WO2001064700A1 - Novel macrolide compound jk - Google Patents

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WO2001064700A1
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culture
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novel
medium
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Yasushi Tanaka
Hisayuki Komari
Akira Nemoto
Katsukiyo Yazawa
Yuzuru Mikami
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Higeta Shoyu Co Ltd
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    • A—HUMAN NECESSITIES
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    • A61P31/04—Antibacterial agents
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    • C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
    • C12P19/44—Preparation of O-glycosides, e.g. glucosides
    • C12P19/60—Preparation of O-glycosides, e.g. glucosides having an oxygen of the saccharide radical directly bound to a non-saccharide heterocyclic ring or a condensed ring system containing a non-saccharide heterocyclic ring, e.g. coumermycin, novobiocin
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/03—Actinomadura

Definitions

  • the present invention relates to a novel compound JK, and more specifically, the present invention relates to new compounds JK-11 and JK-12, and methods for producing and using the same.
  • the new compounds JK-1 and JK-2 are novel macrolide compounds that have been isolated and collected from cultures of microorganisms, especially actinomycetes, and have excellent physiological activity, particularly excellent antibacterial activity, especially anti-MR. It has SA (methicillin-resistant Staphylococcus aureus) activity.
  • MM46115 R. j. Ashton et. Al., J. Antibiot., Vol. 43, pp. 1387-1393, 1990, K. Luk et. Al., J. Chem. Soc. Perkin Trans. 1, Vol. 7, pp.
  • novel macrolide compounds JK-1 and JK-2 according to the present invention are very useful as antibacterial agents and as prophylactic and / or therapeutic agents, and can be used effectively.
  • This compound has excellent antibacterial properties, and in particular, A (methicillin-resistant Staphylococcus aureus) is not only effective, but also characterized by its much higher anti-MRSA activity than currently used vancomycin, and also in terms of safety. It has no problems and has particularly good features in practical use.
  • the present invention has been made in response to such demands in the industry, and as a result of repeated screening in accordance with the flow of technological development of antibacterial agents, the antibacterial activity of a novel compound that has not been known until now has been determined.
  • the inventors have found that the present invention has been completed.
  • the present invention has been known in view of antibacterial properties against various microorganisms including resistant bacteria, safety without toxicity and side effects, and productivity such as easy production and mass production. To provide novel compounds with better antibacterial activity than other substances It was done for the purpose. Means for solving the problem
  • the present inventors have conducted a broad search for natural products, particularly for metabolites of microorganisms, with the aim of obtaining a substance having a novel antibacterial action, and as a result of conducting a search for substances having a more effective antibacterial action, A substance having the desired action was found in the cell extract of Actinomadura pelletieri IFM 0903 (FERM BP-730), and the physicochemical properties of this substance were investigated in detail, and the chemical structure was determined. As a result, it was confirmed that the substance was a novel substance that was not known before.
  • This substance was a novel macrolide compound represented by the general formula (1) as described in claims 1 to 3.
  • the present inventors named the present compound JK, and further named JK-1 when R is a methyl group in the general formula (1) and JK-2 when R is a hydrogen atom in the general formula (1). .
  • salts include alkali metal salts such as sodium salt and potassium salt, alkaline earth metal salts such as calcium salt and magnesium salt, inorganic acid salts such as hydrochloride, sulfate, nitrate, and various organic acid salts. All pharmaceutically acceptable salts such as organic salts such as amine salts and pyridinium salts are included.
  • the present invention also relates to an antibacterial agent comprising the novel macrolide compound JK_1, 2 or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient.
  • an antibacterial agent comprising the novel macrolide compound JK_1, 2 or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient.
  • the compound JK according to the present invention is a mixture, and at present, two kinds of compounds, JK-1 and JK-12, have been separated. Among these compounds, the physicochemical properties of JK-1 are shown in Table 1 below.
  • Compound according to the present invention JK is produced by Actinomadura pelletieri IFM Q903 (FERM BP- 7030 ).
  • the microbiological properties of the Actinomadura pelletieri IFM 0903 strain are morphologically long and divergent, as seen in a species of Actinomycetes, when cultivated on a sodium agar medium (ISP-3). It had hyphae and aerial mycelium. By increasing the culture time, several bacillus-like spores and aerial hyphae and vegetative hyphae were observed. Since vegetative hyphae were also observed, it was presumed to belong to the genus Actinomadura morphologically.
  • Table 3 below shows the culture characteristics of Actinomadura pelletieri IFM 0903 strain in various media.
  • Table 4 below shows the physiological and biochemical properties.
  • This strain was shake-cultured in a medium (Brainheart 'Infusion containing 2% glucose) at a stirring speed of 25 O rpm at 30 ° C for 72 hours, and the cells grown in the medium were centrifuged ( (300 rpm ⁇ 10 min) and washed twice with distilled water. The cells were further washed with ethanol, and then dried under vacuum to obtain dried cells.
  • the amino acid composition, sugar composition and lipid composition of the cell wall of the dried cells were examined based on Bergey's Manual of Determinative Bacteriology 9th ed., Willams, Browntmore, 1993. Amino acid analysis showed meso-diaminobimelic acid, and sugar analysis showed mudulose.
  • MK-9 (H6) was confirmed as a major component of isoprenoid quinone, which is a bacterial lipid component.
  • the strain was identified as Actinomadura pelletieri based on the utilization of adenine, casein, hypoxanthine, and tyrosine shown in Table 4 and the pattern of acid production from sugar. This strain is classified as Actinomadura pelletieri as in Since it is extremely distinctive in its production, it was named Actinomadura pelletieri IFM 0903 as a new strain, and deposited internationally with the National Institute of Advanced Industrial Science and Technology, Biotechnology and Industrial Technology Research Institute (FERM BP-730).
  • Compound JK according to the present invention is produced by Actinomadura pelletieri IFM 0903 strain (FERM BP-730) strain, and has also been confirmed to be produced by other strains belonging to the genus Act inomadura. JK is produced from these microorganisms by treatment with X-rays, ⁇ -irradiation, nitrogen mustard, N-methyl-N, —nitro-N-N-l-nitrosogazine, mutagen such as 2-aminopurine, and ethyl methanesulfonate.
  • the present invention also broadly includes the use of all mutants capable of producing compound JK, including artificial mutants and natural mutants obtainable by the above method.
  • novel compound JK represented by the general formula (1) according to the present invention can be produced not only by a chemical synthesis method but also by a microorganism as described above.
  • Actinomadura pelletieri IFM 903 strain a medium containing a carbon source and a nitrogen source which can be utilized, but under aerobic submerged culture conditions (for example, shaking). It is preferable to produce the cells by a continuous culture or aeration and stirring culture.
  • glucose As the carbon source, glucose, glycerol, sucrose, starch, dextrin and other carbohydrates are preferably used.
