<Desc/Clms Page number 1>
Procède de production de la tétraoyoline.
La présent invention concerne un procédé de production de la tétracycline et plus particulièrement un nouveau procédé de fermentation pour la production de la tétracycline avec un rendement élevé au moyen du mioroorganisme Streptomyces sp:1616, déposé près de l'Amerioan Type Culture Collection, Washington, sous le numéro 15299. Streptomyces sp. 1616 a été trouvé dans le sol en Somma Lombardo, Italie et diffère des autres mioroorganismes décrits dans la littérature comme étant utiles pour la production de tétracycline. Il permet la production de la tétracycline
<Desc/Clms Page number 2>
également en présence d'ions chlorure.
En outre, il a été trouvé que'la présence de carbonate de strontium dans le milieu de fermentation rend notablement meilleur le rendement de tétracycline dans les procédés de fermentation avec Streptomyces sp.1616 et qu'en remplaçant un certain pour- oentage de chlorure d'ammonium par du phosphate d'ammonium, la quantité d'azote ammonique' reste inaltérée dans le milieu. et. le métabolisme'des carbohydrates est actie avec un accroissement du rendement allant de 10% à 20%.
Les caractéristiques morphologiques, physiologiques, bio- chimiques et culturelles principales du Streptomyces sp. 1616 sont les suivantes : ,
1) Mycélium végétatif Incolore jusqu'à. 24 heures et ensuite rouge clair avec différentes nuances rouge selon les divers milieux de culture.
2) Mycélium aérien,; si présent, il est blanc et ensuite gris et brun.
3) Spores si présente$, elles sont brun-gris aveo une surface sèche sans condensation d'eau.
4) La température pour la croissance est comprise entre 22 C et
35 C La température optimale est 26-28 C
Son aspect dans les divers milieux de culture est le suivant !
Glucose-peptone-agar : Pigment rouge-brun, mycélium végétatif rouge- orange,mycélium aérien blanc à rosé.
Tasseaux de pommes de terre Mycélium végétatif brun foncé, mycélium aérien rosé,
Clucose-asparagine-agar: Croissance médiocre, mycélium végétatif gris-jaune, pas de mycélium aérien.
<Desc/Clms Page number 3>
EMI3.1
Czapek4Dox-a.ger synthétique pas de croissance, Agar nut1tif ; Croissance médiocre, colonies brunes abondantes, Olucosa-extàit de viande-agar ! Croissance assez bonne, mycélium végétatif brun clair., Pommes ie terre-agar : Croissance médiocre, mycélium végétatif rouge-brun, pas de mycélium aérien.
Le microorganisme Streptomyces psammoticus a été décrit par Virgilio, Hennegeller (Il Farmaco, Ed. Se, Vol.3. p. 164-171,1960)
EMI3.2
et dans le brevet anglais 775.139, comme étant un miaroorzanieine apte à produire la tétracycline en présence d'ions chlorure.
Nous avons comparé le Streptomyces sp,1616 avec les caracté- ristiques morphologiques et culturelles du Streptomyces psammoticus,' décrites dans la littérature, et nous avons établi que les deux souches sont différentes.
TABLEAU I,,
EMI3.3
¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯!¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯L-.¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯##¯¯¯¯¯¯¯ Str.sammrticus 8tr, sp. 1 16 Sporophores (+) Treetus flexibilis retinaculum apertum
EMI3.4
<tb>
<tb> Couleur <SEP> des <SEP> spores <SEP> (+) <SEP> olive-buffle <SEP> rouge-gris
<tb>
EMI3.5
---.-¯¯¯.--¯¯¯---..-.-¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯¯--¯¯¯¯¯¯¯------------------.---------
EMI3.6
<tb>
<tb> Sporophores <SEP> (++) <SEP> sympodialis <SEP> à <SEP> rami- <SEP> monopodialis <SEP> ramifie
<tb> fications
<tb> flexueux <SEP> spirales <SEP> ouvertes
<tb> Couleur <SEP> des <SEP> spores <SEP> (++) <SEP> grisâtre <SEP> oinnamoneux-cendreux.
<tb>
(+) Pridham et al. - Applied Microbiology, Vol. 6,1. 52-79,1958
EMI3.7
(++) Ettlinger et al, - Archiv Mikrobiologie Vol.31, PP.326-358,
1958.
Après la première observation, nous avons comparé notre souche Streptomyces sp.1616 également aveo toutes les souches que pro-
EMI3.8
duisent la ohlortetraoyoline (et tétracycline dans milieux dé- pourvus dlions chlorure et en présence d'inhibiteurs de chloruration).
<Desc/Clms Page number 4>
Les souches de ce groupe sont les suivantes
EMI4.1
Streptomyces aureofaciens ; décrit par Duggar s Ann,riT.', Aaa.,Sa.w
Vole 51, p.177, 1958; et dans le brevet américain n 2.482.055.
Streptomyces viridifaoiens :décrit dans le brevet américain n*
2,712. 517.
Streptomyces persimilis : décrit dans le brevet anglais n 799.051.
EMI4.2
Streptomyces RO 1441 décrit dans le brevet anglais ne 778.19.
'Streptomyaes p 4871 : décrit dans le-brevet anglais ne 790.953. Stre tvm ces 1TGC 11652., 116530 et 11654 ; décrits dans le brevet anglais n* 787.895.
Nous avons comparé le Streptomyces aureofaciens ATCC 10762 avec le Streptomyces sp, 1616 par des essais morphologiques, physio.logiques et de culture employés par divers auteurs pour la classi- fication du Streptomyces aureofaciens: les autres souches ont été comparées par les données trouvées dans la littérature.
TABLEAU II, Milieu : Peptone .... 10 g
Glucose .... 20 g
NaCl 5 g
Agar ...18 g
EMI4.3
<tb>
<tb> Souche <SEP> -Croissance <SEP> Mycélium <SEP> végétatif <SEP> Mycélium <SEP> aérien <SEP> Spores
<tb>
EMI4.4
Str,/sp.l616modéréeorange clair à rouge blanc blancr XXx rose r¯v---wwwrwrwwwwrwwwrTwwwr¯rwrrrwr¯-----m--wr--.-----------------rl-w--r Aureofaciens assez topaze à orange- blanc à blanc.
