La présente invention a pour objet un procédé de fabrication d'une préparation d'hormone stimulant les follicules (H S F) de la glande pituitaire antérieure et plus particuliè- rement d'une telle hormone exempte de facteurs physiologiques contaminants.
La préparation de l'hormone stimulant les follicules "apparemment homogène" a été décrite dès 1949 par Fruton et Simonds, dans l'ouvr&ge Général Biochemistry, édité par John Wilez & Sons, Inc., New York 1953. Dans la revue Endocrinology,
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56t p. 216-217 (1955), S.L. Steelman et autres ont décrit l'isl- lement d'un produit de cette hormone ayant une puissance de l'ordre de 8 à 9 fois celle de la préparation apparemment homogène prémentionnée.
La présente invention crée maintenant un procédé de fabrication d'une préparation d'hormone stimulant les follicules présentant non seulement une puissance biologique beaucoup plus grande que le produit décrit par Fruton et Simonds, mais qui est d'une pureté supérieure même à celle décrite dans l'article de Steelman et autres. Le procédé de l'invention donne une préparation d'hormone qui est sensiblement non-antigène lors de l'adminis- tration parentérale à un niveau de dosage physiologiquement actif.
En outre ce procédé est particulièrement approprié à une fabri- cation industrielle, c'est-à-dire sur une grande échelle.
La préparation de HSF obtenue par le procédé de l'invention est bien différente des produits décrits dans les publications antérieures en ce qui concerne le poids moléculaire, la teneur en cystine, la puissance de HSF et sa teneur en earbohydrate, puis plus particulièrement en ce qui concerne sa .teneur en hexose et en hexosamine.
Les avantages du procédé de l'invention peuvent être obtenus avec un produit de HSF ayant un poids moléculaire inférieur à 50.000, bien que les meilleurs résultats soient obtenus avec un produit de HSF ayant un poids moléculaire inférieur à 35.000 et en particulier, pour l'application' thérapeutique, avec l'hormone décrite ici ayant un poids moléculaire de 30.000,
La teneur en carbohydrate de ce produit de HSF est au moins de 3 % en poids, bien que les meilleurs résultats puissent être obtenus avec un produit ayant une teneur en carbohydrate d'au moins 5 % en poids et que les préparations thérapeutiques particulièrement actives obtenues par le procédé de l'invention aient une teneur en carbohydrate d'environ 7 à 8% en poids, Les carbohydrates détectables proéminents contenus dans le produit de HSF sont la mannose,
la galactose et la fucose, ce
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dernier sucre n'ayant pas été antérieurement mentionné comme cons'tituant de la HSF. La teneur en hexose de ce produit HSF doit être d'au moins 2 %, tandis que les meilleurs résultats sont obtenus avec un produit HSF contenant au moins 3 % on poids d'hexose et que les avantages particuliers de l'invention peuvent être obtenus avec un produit HSF contenant environ 4 % en poids d'hexose.
De même, la teneur en hexosamine du produit HSF est d'au moins 1% en poids, tandis que de meilleurs résultats peuvent être obtenus avec un produit HSF contenant au moins 2,5 % en poids d'hexosamine et qu'un effet thérapeutique particulièrement désirable peut.être. obtenu avec un produit HSF contenant environ 4 % en poids d'hexosaminé.
, Les avantages de l'invention peuvent être obtenus avec un produit HSF contenant au moins 4,5 % en poids de cystine, bien que de meilleurs résultats puissent être obtenus avec un produit HSF contenant au moins 5,5 % en poids de cystine et qu'un effet thérapeutique marquant selon cette invention puisse être obtenu avec un produit HSF contenant environ 6 à 7% en poids de cystine.
L'activité biologique de ce produit HSF peut être déterminée selon le procédé d'augmentation de Steelman et Pohley, Endocrinologie, 53, 604-616 (1955). Les résultats analytiques de ce mode opératoire peuvent être exprimés comme un multiple de l'étalon HSF (264-151X) décrit dans l'article de Steelman et Pohley et, dans la description de la présente Invention, l'étalon HSF est appelé simplement "étalon".
