<Desc/Clms Page number 1>
PROCEDE D'OBTENTION D'UN MELANGE D'ALCALOIDES A PARTIR DE DROGUES DE VERATRUM.
Lettre rectificative :jointe pour valoir comme de droit à la datedu 16/5/1955 Page 1 ligne 46 doit se lire "tandis que des sels d'autres alcaloides au lieu de "tandis que d'autres alcaloïdes.." Page 1 lignes 49 & 50 il y aurait lieu d'ajouter après "dans le cas" les mots "des sels".
Page 4 ligne 55, pour la clarté, il serait préférable après "elle-même" de com- mencer un nouveau paragraphe.
Page 1 ligne 49 il est indiqué "la courbe courant-potentiel". Il nous est de- mandé de remplacer cette expression par "la courbe indiquant le report de l'in- tensité du'courant et le potentiel".
<Desc/Clms Page number 2>
On sait que les alcaloïdes totaux des drogues de Veratrum, en par- ticulier de Veratrum album et de Veratrum viride, possèdent une forte action hypotensive qui a déjà été mise à profit thérapeutiquemento
On a,par conséquent,cherché à obtenir par le choix d'agents d'extraction appropriés, par exemple du benzène, et par une série de multi- ples précipitations et extractions sous agitation, des mélanges d'alcaloïdes
EMI2.1
qui ne contiennent essentiellement que les SLoaloIdes responsables de l'ac- tion sur la pression sanguine, de façon à accroître ainsi l'action hypoten- sive tout en ayant une toxicité aussi réduite que possible.
Naturellement on n'obtient ainsiqu'une fractiondes alcaloïdes contenus dans la drogue, par exemple 50 %
EMI2.2
Or1 a trouvé avec étonnement qu'il est possible d'obtenir par éleva- trodialyse de drogues de Veratrum un mélange'd'alcaloïdes avec un rendement élevée mélange qui, avec une bonne activité thérapeutique (action hypoten- sive), possède une toxicité notablement plus réduite que les alcaloïdes to- taux obtenus suivant d'autres voies, par exemple par extraction de la dro- gue avec du chloroforme.Ainsi, un mélange alcaloïdes obtenu, par exemple, à l'aide de chloroforme à partir de la drogue, mélange obtenu avec un ren- dement de 90% montre dans un essai sur animaux une toxicité DL 50 = 0,
467 mg/kg de souris (durée d'injection = 7 secondes) ; pour un produit obtenu
EMI2.3
par voie ëlectrôdialytique, de même avec un rendement de 90%, on enregistre dans les mêmes conditions dans l'essai sur animaux une DL 50 = 0,75 mg/kg de souris (durée d'injection = 7 secondes).L'action hypotensive du produit obtenu par électrodialyse s'avère être, dans l'essai sur animaux (chats), en- viron 5 % plus élevée que celle de la préparation de comparaison obtenue par extraction.
L'électrodialyse en tant que méthode d'obtention d'alcaloïdes à partir de drogues n'a été décrite jusqu'ici que dans quelques rares publica-
EMI2.4
tions (R.I. Ginsburg et N.I. Gawriloff : J. Angew. Chem. (russe) 2, 120- 129 (1947), S.Ch. Babitsch : J. Angew. Chem. (russe) 20, 652-659 (1947 et So Ch. Babitsch : s Jo Angew. Chem (russe) 24, 74-85 (195' D'autre part, on a déjà proposé la séparation éloctrodialytique des alcaloïdes de coca à'parti des feuilles de coca et de la nicotine à partir du tabac. D'après Ginsburg et Gawriloff on peut obtenir à partir d'opium de la morphine et de la nar-
EMI2.5
cotine, tandis que Babitsoh a établi que d'autres alcaloïdes également se laissent transporter dans une mesure plus ou moins grande dans le comparti- ment cathodique par électrodialyse.
Parmi des drogues essayes, il ne se trou- ve toutefois pas de drogues de Veratrum.
On sait que les alcaloïdes de Veratrumimportants au point de vue thérapeutique sont des esters d'alcanolamines et il était à craindre que dans un mode d'obtention électrolytique ces esters soient saponifiés, d'au- tant plus qu'on a trouvé qu'un autre ester d'une alcanolamine, en substance
EMI2.6
1"atropine dans une tentative de la séparer par électrodialyse à la catho- de, se décompose en partie avec hydrolyse et formation de tropine (cf.
Arzneimittelforsch. 3,530 (1953).
Tandis que dÇautres alcaloïdes possèdent un<;tension de décomposi-- tion relativement réduite (cf. S. Ch. Babitsch, Joângewo Chem.(russe) 2., 74-85 (1951), quia lieu toujours en-dessous de 5 V, la plupart du temps mê- me en dessous de 2,5 V il a été trouvé que la courbe courant-potentiel dans le cas de la Vératrine et des alcaloïdes de Veratrum est anormalement plate. apparemment par passivation de la cathode, et il s'avère nécessaire d'emplo- yer pour la séparation une tension d'au moins 19 a 20 V environ, mais de pré-
EMI2.7
férence tou'eefois supérieure, par exemple de 30 V et plus.
