WO2020096029A1 - 自動分析装置での免疫測定における異常検出抑制方法、及び免疫測定試薬 - Google Patents

自動分析装置での免疫測定における異常検出抑制方法、及び免疫測定試薬 Download PDF

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忠晃 吉田
千尋 水庭
北原　慎一郎
弘至 高橋
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    • G01N2021/7769—Measurement method of reaction-produced change in sensor
    • G01N2021/7783—Transmission, loss

Definitions

  • the present invention in an immunoassay using an automatic analyzer, suppresses anomaly detection that occurs when optically detecting a turbidity change due to an immune reaction, improves the measurement reproducibility, and immunity used in the method.
  • measurement reagents More specifically, the present invention relates to a method for suppressing the above-mentioned abnormality detection and improving measurement reproducibility in latex immunoaggregation measurement using an automatic analyzer, and an immunoassay reagent used for the method.
  • the concentration of the substance to be measured contained in the sample is measured, and the measured value is used for early detection of disease and judgment of therapeutic effect.
  • automatic analyzers have been widely used for accurately performing a large number of samples in a short time.
  • a method of measuring the concentration of a measurement target substance with an automatic analyzer there is a method of mixing a sample and a reagent for automatic analysis and optically detecting the concentration-dependent change of the measurement target substance per unit time. Widely used. Transmitted light, scattered light and the like are generally used for the optical detection method.
  • reagents for automatic analysis include reagents based on the latex immunoaggregation method (latex immunoaggregation turbidimetric method: hereinafter referred to as LTIA method).
  • LTIA method for example, immunoassay particles to which an antibody against a measurement target substance is bound (hereinafter, also referred to as antibody-bound immunoassay particles) are used, and an antigen that is a measurement target substance and an antibody of the antibody-bound immunoassay particle Are bound by an antigen-antibody reaction, and the turbidity change caused by aggregation of antibody-bound immunoassay particles is measured by optical means (eg, nephelometry measuring transmitted light, nephelometry measuring scattered light, etc.) Is a measuring method to be detected by.
  • optical means eg, nephelometry measuring transmitted light, nephelometry measuring scattered light, etc.
  • reaction cuvette Most of the automatic analyzers that are currently in use are made by mixing a sample and a reagent in a transparent plastic or glass container called a reaction cuvette that is irradiated with light, and transmit the light such as transmitted light or scattered light at regular intervals. The change of interest is detected.
  • This reaction cuvette includes a disposable (disposable) type that is discarded after each measurement and a type that is washed and reused after the measurement.
  • there is a causative factor of abnormality detection that interferes with optical detection and reduces measurement accuracy and measurement reproducibility. Specifically, for example, bubbles and dirt adsorbed in the reaction cuvette, defective mixing of reagents (nonuniform solution), and the like can be mentioned.
  • abnormality detection means, for example, when a simultaneous reproducibility test in which a sample is continuously measured is performed, a value clearly different from other measured values is shown, or due to its influence. , CV value (coefficient of variation) in the simultaneous reproducibility test exceeds 10%.
  • accuracy a ratio between the known concentration and the actual measured value is out of the range of 80 to 120%, Or, when it is more seriously affected, the accuracy of the measured value may deviate from 50 to 150%.
  • Patent Document 1 As a method for suppressing the generation of bubbles adsorbed in a disposable type reaction cuvette, an immunoassay reagent containing a surfactant has been reported as disclosed in Patent Document 1, for example.
  • This document discloses a method of suppressing the adsorption of bubbles on the side surface of a dried cuvette by performing reaction and / or measurement in the presence of a polyoxyethylene type nonionic surfactant.
  • a surfactant when a surfactant is present in the immunoassay system, depending on the type, it may inhibit the antigen-antibody reaction itself or may dissociate the aggregate formed by the antigen-antibody reaction again. It cannot be denied that even if a different surfactant is selected, the measurement sensitivity may be reduced.
  • the structural change of the substance to be measured itself caused by a surfactant the formation of a complex with the substance to be measured, non-specific adsorption to antibody-bound latex particles, the antibody or blocking protein bound to the latex particles.
  • interference with the measurement system such as peeling, occurs in combination.
  • a reaction cuvette cleaning liquid containing a specific organic solvent is provided as in Patent Document 3.
  • Patent Document 5 inclusion of PEG increases the rate of change in the intensity of transmitted light or scattered light (acceleration of aggregation), enhances the signal, and enables highly sensitive and accurate quantification, and the average of polyethylene glycol. It is noted that the effect increases as the molecular weight increases.
  • Patent Document 5 in the case of average molecular weights of 1540 (PEG1540) and 4000 (PEG4000), the effect is not so different from the control without addition, and the effect is obtained when PEG having an average molecular weight of 6000 or more is used. , And all other examples are measured with PEG6000.
  • Patent Document 6 also describes that PEG6000 having an average molecular weight of 6000 is widely used for promoting the agglutination reaction in immunoaggregation reaction and for highly sensitive measurement. That is, the use of PEG in the immuno-aggregation method is limited to the purpose of increasing the sensitivity by containing a PEG having a relatively high molecular weight to enable highly sensitive and highly accurate quantification. ..
  • Patent Documents 5 and 6 since the average molecular weight of PEG disclosed in Patent Documents 5 and 6 is 6000, which is a relatively high molecular weight, the sensitivity-enhancing effect appears strongly, which may affect the measured value. Further, the measurement methods of Patent Documents 5 and 6 are manual methods, and there is no mention of problems such as suppression of abnormality detection and improvement of reproducibility in the measurement of the automatic analyzer.
  • the present invention in an immunoassay using an automatic analyzer, regardless of whether the reaction cuvette used is a disposable type or a reusable type, the optical detection method is transmitted light,
  • An object of the present invention is to provide a method for suppressing the occurrence of an abnormal detection value in the measurement regardless of whether it is scattered light and performing measurement with good reproducibility, and an immunoassay reagent used therefor.
  • polyethylene glycols (hereinafter, polyethylene glycols are PEG, polyethylene glycols are PEGs) having a specific average molecular weight (defined as a weight average molecular weight will be described later) in the immunoassay reagent. It has been found that the inclusion of () may suppress abnormal detection and improve measurement reproducibility without causing a change in measurement sensitivity.
  • the present invention relates to the following (1) to (17).
  • (1) A method for suppressing generation of abnormal detection values and improving measurement reproducibility in a method of optically detecting a reaction between a substance to be measured in a sample and an immunoassay reagent, the immunoassay reagent being a weight.
  • the above method which comprises polyethylene glycols having an average molecular weight of 300 to 3,000.
  • (2) The method according to (1), wherein the polyethylene glycols are at least one selected from the group consisting of polyethylene glycol, polypropylene glycol, polybutylene glycol, polyoxyethylene polyoxypropylene glycol, and polyglycerin.
  • polyethylene glycol is at least one selected from the group consisting of polyethylene glycol, polypropylene glycol, polybutylene glycol, polyoxyethylene polyoxypropylene glycol, and polyglycerin.
  • concentration of the polyethylene glycols in the reaction system is 0.05 to 0.5%.
  • polyethylene glycol is polyethylene glycol.
  • immunoassay reagent is a latex immunoaggregation assay reagent.
  • the immunoassay reagent used for the method of optically detecting with an automatic analyzer which comprises polyethylene glycols having a weight average molecular weight of 300 to 3000.
  • the immunoassay reagent comprises a first reagent containing a buffer solution and a second reagent containing a latex, and one or both of which contains polyethylene glycols having a weight average molecular weight of 300 to 3,000. The immunoassay reagent described.
