WO2007087738A1 - Biologisch aktive tripeptide, deren kupferkomplexe und salze - Google Patents

Biologisch aktive tripeptide, deren kupferkomplexe und salze Download PDF

Info

Publication number
WO2007087738A1
WO2007087738A1 PCT/CH2007/000050 CH2007000050W WO2007087738A1 WO 2007087738 A1 WO2007087738 A1 WO 2007087738A1 CH 2007000050 W CH2007000050 W CH 2007000050W WO 2007087738 A1 WO2007087738 A1 WO 2007087738A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
sub
skin
tripeptides
sup
salts
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Ceased
Application number
PCT/CH2007/000050
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
Hugo Ziegler
Peter Wikstroem
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
DSM Nutritional Products AG
Original Assignee
Pentapharm AG
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Pentapharm AG filed Critical Pentapharm AG
Publication of WO2007087738A1 publication Critical patent/WO2007087738A1/de
Anticipated expiration legal-status Critical
Ceased legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q19/00—Preparations for care of the skin
    • A61Q19/08—Anti-ageing preparations
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/19—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing inorganic ingredients
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/30—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds
    • A61K8/64—Proteins; Peptides; Derivatives or degradation products thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/02—Drugs for dermatological disorders for treating wounds, ulcers, burns, scars, keloids, or the like
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q19/00—Preparations for care of the skin
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/06—Dipeptides
    • C07K5/06086—Dipeptides with the first amino acid being basic
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/08—Tripeptides
    • C07K5/0802—Tripeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/0804—Tripeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic
    • C07K5/0806—Tripeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic the side chain containing 0 or 1 carbon atoms, i.e. Gly, Ala
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/08—Tripeptides
    • C07K5/0802—Tripeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/0804—Tripeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic
    • C07K5/0808—Tripeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic the side chain containing 2 to 4 carbon atoms, e.g. Val, Ile, Leu
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/08—Tripeptides
    • C07K5/0802—Tripeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/0812—Tripeptides with the first amino acid being neutral and aromatic or cycloaliphatic
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2800/00—Properties of cosmetic compositions or active ingredients thereof or formulation aids used therein and process related aspects
    • A61K2800/40—Chemical, physico-chemical or functional or structural properties of particular ingredients
    • A61K2800/58—Metal complex; Coordination compounds
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides

Definitions

  • the present invention relates to biologically active tripeptides, their 1: 1 copper complexes and salts thereof.
  • GHK-Cu is a potent, selective activator for the skin in wound healing processes, removing scars or damaged tissue and forming and properly storing new tissue.
  • GHK-Cu is involved in the construction of new skin tissue by enhancing angiogenesis and generally stimulates the synthesis of extracellular matrix (ECM) molecules, such as the production of collagen I and III, the accumulation of glycosaminoglycans and proteoglycans, e.g. Decorin (but not biglycan) as well as elastin.
  • ECM extracellular matrix
  • GHK-Cu also stimulated the chemotaxis of leukocytes.
  • GHK-Cu basically stimulates the synthesis of ECM molecules, in serum of free primary culture it was shown that GHK-Cu reduces the excretion of TGF-ß-1 from normal fibroblasts and especially in keloid-forming (scar-forming) fibroblasts.
  • the improved healing of wounds or new formation of fresh Skin tissue by GHK-Cu is also based, inter alia, on a selective stimulation of MMP-9 and MMP-2 in an early or late phase of the wound healing process. This accelerates the breakdown of damaged protein and removes scars, and appropriately increases the synthesis of new collagen. Overall, there is improved wound healing with less scarring. Further effects are described in Cosmetics & Toiletries 118 (7), 24-28 (2003).
  • GHK-Cu topical cosmetic application
  • the positive effects of GHK-Cu in topical cosmetic application are i.a. an increase in skin thickness in the epidermis and dermis, improved skin hydration, significant smoothing of the skin through the stimulation of collagen synthesis, increased elasticity of the skin, marked improvement in skin contrast, increased production of collagen I, glycosaminoglycans and decorin Damaged skin (Nils Krüger et al., Cosmetic Medicine 2003 (1), 31-33; Alain Simeon et al., J. Invest Dermatol., 115, 962-968 (2000)).
  • GHK-Cu The topical application of GHK-Cu, however, is associated with two serious disadvantages.
  • the enzymatic stability of GHK-Cu to peptidases in the skin is very low. Within one minute, 95% GHK is degraded to glycine and HK. In addition, only between 0.1 and 0.3% of the applied amount can penetrate into the dermis. As a result, high concentrations (4%) of GHK-Cu have to be used for a still unsatisfactory effect (Loren Pickart, Published Studies on Copper-Peptide Induced Tissue Regeneration).
  • the object of the present invention was to find GHK-Cu analogous active ingredients whose stability is higher and / or their skin penetration rate significantly improved. It has now been found that, surprisingly, with selected artificial peptides, as they are defined herein below, stable 1: 1 copper complexes can be obtained and that the biological activity of these peptides not only remains intact but can even be improved in some cases. Description of the invention
  • the present invention relates to biologically active tripeptides of the general formula (I):
  • R 1 is hydrogen or C 1 -C 18 -alkylcarbonyl
  • R 2 is 4-imidazolyl or -CH 2 NH 2 ,
  • R 3 is hydrogen, C 1 -C 6 -alkyl or optionally substituted
  • Arylalkyl (C 1 -C 4 ), A is -CH 2 -, -CH 2 CH 2 -, C (CH 3 J 2 , -NH- or -CH (R 4 ) -, where the group [-CH (R 4 ) -] is D-configured; R 4 is C 1 -C 4 -alkyl or benzyl and X is oxygen (-O-) or -NH-;
  • A is -CH 2 -, -CH 2 -CH 2 - or -CH (R 4 ) -, wherein R 4 is CH 3 , and X is
  • A is -CH 2 -, X is -NH- and R 3 is hydrogen.
  • A is -CH 2 - or -CH (R 4 ) -, wherein R 4 is -CH 2 -CH 3 or -CH (CH 3 J 2 , R 2 is 4-imidazolinyl and X is oxygen.
  • the present invention also relates to compositions, in particular cosmetic preparations, which comprise at least one compound of the formula (I), their copper complexes and / or their salts, and to processes for the preparation of these preparations.
  • the present invention also relates to compositions, in particular cosmetic preparations, which contain at least one compound of the formula (I), their copper complexes and / or salts thereof and at least one further dermatologically cosmetic active ingredient.
  • tripeptides of the general formula (I) and 1: 1 complexes of these tripeptides with Cu +2 [Cu (II)], as racemates or in their enantiomerically pure form, as well as their salts the compounds of the formula (I ), their 1: 1 copper (II) complexes, salts of these copper (II) complexes with acids, and salts, ie salts of the tripeptides of the formula (I) per se and salts of 1: 1 complexes of the tripeptides of the formula (I ., to understand) with Cu +2 [Cu (II)], in particular those salts with acids, which salts are formed by the basic amino groups of the compounds of formula (I) with acids, preferably the 1: 1 copper (II) Complexes and salts of these copper (II) complexes with acids.
  • alkyl as a group per se and as a structural element for alkyl-containing groups are meant both linear and branched saturated hydrocarbon radicals. Examples are methyl, ethyl, propyl, n-butyl, n-pentyl, n-hexyl, n-heptyl, n-octyl, n-nonyl, n-undecanyl, n-dodecanyl, n-tridecanyl, n-hexadecanyl, n- Heptadecanyl, n-octadecanyl and n-nonadecanyl as unbranched radicals and as branched radicals: isopropyl, tert-butyl, isobutyl, sec-butyl and isoamyl.
  • Aryl represents aromatic hydrocarbon radicals, such as phenyl and naphthyl; preferred
  • substituents of the optionally substituted aryl groups are, for example, halogen, C 1 -C 5 -Al] CyI, hydroxy, C 1 -C 6 -alkoxy, C 1 -C 6 -alkoxycarbonyl, -CN, amino (-NH 2 ), Ci C 6 alkylamino, di (C 1 -C 6 ) alkylamino, aminocarbonyl, C 1 -C 6 -alkylaminocarbonyl or di (C 1 -C 6 ) -alkylaminocarbonyl.
  • Halogen means fluorine, chlorine, bromine and iodine; preferred are fluorine and chlorine.
  • R 1 is preferably hydrogen or CH 3 C (O) -.
  • R 3 is preferably hydrogen or benzyl.
  • R 4 is preferably methyl.
  • the basic amino groups of the compounds of formula (I) and / or their copper complexes can turn with acids or multidentate / form homogeneous or mixed salts, for example with inorganic acids such as hydrogen chloride, hydrogen bromide, sulfuric acid or phosphoric acid; or with suitable carboxylic acids, for example aliphatic mono- or dicarboxylic acids, such as formic acid, acetic acid, trifluoroacetic acid, trichloroacetic acid, propionic acid, glycolic acid, succinic acid, fumaric acid, malonic acid, maleic acid, oxalic acid, phthalic acid, citric acid, lactic acid or tartaric acid; or with aromatic carboxylic acids, such as benzoic acid or salicylic acid; or with aromatic-aliphatic carboxylic acids, such as mandelic acid or cinnamic acid; or with heteroaromatic carboxylic acids, such as nicotinic acid; or with aliphatic or aromatic sulfonic acids
  • the general formula (I) includes all possible isomeric forms as well as their mixtures, for example racemic mixtures and mixtures of rotamers.
  • the copper-free compounds of general formula I can be prepared according to known methods (1994 general rules of M. Bodanszky "The Practice of Peptide Synthesis” Springer Verlag, 2 nd Edition). Accordingly, the P-amino acid is derivatized at the carboxy-terminal end, deprotected the ⁇ -amino protecting group (eg a Boc group) and the peptide gradually built up with the customary in peptide synthesis reagents until the desired sequence is fully established. Subsequently, the side-chain protective groups (eg Z or Boc functions) are cleaved off and the tripeptide derivatives are purified by chromatography and / or by recrystallization.
  • ⁇ -amino protecting group eg a Boc group
  • the copper-free, purified peptide derivatives are dissolved in water or alcohol / water and reacted with the equimolar amount of a copper salt, e.g. Copper (II) chloride and copper (II) acetate or copper (II) hydroxide are added and the pH of the solution is adjusted, typically with sodium hydroxide (NaOH).
  • a copper salt e.g. Copper (II) chloride and copper (II) acetate or copper (II) hydroxide are added and the pH of the solution is adjusted, typically with sodium hydroxide (NaOH).
  • the compounds according to the invention can be used in concentrations which vary between 0.5 and 20,000 ppm (w / w), preferably between 1 and 5,000 ppm (w / w), in the final cosmetic product.
  • the compounds according to the invention may be in the form of a solution, a dispersion, an emulsion or encapsulated in carriers such as the macro-, micro- or nanocapsules, in liposomes or chylomicrons, or included in macro, micro or nanoparticles or in microsponges or absorbed on powdered organic polymers, talc, bentonite and other mineral carriers.
  • the compounds of this invention may be used in any galenic form: aqueous / oily and oily / aqueous emulsions, milk, lotions, ointments, gelling and viscous, stress active and emulsifying polymers, pomades, shampoos, soaps, gels, powders, sticks and sticks, sprays , Body oils, face masks, plasters.
  • the compounds according to the invention can be used with any other cosmetic ingredient commonly used: extraction lipids and / or synthetic lipids, gelling and viscous, active and emulsifying polymers, water or fat soluble active principles, plant extracts, tissue extracts, marine extracts, sunscreens, antioxidants, moisturizers and barrier agents. Skin revitalizing agents.
  • compositions according to the invention may contain a safe and effective amount of one or more anti-wrinkle active ingredients or anti-atrophic ingredients.
  • Exemplary anti-wrinkle / anti-atrophic agents suitable for use in the compositions of the invention include sulfur-containing D and L amino acids and their derivatives and salts, especially the N-acetyl derivatives, a preferred example of which is N-acetyl-L- cysteine is; Thiols, such as ethanethiol; Hydroxy acids (eg .alpha.-hydroxy acids such as lactic acid and glycolic acid or .beta.-hydroxy acids such as salicylic acid and salicylic acid derivatives such as the octanoyl derivatives), phytic acid, lipoic acid; Lysophosphatidic acid, skin peeling agents (eg, phenol and the like), vitamin B 3 compounds, and retinoids, which improve the skin smoothing benefits of the present invention.
  • Vitamin B3 compounds such as a preferred example of which is N-acetyl-L- cysteine is
  • Thiols such as ethanethiol
  • Hydroxy acids e
  • compositions of this invention may contain a safe and effective amount of a vitamin B3 compound.
  • Vitamin B3 compounds are particularly useful for the regulation of skin condition, as described in copending U.S. Patent Application Serial No. 08 / 834,010, filed April 11, 1997 (corresponding to International Publication WO 97/39733 A1, published on May 30, 1997) October 30, 1997).
  • Exemplary derivatives of said vitamin B 3 compounds include nicotinic acid esters including non-vasodilating esters of nicotinic acid (eg, tocopheryl nicotinate), nicotinyl amino acids, nicotinyl alcohol esters of carboxylic acids, nicotinic acid N-oxide, and niacinamide N-oxide.
  • compositions of the invention may also contain a retinoid.
  • retinoid as used herein includes all natural and / or synthetic analogs of vitamin A or retinol-like compounds that have biological activity of vitamin A in the skin, as well as the geometric isomers and stereoisomers of these compounds.
  • the retinoid is preferably retinol, retinol esters (eg, C 2 to C 22 alkyl esters of retinol including retinyl palmitate, retinyl acetate, retinyl propionate), retinal and / or retinoic acid (including all-trans retinoic acid and / or 13-cis retinoic acid ), in particular retinoids other than retinoic acid.
  • retinol retinol esters
  • retinyl esters eg, C 2 to C 22 alkyl esters of retinol including retinyl palmitate, retinyl acetate, retinyl propionate
  • retinal and / or retinoic acid including all-trans retinoic acid and / or 13-cis retinoic acid
  • retinoids other than retinoic acid.
  • Suitable retinoids are tocopheryl retinoate [tocopherol esters of retinoic acid (trans or ice)], adapters ⁇ 6- [3- (1-adamantyl) -4-methoxyphenyl] -2-naphthoic acid ⁇ and tazarotene (ethyl-6- [2- (4 , 4-dimethylthiochroman-6-yl) ethynyl] nicotinate).
  • Preferred retinoids are retinol, retinyl palmitate, retinyl acetate, retinyl propionate, retinal and combinations thereof.
  • compositions of this invention may contain a safe and effective amount of the retinoid such that the resulting composition is safe and effective for regulating the condition of horny tissue, preferably for regulating visible and / or tactile discontinuities of the skin, particularly for regulating signs of aging of the skin. more preferably for the regulation of visible and / or tactile Skin surface texture discontinuities associated with skin aging.
  • compositions of this invention may contain a safe and effective amount of a hydroxy acid.
  • Preferred hydroxy acids for use in the compositions of this invention include salicylic acid and salicylic acid derivatives.
  • Additional peptides include, but are not limited to, di-, tri-, tetra-, penta- and hexapeptides. Derivatives thereof may be added to the compositions of this invention in safe and effective amounts.
  • peptides refers to both the naturally occurring peptides and the synthesized peptides, and also includes peptidomimetics and metal complexes of "peptides". The naturally occurring and commercially available compositions containing peptides are also useful herein.
  • Suitable dipeptides for use herein include carnosine ( ⁇ -Ala-His).
  • Suitable tripeptides for use herein include Gly-His-Lys, Arg-Lys-Arg, His-Gly-Gly.
  • Preferred tripeptides and derivatives thereof include palmitoyl-Lys-Val-Lys, which as SYN ® -COLL commercially available from Pentapharm, Switzerland is available, palmitoyl-Gly-His-Lys, which can be purchased as Biopeptide CL TM (100 ppm palmitoyl-Gly He-Lys, commercially available from Sederma, France), peptide CK (Arg-Lys-Arg), peptide CK + (ac-Arg-Lys-Arg-NH 2 ), and ⁇ -Ala-Pro-Dab-NH-benzyl, which is sold under the name SYN ® -AKE of Pentapharm, Switzerland, one.
  • Tetrapeptides suitable for use herein include Peptide E, Arg-Ser-Arg-Lys.
  • pentapeptides are Matrixyl (palmitoyl-Lys-Thr-Thr-Lys-Ser), available from Sederma, France, and those described in WO 03/037933 (Pentapharm, Switzerland).
  • a hexapeptide suitable for use is Argireline (Ac-Glu-Glu-Met-Gln-Arg-Arg-NH2) manufactured by Lipotec, Spain.
  • the compounds can be by the methods described below to known methods (general rules of M. Bodanszky "The Practice of Peptide Synthesis” Springer Verlag, 2 nd Edition 1994) are manufactured. Accordingly, the P-amino acid is derivatized at the carboxy-terminal end, the ⁇ -amino-protecting group (eg a Boc group) is deprotected and the peptide is built up stepwise with the reagents customary in peptide synthesis until the desired sequence is completely established. Subsequently, the side chain protection groups (eg Z or Boc functions) are split off.
  • the side chain protection groups eg Z or Boc functions
  • phase A While stirring, add phase A to phase B and homogenize.
  • the laminin V production per cell of in vitro cultured HaCaT keratinocytes was detected by an ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay).
  • ELISA Enzyme-Linked Immunosorbent Assay
  • the human HaCaT keratinocytes were a gift of Prof. Fusenig from the German Cancer Research Center in Heidelberg and were in
  • AK P3H9-2, Santa Cruz Biotechnology, Inc.
  • AK 31430; Socochim S.A.
  • AK 1/500 with AK-Verd.Lsg.
  • the keratinocytes are incubated at a density of approximately 5000 cells / well seeded in 96well-plates for 3 days until confluency in the culture medium (37 C C 10% CO 2 ).
  • the medium is triplicate to test medium with three different concentrations replaced. The following controls are tested on each plate:
  • the plates are incubated for a further 72 hours. Thereafter, the deposited laminin V is detected and quantified according to the following protocol:
  • the laminin V production per cell is calculated according to the following formula: (value OD LamInn v / value RFU Ze ii z ahi) x 100
  • Type I collagen of in vitro cultured skin fibroblasts was detected by an enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). In the presence of the active ingredients, the increase in collagen production of the cells was quantified by this method.
  • ELISA enzyme-linked immunosorbent assay
  • the human dermal fibroblasts were isolated from foreskin and grown in the culture medium.
  • AK MAB1340, Chemicon
  • AK 31430, Socochim S.A.
  • the fibroblasts are for 3 days at a density of approximately 5000 cells / well in 96-well plates to confluence in the culture medium were incubated (37 0 C / 5% CO 2.
  • the medium is replaced with assay medium with three different concentrations in triplicate to the test substance The following controls are tested on each plate:
  • the plates are incubated for a further 72 hours. Thereafter, the deposited collagen I is detected and quantified according to the following protocol:

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Birds (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Gerontology & Geriatric Medicine (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