Mais même une tel- le tension s'avère encore insuffisante pratiquement, étant donné qu'avec une tension de 30 à 40 V un transfert total ou très important des alcaloïdes dans
<Desc/Clms Page number 3>
EMI3.1
le compartiment cathodique exigerait uxi temps tel que ce procédé serait in exécutable techniquement. A cause des tensions si élevées s'avérant indis- pensables, on était en droit de redouter q.e9 par suite du dégagement de chaleur et éventuellement le processus électrochimiques de réduction, il se produirait une décomposition importante du mélange des alcaloïdes et il est d'autant plus surprenant que l'on paisse obtenir avec un excellent rendement
EMI3.2
un mélange #alcalo!des à grande activité et à faible toxicité par la mêtho- de électrodialytique.
En vue de ménager les alcaloïdes il s'avère toutefois avantageux, au début de 1Uélectrodialyse en particulier tant que des sels minéraux sont extraits de la drogue par dissolution et que leurs cations se déplacent dans le compartiment cathodique; de réduire la tension appliquée aux électrodes et de ce fait, la quantité de courant qui -passe, en interca- lant une résistance, D'autre part, il est favorable d'accroître la tension
EMI3.3
de 110 à 20C V9 lorsque la quantité de ca-arant qui passe s'abaisse de maniè- re importante, ce qui se produit surtout vers la fin de l'électrodialyse, lorsque la drogue est appauvrie en alcaloïdes
EMI3.4
On pouvait redouter comme autre difficulté nu'il se produise un colmatage des diaphragmes étant donné que, comme Ginsburg et Gawriloff l'on trouvé dans l'électrodialyse des extraits d'opium ou de capsules de pavot,
EMI3.5
les diaphragmes dvierillent rapidement inutilisables lorsqu'on ne prend pas de mesures supplémentaires. Comme les essais l'ont montré, cette difficulté n'apparaît pas dans l'obtention élec-trodialytique des alcaloïdes de Veratrumo
L'objet de l'invention est donc un procédé d'obtention d'alcaloi- des à partir de drogues de Veratrum et d'extraits obtenus à partir de ces drogues, dans lequel la matière de départe en suspension dans une solution aqueuse à réaction acide,
qui correspond au plus à l'acidité d'une solution
EMI3.6
aq'cetise oxacide acétique à 20 f est ajoutée dans le compartiment moyen d'un récipient d'électrodialyse séparé du compartiment anodique et du comparti-
EMI3.7
ment cahodique par des diaphragmes, est soumise à une électrodialyse avec une tension au minimum de 20 V et une densité de courant ne dépassant: pas 0,1 Ampcm2 de surface cathodique à une température au plus de 80 C ; le mé- lange d'alcaloïdes transféré par 1'électrodialyse dans le compartiment catho- dique est, après réglage à une valeur de pH d'au moins 8, séparé par extrac- tion un solvant non miscible avec l'eau, puis il est séparé de ce solvant.
En vue de l'obtention électrodialytique des alcaloïdes de Veratrum, la drogue en poudre, par exemple des rhizomes de Veratrum album, ou un ex-
EMI3.8
trait de la arogue9 es% mise en .suspension dans une quantité 6 à 10 fois plus grande c5ac.a.e acétique â environ 5 % ou d'une autre solution acide aqueuse dont l'acidité n'est pas plus grande que celle d'une solution acétique aqueu- se à 20 %, par exemple une solution aqueuse d'acide maléique, d'acide lacti- que9 d'acide tartrique, d'acide mandélique, d'acide phosphorique, d'acide chlorhydrique ou d'autres acides minéraux ou organiques, et on fait passer la suspension obtenue dans le compartiment moyen d'un récipient d'électro- dialyse qui est pourvu d'un serpentin de refroidissement.
Les compartiments cathodique et anodique, qui sont remplis tous deux de préférence avec de l'eau distillée ou désionisée, sont séparés de ce compartiment moyen par un
EMI3.9
diaphragme .par exemple en cellophane. Comme matériau d"anode on peut utili- ser du charbon, du graphite ou du platine ;
comme matériau de cathode on peut de même employer du platine,, mais toutefois le cuivre convient -très bien
EMI3.10
aussi"Aa lieu de prévoir le récipient central avec 'un dispositif de refrci- dissemer2t, le compartiment cathodique peut aussi ,,on-tenir un dispositif ana- logue .Mais on peut prévoir également des moyens de :z.'efroidisaement pour tous les compariiments"En outre, il est fréquemment J-aâioieux, spécialement en cas de traitement de plus grandes quantités de drogue, de prévoir le compartiment central avec un dispositif dçagï-at.ar¯qu. es 3 enc.enchéde tempsen temps 2nvuede
<Desc/Clms Page number 4>
EMI4.1
diminuer lCalúaLllté dans le compartiment cathodique et de protéger les al- caloldes au coars de 19é1ectrodialyse, il s'avère avantageux d'introduire constamment t de :
9 an:nyd..'ride carbonique dans le compartiment cathodique pen- dant 1 e éle c-rod:.iyse
Au début de l'électrodialyse on opère de préférence avec une ten- sion ne dépassant pas sensiblement 30 V, étant donné qu'il se produit tout d'abord un passage de courant plus fort à cause des sels minéraux contenus dans la drogue,, Ce n'est que plus tard que l'on accroît la tension jusqu'à 100v et quelquefois au delà. Il s'avère en outre avantageux de changer à plusieurs reprises le liquide cathodique de temps à autre, particulièrement au début.Par refroidissement du réservoir d'électrodialyse ou respective-
EMI4.2
ment du compartiment cathodique on veille à ce que la température ne s'élè- ve pas au--delà de 50 à 60 c ou tout au plus un peu de au-delà de cette tem-
EMI4.3
pérature par exemple 80 C..
