WO2025238109A2 - Verfahren zur verringerung der bakteriellen last auf bzw. in einer klimaanlage - Google Patents

Verfahren zur verringerung der bakteriellen last auf bzw. in einer klimaanlage

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WO2025238109A2
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conditioning system
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Definitions

  • the present invention relates to a method for reducing the bacterial load on or in an air conditioning system, as well as various uses of bacteriophages or a component thereof. Furthermore, the present invention relates to certain deposited bacteriophages as such.
  • dirt particles and microorganisms often accumulate on the system's components after only a short time, especially directly on the evaporator and the pollen filter housing. These microorganisms use the dirt particles and airborne components as a food source and can form a stable biofilm. Heavy biofilm growth produces unpleasant odors that are clearly noticeable in the passenger compartment. This occurs particularly when air conditioning units are left unused for extended periods after the introduction of microbially digestible substances, especially in high humidity and mild temperatures.
  • An alcohol-based cleaner is sprayed directly onto the evaporator at high pressure using a pressure cup gun and a rigid probe. This removes dirt and deposits.
  • the high spray pressure flushes the evaporator and removes the biofilm formed by microorganisms. This system is currently the most effective system for cleaning air conditioning systems.
  • the foam is sprayed towards the evaporator using a probe, either through the air conditioning system's condensate drain or through the pollen filter box opening.
  • the foam is intended to coat the evaporator and thereby clean/disinfect it.
  • a cleaning agent is atomized using an ultrasonic device placed inside the vehicle.
  • the spray is then circulated through the air conditioning system via the recirculation setting and distributed throughout the interior.
  • ozone is produced from atmospheric oxygen and then introduced into the vehicle interior.
  • organic compounds such as bacteria and other germs, are broken down.
  • the escaping ozone of the Generators are hazardous to health and can cause lung damage and/or headaches, among other things, if inhaled.
  • Biocidal Products Regulation Biocidal Products Regulation
  • viruses can be combated by viruses, in particular by lysis and thus killing them.
  • viruses which are specialized to infect bacteria as host cells, are called bacteriophages and are classified into different groups according to their host specificity.
  • bacteriophages are only used in the medical, therapeutic, and food technology sectors. These applications primarily involve medically relevant bacteriophages, meaning bacteriophages that lyse pathogenic bacteria.
  • WO 2009/090097 A1 describes the use of bacteriophages in hygiene and care products, particularly for wound care.
  • WO 2010/090542 A2 This describes the therapeutic treatment of bacterial infections using specific bacteriophages.
  • bacteriophages are used to treat Pseudomonas infections.
  • DE 601 06 727 T2 discloses food packaging containing bacteriophages.
  • bacteriophages in air conditioning systems, such as those found in vehicles, has not yet been described to date.
  • bacteriophages represent a promising biological approach that can overcome the disadvantages of known chemical and environmentally harmful substances.
  • One object of the present invention is therefore to achieve a biological removal or at least reduction of bacteria in air conditioning systems without the disadvantages of the prior art due to chemical, environmentally harmful substances.
  • This problem is solved according to the invention by using bacteriophages or a component thereof to reduce the bacterial load on or in an air conditioning system, to prevent the formation of a biofilm or to remove a biofilm on or in an air conditioning system, and/or to prevent the formation of odors in an air conditioning system.
  • vehicle air conditioning systems primarily contain representatives of the two bacterial genera Sphingomonas spp. and Methylobacterium spp.
  • the inventors of the present invention Furthermore, the invention made it possible to isolate suitable bacteriophages with these bacterial species as host organisms and thus selectively combat the bacteria predominantly present in a vehicle air conditioning system. A long-term effect (depot effect) can also be achieved, along with good material compatibility.
  • the present invention relates accordingly to a method for reducing the bacterial load (or a method for removing, killing or reducing the number of bacteria, preventing the formation of a biofilm or removing a biofilm and/or preventing the formation of odors) on or in an air conditioning system, wherein the method comprises applying bacteriophages or a component thereof to one or more parts of the air conditioning system.
  • the present invention relates to the use of bacteriophages or a component thereof for reducing the bacterial load (for removing, killing or reducing the number of bacteria) on or in an air conditioning system.
  • the present invention relates to the use of bacteriophages or a component thereof to prevent the formation of a biofilm or to remove a biofilm on or in an air conditioning system.
  • the present invention relates to the use of bacteriophages or a component thereof to prevent the formation of (bacterially caused, unpleasant) odors in an air conditioning system.
  • the present invention relates to selected bacteriophages or a component thereof, comprising at least one from the group consisting of Bacteriophage SP-P_L_l_2022, filed under DSM 34460, and Bacteriophage SP-P_M_l_2022, filed under DSM 34461. Further tasks and advantages of embodiments of the present invention will become apparent from the following detailed description.
  • the present invention relates to a method for reducing the bacterial load on or in an air conditioning system.
  • reduction of bacterial load means in particular that the number of (live or active) bacteria is reduced, or that bacterial infestation is reduced or even prevented.
  • the bacteriophages used, or a component thereof, may exhibit antimicrobial activity or efficacy for this purpose.
  • an “antibacterial effect” or “antibacterial efficacy” is understood to mean the ability to kill bacteria or at least to inhibit their growth.
  • an "antibacterial effect” or “antibacterial efficacy” is understood to mean a bacteriostatic and/or a bactericidal effect or property.
  • the method for reducing the bacterial load on or in an air conditioning system can thus be a method for removing, killing or reducing the number of (living) bacteria on or in an air conditioning system.
  • the method for reducing the bacterial load on or in an air conditioning system can be a method for preventing the formation of a biofilm on or in an air conditioning system, or a method for removing a biofilm from an air conditioning system.
  • a biofilm is understood to mean, in particular, a group of microorganisms, especially bacteria, in which the cells adhere to one another on a surface.
  • the method for reducing the bacterial load on or in an air conditioning system can be a method for preventing the formation of (bacterially caused, unpleasant) odors in an air conditioning system.
  • a "bacterially caused odor” is understood to mean, in particular, an odor produced by odorants generated by bacteria.
  • an "unpleasant odor” is understood to mean, in particular, an odor that is perceived as unpleasant by at least 50% of people, and especially by at least 80% of people.
  • Sphingomonas and Methylobacteria bacteriophages have proven to be particularly suitable for preventing the formation of unpleasant odors in an air conditioning system.
  • An air conditioning system can refer in particular to the air conditioning system of a vehicle, such as a motor vehicle, especially an automobile (e.g., with a gasoline or diesel engine, including a hybrid vehicle, or an electric vehicle), a commercial vehicle (e.g., a truck or a construction vehicle), a ship, or an aircraft.
  • a vehicle such as a motor vehicle, especially an automobile (e.g., with a gasoline or diesel engine, including a hybrid vehicle, or an electric vehicle), a commercial vehicle (e.g., a truck or a construction vehicle), a ship, or an aircraft.