Biologisch aktive Tripeptide der allgemeinen Formel (I) worin R<SUP>1</SUP> Wasserstoff oder C<SUB>1</SUB>-C<SUB>16</SUB>-Alkylcarbonyl, R<SUP>2</SUP> 4-Imidazolyl oder -CH<SUB>2</SUB>NH<SUB>2</SUB>, R<SUP>3</SUP> Wasserstoff, C<SUB>1</SUB>-C<SUB>16</SUB>-Alkyl oder gegebenenfalls substituiertes Arylalkyl (C<SUB>1</SUB>-C<SUB>4</SUB>), -CH<SUB>2</SUB>-, -CH<SUB>2</SUB>CH<SUB>2</SUB>-, C (CH<SUB>3</SUB>)<SUB>2</SUB>, -NH-, oder -CH(R<SUP>4</SUP>)-, wobei die Gruppe [-CH(R<SUP>4</SUP>)-] D-konfiguriert ist; R<SUP>4</SUP> C<SUB>1</SUB>-C<SUB>4</SUB>-AIkyl oder Benzyl und X Sauerstoff (-0-) oder -NH- bedeuten; 1:1 Komplexe dieser Tripeptide mit Cu<SUP>+2</SUP> [Cu(II)], als Racemate oder in ihrer enantiomeren reinen Form; Salze der Tripeptide der Formel (I) und Salze der 1:1 Komplexe dieser Tripeptide mit Cu<SUP>+2</SUP> [Cu(II)], mit der Massgabe, dass, wenn R<SUP>1</SUP> Wasserstoff und R<SUP>2</SUP> 4-Imidazolyl bedeuten, weder gleichzeitig A -CH<SUB>2</SUB>-, -CH<SUB>2</SUB>-CH<SUB>2</SUB>- oder -CH(R<SUP>4</SUP>)-, worin R<SUP>4</SUP> CH<SUB>3</SUB> ist, und X Sauerstoff bedeuten; noch gleichzeitig A -CH<SUB>2</SUB>-, X -NH- und R<SUP>3</SUP> Wasserstoff bedeuten; sowie kosmetisch dermatologisch wirksame Zusammensetzung, welche solche Verbindungen enthalten.

