BE1030308B1 - Temperaturempfindliches in-situ-gel, temperaturempfindliches melatonin-in-situ-gel und verfahren zum herstellung von deren - Google Patents
Temperaturempfindliches in-situ-gel, temperaturempfindliches melatonin-in-situ-gel und verfahren zum herstellung von deren Download PDFInfo
- Publication number
- BE1030308B1 BE1030308B1 BE20235564A BE202305564A BE1030308B1 BE 1030308 B1 BE1030308 B1 BE 1030308B1 BE 20235564 A BE20235564 A BE 20235564A BE 202305564 A BE202305564 A BE 202305564A BE 1030308 B1 BE1030308 B1 BE 1030308B1
- Authority
- BE
- Belgium
- Prior art keywords
- temperature
- melatonin
- sensitive
- poloxam
- gel
- Prior art date
Links
- YJPIGAIKUZMOQA-UHFFFAOYSA-N Melatonin Natural products COC1=CC=C2N(C(C)=O)C=C(CCN)C2=C1 YJPIGAIKUZMOQA-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 171
- 229960003987 melatonin Drugs 0.000 title claims abstract description 171
- DRLFMBDRBRZALE-UHFFFAOYSA-N melatonin Chemical compound COC1=CC=C2NC=C(CCNC(C)=O)C2=C1 DRLFMBDRBRZALE-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 171
- 238000011065 in-situ storage Methods 0.000 title claims abstract description 87
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims abstract description 15
- 229940057838 polyethylene glycol 4000 Drugs 0.000 claims abstract description 55
- 229920003088 hydroxypropyl methyl cellulose Polymers 0.000 claims abstract description 51
- 235000010979 hydroxypropyl methyl cellulose Nutrition 0.000 claims abstract description 51
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical group O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 48
- 239000001866 hydroxypropyl methyl cellulose Substances 0.000 claims abstract description 35
- UFVKGYZPFZQRLF-UHFFFAOYSA-N hydroxypropyl methyl cellulose Chemical compound OC1C(O)C(OC)OC(CO)C1OC1C(O)C(O)C(OC2C(C(O)C(OC3C(C(O)C(O)C(CO)O3)O)C(CO)O2)O)C(CO)O1 UFVKGYZPFZQRLF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 35
- 239000008215 water for injection Substances 0.000 claims abstract description 19
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 42
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 28
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 22
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 18
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 claims description 14
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 claims description 14
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims description 8
- 238000005202 decontamination Methods 0.000 claims description 4
- 230000003588 decontaminative effect Effects 0.000 claims description 4
- 238000005303 weighing Methods 0.000 claims description 4
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 abstract description 4
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 177
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 43
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 30
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 19
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 19
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 18
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 17
- 229920001030 Polyethylene Glycol 4000 Polymers 0.000 description 17
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 17
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 description 16
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 16
- 102000016938 Catalase Human genes 0.000 description 13
- 108010053835 Catalase Proteins 0.000 description 13
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 13
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 13
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 13
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 13
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 12
- 102000019197 Superoxide Dismutase Human genes 0.000 description 11
- 108010012715 Superoxide dismutase Proteins 0.000 description 11
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 11
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 10
- 229940068918 polyethylene glycol 400 Drugs 0.000 description 10
- WSMYVTOQOOLQHP-UHFFFAOYSA-N Malondialdehyde Chemical compound O=CCC=O WSMYVTOQOOLQHP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 229920002565 Polyethylene Glycol 400 Polymers 0.000 description 9
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 9
- 229940118019 malondialdehyde Drugs 0.000 description 9
- 229920001661 Chitosan Polymers 0.000 description 8
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 8
- 230000008859 change Effects 0.000 description 8
- 238000001879 gelation Methods 0.000 description 8
- 230000004044 response Effects 0.000 description 8
- 239000012086 standard solution Substances 0.000 description 8
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 7
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 7
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 7
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 7
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 6
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 6
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 5
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 5
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 4
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 4
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 4
- 230000032798 delamination Effects 0.000 description 4
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 4
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 4
- 238000013112 stability test Methods 0.000 description 4
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 4
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 4
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 3
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 3
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 3
- 238000013401 experimental design Methods 0.000 description 3
- 230000008642 heat stress Effects 0.000 description 3
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 3
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 3
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 3
- 238000009304 pastoral farming Methods 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- 238000000581 reactive spray deposition Methods 0.000 description 3
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 3
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 3
- 241001251200 Agelas Species 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000006587 Glutathione peroxidase Human genes 0.000 description 2
- 108700016172 Glutathione peroxidases Proteins 0.000 description 2
- 238000013494 PH determination Methods 0.000 description 2
- 230000001133 acceleration Effects 0.000 description 2
- 238000000540 analysis of variance Methods 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 2
- 239000002131 composite material Substances 0.000 description 2
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 2
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 2
- CEQFOVLGLXCDCX-WUKNDPDISA-N methyl red Chemical compound C1=CC(N(C)C)=CC=C1\N=N\C1=CC=CC=C1C(O)=O CEQFOVLGLXCDCX-WUKNDPDISA-N 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 2
- 150000003254 radicals Chemical class 0.000 description 2
- 239000001044 red dye Substances 0.000 description 2
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 2
- 230000035882 stress Effects 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 2
- 102100027950 Bile acid-CoA:amino acid N-acyltransferase Human genes 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 101000697858 Homo sapiens Bile acid-CoA:amino acid N-acyltransferase Proteins 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- -1 Oxygen radicals Chemical class 0.000 description 1
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- ATJFFYVFTNAWJD-UHFFFAOYSA-N Tin Chemical compound [Sn] ATJFFYVFTNAWJD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 230000001746 atrial effect Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 1
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 1
- 235000013330 chicken meat Nutrition 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L disodium hydrogen phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 1
- 238000001647 drug administration Methods 0.000 description 1
- 238000012377 drug delivery Methods 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 1
- 230000029142 excretion Effects 0.000 description 1
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 1
- 230000007760 free radical scavenging Effects 0.000 description 1
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 1
- 230000006870 function Effects 0.000 description 1
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 1
- 239000003349 gelling agent Substances 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 238000004811 liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 244000144972 livestock Species 0.000 description 1
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 239000012982 microporous membrane Substances 0.000 description 1
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000955 neuroendocrine Effects 0.000 description 1
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000001543 one-way ANOVA Methods 0.000 description 1
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001590 oxidative effect Effects 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- PJNZPQUBCPKICU-UHFFFAOYSA-N phosphoric acid;potassium Chemical compound [K].OP(O)(O)=O PJNZPQUBCPKICU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001766 physiological effect Effects 0.000 description 1
- 210000004560 pineal gland Anatomy 0.000 description 1
- 238000009374 poultry farming Methods 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 238000003908 quality control method Methods 0.000 description 1
- 238000013441 quality evaluation Methods 0.000 description 1
- 239000002516 radical scavenger Substances 0.000 description 1
- 230000001850 reproductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 210000004767 rumen Anatomy 0.000 description 1
- 239000012488 sample solution Substances 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 238000012430 stability testing Methods 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 1
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 1
- 230000007704 transition Effects 0.000 description 1
- 238000010200 validation analysis Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
- A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
- A61K31/40—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil
- A61K31/403—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil condensed with carbocyclic rings, e.g. carbazole
- A61K31/404—Indoles, e.g. pindolol
- A61K31/4045—Indole-alkylamines; Amides thereof, e.g. serotonin, melatonin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
- A61K47/08—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing oxygen, e.g. ethers, acetals, ketones, quinones, aldehydes, peroxides
- A61K47/10—Alcohols; Phenols; Salts thereof, e.g. glycerol; Polyethylene glycols [PEG]; Poloxamers; PEG/POE alkyl ethers
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
- A61K47/36—Polysaccharides; Derivatives thereof, e.g. gums, starch, alginate, dextrin, hyaluronic acid, chitosan, inulin, agar or pectin
- A61K47/38—Cellulose; Derivatives thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/08—Solutions
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
- A61K9/141—Intimate drug-carrier mixtures characterised by the carrier, e.g. ordered mixtures, adsorbates, solid solutions, eutectica, co-dried, co-solubilised, co-kneaded, co-milled, co-ground products, co-precipitates, co-evaporates, co-extrudates, co-melts; Drug nanoparticles with adsorbed surface modifiers
- A61K9/146—Intimate drug-carrier mixtures characterised by the carrier, e.g. ordered mixtures, adsorbates, solid solutions, eutectica, co-dried, co-solubilised, co-kneaded, co-milled, co-ground products, co-precipitates, co-evaporates, co-extrudates, co-melts; Drug nanoparticles with adsorbed surface modifiers with organic macromolecular compounds
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P39/00—General protective or antinoxious agents
- A61P39/06—Free radical scavengers or antioxidants
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Public Health (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Hematology (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Obesity (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Inorganic Chemistry (AREA)
- Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
Die vorliegende Erfindung stellt ein temperaturempfindliches In-situ-Gel, ein Melatonin-temperaturempfindliche In-situ-Gel und ein Verfahren zur Herstellung zur Verfügung, wobei ein temperaturempfindliches Melatonin-in-situ-Gel aus den Komponenten mit folgenden Gewichtsprozenten besteht: Melatonin 0,05% bis 10% Poloxam 407 21% bis 23% Poloxam 188 1,5% Hydroxypropylmethylcellulose 0,4% bis 0,6% Polyethylenglykol 4000 0,3% bis 0,5% Der Rest ist Wasser für Injektionszwecke. Das temperaturempfindliche Melatonin-in-situ-Gel gemäß der vorliegenden Erfindung ist in der Lage, eine langsame Freisetzung von Melatonin zu erreichen, m das Problem der geringen Verwendungsrate und der häufigen Verabreichung von Melatonin aufgrund des schnellen Metabolismus wirksam zu lösen.
Description
l BE2023/5564
TEMPERATUREMPFINDLICHES IN-SITU-GEL, TEMPERATUREMPFINDLICHES
MELATONIN-IN-SITU-GEL UND VERFAHREN ZUM HERSTELLUNG VON DEREN
TECHNISCHES GEBIET
Die vorliegende Erfindung betrifft das Gebiet der Veterinärmedizin, Temperaturempfindliches in-situ-
Gel, temperaturempfindliches Melatonin-in-situ-Gel und Verfahren zum Herstellung von deren.
STAND DER TECHNIK
Melatonin (MLT), auch bekannt als Cerebrolysin oder Pinealin, ist ein neuroendokrines Hormon mit einem breiten Spektrum an physiologischen und pharmakologischen Wirkungen, das von der
Zirbeldrüse bei Säugetieren und Menschen ausgeschieden wird. In den letzten Jahren wurde die
Anwendung von Melatonin in der Vieh- und Geflügelzucht zunehmend untersucht, und es konnte nachgewiesen werden, dass Melatonin eme wichtige Rolle bei der Regulierung der Immunität von
Tieren, der Verbesserung der Reproduktionsleistung von Tieren, bei der Bekämpfung von Stress, als
Antioxidans und zum Fangen freier Radikale spielt. In der Viehzucht nimmt die Fähigkeit der Tiere, freie Radikale abzufangen, unter äußeren Hitzestressbedingungen ab. Zu den Enzymen, die an
Hitzestress beteiligt smd, gehören außer der Peroxidase (SOD) noch die Katalase (CAT) und die gesamte antioxidative Kapazität (T-AOC). Melatonin hat eine breite und starke antioxidative Wirkung und ist der stärkste bekannte endogene Radikalfänger mit minimalen Nebenwirkungen. Melatonin fängt nicht nur freie Radikale ab, sondern hat auch eme Anti-Schädigungswirkung. Während des aeroben
Stoffwechsels entstehen bei der oxidativen Zersetzung organischer Stoffe eine Vielzahl reaktiver
Sauerstoffradikale (ROS) wie H202, -OH und O2-. Melatonin ist das einzige bekannte Antioxidans, das
ROS durch die Bereitstellung von Elektronen beseitigt und sich bei der Ausübung seiner antioxidatrven
Funktionen ganz auf die Bereitstellung von Elektronen zwischen biologischen Makromolekülen verlässt. Durch die direkte Neutralisierung von ROO- und OH- und die Aktivierung der Aktivität der
Glutathionperoxidase (GSH-Px) ist Melatonin in der Lage, Oxidationsprodukte zu entfernen, oxidativen
Stress zu hemmen und antioxidativen Schutz zu bieten.
Temperaturempfindliche In-situ-Gele sind eine neue Klasse von Arznemmitteldarreichungsformen, bei denen polymere Materialien verwendet werden, um am Verabreichungsort als Reaktion auf die
Außentemperatur einen Phasenübergang zu vollziehen, der von einem flüssigen Zustand bei niedriger
Temperatur zu einem Gel bei Geliertemperatur reversibel ist. Die Herstellung des Medikaments zum temperaturempfindliche In-situ-Gel kann die Halbwertszeit und die Bioverfügbarkert des Medikaments im Organismus verbessern, und das Gel hat eine bessere FlieBfähigkeit im Vergleich zu der ursprünglichen Lösung und bietet die Vorteile einer einfachen Verabreichung und einer gleichmäßigen
Verteilung des Medikaments, so dass das temperaturempfindliche In-situ-Gel-Medikament gute
Entwicklungsaussichten hat.
2 BE2023/5564
In der Viehzucht wird Melatonin hauptsächlich durch Dosierung, Fütterung oder intravenôse (subkutane) Injektion verabreicht, was zwar schnell geht, aber noch viele Probleme mit sich bringt.