Le produit HSF du procédé de cette invention peut être caractérisé biologiquement comme montrant une puissance d'au moins 1350 % par rapport à celle dudit étalon. Mais, de meilleurs résultats sont obtenus avec un produit ayant une puissance HSF d'au moins 1600 à 1800 % de celle de l'étalon et un effet thérapeutique particulièrement désirable peut être obtenu avec une préparation ayant une puissance HSF d'au moins 3000 % de cell de 1 étalon. Le procédé de l'invention a permis de fabriquer
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des préparations ayant des puissances HSF de l'ordre de 3500 à 5000 % de celle de l'étalon.
Ce produit HSF peut être fabriqué par le procédé comprenant une opération spéciale de fractionnement à échange ionique pouvant être effectuée soit par masses, soit en continu: dans une colonne. Conformément à ce procédé, une solution d'une matière contenant la HSF est amenée en contact avec un échangeur d'anions de cellulose à un pH d'alcalin au point isoélectrique de la HSF et avec une molarité ne dépassant pas 0,1 pour adsorber la HSF sur cet échangeur d'anions. Par échangeur d'anions de cellulose, on entend une cellulose ayant des groupes d'échange anionique liés à la molécule de cellulose. Des exemples d'échan- geurs d'anions de cellulose convenables sont la diéthylaminoéthyl'' cellulose, la diméthylaminoéthyl-cellulose et les éthers d'ammonium quaternaires de cellulose.
Le point isoélectrique de la HSF est environ le pH 5,0 à 5,2 et, en conséquence, l'opération'd'adsorption prémentionnée doit être effectuée à un pH d'au moins 5,0 , 5,5. La meilleure adsorption de la HSF sur l'échangeur d'anions de cellulose est .obtenue à un pH entre 6,0 et 8,5 avec une molarité inférieure à 0,02 Des résultats particulièrement désirables sont obtenus lorsque la matière contenant la HSF est amenée en contact avec l'échangeur d'anions de cellulose approximativement au pH neutre,, donc à environ 7,0. Une adsorption très sélective de la HSF sur l'échangeur d'anions de cellulose peut être obtenue avec une molarité d'environ 0,005.
Dans l'exécution de cette opération d'adsorption, l'échangeur d'anions de cellulose peut être équilibré avec les conditions prémentionnées par traitement avec une solution aqueuse ayant le pH et la molarité désirés. L'échangeur d'anions de cellulose équilibré peut être séparé du liquide résiduel et tassé dans une colonne placée verticalement. La solution de matière contenant la HSF, également réglée au pH et à la molarité désirés, peut ensuite être amenée à descendre à travers la colonne
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d'échangeur d'anions de cellulose. Le produit sortant, récupéré au bas de la colonne, peut être rejeté ou utilisé dans la fabrication d'autres facteurs pituitaires à action physiologique.
La HSF adsorbée sur un échangeur d'anions de cellulose, comme décrit dans ce qui précède,,peut être séparée sélectivement de la substance contaminante par une opération d'élution spéciale.
Cette élution peut être obtenue en traitant l'adsorbat de HSF sur un échangeur d'anions de cellulose avec une solution aqueuse à un pH acide par rapport au point isoélectrique de la HSF, c'est-à-dire à un pH inférieur à environ 4,8. L'élution sélective d,e,HSF peut être effectuée à un pH acide par rapport au point isoélectrique de la HSF sans qu'il soit nécessaire de régler , spécialement la molarité du système. Etant donné qu'à un pH inférieur à 3,5, l'activité de la HSF est susceptible de destruc- tion et que la capacité de l'échangeur d'anions de cellulose est -beaucoup réduite, il est désirable, pendant cette opération de désorption, de maintenir dans le système un pH de 3,5 à 4,8 environ.