On a trouvé qu'il est avantageux de proportion- ner la densité de courant par réglage de la tension pour qu'on ne dépasse pas 0,1 Ampo par cm2 de surface de cathode. Une intensité de courant de 0,07 à 0,08 Amp/cm2 est avantageuse'. Par réglage de l'intensité de courant et de la tension appliquée aux électrodes qui lui est reliée, on peut en outre contrôler le dégagement de chaleur.
Il est notamment possible, par la réduc- tion de la tension et par la diminution ainsi causée du passage de courant .en cas d'une température fortement croissante dans les récipients d'électro-
EMI4.4
dialyse, en particulier dans le oompartiement cathodique, de veiller à une diminution progressive de la température en relation avec le dispositif de refroidissement
A partir des liquides cathodiques réunis on Deut, après addition d'ammoniaque ou d'une autre base, extraire par agitation le mélange d'alca- loides au moyen de divers solvants.
En vue de récupérer pratiquement la to- talité des alcaloides qui se trouvent dans le liquide cathodique, conviennent particulièrement les hydrocarbures halogénés comme le chloroforme, le tri-
EMI4.5
ohlorétbylêne, le dichloréthylène, le perchloréthylène, le tétrachlorure de carbone, le chlorure de méthylène, le dichloréthane, le trichloréthane, le tétraoh.lorëthane9 le pentachloréthane, le dibromoéthane, le bromure de mé- thylène, de dichloropropane, etc.
En faisant varier le solvant qui est em- ployé pour l'extraction du liquide cathodique,on obtient des mélanges d'al- caloides de composition qaelque peu différente et aussi d'un comportement thérapeutique et toxicologique quelque peu différent également, le rende-
EMI4.6
ment, en l'occurexice, étant le plus souvent un peu moindre.
Par l'emploi d'éthers comme l'éther diéthylique, l'éther diisopropylique, le méthyliso- propylêcher, 9 1 éthyl.sopropyléther' le méthylpropyléther, etc., on obtient des produits qui offrent une toxicité relativement mondre et une bonne éten- due thérapeutique. Par l'emploi d'un hydrocarbure benzénique comme agent d'extraction, par exemple le benzène, le toluène ou le xylène, on obtient des produits un peu plus toxiques qu'avec l'emploi d'éthers ; leur puissan- ce d'action est toutefois plus élevée. On peut aussi utiliser des esters comme l'acétate d'éthyle, l'acétate de propyle, le propionate d'éthyle, le butyrate d'éthyle, l'acétate de butyle, etc.
Tout comme les hydrocarbures halogénés ils extrayent intensément tous les alcaloïdes du liquide oathodi- que, et les mélanges d'alcaloïdes obtenus avec leur assistance ne sont pas, eux aussi, aussi fortement toxiques.
A partir des solutions dans un solvant, on peut obtenir le mélange d'alcaloïdes en chassant le solvant ou encore par extraction sous agitation avec un acide dilué, précipitation subséquente de bases hors de la solu- tion acide avec de l'ammoniaque et éventuellement nouvelle reprise avec un solvant.
Les produits ainsi obtenus sont toujours de couleurs très claires, presque incolores dans l'emploi d'éthers et en particulier d'hydrocarbures aromatiques, et ils peuvent donc la plupart du temps être employés thérapeu-
<Desc/Clms Page number 5>
EMI5.1
tiquement sans autre traitement après standardisation biologiques Avec une durée d'électrodialyse suffisamment longue et avec des tensions qui ne sont pas trop basses en vue de son exécution9 les rendements, suivant les solvants employés, s'élèvent à 70-95% des alcaloïdes déterminés analytiquement dans la drogueoLes hydrocarbures halogénés fournissent les rendements les plus élevés (85 à 95 %) Avec les éthers on obtient des rendements entre 75 et 85 % parfois un peu plus, et avec des hydrocarbures aromatiques,
entre 70 et 77%
Si par contre on utilise la méthode classique en vue de l'extrac-
EMI5.2
tion des aloaloides, par exemple une extraction de la drogue, humectée avec de l'ammoniaque ou un alcali, avec de l'éther, on obtient des extraits qui ne contiennent que 70% environ des alcaloïdes trouvés dans la drogue, avec l'emploi de chloroforme des extraits avec environ 90% de la teneur de la dro- gue en alcaloïdes, et avec 1''emploi de benzène des extraits avec environ 50 % de la teneur de la drogue en alcaloïdes. En plus de ces alcaloïdes, ces extraits contiennent toutefois aussi en quantités importantes, par exemple 35 à 50 %, d'impuretés comme des graisses, des résines, des colorants et dautres matières d'extraction.
