JPH02176466A - 液性試料中の特定物質の測定方法および測定器具 - Google Patents

液性試料中の特定物質の測定方法および測定器具

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JPH02176466A
JPH02176466A JP63330300A JP33030088A JPH02176466A JP H02176466 A JPH02176466 A JP H02176466A JP 63330300 A JP63330300 A JP 63330300A JP 33030088 A JP33030088 A JP 33030088A JP H02176466 A JPH02176466 A JP H02176466A
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Tomoaki Katamine
片峯　奉章
Hiroshi Sato
浩 佐藤
Suguru Mochida
持田　英
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Mochida Pharmaceutical Co Ltd
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Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ［産業上の利用分野］ 本発明は、液性試料を所定量採取した後、液性試料中の
特定物質を定量、半定量、または定性的に検知する方法
、および該方法を実施するための液性試料を所定量採取
できる構造を有する液性試料中の特定物質の測定器具に
関する。
［従来の技術］ 液性試料中の特定物質量を、固相上で反応を行わせて測
定する方法には、様々な方法が知られている。
一例をあげると、液体試料中の物質を固相上に物理的に
吸着させ、ここに、被測定物質である特定物質に特異的
に結合する物質（結合性物質）を結合させ、被測定物質
である特定物質に結合した物質の量を、放射活性、発色
、蛍光、発光等によって測定する方法がある。
また、液性試料中の特定物質に特異的に反応する物質（
反応性物質）もしくは結合性物質を結合させた固相を用
い、固相上の該反応性物質もしくは該結合性物質と該特
定物質との反応もしくは結合に基づき、液性試料中の該
特定物質量を測定する方法がある。
より具体的には、結合性物質を使用する方法としては、
結合性物質として、例えば抗原、抗体、抗体分画、核酸
、レクチン、受容体またはりガント等を用い、抗原抗体
反応、核酸ハイブリダイゼーション反応または受容体−
リガント反応等の結合反応を固相上で行わせる方法があ
る。
また、反応性物質を使用する方法としては、例えば、液
性試料中の特定物質を基質とする酵素を固相上に結合さ
せておき、液性試料中の特定物質を基質として固相上で
進行する酵素反応を検出することにより、液性試料中の
特定物質濃度を測定する酵素的測定法があり、より具体
的には、酵素としてグルコースオキシダーゼおよびペル
オキシダーゼを用いる液性試料中のグルツースの測定、
ウレアーゼおよびインドフェノールを用いる尿素窒素の
測定、コレステロールオキシダーゼおよびコレステロー
ルエステラーゼを用いるコレステロールの測定、リンゴ
酸脱水素酵素およびＮＡＤＨを用いるＧＯＴの測定、乳
酸脱水素酵素およびＮＡＤＨを用いるＧＰＴの測定等多
種類が例示でき、これらの測定法は、主として尿検査や
血液検査に利用されている。
固相上におけるこれらの反応を利用して液性試料中の特
定物質量を測定する方法は、測定手技が簡便であり、か
つ、精度、特異性および感度が高いので、臨床検査等の
分野で汎用されている。
そして、これらの技術の中でも、固相としてシート状固
相を用いる方法は、微量の液性試料中の特定物質の測定
が可能であり、かつ、血清、尿のみならず、乳頭分泌液
のように粘稠性や蛋白質濃度等の性状の検体差が著しく
大きい場合にも正確な測定を可能とし、特に有用な方法
である。
シート状固相上での反応を利用して液性試料中の特定物
質濃度を測定する方法の一例として、微量の乳頭分泌液
中の特定物質、特にＣＥＡ（ｅａｒｃｉｎｏｅｍｂｒｙ
ｏｎｉｃ　ａｎｔｉｇｅｎ）等の腫瘍関連抗原の測定を
行う方法が、本発明者等により提案されている（特願昭
６３−２５２３５７号公報）。
この方法は、乳頭異常分泌症の患者における乳癌の早期
診断を可能とし、特に、癌検診スクリーニングの際の視
触診で見逃されやすい無腫瘤性乳癌を極めて高い陽性率
で発見でき、なおかつ、測定を簡便にかつ正確に行いう
る非常に有用性の高い方法である。
特願昭６３−２５２３５７号公報記載の方法は、乳頭分
泌液という採取できる試料の量が多くともせいぜい１０
μＬ程度にすぎず、粘稠度にパラつきの多い試料中の特
定物質２ａ度の測定を可能としたものであり、シート状
固相上の比較的広い面積に試料を塗布するので、試料を
、より多くの被測定物質である特定物質と特異的に結合
する物質、例えば抗体と接触させることができ、同時に
、試料液相の厚みを薄くすることができ、よって、反応
効率を高め、粘稠性等の試料性状の測定結果への影響を
極小に抑えたものである。　　従って、ピペットやキャ
ピラリー等の通常の採取用具による採取が困難な症例や
、試料の量が微量すぎて従来は測定できなかった症例の
測定を可能とした。
なお、シート状固相の材質を選択することにより、試料
中の非特異成分の固相上への非特異的吸着を低くするこ
とができる。
加えて、この方法では、試料が固相上で乾固する前であ
っても、乾固した後であっても、また、その粘稠性の度
合に拘らず、非特異成分を洗浄操作によって容易に除去
できるため、乾固の有無や試料の性状の影響も極小に抑
えられた。　　これにより、マススクリーニングの場合
のように多数の検体が不定期に生じるような場合には、
検体採取時には検体を固相上に塗布するだけで放置し、
後でまとめて反応を行なえるという自由度も付加された
。
ところで、これら従来の測定方法のほとんどは、必要と