CC¯g762¯¯bonne¯¯¯¯¯.¯¯aune¯¯¯¯¯¯¯¯gris¯¯¯¯¯¯¯XX¯¯¯¯ ATCC 116'32 XX XX XX XX ATOC 1165:; 'Xx XX XX XX ------m ---------- ----m.... --- ---- "0 ATOC 11654 XX XX. XX XX Feofaciens XX XX ' XX XX Viridifë1ns-XX.¯.."---.¯--¯.¯--¯.-.-------fX---------..XX.-R -I4I-------XX-----------¯.XX-----------¯.¯.-XX----------Xf-RoIlHIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII P4871 raR 7±x rwrwwwwrwrwrw K7C XX XX Përs1ml!le---XX-.¯¯..-----¯..¯.¯------------.-fX----------iX--.
-----------3------------.3---.-¯..---------.3------..¯--M555?aoIëns****'**''***XX''***'*"***"*****XX*'**'****"JS*"*'' XX- non décrit en' littérature XXX= pas de croissance.
<Desc/Clms Page number 5>
EMI5.1
TABLEAU III.
EMI5.2
Oéla t1ne-D1f'co : :'1. 1
EMI5.3
<tb>
<tb>
<tb>
EMI5.4
Souchè Str, sp. 1616 liquéfaction comlte Aureofaciens ATCC 10761 liquéfaction non déterminable wW r¯w¯w¯¯¯¯¯wllwwwwrww¯¯¯w ww¯W ww W !w¯ww¯¯rrrr¯W www¯¯¯rTw¯w..www¯ww 11652 xx -------¯.---------"--t-----------------¯.-------.----.
ATCC 11653 xx - ------ - - Q-+ --"OOW --1+ -OO-- --OOOO----+----- -OO-- -"- --- --ATCC 11654 Il XX . w¯¯...w¯...¯¯ww¯ws..w......w¯w.r,..l..wrw.wwwww¯w..¯¯,.¯rw¯wr..wwr¯n.¯wanrswrwwrm.
EMI5.5
<tb>
<tb> Feofaciens <SEP> XX
<tb>
EMI5.6
-------------------------- ---------------------------------------RO 1!f41 !pas de liquéfaction -------------------------- 1------------1------------------
EMI5.7
<tb>
<tb> P <SEP> 4871 <SEP> pas <SEP> de <SEP> liquéfaction
<tb>
EMI5.8
wrwwr¯rwrrwrwwwrww..,ww,wwrr.wwrmn.,wrrrww..rwwwww¯wwwwwwrmwrwwww¯wqewrww Persimilis iliqéfaotion non déterminable -- W- -++-"++W + W' Ç- W " OO-- - OO OO -OOOOW W0 Vir1ditaciens 1 xx - 0'WOO -WWm - -j- ' -W " W -w,, oo +,oooo w "" Fuscofaaiens Ipae liquéfaction
EMI5.9
XX - non décrit'jans la littérature ' XXX m pas de ooiJance .
<Desc/Clms Page number 6>
TABLEAU IV.
EMI6.1
Glucose-4sparagine-agar ; Glucose 10 g
Asparagine 0,5 g
K2HPO4 . 0,5 g
Extrait de viande 2 g
Agar 18 g H20 distillée à 1000 cm3 pH= 6,6
EMI6.2
<tb>
<tb> Souche <SEP> Croissance <SEP> Mycélium <SEP> végétatif <SEP> Mycélium <SEP> aérien <SEP> Spores
<tb> Str.1616 <SEP> bonne <SEP> .orange <SEP> clair <SEP> avec <SEP> gris <SEP> rosé <SEP> XXX
<tb> pois <SEP> rouges
<tb>
EMI6.3
---------- -------------------- ------------------------------
EMI6.4
<tb>
<tb> Aureofaciens <SEP> ATCC <SEP> abondante <SEP> incolore <SEP> blanc <SEP> à <SEP> gris <SEP> gris-souris
<tb> 107262 <SEP> clair
<tb> ATCC <SEP> 11652 <SEP> assez <SEP> bonne <SEP> buffle <SEP> à <SEP> cinname- <SEP> blanc <SEP> à <SEP> gris <SEP> blanc <SEP> à <SEP> brun
<tb> buffle <SEP> clair <SEP>
gris <SEP> à <SEP> grissouris
<tb> ATCC <SEP> 11653 <SEP> modérée <SEP> orange <SEP> blanc <SEP> blanc <SEP> à
<tb> brun <SEP> clair
<tb> ATCC <SEP> 11654 <SEP> modérée <SEP> à <SEP> incolore <SEP> à <SEP> brun <SEP> XXX <SEP> XXX
<tb> -bonne <SEP> foncé
<tb> Feofaciens <SEP> rare <SEP> jaune <SEP> clair <SEP> à <SEP> brun <SEP> blanc <SEP> à <SEP> jaune- <SEP> très <SEP> rare,
<tb> clair <SEP> clair <SEP> brun <SEP> clair
<tb> à <SEP> brun <SEP> foncé
<tb> Viridifa- <SEP> bonne <SEP> gris <SEP> clair <SEP> gris <SEP> clair
<tb> oiens
<tb> RO <SEP> 1441 <SEP> 3 <SEP> jayne <SEP> à <SEP> jaune <SEP> brun <SEP> blanc <SEP> gris
<tb> P <SEP> 4871 <SEP> bonne <SEP> abondant <SEP> blanc <SEP> à <SEP> gris <SEP> gris
<tb> foncé
<tb> Persimilis <SEP> X <SEP> jaune <SEP> à <SEP> brun <SEP> clair <SEP> blanc <SEP> à <SEP> gris <SEP> gris <SEP> foncé
<tb> clair
<tb> Fuscofa- <SEP> rare <SEP> à <SEP> mo- <SEP> pourpre-brun <SEP> XXX <SEP> XXX
<tb> ciens <SEP> dérée
<tb>
X = non décrit par les Auteurs XXX = pas de croissance,
<Desc/Clms Page number 7>
TABLEAU V.
EMI7.1
Aga Nutritif : Peptope 5 g .