  • Nitrogen sources include oatmeal, yeast extract, beef extract, tuna extract, peptone, gluten meal, cottonseed oil, soybean meal, cornsprika, and dried It is preferable to use dried yeast, wheat germ, groundnut flour, chicken bone meat meal, etc., but inorganic and organic nitrogen compounds such as ammonium salts (for example, ammonium nitrate, ammonium sulfate, ammonium phosphate, etc.), urea, amino acids and the like. Can also be used advantageously.
  • Inorganic salts can be added to the medium.
  • an antifoaming agent such as liquid paraffin, animal oil, plant oil, mineral oil, silicone, etc. can be added, especially if the medium foams.
  • aeration-agitation culture In order to industrially produce the target substance in large quantities, it is preferable to carry out aeration-agitation culture as in the case of other fermentation products. For small-scale production, shake culture using a flask is preferred.
  • the composition of the medium used for the preculture and the composition of the medium used for the production culture may be the same, or both may be changed if necessary.
  • the cultivation is preferably performed under aeration and stirring conditions. For example, known methods such as stirring with a propeller or other machine, rotation or shaking of a flamenze, pumping, and air blowing are appropriately used.
  • the air for ventilation should be sterilized.
  • the culturing temperature can be appropriately changed within a range in which the compound JK-producing bacterium produces the substance, but it is usually 10 to 40 ° C; preferably 25 to 35 ° C.
  • the culturing time varies depending on the culturing conditions and the culturing volume, but is usually about 1 day to 1 week.
  • the target compound JK is recovered from the culture. That is, the cells are directly extracted with water and / or an organic solvent, or are disrupted mechanically or by using known means such as ultrasonic waves, and then extracted with water and Z or an organic solvent, and the cells are extracted according to a conventional method. Collect and purify.
  • a culture solution it may be directly extracted with a solvent, or after filtration or centrifugation of the culture solution, concentration under reduced pressure, lyophilization, pH adjustment, anion or cation exchange resin, activated carbon, powdered cellulose, After the compound JK is adsorbed by contacting with a carrier such as silica gel, alumina, or an adsorptive resin, this may be eluted from the carrier.
  • a carrier such as silica gel, alumina, or an adsorptive resin
  • conventional methods for collecting antibiotics are appropriately used, for example, solvent extraction with water, an organic solvent, or a mixed solvent thereof; chromatography; recrystallization from a single solvent or a mixed solvent. Can be used alone or in combination as appropriate.
  • the recovery and purification of compound JK are carried out by appropriately utilizing known methods as described above. For example, the following methods may be used.
  • the cells are collected by centrifuging the culture or treating with an MF membrane, followed by extraction with methanol, concentration of the extracted fraction, and further extraction with getyl ether.
  • the extract fraction was concentrated under reduced pressure, further subjected to silica gel chromatography, and hexane,
  • the fractionation and purification may be performed by stepwise, z- or continuous elution with ethyl acetate, concentrated under reduced pressure to dryness, fractionated and purified by HPLC (ODS column), concentrated and dried to dryness.
  • the compound of the present invention is used as it is or in a pharmaceutically acceptable non-toxic and inert carrier, for example, from 0.1% to 99.5%, preferably from 0.1% to 99.5%. It is administered as a pharmaceutical composition containing 5% to 90%.
  • a pharmaceutically acceptable non-toxic and inert carrier for example, from 0.1% to 99.5%, preferably from 0.1% to 99.5%. It is administered as a pharmaceutical composition containing 5% to 90%.
  • a solid, semi-solid, or liquid diluent filler, and one or more auxiliary agents for formulation are used.
  • the pharmaceutical compositions are administered in dosage unit form.
  • the pharmaceutical composition of the present invention can be administered orally, intraosseously, topically (eg, transdermally), or rectally, but can also be used as an external preparation. Needless to say, it is administered in a dosage form suitable for these administration methods.
  • the dose is desirable to adjust the dose as an antibacterial agent in consideration of the condition of the patient such as age and weight, the administration route, the nature and extent of the disease, and the like. As a rule, the range of 10 to 200 mg per day is common. In some cases, lower doses may be sufficient, and conversely, higher doses may be required. When administering a large amount, it is desirable to administer it in divided doses several times a day and / or continuously. This compound JK was orally administered to 50 mg / day rats, and no acute toxicity was observed even after 10 days, indicating safety. Oral administration can be carried out in solid or liquid dosage units such as powders, powders, tablets, dragees, capsules, drops, sublingual tablets and other forms.
  • Powders are prepared by comminuting the active substance to an appropriate degree. Powders may contain the active ingredient in an appropriate finely divided form, and then a finely divided pharmaceutical carrier such as, for example, starch, Manufactured by mixing with edible carbohydrates and the like, such as carbohydrates. If necessary, flavoring agents, preservatives, dispersing agents, coloring agents, flavors and the like may be added.
  • Capsules are manufactured by first filling a powdered powder, powder or granulated preparation into a capsule containing, for example, gelatin capsules. Lubricants and superplasticizers, such as colloidal silica, talc, magnesium stearate, calcium stearate, and solid polyethylene glycol, are mixed with the powder and then filled. Can also.
  • disintegrants and solubilizers such as carboxymethyl cellulose, calcium carbonate, and sodium carbonate
  • the fine powder of this product can be suspended and dispersed in vegetable oil, polyethylene glycol, glycerin, or a surfactant, and wrapped in a gelatin sheet to prepare a soft capsule. Tablets are made by preparing a powder mixture, granulating or slugging, then adding a disintegrant or lubricant and pressing.
  • the powder mixture is prepared by mixing the appropriately powdered substance with the diluent or base described above and, if necessary, a binder (eg, sodium carboxymethylcellulose, alginate, gelatin, polyvinylpyrrolidone, polyvinyl alcohol, etc.), dissolution delay
  • a binder eg, sodium carboxymethylcellulose, alginate, gelatin, polyvinylpyrrolidone, polyvinyl alcohol, etc.
  • An agent eg, paraffin
  • a resorbent eg, quaternary salt
  • an adsorbent eg, bentonite, kaolin, dicalcium phosphate, etc.
  • the powder mixture can be first moistened with a binder such as syrup, starch paste, gum arabic, cellulose solution or a polymer solution, and then forced through a sieve to form granules. Wear. Instead of granulating the powder in this way, it is also possible to first crush the powder in a tableting machine
  • the granules thus prepared can be prevented from adhering to each other by adding stearic acid, stearic acid salt, talc, mineral oil and the like as a lubricant.
  • the mixture thus lubricated is then compressed.
  • the drug may be directly tableted after binding to a fluid inert carrier without going through the steps of granulation and slag formation as described above.
  • Transparent or translucent protective coatings made of shellac sealing coatings, coatings of sugar or polymeric materials, and polish coatings made of wax may also be used.
  • compositions such as solutions, syrups and elixirs can also be presented in dosage unit form so that a given quantity is contained.