される試料の量に多少はあるが、いずれも、固相上の反
応領域を完全に浸漬、もしくは固相上の反応領域に塗布
するに十分な量の液性試料をあらかじめ準備し、固相上
の反応領域を液性試料中に一定時間浸漬するか、もしく
は液性試料を塗布して固相上で反応を行わせ、生じた反
応を利用し、液性試料中の特定物質濃度を測定するもの
である。
固相上での反応が、液性試料中の特定物質濃度にのみ依
存し、液性試料の液量、つまりは試料中の特定物質の絶
対量に依存しない場合には、固相と接触させる液性試料
の液量は、固相上の反応領域を完全に浸漬、もしくは固
相上の反応領域に塗布するに十分な量であれば任意の量
でかまわない。
固相上での酵素反応を利用した測定試薬の一部、例えば
カップに任意量採取された尿に反応用固相を浸漬する尿
検査試薬等がこの場合に該当する。
一方、固相上での反応が、液性試料中の特定物質濃度に
依存するだけでな（、液性試料の液量つまりは試料中の
特定物質の絶対量にも依存する場合には、固相と接触さ
せる液性試料の液量は、あらかじめ決められた一定量で
ある必要がある。
固相上での酵素反応を利用した一部の測定方法と、固相
上での結合反応を利用した測定方法の大部分がこの場合
に該当する。
［発明が解決しようとする課題］ 上述のごとく、液性試料中の特定物質量の測定方法とし
て、簡便な方法が知られている。
液性試料中の特定物質量の測定において、固相上での反
応が、液性試料中の特定物質濃度にのみ依存し、液性試
料の液量、つまりは試料中の特定物質の絶対量に依存し
ない場合には、従来知られている方法で簡便な測定が可
能である。　一方、反応が試料液量にも依存する場合で
あっても、陽性／陰性の判定でよい場合や半定量でよい
場合等の限定された用途範囲では、採取された液性試料
液量が厳密でなくてもよいので、従来知られている方法
で十分測定可能である。
しかし、試料の液量に定量性が要求される測定では、一
定量の試料を量り取るという工程が加わるため、この作
業のための分注ピペットや計量カップ等の道具が必要と
なり、試料数が多くなれば多（なるほど試料の煩わしい
計量作業に要する時間を無視できなくなり、測定のため
の作業効率が低下する。　特に、試料量が微量の場合、
この作業は慎重に正確に行う必要があり、加えて、先に
述べた乳頭分泌液のように、その粘稠性等の試料の性状
に差異のある場合や、その粘稠性のためにピペットやキ
ャビラリーでの正確な採取が困難な場合には、試料液量
の計量操作は深刻な障害となる。
従って、固相上の反応領域に、液性試料を簡便に実質的
に一定量直接採取でき、固相上で試料が乾固する前でも
、乾固した後でも、都合の良い時に測定を行える方法の
開発は、特にマススクリーニングの現場から強い要望が
ある。　　中でも、液性試料が、例えば乳頭分泌液のよ
うに、微量でかつ性状の差異が大きい場合、この方法が
切望されている。
本発明者らは、上記の社会的要求に鑑み、試料の液量が
微量であっても、試料を所定の一定量採取でき、かつ簡
便な方法で液性試料中の特定物質量を測定できる方法お
よび該方法に使用する測定器具を開発すべく研究を重ね
た結果、固相上での反応に基づいた液性試料中の特定物
質量の測定に際し、採取した液性試料のうちの実質的に
一定量だけを保持できる器具構成を発明し、この知見に
基づいて、本発明を完成するに至ったものである。
本発明の目的は、液性試料を所定量採取した後、液性試
料中の特定物質量を定量、半定量、または定性的に検知
する方法、および該方法を実施するための液性試料を所
定量採取できる構造を有する液性試料中の特定物質の測
定器具を提供することにある。
［課題を解決するための手段］ 本発明の第一の態様は、所定の固相で構成される反応領
域を存する器具を用いて液性試料中の特定物質量を測定
する方法であって、前記液性試料を、多孔性部材を経て
前記固相で構成される前記反応領域に保持せしめ、実質
的に一定量の前記液性試料を、前記反応領域で反応させ
ることを特徴とする液性試料中の特定物質の測定方法を
提供するものである。
また、本発明の第二の態様は、少なくとも一個の固相で
構成される所定の反応領域を有する器具本体と、該反応
領域上に載置される液性試料透過性の多孔性部材とを有
することを特徴とする液性試料中の特定物質の測定器具
を提供するものである。
以下に、本発明について詳細に説明する。
本発明の測定方法は、実質的に一定量の液性試料を簡便
な方法で採取し、該試料中の特定物質量を、固相で構成
される反応領域で反応させることによって測定すること
を特徴とする。
本発明法では、液性試料を多孔性部材の多孔性部分を通
して反応領域に付与することにより、実質的に一定量の
液性試料を前記反応領域で反応させることを可能とした
。
本発明法を、図面に基づいて説明する。
第１ａ図、第１ｂ図、第１ｃ図、第１ｄ図および第１ｅ
図は、本発明法の好適な一実施例の液性試料採取までの
工程を示す模式図である。
第１ａ図は、液性試料が付与される前の状態を示す。　
即ち、本実施例では、器具本体の固相２１は、反応領域
２２と非反応領域２６とに分かれており、固相２１上に
は、間隔をおいて、着脱可能な多孔性部材の多孔性（ネ
ット）部分１１があり、固相２１とネ・ノド部分１１の
間には、反応領域２２とネット部分１１との間隔を一定
に保ち、ネット部分１１を張設する構造となっている枠
部材２５がある。
尚、器具本体と多孔性部材の構造は、これに限定されず
、例えば後述する第２ａ図のように、反応領域２２に多
孔性部材ｌの多孔性部分１１が接していてもよいし、同
じく後述する第２ｂ図のように、反応領域２２に多孔性
部材ｌの支持体１２が載っていてもよい。
第１ｂ図は、ネット部分１１の上から液性試料４０を付
与した状態を示し、第１ｃ図は、ネット部分１１の上か
ら余分な液性試料４０を除去部材４１で除去している状
態を示す。
本実施例では、余分な液性試料４０を除去部材４１で除
去しているが、この工程は必須ではない。
第１ｄ図は、除去部材４１を取り除いた状態を示し、第
１ｅ図は、さらに多孔性部材を取り除いた状態を示す。
　　尚、多孔性部材は取り除力）なくてもよい。　　そ