Description

Biologisch aktive Tripeptide, deren Kupferkomplexe und Salze
Die vorliegende Erfindung betrifft biologisch aktive Tripeptide, deren 1:1 Kupferkomplexe und Salze davon.
Einleitung
Es ist bekannt, dass nach Schädigung von Körpergewebe und bei natürlich ablaufender Hauterneuerung durch Proteolyse das Tripeptid H-Gly-His-Lys-OH freigesetzt wird. Die hohe Affinität dieses Tripeptids zu Kupfer (II) Ionen ermöglicht es ihm, Kupfer (II) Ionen aus Trägermolekülen wie Albumin heraus zu lösen und einen Kupfer (II) Komplex zu bilden. Dabei bildet sich ein 1:1 Komplex (GHK-Cu), in welchem das Kupfer. Ion über den Glycin Stickstoff, den deprotonierten Stickstoff der GIy-His-Bindung und den Imidazol Stickstoff des Histidins gebunden ist, wobei zusammen mit zwei Wassermolekülen eine quadratisch-pyramidale Konfiguration entsteht (Loren Pickart, SpecChem Online 10/2002) . Dieser Komplex ist ein natürlicher Bestandteil des menschlichem Plasmas, Speichels und Urins.
Die biologische Wirkung von GHK-Cu ist vielfältig. GHK-Cu ist für die Haut ein potenter, selektiver Aktivator in Wundheilungsprozessen, wobei Narben oder beschädigtes Gewebe entfernt und neues Gewebe gebildet und richtig eingelagert werden. GHK-Cu ist beteiligt am Aufbau von neuem Hautgewebe mittels Steigerung der Angiogenese und stimuliert generell die Synthese von Molekülen der extrazellulären Matrix (ECM) , wie zum Beispiel der Produktion von Kollagen I und III, die Akkumulation von Glycosaminoglycanen und Proteoglycanen, wie z.B. Decorin (aber nicht Biglycan) sowie von Elastin. Studien zeigten das GHK-Cu auch die Chemotaxis von Leukozyten stimuliert.
Obwohl GHK-Cu grundsätzlich die Synthese von ECM Molekülen anregt, konnte in Serum freier Primärkultur gezeigt werden, dass GHK-Cu die Ausscheidung von TGF-ß-1 aus normalen Fibroblasten und besonders in Keloid bildenden (Narben bildenden) Fibroblasten reduziert. Die verbesserte Heilung von Wunden bzw. Neubildung von frischem Hautgewebe durch GHK-Cu basiert u.a. auch auf einer selektiven Stimulation von MMP-9 und MMP-2 in einer frühen bzw. späten Phase des Wundheilungsprozesses. Dadurch werden der Abbau von geschädigtem Protein beschleunigt und Narben entfernt, und die Synthese von neuem Kollagen angemessen gesteigert. Insgesamt ergibt sich eine verbesserte Wundheilung mit weniger Narbenbildung. Weitere Effekte sind beschrieben in Cosmetics & Toiletries 118 (7), 24-28 (2003).
Die positiven Effekte von GHK-Cu bei topischer kosmetischer Applikation sind u.a. eine Zunahme der Hautdicke im Bereich der Epidermis und Dermis, eine verbesserte Hautdurchfeuchtung, eine signifikante Glättung der Haut durch die Stimulation der Kollagen Synthese, eine erhöhte Elastizität der Haut, eine deutliche Verbesserung des Hautkontrastes, eine erhöhte Produktion von Kollagen I, Glycosaminoglycanen und Decorin bei geschädigter Haut (Nils Krüger et al., Kosmetische Medizin 2003 (1), 31-33; Alain Simeon et al . , J. Invest. Dermatol. 115, 962-968 (2000)).
Die topische Applikation von GHK-Cu ist allerdings mit zwei schwerwiegenden Nachteilen verbunden. Die enzymatische Stabilität von GHK-Cu gegenüber Peptidasen in der Haut ist sehr gering. Innerhalb von einer Minute werden 95% GHK zu Glycin und HK abgebaut. Zudem können nur zwischen 0.1 und 0.3% der applizierten Menge in die Dermis penetrieren. Das führt dazu, dass für eine noch immer nicht befriedigende Wirkung hohe Konzentrationen (4%) an GHK-Cu zur Anwendung kommen müssen (Loren Pickart, Published Studies on Copper- Peptide Induced Tissue Regeneration) .
Aufgabe der vorliegenden Erfindung war, zu GHK-Cu analoge Wirkstoffe zu finden, deren Stabilität höher und/oder deren Hautpenetrationsrate deutlich verbessert sind. Es wurde nun gefunden, dass überraschenderweise mit ausgewählten künstlichen Peptiden, wie diese im weiteren hierin definiert sind, stabile 1:1 Kupferkomplexe erhalten werden können und dass die biologische Wirksamkeit dieser Peptide dabei nicht nur erhalten bleibt sondern teilweise sogar verbessert werden kann. Beschreibung der Erfindung
Die vorliegende Erfindung betrifft biologisch aktive Tripeptide der allgemeinen Formel (I) :
Figure imgf000004_0001
worin
R1 Wasserstoff oder Ci-Ciβ-Alkylcarbonyl,
R2 4-Imidazolyl oder -CH2NH2,
R3 Wasserstoff, C1-Ci6-AIkYl oder gegebenenfalls substituiertes
Arylalkyl (Ci-C4) , A -CH2-, -CH2CH2-, C(CH3J2, -NH-, oder -CH(R4)-, wobei die Gruppe [-CH(R4)-] D-konfiguriert ist; R4 C1-C4-AIkYl oder Benzγl und X Sauerstoff (-0-) oder -NH- bedeuten;
1:1 Komplexe dieser Tripeptide mit Cu+2 [Cu(II)], als Racemate oder in ihrer enantiomeren reinen Form; Salze der Tripeptide der Formel (I) und Salze der 1:1 Komplexe dieser Tripeptide mit Cu+2 [Cu(II)], mit der Massgabe, dass, wenn R1 Wasserstoff und R2 4-Imidazolyl bedeuten, weder gleichzeitig
A -CH2-, -CH2-CH2- oder -CH(R4)-, worin R4 CH3 ist, und X
Sauerstoff bedeuten; noch gleichzeitig
A -CH2-, X -NH- und R3 Wasserstoff bedeuten.
In einer spezifischen Ausführungsform bedeutet in Formel I A -CH2-, -CH2CH2-, -NH- oder -CH(R4)-, wobei die Gruppe [-CH(R4)-] D- konfiguriert ist.
In einer weiteren spezifischen Ausführungsform bedeuten nicht gleichzeitig A -CH2- oder -CH(R4)-, worin R4 -CH2-CH3 oder -CH(CH3J2 ist, R2 4-Imidazolγl und X Sauerstoff.
In einer bevorzugten Ausführungsform bedeutet in Formel I R2 -CH2NH2. Die vorliegende Erfindung betrifft auch die Verwendung der Verbindungen der Formel (I) , deren Kupferkomplexe sowie deren Salze, als kosmetische Wirkstoffe.
Die vorliegende Erfindung betrifft auch Zusammensetzungen, insbesondere kosmetische Zubereitungen, welche mindestens eine Verbindung der Formel (I), deren Kupferkomplexe und/oder deren Salze enthalten, sowie Verfahren zur Herstellung dieser Zubereitungen.
Die vorliegende Erfindung betrifft auch Zusammensetzungen, insbesondere kosmetische Zubereitungen, welche mindestens eine Verbindung der Formel (I), deren Kupferkomplexe und/oder deren Salze sowie mindestens einen weiteren dermatologisch kosmetischen Wirkstoff enthalten.
Unter der Definition „Tripeptide der allgemeinen Formel (I) und 1:1 Komplexe dieser Tripeptide mit Cu+2 [Cu(II)], als Racemate oder in ihrer enantiomeren reinen Form, sowie deren Salze", sind die Verbindungen der Formel (I), deren 1:1 Kupfer (II) komplexe, Salze dieser Kupfer (II) komplexe mit Säuren, sowie Salze, das heisst Salze der Tripeptide der Formel (I) an sich und Salze der 1:1 Komplexe der Tripeptide der Formel (I) mit Cu+2 [Cu(II)], zu verstehen, insbesondere solche Salze mit Säuren, wobei diese Salze durch die basischen Aminogruppen der Verbindungen der Formel (I) mit Säuren gebildet werden. Bevorzugt sind die 1:1 Kupfer (II) komplexe und Salze dieser Kupfer (II) komplexe mit Säuren.
Die oben verwendeten allgemeinen Ausdrücke sind wie folgt definiert. Unter "Alkyl" als Gruppe per se und als Strukturelement für Alkyl enthaltende Gruppen sind sowohl lineare wie verzweigte gesättigte Kohlenwasserstoffreste zu verstehen. Beispiele sind Methyl, Ethyl, Propyl, n-Butyl, n-Pentyl, n-Hexyl, n-Heptyl, n-Octyl, n-Nonyl, n- Undecanyl, n-Dodecanyl, n-Tridecanyl, n-Hexadecanyl, n-Heptadecanyl, n-Octadecanyl und n-Nonadecanyl als unverzweigte Reste und als verzweigte Reste: Isopropyl, tert.-Butyl, Isobutyl, sec.-Butyl und Isoamyl. "Aryl" steht für aromatische Kohlenwasserstoffreste, wie Phenyl und Naphthyl; bevorzugt ist Phenyl.
Beispiele für Substituenten der gegebenenfalls substituierten Arylgruppen sind z.B. Halogen, C1-C5-Al]CyI, Hydroxy, C1-C6-AIkOXy, C1- C6-Alkoxycarbonyl, -CN, Amino (-NH2), Ci-C6-Alkylamino, Di(C1-C6)- alkylamino, Aminocarbonyl, Ci-Cε-Alkylaminocarbonyl oder Di(C1-C6)- alkylaminocarbonyl .
"Halogen" steht für Fluor, Chlor, Brom und Jod; bevorzugt sind Fluor und Chlor.
Die Gruppe [-CH(R4)-] (als eine der Bedeutungen von „A") in der Verbindung der Formel (I) ist von der Aminosäure H2N-A-COOH abgeleitet, welche in der unnatürlichen D-Konfiguration vorliegt.
In Formel (I) bedeutet R1 vorzugsweise Wasserstoff oder CH3C(O)-. R3 bedeutet vorzugsweise Wasserstoff oder Benzyl. R4 bedeutet vorzugsweise Methyl.
Die basischen Aminogruppen der Verbindungen der Formel (I) und/oder ihrer Kupferkomplexe können mit Säuren ein- oder mehrzählige/ einheitliche oder gemischte Salze bilden, z.B. mit anorganischen Säuren, wie Chlorwasserstoff, Bromwasserstoff, Schwefelsäure oder Phosphorsäure; oder mit geeigneten Carbonsäuren, z.B. aliphatischen Mono- oder Dicarbonsäuren, wie Ameisensäure, Essigsäure, Trifluoressigsäure, Trichloressigsäure, Propionsäure, Glykolsäure, Bernsteinsäure, Fumarsäure, Malonsäure, Maleinsäure, Oxalsäure, Phthalsäure, Zitronensäure, Milchsäure oder Weinsäure; oder mit aromatischen Carbonsäuren, wie Benzoesäure oder Salicylsäure; oder mit aromatisch-aliphatischen Carbonsäuren, wie Mandelsäure oder Zimtsäure; oder mit heteroaromatischen Carbonsäuren, wie Nikotinsäure; oder mit aliphatischen oder aromatischen Sulfonsäuren, wie Methansulfonsäure oder Toluolsulfonsäure. Bevorzugt sind dermatologisch verträgliche Salze.
Die Einzelverbindungen in den folgenden Tabelle 1 und 2 illustrieren die Erfindung.
Figure imgf000007_0001
Figure imgf000008_0001
Figure imgf000009_0001
Tabelle 2: Kupfer (II) -Komplexe der allgemeinen Formel I
Figure imgf000010_0001
Figure imgf000011_0001
Figure imgf000012_0001
Figure imgf000013_0001
Die allgemeine Formel (I) umfasst alle möglichen isomeren Formen sowie deren Gemische, z.B racemische Gemische und Gemische von Rotameren.
Die Kupfer freien Verbindungen der allgemeinen Formel I können nach an sich bekannten Verfahren (allgemeinen Vorschriften von M. Bodanszky "The Practice of Peptide Synthesis" Springer Verlag, 2nd Edition 1994) hergestellt werden. Entsprechend wird die Pl- Aminosäure am carboxyterminalen Ende derivatisiert , die α- Aminoschutzgruppe (z.B. eine Boc-Gruppe) entschützt und das Peptid stufenweise mit den in der Peptidsynthese üblichen Reagenzien aufgebaut bis die gewünschte Sequenz vollständig aufgebaut ist. Anschliessend werden die Seitenkettenschutzgruppen (z.B. Z- oder Boc-Funktionen) abgespalten und die Tripeptid Derivate chromatografisch und/oder durch Umkristallisieren gereinigt.
