WO1995010612A1 - FIMBRILLIN PROTEIN OF $i(PORPHYROMONAS GINGIVALIS) - Google Patents

Description

明 細 書 ポルフ ィ ロモナス · ジンジバリ スのフィ ンブリ リ ンタ ン 、'ク 技術分野

本発明は、 ボルフ イ ロモナス ' ジンジバリ ス ( Porphyromonas g i ng i va l i s) (以下、 P . ジンジバリスという） の主要線毛構成タ ンパクであるフィ ンブリ リ ン及びその断片、 並びに該フィ ンブリ リ ンをコー ドする DNA及びその断片に関する。 DNA断片の内、 菌株間 で相同性の高いものは、 前記細菌種の検出のために有用であり、 他 方菌株間で相同性の低いものは菌株の識別のためのプローブと して 有用である。 また.、 前記タンパク、 又はその断片の内菌株間で相同 性の高いものは、 前記細菌種を認識する抗体の生成のための抗原と して有用であり、 他方菌株間で相同性の低いペプチ ドは、 菌株を識 別できる抗体の生成のための抗原と して有用であろう。

本発明はまた、 P . ジンジバリスの線毛構成タンパクであるフィ ンブリ リ ンの血清型共通のぺプチ ド断片に対して免疫活性を有する 抗体に関する。 これら共通ペプチ ドに対する抗体は、 異なる血清型 の線毛の機能を共通に阻害することによって、 歯周疾患を予防ある いは改善させることに利用できる。 背景技術

P . ジンジバリスは、 グラム陰性嫌気性細菌の一種で歯周病患者 の病巣部から高頻度に検出されることなどから、 近年、 歯周病原因 菌として注目されている。 この菌の表層には、 抗原性が非常に高い 線毛 （フィ ンブリエ） が存在することが知られている。 この線毛は 宿主細胞に対して多彩な生物学的活性を有し、 また、 付着因子と し ても P. ジ ンジバリスの病原性に深く関わっていると考えられてい る o

この線毛タンパクの構造については、 フィ ンブリ リ ンと呼ばれる 分子量 41， 000程度のサブュニッ トタンパク力 何らかのかたちで重 合して形成されているものと考えられている。

このフィ ンプリ リ ンをコー ドしている塩基配列は、 P. ジンジバ リス 381株についてのみ報告されている 〔 J. Bacteriol. ]_70 1658 (1988)〕 。 しかしながら、 最近、 この線毛の免疫学的反応性が菌株 間で異なることが明らかとなり、 〔0ral Microbiol. Immunol. 6 332 (1991)〕 この線毛タンパクが P. ジンジバリス菌株間で均一な ものではないことが示唆された。

そこで、 これら免疫学的反応性の異なる P . ジンジバリ スのフィ ンブリ リ ンをコ一ドする遺伝子配列を明らかにし、 菌株間での相違 点を明確にすることが望まれた。

一方、 これら免疫学的反応性の異なるボルフイ ロモナス · ジ ン ジ ノくリスの線毛に対する抗体を用いて、 ボルフイ ロモナス · ジンジバ リスの病原性を阻害するためには、 それぞれの血清型の線毛に対す る抗体が必要となり、 あまり実用的ではない。

これに対して、 これらフィ ンプリ リ ンタンパクの共通配列に対す る特異抗体を用いることにより、 免疫学的に反応性の異なるボルフ イ ロモナス · ジンジバリスの線毛を単一の抗体と反応させ、 線毛の 機能を阻害させることが可能であると考えられる。

発明の開示

従って本発明は、 P. ジンジノ 'リスの種々の株のフィ ンブリ リ ン タンパクをコー ドする DNA、 菌株間で相同性が高く、 前記種を検出 するためのプローブとして有用な DNA断片、 及び菌株間で相同性が CT/JP94/01687 低く （菌株特異的な） 、 菌株を識別するためのプローブとして有用 な DNA断片、 並びに特定のアミ ノ酸配列を有する種々の菌株からの フィ ンブリ リ ンタンパク、 菌株間でァミ ノ酸配列の相同性が高く、 前記種を認識する抗体を生成するのに有用なぺプチ ド、 及び菌株間 でアミ ノ酸配列の相同性が低く （菌株特異的な） 、 菌株を識別する ことができる抗体を生成させるために有用なぺプチ ド、 等を提供し よう とするものである。

本発明はさ らに、 免疫学的反応性の異なるボルフイ ロモナス . ジ ンジバリ スのフィ ンブリ リ ンタンパクのアミ ノ酸配列において相同 性が高いァミ ノ酸配列部分から選ばれたぺプチ ド断片または適当な タンパクを結合させた同ペプチ ド断片を抗原として用いることによ つて、 これらボルフイ ロモナス · ジンジバリ スの菌株間で共通に反 応させることができる抗体を提供しよう とするものである。

上記の課題を解決するため、 本発明は、 配列番号 ： 2〜 9のいず れかに示される塩基配列中に含有される、 ボルフイ ロモナス . ジン ジバリ ス (Porphyromonas gingival i s)ATCC33277, BH18/10, HW24D- 1 , 0MZ314, 0MZ409, ATCC49417, 6/26または HG564株の フィ ンプリ リ ンタンパクをコー ドする DNAを提供する。

本発明はさらに、 配列番号 1 〜 9 に示す塩基配列中の少なく とも 2種類の塩基配列間で 50%以上の塩基配列の相同性を有する、 少な く とも 10個の連続する塩基から成る領域を構成するいずれかの塩基 配列を有する DNAを提供する。

本発明はさらに、 配列番号 1 〜 9 に示す塩基配列中の少なく とも 2種類の塩基配列間で 50%未満の塩基配列の相同性を有する、 少な く とも 10個の連続する塩基から成る領域を構成するいずれかの塩基 配列を有する DNAを提供する。

本発明はまた、 配列番号 ： 11〜 18に示されるアミ ノ酸配列を有す るポルフ ィ ロモナス · ジ ンジノ 'リ スのフ ィ ンブリ リ ンタ ンパクを提 供する。

本発明はさ らに、 配列番号 ： 10〜18に示すァ ミ ノ酸配列中の少な く とも 2種類のァミ ノ酸配列間で 50%以上のァ ミ ノ酸配列の相同性 を有する、 少なく とも 5個の連続するアミ ノ酸から成る領域を構成 するいずれかのァミ ノ酸配列を有するぺプチ ドを提供する。

本発明はさらに、 配列番号 ： 10〜18に示すア ミ ノ酸配列中の少な く とも 2種類のァミ ノ酸配列間で 50%未満のァミ ノ酸配列の相同性 を有する連結する 5個以上の連続するア ミ ノ酸から成る領域を構成 するいずれかのア ミ ノ酸配列を有するぺプチ ドを提供する。

本発明はさ らに、 前記種々の DNAを含んで成る発現べクタ一を提 供する。

本発明はまた、 上記発現ベクターを有する宿主を提供する。

本発明はまた、 ボルフイ ロモナス ' ジンジノくリスの種々の株のフ ィ ンブリ リ ンと反応する抗体を提供する。 このため、 本発明におい ては、 ボルフ イ ロモナス ' ジ ンジバリ ス種の 9菌株からフ ィ ンブリ リ ンをコ一ドする遺伝子をクロ一ニングし、 該遺伝子の塩基配列か らフ ィ ンプリ リ ンのアミ ノ酸配列を推定し、 該アミ ノ酸配列の比較 により複数個の共通ァミ ノ酸配列を見出し、 この共通アミ ノ酸配列 を有するぺプチ ドに対する抗体を作製することにより、 ボルフイ ロ モナス · ジンジバリスの異る血清型に対して共通に反応することが できる抗体を得た。

従って本発明は、 ボルフイ ロモナス ' ジンジバリスの 9株のフィ ンブリ リ ンのアミ ノ酸配列中の、 次の共通アミ ノ酸配列 ：

式 （ 1 ) Asn (または Lys) Gly Glu Gin Gin Glu Ala He Lys Ser Ala (または Val) Glu Asn Ala Thr (または lie) Lys Val Glu Asp (または Asn) lie Lys Cys Ser (または G ）（配列番号 ： 21) 式 （ 2 ) Glu Asp (または Asn) lie Lys Cys Ser (または G ） Ala

Gly Gin Arg Thr Leu Val Val Met Ala Asn Thr Gly Ala (または Glu, Gly) Met Glu (または Lys) Leu Val (または Ala) Gly Lys Thr Leu Ala (配列番号 ： 22)

式 （ 3 ) Val (または Ala) Gly Lys Thr Leu Ala Glu Val Lys Ala

Leu Thr Thr Glu Leu Thr Ala (または Glu) Glu (または G ） Asn

Gin Glu Ala Ala Gly Leu lie Met Thr Ala Glu Pro (配列番号 ： 23)

式 （ 4 ) Gin Gly Phe Tyr Val Leu Glu Asn (または Ser) Thr (ま たは Asp， Lys) Tyr Ala (または Ser， Asp) Gin (または Ala) Asn (ま たは Ser) (配列番号 ： 24)

式 （ 5 ) Gly (または Pro) Thr (または Lys) Thr Tyr Tyr Pro Val

Leu Val Asn Phe (または Tyr) Asn (または Glu, Asp) Ser (または

Gly) Asn Asn (または Gly) Tyr Thr (または lie) Tyr (配列番号 ： 25)

式 （ 6 ) Ser Asn Asn Tyr Thr Tyr Asp Ser (または Asn) Asn (ま たは Gly) Tyr Thr Pro Lys Asn Lys He Glu Arg Asn His Lys Tyr

Asp lie Lys Leu Thr lie Thr Gly Pro Gly Thr Asn (配列番号 ：

26)

式 （ 7 ) He Thr Gly Pro Gly Thr Asn Asn (または Thr) Pro Glu

Asn Pro lie (または Gin) Thr Glu Ser Ala His (または Asn) Leu

Asn Val Gin Cys Thr Val Ala Glu Trp Val Leu Val Gly Gin Asn Ala Thr Trp (配列番号 ： 27)

式 （ 8 ) Thr Gly Ser Leu Thr Thr (または Asn) Phe Asn Gly Ala

Tyr Ser (または Thr) Pro Ala Asn Tyr Thr (または Ala) (配列番 号 ： 28)

中の少なく とも 5個の連続したァミ ノ酸を含んで成る抗原性べプチ ドに関する。

本発明はまた、 上記ペプチ ドとキヤ リヤータンパクとの複合体で ある抗原に関する。

本発明はさらに、 上記抗原性べプチ ド又は複合体抗原に対する抗 体に関し、 これにはポリ クローナル抗体、 及びモノ クローナル抗体 が含まれる。

本発明はさ らに、 上記の抗体を含んで成る歯周疾患予防、 改善剤 に関する。 図面の簡単な説明

図 1 は 9株の P . ジンジバリスのフィ ンブリ リ ンをコ一 ドする遣 伝子の塩基配列を相互に対応するように並列した図である。 アンダ 一ライ ン部分は PCRのブライマ一配列を示す。 コロン 「 ： 」 で示す 部位は 9株すべてにおいて同じであることを示し、 「一」 は最良の 一致を得るために生じるギャ ップを示す。

図 2 は 9株の P . ジンジバリスのフィ ンブリ リ ンをコ一ドする遣 伝子の塩基配列を相互に対応するように並列した図である。 コロン 「 ： 」 で示す部位は 9株すべてにおいて同じであることを示し、 「一」 は最良の一致を得るために生じるギャ ップを示す。

図 3 は 9株の P . ジンジバリスのフィ ンブリ リ ンをコ一ドする遺 伝子の塩基配列を相互に対応するように並列した図である。 コロン 「 ： 」 で示す部位は 9株すべてにおいて同じであることを示し、 「一」 は最良の一致を得るために生じるギャ ップを示す。

図 4 は 9株の P . ジンジバリスのフィ ンプリ リ ンをコー ドする遺 伝子の塩基配列を相互に対応するように並列した図である。 コロン 「 ： 」 で示す部位は 9株すべてにおいて同じであることを示し、 「―」 は最良の一致を得るために生じるギャ ップを示す。 図 5 は 9株の P . ジンジノくリスのフィ ンブリ リ ンをコ一ドする遣 伝子の塩基配列を相互に対応するように並列した図である。 コロン 「 ： 」 で示す部位は 9株すべてにおいて同じであることを示し、 「一」 は最良の一致を得るために生じるギャ ップを示す。

図 6 は 9株の P . ジンジバリスのフィ ンブリ リ ンをコ一ドする遺 伝子の塩基配列を相互に対応するように並列した図である。 コロン 「 ： 」 で示す部位は 9株すべてにおいて同じであることを示し、 「一」 は最良の一致を得るために生じるギャ ップを示す。

図 7 は 9株の P . ジンジバリ スのフィ ンプリ リ ンをコー ドする遺 伝子の塩基配列を相互に対応するように並列した図である。 アンダ —ライ ン部分は PCRのプライマー配列を示す。 コロン 「 ： 」 で示す 部位は 9株すべてにおいて同じであることを示し、 「一」 は最良の 一致を得るために生じるギャ ップを示す。

