WO1996005233A1

WO1996005233A1 - Low-molecular-weight acetylated hyaluronic acid, emollient, and processes for producing and purifying the acid

Info

Publication number: WO1996005233A1
Application number: PCT/JP1995/001613
Authority: WO
Inventors: Takashi Oka; Toshio Yanaki; Michihiro Yamaguchi
Original assignee: Shiseido Co Ltd
Current assignee: Shiseido Co Ltd
Priority date: 1994-08-11
Filing date: 1995-08-11
Publication date: 1996-02-22
Anticipated expiration: 1997-02-11
Also published as: US5679657A; EP0725083A4; DE69524197D1; DE69524197T2; EP0725083B1; EP0725083A1

Description

明細書低分子量ァセチル化ヒアルロン酸、皮膚柔軟化剤および

その製造方法、精製方法

[技術分野]

本発明は低分子量ァセチル化ヒアル口ン酸、皮膚柔軟化剤およびその製造方法. 精製方法、特にヒアルロン酸のアルコール性水酸基にァセチル基を高率で結合させたァセチル化ヒアル口ン酸の改良に関する。

[背景技術]

ヒアルロン酸は生体由来の高分子物質であり、高い増粘性、粘弾性、曳糸性等の特異的な物性を有しており、しかも生体適合性が高いことから各種分野での応用が期待されている。

特にヒアルロン酸の極めて高い保湿性は特筆すべき物性であり、各種皮膚外用剤などに保湿剤として用いられ、さらに有機溶媒系での增粘剤、油性基剤中での各種乳化安定剤、リボソームの被覆強化剤、生体への埋め込み基剤、カプセル基剤などへの用途が期待されている。

しかしながら、前述したようにヒアルロン酸は各種特異な物性を有しており、その一部の特性に起因して、ヒアルロン酸の大量の添加は製品の使用性を著しく害する場合があった。

また、ヒアルロン酸は強水溶性であり、このため有機溶媒系あるいは油性基剤中での保湿剤としては使用できないものであった。

[発明の開示 ]

本発明は前記従来技術の課題に鑑みなされたものであり、その第一の目的はヒアル口ン酸の本来有する機能を保持し、各種特異な物性を有するァセチル化ヒアルロン酸の安価な製造方法、精製方法を提供し、さらに第二の目的はヒアルロン酸の有する曳糸性などの欠点を改善しつつ、優れた皮朦柔軟化効果を発揮し得る低分子量ァセチル化ヒアルロン酸を提供することにある。

前記目的を達成するために本発明者が鋭意検討した結果、無水齚酸および濃硫酸の存在下でヒアルロン酸を反応させることにより安価にァセチル化ヒアル口ン酸の製造が可能となり、しかも特定の極限粘度及びァセチル基置換数、即ち、特定の分子量及び疎水性を有するァセチル化ヒアル D ン酸が、曳糸性の点で大幅に改善され、しかも高度の皮庵柔軟化効果を発揮し得ることを見いだし、本発明を完成するに至った。

すなわち、本出願にかかる低分子量ァセチル化ヒアルロン酸は、下記特性を有することを特徴とする。

極限粘度： 5 0 - 2 0 0 c m ³ / g

ァセチル基置換数： 2 . 6 〜 3 . 6 個（ただし、 N - ァセチル基は含まず）なお、本願明細書において極限粘度は 2 5 ° (：、 p H 7 . 4 のリン酸緩衝液中で測定したものを意味する

また、本出願の皮膚柔軟化剤は、低分子量ァセチル化ヒアルロン酸を主成分とする。

また、本出願にかかるァセチル化ヒアルロン酸の製造方法は、粉末状ヒアル口ン酸を無水酢酸溶媒に懸濁し、さらに濃硫酸を加えてァセチル化することによりァセチル化ヒアルロン酸を得ることを特徴とする。

前記方法において、無水酢酸溶媒には齚酸が混合され、酢酸：無水酸酸の混合比は 1 ： 4 ~ 1 ： 1 であることが好適である。この場合、ァセチル化率の高い高度ァセチル化ヒアル口ン酸が得られる。

また、無水舴酸溶媒には酢酸が混合され、酢酸：無水酸酸の混合比は 2 ： 1 〜 4 ： 1 であることが好適である。この場合、ァセチル化の進行が緩和となり、ァセチル化率の微調整が容易である。

また、溶媒に対し濃硫酸は 2 〜 7 容量％添加させることが好適である。

一方、本発明にかかるァセチル化ヒアルロン酸の精製方法は、粗ァセチル化ヒアルロン酸をアセトン水溶液に添加し、乳酸ナトリウムを加えて溶解させ、さらに高濃度アセトンを加えて高純度ァセチル化ヒアルロン酸を得ることを特徴とする。