  • the above detection methods (1) to (10) can be expressed in other words as follows.
  • (18) A method for suppressing generation of abnormal detection values and improving measurement reproducibility in a method of optically detecting a reaction between a substance to be measured in a sample and an immunoassay reagent, the method having a weight average molecular weight of 300 to 3,000. 6.
  • the method which comprises the step of bringing the substance to be measured in the sample into contact with the immunoassay reagent in the presence of polyethylene glycols.
  • the polyethylene glycol is at least one selected from the group consisting of polyethylene glycol, polypropylene glycol, polybutylene glycol, polyoxyethylene polyoxypropylene glycol, and polyglycerin.
  • polyethylene glycol is at least one selected from the group consisting of polyethylene glycol, polypropylene glycol, polybutylene glycol, polyoxyethylene polyoxypropylene glycol, and polyglycerin.
  • concentration of the polyethylene glycols in the reaction system is 0.05 to 0.5%.
  • the polyethylene glycol is polyethylene glycol.
  • the immunoassay reagent is a latex immunoaggregation assay reagent.
  • the immunoassay reagent (reagent solution) of the present invention is characterized by containing PEGs having a specific weight average molecular weight, which will be described later, in addition to the main component of the reaction.
  • PEGs having a specific weight average molecular weight, which will be described later
  • acetic acid, citric acid, phosphoric acid, tris, glycine, boric acid, carbonic acid, and Good's buffer are used as components for buffering and adjusting the pH, ionic strength, osmotic pressure, etc. of the sample.
  • Their sodium salts, potassium salts, calcium salts and the like may be included.
  • a polymer such as polyvinylpyrrolidone or a phospholipid polymer may be included as a component that enhances aggregation formation.
  • a component for controlling the formation of aggregates one or a combination of commonly used components such as proteins, amino acids, saccharides, metal salts, surfactants, reducing substances and chaotropic substances may be contained. ..
  • the present invention is a method for optically detecting the reaction between a substance to be measured in a sample and the above immunoassay reagent, or a method for suppressing the occurrence of abnormal detection values and improving the measurement reproducibility in the detection method. In other words, in other words, it can be said that these methods include a step of bringing the substance to be measured in the sample into contact with the immunoassay reagent in the presence of PEGs having a specific weight average molecular weight.
  • particles for immunoassay As the particles for immunoassay used in the present invention, known particles can be used as long as they can carry a binding partner specific to a desired target component.
  • latex particles using a polymer material such as polystyrene can be used, but depending on the method of supporting a specific binding partner for the substance to be measured, metal colloid, silica, inorganic particles such as carbon, It can be used as the particle for immunoassay of the present invention.
  • the size of the particles for immunoassay should be determined in consideration of the optical measurement method used (eg, nephelometry for measuring transmitted light, nephelometry for measuring scattered light, etc.) to obtain the desired measurement sensitivity and measurement range.
  • the average particle size of 0.1 to 0.4 ⁇ m is generally used for optical measurement in an automatic analyzer, but the present invention is not limited to this.
  • the average particle size of the particles for immunoassay can be confirmed by a particle size distribution meter or a transmission electron microscope image.
  • the concentration of the immunoassay particles in the reagent solution can be appropriately selected from the range of, for example, 0.0001 mg / mL to 10 mg / mL according to the particle size of the immunoassay particles to be used and the design of the entire measurement system.
  • the synthetic polymer constituting the latex particles is not particularly limited, and examples thereof include polystyrene, styrene-styrene sulfonate copolymer, methacrylic acid polymer, Acrylic acid polymer, itaconic acid polymer, styrene-hydrophilic carboxy monomer copolymer: Examples include styrene-methacrylic acid copolymer, styrene-acrylic acid copolymer, styrene-itaconic acid copolymer.
  • styrene-methacrylic acid copolymers preferred are styrene-methacrylic acid copolymers, styrene-itaconic acid copolymers, styrene and styrene-styrene sulfonate copolymers. Particularly preferred are styrene and styrene- (meth) acrylic acid copolymers.
  • the styrene sulfonate salt is not particularly limited, and examples thereof include sodium salt, potassium salt, lithium salt, and ammonium salt. These may be used alone or in combination of two or more. Among them, sodium styrenesulfonate is preferably used.
  • hydrophilic carboxyl monomer used in the present invention methacrylic acid, acrylic acid, itaconic acid, maleic acid, fumaric acid and the like can be used.
  • methacrylic acid and acrylic acid can be used.
  • sample containing the substance to be measured of the present invention examples include human or animal blood, serum, plasma, culture supernatant, urine, spinal fluid, saliva, sweat, ascites, or cell or tissue extract.
  • the immunoassay reagent of the present invention can measure various substances contained in the sample.
  • the substance to be measured include proteins, peptides, amino acids, lipids, sugars, nucleic acids, haptens, etc., but there is no particular limitation as long as they are theoretically measurable substances.
  • CRP C-reactive protein
  • Lp a
  • MMP3 matrix metalloproteinase 3
  • anti-CCP cyclic citrullinated peptide
  • RPR type IV collagen
  • PSA BNP (brain natriuresis) Peptide
  • NT-proBNP insulin, microalbumin, cystatin C
  • RF rheumatoid factor
  • CA-RF CA-RF
  • KL-6 KL-6
  • PIVKA-II FDP
  • D dimer D dimer
  • SF soluble fibrin
  • TAT thrombin-antithrombin III complex
  • PAI factor XIII
  • pepsinogen I ⁇ II pepsinogen I ⁇ II
  • phenytoin phenobarbital
  • carbamazepine valproic acid
  • theophylline cyclic citrullinated peptide
  • the immunoassay reagent of the present invention is composed of one reagent solution or a plurality of reagent solutions of two or more reagent solutions.
  • a plurality of test solutions include a test solution containing a buffer solution for the purpose of adjusting the concentration of a substance to be measured to a suitable concentration for measurement, adjusting the environment of antigen-antibody reaction, and a test solution containing antibody-binding particles.
  • Etc. The PEGs of the present invention may be contained in all the reagent solutions constituting the reagent, or may be selectively contained in any of the reagent solutions constituting the measurement reagent.
  • kits containing the immunoassay reagent of the present invention may include other components necessary for measurement in addition to the above-mentioned immunoassay reagents, and other components include, for example, a washing solution, a sample diluent, a sample extract, and a sample collection. Pipettes, standard products, instruction manuals, etc.
  • PEGs The PEGs used in the present invention are not particularly limited as long as they have an effect of suppressing abnormality detection.
  • Representative PEGs are as follows (see FIG. 1). ⁇ Polyethylene glycol (i) ⁇ Polypropylene glycol (ii) ⁇ Polybutylene glycol (iii) ⁇ Polyoxyethylene polyoxypropylene glycol (iv) ⁇ Polyglycerin (v)
  • m and n in the figure represent a repeating structure, and may be any numerical value within the range of the weight average molecular weight described later. When polyethylene chains and polypropylene chains are mixed, the mixing degree may be random.
  • polyethylene glycol (PEG) is preferably used, but a mixture of the above substances may be used.
  • PEGs examples include the following products.
  • polyethylene glycol polyethylene glycol (Kishida Chemical Co., Ltd.), ADEKA PEG (ADEKA), PEG (SANYO KASEI KOGYO Co., Ltd.), and as polypropylene glycol
  • Uniol (registered trademark) D (NOF) Newpol (registered trademark) PP (Sanyo Chemical) Industrial)
  • polybutylene glycol Uniol (registered trademark) PB (NOF)
  • polyoxyethylene polyoxypropylene glycol Emulgen (registered trademark) PP-290 (Kao), pronone (registered trademark) (NOF)
  • polyglycerin include polyglycerin (Sakamoto Yakuhin Kogyo).
