BE839828A

BE839828A - Undecapeptides cycliques analogues de la somatostatine et leur preparation

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Publication number: BE839828A
Application number: BE165393A
Authority: BE
Priority date: 1975-03-21
Filing date: 1976-03-19
Publication date: 1976-09-20

Description


  "Undécapeptides cycliques analogues de la somatostatine et leur préparation"  <EMI ID=1.1> 

  
des cycliques analogues de la somatostatine et à leur synthèse par une combinaison de la méthode en phase solide et de la méthode classique de synthèse des peptides.

  
La somatostatine (connue également sous le nom de facteur inhibiteur de la libération de somatotropine ou SRIF) est le tétradécapeptide :

  

 <EMI ID=2.1> 


  
On a. identifié ce tétradécapeptide en l'isolant d'extraits de tissus hypothalamiques d'animaux de la race bovine et on a trouvé qu'il inhibe la sécrétion de l'hormone somatotropine que l'on désigne couramment par hormone de croissance (GH) ; voir Brazeau et consort, Science, 179, pages 77-79 (janvier 1973). Brazeau et consort (citation précédente), ont signalé également que la forme linéaire de ce tétradécapeptide :

  

 <EMI ID=3.1> 


  
a été synthétisée par une méthodologie en phase solide et qu'elle présente la même activité biologique que la somatostatine obtenue d'une source naturelle.. Dans la demande de brevet aux Etats-Unis

  
 <EMI ID=4.1> 

  
le n[deg.] 3.882.098, on a décrit l'undécapeptide Des-Ala -Gly -Asn SRIF et sa forme oxydée, et dans la demande de brevet des EtatsUnis d'Amérique n[deg.] 457.038 du 1 avril 1974, on a décrit le dodécapeptide Des-Ala <1> -Gly <2> -SRIF et sa forme oxydée.

  
Des analogues cycliques de somatostatine, ne contenant pas de cystéine, n'ont pas été décrits dans la littérature antérieure. Les undécapeptides cycliques de la présente. invention comportent une struture cyclique qui ne contient pas de soufre mais bien du carbone à titre d'élément.du noyau et qui en outre ne comporte pas les aminoacides des positions 1 et 2 de la somatostatine (c'est-à-dire Ala et Gly).

  
Les undécapeptides cycliques de la présente invention, qui empêchent la sécrétion de l'hormone somatotropine, sont représentés par la formule : 

  

 <EMI ID=5.1> 


  
dans laquelle Trp représente le D-tryptophyle ou le L-tryptophyle et tous les autres aminoacides sont de la configuration L, l'in-

  
 <EMI ID=6.1> 

  
ques des composés précédents. Dans cette formule, n est un nombre entier de 1 à 5 ; lorsque n est égal à 1, l'aminoacide C-terminal est l'acide 'aspartique; lorsque n est égal à 2, l'aminoacide C-terminal est l'acide glutamique ; lorsque n est égal à 3, l'aminoacide C-terminal est l'acide a-aminoadipique ; lorsque n est égal à 4, l'aminoacide C-terminal est l'acide a-aminopimélique ; et lorsque n est égal à 5, l'aminoacide C-terminal est l'acide a-arninosubérique. Le composé préféré suivant la formule

  
 <EMI ID=7.1> 

  
Des exemples de-sels d'addition d'acide sont le chlorhydrate, le bromhydrate, le sulfate, le phosphate, le maléate, l'acétate, le citrate, le benzoate, le succinate, le malate,

  
 <EMI ID=8.1> 

  
1, pages VIII-XXIX (Academic Press 1965). Tous les restes d'ami-

  
 <EMI ID=9.1> 

  
mules présentées par la suite sont de la configuration naturelle ou configuration L, sauf pour le Trp, qui est facultativement de la configuration L ou D.

  
La présente invention se rapporte également à de nouveaux décapeptides de la formule :

  

 <EMI ID=10.1> 


  
dans laquelle R désigne un groupe protecteur a-amino. Les grou-

  
 <EMI ID=11.1> 

  
comme étant d'un intérêt en pratique dans la synthèse graduelle des polypeptides. parmi les classes de groupes protecteurs aamino englobés par R, on peut citer : (1) les groupes protecteurs du type acyle illustrés par les groupes suivants : formyle, trifluoroacétyle, phtalyle, toluènesulforiyle (tosyle); benzènesulfo- <EMI ID=12.1> 

  
le, y-chlorobutyryle, etc ; (2) les groupes protecteurs du type uréthanne aromatiques., illustrés par le.benzyloxycarbonyle et les

  
 <EMI ID=13.1> 

  
ques, illustrés par : cyclopentyloxycarbonyle, adamantyloxycarbonyle, cyclohexyloxycarbonyle ; (5) les groupes protecteurs du type

  
 <EMI ID=14.1> 

  
protecteurs du type alcoyle, tels qu'illustrés par le triphénylméthyle (trityle), le benzyle ; (7) les groupes de trialcoyisilane, tels que le triméthylsilane. Le groupe protecteur a-amino préféré pour R est le ter-butyloxycarbonyle.

  
 <EMI ID=15.1> 

  
tecteur pour*le substituant amino de chaîne latérale de la lysine. Des exemples de groupes protecteurs appropriés du substituant amino de chaîne latérale sont le benzyloxycarbonyle et les benzyloxycarbonyles substitués, le substituant étant choisi parmi les radicaux halo (par exemple chloro, bromo, fluoro) et nitro
(par exemple 2-chlorobenzyloxycarbonyle, p-nitrobenzyloxycarbonyle, 3,4-dichlorobenzyloxycarbonyle), tosyle, t-amyloxycarbonyle,

  
 <EMI ID=16.1> 

  
de ce groupe protecteur du substituant amino de chaîne latérale n'est pas critique sauf qu'il doit s'agir d'un groupe qui n'est pas enlevé durant la séparation du groupe protecteur a-amino au cours de la synthèse jusqu'à obtention de l'undécapeptide cyclique répondant à la séquence désirée d'aminoacides. De ce fait,

  
 <EMI ID=17.1> 

  
situant amino de la chaîne latérale de la lysine, désigné par R , ne peuvent pas être identiques. 

