CH304875A - Procédé de préparation d'une nouvelle substance antibiotique. - Google Patents

Description

  Procédé de préparation d'une nouvelle substance     antibiotique.       La présente invention est relative à un  procédé de préparation d'une nouvelle     subsr     tance antibiotique, pour laquelle la titulaire  propose la désignation      Terramycin ,    qui a  été     enregistrée    comme marque.  



  Ce procédé est caractérisé en ce que le  micro-organisme     Streptomyees        rimosus    est cul  tivé dans un milieu nutritif aqueux, d'ans des  conditions d'aérobie et en profondeur.  



  Le micro-organisme Streptomyces     rimosus     n'a pas encore été décrit jusqu'ici. La des  cription     d'une   <B>de</B> ses souches (référence  S 3279) selon la méthode indiquée dans le   Manuel de bactériologie déterminative  de         Bergey,    6e édition, pages 929 à 933,     est    don  née     dans    le tableau ci-dessous.

   Toutefois, l'in  vention n'est pas     limitée    à l'emploi de cette  souche     particulière;    elle englobe -     notamment     aussi l'utilisation     d'organismes    modifiés obte  nus par des moyens de mutation,     tels    que des  rayons X, des rayons     ultraviolets,    le     chlor-          hydrate    de     2,2'-dichloro-N'-méthyl-diéthyl-          amine,    etc.  



  Les     caractéristiques    du tableau ci-dessous  sont basées sur les     constatations.    faites avec sir  tubes ou plaques. Les couleurs     â.    côté     des-          quelles    se trouve la     lettre    le sont     désignées     d'après Ridgway,     Color    Standards and Nomen  clature.

    
EMI0001.0030     
  
    Milieu <SEP> Croissance <SEP> et <SEP> MYc <SEP> sporesélium <SEP> aérien <SEP> pigment <SEP> soluble <SEP> Remarques
<tb>  glucose, <SEP> modérée <SEP> entre <SEP> blanc <SEP> et <SEP> jaunâtre <SEP> colonie <SEP> plate; <SEP> bords <SEP> irrégu  asparagine, <SEP> à <SEP> bonne, <SEP> gris <SEP> pâle <SEP> (R) <SEP> très <SEP> pâle <SEP> liers; <SEP> surface <SEP> lisse; <SEP> sporula  agar <SEP> la <SEP> plupart <SEP> tion <SEP> légère; <SEP> mycélium <SEP> aérien
<tb>  du <SEP> temps <SEP> léger; <SEP> envers <SEP> presque <SEP> jaune
<tb>  submergée <SEP> ocre <SEP> (R) <SEP> au <SEP> centre, <SEP> chamois
<tb>  colonial <SEP> aux <SEP> bords; <SEP> spirales
<tb>  très <SEP> nombreuses;

   <SEP> conidies <SEP> en
<tb>  - <SEP> chaines <SEP> 0,6 <SEP> à <SEP> 0,7 <SEP> X <SEP> 0,8 <SEP> à <SEP> 1,4,u
<tb>  courtes <SEP> et <SEP> cylindriques; <SEP> colo  nies <SEP> isolées; <SEP> ensembles <SEP> pelli  culaires <SEP> ou <SEP> dispersés <SEP> de
<tb>    grands <SEP> amas <SEP> de <SEP> spirales;
<tb>  odeur <SEP> de <SEP> terre
<tb>  gélatine <SEP> modérée <SEP> blanc <SEP> aucun <SEP> liquéfaction <SEP> modérée       
EMI0002.0001     
  
    Milieu <SEP> Croissance <SEP> Mycélium <SEP> aérien <SEP> pigment <SEP> soluble <SEP> Remarques
<tb>  et <SEP> spores
<tb>  lait <SEP> de <SEP> bonne, <SEP> blanc <SEP> grisâtre <SEP> partie <SEP> inférieure <SEP> aucune <SEP> hydrolyse <SEP> ou <SEP> pepto  tournesol <SEP> pellicule <SEP> du <SEP> tube <SEP> plus <SEP> nisation;

   <SEP> le <SEP> pH <SEP> est <SEP> inchangé
<tb>  (à <SEP> 28 ) <SEP> épaisse <SEP> claire <SEP> que <SEP> celle
<tb>  du <SEP> tube <SEP> de
<tb>  contrôle
<tb>  lait <SEP> de <SEP> très <SEP> bonne <SEP> blanc <SEP> grisâtre <SEP> partie <SEP> supé- <SEP> aucune <SEP> hydrolyse <SEP> ou <SEP> pepto  tournesol <SEP> rieure <SEP> du <SEP> liquide <SEP> nisation;

   <SEP> le <SEP> pH <SEP> a <SEP> passé <SEP> de
<tb>  (à <SEP> 37 ) <SEP> presque <SEP> noire <SEP> 6,1 <SEP> à <SEP> 6,6-7,02
<tb>  glucose <SEP> modérée, <SEP> surface <SEP> plus <SEP> clair <SEP> que- <SEP> brun <SEP> jaunâtre <SEP> envers <SEP> presque <SEP> orange <SEP> de
<tb>  craquelée <SEP> par <SEP> gris <SEP> souris <SEP> zinc <SEP> (chromate <SEP> de <SEP> zinc) <SEP> (R)
<tb>  croissance <SEP> pâle <SEP> (R) <SEP> et <SEP> orange <SEP> ocreux <SEP> (R)
<tb>  continuelle
<tb>  d'hyphes
<tb>  agar <SEP> pauvre <SEP> aucuninycélium <SEP> jaune <SEP> très <SEP> envers <SEP> presque <SEP> chamois <SEP> et
<tb>  nutritif <SEP> aérien <SEP> faible <SEP> jaune <SEP> de <SEP> miel <SEP> (R)
<tb>  morceau <SEP> de <SEP> modérée,

   <SEP> blanchâtre <SEP> à <SEP> légèrement <SEP> mycélium <SEP> presque <SEP> ocre <SEP> fauve
<tb>  pomme <SEP> de <SEP> surface <SEP> plissée <SEP> gris <SEP> pâle <SEP> (R) <SEP> brun <SEP> jaunâtre <SEP> (R)
<tb>  terre
<tb>  malate <SEP> de <SEP> pauvre, <SEP> aucun <SEP> mycélium <SEP> aucun
<tb>  calcium <SEP> surface <SEP> plate <SEP> aérien; <SEP> colonie
<tb>  presque <SEP> jaune
<tb>  - <SEP> de <SEP> Mars <SEP> (R)
<tb>  plaques <SEP> pauvre, <SEP> très <SEP> peu <SEP> de <SEP> mycé- <SEP> aucun <SEP> légère <SEP> hydrolyse
<tb>  d'amidon <SEP> couche <SEP> mince <SEP> Hum <SEP> aérien;

