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La présente invention concerne, de manière générale, de nouveaux composés stéroides et des procédés pour leur préparation. Plus particulièrement, elle est relati-
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ve à de nouveaux composés 16-méthyl-11-oxygéné-l,i-prégna- diène-17 0( ,21-diol-3,20-diones, et au procédé de préparation de ces composés au départ du composé 16-méthyl-ll-oxy- géné-4-prégnène-17 o(,21-diol-3,20-dione correspondant.
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Ces nouveaux Composés 16-méthyl-11-oxygéné-l,l-prégnadiène-17 0(,21-diol-3,20-diones possèdent une activité anti- inflammatoire extrêmement élevée et conviennent spécialement pour le traitement de l'arthrite et de maladies apparentées, étant donné qu'elles peuvent être administrées pour leur action cortisonale à des doses extrêmement faibles, en réduisant au minimum les effets secondaires indésirables.
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Les nouveaux composés 16-mêthyl-11-oxygéné-1,.prégnadiène-17 ol ,21-diol-3,20-diones, faisant l'objet de la présente invention, peut être chimiquement représenté comme suit :
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dans laquelle X est de l'hydrogène ou du fluor, R désigne
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de 7.rkrydroF-ne ou un radàcr;1 cvmonyl d'liydrocirbure inférieur et7st un substituént ceto ou hydroxy.
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Ces composés l6-méthy'= :...oxCgéné-1,;."Yprégnadiè-. ne-17 0( ,21-diol- (3-d.ozes se p âp;rent par contact du composé 16-wéthyl-li-oxygéné-Q-pà'égiiéne-1? d 21-aiol, 3,20-dione correspondant avec la fonction déshydrogénante de microorganismes de la classe des Schizomycètes,qui comprend les microorganismes appartenant aux typs des
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Actinomycetales et uba et ena les. Les Eubaçteriles préfé- rées comprennent des microorganismes du genre Acetobacter, du genre Aarobacter, et du genre Bacillus; les Actinomycetales préférés comprennent des microorganismes du genre Nocardia et du genre Mycobacteriu.
On préfère particulièrement employer des microorganismes de la classe des Schizomycetes Appartenant aux espèces suivantes, Acetobacter xylinum, Aerobacter aerogenes, Bacillus
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snhaericus, Nocardia erythropolis, Nocardia blackwellii, Nocardia asteroides, Nocardia minima, Nocardia globerula, Nocardia leishmanii, Nocardia formica, Nocardia convoluta,
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Nocardia corallina, et 1!Iycobacterium smegmatis, Mycobacterium phlei, i'ycobacteri.um lacticola, et Mygobacterium tuberculosis.
L'espèce Bacillus sphaericus, telle que dé- finie dans le "Manuel for Determinative Bacteriology,"de Bergey, 6ème Edition, comprend plusieurs variétés, telles que la variété rotans , la variété fusiformis, etc.. et, dans certaines collections, ces variétés sont désignées par les noms d'espèce Bacillus rôtans et Bacillus fusifor- mis. Ces microorganismes de la classe des Schizomycètes peuvent être obtenus à des sources connues, telles que l'American Type Culture Collection, Washington, D.C.; ils peuvent aussi être isolés de sources naturelles, telles que le sol, par des méthodes connues.
Il est à noter que, pour une espèce donnée de Schizomycètes, les souches déshydrogénantes préférées peu- vent être choisies par le test suivant : Un milieu nutritif-
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contenant 1 g. (le ceré10se, 1 ,,:' :damzr¯p, : ,;'; ;1 de liqueur de macéra Mon ds [u.ï8) f.<, >i '.J' ù' o=,tr. 5.1 4x. -.evur et suffisamment d'e:.: 1 stillv1 par *bte>%1 , :îl1 volume de 50 ml, est amené à un pH de bus rilisé inoculé à l'aide d'une culture ae la sou:;:!1.:; ',pier., r'?: ;.Ù3me particulière à tester pour son activité ;3.ésx?varc;ïerL::;,a er l La culture inoculée rësultpnte e,, .:rt.2z;,ée alors à une température de 280 C, en agitant, pendant: bzz. heures, et à la culture résultante on ajoute une S\.Jl1x::içr> contenant 10 mg. dthgdracortisor,e dissous dnnf 0,1 m3 de diféthylforma- mide.
La culture contenant le composé stércde est incubée, en agitant, pendant une période supplémentaire d'environ 10 heures à 28 C. le bouillon de fermentation est extrait, de manière répétée, à l'aide d'acétate d'éthyle et les extraits à l'acétate dthyle sont combinés et évaporés jusqu'à siccité sous vide. Une partie de la matière résiduelle est dissoute dans de l'acétone et étalée par taches ou touches sur un chromatogramme de papier, qui est développé en utilisant de la formamide comme phase stationnaire et du chloroforme comme phase mobile. Deux bandes séparées sont ordinairement obtenues, la bande inférieure correspondant à 1'hydrocortisone; la bande supérieure correspond au dérivé -déshydrogéné. Les deux bandes sont découpées et éluées séparément avec du méthanol.
Chacun des éluahts méthanoliques est soumis à une analyse d'absorption d'ultra-violet. L'efficacité de la souche de microorganismes testée pour effectuer la -déshydrogénation est indiquée par les proportions relatives de dérivé #1- déshydrogéné et d'hydrocortisone inchangée, mesurées par cette analyse d'absorption d'ultra-violet.
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Les lb-méthyl-11-oxygéné--prégnène-17 0(,21- diol-3,20-diones utilisées comme matières de départ dans ce procédé sont avantageusement préparées en partant du
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3-acé Late de 1 ":.¯ o ,.,:ß e- o( --r " :¯., :0-dione par le mode opératoire suipe:-fr î<, fait .t :3::lgL du 3-acétrta de 16-prégnène-30( avec de ".:. 9.odtzre de métbyl magnésium en présence de chlorure eu4-vÈ,ux, de fu3nire à former du 3-acétate de 160=, mmétinyl-pragnaîe3o( =7c1-1120-dione, qui est mis en réaction avec th1 l' (' ci..-te chlorhydrique méthanolique aqueux de manière à forcer de 160((-méthyl-prégnane-3o( -0l-11,20-d.oaem.:
e dernier composé, qui est un puissant anesthésique, est mis en réaction avec de l'anhydride acétique en présence diacide p-toluène sulfonique comme catalyseur, de manière à former un mélange d'acétates énoliques contenant du 3,20-diacétate de 16o(-méthyl-
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l?,30-pr-égnène-3d ,20-diol-11-one; ce mélange, après puri- fication chromatographique pour éliminer la matière de départ inchangée éventuelle, est mis en réaction avec de 11-acide perbenzoique et le 3,20-diacétate de 16[alpha] -méthyl-
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170( -P!#t'hy;è'rJ:7' , ,20-époxy-prégnane-3c( ,20-diol-11-one ré- sultant est hydrolysé avec du bicarbonate de potassium mé-
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thanolique, de manière à produire de la 16o(mm6thyl-prégnane-3o( ,1701 -diol-11,20-dione.
Ce dernier composé est mis en réaction avec du brome dans du chloroforme, de manière
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à former de la 21-bromo-16 -méthyl-prégnane-3o( ,170( -diol-' 11,20-dione, qui est mise en réaction avec de l'iodure de sodium dans de l'acétone, de manière à produire de la 21-
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iodo-1601 -wéthyl-pr-égnane-301 lo( -diol-11, 20-dione, qui est convertie sans isolement en 21-acétate de 160( -méthylprégnane-3o( ,170,21-triol-11,20-dione par réaction avec de l'acétate de potassium anhydre;
ce composé est mis en réaction avec du trioxyde de chrome dans de la pyridine, de
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manière à former du 21-acétate de 16o(-méthyl-prégnane- 170(,21-diol-3,11,20-trione. Le 21-acétate de 16o(-méthyl- prégnane-17o(,21-diol-3,11,20-trione est mis en réaction
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avec ciu brome .3ür,:. un mêla:ar ..1 .;dde acét .." glacial et de chloroforma 1# manière .. ,:'.;C t :..!'s di . : ...- 'omo-l6o('" méthyl-prégn&ne-!.7o( 21-cie g 3 , 1 1 'u-'?r-' ie, i; > : : est a' ors mise en réaction avec de éi aesi t:. oazid :, ¯ maniera former de la 3,20-bis-se'itiearo.-e de 2i-ac;#ate 16o( -rn&thyl-4-prégnèn17o( ,21-di 1-3/L1 :2<J,triol':e.
Cette 3,20bis-samicarbazc. est mise el t .:.- . :,.an avec du borohydri-. de de sodium de manière é. for,"f-r as 3 ):W-:Jis-semica.i"bazone, lo( --méthyl.-l-prégnéne-Iï3 , 170( .21-trio: 3,20-dio- ne, qui est hydrolysée dans des conditions acides, da ma-
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nière à former de la 16 o( -mëtnvl.-.-préûnène-l¯ 3 , 17 0( , 21-triol-3,20-dione; ce composé est mis en réaction avec des agents estérifiants, tel que l'anhydride benzoïque ou les anhydrides alcanoiques inférieurs, de manière à former les 21-esters correspondants.
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La 3,20-bis-senicarbazone de 21-acétate de 16 d . mét 'l-4-prégnène-17 0(, fll-diol-3,11,20-tr-ione, est mise en réaction avec du bicarbonate de potassium ou de l'hydroxyde de potassium dans du méthanol aqueux, de manière à former de la 3,20-bis-semicarbazone de 16 c( -méthyl-4-pré-
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gnène-17 ol ,21-diol-3,11,20-tr-ione, qui est alors hydrolysé dans des conditions acides, de manière à produire de la 16 c( -méthyl-4-prégnène-1? d ,21-diol-3,11,20-trione à fonction alcool libre en 21 ; composé est estérifié, en utilisant les agents estérifiants susmentionnés, de manière à produire les 21-esters correspondants.
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La 16 0( -méthyl--J--prëgnène-11 3 , 1? ol , 21- triol-3,20-dione, par réaction avec de l'anhydride acétique dans de la pyridine, produit le 21-acétate correspondant qui est mis en réaction avec du chlorure de méthane sulfo- nyle puis avec de l'acétate de potassium acétate ou de l'oxychlorure de phosphore, de manière à produire du 21-acé
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tate de 16 0( -méthyl-.,9(llj-prégnadiêne-17 q ,21-diol-
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3,20--ilo.ne; ce 5Grnier composa s'.'.', mis en réaction avec de l'acide i!yl6JJid;:.w de man:1..i,; --0 3 p:':Jduire du 21-acétate de 9 o(- bromo-16 0( -é'chyl-4"'praguèna-ll 117 o( , 21triol-3t20-dione, qui est mis en r0ction avjv. de l'acétate de potassium dans de l'éthanol, de manièm à produire du 21-acétate de 16 0( -méthyl 1 â .3 -époxy-1 ,pa-;nène-17 c( , 21-diol-3,20-dione.