  
Dans la formule précédente, R<2>est choisi parmi les

  
 <EMI ID=18.1> 

  
 <EMI ID=19.1>   <EMI ID=20.1> 

  
sont choisis parmi l'acétyle, le benzoyle, le butyle tertiaire, le trityle, le benzyle, le dichloro-2,6 benzyle et le benzyloxycarbonyle..Le groupe protecteur préféré dans ce cas est le ben-

  
 <EMI ID=21.1> 

  
gène, ce qui signifie alors qu'il n'y a pas de groupe protecteur sur la fonction hydroxyle alcoolique.

  
 <EMI ID=22.1> 

  

 <EMI ID=23.1> 


  
Le support de résine de polystyrène est de préférence constitué par un polymère de styrène avec environ 1 à 2 % de divinylbenzène à titre d'agent de réticulation, ce qui amène le polymère de polystyrène à être totalement insoluble dans certains solvants organiques. Le polymère de polystyrène est composé de longues chaînes d'alcoyles, portant un noyau de phényle, un carbone sur deux et le reste d'aminoacide terminal (Ser) est réuni par une liaison carbone-carbone covalente à ces noyaux de phényle. Les chaînes d'alcoyles sont réticulées à peu près sur chaque cinquantième atome de carbone par des restes de p-diéthyiphényle, dérivant du divinylbenzène.

  
La présente invention se rapporte également à de nouveaux undéçapeptides de la formule : 

  

 <EMI ID=24.1> 


  
 <EMI ID=25.1> 

  
 <EMI ID=26.1> 

  
 <EMI ID=27.1> 

  
drogène ou un groupe protecteur carboxyle de chaîne latérale, qui est enlevé sous des conditions qui ne sépareront pas le groupe  <EMI ID=28.1>  représenter un même groupe protecteur. Des exemples de groupes protecteurs carboxyles de chaîne latérale, représentant R , sont

  
 <EMI ID=29.1> 

  
 <EMI ID=30.1> 

  
représenté par R9 est un groupe qui est stable sous les conditions qui (<1>) séparent le groupe protecteur carboxyle R , s'il y en a un, et (2 ) séparent tout groupe protecteur a-ainino se trouvant sur le groupe lysyle de la partie N-terminale du peptide. Le

  
 <EMI ID=31.1> 

  
(par exemple méthyle, éthyle, butyle, pentyle, isobutyle), le benzyle, les benzyles substitués (comportant au moins un substituant des groupes nitro, méthoxy et méthyle, de sorte qu'il s'agit par exemple du p-méthoxybenzyle, du 2,4-diméthoxybenzyle,

  
 <EMI ID=32.1> 

  
pe R9 préféré est le benzyle. 

  
La présente invention englobe également des composés répondant à -la formule : 

  

 <EMI ID=33.1> 


  
 <EMI ID=34.1> 

  
 <EMI ID=35.1> 

  
signés par R ; R est choisi parmi l'hydrogène et les groupes

  
12 

  
désignés par R ; et R est choisi parmi l'hydrogène et les grou-

  
 <EMI ID=36.1> 

  
On prépare les nouveaux décapeptides de la formule II en utilisant une synthèse en phase solide. On commence la synthèse à partir de l'extrémité C-terminale du peptide en utilisant une résine protégée par a-amino. On peut préparer une telle matière de départ en attachant une serine protégée par a-amino à  <EMI ID=37.1> 

  
 <EMI ID=38.1> 

  
en chaîne latérale est combinée avec. la résine chlorométhylée. suivant la procédé de Gisin, Helv. 56, pages 1476 (1973). Après la combinaison de cette serine avec le support de résine, on en-

  
 <EMI ID=39.1> 

  
l'acide trifluoroacêtique dans -du chlorure de méthylène, de l'aci-

  
 <EMI ID=40.1> 

  
sion de la protection est réalisée à une température comprise entre environ 0[deg.]C et la température ambiante. D'autres réactifs et conditions classiques de séparation, permettant l'enlèvement de groupes protecteurs a-amino particuliers, peuvent s'utiliser, com-

  
 <EMI ID=41.1> 

  
pages 72-75.'- Après séparation du groupe protecteur a-amino, les

  
 <EMI ID=42.1> 

  
re graduelle dans l'ordre désiré en vue d'obtenir un composé de  la formule (II) ou bien à titre de variante de l'addition séparée de chaque aminoacide au cours de la synthèse, certains de ces

  
 <EMI ID=43.1> 

  
en phase solide. le choix d'un réactif approprié de combinaison est du domaine de l'expériepce courante. Un réactif de combinai-

  
 <EMI ID=44.1> 

  
mide. comme mentionné précédemment, les. réactifs activants utilisée dans la synthèse décrite ci-dessus sont les réactifs bien connus dans la technique des peptides. Des exemples de ces réac-

  
 <EMI ID=45.1> 

  
 <EMI ID=46.1> 

  
soutenant de l'azote monocycliques, de type aromatique, conte-  nant 1 à 4 atomes d'azote dans le noyau, par exemple les imidazo- <EMI ID=47.1> 

  
carbonyl-di-1,2,4-triazole ; (6) les acétylènes alcoxylés (par exemple éthoxyacétylène) ; (7) les réactifs qui forment un anhydride mixte avec le fragment de carboxyle de l'aminoacide (par