   <SEP> co  lonie <SEP> jaune <SEP> can  nelle <SEP> clair <SEP> (R)
<tb>  agar <SEP> aucune
<tb>  synthétique
<tb>  cellulose <SEP> aucune
<tb>  milieu <SEP> modérée <SEP> à <SEP> blanc <SEP> à <SEP> gris <SEP> pâle <SEP> brun <SEP> jaunâtre <SEP> envers <SEP> presque <SEP> orange <SEP> de
<tb>  d'Rmerson <SEP> bonne, <SEP> surface <SEP> (R);

   <SEP> colonie <SEP> en <SEP> pâle <SEP> (R) <SEP> zinc <SEP> (chromate <SEP> de <SEP> Zn)
<tb>  éventuellement <SEP> masse <SEP> presque
<tb>  fendillée <SEP> en <SEP> jaune <SEP> de <SEP> miel <SEP> à
<tb>  plusieurs <SEP> orange <SEP> de <SEP> zinc
<tb>  petites <SEP> pièces <SEP> ou <SEP> orange
<tb>  ocreux <SEP> (R)
<tb>  bouillon <SEP> de <SEP> modérée, <SEP> jaune <SEP> réduction <SEP> du <SEP> nitrate <SEP> faible <SEP> à
<tb>  dextrose <SEP> et <SEP> avec <SEP> pellicule <SEP> forte <SEP> dans <SEP> plusieurs <SEP> tubes
<tb>  de <SEP> nitrate <SEP> \         Cette espèce est voisine du S.     albus,    mais en diffère par les caractères     suivants:

       
EMI0003.0003     
  
    <I>S. <SEP> albus</I> <SEP> (Rossi <SEP> Dorià <SEP> emend.) <SEP> <I>S. <SEP> rimosus</I>
<tb>  1. <SEP> Mycélium <SEP> aérien <SEP> abondant. <SEP> 1. <SEP> Mycélimn <SEP> aérien <SEP> pauvre.
<tb>  2. <SEP> Mycélium <SEP> aérien <SEP> blanc. <SEP> 2. <SEP> Mycélium <SEP> aérien <SEP> plutôt <SEP> gris <SEP> pâle <SEP> (R).
<tb>  3. <SEP> Pas <SEP> de <SEP> fendillement <SEP> de <SEP> la <SEP> colonie. <SEP> 3.

   <SEP> Quand <SEP> une <SEP> croissance <SEP> vigoureuse <SEP> se <SEP> produit.
<tb>  les <SEP> colonies <SEP> se <SEP> fendillent,- <SEP> d'abord <SEP> à <SEP> la <SEP> péri  phérie <SEP> et <SEP> ensuite <SEP> sur <SEP> toute <SEP> la <SEP> surface, <SEP> et <SEP> la
<tb>  couche <SEP> sporifère <SEP> se <SEP> craquelle <SEP> en <SEP> petites
<tb>  pièces <SEP> qui <SEP> se <SEP> détachent <SEP> par <SEP> la <SEP> croissance
<tb>  continuelle <SEP> des <SEP> hyphes <SEP> de <SEP> dessous.
<tb>  4. <SEP> Le <SEP> lait <SEP> est <SEP> peptonisé <SEP> après <SEP> coagulation. <SEP> 4. <SEP> Le <SEP> lait <SEP> n'est <SEP> pas <SEP> hydrolysé <SEP> ni <SEP> peptonisé.
<tb>  5. <SEP> Croissance <SEP> sur <SEP> agar <SEP> synthétique <SEP> abon- <SEP> - <SEP> -5. <SEP> Aucune.

   <SEP> croissance <SEP> sur <SEP> l'agar <SEP> synthétique.
<tb>  dante <SEP> et <SEP> étalée.
<tb>  6. <SEP> Les <SEP> colonies <SEP> sur <SEP> un <SEP> morceau <SEP> de <SEP> pomme <SEP> 6. <SEP> Le <SEP> mycélium <SEP> sur <SEP> un <SEP> morceau <SEP> de <SEP> pomme <SEP> de
<tb>  de <SEP> terre <SEP> sont <SEP> de <SEP> couleur <SEP> blanche. <SEP> terre <SEP> est <SEP> de <SEP> couleur <SEP> presque <SEP> ocre <SEP> fauve <SEP> (R).       Le nom     spécifique    provient de      rimosus ,     qui signifie  craquelé , à cause de l'aspect  fendillé, craquelé de certaines colonies.  



  Le produit obtenu selon l'invention par  tage avec les antibiotiques préparés à     partir     d'autres     espèces    de streptomyces la propriété  d'avoir un champ d'activité antibiotique  étendu, surtout contre les     bactéries        grain-          négatives.     



  Parmi les. organismes dont la     croissance        est     inhibée par des concentrations très faibles du  nouvel antibiotique, on peut citer les suivants:       Aerobacter        aerogenes    et Salmonella     para-          typhi    A, y compris leurs souches     résistant    à    la     streptothricine,    les     souches    de Salmonella       paratyphi    A ou B     résistant    à la streptomycine,  les souches de Salmonella     paratyphi    B,       d'Escherichia        coli,

      de     Pseudomonas        aeruginosa,     de     Staphylococcus        albus,    de     Staphylococcus          aureus,    de     Bacillus        subtilis,    de     Bacillus          mycoides,        d'Eberthella        typhosa,    de     Shigella          paradysenteriae,

      de     glebsiella        pneumoniae    et  de     Salmonella        pullorum    résistant au     chlor-          amphénicol.     



