WO2020196844A1 - 耐熱性細菌組成物 - Google Patents

耐熱性細菌組成物 Download PDF

Info

Publication number
WO2020196844A1
WO2020196844A1 PCT/JP2020/014078 JP2020014078W WO2020196844A1 WO 2020196844 A1 WO2020196844 A1 WO 2020196844A1 JP 2020014078 W JP2020014078 W JP 2020014078W WO 2020196844 A1 WO2020196844 A1 WO 2020196844A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
bacteria
emulsifier
less
oil
bacterium
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Ceased
Application number
PCT/JP2020/014078
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
小澤　智仁
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Morinaga Milk Industry Co Ltd
Original Assignee
Morinaga Milk Industry Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Morinaga Milk Industry Co Ltd filed Critical Morinaga Milk Industry Co Ltd
Priority to EP20778830.8A priority Critical patent/EP3949742A4/en
Priority to JP2021509644A priority patent/JPWO2020196844A1/ja
Priority to US17/441,813 priority patent/US20220195376A1/en
Priority to CN202080023510.4A priority patent/CN113677212A/zh
Priority to AU2020246725A priority patent/AU2020246725A1/en
Publication of WO2020196844A1 publication Critical patent/WO2020196844A1/ja
Anticipated expiration legal-status Critical
Ceased legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/04—Preserving or maintaining viable microorganisms
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23C—DAIRY PRODUCTS, e.g. MILK, BUTTER OR CHEESE; MILK OR CHEESE SUBSTITUTES; PREPARATION THEREOF
    • A23C9/00—Milk preparations; Milk powder or milk powder preparations
    • A23C9/16—Agglomerating or granulating milk powder; Making instant milk powder; Products obtained thereby
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; PREPARATION OR TREATMENT THEREOF
    • A23L29/00—Foods or foodstuffs containing additives; Preparation or treatment thereof
    • A23L29/10—Foods or foodstuffs containing additives; Preparation or treatment thereof containing emulsifiers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; PREPARATION OR TREATMENT THEREOF
    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
    • A23L33/115—Fatty acids or derivatives thereof; Fats or oils
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; PREPARATION OR TREATMENT THEREOF
    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
    • A23L33/135—Bacteria or derivatives thereof, e.g. probiotics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; PREPARATION OR TREATMENT THEREOF
    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/40—Complete food formulations for specific consumer groups or specific purposes, e.g. infant formula
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23C—DAIRY PRODUCTS, e.g. MILK, BUTTER OR CHEESE; MILK OR CHEESE SUBSTITUTES; PREPARATION THEREOF
    • A23C2220/00—Biochemical treatment
    • A23C2220/20—Treatment with microorganisms
    • A23C2220/204—Use of bacteria which are encapsulated, entrapped or immobilised; Fermentation with these bacteria
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2400/00—Lactic or propionic acid bacteria
    • A23V2400/51—Bifidobacterium
    • A23V2400/519—Breve
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2400/00—Lactic or propionic acid bacteria
    • A23V2400/51—Bifidobacterium
    • A23V2400/533—Longum