  
 <EMI ID=48.1> 

  
et (8) les composés hétérocycliques contenant de l'azote, compor-

  
 <EMI ID=49.1> 

  
 <EMI ID=50.1> 

  
D'autres réactifs activants et leur utilisation dans la combinaison des peptides sont décrits par Schroder & Lubke, supra, chapi-

  
 <EMI ID=51.1> 

  
Chaque aminoacide protégé ou séquence d'aminoacides est introduit dans la réaction en phase solide en un excès d'environ 4 fois et on réalise la combinaison dans un milieu de diméthylformamide/chlorure de méthylène (1/1) ou dans du diméthylformamide seul ou du chlorure de méthylène seul. Dans les cas où une combinaison incomplète se développe, le procédé de combinaison est répété avant enlèvement du groupe protecteur a-amino, et ce avant la combinaison de l'aminoacide suivant à la réaction en phase solide. Le succès de la réaction de combinaison, à chaque stade de la synthèse, est surveillé par la réaction à la ninhydrine, comme décrit par E. Kaiser et consort, Analyt. Biochem.,

  
 <EMI ID=52.1> 

  
Après obtention de .la séquence désirée d'aminoacides de la formule II, on sépare le peptide de la résine. Ceci peut se réaliser par méthanolyse pour obtenir un composé répondant à la formule : 

  
 <EMI ID=53.1> 

  
puis l'ester méthylique C-terminal est'converti en l'acide correspondant par hydrolyse, cette opération étant suivie par l'activation du groupe carboxyle et la formation de l'hydrazide. par des méthodes classiques. de la synthèse des peptides en vue d'obtenir un composé de la formule III. Toutefois, le procédé préféré pour l'obtention d'un composé de la formule .1 est un procédé se développant suivant le schéma de réactions donné à la fin de la présente description. En considérant ce schéma, un décapepti-

  
 <EMI ID=54.1>   <EMI ID=55.1> 

  
sont les nitrites d'alcoyles inférieurs (par exemple le nitrite de t-butyle, le nitrite d'isoamyle) ou un nitrite de métal alcalin (par exemple du nitrite de sodium, du nitrite de potassium) en présence d'un acide fort, tel que de l'acide chlorhydrique, de l'acide phosphorique, de l'acide sulfonique, etc. 'Cette réaction est réalisée en présence d'eau et/ou d'un solvant non aqueux, tel que du diméthylformamide, du tétrahydrofuranne, du dioxane, du chloroforme, du chlorure de méthylène, etc., à une température comprise entre environ -40[deg.]C et +20[deg.]C. L'azide de la formule C, qui n'est de préférence pas isolé du milieu de réaction, est alors combiné avec un aminoacide de la formule :

  

 <EMI ID=56.1> 


  
 <EMI ID=57.1> 

  
undécapeptide de la formule :

  

 <EMI ID=58.1> 


  
Cette combinaison est réalisée à une température com-

  
 <EMI ID=59.1> 
-25[deg.]C et +10[deg.]C.

  
On fait ensuite réagir l'undécapeptide de formule (E) avec un réactif de séparation qui libérera le groupe protecteur  <EMI ID=60.1> 

  

 <EMI ID=61.1> 


  
Il est essentiel que le réactif de séparation soit un réactif ne libérant pas, à ce stade de la synthèse, les groupes protecteurs a -amino de chaîne latérale en 121 et R , se trouvant sur les restes de l'aminoacide lysine dans les positions 1 et 6 de l'undêcapeptide, ni le groupe protecteur a-carboxyle représenté par R . Si ces groupes protecteurs étaient séparés à ce stade, la cyclisation désirée de la phase suivante du procédé ne se développerait pas. Un réactif de séparation particulièrement approprié est l'acide trifluoroacétique, lorsque R représente le

  
 <EMI ID=62.1> 

  
Le choix d'un réactif compatible pour la séparation des divers groupes protecteurs bien connus a-amino et en chaîne latérale est

  
 <EMI ID=63.1> 

  
soit préférable que les groupes protecteurs quelconques en chaîne

  
2 3 4 5 

  
latérale, représentés par R , R , R et R , ne soient pas séparés durant la formation d'un composé de la formule F, de tels groupes peuvent toutefois être séparés, si on le désire, pour obtenir un composé de la formule :

  

 <EMI ID=64.1> 


  
Le composé de formule F est alors cyclisé pour produire un composé de la formule : 

  

 <EMI ID=65.1> 


  
 <EMI ID=66.1> 

  
sant du N,N -dicyclohexylcarbodiimide (DCC) et du N-hydroxybenzotriazole en présence d'un solvant organique, dans un intervalle de températures de -40[deg.]C à +20[deg.]C. Des solvants appropriés sont le diméthylformamide, le dichlorométhane, le chloroforme, le dioxane, le tétrahydrofuranne et leurs mélanges. On peut également utiliser d'autres réactifs de cyclisation, exemplifiés notamment par les réactifs de combinaison décrits ci-dessus en liaison avec la préparation du décapeptide-résine, ainsi que

  
 <EMI ID=67.1> 

  
(1972).