On a trouvé que la sélectivité de cette opération d'élution est renforcée à un pH alcalin par rapport au point isoélectrique de la HSF et à une molarité critique dans le système. Pendant la désorption, le pH peut être le même que celui indiqué dans ce qui précède relativement à l'adsorption. Les avantages de l'invention peuvent être obtenus par élution de la HSF adsorbée sur l'échangeur d'anions de cellulose à une molarité d'au moins 0,01. Lorsque le pH du système pendant la désorption est de 6,0 à 8,5, les meilleurs résultats sont obtenus à une molarité de 0,0075. Dans les opérations industrielles pratiques, la molarité du système pendant la désorption peut être de l'ordre de 0,1 à 0,2, bien que l'on ait trouvé qu'une plus grande molarité n'affecte pas notablement l'élution sélective de la HSF.
Les sels utilisés pour donner la molarité critique aux systèmes d'adsorption et de désorption dans ce fractionnement-
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ne doivent pas avoir un effet inhérent détériorant la molécule de HSF ou son activité physiologique, mais, cette considération . mise à part, tout sel peut être utilisé dans ce procédé. Par exemple, des sels appropriés à être utilisés dans ce procédé sont le chlorure de potassium, le chlorure de sodium, le phosphate de sodium, l'hypophosphate de sodium, l'hyperphosphate de sodium et les composés de phosphate potassique. correspondants.
L'élution peut être effectuée en faisant descendre une solution aqueuse ayant le pH et la molarité désirés à travers , une colonne tassée contenant l'adsorbat de HSF adsorbé sur un échangeur d'anions.de cellulose. L'éluat contenant la HSF désorbée sélectivement peut être recueilli au bas de la colonne et l'éluat recueilli peut être déshydraté par lyophilisation, traité pour produire une nouvelle épuration, ou mis en paquets directement pour la vente.
La matière première utilisée pour ce 'traitement de fractionnement peut être toute matière contenant la HSF. Ainsi, cette matière première peut être un extrait aqueux convenable de tissu pituitaire ou de tissu pituitaire antérieur. Le tissu peut 'être tiré de glandes pituitaires d'animaux, tels que porcs, boeufs, moutons, etc.. Cependant, un produit de HSF particuliè- rement désirable peut être fabriqué, conformément à l'invention, à partir de tissu pituitaire de porcs réduit. Dans des opérations industrielles, cette épuration peut être exécutée efficacement sur un extrait aqueux des résidus de 'tissu provenant de l'extrac- tion de l'hormone adrenocorticotrophine (HACT) à partir de glandes pituitaires dans un système acide-acétone.
Préparatoirement à ce traitement d'adsorption-élution, il est désirable de traiter auparavant une solution aqueuse de la matière contenant la HSF, telle que l'extrait prémentionné de résidus de la fabrication de l'hormone adrénocorticotrophine par un fractionnement à l'alcool. Dans ce traitement préalable, une monohydroxy alcane contenant moins de 4 atomes de carbone, par exemple de l'éthanol, du méthanol et du propanol, est
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additionnée à une solution aqueuse de ce genre pour produire une concentration alcoolique finale d'au moins 50 % en volume pour précipiter une fraction contenant la HSF et ce précipité est séparé du liquide surnageant.
Ce précipité séparé peut être mis en suspension dans l'eau. au pH et à la'molarité désirés, puis utilisé comme matière,première dans le traitement d'adsorp- tino-élution de l'invention. Le pH du mélange alcool-eau dans ce fractionnement doit être d'environ 7,0 à 10 et des résultats particulièrement désirables sont obtenus à un pH d'environ 8,0 à 9,0. Un fractionnement à l'alcool particulièrement, utile est produit à un pH d'environ 8,6 et avec uneconcentration d'alcool d'environ 70 % en volume. La température pendant ce fractionnement à l'alcool doit être quelque peu inférieure à 25 C pour empêcher la destruction thermique de l'activité de HSF.