して、この状態で、固相２１の反応領域２２上に、液性
試料４０中の特定物質が結合または吸着し、あるいは反
応領域２２上で反応を行い、特定物質量が測定される。
本発明法の対象となる被測定物質である特定物質には、
例えば、酵素の基質が挙げられる。　即ち、グルコース
オキシダーゼの基質であるβ−Ｄ−グルコース、ペルオ
キシダーゼの基質である過酸化水素、ウレアーゼの基質
である尿素、コレステロールオキシダーゼの基質である
コレステロール、コレステロールエステラーゼの基質テ
するコレステロールエステル、リンゴ酸脱水１ｕｌ素の
基質であるオキザロ酢酸、乳酸脱水素酵素の基質である
乳酸等である。
また、各種抗原、ハプテン、抗体、抗体分画、核酸、レ
クチン、受容体およびリガンド等が挙げられる。　即ち
、抗原またはハブテンとしては、従来から血中濃度が測
定されてきた腫瘍関連抗原、例えばＣＥ　Ａ　（ｃａｒ
ｃｉｎｏｅｍｂｒｙｏｎｉｃ　ａｎｔｉｇｅｎ）　−。
ＡＦＰ　（α−フェトプロティン）　、ＴＰＡ（ｉｓｓ
ｕｅ　ｐｏｌｙｐｅｐＨｄｅ　ａｎｔｉｇｅｎ）、およ
びその他の単クローン性抗体によって認識される癌関連
抗原等、例えばＣＡ１９−９、ＣＡ１２５、ＴＡＧ７２
、ＣＡ１５−３等が挙げられる。　　抗体は、多クロー
ン性抗体であっても単クローン性抗体であってもよ（、
また、精製抗体に限定されるものではな（、特定物質と
の結合活性を有する抗体を含有する抗血清もしくは塩析
抗体等の粗精製物も含む。　抗体分画としては、抗原と
の結合活性を有する抗体分子の部分成分で、例えば、Ｆ
ｅｂ。
Ｆ（ａｂ）２　等、核酸としては、病原体ゲノム（ウィ
ルスゲノム）等、受容体としては、ホルモンレセプター
、例えばエストロゲンレセプタープロゲステロンレセプ
ター等が挙げられ、さらに病原微生物抗原、もしくは病
原微生物に対する抗体等も測定可能である。
本発明法の対象となる液性試料には、血液、血清、血漿
、尿、汗、涙液、唾液、喀痰、乳頭分泌液、細胞培養液
、組織抽出液、組織洗浄液等、測定対象である特定物質
を含むことが予想される液性試料全てを含み、そのまま
でも、希釈液でもよい。
また、本発明法では、液性試料の採取は、ピペット、キ
ナピラリー等の採取用具を用いて行ってもよいが、必要
な場合には、特に液性試料が乳頭分泌液のように液量が
微量であったり、粘稠性がある場合には、多孔性部材の
多孔性部分を通して直接採取することも可能である。
採取された液性試料の過剰部分は、特に液性試料に粘稠
性がある場合は、多孔性部材を取り除くことによって同
時に取り■除かれるが、好ましくは除去部材を用い、多
孔性部材の多孔性部分の上から液性試料の過剰部分を取
り除く。　　この工程を加えることにより、反応に使用
される液性試料の液量の精度がさらに上昇する。
被測定物質である特定物質の量を測定する方法は、例え
ば以下のものが挙げられる。
即ち、第１の方法として、固相で構成される反応領域に
、液性試料中の被測定物質である特定物質を物理的に吸
着させ、ここに、該特定物質と特異的に結合または反応
する物質を作用させ、特定物質と特異的に結合または反
応した物質が示す指標に基づいて、特定物質の量を測定
する方法が挙げられる。
この方法では、液性試料中の特定物質以外の物質も反応
領域に物理的に吸着するが、固相の材質を選択すること
により、特定物質以外の物質の吸着を少なくすることが
できる。
また、この方法では、特定物質の量の測定は、該特定物
質と特異的に結合または反応する物質が示す指標に基づ
くので、反応領域に特定物質以外の物質の吸着が生じて
も、精度は若干低下する場合があるが、特定物質の量の
測定は可能である。
より好ましい第２の方法は、あらかじめ、液性試料中の
被測定物質である特定物質と特異的に結合または反応す
る物質を、固相で構成される反応領域に不溶化させてお
き、ここに、前記の方法により実質的に一定量の液性試
料を付与する工程を含む方法である。
第２の方法を、液性試料中の被測定物質である特定物質
が抗原である場合について説明する。
抗原に対する抗体または抗体分画（以下、両者を含めて
単に抗体という）を、あらかじめ固相で構成される反応
領域に結合させておき、ここに、実質的に一定量の液性
試料を付与し、該液性試料中の被測定物質である抗原を
結合させ、次に、ここに、該抗原と特異的に結合し、同
時に抗原の量を測定する指標となる標識剤が結合した抗
体（標識抗体）を反応させると、標識抗体の示す指標に
基づいて、液性試料中の抗原の量を測定することができ
る（サンドイツチ法）。
また、抗原に対する抗体を、あらかじめ、固相で構成さ
れる反応領域に一定量結合させておき、ここに、実質的
に一定量の液性試料と量が既知のｍ！ａ抗原とを付与し
、該標識抗原の示す指標に基づいて、液性試料中の抗原
の量を測定することができる（競合法）。
さらに、第２の方法を、液性試料中の被測定物質である
特定物質が酵素の基質である場合について説明すると、
あらかじめ、固相で構成される反応領域に、酵素をその
活性中心以外の部位で結合させておき、こ・こに、実質
的に一定量の液性試料を付与し、該液性試料中の被測定
物質である基質と酵素との反応に起因する指標から、液
性試料中の基質の量を測定する。
上記の方法の“うち、第２の方法は、第１の方法と比べ
、測定感度が高い。　　また、第２の方法のうち、サン
ドイツチ法は、液性試料中の被測定物質である特定物質
以外の成分の影響を受けにくい上に、測定感度または測
定可能な濃度範囲の調節が容易である。　　従って、サ
ンドイツチ法が望ましい。
また、本発明法に用いるサンドイツチ法は、固相で構成
される反応領域に不溶化された被測定物質である特定物
質と特異的に結合する物質と、被測定物質である特定物
質と、被測定物質である特定物質と特異的に結合する標
識物質との３成分の反応の順序の相違に関し、３種の変
法が可能である。
被測定物質である特定物質が抗原である場合について説
明すると、 ■抗体を結合させてある反応領域上に、抗原を含有する
ことが予想される液性試料を付与し、反応させた後、こ
こに、標識抗体を反応させ、その後、反応領域上に結合
している抗体に結合しなかった液性試料成分および標本
