WO2002000255A1 - Remedies for cancer - Google Patents

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Minoru Ikeda
Takashi Ono
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Definitions

  • the present invention relates to an X-type s P LA 2 preventing cancer comprising as an active ingredient (secreted P LA 2) inhibitor or therapeutic agent.
  • the present inventors using an anti-type X s P LA 2 antibody, examined the expression of type X s PLA 2 in each pathological tissue, it was confirmed that the X-type s P LA 2 is highly expressed in cancerous tissue in performing immunohistochemical analysis of c cancer tissue, firstly, the slide made from healthy adult tissues and cancer patients from the cancer tissues, the anti-X-type s PLA 2 antibody was added and allowed to react for several hours. Then, by means of a label or the like, the expression of type X s P LA 2 visualized to detect the X-type s PLA 2 signals were examined the expression of type X s P LA 2 in the tissue. As a result, the slide made from cancerous tissue, X-type s P LA 2 signal was detected, and had us in cancer tissue, suggesting that type X s P LA 2 is highly expressed.
  • the present invention provides preventive or therapeutic agent for cancer comprising as active ingredient I) X-type s P LA 2 inhibitors,.
  • ring A is a ring represented by the following (a) to (d)
  • 1 1 Oyobi 1 2 are each independently a hydrogen atom, non-interfering substituents or a (L 1) i (acidic group) (wherein, L 1 is a linking group with an acidic group And the length of the linking group to the acidic group is 1 to 5. However, one of R 1 and R 2 is one (L 1 ) one (acidic group);
  • R 3 and R 4 are each independently substituted with a hydrogen atom, a non-interfering substituent, a carbocyclic group, a carbon group substituted with a non-interfering substituent, a heterocyclic group, or a non-interfering substituent. Heterocyclic group);
  • One B— is a group represented by the following (e) to (h):
  • R 5 is (j) CI—C 20 alkyl, C 2 —C 20 alkenyl, C 2 —C 20 alkynyl, carbocyclic group or heterocyclic group, (k) 1 or more, or A group represented by (j), independently substituted by a group selected from non-interfering substituents, or — (L 2 ) —R 8 (where L 2 is a hydrogen atom, a nitrogen atom, a carbon atom A divalent linking group of 1 to 18 atoms selected from, an oxygen atom and a sulfur atom; R 8 is a group selected from (j) or (k));
  • R 6 is a hydrogen atom, halogen, CI—C 3 alkyl, C 3—C 4 cycloalkyl, C 3—C 4 cycloalkenyl, C 1—C 3 alkyloxy, or C 1—C 3 alkylthio;
  • R 7 is a hydrogen atom or a non-interfering substituent
  • RA is the formula
  • R 9 and R 1 ° each independently represent a hydrogen atom, C 1 -C 3 alkyl, or halogen
  • X and ⁇ each independently represent an oxygen or sulfur atom
  • ⁇ is a group represented by ⁇ 2 or ⁇ 2 );
  • R B is one CONH 2 or one CONHNH 2 ;
  • Ring D is a cyclohexene ring or a benzene ring
  • a prodrug thereof, or a pharmaceutically acceptable salt thereof, or a solvate thereof as a prophylactic or therapeutic agent for cancer.
  • R 1 is a hydrogen atom or one (L 3 ) —R 11 (where L 3 is one O CH 2 —, one S CH 2 —, one NH—CH 2 —, — CH 2 — CH 2 — ,-0-CH (CH 3 ) one or one O— CH (CH 2 CH 2 C 6 H 5 ) one, R 11 is one C OOH, one CONH S 0 2 C 6 H 5 , one S 0 3 H Or one P (0) (OH) 2 );
  • R 2 is a hydrogen atom or — (L 4 ) —R 12 (where L 4 is a formula:
  • R 13 and R 14 are each independently a hydrogen atom, CI—C 10 alkyl--1-10 aralkyl, carbonyl, alkyloxycarbonyl, or halogen), and 1 12 is 0011 one S 0 3 H or a P (0) (0 H) 2),; provided that - R 1 and R 2 are the compounds of II), wherein at the same time not a hydrogen atom), a prodrug or thereof,
  • An agent for preventing or treating cancer comprising a pharmaceutically acceptable salt or a solvate thereof as an active ingredient.
  • a prophylactic or therapeutic agent for cancer comprising as an active ingredient a compound described above, a prodrug thereof, or a pharmaceutically acceptable salt thereof, or a solvate thereof.
  • R 16 and R 17 are each independently halogen, C 1 -C 10 alkyl A group independently selected from C 1 -C 10 alkyloxy, C 1 -C 10 alkylthio, aryloxy, and C 1 -C 10 haloalkyl, a is an oxygen atom or a sulfur atom, and> 6 is —CH 2 — Or one (CH 2 ) 2 —, where a is an oxygen or sulfur atom, c, i, and P are integers from 0 to 5, e is an integer from 0 to Ma, g is an integer from 0 to 4, k and n are The compound according to any one of II) to IV), which is a group independently represented by an integer of 0 to 3), a prodrug thereof, or a pharmaceutically acceptable salt thereof, or a solvate thereof.
  • a prophylactic or therapeutic agent for cancer is a group independently represented by an integer of 0 to 3
  • R 19 is a hydrogen atom, C 1 -C 37 alkyl, or halogen; E is a single bond, 1 CH 2 — or —0—) Or a prodrug thereof, or a pharmaceutically acceptable salt thereof, or a solvate thereof, as an active ingredient.
  • XII The cancer according to any one of I) to XI), wherein the cancer is colon cancer, lung cancer, liver cancer, stomach cancer, kidney cancer, gallbladder cancer, prostate cancer, Tengler cancer, testicular cancer, ovarian cancer, or skin cancer. Prophylactic or therapeutic agent.
  • XI I The preventive or therapeutic agent for cancer according to any one of I) to XI), wherein the cancer is colorectal cancer.
  • XIV) is a compound of any pharmaceutical use of the X-type s PLA 2 inhibitor for the manufacture of a c XV) X-type s P LA 2 inhibitor II) ⁇ xi) for treating cancer XIV ) Use of the description.
  • XV I an amount indicating the therapeutic effect of the X-type s P LA 2 inhibitors comprising administering to a mammal, including a human, a method of treating a mammal to alleviate the effects of cancer.
  • XV II The method for treating a mammal according to XVI), wherein the X-type s PLA 2 inhibitor is the compound according to any one of II) to XI).
  • the present invention will be described in detail.
  • the X-type s PLA 2 inhibitor refers to a compound having an X-type s PLA 2 inhibitory action, X-type s PLA 2 inhibitory action other than the action (e.g., inhibition of other enzymes, against the receptor affinity Action). That is, in the test for evaluating the X-type s P LA 2 inhibitory activity, than a compound not having the X-type s PLA 2 inhibitory action, if X type s P LA 2 inhibitory action is stronger compounds, in the sense that particularly limited Absent.
  • a compound having an X-type s PLA 2 selective inhibitory activity are preferred.
  • X-type s PLA 2 inhibitory activity the experiments as described in Example 2, IC 50 the following compounds 1 ⁇ M news, IC 50 is preferably the following compound Iotaomikuron'omikuron'itamyu.
  • X-type s P LA 2 inhibitors i.e. compounds having an X-type s PLA 2 inhibitory action, if it has one or more chiral centers may exist in optically active.
  • the compound contains an alkenyl or alkenylene, the potential for cis and trans isomers exists.
  • R- and S-isomers, cis and trans variants Mixtures of R- and S-isomers, including mixtures of racemates and racemic mixtures, are within the scope of the invention.
  • Asymmetric carbon atoms can also be present in substituents, such as alkyl groups. All such isomers are included in the present invention, as are their mixtures.
  • the starting material with pre-resolved asymmetric centers can be prepared by methods known to those skilled in the art of subjecting to a stereospecific reaction, or a mixture of stereoisomers. And then dividing by a known method.
  • Prodrugs are derivatives of the compounds having the X-type s PLA 2 inhibitory action having chemically or metabolically decomposable group capable, the pharmaceutically active compound in vivo by solvolysis or under physiological conditions Compound.
  • Derivatives of the compounds are active in both acid and base derivatives, but acid derivatives are advantageous in solubility, tissue binding and controlled release in mammalian organisms (Bungard, H., Desinof Prodrugrugs). pp. 7-9, 21-24, Elsevier, Amsterdam 1980).
  • acid derivatives include an ester produced by reacting a base acidic compound with a suitable alcohol, or an acidic derivative such as an amide prepared by reacting a base acidic compound with a suitable amine.
  • Prodrugs are well known to those skilled in the art.
  • Simple aliphatic or aromatic esters derived from the acidic groups possessed by the compounds are preferred prodrugs. More preferably, it is a CI—C 6 alkyl ester of an acidic group (eg, a methyl ester or an ethyl ester). In some cases, double ester-type prodrugs such as (acyloxy) alkyl esters or ((alkoxycarbonyl) oxy) alkyl esters can be prepared.
  • Typical pharmaceutically acceptable salts include lithium, sodium, potassium, calcium, magnesium, aluminum, and other salts. And salts of lithium metal and alkaline earth metal. Salts are conveniently prepared from the free acid by treating the acid in solution with a base or contacting the acid with an ion exchange resin.
  • a relatively non-toxic addition salt of a compound having an X-type sPLA 2 inhibitory action with an inorganic base and an organic base for example, an amine cation derived from a nitrogen base having sufficient basicity to form a salt with the compound;
  • Ammonium and quaternary ammonium are included in the definition of pharmaceutically acceptable salts (eg, S. M. Berge et al., "Jharma ceutical Salts," J. Phar. Sci., 66, 1-19 (1977)).
  • Solvates include solvates with organic solvents and / or water. When forming a hydrate, it may be coordinated with any number of water molecules.
  • pharmaceutically acceptable means compatible with the other ingredients in the formulation and not harmful to the recipient.
  • Cancer means various malignant tumors originating from epithelial tissues at various sites, for example, colorectal cancer, lung cancer, liver cancer, stomach cancer, kidney cancer, gallbladder cancer, prostate cancer, tengular cancer, testis cancer, Ovarian, skin, esophageal, laryngeal, breast or uterine cancer.
  • the present inventors have colorectal cancer, lung cancer, liver cancer, stomach cancer, kidney cancer, gallbladder cancer, prostate cancer, ⁇ cancer, testicular cancer, X-type s PLA 2 in ovarian cancer or skin cancer cancer tissues, highly expressed Has been confirmed in experiments, especially for the prevention or treatment of colon cancer, lung cancer, liver cancer, stomach cancer, muscle cancer, gallbladder cancer, prostate cancer, prostate cancer, Tengler cancer, testicular cancer, ovarian cancer, or skin cancer In this, the present invention is useful.
  • alkyl as used herein, alone or in combination with other terms, refers to a straight or branched chain monovalent hydrocarbon radical having the specified number of carbon atoms. I do.
  • alkenyl used alone or in combination with other terms, refers to a straight or branched chain having the specified number of carbon atoms and one or more double bonds. It means a branched monovalent hydrocarbon group.
  • vinyl, aryl, propenyl, crotonyl, isopentenyl, various butenyl isomers and the like can be mentioned.
  • alkynyl refers to a straight or branched monovalent hydrocarbon group having the specified number of carbon atoms and one or more triple bonds. It may have a double bond. For example, ethynyl, propynyl, 6-heptynyl, alkynyl, 8-nonyl and the like can be mentioned.
  • carbocyclic group means a saturated or unsaturated, substituted or unsubstituted, atom forming ⁇ is only a carbon atom except a hydrogen atom.
  • To 14-membered ring preferably 5- to 10-membered ring, more preferably 5- to 7-membered ring It means a group derived from a skeleton. Also included are those in which two or three of the above carbocycles are continuous.
  • carbocyclic groups include cycloalkyl (eg, cyclopropyl, cyclobutyl, cyclopentyl, cyclohexyl, cycloheptyl, and cyclooctyl), cycloalkenyl (cyclobutenyl, cyclopentenyl, cyclohexenyl, cycloheptenyl) , And cyclooctenyl), phenyl, naphthyl, norpoluel, bicyclohepgenyl, indenyl, stilbenyl, terphenyl, phenylcyclohexenyl, acenaphthyl, anthryl, biphenylyl, bibenzylyl, and formula (II):
  • cycloalkyl eg, cyclopropyl, cyclobutyl, cyclopentyl, cyclohexyl, cycloheptyl, and
  • heterocyclic group refers to a monocyclic or polycyclic, saturated or unsaturated, 1 to 3 atom selected from the group consisting of a nitrogen atom, an oxygen atom, and a sulfur atom.
  • R 16 and R 17 are each independently halogen, C 1 -C 10 alkyl, C 1 -C 10 alkyloxy, C 1 -C 10 alkylthio, Aryloxy, and a group independently selected from C 1 -C 10 haloalkyl, ⁇ is an oxygen atom or a sulfur atom,? Is —CH 2 — or 1 (CH 2 ) 2 —, ⁇ is an oxygen atom or a sulfur atom, ci and p are preferably integers of 0 to 5, e is an integer of 0 to 7, g is an integer of 04, and k and n are each independently an integer of 03.
  • a plurality of R 16 and a plurality of R 17 may be different from each other.
  • R 16 is a substituent of a naphthyl group, it can be substituted at any position on the naphthyl group.
  • R 19 is a hydrogen atom, C 1 -C 3 alkyl, or halogen; E is a single bond, — CH 2 — or 1 0 —: 5 is one CH 2 — or one (CH 2 ) 2 —) And the group represented by
  • R 5 is the above “carbocyclic” C 1 —C 3 alkyl and the above “heterocyclic” C 1-C3 alkyl is preferred.
  • non-interfering substituent means the above-mentioned “carbocyclic group", “heterocyclic group” and groups suitable as substituents of the basic skeleton.
  • C1-C6 alkylamino eg, aminoamino and ethyloxyaminocarbonyl
  • mono- or di-C1-C6 alkylamino eg, methylamino, ethylamino, dimethylamino, and ethylmethylamino
  • C1-C10 alkylthio C1-C6 6 alkylthiocarbonyl (eg, methylthiocarbonyl and ethylthiocarbonyl)
  • C 1 -C 6 alkylsulfinyl eg, methylsulfinyl and ethylsulfinyl
  • C 1 -C 6 alkylsulfonyl eg, methylsulfonyl and ethylsulfonyl
  • C2-C6 haloalkyloxy for example, 2-chloroethyloxy and 2-bromoethyloxy, C 1 -C
  • C 00 H e.g., carboxymethyl Kishimechiru, Karubokishechiru, and carboxypropyl
  • Shiano Shiano Guanijino , Guanijino, hydrazide
  • human Dorajino hydroxy, hydroxy ⁇ amino, nitro, phosphono, - S 0 3 H, thioacetal, Chio carbonyl, C 1 - C 6 carbonyl carbon ⁇ , complex ⁇ and the like.
  • substituents selected from the group consisting of C 1 -C 6 alkyl, C 1 -C 6 alkyloxy, C 2 -C 6 haloalkyloxy, C 1 -C 6 haloalkyl, and halogen. It may be substituted.
  • R 3 , R 4 , and the non-interfering substituent of the “substituted by non-interfering substituent” of R 5 include halogen, C 1 -C 6 alkyl, C 1 -C 6 alkyloxy, C Preferred are C 1 -C 6 alkylthio and C 1 -C 6 haloalkyl. More preferably, there can be mentioned, for example, rho, logen, C 1 -C 3 alkyl, C 1 -C 3 alkyloxy, CI—C 3 alkylthio, and C 1 -C 3 haloalkyl.
  • Non-interfering substituents on RR 2 , R 3 , and R 4 , and R 7 include C 1 -C 6 alkyl, aralkyl, C 1 -C 6 alkyloxy, C 1 -C 6 alkylthio, C 1 — C 6 hydroxyalkyl, C 2 -C 6 haloalkyloxy, rho, logen, carboxy, C 11 -C 6 alkyloxycarbonyl, aryloxy, arylthio, carbocyclic or heterocyclic groups are preferred. More preferably, C 1 -C 6 alkyl, aralkyl, carboxy, C 1 -C 6 hydroxyalkyl, phenyl, or C 1 -C 6 alkyloxycarbonyl is exemplified.