On narrive à séparer les alcaloïdes de ces impuretés qu'avec difficulté et non sans pertes, étant donné qu'avec les mé- thodes d'extraction usuelles par agitation, il se produit toujours des émul- sions,surtout quand on emploie le Veratrum album comme matière première, si bien qu'avec un tel procédé on doit compter non seulement sur une perte en alcaloïdes mais aussi sur une perte en solvants de même que sur une dé- pense de temps non négligeable.
Contrairement à ceci, l'obtention électrodia- lytique des alcaloïdes noffre aucune de ces difficultés et à cela s'ajoute encore le rendement constamment élevé en mélange d'alcaloïdes qui a déjà été signalé
EMI5.3
Un trait caractéristique des mélanges dialaaloides qui sont obte- nus suivant le procédé de la présente invention est que leur toxicité est la plupart du temps plus petite, leur activité pharmacologique fréquemment plus élevée et leur étendue thérapeutique toujours plus grande que celles des
EMI5.4
préparations de comparaison qui ont été obtenues suivant un procédé d'extrac- tion classique avec emploi des mêmes solvants. Ces différentes propriétés constituent un autre avantage du procédé.
Si l'on soumet au procédé de l'invention les extraits bruts totaux qui ont été obtenus à partir de la drogue par extraction, comme par macéra- tion digestion ou percolation avec des solvants comme-le chloroforme9 le
EMI5.5
trlCÎliaithY'lelle léther et le benzène, on peut se passer d'une épuration préalable des extraits comme par exemple par extraction des alcaloïdes de
EMI5.6
l'extrait, la l'a2ü& d'un acide, précipitation des alcaloïdes extraits hors de la solution acide par des bases et reprise des bases précipitées avec un sol- vant,tout ceci demandant beaucoup de temps et étant compliqué (voir le bre- vet britannique n 683,083 Un autre avantage réside dans le fait qu'on évi- te les émulsions difficilement séparables se produisant au cours d'un tel
EMI5.7
traitement, étant donné que dans la méthode ëlectrodzalytïq,
ue on arrive direc- tement à des produits purs qui ne néoessi-cent plus une épuration ultérieure. Au cas toutefois où une telle épuration ultérieure serait appliquée., celle-ci n'est pas compliquée par la formation d'une émulsion. Contrairementà l'ob-
EMI5.8
tention électrodialytique des alcaloïdes à partir Le la drogue proprement di- teg la durée d'éleotrodialyse peut en cas a. "application QU procède à des ex- traits totaux bruts être notablement écourtée,. e:;a!1.'t" ci-onnê que le transport des alcaloïdes dans le compartiment ca.;,hod=e progresse plûs rapidement.
Les rendement obtenables dans l'emploi du procède avec c-es extraits totaux bruts sont en moyenne un peu moindres que dans l, du prsceo-e avec la orogue elle-même:, On obtient des mélanges c.'alcaloïdes ayant une 'bonne activité lorsque 1 êlectrodialyse nr9s Da..3 exécutée j.aqu à transfert complet des al- caloides de Ici. c5Ùe, cl de i " t,.âûi:c.or. - prépaz-à s. partis. ie 'h..'.bJc.-.r.y, ¯ dans le
<Desc/Clms Page number 6>
compartiment cathodique,mais qu'on l'interrompt déjà plus tôt, par exemple après transfert d'environ 40 à 70 % au plus des alcaloïdes se trouvant dans le compartiment moyen de l'appareil d'électrodialyse.
On obtient ainsi dans de nombreux cas des préparations plus actives et un peu plus toxiques, avec une étendue thérapeutique plus grande que dans le cas où on exécute l'élec- trodialyse jusqu'à achèvement du transfert des alcaloïdes dans le comparti- ment cathodique.
Les exemples d'exécution suivants illustrent l'invention, sans la limiter.
Exemple 1
On humecte 1,5 kg de rhizomes de Veratr. alb. avec une quantité 5 à 6 fois plus grande d'acide acétique à 5 % on laisse reposer pendant 24 heures et on introduit le tout dans le compartiment moyen d'un récipient d'électrodialyse. Le compartiment cathodique et le compartiment anodique, tous deux remplis avec de l'eau distillée, sont séparés du compartiment mo- yen par des membranes de cellophane et ou utilise comme cathode une tôle de cuivre ayant 100 am2 de surface, et comme anode une tôle de platine de 30 cm2 Pendant l'électrodialyse, on refroidit l'appareillage de dialyse. On utilise des tensions de 110 à 220 V, mais au début toutefois, on réduit la tension aux électrodes mêmes à environ 35 V, par intercalage d'une résistan- ce.