図 8 は 9株の P . ジンジバリスのフィ ンブリ リ ンのアミ ノ酸配列 を相互に対応するように並列した図である。 アンダーライ ン部分は シグナルペプチ ドの位置を示す。 コロン 「 ： 」 で示す部位は 9株す ベてにおいて同じであることを示し、 「一」 は最良の一致を得るた めに生じるギャ ップを示す。

図 9 は 9株の P . ジンジノ < リ スのフィ ンブリ リ ンのアミ ノ酸配列 を相互に対応するように並列した図である。 コロン 「 ： 」 で示す部 位は 9株すべてにおいて同じであることを示し、 「一」 は最良の一 致を得るために生じるギャ ップを示す。 具体的な説明

本発明はまず、 P . ジンジバリ スの種々の株のフ ィ ンプリ リ ンタ ンパクをコー ドする新規な DNA、 及び該 DNAにより コー ドされる新 規なフィ ンプリ リ ンタンパクを提供する。 本発明においては、 P. ジ ンジバリ スの株 381、 ATCC33277, BH18 /10. HW24D— 1， 0MZ314, 0 Z409, ATCC49417, 6ノ 26、 及び HG564 を使用 し、 これら 9株の染色体 DNAを菌体より精製し、 これを铸型 (こして PCR (Polymerase chain reaction) 法（こよ り、 フ ィ ンブリ リ ンをコ一ドする遺伝子 を含む DNAを増幅させる。 さ らに増 幅されたこれら 9菌株の fimA遺伝子をク ローニングし、 塩基配列お よびァ ミ ノ酸配列を決定する。

以下、 本発明について詳し く説明すると、 P. ジ ンジバリ スの染 色体 DNAは、 培養菌体等より抽出、 精製し、 得ることができる。 こ の染色体 DNAを铸型と して PCR法を用いて、 fimA遺伝子を含む DNA を増幅させる。 使用する PCRプライマーは、 既に公知である P. ジ ンジバリ ス 381株 fimA遣伝子の DNA配列を基に DNA合成機で適当な 長さのオリ ゴヌ ク レオチ ドを合成 ' 精製したものである。 この際、 増幅させた PC'R産物のベクタープラス ミ ドへのク ローニングが容易 にできるように、 fimA遣伝子内に存在しない制限酵素認識配列を人 ェ的に付加することが望ま しい。

このようにして増幅された DNAは、 プライマ一に付加した制限酵 素で消化後、 同様の酵素で消化した適当な発現ベクターのプロモー ター下流に DNAリガーゼを用いて連結させるこ とができ、 この組換 え DNAを大腸菌等に導入することで目的のク ローンを得るこ とがで きる。 この際、 使用するブラス ミ ドベクタ一または、 宿主の大腸菌 DNAの片方も しく は、 両方に、 lac l ^q 等の発現ベクターのプロモ 一ターのリブレッサーを持つなど、 挿入した遺伝子がコー ドしてい るタ ンパクの発現を調節できるベクターシステムを用いることが望 ま しい。

このようにして得られた形質転換株から目的のクローンを得るた めには、 適当な化合物で標識した fimA遺伝子またはその一部をプロ —ブと してコロニーハイブリ ダイゼーショ ン等の手法を用いてスク リーニングすることができる。

さらに、 得られたクローンが目的のものであるかどうかは、 形質 転換株よりプラスミ ド DNAを抽出、 分離し、 適当な制限酵素により 消化後、 ァガロースゲル電気泳動で確認することができる。

また、 大腸菌クローンにリ コ ンビナン トタ ンパクの発現を誘導さ せたのち、 抗 P . ジンジバリス線毛抗体を用いたウェスタンブロッ ト等の手法で、 組換え型のフイ ンブリ リ ンの発現を確認すれば、 さ らに確実である。

このようにしてクローニングされた P . ジンジバリスの f imA遺伝 子の塩基配列を決定するためには、 上記と同様に適当な制限酵素で 消化したのち、 適当なベクターに組み込み、 Steven Henikoffの方 法等に基づいて欠失変異株を作製し、 一連の欠失変異株からプラス ミ ド DNAを抽出、 精製した後、 あるいは適当なヘルパーフ ァージを 感染させ、 一本鎖 DNAを精製した後、 Sanger法等に基づいて塩基配 列を決定することができる。

配列を決定した結果を配列番号 1〜 9 に示す。 配列番号 ： 1 には 381株、 配列番号 ： 2 には ATCC33277株、 配列番号 ： 3 には BH18Z 10株、 配列番号 ： 4 には HW24D— 1株、 配列番号 ： 5 には 0MZ314株、 配列番号 ： 6 には 0MZ409株、 配列番号 ： 7 には ATCC49417株、 配列 番号 ： 8 には 6 /26株、 そして配列番号 ： 9 には HG564株の、 フ ィ ンブリ リ ンをコ一ドする塩基配列を含む DNA断片の塩基配列を示す ( また、 これらの塩基配列中のリーディ ングフ レームにより コ一 ド されているア ミ ノ酸配列を配列番号 ： 10〜18に示す。 すなわち配列 番号 ： 10には 381株、 配列番号 ： 11には ATCC33277株、 配列番号 ： 12には BH18/10株、 配列番号 ： 13には HW24D— 1株、 配列番号 ： 14 には 0MZ314株、 配列番号 ： 15には 0MZ409株、 配列番号 ： 16には ATCC 49417 株、 配列番号 ： 17には 6 26株、 そして配列番号 ： 1 8には HG 564 株のフィ ンブリ リ ンのア ミ ノ酸配列を示す。

本発明において、 P . ジンジバリス又はその菌株の同定に使用す る場合には、 配列番号 ： 1 〜 9 に記載する塩基配列又はその断片、 あるいはそれと実質的に同一の塩基配列を有する DNAが好ま しい。 ここで実質的に同一とは、 目的とする種、 又は株を識別できる程度 に、 前記の塩基配列と相同な配列を意味する。 しかしながら、 フィ ンブリ リ ンタンパク又はその部分から成るぺプチ ドを組換え法によ り製造するためには、 配列番号 ： 1 0〜1 8に示すァミ ノ酸配列又はそ の部分を任意のコ ドンによりコー ドする DNAを用いることもできる _t 前記 DNA又はその断片は、 前記種々の菌株からクローニングし、 必要によりそれを切断し、 又は修飾することにより得られる。 しか しながら、 一旦塩基配列が決定されれば、 周知の常法に従って所望 の DNAを化学合成することもできる。 従って、 本発明の DNAは、 前 記菌株が入手できなくても得ることができる。

本発明の 1 つの態様によれば、 前記の複数の塩基配列間で相同性 の高い領域から成る DNA断片を、 P . ジンジバリス種を検出するた めのプローブとして使用することができる。 この様な DNA断片と し て、 前記 9種類の塩基配列の内、 任意の 2種類の塩基配列において、 50 %以上の相同性を有する、 連続する 10個以上の塩基から成る領域 の DNA断片が挙げられる。 この相同性は、 好ま しく は 70 %以上、 さ らに好ま しく は 80 %以上、 そしてさ らに好ま しく は 90 %以上である _c 上記相同性領域は、 好ま しく は 20塩基以上から成る。

この様な相同性領域は、 複数の塩基配列を並列させて観察するこ とにより、 又は入手可能なコンピュータープログラムを用いて、 容 易に決定することができる。 なお、 本発明において、 相同性とは、 2種類の塩基配列又はァミ ノ酸配列の対応する一定の領域の塩基配 列又はアミ ノ酸配列を比較した場合の、 全塩基数又はァ ミ ノ酸数に 対する 2配列間で同一の塩基又はァミ ノ酸の数の比率を意味する。

本発明の他の態様によれば、 複数の塩基配列間で相同性の低い、 すなわち菌株特異性の高い領域からなる DNA断片が提供される。 こ の様な DNA断片は、 P . ジンジバリ スに属する菌株を識別するため のプローブとして有用である。 この様な DNA断片と して、 配列番号

1 〜 9 に示す塩基配列の内、 任意の 2種類の塩基配列間で、 50 %未 満の塩基配列の相同性を有する、 1 0個以上の連続する塩基配列から 成る DNAが挙げられる。 この相同性は、 好ま しく は 40 %以下、 さ ら に好ま しく は 30 %以下、 さ らに好ま しく は 20 %以下である。 この様 な、 連続する非相同性の塩基配列の長さは、 好ま しく は 20塩基以上 あ o o

前記のプローブとしての DNAは、 好ま しく は、 放射能標識、 蛍光 標識、 酵素標識等、 常用の標識により標識されている。 標識の種類. 標識付与の方法、 標識の検出方法等は、 当業界において周知の技術 める。

本発明はさ らに、 配列番号 ： 10〜 1 8に示すアミ ノ酸配列の内、 複 数のア ミ ノ酸配列間で相同性の高い領域から成るァ ミ ノ酸配列を有 するペプチ ドを提供する。 この様なペプチ ドは、 P . ジンジバリス のフィ ンブリ リ ンを認識する抗体、 例えばポリ クローナル抗体又は モノ クローナル抗体の生成のための抗原として有用である。

この様なペプチ ドと して、 配列番号 ： 10〜； 18に示すァミ ノ酸配列 中の任意の 2種類のァミ ノ酸配列間で 50 %以上のァ ミ ノ酸配列の相 同性を有する、 少なく とも 5個の連続するアミ ノ酸配列を有するぺ プチ ドが挙げられる。 この配列は好ま しく は 70 %以上であり、 さ ら に好ま しく は 90 %以上である。 前記連続するアミ ノ酸配列の長さは 好ま しく は 1 0アミ ノ酸以上である。 1 本発明はさ らに、 配列番号 ： 1 0〜1 8に示すア ミ ノ酸配列において、 複数のア ミ ノ酸配列間の相同性が低い、 すなわち菌株特異性が高い 領域のァ ミ ノ酸配列から成るぺプチ ドを提供する。 このべプチ ドは、 P . ジンジバリ スの菌株のフィ ンブリ リ ンを識別するこ とができる 抗体、 すなわちポリ ク ローナル抗体又はモノ ク ローナル抗体の生成 のための抗原と して有用である。 この様なペプチ ドと して、 配列番 号 ： 10〜1 8に示すァ ミ ノ酸配列の内、 任意の 2種類のア ミ ノ酸配列 の相同性が 50 %未満である、 連続する 5以上のァ ミ ノ酸から成る領 域のペプチ ドが挙げられる。 この相同性は好ま しく は 40 %以下であ り、 さ らに好ま しく は 30 %以下である。

これらのペプチ ドは、 それ自体と して、 又は他の蛋白質との結合 物と して、 常法によりポリ ク ローナル抗体又はモノ ク ローナル抗体 を生成せしめるための抗原と して有用である。 例えば、 前記タンパ ク又はべプチ ドを、 単独あるいは他のタンパク とカ ツプリ ングした ものを抗原と して適当な哺乳動物あるいは鳥類に免疫することで、 フィ ンプリ リ ンに対する特異抗体を得ることができる。 この抗体は、 先に述べたオリ ゴヌ ク レオチ ドプライマーと同様に適当な標識化合 物でラベルすることによつて特定の P . ジンジバリ スを検出するの に用いるこ とができる。

また、 これらポ リペプチ ドあるいは B SA等のタンパク とカ ツプリ ングさせたものそれ自体は、 ワクチン抗原と して、 また、 特異抗体 は免疫活性を有する抗体と して、 P . ジンジバリ スによる歯周疾患 を予防、 治療することに利用することができる。

前記のア ミ ノ酸配列を有するタンパク又はペプチ ドは、 常法に従 つて、 遺伝子組換え法により製造することができ、 又は常法に従つ て化学合成により得ることができる。 従って本発明はまた、 前記 DNA を含んで成る発現ベクター、 該発現べクターにより形質転換された 宿主、 及び該宿主を用いての目的とする蛋白質燐酸化酵素の製造方 法を提供する。 このために、 宿主と して、 原核性宿主及び真核性宿 主を用いることができる。

原核性宿主と しては、 例えば細菌、 例えば、 大腸菌 (Escherichia coli) 、 バシルス (Bacillus) 属微生物、 例えばバシルス · ズブチ リス (Bacillus zubtilis) 等を使用することができる。 真核性宿 主と しては、 下等真核生物、 例えば酵母、 例えばサッカロ ミ セス

(Saccharomyces ) 属酵母、 例えばサッカロ ミセス · セレビシェ

(Saccharomyces serevi s iae) 等力《挙げられる。

また、 高等真核性宿主と して、 動物細胞、 例えば CH0細胞、 Hela 細胞、 COS細胞等を使用することができる。 さらに昆虫細胞、 例え ばカイコの細胞、 例えば夜燈蛾細胞等を使用することができる。 さ らに、 昆虫成体を使用することもできる。