  • halogen means fluorine, chlorine, bromine, and iodine.
  • cycloalkyl refers to a cyclic monovalent hydrocarbon group having the specified number of carbon atoms. Examples include cyclopropyl, cyclobutyl, cyclopentyl, cyclohexyl, cycloheptyl, cyclooctyl, etc. I can do it.
  • cycloalkenyl refers to a cyclic monovalent hydrocarbon group having the specified number of carbon atoms and one or more double bonds.
  • alkyloxy examples include methyloxy, ethyloxy, n-propyloxy, isopropyloxy, n-butyloxy, n-pentyloxy, n-hexyloxy and the like.
  • alkylthio includes, for example, methylthio, ethylthio, n-propylthio, isopropylthio, n-butylthio, n-pentylthio, n-hexylthio and the like.
  • the term “acidic group” refers to a group that, when attached to the basic skeleton via an appropriate linking atom (hereinafter defined as a “linking group to an acidic group”), enables hydrogen bonding
  • an organic group that acts as a proton donor For example, the formula:
  • R 2 1 is hydrogen atom, a metal or C 1-C 1 0 alkyl, R 2 2 it it independently represent a hydrogen atom or a C 1 one C 1 0 alkyl, provided that R 2 1 and R 2 2, If the acidic groups to be closed together, one at least of R 2 1 and R 2 2 is represented by a hydrogen atom) Groups.
  • a C OOH one S 0 3 H, - C ONHS 0 2 C 6 H 5 or P (0), (OH) 2 and the like. More preferably, one COOH is used.
  • linking group to an acidic group means a divalent linking group represented by-(L 1 ), and in an ordinary relationship, connects the "acidic group” to the basic skeleton. Play a role.
  • L 1 divalent linking group represented by-(L 1 )
  • R 23 and R 24 are each independently a hydrogen atom, C 1 -C 10 alkyl, aryl , Aralkyl, carboxy, or halogen), and the formula:
  • R 13 and R 14 are each independently a hydrogen atom, C 1 -C 10 alkyl, 01- ⁇ 10 aralkyl, carboxy, alkyloxycarbonyl, or halogen).
  • the term “length of the linking group to the acidic group” refers to the number of atoms in the shortest chain of the linking group (L 1 ) that connects the basic skeleton and the “acidic group” (excluding hydrogen atoms) If there is a carbocycle in one (L 1 ), it is counted as a number of atoms approximately equal to the calculated diameter of the carbocycle. Therefore, the number of benzene rings and cyclohexane rings in the linking group to the acidic group is counted as one (L is 2 atoms in length. The preferred length is 2 to 3.
  • haloalkyl means the above “alkyl” substituted by the above “halogen” at an arbitrary position.
  • chloromethyl, trifluoromethyl, 2-chloroethyl, 2-bromoethyl and the like can be mentioned.
  • hydroxyalkyl means the above “alkyl” substituted at any position by hydroxy.
  • hydroxymethyl 2-hydroxyethyl, 3-hydroxypropyl and the like can be mentioned. Hydroxymethyl is preferred.
  • haloalkyl of “haloalkyloxy” has the same meaning as described above.
  • 2-chloroethyloxy, 2-trifluoroethyloxy, 2-chloroethyloxy and the like can be mentioned.
  • aryl means a monocyclic or condensed cyclic aromatic hydrocarbon.
  • phenyl, 1-naphthyl, 2-naphthyl, anthryl and the like can be mentioned.
  • phenyl and 1-naphthyl are preferred.
  • the “aralkyl” is the above “alkyl” replaced by the above “aryl”, and these may be bonded at all substitutable positions.
  • benzyl, phenyl, phenylpropyl (for example, 3-phenylpropyl), naphthylmethyl (for example, 1-naphthylmethyl) and the like can be mentioned.
  • alkyloxycarbonyl includes, for example, methyloxypropyl, n-propoxycarbonyl, and the like.
  • aryloxy includes phenyloxy and the like.
  • examples of “arylthio” include phenylthio and the like.
  • halophenyl includes phenyl substituted by one or more of the above “halogen”. Examples thereof include fluorophenyl, cyclophenyl, bromophenyl, rhophenyl, difluorophenyl, dichlorophenyl, dibromophenyl, trifluorophenyl, trichlorophenyl, tribromophenyl, cyclobromophenyl, and bromochlorophenyl.
  • cyclohexene ring j in ring D means a cyclohexene ring having only one double bond in a condensed portion with an adjacent ring in ⁇ .
  • Preferred combinations of the ring A and —B— are the combinations represented by the following (m) to (r).
  • X-type s PLA 2 inhibitors may be used a known X-type s PLA 2 inhibitors.
  • EP-6 202 1 4 Japanese Patent Laid-Open No. 7-0 1 0838 US-5 5 78 6 34
  • EP-6202 15 JP-A-7-025850, US-5684403
  • EP-675 5110 JP-A-7-285933, US-56564326
  • W09 6/0 3 12 0 Japanese Patent Application Laid-Open No. 10-0505533 6
  • WO 9 6/03 37 6 Japanese Patent Application Laid-Open No.
  • I 1 , R 2 , R 3 , and R 4 are each independently a hydrogen atom, a non-interfering substituent, etc.
  • R 5 is a carbocyclic group, a heterocyclic group, etc.
  • R 6 is hydrogen.
  • R B is a compound shown by a CONH 2, etc.
  • the prophylactic or therapeutic agent for cancer of the present invention can be administered orally, It can be administered by a variety of routes, including sol, rectal, transdermal, subcutaneous, intravenous, intramuscular, intranasal, etc.
  • Formulations of the invention combine a therapeutically effective amount of the compound with a pharmaceutically acceptable carrier or diluent. (For example, by mixing)
  • the formulations of the present invention are prepared by known procedures using well-known, readily available ingredients.
  • the active ingredient may be mixed with a carrier or diluted with a carrier or placed in a carrier which may be in the form of a capsule, sash, paper, or other container.
  • a carrier acts as a diluent
  • the carrier is a solid, semi-solid, or liquid material that acts as a vehicle, which is a tablet, pill, powder, buccal, elixir, suspension, emulsion, solution. It can be in the form of a syrup, aerosol (solid in liquid medium), ointment and contains, for example, up to 10% of the active compound.
  • the compound having a prophylactic or therapeutic effect on cancer of the present invention is formulated before administration. Preferably.
  • the carrier is a solid, liquid, or mixture of a solid and a liquid.
  • the carrier is a solid, liquid, or mixture of a solid and a liquid.
  • Solid formulations include powders, tablets and capsules.
  • a solid carrier is one or more substances that also serve as ingredients for flavoring, lubricants, dissolving agents, suspending agents, binders, tablet disintegrants, and capsules.
  • Tablets for oral administration include calcium carbonate, sodium carbonate, and disintegrants such as corn starch and alginic acid, and / or binders such as gelatin and acacia, and lubricants such as magnesium stearate, stearic acid, and talc. Contains suitable excipients such as lactose and calcium phosphate.
  • the carrier is a finely divided solid, which is in a mixture with the finely divided active component.
  • the active component is mixed with the carrier having the necessary binding properties in suitable proportions and compacted in the shape and size desired.
  • Powders and tablets contain from about 1 to about 99% by weight of the active ingredient, a novel compound of the present invention.
  • Suitable solid carriers are magnesium carbonate, magnesium stearate, talc, sugar, lactose, pectin, dextrin, starch, gelatin, tragacanth, methyl cellulose, sodium carboxymethyl cellulose, low melting wax, cocoa powder. .
  • Sterile liquid preparations include suspensions, emulsions, syrups, and elixirs.
  • the active ingredient can be dissolved or suspended in a pharmaceutically acceptable progeny such as sterile water, sterile organic solvent, or a mixture of both.
  • the active ingredient often can be dissolved in a suitable organic solvent, for example, aqueous propylene glycol.
  • suitable organic solvent for example, aqueous propylene glycol.
  • Other compositions can be prepared by dispersing the finely divided active component in aqueous starch, sodium carboxymethyl cellulose solution, or in a suitable oil. Dosages will vary depending on disease state, route of administration, patient age, or body weight, but are usually between 0.01 and 1 Omg / lig / h when given intravenously to adults. Preferably, it is 0.1 to lmg / kg / hr.
  • Human type X sPLA 2 co one de to cDNA sequence (Cupillard etc., J. Biol. Chem, 1997, 272, 15745- 15752) , and a base Kuta one expression for animal cell pSVL SV40 Late Promoter Expression Vector (Amersnam The promoter of Pharmacia Biotech (E) was inserted forward into the basin.
  • the resulting expression vector using LipofectAMINE reagent (Gibco BRL Co.) was transflector Ekushi Yon according to the instructions in the host cell CHO, a human type X sPLA 2 was obtained CHO cells stably expressing.
  • the expressing cells were cultured in ⁇ -II medium containing 10% fetal calf serum for 3 days, and the culture supernatant was used for measurement of enzyme activity.
  • test compound or solvent plank
  • Tris buffer 25 mM, pH 7.5
  • CaCl 2 10 mM
  • KCl 100 mM
  • ⁇ serum albumin 1.0 mg / ml
  • Triton-X 100 0.3 mM
  • 5,5'-dithiobis (2- Presence of nitrobenzoic acid) 125 i M
  • the Jihepu evening Noiruchio PC LMM
  • human type X sPLA 2 with the reaction (15/1 / Ueru at 40 ° C, 30 minutes) is the absorbance variations at 405nm
  • the activity was measured and the inhibitory activity was calculated.
  • IC 5 was determined by plotting the log concentrations of the compounds (1) to (19) against inhibition values in the range of 10% to 90% inhibition.
  • bovine serum albumin in including PBS, anti-X type sPLA 2 antibody (6 U g / mL) and 14 hours, the mixture was reacted at 4 ° C. After washing with PBS, the cells were reacted with a goat anti-Peacock IgG antibody conjugated with biotin for 30 minutes, and treated with a peroxidase-labeled avidin-biotin complex reagent (Vector Laboratories).
  • a positive signal is X-type sPLA 2
  • is hardly detected in normal colon tissues was detected strongly in cancer cells of colon adenocarcinoma tissues.
  • These signals it was confirmed to be specific to type X sPLA 2 since disappeared by the addition of X-type S PLA 2 protein.
  • these positive signals were not observed in IgG prepared from non-immunized egrets.
  • colorectal cancer suggested that X-type sPLA 2 protein is significantly high expression.
  • the cells were reacted with a goat anti-Peacock IgG antibody conjugated with biotin for 30 minutes, and treated with a peroxidase-labeled avidin-biotin complex reagent (Vector Laboratories). After washing, 200 i 50 mmol / L Tris -HCl (pH 7.6) containing Jiamino base Njijin and 0.006% H 2 0 2 in glmL by reaction for 10 minutes in buffer and colored the Peruokishida Ichizekatsu tissue X-type sPLA 2 in the specimen was visualized. Cell nuclei were counterstained by reaction with a 0.4% aqueous solution of methoxylin.
  • X-type S PLA 2 positive signal was detected as deposits diaminobenzidine den dark brown. Neutralization experiments of X-type sPLA 2 signal, prior to the addition of antibody to slide, purified Type X sPLA 2 protein (60 glmL) For 2 hours.
  • the cells were reacted with a goat anti-Peacock IgG antibody conjugated with biotin for 30 minutes, and treated with a peroxidase-containing avidin-biotin complex reagent (Vector Laboratories). After washing, 200 g / Jiamino base Njijin and 0.006% or in mL H 2 0 2 50 mmol / L Tris-HCl (pH 7.6) containing color Mr. the Peruokishida Ichizekatsu properties by reaction for 10 minutes in buffer type X sPLA 2 in the tissue specimens were visualized. Cell nuclei were counterstained by reaction with a 0.4% aqueous solution of methoxylin.
  • X-type sPLA 2 positive signal was detected as deposits dark brown di ⁇ amino benzylidene den.
  • Neutralization experiments of X-type sPLA 2 signal, prior to the addition of antibody to slide was performed purified X-type sPLA 2 protein and (60 jg / mL) by reacting for 2 hours.
  • a positive signal is X-type sPLA 2
  • in normal liver tissues was detected with low levels in the liver lobule and Kupffer star cells, liver cancer patient-derived liver tissue , was strongly detected in cancer cells.
  • These signals it was confirmed to be specific to type X sPLA 2 since disappeared by the addition of X-type sPLA 2 protein.
  • these positive signals were not observed in IgG prepared from non-immunized egret.
  • the cells were reacted with biotin-conjugated goat anti-Peacock IgG antibody for 30 minutes, and treated with a peroxidase-containing avidin-biotin complex reagent (Vector Laboratories). After rinsing, 200 g / downy Jiamino of mh Njijin and 0.006% H 2 0 2 50 mmol / L Tris-HCl (P H 7.6) containing buffer coloration said the Peruokishidaze activity by reacting 10 minutes in type X sPLA 2 in the tissue specimens were visualized. Cell nuclei were counterstained by reaction with a 0.4% aqueous solution of methoxylin.
  • X-type sPLA 2 positive signal was detected as deposits diaminobenzidine den dark brown.
  • X-type sPLA 2 positive signal was detected as deposits diaminobenzidine den dark brown.
  • Neutralization experiments of X-type sPLA 2 signal, prior to the addition of antibody to slide was performed purified X-type sPLA 2 protein and (60 mL) by reacting for 2 hours.
  • the cells were reacted with a goat anti-Peacock IgG antibody conjugated with biotin for 30 minutes, and treated with a peroxidase-containing avidin-biotin complex reagent (Vector Laboratories). After washing, 200 g / Jiamino base Njijin and 0.006% or in mL H 2 0 2 50 mmol / L Tris-HCl (pH 7.6) containing color Mr. the Peruokishida Ichizekatsu properties by reaction for 10 minutes in buffer type X sPLA 2 in the tissue specimens were visualized. In addition, cell nuclei were counterstained by reaction with a 0.4% aqueous solution of methoxylin.
  • X-type sPLA 2 positive signal was detected as deposits dark brown di ⁇ amino benzylidene den.
  • a positive signal is X-type sPLA 2
  • These sheets Gunaru will specifically der Rukoto was confirmed in the X-type sPLA 2 since disappeared by the addition of X-type sPLA 2 protein.
  • these positive signals were not observed in IgG prepared from non-immunized egrets.
  • X-type sPLA 2 protein is significantly high expression.
  • the immunohistochemical analysis the study of human prostate tissues using Example 9 Anti-X type sPLA 2 antibody, The Journal of Biological Chemistry Vol. 274, No. 48, pp.
  • the cells were reacted with a goat anti-Peacock IgG antibody conjugated with biotin for 30 minutes, and treated with a peroxidase-containing avidin-biotin complex reagent (Vector Laboratories). After washing, peroxidase activity is developed by reacting 200 ⁇ g / mL diaminobenzidine and 50 mmol / L Tris-HCl (pH 7.6) buffer containing 0.006% H 2 O 2 for 10 minutes. type X sPLA 2 in and tissue specimens were visualized. Cell nuclei were counterstained by reaction with a 0.4% aqueous solution of methoxylin.
  • X-type sPLA 2 positive signal was detected as deposits dark brown di ⁇ amino benzylidene den.
  • Neutralization experiments of X-type sPLA 2 signal, prior to the addition of antibody to slide was performed purified X-type sPLA 2 protein and (60 g / mL) by reacting for 2 hours.
  • a positive signal is X-type sPLA 2
  • These signals it was confirmed to be specific to type X sPLA 2 since disappeared by the addition of X-type sPLA 2 protein.
  • these positive signals were not observed in IgG prepared from non-immunized egrets.
  • prostate cancer it has been suggested that X-type sPLA 2 protein is significantly high expression.