Definitions

  • the present invention relates to a composition containing a bacterium having improved heat resistance and a method for producing the same.
  • Patent Document 1 milk protein
  • Patent Document 2 coagulant
  • Patent Document 3 hydrophobic substance that is non-fluid at room temperature
  • Patent Document 3 hydrophobic substance that is non-fluid at room temperature
  • Bacteria are coated or coated with components such as an agent (Patent Document 4), a protein-based edible gelling agent (Patent Document 5), a protein (Non-Patent Document 1), and a low melting point fat (LMF) (Non-Patent Document 2).
  • Encapsulation techniques are known.
  • Patent Documents 6 to 7 a technique for coating or granulating bacteria using a glycerin fatty acid ester is known (Patent Documents 6 to 7). However, Patent Documents 6 to 7 do not describe the heat resistance of bacteria.
  • An object of the present invention is to provide a technique for improving the heat resistance of bacteria.
  • the present inventors have found that the heat resistance of bacteria is improved by mixing bacteria such as Bifidobacterium spp. With fats and oils and emulsifiers, and have completed the present invention.
  • One aspect of the present invention is a method for producing a composition containing bacteria.
  • the step A is a method in which the step A is carried out at a temperature equal to or higher than the melting point of the fat or oil.
  • the step A it is preferable that the step A is started before or after the start of the step B.
  • the steps A and B are started at the same time.
  • the fat and oil has a melting point of 50 ° C. or lower.
  • the fat and oil has a melting point of 35 ° C. or higher. In the method, it is preferable that the fat and oil is palm kernel extremely hydrogenated oil. In the method, it is preferable that the step A is carried out at a temperature of 50 ° C. or lower. In the method, it is preferable that the step A is carried out at a temperature of 40 ° C. or higher. In the method, it is preferable that the emulsifier is lecithin or a polyglycerin fatty acid ester. In the method, it is preferable that the step B is carried out at a temperature of 50 ° C. or lower. In the method, it is preferable that the step B is carried out at a temperature of 40 ° C.
  • the method preferably has a mixed amount of the fats and oils of 1.5 to 4.5 g per 50 g of dry bacterial cell weight of the bacterium.
  • the emulsifier is a polyglycerin fatty acid ester and the mixed amount of the emulsifier is 8 to 17 g per 50 g of the dry cell weight of the bacterium.
  • the emulsifier is lecithin and the mixed amount of the emulsifier is 1 to 20 g per 50 g of the dry cell weight of the bacterium.
  • the bacterium is a bacterium belonging to the genus Bifidobacterium.
  • the bacterium is Bifidobacterium longum or Bifidobacterium breve. In the method, it is preferable that the bacterium is Bifidobacterium Longum BB536 (NITE BP-02621) or Bifidobacterium Breve M-16V (NITE BP-02622).
  • One aspect of the present invention is a method for improving the heat resistance of bacteria. The following steps A and B: (A) Step of mixing bacteria with fats and oils; (B) Including the step of mixing bacteria with an emulsifier.
  • the step A is a method in which the step A is carried out at a temperature equal to or higher than the melting point of the fat or oil.
  • One aspect of the present invention is a composition containing bacteria, fats and oils, and an emulsifier.
  • the composition preferably has the bacterium coated with the fat and oil and the emulsifier.
  • One aspect of the present invention is the composition produced by the method or milk powder containing the composition. It is preferable that the milk powder is a milk powder prepared for childcare.
  • Method of the present invention is a method including the following steps A and B: (A) Step of mixing bacteria with fats and oils; (B) A step of mixing bacteria with an emulsifier.
  • the heat resistance of bacteria can be improved.
  • the effect of improving the heat resistance of bacteria can be obtained.
  • This effect is also called “heat resistance improving effect”. That is, the method of the present invention may be, for example, a method for improving the heat resistance of bacteria.
  • a composition containing bacteria may be obtained.
  • a composition containing bacteria is also referred to as a "bacterial composition”. That is, the method of the present invention may be, for example, a method for producing a bacterial composition.
  • the bacterium contained in the bacterium composition may be a bacterium having improved heat resistance. That is, the bacterial composition may be a composition containing bacteria having improved heat resistance.
  • a composition containing bacteria with improved heat resistance is also referred to as a "heat-resistant bacterial composition”.
  • one aspect of the bacterial composition may be the composition of the present invention described later.
  • “Improvement of heat resistance” means that the heat resistance of bacteria after performing steps A and B is higher than that of bacteria before performing steps A and B.
  • Examples of the improvement in heat resistance include an improvement in the survival rate when the bacteria are heated.
  • Examples of the heating temperature include 70 ° C.
  • the heating time is 1 minute. That is, specific examples of heating include heating at 70 ° C. for 1 minute.
  • the survival rate when the bacteria are heated at 70 ° C. for 1 minute can be measured as, for example, the survival rate 1 minute after the bacteria are dispersed in hot water at 70 ° C.
  • the survival rate when the bacterium is heated at 70 ° C. for 1 minute can be measured, for example, under the conditions described in Examples.
  • the survival rate when the bacteria are heated is calculated as the ratio of the viable cell count after heating to the viable cell count before heating (specifically, at the start of heating).
  • the viable cell count can be measured, for example, as a colony forming unit (cfu).
  • the term "heating of bacteria” may mean heating of the bacterial composition in the case of bacteria contained in the bacterial composition.
  • Survival rate when the bacteria after performing steps A and B are heated at 70 ° C. for 1 minute is, for example, 10 times or more, 100 times or more, 1000 times or more, 10000 times or more, or more than the survival rate when the bacteria before the steps A and B are heated at 70 ° C. for 1 minute. It may be 100,000 times or more.
  • Survival rate when the bacteria after performing steps A and B are heated at 70 ° C. for 1 minute (specifically, bacteria when the bacterial composition obtained by the method of the present invention is heated at 70 ° C. for 1 minute. Survival rate) may be, for example, 1% or more, 3% or more, 5% or more, or 10% or more.
  • Bacteria, fats and oils, and emulsifiers are collectively called "active ingredients".
  • active ingredients Bacteria, fats and oils, and emulsifiers are collectively called "active ingredients".
  • active ingredients Bacteria, fats and oils, and emulsifiers.
  • only the active ingredient may or may not be used. That is, in the method of the present invention, other ingredients may be used in addition to the active ingredient.
  • the components used in the method of the present invention ie, the active ingredient and optionally other components
  • raw materials are also collectively referred to as "raw materials".
  • step A other components may be used in addition to bacteria and fats and oils.
  • the “raw material” may collectively refer to bacteria, fats and oils, and optionally other components in step A.
  • step B other components may be used in addition to the bacteria and the emulsifier.
  • the “raw material” may collectively refer to bacteria, emulsifiers, and optionally other components in step B.
  • Bacteria are not particularly limited. As the bacterium, one kind of bacterium may be used, or two or more kinds of bacteria may be used in combination. Bacteria include bacteria that can be used as probiotics. Specific examples of the bacterium include lactic acid bacteria. Examples of the lactic acid bacterium include a bacterium belonging to the genus Bifidobacterium, a bacterium belonging to the genus Lactobacillus, a bacterium belonging to the genus Lactococcus, and a bacterium belonging to the genus Streptococcus.
  • Bifidobacterium genus bacteria include Bifidobacterium longum, Bifidobacterium breve, Bifidobacterium bifidum, and Bifidobacterium addressntis (Bifidobacterium addressntis).
  • Bifidobacterium adolescentis Bifidobacterium angulatum, Bifidobacterium dentium, Bifidobacterium pseudocatenulatum, Bifidobacterium animalis ), Bifidobacterium pseudolongum, Bifidobacterium thermophilum, and the like.
  • Bifidobacterium genus bacteria include, in particular, Bifidobacterium longum and Bifidobacterium breve.
  • Bifidobacterium genus bacteria include, more particularly, Bifidobacterium longum.
  • Bifidobacterium longum includes Bifidobacterium longum subspecies longum (B. longum subsp. Longum) and Bifidobacterium longum subspecies infantis (B. longum subsp. Infantis). , Bifidobacterium longum subspecies swiss (B. longum subsp. Suis), etc., strains classified into any subspecies of Bifidobacterium longum are also included.
  • Bifidobacterium animalis also includes strains classified into any subspecies of Bifidobacterium animalis, such as Bifidobacterium animalis subspecies lactis (B. animalis subsp. Lactis). To.
  • Bifidobacterium pseudolongum includes Bifidobacterium pseudolongum subsp. Globosum and Bifidobacterium pseudolongum subspecies pseudolongum (B. pseudolongum subspecies globosum). Includes strains classified into any subspecies of bifidobacteria and pseudolongum, such as. Pseudolongum subsp. Pseudolongum).
  • Bifidobacterium longum specifically, BB536 (NITE BP-02621), ATCC 15697, ATCC 15707, ATCC 25962, ATCC 15702, ATCC 27533, M-63 (NITE BP-02623), BG7, DSM 24736 , SBT 2928, NCC 490 (CNCM I-2170), NCC 2705 (CNCM I-2618).
  • Bifidobacterium longum is particularly BB536.
  • the bifidobacteria longum one strain may be used, or two or more strains may be used.
  • Bifidobacterium breve specifically, M-16V (NITE BP-02622), MCC1274 (FERM BP-11175), ATCC 15700, B632 (DSM 24706), Bb99 (DSM 13692), ATCC 15698, DSM 24732, UCC2003, YIT4010, YIT4064, BBG-001, BR-03, C50, R0070 can be mentioned.
  • Bifidobacterium breve is particularly M-16V.
  • one strain may be used, or two or more strains may be used.
  • Bifidobacterium Longum BB536 was issued on January 26, 2018 by the National Institute of Technology and Evaluation Patent Microorganisms Depositary Center (Room 122, 2-5-8 Kazusakamatari, Kisarazu City, Chiba Prefecture, Japan 292-0818). ), The deposit number is NITE BP-02621, and an international deposit is made based on the Budapest Treaty.
  • Bifidobacterium Bifidum examples include ATCC 29521, OLB6378, and BF-1.
  • Specific examples of the Bifidobacterium addressntis include ATCC 15703.
  • Specific examples of Bifidobacterium dentium include DSM20436.
  • Specific examples of Bifidobacterium animalis include DSM10140, Bb-12, DN-173010, GCL2505, and CNCM I-3446.
  • Specific examples of the Bifidobacterium pseudolong gum include JCM 5820 and ATCC 25526.
  • Specific examples of the Bifidobacterium thermophyllum include ATCC 25525.
  • Lactobacillus paracasei Lactobacillus casei, Lactobacillus plantarum, Lactobacillus gasseri, Lactobacillus gasseri, Lactobacillus gasseri, Lactobacillus plantarum, Lactobacillus gasseri, Lactobacillus gasseri acidophilus), Lactobacillus delbrueckii. Lactobacillus delbrueckii subsp. Bulgaricus, Lactobacillus delbrueckii subsp. Subsp. Lactobacillus delbrueckii subsp. Lactobacillus delbrueckii subsp. Lactobacillus delbrueckii subsp. Lactobacillus delbrueckii subsp. Lactobacillus delbrueckii subsp. Lactobacillus delbrueckii subsp. Strains classified into any subspecies of Lactobacillus delbrueckii, such as Lacto
  • Lactococcus lactis examples include Lactococcus lactis. Lactococcus lactis subsp. Lactoccus lactis subsp. Lactoccus lactis subsp. Lactococcus lactis subsp. Cremoris, Lactococcus lactis subsp. Cremoris, Lactococcus lactis subsp. Cremoris, Lactococcus lactis subsp. Strains classified into any subspecies of Lactococcus lactis, such as (Lactococcus lactis subsp. Hordniae), are also included.
  • Streptococcus bacterium examples include Streptococcus thermophilus.
  • strains include, for example, American Type Culture Collection (ATCC, Address: 10801 University Boulevard Manassas, VA20110, United States of America), Belgian Coordinated Collections of Microorganisms (BCCM, Address: Rue de la Science). ), German Collection of Microorganisms and Cell Cultures (DSMZ, Address: Inhoffenstr.7B, D38124 Braunschweig, Germany), Japan Collection of Microorganisms (JCM, Postal Code: 305-0074, Address: 3-Takanodai, Ibaraki, Japan 1-1) Japan Collection of Microorganisms, Bioresource Research Center, Institute of Physical and Chemical Research) or the depositary institution where each strain was deposited.
  • ATCC American Type Culture Collection
  • BCCM Belgian Coordinated Collections of Microorganisms
  • DSMZ German Collection of Microorganisms and Cell Cultures
  • JCM Postal Code: 305-0074, Address: 3-Takanodai, Ibaraki, Japan 1-1) Japan
  • strain specified by the above-exemplified strain name is not limited to the strain itself that has been deposited or registered with a predetermined institution under the strain name (hereinafter, also referred to as "deposited strain” for convenience of explanation).
  • deposited strain for convenience of explanation.
  • Substantially equivalent strains also referred to as “derivative strains” or “derivative strains” are also included. That is, for example, "Bifidobacterium longum BB536" is not limited to the strain itself deposited at the depository institution with the deposit number of BB536, and includes strains substantially equivalent thereto.
  • a strain substantially equivalent to the above-mentioned deposit strain belongs to the same species as the above-mentioned deposit strain, and the base sequence of the 16SrRNA gene thereof is relative to the base sequence of the 16SrRNA gene of the above-mentioned deposit strain.
  • a strain substantially equivalent to the above-mentioned deposit strain may be, for example, a derivative strain having the deposit strain as a parent strain. Derivative strains include strains bred from deposited strains and strains naturally occurring from deposited strains.
  • Examples of the breeding method include modification by a genetic engineering method and modification by mutation treatment.
  • Mutation treatment includes X-ray irradiation, ultraviolet irradiation, and N-methyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidine (MNNG), ethylmethanesulfonate (EMS), and methylmethanesulfonate (MMS). ) And other treatments with a mutagen.
  • MNNG N-methyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidine
  • EMS ethylmethanesulfonate
  • MMS methylmethanesulfonate
  • Other treatments with a mutagen include strains naturally occurring during the use of the deposited stock. Examples of such a strain include a mutant strain naturally generated by culturing a deposited strain (for example, subculture).
  • the derivative strain may be constructed by one modification or by two or more modifications.
  • bacterium a commercially available product may be used, or a bacterium obtained by appropriately manufacturing may be used.
  • commercially available products of the genus Bifidobacterium include Bifidobacterium Longum Subspecies Longham BB536 and Bifidobacterium Breve M-16V manufactured by Morinaga Milk Industry Co., Ltd.
  • bacterial cells can be easily obtained by culturing the bacteria.
  • the culture method is not particularly limited as long as the bacteria can grow.
  • culturing method for example, a method usually used for culturing bacteria such as Bifidobacterium spp. Can be used as it is or after being appropriately modified.
  • the culture temperature may be, for example, 25 to 50 ° C, preferably 35 to 42 ° C.
  • the culture can be preferably carried out under anaerobic conditions, for example, while aerating an anaerobic gas such as carbon dioxide.
  • the culture can also be carried out under microaerobic conditions such as liquid static culture. Culturing can be carried out, for example, until the bacteria have grown to the desired degree.
  • the medium used for culturing is not particularly limited as long as the bacteria can grow.
  • a medium usually used for culturing bacteria such as Bifidobacterium can be used as it is or after being appropriately modified.
  • the medium may contain, for example, a carbon source, a nitrogen source, an inorganic salt, an organic component, a milk component, or a combination thereof.
  • a carbon source for example, sugars such as galactose, glucose, fructose, mannose, cellobiose, maltose, lactose, sucrose, trehalose, starch, starch hydrolysate, and waste sugar honey can be used depending on the assimilation property.
  • ammonium salts such as ammonia, ammonium sulfate, ammonium chloride and ammonium nitrate and nitrates
  • inorganic salt for example, sodium chloride, potassium chloride, potassium phosphate, magnesium sulfate, calcium chloride, calcium nitrate, manganese chloride, ferrous sulfate and the like
  • organic component for example, peptone, soybean flour, defatted soybean meal, meat extract, yeast extract and the like can be used.
  • milk component for example, milk protein or the like can be used. Milk proteins include casein, whey, and their degradation products.
  • a medium usually used for culturing bacteria such as Bifidobacterium spp.
  • a fortified Clostridia medium Reinforced Clostridia medium
  • an MRS medium deMan, Rogosa, and Sharpe medium
  • an mMRS medium MMRS medium
  • Modified MRS medium TOSP medium
  • TOSPMup medium TOSpropionatemupirocinmedium
  • a bacterial cell or a fraction containing the bacterium can be used without particular limitation. That is, as the bacterium, for example, the culture obtained by culturing may be used as it is, the culture may be diluted or concentrated and used, or the cells recovered from the culture may be used. In addition, various additional operations such as heating, spray drying, and freeze drying can be performed after culturing as long as the effect of improving heat resistance is not impaired. The additional operation preferably has a high survival rate of bacterial cells. That is, specific examples of the bacterial cells or the fraction containing them include bacterial cultures, bacterial cells recovered from the cultures, and processed products such as dilutions, concentrates, and dried products thereof. Be done.
  • the bacterial cells shall be used in a form containing live bacterial cells.
  • the bacterial cells may be, for example, those consisting of live bacterial cells or a mixture of live bacterial cells and dead bacterial cells.
  • freeze-dried bacterial powder As the bacterium. That is, examples of bacteria (specifically, bacterial cells or fractions containing them) include freeze-dried bacterial powders. Further, it is preferable to disperse the bacteria in a dispersion medium together with a protective agent or the like before freeze-drying. Specifically, the bacterial cells can be collected from the culture solution, washed to obtain wet bacterial cells, and then the wet bacterial cells are dispersed in water to prepare a bacterial cell dispersion.
  • a protective agent or the like is added to the cell dispersion, and the mixture is uniformly mixed, and then freeze-dried by a conventional method to obtain a freeze-dried bacterial powder.
  • the protective agent amino acids such as aspartic acid, arginine, glutamic acid, proline, lysine, leucine, and methionine, and known protective agents such as glycerin, sucrose, and ascorbic acid can be used.
  • the lyophilized bacterial powder can be used as it is or mixed with other food materials.
  • the lyophilized bacterial powder is preferably used as it is.
  • the fats and oils are not particularly limited as long as they can obtain the effect of improving heat resistance when used in combination with an emulsifier.
  • the fats and oils one kind of fats and oils may be used, or two or more kinds of fats and oils may be used in combination.
  • the fats and oils commercially available products may be used, or those obtained by appropriately manufacturing may be used.
  • fats and oils examples include animal-derived fats and oils (animal fats and oils), plant-derived fats and oils (vegetable fats and oils), and hydrogenated oils thereof.
  • animal fats and oils include chicken fat, lard, beef tallow, sheep oil, whale oil, fish oil, egg oil, and butter.
  • fish oil examples include tuna oil, bonito oil, sardine oil, mackerel oil, salmon oil, and cod oil.
  • Vegetable oils and fats include rapeseed oil, rice oil, red flower oil, sunflower oil, olive oil, peanut oil, palm oil, palm kernel oil, palm oil, soybean oil, corn oil, cottonseed oil, sesame oil, grape seed oil, and sesame oil. Be done.
  • Examples of the hydrogenated oil include partially hydrogenated oil and extremely hydrogenated oil. Specific examples of the hydrogenated oil include partially hydrogenated oils of the above-exemplified vegetable oils and fats and extremely hardened oils of the above-exemplified vegetable oils and fats. Examples of the hydrogenated oil include a hydrogenated oil of palm kernel oil. Examples of the hydrogenated oil include an extremely hydrogenated palm kernel oil (palm kernel extremely hydrogenated oil). Examples of commercially available palm kernel extremely hardened oil include K-40 (manufactured by Taiyo Yushi Co., Ltd.).
  • Examples of fats and oils include those having a melting point in a specific range.
  • the fat and oil for example, among the fats and oils exemplified above, those having a melting point in a specific range may be selected.
  • the melting point of the palm kernel extremely hydrogenated oil can be around 40 ° C.
  • the melting point of fats and oils may be, for example, 20 ° C. or higher, 25 ° C. or higher, 30 ° C. or higher, 35 ° C. or higher, 40 ° C. or higher, 45 ° C. or higher, or 50 ° C. or higher, 55 ° C. or lower, 50 ° C. or lower, 45.
  • the melting point of the fat or oil may be, for example, 20 to 55 ° C, 25 to 50 ° C, 30 to 50 ° C, 35 to 50 ° C, or 40 to 50 ° C.
  • the melting points of fats and oils are, for example, 20 to 25 ° C, 25 to 30 ° C, 30 to 35 ° C, 35 to 40 ° C, 40 to 45 ° C, 45 to 50 ° C, or 50 to 55 ° C. May be good.
  • the melting point of fats and oils may be 35 ° C. or higher, 50 ° C. or lower, or 35 to 50 ° C.
  • the emulsifier is not particularly limited as long as it can obtain the effect of improving heat resistance when used in combination with fats and oils.
  • the emulsifier one type of emulsifier may be used, or two or more types of emulsifiers may be used in combination.
  • As the emulsifier a commercially available product may be used, or an emulsifier obtained by appropriately producing it may be used.
  • Examples of the emulsifier include glycerin fatty acid ester, sucrose fatty acid ester, propylene glycol fatty acid ester, lecithin, and saponin.
  • Examples of the glycerin fatty acid ester include monoglycerin fatty acid ester and polyglycerin fatty acid ester.
  • Examples of the glycerin fatty acid ester include polyglycerin fatty acid ester.
  • Examples of the emulsifier include polyglycerin fatty acid ester and lecithin. Examples of the emulsifier include lecithin, more particularly.
  • Polyglycerin fatty acid ester is a general term for compounds having a structure in which a fatty acid is ester-bonded to a hydroxyl group of polyglycerin.
  • Molecular structure of polyglycerin fatty acid ester (for example, degree of polymerization of polyglycerin, polymerization form of polyglycerin (linear, cyclic, branched), type of constituent fatty acid, esterification rate, esterification position, etc.) Is not particularly limited as long as the effect of improving heat resistance can be obtained by using it in combination with fats and oils.
  • the constituent fatty acids include fatty acids having 8 to 24 carbon atoms.
  • the constituent fatty acid may be a saturated fatty acid or an unsaturated fatty acid.
  • fatty acid having 8 to 24 carbon atoms examples include caprylic acid, lauric acid, myristic acid, palmitic acid, stearic acid, oleic acid, behenic acid, and erucic acid.
  • the constituent fatty acid one type of fatty acid may be used, or two or more types of fatty acids may be used in combination.
  • one molecule of polyglycerin may be ester-bonded with two or more fatty acids.
  • the degree of polymerization (average degree of polymerization) of polyglycerin may be, for example, 2 or more, 3 or more, 4 or more, 5 or more, 6 or more, 7 or more, or 8 or more, and 20 or less, 15 or less, 12 or less, It may be 10 or less, 8 or less, or 5 or less, and may be a range of consistent combinations thereof.
  • the degree of polymerization (average degree of polymerization) of polyglycerin is preferably, for example, 2 to 20, 3 to 15, 3 to 12, or 3 to 5.
  • the degree of polymerization (average degree of polymerization) of polyglycerin shall be calculated based on the hydroxyl value of polyglycerin.
  • the hydroxyl value of polyglycerin shall be measured in accordance with Japanese Industrial Standard JIS K 0070: 1992.
  • the HLB (hydrophile-lipophile balance) value of polyglycerin may be, for example, 1 or more, 2 or more, 3 or more, or 4 or more, and is 20 or less, 15 or less, 10 or less, 8 or less, or 5 or less. It may be a range of consistent combinations thereof. Specifically, the HLB value of polyglycerin is preferably, for example, 1 to 15, 1 to 10, 2 to 8, or 2 to 5. The HLB value shall be calculated by the Atlas method.
  • the description of the molecular structure of the polyglycerin fatty acid ester (for example, the type of constituent fatty acid, etc.) can be applied mutatis mutandis to other fatty acid esters.
  • Poem RJ-38 is a polyglycerin fatty acid ester having C18 (65%) and C16 (34%) constituent fatty acids.
  • Lecithin is a general term for materials containing phospholipids. Lecithin may contain a phospholipid as a main component. Examples of lecithin include plant lecithin, egg yolk lecithin, and derivatives thereof. Examples of plant lecithin include soybean lecithin, oilseed lecithin, and sunflower lecithin. Derivatives include fractionated lecithin, enzymatically treated lecithin, and enzymatically degraded lecithin. Examples of lecithin include soybean lecithin.
  • the HLB value of lecithin may be, for example, 1 or more, 2 or more, 3 or more, or 4 or more, 20 or less, 15 or less, 10 or less, 8 or less, or 5 or less, and their contradictions. It may be a range of combinations that do not. Specifically, the HLB value of lecithin is preferably, for example, 1 to 15, 1 to 10, 2 to 8, or 2 to 5.
  • saponin is a general term for sapogenin glycosides.
  • saponins include saponins of various plants. Specific examples of the saponin include soybean saponin, tea seed saponin, and soybean saponin.
  • acceptable ones can be used depending on the usage mode of the bacterial composition.
  • Other ingredients include those that can be taken orally.
  • Ingestible ingredients include ingredients used in foods and drinks or pharmaceuticals.
  • Step A is a step of mixing bacteria with fats and oils.
  • Step B is a step of mixing the bacteria with the emulsifier. Bacteria are subjected to both steps A and B (ie, both mixed with fats and oils and mixed with emulsifiers).
  • Steps A and B may be carried out at the same time or individually. Steps A and B may be performed individually, in particular.
  • the order in which steps A and B are carried out is not particularly limited. That is, the step B may be carried out after the execution of the step A, or the step A may be carried out after the execution of the step B. In particular, step B may be carried out after the step A is carried out.
  • “Steps A and B are performed simultaneously” means that the other of steps A and B is started before the completion of either of steps A and B.
  • “Steps A and B are carried out at the same time” means that steps A and B are started at the same time, or steps A and B are started while one of steps A and B is being carried out. Included.
  • steps A and B are carried out simultaneously may mean that steps A and B are carried out simultaneously for a part or all of the period. If steps A and B are performed simultaneously, steps A and B may be completed simultaneously or individually. “Steps A and B are performed individually” means that after the completion of either step A or B, the other of steps A and B is started. "Under implementation of a process” means the period from the start to the completion of the process. “Completion of the process” means a state in which the process is sufficiently carried out, and specifically, may mean a state in which the process is carried out for a predetermined time. Examples of the "predetermined time” for executing each step include the execution time of each step described later.
  • steps A and B may be started at the same time or individually. Steps A and B may, in particular, be initiated individually. That is, after the start of either step A or B, the other of steps A and B may be started. Specifically, the other of steps A and B may be started during or after the implementation or completion of one of steps A and B.
  • the order in which steps A and B are started is not particularly limited. That is, the step B may be started after the start of the step A, or the step A may be started after the start of the step B. In particular, step B may be started after the start of step A. More particularly, step B may be started after the completion of step A.
  • bacteria may be coated with fats and oils.
  • step B for example, the bacteria may be coated with an emulsifier.
  • bacteria may be coated with fats and oils and emulsifiers.
  • steps A and B specifically, for example, bacteria may be coated with a mixture of fats and oils and an emulsifier.
  • steps A and B specifically, for example, bacteria may be coated with fats and oils, and further coated with an emulsifier.
  • step B when step B is initiated after step A, the bacteria may be coated with fats and oils and further with an emulsifier.
  • bacteria may be coated with an emulsifier and further coated with oil or fat.
  • the bacteria when step A is initiated after step B, the bacteria may be coated with an emulsifier and further coated with fats and oils. That is, "bacteria are coated with fats and oils and emulsifiers” means that bacteria are coated with fats and oils and emulsifiers regardless of the mixed state of fats and oils and emulsifiers and the order of coating with fats and oils and emulsifiers, unless otherwise specified. You can do it.
  • Bacteria are coated with fats and oils is not limited to cases where bacteria are coated with fats and oils alone, but also includes cases where bacteria are coated with a mixture of fats and oils and other components. For example, when performing step A, if other components coexist in addition to the bacteria and fats and oils, the bacteria may be coated with a mixture of the fats and oils and other components.
  • Bacteria are coated with an emulsifier is not limited to the case where the bacteria are coated with the emulsifier alone, but also the case where the bacteria are coated with a mixture of the emulsifier and other components.
  • the bacteria when performing step B, if the bacteria and the emulsifier are coexisting with other ingredients, the bacteria may be coated with a mixture of the emulsifier and the other ingredients.
  • the "bacteria” provided in step B may be read as bacteria after the start of step A.
  • the bacteria after the start of step A may be, for example, a mixture of bacteria and fats and oils.
  • the bacterium after the start of step A may be, for example, a bacterium coated with fat or oil.
  • the "bacteria” provided in the step A may be read as the bacteria after the start of the step B.