発現ベクターとしては、 プラスミ ド、 ファージミ ド、 ファージ、 ウィルス等を宿主に依存して使用することができる。 例えば、 細菌 宿主に対してはプラスミ ド又はファージミ ドが使用され、 酵母に対 してはプラスミ ドが使用され、 動物又は昆虫細胞に対してはウィル ス、 例えばワク シニアウィルス、 バキュロウィルス等が使用される。 発現ベクターは、 前記の蛋白質燐酸化酵素をコー ドする構造遺伝 子のほかに、 該構造遺伝子と作用可能に（operablly) 連結された、 発現制御領域、 例えばプロモーター、 ェンハンサー、 ターミネータ 一等を含有する。 細菌用プロモーターと しては例えば、 ト リプトフ アンオペロ ン、 Tacプロモーター、 Trcプロモーター等が使用され、 酵母用プロモーターとしては、 例えば TDH₃プロモーター、 ADHIプロ モーター、 GALI— 7プロモーター、 PGKLプロモーター等が使用され、 動物細胞用プロモーターと しては、 例えば、 SV40プロモーター、

Ad 2プロモーター、 ワクチニァ 75 Kプロモーター等が使用され、 そ して昆虫用プロモーターと しては、 例えば、 ポリヘ ドリ ンプロモー ター等が使用される。

形質転換された宿主の培養及び目的遺伝子の発現には、 用いられ る宿主、 プロモーター等に依存して常法に従って行う ことができる。 また培養物からの目的タ ンパクの単離、 精製は、 タンパクの単離 . 精製のための常法、 例えば、 濾過、 遠心分離、 塩析、 カラムクロマ トグラフィー、 電気泳動、 ァフィ二ティークロマ トグラフィ ー等を 適宜組合わせることにより行なうことができる。

本発明の DNA又はペプチ ドを用いての P. ジンジバリ スの検出は、 例えば次の様にして行うことができる。

DNAプローブを用いた目的菌株の検出

被験試料中の目的菌株を検出するためには、 適当な処理を施し得 られた試料 DNAを、 ナイロ ンメ ンブレン等の支持体に固定させ、 あ らかじめ目的に応じて適当な標識化合物でラベルした DNAプローブ を用いてハイブリダィズさせ、 非特異的に吸着した標識 DNAプロ一 ブを取り除いたのち、 使用した DNAプローブを検出することにより 行なう ことができる。

ここで用いる DNAプローブは P. ジンジバリス染色体 DNAからク ローニングしたものを適当な制限酵素で消化したものを、 あるいは、 DNA合成機で化学的に合成したものを使用することができる。

また、 DNAプローブの標識方法は、 例えば³² P等の放射性化合物 [Molecular Cloning ： a laboratory manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press (1989)〕 、 アルカ リ フォスフ ァターゼ 〔Nucl. Acids Res. 14 6115 (1986)〕 等の方法に準じて行う ことができる。 これら、 プローブの一般的な検出方法は、 オー トラジオグラフィ ―、 呈色反応等により行なう ことができ、 目的菌株の DNAと結合し ているプローブを検出することにより目的菌株を定量的に検出する ことが可能である。

特異的抗体を用いた目的菌株の検出

フィ ンブリ リ ンおよびその構成べプチ ドに対する特異抗体を用い た目的菌株の検出は、 抗原抗体反応に基づく一般的な抗原の検出方 法を利用することができる。

例えば、 ELISA法、 ラテッ クス凝集法、 免疫電気泳動法、 ォクテ ロニー法等の手法を用いることができる。 ここで用いる被験試料は. 直接あるいは適当な溶媒中で加熱処理等の前処理を行なつた後反応 させ、 形成された抗原抗体複合物の量を直接的、 間接的に定量する ことにより、 目的菌株を定量することができる。

ポルフィ ロモナス · ジンジバリ スの種々の株のフィ ンブリ リ ンタ ンパクと反応する抗体を得るには、 該フィ ンプリ リ ンタンパクに共 通なア ミ ノ酸配列を有するぺプチ ドに対する抗体を得る必要がある c 本発明においてクローニングした 9種類のフィプリ ンタンパクをコ ー ドする DNAから推定されるァミ ノ酸配列を相互に比較したところ、 次に示す 8個の代表的な共通配列の存在が認められた。

式 （ 1 ) Asn (または Lys) Gly Glu Gin Gin Glu Ala lie Lys Ser Ala (または Val) Glu Asn Ala Thr (または lie) Lys Val Glu Asp (または Asn) lie Lys Cys Ser (または G ）（配列番号 ： 21)

式 （ 2 ) Glu Asp (または Asn) lie Lys Cys Ser (または Gly) Ala Gly Gin Arg Thr Leu Val Val Met Ala Asn Thr Gly Ala (または Glu, Gly) Met Glu (または Lys) Leu Val (または Ala) Gly Lys Thr Leu Ala (配列番号 ： 22)

式 （ 3 ) Val (または Ala) Gly Lys Thr Leu Ala Glu Val Lys Ala Leu Thr Thr Glu Leu Thr Ala (または Glu) Glu (または G ） Asn Gin Glu Ala Ala Gly Leu He Met Thr Ala Glu Pro (配列番号 ： 23) 式 （ 4 )_ Gin Gly Phe Tyr Val Leu Glu Asn (または Ser) Thr (ま たは Asp, Lys) Tyr Ala (または Ser, Asp) Gin (または Ala) Asn (ま たは Ser) (配列番号 ： 24)

式 （ 5 ) Gly (または Pro) Thr (または Lys) Thr Tyr Tyr Pro Val

Leu Val Asn Phe (または Tyr) Asn (または Glu， Asp) Ser (または

Gly) Asn Asn (または Gly) Tyr Thr (または lie) Tyr (配列番号 ： 25)

式 （ 6 ) Ser Asn Asn Tyr Thr Tyr Asp Ser (または Asn) Asn (ま たは Gly) Tyr Thr Pro Lys Asn Lys lie Glu Arg Asn His Lys Tyr

Asp lie Lys Leu Thr lie Thr Gly Pro Gly Thr Asn (配列番号 ：

26)

式 （ 7 ) lie Thr Gly Pro Gly Thr Asn Asn (または Thr) Pro Glu

Asn Pro lie (または Gin) Thr Glu Ser Ala His (または Asn) Leu

Asn Val Gin Cys Thr Val Ala Glu Trp Val Leu Val Gly Gin Asn Ala Thr Trp (配列番号 ： 27)

式 （ 8 ) Thr Gly Ser Leu Thr Thr (または Asn) Phe Asn Gly Ala

Tyr Ser (または Thr) Pro Ala Asn Tyr Thr (または Ala) (配列番 号 ： 28)

上記配列番号 ： 21〜28のァ ミ ノ酸配列が、 配列番号 ： 10〜18で示 すァミ ノ酸配列中に存在する位置は次の表に示す通りである。

1 6

/ OAV【dfcvjG9i6 ,8

ΐ 拏

本発明の抗原べプチ ドは、 前記のァ ミ ノ酸配列 （配列番号 ： 21〜 28) 中の少なく と も 5個の連続するァ ミ ノ酸を含んで成るぺプチ ド である。 さ らに図 8及び 9 において認められる上記以外の共通ぺプ チ ドも同様に使用することができる。 また、 これらのペプチ ドが短 か過ぎる等の理由で抗原性を有しない場合には、 これらのぺプチ ド をキヤ リ ヤータンパクに結合させて抗原と して用いることができる。

これらのペプチ ドは常法に従って、 固相法又は液相法により合成 することができる。 あるいは、 それらのペプチ ドをコー ドする遺伝 子を発現させて作ることもできる。 この遺伝子は化学合成するこ と もでき、 あるいは、 配列番号 ： 10〜 18に示すア ミ ノ酸配列をコー ド する DNA、 又は例えば配列番号 ： 1 〜 9 に示す塩基配列を有する DNA を铸型と し、 その所望の一部分を PCR法により増幅すること もでき る。 なお、 PCRで増幅させる際、 PCRプライマ一に人工的に制限酵 素の切断部位を付加させることが好ま しい。

これらの DNAはそれ自体と して発現させてぺプチ ドを得ること も でき、 あるいは、 他のタ ンパクをコー ドする DNAと連結して発現せ しめ、 他のタンパク との融合タ ンパクを得ること もできる。 これら の発現は常法に従って行えばよい。

このようにして得られた目的とするペプチ ド、 あるいは融合タ ン パクはそのものを単独で、 あるいは、 適当なキャ リ アータ ンパク と 複合体を形成させた後、 免疫原とすることができる。 こ こで使用で きるキャ リ アータ ンパクの種類と しては、 牛血清アルブミ ン、 卵白 アルブミ ン、 ミオグロ ビン、 テタヌス トキソイ ド、 KLH (Keyhole limpet hemocyanin) 等を用いるこ と力、できる。

さ らに、 これらキャ リアータ ンパク と目的ペプチ ドとの結合には、 公知の手段を用いて行う ことができる。 結合に用いる試薬と しては、 伊 Jえ（ま'、 グ'ノレターノレアノレデヒ ド、 Bis— imido Ester類、 bis-diazotized

l 8 benzidine、 水溶性カノレポ'ジィ ミ ド、 m— maleimidobenzoyl— N- hydroxysuccinimide等を用いることができる。 これらキャ リ ア一タ ンパクとぺプチ ドの結合比 （モル比） は 1 ： 1 〜 1 ： 40が好ま しく 特に 1 ： 5〜 1 ： 20が好ま しい。

ポリ クローナル抗体を得るためには、 このようにして得られた免 疫原を哺乳動物 （羊、 山羊、 牛、 馬、 豚、 ゥサギ、 ラ ッ ト、 マウス モルモッ ト等） または鳥類 （ニヮ ト リ、 ハ ト、 ゥズラ、 ァヒル、 ガ チョウ等） に免疫することにより、 これら動物の血清、 乳、 卵、 卵 黄等より得ることができる。 哺乳動物への免疫方法と しては、 ここ で得られた免疫原を皮下投与、 筋肉内投与、 腹腔内投与等の通常の 方法や、 点鼻、 点眼等の方法によって行う ことができる。 また、 必 要に応じてフロイン トの完全アジュバン ト等のアジュバン 卜と混合 して免疫を行うこともできる。 ここで、 1 回の免疫に使用する抗原 量は、 0. lmg〜 3 mgZkg体重が好ま しく、 特に 0.25mg〜 2 mgZ kg体 重が好ま しいが、 所望の抗体価が得られ、 かつ動物に対して悪影響 を与えない量を適宜選択すれば良い。

免疫は、 2〜 4週おきに 3〜 5回行い、 最終免疫後 10〜14日後、 常法に基づき免疫した動物より採血し、 抗血清を得ることができる ₍ 得られた抗血清は のままあるいは、 塩析、 透析、 ィォン交換ク口 マ トグラフィー、 ゲル濾過、 ァフィ二ティークロマ トグラフィ ー等 を適宜組み合わせて使用することにより、 目的とする免疫グロプリ ンを精製した後、 使用することもできる。

また、 免疫に使用する鳥類は特に制限はないが、 抗体の産生性か ら考えて、 白色レグホン等の卵用種が好ま しい。 免疫原の投与方法 は、 上述した哺乳動物と同様の方法を用いることができ、 抗原の投 与量は、 所望の抗体価が得られ、 かつ動物に対して悪影響を与えな い量を適宜選択すれば良い。 さ らに、 必要に応じてフロイ ン トの完 全アジュバン ト等のアジュバン ト と混合して免疫を行う こ と もでき る。

このようにして免疫した鳥類からの抗体の調製は、 通常、 卵黄に 含まれる免疫グロブリ ンを抽出、 分離することにより行う ことがで きる。 この抽出、 分離方法としては、 多糖、 ポリエチレングリ コー ルを用いた沈殿法や、 エタノール、 ク ロ口ホルム等の有機溶媒を用 いた抽出法等の通常用いられている免疫グロプリ ンの抽出方法を使 用することができ、 精製は上述した抗血清からの精製方法を使用す ることができる。

また、 これら抗体はモノ ク ローナル抗体と して得、 使用するこ と もできる。 モノ クローナル抗体を得るためには、 上述した免疫原を マウス、 ラ ッ ト、 モルモッ ト等の動物に同様の方法で免疫すること が好ま しく 、 最終免疫後 2 〜 5 日後に脾臓細胞を摘出し、 常法にし たがって、 モノ ク ローナル抗体産生ハイプリ ドーマを調製すること ができる。 このようにして得られた抗体産生ハイプリ ドーマを適当 な培地で培養することにより得られた培養上清より、 上述したポリ ク ローナル抗体の精製方法と同様の手段を用いてモノ ク ローナル抗 体を精製し、 使用することができる。 これら抗血清あるいは、 抗体 の力価は通常使用される EL I SA法、 ラ ジオィムノアツセィ法を用い て測定することができる。

以上のようにして得られた抗血清、 ポリ ク ローナル抗体、 又はモ ノ ク ローナル抗体は、 ボルフイ ロモナス ' ジンジバリ スの表層に存 在する線毛と特異的に反応し、 ボルフイ ロモナス ' ジンジバリ スに 対して免疫活性を有する。 すなわち、 これらの抗体そのもの、 ある いは適当な標識化合物でラベルすることにより、 特異的に P . ジ ン ジバリ スを検出することに利用できる。 また、 これらの抗体は、 ポ ルフ イ ロモナス ' ジ ンジバリ スの口腔内組織への付着を阻害する効 果も有し、 該抗体を口腔内に適用することによりポルフ ィ ロモナス ジンジバリスの口腔内への定着を阻害し、 歯周疾患を予防すること ができる。

