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Publication number: BE624559A
Authority: BE

Description


   <Desc/Clms Page number 1> 
 la présente invention concerne de nouvelles   substan-   ces antibiotiques que l'on peut représenter par la formule suivante : 
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 dans laquelle R est un groupe alkyle inférieur,   R.     est   un grou- pe raéthoxy ou amine et R2 est un atome   d'hydrogène   ou un grou- pe méthyle..' 
Les nouveaux   composta   suivant l'invention sont des solides cristallisés de couleur orange et sont doués de pro- priétés faiblement basiques, Ils sont relativement insolubles dans l'eau, l'éther éthylique, l'éther de pétrole,, Ils sont très faiblement solubles dans les solvants tels que le benzène, le toluène, le chloroforme et les solvants analogues, mais relativement solubles dans l'éthanol, la pyridine, la diméthyl- formamide, et analogues.

   Les diagrammes d'absorption infra- rouge et ultra-violet sont caractéristiques et permettent de distinguer et d'identifier les nouvelles substances. 



   Les nouveaux composés sont actifs in vitro sur une variété de   microorganismes   incluant des bactéries gram-posi- tives et   grain-négatives.   Deu tests réalisés sur des souris in vivo, démontrent que les nouveaux composés antibactériens sont extrêmement actifs quand on les   aduinistre   par la voie orale ou sous-cutanée à des souris infestées par une dose toxique d'une souche de Staphylococcus aureus de Smith.

   On a également trouvé que les nouvelles substances sont à peu près aussi efficaces que la triéthylèemélamine dans le traitement 

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 des adénocarcinomes 72 jours chez la souris C3H. 
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 On prépare certains de ces composée à partir de la mitomycine A ou de la mitomycine B, groupe de nouveaux anti- biotiques doués d'une activité importante anti-tumorale et 
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 décrits par Hâta et autres dans "J.Anti'biotics, Sers A, .iXs" fi  4, 141, (Juillet 1956). 



   Ainsi, pour préparer le produit que l'on peut dési-   gner sous   le nom   d'anhydro   apo   mitonycine   B, pour lequel; dans la formule   ci-dessus,   il est un groupe méthyle, R1   est   
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 un groupe méthoxy et R2 est un groupe méthyle, on dissous, de préférence la mitooyne B dans un solvant polaire convenable. tel que l'eau, le dioxane, le   2-méthoxyéthanol,   le   2-4thoxy- '   
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 éthanol, l'acétate d'éthyle, le méthanol, ltdthmolo la diméthylformamide, le dimwthylsulfoxyde, la d1méthylaclStlal41d., etc... avant de mettre la solution en contact avec de   l'hydro-   gène en présence d'un catalyseur à métal noble, de préférence 
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 du ptl.1J.n4:

  LWIi métallique finement divine ua un a*at4 ipétal de la famille du palladium. 



   On peut employer le catalyseur sous forme de métal pur ou en suspension sur l'un des supports   ordinaire   tels que l'alumine finement divisée, le charbon activé, la terre   d'infu-     soires,   etc,.. On peut procéder   à   l'hydrogénation à des   tempes   ratures dans l'intervalle de 0 à 50 C et, de préférence, en- 
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 viron à la température ambiante, c'ent-à-dire autour 4e 2509# et sous pression d'hydrogène d'environ une atmosphère, 
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 Une concentration de catalyseur d'au meine 1 en poids de la substance de départ est nécessaire ut on peut en utiliser jusqu'il 100% en poids; ordinairement, on utilise de 
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 10 à 20%.

   On pousse généralement l'hydrogénation jusqutà ce qu'une molécule d'hydrogène ait été absorbée, au moment où la vitesse d' absorption tend à diminuer. Il faut fair% atten- tion à ne pas poursuivre ladite hydrogénation   au-delà     au ,   temps 

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 normal pour éviter que des réductions indésirables ne se   produit   'sent, 
Après la fin de l'hydrogénation. on-récupère le produit réduit selon les moyens désirés, par exemple, par éli- mination du catalyseur et concentration de la   solution.   On oxyde le produit réduit avec de l'air, de l'oxygène, de la benzoquinone ou d'autres agents d'oxydation similaires et on récupère le produit final du mélange réactionnel par filtration, lavage   à   l'alcool et séchage sous vide.