  • the bacterium after the start of step B may be, for example, a mixture of the bacterium and an emulsifier.
  • the bacterium after the start of step B may be, for example, an emulsifier-coated bacterium.
  • the raw materials may all be used in any form such as liquid, paste, and powder.
  • fats and oils may be used in step A, especially in the form of a liquid.
  • the liquid fat or oil may be inherently liquid or may be processed (for example, heated) so as to be liquid. That is, the fats and oils may be used in the step A after being heated to a temperature equal to or higher than the melting point in advance.
  • fats and oils may be added to the fats and oils, and bacteria may be added to the fats and oils.
  • the addition means can be appropriately set according to various conditions such as the shape of the raw material.
  • the component to be added when the component to be added is liquid, the component may be dropped or sprayed. Specifically, for example, when the fat or oil is liquid, the fat or oil may be dropped or sprayed on the bacteria.
  • the other ingredients may or may not be premixed with, for example, bacteria and / or fats and oils.
  • the raw materials may all be used in any form such as liquids, pastes, powders and the like.
  • the emulsifier may be used in step B, especially in the form of a liquid.
  • the liquid emulsifier may be originally in a liquid state, or may be processed (for example, heated) so as to be in a liquid state. That is, the emulsifier may be used in step B after being preheated to a temperature equal to or higher than the melting point, for example.
  • an emulsifier may be added to the bacterium, or the bacterium may be added to the emulsifier.
  • the addition means can be appropriately set according to various conditions such as the shape of the raw material.
  • the component to be added is liquid
  • the component may be dropped or sprayed.
  • the emulsifier may be dropped or sprayed onto the bacteria.
  • the other ingredients may or may not be premixed with, for example, bacteria and / or emulsifiers.
  • the fats and oils and the emulsifier may be used individually or as a mixture, for example.
  • the means for mixing the raw materials is not particularly limited.
  • Examples of the means for mixing the raw materials include stirring mixing and inversion mixing.
  • Examples of the means for mixing the raw materials include stirring and mixing.
  • Mixing of raw materials can be carried out, for example, in a suitable container.
  • a container in which raw materials are mixed is also referred to as a "mixing container".
  • Steps A and B may or may not be performed in the same mixing vessel. Both steps A and B may be carried out, for example, in a batch manner or in a continuous manner.
  • Mixing of raw materials can be carried out using, for example, a mixing device.
  • the mixing device may include, for example, a mixing container. Further, the mixing device may include, for example, a stirring blade.
  • the stirring blade may be called an agitator, a chopper, or the like.
  • the mixing device may have, for example, a temperature control function.
  • Examples of the mixing device include a stirring granulator.
  • a high-speed stirring type mixing granulator (NMG series, etc .; manufactured by Nara Machinery Co., Ltd.), a new speed kneader (NSK series, etc.; manufactured by Okada Seiko), a balance gran (BG series, etc .; Freund Turbo) (Manufactured by), Flexomix (FXD-250, etc .; manufactured by Hosokawa Micron), Vertical Granulator (manufactured by Paulek).
  • the amount ratio of the raw materials used in the method of the present invention is not particularly limited as long as the effect of improving heat resistance can be obtained.
  • the amount ratio of the raw material used in the method of the present invention can be appropriately set according to various conditions such as the type of raw material, the shape (dosage form) of the bacterial composition, and the use of the bacterial composition.
  • the amount of fats and oils used may be, for example, 1.2 g or more, 1.5 g or more, 2 g or more, 2.5 g or more, 3 g or more, or 3.5 g or more per 50 g of dried bacterial cell weight. It may be 8.8 g or less, 4.5 g or less, 4 g or less, 3.5 g or less, 3 g or less, or 2.5 g or less, and may be in a range of consistent combinations thereof.
  • the amount of fats and oils used may be, for example, 1.2 to 4.8 g, preferably 1.5 to 4.5 g, and more preferably 2 to 4 g per 50 g of dried bacterial cell weight. Good.
  • the amount of fats and oils used may be set based on the viable count of bacteria.
  • the above-mentioned "per 50 g of dry bacterial cell weight” may be read as, for example, “per 4 ⁇ 10 12 cfu of live bacteria”.
  • the amount of the emulsifier used is, for example, 1 g or more, 1.5 g or more, 2 g or more, 3 g or more, 4 g or more, 5 g or more, 6 g or more, 7 g or more, 8 g or more, 9 g or more, or It may be 10 g or less, 20 g or less, 17 g or less, 15 g or less, 14 g or less, 13 g or less, 12 g or less, 11 g or less, 10 g or less, 9 g or less, 8 g or less, and a range of consistent combinations thereof. It may be.
  • the amount of the emulsifier used may be, for example, 1 to 20 g, 1.5 to 17 g, or 2 to 15 g, and 8 to 17 g, 9 to 16 g, per 50 g of the dry cell weight of the bacterium. Alternatively, it may be 10 to 15 g.
  • the amount of the emulsifier used may be 1 to 20 g, preferably 1.5 to 17 g, and more preferably 2 to 15 g per 50 g of dry bacterial cell weight, particularly when the emulsifier is lecithin.
  • the amount of the emulsifier used may be 8 to 17 g, preferably 9 to 16 g, and more preferably 10 to 15 g per 50 g of dry bacterial cell weight, particularly when the emulsifier is a polyglycerin fatty acid ester. Further, the amount of the emulsifier used may be half the amount of the above-exemplified amount in terms of the weight of phospholipid per 50 g of dried bacterial cells, especially when the emulsifier is lecithin. Good. Further, the amount of the emulsifier used may be set based on the viable count of bacteria. In that case, the above-mentioned "per 50 g of dry bacterial cell weight" may be read as, for example, "per 4 ⁇ 10 12 cfu of live bacteria".
  • the total amount of the active ingredient used is, for example, 1% or more, 3% or more, 5% or more, 10% or more, 20% or more, 30% or more, 40% or more, 50% as a weight ratio to the total amount of the raw material used.
  • it may be 90% or less, 80% or less, 70% or less, 60% or less, or 50% or less, and may be a range of consistent combinations thereof.
  • the total amount of the active ingredient used is, as a weight ratio to the total amount of the raw material used, specifically, for example, 1 to 100%, 10 to 100%, 30 to 100%, 50 to 100%, 70 to 100%. It may be 90 to 100%, 95 to 100%, or 99 to 100%.
  • the implementation time of step A is not particularly limited as long as the effect of improving heat resistance can be obtained.
  • the implementation time of step A can be appropriately set according to various conditions such as the type of raw material, the shape (dosage form) of the bacterial composition, and the use of the bacterial composition.
  • the implementation time of step A is, for example, 30 seconds or more, 45 seconds or more, 1 minute or more, 1.5 minutes or more, 2 minutes or more, 2.5 minutes or more, 3 minutes or more, 3.5 minutes or more, or 4 minutes. It may be more than 15 minutes or less, 10 minutes or less, 7 minutes or less, 5 minutes or less, 4.5 minutes or less, 4 minutes or less, 3.5 minutes or less, 3 minutes or less, or 2.5 minutes or less. It may be, or it may be a range of consistent combinations thereof.
  • the execution time of the step A may be, for example, 30 seconds to 15 minutes, preferably 45 seconds to 10 minutes, and more preferably 1 minute to 7 minutes.
  • the implementation time of step B is not particularly limited as long as the effect of improving heat resistance can be obtained.
  • the execution time of step B can be appropriately set according to various conditions such as the type of raw material, the shape (dosage form) of the bacterial composition, and the use of the bacterial composition.
  • the implementation time of step B is, for example, 30 seconds or more, 1 minute or more, 2 minutes or more, 3 minutes or more, 5 minutes or more, 7 minutes or more, 10 minutes or more, 15 minutes or more, 20 minutes or more, 25 minutes or more, or It may be 30 minutes or more, 180 minutes or less, 150 minutes or less, 120 minutes or less, 100 minutes or less, 90 minutes or less, 80 minutes or less, 70 minutes or less, 60 minutes or less, 50 minutes or less, 45 minutes or less, 40 minutes.
  • the execution time of the step B may be, for example, 30 seconds to 30 minutes, 1 minute to 20 minutes, or 2 minutes to 15 minutes, 30 seconds to 180 minutes, 1 minute to 120 minutes, and the like. Alternatively, it may be 2 to 90 minutes.
  • the implementation time of step B may be 30 seconds to 40 minutes, preferably 1 minute to 30 minutes, and more preferably 2 minutes to 20 minutes, particularly when the emulsifier is a polyglycerin fatty acid ester.
  • the implementation time of step B may be 30 seconds to 180 minutes, preferably 1 minute to 120 minutes, and more preferably 2 minutes to 90 minutes, particularly when the emulsifier is lecithin.
  • the step B When the step B is started after the step A, for example, the step B may be started after the step A is started and before the execution time of the step A as illustrated above elapses. Step B may be started after the implementation time of A has elapsed. For example, the time from the start of the step A to the start of the step B may be set to the execution time of the step A as illustrated above.
  • the step A When the step A is started after the step B, for example, the step A may be started after the step B is started and before the execution time of the step B as illustrated above elapses. Step A may be started after the lapse of the implementation time of B. For example, the time from the start of the step B to the start of the step A may be set to the execution time of the step B as illustrated above.
  • the total implementation time of steps A and B may be set so that, for example, the implementation time as illustrated above can be secured for both processes.
  • the “total execution time of steps A and B” means the time from the start of the process A or B, whichever starts earlier, to the completion of the process A or B, whichever is later completed.
  • start of step A or B whichever starts earlier means start of both steps when both steps start at the same time.
  • completion of the later of steps A and B, whichever is completed means completion of both steps when both steps are completed at the same time.
  • the total execution time of steps A and B is, for example, the longer of the implementation time of step A as illustrated above and the implementation time of step B as exemplified above. You may set it.
  • steps A and B may or may not be the same. At least during the period in which steps A and B are carried out at the same time, the conditions for carrying out steps A and B are the same.
  • step A may or may not be constant during the entire period in which step A is performed.
  • step B may or may not be constant during the entire period in which step B is implemented.
  • Step A is carried out at a temperature equal to or higher than the melting point of the fat or oil. That is, the temperature of the step A (that is, the temperature at which the step A is carried out) is a temperature equal to or higher than the melting point of the fat or oil.
  • the temperature of the step A is not particularly limited as long as it is equal to or higher than the melting point of the fat and oil and the heat resistance improving effect can be obtained.
  • the temperature of step A can be appropriately set according to various conditions such as the type of raw material, the shape (dosage form) of the bacterial composition, and the use of the bacterial composition.
  • the temperature in step A may be, for example, 1 ° C. or higher, 2 ° C. or higher, 3 ° C. or higher, 4 ° C.
  • the temperature of step A may be, for example, 20 ° C or higher, 25 ° C or higher, 30 ° C or higher, 35 ° C or higher, 40 ° C or higher, 45 ° C or higher, or 50 ° C or higher, 55 ° C or lower, 50 ° C or lower, It may be 45 ° C. or lower, 40 ° C. or lower, 35 ° C. or lower, 30 ° C. or lower, or 25 ° C. or lower, and may be in a range of consistent combinations thereof.
  • the temperature of step A may be, for example, 20 to 55 ° C, 25 to 50 ° C, 30 to 50 ° C, 35 to 50 ° C, or 40 to 50 ° C.
  • the temperature of step A is, for example, 20 to 25 ° C, 25 to 30 ° C, 30 to 35 ° C, 35 to 40 ° C, 40 to 45 ° C, 45 to 50 ° C, or 50 to 55 ° C. You may.
  • the temperature of step A may be particularly 40 ° C. or higher, 50 ° C. or lower, or 40 to 50 ° C.
  • the temperature may normally be within the temperature range as exemplified above during the entire period of step A, but may be temporarily outside the range.
  • the temperature of the step A is in a certain range is not limited to the case where the temperature is within the range during the entire period of the step A, and also includes the case where the temperature is temporarily out of the range.
  • the temperature may be temporarily lowered below the melting point of the fat or oil.
  • the length of the "temporary” for the step A is not particularly limited as long as the heat resistance improving effect can be obtained.
  • “Temporary” for step A means, for example, a period of 20% or less, 15% or less, 10% or less, 5% or less, 3% or less, or 1% or less of the entire period of step A. You can do it.
  • the temperature of the step A is set so that the bacteria survive to a desired degree when the step A is carried out.
  • the survival rate of bacteria when the step A is carried out may be, for example, 50% or more, 70% or more, 90% or more, or 95% or more.
  • the survival rate of bacteria when step A is carried out is the number of viable bacteria before the step A (specifically, at the start of step A) after the step A is carried out (specifically, in step A). It is calculated as the ratio of the viable cell count (at the time of completion).
  • the temperature of step B (that is, the temperature at which step B is carried out) is not particularly limited as long as the heat resistance improving effect can be obtained.
  • the temperature of step B can be appropriately set according to various conditions such as the type of raw material, the shape (dosage form) of the bacterial composition, and the use of the bacterial composition.
  • Step B may be carried out, for example, at a temperature equal to or higher than the melting point of the emulsifier. That is, the temperature in step B may be, for example, a temperature equal to or higher than the melting point of the emulsifier.
  • the temperature in step B may be, for example, 1 ° C. or higher, 2 ° C. or higher, 3 ° C. or higher, 4 ° C. or higher, or 5 ° C.
  • the temperature of step B may be, for example, 20 ° C or higher, 25 ° C or higher, 30 ° C or higher, 35 ° C or higher, 40 ° C or higher, 45 ° C or higher, or 50 ° C or higher, 55 ° C or lower, 50 ° C or lower, It may be 45 ° C. or lower, 40 ° C. or lower, 35 ° C. or lower, 30 ° C. or lower, or 25 ° C. or lower, and may be in a range of consistent combinations thereof.
  • the temperature of step B may be, for example, 20 to 55 ° C, 25 to 50 ° C, 30 to 50 ° C, 35 to 50 ° C, or 40 to 50 ° C.
  • the temperature of step B is, for example, 20 to 25 ° C, 25 to 30 ° C, 30 to 35 ° C, 35 to 40 ° C, 40 to 45 ° C, 45 to 50 ° C, or 50 to 55 ° C. You may.
  • the temperature of step B may be particularly 40 ° C. or higher, 50 ° C. or lower, or 40 to 50 ° C.
  • the temperature may normally be within the temperature range as illustrated above for the entire period of step B, but may be temporarily outside the range.
  • the temperature of step B is within a certain range” is not limited to the case where the temperature is within the range during the entire period of step B, and also includes the case where the temperature is temporarily outside the range.
  • the length of the "temporary” for the step B is not particularly limited as long as the heat resistance improving effect can be obtained.
  • “Temporary” for step B means, for example, a period of 20% or less, 15% or less, 10% or less, 5% or less, 3% or less, or 1% or less of the entire period of step B. You can do it.
  • the temperature of step B is set so that the bacteria survive to a desired degree when step B is carried out.
  • the survival rate of bacteria when the step B is carried out may be, for example, 50% or more, 70% or more, 90% or more, or 95% or more.
  • the survival rate of bacteria when step B is carried out is the number of viable bacteria before the step B (specifically, at the start of step B) after the step B is carried out (specifically, in step B). It is calculated as the ratio of the viable cell count (at the time of completion).
  • the temperature control method (for example, the temperature raising method) is not particularly limited.
  • the temperature can be controlled (for example, raised) by heating the mixing vessel.
  • the means for heating the mixing container is not particularly limited as long as the inside of the mixing container can be heated (specifically, the raw material inside the mixing container can be heated).
  • the heating means may be incorporated in the mixing container, for example, or may be provided outside the mixing container.
  • a heating jacket can be mentioned. That is, for example, by covering the mixing container with a heating jacket and heating the jacket, the inside of the mixing container can be heated from the outside.
  • the mixing speed in step A is not particularly limited as long as the effect of improving heat resistance can be obtained.
  • the mixing rate in step A can be appropriately set according to various conditions such as the type of raw material, the shape (dosage form) of the bacterial composition, the use of the bacterial composition, and the type of mixing device used.
  • the mixing speed in step A may be, for example, 100 rpm or more, 300 rpm or more, 500 rpm or more, 1000 rpm or more, 1500 rpm or more, 2000 rpm or more, or 2500 rpm or more, as the rotation speed of the stirring blade, 5000 rpm or less, 4000 rpm or less, 3000 rpm.
  • the mixing speed in the step A may be, for example, 500 to 5000 rpm, preferably 1000 to 4000 rpm, and more preferably 2000 to 3000 rpm as the rotation speed of the stirring blade.
  • the mixing speed in step A is, for example, 1 m / s or more, 3 m / s or more, 5 m / s or more, 10 m / s or more, 15 m / s or more as the peripheral speed of the stirring blade (that is, the rotation speed of the tip of the stirring blade).
  • the mixing speed in the step A is, for example, 3 to 50 m / s, preferably 5 to 40 m / s, more preferably 10 to 10 to the peripheral speed of the stirring blade (that is, the rotation speed of the tip of the stirring blade). It may be 30 m / s.
  • the mixing rate may normally be within the range of the mixing rate as illustrated above during the entire period of step A, but may be temporarily outside the range. That is, "the mixing speed in step A is within a certain range” is not limited to the case where the mixing speed is within the range during the entire period of step A, and the mixing speed may be temporarily out of the range. Include.
  • step A mixing of raw materials may be temporarily stopped. That is, in step A, the mixing of the raw materials may be performed continuously or intermittently.
  • the length of the "temporary" for the step A is not particularly limited as long as the heat resistance improving effect can be obtained.
  • “Temporary” for step A means, for example, a period of 20% or less, 15% or less, 10% or less, 5% or less, 3% or less, or 1% or less of the entire period of step A. You can do it.
  • the mixing speed in step B is not particularly limited as long as the heat resistance improving effect can be obtained.
  • the mixing rate in step B can be appropriately set according to various conditions such as the type of raw material, the shape (dosage form) of the bacterial composition, the use of the bacterial composition, and the type of the mixing device used.
  • the mixing speed in step B may be, for example, 100 rpm or more, 300 rpm or more, 500 rpm or more, 1000 rpm or more, 1500 rpm or more, 2000 rpm or more, or 2500 rpm or more as the rotation speed of the stirring blade, 5000 rpm or less, 4000 rpm or less, 3000 rpm.
  • the mixing speed in the step B may be, for example, 500 to 5000 rpm, preferably 1000 to 4000 rpm, and more preferably 2000 to 3000 rpm as the rotation speed of the stirring blade.
  • the mixing speed in step B is, for example, 1 m / s or more, 3 m / s or more, 5 m / s or more, 10 m / s or more, 15 m / s or more as the peripheral speed of the stirring blade (that is, the rotation speed of the tip of the stirring blade).
  • the mixing speed in step B is, for example, 3 to 50 m / s, preferably 5 to 40 m / s, more preferably 10 to 10 to the peripheral speed of the stirring blade (that is, the rotation speed of the tip of the stirring blade). It may be 30 m / s.
  • the mixing rate may normally be within the range of the mixing rate as illustrated above during the entire period of step B, but may be temporarily outside the range. That is, "the mixing rate in step B is within a certain range” is not limited to the case where the mixing rate is within the range during the entire period of step B, and the mixing rate may be temporarily out of the range. Include.
  • step B mixing of raw materials may be temporarily stopped. That is, in step B, the mixing of the raw materials may be performed continuously or intermittently.
  • the length of the "temporary" for the step B is not particularly limited as long as the heat resistance improving effect can be obtained.
  • “Temporary” for step B means, for example, a period of 20% or less, 15% or less, 10% or less, 5% or less, 3% or less, or 1% or less of the entire period of step B. You can do it.
  • the heat resistance of bacteria can be improved.
  • the bacterium having improved heat resistance may be obtained, for example, as a bacterium composition (specifically, a heat-resistant bacterium composition).
  • the bacterial composition may be obtained, for example, as a paste-like composition.
  • the bacterial composition may be used as it is or after being appropriately processed.
  • the bacterial composition may be processed into any shape and used, for example.
  • the use of the bacterial composition is not particularly limited.
  • the bacterial composition may be used, for example, by adding it to foods and drinks. That is, the bacterial composition may be, for example, a composition for adding food or drink (that is, a composition used by adding to food or drink).
  • the present invention also provides foods and drinks containing a bacterial composition.
  • Food and drink are not particularly limited. Examples of food and drink include dairy products.
  • the dairy product may be a product produced from milk as a raw material. Examples of dairy products include milk powder. Examples of milk powder include whole milk powder, skim milk powder, adjusted milk powder, whey powder, and creaming powder. Specific examples of foods and drinks such as milk powder include those for babies and those for infants. Examples of foods and drinks such as milk powder include those for babies.
  • milk powder specific examples thereof include milk powder prepared for infants and milk powder prepared for childcare such as follow-up milk.
  • infants means a child less than one year old.
  • infant means a child from the first year of life to elementary school.
  • the content of the bacterial composition in food and drink is not particularly limited.
  • the content of the bacterial composition in foods and drinks is, for example, 0.01% (w / w) or more, 0.1% (w / w) or more, 0.5% (w / w) or more, and 1% (w). / W) or more, 5% (w / w) or more, or 10% (w / w) or more, 50% (w / w) or less, 30% (w / w) or less, 20% ( It may be w / w) or less, 10% (w / w) or less, or 5% (w / w) or less, and may be a range of consistent combinations thereof.
  • the content of the bacterial composition in foods and drinks is, for example, 0.01% (w / w) to 50% (w / w) and 0.1% (w / w) to 50% (w). / W), 0.1 (w / w) to 10 (w / w)%, or 0.5 (w / w) to 5 (w / w)%.
  • the content of the bacterial composition in foods and drinks is, for example, 1 ⁇ 10 4 cfu / g or more, 1 ⁇ 10 5 cfu / g or more, and 1 ⁇ 10 6 cfu / g or more in terms of the bacterial content.
  • the content of the bacterial composition in foods and drinks is, for example, 1 ⁇ 10 5 to 1 ⁇ 10 12 cfu / g, preferably 1 ⁇ 10 6 to 1 ⁇ 10 in terms of the content of bacteria. It may be 11 cfu / g, more preferably 1 ⁇ 10 7 to 1 ⁇ 10 10 cfu / g.
  • composition of the present invention is a composition containing bacteria, fats and oils, and an emulsifier. Bacteria, fats and oils, and emulsifiers are also collectively referred to as "active ingredients”.
  • composition of the present invention may or may not consist of an active ingredient. That is, the composition of the present invention may contain other ingredients in addition to the active ingredient.
  • the description of the raw material in the method of the present invention can be applied mutatis mutandis.
  • the bacterium contained in the composition of the present invention may be a bacterium having improved heat resistance as compared with the case where it is not contained in the composition of the present invention. That is, the composition of the present invention may be a heat-resistant bacterial composition (composition containing bacteria having improved heat resistance).
  • the effect of improving the heat resistance of bacteria obtained by being contained in the composition of the present invention is also referred to as "heat resistance improving effect".
  • the description of the heat resistance improving effect in the method of the present invention can be applied mutatis mutandis. That is, the bacteria before the implementation of steps A and B in the method of the present invention may be read as bacteria in a state not contained in the composition of the present invention. In addition, the bacteria after performing steps A and B in the method of the present invention may be read as the bacteria in the state contained in the composition of the present invention.
  • the amount and amount ratio of the components contained in the composition of the present invention are not particularly limited as long as the effect of improving heat resistance can be obtained.
  • the description of the amount of the raw material used in the method of the present invention can be applied mutatis mutandis. That is, the amount ratio of the raw materials used in the method of the present invention may be read as the amount ratio of the components contained in the composition of the present invention.
  • the weight ratio of the total amount of the active ingredient used to the total amount of the raw material used in the method of the present invention may be read as the total content of the active ingredient in the composition of the present invention.
  • the content of each active ingredient in the composition of the present invention is in the range calculated from the total content of the active ingredient in the composition of the present invention and the amount ratio of the components contained in the composition of the present invention. Good.
  • the bacterial content in the composition of the present invention is, for example, 1 ⁇ 10 4 cfu / g or more, 1 ⁇ 10 5 cfu / g or more, 1 ⁇ 10 6 cfu / g or more, or 1 ⁇ 10 7 cfu / g. It may be 1 ⁇ 10 13 cfu / g or less, 1 ⁇ 10 12 cfu / g or less, or 1 ⁇ 10 11 cfu / g or less, and may be in the range of a combination thereof. Good.
  • the content of bacteria in the composition of the present invention is, for example, 1 ⁇ 10 4 to 1 ⁇ 10 13 cfu / g, preferably 1 ⁇ 10 6 to 1 ⁇ 10 12 cfu / g, more preferably. It may be 1 ⁇ 10 7 to 1 ⁇ 10 11 cfu / g.
  • the bacterium may be coated with, for example, an oil and an emulsifier.
  • the bacterium may be specifically coated with, for example, a mixture of a fat and an emulsifier.
  • the bacterium may be specifically coated with, for example, an oil or fat, and further coated with an emulsifier.
  • the bacterium may be specifically coated with, for example, an emulsifier and further coated with an oil or fat.
  • the shape of the composition of the present invention is not particularly limited.
  • the composition of the present invention may be in the form of powder or paste, for example.
  • composition of the present invention is not particularly limited.
  • the description of the use of the bacterial composition obtained by the method of the present invention can be applied mutatis mutandis. That is, the composition of the present invention may be used by adding it to foods and drinks such as milk powder.
  • the method for producing the composition of the present invention is not particularly limited.
  • the composition of the present invention can be produced, for example, by the method of the present invention described above. That is, one aspect of the composition of the present invention may be a bacterial composition produced by the method of the present invention.
  • Example 1 the effect of improving the heat resistance of bacteria by the combined use of fats and oils and an emulsifier was evaluated.
  • Bifidobacterium longum BB536 NITE BP-02621; hereinafter, also referred to as “BB536”
  • BB536 Bifidobacterium longum
  • K-40 palm kernel extremely hydrogenated oil
  • emulsifier polyglycerin fatty acid ester
  • Poem RJ-38 is a polyglycerin fatty acid ester having C18 (65%) and C16 (34%) constituent fatty acids.
  • BB536 was cultured, and the obtained cells were freeze-dried to obtain dried cells.
  • the stirring is carried out in two steps, the raw material of the first layer is added and the stirring is carried out under the condition of the first layer, and then the raw material of the second layer is further added under the condition of the second layer. Stirring was performed.
  • the palm kernel extremely hardened oil was previously heated and dissolved, and then added dropwise to the cells.
  • the polyglycerin fatty acid ester was added to the cells as a powder.
  • the product was dispersed in hot water at 70 ° C. at a concentration of 1.0% by weight, and the survival rate of BB536 after 1 minute was measured and used as an index of heat resistance of BB536.
  • the experimental conditions are the same in the following examples.
  • Example 2 In this example, the effect of improving the heat resistance of bacteria by the combined use of fat and oil and the emulsifier was evaluated when the emulsifier was used in various addition amounts.
  • the bacteria, fats and oils and emulsifiers used are the same as in Example 1.
  • Example 3 In this example, when other emulsifiers were used, the effect of improving the heat resistance of bacteria by the combined use of fats and oils and emulsifiers was evaluated.
  • the bacteria and fats and oils used are the same as in Example 1.
  • lecithin (Yelkin TS; manufactured by ADM Japan Co., Ltd.) was used.
  • Yelkin TS is a liquid soy lecithin.
  • Example 4 In this example, when other bacteria were used, the effect of improving the heat resistance of the bacteria by the combined use of fats and oils and an emulsifier was evaluated.
  • the fats and oils and emulsifiers used are the same as in Example 3.
  • Bifidobacterium breve M-16V NITE BP-02622; hereinafter, also referred to as “M-16V” was used.
  • M-16V was cultured and the cells were freeze-dried to obtain dried cells. Using 50 g of dried bacterial cells of M-16V, stirring was carried out under the raw materials and stirring conditions shown in Table 4, and the heat resistance of the bacteria was evaluated.
  • the heat resistance of bacteria can be improved.