なお、前記乳酸ナトリウムはアセトン水溶液に対し、 1 ~ 3重量％添加されることが好適である。

また、前記製造方法により得られた粗ァセチル化ヒアルロン酸に対して、前記精製方法を適用することが好適である。以下、本発明の榷成についてさらに詳細に説明する。

本発明にかかる低分子 Sァセチル化ヒアルロン酸は、下記構造式 1 に示すような構造を有する。

R ： COCH₃ (Ac) or H

本発明にかかる低分子量ァセチル化ヒアルロン酸を皮膚柔軟化剤として用いる場合、分子量を極限粘度で示すと、前述したとおり 5 0〜 2 0 0 cm ^s /gであることが必要である。なお、ァセチル化ヒアルロン酸の分子量を直接明示することは困難であるので、ここでは極限粘度を用いている。

極限粘度が 5 0 cm ^s / g以下であると、ァセチル化ヒアル D ン酸による皮膚柔軟化作用が得られにくくなる。また、 2 0 0 cm ³ /g以上であると、ァセチル化によっても曳糸性などの好ましくない物性を十分に抑制することができない。

また、ァセチル化の程度を、ァセチル基置換数で示すと、 2 . 6個以上 3 . 6 個以下であることが好ましい。なお、ヒアルロン酸には前記構造式 1 に示す通り緣り返し単位中 4 個のアルコール性水酸基が存在するが、これらのうち何個がァセチル基で置換されたかをァセチル基置換数としてここでは用いている。

ァセチル基置換数が 2 . 6個未満であると疎水性の付与が不十分となる傾向にある。また、 3 . 6 個を越えると、親水性の低下、使用性の悪化などが生じることがある。

なお、たとえば特開平 3 - 1 4 3 5 4 0 号公報には、ヒアルロン酸の緣り返し単位にァセチル化などのァシル基を導入した乳化安定剤が示されている。しかしながら、このヒアルロン酸誘導体は修飾率がきわめて低く、ァシル基 Z N - ァセチル基の比率が数分の 1 以下である。すなわち、数個ないし数十個の繰り返し単位に一つのァシル基が導入されているのみであり、本発明の効果を奏することはできない。また、乳化剤として使用する場合にも、バルミトイル基等の高油性ァシル基を導入しなければ乳化剤としての機能を事実上奏することはできず、しかもピリジン系を用いるため、修飾率を高くしょうとすればヒアルロン酸の著しい分解を生じ、ヒアルロン酸の有する本来の機能を損なってしまう場合もある。また、特開平 6 - 9 7 0 7 には、高ァセチル化ヒアル口ン酸の製造方法が開示されている。この製造方法は穏和な条件で高ァセチル化率を得られる点で優れた方法であるが、他方で高価な薬剤を使用するため、より簡便で安価なァセチル化ヒアルロン酸の製造方法が求められた。また、これはむしろ高分子量のァセチルィ匕ヒアル口ン酸を指向するものであり、本発明のように低分子量ァセチル化ヒアルロン酸に高い皮膚柔軟化作用などが存在することを示唆するものではない。本発明にかかるァセチル化ヒアルロン酸は、下記のように製造されることが好適である。

すなわち、粉末状ヒアルロン酸を無水^酸溶媒に懸濁し、さらに濃硫酸を加えてァセチル化する。

この際に、無水酢酸溶媒には酢酸が混合され、齚酸：無水酢酸の混合比は 1 ： 4 〜 1 ： 1 であることが好適である。この場合、ァセチル化率の高い低分子量ァセチル化ヒアル口ン酸が得られる。

また、酢酸：無水酢酸の混合比が 2 ： 1 ~ 4 ： 1 である場合には、ァセチル基置換度を微妙に調節することができる。また、溶媒に対して濃硫酸は 2 〜 7容量％添加することが好適である。

一方、本発明において特徴的なァセチル化ヒアル口ン酸を精製するためには、粗ァセチル化ヒアル口ン酸をァセ卜ン水溶液に添加し、乳酸ナトリゥムを加えて溶解させ、さらにアセトンを加えることにより、高純度ァセチル化ヒアルロン酸を得ることができる。

なお、前記乳酸ナトリウムはアセトン水溶液に対し、 1 〜 3 重量％添加することが好適である。

本発明において、ヒアルロン酸とは、ヒアルロン酸及びヒアルロン酸塩を意味し、各種分子量のものを用いることができる。

又、本発明にかかるァセチル化ヒアルロン酸の製造方法において、ヒアルロニダ一ゼ等の酵素処理により、オリゴヒアルロン酸から分子量 1 0 , O O O kd以上におよぶ広範囲のァセチル化率ヒアル口ン酸を得ることができ、又エステル化反応時間を変えることにより修飾化率を変更することができる。