Erstens wird die Absorption und Verwertung von Melatonin leicht durch die Umgebung des
Verdauungstraktes beeinflusst, wie z.B. durch den Einfluss von Pansenmikroorganismen, und seine
Bioverfügbarkeit ist dosisabhängig; zweitens ist die Halbwertszeit von Melatonin kurz und seine
Bioverfügbarkeit wird durch die Dosierung oder Fütterung beeinflusst; drittens ist die intravenôse (subkutane) Injektion von Melatonimn eine belastende und schmerzhafte Injektion und die Dosierung ist nicht leicht zu kontrollieren. Darauf basierend stellt die vorliegende Erfindung ein temperaturempfindliches In-situ-Gel, ein Melatonin-temperaturempfindliche In-situ-Gel und ein
Verfahren zur Herstellung zur Verfügung.
INHALT DER VORLIEGENDEN ERFINDUNG
Die vorliegende Erfindung stellt ein temperaturempfindliches In-situ-Gel, ein Melatonin- temperaturempfindliche In-situ-Gel und ein Verfahren zur Herstellung zur Verfügung, die das Problem der geringen Verwendungsrate und der häufigen Verabreichung von Melatonin aufgrund des schnellen
Metabolismus lösen können.
Um die oben genannten technischen Probleme zu lösen, wird das temperaturempfindliche Melatonin-in- situ-Gel gemäß der vorliegenden Erfindung wie folgt realisiert:
Ein temperaturempfindliches Melatonin-in-situ-Gel, enthaltend die Substanzen mit folgenden
Gewichtsprozenten:
Melatonin 0,05% bis 10%
Poloxam 407 21% bis 23%
Poloxam 188 1,5%
Hydroxypropylmethylcellulose 0,4% bis 0,6%
Polyethylenglykol 4000 0,3% bis 0,5%
Der Rest ist Wasser für Injektionszwecke.
Optional enthält das Melatonin-temperaturempfindliche In-srtu-Gel die Substanzen mit folgenden
Gewichtsprozenten:
Melatonin 0,15%
Poloxam 407 22%
Poloxam 188 1,5%
Hydroxypropylmethylcellulose 0,5%
Polyethylenglykol 4000 0,4%
Der Rest ist Wasser für Injektionszwecke.
Um die oben genannten technischen Probleme zu lösen, wird das Verfahren zum Herstellen eines temperaturempfindlichen Melatonin-in-situ-Gels gemäß der vorliegenden Erfindung wie folgt realisiert: ein Verfahren zum Herstellen eines temperaturempfindlichen Melatonin-in-situ-Gels, umfassend:
Abwiegen von Poloxam 407, Hinzufügen von Wasser für Injektionszwecke Auflösen und
3 BE2023/5564 anschlieRendes Einlegen in einen Kühlschrank bei 4°C über Nacht; Herausnehmen der Poloxam 407-
Lösung, Zurückbrmgen auf Raumtemperatur und anschlieBendes Hinzufügen von Poloxam 188,
Polyethylenglykol 4000 und Melatonin nacheinander und Rühren zum Lösen; anschließend Hinzufügen von Hydroxypropylmethylcellulose, Rühren zum Lösen und anschlieBendes Hinzufügen von Wasser für
Injektionszwecke zur Volumeneinstellung und Einlegen in einen Kühlschrank; in 24 Stunden wird die temperaturempfindliche Melatonin-m-situ-Gel-Lôsung durch Filtration und Dekontamination hergestellt.
Optional kann die Filtration und Sterilisation durch eine 0,22-um-Filtermembran erfolgen.
Um die oben genannten technischen Probleme zu lösen, wird das temperaturempfindliche in-situ-Gel gemäß der vorliegenden Erfindung wie folgt realisiert: ein temperaturempfindliches Melatonin-in-situ-Gel, bestehend aus den Komponenten mit folgenden
Gewichtsprozenten:
Poloxam 407 21% bis 23%
Poloxam 188 1,5%
Hydroxypropylmethylcellulose 0,4% bis 0,6%
Polyethylenglykol 4000 0,3% bis 0,5%
Der Rest ist Wasser für Injektionszwecke.
Optional besteht das temperaturempfindliche Melatonin-in-situ-Gel aus den Komponenten mit folgenden Gewichtsprozenten:
Poloxam 407 22%
Poloxam 188 1,5%
Hydroxypropylmethylcellulose 0,5%
Polyethylenglykol 4000 0,4%
Der Rest ist Wasser für Injektionszwecke.
Um die oben genannten technischen Probleme zu lösen, wird das Verfahren zum Herstellen eines temperaturempfindlichen in-situ-Gels gemäß der vorliegenden Erfindung wie folgt realisiert: ein Verfahren zum Herstellen eines temperaturempfindlichen in-situ-Gels, umfassend: Abwiegen von
Poloxam 407, Hinzufügen von Wasser für Injektionszwecke, Auflösen und anschließendes Einlegen in einen Kühlschrank bei 4°C über Nacht; Herausnehmen der Poloxam 407-Lösung, Zurückbringen auf
Raumtemperatur und anschließendes Hinzufügen von Poloxam 188 und Polyethylenglykol 4000 nacheinander und Rühren zum Lösen; anschließend Hinzufügen von Hydroxypropylmethylcellulose,
Rühren zum Lösen und anschließendes Hinzufügen von Wasser für Injektionszwecke zur
Volumeneinstellung und Einlegen in einen Kühlschrank; in 24 Stunden wird die temperaturempfindliche in-situ-Gel durch Filtration und Dekontamination hergestellt.
Optional kann die Filtration und Sterilisation durch eine 0,22 um Filtermembran erfolgen.
Das durch die vorliegende Erfindung hergestellte temperaturempfindliche Melatonin-in-situ-Gel ist bei
Raumtemperatur eine homogene, durchscheinende Gellösung, die nach dem Eintritt in den Körper des
Tieres schnell zu einem Gel wird, und die Freisetzungszeit von Melatonin in dem
4 BE2023/5564 temperaturempfindlichen Melatonin-in-situ-Gel kann bis zu 5 Tage betragen, und dabei wird es getestet und bewiesen, dass die vorliegende Erfindung die Probleme mit der geringen Verwendungsrate und der häufigen Verabreichung aufgrund des schnellen Metabolismus 1m Stand der Technik wirksam lösen kann.
KURZE BESCHREIBUNG DER ZEICHNUNGEN
Figur 1 zeigt eme Auswirkung von durch die vorliegende Erfindung bereitgestelltem P407 verschiedener Konzentrationen auf die Geliertemperatur.
Figur 2 zeigt eine Auswirkung von durch die vorliegende Erfindung bereitgestelltem P188 verschiedener Konzentrationen auf die Geliertemperatur.
Figur 3 zeigt eme Auswirkung von durch die vorliegende Erfindung bereitgestelltem HPMC (15KM) verschiedener Konzentrationen auf die Geliertemperatur.
Figur 4 zeigt eine Auswirkung von durch die vorliegende Erfindung bereitgestelltem Chitosan verschiedener Konzentrationen auf die Geliertemperatur.
Figur 5 zeigt eine Auswirkung von durch die vorliegende Erfindung bereitgestelltem PEG400 verschiedener Konzentrationen auf die Geliertemperatur.
Figur 6 zeigt eme Auswirkung von durch die vorliegende Erfindung bereitgestelltem PEG4000 verschiedener Konzentrationen auf die Geliertemperatur.
Figur 7 zeigt ein Diagramm der Standardkurve von Melatonin in einem temperaturempfindlichen m- situ-Gel, das durch die vorliegende Erfindung bereitgestellt wird.
Figur 8 zeigt ein Liniendiagramm der In-vitro-Freisetzung des temperaturempfindlichen Melatonin-in- situ-Gels, das durch die vorliegende Erfindung bereitgestellt wird.
Figur 9 zeigt ein Diagramm der Standardkurve von Melatonin in einem Plasma, das durch die vorliegende Erfindung bereitgestellt wird.
Figur 10 zeigt em Vergleichsdiagramm des durch die vorliegende Erfindung bereitgestellten Melatonin- m-situ-Gels vor und nach dem gelierten Zustand; A: Melatonin-in-srtu-Gel vor dem Gelieren; B:
Melatonin-in-situ-Gel im gelierten Zustand.
Figur 11 zeigt eine Untersuchung der in-vivo- und in-vitro-Gelierfähigkeit, die durch die vorliegende
Erfindung bereitgestellt wird: A. wässrige Melatonin-Lôsung; B. Melatonin-Gel-Lôsung; C. Melatonin- in-vivo-Gel.
AUSFÜHRLICHE BESCHREIBUNG
Die technische Lösung des Ausführungsbeispiels der vorliegenden Erfindung wird im Folgenden klar und vollständig erläutert, so dass das Ziel, die technische Lösung und die Vorteile des
Ausführungsbeispiels der vorliegenden Erfindung klarer werden. Offensichtlich stellen die geschilderten Ausführungsbeispiele nicht alle Ausführungsbeispiele, sondern nur einen Teil der
Ausführungsbeispiele der vorliegenden Erfindung dar. Alle anderen Ausführungsbeispiele, die durch
> BE2023/5564 den Durchschnittsfachmann auf diesem Gebiet auf der Grundlage der Ausführungsbeispiele in der vorliegenden Erfindung erhalten werden, sollten als vom Schutzumfang der vorliegenden Erfindung gedeckt angesehen werden.
Die Reagenzien und Geräte, die von der vorliegenden Erfindung betroffen werden:
Melatonin (MT)-Standard (HPLC > 98%), hergestellt von Sigma, USA; Poloxam 407 (P407), hergestellt von BASF, Deutschland; Poloxam 188 (P188), Chitosan, Polyethylenglykol 400 (PEG400), hergestellt von Beijing Solarbio GmbH; Hydroxypropylmethylcellulose (HPMC, 15KM),
Polyethylenglykol 4000 (PEG4000), hergestellt von Shanghai Maclean GmbH; Methanol und
Acetonitril in Chromatographiequalität, hergestellt von Thermo Fisher Scientific, Shanghai;
Dmatriumhydrogenphosphat und Kaliumdihydrogenphosphat, hergestellt von Tianjin Zhiyuan Chemical
Reagent Co;Glutathionperoxidase (GSH-PX), antioxidative Gesamtkapazität (T-AOC), Katalase (CAT),
Malondialdehyd (MDA) und Superoxiddismutase (SOD) wurden vom Nanjing Hancheng Institute of
Biological Engineering zur Verfügung gestellt; die Hochgeschwindigkeits-Tiefkühlzentrifuge wurde von
Hunan Xiangxin Instrument GmbH beschaffen.
Nachfolgend stellt die vorliegende Erfindung detaillierte Ausführungsbeispiele zur Veranschaulichung eines temperaturempfindlichen Melatonin-in-situ-Gels, eines temperaturempfindlichen 1n-sttu-Gels und ein Herstellungsverfahren dafür zur Verfügung.
Ausführungsbeispiel 1
Ein temperaturempfindliches Melatonin-in-situ-Gel des vorliegenden Ausführungsbeispiels, enthaltend die Substanzen mit folgenden Gewichtsprozenten:
Poloxam 407 22%
Poloxam 188 1,5%
Hydroxypropylmethylcellulose 0,5%
Polyethylenglykol 4000 0,4%
Der Rest ist Wasser.
Abwiegen von 22g Poloxam 407, Hinzufügen von Wasser, Auflösen und anschlieBendes Einlegen in einen Kühlschrank bei 4°C über Nacht; Herausnehmen der gekühlte Poloxam 407-Lösung,
Zurückbringen auf Raumtemperatur und anschliebendes Hinzufügen von 1,5 g Poloxam 188 und 0,4 g
Polyethylenglykol 4000 nacheinander und Rühren zum Lösen; anschließend Hinzufügen von 0,5 g
Hydroxypropylmethylcellulose, Rühren zum Lösen und anschlieBendes Hinzufügen von Wasser für
Injektionszwecke zur Volumeneinstellung auf 100 ml und Einlegen in einen Kühlschrank; in 24 Stunden werden eine temperaturempfindliche 1n-situ-Gel durch Filtration und Sterilisation über eme
Filtermembran von 0,22 um hergestellt.
Wenn es notwendig ist, in dem temperaturempfindlichen 1n-s1tu-Gel therapeutische Wirkstoffe, wie
Melatonm, hinzuzufügen, erfolgt die Zugabe von Melatonin bei der Zugabe von Poloxam 188 und
Polyethylenglykol 4000.
Ausführungsbeispiel 2
6 BE2023/5564
Ein temperaturempfindliches Melatonin-in-situ-Ge des vorliegenden Ausführungsbeispiels, enthaltend die Substanzen mit folgenden Gewichtsprozenten:
Poloxam 407 21%
Poloxam 188 1,5%
Hydroxypropylmethylcellulose 0,6%
Polyethylenglykol 4000 0,3%
Der Rest ist Wasser.
Abwiegen von 21g Poloxam 407, Hinzufügen von Wasser, Auflösen und anschlieBendes Einlegen in einen Kühlschrank bei 4°C über Nacht; Herausnehmen der gekühlte Poloxam 407-Lösung,
Zurückbrmgen auf Raumtemperatur und anschlieBendes Hinzufügen von 1,5 g Poloxam 188 und 0,3 g
Polyethylenglykol 4000 nacheinander und Rühren zum Lösen; anschließend Hinzufügen von 0,5 g
Hydroxypropylmethylcellulose, Rühren zum Lösen und anschlieBendes Hinzufügen von Wasser für
Injektionszwecke zur Volumeneinstellung auf 100 ml und Einlegen in einen Kühlschrank; in 24 Stunden werden eine temperaturempfindliche 1n-situ-Gel durch Filtration und Sterilisation über eme
Filtermembran von 0,22 um hergestellt.
Wenn es notwendig ist, mn dem temperaturempfindlichen 1n-s1tu-Gel therapeutische Wirkstoffe, wie
Melatonm, hinzuzufügen, erfolgt die Zugabe von Melatonin bei der Zugabe von Poloxam 188 und
Polyethylenglykol 4000.
