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" Procédé permettant d'obtenir à la fois des préparations de ferment et d'hormone hypogly- cemiante à partir du pancréas ".
Les pancréas des animaux des abattoirs constituent une matière première précieuse et recherchée car, d'une part, ils sont une source d'hormone hypoglycémiante ('insuline ), d'autre part, ils peuvent servir à l'obtention de préparations de fer- ments qui renferment, notamment, de la trypsine et'de l'amylase et qui sont utilisables tant à des fins pharmaceutiques qu'à diverses autres fins industrielles.
Jusqu'à présent, on n'avait pas réussi à retirer en même temps des glandes les deux groupes de corps actifs.'Bien'plus, *le mode opératoire généralement en usage pour la préparation le l'hormone hypoglycémiante repose, sur le fait que, par l'em- ploi d'alcool acide comme solvant, on écarte les ferments et les détruit.
La présente invention a pour objet un procédé qui permet l'obtenir l'hormone hypoglycémiante avec un rendement satisfai- -sant sans que les ferments du pancréas soient détruits, de sor- te qu'à partir des résidus d'extraction provenant de la fabri- cation de l'hormone, on peut' obtenir des préparations de fer- ments utilisables.
La particularité essentielle du procédé consiste en ce que, pour retirer l'hormone hypoglycémiante des glandes, on soumet celles-ci à un extraction avec des solvants organiques aqueux, par exemple de l'alcool ou de l'acétone, en opérant avec une réaction alcaline, de préférence à un VU--de 8 à 8,5 environ. On acidule l'extrait après sa séparation puis on en poursuit le traitement de la manière usuelle pour aboutir à l'hormone hypoglycémiante... '
Pour régler la réaction du milieu à -l'alcalinité, on peut utiliser aussi bien des bases organiques que des bases minérales, par exemple des lessives d'alcalis, 'des carbonates alcalins, de l'ammoniaque ou des amines organiques.
On transforme les résidus de glandes, après l'extraction, en préparations de fermenta, par exemple par séchage ménagé et l'on obtient ainsi des préparations faisant preuve de la même activité, du point de vue des ferments, que'' les préparations fabriquées directement à partir de glandes non traitées.
Ces préparations contenant les ferments offrent l'inoon- vónient de n'être solubles dans l'eau que jusqu'à un certain - point. Or, pour beaucoup de destinations, les branches les plus
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diverses' de l'industrie réolanent des préparations de fervents qui, .outre une forte teneur en 8nZ:/71'-,3, :os3èd':;J.1t une très
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bonne solubilité dans l'eau.
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La société Ter;r.rtd'-r.cssf a trouvé que l'on pouvait aboubir à des préparations satisfaisant à ces exigences n ïl Hounebtant les résidus pancréatiques recueillis C;( la naniere décrite c,- dessus à uns extraction au moyen de solutions sr;1:in.=;s, Une cir- constance d'importance spéciale est CJ.1.;; les résidus peuvent être directement utilisés encore hnrddes d'alcool srns la né- cessité d'un séchage préalable. Avant l'extraction, il y a in- térêt à entreposer un certain tenps é. basse ta:::p4r#..1:ui,e les résidus glandulaires hunectés dt=lco1 car f'rénU8ï1LC nt on con- state ensuite une augmentation de la teneur ('11 .i':':::J"l\.:nts.
On a déjà soumis des pancréas une extraction par des solutions alcooliques ds bicarbonate de sodiun 2.t cela simple- ment pour l'obtention de l'hornone hypoglyc filante. Dans les
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conditions indiquées par la littérature, on n'atteignait toute-
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'fois qu'un DR de 7,5 environ. Le rendement obtenu dans le xiJd,e opératoire décrit dans la littérature est extrencnent faible
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par rapport au rendement du procédé d'extraction avec agents
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acides ( tiill et Howitt, "Izlsulïntt, 19a'3, page 02, dans le bas) de sorte que cette proposition nt a eu aucune importance pra-
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tique.