Extrait de viande 5 g NaCl 5 g Agar H2O distillée à 1000 cm3 pH =7. 2-7,4
EMI7.2
<tb>
<tb> Souche <SEP> Croissance <SEP> Mycélium <SEP> végétatif <SEP> Mycélium <SEP> aérien <SEP> Spores
<tb> Str, <SEP> 16126 <SEP> rare <SEP> brun- <SEP> XXX <SEP> XXX
<tb> Aureofaci- <SEP> modérée <SEP> topaze <SEP> blanc <SEP> à <SEP> grisens <SEP> ATCC <SEP> blanc <SEP> X
<tb> 10762
<tb>
EMI7.3
ATCC 11652 à mo- blanc crème XXX XXX ##----. -ûerce-.-#-.-<#.-#.--#--.-<-#-.--.-<-.-<-.-#--- -...-.-- #--#-<-#-
EMI7.4
<tb>
<tb> ATCC <SEP> 11653 <SEP> rare <SEP> à <SEP> mo- <SEP> buffle <SEP> XXX <SEP> XXX
<tb> dérée
<tb>
EMI7.5
wprto---r---rrrrwrr.-rwrm-rr--w,-----r---------r .--r-----r----------r-----------wr--ATCC 11654 rare,a mo- blanc crème Xxi XXX .rrrrr.,rrrr ,mr"u,""re rrrrr rrmwr¯ranrr'wrnwrrrrfnrr .
W " '
EMI7.6
<tb>
<tb> Feoaciens
<tb> ou <SEP> psammoticus <SEP> XX <SEP> XX <SEP> XX <SEP> XX
<tb>
EMI7.7
------ -r-rrrr--rr ---rwr.----------w¯r-----r---------------- ----------------RO 141 abondante ' brun blanc neige X ---.--rr-rrrr¯¯r--r---- ---------------u--.-r----------.w-.¯--r.rr-rrrrr--rr-------
EMI7.8
<tb>
<tb> P <SEP> 4871 <SEP> abondante <SEP> et <SEP> X <SEP> XX <SEP> X
<tb> caractéristique
<tb>
EMI7.9
--r--r--r rR------------RrnrrrwY--------tr------------------ rrrrwrrr¯rrnrrwr¯ Viridifa- bonne tan z.
brun clair w X X .Q*en--- -------.---------------------¯.¯------------- --------.--------
EMI7.10
<tb>
<tb> Fuscofa- <SEP> rare <SEP> à <SEP> mode- <SEP> XX <SEP> XX <SEP> XX
<tb> ciens <SEP> dérée
<tb>
EMI7.11
rrrrw-r¯rr--rrrrwrr"'ww/mr-rrrlrr--------------w--y-rrr-.----.---r----r----¯---r-----
EMI7.12
<tb>
<tb> Persimilis <SEP> rare <SEP> à <SEP> mode- <SEP> brun <SEP> blanc <SEP> neige
<tb> rée
<tb>
X = non décrit par les Auteurs XX = non décrit en littérature XXX = pas de croissance.
<Desc/Clms Page number 8>
TABLEAU VI Czapel-Dox-agar synthétique Saccharose " ' 30 g
NaNo3 2' g
K2HPO4 1 g
MgSO4.7H2O 0,5 g
KCL 0,5 g peso 4 0,01 g Agar 20 g Eau distillée à 1000 on? pH- 7.0-7.3
EMI8.1
Souche Croissance Mycélium'végétatif Mycélium aérien' Spores Str. 1616 t,7::XXX;. ';[1 ..la. (.XXX XXX XXX -----------1--------- ----------------------- rwrwrthlrnrwrprrwrwywW rr wrrrrwwrrrWwpr
EMI8.2
<tb>
<tb> Aureofa- <SEP> abondante <SEP> blanc <SEP> blanc <SEP> à <SEP> gris <SEP> clair <SEP> Piping <SEP> Rock
<tb>
EMI8.3
ciensATCC 13A2 (+) à 10762 , ¯ ¯ ------------¯.-:2B!.
ATCC 11652 rare XX XXX XXX ylrVwwWrm4¯ t,.ywisywrwwrT wwwwwwl¯wwwww rrlYlw vrn1rw.wrrrrwwrr -------------ATCC 11653 rare XX blanc gris-souris -----.-sor.-e,------rrrrwwwwrr----.--------------------wrrr."ww.rwr-----w bzz-
EMI8.4
<tb>
<tb> ATCC <SEP> 11654 <SEP> rare <SEP> XX <SEP> pas <SEP> de <SEP> croissance <SEP> XXX
<tb> sur <SEP> la <SEP> surface
<tb>
EMI8.5
.nrwwwrr..w wwm..rwwrwrr rmrnrrn-rw-r------------- rwwwrw.rmrrr,rwrrurrwSr bzz-
EMI8.6
<tb>
<tb> Feofaciens
<tb> ou <SEP> psammo- <SEP> X <SEP> léger <SEP> XXX <SEP> XXX
<tb> ficus
<tb>
EMI8.7
---rrnrrY.-----------wrw-r .rwwmrrmw----.--wy-----r---- rr.wrrrw..r¯o,.ww...ww wrwr¯w.,wwwwrww
EMI8.8
<tb>
<tb> RO <SEP> 144 <SEP> rare <SEP> XX <SEP> XXX <SEP> XXX
<tb>
EMI8.9
P 4871 trës rare XXX XXX XXX rrrr.wr.wwr rrrrwwwrrnrrr r¯rwwrwrfrwwrwrwrwr.w rww.wwwwrrirrwmwrwrrr .rrr,rwrwwrrwwr Perr.;
1milis inadérée à XX gris-souris bonne bonne ------.---.----r-,-.-rrrwwwr-r,rr-www.ewrrwrwarwwwrrwr.--------n-------------------w-w-----------
EMI8.10
<tb>
<tb> Viridifaciens <SEP> rare <SEP> XX <SEP> X <SEP> X
<tb>
EMI8.11
bzz- ----------- 1-- ----------------- ------------------- L------------- X = non décrit par les Auteurs XX =.non décrit en littérature XXx pas de croissance
EMI8.12
(+) Maerz A., Paul M.R. - "A Diotionary of coloris" " McOraw Hill (1950)
<Desc/Clms Page number 9>
TABLEAU VII
EMI9.1
alucose-Peptone-"agar ; .Glucose 30 g Peptone 10 g .
