<Desc/Clms Page number 1>
La présente invention concerne, de manière générale, de nouveaux com- posés stéroides et des procédés pour leur préparation. Plus particulièrement, elle
EMI1.1
est relative à de nouveaux composés 6,16Tdiméthyl-11-oxygéné-l,4-prégnadiène-17 [alpha] 21-diol-3,20-dioniques, ainsi qu'au procédé de préparation de ces composés à partir de 16-méthyl-4-prégnène-17 a,21-diol-3,11,20-trione. Ces nouveaux composés 6,16-diméthyl-ll-oxygéné 1,4-prégnadiène-17 a, 21-diol-3,20-dioniques possèdent une activité anti-inflammatoire extrêmement élevée et sont spécialement efficaces pour le traitement de l'arthrite et de maladies apparentées, étant donné qu'ils peuvent être administrés pour leur action analogue à celle de la cortisone à des doses extrêmement faibles,
de façon que les effets secondaires indésirables soient minimisés.
EMI1.2
Les nouveaux composés 6,l6-diméthyl-ll-'oxygénê-l,4-prégnadiène-17 OC 21-diol-3,20-dioniques, faisant l'objet de la présente invention, peuvent être chimiquement représentés comme suit :
EMI1.3
formule dans laquelle X est de l'hydrogène ou un halogène, R est de l'hydrogène ou un radical acyle et Z est un groupe céto ou hydroxy.
Ces 6,16-diméthyl-11-oxygéné 1,4-prégnadiène-17 [alpha], 21-diol-3,20-diones se préparent par réaction de l6-méthyl-4-prégnène-17 [alpha], 21-diol-3,11, 20-trione . avec de la formaldéhyde dans des conditions acides, de manière à former de la 17
EMI1.4
a, 20,20,21-bisméthylènedioxy-16 a méthyl-°-prégnène-3,11-dione, qui est mise en réaction avec de l'éthylène glycol en présence d'un catalyseur acide de manière à produire de la 3#éthylènedioxy-17 a, 20,20,21-bisméthylènedioxy-16 a-méthyl-5- prégnène-11-oneo Ce dernier composé est mis en réaction avec de l'acide perben- zoique, de l'acide perphtalique et analogue, de manière à former de la 3-éthylène-
EMI1.5
dioxy-17 a,20, 20, 21-bismthylènedioxy-5,
$-épo$y-16 a-méthyl-prégnane-11-one,qui est alors mise en réaction avec de l'acide formique de manière à produire un mé- lange de 17 a, 20, 20, 21-bisméthylènedioxy-16 oc-méthyl-6-formyloxy-prégnane-<5'- ol-3,11-dione et de 17 a, 20, 20, 21-bisméthylènedioxy-16 a-méthyl-5-formyloxy prégnane-6-ol-3,11-dione, lequel mélange est converti, par réaction avec une solu- tion aqueuse d'hydroxyde alcalin, en 17 [alpha], 20, 20, 21-bisméthylènedioxy-16 a-mé- thyl-alloprégnane-3,6,11-trione, Le composé mentionné en dernier lieu est mis en réaction avec du butanone dioxolane, de manière à produire de la 3-éthylènedioxy-
EMI1.6
17 20, 20, 21-bisméthylènedioxy-16 -méthylalloprégnane-6,11-dione, qui est mise en réaction avec un réactif de Grignard méthylé,
de manière à former de la 3-éthylènedioxy-17 oc,20,20,21-bisméthylènedioxy-..6 OE,16 a-diméthyl-alloprégnane-6 'A -ol-11-one. Cette 3-éthylènedioxy-17 a, 20,20,21-bisméthylènedioxy-6 a, 16 a- diméthyl-alloprégnane-6 -ol-11-one est mise en réaction avec un agent déshydra-
<Desc/Clms Page number 2>
tant,.tel que du chlorure de thionyle dans de la pyridine, de manière à former la
EMI2.1
3-éthylènedioxy-17 OE,20,20,21-bisméthyiènedioxy-6,16 a-diméthyl-5-prégnène-11-one correspondante, qui, par réaction avec de l'acide p-toluène sulfonique monohydra- té dans de l'acétone, est convertie en 17 [alpha], 20,20, 21-bisméthylènedioxy-6 [alpha], 16
EMI2.2
tx-diméthyl-4-prégnène-3,11-dione;
ce dernier composé est mis en réaction avec un acide organique aqueux constituant un agent d'hydrolyse, de manière à former de la 6 a, 16 oc-diméthyl-4-prégnène-17 a,21-diol-3,11,20-trione, qui peut être mise en réaction avec un agent d'acylation, de manière à former le 21-acylate correspondan' En variante, on peut faire réagir la 3-éthylènedioy-17 tx,202021-bisméthylène- dioxy-6,16 tx-diméthyl-5-prégnène-ll-one susmentionnée avec de l'hydrure de lithium et d'aluminium, de manière à réduire le groupe 11-céto en un radical Il -hydroxy, de manière à produire du 3-éthylènedioxy-17 cx,2020,21-bisméthylènedioxy-6,16 a- diméthyl-5'-prégnène-ll P -ol, qui est converti, par réaction avec de l'acide p- toluène-sulfonique monohydraté dans de l'acétone, en 17 tx, 20,20,21-bisméthyène- àioxy-6àl6-dànéthyl-4-prégnène-li fi -ol-3-one;
ce dernier composé mis en réaction avec un acide organique aqueux en tant qu'agent d' hydrolyse, de manière à former de la 6 oc, 16 a -diméthyl-4-prégnène-ll fi, 17 cc,21-triol-3,20-dione, qui peut être mise en réaction avec un agent d'acylation, de manière à former le 21-acylate correspondant.
EMI2.3
Ce 21-acylate de 6 a, 16 oc-'diméthyl-4-prégnène-ll fi, 17 a, 21-triol- 3,20-dione est mis en réaction avec un agent de déshydratation, tel que du chloru- re de méthane sulfonyle dans de la pyridine, ou de l'oxychlorure phosphoreux dis- sous dans de la pyridine, de manière à produire le 21-acylate de 6 [alpha] 16 a-dimé-
EMI2.4
thyl-4,9(ll)- prégnadiène-17 oc, 21-diol-3,20-d.ione correspondant;
ce dernier com- posé est mis en réaction avec de l'acide hypobromeux (par exemple, N-bromosuccini- mide et. acide perchlorique, de manière à produire du 21-acylate de 9 [alpha] -bromo-6
EMI2.5
a,l6a-a3néthyl 4-prégnène-ll pue 17 a, 21- triol-3,20=dione, qui est mis en réaction avec de l'acétate de potassium anhydre dans de l'éthanol, de manière à produire du 21-acylate de 6 a, 16 a, 16 a diméthyl-9,11-époy-q.-prégnène-l7 a, 21-diol- 3,20-dione.
Ce 9,11-époxyde est alors mis en réaction avec du fluorure d'hydrogène dans du tétrahydrofurane, de manière à produire du 21-a-cylate de 6 [alpha] 16 a-dimé-
EMI2.6
thyl-9 a -fluoro-4-prégnène ll , 17 a, 21-triol-3,2o-dione; ce composé est mis en réaction avec un agent d'hydrolyse, de manière à former de la 6 oG, 16 a-dimé- thyl-9 oc-fluoro-4-prégnène-ll foi, 17 ot, 21-triol-3,20-dione, qui peut être mise en réaction avec un agent d'acylation de manière à produire du 21-acylate de 6 OE, 16 a-diméthyl-9 oc-fluoro-4-prégnène-ll , 17 OE, '21-triol-3,20-àîone.
Ce 21-acylate de 6 a,16-diméthyl-9 [alpha] -fluoro-4-prégnène-ll ss, 17 [alpha], 21-triol-3,20-dione est mis en réaction avec du trioxyde de chrome dans de la py-
EMI2.7
ridine, de manière à former du 21-acylate de 6 a, l6ctx-diméthyl-9 a-fluoro-4-prégnè ne-17 a, 21-diol-3,11,20-trione, qui, par réaction avec un agent d'hydrolyse, for me de la 6 [alpha], 16 a-diméthyl-9 a -fluoro-4-prégnène-17 [alpha], 21- triol-3,11,20-trione.
EMI2.8
Les composés 6 a, 16 a -dimêthyl-ll-oxygéné-4-prégnène-17 a-21-diol- 3,2o-dioniques préparés de la manière décrite plus haut, par exemple les composés 6 cx, 16 tx-diméthyl-4-prégnène-17 a, 21-diol-3,11,20-trionique et les composés 6 a, 16 cx -diméthyl-4-prégnëne-ll fi, 17 a, 21-triol-3,20-dioniques, sont mis en con- tact avec l'activité deshydrogénante de microorganismes du genre Schizomycetes,
EMI2.9
ou avec du bioxyde de sélénium, de manière à former le composé 6 #, 16 ot-diméthyl- 11-oxygéné-1,4- prégnadiène-17 a,21-diol-3,20-dioniques correspondants.
Le composé 16-méthyl-.-prégnène-17 a,21-diol-3,11,20-trione utilisé comme matière de départ dans le mode opératoire décrit plus haut est avantageuse- ment préparé en partant du 3-acétate de 16-prégnène-3 a -ol-11, 20-dione connu selon le mode opératoire suivant : - Le 3-acétate de 16-prégnène-3 [alpha]-01-11,20- dione est mis en réaction avec de l'iodure de méthyl magnésium en présence de
EMI2.10
chlorure cuivreux, de manière à former du 3-acétate de 16 a-méthyl-prégnane-3 cc -ol-11,20-dione, qui est mis en réaction avec du HOl'aqueux méthanolique, de ma- nière à former de la 16 a-méthyl-prégnane-3 ce -0l-3.'192D=ü.ion,e.
<Desc/Clms Page number 3>
Ce dernier composé, qui est un puissant anesthésique, est mis en réaction avec de l'anhydride acétique, en présence d'acide p-toluène sulfonique comme catalyseur, de manière à former un mélange d'acétates énoliques contenant du 3,20-diacétate de 16 a-méthyl-17,20-prégnène-3 a,20-diol-ll-one;
ce mélange, après purification chromatographique pour-éliminer la matière de départ inchangée, est mis en réaction avec de l'acide perbenzoique et le 3,20-diacétate de 16 [alpha]-méthyl-17 [alpha], 20-époxy- prégnane-3 [alpha],20-diol-11-one résultant est hydrolysé avec du bicarbonate de potas- sium méthanolique, de manière à produire de la 16 a-méthyl-prégnane-3 [alpha] -17 [alpha]-diol -11,20-dioneo Ce dernier composé est mis en réaction avec du brome dans du chloro- forme, de manière à former de la bromo-16 a-méthyl-prégnane-3 OE,17 [alpha]-diol-11,20- dione, qui est mise en réaction avec de l'iodure de sodium dans de'l'acétone,
de manière à produire de la 21-iodo-16 a-méthyl-prégnane-3 ce,17 a-diol-11,20-dione, qui est convertie sans isolement en 21-acétate de 16 a-méthyl-prégnane-3 a-17 [alpha] 21-triol-11,20-dione par réaction avec de l'acétate de potassium anhydre;
ce com- posé est mis en réaction avec du trioxyde de chrome dans de la pyridine, de manière à former du 21-acétate de 16 a-méthyl-prégnane-17 a,21-diol-3,11,20-trione. Le 21-acétate de 16 [alpha]-méthyl-prégnane-17 a,21-diol-3,11, 20-trione est mis en réac- tion avec du brome dans un mélange d'acide acétique glacial ét de chloroforme, de manière à produire de la 4-bromo-16 a -méthyl-prégnane-17 a, 21-diol-3,11,20- trione, qui est alors mise en réaction avec de la semicarbazide, de manière à former du 21-acétate de 3,20-bis-semicarbazone de 16 a-méthyl-4-prégnène-17 [alpha] 21-diol-3,11,20-trioneo Le 21-acétate de la 3,20-bis-semicarbazone de 16 a-méthyl- 4-prégnène-17 a,21-diol-3,11,
20-trione est mis en'réaction avec du bicarbonate de potassium ou de l'hydroxyde de potassium dans du méthanol aqueux, de manière à for- mer de la 3,20-bis-semicarbazone de 16 a-méthyl-4-prégnène-17 a, 21-diol-3,11,20- trione, qui est alors hydrolysé dans des conditions acides, de manière à produire de la 16 [alpha]-méthyl-4-prégnène-17 [alpha]21-diol-3,11,20-trione.
La réaction entre la 16-méthyl-4-prégnène-17 a,21-diol-3,11,20-trione et la formaldéhyde, de manière à former le dérivé bisméthylènedioxy correspondant est avantageusement exécutée en mélangeant intimement une solution du stéroïde dans un solvant organique, de préférence un hydrocarbure halogéné, tel que le chloroforme, et une solution de formaldéhyde dans un acide minéral aqueux, tel que l'acide chlorhydrique aqueux. La réaction est ordinairement exécutée sensi- blement à température ambiante ; ces conditions la formation du dérivé bis- méthylènedioxy est sensiblement complète en environ 2 à 3 jours.
La couche non- aqueuse est récupérée, lavée avec une solution aqueuse alcaline jusqu'à neutralité, séchée et évaporée, ce qui donne de la 17 a, 20,20,21-bisméthylènedioxy-16 a-mé- thyl-4-prégnène-3,11-dione.
La réaction entre ce dérivé bisméthylènedioxy et l'éthylène glycol est exécutée en chauffant les réactifs en solution dans un hydrocarbure solvant, tel que le benzène, en présence d'un catalyseur acide, tel que l'acide p-toluène sul- fonique. Lorsqu'on emploie du benzène comme solvant, la réaction est avantageuse- ment exécutée en chauffant la solution de réaction sous reflux pendant environ 15 heures, après quoi la solution de réaction refroidie est lavée avec une solution aqueuse alcaline, séchée et évaporée, ce qui fournit de la 3-éthylènedioxy-17 a, 20,20,21-bisméthylènedioxy-16 [alpha] -méthyl-5-prégnène-11-one. Ce dérivé 3-éthylène- dioxy peut être purifié, si on le désire, par chromatographie sur de l'alumine lavée à l'acide.
La 3-éthylènedioxy-17 a,20,20,21-bisméthylènedioxy-16 a-méthyl-5- prégnène-11-one est mise en réaction avec de l'acide perbenzoique ou de l'acide perphtalique en présence d'un milieu liquide, par exemple un hydrocarbure solvant, tel que le benzèneo La réaction est avantageusement à température ambiante; dans ces conditions la réaction est ordinairement sensiblement complète en environ 2 jours. La solution de réaction est décantée d'une partie du produit époxyde, et l'époxyde est récupéré de la solution de réaction neutralisée et séchée par évapo- ration.