  
,On convertit alors un composé de formule IV en un composé de formule I, par- séparation du groupe protecteur amino de

  
 <EMI ID=68.1> 

  
en même temps que les groupés protecteurs quelconques représentés

  
 <EMI ID=69.1> 

  
séparation est constitué par de l'hydrogène sur un catalyseur de palladium. La phase de séparation, si on le désire, peut être réalisée de manière graduelle par le choix d'un réactif qui ne séparera que le groupe protecteur a-carboxyle R , avec ensuite

  
 <EMI ID=70.1> 

  
les autres groupes protecteurs de chaîne latérale quelconques. A titre de variante, les groupes R peuvent être séparés d'abord, avec ensuite séparation simultanée ou de manière séquentielle des 

  
 <EMI ID=71.1> 

  
réactifs appropriés de séparation, que l'on peut utiliser et qui sont compatibles avec le groupe particulier a-carboxyle et de chaîne latérale, a été décrit par Schroeder &#65533; Lubke, supra, pages
72-75.

  
Une autre méthode de préparation des composés de la formule (IV) consiste à convertir un composé répondant à la for-
 <EMI ID=72.1> 
 dans laquelle R est choisi parmi l'hydrogène et R , et Me désigne le méthyle, en l'hydrazide correspondant par réaction avec de

  
 <EMI ID=73.1> 

  

 <EMI ID=74.1> 


  
avec ensuite conversion de ce composé en l'azide correspondant par réaction avec un réactif qui donnera de l'acide nitreux in situ, de la manière décrite précédemment. On cyclise alors l'azide après séparation préalable du groupe protecteur a-amino se trouvant sur la lysine.

  
Les matières.représentées par la formule D sont des matières connues de la technique antérieure et/ou on peut les préparer aisément par des techniques traditionnelles pour des ami.noacides non protégés bien connus, notamment l'acide aspartique,

  
 <EMI ID=75.1> 

  
lique et l'acide a-aminosubérique.. La préparation de ces aminoacides a été décrite par Farkasova et consort, col. Czechoslov.  Chem. Commun. 30, 3117 (1965). La préparation d'esters protégés

  
 <EMI ID=76.1> 

  
673, pages 196, 208 (1964) et Rudinger et consort, Col. Czechos-

  
 <EMI ID=77.1> 

  
Les Exemples suivants illustreront encore plus complètement la préparation des composés de la présente invention.

Exemple 1

  
 <EMI ID=78.1>  .dM   <EMI ID=79.1> 

  
(7,5 mmoles) comme décrit par Gisin, Helv. 56, 1476 (1973). On analyse l'aminoacide-résine par une analyse quantitative des ami-

  
 <EMI ID=80.1> 

  
On traite cet ester polymère suivant le plan A pour l'incorpora-

  
 <EMI ID=81.1> 

  
OH, Boc-Trp-OH, Boc-Phe-OH, Boc-Phe-OH. Le reste d'asparagine est introduit sous la forme d'ester p-nitrophénylique activé, BocAsn-ONP, suivant le plan B et finalement le Boc-Lys(Clz)-OH suivant le plan A.

  
Plan A

  
 <EMI ID=82.1> 

  
résine,à raison de 10 g équivalents à 4 mmoles de sérine/g :

  
2. On lave trois fois avec du CH2C12

  
 <EMI ID=83.1> 

  
thrite (1:1:0,5%) pendant 25 minutes

  
 <EMI ID=84.1> 

  
6. On lave avec du diméthylformamide

  
 <EMI ID=85.1> 

  
mamide deux fois pendant 3 minutes.

  
8. On lave avec du diméthylformamide

  
9. On lave trois fois avec du CH2C12

  
10. On traite avec 20 mmoles du dérivé correspondant d'aminoacide

  
 <EMI ID=86.1> 

  
5 minutes

  
11. On ajoute en deux portions 2 5 mmoles de diisopropylcarbodii-

  
mide sur une période de 30 minutes, la durée de réaction étant de 18 heures 

  
12. On lave avec du diméthylformamide

  
13.. On lave trois fois avec du CH2C12

  
 <EMI ID=87.1> 

  
 <EMI ID=88.1> 

  
tion incomplète, on répète les phases 10 à 14 susdites. 

  
 <EMI ID=89.1> 

  
érythrite (1:1:0,5%) pendant 25 minutes 

  
 <EMI ID=90.1> 

  
6. On lave avec du diméthylformamide

  
7. On traite avec de la triéthylamine à 12% dans du diméthylformamide, et ce deux fois pendant 3 minutes 

  
 <EMI ID=91.1> 

  
9. On lave trois fois avec du CH2C12 

  
10. On traite avec 40 mmoles de Boc-Asn-ONP en présence de 2-3

  
gouttes d'acide acétique glacial et en dissolution dans du diméthylformamicle, la durée de réaction étant de 72 heures

  
11. On lave trois fois avec du diméthylformamide

  
 <EMI ID=92.1> 

  
13. On procède à la réaction à la ninhydrine

  
 <EMI ID=93.1> 

  
hydrolysée et analysée.

  
On prépare l'analogue D-Trp par le même procédé, sauf que l'on substitue le Boc-D-tryptophane au Boc-L-tryptophane.

Exemple 2 

  
 <EMI ID=94.1> 

  
mélangée avec 75 ml de diméthylformamide et ensuite avec 10 ml d'hydrazine (qualité de 95% et plus), et on agite le mélange pendant la nuit. 

  
On filtre le mélange, on lave la partie solide avec une quantité supplémentaire de diméthylformamide et' on évapore   <EMI ID=95.1> 

  
te avec un excès d'eau pour donner un solide que l'on dissout dans une certaine quantité de diméthylformamide, puis on précipite à nouveau avec de l'eau, la production étant de 2,8 g.

  
 <EMI ID=96.1> 

  
 <EMI ID=97.1> 

  
l'Exemple 2 est dissous dans du diméthylformamide (environ 50 ml) , 

  
 <EMI ID=98.1> 

  
puis avec du nitrite d'isoamyle (0,2 ml) . On agite la solution 

  
 <EMI ID=99.1> 

  
 <EMI ID=100.1> 

  
4 jours. On évapore le mélange jusqu'à siccité sous vide et on triture le reste avec ,un excès d'eau pour obtenir un solide blanc

  
 <EMI ID=101.1> 

  
La production est de 1,9 g. 