Il est évident que sous des conditions d'acidité relativement grande de la HSF, la précipitation peut être obtenue à une concentration alcoolique inférieure ou qu'un sel de zinc convenable peut y être additionné à une concentration alcoolique encore inférieure.
De même) la matière contenant la HSF peut être soumise à la protéolyse avant le fractionnement dans ce traitement d'adsorption-élution et, pour obtenir des résultats particuliè- rement désirables, la protéolyse peut être suivie du fractionne- ment à l'alcool prémentionné, puis d'un traitement avec 1'échange d'anions de cellulose. Dans cette protéolyse, la matière contenanl la HSF, par exemple un extrait aqueux des tissus prémentionnés provenant de l'extraction de l'hormone adrénocorticotrophine, peut être traitée avec des protéinases tels que trypsine et chymotrypsine, à un pH et à une température auxquels l'action protéolytique de ces enzymes est maximum pour rendre la HSF plus facilement séparable des protéines contaminantes.
Les meilleurs résultats sont obtenus par protéolyse avec de la pancréatine, par exemple du tissu pancréatique de porcs réduit, déshydraté, dégraissé, à un pH entre environ 6,5 et 10,0. Une protéolyse particulièrement désirable peut être obtenue avec de la
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pancréatine à un pH d'environ 8 à 9.
Dans l'exécution de cette protéolyse, de la pancréatine triple force (puissance N.F. 1 : 75) peut être mélangée avec la matière contenant la HSF suivant un rapport enzyme-substrat de 1 : 90 environ. Cette protéolyse peut être obtenue selon les principes bien connus d'action enzymatique à une température élevée, c'est-à-dire au-dessus d'environ 25 C, en un court laps de temps et, sous les conditions prémentionnées, la protéolyse complète peut être effectuée à une température d'environ 37 C en trois heures environ.
Après achèvement de la protéolyse, le protéolysat résultant peut être soumis au traitement de fractionnement à l'alcool prémentionné ou il peut être utilisé directement dans le procédé d'adsorption-élution de l'invention, ou bien, si on le désire, le protéclysat peut être dialysé contre de l'eau pour séparer les produits finaux de digestion d'enzymes de la matière contenant la HSF.
Le procédé de l'invention peut être illustré par les exemples particuliers qui suivent.
EXEMPLE 1
De la diéthylaminoéthyl-cellulose fut équilibrée par traitement avec une solution tampon de phosphate de sodium 0,05 M au pH 7,0. L'échangeur d'anions de cellulose équilibré fut tassé dans une colonne placée verticalement jusqu'à une hauteur.de 40 à 50 cm.
De la HSF de porc en une quantité de 400 mg, préparée' par le traitement de protéolyse prémentionné et préalablement traitée par le fractionnement alcoolique précédemment décrit, ayant une puissance de 800 % de sel de l'étalon, fut dissoute dans 10 ml d'eau distillée. La solution obtenue fut réglée au pH 7,0. On fit descendre cette solution de HSF à travers la colonne d'échangeur d'anions de cellulose. La matière sortante
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fut rejetée.
La colonne d'échangeur de ce'llulose fut lavée avec 30 ml de solution tampon au phosphate de sodium 0,005 M au pH 7,0. L'élution de la colonne lavée fut obtenue avec une solution aqueuse contenant 0,5 M de.chlorure de sodium et 0,1 M de phosphate bisodique ayant passé à travers un réservoir d'eau distillée de 200 ml.
Les douze premiers lm d''éluat ainsi obtenus furent rejetés. On recueillit ensuite des fractions d'éluat en la quantité de 3 ml. Chacune des fractions recueillies fut soumise à l'analyse spectrophotométrique pour déterminer l'absorption ultra-violette à une longueur d'onde de 280 comme mesure de densité optique. La concentration de protéine de ces fractions fut calculée en multipliant le volume de la fraction, en prenant en considération un facteur de dilution approprié, avec sa densité optique. Cette concentration de protéine peut être exprimée en termes "d'unités de densité optique".