抗体を、洗浄操作により除去し、反応領域上に結合した
標識抗体の１から、液性試料中の抗原の量をを測定する
方法、■抗体を結合させてある反応領域上に、標識抗体
もあらかじめ塗布しておき、ここに、抗原を含有するこ
とが予想される液性試料を付与し、３者を同時に反応さ
せる方法、 ■採取した液性試料と標識抗体とをあらかじめ混合して
おき、これを、抗体を結合させてある反応領域上に付与
し、反応させる方法である。
なお、■の方法では、必要であれば、抗体を結合させて
ある反応領域に標識抗体を塗布した後に凍結乾燥を行う
と、標識抗体等の試薬の安定性を増加させうる。
これら３ＦＪの方法のうち、特に液性試料が乳頭分泌液
のように液量が微量であったり、粘稠性がある場合には
、本発明法は、試料を実質的に一定同直接採取できるの
で、■または■の方法で行うことが好ましい。
前記第１の方法および第２の方法で用いる指標となる物
質とは、液性試料中の特定物質に対して特異的に結合す
る物質に、識別可能な標識剤を結合させたもの（標識物
）、あるいは、液性試料中の特定物質と反応することに
より、発色等の識別可能な信号を与える物質である。
液性試料中の特定物質に対して特異的に結合する物質に
付ける識別可能な標識剤としては、色素、放射性同位体
元素、酵素、もしくは蛍光物質が例示できるが、安定性
、検出感度、安全性、および取り扱いが容易である点等
から、酵素が好適である。　酵素としては、西洋わさび
ペルオキシダーゼ、アルカリフォスファターゼ等一般に
酵素免疫測定法において用いられている酵素が使用でき
る。
反応結果は、免疫反応後に反応領域上の特定物質に結合
した標識物の量または活性を測定することにより得られ
る。　　識別可能な標識剤が酵素の場合には、この標識
物の測定は、標識酵素の酵素反応の結果により生じる物
質量を測定することにより、簡便に行うことができる。
　物質量の測定は、反射率計、蛍光光度計、発光光度計
等の測定機器を用いて物理的に定量的に行なうこともで
きる。　　また、該物質が発色物質の場合には、発色の
度合を色の濃さによりいくつかの段階に分けて肉眼的に
半定ユしてもよいし、陰性・陽性のみの定性で判定すれ
ば、より簡便である。　　さらに、職別可能な標識剤が
放射性同位体元素である場合は、直接放射活性を測定す
ればよい。
酵素反応によって発色する発色剤としては、股的に酵素
免疫測定法で使用されている発色剤が使用可能である。
　　例えば、ペルオキシダーゼに対しては、２，２°−
アジノジ（３−エチルベンズチアゾリン）−６′　−ス
ルホン酸（ＡＢＴＳ）、０−フェニレンジアミン（ＯＰ
Ｄ）、テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）、５−アミノ
サリチル酸等があり、アルカリフォスファターゼに対し
ては、ｐ−ニトロフェノールりん酸、もしくは、フェニ
ルりん酸を基質として用い、酵素反応によって生成する
フェノールを４−７ミノアンチビリンとの酸化的共役に
よって呈色させてもよい。　　また、固相上に沈着する
性質を有している発色物質で、その色調が経時的に大き
く変化しない場合には、判定後も結果を残すことが可能
であり、さらに有用である。　　このような発色剤のＰ
ｌとして、ペルオキシダーゼに対するジアミノベンジジ
ン、アルカリフォスファターゼに対する５−ブロモ−４
−クロロ−３−インドリルりん酸塩（Ｂ　ＣＩ　Ｐ）等
、多種知られている。
液性試料中の特定物質と反応することにより、発色等の
識別可能な信号を与える物質とは、例えば、液性試料中
の特定物質がある酵素の基質となりうる場合、酵素がそ
れにあたる。
反応結果は、反応領域上の特定物質との反応に基づ（活
性を測定することにより得られる。　液性試料中の特定
物質がある酵素の基質となりうる物質であり、該特定物
質と反応することにより識別可能な信号を与える物質が
酵素の場合には、この測定は、酵素反応の結果により生
じる物質量を測定することにより、簡便に行うことがで
きる。
物質量の測定は、標識剤の項で説明した通りである。
また、この方法が適用される特定物質と酵素の組合せは
、以下のものが例示できる。
即ち、特定物質がβ−〇−グルコースの場合、対応する
酵素はグルコースオキシダーゼであり、過酸化水素の場
合はペルオキシダーゼであり、尿素の場合はウレアーゼ
であり、コレステロールの場合はコレステロールオキシ
ダーゼであり、コレステロールエステルの場合はコレス
テロールエステラーゼであり、オキザロ酢酸の場合はリ
ンゴ酸脱水素酵素であり、乳酸の場合は乳酸脱水素酵素
である。
なお、本発明法では、液性試料を、多孔性部材の多孔性
部分を通して、実質的に一定量、反応領域上に付与した
後、すぐにその後の操作を行わな（でもよい。　実質的
に一定量の液性試料が反応領域上で乾固した状態で放置
し、多数の試料が集まった後、まとめて以後の操作を行
ってもよい。
続いて、本発明の第２の態様である液性試料中の特定物
質の測定器具について説明する。
本発明の測定器具は、液性試料を実質的に一定量採取で
き、しかも、その場〒１簡便な方法で、液性試料中の特
定物質の量を測定できるという特徴を有する。
以下に、図面に基づき、その構成を説明する。
・本発明の測定器具は、第２ａ図、第２ｂ図、第３ａ図
および第３ｂ図に示すように、多孔性部材１と器具本体
２とを有し、多孔性部材ｌは、器具本体２に載置される
。
多孔性部材ｌは、第２ａ図に示すように、多孔性部分１
１のみで構成してもよいし、第２ｂ図および第３ａ図に
示すように、多孔性部分ｌｌと支持体１２で構成しても
よい。
多孔性部分１１は、液性試料透過性の材料で作られ、そ
の材質としては、例えば、ガラス繊維製ろ紙、セルロー
ス製ろ紙、ナイロン製ネット、ウレタン製スポンジ、合
成繊維製布地等が挙げられるが、これらに限定されるも
のではない。
多孔性部分１１が張設される支持体１２の材質としては
、ポリエチレン、ポリエステル等が挙げられるが、これ
らに限定されるものではない。
多孔性部材１の形状は、特に限定されないが、後述する
器具本体の横断面の形状が同じであることが好ましい。
多孔性部材１の大きさは、後述する器具本体２の大きさ
