WO2014126191A1 - シクロプロパン環を有する不飽和脂肪酸誘導体を含むリン脂質化合物 - Google Patents

シクロプロパン環を有する不飽和脂肪酸誘導体を含むリン脂質化合物 Download PDF

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知之 西崎
田中　明人
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Definitions

  • the present invention relates to a phospholipid compound having an effect of improving cognitive function and / or an effect of treating diabetes, and more particularly to a phospholipid compound containing an unsaturated fatty acid derivative having a cyclopropane ring.
  • dementia has become a major medical problem worldwide.
  • Dementia is a disease with various symptoms centered on learning / memory impairment and a decline in judgment, but the symptoms and their course differ depending on the disease that causes them.
  • both cases are common in that the quality of life of the patient is significantly impaired.
  • dementia is a serious social problem when considering the fact that the caregivers including the patient's family are forced to suffer a great deal of labor. Since the increase in the elderly population due to prolonged lifespan is related to the increase in patients with dementia, it is predicted that the number of patients with dementia will increase in Japan in the future. Many people suffer from cognitive impairment associated with aging that is not classified as dementia.
  • DCP-LA 8- [2- (2-Pentyl-cyclopropylmethyl) -cyclopropyl] -octanoic acid
  • DCP-LA a linoleic acid derivative
  • LTP is thought to be involved in the development of various neurological and psychiatric disorders such as Alzheimer's disease, and thus substances that induce LTP expression are therapeutic or preventive agents for these neurological and psychiatric disorders including dementia. Have potential.
  • 1,2-dilinoleoyl-sn-glycero-3-phosphocholine or 1-palmitoyl-2-oleoyl-sn-glycero-3-phosphocholine is a spatial learning and memory disorder induced by scopolamine, or mild cognition It has been reported that disability and dementia are improved (Non-Patent Documents 1 and 2).
  • phosphatidylethanolamine is a phospholipid that is one of the main components of biological membranes and is marketed as a health food along with phosphatidylserine and the like.
  • phosphatidylethanolamines in particular, dilinoleoyl phosphatidylethanolamine (as fatty acids) (Including two linoleic acids) have cell death induction inhibitory activity, particularly endoplasmic reticulum stress inhibitory activity. Due to this activity, dilinoleoyl phosphatidylethanolamine is used for pharmaceutical use, particularly for prevention and / or treatment of neurodegenerative diseases. (Patent Document 2).
  • An object of the present invention is to provide a phospholipid compound containing an unsaturated fatty acid derivative having a cyclopropane ring, particularly a phospholipid compound having an effect of improving cognitive function and / or a therapeutic effect of diabetes, and a pharmaceutical use of the compound. .
  • the present inventors conducted further intensive studies for the purpose of obtaining a drug capable of improving cognitive function more effectively. As a result, it was confirmed that phospholipid compounds containing unsaturated fatty acid derivatives having a cyclopropane ring have various pharmacological effects useful for improving cognitive function, and also have pharmacological actions useful for the treatment of diabetes.
  • the present invention has been completed. That is, the present invention is as follows. [1] A pharmaceutical comprising a phospholipid compound containing an unsaturated fatty acid having a cyclopropane ring as an active ingredient.
  • the unsaturated fatty acid having a cyclopropane ring is 8- [2- (2-pentyl-cyclopropylmethyl) -cyclopropyl] -octanoic acid (DCP-LA) or 8- (2-octylcyclopropyl) octane
  • DCP-LA 2- (2-pentyl-cyclopropylmethyl
  • DCP-LA octanoic acid
  • phospholipid compound is phosphatidylethanolamine (PE), phosphatidylserine (PS), phosphatidylcholine (PC), or phosphatidylinositol (PI).
  • PE phosphatidylethanolamine
  • PS phosphatidylserine
  • PC phosphatidylcholine
  • PI phosphatidylinositol
  • the phospholipid compound is 1,2-o-bis- [8- ⁇ 2- (2-pentyl-cyclopropylmethyl) -cyclopropyl ⁇ -octanoyl] -sn-glycero-3-phosphatidylethanolamine ( diDCP-LA-PE), 1,2-o-bis- [8- ⁇ 2- (2-pentyl-cyclopropylmethyl) -cyclopropyl ⁇ -octanoyl] -sn-glycero-3-phosphatidyl-L-serine (diDCP-LA-PS), 1,2-o-bis- [8- ⁇ 2- (2-pentyl-cyclopropylmethyl) -cyclopropyl ⁇ -octanoyl] -sn-3-glycero-3-phosphatidylcholine (diDCP-LA-PC), 1,2-o-bis- [8- ⁇ 2- (2-pentyl-cyclopropylmethyl)
  • [6] The medicament according to any one of [1] to [5] above, which is a therapeutic drug for diabetes.
  • the medicament according to [6] above, wherein the diabetes is type 1 diabetes.
  • the medicament according to [6] above, wherein the diabetes is type 2 diabetes.
  • the medicament according to [6] above, wherein the diabetes is type 1 and type 2 diabetes.
  • the medicament according to [11] above, wherein the dementia is Alzheimer's dementia.
  • a reagent comprising a phospholipid compound containing an unsaturated fatty acid derivative having a cyclopropane ring as an active ingredient.
  • the unsaturated fatty acid having a cyclopropane ring is 8- [2- (2-pentyl-cyclopropylmethyl) -cyclopropyl] -octanoic acid (DCP-LA) or 8- (2-octylcyclopropyl) octane
  • DCP-LA octanoic acid
  • DCP-OA octanoic acid
  • octylcyclopropyl octane
  • DCP-OA an acid
  • the reagent according to [13] above, wherein the phospholipid compound is phosphatidylethanolamine (PE), phosphatidylserine (PS), phosphatidylcholine (PC), or phosphatidylinositol (PI).
  • PE phosphatidylethanolamine
  • PS phosphatidylserine
  • the phospholipid compound is 1,2-o-bis- [8- ⁇ 2- (2-pentyl-cyclopropylmethyl) -cyclopropyl ⁇ -octanoyl] -sn-glycero-3-phosphatidylethanolamine ( diDCP-LA-PE), 1,2-o-bis- [8- ⁇ 2- (2-pentyl-cyclopropylmethyl) -cyclopropyl ⁇ -octanoyl] -sn-glycero-3-phosphatidyl-L-serine (diDCP-LA-PS), 1,2-o-bis- [8- ⁇ 2- (2-pentyl-cyclopropylmethyl) -cyclopropyl ⁇ -octanoyl] -sn-3-glycero-3-phosphatidylcholine (diDCP-LA-PC), 1,2-o-bis- [8- ⁇ 2- (2-pentyl-cyclopropylmethyl)
  • a method for preventing or treating diabetes comprising administering an effective amount of a phospholipid compound containing an unsaturated fatty acid having a cyclopropane ring to a patient in need thereof.
  • the phospholipid compound is diDCP-LA-PE, diDCP-LA-PS, diDCP-LA-PC, diDCP-LA-PI, or diDCP-LA-PI ent.
  • a method for preventing or treating dementia comprising administering an effective amount of a phospholipid compound containing an unsaturated fatty acid having a cyclopropane ring to a patient in need thereof.
  • phospholipid compound is diDCP-LA-PE, diDCP-LA-PS, diDCP-LA-PC, diDCP-LA-PI, or diDCP-LA-PI ent.
  • a phospholipid compound containing an unsaturated fatty acid having a cyclopropane ring for the prevention or treatment of dementia [30] The phospholipid compound according to [29] above, which is diDCP-LA-PE, diDCP-LA-PS, diDCP-LA-PC, diDCP-LA-PI, or diDCP-LA-PI ent.
  • the phospholipid compound containing an unsaturated fatty acid having a cyclopropane ring provided by the present invention has excellent pharmacological action (protein tyrosine phosphatase 1B (PTP1B) inhibitory action, Akt activity) in improving cognitive function and / or treating diabetes.
  • PTP1B protein tyrosine phosphatase 1B
  • Akt activity protein tyrosine phosphatase 1B
  • Akt activity protein tyrosine phosphatase 1B
  • Akt activity protein tyrosine phosphatase 1B
  • Akt activity protein tyrosine phosphatase 1B
  • Akt activity protein tyrosine phosphatase 1B
  • Akt activity protein tyrosine phosphatase 1B
  • Akt activity protein tyrosine phosphatase 1B
  • Activating action Protein phosphatase C (PKC) activating action, PKC ⁇ and PKC ⁇ activating action,
  • FIG. 1 shows the structure of the phospholipid compound of the present invention.
  • FIG. 3 is a diagram showing a membrane transport signal pathway of GLUT4 by diDCP-LA-PE.
  • DiDCP-LA-PE inhibits PTP1B, thereby indirectly activating tyrosine kinase and promoting GLUT4 cell membrane transport.
  • FIG. 4 is a graph showing that diDCP-LA-PE induces Akt activation.
  • 3T3L1-GLUT4myc cells are not treated with diDCP-LA-PE (1 ⁇ M) or treated for 10 minutes followed by antibodies against phospho-threonine 308 (P-Thr308), phospho-serine 473 (P-Ser473) and Akt. Western blotting was performed. The signal intensity of P-Thr308 or P-Ser473 was normalized by the signal intensity of Akt.
  • FIG. 5 is a graph showing that diDCP-LA-PE induces PKC activation. PKC activity was monitored in a cell-free system. A given PKC isozyme was evaluated in the absence (control) or presence of diDCP-LA-PE (100 ⁇ M). In the graph, each column
  • diDCP-LA-PE is a specific activator of PKC ⁇ and PKC ⁇ .
  • diDCP-LA-PE 100 ⁇ M
  • diDCP-LA-PS 100 ⁇ M
  • diDCP-LA-PC 100 ⁇ M
  • diDCP-LA-PI 100 ⁇ M
  • diDCP-LA-PI enantiomer diDCP-LA-PIe
  • FIG. 7 is a graph showing that diDCP-LA-PE promotes cell membrane transport of GLUT4 in differentiated 3T3L1-GLUT4myc adipocytes. Not treated with insulin or diDCP-LA-PE (1 ⁇ M), or 20 minutes after treatment, cells were lysed and separated into cytoplasmic and cell membrane fractions, then Western blotting using anti-c-myc antibody I did it.
  • P value unpaired t-test.
  • FIG. 8 is a graph showing the concentration-dependent effect of diDCP-LA-PE on cell membrane transport of GLUT4 in 3T3L1-GLUT4myc adipocytes. Not treated with diDCP-LA-PE at a given concentration, or 20 minutes after treatment, cells were lysed and separated into cytoplasmic fraction and cell membrane fraction, and then Western blotting was performed using anti-c-myc antibody It was.
  • FIG. 9 is a graph showing that phospholipid derivatives promote cell membrane transport of GLUT4 in differentiated 3T3L1-GLUT4myc adipocytes. 20 minutes after treatment with various phospholipid derivatives (control) or 1 ⁇ M, cells are lysed and separated into cytoplasmic fraction and cell membrane fraction, and then Western blotting is performed using anti-c-myc antibody It was.
  • FIG. 10 is a graph showing lowering serum glucose levels in C57BL / KsJ-lepr db / lepr db mice.
  • FIG. 11 is a graph showing that diDCP-LA-PE reduces serum glucose levels in mice treated with streptozotocin (STZ). After the mouse was left in a state of glucose starvation for 12 hours, glucose (2 g / kg) was orally administered (arrow), and blood was collected at a predetermined time to perform a serum glucose assay.
  • FIG. 12 is a graph showing that diDCP-LA-PE promotes GLUT4 cell membrane transport in 3T3L1-GLUT4myc adipocytes in which the insulin receptor is knocked down (IR KD).
  • NC siRNA negative control NC siRNA
  • IR KD insulin receptor siRNA
  • the present invention provides a medicament containing a phospholipid compound containing an unsaturated fatty acid having a cyclopropane ring as an active ingredient.
  • the phospholipid compound is also referred to as the phospholipid compound of the present invention and the medicament is also referred to as the medicament of the present invention.
  • the said medicine is mentioned later, it is a concept including a dementia therapeutic drug, a diabetes therapeutic drug, an anti-aging drug, etc.
  • the “unsaturated fatty acid having a cyclopropane ring” is an unsaturated fatty acid in which a double bond is converted into a cyclopropane ring, and the number of the conversion is 1 or 2 depending on the number of the original double bonds. It is 2 or more, preferably 1 or 2, and more preferably 2.
  • the unsaturated fatty acid is not particularly limited as long as it is a fatty acid having at least one or more double bonds in the molecule, but monounsaturated fatty acid, polyunsaturated fatty acid, cis type unsaturated fatty acid, Any of trans-type unsaturated fatty acids may be used.
  • Examples of monounsaturated fatty acids include oleic acid, palmitoleic acid, petrothelic acid, erucic acid, brassic acid, obtusilic acid, capreic acid, undecylenic acid, lindelic acid, tuzic acid, fizeteric acid, myristic acid, palmitoleic acid , Elaidic acid, asclepic acid, vaccenic acid, gadoleic acid, gondoic acid, cetreic acid and cis-6-hexadecenoic acid.
  • polyunsaturated fatty acids include linoleic acid, linolenic acid, ⁇ -linolenic acid, ricinoleic acid, ⁇ -eleostearic acid, ⁇ -eleostearic acid, bunic acid, trans-10-octadecadienoic acid and Examples thereof include trans-12-octadecadienoic acid.
  • Preferred are linoleic acid (cis, cis-9,12-octadienoic acid) and oleic acid (cis-9-octadecenoic acid), and more preferred is linoleic acid.
  • “unsaturated fatty acid having a cyclopropane ring” is preferably 8- [2- (2-pentyl-cyclopropylmethyl) -cyclopropyl] in which a double bond of linoleic acid is converted to a cyclopropane ring.
  • DCP-LA -Octanoic acid
  • DCP-OA 8- (2-octylcyclopropyl) octanoic acid
  • DCP-LA 8- (2-octylcyclopropyl) octanoic acid
  • DCP-OA 8- (2-octylcyclopropyl) octanoic acid
  • More preferred is DCP-LA.
  • phospholipids There are roughly two types of phospholipids: glycerophospholipids with a glycerin skeleton and sphingophospholipids with a sphingosine skeleton. Fatty acid and phosphoric acid are combined with glycerin or sphingosine as the central skeleton, and alcohol has an ester bond with phosphoric acid.
  • the phospholipid compound of the present invention may be either glycerophospholipid or sphingophospholipid, but is preferably glycerophospholipid.
  • a molecule in which a fatty acid is linked to C1 and C2 positions of glycerin and phosphoric acid is linked to C3 position is called phosphatidic acid, and a preferred embodiment of the present invention is that the fatty acids at C1 and C2 positions have the above-mentioned “cyclopropane ring. It has an unsaturated fatty acid.
  • the two unsaturated fatty acids may be different or the same, but are preferably the same.
  • Examples of alcohols ester-bonded to phosphoric acid include choline, ethanolamine, inositol, serine and the like. Ethanolamine is preferred.
  • the phospholipid compounds of the present invention may contain one or more stereoisomers (eg optical isomers, geometric isomers) resulting from asymmetric carbon atoms or double bonds. All such isomers and mixtures thereof are included within the scope of the present invention.
  • the phospholipid compound of the present invention is an ordinary phospholipid synthesis method (for example, “The Chemical Society of Japan, 5th edition, Experimental Chemistry Course 16”, except that the fatty acid contained therein is an unsaturated fatty acid having a cyclopropane ring. It can be synthesized according to the synthesis of organic compounds (cooperation); the method described in Chapter 3, “Phosphoric esters of carboxylic acids / amino acids / peptides”. In more detail, it is compoundable according to the method as described in an Example.
  • the unsaturated fatty acid having a cyclopropane ring can be produced, for example, by the method shown in Patent Document 1 or a method analogous thereto. Moreover, what was extracted from the natural product may be used.
  • a method for producing DCP-LA is described in Patent Document 1.
  • phospholipid compound containing an unsaturated fatty acid having a cyclopropane ring preferably 1,2-o-bis- [8- ⁇ 2- (2-pentyl-cyclopropylmethyl) -cyclopropyl ⁇ -octanoyl] -sn-glycero-3-phosphatidylethanolamine (diDCP-LA-PE), 1,2-o-bis- [8- ⁇ 2- (2-pentyl-cyclopropylmethyl) -cyclopropyl ⁇ -octanoyl] -sn-glycero-3-phosphatidyl-L-serine (diDCP-LA-PS), 1,2-o-bis- [8- ⁇ 2- (2-pentyl-cyclopropylmethyl) -cyclopropyl ⁇ -octanoyl] -sn-3-glycero-3-phosphatidylcholine (diDCP-LA-PC), 1,2-o-bis- [
  • the phospholipid compound of the present invention may also be used as a salt thereof.
  • a salt is not particularly limited, but is preferably a pharmaceutically or food acceptable salt, for example, an inorganic base (eg, alkali metals such as sodium and potassium; alkaline earth metals such as calcium and magnesium; aluminum and ammonium), organic Base (eg, trimethylamine, triethylamine, pyridine, picoline, ethanolamine, diethanolamine, triethanolamine, dicyclohexylamine, N, N-dibenzylethylenediamine), inorganic acid (eg, hydrochloric acid, hydrobromic acid, nitric acid, sulfuric acid, phosphorus) Acid), organic acid (eg, formic acid, acetic acid, trifluoroacetic acid, fumaric acid, oxalic acid, tartaric acid, maleic acid, citric acid, succinic acid, malic acid, methanesulfonic acid, benzenesulfonic acid,
  • the phospholipid compound of the present invention comprises (1) protein tyrosine phosphatase 1B (PTP1B) inhibitory action, (2) Akt activation action, and (3) protein phosphorylase C (PKC). ) Activation action, (4) PKC ⁇ and PKC ⁇ activation action, (5) glucose transporter 4 (GLUT4) migration promoting action to the cell membrane, and (6) insulin-independent blood glucose level lowering action. Due to these excellent pharmacological actions, the phospholipid compound of the present invention is particularly useful for the prevention or treatment of diseases associated with cognitive impairment and for the prevention or treatment of diabetes, and is provided as a pharmaceutical product.
  • PTP1B protein tyrosine phosphatase 1B
  • PKC protein phosphorylase C
  • diseases or conditions associated with cognitive impairment include dementia (eg, senile dementia, Alzheimer's dementia (Alzheimer's disease), cerebrovascular dementia, post-traumatic dementia, dementia caused by brain tumor , Dementia caused by chronic subdural hematoma, dementia caused by normal pressure cerebral edema, dementia caused by various diseases such as postmeningitis dementia and Parkinsonian dementia), non-demented cognitive impairment ( Examples include various diseases or conditions, including mild cognitive impairment (MCI)), learning or memory impairment (eg, learning and memory impairment associated with brain development disorders) and the like.