Les 400 mg de matière première contenant la HSF repré- sentèrent un total de 537 unités de densité optique conformément à la.valeur obtenue avec un nombre aliquote à partir de cette matière de départ. rassemblées rassemblées
Des fractions 1 à 16 et 17 à 42 furent/séparément et par détermination biologique d'augmentation de poids ovarien dans des rats femelles vierges non formés selon le procédé analytique prémentionné, on a trouvé,que l'activité de fractions réunies 17 à 42 présentaient une augmentation de puissance triple par rapport è. la matière première, c'est-à-dire environ 2500 % de l'étalon.
EXEMPLE 2
Une autre quantité de 400 mg de matière première contenant la HSF décrite à l'exemple 1 fut traitée de la même manière qu'exposé audit exemple et une collection comparable de
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fractions 17 à 42 fut recueillie et combinée avec les fractions rassemblées 17 à 42 provenant de la masse décrite à l'exemple 1.
Les fractions combinées furent dialysées contre de l'eau distillée, lyophilisées et ensuite redissoutes dans 10 ml d'eau distillée. L'analyse montra que la solution résultante contenait 285 unités de densité optique ou environ un quart de la teneur de protéine de 800 mg dans la matière première.
La solution fut réglée au pH 7,0 et on la fit passer de nouveau à travers la colonne d'échangeur d'anions de cellulose.
Le produit sortant fut rejeté et l'adsorbat résultant fut lavé avec 30 ml de solution tampon au phosphate de sodium 0,005 M au pH 7,0. L'adsorbat lavé fut élue avec une solution contenant 0,25 M de chlorure de sodium et 0,05M de phosphate bisodique passé à travers un réservoir de 200 ml d'eau distillée. On recueillit de nouveau des fractions de 3,0 ml et la densité optique de ces fractions fut déterminée.
Les résultats analytiques montrèrent que les fractions de 33 à 42 et les fractions de 43 à 60 contenaient la majeure partie de l'activité de HSF et que,ces deux constituants de la matière première étaient probablement identiques.
EXEMPLE 3
Des fractions 33 à 42 et 43 à 60 provenant de l'exemple 2 furent rassemblées et dissoutes dans 10 ml d'eau.
La solution obtenue, qui contenait un total de 90 unités de densité optique, fut réglée au pH 7.
On fit passer la solution réglée à travers une colonne
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contenant 10 ml de diéthylaminoéthyl-oe.7ulose équilibrée d'une hauteur de 40 cm. Le produit sortant fut rejeté et l'adsorbat résultant fut lavé avec 10 ml de solution tampon au phosphate de sodium 0,005 M au pH 7,0.
L'adsorbat lavé fut élué avec une solution contenant
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0,5 M de chlorure de sodium et 0,1 M de phosphate bisodique passé à travers un réservoir de 200 ml d'eau distillée. L'éluat fut recueilli en fractions de 1,0 ml.
L'éluat combiné montra une pointe unique vive à l'ana- lyse chromatographique. Les fractions rassemblées furent dialysées et lyophilisées. Le produit séché fut obtenu en un rendement de 96 mg.
Ce produit fut analysé dans des rats femelles non formés hypophysectomisés conformément au traitement prémentionné pour déterminer la dose minimum nécessaire pour obtenir une réaction ovarienne, de même que pour déterminer la présence de facteurs physiologiques contaminants. Les résultats indiquèrent qu'une augmentation importante du poids ovarien était obtenue avec une dose de 0,001 à 0,0025 mg du produit. On n'observa pas d'effet histologique dans les glandes thyroïdes ou adrénales avec une dose allant jusqu'à 0,5 mg. L'analyse dans des rats mâles hypophysectomisés avec une dose de 0,5 mg ne montra pas d'activité d'hormone leutinisante telle que mesurée par l'augmen- tation du poids de la glande prostatique ventrale. Les poids testitulaires furent maxima pour la HSF.
