WO1997049724A1 - Depsipeptides cycliques et medicaments contenant ces composes comme ingredient actif - Google Patents

Depsipeptides cycliques et medicaments contenant ces composes comme ingredient actif Download PDF

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WO1997049724A1
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Makoto Yanai
Masashi Suzuki
Norio Oshida
Koji Kawamura
Shigeru Hiramoto
Orie Yasuda
Nobuhiro Kinoshita
Akiko Shingai
Masako Kanai
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Nisshin Seifun Group Inc
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    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
    • C07K7/06—Linear peptides containing only normal peptide links having 5 to 11 amino acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
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    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
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    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
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    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
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    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides

Definitions

  • the present invention relates to a cyclic debpeptide and a medicine containing the same as an active ingredient.
  • the cyclic depsipeptide of the present invention has an apolipoprotein E production promoting action, an apolipoprotein B production suppressing action, and an apolipoprotein A1 production promoting action. Since apolipoprotein E has a repair effect on nerve damage, the cyclic debucipeptide of the present invention having an abolipoprotein E production promoting effect is useful as a drug for treating nerve damage, particularly as a drug for treating dementia.
  • Apolipoprotein B is the major apoliboprotein of low-density lipoprotein cholesterol (LDL cholesterol) known as bad cholesterol, and apolipoprotein A 1 is high-density lipoprotein cholesterol (HDL cholesterol) known as good cholesterol.
  • LDL cholesterol low-density lipoprotein cholesterol
  • HDL cholesterol high-density lipoprotein cholesterol
  • the cyclic debpeptide of the present invention which has the action of suppressing the production of avorolipoprotein B and promoting the production of avoripoprotein A1, is a major therapeutic agent for hyperlipidemia. It is useful.
  • Drugs for improving cerebral circulation and metabolism are mainly used as treatments for senile dementia, but these drugs have no effect on central nervous system breakdown, which is considered to be the cause of senile dementia. Absent. As a result c where a new type of senile dementia therapeutic agent shows no improving effect against core symptoms and memory impairment and computing power failure should say dementia, nervous system repair, and promoting growth, There is a need for drugs that inhibit central nervous system breakdown.
  • apolipoprotein E has been reported to be expressed at high levels in damaged and recovering areas of the nervous system (eg, MJ Igunalius et al., Pro. Natl. Acad. Sci. USA, 83 : 1125 (1986)), nervous system It has been suggested that it may play an important role in restoration.
  • the present inventors have conducted intensive studies to promote the production of apoliboprotein E and to provide a drug having an effect of recovering nerve damage, and as a result, have found that certain cyclic debpeptides have these effects.
  • the present invention has been completed.
  • the present invention provides a compound represented by the general formula (1)
  • R is a linear or branched alkyl group having 5 to 20 carbon atoms or a linear or branched alkoxymethyl group having 5 to 15 carbon atoms
  • A, B, D, E and F are each independently alanine, valin, leucine, isoleucine, serine, threonine, lysine, hydroquinine lysine, arginine, cystine, methionine, phenylalanine, tyrosine, triptocin.
  • W and ⁇ each independently represent an amino acid residue selected from aspartic acid, asparagine, glutamic acid and glutamic acid; m and ⁇ each independently represent 0 Or 1.
  • a free amino group, carboxyl group or ⁇ -calcium in the above amino acid residue The bamido groups may be each protected with a protecting group commonly used in peptide chemistry as their protecting group, and the amino acid residue in A, B, D, E, F, W and Z above is lysine.
  • Hydroquinysine, glutamic acid or aspartic acid means that the amino or carboxyl group which binds the peptide to an adjacent amino acid may be ⁇ -position or ⁇ -position.
  • the present invention also relates to an apolipoprotein II production promoter comprising a pharmacologically acceptable salt thereof as an active ingredient.
  • the present invention also relates to a method for promoting the production of apolipoprotein, which comprises administering the cyclic debpeptide represented by the general formula (1) or a pharmacologically acceptable salt thereof.
  • the present invention relates to a therapeutic agent for nerve damage and a therapeutic agent for dementia, comprising as an active ingredient the cyclic debpeptide represented by the general formula (1) or a pharmacologically acceptable salt thereof.
  • the present invention also relates to a method for treating nerve damage and a method for treating dementia, which comprises administering the cyclic debpeptide represented by the general formula (1) or a pharmacologically acceptable salt thereof.
  • A, B, D, E, F ⁇ W, Z, m and n are the same as described above, and R ′ has the same meaning as R above, provided that m and n are 1, A is isoleucine, B is leucine, W is aspartic acid, 'D is ballin, E is leucine, F is leucine, Z is glutamate or glutamin, and R' is the formula (CH 2 ) A group having P- (in the formula, methyl, isopropyl, sec-butyl or isobutyl, and p is an integer of 5 to 15) Or a pharmacologically acceptable salt thereof, as well as an apoliboprotein B production inhibitor, an apolipoprotein A 1 production enhancer and Related to lipemic drugs.
  • the present invention also relates to a method for inhibiting the production of apolipoprotein B1, a method for promoting apolipoprotein A1 production, and a method for administering a cyclic lipopeptide represented by the general formula (1) or a pharmacologically acceptable salt thereof.
  • the present invention relates to a method for treating lipemia.
  • the above-mentioned amino acids constituting the cyclic depeptide having formula (1) of the present invention described above may be either an L-form or a D-form.
  • A is lie or Ala
  • B is Leu, Ala, t-BuAla, -Val or Phe
  • D is Val or Ala
  • E is Leu, Ala, t-BuAla, Val or Phe
  • F is Leu, Ala.t-BuAla, Val or Phe
  • W is Asp or Glu and Z is Gin or Asn
  • m and n are 1, and R is a straight chain having 6 to 12 carbon atoms Is an alkyl or alkoxymethyl group.
  • the amino acids A, D, F, W and Z are preferably in the L-form
  • the amino acids B and E are preferably in the D-form.
  • A is lie or Ala
  • B is D-Leu ⁇ D-Ala.
  • Dt-BuAla. D-Val or D-Phe D is Val or Ala
  • E is D-Leu, D-Ala, Dt -BuAla.D-Val or D-Phe
  • F is Leu, Ala.t-BuAla.Val or Phe
  • W is Asp or Glu and Z is Gin or Asn.
  • Preferred examples of the compound of the formula (1) include a cyclic depsipeptide represented by the following general formula or a pharmacologically acceptable salt thereof.
  • R has the same meaning as described above.
  • R is a linear alkyl or alkoxymethyl group having 6 to 12 carbon atoms, m and n Is 0 or 1 and
  • R 2 represents a methyl or isopropyl group
  • R 3 is directly Combination or group-0CH 2 --3 ⁇ 4: No, q td.
  • O represents an integer of ⁇ 10
  • a w D E F_ Z m n lie D-Phe Glu Val D-Leu leu Asn
  • amino acids or amino acid residues constituting peptides are generally referred to as amino acids. According to the three-letter notation used.
  • alanine Ala
  • leucine Lue
  • isoleucine Ile
  • serine Ser, threonine-Thr
  • aspartic acid Asp
  • ⁇ sparagine Asn
  • glutamate Glu
  • Glutamine Gln
  • lysine Lys
  • cystine Cys
  • phenylalanine Phe
  • tyrosine Tyr
  • tryptophan-Trp histidine-His
  • m and n are 1, A is isoleucine, B is leucine, W is aspartic acid, D force valinine, E is leucine, F is leucine, and Z is glutamate.
  • R is the formula (Wherein the formula represents isopropyl and p represents 9), the compound having a function of inhibiting blood coagulation is described as a surfactant having a function of inhibiting blood coagulation. Arg. Biol. Chem. Vol. 33. No. 10. P.1523-1524, 1969.
  • m, n, A, B, W, D, E, F are the same as above
  • Z is glutamine
  • R represents methyl, and p represents 11
  • R is a compound having antifungal, antibacterial, and antitumor activity, Tetrahedron Letters, Vol. 35, No. 31,. 5574. 1994.
  • m, n, A, B, W, D, E, F are the same as above
  • Z is glutamine
  • R is the formula Ri- (CH 2 ) p- (where isopropyl is Is an integer of 5 to 15).
  • the compound having the group is a drug for treating hyperlipidemia, a drug for suppressing lipid secretion, It is described in WO 95Z32990 that it is useful as a poplin B production inhibitor.
  • n, A, B, W, D, E, F are the same as above, Z is glutamine, and R is the formula (Wherein R, represents isopyl pill, sec-butyl or isobutyl, and p represents 8), a compound having an endoserine antagonistic action, a vasodilator, It is described in Japanese Patent Application Laid-Open No. 7-291993 that it is useful as a hypertensive agent and the like. However, it is not described in any literature that these compounds have an apolipoprotein E production promoting effect.
  • the above-mentioned publicized platform is the cyclic depsipeptide-producing bacterium belonging to Bacillus according to the method described in International Publication No. 95Z32990 or JP-A-7-291993. Bacillus sp. No. 4691 strain (FERM BP-5101) etc.).
  • the cyclic depsipeptide of the present invention can be produced, for example, by the following general peptide synthesis technique.
  • cyclic depsipeptide represented by the general formula (1) comprises the following steps:
  • R has the above-mentioned meaning
  • R has the above-mentioned meaning
  • This compound is condensed with an amino acid B protected with an amino group to obtain a compound represented by the general formula (6)
  • Glutamate in which the amino group and the carboxyl group in the a-position are protected, or glutamin in which the amino group and the rubamide group in the a-position are protected, are condensed into a compound represented by the general formula (8)
  • X ' is a carboxyl group at the 3-position of aspartic acid, a carboxyl group at the ⁇ -position of glutamic acid, or asparagin; a carbamide group at the S-position or a carbamido at the 7-position of glutamic acid.
  • A, B, W, X, Y and R have the above-mentioned meanings).
  • A, B, W, D, E, Y, X, X ′, R and m have the above-mentioned meanings.
  • This depsipeptide is condensed with an amino acid F in which an amino group is protected, or the general formula (11) or the general formula (9) can be obtained without a condensation step of the amino acid E. Is fused with the amino acid F having an amino group protected to obtain a compound represented by the general formula (14)
  • Aspartic acid having an amino group and an amino group an aspartic acid having a protected carboxyl group at the S-position, asparagine having an amino group and a carbamide group having the S-position protected, and amino.
  • the cyclic depeptide of the general formula (II) is also prepared in advance by Some of the oligopeptides obtained can be condensed and then prepared by self-contraction.
  • This method includes, for example, the general formula (9) obtained in the first half of the stepwise condensation method described above.
  • the protecting group X of the carboxyl group of the debutpeptide is deprotected and then self-condensed to obtain a compound represented by the general formula
  • a carboxyl group at the-position of aspartic acid a carboxyl group at the-position of glutamate, and a carbamide group at the 3-position of glutamate or 7-position of glutamine.
  • a carboxyl group at the-position of aspartic acid a carboxyl group at the-position of glutamate, and a carbamide group at the 3-position of glutamate or 7-position of glutamine.
  • the cyclic depeptide prepared as described above can be converted into a pharmacologically acceptable salt, if necessary.
  • examples of the method of the condensation reaction for forming a peptide bond include a condensing agent method, an azide method, an acid anhydride method, an active ester method, a redox method, and an enzymatic method.
  • N, N-zincchlorohexylcarbodiimide (hereinafter referred to as “DCC”) or 1-ethyl-3- (3-dimethylaminopropyl) carbodiimide hydrochloride is used.
  • additives commonly used to suppress racemization such as N-hydroxysuccinimide, N-hydroxybenzotriazole (hereinafter referred to as “H0Bt”), N-hydroxy-5- Norbonene-2.3-dicarposimid It is also preferable to add benzotriazole or the like.
  • Examples of the main condensing agent used in the azide method include diphenyluric acid azide (hereinafter, referred to as “DPPA”), and cyanide getylphosphate.
  • DPPA diphenyluric acid azide
  • cyanide getylphosphate examples of the main condensing agent used in the azide method.
  • a protecting means to a carboxyl group, an amino group, an ⁇ -carbamide group and the like which are not involved in the condensation reaction by a generally known means.
  • a protecting group used for the protecting means for example, as a protecting group for an amino group, a t-butoxycarbonyl (hereinafter referred to as “Boc”) group, a benzyloxycarbonyl group, a ⁇ -meth Toxyl-benzyloxycarbonyl group or 9-fluorenylmethoxycarbonyl (hereinafter, referred to as “Fmoc”) group, and carboxyl-protecting group such as benzyloxy group or t-butoxy (hereinafter, referred to as “0tBu”) group.
  • the protective group for the terminal carbamide group include a 4,4-dimethoxybenzhydryl (hereinafter, referred to as “Mbh”) group and a trityl group.
  • the elimination reaction of the protecting group in the production process of the cyclic depsibeptide of the present invention needs to be capable of eliminating the protecting group without affecting the peptide bond, and is appropriately selected depending on the type of the protecting group to be used. do it.
  • Examples of the solvent used for each of the above-described peptide bases include anhydrous or water-containing chloroform-form, dichloromethane, ethyl acetate, N, N-dimethylformamide (hereinafter, referred to as “DMF”), Dimethyl sulfoxide, pyridine, dioxane, tetrahydrofuran (hereinafter referred to as “H1F”), dimethoxy Ethane, acetate nitrile and the like, and if necessary, two or more kinds of solvents may be used in combination.
  • this condensation reaction is carried out at a temperature in the range of about -20 to 50 ° C as in the usual case.
  • peptide synthesis can be produced by any of a liquid phase method and a solid phase method, and further, any of a column method and a batch method may be used.
  • the cyclic depsipeptide used in the present invention can be produced by a method known per se, such as a metal salt such as a sodium salt, a potassium salt, and a calcium salt; a salt with an organic amine such as an ammonium salt or a triethylamine salt; A pharmacologically acceptable salt can be formed, and these pharmacologically acceptable salts can also be used as the apolipoprotein E production promoter of the present invention.
  • a metal salt such as a sodium salt, a potassium salt, and a calcium salt
  • a salt with an organic amine such as an ammonium salt or a triethylamine salt
  • a pharmacologically acceptable salt can be formed, and these pharmacologically acceptable salts can also be used as the apolipoprotein E production promoter of the present invention.
  • 3—hydroxy mono- or long-chain fatty acid of the general formula (2) as a starting material used for the synthesis of the cyclic debutpeptide represented by the general formula (1) of the present invention include: Examples include 3-hydroxy-cabric acid, 3-hydroxy-lauric acid, 3-hydroxy-myristic acid, and the like.
  • the 3-hydroquine-medium or long chain fatty acids may be D-, L- or racemic.
  • the cyclic debpeptide used in the present invention potently promotes apolipoprotein E production against HepG2 cells, which are apolipoprotein-producing cells, and is therefore useful as a therapeutic agent for nerve damage, It is useful as a dementia drug. Furthermore, due to its nerve injury therapeutic action, peripheral neuropathy, diabetic neuropathy For example, useful in the treatment of such peripheral neuropathy due to absence of Vita Mi emissions Group B (BB 2, B 1 2, etc.).
  • the cyclic debpeptide of the present invention or a pharmacologically acceptable salt thereof promotes the production of apolipoprotein E and also strongly suppresses the production of apolipoprotein B, thereby promoting the production of apolipoprotein A1. Therefore, it is useful as a hyperlipidemic drug.
  • the cyclic debpeptide or a pharmaceutically acceptable salt thereof used in the present invention can be formulated into various dosage forms. That is, this formulation is for oral administration such as tablets, hard capsules, soft capsules, granules, solid formulations such as powders, and liquid formulations such as solutions, emulsions or suspensions, etc. can give. Parenteral dosage forms include injections, suppositories and the like.
  • additives for formulation such as excipients, stabilizers, preservatives, dissolving agents, wetting agents, emulsifiers, lubricants, sweeteners, coloring agents, flavoring agents, Formulations can be made by adding tonicity adjusting agents, buffers, antioxidants, and the like.
  • Additives include, for example, starch, sucrose, fructose, lactose, glucose, mannitol, sorbitol, precipitated calcium carbonate, crystalline cellulose, carboxymethylcellulose, dextrin, gelatin, gum arabic, magnesium stearate, talc, hydroxy. Quinpropyl methyl cell mouth and the like.
  • the cyclic debpeptide used in the present invention When used as a liquid preparation or an injection, the cyclic debpeptide which is an active ingredient or a pharmacologically acceptable salt thereof is used.
  • the diluent include physiological saline, Ringer's solution, aqueous glucose solution, alcohols, fatty acid esters, glycols, glycerin, animal and plant-derived fats and oils, and paraffins. These preparations can be manufactured by a usual method.
  • Mochiirire O 0 As a normal clinical dose, it is used in the range of 0.5 to 5000 mg orally per adult per day. Mochiirire O 0 more preferably in the range of 5 ⁇ 500mg
  • parenteral use per adult per day it is used in the range of 0.05 to 5000 nig.
  • Synthesis example 3 A solution of the intermediate compound (1) (4.62 g) obtained in Synthesis Example 2 in trifluoroacetic acid (hereinafter, referred to as “TFA”) (9 ml) was stirred at room temperature for 15 minutes. After the TFA was distilled off, the residue was dissolved in ethyl acetate and washed with a 5% aqueous sodium hydrogen carbonate solution. After drying over anhydrous sodium sulfate, ethyl acetate was distilled off to obtain 3.78 g of the intermediate compound (2).
  • TFA trifluoroacetic acid
  • the separated form layer was washed successively with water, a 5% aqueous sodium hydrogen carbonate solution and water, and then dried over anhydrous sodium sulfate.
  • ⁇ -NR ( ⁇ ppm, CD 3 0D): 5.20-5.30 (1H, m), 4.80-4.90 (1H, m), 4.20-4.50 (5H, m), 4.10-4.20 (1H, m), 2.80- 2.95 (2H, m), 2.40- 2.55 (2H, m), 2.10-2.25 (2H, m), 1.80-2.00 (4H, m), 1.45-1.80 (10H.m), 1.10-1.45 (21H, m ), 0.70-1.10 (33H, m)
  • reaction solution was diluted with chloroform (lOOnil), washed sequentially with a 10% aqueous solution of citric acid, water, a 5% aqueous solution of sodium hydrogen carbonate, and water, and then dried over anhydrous sodium sulfate.
  • the solvent was distilled off to obtain 5.02 g of tetrabeptide (1).
  • the tetrabeptide (1) (1.50 g) obtained in Synthesis Example 16 was dissolved in a mixed solution of methanol (150 ml) and DMF (75 ml), and 10% palladium on carbon (0.70 g) was added. The mixture was stirred under a gas atmosphere for 2 hours. The palladium carbon was filtered off, and the solvent was distilled off to obtain 1.43 g of tetrapeptide (2).
  • the tetrapeptide (3) (1.45 g) obtained in Example 20 was dissolved in a mixture of methanol (70 ml) and DMF (70 ml), and 10% palladium on carbon (0.50 g) was added. Stir for 1 hour. The palladium carbon was separated, and the solvent was distilled off to obtain 1.76 g of tetrapeptide (4).
  • Tetrabeptide (5) (1.45 g) obtained in Synthesis Example 24 was dissolved in a mixed solution of methanol (100 ml) and DMF (50 ml), and 10% palladium on carbon (0.50 g) was added. The mixture was stirred for 1 hour and 30 minutes in a gas atmosphere. The palladium carbon was filtered off, and the solvent was distilled off to obtain 2.00 g of tetrapeptide (6).
  • the tetrapeptide (5) (l.Olg) obtained in Synthesis Example 24 was dissolved in a mixture of methanol (80 ml) and DMF (80 ml), 10% palladium carbon (0.55 g) was added, and a hydrogen gas atmosphere was added. The mixture was stirred for 2 hours. Palladium carbon was filtered off and methanol was distilled off to obtain 1.98 g of tetrabeptide (7).
  • Synthesis Example 28 A solution of the intermediate compound (10) (1.70 g) obtained in Synthesis Example 27, Fmoc-D-mouth isocyanate (1.48 g) and HOBt 'monohydrate (0.62 g) in dichloromethane (50 ml) was cooled with ice. Then, WSCI (1.20 g) was added thereto, and the mixture was stirred for 1 hour under ice-cooling, and then gradually heated to room temperature and stirred for a while. The reaction solution was washed with brine and dried over anhydrous sodium sulfate.
  • the intermediate compound (13) (1.46 g) obtained in Synthesis Example 30 was dissolved in methanol (150ral), 10% palladium carbon (0.44 g) was added, and the mixture was stirred under a hydrogen gas atmosphere for 30 minutes. After filtering off the palladium carbon and distilling off the methanol, the residue (0.70 g) was dissolved in a mixed solution of THF (390 ml) and DMF (130 ml), and cesium chloride (0.94 g) and lithium chloride ( 0.37g), N-methylmorpholine
  • the intermediate compound (19) (0.65 g) obtained in Example 35 was dissolved in a mixed solution of THF (390 ml) and DMF (130 ml), and cesium chloride (0.94 g), potassium chloride (0.37 g), N-Methylmorpholine (0, llg), HOBt ⁇ monohydrate (0.30 g) and WSCI (0.96 g) were sequentially added, and the mixture was stirred at room temperature for 5 days.
  • the reaction mixture was diluted with ethyl acetate (400 ml), washed sequentially with water, 5% aqueous sodium hydrogen carbonate, water, 10% aqueous citric acid and water, and dried over anhydrous sodium sulfate.
  • Cesium chloride (0.70 g), potassium chloride (0.28 g) and WSCI (0.71 g) were sequentially added to a mixture of THF (190 ml) and DMF (95 ml) to obtain a solution B.
  • Solution A was added dropwise to Solution B over 20 minutes while stirring at room temperature, and the mixture was further stirred at room temperature for 5 days.
  • the reaction solution was diluted with ethyl acetate (200 ml), washed sequentially with water, 5% aqueous sodium hydrogen carbonate, water, 10% aqueous citric acid and water, and dried over anhydrous sodium sulfate.
  • the intermediate compound (25) (1.22 g) obtained in Synthesis Example 42 was dissolved in methanol (150ral), 10% palladium carbon (0.18 g) was added, and the mixture was stirred under a hydrogen gas atmosphere for 1 hour. Palladium carbon was separated off, and methanol was distilled off to obtain 1.00 g of the intermediate compound (26).