  
 <EMI ID=102.1> 

  
 <EMI ID=103.1> 

  
terminés.

  
L'analogue correspondant contenant. du D-Trp est combi-

  
 <EMI ID=104.1> 

  
 <EMI ID=105.1> 

  
 <EMI ID=106.1> 

  
Trp, non déterminé. 

Exemple 4 

  
 <EMI ID=107.1>   <EMI ID=108.1> 

  
(1,8 g) de l'Exemple 3 est mélangé avec 3 ml d'anisole et on traite avec 50 ml de TFA pendant 30 minutes à la température ambiante. On évapore.la solution jusqu'à siccité sous vide et on balaye deux fois le reste avec de l'éther. On triture le reste avec de l'éther et on dissout la matière solide dans une certaine quantité de diméthylformamide. On verse cette solution dans 100

  
 <EMI ID=109.1> 

  
On récolte la matière solide blanche qui précipite et on sèche pour obtenir 1,35 g de la matière identifiée précédemment. Analyse des aminoacides : Asp . (1) 1,02 ; Thr (2) 1,64 ; Ser (1)

  
 <EMI ID=110.1> 

  
Trp, non déterminé. 

  
On supprime partiellement la protection de l'analogue D-Trp de la même manière.

Exemple 5

  
 <EMI ID=111.1> 

  
di dans un bain de' glace et traité avec du DCC (0,5 g) pendant 2 heures à froid, puis pendant 30 heures à la température ambiante.

  
On évapore le mélange jusqu'à siccité, on triture le reste avec de l'eau pour obtenir un précipité qu'on lave avec du

  
 <EMI ID=112.1> 

  
que, et de l'eau, puis on dessèche. On fait digérer le solide seç avec du EtOH absolu au bain-marie qu'on laisse revenir à la température ambiante, puis on filtre. La matière se trouvant sur le

  
 <EMI ID=113.1> 

  
 <EMI ID=114.1> 

  
drogénation pendant 20 heures. On sépare le catalyseur et on évapore le filtrat jusqu'à siccité, puis on le reprend dans du

  
 <EMI ID=115.1> 

  
dre qui est le produit identifié ci-dessus.

  
 <EMI ID=116.1>   <EMI ID=117.1> 

  
0,70

  
 <EMI ID=118.1> 

  
0,73 ; Glu (1) 0,.89 ; Phe (3) 3 ; Lys (2) 1,91 ; NH3, Trp, non déterminés.

Exemple 6

  
 <EMI ID=119.1> 

  
On dissout l'undécapeptide partiellement débarrassé de la protection, issu du dernier paragraphe de l'Exemple 4 (3 g),

  
 <EMI ID=120.1> 

  
triéthylamine (0,2 ml) pour amener le pH à 7. On ajoute du Nhydroxybenzotriazole (1 g) et on refroidit le mélange au bain de glace, puis on traite avec du DCC (0,59 g) pendant 2 jours et sous agitation. On filtre le mélange de réaction et on évapore le filtrat jusqu'à un petit volume. On ajoute un excès d'eau pour obtenir une.matière solide blanche que l'on filtre, lave à

  
 <EMI ID=121.1> 

  
 <EMI ID=122.1> 

  
sé de sa protection, a ensuite été traité avec de l'acide fluorhydrique liquide (environ 100 ml) en présence d'anisole (5 ml) et à l'exclusion d'air pendant 35 minutes dans un bain de glace. On sépare l'excès de HF sous vide aussi vite que possible, on reprend le reste dans du AcOH aqueux 2M et on extrait la phase aqueuse avec de l'éther diéthylique pour séparer l'anisole. La solution aqueuse est lyophilisée pour donner 1,03 g de matière solide. Cette matière brute (1 g) est appliquée à une colonne de Sephadex G-25 (2,5 x 120 cm)'et on procède à une élution avec du AcOH aqueux 2M. Les fractions,(4 ml chacune) qui émergent dans les tubes 89-109 sont rassemblées et lyophilisées pour donner 155,8 mg d'un solide duveteux. On applique ce solide à une

  
 <EMI ID=123.1> 

  
Les éluats des tubes 13-35 sont rassemblés et lyophilisés pour

  
 <EMI ID=124.1> 

  
pyridine, 30/24/6/20), 0,71. 

  
 <EMI ID=125.1> 

  
0,92 ; Glu (1) 0,99 ; Phe (3) 3,12 ; Lys (2) 2 ; NH3 (1) 1,16 ; Trp (1) 0,77.

  
On a déterminé les activités d'hormone de croissance des composés de l'Exemple 5, en injectant à des rats pesant envi-

  
 <EMI ID=126.1> 

  
de 50 mg/kg, puis 5 minutes après, par voie sous-cutanée, une solution du composé de l'Exemple 5 en solution saline à une dose

  
de 2 mg/kg par rat. Des échantillons de sang sont prélevés 15 minutes après injection du composé de l'Exemple 5, et le taux d'hormone de croissance est déterminé par un essai d'appréciation de l'immunité. Le taux moyen d'hormone de croissance chez les rats témoins (13 animaux) était, d'après ce que l'on a trouvé,

  
 <EMI ID=127.1> 

  
chez les rats (13 animaux) ayant reçu le composé de l'Exemple 5

  
 <EMI ID=128.1> 

  
mais la dose du composé- de l'Exemple 5 a été élevée à 2,38 mg/kg et le prélèvement d'échantillons de sang a été fait 2 heures après l'injection. Le taux moyen d'hormone de croissance chez les rats témoins (15 animaux) était de 244 t 38 ng/ml, tandis que le taux d'hormone de croissance.chez les rats (15 animaux) ayant reçu le composé de l'Exemple 5 était de 89 t 23 ng/ml.