   On peut purifier le produit final par recristallisation à partir de l'éthanol ou de la pyridine ou de la diméthylformamide,   etc...   selon les procédés standards. 



   On peut alternativement utiliser le produit appelé la N-méthylmitomcine A de formule : 
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 comme substance de départ pour la préparation de l'anhydre apo mitomycine B. Les conditions nécessaires à l'hydrogéna- tion catalytique de la   N-méthylmitomycine   A et la   réoxydation   par l'air consécutive sont pratiquement identiques à celles décrites ci-dessus à propos de la réduction et de l'oxydation de la mitomycine B. 



   Lesconditions nécessaires à la préparation du produit que l'on peut appeler anhydro apo mitomycine A, dans la formule   (I)   de laquelle R est un groupe méthyle, R1 est un groupe méthoxy et R2 est un atome   d'hydrogène ,   Dont pratique- ment identiques à celles dont on donne un aperçu à propos de la préparation de l'anhydro apo   mitomycine   B. 

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   Pour préparer le produit que l'on peut désigner anhy- dro apo   porfiromycine,   dans la formule de laquelle (formule ci-dessus), R est un groupe méthyle, R1 est un groupe amine et R2 est un groupe méthyle, il est nécessaire de sou- mettre simplement l'anhydro apo   mitoaycyne   B au traitement par l'ammoniaque pendant un temps suffisant pour que l'amination désirée s'accomplisse. Les conditions de la réaction-ne sont pas primordiales et on peut y procéder à la température ambi- ante de 2 à 20 heures. 



   Les nouveaux produits de la présente invention ont une activité antibactérienne   à   spectre étendu. Le spectre an- ti-bactérien des nouveaux composés, représentant la quantité requise pour inhiber la croissance' de différentes bactéries types est déterminé selonun procédé standard par la technique de dilution sur agar sur plaque striée que   l'on   utilise commun- hément pour tester les nouveaux antibiotiques, Lesconcentra- tions minima inhibitrices exprimées en gamma par cm3, des   nou-   teaux produite sur les organismes tests sont indiquées   dans 1.   tableau ci-dessous.

   Pour permettre la comparaison. on a   éga-   lement indiqué les spectres anti-bactériens de la mitomyoi- ne   B,   

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 !rA3LEA.tJ 
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 Organisme Anhydro aJ)c Anhydro 4IDo Anhydro apo Kitonycine 11 Mitomycine B itomycne A Porfiromyoine 1,1-ycobacterium emermatis ATCC 607 10 1925 Staphvlococcus aureus 209P 195 0,64 25 20 
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<tb> Sarcina <SEP> Lutea <SEP> 1001 <SEP> 0,62 <SEP> 0,04 <SEP> 25
<tb> Bacillus <SEP> subtilis
<tb> 
 
 EMI5.4 
 ATCC 6633 0,62 0,16 391 5 Streptococcus faeealia 2,5 2,5 125 20 ATCC 6043 125 Streptococcus pyoenes 203, . :

   - 0,02 0,.02 , 1. 5 0,62 Streptococcus pyogene3 -'Y-5 0,15 - - 1, 25 tretococcus 1f ne 11 2,5 1,25 ) 25 20 Stri2hylococcus albus ne 69 0,16 0,16 25 10 Stren+ococcus téta ne 80 ,2,5 1,25 '> 25 20 

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   TABLEAU! (Suite)   
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 Organisme Anhydro a a Anhydre apo Anhydre apo itomyc1n B  ¯ ¯#> ¯¯¯ Mitosycine B :

  3toycin A Porfirosysine 
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<tb> Staphylococcus <SEP> aureus <SEP> 
<tb> 
 
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 NY 104 z5 - 20 Bacillus Cereus n  5 0,62 1925 25 20 Klebs1ella pneumon1ae 2,5 - lt25 > 25 20 Alcaligenes e2, ATOC 10153 2,5 5 25 > 20 ÇoràMebacterium xeroe3e N..' 4ilaW B-1397 0, 02 0,02 12,5 Salmonella lallinarum 10 20 > 25 7 20 Escherichia colt. nl 22 2,5 1,25 T 25 >20 Klebsiella pneumonit, A Strain AD 0962 1925 > 25 > 20 

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Comme il est indiqué, les nouveaux produits eont très efficaces in   vivo   sur certaines infections normalisées 
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 des souris, le Starhylococcus aureus de Smitli par exemple, La souche Staphylococuus aureus de Smith a étú étu- diée à l'Institut   Rockfeller.et   décrite par   J.M.Smith   et R. J.