  • This intermediate compound (26) (0.70 g) was dissolved in a mixture of THF (390 ml) and DMF (130 ml), and cesium chloride (0.94 g), potassium chloride (0.37 g), and N-methylmorpholine (0. ll g), HOBt 'monohydrate
  • This intermediate compound (30) (2.14 g) was dissolved in a mixture of DMF (390 ml) and THF (1170 ml), and cesium chloride (2.82 g), rhodium chloride (1.lig), and N-methylmorpholine were dissolved. (0.33 g), HOBt-1 hydrate (0.90 g) and WSCI (2.88 g) were added sequentially, and the mixture was stirred at room temperature for 5 hours. The reaction solution was concentrated, and the residue was dissolved in ethyl acetate (400 ml), washed with water (200 ml), and dried over anhydrous sodium sulfate.
  • Tripeptide (9) (0.92 g) obtained in Synthesis Example 77 described later and peptide (6) obtained in Synthesis Example 73 described below were synthesized in the same manner as in Synthesis Example 59 described below.
  • a solution of (0.50 g) and HOBt ⁇ monohydrate (0.17 g) in DMF (10 ml) was added WSCI (0.21 g) under ice-cooling. This solution was stirred for 2 hours under ice cooling, and then stirred at room temperature for 10 hours. After the DMF was distilled off, a 10% methanol solution of chloroform and a 10% aqueous solution of citric acid were added to the residue.
  • Cesium chloride (0.76 g), potassium chloride (0.30 g) and WSCI (0.78 g) were sequentially added to a mixture of THF (200 ml) and DMF (100 ml) to obtain a solution B.
  • Solution A was added dropwise to Solution B over 20 minutes while stirring at room temperature, and further stirred at room temperature for 10 days.
  • reaction solution was washed with saturated saline, and dried over anhydrous sodium sulfate. After the solvent was distilled off, the residue was dissolved in F (50 ml), getylamine (3 ml) was added, and the mixture was stirred at room temperature for 1 hour. solvent After distilling off the residue, the residue was purified by silica gel column chromatography (silica gel 75 g, chloroform to chloroform: methanol: 50: 1) to obtain 2.86 g of the intermediate compound (35) (SEQ ID NO: 1).
  • Synthesis Example 54 Asp (OtBu)-Val-Leu A solution of the intermediate compound (35) (2.86 g) obtained in Synthesis Example 53, Fmoc-L-mouth isocyanate (1.20 g) and HOB monohydrate (0.50 g) in dichloromethane (100 ml) was added under ice cooling. Then, WSCI (0.98 g) was added thereto, and the mixture was stirred for 1 hour under ice-cooling, then gradually warmed to room temperature and stirred overnight. The reaction solution was washed with a saturated saline solution, and dried over anhydrous sodium sulfate.
  • This intermediate compound (39) (SEQ ID NO: 5) (2.08 g) was dissolved in a mixture of DMF (390 ml) and THF (1170 ml), and cesium chloride (2.82 g) and potassium chloride (l.llg) were dissolved.

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Description

7 明 細 書
環状デブシぺプチドおよびこれを有効成分とする医薬
技術分野
本発明は、 環状デブシぺプチドおよびこれを有効成分とする医薬に関 する。 本発明の環状デプシペプチドは、 アポリポプロテイン Eの産生促 進作用、 ァポリポプロティン Bの産生抑制作用およびアポリポプロティ ン A 1の産生促進作用を有する。 ァポリポプロティン Eは神経損傷の修 復作用を有するので、 ァボリポプロティン Eの産生促進作用を有する本 発明の環状デブシペプチドは、 神経損傷治療薬、 特に痴呆症治療薬とし て有用である。 また、 アポリポプロテイン Bは悪玉コ レステロールとし て知られる低密度リポタンパク質コレステロール （LDLコレステロール） の主要アポリボタンパク質であり、 アポリポプロティン A 1は善玉コレ ステロールとして知られる高密度リポタンパク質コレステロール（HDLコ レステロール） の主要アポリポタンパク質であるので、 ァボリポプロテ ィン Bの産生を抑制し、 ァボリポプ口ティ ン A 1の産生を促進する作用 を有する本発明の環状デブシぺプチドは、 高脂血症の治療薬として有用 である。
背景技術
老人性痴呆症の治療薬として、 脳循環代謝改善薬が主として使用され ているが、 これらの薬物は、 老人性痴呆症の原因と考えられている中枢 神経系の崩壊には何ら改善作用を示さない。 その結果痴呆の中核的症状 というべき記憶障害や計算能力障害に対しても何ら改善作用を示さない c そこで新しいタイプの老人性痴呆症の治療薬として、 神経系の修復、 成 長を促進し、 中枢神経の崩壊を抑制する薬物が求められている。
他方、 アポリポプロテイン Eは、 損傷し回復しつつある神経系部位で 高レベルで発現することが報告されており（例えば、 M. J. Igunal ius et al. , Pro. Nat l. Acad. Sci. U. S. A. , 83 : 1125( 1986)参照）、 神経系の 修復に重要な役割を担うであろうことが示唆されている。
本発明者らはアポリボプロティン Eの産生を促進し、 神経損傷の回復 作用を有する薬物を提供すべく鋭意研究の結果、 ある種の環状デブシぺ プチ ドがこれらの作用を有することを知り、 本発明を完成するに至つ た。
発明の開示
本発明は一般式（1 )
Figure imgf000004_0001
1リ
(式中、 Rは炭素数 5〜20の直鎖状または有枝鎖状のアルキル基または 炭素数 5〜15の直鎖状または有枝鎖状のアルコキシメチル基を、 A、 B、 D、 Eおよび Fはそれぞれ独立して、 ァラニン、 バリ ン、 ロイシン、 ィ ソロイ シン、 セリ ン、 ト レォニン、 リ シン、 ヒ ドロキンリ シン、 アルギ ニン、 システィ ン、 メ チォニン、 フヱニルァラニン、 チロ シン、 ト リプ トフ ア ン、 ヒスチジン、 プロ リ ン、 4 ー ヒ ドロキシプロ リ ン、 ピベリ ジ ン - 4 -カルボン酸、 ホモプロリ ン、 ォクタヒ ドロインドール- 2 -力 ルボン酸、 ノ ノいくリ ン、 ノルロイ シン、 α - t - ブチルグリ シン、 シク 口へキシルグリ シン、 ァゼチジン - 2 - カルボン酸、 3 - ( 3 - ピリジ ル） ァラニン、 （ 3— N - メチル） ピベリ ジルァラニン、 3 — ( 2 - ナ フチル） ァラニン、 3 - シク 口へキシルァラニン、 - t - ブチルァラ ニン、 9—アントラセニルァラニン、 α —メチルァラニン、 および 2 - アミ ノブタン酸から選ばれるァミノ酸残基またはこれらァミ ノ酸残基の Ν - 〜^アルキル体を、 Wおよび Ζはそれぞれ独立して、 ァスパラギ ン酸、 ァスパラギン、 グルタ ミ ン酸およびグルタミ ンから選ばれるァミ ノ酸残基を、 mおよび ηはそれぞれ独立して 0または 1を示す。 上記ァ ミ ノ酸残基における遊離のァミ ノ基、 カルボキシル基もしくは ω -カル バミ ド基はそれらの保護基としてべプチド化学で通常用いられる保護基 でそれぞれ保護されていてもよく、 そして上記 A、 B、 D、 E、 F、 W および Zにおけるアミ ノ酸残基がリシン、 ヒ ドロキンリ シン、 グルタミ ン酸またはァスパラギン酸である場台は隣接するアミノ酸とぺプチド結 合するァミ ノ基もしくはカルボキシル基は α -位でも ω -位でもよい） で示される環状デブシぺプチドまたはその薬理学的に許容される塩を有 効成分とするアポリポプロティン Εの産生促進薬に関する。
本発明はまた、 前記一般式（1 )で示される環状デブシぺプチ ドまたは その薬理学的に許容される塩を投与することからなるアポリポプロティ ン Εの産生促進方法に関する。
さらに本発明は、 前記一般式（1 )で示される環状デブシぺプチドまた はその薬理学的に許容される塩を有効成分とする神経損傷治療薬および 痴呆症治療薬に関する。
本発明はまた、 前記一般式（1 )で示される環状デブシぺプチ ドまたは その薬理学的に許容される塩を投与することからなる神経損傷治療方法 および痴呆症治療方法に関する。
さらに本発明は、 一般式（Γ )
Figure imgf000005_0001
〔式中、 A、 B、 D、 E、 F\ W、 Z、 mおよび nは前述したものと同 一であり、 R'は前記 Rと同一の意味を有するが、 但し、 mおよび nが 1 であり、 Aがイソロイシン、 Bがロイシン、 Wがァスパラギン酸、' Dが バリ ン、 Eがロイシン、 Fがロイシン、 Zがグルタミ ン酸またはグルタ ミ ンであり、 R'が式 (CH2)P- (式中 はメチル、 イソプロピル、 sec - ブチルまたはイソブチルを示し、 pは 5 ~ 15の整数を示す） を有する基 である場合を除く〕 で示される環状デブシぺプチドまたはその薬理学的 に許容される塩、 並びにこれらを有効成分とするアポリボプロテイン B 産生抑制薬、 ァポリポプロティン A 1産生促進薬および高脂血症治療薬 に関する。
本発明はまた、 前記一般式（1)で示される環状デブシぺプチドまたは その薬理学的に許容される塩を投与することからなるァボリポプロティ ン B産生抑制方法、 アポリポプロティン A 1産生促進方法および高脂血 症治療方法に関する。
上記した本発明の式（1 )を有する環状デブシぺプチドを構成する上記 アミノ酸は L -体または D -体のいずれであってもよい。
上記一般式（ 1 )において、 好ましくは、 Aは lieまたは Ala、 Bは Leu、 Ala, t- BuAla、 - Valまたは Phe、 Dは Valまたは Ala、 Eは Leu、 Ala、 t- BuAla、 Valまたは Phe、 Fは Leu、 Ala. t- BuAla、 Valまたは Phe、 Wは Aspまたは Gluそして Zは Ginまたは Asnであり、 mおよび nは 1であり、 そして Rは炭素数 6 ~ 12の直鎖状のアルキル若しくはアルコキシメチル 基である。 A、 D、 F、 Wおよび Zのアミ ノ酸は L -体が好ましく、 B および Eのアミ ノ酸は D -体であるのが好ましい。 特に、 Aは lieまた は Ala、 Bは D- Leuゝ D-Ala. D-t-BuAla. D-Valまたは D- Phe、 Dは Valま たは Ala、 Eは D- Leu、 D-Ala、 D-t-BuAla. D- Valまたは D- Phe、 Fは Leu、 Ala. t-BuAla. Valまたは Phe、 Wは Aspまたは Gluそして Zは Ginまたは Asnが好ましい。
前記式（ 1 )の化合物の好ましい例として下記の一般式で示される環状 デプシペプチドまたはその薬理学的に許容される塩があげられる。
R
Figure imgf000006_0001
Figure imgf000007_0001
o- 1 le— D一 Ala- Asp
Val
CO- Gin— Leu- D— Leu'
R
Figure imgf000007_0002
0. 1 le- D一 L eu - Asp-
Val
C 0 - G In- Leu— D— Ala'
R o- I le - D - Leu - Asp
Val
CO - Gin- Ala- D - Leu
R
0· 1 le - D■- L eu - Asp
Val
C 0— Gin— し eu— Leu'
R
〇- I le 一 Leu — Asp 一 Val
CO— Gin— Leu— D- Leu
R
Figure imgf000007_0003
0- le- D - A la- Asp-
Val
C 0 - Gin- Ala- D— Ala'
R
Figure imgf000008_0001
0 I le- D - L eu- Asp
C 0 Gin - Val
R 上記式中、 Rは前述したものと同一の意味を有する。
また本発明の前記一般式（1 )または（Γ)で示される環状デブシぺプチ ドの好ましい例として、 Rが炭素数 6〜12の直鎖状のアルキル若しくは アルコキシメチル基であり、 mおよび nは 0または 1でありそして
A = Ile、 B=Leu、 W = Asp、 D=Ala、 E=Leu、 F=Leu、 Z =Gln の化合物 ： ―
A = Ile、 B=Ala、 W = Asp、 D=Val、 E=Leu、 F=Leu、 Z =Gln の化合物：
A=Ala、 B=Leu、 W = Asp、 D=Val、 E=Leu、 F=Leu、 Z =Gln の化合物：
A = Ile、 B=Leu、 W = Asp、 D=Val、 E=Ala、 F=Leu、 Z =Gln の化合物 ：
A = Ile、 B =Leu. W = Asp. D=Val、 E =Leu、 F=Ala、 Z =Gln の化合物：
などが挙げられる。
上記一般式（1 )または（Γ)を有する化合物で特に好適な化合物を下に 表で示す。
Figure imgf000008_0002
上記式において、 R2はメチルまたはイソプロピル基を示し、 R3は直接 合または基- 0CH2- -¾：不し、 q td. ~10の整数を示す o
A w D E F_ Z m n lie D-Phe Glu Val D-Leu leu Asn
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Ala D-Leu Asp Val D - Val leu Asn
Ala D-Leu Asp Val D-Val Leu Gin
Ala D -し eu Asp Val D-Val Ala Asn
Ala D -し eu Asp Val D-Val Ala Gin
Ala D -し eu Asp Val D-Phe Leu Asn
Ala D-Leu . Asp Val D-Phe Leu Gin
Ala D-Leu Asp Val D-Phe Ala Asn
Ala D-Leu Asp Val D-Phe Ala Gin
Ala D-Leu Asp Ala D-Leu Leu Asn
Ala D-Leu Asp Ala D-Leu leu Gin
Ala D-Leu Asp Ala D-Leu Ala Asn
Ala D-Leu Asp Ala D-Leu Ala Gin
Ala D-Leu Asp A la D-A la Leu Asn
Ala D-Leu Asp A la D-Ala leu Gi n
Ala D-Leu Asp A la D-Ala A la Asn
Ala D -し eu Asp A la D-Ala Ala Gin
Ala D-Leu Asp Ala D-Val leu Asn
Ala D-Leu Asp Ala D-Val Leu Gin
Ala D-Leu Asp Ala . D-Val Ala Asn
A la D-Leu Asp Ala D-Val Ala Gin
A la D-Leu Asp Ala D-Phe Leu Asn
Ala D -し eu Asp A la D-Phe Leu Gin
A la D-Leu Asp Ala D-Phe Ala Asn
A la D-Leu Asp A la D-Phe A la Gin A W D E £ Z m n
Ala D-Ala Asp Val D-Leu Leu Asn
Ala D-Ala Asp Val D -し eu leu Gin
Ala D-Ala Asp Val D -し eu Ala Asn
Ala D-Ala Asp Val D -し eu Ala Gin
Ala D-Ala Asp Val D-Ala Leu Asn
Ala D-Ala Asp Val D-Ala leu Gin
Ala D-Ala Asp Val D-Ala Ala Asn
Ala D-Ala Asp Val D-Ala Ala Gin
Ala D-Ala Asp Val D-Val Leu Asn
Ala D-Ala Asp Val D-Val Leu Gin
Ala D-Ala Asp Val D-Val Ala Asn
Ala D-Ala Asp Val D-Val Ala Gin
Ala D-Ala Asp Val D-Phe leu Asn
Ala D-Ala 一 Asp Val D-Phe ten Gin
Ala D-Ala Asp Val D-Phe Ala Asn
Ala D-Ala Asp Val D-Phe Ala Gin
Ala D-Ala Asp Ala D-Leu Leu Asn
Ala D-Ala Asp Ala D -し eu Leu Gin
Ala D-Ala Asp Ala D-Leu Ala Asn
Ala D-Ala Asp ' Ala D-Leu Ala Gin
Ala D-Ala Asp Ala D-Ala leu Asn
Ala D-Ala Asp Ala D-Ala leu Gin
Ala D-Ala Asp Ala D-Ala Ala Asn
Ala D-Ala Asp Ala D-Ala Ala Gin
Ala D-Ala Asp Ala D-Val leu Asn
Ala D-Ala Asp Ala D-Val Leu Gin
Ala D-Ala Asp Ala D-Val Ala Asn
Ala D-Ala Asp Ala D-Val Ala Gin
Ala D-Ala Asp Ala D-Phe eu Asn
Ala D-Ala Asp Ala D-Phe leu Gin
Ala D-Ala Asp Ala D-Phe Ala Asn
Ala D-Ala Asp A la D-Phe Ala Gin A W D F Z m n
Ala D-Phe Asp Val D-Leu leu Asn
Ala D-Phe Asp Val D-Leu Leu Gin
Ala D-Phe Asp Val D -し eu Ala Asn
Ala D-Phe Asp Val D-Leu Ala Gin
Ala D-Phe Asp Val D-Ala leu Asn
Ala D-Phe Asp Val D-Ala leu Gin
Ala D-Phe Asp Val D- Ala Ala Asn
Ala D-Phe Asp Val D-Ala Ala Gin
Ala D-Phe Asp Val D-Val Leu Asn
Ala D-Phe Asp Val D-Val leu Gin
Ala D-Phe Asp Val D-Val Ala Asn
Ala D-Phe Asp Val D-Val Ala Gin
Ala D-Phe Asp Val D-Phe leu Asn
Ala D-Phe Asp Val D-Phe leu Gin
Ala D-Phe Asp Val D-Phe Ala Asn
Ala D-Phe Asp Val D-Phe Ala Gin
Ala D-Phe Asp Ala D-Leu leu Asn
Ala D-Phe Asp Ala D-Leu leu Gin
Ala D-Phe Asp Ala D-Leu Ala Asn
Ala D-Phe Asp Ala D-Leu Ala Gin
Ala D-Phe Asp Ala D-Ala leu Asn
Ala D-Phe Asp Ala D-Ala し eu Gin
Ala D-Phe Asp Ala D-Ala Ala Asn
Ala D-Phe Asp Ala D-Ala Ala Gin
Ala D-Phe Asp Ala D-Val leu Asn
Ala D-Phe Asp Ala D-Val leu Gin
Ala D-Phe Asp Ala D-Val Ala Asn
Ala D-Phe Asp Ala D-Val Ala Gin
Ala D-Phe Asp Ala D-Phe Leu Asn
Ala D-Phe Asp Ala D-Phe Leu Gin
Ala D-Phe Asp Ala D-Phe Ala Asn
A la D-Phe Asp Ala D-Phe Ala Gin A W D E F_ Z m n
Ala D-Val Asp Val D-Leu Leu Asn
Ala D-Val Asp Val D-Leu Leu Gin
Ala D-Val Asp Val D-Leu Ala Asn
Ala D-Val Asp Val D-Leu Ala Gin
Ala D-Val Asp Val D-Ala Leu Asn
Ala D-Val Asp Val D-Ala Leu Gin
Ala D-Val Asp Val D-Ala Ala Asn
Ala D-Val Asp Val D-Ala Ala Gin
Ala D-Val Asp Val D-Val Leu Asn
Ala D-Val Asp Val D-Val leu Gin
Ala D-Val Asp Val D-Val Ala Asn
Ala D-Val Asp Val D-Val Ala Gin
Ala D-Val Asp Val D-Phe Leu Asn
Ala D-Val _ Asp Val D-Phe Leu Gin
Ala D-Val Asp Val D-Phe Ala Asn
Ala D-Val Asp Val D-Phe Ala Gin
Ala D-Val Asp Ala D-Leu Leu Asn
Ala D-Val Asp Ala D-Leu leu Gin
Ala D-Val Asp Ala D-Leu Ala Asn
Ala D-Val Asp Ala D-Leu Ala Gin
Ala D-Val Asp Ala D-Ala し eu Asn
Ala D-Val Asp Ala D-Ala Leu Gin
Ala D-Val Asp Ala D-Ala Ala Asn
Ala D-Val Asp Ala D-Ala Ala Gin
Ala D-Val Asp Ala D-Val し eu Asn
Ala D-Val Asp Ala D-Val leu Gin
Ala D-Val Asp Ala . D-Val Ala Asn
Ala D-Val Asp Ala D-Val Ala Gin
Ala D-Val Asp Ala D-Phe Leu Asn
Ala D-Val Asp Ala D-Phe Leu Gin
Ala D-Val Asp Ala D-Phe Ala Asn
Ala D-Val Asp Ala D-Phe Ala Gin A W D E m n lie D-Leu Asp Val Gin 0 0 lie D -し eu Asp Val D-Leu Gin 0 1
Ala D-Leu Asp Val Gin 0 0
Ala D -し eu Asp Val D-Leu Gin 0 1 ここで上記した一般式および下記する実施例などの記載において、 ぺ プチドを構成するァミ ノ酸またはアミノ酸残基については、 アミノ酸の 表示に一般に用いられている三文字表記によった。
すなわち、 ァラニン = Ala、 ノ、'リ ン = Val、 ロイシン = Lue、 イソロイ シン = Ile、 セリ ン = Ser、 ト レォニン- Thr、 ァスパラギン酸 = Asp、 Ύ スパラギン = Asn、 グルタ ミ ン酸 = Glu、 グルタ ミ ン = Gln 、 リ シン = Lys、 システィ ン =Cys、 フヱニルァラニン = Phe、 チロシン = Tyr、 ト リ プトファ ン-Trp、 ヒスチジン- His、 プロ リ =Pro、 4 — ヒ ドロキシ プロリ ン = 4 Hypなどの表示方法を用いた。
前記一般式（1 )において、 mおよび nが 1であり、 Aがイソロイシン、 Bがロイシン、 Wがァスパラギン酸、 D力 バリ ン、 Eがロイ シン、 Fが ロイシン、 Zがグルタ ミ ン酸であり、 Rが式
Figure imgf000025_0001
(式中 はイソ プロピルを示し、 pは 9を示す） を有する基である化合物は、 血液凝固 阻止作用を有する界面活性剤である旨、 Arg. Biol. Chem. Vol.33. No. 10. P.1523-1524、 1969に記載されている。 m、 n、 A、 B、 W、 D、 E、 Fが上記と同じであり、 Zがグルタ ミ ンであり、 R
Figure imgf000025_0002
(式中 R,はメチルを示し、 pは 11を示す） を有する基である化合物は、 抗かび、 抗菌、 抗腫瘍作用を有する旨、 Tetrahedron Letters, Vol. 35, No.31, . 5571-5574. 1994に記載されている。 m、 n、 A、 B、 W、 D、 E、 Fが上記と同じであり、 Zがグルタ ミ ンであり、 Rが式 Ri-(CH2)p- (式中 はイソプロピルを示し、 pは 5〜15の整数を示す） を有する基である化合物は、 高脂血症治療薬、 脂質分泌抑制薬、 ァボリ ポプロティン B産生抑制薬として有用である旨、 国際公開 95 Z 32990号 に記載されている。 そして m、 n、 A、 B、 W、 D、 E、 Fが上記と同 じであり、 Zがグルタ ミ ンであり、 Rが式
Figure imgf000026_0001
(式中 R ,はイ ソプ 口ピル、 s ec -ブチルまたはイソブチルを示し、 pは 8を示す） を有す る基である化合物は、 エン ドセリ ン拮抗作用を有し、 血管拡張剤、 抗高 血圧剤などとして有用である旨、 日本特許特開平 7 - 291993号公報に記 載されている。 しかしながらこれらの化合物がアポリポプロテイ ン Eの 産生促進作用を有することはいずれの文献にも記載されていない。
本発明の環状デプシペプチドのうち、 上記公知化台物は、 国際公開 95 Z 32990号または特開平 7 - 291993号公報などに記載の方法に従って、 バ シラス厲に属する該環状デブシぺプチド生産菌 （例えばバシラス · エス ピー · No. 4691株- (FERM BP- 5101 ) など） を培養することにより得るこ とができる。
また、 本発明の環状デプシペプチドは、 例えば、 次に述べる通常のぺ プチド合成の手法により製造することができる。
すなわち、 前記一般式（1 )で示される環状デプシペプチドは、 つぎの 工程 ：
一般式（2 )
Figure imgf000026_0002
(式中、 Rは上記の意味を有する） で示される 3 - ヒ ドロキジ -中鎖ま たは長鎮脂肪酸のカルボキシル基を適当な保護基で保護して得られる、 一般式（3 )
Figure imgf000026_0003
(式中、 Xはカルボキシル基の保護基であり、 Rは上記の意味を有する） で示されるカルボキシル基が保護された 3 - ヒ ドロキシ -中鎖または長 鎖脂肪酸と、 ァミ ノ基が保護されたァミ ノ酸 Aを縮合させて、 一般式 (4)
0—— A -Y cox (4)
R
(式中、 Yはァミノ基の保護基を示し、 A、 X、 および Rは上記の意味 を有する） で示される化合物とし、
この化合物のアミ ノ酸 Aのアミ ノ基の保護基を脱保護して、 一般式 (5)で示される化合物
Figure imgf000027_0001
(式中、 A、 X、 および Rは上記の意味を有する） で示される化合物と し、
この化合物と、 ァミ ノ基が保護されたァミ ノ酸 Bを縮合させて、 一般 式（6)
Figure imgf000027_0002
(式中、 Α、 Β、 Υ、 X、 および Rは上記の意味を有する）
で示されるデブシぺプチドとし、
このデブシぺプチドのアミ ノ酸 Bのアミ ノ基の保護基を脱保護して、 一般式（7) 0—— A - B ノ c o x ( 7 )
(式中、 A、 B、 X、 および Rは上記の意味を有する） で示されるデブ シぺプチ ドとし、
このデプシぺプチ ドと、 ァ ミ ノ基と / 3 -位置のカルボキシル基とが保 護されたァスパラギン酸、 ァ ミ ノ基と / 3 -位置のカルバミ ド基が保護さ れたァスパラギン、 ァ ミ ノ基とァ -位置のカルボキシル基とが保護され たグルタ ミ ン酸、 またはァ ミ ノ基とァ -位置の力ルバミ ド基が保護され たグルタ ミ ンを縮合させて、 一般式（8 )
( 8 )
Figure imgf000028_0001
(式中、 X'はァスパラギン酸の 3 -位置のカルボキシル基、 グルタ ミ ン 酸の Ί -位置のカルボキシル基、 ァスパラギンの； S -位置の力ルバミ ド 基またはグルタ ミ ンの 7 -位置のカルバミ ド基の保護基であり、 A、 B、 W、 X、 Yおよび Rは上記の意味を有する） で示されるデプシペプチ ド とし、
このデプシペプチ ドのァスパラギン酸、 ァスパラギン、 グルタ ミ ン酸 またはグルタ ミ ンのア ミ ノ基の保護基を脱保護して、 一般式（9 )
Figure imgf000028_0002
(式中、 Λ、 B、 W、 X、 X'および Rは上記の意味を有する） で示され るデブシぺプチ ドとし、
このデプシペプチ ドと、 ア ミ ノ基が保護されたァ ミ ノ酸 Dを縮台させ て、 一般式（10)
Figure imgf000029_0001
(式中、 A、 B、 W、 D、 Y、 X、 X'および Rは上記の意味を有する） で示されるデブシぺプチドとし、
このデブシぺプチ ドのアミ ノ酸 Dのアミ ノ基の保護基を脱保護して、 一般式（11 )
Figure imgf000029_0002
(式中、 A、 B、 W、 D、 X、 X'および Rは上記の意味を有する） で示 されるデブシぺプチ ドとし、
このデプシペプチドと、 ァミ ノ基が保護されたァミ ノ酸 Eを縮台させ るか、 またはこのァミ ノ酸 Dの縮合工程を経ないで一般式（9 )のデプシ ペプチ ドとアミ ノ基が保護基されたァミ ノ酸 Eを縮合させて、 一般式 ( 12)
Figure imgf000029_0003
(式中、 A、 B、 W、 D、 E、 Y、 X、 X'、 Rおよび mは上記の意味を 有する） で示される化合物とし、
このデブシぺプチ ドのアミ ノ酸 Eのアミ ノ基の保護基を脱保護して、 一般式（13)
Figure imgf000029_0004
(式中、 A、 B、 W、 D、 E、 X、 X'および Rは上記の意味を有する） で示されるデブシぺプチ ドとし、
このデプシペプチ ドと、 ア ミ ノ基が保護されたァミ ノ酸 Fを縮合させ るか、 またはこのア ミ ノ酸 Eの縮合工程を経ないで一般式（11)または一 般式（9 )のデブシぺプチ ドと、 ア ミ ノ基が保護されたァ ミ ノ酸 Fを縮合 させて、 一般式（14)
Figure imgf000030_0001
(式中、 A、 B、 W、 D、 E、 F、 Y、 X、 V、 R、 mおよび nは上記 の意味を有する） で示されるデプシペプチ ドとし、
このデブシぺプチ ドのア ミ ノ酸 Fのア ミ ノ基の保護基を脱保護して、 一般式（15) - -
Figure imgf000030_0002
(式中、 A、 B、 W、 D、 E、 F、 X、 X'、 R、 mおよび nは上記の意 味を有する） で示されるデプシペプチ ドと し、
このデブシぺプチ ドと、 ァ ミ ノ基と； S -位置のカルボキシル基とが保 護されたァスパラギン酸、 ァ ミ ノ基と S -位置のカルバミ ド基が保護さ れたァスパラギン、 ア ミ ノ基とァ -位置のカルボキシル基とが保護され たグルタ ミ ン酸、 またはァ ミ ノ基とァ -位置のカルバミ ド基が保護され たグルタ ミ ンを縮合させて、 一般式（16)
Figure imgf000030_0003
(式中、 X"はァスパラギン酸の /3 -位置のカルボキシル基またはグルタ ミ ン酸のァ -位置のカルボキシル基、 ァスパラギンの /3 -位置の力ルバ ミ ド基またはグルタミ ンの 7 -位置のカルバミ ド基の保護基であり、 A , B、 W、 D、 E、 F、 Z、 X、 X'、 Y、 R、 mおよび nは上記の意味を 有する） で示されるデブシペプチドとし、
このデプシペプチドのァスパラギン酸、 ァスパラギン、 グルタ ミ ン酸 またはグルタミ ンのアミ ノ基の保護基を脱保護して、 一般式（Π)
Figure imgf000031_0001
(式中、 A、 B、 W、 D、 E、 F、 Z、 X、 X'、 R、 mおよび nは 上記の意味を有する） で示されるデプシペプチドとし、
このデブシぺプチドのカルボキシル基の保護基 Xを脱保護し、 その後 自己縮合させて、 -一般式（18)
Figure imgf000031_0002
(式中、 A、 B、 W、 D、 E、 F、 Z、 X'、 X\ R、 mおよび nは上記 の意味を有する） で示される環状デプシペプチドとし、
そして、 この環状デブシぺプチドのァスパラギン酸の /? -位置のカル ボキシル基、 グルタ ミ ン酸のァ -位置のカルボキシル基、 ァスパラギン の β -位置のカルバミ ド基またはグルタミ ンのァ -位置のカルバミ ド基 を脱保護することからなる、 上記工程によって製造される。
この一般式（Γ )の環状デブシぺプチドは上記したぺプチド合成の常法 に従ってァミ ノ酸を 1個ずつ段階的に縮合させ次いで自己縮合する方法 によつて製造する他に、 あらかじめ台成したいくつかのォリゴぺプチド を縮合させ次いで自己縮台する方法によって製造することができる。 この方法には、 例えば上記段階的縮合方法の前半に得られる一般式 ( 9 ) W
Figure imgf000032_0001
(式中、 A、 B、 W、 X、 X'および Rは上記の意味を有する） で示され るデブシぺプチ ドと、 一般式（19)
(D)m-(E)n-F-Z(X" ) Y ( 19)
(式中、 D、 E、 F、 Z、 Y、 Y、 mおよび ηは上記の意味を有する） で示されるテ トラペプチ ド （または ト リペプチ ドまたはジペプチ ド） と を縮合させるか、 または一般式（5 )
Figure imgf000032_0002
(式中、 A、 Xおよび Rは上記の意味を有する） で示されるデブシぺプ チ ドと、 一般式（19' )
B - W(X' ) - (D)mY (19' )
(式中、 B、 D、 W、 X'、 Yおよび mは上記の意味を有する） で示され る ト リぺプチ ド （またはジぺプチ ド） とを縮合させ、 次いで得られたデ プシぺプチ ドのァ ミ ノ基の保護基 Yを脱保護し、 さらに一般式（19" )
(E)n-F-Z(X' ) Y ( 19" )
(式中、 E、 F、 Z、 X 、 Yおよび nは上記の意味を有する） で示され る ト リペプチ ド （またはジペプチ ド） と縮合させて、 上記一般式（16)で 示されるデプシペプチ ドと し、 このデブシぺプチ ドのァスパラギン酸、 ァスパラギン、 グルタ ミ ン酸またはグルタ ミ ンのアミ ノ基の保護基を脱 保護して、 一般式（17)
Figure imgf000032_0003
(式中、 A、 B、 W、 D、 E、 F、 Z、 X、 X'、 X"および Rは上記の意 味を有する） で示されるデプシペプチドとし、
このデブシぺプチドのカルボキシル基の保護基 Xを脱保護し、 その後 自己縮合させて、 一般式（18)
0—— A - B - W(X') \ /Lz(X")— P— (E)n/ 丄 8 J
R
(式中、 A、 B、 W、 D、 E、 F、 Z、 X'、 X"および Rは上記の意味を 有する） で示される環状デプシペプチドとし、
そして、 この環状デブシぺプチドのァスパラギン酸の -位置のカル ボキシル基、 グルタ ミ ン酸のァ -位置のカルボキシル基、 ァスパラギン の；3 -位置のカルバミ ド基またはグルタ ミ ンの 7 -位置のカルバミ ド基 を脱保護することからなる、 上記工程によって製造することもできる。 さらにこのようにして製造された環状デブシぺプチドは必要によって 薬理学的に許容される塩に変換することができる。
上記した本発明の環状デブシぺプチドを得るための合成工程には、 ぺ プチ ド合成において採用される慣用方法のいずれを用いることもでき る。
例えば、 ペプチド結合を形成するための縮合反応の方法としては、 縮 合剤法、 アジ ド法、 酸無水物法、 活性エステル法、 酸化還元法および酵 素法などが挙げられる。
縮合剤法を用いてペプチ ド合成を行う場合は、 N， N -ジンクロへキシ ルカルボジィ ミ ド （以下、 「DCC」 という） 、 または 1 -ェチル- 3 - ( 3 -ジメチルァミ ノプロピル） カルボジィ ミ ド塩酸塩、 すなわち水溶 性カルボジィ ミ ド （以下、 「liSCI」 という） 、 〇 - ( 1 H ベンゾトリ ァゾール— 1 -ィル）— N, N， N' , N' -テ トラメチルゥロニゥムテトラフル ォロボレ一 ト （以下、 「TBTU」 という） 、 ベンゾ卜リァゾール- 1 -ィ ル-ォキシ - 卜 リス （ジメチルァミ ノ） ホスホニゥ厶へキサフルォロホ スフェー ト （以下、 「B0P」 という） 等を用いることが好ま しい。 また、 同時に、 ラセミ化を抑制するために通常用いられる添加剤、 例えば N - ヒ ドロキシスクシンイ ミ ド、 N— ヒ ドロキシベンゾ卜 リアゾ一ル （以下、 「H0Bt」 という）、 N - ヒ ドロキシー 5 - ノルボネン— 2. 3— ジカルポジ ィ ミ ドベンゾト リァゾール等を加えることも好ま しい。
また、 アジ ド法で用いられる主な縮合剤としては、 ジフエ二ルリ ン酸 アジ ド （以下、 「DPPA] という） 、 ジェチルリ ン酸シアニ ド等が挙げら れる。
なお、 縮合反応を行う前に、 通常公知の手段によって当該縮合反応に 関与しないカルボキシル基、 ア ミ ノ基および ω -カルバミ ド基等へ保護 手段を施すことが好ま しい。
この場合、 保護手段に用いる保護基としては、 例えば、 ァミ ノ基の保 護基と しては t -ブトキシカルボニル （以下、 「Boc」 という） 基、 ベン ジルォキシカルボニル基、 ρ -メ トキシ -ベンジルォキシカルボニル基 または 9 - フルォレニルメ トキシカルボニル （以下、 「Fmoc」 という） 基等が、 また、 カルボキシル基の保護基としてはベンジルォキシ基また は t -ブトキシ （以下、 「0tBu」 という） 基等が、 末端カルバミ ド基の 保護基と しては、 4, 4 - ジメ トキシベンズヒ ドリル （以下、 「Mbh」 とい う） 基または ト リチル基等が挙げられる。
本発明の環状デプシベプチ ドの製造工程における保護基の脱離反応は、 ぺプチ ド結合に影響を与えずに保護基を脱離できるものが必要であり、 用いる保護基の種類に応じて適宜選択すればよい。
前記の各ペプチ ド台成に用いる溶媒としては、 例えば、 無水または含 水のクロ口ホルム、 ジクロロメ タ ン、 酢酸ェチル、 N , N - ジメ チルホル 厶ア ミ ド （以下、 「DMF」 という） 、 ジメチルスルホキシ ド、 ピリ ジン、 ジォキサン、 テ トラ ヒ ドロフラ ン （以下、 「"H1F」 という） 、 ジメ トキシ ェタン、 ァセ 卜ニトリルなどが挙げられ、 必要に応じて 2種以上の溶媒 を合わせて用いても良い。 また、 この縮合反応は通常の場合と同様に、 約— 20〜50°Cの範囲で行われる。
また、 ペプチド合成は、 液相法および固相法のいずれによっても製造 でき、 更にカラム法、 バッチ法のいずれを用いてもよい。
本発明に用いる環状デプシペプチドは、 それ自体公知の方法で、 ナ卜 リウム塩、 カリウム塩、 カルシウム塩等の金属塩、 アンモニゥム塩、 あ るいはトリェチルァミ ン塩等の有機ァミ ンとの塩など、 薬理学的に許容 されうる塩を形成させることができ、 これらの薬理学的に許容されうる 塩も本発明のァポリポプロティン E産生促進剤として用いることができ る。
上記した本発明の一般式（1 )で示される環状デブシぺプチドの合成に 用いられる出発原料の一般式（2 )の 3 —ヒ ドロキシ一中鎖または長鎖脂 肪酸の具体例としては、 3 - ヒ ドロキシ -カブリ ン酸、 3 - ヒ ドロキシ -ラウリ ン酸、 3 - ヒ ドロキン - ミ リスチン酸などがあげられる。 この 3 - ヒ ドロキン -中鎖または長鎖脂肪酸は D -体、 L -体または ラセミ体のいずれでもよい。
出発原料として 3 - ヒ ドロキシ - ミ リスチン酸を用いる場合の本発明 の環状デブシぺプチ ドの合成工程の一例を反応スキームで示すと次の通 りである。
反応スキーム
Figure imgf000036_0001
3— ヒ ドロキ ン 3— ヒ ドロキシ ミ リ 中間体化合物（1) 中間体化合物（2) ミ リ スチ ン酸 スチ ン酸べン ジル
Figure imgf000036_0002
中間体化合物（3) 中間体化合物（4) to
O-D-Ile-Leu-Asp(OtBu) 0-Ile-D-Leu-Asp(OtBu)-Val-Fmoc
X02Bzl 02Bzl
ゝ 0 0
中間体化合物（5) u-Asp(OtBu)-Val-D-Leu-Fmoc
Figure imgf000036_0003
中間体化合物（6)
反応スキー ム （続き） -Asp(OtBu) - Va D - Leu-し eu- Fraoc
Figure imgf000037_0001
中間体化合物（7)
O-Ile- D- Leu-Asp(OtBu)-Val- D- Leu- Leu
.C02Bzl
'10、
0- lie- D- Leu- Asp(OtBu)- Val- D- Leu- Leu- Gln(Mbh)- Fraoc
C02Bzl
Ο
中間体化合物（8)
0-Ile-D- Leu-Asp(OtBu)- Val- D- Leu- Leu- GlnOlbh)
C02H
中間体化合物（9)
0—— Ile-D-Leu-Asp(OtBu) C0、
10 Gln( bh)-Leu-D-Leu
Figure imgf000037_0002
璟状デブシぺプチ ド（1 ) 化合物（4)
本発明に用いる環状デブシぺプチ ドはァポリポプロティン産生細胞で ある Hep G 2細胞に対してァポリポプロティン E産生を強力に促進する ことから、 神経損傷治療剤として有用であり、 また抗痴呆剤として有用 である。 さらには、 その神経損傷治療作用により、 末梢神経障害、 例え ば糖尿病性神経障害、 ビタ ミ ン B群 （B B 2、 B 1 2等） の欠乏による 末梢神経障害などの治療に有用である。
また、 本発明の環状デブシぺプチドまたはその薬理学的に許容される 塩は前述のアポリポプロティン E産生の促進と共に、 アポリポプロティ ン Bの産生を強力に抑制し、 アポリポプロテイン A 1の産生を促進する ので、 高脂血症薬として有用である。
本発明に用いる環状デブシぺプチドまたはその薬理学的に許容し得る 塩は種々の投与形態の製剤とする事ができる。 すなわち、 この製剤は経 口投与剤としては例えば、 錠剤、 硬質カプセル剤、 軟質カプセル剤、 顆 粒剤、 散剤のような固形製剤、 および溶液、 ェマルジヨ ンまたは懸濁液 のような液体製剤などがあげられる。 また、 非経口投与の剤型としては 注射剤、 坐剤などがあげられる。
これらの製剤の調製にあたっては製剤化のための慣用の添加剤、 例え ぱ賦形剤、 安定剤、 防腐剤、 溶解剤、 湿潤剤、 乳化剤、 滑沢剤、 甘味剤、 着色剤、 香味剤、 張度調製剤、 緩衝剤、 酸化防止剤などを添加して製剤 化することができる。
添加剤としては、 例えばデンプン、 白糖、 果糖、 乳糖、 ブドウ糖、 マ ンニトール、 ソルビトール、 沈降性炭酸カルシウム、 結晶セルロース、 カルボキシメチルセルロース、 デキス ト リン、 ゼラチン、 アラビアゴム、 ステアリ ン酸マグネシウム、 タルク、 ヒ ドロキンプロピルメチルセル口 一ス等が挙げられる。
本発明に用いる環状デブシぺプチ ドを液剤、 注射剤として用いるとき は、 有効成分である環状デブシぺプチドまたはその薬理学的に許容され る塩を慣用の希釈剤中に溶解または懸濁して用いることができる。 希釈 剤としては、 生理食塩水、 リ ンゲル液、 ブドウ糖水溶液、 アルコール類、 脂肪酸エステル類、 グリコール類、 グリセリ ン、 動植物由来の油脂、 パ ラフィ ン類などが含まれる。 また、 これらの製剤は、 通常の方法で製造 することができる。
そして通常の臨床投与量として、 成人一人 1日当たり経口の場合、 0. 5〜5000mgの範囲で用いられる。 さらに好ましくは 5〜500mgの範囲で 用いりれ O 0
また、 成人一人 1日あたり非経口の場合は 0. 05~5000nigの範囲で用い られる。
次に本発明の環状デブシぺプチドの製造方法の具体例を合成例として、 本発明の環状デプシぺプチ ドのアポリポプロティン E産生促進作用につ いての試験例を実施例として、 また本発明の環状デブシぺプチ ドを有 効成分とする製剤についての具体例を製剤例として説明することにす る o
以下の合成例、 実施例において、 デプシペプチドおよび環状デブシぺ プチドを構成するァミノ酸が D体である場合についてはその旨を特記す るこ ととし、 かかる特記のない場台はァミ ノ酸は L体であるものとす る
合成例 1
Figure imgf000039_0001
3 - ヒ ドロキシミ リスチン酸（5. 00 g ) およびトリェチルァ ミ ン（2. 85 m l ) の DMF ( 50m l ) 溶液に臭化べンジル （2. 43m l ) を加え、 室温で一晩 撹拌した。 溶媒を留去した後、 残留物に酢酸ェチルと水を加えた。 分液 した酢酸ェチル層を水で 2回洗浄後、 無水硫酸ナトリゥムで乾燥した。 酢酸ェチルを留去した後、 シリカゲルカラムクロマ トグラフィ ー （シリ 力ゲル 30g、 クロ口ホルム ： メ タノール = 100： 0 ~10)で精製し、 3 - ヒ ドロキシミ リスチン酸ベンジルを 3.69 g得た。
( 3 - ヒ ドロキンミ リスチン酸べンジルの NMRデータ）
Ή-NMR (5 ppm, CDC13)： 7.33-7.40 (5H. ra), 5.16 (2H, s), 3.95- 4.05 (1H, m)， 2.85 (1H, d, J=4. Hz), 2.56 (1H， dd, J=2.9, 17Hz), 2.46 (1H, dd, J=9.0, 17Hz), 1.20-1.60 (20H, m), 0.88 (3H. t, J= 6.8Hz)
合成例 2 l
Figure imgf000040_0001
合成例 1で得られた 3 - ヒ ドロキンミ リスチン酸べンジル （3.00g) 、 Boc -イソロイ シン （2.22 g) およびジメチルアミ ノ ビリ ジン（77mg) の ジクロロメ タン （25ral) 溶液に氷?令下、 DCC(2.78g) のジクロロメタン
(25ml) 溶液を滴下し、 氷冷下 1時間、 続いて室温で 2時間撹拌した。 析出物を«別した後、 ジクロロメ タ ンを留去した。 残留物を酢酸ェチル に溶解し、 0.5N塩酸、 5 %炭酸水素ナ ト リ ゥム水溶液、 そして飽和食 塩水で順番に洗净後、 無水硫酸ナ ト リ ウムで乾燥した。 酢酸ェチルを留 去した後、 シリ カゲルカラムクロマ トグラフィ ー （シリ カゲル 100 g、 へキサン ： 酢酸ェチル = 200 ： 0〜15) で精製し、 中間体化合物（1 )を 4.62g得た。
(中間体化合物（1 )の NMRデータ）
ΊΙ-NH (5 ppm. CDC13) ： 7.30-7.39 (511, m), 5.24-5.33 (1H. m), 5.12 (III. s), 5.10 (111. d. J = 2.5Hz), 4.98-5.05 (111. m). 4.15- 4.25 (111. m), 2.56-2.72 (211. ra), 1.75-1.90 (III, m), 1.50-1.70 (2H. ra), 1.20-1. 5 ( 1911. m). 1. 4 (9H, s), 1.10-1.20 (111, m). 0.86-0.93 (9H, m)
合成例 3
Figure imgf000041_0001
合成例 2で得られた中間体化合物（1 ) (4.62g) のトリフルォロ酢酸 (以下、 「TFA」 という） （9ml) 溶液を室温で 15分撹拌した。 TFAを留 去した後、 残留物を酢酸ェチルに溶解し、 5%炭酸水素ナトリウム水溶 液で洗浄した。 これを無水硫酸ナ ト リウムで乾燥後、 酢酸ェチルを留去 し、 中間体化合物（2)を 3.78g得た。
(中間体化合物（2)の NMRデータ）
Ή-NMR ( δ pptn, CDC13) ： 7.31-7.39 (5H, m), 5.24-5.32 (III, m),
5.06-5.14 (2H, m), 3.02-3.29 (1H m), 2.75-2.69 (2H, m), 1.50-
1.75 (4H m), 1.30-1. 0 (1H, m), 1.10-1.30 (20H m). 0.85-0.94
(9H, m)
合成例 4
0 - lie 0- lie- D- Leu-Boc
X02Bzl
ヽ、 i/C02Bzl
Γ10 '10 台成例 3で得られた中間体化合物（2 )(3.78 g) と Boc- D -ロイシン 1水和物 （2.10g ) と HOBt · II20 (1.25 g ) とのジクロロメタン （50ml) 溶液に氷冷下、 WSCI (1.78g) を加えた。 この溶液を氷冷下で 1時間撹 拌した後、 室温で一晩撹拌した。 ジクロロメ タンを留去した後、 残留物 に酢酸ェチルを加え、 1 N塩酸、 水、 5%炭酸水素ナ トリウム水溶液そ して水で順番に洗浄後、 無水硫酸ナトリゥムで乾燥した。
酢酸ェチルを留去した後、 シリカゲルカラムクロマトグラフィー （シ リカゲル 80g、 へキサン ：酢酸ェチル = 200： 10 25)で精製し、 中間体 化合物（3)を 5.58g得た。
(中間体化合物（3)の NMRデータ）
Ή-NMR ( δ ppm, CDC13) ： 7.30-7.39 (5H. m), 6.60-6.70 (1H, m), 5.25-5.30 (1H, m), 5.07-5.14 (2H, m), 4.75-4.95 (1H, in), 4.45- 4.55 (1H, m), 4.10-4.20 (1H, m), 2.55-2.71 (2H, m), 1.80-1.95 (1H, m), 1.50-1.70 (3H, n , 1.35-1.50 (2H, m), 1. 5 (9H, 2s), 1.20-1.35 (19H, m), 1.00-1.20 (1H, ra), 0.85-0.95 (15H, m) 合成例 5
0 - Ile-D- Leu-Boc 0-Ile-D-Leu-Asp(OtBu)-Fmoc
Figure imgf000042_0001
合成例 4で得られた中間体化合物（3)(8.77g) の TFA (17ml) 溶液を 室温で 45分撹拌した。 TFAを留去した後、 残留物を酢酸ェチルに溶解し、 5%炭酸水素ナトリゥム水溶液で洗浄した。 これを無水硫酸ナトリウム で乾燥後、 酢酸ェチルを留去してァミ ン体を得た。 得られたァミ ン体、 Fmoc- L -ァスパラギン酸/ S - t -ブチルエステル （5.46 g ) と HOBt . Η20 (2.24 g) のジクロロメ タン （80ml) 溶液に氷冷下、 WSCI (2.80 g ) を加えた。 この溶液を氷冷下で 2時間撹拌した後、 室温で一晩撹拌した。 ジクロロメタンを留去した後、 残留物に酢酸ェチルと 10%クェン酸水溶 液を加えた。 分液した酢酸ェチル層を水、 5%炭酸水素ナ ト リウム水溶 液そして水で順番に洗浄後、 無水硫酸ナ トリウムで乾燥した。 酢酸ェチ ルを留去した後、 シリカゲルカラムクロマトグラフィー （シリカゲル 60 g、 へキサン ：酢酸ェチル = 200： 10〜50)で精製し、 中間体化合物（4 ) を 11.06g得た。
