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" Procédé permettant d'obtenir à la fois des préparations de ferment et d'hormone hypogly- cemiante à partir du pancréas ".
Les pancréas des animaux des abattoirs constituent une matière première précieuse et recherchée car, d'une part, ils sont une source d'hormone hypoglycémiante ('insuline ), d'autre part, ils peuvent servir à l'obtention de préparations de fer- ments qui renferment, notamment, de la trypsine et'de l'amylase et qui sont utilisables tant à des fins pharmaceutiques qu'à diverses autres fins industrielles.
Jusqu'à présent, on n'avait pas réussi à retirer en même temps des glandes les deux groupes de corps actifs.'Bien'plus, *le mode opératoire généralement en usage pour la préparation le l'hormone hypoglycémiante repose, sur le fait que, par l'em- ploi d'alcool acide comme solvant, on écarte les ferments et les détruit.
La présente invention a pour objet un procédé qui permet l'obtenir l'hormone hypoglycémiante avec un rendement satisfai- -sant sans que les ferments du pancréas soient détruits, de sor- te qu'à partir des résidus d'extraction provenant de la fabri- cation de l'hormone, on peut' obtenir des préparations de fer- ments utilisables.
La particularité essentielle du procédé consiste en ce que, pour retirer l'hormone hypoglycémiante des glandes, on soumet celles-ci à un extraction avec des solvants organiques aqueux, par exemple de l'alcool ou de l'acétone, en opérant avec une réaction alcaline, de préférence à un VU--de 8 à 8,5 environ. On acidule l'extrait après sa séparation puis on en poursuit le traitement de la manière usuelle pour aboutir à l'hormone hypoglycémiante... '
Pour régler la réaction du milieu à -l'alcalinité, on peut utiliser aussi bien des bases organiques que des bases minérales, par exemple des lessives d'alcalis, 'des carbonates alcalins, de l'ammoniaque ou des amines organiques.
On transforme les résidus de glandes, après l'extraction, en préparations de fermenta, par exemple par séchage ménagé et l'on obtient ainsi des préparations faisant preuve de la même activité, du point de vue des ferments, que'' les préparations fabriquées directement à partir de glandes non traitées.
Ces préparations contenant les ferments offrent l'inoon- vónient de n'être solubles dans l'eau que jusqu'à un certain - point. Or, pour beaucoup de destinations, les branches les plus
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diverses' de l'industrie réolanent des préparations de fervents qui, .outre une forte teneur en 8nZ:/71'-,3, :os3èd':;J.1t une très
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bonne solubilité dans l'eau.
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La société Ter;r.rtd'-r.cssf a trouvé que l'on pouvait aboubir à des préparations satisfaisant à ces exigences n ïl Hounebtant les résidus pancréatiques recueillis C;( la naniere décrite c,- dessus à uns extraction au moyen de solutions sr;1:in.=;s, Une cir- constance d'importance spéciale est CJ.1.;; les résidus peuvent être directement utilisés encore hnrddes d'alcool srns la né- cessité d'un séchage préalable. Avant l'extraction, il y a in- térêt à entreposer un certain tenps é. basse ta:::p4r#..1:ui,e les résidus glandulaires hunectés dt=lco1 car f'rénU8ï1LC nt on con- state ensuite une augmentation de la teneur ('11 .i':':::J"l\.:nts.
On a déjà soumis des pancréas une extraction par des solutions alcooliques ds bicarbonate de sodiun 2.t cela simple- ment pour l'obtention de l'hornone hypoglyc filante. Dans les
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conditions indiquées par la littérature, on n'atteignait toute-
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'fois qu'un DR de 7,5 environ. Le rendement obtenu dans le xiJd,e opératoire décrit dans la littérature est extrencnent faible
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par rapport au rendement du procédé d'extraction avec agents
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acides ( tiill et Howitt, "Izlsulïntt, 19a'3, page 02, dans le bas) de sorte que cette proposition nt a eu aucune importance pra-
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tique.
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!Ti#lPL1 1 : On broie finenent 2 LG de pancréas de porc congelés et on les agite avec 3 litres G'alcool il S3 % et 2 li- tres d'aloool à 70 ;'S. On ajoute de Lf;Irr¯oYi^cyuc, conc-ntréû jus- qu'à réaction nette au cur cwia ( 2!I d'environ i îo à 3,5 ) Cil, tout en refroidissant avec de la t¯.C,C , on tlgi te ;1l,tlilt une heure en maintenant la valeur du DI: par addition î' t a':'%,071i' CuC.