との関連で規定されるが、多孔性部材１の多孔性部分１
１は、器具本体２の反応領域２２と同程度の大きさであ
ることが好ましい。
器具本体２は、固相２１で構成される反応領域２２を有
する。
器具本体２の形状は、特に限定されないが、好ましくは
、その断面が円形、楕円形、四角形、六角形等の形状と
する。
また、器具本体２は、第２ａ図および第２ｂ図に示すよ
うに、台２４にシート状固相２１が張設されていること
が好ましい。　　さらに、第３ａ図および第３ｂ図に示
すように、台２４にシート状固相２１が張設され、台２
４の周囲には、シート状固相２１を固定するための枠部
材２５があることが好ましい。　　なお、枠部材２５は
、第３ｂ図に示すように、多孔性部材１の多孔性部分１
１に張力を与え、反応領域２２と多孔性部材１の多孔性
部分１１との間の間隔を全体にわたって均一にする構造
となっていることが、さらに好ましい。
また、台２４が所定の開口を有し、該開口部にシート状
固相２１があると、透過光を利用して測定を行う際に有
利である。
器具本体２の台２４および枠部材２５の材質は、各種プ
ラスチック、例えばポリエチレン、ポリエステル等が好
ましい。
反応領域２２は、固相２１全体であってもよいが、好ま
しくは、第３ａ図に示すように、固相２１の一部が反応
領域２２であり、反応領域２２と非反応領域２６との境
界部２３に、反応領域２２内のシート状固相を均一に緊
張させるための部材を設ける。　　あるいは、第１ａ図
に示すように、固相２１の一部を撥水剤等で処理し、非
反応領域２６とする。
反応領域２２の形状は、特に限定されないが、例えば、
円形、楕円形等が好ましい。
器具本体２の固相２１は、その一部または全体が反応領
域２２となるが、実質的に液体不透過性のシート状固相
とすることが好ましい。
このような固相２１の材質としては、ポリエステル、ポ
リプロピレン、塩化ビニル、ポリエチレン、ポリメチル
ペンテン等のプラスチックや、ナイロン膜、ニトロセル
ロース膜等の合成膜等が挙げられ、紙を上記の材料でコ
ートしたもの等も使用可能であるが、ポリエステル、ポ
リプロピレン、ポリエチレン等のプラスチ・ツクやナイ
ロン膜等が、洗浄操作が容易である等、取り扱いに便利
であるので好ましい。　特に、液性試料が乳頭分泌液で
、被測定物質である特定物質がＣＥＡである場合は、固
相２１の材質として、ポリエステル、ポリプロピレン、
ポリエチレン等のプラスチックやナイロン膜等を用いる
と、非特異的な吸着が少なく、好ましい。
また、シート状固相が液体不透過性であると、検体量が
超微量であっても、採取される（反応に供される）検体
量の定量性が保たれ、検体の粘稠性等の性状の測定結果
への影響を極小に抑えられるという利点も有する。
さらに、固相２１を、実質的に液体不透過性のシート状
固相とすると、固相で構成される反応領域２２に吸着し
なかった成分は、反応領域２２上で乾固する前であって
も、乾固した後であっても、また、その粘稠性の度合に
拘らず、洗浄操作によって容易に除去できるため、乾固
の有無や検体の性状の測定結果への影響を極小に抑えら
れる。
これにより、マススクリーニングの場合のように、多数
の検体が不定期に生じるような場合には、検体採取時に
は、検体を多孔性部材１の多孔性部分１１を通して反応
領域２２上に付与するだけで放置し、後でまとめて反応
を行えるという自由度が付加された。
なお、これらの効果は、シート状固相の材質を実質的に
液体不透過性のプラスチックとすることにより、さらに
効果的となる。
固相２１が、反応領域２２と非反応領域２６とに分けら
れる場合、その境界部２３は、例えば、エポキシ系樹脂
等の材料を使用し、印刷、蒸着、熱圧着等の方法で、固
相２１上に設ける。　　これにより、反応領域２２全体
が均一に緊張せられ、液性試料の採取量の精度が上昇す
る。
また、固相２１の一部を撥水剤等で処理し、非反応領域
２６としてもよい。　　このような処理に使用される材
料として、シリコーン、エポキシ系樹脂等の撥水剤、ア
ルミニウムのような金属等が例示できる。
さらに、固相２１の一部または全部に、液性試料中の被
測定物質である特定物質に反応性もしくは結合性を有す
る物質を結合させ、反応領域２２としてもよい。　　こ
こで、結合とは、化学的結合、物理的結合等の方法によ
り、反応中に実質的に遊離しないように、反応性物質も
しくは結合性物質を固相２１に固定することを意味する
。　　この方法は、測定感度を上昇させる。
なお、固相２１の一部または全部に結合させる液性試料
中の被測定物質である特定物質に反応性もしくは結合性
を有する物質については、本発明の第１の態様で説明し
た通りである。
また、固相２１の全部に液性試料中の被測定物質である
特定物質に反応性もしくは結合性を有する物質を結合さ
せる方法は、例えば、液性試料中の被測定物質である特
定物質に結合性を有する物質が抗体である場合は、以下
の通りである。
抗体は、市販のものを利用してもよいし、常法に従って
調製してもよい。
抗体を固相で構成される反応領域に結合させるには、物
理的に結合させても化学的に結合させてもよい。　例え
ば、抗体溶液中に固相を浸し、４〜５６°Ｃで０．５〜
２４時間、好ましくは３７〜５０℃で１〜２時間時間イ
ンベコベート物理的に結合させる。
用いる抗体の濃度は、精製抗体または精製抗体分画の場
合、１　μｇ−１００ｍｇ／ｍＬであればよく、１〜１
００μｇ　／　ｍ　Ｌが好ましい。
固相の抗体溶液への浸漬後の乾燥手段は、風乾燥でも、
凍結乾燥でもよい。
しかしながら、抗体を固相で構成される反応領域へ結合
させる方法は、これに限、定されるものではなく、塗布
操作および洗浄操作等の通常の測定操作によって反応領
域から抗体が実質的に脱離しないように、反応領域に抗
体を固定化する手段をすべて含む。
抗体を固相で構成される反応領域に結合させた後、チト
クロームＣ溶液を加熱変性させたものや、ＢＳＡ　（ウ
シ血清アルブミン）、）ＩＳＡ（ヒト血清アルブミン）
、動物血清、脱脂粉乳等、液性試料中の特定物質との抗
原抗体反応には全く関与しない物質で反応領域をコート
することにより、非特異的な反応を抑制でき、結果の判