  • an air conditioning system can also refer to a stationary air conditioning system, such as the air conditioning system of a building.
  • the procedure involves applying bacteriophages or a component thereof to one or more parts of the air conditioning system.
  • bacteriophage refers specifically to a virus that can infect a bacterium, multiply at its expense, and ultimately lyse (dissolve) it.
  • a bacteriophage usually infects one or more specific bacteria and therefore typically exhibits a corresponding host specificity.
  • the applied component of a bacteriophage may in particular be an antibacterial component of the bacteriophage.
  • the bacteriophages, or a component thereof comprise at least one from the group consisting of Sphingomonas bacteriophages and Methylobacterium bacteriophages.
  • Sphingomonas spp. the following bacterial species have been identified in vehicle air conditioning systems: Sphingomonas spp. and Methylobacterium spp. Therefore, Sphingomonas bacteriophages and Methylobacterium bacteriophages are especially suitable for reducing the bacterial load on or in an air conditioning system.
  • the bacteriophages, or a component thereof comprise at least one from the group consisting of Bacteriophage SP-P_L_l_2022, deposited under DSM 34460, and Bacteriophage SP-P_M_l_2022, deposited under DSM 34461, or a component thereof. These bacteriophages have proven to be particularly suitable for reducing the bacterial load on or in an air conditioning system.
  • the application of bacteriophages or a component thereof comprises the application of a solution or a dispersion (in particular a suspension or an emulsion) containing the bacteriophages or a component thereof.
  • a solution or a dispersion in particular a suspension or an emulsion
  • the bacteriophages or a component thereof can be applied as a solution, for example, by dissolving the bacteriophages or a component thereof in a solvent.
  • freeze-dried bacteriophages or a component thereof were dissolved or dispersed before application. It is thus possible to freeze-dry bacteriophages or a component thereof, thereby improving their shelf life, and then dissolve or disperse them only immediately before application—for example, directly before application by the user or even by the manufacturer (so to speak, "pre-packaged"). As already mentioned, this improves the shelf life of the bacteriophages or a component thereof.
  • the solution or dispersion further contains at least one nutrient for bacteria, in particular for bacteria that may be found in air conditioning systems.
  • Bacteriophages can multiply in metabolically active bacteria and thereby kill them. Therefore, it is usually necessary to supply the bacteria with nutrients.
  • a "nutrient" is understood to mean, in particular, a substance that can serve as food for the host bacteria of the bacteriophages. Suitable nutrients include, among other things, organic substrates as well as mineral macro- and trace elements and buffer components.
  • the solution or dispersion furthermore has a Ca2+ concentration in the range of 1 to 10 mmol/l, in particular 1.5 to 5 mmol/l, more particularly 2 to 4 mmol/l, preferably about 2.5 mmol/l. It has been shown that a Ca2+- A concentration within the aforementioned range improves the antibacterial efficacy of bacteriophages or a component thereof.
  • the Ca2+ concentration can be adjusted by adding an appropriate amount of a calcium salt, such as calcium chloride, to the applied fluid.
  • the application of bacteriophages or a component thereof comprises spraying a solution or dispersion containing the bacteriophages or a component thereof onto one or more parts of the air conditioning system.
  • This can be done, for example, using a pressure cup gun, optionally with a spray lance, a metering system, or an alternative application system, as is generally known from the prior art.
  • one or more parts of the air conditioning system comprise an evaporator and/or a pollen filter housing.
  • These parts of an air conditioning system, particularly a vehicle air conditioning system, are especially susceptible to bacterial colonization and biofilm formation, making it advantageous to apply the bacteriophages, or a component thereof, directly to the target or intended site of action.
  • the present invention relates to the use of bacteriophages or a component thereof for reducing the bacterial load (for removing, killing, or reducing the number of bacteria) on or in an air conditioning system.
  • the bacteriophages or a component thereof can be used to remove, kill, or reduce the number of (live) bacteria on or in an air conditioning system, such as a vehicle air conditioning system.
  • an air conditioning system such as a vehicle air conditioning system.
  • the present invention relates to the use of bacteriophages or a component thereof to prevent the formation of a biofilm or to remove a biofilm on or in an air conditioning system.
  • the present invention relates to the use of bacteriophages or a component thereof to prevent the formation of (bacterially caused, unpleasant) odors in an air conditioning system.
  • Sphingomonas and Methylobacteria bacteriophages have proven particularly suitable for use in preventing the formation of unpleasant odors in an air conditioning system.
  • the present invention relates to a bacteriophage or a component thereof, comprising at least one from the group consisting of Bacteriophage SP-P_L_l_2022, filed under DSM 34460, and Bacteriophage SP-P_M_l_2022, filed under DSM 34461.
  • Modern car air conditioning systems typically use evaporator plates made primarily of aluminum. Manufacturers optimize the material properties through additional additives and coatings designed to extend the material's lifespan. Some of these coatings are also intended to have antimicrobial properties. In this case, they would prevent the intended investigations by inhibiting the growth of the bacteria used. Therefore, for this study, metal samples were obtained that were not coated with antimicrobial substances.
  • the sheet metal pieces were cut into equal-sized sections (e.g., 5 x 5 cm) for testing. To degrease them, the sections were washed with dish soap and then rinsed with ultrapure water until no more foam appeared. The sheet metal pieces were then pre-sterilized (dry heat at 100°C or 140°C).
  • Bacteriophages can only multiply and kill metabolically active bacteria. Therefore, it is necessary to supply the bacteria with nutrients. A high infection rate can be promoted by the presence of phages, growing bacteria, and higher concentrations of calcium carbonate (CaC). Therefore, samples with 0 mM, 2.5 mM, 5 mM, and 10 mM CaC were prepared.
  • CaC calcium carbonate
  • the experimental setup involved distributing the test bacteria (0.1 mL of a suspension with an OD550 nm of 0.5) onto metal sheets in a soft agar (1.2 mL with 4 g agar/L) containing NAR medium and 0–10 mM CaC. After cooling the agar, 250 pL of a phage solution (with approximately 10 million phage units/mL) were added dropwise. The samples were then incubated for several days and evaluated for visually detectable differences. As a control, samples were prepared using sterile SM buffer instead of phage solution. Additionally, samples were prepared where the agar film was deposited not on metal sheets but on plastic culture dishes. Comparing the data for the plastic culture dishes and the metal sheets was intended to reveal whether the metal affected the efficacy of the phages.
  • the agar was only evenly distributed on the trays after the trays had been preheated and the dosed volume doubled. Presumably, the longer exposure to higher temperatures was the cause. At 46 °C, the vitality of the bacteria was impaired. Even after 3 days of incubation, the growth remained unexpectedly low, even in cultures to which no phages were added. No visual differences were discernible between the variants on metal and plastic culture dishes.
