WO1994009015A1 - Phosphatidylcholine et procede pour sa production - Google Patents

Description

明 細 書 ホ ス フ ァ チ ジ ノレ コ リ ン お よ び そ の 製造方法 技 術 分 野

本発明 は 、 酸化安定性 に 優れた ホ ス フ ァ チ ジ ル コ リ ン お よ びそ の製造方法 に 関す る も の で あ る 。

背 景 技 術

—般 に ホ ス フ ァ チ ジ ル コ リ ン は 、 そ の 構成脂肪酸 と し てォ レ イ ン 酸、 リ ノ ー ル酸、 リ ノ レ ン 酸、 ド コ サへキ サ ェ ン 酸、 ァ ラ キ ド ン 酸 な ど の 不飽和脂肪酸を含む た め 、 酸化 さ れやす い性質を有 し て お り 、 特 に高純度 に 精製 さ れ た場合 は 、 不純物 と し て存在 し 、 かつ保護層的 な 働 き を し て い た 中性脂質や蛋 白 質 な どか ら 分離 さ れて空気中 の酸素 に 直接 さ ら さ れ る 状態 に な る の で 、 一段 と 酸化 さ れやす く な る 。

こ の た め 、 通常、 冷暗所や不活性ガ ス の雰囲気下で保 存 し た り 、 ビ タ ミ ン E な どの 酸化防止剤を添加 し た り 、 あ る い は水素添加を行 っ て不飽和結合を飽和結合 に変換 さ せ た り し て 、 保存中 な ど に 酸化が進行 し な い よ う な 努 力力 な さ れて い る 。

と こ ろ で、 高純度 に精製 さ れた ホ ス フ ァ チ ジ ル コ リ ン は化粧品 や 医薬品 な どへ使用 さ れ る 場合が多 く 、 こ の場 合、 通常 リ ボ ソ ー ム 、 乳化材な ど と し て使用 さ れて い る こ の よ う な 用 途で用 い る 場 台、 無機塩や遊離 ア ミ ノ 酸 な ど の 不純物が少 な い ほ ど よ り 良 い 製品が得 ら れ る こ と が 知 ら れて い る （例 え ば、 特開昭 6 4 — 3 1 1 5 号公報参 照） 。

と こ ろ が、 冷暗所 や不活性ガ ス の雰囲気下で の 保存 は 製造 し た ホ ス フ ァ チ ジ ル コ リ ン 自 体 を保存す る 上で は有 効で あ る が、 化粧品 や 医薬品 な どの 製品 と し た場合 は、 こ の よ う な 状態下で の保存 は実用 的で な く 、 不可能 に 近 い o

ま た 、 酸化防止剤 の 添加 は、 化粧品、 医薬品、 食品 な どへの用 途 を考え る と 好 ま し く な く 、 添加で き な い場合 ち あ 。

さ ら に 、 水素添加処理 は、 こ の た め の 工程を わ ざ わ ざ 設 け な く て は な ら な い。

ま た 、 ホ ス フ ァ チ ジ ノレ コ リ ン が酸化 さ れて し ま う と 、 せ つ 力、 く 得 ら れ た リ ポ ソ ー ム ゃ乳化物 な どの 安定性 も 低 下す る よ う に な り 、 ま た そ の 酸化物 は身体 な どへの 毒性 の 問題 も 生 じ て く る 。

し た 力《 つ て、 精製 さ れた ホ ス フ ァ チ ジ ル コ リ ン は 、 製 造後、 直 ち に 冷暗所 に 保存 し 、 で き る だ け早 く 所望製品 の製造 に 用 い 、 得 ら れた製品 も 短期間 の う ち に 使用 し て し ま う の が一般的で あ っ た 。

こ の よ う な 状況下 に あ っ て 、 ホ ス フ ァ チ ジ ノレ コ リ ン 自 体が酸化安定性 に 優れて い る も の の 開発が強 く 望 ま れ て 一 ？ い る の が現状 で あ る 。

よ っ て 、 本発明 は 、 こ の よ う な 要望 に 答 え う る 酸化安 定性 に 俊れ た ホ ス フ ァ チ ジ ル コ リ ン を提供す る こ と を 目 的 と す る 。

