BE474785A - - Google Patents

Description

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  Nouveau procédé de fabrication de la lactoflavine. 



   Le fait que le champignon Eremothecium   ashbyii,   quand il est cultivé dans certains milieux nutritifs, produit de la lacto- flavine, est connu. La lactoflavine, synthétisée en quantité relativement élevée par ces cultures, peut être isolée par des opérations chimiques comparativement simples (voyez Ao Guilliermond, Revue de mycologie, nouvelle série, tome 1, [1936] page 115). 



   En général, les champignons sont cultivés en forme de couche à la surface du milieu nutritif non agité, ou ils sont dis- 

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 persés à travers le milieu nutritif au moyen d'un agitateur mécanique, qui peut être de nature à dispenser de la nécessité d'aérer le milieu de culture au moyen d'un dispositif spécialo Cette dernière méthode de culture, qui est généralement pré- férée dans des opérations de grande envergure, est connue en soi et elle est désignée par procédé de fermentation par im- mersion (voyez D.R.P.   129,164   et   Prescott   et Dunn, Industrial Microbiology, 1940, p.380 etc.).

   Le champignon   Eremothecium   ashbyii ne fait pas exception à. la règle générale établie ci- dessus, en ce au'il peut être cultivé ou en milieu non agité, ou en culture immergée. 



   Le milieu nutritif, généralement sous forme de bouillie, approvisionne le champignon en carbone, en azote et en cer- tains sels inorganiques nécessaires à sa croissance.   Evidemment,   bien qu'une croissance satisfaisante puisse être réalisée en cultivant le champignon dans différents milieux, le produit ob- tenu n'est pas toujours le même pour chaque milieu nutritif utilisé. C'est pourquoi il est nécessaire, pour qu'un tel procédé ait un succès industriel, que la composition nutritive soit choisie de manière très soigneuse. 



   Le métabolisme   d'un   champignon est influencé aussi par d'autres facteurs, tels que lePH de la solution ou de la substance constituant le milieu nutritif dans lequel il est cultivé. Il est ainsi possible   au un   produit déterminé ne soit formé avec un rendement satisfaisant, que si le PH de la solution ou de la bouillie fermentée est maintenu dans un intervalle particulier,   ,--'est   à dire aux environs de 7, non seulement lerendement, mais aussi   la   composition   chimique   du produit sont altérés du fait que la culture est effectuée en dehors de l'intervallede   p   appro-   prié.   



   Nous avons trouvé que des quantités relativement éle- vées de lactoflavine sont produites quand on inocule avec un mycélium d'Eremothecium   ashbyii   une solution nutritivestérile composée principalement de 1 - 10% de lentilles moulues (lens   esculenta),   auxquels peuvent êtreajoutés 0,5 - 10% d'hydrates de carbone fermentables, et que l'on conserve le milieu inoculé en incubation. 



   Le PH de la solution fermentée peut être maintenu dans 

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 les limites les plus appropriées à la production de lactoflavine par l'adjonction d'hydrates de carbone durant le cours de la fer- mentation. 



   Nous avons trouvé également que le rendement de lacto- flavine est influencé favorablement par l'adjonction de ions d'ammonium sous forme des sels d'ammonium d'acides organiques. 



   L'invention présente consiste en un procédé de fabri- cation de lactoflavine, caractérisé par le fait que l'on inocule avec un mycélium d'Eremothecium   ashbyii,   une solution nutritive stérile, composée de 1 - 10% de lentilles moulues (lens esculenta) et de 0,5 - 10% d'hydrates de carbone fermentables, que l'on conserve la solution nutritive en incubation et que l'on isole la lactoflavine obtenue ainsi. Le   p   de la solution nutritive peut être maintenu à.une valeur constante par l'adjonction d'hydrates de carbone fermentables. 



   Il est bon de soumettre le mycélium   d'Eremothecium   ashbyii, utilisé pour l'inoculation, à une germination prélimi- naire, c'est-à-dire de lui permettre de croître en immersion dans un milieu nutritif avant l'inoculation. 



   Pour la préparation de la solution nutritive, ainsi que pour le maintien d'un PH approprié, on utilise comme hydrate de carbone de préférence le sucre de canne, tout particulière- ment la mélasse de sucre de canne de couleur brun-foncée, dont une partie peut être invertie. Pour le maintien du PH approprié, le glucose ou le fructose est utilisable aussi. 



   A part la farine de lentilles et les hydrates de carbone, la solution nutritive peut contenir encore des ions d'ammonium sous forme des sels d'ammonium d'acides organiques. Parmi les sels d'ammonium que l'on peut utiliser à cet effet, le succinate d'ammonium et l'acétated'ammonium se sont avérés être particulière- ment appropriés. Il est toutefois possible d'utiliser d'autres sels d'ammonium d'acides organiques, tels que le fumarate d'ammonium par exemple. 



   Suivant le procédé présent, la solution nutritive peut être préparée avec des produits aisément accessibles de prix re- lativement bas. On peut atteindre un rendement de 1,0 - 2,5 g de lactoflavine par litre de solution. 

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    Exemple e 1.   