  • Syrups are prepared by dissolving the compound in a suitable flavoring aqueous solution
  • elixirs are formulated by dispersing in a non-toxic alcoholic carrier.
  • Solubilizers and emulsifiers eg, ethoxylated isostearyl alcohols, polyoxyethylene sorbitol esters
  • flavor enhancers eg, peppermint oil, saccharin
  • dosage unit formulations for oral administration may be microencapsulated.
  • the formulation can also provide an extended period of action or sustained release by coating or embedding in polymers, waxes and the like.
  • Parenteral administration can be carried out using liquid dosage unit forms for subcutaneous, intramuscular or intravenous injection, such as solutions and suspensions. These include dissolving a fixed amount of the compound in a non-toxic liquid carrier suitable for injectable use, e.g., aqueous Or by suspending or dissolving in an oily medium and then sterilizing the suspension or solution. Alternatively, an aliquot of the compound may be placed in a vial and the vial and its contents sterilized and sealed. Spare vials or carriers may be provided with the powder or lyophilized active ingredient for dissolution or mixing immediately prior to administration. A non-toxic salt or salt solution may be added to make the injection solution isotonic.
  • Rectal administration can be accomplished by using the compound as a suppository with a low melting point solid, such as polyethylene glycol, strength resin, higher esters (eg myristyl palmitate), and mixtures thereof. It can also be applied directly to the affected area as an external preparation.
  • a low melting point solid such as polyethylene glycol, strength resin, higher esters (eg myristyl palmitate), and mixtures thereof. It can also be applied directly to the affected area as an external preparation.
  • Actinomadura pelletieri IFM 0903 strain (FERM BP-7030) was inoculated into 25 ml of Brain Heart Infusion liquid medium (manufactured by Difco) supplemented with 2% glucose in a 50 ml Erlenmeyer flask at 30 ° C; shaken for 72 hours. Culture was continued. 2 ml of this was further inoculated into a 500 ml Erlenmeyer flask in which 200 ml of the same medium was dispensed, and the same preculture was performed.
  • This preculture (1.5 L) is made up of glucose 2%, meat extract (Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) 0.5%, polypeptone P1 0.5%, polypeptone (Nippon Pharmaceutical Co., Ltd.) 0.5%, chloride Production medium consisting of 0.3% sodium, pH 7.0 15
  • the inoculum was inoculated into a 2 OL tank cultivation tank containing L, and the cells were cultured for 90 hours at 28 ° C, aeration rate of 15 rpm, stirring speed of 200 rpm.
  • the cells were collected by filtering 15 L of the obtained culture with a filter cloth. 3 L of methanol was added to the cells to perform extraction, and this extract was concentrated on an evaporator. 300 ml of distilled water was added to the concentrated solution, and the mixture was partitioned and extracted three times with 1 L of ethyl acetate. The ethyl acetate layer (3 L) was concentrated and evaporated to dryness on an evaporator, and subjected to silica gel column chromatography (column size; 3 cm x 20 cm). Elution was carried out stepwise with 1 L each of n-hexane and ethyl acetate at 40: 1, 20: 1 and 5: 1.
  • cell growth was measured by a dye assay using 3- (4,5-dimethylthiazol-2-yl) -2,5-diphenyltetrazolium bromide (MTT). . That is, 2 mg / ml MTT solution is added to each well at 20/1, and after culturing at 37 ° C for 4 hours, the formazan crystals formed in the cells are prepared with 50% dimethylformamide solution. The resulting 20% sodium dodecyl sulfate solution was added at 50/1 and dissolved, and the absorbance at 570 thighs was measured using a microplate absorptiometer (Imnoreader I) to use as an index of growth. The growth inhibition rate was calculated from the following formula, and the concentration of the sample that inhibited growth by 50% (IC 5e value) was determined from the relationship between the sample concentration and the inhibition rate.
  • MTT 3- (4,5-dimethylthiazol-2-yl) -2,5-diphenyltetrazolium bromide
  • the antimicrobial activity of JK-1 was determined by measuring the minimum inhibitory concentration (MIC) as follows.
  • JK MIC values for various microorganisms were determined in a Murat-Hinton medium containing 0.2% glucose, based on the rules of the Japanese Society of Chemotherapy (Summary of Antibiotics, 4th Edition, The University of Tokyo Press 1992). JK-1 was dissolved in methanol and diluted using the above medium, and the dilution was prepared by repeating the 2-fold dilution from a concentration of 1 mg / ml. The test bacteria were prepared at 1 ⁇ 10 6 / ml in the above medium and used as the test bacteria solution. The JK solution 20 ⁇ 1 and the test bacterial solution 180 ⁇ 1 were dispensed into a 96-well microplate and cultured at 37 ° C. 24 The growth of the 4th hour was confirmed visually and Ml. The value was calculated. The results obtained are shown in Tables 5 and 6 below.
  • Bacillus subtil is PCI 189 0.39
  • JK-1 has a strong antibacterial activity against gram-positive bacteria with a MIC value of 0.025 to 0.39 g / ml showed that.
  • gram-negative bacteria and fungi have antibacterial activity. I didn't.
  • Staphylococcus aureus Staphylococcus aureus
  • MRS A which is a multidrug resistant strain of the drug
  • Tablets were produced from (1) 20 g of the compound JK produced in Example 1, (2) 80 g of lactose, (3) 30 g of corn starch, and (4) 2 g of magnesium stearate. That is, (1), (2) and (3) (but 15 g) are mixed, (3) (5 g) and (4) are added and mixed well, and this mixture is compressed by a compression tablet machine. Then, 800 tablets each containing 25 mg of the active ingredient (1) were produced.
  • the invention's effect was produced from (1) 20 g of the compound JK produced in Example 1, (2) 80 g of lactose, (3) 30 g of corn starch, and (4) 2 g of magnesium stearate. That is, (1), (2) and (3) (but 15 g) are mixed, (3) (5 g) and (4) are added and mixed well, and this mixture is compressed by a compression tablet machine. Then, 800 tablets each containing 25 mg of the active ingredient (1) were produced.
  • the invention's effect was produced from (1) 20 g of the compound JK produced in Example 1, (2) 80 g
  • the present invention provides compound JK.
  • This compound is a novel substance, has excellent physiological activity, and is an antibiotic-resistant bacterium such as MRSA, which has recently become a particular problem, for example, in hospital-acquired infections. It can be used in various pharmaceuticals as an antibacterial agent effective against (more effective than vancomycin) and other various antibacterial agents.