On soumet le. tout à une centrifugation E on extrait t nouveau le résidu avec 5 litres d'picool à 7C r; en réglant li px é iinc valeur de 8 8. 8,5 conne. préC'Óc1,.';J'1J,211t. ,',j;, acidulé cii.: cvi; des e:;- traits avec de l'aeich sulfuri<]l1c, on les centrifuge jusqu'à limpidité et, après plusieurs heures c- wos, on poursuit le traitement de la r:aniàrc: usuelle jusqu'' 1'? Dt:";.<.ti?r de l'in- suline. L'insuline brute renferme ¯ç,1<1<. de 20C.C L:.nit'<. par kg.
On sèche avec de l'acétone et de 1r':-;;h.'r L:;,; résidus gl"rdulai- res provenant do 1'<.,iitra ctl.nr<, La J"')1.1Cl:r:- sèche ainsi oJl;''''I1](, accuse les nêmes valeurs en trypsine e'. c,x:'lc.se ou' 11-' prépa- ration sèche produite directement %2. ):'1'ti:n c.- >1 ...-T.t. à3ard.<>x .
EXE.'7"LE 2 : CO("E c1llîf) :5 1. ' a x i- i ; , < 1.. : ', on broie 3 :\:3 ell' pan- créas de porcs congèle et on les 0,,-,1-1;, 'v'c c :1.: 1¯r c, l s, 7.. :.r addition d'une solution concentré': de carbone t,: <1= sodium, Jn règle le pH à environ ?,5; on poursuit 1.= tr"te-c'it eo5,;.'c, dans l'exemple 1. On obtient plus de :J.30J i1?:L i, .'.:; par kilo d'insuline brute, rendant un court laps de t(.;'l\S, "11 agit?, deux fois avec de l'éther les résidus glandulaires provenant dr l'extraction, à chaque fois on presse 6ncrgic,Luon.'nt puis on sèche .'. basse
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température dans un vide poussé.
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'EXETLE 3 : .Jn coupe en tranchas de 2 a C ix c'épaisseur 2 kg de pancréas de boeufs congelés et on. ajoute de l'alcool comme dans l'exemple 1. On poursuit 1<- traitèrent corne dans l'exemple 2. On obtient plus de. 30u0 unités par kilo d'insulinc- purifi3e. On transforme la r Jsidu de ltF:=:trï;e Liorl en une prépa-
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ration sèche de ferments.
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EXEf:'J!LT 4 : On broie le plus fine'-'ert possible a 1; de pancréas de boeufs congelés, on les introduit dans. un nà181ngc de 4 litres d'alcool, 9u0 cm3 d'eau et t 50 c:ra3 d'ammoniaque concentrée et, tout en refroidissant avec de la glace, on agite énergiquement, le pi étant du nieux poesible maintenu 2. environ
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8,9. Au bout d'une heure, on ajoute 1,2 litres d'alcool puis au bout d'une demi-heure, on centrifuge.
On acidulé la solution olaire avec de l'acide sulfurique, on la centrifuge jusqu'à limpidité puis on la concentre dans le vide. -
Pendant une heure et demie, tout en refroidissant avec de la glace, on agite les résidus de centrifugation avec 3,2 litres d'eau + 3 litres d'alcool, en maintenant le pH à envi- ron 8,9 par addition d'ammoniaque. on ajoute ensuite 2,8 litres d'alcool, on agite pendant une demi-heure et on centrifuge. On poursuit le traitement de .l'extrait comme précédemment.
Ayant chassé l'alcool par distillation, on retire l'insu- line de la manière usuelle, du produit concentré restant. On obtient environ 2000 unités par kilo d'hormone cristallisée.
On agite à deux reprises avec de l'éther les résidus pan- créatiques provenant de l'extraction et on les presse. Après séchage dans le vide, on obtient une préparation sèche qui ren- ferme la totalité de la trypsine figurant dans la matière pre- mière,
EXEMPLE 5: On prend 108 g de résidus de pancréas de boeufs humectes d'alcool et préparés conformément aux exemples 1 à 4, ce qui correspond à 200 g de pancréas frais à 1806 unités de trypsine ;
on les extrait pendant 48 heures à la température du local avec 600 cm3 d'une solution de sulfate d'ammonium à
20 %, tout en agitant. Qn enlève les corps insolubles par cen- trifugation et on provoque la précipitation de la solution sa- line aqueuse contenant les ferments avec .la quantité décuple d'acétone, On lave le précipité avec de l'acétone et de l'éther et on sèche dans l'exsiecateur à vide sur du chlorure de cal- cium. On obtient ainsi 122,3 g d'une masse blanche pulvérulente contenant 1745 unités de trypsine soit 96,5 % de la quantité mise en oeuvre.
