WO2015097601A1 - Utilisation cosmetique d'un extrait de gymnema sylvestre - Google Patents

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Definitions

  • the present invention relates to the field of cosmetic treatment of the skin.
  • the skin is a particular organ of the human body. Thin, it is very extensive since it covers the entire surface of the body and totals in adults an area of about 1, 6 m 2 . Its function is to protect the deep tissues of the external environment, both in the physical penetration of foreign bodies, immunity, temperature regulation, loss of fluids, etc. Finally, the constraints mechanical forces to which it is subjected permanently impose a solid and coherent structure associated with great flexibility. Because of the environmental aggressions that the skin undergoes, it is important to maintain its renewal and its repair by stimulating the metabolism of the cells which constitute it.
  • the Applicant has demonstrated the beneficial effect of an extract of Gymnema sylvestre on the metabolism of skin cells; In particular, it has demonstrated that this extract can stimulate mitochondria and increase the cellular energy level, thereby preventing or combating the signs of skin aging, as well as the damage caused by external aggressions, such as cold weather, wind , UV radiation, radiation, or exposure to toxins or pollutants.
  • ATP adenosine triphosphate
  • the terminal phosphate group of ⁇ is hydrolyzed to release energy from the binding and adenosine diphosphate (ADP).
  • ADP adenosine diphosphate
  • ⁇ is constantly hydrolysed and then regenerated.
  • the integrity and functionality of mitochondria are impaired: the neosynthesis of ATP is reduced. It therefore appears important to identify active agents capable of increasing the intracellular level of ATP and boosting the metabolism of skin cells by stimulating the neosynthesis of ATP.
  • Cytochrome C oxidase is present in the different cell types of skin and hair; it is known to be involved in energy metabolism at the level of the mitochondrial respiratory chain or redox chain, which controls the energy level, the metabolism and the homeostasis of the cells.
  • This enzyme is a photoacceptor activated by red light: when photons are absorbed by the redox chain, they transfer their energy to the respiratory system leading, via the electrochemical potential change of the photoactivated cell and the Ca-mediated intracellular signal transduction. 2+ and cAMP, to a cascade of events in the cell (DNA and RNA synthesis, proliferative cell activity) and energy production in the form of ATP.
  • This enzyme has the capacity to catalyze the transfer of electrons to molecular oxygen to transform it into water molecules without forming harmful intermediate free radicals to the cell, according to the following scheme:
  • Cytochrome C one of its substrates, is an essential component of the respiratory chain. Cytochrome C plays a key role in mitochondrial function and cell survival. The main role of cytochrome C is to ensure the transfer of electrons, thanks to the change of valence of the iron atom. Cytochrome C, which is soluble, transports electrons from complex III to complex IV (cytochrome oxidase). The electrons, which are the substrate for cytochrome oxidase, are then transferred by the enzyme to oxygen. Very many elements currently make it possible to affirm that free radicals, by inducing lipid peroxidation reactions, are responsible for a large part of the decrease in the membrane fluidity and the decrease in activity of certain transporters such as cytochrome. oxidase, in the mitochondria of older tissues; the identification of compounds capable of increasing the activity of cytochrome C oxidase would therefore prove useful.
  • the extract of Gymnema sylvestre has a significant effect on the regulation of metabolic and energetic processes in human keratinocytes in culture.
  • the pentose phosphate pathway is a metabolic pathway that produces NADPH, an electron donor favoring cellular respiration (Krebs cycle, respiratory chain), and ribose-5. -phosphate (DNA biosynthesis, RNAs).
  • Gymnema sylvestre Because of its properties, the extract of Gymnema sylvestre appears to be a useful asset to increase the energetic metabolism of the cells of the skin.
  • Gymnema sylvestre is native to the tropical forests of central and southern India and Sri Lanka; this plant is traditionally used in medicinal preparations for various therapeutic uses, particularly for the treatment of diabetes.
  • the present invention thus relates to the cosmetic use of a Gymnema sylvestre extract or a cosmetic composition comprising such an extract for activating the energy-producing metabolic pathways of the skin cells; to increase ATP synthesis; to stimulate the activity of cytochrome C oxidase; to induce the synthesis of ribose-5-phosphate; and so to regulate metabolic and energetic processes in the skin.
  • the extract of Gymnema sylvestre is preferably obtained from the aerial part of the plant, more preferably from the leaves, and may be prepared by any extraction method known to those skilled in the art.
  • the extraction is carried out from fragments of aerial parts of Gymnema sylvestre by the following treatment:
  • solid / liquid extraction in the hydroalcoholic phase for example in a mixture of water and lower C 1 -C 4 alcohol such as ethanol;
  • the extract may then be solubilized on a support acceptable in cosmetics, such as glycerine.
  • the extract Gymnema sylvestre is a hydroalcoholic extract and / or is stabilized with glycerin.
  • the extract of Gymnema sylvestre is formulated in a cosmetic composition which comprises between 0.01 and 10%, preferably between 0.01 and 5%, of Gymnema sylvestre extract by weight of dry matter relative to to the total weight of the composition.
  • This composition may be in any galenical form normally used in the cosmetic and dermatological fields, and it may especially be in the form of an optionally gelled aqueous solution, an optionally biphasic lotion type dispersion, an emulsion obtained by dispersion of a fatty phase in an aqueous phase (O / W) or conversely (W / O), or a triple emulsion (W / O / W or W / O / H) or a vesicular dispersion of the type ionic and / or nonionic.
  • These compositions are prepared according to the usual methods.