  • the cells were reacted with a goat anti-Peacock IgG antibody conjugated with biotin for 30 minutes, and treated with a peroxidase-containing avidin-biotin complex reagent (Vector Laboratories). After washing, peroxidase activity is developed by reacting 200 ⁇ g / mL diaminobenzidine with 50 mmol / L Tris-HCl (pH 7.6) buffer containing 0.006% H 2 O 2 for 10 minutes. type X sPLA 2 in and tissue specimens were visualized. Cell nuclei were counterstained by reaction with a 0.4% aqueous solution of methoxylin.
  • X-type sPLA 2 positive signal was detected as deposits diaminobenzidine den dark brown.
  • Neutralization experiments of X-type sPLA 2 signal, prior to the addition of antibody to slide was performed purified X-type sPLA 2 protein and (60 g / mL) by reacting for 2 hours.
  • X-type sPLA 2 positive signal was detected as deposits dark brown di ⁇ amino benzylidene den.
  • Neutralization experiments X-type sPLA 2 signal, prior to the addition of antibody to slide, was purified X-type sPLA 2 protein and (60 Ai g / mL) carried out by reacting for 2 hours.
  • a positive signal is X-type sPLA 2 but in normal testicular tissue was detected while your Kuwazuka part seminiferous tubules, in testicular cancer patients from testicular tissue, occurs in the seminiferous tubules Oyo BiTadashi pouch epithelium was strongly detected in cancer cells.
  • X-type sPLA 2 signal prior to the addition of antibody to slide, was purified X-type sPLA 2 protein and (60 U glmh) made by reacting for 2 hours.
  • positive signals X type sPLA 2 has been hardly detectable in normal ovarian tissue, in ovarian cancer patients from ovarian tissue was detected strongly from follicular epithelial cancer cells resulting in the vicinity of the oviduct.
  • These signals it was confirmed to be specific to type X sPLA 2 from that extinguishing deleted by the addition of X-type sPLA 2 protein. Further, these positive signals were not observed in IgG prepared from non-immunized egret.
  • ovarian cancer suggested that X-type sPLA 2 protein is significantly high expression.
  • the immunohistochemical analysis this study human skin tissue using the Example 1 3 Anti X type sPLA 2 antibody, The Journal of Biological Chemistry Vol. 274, No. 48, anti pp. 34203-34211 1999 according using X type sPLA 2 antibody.
  • Specimens of healthy adult skin tissue and skin tissue from skin cancer (malignant melanoma) patients were purchased from Biochain lnc. (San Leandro, CA).
  • the peroxidase activity was developed by reacting 200 g / mL diaminobenzidine and 50 mmol / L Tris-HCl (pH 7.6) buffer containing 0.006% H 2 O 2 for 10 minutes.
  • type X sPLA 2 in the tissue specimens were visualized.
  • cell nuclei were compared by reaction with 0.1 mol / L sodium acetate (pH 4.0) containing 1% methyl darene. Stained.
  • X-type sPLA 2 positive signal was detected with the deposition of dark brown di ⁇ amino benzylidene den.
  • Neutralization experiments X-type sPLA 2 signal, prior to the addition of antibody to slide became row by a reacting 2 hours purified X-type sPLA 2 protein (60 g mL).
  • a positive signal is X-type sPLA 2, but in normal skin tissue were detected with low levels in Meranosai preparative basal cell layer from squamous cell layer of the epidermis, skin cancer (malignant melanoma) from patients skin tissue In, atypical melanocytes were strongly detected. These signals, it was confirmed to be specific to type X sPLA 2 since disappeared by the addition of X-type sPLA 2 protein. In addition, these positive signals were not observed in IgG prepared from non-immunized egrets. These results suggested that X-type sPLA 2 protein in skin cancer (malignant melanoma) have significantly higher expression.
  • Example 14 Inhibitory effect of sPLA 2 inhibitor on oleic acid release by human X-type sPLA 2 in human colon cancer cell line HT-29 cells
  • Human colon cancer cell line HT-29 cells (purchased from ATCC) cultured in DMEM medium containing 10% fetal serum were washed with phosphate buffered saline (PBS), and then treated with trypsin-EDTA. detached from the plate with a solution, further; washed with PBS, and suspended in Hanks buffered saline containing to give a cell density of 12.5 x 10 s cells / ml 0.1 % ⁇ Shi serum albumin (BSA).
  • PBS phosphate buffered saline
  • a test compound dissolved in dimethyl sulfoxide (DMSO) (final concentration: 10 ⁇ M; dissolved in DMSO) was added, and the mixture was kept at 37 ° C for 10 minutes. Thereafter, 100 nM purified human type X sPLA 2 enzyme (Hanasaki et al., J. Biol. Chem.
  • the HT-29 cells 2.5 were seeded in x lO 5 cells / ml 24-well plates at a cell density of, cells were washed with PBS after 24 hours, of 30 ng / ml Tumor necrosis factor- a (R & D Systems, Inc.) was further cultured for 18 hours in a DMEM medium containing 10% fetal serum. After washing with PBS, Hanks buffered saline containing 0.1% BSA containing the test compound dissolved in DMSO (final concentration: 10 M; dissolved in DMSO) was added, and the mixture was incubated at 37 ° C for 10 minutes, and then purified with 100 nM purified human.
  • Formulation Examples 1 to 8 shown below are merely examples, and are not intended to limit the scope of the invention in any way.
  • the term “active ingredient” refers to a compound having a type X s PLA 2 inhibitory activity, a prodrug thereof, or a pharmaceutically acceptable salt thereof, or a hydrate thereof.
  • Hard gelatin capsules are manufactured using the following ingredients
  • Tablets are prepared using the following ingredients:
  • Tablets containing 60 mg of active ingredient are manufactured as follows
  • Microcrystalline cellulose 35 mg Polyvinylpyrrolidone (10% solution in water) 4 mg Sodium carboxymethyl starch 4.5 mg Magnesium stearate 0.5 mg talc 1 mg Total 150 mg Active ingredient, starch, And cellulose is No. 45 mesh U.S. sieve And mix well.
  • the aqueous solution containing polyvinylpyrrolidone is mixed with the obtained powder, and the mixture is passed through a No. 14 mesh U.S. sieve.
  • the granules thus obtained are dried at 50 ° C and passed through a ⁇ .18 mesh U.S. sieve.
  • Capsules containing 80 mg of active ingredient are prepared as follows
  • Suppositories containing 2 25 mg of the active ingredient are prepared as follows:
  • Active ingredient 2 25 mg Saturated fatty acid glyceride 200 m 3 ⁇ 4Total 222 5 mg Active ingredient is passed through a No. 60 mesh S S. sieve, and heated to the minimum necessary for melting in advance. Suspended in saturated fatty acid glycerides. The mixture is then cooled in an apparent 2 g mold.
  • Formulation Example 7
  • a suspension containing 5 Omg of the active ingredient is prepared as follows:
  • Active ingredient D 0 mg Sodium carboxymethylcellulose 50 mg Syrup 1.25 ml Benzoic acid solution 0.10 ml Flavor q.v.
  • An intravenous formulation is prepared as follows:
  • Active Ingredient 100 mg Saturated Fatty Acid Glyceride 100 ml
  • the solution of the above ingredients is usually administered intravenously to a patient at a rate of 1 ml per minute.
  • X-type s P LA 2 inhibitors were found to be effective as a preventive or therapeutic agent for cancer.

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Description

明細書 癌の治療剤 技術分野
本発明は、 X型 s P LA2 (分泌型 P LA2) 阻害剤を有効成分として含有する 癌の予防または治療剤に関する。 背景技術
C e l l . ( 1 9 9 6 ) 8 7 8 0 3— 8 0 9にはァラキドン酸カスケードに おいて P L A 2の下流に位置する C OX— 2 の阻害剤が直腸結腸癌の治療に有 望であるとの記載がある。 また、 文献 WO 9 8/0 5 3 4 9 (特開 2 0 0 1— 5 0 0 84 7 ) には、 s P LA2タンパク質または s P L A 2 m R N Aレベルを検出 するための定量的であり定性的な診断アツセィを用いて、 前立腺癌を含む癌の存 在を検出する方法について記載されている。 しかしながら、 いずれの文献にも、 X型 s P LA2阻害作用を有する化合物が癌の治療に有効であるとの記載はない。 発明の開示