Agar 20 g Eau distillée à 1000 cm3 pH = 5,9
EMI9.2
<tb>
<tb> Souche <SEP> Croissance <SEP> Mycélium <SEP> végétatif <SEP> Mycélium <SEP> aérien <SEP> Spores <SEP> - <SEP>
<tb> Str. <SEP> 1616 <SEP> modérée <SEP> orange <SEP> clair <SEP> à <SEP> blano <SEP> à <SEP> gris- <SEP> XXX
<tb> rouge <SEP> blanc <SEP> à <SEP> gris-rose
<tb>
EMI9.3
-----.-- wwwwuw",
wwwrw-w¯¯www--.--¯ww------------------------www----w---w----r
EMI9.4
<tb>
<tb> Aureofaciens <SEP> ATCC <SEP> bonne <SEP> jaune <SEP> ocre <SEP> blanc <SEP> XXX
<tb> 10762
<tb>
EMI9.5
--¯-------- -------¯----¯----¯..¯---------- ------------------- -----.------¯ ATCC 11652 XX XX XX XX ------ 1----------------- -------¯-------------------------------¯--¯----------ATCC l165 XX XX XX XX wwwwwwwwwww wwwwwwwwwwww www¯wwwww-------wr-w-w------------¯------¯¯w-------w----ATCC 11654 XX XX XX XX --- --- ffl --- ----¯..¯¯....-..-..----..
---..---..----¯--1"'...-." wwww www wwwwwww
EMI9.6
<tb>
<tb> Feofaciens
<tb> ou <SEP> psammo- <SEP> XX <SEP> XX <SEP> xx <SEP> XX
<tb> ticus
<tb>
EMI9.7
wwwrwwwwwww wwwwwwww9lnwww wwlvlwwwwwplwwwwww wwwwwwwwwwwwwlnwwwl ww¯ww¯wwlwlw¯
EMI9.8
<tb>
<tb> Ro <SEP> 1441 <SEP> XX <SEP> Xx <SEP> XX <SEP> XX
<tb>
EMI9.9
--M --- --- m--- rwswwwww,wwwwwWlllywwt wwwrwwwwwwwwwwwwwww www/IwwwwwwwwwW P 4871 xx XX XX XXX ----.----- wewwwwwwllwww wwwwwwwwsw(wwwwwwwww wwwwwwwwwwwwwwwwww www¯ewwwwwww Persimilis XX XX XX XX ' ---------w ----.--. wlwwnlww¯".,.yw,W -w------ww--ww--ww---w-w--w---.-------
EMI9.10
<tb>
<tb> Fuscoffaciens <SEP> XX <SEP> XX <SEP> XX <SEP> XX
<tb>
XX = non décrit en littérature XXX pas de croissance
<Desc/Clms Page number 10>
TABLEAU VIII.
Agar-Amidon : Amidon soluble 10 g
NaNO3 1 g
K2HPO4 0,3 g
NaCl 0,5 g
MgCO3 g
Agar 15
Eau distillée à 1000 cm3
EMI10.1
<tb>
<tb> Souche <SEP> ' <SEP> Croissance <SEP> Mycélium <SEP> végétatif <SEP> Mycélium <SEP> aérien <SEP> Spores
<tb>
EMI10.2
Str. 1616 très rare incolore ---------r ---------- XXX XXX.
EMI10.3
<tb>
<tb>
Aureôfaciens <SEP> ATCC <SEP> abondante <SEP> brun <SEP> clair <SEP> à <SEP> Piping <SEP> blanc <SEP> à <SEP> gris <SEP> 'gris-souris
<tb> 10762 <SEP> Rock <SEP> 13A2 <SEP> (+) <SEP> ,
<tb>
EMI10.4
ww¯.wwwwwww wwmwwuwwwwww wwwwww¯wrwwwwwwwwww w.w.wwawwr.wwwmwwwrw ww¯wwwww..wwwwwwr
EMI10.5
<tb>
<tb> ATCC <SEP> 11652 <SEP> Modérée <SEP> X <SEP> X <SEP> bonne <SEP> sporulation <SEP> blanche
<tb> à <SEP> gris-souris
<tb> ,
<SEP> à <SEP> noire
<tb>
EMI10.6
wwwwwww¯ww-wewwwwwwwwww wswwwwwr----wr-w-r---¯ww---w-----w--ww mrw-w---------r-r-
EMI10.7
<tb>
<tb> ATCC <SEP> 11653 <SEP> Modérée <SEP> blanc <SEP> à <SEP> gris-sou- <SEP> blanc <SEP> gris-souris
<tb> ris <SEP> clair <SEP> à <SEP> foncé
<tb>
EMI10.8
r...ewwwwwww wwrswwwrw.rw wwwwwwwwwwwwwwwwwwr wrwwwwrwwwrrwrwww wrwwwwwwwmnrtwmw
EMI10.9
<tb>
<tb> ATCC <SEP> 11654 <SEP> rare <SEP> à <SEP> mo- <SEP> blanc <SEP> aux <SEP> bords, <SEP> XXX <SEP> XXX
<tb> dérée <SEP> ensuite <SEP> jaune-gris
<tb> brun-gris
<tb>
EMI10.10
wwewwwwronw-wwrrwwwwrsww wwawrrw¯wnr-wwwwamwW-wwwwrwrrwr¯wwlpllvrw wwmwrw-ww-wr---r Feofaciens très rare incolore XXX XXX ..w.rwee...pw.www wwww¯ww.w¯ww ¯w¯wwwrryw..,
4rwAlW w¯w wwwswrwwwwW wwwwrw rwwtAww¯waWrwwwa RO 1441 X très lent et rare X 'J X ¯w.wmww.nwww wwwWwwwwwww ¯w.wwWwwwrwrwrrrwwww wrwlrwwwwwwnuwwww rwwwwwrwwwhrwwwr P 4871 XX XX XX XX ......,o¯.¯.,..¯ ..ww...wweww¯¯-wwww.....wwwww¯¯¯w..m,w¯-wwwwww¯r.w.,iwwww¯s wwwwwww¯wwwwww Persimilis très rare X XI X .xww...www¯ww ...,¯..wwwwwwww waww.w¯w¯w.¯wwww.wwwwww wrwr¯www.rw.",wwwwww ww¯www.r¯mw.wmwww
EMI10.11
<tb>
<tb> Viridifaciens <SEP> XX <SEP> XX <SEP> XX <SEP> XX <SEP> . <SEP>
<tb>
EMI10.12
----------.------¯¯ww--¯-w¯w¯wwww----ew¯r--wr----¯---ww--.wwwwwww-w--------..--w--.rx
EMI10.13
<tb>
<tb> Fuscofa- <SEP> rare <SEP> à <SEP> modé <SEP> encre <SEP> bleue <SEP> clair <SEP> XXX <SEP> XXX
<tb> ciens
<tb>
EMI10.14
--------¯w¯w¯¯ww¯¯-,¯¯¯¯w¯--¯---,.------------¯¯ww¯w¯--rw...wm,-wlw---.wwwww-ww-w-¯w---w---w------¯ X= non décrit par les Auteurs XX = non décrit en littérature XXX = pas de croissance (+) Maezr A., Paul M.R. -33A Diotionary of Colors" -MoGraw Hill (1950)
<Desc/Clms Page number 11>
TABLEAU IX.
