WO2008026318A1

WO2008026318A1 - Agent anti-ride

Info

Publication number: WO2008026318A1
Application number: PCT/JP2007/000927
Authority: WO
Inventors: Naoki Izawa; Ryoko Iizuka; Toshiro Sone; Katsuyoshi Chiba
Original assignee: Yakult Honsha Co Ltd
Current assignee: Yakult Honsha Co Ltd
Priority date: 2006-08-30
Filing date: 2007-08-29
Publication date: 2008-03-06
Anticipated expiration: 2009-02-28
Also published as: TW200829262A; EP2057981A4; CN101505721B; KR20090043491A; US20100291049A1; CN101505721A; BRPI0716118B1; US8088369B2; TWI387459B; EP2057981A1; JP5324220B2; BRPI0716118A2; JPWO2008026318A1

Description

明細書

シヮ形成抑制剤

技術分野

[0001 ] 本発明は、シヮ形成抑制剤に関し、更に詳細には、紫外線照射下における皮膚表面のシヮの形成を抑制する効果に優れたシヮ形成抑制剤に関する。背景技術

[0002] 肌は、加齢や温度、湿度、紫外線等の外来ストレスの影響を受け、シヮゃ肌荒れ等の症状を誘発する。これまでの研究からシヮ等の発症には、皮膚真皮の線維芽細胞の機能低下やマトリックス線維の減少又は分解が寄与しているものと考えられ、このような症状を改善する目的で様々な手段が提案されている。例えば、このような手段として、ビヮ抽出物（特許文献 1 ) や酸化型コェンザィム A (特許文献 2 ) 、ァガリクス茸（特許文献 3及び 4 ) 等を利用する方法を挙げることができる。しかし、未だシヮ形成抑制効果と安全性の両面から充分満足できるものではなかった。

[0003] 一方で、乳酸菌の培養上清、すなわち主に乳を主成分とする培地に乳酸菌を接種して得られた培養物が、皮膚外用剤としての効果を有することが報告されている。例えば、乳酸菌の培養上清が、保湿作用（非特許文献 1 ) 、抗酸化作用（非特許文献 2 ) 、光防御作用（非特許文献 3 ) 、皮膚菌叢のコントロール作用、皮膚 p Hコントロール作用（非特許文献 4 ) を有することが報告されている。

[0004] また、近年では、乳酸菌の培養上清中に含まれる成分として、乳酸菌の代謝により細胞外に産生される多糖類に関する研究も盛んに進められるようになり、各乳酸菌が産生する細胞外多糖類を有効成分として利用する皮膚外用剤に関する技術も数多く報告されている。

このような技術としては、例えば、ストレプトコッカス■ラクチス、ラクトコッカス■ラクチスなどが産生するリン酸化多糖類を保湿剤や美白剤として利用する方法（特許文献 5及び 6 ) 、ラクトバチルス属に属する乳酸菌が産生する多糖類を抗炎症剤として利用する方法（特許文献 7 ) などを挙げることができる。

[0005] しかしながら、これらの乳酸菌培養上清（或いは乳酸菌産生細胞外多糖類 ) は、保湿作用ゃ抗酸化作用を期待する皮膚外用剤として利用されるものであって、シヮの形成を抑制する効果に優れたものは見出されていなかった。特許文献 1 ：特公平 5— 1 7 2 0 6号公報

特許文献 2：特開平 8— 1 7 5 9 6 1号公報

特許文献 3：特開平 1 1—2 2 8 4 3 8号公報

特許文献 4：特開平 1 1—2 2 8 4 3 9号公報

特許文献 5：特開平 1 0— 2 5 1 1 4 0号公報

特許文献 6：特開平 9— 2 4 9 5 2 4号公報

特許文献 7：特開平 7— 7 0 2 0 9号公報

非特許文献 1 ：日本香粧品科学会誌， 6 ( 4 ) , p 2 3 8 , 1 9 8 2 非特許文献 2：日本香粧品科学会誌第 7回学術学会講演要旨， 5 9 , 1 9 8 2 非特許文献 3：日本香粧品学会第 8回学術学会講演要旨， 2 1 0 , 1 9 8 3 非特許文献 4：日本香粧品学会第 9回学術学会講演要旨， 1 3 2 , 1 9 8 4 発明の開示