発 明 の 開 示

本発明者 ら は、 上記 の 目 的 を達成 し よ う と 種 々 研究を 重ね て本発明 を完成す る に至 っ た 。

す な わ ち 、 本発明 は 、 ホ ス フ ァ チ ジ ル コ リ ン を構成す る 分子種の う ち 、 ス テ ア ロ イ ノレ - リ ノ レ オ イ ノレ - グ リ セ 口 ホ ス ホ コ リ ン （ S L P C ) と ス テ ア ロ イ ノレ - ォ レ オ イ ル - グ リ セ 口 ホ ス ホ コ リ ン （ S 0 P C ) と の 合計重量 に 対す る 、 ノ、。 ル ミ ト イ ノレ - リ ノ レ オ イ ノレ - グ リ セ 口 ホ ス ホ コ リ ン （ P L P C ) と パ ノレ ミ ト イ ノレ - ォ レ オ イ ノレ - ダ リ セ ロ ホ ス ホ コ リ ン （ P O P C ) と の 合計重量の比が 4 . 5 以下で あ り 、 かつ 、 該 ホ ス フ ァ チ ジ ル コ リ ン の 5 %蒸留水懸濁液 に お け る 電気伝導度が 1 0 0 β S / c B1以 下で あ る こ と を特徴 と す る ホ ス フ ァ チ ジ ル コ リ ン を提供 す る も の で あ る 。

図面の簡単 な 説明

図 1 は、 本発明 の実施例 1 に お け る 溶 出 液 の紫外線吸 収 ク ロ マ ト グ ラ ム を示す グ ラ フ で あ る 。

発明 を実施す る た め の最良 の 形態 本発明 の 対象物質で あ る ホ ス フ ァ チ ジ ル コ リ ン は、 通 常、 下記 の 構造式で表わ さ れ る も の で あ る 。 H C-O-R

R 2 O-CH

0

Hつ C - 0 - P - 0— CHつ CH₂N (CH₃) ₃ OH

(式中 、 R ¹ お よ び R ² は ァ シ ル基を表わす。 ）

本発明 に お い て分子種 と は、 結合す る ァ シ ル基 の 組合 せ に よ っ て生 じ る 個 々 の 化合物を い う 。 し た 力 つ て、 ホ ス フ ァ チ ジ ル コ リ ン を構成す る 分子種 と は、 対象 と な る ホ ス フ ァ チ ジ ル コ リ ン に お い て 、 上記式 に お け る R ¹ 、 R ² の ァ シ ル基が特定 さ れて構造が決定 さ れ た 個 々 の ホ ス フ ァ チ ジ ル コ リ ン の こ と を ラ o

本発明 に お い て S L P C と は、 上記構造式 に お い て ァ シ ル基 R ¹ が ス テ ア リ ン 酸残基で あ り 、 ァ シ ル基 R が リ ノ レ ン 酸残基で あ る ホ ス フ ァ チ ジ ノレ コ リ ン を い う 。

ま た 、 S 0 P C と は 、 上記構造式 に お い て ァ シ ル基 R ¹ 力 ス テ ァ リ ン 酸残基で あ り 、 ァ シ ル基 R ² がォ レ イ ン 酸残基で あ る ホ ス フ ァ チ ジ ル コ リ ン を い う 。

ま た 、 P L P C と は 、 上記構造式 に お い て ァ シ ル基 R ¹ がパル ミ チ ン 酸残基で あ り 、 ァ シ ル基 R 力 リ ノ レ ン 酸残基で あ る ホ ス フ ァ チ ジ ル コ リ ン を い う 。

さ ら に ま た 、 P 0 P C と は 、 上記構造式 に お い て ァ シ ル基 R がパル ミ チ ン 酸残基で あ り 、 ァ シ ル基 R ² 力 ォ レ イ ン 酸残基で あ る ホ ス フ ァ チ ジ ノレ コ リ ン を い う 。 本発明 に よ れば、 本発明 の ホ ス フ ァ チ ジ ル コ リ ン は 、 ま ず、 （ P L P C の 重量 + P O P C の 重量） Z ( S L P C 重量 + S O P C 重量） の比力 <、 4 . 5 以下 の も の で あ る 。 こ の重量比力 こ の 値、 す な わ ち 4 . 5 よ り 大 き く な る と 酸化安定性 の あ る ホ ス フ ァ チ ジ ル コ リ ン が得難 く な o

ま た 、 本発明 に よ れば、 本発明 の ホ ス フ ァ チ ジ ル コ リ ン は 、 該 ホ ス フ ァ チ ジ ノレ コ リ ン の 5 %蒸留水懸濁液 に お け る 電気伝導度が 1 ◦ ◦ a S ノ c m以下 の も の で あ る 。 な お 、 電気伝導度の値 は 、 本発明 に お い て はすべて 2 5 °C に お け る 測定値で あ る 。 こ の電気伝導度が 1 0 0 n S / cmよ り 大 き く な る と 酸ィ匕安定性の あ る ホ ス フ ァ チ ジ ル コ リ ン が得難 く な る 。