定が容易となる。
反応領域内に結合させる抗体の量は、液性試料中におい
て測定すべき特定物質の濃度に対して決定する。　例え
ば、ある濃度（カットオフ濃度）以上の特定物質が検体
中に含有されている場合にはすべて陽性と判定される測
定系では、反応領域内に結合されている抗体の総抗原結
合部位が、そのカットオフ濃度の特定物質で実質的に飽
和されるような量の抗体をこの領域内に結合させると、
判定を容易にかつ厳密に行うことができる。　別の例と
して、検体中に含有されている特定物質をある濃度範囲
で定量もしくは半定量する必要がある場合には、その必
要な濃度範囲の上限濃度で、領域内に結合されている抗
体の総抗原結合部位が実質的に飽和されるような量の抗
体を該領域内に結合させると、判定を容易にかつ厳密に
行うことができる。
本発明の測定器具は、その最低必須要件として、上記の
多孔性部材ｌと器具本体２とを有するが、多孔性部材１
と器具本体２との位置関係は以下の通りである。
即ち、第２ａ図のように、多孔性部材１の多孔性部分１
１が、器具本体２の反応領域２２に接していてもよいし
、第２ｂ図および第３ｂ図で示されるように、多孔性部
材１の多孔性部分１１と器具本体２の反応領域２２との
間に、所定の間隔があっでもよい。　　これは、多孔性
部材１の多孔性部分１１に用いる材料の材質と、測定す
る検体の性状（粘度等）によって選択する。
第３ｂ図について詳述すると、多孔性部材１の多孔性部
分１１までの高さｈｌは、器具本体２の反応領域２２の
上面から７ランジ２８の上面までの高さｈ２よりも太き
（、しかも、器具本体２の枠部材２５が、多孔性部材ｌ
の多孔性部分１１に張力を与えるので、多孔性部分１１
と反応領域２２との間の間隔が均等となっている。
但し、多孔性部材ｌの多孔性部分１１と器具本体２の反
応領域２２の間に所定の間隔を設ける場合でも、第２ｂ
図や第３ｂ図に示された構造に限定されるものではなく
、例えば、第３ｂ図に示された構造に類似しているが、
支持体１２が器具本体２のフランジ２８の上面に達しな
い構造等であってもよい。
また、多孔性部材１と器具本体２は、一体化されていて
もよいし、着脱可能であってもよい。
本発明の測定器具は、上記の多孔性部材ｌと器具本体２
とを有するが、さらに、除去部材４１を有することが好
ましい。
除去部材４１は、第１ｂ図および第１Ｃ図に示すように
、液性試料４０が多孔性部材１の多孔性部分１１の上か
ら付与された後に、多孔性部材１の多孔性部分１１の上
に残留した液性試料４０の過剰部分を除去するために使
用される。　　あるいは・、反応溶液の過剰部分を除去
するために使用される。
除去部材４１は、特に、液性試料４０が粘稠性を有する
場合はスパーチル等であってもよいが、過剰の液性試料
４０を吸収できる液体吸収性の材料であることが好まし
く、その材料として、例えば、多孔性ポリエチレン、ポ
リウレタン、ろ紙、布等が挙げられる。
以上、本発明の測定器具について説明してきたが、本発
明の測定器具は、その検体測定部に、検体反応領域を一
以上有する。
第４ａ図、第４ｂ図および第４Ｃ図に、本発明の測定器
具３の好適な一実施例を示すが、この例では、測定器具
３は、境界部２３で区分された検体の反応領域２２を複
数有する。
ここで、第４ａ図は、多孔性部材１の平面図、第４ｂ図
°は、器具本体２の平面図、第４Ｃ図は、多孔性部材ｌ
を器具本体２に重ねた状態を示す断面図である。
尚、多孔性部材ｌは、器具本体２と一体化されていても
よ（、着脱可能であってもよい。　多孔性部材１の支持
体１２の底面が器具本体２の固相２１の非反応領域２６
に載り、多孔性部分１１と反応領域２２との間に一定の
間隔を有する空間が形成され、ここに、所定量の液性試
料が採取される。
そして、この例では、多孔性部材１の個々の多孔性部分
１１が、器具本体２０個々の反応領域２２と対応してい
るが、複数の反応領域２２を有する器具本体２全体を、
一つの大きな多孔性部分が覆う構造であってもよい。
このような複数の反応領域を有する例では、測定器具３
は、複数の検体を同時に反応させることができるので、
マススクリーニングの場合に特に有用である。
さらに、本発明の測定器具は、対照用反応領域および／
または標準物質反応領域を有することが好ましい。
第６ａ図、第６ｂ図および第６ｃ図に、本発明の測定器
具３の好適な他の実施例を示すが、この例では、測定器
具３は、検体中に含有され、被測定物質である特定物質
とは交叉反応性を有しない物質と反応性あるいは結合性
を有する物質を不溶化させてある対照用反応領域６と、
被測定物質である特定物質と反応性あるいは結合性を有
する物質を不溶化させてある複数の検体用反応領域２２
を有する検体測定部４からなる。
ここで、第６ａ図は、多孔性部材１の平面図、第６ｂ図
は、器具本体２の平面図、第６ｃ図は、多孔性部材１を
器具本体２に重ねた状態を示す断面図である。
第６Ｃ図に示すように、検体測定部４の反応領域２２は
、各々多孔性部材１の多孔性部分１１で覆われているが
、対照用反応領域６は、多孔性部材１で覆われない。
また、多孔性部材ｌは、器具本体２と一体化されていて
もよく、着脱可能となっていてもよい。
多孔性部材１の支持体１２の底面が、器具本体２の固相
２１の非反応領域２６に載り、このとき、多孔性部分１
１と反応領域２２はほぼ接触しており、ここに、所定量
の液性試料が採取される。
対照用反応領域６があると、洗浄等の操作が十分行われ
たか否かを確認でき、また、検体について定性的に判定
を行う場合、判定の精度を上昇させる。
また、第５図に示す例では、多孔性部材ｌと器具本体２
とを有する検体測定部４の他に、複数の濃度の異なる標
準品を反応させるための標品測定部５を有する。
この例では、標品測定部５は、固相２１で構成される反
応領域２２を複数有し、多孔性部材１はないが、標品測
定部５の反応領域２２と非反応領域２６とは、検体測定
部４の場合と同様に、境界部２３を設けることで分けて
もよいし、非反応領域２６を撥水剤等で処理する方法、
反応領域２２のみに非測定物質である特定物質に反応性
もしくは結合性を存する物質を結合させる方法等の手段
で分けてもよい。