D'autres détails figurent dans le tableau suivant :
EMI6.1
<tb> Fraction <SEP> Durée <SEP> en <SEP> Voltage <SEP> Ampèrage <SEP> Watts- <SEP> Tmep <SEP> Rendement <SEP> en
<tb> heures <SEP> heures <SEP> alcal. <SEP> totaux
<tb>
<tb> par <SEP> extrac <SEP> t. <SEP>
<tb>
<tb> au <SEP> chloroforme
<tb>
<tb> ammoniacal.
<tb>
<tb>
1 <SEP> 15 <SEP> 110 <SEP> 0,45 <SEP> - <SEP> 1,65 <SEP> 2300 <SEP> 22-45 <SEP> 2,84 <SEP> g
<tb>
<tb>
<tb> II <SEP> 49,5 <SEP> 110- <SEP> 0,3 <SEP> - <SEP> 1,7 <SEP> 7750 <SEP> 22-46 <SEP> 7,75 <SEP> g
<tb>
<tb> 220
<tb>
<tb> III <SEP> 155 <SEP> 110- <SEP> 0,3 <SEP> - <SEP> 1,65 <SEP> 12205 <SEP> 22-43 <SEP> 3,81 <SEP> g
<tb>
<tb> 220
<tb>
<tb> totaux: <SEP> 219,5 <SEP> 22255 <SEP> 14,40 <SEP> g <SEP>
<tb>
On récupère les alcaloïdes à partir des liquides cathodiques en les réglant a un pH de 9 avec de l'ammoniaque, en extrayant sous agitation à trois reprises chaque fois avec 100 cm3 de chloroforme, et en les isolant sous la forme de résidu sec après évaporation du solvant.
La densité moyenne de courant sur la surface cathodique s'élève à 0,003 - 0,02 Amp/cm2 maximum 0,03 Amp/cm2
Vu que diaprés d'analyse la drogue contient 1,1% d'alcaloïdes, le rendement s'élève à 87,3 %.
Exemple 2.
Tout comme dans l'exemple 1, c'est-à-dire avec le même matériau d'électrode, la même densité moyenne de courant et en restant dans le même intervalle de température, on électrodialyse 2 kg de la même drogue avec emploi de courant continu de 110 et 220V (tension initiale de 30 V), mais cette fois-ci toutefois pendant 320 heures. A partir des liquides cathodi- ques réunis, après addition d'ammoniaque jusqu'à une valeur de pH de 9,1, on extrait le mélange alcaloïde avec 3 fois 300 cm3 de chloroforme. Après évaporation du chloroforme on obtient 20,9g (ce qui correspond à 95 % de la théorie) de mélange d'alcaloïdes pratiquement incolore.
La toxicité de ce mé- lange est : LD 50 = 0,765 mg/kg de souris (durée injection = 7 secondes) avec
<Desc/Clms Page number 7>
une action thérapeutique environ 5% plus élevée qu'un mélange d'alcaloïdes obtenu avec un rendement de 90 % par une extraction normale au chloroforme, ce dernier mélange ayant une toxicité LD 50 = 0,467 mg/kg de souris (durée d'injection = 7 secondes).
Exemple 3.
De nouveau comme dans l'exemple 1, on électrodialyse 480 g de rhi- zomes de Veratrum album humeatés avec 2,5 litres d'acide acétique à 5 % La durée d'électrodialyse, s'élève à 125 heures avec emploi de courant continu de 110 et de 220 V, mais toutefois dans ce cas-ci, par agrandissement de la distance entre électrodes et non par intercalage d'une résistance, on arrive à ce que la densité de courant par cm2 de surface cathodique ne dépasse pas 0,035 Amp et se maintienne en général en dessous de 0,02 Amp. par cm2 La consommation de courant s'élève à 12,8 kwh Par extraction des liquides ca- thodiques rendus-ammoniacaux jusquà pH 9, avec 3 fois 200 cm3 de trichloré- thylène, on obtient 5,8 g de mélange d'alcaloïdes.
Etant donné que la drogue d'après la détermination analytique contient 1,25 % d'alcaloïdes, le rende- ment dans ce cas est de 96,7 % de la théorie. Le mélange d'alcaloïdes pres- que incolore possède une toxicité LD 50 = 0,772 mg/kg de souris (durée d'in- jection = 7 secondes).
Exemple 4.
On humecte 500 g de rhizomes de Veratrum album pulv. avec 2,8 li- tres de solution d'acide maléique à 3 % et, après repos de 24 heures, on é- lectrodialyse dans l'appareillage décrit dans l'exemple 1 La durée d'élec- trodialyse s'élève à 163 heures avec emploi de courant continu de 110 et 220 V en réduisant au début cette tension à environ 35-40 V par intercalage d'u- ne résistance. La densité de courant s'él.ève au maximum à 0,035 Amp/cm2 de surfage cathodique, par exemple entre 0,002 et 0,02 Amp/cm2, et la consomma- tion de courant à 12,5 kwh Par extraction des liquides cathodiques réunis et rendus ammoniacaux (pH 8,9) avec 3 fois 200 cm3 de tétrachlorure de car- bone, on obtient 5,1 g de mélange d'alcaloïdes.