  • the effect of suppressing abnormality detection is determined by the weight average molecular weight of PEGs, as described in detail in the examples below.
  • the weight average molecular weight of the PEGs in the present invention is too high, the sensitivity enhancing effect becomes large and the measured value itself is largely changed, so that it is preferably 3000 or less.
  • the upper limit is preferably 3000 or less, more preferably 2800 or less, even more preferably 2500 or less, most preferably 2100 or less. Further, if it is too low, the suppressing effect itself disappears, so 300 or more is preferable.
  • the lower limit is preferably 300 or more, more preferably 400 or more, even more preferably 1000 or more, and most preferably 1900 or more.
  • the range of the weight average molecular weight of the PEGs used in the present invention is a range in which both the sensitivity enhancing effect and the abnormality detection suppressing effect possessed by the PEGs can be exhibited, and the range having both such functions is the present invention. It was first discovered by.
  • the preferred range of the weight average molecular weight of the PEGs of the present invention is 300 to 3000, more preferably 400 to 2500, and even more preferably 400 to 2100. Most preferably, it is 1900 to 2100.
  • the concentration of the PEGs used in the present invention in the measurement reaction system may be a concentration that exhibits a desired suppressing effect depending on the molecular weight of the PEGs.
  • the sensitivity enhancing effect becomes large like the weight average molecular weight. Therefore, it is preferably 5% or less, more preferably 1.0% or less, still more preferably 0.5% or less. If it is too low, the suppression effect is similarly diminished, so 0.005% or more is preferable, 0.01% or more is more preferable, and 0.05% or more is still more preferable.
  • the preferred concentration range is 0.005% or more and 5% or less, more preferably 0.01% or more and 1.0% or less, and even more preferably 0.05% or more and 0.5% or less. ..
  • PEGs are contained in the measuring reagent of the present invention in advance, it may be contained in the measuring reagent in advance so that the concentration in the reaction system becomes the above concentration.
  • the “weight average molecular weight” of the PEGs of the present invention is calculated by the following weight average molecular weight measuring method.
  • Method for measuring weight average molecular weight A solution obtained by mixing 20 ⁇ L of various PEG aqueous solutions (5%) and 980 ⁇ L of tetrahydrofuran was used as a sample (sample concentration: 1.0 g / L), and a size exclusion chromatography device (high-speed GPC device manufactured by Tosoh Corporation: ECO).
  • PEG200 product code number 010-62905, average molecular weight 190 to 210, weight average molecular weight 401
  • PEG400 product code number 010-62925, average molecular weight 380 to 420, weight average molecular weight 562
  • PEG1000 product code number 010-62945) , Average molecular weight 950 to 1050, weight average molecular weight 1033
  • PEG2000 product code number 010-62965, average molecular weight 1800 to 2200, weight average molecular weight 2072
  • PEG4000 product code number 010-62975, average molecular weight 2700 to 3400, weight
  • Average molecular weight 3400 PEG6000 (product code number 010-62985, average molecular weight 7400 to 9000, weight average molecular weight 10736),
  • PEG20000 product code number 020-63005, average molecular weight 18000 to 25000, weight average molecular weight 23555).
  • the PEGs used in the present invention should have a measured weight average molecular weight value within the above range of 300 to 3000. That is, the present invention also includes a measurement reagent or the like to which PEGs having the above-mentioned weight average molecular weight newly added by, for example, mixing two or more kinds of PEGs having different weight average molecular weights are added. Specifically, even if a PEG having a weight average molecular weight of 2072 or more is added and coexistent with a PEG having a molecular weight of PEG of 300 to 3000, the PEG in the reagent after the addition is added. There is no problem if the weight average molecular weight of the class is in the range of 300 to 3000.
  • Preparation of latex immunoaggregation reagent for D-dimer measurement (Preparation of first reagent) (1) Reagent of the present invention 500 mM sodium chloride, 0.4% BSA, 0.052% proclin 300 was dissolved in 30 mM Tris buffer (pH 8.5). To this, PEG200 (weight average molecular weight 401), PEG400 (weight average molecular weight 562), PEG1000 (weight average molecular weight 1033), PEG2000 (weight average molecular weight 2072) (above, PEG is manufactured by Kishida Chemical Co., Ltd.) respectively, final concentration 0. 0.05% and 0.5% were added to make the reagents of the present invention 1, 2, 3, and 4, respectively.
  • PEG200 weight average molecular weight 401
  • PEG400 weight average molecular weight 562
  • PEG1000 weight average molecular weight 1033
  • PEG2000 weight average molecular weight 2072
  • final concentration 0. 0.05% and 0.5% were added to make the reagents of
  • Control reagent 1 was prepared by dissolving 500 mM sodium chloride, 0.4% BSA, 0.052% proclin 300 in 30 mM Tris buffer (pH 8.5) and adding no PEG.
  • PEG4000 weight average molecular weight 3400
  • PEG6000 weight average molecular weight 10736
  • PEG20000 weight average molecular weight 23555
  • a calibration curve was prepared from 6 points of calibrators having the D-dimer concentrations of 0.0, 1.0, 3.0, 15, 30, and 60 ⁇ g / mL. Similarly, a 0.33 ⁇ g / mL known-concentration D dimer sample (sodium citrate plasma) was continuously measured 10 times to calculate the coefficient of variation, and the accuracy and simultaneous reproducibility of the measured values were confirmed.
  • Table 1 shows the results of simultaneous reproducibility measurement when the PEG type and the addition concentration were changed in the Hitachi 7180 type automatic analyzer. This automatic analyzer uses a reusable reaction cuvette and measures by detecting transmitted light. Further, in Table 1, the accuracy of the measured value of the D-dimer sample with a known concentration of 0.33 ⁇ g / mL is outside the range of 80 to 120% (the measured value is 0.26 ⁇ g / mL or less and 0.40 ⁇ g / mL or more). Values and the case where the coefficient of variation is 10% or more are shown in gray.
  • the coefficient of variation was 10% or less when 0.05% of PEG4000 was contained, but there was one measured value whose accuracy was out of the range of 80 to 120%. Furthermore, when the content was 0.5%, there were 6 measured values that were out of the range of accuracy of 80 to 120%, and the coefficient of variation was poor at 14.8%. Similarly, with the control reagents 3 to 4, there were 2 to 6 measured values whose accuracy was out of the range of 80 to 120%, and the coefficient of variation was poor at 14.3 to 19.2%.
  • the reagents 1 to 4 of the present invention there was no measured value whose accuracy was out of the range of 80 to 120%, and the coefficient of variation was 10% or less. From the above, it was confirmed that when PEG 200 to 2000 (weight average molecular weight 300 to 3000) was added at 0.05 to 0.5%, the accuracy and reproducibility were improved.
  • Table 2 shows the measurement results when PEG2000 was added in an amount of 0.05 to 0.5% (Reagent 4 of the present invention) in the Corepresta 3000 automatic analyzer and when Control Reagent 1 was used.
  • This automatic analyzer uses a disposable reaction cuvette and measures by detecting transmitted light. Further, in Table 2, a value and a coefficient of variation indicating that the accuracy of the 0.55 ⁇ g / mL D-dimer sample is outside the range of 80 to 120% (measured value is 0.44 ⁇ g / mL or less and 0.66 ⁇ g / mL or more). Is gray when 10% or more is shown.