  
En suivant le même procédé, on a déterminé l'activité du produit de l'Exemple 6 deux heures après administration de 1500

  
 <EMI ID=129.1> 

  
par ml, tandis que le taux d'un groupe témoin était de 180 &#65533; 27

  
 <EMI ID=130.1> 

  
 <EMI ID=131.1> 

  
La découverte d'une réduction importante du taux d'hormone de croissance après 2 heures démontre que les composés .de la formule 1 présentent; de façon surprenante, une activité prolongée sensiblement plus longue que celle de la somatostatine qui, d'après Brazeau et consort, Biochem. and Biophys. Res. Comm.
60, page 1202 (1974); a une demi-vie biologique d'environ 4 minutes.

  
On a procédé à une autre essai sur le composé de l'Exemple 5 pour déterminer son effet sur les taux d'insuline et de glucagon. La détermination in vivo donnant la libération si- <EMI ID=132.1> 

  
a été faite en injectant à trois groupes de rats mâles pesant environ 200 à 250 g (9 animaux par groupe) du pentobarbital dans le péritoine à une dose de 50 mg/kq par rat, et en prévoyant ensuite,
15 minutes plus tard, une injection sous-cutanée du composé de

  
 <EMI ID=133.1> 

  
jection sous-cutanée de SRIF à une dose de 0,2 mg/kg à un autre groupe de rats et une injection sous-cutanée d'une solution saline au troisième groupe de rats. Dix minutes après une telle in-

  
 <EMI ID=134.1> 

  
d'arginine dans 0,5 ml de solution saline. Cinq minutes plus tard, les rats ont été décapités, on a récolté le sang et on a procédé à diverses radio-déterminations d'immunité. Les résultats ont indiqué que ni le taux de glucagon, ni le taux d'insuline n'ont été abaissés par l'administration du composé de l'Exemple 5, tandis que les taux de ces deux .hormones ont été abaissés par la somatostatine.

  
D'une manière analogue, on a essayé le produit de l'Exemple 6 au cours de trois expériences distinctes, et on a obtenu les résultats suivants : 

  

 <EMI ID=135.1> 


  
 <EMI ID=136.1> 

  
mifères à sang chaud, notamment aux êtres humains, par voie intraveineuse, sous-cutanée, intramusculaire ou orale pour empêcher la libération de l'hormone de croissance lorsque le sujet traité exige un traitement thérapeutique en raison d'un excès de sécrétion de.somatotropine, qui est associé à des états, tels que l'acromégalie. La posologie envisagée pour l'administration par voie orale, sous forme de comprimés ou de capsules, à de grands  <EMI ID=137.1> 

  
corps par jour, tandis que la posologie pour une injection intra-

  
 <EMI ID=138.1> 

  
mg/kg de poids de corps par jou&#65533;. Lors d'une administration sous-cutanée ou intramusculaire, on envisage une posologie d'en-

  
 <EMI ID=139.1> 

  
demment, la dose requise variera avec l'état particulier que l'on traite, la rigueur de cet état et la durée du traitement.

  
Si on administre l'ingrédient actif sous la forme de comprimés, un tel comprimé peut comprendre : un liant, tel que de la gomme adragante, de l'amidon de mais, de la gélatine ; un ex-

  
 <EMI ID=140.1> 

  
tion, tel que de l'amidon de mais, de l'acide alginique, etc ; un lubrifiant, tel que stéarate de magnésium ; et un agent édulcorant et/ou aromatisant, comme le sucrose, le lactose, de l'essence de wintergreen, etc. Des véhicules liquides appropriés pour une administration intraveineuse sont une solution saline isotonique, des solutions de tampons phosphates, etc.

  
Schéma de réactions 

  

 <EMI ID=141.1> 
 

  

 <EMI ID=142.1>

Claims

<EMI ID=143.1>

1. Composés nouveaux, caractérisés en ce qu'ils appartiennent à la classe comprenant les composés : <EMI ID=144.1>

et leurs sels d'addition d'acide non toxiques, formules dans lesquelles Trp représente le D-tryptophyle ou le L-tryptophyle et <EMI ID=145.1>

<EMI ID=146.1>

le substituant amino de chaîne latérale, choisi parmi le ben-

<EMI ID=147.1>

carbonyle, le diisopropylméthoxycarbonyle et les benzyloxycarbo-. nyles substitués, dans lesquels le substituant est constitué par

un radical halo ou nitro ;

<EMI ID=148.1>

protecteur pour le groupe hydroxyle alcoolique de la thréonine

et de la serine, ce groupe étant choisi parmi l'acétyle, le benzoyle, le butyle tertiaire, le trityle, le benzyle, le dichloro-

2,6 benzyle et le benzyloxycarbonyle ;

<EMI ID=149.1>

<EMI ID=150.1>

<EMI ID=151.1>

carboxyle choisi parmi les alcoyles Cl-C6, le benzyle, les ben-

<EMI ID=152.1>

zhydryle, le trichloroéthyle, le 4-picolyle, le P-méthylthioéthy- <EMI ID=153.1>

<EMI ID=154.1>

et

<EMI ID=155.1>

2. Composés suivant la revendication 1, caractérisés e. ce que n est égala deux.

3. Composés suivant la revendication 1, caractérisés e ce que Trp désigne le D-tryptophyle.

4. Composés suivant la revendication 1, caractérisés e ce que Trp désigne le L-tryptophyle.

5. Composés suivant la revendication 1, caractérisés e

<EMI ID=156.1>

6. Nouveaux composés, caractérisés en ce qu'ils sont constitués par des composés répondant à la, formule.:

<EMI ID=157.1>

et par leurs sels non toxiques, formule dans laquelle n est un.