(中間体化合物（4 )の NMRデータ）
ΊΙ-NHR ( δ ppm, CD30D) ： 7.78 (2H. d, 7.8 Hz), 7.64 (211. d. J=7.3 Hz). 7.38 (2H, t, 5 = 1.6 Hz), 7.25-7.35 (7H. m), 5.20-5.25 (1H, m), 5.07 (1H， s). 5.06 (1R. s), 4.35-4.50 (3H, m), 4.25- 4.35 (2H, n , 4.15-4.25 (1H, m), 2.70-2.80 (1H, m), 2.55-2.65 (3H, m), 1.75-1.90 (1H, m)， 1.50-1.75 (4H, m), 1.44 (9H, s), 1.10-1.50 (21H, m), 0.75-0.95 (15H, m)
合成例 6
0-Ile-D-Leu-Asp(OtBu)-Fmoc
Figure imgf000043_0001
合成例 5で得られた中間体化合物（4) (ll.OOg) の DM 125ml) 溶液 にジェチルァミ ン （12.5ml) を加え室温で 2時間撹拌した。 溶媒を留去 した後、 Fmoc— L -バリ ン （3.91g) と HOBt · 1水和物 （1.94g) とを 加えてジクロロメ タン （70ml) に溶解した。 この溶液に氷冷下、 WSCI
(2.43g) を加えた。 この溶液を氷冷下で 2時間撹拌した後、 室温で一 晚撹拌した。 DMFを留去した後、 残留物に酢酸ェチルと 10%クェン酸水 溶液を加えた。 分液した酢酸ェチル層を水、 5%炭酸水素ナ トリウム水 溶液そして水で順番に洗浄後、 無水硫酸ナ ト リ ウムで乾燥した。 酢酸ェ チルを留去した後、 シリカゲルカラムクロマトグラフィー （シリカゲル 100g、 クロロホルム ： メタノール = 200： 0〜10) で精製し、 中間体化 合物（5)を 10.65g得た。
(中間体化合物（5)の NMRデータ）
Ή-N R (δ ppm, CD30D)： 7.66-7.82 (4H. in), 7.25-7.40 (9H, m),
5.15-5.25 (III, m), 5.00-5.10 (211, m), 4.60-4.65 (1H, m), 4.30- 4.50 (311, m), 4.20-4.30 (211, m), 3.80 (III. d, 】 = 6.4 Hz). 2.90- 3.00 (III, m), 2.50-2.80 (311, m), 2.00-2.10 (III, m), 1.60-1.95 (3H. m). 1.35-1.60 (311. m), 1.43 (9H, s), 1.10-1.35 (2011. m), 0.80-1.05 (2111. m) 合成例 Ί
0-Ile-D-Leu-Asp(OtBu)-Val-Fmoc
Figure imgf000044_0001
0-Ile-D-Leu-Asp(OtBu)-Val-D-Leu-Fmoc
Figure imgf000044_0002
合成例 6で得られた中間体化合物（5) (2.74 g) の DMFGOml) 溶液に ジェチルァミ ン （3 ml) を加え室温で 4時間撹拌した。 溶媒を留去した 後、 Fmoc- D -ロイシン （l.Olg) と HOBt · 1水和物 （0.44g) とを加 えてジクロロメタン（15ml) に溶解した。 この溶液に氷冷下、 WSCIC0.55 g) を加えた。 この溶液を氷冷下で 2時間撹拌した後、 室温で一晩撹拌 した。 DMFを留 した後、 残留物に酢酸ェチルと 10%クェン酸水溶液を 加えた。 分液した酢酸ェチル層を水、 5 %炭酸水素ナトリウム水溶液そ して水で順番に洗浄後、 無水硫酸ナトリゥムで乾燥した。 酢酸ェチルを 留去した後、 シリカゲルカラムクロマトグラフィー （シリカゲル 30 g、 クロロホルム ： メタノ一ル = 200： 0〜2)で精製し、 中間体化合物（6) を 2.54 g得た。
(中間体化合物（6)の NMRデータ）
Ή-NHR ( δ ρρπι. CD30D)： 7.60-7.80 (4H. m), 7.25-7.40 (911, m), 5.15-5.25 (111. m). 5.19 (211. s), 4.50-4.55 (1H, m), 4.25-4.40 (411, m), 4.15-4.25 (2H, m), 4.13 (1H. d, J=5.9 Hz), 2.80-2.90 (1H, m), 2.50-2.80 (3H, m), 2.15-2.25 (1H, m), 1.80-1.90 (1H, m), 1.50-1.75 (711. m), 1.36 (911. s), 1.10-1.50 (21H, m), 0.80-1.00 (2711, m)
合成例 8 O-Ile- D- Leu- Asp(OtBu)- Val- D- Leu- Fmoc
Figure imgf000045_0001
O-Ile- D- Leu- Asp(OtBu)- Val-D- Leu- Leu- Fmoc XOzBzl
'10
合成例 7で得られた中間体化合物（6)(2.00g) の DMF (20ml) 溶液に ジェチルァミ ン （2ml) を加え室温で 4時間撹拌した。 溶媒を留去した 後、 Fmoc - L -ロイシン （0.67g) と HOBt · 1水和物 （0.29g) とを加 えてジクロロメタン（20ml) に溶解した。 この溶液に氷冷下、 WSCIC0.36 g) を加えた。 この溶液を氷冷下で 2時間撹拌した後、 室温で一晚撹拌 した。 ジクロロメタンを留去した後、 残留物にクロ口ホルムと 10%クェ ン酸水溶液を加えた。 分液したクロ口ホルム層を水、 5 %炭酸水素ナト リゥム水溶液そして水で順番に洗浄後、 無水硫酸ナトリゥムで乾燥した c クロ口ホルムを留去した後、 シリカゲルカラムクロマトグラフィー （シ リ力ゲル 25g、 クロロホルム ： メタノール = 200： 0〜6 )で精製し、 中 間体化合物（7)を 2.19g得た。
(中間体化合物（7)の NMRf—夕）
Ή-NMR ( δ ppm, CD30D) ： 7.75-7.80 (2H, m), 7.55-7.65 (211, m), 7.25-7.40 (9H, m), 5.20-5.30 (1H, m), 5.05-5.10 (211, m). 4.15- 4.65 (7H, m), 4.00-4.10 (111. m), 3.85-3.95 (III, m), 2.90-3.00 (1H. m), 2.55-2.75 (3H, m). 2.05-2.15 (1H, m), 1.85-1.95 (1H. m), 1.50-1.80 (1011, m), 1.37. 1.39 (911, 2s), 1.10-1.50 (21H, m), 0.75-1.00 (33H. m)
合成例 9
0-Ile-D-Leu-Asp(OtBu)-Val-D-Leu-Leu-Fmoc
C02Bzl
ヽ、 '10
0-Ile-D-Leu-Asp(OtBu)-Val-D-Leu-Leu-Gln(Mbh)-Fmoc C02Bzl 合成例 8で得られた中間体化合物（7)(2.00g) の DMF (20ml) 溶液に ジェチルァミ ン（2ml) を加え室温で 2.5時間撹拌した。 溶媒を留去した 後、 N - a - Fnoc— N - r - Mbh - L -グルタミ ン（1.02g ) と HOBt · 1 水和物 （0.26g) とを加えて DMF (20ml) とジクロロメタン（ΙΟπιΙ) との 混合溶媒に溶解した。 この溶液に氷冷下、 WSCI (0.33g) を加えた。 こ の溶液を氷冷下で 2時間攬拌した後、 室温で 2曰間撹拌した。 混合溶媒 を留去した後、 残留物にクロ口ホルムと 10%クェン酸水溶液を加えた。 分液したクロ口ホルム層を水、 5 %炭酸水素ナ 卜 リゥム水溶液そして 水で順番に洗浄後、 無水硫酸ナ ト リウムで乾燥した。 クロ口ホルムを留 去した後、 シリカゲルカラムクロマトグラフィー （シリカゲル 50g、 ク ロロホルム ： メタノール = 200： 0〜4 )で精製し、 中間体化合物（8)を 1.92g得た。 - (中間体化合物（8)の NMRデータ）
Ή-NMR (δ ppm, CD30D)： 7.20-7.40 (讓, m), 7.13 (4H， d, J=8.3 Hz), 6.83 (4H, dd, J=2.0. 8.8 Hz), 6.08 (1H, s), 5.15-5.25 (1H, m), 5.00-5.10 (4H, m). 4.70-4.80 (1H, m). 4.50-4.60 (1H, w), 4.30-4.50 (2H. m), 4.20-4.30 (2H, w), 4.01 (1H, d, J=6.4 Hz), 3.76 (6H, s), 2.90-2.95 (1H, w). 2.75-2.85 (1H, in), 2.60-2.70 (2H, w), 2.35-2.45 (2H, ra)， 2.10-2.20 (1H, m), 1.80-2.05 (311, m), 1.50-1.80 (1011， m). 1.41 (9H, s), 1.10-1.50 (21H, m). 0.80-1.00 (3311, m)
合成例 10
0 - Ile-D-Leu- Asp(OtBu)- Val-D-Leu- Leu- Gln(Mbh)- Fntoc
C02Bzl
V) 10
O-Ile-D-Leu-Asp(0tBu)-Val-D-Leu-Leu-Gln(Mbh) . 1 .C02H 合成例 9で得られた中間体化合物（8)(1.85g) の DMF (20ml) 溶液に ジェチルァミ ン （2 ml) を加え室温で 1時間攪拌した。 溶媒を留去した 後、 メ タノ ール （60ml) に溶解し 5 %パラ ジウム炭素 （0.20g) を加え、 水素ガス雰囲気下 3時間撹拌した。 パラ ジウム炭素を濾別し、 メタノー ルを留去した後、 得られた粗生成物をシリ力ゲルカラムクロマ 卜グラフ ィー （シリ力ゲル 30g、 クロロホルム ： メタノール = 200： 0〜30)で精 製し、 中間体化合物（9)を 1.16g得た。
(中間体化合物（9)の NMRデータ）
^-N R (δ ppra, CD30D)： 7.14 ( H, d, J=8.3 Hz), 6.85 (4H， dd, J=2.2, 9.3 Hz). 6.08 (1H. s), 5.23 (1H, quint.. J=6.0 Hz), 4.79 (1H, dd, J=5.0, 8.8 Hz). 4.46 (1H, dd, J = 10, 21 Hz), 4.46 (1H. t, J = 10 Hz), 4.28 (1H, d, J=6.8 Hz), 4.24 (1H, t, J = 7.4 Hz), 4.02(1H, d, J=6.4 Hz). 3.84 (1H, t, J = 14 Hz), 3.77 (6H, 2s), 3.01 (111, dd, J=5.2. 16 Hz), 2.75 (1H, dd, J=9.0, 16 Hz), 2.37- 2.52 (3H, ra), 2.34 (III. dd, J = 6.6, 15 Hz), 2.02-2.19 (2H, m), 1.83-2.02 (2H, m). 1.54-1.83 (10H, m), 1. 4 (9H, s)， 1.08-1.53 (21H, in), 0.81-1.08 (33H, m)
台成例 11
0 - Ile-D- Leu- Asp(OtBu)- Val- D-Leu- Leu- Gln(Mbh) >
,C0211
0
Figure imgf000047_0001
合成例 10で得られた中間体化台物（9) (0.50g ) の DMF (200ml) 溶液 に DPPA (0.09ml) を氷冷下加えた。 さらに ト リェチルァミ ン（0.06ml)を 加え氷冷下で 3時間撹拌した後、 室温で一晩撹拌した。 この溶液を氷冷 した後、 (0.09ml) およびトリェチルァミ ン （0.06ml) を加えた。 この溶液を氷冷下で 4時間撹拌した後、 室温で 3日間撹拌した。 溶媒を 留去した後、 残留物に酢酸ェチルと 10%クェン酸水溶液を加えた。 分液 した酢酸ェチル層を水、 5 %炭酸水素ナ卜リゥム水溶液そして水で順番 に洗浄後、 無水硫酸ナトリウムで乾燥した。 酢酸ェチルを留去した後、 シリ力ゲル力ラムクロマ トグラフィー （シリカゲル 25 g、 クロ口ホル ム ： メタノール = 200： 0〜4)で精製し、 本発明の環状デブシぺプチド ( 1 ) を 0.35g得た。
(環状デブシぺプチド（1 )の NMRデータ）
Ή-NHR ( δ ppm, CD30D) ： 7.07-7.20 (4H. m). 6.80-6.92 (4H, m), 6.01-6. 10 (111, m). 5. 14-5.29 (1H, m), 4.67-4.78 (1H, m), 4.21- 4.45(5H, m), 4. 06-4. 16 (1H, m), 3.77 (3H, s). 3. 76 (3H, s)， 2.62-2.85 (2H, ), 2.47-2.58 (111, m). 2.21-2.44 (3H, m), 1.81- 1.94 (4H. m), 1.53-1.81 (鼠 m), 1.44 (9H. s), 1.08-1.53 (21H, m), 0.74-1.08 (33H, m)
台成例 12
Figure imgf000048_0001
合成例 11で得られた環状デブシぺプチド（1 )(0.35g) を TFA ( 5 ml) に溶解した後、 室温で 1.5時間撹拌した。 TFAを留去した後、 5 %炭酸水 素ナ トリゥム水溶液で中和し、 クロ口ホルムの 10%メタノール溶液で抽 出した。 クロロホルム層を無水硫酸ナ ト リゥムで乾燥後、 溶媒を留去し てシリカゲルカラムクロマトグラフィー （シリカゲル 20 g、 クロ口ホル ム ： メタノール = 100 ： 0〜50)で精製し、 本発明の環状デブシぺプチド ( 2 ) (以下、 「化合物 4」 という） を 0.23g得た。 (化合物 4の NMRデータ）
Ή-N R (δ ppm, CD30D)： 5.20-5.30 (1H, m), 4.80-4.90 (1H, m), 4.20-4.50 (5H, m), 4.10-4.20 (1H， m), 2.80-2.95 (2H， m), 2.40- 2.55 (2H, m), 2.10-2.25 (2H, m), 1.80-2.00 (4H, m), 1.45-1.80 (10H. m), 1.10-1.45 (21H, m), 0.70-1.10 (33H, m)
合成例 13
BzlO-Ala + D-し eu— Fmoc→Fmoc— D—し eu— Ala— OBzl
L -ァラニン ベンジルエステル · p - トルエンスルホン酸塩 （3.16 g) に酢酸ェチル （100ml) および 5 %炭酸水素ナトリウム水溶液 （50 ml) を加え、 激しく攬拌した後静置し、 分液した酢酸ェチル層を無水硫 酸ナ ト リ ウムで乾燥した。 溶媒を留去した後、 Fmoc - D - ロイシン
(3.18g) と HOBt * 1水和物 （1.35g) とを加えてジクロロメタン（100 ml) に溶解した。 この溶液に氷冷下で WSCI (2.59g) を加え、 氷冷下 1 時間、 その後徐々に室温まで昇温させて一晚撹拌した。 反応液を 10%ク ェン酸水溶液、 水、 5 %炭酸水素ナトリウム水溶液、 そして水で順番に 洗浄後、 無水硫酸ナ ト リ ウムで乾燥した。 溶媒を留去した後、 シリカゲ ルカラムクロマトグラフィー （シリカゲル 50g、 クロ口ホルム ： メタノ ール： ァンモニァ水 =20： 1 ： 0.05) で精製し、 ジぺプチド（ 1：)を 5· 36 g得た。
(ジぺプチド（1 )の 1？データ）
Ή-NMR (<5 ppm, CDC13) 7.76 (2H， d, J = 7.8 Hz), 7.58 (2H. d. J= 7.3 Hz), 7.28-7.42 (9H, m), 6.57 (1H, d, J=6.3 Hz), 5.18 (1H， d. ] = 12.2 Hz). 5.12 (1H. d, J = 12.2 Hz). 5.09 (1H, d, J=8.3 Hz). 4.57-4.6 (111. m), 4.41-4.46 (211. m). 4.20-4.23 (211. ra), 1.48- 1.69 (311. m), 1. 1 (311. d, J=6.8 Hz), 0.93 (311, d. J=6.8 Hz) 合成例 14
Fmoc— D— Leu— Ala— 0Bzl→ Fmoc— Leu— D— Leu— Ala— OBzl 合成例 13で得られたジペプチド（1 ) (5.36g) を DMF(50nil) に溶解し、 ジェチルァミ ン （5 ml) を加え、 室温で 2時間撹拌した. 溶媒を留去し た後、 Fnoc- L -ロイシン （3.18g) および HOBt · 1水和物 （1.35g ) とを加えてジクロロメタン （lOOral) に溶解した。 この溶液に氷冷下で WSCI (2.59g) を加え、 氷冷下で 1時間、 その後徐々に室温まで昇温さ せて一晩撹拌した。 反応液を 10%クェン酸水溶液、 水、 5 %炭酸水素ナ トリウム水溶液、 そして水で順番に洗浄後、 無水硫酸ナト リウムで乾燥 した。 溶媒を留去した後、 シリ力ゲルカラムク口マトグラフィ ー （シ リカゲル 50g、 クロ口ホルム ： メタノール： ア ンモニア水 = 50 : 1 ： 0.05) で精製し、 トリベプチド（1)を 7.18g得た。
(トリぺプチド（1 )の NMRデータ）
Ή-N R (Sppn CDC13) 7.75 (2H, d, J = 7.3 Hz), 7.53-7.57 (2H, m). 7.28-7.41 (9H, m), 7.01 (1H, d， J=6.8 Hz). 6.43 (1H, d, J = 8.3 Hz). 5.20 (1H. d, J=6.8 Hz), 5.12 (1H, d， J=12.2 Hz), 5.05 (1H. d. J = 12.2 Hz), 4.06-4.56 (6H, m), 1.47-1.78 (6H, m), 1.34 (3H, d. J=7.3 Hz). 0.90-0.95 (12H, m)
合成例 15
Fmoc—し eu— D—し eu—/ a— 0Bzl→し eu— D—し eu— Ala— OBzl
合成例 14で得られた トリペプチド（ 1 )(7.08g) を DMF (70ml) に溶解 し、 ジェチルァミ ン （7 ml) を加え、 室温で 2時間撹拌した。 溶媒を留 去した後、 シリカゲルカラムクロマ トグラフィー （シリカゲル 100 g、 クロ口ホルム ： メタノール ： アンモニア水 = 50 : 1 ： 0.05-10： 1 ： 0.05) で精製し、 トリぺプチド（2 )を 2.08g得た。
(トリぺプチド（2)の NMRデータ）
リト画 ( (5ppm, CDCI3) 7.57 (III, d, J=8.3 Hz). 7.31-7.38 (5H. m), 6.86 (III, d, J = 7.3 Hz), 5.19 (111, d, J = 12.2 Hz), 5.11 (111, d, J = 12.2 Hz), 4.52-4.59 (111. m), 4.41-4.47 (III, m), 3.38 (III. dd. J-3.9, 9.8 Hz). 1.28-1.79 (6H， m), 1.40 (3H， d, J=6.8 Hz), 0.91-0.96 (12H. m)
合成例 16
Leu— D - Leu— Ala- 0Bzl→Fmoc- Gln(Mbh) - Leu- D- Leu- Ala- OBzl 合成例 15で得られた トリベプチド（2 )(2.08g)、 N - α _ Fraoc - Ν - r - Hbh- L -グルタミ ン（3.05 g) および HOBt · 1水和物 （0.76 g) を ジクロロメタン （30ml) と DMF (3ml) の混合液に溶解し、 氷冷下で WSCI
(1.47g) を加え、 氷冷下で 1時間、 その後徐々に室温まで昇温させて ー晚撹拌した。 反応液をクロ口ホルム（lOOnil) で希釈し、 10%クェン酸 水溶液、 水、 5 %炭酸水素ナ トリウム水溶液、 そして水で順番に洗浄後、 無水硫酸ナトリゥムで乾燥した。 溶媒を留去し、 テトラべプチド（1 )を 5.02g得た。 -
(テトラべプチド（1 )の NMRデータ）
Ή-NHR ( δ ppm, d-DMSO) 8.52 (111. d， J=8.8 Hz), 7.27-8.13 (18H, m), 7.08-7.15 (4H, m), 6.83-6.85 (4H， m), 6.01 (1H, d, J=8.3 Hz), 5.06 (1H. d, J = 12.7 Hz), 5.11 (1H. d, J=12.7 Hz), 4.01-4.27 (7H, m), 3.70 (6H, s), 2.23-2.29 (2H, m), 1.79-1.92 (2H. m), 1.46- 1.58 (6H, m), 1.29 (3H. d, J=7.3 Hz), 0.78-0.87 (12H, m)
合成例 Π
Fmoc-Gln(Mbh)-Leu-D-Leu-Ala-OBzl→Fmoc-Gln( bh)-Leu- D- Leu— Ala(Mbh)— Fmoc
合成例 16で得られたテトラべプチド（1 )(1.50g) をメ夕ノール （150 ml) と DMF (75ml) の混台液に溶解し、 10%パラジウム炭素（0.70 g ) を 加え、 水素ガス雰囲気下 2時間撹拌した。 パラジウム炭素を濾別し、 溶 媒を留去し、 テトラペプチド（2)を 1.43g得た。
(テトラべプチド（2 )の NMRデータ）
Ή-N R ( δ pptn. d-DMSO) 8.56 (HI, d, J=8.8 Hz), 7.28-8.17 (12H, in), 7.13-7.16 (4H, m), 6.82-6.85 (4H, in), 6.01 (1H, d, J=8.3 Hz). 4.09-4.27 (7H, m), 3.71 (6H. s). 2.24-2.33 (2H. n , 1.75-1.92 (2H, m), 1.44-1.59 (6H. m), 1.24 (3H, d, J = 7.3 Hz), 0.78-0.87 (12H, m)
台成例 18
Val-OBzl→D-Leu-Val-OBzl
Lーバリ ン ベンジルエステル · p— トルエンスルホン酸塩 （4.56 g) に酢酸ェチル （lOOral) および 5 %炭酸水素ナト リウム水溶液（50ral) を 加え、 激しく撹拌した後静置し、 分液した酢酸ェチル層を無水硫酸ナト リゥムで乾燥した。 溶媒を留去した後、 Fmoc- D -ロイシン （4.24g) と HOBt * 1水和物 （1.78g) とを加えてジクロロメタン （40ml) に溶解 した。 この溶液に氷?令下で WSCI (3.46g) を加え、 氷冷下 1時間、 その 後徐々に室温まで昇温させて一晩撹拌した。 反応液をクロ口ホルム （80 ml) で希釈し、 飽和食塩水で洗浄した後、 無水硫酸ナ ト リウムで乾燥し た。 溶媒を留去した後、 残留物を DMF(50ml) に溶解し、 ジェチルァミ ン
(8ml) を加え、 室温で 3時間撹拌した。 溶媒を留去した後、 シリカゲ ルカラムクロマ トグラフィー （シリ カゲル 75 g、 クロ口ホルム ： メ タノ ール =100： 0〜2) で精製し、 ジぺプチ ド（2)を 3.27 g得た。
(ジぺプチド（2)の NMRデータ）
■H-NMR ( 5ppm, CD30D) 7.29-7.39 (5H, m), 5.20 (111. d, J = 12.2 Hz), 5.14 (III. d. J=12.2 Hz), 4.35 (1H, d, J=5.9 Hz). 3.42 (1H, dd. J = 6.4. 7.8 Hz), 2.13-2.22 (HI. m), 1.63 - 1.73 (1H， m), 1.49- 1.55 (HI. m), 1.33-1.40 (111, m). 0.91-0.95 (12H, m)
台成例 19
D-Leu- Val-OBzl→Ala-D-Leu- Val-OBzl
台成例 18で得られたジぺプチ ド（2) (2.88g) 、 Fmoc - L -ァラニン (1.97g ) および HOBt ' 1水和物 （0.89g) を DMF (25ml) と THF (25ml) の混合液に溶解し、 氷冷下で WSCI (1.72g) を加え、 氷冷下で 1時間、 その後徐々に室温まで昇温させて一晩撹拌した。 溶媒を留去した後、 残 留物を DMF (20ml) に溶解し、 ジェチルァミ ン（ 3 ml) を加え、 室温で 1 時間撹拌した。 溶媒を留去した後、 シリカゲルカラムクロマ 卜グラフィ 一（シリ力ゲル 50g、 クロ口ホルム ： メタノール =100： 0〜2) で精製 し、 卜リベプチド（3)を 1.59g得た。
(トリぺプチド（3)の NMRデータ）
Ή-NMR ( <5ppm, CDC13) 7.57 (1H, d, J = 8.3 Hz), 7.30-7.38 (5H, m), 6.86 (1H, d, J = 8.3 Hz), 5.18 (1H, d, J = 12.2 Hz), 5.11 (1H, d, J = 12.2 Hz). 4.43-4.52 (2H, m), 3.49 (1H. q, J=6.8 Hz), 2.14- 2.25 (1H， m), 1.74-1.80 (1H, m), 1.62-1.70 (1H, m). 1.53-1.60 (1H. in), 1.51 (211, br), 1.32 ( 3H, d, J=6.8 Hz), 0.86-0.96 (12H. m)
合成例 20
Ala-D-Leu-Val-OBzl→Fmoc-Gln( bh)-Ala-D-Leu-Val-OBzl 合成例 19で得られた トリぺプチド（3) (1.59g) 、 N - a - Fmoc - Ν - r - Mbh - L -グノレ夕ミ ン（2. g) および HOBt · 1水和物（0.60g) の DMF (50ml) 溶液に、 氷冷下で WSCI(1.17 g ) を加え、 氷冷下で 1時間、 その後徐々に室温まで昇温させて一晩撹拌した。 反応液に水（100ml) を 加え、 析出した不溶物を遽取し、 乾燥し、 テ卜ラベプチド（3)を 3.78 g 得た。
(テトラべプチド（3 )の NMRデータ）
ΊΙ-NMR ( 5ppni, d-D SO) 8.51 (III, d, J=8.3 Hz), 8.07 (111, d， J = 8.3 Ilz). 7.91-7.99 (211, m), 7.86 (211. d, J = 7.3 Hz), 7.67-7.72 (2H. m). 7.43 (2H. d, J = 7.8 Hz). 7.28-7.41 (911, m), 7.13-7.15 ( H. m). 6.82-6.85 (411, m). 6.01 (111. d, J=8.8 Hz), 5.13 (III. d. J = 12.7 Hz), 5.07 (1H, d, J = 12.7 Ilz), 3.71-4. 4 (711, m), 3.71 (6H, s), 2.26-2.53 (4H, m), 2.02-2.08 (1H, in), 1.45-1.93 (3H, m), 1.21 (3H, d. J=7.3 Hz), 0.80-0.86 (12H, m)
合成例 21
Fraoc-Gln(Mbh)-Ala-D-Leu-Val-OBzl-→Finoc-Gln(Mbh)-Ala-D- Leu-Val
台成例 20で得られたテトラペプチド（3) (1.45g) をメタノール （70 ml) と DMF (70ml) の混合液に溶解し、 10%パラジウム炭素（0.50 g ) を 加え、 水素ガス雰囲気下 1時間撹拌した。 パラジウム炭素を據別し、 溶 媒を留去し、 テトラペプチド（4)を 1.76g得た。
(テトラべプチド（4 )の NMRデータ）
Ή-NMR ( δ ppm, d-D SO) 8.53 (1H, d, J=8.3 Hz), 7.28-7.97 (12H, m). 7.13-7.16 ( H, m), 6.82-6.86 (4H, m), 6.01 (1H, d. J=8.8 Hz), 4.02-4.43 C7H, m). 3.71 (6H, s)， 2.23-2.39 (1H, m), 1.79-2.06 (3H, m), 1. 5-1.60 (3H. m), 1.21 (3H, d， J = 6.8 Hz), 0.81-0.86 (12H, m)
合成例 22
Val-OBzl→D-Ala- Val-OBzl
L -バリ ン ベンジルエステル · p - トルエンスルホン酸塩 （2.28g) に酢酸ェチル （100ml) および 5 %炭酸水素ナトリウム水溶液（50ml) を 加え、 激しく撹拌した後静置し、 分液した酢酸ェチル層を無水硫酸ナト リウムで乾燥した。 溶媒を留去した後、 Fmoc- D -ァラニン （1.87g) と HOBt * 1水和物 （0.89g) とを加えてジクロロメタン （20ml) に溶解 した。 この溶液に氷冷下で WSCI (1.73g) を加え、 氷冷下 1時間、 その 後徐々に室温まで昇温させてー晚撹拌した。 反応液をクロ口ホルム （30 ml) で希釈し、 飽和食塩水で洗浄した後、 無水硫酸ナ ト リウムで乾燥し た。 溶媒を留去した後、 残留物を DMF(30mU に溶解し、 ジェチルァミ ン (3ml) を加え、 室温で 1時間撹拌した。 溶媒を留去した後、 シリカゲ ルカラムクロマ トグラフィ ー （シリカゲル 50g、 クロ口ホルム ： メ タノ ール = 100 : 0〜2) で精製し、 ジペプチ ド（3)を 1.47g得た。
(ジぺプチ ド（3)の NMRデータ）
!H-N R (< ριπ, CDC13) 7.71 (1H, d, J=8.8 Hz), 7.31-7.39 (5H. ra). 5.21 (1H. d, J = 12.2 Hz), 5.12 (1H, d, J=12.2 Hz), 4.56 (1H, dd, J=4.4, 8.8 Hz), 3.53 (1H, q, J=6.8 Hz), 2.17-2.28 (1H, ra), 1.50 (2H( br)， 1,33 (1H, d, J=6.8 Hz), 0.93 (3H. d, J=6.8 Hz), 0.88 (3H. d, J=6.8 Hz)
合成例 23
D- Ala- Val-OBzl→Leu-D- Ala-Val-OBzl
合成例 22で得られたジぺプチ ド（3 ) (1.47g) 、 Fmoc- L -ロイシ ン
(1.98g) および HOBt * 1水和物 （0.83g) の DMF(20ral) 溶液に、 氷?令 下で WSCI (1.61g) を加え、 氷冷下で 1時間、 その後徐々に室温まで昇 温させて一晚撹拌した。 反応液を酢酸ェチル （50ml) で希釈し、 5%炭 酸水素ナ ト リ ウム水溶液、 水、 10%クェン酸水溶液そして水で順番に洗 '净後、 無水硫酸ナ ト リ ウムで乾燥した。 溶媒を留去した後、 残留物を DMF(30ml) に溶解し、 ジェチルァ ミ ン （3ml) を加え、 室温で 1時間撹 拌した。 溶媒を留去した後、 シリカゲル力ラムクロマ トグラフィ ー （シ リカゲル 50 g、 クロ口ホルム〜クロ口ホルム ： メ タノーノレ ： ア ンモニア 水 = 50 : 1 : 0.05) で精製し、 ト リペプチ ド（4)を 2.11g得た。
( 卜 リベプチ ド（4)の NMRデータ）
Ή-NMR ((5ppm, CDC13) 7.66 (1H, d, J=7.3 Hz), 7.30-7.38 (5H, m), 6.90 (111. d. J=8.3 Hz), 5.19 (1H. d. J=12.7 Hz), 5.10 (1H. d, J-12.7 Ilz), 4.49-4.57 (211, m), 3.37 (III, dd, J = 3.4, 9.8 Hz), 2.14-2.26 (III. m), 1.40 (111. d, J = 6.8 Hz), 1.29-1.77 (511, m), 0.85-0.96 (1211. m)
合成例 24 Leu-D- Ala-Val-OBzl- Fmoc-Gln(Mbh)-Leu-D- Ala- Val-OBzl 合成例 23で得られたトリぺプチド（4 ) (2. llg) 、 N - α - Fmoc - N - r - Mbh- L -グルタミ ン（3.20g) および HOBt · 1水和物（0.80g) の DMF (25ml) 溶液に、 氷冷下で WSCK1.55 g ) を加え、 氷冷下で 1時間、 その後徐々に室温まで昇温させてー晚撹拌した。 反応液に水（100ml) を 加え、 析出した不溶物を炉取し、 乾燥し、 テトラべプチ ド（5)を 4.38 g fた。
(テトラべプチド（5 )の NMRデータ）
■H-NHR (< ppm, d-DMSO) 8.51 (1H. d, J=8.3 Hz), 7.87-7.99 (3H. m), 7.86 (2H, d, J = 7.3 Hz), 7.67-7.69 (2H, m), 7.28-7.44 (10H, in), 7.12-7.15 (4H, ni), 6.83-6.85 (411, m), 6.01 (1H, d, J=8.3 Hz), 5.14 (1H. d, J = 12.2 Hz), 5.08 (1H, d， J=12.2 Hz), 4.02-4.40 (7H, m), 3.71 (6H. s), 1.46-2.26 (8H. m). 1.19 (3H, d, J = 6.8 Hz), 0.80-0.86 (12H, m)
合成例 25
Fmoc -Gln(Hbh)- Leu-D- Ala- Val-OBzl→Fmoc- Gln(Mbh)- Leu- D- Ala-Val
合成例 24で得られたテ 卜ラベプチド（5 ) (1.45 g) をメ夕ノール（100 ml) と DMF (50ml) の混台液に溶解し、 10%パラジウム炭素（0.50 g ) を 加え、 水素ガス雰囲気下 1時間 30分間撹拌した。 パラ ジウム炭素を濾別 し、 溶媒を留去し、 テ トラペプチド（6)を 2.00g得た。
(テトラべプチ ド（6)の NMRデータ）
'I!-NMR ( (5ppm. CD30D) 7.62-7.78 (4H, m), 7.28-7.39 (411, m), 7.12-7.15 (411. m), 6.83-6.86 (411. m), 6.09 (1H. s), 3.87-4.45 (711. m), 3.75 (611, s), 1.33-2.39 (8H, m), 0.85-0.97 (1511, m) 台成例 26
Fmoc-Gln(Mbh)- Leu-D- Leu- Val-OBzl-→Fmoc- Gln( bh)- Leu- D- し eu— Val
合成例 24で得られたテトラペプチド（5) (l.Olg) をメタノール （80 ml) と DMF (80ml) の混合液に溶解し、 10%パラ ジウム炭素（0.55 g ) を 加え、 水素ガス雰囲気下 2時間撹拌した。 パラ ジウム炭素を濾別し、 メ タノ一ルを留去し、 テトラべプチド（7 )を 1.98g得た。
(テトラべプチド（7)の NMRデータ）
Ή-NMR ( δ ppm, d-D SO) 8.55 (1H. d, J=8.8 Hz), 7.28-8.01 (12H, tn), 7.13-7.16 (4H, ra), 6.82-6.85 (4H, m), 6.01 (1H. d, J=8.8 Hz), 4.02-4.33 (7H, m). 3.71 (6H, s), 2.25-2.29 (2H. m), 1.77-2.05 (3H. m), 1.45-1.60 (6H, n , 0.80-0.88 (18H, m)
合成例 27
Figure imgf000057_0001
3 -ヒ ドロキシ ミ リ スチン酸べンジル （ 1.67 g ) 、 Fmoc— L -ァラニ ン · 1水和物 （1.65g) およびジメチルァミ ノ ピリ ジン （60mg) のジク ロロメタン （120ml) 溶液に氷冷下で DCC (1.54g) を加え、 氷冷下 1時 間、 その後徐々に室温まで昇温させて一晩撹拌した。 沈殿を濾別した後、 ジクロロメタンを留去した。 残留物に酢酸ェチル （30ml) を加え、 不溶 物を濾別した後、 酢酸ェチルを留去した。 残留物を DMF(20ml) に溶解し、 ジェチルァミ ン （2 ml) を加え、 室温で 1時間撹拌した。 溶媒を留去し た後、 シリカゲルカラムクロマトグラフィー （シリカゲル 50 g、 クロ口 ホルム ： メタノール = 200： 0〜 ）で精製し、 中間体化合物（10)を 1.70 g得た。
(中間体化合物（10)の NMRデータ）
ΊΙ-NMR (5 ppm. CDC13) 7.32-7.36 (5H, m), 5.22-5.29 (III. in), 5.10-5.11 (211, m). 3.34-3.44 (111. nt), 2.60-2.63 (211, m), 1.20- 1.59 (25H, m), 0.88 (3H, t, J=7 Hz)
合成例 28
Figure imgf000058_0001
合成例 27で得られた中間体化合物（10) (1.70g) 、 Fmoc- D -口イシ ン （1.48g) および HOBt ' 1水和物 （0.62g) のジクロロメタン（50ml) 溶液に氷冷下で WSCI (1.20g) を加え、 氷冷下 1時間、 その後徐々に室 温まで昇温させて一晚撹拌した。 反応液を飽和食塩水で洗浄し、 無水硫 酸ナトリウムで乾燥した。 溶媒を留去した後、 残留物を DMF (20ml)に溶 解し、 ジェチルァミ ン （3 ml) を加え、 室温で 1時間撹拌した。 溶媒を 留去した後、 シリ-力ゲルカラムクロマトグラフィー （シリカゲル 75 g、 クロロホルム ： メタノール = 200： 0〜10)で精製し、 中間体化合物（11) を 1.93g得た。
(中間体化合物（11)の NMRデータ）
Ή-NMR ( ( pm, CDC13) 7.65 (1H, d. J = 7.3 Hz), 7.32-7.38 (5H, m), 5.25-5.31 (1H, m). 5.07-5.14 (211. m). 4.48-4.53 (1H, m), 3.35-3.38 (1H, m), 2.61-2.71 (2H, ra), 1.24-1.74 (28H, m), 0.94 (3H, d, J = ll.2 Hz), 0.93 (311, d, J=ll.2 Hz), 0.88 (3H, t, J=6.8 Hz)
台成例 29
0 - Ala - D-Leu - Asp(OtBu) ' .CO Bzi
Figure imgf000058_0002
合成例 28で得られた中間体化台物（11) (1.93g) 、 Fmoc- L -ァスパ ラギン酸/ S - t -ブチルエステル 53g) および HOBt ' 1水和物（0.55 g) のジクロロメタン （100ml) 溶液に氷冷下で WSCI (1.07g) を加え、 氷冷下 1時間、 その後徐々に室温まで昇温させて一晩撹拌した。 反応液 を飽和食塩水で洗浄し、 無水硫酸ナトリウムで乾燥した。 溶媒を留去し た後、 残留物を DMF (30ml) に溶解し、 ジェチルアミ ン （3ml) を加え、 室温で 1時間撹拌した。 溶媒を留去した後、 シリカゲルカラムクロマト グラフ ィ ー （シリ カゲル 75 g、 クロ口ホルム ： メ タノール = 200： 0〜 10) で精製し、 中間体化合物（12)を 2.76g得た。
(中間体化合物（12)の NMRデータ）
Ή-NMR (< ppra， CDC13) 7.78 (1H, d, J=8.8 Hz), 7.09 (1H, d, J = 7.3 Hz), 7.32-7.35 (5H, m)， 5.23-5.26 (1H, m). 5.09-5.14 (211, m). 4.45-4.53 (2H, m), 3.58-3.61 (1H， m), 2.60-2.75 (4H, m), 1.24- 1.90 (34H, m), 1.43 (9H, s)， 0.88 (3H， t, J=6.8 Hz)
合成例 30 .
Figure imgf000059_0001
u - Asp(OtBu) - Val - D-Leu - Leu - Gln( bh)
Figure imgf000059_0002
合成例 29で得られた中間体化合物（ 12 )( 0.79 g )、 下記する合成例 71で 得られたテ トラべプチド（9 ) (1.08 g) および HOBt · 1水和物（0.17g) の DMF (25ml) 溶液に氷冷下で WSCI(0.33g ) を加え、 氷冷下 1時間、 そ の後徐々に室温まで昇温させてー晚撹拌した。 反応液をジクロロメタン (100ml) で希釈し、 飽和食塩水で洗净し、 無水硫酸ナトリウムで乾燥し た。 溶媒を留去した後、 残留物を DMF(30ral) に溶解し、 ジェチルァミ ン (3ml) を加え、 室温で 1時間撹拌した。 溶媒を留去した後、 シリカゲ ルカラムクロマ トグラフィ ー （シリカゲル 75 g、 クロ口ホルム ： メ 夕ノ ール ： ァンモニァ水 =50 1 0.05〜20 : 1 : 0.05) で精製し、 中間体 化合物（13)を L 46g得た。 (中間体化合物（13)の NMRデータ）
■H-N R ( <5ppiD, CD3OD) 7.29-7.35 (5H, m), 7.11-7.14 (4H, m), 6.83-6.86 (4H. m), 6.07 (1H. s), 5.21-5.25 (1H, m), 5.11 (2H. s), 4.00-4.64 (7H, m), 3.76 (611. s), 2.64-2.98 (4H, tn), 1.55- 2.34 (14H, tn), 1.44 (9H. s). 1.25-1.31 (23H, ra)， 0.87-0.98 (27H, n
合成例 31
Figure imgf000060_0001
合成例 30で得られた中間体化合物（13) (1.46g) をメタノール（150ral) に溶解し、 10%パラジウム炭素 （0.44g) を加え、 水素ガス雰囲気下 30 分間撹拌した。 パラジウム炭素を濾別し、 メタノールを留去した後、 残 留物 （0.70g) を THF (390ml) と DMF (130ml) の混台液に溶解し、 塩化 セシウム （0.94g) 、 塩化力リウム （0.37g) 、 N -メチルモルホリ ン
(0. llg) 、 HOBt - 1水和物 （0.30g) および WSCI (0.96 g ) を順次加 え、 室温で 5日間撹拌した。 反応液を舴酸ェチル （400ml) で希釈し、 水、 5 %炭酸水素ナ トリウム水溶液、 水、 10%クェン酸水溶液そして水 で順番に洗浄後、 無水硫酸ナ ト リウムで乾燥した。 溶媒を留去した後、 残留物をシリカゲル力ラム （シリカゲル 75g) に付し、 クロ口ホルム ： メ タノール =40 ： 1にて流出した分画 （500ml) を濃縮した。 残留物 (0.91g) を TFA (5ml) に溶解し、 室温で 2時間撹拌した。 溶媒を留去 した後、 5 %炭酸水素ナ ト リウム水溶液で中和し、 クロ口ホルムの 10% メ 夕ノール溶液で抽出した。 有機層を無水硫酸ナ 卜 リウムで乾燥後、 シ リ 力ゲルカラムク口マ トグラフィー （シリ力ゲル 30g、 クロ口ホルム ： メ タノール = 10: ι〜4 ： 1) で精製し、 本発明の環状デプシペプチ ド (3) (以下、 「化合物 5」 という） を 0.31g得た。
(化合物 5の NMRデータ）
'H-NMR ( 5ppm, d-DMSO) 6.65-9.24 (9H, m), 4.98-5.10 (1H, m), 4.04-4.44 (7H. m), 2.50-2.66 (2H, m), 1.98-2.42 (4H, m), 1.74- 1.90 (2H, m). 1.23-1.63 (30H, m). 0.74-0.90 (30H. ra)
FAB-MS 979 (MH+). 1017 (MK+)
合成例 32
Figure imgf000061_0001
3 -ヒ ドロキシミ リ スチン酸べンジル （3.18 g ) 、 Fmoc— L -イソ口 イシン （3.70g) およびジメチルァミ ノ ピリ ジン （0.10g) のジクロ口 メ タン （250ml) 溶液に氷冷下で DCC (3.14g) を加え、 氷冷下 1時間、 その後徐々に室温まで昇温させて一晚撹拌した。 沈殿を澳別した後、 ジ クロロメ タンを留去した。 残留物に酢酸ェチル （30ml) を加え、 不溶物 を濾別した後、 酢酸ェチルを留去した。 残留物をシリカゲルカラムクロ マ トグラフィー（シリカゲル 200g、 クロ口ホルム） で精製し、 中間体化 合物（14)を 7.14g得た。
(中間体化合物（14)の NMRデータ）
リト隱 ( ( ppm, CDC13) 7.29-7.77 (1311, m), 5.27-5.33 (211. m). 5.11 (2H, s). 4.29-4.34 (311. m), 4.23 (1H. t, J=6.8 Hz), 2.57- 2.72 (211, m), 1.07-1.90 (2311, m), 0.86-0.95 (911, m) 合成例 33
C〇2Bzl
Figure imgf000062_0001
合成例 32で得られた中間体化合物（14K7.14 g) を DMF (70ml) に溶解 し、 ジェチルァミ ン （7 ml) を加え、 室温で 5時間撹拌した。 溶媒を留 去した後、 シリカゲルカラムクロマ トグラフィ ー （シリカゲル 200 g、 クロロホルム ： メ タノール = 200： 0〜10)で精製し、 中間体化合物（15) を 4.33g得た。
(中間体化合物（15)の NMRデータ）
1 H-N R ( 5ppm, CDC13) 7.33-7.36 (5H. m), 5.24-5.31 (1H, m), 5.11 (2H. s), 3.19 (1H. d. J=4.9 Hz), 2.57-2.66 (2H, m), 1.05- 1.75 (25H, m), 0.86-0.94 (9H, m)
台成例 34
Figure imgf000062_0002
台成例 33で得られた中間体化合物（15) (1.83g) 、 Fmoc- D -ァラニ ン （0.91g) および HOBい 1水和物 （0.40g) のジクロロメタ ン （70ml) 溶液に氷冷下で WSCI (0.77g) を加え、 氷冷下で 3時間 30分撹拌した。 反応液を飽和食塩水で洗浄し、 無水硫酸ナ ト リ ウムで乾燥した。 溶媒を 留去した後、 残留物を MF (50ml) に溶解し、 ジェチルァミ ン（4ml) を 加え、 室温で 4時間撹拌した。 溶媒を留去した後、 残留物を酢酸ェチル (100ml) に溶解し、 飽和食塩水で洗浄し、 無水硫酸ナ ト リウムで乾燥し た。 溶媒を留去した後、 残留物をシリ力ゲルカラムクロマトグラフィ一 (シリ カゲル 100 g、 クロ口ホルム ： メ タノール ： アンモニア水 =40： 1 ： 0.05) で精製し、 中間体化合物（16)を 1.77g得た。 (中間体化合物（16)の NMRデータ）
•H-NMR ( < ppm, CDC13) 7.66 (1H, d, J=8.8 Hz), 7.29-7.38 (5H, π), 5.26-5.31 (1H, m), 5.13 (1H. d, J=12.2 Hz), 5.08 (1H, d, J= 12.2 Hz), 4.49-4.54 (1H, m), 3.48-3.53 (1H, m), 2.56-2.72 (2H, ID), 1.04-1.95 (25H, m), 0.86-0.93 (12H, m)
合成例 35
O- lie- D-Ala - Asp(OtBu)
,C〇2Bzl
Figure imgf000063_0001
- Asp(OtBu) - Val - D-Leu - Leu - Gln( bh)
- Asp(OtBu) - Val - D-Leu - Leu - Gln(Mbh)
Figure imgf000063_0002
合成例 34で得られた中間体化合物（16) (1.77g) 、 Foioc_ L -ァスパ ラギン酸 β - t -ブチルエステル （1.21g) および HOBt · 1水和物
(0.40g) のジクロロメタン （lOOnil) 溶液に氷冷下で WSCI(0.77g) を 加え、 氷冷下で 5時間 30分撹拌した。 反応液を飽和食塩水で洗浄し、 無 水硫酸ナトリウムで乾燥した。 溶媒を留去した後、 残留物を DMF (30ml) に溶解し、 ジェチルァミ ン （3ml) を加え、 室温で 2時間撹拌した。 溶 媒を留去し、 シリカゲルカラムクロマトグラフィー （シリカゲル 100 g、 クロ口ホルム ： メタノール： ァンモニァ水 =40 : 1 : 0.05) で精製し、 中間体化合物（Π)を 2.33g得た。 この中間体化合物（17)(0.77g)、 合成 例 71で得られたテトラべプチド（9) (1.46 g) および HOBt · 1水和物
(0.15g) の DMF (50ml) 溶液に氷冷下で WSCI(0.29 g ) を加え、 氷冷下 で 1時間、 その後徐々に室温まで昇温させて一晚撹拌した。 反応液を酢 酸ェチル（200ml) で希釈し、 水、 10%クェン酸水溶液、 水、 5%炭酸水 素ナトリゥム水溶液で順次洗浄し、 無水硫酸ナトリゥムで乾燥した。 溶 媒を留去した後、 残留物を DMF(40ml) に溶解し、 ジェチルァミ ン（ 1 ml) を加え、 室温で 1時間撹拌した。 溶媒を留去し、 シリカゲルカラムクロ マ トグラフィ一 （シリカゲル 100 g、 クロ口ホルム ： メタノール： アン モニァ水 =50： 1 ： 0.1〜20： 1 ： 0.1) で稍製し、 中間体化合物（18)を 0.73g得た。 この中間体化合物（18) (0.73g) をメタノール（100ml) に 溶解し、 10%パラジウム炭素 （0.27g) を加え、 水素ガス雰囲気下 1時 間撹拌した。 パラジウム炭素を濾別し、 メタノールを留去し、 中間体化 合物（19)を 0.65g得た。
(中間体化合物（19)の NMRデータ）
Ή-NMR (< pm, CDC13) 6.65-8.20 (15H, m), 6.11 (1H, d， J=6.3 Hz), 5.26-5.30 (1H, m), 3.93-4.53 (6H, m), 3.76 (6H, s), 1.10- 3.03 (柳. m), 0.86-0.94 (30H. m)
合成例 36
Figure imgf000064_0001
〇 - lie - D-Ala - Asp(OtBu) - Val O - lie - D-Ala - ASD - Val
Figure imgf000064_0002
Gin - Leu - D-Leu
台成例 35で得られた中間体化合物（19) (0.65g) を THF(390ml) と DMF (130ml) の混台液に溶解し、 塩化セシウム （0.94g) 、 塩化カリウム (0.37g)、 N -メチルモルホリ ン （0, llg)、 HOBt · 1水和物 （0.30g) および WSCI (0.96g) を順次加え、 室温で 5日間撹拌した。 反応液を酢 酸ェチル （400ml) で希釈し、 水、 5%炭酸水素ナトリウム水溶液、 水、 10%クェン酸水溶液そして水で順番に洗浄後、 無水硫酸ナ卜リゥムで乾 燥した。 溶媒を留去した後、 残留物をシリカゲルカラム （シリカゲル、 100g) に付し、 クロロホルム ： メタノール =20： 1にて流出した分画 (500ml) を濃縮した。 残留物 （1.05g) を TFA (5ml) に溶解し、 室温 で 2時間撹拌した。 溶媒を留去した後、 5%炭酸水素ナト リウム水溶液 で中和し、 クロ口ホルムの 10%メタノール溶液で抽出した。 有機層を無 水硫酸ナトリゥムで乾燥後、 シリ力ゲルカラムクロマ トグラフィー （シ リ力ゲル 30g、 クロロホルム ： メタノール =10： 1〜4 ： 1 ) で精製し、 本発明の環状デブシぺプチド（4)を 0.24g得た。
(環状デブシぺプチド（4)の NJIRデータ）
Ή-N R (< ppm, d-D SO) 6.63-9.86 (9H, m), 4.94-5.14 (1H, m), 3.72-4.55 (7H, m), 1.04-2.66 (38H, m), 0.74-0.91 (30H, m)
FAB-MS 979 (MH+), 1017 ( K+)
合成例 37
- Asp(OtBu)
Figure imgf000065_0001
合成例 5で得られた中間体化合物（4)(8.37g) を DMF (80ml) に溶解 し、 ジェチルアミ ン （8 oil) を加え、 室温で 1時間 30分撹拌した。 溶媒 を留去し、 酢酸ェチル（150ml) に溶解し、 飽和食塩水で洗浄し、 無水硫 酸ナトリゥムで乾燥した。 溶媒を留去した後、 シリ力ゲルカラムクロマ 卜グラフィー（シリカゲル 200g、 クロ口ホルム ： メタノール =30： 0〜 1 ) で精製し、 中間体化合物（20)を 5.81g得た。
(中間体化合物（20)の NMRデータ）
Ή-NMR (5ppm. CDC13) 7.28-7.37 (6H， m), 6.88 (1H, d, J = 6.9 Hz). 5.23-5.28 (1H, m). 5.06-5.13 (2H, m), 4.45-4.83 (2H. m), 3.62-3.66 (1H, m), 2.55-2.85 (411. m), 1.24-1.94 (37H, m), 0.85- 1.07 (15H, m)
合成例 38
Figure imgf000066_0001
u - Asp(OtBu) - Ala - D-し eu - Leu
!