こ の よ う に 、 本発明 の ホ フ ァ チ ジ ノレ コ リ ン は、

( P L P C + P O P C ) / ( S L P C + S O P C ) の重 量比が 4 . 5 以下で あ り 、 かつ上記条件下での電気伝導 度力 1 0 0 ^ S Z cm以下で あ る こ と を特徴 と す る も の で あ る 。 後述の 試験例 に お け る 保存中 の過酸化物価の経時 変化の結果か ら 明 ら か な よ う に 、 上記 し た分子種の 重量 比並 び に電気伝導度の両特性を有す る こ と が酸化安定性 の観点か ら 必須で あ る 。

な お、 本発明 の ホ ス フ ァ チ ジ ル コ リ ン は、 こ の よ う な 特性を有す る も の で あ る 限 り 純品で な く て も よ く 、 例 え は 、 従来 ホ ス フ ァ チ ジ ル コ リ ン を天然物か ら 抽 出 し た場 合 に通常含有 さ れ る 中性脂質類 や コ レ ス テ ロ ー ル 、 そ の 他混入が予想 さ れ る 微量 の 他の リ ン 脂質 な ど を 含ん で い て も よ い。 た だ し 、 ホ ス フ ァ チ ジ ル コ リ ン が主成分で あ る の で 、 全成 分 中 ホ ス フ ァ チ ジ ル コ リ ン を 少 な く と も 7 〇 ％ 以上含む こ と が好 ま し い。

本発明 の ホ ス フ ァ チ ジ ル コ リ ン は 、 一般的 に は以下 の よ う に し て製造す る 。

ま ず、 ホ ス フ ァ チ ジ ル コ リ ン を 含有す る 脂質組成物を 用意す る 。 こ の よ う な脂質組成物 と し て は、 植物種子、 卵黄、 脳、 内臓、 菌体な ど と い っ た 公知 の リ ン 脂質含有 物力、 ら 常法 に よ り 抽 出す る こ と に よ っ て得 ら れた も の 、 あ る い は種 々 の合成法 に よ っ て得 ら れ た も の を挙 げ る こ と がで き る 。 例え ば、 乾燥 ， 粉砕 し た リ ン 脂質含有物 に ジ ク ロ ロ メ タ ン 、 ア ル コ ー ル な どの ホ ス フ ァ チ ジ ノレ コ リ ン が よ く 溶解す る 有機溶媒を加 え て攪拌 し 、 固形物を 除 去 し て液相部を得、 こ れを ァ セ ト ン な ど ホ ス フ ァ チ ジ ル コ リ ン が溶解 し に く い有機溶媒で洗浄 し た の ち 沈澱 し て い る 物質力、 ら 溶媒を 除去すればホ ス フ ァ チ ジ ル コ リ ン を 含有 し た脂質組成物を得 る こ と がで き る 。 こ の脂質組成 物 は、 ホ ス フ ァ チ ジ ノレ コ リ ン の み 力、 ら な る も の で あ っ て も 、 ホ ス フ ァ チ ジ ル コ リ ン 以外 の脂質を含ん だ も の で あ つ て も よ い。 .

次 い で、 こ の よ う に し て得 ら れ た 脂質組成物を カ ラ ム ク ロ マ ト グ ラ フ ィ ー を用 い て処理 し 、 本発明 の ホ ス フ ァ チ ジ ル コ リ ン 画分 を分画 · 分取すれば よ い 。

以下、 カ ラ ム ク ロ マ ト グ ラ フ ィ ー と し て液体 カ ラ ム ク ロ マ 卜 グ ラ フ ィ 一 を用 い て本発明 の ホ ス フ ァ チ ジ ル コ リ ン を分画 ♦ 分取す る 典型的 な 方法を説明 す る 。

上記 の よ う に し て得 ら れ る 脂質組成物 は、 通常 ホ ス フ ァ チ ジ ル コ リ ン を 5 %以上含有 し て い る の が好 ま し い が よ り 好 ま し く は ク ロ マ 卜 グ ラ フ ィ 一 で処理す る に先立 ち 所望す る 最終製品 に 応 じ て ホ ス フ ァ チ ジ ル コ リ ン の 含有 量を調整 し て お く と よ い 。 例え ば、 高純度 の も の を得 る に は脂質組成物中 の ホ ス フ ァ チ ジ ル コ リ ン 含有量を 2 0 % 以上 と す る の が好 ま し い 。

液体 カ ラ ム ク ロ マ ト グ ラ フ ィ 一 の手法 は従来法 に よ れ ば よ い が、 医薬品、 化粧品、 食品 な どへの使用 を 目 的 と し て い る 場合 は移動相溶媒 と し て は人体 に 安全な 溶媒を 用 い た 方が よ い。