L'analyse électrophorétique à plusieurs niveaux de pH entre 4,0 et 9,5 montra un constituant unique. Des études ultra-centrifuges montrèrent l'homogénéité avec un poids molécu- laire approximatif de 29.000, une constante de sédimentation (S20w) ,de 2,49 et une constante de diffusion (D20w) de 7,3 x 10-7.
Cette préparation de HSF fut soumise à l'analyse à l'acide aminé et les résultats furent comme suit
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<tb> acide <SEP> aminé <SEP> teneur' <SEP> % <SEP> en <SEP> poids
<tb>
<tb>
<tb>
<tb>
<tb> acide <SEP> aspartique <SEP> 11,6
<tb>
<tb>
<tb> acide <SEP> glutamique <SEP> 9,2
<tb>
<tb>
<tb> sérine <SEP> 4,4
<tb>
<tb>
<tb> glycine <SEP> .
<SEP> 2,9
<tb>
<tb>
<tb> thréonine <SEP> 5,4
<tb>
<tb>
<tb> alanine <SEP> 3,5
<tb>
<tb>
<tb> lysine <SEP> 5,7
<tb>
<tb>
<tb> arginine <SEP> 3,6
<tb>
<tb>
<tb> proline <SEP> 4,4
<tb>
<tb>
<tb> tyrosine <SEP> 4,5
<tb>
<tb>
<tb> valine <SEP> 3,9
<tb>
<tb>
<tb> méthionine <SEP> 1,5
<tb>
<tb>
<tb> isoleucine <SEP> 2,8
<tb>
<tb>
<tb> leucine <SEP> 4,c
<tb>
<tb>
<tb> phénylalanine <SEP> 3,3
<tb>
<tb>
<tb> histidine <SEP> 2,8
<tb>
<tb>
<tb> cystine <SEP> 6,5
<tb>
<tb>
<tb> tryptophane <SEP> 0,7
<tb>
On trouva que la teneur en hexose de cette préparation de HSF était de 3,7 % en poids, ce qui était représenté par 1,2 % en poids de galactose, 1,4 % en poids de mannose et 1,1 % en poids de fucose. La précision des analyses individuelles de carbohydrate était + 10 %.
La teneur en hexosamine de cette préparation de HSF fut déterminée comme 3,7 % en poids avec une erreur analytique potentielle de 15 à 20 %.
L'invention s'étend à la préparation d'hormone pitui- taire stimulant les follicules appropriée à l'administration parentérale obtenue par le procédé-décrit ci-dessus.
Bien que diverses réalisations de cette invention aient été décrites et que l'on ait donné des détails spécifiques pour l'illustrer, il est évident que l'on peut faire varier beaucoup de ces détails et appliquer diverses variantes de réalisation sans sortir du cadre de l'invention.
REVENDICATIONS
1 - Une préparation d'hormone pituitaire stimulant les follicules appropriée: à l'administration parentérale, caracté- risée biologiquement en ce qu'elle montre une puissance d'au moins 1350 % de celle'de l'étalon et chimiquement en ce qu'ell a un poids moléculaire inférieur à 50.000, une teneur en cysti d'au moins 4,5 % en poids et une teneur en carbohydraté d'au moins 3 % en poids constituée par'au moins 2 % en poids d'hexose et au moins 1 % en poids d'hexosamine.
2 - Une préparation d'hormone pituitaire stimulant le follicules appropriée à l'administration parentérale, caractérisa biologiquement .en ce qu'elle montre une puissance d'au moins 1600 à 1800 % de celle de l'étalon'et-chimiquement en ce qu'élis a un poids moléculaire d'au moins 35.000, une teneur en cystine de 5,5 à 6,5 % en poids et une teneur en carabohydrate d'au moins 5 % en poids constituée par au moins 3 % en poids d'hexose et au moins 2,5 % en poids d'hexosamine.