発明が解決しょうとする課題

[0006] 本発明の目的は、肌におけるシヮの形成、具体的には、紫外線照射による皮膚表面のシヮの形成を特異的に抑制する効果を有し、安全性に優れた新規な皮膚外用剤を提供することにある。

課題を解決するための手段

[0007] 本発明者らは上記課題を解決するために鋭意研究を行った結果、数多くの乳酸菌の中で、ストレプトコッカス■サ一モフィルスに属する乳酸菌を培養して得られる培養上清に、シヮの形成を特異的に抑制する優れた効果があることを見出し、本発明を完成した。

[0008] すなわち、本発明は、ストレプトコッカス■サ_モフィルスに属する乳酸菌の培養上清を有効成分として含有するシヮ形成抑制剤を提供するものである。

また、本発明は、ストレプトコッカス■サ_モフィルスに属する乳酸菌の培養上清を含有する組成物を皮膚に塗布することを特徴とするシヮの形成抑制方法を提供するものである。

さらに、本発明は、ストレプトコッカス■サ_モフィルスに属する乳酸菌の培養上清を含有する組成物のシヮ形成抑制剤としての使用を提供するものである。

発明の効果

[0009] 本発明のシヮ形成抑制剤は、天然の乳酸菌を用いて得られる培養上清を有効成分とするので、安全性に優れており、各種皮膚外用剤組成物として使用が可能である。

図面の簡単な説明

[0010] [図 1]実施例 1のシヮ面積比率を示す図面である。

[図 2]シヮ深さ別面積率の測定を示す概略図である。

[図 3]実施例 2のシヮ深さ別面積比率を示す図面である。

[図 4]実施例 2のマウス背部皮膚レプリカ写真である。

発明を実施するための最良の形態

[0011] 本発明のシヮ形成抑制剤の有効成分である乳酸菌培養上清は、ストレプトコッカス■サ_モフィルスに属する乳酸菌を、乳を主成分とする培地で培養し、得られた培養物から固形物を除去することにより製造される。

[0012] ここで用いられるストレプトコッカス■サ一モフィルスに属する乳酸菌としては、特に限定されるものではないが、得られる培養上清のシヮ形成に対する充分な抑制効果を得る観点から、ストレプトコッカス ■サ一モフィルス Y I T 202 1株（F E RM B P_7537、寄託日：平成 8年（ 1 99 6年） 1 1月 1 日）、ストレプトコッカス■サ一モフィルス Y I T 200 1 株（F E RM B P— 7538、寄託日：平成 1 3年（200 1年） 1月 3 1 日）、ストレプトコッカス .サ一モフィルス Y I T 2085株 (F E RM B P- 1 0880、寄託日： 2006年 8月 1 8日）、ストレプトコッカス■サ一モフィルス Y I T 2084株（FERM BP_ 1 0879、寄託日： 2006年 8月 1 8日）及びストレプトコッカス■サ一モフィルス Y I T 2059株（FERM BP_ 1 0878、寄託日： 2006年 8月 1 8 日）からなる群から選ばれる 1種又は 2種以上を使用することが好ましい。なお、これらのストレプトコッカス■サ一モフィルスに属する乳酸菌株は、独立行政法人産業技術総合研究所特許生物寄託センター（日本国茨城県つくば市東 1丁目 1番地 1 中央第 6 (郵便番号 305_8566) ) に寄託されている。

[0013] ストレプトコッカス■サ一モフィルスに属する乳酸菌を培養する培地としては、人乳、牛乳、山羊乳等の獣乳や、脱脂乳、粉乳や脱脂粉乳からの還元孚し、クリーム等の乳製品が好適なものとして挙げられ、また、豆乳等の大豆加工品を用いることも可能である。なお、これらは、そのまま培地として使用してもよく、また、必要に応じて適当な濃度に希釈して使用しても良い。