<EMI ID=158.1>

composé sont de la configuration L, sauf pour le Trp qui est de la configuration D ou L.

7. Composés suivant la revendication 6, caractérisas

<EMI ID=159.1>

<EMI ID=160.1>

tamyl)peptide ou un sel non toxique de celui-ci.

8. Composés suivant la revendication 6, caractérisés

<EMI ID=161.1>

tamyl)peptide ou par un sel non toxique de celui-ci.

9. Nouveaux composés, caractérisés en ce qu'ils répon-

<EMI ID=162.1>

<EMI ID=163.1> <EMI ID=164.1>

et tous les autres aminoacides chiraux sont de la configuration L ;

R désigne un groupe protecteur a-amino qui est séparable

<EMI ID=165.1>

R<1> et R<2>;

<EMI ID=166.1>

tuant amino de chaîne latérale de la lysine, ce groupe protecteur étant choisi parmi le benzyloxycarbonyle, le tosyle, le t-

<EMI ID=167.1>

étant choisi parmi les radicaux halo et nitro, et R <1> et R2 étant différents du groupe R susdit ;

<EMI ID=168.1>

tecteur pour le groupe hydroxyle alcoolique de la thréonine et de la serine, ce groupe protecteur étant choisi parmi l'acétyle, le benzoyle, le butyle tertiaire, le trityle, le benzyle, le dichloro-2,6 benzyle et le benzyloxycarbonyle ; et

R est choisi parmi OH, NHNH2, N3, OCH3 et

<EMI ID=169.1>

10. Composé suivant la revendication 9, caractérisé en

<EMI ID=170.1>

<EMI ID=171.1>

benzyle .

11. Composé suivant la revendication 10, caractérisé en ce que R représente NHNH2.

12. Composé suivant la revendication 10, caractérisé <EMI ID=172.1> <EMI ID=173.1>

dent aux formules :

<EMI ID=174.1>

formules dans lesquelles Trp représente le D-tryptophyle ou le L-tryptophyle, et tous les autres aminoacides chiraux sont de la configuration L ;

R <1> et R2 désignent un groupe protecteur pour le substi-

<EMI ID=175.1>

teur étant choisi parmi le benzyloxycarbonyle, le tosyle, le tamyloxycarbonyle, le t-butyloxycarbonyle, le diisopropylméthoxycarbonyle et les benzyloxycarbonyles substitués, le substituant étant choisi parmi les radicaux halo et nitro ;

<EMI ID=176.1>

tecteur pour le groupe hydroxyle alcoolique de la thréonine et de la serine, ce groupe protecteur étant choisi parmi l'acétyle, le benzoyle, le butyle tertiaire, le trityle, le benzyle, le dichloro-2,6 benzyle et le benzyloxycarbonyle;

<EMI ID=177.1>

a-amino, ce groupe protecteur a-amino étant différent des groupes ,protecteurs R et R , ce groupe protecteur a-amino étant séparable sous des conditions qui ne sépareront pas les groupes

<EMI ID=178.1>

<EMI ID=179.1>

boxyle de chaîne latérale, qui es.t séparable sous des conditions qui ne sépareront pas le groupe protecteur carboxyle R ;

<EMI ID=180.1> <EMI ID=181.1>

<EMI ID=182.1>

étant choisi parmi les alcoyles Cl-C6, le benzyle, le phénacyle, le phtalimidométhyle, le benzhydryle, le trichloroéthyle, le 4-

<EMI ID=183.1>

benzyles substitués, le substituant étant choisi parmi les radicaux nitro, méthoxy et méthyle ;

R désigne de l'hydrogène ou un groupe protecteur choisi parmi ceux qui ont été définis pour R9 ; et

n est un nombre entier de 1 à 5.

14. Composé suivant la revendication 13, caractérisé en ce qu'il correspond à la formule (A), dans laquelle R <1> et R

<EMI ID=184.1>

<EMI ID=185.1>

<EMI ID=186.1>

15. Composé suivant la revendication 13, caractérisé

<EMI ID=187.1>

<EMI ID=188.1>

désignent du 2-chlorobenzyloxycarbonyle, R , R et R désignent

<EMI ID=189.1>

<EMI ID=190.1>

16. Procédé de préparation d'un composé répondant à la formule :

<EMI ID=191.1>

dans laquelle Trp représente du D-tryptophyle ou du L-tryptophyle et tous les autres aminoacides sont de la configuration. L, caractérisé en . ce qu'il comprend l'enlèvement du ou des groupes protecteurs d'un composé correspondant de la formule :

<EMI ID=192.1> <EMI ID=193.1>

cation donnée dans la revendication 1, et, si on le désire, la conversion du composé de formule I ainsi obtenu en un sel d'addition d'acide non toxique.

<EMI ID=194.1>

ce qu'on utilise une hydrogénolyse et/ou un ensemble d'acide fluorhydrique et d'anisole.

18. Procédé de préparation d'un composé répondant à la formule :

<EMI ID=195.1>

<EMI ID=196.1>

née dans la revendication 1, caractérisé en ce qu'il comprend la cyclisation (i) d'un composé de la formule .