本発明者らは、 抗 X型 s P LA2抗体を用い、 各病理組織における X型 s P L A 2の発現を調べ、 癌組織において X型 s P LA2が高発現していることを確認した c 癌組織の免疫組織化学的解析を行うにあたり、 まず、 健常成人組織ならびに癌 患者由来の癌組織から作成したスライ ドに、 抗 X型 s P L A 2抗体を加え、 数時間 反応させた。 次に、 標識等の手段により、 X型 s P LA2の発現を可視化し、 X型 s P L A2シグナルを検出し、 組織中の X型 s P LA2の発現を調べた。 その結果、 癌組織から作成したスライ ドに、 X型 s P LA2シグナルが検出され、癌組織にお いて、 X型 s P LA2が高発現していることが示唆された。
さらに、 本発明者らは X型 s P LA2シグナルの中和実験を行った。すなわち、 抗 X型 s P LA2抗体をスライ ドに添加する前に、 精製した X型 s P LA2蛋白質 を数時間反応させ、 その後上記と同様の操作を行い、 X型 s P L A2シグナルを調 ぺた。 その結果、 癌組織から作成したスライ ドにおいて、 X型 s P LA2シグナル は消失した。
以上より、 ヒ ト癌組織において、 X型 s P LA2が高発現していることを確認し た。 さらに、 本発明者らは、 癌細胞における X型 s P LA2によるォレイン酸遊離に 対する s P LA2阻害剤による阻害効果を調べた。 その結果、 S P LA2阻害剤が、 癌細胞における X型 s P LA2によるォレイン酸遊離を有意に抑制することを確 tf し o
一方、 PGE2 が癌の発生と綿密な関係を有することは Cancer Research 59, 5093-5096, 1999に記載されている。そこで本発明者らは、癌細胞における X型 s P L A2による PGE2産生作用に対する s P LA2阻害剤による阻害効果を調べた c その結果、 s P LA2阻害剤が、 癌細胞におけるヒト X型 s PLA2による PGE2 産生作用を有意に抑制することを確認した。
以上の実験事実より、 本発明者らは、 以下の本発明を完成した。 すなわち本発明は、 I ) X型 s P LA2阻害剤を有効成分として含有する癌の予 防または治療剤、 に関する。
また、 詳細には以下の I I ) ~xv) に関する。
I I) 一般式 （I) ：
Figure imgf000003_0001
(式中、 A環は以下の （a) ~ (d) で表わされる環
Figure imgf000004_0001
( ) (c) または (d)
(式中、 1 1ぉょび1 2は、 それぞれ独立して水素原子、 非妨害性置換基、 または 一 （L1) 一 （酸性基） （式中、 L1は酸性基との連結基を示し、 酸性基との連結 基の長さは 1 ~ 5である） 。 ただし、 R1または R2のどちらか一方は一 （L 1) 一 （酸性基） である。 ；
R 3および R 4は、 それぞれ独立して水素原子、 非妨害性置換基、 炭素環基、 非妨 害性置換基で置換された炭素璟基、 複素環基、 または非妨害性置換基で置換され た複素環基） ；
一 B—は以下の （e) ~ (h) で表わされる基：
Figure imgf000004_0002
(式中、 R5は （j ) C I— C 20アルキル、 C 2— C 20アルケニル、 C 2— C 20アルキニル、 炭素環基、 または複素璟基、 （k) 1またはそれ以上、 それそ れ独立して、 非妨害性置換基から選択される基によって置換された （j ) で示し た基、 または— （L2) —R8 (式中、 L2は水素原子、 窒素原子、 炭素原子、 酸 素原子、および硫黄原子から選択される 1〜 1 8原子の 2価の連結基； R8は（ j ) または （k) から選択される基） から選択される基；
R 6は、 水素原子、 ハロゲン、 C I— C 3アルキル、 C 3— C 4シクロアルキル、 C 3— C 4シクロアルケニル、 C 1— C 3アルキルォキシ、 または C 1一 C 3ァ ルキルチオ； R7は、 水素原子または非妨害性置換基
RAは、 式 ；
Figure imgf000005_0001
(式中、 R 9および R 1 °はそれそれ独立して、 水素原子、 C 1一 C 3アルキル、 またはハロゲン ；
Xおよび Υはそれそれ独立して酸素原子または硫黄原子 ；
Ζは一 ΝΗ2または一ΝΗΝΗ2) で表わされる基；
RBは、 一 CONH2または一 CONHNH2 ；
D環はシクロへキセン環またはベンゼン環） ；
ただし、 一 B—が （e) または （： ) である場合は、 A環は （b) 、 （c ) 、 ま たは （d) である）
で示される化合物、 そのプロ ドラッグ、 もしくはそれらの製薬上許容される塩、 またはそれらの溶媒和物を有効成分として含有する癌の予防または治療剤。
I I I ) R 1が水素原子または一 （L3) - R 1 1 (式中、 L3は一 O CH2—、 一 S CH2—、 一 NH - CH2—、 — CH2— CH2 -、 - 0 - C H (CH3) 一、 または一 O— CH (CH2 CH2 C6H5) 一、 R11は一C OOH、 一CONH S 02 C6H5、 一 S 03H、 または一 P (0) (OH) 2) ；
R 2が水素原子または— （L4) -R 1 2 (式中、 L4は式 ：
I'S
Figure imgf000006_0001
R13 13
-N— 9— (CH^-s— -CH2-C-(CH2) 3- R14 R 14
, または
(式中、 R13および R14はそれぞれ独立して、 水素原子、 C I— C 1 0アルキル- 〇 1ー01 0ァラルキル、 力ルポキシ、 アルキルォキシカルボニル、 またはハロ ゲン） 、 1 12は一〇0011、 一 S 03H、 または一 P (0) (0 H) 2) ； ただし- R 1および R2は同時に水素原子ではない） である I I ) 記載の化合物、 そのプロ ドラッグ、 もしくはそれらの製薬上許容される塩、 またはそれらの溶媒和物を有 効成分として含有する癌の予防または治療剤。
I V) R 3が水素原子、 C 1一 C 6アルキル、 C 3— C 6シクロアルキル、 ァリ ール、 または複素環基であり、 R4が水素原子またはハロゲンである I I ) または I I I ) に記載の化合物、 そのプロ ドラッグ、 もしくはそれらの製薬上許容され る塩、 またはそれらの溶媒和物を有効成分として含有する癌の予防または治療剤。
V) R5がー （CH2) !_6 -R 15 (R15は式 ：
Figure imgf000007_0001
(式中、 b、 d、 f、 h、 j、 m、 および oはそれぞれ独立して 0〜 2の整数、 R 1 6および R 17はそれそれ独立してハロゲン、 C 1一 C 1 0アルキル、 C 1一 C 1 0アルキルォキシ、 C 1 - C 1 0アルキルチオ、 ァリールォキシ、 および C 1 一 C 1 0ハロアルキルから独立に選択される基、 aは酸素原子または硫黄原子、 >6は— CH2—または一 （CH2) 2—、 ァは酸素原子または硫黄原子、 c、 i、 および Pは 0〜 5の整数、 eは 0〜マの整数、 gは 0~4の整数、 kおよび nは それそれ独立して 0〜 3の整数） で表わされる基である I I ) 〜I V) のいずれ かに記載の化合物、 そのプロ ドラッグ、 もしくはそれらの製薬上許容される塩、 またはそれらの溶媒和物を有効成分として含有する癌の予防または治療剤。
V I) ： 5が一 CH2— R 18 (R 18は式 ：
Figure imgf000008_0001
(式中、 5は— CH2—または一 （CH2) 2— ； R 1 9は水素原子、 C l—C 37 ルキル、 またはハロゲン ； Eは単結合、 一 CH2—または—0— ) で表わされる基 である V) 記載の化合物、 そのプロ ドラッグ、 もしくはそれらの製薬上許容され る塩、 またはそれらの溶媒和物を有効成分として含有する癌の予防または治療剤。
V I I ) R1がー O CH2 COOHである I I) 〜V I) のいずれかに記載の化 合物、 そのプロ ドラッグ、 もしくはそれらの製薬上許容される塩、 またはそれら の溶媒和物を有効成分として含有する癌の予防または治療剤。
V I I I) R 2が水素原子である I I ) ~V I I ) のいずれかに記載の化合物、 そのプロ ドラッグ、 もしくはそれらの製薬上許容される塩、 またはそれらの溶媒 和物を有効成分として含有する癌の予防または治療剤。
I X) R6が C 1 - C 3アルキルである I I ) 〜V I I I ) のいずれかに記載の 化合物、 そのプロ ドラッグ、 もしくはそれらの製薬上許容される塩、 またはそれ らの溶媒和物を有効成分として含有する癌の予防または治療剤。
X) RAが一 CH2 CONH2または一CO CONH2である I I ) 〜I X) のい ずれかに記載の化合物、 そのプロ ドラッグ、 もしくはそれらの製薬上許容される 塩、 またはそれらの溶媒和物を有効成分として含有する癌の予防または治療剤。
X I ) 式：
Figure imgf000008_0002
Figure imgf000009_0001
で示される化合物、 そのプロ ドラッグ、 も しくはそれらの製薬上許容される塩、 またはそれらの溶媒和物を有効成分として含有する癌の予防または治療剤。 X I I ) 癌が大腸癌、 肺癌、 肝臓癌、 胃癌、 腎臓癌、 胆嚢癌、 前立腺癌、 滕臓 癌、 精巣癌、 卵巣癌、 または皮膚癌である I ) 〜X I ) のいずれかに記載の癌の 予防または治療剤。
X I I I ) 癌が大腸癌である I ) 〜X I ) のいずれかに記載の癌の予防または 治療剤。
X I V)癌を治療するための医薬を製造するための X型 s P L A2阻害剤の使用 c XV) X型 s P LA2阻害剤が I I)〜X I ) のいずれかに記載の化合物である X I V) 記載の使用。
XV I ) X型 s P LA2阻害剤の治療上効果を示す量を人を含む哺乳動物に投与 することからなる、 癌による影響を緩和するための哺乳動物を治療する方法。
XV I I) X型 s PLA2阻害剤が I I ) ~X I) のいずれかに記載の化合物で ある XV I) 記載の哺乳動物を治療する方法。 以下、 本発明を詳細に説明する。
X型 s P L A2阻害剤とは、 X型 s P L A2阻害作用を有する化合物を意味し、 X型 s P L A2阻害作用以外の作用 （例えば、 他の酵素の阻害作用、 受容体に対す る親和作用） を有していてもよい。 すなわち、 X型 s P LA2阻害作用を評価する 試験において、 X型 s P L A2阻害作用を有しない化合物よりも、 X型 s P LA2 阻害作用が強い化合物であれば、 特に限定する意味ではない。 なお、 本発明の X 型 s P L A2阻害剤としては、 特に、 X型 s P L A2選択的阻害作用を有する化合 物が好ましい。 また、 X型 s P L A2阻害作用が、 実施例 2に記載されている実験 等において、 IC50が 1〃M以下の化合物、 さらには、 IC50が ΙΟΟηΜ以下の化合物 が好ましい。
X型 s P LA2阻害剤、 すなわち X型 s P L A2阻害作用を有する化合物が、 1 またはそれ以上のキラル中心を有する場合は、 光学活性体として存在し得る。 同 様に、 該化合物がアルケニルまたはアルケニレンを含む場合は、 シスおよびトラ ンス異性体の可能性が存在する。 R—および S—異性体、 シスおよびトランス異 性体の混合物やラセミ混合物を含む R—および S—異性体の混合物は、 本発明の 範囲に包含される。 不斉炭素原子はアルキル基のような、 置換基にも存在し得る。 このような異性体はすべて、 それらの混合物と同様に本発明に包含される。 特定 の立体異性体が所望である場合は、 あらかじめ分割した不斉中心を有する出発物 質を、 立体特異的反応に付する当業者には公知の方法により製造するか、 または 立体異性体の混合物を製造してから公知の方法により分割する方法により製造す る。
プロ ドラッグは、 化学的または代謝的に分解できる基を有する X型 s P L A 2 阻害作用を有する化合物の誘導体であり、 加溶媒分解によりまたは生理学的条件 下でインビボにおいて薬学的に活性な化合物となる化合物である。 該化合物の誘 導体は、 酸誘導体または塩基誘導体の両者において活性を有するが、 酸誘導体が 哺乳類生物における溶解性、 組織結合性、 放出制御において有利である （B u n g a r d , H . ， D e s i n o f P r o d r u g s , p p . 7— 9 , 2 1 - 2 4 , E l s e v i e r , Am s t e r d a m 1 9 8 5 ) 。 例えばもとにな る酸性化合物と適当なアルコールを反応させることによって製造されるエステル、 またはもとになる酸性化合物と適当なアミンを反応させることによって製造され るアミ ドのような酸性誘導体を含むプロ ドラッグは当業者にはよく知られている 該化合物が有している酸性基から誘導される単純な脂肪族のまたは芳香族のエス テルは好ましいプロ ドラッグである。 さらに好ましくは、 酸性基の C I — C 6ァ ルキルエステル （例えば、 メチルエステル、 ェチルエステル） である。 場合によ つては、 (ァシルォキシ） アルキルエステルまたは ( (アルコキシカルボニル） ォキシ） アルキルエステルのような二重エステル型プロ ドラッグを製造すること もできる。
X型 s P L A2阻害作用を有する化合物が、酸性または塩基性の官能基を有する 化合物である場合は、 そのもとの化合物よりも水溶性が高く、 かつ生理的に適切 な様々な塩を形成することができる。 代表的な製薬上許容される塩には、 リチウ ム、 ナト リウム、 カリウム、 カルシウム、 マグネシウム、 アルミニウム等のアル 力リ金属およびアル力リ土類金属の塩が含まれるがそれらに限定されない。 塩は 溶液中の酸を塩基で処理するか、 または酸をイオン交換樹脂に接触させることに よって遊離の酸から簡便に製造される。 X型 s P LA2阻害作用を有する化合物の 比較的無毒の無機塩基及び有機塩基の付加塩、 例えば、 該化合物と塩を形成する に十分な塩基性を有する窒素塩基から誘導されるアミンカチオン、 アンモニゥム、 第四級アンモニゥムは製薬上許容される塩の定義に包含される （例えば、 S . M. B e r g eら, "j h a rma c e u t i c a l S a l t s , " J . P h a r . S c i . , 6 6 , 1 - 1 9 ( 1 9 7 7 ) ) 。 さらに X型 s P L A2阻害作用を有す る化合物の塩基性基は適当な有機または無機の酸と反応させてァセテ一ト、 ベン ゼンスルホネート、 ベンゾエート、 ビカルボネート、 ビスルフェート、 ビ夕一夕 レート、 ボレート、 プロミ ド、 力ムシレート、 カーボネート、 クロライ ド、 クラ ブラネート、 シトレ一ト、 ェデテート、 ェジシレート、 エストレート、 ェシレ一 ト、 フルオライ ド、 フマレート、 グルセプテート、 ダルコネート、 グル夕メート、 グリコリアルサニレート、 へキシルレゾルシネート、 ヒ ドロキシナフトェート、 ィオダイ ド、 イソチォネート、 ラクテート、 ラク トビォネート、 ラウレート、 マ レート、 マルセエート、 マンデレート、 メシレート、 メチルブロミ ド、 メチル二 トレート、 メチルスルフエ一ト、 ムケート、 ナプシレート、 ニトレート、 ォレエ ート、 ォキサレート、 パルミテート、 パントセネート、 ホスフェート、 ポリガラ ク トウ口ネート、 サリシレート、 ステアレート、 スバセテート、 スシネート、 タ ネート、 夕ルトレート、 トシレート、 トチフルォロアセテート、 トリフルォロメ タンスルホネート、 バレレート等の塩を形成する。
溶媒和物としては、 有機溶媒および/または水との溶媒和物を包含する。 水和 物を形成する時は、 任意の数の水分子と配位していてもよい。
「製薬上許容される」 なる用語は、 製剤中の他の成分と適合し、 受容者にとつ て有害ではないことを意味する。
「癌」 とは、 様々な部位の上皮組織から発生する種々の悪性腫瘍を意味し、 例 えば、 大腸癌、 肺癌、 肝臓癌、 胃癌、 腎臓癌、 胆嚢癌、 前立腺癌、 滕臓癌、精巣癌、 卵巣癌、 皮膚癌、 食道癌、 喉頭癌、 乳癌または子宮癌が挙げられる。 本発明者は、 大腸癌、 肺癌、 肝臓癌、 胃癌、 腎臓癌、 胆嚢癌、 前立腺癌、 滕臓癌、精巣癌、卵巣 癌、または皮膚癌の癌組織において X型 s P L A 2が高発現されていることを実験 で確認しており、 特に、 大腸癌、 肺癌、 肝臓癌、 胃癌、 膂臓癌、 胆嚢癌、 前立腺 癌、 滕臓癌、精巣癌、卵巣癌、 または皮膚癌の予防または治療において、 本発明は 有用である。 本明細書中、 単独でもしくは他の用語と組み合わせて用いられる 「アルキル」 なる用語は、 指定した数の範囲の炭素原子数を有する、 直鎖または分枝鎖の 1価 の炭化水素基を意味する。 例えば、 メチル、 ェチル、 n—プロピル、 イソプロピ ル、 n -ブチル、 イソブチル、 s e c—ブチル、 t e r t —ブチル、 n 一ペンチ ル、 n—へキシル、 n—ヘプチル、 n—ォクチル、 n—ノナニル、 n—デカニル、 n —ゥンデ力ニル、 n—ドデカニル、 n— ト リデカニル、 n—テトラデカニル、 n—ペン夕デカニル、 n—へキサデ力ニル、 n—ヘプ夕デカニル、 n—ォク夕デ 力ニル、 n—ノナデカニル、 n —ィコサニル等が挙げられる。