[0014] 更に、これらの培地には、乳酸菌の培養において栄養源を補う目的で、一般的に用いられる成分を別途配合してもよい。このようなものとしては、酵母エキス、クロレラエキス、ビタミン A、ビタミン B類、ビタミン C、ビタミン E等のビタミン類や、各種ペプチド類を含むタンパク分解物、アミノ酸類、カルシウム、マグネシウム等の塩類が挙げられる。

[0015] 前記培地を用いたストレプトコッカス■サ_モフィルスに属する乳酸菌の培養は、常法に従って行えばよいが、培養温度や時間をある範囲に設定すれば、得られる培養上清のシヮ形成に対する顕著な抑制効果が得られるので好ましい。すなわち、培養温度を 30°C〜45°C、より好ましくは 37°C〜4 2°Cとし、培養時間を、 1時間〜 48時間、より好ましくは、 4時間〜 24 時間とすれば、シヮ形成に対する顕著な抑制効果を有する培養上清が得られる。なお、このときの他の培養条件としては、静置、攪拌、振盪、通気等が挙げられ、これらから培養に適した方法を適宜選択して行えばよい。

[0016] 本発明に用いる乳酸菌培養上清は、上記の如くして得られた乳酸菌培養物から、ろ過等常法に従って処理することにより得ることができる。ここで、本発明者等は、従来から皮膚外用剤に関し、各種乳酸菌が産生する細胞外多糖類に関する技術的知見が数多く報告されていることに鑑み、前記のようにして得られたストレプトコッカス■サ一モフィルスに属する特定の乳酸菌の培養上清に含まれる多糖類についても分析を行ったところ、グルコース、ガラクト一ス、 N—ァセチルグルコサミンおよびグルクロン酸を含むことが確認され、既知の乳酸菌が産生する多糖類とは異なる特異的な多糖類であることが示唆された。

[001 7] 乳酸菌が産生する多糖類については、代表的な効果として、保湿効果に優れたヒアルロン酸を挙げることができるが、ヒアルロン酸は、シヮ形成を特異的に抑制する効果を有することは知られておらず、また、他の乳酸菌産生多糖類についても同様にこのような知見は報告されていない。本発明のシヮ形成抑制剤は、前記のとおり、従来から報告されている乳酸菌が産生する多糖類とは異なる特異的な構造を有することが示唆される多糖類を含む乳酸菌培養上清を有効成分として含有するため、シヮの形成に対する特異的な抑制効果が得られるものと考えられる。従って、本発明のシヮ形成抑制剤の有効成分である乳酸菌培養上清は、公知の乳酸菌産生多糖類を含む乳酸菌培養上清とは明確に区別されるものである。

[0018] 本発明のシヮ形成抑制剤は、ストレプトコッカス■サ一モフィルスに属する乳酸菌の培養上清を有効成分として含有するものであれば、その使用方法、使用形態は特に限定されることはない。即ち、ストレプトコッカス 'サ_ モフィルスに属する乳酸菌の培養上清をそのまま或いは、濃縮または希釈して、さらには、噴霧乾燥や凍結乾燥等の手段により乾燥した粉末として使用することができる。また、当該培養上清を含有する成分として、乳酸菌培養物をそのまま使用することもできる。

[001 9] 本発明のシヮ形成抑制剤は、化粧品、医薬品、医薬部外品等の皮膚外用剤組成物に配合することができ、例えば、化粧水、乳液、各種クリーム、パック、美容液等の基礎化粧料、シャンプ一、リンス、トリートメント、へアトニック、ヘアリキッド、ヘアクリーム、ヘアミルク等の頭髪用製品、入浴剤等の浴用化粧品、ファンデーション、口紅、マスカラ、アイシャドウ等のメ一キャップ化粧品、日焼け止め等の特殊化粧品等とすることができる。本発明のシヮ形成抑制剤としての乳酸菌培養上清の配合量は、特に限定されるわけではなく、皮膚外用剤組成物の形態等によって適宜設定すればよく、好ましくは 0 . 0 1重量％〜 1 0 0重量⁰ /o、特に好ましくは 0 . 1重量％〜 9 0 重量％、さらに好ましくは 1重量 0/ &〜 3 0重量％である。