Zur Herstellung der Kupferkomplexe der allgemeinen Formel (I) werden die Kupfer freien, gereinigten Peptid Derivate in Wasser oder Alkohol/Wasser gelöst und mit der aequimolaren Menge eines Kupfersalzes wie z.B. Kupfer (II) Chlorid und Kupfer (II) acetat oder mit Kupfer (II) hydroxid versetzt und der pH der Lösung eingestellt, typischerweise mit Natriumhydroxid (NaOH) .
Die erfindungsgemässen Verbindungen können in Konzentrationen verwendet werden, die zwischen 0,5 und 20.000 ppm (w/w) , vorzugsweise zwischen 1 und 5000 ppm (w/w) , im kosmetischen Endprodukt variieren.
Die erfindungsgemässen Verbindungen können in Form einer Lösung, einer Dispersion, einer Emulsion oder eingekapselt in Träger wie die Makro-, Mikro- oder Nanokapseln, in Liposomen oder Chylomikrönen, oder eingeschlossen in Makro-, Mikro- oder Nanoteilchen oder in Mikroschwämme oder absorbiert auf pulverförmigen organischen Polymeren, Talk, Bentonit und anderen mineralischen Trägern verwendet werden .
Die erfindungsgemässen Verbindungen können in jeder galenischen Form verwendet werden: Emulsionen wässerig/ölig und ölig/wässerig, Milch, Lotionen, Salben, gelierende und viskose, spannungsaktive und emulgierende Polymere, Pommaden, Shampoos, Seifen, Gele, Puder, Sticks und Stifte, Sprays, Körperöle, Gesichtsmasken, Pflaster.
Die erfindungsgemässen Verbindungen können mit jedem anderen üblicherweise verwendeten kosmetischen Inhaltsstoff verwendet werden: Extraktionslipide und/oder Syntheselipide, gelierende und viskose, spannungsaktive und emulgierende Polymere, wasser- oder fettlösliche Wirkprinzipien, Pflanzenextrakte, Gewebeextrakte, Meeresextrakte, Sonnenschutzmittel, Antioxidantien, Feuchthalte- und Barrieremittel, Haut revitalisierende Wirkstoffe.
Die erfindungsgemässen Verbindungen können mit jedem anderen üblicherweise verwendeten kosmetischen Hautpflegewirkstoff verwendet werden. Beispielhaft für einen zusätzlichen Hautpflegewirkstoff seien Anti-Faltenwirkstoffe/Anti-Atrophiewirkstoffe genannt: Die erfindungsgemässen Zusammensetzung können eine sichere und wirksame Menge von einem oder mehreren Anti-Faltenwirkstoffen oder Anti- Atrophiewirkstoffen enthalten. Beispielhafte Anti-Falten/AntiAtrophie-Wirkstoffe, die zur Verwendung in den erfindungsgemässen Zusammensetzungen geeignet sind, schliessen schwefelhaltige D- und L-Aminosäuren und ihre Derivate und Salze, insbesondere die N- Acetylderivate, wobei ein bevorzugtes Beispiel hierfür N-Acetyl-L- cystein ist; Thiole, wie Ethanthiol; Hydroxysäuren (z.B. α-Hydroxy- säuren wie Milchsäure und Glykolsäure oder ß-Hydroxysäuren wie Salicylsäure und Salicylsäurederivate, wie die Octanoylderivate) , Phytinsäure, Liponsäure; Lysophosphatidinsäure, Haut-Peelingmittel (z.B. Phenol und dergleichen), Vitamin B3-Verbindungen und Retinoide ein, die Vorteile der vorliegenden Erfindung für die Glättung der Haut verbessern. a) Vitamin B3-Verbindungen
Die erfindungsgemässen Zusammensetzungen können eine sichere und wirksame Menge einer Vitamin B3-Verbindung enthalten. Vitamin B3- Verbindungen sind besonders nützlich zur Regulierung des Hautzustands, wie in der gleichzeitig anhängigen US-Patentanmeldung mit dem Aktenzeichen Nr. 08/834,010 beschrieben ist, eingereicht am 11. April 1997 (entsprechend der internationalen Veröffentlichung WO 97/39733 Al, veröffentlicht am 30. Oktober 1997) . Beispielhafte Derivate der genannten Vitamin B3~Verbindungen schliessen Nicotinsäureester einschliesslich nicht-vasodilatierender Ester von Nicotinsäure (z. B. Tocopherylnicotinat) , Nicotinylaminosäuren, Nicotinylalkoholestern von Carbonsäuren, Nicotinsäure-N-oxid und Niacinamid-N-oxid ein.
b) Retinoide
Die erfindungsgemässen Zusammensetzungen können auch ein Retinoid enthalten. "Retinoid" schliesst, wie hier verwendet, alle natürlichen und/oder synthetischen Analoga von Vitamin A oder retinolartigen Verbindungen ein, die biologische Wirksamkeit von Vitamin A in der Haut besitzen, sowie die geometrischen Isomere und Stereoisomere dieser Verbindungen. Das Retinoid ist vorzugsweise Retinol, Retinolester (z. B. C2- bis C22-Alkylester von Retinol einschliesslich Retinylpalmitat, Retinylacetat, Retinylpropionat) , Retinal und/oder Retinsäure (einschliesslich all-trans-Retinsäure und/oder 13-cis-Retinsäure) , insbesondere von Retinsäure verschiedene Retinoide. Andere geeignete Retinoide sind Tocopherylretinoat [Tocopherolester von Retinsäure (trans oder eis) ] , Adaptalen {6- [3- (1-Adamantyl) -4-methoxyphenyl] -2- naphthoesäure} und Tazaroten (Ethyl-6- [2- (4, 4-dimethylthiochroman-6- yl) -ethinyl] nicotinat) . Bevorzugte Retinoide sind Retinol, Retinylpalmitat, Retinylacetat, Retinylpropionat, Retinal und Kombinationen davon. Die erfindungsgemässen Zusammensetzungen können eine sichere und wirksame Menge des Retinoids enthalten, so dass die resultierende Zusammensetzung sicher und wirksam zur Regulierung des Zustands von Horngewebe ist, vorzugsweise zur Regulierung von sichtbaren und/oder fühlbaren Diskontinuitäten der Haut, insbesondere zur Regulierung von Zeichen der Hautalterung, bevorzugter zur Regulierung von sichtbaren und/oder fühlbaren Diskontinuitäten der Hautoberflächenbeschaffenheit, die mit Hautalterung zusammenhängen.
(c) Hydroxysäuren
Die erfindungsgemässen Zusammensetzungen können eine sichere und wirksame Menge einer Hydroxysäure enthalten. Bevorzugte Hydroxysäuren zur Verwendung in den erfindungsgemässen Zusammensetzungen schliessen Salicylsäure und Salicylsäurederivate ein.
d) Peptide
Zusätzliche Peptide einschliesslich, aber nicht begrenzt auf Di-, Tri-, Tetra-, Penta- und Hexapeptide. Derivate davon können den erfindungsgemässen Zusammensetzungen in sicheren und wirksamen Mengen zugefügt werden. „Peptide" bezieht sich hier auf sowohl die natürlich vorkommenden Peptide als auch die synthetisierten Peptide und umfasst auch Peptidmimetika und Metallkomplexe von „Peptiden". Die natürlich vorkommenden und im Handel erhältlichen Zusammensetzungen, die Peptide enthalten, sind hier auch brauchbar.
Zur hiesigen Verwendung geeignete Dipeptide schliessen Carnosin (ß- Ala-His) ein. Zur hiesigen Verwendung geeignete Tripeptide schliessen Gly-His-Lys, Arg-Lys-Arg, His-Gly-Gly ein. Bevorzugte Tripeptide und Derivate davon schliessen Palmitoyl-Lys-Val-Lys, das als SYN®-COLL kommerziell von Pentapharm, Schweiz erhältlich ist, Palmitoyl-Gly-His-Lys, das als Biopeptid CL™ erworben werden kann (100 ppm Palmitoyl-Gly-His-Lys, kommerziell erhältlich von Sederma, Frankreich) , Peptid CK (Arg-Lys-Arg) , Peptid CK+ (ac-Arg-Lys-Arg-NH2) und ß-Ala-Pro-Dab-NH-Benzyl, das unter dem Namen SYN®-AKE von Pentapharm, Schweiz vertrieben wird, ein. Zur hiesigen Verwendung geeignete Tetrapeptide schliessen Peptid E ein, Arg-Ser-Arg-Lys . Beispiele für Pentapeptide sind Matrixyl (Palmitoyl-Lys-Thr-Thr-Lys- Ser) , erhältlich von Sederma, Frankreich, und jene, die in WO 03/037933 (Pentapharm, Schweiz) beschrieben sind. Ein zur Verwendung geeignetes Hexapeptid ist Argireline (Ac- Glu-Glu-Met-Gln-Arg-Arg- NH2), hergestellt von Lipotec, Spanien. Experimenteller Teil
1. Herstellung der Verbindungen
Die folgenden Beispiele sollen die Erfindung erläutern ohne diese einzuschränken .
Benutzte Abkürzungen:
NMR Magnetische Kernspin Resonanz
MS Massenspektrometrie
Boc tert . -Butyloxycarbonyl
Z Benzyloxycarbonyl
Dab 1, 4-Diaminobuttersäure
EtOAc Essigsäureethylester
DCM Dichlormethan
DMF Dimethylformamid
ACN Acetonitril
TCTU O- (lH-6-Chlorobenzotriazole-l-yl) -1,1,3,3- tetramethyluronium tetrafluoroborat DIPEA Diisopropylethylamin
NMM N-Methylmo N-hydroxysuccinimidester
TFA Trifluoressigsäure
GF/A Glasfaser-Mikrofilter
LH20 Grössenteilsausschlusschromatographie
(RAmersham)
Im nachfolgenden Ausführungsbeispiel 1 wird die Herstellung von erfindungsgemässen Verbindungen der Formel I beschrieben. Die
Analyse der gemäss den Beispielen erhaltenen Eluate und Produkte wurde mit Proton-NMR Spektroskopie, HPLC-Elektrospray-MS oder mittels Elementaranalyse ausgeführt. Die Verbindungen konnten auf
ZIC-HILIC-Säulen (Zwitterionen-Chromatographie Hydrophobie
Interaction Chromatography Column) retentiert werden, was zu aussagekräftigen HPLC-Chromatogrammen führte.
Säule: SeQuant ZIC™-HILIC, 5um. 150 X 4.6mm)
Laufmittel A: A - 85% (v/v) ACN mit 15% (v/v) 1OmM KH2PO4 Puffer, pH
7
B - 10OmM KH2PO4 Puffer, pH 7 . Linearer Gradient: von 10% B auf 100% B in 20min.
Die Verbindungen können nach den im Folgenden beschriebenen an sich bekannten Verfahren (allgemeinen Vorschriften von M. Bodanszky "The Practice of Peptide Synthesis" Springer Verlag, 2nd Edition 1994) hergestellt werden. Entsprechend wird die Pl-Aminosäure am carboxy- terminalen Ende derivatisiert, die α-Aminoschutzgruppe (z.B. eine Boc-Gruppe) wird entschützt und das Peptid wird stufenweise aufgebaut mit den in der Peptidsynthese üblichen Reagenzien bis die gewünschte Sequenz vollständig aufgebaut ist. Anschliessend werden die Seitenkettenschutzgruppen (z.B. Z- oder Boc-Funktionen) abgespalten.
Beispiel 1: Kupfer (II) - Glycyl-2, 4-diaminobuturyl-lysin-Komplex
Acetat Dihydrat
Cu [H-Gly-Dab-Lys-OH] x HOAc x 2 (H2O)
1.1) Boc-Dab (Z) -Lys (Z) -OBzI
26.8 g Boc-Dab (Z) -OH wurden in 240ml ACN und 60 ml DMF gelöst und zur Lösung 27 g TCTU und 26 ml DIPEA zugefügt. Nach 5 Minuten rühren bei RT wurde eine Lösung bestehend aus 34 g H-Lys (Z) -OBzI • HCl und 8.4 ml NiMM in 100 ml DMF zugegeben. Nach Rühren über Nacht bei RT wurde das Lösungsmittel abdestilliert, der Rückstand in EtOAc aufgenommen und mit 10% Na2CO3, 10% Zitronensäure und ges . NaCl- Lösung gewaschen. Nach Trocknen über Na2SO4 und Abdestillieren des Lösungsmittels wurde das Rohprodukt über LH20 chromatographisch gereinigt. Nach Abdestillieren des Lösungsmittel und Trocknen im Vakuumtrockenschrank bei 4O0C über Nacht wurden 38.2 g der gewünschten Verbindung erhalten. Die theoretische Masse von 706 wurde mit einem Befund von 706 bestätigt.
1.2) H-Dab (Z) -Lys (Z)-OBzI x HCl
38.2 g der Verbindung 1.1 wurden in 150 ml Dioxan gelöst und mit 136 ml 4M HCl in Dioxan-Lösung versetzt und 3 h bei RT gerührt. Nach Abdestillieren des Lösungsmittels wurden 35 g der gewünschten Verbindung erhalten. Dessen Molekulargewicht konnte mit einem Massen-befund von 606 bestätigt werden. 1.3) Boc-Gly-Dab (Z) -Lys (Z) -OBzI