  • the soft agar from the initial series with 10 mM CaC was transferred to a suspension medium (10 mL SM buffer) and eluted. Dilutions of the initial eluates with SM buffer were used for viable cell count determinations on NAR agar.
  • the evaluation data are summarized in Table 1.
  • the two assay variants to which phages were added showed significantly lower numbers of colony-forming units. The percentage of underreported results was 95% for the Petri dish variant and 79% for the variant with metal plates.
  • the effect of phages on bacteria colonizing the metal surface was investigated.
  • the aim was to determine whether the phages were able to reach the bacteria, a prerequisite for infection. It was important that the phage dilution was not too high to allow for successful interaction with the bacteria.
  • 25 mL of NAR broth were placed in 8 screw-top glass jars, with a metal tray placed in each jar.
  • a bacterial solution with a defined initial cell count was then prepared from a pre-culture. 1 mL of this solution was inoculated into each jar and incubated at 30 °C with gentle shaking (45 rpm) over a weekend. As expected, this resulted in turbidity and bacterial growth on the tray surfaces.
  • solutions of NAR broth and CaC with final concentrations of 0 mM, 2.5 mM, 5 mM, and 10 mM were prepared.
  • 0.1 mL of a previously diluted 1:100 phage high-titer solution was added to a 2 mL aliquot of each of the prepared solutions. This solution should then contain approximately 100 million PFU.

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Abstract

Die vorliegende Erfindung betrifft ein Verfahren zur Verringerung der bakteriellen Last auf bzw. in einer Klimaanlage, wobei das Verfahren ein Applizieren von Bakteriophagen oder eines Bestandteils davon auf einen oder mehrere Teile der Klimaanlage umfasst. Die vorliegende Erfindung betrifft ferner die Verwendung von Bakteriophagen oder eines Bestandteils davon zur Verringerung der bakteriellen auf bzw. in einer Klimaanlage, zur Verhinderung der Bildung eines Biofilms bzw. zur Entfernung eines Biofilms auf bzw. in einer Klimaanlage, und/oder zur Verhinderung der Bildung von Gerüchen in einer Klimaanlage. Schließlich betrifft die vorliegende Erfindung noch bestimmte Bakteriophagen an sich.

Description

Verfahren zur Verringerung der bakteriellen Last auf bzw. in einer Klimaanlage
GEBIET DER. ERFINDUNG
Die vorliegende Erfindung betrifft ein Verfahren zur Verringerung der bakteriellen Last auf bzw. in einer Klimaanlage sowie verschiedene Verwendungen von Bakteriophagen oder eines Bestandteils davon. Ferner betrifft die vorliegende Erfindung bestimmte hinterlegte Bakteriophagen als solche.
HINTERGRUND
Im Normalbetrieb einer Klimaanlage, wie zum Beispiel einer Fahrzeugklimaanlage, kommt es häufig bereits nach kurzer Zeit zum Eintrag von Schmutzpartikeln und Mikroorganismen an den Bauteilen der Klimaanlage, vor allem direkt auf dem Verdampfer und dem Pollenfiltergehäuse. Die eingebrachten Mikroorganismen nutzen die Schmutzpartikel und Bestandteile der Luft als Nahrungsquelle und können einen stabilen Biofilm bilden. Bei starkem Bewuchs werden unangenehme Gerüche erzeugt, die deutlich in der Fahrtgastzelle wahrnehmbar sind. Dies geschieht vor allem dann, wenn Klimageräte nach Eintrag mikrobiell verwertbarer Stoffe bei hoher Luftfeuchte und milden Temperaturen längere Zeit stehen.
Zur Bekämpfung dieser Gerüche sind verschiedene Produkte auf dem Markt erhältlich. Das Spektrum reicht von einfachen Sprühprodukten, die kurzzeitig Gerüche überdecken bis hin zu professionellen Anwendungen, die mit einer Kombination aus mechanischer und chemischer Reinigungsleistung direkt am Verschmutzungsort wirken und die geruchserzeugenden Mikroorganismen entfernen. Folgende herkömmliche Systeme kommen dabei zum Einsatz:
- Druckbecherpistole mit starrer Sonde
Ein alkoholischer Reiniger wird mit Hilfe einer Druckbecherpistole und einer starren Sonde mit Hochdruck direkt auf den Verdampfer gesprüht. Das sorgt für eine Abreinigung von Verschmutzungen und Ablagerungen. Durch den hohen Sprühdruck wird der Verdampfer durchspült und der durch Mikroorganismen gebildete Biofilm entfernt. Dieses System ist derzeit das effektivste System zur Klimaanlagenreinigung.
- Selbstentleerendes Aerosol (Klick-Dose)
Eine im Fußraum eines Fahrzeuges platzierte Aerosoldose entleert sich nach Betätigung des Sprühkopfs selbstständig. Über die Umluft-Einstellung der Klimaanlage wird der Sprühnebel durch die Klimaanlage geführt.
- Aerosol Schaum mit Plastiksonde
Der Schaum wird mit einer Sonde entweder über den Kondenswasserablauf der Klimaanlage oder über die Öffnung der Pollenfilterbox in Richtung Verdampfer gesprüht. Der Schaum soll den Verdampfer benetzen und dadurch reinigen/desinfizieren.
- Ultraschallverneblung
Hier wird ein Reiniger mit Hilfe eines Ultraschallgerätes, das im Innenraum des Fahrzeuges platziert wird, vernebelt. Der Sprühnebel wird über die Umluft- Einstellung durch die Klimaanlage geführt und im Innenraum verteilt.
- Saugbecherpistole mit Plastiksonde
In der Saugbecherpistole mischen sich Luft und Reiniger durch den Venturi- Effekt. Ähnlich der Druckbecherpistole wird der Reiniger direkt auf den Verdampfer aufgebracht. Durch die flexible Plastiksonde ist jedoch ein zielgerichtetes Durchspülen des Verdampfers nicht möglich.
- Ozongenerator
Hierbei wird Ozon aus dem Luftsauerstoff hergestellt und anschließend in den Fahrzeuginnenraum eingebracht. Durch den Zerfallsmechanismus mit hoher oxidativer und reaktiver Wirkung werden organische Verbindungen, wie zum Beispiel Bakterien und andere Keime, zersetzt. Das austretende Ozon des Generators ist gesundheitsgefährdend und kann beim Einatmen u.a. zu Lungenschäden und/oder Kopfschmerzen führen.
Zum Einsatz kommen bei den herkömmlichen Systemen meist klassische Reinigungsmittel auf Basis von Alkoholen, Tensiden und/oder Bioziden. Die von der Biozidverordnung (BiozidVO) streng regulierten bioziden Wirkstoffe sind jedoch potenziell gefährlich für die Umwelt und die Gesundheit von Mensch und Tier.
Es ist somit festzustellen, dass bei den Produkten des Stand der Technik zur Bekämpfung bakteriell verursachter Gerüche bei Klimaanlagen wenig auf die Aspekte Umwelt und Gesundheit geachtet wird. Vielmehr stehen kommerzielle und funktionelle Themen im Vordergrund.