  • This composition may be more or less fluid and have the appearance of a white or colored cream, an ointment, a milk, a lotion, a serum, a paste, a mousse . It can optionally be applied to the skin in the form of an aerosol. It can also be in solid form, in particular in the form of a stick. It can be used as a care product and / or as a make-up product for the skin.
  • composition of the invention may also contain the usual adjuvants in the cosmetic field, such as hydrophilic or lipophilic gelling agents, hydrophilic or lipophilic active agents, preservatives, antioxidants, solvents, perfumes, fillers, filters, pigments, odor absorbers and dyestuffs.
  • the amounts of these various adjuvants are those conventionally used in the field under consideration, and for example from 0.01 to 20% of the total weight of the composition.
  • These adjuvants depending on their nature, can be introduced into the fatty phase, into the aqueous phase, into the lipid vesicles and / or into the nanoparticles. In any case, these adjuvants, as well as their proportions, will be chosen so as not to interfere with the desired properties of the Gymnema sylvestre extract according to the invention.
  • the extract of Gymnema sylvestre can be combined with other anti-aging active agents, in particular anti-wrinkle, depigmenting, firming, draining, tensor, anti-radical active ingredients. and / or immunoprotective agents and / or agents stimulating cell metabolism (including protein synthesis) and / or cell proliferation.
  • other anti-aging active agents in particular anti-wrinkle, depigmenting, firming, draining, tensor, anti-radical active ingredients. and / or immunoprotective agents and / or agents stimulating cell metabolism (including protein synthesis) and / or cell proliferation.
  • the extract of Gymnema sylvestre and thus the cosmetic composition according to the invention which contains it, can be used to activate the metabolic pathways of the cells of the skin, in particular those providing cellular energy.
  • skin cells refers to keratinocytes, fibroblasts and melanocytes, preferably keratinocytes and fibroblasts.
  • the use of a Gymnema sylvestre extract is a skin cell invigorating agent and / or stimulating the metabolism of skin cells; this extract and / or the cosmetic composition according to the invention can therefore be used as a skin cells tonifying agent and / or stimulating the metabolism of skin cells.
  • the extract of Gymnema sylvestre and / or the cosmetic composition according to the invention can still be used to allow optimum functioning of the skin cells, to ensure their homeostasis, their renewal and their repair.
  • the extract of Gymnema sylvestre and / or the composition according to the invention are advantageously used to energize, tone, revitalize or detoxify the skin, in particular the stressed and tired skin, by improving the radiance of its complexion and the skin. appearance of its surface; they are also used to prevent and / or repair facial fatigue marks such as dull and / or gray complexion; they are also used to protect skin cells and skin from the environmental factors that attack them, such as climatic factors, such as cold and wind, or pollution.
  • the extract of Gymnema sylvestre and / or the composition according to the invention are also useful for improving the color and / or the radiance of the complexion of the skin; they thus prevent the appearance of a dull skin and / or without radiance.
  • the extract of Gymnema sylvestre and / or the composition according to the invention are still useful for toning the eye contour, energizing tired eyes, reducing puffiness and dark circles and overall restore a relaxed and relaxed look.
  • the extract of Gymnema sylvestre and / or the composition according to the invention can be used in energizing or defatigating care.
  • the foregoing applications preferentially target the skin of the face, that is to say the skin of the face, neck, Vietnameselleté and / or the eye contour but also allow specific cosmetic treatments of the skin of the body.
  • the present invention also relates to a cosmetic treatment method for activating the metabolic pathways supplying energy to the cells of the skin; energizing, toning, revitalizing or detoxifying the skin, toning the eye area, energizing tired eyes, reducing puffiness and dark circles and, overall, regaining a relaxed, relaxed look; comprising the application to the skin of a Gymnema sylvestre extract or a cosmetic composition comprising a Gymnema sylvestre extract as described above.
  • the application to the skin can therefore be carried out according to the dosage form used. It may be, for example a simple application to the skin or an application accompanied by a massage of the skin with the composition of the present invention.
  • the application is preferably carried out with a sufficient amount of the composition so that the entire surface of the skin to be treated is treated. It may be for example a conventional application, such as a cream on the skin. It can also be for example also an application to form a treating mask.
  • test product is an extract of Gymnema sylvestre leaf obtained by the hydroalcoholic extraction process described earlier and then stabilized in glycerin (1.5% of dry extract in a glycerin mixture). 70% water / 30%).
  • the keratinocyte cultures were established from skin of human foreskins harvested during circumcisions and were amplified in KGM2 medium (Keratinocytes Growth Medium, KGM2, clonetics) supplemented with insulin, EGF and pituitary extract. .
  • KGM2 medium Keratinocytes Growth Medium, KGM2, clonetics
  • the tests were carried out on keratinocytes on the 3rd pass.
  • Cells were seeded in multiwell wells at 1x10 5 cells. After 24 hours incubation at 37 ° C (5% CO 2 ), the cells in exponential growth phase, were treated with Gymnema sylvestre extract at concentrations of 0.125% and 0.25%. After 24 hours of treatment, the cells were removed and the ATP assay was performed.
  • the de assay was performed using the PROMOKINE Quantification Kit (Promocell, France). Colorimetric quantification was performed using a spectrophotometer at 570 nm.