Le produit époxyde, à savoir la 3-éthylènedioxy-17 a,20,20,21-bisméthylè- nedixoy-5,6-époxy-16 a -méthyl-prégnane-11-one, est dissous dans de l'acide for-
<Desc/Clms Page number 4>
mique sensiblement anhydre, et la solution résultante est laissée au repos à température ambiante pendant 2 à 3 heures environ. La solution de réaction est alors versée dans de l'eau et le mélange aqueux est extrait avec un hydrocarbure halogéné, telle que le chloroforme.
L'extrait chloroformique est neutralisé, séché et évaporé, en sorte qu'on obtient un mélange de 17 a, 20,20,21-bisméthylè- nedioxy-16 [alpha] -méthyl-6-formyloxyprégnane-5-ol-3,ll-dione et de 17 [alpha], 20,20,21-
EMI4.1
bisméthylènedioxy-16 cx-méthyl-5-formylogy-prégnane-6-ol-3,1I-dione.
La réaction entre les dérivés formyloxy mélangés et la solution d'hy- droxyde alcalin est avantageusement exécutée en dissolvant les composés formyloxy dans un alcanol inférieur, en ajoutant à cette solution une solution aqueuse d' hydroxyde de métal alcalin, tel que l'hydroxyde de potassium, et en chauffant la solution alcaline aqueuse alcoolique résultante sous reflux et en présence d'une atmosphère d'azote pendant environ 1/2 heure. La solution de réaction est refroi- die, neutralisée avec un acide organique, tel que l'acide acétique, et évaporée jusqu'à un petit volume. Le concentrat aqueux est dilué avec de l'eau, et le mé- lange aqueux est extrait à l'aide d'un hydrocarbure halogéné, tel que le chloro- forme.
L'extrait non-aqueux est neutralisé, séché et évaporé, en sorte qu'on ob-
EMI4.2
tient de la 17 ce,20,20,21-bisméthylènedioxy-16 a-méthyl alloprégnane-3,6,11-trio- ne, qui peut être purifié, si on le désire, par cristallisation dans un alcanol inférieur, tel que le méthanol.
EMI4.3
La réaction entre la 17 lx, 20,0,21-bisméthylènedioxy-16 a-méthyl- alloprégnane-3,6,11-trione et le butanone dioxolane est avantageusement conduit par chauffage des réactifs sous reflux en présence d'un catalyseur acide, tel que l'acide p-toluène sulfonique;
dans ces conditions, la réaction est ordinaire- ment complète en environ 10 minutes, Le mélange réactionnel est refroidi, dilué avec du chloroforme et la solution chloroformique résultante est lavée avec du bicarbonate, séchée et évaporée, en sorte qu'on obtient de la 3-éthylènedioxy-17
EMI4.4
a,20,20,21-bisméthylènedioxy-16 a-méthyl-alloprégnane-611-dione qui peut être purifiée, si on le désire, par cristallisation dans de l'acétate d'éthyle.
Une solution de cette 3-éthylènedioxy-17 OE,20,20,21-bisméthylène- dioxy-16 (X-méthyl-alloprégnane-6,11-dione dans du benzène est alors ajoutée, en agitant en l'espace de 10 minutes, à une solution d'iodure de méthyl magnésium dans de l'éther diéthylique. Le mélange résultant est agité pendant environ 1/2 heure supplémentaire, après quoi on ajoute de l'eau et un supplément de benzène et la couche organique est récupérée, séchée et évaporée, ce qui donne la 3-éthy-
EMI4.5
lènedioxy-17 a, 20,20,21-bisméthylènedioxy-6 a,16 z-diméthyl-alloprégnane-6 ol-11-one correspondante.
La réaction entre la 3-éthylènedioxy-17 [alpha], 20,20,21-bisméthylènedioxy-
EMI4.6
6 a, 16 a-diméthyl- alloprégnane-6 fi-ol-11-one et le chlorure de thionyle, lors- que ce dernier est utilisé comme agent déshydratant, est avantageusement exécutée en ajoutant une solution de chlorure de thionyle dans de la pyridine anhydre, goutte à goutte à une solution pyridinique anhydre du stérioide, tout en mainte- nant la température de la solution à approximativement 40 C. La solution résul- tante est-agitée pendant 1/2 heure de plus, refroidie, versée dans de l'eau glacée et le mélange aqueux est extrait avec un hydrocarbure halogénê, tel que le chloro- forme.
La couche chloroformique est neutralisée, séchée et évaporée jusqu'à obten-
EMI4.7
tion d'un produit brut qui'est purifié par chrosatographie sur de l'alumine, en sorte qu'on obtient de la 3-éthylènedioxy-17 [alpha], 20,20,21-bisméthylènedioxy-6,16 a-diméthyl-5-prégnène-ll-one.
EMI4.8
La 3-éthylènedioxy-17 OE,20,20,21-bisméthylènedioxy-6,16 a-diméthyl- 5-prégnène-11-one est dissoute dans de l'acétone anhydre contenant de l'acide p-toluène sulfonique monohydraté, et la solution résultante est laissée au repos à température ambiante pendant environ 15 heures. La solution résultante est alors versée dans de l'eau et le mélange aqueux est extrait à l'aide d'un hydrocarbure halogéné, tel que le chloroforme. La solution chloroformique est neutralisée,
EMI4.9
séchée et évaporée, en sorte qu'on obtient de la 17 <X,20,20,21-bisméthylènedioxy-
<Desc/Clms Page number 5>
6 [alpha], 16 a-diméthyl-4-prégnène-3,11-dione.
La réaetion entre la 17 a, 20,20,21-bisméthylènedioxy-6 a, 16 a-dimé-
EMI5.1
thyl-4-Prégnène-3511-dione et l'acide organique aqueux constituant l'agent d'hydro- lyse, plus particulièrement une solution aqueuse d'acide acétique, est exécutée en chauffant les réactifs à environ 70 C dans une atmosphère d'azote pendant en- viron 8 heures. La solution d'hydrolyse est évaporée, en sorte qu'on obtient de
EMI5.2
la 6 oye 16 cx-dimêthyl-4prégnène-17 a,21-diol-3,11,20-trione, qui est alors mis en réaction avec un agent d'acylation, par exemple de l'anhydride acétique et de la pyridine, de manière à former le 21-acylate de 6 [alpha],16 a-diméthyl-4-prégnène-17 a, 21-diol-3,11,20-trione correspondant.
La réaction entre le composé- 3-éthylènedioxy-17 [alpha], 20,20,21-bisméthy-
EMI5.3
lènedioxy-6,16 cx-diméthyl-5-prégnène-11-one et l'hydrure de lithium et d'aluminium est exécutée en ajoutant une solution du stéroïde dams un hydrocarbure solvant, tel que le benzène, à une suspension éthérée de l'hydrure de lithium et d'alumi- nium et en chauffant la suspension résultante sous reflux pendant environ 4 heu- res.
L'acétate d'éthyle est ajouté au mélange réactionnel refroidi, de manière à détruire l'excès d'hydrure de lithium et d'aluminium ; l'eau est alors ajoutée et la couche éthérée est récupérée, séchée et évaporée, en sorte qu'on obtient une matière cristalline brute, qui est purifiée par chromatographie sur de l'alumine lavée à l'acide, en sorte qu'on obtient du 3-éthylènedioxy-17 a, 20,20,21-bismé-
EMI5.4
thylènedioxy-6,1-6 a-diméthyl-5-prégnène-11 p-ol.
La réaction du 3-éthylènedioxy-17 a,20,20,21-bisméthylènedioxy-6,16 a-diméthyl-5-prégnène-11 S -ol et de l'acide p-toluènesulfonique monohydraté dans de l'acétone est conduite de la manière décrite plus haut pour la 3-éthy- lènedioxy-17 a,20,20,21:-bisméthylènedioxy-6, 16 a-diméthyl-5-prégnène-11-one correspondante, pour produire de la 17 a, 20,20,21-bisméthylènedioxy-6 a,16 cx- diméthyl-°-prégnène-11 S-ol-3-one, qui est alors mise en réaction avec un acide organique aqueux en tant qu'agent d'hydrolyse, tel que l'acide acétique aqueux
EMI5.5
de la manière indiquée plus haut pour l'hydrolyse du composé 17 ot,202021-bis- méthylènedioxy-6, 16 a-diméthyl-4-prégnène-3,11-dione, de manière à former de la 6 cx, 16 oc-diméthyl-4-prégnène-11 j3, 17 et, 21-triol-3,20-dione, qui est mise en réaction avec un agent d'acylation,
par exemple de l'anhydride acétique dans de la pyridine, de manière à former le 21-acylate correspondant, tel que le
EMI5.6
21-acétate de 6 a,16 Ci-diméthyl-°-Prégnène-11 fi, 17 a,21-triol-3,20-dione et analogues.
La réaction entre le 21-acylate de 6 a, 16 a-diméthyl-4-Prégnène-11 ss, 17 a, 21-triol-3,20-dione et l'oxychlorure phosphoreux ou du chlorure de mé- thane sulfonyle est exécutée en mettant les réactifs en présence en solution pyridinique à température ambiante et en laissant la solution au repos à cette température pendant environ 15 heures. La solution de réaction pyridinique est é- vaporée sous vide jusqu'à un petit volume, diluée avec de l'eau et extraite à l'aide d'un solvant organique non miscible à l'eau, tel que l'acétate d'éthyle.
Par évaporation de la solution d'acétate d'éthyle lavée et séchée, on obtient
EMI5.7
le 21-acylate de 6 #, 16 a-diméthyl-4)9(ll)-prégnadiène-17 a,21-diol-3,20-dione, qui peut être purifié, si on le désire, par cristallisation dans un solvant or- ganique, tel qu'un mélange d'acétate d'éthyle et d'éther.
L'addition d'acide hypobromeux à la double liaison± 9(11) de ce
EMI5.8
21-acylate de 6 ,16 xdiméthyl-°,9(11)-prégnadiène-17 OE,21-diol-3,20-dione est avantageusement opérée en ajoutant une solution aqueuse d'acide perchlorique à une suspension du composé stéroide et de N-bromosuccinimide dans du dioxane a- queux, tout en maintenant la température du mélange inférieur à environ 15 C. Le mélange réactionnel est laissé au repos à 15 C pendant environ 2 à 3 heures, la solution jaune est traitée avec de l'alcool allylique pour éliminer l'excès de N-bromosuccinimide, et la solution résultante est évaporée sous vide jusqu'à un petit volume.
La solution concentrée est diluée avec de l'eau et le mélange aqueux est extrait à l'aide d'un solvant organique non miscible à l'eau tel que
<Desc/Clms Page number 6>
l'acétate d'éthyleo L'extrait à l'acétate d'éthyle lavé et séché est évaporé jusqu'à siccité, en sorte qu'on obtient le 21-acylate de 9[alpha] -bromo-6 a, 16 [alpha]- diméthyl-4-prégnène-ll ss, 17 a,21-triol-3,20-dione, qui peut être purifié, si on le désire, par cristallisation dans un solvant organique, tel qu'un mélange d'acé- tate d'éthyle et d'éther.
La réaction de cette 9,11-bromhydrine avec de l'acétate de potassium est exécutée en chauffant les réactifs ensemble dans de l'éthanol sous reflux pen- dant environ deux heureso Le mélange réactionnel refroidi est évaporé jusqu'à petit volume sous vide, la solution concentrée est diluée avec de l'eau et le mélange aqueux est extrait avec de l'acétate d'éthyle. L'extrait à l'acétate d'éthyle lavé et séché est évaporé jusqu'à siccité sous vide, en sorte qu'on ob-
EMI6.1
tient le 21-acylate de 6 oc, 16 oc-diméthyl-9,ll-époxy-4-prégnène-17 a,21-diol-3,20- dione correspondant qui est purifié par cristallisation dans un mélange d'acétate d'éthyle d'éther.
La réaction entre ce 9,11-époxyde et du fluorure d'hydrogène est avantageusement opérée en mettant les réactifs en présence dans du chloroforme froid exempt d'alcool et en laissant le mélange au repos à 0 C pendant environ 2 heures. Une solution aqueuse froide d'acétate de sodium est ajoutée et le mélan- ge résultant est agité vigoureusement. Les couches sont séparées et la couche chloroformique est lavée, séchée et évaporée jusqu'à siccité sous vide, en sorte
EMI6.2
qu'on obtient du 21-acylate de 6 a, 16 a-diméthyl-9 oc -fluoro-4-prégnène-ll fi, 18 [alpha] 21-triol-3,20-dione, qui peut être purifié par cristallisation dans un mé- lange acétone-éther de pétrole.
EMI6.3
Ce 21-acylate de 6 a, 16 Oc-dïméthyl-9 Ex - fluoro-4-prégnène-11 fi, 17 00, 21-triol-3.2,0-dione est alors dissous dans un mélange de benzène et d'hydro- xyde de potassium en solution méthanolique diluée et le mélange est laissé au repos à température ambiante pendant environ 10 minutes. Le mélange réactionnel est acidifié avec de l'acide acétique, les solvants sont évaporés sous vide et la matière résiduelle est cristallisée dans un mélange acétate d'éthyle-éther, ce
EMI6.4
qui donne de la 6 ;, 16 a-diméthyl-9 a-fluoro-4-prégnène-ll fi, 17 a, 21-triol- 3,20-dione.
L'oxydation du groupe 11 fi-hydroxyle dans le 21-acylate de 6 [alpha], 16 [alpha]-
EMI6.5
diméthyl-9 a-fluoro-,4-Prégnène-11 fi, 17 a, 21-triol-3,20-dione est conduite en dissolvant l'ester de stéroide dans de la pyridine et en ajoutant la solution au complexe formé par addition de 1 partie de trioxyde de chrome à 5 parties de pyridine. Les réactifs sont mélangés intimement et le mélange est laissé au repos à température ambiante pendant environ 15 heures. Le mélange réactionnel est versé dans de l'eau et le mélange aqueux est extrait à l'aide d'éther, puis à l'aide d'acétate d'éthyle.