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Pediatric Medicine (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • General Preparation And Processing Of Foods (AREA)

Abstract

細菌の耐熱性を向上させる技術を提供する。細菌を油脂および乳化剤と混合することにより細菌の耐熱性を向上させる。

Description

耐熱性細菌組成物
　本発明は、耐熱性の向上した細菌を含有する組成物およびその製造法に関する。
　細菌の耐熱性を向上させる技術としては、例えば、乳タンパク質（特許文献１）、凝固剤（特許文献２）、常温で非流動性である疎水性物質（特許文献３）、安定化剤および保護剤（特許文献４）、タンパク質系食用ゲル化剤（特許文献５）、タンパク質（非特許文献１）、低融点油脂（ＬＭＦ）（非特許文献２）等の成分を利用して細菌を被覆またはカプセル化する技術が知られている。
　また、グリセリン脂肪酸エステルを利用して細菌を被覆または造粒する技術が知られている（特許文献６～７）。しかしながら、特許文献６～７には、細菌の耐熱性については記載されていない。
　また、細菌を油脂および乳化剤と混合することにより細菌の耐熱性が向上することは知られていない。
特許第３６９８４５５号 特開２００４－３４４１４６ 特許第３１０２９９０号 特許第５８４１５２７号 特開平１０－１９１９５０ 特開平２－２００６３９ 特許第２５９６４１８号
Journal of Food Science, 2017, 9, 2134-2141 Food Hydrocolloids, 2015, 51, 459-467
　本発明は、細菌の耐熱性を向上させる技術を提供することを課題とする。
　本発明者らは、ビフィドバクテリウム（Bifidobacterium）属細菌等の細菌を油脂および乳化剤と混合することにより細菌の耐熱性が向上することを見出し、本発明を完成するに至った。
　すなわち、本発明は、以下の通り例示できる。
　本発明の一態様は、細菌を含有する組成物の製造方法であって、
　下記工程ＡおよびＢ：
（Ａ）細菌を油脂と混合する工程；
（Ｂ）細菌を乳化剤と混合する工程
　を含み、
　前記工程Ａが、前記油脂の融点以上の温度で実施される、方法である。
　前記方法は、前記工程Ａが、前記工程Ｂの開始前または開始後に開始されることを好ましい態様としている。
　前記方法は、前記工程ＡおよびＢが、同時に開始されることを好ましい態様としている。
　前記方法は、前記油脂が、融点が５０℃以下の油脂であることを好ましい態様としている。
　前記方法は、前記油脂が、融点が３５℃以上の油脂であることを好ましい態様としている。
　前記方法は、前記油脂が、パーム核極度硬化油であることを好ましい態様としている。
　前記方法は、前記工程Ａが、５０℃以下の温度で実施されることを好ましい態様としている。
　前記方法は、前記工程Ａが、４０℃以上の温度で実施されることを好ましい態様としている。
　前記方法は、前記乳化剤が、レシチンまたはポリグリセリン脂肪酸エステルであることを好ましい態様としている。
　前記方法は、前記工程Ｂが、５０℃以下の温度で実施されることを好ましい態様としている。
　前記方法は、前記工程Ｂが、４０℃以上の温度で実施されることを好ましい態様としている。
　前記方法は、前記油脂の混合量が、前記細菌の乾燥菌体重量５０ｇ当たり、１．５～４．５ｇであることを好ましい態様としている。
　前記方法は、前記乳化剤が、ポリグリセリン脂肪酸エステルであり、前記乳化剤の混合量が、前記細菌の乾燥菌体重量５０ｇ当たり、８～１７ｇであることを好ましい態様としている。
　前記方法は、前記乳化剤が、レシチンであり、前記乳化剤の混合量が、前記細菌の乾燥菌体重量５０ｇ当たり、１～２０ｇであることを好ましい態様としている。
　前記方法は、前記細菌が、ビフィドバクテリウム属細菌であることを好ましい態様としている。
　前記方法は、前記細菌が、ビフィドバクテリウム・ロンガム（Bifidobacterium longum）またはビフィドバクテリウム・ブレーベ（Bifidobacterium breve）であることを好ましい態様としている。
　前記方法は、前記細菌が、ビフィドバクテリウム・ロンガムBB536（NITE BP-02621）またはビフィドバクテリウム・ブレーベM-16V（NITE BP-02622）であることを好ましい態様としている。
　本発明の一態様は、細菌の耐熱性を向上させる方法であって、
　下記工程ＡおよびＢ：
（Ａ）細菌を油脂と混合する工程；
（Ｂ）細菌を乳化剤と混合する工程
　を含み、
　前記工程Ａが、前記油脂の融点以上の温度で実施される、方法である。
　本発明の一態様は、細菌、油脂、および乳化剤を含有する、組成物である。
　前記組成物は、前記細菌が、前記油脂および前記乳化剤でコーティングされていることを好ましい態様としている。
　本発明の一態様は、前記方法で製造された組成物または前記組成物を含有する粉乳である。
　前記粉乳は、育児用調製粉乳であることを好ましい態様としている。
　以下、本発明を詳細に説明する。なお、本発明に関する下記の説明は、特記しない限り、いずれも単独で採用してもよく、適宜組み合わせて採用してもよい。
＜１＞本発明の方法
　本発明の方法は、下記工程ＡおよびＢを含む方法である：
（Ａ）細菌を油脂と混合する工程；
（Ｂ）細菌を乳化剤と混合する工程。
　本発明の方法によれば、細菌の耐熱性を向上させることができる。言い換えると、本発明の方法によれば、細菌の耐熱性を向上させる効果が得られる。同効果を「耐熱性向上効果」ともいう。すなわち、本発明の方法は、例えば、細菌の耐熱性を向上させる方法であってよい。
　また、本発明の方法によれば、細菌を含有する組成物が得られてよい。細菌を含有する組成物を「細菌組成物」ともいう。すなわち、本発明の方法は、例えば、細菌組成物の製造方法であってもよい。細菌組成物に含有される細菌は、耐熱性の向上した細菌であってよい。すなわち、細菌組成物は、耐熱性の向上した細菌を含有する組成物であってよい。耐熱性の向上した細菌を含有する組成物を「耐熱性細菌組成物」ともいう。また、細菌組成物の一態様は、後述する本発明の組成物であってよい。
　「耐熱性の向上」とは、工程ＡおよびＢの実施後の細菌の耐熱性が工程ＡおよびＢの実施前の細菌の耐熱性よりも高いことを意味する。耐熱性の向上としては、細菌を加熱した際の生残率（survival rate）の向上が挙げられる。加熱の温度としては、７０℃が挙げられる。加熱の時間としては、１分が挙げられる。すなわち、加熱として、具体的には、７０℃で１分間の加熱が挙げられる。細菌を７０℃で１分間加熱した際の生残率は、例えば、細菌を７０℃の湯に分散してから１分後の生残率として測定できる。細菌を７０℃で１分間加熱した際の生残率は、具体的には、例えば、実施例に記載の条件で測定できる。細菌を加熱した際の生残率は、加熱前（具体的には、加熱開始時）の生菌数に対する加熱後の生菌数の比率として算出される。生菌数は、例えば、コロニー形成単位（colony forming unit；ｃｆｕ）として測定することができる。なお、「細菌の加熱」とは、細菌組成物に含有される細菌にあっては、細菌組成物の加熱を意味してよい。
　工程ＡおよびＢの実施後の細菌を７０℃で１分間加熱した際の生残率（具体的には、本発明の方法により得られた細菌組成物を７０℃で１分間加熱した際の細菌の生残率）は、例えば、工程ＡおよびＢの実施前の細菌を７０℃で１分間加熱した際の生残率の、１０倍以上、１００倍以上、１０００倍以上、１００００倍以上、または１０００００倍以上であってよい。
　工程ＡおよびＢの実施後の細菌を７０℃で１分間加熱した際の生残率（具体的には、本発明の方法により得られた細菌組成物を７０℃で１分間加熱した際の細菌の生残率）は、例えば、１％以上、３％以上、５％以上、または１０％以上であってよい。
　細菌、油脂、および乳化剤を総称して「有効成分」ともいう。本発明の方法においては、有効成分のみを用いてもよく、そうでなくてもよい。すなわち、本発明の方法においては、有効成分に加えて、他の成分を用いてもよい。本発明の方法に用いられる成分（すなわち、有効成分および任意で他の成分）を総称して「原料」ともいう。
　具体的には、工程Ａにおいては、細菌および油脂に加えて、他の成分を用いてもよい。「原料」とは、工程Ａにおいては、細菌および油脂、ならびに任意で他の成分を総称してもよい。また、具体的には、工程Ｂにおいては、細菌および乳化剤に加えて、他の成分を用いてもよい。「原料」とは、工程Ｂにおいては、細菌および乳化剤、ならびに任意で他の成分を総称してもよい。
＜細菌＞
　細菌は特に制限されない。細菌としては、１種の細菌を用いてもよく、２種またはそれ以上の細菌を組み合わせて用いてもよい。細菌としては、プロバイオティクスとして用いられ得る細菌が挙げられる。細菌として、具体的には、乳酸菌が挙げられる。乳酸菌としては、ビフィドバクテリウム（Bifidobacterium）属細菌、ラクトバチルス（Lactobacillus）属細菌、ラクトコッカス（Lactococcus）属細菌、ストレプトコッカス（Streptococcus）属細菌が挙げられる。
　ビフィドバクテリウム属細菌としては、ビフィドバクテリウム・ロンガム（Bifidobacterium longum）、ビフィドバクテリウム・ブレーベ（Bifidobacterium breve）、ビフィドバクテリウム・ビフィダム（Bifidobacterium bifidum）、ビフィドバクテリウム・アドレセンティス（Bifidobacterium adolescentis）、ビフィドバクテリウム・アンギュラツム（Bifidobacterium angulatum）、ビフィドバクテリウム・デンティウム（Bifidobacterium dentium）、ビフィドバクテリウム・シュードカテヌラータム（Bifidobacterium pseudocatenulatum）、ビフィドバクテリウム・アニマリス（Bifidobacterium animalis）、ビフィドバクテリウム・シュードロンガム（Bifidobacterium pseudolongum）、ビフィドバクテリウム・サーモフィラム（Bifidobacterium thermophilum）が挙げられる。ビフィドバクテリウム属細菌としては、特に、ビフィドバクテリウム・ロンガムやビフィドバクテリウム・ブレーベが挙げられる。ビフィドバクテリウム属細菌として、さらに特には、ビフィドバクテリウム・ロンガムが挙げられる。
　ビフィドバクテリウム・ロンガムには、ビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・ロンガム（B. longum subsp. longum）、ビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・インファンティス（B. longum subsp. infantis）、ビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・スイス（B. longum subsp. suis）等の、ビフィドバクテリウム・ロンガムのいずれの亜種に分類される株も包含される。ビフィドバクテリウム・アニマリスには、ビフィドバクテリウム・アニマリス・サブスピーシーズ・ラクティス（B. animalis subsp. lactis）等の、ビフィドバクテリウム・アニマリスのいずれの亜種に分類される株も包含される。ビフィドバクテリウム・シュードロンガムには、ビフィドバクテリウム・シュードロンガム・サブスピーシーズ・グロボッサム（B. pseudolongum subsp. globosum）やビフィドバクテリウム・シュードロンガム・サブスピーシーズ・シュードロンガム（B. pseudolongum subsp. pseudolongum）等の、ビフィドバクテリウム・シュードロンガムのいずれの亜種に分類される株も包含される。
　ビフィドバクテリウム・ロンガムとして、具体的には、BB536（NITE BP-02621）、ATCC 15697、ATCC 15707、ATCC 25962、ATCC 15702、ATCC 27533、M-63（NITE BP-02623）、BG7、DSM 24736、SBT 2928、NCC 490（CNCM I-2170）、NCC 2705（CNCM I-2618）が挙げられる。ビフィドバクテリウム・ロンガムとしては、特に、BB536が挙げられる。ビフィドバクテリウム・ロンガムとしては、１種の株を用いてもよく、２種またはそれ以上の株を用いてもよい。
　ビフィドバクテリウム・ブレーベとして、具体的には、M-16V（NITE BP-02622）、MCC1274（FERM BP-11175）、ATCC 15700、B632（DSM 24706）、Bb99（DSM 13692）、ATCC 15698、DSM 24732、UCC2003、YIT4010、YIT4064、BBG-001、BR-03、C50、R0070が挙げられる。ビフィドバクテリウム・ブレーベとしては、特に、M-16Vが挙げられる。ビフィドバクテリウム・ブレーベとしては、１種の株を用いてもよく、２種またはそれ以上の株を用いてもよい。
　ビフィドバクテリウム・ロンガムBB536は、2018年1月26日付で、独立行政法人製品評価技術基盤機構特許微生物寄託センター（〒292-0818　日本国千葉県木更津市かずさ鎌足2-5-8 122号室）に、NITE BP-02621の受託番号で、ブダペスト条約に基づく国際寄託がなされている。
　ビフィドバクテリウム・ブレーベM-16Vは、2018年1月26日付で、独立行政法人製品評価技術基盤機構特許微生物寄託センター（〒292-0818　日本国千葉県木更津市かずさ鎌足2-5-8 122号室）に、NITE BP-02622の受託番号で、ブダペスト条約に基づく国際寄託がなされている。
　ビフィドバクテリウム・ビフィダムとして、具体的には、ATCC 29521、OLB6378、BF-1が挙げられる。ビフィドバクテリウム・アドレセンティスとして、具体的には、ATCC 15703が挙げられる。ビフィドバクテリウム・デンティウムとして、具体的には、DSM 20436が挙げられる。ビフィドバクテリウム・アニマリスとして、具体的には、DSM 10140、Bb-12、DN-173 010、GCL2505、CNCM I-3446が挙げられる。ビフィドバクテリウム・シュードロンガムとして、具体的には、JCM 5820やATCC 25526が挙げられる。ビフィドバクテリウム・サーモフィラムとして、具体的には、ATCC 25525が挙げられる。
　ラクトバチルス属細菌としては、ラクトバチルス・パラカゼイ（Lactobacillus paracasei）、ラクトバチルス・カゼイ（Lactobacillus casei）、ラクトバチルス・プランタラム（Lactobacillus plantarum）、ラクトバチルス・ガセリ（Lactobacillus gasseri）、ラクトバチルス・アシドフィラス（Lactobacillus acidophilus）、ラクトバチルス・デルブレッキィ（Lactobacillus delbrueckii）が挙げられる。ラクトバチルス・デルブレッキィには、ラクトバチルス・デルブレッキィ・サブスピーシーズ・ブルガリクス（Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus）、ラクトバチルス・デルブレッキィ・サブスピーシーズ・デルブレッキィ（Lactobacillus delbrueckii subsp. delbrueckii）、ラクトバチルス・デルブレッキィ・サブスピーシーズ・ラクティス（Lactobacillus delbrueckii subsp. lactis）等の、ラクトバチルス・デルブレッキィのいずれの亜種に分類される株も包含される。
　ラクトコッカス属細菌としては、ラクトコッカス・ラクティス（Lactococcus lactis）が挙げられる。ラクトコッカス・ラクティスには、ラクトコッカス・ラクティス・サブスピーシーズ・ラクティス（Lactococcus lactis subsp. lactis）、ラクトコッカス・ラクティス・サブスピーシーズ・クレモリス（Lactococcus lactis subsp. cremoris）、ラクトコッカス・ラクティス・サブスピーシーズ・ホルドニエ（Lactococcus lactis subsp. hordniae）等の、ラクトコッカス・ラクティスのいずれの亜種に分類される株も包含される。
　ストレプトコッカス属細菌としては、ストレプトコッカス・サーモフィラス（Streptococcus thermophilus）が挙げられる。
　これらの菌株は、例えば、American Type Culture Collection（ATCC, Address: 10801 University Boulevard Manassas, VA 20110, United States of America）、Belgian Coordinated Collections of Microorganisms（BCCM, Address: Rue de la Science 8, 1000 Brussels, Belgium）、German Collection of Microorganisms and Cell Cultures（DSMZ, Address: Inhoffenstr.7B, D38124 Braunschweig, Germany）、Japan Collection of Microorganisms（JCM, 郵便番号：305-0074、住所：日本国茨城県つくば市高野台3-1-1 理化学研究所バイオリソース研究センター微生物材料開発室）、または各菌株が寄託された寄託機関から入手することができる。
　なお、上記例示した菌株名で特定される菌株には、当該菌株名で所定の機関に寄託や登録がなされている株そのもの（以下、説明の便宜上、「寄託株」ともいう）に限られず、それと実質的に同等な株（「派生株」または「誘導株」ともいう）も包含される。すなわち、例えば、「ビフィドバクテリウム・ロンガムBB536」には、BB536の寄託番号で上記寄託機関に寄託されている株そのものに限られず、それと実質的に同等な株も包含される。各菌株について、「上記寄託株と実質的に同等の株」とは、上記寄託株と同一の種に属し、さらにその１６ＳｒＲＮＡ遺伝子の塩基配列が、上記寄託株の１６ＳｒＲＮＡ遺伝子の塩基配列に対して、好ましくは９９．８６％以上、より好ましくは９９．９３％以上、さらに好ましくは１００％の同一性を有し、且つ、好ましくは上記寄託株と同一の菌学的性質を有する株をいう。各菌株について、上記寄託株と実質的に同等の株は、例えば、当該寄託株を親株とする派生株であってよい。派生株としては、寄託株から育種された株や寄託株から自然に生じた株が挙げられる。育種方法としては、遺伝子工学的手法による改変や、突然変異処理による改変が挙げられる。突然変異処理としては、Ｘ線の照射、紫外線の照射、ならびにＮ－メチル－Ｎ'－ニトロ－Ｎ－ニトロソグアニジン（ＭＮＮＧ）、エチルメタンスルフォネート（ＥＭＳ）、およびメチルメタンスルフォネート（ＭＭＳ）等の変異剤による処理が挙げられる。寄託株から自然に生じた株としては、寄託株の使用の際に自然に生じた株が挙げられる。そのような株としては、寄託株の培養（例えば継代培養）により自然に生じた変異株が挙げられる。派生株は、１種の改変により構築されてもよく、２種またはそれ以上の改変により構築されてもよい。
　細菌としては、市販品を用いてもよく、適宜製造して取得したものを用いてもよい。例えば、ビフィドバクテリウム属細菌の市販品としては、森永乳業社製のビフィドバクテリウム・ロンガム・サブスピーシーズ・ロンガムBB536やビフィドバクテリウム・ブレーベM-16Vが挙げられる。また、細菌の菌体は、細菌を培養することにより容易に取得することができる。培養方法は、細菌が増殖できる限り、特に制限されない。培養方法としては、例えば、ビフィドバクテリウム属細菌等の細菌の培養に通常用いられる方法を、そのまま、あるいは適宜修正して、用いることができる。培養温度は、例えば、２５～５０℃であってよく、３５～４２℃であることが好ましい。培養は、好ましくは嫌気条件下で実施することができ、例えば、炭酸ガス等の嫌気ガスを通気しながら実施することができる。また、培養は、液体静置培養等の微好気条件下で実施することもできる。培養は、例えば、細菌が所望の程度に増殖するまで実施することができる。
　培養に用いる培地は、細菌が増殖できる限り、特に制限されない。培地としては、例えば、ビフィドバクテリウム属細菌等の細菌の培養に通常用いられる培地を、そのまま、あるいは適宜修正して、用いることができる。培地は、例えば、炭素源、窒素源、無機塩、有機成分、乳成分、またはそれらの組み合わせを含有してよい。炭素源としては、例えば、ガラクトース、グルコース、フルクトース、マンノース、セロビオース、マルトース、ラクトース、スクロース、トレハロース、デンプン、デンプン加水分解物、廃糖蜜等の糖類を資化性に応じて用いることができる。窒素源としては、例えば、アンモニア、硫酸アンモニウム、塩化アンモニウム、硝酸アンモニウム等のアンモニウム塩類や硝酸塩類を用いることができる。また、無機塩としては、例えば、塩化ナトリウム、塩化カリウム、リン酸カリウム、硫酸マグネシウム、塩化カルシウム、硝酸カルシウム、塩化マンガン、硫酸第一鉄等を用いることができる。また、有機成分としては、例えば、ペプトン、大豆粉、脱脂大豆粕、肉エキス、酵母エキス等を用いることができる。乳成分としては、例えば、乳タンパク質等を用いることができる。乳タンパク質としては、カゼイン、ホエイ、それらの分解物が挙げられる。また、ビフィドバクテリウム属細菌等の細菌の培養に通常用いられる培地として、具体的には、強化クロストリジア培地（Reinforced Clostridial medium）、ＭＲＳ培地（de Man, Rogosa, and Sharpe medium）、ｍＭＲＳ培地（modified MRS medium）、ＴＯＳＰ培地（TOS propionate medium）、ＴＯＳＰ　Ｍｕｐ培地（TOS propionate mupirocin medium）が挙げられる。
　細菌としては、細菌の菌体またはそれを含有する画分を、特に制限されず用いることができる。すなわち、細菌としては、例えば、培養により得られた培養物をそのまま用いてもよく、培養物を希釈又は濃縮して用いてもよく、培養物から回収した菌体を用いてもよい。また、耐熱性向上効果を損なわない限り、加熱、噴霧乾燥、凍結乾燥等の種々の追加操作を培養後に行うことができる。追加操作は、菌体の生残率が高いものであるのが好ましい。すなわち、細菌の菌体またはそれを含有する画分として、具体的には、細菌の培養物、同培養物から回収した菌体、それらの希釈物、濃縮物、乾燥物等の処理物が挙げられる。