22.1 g Boc-Gly-OSu wurden in 150 ml DMF gelöst. Eine Lösung bestehend aus 35 g der obigen Verbindung 1.2 und 6 ml NMM in 300ml DMF wurde dazu gegeben. Nach 1.5 Tagen Rühren bei RT wurde das Lösungsmittel abdestilliert, der Rückstand in EtOAc aufgenommen und mit je 3 X 10% Na2CO3, 10% Zitronensäure und ges . NaCl-Lösung gewaschen. Nach Trocknen über Na2SO4 und Abdestillieren des Lösungsmittels wurde das Rohprodukt über LH20 in Methanol gereinigt. Nach Abdestillieren des Methanols und Trocknen im Vakuumtrockenschrank bei 400C über Nacht wurden 31.4 g amorphes Produkt erhalten. Dessen Molekulargewicht konnte mit einem Massenbefund von 763 bestätigt werden.
1.4) H-Gly-Dab (Z) -Lys (Z) -OBzI x TFA
12.4 g der obigen Verbindung 1.3 wurden in 30 ml DCM gelöst und mit 12 ml TFA versetzt und 1.5 h bei RT gerührt. Nach Abdestillieren des Lösungsmittels wurde das Rohprodukt über LH20 chromatographiert. Nach Trocknen im Vakuumtrockenschrank bei 4O0C über Nacht wurden 12.4 g Produkt erhalten, dessen Molekulargewicht mit einem Massenbefund von 663 bestätigt werden konnte.
1.5) H-Gly-Dab-Lys-OH x 2HOAc
12.02 g der obigen Verbindung 1.4 wurden in 100 ml Essigsäure gelöst und die Lösung mit einer Suspension von 2.4 g Palladium (10% auf Kohle) in 20 ml Wasser versetzt. Wasserstoffgas wurde bis zur Sättigung eingeleitet, und es wurde bis zur vollständigen Umsetzung bei Normaldruck hydriert (ca. 12 h) . Die Suspension wurde über ein GF/A-Filter filtriert und das Lösungsmittel abdestilliert. Das erhaltene Rohprodukt wurde in ca. 100 ml deionisiertem Wasser gelöst, filtriert und mit noch 400 ml deionisiertem Wasser verdünnt und in einer Ionenaustauschersäule (OAc") umgesalzt. Das erhaltene amorphe Rohprodukt (6.45 g) wurde mittles präparativer HPLC chromatographiert. Nach Abdestillieren des Lösungsmittels und Trocknen im Vakuumtrockenschrank bei 4O0C über Nacht wurden 5.54 g der gewünschten Verbindung erhalten. Der Massenbefund von 304 bestätigte das erwartete Molekulargewicht. 1.6) Cu [H-Gly-Dab-Lys-OH] x HOAc x (H2O)
2.5 g der obigen Peptids 1.5 wurden in 40 ml WFl gelöst. Der pH betrug 6.06. Danach wurden 0.658 g Cu(OH)2 als Feststoff zugegeben. Der pH sank dabei auf 5.34. Während einer Stunde wurde der pH mit 115 ml NH4OH-Lösung (0.05 M) der auf 6.95 eingestellt. Die dabei entstandene dunkelblaue, leicht trübe Lösung wurde filtriert und lyophilisiert. Nach zusätzlichem Trocknen über Nacht bei 300C unter Vakuum wurden 2.67 g der gewünschten Verbindung erhalten, dessen Molekulargewicht mit einem Massenbefund von 365 bestätigt wurde.
In analoger Weise können die Verbindungen der Tabellen 1 und 2 hergestellt werden.
2. Herstellung einer kosmetischen Creme
Figure imgf000020_0001
Das Keltrol RD in der Phase B gut dispergieren.
Phasen A und B separat auf 800C erwärmen.
Unter Rühren, Phase A zu Phase B geben und homogenisieren.
Auf Raumtemperatur abkühlen lassen, Phase C zugeben, dann pH-Wert mittels Phase D auf ca. 5.0 - 5.5 einstellen. 3. Biologische Wirksamkeit
3.1 Bestimmung der Stimulierung der Laminin V Synthese in Keratinocyten-Zellkulturen der Zellinie HaCaT durch Behandlung mit den erfindungsgemässen Verbindungen
Die Laminin V Produktion pro Zelle von in-vitro kultivierten HaCaT Keratinocyten wurde mittels eines ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay) detektiert. In Gegenwart der erfindungsgemässen Verbindungen wurde die Steigerung der Laminin V-Produktion der Zellen mit dieser Methode quantifiziert.
Die humanen HaCaT Keratinocyten waren ein Geschenk von Prof. Fusenig vom Deutschen Krebsforschungszentrum in Heidelberg und wurden in
Kulturmedium nach Standard-Zellkulturmethoden gezüchtet. Nach 72
Stunden Inkubationszeit mit den entsprechenden Wirkstoffen erfolgt die quantitative Bestimmung mit einem für Laminin V spezifischen
Antikörper. Nach Bestimmung des Laminin V Gehaltes wird die Zellzahl mittels des CyQÜANT® der Firma Molecular Probes ermittelt. Aus den
Einzelwerten wird der Laminin V-Gehalt pro Zelle als Units berechnet.
Material:
Kulturmedium: Testmedium:
- DMEM - DMEM
- 10% FCS - kein FCS
- 100IU/ml Penicillin - lOOIU/ml Penicillin
- 0.1mg/ml Streptomycin - 0.1mg/ml Streptomycin Waschpuffer: Milchlösung:
- 0.05M Tris, pH 8.5 - Waschpuffer
- 0.15M NaCl - 5% Milchpulver
- 0.1 % BSA
- 0.1 % Tween-20
AK-Verdünnungs1ösung: Substratlösung:
- 50ml SuperBlock (37515; Pierce) - 1 ImmunoPure® OPD Tablet
(34006; Pierce)
- 450ml H2O - 9ml H2O - 0.05% Tween - ImI Stable Peroxide
Substr. Buffer, 10x (34062; Pierce)
1. AK (P3H9-2; Santa Cruz Biotechnology, Inc.) wird 1/60'0OO und 2. AK (31430; Socochim S.A.) 1/500 mit AK-Verd.Lsg verdünnt.
Methode :
Die Keratinocyten werden mit einer Dichte von ca. 5000 Zellen/Well in 96well-plates ausgesät für 3 Tage bis zur Konfluenz im Kulturmedium inkubiert (37 CC 10% CO2) • Das Medium wird gegen Testmedium mit drei unterschiedlichen Konzentrationen in triplicate an Testsubstanz ausgetauscht. Folgende Kontrollen werden auf jeder Platte mitgetestet:
Negativkontrollen: Positivkontrollen:
A) A)
- mit Zellen - mit Zellen
- ohne l.AK; mit 2.AK - mit 1. und 2. AK
B) B)
- ohne Zellen - mit Zellen
- mit 1. und 2. AK - mit 1. und 2. AK
- mit lOng/ml TGF-ß2
C) Für jede Verbindung wird ein well ohne Zellen getestet, um die unspezifische Bindung der beiden AK auszuschließen.
Die Platten werden für weitere 72 Stunden inkubiert. Danach wird das abgelagerte Laminin V nach folgendem Protokoll detektiert und quantifiziert :
■ Medium verwerfen und mit 200μl/well PBS waschen
■ mit lOOμl/well Methanol fixieren -> 15min/ RT/ Shaker 600rpm
■ Methanol verwerfen und mit 200μl/well Milchlösung blockieren -> 30min/ RT/ Shaker 600rpm
■ Milchlösung verwerfen und mit lOOμl/well l.AK-Verd. inkubieren -> 2h/ RT/ Shaker 600rpm
■ l.AK-Verd. verwerfen und 3x mit 200μl/well Waschpuffer waschen ■ mit 100μl/well 2.AK-Verd. inkubieren -> 3h/ RT/ Shaker 600rpm
■ 2.AK-Verd. verwerfen; 3x mit 200μl/well Waschpuffer und Ix 100μl/well PBS waschen
■ add 100μl/well Substratlösung -> 15min/ RT/ Shaker 600rpm
■ mit 50μl/well H2SO4 (2M) Reaktion stoppen und bei 492nm messen.
■ Die Färbelösung wird verworfen, die Platte mit H2O bidest. gewaschen und für ca. 16 Stunden bei -800C eingefroren.
■ Die Platte wird aufgetaut und die Zellzahl mittels des CyQUANT Assays nach Herstellervorschrift gemessen.
Die Laminin V Produktion pro Zelle wird nach folgender Formel berechnet: (Wert ODLamlnin v / Wert RFUZeiizahi) x 100
Die berechneten Werte sind willkürliche Units. Dabei ergibt sich für die Verbindungen 1.1 bis 1.11, 1.90, 2.1 bis 2.11, und 2.90 der Tabellen 1 und 2 eine bessere oder vergleichbare Wirkung bezogen auf die Referenzsubstanz H-Gly-His-Lys-OH.
3.2 Bestimmung der Stimulierung der Kollagensynthese Typ I in Fibroblasten-Zellkulturen durch Behandlung mit den erfindungs- gemässen Verbindungen.
Typ I Kollagen von in-vitro kultivierten Hautfibroblasten wurde mittels eines ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay) detektiert. In Gegenwart der Wirkstoffe wurde die Steigerung der Kollagenproduktion der Zellen mit dieser Methode quantifiziert.
Die humanen Hautfibroblasten wurden aus Vorhaut isoliert und im Kulturmedium gezüchtet.
Nach 72h Inkubationszeit mit den entsprechenden Wirkstoffen erfolgt die quantitative Bestimmung mit einem für Kollagen I spezifischen Antikörper.
Material :
Kulturmedium: Testmedium:
- MEM - MEM - 10% FCS kein FCS
- 100IU/ml Penicillin 100IU/ml Penicillin
- 0,1mg/ml Streptomycin 0. lmg/ml Streptomycin
- ImM NEAA ImM NEAA
- ImM Na-Pyruvat ImM Na-Pyruvat
- 2mM L-Glutamin 2mM L-Glutamin
- 2OmM Hepes Buffer 2OmM Hepes Buffer
Waschbuffer: Milchlösung:
- 0.05M Tris, pH 8.5 Waschbuffer
- 0.15M NaCl 5% Milchpulver
- 0.1 % BSA
- 0.1 % Tween-20
AK-Verdünnungslösung : Substratlösung :
- 50ml SuperBlock; (37515; Pierce) - 1 ImmunoPure® OPD Tablet
(34006; Pierce)
- 450ml H2O - 9ml H2O
- 0.05% Tween - ImI Stable Peroxide Substr.
Buffer, 10x (34062; Pierce)
1. AK (MAB1340; Chemicon) und 2. AK (31430; Socochim S.A.) werden mit AK-Verd.Lsg 1/500 verdünnt.
Methode :
Die Fibroblasten werden mit einer Dichte von ca. 5000 Zellen/Well in 96well-plates für 3 Tage bis zur Konfluenz im Kulturmedium inkubiert (37 0C / 5% CO2. Das Medium wird gegen Testmedium mit drei unterschiedlichen Konzentrationen in triplicate an Testsubstanz ausgetauscht. Folgende Kontrollen werden auf jeder Platte mitgetestet:
Negativkontrollen: Positivkontrollen:
A) A)
- mit Zellen - mit Zellen - ohne l .AK; mit 2 . AK - mit 1 . und 2 . AK
B) B)
- ohne Zellen - mit Zellen
- mit 1. und 2. AK - mit 1. und 2. AK
- mit lOng/ml TGF-ßl
C) Für jede Testsubstanz wird ein well ohne Zellen getestet, um die unspezifische Bindung der beiden AK auszuschließen.
Die Platten werden für weitere 72 Stunden inkubiert. Danach wird das abgelagerte Kollagen I nach folgendem Protokoll detektiert und quantifiziert :
■ Medium verwerfen und mit 200μl/well PBS waschen
■ mit lOOμl/well Methanol fixieren -> 15min/ RT/ Shaker βOOrpm
■ Methanol verwerfen und mit 200μl/well Milchlösung blockieren -> 30min/ RT/ Shaker 600rpm
■ Milchlösung verwerfen und mit lOOμl/well l.AK-Verd. inkubieren -> 2h/ RT/ Shaker βOOrpm
■ l.AK-Verd. verwerfen und 3x mit 200μl/well Washbuffer waschen
■ mit lOOμl/well 2.AK-Verd. inkubieren -> 3h/ RT/ Shaker βOOrpm
■ 2.AK-Verd. verwerfen; 3x mit 200μl/well Washbuffer und Ix lOOμl/well PBS waschen
■ add lOOμl/well Substratlösung -> 20min/ RT/ Shaker 600rpm
■ mit 50μl/well H2SO4 (2M) Reaktion stoppen und bei 492nm messen. Dabei zeigen die Verbindungen 1.1 bis 1.12, 1.91, 2.1 bis 2.12, und 2.91 der Tabellen 1 und 2 eine bessere Wirkung als für die Referenzsubstanz H-Gly-His-Lys-OH.
3.3 Bestimmung der Stimulierung der Glycosaminoglycan (GAG) Synthese in Fibroblasten
Normale humane Fibroblasten werden in 96well Platten kultiviert und mit den erfindungsgemässen Wirksubstanzen in unterschiedlicher Konzentration inkubiert. Nach der Inkubationsphase wird der Zellkulturüberstand auf den Gehalt an Hyaluronsäure mittels eines ELISA untersucht. Dabei ergibt sich für die Verbindungen 1.1 bis 1.11, 1.90, 2.1 bis 2.11, und 2.90 der Tabellen 1 und 2 eine bessere Wirkung als für die Referenzsubstanz H-Gly-His-Lys-OH.