   Une bouillie, composée de 4% de lentilles finement moulues, de 1% de mélasse de sucre de canne et de 0,5% de chlorure de sodium, est réchauffée à la vapeur sous pression pendant 30 minutes en vase clos à 120 C. Après avoir laissé reposer cette bouillie pendant 2 jours, on la soumet à nouveau au même traite- ment pendant 30 minutes. Après refroidissement, elle est inoculée avec 10% de son volume d'une suspension dense d'un mycélium d' Eremothecium   ashbyii.   La culture ainsi obtenue est appro- visionnée d'air   stéril   et agitée au moyen d'un agitateur mécanique. 



  L'axe de l'agitateur et la partie supérieure du récipient sont munis d'un dispositif complémentaire, devant éviter l'entrée d'organismes étrangers à l'endroit où l'agitateur pénètre dans le récipient. La température est maintenue à 28 C. La croissance du champignon est très rapide   et.la   lactoflavine   produite   est d'une couleur jaune sombre. Un agent anti-mousseux stéril, consistant en octadécanol dissous dans de la. paraffine liquide, est ajouté, si cela est nécessaire.

   De temps en temps, des échantillons de culture sont prélevés pour déterminer le PH La tendance du PH de s'élever au-dessus de 7,5est corrigée par l'adjonction de   0,5%   de mélasse de sucre de canne stérilisée, cette opération étant répétée plus tard à des intervalles réguliers afin de maintenir le PH entre   6,6   et 7,4. Au bout de 8 jours la teneur de lactoflavine atteignant 1,4 g par litre, on procède à l'isolement de la vitamine. 



   Exemple 2. 



   Une bouillie, composée de 4% de lentilles finement moulues ayant été réchauffées préalablement pendant 3 heures à la vapeur, de 1,5% de mélasse de sucre de canne et de   0,5%   de chlorure de sodium, est préparée et stérilisée, dans une bouteille fermée par un tampon d'ouate, par chauffage à 120 C à la vapeur sous pression pendant 30 minutes. Après   reidissement,   elle est inoculée avec 10% de son volume d'une suspension dense d'un mycélium d'Eremothecium ashbyii. Puis la bouteille est placée dans un bain de 28 C, la culture est protégée de la lumière directe et agitée. La croissance du champignon est rapide et, au bout de 7 jours, on atteint une concentration de lactoflavine de 1,1 g par litre de solution. 

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   Exemple 3. 



   6 litres d'un mélange de 4% de farine de lentilles, de   0,75%   de mélasse de sucre de canne de couleur brun-foncée, de   0,25%   de sucre inverti brun-foncé, de 0,3% de succinate d'ammoni- um et de 0,5% de chlorure de sodium dans de l'eau sont stérilisés après l'adjonction de 5 ccm d'une solution à 5% d'octadécanol dans de la paraffine liquide   comme agent   anti-mousseux, puis ils sont inoculés avec une suspension d'un mycélium pré-germé d' Eremothecium   ashbyii.   La culture est conservée à une température de 28 C et elle est agitée, pendant que l'on introduit de   l'ait   stéril. Le PH est maintenu dans un intervalle de 6,8 - 7,5 par l'adjonction d'un mélange de 5 g de sucre de canne de couleur brun-foncée et de 5 g de sucre inverti brun-foncé.

   Au bout de 8 jours, une concentration de 1,78 g de lactoflavine par litre de solution est obtenue. 



     E x e m p 1 e   4. 



   6 litres d'un mélange   de '4%   de farine de lentilles, de 0,25% de sucre inverti brun-foncé, de   0,75%   de sucre de canne de couleur brun-foncée, de   0,27%   de succinate d'ammonium, de   0,23%   de succinate de sodium et de 0,5% de chlorure de sodium dans de l'eau sont stérilisés et fermentés, suivant les données de l'exemple 3. Au bout de 7 jours, on obtient une concentration de 1,81 g de lactoflavine par litre de solution. 



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   1,5 litres d'un mélange de 2% de farine de lentilles, de   0,375%   de sucre inverti brun-foncé, de   1,125%   de sucre de canne brun-foncé, de 0,5% de succinate d'ammonium et de 0,5% de chlorure de sodium dans de l'eau sont stérilisés et fermentés, suivant les données de l'exemple 3. Au bout de 136 heures après l'inoculation, on obtient une concentration de 2,48 g de lacto- flavine par litre de solution. 



   Revendications. 

**ATTENTION** fin du champ DESC peut contenir debut de CLMS **.

Claims (1)

1. 1. Procédé de fabrication de la lactoflavine par fermentation de solutions nutritives au moyen du champignon Eremothecium ashbyii, caractérisé par le fait que la solution nutritive utilisée contient 1 - 10% de lentilles moulues (lens <Desc/Clms Page number 6> esculenta) et 0,5 - 10% d'hydrates de carbone fermentables, et que d'autres quantités d'hydrates de carbone fermentables peuvent être ajoutées afin de maintenir une concentration d'ions d' hydrogène définie.

   2. Procédé suivant la revendication 1, caractérisé par le fait que l'on ajoute à la solution nutritive des ions d'ammonium sous forme de sels d'ammonium d'acides organiques.