Ce 9,11-époxyde est alors mis en réaction avec ôa fluorure dehye-rogùne dans da tétrahydrofurane, de manière à produire du 21-"acétate de 16d-méthyl- 9 o(-fluoro-4"prégr[ène-ll , 17 ci. ,21-tr;.U:,20-dione,; ce composé est mis en réaction avec un agent d'hydrolyse de manière à former de la 16 [alpha] -méthyl-9 [alpha] -fluoro-4-prégnè'
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ne-11 , 17 o( , 21-tr.ol-3,20-dione à fonction alcool li- bre en 21. Cet alcool est mis en réaction avec un agent estérifiént, tel que l'anhydride benzoique, les anhydrides alcanoiques inférieurs et analogues, de manière à former le 21-ester correspondant.
Le 21-acétate de 16 o(-méthyl-9 o(-fluoro-4- prégnène-11 ss, 17 [alpha], 21-triol-3,20-dione est mis en réaction avec du trioxyde de chrome dans de la pyridine, de manière à former du 21-acétate de 16 [alpha] -méthyl-9 0( -fluoro
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4-prégnène-17 c( ,2l-diol-3,ll,20-trione qui, par réaction avec un agent hydrolysant, forme de la 1601 -méthyl-9 d - fluoro-4-prégnène-17 c( , 21-triol-3,11,20-trione à fonctio alcool libre en 21. Cet alcool libre en 21 est mis en réaction avec des agents estériiants, tels que ltanhydri- de benzoique, les anhydrides alcanoiques inférieurs et ana' logues, de manière à former les 21-esters correspondants.
Parmi ces 16-méthyl-ll-oxygéné -4-prégnène- 17 [alpha] ,21-diol-3,20-diones de départ, on peut citer la 16 [alpha]
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méthyl-4-pr-égnène-1? d , 21-àiol-3,11,20-tr-ione et ses 21- esters, et en particulier ses 21-esters carbonylés d'hydro- carbures inférieurs, comme %benzoate le 16 o(-méthyl-4-
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prC-;r.ène-17 G\ ; .:.. -dio...3 ,: , s .rîons 2'..". ; 1,>#5 21-alca;.Gateo i.nférie!z. - d," 16 c - ¯.=p" --arègnère=-li à , 21dioJ.- 3,11,20-trione, te 1 ql6 1 e 21 -.a ré# a te co 1:::' 0( -méthy:t.-J..prégnène-17 d 21.-diol- , l , 2C-r, r ior.e; le 21-propionate de 16 o( -méthyl-4-préjni#>e-1? 0\ , 21-diol-? .,2U-trione; la 16 0( -méthyl-1-prénène-lL ll3 , 1'1 d , 2l-.;
îo'-.3?0-dîorm jsters et ses 21-esters,et on particulier les 2Jlcerbonylés d'hy-
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drocarbures inférieurs, tels que le 21-benzate. de 16 0(méthyl-4-prégnèna-ll /J ' 17 0( , 1-triol , 2u-üione ,'.-; les 21-alcanoates inférieurs de 16 o(-méthyl-4-prégnène- 11 /3 , 170(, 21-triol-3,20-dione, tels que le 21-acétate de l6 0( -méthyl-.-prégnène-li , 17 o( , 21-triol-3,20dione; le 21-propionate de 16 0( -méthyl-4-prégnène-ll jJ , 17 0( , 21-riol-3,20-dione; la 16 c -méthyl--' c( -fluor'o- 4-prégnène-17 d ,21-diol-3>11,20-trione et ses 21-esters,
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et en particulier les 21-esters carbonylés d'hydrocarbures
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inférieurs, tels que le 21-benzoate de 16 o(-méthyl-9 0( -
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fluoro-4-prégnène-17 0(, 21-diol-3,11,20-trione;
les 21-
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alcanoates inférieurs de 16 d -méthyl-9 0( -fluoro-4-prégnène-17 o ,21-diol-3,11,20-trione tels que le 21-acétate de 16 0( -méthyl-9 o(-fluoro-4-prégnène-17 0( - 21-diol-3 ,11, 20-
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trione; le 21-propionate de 16 c( -méthyl-9 o(-fluoro-4-
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prégàÀàe-17 d , 21-diol-3,11,20-trione; la 16 0( -méthyl- . ;,J;, .
9 0( =luoro-l-prégnène-11 3 , 17 d , 21-triol-3,20-dione
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et ses 21-esters, et en particulier ses 21-esters carbonylés dhydrocarbures inférieurs tels que le 21-benzoate de
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16 0( ,-méthyl-9 0( -fluo-ro-l-prégnène-11 /3 , 17 o( , 21-triol- 3,20-dione; les 21-alcanoates inférieurs de 16 c( -méthyl- 9 0( -fluoro-!-prégnëne.-11 /3 , 17 0( , 21-triol-3 , 20-dione, tels que le 21-acétate de 16 c( -méthyl-9 d-fluoro-y-prégnène-11 , 17 d , 21-triol-3,20-dione; le 21-prmptonate de 16 c( --méthyl-9 -fluaro-x,-pr è;nène-11 , 17 c( , 21-
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triol-3,20-dione et analogues.
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(;u :"'ormément à la présente invention et en utlisant les couchas préféi 4e5: àe microorganismes âchi,z2M7 cétes, le déshydrogénaticn du compose l6-N4thyl-ll-oxygéné-' 4-prégnène-17 21-di o:i3 , :0-dione est effectuée en mettant le composé 3téroide er. contact avec les microorganismes Schizomycètes, eux-mêmes o . si on le préfère, avec les systèmes enzylatiques de microorganismes Schizomycètes. er sorte que l'hydrogène attache aux atomes de carbone C-1 et C-2 est sélectivement enlevé, de manière à produire le #1, stéroïde désiré sensiblement non contaminé par des sous-produits non désirés.
Lorsque le composé 16-méthyl-
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11-c:acygëné-.-prégnène-17 , 21-diol-3,20-dione est soumis à l'activité déshydrogénant-3 des souches déshydrogénantes préférées de microorganismes Schizomycètes, on obtient directement et avec un rendement élevé le composé 16-méthyl-
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11-oxygéné-l,l-prégnadiène-l'7 q , 21-diol-3,20-dione cor- respondant.
Le traitement de déshydrogénation microbiologi= que suivant l'invention est effectué en mettant le composé l6-méthyl-ll-oxygéné-4-prégnène-17 c( , 21-diol-3,20-dione en contact avec l'activité déshydrogénante de microorganis- mes Schizomycetes. Ceci peut se faire en ajoutant le com- posé stéroïde, sous forme solide ou sous forme d'une solu- tion dans un solvant, telle qu'une dialcoyl-cétone, comme l'acétone, une dialcoyl-formamide, telle que la diméthylfor--' mamide et analogues, dans des conditions stériles, à une culture du microorganisme dans un milieu nutritif et en agitant le mélange résultant, de manière à faire croître le microorganisme et à déshydrogéner le composé stéroide.
Le stéroide peut être ajouté au moment où le milieu nutritif est inoculé à l'aide de la culture de microorganismes Schizomycètes, ou bien il peut être ajouté à une culture
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t.abl1.e. Au 1 se d'ajcutel < , t -osé stéx<.w s: à la culture établie dans .le milieu r"t;s- les cell'l1.±: obtenues de cette culture établie peuvent:
ire réparées du bouillon par filtration, lavées avec de @@ distillée, puis mises
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en suspension dans une solution qae4F.r '";)mponnée convenant le composé 16-méthyl-11-o"gënéf.-prégzèr.e-.1% , J 21-diol- 3,20-dione, après cuoi le mélange résultant 95i agité de manière à réaliser la déshydro 2;éT\at.ion du '!oi2PQsé stércîde et à former la 16-méthy.-il-oxygéz-' ,.-prégriâiéne-ll d , 21-diol-3,20-dione correspondante.
Ce demie..' composé est plus facilement récupéré de ce milieu que du mélange obtenu lorsque le stéroide est incubé avec le microorganisme dans le milieu nutritif originel. Le composé 16-méthyl-
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ll-oxygéné-4-prégnène-17 0( ?l-diol-3,20-dione pout être aussi mis en contact avec des préparations enzymatiques déshydrogénantes provenant de la croissance de microorganismes Schizomycètes.
Les milieux nutritifs utilisés pour effectuer cette déshydrogénation bactériologique sont ceux ordinairement utilisés pour la propagation de microorganismes Schizomycétes. Les milieux nutritifs usuels comportent une - source de carbone et d'azote, des sels inorganiques et des facteurs de croissance, en cas de besoin. Le carbone peut être fourni par des composés, tels que des acétates, des lactates et analogues.
L'azote peut être fourni par un sel d'ammonium, des amino-acides ou des protéines, telles que les graines de soja, des avoines, de la levure, des extraits de levure, du produit de digestion tr@ptique de caséine, des extraits de viande, de la farine au sang, de la viande protéinique et des fragments d'os, de la farine de saumon, des farines de poisson, des matières solubles de poisson, des solubles de distillateur et analogues. Si on le désire, les microorganismes Schizomycètes peuvent être propagés en utilisant des protéines (ou des amino-acides)
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sans qu'aucun hlP:3e de carbone 1'10i t présent dans le milieu, auquel cas Le protéinefu cu 0mio=acides servent de source de carbone et d#azote requis par les tuicrocrganisC' f' mes.
Bien que, comme on l'a noté plus haut, la déshy-
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drogénation du composé l6-!néthyl"'il"oxygéné"4-prégnène- 17 d ,21-diol-s20--d.one puisse se',.ectuer en utilisant des préparations enzymatiques déshydrogénantes provenant de la croissance de microorganismes Schizomycètes ou en mettant le composé stérode en contact avec une suspension d'une culture établie dans de 1 eau distillée, on préfère
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ordinairement ajouter le composé l6-méthyl-ll-oxygéné-4F prégnène-l7 0{ ,21-diol-3,20-dione à un milieu nutritif contenant une culture de 24 heures de microorganisles
Schizomycètes.
La proportion de composé stéroide, qui peut être ajoutée au milieu, varie en fonction du substrat particulier à déshydrogéner, mais on préfère ordinairement utiliser une concentration d'environ 0,005 % à 0,2 % de
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composé 16-méthyl-11-oxygéné-1-prégnène-17 ,21-diol- 3,20-dione, bien que des concentrations plus élevées ou moins élevées puissent être employées, si on le désire.
La culture contenant le composé stéroide ajouté est alors incubée, de préférence en agitant et en aérant pendant une période additionnelle, qui varie ordinairement entre environ 10 heures et 50 heures, bien que des temps de fermentation plus courts ou plus longs puissent être avantageux pour la déshydrogénation de substrats particuliers.