従って、 本発明の抗体は、 歯周疾患予防剤の有効成分と して好適 に使用することができ、 その口腔への投与形態に応じて種々の製剤 例えば、 練り歯磨、 液体歯磨、 マウスゥォッシュ等に配合すること が可能である。 また、 本発明の歯周疾患予防剤には、 上述した抗体 の他に、 その製剤に応じて公知の有効成分を配合し、 併用すること ができる。 実施例

次に、 本発明を実施例により、 さ らに詳しく説明する。

実施例 1. フィ ンブリ リ ンタ ンパクをコ一 ドする DNAのク ローニン

P . ジンジバリ ス染色体 DNAの調製

P. ジンジバリ ス 381, ATCC33277, BH18/10, HW24D1, 0MZ314, 0MZ409, ATCC49417, 6Z26および HG564株は、 へミ ン、 メナジオン を添加した GAM液体培地で嫌気的に 37°Cで 2 日間培養し、 遠心集菌 したものを TEバッフ ァー（10mM Tris · HC1， 1 m EDTA； pH 8.0) で洗浄したのち、 同バッファ一 20mlに分散させた。

これにジェチルピロカーボネー ト 0.4mlを加え 50°Cで 1 時間加温 した後、 再度遠心により集菌し、 5 mlの TENバッフ ァ一 （10mM Tris - HC1, 1 mM EDTA, lOOmM NaCl ； pH 8.0) に分散し、 リ ゾチ ーム、 SDS、 N—ラウロイルザルコシンナ ト リ ウムをそれぞれ終濃 度で 1 mg、 10mM、 2 %添加し溶菌させた。 ついで、 プロティナーゼ Kを 50〃 gZmlになるように添加し、 55°Cで 1 時間加温した。 遠心 により得られた上清を塩化セシウム密度勾配遠心により染色体 DNA を分離し、 TE 'ッファーに対して透析することにより精製した。 PCR法による f imA遺伝子の増幅

得られた P. ジンジバリ スの染色体 DNAを铸型にして、 f imA遺伝 子を PCR法により増幅させた。 すなわち、 P. ジンジバリス 381株 の fimA遺伝子の塩基配列をもとに設計し、 ^H I認識 ¾Γ位 （下線部） を付加したプライマ— 〔 5' AATTGGATCCGCGCAGCAAGGCCAGCCCGG3 ' (配列番号 ： 19) および 5' AGAGGGATCCGAGCGAACCCCGCTCCCTGT3 ' (配列番号 ： 20) 〕 を用いて、 DNAポリメ ラーゼによる 20〜30 サイクルの PCRを行ない、 f i mA遺伝子を含む DNAを増幅した。

f i mA遺伝子のクローニング

PCRにより増幅された DNAおよび発現べクターである pTrc99を

^H Iで消化後、 T4 DNAリガーゼを用いて、 連結させた。 このよう にして得られた、 組換え DNAは大腸菌 JM109株に導入し、 アンピシ リ ン 100/z g Zmlを含む LD Luria- Bertani) 寒天培地上でー晚培養 し、 形質転換株を得た。

コロニ一ハイブリ ダィゼーショ ンによる陽性ク ロ一—ンのスク リ ー二 ング

得られた形質転換株のコロニーをナイロンメ ンブレンに転写後、 アルカ リ存在下、 SDSにより溶菌させた後、 ³²Pで標識した fimA遺 伝子をプローブと して、 コロニーハイブリダィゼーショ ンにより、 目的の陽性クローンをスク リーニングした。

実施例 ^ ゥヱスタ ンブロ ッ トによる組換えタンパクの発現

得られたクローンが、 目的のものであることをより確実に確認す るために、 組換えフィ ンブリ リ ンタンパクの発現をウェスタンィム ノブロ ッ 卜によって確認した。 すなわち、 大腸菌クローンをアンピ シリ ン 100 g/ml添加した LB液体培地で 0D₅₅。が 0.3〜0.5 程度 になるまで、 振盪培養した後、 IPTGを 0.2〜 1 mMになるように添加 し、 さ らに 1 時間以上、 培養を続けた。 培養後、 遠心により集菌し たものを、 SDS— PAGEにかけ、 抗 P . ジンジバリス線毛血清を用い たゥヱスタンブロッ トにより、 分子量が約 43， 000〜48, 000の位置に 組換タンパクの発現を確認した。

f imA遺伝子の塩基配列の決定

目的のプラスミ ド DNAより、 Bam H I で^^を含む DNAを断片を 消化、 精製し、 PUC119ベクターに、 T4 DNAリガーゼを用いて、 連結 させた。 この時、 f imA遺伝子の挿入方向は、 pUC119の lacプロモー ターに対して、 正逆両方向の 2種類作製し、 Kpn I および Sma I で 消化したのち、 Steven Henikof fの方法および Yanisch Perronらの 方法に基づいて、 100〜 200bpずつ大きさの異なる欠失変異株を作 製し、 大腸菌 MV1184株に形質転換し、 一連のクローンを得た。

一連の欠損プラスミ ドを大腸菌クローンより抽出、 精製、 変性後. または、 これらのクローンに M13ヘルパーファージを感染させるこ とにより一本鎖 DNAを抽出、 精製した後、 Sanger法により、 f imA遺 伝子の塩基配列を決定した。

このようにして P . ジンジバリ スの 9菌株の f imA遺伝子の配列を 明らかにした （配列番号 ： 1 〜 9 ) 。 その結果、 P . ジンジバリ ス 381、 ATCC33277, BH18/10, 0MZ409及び ATCC49417株は、 配列表 に示した DNA配列の 216〜218 番目の、 HW24D— 1， 0MZ314および 6 /26株は 211〜213 番目の、 HG564株は、 187〜189 番目の GTG が、 それぞれ開始コ ドンとなり、 配列番号 10〜18に示したシグナル 配列を含むアミ ノ酸をコー ドしていることが明らかとなった。

実施例 4. 抗原の調製

目的べプチ ドの調製

ポルフ ィ ロモナス · ジンジバリ スの種々の株に共通なフィ ンブリ リ ンタンパクのアミ ノ酸配列部分と して選択した前記 9種のアミ ノ 酸配列の内、

( 1 ) 配列番号 ： 23中のアミ ノ酸番号 14〜31 (配列番号 ： 10中の ァミ ノ酸番号 73〜89) などに相当するアミ ノ酸配列 （配列番号 ： 29) Glu Leu Thr Ala Glu Asn Gin Glu Ala Ala Gly Leu lie Met Thr Ala Glu Pro

( 2 ) 配列番号 ： 29中のアミ ノ酸番号 1〜14 (配列番号 ： 10中の ァミ ノ酸番号 177〜190)等に相当するァミ ノ酸配列 （配列番号 ： 30) Gly Ser Leu Thr Thr Phe Asn Gly Ala Tyr Ser Pro Ala Asn

( 3 ) 配列番号 ： 25中のァミ ノ酸番号 3〜17 (配列番号 ： 10中の ア ミ ノ酸番号 264〜278)等に相当するァミ ノ酸配列 （配列番号 ： 31) Thr Tyr Tyr Pro Val Leu Val Asn Phe Asn Ser Asn Asn Tyr Thr

( 4 ) 配列番号 ： 27中のアミ ノ酸番号 4〜 20 (配列番号 ： 10中の 304〜320)等に相当するアミ ノ酸配列 （配列番号 ： 32) ：

Pro Gly Thr Asn Asn Pro Glu Asn Pro He Thr Glu Ser Ala His Leu Asn

で示される 4種類の目的ペプチ ド （ 1 ) 〜 （ 4 ) の化学的合成を、 自動べプチ ド合成装置 （アプライ ド バイオケミ カル社製） を用い た固相合成法を用いて常法に従い行なった後、 高速液体クロマ トグ ラフィ一で分取、 ゲル濾過により脱塩し精製した。

また、 別法と して目的ペプチ ドのアミ ノ酸配列をコー ドしている DNAを染色体 DNAより PCRにより増幅し、 これを適当な発現べクタ 一に挿入、 発現させた。 すなわち、 目的とする DNA配列から PCR用 のプライマーを設計した。 その際フ ォヮ一ドプライマ一には！^ H I部位を、 リバースプライマーには！^ _R I部位をそれぞれ人工的 に付加させたものを DNA合成機により合成した。

これらの PCRプライマーを用いてボルフ イ ロモナス . ジンジノくリ スの染色体 DNAを铸型にして 30サイクルの PCRを行い、 常法に従つ て、 増幅された目的とする DNA断片を得た。 Bam H I および Eco R I で消化した後、 pGEX— 3Xベクター （フアルマシア社製） の同部位 に挿入した。 得られたキメラプラスミ ドを大腸菌 JM109株に常法に 従って、 形質転換し目的とする大腸菌クローンを得た。

得られた大腸菌クローンを LB培地で OD550が 0.3付近まで振盪培 養し、 IPTGを終濃度 1 mMになるように添加し、 さ らに 1〜 3時間振 盪培養を続け目的タンパクの発現を誘導した。

発現させたタンパクは、 酵素、 超音波処理によって菌体を破砕し た画分から 1 ステップァフィ二ティ一クロマ トグラフィ一により精 製を行い、 必要に応じてイオン交換、 ゲル濾過クロマ トグラフィー を用いて精製を行なつた。

キヤ リア一タンパクと目的べプチ ドとの結合

キャ リ アータ ンパク と して KLH (キーホールリ ンぺッ 卜へモシァ ニン） を用いて行なった。 すなわち、 透析により低分子不純物を取 り除いた KLH 10mg/ml (0.01Mリ ン酸バッファー （pH7.0)) に MBS (m—マレイ ミ ドベンゾィルー N—ヒ ドロキシサク シンイ ミ ドエス テル） ISmgZml (ジメ チルホルムア ミ ド溶液） を 100 Z 1 添加し、 室温で 30分間緩やかに攪拌し、 KLHを活性化させた。

活性化した KLHは PD— 10カラム （フアルマシア社製） を用いて、 未反応物を取り除いた後、 あらかじめ 6 Mグァニジン塩酸/ 01M リ ン酸バッファー （PH 7.0) に溶解しておいた目的とするペプチ ド 断片（（合成ペプチ ド （ 1 ) 〜 （4 ))に示したもの 5 mgZml) を添加 し、 _PHを 7.3に調整し、 室温において 3時間攪拌した後、 透析によ り未反応物質を取り除き免疫原と した。

実施例 5. 抗体の製造

実施例 4で得られた免疫原 （ 1 nigZnil) 2 mlをフロイ ン 卜の完全 アジュバン ト と等量混合し、 乳化させた後、 日本白色家兎 （体重 2 kg) の背部皮下 4箇所に免疫した。 2週間後、 同量の免疫原をフロ イ ン 卜の不完全アジュバン トと等量混合、 乳化させたものを同様に 追加免疫を行い、 2〜 3週間隔で 2〜 3回追加免疫を行なった。 最 終免疫の 1週間後に、 常法に従い採血を行い、 抗血清を得た。 得ら れた抗血清中の特異抗体価の測定は、 以下に示した ELISA法に基づ いて測定した。

ELISA法を用いた血清中抗体価の測定は、 前記の合成べプチ ド ( 1 ) 〜 （ 4 ) を 30 / g Zmlになるように炭酸バッフ ァー （pH9.6) で希釈し、 96穴マルチプレー ト （住友べ一クライ ト社製） に 100 1 Ζゥヱル注入し 4 °Cで一晩吸着させた。 PBST (リ ン酸バッファ 一 (pH 7.4) に 0.05% Tween20を添加したもの） バッフ ァ一で洗浄 した後、 1 %牛血清アルブミ ン 100〃 1ノウヱル添加し、 ブロ ッキ ングを行なった後、 同様に PBSTバッファーで洗浄後、 抗血清の 100 〜 10000 倍希釈液を 100 ゥエル添加し、 室温で 2時間反応さ せた。

PBSTで洗浄後、 アルカ リ フ ォスファターゼ標識抗ゥサギ血清 （ャ ギ） の 1000倍希釈液を 100 1 Zゥ ル添加し、 室温で 2時間反応 させた。 反応後、 同様に PBSTバッフ ァーで洗浄後、 基質である p — ニ トロフエ二ルリ ン酸 Naを 1 mgZmlになるようにジエタノールアミ ンバッフ ァー （pH 9.8) に溶解したものを 1 Zゥ ヱル添加し 室温で発色させた後、 405nmで比色定量した。