こ こ で は充填剤 と し て シ リ カ ゲルを 、 ま た 移動相溶媒 と し て ア ル コ ー ル と 水を用 い る 場合 を例 と し て説明 す る シ リ 力 ゲル に つ い て は そ の種類 は特 に 限定 さ れな い が 四塩化珪素 ま た は珪酸 ナ ト リ ゥ ム 力、 ら 得 ら れ る も の で珪 酸が三次元的 に 重合 し た シ リ 力 ゲルを用 い る こ と が望 ま し い 。 こ の よ う な シ リ カ ゲル と し て は全多孔 シ リ カ と 称 さ れ る も の で、 直径 1 0 〜 2 0 0 0 オ ン グス ト ロ ー ム の 大 き さ の 微細孔を有 し た も の が好 ま し い。 具体的 に は、 粒 径 3 〜 5 ◦ m の 全 多 孔 球 状 シ リ カ ゲ ル 、 粒径 5 〜 3 5 0 〃 m の 全多孔破砕状 シ リ 力 ゲル な どが挙 げ ら れ る 移動相 溶媒 に 用 い る ア ル コ ー ル と し て は 、 移動相溶媒 と し て ^用 可能で あ れば特 に 限定 は さ れな い が、 ホ ス フ ァ チ ジ ル コ リ ン の 溶解性を考え る と 、 炭素数 4 以下 の ァ ル コ ー ル と 水 と の 混合溶媒が好 ま し い。 具体的 に は 、 メ 夕 ノ ー ル、 エ タ ノ ー ル、 プ ロ ノ、" ノ ー ル、 ブ 夕 ノ ー ルの 他 こ れ ら の構造異性体な どが挙 げ ら れ る 。 な お、 人体への 安全性を考慮す る 場合 は エ タ ノ ー ルを使用 すれば よ い 。 ア ル コ ー ル と 水 と の混合割合 は 、 ア ル コ ー ル対水の 容量 比力 9 9 ： 1 〜 5 ◦ ： 5 ◦ 程度力く好 ま し い。 こ れよ り ァ ノレ コ ー ルが多 く て も 、 少な く て も 本発明 の ホ ス フ ァ チ ジ ル コ リ ン 力く得難 い傾向 と な る 力、 ら で あ る 。

カ ラ ム 力、 ら 溶 出 し て く る ホ ス フ ァ チ ジ ノレ コ リ ン の検 出 は 、 紫外線吸収法、 超音波測定法 な ど、 従来公知の方法 で行え ば よ く 、 検出 の結果得 ら れた ホ ス フ ァ チ ジ ル コ リ ン 画分 の ク ロ マ 卜 グ ラ ム の極大値を示 し た点以降の 部分 を採取 （分画 · 分取） し た後、 溶媒を常法 に よ り 除去す れば本発明 の ホ ス フ ァ チ ジ ル コ リ ン を得 る こ と 力《で き る な お、 極大点以降で、 ホ ス フ ァ チ ジ ル コ リ ン が検出 さ れ て い る 部分で あ れば、 どの 部分 を分取 し て も か ま わ な い ま た 、 こ う し て得 ら れた 本発明 の ホ ス フ ァ チ ジ ル コ リ ン'の そ れ 自 体の 含有量、 す な わ ち 純度を よ り 高 め る た め に は、 上記 ク ロ マ ト グ ラ フ ィ ー の工程を繰 り 返すか、 あ る い は ァ ノレ コ ー ノレゃ ァ セ 卜 ン な どの有機溶媒を用 い て常 法 に よ り 精製すれば よ い 。

こ う し て得 ら れ た 本発明 の ホ ス フ ァ チ ジ ノレ コ リ ン は 、 後述 の 1¾験例 の結果か ら 明 ら か な よ う に 、 そ れ 自 体優れ た 酸化安定性を有す る も の で あ る 。

以下、 本発明 を実施例 お よ び試験例 に よ り 更 に 詳 し く 説 明 す る 。 な お、 本発明 に お い て特記の な い 限 り ％ お よ び比 は い ずれ も 重量基準で め 。

実施例 1

下記 の組成 の精製卵黄 リ ン脂質 （ ホ ス フ ァ チ ジ ノレ コ リ ン 含量約 8 0 % ) 1 5 0 g を 9 2 容量％ の エ タ ノ ー ル水 溶液 3 0 0 m 1に溶解 し て試料 と し 、 下記の条件下で高速 液体 カ ラ ム ク ロ マ ト グ ラ フ ィ 一を行 っ た。

( リ ン 脂質の組成、 単位 は % )