第５図に示すような測定器具３では、検体と標準品とを
同時に反応させうるので、液性試料中の特定物質の定量
、半定量、または定性測定が、容易に、かつ精度高く行
いうる。
［実施例］ 以下に、実施例を挙げて本発明を具体的に説明するが、
本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。
（実施例１）　多孔性部材の多孔性部分の材質と採取さ
れる液性試料量との関係 以下の条件で測定器具を作製し、それを用いて液性試料
を採取し、採取量を測定した。　結果は表１−■〜１−
■に示した。
（ａ）測定器具の作製 ６ｍｍφの円盤状に切断したｉｔｍ厚のポリエチレン製
板の上に、０．０４ｍｍの間隔をあけて、同じ（６ｍｍ
φの円盤状に切断した下記材質のろ紙またはネット（多
孔性部材の多孔性部分にあたる）を１枚もしくは２枚固
定した。
（材質と枚数） ■孔サイズ１μｍ、０．４ｍｍ厚のガラス繊維製ろ紙　
１枚 ■孔サイズ１μｍ、０．２ｍｍ厚のセルロース類ろ紙　
１枚 ■孔サイズ１０μｍのナイロン製ネット　１枚■孔サイ
ズ２０μｍのナイロン製ネット　１枚■孔サイズ３０μ
ｍのナイロン製ネット　１枚■孔サイズ３０μｍのナイ
ロン製ネット　２枚（ｂ）試料の採取 予めｉｔｍを測定しである測定器具のろ紙またはネット
の上から、液性試料（蒸留水、尿、血清、乳頭分泌液）
を各々５μＬ添加し、続いて、ろ紙またはネットの上面
に孔サイズ５０μｍのセルロース類ろ紙をあて、ろ紙ま
たはネットの上にある液性試料の過剰部分を吸収除去し
た。
速やかに重量を測定し、各試料の比重で補正し、採取さ
れた試料液量を算出した。　なお、測定はそれぞれ１０
回行った。
（実施例２）　試料の添加液量の影響 実施例！−■に示した測定器具を用い、予め重量を測定
しである測定器具のネットの上から、血清を１．　２．
５．１０または２０μＬ添加し、統いて、ネットの上面
に孔サイズ５０μｍのセルロース類ろ紙をあて、ネット
の上にある血清の過剰部分を吸収除去した。
速やかに１１ｆｆｉを測定し、各試料の比重で補正し、
採取された自涜の液量を算出した。　　なお、測定はそ
れぞれ１０回行った。
結果は表２に示した。
（実施例３）　測定器具を用いた酵素反応ポリエチレン
製板上に一定量の西洋わさびベルオキシダーゼ（以下、
ＨＲＰＯという）を不溶化させてあること以外は、実施
例１に示したと同様の測定器具を用い、以下の方法で酵
素反応を行わせ、反応液の吸光度（４９２ｎｍ）を測定
した。
測定はそれぞれ１０回行い、結果を表３に示した。
（酵素反応） 測定器具のろ紙またはネットの上から、０−フェニレン
ジアミン３　ｍ　ｇ　／　ｍ　Ｌおよび０．０１％過酸
化水素水を含むＭｃｌｌｖａｉｎ緩衝液５μＬを添加し
、続いて、ろ紙またはネットの上面に孔サイズ５０μｍ
のニトロセルロース製ろ紙をあて、ろ紙またはネット上
にある反応溶液の過剰部分を吸収除去した。
室温で３０分間反応させた後、５０μＬ０１Ｍリン酸溶
液をろ紙またはネットの上から滴下し、その後、ろ紙ま
たはネ・ノドを除去した。
（実施例４）　液性試料の過剰部分の除去操作の有無 以下の条件で測定器具を作製し、それを用いて液性試料
を採取し、液性試料の過剰部分の除去操作を行い、また
は行わずに、液性試料中のＣＥＡ濃度を測定した。　結
果は表４−■〜４−■に示した。
（ａ）測定器具の作製 すりガラス表面に、テフロンを含有する塗料を用いて内
径１０ｍｍφの円を印刷した。　　このすりガラスの円
内だけに抗ＣＥＡ抗体を不溶化させ、その上に、０．０
４ｍｍの間隔をあけて、１０ｍｍφの円盤状に切断した
孔サイズ３０μｍのナイロン製ネット１枚を固定した。
（ｂ）試料の採取 測定器具のネットの上から、ＣＥＡ標準品をＣＥＡ濃度
が１０ｎｇ／ｍＬとなるように添加しである液性試料（
■尿、■血清、■乳頭分泌液）を各々１〜５μＬ添加し
、この状態で、または、ネットの上面に孔サイズ５０μ
ｍのニトロセルロース製ろ紙をあて、液性試料の過剰部
分を吸収除去した後、以下の酵素反応を行わせた。
（Ｃ）酵素反応 測定器具のネットの上から、ＨＲＰＯで標識した抗ＣＥ
Ａ抗体溶液２５μＬを滴下し、室温で６０分間反応させ
た。
ネットを除去した後、０．ｏ５％Ｔｗｅｅｎ２０加０．
１Ｍ！Ｊン酸緩衝波緩衝液、未反応のＨＲＰＯ標識抗体
を洗浄除去した。
水分をろ紙で十分吸取った後、反応面に、０フエニレン
ジアミン３　ｍ　ｇ　／　ｍ　Ｌおよび０．０１％過酸
化水素水を含むＭｃｌｌｖａｆｎ緩衝液５０μＬを滴下
し、室温で６０分間反応させた。
１Ｍリン酸溶液５０μＬを滴下し、攪拌した後、反応液
の吸光度（６６０ｎｍ）を測定した。
（実Ｍ［５）　　ＣＥＡｍｆ？）ａｔｌ＋定（（−のｆ
）以下の条件で測定器具を作製し、それを用いて乳頭分
泌液を採取し、乳頭分泌液中のＣＥＡ濃度を測定した。
また、同一試料を用い、エルモチツク−ＣＥＡ（持田製
薬株式会社）でＣＥＡ？ａ度を測定した。
結果は、第７図に示した。
（ａ）測定器具の作製 表面に凹凸処理を施した０、２ｍｍ厚のポリエステル製
フィルムを、０．１μｇ　／　ｍ　Ｌ濃度の抗ＣＥＡ抗
体溶液中に浸し、４℃で２４時間インキュベートを行い
、蒸留水で洗浄し、抗体不溶化フィルムを作製した。
次に、上記の抗体不溶化フィルムを１０ｍｍφの円盤状
に切断し、台に載せ、枠部材をかぶせて固定し、器具本
体とした。
さらに、ナイロン製ネットを支持体に溶着させてある多
孔性部材を器具本体の上からかぶせ、器具本体に固定し
、測定器具とした。
（ｂ）試料の採取 乳頭分泌液が分泌されている孔管孔に、上記の測定器具
のネット部分を直接押し当て、乳頭分泌液を採取した。
次に、多孔質ポリエチレン製の吸収体（除去部材）をネ
ットに軽く押し当て、試料の過剰部分を除去した。
この操作により、約ｌμＬの試料が採取できた。
（ｃ）酵素反応 測定器具のネットの上から、ＨＲＰＯで標識した抗ＣＥ
Ａ抗体溶液１０μＬを滴下し、室温で３０分間反応させ
た。
多孔性部材除去後、Ｏ，ＯＳ％Ｔｗｅｅｎ２０加０，１
Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７，０）を用い、未反応のＨＲＰ