その結果、 目的とする合成べプチ ドに対する特異抗体の上昇が認 められた。

実施例 6. 抗体によるポルフィ 口モナス菌の付着の阻害

P . ジンジバリスの付着阻害試験は以下に示した方法に基づいて 行なった。 粒径 100— 150〃 mのハイ ドロキシァパタイ ト （HA) 顆 粒 5 mgを 96穴マルチプレー ト入れ、 滅菌した無刺激唾液を添加し、 室温で 2時間作用させ、 HA表面に唾液成分を吸着させた後、 KC1バ ッフ ァー （pH 6.0) で洗浄したもの （ S— HA) を被吸着体と して使 用した。

上記 S — HAに ³H—チ ミ ジンでラベルした P . ジンジバリ ス ATCC 33277 株を 10⁷個添加し、 室温で 1 時間反応させ、 S— HAに付着さ せた。 反応終了後、 同バッフ ァーで洗浄した後、 S— HAに付着して いる菌体を液体シンチレーシヨ ンカウ ンターで計測し、 P. ジンジ バリスの付着量を求めた。

目的とする抗体の付着阻止効果は、 上記実験系に被験抗体（（ 1 ) 〜 （ 4 ) のペプチ ドに対する抗体） を添加し、 その付着抑制率をコ ン トロールに対する％と して表 2 に表示した。

表 2 抗体の P. ジンジバリス付着阻止効果

_ ぺプチ ド抗原 付着阻害率 （％)

( 1 ) 72.1

( 2 ) 33.6

( 3 ) 53.6

( 4 ) 89.9 表 2に示した結果より （ 1 ) 〜 （ 4 ) のべプチ ドに対する抗体が ボルフイ ロモナス ' ジンジバリスの S— HAへの付着を有意に抑制し ていることが認められ、 本抗体の有用性が認められた。

実施例 7. 歯周疾患予防剤の処方剤

( 1 ) 歯磨剤

第 2 リ ン酸カルシウム . 2水和物 50.0% ソノレビッ ト 10.0% グリ セ リ ン 10.0% 力ラゲナン 1.0% ラ ウ リ ル硫酸ナ ト リ ウム 1.0% 香 料 1.0% サ ッ カ リ ン 0.1% エタ ノ ール 2.0% ト リ ク ロサン 0.05% 抗線毛断片ャギ乳抗体 0.2% 水

100.0%

( 2 ) 歯磨剤

無水ゲイ酸 30.0% グリ セ リ ン 30.0% ソノレビッ ト 20.0% カルボキシメ チルセル口一ス 1.0% ラ ウ リ ル硫酸ナ ト リ ウム 1.2% 香 料 1. % サ ッ カ リ ン 0.1% エタ ノ ール 2.0% ト ラネキサム酸 0.05% 抗線毛断片牛乳抗体 0.1% 水

100.0% ( 3 ) 歯磨剤

水酸化アルミニゥム 45.0% ソノレビッ ト 20.0% 力ラゲナン 0.5% カルボキシメチルセル口 ス 1.0% ラウ リノレジエタノールァ K 1.0% ショ糖モノ ラウ レー ト 2.0% 香 料 1.0% サッカ リ ン 0.1% 抗線毛断片羊血清抗体 0.3% 水

100.0%

( 4 ) 歯磨剤

第 2 リ ン酸カルシウム 45.0% カルボキシメチルセルロース 1.0% 力ラゲナン 0.5% ソルビッ ト 35.0% プロ ピレングリ コール 3.0%

N—ラウロイルメチルタウ リ ンナ ト リ ウム 0.5% ゼラチン 1.0% パラォキシ安息香酸ェチル 0.2% サッカ リ ンナ ト リ ウム 0.1% 香 料 1.1% ァスコルビン酸リ ン酸エステルマグネシウム 0.5% 抗線毛断片鶏卵抗体 0.5% 水 残

100.0% 94/01687

( 5 ) 歯磨剤

水酸化アルミニウム 40.0%

カルボキシメ チルセルロースナ ト リ ウム 1.0%

力ラゲナン 0.5%

ソルビッ ト 30.0%

プロ ピレングリ コール 3.0%

N— ミ リ ス トイルメチルタウ リ ンナ ト リ ウム 0.5%

ぺプタイ ド 1.0%

パラォキシ安息香酸メチル 0.2%

サッカ リ ンナ ト リ ウム 0.1%

香 料 1.1%

塩化セチルピリ ジニゥム 0.5%

抗線毛断片馬血清抗体 0.5%

水 残

100.0%

( 6 ) 洗口剤

エタノール 20.0%

香 料 1.0%

サッカ リ ン 0.05%

ラウ リルジエタノールア ミ ド 0.3%

クロルへキシジンダルコ ン酸塩 0.01%

抗線毛断片牛乳抗体 0.1%

水

100.0% ( 7 ) 洗口剤

ソルビッ ト 10.0% エタノール 20.0% N—パルミ トイルメ チルタウ リ ンナ ト リ ウム 0.5%

P0E (20)ソルビタ ンモノォレエ一 ト 1.0% コラーゲン 0.5% パラォキシ安息香酸メ チル 0.1% サッカ リ ンナ ト リ ウム 0, 1% 香 料 0.5% 抗線毛断片鶏卵抗体 0.4% 水 残

100.0%

( 8 ) タブレッ ト

ァラ ビアゴム 6.0% ブ ドウ糖 72.0% ゼラチン 3.0% 香 料 0.2% 1 —メ ン トール 0. \% スペア ミ ン トオイル 0. \% ァスコルビン酸ナ ト リ ウム 0. \% 抗線毛断片羊乳抗体 0. \% 水

100.0% ( 9 ) ガ ム

ガムベース 43.9%

炭酸カルシウム 2.0%

水 飴 15.0%

砂 糖 30.0%

シ ョ糖パルミ テー ト 1. %

フノレク トース 4.0%

アル ドース 3.0%

番 料 1.0%

抗線毛断片鶏卵抗体 0.1%

100.0%

(10) アイ スク リ ーム

ク リ ーム （脱脂率 50%) 16.84%

無糖脱脂練乳 24.24%

砂 糖 11.25%

コーンシロ ップ 4.65%

安定剤 0.35%

抗線毛断片抗体含有牛乳 37.67%

抗線毛断片抗体含有卵黄 5.00%

100.0 %

産業上の利用可能性

本発明においてクロ一ニングされたポルフィ ロモナス · ジンジバ リ スのフィ ンプリ リ ンタ ンパクをコー ドする核酸の内、 各菌株に対 して特異的な配列部分をプローブと して用いれば個々の株を分別検 出することができ、 また種々の株間で相同性の高い部分をプローブ と して用いることにより 1 種又は少数種のプローブによりポルフ ィ 口モナス * ジ ンジバリス種の微生物を全体的に検出することができ る。 同様に、 上記フィ ンブリ リ ンタンパクのァミ ノ酸配列の内各株 に特異的な部分に対する抗体を用いることにより個々の株を分別検 出することができ、 また種々の株間で相同性の高いアミ ノ酸配列に 対する抗体を用いることにより、 1又は少数の抗体を用いてボルフ イ ロモナス · ジンジバリス種の微生物を全体と して検出することが でき、 また、 かかる抗体を用いることにより 1種又は少数の抗体に より、 ボルフイ ロモナス ' ジンジバリスの歯への付着を防止するこ とができる。

配列表

配列番号 ： 1

配列の長さ ： 1309

配列の型 ： 核酸

鎖の数 ： 二本鎖

配列の種類 ： genom i c DNA

起源

生物名 ： ポルフ ィ ロモナス ジ ンジノくリ ス ( Porphyromonas g i ng i va l i s

配列の特徴

f i m A 遺伝子を含む DNA

216〜218 開始コ ドン

1257〜1259 終止コ ドン

配列 ：

AGCACAACAT AATCTGAACG AACTGCGACG CTATATGCAA GACAATCTCT 50

AAATGGGAAA AGATTAGATT TTTAGAAAAC AATATTCACT TTTAAAACAA 100

AAACGAGATG AAAAAAACAA AGTTTTTCTT GTTGGGACTT GCTGCTCTTG 150

CTATGACAGC TTGTAACAAA GACAACGAGG CAGAACCCGT TACAGAAGGT 200

AATGCCACCA TCAGCGTGGT ATTGAAGACC AGCAATTCGA ATCGTGCTTT 250

TGGAGTTGGC GATGACGAAT CAAAGGTGGC TAAGTTGACC GTAATGGTTT 300

ATAATGGAGA ACAGCAGGAA GCCATCAAAT CAGCCGAAAA TGCGACTAAG 350

GTTGAAGACA TCAAATGTAG TGCAGGCCAA CGTACGCTGG TCGTAATGGC 400

CAATACGGGT GCAATGGAAC TGGTTGGCAA GACTCTTGCA GAGGTAAAAG 450

CATTGACAAC TGAACTGACT GCAGAAAACC AAGAGGCTGC AGGGTTGATC 500

ATGACAGCAG AGCCAAAAAC AATCGTTTTG AAGGCAGGCA AGAACTACAT 550

TGGATACAGT GGAACCGGAG AGGGTAATCA CATTGAGAAT GATCCTCTTA 600 AGATCAAGCG TGTTCATGCT CGCATGGCTT TCACCGAAAT TAAAGTGCAA 650

ATGAGCGCAG CCTACGATAA CATTTACACA TTCGTCCCTG AAAAGATTTA 700

TGGTCTCATT GCAAAGAAGC AATCTAATTT GTTCGGGGCA ACACTCGTAA 750

ATGCAGACGC TAATTATCTG ACAGGTTCTT TGACCACATT TAACGGTGCT 800

TACACACCTG CCAACTATGC CAATGTGCCT TGGCTGAGCC GTAATTACGT 850

TGCACCTGCC GCCGATGCTC CTCAGGGTTT CTACGTATTA GAAAATGACT 900

ACTCAGCTAA CGGTGGAACT ATTCATCCGA CAATCCTGTG TGTTTATGGC 950

AAACTTCAGA AAAACGGAGC CGACTTGGCG GGAGCCGATT TAGCAGCTGC 1000

TCAGGCCGCC AATTGGGTGG ATGCAGAAGG CAAGACCTAT TACCCTGTAT 1050

TGGTAAACTT CAACAGCAAC AACTATACTT ATGACAGCAA TTATACGCCT 1100

AAGAATAAAA TTGAGCGTAA CCATAAGTAT GATATTAAGT TGACAATTAC 1150

AGGCCCCGGA ACGAATAACC CAGAGAATCC TATCACAGAG TCTGCTCACT 1200

TGAATGTACA GTGCACTGTA GCTGAGTGGG TTCTCGTTGG TCAGAATGCT 1250

ACTTGGTAAT CGACCCGTCA AACGACTAAA AAACTTTCAT AGTTTGTCTA 1300

TATCGGAAT 1309 配列番号 ： 2

配列の長さ ： 1309

配列の型 ： 核酸

鎖の数 ： 二本鎖

配列の種類 ： genomi c DNA

起源

生物名 ： ポルフ ィ ロモナス ジ ンジノ 'リ ス ( Porphyromonas g i ng i va l i s)

株名 ： ATCC33277

配列の特徴

f im A 遺伝子を含む DNA

216〜218 開始コ ドン

1 7

ACTTGGTAAT CGACCCGTCA AACGACTAAA AAACTTTCAT AGTTTGTCTA 1300 TATCGGAAT 1309 配列番号 ： 3

配列の長さ ： 1309

配列の型 ： 核酸

鎖の数 ： 二本鎖

配列の種類 ： genom i c DNA

起源

生物名 ： ボルフ イ ロモナス ' ジ ンジバ リ ス （^rphyromonas g i ng i va l i s)

株名 ： BH18Z 10

配列の特徴

f i m A 遺伝子を含む DNA

216〜218 開始コ ドン

1257〜1259 終止コ ドン

配列 ：

AGCACAACAT AATCTGAACG AACTGCGACG CTATATGCAA GACAATCTCT 50 AAATGGGAAA AGATTAGATT TTTAGAAAAC AATATTCACT TTTAAAACAA 100 AAACGAGATG AAAAAAACAA AGTTTTTCTT GTTGGGACTT GCTGCTCTTG 150 CTATGACAGC TTGTAACAAA GACAACGAGG CAGAACCCGT TACAGAAGGT 200 AATGCCACCA TCAGCGTGGT ATTGAAGACC AGCAATTCGA ATCGTGCTTT 250 TGGAGTTGGC GATGACGAAT CAAAGGTGGC TAAGTTGACC GTAATGGTTT 300 ATAATGGAGA ACAGCAGGAA GCCATCAAAT CAGCCGAAAA TGCGACTAAG 350 GTTGAAGACA TCAAATGTAG TGCAGGCCAA CGTACGCTGG TCGTAATGGC 400 CAATACGGGT GCAATGGAAC TGGTTGGCAA GACTCTTGCA GAGGTAAAAG 450 CATTGACAAC TGAACTGACT GCAGAAAACC AAGAGGCTGC AGGGTTGATC 500 ATGACAGCAG AGCCAAAAAC AATCGTTTTG AAGGCAGGCA AGAACTACAT 550 TGGATACAGT GGAACCGGAG AGGGTAATCA CATTGAGAAT GATCCTCTTA 600