また、本発明にかかるヒアルロン酸の精製方法において、乳酸ナトリウムはその塩析効果によりァセチル化ヒアルロン酸を析出させる目的で添加される。即ち, 例えばァセチル化ヒアル口ン酸の溶解可能な 8 0 %ァセトン水溶液に予め乳酸ナトリウムを溶解させておく。さらにアセトンを添加してアセトンを 9 2 %まで上昇させると、前記ァセチル化ヒアルロン酸がゲル状沈殿として析出する。この塩祈に利用する塩類に関して、酢酸ナトリウム、クェン酸 3 ナトリウム、グルタミン酸ナトリウム、塩化ナトリウム、ピロリドンカルボン酸ナトリウム、酒石酸ナトリウム、グリシン、硫酸マグネシウム、塩化カリウムを検討した結果、酢酸ナ卜リゥムには多少の塩析効果が認められたが、他の物にはほとんど効果が認められず、一方で乳酸ナトリゥムには極めて良好な効果が認められた。

本発明にかかる精製方法は、前記製造方法で製造したァセチル化ヒアル口ン酸独自の溶媒溶解性を利用したものであり、特に本発明にかかる製造方法及び精製方法を組合せることにより、高純度のァセチル化ヒアルロン酸を収率よく得ることができる。

乳酸ナトリゥ厶の添加量に関しては、増量によりァセチル化ヒアル口ン酸の回収率は向上する力^ その後の工程であるエタノールによる乳酸ナトリゥムの除去が困難となる場合がある。このため、ァセトン漠度の上昇によりァセチル化ヒアルロン酸をゲル状沈殿として析出させる際のァセトンの添加量をコン卜ロールして、ァセチル化ヒアルロン酸の回収率が高く且つ乳酸ナトリゥムの残存率が低くなるような必要最小限の乳酸ナトリゥムの添加量を検討した結果、ァセ卜ン水溶液に対し 1〜 3重量％添加することを決定したのである。

以上説明したように本発明にかかるァセチル化ヒアルロン酸の製造方法は、安価にァセチル化ヒアル口ン酸を調製することができる。

また、本発明にかかるァセチル化ヒアルロン酸の精製方法は、ァセチル化ヒアノレ口ン酸の精製を効率的に進めることができる。

以上のようにして得られたァセチル化ヒアルロン酸は、粘度あるいは修飾化率等によって著しく物性が異なり、高粘度で中程度の修飾度のものは、少量の有機溶剤の添加のより安定なゲルをつくる等、その化粧品基剤、あるいはドラッグデリノ <リ一システムの基剤としてその応用が期待される。

又、高粘度で高度ァセチル化等のものや、低粘度のものは、かなりの濃度の有機溶剤に可溶であり、乳液などにも容易に配合され得る。そして、乳液等に配合された場合、使用時の滑らかさを増すなど、種々の効果を発揮することが出来る又、ァセチル化により脂溶性を増加させれば、表面が脂質膜である角質層との親和性が増し、生体適合性を向上させることが出来る。

また、本発明にかかる高ァセチル化ヒアルロン酸は、化粧品などに配合された場合にヒアルロン酸の欠点でもあった曳糸性が著しく低下するという利点を有する。

本発明の皮膚柔軟化剤には、上記構成成分の他に必要に応じ、一般的に皮膚外用剤に配合される、各種成分を配合することができる。それらの成分としては、流動パラフィン、スクヮラン、ラノリン誘導体、高級アルコール、各種エステル油、シリコーン油、ポリアルキレングリコ一ルポリエ一テル及びその他カルボン酸、オリゴエステル化合物、テルペン系炭化水素油等の油分、界面活性剤、紫外線吸収剤、紫外線散乱剤、アクリル系樹脂、シリコーン樹脂、ポリビニルピロリドン等の樹脂類、大豆タンパク、ゼラチン、コラーゲン、絹フイブ口イン、エラスチン等のタンパク又はタンパク分解物、ェチルパラベン、ブチルパラベン等の防腐剤、ピオチン、パントテン酸誘導体等の賦活剤、エタノール、イソプロパノ —ル、テトラクロジフルォロェタントルエン等の希釈剤、カルボキシビニルポリマー等の増粘剤、キレート剤、酸化防止剤、保湿剂、薬剤、香料、色剤等が挙げられる。

[図面の簡単な説明 ]

図 1 は、本発明にかかるァセチル化ヒアルロン酸の製造方法において、酢酸と無水酢酸の溶媒比を変更した場合のァセチル化反応時間と、極限粘度との関係を示した説明図、

図 2は、本発明にかかるァセチル化ヒアルロン酸の製造方法において、酢酸と無水齚酸の溶媒比を変更した場合のァセチル化反応時間を、ァセチル基置換度との関係を示した説明図、