<EMI ID=197.1>

en présence d'un agent de cyclisation, ou bien (ii) d'un composé de la formule :

<EMI ID=198.1>

formules dans lesquelles Trp représente du D-tryptophyle ou du L-tryptophyle et tous les autres aminoacides chiraux sont de la

<EMI ID=199.1> <EMI ID=200.1>

<EMI ID=201.1>

damment de l'hydrogène ou un groupe protecteur pour le groupe

<EMI ID=202.1>

sont des groupes protecteurs a-carboxyles, et n est un nombre entier de 1 à 5, et, si on le désire, la séparation d'un ou plusieurs groupes protecteurs à partir du composé de la formule IV ainsi obtenu, pour obtenir d'autres composés de formule IV.

19. Procédé de-préparation d'un composé de la formule IV suivant la revendication 18, caractérisé en ce que l'agent de

<EMI ID=203.1>

benzotriazole.

<EMI ID=204.1>

ce qu'il est mis en oeuvre à une température comprise entre -40

<EMI ID=205.1>

21. Procédé suivant la revendication 18, caractérisé en ce que le composé de formule (F) est préparé par (i) combinaison d'un composé de la formule :

<EMI ID=206.1>

ou d'un dérivé fonctionnel acylant de celui-ci, avec un composé.

de la formule :

<EMI ID=207.1>

pour obtenir un composé de la formule :

<EMI ID=208.1>

<EMI ID=209.1>

tion donnée dans la revendication 18, R représente un groupe protecteur a-amino qui est séparable sous des conditions qui ne

<EMI ID=210.1>

<EMI ID=211.1> <EMI ID=212.1>

sous des conditions qui ne sépareront pas le groupe protecteur

<EMI ID=213.1>

<EMI ID=214.1>

22. Procédé suivant lu revendication 21, caractérisé en ce que les dérivés fonctionnels du composé de formule (lia) est l'azide.

23. Procédé suivant l'une ou l'autre des revendications <2><1> et <2><2>, caractérisé en ce que la combinaison est réalisée à une

<EMI ID=215.1>

24. Procédé suivant l'une ou l'autre des revendications <2><2> et <2>3, caractérisé en ce que le dérivé azide du composé de la formule (lia) est préparé par (i) réaction d'un composé correspondant de la formule :

<EMI ID=216.1>

avec de l'hydrazine pour obtenir un composé correspondant de la formule :

<EMI ID=217.1>

<EMI ID=218.1>

nitreux.

25. Procédé suivant la revendication 21, caractérisé en ce que le composé de formule II (a) est préparé par (i) sépa-

<EMI ID=219.1>

<EMI ID=220.1>

par méthanolyse' pour obtenir un composé de la formule : <EMI ID=221.1>

et (ii) hydrolyse du composé de formule II (d).

26. Procédé suivant l'une ou l'autre des revendications 24 et 25, caractérisé en ce que le composé de formule II (b) est préparé par combinaison en succession des aminoacides activés et convenablement protégés, Ser, Thr, Phe, Thr, Lys, Trp, Phe, phe, Asn, Lys sous des conditions de synthèse en phase solide, avec un support de résine chlorométhylé ou hydroxyméthylé.

27. Procédé suivant.l'une quelconque des revendications 16 à 2 6, caractérisé en ce que Trp désigne le D-tryptophyle.

<EMI ID=222.1>

III suivant la revendication 13, caractérisé en ce qu'il comprend la combinaison d'un composé de la formule :

<EMI ID=223.1>

ou d'un dérivé fonctionnel acylant de celui-ci, avec un composé répondant à la formule :

<EMI ID=224.1>

<EMI ID=225.1>

<EMI ID=226.1>

tion donnée dans la revendication 13, R représente un groupe protecteur a-amino qui est séparable sous des conditions qui ne

<EMI ID=227.1>

pe protecteur carboxyle 'de chaîne latérale, qui est séparable sous des conditions qui ne sépareront pas le groupe protecteur R , et, si on le désire, la séparation sélective de l'un ou l'autre <EMI ID=228.1>

<EMI ID=229.1>

eh ce que le dérivé fonctionnel du composé de formule II (a) est l'azide.

30. procédé suivant la revendication 29, caractérisé en ce que la combinaison est réalisée à une température comprise

<EMI ID=230.1>

<3><1>. procédé de préparation d'un composé de la formule.

<EMI ID=231.1>

caractérisé en ce qu'il comprend la réaction d'un composé corres-

<EMI ID=232.1>

de l'acide nitreux.

32. procédé de préparation d'un composé de la formule II suivant la revendication 9, dans laque:lle R représente -NHNH2' caractérisé en ce qu'il.comprend la réaction d'un composé correspondant de la formule il, dans laquelle R6 représente :

<EMI ID=233.1>

avec de l'hydrazine.

<3><3>. procédé de préparation d'un composé de la formule II suivant la revendication 9, caractérisé en ce qu'il comprend la combinaison par étape des 'aminoacides activés et .convenable-

<EMI ID=234.1>

sous des conditions de synthèse en phase solide avec un support de résine chlorométhylé ou hydroxyméthylé,

<3>4. Composition pharmaceutique, caractérisée en ce qu'elle comprend un composé répondant à la formule 1 ou un sel d'acide non toxique de celui-ci, en même temps qu'un véhicule acceptable du point de vue pharmaceutique.

<3>5. Composition pharmaceutique suivant la revendication 34, caractérisée en ce que, dans le composé de la formule I, Trp désigne le L-tryptophyle.

<3>6. Composition pharmaceutique suivant la revendication 34, caractérisée en ce que, dans le composé -de la formule I, Trp désigne le D-tryptophyle. <EMI ID=235.1>

37. Nouveaux undécapeptides cycliques analogues de la somatostatine, leurs intermédiaires et leurs préparations, comme décrit ci-dessus, notamment dans les Exemples donnés.

<EMI ID=236.1>