Ausführungsbeispiel 3
Ein temperaturempfindliches Melatonin-in-situ-Ge des vorliegenden Ausführungsbeispiels, enthaltend die Substanzen mit folgenden Gewichtsprozenten:
Poloxam 407 23%
Poloxam 188 1,5%
Hydroxypropylmethylcellulose 0,4%
Polyethylenglykol 4000 0,5%
Abwiegen von 23g Poloxam 407, Hinzufügen von Wasser, Auflösen und anschlieBendes Einlegen in einen Kühlschrank bei 4°C über Nacht; Herausnehmen der gekühlte Poloxam 407-Lösung,
Zurückbringen auf Raumtemperatur und anschliebendes Hinzufügen von 1,5 g Poloxam 188 und 0,5 g
Polyethylenglykol 4000 nacheinander und Rühren zum Lösen; anschließend Hinzufügen von 0,4 g
Hydroxypropylmethylcellulose, Rühren zum Lösen und anschlieBendes Hinzufügen von Wasser für
Injektionszwecke zur Volumeneinstellung auf 100 ml und Einlegen in einen Kühlschrank; in 24 Stunden werden eine temperaturempfindliche 1n-situ-Gel durch Filtration und Sterilisation über eme
Filtermembran von 0,22 um hergestellt.
Wenn es notwendig ist, in dem temperaturempfindlichen 1n-s1tu-Gel therapeutische Wirkstoffe, wie
Melatonm, hinzuzufügen, erfolgt die Zugabe von Melatonin bei der Zugabe von Poloxam 188 und
Polyethylenglykol 4000.
Ausführungsbeispiel 4
7 BE2023/5564
Ein Melatonm-temperaturempfindliches In-situ-Gel, das durch das Ausführungsbeispiel bereitgestellt wird, enthält die Substanzen mit folgenden Gewichtsprozenten:
Melatonin 0,05%
Poloxam 407 21%
Poloxam 188 1,5%
Hydroxypropylmethylcellulose 0,6%
Polyethylenglykol 4000 0,3%
Der Rest ist Wasser.
Die Herstellung eines temperaturempfindlichen Melatonin-in-situ-Gels lautet insbesondere wie folgt:
Abwiegen von 219 Poloxam 407, Hinzufügen von Wasser, Auflôsen und anschlieBendes Einlegen in einen Kühlschrank über Nacht; Herausnehmen der gekühlten Poloxam 407-Lösung, Zurückbringen auf
Raumtemperatur und anschliefendes Hinzufügen von 1,5 g Poloxam 188, 0,3 g Polyethylenglykol 4000 und 0,05 g Melatonin nacheinander und Rühren zum Lösen; anschließend Hinzufügen von 0,6 g
Hydroxypropylmethylcellulose, Rühren zum Lösen und anschlieBendes Einstellen des Volumens auf 100 ml und Einlegen in einen Kühlschrank; in 24 Stunden werden die Filtration und Sterilisation durchgeführt, um eme temperaturempfindliche Melatonin-in-srtu-Gel-Lôsung herzustellen.
Ausführungsbeispiel 5
Ein Melatonm-temperaturempfindliches In-situ-Gel, das durch das Ausführungsbeispiel bereitgestellt wird, enthält die Substanzen mit folgenden Gewichtsprozenten:
Melatonin 0,15%
Poloxam 407 22%
Poloxam 188 1,5%
Hydroxypropylmethylcellulose 0,5%
Polyethylenglykol 4000 0,4%
Der Rest ist Wasser.
Die Herstellung eines temperaturempfindlichen Melatonin-in-situ-Gels lautet insbesondere wie folgt:
Abwiegen von 22g Poloxam 407, Hinzufügen von Wasser, Auflösen und anschlieBendes Einlegen in einen Kühlschrank bei 4°C über Nacht; Herausnehmen der Poloxam 407-Lösung, Zurückbringen auf
Raumtemperatur und anschliefendes Hinzufügen von 1,5 g Poloxam 188, 0,4 g Polyethylenglykol 4000 und 0,15 g Melatonin nacheinander und Rühren zum Lösen; anschließend Hinzufügen von 0,5 g
Hydroxypropylmethylcellulose, Rühren zum Lösen und anschlieBendes Einstellen des Volumens auf 100 ml und Einlegen in einen Kühlschrank; in 24 Stunden werden die Filtration und Sterilisation durchgeführt, um eme temperaturempfindliche Melatonin-in-srtu-Gel-Lôsung herzustellen.
Ausführungsbeispiel 6
Ein Melatonm-temperaturempfindliches In-situ-Gel, das durch das Ausführungsbeispiel bereitgestellt wird, enthält die Substanzen mit folgenden Gewichtsprozenten:
Melatonin 0,5%
Poloxam 407 23%
8 BE2023/5564
Poloxam 188 1,5%
Hydroxypropylmethylcellulose 0,4%
Polyethylenglykol 4000 0,5%
Der Rest ist Wasser.
Die Herstellung eines temperaturempfindlichen Melatonin-in-srtu-Gels lautet insbesondere wie folgt:
Abwiegen von 23g Poloxam 407, Hinzufügen von Wasser, Auflôsen und anschliebendes Einlegen in einen Kühlschrank über Nacht; Herausnehmen der gekühlten Poloxam 407-Lôsung, Zurückbringen auf
Raumtemperatur und anschliefendes Hinzufügen von 1,5 g Poloxam 188, 0,5 g Polyethylenglykol 4000 und 0,5 g Melatonin nacheinander und Rühren zum Lösen; anschließend Hinzufügen von 0,4 g
Hydroxypropylmethylcellulose, Rühren zum Lôsen und anschlieBendes Finstellen des Volumens auf 100 ml und Einlegen in einen Kühlschrank; in 24 Stunden werden die Filtration und Sterilisation durchgeführt, um eine temperaturempfindliche Melatonin-in-srtu-Gel-Lôsung herzustellen.
Ausführungsbeispiel 7
Ein Melatonm-temperaturempfindliches In-situ-Gel, das durch das Ausführungsbeispiel bereitgestellt wird, enthält die Substanzen mit folgenden Gewichtsprozenten:
Melatonm 1%
Poloxam 407 22%
Poloxam 188 1,5%
Hydroxypropylmethylcellulose 0,5%
Polyethylenglykol 4000 0,4%
Der Rest ist Wasser.
Die Herstellung eines temperaturempfindlichen Melatonin-in-situ-Gels lautet insbesondere wie folgt:
Abwiegen von 22g Poloxam 407, Hinzufügen von Wasser, Auflösen und anschlieBendes Einlegen in einen Kühlschrank über Nacht; Herausnehmen der gekühlten Poloxam 407-Lôsung, Zurückbrmgen auf
Raumtemperatur und anschlie—endes Hinzufügen von 1,5 g Poloxam 188, 0,4 g Polyethylenglykol 4000 und 1 g Melatonin nacheinander und Rühren zum Lösen; anschließend Hinzufügen von 0,5 g
Hydroxypropylmethylcellulose, Rühren zum Lösen und anschlieBendes Einstellen des Volumens auf 100 ml und Einlegen in einen Kühlschrank; in 24 Stunden werden die Filtration und Sterilisation durchgeführt, um eme temperaturempfindliche Melatonin-in-srtu-Gel-Lôsung herzustellen.
Ausführungsbeispiel 8
Ein Melatonm-temperaturempfindliches In-situ-Gel, das durch das Ausführungsbeispiel bereitgestellt wird, enthält die Substanzen mit folgenden Gewichtsprozenten:
Melatonm 3%
Poloxam 407 22%
Poloxam 188 1,5%
Hydroxypropylmethylcellulose 0,5%
Polyethylenglykol 4000 0,4%
Der Rest ist Wasser.
9 BE2023/5564
Die Herstellung eines temperaturempfindlichen Melatonin-in-situ-Gels lautet insbesondere wie folgt:
Abwiegen von 22g Poloxam 407, Hinzufügen von Wasser, Auflösen und anschlieBendes Einlegen in einen Kühlschrank über Nacht; Herausnehmen der gekühlten Poloxam 407-Lôsung, Zurückbrmgen auf
Raumtemperatur und anschlieñendes Hinzufügen von 1,5 g Poloxam 188, 0,4 g Polyethylenglykol 4000 und 3 g Melatonin nacheinander und Rühren zum Lösen; anschließend Hinzufügen von 0,5 g
Hydroxypropylmethylcellulose, Rühren zum Lösen und anschlieBendes Einstellen des Volumens auf 100 ml und Einlegen in einen Kühlschrank; in 24 Stunden werden die Filtration und Sterilisation durchgeführt, um eme temperaturempfindliche Melatonin-in-srtu-Gel-Lôsung herzustellen.
Ausführungsbeispiel 9
Em Melatonin-temperaturempfindliches In-situ-Gel, das durch das Ausführungsbeispiel bereitgestellt wird, enthält die Substanzen mit folgenden Gewichtsprozenten:
Melatonm 5%
Poloxam 407 22%
Poloxam 188 1,5%
Hydroxypropylmethylcellulose 0,5%
Polyethylenglykol 4000 0,4%
Der Rest ist Wasser.
Die Herstellung eines temperaturempfindlichen Melatonin-in-situ-Gels lautet insbesondere wie folgt:
Abwiegen von 22g Poloxam 407, Hinzufügen von Wasser, Auflösen und anschlieBendes Einlegen in einen Kühlschrank über Nacht; Herausnehmen der gekühlten Poloxam 407-Lôsung, Zurückbringen auf
Raumtemperatur und anschlieBendes Hinzufügen von 1,5 g Poloxam 188, 0,4 g Polyethylenglykol 4000 und 5 g Melatonin nacheinander und Rühren zum Lösen; anschließend Hinzufügen von 0,5 g
Hydroxypropylmethylcellulose, Rühren zum Lösen und anschlieBendes Einstellen des Volumens auf 100 ml und Einlegen in einen Kühlschrank; in 24 Stunden werden die Filtration und Sterilisation durchgeführt, um eme temperaturempfindliche Melatonin-1n-sttu-Gel-Lösung herzustellen.
Ausführungsbeispiel 10
Ein Melatonm-temperaturempfindliches In-situ-Gel, das durch das Ausführungsbeispiel bereitgestellt wird, enthält die Substanzen mit folgenden Gewichtsprozenten:
Melatonm 10%
Poloxam 407 22%
Poloxam 188 1,5%
Hydroxypropylmethylcellulose 0,5%
Polyethylenglykol 4000 0,4%
Der Rest ist Wasser.
Die Herstellung eines temperaturempfindlichen Melatonin-in-situ-Gels lautet insbesondere wie folgt:
Abwiegen von 22g Poloxam 407, Hinzufügen von Wasser, Auflösen und anschlieBendes Einlegen in einen Kühlschrank über Nacht; Herausnehmen der gekühlten Poloxam 407-Lôsung, Zurückbrmgen auf
Raumtemperatur und anschliefendes Hinzufügen von 1,5 g Poloxam 188, 0,4 g Polyethylenglykol 4000
10 BE2023/5564 und 10 g Melatonin nacheinander und Rühren zum Lösen; anschließend Hinzufügen von 0,5 g
Hydroxypropylmethylcellulose, Rühren zum Lösen und anschlieBendes Einstellen des Volumens auf 100 ml und Einlegen in einen Kühlschrank; in 24 Stunden werden die Filtration und Sterilisation durchgeführt, um eme temperaturempfindliche Melatonin-in-srtu-Gel-Lôsung herzustellen.
Zur weiteren Veranschaulichung des Testverfahrens und der Wirkung der vorliegenden Erfindung werden die folgenden Versuchsbeispiele im Detail beschrieben.
Versuchsbeispiel 1: Screening der Bestandteile des temperaturempfindlichen in-situ-Gels gemäß der vorliegenden Erfindung
Die Arten und Mengen von Hilfsstoffen, die üblicherweise in In-situ-Gel-Formulierungen mit langsamer Freisetzung verwendet werden, wie z.B. Poloxam 407, Poloxam 188,
Hydroxypropylmethylcellulose [HPMC(15KM)], Chitosan, Polyethylenglykol 4000 (PEG400) und
PEG4000, wurden untersucht und die Geltemperatur wird mittels der Reagenzglasumkehrmethode gemessen, um festzustellen, ob sie als Ausgangsstoffe für die Herstellung von temperaturempfindlichen in-situ-Gel verwendet werden können und welche Konzentration erforderlich ist.
Reagenzglasumkehrmethode: eine entsprechende Menge an Gel wird in em Zentrifugenröhrchen hinzugefügt, dann wird es in ein Schüttelherd im Wasserbad mit konstanter Temperatur gelegt und die
Temperatur erhöht sich mit einer Geschwindigkeit von 0,5°C/min. Bei jeder Erhöhung der Temperatur um 0,5 °C wird das Zentrifugenröhrchen um 90 Grad umgekehrt und das Fließen des Gels wird beobachtet, wenn das Gel nicht fließt, ist die Temperatur die Geliertemperatur. Die Temperatur zu diesem Zeitpunkt wird aufgezeichnet. pH-Test des Gels: der pH-Wert des temperaturempfindlichen in-situ-Gels wird mit einem
Säuremessgerät gemessen, und es ist optimal, wenn der Bereich der einzelnen Hilfsstoffe des Gels 7,0 bis 7,4 beträgt. 1.1 Vorläufiges Screening der P407-Konzentrationen
Neun Gruppen von P407-Gelen mit Konzentrationen von 15%, 16%, 17%, 18%, 19%, 20%, 21%, 22% und 23% werden mit jeweils drei Wiederholungen konfiguriert und ihre Geliertemperaturen werden bestimmt.