Figure imgf000066_0002
合成例 37で得られた中間体化合物（20) (1.12g) 、 合成例 17で得られ たテトラペプチド（2) (1.43g) および HOBt * 1水和物（0.44 g) の DMF (50ml) 溶液に氷冷下で WSCI (0.44g) を加え、 氷冷下で 1時間、 その 後徐々に室温まで昇温させて一晚撹拌した。 反応液をクロ口ホルム （20 Oml)で希釈し、 10%クェン酸水溶液、 水、 5%炭酸水素ナ ト リウム水溶 液、 水で順次洗浄し、 無水硫酸ナトリウムで乾燥した。 溶媒を留去した 後、 残留物を!)) iF (15ml) に溶解し、 ジェチルァミ ン （0.7ml) を加え、 室温で 1時間撹拌した。 溶媒を留去し、 シリカゲルカラムクロマトグラ フィー （シリカゲル 75g、 クロ口ホルム ： メ タノール =100： 1〜5 )で 精製し、 中間体化合物（21)を 0.94g得た。
(中間体化合物（21)の NMRデータ）
^-NMR (5ppm, CDC13) 6.35-7.80 (20H, m), 6.28 (1H, d, J=8.3 Hz), 5.20-5.24 (1H， m), 5.06-5.11 (2H, m), 3.90-4.65 (6H. m), 3.78 (3H. s)， 3.77 (3H, s), 3.18-3.22 (1H, m), 2.22-2.65 (8H, m), 1.21-1.95 (43H, m), 0.79-0.97 (30H, m)
合成例 39 - Asp(OtBu) - Ala - D-Leu - Leu - Gln(Mbh)
Figure imgf000066_0003
O - lie - D-Leu - Asp(OtBu) - Ala - D-Leu - Leu - Gln(Mbh)
Figure imgf000066_0004
O - lie - D-Leu - Asp(OtBu) - Ala O - lie - D-Leu - Asp - Ala 〇 ' O
Gln(Mbh) - Leu - D-Leu Gin - Leu - D-Leu 合成例 38で得られた中間体化合物（21)(0.93g) をメタノール（150nil) に溶解し、 10%パラジウム炭素 （0.31g) を加え、 水素ガス雰囲気下 1 時間撹拌した。 パラジウム炭素を濾別し、 メ タノールを留去し、 中間体 化合物 （22) を 0.77g得た。 この中間体化合物 （22) (0.50 g)を THF(95 ml) に溶解し、 N -メチルモルホリ ン （0.08g) および HOBt ' 1水和物 (0.25g) を加え A液とした。 THF (190ml) と DMF(95ml) の混合液に、 塩化セシウム （0.70g)、 塩化カリウム （0.28g) および WSCI (0.71g) を順次加え、 B液とした。 室温で撹拌しながら A液を 20分かけて B液に 滴下し、 さらに室温で 5日間撹拌した。 反応液を酢酸ェチル（200ml) で 希釈し、 水、 5%炭酸水素ナトリウム水溶液、 水、 10%クェン酸水溶液 そして水で順番に洗浄後、 無水硫酸ナ ト リウムで乾燥した。 溶媒を留去 した後、 残留物をシリカゲルカラム（シリカゲル、 100 g) に付し、 クロ 口ホルム ： メ タノール =50： 1にて流出した分画 （500ml) を濃縮した。 残留物 （0.79g) を TFA (3ml) に溶解し、 室温で 1時間 30分撹拌した。 溶媒を留去した後、 5%炭酸水素ナトリウム水溶液で中和し、 クロロホ ルムの 10%メタノール溶液で抽出した。 有機層を無水硫酸ナトリゥムで 乾燥後、 シリカゲルカラムクロマトグラフィー （シリカゲル 30 g、 クロ 口ホルム ： メタノール =10： 1〜4 ： 1 ) で精製し、 本発明の環状デブ シぺプチド（5)を 0.21 g得た。
(環状デブシぺプチ ド（5)の NMRデータ）
Ή-NMR (δρριπ, d-DHSO) 6.63-9.74 (9H, m), 4.92-5.11 (111, ra), 3.81-4.56 (711. m), 1.75-2.69 (8H, m), 1.21-1.57 (32H, m), 0.77- 0.87 (3011. m)
FAB-MS 993 (MH+). 1031 ( K+) 合成例 40
0 - lie - D-Leu - Asp(OtBu)
Figure imgf000068_0001
O - lie - D-Leu - Asp(OtBu) - Val - D-Ala - Leu - Gln(Mbh)
Figure imgf000068_0002
合成例 37で得られた中間体化合物（20) (1.55 g) 、 合成例 25で得られ たテトラペプチド（6) (2. OOg) および HOBい 1水和物（0.22g) の DMF
(40ml) 溶液に氷冷下で WSCI (0.43g) を加え、 氷冷下で 1時間、 その 後徐々に室温まで昇温させて一晚撹拌した。 反応液をクロロホルム（200 ml) で希釈し、 飽和食塩水で洗浄し、 無水硫酸ナ ト リウムで乾燥した。 溶媒を留去した後、 残留物を DMF(50ml) に溶解し、 ジェチルァミ ン （3 ml) を加え、 室温で 1時間撹拌した。 溶媒を留去し、 シリカゲルカラム クロマ トグラフィー （シリカゲル 75 g、 クロ口ホルム〜クロ口ホルム ： メタノール： ァンモニァ水 =50： 1 ： 0.1~20： 1 ： 0.1) で精製し、 中 間体化合物（23)を 1.21 g得た。
(中間体化合物（23)の NHRデータ）
Ή-NMR ( 5ppm. CDC13) 6.60-7.68 (20H, m), 6.12 (1H, d, J = 8.4
Hz). 5.20-5.24 (HI, m), 5.06-5.11 (2H, m). 3.85-4.48 (6H. m).
3.79 (6H. s). 3.32-3.36 (1H, m), 2.25-2.52 (8H, in), 1.25-2.06 (41H, m), 0.86-0.99 (細' m)
台成例 41
O- He - D-Leu - Asp(OtBu) - Val - D-Aia - Leu - Qln( bh)
.CO Bzl sp(OtBu) - Val - D-Ala - Leu - G!n(Mbh) p(OtBu) - Val -Leu - Asp - Vai
Figure imgf000069_0001
- Leu - D-Ala Gin - Leu - D-Ala
合成例 40で得られた中間体化合物（23)(1.21g) をメタノール（100ml) に溶解し、 10%パラジウム炭素 （0.33g) を加え、 水素ガス雰囲気下 1 時間撹拌した。 パラジウム炭素を癍別し、 メ タノールを留去し、 中間体 化合物（24) を 0.88g得た。 この中間体化合物（24) (0.65 g)を THF (390 ml)と DMF (130ml) の混合液に溶解し、 塩化セシウム （0.94g：)、 塩化力 リ ウム （0.37g)、 N -メチルモルホリ ン （0. llg)、 HOBt · 1水和物
(0.30 ) および WSCI (0.96g) を順次加え、 室温で 5日間撹拌した。 反応液を酢酸ェチル（400ml) で希釈し、 水、 5%炭酸水素ナ ト リウム水 溶液、 水、 10%クェン酸水溶液そして水で順番に洗净後、 無水硫酸ナト リウムで乾燥した。 溶媒を留去した後、 残留物をシリカゲルカラム （シ リ力ゲル、 75 g) に付し、 クロロホルム ： メタノール =40： 1にて流出 した分画 （500ml) を濃縮した。 残留物 （l.Olg) を TFA(5ml)に溶解し- 室温で 2時間撹拌した。 溶媒を留去した後、 5%炭酸水素ナ ト リ ウム水 溶液で中和し、 クロ口ホルムの 10%メタノール溶液で抽出した。 有機層 を無水硫酸ナ 卜リゥムで乾燥後、 シリカゲル力ラムクロマトグラフィー (シリ力ゲル 30g、 クロ口ホルム ： メタノール =io: 0〜3) で精製し、 本発明の環状デブシぺプチド（6)を 0.40g得た。
(環状デブシぺプチド（6)の NMRデータ）
"ト薩 (δρρπ), d-DHSO) 6.63-10.01 (911, m), 4.93-5.11 (1H， m), 3.99-4.60 (711, m), 2.61-2.78 (2H, m), 2.00-2.34 (4H, m), 1.80- 1.98 (2H, m), 1.16-1.76 (30H, m), 0.76-0.91 (30H, m)
FAB-MS 979 ( H+), 1017 (MK+)
合成例 42
tBu) - Asp(OtBu) - Val - D-Leu - Ala - Gln( bh)
Figure imgf000070_0001
合成例 37で得られた中間体化合物（20) (1.10g) 、 合成例 21で得られ たテトラペプチド（4) (1.76g) および HOBt * 1水和物（0.22g) の DMF (25ml) 溶液に氷冷下で WSCI (0.43g) を加え、 氷冷下で 1時間、 その 後徐々に室温まで昇温させて一晚拢拌した。 反応液をクロロホルム（200 ml) で希釈し、 飽和食塩水で洗浄し、 無水硫酸ナトリウムで乾燥した。 溶媒を留去した後、 残留物を DMF(50ml) に溶解し、 ジェチルァミ ン （3 ml) を加え、 室温で 1時間撹拌した。 溶媒を留去し、 シリカゲルカラム クロマトグラフィー （シリカゲル 75 g、 クロ口ホルム〜クロ口ホルム ： メ タノール： アンモニア水 =50： 1 ： 0.1)で精製し、 中間体化合物（25) を 1.22g得た。
(中間体化合物（25)の NMRデータ）
Ή-NHR ( ( pni. CDC13) 8.28-8.31 (1H, m), 6.74-7.50 (1911， m), 6.18 (1H, d, J=8.3 Hz), 5.19-5.24 (1H. m), 5.09 (211, s), 4.37- 4.49 (4H. m). 3.93-4.06 (211, m), 3.28-3.31 (1H. m), 3.02-3.10 (III. m), 2.55-2.71 (411. m), 2.18-2.46 (3H, m), 1.10-2.10 (41H, m), 0.83-0.97 (3011, ra)
合成例 3 - Asp(OiBu) - Val - D-Leu - Ala - GlnCMbh)
Figure imgf000071_0001
0 - lie - D-し su - Asp(OtBu) - Val - D-Leu - Ala - Gln(Mbh)
Figure imgf000071_0002
合成例 42で得られた中間体化合物（25) (1.22 g)をメタノール（150ral) に溶解し、 10%パラジウム炭素 （0.18g ) を加え、 水素ガス雰囲気下 1 時間撹拌した。 パラジウム炭素を澳別し、 メタノールを留去し、 中間体 化合物（26)を 1.00 g得た。 この中間体化合物（26) (0.70 g) を THF(390 ml) と DMF (130ml) の混合液に溶解し、 塩化セシウム （0.94 g ) 、 塩化 カリウム （0.37g)、 N -メチルモルホリ ン （0. ll g) 、 HOBt' 1水和物
(0.30g ) および WSCI (0.96 g) を順次加え、 室温で 5日間撹拌した。 反応液を酢酸ェチル（400ral) で希釈し、 水、 5 %炭酸水素ナ ト リウム水 溶液、 水、 10%クェン酸水溶液そして水で順番に洗浄後、 無水硫酸ナト リウムで乾燥した。 溶媒を留去した後、 残留物をシリカゲルカラム （シ リ力ゲル、 75 g ) に付し、 クロ口ホルム ： メタノール =40： ] にて流出 した分画 （500ml) を濃縮した。 残留物 （L lOg) を TFA( 5 ml)に溶解し、 室温で 2時間撹拌した。 溶媒を留去した後、 5 %炭酸水素ナ トリウム水 溶液で中和し、 クロ口ホルムの 10%メタノール溶液で抽出した。 有機層 を無水硫酸ナ トリゥ厶で乾燥後、 シリ力ゲルカラムクロマトグラフィー
(シリ力ゲル 30g、 クロロホルム： メタノール = 10： 0〜3 ) で精製し、 環状デブシぺプチ ド（7 )を 0.38g得た。
(環状デブシぺプチド（7 )の NMRデータ）
Ή-NMR ( 5ppm. d-DMSO) 6.65-9.20 (911, m), 4.95-5.09 (1H. m), 3.85-4.53 (711. m), 2.61-2.66 (111， m), 2.34-2.37 (1H. m), 1.75- 2.12 (6H. m), 1.18-1.56 (30H, m), 0.78-0.88 (30H, m)
FAB-MS 979 ( H+). 1017 (MK+)
合成例 44 - Asp(OtBu) - Val
Figure imgf000072_0001
合成例 37で得られた中間体化合物 （20) (4.51g)、 Fmoc- L -バリ ン
(1.85g) および HOBt ' 1水和物 （0.81g) のジクロロメタン（50ml)溶 液に氷冷下で WSCI (1.56g) を加え、 氷冷下で 1時間、 その後徐々に室 温まで昇温させて一晩撹拌した。 反応液を飽和食塩水で洗浄し、 無水硫 酸ナ ト リ ウムで乾燥した。 溶媒を留去した後、 残留物を DMF(30ml) に溶 解し、 ジェチルァミ ン （3ml) を加え、 室温で 2時間撹拌した。 溶媒を 留去し、 シリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカゲル 100g、 クロ 口ホルム〜ク口口ホルム ： メタノール =40： 1 ) で精製し、 中間体化合 物（27)を 2.74g得た。
(中間体化合物（27)の NMRデータ）
Ή-NHR ( ( ppm, CDC13) 8.30 (1H, t, J = 8.8 Hz), 7.30-7.37 (5H. m), 7.08 (1H, t, J = 7.3 Hz). 6.75 (1H, d, J = 8.3 Hz), 5.21-5.24
(1H, m), 5.11 (211, s), 4.76-4.79 (1H. m), 4.44-4.50 (2H, m),
3.32-3.35 (111. m). 2.55-2.71 (4H, m), 2.23-2.26 (111, m), 1.04-
1.81 (28H, m). 0.82-0.99 (2111, m)
台成例 45
O - l!e - D-Leu - Asp(OtBu) - Val
.C02Bzl
O- lie - D-Leu - Asp(OtBu) - Val - Leu
,C〇2Bzl
9 - lie - D-Leu - Asp(OtBu) - Va! - Leu - Leu
C〇2Bzl 合成例 44で得られた中間体化合物（27) (2.74 g) 、 Fraoc- L -口イシ ン （1.16g) および HOBt ' 1水和物（0.49g) のジクロロメ タ ン（50ml) 溶液に氷冷下で WSCI (0.95g) を加え、 氷冷下で 1時間、 その後徐々に 室温まで昇温させて一晚搜拌した。 反応液を飽和食塩水で洗浄し、 無水 硫酸ナ ト リ ウムで乾燥した。 溶媒を留去した後、 残留物を DMF(30ral) に 溶解し、 ジェチルァミ ン （3 ml) を加え、 室温で 4時間撹拌した。 溶媒 を留去し、 Fraoc- L -ロイシン （1.16g) および HOBt · 1水和物 （0.49 g) を加えてジクロロメタン （50ml) に溶解し、 氷冷下で WSCI(0.95g) を加え、 氷冷下で 1時間、 その後徐々に室温まで昇温させて一晩撹拌し た。 反応液を飽和食塩水で洗浄し、 無水硫酸ナトリウムで乾燥した。 残 留物を DMF (30ml) に溶解し、 ジェチルァミ ン（3ml) を加え、 室温で 1 時間撹拌した。 溶媒を留去し、 シリ力ゲルカラムクロマ トグラフィー
(シリ力ゲル 75g、 クロ口ホルム〜ク口口ホルム ： メタノ一ル =40： 1 ) で精製し、 中間体化合物（28)を 2.15g得た。
(中間体化合物（28)の NMRデータ）
Ή-NMR (5ppm, CDC13) 6.85-7.90 (10H, m), 5.20-5.25 (1H, m),
5.07-5.13 (2H. m). 4.05-4.78 (5H, m), 3.28-3.40 (1H, m), 2.59-
2.87 (4H, m). 1.23-2.21 (44H, m), 0.84-0.96 (33H, m)
合成例 46
lBu) - Val - Leu - Leu - Asp(OtBu) - Val - Leu - Leu - Gln(Mbh)
Figure imgf000073_0001
合成例 45で得られた中間体化合物（28) (2.15g) 、 N - a - Fmoc - N - r - Mbh - L -グルタ ミ ン （ 1.21 g)および HOBt · 1水和物（0.30 g)を ジクロロメタン （25ml) と DMF(25ml) の混合液に溶解し、 氷冷下で WSCI (0.58g) を加え、 氷冷下で 1時間、 その後徐々に室温まで昇温させて 一晩撹拌した。 反応液を濃縮し、 残留物を DMF(30IB1) に溶解し、 ジェチ ルァミ ン （5 ml) を加え、 室温で 1時間撹拌した。 溶媒を留去した後、 シリカゲルカラムクロマ トグラフィー （シリカゲル 150 g、 クロ口ホル ム ： メタノール =30： 0〜 1 ) で精製し、 中間体化台物（29)を 2.92g得 た。
(中間体化合物（29)の NMRデータ）
]H-N R ( δρρΐϋ, CDC13) 6.82-7.75 (20H, m), 5.15-5.20 (1H, m)， 5.07 (2H, s), 4.05-4.50 (6H, m), 3.78 (3H， s), 3.77 (3H, s), 3.31-3.35 (1H, m), 2.33-2.80 (8H, m), 1.22-2.08 (44H, m), 0.81- 0.94 (33H, m)
合成例 47
Figure imgf000074_0001
0 - lie - D-し eu - Asp(OtBu) - Val - Leu - Leu - Gln( bh)
D-Leu - Asp - Val
Figure imgf000074_0002
Gin - Leu - Leu 合成例 46で得られた中間体化合物（29) (2.92 g) をメ タノール（75ml) と DMF(50ml) の混合液に溶解し、 10%パラジウム炭素 （0.43g) を加え、 水素ガス雰囲気下 1時間 30分撹拌した。 パラジウム炭素を濾別し、 溶媒 を留去し、 中間体化合物 （30) を 2:77g得た。 この中間体化合物 （30) (2.14 g) を DMF (390ml) と THF (1170ml) の混合液に溶解し、 塩化セシ ゥ厶 （2.82g)、 塩化力リウ厶 （1. lig)、 N -メチルモルホリ ン （0.33 g)、 HOBt - 1水和物 （0.90g) および WSCI(2.88g) を順次加え、 室温 で 5曰間撹拌した。 反応液を濃縮し、 残留物を酢酸ェチル（400ml) に溶 解し、 水（200ml) で洗浄後、 無水硫酸ナ ト リ ゥムで乾燥した。 溶媒を留 去した後、 残留物をシリカゲルカラム （シリカゲル 75 g、 クロ口ホル ム ：酢酸ェチル = 1 : 1 ) で精製し、 環状デブシぺプチド （8') を 1.04 g得た。 この環状デプシペプチド （8') (0.54 g) を TFA (5ml) に溶解 し、 室温で 2時間撹拌した。 溶媒を留去した後、 5%炭酸水素ナトリゥ ム水溶液で中和し、 クロ口ホルムの 10%メタノール溶液で抽出した。 有 機層を無水硫酸ナトリゥムで乾燥後、 シリカゲルカラムクロマトグラフ ィー （シリ力ゲル 30g、 クロ口ホルム ： メタノール =10 : 0〜2) で精 製し、 本発明の環状デブシペプチド（8) (以下、 「化合物 6」という） を 0.26g得た。
(化合物 6の NMRデータ）
】H-匪 (5ppm. d-D SO) 6.64-9.45 (9H, m), 5.04-5.14 (1H, m), 3.74-4.45 (7H, jn), 2.32-2.44 (2H, m), 2.05-2.20 (4H, ra), 1.70- 1.99 (21!， m), 1.23-1.60 (33H, m), 0.82-0.94 (33H. m)
FAB-MS 1021 ( H+), 1059 (MK+)
合成例 48
Fmoc- Asp(OtBu) + Leu- 0Bzl→Fmoc- Asp(OtBu)一 Leu
合成例 13と同様にして L -ロイシンべンジルエステル · p - トルエンス ルホン酸塩 （6.00g) と L -ァスパラギン酸 B - t -ブチルエステル (5.23g) からジペプチド （6.63g) を得た。 得られたジペプチドを合 成例 1 7と同様にして脱べンジル化して目的とするジぺプチド（5.21 g) を得た。
Ή-NMR (CDC13) <5ppm： 7.75 (2H, d, J = 7.8 Hz), 7.56 (2H, d, J = 7.3 Hz), 7.39 (2H. t, J = 7.6 Hz), 7.30 (2H, dt, J = l.0, 7.3 Hz), 7.00 (111. d, J=7.8 Hz), 6.03 (1H, d, J = 8.3 Hz), 5.60 (111. br s). 4.52-4.64 (211. m), 4. 1 (211. d, J=6.8 Hz), 4.21 (III, t, J=6.8 Hz), 2.87 (III, dd, J-4. , 17 Hz), 2.62 (1H, dd, J=6.8, 17 Hz), 1.66-1.76 (211, m). 1.55-1.65 (1H, m). 1. 4 (9H， s), 0.92 (611. t, J=5.6 Hz)
合成例 49
Fnoc- Gln(Mbh)- Leu- D- Leu + Val- Asp(OtBu)- D- Leu_0Bzl →
Fmoc-Gln( bh)-Leu-D-Leu-Val-Asp(OtBu)-D-Leu-OBzl
後述の合成例 77で得られたトリペプチド（9) (0.92g) と後述の合成 例 73で得られたトリぺプチド（6)を後述の合成例 59と同様にして得られ た トリぺプチド （0.50g) および HOBt · 1水和物 （0.17g) の DMF (10 ml) 溶液に氷冷下、 WSCI (0.21g) を加えた。 この溶液を氷冷下で 2時 間携拌した後、 室温で一晚撹拌した。 DMFを留去した後、 残留物にクロ 口ホルムの 10%メタノール溶液と 10%クェン酸水溶液を加えた。 分液し た有機層を水、 5 %炭酸水素ナトリゥム水溶液そして水で順番に洗浄後、 無水硫酸ナ ト リウムで乾燥した。 溶媒を留去した後、 シリカゲルカラ ムクロマ トグラフィー （シリカゲル 30 g、 クロ口ホルム ：酢酸ェチル =
100： 0〜85： 15)で精製し、 さらにジェチルェ一テルで固体にして目的 のへキサぺプチド（1 )を 0.82g得た。
lH-NHR (D S0-d6) 5ppm ： 8.53 (1H, d， J=8.3 Hz), 8.09 (1H, d, J=8.3 Hz). 8.05 (1H, d, J = 7.3 Hz), 8.01 (1H, d, J=7.8 Hz), 7.86 (2H. d, J = 7.3 Hz), 7.80-7.89 (1H, m)， 7.64-7.76 (311, m), 7.46 (1H, d, J = 7.8 Hz). 7.39 (211, t. J = 7.3 Hz), 7.24-7.36 (711. m), 7.13 (4H. d, J=8.8 Hz), 6.83 (4H, dd, J=2.0, 8.8 Hz), 6.00 (111, d, J = 8.8 Hz), 5.09 (211. s), 4.65 (1H, dd, J=8.3. 14 Hz), 4.11- 4.40 (7H, m), 3.98-4.07 (1H, m), 3.71 (3H, s), 3.70 (3H, s), 2.63 (111. dd, J=5.6, 16 Hz), 2.45-2.51 (111, m), 2.19-2.34 (2H, m), 1.86-2.00 (211, m). 1.73-1.85 (III. m), 1.38-1.64 (9H, m), 1.33 (911， m), 0.69-0.88 (2411, m)
台成例 50 0-Ile-Finoc
Figure imgf000077_0001
合成例 32と同様にして（R)- 3 -ヒ ドロキシミ リスチン酸を原料とし て、 合成例 1と同様にして得られるアルコール （2.77g) から目的の中 間体化合物を 5.55g得た。
Ή-NMR (CDC13) (5 pm ： 7.76 (2H, d, J=7.3 Hz), 7.59 (2H, d, J= 5.4 Hz), 7.39 (2H, t, J=7.3 Hz), 7.26-7.36 (7H, m). 5.24-5.34 (2H, m), 5.10 (2H, s), 4.35-4.43 (2H, m), 4.30 (111, dd, J=4.6, 8.8 Hz), 4.22 (1H, t, J=7.1 Hz), 2.69 (1H, dd, J=7.3, 16 Hz), 2.59 (1H, dd, J=5.4, 16 Hz), 1.84-1.94 (1H, m), 1.54-1.69 (2H, m), 1.07-1.45 (20H, m), 0.81-0.97 (9H, m)
合成例 51
O-Ile-Fmoc O-Ile- Leu - Asp(OtBu) - Fmoc
、 ! OzBzl > . C02Bzl
wio ノ Wio ^ 合成例 50で得られた中間体化合物 （5.45g) の DMF(80ml) 溶液にジェ チルァ ミ ン（8ml) を加え室温で 1.5時間撹拌した。 溶媒を留去した後、 シリ力ゲル力ラムクロマトグラフィ一（シリ力ゲル 50g、 クロ口ホルム： メタノール = 200： 0〜 10)で精製しァミ ン体を 3.62 g得た。 得られたァ ミ ン体と合成例 48で得られたジペプチド （5.06g) および ΗΟΒΐ · 1水和 物 （1.48g) のジクロロメタン （60ml) 溶液に氷冷下、 WSCI (1.85g) を加えた。 この溶液を氷冷下で 2時間撹拌した後、 室温で一晚撹拌した c ジクロロメタンを留去した後、 残留物に酢酸ェチルと 10%クェン酸水溶 液を加えた。 分液した δΐ酸ェチル層を水、 5 %炭酸水素ナトリウム水溶 液そして水で順番に洗浄後、 無水硫酸ナ トリウムで乾燥した。 酢酸ェチ ルを留去した後、 シリ力ゲル力ラムクロマトグラフィー（シリカゲル 100 g、 へキサン ： 酢酸ェチル = 200： 50~90)で精製し、 さらにジェチルェ 一テル-へキサン系で固体にして目的の中間体化合物を 7. llg得た。
Ή-NMR (CDC13) 5ppm ： 7.76 (2H, d， J=7.3 Hz), 7.58 (2H, d, J = 7.3 Hz), 7.40 (2H， t, J=7.6 Hz), 7.28-7.37 (7H， ra), 6.85 (1H. d, J=8.3 Hz), 6.49 (1H, d， J=8.3 Hz), 5.97 (1H, d. J=8.3 Hz), 5.27 (1H, qui. , J=6.2 Hz), 5.12 (1H, d. J=13 Hz), 5.09 (1H, d, J=13 Hz), 4.51 (1H, dd, J=4.4, 8.8 Hz), 4.47-4.56 (1H. m), 4.37-4.46 (3H, m). 4.22 (1H, t. J=6.8 Hz), 2.92 (1H, dd, J=4.4. 17 Hz), 2.68 (1H， dd. J = 6.8, 16 Hz), 2.58 (1H, dd, J=5.9. 16 Hz), 2.55- 2.67 (1H, m), 1.75-1.88 (1H, m), 1.52-1.73 (511, m)， 1.45 (9H, s), 1.07-1.46 (20H, m), 0.82-0.97 (15H, m)
合成例 52(1) -
0- lie- Leu- Asp(OtBu)- Fmoc 0- lie- Leu-Asp(OtBu)- Val- Fmoc
. f ノ C02Bzl > ヽ Ϊ 02Bzl
HlO ノ WlO 合成例 51で得られた中間体化合物 （2.90g) の DMF(30inl) 溶液にジェ チルァ ミ ン（3ml) を加え室温で 1.5時間撹拌した。 溶媒を留去した後、 シリ力ゲルカラムク口マ トグラフィー（シリ力ゲル 30g、 ク口口ホルム： メ タノール =100： 0-7 )で精製しァ ミ ン体を 2.22g得た。 得られたァ ミ ン体と I½oc— L -バリ ン （1.24g) および HOBt · 1水和物 （0.56g) のジクロロメ タン （25ml) 溶液に氷冷下、 WSCI (0.70g) を加えた。 こ の溶液を氷冷下で 2時間撹拌した後、 室温で二曰間撹拌した。 ジクロロ メ 夕ンを留去した後、 残留物にクロロホルムと 10%クェン酸水溶液を加 えた。 分液したクロ口ホルム層を水、 5%炭酸水素ナ ト リ ウム水溶液そ して水で順番に洗浄後、 無水硫酸ナ ト リ ウムで乾燥した。 クロ口ホルム を留去した後、 シリ 力ゲル力ラムクロマ トグラフィー （シリ カゲル 30g. クロ口ホルム ： メ タ ノール =100 ： 0〜2) で精製し目的の中間体化台 物を 2.29g得た。
Ή-NMR (CDC13) < pm ： 7.77 (2H. d, J=7.3 Hz), 7.59 (2H, dd, J = .9, 7.3 Hz), 7.40 (2H, t, J = 7.3 Hz), 7.28-7.37 (8H, m), 7.05 (1H, d, J=7.8 Hz), 6.59 (1H, d, J=7.8 Hz), 5.30 (1H, d. J=7.3 Hz), 5.26 (1H, qui. , J=6.3 Hz), 5.12 (1H, d, J=14 Hz), 5.09 (1H, d, 12 Hz), 4.68-4.75 (1H. m), 4.45-4.52 (2H, m)， 4.35-4.44 (2H. m), 4.23 (1H, t, J=6.8 Hz), 4.00 (1H, t. J=5.6 Hz), 2.92 (1H， dd, J=3.7, 17 Hz), 2.70 (1H, dd, J=6.8, 16 Hz), 2.59 (111, dd, J=6.6, 17 Hz), 2.58 (1H. dd, J=6.6, 17 Hz), 2.13-2.23 (1H, m), 1.85- 1.94 (1H， m), 1.48-1.76 (5H, m), 1. 1 (9H. s), 1.09-1.45 (20H, m), 0.99 (3H, d, J = 6.8 Hz), 0.95 (3H. d, J=6.4 Hz), 0.80-0.92 (15H, ra) - 合成例 52(2)
0- lie- Leu- Asp(OtBu)- Val- Fmoc
、 I C02Bzl ^
0-Ile-Leu-Asp(OtBu)-Val-D-Leu-Leu-Gln(Mb )-Fmoc
Figure imgf000079_0001
合成例 52(1)で得られた中間体化合物 （1.58g) の DMF (15ml) 溶液に ジェチルアミ ン （1.5ml) を加え室温で 1.5時間撹拌した。 溶媒を留去し た後、 シリカゲルカラムク ロマ トグラフィー （シリカゲル 25 g、 クロ口 ホルム ： メ タ ノール =100 ： 0〜8) で精製しァミ ン体を 1.09 g得た。 得られたァミ ン体と後述の合成例 77で得られた卜リベプチド（9) (1.29 g)および HOBい 1水和物 （0.24g) の DMF (20mL) 溶液に氷冷下、 WSCI (0.30g) を加えた。 この溶液を氷冷下で 2時間撹拌した後、 室温で一 晚撹拌した。 溶媒を留去した後、 残留物にクロ口ホルムと 10%クェン酸 水溶液を加えた。 分液したクロ口ホルム層を水、 5%炭酸水素ナ 卜リウ ム水溶液そして水で順番に洗浄後、 無水硫酸ナトリウムで乾燥した。 ク ロロホルムを留去した後、 シリカゲルカラムクロマ トグラフ ィ ー （シリ 力ゲル 50g、 クロロホルム ： メ タノール = 200： 0〜6)で精製し目的の 中間体化合物を 1.91g得た。
Ή-NMR (CDC13) <5ppm ： 7.73 (2H, d, 1=1.3 Hz), 7.63 (1H, d， J = 8.3 Hz), 7.59 (1H, d, J=8.8 Hz). 7.55 (2H, d, J=7.3 Hz). 7.38 (2H, t, J=7.6 Hz). 7.20-7.35 (8H， ra), 7.18 (2H, d, J=8.3 Hz), 7.14 (2H, d, J=8.8 Hz). 6.84 (4H, dd, J=4.2, 8.3 Hz), 6.60-7.10 (4H, in), 6.40 (1H. d, J = 8.3 Hz). 6.24 (1H, d, J=8.3 Hz), 5.18 (1H, qui. , J=6.3 Hz), 5.07 (2H, s), 4.78-4.85 (1H, m), 4.45-4.55 (2H, m), 4.25-4.44 (4H, m), 4.10-4.20 (3H, m), 3.77 (3H, s)， 3.74 (3H, s), 2.89 (1H, dd, J=7.3, 16 Hz), 2.71 (1H. dd, J=5.1, 17 Hz). 2.61 (1H, dd, J=6.8. 16 Hz). 2.51 (1H, dd. J = 6.4. 16 Hz), 2.14-2.32 (3H, m), 1.90-2.11 (2H, m), 1.76-1.87 (3H, m), 1.43 (9H， s), 1.05-1.65 (29H, m), 0.95 (3H, d, J=6.3 Hz), 0.79-0.93 (24H, m), 0.76 (3H, d, J=5. Hz), 0.74 (3H, d, J=5.9 Hz) 合成例 52(3)
0-Ile-Leu-Asp(OtBu)-Val-D-Leu-Leu-Gln(Mbh)-Fmoc
/C 1 ~~ "
Figure imgf000080_0001
合成例 52(2)で得られた中間体化合物 （1.90g) の DMF (15ml) 溶液に ジェチルァ ミ ン （1.5ml) を加え室温で 1.5時間撹拌した。 溶媒を留去し た後、 シリカゲルカラムクロマ トグラフ ィ ー （シリ カゲル 30 g、 クロ口 ホルム ： メ タノール = 200： 0~7)で精製しァ ミ ン体を 1.36g得た。 得られたア ミ ン体をメ タ ノール （40ml) に溶解し、 5%パラジウム炭 素 （0.28g) を加え、 水素雰囲気下 10時間撹拌した。 パラジウム炭素を 濾别し、 メ タノールを留去した後、 シリカゲルカラムクロマ トグラフィ 一（シリカゲル 30g、 クロ口ホルム ： メタノール = 200： 0〜20) で精製 し、 さらにクロロホルム - ジェチルエーテル系で固体にして脱保護体を 0.87g得た。
得られた脱保護体 （0.60g) を THF (100ml) に溶解し、 N -メチルモ ルホリ ン （0. lOral) および HOBt * 1水和物 （0.28g) を加え A液とした。
THF (200ml) と DMF (100ml) の混合液に、 塩化セシウム （0.76g) 、 塩 化カ リウム （0.30g) および WSCI (0.78g) を順次加え、 B液と した。 室温で撹拌しながら A液を 20分かけて B液に滴下し、 さらに室温で 10日 間撹拌した。 反応液を酢酸ェチル（150nil) で希釈し、 水、 5%炭酸水素 ナ ト リウム水溶液、 水、 10%クェン酸水溶液そして水で順番に洗浄後、 無水硫酸ナ ト.リ ウ-ムで乾燥した。 溶媒を留去した後、 シリカゲルカラム ク ロマ トグラフ ィ ー （シリ カゲル 20 g、 ク ロ口ホルム ： メ タノ一ル= 200： 0〜6 ) で精製し、 さらにシリカゲル力ラムクロマ トグラフィー
(シリ 力ゲル 20g、 クロ口ホルム ： 酢酸ェチル = 100： 10〜70)で再精製 した後、 ジェチルエーテルおよびへキサンを用いて固体にして本発明の 環状デブシぺプチ ド（9)を 0.40g得た。
(環状デブシぺプチ ド（9)のデータ）
'Iト瞧 (CDC13) 5ppm ： 7.50 (1H, d, J=7.8 Hz), 7.40 (1H, br s), 7.32 (1H, br s)， 7.11-7.28 (4H, m), 7.16 (211, d, J=8.3 Hz), 7.14 (2H, d, J=7.8 Hz). 6.95 (III. br s). 6.83 (4H, d, J=7.8 Hz), 6.15 (111. d， J = 7.8 Hz), 5.06-5.13 (1H, m), 4.65-4.73 (1H, m), 4.26- 4.37 (3H, m), 4.11-4.26 (211, m), 4.06 (1H, t, J=6.6 Hz), 3.78 (6H, s), 2.78-2.92 (211. m), 2.19-2.48 (511, m). 2.03-2.12 (2H, m), 1.77 -1.91 (111, m), 1.35-1.76 (HI, ra), 1.43 (911, s), 1.07-1.34 (20H, m), 0.81-0.98 (33H, in) 合成例 52(4)
Figure imgf000082_0001
合成例 12と同様にして合成例 52(3)で得られた中間体化合物 （0.30g) から本発明の環状デブシぺプチド（10)を 0.16g得た。
(環状デブシぺプチド（10)のデータ）
Ή-NMR (DMS0-de) 5ppm ： 12.28 (1H, s), 8.72 (1H. d, J=5.4 Hz), 8.27 (1H. d. J = 9.8 Hz), 8.16 (1H. d， J=7.8 Hz), 8.07 (1H, d. J= 8.3 Hz), 7.92 (1H, d, J=5.9 Hz), 7.74 (III, d, J=6.8 Hz), 7.32 (1H. d, J=9.3 H2). 7.19 (1H. s), 6.64 (111, s), 5.19 (1H, qui. , J=6.3 Hz), 4.61-4.69 (1H, m), 4.20-4.38 (3H, ra), 4.06-4.16 (3H, m). 2.90-2.98 (1H, m), 2.60-2.70 (1H, m), 1.90-2.40 (5H, m), 1.60- 1.80 (3H, m), 1.00-1.60 (31H. m), 0.70-0.95 (33H, ni)
台成例 53 sp(OtBu)- Val
Figure imgf000082_0002
台成例 1で得られた 3 - ヒ ドロキンミ リスチン酸ベンジルを原料とし て台成例 50、 51と同様にして得られた中間体化合物を合成例 57と同様に して脱保護し得られた中間体化合物（32) (2.50g) 、 Fnioc- L -バリ ン (1.16g ) および I10Bい 1水和物 （0.50g) のジクロロメタ ン（100ml) 溶液に氷冷下で WSCI (0.98g) を加え、 氷冷下 1時間、 その後徐々に室 温まで昇温させて 3時間撹拌した。 反応液を飽和食塩水で洗浄し、 無水 硫酸ナト リウムで乾燥した。 溶媒を留去した後、 残留物を F(50ml) に 溶解し、 ジェチルァミ ン （3 ml) を加え、 室温で 1時間撹拌した。 溶媒 を留去した後、 シリカゲルカラムクロマ トグラフィー （シリカゲル 75 g、 クロロホルム〜ク口口ホルム ： メタノール =50： 1 ) で精製し、 中間体 化合物 （35) (配列番号 1) を 2.86g得た。
(中間体化合物（35)の NMRデータ）
Ή-NMR (<5ppm, CDC13) 8.26 (1H, d, J=8.3 Hz), 6.97 (1H, d. J = 7.8 Hz), 6.97 (1H, d, J=7.3 Hz), 7.32-7.38 (5H， m), 5.24-5.29 (1H, m), 5.11 (2H, s)， 4.72-4.77 (1H, m), 4.46-4.51 (1H, m)，
4.36-4.41 (1H， m), 3.27 (1H. d. J=3.9 Hz), 2.55-2.71 (4H, m), 2.24-2.32 (1H. m), 1.44 (9H, s). 1.03-1.91 (28H, m), 0.81-1.00 (21H, m)
合成例 54 Asp(OtBu) - Val - Leu
Figure imgf000083_0001
合成例 53で得られた中間体化合物（35) (2.86g) 、 Fmoc- L -口イシ ン （1.20g) および HOBい 1水和物（0.50g) のジクロロメタン（100ml) 溶液に氷冷下で WSCI (0.98g) を加え、 氷冷下 1時間、 その後徐々に室 温まで昇温させて一晩撹拌した。 反応液を飽和食塩水で洗浄し、 無水硫 酸ナ トリウムで乾燥した。 溶媒を留去した後、 残留物を DMF (50ml)に溶 解し、 ジェチルァミ ン （3 ml) を加え、 室温で 1時間 30分撹拌した。 溶 媒を留去した後、 シリカゲルカラムクロマトグラフィー （シリカゲル 10 0g、 クロ口ホルム〜ク口口ホルム. ： メタノ一ル =40： 1.〜20： 1 )で精 製し、 中間体化合物（36) (配列番号 2) を 2.99g得た。
(中間体化合物（36)の NMRデータ）
'H-NHR ( 5ppm, CDC13) 7.98-8.02 (III, m), 7.53-7.56 (1H, m), 7.22-7.25 (1H. m). 6.74-6.77 (111, m), 7.31-7.36 (511. m), 5.23-
5.26 (111, m), 5.10 (2H, s), 4.61-4.67 (1H, m), 4.41-4.49 (211, m). 4.07-4.11 (1H, ID), 3.48-3.51 (1H, m), 1.59-2.78 (16H， m), 1. 2
(9H, s), 1.24 (bs, 20H), 1.03-1.91 (28H, m), 0.85-1.01 (27H. m) 合成例 55
Figure imgf000084_0001
Asp(OtBu) - Val - Leu - Leu
Asp(OtBu) - Val - Leu - Leu - Gln( bh)
Asp(OtBu) - Val - Leu - Leu - Gln(Mbh)
Asp(OtBu) - Val O - lie - Leu - ASD - Val
' 〇 '
Figure imgf000084_0002