  Le tableau suivant montre les champs d'ac  tivité comparés de     diverses        préparations    de  streptomycine, de     streptothricine,    de     chlor-          amphénicol,    de     chlorotétracycline    de formule  
EMI0003.0051     
    et de l'antibiotique préparé selon la présente  invention.     L'activité        des    diverses préparations       antibiotiques    utilisées est exprimée de deux  manières:

    1  En unités de     dilution    E.     coli        par.milli-          gramme        (UDC[mg),    par quoi on entend le    volume     maximum    de bouillon nutritif (en  millilitres)     dans    lequel un milligramme de la       préparation    antibiotique (qui peut avoir un.

    degré de pureté variable) peut être dilué et       qui,        inoculé    à la concentration de. 10-6 avec  une culture de E. soli     cultivée    pendant 1$     heures         dans les     mêmes    conditions, ne présente aucune  croissance bactérienne après une incubation  de 18 heures à 37 ;

    2  En     unités        chloramphénicol    par milli  gramme     (UCL/mg),    ces unités étant basées sur  le résultat d'un essai pour lequel on se sert  comme organisme d'essai du     Klebsiella        pneu-          moniae    (référence     OCI    602), et comme     milieu       d'essai d'un bouillon du Laboratoire biologi  que de Baltimore, préparé selon la     formule    de  la Food and     Drug        Administration    pour la dé  termination     turbidimétrique    de la strepto  mycine.

   La méthode adoptée pour l'essai est  celle de J. R. Me     Mahon    (J.     Biol.        Chem.,    153,  249-258, avril 1944), pour laquelle on a     uti-          lisé    10 mg de     chloramphénicol        cristallisé    par  litre.

    
EMI0004.0021     
  
    <I>Tableau <SEP> I;</I>
<tb>  Concentration <SEP> (en <SEP> UDC <SEP> et <SEP> en <SEP> UCL) <SEP> de <SEP> la, <SEP> préparation <SEP> antibiotique <SEP> (activité <SEP> en <SEP> UDC/mg <SEP> et
<tb>  en <SEP> UCL/mg) <SEP> par <SEP> millilitre <SEP> d'agar <SEP> nutritif <SEP> nécessaire <SEP> pour <SEP> empêcher <SEP> la <SEP> croissance <SEP> bacté  rienne <SEP> à <SEP> la <SEP> surface <SEP> de <SEP> plaques <SEP> de <SEP> Pétri.
<tb>  Nouvel <SEP> Chloro- <SEP> Chlor- <SEP> Strepto- <SEP> Strepto  antibiotiquei <SEP> tétracycline <SEP> amphénicol3 <SEP> thricine4 <SEP> mycine5
<tb>  20 <SEP> 65 <SEP> 3840 <SEP> 7500 <SEP> I000 <SEP> 1000 <SEP> 2200 <SEP> 4000
<tb>  UDC/mg <SEP> UCL/mg <SEP> UDC/mg <SEP> UCL/mg <SEP> UDC/mg <SEP> UCL/mg <SEP> UDC/mg <SEP> UDC/mg
<tb>  UDC <SEP> UCL <SEP> UDC <SEP> UCL <SEP> UDC <SEP> UCL <SEP> UDC <SEP> 

  UDC
<tb>  E. <SEP> typhosa <SEP> 344 <SEP> 1-2 <SEP> 6 <SEP> 4-10 <SEP> 7,5 <SEP> 1-5 <SEP>  <  <SEP> 5 <SEP> 2-6 <SEP> 12-20
<tb>  Ps. <SEP> aeruginosa.
<tb>  173 <SEP> 20-40 <SEP> 65 <SEP> 192-384. <SEP> 375-750 <SEP> 100- <SEP> 100 <SEP> 220- <SEP> 200
<tb>  1000 <SEP> 2200
<tb>  S.paradysen  teriae <SEP> 131 <SEP> 1 <SEP> 4 <SEP> 4 <SEP> 7,5 <SEP>  <  <SEP> 0,5 <SEP>  <  <SEP> 5 <SEP> 2-6 <SEP> 4
<tb>  K. <SEP> pneumoniae
<tb>  132 <SEP> 2 <SEP> 7 <SEP> 2 <SEP> 4 <SEP> 0,5-1,0 <SEP>  <  <SEP> 5 <SEP> 1 <SEP>  <  <SEP> 2
<tb>  S. <SEP> paratyphi <SEP> A
<tb>  134 <SEP> 2-5 <SEP> . <SEP> 6-65 <SEP> 38-192 <SEP> 75-375 <SEP> 5-10 <SEP> 10 <SEP> 2-6 <SEP> 20-40
<tb>  S. <SEP> pullorum <SEP> 136 <SEP> 2-5 <SEP> 6-65 <SEP> 38 <SEP> 75 <SEP> 10 <SEP> 10 <SEP> 6 <SEP> 40-200
<tb>  S.

   <SEP> paratyphi <SEP> B
<tb>  139 <SEP> 2-5 <SEP> 6-65 <SEP> 38-192 <SEP> 75-375 <SEP> 5-10 <SEP> 5 <SEP> 22-110 <SEP> 20-40 <SEP> '
<tb>  E. <SEP> coli <SEP> 21 <SEP> 2-5 <SEP> 6-65 <SEP> 19-38 <SEP> 37 <SEP> 10 <SEP> 10 <SEP> 6 <SEP> 20-40
<tb>  A. <SEP> aerogenes <SEP> 2 <SEP> 0,2-1,0 <SEP> 2 <SEP>  <  <SEP> 0,5 <SEP>  <  <SEP> 4 <SEP> 0,5 <SEP>  <  <SEP> 5 <SEP> 2-6 <SEP> 2-4
<tb>  f
<tb>  Proteus. <SEP> sp. <SEP> 1 <SEP> 20-40 <SEP> 130-190 <SEP> 384- <SEP> 750- <SEP> 10 <SEP> 10 <SEP> 6-11 <SEP> 4-12
<tb>  3840 <SEP> 7500
<tb>  Monilia
<tb>  albicans <SEP> 8 <SEP> > <SEP> 60 <SEP> > <SEP> 190 <SEP> > <SEP> > <SEP> > <SEP> 3,000 <SEP> > <SEP> 1,000 <SEP> 22-100 <SEP> >
<tb>  11,000 <SEP> 22,000 <SEP> 12,000 <SEP> ,
<tb>  9
<tb>  S. <SEP> aureus <SEP> 3 <SEP> 1-2 <SEP> 4-5 <SEP> 0,5 <SEP> 4 <SEP> 5-10 <SEP> 10 <SEP> 6-11.