Die Ergebnisse sind in Tabelle 1 und Figur 1 dargestellt. Die Temperatur liegt zwischen 28-30°C und die Temperatur des temperaturempfindlichen In-situ-Gels ist in vitro anfällig für einen Phasenwechsel, daher wird die Gesamtgeliertemperatur der Gel-Hilfsstoffe vor der Verdünnung durch Körperflüssigkeit m diesem Test auf 28-30°C festgelegt. Frühere Studien haben gezeigt, dass die Temperatur von P407, bevor seine Konzentration die Gelbildung erreicht, am besten 5-10% geringer als die gesamte
Geliertemperatur liegt, und das optimale Verhältnis besteht darin, dass die Geliertemperatur mit zusammengenommenen Hilfsstoffen innerhalb des Einstellbereichs liegt, und in Verbindung mit dem optimalen Bereich der pH-Werte wird der Konzentrationsbereich von P407 auf 21-23% festgelegt.
Tabelle 1 Ergebnisse der unterschiedlichen Konzentrationen von P407 auf die Geliertemperatur
Il BE2023/5564
P407-Konzentration 15 16 17 18 19 20 21 22 23 (%)
Probe 1 42.0 38.0 32.0 30.0 28.0 26.0 24.0 22.0 20.0
Geliertemperatur (°C)
Probe 1 42.5 37.5 32.5 30.5 28.5 26.5 24.5 21.0 20.0
Geliertemperatur (°C)
Probe 1 43.0 37.0 31.0 30.8 28.6 26.2 24.0 21.0 19.8
Geliertemperatur (°C)
Mittelwert 42.0+0.5 37.5+0.5 31.8#0.7 30.4+0.4 28.3+0.3 26.3+0.3 24.2+0.3 21.3+0.6 20.0+0.1 pH-Wert 68 6.9 70 70 6.9 6.9 7.0 7.1 7.2 1.2 Einfluss von P188 auf die Geliertemperatur
Die Konzentration von P407 wird auf 21% festgelegt und fünf Gruppen von P407-Gelen werden konfiguriert, wobei jeder Probengruppe P188 in Konzentrationen von 1%, 1,5%, 3%, 5% und 8% zugesetzt wird, wobei in jeder Gruppe drei Wiederholungen durchgeführt werden, und die
Geliertemperatur wird gemessen.
Die Ergebnisse sind in Tabelle 2 und Figur 2 dargestellt. P188 ist in der Lage, die Geliertemperatur und die Gelfestigkeit eines temperaturempfindlichen Gels zu regulieren und ein temperaturempfindliches In- situ-Gels herzustellen. 21% P407 wird als Referenz für die bevorzugte Auswahl anderer Hilfsstoffe verwendet, kombiniert mit dem optimalen Bereich von pH-Werten wird die Konzentration von P188 auf 1,5% festgelegt.
Tabelle 2 Ergebnisse der unterschiedlichen Konzentrationen von P188 auf die Geliertemperatur
P188- 1 1.5 3 5 8
Konzentration (%)
Probe 1 25.0 28.0 30.0 33.0 36.0
Geliertemperatur (°C)
Probe 1 24.8 29.0 31.0 34.0 35.0
Geliertemperatur (°C)
Probe 1 25.0 29.5 31.0 33.5 35.5
Geliertemperatur (°C)
Mittelwert 24.9+0.1 28.80.8 30.7+0.5 33.540.5 35.540.5 pH-Wert 6.9 71 7.5 7.5 7.6 1.3 Einfluss von HPMC (15KM) auf die Geliertemperatur
Die Konzentration von P407 wird auf 21% festgelegt und sechs Gruppen von P407-Gelen werden durch
Zugabe von HPMC (15KM) in Konzentrationen von 0,4%, 0,6%, 0,8%, 1,5%, 2% und 3% konfiguriert.
HPMC muss im Voraus durch Zugabe von Wasser für die Injektion bei 85°C gelöst werden, wobei drei
12 BE2023/5564
Wiederholungen in jeder Gruppe durchgeführt werden, und wobei es in den Kühlschrank bei 4°C über
Nacht eingelegt, um es zu einem Gel zuzubereiten und die Geliertemperatur zu messen.
Die Ergebnisse sind in Tabelle 3 und Figur 3 dargestellt. Mit zunehmender Dosierung von HPMC (15KM) nimmt die Geliertemperatur des Gels zu, und in Verbindung mit dem optimalen Bereich der pH-Werte und der gesamten Geliertemperatur stellt 0,4-0,6% HPMC (15KM) den optimalen Bereich dar.
Tabelle 3 Ergebnisse der unterschiedlichen Konzentrationen von HPMC(15KM ) auf die
Geliertemperatur
OO HPMCOSKM) 0406 08523
Konzentration(%)
Probel 280 310 NO 390 000 MO
Geliertemperatur (°C)
Probe 1 28.5 31.0 32.0 39.5 40.5 41.5
Geliertemperatur (°C)
Probe 1 29.0 30.0 32.5 39.0 40.8 41.5
Geliertemperatur (°C)
Mittelwert 28.540.5 30.6x06 32203 39.1+0.3 40.4+0.4 41.6+0.3 pH-Wert 7.0 7.2 7.5 7.6 7.7 7.6 0 1.4 Einfluss von Chitosan auf die Geliertemperatur
Die Konzentration von P407 wird auf 21% festgelegt und fünf Gruppen von P407-Gelen werden durch
Zugabe von Chitosan in Konzentrationen von 0,1%, 0,15%, 0,2%, 0,3% und 0,5%, mit drei
Wiederholungen in jeder Gruppe konfiguriert, um die Gele herzustellen und ihre Geliertemperaturen zu messen.
Die Ergebnisse sind in Tabelle 4 und Figur 4 dargestellt. Mit der schrittweisen Erhöhung der
Chitosanmenge nimmt die Geltemperatur der 21%1gen P407-Lösung tendenziell ab, und alle pH-Werte sind für eine In-vivo-Injektion zu niedrig, so dass Chitosan für die Zugabe zum Gel nicht geeignet ist.
Tabelle 4 Ergebnisse der unterschiedlichen Konzentrationen von Chitosan auf die Geliertemperatur
Konzentration(%)
Probel 1 330 280 230 000 180
Geliertemperatur
CC)
Probe 1 34.0 27.0 22.0 20.2 18.5
Geliertemperatur (°C)
Probe 1 34.3 28.2 21.5 20.6 19.0
Geliertemperatur (°C)
13 BE2023/5564
Mittelwert 33.740.6 27.7+0.6 22.1+0.7 20.3+0.3 18.5+0.5 pH-Wert 45 40 3.6 3.5 3.0 1.5 Emfluss von PEG400 auf die Geliertemperatur
Die Konzentration von P407 wird auf 21% festgelegt und fünf Gruppen von P407-Gelen werden durch
Zugabe von PEG400 in Konzentrationen von 0,5%, 0,6%, 0,7%, 0,8% und 1% mit drei Wiederholungen in jeder Gruppe konfiguriert, um die Gele herzustellen und ihre Geliertemperaturen zu messen.
Die Ergebnisse sind in Tabelle 5 und Figur 5 dargestellt. Die Menge an PEG400 nimmt allmählich zu und die Geltemperatur der 21%1gen P407-Lôsung änderte sich in keinem Fall. In Verbindung mit dem optimalen Bereich der pH-Werte wird es davon ausgegangen, dass PEG400 für die Zugabe zum Gel nicht geeignet ist.
Tabelle 5 Ergebnisse der unterschiedlichen Konzentrationen von PEG400 auf die Geliertemperatur
TO PEG400 05 06 0708 0
Konzentratio(%)
Probel 1 260 260 260 1 260 260
Geliertemperatur (°C)
Probe 1 26.1 26.0 26.0 26.0 26.0
Geliertemperatur (°C)
Probe 1 26.0 26.1 26.1 26.1 26.1
Geliertemperatur (°C)
Mittelwert 26.0+0.1 26.0+0.1 26.0+0.1 26.0+0.1 26.0+0.1 pH-Wert 7.5 7.5 7.6 7.5 7.5 1.6 Einfluss von PEG4000 auf die Geliertemperatur
Die Konzentration von P407 wird auf 21% festgelegt und fünf Gruppen von P407-Gelen werden durch
Zugabe von PEG4000 in Konzentrationen von 0,3%, 0,5%, 0,7%, 0,9% und 1% konfiguriert, wobei in
Jeder Gruppe drei Wiederholungen durchgeführt werden, und die Geliertemperatur wird gemessen. die Ergebnisse sind in Tabelle 6 und Figur 6 dargestellt. Die Geliertemperatur der 21%igen P407-
Lösung nimmt mit zunehmender Dosierung von PEG4000 allmählich zu, in Verbindung mit dem optimalen Bereich der pH-Werte und der gesamten Geliertemperatur stellt 0,3-0,5% PEG4000 den optimalen Bereich dar.
Tabelle 6 Ergebnisse der unterschiedlichen Konzentrationen von PEG4000 auf die Geliertemperatur
PEG4000 03° 05070 0
Konzentratio(%)
Probel 1 280 300 800 360 380
Geliertemperatur (°C)
Probe 1 27.5 31.2 32.0 36.5 38.5
Geliertemperatur (°C)
Probe 1 28.0 30.5 32.5 36.8 38.0
14 BE2023/5564
Geliertemperatur (°C)
Mittelwert 27.8+40.3 30.6+0.6 32.1+0.4 36.4+0.4 38.2+0.3 pH-Wert 71 7.3 7.5 7.6 7.6
Bisher werden im Rahmen der vorliegenden Erfindung die Substanzen für die Herstellung eines temperaturempfindlichen 1n-s1tu-Gels und der Konzentrationsbereich jeder Substanz im temperaturempfindlichen in-situ-Gel untersucht: der Konzentrationsbereich von P407 beträgt 21% bis 23%, die Konzentration von P188 beträgt 1,5%, der Konzentrationsbereich von HPMC (15KM) beträgt 0,4% bis 0,6% und der Konzentrationsbereich von PEG4000 beträgt 0,3% bis 0,5%.
Versuchsbeispiel 2: Herstellung und Konzentrationsoptimierung des temperaturempfindlichen
Melatonin-in-situ-Gels gemäß der vorliegenden Erfindung 2.1 Etablierung einer HPLC-Methode zur Bestimmung von Melatonin in einem temperaturempfindlichen in-situ-Gel 2.1.1 Auswahl der Wellenlänge von Melatonin: 10 mg Melatonin-Standard werden gewogen und in
Methanol aufgelöst, um eine 0,1 mg/ml-Lösung des Standards herzustellen, die mit einem UV-
Spektrophotometer 1m Wellenlängenbereich von 230-450 nm gescannt wird, wobei die maximale
Absorptionswellenlänge des Melatonin-Standards bei 230 nm gemessen wird. 2.1.2 Chromatographische Bedingungen für die Hochleistungsflüssigkeitschromatographie (HPLC):
Säule: Agela Odssil C18-Säule (250x4,6 mm, 5 um); Säulentemperatur 25°C; Durchflussrate 1 mL/min; mobile Phase Methanol: Wasser = 60:40 (V/V); Injektionsvolumen 10 uL. 2.1.3 Erstellung der Standardkurve: Die Melatonin-Standards werden genau abgemessen und zu
Melatonin-Standardlösung von 100 ug/mL, 75 ug/mL, 50 ug/mL, 25 ug/mL, 10 ug/mL, 7,5 ug/mL, 5 ug/mL, 1 ug/mL und 0,5 ug/mL zubereitete, wobei das Injektionsvolumen jeweils 10 uL beträgt. Mit der Peakfläche Y als Ordinate und der gemessenen Konzentration des Melatonin-Standards (ug/mL) als
Abszisse wird die Standardkurve in Figur 7 dargestellt: Y=57,988x-9,9134, R2=0,9997, mit guter
Linearität 1m Bereich von 0,5-100 ug/mL für Melatonin-Standard. 2.1.4 Spezifitätstest: 10 mg Melatonin-Standard werden genau abgewogen und mit einer angemessenen
Menge Methanol verdünnt, um eine Standardlösung mit einer Konzentration von 1 mg/mL zu erhalten, ein temperaturempfindliches Gel und ein temperaturempfindliches In-situ-Gel mit Melatonin werden hergestellt und in der mobilen Phase aufgelöst, die Probe wird durch eine 0,22-um-Filtermembran geleitet und das Volumen von 1 mL des Filtrats wird auf 10 mL eingestellt. Jeweils 10 uL des
Melatonin-Standards, des temperaturempfindlichen 1n-situ-Gels und des temperaturempfindlichen In- situ-Gels mit Melatonm werden genau abgesaugt und gemäß den oben genannten chromatographischen
Bedingungen bestimmt. Das Chromatogramm ist aufgezeichnet, und die Ergebnisse zeigen eine gute
Spezifität der Methode. 2.1.5 Präzisionstest: Drei Standardlösungen von Melatonin in niedriger, mittlerer und hoher
Konzentration (2 ug/mL, 25 ug/mL und 75 pg/mL) werden hergestellt; die Peakwerte werden jeweils in 0, 2, 4, 6 und 8 Stunden gemessen, um die Präzision innerhalb eines Tages zu berechnen, und dann in 1,
15 BE2023/5564 2, 3, 4 und 5 Tagen gemessen, um die Präzision zwischen den Tagen zu berechnen. Die Ergebnisse sind in den Tabellen 7 und 8 dargestellt. Die RSDs der Peakflächen des Intraday-Präzisionstests und der
Peakflächen des Interday-Präzisionstests liegen unter 2%, was auf eine gute Präzision der Methode hindeutet.