Ce rendement correspond à 92,7% de la théorie, étant donné que la drogue, d'après une détermination analytique gravimétrique, à une teneur en alcaloïdes de 1,1% Le mélange d'alcaloïdes faiblement coloré en jaune possède une toxicité DL 50 = 0,760 mg/kg de souris (durée d'injection = 7 secondes).
Exemple 5.
On humecte complètement 1,5 kg de rhizomes de Veratrum album pulvo avec 8 litres d'acide acétique à 5 %, on laisse reposer pendant 24 heures puis on introduit le tout dans le compartiment moyen d'un récipient d'élec- trodialyseoLe compartiment cathodique et le compartiment anodique, tous deux remplis avec de l'eau distillée, sont séparés du compartiment moyen par des membranes de cellophane. La cathode est en cuivre et l'anode en platine.
Chaque compartiment comporte un dispositif de refroidissement sous la for- me d'un serpentin de refroidissement. Il existe des bornes de 110 à 220 V de courant continu, et au début on intercalle une résistance dans le circuit pour diminuer l'intensité de courante Au cours de l'électrodialyse on bran- che chaque fois avec diminution de l'intensité de courant., sur 110 et 220Vo Dans le compartiment cathodique on introduit du CO2 pendant tout l'essai.
Le liquide cathodique (400 cm3 est remplacé à plusieurs reprises (eau dis- tillée). Les liquides cathodiques séparés sont rendus faiblement alcalins PH 9) par addition d'ammoniaque et on extrait à deux reprises sous agita- tion des solutions aqueuses,chaque fois avec 300 cm3 d'éther. D'autres dé- tails apparaissent dans le tableau suivant :
<Desc/Clms Page number 8>
EMI8.1
<tb> Fraction <SEP> Durée <SEP> Voltage <SEP> Ampèrage <SEP> Watts <SEP> Tempo <SEP> Rendement <SEP> en
<tb>
<tb>
<tb> heures <SEP> heures <SEP> C <SEP> alcaloïdes <SEP> to-
<tb>
<tb>
<tb> taux <SEP> de <SEP> l'ex
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> traction <SEP> à <SEP> l'é
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> ther <SEP> ammoniacal.,
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> 1 <SEP> 16,5 <SEP> 110 <SEP> 0,5-1,7 <SEP> 2600 <SEP> 22-45 <SEP> 2,87 <SEP> g <SEP>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> II <SEP> 14 <SEP> 110- <SEP> 0,25-1,3 <SEP> 2000 <SEP> 22-42 <SEP> 2,84 <SEP> g <SEP>
<tb>
<tb>
<tb> 220
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> III <SEP> 17 <SEP> 110- <SEP> 0,550-1,8 <SEP> 2400 <SEP> 22-46 <SEP> 1,99 <SEP> g
<tb>
<tb>
<tb> 220
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> IV <SEP> 15,5 <SEP> 110- <SEP> 0,5-1,55 <SEP> 2900 <SEP> 22-46 <SEP> 1,
95 <SEP> g
<tb>
<tb>
<tb> 220
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> V <SEP> 33 <SEP> 110- <SEP> 0,3-1,7 <SEP> 4005 <SEP> 22-43 <SEP> 1,64 <SEP> g
<tb>
<tb>
<tb> 220
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> VI <SEP> 44,5 <SEP> 110 <SEP> 0,27-0,75 <SEP> 3400 <SEP> 23-36 <SEP> 0,78 <SEP> g <SEP>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> VII <SEP> 27,5 <SEP> 110 <SEP> 0,35-0,67 <SEP> 1700 <SEP> 22-35 <SEP> 0,57 <SEP> g <SEP>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> VIII <SEP> 49,5 <SEP> 220 <SEP> 0,5-1,0 <SEP> 3100 <SEP> 29-38 <SEP> 0,54 <SEP> g <SEP>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> Totaux <SEP> : <SEP> 217,5 <SEP> 22105 <SEP> 13g18 <SEP> g
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> 80% <SEP> de <SEP> la <SEP> théorie).,
<tb>
La densité de courant moyenne s'élève à 0,0025-0,02 maximum 0,035 Amp/cm2 de surface cathodique.
Comme la drogue employée contient 1,1% d'alcaloïdes (par la métho- de gravimétrique), le rendement de 13,18 g d'alcaloïdes correspond à 80% de la théorie. La toxicité du mélange d'alcaloïdes de Veratrum ainsi obtenu est DL 50 = 0,810 mg/kg de souris (durée d'injection = 7 secondes), alors qu'un mélange d'alcaloïdes, obtenu par extraction directe à l'éther à partir d'une drogue rendue alcaline avec de l'ammoniaque et avec un rendement de 73 % possède une -toxicité DL 50 = 0,535 mg/kg de souris (durée d'injection = 7 se- condes). L'action pharmacologique dans l'essai sur la pression sanguine (chats) ests, pour la préparation obtenue ci-dessus par électrodialyse,
plus élevée (environ 10 % que pour la préparation de comparaison obtenue par 1'extraction usuelle.