AGATCAAGCG TGTTCATGCT CGCATGGCTT TCACCGAAAT TAAAGTGCAA 650

ATGAGCGCAG CCTACGATAA CATTTACACA TTCGTCCCTG AAAAGATTTA 700

TGGTCTCATT GCAAAGAAGC AATCTMTTT GTTCGGGGCA ACACTCGTAA 750

ATGCAGACGC TAATTATCTG ACAGGTTCTT TGACCACATT TAACGGTGCT 800

TACACACCTG CCAACTATGC CAATGTGCCT TGGCTGAGCC GTAATTGCGT 850

TGCACCTGCC GCCGATGCTC CTCAGGGTTT CTACGTATTA GAAAATGACT 900

ACTCAGCTAA CGGTGGAACT ATTCATCCGA CAATCCTGTG TGTTTATGGC 950

AAACTTCAGA AAAACGGAGC CGACTTGGCG GGAGCCGATT TAGCAGCTGC 1000

TCAGGCCGCC AATTGGGTGG ATGCAGAAGG CAAGACCTAT TACCCTGTAT 1050

TGGTAAACTT CAACAGCAAC AACTATACTT ATGACAGCAA TTATACGCCT 1 100

AAGAATAAAA TTGAGCGTAA CCATAAGTAT GATATTAAGT TGACAATTAC 1 150

AGGCCCCGGA ACGAATAACC CAGAGAATCC TATCACAGAG TCTGCTCACT 1200

TGAATGTACA GTGCACTGTA GCTGAGTGGG TTCTCGTTGG TCAGAATGCT 1250

ACTTGGTAAT CGACCCGTCA AACGACTAAA AAACTTTCAT AGTTTGTCTA 1300

TATCGGAAT 1309 配列番号 ： 4

配列の長さ ： 1306

配列の型 ： 核酸

鎖の数 ： 二本鎖

配列の種類 ： genomi c DNA

起源

生物名 ： ポルフ ィ ロモナス ジンジノヽ リ ス ( Porphyromonas g i ng i va l i s)

株名 ： HW24D— 1

配列の特徵

f i m A 遺伝子を含む DNA > - <n

CD ■

-3

o > - CD D

CD —3 C

o

- o "-3

CCCCAT GAGCT CTTTATTTT GTGATGCATA TGTAAAA AAA CGCATT GTCTAGATGTTTT T CGCGAGAT CGGTT ATCTATG

CAATAA GCGGAAATCTAGG T

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-3 -3

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〜

〜 AATGTACAGT GCACTGTAGC TGAGTGGGTT CTCGTTGGTC AGAATGCTAC 1250 TTGGTAATCG ACCCTCAAAC GACTAAAAAA CTTTCATAGT TTGTCTATAT 1300 CGGAAT 1306 配列番号 ： 5

配列の長さ ： 1306

配列の型 ： 核酸

鎖の数 ： 二本鎖

配列の種類 ： enom i c DNA

起源

生物名 ： ボルフ イ ロモナス · ジ ンジノ<リ ス ( Porphyromonas g i ng i va l i s)

株名 ： 0MZ314

配列の特徴

f i m A 遣伝子を含む DNA

211〜213 開始コ ドン

1252〜1254 終止コ ドン

配列 ：

AGCACAACAT AATCTGAACG AACTACGACG CTATATGCAA GACAATCTCT 50 AAATGGGAAA AGATTCTTAG AAAACAATAT TCACTTTTAA AACAAAAACG 100 AGATGAAAAA AACAAAGTTT TTCTTGTTGG GACTTGCTGC TCTTGCTATG 150 ACAGCTTGTA ACAAAGACAA CGAGGCAGAA CCCGTTACAG AAGGTAATGC 200 TACCATCAGC GTGGTATTGA AGACCAGCAA TCCGAATCGT GCTTTTGGAG 250 AAGACGAATC AAAGGTGGCT AAGTTGACCG TAATGGTTTA TAATGGAGAA 300 CAGCAGGAAG CCATCAAATC AGCCGAAAAT GCGACTAAGG TTGAAGACAT 350 CAAATGTAGT GCAGGCCAAC GTACGCTGGT CGTAATGGCC AATACGGGTG 400 AAATGAAATT GGCTGGCAAG ACTCTTGCAG AGGTAAAAGC ATTGACAACT 450 GAACTGACTG CAGAAAACCA AGAGGCTGCA GGGTTGATCA TGACAGCAGA 500 GCCTGTTGAG GTAACACTTG TCGCCGGCAA TAACTATTAT GGTTATGATG 550

GATCTCAGGG AGGTAATCAG ATTTCGCAAG ATACTCCTCT TGAAATCAAA 600

CGTGTTCATG CTCGCATGGC TTTCACCGAA ATTAAAGTGC AGATGAGTCC 650

GTCTTATGTT AACAAATACA ATTTTGCCCC CGAAAACATC TATGCACTTG 700

TGGCTAAAAA GGAGTCTAAT CTATTCGGTG CTTCATTGGC AAATAGTGAT 750

GATGCTTATT TGACTGGTTC TTTGACGAAT TTCAACGGTG CTTATTCCCC 800

TGCAAACTAT ACTCATGTTG ACTGGTTGGG AAGAGACTAC ACAGAGCCTT 850

CCAATAATGC TCCACAAGGT TTCTATGTTT TGGAGAGCAC ATACGCTCAG 900

AATGCAGGTC TACGTCCTAC TATTCTATGT GTAAAAGGCA AGCTGACAAA 950

GCATGATGGT ACTCCTTTGA GTTCTGAGGA AATGACAGCT GCATTCAATG 1000

CCGGCTGGAT TGTTGCAGAC AATAATCCTA CGACCTATTA CCCTGTATTG 1050

GTAAACTTCA ACAGCAACAA CTATACTTAT GACAATGGTT ATACGCCTAA 1100

GAATAAAATT GAGCGTAACC ATAAGTATGA TATTAAGTTG ACAATTACAG 1150

GCCCCGGAAC GAATAACCCA GAGAATCCTA TCACAGAGTC TGCTCACTTG 1200

AATGTACAGT GCACTGTAGC TGAGTGGGTT CTCGTTGGTC AGAATGCTAC 1250

TTGATAATCG GCCCTCAAAC GACTAAAAAA CTTTCATAGT TTGTCTATAT 1300

CGGAAT 1306 配列番号 ： 6

配列の長さ ： 1311

配列の型 ： 核酸

鎖の数 ： 二本鎖

酉己歹 |Jの種類 ： enom i c DNA

起源

生物名 ： ボルフイ ロモナス ' ジ ンジバリ ス （ rphyromonas g i ng i va l i s)

株名 ： 0MZ409 配列の特徵

f i m A 遺伝子を含む DNA

216〜218 開始コ ドン

1260〜； 1262 終止コ ドン

配列 ：

AGCACAACAT AATCTGAACG AACTACGACG CTATATGCAA GACAATCTCT 50 AAATGGGAAA AGATTAGATT CTTAGAAAAC AATATTCACT TTTAAAACAA 100 AAACGAGATG AAAAAAACAA AGTTTTTCTT GTTGGGACTT GCTGCTCTTG 150

CTATGACAGC TTGTAACAAA GACAACGAGG CAGAACCCGT TACAGAAGGT 200

AATGCTACCA TCAGCGTGGT TTTGAAGACC AGCAATCCGA ATCGTGCTTT 250

TGGAGAAGAC GAATCAAAGG TGGCTAAGTT GACCGTAATG GTTTATAATG 300

GAGAACAGCA GGAAGCCATC AAATCAGCCG AAAATGCGAC TAAGGTTGAA 350

GACATCAAAT GTAGTGCAGG CCAACGTACG CTGGTCGTAA TGGCCAATAC 400

GGGTGCAATG GAACTGGTTG GCAAGACTCT TGCAGAGGTA AAAGCATTGA 450

CAACTGAACT GACTGCAGAA AACCAAGAGG CTACAGGTTT GATCATGACA 500

GCAGAGCCTG TTGACGTAAC ACTTGTCGCC GGCAATAACT ATTATGGTTA 550

TGATGGATCT CAGGGAGGTA ATCAGATTTC GCAGGATACT CCTCTTGAAA 600

TCAAACGTGT TCATGCTCGC ATGGCTTTCA CCGAAATTAA AGTGCAGATG 650

AGTCCGTCTT ATGTTAACAA ATACAATTTT GCCCCCGAAA ACATCTATGC 700

ACTTGTGGCT AAAAAGGAGT CTAATCTATT CGGTGCTTCA TTGGCAAATA 750

GTGATGATGC TTATTTGACT GGTTCTTTGA CGAATTTCAA CGGTGCTTAT 800

TCCCCTGCAA ACTATACTCA TGTTGACTGG TTGGGAAGAG ACTACACAGA 850

GCCTTCCAAT AATGCTCCAC AAGGTTTCTA TGTTTTGGAG AGCACATACG 900

CTCAGAATGC AGGTCTACGT CCTACTATTC TATGTGTAAA AGGCAAGCTG 950

ACAAAGCATG ATGGTACTCC TTTGAGTTCT GAGGAAATGA CAGCTGCATT 1000

CAATGCCGGC TGGATTGTTG CAGACAATAA TCCTACGACC TATTACCCTG 1050

TATTGGTAAA CTTCAACAGC AACAACTATA CTTATGACAA TGGTTATACG 1 100 CCTAAGAATA AAATTGAGCG TAACCATAAG TATGATATTA AGTTGACAAT 1150 TACAGGCCCC GGAACGAATA ACCCAGAGAA TCCTATCACA GAGTCTGCTC 1200 ACTTGAATGT ACAGTGCACT GTAGCTGAGT GGGTTCTCGT TGGTCAGAAT 1250 GCTACTTGGT AATCGACCCT CAAACGACTA AAAAACTTTC ATAGTTTGTC 1300 TATATCGGAA T 1311 配列番号 ： 7

配列の長さ ： 1318

配列の型 ： 核酸

鎖の数 ： 二本鎖

配列の種類 ： genomi c DNA

起源

生物名 ： ボルフ イ ロモナス ' ジ ンジバリ ス （porphyromonas g i ng i va l i s)

株名 ： ATCC49417

配列の特徴

f i m A 遺伝子を含む DNA

216〜218 開始コ ドン

1266〜1268 終止コ ドン

配列 ：

AGCACAACAC AATCTGAACG AACTACGACG CTATATGCAA GACAATCTCT 50 AAATGGGAAA AGATTAGATT CTTAGAAAAC AATATTCACT TTTAAAACAA 100 AAACGAGATG AAAAAAACAA AGTTTTTCTT GTTGGGACTT GCTGCTCTTG 150 CTATGACAGC TTGTAACAAA GACAACGAGG CAGAACCTGT TACAGAAGGT 200 AATGCTACCA TCAGCGTGGT ATTGAAGACC AGCAATCCGA ATCGTGCTTT 250 TGGAAATGCG GGAGACGAAG CAAAAGTGGC TAAGTTGACC GTAATGGTTT 300 ACAAGGGTGA ACAGCAGGAA GCCATCAAAT CAGCCGAAAA TGCGACTAAG 350 GTTGAAAACA TCAAATGTAG TGCAGGCCAA CGTACGCTGG TCGTAATGGC 400 CAATACGGGT GGAATGGAAT TGGCTGGCAA GACTCTTGCA GAGGTAAAAG 450

CATTGACAAC TGAACTGACT GAAGGAAACC AAGAGGCTGC AGGGTTGATC 500

ATGACAGCAG AGCCTGTTGA GGTAACACTT GTCGCCGGCA ATAACTATTA 550

TGGTTATGAT GGATCTCAGG GAGGTAATCA GATTTCGCAA GATACTCCTC 600

TTGAAATCAA ACGTGTTCGT GCCCGTATTG CGTTCACCAA GATTGAAGTG 650

ACGATGAGCC AGTCTTATGC GAACAAATAC AATTTTGCCC CCGAAAACAT 700

CTATGCACTT GTGGCTAAAA AGAAGTCTAA TCTATTCGGT GCTTCATTGG 750

CAAATAATGA TGATGCTTAT TTGACTGGTT CTTTGACGAC TTTCAACGGA 800

GCTTATACCC CTGCAAACTA TACTCATGTC GACTGGTTGG GAAGAGACTT 850

CACAGAGCCT TCCAATAATG CTCCACAAGG TTTCTATGTT TTGGAGAGCA 900

CATACGCTCA GAATGCAGGT CTACGTCCTA CTATTCTATG TATAAAAGGC 950

AAGCTGACAA AGCATGATGG TACTCCTTTG AGTTCTGAGG AAATGACAGC 1000

TGCATTCAAT GCCGGCTGGA TTGTTGCAAA CAATGATCCT ACGACCTATT 1050

ATCCTGTATT AGTGAACTTT GAGAGCAATA ATTACACCTA CACAGGTGAG 1 100

GCTGTTGAGA AAGGAAAAAT CGTTCGTAAC CATAAATTCG ACATCAACCT 1 150

GACGATCACC GGTCCTGGTA CGAATAATCC TGAAAACCCC ATTACTGAGT 1200

CTGCTAACCT CAACGTTAAT TGTGTGGTTG CTGCCTGGAA AGGTGTTGTA 1250

CAAAATGTTA TTTGGTAATC GACCCGTCAA ACGACTAAAA AACTTTCATA 1300

GTTTGTCTAT ATCGGAAT 1318 配列番号 ： 8

配列の長さ ： 1314

配列の型 ： 核酸

鎖の数 ： 二本鎖

配列の種類 ： genom i c DNA

起源

生物名 ： ボルフイ ロモナス ジ ンジノくリ ス ( Porphyromonas g i ng i va l i s) 株名 ： 6 / 26

配列の特徴

f i m A 遺伝子を含む DNA

211〜213 開始コ ドン

1270〜1272 終止コ ドン

配列 ：

AGCACAACAT AATCTGAACG AACTGCGACG CTATATGCAA GACAATCTCT 50 AAATGGAAAA AGATTCTTAG AAAACAATAT TCACTTTTAA AACAAAAACG 100 AGATGAAAAA AACAAAGTTT TTCTTGTTGG GACTTGCTGC TCTTGCTATG 150