[0020] 前記した本発明のシヮ形成抑制剤を含有する皮膚外用剤組成物は、常法に従って製造することができ、特に限定されるものではない。例えば、精製水や化粧水基剤、クリーム基剤、乳液基剤等に本発明のシヮ形成抑制剤を所望の作用効果を発揮できる程度に適量溶解若しくは分散させればよい。

[0021 ] また、皮膚外用剤組成物には、必須成分である本発明のシヮ形成抑制剤の他に、通常、皮膚外用剤に配合される副素材を配合することができる。このような副素材としては、界面活性剤、油分、アルコール類、保湿剤、增粘剤、防腐剤、酸化防止剤、キレート剤、 p H調整剤、香料、色素、紫外線吸収 ■散乱剤、粉体、ビタミン類、アミノ酸類、水溶性高分子、発泡剤、顔料、植物抽出物、動物由来成分、海藻抽出物、各種薬剤、添加剤、水等を挙げることができる。

[0022] また更に、本発明のシヮ形成抑制剤は、食経験のある乳酸菌が産生する多糖類を有効成分としていることから、各種飲食品にも配合することもできる。ここでいう飲食品とは、前記のシヮ形成抑制剤をそのまま、またはそれを含む乳酸菌培養物もしくはこれらを飲食品中に含有せしめて、シヮ形成の予防に有用な機能性食品又は食品素材として食されるものである。例えば、前記シヮ形成抑制剤に、適当な助剤を添加した後、慣用の手段を用いて食用に適した形態、例えば、顆粒状、粒状、錠剤、カプセル、ペーストなどに成形して食用に供してもよく、また各種の食品、例えば、ハム、ソーセージなどの食肉加工食品、かまぼこ、ちくわなどの水産加工食品、パン、菓子などに添加して使用したり、水、果汁、牛乳、清涼飲料などの飲料に添加して使用しても良い。また、本発明のシヮ形成抑制剤を含有する乳酸菌培養物をそのまま発酵乳製品とすることもできる。

実施例

[0023] 以下に、実施例及び試験例を挙げて本発明を更に詳細に説明するが、本発明はこれらの実施例等になんら制約されるものではない。

[0024] 製造例 1

シヮ形成抑制剤の調製

1 0% S k i mme d m i l k培地（ D i f c o社製） 1 m L に、ストレプトコッカス .サ一モフィルス Y I T 2085株（FERM BP— 1 0880) 、ストレプトコッカス .サ一モフィルス Y I T 2021株（ F ERM BP_7537) 、ストレプトコッカス .サ一モフィルス Y I T 2 001株（FERM BP_7538) 、ストレプトコッカス .サ一モフィルス Y I T 2084株 (FERM BP— 1 0879) またはストレプトコッカス 'サ一モフィルス Y I T 2059株（FERM BP— 1 0878) を 1 %植菌し、 42 °Cで 4時間培養した。次いで、氷中で冷却後、終濃度が 1 0%w/vになるようにトリクロ口酢酸（TCA) を加え、 4°Cで 2時間静置した。これを 1 1 , 000 X gで 30分間遠心して、上澄み液に等量の 99%冷エタノールを加え、更に 4 °Cで一晚静置した。

これを S p e c t r a/P o r Memb r a n e (MW3500) にて透析し、常法に従って凍結乾燥して 5種類の培養上清（以下、使用菌株に応じて、それぞれ 2085 EPS、 2021 EPS、 2001 EPS、 208 4 E P S及び 2059 E P Sという。）を得た。これらの培養上清は、 N a O Hで p Hを 7に調整した 1 %超純水溶液として、次に挙げる検証に供した