図 3は、本発明にかかるァセチル化ヒアルロン酸の製造方法において、反応触媒量（濃硫酸）を変更した場合のァセチル化反応時間と、極限粘度との関係を示した説明図、

図 4 は、本発明にかかるァセチル化ヒアルロン酸の製造方法において、反応触媒量（濃硫酸）を変更した場合のァセチル化反応時間と、ァセチル基置換度との関係を示した説明図、

図 5 は、本発明にかかるァセチル化ヒアル口ン酸による曳糸長を示す説明図、図 6 は、本発明にかかるァセチル化ヒアル口ン酸による水分蒸発速度を示す説明図、

図 7 は、本発明にかかるァセチル化ヒアルロン酸による角質柔軟効果を示す説明図である。

[発明を実施するための最良の形態 ]

以下、本発明を実施例に基づき説明する。尚、本発明は以下の実施例に限定されるものではない。製造例 1 ァセチル化ヒアルロン酸の製造方法 3 0 0 ml容のガラス製三角コルベンに 2 0 mlの市販の特級酢酸及び 8 0 mlの無水酢酸を入れ、 6 gのバイオヒア口 1 2 (分子量約 1 2 0 O kdのヒアルロン酸，資生堂（株）製）の微細粉末を搜拌しながら少しずつ加える。続いて、 4 mlの濃硫酸をゆっくり加え、室温で 1 時間撹拌してァセチル化反応を行わせる。反応液は粘稠な白色液体となる。ここで得られたァセチル化ヒアル口ン酸の置換度を測定した結果、 3置換体であることが判明し、これを基に収率を計算した結果、 8 8. 8 %であった。精製例 1 ァセチル化ヒアルロン酸の精製方法

3 1 容のガラス製ビーカーに、あらかじめ 2 1 の精製水を入れておき、撹拌しながら上記反応液を糸状になるようにゆつくり加える。生じたァセチル化ヒアルロン酸の沈殿を分取し、沈殿はさらに 2 1 の精製水で 2回同様に洗浄する。上記沈殿を 1 1 容のガラス製ビーカーに移し、 8 0 % (v/v)アセトン水溶液 2 5 0 ml及び 5 0 %乳酸ナトリウム水溶液 9 gを加え、撹拌しながら沈殿を完全に溶解させる。続いて、アセトン 4 0 0 mlをゆっくり加え、ァセチル化ヒアルロン酸のゲル状沈殿を再沈殿させる。上記沈殿を分取した後、ホモジナイザ一を併用しェタノール 1 0 0 mlを用いて 1 0 0 0 0 rpmの速度で 1 0分間の洗浄を 2回行なう。次に. 減圧 ¾過により沈殿を分取した後、減圧乾燥し、ァセチル化ヒアルロン酸の白色粉末を得る。

この結果、ァセチル化ヒアルロン酸が 6. 5 _g (収率 8 2. 5 % ) 得られ、？ L 酸は 0. 2 %残存するものの、酢酸、硫酸は検出されなかった。

また、このものは 9 0 %エタノールに可 ¾であった。反応 ¾蜞比の影響

次に、本発明者らは前記製造例 1 と基本的に同じ条件で、前記酸と無水酢酸の比を変化させた場合のァセチル化反応時間と、生成したァセチル化ヒアル口ン酸の極限粘度、ァセチル基置換数の関係を調べた。

極限粘度との関係を図 1 に、またァセチル基置換数との関係を図 2 に示す同図より明らかなように、ァセチル基置換数は反応開始数時問、特に 1 時間以内で急激に上昇する。一方、粘度は反応開始後 5 〜 1 0時間程度まで急激に低下する。従って、高粘度のァセチル化ヒアルロン酸を得たい場合には反応時間を 1 時間ないしそれ以下とし、また低粘度のァセチル化ヒアル口ン酸を得たい場合には反応時間を 5 ~ 1 0時間の範囲で長くする事が好適である。

一方、溶媒比との関係を見ると、無水酢酸のみの場合よりも、 8ΐ酸を多少混合した方がァセチル化の進行が向上し、特に齚酸：無水酢酸が 1 ： 4 程度ではァセチル化がより効率的に進行し、齚酸：無水酢酸が 1 ： 1 程度でもほぼ無水酢酸単独の場合と同じ程度のァセチル化進行、低粘度化が認められる。

従って、ァセチル化を効率的に進行させる場合の酢酸と無水酢酸の溶媒比は、 1 ： 4 〜 1 ： 1 が特に好ましい。なお、ァセチル基置換数を低く調節する場合には、むしろ酢酸：無水酢酸を 1 ： 2 〜 4 ： 1 程度とすることで、時間の経過によるァセチル基置換数の変動が小さくなり、調節が容易となる。反応触媒量の変化