   Dubos dans le "Journ.   Expt.     Lied."   103, 87 (1956). La souche en.question est positive à la coagulase, négative à. la   tellurite,   et sensible, in   vitro, à   la tétracycline., la 
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 pénicilline, la streptomycine, l'érythromycine, la carbomyci- ne, la néomycine, au chloramphénicol et ta la zovobiocine. On a fait des essais pour déterminer la phase type de cette sou- che mais on a trouvé qu'elle n'était paa susceptible d'être 
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 clasa6e.

   L'anhydro kapo mitomycino 3, administrée on une sim- ple dose   sous-cutanée,   est efficace à un taux aussi bas que 1 mg/kg pour la protection   à   93% de souris infestées par une 
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 dose toxique de la souche S t a phylo o t ce Lta aureus de Smith au moyen d'un ED54 de 0,5-1#0*mg/kg de poids du corps. Dans les   mêmes   conditions, la mitomycine les protège seulement à 33%. 



  Toutes celles infectées que l'on n'a pas traitées sont mortes en 1 à 2 jours. D'après ces conditions de test, le nouveau produit se révèle de 2-4 fois plus actif que la   mitomycine   et 8 fois moins toxique. 



   Dans les mêmes conditions, et sur la même souche, 
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 l'anhydroporfiromycine donne un BD 50 de 2-8 mg/kg de poids du corps. 



   Dans les mêmes conditions de tests et toujours sur 
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 la souche de Smith de Stnohlococcus aureus, excepté que l'on administre le médicament par voie orale unique par tubage, l'anhydre apo In1tomycine A donne un BD 50 de 8 + 16 mg.kg de poids de corps. 

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   Les exemples suivants fournissent des explications détaillées sur la présente invention. Les parties sont exprimées en poids, sauf indication contraire. 



   EXEMPLE 1 
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 Préparation de l'anhydro à mitoaycine B 
On ajoute 25 et 14 parties de mitomycine B à une      suspension de 25   parties   d'oxyde de platine   dans 3.000   parties 
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 de N,N-diméthylformamide en atmosphère hydrogénée dans un appareil d'hydrogénation. On agite le mélange réactionnel jus- qu'à ce que la couleur bleue disparaisse et qu'une molécule d'hydrogène ait été consommée. On élimine alors le catalyseur par fil'tration à travers une terre   d'infusoirea   et on fait évaporer le filtrat à basses température et   pression.   On trans-' porte le résidu séché dans 1.000 parties   d'éthanol   absolu et on fait barboter de l'air à travers la solution pendant 10 minutes.

   On élimine par filtration les cristaux oranges qui se sont formés après l'oxydation par l'air, on les lave avec. 
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 un peu d'éthanol et on les abene moue vide. Le rendement dwa ,. cristaux oranges bruts est de 11 parties, On obtient un .upp14 ment à partir de la liqueur-mère. On purifie le produit par recristallisation à partir de la pyridine ou de   l'éthanol.   



  Analyse ! 
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 Calculé pour 0,6H17N,05 0=58,00; H=5,7?f N=12#68; Hm5947i "12,6i.. 



  EXEMPLE 2 Préparation de la IT-aéthylmitomycine A On traite une solution de 41,5 mg de bicarbonate de soude dans 1,25 em3 d'eau par 1,25 ca3 de diméthylformamide et 10 mg de   mitomyoine   A puis on ajoute 0,5 cm3   d'ibdure   de 
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 aéthyle"exempt d'acide. On ajoute le mélange dans un récipient fermé pendant 5 heures environ et on le laisse reposer une nuit à la température ambiante. On aère le mélange réactionnel 

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 ci-dessus avec de   1'.azote   -pour éliminer 1'excès   d'iodure   de méthyle puis on le fait évaporer à siccité sous vide. On extrait le résidu avec du chloroforme et, après évaporation à sircité, on extrait ledit extrait par l'éther, L'évaporation 
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 de la solution éther donne la N-méthylmitomyoine A.