　なお、菌体は、生菌体を含有する形態で使用されるものとする。菌体は、例えば、生菌体からなるものであってもよく、生菌体と死菌体の混合物であってもよい。
　菌体の生残率の観点から、細菌としては、凍結乾燥菌末を用いることが好ましい。すなわち、細菌（具体的には細菌の菌体またはそれを含有する画分）としては、特に、凍結乾燥菌末が挙げられる。また、凍結乾燥前に細菌を保護剤等とともに分散媒に分散させることが好ましい。具体的には、培養液から菌体を集菌し、洗浄し、湿菌体を得た後、当該湿菌体を水に分散して菌体分散液を調製することができる。次いで、当該菌体分散液に好ましくは保護剤等を添加して均一に混合した後、常法により凍結乾燥して凍結乾燥菌末を得ることができる。保護剤としては、アスパラギン酸、アルギニン、グルタミン酸、プロリン、リジン、ロイシン、及びメチオニン等のアミノ酸、グリセリン、ショ糖、及びアスコルビン酸等の公知の保護剤を使用することができる。凍結乾燥菌末は、そのまま、あるいは他の食品素材と混合して用いることができる。凍結乾燥菌末は、そのまま使用することが好ましい。
＜油脂＞
　油脂は、乳化剤との併用により耐熱性向上効果が得られるものであれば、特に制限されない。油脂としては、１種の油脂を用いてもよく、２種またはそれ以上の油脂を組み合わせて用いてもよい。油脂としては、市販品を用いてもよく、適宜製造して取得したものを用いてもよい。
　油脂としては、動物由来の油脂（動物油脂）、植物由来の油脂（植物油脂）、それらの硬化油が挙げられる。動物油脂としては、鶏脂、豚脂、牛脂、羊油、鯨油、魚油、卵油、バターが挙げられる。魚油としては、マグロ油、カツオ油、イワシ油、サバ油、サケ油、タラ油が挙げられる。植物油脂としては、菜種油、米油、紅花油、ヒマワリ油、オリーブ油、落花生油、パーム油、パーム核油、やし油、大豆油、コーン油、綿実油、ごま油、ぶどう種子油、えごま油が挙げられる。硬化油としては、部分硬化油や極度硬化油が挙げられる。硬化油として、具体的には、上記例示した植物油脂の部分硬化油や、上記例示した植物油脂の極度硬化油が挙げられる。硬化油としては、特に、パーム核油の硬化油が挙げられる。硬化油として、さらに特には、パーム核油の極度硬化油（パーム核極度硬化油）が挙げられる。市販のパーム核極度硬化油としては、K-40（太陽油脂社製）が挙げられる。
　油脂としては、融点が特定の範囲であるものが挙げられる。油脂としては、例えば、上記例示した油脂の内、融点が特定の範囲であるものを選択してもよい。なお、パーム核極度硬化油の融点は、４０℃付近であり得る。油脂の融点は、例えば、２０℃以上、２５℃以上、３０℃以上、３５℃以上、４０℃以上、４５℃以上、または５０℃以上であってもよく、５５℃以下、５０℃以下、４５℃以下、４０℃以下、３５℃以下、３０℃以下、または２５℃以下であってもよく、それらの矛盾しない組み合わせの範囲であってもよい。油脂の融点は、具体的には、例えば、２０～５５℃、２５～５０℃、３０～５０℃、３５～５０℃、または４０～５０℃であってもよい。油脂の融点は、具体的には、例えば、２０～２５℃、２５～３０℃、３０～３５℃、３５～４０℃、４０～４５℃、４５～５０℃、または５０～５５℃であってもよい。油脂の融点は、特に、３５℃以上であってもよく、５０℃以下であってもよく、３５～５０℃であってもよい。
＜乳化剤＞
　乳化剤は、油脂との併用により耐熱性向上効果が得られるものであれば、特に制限されない。乳化剤としては、１種の乳化剤を用いてもよく、２種またはそれ以上の乳化剤を組み合わせて用いてもよい。乳化剤としては、市販品を用いてもよく、適宜製造して取得したものを用いてもよい。
　乳化剤としては、グリセリン脂肪酸エステル、ショ糖脂肪酸エステル、プロピレングリコール脂肪酸エステル、レシチン、サポニンが挙げられる。グリセリン脂肪酸エステルとしては、モノグリセリン脂肪酸エステルやポリグリセリン脂肪酸エステルが挙げられる。グリセリン脂肪酸エステルとしては、特に、ポリグリセリン脂肪酸エステルが挙げられる。乳化剤としては、特に、ポリグリセリン脂肪酸エステルやレシチンが挙げられる。乳化剤として、さらに特には、レシチンが挙げられる。
　「ポリグリセリン脂肪酸エステル」とは、ポリグリセリンの水酸基に脂肪酸がエステル結合した構造を有する化合物の総称である。ポリグリセリン脂肪酸エステルの分子構造（例えば、ポリグリセリンの重合度、ポリグリセリンの重合形態（直鎖状か、環状か、分岐状か）、構成脂肪酸の種類、エステル化率、エステル化位置、等）は、油脂との併用により耐熱性向上効果が得られる限り、特に制限されない。構成脂肪酸としては、炭素数８～２４の脂肪酸が挙げられる。構成脂肪酸は、飽和脂肪酸であってもよく、不飽和脂肪酸であってもよい。炭素数８～２４の脂肪酸として、具体的には、カプリル酸、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、オレイン酸、ベヘン酸、エルカ酸が挙げられる。構成脂肪酸としては、１種の脂肪酸を用いてもよく、２種またはそれ以上の脂肪酸を組み合わせて用いてもよい。例えば、１分子のポリグリセリンに２種またはそれ以上の脂肪酸がエステル結合していてもよい。
　ポリグリセリンの重合度（平均重合度）は、例えば、２以上、３以上、４以上、５以上、６以上、７以上、または８以上であってもよく、２０以下、１５以下、１２以下、１０以下、８以下、または５以下であってもよく、それらの矛盾しない組み合わせの範囲であってもよい。ポリグリセリンの重合度（平均重合度）は、具体的には、例えば、２～２０、３～１５、３～１２、または３～５であることが好ましい。ポリグリセリンの重合度（平均重合度）は、ポリグリセリンの水酸基価に基づいて算出されるものとする。ポリグリセリンの水酸基価は、日本工業規格JIS K 0070:1992に準拠して測定されるものとする。
　ポリグリセリンのHLB（hydrophile-lipophile balance）値は、例えば、１以上、２以上、３以上、または４以上であってもよく、２０以下、１５以下、１０以下、８以下、または５以下であってもよく、それらの矛盾しない組み合わせの範囲であってもよい。ポリグリセリンのHLB値は、具体的には、例えば、１～１５、１～１０、２～８、または２～５であることが好ましい。HLB値は、アトラス法によって算出されるものとする。
　ポリグリセリン脂肪酸エステルの分子構造（例えば、構成脂肪酸の種類、等）についての記載は、他の脂肪酸エステルにも準用できる。
　市販のポリグリセリン脂肪酸エステルとしては、ポエムRJ-38（理研ビタミン社製）が挙げられる。ポエムRJ-38は、Ｃ１８（６５％）およびＣ１６（３４％）の構成脂肪酸を有するポリグリセリン脂肪酸エステルである。
　「レシチン」とは、リン脂質を含有する素材の総称である。レシチンは、リン脂質を主成分として含有していてよい。レシチンとしては、植物レシチン、卵黄レシチン、それらの派生物が挙げられる。植物レシチンとしては、大豆レシチン、アブラナレシチン、ヒマワリレシチンが挙げられる。派生物としては、分別レシチン、酵素処理レシチン、酵素分解レシチンが挙げられる。レシチンとしては、特に、大豆レシチンが挙げられる。
　レシチンのHLB値は、例えば、１以上、２以上、３以上、または４以上であってもよく、２０以下、１５以下、１０以下、８以下、または５以下であってもよく、それらの矛盾しない組み合わせの範囲であってもよい。レシチンのHLB値は、具体的には、例えば、１～１５、１～１０、２～８、または２～５であることが好ましい。
　市販のレシチンとしては、Yelkin TS（HLB値＝約４、エー・ディー・エム・ジャパン社製）が挙げられる。Yelkin TSは、液体状の大豆レシチンである。
　「サポニン」とは、サポゲニン配糖体の総称である。サポニンとしては、各種植物のサポニンが挙げられる。サポニンとして、具体的には、大豆サポニン、茶種子サポニン、エンジュサポニンが挙げられる。
＜他の成分＞
　他の成分は、耐熱性向上効果を損なわない限り、特に制限されない。他の成分としては、１種の成分を用いてもよく、２種またはそれ以上の成分を組み合わせて用いてもよい。
　他の成分としては、細菌組成物の利用態様に応じて許容可能なものを利用できる。他の成分としては、経口摂取可能な成分が挙げられる。経口摂取可能な成分としては、飲食品または医薬品に配合して利用される成分が挙げられる。
＜工程ＡおよびＢ＞
　工程Ａは、細菌を油脂と混合する工程である。工程Ｂは、細菌を乳化剤と混合する工程である。細菌は、工程ＡおよびＢの両方（すなわち、油脂との混合と乳化剤との混合の両方）に供される。
　工程ＡおよびＢは、同時に実施されてもよく、個別に実施されてもよい。工程ＡおよびＢは、特に、個別に実施されてよい。工程ＡおよびＢを実施する順序は特に制限されない。すなわち、工程Ａの実施後に工程Ｂを実施してもよく、工程Ｂの実施後に工程Ａを実施してもよい。特に、工程Ａの実施後に工程Ｂを実施してよい。「工程ＡおよびＢが同時に実施される」とは、工程ＡおよびＢのいずれか一方の完了前に、工程ＡおよびＢのもう一方を開始することを意味する。「工程ＡおよびＢが同時に実施される」ことには、工程ＡおよびＢを同時に開始する場合や、工程ＡおよびＢのいずれか一方の実施中に工程ＡおよびＢのもう一方を開始する場合が包含される。すなわち、「工程ＡおよびＢが同時に実施される」とは、工程ＡおよびＢが一部または全部の期間において同時に実施されることを意味してもよい。工程ＡおよびＢが同時に実施される場合、工程ＡおよびＢは、同時に完了してもよく、個別に完了してもよい。「工程ＡおよびＢが個別に実施される」とは、工程ＡおよびＢのいずれか一方の完了後に、工程ＡおよびＢのもう一方を開始することを意味する。「工程の実施中」とは、当該工程の開始から完了までの期間を意味する。「工程の完了」とは、当該工程が十分に実施された状態を意味し、具体的には、当該工程が所定の時間実施された状態を意味してよい。各工程が実施される「所定の時間」としては、後述する各工程の実施時間が挙げられる。
　言い換えると、工程ＡおよびＢは、同時に開始してもよく、個別に開始してもよい。工程ＡおよびＢは、特に、個別に開始してよい。すなわち、工程ＡおよびＢのいずれか一方の開始後に、工程ＡおよびＢのもう一方を開始してよい。具体的には、工程ＡおよびＢのいずれか一方の実施中または完了後に、工程ＡおよびＢのもう一方を開始してよい。工程ＡおよびＢを開始する順序は特に制限されない。すなわち、工程Ａの開始後に工程Ｂを開始してもよく、工程Ｂの開始後に工程Ａを開始してもよい。特に、工程Ａの開始後に工程Ｂを開始してよい。さらに特には、工程Ａの完了後に工程Ｂを開始してもよい。
　工程Ａの実施により、例えば、細菌が油脂でコーティングされてよい。工程Ｂの実施により、例えば、細菌が乳化剤でコーティングされてよい。工程ＡおよびＢの実施により、例えば、細菌が油脂および乳化剤でコーティングされてよい。工程ＡおよびＢの実施により、具体的には、例えば、細菌が油脂および乳化剤の混合物でコーティングされてよい。また、工程ＡおよびＢの実施により、具体的には、例えば、細菌が油脂でコーティングされ、さらに、乳化剤でコーティングされてもよい。特に、工程Ｂが工程Ａの後に開始される場合に、細菌が油脂でコーティングされ、さらに、乳化剤でコーティングされてよい。また、工程ＡおよびＢの実施により、具体的には、例えば、細菌が乳化剤でコーティングされ、さらに、油脂でコーティングされてもよい。特に、工程Ａが工程Ｂの後に開始される場合に、細菌が乳化剤でコーティングされ、さらに、油脂でコーティングされてよい。すなわち、「細菌が油脂および乳化剤でコーティングされる」とは、特記しない限り、油脂および乳化剤の混合状態ならびに油脂および乳化剤によるコーティングの順序によらず、細菌が油脂および乳化剤でコーティングされることを意味してよい。
　「細菌が油脂でコーティングされる」とは、細菌が油脂単独でコーティングされる場合に限られず、細菌が油脂と他の成分との混合物でコーティングされる場合も包含する。例えば、工程Ａを実施する際に、細菌と油脂に加えて、他の成分が共存している場合、細菌が油脂と他の成分との混合物でコーティングされてよい。
　「細菌が乳化剤でコーティングされる」とは、細菌が乳化剤単独でコーティングされる場合に限られず、細菌が乳化剤と他の成分との混合物でコーティングされる場合も包含する。例えば、工程Ｂを実施する際に、細菌と乳化剤に加えて、他の成分が共存している場合、細菌が乳化剤と他の成分との混合物でコーティングされてよい。
　なお、工程Ｂが工程Ａの後に開始される場合にあっては、工程Ｂに供される「細菌」とは、工程Ａの開始後の細菌と読み替えてよい。工程Ａの開始後の細菌は、例えば、細菌と油脂の混合物であってよい。工程Ａの開始後の細菌は、具体的には、例えば、油脂でコーティングされた細菌であってもよい。また、工程Ａが工程Ｂの後に開始される場合にあっては、工程Ａに供される「細菌」とは、工程Ｂの開始後の細菌と読み替えてよい。工程Ｂの開始後の細菌は、例えば、細菌と乳化剤の混合物であってよい。工程Ｂの開始後の細菌は、具体的には、例えば、乳化剤でコーティングされた細菌であってもよい。
　工程Ａにおいて、原料（細菌および油脂、ならびに任意で他の成分）は、いずれも、液体、ペースト、粉末等の任意の形状で用いられてよい。例えば、油脂は、特に、液体の形状で工程Ａに用いられてよい。液体状の油脂は、本来的に液体状のものであってもよく、液体状になるように処理（例えば加熱）したものであってもよい。すなわち、油脂は、例えば、予め融点以上の温度に加熱してから工程Ａに用いてもよい。工程Ａの実施の際には、例えば、細菌に油脂を添加してもよく、油脂に細菌を添加してもよい。添加手段は、原料の形状等の諸条件に応じて適宜設定できる。例えば、添加する成分が液状である場合、同成分を滴下または噴霧してよい。具体的には、例えば、油脂が液状である場合、油脂を細菌に滴下または噴霧してよい。他の成分が用いられる場合、他の成分は、例えば、予め細菌および／または油脂と混合されていてもよく、そうでなくてもよい。
　工程Ｂにおいて、原料（細菌および乳化剤、ならびに任意で他の成分）は、いずれも、液体、ペースト、粉末等の任意の形状で用いられてよい。例えば、乳化剤は、特に、液体の形状で工程Ｂに用いられてよい。液体状の乳化剤は、本来的に液体状のものであってもよく、液体状になるように処理（例えば加熱）したものであってもよい。すなわち、乳化剤は、例えば、予め融点以上の温度に加熱してから工程Ｂに用いてもよい。工程Ｂの実施の際には、例えば、細菌に乳化剤を添加してもよく、乳化剤に細菌を添加してもよい。添加手段は、原料の形状等の諸条件に応じて適宜設定できる。例えば、添加する成分が液状である場合、同成分を滴下または噴霧してよい。具体的には、例えば、乳化剤が液状である場合、乳化剤を細菌に滴下または噴霧してよい。他の成分が用いられる場合、他の成分は、例えば、予め細菌および／または乳化剤と混合されていてもよく、そうでなくてもよい。
　工程ＡおよびＢが同時に実施される場合、油脂および乳化剤は、例えば、個別に用いてもよく、混合物として用いてもよい。
　原料を混合する手段は、特に制限されない。原料を混合する手段としては、撹拌混合や反転混合が挙げられる。原料を混合する手段としては、特に、撹拌混合が挙げられる。原料の混合は、例えば、適当な容器内で実施することができる。原料の混合が実施される容器を「混合容器」ともいう。工程ＡおよびＢは、同一の混合容器内で実施されてもよく、そうでなくてもよい。工程ＡおよびＢは、いずれも、例えば、バッチ式で実施されてもよく、連続式で実施されてもよい。原料の混合は、例えば、混合装置を用いて実施することができる。混合装置は、例えば、混合容器を備えていてよい。また、混合装置は、例えば、撹拌羽根を備えていてよい。撹拌羽根は、アジテーターまたはチョッパー等と呼ばれる場合もある。また、混合装置は、例えば、温度制御機能を備えていてよい。混合装置としては、撹拌造粒装置が挙げられる。混合装置として、具体的には、高速撹拌型混合造粒機（NMGシリーズ等；奈良機械製作所製）、ニュースピードニーダー（NSKシリーズ等；岡田精工製）、バランスグラン（BGシリーズ等；フロイント・ターボ製）、フレキソミックス（FXD-250等；ホソカワミクロン製）、バーチカル・グラニュレーター（パウレック製）が挙げられる。
　本発明の方法に用いられる原料の量比は、耐熱性向上効果が得られる限り、特に制限されない。本発明の方法に用いられる原料の量比は、例えば、原料の種類、細菌組成物の形状（剤形）、細菌組成物の用途等の諸条件に応じて適宜設定できる。
　油脂の使用量は、細菌の乾燥菌体重量５０ｇ当たり、例えば、１．２ｇ以上、１．５ｇ以上、２ｇ以上、２．５ｇ以上、３ｇ以上、または３．５ｇ以上であってもよく、４．８ｇ以下、４．５ｇ以下、４ｇ以下、３．５ｇ以下、３ｇ以下、または２．５ｇ以下であってもよく、それらの矛盾しない組み合わせの範囲であってもよい。油脂の使用量は、細菌の乾燥菌体重量５０ｇ当たり、具体的には、例えば、１．２～４．８ｇ、好ましくは１．５～４．５ｇ、より好ましくは２～４ｇであってもよい。また、油脂の使用量は、細菌の生菌数を基準に設定してもよい。その場合、上記「細菌の乾燥菌体重量５０ｇ当たり」とは、例えば、「細菌の生菌４×１０１２ｃｆｕ当たり」と読み替えてもよい。
　乳化剤の使用量は、細菌の乾燥菌体重量５０ｇ当たり、例えば、１ｇ以上、１．５ｇ以上、２ｇ以上、３ｇ以上、４ｇ以上、５ｇ以上、６ｇ以上、７ｇ以上、８ｇ以上、９ｇ以上、または１０ｇ以上であってもよく、２０ｇ以下、１７ｇ以下、１５ｇ以下、１４ｇ以下、１３ｇ以下、１２ｇ以下、１１ｇ以下、１０ｇ以下、９ｇ以下、８ｇ以下であってもよく、それらの矛盾しない組み合わせの範囲であってもよい。乳化剤の使用量は、細菌の乾燥菌体重量５０ｇ当たり、具体的には、例えば、１～２０ｇ、１．５～１７ｇ、または２～１５ｇであってもよく、８～１７ｇ、９～１６ｇ、または１０～１５ｇであってもよい。乳化剤の使用量は、特に、乳化剤がレシチンである場合に、細菌の乾燥菌体重量５０ｇ当たり、１～２０ｇ、好ましくは１．５～１７ｇ、より好ましくは２～１５ｇであってもよい。乳化剤の使用量は、特に、乳化剤がポリグリセリン脂肪酸エステルである場合に、細菌の乾燥菌体重量５０ｇ当たり、８～１７ｇ、好ましくは９～１６ｇ、より好ましくは１０～１５ｇであってもよい。また、乳化剤の使用量は、特に、乳化剤がレシチンである場合に、細菌の乾燥菌体重量５０ｇ当たり、リン脂質の重量に換算して、上記例示した使用量の１／２量であってもよい。また、乳化剤の使用量は、細菌の生菌数を基準に設定してもよい。その場合、上記「細菌の乾燥菌体重量５０ｇ当たり」とは、例えば、「細菌の生菌４×１０１２ｃｆｕ当たり」と読み替えてもよい。
　有効成分の総使用量は、原料の総使用量に対する重量比として、例えば、１％以上、３％以上、５％以上、１０％以上、２０％以上、３０％以上、４０％以上、５０％以上、６０％以上、７０％以上、８０％以上、９０％以上、９５％以上、９７％以上、または９９％以上であってもよく、１００％以下、９９％以下、９７％以下、９５％以下、９０％以下、８０％以下、７０％以下、６０％以下、または５０％以下であってもよく、それらの矛盾しない組み合わせの範囲であってもよい。有効成分の総使用量は、原料の総使用量に対する重量比として、具体的には、例えば、１～１００％、１０～１００％、３０～１００％、５０～１００％、７０～１００％、９０～１００％、９５～１００％、または９９～１００％であってもよい。
　工程Ａの実施時間は、耐熱性向上効果が得られる限り、特に制限されない。工程Ａの実施時間は、例えば、原料の種類、細菌組成物の形状（剤形）、細菌組成物の用途等の諸条件に応じて適宜設定できる。工程Ａの実施時間は、例えば、３０秒以上、４５秒以上、１分以上、１．５分以上、２分以上、２．５分以上、３分以上、３．５分以上、または４分以上であってもよく、１５分以下、１０分以下、７分以下、５分以下、４．５分以下、４分以下、３．５分以下、３分以下、または２．５分以下であってもよく、それらの矛盾しない組み合わせの範囲であってもよい。工程Ａの実施時間は、具体的には、例えば、３０秒～１５分、好ましくは４５秒～１０分、より好ましくは１分～７分であってもよい。
　工程Ｂの実施時間は、耐熱性向上効果が得られる限り、特に制限されない。工程Ｂの実施時間は、例えば、原料の種類、細菌組成物の形状（剤形）、細菌組成物の用途等の諸条件に応じて適宜設定できる。工程Ｂの実施時間は、例えば、３０秒以上、１分以上、２分以上、３分以上、５分以上、７分以上、１０分以上、１５分以上、２０分以上、２５分以上、または３０分以上であってもよく、１８０分以下、１５０分以下、１２０分以下、１００分以下、９０分以下、８０分以下、７０分以下、６０分以下、５０分以下、４５分以下、４０分以下、３５分以下、３０分以下、２５分以下、２０分以下、１５分以下、または１０分以下であってもよく、それらの矛盾しない組み合わせの範囲であってもよい。工程Ｂの実施時間は、具体的には、例えば、３０秒～３０分、１分～２０分、または２分～１５分であってもよく、３０秒～１８０分、１分～１２０分、または２分～９０分であってもよい。工程Ｂの実施時間は、特に、乳化剤がポリグリセリン脂肪酸エステルである場合に、３０秒～４０分、好ましくは１分～３０分、より好ましくは２分～２０分であってもよい。工程Ｂの実施時間は、特に、乳化剤がレシチンである場合に、３０秒～１８０分、好ましくは１分～１２０分、より好ましくは２分～９０分であってもよい。
　工程Ｂが工程Ａの後に開始される場合、例えば、工程Ａを開始した後、上記例示したような工程Ａの実施時間の経過前に工程Ｂを開始してもよく、上記例示したような工程Ａの実施時間の経過後に工程Ｂを開始してもよい。例えば、工程Ａの開始から工程Ｂの開始までの時間を、上記例示したような工程Ａの実施時間に設定してもよい。
　工程Ａが工程Ｂの後に開始される場合、例えば、工程Ｂを開始した後、上記例示したような工程Ｂの実施時間の経過前に工程Ａを開始してもよく、上記例示したような工程Ｂの実施時間の経過後に工程Ａを開始してもよい。例えば、工程Ｂの開始から工程Ａの開始までの時間を、上記例示したような工程Ｂの実施時間に設定してもよい。
　工程ＡおよびＢの総実施時間は、例えば、両工程について上記例示したような実施時間が確保できるように設定してよい。「工程ＡおよびＢの総実施時間」とは、工程ＡおよびＢのいずれか早く開始する方の開始から工程ＡおよびＢのいずれか遅く完了する方の完了までの時間をいう。なお、「工程ＡおよびＢのいずれか早く開始する方の開始」とは、両工程が同時に開始する場合にあっては、両工程の開始をいう。また、「工程ＡおよびＢのいずれか遅く完了する方の完了」とは、両工程が同時に完了する場合にあっては、両工程の完了をいう。工程ＡおよびＢが同時に開始される場合、工程ＡおよびＢの総実施時間は、例えば、上記例示したような工程Ａの実施時間および上記例示したような工程Ｂの実施時間のいずれか長い方に設定してよい。