(Mbh)-Leu-Leu Gin— Leu- Leu 台成例 54で得られた中間体化合物（36) (2.99 g) 、 Fraoc- L -口イシ ン （1.12g) および HOBい 1水和物 （0.47g) のジクロロメタ ン（50ral) 溶液に氷冷下で WSCI (0.91g) を加え、 氷冷下で 1時間、 その後徐々に 室温まで昇温させて一晩撹拌した。 反応液を飽和食塩水で洗浄し、 無水 硫酸ナトリウムで乾燥した。 溶媒を留去した後、 残留物を DMF(30ml) に 溶解し、 ジェチルァミ ン （3 ml) を加え、 室温で 2時間撹拌した。 溶媒 を留去した後、 シリカゲルカラムクロマトグラフィー （シリカゲル 75 g、 クロロホルム ： メタノール =20： 0~1) で精製し、 中間体化合物（37) (配列番号 3) を 3.46 g得た。 これに N - α - Fmoc - N - r - bh - L - グルタ ミ ン （1.88g) および Η0 · 1水和物 （0.47g) を加えて DMF(25 ml) に溶解し、 氷冷下で WSCI (0.91g) を加え、 氷冷下で 1時間、 その 後徐々に室温まで昇温させて一晩撹拌した。 反応液を澳縮し、 残留物を DMF (100ml) に溶解し、 ジェチルァミ ン （5 ml) を加え、 室温で 2時間 撹拌した。 溶媒を留去し、 シリカゲルカラムクロマトグラフィー （シリ 力ゲル 150g、 クロロホルム ： メタノール =30： 0〜 1 )で精製し、 中間 体化合物（38) (配列番号 4) を 2.55g得た。 これをメ タノール （50ml) と DMF (25ml) の混合液に溶解し、 10%パラジウム炭素（0.33 g )を加え、 水素ガス雰囲気下 1時間撹拌した。 パラジウム炭素を濾別し、 溶媒を留 去し、 中間体化合物（39)を 2.52g得た。 この中間体化合物（39) (配列番 号 5) (2.08 g) を DMF (390ml) と THF (1170ml) の混合液に溶解し、 塩 化セシウム （2.82g) 、 塩化カ リウム （l.llg) 、 N -メチルモルホリ ン （0.33g) 、 HOBt - 1水和物 （0.90g) および WSCI (2.88g) を順次 加え、 室温で 5日間撹拌した。 反応液を濃縮し、 残留物を酢酸ェチル (400ml) に溶解し、 水 （200ral) で洗浄後、 無水硫酸ナ ト リ ゥムで乾燥 した。 溶媒を留去した後、 残留物をシリカゲルカラム （シリカゲル 75 g、 クロロホルム ： メタノール =100 : 0〜 1 )で精製し、 本発明の環状デブ シペプチ ド（11) (配列番号 6) を 1.24g得た。 これを TFA(5ml) に溶解 し、 室温で 2時間撹拌した。 溶媒を留去した後、 5%炭酸水素ナトリゥ ム水溶液で中和し、 クロ口ホルムの 10%メタノール溶液で抽出した。 有 機層を無水硫酸ナ卜リゥムで乾燥後、 シリ力ゲル力ラムクロマトグラフ ィー（ンリ力ゲル 50g、 クロロホルム：メタノール =10： 0〜2) で精製 し、 本発明の環状デプシペプチド（12) (以下「化合物 7」という） （配列 番号 7) を 0.40 g得た。
(化合物 7の NMRデータ）
ΊΙ-NMR ( < ppm, d-DMSO) 6.64-9.45 (911, m), 4.93-5.12 (111. m), 3.96-4.44 (711, m), 1.90-2.56 (811, m), 1.10-1.77 (3311, m), 0.75- 0.92 (33 m)
FAB-MS 1021 ( H+). 1059 (MK+)
台成例 56
Figure imgf000086_0001
合成例 27で得られた中間体化合物（10) (2.46g) 、 Fmoc- D -ァラニ ン （1.89g) および HOBt ' 1水和物 （0.90g) のジクロロメ タン（50ml) 溶液に氷冷下で WSCI (1.74g) を加え、 氷冷下 1時間、 その後徐々に室 温まで昇温させて一晚撹拌した。 溶媒を留去した後、 シリカゲルカラム クロマ トグラフィー（シリカゲル 150g、 クロ口ホルム） で精製し、 中間 体化合物（40)を 3.48g得た。
(中間体化合物（40)の NMRデータ）
Ή-NMR ( 5ppmf CDC13) 7.76 (2H, d. J = 7.8 Hz), 7.59 (2H, d, J = 7.3 Hz), 7.24-1.51 (9H, m), 6.52 (1H, bs)， 5.26-5.30 (1H, m), 5. 2 (1H, bs), 5.11 (111, d, 12.2 Hz), 5.07 (1H. d. J=12.2 Hz), 4.21-4.50 (5H. m), 2.56-2.64 (2H, m), 1.23-1.60 (26H, m), 0.88 (311, t, J= 6.8 Hz)
合成例 57
O - Ala - D-Aia - Fmoc 〇 - Ala - D-Ala
Figure imgf000086_0002
台成例 56で得られた中間体化合物（40) (3.48 g) を DMFGOml) に溶解 し、 ジェチルァミ ン （3 ml) を加え、 室温で 1時間撹拌した。 溶媒を留 去した後、 シリカゲルカラムク ロマ トグラフィー （シリカゲル 75 g、 ク ロロホルム ： メ タノール = 200： 0~10)で精製し、 中間体化合物（41)を 1.99g得た。
(中間体化合物（41)の NMRデ一タ）
ΊΙ-NMR ( δρρπι, CDC13) 7.65 (III, bs). 7.31-7.38 (5H, m), 5.25- 5.32 (HI, in). 5.13 (1H, d. 1 = 12.2 Hz). 5.08 (111, d. J = 12.2 Hz), 4.47-4.54 (1H, in). 3.48 (1H, q, J= 6.8 Hz), 2.57-2.70 (2H, m). 1.24-1.60 (28H. m), 0.88 (3H, t, J= 6.8 Hz)
合成例 58 - Asp(OtBu) - Fmoc
Figure imgf000087_0001
合成例 57で得られた中間体化合物（41) (1.99g) 、 Fmoc- L -ァスパ ラギン酸 3 - t -ブチルエステル（1.72g)および HOBt · 1水和物（0.62 g) のジクロロメタン （200ml) 溶液に氷冷下で WSCI (1.20g) を加え、 氷冷下 1時間、 その後徐々に室温まで昇温させて一晚撹拌した。 溶媒を 留去した後、 シリカゲルカラムクロマトグラフィー （シリカゲル 100 g、 クロロホルム ： メ-タノール =50： 0〜 1 ) で精製し、 中間体化合物（42) を 3.42g得た。
(中間体化合物（42)の NMRデータ）
Ή-NMR (5 pm, CDC13) 7.76 (2H, d, J = 7.3 Hz), 7.58 (2H, d. J = 7.3 Hz), 7.28-7.42 (9H, m), 6.97-7.01 (1H, m), 6.82-6.90 (111. m), 5.93-5.97 (1H, m), 5.22-5.26 (1H, m), 5.10 (1H, d, J = 12.2 Hz), 5.04 (1H, d, J = 12.2 Hz), 4.21-4.59 (611, m), 2.55-2.68 (3H, m), 3.04 (1H, dd， J=4.4 Hz, 17.1 Hz), 1.22-1.64 (35H. m), 0.88 (3H, t, J=6.3 Hz)
合成例 59 a - Asp(OtBu)
Figure imgf000087_0002
台成例 58で得られた中間体化合物（42)(3.42 g) を DMF (30ml) に溶解 し、 ジェチルァミ ン （3 ml) を加え、 室温で 1時間撹拌した。 溶媒を留 去した後、 シリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカゲル 100g、 ク ロロホルム ： メ タノール =50： 0~ 1 ) で精製し、 中間体化合物（43)を 2.52 g得た。
(中間体化合物（43)の NMRデータ）
'Η-匪 ( ( ppni, CDC13) 7.85 (1H, d, J=8.3 Hz), 7.00-7.06 (1H, m). 7.31-7.35 (5H, m), 5.23-5.27 (1H, m), 5.12 (1H, d, J = 12.2 Hz), 5.07 (1H, d, J = 12.2 Hz), 4.45-4.55 (2H. m), 3.57-3.60 (1H ra), 2.56-2.96 (4H, ID), 1.24-1.66 (37H, m), 0.88 (3H, t, J= 6.3 Hz)
合成例 60
a - D-AIa - Asp(OiBu) - Ala - moc C〇，Bzl
Figure imgf000088_0001
台成例 59で得られた中間体化合物（43) (1.99 g) Fmoc- L -ァラニ ン · 1水和物 （1.27g) および HOBt · 1水和物 （0.57g) のジクロロメ タン （50ml) 溶液に氷冷下で WSCI (l. llg) を加え、 氷冷下 1時間、 そ の後徐々に室温まで昇温させて一晚撹拌した。 溶媒を留去した後、 シ リ 力ゲルカラムクロマ ト グラフ ィ ー（シリ カゲル 100g、 ク ロ口ホルム ： メ 夕ノール = 50 : 0 1 ) で精製し、 中間体化合物（44)を 3.45 g得た。 (中間体化合物（44)の NMRデータ）
ΊΙ-NMR (5pprn, CDC13) 7.75 (211. d, J = 6.8 Hz), 7.13-7.63 (14H. m), 6.88-6.91 (III. m), 5.40-5.43 (HI, m), 5.18-5.21 (1H, in), 5.00-5.11 (2H, m), 4.72—4.78 (1H, m), 4.42-4.53 (311, m), 4.16- 4.22(211. m), 2.47-2.96 (411. m), 1.17-1.71 (3811, tn), 0.88 (3H, t, J=6.8 Hz)
合成例 61 - D-Aia - Asp(OiSu) - Ala - Fmoc - D-AIa - Asp(OiBu) - Aia O,Bzl 一 02Bzl
Figure imgf000088_0002
合成例 60で得られた中間体化合物（44) (3.45 g) を DMF(30ml) に溶解 し、 ジェチルァ ミ ン （3 ml) を加え、 室温で 2時間撹拌した。 溶媒を留 去した後、 シリカゲルカラムクロマ トグラフィー（シリカゲル 100 g、 ク ロロホルム ： メ タノール =100： 0〜5) で精製し、 中間体化合物（45) を 2.88g得た。
(中間体化合物（45)の NMRデータ）
Ή-N R (5ppm. CDC13) 8.21-8.26 (III, m), 7.13 (1H, d， J=7.8 Hz), 6.88-6.95 (1H. m), 7.32-7.37 (5H, m), 5.22-5.26 (1H, m), 5.06-5.14 (2H. m), 4.68-4.74 (1H, m), 4.39-4.56 (2H, m), 3.53— 3.60 (111, n , 2.56-2.95 (4H, m). 1.83 (2H, br), 1.24-1.64 (38H, m), 0.88 (3H, t, J= 6.8 Hz)
合成例 62 .
Figure imgf000089_0001
O - Ala - D-Ala - Asp(OtBu) - Ala - D-Ala - Fmoc
Figure imgf000089_0002
台成例 61で得られた中間体化合物（45)(1.50 g：)、 Fmoc - D -ァラニン (0.68g) および HOBt ' 1水和物（0.33 g) のジクロロメ タン（50ml) 溶 液に氷冷下で WSCI (0.58g) を加え、 氷冷下で 3時間撹拌した。 溶媒を 留去した後、 シリカゲルカラムクロマ トグラフィ ー （シリカゲル 100 g、 クロロホルム ： メ タノール =50： 0〜 1 ) で精製し、 中間体化合物（46) を 1.76g得た。
(中間体化合物（46)の Rデータ）
Ή-N R (5ppm, CDC13) 7.76 (211. d, J = 7.3 Hz), 7.56-7.60 (2H, m), 7.14-7.41 (1211, m). 6.95-7.01 (111, m), 6.16-6.18 (HI, m), 5.24-5.27 (1H. m), 5.02-5.13 (211. m), 4.19-4.54 (811, m). 2.53- 2.99 (4H, m), 1.14-1.66 (41H, m). 0.88 (3H, t. J= 6.8 Hz)
合成例 63
Figure imgf000090_0001
- Asp(OtBu) - Ala - D-Ala - Ala - Fmoc
Figure imgf000090_0002
台成例 62で得られた中間体化合物（46 1.76g) を DMF (30ml) に溶解 し、 ジェチルァミ ン （2 ml) を加え、 室温で 4時間撹拌した。 溶媒を留 去した後、 Fmoc- L -ァラニン · 1水和物 （0.57g) と HOBt · 1水和物 (0.26g) とを加えてジクロロメタン （30ml) に溶解した。 この溶液に 氷冷下で WSCI (0.50 g) を加え、 氷冷下で 3時間撹拌した。 溶媒を留去 した後、 シリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカゲル 100g、 クロ 口ホルム ： メ タノール =50： 0 ~ 1 ) で精製し、 中間体化合物（47)を 1.55 g得た。
(中間体化合物（47)の NMRデータ）
Ή-NMR ( δρρπι, CDC13) 7.26-7.93 (18H, m), 5.40-5.48 (1H, m), 5.22-5.26 (1H, m), 5.08-5.10 (2H, m), 4.08-4.77 (9H, m), 3.05- 3.13 (UK m), 2.55-2.72 (3H, m), 1.21-1.67 (44H. m), 0.88 (311, t, J=6.3 Hz)
台成例 64 - Asp(OtBu) - Ala - D-Ala - Ala - Fmoc
Figure imgf000090_0003
O - Ala - D-Ala - Asp(OtBu) - Ala - D-Ala - Ala
C02Bzl 合成例 63で得られた中間体化合物（47)(1.55 g) を DMF (30ml) に溶解 し、 ジェチルァミ ン （2ral) を加え、 室温で 1時間 30分撹拌した。 溶媒 を留去した後、 シリ カゲルカラムクロマ トグラフィー（シリ カゲル 100 g、 クロ口ホルム ： メタノール =50： 0〜5) で精製し、 中間体化合物（48) を 1.10g得た。
(中間体化合物（48)の NMRデータ）
^-N R ( 5ppm, CDC13) 6.96-7.92 (10H. m), 5.24-5.28 (1H, m)， 5.07 (1H, d， J=12.2 Hz), 5.12 (1H. d, J=12.2 Hz), 4.25-4.61 (5H, m), 3.47-3.53 (1H, m), 2.83-2.95 (2H， m), 2.56-2.74 (2H, m), 1.24-2.91 (46H, ra), 0.88 (3H, t, J= 6.8 Hz)
合成例 65
O - Ala - D-Ala - Asp(OtBu) - Ala - D-Ala - Ala
' ,C02Bzl
la - Asp(OtBu) - Ala - D-Ala - Ala - Gln(Mbh)
Figure imgf000091_0001
合成例 64で得られた中間体化合物（48) (1.10g) 、 N - α - Fmoc - N - r - Mbh - L -グノレ夕ミ ン （0.77g) および HOBt · 1水和物 （0.19g) をジクロロメタン （30ml) と DMF (15ml) の混合液に溶解し、 氷冷下で WSCI (0.36g) を加え、 氷冷下で 1時間、 その後徐々に室温まで昇温さ せて一晩撹拌した。 反応液を濃縮し、 残留物を DMF (100ml) に溶解し、 ジェチルァミ ン （2ral) を加え、 室温で 1時間撹拌した。 溶媒を留去し た後、 シリカゲルカラムクロマ トグラフィ ー（シリカゲル 100 g、 クロ口 ホルム ： メ タノール =50： 0~ 1 ) で精製した。 得られた精製物をメ タ ノール （100ml) と DMF (20ml) の混台液に溶解し、 10%パラジウム炭素 (0.21g) を加え、 水素ガス雰囲気下 1時間撹拌した。 パラジウム炭素 を濾別し、 溶媒を留去し、 中間体化合物（49)を 1.29g得た。 (中間体化合物（49)の NMRデータ）
Ή-NMR ( ( pm. CDC13) 8.51-8.58 (2H, ra)， 8.23 (1H, d, J = 7.8
Hz), 8.10 (1H, d， J = 7.8 Hz). 7.90 (1H, bs)， 7.62 (1H, bs), 7.24
(1H, d. J=7.3 Hz), 7.13-7.16 (4H, m), 6.80-6.83 (4H, m), 6.09
(1H, d, J = 7.8 Hz), 5.17-5.20 (1H, ra), 4.81-4.85 (1H, m), 4. 3-
4.48 (2H, DI), .28-4.32 (1H, m), 4.02-4.11 (2H, m), 3.77 (s, 6H),
3.65-3.69 (1H, m), 3.01-3.06 (1H, m), 2.64-2.71 (1H, m). 2.48- 2.51 (2H, m), 2.32-2.35 (2H, m), 1.95-2.06 (2H, m), 1.10-1.57 (46H, in), 0.88 (3H, t, J= 6.3 Hz)
台成例 66
Figure imgf000092_0001
合成例 65で得られた中間体化合物（49) (0.12g) を THF (75ral) と DMF (25ml) の混合液に溶解し、 塩化セシウム （0.18g)、 塩化カリウム（70 mg) 、 N -メチルモルホリ ン （20mg) 、 HOBt · 1水和物 （60mg) および WSCI (0.18g) を順次加え、 室温で 5日間撹拌した。 溶媒を留去した後、 シリ カゲルカラムク ロマ トグラフ ィ ー （シリカゲル 30 g、 ク ロ口ホル ム ： メ タノール =50： 0〜 1 )で精製し、 本発明の環状デブシぺプチド (13)を 0.11 g得た。
(環状デブシぺプチ ド（13)の NMRデータ）
Ή-NMR (<5ppra, CDC13) 8.04-8.18 (211, m)， 7.77 (1H, d, J = 7.8 Hz). 7.55-7.60 (311. m), 7.39-7.41 (111, m), 7.13-7.16 (5H, m), 6.81-6.85 (411, m), 6.11 (111. d, J=8.3 Hz), 5.08-5.11 (1H, m), 4.77-4.81 (HI, m). 4.13-4.41 (6H, m). 3.78 (s, 611), 3.01-3.04 (1H, m), 2.63-2.67 (1H, in), 2.30-2.47 (4H, m), 2.05-2.08 (2H, m), 1.25-1.67 (44H. m), 0.88 (3H, t. J= 6.3 Hz)
台成例 67
Figure imgf000093_0001
合成例 66で得られた環状デプシペプチド（13) (0. llg) を TFA (3ml) に溶解し、 室温で 1時間 30分撹拌した。 溶媒を留去した後、 残留物にク ロロホルムと水を加え、 水層を 5%炭酸水素ナトリゥム水溶液で中和し た。 析出した不溶物を濾取し、 エーテルで洗浄後、 減圧乾燥し、 本発明 の環状デブシぺプチド（14)を 41mg得た。
(環状デブシぺプチド（14)の NMRデータ）
Ή-NHR (<5ppm. d-DMSO) 8.27 (1H, bs), 7.69-8.11 (6H, m), 7.19 (1H, bs), 6.67 (1H. bs), 5.07-5.11 (1H. m), 4.17-4.34 (7H, m)， 2.39-2.62 (2H, m). 1.58-1.89 (4H, m), 2.09-2.12 (2H. m), 1.08- 1.2δ (25H, m), 0.86 (3H, t, J= 6.3 Hz)
FAB-MS 825 (MH+)
合成例 68
Fmoc -D-Leu + Val- 0Bzl→Fmoc - D- Leu- Val - OBzl
L -バリ ンベンジルエステル · p - トルエンスルホン酸塩 （8.35g) と Fmoc— D ロイシン （7.07g) および HOBt ' 1水和物 （3.37g) とを 加えてジクロロメ タン （80ml) に溶解した。 この溶液に氷冷下、 WSCI
(4.22g) を加えた。 この溶液を氷冷下で 2時間撹拌した後、 その後、 室温まで徐々に昇温させて二日間撹拌した。 ジクロロメタンを留去した 後、 残留物に酢酸ェチルおよび 10%クェン酸水溶液を加えた。 分液した 酢酸ェチル層を水、 5 %炭酸水素ナトリゥム水溶液そして水で順番に洗 浄後、 無水硫酸ナ 卜 リゥムで乾燥した。 酢酸ェチルを留去した後、 シリ 力ゲル力ラムクロマ トグラフィ ー （シリ カゲル 80g、 クロ口ホルム ： メ 夕ノール = 200 : 0〜4) で精製しジペプチ ド（4)を 6.27g得た。
(ジぺプチ ド（4 )の NMRデータ）
Ή-NMR (CDC13) 5p m ： 7.76 (2H. d. J = 8.0 Hz), 7.58 (2H, d, J = 7.6 Hz), 7.24-7.35 (7H, m), 6.45-6.65 (1H, m)， 5.17 (1H, d, J=12 Hz), 5.08 (1H. d, J = 12 Hz), 5.02-5.26 (1H, ra), 4.58 (1H, dd, J= 4.4, 8.0 Hz). 4.40 (2H, d, J=6.8 Hz), 4.22 (1H, t, J=6.8 Hz), 4.15-4.31 (1H. m), 2.08-2.26 (1H. m). 1.53-1.79 (2H, m), 1.41- 1.53 (1H, m), 0.70-0.96 (12H, m)
台成例 69
Fmoc— D— Leu— Val― 0Bzl→Fmoc—し eu— D—し eu— Val— OBzl
合成例 68で得られたジペプチ ド（4 ) (5.00g) の DMF(60nil) 溶液にジ ェチルァ ミ ン （6ral) を加え室温で 2時間撹拌した。 溶媒を留去した後. Fmoc - L - ロイ シン （3.58g) と HOBt · 1水和物 （1.55g) とを加えて ジクロロメ タ ン （30ml) に溶解した。 この溶液に氷冷下、 WSCI(1.94g) を加えた。 この溶液を氷冷下で 2時間撹拌した後、 その後室温まで昇温 させて一晚撹拌した。 ジクロロメ タ ンを留去した後、 残留物に酢酸ェチ ルおよび 10%クェン酸水溶液を加えた。 分液した 酸ェチル層を水、 5 %炭酸水素ナ ト リ ゥム水溶液そして水で順番に洗'净後、 無水硫酸ナ ト リ ゥムで乾燥した。 酢酸ェチルを留去した後、 シリカゲルカラムクロマ ト グラフィ ー （シリ力ゲル 50g、 クロロホルム ： メ 夕ノール = 200： 0〜 6) で精製し、 さらにジェチルエーテルおよびへキサンを用いて固体に して ト リぺプチ ド（5 )を 5.43g得た。
( ト リベプチ ド（5 )の NMRデータ）
リト隱 (CDC13) 5ppm ： 7.76 (2H, d, J = 7.3 Hz). 7.57 (211. d, J = 7.3 Hz), 7. 0 (2H. t. J=7.6 llz), 7.20-7.36 (711, m), 6.78 (1H, d, J = 8.3 Hz), 6.36 (1H, d, J = 7.8 Hz), 5.13 (1H, d, J = 13 Hz), 5.03 (1H, d. J=13 Hz), 4.98-5.20 (1H, ra), 4. 1-4.53 (3H, ra)， 4.37 (1H, t, J=8.6 Hz), 4.08-4.26 (2H. in), 2.08-2.24 (1H, m), 1.38-1.83 (6H, n , 0.74-1.03 (18H, m)
合成例 70
Fmoc - Leu— D-Leu— Val— 0Bzl→Fmoc— Gln(Mbh) - Leu - D - Leu— Val - OBzl
合成例 69で得られた 卜リぺプチド（5)(1.00g) の DMF (12ml) 溶液に ジェチルァミ ン（1.2ral) を加え室温で 2時間撹拌した。 溶媒を留去した 後、 N— α - 9 - Fmoc— N - ァ - Mbh— L グルタ ミ ン （l. OOg) と HOBt - 1水和物 （0.26g) とを加えてジクロロメタン （30tnU に溶解し た。 この溶液に氷冷下、 WSCI (0.32g) を加えた。 この溶液を氷冷下で 2時間撹拌し、 その後、 室温まで徐々に昇温させ一晩撹拌した。 ジクロ 口メタンを留去した後、 残留物にクロロホルムと酢酸ェチルおよび 10% クェン酸水溶液を加えた。 分液した有機層を水、 5%炭酸水素ナトリウ ム水溶液そして水で順番に洗浄後、 無水硫酸ナト リウムで乾燥した。 溶 媒を留去した後、 クロ口ホルム、 メタノールおよびジェチルエーテルを 用いて固体にしてテトラべプチド（8 )を 1.48g得た。
(テトラべプチド（8)の NMRデータ）
Ml-NHR (CDC13) <5ppm 7.75 (2H, d, J = 7.3 Hz), 7.62 (2H, d, J= 7.6 Hz), 7.39 (2H. t, J=7.6 Hz), 7.24-7.35 (7H, m), 7.10-7.20 (411, m), 6.78-6.88 (4H, m), 6.13 (111. d, J=8.3 Hz), 5.14 (1H, d. J = 12 Hz), 5.02 (1H, d. J = 14 Hz), 4.28-4.50 (5H, m), 4.16-4.24 (1H, m), 4.00-4.10 (III. m), 3.77 (311. s), 3.75 (3H, s), 2.21- 2.40 (211. m), 2.08-2.21 (1H, m), 1.92-2.08 (2H. m), 1. 2-1.75 (611, m), 0.78-0.98 (1811. m) 合成例 71
Fraoc— Gln(Mbh)— Leu— D— Leu— Val— 0Bzl→Fraoc- Gln(Mbh) -Leu-D- Leu-Val
合成例 70で得られたテトラべプチド（8)(1.40g)をメタノール（50ml) と DMF(40ml) との混合液に溶解し、 5%パラジウム炭素 （0.14g) を加 え、 水素ガス雰囲気下 2時間撹拌した。 パラジウム炭素を i 別し、 溶媒 を留去し、 テトラペプチド（9)を 1.10g得た。
(テトラべプチド（9)の NMRデータ）
'H-NHR (CDC13) 5ppm ： 7.77 (2H. d, J = 7.3 Hz). 7.64 (2H. d, J=
8.8 Hz), 7.37 (2H. t, J=7.3 Hz), 7.29 (2H, U, ] = 1.1, 7.6 Hz), 7.14 (4H, dd, J = l.7, 9.3 Hz), 6.84 (4H, dd， J = 2.4, 6.8 Hz),
6.09 (1H， s), 4,41-4.47 (III. m), 4.31-4.39 (3H( m). 4.25 (1H, d, J=5.9 Hz), 4.12-4.22 (1H. m), 3.78-4.05 (1H, m), 3.75 (6H, s)， 2.20-2.33 (2H, m). 2.09-2.20 (1H, m), 1.91-2.09 (2H, m), 1.53- 1.71 (6H, m), 0.82-0.99 (18II, m)
合成例 72
Fraoc- Asp(OtBu) + D-Leu- 0Bzl→Fmoc- Asp(OtBu) -D-Leu-OBzl
Fmoc- L -ァスパラギン酸 /3 - t -ブチルエステル（9.05 g ) と D - ロイ シンべンジルエステル （4.42g) および HOBt . 1水和物 （3.37g) とを加えてジクロロメ タン （80ml) に溶解した。 この溶液に氷冷下、 SCI (4.22g) を加えた。 この溶液を氷冷下で 2時間撹拌し、 その後室 温まで徐々に昇温させて一晩撹拌した。 ジクロロメタンを留去した後、 残留物に酢酸ェチルおよび 10%クェン酸水溶液を加えた。 分液した酢酸 ェチル層を水、 5%炭酸水素ナ卜リゥム水溶液そして水で順番に洗浄後、 無水硫酸ナ トリウムで乾燥した。 酢酸ェチルを留去した後、 シリカゲル カラムクロマ トグラフィー （シリカゲル 80 g、 クロ口ホルム ： メタノー ル = 200 : 0〜4) で精製しジペプチド（5 )を 8.36 g得た。 (ジぺプチド（5)の NMRデータ）
Ή-NMR (CDC13) 5p m ： 7.77 (2H, d, J = 7.3 Hz), 7.59 (2H. d, J= 7.8 Hz), 7.40 (2H, t, J = 7.3 Hz), 7.28-7.37 (7H， in), 6.94 (1H, d, J=7.8 Hz), 5.96 (1H, d, J=7.8 Hz). 5.17 (1H, d. J=12 Hz), 5.13 (1H, d, J = 12 Hz), 4.53-4.67 (2H, ID), 4.39 (2H, d, J=6.8 Hz), 4.23 (1H, t, J=7.1 Hz), 2.89 (1H, dd, J=3.2, 17 Hz), 2.62 (1H, dd, J=6.8, 17 Hz), 1.51-1.70 (3H, m), 1.44 (9H， s), 0.90 (3H, d， J=2.4 Hz), 0.88 (3H， d, J=2.4 Hz)
合成例 73
Fnioc-Asp(OtBu)-D-Leu-OBzl → Fmoc— Val— Asp(OtBu)— D—し eu— OBzl
合成例 72で得られたジペプチド（5) (6.15g) の DMF (100ml) 溶液に ジェチルァミ ン （10ml) を加え室温で 2時間撹拌した。 溶媒を留去した 後、 Fmoc- L -バリ ン （3.39g) と HOBt · 1水和物 （1.53g) とを加え て DMF(70ml) に溶解した。 この溶液に氷冷下、 WSCI (1.92 g ) を加えた。 この溶液を氷冷下で 2時間撹拌し、 その後室温まで徐々に昇温させて一 晚撹拌した。 DMFを除いた後、 残留物に酢酸ェチルおよび 10%クェン酸 水溶液を加えた。 分液した酢酸ェチル層を水、 5%炭酸水素ナトリウム 水溶液そして水で順番に洗浄後、 無水硫酸ナ トリウムで乾燥した。 酢酸 ェチルを留去した後、 シリカゲルカラムクロマトグラフィー （シリカゲ ル 50g、 クロロホルム ： メタノール = 200： 0~6 )で精製し、 さらにジ ェチルエーテルおよびへキサンを用いて固体にしてトリペプチド（6 )を 6.19g得た。
(トリぺプチ ド（6 )の NMRデータ）
'H -瞧 (CDC13) δρρια ： 7.77 (211. d, J = 7.3 Hz), 7.60 (211, d, J = 8.3 Hz), 7.40 (2H, dt. J=3.4. 7.3 Hz), 7.27-7.37 (711. m), 7.22 (111. d, J = 7.8 Hz), 7.08 (1H, d, J = 7.3 Hz), 5.29 (HI, d, J = 6.8 Hz), 5.09 (2H, s), 4.79-4.86 (1H, m), 4.56-4.63 (111, m), 4.41 (2H. d, J = 7.3 Hz). 4.23 (1H, t, J = 6.8 Hz). 4.01 (1H. t, J = 6.3 Hz), 2.90 (1H, dd. J=4.4, 17 Hz), 2.58 (1H， dd, J=6.5, 17 Hz), 2.10-2.20 (1H, n ， 1.56-1.68 (3H, m), 1.42 (911, s), 0.98 (3H, d, J=6.8 Hz), 0.93 (3H, d, J=6.8 Hz) 0.85-0.91 (6H. m)
台成例 74
Fmoc-Val - Asp(OtBu) - D- Leu-OBzl→Fmoc- Val- Asp(OtBu)一 D— Leu 合成例 73で得られた トリぺプチド（6) (2.44g) をメタノ一ル （100 ml) に溶解し、 5 %パラジウム炭素 （0.25g) を加え、 水素ガス雰囲気 下 2時間撹拌した。 パラジウム炭素を濾別し、 溶媒を留去し、 ト リぺプ チド（7 )を 2.13g得た。
合成例 75 - -
Fmoc— Leu + D— Leu— 0Bzl→Fmoc— Leu— D— Leu— OBzl
Fraoc- L— ロイシン（8.16g ) と D— 口イ シンベンジルエステル（4.64 g) に HOBt ' 1水和物 （3.54g) を加えてジクロロメタン（140ml) に溶 解した。 この溶液に氷冷下、 WSCI (4.43g) を加えた。 この溶液を氷冷 下で 2時間撹拌し、 その後室温まで徐々に昇温させて 4日間撹拌した。 ジクロロメ夕ンを留去した後、 残留物に酢酸ェチルおよび 10%クェン酸 水溶液を加えた。 分液した詐酸ェチル層を水、 5 %炭酸水素ナ ト リ ウム 水溶液そして水で順番に洗净後、 無水硫酸ナトリウムで乾燥した。 酢酸 ェチルを留去した後、 シリカゲルカラムクロマトグラフィー （シリカゲ ル 100 g、 へキサン ： 酢酸ェチル = 200 ： 20〜60) で精製しジぺプチド (6 )を 11.7g得た。
(ジぺプチ ド（6)の NMRデータ）
Ή-N (CDC13) (5ppm ： 7.76 (211. d. J = 7.3 Hz), 7.57 (2H, d, J = 7.3 Hz), 7.39 (2H, t, J = 7.6 Hz), 7.27-7.36 (711, m), 6.52 (1H, d, J-7.8 IIz), 5.19 (III, d, J = 7.8 Hz). 5.14 (111, d, J = 12 Hz), 5.09 (1H, d, J=12 Hz), 4.60-4.68 (1H, m), 4.34-4.46 (2H, m), 4.21 (1H. t, J = 7.1 Hz), 4.17-4.29 (1H, ra), 1.43-1.76 (6H, m), 0.93 (6H, d, J=5.4 Hz). 0.89 (6H. d, J=5.9 Hz)
合成例 76
Fmoc— Leu— D—し eu— OBzl → Fraoc— Gln(Mbh)—し eu— D—し eu— OBzl
合成例 75で得られたジペプチド（6)(4.81g) の DMF (90ml) 溶液にジ ェチルァミ ン （9 ml) を加え室温で 2時間撹拌した。 溶媒を留去した後、 N - - 9 - Fmoc - N - r -Mbh- L -グルタミ ン （5.14 g) と HOBt . 1水和物 （1.32g) とを加えてジクロロメタン （60ml) に溶解した。 こ の溶液に氷冷下、 WSCI (1.66 ) を加えた。 この溶液を氷冷下で 2時間 撹拌し、 その後室温まで徐々に昇温させて一晩撹拌した。 ジクロロメタ ンを留去した後、 -残留物にクロ口ホルムの 10%メタノール溶液および 10 %クェン酸水溶液を加えた。 分液したクロ口ホルムの 10%メタノール溶 液層を水、 5%炭酸水素ナトリウム水溶液そして水で順番に洗净後、 無 水硫酸ナ 卜リゥムで乾燥した。 クロ口ホルムの 10%メタノール溶液を留 去した後、 クロ口ホルムおよびジェチルエーテルを用いて固体にしトリ ぺプチド（8)を 5.59g得た。
(トリぺプチド（8)の NMRデータ）
Ή-NMR (DMS0-d6) < ppm ： 8.51 (111. d. J=8.3 Hz), 8.23 (111. d, J=7.8 Hz), 7.86 (211. d, J=7.8 Hz), 7.78 (111, d, J=7.8 Hz), 7.70 (2H. t, J=5.9 Hz), 7.47 (1H, d, J=7.8 Hz), 7.39 (211. t, J=7.3 Hz), 7.26-7.36 (711. m), 7.14 (4H, dd， J=l.5, 8.8 Hz), 6.83 (4H, dd, J=2. , 8.8 Hz), 6.02 (III, d, J=8.3 Hz), 5.06 (211. s), 4.35- 4.46 (111, m), 4.17-4.34 (411. m), 4.00-4.08 (111, m), 3.71 (3H, m), 3.70 (311. s)， 2.21-2.34 (211. m), 1.90-2.01 (III, m), 1.74-1.87 (111, m), 1. 7-1.64 (411, m), 1. 4 (211, t, J = 7.1 Hz), 0.75-0.91 (1211, m) 合成例 ΊΊ
Fmoc-Gln( bh) - Leu - D- Leu- 0Bzl→Fmoc- Gln(Mbh)一 Leu- D- Leu 台成例 76で得られた トリぺプチド（8)(2.73g) をメタノール （50ml) と DMF (50ral) との混合液に溶解し、 5 %パラジウム炭素（0.27 g ) を加 え、 水素ガス雰囲気下 2時間撹拌した。 パラジウム炭素を濾別し溶媒を 留去し、 ジェチルエーテルで固体にして トリペプチド（9)を 2.46 g得 た。
合成例 78
Figure imgf000100_0001
4 -メチルペンチルアルデヒ ド （4.80 g) とブロム酢酸ェチル （10.0 g ) とをベンゼン （100ml) とジェチルエーテル （20ml) との混合液に 溶解した。 この溶液の一部 （10ml) を亜鉛粉末 （3.8g) に加えて加熱 し、 反応を開始させた。 開始後、 残りの溶液をゆっく りと還流する程度 に滴下して加えた。 滴下終了後、 30分間加熱撹拌した。 反応溶液を冷却 した後、 10%硫酸水溶液（100ml) を冷却しながらゆっく り加えた。 静置 した後、 有機層を分取した。 分取した有機層を水、 飽和炭酸水素ナトリ ゥム水溶液、 飽和食塩水で順次洗净した後、 無水硫酸マグネシウムで乾 燥した。 溶媒を減圧下濃縮した後、 残留物をシリカゲルカラムクロマト グラフィー （シリ力ゲル 100 g、 へキサン ：酢酸ェチル =100： 20) で精 製し - ヒ ドロキシェチルエステルを 5.0g得た。
( 3 - ヒ ドロキシェチルエステルの NMRデ一夕）
'"-匿 (CDCl3)(5ppm ： 4.17 (211. q. J=7 Hz), 3.97 (1H, m), 2.97 (111. t. J Hz), 2.53 (1H. dd. J=3. 17 Hz). 2.40 (111. dd, J=9, 16 Hz). 1.53 (211. m). 1.28 (311, t. J=7 Hz), 1.30 (211, m), 0.89 (611, dd, J = 1.7， 6.6 Hz) 合成例 79
Figure imgf000101_0001
合成例 78で得られた ^ - ヒ ドロキンェチルエステル（5. Og) のジェチ ルエーテル （100ml) 溶液に、 ジヒ ドロピラン （8. Og) と p - トルェン スルホン酸（0.2g) を加え室温で 2時間撹拌した。 反応液を飽和炭酸水 素ナ トリゥム水溶液で 2回洗浄後飽和食塩水で洗浄し無水硫酸マグネシ ゥムで乾燥した。 溶媒を減圧下濃縮し油状物 （7.33g) を得た。
得られた油状物 （7.33g) のメタノール （50ml) 溶液に、 氷冷下水酸 化カリウム （1.75g) の水溶液 （20ml) を加えた。 30分後さらに水酸化 カリウム（2.0g)-を加えた。 30分後メタノールを留去した後、 残渣に水 (100ml) を加えた。 イソプロピルエーテルで洗浄後、 水層を希塩酸で中 和しィソプロピルエーテルで 3回抽出した。 合わせたィソプロピルエー テル層を水、 飽和食塩水で洗浄後、 無水硫酸マグネシウムで乾燥した。 溶媒を減圧下濃縮しカルボン酸 5.2 gを得た。
(カルボン酸の IRデータ）
IR (film, n) ： 3000 (br), 2953 (s), 2870 (m), 2700 (br). 1736 (s ), 1711 (s), 1026 (s) cnr '
合成例 80
Figure imgf000101_0002
合成例 79で得られたカルボン酸（5.2g)と臭化べンジル（7.28 g) およ びトリェチルァミ ン （4.3g) の DMF (80ml) 溶液を室温で 3日間撹拌し た。 イソプロピルエーテル （100ml) と水 （100ml) を加えた後、 有機層 を分液し水層をィソプロピルエーテルで抽出した。 先の有機層とあわせ, 水および飽和食塩水で洗浄後、 無水硫酸マグネシウムで乾燥した。 溶媒 を減圧下濃縮し、 残留物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー （へキ サン ： 酢酸ェチル =100： 10)で精製しべンジルエステルを 3. llg得た。 (ベンジルエステルの NMRデータ）
LH-NMR (CDC13) δρρπι： 7.36 (5Η' m), 5.12 (2H, 2s), 4.66 (1H, m), 4.05 (1H, m), 3.85 (1H, m), 3.42 (1H, m). 2.52 and 2.72 (2H, m), 1.70 (2H, n), 1.50 (6H. m), 1.25 (2H， ra), 0.86 (6H, m)
合成例 81
Figure imgf000102_0001
台成例 80で得られたベンジルエステル （3. llg)のメ タノール （70ml) 溶液に P - トルエンスルホン酸 （0.35g) を加え 1時間加熱還流させた。 室温に戻した後、 イソプロピルエーテルと水を加えた。 有機層を分液し、 水層をイソプロピルエーテルで抽出した。 先の有機層とあわせ、 水、 飽 和炭酸水素ナトリゥム水溶液および飽和食塩水で洗浄後、 無水硫酸マグ ネシゥムで乾燥した。 溶媒を減圧下濃縮し、 残留物をシリカゲルカラム クロマ トグラフィ ー （シリ カゲル 70 g、 へキサン ： 酢酸ェチル =100 ： 15) で精製し 6 - メチル - 3 - ヒ ドロキシヘプ夕ン酸ベンジルを 1.38 g 得た。
(6 —メチル - 3 - ヒ ドロキンヘプ夕ン酸ベンジルの NMRデータ）
Ή-NMR (CDC13) <5 pm ： 7.36 (5H, m), 5.16 (2H, s). 4.00 (1H, br septet.. J=3 Hz), 2.57 (111, dd. J=3, 17 Hz), 2. 6 (1H, dd, J=9, 17 Hz). 1.50 (311. m), 1.32 (III, m), 1.21 (111, m), 0.88 (6H, d, J=7 llz)
台成例 82
Figure imgf000103_0001