Claims

Patentansprüche
1. Biologisch aktive Tripeptide der allgemeinen Formel (I)
Figure imgf000027_0001
worin
R1 Wasserstoff oder Ci-Cie-Alkylcarbonyl,
R2 4-Imidazolyl oder -CH2NH2,
R3 Wasserstoff, Ci-Ci6-Alkyl oder gegebenenfalls substituiertes
ArYIaIkYl(C1-C4) , A -CH2-, -CH2CH2-, C(CH3)2, -NH-, oder -CH(R4)-, wobei die Gruppe [-CH(R4)-] D-konfiguriert ist; R4 Ci-C4-Alkyl oder Benzyl und X Sauerstoff (-0-) oder -NH- bedeuten;
1:1 Komplexe dieser Tripeptide mit Cu+2 [Cu(II)], als Racemate oder in ihrer enantiomeren reinen Form; Salze der Tripeptide der Formel (I) und Salze der 1:1 Komplexe dieser Tripeptide mit Cu+2 [Cu(II)], mit der Massgabe, dass, wenn R1 Wasserstoff und R2 4-Imidazolyl bedeuten, weder gleichzeitig
A -CH2-, -CH2-CH2- oder -CH(R4)-, worin R4 CH3 ist, und X
Sauerstoff bedeuten; noch gleichzeitig
A -CH2-, X -NH- und R3 Wasserstoff bedeuten.
2. Verbindungen gemäss Anspruch 1, worin A -CH2-, -CH2CH2-, -NH- oder -CH(R4)- bedeutet, wobei die Gruppe [-CH(R4)-] D- konfiguriert ist.
3. Verbindungen gemäss Anspruch 1 oder 2, worin nicht gleichzeitig A -CH2-, oder -CH(R4)-, worin R4 -CH2-CH3 oder -CH (CH3) 2 ist, R2 4- Imidazolyl und X Sauerstoff, bedeuten.
4. Verbindungen gemäss einem der Ansprüche 1-3, worin R2 -CH2NH2 bedeutet.
5. Verbindungen gemäss einem der Ansprüche 1-4, worin R3 Wasserstoff und X Sauerstoff, bedeuten.
6. Verbindungen gemäss einem der Ansprüche 1-4, worin R3 Benzyl und X -NH- bedeuten. .
7. Verwendung der Verbindungen der Formel (I) gemäss einem der Ansprüche 1-6, deren Kupferkomplexe; Salze der Tripeptide der Formel
(I) und Salze der 1:1 Komplexe dieser Tripeptide mit Cu+2 [Cu(II)], als dermatologisch kosmetische Wirkstoffe, insbesondere zur Stimulation der Synthese der extrazellulären Matrix, vorzugsweise Kollagen I und III, der Proteine der Basalmembran, vorzugsweise Laminin V, zur Akkumulierung von Glycosaminoglycanen, Dekorin und Elastin.
8. Verwendung der Verbindungen der Formel (I) gemäss einem der Ansprüche 1-6, deren Kupferkomplexe; Salze der Tripeptide der Formel
(I) und Salze der 1:1 Komplexe dieser Tripeptide mit Cu+2 [Cu(II)], zur Herstellung von kosmetisch dermatologisch wirksamen Zusammensetzungen, insbesondere zur Herstellung von Hautpflegemittel, vorzugsweise zur Verhinderung der Bildung und zur Reduktion von Falten und gegen alle Folgen der Hautalterung natürlicher endogener oder beschleunigter exogener Art, insbesondere der Hautdicke, der Hautelastizität, des Hautkontrastes und der Hautdurchfeuchtung.
9. Kosmetisch dermatologisch wirksame Zusammensetzung, dadurch gekennzeichnet, dass sie mindestens eine Verbindungen der Formel (I) gemäss einem der Ansprüche 1-6, deren Kupferkomplexe; mindestens ein Salz der Tripeptide der Formel (I) und/oder mindestens ein Salz der 1:1 Komplexe dieser Tripeptide mit Cu+2 [Cu(II)], enthält, vorzugsweise in einer Menge im Bereich zwischen 0.01 ppm und I1OOO ppm (w/w) , insbesondere zwischen 1 ppm und 100 ppm (w/w) , berechnet auf das Gewicht der erfindungsgemässen Verbindung und des Trägermaterials bzw. der Trägermaterialien.
10. Kosmetisch dermatologisch wirksame Zusammensetzung, dadurch gekennzeichnet, dass sie a) mindestens eine Verbindung der Formel (I) gemäss einem der Ansprüche 1-6, deren Kupferkomplexe sowie deren Salze enthält, sowie b) eine sichere und wirksame Menge von mindestens einem zusätzlichen Hautpflegewirkstoff ausgewählt aus der Gruppe enthaltend: Wirkstoffe für die Abschuppung, Anti-Aknewirkstoffe, Vitamin B3-Verbindungen, Retinoide, Di-, Tri-, Tetra-, Penta- und Hexapeptide und Derivate davon, Hydroxysäuren, Radikalfänger, entzündungshemmende Mittel, Hautbräunungswirkstoffe, Hautaufhellungsmittel, Anti- Cellulitismittel, Flavonoide, antimikrobielle Wirkstoffe, Hautheilungsmittel, antimykotische Wirkstoffe,
Sonnenschutzwirkstoffe, Farnesol, Phytantriol, Allantoin, Glucosamin und Mischungen davon enthält.
11. Zusammensetzung gemäss Anspruch 10, dadurch gekennzeichnet, dass sie einen dermatologischen Träger enthält.
12. Zusammensetzung gemäss einem der Ansprüche 9-11, dadurch gekennzeichnet, dass diese in Form einer Lösung, einer Dispersion, einer Emulsion oder eingekapselt in Trägern, vorzugsweise in Makro-, Mikro- oder Nanokapseln, in Liposomen oder Chylomikronen, oder eingeschlossen in Makro-, Mikro- oder Nanoteilchen oder in
Mikroschwämme oder absorbiert auf pulverförmigen organischen Polymeren, Talk, Bentonit und anderen mineralischen Trägern, vorliegt.
13. Zusammensetzung gemäss einem der Ansprüche 9-11, dadurch gekennzeichnet, dass diese in Form einer Emulsion, Milch, Lotion, Salbe, eines gelierenden und viskosen, spannungsaktiven und emulgierenden Polymeren, einer Pommade, eines Shampoos, einer Seife, eines Gels, Puders, Sticks oder Stifts, Sprays, Körperöls, einer Gesichtsmaske oder eines Pflasters zur transdermalen Applikation, vorliegt.
14. Zusammensetzung gemäss einem der Ansprüche 9-13 als kosmetisch wirksames Mittel, insbesondere für die Stimulation der Produktion von Kollagen I, Laminin V, Glycosaminoglycan, Dekorin und Elastin in der menschlichen Haut, als Hautpflegemittel, insbesondere zur Verhinderung der Bildung und zur Reduktion der Falten und gegen alle Folgen der Hautalterung natürlicher endogener oder beschleunigter exogener Art (Heliodermie, Verschmutzung) .
15. Verfahren zur Erhöhung der Produktion von Kollagen und/oder Laminin V und/oder Glycosaminoglycan und/oder Dekorin und/oder Elastin in der menschlichen Haut und/oder zur Verzögerung oder Behandlung der Hautalterung, dadurch gekennzeichnet, dass man eine Verbindung gemäss einem der Ansprüche 1-6 oder eine Zusammensetzung gemäss den Ansprüchen 9-14 auf die Haut appliziert.
PCT/CH2007/000050 2006-02-03 2007-02-01 Biologisch aktive tripeptide, deren kupferkomplexe und salze Ceased WO2007087738A1 (de)