Es mag daher einen Bedarf geben, die vorstehend beschriebenen Probleme und Nachteile aus dem Stand der Technik zu überwinden. Insbesondere mag es einen Bedarf geben chemische, umweltbelastende Stoffe durch für den Menschen ungefährliche und umweltneutrale biologische Rohstoffe zu ersetzen.
Es ist bekannt, dass Bakterien durch Viren bekämpft werden können, insbesondere lysiert und somit abgetötet werden können. Solchen Viren, die auf Bakterien als Wirtszellen spezialisiert sind, werden als Bakteriophagen bezeichnet und entsprechend ihrer Wirtsspezifität in verschiedene Gruppen klassifiziert.
Bislang kommen Bakteriophagen nur im medizinischen und therapeutischen sowie im lebensmitteltechnologischen Bereich zum Einsatz. Hierbei werden meist medizinisch relevante Bakteriophagen eingesetzt, d.h. Bakteriophagen, die pathogene Bakterien lysieren. Beispielsweise beschreibt die WO 2009/090097 Al den Einsatz von Bakteriophagen in Hygiene- oder Pflegeartikeln, insbesondere zur Wundversorgung. Die WO 2010/090542 A2 beschreibt die therapeutische Behandlung bakterieller Infektionen mittels spezieller Bakteriophagen. In der WO 2019/136108 Al werden Bakteriophagen zur Behandlung von Pseudomonas-Infektionen verwendet. Die DE 601 06 727 T2 offenbart wiederum Lebensmittelverpackungen, die Bakteriophagen enthalten.
Ein Einsatz von Bakteriophagen bei einer Klimaanlage, wie zum Beispiel einer Klimaanlage eines Fahrzeugs, ist nach gegenwärtigem Kenntnisstand noch nicht beschrieben worden. Angesichts der oben beschriebenen nachteiligen Auswirkung von Mikroorganismen wie Bakterien auf eine Klimaanlage, wie zum Beispiel die Bildung eines Biofilms und die Entstehung unangenehmer Gerüche, stellen Bakteriophagen aber einen vielversprechenden biologischen Ansatz dar, der die Nachteile aus dem Stand der Technik bekannten chemischen und umweltbelastenden Stoffen überwinden kann.
ZUSAMMENFASSUNG DER. ERFINDUNG
Eine Aufgabe der vorliegenden Erfindung ist es daher, eine biologische Entfernung oder zumindest Reduzierung von Bakterien in Klimaanlagen zu erreichen ohne die Nachteile aus dem Stand der Technik durch chemische, umweltbelastende Stoffe.
Diese Aufgabe wird erfindungsgemäß durch den Einsatz von Bakteriophagen oder eines Bestandteils davon zur Verringerung der bakteriellen Last auf bzw. in einer Klimaanlage, zur Verhinderung der Bildung eines Biofilms bzw. zur Entfernung eines Biofilms auf bzw. in einer Klimaanlage, und/oder zur Verhinderung der Bildung von Gerüchen in einer Klimaanlage gelöst.
Die Erfinder der vorliegenden Erfindung haben umfangreiche Studien hierzu durchgeführt und haben festgestellt, dass in Fahrzeugklimaanlagen hauptsächlich Vertreter aus den zwei Bakteriengattungen Sphingomonas ssp. und Methylobakterium ssp. zu finden sind. Die Erfinder der vorliegenden Erfindung konnten ferner geeignete Bakteriophagen mit diesen Bakterienarten als Wirtsorganismen isolieren und somit die in einer Fahrzeugklimaanlage vorwiegend vorhandenen Bakterien selektiv bekämpfen. Es kann zudem eine Langzeitwirkung (Depoteffekt) ermöglicht werden und eine gute Materialverträglichkeit erreicht werden.
Die vorliegende Erfindung betrifft dementsprechend ein Verfahren zur Verringerung der bakteriellen Last (bzw. ein Verfahren zum Entfernen, Abtöten bzw. Reduzieren der Anzahl von Bakterien, zur Verhinderung der Bildung eines Biofilms bzw. zur Entfernung eines Biofilms und/oder zur Verhinderung der Bildung von Gerüchen) auf bzw. in einer Klimaanlage, wobei das Verfahren ein Applizieren von Bakteriophagen oder eines Bestandteils davon auf einen oder mehrere Teile der Klimaanlage umfasst.
Des Weiteren betrifft die vorliegende Erfindung die Verwendung von Bakteriophagen oder eines Bestandteils davon zur Verringerung der bakteriellen Last (zum Entfernen, Abtöten bzw. Reduzieren der Anzahl von Bakterien) auf bzw. in einer Klimaanlage.
Ferner betrifft die vorliegende Erfindung die Verwendung von Bakteriophagen oder eines Bestandteils davon zur Verhinderung der Bildung eines Biofilms bzw. zur Entfernung eines Biofilms auf bzw. in einer Klimaanlage.
Außerdem betrifft die vorliegende Erfindung die Verwendung von Bakteriophagen oder eines Bestandteils davon zur Verhinderung der Bildung von (bakteriell bedingten, unangenehmen) Gerüchen in einer Klimaanlage.
Darüber hinaus betrifft die vorliegende Erfindung ausgewählte Bakteriophagen oder ein Bestandteil davon, umfassend mindestens einen aus der Gruppe, bestehend aus Bacteriophage SP-P_L_l_2022, hinterlegt unter DSM 34460, und Bacteriophage SP-P_M_l_2022, hinterlegt unter DSM 34461. Weitere Aufgaben und Vorteile von Ausführungsformen der vorliegenden Erfindung werden an Hand der folgenden detaillierten Beschreibung ersichtlich.
DETAILLIERTE BESCHREIBUNG DER ERFINDUNG
Im Folgenden werden nähere Details der vorliegenden Erfindung und weitere Ausführungsformen davon beschrieben. Die vorliegende Erfindung ist jedoch nicht auf die folgende detaillierte Beschreibung beschränkt, sondern sie dient lediglich der Veranschaulichung der erfindungsgemäßen Lehren.
Es sei darauf hingewiesen, dass Merkmale, die im Zusammenhang mit einer beispielhaften Ausführungsform beschrieben werden, mit jeder anderen beispielhaften Ausführungsform kombiniert werden können. Insbesondere können Merkmale, die im Zusammenhang mit einer beispielhaften Ausführungsform eines erfindungsgemäßen Verfahrens beschrieben werden, mit jeder anderen beispielhaften Ausführungsform eines erfindungsgemäßen Verfahrens sowie mit jeder beispielhaften Ausführungsform einer erfindungsgemäßen Verwendung und mit jeder beispielhaften Ausführungsform eines erfindungsgemäßen Bakteriophagen kombiniert werden und umgekehrt, sofern nicht ausdrücklich etwas anderes vermerkt ist.