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!Ti#lPL1 1 : On broie finenent 2 LG de pancréas de porc congelés et on les agite avec 3 litres G'alcool il S3 % et 2 li- tres d'aloool à 70 ;'S. On ajoute de Lf;Irr¯oYi^cyuc, conc-ntréû jus- qu'à réaction nette au cur cwia ( 2!I d'environ i îo à 3,5 ) Cil, tout en refroidissant avec de la t¯.C,C , on tlgi te ;1l,tlilt une heure en maintenant la valeur du DI: par addition î' t a':'%,071i' CuC.
On soumet le. tout à une centrifugation E on extrait t nouveau le résidu avec 5 litres d'picool à 7C r; en réglant li px é iinc valeur de 8 8. 8,5 conne. préC'Óc1,.';J'1J,211t. ,',j;, acidulé cii.: cvi; des e:;- traits avec de l'aeich sulfuri<]l1c, on les centrifuge jusqu'à limpidité et, après plusieurs heures c- wos, on poursuit le traitement de la r:aniàrc: usuelle jusqu'' 1'? Dt:";.<.ti?r de l'in- suline. L'insuline brute renferme ¯ç,1<1<. de 20C.C L:.nit'<. par kg.
On sèche avec de l'acétone et de 1r':-;;h.'r L:;,; résidus gl"rdulai- res provenant do 1'<.,iitra ctl.nr<, La J"')1.1Cl:r:- sèche ainsi oJl;''''I1](, accuse les nêmes valeurs en trypsine e'. c,x:'lc.se ou' 11-' prépa- ration sèche produite directement %2. ):'1'ti:n c.- >1 ...-T.t. à3ard.<>x .
EXE.'7"LE 2 : CO("E c1llîf) :5 1. ' a x i- i ; , < 1.. : ', on broie 3 :\:3 ell' pan- créas de porcs congèle et on les 0,,-,1-1;, 'v'c c :1.: 1¯r c, l s, 7.. :.r addition d'une solution concentré': de carbone t,: <1= sodium, Jn règle le pH à environ ?,5; on poursuit 1.= tr"te-c'it eo5,;.'c, dans l'exemple 1. On obtient plus de :J.30J i1?:L i, .'.:; par kilo d'insuline brute, rendant un court laps de t(.;'l\S, "11 agit?, deux fois avec de l'éther les résidus glandulaires provenant dr l'extraction, à chaque fois on presse 6ncrgic,Luon.'nt puis on sèche .'. basse
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température dans un vide poussé.
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'EXETLE 3 : .Jn coupe en tranchas de 2 a C ix c'épaisseur 2 kg de pancréas de boeufs congelés et on. ajoute de l'alcool comme dans l'exemple 1. On poursuit 1<- traitèrent corne dans l'exemple 2. On obtient plus de. 30u0 unités par kilo d'insulinc- purifi3e. On transforme la r Jsidu de ltF:=:trï;e Liorl en une prépa-
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ration sèche de ferments.
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EXEf:'J!LT 4 : On broie le plus fine'-'ert possible a 1; de pancréas de boeufs congelés, on les introduit dans. un nà181ngc de 4 litres d'alcool, 9u0 cm3 d'eau et t 50 c:ra3 d'ammoniaque concentrée et, tout en refroidissant avec de la glace, on agite énergiquement, le pi étant du nieux poesible maintenu 2. environ
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8,9. Au bout d'une heure, on ajoute 1,2 litres d'alcool puis au bout d'une demi-heure, on centrifuge.
On acidulé la solution olaire avec de l'acide sulfurique, on la centrifuge jusqu'à limpidité puis on la concentre dans le vide. -
Pendant une heure et demie, tout en refroidissant avec de la glace, on agite les résidus de centrifugation avec 3,2 litres d'eau + 3 litres d'alcool, en maintenant le pH à envi- ron 8,9 par addition d'ammoniaque. on ajoute ensuite 2,8 litres d'alcool, on agite pendant une demi-heure et on centrifuge. On poursuit le traitement de .l'extrait comme précédemment.
Ayant chassé l'alcool par distillation, on retire l'insu- line de la manière usuelle, du produit concentré restant. On obtient environ 2000 unités par kilo d'hormone cristallisée.