''Pomme de terre-Agar : Pomme de terre à 200 g
Glucose 20 g
Agar 20 g
EMI11.1
<tb>
<tb> Souche <SEP> croissance <SEP> Mycélium <SEP> végétatif <SEP> Mycélium <SEP> aérien <SEP> Spores
<tb> =
<tb> Str. <SEP> 1616 <SEP> rare <SEP> orange <SEP> à <SEP> rouge- <SEP> XXX <SEP> XXX
<tb> orange
<tb>
EMI11.2
--",r.w.r,wrw.¯."---.-----w.-ww.-------------...--.----¯r¯w¯- w.¯n-.----.w-------¯o,w¯,..w.o,..,
EMI11.3
<tb>
<tb> Aurecfaciens
<tb> ATCC <SEP> 10762 <SEP> abondante <SEP> incolore <SEP> blanc <SEP> gris-souris
<tb>
EMI11.4
-.-------wwww ---n..."w,¯wwrw--.---,s¯rwwww--.-------.------------r-----w-------------ww ATCC 11652 XX xX XX XX 4f111W ------III-.o1w111r111-rIr-111-1-11--r--wwlW-wr-W-111-rrllfwr!-.1----------¯r------------y--ATCC 11653 XX XX XX xx .Ywy¯w¯wrrry.
-----.---- w1¯!¯rIn111w1wwYrr¯.f ¯11r.1¯wwwr¯wwW w1r¯rr ypy¯¯wrlw.rr¯¯ ATCC 11654 XX xx xx xx v-¯wwmwr--------.-----,--.--rs.-,---wrr¯rr--¯---------w------------.-¯¯r---------------r
EMI11.5
<tb>
<tb> Feofaciens <SEP> très <SEP> rare <SEP> brun <SEP> X <SEP> très <SEP> rares
<tb> ou <SEP> psammoti- <SEP> brun
<tb> eus
<tb>
EMI11.6
¯¯¯,.¯,.¯¯¯w.. r¯¯..¯..¯¯¯¯ ------------------¯-4-W--------.--- ---------------RO 1441 XX XX XX XX ----------- --a,-------.----,---------------m-¯--------------- z P 4871 XX 3EX XX XX ----------- bzz --------- --¯¯---- ¯¯-------------------- ---------------Persimilis XX XX XX XX rmr¯a.rw¯ww rwwrrenwr.wr¯ ¯r.".ru,wr.¯rwmrr¯m,¯r¯ rm.w"¯¯wr.,m.wrrw w¯..m¯¯,a..¯r¯¯.,..
EMI11.7
<tb>
<tb> Viridifa- <SEP> surface <SEP> éle- <SEP> écru-beige' <SEP> X <SEP> X
<tb> ciens <SEP> vée <SEP> à <SEP> noeuds
<tb>
EMI11.8
-------.--rw...---..----...---..w¯r-'....¯..--ww¯..,.... wrrnrtrrnrwn.r.ww.r.--ww-.-------ww---w
EMI11.9
<tb>
<tb> Fuscofa- <SEP> bonne <SEP> gris-olive <SEP> et <SEP> jaune <SEP> XXX <SEP> XXX
<tb> ciens <SEP> ou <SEP> brun <SEP> clair <SEP> à <SEP> brun
<tb> foncé
<tb>
X = non décrit par les Auteurs XX = non décrit en littérature XXX = pas de croissance.
<Desc/Clms Page number 12>
TABLEAU X.
Tasseaux de pomme de terre.
EMI12.1
<tb>
<tb>
Souche <SEP> Croissance <SEP> Mycélium <SEP> végétatif <SEP> Mycélium <SEP> aérien <SEP> Spores
<tb> Str. <SEP> 1616 <SEP> bonne <SEP> Brigand <SEP> Red <SEP> 2J11 <SEP> blanc <SEP> à <SEP> gris <SEP> gris <SEP> cendre
<tb> (+) <SEP> rosé <SEP> à <SEP> gris
<tb> cendre
<tb>
EMI12.2
-..-------"wrwr-wwrmwww--w--w--,-w.-w.newwrr.-w-- --"------"---- ------------ Aureofa- rare jaune-brûn brun aux
EMI12.3
<tb>
<tb> Aureofa- <SEP> rare <SEP> 4 <SEP> modé <SEP> Jaune-brun <SEP> à <SEP> brun <SEP> gris-blanc <SEP> aux
<tb> ciens <SEP> bords <SEP> X
<tb> ATCC <SEP> 16762
<tb>
EMI12.4
wrw.wrwwrw¯ ----¯..¯--¯..- ,.. ---¯.., -"."I11III-"'''.''-.'''''..... -- .-- -.-..- ......,.. ---.....--....."".......
EMI12.5
<tb>
<tb>
ATCC <SEP> 11652 <SEP> bonne <SEP> jaune-brun <SEP> clair <SEP> à <SEP> blanc <SEP> blanc <SEP> à <SEP> brun-
<tb> - <SEP> brun <SEP> olive <SEP> foncé <SEP> gris
<tb> ATCC <SEP> 11653 <SEP> modérée <SEP> blanc <SEP> crème <SEP> à <SEP> jaunecrème <SEP> à <SEP> jaune-moutarde <SEP> XXX <SEP> ' <SEP> XXX
<tb>
EMI12.6
..,.rrwwwwwrwr .Tw¯rrwrr¯w rrrwrrwwwrrrrwrwww wwrw wqw,wrwrwHrrrr ryrrrw.w.w.orwrwrrlv ATCC 11654 bonne brun olive .