　工程ＡおよびＢの実施条件（例えば、温度や混合速度）は同一であってもよく、なくてもよい。少なくとも、工程ＡおよびＢが同時に実施されている期間において、工程ＡおよびＢの実施条件は同一である。
　工程Ａの実施条件（例えば、温度や混合速度）は、工程Ａが実施される全期間において一定であってもよく、そうでなくてもよい。
　工程Ｂの実施条件（例えば、温度や混合速度）は、工程Ｂが実施される全期間において一定であってもよく、そうでなくてもよい。
　工程Ａは、油脂の融点以上の温度で実施される。すなわち、工程Ａの温度（すなわち、工程Ａが実施される温度）は、油脂の融点以上の温度である。工程Ａの温度は、油脂の融点以上であり、且つ、耐熱性向上効果が得られる限り、特に制限されない。工程Ａの温度は、例えば、原料の種類、細菌組成物の形状（剤形）、細菌組成物の用途等の諸条件に応じて適宜設定できる。工程Ａの温度は、例えば、油脂の融点より１℃以上、２℃以上、３℃以上、４℃以上、または５℃以上高くてもよい。工程Ａの温度は、例えば、２０℃以上、２５℃以上、３０℃以上、３５℃以上、４０℃以上、４５℃以上、または５０℃以上であってもよく、５５℃以下、５０℃以下、４５℃以下、４０℃以下、３５℃以下、３０℃以下、または２５℃以下であってもよく、それらの矛盾しない組み合わせの範囲であってもよい。工程Ａの温度は、具体的には、例えば、２０～５５℃、２５～５０℃、３０～５０℃、３５～５０℃、または４０～５０℃であってもよい。工程Ａの温度は、具体的には、例えば、２０～２５℃、２５～３０℃、３０～３５℃、３５～４０℃、４０～４５℃、４５～５０℃、または５０～５５℃であってもよい。工程Ａの温度は、特に、４０℃以上であってもよく、５０℃以下であってもよく、４０～５０℃であってもよい。温度は、通常は工程Ａの全期間において上記例示したような温度の範囲内であってよいが、一時的にその範囲外となってもよい。すなわち、「工程Ａの温度が或る範囲である」とは、工程Ａの全期間において温度が当該範囲内である場合に限られず、温度が一時的に当該範囲外となる場合も包含する。例えば、工程Ａにおいて、温度は、一時的に油脂の融点未満に低下してもよい。工程Ａについての「一時的」の長さは、耐熱性向上効果が得られる限り、特に制限されない。工程Ａについての「一時的」とは、例えば、工程Ａの全期間の内の、２０％以下、１５％以下、１０％以下、５％以下、３％以下、または１％以下の期間を意味してよい。なお、工程Ａの温度は、工程Ａを実施した際に所望の程度に細菌が生存するように設定されるものとする。工程Ａを実施した際の細菌の生残率は、例えば、５０％以上、７０％以上、９０％以上、または９５％以上であってよい。工程Ａを実施した際の細菌の生残率は、工程Ａの実施前（具体的には、工程Ａの開始時）の生菌数に対する工程Ａの実施後（具体的には、工程Ａの完了時）の生菌数の比率として算出される。
　工程Ｂの温度（すなわち、工程Ｂが実施される温度）は、耐熱性向上効果が得られる限り、特に制限されない。工程Ｂの温度は、例えば、原料の種類、細菌組成物の形状（剤形）、細菌組成物の用途等の諸条件に応じて適宜設定できる。工程Ｂは、例えば、乳化剤の融点以上の温度で実施されてよい。すなわち、工程Ｂの温度は、例えば、乳化剤の融点以上の温度であってよい。工程Ｂの温度は、例えば、乳化剤の融点より１℃以上、２℃以上、３℃以上、４℃以上、または５℃以上高くてもよい。工程Ｂの温度は、例えば、２０℃以上、２５℃以上、３０℃以上、３５℃以上、４０℃以上、４５℃以上、または５０℃以上であってもよく、５５℃以下、５０℃以下、４５℃以下、４０℃以下、３５℃以下、３０℃以下、または２５℃以下であってもよく、それらの矛盾しない組み合わせの範囲であってもよい。工程Ｂの温度は、具体的には、例えば、２０～５５℃、２５～５０℃、３０～５０℃、３５～５０℃、または４０～５０℃であってもよい。工程Ｂの温度は、具体的には、例えば、２０～２５℃、２５～３０℃、３０～３５℃、３５～４０℃、４０～４５℃、４５～５０℃、または５０～５５℃であってもよい。工程Ｂの温度は、特に、４０℃以上であってもよく、５０℃以下であってもよく、４０～５０℃であってもよい。温度は、通常は工程Ｂの全期間において上記例示したような温度の範囲内であってよいが、一時的にその範囲外となってもよい。すなわち、「工程Ｂの温度が或る範囲である」とは、工程Ｂの全期間において温度が当該範囲内である場合に限られず、温度が一時的に当該範囲外となる場合も包含する。工程Ｂについての「一時的」の長さは、耐熱性向上効果が得られる限り、特に制限されない。工程Ｂについての「一時的」とは、例えば、工程Ｂの全期間の内の、２０％以下、１５％以下、１０％以下、５％以下、３％以下、または１％以下の期間を意味してよい。なお、工程Ｂの温度は、工程Ｂを実施した際に所望の程度に細菌が生存するように設定されるものとする。工程Ｂを実施した際の細菌の生残率は、例えば、５０％以上、７０％以上、９０％以上、または９５％以上であってよい。工程Ｂを実施した際の細菌の生残率は、工程Ｂの実施前（具体的には、工程Ｂの開始時）の生菌数に対する工程Ｂの実施後（具体的には、工程Ｂの完了時）の生菌数の比率として算出される。
　工程ＡおよびＢの温度は、いずれも、例えば、上記例示したような温度範囲となるように適宜制御する（例えば昇温させる）ことができる。温度の制御方法（例えば昇温方法）は、特に制限されない。例えば、混合容器を加熱することにより、温度を制御する（例えば昇温させる）ことができる。混合容器を加熱する手段は、混合容器内部を加熱できるもの（具体的には、混合容器内部の原料を加熱できるもの）であれば、特に制限されない。加熱手段は、例えば、混合容器に組み込まれていてもよく、混合容器の外部に備わっていてもよい。混合容器の外部に備わる加熱手段としては、加熱用ジャケットが挙げられる。すなわち、例えば、混合容器を加熱用ジャケットで覆い、ジャケットを加熱することにより、混合容器内部を外部から加熱することができる。
　工程Ａにおける混合速度は、耐熱性向上効果が得られる限り、特に制限されない。工程Ａにおける混合速度は、例えば、原料の種類、細菌組成物の形状（剤形）、細菌組成物の用途、用いる混合装置の種類等の諸条件に応じて適宜設定できる。工程Ａにおける混合速度は、例えば、撹拌羽根の回転数として、１００ｒｐｍ以上、３００ｒｐｍ以上、５００ｒｐｍ以上、１０００ｒｐｍ以上、１５００ｒｐｍ以上、２０００ｒｐｍ以上、または２５００ｒｐｍ以上であってもよく、５０００ｒｐｍ以下、４０００ｒｐｍ以下、３０００ｒｐｍ以下、２５００ｒｐｍ以下、２０００ｒｐｍ以下、１５００ｒｐｍ以下、または１０００ｒｐｍ以下であってもよく、それらの矛盾しない組み合わせの範囲であってもよい。工程Ａにおける混合速度は、具体的には、例えば、撹拌羽根の回転数として、５００～５０００ｒｐｍ、好ましくは１０００～４０００ｒｐｍ、より好ましくは２０００～３０００ｒｐｍであってもよい。また、工程Ａにおける混合速度は、例えば、撹拌羽根の周速（すなわち撹拌羽根の先端の回転速度）として、１ｍ／ｓ以上、３ｍ／ｓ以上、５ｍ／ｓ以上、１０ｍ／ｓ以上、１５ｍ／ｓ以上、２０ｍ／ｓ以上、または２５ｍ／ｓ以上であってもよく、５０ｍ／ｓ以下、４０ｍ／ｓ以下、３０ｍ／ｓ以下、２５ｍ／ｓ以下、２０ｍ／ｓ以下、１５ｍ／ｓ以下、または１０ｍ／ｓ以下であってもよく、それらの矛盾しない組み合わせの範囲であってもよい。工程Ａにおける混合速度は、具体的には、例えば、撹拌羽根の周速（すなわち撹拌羽根の先端の回転速度）として、３～５０ｍ／ｓ、好ましくは５～４０ｍ／ｓ、より好ましくは１０～３０ｍ／ｓであってもよい。混合速度は、通常は工程Ａの全期間において上記例示したような混合速度の範囲内であってよいが、一時的にその範囲外となってもよい。すなわち、「工程Ａにおける混合速度が或る範囲である」とは、工程Ａの全期間において混合速度が当該範囲内である場合に限られず、混合速度が一時的に当該範囲外となる場合も包含する。例えば、工程Ａにおいて、原料の混合は、一時的に停止してもよい。すなわち、工程Ａにおいて、原料の混合は、連続的に行われてもよく、間欠的に行われてもよい。工程Ａについての「一時的」の長さは、耐熱性向上効果が得られる限り、特に制限されない。工程Ａについての「一時的」とは、例えば、工程Ａの全期間の内の、２０％以下、１５％以下、１０％以下、５％以下、３％以下、または１％以下の期間を意味してよい。
　工程Ｂにおける混合速度は、耐熱性向上効果が得られる限り、特に制限されない。工程Ｂにおける混合速度は、例えば、原料の種類、細菌組成物の形状（剤形）、細菌組成物の用途、用いる混合装置の種類等の諸条件に応じて適宜設定できる。工程Ｂにおける混合速度は、例えば、撹拌羽根の回転数として、１００ｒｐｍ以上、３００ｒｐｍ以上、５００ｒｐｍ以上、１０００ｒｐｍ以上、１５００ｒｐｍ以上、２０００ｒｐｍ以上、または２５００ｒｐｍ以上であってもよく、５０００ｒｐｍ以下、４０００ｒｐｍ以下、３０００ｒｐｍ以下、２５００ｒｐｍ以下、２０００ｒｐｍ以下、１５００ｒｐｍ以下、または１０００ｒｐｍ以下であってもよく、それらの矛盾しない組み合わせの範囲であってもよい。工程Ｂにおける混合速度は、具体的には、例えば、撹拌羽根の回転数として、５００～５０００ｒｐｍ、好ましくは１０００～４０００ｒｐｍ、より好ましくは２０００～３０００ｒｐｍであってもよい。また、工程Ｂにおける混合速度は、例えば、撹拌羽根の周速（すなわち撹拌羽根の先端の回転速度）として、１ｍ／ｓ以上、３ｍ／ｓ以上、５ｍ／ｓ以上、１０ｍ／ｓ以上、１５ｍ／ｓ以上、２０ｍ／ｓ以上、または２５ｍ／ｓ以上であってもよく、５０ｍ／ｓ以下、４０ｍ／ｓ以下、３０ｍ／ｓ以下、２５ｍ／ｓ以下、２０ｍ／ｓ以下、１５ｍ／ｓ以下、または１０ｍ／ｓ以下であってもよく、それらの矛盾しない組み合わせの範囲であってもよい。工程Ｂにおける混合速度は、具体的には、例えば、撹拌羽根の周速（すなわち撹拌羽根の先端の回転速度）として、３～５０ｍ／ｓ、好ましくは５～４０ｍ／ｓ、より好ましくは１０～３０ｍ／ｓであってもよい。混合速度は、通常は工程Ｂの全期間において上記例示したような混合速度の範囲内であってよいが、一時的にその範囲外となってもよい。すなわち、「工程Ｂにおける混合速度が或る範囲である」とは、工程Ｂの全期間において混合速度が当該範囲内である場合に限られず、混合速度が一時的に当該範囲外となる場合も包含する。例えば、工程Ｂにおいて、原料の混合は、一時的に停止してもよい。すなわち、工程Ｂにおいて、原料の混合は、連続的に行われてもよく、間欠的に行われてもよい。工程Ｂについての「一時的」の長さは、耐熱性向上効果が得られる限り、特に制限されない。工程Ｂについての「一時的」とは、例えば、工程Ｂの全期間の内の、２０％以下、１５％以下、１０％以下、５％以下、３％以下、または１％以下の期間を意味してよい。
　上記のようにして工程ＡおよびＢを実施することにより、細菌の耐熱性を向上させることができる。耐熱性の向上した細菌は、例えば、細菌組成物（具体的には、耐熱性細菌組成物）として得られてよい。
　細菌組成物は、例えば、ペースト状の組成物として得られてよい。細菌組成物は、そのまま、あるいは適宜加工して利用してよい。細菌組成物は、例えば、任意の形状に加工して利用してもよい。
　細菌組成物の用途は、特に制限されない。細菌組成物は、例えば、飲食品に添加して利用されてよい。すなわち、細菌組成物は、例えば、飲食品添加用の組成物（すなわち飲食品に添加して利用される組成物）であってよい。また、本発明は、細菌組成物を含有する飲食品を提供する。飲食品は、特に制限されない。飲食品としては、乳製品が挙げられる。乳製品は、牛乳を原料として製造された製品であってよい。乳製品としては、粉乳が挙げられる。粉乳としては、全粉乳、脱脂粉乳、調整粉乳、ホエイパウダー、クリーミングパウダーが挙げられる。粉乳等の飲食品として、具体的には、乳児用のものや幼児用のものが挙げられる。粉乳等の飲食品としては、特に、乳児用のものが挙げられる。例えば、粉乳として、具体的には、乳児用調製粉乳やフォローアップミルク等の育児用調製粉乳が挙げられる。「乳児」とは、生後１年未満の子供をいう。「幼児」とは、生後１年から小学校就学までの子供をいう。
　飲食品における細菌組成物の含有量は、特に制限されない。飲食品における細菌組成物の含有量は、例えば、０．０１％（ｗ／ｗ）以上、０．１％（ｗ／ｗ）以上、０．５％（ｗ／ｗ）以上、１％（ｗ／ｗ）以上、５％（ｗ／ｗ）以上、または１０％（ｗ／ｗ）以上であってもよく、５０％（ｗ／ｗ）以下、３０％（ｗ／ｗ）以下、２０％（ｗ／ｗ）以下、１０％（ｗ／ｗ）以下、または５％（ｗ／ｗ）以下であってもよく、それらの矛盾しない組み合わせの範囲であってもよい。飲食品における細菌組成物の含有量は、具体的には、例えば、０．０１％（ｗ／ｗ）～５０％（ｗ／ｗ）、０．１％（ｗ／ｗ）～５０％（ｗ／ｗ）、０．１（ｗ／ｗ）～１０（ｗ／ｗ）％、または０．５（ｗ／ｗ）～５（ｗ／ｗ）％であってもよい。また、飲食品における細菌組成物の含有量は、例えば、細菌の含有量に換算して、１×１０４ｃｆｕ／ｇ以上、１×１０５ｃｆｕ／ｇ以上、１×１０６ｃｆｕ／ｇ以上、または１×１０７ｃｆｕ／ｇ以上であってもよく、１×１０１３ｃｆｕ／ｇ以下、１×１０１２ｃｆｕ／ｇ以下、１×１０１１ｃｆｕ／ｇ以下、または１×１０１０ｃｆｕ／ｇ以下であってもよく、それらの組み合わせの範囲であってもよい。飲食品における細菌組成物の含有量は、具体的には、例えば、細菌の含有量に換算して、１×１０５～１×１０１２ｃｆｕ／ｇ、好ましくは１×１０６～１×１０１１ｃｆｕ／ｇ、より好ましくは１×１０７～１×１０１０ｃｆｕ／ｇであってもよい。
＜２＞本発明の組成物
　本発明の組成物は、細菌、油脂、および乳化剤を含有する組成物である。細菌、油脂、および乳化剤を総称して「有効成分」ともいう。
　本発明の組成物は、有効成分からなるものであってもよく、そうでなくてもよい。すなわち、本発明の組成物は、有効成分に加えて、他の成分を含有していてもよい。
　本発明の組成物に含有される成分（すなわち、有効成分および任意で他の成分）については、本発明の方法における原料についての記載を準用できる。本発明の組成物に含有される細菌は、本発明の組成物に含有されない場合と比較して耐熱性の向上した細菌であってよい。すなわち、本発明の組成物は、耐熱性細菌組成物（耐熱性の向上した細菌を含有する組成物）であってよい。本発明の組成物においては、本発明の組成物に含有されることにより得られる細菌の耐熱性を向上させる効果を「耐熱性向上効果」ともいう。本発明の組成物における耐熱性向上効果については、本発明の方法における耐熱性向上効果についての記載を準用できる。すなわち、本発明の方法における工程ＡおよびＢの実施前の細菌は、本発明の組成物に含有されていない状態の細菌と読み替えてよい。また、本発明の方法における工程ＡおよびＢの実施後の細菌は、本発明の組成物に含有された状態の細菌と読み替えてよい。
　本発明の組成物に含有される成分の量および量比は、耐熱性向上効果が得られる限り、特に制限されない。本発明の組成物に含有される成分の量および量比については、本発明の方法における原料の使用量についての記載を準用できる。すなわち、本発明の方法に用いられる原料の量比は、本発明の組成物に含有される成分の量比と読み替えてよい。また、本発明の方法における原料の総使用量に対する有効成分の総使用量の重量比は、本発明の組成物における有効成分の総含有量と読み替えてよい。また、本発明の組成物における各有効成分の含有量は、本発明の組成物における有効成分の総含有量と本発明の組成物に含有される成分の量比から算出される範囲であってよい。
　また、本発明の組成物における細菌の含有量は、例えば、１×１０４ｃｆｕ／ｇ以上、１×１０５ｃｆｕ／ｇ以上、１×１０６ｃｆｕ／ｇ以上、または１×１０７ｃｆｕ／ｇ以上であってもよく、１×１０１３ｃｆｕ／ｇ以下、１×１０１２ｃｆｕ／ｇ以下、または１×１０１１ｃｆｕ／ｇ以下であってもよく、それらの組み合わせの範囲であってもよい。本発明の組成物における細菌の含有量は、具体的には、例えば、１×１０４～１×１０１３ｃｆｕ／ｇ、好ましくは１×１０６～１×１０１２ｃｆｕ／ｇ、より好ましくは１×１０７～１×１０１１ｃｆｕ／ｇであってもよい。
　本発明の組成物において、細菌は、例えば、油脂および乳化剤でコーティングされていてよい。本発明の組成物において、細菌は、具体的には、例えば、油脂と乳化剤の混合物でコーティングされていてよい。本発明の組成物において、細菌は、具体的には、例えば、油脂でコーティングされ、さらに乳化剤でコーティングされていてもよい。本発明の組成物において、細菌は、具体的には、例えば、乳化剤でコーティングされ、さらに油脂でコーティングされていてもよい。
　本発明の組成物の形状は、特に制限されない。本発明の組成物は、例えば、粉末状であってもよく、ペースト状であってもよい。
　本発明の組成物の用途は、特に制限されない。本発明の組成物の用途については、本発明の方法により得られる細菌組成物の用途についての記載を準用できる。すなわち、本発明の組成物は、例えば、粉乳等の飲食品に添加して利用されてよい。
　本発明の組成物を製造する方法は、特に制限されない。本発明の組成物は、例えば、上述した本発明の方法により製造できる。すなわち、本発明の組成物の一態様は、本発明の方法により製造される細菌組成物であってよい。
　以下、非限定的な実施例を参照して、本発明をさらに具体的に説明する。
〔実施例１〕
　本実施例では、油脂および乳化剤の併用による細菌の耐熱性向上効果を評価した。細菌としては、Bifidobacterium longum BB536（NITE BP-02621；以下、「BB536」ともいう）を用いた。油脂としては、パーム核極度硬化油（K-40；太陽油脂社製）を用いた。乳化剤としては、ポリグリセリン脂肪酸エステル（ポエムRJ-38；理研ビタミン社製）を用いた。ポエムRJ-38は、Ｃ１８（６５％）およびＣ１６（３４％）の構成脂肪酸を有するポリグリセリン脂肪酸エステルである。
　BB536を培養し、得られた菌体を凍結乾燥し、乾燥菌体を得た。BB536の乾燥菌体50 gをバランスグランLBG-1L（撹拌羽根の回転直径＝0.136 m；フロイント・ターボ社製）に入れ、2400 rpmで撹拌しながら、表１に記載の原料を添加した。原料の添加後、表１に記載の条件で撹拌を実施し、ペースト状の産物を得た。なお、撹拌が２段階で実施される場合は、１層目の原料を添加して１層目の条件で撹拌を実施した後、さらに２層目の原料を添加して２層目の条件で撹拌を実施した。パーム核極度硬化油は、予め加熱溶解してから菌体に滴下した。ポリグリセリン脂肪酸エステルは、粉末のまま菌体に添加した。産物を1.0重量％の濃度で７０℃の湯に分散し、１分後のBB536の生残率を測定し、BB536の耐熱性の指標とした。実験条件は、特記しない限り、以下の実施例においても同一である。
　結果を表１に示す。パーム核極度硬化油とポリグリセリン脂肪酸エステルを併用した場合（Ｎｏ．４～６）には、未処理の場合（Ｎｏ．１）およびパーム核極度硬化油またはポリグリセリン脂肪酸エステルを単独で用いた場合（Ｎｏ．２～３）と比較して、高い耐熱性が得られた。特に、パーム核極度硬化油とポリグリセリン脂肪酸エステルを２段階に分けて細菌と混合した場合（Ｎｏ．５～６）には、パーム核極度硬化油とポリグリセリン脂肪酸エステルを同時に添加した場合（Ｎｏ．４）と比較して、高い耐熱性が得られた。一方、パーム核極度硬化油の添加後の撹拌温度がパーム核極度硬化油の融点未満である場合には、耐熱性はあまり向上しなかった（Ｎｏ．７）。以上より、細菌を油脂および乳化剤と混合することにより細菌の耐熱性が向上すること、および細菌と油脂との混合は油脂の融点以上の温度で実施するのが好ましいことが明らかとなった。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000001
〔実施例２〕
　本実施例では、乳化剤を種々の添加量で用いた際の、油脂および乳化剤の併用による細菌の耐熱性向上効果を評価した。用いた細菌、油脂、および乳化剤は実施例１と同一である。
　表２に記載の原料および撹拌条件にて撹拌を実施し、細菌の耐熱性を評価した。
　結果を表２に示す。いずれの添加量でポリグリセリン脂肪酸エステルを用いた場合（Ｎｏ．８～１２）でも、未処理の場合（Ｎｏ．１）と比較して、高い耐熱性が得られた。特に、ポリグリセリン脂肪酸エステルの添加量が１０ｇ～１５ｇの場合（Ｎｏ．９～１１）に、高い耐熱性が得られた。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000002
〔実施例３〕
　本実施例では、他の乳化剤を用いた際の、油脂および乳化剤の併用による細菌の耐熱性向上効果を評価した。用いた細菌および油脂は実施例１と同一である。乳化剤としては、レシチン（Yelkin TS；エー・ディー・エム・ジャパン社製）を用いた。Yelkin TSは、液体状の大豆レシチンである。
　表３に記載の原料および撹拌条件にて撹拌を実施し、細菌の耐熱性を評価した。レシチンは、そのまま菌体に滴下した。
　結果を表３に示す。乳化剤としてレシチンを用いた場合（Ｎｏ．１３～２８）でも、未処理の場合（Ｎｏ．１）と比較して、高い耐熱性が得られた。以上より、ポリグリセリン脂肪酸エステルに限られず、種々の乳化剤について、油脂との併用により細菌の耐熱性向上効果が得られることが明らかとなった。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000003
〔実施例４〕
　本実施例では、他の細菌を用いた際の、油脂および乳化剤の併用による細菌の耐熱性向上効果を評価した。用いた油脂および乳化剤は実施例３と同一である。細菌としては、Bifidobacterium breve M-16V（NITE BP-02622；以下、「M-16V」ともいう）を用いた。
　M-16Vを培養し、菌体を凍結乾燥し、乾燥菌体を得た。M-16Vの乾燥菌体50 gを用いて、表４に記載の原料および撹拌条件にて撹拌を実施し、細菌の耐熱性を評価した。
　結果を表４に示す。細菌としてBifidobacterium breveを用いた場合（Ｎｏ．３０）でも、未処理の場合（Ｎｏ．２９）と比較して、高い耐熱性が得られた。以上より、Bifidobacterium longumに限られず、種々の細菌について、油脂および乳化剤の併用による耐熱性向上効果が得られることが明らかとなった。
Figure JPOXMLDOC01-appb-T000004
 