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Description

明細書
新規マクロライ ド系化合物 J K
発明の属する技術分野
本発明は、 新規化合物 J Kに関するものであり、 更に詳細には、 本発明は、 新 規化合物 J K一 1および J K一 2、 その製造法及び用途に関するものである。 新 規化合物 J K— 1、 2は、 微生物、 特に放線菌の培養物から分離採取された従来 未知の新規マクロライ ド系化合物であって、 すぐれた生理活性、 特にすぐれた抗 菌作用、 特に抗 MR S A (メチシリン耐性黄色ブドウ状球菌） 活性を有するもの である。 本発明の類似物質として MM46115 (R. j. Ashton et. al.， J. Antibiot. , Vol.43, pp. 1387-1393, 1990, K. Luk et. al.， J. Chem. Soc. Perkin Trans. 1, Vol. 7, pp. 1641-1644, 1991) が知られているが、 MM46115が強い細胞毒性を有 しているのに対し、 本発明に係る新規化合物 J K _ 1及び J K— 2は全く細胞毒 性を有していない点できわめて特徴的である。 その詳細なメカニズムについては 今後の研究にまたねばならないが、 そのひとつとしては、 構造上の差異から 3 '位 の C H3基が毒性発現に重要であると推測される。
従って、 本発明に係る新規マクロライ ド系化合物 J K— 1及び J K— 2は、 抗 菌剤として予防及び/又は治療剤として非常に有用であり、 また有効に利用する ことが出来る。 本化合物は、 抗菌性にすぐれ、' 特に近年問題となっている MR S A (メチシリン耐性黄色ブドウ状球菌 ） に対して有効であるのみでなく、 現在用 いられているバンコマイシンよりもはるかに抗 MR S A活性が高い点で特徴的で あり、 しかも安全性の面においても問題がなく、 特に実用上すぐれた特徴を有す るものである。
従来の技術
抗菌剤として数多く新規化合物が発見され、 また合成され、 その一部は実用化 されている。 一方、 院内感染に代表される様に多剤耐性菌が出現したことから既 存の抗菌剤とは異なる作用点を有する耐性菌にも有効な新規な抗菌剤が求められ ている。
従来より知られている抗菌剤にはすぐれたものが各種知られているが、 MR S Aその他の耐性菌にも有効で、 安全性、 生産性の面から優れた抗菌剤の開発が求 められていた。
発明が解決しょうとする課題
本発明は、 このような当業界における要望に応えるためになされたものであつ て、 抗菌剤の技術開発の流れに沿いスクリーニングを重ねた結果、 今までに知ら れていない新規な化合物に抗菌活性があることを見い出し、本発明を完成させた。 本発明は、 耐性菌を含め各種微生物に対する抗菌性、 毒性や副作用がないといつ た安全性、 製造が容易であつて大量生産が可能であるといつた生産性の面からし て、 従来既知の物質より更にすぐれた抗菌活性を有する新規な化合物を提供する 目的でなされたものである。 課題を解決するための手段
本発明者らは、新規な抗菌作用を有する物質を得ることを目的として、天然物、 特に微生物の代謝産物について広く検索を行い、 より有効な抗菌作用を有する物 質について検索を行った結果、 放線菌 Actinomadura pelletieri IFM 0903(FERM BP- 7 0 3 0 )の菌体抽出物中に目的とする作用を有する物質を見出し、 本物質につ いてその物理化学的性質を詳細に調べ、 化学構造を明らかにしたところ、 従来知 られていない新規物質であることが確認された。 本物質は請求の範囲 1 ~ 3項に 記載した様に、 一般式（1 )で示されるマクロライド系の新規な化合物であった。 発明者らは、 本化合物を J Kと命名し、 更に、 一般式 （ 1 ) において Rがメチル 基の場合の化合物を J K— 1、 Rが水素原子の場合の化合物を J K— 2と命名し た。
すなわち本発明は、 図 1に示される一般式 （ 1 ) を有する新規化合物 J K (但 し、 R二 C H3の場合は、 J K— 1、 1 = 11の場合は —2 ) 又はその医薬的に 許容し得る塩に関するものである。
本発明において、塩とは、 ナトリウム塩、 カリウム塩といったアルカリ金属塩、 カルシウム塩やマグネシウム塩といったアルカリ土類金属塩、 塩酸塩、 硫酸塩、 硝酸塩等の無機酸塩のほか、 各種有機酸塩、 アミン塩ゃピリジニゥム塩等の有機 塩等、 医薬的に許容される塩がすべて包含される。
また、 本発明は、 新規マクロライド系化合物 J K _ 1、 2又はその医薬的に許 容される塩を有効成分とする抗菌剤に関するものである。 以下、 本発明について 詳述する。 図面の簡単な説明
図 1
一般式 （1) を有する新規化合物 J Kの化学構造を示す。
発明の実施の形態
本発明に係る化合物 J Kは混合物であり、 現時点においては JK— 1、 JK一 2の 2種の化合物が分離されている。 これら化合物のうち、 JK—1の物理化学 的諸性質を、 下記表 1に示した。
(表 1)
第 1表 J K一 1の物理化学的諸性質
( 1 ) 物質の色及び状態：無色粉末
(2) 赤外吸収スペクトル：有意なシグナルは次のとおりである。
I R "腿 ( 1、 in KBr) ：
813, 936,977, 1006, 1030, 1058, 1094, 1122， 1180， 1219, 1289, 1312, 1343， 1375, 1404， 1453, 1456， 1504, 1580, 1618， 1690, 1723,1753， 2950, 3425
(3) 紫外吸収スぺクトル：
υνλΜΧ (nm、 MeOH) : 235, 280 11000)
( 4 )分子量： 877 (5) 分子式： (^Η^ Ο Ι
(6) マススぺクトル
HREIMS m/z
実測値： 877.4425 (M+)
計算値： 877.4440 (C49H66N2010C1 )
( 7 ) 比旋光度：
[ひ] D (MeOHヽ C = 0.15%) -141.5
化合物 JK— 1の1 H NMR及び13 C NMRスペクトルの内、 有意なシグナ ルは下記表 2に示される。
(表 2)
第 2表 JK一 1のケミカルシフト
( δ in ppm, J in Hz )
Position 6n,J δ, HMBC (Ή)
1 166.8
2 105.6
3 208.7 27
4 53.7 27, 13
5 3.8 dd, 3， 3 38.0 27, 10
6 1.9 m 30.4 28, 5， 7 7 1.65 m/1.77 m 39.9 28， 8 oc 9'Z2 ω 96 'ΐ/11108*1