XXX XXX rwrrwr.r1ww .rrrrrrrrrrw wrrwnwrrrrrwwwrlwwr wrrrrnwrrrwr41w1i1wr -----¯.¯¯..¯----
EMI12.7
<tb>
<tb> Feofaciens
<tb> ou <SEP> psammoficus <SEP> XX <SEP> XX <SEP> XX <SEP> XX
<tb>
EMI12.8
-----------..- -wrwwwrwrwrr-.asrwwrrwr--r-----.rwrw rrwww--w-----------r------r-------rt .RC 1441 XX XX XX xx ------.----r-r----r----r----------------r--- -------r--rmww--r -----r---rrr-r-r p 4871 xxx xx xx m wrrrm.w.wwr.y wwww.ywwwww. -.wrrwwwwwrrwwwr.rw-.
rwwwrw--.w-----r-- rw-q--w---------rw-Persimilis XX XX XX XX
EMI12.9
<tb>
<tb> Fuscofaciens <SEP> xx <SEP> XX <SEP> XX <SEP> XX
<tb>
X = non décrit par les Auteurs XX = non décrit dans la littérature XXX = pas de croissance (+) Maerz A., Paul M.R., - "A Dictionary of Colors" - MaoGraw Hill (1950)
<Desc/Clms Page number 13>
Comme on peut le voir des tableaux et données ci-dessous, le Streptomyces sp, 1616 ne peut pas être identifié, à cause de ses caractéristiques morphologiques, biochimiques et culturelles$ comme appartenant à un groupe quelconque de mioroorganismes décrits comme producteurs de tétracycline,
Nous avons trouvé que l'action stabilisante du carbonate de strontium sur le pH rend meilleure la croissance et le rendement en tétracycline. pas
Cette propriété inattendue n'a/été décrite jusqu'aujour- d'hui dans la littérature pour un procédé miorobiologique compara- ble.
En outre, nous avons trouvé qu'on peut obtenir les plus grands rendements si le milieu de fermentation contient "Zea mats" frais ou ensilé,
Nous avonc trouvé que le "Zea mals" contient des facteurs de croissance qui ne sont pas oontenus dans les autres plantes.
Nous avons essayé de remplacer le"Zea mais" par de la soja, mais le rendement est substantiellement diminué,
Le facteur de croissance oontenu dans le"Zea mais "peut être isolé par des agents d'extraction acides., alcalines ou neutres,
Nous avons en outre établi que l'addition de phosphates, par opposition à ce qu'on affirme dans la littérature, augmente notablement le rendement en antibiotique, en activant le métabolisme des charbohydrates.
On a ajouté les phosphates sous la forme de phosphate d'ammonium; en substitution d'une certaine quantité de ohlorure d'ammonium, de manière que la quantité d'azote ammonique soit inaltérée,
Le pH du milieu de croissance et de fermentation doit être initialement de 6.0-7.0 et pendant la fermentation il doit être de
<Desc/Clms Page number 14>
5.7-6.8. La température du milieu de croissance et de fermentation doit être comprise entre 24 et 35 C. bien qu'on préfère opérer à une température comprise entre 26 et 28 C.
Un milieu approprié de croissance est oomposé comme suit : .
EMI14.1
<tb>
<tb>
Dextrine <SEP> 10 <SEP> à <SEP> 40 <SEP> g/lg
<tb>
EMI14.2
" - S ro 0.3,, 2 4 12 g/1t
Le filtrat de "Zea mais" est préparé comme suit on fait bouillir 720 g de "Zea mals" dans 2 lt d'eau et ensuite on filtre .1' le mélange. On obtient un filtrat de couleur brune avec un pH environ de 6,2 et avec une concentration totale d'azote d'environ 0,2%.
Le filtrat est ajouté ensuite à 250-750 cm3 de milieu.
EMI14.3
<tb>
<tb>
Sulfate <SEP> d'ammonium <SEP> 1 <SEP> à <SEP> 5 <SEP> g/lt
<tb> Eau <SEP> q.s. <SEP> pour <SEP> 1000 <SEP> cm3
<tb>
Avant la stérilisation le pH doit être réglé à 6,9 par de l'acide chlorhydrique.
Après stérilisation le pH doit être compris entre 6 et 7.
La présence de carbonate de strontium régularise le pH et exerce une influence favorable sur le rendement en tétraoyoline.
Les exemples suivants illustrent la croissance du Streptomyces sp. 1616 et peuvent être utilisés pour la préparation d'un inooulum pour le milieu de fermentation,
Exemple I.
Sur une culture, on prélève des spores de la souche Streptomycus sp, 1616 en les lavant à l'eau stérile peptonisée à . 1%6, pour former une suspension contenant environ 50 x 107 spores' par cm3. On utilise une portion de 1 cm3 de la suspension pour inoculer un flacon de 3 lt, contenant 500 cm3 de ce milieu :
<Desc/Clms Page number 15>
EMI15.1
<tb>
<tb> 20g
<tb> 10g
<tb> Filtrat <SEP> de <SEP> "Zea-mais", <SEP> préparé
<tb> comme <SEP> décrit <SEP> ci-dessous <SEP> 250 <SEP> cm3
<tb> Sulfate <SEP> d'ammonium <SEP> 2 <SEP> g
<tb> Eau, <SEP> q.s. <SEP> pour <SEP> 1000 <SEP> cm3
<tb>
Avant la stérilisation le pH est réglé à 5,0 par de l'acide ohlorhydrique.
Après la stérilisation le pH passe à 6,35-6,5,
On conduit la croissance dans le milieu pendant 24 à 48 'heures.
EXEMPLE II,
On répète l'exemple I en utilisant un milieu contenant :
EMI15.2
<tb>
<tb> Dextrine <SEP> 20 <SEP> g
<tb> SrCO2 <SEP> 10g
<tb>
EMI15.3
Filtrat de "Zea-Mats,"1.épard '3
EMI15.4
<tb>
<tb> comme <SEP> décrit <SEP> ci-dessous <SEP> '' <SEP> 500 <SEP> cm3
<tb> Sulfate <SEP> d'ammonium* <SEP> 2 <SEP> g
<tb> Eau,, <SEP> q.s.) <SEP> pour <SEP> 1000 <SEP> cm3.