ホ ス フ ァ チ ジ ノレ コ リ ン 8 1 . 6 ホ ス フ ァ チ ジ ノレ エ タ ノ — ルァ ミ ン 1 6 . 3 コ レ ス テ ロ一ノレ

ス フ ィ ン ゴ脂質 〇 . 8 リ ゾ リ ン 脂質 0 . 2 (条 件）

カ ラ ム ： 内径 5 O mm X 長 さ 1 0 0 0 mm

充填剤 ： シ リ 力 ゲ ル （粒径 4 0 〜 6 0 の 全多孔球 状.シ リ 力 ゲル）

移動相 ： エ タ ノ ー ル 水 9 2 / 8 V/V、 5 0 in

ni i n . 検 出 ： 紫外線吸収 （ λ = 2 0 4 n m )

リ ン 脂質 の 溶 出順序 は 、 最初 に ホ ス フ ァ チ ジ ル ェ タ ノ — ノレ ア ミ ン （ P E ) 、 次 に ホ ス フ ァ チ ジ ノレ コ リ ン （ P C ) で あ る の で、 カ ラ ム か ら の溶 出 液 の紫外線吸収を測定 し な 力 ら 、 ホ ス フ ァ チ ジ ル コ リ ン 画分の 極大点か ら 分取を 始め 、 紫外線吸収 に よ る 検 出が終了す る 時点 ま で の部分 を分取 し た （ 図 1 参照） 。

分取液 よ り 溶媒成分を 除去 し 、 さ ら に 真空乾燥機で乾 燥 さ せ、 本発明 の ホ ス フ ァ チ ジ ノレ コ リ ン 9 8 . 1 g を得 た o

な お、 得 ら れた本発明 の ホ ス フ ァ チ ジ ノレ コ リ ン に つ い て、 T L C 一 F I D 法 （油化学、 第 3 2 巻、 第 1 0 号、 1 9 8 3 年、 5 6 6 頁〜 5 7 3 頁、 社団法人 日 本油化 学協会発行） の展開条件 を以下の よ う に変更 し た 方法 に よ り 計 測 し た 'と こ ろ 、 ホ ス フ ァ チ ジ ル コ リ ン の 純度 は 9 9 . 9 % で あ っ た 。

(展開条件）

口 ッ ド ： ク ロ マ ト ロ ッ ド S - 111 (株式会社 ャ ト ロ ン 製）

展開溶媒 ：

1 次展開 ク ロ ロ ホ ノレ ム Zメ タ ノ ー ル Z水 （ 7 0

/ 3 0 / 3 V/V) 8 cm

2 次展開 n — へ キ サ ン Z ジ ェ チ ルェ 一 テ ル 蟻 酸 （ 9 0 1 0 0 . 1 V/V) 1 0 cm

〇 ま た う し て得 ら れ た ホ ス フ ァ チ ジ ル コ リ ン を 成 し て い る P L P C , P O P C , S L P C お よ び S O P C の 4 つ め分子種の組成 に つ い て は、 下記 の 測定条件下で の高速液体 カ ラ ム ク ロ マ 卜 グ ラ フ ィ 一 に よ り R I 検 出 チ ャ 一 ト を得、 計測 し た と こ ろ 、 そ の結果 は後述 の表 1 に 示す通 り で あ っ た 。 な お、 こ う し て得 ら れ た分子種 の組 成 の 数値 に 基づ き 、 （ P L P C + P O P C ) / ( S L P C + S 0 P C ) の 重量比を求 め、 そ の結果を後述 の表 2 示 し た 。

測定条件 )

充填剤 ： ォ ク 夕 デ シ ル シ リ 力 ゲル

( 内径 4 . 6 mm x 長 さ 2 5 0 πιπι) 移動相 メ チ ル ァ ノレ コ 一 ノレ Z l m M リ ン 酸 カ リ ウ ム 緩 液 （ pH 7 . 4 、 9 3 / 7 V/V) 1 , 5 ml/rain. 検 出 ： 示差屈折計 （ R I )

ϋ式不斗 〇 〇 β

更 に ま た 得 ら れた本発明 の ホ ス フ ァ チ ジ ル コ リ ン の 導度 つ い て は 、 下記の方法 に よ り 計測 し た。

サ ン プル g に 蒸留水 を加 え て全体を 3 0 g に し た 後、 ホ モ ゲ ナ ィ ザ一 に よ り 分散 さ せ て 5 %蒸留水懸濁 液 を調製 し た の ホ ス フ ァ チ ジ ル コ リ ン 懸濁液 を電気 伝 計 （ (株） 堀場製作所製 ： 商品名 「導電率計 D S

1 4 J ) を用 い て計測 し た 。 そ の結果 は後述の 表 2 に 不す通 り で あ つ た 実施例 2

下記の 組成 の 卵黄 リ ン 脂質 （ ホ ス フ ァ チ ジ ノレ コ リ ン 含 量約 6 0 % ) 2 5 0 g を無水エ タ ノ ー ル に 溶解 し 、 全量 を 5 0 〇 m 1と し た も の を試料 と し た o

( リ ン脂質 の組成、 単位 は ％ )