En raison du fait que des fermentations prolongées peuvent donner lieu à la destruction d'une partie du produit stéroide /\ -déshydrogéné, on préfère ordinairement appliquer un temps de fermentation d'environ 10 heures à 24 heures qui, en fonction du substrat stéroide, donne, ainsi qu'on l'a constaté, des rendements maxima en produit stéroïde
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L.., --déshYd'-', [;v' .'.0 tordue le gr ¯:,.:-..:.:
de dµ==1.>;,r<ià..;±ñation est. terminé, la 13.,mfthyi,-il-ixyàéi:,é-.î,-çi :grs,rïs.ne-17 c.{ , 21-diol-3,20-dione obtenue est <1Vlmta,:.u.' ,,:;l1\.- récupérée du bouillon fermenté par extraction avec un solvant non miscible à l'eau, tel que, p exemple, @ hydrocarbure
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chloré, comme le chlorofor,ne, u,e c4t0h3, Lomme la méthyl- isobutylcétone, un alcanoate d'alcoyle, comme l'acétate d'éthyle, et analogues. L'extrait du produit stéroïde -déshydrogéné et la matière de départ éventuelle qui n'a pas réagi et qui peut être présente est avantageuse-
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ment purifié par chromatographie en utilisant du gel de silice, de l'alumine activée ou analogue ou, si on le désire, à l'aide de chromatogrammes de papier.
Après sépara- ' tion du produit déshydrogéné de la matière de départ n'avait pas réagi, le produit peut être purifié davantage, si on le désire par recristallisation dans un solvant, tel que l'acétate d'éthyle, les mélanges d'acétate d'éthyle et d'éther de pétrole, et analogues.
Par ce procédé de déshydrogénation microbiologie que, en utilisant les l6-méthyl-ll-oxygéné-4-prégnène- 17 [alpha], 21-dione-3,20-diones de départ énumérées plus loin,
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on obtient des 16-méthyl-11-oxygéné-1,y-prégnadiéne-1? d , 21-diol-3,20-diones, telles que la 16 d -méthyl-l,4-prégnadiène-17 0( ,21-dial-3,11,20-trione; la 16 -méthyl- 1,.-prégnadiène-11 j3 , 17 0( , 21-triol-3,20-dione; la 16 cl méthyl-9 c( -fluoro-17 c( ,21-diol-3,ll,20-trione et 16 c(méthyl-9 o(-fluoro-ll/3 , 17 d , 21-triol-3,20-dione.
Tant dans le cas où la 16-inéthyl-11-oxygéné-4-
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prégnène-17 o ,21-diol-3,20-dione de départ employée dans cette réaction de déshydrogénation microbiolique est un alcool libre en 21 que dans celui où il s'agit d'un 21-es-
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ter de celui-ci, le produit obtenu est la 16--m;ahyl--11-oxy-
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génél,.pre'.gn.d..èae-17 0( ,2..-d.-3,20-d:one correspondant à fonction alcool lib:'ffJ 2le étant donné que tout groupement 21-est'":.'.-s qui peut ét,1.a présent est hydrolysé pendant la réaction de déshydrogénation microbiologique.
Ces 16-méthyl-11-ocygénél,emprégnadiêne-l' o( ,21-diol-3,20- diones à fonction alcool libre en 21 peuvent être converties en 21-esters correspondants par réaction avec un agent d'acylation, tel qu'un agent de phosphorylation, un agent d'acylation d'acide carboxylique d'hydrocarbure inférieur, tel que l'anhydride benzoique, le chlorure de tert.-butyl acétyle, un anhydride alcanoique inférieur ou un halogénure d'alcanoyle inférieur tel que l'anhydride acétique, l'anhydride propionique, un anhydride d'acide polybasique,
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tel que ltanhydr:idë , -diméthyl-'glutarique, l'anhydride succinique, et analogues.
Suivant ce procédé d'acylation, on obtient des
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21-esters de 16 d -méthyl-1,4-prégnadiéne-17 d ,21-diol- 3,11,20-trione, tels que le 21-phosphate de 16 o(-méthyl- .
EMI12.4
1,y-prégnadiène-17 d ,21-diol-3,11,20-%rione, les 21-ester' d'hydrocarbures inférieurs de 16 o(-méthyl-1,.-prégnadiêne 17 0(,21-diol-3,11,20-trione, tels que le 21-benzoate de 16 ol-méthyl-1,%-prégnadiéne-1? d ,21-diol-3,11,20-trione; le 21-tert.-butyl acétate de 16 d-aéthyl-1,%-prégnadiénel7 d ,21-diol-3,11,20-trione; [Les 21-alcanoates inférieurs de 16 0( -méthyl-16 0( -méthyl-l,l-prégnadiêne-17 ci ,21-diol- 3,11,20-trione, tels que le 21-acétate de 16 c( -méthyl-1,4prégnadiéne-17 d ,21-diol 3,11,20-trione; le 21-propionate de 16 0( -méthyl-1,1-p'égnadiène-17 c( 21-diol-3,11,20-trione; les 21-esters de 16 4 -méthyl-1,.-prégnadiène-11 17 0(,21-triol-3,20-dioney tels que le 21-phosphate de 16 0( -méthyl.-ï,i-prégnadiène-.11,' 17 c( ,1-triol-3,z0-dione;
les 21-esters carbonylés d'hydrocarbures inférieurs de 16 o( méthyl-1,.-prëgnadiène-ll 3 , 17 c( ,21-triol-3,20-dione,
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tels que le 21-.; w =o de 16 <o-it.1:hyl-1,µ-=,1*égnadiéne- 11 , 17 z , 21- : o' - 3 20-' ï , .. le tert......mt.:. acétate de 16 0 -méthpl-1, .--p égnadi èn .=-i . 1 17 ' s -triol-3 , 20dione; les 21-alcpnoates inférée!'-s de 16 0( -.ety.-1,4.prégnadiène-l1 j3 r "s.? o( 21-trßu-" ,20-dione, '.:;els que le acétate de 16 d -méthyl-1,@-prégnadiène-li j3 , 9 17 cl 21-triol-3,20-dione; le 21-propionate di 16 d-méthyl-1,@prégnadiène-11 /3 , 17 0( , 21-triol-3,20-dione;
les 21-esters de 9 0( -fluor-16 0( -méthyl-l,4-prégnadière-l'l 0( ,21-
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diol-3,11,20-trione, tels que, par exemple, le 21-phosphate
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de 9 0( -fluor-16 0( -méthyl-1, t-prégr.adiène-l' c( ,21-diol- /21-
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3,11,20-trione; les esters carbonylés d'hydrocarbures infé-
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rieurs de 9 0( -fluoro-16 r( ..méthyl-l,t-prégnad.ène-1 0( , 21-diol-3,11,20-trione, tels que le 21-Denzoate de 9 c( fluoro-16 cl -méthyl-l,l-prégnadiène-l' d ,21-diol-3,11,20trione; le 21-tert.-butyl acétate de 9 o(-fluoro-16 0{ -méthyl-1,-prégnadiène-l' o ,21-diol-3,11,20-trione; les 21alcanoates inférieurs de 9 0( -fluor-16 d -méthyl-l,4-prégnadiène-17 d ,21-diol-3,11,20-trione, tels que le 21-acétate de 9 0( -fluoro-16 d -méthyl-1,1-prégnadiène..l7 0( ,21-
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diol-3,11,20-trione;
le 21-propionate de 9 0( -fluoro-16 c( -
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méthyl-1,4-prégnadiène-17 d ,21-dial-.3,11,20.-trione; les 21-esters de 9 o(-fluoro-16 d -méthyl-l,4-prégnadiène-17 0(,
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21-diol-3,11,20-trione, tels que, par exemple, le 21-phos-
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phate de 9 0( -fluoro-16 c(-méthyl-l,4-prégnadiène-ll f3 '
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17 o(,21-triol-3,20-dione; les 21-esters carbonylés d'hy-
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drocarbures inférieurs de 9 -fluoro-16 0( -méthyle.prégnadiène-11 , 17 o( ,21-triol-3,20-dione, tels que le 21-benzoate de 9 c( -fluoro-16 0( -méthyl-l,4-prégnadièneIl 6 , 1? 0(, 21-triol-,20-dione; le 21-tert.-butyl-acétate de 9 c( -fluoro-16 0( -aéthyl-1,.-prégnadiène-1Z f3 ' 17 o(, t 21-trio.-3,.20-dione;
les 21-alcanoates inférieurs de ,
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9 oi-fluoro-16 o( -méthyl-l,l-prégnadièna-11 3 , 17 o( , 21- triol-3,20-dione, tels que le 21-acétate de 9 o(-fluoro- 16 o(-méthyl-1,4-prégnadiène-11 ss, 17 [alpha], 21-triol-3,20dione ; le 21-propionate de 9 o(-fluoro-1.6 o(-méthyl-1,4- prégnadiène-11 ss, 17 [alpha], 21-triol-3,20-dione, et analogue.
En variante, au lieu d'être soumis au traitement de déshydrogénation microbiologique susmentionné, le
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composé l6-méthyl-l,4-prégnène-17 o(-0l-3,20-dione ou, si on le préfère, le composé 16 -méthyl-prégnane-17 0(-0l- 3,20-dione saturé correspondant est mis en réaction avec du bioxyde de sélénium, de façon à provoquer une déshydro- génaion du noyau A et à former le composé l6-méthyl-l,4- prégnadiène-17 o(-ol-3,20-dione correspondant.
Ce procédé' de déshydrogénation au bioxyde de sélénium est avantageu-
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sement exécuté en mettant le composé 16-méthyl-I-prégnêne 17 0( -0l-3,20-dione ou le composé 16-méthyl-prégnane-17 0( ol-3,20-dione et le bioxyde de sélénium en contact l'un avec l'autre en présence d'un solvant organique, tel que le dioxane, un alcool solvant, tel que let-butanol, etc.., et en chauffant le mélange à une température élevée. Lorsqu'on utilise du t-butanol comme solvant, on préfère ordinairement exécuter cette réaction au point d'ébullition du solvant. Dans ces conditions, la réaction est ordinairement terminée en environ 15 heures.
Le mélange réactionnel est ordinairement filtré, de manière à séparer le sélé- nium métallique, et la solution filtrée est évaporée jusqu'à siccité sous vide, en sorte qu'on obtient le composa
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16-4'éthYl-le4-Prégnadiène-17 0(-0l-3,20-dione désiré. la; Matière brute obtenue de cette manière est avantagauseufn-it purifiée par chromatographie sur bandes de papier, selon le procédé décrit plus haut à propos de la purification des
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composés 16-méthyl-1,1.-pré;radiène-17 0( -0l-3, 2U-diar:t pro-
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duits par dél:Ùyci! ogènatiol1 u c. o.ologiqu.