本明細書中、 単独でもしくは他の用語と組み合わせて用いられる 「ァルケニル」 なる用語は、 指定した数の範囲の炭素原子数および 1個もしくは 2個以上の二重 結合を有する、 直鎖または分枝鎖の 1価の炭化水素基を意味する。 例えば、 ビニ ル、 ァリル、 プロぺニル、 クロ トニル、 イソペンテニル、 種々のブテニル異性体 等が挙げられる。
本明細書中、 「アルキニル」 とは、 指定した数の範囲の炭素原子数および 1個 もしくは 2個以上の三重結合を有する、 直鎖または分枝鎖の 1価の炭化水素基を 意味する。 二重結合を有していてもよい。 例えば、 ェチニル、 プロピニル、 6— へプチニル、 ァ—ォクチニル、 8—ノニル等が挙げられる。
本明細書中、 「炭素環基」 とは、 飽和または不飽和であって、 置換されたまた は置換されていない、 璟を形成している原子が水素原子以外は炭素原子のみであ る 5〜 1 4員環、 好ましくは、 5〜 1 0員環、 さらに好ましくは 5〜 7員環の有 機骨格から誘導される基を意味する。 上記の炭素環が 2〜 3個連続しているもの も包含する。 代表的な炭素環基としては、 シクロアルキル (例えば、 シクロプロ ピル、 シクロブチル、 シクロペンチル、 シクロへキシル、 シクロへプチル、 およ びシクロォクチル） 、 シクロアルケニル (シクロブチレニル、 シクロペンテニル、 シクロへキセニル、 シクロへプテニル、 およびシクロォクテニル） 、 フエニル、 ナフチル、 ノルポルエル、 ビシクロヘプ夕ジェニル、 インデニル、 スチルベニル、 テルフエ二リル、 フエニルシクロへキセニル、 ァセナフチル、 アント リル、 ビフ ェニリル、 ビベンジリル、 およぴ式 （ I I ) ：
(Π)
Figure imgf000014_0001
で表わされるフヱニルアルキルフエニル誘導体が挙げられる。
R 3および R 4における炭素璟基としては、 フヱニル、 シクロへキシル等が好ま しい。
本明細書中、 「複素環基」 とは、 単環式または多環式であって、 飽和または不 飽和であり、 窒素原子、 酸素原子、 硫黄原子からなる群から選択される 1〜 3の ヘテロ原子を含む 5〜 1 4の環原子を有する、 置換されたまたは置換されていな い複素環骨格から誘導される基を意味する。 例えば、 ピリジル、 ピロリル、 フラ ニル、 ペンゾフラニル、 チェニル、 ベンゾチェニル、 ピラゾリル、 イミダゾリル、 フエ二ルイ ミダゾリル、 ト リァゾリル、 イソォキサゾリル、 ォキサゾリル、 チア ゾリル、 チアジアゾリル、 イン ドリル、 カルパゾリル、 ノルハルマニル、 ァザィ ンドリル、 ベンゾフラニル、 ジベンゾフラニル、 ジベンゾチォフエニル、 インダ ゾリル、 イ ミダゾ [ 1 , 2 — a ] ピリジニル、 ベンゾト リアゾリル、 アントラニ リル、 1， 2—ベンズイソォキサゾリル、 ベンゾォキサゾリル、 ベンゾチアゾリ ル、 プリニル、 プリジニル、 ジピリジニル、 フエニルピリジニル、 ベンジルピリ ジニル、 ピリ ミジニル、 フエニルピリ ミジニル、 ピラジェル、 1 , 3， 5 —ト リ アジニル、 キノ リル、 フタラジニル、 キナゾリニル、 キノキサリニル等が挙げら れる。 R 3および R 4における複素環基としては、 フリル、 チェニル等が好ましい。 R 5における炭素環基および複素環としては、 式：
Figure imgf000015_0001
(式中、 hは 0 2の整数、 R 1 6および R 1 7はそれそれ独立してハロゲン、 C 1 一 C 1 0アルキル、 C 1一 C 1 0アルキルォキシ、 C 1一 C 1 0アルキルチオ、 ァリールォキシ、 および C 1— C 1 0ハロアルキルから独立に選択される基、 α は酸素原子または硫黄原子、 ?は— CH2—または一 （CH2) 2—、 ァは酸素原 子または硫黄原子、 c i、 および pは 0~5の整数、 eは 0~7の整数、 gは 0 4の整数、 kおよび nはそれそれ独立して 0 3の整数） で表わされる基が 好ましい。 c e g i k n、 および/または pが 2以上の場合、 複数個 の R 1 6および複数個の R 17はそれそれ異なっていてもよい。 R 1 6がナフチル基 の置換基である場合は、 当該ナフチル基上の任意の位置で置換し得る。
さらに好ましくは、 式 ：
Figure imgf000015_0002
(式中、 R 1 9は水素原子、 C 1—C 3アルキル、 またはハロゲン ； Eは単結合、 — CH2—または一 0— : 5は一 CH2—または一 （CH2) 2—） で表わされる基 が挙げられる。
R 5としては、 上記の 「炭素環」 C 1— C 3アルキルおよび上記の 「複素環」 C 1— C 3アルキルが好ましい。
本明細書中、 「非妨害性置換基」 とは、 上記の 「炭素環基」 、 「複素環基」 、 および基本骨格の置換基として適当な基を意味する。 例えば、 C 1一 C 1 0アル キル、 C 2— C 6アルケニル、 C 2— C 6アルキニル、 C 7— C 1 2ァラルキル (例えば、 ベンジルおよびフエネチル） 、 C 7— C 1 2アルカリル、 C 3— C 8 シクロアルキル、 C 3— C 8シクロアルケニル、 フエニル、 ト リル、 キシリル、 ビフエ二リル、 C 1一 C 1 0アルキルォキシ、 C 1— C 6アルキルォキシ C 1— C 6アルキル （例えば、 メチルォキシメチル、 ェチルォキシメチル、 メチルォキ シェチル、 およびェチルォキシェチル） 、 C 1一 C 6アルキルォキシ C 1 - C 6 アルキルォキシ （例えば、 メチルォキシメチルォキシ、 およびメチルォキシェチ ルォキシ） 、 C 1一 C 6アルキルカルボニル （例えば、 メチルカルボニルおよび ェチルカルボ二ル） 、 C 1一 C 6アルキルカルボニルァミノ （例えば、 メチルカ ルポニルァミノおよびェチルカルポニルァミノ） 、 C 1一 C 6アルキルォキシァ ミノ （例えば、 メチルォキシァミノおよびェチルォキシァミノ） 、 C 1一 C 6ァ ルキルォキシァミノカルボニル （例えば、 メチルォキシァミノカルボニルおよび ェチルォキシァミノカルボニル） 、 モノまたはジ C 1 - C 6アルキルアミノ （例 えば、 メチルァミノ、 ェチルァミノ、 ジメチルァミノ、 およびェチルメチルアミ ノ） 、 C 1— C 1 0アルキルチオ、 C 1 - C 6アルキルチオカルボニル （例えば、 メチルチオカルボニルおよびェチルチオカルボニル） 、 C 1 - C 6アルキルスル フィニル （例えば、 メチルスルフィニルおよびェチルスルフィニル） 、 C 1— C 6アルキルスルホニル (例えば、 メチルスルホニルおよびェチルスルホニル） 、 C 2— C 6ハロアルキルォキシ （例えば、 2—クロ口ェチルォキシおよび 2—ブ ロモェチルォキシ） 、 C 1— C 6ハロアルキルスルホニル （例えば、 クロロメチ ルスルホニルおよびブロモメチルスルホニル） 、 C 1 - C 1 0ハロアルキル、 C 1— C 6ヒ ドロキシアルキル （例えば、 ヒドロキシメチルおよびヒドロキシェチ ル） 、 C 1— C 6アルキルォキシカルボニル （例えば、 メチルォキシカルボニル およびェチルォキシカルボニル）、 一 （ C H ^ i— 8— 0— （ C I— C 6アルキル）、 ベンジルォキシ、 ァリールォキシ (例えば、 フエニルォキシ) 、 ァリールチオ （例 えば、 フエ二ルチオ） 、 一 （C ONH S 02 R 2 °) (R 2。は C 1一 C 6アルキル またはァリ一ル） 、 — C H 0、 ァミノ、 アミジノ、 ハロゲン、 力ルバミル、 カル ポキシル、 カルブアルキルォキシ、 一 （ CH2) !_8 - C 00 H (例えば、 カルボ キシメチル、 カルボキシェチル、 およびカルボキシプロピル） 、 シァノ、 シァノ グァニジノ、 グァニジノ、 ヒドラジド、 ヒ ドラジノ、 ヒドロキシ、 ヒドロキシァ ミノ、 ニトロ、 ホスフォノ、 — S 03 H、 チオアセタール、 チォカルボニル、 C 1 — C 6カルボニル、 炭素璟基、 複素璟基等が挙げられる。 これらは、 C 1 — C 6 アルキル、 C 1 一 C 6アルキルォキシ、 C 2— C 6ハロアルキルォキシ、 C 1 一 C 6ハロアルキル、 およびハロゲンからなる群から選択される 1もしくは 2以上 の置換基で置換されていてもよい。
R3、 R4、 および; R 5の 「非妨害性置換基で置換された」 の 「非妨害性置換基」 としては、 ハロゲン、 C 1 - C 6アルキル、 C 1 - C 6アルキルォキシ、 C 1 一 C 6アルキルチオ、 C 1一 C 6ハロアルキルが好ましい。 さらに好ましくは、 ノ、 ロゲン、 C 1 — C 3アルキル、 C 1 - C 3アルキルォキシ、 C I— C 3アルキル チォ、 C 1一 C 3ハロアルキルが挙げられる。
R R2、 R 3, および R4、 および R7における 「非妨害性置換基」 としては、 C 1 一 C 6アルキル、 ァラルキル、 C 1 — C 6アルキルォキシ、 C 1— C 6アル キルチオ、 C 1 — C 6ヒドロキシアルキル、 C 2— C 6ハロアルキルォキシ、 ノ、 ロゲン、 カルボキシ、 C 1一 C 6アルキルォキシ力ルポニル、 ァリ一ルォキシ、 ァリールチオ、 炭素環基、 または複素環基が好ましい。 さらに好ましくは、 C 1 一 C 6アルキル、 ァラルキル、 カルボキシ、 C 1一 C 6ヒ ドロキシアルキル、 フ ェニル、 または C 1 一 C 6アルキルォキシカルボニルが挙げられる。
本明細書中、 「ハロゲン」 とは、 フッ素、 塩素、 臭素、 ヨウ素を意味する。 本明細書中、 「シクロアルキル」 とは、 指定した数の範囲の炭素原子数を有す る、 環状の 1価の炭化水素基を意味する。 例えば、 シクロプロピル、 シクロプチ ル、 シクロペンチル、 シクロへキシル、 シクロへプチル、 シクロォクチル等が挙 げられる。
本明細書中、 「シクロアルケニル」 とは、 指定した数の範囲の炭素原子数およ び 1個も しくは 2個以上の二重結合を有する、 環状の 1価の炭化水素基を意味す
OOSMH
る。 例えば、 1 ーシクロプロぺニル、 2—シクロプロぺニル、 1 ーシクロブテニ
o
H
ル、 2—シクロブテニル等が挙げられる。
本明細書中、 「アルキルォキシ」 としては、 例えば、 メチルォキシ、 ェチルォ キシ、 n—プロピルォキシ、 イソプロピルォキシ、 n—プチルォキシ、 n—ペン チルォキシ、 n—へキシルォキシ等が挙げられる。
本明細書中、 「アルキルチオ」 としては、 例えば、 メチルチオ、 ェチルチオ、 n—プロピルチオ、 イソプロピルチオ、 n―ブチルチオ、 n—ペンチルチオ、 n 一へキシルチオ等が挙げられる。
本明細書中、 「酸性基」 とは、 適当な連結原子 （後に 「酸性基との連結基」 と して定義する） を介して基本骨格に結合している時、 水素結合を可能にするプロ トン供与体として働く有機基を意味する。 例えば、 式：
N-N O O
—i 4 4
； N 一 P-OH -0-P-OH
N ,21 21
H OR OR
Figure imgf000018_0001
(式中、 R 2 1は水素原子、 金属、 または C 1—C 1 0アルキル、 R 2 2はそれそれ 独立して水素原子または C 1一 C 1 0アルキル、ただし R 2 1および R 2 2を共に有 する酸性基の場合は、 R 2 1および R 2 2の少なく とも 1つは水素原子） で表わされ る基が挙げられる。 好ましくは、 一 C OOH、 一 S 03H、 - C ONHS 02 C6 H5、 または P (0) (OH) 2が挙げられる。 さらに好ましくは、 一 CO OHが 挙げられる。
本明細書中、 「酸性基との連結基」 とは、 ― （L1) 一なる記号で表わされる 2 価連結基を意味し、 通常の関係では基本骨格のと 「酸性基」 を連結する役目をす る。 例えば、 式 ：
Figure imgf000019_0001
(式中、 Mは一 CH2—、 一 0—、 -N (R 25) ―、 または一 S―、 R23および R 24はそれぞれ独立して水素原子、 C 1― C 1 0アルキル、 ァリール、 ァラルキ ル、 カルボキシ、 またはハロゲン） で表わされる基、 および式 ：
)i-3-
Figure imgf000019_0002
R13 13
H V
■N-C-(CH2) 3- -CH2— 9—(CH2)r3-
R 14
R 14
または
(式中、 R 13および R 14はそれぞれ独立して、 水素原子、 C 1― C 1 0アルキル、 01—〇 1 0ァラルキル、 カルボキシ、 アルキルォキシカルボニル、 またはハロ ゲン） で表わされる基が挙げられる。 好ましくは、 ― 0— CH2—、 - S - C H 2 —ヽ ― N (R 25) — CH2—、 ― CH2— CH2—、 - 0 - C H (CH3) ―、 ま たは— 0— CH ( (CH2) 2 C 6 H 5) - (式中、 R25は C 1― C 6アルキル） が挙げられる。 さら.に好ましくは、 一 0— CH2—または一 S— CH2—が挙げら れる。
本明細書中、 「酸性基との連結基の長さ」 なる用語は、 基本骨格と 「酸性基」 をつなぐ連結基一 （L 1 ) —の最短の鎖の原子の数 （水素原子を除く） を意味する < 一 （L 1 ) 一に炭素環がある場合、 算出した炭素環の直径とほぼ等しい数の原子と して計数する。 従って、 酸性基との連結基におけるベンゼン環およびシクロへキ サン環は、 一 （Lつ 一の長さを 2原子として計数する。 好ましい長さは、 2〜 3 である。
本明細書中、 「ハロアルキル」 とは、 任意の位置で前記 「ハロゲン」 により置 換された前記 「アルキル」 を意味する。 例えば、 クロロメチル、 ト リフルォロメ チル、 2—クロロェチル、 2—ブロモェチル等が挙げられる。
本明細書中、 「ヒ ドロキシアルキル」 とは、 任意の位置でヒ ドロキシにより置 換された前記 「アルキル」 を意味する。 例えば、 ヒ ドロキシメチル、 2—ヒドロ キシェチル、 3—ヒ ドロキシプロピル等が挙げられる。 ヒ ドロキシメチルが好ま しい。
本明細書中、 「ハロアルキルォキシ」 の 「ハロアルキル」 は前記と同義である。 例えば、 2—クロロェチルォキシ、 2— ト リフルォロェチルォキシ、 2—クロ口 ェチルォキシ等が挙げられる。
本明細書中、 「ァリール」 とは、 単環状もしくは縮合環状芳香族炭化水素を意 味する。 例えば、 フエニル、 1—ナフチル、 2—ナフチル、 アントリル等が挙げ られる。 特に、 フエニル、 1一ナフチルが好ましい。
本明細書中、 「ァラルキル」 とは、 前記 「アルキル」 に前記 「ァリール」 が置 換したもので、 これらは置換可能な全ての位置で結合しうる。 例えば、 ベンジル、 フエネチル、 フエニルプロピル （例えば、 3—フエニルプロピル） 、 ナフチルメ チル （例えば、 1一ナフチルメチル） 等が挙げられる。
本明細書中、 「アルキルォキシカルボニル」 としては、 例えば、 メチルォキシ 力ルポニル、 ェチルォキシ力ルポニル、 n—プロプルォキシカルボニル等が挙げ られる。 本明細書中、 「ァリールォキシ」 としては、 フエニルォキシ等が挙げられる。 本明細書中、 「ァリールチオ」 としては、 フエ二ルチオ等が挙げられる。
本明細書中、 「ハロフエニル」 とは前記 「ハロゲン」 で 1または 2個所以上置 換されたフヱニルを包含する。 例えば、 フルオロフヱニル、 クロ口フエニル、 ブ ロモフエニル、 ョードフエニル、 ジフルオロフェニル、 ジクロロフエニル、 ジブ ロモフエニル、 トリフルオロフェニル、 ト リクロ口フエニル、 ト リブロモフエ二 ル、 クロ口フルオロフェニル、 ブロモクロロフェニル等が挙げられる。
本明細書中、 D環における 「シクロへキセン環 j とは、 隣接する環との縮合部 分に有する 1つの二重結合のみを璟内に有するシクロへキセン環を意味する。
A環および— B—の好ましい組み合わせとしては、 以下に示す （m) ~ (r) で表わされる組み合わせが好ましい。
Figure imgf000021_0001
(p) (q)
特に （m) （p) で表わされる組み合わせが好ましい。
さらに、 構造式 （ 1 ) から （ 1 9) で示される化合物が特に好ましい。 発明を実施するための最良の形態