EXEMPLE 6 : On conserve pendant 14 jours dans une chambre frigorifique108 g de résidus de pancréas de boeufshumides d'al- cool et préparés conformément aux exemples 1 à 4, ces résidus , correspondant à 200 g de pancréas frais et contenant 2170 uni- tés de trypsine, et finalement onextrait, tout en agitant, avec 600 cm3 d'une solution de sulfate de sodium à 13 % pendant
48 heures à la température du local. Après élimination, par . centrifugation, des corps restés insolubles, on concentre à en- viron 150 cm3 la solution saline des ferments, en opérant dans le vide à 40 au maximum et on précipite la solution'restante avec levolume décuple d'acétone.
On lave le précipité avec de l'acétone et de l'éther et on le sèche dans un exsiocateur sur du chlorure de calcium. On obtient ainsi 94,3 g'd'une poudre semblable à de la farine et contenant 2020 unités de trypsine, soit 93 % de la quantité miseen oeuvre.
EXEMPLE 7: On prend 108 g de résidus'de pancréas de boeufs humides d'alcool et préparés conformément aux exemples 1 à 4, ces résidus correspondant à 200 g de pancréas frais à 2170 uni- tés de trypsine et on les agite pendant 48'heures à la tempéra- ture du local avec 600 cm3 d'une' solution qui, contient 8 % de sulfate de sodium et 5 % de sulfate d'ammonium. Par'oentrifu- gation, on enlève les fractions non dissoutes et on 'évapore à siccité la solution saline de ferments dans le vide à 40 au maximum. en obtient 87,5 g d'une poudre blanc jaunâtre conte- nant 2080 unités dd trypsine, c'est-à-dire 95,7 % de la quanti- té mise en oeuvre.
EXEMPLE 8 : On extrait pendant 48 heures, tout en agitant, à la température du local, avec une solution de sulfate de so- diumf à 13 %, 108 g de résidus de pancréas de boeufs, humides
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d'alcool et préparés conformément aux exemples 1 à 4, ces ré- sidus correspondant à 200 g de paneras frais à 1690 @nités de trypsine. Après séparation des corps insolubles, on trans- forme la solution enzymatique saline en préparation sèche en effectuant le séchage par pulvérisation. On obtient 83,5 g d' une substance blanc jaunâtre contenant 1625 unités do trypsine, soit 96 % de la quantité mise en oeuvre.
Dans la mesure où ils seraient destinés à servir de remè- des, les produits décrits dans le préssent mémoire ne font pas partie de l'invention.
R E S U @ E.
Ltinvention comprend notamment :
1.)Un procédé permettant d'obtenir, à partir de pancréas, à la fois des préparations de ferments et l'hormone hypoglyoé- miante, procédé dans lequel on sourcet les glandes à une extrac- tion avec des solvants organiques aqueux, en maintenant une ré- action alcaline, pour récupérer ladite hormone et on transforme les résidus d'extraction en préparations de ferments.
2.)Des modes d'exécution du procédé spécifié sous 1), pré- sentant les particularités suivantes prises séparément ou en combinaison : a) on soumet les résidus d'extraction à une extraction avec des solutions salines et on transforme en préparations sè- ohes de ferments les solutions salines ayant retenu les ferments. b) Avant l'extraction par les solutions salines, on entre- pose à basse température les résidus de l'extraction par les solvants organiques aqueux.
**ATTENTION** fin du champ DESC peut contenir debut de CLMS **.
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"Method for obtaining both ferment and hypoglycemic hormone preparations from the pancreas".
The pancreas of slaughterhouse animals constitute a valuable and sought-after raw material because, on the one hand, they are a source of hypoglycaemic hormone ('insulin), on the other hand, they can be used to obtain iron preparations. Elements which contain, in particular, trypsin and'de amylase and which are usable both for pharmaceutical purposes and various other industrial purposes.
Until now, it had not been possible to remove both groups of active bodies from the glands at the same time. 'Well' more, * the procedure generally in use for the preparation of hypoglycaemic hormone is based on the fact that, by employing acid alcohol as a solvent, the ferments are removed and destroyed.
The present invention relates to a process which makes it possible to obtain the hypoglycaemic hormone with a satisfactory yield without the enzymes of the pancreas being destroyed, so that only from the extraction residues originating from the production. - cation of the hormone, suitable ferment preparations can be obtained.