9 6'6T (P 0
'9T 9 'Ρ 6ΪΊ
6·66ΐ
L'
6'9C Ϊ 'CI (PP L '\
O' : 82 zz (\z 01 c9 'PP 9Z'9
02 'zz 9 '01 'PP 6S'S \l
\Z c6l \'Z z Όΐ (pp 09·ε OZ OZ CIC Z'ZZl 6 (P Z2' 61
61 'TC r 81 Λ '91 (IS z lz 'PP Ζ8·ε AT
ϊ'9ΐ 91
\'LZ\ Z l 'Z\ 'PP so's SI
ST 'ετ 8'2CI L lZ 'PP I9'9 1
62 Ή L 'P IVl ετ
m
Όΐ Γ6ΤΪ 01 'P 99'9 π
9 6*0 01
01 (8 6 L £6 6'69 8
C9ClO/lOdf/X3d 00Z.f9/l0 OAV 0 0.94 t, 7 12.45 29
1 1.69 s 11.5 17
2 1.3 - 1.4 m 37.8 22
3 1.3 - 1.4 m 19.7 34
4 0. 91 t， 7 14.2 33
1， 4.43 dd, 11, 2 98.8 2，
2， 1.32 m/ 2.0 m 31.7 1'
3， 2.28 m 64.0 4，， 2，, r
2.85 br (NH)
4， 4.49 dd, 11， 3 48.5 3，， 5，， 4' -NH
6.04 d (NH)
5， 3.58 m 70.4 6，
6， 1.26 d, 7 17.3 5，
T 2.37 br 43. 1
125. 18 8"
r 133.7 8"
3s 125.0 8"
4K 7.21 d, 7 131.2 5"
5" 6.67 d, 7 116.2 4"
6" 153. 1
r 167.5 5， (4 J Weak) :
4， - NH 8" 2.34 17.2 - また、 化合物 JK—2についても FAB— MS、 HR— FAB— MSでの 分析を行い、 分子量を測定するとともに、 推定分子式から請求項に記載した構造 式を推定した。 その結果を以下に示す。
JK-2 C48H63N2O10Cl (863) 本発明に係る化合物 J Kは、 例えば Actinomadura pelletieri IFM Q903(FERM BP- 7030 )によって生産される。
Actinomadura pelletieri IFM 0903株の菌学的性質は、 形態学的にはォ一トミ ール寒天培地（ I S P— 3)で培養した時、 ァクチノミセ一テス (Actinomycetes) の一種に見られる様な分岐した長い菌糸と気中菌糸体を有していた。 また、 培養 時間を長くすることによって、 桿菌様胞子が数個と気中菌糸断列および栄養菌糸 の断列が観察された。栄養菌糸断列も観察されたことから形態学的に Actinomadura 属に属するものと推定された。
各種培地での Actinomadura pelletieri IFM 0903株の培養的性質を下記表 3に 示した。 また、 生理生化学的性質については下記表 4に示した。
(表 3)
第 3表 Actinomadura pelletieri IFM 0903の培養的性質 培 地 特 性
I SP- 1 豊富な生育、 表面にしわ、 薄茶色
(トリプトン ·酵母エキス寒天） 気中菌糸無し、 茶色の可溶性色素生産
SP- 2 豊富な生育、 表面にしわ、 薄赤色
(イースト ·麦芽寒天） 気中菌糸無し、 茶褐色の可溶性色
SP-3 中程度の生育、 平滑な表面、 淡赤
(ォ一トミ一ル寒天） 色、 気中菌糸無し、 可溶性色素生産し ない
SP- 5 豊富な生育、 表面にしわ、 淡橙色
(グリセロール ·ァスパラギン寒天） 気中菌糸無し、 淡桃色の可溶性色
SP- 7 豊富な生育、 表面にしわ、 淡橙色 寒天） 気中菌糸無し、 淡桃色の可溶性色
BH 中程度生育、 表面にしわ、 無色
(ブレインハート 'インフュージョン寒天） 気中菌糸無し、 可溶性色素生産しない
NB 豊富な生育、 表面にしわ、 赤桃色
(ニュー卜リエント寒天） 気中菌糸無し、 濃赤色の可溶性 色素生産
(表 4 )
第 4表 Actinomadura pelletieri IFM 0903の生理生化学的性質 分解性
アデニン 陰性
カゼィン 陰性
ヒポキサンチン 陰性
チロシン 陰性
キサンチン 陰性
糖からの酸産生
ガラクトース 陰性
グルコース 陽性
イノシトール 陰性
ラムノース 陰性
マルト一ス 陰性
ァドニトール 陰性
ァラビノース 陰性
エリスリ トール 陰性
マンノース 陰性
ソルビトール 陰性 抗生物質に対する感受性
ィミぺネム 陽性
トブラマイシン 陽性
5 - F U 陽性
カナマイシン 陽性
ーラク夕マーゼ生産 陽性
4 5 °Cでの生育 生育する
本菌株を培地 （2 %グルコースを含むブレインハート 'インフュージョン） 中 で、 撹拌数 2 5 O rpmで 3 0 °C、 7 2時間振とう培養し、 培地中に生育した菌体を 遠心分離 （3 0 0 O rpmx 1 0分） で集め、 蒸留水で 2回洗浄した。 更に菌体をェ 夕ノールで洗い、 次いで真空乾燥し、 乾燥菌体とした。 この乾燥菌体の細胞壁の ァミノ酸組成、糖組成、脂質組成を Bergey' s Manual of Determinative Bacteriology 9th ed. , Willams, Balitmore, 1993に基づいて調べた。 アミノ酸分析の結果より メソ—ジアミノビメリン酸、 糖分析の結果よりマデュロースが検出された。 菌体 脂質成分であるイソプレノィ ド ·キノンは主たる成分として M K— 9 ( H 6 ) が 確認された。 また、 表 4に示したアデニン、 カゼイン、 ヒポキサンチン、 チロシ ンの資化性、 さらに糖からの酸の生成パターンから、 本菌株は Actinomadura pelletieriと同定された。 の様に本菌株は、 Actinomadura pelletieriに分類されるが、 化合物 J Kを生 産することで極めて特徴的であるので、 これを新菌株として Actinomadura pelletieri IFM 0903株と命名し、 産業技術総合研究所生命工学工業技術研究所に 国際寄託した （FERM BP- 7 0 3 0 )。 本発明に係る化合物 J Kは、 Actinomadura pelletieri IFM 0903株 (FERM BP- 7 0 3 0 )株によって生産されるほか、 Act inomadura属に属する他の菌株によって も生産されることが確認されており、 化合物 J Kの生産はこれらの微生物から X 線照射、 ァ線照射、 ナイ トロジェンマスタード、 N—メチル— N， —ニトロ一 N 一二トロソグァ二ジン、 2—ァミノプリン、 ェチルメタンスルホネート等の変異 剤処理により取得できる人工変異株ならびに自然変異株を含めて化合物 J Kを生 産しうるすベての変異株の使用も広く包含するものである。