Exemple 6
Avec les mêmes conditions d'essai que dans l'exemple 1, on utili- se 2 kg de la même drogue avec une teneur en alcaloïdes de 1,1 % détermi- née par l'analyse. On fait une électrodialyse de nouveau avec une tension de 110-220 V La durée d'électrodialyse s'élève à 320 heures avec en tout une consommation de 290010 Watts heures, la densité de courant maxima étant de 0,03 Amp/cm2 de surface cathodique, en moyenne de 0,002-0,02 Amp/cm,2 Le liquide cathodique est de nouveau renouvelé fréquemment, sans toutefois dé- terminer chaque fois la teneuro Les solutions cathodiques réunies sont ren- dues faiblement alcalines avec de l'ammoniaque (pH 9) et extraites à 3 re- prises, chaque fois avec 1000 cm3 d'éther. Après évaporation de l'éther,
on obtient 19,1 g de mélange d'alcaloïdes ce qui correspond à 87 % de la théorie.
La toxicité du cprodut est DL 50 = 0,800 mg/kg de souris (durée d'injection = 7 secondes).L'activité correspond à celle du procuti obtenu suivant l'exem- ple 1 par électrodialyseo
A partir de la solution cathodique extraite par agitation à l'é ther, on peut obtenir par extraction subséquente avec du chloroforme encore le75 g d'alcaloïdes, soit 8 %, Cette fraction présente une toxicité passa- blement élevée (DL 50 = 0,295 mg/kg de souris) sans toutefois posséder une activité plus élevée en rapporto
<Desc/Clms Page number 9>
Dans un autre essai suivant l'exemple précédent,
on extrait par agitation le liquide cathodique à 3 reprises avec chaque fois 1 litre de
EMI9.1
méthylisopropylëther, au lieu d'éther, On obtient 18,9 g de mélange d'alca- loides, ce qui correspond à 86% de la théorie. La toxicité s'élève à : DL 50 = 0,815 mg/kg de souris (durée d'injection = 7 secondes).
Exemple u
On humecte avec 3 litres d'acide lactique à 5 % 500 g de Veratrum album puiv ayant une teneur en alcaloïdes de 1,1 % mesurée par analyse gra-
EMI9.2
vimétriqae et, après 24 heures de repos, on introduit le tout dans le com- partiment moyen de l'appareillage dÇélectrodialyse décrit dans l'exemple 1.
On remplace le liquide cathodique à 4 reprises, sans déterminer la teneur en alcaloïdes chaque fois. On électrodialyse par application d'une tension de 110 et de 220 V, avec de nouveau interoalage d'une résistance au début de l'opération La durée d'électrodialyse s'élève à 295 heures, avec une
EMI9.3
consommation de 7320 Watts-heures" La densité de courant maximum est de 0,3 Amp/cm2, en moyenne de 0,003-0,02 Amp/cm2 On rend les solutions cathodi- ques réunies faiblement alcalines (pH de 9) avec de l'ammoniaque et on ex- trait 3 fois par agitation, avec chaque fois 300 cm3 de toluène.
Après éva-
EMI9.4
poratîon du solvant on obtient °s1'! g du mélange dnalcaloi.des ce qui cor- espond à 74,7 % de la théorie.La toxicité s'élève à 0,700 mg/kg de souris
EMI9.5
(durée arinje zion = 7 secondes) tandis qu'une préparation de comparaison, obtenue par extraction au toluène de la drogue avec un rendement de 62 %
EMI9.6
offre une toxicité de 0,650 mg/kg de souris (durée d'injesiion = 7 secondes). Dans la comparaison pharmacologique, le premier produit s'avère environ 1,5 fois plus actif que celui obtenu par l'extraction courante.
Exemple 8"
EMI9.7
On soumet à une percolation avec 40 litres de chlorofoi-me 10 kg de rhizomes de Veratrum album pulv. humectés à 1?ammoniaqueo Après avoir chassé le chloroforme par distillation, on obtient 230 g d'un extrait brut ayant une teneur en alcaloïdes de 41 %
On met 115 g de cet extrait brut en suspension dans 2,8 litres d'acide acétique à 5 % et on introduit cette suspension dans le compartiment moyen de l'appareillage d'électrodialyse décrit dans l'exemple 1 On élec-
EMI9.8
trodialyse pendant 8 heures sous 220V et 1,5 Amp avec introduction de C02 dans le compartiment cathodiqueOn alcalinise PH de 9) le liquide cathodi- que 1,5 litres) avec de l'ammoniaque et on extrait sous agitation a 3 re-
EMI9.9
prises,
chaque fois avec 500 cm3 de triohioréthylèneo A partir de la couche de trichloréthylène on obtient 32 g àôéàlealoiàes presque incolores (ce qui correspond a 68 % calculé sur l'extrait brut).La toxicité est : DL 50 = 0,550 mg/kg de souris 115 g de l'extrait brut obtenu à partir de la drogue ci-dessus
EMI9.10
sont extraits sans appliquer une élaotrodialyse, avec de l'acide chloriidi# que 1 %, on extrait sous agitation la solution acide a 2 reprises avec du chloroforme et on la rend ammoniacale (pH 9) avec de 1'-ammoniaque A partir de la solution alcaline on extrait sous agitation les alcaloïdes avec de
EMI9.11
leêther.