Wenn ein Begriff mit einem unbestimmten oder bestimmten Artikel, wie zum Beispiel „ein", „eine", „eines", „der", „die" und „das", im Singular bezeichnet wird, schließt dies auch den Begriff im Plural mit ein und umgekehrt, sofern der Kontext nicht eindeutig anderes festlegt. Die Ausdrücke „aufweisen" bzw. „umfassen", wie sie hier verwendet werden, schließen nicht nur die Bedeutung von „enthalten" oder „beinhalten" ein, sondern können auch „bestehen aus" und „im Wesentlichen bestehen aus" bedeuten.
In einem ersten Aspekt betrifft die vorliegende Erfindung ein Verfahren zur Verringerung der bakteriellen Last auf bzw. in einer Klimaanlage. Der Ausdruck „Verringerung der bakteriellen Last", wie er hierin verwendet wird, was auch als „Verringerung der bakteriellen Belastung" bezeichnet werden kann, bedeutet insbesondere, dass die Anzahl an (lebenden bzw. aktiven) Bakterien verringert wird bzw. ein bakterieller Befall reduziert oder sogar vermieden wird. Hierzu können die eingesetzten Bakteriophagen oder eines Bestandteils davon eine antimikrobielle Wirkung bzw. eine antimikrobielle Wirksamkeit aufweisen.
Unter einer „antibakteriellen Wirkung" bzw. einer „antibakteriellen Wirksamkeit" wird im Rahmen der vorliegenden Anmeldung die Fähigkeit verstanden Bakterien abzutöten oder zumindest deren Wachstum bzw.
Vermehrung zu kontrollieren bzw. zu beschränken. Gemäß einer beispielhaften Ausführungsform wird im Rahmen der vorliegenden Anmeldung unter einer „antibakteriellen Wirkung" bzw. einer „antibakteriellen Wirksamkeit" eine bakteriostatische und/oder eine bakterizide Wirkung oder Eigenschaft verstanden.
Gemäß einer beispielhaften Ausführungsform kann das Verfahren zur Verringerung der bakteriellen Last auf bzw. in einer Klimaanlage somit ein Verfahren zum Entfernen, Abtöten bzw. Reduzieren der Anzahl von (lebenden) Bakterien auf bzw. in einer Klimaanlage sein.
Gemäß einer beispielhaften Ausführungsform kann das Verfahren zur Verringerung der bakteriellen Last auf bzw. in einer Klimaanlage ein Verfahren zur Verhinderung der Bildung eines Biofilms auf bzw. in einer Klimaanlage bzw. ein Verfahren zur Entfernung eines Biofilms von einer Klimaanlage sein. Unter einem „Biofilm" wird im Rahmen der vorliegenden Anmeldung insbesondere eine Gruppe von Mikroorganismen, insbesondere Bakterien, verstanden, bei denen die Zellen auf einer Oberfläche aneinander haften.
Diese aneinanderhaftenden Zellen können in eine selbstproduzierte Matrix aus extrazellulärer polymerer Substanz eingebettet sein, die auch als Schleim bezeichnet werden kann. Gemäß einer beispielhaften Ausführungsform kann das Verfahren zur Verringerung der bakteriellen Last auf bzw. in einer Klimaanlage ein Verfahren zur Verhinderung der Bildung von (bakteriell bedingten, unangenehmen) Gerüchen in einer Klimaanlage sein. Unter einem „bakteriell bedingten Geruch" wird im Rahmen der vorliegenden Anmeldung insbesondere ein Geruch verstanden, der von Geruchsstoffen, die von Bakterien erzeugt wurden, hervorgerufen wird. Unter einem „unangenehmen Geruch" wird im Rahmen der vorliegenden Anmeldung insbesondere ein Geruch verstanden, der von mindestens 50 % der Menschen, insbesondere mindestens 80 % der Menschen, als unangenehm empfunden wird. Zum Zweck der Verhinderung der Bildung von unangenehmen Gerüchen in einer Klimaanlage haben sich Sphingomonas- und Methylobakterien-Bakteriophagen als besonders geeignet erwiesen.
Bei der Klimaanlage kann es sich insbesondere um die Klimaanlage eines Fahrzeugs, wie zum Beispiel eines Kraftfahrzeugs, insbesondere ein Automobil (z.B. mit Ottomotor oder Dieselmotor, einschließlich einem Hybridfahrzeug, oder ein Elektrofahrzeug), eines Nutzfahrzeugs (z.B. ein Lastkraftwagen oder ein Baufahrzeug), eines Schiffs oder eines Flugzeugs handeln. Bei der Klimaanlage kann es sich aber auch um eine stationäre Klimaanlage, wie insbesondere die Klimaanlage eines Gebäudes, handeln.
Das Verfahren umfasst ein Applizieren von Bakteriophagen oder eines Bestandteils davon auf einen oder mehrere Teile der Klimaanlage.
Der Ausdruck „Bakteriophage", wie er hierin verwendet wird, bedeutet insbesondere einen Virus, das ein Bakterium befallen kann, sich auf dessen Kosten vermehren kann und dieses letztlich lysieren (auflösen) kann. Meist befällt ein Bakteriophage ein oder mehrere spezifische Bakterien und weist daher meist eine entsprechende Wirtsspezifität auf. Bei dem applizierten Bestandteil eines Bakteriophagen kann es sich insbesondere um einen antibakteriell wirksamen Bestandteil des Bakteriophagen handeln.
Gemäß einer beispielhaften Ausführungsform umfassen die Bakteriophagen oder eines Bestandteils davon mindestens einen aus der Gruppe, bestehend aus Sphingomonas-Bakteriophagen und Methylobakterien-Bakteriophagen. In Fahrzeugklimaanlagen konnten insbesondere folgende Bakterienarten identifiziert werden: Sphingomonas ssp. und Methylobakterium ssp.. Daher sind Sphingomonas-Bakteriophagen und Methylobakterien-Bakteriophagen besonders geeignet zur Verringerung der bakteriellen Last auf bzw. in einer Klimaanlage.
Gemäß einer beispielhaften Ausführungsform umfassen die Bakteriophagen oder eines Bestandteils davon mindestens einen aus der Gruppe, bestehend aus Bacteriophage SP-P_L_l_2022, hinterlegt unter DSM 34460, und Bacteriophage SP-P_M_l_2022, hinterlegt unter DSM 34461, oder eines Bestandteils davon. Diese Bakteriophagen haben sich als ganz besonders geeignet zur Verringerung der bakteriellen Last auf bzw. in einer Klimaanlage erwiesen.