硫酸はヒアル口ン酸のァセチル化を進める際の触媒となる力、'、この反応触媒量も生成ァセチル化ヒアルロン酸の極限粘度、及びァセチル基置換数に影響を与える。前記実施例 1 と同条件において、硫酸量を変化させた場合の極限粘度との関係（図 3 ) 及びァセチル基置換数（図 4 ) との関係を調べた。

同図より明らかなように、硫酸量を増加させるとァセチル基置換度は上昇するが、対して粘度低下もほぼこれに一致することが理解される。以上のようにして得られたァセチル化ヒアルロン酸により、以下の有用性試験即ち使用性に関しては曳糸性試験を、保湿性に関しては水分蒸発度試験を、皮府柔軟性に関しては皮膚柔軟効果測定試験を行った。曳糸性試験

恒温恒温室（温度 2 5 °C , 相対湿度 5 0 % ) にて、 1 0 () m 1容のガラス製ビー力に入れた 2 %濃度の試験液中に、予め径約 7 匪のガラス棒を 1 cm浸潰しておき、ビーカーを 5 cm / m i nの速度で降下させたときの曳糸長を測定した。フ分発度試験

ォクルージョン効果（水分不揮散性）測定試験法に基づいた。

濾紙（ N o . 2 ) に 1 %澳度の試験液 0. 5 mlを均一に浸透させ、一夜室温で減圧乾燥した。次に、該濾紙を 5 mlの水を入れたプラスチックシャーレの開口部に接着し、恒温恒湿室（温度 2 5 °C, 相対湿度 5 0 % ) にて重量変化を経時的に測定した。試料溶液の重量は、一定時間放置すると時間に比例して減少する。そこで、放置時間に対して試験試料に対して試験試料の重量をプロットし、その近似直線の傾きを水分蒸発速度定数 k (mg/min) と定義し、 kからォクル一ジョン効果を評価した。即ち、 kの値が小さいほどォクルージョン効果は高いということになる。皮) g 軟化試

角質柔軟効果測定試験法に基づいた。

モルモット背部から加熱 - トリブシン処理により採取した角質層を 2 X 3 0 mm の切片とした。これを連続的動的粘弾性測定装笸（東洋精機、資生堂共社製）にセットし、弾性率をを 3分毎に経時で 3回測定し、その平均を試験液塗布前の弾性率の測定値とした。次いで試験液 2 1を角質上に塗布し 3 〜 4 mm幅に広げ、同様にして経時で 2時間測定し、試験液塗布前の弾性率に対する比で角質柔軟効果を評価した。即ち、弾性率比の値が小さいほど角質柔軟効果が高いということになる。电糸性予備試験

以下の被験液を用い、前述の通りに曳糸性試験を行った。

被検液 1 ：分子量 1 2 0万のヒアルロン酸ナトリウム（ H A ) () . 2 %水溶液被験液 2 ：極限粘度 1 7 0 cm³/g、ァセチル基置換数 2. 7個の低分子量ァセチルィ匕ヒアルロン酸ナトリウム 0. 2 %水溶液

被験液 3 ：極限粘度 1 6 0 cm³/g、ァセチル基置換数 2. 8個の低分子量ァセチルィ匕ヒアルロン酸ナトリウム 0. 2 %水溶液被験液 4 ：極限粘度 1 4 0 cm³/g、ァセチル基置換数 2. 9 個の低分子量ァセチル化ヒアルロン酸ナトリウム 0. 2 %水溶液

被験液 5 ：極限粘度 1 2 0 cm³/g、ァセチル基置換数 3. 0 個の低分子量ァセチル化ヒアルロン酸ナトリウム 0. 2 %水溶液

被験液 6 ：極限粘度 1 1 0 cm³/g、ァセチル基置換数 3. 1 個の低分子量ァセチル化ヒアルロン酸ナトリウム 0. 2 %水溶液

被験液 7 ：極限粘度 1 0 0 cm³/g、ァセチル基置換数 3. 2 個の低分子量ァセチル化ヒアルロン酸ナトリウム 0. 2 %水溶液

この結果を図 5 に示す。

同図に示したように、ヒアルロン酸ナトリウム水溶液では 2. () cm程度の曳糸長を有している。これに対して、ァセチル化ヒアル口ン酸ナトリゥム水溶液では、その長さはいずれも 0. 1 〜 0. 4 cmの範囲に収まっており、ヒアルロン酸ナ卜リウム水溶液に比較して優位に短い。これらの結果から、明らかに曳糸性が改善されたことが理解できる。