   <SEP> 2-4
<tb>  4       
EMI0005.0001     
  
    <I>Pableau <SEP> Î</I> <SEP> (suite)
<tb>  Nouvel <SEP> Chloro- <SEP> Chlor- <SEP> Strepto- <SEP> Strepto  antibiotique1 <SEP> tétracycline <SEP> 2 <SEP> amphénicol3 <SEP> - <SEP> thricine4 <SEP> mycines
<tb>  20 <SEP> 65 <SEP> 3840 <SEP> 750o <SEP> 100o <SEP> iooo <SEP> 220o <SEP> 400o
<tb>  UDC/mg <SEP> UCL/mg <SEP> UDC/mg <SEP> UCL/mg <SEP> UDC/mg <SEP> UCL/mg <SEP> UDC/mg <SEP> UDC/mg
<tb>  UDC <SEP> UCL <SEP> UDC <SEP> UCL <SEP> UDC <SEP> UCL <SEP> UDC <SEP> UDC
<tb>  S. <SEP> albus <SEP> 5 <SEP> 1 <SEP> 4 <SEP> 38-192 <SEP> 75 <SEP> 5-<B><I>1</I></B>0 <SEP> 10 <SEP> 6-11 <SEP> 2-4
<tb>  B. <SEP> subtilis <SEP> 7 <SEP> > <SEP> 60 <SEP> > <SEP> 65 <SEP> 38-192 <SEP> 7,5-75 <SEP> 1-5 <SEP>  <  <SEP> 5 <SEP> 22-110 <SEP> 12
<tb>  B.

   <SEP> mycoides <SEP> 18 <SEP> 0,2 <SEP> 0,6 <SEP>  <  <SEP> 0,5 <SEP>  <  <SEP> 4 <SEP> 1-5 <SEP>  <  <SEP> 5 <SEP> 110-220 <SEP> 12-20
<tb>  B. <SEP> subtilis <SEP> 219 <SEP> 0,2-1,0 <SEP> 0,6-3 <SEP>  <  <SEP> 0,5 <SEP>  <  <SEP> 4 <SEP> 1-5 <SEP>  <  <SEP> 5 <SEP> 1-2 <SEP>  <  <SEP> 2
<tb>  1 <SEP> Matière <SEP> brute <SEP> préparée <SEP> comme <SEP> dans <SEP> l'exemple <SEP> II <SEP> ci-dessous, <SEP> le <SEP> produit <SEP> précipité <SEP> à <SEP> un <SEP> pH <SEP> de <SEP> 9 <SEP> étant
<tb>  filtré, <SEP> remis <SEP> en <SEP> suspension <SEP> dans <SEP> l'eau <SEP> et <SEP> séché <SEP> apr <SEP> ès <SEP> congélation.
<tb>  2 <SEP> Chlorhydrate <SEP> cristallisé.
<tb>  3 <SEP> Cristallisé.
<tb>  4 <SEP> Sulfate <SEP> à <SEP> 80o <SEP> unités/mg <SEP> (ex <SEP> hélianthate <SEP> cristallisé)

  .
<tb>  <B>></B> <SEP> Sulfate <SEP> à <SEP> <B>750</B> <SEP> unités/mg.       Avec le nouvel antibiotique     pur,    à l'état  cristallisé, on a obtenu les résultats suivants:  <I>Tableau II:</I>  Poids     du:    nouvel antibiotique     cristallisé;     nécessaire pour l'inhibition complète des  organismes     suivants:     
EMI0005.0006     
  
    Microgrammes/ml
<tb>  A.aerogenes <SEP> 1,0
<tb>  Klebsiella <SEP> pneumoniae <SEP> 3,0
<tb>  E. <SEP> coli <SEP> 5,0
<tb>  E. <SEP> typhosa <SEP> 3,0
<tb>  S. <SEP> paratyphi <SEP> A <SEP> 1,0
<tb>  S. <SEP> paratyphi <SEP> B <SEP> 1,0
<tb>  S.paradysenteriae <SEP> 1,0
<tb>  S. <SEP> pullorum <SEP> 10,0
<tb>  B. <SEP> subtilis <SEP> (FDA <SEP> 219) <SEP> 3;

  0
<tb>  S. <SEP> albus <SEP> 1,0
<tb>  S. <SEP> aurells <SEP> 1,0
<tb>  M. <SEP> albicans <SEP> 1000
<tb>  Proteus <SEP> sp. <SEP> 1000
<tb>  Ps. <SEP> aeruginosa <SEP> 100
<tb>  Br. <SEP> bronchisepticus <SEP> 3,0       L'activité du nouvel antibiotique envers  différentes souches de bactéries     rendues    résis  tantes à divers antibiotiques par transfert  successif dans des bouillons contenant des    concentrations progressivement     croissantes     d'antibiotique, par rapport à la culture ini  tiale,     sensible    à     tous    les antibiotiques,     ressort     de     l'expérience        ci-dessous:

      On     plonge    un dis  que de 12 mm de papier filtrant stérile     dans     un bouillon de culture de     l'antibiotique    et on  le pose au centre de la surface d'une plaque  nutritive     d'agar.    Sur le     disque,    on recueille  les souches     suivantes    de     Aerobacter        aerogenes     1  ,sensible au     chloramphénicol,    à la strepto  mycine et à la     streptothricine;

      2  résistant à  la     streptomycine,    3  résistant à la     strepto-          thricine,    4      résistant    au     chloramphénicol.     Après une     incubation    de 18 heures à 37 , on  trouve des zones d'inhibition pour     toutes    les  cultures, excepté celle qui était résistante au       chloramphénicol,

      ce qui montre que le nouvel  antibiotique se     distingue    nettement de<B>-1</B> a  streptomycine et de la     streptothricine.    Il se       distingue        toutefois    du     chloramphénicol    lors  qu'il est     soumis    à l'analyse     polaxographiquë,

            d'ans    laquelle la     tension        dïi'        demi-nivëau    limite  caractéristique du     chloramphénicol    (qui pour       une    solution de     chloralnphénicol    de     pg    4,5 est  d'environ -0,85 volt par rapport à la nappe  de mercure,     sous    conditions internes norma  lisées)     n'est    pas     observée.     



  La toxicité du nouvel antibiotique peut       être        estimée,        comparativement    à-celle d'autres      antibiotiques, en se basant sur les considéra  tions     suivantes:    Une préparation du nouvel  antibiotique, comparable     comme    activité à  255     unitésimg    de     chlaramphénicol    et à  2000     unités/mg    de streptomycine présentait  Lin     LDo    de 3,5 mg par voie intraveineuse pour  une souris de 20 g, ce qui correspond à  0,893 mg de     chloramphénicol    et à 7 mg de  streptomycine.

       Ces    derniers antibiotiques pré  sentent     1m        LDo,    pour une souris de 20 g, res  pectivement de 0,6 mg et de 2,5 mg. A l'état  cristallisé, le nouvel antibiotique présente  par voie intraveineuse et pour     ime    souris de  20 g un     LDo    de 3,0 mg et un     LD5o    de 4,0 mg.