  • the keratinocyte cultures were established from skin of human foreskins harvested during circumcisions and were amplified in KGM2 medium (Keratinocytes Growth Medium, KGM2, clonetics) supplemented with insulin, EGF and pituitary extract. . The tests were carried out on keratinocytes on the 3rd pass. Cells were seeded in multiwell boxes at 1x10 6 cells. After 24 hours incubation at 37 ° C. (5% CO 2 ), the cells in the exponential growth phase were treated with Gymnema sylvestre extract at concentrations of 0.125% and 0.25% alone or in presence of 3 ⁇ 4 (3 ⁇ 4.
  • the extract of Gymnema sylvestre has a significant effect on the regulation of metabolic and energetic processes in human keratinocytes in culture.
  • Lot 3 treated with Gymnema sylvestre extract diluted to 0.125% in the culture medium
  • Lot 4 treated with Gymnema sylvestre extract diluted to 0.25% in the culture medium
  • the method used was that of enzymatic digestion for obtaining from a biopsy of human skin primocultures of fibroblasts.
  • the cells obtained were amplified in RPMI 1640 medium supplemented with calf serum, L-glutamine and antibiotics.
  • the tests were carried out on fibroblasts on the 3rd pass.
  • Cells were seeded in multiwell wells at 1x10 5 cells. After 24 hours of incubation at 37 ° C. (5% CO 2 ), the cells in the exponential growth phase were treated with Gymnema sylvestre extract at concentrations of 0.125%) and 0.25%.
  • the cells were removed and the cell pellets were sonicated for 30s in an ice bath and then centrifuged for 5 min at 11000g at 10 ° C. The supernatants were then transferred to new tubes. Residual enzymatic activity was stopped by adding 50 ⁇ l of perchloric acid (2.5%) containing 3 ⁇ / L of IS to the samples which were then stored at -20 ° C for at least 30 min. for deproteinization. Subsequently, 15 ⁇ l of the phosphate buffer (pH 11.5, 1 mol / L) was added to neutralize the solution and the samples were centrifuged for 5 min at 21000 g at 4 ° C.
  • perchloric acid 2.5%) containing 3 ⁇ / L of IS
  • the supernatants were transferred to glass vials which were stored at -20 ° C until injection.
  • a standard range was prepared and consists respectively of 0.625; 1, 25; 2.5; 3.75 and 6.25 ⁇ / L ribose-5-phosphate. The standard range has been treated in the same way as the samples. Quantification of the ribose-5-phosphate level was performed by LC-MS / MS.
  • Gymnema sylvestre extract at concentrations of 0.125% and 0.25% induced a significant increase in ribose-5-phosphate synthesis of 26% and 33%, respectively.
  • the extract of Gymnema sylvestre has a significant effect on the regulation of metabolic and energetic processes at the level of human keratinocytes and fibroblasts in culture.

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Abstract

La présente invention se rapporte à l'utilisation cosmétique d'un extrait de Gymnema sylvestre et de compositions cosmétiques comprenant ledit extrait pour augmenter la synthèse d'ATP; pour stimuler l'activité du cytochrome C oxydase; pour induire la synthèse de ribose-5-phosphate; et ainsi pour réguler les processus métaboliques et énergétiques au niveau de la peau.

Description

Utilisation cosmétique d'un extrait de Gymnema sylvestre
La présente invention se rapporte au domaine du traitement cosmétique de la peau.
La peau est un organe particulier du corps humain. De fine épaisseur, elle est très étendue puisqu'elle recouvre toute la surface du corps et totalise chez l'adulte une surface d'environ 1 ,6 m2. Elle a pour fonction de protéger les tissus profonds du milieu extérieur, tant au niveau de la pénétration physique de corps étrangers, que de l'immunité, de la régulation de la température, de la déperdition de fluides, etc .. Enfin, les contraintes mécaniques auxquelles elle est soumise en permanence lui imposent une structure solide et cohérente associée à une grande souplesse. En raison des agressions environnementales que subit la peau, il est important d'entretenir son renouvellement et sa réparation en stimulant le métabolisme des cellules qui la constituent.
Dans le cadre de ses études sur la régulation des processus métaboliques et énergétiques au niveau des cellules cutanées, la Demanderesse a mis en évidence l'effet bénéfique d'un extrait de Gymnema sylvestre sur le métabolisme des cellules de la peau ; elle a plus particulièrement démontré que cet extrait peut stimuler les mitochondries et augmenter le niveau énergétique cellulaire et permet ainsi de prévenir ou de lutter contre les signes du vieillissement cutané, mais aussi les dommages causés par les agressions extérieures, telles que le froid, le vent, les rayonnements UV, les radiations, ou les expositions à des toxines ou à des polluants.
Ces études ont plus particulièrement montré l'effet d'un extrait de Gymnema sylvestre sur :
- la synthèse d'ATP au niveau des kératinocytes humains en culture : L'énergie dans la cellule est produite à partir de molécules basiques (glucides, protéines, lipides) obtenues pour l'essentiel par l'alimentation. L'oxydation de ces composés au niveau des mitochondries conduit à la libération d'énergie sous la forme d'un composé hautement énergétique, l'adénosine triphosphate (ATP).
Lorsque la cellule a besoin d'énergie, le groupement phosphate terminal de ΓΑΤΡ est hydrolysé pour libérer l'énergie de la liaison et de l'adénosine diphosphate (ADP). En fonction des besoins des cellules, ΓΑΤΡ est constamment hydrolysée, puis régénéré. Toutefois, avec l'âge et les stress oxydants variés que subissent les cellules de la peau, l'intégrité et la fonctionnalité des mitochondries sont altérées : la néosynthèse d'ATP est réduite. Il apparaît donc important d'identifier des actifs capables d'augmenter le taux intracellulaire d'ATP et de booster le métabolisme des cellules de la peau en stimulant la néosynthèse d'ATP.