Après avoir chassé l'éther par d.aaîï2aîosa on obtient: 23 g dal- caloïdes, ce qui correspond à 48 % de la théorie en calculant isur 1 extrait brut. Perdes par formation d'une émulsion. La toxicité de oee P::"Dd1ilo; est de DL 50 - o 750 mg/Kg de souris. Pharmacologiquemeilt, il r c e&. ',e SiOitie aus- si actif que la préparation obtenue ci-dessus par é.ecE oc.. ..1; sc Exemple 90 On nuneote 900 g de rhizomes au Teratrtm album pulVo O 6 VLSilRtsi en alcaloïdes de 1,1 %'1 mesurée par gra.i;'imên-ie) avec 5 litres oxacide acétique a 5 % et!! après repos de 24 heures, on. électrodialyse sonformëme/it à lexem-
<Desc/Clms Page number 10>
ple 1. Les membranes de dialyse, le matériau anodique et le matériau cathodi- que sont encore une fois les mêmes.
La tension appliquée est de nouveau de
110-220 V (tout d'abord avec l'intercalage en série d'une résistance). La densité de courant maximum est de 0,035 Amp/om2 de surface cathodique.On interrompt 1 électrodialyse déjà après 16 heures, c'est-à-dire après trans- port d'un peu moins de la moitié des alcaloïdes de la drogue mise en jeu (consommation de courant : 2400 watts-heures) Le liquide cathodique obtenu est bien mélangé puis divisé exactement en deux parties.
La première moitié (600 cme ce qui correspond à 450 g de drogue) est rendue alcaline avec de l'ammoniaque (pH 9) et extraite sous agitation
3 fois, chaque fois avec 300 cm3 de benzène. A partir de la solution benzé- nique on obtient, après avoir chassé le solvant, 2,1 g d'alcaloïdes de cou- leur claire (rendement calculé sur le maximum d'alcaloïdes que l'on peut re- tirer de la drogue : 42,5 %). La toxicité s'élève à DL 50 = 0,275 mg/kg de souris).
A titre comparatif, on humecte 300 g de la même drogue avec de l'am moniaque et on extrait avec 1,4 litres de benzène. A partir de la solution benzénique, on transfert les alcaloïdes par agitation avec 200 cm3 d'acide chlorhydrique dilué 1% dans la phase. aqueuse et, après séparation de cette phase aqueuse et purification de cette dernière par extraction sous agita- tion avec 25 cm3 de benzène, on met en liberté les bases alcaloïdes par ad- dition d'ammoniaque et on les reprend alors dans du chloroforme par extrac- tion avec ce dernier solvant. Après avoir chassé le solvant par distillation de la couche chloroformique séparée, on obtient 1,75 g (rendement de 53% d'un mélange alcaloïdes d'aspect un peu'plus foncé, qui présente une toxi- cité DL 50 = 0,870 mg/kg de souris.
En comparaison avec le mélange d'alcaloï- des décrit précédemment, obtenu par voie électrodialytique, la préparation obtenue par extraction directe de la drogue a une action sur la pression sanguine 3, 8 - 4 fois moindre.
Exemple 10.-
La seconde moitié du liquide cathodique (600 cm3 obtenu dans l'exemple 9, alinéa 1, est de même rendu alcalin avec de l'ammoniaque (va- leur de pH de 9) puis extrait sous agitation à 3 reprises avec chaque fois 250 am3 d'éther diéthylique. Après avoir chassé le solvant par distillation, on obtient 2,0 g (rendement de 40,5 %) de mélange d'alcaloïdes presque in- colore, ayant une toxicité DL 50 = 0,550 mg/kg de souris.
A titre comparatif, on humecte 300 g de la même drogue avec de l'ammoniaque et on extrait avec 1,5 litres d'éther. A partir de la solution éthérée, on extrait sous agitation les alcaloïdes avec 200 om3 d'acide chlor- hydrique aqueux 1% on purifie la souche aqueuse encore une fois par ex- traction sous agitation avec 30 cm3 d'éther, puis on alcalinise encore une fois avec de l'ammoniaque. Les alcaloïdes mis en liberté sont repris dans du chloroforme par extraction sous agitation avec ce solvant. Après départ du solvant par distillation à partir de la couche chloroformique séparée, on obtient 2,1 g (rendement de 63,6 %) de mélange d'alcaloïdes de couleur sombre, ayant une toxicité DL 50 = 0,685 mg/kg de souris.
Le produit ainsi obtenu s'avère dans l'essai pharmacologique (chats) 1,7 fois moins actif que la préparation décrite antérieurement obte- nue par électrodialyse et extraction sous agitation du liquide cathodique alcalin avec de l'éther.
REVENDICATIONS.
**ATTENTION** fin du champ DESC peut contenir debut de CLMS **.