Gemäß einer beispielhaften Ausführungsform umfasst das Applizieren von Bakteriophagen oder eines Bestandteils davon das Applizieren einer Lösung oder einer Dispersion (insbesondere einer Suspension oder einer Emulsion), welche die Bakteriophagen oder eines Bestandteils davon enthält. In vorteilhafter Weise können die Bakteriophagen oder eines Bestandteils davon als eine Lösung appliziert werden, zum Beispiel indem die Bakteriophagen oder eines Bestandteils davon in einem Lösungsmittel gelöst werden. Es ist aber auch möglich, die Bakteriophagen oder eines Bestandteils davon als eine Dispersion, insbesondere einer Suspension oder einer Emulsion, zu applizieren. Dabei können die Bakteriophagen, ein Bestandteil davon und/oder andere Inhaltsstoffe der Dispersion ungelöst vorliegen, insbesondere als ein Feststoff wie im Fall einer Suspension, oder auch im flüssigen Zustand wie im Fall einer Emulsion. Ein vollständiges Auflösen sämtlicher Inhaltsstoffe, wie insbesondere der Bakteriophagen oder eines Bestandteils davon, ist somit nicht zwingend erforderlich, auch wenn es vorteilhaft sein kann, je nach Art der Applikation.
Gemäß einer beispielhaften Ausführungsform wurden vor dem Applizieren gefriergetrocknete Bakteriophagen oder eines Bestandteils davon in Lösung oder Dispersion gebracht. Es ist somit möglich, Bakteriophagen oder eines Bestandteils davon gefrierzutrocknen, wodurch die Haltbarkeit der Bakteriophagen verbessert werden kann, und erst vor dem Applizieren, zum Beispiel erst unmittelbar vor dem Applizieren durch den Anwender oder auch schon durch den Hersteller (sozusagen „vorkonfektioniert"), werden die gefriergetrockneten Bakteriophagen oder eines Bestandteils davon in Lösung oder Dispersion gebracht. Wie bereits erwähnt, kann hierdurch die Haltbarkeit der Bakteriophagen oder eines Bestandteils davon verbessert werden.
Gemäß einer beispielhaften Ausführungsform enthält die Lösung oder die Dispersion ferner mindestens einen Nährstoff für Bakterien, insbesondere für Bakterien, die in Klimaanlagen vorkommen können. Bakteriophagen können sich in stoffwechselaktiven Bakterien vermehren und dabei die Bakterien abtöten. Daher ist es meist nötig, die Bakterien mit Nährstoffen zu versorgen. Unter einem „Nährstoff' wird im Rahmen der vorliegenden Anmeldung insbesondere ein Stoff verstanden, der als Nahrung für Wirtsbakterien der Bakteriophagen dienen kann. Geeignete Nährstoffe beinhalten unter anderem organische Substrate sowie mineralische Makro- und Spurenelemente und Pufferkomponenten.
Gemäß einer beispielhaften Ausführungsform weist die Lösung oder die Dispersion ferner eine Ca2+-Konzentration im Bereich von 1 bis 10 mmol/l, insbesondere von 1,5 bis 5 mmol/l, insbesondere von 2 bis 4 mmol/l, vorzugsweise etwa 2,5 mmol/l, auf. Es hat sich gezeigt, dass eine Ca2+- Konzentration in dem oben genannten Bereich die antibakterielle Wirksamkeit der Bakteriophagen oder eines Bestandteils davon verbessert. Die Ca2+- Konzentration kann durch Zugabe einer entsprechenden Menge eines Calciumsalzes, wie zum Beispiels Calciumchlorid, zur applizierten Flüssigkeit, eingestellt werden.
Gemäß einer beispielhaften Ausführungsform umfasst das Applizieren von Bakteriophagen oder eines Bestandteils davon ein Sprühen einer Lösung oder einer Dispersion, welche die Bakteriophagen oder eines Bestandteils davon enthält, auf den einen oder die mehreren Teile der Klimaanlage. Dies kann beispielsweise mittels einer Druckbecherpistole, wahlweise mit Sprühlanze, einem Dosiersystem oder einem alternativen Applikationssystem erfolgen, wie es grundsätzlich aus dem Stand der Technik bekannt ist.
Gemäß einer beispielhaften Ausführungsform umfassen der eine oder die mehreren Teile der Klimaanlage einen Verdampfer und/oder ein Pollenfiltergehäuse der Klimaanlage. Diese Teile einer Klimaanlage, insbesondere einer Fahrzeugklimaanlage, sind besonders anfällig für die Ansiedlung von Bakterien und die Bildung eines Biofilms, so dass es vorteilhaft ist, die Bakteriophagen oder ein Bestandteil davon direkt am Ziel- bzw. vorgesehenen Wirkort zu applizieren.
In einem weiteren Aspekt betrifft die vorliegende Erfindung die Verwendung von Bakteriophagen oder eines Bestandteils davon zur Verringerung der bakteriellen Last (zum Entfernen, Abtöten bzw. Reduzieren der Anzahl von Bakterien) auf bzw. in einer Klimaanlage. Insbesondere können die Bakteriophagen oder eines Bestandteils davon zum Entfernen, Abtöten bzw. Reduzieren der Anzahl von (lebenden) Bakterien auf bzw. in einer Klimaanlage, wie zum Beispiel einer Fahrzeugklimaanlage, verwendet werden. Zu weiteren Details dieser Verwendung wird auf die obigen Ausführungen zu dem erfindungsgemäßen Verfahren verwiesen. In noch einem weiteren Aspekt betrifft die vorliegende Erfindung die Verwendung von Bakteriophagen oder eines Bestandteils davon zur Verhinderung der Bildung eines Biofilms bzw. zur Entfernung eines Biofilms auf bzw. in einer Klimaanlage. Bei der Verhinderung der Bildung eines Biofilms handelt es sich insbesondere um einen sog. keep c/ean-Ansatz, während die Entfernung eines (vorhandenen oder bereits bestehenden) Biofilms insbesondere einem sog. dean up-Ansatz entspricht. Zu weiteren Details dieser Verwendung wird auf die obigen Ausführungen zu dem erfindungsgemäßen Verfahren verwiesen.
In noch einem weiteren Aspekt betrifft die vorliegende Erfindung die Verwendung von Bakteriophagen oder eines Bestandteils davon zur Verhinderung der Bildung von (bakteriell bedingten, unangenehmen) Gerüchen in einer Klimaanlage. Für die Verwendung zur Verhinderung der Bildung von unangenehmen Gerüchen in einer Klimaanlage haben sich insbesondere Sphingomonas- und Methylobakterien-Bakteriophagen als besonders geeignet erwiesen. Zu weiteren Details dieser Verwendung wird auf die obigen Ausführungen zu dem erfindungsgemäßen Verfahren verwiesen.
In noch einem weiteren Aspekt betrifft die vorliegende Erfindung einen Bakteriophagen oder ein Bestandteil davon, umfassend mindestens einen aus der Gruppe, bestehend aus Bacteriophage SP-P_L_l_2022, hinterlegt unter DSM 34460, und Bacteriophage SP-P_M_l_2022, hinterlegt unter DSM 34461.