本発明は、 X型 s P L A 2阻害剤によって、 癌の予防または治療を行うものであ る。 X型 s P LA2阻害剤は、 公知の X型 s P L A2阻害剤を使用してもよい。 例 えば、 EP— 6 202 1 4 (特開平 7— 0 1 0838 US— 5 5 78 6 34) 、 EP - 6202 1 5 (特開平 7— 0258 5 0、 US— 5 68 4034) 、 E P - 6 7 5 1 1 0 (特開平 7— 2 85 9 3 3、 US— 5 6 5 43 26) 、 W09 6 / 0 3 12 0 (特開平 1 0— 5 0533 6) 、 WO 9 6/03 37 6 (特開平 1 0— 5 032 0 8、 US - 5 641 80 0) s WO 9 6/03 383 (特開平 1 0— 5 05584) 、 W09 7/2 1 6 64 (EP - 77 92 7 1 ) 、 WO 9 7 /2 1 7 1 6 (EP- 7 7 9 2 73) , W09 8/1 8464 (EP 8 3 98 0 6) 、 WO 9 8/2443 7 (EP 846 687) 、 W098/247 5 6, W 09 8/247 94、 WO 9 8/2 5 60 9, WO 9 9/5 1 60 5、 WO 9 9 / 5 9999等に記載の化合物、 パラブロモフエナシルプロマイ ド、 メパクリン、 マノアライ ド、 チェロシン A1等の s P L A2阻害剤のうち、 X型 s P LA2阻害 作用を有する化合物等を使用してもよい。
X型 s P L A2阻害剤としては、 P CT/JP 0 0/0 7 0 24に式 ：
Figure imgf000022_0001
(式中、 I 1、 R2、 R3、 および R 4は、 それぞれ独立して水素原子、 非妨害性置 換基等、 R 5は炭素環基、 複素環基等、 R6は、 水素原子、 C 1 - C 3アルキル等、 RAは、 一 CO CONH2等、 RBは、 一 CONH2等） で示される化合物が記載さ れているが、 これらを使用してもよい。
また、 以下の手順等によって X型 s P L A2阻害剤であることを確認し、 本発明 に使用してもよい。
まず、 ヒト X型 s P L A2発現細胞の作成を行う。 すなわち、 ヒト X型 s P L A 2をコードする cDNA配歹 U Cupillard等， J. Biol. Chem, 1997, 272, 15745-15752) を、 動物細胞用発現ベクターに揷入する。 得られた発現ベクターを宿主細胞にト ランスフエクシヨンし、 ヒト X型 s P LA2を安定に発現する細胞を得る。
次に、 阻害活性の検定であるが、 上記の発現細胞を培地にて培養し、 その培養 上清を酵素活性の測定に使用する。 なお、 X型 s P LA2の阻害剤を同定及び評価 するために、 以下のクロモジエニックァヅセィを用いる。 このアツセィの一般的 な説明は、 Laure J. Reynolds, Lori L. Hughes 及び Edward A. Dennis による言 3 事 「 Analysis oi Human Synovial Fluid Phospholipase A2 on Short Chain Phosphatidylcholine-Mixed Micelles: Development of a Spectrophotometric Assay Suitable for a Microtiterplate Readerj (Analytical Biochemistry, 204, pp 190-197,1992:)に記載されている。 一般式 （ I ) で表わされる化合物は、 P C T/J P 0 0/0 7 0 2 4、 E P - 6 2 0 2 1 4 (特開平 7— 0 1 0 8 3 8、 U S— 5 5 7 8 6 3 4) 、 E P - 6 2 0 2 1 5 (特開平 7— 0 2 5 8 5 0、 U S— 5 6 8 4 0 3 4) 、 E P— 6 7 5 1 1 0 (特開平 7— 2 8 5 9 3 3、 U S— 5 6 5 43 2 6 ) 、 WO 9 6 / 0 3 1 2 0 (特開平 1 0— 5 0 5 3 3 6 ) 、 WO 9 6/0 3 3 8 3 (特開平 1 0— 5 0 5 5 8 4) 、 W09 8/ 1 84 6 4 (E P 8 3 9 8 0 6 ) 、 W09 9/5 1 6 0 5, W0 9 9/5 9 9 9 9等に記載されている方法により合成することができる。 本発明の癌の予防または治療剤は、 経口、 エアロゾル、 直腸、 経皮、 皮下、 静 脈内、 筋肉内、 鼻腔内を含む様々な経路によって投与できる。 本発明の製剤は、 治療有効量の化合物を製薬上許容される担体または希釈剤とともに組み合わせる (例えば混合する） ことによって製造される。 本発明の製剤は、 周知の、 容易に 入手できる成分を用いて既知の方法により製造される。
本発明の組成物を製造する際、 活性成分は担体と混合されるかまたは担体で希 釈されるか、 カプセル、 サッシヱ一、 紙、 あるいは他の容器の形態をしている担 体中に入れられる。 担体が希釈剤として働く時、 担体は媒体として働く固体、 半 固体、 または液体の材料であり、 それは錠剤、 丸剤、 粉末剤、 口中剤、 エリキシ ル剤、 懸濁剤、 ェマルジヨン剤、 溶液剤、 シロップ剤、 エアロゾル剤 （液体媒質 中の固体） 、 軟膏の型にすることができ、 例えば、 1 0 %までの活性化合物を含 む。 本発明癌の予防または治療剤作用を有する化合物は、 投与に先立ち製剤化す るのが好ましい。
当業者には公知の適当な担体はいずれもこの製剤のために使用できる。 このよ うな製剤では担体は、 固体、 液体、 または固体と液体の混合物である。 例えば、 静脈注射のために X型 s P L A 2阻害作用を有する化合物を 2 m g / m 1の濃度 になるよう、 4 %デキス トロース/ 0 . 5 %クェン酸ナト リウム水溶液中に溶解 する。 固形の製剤は粉末、 錠剤およびカプセルを包含する。 固形担体は、 香料、 滑沢剤、 溶解剤、 懸濁剤、 結合剤、 錠剤崩壊剤、 カプセル剤にする材料としても 役立つ 1 またはそれ以上の物質である。 経口投与のための錠剤は、 トウモロコシ デンプン、 アルギン酸などの崩壊剤、 および/またはゼラチン、 アカシアなどの 結合剤、 およびステアリン酸マグネシウム、 ステアリン酸、 滑石などの滑沢剤と ともに炭酸カルシウム、 炭酸ナトリウム、 ラク ト一ス、 リン酸カルシウムなどの 適当な賦形剤を含む。
粉末剤では担体は細かく粉砕された活性成分と混合された、 細かく粉砕された 固体である。 錠剤では活性成分は、 適当な比率で、 必要な結合性を持った担体と 混合されており、 所望の形と大きさに固められている。 粉末剤および錠剤は約 1 〜約 9 9重量％の本発明の新規化合物である活性成分を含んでいる。 適当な固形 担体は、 炭酸マグネシウム、 ステアリン酸マグネシウム、 滑石、 砂糖、 ラク トー ス、 ぺクチン、 デキスト リン、 デンプン、 ゼラチン、 トラガカントゴム、 メチル セルロース、 ナトリウムカルボキシメチルセルロース、 低融点ワックス、 ココア パ夕一である。
無菌液体製剤は懸濁剤、 ェマルジヨン剤、 シロップ剤、 およびエリキシル剤を 含む。 活性成分は、 滅菌水、 滅菌有機溶媒、 または両者の混合物などの製薬上許 容し得る祖体中に溶解または懸濁することができる。 活性成分はしばしば適切な 有機溶媒、 例えばプロピレングリコール水溶液中に溶解することができる。 水性 デンプン、 ナト リウムカルボキシメチルセル D—ス溶液、 または適切な油中に細 かく砕いた活性成分を散布することによってその他の組成物を製造することもで きる。 投与量は疾患の状態、 投与ルート、 患者の年齢、 または体重によっても異なる が、 成人に静注で投与する場合、 通常 0 . 0 1 ~ 1 O mg/lig/時である。 好ま し くは、 0 . 1 ~ l mg/kg/時である。 実施例
実施例 1 ヒ ト X型 sPLA2発現細胞の作成とその培養上清の調製
ヒ ト X型 sPLA2をコ一ドする cDNA配列 （Cupillard等， J. Biol. Chem, 1997, 272, 15745- 15752)を、動物細胞用発現べクタ一である pSVL SV40 Late Promoter Expression Vector (Amersnam Pharmacia Biotech ¾E)のプロモーター 、流域に 順方向に揷入した。 得られた発現ベクターを LipofectAMINE 試薬 （Gibco BRL 社） を用いて、 宿主細胞 CHOに使用説明書にしたがってトランスフエクシヨンし、 ヒ ト X型 sPLA2を安定に発現する CHO 細胞を得た。 発現細胞を、 10%ゥシ胎児 血清含有 α-ΜΕΜ培地にて 3日間培養し、その培養上清を酵素活性の測定に使用し た。 実施例 2 阻害活性の検定
X型 sPLA2の阻害剤を同定及び評価するために、 以下のクロモジエニックァヅ セィを用いる。 このアツセィは 9 6ウェルマイク口夕イタ一プレートを用いる高 容量スクリ一ニングに適用されている。このアツセィの一般的な説明は、 Laure. J. Reynolds, Lori L. Hughes 及ぴ Edward A Dennis による記事 「Analysis of Human Synovial Fluid Phospholipase A2 on Short Chain Phosphatidylcholine- Mixed Micelles: Development of a Spectroph-otometric Assay Suitable for a Microtiterplate Readerj (Analytical Biochemistry, 204, pp 190-197, 1992:)に記 載されている。
被検化合物 （又は溶媒プランク） をあらかじめ設定したプレートの配列に従つ て加え、 反応はトリス緩衝液（25mM, pH7.5)、 CaCl2(10mM)、 KCl(lOOmM), ゥ シ血清アルブミン（1.0mg/ml)中、 トライ トン一 X l00(0.3mM)、 5, 5'-ジチォビス（2- ニトロ安息香酸） (125 i M)の存在下、 ジヘプ夕ノィルチオ PC(lmM)を、 ヒ ト X型 sPLA2と反応 （15 / 1 /ゥエルで 40°C、 30分間） させ、 405nmにおける吸光度変 化を測定し、 阻害活性を算出した。
IC5。は、 前記化合物 （ 1 ) ~ ( 1 9 ) の log濃度を 10%〜90%阻害の範囲の阻 害値に対して、 プロットすることにより求めた。
X型 sPLA2阻害試験の結果を以下の表 1に示す。
表 1
Figure imgf000026_0001
実施例 3 抗 X型 sPLA2抗体を用いたヒ ト大腸癌組織の免疫組織化学的解析 本試験には、 The Journal of Biological Chemistry Vol. 274, No. 48, pp . 34203-34211 1999記載の抗 X型 sPLA2抗体を用いた。 健常成人大腸組織ならび に大腸癌患者由来大腸癌組織の標本は、 Biochain Inc. ( San Leandro, CA) より 購入した。 組織切片のスライ ドは、 パラフィ ンワックスを取り除き、 0.3% H202 を含むメタノールに 3 0分間反応させ内因性ペルォキシ夕ーゼの活性を除去した 後、 5%の正常ャギ血清で 20分間処置した。 その後、 0.1% 牛血清アルブミンを含 む PBS中で、 抗 X型 sPLA2抗体（6 U g/mL) と 14時間、 4°Cで反応させた。 PBS で洗浄後、 ピオチンを結合したャギ抗ゥサギ IgG抗体と 30分間反応させ、 ペルォ キシダーゼ標識アビジン一ピオチン複合体試薬 （Vector Laboratories) で処置し た。 洗浄後、 200〃g/mLのジァミノべンジジンと 0.006% H202を含む 50 mmol/L Tris-HCl (pH 7.6)緩衝液中で 10分間反応させることによりペルォキシダーゼ活 性を呈色し、 組織標本中の X型 sPLA2を可視化した。 また、 0.4%へマトキシリン 水溶液との反応により、 細胞核を対比染色した。 X型 sPLA2陽性シグナルは、 濃 い茶色のジアミノベンジデンの沈着として検出した。 X型 sPLA2シグナルの中和 実験は、抗体をスライ ドに添加する前に、精製した X型 sPLA2蛋白質（60 . g/mL) と 2時間反応させることにより行なった。
その結果、 X型 sPLA2の陽性シグナルは、 正常大腸組織にはほとんど検出され ず、 大腸腺癌組織中の癌細胞に強く検出された。これらのシグナルは、 X型 SPLA2 蛋白質の添加で消失したことから X型 sPLA2に特異的であることが確認された。 また、 これら陽性シグナルは、 非免疫のゥサギから調製した IgGでは認められな かった。 以上の結果から、 大腸癌では X型 sPLA2蛋白質が顕著に高発現している ことが示唆された。 実施例 4 抗 X型 sPLA2抗体を用いたヒ ト肺組織の免疫組織化学的解析
本試験には、 The Journal of Biological Chemistry Vol. 274, No. 48, pp . 34203-34211 1999記載の抗 X型 sPLA2抗体を用いた。 健常成人肺組織ならびに 肺癌患者由来肺組織の標本は、 Biochain Inc. ( San Leandro, CA) より購入した。 組織切片のスライ ドは、 パラフィンワックスを取り除き、 0.3% H202を含むメタ ノールに 3 0分間反応させ内因性ペルォキシターゼの活性をを除去した後、 5%の 正常ャギ血清で 20 分間処置した。 その後、 0.1% 牛血清アルブミンを含む PBS 中で、 抗 X型 sPLA2抗体 （6 U glmL) と 14時間、 4°Cで反応させた。 PBSで洗 浄後、 ピオチンを結合したャギ抗ゥサギ IgG抗体と 30分間反応させ、ペルォキシ ダーゼ標識アビジン一ピオチン複合体試薬 （Vector Laboratories) で処置した。 洗浄後、 200 i glmL のジァミノべンジジンと 0.006% H202を含む 50 mmol/L Tris-HCl (pH 7.6)緩衝液中で 10分間反応させることによりペルォキシダ一ゼ活 性を呈色し組織標本中の X型 sPLA2を可視化した。 また、 0.4%へマトキシリン水 溶液との反応により、 細胞核を対比染色した。 X型 SPLA2陽性シグナルは、 濃い 茶色のジアミノベンジデンの沈着として検出した。 X型 sPLA2シグナルの中和実 験は、 抗体をスライ ドに添加する前に、 精製した X型 sPLA2蛋白質 （60 glmL) と 2時間反応させることにより行なった。
その結果、 X型 sPLA2の陽性シグナルは、 正常肺組織では I I型肺胞上皮細胞 において低レベルながら検出されたが、 肺癌患者由来肺組織においては、 癌細胞 に強く検出された。 これらのシグナルは、 X型 sPLA2蛋白質の添加で消失したこ とから X型 sPLA2に特異的であることが確認された。 また、 これら陽性シグナル は、 非免疫のゥサギから調製した IgGでは認められなかった。 以上の結果から、 肺癌では X型 sPLA2蛋白質が顕著に高発現していることが示唆された。 実施例 5 抗 X型 sPLA2抗体を用いたヒ ト肝臓組織の免疫組織化学的解析
本試験には、 The Journal of Biological Chemistry Vol. 274, No . 48, pp . 34203-34211 1999記載の抗 X型 sPLA2抗体を用いた。 健常成人肝臓組織ならび に肝臓癌患者由来肝臓組織の標本は、 Biochain Inc . ( San Leandro, CA) より購 入した。 組織切片のスライ ドは、 パラフィンワックスを取り除き、 0.3% H202 を 含むメタノールに 3 0分間反応させ内因性ペルォキシ夕ーゼの活性を除去した後、 5%の正常ャギ血清で 20 分間処置した。 その後、 0. 1% 牛血清アルブミンを含む PBS 中で、 抗 X型 sPLA2抗体 （6 ju gl h) と 14時間、 4°Cで反応させた。 PBS で洗浄後、 ピオチンを結合したャギ抗ゥサギ IgG抗体と 30分間反応させ、ペルォ キシダ一ゼ含有アビジン—ピオチン複合体試薬 （Vector Laboratories) で処置し た。洗浄後、 200 g/mLのジァミノべンジジンと 0.006% H202を含む 50 mmol/L Tris-HCl ( pH 7.6 ) 緩衝液中で 10分間反応させることによりペルォキシダ一ゼ活 性を呈色し組織標本中の X型 sPLA2を可視化した。 また、 0.4%へマトキシリン水 溶液との反応により、 細胞核を対比染色した。 X型 sPLA2陽性シグナルは、 濃い 茶色のジァミノベンジデンの沈着として検出した。 X型 sPLA2シグナルの中和実 験は、 抗体をスライ ドに添加する前に、 精製した X型 sPLA2蛋白質 （60 j g/mL) と 2時間反応させることにより行なった。
その結果、 X型 sPLA2 の陽性シグナルは、 正常肝臓組織では肝小葉および Kupffer 星細胞において低レベルながら検出されたが、 肝臓癌患者由来肝臓組織 においては、 癌細胞に強く検出された。 これらのシグナルは、 X型 sPLA2蛋白質 の添加で消失したことから X型 sPLA2に特異的であることが確認された。 また、 これら陽性シグナルは、非免疫のゥサギから調製した IgGでは認められなかった。 以上の結果から、 肝臓癌では X型 sPLA2蛋白質が顕著に高発現していることが示 唆された。 実施例 6 抗 X型 sPLA2抗体を用いたヒ ト胃組織の免疫組織化学的解析
