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LIQUIDE POUR LE TRAITEMENT DES TISSUS HISTOLOGIQUES,
La présente invention se rapporte à la préparation d'échantil- lons tissulaires en vue de leur exament microscopique.
La préparation des tissus organiques en vue de leur exement mi- croscopique demande que ces derniers soient soumis à des traitements multiples avant qu'on en tire des coupes destinées à être colorées et montées sur les platines d'examen. Plus particulièrement, dans la préparation d'un tissu, il est nécessaire d'immerger ce dernier successivement dans divers agents liqui- des et pour des durées déterminées, ayant tout pour fixer le tissu., de laver celui-ci afin d'en éliminer le fixateur, de le déshydrater en l'immergeant successivement dans plusieurs- agents déshydratants,
de l'immerger dans un agent éliminateur et enfin d'imprégner le tissu au moyen d'un agent d'infil- tration tel que la paraffine, la celloïdine, etc. A la suite de ce traite- ment, on le tranche en coupes de l'épaisseur voulue, on en élimine la paraf- fine ou autre agent d'infiltration, généralement au moyen d'un solvant de la paraffine,, après quoi on monte les coupes sur des lamelles et on les co- lore.
La présente invention se rapporte à la déshydratation du tissu après qu'il a été fixé, et son objet essentiel dans cet ordre d'idées est de supprimer certains inconvénients inhérents aux procédés antérieurs de déshy- dratation et aux substances employées jusqu'à ce jour pour déshydrater les tissus.
L'invention se rapporte également au traitement des tissus en ce qui touche l'élimination de la paraffine ou autre agent d'infiltration pré- sent dans les coupes et la coloration des coupes déparaffinées, et le pre- mier objet de l'invention est de supprimer les divers inconvénients inhé- rents aux procédés antérieurs et aux substances employées jusqu'à ce jour pour éliminer la paraffine des coupes et au cours du traitement colorant.
L'alcool, qu'il soit méthylique ou éthylique, a longtemps été re- commandé comme solvant et déshydratant en histologie. On l'a employé soit
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seul soit en combinaison avec d'autres réactifs comme l'acétone, le chlorofor- me et divers autres hydrocarbures. Son usage n'a, en aucun cas, donné entiè- rement satisfaction. Physiquement, il est très inflammable, extrêmement vola- til et possède un haut degré d'hygroscopicité qui l'amène à se diluer. Comme déshydratant et du point de vue de ses effets sur les tissus, il a toujours déterminé un retrait, une distorsion et un durcissement inadmissibles des tissus trop longtemps exposés à son action.
En matière de coloration, ses ef- fets sont ceux qu'on a signalés à propos de ses particularités physiques, en plus de quoi et dans bien des cas il délave le colorant qui s'était fixé dans le tissu, c'est-à-dire qu'il produit l'effet d'un agent décolorant ou diffé- rentiateur.
Dans la déshydratation d'un tissu il était de règle, afin de dimi- nuer son retrait et sa distorsion, de l'immerger d'abord dans de l'alcool di- lué et ensuite dans de l'alcool de plus en plus concentré pour terminer avec de l'alcool pur ou absolu. Cependant, malgré ces précautions, on ne parvient pas à empêcher le retrait et la distorsion du tissu dans la mesure nécessaire pour aboutir à des résultats satisfaisants dans la préparation des coupes.
Les inconvénients et désavantages énumérés ci-dessus et entre au- tres,inhérents à l'usage des alcools ou d'autres réactifs antérieurement em- ployés comme déshydratants et solvants en histologie sont supprimés grâce à la présente invention et à la réalisation de ses objets essentiels.
Plus particulièrement, cette invention a pour objet de créer un agent déshydratant et solvant qui 1 - supprime ou atténue considérablement la distorsion du tissu, 2 - ne s'évapore pas facilement, 3 - ne soit pas sen- siblement bygroscopique, 4 - ne soit pas inflammable et 5 - ne soit pas toxi- que. Cette non-toxicité de l'agent déshydratant et solvant suivant la présen te invention constitue un avantage supplémentaire qui supprime les inconvénients résultant de l'emploi de substances telles que l'alcool méthylique et le dioxa- ne dans le traitement des tissus.