〔実施例５〕
　BB536の培養物を凍結乾燥して得た菌末50 gをバランスグランLBG-1L（撹拌羽根の回転直径＝0.136 m；フロイント・ターボ社製）に入れ、2400 rpmで撹拌しながら、あらかじめ加熱溶解しておいた液体状のナタネ極度硬化油脂3gを添加し、45℃、回転数2400rpmの条件で3分間撹拌する。次いで、液体状のレシチン5gを添加した後、45℃、回転数2400rpmの条件でさらに3分間撹拌して、耐熱性の高い細菌を含有する組成物を得る。
〔実施例６〕
　BB536の培養物を凍結乾燥して得た菌末50 gをバランスグランLBG-1L（撹拌羽根の回転直径＝0.136 m；フロイント・ターボ社製）に入れ、2400 rpmで撹拌しながら、あらかじめ加熱溶解しておいた液体状のパーム極度硬化油脂3gを添加し、45℃、回転数2400rpmの条件で3分間撹拌する。次いで、モノグリセリン脂肪酸エステル１０gを添加した後、45℃、回転数2400rpmの条件でさらに5分間撹拌して、耐熱性の高い細菌を含有する組成物を得る。
〔実施例７〕
　M-16Vの培養物を凍結乾燥して得た菌末50 gをバランスグランLBG-1L（撹拌羽根の回転直径＝0.136 m；フロイント・ターボ社製）に入れ、2400 rpmで撹拌しながら、あらかじめ加熱溶解しておいた液体状のパーム核極度硬化油脂3gを添加し、45℃、回転数2400rpmの条件で3分間撹拌する。次いで、ショ糖脂肪酸エステル１０gを添加した後、45℃、回転数2400rpmの条件でさらに5分間撹拌して、耐熱性の高い細菌を含有する組成物を得る。
　本発明によれば、細菌の耐熱性を向上させることができる。