6 -メチル- 3 -ヒ ドロキシヘプ夕ン酸ベンジル （0.75g) 、 Mnoc- L -イソロイシン （1.17g) およびジメチルァ ミ ノ ピリ ジン （26mg) の ジクロロメタン （20ml) 溶液に氷冷下で DCC(0.93g) を加え、 氷冷下に 2時間、 その後徐々に室温まで昇温させて 2日間撹拌した。 沈殿を濾別 した後、 ジクロロメタンを留去した。 残留物に酢酸ェチルと 10%クェン 酸水溶液を加えた。 分液した有機層を水、 5%炭酸水素ナ ト リウム水溶 液そして水で順番に洗浄後、 無水硫酸ナ トリウムで乾燥した。 濃縮後、 シリ力ゲルカラムク口マトグラフィ一 （シリ力ゲル 30g、 へキサン ：酢 酸ェチル = 200 : 0 -20) で精製し中間体化合物（50)を 1.76g得た。
(中間体化合物（50)の NMRデータ）
Ή-NHR (CDC13) δ ρπι ： 7.76 (2H, d, J=7.3 Hz), 7.60 (211. d, J = 7.3 Hz), 7.40 (2H, t, J = 7.3 Hz), 7.27-7.37 (7H, m), 5.23-5.35 (2H, m), 5.11 (2H, s), 4.28-4.44 (311, m), 4.23 (1H, t, J=6.8 Hz), 2.54-2.74 (2H. m). 1.80-1.97 (1H, m), 1.32-1.67 H， m), 1.06- 1.28 (3H, m), 0.76-0.98 (1211, m)
合成例 83
Figure imgf000103_0002
合成例 82で得られた中間体化合物（50K1.76g) の DMF (30ml) 溶液に ジェチルァミ ン （3 ml) を加え室温で 2時間撹拌した。 溶媒を留去した 後、 得られたァミ ン体と Fmoc- D -ロイシン （1.17g) および HOBt · 1 水和物 （0.51g) のジクロロメタン （20ml) 溶液に氷冷下、 WSCI (0.63 g) を加えた。 この溶液を氷冷下で 2時間撹拌し、 その後徐々に室温ま で昇温させてー晚撹拌した。 ジクロロメタンを留去した後、 残留物に酢 酸ェチルと 10%クェン酸水溶液を加えた。 分液した酢酸ェチル層を水、 5%炭酸水素ナトリゥム水溶液そして水で順番に洗浄後、 無水硫酸ナト リウムで乾燥した。 酢酸ェチルを留去した後、 シリカゲルカラムクロマ 卜グラフィ一 （シリ力ゲル 25g、 へキサン ：酢酸ェチル = 200： 6〜30) で精製し中間体化合物（51)を 2.10g得た。
(中間体化合物（51)の NMRデータ）
'H-N R (CDC13) 5ppm ： 7.76 (2H, d, J = 7.8 Hz), 7.59 (2H, d， J = 6.1 Hz). 7.40 (2H, t. J = 7.6 Hz), 7.27-7.36 (7H, ID), 6.45-6.59 (1H, m), 5.21-5.33 (1H. m), 50.9 (2H, s), 5.05-5.19 (1H, m), 4.33-4.56 (3H. m), 4.18-4.30 (2H, m), 2.54-2.71 (2Π, m), 1.79- 1.96 (1H, m)， 1.31-1.75 (7H. m), 1.05-1.20 (3H， m), 0.78-1.00 (18H, m) - 台成例 84
Figure imgf000104_0001
合成例 83で得られた中間体化合物（51)(2. lOg) の DMF (30ml) 溶液に ジェチルァミ ン （3 ml) を加え室温で 2時間撹拌した。 溶媒を留去した 後、 得られたアミ ン体と Fmoc - L -ァスパラギン酸 β - t -プチルェ ステル （1.36g) および HOBt' 1水和物 （0.51g) のジクロロメタ ン（20
1) 溶液に氷冷下、 WSCI (0.63g) を加えた。 この溶液を氷冷下で 2時 間撹拌し、 その後徐々に室温まで昇温させ一晚攬拌した。 ジクロロメ夕 ンを留去した後、 残留物に酢酸ェチルと 10%クェン酸水溶液を加えた。 分液した酢酸ェチル層を水、 5%炭酸水素ナト リゥム水溶液そして水で 順番に洗浄後、 無水硫酸ナトリウムで乾燥した。 酢酸ェチルを留去した 後、 シリカゲルカラムクロマ トグラフィー （シリカゲル 25 g、 へキサ ン ： 酢酸ェチル = 200： 10~50) で精製し中間体化合物（52) を 2.61 g得 た。
(中間体化合物（52)の NMRデータ）
Ή-NMR (CDC13) ( ppm ： 7.76 (2H, d, J = 7.3 Hz), 7.53-7.62 (2H, π , 7.40 (2H, t, J=7.6 Hz), 7.27-7.36 (7H, m), 6.93, 6.85 (1H, 2d, J=8.3 Hz), 6.72 (1H, d. J=8.3 Hz), 5.98 (111, d, J=8.3 Hz), 5.20-5.29 (1H, m), 5.01-5.12 (2H, m), 4.34-4.61 (5H, m), 4.22 (1H, t, J=6.8 Hz), 2.90-3.00 (1H, m), 2.51-2.74 (3H, m), 1.74- 1.96 (2H, m), 1.34-1.68 (6H. in), 1.44 (9H, 2s), 1.07-1.21 (3H, m), 0.78-0.96 (18H, m)
合成例 85
0-Ile-D-Leu-Asp(OtBu)-Fmoc >
Figure imgf000105_0001
O-Ile-D-Leu-Asp(OtBu)- Val- D-Leu- Leu- Gln(Mbh)- Fmoc
Figure imgf000105_0002
合成例 84で得られた中間体化合物（52)(0.99g) の DMF (20ml) 溶液に ジェチルァミ ン （2 ml) を加え室温で 2時間撹拌した。 溶媒を留去した 後、 得られたァミ ン体と合成例 71で得られたテトラべプチ ド（9 ) (1.10 g) および HOBt · 1水和物 （0.18g) の DMF (20ml) とジクロロメタン (10ml) の混合溶液に氷冷下、 WSCI (0.23g) を加えた。 この溶液を氷 冷下で 2時間撹拌した後、 室温で一晚撹拌した。 溶媒を留去した後、 残 留物にクロロホルムと 10%クェン酸水溶液を加えた。 分液した酢酸ェチ ル層を水、 5 %炭酸水素ナトリウム水溶液そして水で順番に洗浄後、 無 水硫酸ナ ト リウムで乾燥した。 酢酸ェチルを留去した後、 シリカゲル力 ラムクロマ トグラフィー （シリカゲル 50 g、 クロ口ホルム ： メタノール
= 200 ： 0〜4 ) で精製し中間休化合物（53)を 1.76g得た。
(中間体化合物（53)の NMRデータ）
Ή-N R (CD30D) dppm ： 7.75 (2H, d, J = 7.3 Hz). 7.54-7.62 (2H, m), 7.37 (2fl. t， J=7.6 Hz), 7.24-7.34 (7H, m). 7.15 (4H. d. J = 8.3 Hz). 6.84 (4H, d, J = 8.3 Hz), 6.12 (1H, s)， 5.16-5.27 (111. m), 5.02-5.14 (2H. m), 4.84 (1H, br s), 4.40-4.50 (211, m), 4.12- 4.50 (7H, m), 4.03 (1H. d, J=6.3 Hz), 3.76 (6H， s)， 2.91-2.98 (1H, m), 2.54-2.78 (3H. m), 2.39 (2H, t. J = 7.6 Hz), 1.95-2.17 (3H, m). 1.33-1.81 (13H, m), 1.42 (9H， s), 1.08-1.25 (3H, m)， 0.76-1.03 (36H, m)
合成例 86
D-Leu-Leu-Gln(Mbh)-Fmoc
Figure imgf000106_0001
0- Ile-D- Leu- Asp(OtBu)- Val- D- Leu- Leu-Gln(Mbh)
Figure imgf000106_0002
合成例 85で得られた中間体化合物（53)(1.75 g) の DMF (30ml) 溶液に ジェチルァ ミ ン （3ml) を加え室温で 2時間撹拌した。 溶媒を留去した 後、 得られたァ ミ ン体をメ 夕ノール （50ml) に溶解し 5 %パラジゥ厶炭 素 （0.15g) を加え、 水素ガス雰囲気下室温で 3時間撹拌した。 パラジ ゥム炭素を濾别し、 メ タノールを留去した後、 シリカゲルカラムクロマ トグラフィー （シリ カゲル 30 g、 クロ口ホルム ： メ タノール = 200： 0〜 25) で精製し中間体化合物（54)を 1.18g得た。
(中間体化合物（54)の NMRデータ）
Ή-NMR (CD30D) (5ppm ： 7.13 (4H, d, J-8.8 Hz), 6.81-6.88 (4H, m), 6.07 (111, s), 5.16-5.29 (1H, m), 4.70-4.84 (2H, m), 4.22- 4.51 (3H. m), 4.00-4.12 (HI, m). 3.82-3.88 (111, m). 3.76 (6H, s), 2.89-3.04 (111, m), 2.70-2.80 (111. m), 2.28-2.49 (4H, m), 2.05- 2.19 (211. m). .37-1.96 (1511, m), 1. 4 (911, s), 1.15-1.30 (3H. m). 0.79-1.02 (36H. m)
合成例 87 0-Ile-D-Leu-Asp(OtBu)-Val-D-Leu-Leu-Gln(Mbh)
Figure imgf000107_0001
合成例 86で得られた中間体化合物（54) (0.58 g) を THF (110ml) に溶 解し、 N -メチルモルホリ ン（0.10ml) および HOBt * 1水和物（0.29g) を加え A液とした。 THF (220ml) と DMF (HOral) の混合液に、 塩化セシ ゥム （0.79g) 、 塩化カリウム （0.31g) および WSCI (0.81g) を順次 加え、 B液とした。 室温で撹拌しながら A液を 20分かけて B液に滴下し、 さらに室温で 7日間撹拌した。 反応液を酢酸ェチル（100ml) で希釈し、 水、 5%炭酸水素ナ ト リウム水溶液、 水、 10%クェン酸水溶液そして水 で順番に洗浄後、-無水硫酸ナ トリゥムで乾燥した。 溶媒を留去した後、 シリカゲルカラムクロマトグラフィー （シリカゲル 30 g、 クロ口ホルム ： メタノール二 200： 0〜6)で精製し、 さらにジェチルエーテル-へキ サン系で固体にして本発明の環状デブシぺプチド（15)を 0.36 g得た。 (環状デブシぺプチド（15)の NMRデータ）
Ή-NMR (CD30D) 5ppm ： 7.10-7.17 (4Η, m), 6.82-6.88 (4H. m), 6.03-6.09 (1H. m). 5.15-5.23 (1H, m), 4.69-4.83 (111. m), 4.22- 4.51 (5H. m), 4.04-4.11 (1H, m). 3.77, 3.76 (6H, 2s). 2.64-2.91 (2H. m), 2.51-2.59 (1H, m), 2.15-2.45 (3H， m), 1.82-2.02 (3H, m), 1.36-1.78 (13H, m), 1. 4 (9H. s). 1.13-1.33 (4H, m), 0.76-1.02 (36H, m)
台成例 88
Figure imgf000107_0002
合成例 87で得られた環状デプシペプチド（15) (0.35g) を TFA (4ml) に溶解し、 室温で 2時間撹拌した。 溶媒を留去した後、 5%炭酸水素ナ ト リ ゥム水溶液で中和し、 クロロホルムの 10%メ タノール溶液で抽出し た。 有機層を無水硫酸ナ ト リ ウムで乾燥 '濃縮後、 シリカゲルカラムク 口マ トグラフィー（シリカゲル 20 g、 クロ口ホルム ： メ タノール = 100： 0〜50) で精製し、 本発明の環状デプシペプチド（16)を 0.21g得た。 (環状デブシぺプチ ド（16)の Rデータ）
'H-N R (CD30D) <5ppm ： 5.07-5.32 (1H, m)， 4,28-4.81 (6H， m), 4.05-4.21 (1H， m), 2.42-2.94 (4H， m), 2.11-2.32 (3H, m), 1.39- 2.08 (15H, m), 1.13-1.36 (4H， m), 0.80-1.11 (3611, m)
合成例 89
Figure imgf000108_0001
3 -ヒ ドロキンオクタン酸 （1.90g) およびト リェチルァ ミ ン （1.65 ml) の DMF(20ml) 溶液に臭化べンジル （1.41ml) を加え、 室温で 3日間 撹拌した。 溶媒を留去した後、 残留物に酢酸ェチルと水を加えた。 分液 した酢酸ェチル層を水で 2回洗浄後、 無水硫酸ナ卜リウムで乾燥した。 濃縮後、 シリカゲルカラムクロマ トグラフィー （シリカゲル 15 g、 クロ 口ホルム ： メタノール =100： 0〜 8)で精製し 3 -ヒ ドロキンオクタン 酸ベンジルを 1.71g得た。
(3 - ヒ ドロキシォクタン酸ベンジルの NMRデータ）
Ή-NMR (CDC13) ( ppm ： 7.31-7.41 (5H. m), 5.16 (211. s), 3.98- 4.06 (111， m). 2.85 (1H, d, J = 3.4 Hz). 2.57 (III, dd, J=3.2, 17 Hz). 2. 6 (111. dd. J=8.8. 17 Hz), 1.22-1.60 (811. m), 0.88 (3H. t, J=6.8 Hz)
合成例 90
Figure imgf000108_0002
3 -ヒ ドロキシォクタン酸べンジル （0.75g) 、 Fmoc- L -イソロイ シン （1.17g) およびジメチルァ ミ ノ ピリ ジン （26rag) のジクロロメ 夕 ン （20ml) 溶液に氷冷下で DCC(0.93g) を加え、 氷冷下に 2時間、 その 後徐々に室温まで昇温させて 3日間撹拌した。 沈殿を濾別した後、 ジク ロロメタンを留去した。 残留物に酢酸ェチルと 10%クェン酸水溶液を加 えた。 分液した有機層を水、 5%炭酸水素ナ ト リウム水溶液そして水で 順番に洗浄後、 無水硫酸ナトリウムで乾燥した。 濃縮後、 シリカゲル力 ラムクロマトグラフィー （シリカゲル 30 g、 へキサン ： 酢酸ェチル = 200： 5-30) で精製し中間体化合物（55)を 1.75g得た。
(中間体化合物（55)のデータ）
Ή-N R (CDCls) ( pm ： 7.76 (211, d, J = 7.3 Hz), 7.60 (2H. d. J = 7.3 Hz), 7.40 C2H， t, J=7.3 Hz), 7.27-7.37 (7H. m), 5.22-5.36 (2H. ra), 5.11 (2H, s)， 4.34-4.44 (2H, m). 4.34-4.44 (2H, m), 4.31 (1H， dd, J=4.6, 8.3 Hz). 4.23 (1H, t， J=7.1 Hz), 2.54-2.74 (2H, m), 1.79-1.96 (1H, m), 1.51-1.71 (2H, m), 1.05-1.46 (811. m), 0.76-0.97 (9H, m)
合成例 91
O-ile-Fmoc O-lle-D-Leu-Fmoc 4 W4 合成例 90で得られた中間体化合物 （55) (1.75 g) の DMF (30ml) 溶液 にジェチルァミ ン （3 ml) を加え.室温で 2時間撹拌した < 溶媒を留去し た後、 得られたァミ ン体と Fmoc - D -ロイシン （ 1.17 g ) および HOBt · 1水和物 （0.51g) のジクロロメタン（20ml) 溶液に氷冷下、 WSCI(0.63 g) を加えた。 この溶液を氷冷下で 2時間撹袢し、 その後徐々に室温ま で昇温させて 2日間撹拌した。 ジクロロメタンを留去した後、 残留物に 酢酸ェチルと 10%クェン酸水溶液を加えた。 分液した酢酸ェチル層を水, 5%炭酸水素ナトリゥム水溶液そして水で順番に洗浄後、 無水硫酸ナ 卜 リウムで乾燥した。 酢酸ェチルを留去した後、 シリカゲルカラムクロマ トグラフィー （シリ 力ゲル 25g、 へキサン ：酢酸ェチル = 200： 5〜35) で精製し中間体化合物（56)を 2.10g得た。
(中間体化合物（56)の NMRデータ）
Ή-N R (CDC13) <5 pm ： 7.76 (2H, d, J=7.3 Hz), 7.57-7.60 (2H. in), 7.40 (2H, t, J=7.3 Hz), 7.27-7.36 (7H, m), 6.45-6.59 (1H, m), 5.22-5.33 (1H, m), 5.09 (2H, s), 5.04-5.18 (1H. m), 4.33-4.56 (3H, m), 4.18-4.30 (2H, m)， 2.53-2.70 (2H, ra), 1.79-1.95 (111. m), 1.45-1.75 (5H, m), 1.04-1.44 (8H, m), 0.75-0.99 (15H. m)
合成例 92
Figure imgf000110_0001
台成例 91で得られた中間体化合物 （56) (2.10g) の DMF(30ID1) 溶液に ジェチルァミ ン （3ml) を加え室温で 2時間撹拌した。 溶媒を留去した 後、 得られたア ミ ン体と Fmoc- L -ァスパラギン酸 β - t -プチルェ ステル （1· 36 g ) および HOB t · 1水和物 （0.51g) のジクロロメ タン (20ml) 溶液に氷冷下、 WSCI (0.63g) を加えた。 この溶液を氷冷下で 2時間撹拌し、 その後徐々に室温まで昇温させて 3日間撹拌した。 ジク ロロメ タ ンを留去した後、 残留物に酢酸ェチルと 10%クェン酸水溶液を 加えた。 分液した酢酸ェチル層を水、 5%炭酸水素ナト リウム水溶液そ して水で順番に洗浄後、 無水硫酸ナト リゥムで乾燥した。 酢酸ェチルを 留去した後、 シリカゲルカラムクロマ トグラフィー （シリカゲル 25 g、 へキサン ： 酢酸ェチル = 200： 10〜60)で精製し中間体化合物（57)を 1.94 g得た。
(中間体化合物（57)の NMRデータ） •H-NHR (CDCI3) 5ρρπι ： 7.76 (2H. d, J=7.3 Hz), 7.58 (2H， d, J = 7.8 Hz), 7.40 (2H, t, J=7.3 Hz). 7.27-7.37 (7fl, m), 6.85-7.00 (1H, m), 6.75 (1H, d, J = 8.3 Hz), 5.95-6.06 (1H. m), 5.21-5.31 (1H. m). 5.01-5.13 (2H, m), 4.34-4.62 (5H. m), 4.22 (1H, t. J = 6.8 Hz), 2.87-3.01 (1H, m)， 2.50-2.75 (3H， m). 1.74-1.97 (2H, m)， 1.34-1.70 (4H, m), 1.44 (9H, 2s), 1.09-1.33 (8H, in), 0.77-0.9,6 (15H, m)
合成例 93 u)-Val-D-Leu-Leu-Gln(Mbh)-Fraoc
Figure imgf000111_0001
合成例 92で得られた中間体化合物 （57) (1.30 g) の DMF (14ml) 溶液 にジェチルァ ミ ン（1.4ml) を加え室温で 3時間撹拌した。 溶媒を留去し た後、 得られたア ミ ン体と合成例 71で得られたテ トラペプチ ド（9 ) (1.37g) および HOBt * 1水和物 （0.23g) の DMF (27ml) とジクロロメ タン （16ml) の混台溶液に氷冷下、 WSCI (0.29 ) を加えた。 この溶液 を氷冷下で 2時間撹拌し、 その後徐々に室温まで昇温させて 2日間撹拌 した。 溶媒を留去した後、 残留物にクロ口ホルムと 10%クェン酸水溶液 を加えた。 分液した酢酸ェチル層を水、 5%炭酸水素ナトリウム水溶液 そして水で順番に洗浄後、 無水硫酸ナトリウムで乾燥した。 酢酸ェチル を留去した後、 シリカゲルカラムクロマトグラフィー （シリカゲル 50 g、 クロ口ホルム ： メタノール = 200： 0~6)で精製し中間体化合物 （58) を 1.61g得た。
(中間体化合物（58)の NMRデータ）
ΊΙ-NHR (CD30D) ( ppm ： 7.68-7.80 (211, π , 7.53-7.63 (2Η, m), 7.18-7.43 (911, m), 7.13 (411, d, J=8.3 Hz), 6.82 (411. d, J=8.3 Hz), 6.09 (1H, s), 5.13-5.29 (1H, m), 4.98-5.13 (2H, m), 4.10- 4.60 (9H. n , 3.98-4.06 (1H, ra)， 3.74 (6H, s), 2.52-3.00 (復 m), 2.31-2.50 (2H, m), 1.96-2.20 (4H, m). 1.47-1.75 (10H, m), 1.41 (9H. s), 1.08-1.45 (9H, m), 0.70-1.00 (33H, m)
台成例 94
0-Ile-D-Leu-Asp(OtBu)-Val-D-Leu-Leu-Gln(Mbh)-Fmoc
Figure imgf000112_0001
-Asp(OtBu)-Val-D-Leu-Leu-Gln(Mbh)
Figure imgf000112_0002
合成例 93で得られた中間体化合物（58) (1.61g) の DMF(20ml) 溶液に ジェチルァミ ン C2ml) を加え室温で 3時間撹拌した。 溶媒を留去した 後、 シリカゲルカラムクロマ トグラフィ ー （シリカゲル 20 g、 クロロホ ルム ： メ タノール =100： 0〜3) で精製し中間体化合物（59) を l.OOg 得た。
(中間体化合物（59)の NMRデータ）
Ή-N R (CD30D) δρρπι ： 7.27-7.38 (5H, m), 7.13 (4H, d. J = 7.8 Hz), 6.84 (4H, d. J = 8.8 Hz), 6.07 (1H, s), 5.21-5.29 (III, m), 5.07-5.12 (211. m). 4.71-4.78 (1H, m), 4.41-4.48 (211, m), 4.29- 4.38 (HI. m). 4.21-4.27 (111, m), 3.97-4.01 (1H. m), 3.76 (611, s), 3.37 (1H. t. J = 7.1 Hz), 2.88-2.98 (111. m), 2.62-2.79 (3H. m), 2.35 (2H, t, J = 7.8 Hz), 2.08-2.17 (111. m), 1.81— 1.95 (2H. ra), 1.50-1.80 (11H, m), 1.43 (9H. s), 1.12-1.48 (9H, ra), 0.81-1.02 (33H. m)
台成例 95
Figure imgf000113_0001
合成例 94で得られた中間体化合物（59) (l.OOg) をメタノール（35ml) に溶解し、 5 %パラジウム炭素（0. lg) を加え、 水素ガス雰囲気下 4時 間撹拌した。 パラジウム炭素を濾別し、 メタノールを留去し、 中間体化 合物を得た。 得られた中間体化合物を THF (170πι1) に溶解し、 N- 3) メチルモルホリ ン （0.17ml) および HOBt' 1水和物 （0.46g) を加え A 液とした。 THF(340ml) と DMF(170ml) の混合液に、 塩化セシウム （1.27 g) 、 塩化カリウム （0.51g) および WSCI (1.30g) を順次加え、 B液 とした。 室温で撹拌しながら A液を 20分かけて B液に滴下し、 さらに室 温で 7日間撹拌した。 反応液を酢酸ェチル（200ral) で希釈し、 水、 5% 炭酸水素ナ ト リウム水溶液、 水、 10%クェン酸水溶液そして水で順番に 洗浄後、 無水硫酸ナ ト リウムで乾燥した。 溶媒を留去した後、 シリカゲ ルカラムクロマトグラフィー （シリカゲル 30 g、 クロ口ホルム ： メタノ ール = 200： 0〜6) で精製し、 さらにジェチルエーテルおよびへキサ ンを用いて固体にして本発明の環状デブシぺプチド（17)を 0.64g得た。 (環状デブシぺプチド（17)の NMRデータ）
' H-NH (CD30D) όρρπ ： 7.10-7.16 (4Η, m), 6.82-6.88 (4H, m), 6.04-6.09 (111, m), 5.09-5.25 (1H, m), 4.70-4.77 (1H, m), 4.23- 4.51 (5H, m), 4.03-4.13 (111, ra). 3.77 (3H, s), 3.76 (3H, s)， 2.64-2.91 (2H, m), 2.51-2.58 (111, m), 2.15-2.43 (3H, m), 1.82- 2.03 (3!!, m), 1.51-1.78 (1111, m), 1.44 (911, s), 1.13-1.49 (9H, m). 0.77-1.04 (3311. m)
合成例 96
Figure imgf000114_0001
合成例 95で得られた環状デプシペプチド（17) (0.64g) を TFA (8ml) に溶解し、 室温で 3時間攬拌した。 溶媒を留去した後、 5%炭酸水素ナ トリゥム水溶液で中和し、 クロ口ホルムの 10%メタノール溶液で抽出し た。 有機層を無水硫酸ナトリゥムで乾燥 ·濃縮後、 シリカゲルカラムク 口マトグラフィー （シリ力ゲル 20g、 クロロホルム ： メタノ一ル =100: 0〜50) で精製し、 さらにジェチルエーテルおよびへキサンを用いて固 体にして本発明の環状デブシぺプチド（18)を 0.36g得た。
(環状デブシぺプチド（18)の NMRデータ）
Ή-NMR (CD30D) άρρπι ： 5.13-5.33 (lH'm), 4.22-4.82 (6H， m), 4.06-4.22 (1H, in), 2.39—2.93 (4H. ra), 1.50-2.34 (16H, m), 1.14- 1.50 (9H, m), 0.79-1.09 (33H, ra)
合成例 97
Figure imgf000114_0002
3 - ヒ ドロキンへキサデカン酸 （1.90g) およびトリェチルァミ ン (0.97ml) の DMF (20ml) 溶液に臭化べンジル （0.83ml) を加え、 室温で 3日間撹拌した。 溶媒を留去した後、 残留物に酢酸ェチルと水を加えた。 分液した酢酸ェチル層を水で 2回洗浄後、 無水硫酸ナ卜リゥムで乾燥し た。 濃縮後、 シリカゲルカラムクロマトグラフィー （シリカゲル 15 g、 クロロホルム ： メタノール =100： 0〜8)で精製し 3 - ヒ ドロキンへキ サデカン酸ベンジルを 1.22 g得た。
(3 - ヒ ドロキンへキサデ力ン酸ベンジルの NMRデータ）
'I!-NHR (CDC13) 5ppm ： 7.31-7.40 (511. m), 5.16 (2H, s), 4.02 (1H, br s), 2.84 (111. br s)， 2.56 (111, dd, J=3.4. 17 Hz). 2. 6 (111. dd. J = 8.8. 17 Hz), 1.47-1.61 (2H. m), 1.37-1.47 (2H, m), 1.20- 1.37 (20H, n , 0.88 (3H, t, J=6.8 Hz)
合成例 98
Figure imgf000115_0001
3 - ヒ ドロキシへキサデ力ン酸べンジル （1.04 g) 、 Fmoc- L -イソ ロイシン （1.17g) およびジメチルァミ ノ ピリ ジン （26rag) のジクロ口 メ タン （20ml) 溶液に氷冷下で DCC(0.93g) を加え、 氷冷下 2時間、 そ の後徐々に室温まで昇温させて 2日間撹拌した。 沈殿を濾別した後、 ジ クロ口メ タ ンを留去した。 残留物に酢酸ェチルと 10%クェン酸水溶液を 加えた。 分液した有機層を水、 5%炭酸水素ナ ト リウム水溶液そして水 で順番に洗浄後、 -無水硫酸ナ ト リウムで乾燥した。 濃縮後、 シリカゲル カラムクロマ トグラフ ィー （シリ力ゲル 30g、 へキサン ： 酢酸ェチル =
200： 0-25) で精製し中間体化合物（60)を 2.00g得た。
(中間体化合物（60)の NJIRデータ）
Ή-N R (CDC13) (5ppm ： 7.76 (2H. d, J = 7.3 Hz), 7.60 (2H, d, J = 7.3 Hz), 7.40 (2H， t, J=7.3 Hz), 7.27-7.37 (7H, m), 5.23-5.36 (2Π. ), 5.11 (2H, s). 4.35-4.43 (2H， m), 4.31 (1H, dd, J=4.6, 9.3 Hz). 4.23 (111. t. J = 7.1 Hz), 2.55-2.73 (211. m), 1.80-1.94 (1H, m), 1.51-1.71 (2H, m), 1.04-1. 6 (24H, ra), 0.78-0.98 (9H. m)
合成例 99 oc
Figure imgf000115_0002
台成例 98で得られた中間体化合物 （60) (2.00 g) の DMF (30ml) 溶液 にジェチルァ ミ ン （3 ml) を加え室温で 2時間撹拌した。 溶媒を留去し た後、 得られたァミ ン体と Fmoc- D -ロイシン（1.12g ) および HOBt.1 水和物 （0.48g) のジクロロメタン （20ml) 溶液に氷冷下、 WSCI (0.60 g) を加えた。 この溶液を氷冷下で 2時間撹拌し、 その後徐々に室温ま で昇温させて 2日間撹拌した。 ジクロロメタンを留去した後、 残留物に 酢酸ェチルと 10%クェン酸水溶液を加えた。 分液した酢酸ェチル層を水、 5%炭酸水素ナ卜リゥム水溶液そして水で順番に洗浄後、 無水硫酸ナ卜 リウムで乾燥した。 酢酸ェチルを留去した後、 シリカゲルカラムクロマ 卜グラフィ一 （シリ力ゲル 25g、 へキサン ： 酢酸ェチル = 200： 5〜30) で精製し中間体化合物（61)を 2.35g得た。
(中間体化合物（61)の NMRデータ）
Ή-NMR (CDC13) ( ppm ： 7.76 (2H. d, J=7.8 Hz), 7.57-7.60 (2H. m). 7.39 (2H, t,- J = 7.6 Hz), 7.27-7.36 (7H, m), 6.44-6.60 (111, m), 5.22-5.34 (1H. m). 5.09 (2H, s), 5.04-5.18 (1H, m). 4.32-4.55 (3H, in), 4.18-4.30 (2H. m), 2.53-2.70 (2H, m), 1.79-1.96 (1H. m), 1.44-1.76 (5H, m)， 1.02-1.44 (24H, m), 0.78-1.00 (15H, m)
台成例 100
Figure imgf000116_0001
台成例 99で得られた中間体化合物（61)(2.35g) の DMF (30ml) 溶液に ジェチルァミ ン （3 ml) を加え室温で 3時間撹拌した。 溶媒を留去した 後、 得られたァミ ン体と Fmoc - L -ァスパラギン酸 /S - t -プチルェ ステル （1.31g) および HOBい 1水和物（0.49g) のジクロロメ タン（20 ml) 溶液に氷'/令下、 WSCI (0.61g) を加えた。 この溶液を氷?令下で 2時 間撹拌し、 その後徐々に室温まで昇温させて一晚撹拌した。 ジクロロメ 夕ンを留去した後、 残留物に酢酸ェチルと 10%クェン酸水溶液を加えた ( 分液した酢酸ェチル層を水、 5%炭酸水素ナ ト リウム水溶液そして水で 順番に洗浄後、 無水硫酸ナトリウムで乾燥した。 齚酸ェチルを留去した 後、 シリ力ゲル力ラムクロマトグラフィー（シリカゲル 25g、 へキサン： 酢酸ェチル = 200 : 10〜50) で精製し中間体化合物（62)を 2.57 g得た。 (中間体化合物（62)の NMRデータ)
Ή-N R (CDC13) 5 pm ： 7.76 (2H, d, J=7.8 Hz), 7.58 (2H, d, J= 7.3 Hz), 7.39 (2H. t, J=7.3 Hz), 7.27-7.36 (7H, m), 6.84-6.93 (1H, m), 6.69-6.75 (1H, m), 5.95-6.05 (1H, m), 5.20—5.30 (1H, ra), 5.01-5.12 (2H, m), 4.34-4.62 (5H, m), 4.22 (1H, t, J=7.1 Hz), 2.89-3.00 (1H, m), 2.50-2.75 (3H, m), 1.74-1.97 (2H, m), 1.34- 1.70 (4H, m), 1.44 (9H, 2s), 1.10-1.34 (24H. m), 0.82—0.98 (15H, m)
合成例 101 -
Figure imgf000117_0001
0 - lie- D- Leu- Asp(OtBu)- Val- D-Leu- Leu-Gln(Mbh)- Fmoc
Figure imgf000117_0002
合成例 100で得られた中間体化合物（62) (1.34 g) の DMF (14ml) 溶液 にジェチルァミ ン （1.4ml) を加え室温で 3時間撹拌した。 溶媒を留去 した後、 得られたアミ ン体と合成例 71で得られたテ トラペプチ ド（9) (1.25g ) および HOBt ' 1水和物 （0.21g) の DMF(25ml) とジクロロメ タン （15ml) の混台溶液に氷冷下、 WSCI (0.26g) を加えた。 この溶液 を氷冷下で 2時間撹拌し、 その後徐々に室温まで昇温させて 2日間撹拌 した。 溶媒を留去した後、 残留物にクロ口ホルムと 10%クェン酸水溶液 を加えた。 分液した酢酸ェチル層を水、 5%炭酸水素ナトリウム水溶液 そして水で順番に洗净後、 無水硫酸ナトリウムで乾燥した。 酢酸ェチル を留去した後、 シリカゲルカラムクロマトグラフィー （シリカゲル 50g. クロロホルム ： メタノール = 200： 0~6)で精製し中間体化合物（63)を 1.28g得た。
(中間体化合物（63)の NMRデータ）
Ή-NMR (CD30D) 5ρρπι ： 7.69-7.79 (2Η, m), 7.56-7.63 (2H, m), 7.23-7.40 (9H, m), 7.14 (4H, d, J=8.8 Hz), 6.83 (4H, dd, J = l.8, 8.8 Hz), 6.10 (1H, s). 5.18-5.27 (1H, m), 5,03-5.10 (2H, m), 4.21-4.61 (8H. m), 4.13-4.20 (1H, m), 4.00-4.05 (1H， m), 3.75 (6H, s), 2.53-2.91 (4H. ra), 2.40 (2H, t, J=7.6 Hz), 2.10-2.19 (1H, m), 1.95-2.06 (2H, m), 1.83-1.93 (1H, m), 1.48-1.81 (10H. m), 1.42 (9H， s), 1.13-1.46 (25H, m), 0.79-1.00 (33H, m)
合成例 102
u-Leu-Gln(Mbh)-Fmoc Bu)-Val-D-Leu-Leu-Gln(Mbh)
Figure imgf000118_0001
合成例 101で得られた中間体化合物（63) (1.28g) の DMF (15ral) 溶液 にジェチルァ ミ ン（1.5ml) を加え室温で 3時間撹拌した。 溶媒を留去し た後、 シリカゲルカラムクロマ トグラフィ ー （シリカゲル 20 g、 クロ Π3 ホルム ： メタノール = 100： 0〜3.5) で精製し中間体化合物（6 を 0.82 g得た。
(中間体化合物 （64) の NMRデ一夕）
'H-N R(CD30D) 5ppm: 7.27-7.38 (511. m), 7.13 (411. d, J=8.3 Hz), 6.84 (411. d. J=8.8 Hz), 6.07 (111, s). 5.21-5.29 (1H, m), 5.08- 5.12 (211. m), 4.71-4.79 (III, m), 4.41-4.49 (211, m), 4.29-4.39 (HI, m). 4.20-4.28 (HI. m). 3.97-4.01 (1H, m), 3.76 (6H, s)， 3.30-3.40 (III. m), 2.89-3.01 (1H, m). 2.62-2.79 (3H. m), 2.36 (211. t, J = 7.8 Hz). 2.09-2.18 (111, m), 1.83-1.95 (211, m), 1.51- 1.77(1111. m), 1. 3C9H. s). 1.12-1.47(2511, m), 0.81-1.0K33H, m) 合成例 103 l
Figure imgf000119_0001
合成例 102で得られた中間体化合物（64) (0.82 g) をメタノール （25 ml) に溶解し、 5%パラジウム炭素 （0.08g) を加え、 水素ガス雰囲気 下 4時間撹拌した。 パラジウム炭素を據別し、 メタノールを留去し、 デ プシペプチドを得た。 得られた中間体化合物を THF (130ml) に溶解し、 N -メチルモルホリ ン （0.13ml) および HOBt * 1水和物 （0.35g) を加 え A液とした。 THF (260ml) と DMF (130ml) の混合液に、 塩化セシウム (0.96g) 、 -塩化カリウム （0.38g) および WSCI (0.98g) を順次加え、 B液とした。 室温で撹拌しながら A液を 20分かけて B液に滴下し、 さら に室温で 11日間撹拌した。 反応液を酢酸ェチル （150ral) で希釈し、 水、 5%炭酸水素ナトリウム水溶液、 水、 10%クェン酸水溶液そして水で順 番に洗浄後、 無水硫酸ナ ト リウムで乾燥した. 溶媒を留去した後、 シリ 力ゲル力ラムクロマトグラフィー （シリ力ゲル 30g、 ク口口ホルム ： メ タノール = 200 : 0〜6)で精製し、 さらにジェチルエーテルおよびへキ サンを用いて固体にして目的の環状デブシぺプチド（19)を 0.60 g得た。 (環状デブシぺプチド（19)の NMRデータ）
lH-N R (CD30D) (5ppm ： 7.10-7.16 (4H, m). 6.82-6.89 (4H, m), 6.04-6.09 (1H, m). 5.11-5.25 (Hi. m). 4.69-4.76 (1H， m), 4.22- 4.51 (5H. m), 4.03-4.13 (1H, tn), 3.77 (3H， s). 3.76 (3H, s), 2.64-2.92 (211, m), 2.51-2.58 (HI, m), 2.15-2.43 (3H, m). 1.81- 2.04 (4H, m), 1.51-1.78 (訓. m). 1.44 (9H. s), 1.11-1.48 (25H, m), 0.77-1.05 (3311, m)
合成例 104
Figure imgf000120_0001
合成例 103で得られた環状デブシペプチド（19) (0.60g) を TFA(7niO に溶解し、 室温で 3時間撹拌した。 溶媒を留去した後、 5%炭酸水素ナ トリゥム水溶液で中和し、 クロロホルムの 10%メタノール溶液で抽出し た。 有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥 '濃縮後、 シリカゲルカラムク 口マトグラフィ一 （シリカゲル 20 g、 クロ口ホルム ： メタノール = loo： 0〜40) で精製し、 さらにジェチルエーテル一へキサン系で固体にして 本発明の環状デブシぺプチ ド（20) (以下、 「化合物 8」 という） を 0.33 g得た。 - (化合物 8の NMRデータ）
■H-N R (CD30D) 5ppm ： 5.12-5.33 (1H. m), 4.67-4.80 (1H, m), 4.26 -4.63 (5H, m)， 4.04-4.20 (1H. ra), 2.38—2.93 (4H. ID), 1.50-2.34 (16H, m), 1.17-1.50 (25H. m), 0.81-1.09 C33H, ra)
合成例 105
Figure imgf000120_0002
シアン化ナトリウム（2.11 g) の 40%エタノール（15ral) 溶液に、 （R) - ( + )- 1.2—エポキシ - 3 -ノニロキシプロパン（2.73 g) と 40%エタ ノール （6ml) 溶液を加えた。 反応液を 8時間加熱還流させた後、 エタ ノールを留去した。 残渣に冷却下 1 N塩酸水を加えて pH4とした後、 ク 口口ホルム抽出した。 台わせたクロ口ホルム層を無水硫酸ナ トリゥムで 乾燥後溶媒を留去し中間体のカルボン酸を得た。
得られたカルボン酸と 卜 リエチルァミ ン （1,90ml) および臭化べンジ ル （1.61ml) のジメチルホルムアミ ド （40ml) 溶液を室温で一晚撹拌し た。 溶媒を留去した後、 残留物に酢酸ェチルと水を加えた。 分液した酢 酸ェチル層を水で 2回洗浄後、 無水硫酸ナ 卜 リ ゥムで乾燥した。 酢酸ェ チルを留去した後、 シリ力ゲルカラムク口マ トグラフィー （シリ力ゲル 20 g、 へキサン ： 酢酸ェチル = 200： 0〜20)で精製して目的のエステル であるノニルォキシヒ ドロキシブ夕ン酸ベンジルを 1.51 g得た。
(ノニルォキシヒ ドロキシブタン酸ベンジルの NMRデータ）
•H-N R (CDCl3)<5ppm ： 7.29-7.39 (5H, m), 5.15 (2H, s), 4.18-4.27 (1H, m), 3.36-3.49 (4H, m), 2.93 (1H, d， J=3.9 Hz), 2.58 (2H, d, J=6.3 Hz), 1.55 (2H, quint. , J=6.8 Hz), 1.19-1.36 (12H, m), 0.88 (3H, t, J=6.8 Hz)
合成例 106
OH O-I!e-Fmoc
\ 'レ。 COつ Szl >- レ C023:l 合成例 105で得られたエステル .50g) 、 Fmoc- L -イソロイシン (1.73g) およびジメチルァミ ノ ピリ ジン （38mg) のジクロロメ タン（30 ml) 溶液に氷冷下で DCC(1.38g) を加え、 氷冷下に 2時間、 その後徐々 に室温まで昇温させて 3日間撹拌した。 沈殿を濾別した後、 ジクロロメ 夕ンを留去した。 残留物に酢酸ェチルと 10%クェン酸水溶液を加えた。 分液した有機層を水、 5%炭酸水素ナ 卜 リゥム水溶液そして水で順番に 洗净後、 無水硫酸ナ ト リウムで乾燥した。 溶媒を留去した後、 シリカゲ ルカラムクロマ トグラフィー （シリ力ゲル 50g、 へキサン ： 酢酸ェチル = 200： O-30) で精製し中間体化合物 （65) を 2.41g得た。
(中間体化合物 （65) の NMRデータ）