         Dans    d'autres     essais,    on a trouvé que le     LDo     par voie intraveineuse du chlorhydrate de cet  antibiotique     calculé    en composé amphotère cris  tallisé est de 103 mg par kilogramme de poids  de souris alors que le     LD5o    est de 192 mg par  kilogramme. On voit que les impuretés qui se  trouvent     dans    l'antibiotique brut ont à peu       près    la même toxicité que l'antibiotique lui  même.  



  Le nouvel antibiotique se distingue de la       ehlorotétracycline    par son mode d'extraction  par des solvants. Une solution de     chlbrotétra-          cycline    ayant     un   <B>pH</B> de 2,0, de 6,5 ou de 9,0;  quand elle est extraite par l'éther, le     butanol     normal, l'acétate d'éthyle. la     méthyl-isobut@rl-          cétone,    le benzène ou le chloroforme, perd son  activité, alors qu'une solution du nouvel anti  biotique ne peut être     extraite    que par du     bu-          tanol    normal.

   De même, la     stabilité    à la cha  leur     est        différente    pour les deux antibiotiques,  ainsi que cela     ressort    du tableau     suivant:     
EMI0006.0036     
  
    <I>Tableau <SEP> III:</I>
<tb>   ,@o <SEP> de <SEP> l'activité <SEP> initiale <SEP> conservés <SEP> après <SEP> traitement:

  
<tb>  à <SEP> iooO <SEP> pendantes <SEP> minutes <SEP> à <SEP> ego
<tb>  i <SEP> PH <SEP> nouvel <SEP> chloro- <SEP> pendant <SEP> une <SEP> heure
<tb>  antibiotique <SEP> tétracycline <SEP> nouvel <SEP> antibiotique
<tb>  2,0 <SEP> 40 <SEP> 80 <SEP> 100
<tb>  6,5 <SEP> 50 <SEP> 25 <SEP> <B>100</B>
<tb>  9,0 <SEP> 80 <SEP> 25 <SEP> 100       Le tableau IV     ci-après    illustre le com  portement de     différents    antibiotiques lors de  la chromatographie sur papier; on s'est servi    de deux genres de     solvants    et les essais ont.

    été effectués à 28  pendant 24 heures, en  utilisant le B. subtiles comme organisme       d'essai.     
EMI0006.0041     
  
    <I>Tableau <SEP> IV:</I>
<tb>  Solvant: <SEP> eau <SEP> saturée <SEP> de <SEP> n-butanol <SEP> Solvant:
<tb>  plus <SEP> 2 /a <SEP> d'acide <SEP> p-toluènesulfo- <SEP> eau <SEP> saturée <SEP> de
<tb>  nique <SEP> plus <SEP> 2% <SEP> de <SEP> pipéridine <SEP> n-butanol
<tb>  RF <SEP> RF
<tb>  Nouvel <SEP> antibiotique <SEP> 0,0-0,5 <SEP> 0,0-0,1.
<tb>  Chlorotétracycline <SEP> 0,0-l,0 <SEP> 0,0-0,5
<tb>  Chloramphénicol <SEP> -1,0 <SEP> 1,0
<tb>  Streptomycine <SEP> A <SEP> -0,2 <SEP> 0,0
<tb>  Str:

  eptothricine <SEP> <B>-0,03</B> <SEP> 0,0       La culture du micro-organisme s'effectue  de préférence à une     température    comprise  entre 24 et 30  C pendant une période com  prise entre 2 jours et une semaine,     sous    agi  tation, dans un milieu comprenant: une  source d'hydrates de carbone, telle que des  sucres, de l'amidon ou de la glycérine; une  source d'azote organique, telle que de la farine  de soja, du gluten de blé, de la farine de  graines de coton, de la lactalbumine, un pro  duit de digestion enzymatique de caséine, une       tryptone    (peptone produite par l'action de la       trypsine)    ;

   une substance favorisant la crois  sance du     micro-organisme,    telle que 1a partie  hydrosoluble du résidu de distillation de  l'alcool d'un mélange de fermentation au de  l'extrait de     levure;        des    sels minéraux, tels que  du chlorure de sodium, du phosphate de po  tassium, du sulfate de magnésium, du nitrate  de sodium; un agent tampon, tel que du car  bonate de calcium et en outre une huile végé  tale.

   Quand la     croissance    est achevée, le mycé  lium est séparé du bouillon de culture qui  contient l'antibiotique et celui-ci peut être       isolé    de ce bouillon par extraction à l'aide de       solvants    organiques à un pli convenable ou  par adsorption de l'antibiotique sur du char  bon actif et     élution    à l'aide de     solvants    orga  niques ou d'eau à un pH approprié, ou par  d'autres moyens connus.  



  On peut en particulier exécuter le pro  cédé     comme    suit:      Pour la culture initiale     (inoculum)    du  micro-organisme, on utilise un milieu solide  tel qu'un bouillon à base d'extrait de     bceuf     et de lactose ou     l'agar        d'Fmerson.    Cette cul  ture initiale     est    utilisée pour inoculer des       flacons    secoués ou des cuves     d'inoculiun    sub  mergé.

   Dans un flacon secoué, la, croissance  atteint généralement son     maximiun    après  quatre jours alors que dans les cuves     d'ino-          culain        submergé,    la croissance la     plats    favo  rable est atteinte en deux jours.     Depuis    la  cuve     d'inoculum,    le bouillon contenant le  micro-organisme     est    transféré dans l'appareil  de fermentation, dans des conditions absolu  ment aseptiques et la croissance continue pen  dant une nouvelle période de deux jours.

    Pendant tout. le temps, on assure l'aération  de la cuve en y insufflant de l'air stérile par  un pulvérisateur d'air; avec un débit. de 0,5  à 2 volumes d'air par volume de     bouillon    et  par minute. Si l'on rencontre des difficultés  pour     éviter    la formation de     mousse        dans    la.  cuve, on peut ajouter des produits      anti-          mousse ,    tels que des huiles végétales ou ani  males.    La séparation du mycélium d'avec le  bouillon de fermentation se fait avantageuse  ment en acidifiant d'abord le mélange, de  préférence jusqu'à un pH inférieur à 4, après  quoi on sépare le mycélium par filtration.