本発明に係る一般式 （ 1 ) で示される新規化合物 J Kは、 化学合成法によって 製造できるほか、 上記のように微生物によっても製造することができる。
後者の場合、 本発明に係る一般式 （ 1 ) で示される新規化合物 J Kは、
Actinomadura属に属する該化合物生産菌、 例えば Act inomadura pelletieri IFM ◦903株が資化しうる炭素源及び窒素源を含む培地で培養して製造することが出来 るが、 好気的深部培養条件 （例えば振とう培養、 通気撹拌培養等） で生産せしめ ることが好ましい。
炭素源としては、 グルコース、 グリセロール、 シュ一クロース、 澱粉、 デキス トリンその他の炭水化物を使用することが好ましい。
窒素源としては、 オートミール、 イースト抽出物、 牛肉抽出物、 ツナ肉抽出物、 ペプトン、 グルテンミール、 綿実油、 大豆ミール、 コ一ンスティ一プリカ一、 乾 燥イースト、 小麦胚芽、 落花生粉、 チキン骨肉ミール等を使用するのが好ましい が、 アンモニゥム塩 （例えば、 硝酸アンモニゥム、 硫酸アンモニゥム、 リン酸ァ ンモニゥム等） 、 尿素、 アミノ酸等の無機及び有機の窒素化合物も有利に使用す ることが出来る。
これらの炭素源及び窒素源は併用することが有利であるが、 必ずしも純粋なも のを使用する必要はない。 純粋でないものには、 生長因子や微量要素が含まれて いるため、 これを使用することが望ましい為である。
必要ならば、 例えば炭酸ナトリウム、 炭酸カリウム、 リン酸ナトリウム、 リン 酸カリウム、 塩化ナトリウム、 塩ィ匕カリウム、 ヨウ化ナトリウム、 ヨウ化力リウ ム、 マグネシウム塩、 銅塩、 コノ レト塩等のような無機塩類を培地に添加するこ とが出来る。
必要ならば、 特に、 培地が発泡するのであれば、 流動パラフィン、 動物油、 植 物油、 鉱物油、 シリコン等の消泡剤を加えることが出来る。
目的物質を大量に工業生産するには、 他の発酵生産物の場合と同様に、 通気撹 拌培養するのが好ましい。 少量生産の場合は、 フラスコを用いる振とう培養が好 適である。
また、 培養を大きなタンクで行う場合、 化合物 J Κの生産工程において菌の生 育遅延を防止するため、 はじめに比較的少量の培地に生産菌を接種培養した後、 次に培養物を大きな生産タンクに移してそこで生産培養するのが好ましい。 この場合、 前培養に使用する培地及び生産培養に使用する培地の組成は、 両者 とも同一であってもよいし必要あれば両者を変えてもよい。 培養は、 通気撹拌条件で行うのが好ましく、 例えばプロペラやその他機械によ る撹拌、 フアーメン夕一の回転または振とう、 ポンプ処理、 空気の吹込み等既知 の方法が適宜使用される。 通気用の空気は滅菌しておくのが良い。
培養温度は、 化合物 J K生産菌が本物質を生産する範囲で適宜変更しうるが、 通常は 1 0〜4 0 °C；、 好ましくは 2 5〜3 5 °Cで培養するのがよい。
培養時間は、 培養条件や培養量によっても異なるが、 通常は約 1日〜 1週間で ある。
発酵終了後、 培養物から目的とする化合物 J Kを回収する。 すなわち、 菌体は、 直接水及び/又は有機溶媒による抽出、 あるいは、 これを機械的に又は超音波等 既知の手段を用いて破壊した後、 水及び Z又は有機溶媒で抽出し、 常法に従って 回収、 精製する。 培養液の場合は、 直接、 溶媒で抽出してもよいし、 また、 培養 液の濾過又は遠心分離後、 減圧濃縮、 凍結乾燥、 p H調節、 ァニオン又はカチォ ン交換樹脂、 活性炭、 粉末セルロース、 シリカゲル、 アルミナ、 吸着性樹脂等の 担体に接触させて化合物 J Kを吸着させた後、 これを担体から溶出すればよい。 回収、 精製方法としては、 抗生物質採取の際の常法が適宜利用され、 例えば、 水、 有機溶媒これらの混合溶媒による溶媒抽出；クロマトグラフィー；単一溶媒 又は混合溶媒からの再結晶等常法が適宜単独であるいは組合わせて使用できる。 化合物 J Kの回収、 精製は上記の様に既知の方法を適宜利用して行うが、 例え ば次の様にしてもよい。
先ず、培養物を遠心分離または M F膜で処理することによつて菌体を集めた後、 メタノールで抽出し、 この抽出画分を濃縮後、 更にジェチルエーテルで抽出する。 抽出画分を減圧濃縮し、 更にシリカゲルクロマトグラフィーに供し、 へキサン、 酢酸ェチルで段階的及び z又は連続的溶出操作を行い分画精製し減圧下で濃縮、 乾固し H P L C ( O D Sカラム） にて分画精製し濃縮、 乾固すればよい。 本発明化合物 J Kを医薬として投与する場合、 本発明化合物をそのまま又は医 薬的に許容される無毒性かつ不活性の担体中に、 例えば、 0 . 1 %〜9 9 . 5 % 好ましくは 0 . 5 %〜9 0 %含有する医薬組成物として投与される。 担体としては、 固形、 半固形、 又は液状の希釈剤充填剤、 及びその他の処方用 の助剤一種以上が用いられる。 医薬組成物は、 投与単位形態で投与することが望 ましい。本発明医薬組成物は、 経口投与、 組織内投与、 局所投与（経皮投与等）、 又は経直腸的に投与する事ができるが、 外用剤としても使用できる。 これらの投 与方法に適した剤型で投与されるのはもちろんである。
抗菌剤としての用量は、 年齢、 体重等の患者の状態、 投与経路、 病気の性質と 程度等を考慮した上で調整することが望ましいが、 通常は、 成人に対して本発明 の有効成分量として、 一日当たり、 1 0〜2 0 0 O mg範囲が一般的である。 場合 によっては、 これ以下で足りるし、 また逆にこれ以上の用量を必要とする事もあ る。 多量に投与するときは、 一日数回に分割して/又は連続的に投与することが 望ましい。なお本化合物 J Kを 1日当り 5 0 O mgラットに対して経口投与したが、 1 0日間経過後においても急性毒性は認められず、 安全性が認められた。 経口投与は固形又は液状の用量単位、 例えば、 末剤、 散剤、 錠剤、 糖衣剤、 力 プセル剤、 ドロップ剤、 舌下錠その他の剤型によって行う事ができる。