Les résultats présentés dans la partie expérimentale qui suit montrent qu'un extrait de Gymnema sylvestre induit une augmentation significative de la synthèse d'ATP.
- l'activité du cytochrome C oxydase, complexe IV de la chaîne respiratoire, chez des kératinocytes humains en culture soumis ou non à un stress oxydant :
Le cytochrome C oxydase est présent dans les différents types cellulaires de la peau et du cheveu ; il est connu pour être impliqué dans le métabolisme énergétique au niveau de la chaîne respiratoire mitochondriale ou chaîne redox, qui contrôle le niveau énergétique, le métabolisme et l'homéostasie des cellules. Cette enzyme est un photoaccepteur activé par la lumière rouge : lorsque des photons sont absorbés par la chaîne redox, ils transfèrent leur énergie au système respiratoire conduisant, via le changement de potentiel électrochimique de la cellule photoactivée et la transduction de signaux intracellulaires médiés par le Ca2+ et l'AMPc, à une cascade d'événements dans la cellule (synthèse ADN et ARN, activité proliférative des cellules) et une production d'énergie sous forme d'ATP.
Cette enzyme a la capacité de catalyser le transfert d'électrons à l'oxygène moléculaire pour le transformer en molécules d'eau sans former de radicaux libres intermédiaires néfastes à la cellule, selon le schéma suivant :
4CytC(Fe2+) +02 + 4H+ ^— = ^ CytC (Fe3t) + 2H20
ADP + P0 2" ATP
Schéma de la réaction conduisant à la production d'ATP et de molécules d'eau à partir d'oxygène par le CytoC oxydase
Le cytochrome C, un de ses substrats, est un composant essentiel de la chaîne respiratoire. Le cytochrome C joue un rôle essentiel dans la fonction mitochondriale et dans la survie cellulaire. Le rôle principal du cytochrome C est d'assurer le transfert d'électrons, grâce au changement de valence de l'atome de fer. Le cytochrome C qui est soluble, transporte ainsi les électrons depuis le complexe III jusqu'au complexe IV (cytochrome oxydase). Les électrons, qui sont le substrat du cytochrome oxydase, sont alors transférés par l'enzyme vers l'oxygène. De très nombreux éléments permettent actuellement d'affirmer que les radicaux libres, en induisant des réactions de péroxydation lipidique, sont responsables d'une part importante de la diminution de la fluidité membranaire et de la baisse d'activité de certains transporteurs tels que le cytochrome oxydase, dans les mitochondries de tissus âgés ; l'identification de composés capables d'augmenter l'activité du cytochrome C oxydase s'avérerait donc utile.
Il a été mis en évidence que l'extrait de Gymnema sylvestre stimule l'activité du cytochrome C oxydase des kératinocytes humains ; en complément, l'effet de l'extrait de Gymnema sylvestre a été testé sur des kératinocytes humains préalablement traitées par du péroxyde d'hydrogène (H202) -qui a pour effet d'entraîner une diminution significative de l'activité du cytochrome C oxydase-, il a alors été démontré que l'extrait de Gymnema sylvestre rétablit significativement l'activité du cytochrome C oxydase.
En conclusion, l'extrait de Gymnema sylvestre présente un effet significatif sur la régulation des processus métaboliques et énergétiques au niveau des kératinocytes humains en culture.
- la voie des pentoses chez des fibroblastes humains en culture par le dosage du ribose 5-phosphate :
Les essais de la Demanderesse ont également mis en évidence que l'extrait de Gymnema sylvestre présente un effet sur la régulation des processus métaboliques et énergétiques au niveau des kératinocytes et des fibroblastes humains en culture en induisant une augmentation significative de la synthèse du ribose-5-phosphate.
Parallèlement à la glycolyse qui intervient dans la production d'ATP, la voie des pentoses phosphates est une voie métabolique qui produit du NADPH, donneur d'électrons favorisant notamment la respiration cellulaire (cycle de Krebs, chaîne respiratoire), et du ribose-5-phosphate (biosynthèses ADN, ARNs).
De par ses propriétés, l'extrait de Gymnema sylvestre apparaît donc être un actif utile pour augmenter le métabolisme énergétique des cellules de la peau.
Gymnema sylvestre est une plante native des forets tropicales du centre et du sud de l'Inde et du Sri Lanka ; cette plante est traditionnellement utilisée dans des préparations médicinales pour diverses utilisations thérapeutiques, en particulier pour le traitement du diabète.
Il est connu d'utiliser des extraits de Gymnema sylvestre dans des compositions destinées à être appliquées sur la peau, notamment en raison du caractère colorant de ce composé ou encore pour ses propriétés inhibitrices de la pousse du poil (WO 2005/067953).
Toutefois, à la connaissance de la Demanderesse, il n'a encore jamais été suggéré qu'un extrait de Gymnema sylvestre pouvait avoir les propriétés précitées et s'avérer utile comme agent activateur des voies métaboliques qui fournissent de l'énergie aux cellules de la peau.
La présente invention se rapporte ainsi à l'utilisation cosmétique d'un extrait de Gymnema sylvestre ou d'une composition cosmétique comprenant un tel extrait pour activer les voies métaboliques productrices d'énergie des cellules de la peau ; pour augmenter la synthèse d'ATP ; pour stimuler l'activité du cytochrome C oxydase ; pour induire la synthèse de ribose-5 -phosphate ; et ainsi pour réguler les processus métaboliques et énergétiques au niveau de la peau.