以上の結果をもとに、曳糸性の評価は曳糸長で比較することにした。水分蒸発度測定予備試験

下記被験液を用い、前述の通りにォクルージョン効果測定試験を行った。

被験液 1 ：イオン交換水

被験液 2 : 極限粘度 2 0 0 (： ³/8、ァセチル基置換数 2. 6 個の低分子量ァセチル化ヒアルロン酸ナトリウム 0. 2 %水溶液

被験液 3 ：極限粘度 1 7 0 cm³/g、ァセチル基置換数 2. 7 個の低分子量ァセチル化ヒアルロン酸ナトリウム 0. 2 %水溶液

被験液 4 ：極限粘度 1 6 0 cm³/g、ァセチル基置換数 2. 8 個の低分子量ァセチル化ヒアルロン酸ナトリウム 0. 2 %水溶液

被験液 6 ：極限粘度 1 0 0 cm³/g、ァセチル基置換数 3. 2 個の低分子量ァセチル化ヒアルロン酸ナトリウム 0. 2 %水溶液被験液 7 ：極限粘度 9 0 cm³ /g、ァセチル基置換数 3. 4 個の低分子量ァセチル化ヒアルロン酸ナトリウム 0. 2 %水溶液

被験液 8 ：分子量 9 0 万ヒアルロン酸ナトリウム（ H A ) 0. 2 %水溶液被験液 9 ： 1 %プロピレングリコール（ P G ) 水溶液

この結果を図 6 に示す。

同図より明らかなように、イオン交換水に比較して、代表的な保湿剂であるヒアルロン酸ナトリゥム、プロピレングリコールを添加した場合には保湿効果が高いが、ァセチル化ヒアルロン酸ナトリウムを用いた場合には、前記ヒアルロン酸ナトリゥム、プロピレングリコールと比較しても更に優位な保湿効果を有することが認められる。皮 I»柔軟効果予備試験

下記被験液を用い、前述の通りに皮膚柔軟効果試験を行った。

被験液 1 ：イオン交換水

被験液 2 ：極限粘度 1 2 0 cm^s/g、ァセチル基置換数 3. 0 個の低分子量ァセチル化ヒアルロン酸ナトリウム 0. 2 %水溶液

被験液 3 ：極限粘度 1 1 0 cm³/g、ァセチル基置換数 3. 1 個の低分子量ァセチル化ヒアルロン酸ナトリウム 0. 2 %水溶液

被験液 4 ：極限粘度 1 0 0 cm³/g、ァセチル基置換数 3. 2 個の低分子量ァセチル化ヒアルロン酸ナトリウム 0. 2 %水溶液

被験液 5 ：分子量 9 0 万ヒアルロン酸ナトリウム（ H A ) 0. 2 %水溶液被験液 6 ： 5 %グリセリン（ D G ) 水溶液

この結果を図 7 に示す。

同図より明らかなように、イオン交換水塗布区では、塗布後 2 () 分まで角質層への水分浸透に起因した弾性率比の低下が生じ、角質層の柔軟性が上昇する。次に、水分蒸発に起因した弾性化により 3 0 分程度経過すると塗布前の値まで回復し、さらに水分蒸発のリバウンドで若干 1 を越えた値となる。また、ヒアルロン酸ナトリゥム水溶液塗布区では、柔軟性の回復値はイオン交換水塗布区よりもやや低く若干効果があるものの、 5 0 分程度で 0. 9 程度まで回復してしまい、角質柔軟効果は低いことが理解される。これに対して、グリセリン水溶液塗布区は、イオン交換水塗布区、ヒアルロン酸塗布区と異なり 0. 7程度の値で維持しており柔軟持続作用が比較的に高い。

一方、低分子化ァセチル化ヒアル口ン酸ナトリゥム水溶液塗布区では、 1 2 0分経過時にあっても弾性率化が 0. 3程度で持続しており、極めて高い角質柔軟効果を有することが理解される。

以上の試験結果をもとに、皮虜柔軟性の評価は、角質層の柔軟性の持続効果を考慮して、塗布後 6 0分以降の弾性率比の平均値で行うこととした。

以上の各予備試験から、ァセチル化ヒアル口ン酸がヒアルロン酸等と比較し、曳糸性、保湿効果、皮膚柔軟効果などで大きく優れていることが理解される。

次に、前記ァセチル化ヒアルロン酸の製造方法の各パラメータを変更し、各種極限粘度（分子量）及びァセチル基置換数のァセチル化ヒアルロン酸を調製し、前記効果について検証を行った。

結果を次に示す。

まず、表 1 には極限粘度を約 1 2 0 cm³ として、各種ァセチル基置換数のァセチル化ヒアルロン酸を調製し、前記各効果について検証を行った結果を次の表一 1 に示す ₀

表一 1

H A A c H A 極限粘度（cm³/g) 1400 125 122 120 118 115 113 ァセチル基置換数 0 2.6 2.8 3.0 3.2 3.4 3.6 曳糸長（cm) 2.00 0.45 0.40 0.34 0.32 0.31 0.30 水分蒸発速度