  • control reagent 1 In the control reagent 1, there was one measurement value whose accuracy was out of the range of 80 to 120%, and the accuracy was 185%. Anomaly detection was recognized. Due to this influence, the coefficient of variation was defective at 25.8%. On the other hand, in the case of the reagent 4 of the present invention, there was no measured value whose accuracy was out of the range of 80 to 120%, and the coefficient of variation was good at 3.4 to 4.1%. From the above, it was confirmed that even if the reaction cuvette was a disposable type automatic analyzer, the effect of suppressing abnormal value detection and the effect of improving measurement reproducibility in the addition of PEG of the present invention were confirmed.
  • the optical detection method is transparent. It is possible to provide an automatic analysis measurement method that does not cause a decrease in measurement sensitivity, suppresses the occurrence of abnormality detection, and improves measurement reproducibility regardless of light or scattered light. This improves the measurement accuracy and reproducibility of the immunoassay in the automatic analyzer.

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Abstract

自動分析装置を用いた免疫測定方法において、反応キュベットがディスポーザブルタイプ、再利用タイプに関わらず、また、光学的検出方法が透過光、散乱光に関わらず、異常検出値の発生を抑制し、再現性良く測定する方法、及び、当該方法に用いる免疫測定試薬の提供を課題とする。　免疫測定試薬中に重量平均分子量３００～３０００のポリエチレングリコール類を含有させることを特徴とする、異常検出値の発生抑制、測定再現性の向上方法。

Description

自動分析装置での免疫測定における異常検出抑制方法、及び免疫測定試薬
　本発明は、自動分析装置を用いた免疫測定において、免疫反応による濁度変化を光学的に検出する場合に発生する異常検出を抑制し、測定再現性を向上させる方法、及びその方法に用いる免疫測定試薬に関する。特に詳しくは、自動分析装置を用いたラテックス免疫凝集測定において、前記異常検出を抑制し、測定再現性を向上させる方法、及びその方法に用いる免疫測定試薬に関する。
　臨床検査では、検体中に含まれる測定対象物質の濃度を測定し、該測定値を疾病の早期発見や治療効果判定に活用している。近年、臨床検査においては、精度良く多数検体を短時間で行うための自動分析装置が汎用されている。自動分析装置で測定対象物質の濃度を測定する方法としては、検体と自動分析用試薬を混合し、測定対象物質の単位時間当たりの濃度依存的な変化を光学的に検出して測定する方法が広く用いられている。該光学的検出方法には、透過光、散乱光などが一般的に用いられている。
　自動分析用試薬には、例えばラテックス免疫凝集法（ラテックス免疫凝集比濁法：以下、ＬＴＩＡ法ということがある）を原理とした試薬がある。ＬＴＩＡ法の試薬は、例えば、測定対象物質に対する抗体を結合させた免疫測定粒子（以下、抗体結合免疫測定粒子ということがある）を用い、測定対象物質である抗原と抗体結合免疫測定粒子の抗体が抗原抗体反応により結合し、抗体結合免疫測定粒子が凝集することによって生じる濁度変化を、光学的手段（例えば、透過光を測定する比濁法、散乱光を測定する比朧法など）などにより検出する測定方法である。
　現在汎用されている自動分析装置の多くは、光を照射した反応キュベットと呼ばれる透明のプラスチック製、あるいはガラス製容器中で検体と試薬を混合させ、一定時間毎に透過光、あるいは散乱光といった光学的変化の検出を行っている。この反応キュベットには、測定毎に廃棄するディスポーザブル（使い捨て）タイプと、測定後に洗浄して再利用するタイプが存在する。自動分析装置を用いた測定では、いずれのタイプにおいても光学的な検出を妨害し、測定精度や測定再現性を低下させる異常検出の原因因子の存在が知られている。具体的には、例えば反応キュベットに吸着する気泡や汚れ、試薬の混合不良（溶液の不均一）などが挙げられる。
　なお、本明細書中で示す「異常検出」とは、例えば検体を連続測定する同時再現性試験を実施した際に、他の測定値とは明らかに異なる値が示される場合や、その影響により、同時再現性試験のＣＶ値（変動係数）が１０％を超える場合を言う。前記場合の具体例としては、既知濃度試料を測定した際に、既知の濃度と実際の測定値との比率（以下、正確性という）が８０～１２０％の範囲外となる値が示される場合や、さらに深刻な影響を受けるときは測定値の正確性が５０～１５０％を外れる場合がある。
特開２０１３－１４００３５号公報 特開２０１３－０６８４４３号公報 特開２００３－２２６８９３号公報 国際公開ＷＯ２０１１／０６５５７３号パンフレット 特開昭５８-４７２５６号公報 特開２００３－６６０４７号公報
　ディスポーザブルタイプの反応キュベットに吸着する気泡の発生を抑制する方法としては、例えば特許文献１のように界面活性剤を含む免疫分析試薬が報告されている。本文献には、ポリオキシエチレン型非イオン系界面活性剤の存在下で反応及び／または測定を行うことで乾燥したキュベット側面への気泡吸着を抑制する方法が示されている。
　しかし、界面活性剤が免疫測定系内に存在する場合、種類によっては抗原抗体反応自体を阻害したり、該抗原抗体反応によって形成された凝集を再び解離させてしまったりすることがあるため、適切な界面活性剤を選択しても、測定感度の低下を招く可能性が否定できない。さらに、例えば、界面活性剤による測定対象物質自体の構造変化の惹起、測定対象物質との複合体形成、抗体結合ラテックス粒子への非特異的吸着、ラテックス粒子に結合していた抗体やブロッキング用タンパク質の剥離などの測定系への干渉が、複合して発生する場合もある。
　再利用タイプの反応キュベットに於いては、例えば特許文献２のように、反応キュベットの汚れをはじめとする装置分析部の状態チェックが定期的に、かつ自動的にチェックされることにより、測定データの正確性を高めた自動分析装置が提供されている。
　また、反応キュベット、特に、ＬＴＩＡ法の試薬を使用した後の反応キュベットの汚れの除去に関しては、例えば特許文献３のような特定の有機溶媒を含む反応キュベット洗浄液が提供されている。