L'extrait de Gymnema sylvestre est de préférence obtenu à partir de la partie aérienne de la plante, encore préférentiellement à partir des feuilles, et peut être préparé par tout procédé d'extraction connu de l'homme du métier.
Selon un mode de réalisation particulier, l'extraction est réalisée à partir de fragments de parties aériennes de Gymnema sylvestre par le traitement suivant :
- séchage puis broyage ;
- extraction solide/liquide en phase hydroalcoolique, par exemple dans un mélange d'eau et d'alcool inférieur en Ci à C4 tel que l'éthanol ;
- filtration grossièrement ;
- décoloration sur du charbon actif ;
- filtration sur plaque avec un seuil de coupure de 1 μιη ;
- concentration.
Pour faciliter son usage ultérieur, l'extrait peut ensuite être solubilisé sur un support acceptable en cosmétique, tel que la glycérine.
On obtient ainsi un extrait liquide limpide et ambré.
De façon avantageuse, l'extrait de Gymnema sylvestre est un extrait hydroalcoolique et/ou est stabilisé par de la glycérine.
Pour son utilisation cosmétique, l'extrait de Gymnema sylvestre est formulé dans une composition cosmétique qui comprend entre 0,01 et 10%, de préférence entre 0,01 et 5%, d'extrait de Gymnema sylvestre en poids de matière sèche par rapport au poids total de la composition. Cette composition peut se présenter sous toutes les formes galéniques normalement utilisées dans les domaines cosmétique et dermatologique, et elle peut être notamment sous forme d'une solution aqueuse éventuellement gélifiée, d'une dispersion du type lotion éventuellement biphasée, d'une émulsion obtenue par dispersion d'une phase grasse dans une phase aqueuse (H/E) ou inversement (E/H), ou d'une émulsion triple (E/H/E ou H/E/H) ou d'une dispersion vésiculaire de type ionique et/ou non ionique. Ces compositions sont préparées selon les méthodes usuelles.
Cette composition peut être plus ou moins fluide et avoir l'aspect d'une crème blanche ou colorée, d'une pommade, d'un lait, d'une lotion, d'un sérum, d'une pâte, d'une mousse. Elle peut éventuellement être appliquée sur la peau sous forme d'aérosol. Elle peut également se présenter sous forme solide, en particulier sous forme de stick. Elle peut être utilisée comme produit de soin et/ou comme produit de maquillage pour la peau.
La composition de l'invention peut contenir également les adjuvants habituels dans le domaine cosmétique, tels que les gélifiants hydrophiles ou lipophiles, les actifs hydrophiles ou lipophiles, les conservateurs, les antioxydants, les solvants, les parfums, les charges, les filtres, les pigments, les absorbeurs d'odeur et les matières colorantes. Les quantités de ces différents adjuvants sont celles classiquement utilisées dans le domaine considéré, et par exemple de 0,01 à 20% du poids total de la composition. Ces adjuvants, selon leur nature, peuvent être introduits dans la phase grasse, dans la phase aqueuse, dans les vésicules lipidiques et/ou dans les nanoparticules. En tout état de cause, ces adjuvants, ainsi que leurs proportions, seront choisis de manière à ne pas nuire aux propriétés recherchées de l'extrait de Gymnema sylvestre selon l'invention.
En fonction de la destination de la composition selon l'invention, l'extrait de Gymnema sylvestre peut être associé à d'autres actifs anti-âge, en particulier des actifs anti-rides, dépigmentants, raffermissants, drainants, tenseurs, anti-radicalaires et/ou immunoprotecteurs et/ou à des agents stimulant le métabolisme cellulaire (notamment la synthèse des protéines) et/ou la prolifération cellulaire.
La Demanderesse a démontré que l'extrait de Gymnema sylvestre, et ainsi la composition cosmétique selon l'invention qui le contient, peuvent être utilisés pour activer les voies métaboliques des cellules de la peau, en particulier celles fournissant de l'énergie cellulaire. On entend par cellules de la peau les kératinocytes, les fibroblastes et les mélanocytes, de préférence, il s'agit des kératinocytes et des fibroblastes. En conséquence, l'utilisation d'un extrait de Gymnema sylvestre est un agent tonifiant des cellules de la peau et/ou stimulant du métabolisme des cellules de la peau ; cet extrait et/ou la composition cosmétique selon l'invention peuvent donc être utilisés comme agent tonifiant des cellules de la peau et/ou stimulant du métabolisme des cellules de la peau.
L'extrait de Gymnema sylvestre et/ou la composition cosmétique selon l'invention peuvent encore être utilisés pour permettre un fonctionnement optimal des cellules de la peau, assurer leur homéostasie, leur renouvellement et leur réparation.
Ainsi, l'extrait de Gymnema sylvestre et/ou la composition selon l'invention sont avantageusement utilisés pour énergiser, tonifier, revitaliser ou encore détoxifïer la peau, en particulier la peau stressée et fatiguée, en améliorant l'éclat de son teint et l'aspect de sa surface ; ils sont également utilisés pour prévenir et/ou réparer les marques de fatigue du visage telles que le teint terne et/ou grisé ; ils sont aussi utilisés pour protéger les cellules cutanées et la peau des facteurs environnementaux qui les agressent, tels que les facteurs climatiques, comme, le froid et le vent, ou encore la pollution.
L'extrait de Gymnema sylvestre et/ou la composition selon l'invention sont également utiles pour améliorer la couleur et/ou l'éclat du teint de la peau ; ils préviennent ainsi l'apparition d'une peau terne et/ou sans éclat.