L'agent liquide employé suivant la présente invention pour déshy- drater dans la masse les spécimens de tissus organiques ainsi quep our traite-r les coupes sur lamelle, comprend de l'acétate de diéthylène-glycol monométhyl- éther CH3COOCH2CH2OCH2CH2OC2H5, que pour plus de concision on dénommera ci- après "solvant F". C'est un produit connu qu'on trouve dans le commerce. Sa densité est de 1,0114, son point d'ébullition de 217 7 G. et il se dissout com- plètement dans l'eau. Il est ininflammable, sensiblement non-hygroscopique et non-toxique.
En raison de sa complète miscibilité avec l'eau, il déshydrate le tissu par déplacement de l'eau présente dans ce dernier et non par extrac- tion comme dans le cas de l'alcool, de sorte qu'il ne se produit ni retrait, ni distorsion du tissi, comme c'est le cas quand le déshydratant employé est de l'alcool.
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Dans son emploi pour la déshydratation des tissus, le solvant com- prend une substance favorisant la pénétration de l'agent déshydratant dans le tissu, cette substance étant, de préférence, l'isopropanol, bien qu'on puisse employer les autres alcools (méthylique ou éthylique); l'isopropanol est pré- férable parce qu'il est moins hygroscopique que lesdits autres alcools. Les proportions.relatives de solvant F et d'isopropanol ou autre diluant peuvent varier dans des limites relativement larges, par exemple entre 2 parties d'i- sopropanol pour 6 parties de solvant F et poids pour poids de l'un et l'autre, cette précision n'ayant toutefois aucun caractère limitatif. La composition 'présentement préférée suivant l'invention renferme 6 parties de solvant F et 4 parties d'isopropanol.
Pour la commodité de l'exposé ci-après, cette compo- sition sera dénommée "solvant FS".
Dans l'emploi de l'agent liquide sus-indiqué, c'est-à-dire du sol- vant FS,pour déshydrater des échantillons tissulaires grossiers après qu'on les aura fixés et lavés, on immerge ces échantillons dans leditsolvant suc- cessivement dans une série de vases ou récipients distincts contenant du sol- vant, de fagon telle que le tissu soit sans cesse immergé dans du solvant neuf, pendant le processus de déshydratation. La durée préférée d'immersion dans
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chaque vase contenant du solvant FS est d'environ une heure, et le nombre de ces immersions d'une heure étant de cinq dans chaque série ininterrompue.
A la suite de la cinquième période d'immersion,on dépose les échantillons dans un liquide composé d'un même poids de solvant FS et d'acétate du butyle, cette immersion s'effectuant, de préférence., dans deux récipients distincts et la durée du sé j our dans chacun d'eux étant d'une heure., sans solution de continuité. A la suite de la seconde période d'immersion, on plonge le tissu pour une durée d'une heure dans un vase contenant uniquement de l'acétate de butyle. Cela fait, on immerge le tissu dans de la paraffine afin qu'on puisse en tirer des coupes qu'on montera sur des lamelles selon une technique bien connue.
Ces immersions successives s'effectueront de préférence automatique- ment grâce à l'emploi d'un appareil automatique tel qu'il est décrit dans le Brevet américain ? 2.341.198 au nom d'Edwin C.WEISKOPF.
Le traitement du tissu au moyen d'acétate de butyle, d'abord dans un liquide contenant du solvant FS et ensuite uniquement dans de l'acétate de butyle, a pour objet de purger le tissu, c'est-à-dire d'en éliminer le solvant FS afin qu'il se laisse plus facilement infiltrer de paraffine, celle-ci se mélangeant mieux avec l'acétate de butyle qu'avec le solvant FS et pouvant ainsi plus aisément déplacer l'acétate de butyle. On a constaté aussi qu'on améliore l'effet éliminatoire de l'acétate de butyle en commençant à l'ajouter au solvant FS des deux derniers bains ainsi qu'il est indiqué ci-dessus, L'a- cétate de butyle a été préféré comme agent éliminatoire non seulement à cause de ses remarquables qualités en tant que tel,
mais aussi parce qu'il ne dur- cit pas les tissus.