  • dementia eg, senile dementia, Alzheimer's dementia (Alzheimer's disease), cerebrovascular dementia, post-traumatic dementia, dementia caused by brain tumor , Dementia caused by chronic subdural hematoma, dementia caused by normal pressure cerebral edema, dementia caused by various diseases such as postmeningitis dementia and Parkinsonian dementia
  • non-demented cognitive impairment Examples include various diseases or conditions, including mild cognitive impairment (MCI)), learning or
  • prevention means preventing the manifestation of the symptom in a subject who does not exhibit cognitive impairment, learning / memory impairment, etc., and “treatment” In a subject exhibiting cognitive impairment, learning / memory impairment, etc., this means reducing the symptom or preventing or delaying the deterioration of the symptom.
  • ⁇ Improvement '' means improvement in cognitive ability and learning / memory ability in subjects who do not show cognitive impairment, learning / memory impairment, etc., and in subjects showing cognitive impairment, learning / memory impairment, etc. It means that the symptoms are alleviated, preferably to the extent that they do not interfere with daily life.
  • a preferred applicable disease includes Alzheimer's disease.
  • the effect as an anti-aging agent can also be anticipated by the said characteristic.
  • Diabetes is a disease in which the metabolic mechanism of sugar falls due to insufficient insulin action, and is divided into two types: insulin-dependent diabetes (IDDM or type 1 diabetes) and non-insulin-dependent diabetes (NIDDM or type 2 diabetes). Differentiated.
  • IDDM insulin-dependent diabetes
  • NIDDM non-insulin-dependent diabetes
  • the former is a type in which insulin is not secreted or the amount of secretion is very low even if blood sugar level rises due to food intake, and the latter is a mechanism in which the response mechanism of peripheral tissues is not affected even though insulin is secreted normally. It is a type that does not operate normally and does not lower blood sugar levels.
  • the present invention is useful for any type of diabetes.
  • PTP1B inhibitory action Protein tyrosine phosphatase (PTP) 1B is a cytoplasmic tyrosine phosphatase, and is involved in the regulation of tyrosine kinase by controlling the phosphorylation state of tyrosine kinase. PTP1B is considered as one of the attenuation factors of insulin signaling, and inhibition of this enzyme is considered beneficial for the treatment of diabetes. In recent years, with the attention of protein phosphorylation involved in neural activity, PTP1B inhibition is expected to be applied to neurodegenerative diseases. Examples of reports showing the possibility of PTP1B inhibitors for pharmaceutical use include the following. 1.
  • Akt activation action Akt also referred to as protein kinase B serine threonine kinase, which is activated by two amino acids, threonine 308 (Thr308) and serine 473 (Ser473) It is believed that phosphorylation of is essential. Akt has a function of specifically phosphorylating serine or threonine residues of intracellular proteins, and is known as an anti-aging factor. Akt plays the most important role in the insulin / insulin receptor signaling pathway involved in promoting the transport of glucose transporter 4 (GLUT4) to the cell membrane / intracellular uptake of glucose. Therefore, Akt activators can be effective diabetic therapeutic agents. Examples of reports showing the potential of Akt activators for pharmaceutical use include the following. 1.
  • PKC protein kinase C
  • PKC ⁇ targets the ⁇ 7 acetylcotine receptor expressed at the presynaptic terminal, enhances synaptic activity, and exhibits a cognitive function improving action (References 1-4 below).
  • PKC ⁇ and ⁇ have an action of promoting the translocation of GLUT4 to the cell membrane as a downstream signal of insulin / insulin receptor (Bryant NJ et al., Nat Rev Mol Cell Biol 2002; 3: 267-277; Reference 5 below). Examples of reports showing the possibility of PKC activators for pharmaceutical use include the following. 1. Yamamoto S, Kanno T, Nagata T, Yaguchi T, Tanaka A, Nishizaki T.
  • the linoleic acid derivative FR236924 facilitates hippocampal synaptic transmission by enhancing activity of presynaptic a7 acetylcholine receptors on the glutamatergic terminals.
  • Linoleic acid derivative DCP-LA improves learning impairment in SAMP8.
  • ⁇ , ⁇ -DCP-LA selectively activates PKC- ⁇ and stimulates neurotransmitter release with the highest potency among 4 diastereomers.Cell Physiol Biochem 2011; 27 (2): 149- 158. 4. Kanno T, Yaguchi T, Shimizu T, Tanaka A, Nishizaki T. 8- [2- (2-Pentyl-cyclopropylmethyl) -cyclopropyl] -octanoic acid and its diastereomers improve age-related cognitive deterioration. Lipids 2012; 47 ( 7): 687-695. 5. Sampsona SR, Cooperb DR.Specific protein kinase C isoforms as transducers and modulators of insulin signaling. Mol Genet Metab 2006; 89 (1-2): 32-47.
  • Glucose transporter 4 (GLUT4) migration promoting action to the cell membrane GLUT4 expressed in adipocytes and skeletal muscle cells is hardly exposed on the cell membrane in the absence of insulin stimulation. It exists in the state of being incorporated into the vesicle group. Stimulation of insulin increases the amount of GLUT4 exposed on the cell membrane surface by promoting the transport of GLUT4 present in the intracellular vesicle onto the cell membrane, and reduces the blood glucose level by taking glucose into the cell. . Although the increase in sugar uptake induced by insulin is physiologically important, it is known that this physiological phenomenon is significantly impaired in the case of diabetes.
  • pancreatic ⁇ -cells die, resulting in impaired insulin secretion and diabetes (type 1 diabetes).
  • type 1 diabetes Currently, treatment of type 1 diabetes can only be done by injecting insulin from outside the body.
  • insulin resistance attenuation of insulin responsiveness
  • insulin secretion stimulants intestinal sugar absorption inhibitors, disaccharide degradation inhibitors, DPP-4 inhibitors, PPAR ⁇ activators, and the like are used.
  • the basic diabetes treatment is to promote GLUT4 cell membrane translocation via insulin / insulin receptor signals.
  • a drug that activates the intracellular downstream signal of insulin / insulin receptor and promotes the translocation of GLUT4 to the cell membrane makes it possible to enhance the intracellular uptake of sugar in an insulin-independent manner, type 1 and type 2 diabetes Regardless, the effect can be expected as a therapeutic drug for diabetes.
  • Examples of reports showing the possibility of drugs that promote the transfer of GLUT4 to the cell membrane for pharmaceutical use include the following. 1. Stockli J, Fazakerley DJ, James DE. GLUT4 exocytosis. J Cell Sci 2011; 124: 4147-4159.
  • the phospholipid compound of the present invention can lower blood sugar level without requiring insulin, and is therefore useful for the treatment of type 2 diabetes.
  • the medicament of the present invention varies depending on the target disease, its severity, the animal species to be administered, the drug acceptability of the administration target, body weight, age, etc., but usually the amount of the phospholipid compound of the present invention which is an active ingredient Thus, 0.5-500 mg, preferably 5-250 mg per day for an adult is administered to the subject.
  • the medicament of the present invention can contain any additive, for example, a pharmaceutically acceptable carrier, in addition to the phospholipid compound of the present invention which is an active ingredient.
  • a pharmaceutically acceptable carrier include sucrose, starch, mannitol, sorbit, lactose, glucose, cellulose, talc, calcium phosphate, calcium carbonate and other excipients, cellulose, methylcellulose, hydroxypropylcellulose, polypropylpyrrolidone.
  • the medicament of the present invention can be formulated as a preparation suitable for oral administration.
  • Preparations suitable for oral administration include solutions in which an effective amount of a substance is dissolved in a diluent such as water or physiological saline, capsules, granules, powders or tablets containing the effective amount of the substance as solids or granules.
  • a diluent such as water or physiological saline
  • capsules such as water or physiological saline
  • granules, powders or tablets containing the effective amount of the substance as solids or granules.
  • a suspension in which an effective amount of a substance is suspended in an appropriate dispersion medium an emulsion in which a solution in which an effective amount of a substance is dissolved is dispersed in an appropriate dispersion medium, and the like.
  • the medicament of the present invention can be formulated as a preparation suitable for parenteral administration.
  • Formulations suitable for parenteral administration include aqueous and non-aqueous isotonic sterile injection solutions, which include antioxidants, Buffers, antibacterial agents, isotonic agents and the like may be included.
  • Aqueous and non-aqueous sterile suspensions are also included, which may contain suspending agents, solubilizers, thickeners, stabilizers, preservatives and the like.
  • the preparation can be enclosed in a container in unit doses or multiple doses like ampoules and vials.
  • the active ingredient and a pharmaceutically acceptable carrier can be lyophilized and stored in a state that may be dissolved or suspended in a suitable sterile vehicle immediately before use.
  • the phospholipid compound of the present invention can be provided as a food.
  • the phospholipid compound of the present invention which is an active ingredient is (1) protein tyrosine for mammals (eg, mouse, rat, hamster, rabbit, cat, dog, cow, sheep, monkey, human, etc.).
  • Phosphatase 1B (PTP1B) inhibitory action is (1) protein tyrosine for mammals (eg, mouse, rat, hamster, rabbit, cat, dog, cow, sheep, monkey, human, etc.).
  • Phosphatase 1B (PTP1B) inhibitory action is Akt activation action, (3) Protein kinase C (PKC) activation action, (4) PKC ⁇ and PKC ⁇ activation action, (5) Glucose transporter 4 (GLUT4 )
  • Phosphatase 1B (PTP1B) inhibitory action is eg, mouse, rat, hamster, rabbit, cat, dog, cow, sheep, monkey, human, etc
  • “food” means all foods and drinks other than drugs and quasi drugs. Examples include, but are not limited to, foods for specified health use, nutritional functional foods, and so-called supplements.
  • the medicament of the present invention may be one in which the unit intake of the medicament or a divided amount thereof is individually packaged or filled, or a plurality of unit intake or the divided amounts thereof are comprehensively packaged or filled.
  • the unit intake of the medicament or its divided amount is the unit intake of the entire phospholipid compound of the present invention or its divided amount.
  • a unit intake or its divided amount thereof is converted into a normal package (for example, a PTP (press through packaging) sheet, a paper container, What was packed or filled separately in a film (for example, plastic film) container, a glass container, a plastic container) is mentioned.
  • a normal package for example, a PTP (press through packaging) sheet, a paper container, What was packed or filled separately in a film (for example, plastic film) container, a glass container, a plastic container
  • Such individually packaged or filled pharmaceuticals or foods can be further combined and packaged together in one container (eg, paper container, film (eg, plastic film) container, glass container, plastic container). It may be filled.
  • a medicine or food in which a large number of unit intakes or divided amounts thereof are comprehensively packaged or filled for example, a single container (eg, paper container, film (eg, , Plastic film) containers, glass containers, plastic containers) or the like packed or filled.
  • the pharmaceutical product or food of the present invention can also contain a unit intake or a divided amount thereof in a sufficient number for long-term intake.
  • a unit intake or a divided amount thereof in a sufficient number for long-term intake.
  • it is 3 days or more, preferably 7 days, 10 days, It may be included in numbers sufficient for ingestion for 14 days or 21 days or more, 1 month, 2 months, 3 months or more.
  • the medicament of the present invention can be used to prevent or treat other one or more compounds that can prevent or treat neurodegenerative diseases, or other diabetes.
  • One or more compounds obtained may be included.
  • Examples of compounds that prevent or treat other neurodegenerative diseases include polyphenols, coenzyme Q10, ⁇ -sitosterol, isoflavones, mevinic acid, vitamin C, vitamin E, flavonoids, terpenes, folic acid, vitamin B6, vitamin B12, ce Skill pen lactone, urokinase, nattokinase, dilinoleoylphosphatidylethanolamine, propyl sulfide, apple pectin, acetic acid, EPA, and DHA.
  • Examples of other compounds that can prevent or treat diabetes include insulin secretagogues, sulfonylureas, sulfonamides, biguanides, ⁇ -glucosidase inhibitors, insulin preparations, insulin resistance improvers, and the like.
  • Examples thereof include nateglinide, glimepiride, glibenclamide, gliclazide, acetohexamide, tolbutamide, glyclopyramide, tolazamide, glybsol, metformin hydrochloride, buformin hydrochloride, voglibose, acarbose, insulin, pioglitazone hydrochloride, and the like.
  • diDCP-LA-PE can be produced by the production method described in Patent Document 1.
  • Example 1 Synthesis of diDCP-LA-PE (Step 1) Synthesis of (R) -3-benzyloxy-1,2-propanediol (S)-(+)-2,2-dimethyl-1,3- To a solution of dioxolane-4-methanol (1.0 g, 7.6 mmol) in dimethylformamide (10 ml) was added 60% NaH (0.61 g, 15.1 mmol) and benzyl bromide (1.1 ml, 9.1 mmol) under ice cooling. After stirring at room temperature for 15 minutes, water was added to the reaction mixture. The aqueous layer was extracted with hexane, and the organic layer was washed with H 2 O and brine.
  • Step 2 Synthesis of 3-O-benzyl-1,2-O-bis- [8- ⁇ 2- (2-pentyl-cyclopropylmethyl) -cyclopropyl ⁇ -octanoyl] -sn-glycerol DCP-LA ( 2.03 g, 6.59 mmol) was added to a toluene solution of (R) -3-benzyloxy-1,2-propanediol (0.5 g, 2.74 mmol), then concentrated under reduced pressure, and the resulting residue was dissolved in dichloromethane (15 ml ).
  • Step 3 Synthesis of 1,2-O-bis- [8- ⁇ 2- (2-pentyl-cyclopropylmethyl) -cyclopropyl ⁇ -octanoyl] -sn-glycerol 3-O-benzyl-1,2- O-bis- [8- ⁇ 2- (2-pentyl-cyclopropylmethyl) -cyclopropyl ⁇ -octanoyl] -sn-glycerol (1.20 g, 1.57 mmol) and 10% (w / v) palladium activated carbon (480 mg) A solution of ethanol (80 ml) was stirred at room temperature for 15 minutes under a hydrogen atmosphere (1 atm).
  • Step 4 Synthesis of diDCP-LA-PE 1,2-O-bis- [8- ⁇ 2- (2-pentyl-cyclopropylmethyl) -cyclopropyl ⁇ -octanoyl] -sn-glycerol (1.05 g, 1.57 mmol) and triethylamine (552 ml, 3.96 mmol) in CH 2 Cl 2 (40 ml) were added methyl N, N-diisopropylamidochloride (460 ml, 2.37 mmol) under ice cooling.
  • Example 2 Synthesis of diDCP-LA-PS 1,2-O-bis- [8- ⁇ 2- (2-pentyl-cyclopropylmethyl) -cyclopropyl ⁇ -octanoyl] -sn-glycerol (0.44 g, 0.66 mmol) and triethylamine (0.18 ml, 1.3 mmol) in CH 2 Cl 2 (15 ml) were added methyl N, N-diisopropylamidochloride (0.15 ml, 0.79 mmol) under ice cooling.
  • N-carbobenzoxy-serine benzyl ester (0.33 g, 0.99 mmol) and 1H-tetrazole (0.19 g, 2.6 mmol) were added to the mixture, and tert-butyl hydroperoxide (0.87 ml, 6.6 mmol) of 70% (v / v) aqueous solution was further added and stirred at the same temperature for 20 minutes.
  • tert-butyl hydroperoxide (0.87 ml, 6.6 mmol) of 70% (v / v) aqueous solution was further added and stirred at the same temperature for 20 minutes.
  • 10% (w / v) Na 2 S 2 O 3 aqueous solution the obtained aqueous layer was extracted with ethyl acetate, and the organic layer was dried over anhydrous MgSO 4 .
  • Example 3 Synthesis of diDCP-LA-PC 1,2-O-bis- [8- ⁇ 2- (2-pentyl-cyclopropylmethyl) -cyclopropyl ⁇ -octanoyl] -sn-glycerol (0.14 g, 0.21 mmol) and triethylamine (0.058 ml, 0.42 mmol) in CH 2 Cl 2 (5 ml) were added methyl N, N-diisopropylamidochloride (0.048 ml, 0.25 mmol) under ice cooling.
  • Example 4 Synthesis of diDCP-LA-D-PI 1,2-O-bis- [8- ⁇ 2- (2-pentyl-cyclopropylmethyl) -cyclopropyl ⁇ -octanoyl] -sn-glycerol (0.080 g , 0.12 mmol) and triethylamine (0.033 ml, 0.24 mmol) in CH 2 Cl 2 (2 ml) were added methyl N, N-diisopropylamidochloride (0.028 ml, 0.14 mmol) under ice cooling.
  • Example 5 Synthesis of unnatural diDCP-LA-L-PI 1,2-O-bis- [8- ⁇ 2- (2-pentyl-cyclopropylmethyl) -cyclopropyl ⁇ -octanoyl] -sn-glycerol (0.175 g, 0.26 mmol) and triethylamine (0.072 ml, 0.52 mmol) in CH 2 Cl 2 (5 ml) were charged with methyl N, N-diisopropylamidochloride (0.061 ml, 0.31 mmol) under ice cooling. Added.
  • O-methyl O- (2 ', 3 NaI 50 mg, 0.33 mmol
  • 2-butanone 2 ml
  • 2N HCl 2N HCl was added to the reaction mixture and the aqueous layer was extracted with chloroform.
  • Test Example 1 Protein tyrosine phosphatase 1B (PTP1B) inhibitory action (materials and methods) Assay of PTP1B activity under cell-free conditions Protein tyrosine phosphatase measurements under cell-free conditions have been reported previously (Baba Y, et al. J Am Chem Soc 2003; 125; 9740-9749; Rice RL, et al. Biochemistry 1997 36: 15965-15974) was carried out by a partially modified method. Human PTP1B was cloned into a pGEX-6P-3 vector having a GST tag at the NH 2 terminus and competent E. coli suitable for transformation and protein expression. It was expressed in E. coli BL21 (DE3).
  • GST-fused PTP1B was affinity purified using glutathione sepharose 4B (GE Healthcare Bio-Science KK, Tokyo, Japan). PTP1B activity was measured by reacting with p-nitrophenyl phosphate (p-NPP) (Sigma, St. Louis, MO, USA) as a substrate.
  • the enzyme is Na, a PTP1B inhibitor, in the reaction medium [50 mM HEPES, 1 mM EDTA, 50 mM NaCl, 1 mM dithiothreitol, pH 7.2] at 37 ° C. for 30 minutes in the presence and absence of diDCP-LA-PE. 3 VO 4 was preincubated with and without addition.
  • Test Example 2 Akt activation action (materials and methods) 1.
  • Cell culture The 3T3L1-GLUT4myc fibroblast cell line expressing GLUT4myc was used. The cell is constructed by inserting a human c-MYC epitope (14 amino acids) into the first ectodomain. Cells were treated with 5% CO 2 in Dulbecco's Modified Eagles Medium (DMEM) supplemented with 10% (v / v) bovine serum, penicillin (final concentration, 100 U / ml) and streptomycin (final concentration, 0.1 mg / ml). Culturing at 37 ° C. in a humid environment of 95% air.