ACAGCTTGTA ACAAAGACAA CGAGGCAGAA CCCGTTACAG AAAGTAATGC 200

TACCATCAGC GTGGTATTGA AGACCAGCAA TCCGAATCGT GCTTTTGGAA 250

ATGCGGGAGA CGAAGCAAAA GTGGCTAAAC TGACTGTAAT GGTTTACAAG 300

GGTGAGCAGC AGGAAGCCAT CAAATCAGTC GAAAATGCAA TTAAGGTTGA 350

AAACATCAAA TGTGGTGCAG GCCAACGTAC GCTGGTTGTA ATGGCCAATA 400

CGGGTGGAAT GGAATTGGCT GGCAAAACTC TTGCAGAGGT AAAAGCATTG 450

ACAACTGAAC TGACTGAAGG AAACCAAGAG GCTGCAGGGT TGATCATGAC 500

AGCAGAGCCT GTTGAGGTAA CACTTGTCGC CGGCAATAAC TATTATGGTT 550

ATGATGGATC TCAGGGAGGT AATCAGATTT CGCAAGGTAC TCCTCTTGAA 600

ATCAAACGTG TTCATGCCCG TATTGCGTTC ACCAAGATTG AAGTGACGAT 650

GAGCCAGTCT TATGCGAACA AATACAATTT TGCCCCCGAA AACATCTATG 700

CACTTGTGGC TAAAAAGAAG TCTAATCTAT TCGGTGCTTC ATTGGCAAAT 750

AGTGATGATG CTTATTTGAC TGGTTCTTTG ACGACTTTCA ACGGTGCTTA 800

TTCCCCTGCA AACTATACTC ATGTTGACTG GTTGGGAAGA GACTACACAG 850

AAATAGGAGC CGCTACTGTT AATACTCCGA AGGGATTCTA TGTCTTGGAG 900

AGCACATACG CTCAGAATGC AGGTCTACGT CCTACTATTC TATGTGTAAA 950

AGGCAAGCTG ACAAAGCATG ATGGTACAGC TTTGAGTTCT GAGGAAATGA 1000

CAGCTGCATT CAATGCCGGC TGGATTGTTG CAAACAATGA TCCTACGACC 1050 TATTATCCTG TATTAGTGAA CTTTGAGAGC AATAATTACA CCTACACAGG 1 100 TGAGGCTGTT GAGAAAGGAA AAATCGTTCG TAACCATAAG TTCGACATCA 1 150 ACCTGACGAT CACCGGTCCT GGCACGAATA ATCCTGAAAA CCCCATTACT 1200 GAGTCTGCTA ACCTCAACGT TAATTGTGTG GTTGCTGCAT GGAAAGGTGT 1250 TGTACAAAAT GTTATTTGGT AATCAGCTCA TCAAAAAACT TTCATAGTTT 1300 GTCTATATCG GAAT 1314 配列番号 ： 9

配列の長さ ： 1319

配列の型 ： 核酸

鎖の数 ： 二本鎖

配列の種類 ： genom i c DNA

起源

生物名 ： ポルフ ィ ロモナス ジ ンジバリ ス ( Porphyromonas g i ng i va l i s)

株名 ： HG564

配列の特徴

f i m A 遺伝子を含む DNA

187〜189 開始コ ドン

1267〜1269 終止コ ドン

配列 ：

AGCACAACAC AATCTGAACG AACTGCGACG CTATATGCAA GACAATCTCT 50 AAATGGAAAA AGATTCTTAG AAAACAATAT TCACTTTTAA AACAAAAACG 100 AGATGAAAAA AACAAAGTTT TTCTTGTTGG GACTTGCTGC TCTTGCTATG 150 ACAGCTTGTA ACAAAGACAA CGAGGCAGAA CCCATTGTGG AAACTGACGC 200 TACTGTTAGT TTCATAATTA AGAGCGGAGA GGGGCGTGCT GTAGGCGATG 250 GCCTTGCAGA TGCCAAGATC ACAAAACTCA CCGCCATGGT CTATGCAGGT 300 CAAATTCAAG AAGGGATTAA GACAGTGGAA GAGGCCGACG GAGTTCTTAA 350 AGTAGAAGGA ATTCCGTGTA AATCAGGAGC CAACCGTGTC CTCGTCGTTG 400

TAGCTAATCA CAATTATGAG CTTACCGGTA AAAGTTTGAA TGAGGTTGAG 450

GCCTTGACGA CTTCTTTGAC AGCTGAAAAC CAAAATGCCA AAAACTTGAT 500

CATGACAGGT AAGTCAGCAG CTTTTACAAT CAAGCCGGGC TCCAACCACT 550

ATGGCTATCC TGATGGGACT ACATCCGACA ACCTTGTTTC TGCTGGAACT 600

CCTCTTGCCG TTACTCGCGT GCATGCCGGT ATCTCATTCG CAGGAGTAGA 650

GGTAAATATG GCTACACAGT ATCAAAACTA CTACTCTTTT AACCCAGCTG 700

ACGCTAAAAT CGCAGCCCTT GTCGCAAAGA AAGATTCTAA GATTTTCGGC 750

AATTCTTTGG TCTCAAACAC TAATGCATAT TTGTATGGAG TCCAAACGCC 800

TGCCGGTCTT TACACTCCGG ATGCTGCAGG AGAAACATAC GAATTGGAGG 850

CGTCTTTGAA TACGAATTAT GCTGTAGGTG CCGGCTTCTA TGTGCTGGAA 900

AGTAAATATG ATGCAAGCAA CGAGCTTCGT CCGACGATCC TTTGTATCTA 950

TGGAAAGCTG CTCGATAAGG ACGGCAACCC TCTCACGGAA CCAGCCTTGA 1000

CGGATGCTAT AAATGCCGGA TTCTGCGACG GAGATGGCAC GACTTACTAT 1050

CCGGTATTGG TGAACTATGA TGGCAATGGC TACATCTATT CAGGTGCTAT 1100

TACCCAAGGA CAAAACAAAA TCGTTCGCAA CAACCACTAC AAGATTACGC 1 150

TGAACATCAC CGGCCCCGGT ACGAATACTC CTGAAAATCC TCAACCGGTA 1200

CAAGCCAACC TGAATGTTAC TTGCCAAGTT ACACCTTGGG TTGTTGTTAA 1250

TCAGGCTGCT ACTTGGTAAT CGACCCGTCA AACGACTAAA AAACTTTCAT 1300

AGTTTGTCTA TATCGGAAT 1319 配列番号 ： 10

配列の長さ ： 347

配列の型 ： アミ ノ酸

トポロジー 直鎖状

配列の種類 タ ンパク

配列の特徴 ボルフイ ロモナス ' ジンジノくリ ス 381株のフィ ンブ リ リ ンのァ ミ ノ酸配列 8 tZ

dsv ¾IV 3 usv sA uio "91 sAq Χΐ9 JAI Ι¾Λ sAQ naq 0 Z 022

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250 255 260

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265 270 275

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280 285 290

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295 300 305

Thr Asn Asn Pro Glu Asn Pro He Thr Glu Ser Ala His Leu Asn

310 315 320

Val Gin Cys Thr Val Ala Glu Trp Val Leu Val Gly Gin Asn Ala

325 330 335

Thr Trp

配列番号 ： 11

配列の長さ ： 347

配列の型 ： ア ミ ノ酸

トポロ ジー ： 直鎖状

配列の種類 ： タ ンパク

配列の特徵 ： ボルフイ ロモナス ' ジンジバリ ス ATCC33277株のフ

イ ンプリ リ ンのァ ミ ノ酸配列

配列 ：

Met Val Leu Lys Thr Ser Asn Ser Asn Arg Ala Phe Gly Val Gly

-10 -5 -1 1 5

Asp Asp Glu Ser Lys Val Ala Lys Leu Thr Val Met Val Tyr Asn

10 15 20

Gly Glu Gin Gin Glu Ala lie Lys Ser Ala Glu Asn Ala Thr Lys

25 30 35

Val Glu Asp lie Lys Cys Ser Ala Gly Gin Arg Thr Leu Val Val

40 45 50

Met Ala Asn Thr Gly Ala Met Glu Leu Val Gly Lys Thr Leu Ala

55 60 65

Glu Val Lys Ala Leu Thr Thr Glu Leu Thr Ala Glu Asn Gin Glu

70 75 80 0 2

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235 340 245

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250 255 260

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265 270 275

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295 300 305

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310 315 320

Val Gin Cys Thr Val Ala Glu Trp Val Leu Val Gly Gin Asn Ala

325 330 335

Thr Trp

配列番号 ： 13

配列の長さ ： 348

配列の型 ： ア ミ ノ酸

トポロジー ： 直鎖状

配列の種類 ： タ ンパク

配列の特徴 ： ボルフイ ロモナス ' ジンジノ <リ ス HW24D1株のフィ ン プリ リ ンのァ ミ ノ酸配列

配列 ：

Met Val Leu Lys Thr Ser Asn Pro Asn Arg Ala Phe Gly Glu Asp

-10 -5 -1 1 5

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10 15 20 ε 9

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Gly Thr Asn Asn Pro Glu Asn Pro He Thr Glu Ser Ala His Leu

310 315 320

Asn Val Gin Cys Thr Val Ala Glu Trp Val Leu Val Gly Gin Asn

325 330 335

Ala Thr Trp 配列番号 ： 14

配列の長さ ： 347

配列の型 ： アミ ノ酸

トポロジー 直鎖状

配列の種類 タ ンパク

配列の特徵 ポルフ ィ ロモナス · ジ ンジノくリ ス 0MZ314株のフ ィ ン

プリ リ ンのァミ ノ酸配列

配列 ：

Met Val Leu Lys Thr Ser Asn Pro Asn Arg Ala Phe Gly Glu Asp

-10 -5 - 1 1 5

Glu Ser Lys Val Ala Lys Leu Thr Val Met Val Tyr Asn Gly Glu

10 15 20 Gin Gin Glu Ala lie Lys Ser Ala Glu Asn Ala Thr Lys Val Glu

25 30 35 Asp lie Lys Cys Ser Ala Gly Gin Arg Thr Leu Val Val Met Ala

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55 60 65 Lys Ala Leu Thr Thr Glu Leu Thr Ala Glu Asn Gin Glu Ala Ala

70 75 80 Gly Leu lie Met Thr Ala Glu Pro Val Glu Val Thr Leu Val Ala

85 90 95 Gly Asn Asn Tyr Tyr Gly Tyr Asp Gly Ser Gin Gly Gly Asn Gin

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nio uiO usv nio Jiu naq nio jqi sAi ΐ¾Λ nio 9IO/Mdf/JL3d ZI90I/S6 OAV Gin Asn Val lie Trp