Les extraits organiques combinés sont lavés, séchés et évaporés jusqu'à siccité sous vide, en sorte qu'on obtient du 21-acylate de 6 [alpha],
EMI6.6
16 a diméthyl-9 a-fluoro-4-prégnène-17 pt, 21-diol-3,11,20-trione, qui peut être purifié par cristallisation dans un mélange acétate d'éthyle-éther. Ce 21-ester est hydrolysé à l'aide d'hydroxyde de potassium méthanolique et de benzène, de la manière décrite plus haut pour l'hydrolyse du 21-acylate de 6 [alpha], 16 [alpha]-diméthyl-
EMI6.7
9 oG -fluoro-q.-prégnène-11 si, 17 ce, 21-triol-3,20-dione, de manière à produire de la 6 [alpha],16 a-diméthyl-9 a-fluoro-4-prégnène-17 [alpha] -21-diol-3,11,20-trione.
La #1 déshydrogénation microbiologique de ces composés 6 [alpha], 16 [alpha]-
EMI6.8
diméthyl-11-oxygéné-q.-prégnène-1? oe,21-dioi-3,20-diones, par exemple de la 6 a, 16 a-diméthyl-4-prégène-17 a,2l-diol-3,11,20-trione, de la 6 a, I6 o-dimethyl-4- prégnene-11 , 17 cx? 21-triol-3,20-dione, de la 6 a,16 a-diméthyl-9 (ï-fluoro-4- prégnène-17 oc, 21-diol-3,I1, 20-trione, de la 6 a, 16 a-diméthyl-9 a-fluoro-4- prégnène-11 fi, 17 oc, 21-triol-3,20-dione, des 21-esters de ces composés 6 a, 16 tx-diméthyl-lIoxygénê-4prégnène-17 a, 21-diol-3,20-diones, et analogues, est avantageusement exécutée en utilisant des microorganismes du genre Schizomycètes.
Cette réaction de déshydrogénatiori est exécutée en mettant le composé stéroide en contact avec les microorganismes du genre Schizomycètes eux-mêmes ou, si on le
<Desc/Clms Page number 7>
préfère, avec des systèmes enzymatiques de microorganismes du genre Schizomycètes, en sorte que l'hydrogène attaché aux-atomes de carbone C-1 et C-2 est sélectivement enlevé de manière à produire le # -stéroide correspondant sensiblement non-con-
EMI7.1
taminé par des produits non désirés.
Lorsque le composé 6 ot, 16 a-dzméthyl-11-oxy- géné-4-prégnène-17 Ct,21-diol 3,20-dian:e est ainsi soumis à l'activité déshydro- génante de microorganismes du genre Schizomycetes, on obtient directement le co posé 6 ce,16 diméthylmllogygéné ,4-pI'égrmadiène-17 x, 21-diol-3, 20-dione corres- pondant et ce avec un rendement élevé.
Ce processus de #1 déshydrogénation mi-
EMI7.2
crobiologique est ordinairement exécuté en ajoutant le composé 6 0, 16 pt-diméthylll-oxygêné-4-prégnène-17 OE,2l-àial-3,20 dione sous forme solide, ou sous forme d'une solution dans un solvant, tel que, par exemple, une dialcoyl cétone, telle que l'acétone, une dialcoyl-formamide, telle que la diméthyl-formamide, et analo- gues, dans des conditions stériles, à une culture du microorganisme dans un mi- lieu nutritif, et en agitant le mélange résultant, de manière à provoquer la croissance du microorganisme et la déshydrogénation du composé stéroide.
Le stéroi- de peut être ajouté au moment où le milieu nutritif est inoculé à l'aide de la culture de microorganismes du genre Schizomycètes, ou bien il peut être ajouté à une culture établieo Au lieu d'ajouter le composé stéroide à la culture établie dans le milieu nutritif, les cellules provenant de cette culture établie peuvent être séparées par filtration du bouillon, lavées à l'aide d'eau distillée, puis mises en suspension dans une solution aqueuse tamponnée contenant le composé 6 [alpha],
EMI7.3
16 a-diméthyl-11-oxygéné-4-prégnène-17 a,21=diol-3,20-dione, et le mélange résul- tant peut être agité, de manière à assurer la déshydrogénation du composé stéroïde, de façon à former la 6 a, 16 OE-diméthyl-ii-oxygéné-1,4-prégnadiène- 17 a, 21-diol -3,20-dione correspondante.
Cette dernière est plus facilement récupérée de ce mi- lieu que du mélange obtenu, lorsque le stéroide est incubé à l'aide du microor- ganisme dans le milieu nutritif originel. Le composé 6 [alpha], 16 a -diméthyl-11-oxygé-
EMI7.4
né-4-prégnène-17 oc,21-diol-3,20-dione peut aussi être mis en contact avec des préparations enzymatiques déshydrogénantes provenant de la croissance de micro- organismes du genre Schizomycètes.
Les milieux nutritifs utilisés pour exécuter cette déshydrogénation bactériologique sont ceux ordinairement utilisés pour la propagation de microor- ganismes du genre Schizomycètes. Les agents nutritifs usuels contiennent une sour- ce d'azote et de carbone, des- sels inorganiques et des facteurs de croissance, lorsque cela est nécessaire. Le carbone peut être fourni par des composés tels que des acétates, des lactates, et analogues.
L'azote peut être fourni par un sel d'ammonium, des amino acides, ou des protéines telles que les graines de soja, des avoines, de la levure, des extraits de levure, des produits de digestion trypti- ques de caséine, des extraits de viande, de la farine de sang, de la nourriture protéinique, des fragments d'os, de la farine de saumon, des farines de poisson, des produits solubles de poisson, des produits solubles de distillateur et ana- logues. Si on le désire, les microorganismes du genre peuvent être propagés en utilisant des protéines (ou des amino acides) sans aucun hydrate de carbone pré- sent dans le milieu, auquel cas les protéines ou amino acides servent de source de carbone et d'azote requise par les microorganismes.
Bien que, comme on l'a noté plus haut, la déshydrogénation du composé 6 a, 16 a-diméthyl-11-oxygéné-4-prégnène-17 [alpha], 21-diol-3,20-dione puisse se faire en utilisant les préparations enzymatiques déshydrogénantes provenant de la crois- sance de microorganismes du genre Schizomycetes, ou en mettant le composé stéroide en contact avec une suspension d'un culture établie dans de l'eau distillée, on
EMI7.5
préfère ordinairement ajouter le composé 6 oc, 16 tx-diméthyl-11-oxygénéq.prégnène 17 ce,21-diol-3,20-dione à un milieu nutritif contenant une culture de 24 heures de microorganismes du genre Schizomycetes. La proportion de composé stéroide, qui peut être ajoutée au milieu varie selon le substrat particulier à déshydrogéner,
mais on préfère ordinairement employer une concentration d'environ 0,005 % à
EMI7.6
0,2% de composé 6 <x, 16 ce-diméthyl-ll-oxygéné-4-prégnène-17 a, 21-diol-3,20-dione, bien que des concentrations plus élevées ou moins puissent être employées, si on le désire. La culture contenant le composé stéroide ajouté est alors incubée, de
<Desc/Clms Page number 8>
préférence en agitant et en aérant pendant une durée supplémentaire qui varie ordinairement entre environ 10 heures et 50 heurs, bien que des temps de fermen- tation plus courts ou plus longs puissent être avantageux pour la déshydrogéna- tion de substrats particuliers.
En raison du fait que des fermentations prolon- gées peuvent donner lieu à la destruction d'une partie du produit stéroïde #1 déshydrogéné, on préfère ordinairement employer un temps de fermentation d'environ 10 heures à 24 heures, qui, selon le substrat stéroïde, donne des rendements maxima en produit stéroïde #1 -déshydrogéné.
Lorsque le processus de déshydrogénation est terminé, le 6 [alpha], 16 oc -
EMI8.1
diméthyl-11-oxygéné-1,4régnadiène-iToey21-àiol-3,2o-àione produit est avanta- geusement récupéré du bouillon fermenté pàr extraction à l'aide d'un solvànt non miscible à l'eau, tel qu'un hydrocarbure chloré, comme le chloroforme, une cétone telle que la mêthyl isobutyl cétone, un alcanoate d'alcoyle, tel que l'acétate d'éthyle, et analogues.
L'extrait du produit stéroïde -déshydrogéné et la matière de départ éventuelle qui n'a pas réagi et qui peut être présenta sont avantageusement purifiés par chromatographie en utilisant du gel de silice, de l'alumine activée ou analogue ou, si on le désire, à l'aide de chromatogrammes ' sur papiero Après séparation du produit déshydrogéné de la matière de départ n'ayant pas réagi, le produit peut être purifié davantage, si on le désire, par recristallisation dans un solvant, tel que l'acétate d'éthyle, les mélanges acéta- te d'éthyle-éther de pétrole, et analogues.
Par le procédé de déshydrogénation microbiologique, en utilisant les
EMI8.2
6 a, 16 oc-diméthyl-11-OxYgéné-4-Prégnèna-17 a, 21-diol-3,20-diones de départ, énumérées plus loin, on obtient des composés 6 a, 16 OG-diméthyl-11-oxygéné-1,4- prégnadiène-17 cce 21-diol-3,20-diones tels que la 6 a, 16 ot-diméthyl-1,4-prégna- diène-17 a, 21-diol-3,11,20-trione, la 6 a, 16 oe-diméthyl-l,4-prégnadiène-ll fi, 17 a, 21-triol-3,20-dione, la 6 ot,l6 a-diméthyl-9 OE-fluoro-17 a-21-diol-3,11,20- trione et la 6 oc, 16 a-diméthyl-9 t fluoro-11 fi, 17 a, 21-triol-3,20-dione.
Tant dant le cas où la 6 a diméthyl-11-oxygéné-4-prégnène-17 oc,21- diol-3,20-dione de départ utilisée dans cette réaction de déshydrogénation micro- biologique-est un alcool libre en 21 que- dans- le cas où il s'agit d'un 21-ester de ce composé, le produit obtenu est l'alcool libre en 21 de 6 [alpha], 16 a-diméthyl-
EMI8.3
11-oxygéné-1,4-prégnadiène-17 c, 21-àiol-3,2màione, étant donné que n'importe quel groupement 21-ester, qui peut être présent, est hydrolysé pendant la réac- tion de déshydrogénation microbiologique.
Ces alcools libres en 21 de 6 [alpha], 16 [alpha]-
EMI8.4
diméthyl-ll-oxygénê-l,4-prêgnadiène-17 a, 21-diol-3,20-dione peuvent être con- vertis en 21-esters correspondants par réaction avec un agent d'acylation, tel qu'un agent de phosphorylation, un acide carboxylique d'hydrocarbure inférieur, un agent d'acylation, tel que l'anhydride benzoïque, le chlorure de tert. -butyl acétyle, un anhydride alcanoique inférieur ou un halogénure d'alcanoyle inférieur, tel que l'anhydride acétique, l'anhydride propionique, un anhydride d'acide poly- basique, tel que l'anhydride ss, ss -diméthyl-glutarique, l'anhydride succinique et analogues.
Par cette réaction d'acylation, on obtient des 21-esters de 6 a, 16
EMI8.5
cc -diméthyl-l,4-prégnadiène-17 ce,21-àiol-3,11,20-trione, tels que, par exemple, le 21-phosphate de 6 [alpha], 16 [alpha] -diméthyl-l,4-prégnadiène-17 [alpha], 21-diol-3,11,20-
EMI8.6
trione, des 21-esters carbonyliques d'hydrocarbures inférieurs de 6 oc, 16 a-di- méthyl-,14-prégnadiène-17 dC;
21-diol-3,11,20-trione, tels que le 21-benzoate de 6 a, 16 o-diméthyl=1,4-p régnadiène-17 a, 21-diol-3,11,20-trione, le 21-tert.- butyl acétate de 6 oc,l6 -diméthyl-1,4-prégnadiène-17 a,21-diol-3,11,20-trione, des 21-alcanoates inférieurs de 6 oc, 16 a-diméthyl-1,4-prégnadiène-17 OE,21-àiol- 3,11,20-trione, tels que le 21-acétate de 6 cx,l6 a-diméthyl- 1,4-prëgna,dièn'e-17 a,21-diol-3,11,20-trione, le 21-propionate de 6 oc, 16 pG-diméthyl-1,4-prégna- diène-17 a, 21-diol-3,11,20-trione, des 21-esters de 6 a,16 ce-àiméthyl-1,4-prég- nadiène-11 fi, 17 cx,21-triol-3,20-dione, tels que, par exemple, le 21-phosphate-de 6 OC) 16 ac-diméthyl-1,4-prégnadiène-l1 pue 17 se, 21-triol-3,20-dione, des esters
<Desc/Clms Page number 9>
EMI9.1
carboxyliques d'hydrocarbures inférieurs de 6 a, 16 cx-diméthyl-1,4-prégnadiène-11 fi, 17 a,21triol-3,20-dione,
tels que le 21-benzoate de 6 oc, 16 a-diméthyl-1,4- prégnadiène-11 ri, 17 a,21-triol-3,20-dione, le 21-tert.-butyl acétate de 6 cx, 16 a-diméthyl-l,4-prégnadiène-11 foi,17 a, 21-triol-3,20-dione, des 21-alcanoates in- férieurs de 6 ce,16 <x-diméthyl-l,4-prégnadiène-ll pe 17 a,21-triol-3,20-dione, tels que l,e 21-acétate de 6 a,16 a-diméthyl-154-Prégnadiène-11 fi, 17 a,21-triol-3,20- dione, le 21-propionate de 6 cx, 16 o!-diméthyl-l,4-prégnadiène-ll fi, 17 a, 21-triol- 3,20-dione, des 21-esters de 9 (X-fluoro-6 ce-àiméthyl-1,4-Prégnaàiène-17 tx,21-diol- 3,11,20-trione, tels que, par exemple, le 21-phosphate de 9 a -fluoro-6 a, 16 oc- diméthyl-1,4-prégna,d.ène- 17 ot, 21-diol-3,11,20-trione, des 21-esters carbonyli- ques d'hydrocarbures inférieurs de 9 a -fluoro-6 a, 16 tx-diméthyl-1,4-prégnadiène- 17 cx, 21-diol-3,11,20-trione,
tels que le 21-benzoate de 9 a-fluoro-6 a, 16 oc- diméthyl-l,4-prégnadiène-17 a,21-diol-3,11,20-trione, le 21-tert.-butyl acétate de 9 a-fluoro-6 a, 16 (x-diméthyl-l,4-prégnadiène-17 (X, 21-diol-3,11,20-trione, des alcanoates inférieurs de 9 oc -fluoro-6 a, 16 a-diméthyl-l',4-prégnadiène-17 a,21-diol-3,11,20-trione, tels que le 21-acétate de 9 a-fluoro-6 a, 16 a-diméthyl- l,4-prégnadiène-17 a,21-diol-3,11,20-trione, le 21-propionate de 9 [alpha] -fluoro-6-a, 16 [alpha] -diméthyl-l,4-prégnadiène-17 a, 21-diol-3,11,20-trione, des 21-esters de 9,
EMI9.2
a-fluoro-6, 16 -diméthyl-1,4-prégnadiène-11, 17 a, 21-diol-3,20-dione, tels que, par exemple,
le 21-phosphate de 9* a-fluoro-6 cx, 16 OE-diméthyl-1,4"prégnâdiène- 11 fi, 17 oc, 21-triol-3e2O-dionee des 21-esters carboxyliques d'hydrocarbures infé- rieurs de 9 a-fluoro-6, 16 ot-diméthyl-1,4-prégnadiène-11 fi, 17 a, 21-triol-3,20- dione, tels que le 21-benzoate de 9 a-fluoro-6 a,16 a-diméthyl-1,4-prégnadiêne- 11 fi, 17 a,21-triol-3,20, le 21 tert.-butyl-acétate de 9 a- fluoro-6 a:
,l6 a-di- méthyl-le4-Prégnadiène-11 foi, 17 a, 21-triol-3,20-dione, des alcanoates inférieurs de 9 a-fluoro-6 a, 16 a-diméthyl-le4-Prégnadiène-11 (3, 17 x, 21-triol-3,20-dione, tels que le 21-acétate de 9 a - flupro-6 a, 16 a-diméthyi-1,4-prégnadiène-11 fi, 17 a,21-triol-3,20-dione, le 21-propionate de 9 [alpha]-fluoro- 6 [alpha], 16 a-diméthyl-1,4- prégnadiène-11 ss, 17 a,21-triol-3,20-dione, et analogues.