  • DMEM Dulbecco's Modified Eagles Medium
  • the cells are then lysed with lysis buffer [150 mM NaCl, 20 mM ethylenediaminetetraacetic acid, 0.5% (v / v) Nonidet P-40 and 50 mM Tris, pH 7.4] containing 1% (v / v) protease inhibitor cocktail. And centrifuged at 3,000 rpm for 5 minutes at 4 ° C. The supernatant was used as a whole cell lysate. For Western blotting, proteins were separated by SDS-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) and transferred to a polyvinylidene difluoride membrane.
  • SDS-PAGE SDS-polyacrylamide gel electrophoresis
  • the blotting membrane was blocked with TBS-T [150 mM NaCl, 0.1% (v / v) Tween20 and 20 mM Tris, pH 7.5] containing 5% (w / v) BSA, followed by phospho-Akt ( Thr308), phospho-Akt (Ser473), and antibodies against Akt (Cell Signaling Technology, Inc., Danvers, MA, USA). After washing, the membrane was reacted with horseradish peroxidase conjugated goat anti-rabbit IgG antibody. Immunoreactivity was detected using an ECL kit (GE Healthcare, Piscataway, NJ, USA) and visualized using a chemiluminescence detection system (GE Healthcare).
  • Test Example 3 PKC activation action (materials and methods)
  • Cell-free PKC assay PKC activity in a cell-free system was quantified by the method described in a previous report (Kanno T et al. J Lipid Res 2006; 47: 1146-1156).
  • a synthetic PKC substrate peptide (10 ⁇ M) was prepared in a medium containing 20 mM Tris-HCl (pH 7.5), 5 mM magnesium acetate, 10 ⁇ M ATP, and DCP-LA-phospholipid in the absence of phosphatidylserine and diacylglycerol. Reaction with various PKC isozymes at 30 ° C. for 5 minutes.
  • Ca 2+ -free medium was used for new PKCs such as PKC- ⁇ and - ⁇ , and medium containing 100 ⁇ M CaCl 2 was used for other PKC isozymes.
  • Reverse phase HPLC LC-10ATvp, Shimadzu Co., Kyoto, Japan
  • the peak of the substrate peptide and the peak of the new product were measured at an absorbance of 214 nm. Measure the areas of the non-phosphorylated PKC substrate peptide and the phosphorylated PKC substrate peptide (the total area corresponds to the concentration of the PKC substrate peptide used in this example), and the amount of phosphorylated substrate peptide was calculated.
  • FIGS. 5 shows that diDCP-LA-PE activates all PKC isozymes.
  • FIG. 6 shows that diDCP-LA-PE acts as a specific activator of PKC ⁇ and PKC ⁇ that are considered important in the regulation of GLUT4 trafficking.
  • Test Example 4 Promoting action of sugar transport carrier GLUT4 to cell membrane-1 (Materials and methods) Analysis of GLUT4 trafficking Krebs-Ringer-HEPES buffer containing 0.2% (w / v) bovine serum albumin containing 3T3L1-GLUT4myc adipocytes and supplemented with 10 mM glucose [136 mM NaCl, 4.7 mM KCl, 1.25 mM CaCl 2 , 1.25 mM MgSO 4 and 20 mM HEPES, pH 7.5] at 37 ° C. for 1 hour. Cells were incubated for 20 minutes in the presence or absence of insulin, phospholipids or derivatives thereof.
  • the cells were then placed in ice-cold mitochondrial buffer [210 mM mannitol, 70 mM sucrose, and 1 mM ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA), 10 mM HEPES, pH 7.5] containing a 1% (v / v) protease inhibitor cocktail. Homogenized by sonication. Subsequently, the homogenate was centrifuged at 3,000 rpm for 5 minutes at 4 ° C. The supernatant was further centrifuged at 11,000 rpm for 15 minutes at 4 ° C.
  • mitochondrial buffer 210 mM mannitol, 70 mM sucrose, and 1 mM ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA), 10 mM HEPES, pH 7.5
  • the collected supernatant was ultracentrifuged at 100,000 g for 60 minutes at 4 ° C., and separated into a cytoplasmic fraction and a cell membrane fraction.
  • the supernatant was used as the cytoplasm fraction and the pellet was used as the cell membrane fraction.
  • Whether or not the cytoplasmic component and the cell membrane component were successfully separated was confirmed by Western blot analysis using an antibody against LDH which is a marker of cell membrane component and an antibody against cadherin which is a cell membrane marker.
  • the protein concentration of each fraction was measured using a BCA protein assay kit (Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA).
  • the protein of the cell membrane fraction was resuspended in mitochondrial buffer containing 1% (w / v) sodium dodecyl sulfate (SDS).
  • the proteins of each fraction were separated by SDS-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) and transferred to a polyvinylidene difluoride membrane.
  • the blotting membrane was blocked with TBS-T [150 mM NaCl, 0.1% (v / v) Tween20 and 20 mM Tris, pH 7.5] containing 5% (w / v) BSA, and anti-c-myc antibody (Merck Millipore , Darmstadt, Germany) followed by reaction with horseradish peroxidase (HRP) conjugated goat anti-mouse IgG antibody.
  • Immunoreactivity was detected using an ECL kit (Invitrogen) and visualized using a chemiluminescence detection system (GE Healthcare, Piscataway, NJ, USA). The signal density was measured using image analysis software (Image Healthcare). (result) The results are shown in FIGS. FIG.
  • FIG. 7 shows that, like insulin, diDCP-LA-PE has an effect of promoting GLUT4 cell membrane transport.
  • FIG. 8 shows that diDCP-LA-PE promotes cell membrane transport of GLUT4 in a concentration-dependent manner.
  • FIG. 9 shows that all phospholipid derivatives except natural diDCP-LA-PI have an effect of promoting cell membrane transport of GLUT4.
  • Test Example 5 Insulin-independent blood glucose lowering action (materials and methods) Glucose tolerance test C57BL / KsJ-lepr db / lepr db mice (female, 8 weeks old) (CLEA Japan; Tokyo, Japan) were used. The glucose tolerance test was performed on mice starved for 12 hours. Glucose (2 g / ml / kg body weight) was forcibly administered orally at that time. 30 minutes before administration of glucose, diDCP-LA-PE (0.01, 0.1, 1, 3 mg / kg), insulin (0.75 U / kg) or saline was orally administered.
  • Test Example 6 Effect on type 1 diabetes model mouse using streptozotocin (materials and methods) C57BL / 6J mice (male, 8 weeks old) (Japan SLC Inc .; Shizuoka, Japan) were used. Streptozotocin (STZ; 250 mg / kg) or saline as a control was injected intraperitoneally. Four days after injection, an oral glucose tolerance test (OGTT) was performed. (result) The results are shown in FIG. This result shows that diDCP-LA-PE significantly suppresses the increase in blood glucose in STZ-treated mice. That is, diDCP-LA-PE is effective for type 1 diabetes.
  • Test Example 7 Promoting action of sugar transport carrier GLUT4 to cell membrane-2 (Materials and methods) The experiment was conducted in the same manner as in Test Example 4 except that 3T3L1-GLUT4myc adipocytes in which the insulin receptor was knocked down were used and that incubation with diDCP-LA-EA was performed in the absence of insulin. . (result) The results are shown in FIG. FIG. 12 shows that diDCP-LA-PE can promote GLUT4 translocation to the cell membrane in an insulin receptor-independent manner. That is, it is shown that diDCP-LA-PE can substitute for an intracellular insulin receptor signal without insulin (lowering blood glucose level independently of insulin / insulin receptor). The results show that diDCP-LA-PE is also effective in the treatment of type 1 diabetes, where insulin is essential for treatment.
  • the phospholipid compound comprising an unsaturated fatty acid derivative having a cyclopropane ring provided by the present invention has an excellent pharmacological action (protein tyrosine phosphatase 1B (PTP1B) inhibitory action, Akt, etc.) in improving cognitive function and / or treating diabetes.
  • PTP1B protein tyrosine phosphatase 1B
  • Akt cyclopropane ring
  • Akt protein tyrosine phosphatase 1B
  • Akt protein tyrosine phosphatase 1B
  • Akt protein tyrosine phosphatase 1B
  • Akt protein tyrosine phosphatase 1B
  • Akt protein tyrosine phosphatase 1B
  • Akt protein tyrosine phosphatase 1B
  • Akt protein tyrosine phosphatase 1B
  • Akt protein tyrosine phosphatase 1B

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Abstract

　本発明は認知機能改善作用及び抗糖尿病作用を有する医薬を提供することを課題とする。　８－［２－（２－ペンチル－シクロプロピルメチル）－シクロプロピル］－オクタン酸（ＤＣＰ－ＬＡ）及び８－（２－オクチルシクロプロピル）オクタン酸（ＤＣＰ－ＯＡ）等のシクロプロパン環を有する不飽和脂肪酸を含むリン脂質化合物、特に１，２－ｏ－ｂｉｓ－［８－｛２－（２－ペンチル－シクロプロピルメチル）－シクロプロピル｝－オクタノイル］－ｓｎ－グリセロ－３－ホスファチジルエタノールアミン（ｄｉＤＣＰ－ＬＡ－ＰＥ）は、認知機能改善作用及び抗糖尿病作用を有し、認知症治療薬、糖尿病治療薬等の医薬として有用である。

Description

シクロプロパン環を有する不飽和脂肪酸誘導体を含むリン脂質化合物
　本発明は、認知機能改善作用及び／又は糖尿病治療効果を有するリン脂質化合物、より詳細にはシクロプロパン環を有する不飽和脂肪酸誘導体を含むリン脂質化合物に関する。
　近年、認知症が世界的に医療上の大きな問題となっている。認知症は、学習・記憶障害及び判断力の低下を中心にした多種の症状を伴う疾患であるが、その原因となる病気によって症状及びその経過は異なる。しかし、いずれの場合も、患者の生活の質を著しく損なうという点で共通している。また、患者の家族をはじめとする介護者にも多大な労苦を強いるという事実を考えたとき、認知症は社会的にたいへん重大な問題であるといえる。寿命の長期化による高齢者人口の増加が、認知症患者の増加と関係しているため、日本では今後更に認知症患者が増加すると予測されている。また、認知症には分類されない老化に伴う認知障害を患う人も多い。
　認知症を改善し得る化合物が種々報告されている。リノール酸誘導体である８－［２－（２－ペンチル－シクロプロピルメチル）－シクロプロピル］－オクタン酸（ＤＣＰ－ＬＡ）は、体内での代謝の遅延を可能とし、且つシナプス伝達の安定なＬＴＰ（long-term potentiation）様増強を持続できる、シナプス伝達効率の長期増強作用を有する化合物である（特許文献１）。ＬＴＰは、例えばアルツハイマー病などの種々の神経及び精神疾患の発症に関与すると考えられ、従って、ＬＴＰ発現を誘導する物質は、認知症を含むこれらの神経及び精神疾患の治療薬又は予防薬となる可能性を有する。
　一方、リン脂質についても認知機能の改善や神経変性疾患に有効であることが報告されている。例えば、１，２－ジリノレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリンや１－パルミトイル－２－オレオイル－ｓｎ－グリセロ－３－ホスホコリンが、スコポラミンによって誘導された空間学習障害及び記憶障害、あるいは軽度の認知障害や痴呆を改善することが報告されている（非特許文献１、２）。
　また、ホスファチジルエタノールアミンは、生体膜の主要成分の１つであるリン脂質であり、ホスファチジルセリン等とともに健康食品として市販されているが、ホスファチジルエタノールアミンの中でも、特にジリノレオイル・ホスファチジルエタノールアミン（脂肪酸として２つのリノール酸を含む）が、細胞死誘導抑制活性、特に小胞体ストレス抑制活性を有すること、当該活性により、ジリノレオイル・ホスファチジルエタノールアミンが医薬用途、特に神経変性疾患の予防および／または治療のために使用され得ることが報告されている（特許文献２）。
　しかしながら、ＤＣＰ－ＬＡ等のシクロプロパン環を有する不飽和脂肪酸誘導体とリン脂質とが結合した化合物が認知機能の改善に有効であることは知られておらず、また、かかる化合物がどのような薬理効果を示すのかは何ら報告がない。
国際公開第０２／５００１３号パンフレット 特開２００５－２４７７２８号公報