Die vorliegende Erfindung wird weiterhin an Hand der folgenden Beispiele beschrieben, die aber lediglich der Verdeutlichung der erfindungsgemäßen Lehren dienen und in keiner Weise den Umfang der vorliegenden Erfindung beschränken sollen.
Beispiele auf einen Modellbiofilm auf
1. Untersuchtes Verdampferblech
In Pkw-Klimaanlagen kommen heute meist Verdampferbleche zum Einsatz, deren Hauptbestandteil Aluminium ist. Die Hersteller optimieren die Werkstoffeigenschaften allerdings durch zusätzliche Additive und Beschichtungen, die die Lebensdauer des Werkstoffs erhöhen sollen. Einige Beschichtungen sollen auch antimikrobiell wirken. In diesem Fall würden sie die angestrebten Untersuchungen durch die Hemmung des Wachstums der eingesetzten Bakterien verhindern. Daher wurden für die vorliegende Untersuchung Blechmuster beschafft, die keine Beschichtung mit antimikrobiell wirkenden Stoffen haben sollten.
Insgesamt konnten 4 Blechmuster mit Seitenlangen von 20 x 28 cm und einer Materialdicke von 0,4 mm zur Verfügung gestellt werden. Die Blechmuster waren Aluminium-Verdampfer-Scheibenband und stammten von MAHLE (Stuttgart).
Die Blechstücke wurden für die Prüfungen in gleich große Teilstücke (z.B. 5 x 5 cm) zerteilt. Zum Entfetten wurden die Teilstücke mit Spülmittel gewaschen und daraufhin mit Reinstwasser so lange gespült, bis keine Schaumentwicklung mehr auftrat. Anschließend wurden die Blechstücke vorentkeimt (trockene Hitze bei 100° bzw. 140 °C).
2. Prüfkeime
Für die Untersuchungen wurde das Wirtsbakterium Sphingomonas ssp. SP- H_M_l_2022, hinterlegt unter DSM 34459, eingesetzt. Von einer Masterplatte wurden Subkulturen beimpft und über 2 -3 Tage bei 30 °C aerob auf einem Horizontalschüttler bebrütet. Die dicht bewachsene Kultur wurde anschließend auf den erforderlichen Ausgangsgehalt an Bakterien eingestellt. Der zugehörige Phage SP-P_M_l_2022, hinterlegt unter DSM 34461, wurde einer 4 °C-Kühlkonserve entnommen und auf die benötigte Ausgangsphagenanzahl mit SM-Puffer vorverdünnt.
3. Prüfvarianten
Bakteriophagen können sich nur in stoffwechselaktiven Bakterien vermehren und dabei die Bakterien abtöten. Daher ist es nötig, die Bakterien mit Nährstoffen zu versorgen. Für eine hohe Infektionsrate kann es förderlich sein, wenn neben Phagen, wachsenden Bakterien und höhere Gehalte an CaC vorhanden sind. Daher wurden jeweils Ansätze mit 0 mM, 2,5 mM, 5 mM und 10 mM CaC bearbeitet.
3.1 Variante 1 : Softagar-beschichtete Bleche
Der Prüfansatz sah vor, die Prüfbakterien (0,1 mL einer Suspension mit OD550 nm von 0,5) in einem Softagar (1,2 mL mit 4 g Agar/L) mit den Bestandteilen von NAR-Medium und 0 - 10 mM CaC auf den Blechstücken zu verteilen und nach dem Abkühlen des Agars 250 pL einer Phagenlösung (mit etwa 10 Mio. Phageneinheiten/mL) aufzutropfen. Anschließend sollten die Ansätze über mehrere Tage bebrütet und hinsichtlich visuell erkennbarer Unterschiede ausgewertet werden. Zur Kontrolle wurden Bleche mitgeführt, die statt mit Phagenlösung mit sterilem SM-Puffer behandelt wurden. Außerdem wurden entsprechende Ansätze mitgeführt, bei denen der Agarfilm nicht auf Blechen, sondern auf Kulturschalen aus Kunststoff abgeschieden worden ist. Der Vergleich der Daten für die Kulturschale aus Kunststoff und den Blechen sollte aufzeigen, ob das Metall die Wirksamkeit der Phagen beeinflusst.
Das gleichmäßige Aufbringen des Agars auf den Blechen gelang erst, nachdem die Bleche vorerwärmt worden sind und das dosierte Volumen um Faktor 2 erhöht worden ist. Vermutlich hat die längere Einwirkung von Temperaturen um 46 °C die Vitalität der Bakterien beeinträchtigt. Auch nach 3-tägiger Bebrütung blieb der Bewuchs selbst bei Ansätzen, zu denen keine Phagen dosiert worden sind, unerwartet gering ausgeprägt. Es waren visuell auch keine Unterschiede zwischen den Varianten auf Blech oder auf Kunststoff- Kulturschalen zu erkennen.
Orientierend wurde von der Ansatzreihe mit 10 mM CaC der Softagar in ein Suspensionsmedium (10 mL SM-Puffer) überführt und eluiert. Verdünnungen der Ausgangseluate mit SM-Puffer wurden für Lebendkeimzahlbestimmungen auf NAR-Agar eingesetzt. Die Daten der Auswertung sind in Tabelle 1 zusammengefasst. Die beiden Ansatzvarianten, zu denen Phagen dosiert worden sind, wiesen wesentlich kleinere Anzahlen an Kolonie-bildenden Einheiten auf. Die prozentualen Minderbefunde lagen bei der Petrischalen- Variante bei 95 % und bei der Variante mit Blechproben bei 79 %.
[Tabelle 1] Lebendkeimzahlen der Ansätze ohne und mit Dosierung von Phagen
3.2 Variante 2: Mit Nährlösung benetzte Bleche
Im zweiten Schritt wurde die Wirkung von Phagen auf Bakterien untersucht, die die Blechoberfläche besiedelt haben. Es galt zu klären, ob die Phagen in der Lage sind, zu den Bakterien zu gelangen, was Voraussetzung für eine Infektion ist. Hierbei war es wichtig, dass die Verdünnung der Phagen nicht zu hoch ist, um eine erfolgreiche Interaktion mit den Bakterien zu ermöglichen. Zu diesem Zweck wurden 25 mL NAR-Bouillon in 8 Schraubdeckelgläser aus Glas gegeben, wobei in jedes Glas ein Blech gelegt wurde. Anschließend wurde aus einer Vorkultur eine Bakterienlösung mit definierter Ausgangszellzahl eingestellt. Von dieser Lösung wurden 1 mL Bakterienlösung in die Ansätze geimpft und bei 30 °C unter leichtem Schütteln (45 rpm) über ein Wochenende inkubiert. Dies führte erwartungsgemäß zu einer Trübung und Keimwachstum auf den Blechoberflächen.