   Ensuite,      on procède à la purification par partage   chromatographique   liquide-liquide. On cristallise le produit, purifié (6,8 mg) partir du tétrachlorure de carbone et de l'heptane. 



   EXEMPLE 3 
Préparation de   l'anhydpo   apo mitomycine B 
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 On réduit 2. parties de la-N-eéthylmitomycine A préparée dans l'exemple 2, dans 300 parties de I,N.dira6thyl l'ormamide avec de l'hydrogène et 0#2 partie d'oxyle de plati- ne. Après réduction, la solution pourpre   devient   incolore,, Après élimination du catalyseur et de   l'oxydant,,   on élimine 
 EMI9.3 
 le solvant a basse température ut on obtient un r4ndu orange. 



  On cristullise le produit brut de l'ethanol. Le rendement des cristaux oranges est u '0,9 partie aprba filtrage et né- c4age sous vide. Le produit "est identique à celui obtenu par réduction de la mitcnlyeinb B'dans 11 le EXEÎ.JP1S Préparation d I$w iliy4ro Uo mitosycine A ######################### On réduit une édition de 25 mu- de raitcuyclne A dans 3 cm3 de dthylforamide par l'hydrogène en Utilisant 2,5 mg de catalyseur Pt02 jusqu'à ce que la r'.ijLCtion devienne jaune pâle. On filtre la réaction, on la lave avec 1 em3 de diméthylformamide et en l'o.%. .yd* l' ai r k,endznt 5 minutes. 



  On élimine le solvant sous vide, sans chauffer et on purifie chromatogràphiquemcnt le proauit brut en utili.unt un système de solvant cyclohexane, EcOAet d:.dthylfora:.ide, H20 (110; 90, 40; 5)' On obtient des crdâtux li f e4,omont oritnjea à par- tir de l'acétate d'ethylo avec un reniement- Ae 21.', en poids, 

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 point de fusion 205-250 avec décomposition. 



   EXEMPLE 5 
Préparation de l'anhydre apo perfiromycine 
On enferme, en scellant, un échantillon de 31,5 mg d'anhydro   apo     mitomyoine   B dans un tube Carius avec 5 cm3   d'ammoniac   liquide et on secour pendant 18 heures à la tempé- rature. ambiante. On descelle alors et on laisse   l'ammoniac   s'évaporer. Le produit obtenu à raison de 65% en poids, est sous forme de cristaux pourpres   à   partir d'acétone.    



  REVENDICATIONS 1.- composé de formule :   
 EMI10.1 
 dans laquelle R est un group)   allcyle   inférieur, R1 est un groupe méthoxy OM amino et R2 est un atone d'hydrogène ou un groupe méthyle. 



   2.- Anhydro apo mitomycine 3. 



   3.- Anhydro apo   mitomyoine   A. 



   4.- Anhydro apo porfiromycine. 

**ATTENTION** fin du champ DESC peut contenir debut de CLMS **.

Claims

5.- Procédé de préparation d'un composé de formule EMI10.2 dans laquelle R est un groupe alkyle inférieur et r2 est un atome d'hydrogène ou un groupe néthyle, caractérise en ce qu'on soumet à une hydrogénation un conposé de foraule : <Desc/Clms Page number 11> EMI11.1 dans laquelle R et R2 ont les significations indiquées plus haut.

6.- Procédé suivant la revendication 5, caractérise en ce qu'or. soumet à une hydrogénation une solution, dans un solvant polaire,un composé de formule EMI11.2 en utilisant de l'hydrogène en présence d'un oatalyseur base d'un métal noble jusqu'à ce qu'une mole d'hydrogène ait été absorbée, et en ce qu'on soumet ensuite le produit à une ré-oxydation.

7.- Procédé suivant la revendication 6, carac- térisé en ce que l'hydrogénation s'effectue à une température comprise entre 0 et 50 C.

8.- Procédé suivant l'une ou l'autre des revendica- tions 5, 6 et 7, caractérisé en ce que R et il? sont des radi- caux méthyle dans le produit final, celui-ci étant traité à l'aide d'ammoniac de façon à former l'anhydre apo porfiromy- cine de formule EMI11.3 <Desc/Clms Page number 12> 9.- Procédé de production d'anhydre apo porfiromy- oine de formule : EMI12.1 caractérisé en oe qu'on met de l'anhydre apo mitomyoine B en contact avec de l'ammoniac.