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CH1712006 2006-02-03
CH171/06 2006-02-03
CH12482006 2006-08-02
CH1248/06 2006-08-02

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2007087738A1 true WO2007087738A1 (de) 2007-08-09

Family

ID=37945063

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/CH2007/000050 Ceased WO2007087738A1 (de) 2006-02-03 2007-02-01 Biologisch aktive tripeptide, deren kupferkomplexe und salze

Country Status (1)

Country Link
WO (1) WO2007087738A1 (de)

Cited By (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2010106044A1 (en) * 2009-03-16 2010-09-23 Dsm Ip Assets B.V. Use of tripeptides
WO2011003696A1 (en) * 2009-07-10 2011-01-13 Unilever Plc Hair treatment compositions
JP2016520069A (ja) * 2013-05-10 2016-07-11 サザン・リサーチ・インスティテュート ＴＧＦ‐β活性阻害を介した疾患の治療のための化合物、組成物及び方法
CN107098950A (zh) * 2017-06-13 2017-08-29 湖北泓肽生物科技有限公司 一种ghk或ahk三肽的合成方法
CN110790816A (zh) * 2018-08-02 2020-02-14 浙江湃肽生物有限公司 一种多肽活性化合物及新型铜胜肽和制备方法
CN112263505A (zh) * 2020-10-29 2021-01-26 广州栋方生物科技股份有限公司 一种铜肽组合物及其制备方法和应用
WO2021247531A1 (en) * 2020-06-01 2021-12-09 Balchem Corporation Metal di-amino acid chelates or metal tri-amino acid chelates
CN114636739A (zh) * 2022-03-07 2022-06-17 西北工业大学 一种基于三胜肽修饰的固态多纳米孔的铜离子超痕量检测的方法
CN115124593A (zh) * 2021-03-25 2022-09-30 深圳市图微安创科技开发有限公司 一种高纯度GHK-Cu的合成方法
CN115286688A (zh) * 2022-05-07 2022-11-04 浙江湃肽生物股份有限公司 一种新型铜胜肽及其制备方法和用途
CN119060121A (zh) * 2024-10-17 2024-12-03 山东美欣生物科技有限公司 一种寡肽-1的合成工艺

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS62116565A (ja) * 1985-11-15 1987-05-28 Fujisawa Pharmaceut Co Ltd 新規ペプチド
WO1991007431A1 (en) * 1989-11-13 1991-05-30 Procyte Corporation Metal-peptide compositions and methods for stimulating hair growth
WO1991012267A1 (en) * 1990-02-09 1991-08-22 Procyte Corporation Anti-oxidative and anti-inflammatory metal:peptide complexes and uses thereof
WO1991014437A2 (en) * 1990-03-26 1991-10-03 Procyte Corporation Use of copper(ii) containing compounds to accelerate wound healing
WO1995035085A1 (en) * 1994-06-17 1995-12-28 Procyte Corporation Stimulation of hair growth by peptide-copper complexes
WO2001043701A2 (fr) * 1999-12-17 2001-06-21 Sederma Compositions cosmetiques ou dermopharmaceutiques contenant le tripeptide gly-hys-lys

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS62116565A (ja) * 1985-11-15 1987-05-28 Fujisawa Pharmaceut Co Ltd 新規ペプチド
WO1991007431A1 (en) * 1989-11-13 1991-05-30 Procyte Corporation Metal-peptide compositions and methods for stimulating hair growth
WO1991012267A1 (en) * 1990-02-09 1991-08-22 Procyte Corporation Anti-oxidative and anti-inflammatory metal:peptide complexes and uses thereof
WO1991014437A2 (en) * 1990-03-26 1991-10-03 Procyte Corporation Use of copper(ii) containing compounds to accelerate wound healing
WO1995035085A1 (en) * 1994-06-17 1995-12-28 Procyte Corporation Stimulation of hair growth by peptide-copper complexes
WO2001043701A2 (fr) * 1999-12-17 2001-06-21 Sederma Compositions cosmetiques ou dermopharmaceutiques contenant le tripeptide gly-hys-lys

Cited By (17)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102355885A (zh) * 2009-03-16 2012-02-15 帝斯曼知识产权资产管理有限公司 三肽的用途
JP2012520340A (ja) * 2009-03-16 2012-09-06 ディーエスエム アイピー アセッツ ビー．ブイ． トリペプチドの使用
WO2010106044A1 (en) * 2009-03-16 2010-09-23 Dsm Ip Assets B.V. Use of tripeptides
WO2011003696A1 (en) * 2009-07-10 2011-01-13 Unilever Plc Hair treatment compositions
AU2014262517B2 (en) * 2013-05-10 2018-10-18 Southern Research Institute Compounds, compositions and methods for the treatment of diseases through inhibiting TGF-beta activity
JP2016520069A (ja) * 2013-05-10 2016-07-11 サザン・リサーチ・インスティテュート ＴＧＦ‐β活性阻害を介した疾患の治療のための化合物、組成物及び方法
EP2994156A4 (de) * 2013-05-10 2017-01-11 Southern Research Institute Verbindungen, zusammensetzungen und verfahren zur behandlung von erkrankungen durch hemmung der tgf-aktivität
CN107098950B (zh) * 2017-06-13 2019-11-08 湖北泓肽生物科技有限公司 一种ghk或ahk三肽的合成方法
CN107098950A (zh) * 2017-06-13 2017-08-29 湖北泓肽生物科技有限公司 一种ghk或ahk三肽的合成方法
CN110790816A (zh) * 2018-08-02 2020-02-14 浙江湃肽生物有限公司 一种多肽活性化合物及新型铜胜肽和制备方法
WO2021247531A1 (en) * 2020-06-01 2021-12-09 Balchem Corporation Metal di-amino acid chelates or metal tri-amino acid chelates
CN112263505A (zh) * 2020-10-29 2021-01-26 广州栋方生物科技股份有限公司 一种铜肽组合物及其制备方法和应用
CN115124593A (zh) * 2021-03-25 2022-09-30 深圳市图微安创科技开发有限公司 一种高纯度GHK-Cu的合成方法
CN114636739A (zh) * 2022-03-07 2022-06-17 西北工业大学 一种基于三胜肽修饰的固态多纳米孔的铜离子超痕量检测的方法
CN114636739B (zh) * 2022-03-07 2024-04-16 西北工业大学 一种基于三胜肽修饰的固态多纳米孔的铜离子超痕量检测的方法
CN115286688A (zh) * 2022-05-07 2022-11-04 浙江湃肽生物股份有限公司 一种新型铜胜肽及其制备方法和用途
CN119060121A (zh) * 2024-10-17 2024-12-03 山东美欣生物科技有限公司 一种寡肽-1的合成工艺

Similar Documents

Publication Publication Date Title
WO2007087738A1 (de) Biologisch aktive tripeptide, deren kupferkomplexe und salze
EP1478666B1 (de) Dermopharmazeutisch und kosmetisch wirksame oligopeptide
EP1809652B1 (de) Neue topisch anwendbare wirkstoffe gegen mimische und alterabedingt falten
CA2655116C (en) Peptide fragments for inducing synthesis of extracellular matrix proteins
EP1625150B1 (de) Tripeptide und deren derivate für die kosmetische verwendung zur verbesserung der hautstruktur
WO2000032235A1 (de) Transportsystemkonjugate
EP2015726B1 (de) Kosmetische zusammensetzung zur stimulierung der synthese der proteine der basalmembran
EP0179332A2 (de) Neue ZNS-aktive Peptide mit Wirkung auf das cholinerge System
DE69513324T2 (de) L-Lysyl-Glycyl-L-Histidin und entsprechende pharmazeutische Zusammensetzungen zur Wundheilung
EP3429577B1 (de) N-lipon-aminosäure oder peptide, derivate und deren verwendungen
EP4188319A1 (de) Kosmetische oder dermatologische behandlung der haut und der hautkrankheiten auf peptidbasis
KR101224809B1 (ko) 레티노산 유도체, 이의 제조 방법 및 이를 포함하는 화장품 조성물
US20230398049A1 (en) Tetrapeptides, compositions comprising them, and their cosmetic use
JPWO2007148831A1 (ja) 亜鉛を有効成分として含有するコラーゲン合成促進剤
TW202517663A (zh) 環肽化合物及其應用
ITMI20102250A1 (it) Composizioni cosmetiche contenenti composti con azione anti-glicazione, da usare per prevenire e rallentare il processo di invecchiamento cutaneo
CH515216A (de) Verfahren zur Herstellung bisher unbekannter Polypeptide

Legal Events

Date Code Title Description
121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application
NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: DE

122 Ep: pct application non-entry in european phase

Ref document number: 07701850

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1