Claims (22)

  1. 　細菌を含有する組成物の製造方法であって、
    　下記工程ＡおよびＢ：
    （Ａ）細菌を油脂と混合する工程；
    （Ｂ）細菌を乳化剤と混合する工程
    　を含み、
    　前記工程Ａが、前記油脂の融点以上の温度で実施される、方法。
  2. 　前記工程Ａが、前記工程Ｂの開始前または開始後に開始される、請求項１に記載の方法。
  3. 　前記工程ＡおよびＢが、同時に開始される、請求項１に記載の方法。
  4. 　前記油脂が、融点が５０℃以下の油脂である、請求項１～３のいずれか１項に記載の方法。
  5. 　前記油脂が、融点が３５℃以上の油脂である、請求項１～４のいずれか１項に記載の方法。
  6. 　前記油脂が、パーム核極度硬化油である、請求項１～５のいずれか１項に記載の方法。
  7. 　前記工程Ａが、５０℃以下の温度で実施される、請求項１～６のいずれか１項に記載の方法。
  8. 　前記工程Ａが、４０℃以上の温度で実施される、請求項１～７のいずれか１項に記載の方法。
  9. 　前記乳化剤が、レシチンまたはポリグリセリン脂肪酸エステルである、請求項１～８のいずれか１項に記載の方法。
  10. 　前記工程Ｂが、５０℃以下の温度で実施される、請求項１～９のいずれか１項に記載の方法。
  11. 　前記工程Ｂが、４０℃以上の温度で実施される、請求項１～１０のいずれか１項に記載の方法。
  12. 　前記油脂の混合量が、前記細菌の乾燥菌体重量５０ｇ当たり、１．５～４．５ｇである、請求項１～１１のいずれか１項に記載の方法。
  13. 　前記乳化剤が、ポリグリセリン脂肪酸エステルであり、
    　前記乳化剤の混合量が、前記細菌の乾燥菌体重量５０ｇ当たり、８～１７ｇである、請求項１～１２のいずれか１項に記載の方法。
  14. 　前記乳化剤が、レシチンであり、
    　前記乳化剤の混合量が、前記細菌の乾燥菌体重量５０ｇ当たり、１～２０ｇである、請求項１～１２のいずれか１項に記載の方法。
  15. 　前記細菌が、ビフィドバクテリウム属細菌である、請求項１～１４のいずれか１項に記載の方法。
  16. 　前記細菌が、ビフィドバクテリウム・ロンガム（Bifidobacterium longum）またはビフィドバクテリウム・ブレーベ（Bifidobacterium breve）である、請求項１～１５のいずれか１項に記載の方法。
  17. 　前記細菌が、ビフィドバクテリウム・ロンガムBB536（NITE BP-02621）またはビフィドバクテリウム・ブレーベM-16V（NITE BP-02622）である、請求項１～１６のいずれか１項に記載の方法。
  18. 　細菌の耐熱性を向上させる方法であって、
    　下記工程ＡおよびＢ：
    （Ａ）細菌を油脂と混合する工程；
    （Ｂ）細菌を乳化剤と混合する工程
    　を含み、
    　前記工程Ａが、前記油脂の融点以上の温度で実施される、方法。
  19. 　細菌、油脂、および乳化剤を含有する、組成物。
  20. 　前記細菌が、前記油脂および前記乳化剤でコーティングされている、請求項１９に記載の組成物。
  21. 　請求項１～１７のいずれか１項に記載の方法で製造された組成物または請求項１９もしくは２０に記載の組成物を含有する粉乳。
  22. 　育児用調製粉乳である、請求項２１に記載の粉乳。
PCT/JP2020/014078 2019-03-28 2020-03-27 耐熱性細菌組成物 Ceased WO2020196844A1 (ja)

Priority Applications (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP20778830.8A EP3949742A4 (en) 2019-03-28 2020-03-27 HEAT-RESISTANT BACTERIAL COMPOSITION
JP2021509644A JPWO2020196844A1 (ja) 2019-03-28 2020-03-27
US17/441,813 US20220195376A1 (en) 2019-03-28 2020-03-27 Heat-Resistant Bacterium Composition
CN202080023510.4A CN113677212A (zh) 2019-03-28 2020-03-27 耐热性细菌组合物
AU2020246725A AU2020246725A1 (en) 2019-03-28 2020-03-27 Heat-resistant bacterium composition

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP2019-063902 2019-03-28
JP2019063902 2019-03-28

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2020196844A1 true WO2020196844A1 (ja) 2020-10-01

Family

ID=72611644

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/JP2020/014078 Ceased WO2020196844A1 (ja) 2019-03-28 2020-03-27 耐熱性細菌組成物

Country Status (6)

Country Link
US (1) US20220195376A1 (ja)
EP (1) EP3949742A4 (ja)
JP (1) JPWO2020196844A1 (ja)
CN (1) CN113677212A (ja)
AU (1) AU2020246725A1 (ja)
WO (1) WO2020196844A1 (ja)

Citations (17)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS5841527B2 (ja) 1977-10-28 1983-09-13 富士通株式会社 デ−タ・バッフア領域管理処理方式
JPS60221078A (ja) * 1984-04-18 1985-11-05 Morinaga Milk Ind Co Ltd 有用微生物粉末の粒状製品およびその製造法
JPH02200639A (ja) 1989-01-31 1990-08-08 Shinfusou Seiyaku Kk 脂質被覆細菌製剤
JPH0739351A (ja) * 1993-07-29 1995-02-10 Riken Vitamin Co Ltd 固形油脂食品
JPH08214875A (ja) * 1995-02-13 1996-08-27 Mizusawa Ind Chem Ltd 有用菌の培養方法
JP2596418B2 (ja) 1986-09-01 1997-04-02 昭和電工株式会社 有用微生物含有粒剤およびその製造方法
JPH10191950A (ja) 1997-01-13 1998-07-28 Riken Vitamin Co Ltd 耐熱性マイクロカプセルの製造法
JP3102990B2 (ja) 1993-07-08 2000-10-23 森下仁丹株式会社 カプセルの製造方法およびそれから得られたカプセル
JP2004344146A (ja) 2003-05-20 2004-12-09 Takayuki Hirano 耐熱性を有する微生物封入物および製造方法
JP3698455B2 (ja) 1995-04-12 2005-09-21 株式会社キティー 物質の被覆方法及び被覆材
US20100055083A1 (en) * 2006-10-18 2010-03-04 Ray Edward Kowalski Encapsulation of heat and moisture sensitive substances
JP2011103823A (ja) * 2009-11-18 2011-06-02 Suntory Holdings Ltd 乳酸菌包含マイクロカプセルの製造方法
US20120282104A1 (en) * 2011-05-06 2012-11-08 Snecma Turbine engine fan disk
JP2013510560A (ja) * 2009-11-13 2013-03-28 ユニストロー パテント ホールディングス リミテッド プロバイオティック組成物、並びにプロバイオティック組成物を投与する方法及び器具
JP2014065669A (ja) * 2012-09-25 2014-04-17 Nihon Kenko Zoshin Shien Kiko 乳幼児用アレルギー疾患予防剤
JP2017102182A (ja) * 2015-11-30 2017-06-08 富士フイルム株式会社 撮像レンズおよび撮像装置
JP2018019628A (ja) * 2016-08-02 2018-02-08 ミヨシ油脂株式会社 加熱殺菌飲料用粉末油脂とそれを用いた加熱殺菌飲料

Family Cites Families (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH06133735A (ja) * 1992-10-23 1994-05-17 Kanebo Ltd 腸溶性乳酸菌造粒物
JP4121306B2 (ja) * 2002-05-17 2008-07-23 太陽化学株式会社 生菌剤
JP2005185181A (ja) * 2003-12-25 2005-07-14 Taiyo Kagaku Co Ltd 生菌剤
JP4751143B2 (ja) * 2005-08-29 2011-08-17 太陽化学株式会社 生菌剤
KR101355003B1 (ko) * 2010-11-02 2014-01-24 정명준 다중 코팅층을 갖는 유산균 및 이의 제조방법
MX2016007006A (es) * 2013-12-06 2016-09-07 Mjn Us Holdings Llc Estabilizacion probiotica.
JP2015172040A (ja) * 2014-02-19 2015-10-01 森下仁丹株式会社 放射性物質回収剤
WO2017095968A1 (en) * 2015-11-30 2017-06-08 Imagilin Technology Llc Compositions comprising probiotics and methods of use thereof

Patent Citations (17)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS5841527B2 (ja) 1977-10-28 1983-09-13 富士通株式会社 デ−タ・バッフア領域管理処理方式
JPS60221078A (ja) * 1984-04-18 1985-11-05 Morinaga Milk Ind Co Ltd 有用微生物粉末の粒状製品およびその製造法
JP2596418B2 (ja) 1986-09-01 1997-04-02 昭和電工株式会社 有用微生物含有粒剤およびその製造方法
JPH02200639A (ja) 1989-01-31 1990-08-08 Shinfusou Seiyaku Kk 脂質被覆細菌製剤
JP3102990B2 (ja) 1993-07-08 2000-10-23 森下仁丹株式会社 カプセルの製造方法およびそれから得られたカプセル
JPH0739351A (ja) * 1993-07-29 1995-02-10 Riken Vitamin Co Ltd 固形油脂食品
JPH08214875A (ja) * 1995-02-13 1996-08-27 Mizusawa Ind Chem Ltd 有用菌の培養方法
JP3698455B2 (ja) 1995-04-12 2005-09-21 株式会社キティー 物質の被覆方法及び被覆材
JPH10191950A (ja) 1997-01-13 1998-07-28 Riken Vitamin Co Ltd 耐熱性マイクロカプセルの製造法
JP2004344146A (ja) 2003-05-20 2004-12-09 Takayuki Hirano 耐熱性を有する微生物封入物および製造方法
US20100055083A1 (en) * 2006-10-18 2010-03-04 Ray Edward Kowalski Encapsulation of heat and moisture sensitive substances
JP2013510560A (ja) * 2009-11-13 2013-03-28 ユニストロー パテント ホールディングス リミテッド プロバイオティック組成物、並びにプロバイオティック組成物を投与する方法及び器具
JP2011103823A (ja) * 2009-11-18 2011-06-02 Suntory Holdings Ltd 乳酸菌包含マイクロカプセルの製造方法
US20120282104A1 (en) * 2011-05-06 2012-11-08 Snecma Turbine engine fan disk
JP2014065669A (ja) * 2012-09-25 2014-04-17 Nihon Kenko Zoshin Shien Kiko 乳幼児用アレルギー疾患予防剤
JP2017102182A (ja) * 2015-11-30 2017-06-08 富士フイルム株式会社 撮像レンズおよび撮像装置
JP2018019628A (ja) * 2016-08-02 2018-02-08 ミヨシ油脂株式会社 加熱殺菌飲料用粉末油脂とそれを用いた加熱殺菌飲料

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
ABE, FUMIAKI ET AL.: "Stability of bifidobacteria in powdered formula", INTERNATIONAL JOURNAL OF FOOD SCIENCE AND TECHNOLOGY, vol. 44, 2009, pages 718 - 724, XP055535855, DOI: 10.1111/j.1365-2621.2008.01881.x *
FOOD HYDROCOLLOIDS, vol. 51, 2015, pages 459 - 467
JOURNAL OF FOOD SCIENCE, vol. 9, 2017, pages 2134 - 2141
See also references of EP3949742A4

Also Published As

Publication number Publication date
EP3949742A1 (en) 2022-02-09
JPWO2020196844A1 (ja) 2020-10-01
EP3949742A4 (en) 2022-12-07
US20220195376A1 (en) 2022-06-23
AU2020246725A1 (en) 2021-11-11
CN113677212A (zh) 2021-11-19

Similar Documents

Publication Publication Date Title
AU2024266804B2 (en) Composition suitable for protecting microorganisms
Elsanhoty et al. Detoxification of aflatoxin M1 in yoghurt using probiotics and lactic acid bacteria
Teijeiro et al. Suitability of kefir powder production using spray drying
JP5314421B2 (ja) 免疫調節活性の高い乳酸菌の培養法
JP5583114B2 (ja) 凍結乾燥粉末状菌体及びその製造方法
MX2012009799A (es) Metodo para construir una nueva bacteria perteneciente al genero bifidobacterium.
JPWO2008099544A1 (ja) 新規乳酸菌
WO2009072867A1 (en) Improved storage stability of micro-organisms
WO2018038004A1 (ja) ラクトバチルス・プランタラムの培養物の製造方法
Teanpaisan et al. Survival rates of human-derived probiotic Lactobacillus paracasei SD1 in milk powder using spray drying
CN119110844A (zh) 高储存稳定性的微囊化微生物培养物制剂
EP3949742A1 (en) Heat-resistant bacterium composition
Hwang et al. Biomass production of Lactobacillus plantarum LP02 isolated from infant feces with potential cholesterollowering ability
JP6330237B2 (ja) ラクトバチルス属乳酸菌培養用食品グレード培地、ラクトバチルス属乳酸菌の培養方法及びラクトバチルス属乳酸菌培養物の製造方法
TWI662902B (zh) 使用包含有三株乳酸菌菌株的混合物來改善水產養殖池的溶氧量
JP7468788B2 (ja) シェワネラ属細菌、及びその使用
Amiri et al. Production of bacteriocin in batch fermentation of dairy effluents by Lactobacillus acidophilus LA5 and Bifidobacterium animalis subsp. lactis BB12
Samuel et al. Isolation and identification of antagonistic Lactobacillus spp. isolated from dairy products against selected pathogens
JP7575424B2 (ja) 組成物及び製造方法
JP2021164435A (ja) ビフィズス菌増殖促進剤
Denkova et al. Biochemical and technological properties of Lactobacillus plantarum X2 from naturally fermented sourdough
Zheng et al. The effect of eight thermal protectants on the survival rate and the viable counts of Lactobacillus casei after heat treatment in fermented goat milk.
JPWO2019193841A1 (ja) 高生残性微生物乾燥菌体の製造方法
RU2795965C1 (ru) Способ производства капсулированной формы пробиотической пищевой добавки
Jawan et al. Influence of media composition and prebiotic-based protectants on the growth and storage stability of probiotic Lactobacillus pentosus A6

Legal Events

Date Code Title Description
121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application

Ref document number: 20778830

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1

ENP Entry into the national phase

Ref document number: 2021509644

Country of ref document: JP

Kind code of ref document: A

NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: DE

ENP Entry into the national phase

Ref document number: 2020778830

Country of ref document: EP

Effective date: 20211028

ENP Entry into the national phase

Ref document number: 2020246725

Country of ref document: AU

Date of ref document: 20200327

Kind code of ref document: A