The essential peculiarity of the process consists in that, in order to remove the hypoglycaemic hormone from the glands, they are subjected to extraction with aqueous organic solvents, for example alcohol or acetone, operating with a reaction alkaline, preferably UV - about 8 to 8.5. The extract is acidified after its separation and then its treatment is continued in the usual way to end up with the hypoglycemic hormone ... '
To control the reaction of the medium to alkalinity, it is possible to use both organic and inorganic bases, for example alkali lyes, alkali carbonates, ammonia or organic amines.
The gland residues, after extraction, are transformed into fermenta preparations, for example by careful drying, and thus obtain preparations which demonstrate the same activity, from the point of view of the ferments, as '' the preparations manufactured directly from untreated glands.
These preparations containing the ferments offer the inconvenience of being soluble in water only up to a certain point. However, for many destinations, the most
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various' of the industry reolan preparations of enthusiasts which,. in addition to a high content of 8nZ: / 71 '-, 3,: os3èd':; J.1t a very
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good solubility in water.
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The company Ter; r.rtd'-r.cssf has found that it is possible to achieve preparations satisfying these requirements n ïl Hounebtant the pancreatic residues collected C; (the naniere described c, - above with an extraction by means of solutions sr; 1: in. =; s, A circumstance of special importance is CJ.1. ;; the residues can be used directly still hnrddes of alcohol without the necessity of a preliminary drying. 'extraction, there is an interest in storing a certain time at low ta ::: p4r # .. 1: ui, e the glandular residues hunected dt = lco1 because f'rénU8ï1LC nt then an increase in the content ('11 .i ':' ::: J "l \ .: nts.
Extraction with alcoholic sodium bicarbonate solutions from the pancreas has already been carried out simply to obtain the hypoglyc shooting hornone. In the
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conditions indicated by the literature, not all
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'times a DR of about 7.5. The yield obtained in the operational xiJd, e described in the literature is extremely low
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compared to the yield of the extraction process with agents
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acids (tiill and Howitt, "Izlsulïntt, 19a'3, page 02, bottom) so that this proposition was of no practical importance.
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tick.
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! Ti # lPL1 1: 2 LG frozen pork pancreas are finely ground and stirred with 3 liters of S3% alcohol and 2 liters of 70% alcohol. Add Lf; Irr¯oYi ^ cyuc, conc-ntréû until a clear reaction to the heart cwia (2! I of about 10 to 3.5) Cil, while cooling with t¯.C , C, one tlgi te; 1l, tlilt one hour while maintaining the value of the DI: by addition î 't a': '%, 071i' CuC.
We submit it. while centrifuging E the residue is extracted again with 5 liters of picool at 7C r; by setting li px é iinc value of 8 8. 8.5 conne. preC'Óc1,. '; J'1J, 211t. , ', j ;, tangy cii .: cvi; of e:; - treated with aeich sulfuri <] l1c, they are centrifuged until clear and, after several hours c- wos, the treatment of the usual r: aniàrc: is continued until '' 1 '? Dt: ";. <. Ti? R of insulin. Crude insulin contains ¯ç, 1 <1 <. Of 20C.C L: .nit '<. Per kg.
It is dried with acetone and 1r ': - ;; h.'r L:;,; gl "regular residues coming from 1 '<., iitra ctl.nr <, La J"') 1.1Cl: r: - thus dry oJl; '' '' I1] (, accuses the same trypsin values e ' . c, x: 'lc.se or' 11- 'directly produced dry preparation% 2.):' 1'ti: n c.-> 1 ...- Tt at3ard. <> x.
EXE.'7 "LE 2: CO (" E c1llîf): 5 1. 'a x i- i; , <1 ..: ', we grind 3: \: 3 ell' pork pancreas freezes and we 0 ,, -, 1-1 ;, 'v'c c: 1 .: 1¯rc, ls , 7 ..: .r addition of a concentrated solution ': of carbon t: <1 = sodium, Jn adjusts the pH to about?, 5; we continue 1. = tr "te-c'it eo5,;. 'c, in example 1. We obtain more than: J.30J i1?: L i,.'.:; per kilo of raw insulin , making a short time of t (.; l \ S, "11 stirred twice with ether the glandular residues from the extraction, each time 6ncrgic, Luon.nt is pressed and then dried. . '. low
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temperature in high vacuum.
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'EXETLE 3: .Jn cut into slices of 2 to C ix c'thick 2 kg of frozen beef pancreas and one. add alcohol as in Example 1. We continue 1 <- treated horn in Example 2. We get more. 30u0 units per kilo of purified insulin. We transform the r Jsidu of ltF: =: trï; e Liorl into a preparation
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dry ration of ferments.