ホ ス フ ァ チ ジ ノレ コ リ ン 6 2 . 4 ホ ス フ ァ チ ジ ノレ エ タ ノ 一 ノレ ァ ミ ン 1 1 . 8 中性脂質類 2 4 . 3 ス フ イ ン ゴ脂質 0 . 7 リ ゾ リ ン脂質 0 . 8 実施例 1 と 同 じ 条件下で高速液体 力 ラ ム ク ロ マ ト グ ラ フ ィ ー を行 い 、 ク ロ マ ト グ ラ ム に お け る ホ ス フ ァ チ ジ ル 3 リ ン 画分 の極大点か ら 分取 を始め、 紫外線吸収 に よ る 検 出 が終了す る 時点 ま での部分を分取 し た。

得 ら れた溶液を真空乾燥機で乾燥 さ せ、 本発明 の ホ ス フ ァ チ ジ ノレ コ リ ン 1 ◦ 2 . 7 g を得、 純度 と 組成を実施 例 1 の T L C - F I D 法 に よ り 測定 し た と こ ろ 、 結果 は 以下 の 通 り で あ つ た 。

(本発明 の ホ ス フ ァ チ ジ ノレ コ リ ン の組成）

ホ ス フ ァ チ ジ ノレ コ リ ン 7 4 . 9 % 中性脂質類 2 4 . 6 ス フ イ ン ゴ脂質 0 . 3 リ ゾ リ ン 脂 0 . 2 ま た 、 得 ら れ た ホ ス フ ァ チ ジ ル コ リ ン に つ い て、 こ れ を構成 し て い る 4 つ の分子種 の組成並 び に 電気伝導度 の 特性 に 関 し て は 実施例 1 の 場合 と 同様 に 計測 し た と こ ろ そ れぞれ後述の表 1 お よ び表 2 に 示す よ う な 結果が得 ら れた 。

後述 の 試験例 に お い て本発明 の ホ ス フ ァ チ ジ ル コ リ ン に 対 し て対照 と し て 用 い る ホ ス フ ァ チ ジ ノレ コ リ ン の サ ン プル 1 〜 7 を そ れぞれ以下の通 り に 調製 あ る い は用 意 し た 。 な お、 得 ら れ た 対照の ホ ス フ ァ チ ジ ノレ コ リ ン に つ い て、 こ れを構成 し て い る 4 つ の 分子種 の組成並 び に 電気 伝導度の特性 に 関 し て は 、 実施例 1 の 場合 と 同様 に 計測 し 、 そ の 結果を後述の 表 1 お よ び表 2 に お い て そ れぞれ 示 し た。

対照サ ン プ ル 1

実施例 1 と 同 じ 卵黄 リ ン 脂質を 同 じ 条件で ク ロ マ ト グ ラ フ ィ 一 に 付 し た。

予 め薄層 ク ロ マ ト グ ラ フ ィ 一 で ホ ス フ ァ チ ジ ノレ コ リ ン 画分 に ホ ス フ ァ チ ジ ルエ タ ノ ー ノレア ミ ン がオ ー バ 一 ラ ッ プす る 部分 を確認 し て お き 、 ホ ス フ ァ チ ジ ルェ タ ノ 一 ル ア ミ ン が溶 出 し 終 っ た 時点 （ ホ ス フ ァ チ ジ ル コ リ ン 画分 の極大値 よ り 前） よ り 分取を始め、 紫外線吸収 に よ る ホ ス フ ァ チ ジ ル コ リ ン の 検 出 が終了す る 時点 ま で の部分 を 分取 し た。 .

分取液 よ り 溶媒成分 を 除去 し 、 得 ら れ た沈殿物を真空 乾燥機で乾燥 さ せ 、 ホ ス フ ァ チ ジ ル コ リ ン 1 1 0 . 4 g

3 純度 9 8 . 2 % ： 測定法 は実施例 1 に 準ず る 。 以下 同 様） を得 た 。

対照 ン プル 2

特公昭 6 0 — 1 6 号公報で記載の方法を用 い 、 ホ ス フ ァ チ ジ ル コ リ ン の 精製を行 っ た 。

す な わ ち 、 実施例 1 で 用 い た の と 同 じ 精製卵黄 リ ン 脂 質 5 g に メ 夕 ノ ー ル 5 0 m 1を加 え て溶解 さ せ た 。 こ れ に 硫酸マ グ ネ シ ウ ム 0 . 5 g を蒸留水 3 m 1に 溶解 し た も の を加 え 、 攪拌 ♦ 静置後、 上清部分 の み を 回収 し 、 溶媒 を 減圧除去 し 、 精製 ホ ス フ ァ チ ジ ル コ リ ン （純度 9 7 . 2 % ) を得 た 。