Tabelle 7 Intraday-Präzisionsergebnisse (n=5)
Konzentration Peakfläche (og/ml) TR RR OO 20091032 101 108 1025098 25 1260 1258 1236 1233.6 1255.6 0.99 75 4408 4403 4106 4314 4320 0.85
Tabelle 8 Interday-Präzisionstest (n=5) “ Konzentration 0 Peakfläche RSD) (ng/ml) 0 à dd SO 2987 1005 1019 1007 1016 08000 25 1261 1272 1275.6 1273.9 1276.5 0.99 75 4300 4315 4307 4316 4418 0.88 0 2.1.6 Stabilitätstest: 10 ul der Melatonm-Standardlösung werden präzise angesaugt und in den
Flüssigkeitschromatographen 0, 2, 4, 6 und 12 Stunden nach der Konfiguration emgespritzt, und die
Peakfläche wird gemessen und die RSD berechnet, die Ergebnisse sind in Tabelle 9 dargestellt, die RSD ist weniger als 2%, was darauf hinweist, dass die Melatonin-Standardlösung innerhalb von 12 Stunden stabil ist.
Tabelle 9 Ergebnisse der Stabilitätsprüfung von Melatonin “ Konzentration 2 Peakfläche RSD) (ng/ml) Oh 2h 4h 6h 12h
TS 3759 3693536730 2.1.7 Test der Rückgewinnungsrate der Probe: jeweils 5 Teile temperaturempfindliche Melatonin-in- situ-Gel-Injektion mit bekanntem Melatoningehalt (2 mg, 4 mg, 6 mg) werden gemessen (siehe Tabelle 10), 1 ml der Standardlösung wird zugegeben und die Rückgewinnungsrate der Probe wird gemäß den oben genannten chromatographischen Bedingungen berechnet. Die Ergebnisse zeigen, dass die mittlere
Rückgewinnungsrate der bekannten Probenbestimmungen 96,86 % beträgt und die RSDs alle innerhalb von 2 % liegen, was darauf hindeutet, dass der Test der Rückgewinnungsrate der Probe dieser Methode die Anforderungen der HPLC-Besttmmung mit hoher Genauigkeit erfüllt, und die Ergebnisse sind in
Tabelle 10 unten dargestellt.
16 BE2023/5564
Tabelle 10 Testergebnisse der Rückgewinnungsrate der Probe
Hinzugefügte (Gemessene Rückgewinnun Mittlere /
Menge (mg) Menge (mg) srate (%) Rückgewinnungsrate RSD(%) (%)
ERS
1.94 97 2 1.92 96 96.44 0.97 1.93 96.6 1.95 97.5 3.8 95 3.81 95.2 4 3.85 96 96 0.96 3.9 97.5 3.85 96.3 5.8 96.6 5.85 97.5 6 5.9 99.2 98.14 0.87 5.95 99.2 5.89 98.2 2.2 Box-Behnken-Reaktionsflächen-Design-Methode zur Optimierung der optimalen Konzentration von temperaturempfindlichen In-situ-Gelen 2.2.1 Versuchsplan
Für die Herstellung eines temperaturempfindliche Melatonin-in-srtu-Gels wird eine 3-Faktoren-3-
Niveaus-Reaktionsflächen-Methode verwendet, und die Bedingungen für die Herstellung eines temperaturempfindlichen Melatonin-m-situ-Gels werden auf der Grundlage der Reaktionswerte der zusammengesetzten Scores optimiert. a: P407 (21-23%) b: PEG4000 (0,3-0,5%) und c: HPMC15 (KM) (0,4-0,6%), der Versuchsplan ist in Tabelle 11 dargestellt.
Tabelle 11 Reaktionsflächen-Faktorniveaus ‘Faktomiveau
Faktor
OO P407A)% = PEG4000(BX% HPMC(15KMXC)% -1 21 0.3 0.4 0 22 0.4 0.5 1 23 0.5 0.6 2.2.2 Reaktionsflächen-Methode-Analyse zur Optimierung der Rezeptur
Die erhaltenen Daten werden durch multiple Regressionsanpassung mit der Software Design-
Expert.8.0.6 analysiert, um die theoretischen optimalen Bedingungen und die vorhergesagten Werte für
17 BE2023/5564 jeden Faktor zu erhalten und zu validieren. Der Koeffizient der Gelierzeit wird auf 0,4, der
Gewichtungskoeffizient der Freisetzung auf 0,4 und der Gewichtungskoeffizient der Geliertemperatur auf 0,2 entsprechend den primären und sekundären Beziehungen festgelegt. Gesamtpunktzahl = (Differenz der Gelierzeit/kürzeste Gelierzeit) x 100 x 0,4 + (Differenz der durchschnittlichen
Freisetzung/gleichmäBige Freisetzung) x 100 x 0,4 (Differenz der Geliertemperatur/schnellste
Geliertemperatur) x 100 x 0,2. Die Versuchsplanung und die Ergebnisse sind in Tabelle 12 dargestellt.
Tabelle 12 Ergebnisse der Reaktionsflächen-Testanalyse
Nr A B C Temperatur Gelierzeit Tagl Tag2 = Tag4 Gesamtpunktzahl (°C) (S) Freisetzung Freisetzung Freisetzung (%) (%) (%)
TI 0 1-32 92202 1 2 0 0 0 325 75 18 47 82 96 3 1 - 0 335 85 20 51 91 85 1 4 - 0 1 321 68 22 54 92 82 1 5 1 0 - 330 72 20 52 90 88 1 6 1 1 O0 318 76 18 48 93 88 7 0 - - 32.0 81 19 54 91 84 1 1 8 1 1 1 322 78 18 55 90 82 9 0 0 0 331 75 18 46 87 93 0 - 1 313 75 19 54 93 81 1 11 - 0 - 323 75 18 55 92 83 1 1 12 0 0 0 327 76 18 46 86 97 13 - 1 0 327 93 20 51 91 84 1 14 - - 0 321 68 20 54 93 80 1 1 0 0 0 325 75 18 46 87 96 16 1 0 1 320 70 20 50 92 81 17 0 0 0 327 77 19 45 85 96 10 2.2.3 Analyse der Varianz
Es ist aus Tabelle 13 ersichtlich, dass das Signifikanzniveau des multiplen Regressionsmodells
P=0,0008<0,01 ist, das entwickelte Regressionsmodell ist hoch signifikant und zeigt auch, dass die
18 BE2023/5564
Regressionsgleichung hoch signifikant ist. Der Anpassungsfehler P=0,1482>0,05, die Differenz ist nicht signifikant, was darauf hmdeutet, dass der Fehler äußerst gering ist und die Testoptimierung ein hohes
Maß an Vertrauen hat. Für die Versuchsdaten wird eme Regressionsanpassung mit der Software Design-
Expert 8.0.6 durchgeführt, um die zusammengesetzte Punktzahl zu ermitteln: Y = 95,6 + 1,625A + 0,5B- 1,125C - 0,25AB - 1,5AC + 1,25BC - 4,8A2 - 6,55B2 - 7,3C2, R2 = 0,9515, was bedeutet, dass die Anderung des Antwortwertes von 95,15% von den ausgewählten Faktoren abhängt, die Gleichung gut angepasst ist und gut mit der tatsächlichen Situation übereinstimmt. Das für diesen Test gewählte binäre multinomiale Modell ist statistisch signifikant (p<0,01); der Out-of-fit-Term p=0,1482>0,05, was bedeutet, dass keine signifikanten Out-of-fit-Faktoren im Test vorhanden sind.
Tabelle 13 Ergebnisse der Varianzanalyse für das Gesamtpunktzahl-Regressionsmodell für temperaturempfindliches Melatonm-1n-s1tu-Gel “Quelle der Varianz Summe der Freiheitsgrad Mittlere F- P-Wert Signifikanz
Quadrate Varianz Wert (SS)
Modell 607590 9 6750 1527 00008 +
A 21.13 1 21.13 4.78 0.0651
B 2.00 1 2.00 0.45 0.5228
C 10.13 1 10.13 2.29 0.1740
AB 0.25 1 0.25 0.057 0.8189
AC 9.00 1 9.00 2.04 0.1967
BC 6.25 1 6.25 1.41 0.2732
A? 97.01 1 97.01 21.94 0.0022 **
B? 180.64 1 180.64 40.86 0.0004 **
Cc? 224.38 1 224.38 50.75 0.0002 **
Residuum 30.95 7 4.42
Fehlanpassungsterm 21.75 3 7.25 3.15 0.1482
Reiner Fehler 9.20 4 2.30
Gesamtdifferenz 638.47 16
Anmerkung: * bedeutet einen signifikanten Unterschied (P < 0,05), ** bedeutet einen hoch signifikanten Unterschied (P < 0,01). 2.2.4 Experimentelle Modellanpassung
In Kombination mit den Ergebnissen in Tabelle 13 zeigt es sich, dass die Unterschiede in den sekundären Termen des Modells A2 (P = 0,0022 < 0,01), B2 (P = 0,0004 < 0,01), C2 (P = 0,0002 < 0,01) alle hoch signifikant sind; die primären Terme A (P = 0,0651 > 0,05), B (P = 0,5228 > 0,05), C (P = 0,1740 > 0,05) und die Interaktionsterme AB (P = 0,8189> 0,05), AC (P = 0,1967> 0,05) und BC (P = 0,2732> 0,05) sind nicht signifikant unterschiedlich. Dies deutet darauf hin, dass der Haupteffekt von A,
B und C auf das Gesamtergebnis signifikant ist und die Haupteffektbeziehung jedes Faktors ist:
C>B>A. Die Analyse zeigt, dass P407 (A), PEG4000 (B) und HPMC (15KM) (C) jeweils 22% für
P407, 0,4% für PEG4000 und 0,5% für HPMC (15KM) sind.
19 BE2023/5564 2.2.5 Herstellung eines temperaturempfindlichen Melatonin-In-situ-Gels: das ideale Gel sollte bei
Raumtemperatur flüssig sein und bei der Injektion in das Tier schnell in den Gelzustand übergehen, wobei dieser Temperaturindex als Screenmg-Kriterium für die optimalen Verschreibungsbedmgungen dient. Drei Chargen von temperaturempfindlichen Melatonin-in-situ-Gelen werden nach den optimierten Rezepturen hergestellt: MT 0,15%, P407 22%, P188 1,5%, PEG4000 0,4%, HPMC (15KM) 0,5% und Wasser für Injektionszwecke 75,45%. 2.2.6 Messung der In-vitro-Auflösung und -Freisetzung des temperaturempfindlichen Melatonin-in-situ-
Gels: die Geltemperatur und die Gelierzeit werden mit der im Versuchsbeispiel 1 beschriebenen
Reagenzglasumkehrmethode bestimmt. Die In-vitro-Auflösung des Gels wird mit Hilfe eines filmfreien
Auflösungsmodells untersucht, um das In-vitro-Freisetzungsverhalten des temperaturempfindlichen
Gels zu untersuchen, d.h. das temperaturempfindliche Melatonin-in-situ-Gel wird gemäß der optimierten Rezeptur hergestellt, 3 g temperaturempfindliches Melatonin-in-situ-Gel werden in ein
Reagenzglas gegeben und für 5 Minuten in einen Schüttelherd mit konstanter Temperatur bei 37°C gestellt, Warten auf das Gelieren, dann werden 2 mL PBS-Pufferlösung zugegeben und 0,5 mL der
Probe in 1, 12, 24, 36, 48, 72, 96, 104 und 120 Stunden in einem 10-mL-Messkolben entnommen und das Volumen wird mit der mobilen Phase eingestellt. 10 ul werden in einen Hochleistungs-
Flüssigkeitschromatographen emgespritzt, die Konzentration der Probenlösung wird ermittelt und die
Freisetzung gemäß der HPLC-Methode für Melatonin in Gel in Versuchsbeispiel 2.1 berechnet. Es wird festgestellt, dass die In-vitro-Freisetzung des Präparats der Rezeptur proportional mit der Zunahme der
Zeit der langsamen Freisetzung zunimmt, was eme moderatere Freisetzungsrate zeigt, und das Präparat der Rezeptur wird im Wesentlichen am fünften Tag vollständig freigesetzt; die Ergebnisse sind in
Tabelle 14 und Figur 8 unten dargestellt.
Tabelle 14 Ergebnisse der Validierung der Rezeptur für das temperaturempfindliche Melatonin-In-situ-
Gel ‘Anzahlder 123 Mittlerer Wert RSD(%) —
Messungen “ Geltemperatur(°C) 328 0000324000325 500 LS
Gelierzeit (S) 76.0 75.7 75.5 75.7+0.3 -
Freisetzung am Tag 18.3 18.5 18.6 18.402 1 1 (%)
Freisetzung am Tag 46.0 47.0 46.5 46.5+0.5 1 2 (%)
Freisetzung an Tag 85.0 86.0 84.0 85.0+1.0 1.1 4 (%)
Freisetzung an Tag 100 99.9 100 99.9+0.6 0.6 5 (%)
Die Zusammensetzung des durch die vorliegende Erfindung bereitgestellten temperaturempfindlichen m-situ-Gels und der Verhältnisbereich werden durch das erste Versuchsbeispiel bestimmt, mit einem
20 BE2023/5564
Konzentrationsbereich von 21% bis 23% für P407, 1,5% für P188, 0,3% bis 0,5% für PEG4000 und 0,4% bis 0,6% für HPMC (15KM); die optimale Konzentration des durch die vorliegende Erfindung bereitgestellten temperaturempfindlichen in-situ-Gels mit 0,15% Melatoni wird durch das zweite
Versuchsbeispiel bestimmt: MT 0,15%, P407 22%, P188 1,5%, HPMC (15KM) 0,5%, PEG4000 0,4% und Wasser für Injekttonszwecke 75,45%, und das temperaturempfindliche Melatonm-m-s1tu-Gel wird hergestellt. Der Konzentrationsbereich der oben genannten Substanzkomponenten und die optimalen
Verhältnisse sind in der Lage, den Zweck der vorliegenden Erfindung zu erreichen.