L'extrait de Gymnema sylvestre et/ou la composition selon l'invention sont encore utiles pour tonifier le contour des yeux, énergiser les yeux fatigués, réduire les poches et les cernes et globalement restaurer un regard détendu et reposé.
L'extrait de Gymnema sylvestre et/ou la composition selon l'invention peuvent être utilisés dans des soins énergisants ou défatiguants.
Les applications qui précèdent visent préférentiellement la peau du visage, c'est-à-dire la peau de la face, du cou, du décolleté et/ou du contour des yeux mais permettent également des traitements cosmétiques spécifiques de la peau du corps.
La présente invention a également pour objet un procédé de traitement cosmétique pour activer les voies métaboliques apportant de l'énergie aux cellules de la peau ; énergiser, tonifier, revitaliser ou encore détoxifïer la peau, et tonifier le contour des yeux, énergiser les yeux fatigués, réduire les poches et les cernes et globalement retrouver un regard détendu et reposé ; comprenant l'application sur la peau d'un extrait de Gymnema sylvestre ou d'une composition cosmétique comprenant un extrait de Gymnema sylvestre tels que décrits plus haut. L'application sur la peau peut donc être réalisée en fonction de la forme galénique utilisée. Il peut s'agir, par exemple d'une simple application sur la peau ou d'une application accompagnée d'un massage de la peau avec la composition de la présente invention.
L'application est de préférence réalisée avec une quantité suffisante de la composition afin que toute la surface de la peau à traiter soit traitée. Il peut s'agir par exemple d'une application classique, comme une crème sur la peau. Il peut aussi s'agir par exemple aussi d'une application pour former un masque traitant.
Les exemples ci-après concernent, d'une part l'évaluation des effets biologiques d'un extrait de Gymnema sylvestre et d'autre part des compositions objets de la présente invention.
Les exemples font référence aux figures suivantes dans lesquelles les histogrammes des Figures 1, 2A, 2B et 3 représentent, respectivement, la teneur en ATP, l'activité de la cytochrome C oxydase sans et avec H202 et la teneur en ribose-5-phosphate dans une culture cellulaire témoin non traitée ou traitée avec 0,125% ou 0,25% d'extrait de feuille de Gymnema sylvestre.
Dans l'ensemble des exemples qui suivent, le produit testé est un extrait de feuille de Gymnema sylvestre obtenu par le procédé d'extraction hydroalcoolique décrit plus tôt puis stabilisé dans de la glycérine (1,5% d'extrait sec dans un mélange glycérine / eau à 70% / 30%).
EXEMPLE 1 - Etude des effets d'un extrait selon l'invention sur la synthèse d'ATP au niveau des kératinocytes humains en culture
1.1. Matériel et méthode
Constitution des lots :
Lot 1 : témoin non traité
Lot 2 : traité par l'extrait de Gymnema sylvestre dilué à 0,125% dans le milieu de culture Lot 3 : traité par l'extrait de Gymnema sylvestre dilué à 0,25%> dans le milieu de culture Culture cellulaire :
Les cultures de kératinocytes ont été établies à partir de peau de prépuces humains récoltés lors de circoncisions et ont été amplifiées dans du milieu KGM2 (Kératinocytes Growth Médium, KGM2, clonetics) supplémenté par l'insuline, l'EGF et de l'extrait pituitaire. Les essais ont été réalisés sur des kératinocytes au 3eme passage. Les cellules ont été ensemencées dans des boîtes multipuits à raison de lxl05cellules. Après 24 heures d'incubation à 37°C (5% de C02), les cellules en phase exponentielle de croissance, ont été traitées par l'extrait de Gymnema sylvestre aux concentrations de 0,125% et 0,25%. Après 24 heures de traitement, les cellules ont été prélevées et le dosage de Γ ATP a été réalisé.
Dosage d'ATP :
Le dosage de ΓΑΤΡ a été réalisé à l'aide du kit de quantification PROMOKINE (Promocell, France). La quantification colorimétrique a été effectuée à l'aide d'un spectrophotomètre à 570 nm.
1.2. Résultats
Figure imgf000009_0001
Tableau I
Les résultats obtenus montrent que l'extrait de Gymnema sylvestre aux concentrations 0,125% et 0,25%o a induit une augmentation significative de la synthèse d'ATP de 19% et 22%) respectivement.
EXEMPLE 2 - Etude des effets d'un extrait selon l'invention sur l'activité du cytochrome C oxydase, complexe IV de la chaîne respiratoire au niveau des kératinocytes humains en culture soumis ou non à un stress oxydant
2.1. Matériels et Méthodes
Constitution des lots
Lot 1 : témoin non traité
Lot 2 : traité par l'extrait de Gymnema sylvestre dilué à 0,125% dans le milieu de culture Lot 3 : traité par l'extrait de Gymnema sylvestre dilué à 0,25% dans le milieu de culture Lot 4 : traité par H202
Lot 5 : traité par l'extrait de Gymnema sylvestre dilué à 0,125% dans le milieu de culture + H202
Lot 6 : traité par l'extrait de Gymnema sylvestre dilué à 0,25% dans le milieu de culture + ¾02 Culture cellulaire
Les cultures de kératinocytes ont été établies à partir de peau de prépuces humains récoltés lors de circoncisions et ont été amplifiées dans du milieu KGM2 (Kératinocytes Growth Médium, KGM2, clonetics) supplémenté par l'insuline, l'EGF et de l'extrait pituitaire. Les essais ont été réalisés sur des kératinocytes au 3eme passage. Les cellules ont été ensemencées dans des boîtes multipuits à raison de lxl06cellules. Après 24 heures d'incubation à 37°C (5% de C02), les cellules en phase exponentielle de croissance, ont été traitées par l'extrait de Gymnema sylvestre aux concentrations de 0,125% et de 0,25% seul ou en présence de ¾(¾.