末剤は、 活性物質を適当な細かさにする事により製造される。 散剤は活性物質 を適当な細かさと成し、 次いで同様に細かくした医薬用担体、 例えば、 澱粉、 マ ンニト一ルの如き可食性炭水化物その他と混合することにより製造される。 必要 に応じて風味剤、 保存剤、 分散剤、 着色剤、 香料その他のものを混じても良い。 カプセル剤は、 まず粉末状となった末剤や散剤あるいは顆粒化したものを、 例 えばゼラチン力プセルのような力プセル外皮の中へ充填することにより製造され る。 滑沢剤や流動化剤、 例えばコロイ ド状のシリカ、 タルク、 ステアリン酸マグ ネシゥム、 ステアリン酸カルシウム、 固形のポリエチレングリコールの如きもの を粉末状態のものに混合し、 然るのちに充填操作を行う事もできる。 崩壊剤や可 溶化剤、 例えばカルボキシメチルセルロース、 炭酸カルシウム、 炭酸ナトリウム を添加すれば、カプセル剤が摂取された時の医薬の有効性を改善する事ができる。 また、 本品の微粉末を植物油、 ポリエチレングリコール、 グリセリン、 界面活 性剤中に懸濁分散し、 これをゼラチンシートで包んで軟カプセル剤とすることも できる。 錠剤は粉末混合物を作り、 顆粒化若しくはスラグ化し、 次いで崩壊剤又は滑 沢剤を加えたのち打錠することにより製造される。
粉末混合物は、 適当に粉末化された物質を上述の希釈剤やベースと混合し、 必 要に応じ結合剤（例えばカルボキシメチルセルロースナトリウム、 アルギン酸塩、 ゼラチン、 ポリビニルピロリ ドン、 ポリビニルアルコールなど） 、 溶解遅延化剤 (例えばパラフィンなど） 、 再吸収剤 （例えば四級塩） 及び/又は吸着剤 （例え ばベントナイ ト、 カオリン、 リン酸ジカルシウムなど） を併用してもよい。 粉末 混合物は、 まずシロップ、 でんぷん糊、 アラビアゴム、 セルロース溶液又は高分 子物質溶液などの結合剤で湿らせ、 次いで篩を強制通過させて顆粒とする事がで きる。 このように粉末を顆粒化するかわりに、 まず打錠機にかけたのち、 得られ る不完全な形態のスラグを破砕して顆粒にすることも可能である。
このようにして作られる顆粒は、滑沢剤としてステアリン酸、 ステアリン酸塩、 タルク、 ミネラルオイルその他を添加することにより、 互いに付着する事を防ぐ 事ができる。 このように滑沢化された混合物を次いで打錠する。 また薬物は、 上 述のように顆粒化ゃスラグ化の工程を経ることなく、 流動性の不活性担体と結合 したのちに直接打錠しても良い。 シェラックの密閉被膜からなる透明又は半透明 の保護被膜、 糖や高分子材料の被覆、 及びワックスよりなる磨上被覆の如きも用 いうる。
他の経口投与剤型、 例えば溶液、 シロップ、 エリキシルなどもまたその一定量 が含有するように用量単位形態とする事ができる。 シロップは、 化合物を適当な 香味化水溶液に溶解して製造され、 またェリキシルは非毒性のアルコール性担体 中に分散させることにより処方される。 可溶化剤や乳化剤 （例えばエトキシ化さ れたィソステアリルアルコール類、 ポリオキシエチレンソルビトールエステル類） 保存剤、 風味賦与剤 （例えばペパーミント油、 サッカリン） その他もまた必要に 応じて添加できる。
必要とあれば、 経口投与のための用量単位処方はマイクロカプセル化してもよ い。 該処方はまた被覆をしたり、 高分子 ·ワックス等中にうめ込んだりすること により作用時間の延長や持続放出をもたらす事もできる。
非経口的投与は、 皮下 ·筋肉内又は静脈内注射用としたところの液状用量単位 形態、 例えば溶液や懸濁剤の形態を用いることによって行いうる。 これらのもの は、 化合物の一定量を、 注射の目的に適合する非毒性の液状担体、 例えば、 水性 や油性の媒体に懸濁し又は溶解し、 次いで該懸濁液又は溶液を滅菌することによ り製造される。 あるいは化合物の一定量をパイアルにとり、 然るのち該バイアル とその内容物を滅菌し密閉しても良い。 投与直前に溶解又は混合するために、 粉 末又は凍結乾燥した有効成分に添えて、 予備的なバイアルや担体を準備しても良 レ、。 注射液を等張にするために非毒性の塩や塩溶液を添加しても良い。 さらに安 定剤、 保存剤、 乳化剤の如きものを併用する事もできる。 直腸投与は、 化合物を低融点の固体、 例えばポリエチレングリコール、 力力 ォ脂、 高級エステル類 （例えばパルミチン酸ミリスチルエステル） 及びそれらの 混合物を混じた座剤を用いることによって行いうる。 また、 外用剤として直接患 部に適用することも可能である。
以下、 本発明を実施例について更に詳しく説明するが、 本発明は実施例によつ て限定されるものではない。
実施例 1
( 1 ) 発酵生産
Actinomadura pelletieri IFM 0903株 (FERM BP- 7030 ) を 2%グルコース 添加 Brain Heart Infusion液体培地 (D if co社製） 25mlを 50ml容三角フラスコ に分注したものに接種し 30°C；、 72時間振とう培養した。 これを更に、 同培地 200mlを 500ml容の三角フラスコに分注したものに 2ml接種し、 同様の前培 養を行った。 この前培養液 （1. 5L) をグルコース 2 %、 肉エキス （和光純薬 株式会社） 0. 5%、 ポリペプトン P 1 0. 5%、 ポリペプトン （日本製薬株 式会社） 0. 5%、 塩化ナトリウム 0. 3%、 pH7. 0からなる生産培地 15 Lを入れた 2 OLタンク培養槽に接種し、 通気量毎分 15L、 攪拌数 200 rp m、 28°C、 90時間培養した。
(2) 回収精製
得られた培養物 15Lを濾布で濾過することにより菌体を回収した。 菌体にメ 夕ノール 3 Lを加え抽出操作を行い、 この抽出液をエバポレー夕一で濃縮した。 濃縮液に蒸留水 300mlを加え、 酢酸ェチル 1 Lで 3回分配抽出をした。 酢酸ェ チル層 （3L) をェパポレー夕一で濃縮、 乾固し、 シリカゲルカラムクロマトグ ラフィ一に供した（カラムサイズ； 3cmx 20cm)。 n—へキサン、酢酸ェチル 4 0 : 1、 20 : 1、 5 ： 1各 1 Lで段階的に溶出した。 その後、 分取逆相 HPL Cにより精製した。 溶出画分中の J Kの検出は Micrococcus luteusを使用したぺ 一パーデイスク法により測定し、 活性画分を各々回収しエバポレー夕一で濃縮、 乾固して化合物 JK— 1、 ー2をそれぞれ13 、 3. 5mgの精製標品とし て得た。
実施例 2
(細胞毒性）
ヒト由来の培養腫瘍細胞株である HL— 60と L 1210の 2種に対する化合 物 J Kの細胞毒性を以下のように測定した。 化合物 JK— 1、 J K一 2各々をメタノールに溶解後、 各培地を用いて段階 希釈を行うことで種々の濃度の J K液を調製した。 リンパ球癌細胞である HL— 60、 L 1210は、 RPMI 1640培地 （ 10%牛血清を含む） でそれぞれ 細胞懸濁液 （5x 104個/ ml) を調製した。 J K液 20〃 1と細胞懸濁液 180 /1を 96穴マイクロプレートに分注し、 5%C02、 95%空気の湿潤環境下、 37°Cで培養した。 72時間後、 3— (4, 5—ジメチルチアゾ一ル—2—ィル） —2， 5—ジフエニルテトラゾリゥムブロマイ ド （MTT) を用いた色素定量法 により細胞の生育を測定した。 すなわち、 2mg/ml MTT溶液を 20 /1ずつ各 ゥエルに添加し、 4時間、 37°Cで培養した後、 細胞内に形成しているホルマザ ン結晶を、 50%ジメチルホルムアミ ド溶液で作成した 20%ドデシル硫酸ナト リウム溶液を 50 /1加え溶解し、 マイクロプレート吸光光度計 （ィムノリーダ 一） を用いて 570腿における吸光度を測定して生育の指標とした。 以下の式よ り生育抑制率を算出し検体濃度と抑制率の関係から 50%生育阻害する検体濃度 ( I C5e値） を求めた。