Yaguchi T, Nagata T, Nishizaki T. Dilinoleoylphosphatidylcholine ameliorates scopolamine-induced impairment of spatial learning and memory by targeting alpha-7 nicotinic ACh receptors. Life Sci 2009;84:263-6 Yaguchi T, Nagata T, Nishizaki T. 1-Palmitoyl-2-oleoyl-sn-glycero-3-phosphocholine improves cognitive decline by enhancing long-term depression. Behav Brain Res 2009;204:129-32
　本発明は、シクロプロパン環を有する不飽和脂肪酸誘導体を含むリン脂質化合物、特に認知機能改善作用及び／又は糖尿病治療効果を有するリン脂質化合物、及び当該化合物の医薬用途を提供することを目的とする。
　本発明者らはより効果的に認知機能を改善し得る薬剤を得ることを目的としてさらに鋭意検討を重ねた。結果、シクロプロパン環を有する不飽和脂肪酸誘導体を含むリン脂質化合物に優れた認知機能の改善に有用な種々の薬理作用を認め、さらには糖尿病治療に有用な薬理作用をも有することを確認して本発明を完成するに至った。即ち、本発明は、以下の通りである。
［１］シクロプロパン環を有する不飽和脂肪酸を含むリン脂質化合物を有効成分として含有する、医薬。
［２］該シクロプロパン環を有する不飽和脂肪酸が、２重結合をシクロプロパン環に変換された不飽和脂肪酸である、上記［１］記載の医薬。
［３］該シクロプロパン環を有する不飽和脂肪酸が８－［２－（２－ペンチル－シクロプロピルメチル）－シクロプロピル］－オクタン酸（ＤＣＰ－ＬＡ）又は８－（２－オクチルシクロプロピル）オクタン酸（ＤＣＰ－ＯＡ）である、上記［１］記載の医薬。
［４］リン脂質化合物がホスファチジルエタノールアミン（ＰＥ）、ホスファチジルセリン（ＰＳ）、ホスファチジルコリン（ＰＣ）、又はホスファチジルイノシトール（ＰＩ）である、上記［１］記載の医薬。
［５］該リン脂質化合物が、１，２－ｏ－ｂｉｓ－［８－｛２－（２－ペンチル－シクロプロピルメチル）－シクロプロピル｝－オクタノイル］－ｓｎ－グリセロ－３－ホスファチジルエタノールアミン（ｄｉＤＣＰ－ＬＡ－ＰＥ）、
１，２－ｏ－ｂｉｓ－［８－｛２－（２－ペンチル－シクロプロピルメチル）－シクロプロピル｝－オクタノイル］－ｓｎ－グリセロ－３－ホスファチジル－Ｌ－セリン（ｄｉＤＣＰ－ＬＡ－ＰＳ）、
１，２－ｏ－ｂｉｓ－［８－｛２－（２－ペンチル－シクロプロピルメチル）－シクロプロピル｝－オクタノイル］－ｓｎ－３－グリセロ－３－ホスファチジルコリン（ｄｉＤＣＰ－ＬＡ－ＰＣ）、
１，２－ｏ－ｂｉｓ－［８－｛２－（２－ペンチル－シクロプロピルメチル）－シクロプロピル｝－オクタノイル］－ｓｎ－グリセロ－３－ホスファチジル－Ｄ－ｌ－イノシトール（ｄｉＤＣＰ－ＬＡ－ＰＩ）、又は
１，２－ｏ－ｂｉｓ－［８－｛２－（２－ペンチル－シクロプロピルメチル）－シクロプロピル｝－オクタノイル］－ｓｎ－グリセロ－３－ホスファチジル－Ｌ－ｌ－イノシトール（ｄｉＤＣＰ－ＬＡ－ＰＩ　ｅｎｔ）である、上記［１］記載の医薬。
［６］糖尿病治療薬である、上記［１］～［５］のいずれかに記載の医薬。
［７］糖尿病が、１型糖尿病である、上記［６］記載の医薬。
［８］糖尿病が、２型糖尿病である、上記［６］記載の医薬。
［９］糖尿病が、１型及び２型糖尿病である、上記［６］記載の医薬。
［１０］認知症治療薬である、上記［１］～［５］のいずれかに記載の医薬。
［１１］認知症が、アルツハイマー型認知症である、上記［１０］記載の医薬。
［１２］抗老化薬である、上記［１］～［５］のいずれかに記載の医薬。
［１３］シクロプロパン環を有する不飽和脂肪酸誘導体を含むリン脂質化合物を有効成分として含有する、試薬。
［１４］該シクロプロパン環を有する不飽和脂肪酸が、２重結合をシクロプロパン環に変換された不飽和脂肪酸である、上記［１３］記載の試薬。
［１５］該シクロプロパン環を有する不飽和脂肪酸が８－［２－（２－ペンチル－シクロプロピルメチル）－シクロプロピル］－オクタン酸（ＤＣＰ－ＬＡ）又は８－（２－オクチルシクロプロピル）オクタン酸（ＤＣＰ－ＯＡ）である、上記［１３］記載の試薬。
［１６］リン脂質化合物がホスファチジルエタノールアミン（ＰＥ）、ホスファチジルセリン（ＰＳ）、ホスファチジルコリン（ＰＣ）、又はホスファチジルイノシトール（ＰＩ）である、上記［１３］記載の試薬。
［１７］該リン脂質化合物が、１，２－ｏ－ｂｉｓ－［８－｛２－（２－ペンチル－シクロプロピルメチル）－シクロプロピル｝－オクタノイル］－ｓｎ－グリセロ－３－ホスファチジルエタノールアミン（ｄｉＤＣＰ－ＬＡ－ＰＥ）、
１，２－ｏ－ｂｉｓ－［８－｛２－（２－ペンチル－シクロプロピルメチル）－シクロプロピル｝－オクタノイル］－ｓｎ－グリセロ－３－ホスファチジル－Ｌ－セリン（ｄｉＤＣＰ－ＬＡ－ＰＳ）、
１，２－ｏ－ｂｉｓ－［８－｛２－（２－ペンチル－シクロプロピルメチル）－シクロプロピル｝－オクタノイル］－ｓｎ－３－グリセロ－３－ホスファチジルコリン（ｄｉＤＣＰ－ＬＡ－ＰＣ）、
１，２－ｏ－ｂｉｓ－［８－｛２－（２－ペンチル－シクロプロピルメチル）－シクロプロピル｝－オクタノイル］－ｓｎ－グリセロ－３－ホスファチジル－Ｄ－ｌ－イノシトール（ｄｉＤＣＰ－ＬＡ－ＰＩ）、又は
１，２－ｏ－ｂｉｓ－［８－｛２－（２－ペンチル－シクロプロピルメチル）－シクロプロピル｝－オクタノイル］－ｓｎ－グリセロ－３－ホスファチジル－Ｌ－ｌ－イノシトール（ｄｉＤＣＰ－ＬＡ－ＰＩ　ｅｎｔ）である、上記［１３］記載の試薬。
［１８］プロテインチロシンホスファターゼ１Ｂ阻害剤である、上記［１３］～［１７］のいずれかに記載の試薬。
［１９］Ａｋｔ活性化剤である、上記［１３］～［１７］のいずれかに記載の試薬。
［２０］タンパク質リン酸化酵素Ｃ（ＰＫＣ）活性化剤である、上記［１３］～［１７］のいずれかに記載の試薬。
［２１］ＰＫＣがＰＫＣι及び／又はＰＫＣζである、上記［２０］記載の試薬。
［２２］１，２－ｏ－ｂｉｓ－［８－｛２－（２－ペンチル－シクロプロピルメチル）－シクロプロピル｝－オクタノイル］－ｓｎ－グリセロ－３－ホスファチジルエタノールアミン（ｄｉＤＣＰ－ＬＡ－ＰＥ）、
１，２－ｏ－ｂｉｓ－［８－｛２－（２－ペンチル－シクロプロピルメチル）－シクロプロピル｝－オクタノイル］－ｓｎ－グリセロ－３－ホスファチジル－Ｌ－セリン（ｄｉＤＣＰ－ＬＡ－ＰＳ）、
１，２－ｏ－ｂｉｓ－［８－｛２－（２－ペンチル－シクロプロピルメチル）－シクロプロピル｝－オクタノイル］－ｓｎ－３－グリセロ－３－ホスファチジルコリン（ｄｉＤＣＰ－ＬＡ－ＰＣ）、
１，２－ｏ－ｂｉｓ－［８－｛２－（２－ペンチル－シクロプロピルメチル）－シクロプロピル｝－オクタノイル］－ｓｎ－グリセロ－３－ホスファチジル－Ｄ－ｌ－イノシトール（ｄｉＤＣＰ－ＬＡ－ＰＩ）、及び
１，２－ｏ－ｂｉｓ－［８－｛２－（２－ペンチル－シクロプロピルメチル）－シクロプロピル｝－オクタノイル］－ｓｎ－グリセロ－３－ホスファチジル－Ｌ－ｌ－イノシトール（ｄｉＤＣＰ－ＬＡ－ＰＩ　ｅｎｔ）からなる群より選択される化合物。
［２３］シクロプロパン環を有する不飽和脂肪酸を含むリン脂質化合物の有効量をそれを必要とする患者に投与することを含む、糖尿病の予防又は治療方法。
［２４］該リン脂質化合物が、ｄｉＤＣＰ－ＬＡ－ＰＥ、ｄｉＤＣＰ－ＬＡ－ＰＳ、ｄｉＤＣＰ－ＬＡ－ＰＣ、ｄｉＤＣＰ－ＬＡ－ＰＩ、又はｄｉＤＣＰ－ＬＡ－ＰＩ　ｅｎｔである、上記［２３］記載の方法。
［２５］シクロプロパン環を有する不飽和脂肪酸を含むリン脂質化合物の有効量をそれを必要とする患者に投与することを含む、認知症の予防又は治療方法。
［２６］該リン脂質化合物が、ｄｉＤＣＰ－ＬＡ－ＰＥ、ｄｉＤＣＰ－ＬＡ－ＰＳ、ｄｉＤＣＰ－ＬＡ－ＰＣ、ｄｉＤＣＰ－ＬＡ－ＰＩ、又はｄｉＤＣＰ－ＬＡ－ＰＩ　ｅｎｔである、上記［２５］記載の方法。
［２７］糖尿病の予防又は治療の為の、シクロプロパン環を有する不飽和脂肪酸を含むリン脂質化合物。
［２８］ｄｉＤＣＰ－ＬＡ－ＰＥ、ｄｉＤＣＰ－ＬＡ－ＰＳ、ｄｉＤＣＰ－ＬＡ－ＰＣ、ｄｉＤＣＰ－ＬＡ－ＰＩ、又はｄｉＤＣＰ－ＬＡ－ＰＩ　ｅｎｔである、上記［２７］記載のリン脂質化合物。
［２９］認知症の予防又は治療の為の、シクロプロパン環を有する不飽和脂肪酸を含むリン脂質化合物。
［３０］ｄｉＤＣＰ－ＬＡ－ＰＥ、ｄｉＤＣＰ－ＬＡ－ＰＳ、ｄｉＤＣＰ－ＬＡ－ＰＣ、ｄｉＤＣＰ－ＬＡ－ＰＩ、又はｄｉＤＣＰ－ＬＡ－ＰＩ　ｅｎｔである、上記［２９］記載のリン脂質化合物。
　本発明により提供される、シクロプロパン環を有する不飽和脂肪酸を含むリン脂質化合物は、認知機能の改善及び／又は糖尿病の治療に優れた薬理作用（プロテインチロシンホスファターゼ１Ｂ(PTP1B)阻害作用、Ａｋｔ活性化作用、タンパク質リン酸化酵素Ｃ(PKC)活性化作用、PKCι及びPKCζ活性化作用、グルコーストランスポーター４(GLUT4)の細胞膜への移行促進作用及びインスリン非依存性の血糖値低下作用）を有し、従って認知症治療薬や糖尿病治療薬として有用である。またかかる薬理作用に基づいて種々の試薬としても有用である。
図１は、本発明のリン脂質化合物の構造を示す。 図２は、ｄｉＤＣＰ－ＬＡ－ＰＥがプロテインチロシンホスファターゼ(PTP1B)阻害を誘導することを示したグラフである。ＰＴＰ１Ｂを、無細胞条件下、ｐ－ＮＰＰとＮａ３ＶＯ４（10μM）存在下及び非存在下で反応させ、脱リン酸化されたｐ－ＮＰＰを定量した。グラフ中、各カラムは、基準となるホスファターゼ活性（コントロール）に対するパーセンテージの平均値（±SD）を表している（各実験においてｎ＝４）。Ｐ値、Dunnett’s test. 図３は、ｄｉＤＣＰ－ＬＡ－ＰＥによるＧＬＵＴ４の膜輸送シグナル経路を示す図である。ｄｉＤＣＰ－ＬＡ－ＰＥがＰＴＰ１Ｂを阻害することにより、間接的にチロシンキナーゼを活性化してＧＬＵＴ４の細胞膜輸送を促進する。 図４は、ｄｉＤＣＰ－ＬＡ－ＰＥがＡｋｔの活性化を誘導することを示すグラフである。３Ｔ３Ｌ１－ＧＬＵＴ４ｍｙｃ細胞をｄｉＤＣＰ－ＬＡ－ＰＥ(1μM)で処理しないか、あるいは１０分間処理して、その後phospho-threonine 308 (P-Thr308)、phospho-serine 473 (P-Ser473)及びＡｋｔに対する抗体を用いてウエスタンブロッティングを行なった。P-Thr308又はP-Ser473のシグナル強度はＡｋｔのシグナル強度によって標準化した。グラフ中、各カラムは、全Ａｋｔに対するリン酸化Ａｋｔの割合の平均値(±SEM)を表している（各実験においてｎ＝４）。Ｐ値、unpaired t-test. 図５は、ｄｉＤＣＰ－ＬＡ－ＰＥがＰＫＣの活性化を誘導することを示すグラフである。無細胞系で、ＰＫＣ活性をモニタリングした。ｄｉＤＣＰ－ＬＡ－ＰＥ（100μM）の非存在下（コントロール）あるいは存在下で所定のＰＫＣアイソザイムを評価した。グラフ中、各カラムは、ＰＫＣ活性(pmol/min)の平均値(±SEM)を表している（ｎ＝６）。Ｐ値、ｄｉＤＣＰ－ＬＡ－ＰＥ非存在下での各ＰＫＣアイソザイム活性化と比べて、Dunnett’s test. 図６は、ｄｉＤＣＰ－ＬＡ－ＰＥがＰＫＣι及びＰＫＣζの特異的な活性化剤であることを示すグラフである。ｄｉＤＣＰ－ＬＡ－ＰＥ(100μM)、ｄｉＤＣＰ－ＬＡ－ＰＳ(100μM)、ｄｉＤＣＰ－ＬＡ－ＰＣ(100μM)、ｄｉＤＣＰ－ＬＡ－ＰＩ(100μM)あるいはｄｉＤＣＰ－ＬＡ－ＰＩエナンチオマー（ｄｉＤＣＰ－ＬＡ－ＰＩｅ）(100μM)の存在下で所定のＰＫＣアイソザイムを評価した。グラフ中、各カラムは、ＰＫＣι及びＰＫＣζの活性（ｐｍｏｌ／ｍｉｎ）の平均値（±ＳＥＭ）を表している（ｎ＝４）。＊＊＊Ｐ＜０．００１（ｄｉＤＣＰ－ＬＡ－ＰＥ以外の）各リン脂質誘導体によって誘導されたＰＫＣι又はＰＫＣζ活性化と比較して、Dunnett’s test. 図７は、分化した３Ｔ３Ｌ１－ＧＬＵＴ４ｍｙｃ脂肪細胞において、ｄｉＤＣＰ－ＬＡ－ＰＥがＧＬＵＴ４の細胞膜輸送を促進させることを示すグラフである。インスリン又はｄｉＤＣＰ－ＬＡ－ＰＥ(1μM)で処理しないか、あるいは処理して２０分後、細胞を溶解し細胞質画分と細胞膜画分に分離し、次いで抗ｃ－ｍｙｃ抗体を用いてウエスタンブロッティングを行なった。グラフ中、各カラムは、細胞膜画分におけるＧＬＵＴ４のシグナル強度／細胞膜画分と細胞質画分全てにおけるＧＬＵＴ４のシグナル強度の比の平均値(±SD)を表している（各実験においてｎ＝６）。Ｐ値、unpaired t-test. 図８は、３Ｔ３Ｌ１－ＧＬＵＴ４ｍｙｃ脂肪細胞におけるＧＬＵＴ４の細胞膜輸送に対するｄｉＤＣＰ－ＬＡ－ＰＥの濃度依存的効果について示すグラフである。所定の濃度のｄｉＤＣＰ－ＬＡ－ＰＥで処理しないか、あるいは処理して２０分後、細胞を溶解し細胞質画分と細胞膜画分に分離し、次いで抗ｃ－ｍｙｃ抗体を用いてウエスタンブロッティングを行なった。グラフ中、各カラムは、細胞膜画分におけるＧＬＵＴ４のシグナル強度／細胞膜画分と細胞質画分全てにおけるＧＬＵＴ４のシグナル強度の比の平均値(±SD)を表している（各実験においてｎ＝４）。 図９は、分化した３Ｔ３Ｌ１－ＧＬＵＴ４ｍｙｃ脂肪細胞において、リン脂質誘導体がＧＬＵＴ４の細胞膜輸送を促進させることを示すグラフである。各種リン脂質誘導体で処理しない（コントロール）か、あるいは１μＭで処理して２０分後、細胞を溶解し細胞質画分と細胞膜画分に分離し、次いで抗ｃ－ｍｙｃ抗体を用いてウエスタンブロッティングを行なった。グラフ中、各カラムは、細胞膜画分におけるＧＬＵＴ４のシグナル強度／細胞膜画分と細胞質画分全てにおけるＧＬＵＴ４のシグナル強度の比の平均値(±SD)を表している（各実験においてｎ＝４）。＊Ｐ<0.05, ＊＊Ｐ<0.001;コントロールと比較した値、unpaired t-test.diDCP-LA-PIe, diDCP-LA-PI enantiomers 図１０は、Ｃ５７ＢＬ／ＫｓＪ－ｌｅｐｒｄｂ／ｌｅｐｒｄｂマウスにおいて血清グルコースレベルを低下させることを示すグラフである。（Ａ）マウスをグルコース飢餓の状態で１２時間置いた後、グルコース(2g/kg)を経口投与し（矢印）、所定の時間に血液を回収して血清グルコースアッセイを行なった。食塩水［ｄｉＤＣＰ－ＬＡ－ＰＥ（－）］あるいはｄｉＤＣＰ－ＬＡ－ＰＥ(1mg/kg≒1μM)［ｄｉＤＣＰ－ＬＡ－ＰＥ（＋）］の経口投与はグルコースを投与する３０分前に行なった。グラフ中、各ポイントはグルコース濃度の平均値（±ＳＥＭ）を表している（各実験においてｎ＝５）。Ｐ値、Fisher’s PLSD（制約付最小有意差検定）（Ｂ）グルコース飢餓の状態で１２時間置いたマウスに、グルコース投与３０分前に食塩水（コントロール）又はｄｉＤＣＰ－ＬＡ－ＰＥを所定の濃度で経口投与した。グラフ中、各カラムはグルコース投与後１時間後の血清グルコース濃度の平均値(±SEM)を表している（各実験においてｎ＝５）。 図１１は、ｄｉＤＣＰ－ＬＡ－ＰＥがストレプトゾトシン（ＳＴＺ）処理したマウスにおいて血清グルコースレベルを低下させることを示すグラフである。マウスをグルコース飢餓の状態で１２時間置いた後、グルコース(2g/kg)を経口投与し（矢印）、所定の時間に血液を回収して血清グルコースアッセイを行なった。食塩水［ｄｉＤＣＰ－ＬＡ－ＰＥ（－）］あるいはｄｉＤＣＰ－ＬＡ－ＰＥ(1mg/kg≒1μM)［ｄｉＤＣＰ－ＬＡ－ＰＥ（＋）］の経口投与はＯＧＴＴの前の４連続日、グルコースを投与する３０分前に行なった。グラフ中、各ポイントはグルコース濃度の平均値（±SEM）を表している（各実験においてｎ＝５）。Ｐ値、Fisher’s PLSD（制約付最小有意差検定） 図１２は、インスリンレセプターがノックダウンした(IR KD)３Ｔ３Ｌ１－ＧＬＵＴ４ｍｙｃ脂肪細胞において、ｄｉＤＣＰ－ＬＡ－ＰＥがＧＬＵＴ４の細胞膜輸送を促進させることを示すグラフである。ネガティブコントロールであるＮＣ ｓｉＲＮＡ(NC)又はインスリン受容体ｓｉＲＮＡ(IR KD)で細胞をトランスフェクトし、４８時間後にｄｉＤＣＰ－ＬＡ－ＰＥで処理しないか、あるいは１μＭで処理して２０分後、細胞を溶解し細胞質画分と細胞膜画分に分離し、次いで抗ｃ－ｍｙｃ抗体を用いてウエスタンブロッティングを行なった。グラフ中、各カラムは、細胞膜画分におけるＧＬＵＴ４のシグナル強度／細胞膜画分と細胞質画分全てにおけるＧＬＵＴ４のシグナル強度の比の平均値(±SD)を表している（各実験においてｎ＝４）。Ｐ値、Dunnett’s test. NS; not significant
　以下、本発明について詳細に説明する。
　本発明はシクロプロパン環を有する不飽和脂肪酸を含むリン脂質化合物を有効成分として含有する医薬を提供する。以下、便宜上、当該リン脂質化合物を本発明のリン脂質化合物、及び該医薬を本発明の医薬とも称する。当該医薬は、後述するが、認知症治療薬、糖尿病治療薬、抗老化薬等を包含する概念である。
　「シクロプロパン環を有する不飽和脂肪酸」とは、２重結合をシクロプロパン環に変換された不飽和脂肪酸であり、該変換の数は、もとの２重結合の数にもよるが１又は２以上であり、好ましくは１又は２であり、より好ましくは２である。不飽和脂肪酸としては、分子内に少なくとも１つ以上の２重結合を有する脂肪酸であれば特に限定されるものではないが、一価不飽和脂肪酸、多価不飽和脂肪酸、cis型不飽和脂肪酸、trans型不飽和脂肪酸のいずれのものであってもよい。
　一価不飽和脂肪酸の例としては、オレイン酸、パルミトレイン酸、ペトロセリン酸、エルカ酸、ブラシジン酸、オブツシル酸、カプレイン酸、ウンデシレン酸、リンデル酸、ツズ酸、フィゼテリン酸、ミリストレイン酸、パルミトレイン酸、エライジン酸、アスクレピン酸、バクセン酸、ガドレイン酸、ゴンドイン酸、セトレイン酸及びｃｉｓ-６-ヘキサデセン酸等が挙げられる。
　多価不飽和脂肪酸の例としては、リノール酸、リノレン酸、γ-リノレン酸、リシノール酸、α-エレオステアリン酸、β-エレオステアリン酸、ブニカ酸、ｔｒａｎｓ－１０－オクタデカジエン酸及びｔｒａｎｓ－１２－オクタデカジエン酸等が挙げられる。
　好ましくはリノール酸（ｃｉｓ，ｃｉｓ－９，１２－オクタジエン酸）及びオレイン酸（ｃｉｓ－９－オクタデセン酸）であり、より好ましくはリノール酸である。
　多価不飽和脂肪酸の場合、全ての２重結合がシクロプロパン環に変換されていてもよいし、一部の２重結合がシクロプロパン環に変換されていてもよい。
　本発明において「シクロプロパン環を有する不飽和脂肪酸」として好ましくは、リノール酸の２重結合がシクロプロパン環に変換された、８－［２－（２－ペンチル－シクロプロピルメチル）－シクロプロピル］－オクタン酸（ＤＣＰ－ＬＡ）；及びオレイン酸の２重結合がシクロプロパン環に変換された、８－（２－オクチルシクロプロピル）オクタン酸（ＤＣＰ－ＯＡ）である。より好ましくはＤＣＰ－ＬＡである。
　リン脂質は、大別するとグリセリンを骨格とするグリセロリン脂質とスフィンゴシンを骨格とするスフィンゴリン脂質の２つが存在する。グリセリンやスフィンゴシンを中心骨格として脂肪酸とリン酸が結合し、さらにリン酸にアルコールがエステル結合した構造を有する。本発明のリン脂質化合物はグリセロリン脂質及びスフィンゴリン脂質のいずれであってもよいが、好ましくはグリセロリン脂質である。グリセリンのＣ１、Ｃ２位に脂肪酸が、Ｃ３位にリン酸がそれぞれエステル結合した分子をホスファチジン酸と称し、本発明の好適な一態様は、Ｃ１、Ｃ２位の脂肪酸が、上記「シクロプロパン環を有する不飽和脂肪酸」である。２つの不飽和脂肪酸は異なっていても同一でもよいが、好ましくは同一である。リン酸にエステル結合するアルコールとしては、コリン、エタノールアミン、イノシトール、セリン等が挙げられる。好ましくはエタノールアミンである。
　本発明のリン脂質化合物は、不斉炭素原子や二重結合に起因する１以上の立体異性体（例えば、光学異性体、幾何異性体）を含んでいてもよいことに注意されるべきであり、このような異性体及びそれらの混合物の全てが本発明の範囲に含まれる。
　本発明のリン脂質化合物は、含まれる脂肪酸がシクロプロパン環を有する不飽和脂肪酸であることを除いては、通常のリン脂質の合成方法（例えば、「日本化学会編　第５版実験化学講座１６　有機化合物の合成（協）；カルボン酸・アミノ酸・ペプチド　３章　リン酸エステル」に記載の方法）に準じて合成することができる。より詳細には実施例に記載の方法に準じて合成することができる。
　シクロプロパン環を有する不飽和脂肪酸は、例えば、特許文献１で示される方法あるいはそれに準じた方法によって製造できる。また、天然物から抽出されたものであってもよい。ＤＣＰ－ＬＡの製造方法は特許文献１に記載されている。
　「シクロプロパン環を有する不飽和脂肪酸を含むリン脂質化合物」としては、好ましくは、
１，２－ｏ－ｂｉｓ－［８－｛２－（２－ペンチル－シクロプロピルメチル）－シクロプロピル｝－オクタノイル］－ｓｎ－グリセロ－３－ホスファチジルエタノールアミン（ｄｉＤＣＰ－ＬＡ－ＰＥ）、
１，２－ｏ－ｂｉｓ－［８－｛２－（２－ペンチル－シクロプロピルメチル）－シクロプロピル｝－オクタノイル］－ｓｎ－グリセロ－３－ホスファチジル－Ｌ－セリン（ｄｉＤＣＰ－ＬＡ－ＰＳ）、
１，２－ｏ－ｂｉｓ－［８－｛２－（２－ペンチル－シクロプロピルメチル）－シクロプロピル｝－オクタノイル］－ｓｎ－３－グリセロ－３－ホスファチジルコリン（ｄｉＤＣＰ－ＬＡ－ＰＣ）、
１，２－ｏ－ｂｉｓ－［８－｛２－（２－ペンチル－シクロプロピルメチル）－シクロプロピル｝－オクタノイル］－ｓｎ－グリセロ－３－ホスファチジル－Ｄ－ｌ－イノシトール（ｄｉＤＣＰ－ＬＡ－ＰＩ）、及び
１，２－ｏ－ｂｉｓ－［８－｛２－（２－ペンチル－シクロプロピルメチル）－シクロプロピル｝－オクタノイル］－ｓｎ－グリセロ－３－ホスファチジル－Ｌ－ｌ－イノシトール（ｄｉＤＣＰ－ＬＡ－ＰＩ　ｅｎｔ）であり、
より好ましくはｄｉＤＣＰ－ＬＡ－ＰＥである。
　ｄｉＤＣＰ－ＬＡ－ＰＩ　ｅｎｔは、ｄｉＤＣＰ－ＬＡ－ＰＩの非天然型の光学異性体である。
　各リン脂質化合物の構造を図１に示す。