Versuchsbeispiel 3 Pharmakokinetischer Test vom Melatonin-in-situ-Gel für die Veterinärmedizin
In diesem Vergleichsbeispiel werden mittels Hochleistungsflüssigkertschromatographie die
Unterschiede in den relevanten pharmakokinetischen Parametern zwischen dem veterinärmedizinischen temperaturempfindlichen Melatonin-in-srtu-Gel der vorliegenden Erfindung und der Melatonin-
Stammlôsung nach subkutaner Verabreichung verglichen, um die Wirksamkeit von Melatonin 1m tierischen Organismus zu untersuchen. 3.1 Etablierung der HPLC-Methode für Melatonin in Plasma 3.1.1 Probenvorbehandlung: 100 ul jeder Probe werden in em Zentrifugenröhrchen gegeben, 1 mL
Acetonitril wird hinzugefügt, 120 s lang vortexen und gemischt, dann 10 min lang bei 12000 r/min zentrifugiert. 100 uL Methanol werden zum Überstand hinzugefügt und 2 min lang bei 12000 r/min zentrifugiert. Der Überstand wird unter Stickstoff trocken geblasen, mit 500 ul Methanol wieder aufgelöst und durch eine mikroporôse 0,22-jum-Membran filtriert. 10 ul werden für die HPLC-Analyse präzise gesaugt. 3.1.2 Chromatografische Bedingungen: Agela Odssil C18-Säule (250 mmx 4,6 mm, 5 um), Methanol-
Wasser=45:55, Säulentemperatur 28°C, Flussrate 1 mL/min, Anregungswellenlänge 286 nm,
Emissionswellenlänge 352 nm, Injektionsvolumen 10 uL. 3.1.3 Erstellung der Standardkurve: Nehmen eines 2-mL-Zentrifugenröhrchens Hinzufügen von 200 ul Leerplasma und Hinzufügen von Melatonin-Standardlösung in Konzentrationen von 5, 10, 15, 20, 50, 75, 50, 100, 150, 200, 500 und 1000 ng/mL, um die Peakfläche des Melatonin-Gels zu quantifizieren, und Verwenden der Konzentration X (ng/mL), um eme Standardkurve für die Peakfläche Y des
Arzneimittels zu zeichnen. Die Ergebnisse in Tabelle 15 zeigen eme gute Linearität im Bereich von 5- 1000 ng/mL, und die Standardkurve für Melatonin im Plasma ist in Figur 9 dargestellt.
Tabelle 15 Ergebnisse der Linearität von Melatonin im Plasma “Konzentration 5 10 15 20 3078 10 150 200 500 1000 (ng/ml)
Peakfläche 3308 6166 920.6 1219 30883 4750.6 60358 89032 120011 28800.1 56000
21 BE2023/5564 3.1.4 Spezifitätstest: Melatonin-Standards, Leerplasma und verabreichtes Plasma (temperaturempfindliches Melatonin-in-situ-Gel) werden für die HPLC-Analyse entnommen, um festzustellen, ob es zwischen ihnen zu Interferenzen kommt. Jeweils 10 ul der Standardlösung, des
Leerplasmas und der Plasmalösung nach Verabreichung des Arzneimittels werden präzise entnommen und gemäß den chromatographischen Bedingungen in 3.1.2 bestimmt. Die Ergebnisse sind zeigen, dass die Methode eine gute Spezifität aufweist. 3.1.5 Genauigkeit und Präzision: Die Melatonin-Standards werden in leerem Plasma gelöst und in abgestuften Konzentrationen von 75, 150 und 500 ng/ml mit jeweils 5 Wiederholungen jeder
Konzentration konfiguriert, und die Intraday-Präzision wird berechnet. 5 Wiederholungen werde an 7 aufemanderfolgenden Tagen in gleicher Weise durchgeführt, und die Interday-Präzision wird berechnet.
Aus den Tabellen 16 und 17 ist es ersichtlich, dass die RSDs der Peakflächen des Intraday-
Präzisionstests und der Peakflächen des Interday-Präzisionstests für Melatonm im Plasma innerhalb von 2% liegt, was darauf hindeutet, dass die Methode eme gute Präzision aufweist.
Tabelle 16 Intraday-Präzision von MT in Masthuhnplasma (n=5) “Konzentration RDS (ng/mL) Peakfläche 75 47199 46856 47076 4618 47675 IT 150 8906.2 8701 8903.7 8806.2 8906.3 1 500 28301.7 28101.4 28001.9 27902.3 28901.6 1.4
Tabelle 17 Präzision von Interday-MT in Masthuhnplasma (n=5)
Konzentration Peakfläche RSD) (ng/mL) 75 4719.06 4719.08 4519.02 47193 4719.22 4718.82 4720.42 1.6 150 8844.9 8764.78 8544.88 8734.98 8857.68 88439 8864.68 13 500 28679.98 2872256 281631 2870174 28702.26 — 291034 29103.4 1.1 3.1.6 Messung der unteren Grenze der festgelegten Menge: Melatonin-haltiges Plasma mit einer
Massenkonzentration von 1 ng/mL wird fünfmal untersucht, unter den oben beschriebenen Bedingungen wird eine HPLC-Analyse durchgeführt, und die Daten werden aufgezeichnet. Die Signale der oben genannten Lösungen werden mit der Methode des Signal-Rausch-Verhältnisses verglichen. Aus Tabelle 18 ist es ersichtlich, dass die RSD der festgelegten Menge der Proben innerhalb von 2% liegt, was darauf hinweist, dass der Test für diese Methode die Anforderungen für die HPLC-Bestimmung erfüllt.
Tabelle 18 Ergebnisse der Messung der unteren Grenze der festgelegten Menge von Melatonin in
Plasma
22 BE2023/5564 (ng/mL) Peakfläche
TB 683 685 682 688 03 3.1.7 Test der Wiedergewinnungsrate:
Die Melatonin-Standards werden m leerem Plasma gelôst und in abgestuften Konzentrationen von 75, 150 und 500 ng/ml mit jeweils 5 Wiederholungen jeder Konzentration konfiguriert. Das Verhältnis zwischen der gemessenen Konzentration und der zugesetzten Konzentration ist die relative
Wiedergewinnungsrate. Die Ergebnisse zeigen (Tabelle 19), dass die mittlere Wiedergewinnungsrate der
Probe 96,86 % beträgt und RSD kleiner als 2% ist, was darauf hindeutet, dass die Methode eine gute
Stabilität aufweist.
Tabelle 19 Wiedergewinnungsrate der Probe in Masthuhnplasma
Konzentration RSD) (ng/mL) Peakfläche 545585 46622 47191 47568 47196 150 8905.6 8703.4 8802.3 8901.6 8900.7 1 500 28901 28905.6 28903.8 27901.9 28902.6 1.5 3.1.8 Stabilitätsversuch: Die Melatonin-Standards werden in Masthuhnplasma gelöst und in abgestuften
Konzentrationen von 75, 150 und 500 ng/ml mit jeweils 5 Wiederholungen jeder Konzentration konfiguriert. Die ersten drei Portionen werden bei Raumtemperatur für Oh, 5h und 10h platziert und dann betrieben, um die Stabilität der Proben zu untersuchen; die vierte Portion wird bei -20°C für 5
Tage gelagert und dann in einem Wasserbad aufgetaut, um die Konzentration zu bestimmen; die fünfte
Portion wird bei -20°C für 10 Tage gelagert und dann aufgetaut, um die Stabilität zu untersuchen. Die
Ergebnisse in Tabelle 20 zeigen, dass die Melatonin-Plasmaproben unter verschiedenen
Lagerungsbedimgungen bei niedrigen, mittleren und hohen Konzentrationen keine signifikanten
Veränderungen aufweisen. Die Proben werden 10 Tage lang bei -20°C gelagert, mit einer RSD von 2% oder weniger, was die Anforderung an die Langzeitstabilität erfüllt; die Proben werden 10 Stunden lang bei Raumtemperatur gelagert, mit einer RSD von 2% oder weniger, was die Anforderung an die
Kurzzeitstabilität erfüllt.
Tabelle 20 Stabilität von MT in Masthuhnplasma
Konzentrat 0 RSD Raumtemper RSD Raumtemper RSD( -20°C(5d) RSD -20°C(10d) RSD ion (h) (%) atur(5h) (%) atur(10b) %) (%) (%) (ug/mL) 75 47.44+0.49 1 47.17+0.91 1.9 47.19+0.89 1.8 47.18+0.54 1.1 47.18+0.89 1.9 150 89.81+1.29 1.4 88.43+1.34 1.5 87.05+1.25 14 88.43+1.34 1.5 88.63+0.90 1 500 29.15+4.64 1.5 282.42+4.77 1.6 287.01+3.99 1.3 287.01+4.46 1.6 287.01+4.47 1.5
23 BE2023/5564 3.2 Pharmakokinetische Studie 3.2.1 Gruppierung der pharmakokinetischen Testtiere: 20 Masthühner werden nach dem Prinzip der ähnlichen Alter und Gewicht ausgewählt, und nach dem Zufallsprmzip in zwei Testgruppen A und B mit 10 Tieren in jeder Gruppe aufgeteilt. Gruppe A ist ursprüngliche Melatonin-Lôsung (im 50% wasserfreien Ethanol gelöst), Gruppe B ist die Gruppe von temperaturempfindlichem Melatonin-in-situ-
Gel gemäß der vorliegenden Erfindung, sowohl Gruppe A und B enthält 3 mg Melatonin und verwendet die subkutane Injektion. Blut wird vor der Verabreichung um 8 Uhr morgens 0,08 h, 0,16 h, 0,25 h, 0,5 h, 0,75 h, 1 h, 1,5 h, 2 h, 4 h, 6 h, 8 h, 9 h, 24h, 48 h, 60 h, 72 h, 84 h, 96 h, 108 h und 120 h nach der
Verabreichung entnommen, und insgesamt 1 ml Blut wird zu jedem Zeitpunkt aus einer Unterflügelvene entnommen und mit Natrumheparm antikoaguliert, 4000 r/min für 15 Minuten zentrifugiert, und die obere Plasmaschicht wird extrahiert und für die HPLC-Analyse zur Verfügung gestellt. 3.2.2 Pharmakokinetische Analyse
Die Verarbeitung der pharmakokinetischen Daten erfolgt nach der Methode des nicht-atrialen Modells mit der Software WinNonlm (5.2). Der Gehalt von Melatonin 1m Masthuhnplasma der Gruppen À und B wird gemessen, und die Massenkonzentrationszeit des Arzneimittels bei Masthühnern der Gruppen A und B wird entsprechend der Veränderung der Blutkonzentration im Laufe der Zeit gezeichnet. Aus
Tabelle 21 ist es ersichtlich, dass das Arzneimittel in Gruppe À schneller ansteigt, während das
Arzneimittel in Gruppe B zunächst langsam ansteigt, nachdem es in den Organismus gelangt war, und dann langsam abfällt, als es die maximale Massenkonzentration erreicht.
Tabelle 21 Melatonin-Wirkstoffkonzentrationen im Masthuhn nach subkutaner Verabreichung von
Melatonin-Stammlösung und -Gel (n=10)
Blutentnahmezeitpunkt A Gruppe(ug/mL) BGruppe(ug/mL) — (h) time 008 1023460025 OIO 0.16 295.36£1.05 0.64+0.02 0.25 431.33+0.18 1.24+0.025 0.5 890.22+0.2 4.84+0.03 0.75 631.47+0.1 8.14+0.03 1 311.790.55 15.45+0.37 1.5 190.19+0.4 18.34+0.08 2 120.53+0.55 25.69+0.22 4 20.62+0.27 45.59+0.24 6 0.77+0.04 55.47+0.25 8 65.34+0.3 9 133.55+0.22 24 162.5+1.03 48 324.6+1.66 60 381.38+0.51 72 561.664+0.82
24 BE2023/5564
BAAT
96 232.76+1.59 108 223.37+1.64 120 138.11+1.05
Die One-Way-ANOVA-Methode in der SPSS-Software wird ebenfalls angewandt, um die Signifikanz der Daten der beiden Gruppen A (Melatonm-Stammlôsung) und B (Melatonin-m-situ-Gel-Gruppe) zu analysieren. Die Testergebnisse werden als X+SD ausgedrückt. Die Ergebnisse sind in Tabelle 22 dargestellt. Im Vergleich zu Gruppe A ist die Halbwertszeit von Gruppe B größer als die von Gruppe A und die Ke geringer als die von Gruppe A ist, was darauf hmdeutet, dass Gruppe A eine schnelle
Ausscheidung des Wirkstoffs und eine kurze Wirkungsdauer hat. Gruppe B hingegen hat eme verzögerte Wirkung auf die Freisetzung des Wirkstoffs in vivo. Die Wirkstoffpeakkonzentration steht für den maximalen Wert der Blutwirkstoffkonzentration nach der Verabreichung und spiegelt die
Absorptionsgeschwindigkeit des Medikaments wieder, Cmax der Gruppe B (561,66+0,82) ug/ml ist signifikant niedriger (P<0,05) als die der Gruppe A (890,22+0,2) pg/ml, was darauf hindeutet, dass die
Absorptionsrate von Melatonin bei Masthühnern nach der Gelzubereitung von Melatonin verlangsamt wird. Die AUC (0-0) (39068,75+1514) h*ug/m L der Gruppe B ist jedoch äußerst signifikant höher als die AUC (0-0) (890,7+1,02) h*ug/m L der Gruppe A (P<0,01) und die Tmax ist äußerst signifikant höher als die der Melatonin-Stammlôsung (P<0,01), was darauf hindeutet, dass Gruppe B von
Masthühnem gut absorbiert wird.