Les exemples su1.Yant illustrent 4es modes d'eexécution de la présente invention, mais \1 iiho da soi que ces exemples sont donnés à des fins illustratives et non limitatives.
EXEMPLE 1
On prépare 50 ml d'un milieu nutritif de compo-' sition suivante :
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<tb>
<tb> cérêlose <SEP> 1 <SEP> g.
<tb> édamin <SEP> 1 <SEP> g.
<tb> liqueur <SEP> de <SEP> macération <SEP> de <SEP> mais <SEP> 0,25 <SEP> ml
<tb> eau <SEP> distillée <SEP> q.s. <SEP> ad <SEP> 50 <SEP> ml.
<tb>
Ce milieu est ajusté à un pH de 6,5 à l'aide de KORE sté- rilisé et inoculé avec environ 2,5 à 5 ml d'une culture de Bacillus sphaericus (ATCC-245). La culture inoculée est alors incubée à une température de 28 C, en agitant, pend dant 24 heures. A la culture résultante, on ajoute une
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solution contenant 10 mg de 16 o(-méthyl-4-prégnène-17 0(s 21-diol-3,11,20-trione dissous dans 0,2 ml de diméthyl formamide. La culture contenant le composé stéroïde est incubée, en agitant, pendant une période supplémentaire d'environ 24 heures à 28 C.
Le bouillon de fermentation est extrait avec quatre fractions de 50 ml d'acétate d'éthyle et les extraits à l'acétate d'éthyle sont combinés et évaporés sous vide jusqu'à un volume d'environ 5 ml. La solution concentrée est alors étalée sur des chromatogrammes de papier, qui sont développés en utilisant de la diméthylformamide comme phase stationnaire et un mélange à 50 % de benzène et à
50 % de chloroforme comme phase mobile. Après 8 heures de
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développement dans un système descendarrtes bandes supé- rieures de chaque chromatogramme, correspondant au dérivé -déshydrogéné, sont découpées et extraites au méthanol
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et la matière oxtraite est à nouveau soumise à une chromatographie sur papier.
La bande supérieure est à nouveau découpée, séchée à fond et extraite au moyen de méthanol.
L'extrait méthanolique est évaporé jusqu'à siccité sous vide. La matière résiduelle est recristallisée dans un mélange d'acétate d'éthyle et d'éther de pétrole, en sorte
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qu'on obtient de la 16 d -métlyi-l,t-pràgnadiàna-J.7 c ,21.. diol-3,11,20-trione.
La 16 0( -méthyl-1,4-prégnadiène-17 c( ,21-dio1...
3,11,20-trione est traitée à l'aide d'anhydride acétique et de pyridine, ce qui permet d'obtenir le dérivé 21-acétylé, qui est purifié par recristallisation dans un mëlangd de benzène et d'éther de pétrole, en sorte qu'on obtient le
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21-acétate de 16 c( méthyl-1,.-prégnadiéne-1 o( ,21-diol- 3,11,20-trione.
EXEMPLE 2
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On prépare 50 ml d'un milieu 1butritif' de compo- sition suivante :
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<tb>
<tb> cérélose <SEP> 1 <SEP> g.
<tb> édamine <SEP> 1 <SEP> g. <SEP>
<tb> liqueur <SEP> de <SEP> macération <SEP> de <SEP> mais <SEP> , <SEP> 0,25 <SEP> ml
<tb> eau <SEP> distillée <SEP> q.s.ad <SEP> 50 <SEP> ml.
<tb>
Ce milieu est ajusté à un pH de 6,5 à l'aide de KOH, stérilisé et inoculé avec environ 2,5 à 5 ml d'une culture de Nocardia asteroides (ATCC 9970). La culture inoculée est alors incubée à une température de 28 C, en agitant, pendant 24 heures. A la culture résultante, on ajoute une
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solution contenant 40 mg de 16 ci -méthyl-4-prégnène-ll jJ . 17 o( , 21¯triol-320-dione dissous dans 0,2 ml de diméthyl- formamide. La culture contenant le composé stéroide est incubée, en agitant) pendant une période supplémentaire d'environ 24¯heures à 28 C.
Le bouillon de fermentation est extrait avec
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quatre fractions .;( 50 ml d ±1.0(Jt<::t.6 d'éthyle et les extraits à l'acétate d'éthyle 3ont combinés et évaporés sous vide jusque un i+<.l,Luq.e d'environ 5 ml. La solution concend trée est alors étalée sur des r .1.'#natogrammes de papier, qui sont développes en utilisant de la dimathylformamide comme phase stationnaire et un mélange à 30 % de benzène et à 50 % de' chloroforme comme phase mobile. Les bandes
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supérieures de chaque chromatograia<e, correspondant au dérivé 6,l""déshydrcJgéné, sont découpées et extraites au mé- thanol et la matière extraite est à nouveau soumise à une chromatographie sur papier. La bende supérieure est à nouveau découpée, séchée à fond et extraite au moyen de méthanol.
L'extrait méthanolique est évaporé jusqu'à siccité sous vide. La matière résiduelle est recristallisée dans un mélange d'acétate d'éthyle et déther de pétrole,
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en sorte qu'on obtient de 16 ci -méthyl-l,i-prégnadiène- 11 3 , 17 Oi , 21-triol-3,20-dione.
La 16 c -méthyl-1,y-prégnadiéne-11 %3 , 17 c( , 21-triol-3,20-dione est traitée avec de l'anhydride acétique et de la pyridine et le produit acétylé est recristallisé dans un mélange de benzène et d'éther de pétrole, en sorte qu'on obtient du 21-acétate de 16 d -méthyl-l,4-pré-
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gnadi ène-11 jJ , 17 d , 21-triol-3,20-dione.
EXEMPLE 3
On prépare 50 ml d'un milieu nutritif de composition suivante :
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<tb>
<tb> cérélose <SEP> 1 <SEP> g.
<tb> édamine <SEP> 1 <SEP> g.
<tb> liqueur <SEP> de <SEP> macération <SEP> de <SEP> mais <SEP> 0,25 <SEP> ml
<tb> eau <SEP> distillée <SEP> q.s.ad <SEP> 50 <SEP> ml.
<tb>
Ce milieu est ajusté à un pH de 6,5 à l'aide de KOH, stérilisé et innculé avec environ 2,5 à 5 ml d'une culture de Mycobacterium smegmatis (NRRL B-1667). La culture inoculée
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est alors incubée à une température de 28 C, en agitant, pendant 24 heures. A la culture résultante, on ajoute une
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solution cftenant 10 mg de 16 o( -méthyl-9 o( R.f'luoro-4-prégnène-11 f3 , 17 o( , 21-triol-3,20-dione dissous dans
0,2 ml de diméthylformamide. La culture contenant le com- posé stéroïde est incubée, en agitant, pendant une période supplémentaire d'environ 24 heures à 28 C.
Le bouillon de fermentation est extrait aveé quatre fractions de 50 ml d'acétate d'éthyle et les ex= traits à l'acétate d'éthyle sont combinés et évaporés sous vide jusqu'à un volume d'environ 5 ml. La solution concen- trée est alors étalée sur des chromatogrammes de papier, qui sont développés en utilisant de la diméthylformamide comme phase-stationnaire et un mélange à 50 % de benzène et à 50 % de chloroforme comme phase mobile.
On obtient deux bandes, dont l'une (correspondant au composant le plus- mobile) révèle le maximum d'adsorption d'ultra-violet ca- ractéristique de la 16 [alpha]-méthyl-9 d -fluoro-4-prégnène-
11 ss,17 [alpha], 21-triol-3,20-dione de départ, et dont l'au- tre (correspondant au composant le moins mobile) révèle un maximum d'adsorption d'ultra-violet à environ 245 mu.
Le chromatogramme sur papier est séché et la bande corres- pondant à l'adsorption de 245 mu est découpée et extraite avec du méthanol. La matière extraite à l'aide de métha- nol est à nouveau soumise à une chromatographie sur papier, en utilisant du papier qui a été extrait pendant 48 heures avec du méthanol et en employant le système chloroforme- formamide utilisé précédemment. Le chromatogramme résultant ne Présente qu'une bande de trace correspondant à la matière de départ, la bande majeure ayant un maximum d'ad- sorption d'ultra-violet de 245 mu.
Le chromatogramme de papier est séché à fond et la bande correspondant au maxi- mum d'adsorption de 245 mu est découpée et extraite avec du
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àtgtllenol. 1wwait méthJ,1t1::'J.tIc. est évaporé jusqu'à siccité sous vide, en sorte q- ::.."! 0btient de la 16 Ci{ "-méthyl- 9 al...fluoro..1J:,''"pr4gnadiÍàJ1ê''''11 lJ ; 17 G{ b 2¯tr3.ol-a20- dione.
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La 16 d. -méthyl-9 0(... ±luoro-lp4=prégnadiène... il 17 1-tris.-3 s 2d.o est mise en réaction avec un excès d'anh@dride acétique dans de la pyridine, en sorte qu'on obtient le dérivé 21-acétyle, qui est purifié par recristallisation dans un mélange de benzène et d'éther de pétrole, ce qui permet d'obtenir du 21-acétate de 16 [alpha] -mé
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thyl-9 d -fluo:z-L,l-prëgnad.êne-1,1 , 17 fi. 21-triol-- 3,20-dione.
EXEMPLE 4
Les traitements de fermentation des exemples 1, 2 et 3 sont répétés en,utilisant, au lieu des microor-
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g,ismes et de la 16 c( -mfithyl-11-oxygéné-4-prégnène-17 d, 21-.ol-3n20-dione de départ employée dans cexemples, les souches de microorganismes et les composés stéroïdes de départ indiqués dans le tableau suivant.