   Si  ce réglage du pH n'a pas lieu, une     partie    de  l'antibiotique reste sur le mycélium.    L'antibiotique peut être isolé en traitant  le bouillon de fermentation filtré     avec,    du  charbon actif à     im    pH voisin de la neutra  lité. L'antibiotique ainsi adsorbé peut être       élué    à l'aide d'eau saturée d'un alcool par  tiellement miscible à l'eau, tel que le     butanol,     le pH étant réglé à 1,5 par un acide, tel que  l'acide chlorhydrique. Après la séparation par  filtration de l'adsorbant     épuisé,    le pH du  filtrat peut être réglé à 6-9 et l'antibiotique  solide peut être récupéré par séchage après  congélation et dans le vide.

   L'antibiotique  peut aussi être extrait du filtrat avec du     bu-          tanol,    après avoir réglé le pH à environ 9.       L'extrait        butanolique    peut     ensuite    être con-    centré     ou.    peut, à son tour, être     soumis    à     une     extraction par un acide aqueux,     tes    que  l'acide chlorhydrique dilué.

       Après    séparation  de la phase     aqueuse,    le     pA    de celle-ci peut  être réglé à 6-9 par addition d'une base ou  par traitement avec un échangeur d'anions,  tel que le produit marque      Amberlite        IR-4      (Robin  &      IIaas).       L'antibiotique peut     aussi    être isolé     dii     bouillon séparé du mycélium par     éxtraction     avec certains     solvants    tel que le     butanol,     l'alcool     amylique    et le produit marque        Phenyleellosolve ,

      de préférence à un     pA     voisin de 9, ou alors inférieur à 3,5.     Après     l'extraction à un pH de 9 à l'aide de     butanol,     l'extrait est concentré sous vide, puis     extrait     lui-même à l'aide d'un acide dilué; on amène  alors le, pH de la phase aqueuse à une valeur  de 6-7, ce qui fait précipiter l'antibiotique       sous,    forme solide.

   Ce produit,     filtré    et séché,  a une activité d'environ 600     mierogrammes     d'antibiotique pur par     milligramme.    Cette       mesure    de l'activité est basée sur celle de  l'antibiotique pur, à l'état     cristallisé        (admise     par définition comme égale à 1000     micro-          grammes    par milligramme     [mcgjnig])    envers  le     Klebsiella        pneumoniae    (référence     PCI   <B>602)

  </B>  en se servant comme milieu d'un bouillon du       Laboratoire    Biologique de Baltimore, préparé       d'après,    la formule de la Food and     Drug          Administration    pour la .détermination     turbi-          dimétrique    de la streptomycine. La méthode  d'essai     est    celle de J. R.     MeMahon    (J.     Biol.          Chem.    153, 249-258, avril 1944).

   Comparée  à. celle du     chloramphénicol,    l'activité     d'un     milligramme du nouvel antibiotique à l'état  pur et cristallisé équivaut à celle de 3,15 milli  grammes de     chloramphénicol        cristallisé.            L'antibotique    cristallisé peut être obtenu  comme suit à partir du précipité impur  (activité environ 600-650     mcgjmg),    tel qu'il  est obtenu par le processus de récupération  indiqué plus haut.

   On règle le     pg    de la     @ma-          tière    brute,     dans    de l'eau, à 2,8,à l'aide d'un  acide, tel que l'acide chlorhydrique; on filtre  la solution obtenue et on évapore partielle  ment la solution sous     vide.        Les    cristaux sé-      parés sont     filtrés,        lavés    et séchés. Ils présen  tent une activité de 850-900     mcg/mg.     



  On peut     aussi    dissoudre le produit brut.       dans    de l'acide chlorhydrique, à un pH de 2,5,  filtrer cette solution aqueuse et lui ajouter  du chlorure     --de    sodium et un peu plus de  la moitié de son volume d'alcool     butylique.     Après avoir secoué soigneusement le mélange,  le précipité formé est séparé par filtration.  Il est     dissous    à nouveau     dans    du méthanol,       puis    on ajoute un volume réduit d'eau. Après  un repos d'une nuit dans un réfrigérateur,  les cristaux formés sont filtrés,     lavés    et, sé  chés.

   La masse cristalline, obtenue de cette  manière, présente une activité d'environ  860     mcg/mg;    c'est l'antibiotique sous forme  de base libre, mélangé à du chlorure de cal  cium qui provient du bouillon de fermenta  tion.  



  Une autre méthode consiste à soumettre le       produit        brut    à un traitement à contre-courant  par des solvants, comme proposé par     Craig     (J.     Biol.        Chem.    155, 519 [1946] ). Les sol  vants utilisés sont de l'eau, réglée à un     pA     de 3 par de l'acide chlorhydrique, et de  l'alcool butylique. La phase aqueuse des tubes  sélectionnés est évaporée sous vide et l'on  obtient des cristaux blancs, prismatiques, de  l'antibiotique, ayant une activité d'environ  950     mcg/mg.       Le nouvel antibiotique est capable de for  mer divers sels avec des acides     minéraux    ou  organiques.

   Comme acides minéraux, on peut  citer les acides chlorhydrique, sulfurique ou  phosphorique et. comme acides     organiques    les  acides citrique, tartrique,     gluconique,    etc.  Comme le nouvel antibiotique est amphotère,  il est également capable de former des sels  avec différents éléments     métalliques.    Ainsi, les  sels de métaux     alcalins    se forment en     traitant     une suspension aqueuse de l'antibiotique par  un hydroxyde alcalin. Des sels métalliques  solides de l'antibiotique peuvent être prépa  rés par évaporation d'une solution aqueuse  de l'antibiotique additionnée de la base vou  lue, jusqu'au pH convenable. Les deux genres  de sels peuvent être utilisés en thérapeutique.

      Diverses autres méthodes peuvent être  utilisées pour purifier l'antibiotique.     Il    peut  être précipité de ses solutions     aqueuses    à  l'aide d'acides     sulfoniques    organiques,     tels     que les acides     aryl-azo-sulfoniques    de faible pH,  par exemple le colorant Orange II ayant un  pH de 2, ou à l'aide d'acide picrique.

   Les sels  formés peuvent être décomposés par des  réactifs tels que le chlorure de baryum, qui  précipite le sel de baryum du colorant.     L'acti-          vit6    et la couleur .de l'antibiotique impur peu  vent être améliorées en dissolvant le produit  brut dans un acide minéral     dilué    et en ajou  tant du-     fi-naphtalènesulfonate    d'ammonium<B>à</B>  la solution. Le précipité, de couleur sombre.  est filtré et le filtrat est neutralisé pour pré  cipiter l'antibiotique purifié.  