[0025] 実施例 1

ヘアレスマウスを用いた皮膚性状に対する検証 1

HOS ： HR— 1ヘアレスマウス、雌 9週令を用意し、 6匹ずつ以下に示すとおり 8群に分け、製造例で調製した各乳酸菌培養上清を試験系に従って塗布した。乳酸菌培養上清（EPS) は、 UVB照射装置（V i I b e r l o u uma t , F r a n c e) により一日 30 m J / c m ²の紫外線を照射したマウスの背部に、綿棒を用いて 4日間 1 00 1_塗布した。また、培養上清の代わりに、 C o n t群には同量の滅菌水を、 H A群には同量の 1 % ヒアルロン酸溶液を塗布した。

なお、前日に塗布した試料の残留により、各群での紫外線照射量に影響がでないよう、紫外線照射前に滅菌水で湿らせた脱脂綿によりマウスの背部をぬぐっておいた。

[0026] 試験終了後、皮膚表面の形態を観察するため、まず、マウスを台に固定し、背部皮膚から不透明の即乾性シリコンゴム（S I L F LO, F I e X i c o D v e l o pm e n t s) を塗布してネガティブレプリカを台紙に固定して作製した。次いで、常法に従って、ネガティブレプリカを 30度の角度で落射照明して画像を入力し、二値化後、画像解析を行ない、面積比率を求めた。その結果を図 1に示す。なお、面積比率とは一定面積当りにシヮが何％存在するかを示すものである。

[0027] 試験系

I ； C o n t群（U V +、水）

I I ； HA群（UV十、 1 %HA溶液）

I I I ； 2059群（UV十、 2059 E P S)

I V ； 202 1群（UV十、 202 1 E P S)

V ； 2084群（UV十、 2084 E P S)

V I ； 2085群（UV十、 2085 E P S)

V I I ； 200 1群（UV十、 200 1 E P S)

V I I I ； U V—群（U V―、水）

[0028] 図 1に示すとおり、乳酸菌培養上清（E P S) を塗布した群では、 C o n t群に比べて紫外線照射によって生じるシヮを減少させる効果が認められた。また一方で、皮膚に対して優れた保湿作用を有し、乳酸菌が産生する多糖類として既知のヒアルロン酸を塗布した群では、紫外線によるシヮの形成を抑制する効果は認められなかったことから、本発明のシヮ形成抑制剤の有効成分はヒアルロン酸ではないことが示唆された。

[0029] 実施例 2

ヘアレスマウスを用いた皮膚性状に対する検証 2

ヘアレスマウスにおける皮膚性状を更に検証するため、実施例 1の C o n t群、 U V_群及び 2085群について、シヮ深さ別面積率を求めた。なお、シヮ深さ別面積率は、図 2に示すとおり、実施例 1の画像処理においてシヮと認識された部分について、照射落射方向の長さ dに t a n声をかけてものをシヮ深さと定義し、その深さ別の面積比率とした。

その結果をマウス背部の皮膚レプリカ写真（図 4) と併せ、図 3に示す。

[0030] まず、図 3に示すとおり、 C o n t群では、深いシヮが多く認められるのに対し、 2085群では、深いシヮの形成が顕著に少なくなつていた。また、このような傾向は、図 4からも明らかに示された。

[0031] 実施例 3 化粧水の調製

下記組成で、化粧水を調製した。なお、調製方法は、（7) に（6) を溶解して、これに（1 ) 〜（5) を加えて十分に攪拌して化粧水を得た。

[0032] [表 1]

組成

[0033] 実施例 4 乳液の調製

下記組成で、乳液を調製した。なお、調製方法は、（1 1 ) に（7) 、 ( 8) 及び（1 0) を加えて加温し、 80°Cで（1 ) 〜（6) を加えて乳化し、その後、（9) を加えて攪拌し、室温まで冷却して乳液を得た。