本試験には、 he Journal of Biological Chemistry Vol. 274, No. 48, pp. 34203-34211 1999記載の抗 X型 sPLA2抗体を用いた。 健常成人胃組織ならびに 胃癌患者由来胃組織の標本は、 Biochain Inc. ( San Leandro, CA) より購入した。 組織切片のスライ ドは、 パラフィンワックスを取り除き、 0.3% H202を含むメタ ノールに 3 0分間反応させ内因性ペルォキシターゼの活性を除去した後、 5%の正 常ャギ血清で 20分間処置した。 その後、 0.1% 牛血清アルブミンを含む PBS 中 で、 抗 X型 sPLA2抗体 （6 g/mL) と 14時間、 4°Cで反応させた。 PBSで洗浄 後、 ビォチンを結合したャギ抗ゥサギ IgG抗体と 30分間反応させ、ペルォキシダ ーゼ含有アビジン—ピオチン複合体試薬 （Vector Laboratories) で処置した。 洗 浄後、 200 g/mh のジァミノべンジジンと 0.006% H202 を含む 50 mmol/L Tris-HCl (PH 7.6)緩衝液中で 10分間反応させることによりペルォキシダーゼ活 性を呈色し組織標本中の X型 sPLA2を可視化した。 また、 0.4%へマトキシリン水 溶液との反応により、 細胞核を対比染色した。 X型 sPLA2陽性シグナルは、 濃い 茶色のジアミノベンジデンの沈着として検出した。 X型 sPLA2シグナルの中和実 験は、 抗体をスライ ドに添加する前に、 精製した X型 sPLA2蛋白質 （60 JUL g/mL) と 2時間反応させることにより行なった。
その結果、 X型 sPLA2の陽性シグナルは、 正常胃組織ではほとんど検出されず、 胃癌患者由来胃組織においては、 癌細胞に強く検出された。 これらのシグナルは、 X型 sPLA2蛋白質の添加で消失したことから X型 sPLA2に特異的であることが確 認された。 また、 これら陽性シグナルは、 非免疫のゥサギから調製した IgGでは 認められなかった。 以上の結果から、 胃癌では X型 sPLA2蛋白質が顕著に高発現 していることが示唆された。 実施例 7 抗 X型 sPLA2抗体を用いたヒ ト腎臓組織の免疫組織化学的解析
本試験には、 The Journal of Biological Chemistry Vol. 274, No. 48, pp. 34203-34211 1999記載の抗 X型 sPLA2抗体を用いた。 健常成人腎臓組織ならび に腎臓癌患者由来腎臓組織の標本は、 Biochain Inc. (San Leandro, CA) より購 入した。 組織切片のスライ ドは、 パラフィ ンワックスを取り除き、 0.3% H202を 含むメ夕ノ一ルに 3 0分間反応させ内因性ペルォキシターゼの活性を除去した後、 5%の正常ャギ血清で 20 分間処置した。 その後、 0.1% 牛血清アルブミンを含む PBS中で、 抗 X型 sPLA2抗体 （6 Ad g/mL) と 14時間、 4°Cで反応させた。 ： PBS で洗浄後、 ピオチンを結合したャギ抗ゥサギ IgG抗体と 30分間反応させ、 ペルォ キシダ一ゼ含有アビジン—ピオチン複合体試薬 （Vector Laboratories) で処置し た。洗浄後、 200 〃g/mLのジアミノベンジジンと 0.006% H202を含む 50 mmol/L Tris-HCl (pH 7.6)緩衝液中で 10分間反応させることによりペルォキシダーゼ活 性を呈色し組織標本中の X型 sPLA2を可視化した。 また、 0.4%へマトキシリン水 溶液との反応により、 細胞核を対比染色した。 X型 sPLA2陽性シグナルは、 濃い 茶色のジアミノベンジデンの沈着として検出した。 X型 sPLA2シグナルの中和実 験は、 抗体をスライ ドに添加する前に、 精製した X型 sPLA2蛋白質 （60 mL) と 2時間反応させることにより行なった。
その結果、 X型 sPLA2の陽性シグナルは、 正常腎臓組織では糸球体メサンギゥ ム細胞において低レベルながら検出されたが、 腎臓癌患者由来腎臓組織において は、 癌細胞に強く検出された。 これらのシグナルは、 X型 sPLA2蛋白質の添加で 消失したことから X型 sPLA2に特異的であることが確認された。 また、 これら陽 性シグナルは、 非免疫のゥサギから調製した IgGでは認められなかった。 以上の 結果から、 腎臓癌では X型 sPLA2蛋白質が顕著に高発現していることが示唆され た。 実施例 8 抗 X型 sPLA2抗体を用いたヒ ト胆嚢組織の免疫組織化学的解析 本試験には、 The Journal of Biological Chemistry Vol. 274, No . 48, pp . 34203-34211 1999記載の抗 X型 sPLA2抗体を用いた。 健常成人胆嚢組織ならび に胆嚢癌患者由来胆嚢組織の標本は、 Biochain Inc. ( San Leandro, CA) より購 入した。 組織切片のスライ ドは、 パラフィンワックスを取り除き、 0.3% ¾02 を 含むメ夕ノールに 3 0分間反応させ内因性ペルォキシ夕ーゼの活性を除去した後、 5%の正常ャギ血清で 20 分間処置した。 その後、 0.1% 牛血清アルブミンを含む PBS 中で、 抗 X型 sPLA2抗体 （6 g/ L) と 14時間、 4°Cで反応させた。 PBS で洗浄後、 ピオチンを結合したャギ抗ゥサギ IgG抗体と 30分間反応させ、 ペルォ キシダーゼ含有アビジン—ピオチン複合体試薬 （Vector Laboratories) で処置し た。洗浄後、 200 g/mLのジァミノべンジジンと 0.006% H202を含む 50 mmol/L Tris-HCl (pH 7.6) 緩衝液中で 10分間反応させることによりペルォキシダ一ゼ活 性を呈色し組織標本中の X型 sPLA2を可視化した。 また、 0.4%へマトキシリ ン水 溶液との反応により、 細胞核を対比染色した。 X型 sPLA2陽性シグナルは、 濃い 茶色のジァミノベンジデンの沈着として検出した。 X型 sPLA2シグナルの中和実 験は、 抗体をスライ ドに添加する前に、 精製した X型 sPLA2蛋白質 （60 g mL) と 2時間反応させることにより行なった。
その結果、 X型 sPLA2の陽性シグナルは、 正常胆嚢組織ではほとんど検出され ず、 胆嚢癌患者由来胆嚢組織においては、 癌細胞に強く検出された。 これらのシ グナルは、 X型 sPLA2蛋白質の添加で消失したことから X型 sPLA2に特異的であ ることが確認された。 また、 これら陽性シグナルは、 非免疫のゥサギから調製し た IgGでは認められなかった。 以上の結果から、 胆嚢癌では X型 sPLA2蛋白質が 顕著に高発現していることが示唆された。 実施例 9 抗 X型 sPLA2抗体を用いたヒト前立腺組織の免疫組織化学的解析 本試験には、 The Journal of Biological Chemistry Vol. 274, No . 48, pp . 34203-34211 1999記載の抗 X型 sPLA2抗体を用いた。 健常成人前立腺組織なら びに前立腺癌患者由来前立腺組織の標本は、 Biochain Inc. ( San Leandro, CA) より購入した。組織切片のスライ ドは、パラフィンワックスを取り除き、 0.3% H202 を含むメ夕ノールに 3 0分間反応させ内因性ペルォキシ夕ーゼの活性を除去した 後、 5%の正常ャギ血清で 20分間処置した。 その後、 0.1% 牛血清アルブミンを含 む PBS中で、 抗 X型 sPLA2抗体（6 z g/mL) と 14時間、 4°Cで反応させた。 PBS で洗浄後、 ピオチンを結合したャギ抗ゥサギ IgG抗体と 30分間反応させ、 ペルォ キシダ一ゼ含有アビジン—ピオチン複合体試薬 （Vector Laboratories) で処置し た。洗浄後、 200 〃g/mLのジァミノべンジジンと 0.006% H2O2を含む 50 mmol/L Tris-HCl ( pH 7.6)緩衝液中で 10分間反応させることによりペルォキシダ一ゼ活 性を呈色し組織標本中の X型 sPLA2を可視化した。 また、 0.4%へマトキシリン水 溶液との反応により、 細胞核を対比染色した。 X型 sPLA2陽性シグナルは、 濃い 茶色のジァミノベンジデンの沈着として検出した。 X型 sPLA2シグナルの中和実 験は、 抗体をスライ ドに添加する前に、 精製した X型 sPLA2蛋白質 （60 g/mL) と 2時間反応させることにより行なった。
その結果、 X型 sPLA2の陽性シグナルは、 正常前立腺組織ではほとんど検出さ れず、 前立腺癌患者由来前立腺組織においては、 癌細胞に強く検出された。 これ らのシグナルは、 X型 sPLA2蛋白質の添加で消失したことから X型 sPLA2に特異 的であることが確認された。 また、 これら陽性シグナルは、 非免疫のゥサギから 調製した IgGでは認められなかった。 以上の結果から、 前立腺癌では X型 sPLA2 蛋白質が顕著に高発現していることが示唆された。 実施例 1 0 抗： X型 SPLA2抗体を用いたヒト脬臓組織の免疫組織化学的解析 本試験には、 The Journal of Biological Chemistry Vol. 274, No. 48, pp. 34203-34211 1999記載の抗 X型 sPLA2抗体を用いた。 健常成人膦臓組織ならび に滕臓癌患者由来脬臓組織の標本は、 Biochain Inc. ( San Leandro, CA) より購 入した。 組織切片のスライ ドは、 パラフィ ンワックスを取り除き、 0.3% H202 を 含むメタノールに 3 0分間反応させ内因性ペルォキシタ一ゼの活性を除去した後、 5%の正常ャギ血清で 20 分間処置した。 その後、 0.1% 牛血清アルブミンを含む PBS 中で、 抗 X型 sPLA2抗体 （6 Z g/mL) と 14時間、 4°Cで反応させた。 PBS で洗浄後、 ピオチンを結合したャギ抗ゥサギ IgG抗体と 30分間反応させ、 ペルォ キシダ一ゼ含有アビジン一ピオチン複合体試薬 （Vector Laboratories) で処置し た。洗浄後、 200 〃g/mLのジァミノべンジジンと 0.006% H2O2を含む 50 mmol/L Tris-HCl (pH 7.6)緩衝液中で 10分間反応させることによりペルォキシダ一ゼ活 性を呈色し組織標本中の X型 sPLA2を可視化した。 また、 0.4%へマトキシリン水 溶液との反応により、 細胞核を対比染色した。 X型 sPLA2陽性シグナルは、 濃い 茶色のジアミノベンジデンの沈着として検出した。 X型 sPLA2シグナルの中和実 験は、 抗体をスライ ドに添加する前に、 精製した X型 sPLA2蛋白質 （60 g/mL) と 2時間反応させることにより行なった。
その結果、 X型 sPLA2の陽性シグナルは、 正常脬臓組織ではほとんど検出され ず、 脬臓癌患者由来滕臓組織においては、 癌細胞に強く検出された。 これらのシ グナルは、 X型 sPLA2蛋白質の添加で消失したことから X型 sPLA2に特異的であ ることが確認された。 また、 これら陽性シグナルは、 非免疫のゥサギから調製し た IgGでは認められなかった。 以上の結果から、 滕臓癌では X型 sPLA2蛋白質が 顕著に高発現していることが示唆された。 実施例 1 1 抗 X型 sPLA2抗体を用いたヒト精巣組織の免疫組織化学的解析 本試験には、 The Journal of Biological Chemistry Vol. 274, No. 48， pp. 34203-34211 1999記載の抗 X型 sPLA2抗体を用いた。 健常成人精巣組織ならび に精巣癌患者由来精巣組織の標本は、 Biochain Inc. ( San Leandro, CA) より購 入した。 組織切片のスライ ドは、 パラフィンワックスを取り除き、 0.3% H202 を 含むメタノールに 3 0分間反応させ内因性ペルォキシターゼ活性を除去した後、 5%の正常ャギ血清で 20 分間処置した。 その後、 0.1% 牛血清アルブミンを含む PBS 中で、 抗 X型 sPLA2抗体 （6 g/mL) と 14時間、 4°Cで反応させた。 PBS で洗浄後、 ビ才チンを結合したャギ抗ゥサギ IgG抗体と 30分間反応させ、 ペルォ キシダーゼ標識アビジン—ピオチン複合体試薬 （Vector Laboratories) で処置し た。洗浄後、 200 〃g/mLのジァミノべンジジンと 0.006% H202を含む 50 mmol/L Tris-HCl (pH 7.6)緩衝液中で 10分間反応させることによりペルォキシダーゼ活 性を呈色し組織標本中の X型 sPLA2を可視化した。 また、 1% メチルグリーン含 有 0.1 mol/L酢酸ナト リウム （pH 4.0) との反応により、 細胞核を対比染色した。 X型 sPLA2陽性シグナルは、 濃い茶色のジァミノベンジデンの沈着として検出し た。 X型 sPLA2シグナルの中和実験は、 抗体をスライ ドに添加する前に、 精製し た X型 sPLA2蛋白質 （60 Ai g/mL) と 2時間反応させることにより行なった。 その結果、 X型 sPLA2の陽性シグナルは、 正常精巣組織では精細管の一部にご くわずかながら検出されたが、 精巣癌患者由来精巣組織においては、 精細管およ び精嚢上皮に生じた癌細胞に強く検出された。 これらのシグナルは、 X型 sPLA2 蛋白質の添加で消失したことから X型 sPLA2に特異的であることが確認された。 また、 これら陽性シグナルは、 非免疫のゥサギから調製した IgGでは認められな かった。 以上の結果から、 精巣癌では X型 sPLA2蛋白質が顕著に高発現している ことが示唆された。 実施例 1 2 抗： X型 sPLA2抗体を用いたヒ ト卵巣組織の免疫組織化学的解析 本試験には、 The Journal of Biological Chemistry Vol. 274, No. 48， pp. 34203-34211 1999記載の抗 X型 sPLA2抗体を用いた。 健常成人卵巣組織ならび に卵巣癌患者由来卵巣組織の標本は、 Biochain Inc. ( San Leandro, CA) より購 入した。 組織切片のスライ ドは、 パラフィ ンワックスを取り除き、 0.3% H202を 含むメタノールに 3 0分間反応させ内因性ペルォキシタ一ゼ活性を除去した後、 5%の正常ャギ血清で 20 分間処置した。 その後、 0.1% 牛血清アルブミンを含む FBS 中で、 抗 X型 sPLA2抗体 （6 〃g/mL) と 14時間、 4°Cで反応させた。 PBS で洗浄後、 ピオチンを結合したャギ抗ゥサギ IgG抗体と 30分間反応させ、 ペルォ キシダーゼ標識アビジン-ピオチン複合体試薬 （Vector Laboratories) で処置し た。洗浄後、 200 g/mLのジァミノべンジジンと 0.006% H202を含む 50 mmol/L Tris-HCl (pH 7.6)緩衝液中で 10分間反応させることによりペルォキシダーゼ活 性を呈色し組織標本中の X型 sPLA2を可視化した。 また、 1% メチルグリーン含 有 O. l mol/L酢酸ナトリウム （ρΗ 4·0) との反応により、 細胞核を対比染色した。 X型 sPLA2陽性シグナルは、 濃い茶色のジァミノベンジデンの沈着として検出し た。 X型 sPLA2シグナルの中和実験は、 抗体をスライ ドに添加する前に、 精製し た X型 sPLA2蛋白質 （60 U glmh) と 2時間反応させることにより行なった。 その結果、 X型 sPLA2の陽性シグナルは、 正常卵巣組織ではほとんど検出され なかったが、 卵巣癌患者由来卵巣組織においては、 卵胞上皮から卵管付近に生じ た癌細胞に強く検出された。 これらのシグナルは、 X型 sPLA2蛋白質の添加で消 失したことから X型 sPLA2に特異的であることが確認された。 また、 これら陽性 シグナルは、 非免疫のゥサギから調製した IgGでは認められなかった。 以上の結 果から、卵巣癌では X型 sPLA2蛋白質が顕著に高発現していることが示唆された。 実施例 1 3 抗 X型 sPLA2抗体を用いたヒ ト皮膚組織の免疫組織化学的解析 本試験には、 The Journal of Biological Chemistry Vol. 274, No. 48, pp . 34203-34211 1999記載の抗 X型 sPLA2抗体を用いた。 健常成人皮膚組織ならび に皮膚癌（悪性黒色腫）患者由来皮膚組織の標本は、 Biochain lnc. ( San Leandro, CA)より購入した。組織切片のスライ ドは、パラフィンヮヅクスを取り除き、 0.3% ¾02 を含むメタノールに 3 0分閬反応させ内因性ペルォキシターゼ活性を除去 した後、 5%の正常ャギ血清で 20分間処置した。 その後、 0.1% 牛血清アルブミン を含む PBS中で、 抗 X型 sPLA2抗体 （6 u g/mL) と 14時間、 4°Cで反応させた。 PBSで洗浄後、 ピオチンを結合したャギ抗ゥサギ IgG抗体と 30分間反応させ、 ペルォキシダ一ゼ標識アビジン—ピオチン複合体試薬 （Vector Laboratories) で 処置した。 洗浄後、 200 g/mLのジァミノべンジジンと 0.006% H2O2を含む 50 mmol/L Tris-HCl ( pH 7.6) 緩衝液中で 10分間反応させることによりペルォキシ ダ一ゼ活性を呈色し組織標本中の X型 sPLA2を可視化した。 また、 1% メチルダ リーン含有 0.1 mol/L酢酸ナト リウム （pH 4.0) との反応により、 細胞核を対比 染色した。 X型 sPLA2陽性シグナルは、 濃い茶色のジァミノベンジデンの沈着と して検出した。 X型 sPLA2シグナルの中和実験は、 抗体をスライ ドに添加する前 に、 精製した X型 sPLA2蛋白質 （60 g mL) と 2時間反応させることにより行 なった。