Les bouillons de fermentation résultants sont traités selon les procédés d'isolement décrits dans les exemples 1, 2 et 3, de manière à produire, en fonction de la souche de microorganisme particulière et du substrat stéroïde particulier utilisés,
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la 16 c -méthyl-11-oxygéné-1,4-pràgnadiéne-17 d ,21-diol- 3,20-dione indiquée dans le tableau suivant :
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<tb>
<tb> Essai <SEP> Substrat <SEP> Microorga- <SEP> 16-méthyl-11No. <SEP> nismes <SEP> Bacil- <SEP> oxygéné-1,4lus <SEP> Spaericus <SEP> prégnadiène-
<tb>
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17 c( ,21-dio] 21-dioJ:-
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<tb>
<tb> 3,20- <SEP> ione, <SEP>
<tb> produite
<tb>
EMI19.9
1 16 c( -méthyl-4-prégnène- ATcc-705Q l6c( -méthyl- 17 d ,21-diol-3,11,20- , la4 prégnadiè
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<tb>
<tb> trione <SEP> ne-174 <SEP> ,21diol-3,11,20trione
<tb>
<Desc/Clms Page number 20>
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2 160( -méthyl-4,-prégnèna.. .é...C-2.5 10;;'( -méthylIl 13 ,17Q{ ,2l-triol- 1,-'-prégnadiè- 3,20-dione . ns.-11 /3 ,170(, 21-tri'ol 3,20-
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<tb>
<tb> dione
<tb> 3 <SEP> 21-acétate <SEP> de <SEP> 16o(-mé- <SEP> ATCC-4525 <SEP> 16[alpha] <SEP> -méthyl-
<tb>
EMI20.3
thyl-J-prégnène-llj3 , . 1,4-prégnadié- 17(,( ,21-triol-3 ,:zef:' :
1I3 ,17 ! dione. :-t101-J,2Uw dione 4 160( -méthyl-4,-prégnène- ATCC-7055 160( -méthyl- 17 ,21-diol-3,11,20- 1,4-prégnadiè-'
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<tb>
<tb> trione <SEP> ne-1701 <SEP> ,21diol-3,11,20trione
<tb> 21-acétate <SEP> de
<tb>
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5 16d -méthyl-9d -fluoro- ATCC-7055 I6 -méthyl- .-prgnène-17o( ,21-diol- 90( -fluor- 3,11,20-trione &-!f!!1 1,.-,prégnadïê
EMI20.6
<tb>
<tb> né-17[alpha] <SEP> ,21diol-3,11,20trione
<tb> 6 <SEP> 160( <SEP> -méthyl-9o( <SEP> -fluoro- <SEP> ATCC-245 <SEP> 16[alpha]-méthyl-
<tb>
EMI20.7
1-prégnène 11f3 ,170( , 9c( -fluoro- 21-triol-3 , 2C!-diane llfr3égl7c(ièi
EMI20.8
<tb>
<tb> ne:11,6 <SEP> ,17[alpha],
<tb>
EMI20.9
2l-tr'iol-J ,20-
EMI20.10
<tb>
<tb> dione
<tb>
EMI20.11
7 21-acétate de 160( -mé- .
ATCC-7063 16c( -méthylthym-90( -fluoro-4-pré- 901 -fluorognène-113 ,17o( ,21- 1,1-prégnad3ètriol-3;20-dione. ne 11 ,170( ,
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<tb>
<tb> 21-triol-3,20dione
<tb> Microorganismes <SEP> Nocardia
<tb>
EMI20.13
9 160( -ïBséthyl-4-prégnène- eblackwellii 16d -méthyl- 11/3 11170( ,21-triol-3, ATCC-6$,6 1,4-prégnaiè- 20' dione ne-11 ,17c( , zl-triol-3 , zo dione 9 16o(-méthyl-4-prégnène- N.globerula 16 o( -méthyl- 17o ,21-diol-3,11,20- ATCC-9356 1,4-prégnadiè-.
EMI20.14
<tb>
<tb> dione...
<SEP> ne-17c( <SEP> ,21-
<tb>
EMI20.15
dio1-J, 1,20trione 10 160( -m.éthyl-9o( -fluoro- N.leishmanii 16d -méthyl- 4-prégnène-17o( ,21-diol- 9c( -fluoro-
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<tb>
<tb> 3,11,20-trione <SEP> 1,4-prégnadiène-17c( <SEP> 21diol-3,11,20trione
<tb>
<Desc/Clms Page number 21>
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il !6o( -méthvl-9B( -fluor?'- N.formica 1-')rÀ -méthyl- 4-prégnèna.,.118 ,17o( NHRL'"24.70 91 -fluoro-lj,4- 21-triol-J;, '20'::
dione prégnadiène-
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<tb>
<tb> 11/3, <SEP> 17[alpha], <SEP> 21triol-3,20dione
<tb>
EMI21.3
12 l6c --méthyl-4--prêg.uène" llI. phl<3i 160{ -méthylll/5,17c( 2i-triol-3 , àl>o itTôÈ-1.2 , 298 14-prégnadiè...
EMI21.4
<tb>
<tb> dione <SEP> . <SEP> ne-11/3 <SEP> ,17[alpha],
<tb>
EMI21.5
sli.-t iol-3 , 2 dione 13 l60( -méthyl-1.-prégr1ène- M. lacticola 16c( -méthyl- 17 ,21-diol-3 ,11,20- ATCC,12,29'ï 1,4-prégnadiè-
EMI21.6
<tb>
<tb> trione <SEP> ne-17[alpha] <SEP> ,21diol-3,11,20trione
<tb>
EMI21.7
14 l6o( -methyl--9o( -fluoro- M. tuber- l6o( -mëthyl- 4-prégnène-17c( 21-diol- culosis 9c( -fluoro- 3,11,20-trione .
ATCC-129296 l,4-prégnadiè-
EMI21.8
<tb>
<tb> ne-17[alpha],21diol-3,11,20triode
<tb>
EXEMPLE 5
A une solution de 110 mg.de 21-acétate de 16 [alpha]- méthyl-4-prégnène-17 [alpha] -21-diol-3,11,20-trione dans 6 ml. de t-butanol, 0,01 ml. d'acide acétique glacial et 0,03 ml d'anhydride acétique, on ajoute 70 mg. d'acide sélénieux (H2SeO3). Le mélange est chauffé à l'ébullition jusqu'au lendemain, après quoi on ajoute encore 50 mg d'acide sélé-. nieux et on poursuit le chauffage pendant 24 heures encore.
La solution est décantée du sélénium métallique et évaporée jusqu'à obtention d'une huile, qui est alors dissoute dans de l'acétate d'éthyle. La solution d'acétate d'éthyle est lavée avec du bicarbonate de sodium aqueux, puis avec de l'eau jusqu'à neutralité, et séchée. Le solvant est chassé de la solution séchée par évaporation, en sorte qu'on obtient une huile qui est dissoute dans du benzène et adsorbée sur de l'alumine lavée à l'acide. Le produit adsorbé est élué avec un mélange d'éther et d'éther de pétrole, puis avec des mélanges d'éther et de chloroforme de plus en plus riches en chloroforme.
Les éluats éther-chlo- roforme 4 : 6 sont combinés et évaporés jusqu'à siccité.
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la'matière résiduelle est recristallisée dans un mélange d'acétate d'éthyle et d'éther, en sorte qu'on obtient du 21-acétate de 16 [alpha]-méthyl-1,4-prégnadiène-17 o( ,21-diol- 3,11,20-trione; P.F. : 208 - 212 C.
EXEMPLE 6
A une solution de 10 mg. de 21-acétate de 16 [alpha]- méthyl-l,4-prégnène-ll ss, 17[alpha] ,21-triol-3,20-dione dans 6 ml. de t-butanol, 0,01 ml. d'acide acétique glacial et 0,03 ml. d'anhydride acétique, on ajoute 70 mg. d'acide sélénieux. Le mélange est chauffé à l'ébullition jusqu'au lendemain, après quoi on ajoute encore 50 mg d'acide sélénieux et on poursuit le chauffgge pendant 24 heures encore.
La solution est décantée du sélénium métallique et évaporée jusqu'à obtention d'une huile, qui est alors dissoute dans de l'acétate d'éthyle. La solution d'acétate d'éthyle est lavée avec du bicarbonate de sodium aqueux, puis avec de l'eau jusqu'à neutralité, et séchée. Le solvant est chassé de la solution séchée par évaporation, en sorte qu'on obtient une huile qui est dissoute dans du benzène et adsorbée sur de l'alumine lavée à l'acide. Le produit adsorbé est élué avec un mélange d'éther et d'éther de pétrole, puis avec des mélanges d'éther et de chloroforme de plus en plus riches en chloroforme. Les éluats éther-chloroforme 4 : 6 sont combinés et évaporés jusqu'à siccité.
La matière résiduelle est recristallisée dans un mélange d'acétate d'éthyle et d'éther, en sorte qu'on obtient du 21acétate de 16 c( -méthyl-1,4-prégnadiàne-11 ss, 17 [alpha], 21- triol-3,20-dione.
EXEMPLE 7
En opérant par le procédé de déshydrogénation à l'acide sélénieux de l'exemple 6, mais en utilisant du 21-acétate de 9 o(-fluoro-16 [alpha], -méthyl-4-prégnène-17 [alpha], 21-diol-3,11,20-trione comme matière de départ au lieu du
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21--acétate de 10 d -méthyl-Q-p;"4.gi;é;ie-l i d ,".:W.dil-3llp 20-triona utilisé d<.3 l'exempi& 6, on obtient du 21-acétate de 9 0( -flu7xzx-1 cj - étt>jii-i,;
q prégnadi.éne-17 4 , 21-diol-3,ll,20-trioneÓ
EXEMPLE 8 En. opérant par le procédé de déshydrogénation à l'acide sélénieux de l'exemple 6,mais en utilisant du
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21-acétate de 9 d.. -fluoro-16 ci -méthy.-,prégaéne-11 17 d ,20-trioi-J,20-dione comme matière de départ au lieu du 21-acétate de 16 d -mêthyl-4-prégnène<1'7 c.( ,21-diol- 3,11,20-trione utilisé dans l'exemple 6, on obtient du 21-acétate de 9 d -fluoro-16 .néthyl-1,.-gxrégraad.éneil / , eze d , 2lrtriohi,tdione.
EXEMPLE 9 A une solution de 110 mg. de 21-acétate de 16 [alpha]- méthyl-prégnane-17 [alpha], 21-diol-3,11,20-trione dans 6 ml.
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de t-butanol, 0,01 ml. d'acide acétique glacial et 0,03 m.lE d'anhydride acétique, on ajoute 70 mg. d'acide sélénieux.
Le mélange est chauffé à l'ébullition jusqu'au lendemain, après quoi on ajoute encore 50 mg d'acide sélénieux et on poursuit le chauffage pendant 24 heures encore. La solution est décantée du sélénium métallique et évaporée jusqu'à obtention d'une huile, qui est alors dissoute dans de l'acétate d'éthyle. La solution d'acétate d'éthyle est lavée avec du bicarbonate de sodium aqueux, puis avec de l'eau jusqu'à neutralité, et séchée. Le solvant est chassé de la solution séchée par évaporation, en sorte qu'on obtient une huile qui est dissoute dans du benzène et adsorbée sur de l'alumine lavée à l'acide. Le produit adsorbé est élué avec un mélange d'éther et d'éther de pétrole, puis avec des mélanges d'éther et de chloroforme de plus en plus riches-en-chloroforme.
Les éluats éther-chloroforme
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4 : 6 sont combinas et évaporés jusqu'à siccité. La matière résiduelle est recristallisée dans un mélange d'acétate d'éthyle et d'éther, en sorte qu'on obtient du 21-acé-
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tate de 16 c( -méthyl-1,4-prêgnadiène-17 c( , 21-diol-3,11, 20-trione.