Evaluation de l'activité du cytochrome C oxydase
Après 24 heures de traitement, les cellules ont été prélevées puis lavées et remises en suspension dans du PBS froid. L'évaluation de l'activité du cytochrome C oxydase a été ensuite réalisée à l'aide du kit d'analyse (Cytochrome C Oxydase Assay Kit - Sigma) selon le protocole indiqué.
2.2. Résultats
Figure imgf000010_0001
Tableau II
Les résultats obtenus ont révélé que l'extrait de Gymnema sylvestre aux concentrations 0,125% et 0,25%) a stimulé l'activité du cytochrome C oxydase des kératinocytes humains en culture respectivement de 17% et 23% en comparaison avec le témoin négatif.
Le traitement des cellules par le péroxyde d'hydrogène seul (H202) a entraîné une diminution significative de l'activité du cytochrome C oxydase (-34%). En présence de H202, l'extrait de Gymnema sylvestre aux concentrations 0,125% et 0,25% a rétabli l'activité du cytochrome C oxydase (+13% et +16%).
En conclusion, l'extrait de Gymnema sylvestre présente un effet significatif sur la régulation des processus métaboliques et énergétiques au niveau des kératinocytes humains en culture.
EXEMPLE 3 - Etude des effets de l'extrait selon l'invention sur la voie des pentoses au niveau des fibroblastes humains en culture par le dosage du ribose 5-phosphate 3.1. Matériels et Méthodes
Constitution des lots
Lot 1 : témoin non traité
Lot 3 : traité par l'extrait de Gymnema sylvestre dilué à 0,125% dans le milieu de culture Lot 4 : traité par l'extrait de Gymnema sylvestre dilué à 0,25% dans le milieu de culture
Culture cellulaire
La méthode utilisée a été celle de la digestion enzymatique permettant d'obtenir à partir d'une biopsie de peau humaine des primocultures de fibroblastes. Les cellules obtenues ont été amplifiées dans un milieu RPMI 1640 supplémenté par du sérum de veau, de la L- glutamine et des antibiotiques. Les essais ont été réalisés sur des fibroblastes au 3eme passage. Les cellules ont été ensemencées dans des boîtes multipuits à raison de lxl05cellules. Après 24 heures d'incubation à 37°C (5% de C02), les cellules en phase exponentielle de croissance, ont été traitées par l'extrait de Gymnema sylvestre aux concentrations de 0,125%) et de 0,25%.
Dosage du ribose-5 -phosphate
Après 24 heures de traitement, les cellules ont été prélevées et les culots cellulaires ont été soniqués pendant 30s dans un bain glacé puis centrifugé pendant 5 min à 11000g à 10°C. Les surnageants ont été ensuite transférés dans de nouveaux tubes. L'activité enzymatique résiduelle a été stoppée en ajoutant 50 μΐ d'acide perchlorique (2,5%) contenant 3 μιτιοΙ/L d'IS aux échantillons qui ont été ensuite conservés à -20°C pendant au moins 30 min. pour la déprotéinisation. Par la suite, 15μ1 du tampon phosphate (pH 11,5 ; 1 mol/L) a été ajouté pour neutraliser la solution et les échantillons ont été centrifugés pendant 5 min à 21000 g à 4°C. Les surnageants ont été transférés dans des flacons en verre qui ont été stockés à - 20°C jusqu'à l'injection. Une gamme étalon a été préparée et consiste respectivement à 0,625 ; 1 ,25 ; 2,5 ; 3,75 et 6,25 μηιοΙ/L du ribose-5-phosphate. La gamme étalon a été traitée de la même manière que les échantillons. La quantification du taux du ribose-5- phosphate a été réalisé par LC-MS/MS.
3.2. Résultats
Figure imgf000012_0001
Tableau III
Les résultats obtenus montrent que l'extrait de Gymnema sylvestre aux concentrations 0,125% et 0,25% a induit une augmentation significative de la synthèse du ribose-5 -phosphate de 26% et 33% respectivement.
En conclusion, l'extrait de Gymnema sylvestre présente un effet significatif sur la régulation des processus métaboliques et énergétiques au niveau des kératinocytes et des fibroblastes humains en culture.