<tb>
EXEMPLE III.
On répète l'exemple 1, en utilisant un milieu contenant !
EMI15.5
<tb>
<tb> Dextrine <SEP> 20 <SEP> g <SEP>
<tb> Carbonate <SEP> de <SEP> strontium <SEP> 10 <SEP> g
<tb> Filtrat <SEP> de <SEP> "Zea <SEP> Mats" <SEP> 750 <SEP> en?
<tb> . <SEP> Sulfate <SEP> d'ammonium <SEP> 2 <SEP> g
<tb> Eau, <SEP> CI.,$, <SEP> pour <SEP> 1000 <SEP> cm <SEP> ,
<tb>
(a inocule un milieu de fermentation, ou pour cent de 2-4% avec m@célium cru pendant 24-28 heures dans les milieux décrits dans ls exemples I, II et III.
EXEMPLE IV.
0prépare un milieu de fermentation avec les ingrédients suivais :
<Desc/Clms Page number 16>
EMI16.1
<tb>
<tb> Filtrat <SEP> neutre <SEP> de <SEP> "Zea <SEP> Mats <SEP> (+)" <SEP> 250 <SEP> cm3
<tb> NH4Cl <SEP> 4,5g
<tb> Amidon <SEP> 55g
<tb> Gruau <SEP> de <SEP> soja <SEP> 10 <SEP> g
<tb> SrCO3 <SEP> 8 <SEP> g
<tb> Eau, <SEP> q.s. <SEP> pour <SEP> 1000 <SEP> cm3.
<tb>
(+) Le filtrat neutre de "Zea Maïs' est préparé en faisant bouil- lir 720 g. de "Zea Maïs" avec 2 1%. d'eau, et en filtrant pour' obtenir un liquide de couleur brune ayant un pH de 2 et'une concentration totale d'azote du 0,02%.
Le pH ayant la stérilisation doit être réglé à 5,0-5,5 et ensuite la stérilisation à 6,2.
EXEMPLE V.
EMI16.2
<tb>
<tb>
Filtrat <SEP> neutre <SEP> de <SEP> "Zea <SEP> mals <SEP> (+)" <SEP> 500 <SEP> oU;
<tb> NH4Cl <SEP> 4,5g
<tb> Amidon <SEP> 55 <SEP> g
<tb> Gruau <SEP> de <SEP> soja <SEP> 10g
<tb> SrCO <SEP> 8 <SEP> g
<tb> Eau, <SEP> q.s. <SEP> pour <SEP> 1000 <SEP> cm3
<tb>
EMI16.3
pH avant la stérilisation. =< , ti-, 5 pH après la stérilisation - 6,2 (+) Le filtrat est préparé comme décrit dans l'exemple IV.
EXEMPLE VI.
EMI16.4
<tb>
<tb>
Filtrat <SEP> neutre <SEP> de <SEP> "Zea <SEP> maïs <SEP> (+)" <SEP> 750 <SEP> On?
<tb>
<tb> NH4Cl <SEP> 4,5g
<tb> Amidon <SEP> 55g
<tb> Gruau <SEP> de <SEP> soja <SEP> 10g
<tb>
EMI16.5
SrCO-. 3 3 8
EMI16.6
nau, q.Bt- fout' LVVV uns pH avant la stérilisation. = 5,0-5,5 pH après la stérilisation = 6,2
EMI16.7
(.
Le filtrat es répaxé comme décrit dans ,' xemp:, 3 il. ,
<Desc/Clms Page number 17>
EXEMPLE VII.
EMI17.1
<tb>
<tb> Filtrat <SEP> alcalin <SEP> de <SEP> "Zea <SEP> mais <SEP> (++) <SEP> " <SEP> 250 <SEP> cm3
<tb> NH4Cl <SEP> 4,5 <SEP> g
<tb> Amidon <SEP> 55 <SEP> g
<tb> Cruau <SEP> de <SEP> soja <SEP> 10 <SEP> g
<tb> SrCO3 <SEP> 8 <SEP> g'
<tb> Eau, <SEP> q.s. <SEP> pour <SEP> 1000 <SEP> cm3
<tb>
pH avant la stérilisation = 5,0-5,5 pH après la stérilisation = 6,2 (++) Le filtrat alcalin de "Zea mais" est préparé en mettant en sus pension 720 g de "Zea maïs" dans 2 lt d'eau et en réglant le pH à 9,0 avec de l'hydroxyde solidque au 20%. Le mélange est ensuite bouilli pendant 30 minutes et filtré.
Le filtrat est un . liquide jaune-brun ayant un pH de 9,0 avec une concentration totale d'azote de 022%
EXEMPLE VIII.
EMI17.2
<tb>
<tb>
Filtrat <SEP> alcalin <SEP> de <SEP> "Zea <SEP> mais <SEP> (++)" <SEP> 500 <SEP> cm3
<tb> NH4Cl <SEP> 4,5 <SEP> g <SEP>
<tb> .Amidon <SEP> 55 <SEP> g
<tb> Gruau <SEP> de <SEP> soja <SEP> 10 <SEP> g
<tb> SrCO, <SEP> 8 <SEP> g
<tb> Eau, <SEP> q.s. <SEP> pour <SEP> 1000 <SEP> cm3
<tb>
pH avant la stérilisation = 5,0-5,5 pH après la stérilisation = 6,2 (++) Le filtrat est préparé comme décrit dans l'exemple VII.
EXEMPLE IX,
EMI17.3
<tb>
<tb> Filtrat <SEP> alcalin <SEP> de <SEP> "Zea <SEP> mais <SEP> (++)" <SEP> 500 <SEP> cm3
<tb> NH4Cl <SEP> 4,5g
<tb> Amidon <SEP> 55g
<tb> Gruau <SEP> de <SEP> soja <SEP> 10 <SEP> g
<tb> SrCO3 <SEP> 8 <SEP> g
<tb> Eau, <SEP> q. <SEP> s. <SEP> pour <SEP> 100 <SEP> cm3
<tb>
<Desc/Clms Page number 18>
pH avant la stérilisation =* 5,0-5,5 H après la stérilisation - 6,2 (++) Le filtrat est préparé comme décrit dans l'exemple VII
EXEMPLE X.