　本発明のリン脂質化合物はまた、その塩として用いられてもよい。かかる塩は、特に限定されないが、医薬又は食品として許容され得る塩が好ましく、例えば無機塩基（例、ナトリウム、カリウムなどのアルカリ金属；カルシウム、マグネシウムなどのアルカリ土類金属；アルミニウム、アンモニウム）、有機塩基（例、トリメチルアミン、トリエチルアミン、ピリジン、ピコリン、エタノールアミン、ジエタノールアミン、トリエタノールアミン、ジシクロヘキシルアミン、Ｎ，Ｎ－ジベンジルエチレンジアミン）、無機酸（例、塩酸、臭化水素酸、硝酸、硫酸、リン酸）、有機酸（例、ギ酸、酢酸、トリフルオロ酢酸、フマル酸、シュウ酸、酒石酸、マレイン酸、クエン酸、コハク酸、リンゴ酸、メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ－トルエンスルホン酸）、塩基性アミノ酸（例、アルギニン、リジン、オルニチン）又は酸性アミノ酸（例、アスパラギン酸、グルタミン酸）との塩などが挙げられる。
　本発明のリン脂質化合物は、実施例にてデータで示されるように、（１）プロテインチロシンホスファターゼ１Ｂ(PTP1B)阻害作用、（２）Ａｋｔ活性化作用、（３）タンパク質リン酸化酵素Ｃ(PKC)活性化作用、（４）PKCι及びPKCζ活性化作用、（５）グルコーストランスポーター４(GLUT4)の細胞膜への移行促進作用、及び（６）インスリン非依存性の血糖値低下作用を有する。これらの優れた薬理作用により、本発明のリン脂質化合物は、特に認知障害を伴う疾患の予防又は治療用として、糖尿病の予防又は治療用として有用であり、医薬品として提供される。
　認知障害を伴う疾患又は状態としては、具体的には、認知症（例、老人性認知症、アルツハイマー型認知症（アルツハイマー病）、脳血管性認知症、外傷後認知症、脳腫瘍により生じる認知症、慢性硬膜下血腫により生じる認知症、正常圧脳水腫により生じる認知症、髄膜炎後認知症及びパーキンソン型認知症などの種々の疾患により生じる認知症）、非認知症性の認知障害（例、軽度認知障害（ＭＣＩ））、学習又は記憶障害（例、脳発達障害に伴う学習及び記憶障害）などを含む様々の疾患又は状態が挙げられる。本明細書中で用いられる場合、「予防」とは、認知障害、学習・記憶障害等を示さない被験体において、該症状が顕在化するのを防ぐことを意味し、「治療」とは、認知障害、学習・記憶障害等を示す被験体において、該症状を軽減すること、あるいは該症状の悪化を防ぐこと又は遅延させることを意味する。「改善」とは、認知障害、学習・記憶障害等を示さない被験体においては、認知能力や学習・記憶能力の向上を意味し、認知障害、学習・記憶障害等を示す被験体においては、該症状を緩和、好ましくは日常生活に差し支えない程度にまで症状を緩和することを意味する。
　好ましい適用疾患としてはアルツハイマー病が挙げられる。また、上記特性により抗老化薬としての効果も期待できる。
　糖尿病は、インスリン作用の不足に基づいて糖の代謝機構が障害に陥る疾患であり、インスリン依存性糖尿病（ＩＤＤＭまたは１型糖尿病）とインスリン非依存性糖尿病（ＮＩＤＤＭまたは２型糖尿病）の２つに区別される。前者は、食物摂取により血糖値が上昇してもインスリンが分泌されないかまたは分泌量が非常に少なくなるタイプで、後者はインスリンが正常に分泌されているにもかかわらず、末梢組織の応答機構が正常に作動しなくなり血糖値が低下しないタイプである。
　本発明はいずれのタイプの糖尿病にも有用である。
　本発明のリン脂質化合物が有する薬理作用としては以下のものが挙げられる。
（１）ＰＴＰ１Ｂ阻害作用
　プロテインチロシンホスファターゼ(PTP)１Ｂは細胞質型のチロシンホスファターゼであり、チロシンキナーゼのリン酸化状態をコントロールすることによって、チロシンキナーゼの調整に関与している。ＰＴＰ１Ｂはインスリンシグナル伝達の減弱因子の１つとして考えられ、この酵素を阻害することが糖尿病の処置に有益であると考えられている。また、近年、神経活動におけるタンパク質リン酸化の関与が注目されるに伴い、ＰＴＰ１Ｂ阻害の神経変性疾患への適用が期待されている。
　ＰＴＰ１Ｂ阻害剤の医薬用途への可能性を示す報告としては例えば以下のものが挙げられる。
1. Sun T, Wang Q, Yu Z, Zhang Y, Guo Y, Chen K, Shen X, Jiang H.
Hyrtiosal, a PTP1B inhibitor from the marine sponge Hyrtios erectus, shows extensive cellular effects on PI3K/AKT activation, glucose transport, and TGFb/Smad2 signaling. Chembiochem 2007;8(2):187-193.
2. Lin Z, Zhang Y, Zhang Y, Shen H, Hu L, Jiang H, Shen X.
Oleanolic acid derivative NPLC441 potently stimulates glucose transport in 3T3-L1 adipocytes via a multi-target mechanism. Biochem Pharmacol 2008;76(10):1251-1262.
3. Zhang Y, Zhang H, Yao XG, Shen H, Chen J, Li C, Chen L, Zheng M, Ye J, Hu L, Shen X, Jiang H.
(+)-Rutamarin as a dual inducer of both GLUT4 translocation and expression efficiently ameliorates glucose homeostasis in insulin-resistant mice. PLoS One 2012;7(2):e31811.
（２）Ａｋｔ活性化作用
　Ａｋｔ（プロテインキナーゼＢとも称される）セリンスレオニンリン酸化酵素の１種であり、その活性化にはスレオニン３０８基（Ｔｈｒ３０８）、セリン４７３基（Ｓｅｒ４７３）の２つのアミノ酸のリン酸化が必須であると考えられている。Ａｋｔは、細胞内タンパク質のセリン又はスレオニン残基を特異的にリン酸化する機能を有しており、抗老化因子として知られている。Ａｋｔはグルコーストランスポーター４（ＧＬＵＴ４）の細胞膜への移行促進／グルコースの細胞内取込みに関与するインスリン／インスリン受容体シグナル経路において最も重要な働きをしている。従って、Ａｋｔ活性化剤は有効な糖尿病治療薬になり得る。
　Ａｋｔ活性化剤の医薬用途への可能性を示す報告としては例えば以下のものが挙げられる。
1. Maarbjerg SJ, Sylow L, Richter EA. Current understanding of increased insulin sensitivity after exercise-emerging candidates. Acta Physiol 2011;202:323-335.
2. Bryant NJ, Govers R, James DE: Regulated transport of the glucose transporter GLUT4. Nat Rev Mol Cell Biol 2002;3:267-277.
（３）タンパク質リン酸化酵素Ｃ（ＰＫＣ）活性化作用
　ＰＫＣは、レセプターではないセリン－スレオニンプロテインキナーゼの最大遺伝子ファミリーの一つとして同定された(Kikkawa et al., J. Biol. Chem., 257, 13341 (1982))多数の生理的シグナリングメカニズムが、この酵素によるものであると考えられている。ＰＫＣ遺伝子ファミリーは、現在、４つのサブグラウンドに分類される１１の遺伝子から構成される：１）古典的なＰＫＣα、β１、β２およびγ、２）新規なＰＫＣδ、ε、ηおよびθ、３）異型のＰＫＣζ、λ、ηおよびι、並びに４）ＰＫＣμ。ＰＫＣεはシナプス前終末に発現するα７アセチルコチン受容体を標的としてシナプス活動性を増強し、認知機能改善作用を示す（下記文献１－４）。ＰＫＣζおよびιはインスリン／インスリン受容体の下流シグナルとしてＧＬＵＴ４の細胞膜への移行を促進する作用がある（Bryant NJ et al., Nat Rev Mol Cell Biol 2002;3:267-277; 下記文献５）。 
　ＰＫＣ活性化剤の医薬用途への可能性を示す報告としては例えば以下のものが挙げられる。
1. Yamamoto S, Kanno T, Nagata T, Yaguchi T, Tanaka A, Nishizaki T.
The linoleic acid derivative FR236924 facilitates hippocampal synaptic transmission by enhancing activity of presynaptic a7 acetylcholine receptors on the glutamatergic terminals. Neuroscience 2005;130(1):207-213.
2. Yaguchi T, Nagata T, Mukasa T, Fujikawa H, Yamamoto H, Yamamoto S, Iso H, Tanaka A, Nishizaki T. Linoleic acid derivative DCP-LA improves learning impairment in SAMP8. Neuroreport 2006;17(1):105-108.
3. Shimizu T, Kanno T, Tanaka A, Nishizaki T. α, β-DCP-LA selectively activates PKC-ε and stimulates neurotransmitter release with the highest potency among 4 diastereomers. Cell Physiol Biochem 2011;27(2):149-158.
4. Kanno T, Yaguchi T, Shimizu T, Tanaka A, Nishizaki T. 8-[2-(2-Pentyl-cyclopropylmethyl)-cyclopropyl]-octanoic acid and its diastereomers improve age-related cognitive deterioration. Lipids 2012;47(7):687-695.
5. Sampsona SR, Cooperb DR. Specific protein kinase C isoforms as transducers and modulators of insulin signaling. Mol Genet Metab 2006; 89(1-2):32-47.
（４）グルコーストランスポーター４（ＧＬＵＴ４）の細胞膜への移行促進作用
　脂肪細胞や骨格筋細胞に発現するＧＬＵＴ４は、インスリンの刺激がない場合は細胞膜上にはほとんど露出しておらず、細胞内の小胞群に組み込まれた状態で存在している。インスリンの刺激は、この細胞内小胞に存在するＧＬＵＴ４の細胞膜上への運搬を促進することにより、細胞膜表面に露出するＧＬＵＴ４の量を増加させ、グルコースを細胞内へ取り込むことにより血糖値をさげる。インスリンによって誘導される糖の取り込み亢進は生理的に重要であるが、糖尿病の場合にはこの生理現象に著しい障害が生じていることが知られている。何らかの原因で膵臓のβ細胞が死滅することで、インスリン分泌障害をきたし糖尿病になる（１型糖尿病）。現在、１型糖尿病の治療は体外からインスリンを注射するしか手だてがない。一方、インスリン刺激に応答した糖取り込みが著しく減弱（インスリン抵抗性＝インスリン反応性の減弱）することも糖尿病発症の引き金となる（２型糖尿病）。２型糖尿病の治療には、インスリン分泌刺激剤、腸管での糖吸収阻害剤、２糖類分解抑制剤、ＤＰＰ－４阻害剤、ＰＰＡＲγ活性化剤等が用いられている。しかし、基本となる糖尿病治療はインスリン／インスリン受容体シグナルを介したＧＬＵＴ４の細胞膜移行を促進させる事である。インスリン／インスリン受容体の細胞内下流シグナルを活性化させＧＬＵＴ４の細胞膜への移行を促進させる薬剤は、インスリン非依存性に糖の細胞内取り込みを亢進することを可能とし、１型、２型糖尿病に関わらず糖尿病治療薬としてその効果が期待できる。
　ＧＬＵＴ４の細胞膜への移行を促進させる薬剤の医薬用途への可能性を示す報告としては例えば以下のものが挙げられる。
1. Stockli J, Fazakerley DJ, James DE. GLUT4 exocytosis. J Cell Sci 2011;124:4147-4159.
（５）インスリン非依存性の血糖値低下作用
　本発明のリン脂質化合物はインスリンを必要とせずに血糖値を低下させることができるので、２型糖尿病の治療に有用である。
　本発明の医薬は、対象疾患、その重篤度、投与対象となる動物種、投与対象の薬物受容性、体重、年齢等によって異なるが、通常、有効成分である本発明のリン脂質化合物の量で、成人１日あたり、０．５～５００ｍｇ、好ましくは５～２５０ｍｇが対象に投与される。
　本発明の医薬は、有効成分である本発明のリン脂質化合物以外に、任意の添加物、例えば医薬上許容され得る担体を含むことができる。医薬上許容され得る担体としては、例えば、ショ糖、デンプン、マンニット、ソルビット、乳糖、グルコース、セルロース、タルク、リン酸カルシウム、炭酸カルシウム等の賦形剤、セルロース、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ポリプロピルピロリドン、ゼラチン、アラビアゴム、ポリエチレングリコール、ショ糖、デンプン等の結合剤、デンプン、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルスターチ、ナトリウム－グリコール－スターチ、炭酸水素ナトリウム、リン酸カルシウム、クエン酸カルシウム等の崩壊剤、ステアリン酸マグネシウム、エアロジル、タルク、ラウリル硫酸ナトリウム等の滑剤、クエン酸、メントール、グリシルリシン・アンモニウム塩、グリシン、オレンジ粉等の芳香剤、安息香酸ナトリウム、亜硫酸水素ナトリウム、メチルパラベン、プロピルパラベン等の保存剤、クエン酸、クエン酸ナトリウム、酢酸等の安定剤、メチルセルロース、ポリビニルピロリドン、ステアリン酸アルミニウム等の懸濁剤、界面活性剤等の分散剤、水、生理食塩水、オレンジジュース等の希釈剤、カカオ脂、ポリエチレングリコール、白灯油等のベースワックスなどが挙げられるが、それらに限定されない。
　一つの実施態様において、本発明の医薬は経口投与に好適な製剤として処方され得る。経口投与に好適な製剤は、水、生理食塩水のような希釈液に有効量の物質を溶解させた液剤、有効量の物質を固体や顆粒として含んでいるカプセル剤、顆粒剤、散剤又は錠剤、適当な分散媒中に有効量の物質を懸濁させた懸濁液剤、有効量の物質を溶解させた溶液を適当な分散媒中に分散させ乳化させた乳剤等である。
　別の実施態様において、本発明の医薬は非経口的な投与に好適な製剤として処方され得る。非経口的な投与（例、静脈内注射、皮下注射、筋肉注射、局所注入など）に好適な製剤としては、水性および非水性の等張無菌の注射液剤があり、これには抗酸化剤、緩衝液、制菌剤、等張化剤等が含まれていてもよい。また、水性および非水性の無菌の懸濁液剤が挙げられ、これには懸濁剤、可溶化剤、増粘剤、安定化剤、防腐剤等が含まれていてもよい。当該製剤は、アンプルやバイアルのように単位投与量あるいは複数回投与量ずつ容器に封入することができる。また、有効成分および医薬上許容され得る担体を凍結乾燥し、使用直前に適当な無菌のビヒクルに溶解又は懸濁すればよい状態で保存することもできる。
　本発明のリン脂質化合物は、食品として提供することができる。有効成分である本発明のリン脂質化合物は、上述の通り、哺乳動物（例、マウス、ラット、ハムスター、ウサギ、ネコ、イヌ、ウシ、ヒツジ、サル、ヒトなど）に対して（１）プロテインチロシンホスファターゼ１Ｂ(PTP1B)阻害作用、（２）Ａｋｔ活性化作用、（３）タンパク質リン酸化酵素Ｃ(PKC)活性化作用、（４）PKCι及びPKCζ活性化作用、（５）グルコーストランスポーター４(GLUT4)の細胞膜への移行促進作用、及び（６）インスリン非依存性の血糖値低下作用を有し、認知障害を伴う疾患の予防、糖尿病予防に効果的な機能性食品として提供することができる。また、抗老化効果を期待した機能性食品として提供することができる。
　本発明において「食品」とは、医薬品及び医薬部外品以外の全ての飲食物を意味する。例えば、特定保健用食品、栄養機能食品、及びいわゆるサプリメントを含むが、これらに限定されない。
　本発明の医薬は、該医薬の単位摂取量又はその分割量が個別に包装又は充填されたもの、あるいは多数の単位摂取量又はその分割量が包括的に包装又は充填されたものであり得る。
　本発明の医薬が、単一の製剤として提供される場合には、該医薬の単位摂取量又はその分割量は、本発明のリン脂質化合物全体の単位摂取量又はその分割量である。
　単位摂取量又はその分割量が個別に包装又は充填された医薬品あるいは食品としては、例えば、単位摂取量又はその分割量を、通常の包装物（例えば、ＰＴＰ（press through packing）シート、紙容器、フィルム（例、プラスチックフィルム）容器、ガラス容器、プラスチック容器）中に別々に包装又は充填したものが挙げられる。このように個別に包装又は充填された医薬品あるいは食品は、さらに組み合わされて、１つの容器（例えば、紙容器、フィルム（例、プラスチックフィルム）容器、ガラス容器、プラスチック容器）中に一緒に包装又は充填されていてもよい。多数の単位摂取量又はその分割量が包括的に包装又は充填された医薬品あるいは食品としては、例えば、多数の錠剤又はカプセル剤が区分されることなく１つの容器（例えば、紙容器、フィルム（例、プラスチックフィルム）容器、ガラス容器、プラスチック容器）中に包装又は充填されたものが挙げられる。本発明の医薬品あるいは食品はまた、単位摂取量又はその分割量を、長期間の摂取に十分な数で含み得るが、例えば食品の場合であれば３日以上、好ましくは７日、１０日、１４日又は２１日以上あるいは１ヶ月、２ヶ月、３ヶ月以上の摂取に十分な数で含み得る。
　本発明の医薬には、必須の有効成分である本発明のリン脂質化合物に加え、他の、神経変性疾患を予防又は治療し得る１種類以上の化合物、あるいは他の、糖尿病を予防又は治療し得る１種類以上の化合物を含めてもよい。
　他の神経変性疾患を予防又は治療する化合物の例として、ポリフェノール、コエンザイムＱ１０、β－シトステロール、イソフラボン、メビニン酸、ビタミンＣ、ビタミンＥ、フラボノイド類、テルペン類、葉酸、ビタミンＢ６、ビタミンＢ１２、セスキルペンラクトン、ウロキナーゼ、ナットウキナーゼ、ジリノレオイルホスファチジルエタノールアミン、硫化プロピル、リンゴペクチン、酢酸、ＥＰＡ、及びＤＨＡが挙げられる。
　他の、糖尿病を予防又は治療し得る化合物の例として、インスリン分泌促進薬、スルホニル尿素薬、スルホンアミド薬、ビグアナイド薬、αグルコシターゼ阻害薬、インスリン製剤、インスリン抵抗性改善薬等が挙げられる。例えば、ナテグリニド、グリメピリド、グリベンクラミド、グリクラジド、アセトヘキサミド、トルブタミド、グリクロピラミド、トラザミド、グリブゾール、塩酸メトホルミン、塩酸ブホルミン、ボグリボース、アカルボース、インスリン、塩酸ピオグリタゾン等が挙げられる。
　本明細書中で挙げられた特許及び特許出願明細書を含む全ての刊行物に記載された内容は、本明細書での引用により、その全てが明示されたと同程度に本明細書に組み込まれるものである。
　以下に実施例及び試験例を挙げ、本発明を更に詳しく説明するが、本発明は下記実施例等に何ら制限されるものではない。
（解析方法）
　１Ｈ－ＮＭＲスペクトルはJEOL JNM-ECX400スペクトロメータで記録した（400 MHz）。１Ｈ－ＮＭＲについて、化学シフトはＴＭＳ（δ＝０．００）又はＣＨＣｌ３（δ＝７．２６）からダウンフィールドした値で表した。
　ＥＳＩ－ＭＳスペクトルはBruker micro TOF-Qマススペクトロメータで測定した。
　カラムクロマトグラフィーはシリカゲル６０（４０－５０μｍ及び４０－１００μｍ）上で行なった（関東化学より購入）。
　０．２５ｍｍシリカゲルプレート６０Ｆ２５４（Merck, Darmstadt, Germany）上で、ＵＶ光、ヨウ素及びｍ－ブロモクレゾールグリーン又は５％（ｗ／ｖ）リンモリブデン酸エタノール溶液及び熱を発色剤として用い全ての反応をモニタリングした。
　ｄｉＤＣＰ－ＬＡ－ＰＥは特許文献１に記載の製造方法により製造することができる。
実施例１：ｄｉＤＣＰ－ＬＡ－ＰＥの合成
（工程１）（Ｒ）－３－ベンジルオキシ－１，２－プロパンジオールの合成
　（Ｓ）－（＋）－２，２－ジメチル－１，３－ジオキソラン－４－メタノール（1.0 g, 7.6 mmol）のジメチルホルムアミド（10 ml）溶液に６０％ＮａＨ（0.61 g, 15.1 mmol）及びベンジルブロミド（1.1 ml, 9.1 mmol)を氷冷下で添加した。
　室温で１５分間撹拌後、反応混合物に水を添加した。水層をヘキサンで抽出し、有機層をＨ２Ｏ及び食塩水で洗浄した。次いで、無水ＭｇＳＯ４で乾燥させ、減圧濃縮により４－ベンジルオキシメチル－２，２－ジメチル－１，３－ジオキソランを得、さらに精製することなく次の工程に使用した。４－ベンジルオキシメチル－２，２－ジメチル－１，３－ジオキソランのメタノール（17.4 ml）溶液に濃ＨＣｌ（1.93 ml）を氷冷下で加えた。６０℃で３０分間撹拌した後、反応混合物にＮａＨＣＯ３の飽和水溶液を氷冷下で加えた。水層をヘキサンで洗浄し、次いで水層を酢酸エチルで抽出した。有機層をあわせＭｇＳＯ４で乾燥し減圧濃縮により（Ｒ）－３－ベンジルオキシ－１，２－プロパンジオール（1.22 g, 88%）を油として得た。
1H-NMR (400 MHz, CDCl3): δ 3.53-3.61 (m, 2H), 3.65 (dd, J = 11.4 and 5.5 Hz, 1H), 3.72 (dd, J = 11.4 and 3.6 Hz, 1H), 3.88-3.93 (m, 1H), 4.56 (s, 2H), 7.30-7.39 (m, 5H).