その結果、 X型 sPLA2の陽性シグナルは、 正常皮膚組織では表皮の有棘細胞層 から基底細胞層のメラノサイ トにおいて低レベルながら検出されたが、皮膚癌（悪 性黒色腫） 患者由来皮膚組織においては、 異型メラノサイ トに強く検出された。 これらのシグナルは、 X型 sPLA2蛋白質の添加で消失したことから X型 sPLA2に 特異的であることが確認された。 また、 これら陽性シグナルは、 非免疫のゥサギ から調製した IgGでは認められなかった。 以上の結果から、 皮膚癌 （悪性黒色腫） では X型 sPLA2蛋白質が顕著に高発現していることが示唆された。 実施例 1 4 ヒ ト大腸ガン細胞株 HT-29細胞におけるヒ ト X型 sPLA2によるォレ イン酸遊離に対する sPLA2阻害剤の阻害効果
被験化合物として、 化合物 （ 1 ) および化合物 （ 1 9 ) を用いた。
10%ゥシ胎児血清入り DMEM培地にて培養したヒ ト大腸ガン細胞株 HT-29細 胞 （ATCC より購入） を、 リン酸緩衝生理食塩水 （PBS) にて洗浄後、 ト リプシ ン · EDTA 溶液によりプレートから剥離し、 さらに ； PBS で洗浄後、 12.5 x 10s cells/mlの細胞密度になるように 0.1% ゥシ血清アルブミン（BSA)を含む Hanks 緩衝生理食塩水に懸濁した。 そのうち 0.4 mlをポリプロピレンチューブにとり、 ジメチルスルホキシド （DMSO) に溶解した被験化合物（最終濃度 10〃M ; DMSO に溶解） を添加し、 37°Cで 10分間保温した。その後、 100 nM精製ヒ ト X型 sPLA2 酵素 (Hanasakiら、 J. Biol. Chem. (1999) 274, 34203-34211) を添加し （最終 反応容積 0.5 ml) 、 さらに 37°Cで 30分間保温後、 2 mlのドールズ試薬 （ヘプ夕 ン ： 2 —プロパノール ： 1M硫酸 = 10:40: 1, v/v/v) を添加することにより反応 を停止した。 その後、 Tojo らの方法 （J. Lipid. Res. (1993) 34, 837-844) に準じ て、 脂肪酸を抽出し、 9-anthryldiazometliane (フナコシ） で脂肪酸を標識後、 逆 相高速液体ク口マトグラフィー （LiChroCART 125-4 Superspher 100 KP-18カラ ム （Merck)) にて、 ォレイン酸の定量を行った。 データーは、 X型 sPLA2を添加 していない時の値を差し引いた後、 X型酵素添加により増加したォレイン酸量を 100%とし、 これに対する各被験化合物存在下での遊離量を％で示した。 表 2に示 すように、 各被験化合物は X型 sPLA2によるォレイン酸遊離反応を有意に抑制し た。 実施例 1 5ヒ ト大腸ガン細胞株 HT-29細胞におけるヒ ト X型 sPLA2による PGE2 産生作用に対する sPLA2阻害剤の阻害効果
HT-29細胞を 2.5 x lO5 cells/mlの細胞密度で 24穴プレートに播種し、 24時間 後に細胞を PBSにて洗浄後、 30 ng/mlの Tumor necrosis factor-a(R & D Systems, Inc.)を含む 10%ゥシ胎児血清入り DMEM培地にてさらに 18時間培養した。 PBS にて洗浄後、 DMSOに溶解した被験化合物 （最終濃度 10 M ; DMSOに溶解） を 含む 0.1% BSA含有 Hanks緩衝生理食塩水を添加し、 37°Cで 10分間保温後、 100 nM精製ヒ ト X型 sPLA2酵素を添加し （最終反応容積 0.5 ml) 、 さらに 37°Cで 3 時間保温した。 その後、 培養上清を回収し、 遠心分離にて浮遊細胞を除いた後、 上清中の PGE2量を市販の酵素免疫測定キヅ ト （Cayman Chemicals Co.) にて定 量した。 データ一は、 X型 sPLA2を添加していない時の値を差し引いた後、 X型 酵素添加により産生された PGE2量を 100%とし、 これに対する各被験化合物存在 下での産生量を％で示した。 表 2に示すように、 各被験化合物は X型 sPLA2によ る PGE2産生反応を有意に抑制した。
PGE2か癌の発生と綿密な関係を有することが Cancer Research 59, 5093-5096, 1999に記載されている。 本発明化合物は、 X型 sPLA2による PGE2産生反応を有 意に抑制することから、 抗癌剤として使用し得る。 表 2
Figure imgf000038_0001
Student's t-test (*P < 0.05, **P < 0.01) 製剤例
以下に示す製剤例 1 ~ 8は例示にすぎないものであり、 発明の範囲を何ら限定 することを意図するものではない。 「活性成分」 なる用語は、 X型 s PLA2阻害 作用を有する化合物、 そのプロ ドラッグ、 もしくはそれらの製薬上許容される塩、 またはそれらの水和物を意味する。 製剤例 1
硬質ゼラチンカプセルは次の成分を用いて製造する
用量
(m
沽性成分 25 0
デンプン （乾燥） 20 0
ステアリ ン酸マグネシウム 1 0
合計 46 0 m g 製剤例 2
錠剤は下記の成分を用いて製造する ：
用量
(mg/錠剤）
活性成分 25 0
セルロース （微結晶） 40 0 二酸化ケイ素 （ヒューム） 1 0
ステアリ ン酸 5
合計 66 5 m g
成分を混合し、 圧縮して各重量 6 6 5 mgの錠剤にする。 製剤例 3
以下の成分を含有するエアロゾル溶液を製造する ： 活性成分 0. 25 エタノール 2 5. 75 プロペラント 22 (クロロジフルォロメタン） 74. 00 合計 1 0 0. 00 活性成分とエタノールを混合し、 この混合物をプロペラント 2 2の一部に加え、 - 3 0°Cに冷却し、 充填装置に移す。 ついで必要量をステンレススチール容器へ 供給し、 残りのプロペラントで希釈する。 バブルユニッ トを容器に取り付ける。 製剤例 4
活性成分 60 mgを含む錠剤は次のように製造する
活性成分 6 0 m g
45 m g 微結晶性セルロース 3 5 m g ポリビニルピロリ ドン （水中 1 0 %溶液） 4 m g ナトリウムカルボキシメチルデンプン 4. 5 m g ステアリ ン酸マグネシウム 0. 5 m g 滑石 1 m g 合計 1 5 0 m g 活性成分、 デンプン、 およびセルロースは No 45メッシュ U. S . のふる いにかけて、 十分に混合する。 ポリ ビニルピロリ ドンを含む水溶液を得られた粉 末と混合し、 ついで混合物を N o . 1 4メ ッシュ U. S . ふるいに通す。 このよ うにして得た顆粒を 5 0 °Cで乾燥して Ν ο . 1 8メッシュ U. S . ふるいに通す。 あらかじめ N o . 6 0メッシュ U. S . ふるいに通したナトリ ウムカルボキシメ チルデンプン、 ステアリン酸マグネシウム、 および滑石をこの顆粒に加え、 混合 した後、 打錠機で圧縮して各重量 1 5 O mgの錠剤を得る。 製剤例 5
活性成分 8 0 m gを含むカプセル剤は次のように製造する
活性成分 8 0 m g
5 9 m g- 微結晶性セルロース 5 9 m g ステアリン酸マグネシウム _一 2 g
合計 2 0 0 mg 活性成分、 デンプン、 セルロース、 およびステアリン酸マグネシウムを混合し、
N o . 4 5メヅシュ U. S . のふるいに通して硬質ゼラチンカプセルに 2 0 0 m gずつ充填する。 製剤例 6
活性成分 2 2 5 mgを含む坐剤は次のように製造する ：
活性成分 2 2 5 m g 飽和脂肪酸グリセリ ド 2 0 0 0 m ¾ 合計 2 2 2 5 mg 活性成分を N o . 6 0メッシュ ϋ· S . のふるいに通し、 あらかじめ必要最小 限に加熱して融解させた飽和脂肪酸グリセリ ドに懸濁する。ついでこの混合物を、 みかけ 2 gの型に入れて冷却する。 製剤例 7
活性成分 5 Omgを含む懸濁剤は次のように製造する ：
活性成分 D 0 m g ナトリウムカルボキシメチルセルロース 5 0 m g シ口ップ 1. 2 5 ml 安息香酸溶液 0. 1 0 ml 香料 q . v .
Θ q . v .
精製水を加え合計 5 ml 活性成分を No . 45メッシュ U. S . のふるいにかけ、 ナト リウムカルボキ シメチルセルロースおよびシロヅプと混合して滑らかなペース トにする。 安息香 酸溶液および香料を水の一部で希釈して加え、 攪拌する。 ついで水を十分量加え て必要な体積にする。 製剤例 8
静脈用製剤は次のように製造する ：
活性成分 1 00 mg 飽和脂肪酸グリセリ ド 1 0 0 0 ml 上記成分の溶液は通常、 1分間に 1 m 1の速度で患者に静脈内投与される。 産業上の利用可能性
X型 s P LA2阻害剤は癌の予防または治療剤として有効であることを見出し た。

Claims

請求の範囲
1. X型 s P L A2阻害剤を有効成分として含有する癌の予防または治療剤,
2. —般式 （I ) ：
Figure imgf000042_0001
(式中、 A環は以下の （a) 〜 （d) で表わされる環
Figure imgf000042_0002
(a) ，または (
(式中、 R1および R2は、 それそれ独立して水素原子、 非妨害性置換基、 または 一 （L1) 一 （酸性基） （式中、 L 1は酸性基との連結基を示し、 酸性基との連結 基の長さは 1 ~5である） 。 ただし、 R1または R 2のどちらか一方は一 （L 1) 一 （酸性基） である。 ；
R 3および R 4は、 それそれ独立して水素原子、 非妨害性置換基、 炭素璟基、 非妨 害性置換基で置換された炭素環基、 複素環基、 または非妨害性置換基で置換され た複素璟基） ；
—B—は以下の （e) 〜 （h) で表わされる基： -
Figure imgf000042_0003
または
(e) (f) (h)
(式中、 R 5は ( j ) C 1— C 2 0アルキル、 C 2 - C 2 0アルケニル、 C 2 - C 2 0アルキニル、 炭素環基、 または複素環基、 （k) 1またはそれ以上、 それそ れ独立して、 非妨害性置換基から選択される基によって置換された （j ) で示し た基、 または— （L 2) — R8 (式中、 L2は水素原子、 窒素原子、 炭素原子、 酸 素原子、および硫黄原子から選択される 1 ~ 1 8原子の 2価の連結基； R8は（ j ) または （k) から選択される基） から選択される基；
R6は、 水素原子、 ハロゲン、 C 1一 C 3アルキル、 C 3— C 4シクロアルキル、 C 3— C 4シクロアルケニル、 C 1一 C 3アルキルォキシ、 または C 1— C 3ァ ルキルチオ ；
R7は、 水素原子または非妨害性置換基；
RAは、 式 ：
Figure imgf000043_0001
(式中、 R 9および R 1 Qはそれぞれ独立して、 水素原子、 C 1— C 3アルキル、 またはハロゲン ；
Xおよび Υはそれそれ独立して酸素原子または硫黄原子 ；
Ζは一ΝΗ2または一 ΝΗΝΗ2) で表わされる基；
RBは、 一 CONH2または一 CONHNH2 ;
D環はシクロへキセン環またはベンゼン璟） ；
ただし、 一 B—が （e) または （： Π である場合は、 A環は （b) 、 （c) 、 ま たは （d) である） で示される化合物、 そのプロ ドラッグ、 もしくはそれらの製 薬上許容される塩、 またはそれらの溶媒和物を有効成分として含有する癌の予防 または治療剤。
3. R1が水素原子または一 （L3) -R 1 1 (式中、 L3は— O CH2—、 一 S CH2—、 -NH - C H2 — CH2— CH2—、 一 0— CH (CH3) 一、 また は—0— CH (CH2 CH2 C6H5) ―、 R 1 1は— C OOH、 - C 0 NH S 02 C6H5、 一 S〇 3H、 または一 P (0) (OH) 2) ；
R 2が水素原子または— （L4) -R 1 2 (式中、 L4は式 ：
Figure imgf000044_0001
(式中、 R 13および R 14はそれそれ独立して、 水素原子、 〇 1ー 01 0ァルキル、 〇 1ー 01 0ァラルキル、 カルボキシ、 アルキルォキシカルボニル、 またはハロ ゲン） 、 R12は一 C00H、 一 S03H、 または一P (0) (0 H) 2) ； ただし- R 1および R 2は同時に水素原子ではない） である請求の範囲第 2項記載の化合物、 そのプロ ドラッグ、 もしくはそれらの製薬上許容される塩、 またはそれらの溶媒 和物を有効成分として含有する癌の予防または治療剤。
4. R 3が水素原子、 C 1— C 6アルキル、 C 3— C 6シクロアルキル、 ァリ一ル、 または複素璟基であり、 R 4が水素原子またはハロゲンである請求の範囲第 2項記 載の化合物、 そのプロ ドラッグ、 もしくはそれらの製薬上許容される塩、 または それらの溶媒和物を有効成分として含有する癌の予防または治療剤。
5. R5が— （CH2) 丄— 6— R15 (R15は式：
Figure imgf000045_0001
— (CH2)j (R16)k — (CHs) m ( 16)n
a
, または
Figure imgf000045_0002
(式中、 b、 d、 f、 h、 j、 m、 および oはそれぞれ独立して 0〜2の整数、 R 1 6および R 1 7はそれぞれ独立してハロゲン、 C 1— C 1 0アルキル、 C 1一 C 1 0アルキルォキシ、 C 1 - C 1 0アルキルチオ、 ァリールォキシ、 および C 1 — C 1 0ハロアルキルから独立に選択される基、 aは酸素原子または硫黄原子、 5は一 CH2—または一 （CH2) 2—、 ァは酸素原子または硫黄原子、 c、 i、 および Pは 0〜 5の整数、 eは 0~7の整数、 gは 0~4の整数、 kおよび nは それぞれ独立して 0〜3の整数） で表わされる基である請求の範囲第 2項記載の 化合物、 そのプロ ドラッグ、 も しくはそれらの製薬上許容される塩、 またはそれ らの溶媒和物を有効成分として含有する癌の予防または治療剤。
6. R5が—CH2— R 18 (R 1 8は式 ：
Figure imgf000046_0001
(式中、 ?は一 CH2—または一 （CH2) 2 R 19は水素原子、 C 1一 C 3ァ ルキル、 またはハロゲン； Eは単結合、 一 CH2-または— 0—） で表わされる基 である） で示される請求の範囲第 5項記載の化合物、 そのプロ ドラッグ、 もしく はそれらの製薬上許容される塩、 またはそれらの溶媒和物を有効成分として含有 する癌の予防または治療剤。
7. R 1がー 0 C H2 C 00 Hである請求の範囲第 2項記載の化合物、 そのプロ ド ラッグ、 もしくはそれらの製薬上許容される塩、 またはそれらの溶媒和物を有効 成分として含有する癌の予防または治療剤。
8. R 2が水素原子である請求の範囲第 2項記載の化合物、 そのプロ ドラヅグ、 も しくはそれらの製薬上許容される塩、 またはそれらの溶媒和物を有効成分として 含有する癌の予防または治療剤。
9. R6が C 1— C 3アルキルである請求の範囲第 2項記載の化合物、 そのプロ ド ラッグ、 もしくはそれらの製薬上許容される塩、 またはそれらの溶媒和物を有効 成分として含有する癌の予防または治療剤。
1 0. RAが— C H2 C ONH 2または一 C 0 C 0 N H 2である請求の範囲第 2項記 載の化合物、 そのプロ ドラッグ、 もしくはそれらの製薬上許容される塩、 または それらの溶媒和物を有効成分として含有する癌の予防または治療剤。
1 1. 式 ：
Figure imgf000046_0002
Figure imgf000047_0001
で示される化合物、 そのプ n ドラッグ、 もしくはそれらの製薬上許容される塩、 またはそれらの溶媒和物を有効成分として含有する癌の予防または治療剤。
1 2 . 癌が大腸癌、 肺癌、 肝臓癌、 胃癌、 腎臓癌、 胆嚢癌、 前立腺癌、 滕臓癌、精 巣癌、卵巣癌、 または皮膚癌である請求の範囲第 1項〜第 1 1項のいずれかに記載 の癌の予防または治療剤。
1 3 . 癌が大腸癌である請求の範囲第 1項〜第 1 1項のいずれかに記載の癌の予 防または治療剤。
1 4 . 癌を治療するための医薬を製造するための X型 s P L A 2阻害剤の使用。
1 5 . X型 s P L A 2阻害剤が請求の範囲第 2項〜第 1 1項のいずれかに記載の化 合物である請求の範囲第 1 4項記載の使用。
1 6 . X型 s P L A 2阻害剤の治療上効果を示す量を人を含む哺乳動物に投与する ことからなる、 癌による影響を緩和するための哺乳動物を治療する方法。
1 7 . X型 s P L A 2阻害剤が請求の範囲第 2項〜第 1 1項のいずれかに記載の化 合物である請求の範囲第 1 6項記載の哺乳動物を治療する方法。
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