Für Behandlungsansätze mit und ohne Phagen, wurden Lösungen aus NAR- Bouillon und CaC mit finalen Konzentrationen von 0 mM, 2,5 mM, 5 mM und 10 mM hergestellt. In je einem 2 mL-Aliquot der vorbereiteten Lösungen wurden in DNA-Lobind-Reaktionsgefäßen 0,1 mL einer zuvor 1 : 100 in SM- Puffer verdünnten Phagenhochtiterlösung zugegeben. Diese sollte dann etwa 100 Mio. PFU enthalten.
Nach der Inkubation für 72 h, wurden die mit Bakterien besiedelten Bleche entnommen und überschüssige NAR-Suspension ablaufen gelassen. Nach der Überführung in sterile Schraubdeckelgefäße wurden vier Bleche dann mit 1 mL der Phagen-haltigen Lösung auf Vorder- und Rückseite benetzt und 10 Minuten stehen gelassen. Anschließend wurden alle acht Bleche in etwa 23 mL des jeweiligen NAR-Bouillon-CaCb-Gemischs inkubiert (30 °C, 45 rpm).
Zu verschiedenen Zeitpunkten wurden aseptisch 200 pL-Aliquote entnommen, in eine Mikrotiterplatte pipettiert und die Trübung bei 490 nm, die Rückschlüsse auf bakterielles Wachstum zulässt, im Reader kontrolliert. In Ansätzen ohne Phagenzusatz war eine stetige Zunahme der Trübung zu beobachten. Wenn Phagen die Bakterien zerstören, ist mit einer Abnahme der Trübung zu rechnen. Dies bestätigte sich bei den Untersuchungen. Auffällig war zudem, dass sich sichtbare Aufhellungen des Belages auf den Blechstücken bei Ansätzen mit Phagendosierung zeigten. Nachdem die Unterschiede in der Trübung zwischen den Ansätzen ohne und mit Phagen nicht mehr zunahmen, wurden die Lebendkeimzahlen der Ansätze ermittelt. Dazu wurde nach ca. 30 h der bakterielle Bewuchs der Bleche durch Spülung mit Pipetten in Suspension gebracht und diese Eluate nach Vorverdünnung dann auf NAR-Platten ausgespatelt. Dies ergab Koloniezahl-Ergebnisse, die in Tabelle 2 dargestellt sind.
[Tabelle 2] Finale Lebendkeimzahlen nach Behandlung ohne und mit Phagen in verschiedenen CaCb Konzentrationen
Die Auswertung der Lebendkeimzahlen der einzelnen Verdünnungsstufen und CaCb Konzentrationen ergab, dass auch ohne CaCb-Zusatz eine Keimzahlminderung durch die Phagen bewirkt wurde. Die Dosierung von 2,5 mM CaCb bewirkte eine 99,86-prozentige Minderung der Lebendkeimzahlen durch die Phagen. Eine weitere Erhöhung der CaCb-Konzentrationen bewirkte keine weitere Steigerung der Phagenwirksamkeit mehr. Mit 5 mM CaCb wurde eine 98,37-prozentige und mit 10 mM CaCb eine 87,67-prozentige Minderung der Lebendkeimzahlen durch die Phagen erzielt. Die Daten belegen, dass die verschiedenen CaCb-Konzentrationen das Wachstum der Bakterien und die Entwicklung der Phagen beeinflusst haben. Demzufolge scheint die 2,5 mM CaCb Konzentration ideal für die Wirkung der Phagen zu sein. Die vorliegende Erfindung wurde an Hand spezifischer Ausführungsformen und Beispiele beschrieben. Die Erfindung ist aber nicht hierauf beschränkt und verschiedene Modifikationen hiervon sind möglich, ohne den Umfang der vorliegenden Erfindung zu verlassen.

Claims

ANSPRÜCHE
1. Verfahren zur Verringerung der bakteriellen Last auf bzw. in einer Klimaanlage, wobei das Verfahren Folgendes umfasst:
Applizieren von Bakteriophagen oder eines Bestandteils davon auf einen oder mehrere Teile der Klimaanlage.
2. Verfahren nach Anspruch 1, wobei die Bakteriophagen oder eines Bestandteils davon mindestens einen aus der Gruppe, bestehend aus Sphingomonas- Bakteriophagen und Methylobakterien-Bakteriophagen, umfassen.
3. Verfahren nach Anspruch 1 oder 2, wobei die Bakteriophagen oder eines Bestandteils davon aus der Gruppe mindestens einen aus der Gruppe, bestehend aus Bacteriophage SP-P_L_l_2022, hinterlegt unter DSM 34460, und Bacteriophage SP-P_M_l_2022, hinterlegt unter DSM 34461, oder eines Bestandteils davon, umfassen.
4. Verfahren nach einem der vorhergehenden Ansprüche, wobei das Applizieren von Bakteriophagen oder eines Bestandteils davon das Applizieren einer Lösung oder einer Dispersion, welche die Bakteriophagen oder eines Bestandteils davon enthält, umfasst.
5. Verfahren nach Anspruch 4, wobei vor dem Applizieren gefriergetrocknete Bakteriophagen oder eines Bestandteils davon in Lösung oder Dispersion gebracht wurden.
6. Verfahren nach Anspruch 4 oder 5, wobei die Lösung oder die Dispersion ferner mindestens einen Nährstoff für Bakterien enthält.
7. Verfahren nach einem der Ansprüche 4 bis 6, wobei die Lösung oder die Dispersion ferner eine Ca2+-Konzentration im Bereich von 1 bis 10 mmol/l aufweist.
8. Verfahren nach einem der vorhergehenden Ansprüche, wobei das Applizieren von Bakteriophagen oder eines Bestandteils davon ein Sprühen einer Lösung oder einer Dispersion, welche die Bakteriophagen oder eines Bestandteils davon enthält, auf den einen oder die mehreren Teile der Klimaanlage umfasst.
9. Verfahren nach einem der vorhergehenden Ansprüche, wobei der eine oder die mehreren Teile der Klimaanlage einen Verdampfer und/oder ein Pollenfiltergehäuse der Klimaanlage umfassen.
10. Verwendung von Bakteriophagen oder eines Bestandteils davon zur Verringerung der bakteriellen Last auf bzw. in einer Klimaanlage.
11. Verwendung von Bakteriophagen oder eines Bestandteils davon zur Verhinderung der Bildung eines Biofilms bzw. zur Entfernung eines Biofilms auf bzw. in einer Klimaanlage.
12. Verwendung von Bakteriophagen oder eines Bestandteils davon zur Verhinderung der Bildung von Gerüchen in einer Klimaanlage.
13. Bakteriophage oder ein Bestandteil davon, umfassend mindestens einen aus der Gruppe, bestehend aus Bacteriophage SP-P_L_l_2022, hinterlegt unter DSM 34460; und Bacteriophage SP-P_M_l_2022, hinterlegt unter DSM 34461, oder eines Bestandteils davon.
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