 Λ»以上の粒子を含まなかった。製造例 3の平均粒子径は、約 2(！〜 lOOnmであり、 1 ju以上の粒子を含まなかつた。

本発明の脂肪乳剤はきわめて微細で、均一な乳剤粒子よりなり、静脈内に投与する際、毒性上間題となる 1 <以上の粒子をも含まないので、有効で安全な薬物療法が達成されることが明白である。

産業上の利用可能性

以上のように、本発明によれば、マイトマイシン Cのプロドラッグであるマイトマイシン C誘導体〔 I〕を注射剤として安全に有効量投与することができることから、医薬品産業において有用である。

Claims

請求の範囲

1. (a)全体の 0.001〜10% (w/v) の、次の一般式〔 I〕

C I

〔式中、 Xは、一（C H₂)n— 0— 又は、

- (C H_a)n-NHC O O- を表し、 π は、 0〜 4の整数を表し、 Rは、炭素数 3〜25の、直鎖又は分歧した、鎖状又は環状の、飽和又は不飽和の炭化水素を表す。〕

で表わされるマイトマイシン C誘導体、

Cb)全体の 0.5〜30% (w/v) の単純脂質、

(c)単純脂質に対して 0.05 〜 2倍（重量比）のリン脂質、及び、

(d)適当量の水

の上記 (a)、 to). (c)、及び (d)を舍有することを特徴とする脂肪乳剤、又はその凍結乾燥製剤。