定数（g/min) 2.03 2.01 1.91 1.87 1.87 1.90 2.00 弾性率比 0.92 0.89 0.61 0.32 0.26 0.54 0.87 上記表 - 1 より明らかなように、極限粘度が 1 2 0 cm³Zg程度であると、ァセチル基置換数が 2. 6個以上で曳糸性、皮膚柔軟効果、保温効果に著しい改善が認められた。しかしながら、ァセチル基置換数が 3. 6個となると、保湿性、皮朥柔軟効果が低下する傾向にあり、皮庸外用剤として用いるには難がある。

次に、本発明者らはァセチル基置換数が 3. 0程度のもので各種極限粘度のァセチル化ヒアル口ン酸を調製し、その効果について検証を行った。

表一 2

H A A c H A 極限粘度（cm³/g) 1400 200 160 120 100 80 50 ァセチル基置換数 0 2.8 2.9 3.0 3.1 3.0 3. 1 曳糸長（ cm) 2.00 1.03 0.61 0.34 0.21 0.10 0.08 水分蒸発速度

定数 (g/min) 2.03 1.99 1.89 1.87 1.85 1.94 2.01 弾性率比 0.92 0.80 0.57 0.32 0.35 0.61 0.79 以上の結果より、ァセチル基置換数が 3. 0個程度であると、極限粘度が 2 0 0 cm³/gを越えるとァセチル化によっても曳糸性の改善が不十分となる。一方、極限粘度が 5 0 cm ^s /gを割ると、保湿効果、皮廣柔軟効果などが不十分となる傾向にある。

以下、本発明にかかる化粧料のより具体的な例について説明する。

実施例 1 _ ΆΜ

( 1 ) ジプロピレングリコール 5. 0

( 2 ) グリセリン 8. 0 ( 3 ) カルボキシビ二ルポリマー 0. 1 ( 4 ) トリエタノールァミン 1 0 ( 5 ) ステアリン酸 2 0

( 6 ) ソノレビタンモノォレイン酸エステル 2 0 ( 7 ) ステアリノレアルコール 1 5 ( 8 ) ワセリン 4 0 ( 9 ) スクヮラン 0 ( 10 ) グリセロールトリー 2 -ェチルへキサン酸エステル 2. 0

( 11 ) ェチルパラベン 0. 2

U 2 ) 香料 0. 0 5

( 1 3 ) ァセチル化ヒアルロン酸

(極限粘度 1 0 2 cm ³ ，ァセチル基置換数 3. 2個） 0. 1

( 1 4 ) イオン交換水 4 7. 0 5 常法により乳液を調製した。パネルによる評価結果は、なじみの良さ、しっとりさともに良好であった。実施例 2 _保湿クリーム

( 1 ) 1， 3 ブチレングリコ一ノレ 9. 5

( 2 ) ァセチル化ヒアルロン酸

(極限粘度 7 2 cm³/g，ァセチル基置換数 3. () 個） 0. 5

( 3 ) P O E (25) セチルアルコールエーテル 3. ϋ ( 4 ) モノステアリン酸グリセリン 2. 0 ( 5 ) セチノレアノレコーノレ 3. 0 ( 6 ) 固体パラフィン 2. 0 ( 7 ) ワセリン 5. () ( 8 ) スクヮラン 1 5. 0 ( 9 ) ブチルパラベン（ 2

( 10) コンドロイチン（に 0 5

( 11) 香料 0. 】

( 12) イオン交換水 5 9. 6 5 常法により保温クリームを調製した。パネルによる評価結果は、なじみの良さしっとりさともに良好であった。実施例 3 マッサージクリーム

( 1 ) ァセチル化ヒアルロン酸

(極限粘度 1 8 () ctn³/g,ァセチル基置換数 3. 1 個） ( 2 ) P O E (20) ソルビタンモノステアリン酸エステル 2. 0

( 3 ) モノステアリン酸グリセリン 2. δ

( 4 ) ステアリン酸 2. 0

( 5 ) 水酸化カリウム 0. 1

( 6 ) セチルアルコール 3. 0

( 7 ) 固形パラフィン D 0

( 8 ) ワセリン 1 0 0

( 9 ) 流動パラフィン 3 5 0

( 10 ) イソプロピルミリステート 1 ϋ 0

( 11) ブチルパラベン ϋ . 2

( 12) ァラニン 0. 0 5

( 13) 香料 0. 1

( 14) イオン交換水 2 9. 0 5 常法によりマッサージクリームを調製した, ペネルによる評価結果は、なじみの良さ、しっとりさともに良好であった。卖施例 4 クレンジングクリーム

( 1 ) ステアリン酸 1 2. ϋ

( 2 ) ミリスチン酸 1 4. ϋ ( 3 ) ラウリン酸 5. 0 ( 4 ) ホホバ油 3. 0 ( 5 ) 水酸化カリウム 5. 0 ( 6 ) ソルビット（ 7 0 % ソルビ卜一ル水溶液） 2 0. 0 ( 7 〉ァセチル化ヒアルロン酸