On agite à deux reprises avec de l'éther les résidus pan- créatiques provenant de l'extraction et on les presse. Après séchage dans le vide, on obtient une préparation sèche qui ren- ferme la totalité de la trypsine figurant dans la matière pre- mière,
EXEMPLE 5: On prend 108 g de résidus de pancréas de boeufs humectes d'alcool et préparés conformément aux exemples 1 à 4, ce qui correspond à 200 g de pancréas frais à 1806 unités de trypsine ;
on les extrait pendant 48 heures à la température du local avec 600 cm3 d'une solution de sulfate d'ammonium à
20 %, tout en agitant. Qn enlève les corps insolubles par cen- trifugation et on provoque la précipitation de la solution sa- line aqueuse contenant les ferments avec .la quantité décuple d'acétone, On lave le précipité avec de l'acétone et de l'éther et on sèche dans l'exsiecateur à vide sur du chlorure de cal- cium. On obtient ainsi 122,3 g d'une masse blanche pulvérulente contenant 1745 unités de trypsine soit 96,5 % de la quantité mise en oeuvre.
EXEMPLE 6 : On conserve pendant 14 jours dans une chambre frigorifique108 g de résidus de pancréas de boeufshumides d'al- cool et préparés conformément aux exemples 1 à 4, ces résidus , correspondant à 200 g de pancréas frais et contenant 2170 uni- tés de trypsine, et finalement onextrait, tout en agitant, avec 600 cm3 d'une solution de sulfate de sodium à 13 % pendant
48 heures à la température du local. Après élimination, par . centrifugation, des corps restés insolubles, on concentre à en- viron 150 cm3 la solution saline des ferments, en opérant dans le vide à 40 au maximum et on précipite la solution'restante avec levolume décuple d'acétone.
On lave le précipité avec de l'acétone et de l'éther et on le sèche dans un exsiocateur sur du chlorure de calcium. On obtient ainsi 94,3 g'd'une poudre semblable à de la farine et contenant 2020 unités de trypsine, soit 93 % de la quantité miseen oeuvre.
EXEMPLE 7: On prend 108 g de résidus'de pancréas de boeufs humides d'alcool et préparés conformément aux exemples 1 à 4, ces résidus correspondant à 200 g de pancréas frais à 2170 uni- tés de trypsine et on les agite pendant 48'heures à la tempéra- ture du local avec 600 cm3 d'une' solution qui, contient 8 % de sulfate de sodium et 5 % de sulfate d'ammonium. Par'oentrifu- gation, on enlève les fractions non dissoutes et on 'évapore à siccité la solution saline de ferments dans le vide à 40 au maximum. en obtient 87,5 g d'une poudre blanc jaunâtre conte- nant 2080 unités dd trypsine, c'est-à-dire 95,7 % de la quanti- té mise en oeuvre.
EXEMPLE 8 : On extrait pendant 48 heures, tout en agitant, à la température du local, avec une solution de sulfate de so- diumf à 13 %, 108 g de résidus de pancréas de boeufs, humides
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d'alcool et préparés conformément aux exemples 1 à 4, ces ré- sidus correspondant à 200 g de paneras frais à 1690 @nités de trypsine. Après séparation des corps insolubles, on trans- forme la solution enzymatique saline en préparation sèche en effectuant le séchage par pulvérisation. On obtient 83,5 g d' une substance blanc jaunâtre contenant 1625 unités do trypsine, soit 96 % de la quantité mise en oeuvre.
Dans la mesure où ils seraient destinés à servir de remè- des, les produits décrits dans le préssent mémoire ne font pas partie de l'invention.
R E S U @ E.
Ltinvention comprend notamment :
1.)Un procédé permettant d'obtenir, à partir de pancréas, à la fois des préparations de ferments et l'hormone hypoglyoé- miante, procédé dans lequel on sourcet les glandes à une extrac- tion avec des solvants organiques aqueux, en maintenant une ré- action alcaline, pour récupérer ladite hormone et on transforme les résidus d'extraction en préparations de ferments.
2.)Des modes d'exécution du procédé spécifié sous 1), pré- sentant les particularités suivantes prises séparément ou en combinaison : a) on soumet les résidus d'extraction à une extraction avec des solutions salines et on transforme en préparations sè- ohes de ferments les solutions salines ayant retenu les ferments. b) Avant l'extraction par les solutions salines, on entre- pose à basse température les résidus de l'extraction par les solvants organiques aqueux.
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