対照サ ン プ ル 3

塩化 カ リ ウ ム 、 塩化 ナ ト リ ウ ム 、 塩化 カ ル シ ウ ム 、 塩 ィ匕マ グ ネ シ ウ ム お よ び塩化鉄が各 々 1 0 m M濃度で含 ま れて い る 電気伝導度調整液を調製 し た 。

別途、 実施例 1 で得 ら れた ホ ス フ ァ チ ジ ル コ リ ン 1 . 5 g に 蒸留水を加 え て全体を 3 0 g に し た 後、 ホ モ ゲ ナ イ ザ 一 に よ り 分散 さ せ て ホ ス フ ァ チ ジ ノレ コ リ ン の 5 %蒸留水懸濁液を調製 し た 。

こ の ホ ス フ ァ チ ジ ル コ リ ン 懸濁液 に電気伝導度調整液 0 . 3 m 1を添加 し た 後、 凍結乾燥 し て電気伝導度が調整 さ れ た ホ ス フ. ァ チ ジ ノレ コ リ ン を製造 し た。

対照サ ン プ ル 4

電気伝導度調整液 を 0 . 5 m 1添加 し た 以外 は 対照サ ン プル 3 の 場合 と 同様 に し て電気伝導度が調整 さ れ た ホ ス フ ァ チ ジ ノレ コ リ ン を製造 し た 。

対照 ザ ン プル 5

電気伝導度調整液 を 1 m 1添加 し た 以外 は対照サ ン プル 3 の 場合 と 同様 に し て電気伝導度が調整 さ れ た ホ ス フ ァ チ ジ ル コ リ ン を製造 し た。

対照サ ン プ ル 6

市販の精製卵黄 ホ ス フ ァ チ ジ ル コ リ ン （ 日 本油脂 （株） 製、 商品名 「 Coats ome NC-1 OS 」 、 純度約 9 9 % ) を用

,、 し た o

対照サ ン プ ル 7

対照サ ン プル 6 の場合 と は メ 一 力 一 の異 な る 市販の精 製卵黄 ホ ス フ ァ チ ジ ル コ リ ン （ S I GMA 社製、 商品名 「 L - a - ホ ス フ ァ チ ジ ル コ リ ン Type X 1 - E」 、 純度約 9 9 % ) を用 意 し た。

表 1

ホスファチジル P L P C POPC S L P C SOPC 3リン ' 実施例 1 1. 05 つ 00 0. 50 0. 45 実施例 2 1. 30 2. 55 0. 70 0. 55 対照サンプル 1 1. 05 1. 85 〇. 25 〇. 25 対照サンプル 2 1. 60 1. 90 0. 35 〇. 25 対照サンプル 6 1. 60 2. 05 0. 45 0. 25 対照サンプル 7 1. 65 2. 75 0. 45 0. 45 註 1 ：表中の数値は各分子種のチャート上の高さ （ ） を示す。

註 2：なお、対照サンプル 3, 4および 5は、実施例 1のものと同一の分 子種組成を有する。

試験例

実施例 1 お よ び 2 で得 ら れた本発明の ホ ス フ ァ チ ジ ル コ リ ン 並 び に対照サ ン プ ノレ 1 〜 7 の ホ ス フ ァ チ ジ ル コ リ ン に関 し て、 保存期間中の過酸化物価 （ P O V ) の経時 変化を下記の条件 · 方法に よ り 計測 し た。 そ の結果を下 記の表 2 に示す。

(保存条件）

各サ ン プ ルを シ ャ ー レ に取 り 、 蓋をせずに 2 0 で 、 暗 所条件の恒温器内 に静置 し た。

( P 0 V 測定）

昭和 4 7 年 1 月 3 0 日 、 社団法人 日 本油化学協会発 行の基準油脂分析試験法、 2.4.12-71 の第 1 頁〜 2 頁の

6 方法 に し た 力《 つ た 。

表 2 の 結果 よ り 、 重量比 お よ び電気伝導度の両方 の 特 性 を 満 こ し た も の 、 す な わ ち 本発明 の ホ ス フ ァ チ ジ ル コ リ ン に 相 当す る も の の み が 、 著 し く 酸化安定性の 高 い ホ ス フ ァ チ ジ ル コ リ ン で あ る こ と 力くわ力、 る 。

7 表 2

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註 1 ：表中の IE量比は、 施例 1におけるのと同様に、 表 1に示された結架に Sづいて求めたものである。 註 2：衷屮の評価および総合評価においては、 本発明のホスファチジルコリンの分子種の 量比特性並び に 気伝 度の特性に関して本発明の構成条件を満たしたものは 0、 満たさないものは Xとして示 した。 また一は、 実施例 1および 2の場合の結 と比蛟して差が明白になつたために計则を中止 したことを示す。