Au lieu d'appliquer le procédé de déshydrogénation microbiologique mentionné plus haut, le composé 6 a, 16 [alpha] -diméthyl-ll-oxygéné-4-prégnène-17 [alpha] 21-diol-3,20-dione peut être mis en réaction avec du bioxyde de sélénium de maniè- re à effectuer une déshydrogénation du noyau A, de façon à former le composé 6 [alpha] 16 [alpha] -diméthyl-11-oxygéné-1,4-prégnadiène-17 [alpha], 21-diol-3,20-dione correspondant.
Cette déshydrogénation au bioxyde de sélénium, est avantageusement exécutée en
EMI9.3
mettant le composé 6 a, 16 a-diméthyl-11-oxgéné-q.-prégnène-17 a, 21-diol-3,20- dione et du bioxyde de sélénium en présence au sein d'un solvant organique, tel que, par exemple, le dioxane, un alcool comme le t-butanol, etc.., et en chauf- fant le mélange à une température élevée. Lorsqu'on utilise du t-butanol comme solvant, on préfère ordinairement exécuter cette réaction au point d'ébullition du solvant ; ces conditions, la réaction est ordinairement complète en envi- ron 15 heures.
Le mélange réactionnel est ordinairement filtré, de manière à éli- miner le sélénium métallique, et la solution filtrée est évaporée jusqu'à siccité
EMI9.4
sous vide, ce qui donne le composé 6 a, 16 OE-àiméthyl-11-oxygéné-1,4-prégnaàiène -17 OE,21-àiol-3,20-àione désiré. La matière brute obtenue de cette manière est avantageusement purifiée par chromatographie sur bandelettes de papier par le mode opératoire indiqué plus haut pour la purification du composé 6 [alpha], 16 [alpha]- diméthyl-ll-oxygéné-l,4-prégnadiène-17 a,21-diol-3,20-dione produit par déshydro- génation microbiologique.
Les exemples suivants illustrent des modes d'exécution de la présente invention, mais il est entendu que ces exemples sont donnés à titre illustratif et non limitatif.
EXEMPLE 1
10 g de 16 a-méthyl-4-prégnène-17 a, 21-diol-3,11,20-trione sont dis- sous dans 400 ce de chloroforme. A cette solution, on ajoute un mélange de 100 cc de HCl aqueux concentré et 100 cc d'une solution aqueuse à 37 % de formaldéhyde.
Le mélange résultant est agité pendant environ 3 jours à température ambiante. La
<Desc/Clms Page number 10>
couche chloroformique est séparée, lavée à l'aide d'une solution de bicarbonate de sodium jusqu'à neutralité, puis à l'aide d'eau, séchée sur du sulfate de sodium anhydre, puis évaporée jusqu'à siccité sous vidéo La matière brute résiduelle est purifiée par cristallisation dans un mélange de chlorure de méthylène et de métha-
EMI10.1
nol, en sorte qu'on obtient de la 17 a, 20,20,21-bisméthylènedioxy-16 a-méthyl-4- prégnène-3,11-dione.
10 g de 17 <x,20,20,21-bismêthylènedioxy-l6 cx-méthyl-Q.prégnène-3,11- dione sont dissous dans 500 cc de benzène. A la solution on ajoute 25 cc d'éthylè- ne glycol et 1 g'd'acide p-toluènesulfonique. Le mélange résultant est chauffé sous reflux pendant environ 15 heureso La solution de réaction est refroidie, la- vée à l'aide de bicarbonate de sodium en solution aqueuse, séchée sur du sulfate de sodium et évaporée jusqu'à siccité sous vide.
La matière brute résiduelle est adsorbée de sa solution dans du benzène sur 250 g d'alumine lavée à l'acide, et l'adsorbat obtenu est élué, en utilisant des mélanges d'éther et d'éther de pé-
EMI10.2
trole, en sorte qu'on obtient de la 3-éthylènedioxy-l7 OE,20,20,21-bisméthylène- dioxy-16 t mêthyl-5prégnène=11oneo Un mélange de 10 g de 3-éthylènedioxy-17 a,2020,21bisméthylène- dioxy-17 oCméthyl-5prégnène11-one, de 4,3 g d'acide perbenzoique et de 230 ce de benzène est laissé au repos à température ambiante pendant environ 2 jours.
Une fraction de l'époxyde produit, qui précipite, est séparée de la solution de réaction par décantation, et la solution décantée est lavée avec une solution aqueuse saturée de bicarbonate de sodium et ensuite séchée sur du sulfate de so- dium anhydre. La solution séchée est alors évaporée sous vide et l'époxyde ré- siduel est combiné avec l'époxyde originellement séparée du mélange réactionnel.
Les époxydes mélangés sont dissous dans 200 cc d'acide formique sensi- blement anhydre et la solution résultante est laissée au repos à température am- biante pendant environ 2 1/2 heures. La solution de réaction est versée dans de l'eau et le mélange aqueux est extrait avec du chloroforme. La solution chloro- formique est lavée avec une solution aqueuse saturée de bicarbonate de sodium, séchée sur du sulfate de sodium anhydre, et évaporée sous vide, de façon à fournir
EMI10.3
un mélange de 17 C, 20,20,21-bisméthylènedioxy-l6 K-méthyl-6-formyloxy-prégnane- 5-ol-3,11-dione et de 17 a, 20,20,21bisméthylènediog 16 oc-méthyl-5-formyloxy- prégnane-6-ol-3,11-àioneo
Ce mélange de dérivés 5-dormyloxy et 6-formyloxy est dissous dans en- viron 850 cc de méthanol.
A cette solution, on ajoute une solution contenant en- viron 17 g d'hydroxyde de potassium dans 80 cc d'eau, et le mélange résultant est chauffé sous reflux dans une atmosphère d'azote pendant environ 1/2 heure. La so- lution de réaction est refroidie, neutralisée avec environ 23 cc d'acide acétique et évaporée sous vide jusqu'à un petit volume. La solution concentrée est versée dans de l'eau et le mélange aqueux est extrait avec du chloroforme.
L'extrait chloroformique est lavé avec une solution aqueuse de bicarbonate de so- dium, séché sur du sulfate de sodium anhydre, et évaporé jusqu'à siocité sous vi- de. La matière résiduelle est cristallisé dans du méthanol, en sorte qu'on obtient
EMI10.4
de la 17 ce,20,20,21-bisméthylèneàioxy-16 tx-méthylalloprégnanem3611-trione.
Une solution contenant environ 5 g de 17 a, 20,20,21-bisméthylène- dioxy-16 [alpha] -méthyl-alloprégnène-3, 6,11-trione et 0,1 g d'acide p-toluènesulfoni- que dans 120 cc de butanone-dioxolane est chauffée sous reflux pendant environ 10 minutes. La solution de réaction est refroidie jusqu'à environ 0-5 C, diluée avec du chloroforme, et,la solution résultante est lavée avec du bicarbonate de sodium en solution aqueuse et séchée sur du sulfate de sodium anhydre. La solu- tion résultante séchée est évaporée jusqu'à siccité sous vide, et la matière rési- duelle est empâtée avec de l'éther, récupérée par filtration et ensuite séchée,
EMI10.5
en sorte qu'on obtient de la 3-éthylènedioxy-17 tx, 20,20,21-bisméthylènedioxy- 16 a-méthyl-alloprégnane-6,11-dione.
Une solution contenant environ 5 g de 3-éthylènedioxy-17 [alpha],20,20,21-
EMI10.6
bisméthylènedioxy-16 OE-méthylalloprégnane-6,11-àione dans 7Ô cc de benzène est
<Desc/Clms Page number 11>
EMI11.1
ajoutée, en agitant en l'espace d'environ 10 minutes, à- une solution -éthérée cont tenant de l'iodure de méthyl magnésium, préparé à partir de 5 cc d'iodure de mé- thyle et 0,5 g de tournures de magnésium, dissous dans 50 cc d'éther. Le mélange' réactionnel est agité pendant encore 1/2 heure, et la solution résultante-est décomposée avec 70 cc d'eau. Environ 170 cc de benzène sont ajoutés au mélange aqueux et les couches sont séparées.
La couche aqueuse est extraite à l'aide de deux fractions de 100 cc de chloroforme et les couches organiques sont combinées, séchées sur du sulfate de sodium anhydre et évaporées jusqu'à siccité sous vide,
EMI11.2
ce qui fournit de la 3éthylènediogy-17-a,20,20,21-bisméthylènedioxy-6 a,16 oc- àiméthyl-alloprégnane-6 fi -oi-11-one. '
Une solution contenant 5,5 ce de chlorure de thionyle fraîchement dis- tillé dans 26 cc de pyridine anhydre froide est ajoutée goutte à goutte, en agi- tant, à une solution de 5,0 g de 3-éthylènedioxy-17 a,20,20,21-bisméthylènedioxy- 6 ce,16 a-diméthylalloprégnène-6 ss-ol-11-one dans 32 cc de pyridine anhydre, tout en maintenant la température du mélange réactionnel à environ 40 C.
La solution de réaction est agitée pendant encore 30 minutes après l'addition du chlorure de thionyle, et le mélange réactionnel est alors refroidi à environ 0-5 C et versé dans 180 cc d'eau glacée. Le mélange aqueux est extrait avec du chloroforme et l'extrait chloroformique est neutralisé, séché sur du sulfate de sodium anhydre, et évaporé jusqu'à siccité sous vide. La matière résiduelle,-dissoute dans du benzène, est chromatographiée sur 150 g d'alumine lavée à l'acide ; l'élutionde l'adsorbat résultant avec des mélanges' d'éther de pétrole et d'éther donne de la
EMI11.3
3-éthylènedioxy-17 , 20,20,21-bisméthylènedioxy=6,16 a -diméthyl-5-prégnène-11- one.
Une solution contenant 5 g de 3-éthylènedioxy-17 a, 20,20,21-bismé- thylènedioxy-6,16 a-diméthyl-5-prégnène-11-one, 500 cc d'acétone anhydre et envi- ron 0,5 g d'acide p-toluènesulfonique monohydraté est laissé au repos pendant en- viron 15 heures. La solution de réaction est versée dans de l'eau, et le mélange aqueux est extrait avec du chloroforme. La solution chloroformique est lavée à l'aide d'une solution aqueuse de bicarbonate de sodium, séchée sur du sulfate de sodium anhydre, et la solution chloroformique est évaporée jusqu'à siccité sous vide.
La matière résiduelle est cristallisée dans du benzène, en sorte qu'on ob- tient de la 17 [alpha], 20,20,21-bisméthylènedioxy-6 [alpha], 16 a-diméthyl-4-prégnène-3,11- dione.
EMI11.4
Environ 0,1 g de 17 ac, 20,20,21-bisméthylènedioxy-6 a, 16 a-diméthyl- 4-prégnène-3,11-dione est mis en suspension dans 18 cc d'acide acétique aqueux à 50% et la suspension est soigneusement purgée à l'aide d'azote, après quoi la suspension est chauffée au bain de vapeur sous azote pendant environ 8 heuresj puis laissée au repos à température ambiante pendant 15 heures supplémentaires.
La solution de réaction est évaporée jusqu'à siccité- sous vide, en sorte qu'on
EMI11.5
obtient de la 6 0, 16 s-diméthyl-4-prégnène-17 a,21-diol-3,ll,20-trione. La matière est dissoute dans 20 cc de chloroforme et la solution chloroformique est évaporée jusqu'à siccité sous vide, A la matière sèche résiduelle on ajoute 1 cc de pyridine et 1 cc d'anhydride acétique, et le mélange résultant est chauffé au bain de vapeur pendant environ 15 minutes. La solution de réaction est refroidie à environ 0-5 C et versée dans de l'eau glacée. La suspension aqueuse est extrai- te à l'aide de chloroforme, et l'extrait chloroformique est lavé avec une solu- tion aqueuse de bicarbonate de sodium, séchée sur du sulfate de sodium anhydre, et évaporée jusqu'à siccité sous vide.
La matière résiduelle, dissoute dans 30 cc de benzène, est adsorbée sur 5 g d'alumine lavée à l'acide; l'adsorbat est lavée avec 50 cc d'éther.
L'adsorbat est alors élué avec 250 cc d'un mélange 5:5 d'éther et de chloroforme, puis avec 50 cc d'un mélange 3 : 7d'éther et de chloroforme. Les éluats sont é- vaporés sous vide, et la matière résiduelle est cristallisée dans du méthanol, en
EMI11.6
sorte qu'on obtient du 21-acétate de 6 tx, 16 a-diméthyl-q--prégnène-17 a,21-diol- 3,11,20-trione.