  L'antibiotique déshydraté cristallise sous  diverses formes, suivant le traitement     utilisé     pour sa préparation. Une de ces formes     est.     constituée par des plaques hexagonales  épaisses et une autre par des     aiguilles    épaisses.  Les indices de réfraction de la première de  ces formes, sont:    <I>na</I> = 1,634     -_I-    0,004;     nR    = 1,646     -i_-    0.004;         nï    est plus grand que     l.,700.    Le pouvoir  rotatoire d'une solution du composé     cristallisé     pur,     dans    le méthanol, diminue rapidement  au repos à la température ambiante.

   Si le  pouvoir rotatoire est mesuré immédiatement.  après que la solution a     été    préparée, on       trouve        (.a)"        =        -f-        26         (c        =        0,5        %,).        L'addition     de     chlorure    de calcium à la. solution     méthano-          lique    provoque un renversement du pouvoir  rotatoire,     qui    devient fortement négatif.

   Des       cristaux    mixtes de l'antibiotique et de chlo  rure de calcium ont également un pouvoir  rotatoire fortement, négatif dans le méthanol.  Dans l'acide chlorhydrique N/10, on trouve       (a)D        =        196         (c        =        0,5        %@).     



  Le spectre d'absorption dans l'ultraviolet  de l'antibiotique cristallisé, déterminé à l'aide  d'un spectrophotomètre     Beckman,    modèle D     U,     dans une solution     aqueuse    M/10 de phosphate       monopotassique    (pH 4,5) présente les maxi  mums     suivants:   <B>E l%</B>     m    à 353,2 mu = 301, à  276     m@c    = 322 et à 249     m,u    = 240.

   Déterminé      dans une solution d'acide phosphorique dilué,  ayant un pH de 1,7, le spectre d'absorption       dans        l'ultraviolet    présente les     maximums    sui  vants: E     i        m    à 353     m,@    = 277 et à 268     m,y    - 379.  



  L'antibiotique est un composé amphotère,  contenant     des    groupements faiblement basi  ques et faiblement acides. Il contient les élé  ments carbone; 'hydrogène, azote et oxygène.  Les     analyses    chimiques du produit cristallisé,  exempt de cendres, donnent, en moyenne,       53,05        %        de        carbone,        5,91%        d'hydrogène,          5,64 /o        d'azote        et        35,4%        d'oxygène        (par     différence).

   Il a un point de fusion voisin de  185 , avec une certaine décomposition. Il est  soluble     dans    le méthanol, l'éthanol, l'acétone  et le glycol     propylénique,    dans l'eau jusqu'à  0,25 mg par ml à 25  et insoluble dans l'éther  et l'éther de pétrole.  



  L'antibiotique     cristallisé,    mélangé à de  l'huile minérale, possède     plusieurs        bandes     d'absorption caractéristiques dans l'infrarouge,  notamment aux     fréquences    suivantes. 3580,  3470, 3350, 3060, 1652, 1625, 1592, 1318,  1280, 1242, 1122, 1090, 1076, 1054, 1033,  1007; 938, 863, 840, 775, 708, 679     em-1.       Les propriétés     ci-dessus    montrent que le  nouvel antibiotique préparé selon     l'invention     est nettement différent des antibiotiques con  nus.    Les exemples ci-dessous illustrent l'inven  tion.

   On a utilisé pour tous ces exemples la  souche de     Streptomyces        rimosus        désignée.par     la référence S 3279, telle qu'elle est décrite  au début du présent exposé.    <I>Exemple I:</I>  On prépare un milieu de culture renfer  mant  Farine de soja 10 g  Hydrate de glucose marque      Cerelose     10 g  Partie hydrosoluble du résidu de dis  tillation de l'alcool d'un mélange  de fermentation 0,5 g  Chlorure de sodium 5 g  Eau distillée pour faire _ 1 litre    Le pH est réglé à 7,0 avec de la soude caus  tique et on ajoute 1 g de carbonate de cal  cium par litre.  



  On introduit 500     ml    du     milieu    ci-dessus  dans des flacons de     Fernbach    qui sont alors  stérilisés à 1211 pendant 30     minutes.    Après  refroidissement, les     flacons    sont inoculés avec  une suspension de la culture de S.

       rimosus     obtenue à la surface de plaques     d'agar    incli  nées à base     d'extrait    de     boeuf    et de lactose  et les flacons sont secoués pendant 4 jours à       28     dans un appareil rotatif ayant un dépla  cement de 5 cm et tournant à 200     t/min.    A la  fin de ce traitement, on constate que le bouil  lon contient 640     UDC/ml    et 400     UCL[ml     d'antibiotique. Le mycélium     est    séparé du  bouillon par     filtration    et le p$ du filtrat est  réglé à 9,0.

   L'antibiotique est alors     extrait     par du     butanol    normal. Le spectre d'absorp  tion     dans    l'ultraviolet de la solution     butano-          lique    ainsi obtenue présente des maximums  d'absorption à 385 et 270     mcc.            Exemple   <I>II:</I>  On prépare un milieu de culture renfer  mant  Farine de soja 30 g  Amidon. de blé 5 g  Produit de digestion enzyma  tique de     caséine    1 g  Nitrate de sodium 3 g  Eau pour faire 1 litre    Le<B>pH</B> est réglé à-7,0 et on ajoute 5 g de  carbonate de calcium par litre.  



  Deux litres de ce milieu sont-répartis dans  plusieurs     flacons    en verre ayant une capacité  de 3,5 litres, munis d'agitateurs et d'atomi  seurs pour l'introduction d'air     stérile.    L'appa  reil et le milieu sont     stérilisés    à 121  pendant.       une    heure. Après     refroidissement,    les milieux  de culture sont inoculés avec 50 ml d'une  suspension de S.     rimosus.    Après agitation pen  dant 40 heures à 1800     tlmin.,    le bouillon     coi-          tient    1600     UCL/ml    et 1280-2560     UDCiml     d'antibiotique.  



  Sept litres du     bouillon    ainsi obtenu sont  séparés d'avec le mycélium par     filtration,    et      le pH     est    réglé à 7,0. On ajoute 70 g de char  bon actif marque      Norit    A  et. l'ensemble est  agité à la température ambiante pendant une  heure.

   Le bouillon épuisé est séparé par fil  tration du     charbon    qui contient l'antibiotique  et le gâteau est lavé à l'eau     distillée.    L'anti  biotique est     élué    à l'aide     d'un        litre    d'eau  distillée saturée avec du     butanol    normal et  dont le pH est réglé à 1,5 à l'aide d'acide  chlorhydrique. Le pH de     l'éluat    est réglé à  9,0 et il est extrait avec un litre de     n-          butanol.    L'extrait     butanolique    est à. son tour  extrait par de l'acide chlorhydrique N/10.