Tabelle 22 Pharmakokinetische Parameter von Melatonin-Stammlösung und -Gel im Blut von
Masthühnern
Parameter Einheit AGruppe OO BGruppe
Im OSE
Cmax ug/m L 890.22+0.2* 561.66+0.82*
Ke 1/h 1.18+0.008 0.03+0.001
Tin h 0.58 22.49
AUC (0-0) h*ug/m L 890.7+1.02** 39068.75+1514**
AUMC (0-0) h*ug/m L 987.44+2.91 3017482.9+10305.74
MRT 0») h*ug/m L 1.108+0.002** 77.32+2,59**
Vz/F mL/kg 2.84+0.02 2.49+0.09
CL/F mL/hkg 3.367+0.003 0.07+0.002
Anmerkung: * bedeutet einen signifikanten Unterschied (P < 0,05), ** bedeutet einen hoch signifikanten Unterschied (P < 0,01).
25 BE2023/5564
Versuchsbeispiel 4 Test der antioxidativen Wirkung von temperaturempfindlichem Melatonin-in-situ-
Gel 4.1 Gruppierung der Versuchstiere für den Antioxidationstest: 21 gesunde Broilerhühner mit ähnlichem
Gewicht im Alter von 40 Tagen werden für den Test ausgewählt und nach dem Zufallsprmzip in 3
Gruppen zu je 7 Hühnern aufgeteilt. Die Versuchshühner werden von einer engagierten Person gehalten und betreut, dreimal täglich um 6:00, 12:00 und 18:00 Uhr gefüttert und haben freien Zugang zu
Wasser. Die Hitzestressbedingungen werden simuliert [im Versuchsstall herrschen tagsüber durchschnittlich 31°C und nachts 24°C, die relative Luftfeuchtigkeit wird auf 55%-75% geregelt]. Die erste Versuchsgruppe erhält Melatonin-Stammlösung, die zweite Gruppe temperaturempfindliches
Melatonm-m-situ-Gel Melatonm und die dritte Gruppe eine Leerwertkontrolle (Kochsalzlôsung) über einen Versuchszeitraum von fünf Tagen. Am ersten, dritten und fünften Tag wird Serum entnommen, und jeweils 2 ml Blut werden aus einer Vene unter dem Flügel entnommen, um die antioxidativen
Parameter mit einem Enzymimmunoassay (ELISA) zu bestimmen. 4.2 Ergebnisse der antioxidativen Eigenschaften am Tag 1
Aus Tabelle 23 ist es ersichtlich, zeigt am ersten Tag das GSH-Px der Stammlösungsgruppe und der
Gelgruppe eme steigende Tendenz und der MDA-Gehalt eine sinkende Tendenz, beide Gruppen smd hochsignifikant höher als die Kontrollgruppe (P<0,01), die SOD-, T-AOC- und CAT-Aktivitäten der
Stammlôsungsgruppe und der Gelgruppe sind signifikant hôher als die Kontrollgruppe (P<0,05); die
MDA-, GSH-Px-, SOD- und CAT-Aktivitäten unterschieden sich nicht signifikant zwischen der
Stammlôsung und der Gelgruppe (P>0,05).
Tabelle 23 Bestimmung der antioxidativen Aktivität am Tag 1 “ Gruppe/Index GSH-Px(u/mL) MDA(nmol/mL) = SOD(wumL) = T-AOC(WmL) CAT(W/mL)_ “Kontrollgrap = 89125+047® 3.08:£0.03%4 88.1940.50° 12.7340.15° 10.4340.36° pe
Stammlösung 923.8340.5542 1.85+0.06Pb 90.70£0.502 13.56£0.362 11.060.112 sgruppe
Gelgruppe 919.63+0.114e 2.09+0.025b 89.52+0.872 13.29+0.198 12.110.098
Anmerkung: Daten in derselben Spalte mit unterschiedlichen Kleinbuchstaben weisen auf signifikante
Unterschiede hin (P<0,05), unterschiedliche Großbuchstaben weisen auf hochsignifikante Unterschiede hin (P<0,01), und die gleichen Buchstaben bedeuten keine signifikanten Unterschiede (P>0,05). 4.3 Ergebnisse der antioxidativen Eigenschaften am Tag 3
Es ist aus Tabelle 24 ersichtlich, dass die SOD und CAT der Gel-Gruppe am dritten Tag eine steigende
Tendenz haben und ihre Aktivitäten äußerst signifikant höher als die der Stammlösungsgruppe und der
Kontrollgruppe (P<0,01); der MDA-Gehalt der Gelgruppe nimmt ab und ist äußerst signifikant höher als der der Stammlösungsgruppe und der Kontrollgruppe (P<0,01), und die T-AOC- und GSH-Px-
Aktivitäten der Gelgruppe sind signifikant höher als die der Kontrollgruppe und der
26 BE2023/5564
Stammlösungsgruppe (P<0,05); die Unterschiede zwischen den Aktivitäten von CAT, GSH-Px, MDA,
T-AOC und SOD in der Stammlôsungsgruppe und der Kontrollgruppe sind nicht signifikant (P>0,05).
Tabelle 24 Bestimmung der antioxidativen Aktivität am Tag 3
Gruppe/Ind GSH-Px (u/mL) MDA (nmol/mL) = SOD(umL) = T-AOC (WmL) CAT (WmL) ex “ Kontrollgru 8945240369 3.2340.02% 87.3440.26% 11844023" 10.8540.22B ppe
Stammlösu 899. 94+0.45P 3.16+0.0242 87.93-£0.302 12.02+0.04P 11.06+0.115b ngsgruppe
Gelgruppe 909.13+0.528 1.62+0.04Bb 93.70+0.91BP 13.36£0.282 17.59+0.26%
Anmerkung: Daten in derselben Spalte mit unterschiedlichen Kleinbuchstaben weisen auf signifikante
Unterschiede hin (P<0,05), unterschiedliche GrofBbuchstaben weisen auf hochsignifikante Unterschiede hm (P<0,01), und die gleichen Buchstaben bedeuten keine signifikanten Unterschiede (P>0,05). 4.4 Ergebnisse der antioxidativen Eigenschaften am Tag 5
Aus Tabelle 25 ist es ersichtlich, dass GSH-Px, T-AOC, CAT und SOD in der Gelgruppe am fünften Tag eine steigende Tendenz zeigen und ihre Aktivitäten signifikant höher als die der Stammlösungsgruppe und der Kontrollgruppe (P<0,05) sind; der MDA-Gehalt der Gelgruppe nimmt ab und ist signifikant höher als der der Stammlösungsgruppe und der Kontrollgruppe (P<0,05); die Aktivitäten von GSH-Px,
MDA, SOD, T-AOC und CAT in der Stammlösungsgruppe und der Kontrollgruppe haben keine signifikanten Unterschiede (P>0,05).
Tabelle 25 Bestimmung der antioxidativen Aktivität am Tag 5 “ Gruppe/nde GSH-Px (u/mL) MDA (nmol/mL) SOD (u/mL) T-AOC (ulmL) CAT (mL).
X
“ Kontrollgru 895.0040.25° 3.2240.03° 87.0040.26° 11.7840.32° 10.844£0.23° ppe
Stammlösun 898. 94+0.45P 3.15+0.03P 87.94+0.32P 12.01+0.06° 11.06+0.11P 8sgruppe
Gelgruppe 910.23+0.13* 2.080.043 90.44+0.918 13.050.328 12.57+0.15*
Anmerkung: Daten in derselben Spalte mit unterschiedlichen Kleinbuchstaben weisen auf signifikante
Unterschiede hin (P<0,05), unterschiedliche Großbuchstaben weisen auf hochsignifikante Unterschiede hin (P<0,01), und die gleichen Buchstaben bedeuten keine signifikanten Unterschiede (P>0,05).
Versuchsbeispiel 5 Qualitätsprüfung eines temperaturempfindlichen Melatonin-in-situ-Gels
Die Qualitätsbewertung und Stabilitätsstudie des temperaturempfindlichen Melatonin-in-situ-Gels wird durch die Untersuchung der Indikatoren des temperaturempfindliche Melatonin-in-situ-Gels,
27 BE2023/5564 einschließlich Aussehen und Form, Geliertemperatur, Gelierzeit und Stabilität, durchgeführt, um die
Qualität des Gelmittels zu kontrollieren. 5.1 Morphologische Untersuchung: Vergleich der Erschemungseigenschaften von temperaturempfindlichen Melatonin-Gelen bei Raumtemperatur und 37°C. Die Gelierzeit wird bestimmt, indem 5 ml Gel in eine braune Celineflasche gegeben werden, die Celmeflasche wird in einem Winkel von 60° aufgestellt, in ein Wasserbad mit konstanter Temperatur von 37°C gestellt und nach einer gewissen Zeit herausgenommen, um die Morphologie zu beobachten. Figur 10 zeigt, dass cs sich bei dem Produkt um eine homogene, halbdurchsichtige Gellösung mit einheitlicher Farbe und guter
Fließfähigkeit bei Raumtemperatur und um ein halbfestes Gel im Zustand (37°C) handelt. 5.2 Bestimmung des pH-Werts: Von jeder Charge werden 2 g des Gels in einem Becherglas entnommen und nach der in der chinesischen Veterinärpharmakopöe (Ausgabe 2015) angegebenen Methode zur
Bestimmung des pH-Werts bestimmt. Die Ergebnisse zeigen, dass die pH-Werte im Bereich von 7,0-8,0 liegen, was der Norm entspricht. 5.3 Zentrifugationstest: 5 mL des Gels werden in ein 10-mL-Zentrifugenröhrchen gegeben und 20
Minuten lang bei 4000 U/min zentrifugiert, um den Zustand des Gels zu beobachten. Der
Melatonmgehalt wird durch Hochleistungsflüssigkeitschromatographie bestimmt. Wie in Tabelle 26 dargestellt, werden nach der Zentrifugation keine signifikanten Veränderungen des Wirkstoffgehalts und des Aussehens beobachtet, was darauf hindeutet, dass das zubereitete Gel eme gute physikalische
Stabilität aufweist.
Tabelle 26 Ergebnisse des Zentrifugationstests
Einflussfaktoren Zeit Form Delamination Homogenität Inhalt%
WE durchsichtig 7 homogen 99
Zentrifugation 20min durchsichtig - homogen 99.69 durchsichtig - homogen 99.68 5.4 Hoch- und Tieftemperaturtests: Das in situ-Gel wird in einer braunen Celineflasche bei 40°C für 10
Tage lichtgeschützt gelagert, an den Tagen 5 und 10 werden Proben zur Untersuchung entnommen und die Ergebnisse mit dem Tag 0 verglichen. Es wird bei 4°C für 10 Tage lichtgeschützt gelagert, an den
Tagen 5 und 10 werden Proben zur Untersuchung entnommen und die Ergebnisse mit dem Tag 0 verglichen. Es ist aus Tabelle 27 ersichtlich, dass das temperaturempfindliche Melatonin-Gel bei 45°C gelagert wird, und obwohl sich das Aussehen 1m Wesentlichen nicht verändert, schwankt der Gehalt erheblich, was darauf hindeutet, dass es nicht bei hohen Temperaturen gelagert werden kann. Das temperaturempfindliche Melatonin-Gel zeigt im Wesentlichen keine Veränderung des Aussehens und des Gehalts, wenn es bei niedrigen Temperaturen gelagert wird, was darauf hindeutet, dass eine
Langzeitlagerung bei 4°C möglich ist.
Tabelle 27 Ergebnisse der Tests bei hohen und niedrigen Temperaturen
28 BE2023/5564
Einflussfaktoren Zeit Form Delamination Homogeniät 7
Inhalt %
BO durchsichtig ITO homogen 40°C 5 durchsichtig - homogen 99.01 10 durchsichtig - homogen 98.50 0 durchsichtig - 99.70 homogen 4°C 5 durchsichtig - homogen 99.65 10 durchsichtig - homogen 99.63 5.5 Beschleunigungstest: aus dem Einflussfaktortest ist es ersichtlich, dass Melatonin lichtempfindlich ist, daher sollte darauf geachtet werden, dass während des beschleunigten Tests Licht vermieden wird.
Fünf Chargen werden von In-situ-Gelen hergestellt und in luftdicht verschließbare Celineflaschen abgefüllt. Die temperaturempfindlichen Gele werden bei 20+2°C und lichtgeschützt 3 Monate lang aufbewahrt. Nach den Monaten 1, 2 und 3 werden Proben entnommen, um ihr Aussehen und ihren
Inhalt zu untersuchen. Aus Tabelle 28 ist es ersichtlich, dass sich das Aussehen des temperaturempfindlichen Gels nicht signifikant verändert, als es 3 Monate lang unter beschleunigten
Bedingungen bei 20+2°C gelagert wird, aber der Inhalt nimmt in allen Fällen ab, was darauf hindeutet, dass das Gel nicht für die Lagerung bei Raumtemperatur geeignet ist.
Tabelle 28 Ergebnisse des Beschleunigungstests
Einflussfaktoren Zeit Form Delamination Homogenität 7
Inhalt %
SD durchsichtig ISO homogen 22°C 2 durchsichtig - homogen 99.46 3 durchsichtig - homogen 98.43 5.6 Langzeitstabilitätstest: 10 g temperaturempfindliches Melatonin-in-situ-Gel aus 3 Chargen werden entnommen und in braunen Celineflaschen bei 4+2°C für mehrere Monate gelagert. Am Ende des 0., 3., 6., 9. und 12. Monats werden Proben entnommen, um die Geliertemperatur und den Wirkstoffgehalt im
Vergleich zu den Gelproben vom Tag 0 zu bestimmen. Aus Tabelle 29 ist es ersichtlich, dass es bei 4+2°C keine signifikanten Veränderungen des Aussehens, der Homogenität und des Gehalts des temperaturempfindlichen Gels gibt, was darauf hindeutet, dass das temperaturempfindliche Melatonin-
Gel unter diesen Lagerungsbedingungen eine gute Stabilität aufweist.