　試薬の混合不良（溶液の不均一）を抑制する方法としては、例えば特許文献４のように、測定試薬にシリコーン系消泡剤を添加処方することにより、攪拌・混合工程の方式が異なる仕様の自動分析装置間でも測定精度を改善する方法が提供されている。
　一方、ＬＴＩＡ法の試薬にＰＥＧ（ポリエチレングリコール）を含有させた場合、抗体結合免疫測定用粒子の凝集を促進し、シグナルを増強させる効果については公知であり、例えば特許文献５、６が挙げられる。特許文献５においては、ＰＥＧの含有により透過光や散乱光の強度の変化速度を大きくし（凝集促進）、シグナルを増強して高感度かつ高精度の定量を行うことができること、ポリエチレングリコールの平均分子量が増大するにつれてその効果が大きくなることが記されている。事実、特許文献５の実施例では平均分子量１５４０（ＰＥＧ１５４０）、４０００（ＰＥＧ４０００）の場合には、その効果は無添加の対照とさほど変わりなく、平均分子量が６０００以上のＰＥＧを使用した場合に効果が高く、他の実施例はすべてＰＥＧ６０００で測定されている。また、特許文献６にも平均分子量６０００のＰＥＧ６０００が免疫凝集反応における凝集反応促進、高感度測定のために広く用いられていることが記載されている。つまり、免疫凝集法におけるＰＥＧの利用は、比較的高分子量のＰＥＧを含有させることにより、感度を上昇させて高感度かつ高精度の定量を可能とすることを目的としたものに限定されている。
　しかし、特許文献５、６に開示されているＰＥＧの平均分子量は６０００と比較的高分子量であるため、感度増強効果が強く現れることで、測定値に影響を与える恐れもある。また、特許文献５、６の測定手法は用手法であり、自動分析装置の測定における異常検出の抑制と再現性向上などの課題に関しては、何ら言及されていない。
　このように、上記のような技術を駆使しても、自動分析装置を用いた免疫測定において回避が困難な異常検出が依然として存在し、測定再現性の課題が解決されていないのが現状である。
　本発明は、上記現状に鑑み、自動分析装置を用いた免疫測定において、使用する反応キュベットがディスポーザブルタイプであるか再利用タイプであるかに関わらず、また、光学的検出方法が透過光か、散乱光かに関わらず、当該測定における異常検出値の発生を抑制し、再現性良く測定する方法、及び、これに用いられる免疫測定試薬を提供することを課題とする。
　本発明者らが鋭意検討したところ、免疫測定試薬中に特定の平均分子量（重量平均分子量として規定したことは後述する）を持つポリエチレングリコール類（以下、ポリエチレングリコールをＰＥＧ、ポリエチレングリコール類をＰＥＧ類ということがある）を含有させることで、測定感度の変化を引き起こすことなく、異常検出が抑制され、測定再現性が向上することを見出した。
　すなわち、本発明は、以下の（１）～（１７）に係るものである。
（１）検体中の測定対象物質と免疫測定試薬の反応を自動分析装置で光学的に検出する方法における異常検出値の発生抑制及び測定再現性の向上方法であって、前記免疫測定試薬が重量平均分子量３００～３０００のポリエチレングリコール類を含有することを特徴とする前記方法。
（２）前記ポリエチレングリコール類が、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、ポリブチレングリコール、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレングリコール、ポリグリセリンからなる群より選ばれる少なくとも一種以上である（１）に記載の方法。
（３）反応系内の前記ポリエチレングリコール類の濃度が０．０５～０．５％である（１）又は（２）に記載の方法。
（４）前記ポリエチレングリコール類が、ポリエチレングリコールである（１）～（３）のいずれかに記載の方法。
（５）前記免疫測定試薬がラテックス免疫凝集測定試薬である（１）～（４）のいずれかに記載の方法。
（６）検体中の測定対象物質と免疫測定試薬の反応を自動分析装置で光学的に検出する方法であって、前記免疫測定試薬が重量平均分子量３００～３０００のポリエチレングリコール類を含有する前記検出方法。
（７）前記ポリエチレングリコール類が、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、ポリブチレングリコール、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレングリコール、ポリグリセリンからなる群より選ばれる少なくとも一種以上である（６）に記載の方法。
（８）反応系内の前記ポリエチレングリコール類の濃度が０．０５～０．５％である（６）又は（７）に記載の方法。
（９）前記ポリエチレングリコール類が、ポリエチレングリコールである（６）～（８）のいずれかに記載の方法。
（１０）前記免疫測定試薬がラテックス免疫凝集測定試薬である（６）～（９）のいずれかに記載の方法。
（１１）自動分析装置で光学的に検出する方法に使用される免疫測定試薬であって、重量平均分子量３００～３０００のポリエチレングリコール類を含有することを特徴とする前記免疫測定試薬。
（１２）前記ポリエチレングリコール類が、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、ポリブチレングリコール、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレングリコール、ポリグリセリンからなる群より選ばれる少なくとも一種以上である（１１）に記載の免疫測定試薬。
（１３）反応系内の前記ポリエチレングリコール類の濃度が０．０５～０．５％となるように調整されている（１１）又は（１２）に記載の免疫測定試薬。
（１４）前記ポリエチレングリコール類が、ポリエチレングリコールである（１１）～（１３）のいずれかに記載の免疫測定試薬。
（１５）前記免疫測定試薬がラテックス免疫凝集測定試薬である（１１）～（１４）のいずれかに記載の免疫測定試薬。
（１６）前記免疫測定試薬が、緩衝液を含む第一試薬とラテックスを含む第二試薬とを含み、いずれか一方あるいは両方に重量平均分子量３００～３０００のポリエチレングリコール類を含有する（１５）に記載の免疫測定試薬。
（１７）（１１）～（１６）のいずれかに記載の免疫測定試薬を含む免疫測定試薬キット。
　また、上記の検出方法（１）～（１０）は換言すれば以下のように表現することもできる。
（１８）検体中の測定対象物質と免疫測定試薬の反応を自動分析装置で光学的に検出する方法における異常検出値の発生抑制及び測定再現性の向上方法であって、重量平均分子量３００～３０００のポリエチレングリコール類存在下、検体中の測定対象物質と免疫測定試薬を接触させる工程を含む前記方法。
（１９）前記ポリエチレングリコール類が、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、ポリブチレングリコール、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレングリコール、ポリグリセリンからなる群より選ばれる少なくとも一種以上である（１８）に記載の方法。
（２０）反応系内の前記ポリエチレングリコール類の濃度が０．０５～０．５％である（１８）又は（１９）に記載の方法。
（２１）前記ポリエチレングリコール類が、ポリエチレングリコールである（１８）～（２０）のいずれかに記載の方法。
（２２）前記免疫測定試薬がラテックス免疫凝集測定試薬である（１８）～（２１）のいずれかに記載の方法。
（２３）検体中の測定対象物質と免疫測定試薬の反応を自動分析装置で光学的に検出する方法であって、重量平均分子量３００～３０００のポリエチレングリコール類存在下、前記測定対象物質と免疫測定試薬とを接触させる工程を含む前記検出方法。