   La  couche aqueuse et acide est séparée du     buta-          nol    et son pH est ramené à 5,0 par agitation  avec un échangeur d'ions résineux marque        Amberlite        IR-4     qui est séparé d'avec la  solution     d'antibiotique    par filtration. Cette  solution, congelée et séchée, donne 2,0 g d'une  poudre d'un brun jaunâtre qui présente une       activité    de 255     UCL/mg    et de 2000 unités de       streptomycine    par     mg.     



  Selon une autre méthode de séparation de  l'antibiotique, on règle à 2,5 le pH de 8 litres  d'un bouillon de fermentation, par addition  d'acide sulfurique et on filtre le mycélium.  Le filtrat contient 2 400 000     mcg    de l'anti  biotique. Son pH est réglé à 9,0 et il est  extrait par portions avec trois litres de     buta-          nol;

      "     les         traits    mélangés contiennent  <B>1600</B> 000     mcg    de     l'antibiotique,        ils,    sont con  centrés     sous    vide jusqu'à 650 ml, cette solu  tion contenant     alors    2400     mcg/ml    de l'anti  biotique. Ce concentrai     butanolique    est extrait.

    avec un litre d'acide chlorhydrique N;10 en       plusieurs    fois, puis on règle le pH des phases       aqueuses        mélangées    à 7,5 avec de la soude       caustique        diluée.    Le produit précipité est  filtré et séché. Il pèse 1,69 g et a une acti  vité de 625     mcg/mg.     



       Exemple   <I>III:</I>  On prépare pour     l'inoculum    le milieu de  culture     suivant:     Produit de digestion enzyma  tique de caséine<B>11/0</B>  Hydrate de glucose marque        Cerelose    <B>1</B> 0/0    Extrait de levure     0,50/0     Chlorure .de sodium     0,51/0     Carbonate de calcium     0,10/m     On complète avec de l'eau du robinet pour  faire un litre et on règle le pH à 6,

  7 avec       KOH.    Environ 875 litres de ce milieu sont       introduits        dans        une    cuve     d'inoculum    de  1400 litres et chauffés à 121  pendant une  heure. Après     refroidissement,    à 28 , le milieu  est inoculé avec un litre d'une suspension de  S.     rimosus.    On introduit dans la cuve de l'air  stérile, sous agitation pendant 25 heures, puis  on en utilise le contenu pour inoculer le mi  lieu de l'appareil de fermentation.  



  Ce milieu de fermentation est constitué  comme     suit:     Farine de soja 3 0/0  Amidon de blé 0,5-     o/m     Produit de digestion enzyma  tique de caséine     0,11/ &           Nitrate        de        sodium        0,3%     Carbonate de calcium 0,5     0/m          Huile        végétale        0,4%       On complète avec de l'eau du robinet, on  règle le pH à 7,0 et on stérilise à une tempé  rature de 121  pendant une heure.  



  Après refroidissement à 28 , le milieu de  fermentation est inoculé avec le contenu de  la cuve     d'inoeuiurri.    Après 47 heures, le pH       s'est    élevé- à 8;0. Le bouillon obtenu a une  activité de 335     UCL/mg    et de 280     UDC/ml.     



  La composition du milieu de culture peut       évidemment    être modifiée, par exemple en  remplaçant la farine de soja par de la  lactalbumine, de la farine de graine de lin ou  de coton, de la farine d'arachides, des pro  téines de céréales, du gluten de blé, etc. De  même, les     conditions    de fermentation, telles  que l'agitation, le degré d'aération, la tempé  rature, etc., peuvent être modifiées d'une ma  nière considérable. On peut en outre avoir  recours à     d'autres    méthodes pour récupérer,  concentrer et purifier l'antibiotique, par  exemple adsorber l'antibiotique directement à  partir du     bouillon    de fermentation sur des  échangeurs d'ions résineux.

        Le nouvel antibiotique est actif in vivo       aussi    bien qu'in vitro,     notamment    contre les       infections    expérimentales des souris,     dues    au       Streptococcus        hemolyticus,    au D.     pneumoniae,     au K.     pneumoniae,    au S.     typhosa    et à d'autres  organismes.

   Le nouvel antibiotique possède  une activité antirachitique     marquée    pour     l'em-          bryon    de poulet, et à des concentrations éle  vées, il empêche l'infection de cet embryon par  une souche     PR8    du     virus        d'influenza    A.  



  L'antibiotique a donc une grande valeur  pour le traitement de différentes     infections     des hommes et     des        animaux.    Il peut être  appliqué par injection parentérale, par voie  buccale ou localement.

Claims (1)

1. REVENDICATION: Procédé de préparation d'une nouvelle substance antibiotique, caractérisé en ce que le micro-organisme Streptomyces rimosus est cultivé dans un milieu nutritif aqueux, dans des conditions d'aérobie et en profondeur. La nouvelle substance antibiotique ainsi obtenue est amphotère. Elle cristallise soit sous forme de plaques hexagonales épaisses, soit sous forme d'aiguilles épaisses.

   Dans de l'huile minérale, elle présente des band d'absorption caractéristiques dans l'infra rouge aux fréquences suivantes: 3580, 3470, 3350, 3060, 1652, 1625, 1592, 1318, 1280, 1242, 1122, 1090, 1076, 1054, 1033, 1007, 938, 863, 840, 775, 708 et 679 cm-1. SOUS-REVENDICATIONS 1. Procédé selon la revendication, caracté- ris6 en ce que le milieu nutritif contient un hydrate de carbone soluble dans l'eau. 2.

   Procédé selon la sous-revendication 1, caractérisé en ce que le milieu nutritif con tient en outre une substance favorisant la croissance du Streptomyces rimosus, la cul ture s'effectuant à une température comprise entre 24 et 30 C pendant une période com prise entre deux jours et une semaine. 3. Procédé selon la revendication; carac térisé par le fait qu'on isole l'antibiotique par adsorption sur du charbon actif. 4. Procédé selon la revendication, caracté risé par le fait qu'on isole l'antibiotique par extraction avec un solvant organique non miscible à l'eau, en opérant dans des condi tions alcalines. 5.

   Procédé selon la revendication, carac térisé par le fait qu'on isole l'antibiotique par extraction avec un solvant non miscible à l'eau, en opérant dans des conditions acides.