Tabelle 29 Ergebnisse der Langzeitstabilitätstests an temperaturempfindlichem Melatonin-in-situ-Gel
Einflussfaktoren Zeit Form Delamination Homogenität 0
Inhalt %
29 BE2023/5564 0 durchsichtig OO homogen 99.70 1 durchsichtig - homogen 99.60 2 durchsichtig - homogen 99.57 3°C 3 durchsichtig - homogen 99.55 6 durchsichtig - homogen 99.41 9 durchsichtig - homogen 99.32 12 durchsichtig - homogen 99.10 5.7 Bestimmung der Gelierfähigkeit in vitro und in vivo: 5.7.1 Die In-vitro-Gelierfähigkeit wird bestimmt, indem eine Menge Methylrot-Farbstoff in eme bestimmte Menge am temperaturempfindlichen Gel emgewogen wird und eine gleiche Menge
Methylrot-Farbstoff in einer quantitativen wasserfreien Ethanollösung gelöst wird. 5 ml von jeder dieser beiden Flüssigkeiten werden in ein bestimmtes Volumen der PBS-Lösung von 37°C und pH 7,4 injiziert, und den Gel- und Stammlösungszustand zu beobachten. 5.7.2 In-vrvo-Gelierungseigenschaften: 1 ml des bei 4°C gelagerten Gels wird in eme 10-ml-Spritze gegeben und unter die Haut des Masthuhns injiziert. 6 Minuten später wird das Masthuhn betäubt und die markierte Stelle geöffnet, um zu beobachten, ob das Gel geliert ist. 5.7.3 Ergebnisse der in-vivo- und m-vitro-Gelierfähigkeitsbestimmung: Die Gellôsung und die wässrige
Lösung gelierten in vitro, wie m Figur 11 dargestellt, nachdem sie mit einer Spritze extrahiert und durch die Nadel in eme PBS-Pufferlösung von 37°C und pH 7,4 gespritzt werden, die linear ist und sich in einer Linie am Boden der Flasche sammelt, was darauf hindeutet, dass das Präparat auch im Tier sofort geliert und sich an der Verabreichungsstelle sammeln und fixieren kann. Außerdem bestätigt dieser
Bewertungsindikator die temperaturempfindlichen Eigenschaften des Präparats. Der Gelierzustand kann unter der Haut des Masthuhnorganismus beobachtet werden. 5.8 Remheitsbestimmung: drei Chargen des temperaturempfindlichen Melatonin-in-sttu-Gels werden hergestellt und die Menge des in den Gelen enthaltenen Wirkstoffs bestimmt. Die Testergebnisse zeigen, dass die erhaltene Menge 99,1%, 98,9% und 99,3% der markierten Menge beträgt. Dies zeigt, dass das mit dem von der vorliegenden Erfindung bereitgestellten Herstellungsverfahren hergestellte temperaturempfindliche Melatonin-in-situ-Gel von hoher Reinheit ist.
Der vorstehende Inhalt ist nur bevorzugte Ausführungsform der vorliegenden Erfindung. Es sollte darauf hingewiesen werden, dass der Durchschnittsfachmann auf dem betroffenen technischen Gebiet mehrere Verbesserungen und Modifikationen durchführen kann, ohne von den technischen Grundsätzen der vorliegenden Erfindung abzuweichen. Die Verbesserungen und Modifikationen sollten als vom
Schutzumfang der vorliegenden Erfindung angesehen werden. Der Schutzbereich der vorliegenden
Erfindung ist jedoch nicht darauf beschränkt, sondern jede gleichwertige Substitution oder Verbesserung usw. gemäß der technischen Lösung der vorliegenden Erfindung und ihres erfinderischen Konzepts, die dem Geist und den Grundsätzen der vorliegenden Erfindung entspricht, fällt in den Schutzbereich der vorliegenden Erfindung.
Claims (8)
1. Temperaturempfindliches Melatonin-1n-sttu-Gel, dadurch gekennzeichnet, dass es aus den Komponenten mit folgenden Gewichtsprozenten besteht: Melatonm 0,05% bis 10% Poloxam 407 21% bis 23% Poloxam 188 1,5% Hydroxypropylmethylcellulose 0,4% bis 0,6% Polyethylenglykol 4000 0,3% bis 0,5% wobei der Rest Wasser für Injektionszwecke ist.
2. Temperaturempfindliches Melatonin-m-situ-Gel nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass es aus den Komponenten mit folgenden Gewichtsprozenten besteht: Melatonin 0,15% Poloxam 407 22% Poloxam 188 1,5% Hydroxypropylmethylcellulose 0,5% Polyethylenglykol 4000 0,4% wobei der Rest Wasser für Injektionszwecke ist.
3. Verfahren zum Herstellen eines temperaturempfindlichen Melatonin-in-situ-Gels nach Anspruch 1 oder 2, dadurch gekennzeichnet, Abwiegen von Poloxam 407, Hinzufügen von Wasser für Injektionszwecke Auflôsen und anschlieBendes Einlegen in einen Kühlschrank bei 4°C über Nacht; Herausnehmen der Poloxam 407-Lösung, Zurückbringen auf Raumtemperatur und anschlieBendes Hinzufügen von Poloxam 188, Polyethylenglykol 4000 und Melatonin nacheinander und Rühren zum Lösen; anschließend Hinzufügen von Hydroxypropylmethylcellulose, Rühren zum Lösen und anschließendes Hinzufügen von Wasser für Injektionszwecke zur Volumeneinstellung und Einlegen in einen Kühlschrank; in 24 Stunden wird die temperaturempfindliche Melatonin-in-situ-Gel-Lösung durch Filtration und Dekontamination hergestellt.
4. Verfahren zum Herstellen eines temperaturempfindlichen Melatonin-in-situ-Gels nach Anspruch 3, dadurch gekennzeichnet, dass die Filtration und Sterilisation durch eine 0,22-um-Filtermembran erfolgen können.
5. Temperaturempfindliches in-sıtu-Gel, dadurch gekennzeichnet, dass es aus den Komponenten mit folgenden Gewichtsprozenten besteht: Poloxam 407 21% bis 23%
31 BE2023/5564 Poloxam 188 1,5% Hydroxypropylmethylcellulose 0,4% bis 0,6% Polyethylenglykol 4000 0,3% bis 0,5% wobei der Rest Wasser für Injektionszwecke ist.
6. Temperaturempfindliches in-sttu-Gel nach Anspruch 5, dadurch gekennzeichnet, dass es aus den Komponenten mit folgenden Gewichtsprozenten besteht: Poloxam 407 22% Poloxam 188 1,5% Hydroxypropylmethylcellulose 0,5% Polyethylenglykol 4000 0,4% wobei der Rest Wasser für Injektionszwecke ist.
7. Verfahren zum Herstellen eines temperaturempfindlichen in-situ-Gels nach Anspruch 5 oder 6, dadurch gekennzeichnet, Abwiegen von Poloxam 407, Hinzufügen von Wasser für Injektionszwecke Auflösen und anschlieBendes Einlegen in einen Kühlschrank bei 4°C über Nacht; Herausnehmen der Poloxam 407-Lôsung, Zurückbringen auf Raumtemperatur und anschliefendes Hinzufügen von Poloxam 188, Polyethylenglykol 4000 und Melatonin nacheinander und Rühren zum Lösen; anschließend Hinzufügen von Hydroxypropylmethylcellulose, Rühren zum Lösen und anschlieBendes Hinzufügen von Wasser für Injektionszwecke zur Volumeneinstellung und Einlegen in einen Kühlschrank; in 24 Stunden wird die temperaturempfindliche in-situ-Gel durch Filtration und Dekontamination hergestellt.
8. Verfahren zum Herstellen eines temperaturempfindlichen m-situ-Gels nach Anspruch 7, dadurch gekennzeichnet, dass die Filtration und Sterilisation durch eme 0,22-um-Filtermembran erfolgen können.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| BE20235564A BE1030308B1 (de) | 2023-07-06 | 2023-07-06 | Temperaturempfindliches in-situ-gel, temperaturempfindliches melatonin-in-situ-gel und verfahren zum herstellung von deren |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| BE20235564A BE1030308B1 (de) | 2023-07-06 | 2023-07-06 | Temperaturempfindliches in-situ-gel, temperaturempfindliches melatonin-in-situ-gel und verfahren zum herstellung von deren |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| BE1030308A1 BE1030308A1 (de) | 2023-09-20 |
| BE1030308B1 true BE1030308B1 (de) | 2025-01-30 |
Family
ID=87137017
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| BE20235564A BE1030308B1 (de) | 2023-07-06 | 2023-07-06 | Temperaturempfindliches in-situ-gel, temperaturempfindliches melatonin-in-situ-gel und verfahren zum herstellung von deren |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| BE (1) | BE1030308B1 (de) |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2019087084A1 (en) * | 2017-11-02 | 2019-05-09 | Eman Biodiscoveries Sd. Bhd. | Extract of orthosiphon stamineus, formulations, and uses thereof |
| CN115252541A (zh) * | 2022-07-26 | 2022-11-01 | 河南省奶牛生产性能测定中心 | 温敏型原位凝胶、褪黑素温敏型原位凝胶及其制备方法 |
-
2023
- 2023-07-06 BE BE20235564A patent/BE1030308B1/de active IP Right Grant
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2019087084A1 (en) * | 2017-11-02 | 2019-05-09 | Eman Biodiscoveries Sd. Bhd. | Extract of orthosiphon stamineus, formulations, and uses thereof |
| CN115252541A (zh) * | 2022-07-26 | 2022-11-01 | 河南省奶牛生产性能测定中心 | 温敏型原位凝胶、褪黑素温敏型原位凝胶及其制备方法 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| GRELA KAMIL P. ET AL: "Poloxamer 407-Based Thermosensitive Emulgel as a Novel Formulation Providing a Controlled Release of Oil-Soluble Pharmaceuticals-Ibuprofen Case Study", MATERIALS, vol. 14, no. 23, 27 November 2021 (2021-11-27), CH, pages 7266, XP093115621, ISSN: 1996-1944, DOI: 10.3390/ma14237266 * |
| LU CHAOCHENG ET AL: "Novel thermosensitive in situ gel based on poloxamer for uterus delivery", EUROPEAN JOURNAL OF PHARMACEUTICAL SCIENCES, vol. 77, 1 September 2015 (2015-09-01), NL, pages 24 - 28, XP093115614, ISSN: 0928-0987, Retrieved from the Internet <URL:https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S1359644615003931/pdfft?md5=941383441aab01ad0d12094b31602ed0&pid=1-s2.0-S1359644615003931-main.pdf> DOI: 10.1016/j.ejps.2015.05.014 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| BE1030308A1 (de) | 2023-09-20 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP3651804B1 (de) | Solubilisat mit curcumin und boswellia und xanthohumol | |
| CH622351A5 (de) | ||
| DE69809434T2 (de) | Immunstimulierendes und metastasehemmendes fermentiertes material aus weizenkeim | |
| EP2976091B1 (de) | Antioxidativ wirksame zusammensetzung und deren verwendung | |
| DE60024240T2 (de) | Vorhersagen ueber von diabetes beeintraechtigte wundheilung | |
| DE69812312T2 (de) | Standardlösung zur bestimmung der thyroidfunktion | |
| US4250051A (en) | Preservative for use in calibrator compositions for blood analysis | |
| Fakir et al. | Formulation and evaluation of antibacterial and anti-inflammatory emulgel containing Eugenia caryophyllus buds extract | |
| BE1030308B1 (de) | Temperaturempfindliches in-situ-gel, temperaturempfindliches melatonin-in-situ-gel und verfahren zum herstellung von deren | |
| DE69321520T2 (de) | Verfahren und Reagenz zur Bestimmung von Fructosamin | |
| EP1021198B1 (de) | Flavonolignan-zubereitungen, insbesondere silymarin-zubereitungen | |
| AT515356B1 (de) | Stabile alkoholische Lösung von Alprostadil | |
| EP1344058B1 (de) | Kit und verfahren zur bestimmung des redox-status im urin | |
| DE69811680T2 (de) | Stabile radioaktive medikamente | |
| WO2019011414A1 (de) | Solubilisat mit curcumin und boswellia | |
| DE3720232C2 (de) | Verfahren zur Herstellung eines Extraktes aus Aloe-Blättern der Pflanzengattung Aloe capensis oder Aloe arborescens | |
| DE69918339T2 (de) | Pharmazeutische zusammensetzungen die selegilin und ginkgo biloba extrakt enthalten zur behandlung von demenz | |
| WO2021000997A1 (de) | Arylalkylamin-, pyrrol-, indol- und opiatderivatkonzentrationsbestimmungsverfahren sowie testkit unter verwendung dieses verfahrens | |
| DE2419310A1 (de) | Technetium-markierte komplexe, verfahren zu deren herstellung und deren anwendung | |
| Mustari et al. | Growth performance, hematological parameters and lipid profile of mice treated with black seed oil and vitamin-E | |
| Wahab et al. | Effects of aqueous extract of Solanum melongena on blood system of wistar rats | |
| Mustari et al. | Md. Kamrul Islam Department of Physiology, Faculty of Veterinary Science, Bangladesh Agricultural University, Mymensingh-2202, Bangladesh* Corresponding author: Dr. Afrina Mustari, Associate Professor, Department of Physiology, Faculty of | |
| Demirbolat et al. | Formulation, stability and analytical method validation of chasteberry (Vitex agnus-castus L.) extract in solid oral dosage forms | |
| DE4023201A1 (de) | Mittel zur vorbeugung und behandlung der undurchsichtigkeit von linsen | |
| Duan et al. | Biotransformation of Cynomorium flavan‐3‐ols in dairy sheep and their effects on inflammation and liver growth retardation |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| FG | Patent granted |
Effective date: 20250130 |