<Desc/Clms Page number 12>
EMI12.1
A une solution de 100 mg de 21-acétate de 6 cx, 16 <x-diméthyl-4-"prégnè- ne-17 OG,21-diol-3,11,20-trione dans 6 ml de t-butanal et 0,01 ml d'acide acétique glacial, on ajoute 70 mg de bioxyde de sélénium. Le mélange est chauffé sous re- flux dans une atmosphère d'azote pendant environ 6 heures. La solution de réaction est filtrée et évaporée sous vide. La matière résiduelle est dissoute dans du benzène, et la solution benzénique est lavée avec une solution aqueuse de bicar- bonate de sodium et séchée sur du sulfate de sodium anhydre. La solution benzé- nique est agitée avec du mercure- jusqu'au lendemain, puis centrifugée et la so- lution benzénique claire est évaporée sous vide.
La matière résiduelle ainsi obte- nue est séparée par chromatographie sur de la silice à diatomées (supercel), en
EMI12.2
sorte qu'on obtient du 21-acétate de 6 a, 16 (x-diméthyl-l,q.-prégnadiène-17 a21- diol-3,11,20-trione.
EXEMPLE 2.
EMI12.3
A une solution de 100 mg de 17 oG, 20,20,21-bisméthylènedioxy-6 c, 16 cx -àiméthyl-4-Prégnène-3,11-àione, préparée de la manière décrite dans l'exemple 1 dans 6 ml de t-butanol et 0,01 ml d'acide acétique glacial, on ajoute 70 mg de bioxyde de sélénium. Le mélange est chauffé sous reflux dans une atmosphère d'azote pendant environ 6 heures. La solution de réaction est filtrée et évaporée sous vide. La matière résiduelle est dissoute dans du benzène, et la solution benzénique est lavée avec une solution aqueuse de bicarbonate de sodium et séchée sur du sulfate de sodium anhydre. La solution benzénique est agitée avec du mer- cure jusqu'au lendemain, puis centrifugée, et la solution benzénique claire est évaporée sous vide.
La matière résiduelle ainsi obtenue est séparée par chroma- tographie sur de la silice à diatomées (supercel), en sorte qu'on obtient de la
EMI12.4
17 <ï) 20,20,21-bisméthylènedioxy-6 a, 16 oC-diméthyl-1,4-prégnadiène-3,11-dione.
Environ 0,1 g de 17 a, 20,20,21-bisméthylènedioxy-6 a, 16 a diméthyl- 1,4-prégnacliène3,11-d.ione est mis en suspension dans 18 cc d'acide acétique aqueux à 30%, et la suspension est soigneusement purgée avec de l'azote, après quoi la suspension est chauffée au bain de vapeur sous azote pendant environ 8 heures et ensuite laissée au repos à température ambiante pendant 15 heures sup- plémentaireso La solution de réaction est évaporée sous vide jusqu'à siccité, en
EMI12.5
sorte qu'on obtient de la 6 , 16 a-diméthyl-l,4-prégnadiène-17 a, 21-diol-3ell, 20-trione. Cette matière est dissoute dans 20 cc de chloroforme, et la solution chloroformique est évaporée jusqu'à siccité sous vide.
A la matière résiduelle sèche, on ajoute 1 cc de pyridine et 1 cc d'anhydride acétique, et le mélange résultant est chauffé au bain de vapeur pendant environ 15 minutes. La solution de réaction est refroidie jusqu'a environ 0-5 C et versée dans de l'eau glacée.
La suspension aqueuse est extraite avec du chloroforme, et l'extrait chlorofor- mique est lavé à l'aide d'une solution aqueuse de bicàrbonate de sodium, séchée sur du sulfate de sodium anhydre, et évaporée jusqu'à siccité sous vide. La ma- tière résiduelle, dissoute dans 30 cc de benzène, est adsorbée sur 5 g d'alumine lavée à l'acide; l'adsorbat est lavé avec 50 ce d'éther. L'adsorbat est alors élué avec 250 cc d'une mélange 5:5 d'éther et de chloroforme, puis avec 50 oc d'une mélange 3 : 7 d'éther et de chloroforme.
Les éluats sont évaporés sous vidé et la matière résiduelle est cristallisée dans du méthanol, en sorte qu'on
EMI12.6
obtient du 21-acétate de 6 eg 16 OE-àiméthyl-1,4-Prégnaàiène-17 a, 21-diol-3,11, 20-trione.
EXEMPLE 3.
EMI12.7
Environ 5 g de 3-éthylènedioxy-17 a, 20,20,21-bisméthylèneàioxy-6, 16 a-diméthyl-5-prégnène-11-one, qui peut être préparé de la manière décrite dans l'exemple 1, sont dissous dans environ 85 cc de benzène. Cette solution est a- joutée à une suspension agitée contenant 5 g d'hydrure de lithium et d'aluminium dans un litre d'éther anhydre. La suspension résultante est chauffée sous reflux pendant environ 4 heures. Le mélange réactionnel est admis à se refroidir sensi- blement jusqu'à température ambiante, et environ 33 cc d'acétate d'éthyle sont ajoutés pour détruire l'excès d'hydrure de lithium et d'aluminium. Le mélange
<Desc/Clms Page number 13>
résultant est mélangé à environ 100 cc d'eau, la couche éthérée est décantée, et la couche aqueuse, dilué avec 200 cc d'eau, est extraite à l'aide de chloroforme.
Les couches d'éther et de chloroforme sont combinées, et les couches organiques combinées sont séchées sur du sulfate de sodium anhydre et évaporées jusqu'à siccité sous vide. La matière résiduelle, dissoute dans environ 250 ce de benzène, est adsorbée sur environ 150 g d'alumine lavée à l'acide, et l'adsorbat obtenu est élué à l'aide de mélange d'éther de pétrole-éther. Cet éluat est évaporé sous vide et la matière résiduelle est purifiée par cristallisation dans de l'éther,
EMI13.1
en sorte qu'on obtient du 3-éthylènedioxy-17 ce, 20,20,21-bisméthylènediox 6, 16 cc-diméthyl-5-prégnène-ll p -ol.
Une solution contenant environ 5 g de 3-éthylène-dioxy-17 cx,20,2021bisméthylènedioxy-6,16 (x diméthyl-5-prégnène-11 -ol, 500 ce d'acétone anhydre et environ 0,5 g d'acide p-toluènesulfonique monohydraté est laisséau repos pen- dant environ 15 heures. La solution de réaction est versée dans de l'eau, et le mélange aqueux est extrait avec du chloroforme. La solution chloroformique est lavée avec une solution aqueuse de bicarbonate de sodium, séchée sur du sulfate de sodium anhydre et la solution chloroformique est évaporée jusqu'à siccité sous vide. La matière résiduelle est cristallisée dans du benzène, en sorte qu'on ob-
EMI13.2
tient de la 17 a, 20,20,21-bisméthylènedioxy-6 cx, 16 OE-àiméthyl-4-PréÔène-11 fi -01-3-one.
Environ 0,1 g de 17 a,20,20,21-bisméthylènedioxy-6 me 16 a-diméthyl- 4-prégnène-11 ss -ol-3-one est mis en suspension dans 18 cc d'acide acétique aqueux à 50% et la suspension est soigneusement purgée avec de l'azote, après quoi la suspension est chauffée au bain de vapeur sous azote pendant environ 8 heures, puis laissée au repos à température ambiante pendant encore 15 heures. La solu- tion de réaction est évaporée.jusqu'à siccité sous vide, en sorte qu'on obtient
EMI13.3
de la 6 a, 16 t-dïméthyl-q.prégnène-li (3, 17 a 21-triol-3,20-dione. Cette ma- tière est dissoute dans 20 cc de chloroforme et la solution chloroformique est évaporée jusqu'à siccité sous vide.
A la matière résiduelle sèche on ajoute 1 cc de pyridine et 1 ce d'anhydride acétique, et le mélange résultant est chauffé au bain de vapeur pendant environ 15 minutes. La solution de réaction est refroidie jusqu'à environ 0-5 C et versée dans de l'eau glacée. La suspension aqueuse est extraite avec du chloroforme et l'extrait chloroformique est lavé avec une solution aqueuse de bicarbonate de sodium, séchée sur du sulfate de sodium, et évaporée jusqu'à siccité sous vide.
La matière résiduelle, dissoute dans 30 cc de benzène, est adsorbée sur 5 g d'a- lumine lavée à l'acide; l'adsorbat est lavé-avec 50 cc d'éther. L'adsorbat est alors élué avec 250 cc d'un mélange 5 :5 et de chloroforme, puis avec 50 cc d'un mélange 3 : 7 d'éther et de chloroforme. Les éluats sont évaporés sous vide et la matière résiduelle est cristallisée dans du méthanol, en sorte qu'on
EMI13.4
obtient du 21-acétate de 6 me 16 cx-diméthyl-4-prégnène-11 , 17 a,21-triol-3,20- dioneo A une solution de 100 mg de 21-acétate de 6 a, 16 ot-diméthyl-4-Prégnè- ne-11 ss, 17 [alpha], 21-triol-3,20-dione dans 6 ml de t-butanol et 0,01 ml d'acide acé- tique glacial, on ajoute 70 mg de bioxyde de sélénium.
Le mélange est chauffé sous reflux dans une atmosphère d'azote pendant environ 6 heures. La solution de réaction est filtrée et évaporée sous vide. La matière résiduelle est dissoute dans du benzène, et la solution benzénique est lavée avec une solution aqueuse de bicarbonate de sodium et séchée sur du sulfate de sodium anhydre. La solution benzénique est agitée avec du mercure jusqu'au lendemain, puis centrifugée. La solution benzénique claire est évaporée sous vide-, La matière résiduelle ainsi obtenue est séparée par chromatographie sur de la silice à diatomées (supercel),
EMI13.5
en sorte qu'on obtient du 21-acétate de 6 a, 16 ce-àiméthyl-1,4-Prégnaàiène-11 fi, 17 <X,21-triol-3,20-dione.
EXEMPLE 4.
A une solution de 100 mg de 17 [alpha], 20, 20,21-bisméthylènedioxy-6 ce,16
<Desc/Clms Page number 14>
EMI14.1
tx -diméthyl-4'-prégnène-ll j3 -01-3 one, préparée de la manière décrite dans l'exem- ple 1 dans 6 ml, de t-butanol et 0,01 ml d'acide acétique glacial, on ajoute 70 mg de bioxyde de sélénium dioxyde. Le mélange est chauffé sous reflux dans une atmosphère d'azote pendant environ 6 heures. La solution de réaction est filtrée et évaporée sous vide. La-matière résiduelle est dissoute dans du benzène et la solution benzénique est lavée avec une solution aqueuse de bicarbonate de sodium et séchée sur du sulfate de sodium anhydre.
La solution benzénique est agitée avec du mercure jusqu'au lendemain, puis centrifugée et la solution benzénique claire est évaporée sous vide. La matière résiduelle ainsi obtenue est séparée par chro- matographie sur de la silice à diatomées (supercel), en sorte qu'on obtient de la
EMI14.2
17 a,20,20,2l-bisméthylènedioxy-6 ce, 16 Ex-diméthy3-1,4-prëgnadiène-11 -ol-3one.
Environ 0,1 g de 17 a,20,20,2l-bisméthylène-dioxy-6 a, 16 a-diméthyl- 1,4-prégnadiène-ll -01-3-one est mis en suspension dans 18 cc d'acide acétique aqueux à 50% et la suspension est soigneusement purgée avec de l'azote:, après quoi la suspension est chauffée au bain de vapeur sous azote pendant environ 8 heures et ensuite laissée au repos à température ambiante pendant encore 15 heu- res. La solution de réaction est évaporée jusqu'à siccité sous vide, en sorte qu'
EMI14.3
on obtient de la 6 a,16 a-diméthyl-194-Prégnadîène-11 ,17 tx, 21-triol-3,20-dione.
Cette matière est dissoute dans 20 cc de chloroforme et la solution chloroformique est évaporée jusqu'à siccité sous vide. A la matière sèche résiduelle, on ajoute 1 cc de pyridine et 1 cc d'anhydride acétique et le mélange résultant est chauffé au bain de vapeur pendant environ 15 minutes. La solution de réaction est refroi- die jusqu'à environ 0-5 C et versée dans de l'eau glacée. La suspension aqueuse est extraite avec du chloroforme, et l'extrait chloroformique est lavé avec une solution aqueuse de bicarbonate de sodium, séché sur du sulfate de sodium anhy- dre et évaporée jusqu'à siccité sous vide.
La matière résiduelle, dissoute dans 30 cc de benzène, est adsorbée sur 5 g d'alumine lavée à l'acide; l'adsorbat est lavé avec 50 cc d'éther= L'adsorbat est alors élué avec 250 cc d'un mélange 5:5 d'éther et de chloroforme, puis avec 50 ce d'un mélange 3:7 d'éther et de chloro- 'forme. Les éluats sont évaporés sous vide et la matière résiduelle est cristal- lisée dans du méthanol, en sorte qu'on obtient du 21-acétate de 6 [alpha], 16 a-dimé-
EMI14.4
thyl-le4-prégnadiène-11 pue 17 a, 21-triol-3,20-dione.
EXEMPLE 5.
A une solution refroidie de 436 mg de 21-acétate de 6 [alpha], 16 [alpha]-diméthyl- 4-prégnène-11 ss, 17 [alpha], 21-triol-3,20-dione (qui peut être préparé de la manière décrite dans l'exemple 3) dans 2,5 cc de diméthyl formamide et 2,0 ml. de pyridi- ne sèche, on ajoute 1,0 ml de chlorure de méthane sulfonyle, tout en maintenant la température inférieure à 0 C. Le mélange résultant est admis à se réchauffer jusqu'à température amiante, à laquelle un précipité apparaît; le mélange résul- tant est alors chauffé à une température d'environ 70 - 100 C pendant environ 10 minutes. Environ 15 ml. d'eau sont ajoutés lentement au mélange réactionnel, en agitant et le mélange aqueux est extrait à l'aide d'acétate d'éthyle.