Le 21-acétate de 16 d-méthyl-prégnane-17 d , 21-d.ol-3,11,20-trïone etiies composés 16-méthyl-11-oxygéné-, 4-prégnène-17 d -diol-3,20-dione utilisés comme matières de départ dans les exemples 1 à 9 sont préparés, en par-
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tant du 3-acétate de 16-prégnùne-3 o(-oI-11,20-dione connu, par le mode opératoire suivant.
Une solution de 10,22 g. d'iodure de méthyle dans 50 ml. d'éther est ajoutée à 1,73 g. de magnésium dans 50 ml. d'éther. A la solution éthérée résultante d'iodure de méthyl magnésium, maintenue sous une atmosphère d'azote, on ajoute 0,045 g. de chlorure cuivreux anhydre. A ce mélange, on ajoute, en l'espace d'environ 1 heure, pendant laquelle le mélange réactionnel est agité vigoureusement et maintenu sensiblement à température ambiante, une solution d'environ 5,6 g de 3-acétate de 16- prégnène-3 d -ol-11,20-dione dans 175 ml d'éther. Pendant cette addition, il se sépare une matière solide granulaire blanche Le mélange résultant est chauffé sous reflux modéré pendant 2 heures,
après quoi le mélange réactionnel est refroidi et 125 ml d'une solution aqueuse saturée de chlorure ammonique puis 250 ml d'éther sont ajoutés. Les couches sont séparées et le couche éthérée est lavée avec trois fractions de 50 ml d'eau. La couche éthérée lavée est séchée et le solvant est évaporé sous vide, en sorte' qu'on obtient une huile visqueuse brune.
Cette huile est chauffée pendant 15 minutes à 60 - 70 C avec un mélange de 25 ml d'anhydride acétique et de 25 ml de pyridine et
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le produit aCEÎty.!.<, .3t purifié !a:r.' chromatograpbie sur de l'alunine lavée à ]>'acide, su:3:f d'u=1 cristallisation dans de l'éther de pétrole, en sorte qu'on obtient approximativement 1.,5 g de 3-acétate d 1,6 d -métli;r1-prégnène- 3 d -ol-11,20-à.ione> A une solution de 0,6 g. de 3-acétate de 16 d méthyl-prégnane-3 o( -oi-11,2ù-dione dans 40 al. de métha- nol, on ajoute 1,5 ml. de HCl aqueux concentré et la solution résultants est ,agitée jusqu'au lendemain à environ 25 C.
La solution de réaction est évaporée sous vide à 25 C jusqu'à un petit volume et la solution concentrée est versée dans 50 ml d'eau glacée. Le solide blanc, qui précipite, est récupéré par filtration, lavé à l'eau et recristallisé dans de l'acétate d'éthyle, en sorte qu'on
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obtient de la 16 cl -méthyl-prêgnane-3 Ol -ol-11,20-dione.
Une solution-de 22 g- de 21-acétate de 16 c( -mé, thyl-prégnane-3 d-ol-11,20-dione et de 1 g. d'acide k-to- luène-sulfonique dans 250 ml d'anhydride acétique est chauffée sous reflux sous azote pendant environ 3 jours.
2 g. d'acétate de potassium (anhydre) sont ajoutés et les solvants volatils sont séparés par distillation sous vide.
La matière résiduelle est extraite avec du benzène et l'extrait benzénique est filtré pour éliminer la matière insoluble. Les extraits benzéniques sont évaporés jusqu'à un volume de 100 ml et on ajoute de l'éther de pétrole jusqu'à apparition d'un trouble. La solution résultante est adsorbée sur 660 g d'alumine lavée à l'acide; l'alumine est alors lavée avec 2 litres d'éther de pétrole. L'adsorbant est alors élué avec un mélange 85 : 15 d'éther de pétrole et d'éther et les quatre premiers litres d'éluat sont- recueillis et évaporés jusqu'à siccité sous vide, en sorte qu'on obtient un mélange d'acétates énoliques contenant du
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3,20-diacétate de 16 c( -méthylo-17(20)-prégnéne-3 d , 2D-
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diol-11-one.
Ce mélange d'énolates, pesant environ 14 g. est dissous dans 50 ml de benzène et traité avec un excès d'acide per@benzoïque en l'espace de 16 heures. Le mélan- ge réactionnel est agité avec une solution aqueuse diluée d'hydroxyde de potassium jusqu'à ce qué la couche benzéni- que soit exempte d'acide per-benzoïque;
la couche benzéni- que est alors lavée avec de l'eau jusqu'à neutralité, sé- chée et débarrassée du solvant par évaporation sous vide, en sorte qu'on obtient une matière cristalline, constituée par du 3,20-diacétate de 16 [alpha]-méthyl-17 [alpha] ,20-époxy-pré- gnane-3 [alpha],20-diol-11-one. Ce dernier composé est dissous sans purification, dans 200 ml de méthanol, 120 ml d'eau et 10 g de bicarbonate de potassium, et la solution résul- tante est chauffée sous reflux sous azote pendant 16 heu- res. Le méthanol est évaporé de la solution d'hydrolyse sous vide et l'huile résiduelle est extrait de la solution aqueuse résultante avec du chloroforme. L'extrait chloro- formique est lavé avec de l'eau jusqu'à neutralité et sé- ché et le chloroforme est évaporé sous pression réduite.
L'huile résiduelle est triturée avec de l'éther et la ma- tière cristalline ainsi formée est recristallisée dans un mélange d'acétate d'éthyle et d'éther de pétrole, en sorte qu'on obtient de la 16 [alpha]-méthyl-prégnane-3 [alpha], 17 c( -diol- 1,20-dione.
A une solution de 7,0 g de 16 [alpha] -méthyl-prégna- ne-3 0(, 17 [alpha] -diol-11,20-dione dans 50 ml de chloroforme, an ajoute goutte à goutte, en agitant, une solution conte- nant 3,36 g de brome dans 24,2 ml de chloroforme eh l'eapa. ce d'environ 60 minutes. Le mélange réactionnel est dis- sous dans 200 ml d'acétate d'éthyle et la solution résul- tante est lavée avec de l'eau jusqu'à neutralité et séchée après quoi les solvants sont évaporés sous vide. La matière brute résiduelle est dissoute dans une quantité mi-
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nimum d'acétate d'éthyle.
La solution résultante est di-
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luée avec de 1$éth;k et le m61ange est agité jusqu'à forma- tion de cristaux. Le produit oristallin est récupéré par filtration et lavé, par empâtage avec un mélange 50 : 50 d'éther et d'éther de pétrole, en sorte quton obtient envi-
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ron 5 g. de 21-bromo-16 d .-méth.y...prégnane-3 o( , 17 d diol-11,20-dione..>., Ces 5 g. de 21-bromo-l6 o{-méthyl-prégnane-3 o(, 17 o(-dial-11,Z0-dione sont mélangés à 590 g. d'acétate de potassium anhydre, 4,0 g. d'iodure de sodium et 0,03 ml. d'acide acétique glacial, et 100 ml. d'acétone sont ajoutés au mélange résultant.
Ce mélange est alors chauffé sous reflux, en agitant pendant environ 16 heures et le mélange réactionnel est refroidi et filtré et la matière insoluble est lavée avec de l'acétone. La solution filtrée est évaporée sous vide, de manière à chasser les solvants. La matière résiduelle est empâtée avec de l'eau et le mélange aqueux est extrait avec de l'acétate d'éthyle. L'extrait à l'acétate d'éthyle est lavé avec de l'eau jusqu'à neutralité et séché, et le solvant est évaporé sous vide jusqu'à obtention d'une huile. Cette huile est cristallisée dans de l'éther et recristallisée dans un mélange acétate d'éthyle-éther, en sorte qu'on obtient du 21-acétate de 16 c( -méthyl-prégnane-3 c( , 17 [alpha], 21-triol- 11,20-dione.
Une solution de 400 mg de 21-acétate de 16 [alpha]-
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méthyl-prégnane-3 d -1? o(, 21-triol-11, 20-dione dans 4 ml\ de pyridine est ajoutée au complexe formé par l'addition de 400 mg. de trioxyde de chrome dans 4 ml. de pyridine.
Le mélange est agité jusqu'à ce qu'il soit bien mélangé, puis laissé au repos à température ambiante jusqu'au lendemain. Le mélange réactionnel est versé dans de l'eau et le mélange aqueux est extrait avec de l'éther, puis à
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deux reprises avec de l'acétate d'éthyle. Les extraits combinés à l'éther et à l'acétate d'éthyle sont lavés avec de l'acide sulfurique aqueux dilué à environ 0 C, puis avec de l'eau jusqu'à neutralités La couche de solvant organique est alors séchée, les solvants sont évaporés sous vide et la matière cristalline résiduelle est purifiée par cristallisation de l'acétate d'éthyle, en sorte qu'on obtient du 21-acétate de 16 c( -méthyl-prégnane-17 d@, 21diol-3,11,20-trione.
A 100 mg de 21-acétate de 16 [alpha] -méthyl-prégnane- 17 o( , 21-diol-3,11,20-trione dissous dans 2 ml. de chloroforme et 2,25 ml d'acide acétique glacial, à une température de -55 C., on ajoute deux gouttes d'une solution 0,001 N de HBr anhydre dans de l'acide acétique glacial.
A environ 0,38 ml de HBr 0,001 N dans de l'acide acétique glacial, à -55 C., on ajoute 0,43 ml. d'une solution contenant 40 mg de brome dans du chloroforme, et la solution résultante est ajoutée, en l'espace d'environ 10 minutes, à la solution du stéroide tout en maintenant le mélange réactionnel à environ -55 C. Le mélange réactionnel est laissé au repos à -55 C pendant environ 1/2 heure; une solution contenant 250 mg d'acétate de sodium dans 3 ml d'eau est ajoutée et le mélange résultant est agité pendant environ 5 minutes. 5 ml d'eau sont alors ajoutés et le mélange aqueux est extrait avec de l'acétate d'éthyle.
L'extrait à l'acétate d'éthyle est lavé avec une solution aqueuse de bicarbonate de sodium jusqu'à neutralité, puis avec de l'eau, après quoi l'extrait est séché et le solvant est évaporé sous vide. La matière résiduelle est dissoute dans 2 ml d'acé,tone et à la solution on ajoute 25 mg de bromure de sodium et 1 ml d'eau.
Le mélange résultant est chauffé sous reflux pendant environ 5 heures, le mélange réactionnel est refroidi et l'acétone est éva-
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porée sous vide. @a matière résiduelle est extraite,au
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moyen d'éther eb .L'outrait 0';.h,"r l; f;;:;t, lavé ''e<; de l'eau et séché, après quoi le solvant $si. évaporé jusqu'à un volume d'environ 1 ml ; onajoute de l'éther de.:! pétrole à cette solution et la matière cristalline, qui se sépare, est récupérée et séchée,en sorte qu'on obtient approxima-
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tivement 90 mg de 21-.-,cétate due 4-brosio-l6 o( -méthyl-prêgnane-17 ci ,21-dio.-3,11,20-triore.