な お 、 従来公知 の ホ ス フ ァ チ ジ ル コ リ ン で あ っ て 、 本 発明 の ホ ス フ ァ チ ジ ル コ リ ン と 同様 の分子種 S量比特性 を有す も の の 例 を以下、 参考例 1 お よ び 2 に お い て示 す。

参考例 1

LI PIDS, Vol .2 , No.3.217- 224(1967) に 記載の 方法 に よ り 卵黄 ホ ス フ ァ チ ジ ル コ リ ン を調製 し た 。 （ な お、 こ の よ う に 調製 さ れた ホ ス フ ァ チ ジ ル コ リ ン は 、

American Oi l Chemists ' Society 発仃 の Lecithins ( 1985 )の第 125 頁 に 記載の 卵黄 ホ ス フ ァ チ ジ ノレ コ リ ン の 分子種の 表 に よ れば、 （ P L P C + P O P C ) / ( S L P C + S O P C ) = 2 . 9 の値を有す る も の で あ る 。 ） 調製 し た 試料 に つ い て電気伝導度の特性 に 関 し て実施 例 1 の 場合 と 同様 に計測 し た と こ ろ 、 2 7 0 μ S c mで あ っ た 。 '

参考例 2

J . Biol . Chem. , Vol .188, 471— 476 (1950)に 言己載の方法 に よ り 卵贲 ホ ス フ ァ チ ジ ル コ リ ン を調製 し た 。 （ な お 、 こ の よ う に 調製 さ れた ホ ス フ ァ チ ジ ル コ リ ン は、 上記 Lecithins の 第 1 2 5 頁の表 に よ れば上記重量比が 2 . 1 の も の で あ る 。 ）

調製 し た 試料 に つ い て電気伝導度 の特性 に 関 し て実施 例 ：！ の場合 と 同様 に 計測 し た と こ ろ 、 3 9 0 fi S / cmで

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9 産業上の 利用 可能性

本発明 の ホ ス フ ァ チ ジ ル コ リ ン は特別 な 処置 を施 さ な く て も 、 そ れ 自 体が酸化安定性 に 優れ た も の で あ っ て 、 従来 の ホ ス フ ァ チ ジ ル コ リ ン利用 上の根本的 な 問題を解 決 し た も の で あ る 。

し た 力《 つ て、 本発明 の ホ ス フ ァ チ ジ ノレ コ リ ン を用 い る こ と に よ り 、 ホ ス フ ァ チ ジ ル コ リ ン 自 体の保存 も 容易 と な り 、 ひ い て は こ れを利用 す る 医薬品、 化粧品、 食品 な ど の製造 · 保存 も 容易 と な り 、 さ ら に は、 ホ ス フ ァ チ ジ ノレ コ リ ン が酸ィヒ さ れ に く い こ と 力、 ら 安全 な 医薬、 化粧品 食品 な どを製造す る こ と が期待で き る 。

Claims

請 求 の 範 囲

1 . ' ホ ス フ ァ チ ジ ル コ リ ン を構成す る 分子種の う ち ス テ ア ロ イ ノレ - リ ノ レ オ イ ノレ - グ リ セ 口 ホ ス ホ コ リ ン

( S L P C ) と ス テ ア ロ イ ノレ - ォ レ オ イ ル - グ リ セ 口 ホ ス ホ コ リ ン （ S 0 P C ) と の 合計重量 に対す る 、 パ ル ミ ト イ ル - リ ノ レ オ イ ノレ - グ リ セ 口 ホ ス ホ コ リ ン （ P L P C ) と パ ル ミ ト イ ノレ - ォ レ オ イ ル - グ リ セ 口 ホ ス ホ コ リ ン （ P O P C ) と の 合計重量の比が 4 . 5 以下で あ り 、 かつ 、 該 ホ ス フ ァ チ ジ ル コ リ ン の 5 %蒸留水懸濁液 に お け る 電気伝導度が 1 0 0 S / era以下であ る こ と を特徴 と す る ホ ス フ ァ チ ジ ル コ リ ン 。

2 . ホ ス フ ァ チ ジ ル コ リ ン を含有す る 脂質組成物を 液体 カ ラ ム ク ロ マ ト グラ フ ィ 一を用 い て処理す る に 際 し て移動相溶媒 と し て炭素数 4 以下の ア ル コ ー ル と 水 と の 混合溶媒を用 い 、 かつ、 得 ら れ る ク ロ マ ト グ ラ ム の う ち ホ ス フ ァ チ ジ ル コ リ ン 画分 の極大点以降を分取す る こ と を特徴 と す る 請求項 1 の ホ ス フ ァ チ ジ ル コ リ ン の製造方 法 o

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