抑制率 （％) = ( 1—Q) X 100
但し Q =被検体を添加した場合の吸光度/被検体未添加の場合の吸光度 その結果、 リンパ球癌細胞に対し化合物 J K— 1及び J K一 2の I C5。値は> 1 00〃g/mlと全く細胞毒性を示さなかった。
実施例 3
(抗菌活性）
JK— 1の抗菌活性は、 以下のようにして最小発育阻止濃度 （MIC) を測定 した。
各種微生物に対する J Kの MI C値を日本化学療法学会の規定に基づき （抗生 物質大要第 4版 東京大学出版会 1992 )、 0. 2%グルコースを含むミュラ —ヒントン培地で行った。 J K— 1はメタノールに溶解後、 上記培地を用いて希釈し 1 mg/ml濃度から 2倍 希釈を繰り返し調製した。被検菌は上記培地で 1 X 1 06/mlに調製し被検菌液と した。 J K液 2 0〃1と被検菌液 1 8 0〃1を 9 6穴マイクロプレートに分注し、 3 7 °Cで培養した。 2 4時間目の生育の可否を目視によって確認し M l。値を算 出した。 得られた結果を下記表 5、 表 6に示す。
(表 5 )
第 5表 J K _ 1の抗菌活性 被検菌 MIC values ( yizg/ml )
Nocardia asteroides 0.05
Gordon l a bronchial is 0.39
Staphylococcus aureus 209P 0.05
MRSA 0.05
Bacillus subtil is PCI 189 0.39
Micrococcus luteus 0.05
Corynebacterium xerosis 0.025
Escherichia coli NIH JC-2 >100
Aspergillus niger >100
Candida ar leans >100 (表 6 )
第 6表 J K— 1、 2の抗 M R S A活性
MIC values ( g/ml )
被検菌 JK-1 JK-2 b
S-l 0.78 0.78 >100 >100 6.25
S-2 0.39 0.78 12.5 >100 3.13
S-3 0.39 0.39 .100 .100 1.56
S-4 0.2 0.39 ►100 > 100 1.56
S-5 0.2 0.2 ►100 > 100 1.56
3666 0.2 0.2 .100 > 100 1.56
3667 0.2 0.2 -100 >100 3.13
3668 0.2 0.2 >100 > 100 1.56
3669 0.2 0.2 .100 .100 0.78
3670 1.56 0.78 > 100 > 100 0.78
3671 0.1 0.2 > 100 > 100 0.78 a: erythromycin b:penicilin-G c : vancomycin その結果、 J K— 1はグラム陽性菌に対して M I C値 0 . 0 2 5〜0 . 3 9g/mlと強い抗菌力を示した。 一方、 グラム陰性菌および真菌類には抗菌力を示 さなかった。グラム陽性菌中、特に臨床上問題となっている Staphylococcus aureus (黄色ブドウ球菌） とその薬剤多剤耐性菌である MRS A間で MI C値に差が認 められなかった （表 5) 。 そこで新鮮臨床分離 MRS A株 11種について JK— 1と上巿 3種薬剤間での抗菌力の比較を行った結果、 MRS Aの特効薬である vancomycinにくらべ JK— 1は約 6倍強い抗菌力を示した （表 6) 。
実施例 4
(製剤化）
(1)実施例 1で製造した化合物 JK 20g、 （2)ラクトース 80g、 (3) コーンスターチ 30 g、 （4) ステアリン酸マグネシウム 2 gを原料として、 錠 剤を製造した。 すなわち、 （1) 、 （2)及び （3) (但し 15 g) を混合し、 (3) (但し 5g) と （4) を加えてよく混合し、 この混合物を圧縮錠剤機によ り圧縮し、 1錠当たり有効成分（1)を 25mg含有する錠剤 800個を製造した。 発明の効果
本発明は、化合物 J Kを提供するものであるが、 本化合物は新規物質であって、 すぐれた生理活性を有し、 例えば院内感染等で最近特に問題となっている MRS A等抗生物質耐性菌に対して有効な （バンコマイシンよりも有効な） 抗菌剤その 他各種の抗菌剤等として各種の医薬品に利用することができる。 規則第 13規則の 2の寄託された微生物への言及 1. Actinomadura pelletieri I F M 0903
ィ 当該微生物を寄託した寄託機関の名称及びあて名
名 称 産業技術総合研究所生命工学工業技術研究所 あて名 〒305— 0046 曰本国茨城県つくば巿東 1丁目 1番 3号 口 ィの寄託機関に寄託した日付
平成 12年 （2000年） 2月 1 5日
ハ ィの寄託機関が寄託について付した受託番号
FERM BP— 7030

Claims

請求の範囲
1. 下記化 1に示される一般式 （ 1 ) を有する化合物 J K又はその医薬的 に許容される塩
(式中、 Rは H又
Figure imgf000027_0001
2. 一般式 （1) において Rが— CH3で示されるものであることを特徴とす る請求項 1に記載の化合物 J K— 1。
3. 一般式 （1) において Rが Hで示されるものであることを特徴とする請 求項 1に記載の化合物 J K一 2。
4. 1〜 3項のいずれか 1項に記載の化合物を有効成分とする抗菌剤。
5. 抗菌剤が抗 MRS A (メチシリン耐性黄色ブドウ状球菌） 活性を有するも のであることを特徴とする 4項に記載の抗菌剤。
6. 1〜 3項のいずれか 1項に記載される 1以上の化合物を生産する能力を有 する新規 Actinomadura pelletieri IFM 0903 (FERM BP- 7030 )。
7. Actinomadura属に属し、 1〜 3項のいずれか 1項に記載の化合物を産生 する菌株を培養し、 培養物より該化合物を採取することを特徴とする 1〜 3項の いずれか 1項に記載の化合物またはその塩の製造法。
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