（２４）前記ポリエチレングリコール類が、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、ポリブチレングリコール、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレングリコール、ポリグリセリンからなる群より選ばれる少なくとも一種以上である（２３）に記載の方法。
（２５）反応系内の前記ポリエチレングリコール類の濃度が０．０５～０．５％である（２３）又は（２４）に記載の方法。
（２６）前記ポリエチレングリコール類が、ポリエチレングリコールである（２３）～（２５）のいずれかに記載の方法。
（２７）前記免疫測定試薬がラテックス免疫凝集測定試薬である（２３）～（２６）のいずれかに記載の方法。
　本発明により、自動分析装置で測定する免疫測定試薬に特定な平均分子量のＰＥＧ類を含有させることにより、測定感度の低下を引き起こすことなく、かつ異常検出の発生を抑制し、測定再現性が向上する方法を提供することができる。これにより、自動分析装置における免疫測定の測定精度、再現性が向上する。
代表的なＰＥＧ類の化学構造を示す。(i）はポリエチレングリコール、（ii）はポリプロピレングリコール、(iii）はポリブチレングリコール、(iv）はポリオキシエチレンポリオキシプロピレングリコール、(v)はポリグリセリンの化学構造を示す。
　以下、本発明について説明する。なお、本明細書中のＰＥＧ類の含量％は、特に断りがない限り、質量基準（Ｗ／Ｖ％）を意味する。
（免疫測定試薬）
　本発明の免疫測定試薬（試液）は、反応の主成分の他に、後述する特定の重量平均分子量のＰＥＧ類を含むことを特徴とする。
　免疫測定試薬中には、試料のｐＨ、イオン強度、浸透圧などを緩衝、調整する成分として、例えば、酢酸、クエン酸、リン酸、トリス、グリシン、ホウ酸、炭酸、及びグッドの緩衝液や、それらのナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩などを含んでも良い。また凝集形成を増強する成分としてポリビニルピロリドン、リン脂質ポリマーなどの高分子を含んでも良い。また、凝集の形成をコントロールする成分として、タンパク質、アミノ酸、糖類、金属塩類、界面活性剤類、還元性物質やカオトロピック物質など汎用される成分を１種類、または複数の成分を組み合わせて含んでも良い。
　本発明は、検体中の測定対象物質と上記の免疫測定試薬の反応を自動分析装置で光学的に検出する方法あるいは、当該検出方法において異常検出値の発生抑制及び測定再現性の向上方法であるところ、換言すれば、特定の重量平均分子量のＰＥＧ類の存在下で検体中の測定対象物質と免疫測定試薬を接触させる工程を含むこれらの方法であるとも言える。
（免疫測定用粒子）
　本発明に用いられる免疫測定用粒子は、所望される目的成分に対して特異的な結合パートナーを担持できるものであれば、公知の粒子を使用できる。好適にはポリスチレン等の高分子材料を用いたラテックス粒子を使用できるが、測定対象物質に対して特異的な結合パートナーを担持する方法に応じて、金属コロイド、シリカ、カーボン等の無機物粒子も、本発明の免疫測定用粒子として用いることができる。
　免疫測定用粒子のサイズは、使用する光学的測定法（例えば、透過光を測定する比濁法、散乱光を測定する比朧法など）を考慮し、所望の測定感度、測定範囲などが得られるよう、０．０５～１μｍの範囲から適宜選択することができる。なお、自動分析装置における光学的測定においては平均粒子径０．１～０．４μｍが汎用されているが、これに限定されない。
　免疫測定用粒子の平均粒子径は粒度分布計や透過型電子顕微鏡像などで確認することができる。免疫測定用粒子の試液中の濃度は、使用する免疫測定用粒子の粒径や測定系全体の設計にあわせ、例えば０．０００１ｍｇ／ｍＬ～１０ｍｇ／ｍＬの範囲から適宜選択をすることができる。
　本発明の免疫測定用粒子としてラテックス粒子を採用する場合、ラテックス粒子を構成する合成高分子としては特に限定はないが、例えば、ポリスチレン、スチレン－スチレンスルホン酸塩共重合体、メタクリル酸重合体、アクリル酸重合体、イタコン酸重合体、スチレン－親水性カルボキシモノマー共重合体：例えば、スチレン－メタクリル酸共重合体、スチレン－アクリル酸共重合体、スチレン－イタコン酸共重合体等が挙げられる。その中で、好ましくはスチレン－メタクリル酸共重合体、スチレン－イタコン酸共重合体、スチレンおよびスチレン－スチレンスルホン酸塩共重合体である。特に好ましくは、スチレン及びスチレン－（メタ）アクリル酸共重合体である。
　スチレンスルホン酸塩の塩としては、特に限定されず、ナトリウム塩、カリウム塩、リチウム塩、アンモニウム塩等が挙げられる。これらは単独で用いられてもよく、２種以上が併用されてもよい。なかでも、スチレンスルホン酸ナトリウムが好ましく用いられる。
　本発明に使用される親水性カルボキシルモノマーとしては、メタクリル酸、アクリル酸、イタコン酸、マレイン酸、フマル酸などを用いることができる。好ましくは、メタクリル酸、アクリル酸を用いることができる。
（測定対象試料） 
　本発明の測定対象物質を含む試料としては、例えばヒト又は動物の血液、血清、血漿、培養上清、尿、髄液、唾液、汗、腹水、又は細胞あるいは組織の抽出液等が挙げられる。
　本発明の免疫測定試薬は、前記試料に含有される種々の物質を測定対象とすることができる。測定対象物質としては、タンパク質、ペプチド、アミノ酸、脂質、糖質、核酸、ハプテンなどが挙げられるが、理論的に測定可能な物質であれば特に制限はない。例えばＣＲＰ（Ｃ反応性タンパク質）、Ｌｐ（ａ）、ＭＭＰ３（マトリクスメタロプロテイナーゼ３）、抗ＣＣＰ（環状シトルリン化ペプチド）抗体、抗リン脂質抗体、ＲＰＲ、ＩＶ型コラーゲン、ＰＳＡ、ＢＮＰ（脳性ナトリウム利尿ペプチド）、ＮＴ－ｐｒｏＢＮＰ、インスリン、マイクロアルブミン、シスタチンＣ、ＲＦ（リウマチ因子）、ＣＡ―ＲＦ、ＫＬ－６、ＰＩＶＫＡ―ＩＩ、ＦＤＰ、Ｄダイマー、ＳＦ（可溶性フィブリン）、ＴＡＴ（トロンビン－アンチトロンビンＩＩＩ複合体）、ＰＩＣ、ＰＡＩ、ＸＩＩＩ因子、ペプシノーゲンＩ・ＩＩや、フェニトイン、フェノバルビタール、カルバマゼピン、バルプロ酸、テオフィリンなどが挙げられる。
　本発明の免疫測定試薬は、一試液、もしくは二試液以上の複数の試液から構成される。複数の試液の例としては、測定対象物質を測定に好適な濃度に調整したり、抗原抗体反応の環境を調整したりするなどを目的とする緩衝液からなる試液、抗体結合粒子を含有する試液等が挙げられる。本発明のＰＥＧ類は試薬を構成する全ての試液に含まれていても良いし、測定試薬を構成する試液のいずれかに選択的に含まれていても良い。ラテックス粒子を用いる免疫測定試薬の場合は、緩衝液を含む第一試薬とラテックスを含む第二試薬とを含み、いずれか一方あるいは両方に重量平均分子量３００～３０００のポリエチレングリコール類を含有する試薬が例示できる。
　本発明の免疫測定試薬を含むキットは、上記の免疫測定試薬のほかに測定に必要な他の構成を含んでもよく、他の構成としては、例えば洗浄液、試料希釈液、試料抽出液、試料採取用ピペット、標準品、取扱説明書などが挙げられる。
（ＰＥＧ類）
　本発明で用いられるＰＥＧ類は、異常検出を抑制する効果を有するものであれば特に制限されない。代表的なＰＥＧ類は以下の通りである（図１参照）。
・ポリエチレングリコール（i）　
・ポリプロピレングリコール(ii）
・ポリブチレングリコール（iii）
・ポリオキシエチレンポリオキシプロピレングリコール（iv）
・ポリグリセリン（v）
　尚、図中のm、nは繰り返し構造を示し、後述する重量平均分子量の範囲であればいかなる数値でもかまわない。また、ポリエチレン鎖及びポリプロピレン鎖が混在する場合、その混在度合いはランダムでかまわない。これらのうち、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）が好適に用いられるが、上記物質の混合物を用いても何らかまわない。