■II-NMR (CDC13) (5ppm ： 7.76 (211. d, J=7.8 Hz), 7.60 (2H. d, J= 4.9 Hz), 7. 0 (2H, t. J=7.3 Hz), 7.27-7.37 (711, m), 5.39-5.48 (III, m), 5.32 (III, d, 8.8 Hz), 5.12 (2H. s)， 4.36-4.42 (211. ra)， 4.32 (III. dd. J=4.9. 8.8 Hz), 4.23 (111. t. J=6.8 Hz), 3. 5-3.60 (2H. m), 3.31-3.45 (211, m), 2.74 (2H, d, J=6.8 Hz), 1.88 (1H, br s). 1.38-1.56 (2H, m). 1.11-1.34 (14H, m). 0.79-0.98 (9H, m) 合成例 107
O-lle-Fmoc 0-lle-D-Leu-Asp(OlBu)-Va!-Fmoc
1 人 CO 合成例 106で得られた中間体化合物（65) (2.09g) の DMF (30ml) 溶液 にジェチルァミ ン （3 ml) を加え室温で 3時間撹拌した。 溶媒を留去し た後、 得られたァミ ン体と合成例 74で得られた卜リぺプチド（6) (2.13 g) および HOBt ' 1水和物 （0.52g) のジクロロメタン （25ml) 溶液に 氷冷下、 WSCI (0.66g) を加えた。 この溶液を氷冷下で 2時間撹拌した 後、 室温で 2.日間撹拌した。 溶媒を留去した後、 残留物に酢酸ェチルと 10%クェン酸水溶液を加えた。 分液した酢酸ェチル層を水、 5%炭酸水 素ナ 卜リゥム水溶液そして水で順番に洗浄後、 無水硫酸ナトリゥムで乾 燥した。 酢酸ェチルを留去した後、 シリ力ゲルカラムク口マ トグラフィ 一（シリカゲル 50g、 クロ口ホルム ： メタノール = 200： 0〜 3 ) で精製 し、 さらにジェチルエーテルおよびへキサンを用いて固体にして目的の 中間体化合物（66)を 1.26g得た。
(中間体化合物（66)の NMRデータ）
Ή-N R (CDC13) ( ppm ： 7.75 (2H, d. J=7.3 Hz), 7.61 (211, t, J=7.3 Hz), 7.38 (211, t, J=7.6 Hz), 7.23-7.36 (8H, m), 7.02 (111, d, J = 7.8 Hz), 6.91 (1H， d, 8.3 Hz), 5.57 (1H, d, J=5.9 Hz), 5.33-5. 0 (1H. m), 5.02-5.10 (2H. m), 4.80-4.89 (1H, m), 4.35-4.57 (4H， m), 4.22 (111, t, J=6.8 Hz), 3.97 (1H, br s), 3.50 (1H, dd, J=5.4, 11 Hz), 3. 4 (111, dd. J=4. , 11 Hz), 3.28-3.39 (211, m), 2.85 (1H, dd, J=5.9, 17 Hz), 2.75 (1H, dd, J=5.9, 18 Hz), 2.66 (211. d, J= 6.3 Hz), 2.06-2.15 (HI, m), 1.71-1.93 (411, m), 1.55-1.67 (211. m), 1.35-1.51 (2H. ra), 1.42 (9H. s), 1.15-1.33 (12H, m), 0.82-1.01 (21H, m)
合成例 108
Figure imgf000123_0001
- Asp(OtBu)- Val- D-Leu-Leu- Gln(Mbh)
Figure imgf000123_0002
合成例 107で得られた中間体化合物（66) (1.10g) の DMF (10ml) 溶液 にジェチルァミ ン （1ml) を加え室温で 3時間撹拌した。 溶媒を留去し た後、 得られたァミ ン体と合成例 77で得られたトリペプチド（9) (0.94 g) および HOBt ' 1水和物 （0.18g) の DMF(lOnil) 溶液に氷冷下、 WSCI
(0.22g) を加えた。 この溶液を氷冷下に 2時間撹拌し、 その後室温ま で徐々に昇温させて 2日間撹拌した。 溶媒を留去した後、 残留物にクロ 口ホルムと 10%クェン酸水溶液を加えた。 分液したクロロホルム層を水、 5%炭酸水素ナトリゥム水溶液そして水で順番に洗浄後、 無水硫酸ナト リウ厶で乾燥した。 クロ口ホルムを留去した後、 シリカゲルカラムクロ マトグラフィ一（シリ力ゲル 30g、 ク口口ホルム ：酢酸ェチル = 200： 0 〜60) で精製し中間体を得た。
得られたこの中間体の DMF (18ml) 溶液にジェチルァ ミ ン （1.8ml) を 加え室温で 3時間撹拌した。 溶媒を留去した後、 シリカゲルカラムクロ マトグラフィ一（シリ力ゲル 30g、 ク口口ホルム ： メタノ一ル = 200： 0 ~6) で精製し中間体化合物 （67) を 0.56g得た。
(中間体化合物（67)の NSIRデータ）
ΊΙ-N R (CDCl3)5ppra ： 8.31 (HI, d, J=8.3 Hz), 7.52 (1H, d， J= 9.3 Hz), 7.44 (HI. d, J=4.9 Hz), 7.24-7.38 (611, m), 7.21 (1H, d, J=5.4 Hz). 7.14 (411. dd. J=2.9. 8.8 Hz), 7.00 (111. d, J=7.8 Hz), 6.82 (4H, dd. J = 2. , 8.8 Hz), 6.67 (1H, d, J=7.8 Hz), 6.17 (1H, d, J=8.3 Hz), 5.33-5. 0 (1H， m). 5.13—5.18 (1H, m), 5.10 (2H, s),
4.37-4.55 (3H, m), 3.93-4.01 (2H. m), 3.95 (1H, t, J=5.4 Hz),
3.77 (6H, s). 3.49 (2H. t, J=4.4 Hz), 3.28-3.40 (3H, m), 3.09
(1H, dd, J=3.7, 16 Hz). 2.72 (2H, d, J=6.8 Hz), 2.66 (1H, dd. J =
10, 16 Hz), 2.42-2.52 (1H， m), 2.31-2.40 (1H， ra), 2.00-2.10 (1H, in), 1.89-1.98 (2H, m), 1.37 (9H, s), 1.34-1.88 (13H, m), 1.12-
1.33 (14H, n , 0.80-1.01 (33H, m)
合成例 109
Figure imgf000124_0001
合成例 108で得られた中間体化合物 （67) (0.46 g) をメ タノール （20 ml) に溶解し、 5%パラジウム炭素 （0.05g) を加え、 水素雰囲気下 3 時間撹拌した。 パラジウム炭素を濾別し、 メタノールを留去した後、 シ リ力ゲル力ラムクロマトグラフィー （シリカゲル 20 g、 クロ口ホルム ： メタノール = 200 : 0〜10) で精製し中間体 0.25gを得た。 得られた中 間体を THF (43ml) に溶解し、 N -メチルモルホリ ン （0.04ml)および HOBt · 1水和物 （0.12g) を加え A液とした。 THF(87ml) と DMF(43ml) の混合液に、 塩化セシウム （0.32g)、 塩化カリウム （0.13g)および WSCI (0.33g) を順次加え、 B液とした。 室温で撹拌しながら A液を 1 時間かけて B液に滴下し、 さらに室温で 7日間撹拌した。 反応液を酢酸 ェチル （50ml) で希釈し、 水、 5 %炭酸水素ナトリウム水溶液、 水、 10 %クェン酸水溶液そして水で順番に洗浄後、 無水硫酸ナ卜リゥムで乾燥 した。 溶媒を留去した後、 シリ力ゲルカラムクロマトグラフィ一 （シリ 力ゲル 20g、 クロ口ホルム ： メ タノール = 200： 0〜3) で精製し本発 明の環状デプシペプチド （21) を 0.18g得た。 (環状デブシぺプチド（21)の NMRデータ）
Ή-NMR (CDC13) 5ppm ： 7.69 (1H, d, J=8.8 Hz), 7.37 (1H. d, J = 7.8 Hz). 7.16 (4H, dd， J = 8.8, 13 Hz), 7.07-7.13 (2H, ID), 7.03 (1H, d， J=8.8 Hz), 7.01 (1H, d. J=8.3 Hz), 6.90 (1H, d， 7.8 Hz), 6.86 (4H, dd, J=2.0. 8.3 Hz), 6.63 (1H, br s). 6.22 (1H, d, J= 8.3 Hz), 5.08-5.17 (2H, m)， 4.36-4.49 (3H, m), 4.19 (1H, dd, J= 4.4, 7.3 Hz), 4.11 (1H. dt, J=2.9, 7.6 Hz), 3.86 (1H, dd, J=4.9, 6.3 Hz), 3.79 (6H, 2s), 3.75-3.84 (2H, m), 3.53 (1H, dd, J=4.2, 11 Hz), 3.35-3.46 (2H, m), 3.15 (1H, dd, J=4.4, 16 Hz), 2.67 (1H, dd, J=5. , 15 Hz), 2. 9 (1H, dd. J=10, 16 Hz), 2.45 (1H. dd, J= 5.1, 15 Hz). 2.27-2.36 (1H, m), 2.17-2.26 (1H, m), 1.99-2.10 (1H, in), 1.47-1.99 (4511. m), 1. 1 (9H, s). 1.09-1. 4 (12H, m), 0.82- 1.00 (33H, m)
合成例 110
Figure imgf000125_0001
合成例 109で得られた環状デプシペプチド （21) (0.12g) を TFA (3 ml) に溶解し、 室温で 3時間撹拌した。 溶媒を留去した後、 5%炭酸水 素ナ卜リウム水溶液で中和し、 クロ口ホルムの 10%メ夕ノール溶液で抽 出した。 有機層を無水硫酸ナ ト リウムで乾燥 · '麋縮後、 シリカゲルカラ ムクロマ トグラフィー （シリカゲル 5 g、 クロ口ホルム ： メタノール = 50 : 0〜15) で精製し、 さらにジェチルエーテル一へキサン系で固体に して本発明の環状デプシペプチド （22) を 0.04g得た。
(環状デブシぺプチド（22)の NMRデータ） Ή-NMR (DMS0-d6) (5 pm ： 9.75 (1H, br s), 9. 0 (1H, br s)， 8. 2 -8.50 (1H, ID), 8.23 (1H, d, J=8.8 Hz), 7.99 (1H, d, J=8.8 Hz), 7.46-7.61 (1H. m). 7.15 (2H, br s), 6.61 (1H, br s), 5.07 (1H, br s), 4.20-4.45 (5H. m). 4.15 (1H， t, J=8.3 Hz). 4.06 (1H. t, J=7.3 Hz), 3.49-3.57 (2H, m). 3.29-3.44 (2H, ra), 2.63-2.73 (2Ht m). 2.42 (1H. dd, J=7.3, 14 Hz), 1.90-2.31 (5H, m), 1.73-1.87 (2H. ra), 1.33-1.62 (12H, m), 1.17-1.32 (13H, m), 1.06-1.16 (1H, m), 0.73-0.90 (33H, m)
合成例 111
0-lle-D-Leu-Asp(OiBu)-Val-Fmoc
C02Bzl
'10
p(0:Bu)-Val-Gln(Mb )-Fmoc
Figure imgf000126_0001
合成例 6で得られた中間体化合物（5) (1.30g) のジメチルホルムァ ミ ド（13ml) 溶液にジェチルァ ミ ン （1.3ml) を加え室温で 2時間撹拌し た。 溶媒を留去した後、 N - α - 9 -Fmoc - Ν - r - Mbh - L -グルタ ミ ン（0.81 g ) と 1 - ヒ ドロキンべンゾト リアゾ一ル 1水和物（0.21 g ) とを加えてジクロロメ タ ン （30ml) に溶解した。 この溶液に氷冷下、 1 -ェチル- 3 - (3 - ジメチルァ ミ ノプロピル） カルボジィ ミ ド塩酸塩 (0.26 ) を加えた。 この溶液を氷冷下で 2時間撹拌し、 その後徐々に 室温まで昇温させて一晚撹拌した。 ジクロロメ タンを除いた後、 残留物 にクロロホルムと 10%クェン酸水溶液を加えた。 分液したクロロホルム 層を水、 5%炭酸水素ナ 卜 リ ゥム水溶液そして水で順番に洗浄後、 無水 硫酸ナ ト リウムで乾燥した。 クロ口ホルムを留去した後、 シリカゲル力 ラムクロマ トグラフィ ー （シリカゲル 25g、 クロ口ホルム ： メ タノール = 200： 0〜4)で精製し、 さらに酢酸ェチルおよびへキサンを用いて固 体にして中間体化合物 （68) を 1.53g得た。 (中間体化合物（68)の NMRデータ）
•H-NMR (DMS0-d6) δρριη ： 8.50 (lfl, d, J = 9.3 Hz), 8.21 (1H, d, J=7.8 Hz), 7.94 (1H, d， J=7.8 Hz), 7.85 (2H, d, J=7.3 Hz), 7.59- 7.76 (4H, m), 7.48 (1H, d， J=8.3 Hz), 7.39 (2H, t, J = 7.6 Hz), 7.27-7.36 (7H, m), 7.14 (4H, dd, J = 2.0, 8.8 Hz), 6.83 (4H, dd, J=2.7, 8.8 Hz), 6.02 (1H, d, J=8.3 Hz), 5.08-5.16 (1H, m), 5.07, 5.06 (2H. s), 4.57-4.65 (1H, m), 4.46-4.44 (1H, m), 4.15—4.31 (5H, m), 4.04-4.12 (1H, m), 3.71 (6H. 2s), 2.58-2.71 (3H, m), 2.40-2.55 (1H, m)， 2.22-2.34 (2H, m), 1.90-2.00 (2H, ra)， 1.72- 1.85 (2H, m), 1.40-1.60 (5H, ra), 1.32 (9H. s), 1.10-1.37 (20H, m), 0.74-0.89 (21H, m)
合成例 112 -
0- lie- D- Leu- Asp(OtBu)- Val-Gln(Mbh)-Fmoc —— >
l 02Bzl eu- Asp(OtBu)- Val- Gln(Mbh)
Figure imgf000127_0001
合成例 111で得られた中間体化合物（68) (1.53g) の DMF (20ml) 溶液 にジェチルァミ ン （2nd) を加え室温で 2時間撹拌した。 溶媒を留去し た後、 得られたァミ ン体をメ夕ノール （50ral) に溶解し 5 %パラジゥム 炭素 （0.15g) を加え、 水素ガス雰囲気下室温で 3時間撹拌した。 パラ ジゥム炭素を濾別し、 メタノールを留去した後、 シリカゲルカラムクロ マトグラフィ一（シリ力ゲル 30g、 クロロホルム ： メタノール = 200： 0 〜30) で精製し中間体化合物 （69) を 0.77g得た。
(中間体化合物（69)の NMRデータ）
Ή-NMR (CD30D) ( ppm ： 7.22 (2H, d, J=8.3 Hz)' 7.14 (2H, d, J = 8.8 Hz), 6.88 (211, d, J=8.8 Hz), 6.85 (2H, d, J=8.8 Hz), 6.04 (III. s), 5.19-5.27 (III, m), 4.59-4.65 (211. m), 4.30 (111, d. J = 4.9 Hz), 4.00-4.06 (1H, m), 3.87 (1H. d. J=7.3 Hz), 3.79 (311, s), 3.77 (3H, s). 2.87 (1H, dd, J=4.4. 17 Hz), 2.61 (1H, dd, J=8.8, 17 Hz). 2.34-2.52 (3fl, in), 2.17-2.34 (3H, tn), 1.92-2.07 (2H. m), 1.42 (9H, s)， 1.39-1.64 (5H, m), 1.20-1.35 (20H. m), 0.85-1.04 (21H, m)
合成例 113
0 -―— lls-D-し eu-Asp(C Bu), 〇
Figure imgf000128_0001
,
Gln(Mbh)-Vaト
10
合成例 112で得られた中間体化合物（69) (0.50 g) を THF(llOnil) に溶 解し、 N -メチルモルホリ ン （0.10ml) および HOBい 1水和物（0.28 g) を加え A液とした。 THF (220ml) と DMF (110ml) の混合液に、 塩化セシ ゥム （0.77g) 、—塩化カリウム （0.31g) および WSCI (0.79g) を順次 加え、 B液とした。 室温で攬拌しながら A液を 20分かけて B液に滴下し、 さらに室温で 5日間攬拌した。 反応液を酢酸ェチル（100ml) で希釈し、 水、 5 %炭酸水素ナトリウム水溶液、 水、 10%クェン酸水溶液そして水 で順番に洗浄後、 無水硫酸ナトリウムで乾燥した。 溶媒を留去した後、 シリカゲルカラムクロマ トグラフィー （シリカゲル 30 g、 クロ口ホル ム ： メ タノール = 200： 0〜6)で精製し本発明の環状デブシぺプチド (23)を 0.49g得た。
(環状デブシぺプチド（23)の NMRデータ）
Ή-NMR (CD30D) 5ppm ： 7.11-7.22 (4H, m). 6.81-6.90 (4H, m)， 6.09 (1H. s), 5.17-5.30 (1H, m), 4.52-4.59 (1H, m), 4.26-4.50 (211. m), 4.11-4.17 (1H, m)， 3.89-4.03 (1H, m), 3.79 (6H, 2s). 3.00-3.09 (111, m). 2.69-2.78 (1H, m), 2.29-2.57 (4H, ra), 1.84- 2.22 (411, m). 1.39-1.77 (5H, m), 1.44 (911. s). 1.11-1.39 (20H, m), 0.84-1.01 (2111, m)
台成例 114
Figure imgf000129_0001
合成例 113で得られた環状デプシペプチド（23) (0.49g) を TFA(5ml) に溶解し、 室温で 2時間撹拌した。 溶媒を留去した後、 5%炭酸水素ナ トリウム水溶液で中和し、 クロ口ホルムの 10%メタノール溶液で抽出し た。 有機層を無水硫酸ナトリゥムで乾燥 ·濃縮後、 シリ力ゲルカラムク 口マ トグラフィー（シリ力ゲル 20g、 クロロホルム ： メタノール =100： 0〜40)で精製し本発明の環状デブシぺプチド（24)を 0.28g得た。
(環状デブシぺプチド（24)の NMRデータ）
Ή-N R (CD30D) δρρπι ： 5.25-5.34 (1H, m), 4.62 (1H, t, J=5.4 Hz), 4.47 (1H, 1, J=7.1 Hz), 4.34 (111. dd, J=4.6, 8.8 Hz). 4.23 (1H, d, J=8.3 Hz), 4.02 (1H, d, J=5.9 Hz), 2.76 (2H, d, J=5.4 Hz), 2.62 (1H, dd, J=3. , 16 Hz), 2.55 (HI, dd, J=7.3, 15 Hz), 2.38 (1H, dd, J=6.8, 8.3 Hz), 2.35 (1H, d, J=5.9 Hz), 2.14-2.31 (2H, m). 1.89-2.10 (2H, m), 1.59-1.78 (4H, ra), 1.47-1.56 (1H， m). 1.16-1.41 (20H, m), 0.83-1.06 (21H. m)
合成例 115 )-Val-D-Leu-G:n(Mbh)-Fmoc
Figure imgf000129_0002
合成例 7で得られた中間体化合物（6) (0.80 ) のジメチルホルムァ ミ ド（8 ml) 溶液にジェチルァミ ン （0.8ml) を加え室温で 4時間撹拌し た。 溶媒を留去した後、 N - α— 9 - Fmoc - N - ァ—Mbh— L -グノレタ ミ ン（0.45 g ) と 1 ヒ ドロキシベンゾトリアゾール 1水和物（0.12 g ) とを加えてジクロロメ タン（15ml)に溶解した。 この溶液に氷冷下、 WSCI (0.14g) を加えた。 この溶液を氷冷下で 2時間撹拌し、 その後徐々に 室温まで昇温させて一晩撹拌した。 ジクロロメ タンを除いた後、 残留物 にクロロホルムと 10%クェン酸水溶液を加えた。 分液したク口口ホルム 層を水、 5%炭酸水素ナ トリウム水溶液そして水で順番に洗浄後、 無水 硫酸ナトリウムで乾燥した。 クロ口ホルムを留去した後、 シリカゲル力 ラムクロマ トグラフィー （シリカゲル 30 g、 クロ口ホルム ： メ タノール = 200： 0~4)で精製し、 さらにジェチルエーテルおよびへキサンを用 いて固体にして中間体化合物 （70) を 1.04g得た。
(中間体化合物（70)の NMRデータ）
'Η -隠 (CD30D) 5ppm ： 7.74-7.78 (2H. m), 7.56-7.69 (2H, m), 7.22-7.42 (9H, m), 7.10-7.17 (4H, m), 6.80-6.86 (4H. m), 6.11 (1H, s). 5.18-5.-31 (1H， m), 4.96-5.08 (2H, m), 4.13-4.56 (7H, m), 4.01-4.13 (1H, m). 3.88-3.95 (1H, ra), 3.75 (6H, s)， 2.37-2.74 (6H, m), 1.96-2.17 (3H, ra). 1.50-1.96 (10H， m), 1.10-1.50 (28H. m), 0.76-0.99 (2711. m)
合成例 116
0-Ile-D-Leu-Asp(OtBu)-Val-D-Leu-Gln(Hb )-Fnioc —— >
Leu- Asp(OtBu)-Val-D- Leu- Gln(Mbh)
Figure imgf000130_0001
合成例 115で得られた中間体化合物（70) (0.97 g) の DMF (10ml) 溶液 にジェチルァミ ン（lml) を加え室温で 1.5時間撹拌した。 溶媒を留去し た後、 残留物をメタノール（40ral) に溶解し、 5%パラジウム炭素（0.10 g) を加え、 水素雰囲気下 3時間撹拌した。 パラジウム炭素を濾別しメ 夕ノールを留去し、 シリカゲルカラムクロマトグラフィー （シリカゲル 18 g、 クロ口ホルム ： メタノール = 200： O〜20)で精製し、 さらに酢酸 ェチル -へキサン系で固体にして中間体化合物 （71) を 0.53g得た。 (中間体化合物（71)の NMRデータ） Ή-NMR (CD3OD) 5p m ： 7.15 (4H, dd, J=4.9. 8.3 Hz), 6.86 (4H, dd. J = 3.4, 8.8 Hz). 6.09 (1H, s), 5.21-5.40 (1H, m), 4.37-4.49 (2H, m), 4.19 (1H. d， 1=1.3 Hz), 4.15-4.26 (1H, m)， 4.04 (1H, d. J=5.9 Hz), 3.91-4.00 (1H， m), 3.77 (6H. s), 2.86-3.02 (1H, in), 2.70-2.80 (1H, m). 2.47-2.60 (2H. ra), 2.32-2.44 (2H. m). 1.82- 2.01 (1H, ra), 1.49-1.82 (8H, in), 1.44 (9H, 2s), 1.14-1.49 (22H, n), 0.80-1.07 (27H. m)
合成例 117
Figure imgf000131_0001
合成例 116で得られた中間体化合物（71) (0.50 g) を THF (95ml) に溶 解し、 N -メチルモルホリン （0.09ml) および HOBt . 1水和物（0.25g) を加え A液とした。 THF (190ml) と DMF (95ml) の混合液に、 塩化セシ ゥム （0.70g) 、 塩化カリウム （0.28g) および WSCI (0.71 g) を順次 加え、 B液とした。 室温で撹拌しながら A液を 20分かけて B液に滴下し、 さらに室温で 5日間撹拌した. 反応液を酢酸ェチル（lOOral) で希釈し、 水、 5 %炭酸水素ナ トリウム水溶液、 水、 10%クェン酸水溶液そして水 で順番に洗浄後、 無水硫酸ナ トリゥムで乾燥した。 溶媒を留去した後、 シリカゲルカラムクロマトグラフィー （シリカゲル 30 g、 クロ口ホルム ： メタノール = 200 ： 0〜6 )で精製し本発明の環状デブシぺプチ ド（25) を 0.44g得た。
(環状デブシぺプチド（25)の NMRデータ）
Ή-NMR (CD30D) (5ppm ： 7. 10-7.17 (411， m), 6.81-6.89 (4H, m), 6.08 (III, s). 5.07-5.23 (HI. m), 4.35-4.54 (311, m), 4.23-4.32 (211, ra)， 3.89-3.94 (111. m), 3.78 (3H, s), 3.77 (311. s). 2.71- 3.04 (3H, m). 2.35-2.53 (4H, m). 2.13-2.45 (lfl. m), 1.92-2.08 (2H. m), 1.50-1.81 (9H, m), 1. 4 (9H, s), 1.21-1.50 (19H, m), 0.83-1.02 (27H. m)
合成例 118
Figure imgf000132_0001
合成例 117で得られた環状デプシペプチド（25) (0.40g) を TFA(5ral) に溶解し、 室温で 2時間撹拌した。 溶媒を留去した後、 5%炭酸水素ナ トリゥム水溶液で中和し、 ク口口ホルムの 10%メ夕ノール溶液で抽出し た。 有機層を無水硫酸ナトリゥ厶で乾燥 ·濃縮後、 シリカゲルカラムク 口マトグラフイー シリカゲル 20 g、 クロ口ホルム ： メタノール = 100： 0〜50) で精製し、 さらにジェチルェ一テル-へキサン系で固体にして 本発明の環状デプシペプチド （26) を 0.25g得た。
(環状デブシぺプチド（26)の NMRデータ）
Ή-N R (CD30D) 5ppra ： 5.08 (1H, s), 4.37-4.64 (5H, m), 3.94- 3.98 (1H, m), 2.36-3.16 (3H. m), 2.16-2.36 (4H. m), 1.86-2.06C3H, m), 1.47-1.80 (7H, m), 1.15-1.44 (21H, m), 0.83-1.08 (27H, m) 合成例 119
Figure imgf000132_0002
合成例 105と同様にして（R) - ( + )- 1,2 -エポキシ - 3 -ゥンデシル ォキシプロパン （2.71g) から目的のアルコールを 0.86g得た。
lH-N R (CDC13) 5ppm： 7.28-7.41 (5H, m), 5.16 (211, s), 4.18- 4.26 (111, m), 3.35-3.49 (4H, m), 2.87 (1H. br s), 2.58 (2H, d, J = 6.3 llz), 1.56 (211, qui. , J=6.8 Hz), 1.20-1.35 (1611. m), 0.88 (311, t. J=6.8 Hz) 合成例 120
Figure imgf000133_0001
合成例 119で得られたアルコール （0.84g) を原料として合成例 106と 同様にして目的の中間体化合物を 1.50 g得た。
Ή-N R (CDC13) <5 ριη ： 7.76 (2Η, d， J=7.3 Hz). 7.60 (2H, d, J= 5.9 Hz). 7. 0 (2H, t, J=7.3 Hz), 7.27-7.37 (7H, m). 5.39-5. 9(1H, m), 5.32 (1H. d, J = 8.8 Hz), 5.12 (2H, s), 4.36-4.41 (2H, m), 4.32 (1H, dd, J=4.6, 8.8 Hz), 4.23 (1H, t, J=6.8 Hz), 3.55 (1H, dd, J=5.1, 11 Hz), 3.49 (1H, dd, J=4.4, 10 Hz), 3.31-3.45 (2H, m), 2.74 (2H. d, J=6.8 Hz), 1.88 (1H, br s), 1.36-1.56 (2H. m)， 1.06 - 1.34 (18H, m), 0.88 (3H. t, J=6.8 Hz), 0.85-0.94 (611. m)
合成例 121
Figure imgf000133_0002
0- Ile-D-Leu-Asp(OtBu)- Val- D-Leu- Leu- Gln(Mbh)- Fmoc
Figure imgf000133_0003
合成例 107と同様にして合成例 120で得られた中間体化合物 （0.35g) から目的の鎖状デブシぺプチドを 0.77 g得た。
ただし、 ト リペプチド （6) の わりに、 合成例 49で られたへキサ ペプチド （ 1 ) を台成例 17と同様にして脱べンジル化したへキサぺプチ ド (0.64g) を使用した。
ΊΙ-NHR (CDC13) (5ppm ： 8.48 (1H, d, J=8.8 Hz), 7.72 (2H, d, J = 7.3 Hz). 7.64-7.78 (HI, in), 7.51-7.62 (211. m), 7.41 (III, d, J = 8.3 Hz), 7.36 (2H, t. J=7.3 Hz). 7.20 (211, d. J=8.8 Hz), 7.16 (2H, d, J=8.3 Hz), 7.13-7.45 (8H, m), 7.10 (1H, d, J=8.8 Hz). 7.00 (1H, d, J=8.3 Hz), 6.93 (1H, d, J=5.4 Hz), 6.85 (4H, d， J= 8.8 Hz). 6.61 (1H, d, 1=1.8 Hz), 6.25 (1H, d, J=8.3 Hz), 5.29- 5.41 (1H, m), 4.99-5.17 (3H, m), 4.27-4.64 (5H, m), 4.10-4.24 (2H, m), 3.91-4.04 (2H, in), 3.77 (3H, s), 3.76 (3H, s), 3.25- 3.57 (4H, in), 3.14 (1H. dd, J = 3.4. 15 Hz), 2.62-2.78 (3H, m), 2.44-2.55 (1H, m), 2.30-2.41 (1H， m), 2.14 (1H, br s), 1. 2 (9H, s), 1.07-2.08 (32H, ra), 0.65-1.05 (33H, m)
合成例 122
O-Ile-D- Leu- Asp(OtBu)- Val- D- Leu- Leu- Gln(Mbh)- Fnioc
Figure imgf000134_0001
合成例 52(3)と同様にして合成例 121で得られた鎖状デブシぺプチド (0.39g) から目的の環状デプシペプチド （27) を 0.30 g得た。
(環状デプシペプチ ド （27) のデータ）
Ή-NM (CDC13) δρρηι ： 7.71 (1H, d, J=8.8 Hz), 7.36 (1H. d. J = 8.3 Hz), 7.17 (111, d, J=8.8 Hz), 7.14 (2H, d, J = 8.8 Hz), 7.07- 7.21 (211. m), 6.98-7.07 (2H, m), 6.91 (1H, d, J=8.3 Hz), 6.85 (4H, dd. J=l.5, 8.3 llz), 6.70 (1H, br s), 6.21 (1H, d, J=8.3 Hz), 5.07-5.17 (211, m), 4.34-4.49 (3H, m), 4.20 (1H, dd, J=4.4, 7.8 Hz), 4.08-4.16 (HI. m), 3.87 (111, t, J=5.4 Hz), 3.79 (6H, 2s), 3.75-3.84 (2H, m), 3.53 (111, dd, J=3.9. 10 Hz), 3.36—3.51 (2H, ra), 3.14 (1H, dd, J-4.9. 16 Hz), 2.68 (1H， dd, J = 5.4, 15 Hz), 2.38-2.53 (211. m), 2.16-2.37 (211, m), 1. 7-2.15 (16H, m), 1. 0 (9H. s), 1.09-1.46 (16H, m), 0.78-1.04 (3311, m) 合成例 123
Figure imgf000135_0001
合成例 12と同様にして合成例 122で得られた環状デブシぺプチド （27) (0.28g) から目的の環状デブシペプチド （28) を 0.16g得た。
(環状デブシぺプチド（28)のデータ）
]H-NMR (DMS0-d6 + TFA) άρρπι ： 8.40 (1H， d, J=8.3 Hz), 8.31 (1H. d, J=6.3 Hz), 8.16 (1H, d, J=7.3 Hz), 7.99 (1H, d, J=5.9 Hz), 7.96 (1H, d, J= .3 Hz), 7.84 (1H, d. J=8.3 Hz), 7.79 (1H， d， J = 8.3 Hz). 7.31 (1H, s), 6.85 (1H. s), 5.07-5.16 (1H, m), 4.44- 4.59 (2H, m), 4.12-4.29 (4H, m), 4.07 (1H, t, J=7.6 Hz). 3.48-3.55 (111. m), 3.26-3.46 (3H, m), 2.58-2.72 (2H, m), 2.35-2.46 (2H, m), 1.95-2.16 (3H, m), 1.68-1.94 (3H. in), 1.32-1.65 (111!, m), 1.11- 1.31 (18H. m), 0.71-0.96 (33H, m)
台成例 124
Figure imgf000135_0002
合成例 105と同様にして（R)- 1.2-エポキシォクタデカン （3.00g) から目的のアルコールを 0.47g得た。
'H-NMR (CDCls) 5ppm ： 7.29-7.42 (511. m), 5.16 (2H, s), 3.97- 4.07 (1H, π , 2.84 (1H. br s). 2.56 (1H, dd, J=3.2. 16 Hz), 2.46 (1H, dd, J = 9.0. 17 Hz), 1.37-1.67 (411, m), 1.06-1.36 (26H, m). 0.88 (311. t. J=6.8 Hz) 合成例 125
Figure imgf000136_0001
合成例 106と同様にして合成例 124で得られたアルコール （0.45g) 力、 ら目的の中間体化合物を 0.82 g得た。
(上記中間体化合物のデータ）
Ή-NHR (CDCl3)5ppm ： 7.76 (2H, d, J=7.8 Hz). 7.59 (2H, d, J= 5.9 Hz), 7.39 (2H, t, J = 7.6 Hz), 7.26-7.36 (7H, m), 5.22-5.36 (2H, m), 5.10 (2H, s)， 4.34-4.42 (2H. m), 4.31 (1H, dd， J=4.4. 8.8 Hz), 4.22 (1H, t, J = 7.1 Hz), 2.69 (1H, dd, J=6.8, 16 Hz), 2.59 (111, dd, 1=5.6, 15 Hz), 1.89 (1H, br s). 1.61 (211, br s)， 1.05-1. 8 (30H, m), 0.85-1.00 (6H, m), 0.88 (3H, t, J=6.6 Hz) 合成例 126
O-Ile-Fmoc
、 I 02Bzl >
0-Ile-D-Leu-Asp(OtBu)-Val-D-Leu-Leu-Gln(Mbh)-Fmoc
T 02Bzl
Wis 合成例 121と同様にして合成例 125で得られた中間体化合物 （0.40g) から目的の鎖状デブシぺプチドを 0.69g得た。
ΊΙ-NMR (CDC13) δρρπι ： 8. 8 (1H, d, J=8.8 Hz), 7.73 (2H, d, J = 7.3 Hz). 7.69 (HI, d, J=8.8 Hz), 7.55 (2H, dd, J=3.2. 6.8 Hz), 7.42 (111. d, J=8.3 Hz), 7.37 (211. t， J=7.3 Hz), 7.20 (2H. d, J= 8.3 Hz), 7.17 (211. d. J = 8.3 Hz). 7.15-7.45 (811, m), 7.04-7.13 (1H. in), 7.01 (HI, d, J = 8.3 Hz). 6.93 (111, d, J=5.9 Hz), 6.85 (411. d. J = 8.3 Hz), 6.54 (11 d, J = 7.8 Hz), 6.25 (111. d. J=8.3 Hz), 4.98-5.23 (4H, ), 4.27-4.69 (5H. ra), 4. 10-4.24 (2H, m), 3.92-4.04 (2H, m). 3.77 (3H, s), 3.76 (3H. s), 3.13 (1H, dd, J= 3.4. 15 Hz), 2.62-2.76 (2H, m), 2.43-2.58 (2H, m), 2.31-2.41 (1H, m), 2.14 (1H, br s), 1.68-2.08 (5H. m), 1.42 (9H, s)， 1.05-1.67 (39H, m), 0.75-1.04 (33H, m)
合成例 127
O-Ile- D- Leu-Asp(OtBu)-Val- D-Leu-Leu- Gln(Mbh)- Fmoc
Figure imgf000137_0001
合成例 122と同様にして合成例 126で得られた鎖状デプシペプチ ド (0.32g) から目的の環状デプシペプチド （27) を 0.28g得た。
(環状デプシペプチド （27) のデータ）
Ή-NMR (CDCl3) 5ppm ： 7.64 (1H, d, J-8.3 Hz), 7.31 (111, d, J = 7.3 Hz), 7. 17 (1H, d, J=8.8 Hz), 7.14 (211, d. J=8.8 Hz), 7.07- 7. 19 (2H, m), 7.01 (1H, d, J=9.3 Hz), 6.96 (1H, d, J=8.8 Hz), 6.90 (1H, d. J=7.3 Hz), 6.85 (4H, d, J=7.8 Hz), 6.78 (1H, br s), 6.20 (1H, d, J = 8.3 Hz), 5.05-5. 15 (1H， m), 4.95-5.04 (1H, m), 4.29-4. 9 (3H, m), 4.18 (111, dd, J=4.4. 12 Hz), 4.09-4.21 (1H, m), 3.87 (111. t, J=5. Hz), 3.79 (6H. 2s), 3.15 (1H, dd, J=4.4, 17 Hz), 2.63 (1H， dd, J=4. , 16 Hz), 2.51 (1H, dd, J=9.8， 17 Hz), 2.30-2.40 (211, m). 2. 19-2.28 (1H, m), 1.54-2. 13 (15H, m), 1.40 (9H. s). 1.04-1.48 (3011. m), 0.77-1.02 (33H, m)
合成例 128
Figure imgf000138_0001
合成例 123と同様にして合成例 127で得られた環状デブシぺプチド（27) (0.27g)から目的の環状デプシペプチ ド （28) を 0.14g得た。
(環状デブシぺプチド（28)のデータ）
Ή-NMR (DMSO-de) (5 pm ： 12.30 (1H, br s), 8.38 (1H, d, J = 6.8 Hz), 8.30 (1H. d, J=7.8 Hz), 8.11 (1H, d, J=7.3 Hz), 7.86 (1H， d, J=8.8 Hz), 7.81--7.96 (3H, m), 7.30 (111, s), 6.86 (1H, s), 4.91- 5.00 C1H, m), 4.45-4.61 (2H， ra), 4.12-4.27 (4H, m), 4.08 (1H, t, J=7.3 Hz), 2.65 (2H, d, J=6.3 Hz), 2.27-2.44 (2H. m), 1.96-2.14 (3H. ra), 1.67-1.93 (3H, m), 1.08-1.64 (41H, m), 0.68-0.92 (33H, m)
実施例 1
以下に本発明の環状デプシペプチ ドが Hep G 2細胞において、 ァポリ ポプロティン E産生促進作用を有することを、 試験方法とともに記す。 実施例に用いた化合物は以下のとおりである。
0 lie— D— Leu— Asp-
Val
R、 ,C0、
ιη— Leu— D— Leu
R =イソプロピル、 n = 7 化合物 1
R =イソプロピル、 π = 8 化合物 2
R =イソプロピル、 n = 9 化合物 3
上記化合物 1、 2および 3はそれぞれ国際公開 95/32990号記載の化 合物 3、 化合物 1および化合物 4を得る方法により、 すなわち、 本発明 の化合物 1〜3を産生するバンラス ·エスピー · No. 4691株 （FERM BP - 5101号） を培養し、 その培養液中から該環状デプシペプチドを抽出、 精 製することにより得た。
まず、 Hep G 2細胞 l x l O 5個/" m l (ダルベッコ変法イーグル培地 (日水製薬社製：以後 「D- MEM培地」 と呼ぶ） に 10%の牛胎児血清を加え たものに懸濁） を 24穴組織培養用プレートに l mlずつ注入し、 37°Cで炭 酸ガス 5 %および空気 95%の混合ガス雰囲気下で培養した。 3日後に、 培地をピぺッターにて除去し、 新たに D- MEM培地 1 m lを加え、 さらに本 発明の環状デブシぺプチドである化合物 1〜3の表 2に示す濃度のメタ ノール溶液 10 / 1を加えた。 18時間後、 培地を再び交換 （D-MEM培地） し、 この環状デブシぺプチドのメタノール溶液 10 1を加え、 さらに 37°Cで 8時間培養し培養液 1〜6とした。 培養液 1 ~ 6に生成したァボリポプ ロティン Eを以下に示すェンザィムィムノアッセィ法によつて定量し た。
なお、 ェンザィムィムノアッセィ法で使用した緩衝液の組成を以下の 表 1に示す。 なお、 PBSとはリ ン酸緩衝液を、 PBS- Tは Tween20を添加し たリ ン酸緩衝液を示し、 ブッ口キング液は大日本製薬社製の乳夕ンパク 質由来の免疫ブロック剤 「Block AceJ を含むリ ン酸緩衝液である。
1
PBS (pH7.2) KH2P04 0.2g
NaaHP04-12H20 2.9g
NaCl & Og
KC1 0.2g
蒸留水 適量
全量 ΙΟΟΟαΙ
PBS一 T (ρΗ7.2) KH2P04 0.2g
Figure imgf000140_0001
NaCl 8. Og
KC1 02K
T een 20 0.5g
- 蒸留水 適量
全量 1000ml
ブ O *yキング液（ρΗ7 2) Block Ace 250豳 1
Figure imgf000140_0002
Na2HP0 '12H20 29?