（工程２）３－Ｏ－ベンジル－１，２－Ｏ－ビス－［８－｛２－（２－ペンチル－シクロプロピルメチル）－シクロプロピル｝－オクタノイル］－ｓｎ－グリセロールの合成
　ＤＣＰ－ＬＡ（2.03 g, 6.59 mmol）を（Ｒ）－３－ベンジルオキシ－１，２－プロパンジオール（0.5 g, 2.74 mmol）のトルエン溶液に添加し、次いで減圧濃縮し、得られた残渣をジクロロメタン（15 ml）に溶解した。次いで、その溶液に、１－（３－ジメチルアミノプロピル）－３－エチルカルボジイミド塩酸塩（1.58 g, 8.23 mmol）及びＮ，Ｎ－ジメチルアミノピリジン（0.30 g, 2.47 mmol）を氷冷下で添加した。窒素雰囲気下、室温で３時間撹拌した後、反応混合物に２Ｎ　ＨＣｌを添加した。水層を酢酸エチルで３回抽出し、有機層をあわせ無水ＭｇＳＯ４で乾燥した。溶液を減圧濃縮し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝２０：１）で精製して３－Ｏ－ベンジル－１，２－Ｏ－ビス－［８－｛２－（２－ペンチル－シクロプロピルメチル）－シクロプロピル｝－オクタノイル］－ｓｎ－グリセロール（2.06 g, 99%）を油として得た。
1H-NMR (400 MHz, CDCl3): δ -0.31- -0.24 (m, 4H), 0.58-0.91 (m, 18H), 0.99-1.20 (m, 5H), 1.25-1.52 (m, 37H), 1.58-1.69 (m, 2H), 2.28 (t, J = 7.3 Hz, 2H), 2.33 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 3.59 (d, J = 5.0 Hz, 2H), 4.19 (dd, J = 11.7 and 6.9 Hz, 1H), 4.34 (dd, J = 11.7 and 3.6 Hz, 1H), 4.52 (d, J = 11.9 Hz, 1H), 4.57 (d, J = 11.9 Hz, 1H), 5.22-5.27 (m, 1H), 7.29-7.37 (m, 5H).
（工程３）１，２－Ｏ－ビス－［８－｛２－（２－ペンチル－シクロプロピルメチル）－シクロプロピル｝－オクタノイル］－ｓｎ－グリセロールの合成
　３－Ｏ－ベンジル－１，２－Ｏ－ビス－［８－｛２－（２－ペンチル－シクロプロピルメチル）－シクロプロピル｝－オクタノイル］－ｓｎ－グリセロール（1.20 g, 1.57 mmol）及び１０％（ｗ／ｖ）パラジウム活性炭素（480 mg）エタノール（80 ml）溶液を水素雰囲気下（1 atm）、室温で１５分間撹拌した。触媒をセライトパッドにより除去し酢酸エチルでリンスした。あわせた有機層を減圧濃縮して、１，２－Ｏ－ビス－［８－｛２－（２－ペンチル－シクロプロピルメチル）－シクロプロピル｝－オクタノイル］－ｓｎ－グリセロール（1.05 g, 100%）を油として得た。
1H-NMR (400 MHz, CDCl3): δ -0.33-0.23 (m, 4H), 0.58-0.89 (m, 12H), 0.99-1.19 (m, 6H), 1.24-1.69 (m, 44H), 2.03 (t, J = 6.4 Hz, 1H), 2.32 (t, J = 7.3 Hz, 2H), 2.35 (t, J = 7.3 Hz, 2H), 3.73 (dd, J = 6.3 and 6.4 Hz, 2H), 4.24 (dd, J = 11.9 and 5.5 Hz, 1H), 4.31 (dd, J = 11.9 and 4.9 Hz, 1H), 5.08 (ddd, J = 6.3, 5.5 and 4.4 Hz, 1H).
（工程４）ｄｉＤＣＰ－ＬＡ－ＰＥの合成
　１，２－Ｏ－ビス－［８－｛２－（２－ペンチル－シクロプロピルメチル）－シクロプロピル｝－オクタノイル］－ｓｎ－グリセロール（1.05 g, 1.57 mmol）及びトリエチルアミン（552 ml, 3.96 mmol）のＣＨ２Ｃｌ２（40 ml）溶液にＮ，Ｎ－ジイソプロピルアミドクロリド亜リン酸メチル（460 ml, 2.37 mmol）を氷冷下で添加した。室温で１０分間撹拌した後、混合物に２－（カルボベンゾキシアミノ）－エタノール（0.58 g, 2.97 mmol）及び１Ｈ－テトラゾール（0.56 g, 7.92 mmol）を添加し、ｔｅｒｔ－ブチルヒドロペルオキシド（2.6 ml, 19.8 mmol）の７０％（ｖ／ｖ）水溶液をさらに添加し、室温で２０分間撹拌した。１０％（ｗ／ｖ）Ｎａ２Ｓ２Ｏ３水溶液を添加した後、得られた水層を酢酸エチルで抽出し、有機層を無水ＭｇＳＯ４で乾燥した。溶液を減圧濃縮し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝４：１）で精製してＯ－［２－Ｎ－（ベンジルオキシカルボニル）アミノエチル］　Ｏ－（１’，２’－Ｏ－ビス－［８－｛２－（２－ペンチル－シクロプロピルメチル）－シクロプロピル｝－オクタノイル］－ｓｎ－３’－グリセリル）　Ｏ－メチルホスフェート（1.13 g, 68 %）を油として得た。
1H-NMR (400 MHz, CDCl3): δ -0.33- -0.23 (m, 4H), 0.58-0.89 (m, 18H), 0.99-1.19 (m, 6H), 1.24-1.54 (m, 37H), 1.54-1.69 (br s, 2H), 2.32 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 2.33 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 3.42-3.56 (m, 2H), 3.75 (dd, J = 11.4 and 4.6 Hz, 3H), 4.05-4.25 (m, 5H), 4.29-4.33 (m, 1H), 5.11 (s, 2H), 5.20-5.26 (m, 1H), 5.38-5.42 (m, 1H), 7.31-7.40 (m, 5H); ESI-HRMS (negative ion, sodium formate) calculated for C54H90NO10PNa ([M+Na]+) 966.6191; found 966.6089.
　Ｏ－［２－Ｎ－（ベンジルオキシカルボニル）アミノエチル］　Ｏ－（１’，２’－Ｏ－ビス－［８－｛２－（２－ペンチル－シクロプロピルメチル）－シクロプロピル｝－オクタノイル］－ｓｎ－３’－グリセリル）　Ｏ－メチルホスフェート（1.2 g, 1.6 mmol）の２－ブタノン（23 ml）溶液にＮａＩ（899 mg, 6.0 mmol）を添加した。８０℃で１時間撹拌した後、２Ｎ　ＨＣｌを反応混合物に添加し、水層をクロロホルムで抽出した。有機層をＨ２Ｏ及び食塩水で洗浄し、あわせた有機層を無水ＭｇＳＯ４で乾燥し減圧濃縮して、Ｏ－［２－Ｎ－（ベンジルオキシカルボニル）アミノエチル］　Ｏ－（１’，２’－Ｏ－ビス－［８－｛２－（２－ペンチル－シクロプロピルメチル）－シクロプロピル｝－オクタノイル］－ｓｎ－３’－グリセリル）ホスフェートを得た。
　Ｏ－［２－Ｎ－（ベンジルオキシカルボニル）アミノエチル］　Ｏ－（１’，２’－Ｏ－ビス－［８－｛２－（２－ペンチル－シクロプロピルメチル）－シクロプロピル｝－オクタノイル］－ｓｎ－３’－グリセリル）ホスフェートのメタノール（120 ml）溶液に１０％（ｗ／ｖ）パラジウム活性炭素（500 mg）を添加した。得られた懸濁液を水素雰囲気下(1 atm)、室温で２４時間撹拌した。触媒をセライトパッドにより除去し、酢酸エチルでリンスし、減圧濃縮した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム：メタノール＝１０：１）で精製して１，２－ｏ－ｂｉｓ－［８－｛２－（２－ペンチル－シクロプロピルメチル）－シクロプロピル）－オクタノイル｝－ｓｎ－グリセロ－３－ホスファチジルエタノールアミン（0.60 g, 70%）を黄色油として得た。
1H-NMR (400 MHz, C6D5N): δ -0.16- -0.08 (m, 4H), 0.69-0.99 (m, 18H), 1.16-1.59 (m, 42H), 1.64-1.80 (m, 5H), 2.43 (t, J = 7.8 Hz, 2H), 2.48 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 3.56-3.64 (br s, 2H), 4.33-4.45 (br s, 2H), 4.53 (dd, J = 11.9 Hz, 1H), 4.56-4.69 (br s, 2H), 4.73 (dd, J = 9.6 and 2.7 Hz, 1H), 6.87 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 6.91 (dd, J = 8.2 and 1.8 Hz, 1H), 7.00 (d, J = 1.8 Hz, 1H), 7.03 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 7.16 (d, J = 1.8 Hz, 1H), 7.47 (d, J = 8.3 Hz, 2H), 7.67 (d, J = 8.3 Hz, 2H);
ESI-HRMS (negative ion, sodium formate) calculated for C45H82NO8PNa+([M+Na]+) 818.5670; found 818.5652.
実施例２：ｄｉＤＣＰ－ＬＡ－ＰＳの合成
　１，２－Ｏ－ビス－［８－｛２－（２－ペンチル－シクロプロピルメチル）－シクロプロピル｝－オクタノイル］－ｓｎ－グリセロール（0.44 g, 0.66 mmol）及びトリエチルアミン（0.18 ml, 1.3 mmol）のＣＨ２Ｃｌ２（15 ml）溶液にＮ，Ｎ－ジイソプロピルアミドクロリド亜リン酸メチル（0.15 ml, 0.79 mmol）を氷冷下で添加した。室温で１０分間撹拌した後、混合物にＮ－カルボベンゾキシ－セリン　ベンジル　エステル（0.33 g, 0.99 mmol）及び１Ｈ－テトラゾール（0.19 g, 2.6 mmol）を添加し、ｔｅｒｔ－ブチルヒドロペルオキシド（0.87 ml, 6.6 mmol）の７０％（ｖ／ｖ）水溶液をさらに添加し、同じ温度で２０分間撹拌した。１０％（ｗ／ｖ）Ｎａ２Ｓ２Ｏ３水溶液を添加した後、得られた水層を酢酸エチルで抽出し、有機層を無水ＭｇＳＯ４で乾燥した。溶液を減圧濃縮し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝３：１）で精製してＯ－［Ｎ－（ベンジルオキシカルボニル）－Ｌ－セリン　ベンジル　エステル］　Ｏ－（１，２－Ｏ－ビス－［８－｛２－（２－ペンチル－シクロプロピルメチル）－シクロプロピル｝－オクタノイル］－ｓｎ－３－グリセリル）　Ｏ－メチルホスフェート（490 mg, 68%）を無色油として得た。
1H-NMR (400 MHz, CDCl3): δ -0.33- -0.20 (m, 4H), 0.55-0.85 (m, 12H), 0.87-0.95 (m, 6H), 0.96-1.70 (m, 44H), 2.30 (t, J = 7.3 Hz, 2H), 2.31 (t, J = 7.3 Hz, 2H), 3.65 (dd, J = 11.5 and 2.8 Hz, 3H), 4.00-4.20 (m, 3H), 4.21-4.41 (m, 2H), 4.42-4.49 (m, 1H), 4.59-4.65 (m, 1H), 5.13 (s, 2H), 5.14-5.20 (m, 1H), 5.21 (s, 2H), 5.93 (dd J = 8.2 and 8.2 Hz, 1H), 7.20-7.44 (m, 10H); ESI-HRMS (positive ion, sodium formate) calculated for C62H96NO12PNa ([M+H]-) 1100.6562; found 1100.6307.
　Ｏ－［Ｎ－（ベンジルオキシカルボニル）－Ｌ－セリン　ベンジル　エステル］　Ｏ－（１，２－Ｏ－ビス－［８－｛２－（２－ペンチル－シクロプロピルメチル）－シクロプロピル｝－オクタノイル］－ｓｎ－３－グリセリル）　Ｏ－メチルホスフェート（200 mg, 0.19 mmol）の２－ブタノン（3 ml）溶液にＮａＩ（139 mg, 0.93 mmol）を添加した。８０℃で１時間撹拌した後、２Ｎ　ＨＣｌを反応混合物に添加し、水層をクロロホルムで抽出した。有機層をＨ２Ｏ及び食塩水で洗浄し、あわせた有機層を無水ＭｇＳＯ４で乾燥し減圧濃縮して、Ｏ－［Ｎ－（ベンジルオキシカルボニル）－Ｌ－セリン　ベンジル　エステル］　Ｏ－（１，２－Ｏ－ビス－［８－｛２－（２－ペンチル－シクロプロピルメチル）－シクロプロピル｝－オクタノイル］－ｓｎ－３－グリセリル）　ホスフェートを得た。
　Ｏ－［Ｎ－（ベンジルオキシカルボニル）－Ｌ－セリン　ベンジル　エステル］　Ｏ－（１，２－Ｏ－ビス－［８－｛２－（２－ペンチル－シクロプロピルメチル）－シクロプロピル｝－オクタノイル］－ｓｎ－３－グリセリル）　ホスフェートのエタノール（30 ml）溶液に１０％（ｗ／ｖ）パラジウム活性炭素（72 mg）を添加した。得られた懸濁液を水素雰囲気下(1 atm)、室温で２時間撹拌した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム：メタノール＝１０：１）で精製して１，２－Ｏ－ビス－［８－｛２－（２－ペンチル－シクロプロピルメチル）－シクロプロピル｝－オクタノイル］－ｓｎ－グリセロ－３－ホスファチジル－Ｌ－セリン（50 mg, 31%）を白色固体として得た。
1H-NMR (400 MHz, CDCl3): δ -0.30- -0.20 (m, 4H), 0.55-0.85 (m, 12H), 0.87-0.95 (m, 6H), 0.96-1.70 (m, 44H), 2.25-2.43 (m, 4H), 3.80-4.30 (m, 4H), 4.32-4.51 (m, 2H), 5.20-5.32 (m, 1H); ESI-HRMS (negative ion, sodium formate) calculated for C46H81NO10P ([M-H]-) 838.5604; found 838.5599.