Les extraits combinés à l'acétate d'éthyle sont lavés avec de l'eau, puis avec une solution aqueuse diluée d'acide chlorhydrique, à nouveau avec de l'eau, et enfin avec une solution aqueuse diluée de bicarbonate de sodium. La solution d'acétate d'éthyle lavée est séchée et le solvant est évaporé sous vide; la matière résiduel- le est triture avec de l'éther et la matière cristalline est recristallisée, ce
EMI14.5
qui donne du 21-acétate de 6 a, 16 oG-di,mêthyl-4 9 ( 11 )-prégnadiène-17 cx, 21-diol- 3,20-dione. Une suspension de 330 mg de 11-acétate de 6 a, 16 (X-diméthyl-3,9(ll)""' prégnadiène-17 OE,21-diol-3,20-àione et de 1,8 g de N-bromo-succinimide dans un mélange de 50 ml de dioxane et de 10 ml d'eau est refroidie à 10 C. Puis 10 ml d'acide perchlorique aqueux 1,ON froid sont ajoutés.
La température du mélange réactionnel est admise à s'élever à 15 C et est maintenue à cette valeur pendant environ 2 1/2 heures pendant lesquelles la matière solide se dissout lentement.
-La solution jaune résultante est traitée avec 1,0 ml d'alcool allylique à des fins de décoloration et d'élimination de la N-bromo-succinimide restante. La solu-
<Desc/Clms Page number 15>
tion résultante est évaporée jusqu'à un petit volume sous vide. La solution con- centrée est diluée avec de l'eau et le mélange aqueux est extrait avec de l'acé- 'tate d'éthyle. Les extraits à l'acétate d'éthyle sont lavés, séchés et évaporés jusqu'à siccité et la matière résiduelle est cristallisée dans un mélange d'acé- tate d'éthyle et d'éther, de façon à former du 21-acétate de 9 [alpha] -bromo-6 [alpha], 16 [alpha]-
EMI15.1
dimêthyl-4-prégnène-ll ,17 ce,21-triol-3,20-àione.
Une solution de 210 mg de 21 acétate de 9 a-bromo-6,16 oc, 16 a-dimé- thyl-4-prégnène-11 foi,17 a, 21-triol-3,20-dione et de 240 mg d'acétate de potas- sium dans 10 ml d'éthanol absolu est chauffée sous reflux pendant 2 heures. Le mélange réactionnel est refroidi jusqu'à température ambiante, évaporé sous vide jusqu'à un petit volume, et dilué avec de l'eau. Le mélange aqueux concentré est extrait à l'aide de trois fractions d'acétate d'éthyle et les extraits à l'acétate d'éthyle sont lavés avec de l'eau, séchés et évaporés jusqu'à siccité sous vide.
La matière résiduelle est cristallisée dans un mélange d'acétate d'éthyle et d'
EMI15.2
éther, en sorte qu'on obtient du 21-acétate de 6 a, 16 oc-diméthyl-9,ll-époxy-4- prégnène-17 [alpha], 21-diol-3,20-dione.
A une solution de 83 mg de fluorure d'hydrogène anhydre dans 4,7 ml de chloroforme glacé exempt d'alcool, on ajoute une solution glacée de 416 mg de 21-acétate de 6 [alpha], 16 a-diméthyl-9,11-époxy-4-prégnène-17 a, 21-diol-3,20-dione.
La solution est agitée vigoureusement et maintenue à 0 C pendant 2 heures, après quoi on ajoute 13,0 ml d'une solution aqueuse glacée à 20% d'acétate de sodium et on agite vigoureusement le mélange résultant. Les couches sont séparées et la couche chloroformique est lavée avec de l'eau jusqu'à être exempte d'acide et sé- chée, après quoi le chloroforme est évaporé sous vide.
La matière résiduelle est cristallisée dans un mélange d'acétone- et d'éther de pétrole, en sorte qu'on ob-
EMI15.3
tient du 21-acétate de 6 cx, 16 a-diméthyl-9 oc-fluoro-4-prégnène-ll pe li oc, 21- triol-3,20-dione. 50 mg de 21-acétate 6.a, 16 a-diméthyl-9 oc-fluoro-4-prégnène-ll ss, 17 [alpha], 21-triol-3,20 -dione sont dissous dans un mélange de 1,0 cc de benzène et de 1,0 cc d'hydroxyde de potassium méthanolique IN et la solution est laissée au repos à température ambiante pendant environ 10 minutes. La solution est alors acidifiée à l'aide d'acide acétique, le benzène est évaporé sous vide, et la ma- tière résiduelle est purifiée par cristallisation, en sorte qu'on obtient de la
EMI15.4
6 oc, 16 a-diméthyl-9 a-fluoro-4-prégnène-11 ge 17 a, 21-triol-3,20-dione.
A une solution de 100 mg de 21-acétate de 6 a, 16 a-diméthyl-9 tx- fluoro-4-prégnène-11 , 17 oc, 21-triol-3,20-dione,cb,ns 6 ml de t-butanol et 0,01 m 1 d'acide acétique glacial, on ajoute 70 mg de bioxyde de sélénium. Le mélange est chauffé sous reflux dans une atmosphère d'azote pendant environ 60 heures. La solution de réaction est filtrée et évaporée sous vide. La matière résiduelle est dissoute dans du benzène, et la solution benzénique est lavée avec une solution aqueuse de bicarbonate de sodium et séchée sur du sulfate de sodium anhydre. La solution benzénique est agitée avec du mercure jusqu'au lendemain, puis centri- fugée. La solution benzénique claire est évaporée sous vide.
La matière résiduel- le ainsi obtenue est séparée, par chromatographie sur silice à diatomées (super- . cel), en sorte qu'on obtient du 21-acétate de 6 [alpha], 16 a-diméthyl-9 [alpha]- fluoro-1,4- prégnadiène-11 ss, 17 [alpha], 21-triol-3,20-dione. Cette matière est hydrolysée en uti- lisant de l'hydroxyde de potassium méthanolique IN dans du benzène, comme décrit
EMI15.5
plus haut pour l'hydrolyse du 21-acétate de 6 ce,16 a-diméthyl-9 oc-fluoro-4-prégnè- ne-11 j3, 17 oc, 21-triol-3,20-dione, en sortè qu'on obtient de la 6 ce,16 a-diméthyl- 9 ce-fluoro-1,4-prégnadiène-11 fi, 17 a, 21-triol-3,20-dione.
EXEMPLE 6.
Une solution de 400 mg de 21-acétate de 6 a, 16 a -diméthyl-9.o:-fluoro- 4-prégnène-11 ss, 17 [alpha], 21-triol-3, 20-dione .dans 4 ml de pyridine est ajoutée au complexe formé par l'addition de 400 mg de trioxyde de chrome à 4 ml de pyridine.
La mélange est agité jusqu'à obtenir un mélange intime après quoi il est laissé au repos à température ambiante jusqu'au lendemain. Le mélange réactionnel est versé dans de l'eau et le mélange aqueux est extrait avec de l'éther et ensuite
<Desc/Clms Page number 16>
à deux reprises avec de l'acétate d'éthyle. Les extraits combinés à l'éther et à l'acétate d'éthyle sont lavés avec de l'acide sulfurique aqueux dilué à environ 0 C., puis avec de l'eau jusqu'à neutralité.
La couche de solvant organique est alors séchée, les solvants sont évaporés sous vide, et la matière cristalline résiduelle est purifiée par cristallisation, en sorte qu'on obtient du 21-acétate de 6 [alpha], 16 a-diméthyl-9 a -fluoro-4-prégnène-17 a, 21-diol-3,11,20-trione. 50 mg de 21-acétate de 6 [alpha], 16 a-diméthyl-9 [alpha]-flupro-4-prégnène-17[alpha], 21-diol-3,11,20- trione sont dissous dans un mélange de 1,0 cc de benzène et de 1,0 cc d'hydroxyde de potassium méthanolique IN. La solution est laissée-au repos à température am- biante, pendant environ 10 minutes.
La solution est alors acidifiée avec de l'aci- de acétique, le benzène est évaporé sous vide et la matière résiduelle est purifiés par cristallisation, en sorte qu'on obtient de la 6 [alpha], 16 a-diméthyl-9 a-fluoro- 4-prégnène-17 [alpha],21-diol-3,11,20-trione.
A une solution de 100 mg de 21-acétate de 6 [alpha], 16 a-diméthyl-9 [alpha]- fluoro-4-prégnène-17 [alpha], 21-diol-3,11,20-trione dans 6 ml de t-butanol et 0,01 ml d'acide acétique glacial, on ajoute 70 mg de bioxyde de sélénium . Le mélange est chauffé sous reflux dans une atmosphère d'azote pendant environ 60 heures. La solution de réaction est filtrée et évaporée sous vide.
La matière résiduelle est dissoute dans du benzène et la solution benzénique est lavée avec une solution aqueuse de bicarbonate de sodium et séchée sur du sulfate de sodium anhydride. La solution benzénique est agitée avec du mercure jusqu'au lendemain, puis centrifugée, et la solution benzénique claire est évaporée sous vide.
La matière résiduelle ainsi obtenue est séparée par chromatographie sur de la silice à diatomées (supercel), en sorte qu'on obtient du 21-acétate de 6 [alpha],16 a- diméthyl-9 a-fluoro- 1,4-prégnadiène-17 [alpha],21-diol-3,11,20-trione. Cette matière est hydrolysée en utilisant de l'hydroxyde de potassium méthanolique IN dans du benzène comme décrit plus haut pour l'hydrolyse du 21-acétate de 6 [alpha], 16 [alpha]-di- méthyl-9 [alpha]-fluoro-4-prégnène-17 [alpha], 21-diol-3,11,20-trione, de telle sorte que l'on obtient de la 6 [alpha], 16 a-diméthyl-9 [alpha]-fluoro-1,4-prégnadiène-17 a, 21-diol- 3,11,20-trione.
EXEMPLE 7.
On prépare 50 ml d'un milieu nutritif de composition suivante
Cerelose 1 g Edamine 1 g
Liqueur de macération de maïs 0,25 ml
Eau distillée q.s.ad. 50 ml.
Ce médium est ajusté à un pH de 6,5 à l'aide de KOH, stérilisé et inoculé avec environ 2,5 à 5 ml d'une culture de Bacillus sphaericus (ATCC-245), et la culture inoculée est alors incubée à une température de 28 C., en agitant pendant 24 heureso A la culture résultante, on ajoute une solution contenant 10 mg de 6 [alpha], 16 a-diméthyl-4-prégnène-17 [alpha], 21-diol-3,11,20-trione dissous dans 0,2 ml de diméthylformamide. La culture contenant le composé stéroïde est incu- bée, en agitant, pendant environ 24 heures encore à 28 C.
Le bouillon de fermentation est extrait à l'aide de 4 fractions de 50 ml d'acétate d'éthyle et les extraits à l'acétate d'éthyle sont combinés et évaporés sous vide jusqu'à un volume d'environ 5 ml. La solution concentrée est alors étalée sur des chromatogrammes de papier, qui sont développés, en utilisant de la formamide comme phase stationnaire et un mélange à 50% de benzène et 50% de chloroforme comme phase mobile.
Après 8 heures de développement dans un système descendant, les bandes supérieures pour chaque chromatogramme, correspondant au dérivé # -déshy- drogéné sont sectionnées et extraites avec du méthanol. La matière extraite au méthanol est à nouveau soumise à une chromatographie sur papier. La bande supé-
<Desc/Clms Page number 17>
.rieure est à nouveau coupée, séchée à fond et extraite avec du méthanol. L'ex- trait méthanolique est évaporée jusqu'à siccité sous vide.
La matière résiduelle est recristallisée, en sorte quron obtient de la 6 [alpha], 16
EMI17.1
a-diméthyl-194-prégnadiène-17 cc,21-diol-3,I1,20-trione.
La 6 a,16 -àiméthyl-1,4-prégnaàiène-17 a, 21-diol-3,11,20-trione est traitée avec de l'anhydride acétique et de la pyridine, de façon à obtenir le dérivé 21-acétyle, qui est purifié par recristallisation, en sorte qu'on obtient
EMI17.2
du 21-acétate de 6 a, 16 o-diméthyl-1,4-prégnadiène-i7, 21-diol-3,11,20-trione sensiblement pur.
EXEMPLE 8.
On prépare 50 ml d'un milieu nutritif de composition suivante :
Cerelose 1 g
Edamine 1 g
Liqueur de macération de mats 0,25 ml
Eau distillé q.s.ad 50 ml
Ce milieu est ajusté à un pH de 6,5 avec du KOH, stérilisé et inoculé avec environ 2,5 à 5 ml d'une culture de Nocardia asteroides (ATCC 9970). La culture inoculée est alors incubée à une température de 28 C, en agitant, pendant 24 heures. A la culture résultante, on ajoute une solution contenant 10 mg de 6 [alpha],
EMI17.3
16 (ï-diméthyl-4-prégnène-ll fi,, 17 oc, 21-triol=3,20-dione dissoute dans 02.,m1 d.dtimethY1dfOrmamide. 'La ou1tureroontenarit le composé stéroide est incubée en -. agitant pendant encore 24 heures environ 2800.
Le bouillon de fermentation est extrait avec 4 fractions de 50 ml d'acétate d'éthyle et les extraits à l'acétate d'éthyle sont combinés et évapo- rés sous vide jusqu'à un volume d'environ 5 ml. La solution concentrée est alors étalée sur des chromatogrammes de papier, qui sont développés en utilisant de la formamide comme phase stationnaire et un mélange à 50% de benzène et à 50% de chloroforme comme phase mobile.-Les bandes supérieures pour chaque chromatogramme correspondant au composée -déshydro sont coupées, extraites à l'aide de méthanol, et la matière extraite au méthanol est soumise à nouveau à une, chromatographie sur papier. La bande supérieure est à nouveau découpée, séchée à fond et extraite avec du méthanol. L'extrait méthanolique est évaporée jusqu'à siccité sous vide.
La matière résiduelle est recristallisée, en sorte qu'on ob-
EMI17.4
tient de la 6 s, 16 a-àiméthyl-1,4-prégnaàiène-11 , 17 cx, 21-triol-3,20-dione.
La 6 a, 16 ce-àiméthyl-1,4-prégnaàiène-11 fi, 17 a, 21-triol-3,20-dione est traitée à l'aide d'anhydride acétique et de pyridine, et le produit acétylé est recristallisé, ce qui donne du 21-acétate de 6 cx, 16 a-diméthyl-1,4-prégnadiè- ne-11 ss, 17 [alpha], 21-triol-3,20-dione sensiblement pur.