3 - Une préparation d'hormone pituitaire stimulant les follicules suivant la revendication 2, dans laquelle le poids moléculaire est d'environ 30.000'.
4 - Procédé de fabrication d'une préparation d'hormone pituitaire stimulant les follicules appropriée à l'administration parentérale, caractérisé en ce qu'on met en contact, une solution de matière contenant de la HSF avec un échangeur d'anions de cellulose à un pH d'alcalin au point isoélectrique de la HSF et une molarité inférieure à 0,1 pour adsorber la HSF sur cet échangeur d'anions, puis on met l'adsorbat obtenu en contact avec une solution aqueuse ayant un pH d'alcalin au point isoélectrique de la HSF et une molarité d'au moins 0,1 pour éluer sélecti- vement la HSF adsorbée.
5 - Procédé de fabrication d'une préparation d'hormone stimulant les follicules appropriée à l'administration parentéral! consistant à amener une solution de matière contenant de la HSF
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en contact avec un échangeur d'anions de cellulose à un pH d'au moins 5,0 à 5,5 environ et une molarité inférieure à 0,1 pour adsorber la HSF sur ledit échangeur d'anions, puis à amener l'adsorbat résultant en contact avec une solution aqueuse ayant un pH d'acide au point isoélectrique de la HSF pour éluer' sélectivement la HSF adsorbée.
6 - Procédé @ fabrication d'une préparation d'hormone stimulant les follicules appropriée à l'administration parentérale, caractérisé en ce qu'une solution de matière contenant de la HSF est amenée en contact avec un échangeur d'anions de cellulose à un pH d'au moins 5,0 à 5,5 environ et une molarité de moins de 0,1 pour adsorber la HSF sur l'échangeur d'anions, puis à séparer l'adsorbat résultant du produit sortant.
7 - Procédé de fabrication d'une préparation d'hormone stimulant les follicules appropriée à l'administration parentérale, caractérisé en ce qu'une solution de matière contenant de la HSF est amenée en contact avec un échangeur d'anions de cellulose à un pH entre 6,0 et 8,5 et une molarité de moins de 0,02 pour adsorber la HSF sur l'échangeur d'anions, puis à séparer l'adsorbat résultant du produit sortant.
8 - Procédé suivant la revendication 7, caractérisé en ce que l'échangeur d'anions de cellulose est la diéthylaminoé- thyl-cellulose.
9 - Procédé de fabrication d'une préparation d'hormone stimulant les follicules appropriée 4 l'administration parentérale, caractérisé en ce qu'un échangeur d'anions de cellulose sur lequel la HSF à adsorber est amenée en contact avec une solution aqueuse à un pH entre 3,5 et 4,8 pour éluer ' sélectivement la HSF adsorbée, puis l'adsorbat est séparé dudit échangeur d'anions.
10 - Procédé de fabrication d'une préparation d'hormone stimulant les follicules appropriée à l'administration parentérale, caractérisé en ce qu'un échangeur d'anions de cellulose sur lequel la HSF est adsorbée est amenée en contact avec une solution aqueuse à un pH d'au moins entre 5,0 et 5,5 environ et une
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molarité d'au moins 0,01 pour éluer sélectivement la HSF, puis l'adsorbat obtenu est séparé dudit échangeur d'anions.
Il - Procédé de fabrication d'une préparation d'hormone stimulant les follicules appropriée à l'administration parentérale, caractérisé en ce qu'un échangeur d'anions de cellulose sur lequel la HSP adsorbée est amenée en contact avec une solution aqueuse à un pH entre 6yo et 8, 5 et une molarité d'au moins 0,01 pour éluer sélectivement la HSF, puis on sépare l'éluat résultant dudit échangeur d'anions.
12 - Procédé suivant la revendication 11, caractérisé en ce que l'échangeur d'anions de cellulose est la diéthylami- noéthyl cellulose.