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EXEf: 'J! LT 4: We grind as finely as possible' - 'ert possible at 1; of frozen beef pancreas, we put them in. a nà181ngc of 4 liters of alcohol, 9u0 cm3 of water and t 50 c: ra3 of concentrated ammonia and, while cooling with ice, vigorously stirred, the pi being poesible nieux maintained about 2.
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8.9. After one hour, 1.2 liters of alcohol are added and then after half an hour, centrifugation is carried out.
The olar solution is acidulated with sulfuric acid, centrifuged until clear and then concentrated in vacuo. -
For an hour and a half, while cooling with ice, the centrifugation residues are stirred with 3.2 liters of water + 3 liters of alcohol, maintaining the pH at about 8.9 by addition of. ammonia. 2.8 liters of alcohol are then added, stirred for half an hour and centrifuged. Processing of the extract is continued as before.
Having removed the alcohol by distillation, the insulin is removed in the usual manner from the remaining concentrate. About 2000 units are obtained per kilogram of crystallized hormone.
The pancreatic residues from the extraction were stirred twice with ether and pressed. After drying in a vacuum, a dry preparation is obtained which contains all of the trypsin contained in the raw material,
EXAMPLE 5 108 g of beef pancreas residues moistened with alcohol and prepared according to Examples 1 to 4 are taken, which corresponds to 200 g of fresh pancreas at 1806 units of trypsin;
they are extracted for 48 hours at room temperature with 600 cm3 of an ammonium sulfate solution at
20%, while shaking. The insoluble bodies are removed by centrifugation and the aqueous saline solution containing the ferments is precipitated with the tenfold amount of acetone. The precipitate is washed with acetone and ether and dried. in the vacuum exchanger on calcium chloride. 122.3 g of a pulverulent white mass is thus obtained containing 1745 units of trypsin, ie 96.5% of the amount used.
EXAMPLE 6 108 g of alcohol-moist beef pancreas residues prepared in accordance with Examples 1 to 4 are stored for 14 days in a refrigeration chamber, these residues corresponding to 200 g of fresh pancreas and containing 2170 units of trypsin, and finally onextracted, while stirring, with 600 cm3 of 13% sodium sulfate solution for
48 hours at room temperature. After elimination, par. After centrifugation, of the bodies which have remained insoluble, the saline solution of the ferments is concentrated to about 150 cm3, operating in a vacuum at a maximum of 40, and the remaining solution is precipitated with the tenfold volume of acetone.
The precipitate is washed with acetone and ether and dried in an exsiocator over calcium chloride. 94.3 g of a powder similar to flour and containing 2020 units of trypsin are thus obtained, ie 93% of the amount used.
EXAMPLE 7: 108 g of alcoholic wet beef pancreas residues and prepared according to Examples 1 to 4 are taken, these residues corresponding to 200 g of fresh pancreas at 2170 units of trypsin and stirred for 48 minutes. hours at room temperature with 600 cm3 of a solution which contains 8% sodium sulfate and 5% ammonium sulfate. By centrifugation, the undissolved fractions are removed and the saline ferment solution is evaporated to dryness in a vacuum at 40 or less. 87.5 g of a yellowish-white powder containing 2080 units of trypsin, that is to say 95.7% of the amount used, are obtained.
EXAMPLE 8 108 g of wet beef pancreas residues are extracted for 48 hours while stirring at room temperature with a 13% solution of sodium sulfate.
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of alcohol and prepared in accordance with Examples 1 to 4, these residues corresponding to 200 g of fresh paneras at 1690 units of trypsin. After separation of the insolubles, the enzymatic saline solution is converted into a dry preparation by carrying out spray drying. 83.5 g of a yellowish-white substance are obtained containing 1625 units of trypsin, ie 96% of the amount used.
Insofar as they would be intended to serve as a remedy, the products described in this specification do not form part of the invention.
R E S U @ E.
The invention comprises in particular:
1.) A process for obtaining, from the pancreas, both ferment preparations and hypoglycaemic hormone, a process in which the glands are sourced for extraction with aqueous organic solvents, while maintaining an alkaline reaction, to recover said hormone and the extraction residues are transformed into ferment preparations.
2.) Methods of carrying out the process specified under 1), having the following peculiarities taken separately or in combination: a) the extraction residues are subjected to extraction with saline solutions and converted into solid preparations. ohes of ferments the saline solutions having retained the ferments. b) Before the extraction with saline solutions, the residues of the extraction with aqueous organic solvents are stored at low temperature.
** ATTENTION ** end of DESC field can contain start of CLMS **.