[0034] [表 2] 組成

[0035] 実施例 5 クリームの調製

下記組成で、クリームを調製した。なお、調製方法は、（1 4) に（9) 、（1 0) 、 (1 2) 及び（1 3) を加えて加温し、 80°Cで（ 1 ) 〜（8 ) を加えて乳化し、その後、（1 1 ) を加えて攪拌し、室温まで冷却してクリームを得た。

[0036] [表 3]

組成

原料使用量（重量％)

① 流動パラフィン 23.0

② ヮセリン 7.0

③ セ夕ノール 1.0

④ ステアリン酸 2.0

⑤ Sッロウ 2.0

⑥ ソルビ夕ンモノステアレート 3.5

⑦ ポリオキシエチレン (20)ソルビ夕ンモノステアレート 2.5

⑧ パラオキシ安息香酸ブチル 0.05

⑨ 1,3—プチレングリコール 1.0

⑩ パラォキシ安息香酸メチル 0.1

⑪ 香料 0.15

⑫ 乳酸菌培養液 5.0

2085EPS 0.1

⑭ 蒸留水全体で 100となる量産業上の利用可能性

本発明のストレプトコッカス■サ一モフィルスに属する乳酸菌の培養上清を有効成分として含有するシヮ形成抑制剤は、シヮ形成抑制効果に優れ、かつ天然の乳酸菌を用いて得られる培養上清を有効成分とするので、安全性に優れており、各種外用剤組成物として使用が可能である。

Claims

請求の範囲

[1] ストレプトコッカス■サ一モフィルスに属する乳酸菌の培養上清を有効成分として含有するシヮ形成抑制剤。

[2] ストレプトコッカス■サ_モフィルスに属する乳酸菌が、ストレプトコッカス■サ一モフィルス Y I T 2021株（FERM BP— 7537) 、ストレプトコッカス .サ一モフィルス Y I T 2001株（FERM BP— 7 538) 、ストレプトコッカス .サ一モフィルス Y I T 2085株 ( F E R M BP_ 1 0880) 、ストレプトコッカス .サ一モフィルス Y I T 20 84株（FERM B P- 1 0879) 及びストレプトコッカス■サ一モフィルス Y I T 2059株（FERM BP— 1 0878) からなる群から選ばれる 1種又は 2種以上である請求項 1記載のシヮ形成抑制剤。

[3] ストレプトコッカス■サ一モフィルスに属する乳酸菌の培養上清を含有する組成物を皮膚に塗布することを特徴とするシヮの形成抑制方法。

[4] 前記ストレプトコッカス■サ_モフィルスに属する乳酸菌が、ストレプトコッカス■サ一モフィルス Y I T 2021株（FERM BP— 7537) 、ストレプトコッカス .サ一モフィルス Y I T 2001株（FERM BP -7538) 、ストレプトコッカス .サ一モフィルス Y I T 2085株 ( F ERM BP_ 1 0880) 、ストレプトコッカス .サ一モフィルス Y I T 2084株 (FERM BP— 1 0879) 及びストレプトコッカス■サ一モフィルス Y I T 2059株（FERM BP— 1 0878) からなる群から選ばれる 1種又は 2種以上である請求項 3記載のシヮの形成抑制方法。

[5] ストレプトコッカス■サ一モフィルスに属する乳酸菌の培養上清を含有する組成物のシヮ形成抑制剤としての使用。

[6] 前記ストレプトコッカス■サ_モフィルスに属する乳酸菌が、ストレプトコッカス■サ一モフィルス Y I T 2021株（FERM BP— 7537) 、ストレプトコッカス .サ一モフィルス Y I T 2001株（FERM BP -7538) 、ストレプトコッカス .サ一モフィルス Y I T 2085株 ( F ERM BP_ 1 0880) 、ストレプトコッカス .サ一モフィルス Y I T 2084株（FERM BP— 1 0879) 及びストレプトコッカス■サ一モフィルス Y I T 2059株（FERM BP— 1 0878) からなる群から選ばれる 1種又は 2種以上である請求項 5記載の使用。