Un mélange de 48 mg de semicarbazide, de 48 mg de 21-acétate de 4-bromo-16 [alpha] -méthyl-prégnane-17 [alpha] ,21- diol-3,ll,20-trione et de 0,6 ml d'éthanol est chauffé sous reflux au contact d'une atmosphère d'azote pendant environ 3 jours et la solution réactionnelle est évaporée jusqu'à un petit volume et diluée avec de l'eau, après quoi la matière cristalline est récupérée et purifiée par recristallisation dans du méthanol aqueux, en sorte qu'on obtient du 21-acétate de 3,20-bis-semicarbazone de 16 [alpha]-
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méthyl-4-prégnène-17 c( ,21-diol-3,ll,20-trione.
50 mg de 21-acétate de 3,20-bis-semicarbazone de 16 ol -méthyl-4prégnène-17 0( , 21-diol-3,11,20-trione sont dissous dans un mélange de 1,0 -ce de benzène et de 1,0 cc d'hydroxyde de potassium méthanolique 1,1 N et la solution est laissée au repos à température ambiante pendant environ 10 minutes. La solution est alors acidifiée au moyen d'acide acétique, après quoi le benzène est évaporé sous vide et la matière résiduelle est recristallisée dans de l'acétate d'éthyle en sorte qu'on obtient de la 3,20-bis-semicarbazone de 16 [alpha] -méthyl-4-prégnène-17 [alpha] ,21-diol-3,11,20trione.
Un mélange de 60 mg de 3,20-bis-semicarbazone-
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de 16 o(-méthyl-prégnêne-17 c( , 21-diol-3,11,20-trione, de 0,2 ml. de diméthylformamide, de 0,6 ml. de chlorofor- me, et de 1,5 ml de HCl aqueux 1,0 N est chauffé sous
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reflux pendant environ 3 heures. Le système à .;aux phases résultant est refroidi jusqu'à une température d'environ 15 C et les couches sont séparées. La couche aqueuse est extraite avec du chloroforme et les extraits chloroformiques sont combinés à la solution chloroforme-diméthylforma mide originelle.
La couche organique est lavée avec une solution aqueuse de bicarbonate de sodium et le chloroforme ainsi que le diméthylformamide de la couche organique sont remplacées par de l'acétate d'éthyle par évaporation sous vide. On ajoute de l'éther de pétrole et*on soumet la solution résultante à une chromatographie, en utilisant du méthanol aqueux comme phase stationnaire et un mélange de benzène et de chloroforme comme phase mobile, en sorte qu'on obtient de la 16 [alpha] -méthyl-4-prégnène-17 [alpha], 21-diol- 3,11,20-trione.
Une solution de 45 mg de 21-acétate de 3,20-
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bis-semicarbazone de 16 d -méthyl-4-prégnène-1? d ,21-diol- 3,11,20-trione, de 17 mg de borohydrure de sodium, de 1 ml de tétrahydrofurane et de 0,3 ml d'eau est maintenue à la température du reflux pendant environ 1 heure. La solution de réaction est refroidie à environ 15 C et le borohydrure de sodium en.excès est décomposé par addition d'une solution de 27 mg d'acide acétique glacial dans 0,2 ml d'eau.
Le tétrahydrofurane est évaporé sous vide et la matière résiduelle est extraite à l'aide d'acétate d'éthyle. Les extraits à l'acétate d'éthyle sont lavés avec une solution saturée de sel, avec de l'eau et avec une solution aqueuse à 5 % de bicarbonate de sodium, puis à nouveau avec de l'eau. Les extraits sont séchés et l'acétate d'éthyle est évaporé sous vide, en sorte qu'on obtient de la 3,20-bis-
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semicarbazone de 16 0( -méthyl-4-prégnène-ll j3 , 17 0( , 21triol-3 , 20-di..one .¯
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f ',,, Un mélange de 60 fit; do 3,20-bisse:aicarbazonn de 16 o( -méthyl---prégnène-1:. ,fj , e 17 0(, 21-triol-3,20dione, de 0,2 ml de dimêthylformamide, de 0,6 ml de chloro- forme et de 1,5 ml de HCl aqueux 1N est chauffé sous reflux pendant environ 3 heures.
Le système à deux phases résultant est refroidi à une température d'environ 15 C et les couches sont séparées. La couche aqueuse est extraite avec du chloroforme et les extraits chloroformiques sont combinés avec la solution chloroforme-diméthylformamide originelle. La couche organique globale est lavée avec une solution aqueuse de bicarbonate de sodium et le chloroforme ainsi que la diméthylformamide contenue dans la couche organique sont remplacés par de l'acétate d'éthyle par évaporation sous vide. On ajoute de l'éther de pétrole et la solution résultante est soumise à une chromatographie, en utilisant du méthanol aqueux comme phase stationnaire et un mélange benzène-chloroforme comme phase mobile, en
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sorte qu'on obtient de la 16 0( -méthyl-4-prégnène-11 j , 17 c( , 21-diol-3,20-dione.
Cette dernière matière est mise en réaction avec un excès d'anhydride acétique dans de la pyridine à température ambiante pendant environ 15 heures et le produit acétylé brut est recristallisé dans de l'acétate d'éthyle, en sorte qu'on obtient du 21-acétate de
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16 c( -méthyl-l-prégnène-11 , 17 d , 21-triol-J ,20-dione.
A une'solution refroidie de 600 mg de 21-acétate de 16 ol-méthyl-@-prégnène-11 f , l'7 0( , 21-triol-3,20- dione dans 5,0 ml de pyridine anhydre, on ajoute 0,15 ml d'oxychlorure de phosphore et le mélange est laissé au repos à température ambiante pendant environ 15 heures. La solution réactionnelle est évaporée sous vide à une température d'environ 20 C jusqu'à un volume de 2-3 ml.
17 ml d'eau sont ajoutés lentement à la solution concentrée, en agitant, et le mélange aqueux est extrait avec de l'acétate
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d'étalé. Les extraits combinas à l'acétate d'éthyle sont laves ''successivement avec de l'eau, avec une solution aqueuse diluée d'acide chlorhydrique, avec de l'eau et avec une solution aqueuse diluée de bicarbonate de sodium.
La solution à l'acétate d'éthyle lavée est séchée et le solvant est évaporé sous vide; la matière résiduelle est triturée avec de l'éther et la matière cristalline est recristallisée dans un mélange acétate d'éthyle-éther, en sorte qu'on obtient du 21-acétate de 16 d -méthyl-4,9(11) prégnadiène-17 o( , 21-diol-3,20-dione. Une suspension de
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330 mg de 21-acétate de 16 -méthyl-1,9i11-prégnadiène- 17 [alpha] ,21-diol-3,20-dione et de 1,8 g de N-bromo-succinimide dans un mélange de 50 ml de dioxane et de 10 ml d'eau est refroidie à 10 C. Puis en agitant, 10 ml d'acide perchlo- rique aqueux 1,0 N froid sont ajoutés.
La température du mélange réactionnel est admise à s'élever jusqu'à 15 et est maintenue à cette valeur pendant environ 2 1/2 heures, pendant lesquelles la matière solide se dissout lentement.
La solution jaune résultante est traitée avec 1,0 ml d'al- cool allylique pour décharger la couleur et le N-bromo-suc-' cinimide restante, et la solution résultante est évaporée jusqu'à un faible volume sous vide. La solution concentrée est diluée avec de l'eau et le mélange aqueux est extrait avec de l'acétate d'éthyle. Les extraits à l'acétate d'é- thyle sont lavés, séchés et évaporés jusqu'à siccité, et la matière résiduelle est cristallisée dans un mélange d'acé- tate d'éthyle et d'éther, en sorte qu'on obtient du 21-acé-
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tate de 9 t( -bromo-16 0( -méthyl-l-prégnène-11 3 , 17 0( 21-triol-3,20-dione.
Une solution de 210 mg de 21-acétate de 9 o(bromo-16 o(-méthyl-4-prégnène 11 ss, 17 o( , 21-triol-3,20dione et de 240 mg d'acétate de potassium dans 10 ml d'étha-
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nol absolu est chauffée sousreflux pendant 2 heures. Le mélange réactionnel est refroidi jusqu'à température am- biante et évaporé sous vide jusqu'à un petit volume. Le mélange aqueux concentré est extrait avec 3 fractions d'acétate d'éthyle et les extraits combinés à l'acétate d'éthyle sont lavés à l'eau, séchés et évaporés jusqu'à siccité sous vide.
La matière résiduelle est cristallisée dans un mélange d'acétate d'éthyle et d'éther, en sorte qu'on pbtient du 21-acétate de 16 [alpha] -méthyl-9,11-époxy-4-prégnène- 17 o( , 21-diol-3,20-dione. une solution de 83 mg de fluorure d'hydrogène anhydre dans 4,7 ml de chlor@lorme exempt d'alcool glacé, on ajoute une solution glacée de 416 mg de 21-acétate de 16 c( -méthyl-9,11-époxy-4-prégnène-17 [alpha] ,21-diol-3,20dione. La solution est bien malaxée et maintenue à 0 C pendant 2 heures, au bout desquelles 13,0 ml d'acétate de sodium aqueux à 20 % glacé sont ajoutés, et le mélange résultant est agité vigoureusement.
Les couches sont séparées et la couche chloroformique est lavée avec de l'eau jusqu'à être exempte d'acide, séchée et débarrassée du chloroforme par évaporation sous vide. La matière résiduelle est cristallisé dans un mélange d'acétone et d'éther de pétrole, en sorte qu'on obtient du 21-acétate de 16 c( - méthyl-9 [alpha]-fluoro-4-prégnàne-11 ss, 17 [alpha], 21-triol-3,20dione. 50 mg de 21-acétate de 16 [alpha]-méthyl-9 [alpha] -fluoro-4prégnàne-11 ss, 17 [alpha], 21-triol-3,20-dione sont dissous dans un mélange de 1,0 cc de benzène et de 1,0 cc de KOH méthanolique 1 N., et la solution est laissée au-repos à température ambiante pendant environ 10 minutes.
La solution est évaporée sous Vide et la matière résiduelle est cristallisée dans un mélange d'acétate d'éthyle et d'éther, en sorte qu'on obtient de la 16 [alpha] -méthyl-9 [alpha]-fluoro-4-
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pré,,nëne-11 , 17 o( , 21-trxol-, , 20-dione...