配列番号 ： 17

配列の長さ ： 353

配列の型 ： ア ミ ノ酸

トポロジー 直鎖状

配列の種類 タ ンパク

配列の特徴 ボルフイ ロモナス ' ジンジノ《リ ス 6ノ 26株のフィ ン プリ リ ンのァ ミ ノ酸配列

配列 ：

Met Val Leu Lys Thr Ser Asn Pro Asn Arg Ala Phe Gly Asn Ala -10 -5 -1 1 5

Gly Asp Glu Ala Lys Val Ala Lys Leu Thr Val Met Val Tyr Lys

10 15 20

Gly Glu Gin Gin Glu Ala lie Lys Ser Val Glu Asn Ala lie Lys

25 30 35

Val Glu Asn lie Lys Cys Gly Ala Gly Gin Arg Thr Leu Val Val

40 45 50

Met Ala Asn Thr Gly Gly Met Glu Leu Ala Gly Lys Thr Leu Ala

55 60 65

Glu Val Lys Ala Leu Thr Thr Glu Leu Thr Glu Gly Asn Gin Glu

70 75 80

Ala Ala Gly Leu lie Met Thr Ala Glu Pro Val Glu Val Thr Leu

85 90 95

Val Ala Gly Asn Asn Tyr Tyr Gly Tyr Asp Gly Ser Gin Gly Gly

100 105 110

Asn Gin lie Ser Gin Gly Thr Pro し eu Glu He Lys Arg Val His

115 120 125

Ala Arg lie Ala Phe Thr し ys lie Glu Val Thr Met Ser Gin Ser

130 135 140

Tyr Ala Asn Lys Tyr Asn Phe Ala Pro Glu Asn lie Tyr Ala Leu

145 150 155

Val Ala Lys Lys Lys Ser Asn Leu Phe Gly Ala Ser Leu Ala Asn

160 165 170 Ser Asp Asp Ala Tyr Leu Thr Gly Ser Leu Thr Thr Phe Asn Gly

175 180 185

Ala Tyr Ser Pro Ala Asn Tyr Thr His Val Asp Trp Leu Gly Arg

190 195 200

Asp Tyr Thr Glu He Gly Ala Ala Thr Val Asn Thr Pro Lys Gly

205 210 215

Phe Tyr Val Leu Glu Ser Thr Tyr Ala Gin Asn Ala Gly Leu Arg

220 225 230

Pro Thr He Leu Cys Val Lys Gly Lys Leu Thr Lys His Asp Gly

235 240 245

Thr Ala Leu Ser Ser Glu Glu Met Thr Ala Ala Phe Asn Ala Gly

250 255 260

Trp He Val Ala Asn Asn Asp Pro Thr Thr Tyr Tyr Pro Val Leu

265 270 275

Val Asn Phe Glu Ser Asn Asn Tyr Thr Tyr Thr Gly Glu Ala Val

280 285 290

Glu Lys Gly Lys lie Val Arg Asn His Lys Phe Asp lie Asn Leu

295 300 305

Thr lie Thr Gly Pro Gly Thr Asn Asn Pro Glu Asn Pro lie Thr

310 315 320

Glu Ser Ala Asn Leu Asn Val Asn Cys Val Val Ala Ala Trp Lys

325 330 335

Gly Val Val Gin Asn Val He Trp

340

配列番号 ： 18

配列の長さ ： 360

配列の型 ： アミ ノ酸

トポロジー 直鎖状

配列の種類 タンパク

配列の特徴 ボルフ イ ロモナス ' ジ ンジバリ ス HG564株のフ ィ ン プリ リ ンのァミ ノ酸配列

配列 ：

Met Glu Thr Asp Ala Thr Val Ser Phe lie lie Lys Ser Gly Glu

-15 - 10 -5 ΐ g

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270 275 280

Tyr Ser Gly Ala lie Thr Gin Gly Gin Asn Lys lie Val Arg Asn

285 290 295

Asn His Tyr Lys lie Thr Leu Asn lie Thr Gly Pro Gly Thr Asn

300 305 310

Thr Pro Glu Asn Pro Gin Pro Val Gin Ala Asn Leu Asn Val Thr

315 320 325

Cys Gin Val Thr Pro Trp Val Val Val Asn Gin Ala Ala Thr Trp 330 335 340 配列番号 ： 19

配列の長さ ： 30

配列の型 ： 核酸

トポロジー ： 直鎖状

配列の種類 ： 合成 DNA

配列 ：

AATTGGATCC GCGCAGCAAG GCCAGCCCGG 30 配列番号 ： 20

配列の長さ ： 30

配列の型 ： 核酸

トポロジー ： 直鎖状

配列の種類 ： 合成 DNA

配列 ：

AGAGGGATCC GAGCGAACCC CGCTCCCTGT 30 配列番号 ： 21

配列の長さ ： 23

配列の型 ： アミ ノ酸

トポロジー ： 直鎖状

配列の種類 ： ハイポセティ カル 配列の特徴 ：

X 0 1 = Asn又は Lys； X。₂= Ala又は Val ； X。₃= Thr又は lie ; X。₄= Asp又は Asn ; X。₅= Ser又は Gly

配列 ：

Xo i Gly Glu Gin Gin Glu Ala lie Lys Ser X。₂ Glu Asn Ala X₀₃

5 10 15

Lys Val Glu X₀4 lie Lys Cys X₀ s

20

配列番号 ： 22

配列の長さ ： 29

配列の型 ： ア ミ ノ酸

トポロジー ： 直鎖状

配列の種類 ： ハイポセティカル

配列の特徴 ：

X 0 1 = Asp又は Asn ; X。₂= Ser又は Gly ; X。₃ = Ala， Glu又 は G ； X 0 4 = Glu又は Lys ; X。₅= Val又は Ala

配列 ：

Glu Xo i lie Lys Cys X₀₂ Ala Gly Gin Arg Thr Leu Val Val Met

5 10 15

Ala Asn Thr Gly Xo ₃ Met X₀₄ Leu X₀₅ Gly Lys Thr Leu Ala

20 25

配列番号 ： 23

配列の長さ ： 31

配列の型 ： ア ミ ノ酸

トポロジー ： 直鎖状

配列の種類 ： ハイポセティ カル

配列の特徵 ：

X 0. = Val又は Ala ; X。₂= Ala又は Glu ; X。₃= Glu又は Gly 配列 ： Xo i Gly Lys Thr Leu Ala Glu Val Lys Ala Leu Thr Thr Glu Leu

5 10 15

Thr Xo 2 Xo 3 Asn Gin Glu Ala Ala Gly Leu lie Met Thr Ala Glu

20 25 30

Pro

配列番号 ： 24

配列の長さ ： 13

配列の型 ： アミ ノ酸

トポロジー ： 直鎖状

配列の種類 ： ハイポセティ カル

配列の特徴 ：

X 0. = Asn又は Ser； X。₂ = Thr, Asp又は Lys ; X。₃ = Ala， Ser又は Asp ; X 0 4 = Gin又は Ala ; X ₀ s = Asn又は Ser 配列 ：

Gin Gly Phe Tyr Val Leu Glu X_{0 1} X_{0 2} Tyr X_{0 3} Xo ₄ Xo ₅

5 10 配列番号 ： 25

配列の長さ ： 18

配列の型 ： ア ミ ノ酸

トポロジー ： 直鎖状

配列の種類 ： ハイポセティカル

配列の特徵 ：

X 0 1 = Gly又は Pro； X 0 2 = Thr又は Lys； X。₃= Phe又は

Tyr； X 0 4 = Asn, Glu又は Asp ; X。₅= Ser又は Gly ; X。₆ = Asn又は Gly ; X。₇= Thr又は lie

配列 ：

Xo i X o 2 Thr Tyr Tyr Pro Val Leu Val Asn X_{0 3} X_{0 4} X _{0 5} Asn X _{0 6}

5 10 15

Tyr X o 7 Tyr 配列番号 ： 26

配列の長さ ： 34

配列の型 ： アミ ノ酸

トポロジー ： 直鑪状

配列の種類 ： ハイポセティカル

配列の特徴 ：

X 0 1 = Ser又は Asn ; X。₂= Asn又は Gly

配列 ：

Ser Asn Asn Tyr Thr Tyr Asp X₀ i X₀₂ Tyr Thr Pro Lys Asn Lys

5 10 15 lie Glu Arg Asn His Lys Tyr Asp lie Lys Leu Thr lie Thr Gly

20 25 30

Pro Gly Thr Asn

配列番号 ： 27

配列の長さ ： 37

配列の型 ： アミ ノ酸

トポロジー ： 直鎖状

配列の種類 ： ハイポセティ カル

配列の特徴 ：

X 0. = Asn又は Thr ; X。₂= lie又は Gin X 0 3 = His又は Asn 配列 ：

He Thr Gly Pro Gly Thr Asn X₀. Pro Glu Asn Pro X。₂ Thr Gl"

5 10 15

Ser Ala X₀₃ Leu Asn Val Gin Cys Thr Val Ala Glu Trp Val Leu

20 25 30

Val Gly Gin Asn Ala Thr Trp

35

配列番号 ： 28

配列の長さ ： 17

配列の型 ： ア ミ ノ酸 トポロジー ： 直鎖状

配列の種類 ： ハイポセティ カル

配列の特徴 ：

X 0. = Thr又は Asn ; X。₂= Ser又は Thr ; X ₀₃= Thr又は Ala 配列 ：

Thr Gly Ser Leu Thr X₀₁ Phe Asn Gly Ala Tyr X₀₂ Pro Ala Asn

5 10 15

Tyr X o 3 配列番号 ： 29

配列の長さ ： 18

配列の型 ： アミ ノ酸

トポロジー ： 直鎖状

配列の種類 ： 合成べプチ ド

配列 ：

Glu Leu Thr Ala Glu Asn Gin Glu Ala Ala Gly Leu lie Met Thr

5 10 15

Ala Glu Pro 配列番号 ： 30

配列の長さ ： 14

配列の型 ： アミ ノ酸

トポロジー ： 直鎖状

配列の種類 ： 合成べプチ ド

配列 ：

Gly Ser Leu Thr Thr Phe Asn Gly Ala Tyr Ser Pro Ala Asn

5 10 配列番号 ： 31

配列の長さ ： 15 配列の型 ： アミ ノ酸

トポロジー ： 直鎖状

配列の種類 ： 合成べプチ ド

配列 ：

Thr Tyr Tyr Pro Val Leu Val Asn Phe Asn Ser Asn Asn Tyr Thr

5 10 15 配列番号 ： 32

配列の長さ ： 17

配列の型 ： アミ ノ酸

トポロジー ： 直鎖状

配列の種類 ： 合成べプチ ド

配列 ：

Pro Gly Thr Asn Asn Pro Glu Asn Pro lie Thr Glu Ser Ala His

5 10 15

Leu Asn

Claims

請 求 の 範 囲

1 . 配列番号 ： 2〜 9のいずれかに示される塩基配列中に含有さ れる、 ;、ノレフ イ ロモナス ' ジンジノくリ ス (Porphyromonas gingival is) ATCC33277, BH18/10, HW24D- 1 ， 0MZ314, 0MZ409, ATCC49417, 6 /26または HG564株のフイ ンプリ リ ンタンパクをコー ドする DNA。

2. 配列番号 1 〜 9 に示す塩基配列中の少なく とも 2種類の塩基 配列間で 50%以上の塩基配列の相同性を有する、 少なく とも 10個の 連続する塩基から成る領域を構成するいずれかの塩基配列を有する 隱。

3. 前記相同性が 70%以上である、 請求項 2 に記載の DNA。

4. 前記相同性が 90%以上である、 請求項 3 に記載の DNA。

5. 前記連続する塩基から成る相同性領域の長さが 30塩基以上で ある請求項 4 に記載の DNA。

6. 配列番号 1 〜 9 に示す塩基配列中の少なく とも 2種類の塩基 配列間で 50%未満の塩基配列の相同性を有する、 少なく とも 10個以 上の連続する塩基から成る領域を構成するいずれかの塩基配列を有 する DNA。

7. 前記相同性が 30%以下である、 請求項 6 に記載の DNA。

8. 配列番号 ： 11〜18に示されるァミ ノ酸配列を有するボルフィ ロモナス · ジンジノくリ スのフ ィ ンブリ リ ンタ ンパク。

9. 配列番号 ： 10〜18に示すァミ ノ酸配列中の少なく とも 2種類 のァ ミ ノ酸配列間で 50%以上のァ ミ ノ酸配列の相同性を有する、 少 なく とも 5個以上の連続するア ミ ノ酸から成る領域を構成するいず れかのアミ ノ酸配列を有するペプチ ド。

10. 前記の相同性が 70%以上である、 請求項 9 に記載のペプチ ド。

11. 前記の相同性が 90%以上である、 請求項 10に記載のペプチ ド。

12. 配列番号 ： 10〜18に示すァ ミ ノ酸配列中の少なく とも 2種類 のアミ ノ酸配列間で 50 %未満のア ミ ノ酸配列の相同性を有する、 5 個以上の連続するァミ ノ酸から成る領域を構成するいずれかのァミ ノ酸配列を有するぺプチ ド。

13. 前記相同性が 40 %未満である、 請求項 12に記載のペプチ ド。

14. 請求項 1 〜 7のいずれか 1 項に記載の DNAを含んだ発現べク ター。

15. 請求項 14に記載の発現ベクターを有する宿主。

16. 配列番号 ： 21〜28に示すァ ミ ノ酸配列のいずれかにおいて少 なく とも 5個連続するアミ ノ酸を含んで成るペプチ ド。

17. 配列番号 ： 29〜32に示すァミ ノ酸配列のいずれかを有するぺ プチ ド。

18. 請求項 9〜 13のいずれか 1項に記載のぺプチ ドとキヤ リヤー タンパクとが結合して成る複合体。

19. 請求項 16に記載のぺプチ ドとキヤ リヤータンパクとが結合し て成る複合体。

20. 請求項 17に記載のぺプチ ドとキヤ リヤータンパクとが結合し て成る複合体抗原。

21. 請求項 8〜13及び 16〜19のいずれか 1項に記載のぺプチ ド又 はタンパクに対する抗体。

22. 請求項 21に記載の抗体を含んで成る歯周疾患予防、 改善剤。