(極限粘度 1 4 8 cm³ . ァセチル基置換数 3. 4 個） 2. 0

( 8 ) 1， 3 ブチレングリコーノレ 1 3. 0

( 9 ) P O E (20) グリセローノレモノステアリン酸エステノレ 2. 0

( 10 ) ァシルメチルタウリン 4. 0

( 11 ) グリシン（に（） 1 U 2 ) キレート剤適量

( 13) 香料適量

( 14) イオン交換水 2 0. 0

【 0 0 3 8 J

ぐ製法〉

( 1 ) 〜（ 4 ) 、（ 6 ) 〜（ 8 ) 及び（ 11) を加熱溶解し、 7 0 °じに保つ。 ( 14) に（ 5 ) を溶解し、前記調製物を撹拌しつつ添加する。中和反応を十分に行った後、（ 9 ) 及び（ 10) を添加し、続いて（ 12) 及び（ 13) を添加する。脱気後冷却して、クレンジングフォームを得た。

パネルによる評価結果は、なじみの良さ、しっとりさともに良好であった。実施例 5 _ヘアトニック

( 1 ) エタノール 7 5. 0

( 2 ) イオン交換水 2 3. 2

( 3 ) 経皮吸収促進剤適量 ( 4 ) 可溶化剤適量 ( 5 ) p H調製剤適量 ( 6 ) 香料適量 ( 7 ) ァセチル化ヒアルロン酸

(極限粘度 1 2 0 cm³/g.ァセチル基置換数 3. 0個） 0. 1 常法によりへアトニックを調製した。パネルによる評価効果は、ぬめりが無くなじみが良くさっぱりとした使用感であった。荬施例 6 柔軟化粧水

( 1 ) イオン交換水 9 0. 2

( 2 ) ァセチル化ヒアルロン酸

(極限粘度 1 2 0 cm ³ /g,ァセチル基置換数 3. () 個） 0. 1 ( 3 ) 1， 3 ブチレングリコール 0 . 0 ( 4 ) グリセリン 4 . () ( 5 ) 防腐剤適量

( 6 ) 緩衝剤適量

( 7 ) 界面活性剤ヒアルロン酸適量常法により柔軟化桩料を調製した。パネルによる評価効果は、ぬめりが無くなじみが良くさっぱりとした使用感であった。以上説明したように本発明にかかる低分子量ァセチル化ヒアル口ン酸は、特定の分子量及びァセチル基置換数を有するため、ヒアルロン酸の有する曳糸性を適度に抑制しつつ、優れた皮廣柔軟効果、保湿効果を発揮することができる。

Claims

請求の範囲

1 . 下記特性を有することを特徴とする低分子量ァセチル化ヒアル口ン酸。

極限粘度： 5 0 〜 2 0 0 c m Vg

ァセチル基の置換数： 2 . 6 ~ 3 . 6 個（ただし、 N - ァセチル Sは含まず）

2 . 請求項 1 記載の低分子量ァセチル化ヒアル口ン酸を主成分とする皮膚柔軟化剤。

3 . 粉末状ヒアルロン酸を無水酢酸溶媒に懸濁し、さらに S硫酸を加えてァセチル化することを特徴とするァセチル化ヒアルロン酸の製造方法。

4 . 請求項 3 記載の方法において、無水酢酸溶媒には酢酸が混合され、酢酸：無水酸酸の混合比は 1 ： 4 〜 1 ： 1 であることを特徴とする高度ァセチル化ヒアル口ン酸の製造方法。

5 . 請求項 3 記載の方法において、無水酢酸溶媒には酢酸が混合され、酢酸：無水酸酸の混合比は 2 ： 1 〜 4 ： 1 であることを特徴とする可変ァセチル化度ヒアル口ン酸の製造方法。

6 . 請求項 3 〜 5 記載の方法において、溶媒に対し硫酸を 2 〜 7 容量％添加することを特徴とするァセチル化ヒアル口ン酸の製造方法。

7 . 粗ァセチル化ヒアルロン酸をアセトン水溶液に添加し、？ L酸ナトリウムを加えて溶解させ、さらに高濃度ァセ卜ンを加えて高純度ァセチル化ヒアル口ン酸を沈殿させて得ることを特徴とするァセチル化ヒアル口ン酸の精製方法 _c

8 . 請求項 7 記載の方法において、乳酸ナトリウムはアセトン水溶液に対し 1 〜 3 重量％添加する事を特徴とするァセチル化ヒアルロン酸の精製方法。

9 . 請求項 3 〜 6 記載の方法により得られた粗ァセチル化ヒアルロン酸に対して, 請求項 5 記載の精製方法を適用することを特徴とするァセチル化ヒアルロン酸の精製方法。