実施例３：ｄｉＤＣＰ－ＬＡ－ＰＣの合成
　１，２－Ｏ－ビス－［８－｛２－（２－ペンチル－シクロプロピルメチル）－シクロプロピル｝－オクタノイル］－ｓｎ－グリセロール(0.14 g, 0.21 mmol) 及びトリエチルアミン(0.058 ml, 0.42 mmol)のＣＨ２Ｃｌ２(5 ml) 溶液にＮ，Ｎ－ジイソプロピルアミドクロリド亜リン酸メチル(0.048 ml, 0.25 mmol) を氷冷下で添加した。
　室温で１０分間撹拌した後、混合物に２－クロロエタノール(0.025 g, 0.31 mmol) 及び１Ｈ－テトラゾール(0.058 g, 0.42 mmol)を添加し、ｔｅｒｔ－ブチルヒドロペルオキシド(0.27 ml, 2.1 mmol)の７０％（ｖ／ｖ）水溶液をさらに添加し、同じ温度で２０分間撹拌した。１０％（ｗ／ｖ）Ｎａ２Ｓ２Ｏ３水溶液を添加した後、得られた水層をCH2Cl2で抽出した。併せた有機層を無水ＭｇＳＯ４で乾燥し、減圧濃縮した。粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝３：１）で精製してＯ－（１，２－Ｏ－ビス－［８－｛２－（２－ペンチル－シクロプロピルメチル）－シクロプロピル｝－オクタノイル］－ｓｎ－３－グリセリル）　Ｏ－（２’－クロロエチル）　Ｏ－メチルホスフェート(107 mg, 60%)を無色油として得た。
1H-NMR (400 MHz, CDCl3): δ -0.33- -0.20 (m, 4H), 0.55-0.85 (m, 12H), 0.87-0.95 (m, 6H), 0.96-1.72 (m, 44H), 2.32 (t, J = 7.8 Hz, 2H), 2.34 (t, J = 7.8 Hz, 2H), 3.70 (t, J = 6.5 Hz, 2H), (dd, J = 11.5 and 2.8 Hz, 3H), 4.10-4.40 (m, 6H), 5.25 (ddd J = 5.0, 5.0 and 5.0 Hz, 1H); ESI-HRMS (positive ion, sodium formate) calculated for C46H82ClO8PNa ([M+Na]+) 851.5334; found 851.5283.
　Ｏ－（１，２－Ｏ－ビス－［８－｛２－（２－ペンチル－シクロプロピルメチル）－シクロプロピル｝－オクタノイル］－ｓｎ－３－グリセリル）　Ｏ－（２’－クロロエチル）　Ｏ－メチルホスフェート（100 mg, 0.19 mmol）のＣＨ３ＣＮ（3 ml）溶液にトリメチルアミン（5 ml）をドライアイス冷下で添加した。７０℃で７時間撹拌した後、反応混合物を室温まで冷却し減圧濃縮した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム：メタノール＝２０：１）で精製して１，２－Ｏ－ビス－［８－｛２－（２－ペンチル－シクロプロピルメチル）－シクロプロピル｝－オクタノイル］－ｓｎ－３－グリセロ－３－ホスファチジルコリン（15 mg, 18%）を白色固体として得た。
1H-NMR (400 MHz, CDCl3): δ -0.33- -0.20 (m, 4H), 0.55-0.84 (m, 12H), 0.87-0.95 (m, 6H), 0.96-1.72 (m, 44H), 2.32 (t, J = 7.8 Hz, 2H), 2.34 (t, J = 7.8 Hz, 2H), 3.23 (s, 9H), 3.60-3.70 (m, 4H), 4.00 (m, 2H), 4.20 (m, 1H), 4.25-4.40 (m, 2H), 4.45 (m, 1H), 5.26 (m, 1H); ESI-HRMS (negative ion, sodium formate) calculated for C48H89NO8P ([M+H]+) 838.6320; found 838.6310.
実施例４：ｄｉＤＣＰ－ＬＡ－Ｄ－ＰＩの合成
　１，２－Ｏ－ビス－［８－｛２－（２－ペンチル－シクロプロピルメチル）－シクロプロピル｝－オクタノイル］－ｓｎ－グリセロール（0.080 g, 0.12 mmol）及びトリエチルアミン（0.033 ml, 0.24 mmol）のＣＨ２Ｃｌ２（2 ml）溶液にＮ，Ｎ－ジイソプロピルアミドクロリド亜リン酸メチル（0.028 ml, 0.14 mmol）を氷冷下で添加した。室温で１０分間撹拌した後、混合物に（－）－２，３，４，５，６－ペンタ－Ｏ－ベンジル－Ｄ－１－イノシトール（0.11 g, 0.18 mmol）及び１Ｈ－テトラゾール（0.033 g, 0.48 mmol）を添加し、ｔｅｒｔ－ブチルペルオキシド（0.16 ml, 1.2 mmol）の７０％（ｖ／ｖ）水溶液をさらに添加し、同じ温度で２０分間撹拌した。１０％（ｗ／ｖ）Ｎａ２Ｓ２Ｏ３水溶液を添加した後、得られた水層をＣＨ２Ｃｌ２で抽出した。併せた有機層を無水ＭｇＳＯ４で乾燥し、減圧濃縮した。粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ヘキサン：酢酸エチル＝１：１）で精製してＯ－（１，２－Ｏ－ビス－［８－｛２－（２－ペンチル－シクロプロピルメチル）－シクロプロピル｝－オクタノイル］－ｓｎ－３－グリセリル）　Ｏ－メチル　Ｏ－（２’，３’，４’，５’，６’－ペンタ－Ｏ－ベンジル－Ｄ－１’－イノシトール）ホスフェート（30 mg, 17%）を白色固体として得た。
1H-NMR (400 MHz, CDCl3): δ -0.33- -0.21 (m, 4H), 0.52-0.85 (m, 12H), 0.87-0.95 (m, 6H), 0.96-1.70 (m, 44H), 2.24 (t, J = 7.3 Hz, 2H), 2.26 (t, J = 7.3 Hz, 2H), 3.46-3.54 (m, 2H), 3.67 (d, J = 11.4 Hz, 3H), 3.88 (dd, J = 11.9 and 6.0 Hz, 1H), 3.94 (ddd, J = 6.8, 6.4 and 5.0 Hz, 1H), 4.00-4.15 (m, 4H), 4.24 (ddd, J = 7.7, 7.4 and 2.1 Hz, 1H), 4.34 (t, J = 2.1 Hz, 1H), 4.67 (d, J = 11.4 Hz, 1H), 4.73 (d, J = 11.4 Hz, 1H), 4.75-4.85 (m, 4H), 4.85-4.95 (m, 3H), 4.95 (d, J = 11.4 Hz, 1H), 5.00-5.07 (m, 1H).
　Ｏ－（１，２－Ｏ－ビス－［８－｛２－（２－ペンチル－シクロプロピルメチル）－シクロプロピル｝－オクタノイル］－ｓｎ－３－グリセリル）　Ｏ－メチル　Ｏ－（２’，３’，４’，５’，６’－ペンタ－Ｏ－ベンジル－Ｄ－１’－イノシトール）ホスフェート（30 mg, 0.020 mmol）の２－ブタノン（2 ml）溶液にＮａＩ（0.017 g, 0.11 mmol）を添加した。８０℃で２時間撹拌した後、２Ｎ　ＨＣｌを反応混合物に添加し、水層をクロロホルムで抽出した。有機層をＨ２Ｏ及び食塩水で洗浄し、あわせた有機層を無水ＭｇＳＯ４で乾燥し減圧濃縮して、Ｏ－（１，２－Ｏ－ビス－［８－｛２－（２－ペンチル－シクロプロピルメチル）－シクロプロピル｝－オクタノイル］－ｓｎ－３’－グリセリル）　Ｏ－メチル　Ｏ－（２’，３’，４’，５’，６’－ペンタ－Ｏ－ベンジル－Ｄ－１’－イノシトール）ホスフェートを得た。Ｏ－（１，２－Ｏ－ビス－［８－｛２－（２－ペンチル－シクロプロピルメチル）－シクロプロピル｝－オクタノイル］－ｓｎ－３’－グリセリル）　Ｏ－メチル　Ｏ－（２’，３’，４’，５’，６’－ペンタ－Ｏ－ベンジル－Ｄ－１’－イノシトール）ホスフェートのエタノール（3 ml）溶液に１０％（ｗ／ｖ）パラジウム活性炭素（21 mg）を添加した。得られた懸濁液を水素雰囲気下（1 atm）、室温で２時間撹拌した。触媒をセライトパッドにより除去し、酢酸エチルでリンスし、減圧濃縮した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム：メタノール＝１０：１）で精製して１，２－Ｏ－ビス－［８－｛２－（２－ペンチル－シクロプロピルメチル）－シクロプロピル｝－オクタノイル］－ｓｎ－グリセロ－３－ホスファチジル－Ｄ－１－イノシトール（10 mg, 55%）を白色固体として得た。
1H-NMR (400 MHz, CDCl3): δ -0.33- -0.20 (m, 4H), 0.55-0.85 (m, 12H), 0.87-0.95 (m, 6H), 0.96-1.70 (m, 44H), 2.20-2.43 (m, 4H), 3.80-4.51 (m, 5H), 5.18-5.32 (m, 1H); ESI-HRMS (negative ion, sodium formate) calculated for C49H86O13P ([M-H]-)913.5811; found 913.5806.
実施例５：非天然型ｄｉＤＣＰ－ＬＡ－Ｌ－ＰＩの合成
　１，２－Ｏ－ビス－［８－｛２－（２－ペンチル－シクロプロピルメチル）－シクロプロピル｝－オクタノイル］－ｓｎ－グリセロール（0.175 g, 0.26 mmol）及びトリエチルアミン（0.072 ml, 0.52 mmol）のＣＨ２Ｃｌ２（5 ml）溶液にＮ，Ｎ－ジイソプロピルアミドクロリド亜リン酸メチル（0.061 ml, 0.31 mmol）を氷冷下で添加した。室温で１０分間撹拌した後、混合物に（＋）－２，３，４，５，６－ペンタ－Ｏ－ベンジル－Ｌ－１－イノシトール（0.25 g, 0.39 mmol）及び１Ｈ－テトラゾール（0.073 g, 1.04 mmol）を添加し、ｔｅｒｔ－ブチルペルオキシド（0.34 ml, 2.6 mmol）の７０％（ｖ／ｖ）水溶液をさらに添加し、同じ温度で２０分間撹拌した。１０％（ｗ／ｖ）Ｎａ２Ｓ２Ｏ３水溶液を添加した後、得られた水層をＣＨ２Ｃｌ２で抽出した。併せた有機層を無水ＭｇＳＯ４で乾燥し、減圧濃縮した。粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（トルエン：酢酸エチル＝６：１）で精製してＯ－（１，２－Ｏ－ビス－［８－｛２－（２－ペンチル－シクロプロピルメチル）－シクロプロピル｝－オクタノイル］－ｓｎ－３－グリセリル）　Ｏ－メチル　Ｏ－（２’，３’，４’，５’，６’－ペンタ－Ｏ－ベンジル－Ｌ－１’－イノシトール）ホスフェート（90 mg, 25%）を白色固体として得た。
1H-NMR (400 MHz, CDCl3): δ -0.33- -0.21 (m, 4H), 0.52-0.85 (m, 12H), 0.87-0.95 (m, 6H), 0.96-1.70 (m, 44H), 2.25 (t, J = 7.3 Hz, 2H), 2.26 (t, J = 7.3 Hz, 2H), 3.46-3.54 (m, 2H), 3.61 (d, J = 11.4 Hz, 3H), 3.94 (dd, J = 11.9 and 6.0 Hz, 1H), 4.00-4.32 (m, 7H), 4.68 (d, J = 11.9 Hz, 1H), 4.72 (d, J = 11.9 Hz, 1H), 4.73-4.85 (m, 8H), 5.15-5.25 (m, 1H).
　Ｏ－（１，２－Ｏ－ビス－［８－｛２－（２－ペンチル－シクロプロピルメチル）－シクロプロピル｝－オクタノイル］－ｓｎ－３－グリセリル）　Ｏ－メチル　Ｏ－（２’，３’，４’，５’，６’－ペンタ－Ｏ－ベンジル－Ｌ－１－イノシトール）ホスフェート（90 mg, 0.070 mmol）の２－ブタノン（2 ml）溶液にＮａＩ（50 mg, 0.33 mmol）を添加した。８０℃で３時間撹拌した後、２Ｎ　ＨＣｌを反応混合物に添加し、水層をクロロホルムで抽出した。有機層をＨ２Ｏ及び食塩水で洗浄し、あわせた有機層を無水ＭｇＳＯ４で乾燥し減圧濃縮して、Ｏ－（１，２－Ｏ－ビス－［８－｛２－（２－ペンチル－シクロプロピルメチル）－シクロプロピル｝－オクタノイル］－ｓｎ－３－グリセリル）　Ｏ－メチル　Ｏ－（２’，３’，４’，５’，６’－ペンタ－Ｏ－ベンジル－Ｌ－１－イノシトール）ホスフェートを得た。Ｏ－（１，２－Ｏ－ビス－［８－｛２－（２－ペンチル－シクロプロピルメチル）－シクロプロピル｝－オクタノイル］－ｓｎ－３－グリセリル）　Ｏ－メチル　Ｏ－（２’，３’，４’，５’，６’－ペンタ－Ｏ－ベンジル－Ｌ－１－イノシトール）ホスフェートのエタノール（5 ml）溶液に１０％（ｗ／ｖ）パラジウム活性炭素（70 mg）を添加した。得られた懸濁液を水素雰囲気下（1 atm）、室温で２時間撹拌した。触媒をセライトパッドにより除去し、酢酸エチルでリンスし、減圧濃縮した。得られた粗生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（クロロホルム：メタノール＝１０：１）で精製して１，２－Ｏ－ビス－［８－｛２－（２－ペンチル－シクロプロピルメチル）－シクロプロピル｝－オクタノイル］－ｓｎ－グリセロ－３－ホスファチジル－Ｌ－１－イノシトール（20 mg, 43%）を白色固体として得た。
1H-NMR (400 MHz, CDCl,): δ -0.33- -0.20 (m, 4H), 0.55-0.85 (m, 12H), 0.87-0.95 (m, 6H), 0.96-1.70 (m, 44H), 2.20-2.43 (m, 4H), 3.50-4.51 (m, 5H), 5.10-5.42 (m, 1H); ESI-HRMS (negative ion, sodium formate) calculated for C49H86O13P ([M-H]- ) 913.5811; found 913.5811.