NaCl 8. Og
KC1 0.2g
蒸留水 適量
全量 lOOOnl マウス抗ヒ トァポリポプ口ティ ン Eモノクローナル抗体（仏国 BY0SIS, S.A. 社製） を 0.05M炭酸水素ナ ト リウム水溶液（pH9.5) に 5 g/mlの 濃度で溶解した。 この 50 1をヌ ンクイムノブレー トに分注し、 4。Cで 16時間静置した。 PBS 300〃 1で 3回洗浄後、 ブロッキング液 300 ;z 1を加 え、 37Cで 2時間静置した。
再び PBS 300 1で 3回洗'净し、 前記の培養液 1を 50 il加え、 室温で 2時間静置した。 PBS-T 300/11で 3回洗浄後、 ャギ抗ァボリポプロティ ン Eポリ クローナル抗体 （米国ケミコン社製） の 3000倍希釈液 （10% Block Ace水溶液） 50 1を加え、 室温で 2時間静置した。 PBS- T 300 1 で 3回洗浄し、 ペルォキシダーゼ標識抗ャギ IgGポリ クローナル抗体 (英国バインディ ングサイ ト社製） の 5000倍希釈液 （10% Block Ace水 溶液） を加え、 室温で 2時間静置した。 PBS- T 300^1で 5回洗浄後、 発 色液 〔組成： 0.1Mクェン酸カ リウム （pH4.5) lral、 30%過酸化水素水 0.4^1、 オルトフヱ二レンジァミ ン lmg〕 100 ^1を加え、 そのまま 2分 間放置した。 2 N硫酸 100 1を加え反応を止め、 650nmを対照としたと きの 490ηπιの吸光度を測定した。 市販のアポリポプロテイン Ε (米国ケミ コン社製） を標品とした場合の検量線より培養液 1〜6のアポリポプロ ティン Εの絶対量を求めた。
実施例 1におい-て、 本発明の環状デプシぺプチドのメタノール溶液の 代わりに単にメタノールを加えた以外は実施例 1と同様に行い、 アポリ ポプ口ティン Ε量を測定し、 これをコントロールとした。
各サンプルの相対アポリポプロテイン Ε量はこれとコン トロールを 100とした時の相対値 （％) で表した。
表 2に示すように、 本発明の化合物 1〜3は、 1ないし 5 ϋでアポ リポプロティ ン Εの産生量を強力に促進する活性を有することが認めら れた。
表 2
化合物 濃度（ 相対アポリボプロテイン E量（％)
1 207
5 256
2 110
5 243
3 147
5 278
コントロール 0 100 以上の結果より、 本発明の環状デプシペプチドは、 Hep G 2細胞のァ ボリボブロティン Eの産生を低濃度で強力に促進することから、 新しい タイプの神経損傷治療剤、 抗痴呆剤として有用である。
実施例 2
以下に前述の一般式 （Γ ) に示される本発明の環状デブシペプチド力 <、 Hep G 2細胞においてアポリポプロテイン E産生促進作用、 ァポリポプ ロティン B産生抑制作用およびアポリポプロテイン A 1産生促進作用を 有することを、 試験方法とともに記す。
まず、 Hep G 2細胞 l x l O 5個/ ml (D-MEM培地に 10%の牛胎児血清 を加えたものに懸濁） を 24穴組織培養用プレー トに 1 mlずつ注入し、 37 °Cで炭酸ガス 5 %および空気 95 %の混合ガス雰囲気下で 3日間培養した。 その後培地をピぺッターにて除去し、 新たに D- MEM培地 1 m lを加え、 再 び、 37°Cで炭酸ガス 5 %および空気 95%の混合ガス雰囲気下で 1日培養 した後に培地をピぺッターにて除去し、 新たに D- MEM培地 0. 5mlで 3回洗 浄した。 新たな D_MEM培地 1 ni lを加え、 さらに本発明の環状デブシぺプ チドである化合物 1および 4〜 8を表 3に示す'濃度でメタノールに溶解 したメタノール溶液 10 1を加え、 さらに 37°Cで 7時間培養し、 培養液 7〜10とした。 培養液 7 ~ 10中に生成したァボリポプ口ティン E、 アポ リポプロテイン B、 ァボリポプ口ティ ン A 1を定量した。 アポリポプロ ティン Eの定量法は実施例 1 と同様の定量法を用い、 ァボリポプロティ ン8、 アポリポプロテイン A 1の定量法は以下に示すとおりである。
1 ) アポリポプロテイン Bの定量
ヒッジ抗ヒ トアポリポプロティン B IgG分画 （英国バインディ ングサ ィ ト社製） を 0. 05M炭酸水素ナトリウム （pli9. 5) に 10 gZmlになるよ うに溶解した。 この 50 1をヌンクイムノプレー トに分注し、 4 °Cで 16 時間静置した。 PBS 300 1で 3回洗浄後、 ブロッキング液 300 1を加え、 37°Cで 2時間静置した。 再び PBS 300 lで 3回洗浄し、 培地溶液 （前記 培養液 7〜10をそれぞれ 10%Block Aceで 3. 3倍希釈したもの） 50〃1を 加え、 室温で 2時間放置した。 PBS-T 300 1で 3回洗浄後、 ヒッジ抗ヒ トアポリボブロティン Bペルォキシダーゼ標識体 （英国バインディ ング サイ ト社製） の 0. 5%溶液（10% 「Block Ace」 水溶液） 50 1を加え、 室 温で 2時間放置した。 PBS- T で 5回洗浄し、 発色液（組成： 0. 1M クェン酸カ リウム pH4. 5 1 ml. 30%過酸化水素水 0. 4 1、 オルトフエ二 レンジァミ ン l ing) 100 ^ 1を加え、 そのまま 2分間放置した。 2 Ν硫酸 100 1を加え反応を止め、 650nmを対照としたときの 490nmの吸光度を測 定した。 これをアポリポプロテイン Bの吸光度とした。 市販の低密度リ ポプ口ティン （米国シグマ社製） を標準品とした場合の検量線よりアポ リポプロティ ン Bの絶対量を求めた。
実施例 2において、 本発明の環状デブシぺプチドのメタノール溶液の 代わりに単にメタノールを加えた以外は実施例 2と同様に行いアポリポ プロテイン B量を測定し、 これをコントロールとした。
本発明の環状デブシぺプチドの相対アポリポプロテイン B量は、 コン トロールを 100とした時の 対値 （％) で表した。
2 ) ァボリポプ口ティ ン A 1の定量
マウス抗ヒ トァボリポプ口ティン A 1モノクローナル抗体（米国メデ イ ツクス バイオテク社製）を 0. 05M炭酸水素ナトリゥム水溶液 （pll9. 5) に lO i gZmlになるように溶解した。 この 50 1をヌ ンクイムノプレー ト に分注し、 4 で 16時間静置した。 PBS 300 1で 3回洗浄後、 ブロッキ ング液 300 /^ 1を加え、 37°Cで 2時間静置し、 その後 4 °Cで 16時間静置し た。
再び PBS 300 / 1で 3回洗净し、 前記培養液？〜 10を 100 1加え、 室温 で 2時間静置した。 PBS- T 300 1で 3回洗浄後、 ヒッジ抗ァポリポプ口 ティン Λ 1ペルォキシダーゼ標識体 （英国バインディ ングサイ ト社製） の 2000倍希釈液 （10 % 「Block AceJ 水溶液） 50 / 1を加え、 室温で 1. 5 時間静置した。 PBS- T 300 lで 3回洗浄し、 発色液 〔組成： 0. 1 Mクェ ン酸カ リウム（pH4. 5) l ml、 30%過酸化水素水 0. 4 μ 1、 オルトフニニレ ンジァ ミ ン l mg〕 1 00 // 1を加え、 そのまま 2分間放置した。 2 N硫酸 100 1を加え反応を止め、 650nmを対照としたときの 490nmの吸光度を測 定した。 市販のアポリポプロティン A 1 (米国シグマ社製） を標品とし た場合の検量線よりアポリポプロティン A 1の絶対量を求めた。
実施例 2において、 本発明の環状デブシぺプチドのメ夕ノール溶液の 代わりに単にメタノールを加えた以外は実施例 2と同様に行いアポリポ プロテイン A 1量を測定し、 これをコン トロールとした。
本発明の環状デブシぺプチ ドの相対アポリポプロテイン A 1量は、 コ ントロールを 100とした時の相対値 （％) で表した。
表 3に示すように、 本発明の環状デプシペプチドは、 1ないし 5 M の濃度でアポリポプロテイン Eの産生を強力に促進した。 また、 化合物 3〜7については、 アポリボプロテイン A 1の産生を強力に促進し、 ま た、 アポリボブロティン Bの産生を強力に抑制する活性を有することも 認められた。
表 3
濃度 相対ァポリポプロ 相対アポリポプロ 相対ァポリポプロ ( //M) ティン E量 （％) ティン B量 （％) ティン A 1量（％) 化合物 4 1 457 43 147
化合物 4 5 1042 25 161
化合物 3 359 64 124
化合物 3 5 851 21 146
化台物 5 1 132 91 123
化合物 6 1 198 72 142
化合物 7 1 163 76 135
化合物 8 423 71 96
コントロール 0 100 100 100 以上の結果より、 前記一般式 （ 1 ) に示される本発明の環状デブシぺ プチドは、 低濃度で、 Hep G 2細胞のアポリポプロテイン Eおよびアポ リポプロテイン A 1の産生を強力に促進し、 また、 アポリポプロテイン Bの産生を強力に抑制することから、 高脂血症治療薬としても有用であ る。
(製剤^ )
(製剤例 1 ) 錠剤 （1錠）
化合物 4 20mg
けい酸マグネシウム 20mg
乳糖 98. 5mg
ヒ ドロキンプロピルセルロース 7. 5mg
ステアリ ン酸マグネシゥム lrag
植物硬化油 3mg
計 150ng
化合物 4、 けい酸マグネシウム及び乳糖を混合し、 これをヒ ドロキシ プロビルセルロースを溶解したアルコール液で練合し、 次いで適当な粒 度に造粒し、 乾燥、 整粒後さらにステアリ ン酸マグネシウム及び植物硬 化油を添加混合し均一な顆粒とする。 次いでロータリ一式打錠機により 直径 7. Oram. 重量 150mgおよび硬度 6 kgの錠剤を調製した。
(製剤例 2 ) 顆粒剤
化合物 4 10mg
酸化マグネシウム 40me
りん酸水素カルシウム 38rag
乳糖 lOmg
ヒ ドロキシプロピルセルロース 20rag
上記処方例中ヒ ドロキンプロピルセルロースを除いた各原料を均一に 混台し、 これにヒ ドロキンプロピルセルロースを溶解したアルコール溶 液を加えて練合した後押出造粒機により造粒し、 乾燥して顆粒を得た。 この顆粒を整粒して 12メ ッシュの篩を通過し 48メ ッシュの篩上に残留す るものを顆粒剤とした。
(製剤例 3 ) シロップ剤
化合物 4 l. OOO g
白糖 30. 000 g
D - ソルビトール 70w/v% 25. 000 g
パラォキシ安息香酸ェチル 0. 030 g
パラォキシ安息香酸プロピル 0. 015 g
香味料 0. 200 g
グリセリ ン 0. 150 g
96%エタ人ール 0. 500 g
精製水 適量
全量 100ml
白糖、 D - ソルビトール、 パラォキシ安息香酸ェチル、 パラォキシ安 息番酸プロピル及び化合物 4を精製水 （温水） 60 sに溶解した。 冷却後 香味料を溶解したグリセリ ン及びエタノールの溶液を加えた。 次にこの 混合物に精製水を加えて 100mlにした。
(製剤例 4 ) 注射液
化合物 4ナ ト リウム塩 10. Omg
塩化ナ ト リウム 81. Omg
炭酸水素ナトリウム 8. 40mg
注射用蒸留水 ϋ量
全量 10. 0ml
炭酸水素ナ トリウム、 塩化ナトリゥム及びこの化合物 4のナトリウム 塩を蒸留水に加えて溶解し、 全量を 10. 0mlとした。 (製剤例 5 ) 坐剤
化合物 4 2 g
マクロゴール 4000 20 g
グリセリ ン 78 g
全量 100 g
化合物 4にグリセリ ンを加えて溶解した。 そこへ、 マクロゴール 4000 を加えて加温し溶解後、 坐剤型に注入して冷却固化し 1個あたり 1. 5 g の坐剤を製造した。
産業上の利用可能性
本発明の環状デブシぺプチドは、 ァポリポプロティン E産生促進作用、 アポリポプロテイン B産生抑制作用およびアポリポプロテイン A 1産生 促進作用を有す ¾。 アポリポプロティン Eは神経損傷の修復作用を有す るので、 ァボリボブロティン E産生促進作用を有する本発明の環状デブ シペプチ ドは、 神経損傷治療薬、 特に抗痴呆薬として有用である。 また、 ァボリポプロティン Bは悪玉コレステロールとして知られる低密度リボ タンパク質コレステロール（LDLコレステロール） の主要アポリポタンパ ク質であり、 アポリポプロテイン A 1は善玉コレステロールとして知ら れる高密度リポタンパク質コレステロール（HDLコレステロール） の主要 アポリポタンパク質であるので、 アポリポプロティン Bの産生を抑制し、 アポリポプロテイン A 1の産生を促進する作用を有する本発明の環状デ プシペプチドは、 高脂血症の治療薬として有用である。
配列表
配列番号： 1
配列の長さ ： 4
配列の型：アミノ酸
トポロジー：直線状
配列の種類：ぺプチド
配列の特徴：
特徴を表す記号： modified-site
存在位置： 2
他の情報： Asp=OtBuAsp
特徴を表す記号： modified- site
存在位置： 4 - 他の情報： Ile = CH3(CH2 ) i oCH(OIle)CH2COOBzl 配列：
Val Asp Leu lie
1 2 4
配列番号： 2
配列の長さ ： 5
配列の型：アミノ酸
トポロジー：直線状
配列の種類：ペプチド
配列の特徴：
特徴を表す言己号： modified-site
存在位置： 3
他の情報： Asp=OtBuAsp
特徴 ¾r表す言己号： modified - si te
存在位置： 5 他の情報： Ile=CH3(CH2) 1 0CH(0Ile)CH2C00Bzl 配列：
Leu Val Asp Leu lie
1 3 5
配列番号： 3
配列の長さ ： 6
配列の型：アミノ酸
トポロジー：直線状
配列の種類：ぺプチド
配列の特徴：
特徴を表す記号： modified- site
存在位置： 4 - 他の情報： Asp=OtBuAsp
特徴を表す記号： modified- site
存在位置： 6
他の情報： Ile=CH3(CH2) 1 ()CH(0Ile)CH2C00Bzl 配列：
Leu Leu Val Asp Leu lie
1 4 6
配列番号： 4
配列の長さ ： 7
配列の型：アミノ酸
トポロジー：直線状
配列の種類：ぺプチド
配列の特徴：
特徴を表す記号： modified-si te
存在位置： 1 他の情報： Gln = MbhGln
特 を表す記号： modiried - site
存在位置： 5
他の情報： Asp=OtBuAsp
特徴を表す記号： modified- site
存在位置： 7
他の情報： Ile-CHs CHz oCHCOIle HzCOOBzl 配列：
Gin Leu Leu Val Asp Leu lie
1 5 7
配列番号： 5
配列の長さ ： 7
配列の型：アミノ酸
トポロジー：直線状
配列の種類：ぺプチド
配列の特徴：
特 ¾を表す記号： modified - si te
存在位置： 1
他の情報： Gln = MbhGln
特傲 ¾r表す記号： modified - site
存在位置： 5
他の情報： Asp=OtBuAsp
特徴 ¾表す記号： modified - site
存在位置： Ί
他の情報： Ile=CI! 3 (CIl2) 1 0CH(0Ile)CII2C00H 配列：
Gin Leu Leu Val Asp Leu lie
1 5 7 配列番号： 6
配列の長さ ： 7
配列の型： アミノ酸
トポロジー：環状
配列の種類：ぺプチド
配列の特徴：
特徴を表す記号： raodified-site
存在位置： 1
他の情報： Gln = MbhGln
特徴を表す記号： modified- site
存在位置： 5
他の情報： Asp=JOtBuAsp
特徴を表す記号： cross- links
存在位置： 1, 7
他の情報： Gln=CH3(CH2)10CH(0Gln)CH2C0 配列：
Gin Leu leu Val Asp leu lie 1 5 7 配列番号： Ί
配列の長さ ： 7
配列の型：アミノ酸
トポロジー：環状
配列の種類：ぺプチド
配列の特徴：
特徴を表す記号： cross- links
存在位置： 1, 7
他の情報： Gln=CH3(CH2),。Cll(0Gln)CH2C0 配列：
Gin Leu Leu Val Asp Leu lie
1 5 7

Claims

請 求 の 範 囲
一般式 （ 1 )
Figure imgf000153_0001
(式中、 Rは炭素数 5〜20の直鎖状または有枝鑌状のアルキル基また は炭素数 5 ~ 15の直鎖状または有枝鎖状のアルコキシメチル基を、 A、 B、 D、 Eおよび Fはそれぞれ独立して、 ァラニン、 バリ ン、 口イ シ ン、 イ ソロイ シン、 セリ ン、 トレオニン、 リ シン、 ヒ ドロキシリ シン、 アルギニン、 システィ ン、 メチォニン、 フヱニルァラニン、 チロシン、 ト リプ トフ ァ ン、 ヒスチジン、 プロ リ ン、 4 一 ヒ ドロキシプロ リ ン、 ピベリ ジン - 4 -カルボン酸、 ホモプロ リ ン、 ォクタヒ ドロイ ン ド一 ル - 2 -カルボン酸、 ノルバリ ン、 ノルロイシン、 α - t -プチルグ リ シン、 シクロへキシルグリ シン、 ァゼチジン - 2 -カルボン酸、 3 - ( 3 — ピリ ジル）ァラニン、 （3 - N—メチル） ピベリ ジルァラニン、 3 - ( 2 -ナフチル） ァラニン、 ； S - シクロへキンルァラニン、 /3 - t -ブチルァラニン、 9 -アン 卜ラセ二ルァラニン、 α -メチルァラ ニン、 および 2 -ア ミ ノブ夕ン酸から選ばれるァ ミ ノ酸残基またはこ れらア ミ ノ酸残基の Ν - (^〜(^アルキル体を、 Wおよび Ζはそれぞれ 独立して、 ァスパラギン酸、 ァスパラギン、 グルタ ミ ン酸およびグル 夕 ミ ンから選ばれるァミ ノ酸残基を、 mおよび ηはそれぞれ独立して 0または 1を示す。 上記ア ミ ノ酸残基における遊離のア ミ ノ基、 カル ボキンル基もしく は ω -力ルバミ ド基はそれらの保護基と してべプチ ド化学で通常用いられる保護基でそれぞれ保護されていてもよく、 そ して、 上記 A、 B、 D、 E、 F、 Wおよび Zにおけるア ミ ノ酸残基が リ シン、 ヒ ドロキンリ シン、 グルタ ミ ン酸またはァスパラギン酸であ る場合は、 隣接するァ ミ ノ酸とぺプチ ド結合するァ ミ ノ基もしく は力 ルボキシル基は -位でも ω -位でもよい）
で示される環状デブシぺプチ ドまたはその薬理学的に許容される塩を 有効成分とするアポリポプロティン Ε産生促進薬。
. 前記一般式 （ 1 ) において、 Αがイ ソロイシンまたはァラニン、 B がロイシン、 ァラニン、 β - t -プチルァラニン、 バリ ンまたはフエ 二ルァラニン、 0カ<バリ ンまたはァラニン、 Eがロイシン、 ァラニン、 3 - tプチルァラニン、 パリ ンまたはフエ二ルァラニン、 Fが口イ シ ン、 ァラニン、 β - t プチルァラニン、 バリ ンまたはフエ二ルァラ二 ン、 Wがァスパラギン酸またはグルタ ミ ン酸そして Zがグルタ ミ ンま たはァスパラギンであり、 mおよび nが 0または 1であり、 そして R が炭素数 6〜12の直鎖状のアルキル若しく はアルコキシメチル基であ る環状デブシぺプチ ドまたはその薬理学的に許容される塩を有効成分 とする請求項 1記載のァポリボブロティ ン E産生促進薬。
. 前記一般式 （ 1 ) において、 Aがイソロイシンまたはァラニン、 B が D -ロイ シン、 D -ァラニン、 D - 5— t プチルァラニン、 D - リ ンまたは D - フエ二ルァラニン、 D力 パリ ンまたはァラニン、 E が D ロイ シン、 D -ァラニン、 D— /3 - t ブチルァラニン、 D - バリ ンまたは D フエ二ルァラニン、 Fがロイ シン、 ァラニン、 β - t -ブチルァラニン、 バリ ンまたはフエ二ルァラニン、 Wがァスパラ ギン酸またはグルタ ミ ン酸そして Zがグルタ ミ ンまたはァスパラギン であり、 mおよび nが 0または 1であり、 そして Rが炭素数 6 ~ 12の 直鎖状のアルキル若しく はアルコキシメチル基である環状デブシぺプ チ ドまたはその薬理学的に許容される塩を有効成分とする請求項 1記 載のアポリポプロティ ン E産生促進薬。
. 請求項 1記載の環状デプシぺブチ ドまたはその薬理学的に許容され る塩を有効成分とする神経損傷治療薬。
5 . 請求項 1記載の環状デブシぺプチドまたはその薬理学的に許容され る塩を有効成分とする痴呆症治療薬。
6 . 請求項 1記載の環状デブシぺプチドまたはその薬理学的に許容され る塩を投与することからなるアポリポプロティ ン E産生促進方法。
7 . 請求項 1記載の環状デブシぺプチドまたはその薬理学的に許容され る塩を投与することからなる神経損傷の治療方法。
8 . 請求項 1記載の環状デブシぺプチドまたはその薬理学的に許容され る塩を投与することからなる痴呆症の治療方法。
9 . ァポリポプロティン E産生促進薬としての請求項 1記載の環状デブ シぺプチドまたはその薬理学的に許容される塩の製造方法。
10. 神経損傷治療薬としての請求項 1記載の環状デブシぺプチドまたは その薬理学的に許容される塩の製造方法。
11. 痴呆症治療薬としての請求項 1記載の環状デプシペプチドまたはそ の薬理学的に許容される塩の製造方法。
12. 一般式 （Γ )
Figure imgf000155_0001
(式中、 R'は炭素数 5 ~20の直鎖状または有枝鎖状のアルキル基また は炭素数 5 ~ 15の直鎖状または有枝鎖状のアルコキシメチル基を、 A . B、 D、 Eおよび Fはそれぞれ独立して、 ァラニン、 バリン、 口イ シ ン、 イソロイシン、 セリ ン、 トレオニン、 リ シン、 ヒ ドロキシリ シン. アルギニン、 システィ ン、 メチォニン、 フエ二ルァラニン、 チロシン ト リプトファ ン、 ヒスチジン、 プロ リ ン、 4 - ヒ ドロキシプロリ ン、 ピぺリ ジン— 4 -カルボン酸、 ホモプロリ ン、 ォクタヒ ドロイ ン ドー ル- 2 -カルボン酸、 ノルパリ ン、 ノルロイシン、 α - t -ブチルグ リ シン、 シクロへキシルグリ シン、 ァゼチジン - 2 - カルボン酸、 3 — ( 3 — ピリ ジル）ァラニン、 （ 3— N メチル） ピベリ ジルァラニン、 3 - ( 2—ナフチル） ァラニン、 3 - シクロへキンルァラニン、 β - t -ブチルァラニン、 9 -アン トラセニルァラニン、 α -メチルァラ ニン、 および 2 -アミ ノブタン酸から選ばれるァミ ノ酸残基またはこ れらア ミ ノ酸残基の Ν - 〜(^アルキル体を、 Wおよび Ζはそれぞれ 独立して、 ァスパラギン酸、 ァスパラギン、 グルタ ミ ン酸およびグル タ ミ ンから選ばれるァミ ノ酸残基を、 mおよび ηはそれぞれ 0または 1を示す。 上記ァ ミ ノ酸残基における遊離のァ ミ ノ基、 カルボキシル 基もしくは ω -力ルバミ ド基はそれらの保護基としてべプチ ド化学で 通常用いられる保護基でそれぞれ保護されていてもよく、 そして、 上 記 A、 B、 . D、— E、 F、 Wおよび Zにおけるア ミ ノ酸残基がリ シン、 ヒ ドロキシリ シン、 グルタ ミ ン酸またはァスパラギン酸である場合は、 隣接するァ ミ ノ酸とぺプチ ド結合するァミ ノ基もしく はカルボキシル 基は α -位でも ω -位でもよい。 但し、 mおよび ηが 1であり、 Αが イソロイシン、 Bがロイ シン、 Wがァスパラギン酸、 D力くパリ ン、 E がロイシン、 Fがロイシン、 Zがグルタ ミ ン酸またはグルタ ミ ンで あり、 R'が式 R （CH2)P- (式中 ^はメチル、 イ ソプロピル、 sec -ブ チルまたはイソブチルを示し、 pは 5〜15の整数を示す） を有する基 である場台を除く。 ）
で示される環状デブシぺプチ ドまたはその薬理学的に許容される塩。 13. Aがイ ソロイ シンまたはァラニン、 Bがロイ シン、 ァラニン、 β - t -ブチルァラニン、 バリ ンまたはフヱニルァラニン、 Dカ くリ ンま たはァラニン、 Eがロイ シン、 ァラニン、 β - tプチルァラニン、 バ リ ンまたはフエ二ルァラニン、 Fがロイシン、 ァラニン、 β - t プチ ルァラニン、 バリ ンまたはフヱニルァラニン、 Wがァスパラギン酸ま たはグルタ ミ ン酸そして Zがグルタ ミ ンまたはァスパラギンであり、 mおよび nが 1であり、 そして R'が炭素数 6 〜12の直鎖状のアルキル 若しくはアルコキシメチル基である請求項 12記載の環状デブシぺプチ ドまたはその薬理学的に許容される塩。
14. Aがイソロイシンまたはァラニン、 Bが D —ロイシン、 D -ァラニ ン、 D - S - t —ブチルァラニン、 D -バリ ンまたは D - フェニルァ ラニン、 Dがバリ ンまたはァラニン、 Eが D -ロイシン、 D -ァラニ ン、 D - ；8 - t -ブチルァラニン、 D —バリ ンまたは D - フェニルァ ラニン、 Fがロイシン、 ァラニン、 β - t -ブチルァラニン、 バリン またはフヱニルァラニン、 Wがァスパラギン酸またはグルタミン酸そ して Zがグルタミ ンまたはァスパラギンであり、 mおよび nが 1であ り、 そして R'が炭素数 6 ~ 12の直鎖状のアルキル若しくはアルコキシ メチル基である請求項 12記載の環状デブシぺプチドまたはその薬理学 的に許容される塩。
15. 請求項 12記載の環状デブシぺプチドまたはその薬理学的に許容され る塩を有効成分とするアポリポプロティン B産生抑制薬。
16. 請求項 12記載の環状デブシぺプチドまたはその薬理学的に許容され る塩を有効成分とするアポリポプロテイン A 1産生促進薬。
17. 請求項 12記載の環状デブシぺプチドまたはその薬理学的に許容され る塩を有効成分とする高脂血症治療薬。
18. 請求項 12記載の環状デブシぺプチドまたはその薬理学的に許容され る塩を投与することからなるアポリポプロティン Bの産生抑制方法。
19. 請求項 12記載の環状デブシぺプチドまたはその薬理学的に許容され る塩を投与することからなるァボリポプ口ティ ン A 1の産生促進方
20. 請求項 12記載の環状デブシぺプチドまたはその薬理学的に許容され る塩を投与することからなる高脂血症の治療方法。
21. アポリボプロティン B産生抑制薬としての請求項 12記載の環状デブ シぺプチドまたはその薬理学的に許容される塩の製造方法。
22. アポリポプロティ ン A 1産生促進薬としての請求項 12記載の環状デ プシぺプチ ドまたはその薬理学的に許容される塩の製造方法。
23. 高脂血症治療薬としての請求項 12記載の環状デブシぺプチドまたは その薬理学的に許容される塩の製造方法。
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