EXEMPLE 9
On prépare 50 ml d'un milieu nutritif de composition suivante:
Cerelose 1 g
Edamine 1 g
Liqueur de macération de mats 0,25 ml
Eau distillé q.s.ad. 50 ml
Ce milieu est ajusté à un pH de 6,5 à l'aide de KOH, stérilisé et inoculé avec environ 2,5 à 5 ml d'une culture de Mycobacterium smegmatis (NRRL B-1667). La culture inoculée est alors incubée à une température de 28 C., en agitant, pendant 24 heures. A la culture résultante on ajoute une solution
EMI17.5
contenant 10 mg de 6¯ ce, 16 a-diméthyl-9 a fluoro-4-prégnène-11 fi, 17 a, 21-triol- '3,20-dione dissoute dans 0,2 ml. De diméthyï'formamideo La culture contenant le composé stéroide est incubée, en agitant, pendant une période supplémentaire d' environ 24 heures à 28 C.
<Desc/Clms Page number 18>
Le bouillon de fermentation est extrait à l'aide de 3 fractions de 50 ml d'acétate d'éthyle et les extraits à l'acétate d'éthyle sont combinés et évaporés sous vide jusqu'à un volume d'environ 5 ml. La solution concentrée est alors utilisée pour préparer des chromatogrammes sur papier, qui sont développés en utilisant de la formamide comme phase liquide stationnaire et un mélange à 50% de benzène et à 50% de chloroforme comme phase liquide mobile. Deux bandes sont obtenues, dont l'une correspond au composant le plus mobile à savoir la 6 [alpha], 16 a -diméthyl-9 [alpha]-fluoro-4-prégnène-11 ss, 17 a,21-triol-3,20-dione de départ, et dont l'autre correspond au composant le moins mobile, à savoir le dérivé # déshydrogéné.
Le chromatogramme sur papier est séché et la dernière bande est découpée et extraite avec du méthanol. La matière extraite avec du méthanol est à nouveau soumise à une chromatographie sur papier en utilisant du papier qui a été extrait pendant 48 heures avec du méthanol et en utilisant le système chloro- forme-formamide précédemment employé. Le chromatogramme résultant ne révèle qu' une bande de trace correspondant à la matière de départ, la bande principale cor- respondant au composant le moins mobile, à savoir le dérivé # -déshydrogéné.
Le chromatogramme sur papier est séché à fond et le bande correspondant au com- posant le moins mobile est découpée et extraite avec du méthanol. L'extrait mé- thanolique est évaporé jusqu'à siccité sous vide, en sorte qu'on obtient de'la 6 [alpha], 16 a-diméthyl-9 [alpha]-fluoro-1,4-prégnadiène-11 ss, 17 a,21-triol-3,20-dione.
La 6 [alpha], 16 a-diméthyl-9 [alpha]-fluoro-1,4-prégnadiène-11 ss, 17 [alpha], 21- triol est mise en réaction avec un excès d'anhydride acétique dans de la pyridine, ce qui fournit le dérivé 21-acétylé qui est purifié par recristallisation dans un mélange de benzène et d'éther de pétrole. On obtient ainsi du 21-acétate de 6 [alpha], 16 a-diméthyl-9 [alpha]-fluoro-1,4-prégnadiène-11 ss, 17 a, 21 triol-3,20-dione sensiblement puro EXEMPLE 10.
Le processus de fermentation des exemples 7,8 et 9 sont répétés, sauf que l'on utilise, à la place des organismes et de la 6 [alpha], 16 [alpha]-diméthyl-11- oxygéné-4-prégnène-17 [alpha], 21-diol-3,20-dione de départ employé dans ces exemples, les souches de microorganismes et les composés stéroïdes de départ indiqués dans le tableau suivant.
Les bouillons de fermentation obtenus sont traités selon les méthodes d'isolement décrites dans les exemples 7, 8 et 9, en sorte qu'on obtient, pour la souche de microorganisme et le substrat stéroïde particuliers utilisés, la 6 a, 16 [alpha] -diméthyl-ll-oxygéné-l,4-prégnadiène-17 a,21-diol-3,20-dione indiquée dans le tableau suivant :
<Desc/Clms Page number 19>
EMI19.1
Essai Substrat Microorganisme 6 c( ,160( -diméthyl-
EMI19.2
<tb> No <SEP> 11-oxygéné-1,4-
<tb>
<tb> prégnadiène-17o(,
<tb>
<tb> 21-diol-3,20-dione
<tb>
<tb> produite
<tb>
<tb>
EMI19.3
1 21-acétate de 6 o( ,16 0( -, Bacillus 60( ,16C( -diméthyl- diméthyl-9c( -fluoro-4-pré- sphaerious 9ci -fluoro-l,4'-pré-
EMI19.4
<tb> gnane-17 <SEP> [alpha],21-diol-3,11, <SEP> ATCC-7055 <SEP> gnadiène-17o( <SEP> ,21-'
<tb>
<tb> 20-trione <SEP> diol-3,11,20-trione
<tb>
EMI19.5
2 21-acétate de 6o( ,l6o(- Bacillus 60( ,160( -diméthyl- diméthyl-9a( -fluor-4- sphaerious 9d -fluoro-l,4-pré- prégnène-11 J3 ,170(,21- ATCC-7063 gnadiène-11 ,170(,; triol-3,20-dione 21-triol-3,20-dione 3 60( ,160( -diméthyl-90( - Nocardia 6d ,16 0( -diméthyl- ;
EMI19.6
<tb>
<tb>
EMI19.7
fluoro-.-prégnène-17o( , leishmanii - 90( -fluoro-1,4-pré-
EMI19.8
<tb> 21-diol-3,11,20-trione <SEP> ATCC-6855 <SEP> gnadiène-17d <SEP> ,21-
<tb>
<tb> diol-3,11,20-trione;
<tb>
EMI19.9
4 60( ,160( -diméthyl-9c( - Nocardia 60( ,160( -diméthyl- , fluoro-4-prégnène-11 3, formica 9o(-fluoro-1,4-pré-, 170( ,21-triol-3,20- NRRL-2470 gnadiène.ll ,1?c( ,
EMI19.10
<tb> dione <SEP> 21-triol-3,20-dione''
<tb>
<tb>
<tb> 5 <SEP> 6[alpha] <SEP> ,160( <SEP> -diméthyl-4-pré- <SEP> Mycobacterium <SEP> 6c( <SEP> ,16c( <SEP> -diméthyl-
<tb>
<tb> gnène <SEP> Il <SEP> /3 <SEP> ,17c( <SEP> ,21-tri- <SEP> phlei <SEP> 1,4-prégnadiène-
<tb>
EMI19.11
01-3,20-dione ATOC-12t298 11 ± ,170( ,21-triol'
EMI19.12
<tb>
<tb> 3,20-dione
<tb>
EMI19.13
6, 60( ,160( -dimêthyl-l-pré- Mycobacterium 60( ,
160( -diméthyl- gnène 17 o(,21-diol-3,ll, lacticola l,4-prégnadiène- 20-trione ATCC-12, 29'7 17d ,21-diol-3 ,11,
EMI19.14
<tb> 20-trione
<tb>
<Desc/Clms Page number 20>
La 16-méthyl-4-prégnène-17 a, 21-diol-3,11,20-trione utilisée comme matière de départ dans les exemples précédents est préparée, en partant du 3- acétate de 16-prégnène-3 [alpha] -01-11,20-dione connu, selon le mode opératoire sui- vant :
Une solution de 10,22 g d'iodure de méthyle dans 50 ml d'éther est ajoutée à 1,73 g de magnésium dans 50 ml d'éther. A la solution éthérée résultan- te d'iodure de méthyl magnésium, maintenue sous une atmosphère d'azote, on ajoute 0,045 g de chlorure cuivreux anhydre.
A ce mélange on ajoute, en l'espace d'en- viron 1 heure, pendant laquelle le mélange réactionnel est agité vigoureusement et maintenu sensiblement à témpérature ambiante, une solution d'environ 5,6 g de 3-acétate de 16-prégnène-3 [alpha] -01-11,20-dione dans 175 ml d'éther. Un solide gra- nulaire blanc se sépare pendant cette addition. Le mélange résultant est chauffé sous reflux modéré pendant 2 heures, après quoi le mélange réactionnel est re- froidi et 125 ml. d'une solution aqueuse saturée de chlorure ammonique est ajou- tée, après quoi on ajoute 200 ml d'éther. Les couches sont séparées et la couche éthérée est lavée avec trois fractions de 50 ml d'eau. La couche éthérée, lavée est séchée et le solvant est évaporé sous vide, en sorte qu'on obtient une huile visqueuse brune.
Celle-ci est chauffée pendant 15 minutes à 60-70 C avec un mé- lange de 25 ml. d'anhydride acétique et de 25 ml de pyridine et le produit acé- tylé est purifié par chromatographie sur de l'alumine lavée à l'acide, puis par cristallisation dans de l'éther de pétrole, en sorte qu'on obtient approximative- ment 1,5 g de 3-acétate de 16 a-méthyl-prégnène-3 a -ol-11,20-dione sensiblement pur.
A une solution de 0,8 g de 3-acétate de 16 [alpha]- méthyl-prégnane-3 [alpha]- 01-11,20-dione dans 40 ml de méthanol, on ajoute 1,5 ml d'acide chlorhydrique aqueux concentré et la solution résultante est agitée jusqu'au lendemain à en- viron 25 C. La solution de réaction est évaporée sous vide à 25 C jusqu'à un pe- tit volume, et la solution concentrée est versée dans 50 ml d'eau glacée. Le soli- de blanc qui précipite est récupéré par filtration, lavé avec de l'eau et recris- tallisé dans de l'acétate d'éthyle, en sorte qu'on obtient de la 16 a-méthyl- prégnane-3 [alpha]-01-11,20-dione.
Une sooution de 22 g de 21-acétate de 16 [alpha]-méthyl-prégnane-3 a -ol- 11,20-dione et de 1 g d'acide p-toluène-sulfonique dans 250 ml d'anhydride acé- tique est chauffée au reflux sous azote pendant environ 3 jours. 2 grammes d'acé- tate de potassium (anhydre) sont ajoutés et les solvants volatils sont séparés par distillation sous vide. La matière résiduelle est extraite avec du benzène, et l'extrait benzénique est filtré, pour séparer la matière insoluble. Les ex- traits benzéniques sont évaporés jusqu'à un volume de 100 ml et de l'éther de pétrole est ajouté jusqu'au point de trouble. La solution résultante est adsorbée sur 660 g d'alumine lavée à l'acide. L'adsorbat est alors lavé avec 2 litres d' éther de pétrole.
L'adsorbat est alors élué avec un mélange 85 : 15d'éther de pétrole et d'éthero Les quatre premiers litres d'éluat sont recueillis et évapo- rés jusqu'à siccité sous vide, en sorte qu'on obtient un mélange d'acétate éno- liques contenant du 3,20-diacétate de 16 a-méthyl-17(20)-prégnène-3 [alpha],20-diol-11 one. Ce mélange d'énolates, qui pèse approximativement 14 g., est dissous dans 50 ml de benzène. Après addition d'un excès d'acide perbenzoique, le mélange est maintenu à environ 25 C pendant 16 heures.
Le mélange réactionnel est agité avec une solution aqueuse diluée d'hydroxyde de potassium jusqu'à ce que la couche benzénique soit exempte d'acide perbenzoique; la couche benzénique est alors lavée avec de l'eau jusqu'à neutralité, et séchée après quoi le solvant est évaporé sous vide, en sorte qu'on obtient du 3,20 diacétate de 16 a-méthyl-17 [alpha], 20-époxy- 'prégnane-3 [alpha],20-diol-11-one cristallin. Cette dernière matière est dissoute, sans purification, dans 200 ml de méthanol, 120 ml d'eau et 10 g de bicarbonate de po- tasium, et la solution résultante est chauffée sous reflux sous azote pendant 16 heures.
Le méthanol est évaporé de la solution d'hydrolyse sous vide et l'huile résiduelle est extraite de la solution aqueuse résultante à l'aide de chloroforme. l'extrait chloroformique est lavé avec de l'eau jusqu'à neutralité et séché. Le
<Desc/Clms Page number 21>
chloroforme est évaporé sous pression réduite. L'huile résiduelle est triturée--, avec de l'éther, et la matière cristalline ainsi formée est recristallisée dans ' un mélange d'acétate d'éthyle et d'éther, ce qui donne de la 16 a-méthyl-prégnane- 3 [alpha], 17 [alpha]-diol-11,20 dione.
A une solution de 7,0 g de 16 ce -méthyl-prégnane-3 ce,17 [alpha]-diol-11,20- dione dans 50 ml de chloroforme on ajoute goutte à goutte en agitant une solution contenant 3,36 g de brome dans 24,2 ml de chloroforme en l'espace d'environ 60 minutes. Le mélange réactionnel est dissous dans 200 ml d'acétate d'éthyle et la solution résultante est lavée avec de l'eau jusqu'à neutralité et séchée. Les solvants sont évaporés sous vide.
La matière brute résiduelle est dissoute dans une quantité minimum d'acétate d' éthyle, la solution résultante est diluée avec de l'éther et le mélange est agi- té jusqu'à ce qu'il se forme des cristaux. Le produit cristallin est récupéré par filtration et lavé, en l'empâtant avec un mélange 50 : 50 d'éther et d'éther de pétrole, en sorte qu'on obtient environ 5 g de 21-bromo-16 [alpha]-méthyl-prégnane-3 [alpha], 17 [alpha]-diol-11,20-dione.
Ces 5 g de 21-bromo-16 a-méthyl-prégnane-3 [alpha], 17 a -diol-ll,20-dione sont mélangés à 5,0 g d'acétate de potassium anhydre à 4,0 g d'iodure de sodium et à 0,03 ml d'acide acétique glacial. 100 ml d'acétone sont ajoutés au mélange résultant. Ce mélange est alors chauffé sous reflux, en agitant, pendant environ 16 heures et le mélange réactionnel est refroidi et filtré. La matière insoluble est lavée avec de l'acétone. La solution filtrée est évaporée sous vide, de maniè- re à chasser les solvants et la matière résiduelle est empâtée avec de l'eau.
Le mélange aqueux est extrait avec de l'acétate. L'extrait à l'acétate d'éthyle est lavé avec de l'eau jusqu'à neutralité et séché. Le solvant est évaporé sous vide, en sorte qu'on obtient une huile. Cette huile est cristallisée dans de 1' éther et recristallisée dans un mélange d'acétate d'éthyle et d'éther, en sorte qu'on obtient du 21-acétate de 16 a-méthyl-prégnane-3 [alpha], 17 [alpha], 21-tril-11,20-dione.