試験例１：プロテインチロシンホスファターゼ１Ｂ(PTP1B)阻害作用
（材料と方法）
無細胞条件下でのＰＴＰ１Ｂ活性のアッセイ
　無細胞条件下でのプロテインチロシンホスファターゼの測定は既報(Baba Y, et al. J Am Chem Soc 2003;125;9740-9749; Rice RL, et al. Biochemistry 1997;36:15965-15974)に記載された方法を部分的に改変した方法により行なった。ヒトＰＴＰ１ＢをＮＨ２末端にＧＳＴタグを有するｐＧＥＸ－６Ｐ－３ベクターにクローニングし、形質転換及び蛋白質発現に適したコンピテントＥ．ｃｏｌｉ　ＢＬ２１（ＤＥ３）中で発現させた。ＧＳＴ融合ＰＴＰ１Ｂをグルタチオンセファロース４Ｂ(GE Healthcare Bio-Science KK, Tokyo, Japan)を用いてアフィニティー精製した。基質としてｐ－ニトロフェニルホスフェート(p-NPP)(Sigma, St. Louis, MO, USA)と反応させてＰＴＰ１Ｂ活性を測定した。酵素を反応メディウム[50 mM HEPES, 1 mM EDTA, 50 mM NaCl, 1 mM dithiothreitol, pH7.2]中３７℃で３０分間、ｄｉＤＣＰ－ＬＡ－ＰＥ存在下及び非存在下、ＰＴＰ１Ｂ阻害剤であるＮａ３ＶＯ４を添加及び未添加でプレインキュベートした。次いで、ｐ－ＮＰＰ(10 mM)を反応メディウムに添加して６０分間インキュベートした。反応は０．１Ｎ　ＮａＯＨを添加することにより停止させた。脱リン酸化されたｐ－ＮＰＰ、即ちｐ－ＮＰをＳｐｅｃｔｒａＭａｘ　ＰＬＵＳ３８４(Molecular Devices, Sunnyvale, CA, USA)を用い４０５ｎｍの吸光度で定量した。
（結果）
　結果を図２に示す。
　この結果は、ｄｉＤＣＰ－ＬＡ－ＰＥが濃度依存性にＰＴＰ１Ｂを阻害することを示している。このことは更に、ｄｉＤＣＰ－ＬＡ－ＰＥがチロシンキナーゼを間接的に活性化することを示唆している（参考経路を図３に示す）。
試験例２：Ａｋｔ活性化作用
（材料と方法）
１．細胞培養
　ＧＬＵＴ４ｍｙｃを発現する３Ｔ３Ｌ１－ＧＬＵＴ４ｍｙｃ線維芽細胞株を用いた。当該細胞は、ヒトｃ－ＭＹＣエピトープ（１４アミノ酸）を第１エクトドメインに挿入して構築される。細胞を１０％（ｖ／ｖ）ウシ血清、ペニシリン(最終濃度,100 U/ml)及びストレプトマイシン(最終濃度,0.1 mg/ml)を添加したDulbecco’s Modified Eagles Medium(DMEM)中、５％ＣＯ２及び９５％空気の湿気のある環境で３７℃で培養した。細胞がコンフルエントな状態に到達したら（０日目）、線維芽細胞から脂肪細胞へと分化させるために、培地を、１０％（ｖ／ｖ）ウシ胎仔血清(FBS)，１μＭデキサメサゾン，０．５ｍＭ　３－イソブチル－メチル－キサンチン及び０．１ｍｇ／ｍｌインスリンを添加したＤＭＥＭに交換した。３日目、７日目及び１１日目で、１０％（ｖ／ｖ）ＦＢＳを添加したＤＭＥＭに培地交換した。１４日目で、細胞を実験に使用した。
２．ウエスタンブロッティング
　３Ｔ３Ｌ１－ＧＬＵＴ４ｍｙｃ脂肪細胞を０．２％（ｗ／ｖ）ウシ血清アルブミンを含有し、１０ｍＭグルコースを添加したKrebs-Ringer-HEPES buffer[136 mM NaCl, 4.7 mM KCl, 1.25 mM CaCl2, 1.25 mM MgSO4及び20 mM HEPES, pH 7.5]中、３７℃で１時間インキュベートした。細胞をｄｉＤＣＰ－ＬＡ－ＰＥの存在下又は非存在下で２０分間インキュベートした。次いで、細胞を１％（ｖ／ｖ）プロテアーゼインヒビターカクテルを含む溶解バッファー[150 mM NaCl, 20 mM エチレンジアミン四酢酸, 0.5% (v/v) Nonidet P-40及び50 mM Tris, pH 7.4]で溶解し、４℃で５分間、３，０００ｒｐｍで遠心分離した。上清を全細胞溶解物として用いた。
　ウエスタンブロッティングのために、蛋白質をＳＤＳ－ポリアクリルアミドゲル電気泳動（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）で分離し、ポリビニリデンジフルオライド膜に転写した。ブロッティング膜は５％（ｗ／ｖ）ＢＳＡを含むＴＢＳ－Ｔ[150 mM NaCl, 0.1% (v/v) Tween20及び20 mM Tris, pH7.5]でブロッキングし、続いて、それぞれphospho-Akt(Thr308)，phospho-Akt(Ser473)，及びＡｋｔに対する抗体(Cell Signaling Technology, Inc., Danvers, MA, USA)と反応させた。洗浄後、膜をホースラディッシュペルオキシダーゼコンジュゲートヤギ抗ウサギＩｇＧ抗体と反応させた。免疫反応性は、ＥＣＬキット(GE Healthcare, Piscataway, NJ, USA)を用いて検出し、化学発光検出システム(chemiluminescence detection system;GE Healthcare)を用いて可視化した。各サンプルの蛋白質濃度はＢＣＡプロテインアッセイキット(Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA)を用いて測定した。
（結果）
　結果を図４に示す。
　この結果は、ｄｉＤＣＰ－ＬＡ－ＰＥにＡｋｔを活性化する作用があることを示している(AktはThr308とSer473のリン酸化で活性化状態となる)。
試験例３：ＰＫＣ活性化作用
（材料と方法）
セルフリーＰＫＣアッセイ
　無細胞系でのＰＫＣ活性は、既報(Kanno T et al. J Lipid Res 2006;47:1146-1156)に記載された方法によって定量した。要すれば、合成ＰＫＣ基質ペプチド(10μM)を２０ｍＭ　Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ(pH 7.5)，５ｍＭ酢酸マグネシウム，１０μＭ　ＡＴＰ，及びＤＣＰ－ＬＡ－リン脂質を含むメディウム中、ホスファチジルセリン及びジアシルグリセロール非存在下で、３０℃、５分間種々のＰＫＣアイソザイムと反応させた。ＰＫＣ－δや－ε等の新規なＰＫＣに対してはＣａ２＋－ｆｒｅｅのメディウムを用い、それ以外のＰＫＣアイソザイムに対しては１００μＭ　ＣａＣｌ２を含むメディウムを用いた。逆相ＨＰＬＣ(LC-10ATvp, Shimadzu Co., Kyoto, Japan)に負荷し、基質ペプチドのピークと新しい生成物のピークを２１４ｎｍの吸光度で測定した。リン酸化されていないＰＫＣ基質ペプチドとリン酸化されているＰＫＣ基質ペプチドの面積を測定し（総面積は本実施例で用いたＰＫＣ基質ペプチドの濃度に相当する）、リン酸化された基質ペプチドの量を算出した。１分間当たりにリン酸化された基質ペプチドの量(pmol/1 min) をＰＫＣ活性の指標として用いた。
（結果）
　結果を図５及び６に示す。図５は、ｄｉＤＣＰ－ＬＡ－ＰＥが全てのＰＫＣアイソザイムを活性化させることを示している。図６は、ｄｉＤＣＰ－ＬＡ－ＰＥがGLUT4 traffickingの調節に重要と考えられているＰＫＣι及びＰＫＣζの特異的活性剤として働くことを示している。
試験例４：糖輸送担体ＧＬＵＴ４の細胞膜への移行促進作用－１
（材料と方法）
ＧＬＵＴ４トラフィッキングの解析
　３Ｔ３Ｌ１－ＧＬＵＴ４ｍｙｃ脂肪細胞を０．２％（ｗ／ｖ）ウシ血清アルブミンを含有し、１０ｍＭグルコースを添加したKrebs-Ringer-HEPES buffer[136 mM NaCl, 4.7 mM KCl, 1.25 mM CaCl2, 1.25 mM MgSO4及び20 mM HEPES, pH 7.5]中、３７℃で１時間インキュベートした。細胞をインスリン、リン脂質又はその誘導体の存在下又は非存在下で２０分間インキュベートした。次いで、細胞を１％（ｖ／ｖ）プロテアーゼインヒビターカクテルを含む氷冷したミトコンドリアバッファー[210 mM マンニトール, 70 mM シュクロース, 及び1 mMエチレンジアミン四酢酸(EDTA), 10 mM HEPES, pH 7.5]中、ソニケーションによりホモジナイズした。続いて、ホモジネートを４℃で５分間、３，０００ｒｐｍで遠心分離した。上清をさらに４℃で１５分間、１１，０００ｒｐｍで遠心分離した。回収した上清を４℃で６０分間、１００，０００ｇで超遠心分離し、細胞質画分と細胞膜画分に分離した。上清を細胞質画分として、ペレットを細胞膜画分としてそれぞれ用いた。細胞質成分及び細胞膜成分が首尾よく分離できたかどうかは細胞膜成分のマーカーであるＬＤＨに対する抗体と、細胞膜マーカーであるカドヘリンに対する抗体とを用いたウェスタンブロット解析によって確認した。各画分の蛋白質濃度はＢＣＡ蛋白質アッセイキット(Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, USA)を用いて測定した。細胞膜画分の蛋白質を１％（ｗ／ｖ）ドデシル硫酸ナトリウム(SDS)を含有するミトコンドリアバッファーに再懸濁した。各画分の蛋白質をＳＤＳ－ポリアクリルアミドゲル電気泳動(SDS-PAGE)によって分離し、ポリビニリデンジフルオライド膜に転写した。ブロッティング膜は５％（ｗ／ｖ）ＢＳＡを含むＴＢＳ－Ｔ[150 mM NaCl, 0.1% (v/v) Tween20及び20 mM Tris, pH7.5]でブロッキングし、抗ｃ－ｍｙｃ抗体(Merck Millipore, Darmstadt, Germany)と反応させ、その後ホースラディッシュペルオキシダーゼ（HRP）コンジュゲートヤギ抗マウスＩｇＧ抗体と反応させた。免疫反応性は、ＥＣＬキット(Invitrogen)を用いて検出し、化学発光検出システム(chemiluminescence detection system; GE Healthcare, Piscataway, NJ, USA)を用いて可視化した。シグナル密度は画像解析ソフト(Image Gauge software; GE Healthcare)を用いて測定した。
（結果）
　結果を図７～９に示す。図７より、インスリンと同様にｄｉＤＣＰ－ＬＡ－ＰＥがＧＬＵＴ４の細胞膜輸送を促進させる作用があることがわかる。図８よりｄｉＤＣＰ－ＬＡ－ＰＥが濃度依存性にＧＬＵＴ４の細胞膜輸送を促進させることがわかる。図９より自然型ｄｉＤＣＰ－ＬＡ－ＰＩを除いたすべてのリン脂質誘導体にＧＬＵＴ４の細胞膜輸送を促進させる作用があることを示している。
試験例５：インスリン非依存性血糖低下作用
（材料と方法）
グルコース耐性テスト
　Ｃ５７ＢＬ／ＫｓＪ－ｌｅｐｒｄｂ／ｌｅｐｒｄｂマウス（雌性、８週齢）(CLEA Japan; Tokyo, Japan)を用いた。グルコース耐性テストは１２時間飢餓状態のマウスで行なった。グルコース(2 g/ml/kg body weight)を強制経口投与し、その時点を０ｈとした。グルコースを投与する３０分前に、ｄｉＤＣＰ－ＬＡ－ＰＥ(0.01,0.1,1,3mg/kg),インスリン(0.75U/kg)あるいは食塩水を経口投与した。０、３０、６０、及び９０分の時点で尾静脈から血液(10μl)を回収し、得られた血液から調製しｐ－アミノベンジルエチルエステルで標識した、各血漿サンプルを高速液体クロマトグラフィー(HPLC)システム(LC-10ATvp; Shimadzu Co., Kyoto, Japan)に負荷した。グルコース濃度は、標準グルコース溶液を用いて作成されたピーク面積／濃度の検量線から算出した。
（結果）
　結果を図１０に示す。この結果は、ｄｉＤＣＰ－ＬＡ－ＰＥが２型糖尿病モデルマウスに対して用量依存性に血糖値を下げる作用があることを示している。この事実は、インスリンを必要とせずにｄｉＤＣＰ－ＬＡ－ＰＥの経口投与で２型糖尿病治療薬となる可能性を示唆している。
試験例６：ストレプトゾトシンを用いた１型糖尿病モデルマウスに対する効果
（材料と方法）
　Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウス（雄性、８週齢）(Japan SLC Inc.; Shizuoka, Japan)を用いた。ストレプトゾトシン(STZ; 250 mg/kg) を、あるいはコントロールとして生理食塩水を腹腔内に注射した。注射して４日後に、経口グルコース耐性テスト（OGTT）を行なった。
（結果）
　結果を図１１に示す。この結果は、ｄｉＤＣＰ－ＬＡ－ＰＥがＳＴＺ処理マウスの血糖上昇を有意に抑制することを示している。即ち、ｄｉＤＣＰ－ＬＡ－ＰＥが１型糖尿病にも有効であることを示している。
試験例７：糖輸送担体ＧＬＵＴ４の細胞膜への移行促進作用－２
（材料と方法）
　インスリン受容体がノックダウンされた３Ｔ３Ｌ１－ＧＬＵＴ４ｍｙｃ脂肪細胞を用いることと、ｄｉＤＣＰ－ＬＡ－ＥＡとのインキュベーションがインスリン非存在下で行なわれることを除いては試験例４と同様にして実験を行った。
（結果）
　結果を図１２に示す。図１２より、ｄｉＤＣＰ－ＬＡ－ＰＥがインスリン受容体非依存性にＧＬＵＴ４の細胞膜への移行を促進できることがわかる。即ち、ｄｉＤＣＰ－ＬＡ－ＰＥはインスリンがなくても細胞内インスリン受容体シグナルを代行できる（インスリン／インスリン受容体非依存性に血糖値を下げる）ことを示している。当該結果よりｄｉＤＣＰ－ＬＡ－ＰＥがインスリンが治療に必須であるとされる１型糖尿病の治療にも有効であることがわかる。
　本発明により提供される、シクロプロパン環を有する不飽和脂肪酸誘導体を含むリン脂質化合物は、認知機能の改善及び／又は糖尿病の治療に優れた薬理作用（プロテインチロシンホスファターゼ１Ｂ(PTP1B)阻害作用、Ａｋｔ活性化作用、タンパク質リン酸化酵素Ｃ(PKC)活性化作用、PKCι及びPKCζ活性化作用、グルコーストランスポーター４(GLUT4)の細胞膜への移行促進作用及びインスリン非依存性の血糖値低下作用）を有し、従って認知症治療薬や糖尿病治療薬として有用である。またかかる薬理作用に基づいて種々の試薬としても有用である。
　本出願は、日本で出願された特願２０１３－０２７９９２（出願日２０１３年２月１５日）を基礎としておりそれらの内容は本明細書に全て包含されるものである。

Claims (22)

  1. 　シクロプロパン環を有する不飽和脂肪酸を含むリン脂質化合物を有効成分として含有する、医薬。
  2. 　該シクロプロパン環を有する不飽和脂肪酸が、２重結合をシクロプロパン環に変換された不飽和脂肪酸である、請求項１記載の医薬。
  3. 　該シクロプロパン環を有する不飽和脂肪酸が８－［２－（２－ペンチル－シクロプロピルメチル）－シクロプロピル］－オクタン酸（ＤＣＰ－ＬＡ）又は８－（２－オクチルシクロプロピル）オクタン酸（ＤＣＰ－ＯＡ）である、請求項１記載の医薬。
  4. 　リン脂質化合物がホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルセリン、ホスファチジルコリン、又はホスファチジルイノシトールである、請求項１記載の医薬。
  5. 　該リン脂質化合物が、１，２－ｏ－ｂｉｓ－［８－｛２－（２－ペンチル－シクロプロピルメチル）－シクロプロピル｝－オクタノイル］－ｓｎ－グリセロ－３－ホスファチジルエタノールアミン（ｄｉＤＣＰ－ＬＡ－ＰＥ）、
    １，２－ｏ－ｂｉｓ－［８－｛２－（２－ペンチル－シクロプロピルメチル）－シクロプロピル｝－オクタノイル］－ｓｎ－グリセロ－３－ホスファチジル－Ｌ－セリン（ｄｉＤＣＰ－ＬＡ－ＰＳ）、
    １，２－ｏ－ｂｉｓ－［８－｛２－（２－ペンチル－シクロプロピルメチル）－シクロプロピル｝－オクタノイル］－ｓｎ－３－グリセロ－３－ホスファチジルコリン（ｄｉＤＣＰ－ＬＡ－ＰＣ）、
    １，２－ｏ－ｂｉｓ－［８－｛２－（２－ペンチル－シクロプロピルメチル）－シクロプロピル｝－オクタノイル］－ｓｎ－グリセロ－３－ホスファチジル－Ｄ－ｌ－イノシトール（ｄｉＤＣＰ－ＬＡ－ＰＩ）、又は
    １，２－ｏ－ｂｉｓ－［８－｛２－（２－ペンチル－シクロプロピルメチル）－シクロプロピル｝－オクタノイル］－ｓｎ－グリセロ－３－ホスファチジル－Ｌ－ｌ－イノシトール（ｄｉＤＣＰ－ＬＡ－ＰＩ　ｅｎｔ）である、請求項１記載の医薬。
  6. 　糖尿病治療薬である、請求項１～５のいずれか１項に記載の医薬。
  7. 　糖尿病が、１型糖尿病である、請求項６記載の医薬。
  8. 　糖尿病が、２型糖尿病である、請求項６記載の医薬。
  9. 　糖尿病が、１型及び２型糖尿病である、請求項６記載の医薬。
  10. 　認知症治療薬である、請求項１～５のいずれか１項に記載の医薬。
  11. 　認知症が、アルツハイマー型認知症である、請求項１０記載の医薬。
  12. 　抗老化薬である、請求項１～５のいずれか１項に記載の医薬。
  13. 　シクロプロパン環を有する不飽和脂肪酸誘導体を含むリン脂質化合物を有効成分として含有する、試薬。
  14. 　該シクロプロパン環を有する不飽和脂肪酸が、２重結合をシクロプロパン環に変換された不飽和脂肪酸である、請求項１３記載の試薬。
  15. 　該シクロプロパン環を有する不飽和脂肪酸が８－［２－（２－ペンチル－シクロプロピルメチル）－シクロプロピル］－オクタン酸（ＤＣＰ－ＬＡ）又は８－（２－オクチルシクロプロピル）オクタン酸（ＤＣＰ－ＯＡ）である、請求項１３記載の試薬。
  16. 　リン脂質化合物がホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルセリン、ホスファチジルコリン、又はホスファチジルイノシトールである、請求項１３記載の試薬。
  17. 　該リン脂質化合物が、１，２－ｏ－ｂｉｓ－［８－｛２－（２－ペンチル－シクロプロピルメチル）－シクロプロピル｝－オクタノイル］－ｓｎ－グリセロ－３－ホスファチジルエタノールアミン（ｄｉＤＣＰ－ＬＡ－ＰＥ）、
    １，２－ｏ－ｂｉｓ－［８－｛２－（２－ペンチル－シクロプロピルメチル）－シクロプロピル｝－オクタノイル］－ｓｎ－グリセロ－３－ホスファチジル－Ｌ－セリン（ｄｉＤＣＰ－ＬＡ－ＰＳ）、
    １，２－ｏ－ｂｉｓ－［８－｛２－（２－ペンチル－シクロプロピルメチル）－シクロプロピル｝－オクタノイル］－ｓｎ－３－グリセロ－３－ホスファチジルコリン（ｄｉＤＣＰ－ＬＡ－ＰＣ）、
    １，２－ｏ－ｂｉｓ－［８－｛２－（２－ペンチル－シクロプロピルメチル）－シクロプロピル｝－オクタノイル］－ｓｎ－グリセロ－３－ホスファチジル－Ｄ－ｌ－イノシトール（ｄｉＤＣＰ－ＬＡ－ＰＩ）、又は
    １，２－ｏ－ｂｉｓ－［８－｛２－（２－ペンチル－シクロプロピルメチル）－シクロプロピル｝－オクタノイル］－ｓｎ－グリセロ－３－ホスファチジル－Ｌ－ｌ－イノシトール（ｄｉＤＣＰ－ＬＡ－ＰＩ　ｅｎｔ）である、請求項１３記載の試薬。
  18. 　プロテインホスファターゼ１Ｂ阻害剤である、請求項１３～１７のいずれか１項に記載の試薬。
  19. 　Ａｋｔ活性化剤である、請求項１３～１７のいずれか１項に記載の試薬。
  20. 　タンパク質リン酸化酵素Ｃ（ＰＫＣ）活性化剤である、請求項１３～１７のいずれか１項に記載の試薬。
  21. 　ＰＫＣがＰＫＣι及び／又はＰＫＣζである、請求項２０記載の試薬。
  22. 　１，２－ｏ－ｂｉｓ－［８－｛２－（２－ペンチル－シクロプロピルメチル）－シクロプロピル｝－オクタノイル］－ｓｎ－グリセロ－３－ホスファチジルエタノールアミン（ｄｉＤＣＰ－ＬＡ－ＰＥ）、
    １，２－ｏ－ｂｉｓ－［８－｛２－（２－ペンチル－シクロプロピルメチル）－シクロプロピル｝－オクタノイル］－ｓｎ－グリセロ－３－ホスファチジル－Ｌ－セリン（ｄｉＤＣＰ－ＬＡ－ＰＳ）、
    １，２－ｏ－ｂｉｓ－［８－｛２－（２－ペンチル－シクロプロピルメチル）－シクロプロピル｝－オクタノイル］－ｓｎ－３－グリセロ－３－ホスファチジルコリン（ｄｉＤＣＰ－ＬＡ－ＰＣ）、
    １，２－ｏ－ｂｉｓ－［８－｛２－（２－ペンチル－シクロプロピルメチル）－シクロプロピル｝－オクタノイル］－ｓｎ－グリセロ－３－ホスファチジル－Ｄ－ｌ－イノシトール（ｄｉＤＣＰ－ＬＡ－ＰＩ）、及び
    １，２－ｏ－ｂｉｓ－［８－｛２－（２－ペンチル－シクロプロピルメチル）－シクロプロピル｝－オクタノイル］－ｓｎ－グリセロ－３－ホスファチジル－Ｌ－ｌ－イノシトール（ｄｉＤＣＰ－ＬＡ－ＰＩ　ｅｎｔ）からなる群より選択される化合物。
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