EXEMPLE 4 - COMPOSITIONS
SERUM %
CARBOMER 0,60
CELLULOSE GUM 0,20 PENTYLENE GLYCOL 2,00
TROMETHAMINE 0,52
GLYCERIN & AQUA & PEG-8 & CAPRYLYL GLYCOL &
SODIUM POLYACRYLATE. 5,00
AQUA & GLYCERIN & GLYCERYL ACRYLATE/ACRYLIC ACID &
COPOLYMER. 10,00
GYMNEMA SYLVESTRIS 3,00
CONSERVATEURS QS
CHELATANT QS
PARFUM QS EAU DEMINERALISEE QSP 100 CREME HYDRATANTE % CETEARYL ALCOHOL & SODIUM LAURYL SULFATE &
SODIUM CETEARYL SULFATE 1,70
HYDROGENATED POLYISOBUTENE. 7,00 ISONONYL ISONONANOATE 5,00
GLYCERYL STEARATE SE 5,60
C12-15 ALKYL BENZOATE. 3,50
PEG-20 METHYL GLUCOSE & SESQUISTEARATE 0,50
GLYCERIN 3,00 CARBOMER. 0,25
SILICA 0,15
MICA 0,10
TALC 0,50
GLYCERIN & AQUA & PEG-8 & CAPRYLYL GLYCOL &
SODIUM POLYACRYLATE 5,00
DIMETHICONE & DIMETHICONOL 0,15
TOCOPHERYL ACETATE 0,20
GYMNEMA SYLVESTRIS 1 ,00
CONSERVATEURS QS CHELATANT QS
PARFUM QS
EAU DEMINERALISEE QSP 100
GEL HYDRATANT % TAPIOCA STARCH 1 ,00
AMMONIUM & ACRYLOYLDIMETHYLTAURATE/VP &
COPOLYMER. 1,00
GLYCOLS 5,00
ETHYLHEXYLGLYCERIN 0,20 AQUA & GLYCERIN & GLYCERYL ACRYLATE/ACRYLIC ACID &
COPOLYMER 5,00
CAPRYLIC/CAPRIC TRIGLYCERIDE 1,50
CYCLOMETHICONE 5,00 PHENYL TRIMETHICONE 1,00
CYCLOPENTASILOXANE & PEG/PPG-18/18 DIMETHICONE 1,00
TOCOPHERYL ACETATE 0,20
GYMNEMA SYLVESTRIS 1 ,00 TETRASODIUM EDTA 0,05
CONSERVATEURS QS
PARFUM QS
EAU DEMINERALISEE QSP 100

Claims

REVENDICATIONS
1) Utilisation cosmétique d'un extrait de Gymnema sylvestre ou d'une composition cosmétique comprenant un tel extrait pour activer les voies métaboliques productrices d'énergie des cellules de la peau.
2) Utilisation cosmétique d'un extrait de Gymnema sylvestre ou d'une composition cosmétique comprenant un tel extrait selon la revendication 1 , dans laquelle l'extrait de Gymnema sylvestre est un extrait de feuilles.
3) Utilisation cosmétique d'un extrait de Gymnema sylvestre ou d'une composition cosmétique comprenant un tel extrait selon la revendication 1 ou 2, dans laquelle l'extrait de Gymnema sylvestre est un extrait hydroalcoolique.
4) Utilisation cosmétique d'un extrait de Gymnema sylvestre ou d'une composition cosmétique comprenant un tel extrait selon la revendication 3, dans laquelle l'extrait de Gymnema sylvestre est stabilisé par de la glycérine.
5) Utilisation cosmétique d'un extrait de Gymnema sylvestre ou d'une composition cosmétique comprenant un tel extrait selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce que ladite composition cosmétique comprend de 0,01 à 10% d'extrait de Gymnema sylvestre en poids de matière sèche par rapport au poids total de la composition.
6) Utilisation cosmétique d'un extrait de Gymnema sylvestre ou d'une composition cosmétique comprenant un tel extrait selon la revendication 5, dans laquelle ladite composition comprend en outre un ou plusieurs agents de formulation ou additifs tels que des adoucissants, des colorants, des agents filmogènes, des tensio-actifs, des parfums, des conservateurs, des émulsionnants, des huiles, des glycols, filtres UV, et des vitamines.
7) Utilisation cosmétique d'un extrait de Gymnema sylvestre ou d'une composition cosmétique comprenant un tel extrait selon l'une quelconque des revendications précédentes pour augmenter la synthèse d'ATP.
8) Utilisation cosmétique d'un extrait de Gymnema sylvestre ou d'une composition cosmétique comprenant un tel extrait selon l'une quelconque des revendications 1 à 6 pour stimuler l'activité du cytochrome C oxydase.
9) Utilisation cosmétique d'un extrait de Gymnema sylvestre ou d'une composition cosmétique comprenant un tel extrait selon l'une quelconque des revendications 1 à 6 pour induire la synthèse de ribose-5-phosphate. 10) Utilisation cosmétique d'un extrait de Gymnema sylvestre ou d'une composition cosmétique comprenant un tel extrait selon l'une quelconque des revendications précédentes pour tonifier des cellules de la peau et/ou stimuler du métabolisme des cellules de la peau.
1 1) Utilisation cosmétique d'un extrait de Gymnema sylvestre ou d'une composition cosmétique comprenant un tel extrait selon l'une quelconque des revendications précédentes pour permettre un fonctionnement optimal des cellules de la peau, assurer leur homéostasie, leur renouvellement et leur réparation.
12) Utilisation cosmétique d'un extrait de Gymnema sylvestre ou d'une composition cosmétique comprenant un tel extrait selon l'une quelconque des revendications précédentes pour énergiser, tonifier, revitaliser ou détoxifier la peau, en particulier la peau stressée et fatiguée ; améliorer la couleur et/ou l'éclat du teint de la peau ; prévenir l'apparition d'une peau terne et/ou sans éclat ; prévenir et/ou réparer les marques de fatigue du visage telles que le teint terne et/ou grisé ; protéger les cellules cutanées et la peau des facteurs environnementaux qui les agressent tels que le froid, le vent, la pollution.
13) Utilisation cosmétique d'un extrait de Gymnema sylvestre ou d'une composition cosmétique comprenant un tel extrait selon l'une quelconque des revendications précédentes pour tonifier le contour des yeux, énergiser les yeux fatigués, réduire les poches et les cernes et/ou retrouver un regard détendu et reposé.
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