Une solution de 400 mg de 21-acétate de 16 a -méthyl-prégnane-3 [alpha]-17 [alpha], 21-triol-11,20-dione dans 4 ml de pyridine est ajoutée au complexe formé par l'addition de 400 mg de trioxyde de chrome à 4 ml de pyridine. Le mélange est agité jusqu'à former un mélange uniforme, puis laissé au repos à température ambiante jusqu'au lendemain. Le mélange réactionnel est versé dans de l'eau et le mélange aqueux est extrait avec de l'éther, puis à deux reprises avec de l'acétate d'éthyle. Les extraits combinés à l'éther et à l'acétate d'éthyle sont lavés avec de l'acide sulfurique aqueux dilué à environ 0 C, puis avec de l'eau jusqu'à neutralité.
La couche de solvant organique est alors séchée, les solvants en sont évaporés sous vide et la matière cristalline résiduelle est purifiée par cristallisation dans de 1 acétate d'éthyle, en sorte qu'on obtient du 21-acétate de 16 a-méthyl- prégnane-17 [alpha], 21-diol-3,11,20-trione.
A 100 mg de 21-acétate de 16 a-méthylprégnane-17 [alpha], 21-diol-3,11,20- trione dissous dans 2 ml de chloroforme et 2,25 ml d'acide acétique glacial, à une température de -55 C., on ajoute deux gouttes de solution 0,001 N de HBr sec dans de l'acide acétique glacial.
A environ 0,38 ml de HBr 0,001 N dans de l'aci- de acétique glacial à -55 C., on ajoute 0,43 ml d'une solution contenant 40 mg de brome dans du chloroforme, et la solution résultante est ajoutée, en l'espace d'environ 10 minutes, à la solution du stéroïde tout en maintenant le mélange ré- actionnel à environ -55 C. Le mélange réactionnel est laissé au repos à -55 C., pendant environ 1/2 heures, une solution contenant 250 mg d'acétate de sodium dans 3 ml d'eau est ajoutée et le mélange résultant est agité pendant environ 5 minutes. 5 ml d'eau sont alors ajoutés et le mélange aqueux est extrait avec de l'acétate d'éthyle.
L'extrait à l'acétate d'éthyle est lavé avec une solution aqueuse de bicarbonate de sodium jusqu'à neutralité, puis avec de l'eau, et séché, après quoi le solvant est évaporé sous vide.
La matière résiduelle est dissoute dans 2 ml d'acétone. A la solution obtenue, on ajoute 25 mg de bromure de sodium et 1 ml d'eau. Le mélange résultant est
<Desc/Clms Page number 22>
chauffé sous reflux pendant environ 5 heurs, le mélange réactionnel est refroidi, et l'acétone est évaporée sous vide. La matière résiduelle est extraite dans de l'éther, l'extrait éthéré est lavé avec de l'eau et séché, et le solvant est évaporé jusqu'à un volume d'environ 1 ml.; on ajoute de l'éther de pétrole à cette solution, et la matière cristalline qui se sépare est récupérée et séchée, en sorte qu'on obtient approximativement 90 mg de 21-acétate de 4-bromo-16 a- méthyl-prégnane-17 [alpha], 21-diol-3,11,20-trione.
Un mélange de 33 mg de semicarbazine, de 90 mg de 21-acétate de 4- bromo-16 a -méthyl-prégnane-17 [alpha], 21-diol-3,11,20-trione, de 90 mg de sulfate de sodium anhydre, de 0,3 ml de diméthyl formamide et de 3,5 ml de chloroforme est chauffé sous reflux au contact d'une atmosphère d'azote pendant environ 45 minutes.
3 ml d'eau sont ajoutés au mélange réactionnel et le mélange résultant est chauf- fé sous reflux pendant environ 10 minutes. Le mélange est refroidi, extrait avec de l'acétate d'éthyle et l'extrait lavé et séché est évaporé jusqu'à siccité sous vide. La matière résiduelle est cristallisée dans du méthanol et recristallisée dans de l'acétate d'éthyle, en sorte qu'on obtient du 21-acétate de 3-semicarba- zone de 16 [alpha]-méthyl-4-prégnène-17 [alpha], 21-diol-3,11,20-trione. P.F., 225-228 C (dec). 50 mg de 21-acétate de 3-semicarbazone de 16 [alpha]-méthyl-4-prégnène-17 [alpha], 21- diol-3,11,20-trione sont dissous dans un mélange de 1,0 cc de benzène et de .1,0 cc d'hydroxyde de potassium méthanolique 1,lN.
La solution est laissée au repos à température ambiante pendant environ 10 minutes. La solution est alors acidi- fiée avec de l'acide acétique, le benzène est évaporé sous vide, et la matière résiduelle est recristallisée dans de l'acétate d'éthyle, en sorte qu'on obtient de la 3,20-bis-semicarbazone de 16 [alpha]-méthyl-4-prégnène-17 a - 21-diol-3,11,20- trione.
Une solution de 90 mg de 3-semicarbazone de 16 a-méthyl-prégnène-17 [alpha], 21-diol-3,11,20-trione, de 1,0 ml d'acide pyruvique, de 1,0 ml d'acide acéti- que et de 1,0 ml d'eau est laissée au repos pendant 20 heures à température am- biante. La solution de réaction est versée dans 8 ml d'eau et le mélange aqueux est extrait avec 40 ml de chloroforme en six fractions. Les extraits chlorofor- miques combinés sont lavés avec une solution aqueuse de bicarbonate de sodium, séchés sur du sulfate de sodium et évaporés sous vide. La matière résiduelle est cristallisée dans de l'acétone, en sorte qu'on obtient de la 16 a-méthyl-4-prégnè- ne-17 [alpha], 21-diol-3,11,20-trione.
REVENDICATIONS.
1. Composés stéroides dans lesquels des substituants sont attachés aux atomes de carbone C-6 et c-16.
2. Stéroïdes 6 [alpha], 16 [alpha]-diméthyl-3,11,17,20,21-penta-oxygénés de la série du prégnane.
EMI22.1
3. Composés de formule suivante : CH2OR b 0 OH CH 3 zozo CH3
<Desc/Clms Page number 23>
dans laquelle Y est un groupe céto ou hydroxy, X est de l'hydrogène ou un halo- gène, et R est de l'hydrogène ou un groupe acyle.,
4. 6 [alpha], 16 a-diméthyl-4-prégnène-17 a, 21-diol-3,11,20-trione.
5. 21-phosphate de 6 [alpha], 16 a-diméthyl-4-prégnène-17 a, 21-diol-3,11, 20-trione.
EMI23.1
6. 21-acétate de 6 a, 16 a-diméthyl-°-prégnène-17 a, 21-diol-3,11,20- trione.
7. 21-(tert.-butyl acétate) de 6 (ï, 16 a-diméthyl-°-prégnène-17 OC, 21-diol-3,11,20-trione.
8. 6 ce, 16 a-diméthyl-4-prégnène-11 P, 17 a, 21-triol-3,20-dione.
9. 21-acétate de 6 a, 16 a-diméthyl-°-préfnène-11 pe 17 a, 21-triol- 3,20-dione.
10. 2l-(tert. -butyl acétate) de 6 a, 16 -diméthyl,°-prégnène-11 fi, 17 a, 21-triol-3,20-dione.
11. 21-phosphate de 6 a, 16 a-diméthyl-°-prégnène-11 fi, 17 a, 21- triol-3,20-dione.
12. 6 ce, 16 a-diméthyl-9 OE-fluoro-4-Prégnène-11 P5 17 a, 21-triol- 3,20-dione.
13. 21-acétate de 6 a, 16 a-diméthyl-9 a-fluoro-°-prégnène-11 P, 17 a, 21-triol-3,20-dione.
14. 6 [alpha], 16 a-diméthyl-9 a-fluoro-4-prégnène-17 a, 21-diol-3,11,20- trione.
EMI23.2
15. 21-acétate de 6 oce 16 a-diméthyl-9 a-fluoro-4-prégnène-l7 a, 21- diol-3,11,20-trione.
16. Composés de formule suivante :
EMI23.3
dans laquelle Y désigne un groupe céto ou hydroxy, X est de l'hydrogène ou un halogène,- et R est de l'hydrogène ou un groupe acyle.
EMI23.4
17. 6 ce, 16 a-diméthyl-1,4-prégnadiène-17 a, 21-diol-3,11,20-trione.
18. 21-phosphate de 6 oc, 16 a-diméthyl-1,4-prégnadiène-17 ce, 21-diol- 3,11,20-trione.
19. 21-acétate de 6 a, 16 a-diméthyl-1,4-prégnadiène-17 a, 21-diol- 3,11,20-trioneo
<Desc/Clms Page number 24>
EMI24.1
20. 21-(terto butyl acétate) de 6 a, 16 OE-diméthyl-1,4-prégnaàiène- 17 OG,21-diol-3,11,20-trione.
21. 6 oc, 16 a-diméthyl-1,4-prégnadiène-11 , 17 a;, 21-triol-3,20-clion, 22. 21-acétate de 6 a, 16 a-c3.iméthyl-1,4-prégnadiène-11 , 17 OC, 21- trio1-3,20-àione> 23. 21-(tert.-butyl acétate) de 6 a, 16 oc-diméthyl-l,4-prêgnadiènè- 11 , 17 a, 21-triol-3,20-dione.
24. 21-phosphate de 6 a, 16 a diméthy11,4-prégnadiène-11 pe 17 a, 21-triol-3,20-dione.
25. 6 a, 16 oc-diméthyl-9 oc-flupro-l,4-prégnadiène-ll Pl 17 a, 21- triol-3,20-dione.
26. 21-acétate de 6 a, 16 a-diméthyl-9 a-fluvro-154-Prégnadiène-11 Pl 17 [alpha], 21-triol-3,20-dione.
27. 6 [alpha],16 a-diméthyl-9 a-fluoro-l,4-prégnadiène-17 a, 21-diol-3,11 20-trione.
EMI24.2
28. 21-acétate de 6 a, 16 a-diméthyl-9 -fluaro-1,4-prégnadiène-17 a,21-diol-3,11,20-trione.
29. Procédé de production d'un 6 [alpha], 16-diméthyl stéroide de la série du prégnane, dans lequel on fait réagir un 6-céto-16-méthyl-stéroide de la série du prégnane avec un agent de méthylation, de manière à former un 6 [alpha], 16-diméthyl, stéroide.
30. Procédé dans lequel on fait réagir du 3-éthylènedioxy-6 ce,16 [alpha]-
EMI24.3
diméthyl-11-oxygéné-17 a, 20,20,21-bisméthylènedioxy-5-prégnène avec un agent d'hydrolyse dans des conditions acides, de manière à produire de la 6 ce, 16 a- diméthyl-11-oxygéné-4-prégnène-17 a, 21-diol-3,20-dione et on fait réagir ce dernier composé avec l'activité déshydrogénante de microorganisme du genre Schizomycetes, de manière à former de la 6 oc, 16 OE-diméthyl-11-oxygénµ-1,4-prégna, diène-17 a, 21-diol-3,20-dione.
31. Procédé dans lequel on hydrolyse de la 3-éthylènedioxy-17 [alpha], 20,
EMI24.4
20,21-bisméthylèneàioxy-6 oc, 16 a -diméthyl-5-prégnène-ll-one dans des conditions acides de manière à produire de la 6 [alpha], 16 a-diméthyl-4-prégnène-17 [alpha], 21-diol- 3,11,20-trione,et on fait réagir ce dernier composé avec l'activité déshydrogénan. te de microorganismes du genre Bapillus sphaericus, de manière à former de la 6 [alpha]
EMI24.5
16 oc-diméthyl-l,4-prégnadiène-17 Ot, 21-àiol-3,11,20-trione.
32. Procédé dans lequel on hydrolyse du 3-éthylènedioxy-17 ce,20,20, 21-bisméthylènedioxy-6 oc, 16 a-diméthyl-5-prégnène-ll -ol dans des conditions acides, de manière à produire de la 6 a, 16 tx-diméthyl-4-prégnène-11 , 17 a, 21-triol-3,20-dione, et on fait réagir ce dernier composé avec l'activité déshy- drogénante de microorganismes du genre Bacillus sphaericus, de manière à former de la 6 ce, 16 [alpha] -diméthyl-1,4-prégnadiène-11 ss, 17 a, 21-triol-3,20-dione.
EMI24.6
33. Procédé dans lequel on soumet de la 3-êthylènedioxy-17 K, 20,20, 21-bisméthylènedioxy-6 oc, 16 a-diméthyl-5-prégnène-11-one à l'action d'acide p- toluènesulfonique en solution acétonique, de manière à produire de la 17 a, 20, 20, 21-bisméthylènediogr 6 oc, 16 oc-diméthyl-4-prégnène-3,ll-dione.
34. Procédé dans lequel on fait réagir de la 17 [alpha], 20,20,21-bisméthy- lènedioxy-6 [alpha], 16 a-diméthyl-4-prégnène-3,11-dione avec de l'acide acétique aqueu
EMI24.7
de manière à former de la 6 axe 16 Ex-diméthyl-4-prégnène-17 or, 21-diol-3,11,20-tri ne.
35. Procédé dans lequel on soumet du 3-éthylènedioxy-17 [alpha], 20,20,21-
EMI24.8
bisméthylènedioxy-6 oc, 16 oe-diméthyl-5-prégnène-ll P -ol à l'action d'acide p- toluène-sulfonique en solution acétonique, de manière à produire de la 17 a, 20,
<Desc/Clms Page number 25>
20,21-bisméthylènedioxy-6 [alpha], 16 [alpha]-diméthyl-4-prégnène-11 ss -01-3-one.
36. Procédé dans lequel on fait réagir de la 17 [alpha], 20,20,21-bismé- . thylènedioxy-6 [alpha], 16 [alpha]-diméthyl-4-prégnène-11 ss -ol-3-one avec de l'acide acéti- que aqueux de manière à former de la 6 [alpha], 16 [alpha]-diméthyl-4-prégnène-11 ss, 17 [alpha], 21-triol-3,20-dione.
37. Procédé dans lequel on met un composé 6 [alpha], 16 a-diméthyl-4-prég- nène-17 [alpha] -01-3,20-dione en contact avec l'activité déshydrogénante de microor- ganismes du genre Schizomycetes, de manière à former le composé 6 [alpha], 16 a- dimé- thyl-1,4-prégnadiène-17 a -al-3,20-dione correspondant,