EMI18.1
<tb>
<tb>
Filtrat <SEP> acide <SEP> de <SEP> "Zea <SEP> mats <SEP> (+++)" <SEP> 250 <SEP> cm3
<tb> NH4Cl <SEP> 4,5g
<tb> amidons <SEP> 55 <SEP> g
<tb> Gruau <SEP> de <SEP> soja <SEP> 10 <SEP> g
<tb> SrCO3 <SEP> 8 <SEP> g <SEP>
<tb> Eau, <SEP> q.s. <SEP> pour <SEP> 1000 <SEP> cm3
<tb>
pH avant la; stérilisation =5,0-5,5 pH après la stérilisation 6,2 Le filtrat acide de "Zea maïs" est préaré en mettant en (+++) Le filtrat acide de "Zea maïs" est prépare en mettant en suspension 720 g de "Zea mais" dans 2 lt d'eau, en acidifiant le mélange avec de l'acide chlorhydrique pour régler, pe pH à 3, en faisant bouillir et ensuite en filtrant le mélange pour obtenir un liquide jaune avec une concentration d'azote de 0,02%
EXEMPLE XI.
EMI18.2
<tb>
<tb>
Filtrat <SEP> acide <SEP> de <SEP> "Zea <SEP> maïs <SEP> (+++) <SEP> 500 <SEP> cm3
<tb> NH4Cl <SEP> 4,5g
<tb> Amidon <SEP> 55 <SEP> g
<tb>
<tb> Gruau <SEP> de <SEP> soja <SEP> 10g
<tb> SrCO3 <SEP> 8 <SEP> g
<tb> Eau, <SEP> q.s. <SEP> pour <SEP> 1000 <SEP> cm3
<tb>
pH avant la stérilisation = 5,0-5,5 pH après la stérilisation - 6,2 (+++) Le filtrat est préparé comme décrit dans l'exemple X.
<Desc/Clms Page number 19>
EXEMPLE XII.
EMI19.1
<tb>
<tb> Filtrat <SEP> acide <SEP> de <SEP> "Zea <SEP> mais <SEP> (+++)" <SEP> 750 <SEP> cm3
<tb> NH4Cl <SEP> 4,5 <SEP> g
<tb> Amidon <SEP> 55 <SEP> g <SEP>
<tb> Gruau <SEP> de <SEP> soja. <SEP> 10 <SEP> g
<tb> SrCO3 <SEP> 8 <SEP> g
<tb> Eau, <SEP> q.s. <SEP> pour <SEP> 1000 <SEP> cm3
<tb>
pH avant la stérilisation = 5,0-5,5 pH après la stérilisation = 6,2 (+++) Le filtrat est préparé comme décrit dans l'exemple X.
EXEMPLE XIII.
EMI19.2
<tb>
<tb>
Filtrat <SEP> neutre <SEP> de <SEP> "Zea <SEP> maïs <SEP> (+) <SEP> " <SEP> 500 <SEP> ce
<tb> NH4Cl <SEP> 4,4 <SEP> g
<tb> (NH4)2HPO4 <SEP> 0,1 <SEP> g
<tb> Amidon <SEP> 55 <SEP> g
<tb> Gruau <SEP> de <SEP> soja <SEP> 10 <SEP> g
<tb> SrCO3 <SEP> 8 <SEP> g
<tb> Eau, <SEP> q.s, <SEP> pour <SEP> 1000 <SEP> cc.
<tb>
pH avant la stérilisation = 5,0-5,5 pH après la stérilisation - 6,2' (+) Le filtrat neutre est préparé comme décrit dans l'exemple
EXEMPLE XIV.
EMI19.3
<tb>
<tb>
Filtrat <SEP> alcalin <SEP> de <SEP> "Zea <SEP> mais" <SEP> (++) <SEP> 500 <SEP> cm3
<tb> NH4Cl <SEP> 4,3 <SEP> g <SEP>
<tb> (NH4)2HPO4 <SEP> 0,1 <SEP> g
<tb> Amidon <SEP> 55 <SEP> g
<tb> Gruau <SEP> de <SEP> soja <SEP> 10 <SEP> g
<tb> SrCO3 <SEP> 8 <SEP> g
<tb> Eau <SEP> q.s. <SEP> pour <SEP> 1000 <SEP> cm3
<tb>
pH avant la stéfrilistation = 5,0-5,5 pH après la stérilisation = 6,2 (++) Le filtrat est préparé comme décrit dans l'exemple VII.
<Desc/Clms Page number 20>
EXEMPLE XV.
EMI20.1
Filtrat acide de "Zea' mla18" (+++)" 500 cap lllÏ4 - 01 4,3 g
EMI20.2
<tb>
<tb> (NH4)2HPO4 <SEP> 0,1 <SEP> g
<tb> Amidon <SEP> 55 <SEP> g
<tb> Gruau <SEP> de <SEP> soja <SEP> 10 <SEP> g
<tb> SrCO3 <SEP> 8 <SEP> tg
<tb> Eau, <SEP> q.s. <SEP> pour <SEP> 1000 <SEP> cm3
<tb>
pH avant la stérilisation - 5,0-5,5 pH après la stérilisation = 6,2 (+++) Le filtrat acide de "Zea mats" est préparé comme décrit dans l'exemple X,
Nous avons trouvé qu'avec les milieux de fermentation décrits ci-dessus, on peut obtenirde très bons rendements en@,
EMI20.3
tétracyolïne, La,:tétraoyâline peut être isoléo du milieu de fermentation par le procédé décrit dans la demande de brevet belge de la demanderesse déposé le 19 mars 1965 Pour : :
"Procédé pour l'extraction des tétracyclines du milieu de fermentation" ' ou par les procédés actuellement connus d'extraction des tétra- cyclines du milieu de fermentation.
Nous avons trouvé qu'on peut obtenir les meilleurs rendements si l'on utilise le carbonate de strontium pour régulariser le pH du milieu de fermentation.
Toutefois, on peut utiliser également d'autres carbonates alcalino-terreux métalliques, tels le carbonate de baryum et calcium avec du carbonate de strontium. Si utilisés au lieu du carbonate de strontium, le rendement en tétracycline diminue.
En outre, comme démontré ci-dessus, le rendement en tétra.. cycline est substantiellement décru si le "Zes maïs" est remplacé par de la soja ou autres composants nutritifs, Nous pensons
<Desc/Clms Page number 21>