Après que les échantillons ont été déshydratés et infiltrés de paraffine, on découpe le tissu en pellicules, ordinairement à l'aide d'un mi- crotome, et l'on monte ces pellicules sur des lamelles de verre. Ainsi mon- tées, on traite ces coupes en vue d'en éliminer la paraffine, puis on les co- lore. Ordinairement, on élimine la paraffine en immergeant les coupes dans du xylène, cependant que la coloration s'effectue habituellement au moyen de colorants à base d'hématoxyline et d'éosine qui agissent respectivement sur les constituants basophiles et acidophiles du tissu. Ces colorants, seront, de préférence, ceux qui sont décrits dans la demande de Brevet déposée au nom de la Demanderesse le 27 avril 1950, ayant pour titre "Procédé et solu- tions pour colorer des coupes histologiques".
Il y a intérêt à éliminer la paraffina et à colorer les cou- pes en employant l'appareil d'immersion automatique dont il a été fait men- tion plus haut. L'opération débute après que les coupes infiltrées de pa- raffine ont été montées sur les lamelles. Les vases occupent les positions indiquées dans le tableau ci-après et contenant les liquides spécifiés; les lamelles y sont immergées pour les durées mentionnées en minutes, ainsi que suit-.
EMI3.1
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Position <SEP> dans <SEP> l'ap- <SEP> Agent <SEP> de <SEP> traitement <SEP> du <SEP> tissu. <SEP> Durée <SEP> de <SEP> séjour
<tb> pareil.,
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<tb> 1 <SEP> Xylène <SEP> 2 <SEP> min.
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2 <SEP> 0,25% <SEP> d'iode <SEP> dans <SEP> solvant <SEP> FS <SEP> 2 <SEP> min.
<tb>
3 <SEP> Solvant <SEP> FS <SEP> 2 <SEP> min. <SEP>
<tb>
4 <SEP> Eau <SEP> distillée <SEP> 2 <SEP> min.
<tb>
5 <SEP> Hématoxyline <SEP> 10 <SEP> min.
<tb>
6 <SEP> Eau <SEP> distillée <SEP> 4 <SEP> mina
<tb> 7 <SEP> Carbonate <SEP> de <SEP> lithium <SEP> 0,01 <SEP> N <SEP> 2 <SEP> min.
<tb>
8 <SEP> Eau. <SEP> distillée <SEP> 2 <SEP> min.
<tb>
9 <SEP> Solution <SEP> d'éosine <SEP> 5 <SEP> min.
<tb>
10 <SEP> Solvant <SEP> FS <SEP> 5 <SEP> min.
<tb>
11 <SEP> Solvant <SEP> FS <SEP> 5 <SEP> min.
<tb>
12 <SEP> Solvant <SEP> FS <SEP> 5 <SEP> min. <SEP>
<tb>
Après avoir été traitées en position 12, les coupes sont reti- rées et placées dans un vase contenant du xylène où elles séjournent pendant 3 à 5 minutes après quoi on les termine de la manière habituelle.
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Dans le tableau ci-dessus, on indique qu'en position 2 le solvant FS contient de l'iode. On peut remarquer, par conséquent, que l'emploi d'io- de est préférable lorsque le fixateur employé est du type Zenkers.
Lorsque le solvant est destiné à éliminer la paraffine des coupes, tout comme au cours de l'opération de coloration, on peut supprimer l'iso- propanol ou autre alcool, et en ce cas le liquide serait simplement du sol- vant F, c'est-à-dire de l'acétate de diéthylène-glycol monoéthyléther, conte- nu au lieu de solvant FS dans les vases occupant les positions indiquées dans le tableau ci-dessus.
Diverses modifications peuvent être apportées à la présente inven- tion sans sortir des limites qui sont exposées dans la description ci-dessus.
REVENDICATIONS.
1. Liquide pour le traitement des tissus histologiques en vue de leur exament microscopique., caractérisé en ce qu'il contient, à titre de con- stituant principal, de l'acétate de diéthylène-glycol monoéthyléther.