　これらのＰＥＧ類としては、以下の製品が一例として挙げられる。ポリエチレングリコールとしては、ポリエチレングリコール（キシダ化学）、アデカＰＥＧ（アデカ）、ＰＥＧ（三洋化成工業）、ポリプロピレングリコールとしてはユニオール（登録商標）Ｄ（日油）、ニューポール（登録商標）ＰＰ（三洋化成工業）、ポリブチレングリコールとしてはユニオール（登録商標）ＰＢ（日油）、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレングリコールとしては、エマルゲン（登録商標）ＰＰ－２９０（花王）、プロノン（登録商標）（日油）、アデカ（登録商標）プルロニックＬ／Ｐ／Ｆ（アデカ）、ニューポール（登録商標）ＰＥ（三洋化成工業）、ポリグリセリンとしては、ポリグリセリン（阪本薬品工業）等が挙げられる。
　異常検出を抑制する効果は以下の実施例で詳述しているように、ＰＥＧ類の重量平均分子量で決定される。
　本発明におけるＰＥＧ類の重量平均分子量は、高すぎると感度増強効果が大きくなり、測定値自体を大きく変化させる為３０００以下が好ましい。上限としては、３０００以下が好ましく、２８００以下がさらに好ましく、２５００以下がさらにいっそう好ましく、２１００以下がもっとも好ましい。
　また、低すぎると抑制効果そのものが消失してしまう為、３００以上が好ましい。下限としては、３００以上が好ましく、４００以上がさらに好ましく、１０００以上がさらにいっそう好ましく、１９００以上がもっとも好ましい。
　したがって、本発明において利用されるＰＥＧ類の重量平均分子量の範囲は、ＰＥＧ類の有する感度増強効果および異常検出抑制効果の両方を発揮できる範囲であり、このような両機能を有する範囲は本発明によって初めて見出されたものである。本発明のＰＥＧ類の重量平均分子量の好ましい範囲としては、３００～３０００であり、さらに好ましくは、４００～２５００であり、よりいっそう好ましくは４００～２１００である。最も好ましくは１９００～２１００である。
　本発明において用いるＰＥＧ類の測定反応系内における濃度は、ＰＥＧ類の分子量により所望の抑制効果を示す濃度とすればよく、一般には、高すぎると重量平均分子量と同様に感度増強効果が大きくなる為、５％以下が好ましく、更に好ましくは１．０％以下であり、更にいっそう好ましくは０．５％以下である。低すぎる場合も同様に抑制効果が薄れてしまう為、０．００５％以上が好ましく、更に好ましくは０．０１％以上であり、更にいっそう好ましくは０．０５％以上である。好ましい濃度の範囲としては、０．００５％以上５％以下であり、更に好ましくは０．０１％以上１．０％以下であり、更にいっそう好ましくは０．０５％以上０．５％以下である。
　本発明の測定試薬中にあらかじめＰＥＧ類を含有させる場合には、反応系内における濃度が上記濃度になるようにあらかじめ測定試薬中に含有させればよい。
　本発明のＰＥＧ類の「重量平均分子量」は、以下の重量平均分子量の測定方法により算出される。
　重量平均分子量の測定方法：各種ＰＥＧ水溶液（５％）２０μＬとテトラヒドロフラン９８０μＬを混合した溶液を試料（試料濃度：１．０ｇ／Ｌ）として、サイズ排除クロマトグラフィー装置（東ソー社製高速ＧＰＣ装置：ＥＣＯ ＳＥＣ　ＨＬＣ-８３２０ＧＰＣ、カラム：ＴＳＫｇｅｌ Ｓｕｐｅｒ Ｍｕｌｔｉｐｏｒｅｈｚ－Ｈ（４．６ｍｍＩ．Ｄ．×１５ｃｍ×1本）、カラム温度：４０．０℃、溶離液流量：０．２ｍＬ/ｍｉｎ.、検量線サンプル：ＰｓｔＱｕｉｃｋ ＭＰ-Ｈ）によるクロマト解析を３回実施する。３回の重量平均分子量（Ｍｗ）の平均値を「重量平均分子量」とする。
　下記試験例で使用するキシダ化学社製のＰＥＧを例に、メーカー標榜の平均分子量と上記測定方法による重量平均分子量を示す。
　ＰＥＧ２００（製品コード番号010-62905、平均分子量１９０～２１０、重量平均分子量４０１）、ＰＥＧ４００（製品コード番号010-62925、平均分子量３８０～４２０、重量平均分子量５６２）、ＰＥＧ１０００（製品コード番号010-62945、平均分子量９５０～１０５０、重量平均分子量１０３３）、ＰＥＧ２０００（製品コード番号010-62965、平均分子量１８００～２２００、重量平均分子量２０７２）、ＰＥＧ４０００（製品コード番号010-62975、平均分子量２７００～３４００、重量平均分子量３４００）、ＰＥＧ６０００（製品コード番号010-62985、平均分子量７４００～９０００、重量平均分子量１０７３６）、ＰＥＧ２００００（製品コード番号020-63005、平均分子量１８０００～２５０００、重量平均分子量２３５５５）。
　なお、ＰＥＧ類は高分子化合物であるため、分子量分布がブロードとなる特性がある。そのため、本発明で用いられるＰＥＧ類は、測定された重量平均分子量の値が上記の範囲３００～３０００を満たしていればよい。すなわち、例えば異なる重量平均分子量を持つ２種類以上のＰＥＧ類を混合する等して、新たに得られた上記重量平均分子量のＰＥＧ類を添加した測定試薬等も本発明に含まれる。具体的には、ＰＥＧ類の重量平均分子量が２０７２以上のものが含まれる試薬に、さらにＰＥＧ類の分子量が３００～３０００のＰＥＧ類を添加して共存させても、添加後の試薬中のＰＥＧ類の重量平均分子量が３００～３０００の範囲内であれば差し支えない。
　以下、実施例により本発明を詳細に説明するが、本発明は以下の実施例により限定されるものではない。
１．Ｄダイマー測定用ラテックス免疫凝集試薬の調製 
（第一試薬の調製）
（１）本発明試薬
　３０ｍＭトリス緩衝液（ｐＨ８．５）に、５００ｍＭ 塩化ナトリウム、０．４％ＢＳＡ、０．０５２％プロクリン３００を溶解した。これにＰＥＧ２００（重量平均分子量４０１）、ＰＥＧ４００（重量平均分子量５６２）、ＰＥＧ１０００（重量平均分子量１０３３）、ＰＥＧ２０００（重量平均分子量２０７２）（以上、ＰＥＧはキシダ化学株式会社製）をそれぞれ、最終濃度０．０５％、０．５％となるように添加し、それぞれ本発明試薬１、２、３、４とした。
（２）対照試薬
　３０ｍＭトリス緩衝液（ｐＨ８．５）に、５００ｍＭ 塩化ナトリウム、０．４％ＢＳＡ、０．０５２％プロクリン３００を溶解し、ＰＥＧを添加しないものを対照試薬１とした。対照試薬１にＰＥＧ４０００（重量平均分子量３４００）、ＰＥＧ６０００（重量平均分子量１０７３６）、ＰＥＧ２００００（重量平均分子量２３５５５）（以上、ＰＥＧはキシダ化学株式会社製）をそれぞれ、最終濃度０．０５％、０．５％となるように添加し、それぞれ対照試薬２、３、４とした。
（第二試薬の調製）
　抗Ｄダイマーモノクローナル抗体０３２０４を３．２ｍｇ／ｍＬ含む２０ｍＭトリス緩衝液（ｐＨ８．５）３ｍＬに、平均粒子径１２０ｎｍの５％ラテックス懸濁液３ｍＬを加え、４℃にて２時間撹拌した。これに２．０％牛血清アルブミンを含む２０ｍＭトリス緩衝液（ｐＨ８．５）６ｍＬを加え、４℃で１時間撹拌した。遠心分離後、沈殿を５ｍＭ ＭＯＰＳ緩衝液（ｐＨ７.０）で、波長６００ｎｍにおける吸光度が３．０ＯＤとなるように再懸濁し、第二試薬を調製した。
２．Ｄダイマー測定用ラテックス免疫凝集試薬の同時再現性測定
（１）日立７１８０形自動分析装置での測定（再利用タイプの反応キュベット、透過光検出）
（i）測定方法
　第一試薬８０μＬにＤダイマー濃度０.０、１．０、３．０、１５、３０、６０μｇ／ｍＬのキャリブレーター９．６μＬを加えて撹拌後、３７℃で５分間加温し、さらに第二試薬８０μＬを添加して３７℃、５分間の主波長５７０ｎｍ／副波長８００ｎｍにおける吸光度変化量を測定した。当該Ｄダイマー濃度０.０、１．０、３．０、１５、３０、６０μｇ／ｍＬのキャリブレーター６ポイントから検量線を作成した。同様に、０．３３μｇ／ｍＬの既知濃度Ｄダイマー試料（クエン酸ナトリウム血漿）を１０回連続測定して、変動係数を算出し、測定値の正確性及び同時再現性を確認した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000001