Une solution de 46É zi de 21-acétate de 16 d ü méthyl-9 0( -fluoro-l-prégnére-11 t7 c( 21-tr.o1-3,J-- dione dans 4 ml de pyridine est ajoutée au complexe formé par l'addition de 400 mg de trioxyde de chrome à 4 ml de pyridine. Le mélange est agité jusqu'à être bien malaxé, puis laissé au repos à température ambiante jusqu'au lendemain. Le mélange réactionnel est versé dans de l'eau et le mélange aqueux est extrait avec de l'éther, puis à deux reprises avec de l'acétate d'éthyle.
Les extraits combinés sont lavés avec du H2SO4 aqueux dilué à environ 0 C, puis avec de l'eau jusqu'à meutralité. La couche de solvant organique est alors séchée, les solvants sont évaporés sous vide et la matière cristalline résiduelle est purifiée par cristallisation dans un mélange d'acétate d'éthyle et d'éther, en sorte qu'on obtient du 21-acétate de
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16 0( -méthyl-9 c-fluoro-4-prégnéne-1? 0( 21-diol-3,11,20. trione. 5 mg de 21-acétate de 16 [alpha] -méthyl-9 d -fluoro-4prégnène-17 [alpha], 21-diol-3,11,20-trione sont dissous dans un mélange de 1,0 cc de benzène et de 1,0 cc de KOH méthanolique 1 N., et la solution est laissée au repos à température ambiante pendant environ 10 minutes.
La solution est alors acidifiée à l'aide d'acide acétique, le benzène est'-évaporé sous vide et la matière résiduelle est cristallisée dans un mélange d'acétate d'éthyle et d'éther, en sorte qu'on obtient de la 16 o(-méthyl-9 o(-fluoro-4-prégnène-17 0(, 21-diol-3,11,20-trione.
REVENDICATIONS 1. Composés l6-méthyl-l,4-prégnadiène-17 [alpha]-ol- 3,20-dione.
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2. 16o(-méthyl-1.4-prégnadiène-17 o(e2l-diol-3ellp 20-trione.
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3. 21-acétates de 16 0( -é yl-1,.-pa égxaad.iène- 17 0( ,21-diol-3,1E,2itr.ne.
4. 21-phosphate de 16 -méthyl-l,4prégnadiène- 17 0( ,21-diol-3,11,20-trione.
5. 21-acétate de 16 d méthßl-l,t-prégnadiène-17 t( 21-diol-3,11,Otrione.
6. 21--itert.-butyl acétate) de 16 0( -méthyl-1,4.prégnadiène-17 <j( 21-diol-3 ,11, 20-trione .
7. 16 c{ -mëth.yl-l,l-prégnadièn-11 j3 , 17 d , 21triol-3,20-diüe. 8. 21-acylates de 16 [alpha] -méthyl-1,4-prégnadiène-
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11 j3 , 17 0( , 21-triol-3,20-dione.
9. 21-propionate de 16 oi -méthyl-1,4-prégnàdiéne- 11 f$ , 17 0( , 21-triol-3,20-dione.
10. 21-acétate de 16 oi-méthyl-1,4-prégnadiène- 11 ss, 17 [alpha], 21-triol-3,20-dione.
Il. 21-(tert.-butyl acétate) de 16 [alpha] -méthyl-1,4-
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prêgnadiène-11.9 , 17 0( , 21-triol-3,20-dione.
12. 21- , -diméthyl hémi-glutarate) de 16 c( -méthyl-1,1-prégnadiène-113 , 17 c( , 21-triol-3,20-dione. 13. 21-phosphate de 16 [alpha] -méthyl-1,4-prégnadiène-
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11 3 , 17 0( , 21-triol-3,20-dione.
14. 16 0( -méthyl-9 0( -fluoro-l,4-prégnadiène-ll , 17 [alpha], 21-triol-3,20-dione.
15. 21-acylates de 16 0( -méthyl-9 o(-fluoro-1,4- prégnadiène-11 ss, 17 o( , 21-triol-3,20-dione.
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16. 21-phosphate de 16 0( -méthyl-9 c( ...flUo:ë":'r ,4;.. prégnadiéne-11 /J , 17 0(, 21-triol-3,20-dione.
17. 21-(tert.-butyl acétate) de 16 o(-méthyl-9 o(- fluoro-l,4-prégnadiène-ll , 17 c( , 21-triol-3,20-dione.
18. 21-.acétate de 16 [alpha] -méthyl-9 c( -fluoro-l,4-pré-
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gnadiène-11-3 , 17 0( , 21-triol-3,20-dione.
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19. 16c( -méthyl--9 0( -fluaxf-l.l-prégnGd:. r.L-l7 0( 21-diol-3,11,20=trione.
20. 21-acylates de 16 0( -raêthyl-9 o( -:"¯soru-1,.prégnadiène-17 0( i,?ldiol-3,11, 20-tr .orsa.
21. 21-phosphate de 16 c{ -méthyl-9 0( -fluoro-1,4prégnadiène-17 0(,21-diol-3,11,20-trione.
22. 21-acétate de 16 0( -méthyl-9 ci -fluoro-1,%-prégnadiène-17 o(,2l-diul-3,ll,20-trione.
23. Procédé dans lequel on met un composé 16-méthyl- %-prégnène-17 0(-0l-3,20-dione en contact avec l'activité déshydrogénante de microorganismes de Schizomycètes, de manière à former le composé l6-méthyl-l,4-prégnadiène-17 z- ol-3,20-dione correspondant.
24. Procédé dans lequel on met de la 16 c( -méthyl-
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4-prégnène-17 ol ,21-diol-3,11,20-trione en contact avec l'activité déshydrogénante de microorganismes Schizomycùtes, de manière à former de la 16 o(-méthyl-1,1-prégn2diène- 17 ol ,21-diol-3 ,11,20-trione. 25. Procédé dans lequel on met de la 16 [alpha]-méthyl-4-
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prégnène-11 17 ol , 21-triol-3,20-dione en contact avec . l'activité déshydrogénante de microorganismes Schizomycè-
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tes, de manière à former de la 16 o(-méthyl-1,4-prégnadiè- ne-11/3, 17 c( , 21-triol-3,20-dione.
26. Procédé dans lequel on met de la 16 [alpha] -méthyl- 9 o(-fluoro-4-prégnène-17 [alpha], 21-diol-3 ,11, 20-trione en contact avec l'activité déshydrogénante de microorganismes Schizomycètes, de manière à former de la 16 [alpha]-méthyl-9 [alpha]-
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fluoro-l,4-prégnadiène-17 o(,21-diol-3,11,20-trione.
27. Procédé dans lequel on met de la 16 d -méthyl- 9 0( -fluoro-l-prégnène-11 , 17 o( , 21-triol-3,20-dione en contact avec l'activité déshydrogénante de microorganismes Schizomycètes, de manière à former de la lô o(-méthyl-
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9 c( -flu.cro-1,..prégnadiène-,'i , 17 o( , 2.-t :0l--3,20- dione.
28. Procédé dans lequel on met un 21-acylate de
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16 0( -méthyl-.-prégnènp-11 9 Il 0( , 21-'riol-,3,20-dione en contact avec m'activité déshydrogénante de microorganismes Schizomycètes, de manière à former de la 16 [alpha] -méthyl-
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1,4-prégnadiène-11 , 17 c( , 21-triol-3,20-dicne. 29. Procédé dans lequel on met un composé 16-raéthyl- 4-prégnène-17 [alpha]-ol-3,20-dione en contact avec l'activité déshydrogénante d'organismes du genre Bacillus sphaericus,
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de manière à former le composé 16.-méthyl.-l,!.-prégnadiêne- 17 [alpha]-ol-3,20-dione correspondant.
30. Procédé dans lequel on met de la 16 [alpha] -méthyl- 4-prégnène-17 [alpha] ,21-diol-3,11,20-trione en contact avec l'activité déshydrogénante d'organismes du genre Bacillus sphaericus, de manière à former de la 16 [alpha]-méthyl-1,4- prégnadiène-17 [alpha] ,21-diol-3,11,20-trione.
31. Procédé dans lequel on met de la 16 o(-méthyl'-
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l-prégnène-11 j3 , 17 ol , 21-triol-3,20-dione en contact avec l'activité déshydrogénante d'organismes du genre Bacillus sphaericus, de manière à former de la 16 [alpha]-mé-
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thyl-1,4.-prégnadiène-11 3 , 17 0( , 21-triol-3,20-diône.
32. Procédé dans lequel on met de la 16 [alpha] -méthyl- 9 o(-fluoro-4-prégnène-17 [alpha], 21-diol-3,11,20-trione en contact avec l'activité déshydrogénante d'organismes dugenre Bacillus sphaericus, de manière à former de la 16 [alpha]-
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méthyl-9 0( -fluoro-l,4-prégnadiène-17 o( ,21-dioi=3,il,20- trione.
33. Procédé dans lequel on met un 21-acylate de 16
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o( -méthyl-9 0( -fluoro-.-prégnène-11 /j , 17 0( , 21-triol- 3,20-dione en contact avec l'activité déshydrogénante de microorganismes du genre Bacillus sphaericus, de manière
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à former de la il -mêthyl-. ''.uoro-1.'. ':nsdiènell,17o(, 21-triol-3t20-d' . .
34.. Procédé dans lequel on. f?'it r;,:.. . composa 16-mthyl--.-prégnène? c( -ol-3C'dione avp-'. <':,1) bioxyde de sélénium, de manière à produ "" '.le -î-tl-lu4thyl-
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1,4-prégnadiène-17 o( -.l-3 fi2:-;ïonW correspondant.
35. Procédé dans lequel )1- fait réagir du 21-acétate de 16 d-méth;1-O-prégnéne-16'î o', p21-d.o.-,:1.,20.-triox avec du bioxyde de sélénium, de manière à produire du 21-acétate de 16 0( ,-méthyl-.l,l-prégnadzène-l' 21-diol- 3,11,20-trione.
36. Procédé dans lequel on fait réagir du 21-acéta-
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te de 16 c( -méthyl-.--prégnène-11 , 17 d , 21-triol-3,20-. dione avec du bioxyde de sélénium, de manière à produire du 21-acétate de 16 0( -méthyî-l,l-crégn,dié:ne-?.. 17 0( 21-triol-3,20-dione.
37. Procédé dans lequel on fait réagir du 21-acétate de 16 0( -méthyl-9 c(-fluoro-4-prégnène-17 c( ,21-diol-3,11, 20-trione avec du bioxyde de sélénium, de manière à pro-
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duire du 21-acétate de 16 0( -méthyl-9 0( -fluoro-1,1-pré- gnadiène-17 o(,21-diol-3,11,20-trione.
38. Procédé dans lequel on fait réagir du 21-acétate
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de 16 -méthyl-9 ol-fiupro-4-prégnéne-il fi , 17 o( , 21trioi-3,20-dione avec du bioxyde de sélébium, de manière à produire du 21-acétate de 16 0( -méthyle o( -fluoro-1,4prégnadiêne-11 17 0( , 21-triol-3,20-dione.