（ii）測定結果
　表１に日立７１８０形自動分析装置においてＰＥＧ種類ならびに添加濃度を変動させた場合の同時再現性測定結果を示した。本自動分析装置は再利用タイプの反応キュベットを用い、透過光検出にて測定する方式である。また、表１中、０．３３μｇ／ｍＬの既知濃度Ｄダイマー試料の測定値の正確性が８０～１２０％の範囲外（測定値で０．２６μｇ／ｍＬ以下及び０．４０μｇ／ｍＬ以上）の値と、変動係数が１０％以上の場合を灰色で示した。
　本測定結果によれば、ＰＥＧを含まない対照試薬１では、正確性が８０～１２０％の範囲外となる測定値が６つ存在し、変動係数は２４．０％と不良であった。また、対照試薬２では、ＰＥＧ４０００を０．０５％含有した場合、変動係数は１０％以下となったが、正確性が８０～１２０％の範囲外となる測定値が１つ存在した。さらに、０．５％含有した場合、正確性８０～１２０％の範囲外となる測定値が６つ存在し、変動係数は１４．８％と不良であった。対照試薬３～４でも同様に、正確性が８０～１２０％の範囲外となる測定値が２～６つ存在し、変動係数が１４．３～１９．２％と不良であった。
　これに対し、本発明試薬１～４では正確性が８０～１２０％の範囲外となる測定値は存在せず、変動係数は１０％以下であった。以上のことから、ＰＥＧ２００～２０００（重量平均分子量３００～３０００）を０．０５～０．５％添加した場合に、正確性の改善と再現性が向上することが確認された。
（２）自動分析装置コアプレスタ３０００での測定（ディスポーザブルタイプの反応キュベット、透過光検出）
(i)測定方法
　第一試薬１００μＬにＤダイマー濃度０.０、１．０、３．０、１５、３０、６０μｇ／ｍＬのキャリブレーター２０．０μＬを加えて撹拌後、３７℃で５分間加温し、さらに第二試薬１００μＬを添加して３７℃、２分間の５７０ｎｍにおける吸光度変化量を測定した。当該Ｄダイマー濃度０.０、１．０、３．０、１５、３０、６０μｇ／ｍＬのキャリブレーター６ポイントから検量線を作成した。同様に、０．５５μｇ／ｍＬの既知濃度Ｄダイマー試料（クエン酸ナトリウム血漿）を１０回連続測定し、変動係数を算出して同時再現性及び測定値の正確性を確認した。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000002
（ii）測定結果
　表２にコアプレスタ３０００自動分析装置においてＰＥＧ２０００を０．０５～０．５％添加した場合（本発明試薬４）ならびに対照試薬１を用いた場合の測定結果を示した。本自動分析装置はディスポーザブルタイプの反応キュベットを用い、透過光検出にて測定する方式である。また、表２中、０．５５μｇ／ｍＬのＤダイマー試料の正確性が８０～１２０％の範囲外（測定値で０．４４μｇ／ｍＬ以下及び０．６６μｇ／ｍＬ以上）を示す値と変動係数が１０％以上を示す場合を灰色で示した。対照試薬１では正確性が８０～１２０％の範囲外となる測定値が１つ存在し、その正確性は１８５％である異常検出を認めた。この影響を受け、変動係数は２５．８％と不良となった。
　一方、本発明試薬４では正確性が８０～１２０％の範囲外となる測定値が存在せず、変動係数は３．４～４．１％と良好であった。
　以上のことから、反応キュベットがディスポーザブルタイプの自動分析装置であっても本発明のＰＥＧ添加における異常値検出の抑制と、測定再現性向上効果が確認された。
　本発明により、自動分析装置で測定する免疫測定試薬に特定の重量平均分子量のポリエチレングリコール類を含有させることにより、反応キュベットがディスポーザブルタイプ、再利用タイプに関わらず、また、光学的検出方法が透過光、散乱光に関わらず、測定感度の低下を引き起こすことなく、かつ異常検出の発生を抑制し、測定再現性が向上する自動分析測定方法を提供することができる。これにより、自動分析装置における免疫測定の測定精度、再現性が向上する。
 

Claims (17)

  1. 検体中の測定対象物質と免疫測定試薬の反応を自動分析装置で光学的に検出する方法における異常検出値の発生抑制及び測定再現性の向上方法であって、前記免疫測定試薬が重量平均分子量３００～３０００のポリエチレングリコール類を含有することを特徴とする前記方法。
  2. 前記ポリエチレングリコール類が、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、ポリブチレングリコール、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレングリコール、ポリグリセリンからなる群から選ばれる一種以上である、請求項１に記載の方法。
  3. 反応系内の前記ポリエチレングリコール類の濃度が０．０５～０．５％である請求項１又は２に記載の方法。
  4. 前記ポリエチレングリコール類が、ポリエチレングリコールである請求項１～３のいずれかに記載の方法。
  5. 前記免疫測定試薬がラテックス免疫凝集測定試薬である請求項１～４のいずれかに記載の方法。
  6. 検体中の測定対象物質と免疫測定試薬の反応を自動分析装置で光学的に検出する方法であって、前記免疫測定試薬が重量平均分子量３００～３０００のポリエチレングリコール類を含有する前記検出方法。
  7. 前記ポリエチレングリコール類が、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、ポリブチレングリコール、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレングリコール、ポリグリセリンからなる群より選ばれる少なくとも一種以上である、請求項６に記載の方法。
  8. 反応系内の前記ポリエチレングリコール類の濃度が０．０５～０．５％である請求項６又は７に記載の方法。
  9. 前記ポリエチレングリコール類が、ポリエチレングリコールである請求項６～８のいずれか１項に記載の方法。
  10. 前記免疫測定試薬がラテックス免疫凝集測定試薬である請求項６～９のいずれかに記載の方法。
  11. 自動分析装置で光学的に検出する方法に使用される免疫測定試薬であって、重量平均分子量３００～３０００のポリエチレングリコール類を含有することを特徴とする前記免疫測定試薬。
  12. 前記ポリエチレングリコール類が、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、ポリブチレングリコール、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレングリコール、ポリグリセリンからなる群より選ばれる少なくとも一種以上である、請求項１１に記載の免疫測定試薬。
  13. 反応系内の前記ポリエチレングリコール類の濃度が０．０５～０．５％となるように調整されている請求項１１又は１２に記載の免疫測定試薬。
  14. 前記ポリエチレングリコール類が、ポリエチレングリコールである請求項１１～１３のいずれかに記載の免疫測定試薬。
  15. 前記免疫測定試薬がラテックス免疫凝集測定試薬である請求項１１～１４のいずれかに記載の免疫測定試薬。
  16. 前記免疫測定試薬が、緩衝液を含む第一試薬とラテックスを含む第二試薬とを含み、いずれか一方あるいは両方に重量平均分子量３００～３０００のポリエチレングリコール類を含有する請求項１５に記載の免疫測定試薬。
  17. 請求項１１～１６のいずれかに記載の免疫測定試薬を含む免疫測定試薬キット。
     
     
     
     
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