Ｏ標識抗体を洗浄除去した。
水分をろ紙で十分吸取った後、反応面に０．５ｍＭテト
ラメチルベンジジンおよび０．０１％過酸化水素水を含
む基質溶液１０μＬを滴下し、室温で３０分間反応させ
た。
以上の操作を、試料としてＣＥＡ標準液（０および１１
０００ｎ／ｍＬ）ＩμＬを用いた場合についても行い（
ただし、多孔性部材は用いない）、それぞれ、基質溶液
滴下３０分後に６６０ｎｍにおける吸光度を測定した。
ＣＥＡ標準液における吸光度から作成した標準曲線より
、試料中のＣＥＡ濃度を算出した。
（ｄ）他の測定キットによる測定 同一試料中のＣＥＡを、エルモチツク−ＣＥＡ（持田製
薬株式会社）で測定し、本願測定方法で得られた測定値
と比較した。
相関係数は、０．９１であった。
表１−■ 孔サイズ１μｍのガラス繊維製のろ紙 １枚 （実施例６）　　ＣＥＡ濃度の測定（その２）実施例５
と同様の測定器具を用い、実施例５と同様の方法付、乳
頭異常分泌症の患者から採取した乳頭分泌液のＣＥＡ濃
度を測定した。
結果は、第８図に示した。
表１−■ 孔サイズ１μｍのセルロース製ろ紙 １枚 表１−■ 孔サイズ１０μｍのナイロン製ネット １枚 表１−■ 孔サイズ２０μｍのナイロン製ネット １枚 表１−■ 孔サイズ３０μｍのナイロン製ネット １枚 表１−■ 孔サイズ３０μｍのナイロン製ネット ２枚 表２ 表３ 表４−■ 血清 表４−■ 尿 表４−■ 乳頭分泌液 実施例１は、本発明の測定器具の多孔性部材の多孔性部
分の材質と採取される液性試料量との関係について検討
したものである。
表１−■〜ｌ−■より、多孔性部材の多孔性部分の材質
を選定すれば、液性試料の種類、性状にかかわらず、実
質的に一定量の採取が可能であることが明らかとなった
。　一方、多孔性部材の多孔性部分と器具本体の反応領
域との間の空間の大きさが一定であっても、使用する多
孔性部材の多孔性部分の材質により、採取される液性試
料の量が異なり、多孔性部材の多孔性部分の材質を選択
することにより、液性試料の採取量を自由に設定するこ
とが可能であることも明らかとなった。
実施例２は、試料の添加量と、採取される液性試料量と
の関係について検討したものである。
表２より、添加ｆｉｔ、　　２．５．１０．２０μＬの
５群の間では、危険率０゜０５％で採取される液性試料
量の平均値間に有意差は認められず、試料の添加量の差
異にかかわらず、一定量の試料を反応領域上に付与する
ことが出来ることが明らかとなった。
実施例３は、本発明の測定器具を用いて酵素反応を行わ
せ、多孔性部材の多孔性部分の材質が酵素の反応性に与
える影響について検討したものである。
表３より、多孔性部材の多孔性部分と器具本体の反応領
域との間の空間の大きさが一定であっても、使用する多
孔性部材の多孔性部分の材質により、反応領域上に付与
される反応液の量が異なるものとなる等の理由により、
反応性が異なったものとなり、多孔性部材の多孔性部分
の材質を適切に選択することにより、反応性を変化させ
ることが可能であることが明らかとなった。
実施例４は、液性試料の過剰部分の除去操作の有無と測
定精度との関係を検討したものである。
表４−■〜４−■より、液性試料の種類、性状にかかわ
らず、除去操作がなくとも測定値のバラツキは許容範囲
内であるが、除去操作を行うことにより、測定精度が向
上することが明かとなった。
実施例５は、乳頭分泌液中のＣＥＡ濃度を、本発明の測
定器具と従来から使用されている測定器具（エルモチツ
ク−ＣＥ　Ａ、持田製薬株式会社）を用いて測定し、比
較したものである。
本発明の測定器具を用いて測定された測定値と、エルモ
チツク−Ｃ’ＥＡを用いて測定された測定値を比較した
ところ、Ｙ＝０．８５Ｘ＋１３゜６、相関係数ｒ＝０．
９１となり、非常に良好な相関が示された（第７図参照
）。
実施例６は、本発明の測定器具を用いて乳頭異常分泌症
の患者の乳頭分泌液のＣＥＡ濃度を測定し、疾患毎にそ
の測定値を比較したものである。
乳癌患者および良性乳腺疾患患者にわけたところ、乳癌
患者の乳頭分泌液のＣＥＡ濃度は、１例を除いて非常に
高値となり、本発明の測定器具を用いる本発明の方法が
、乳癌診断に有用であることが確認された（第８図参照
）。
［発明の効果コ 本発明により、試料の液ｍが微量であっても、試料を所
定の一定量採取でき、かつ簡便な方法で液性試料中の特
定物質量を測定できる方法、および、その方法を実施す
るにあたって使用する、液性試料を所定量採取できる構
造を有する液性試料中の特定物質の測定器具が提供され
た。
本発明により、試料の液量が微量であっても、また、そ
の性状が検体によって異なる場合でも、試料の液量に定
量性が要求される測定が簡便に行えるようになり、従来
は測定が困難または不可能であった乳頭分泌液等の検体
中の特定物質量が測定できるようになった。
さらに、本発明は、操作が簡便であるので、臨床検査の
現場における作業効率を大幅に上昇させることが出来、
特にマススクリーニングに有用である。
加えて、本発明により、試料の液量が微量であっても、
液性試料中の特定物質の濃度だけでなく、絶対量も測定
できるようになった。
【図面の簡単な説明】
第１ａ図、第１ｂ図、第１ｃ図、第１ｄ図および第１ｅ
図は、本発明の測定方法を順次示す模式図である。 第２ａ図および第２ｂ図は、本発明の測定器具の好適実
施例の断面図である。 第３ａ図は、本発明の測定器具の他の好適実施例の分解
部分断面側面図であり、第３ｂ図は、第３ａ図の測定器
具部材を組み立てた状態を示す部分断面側面図である。 第４ａ図および第４ｂ図は、本発明の測定器具のさらに
他の実施例の分解平面図であり、第４Ｃ図は、第４ａ図
および第４ｂ図の測定器具部材を組み立てた状態を示す
部分断面側面図である。 第５図は、標品測定部を有する本発明の測定器具の好適
実施例を示す平面図である。 第６ａ図および第６ｂ図は、対照用反応領域を有する本
発明の測定器具の好適実施例の分解平面図であり、第６
Ｃ図は、第６ａ図および第６ｂ図の測定器具部材を組み
立てた状態を示す部分断面側面図である。 第７図は、本発明の測定器具を用いて測定した乳頭分泌
液中のＣＥＡ濃度と、エルモチツク−ＣＥＡを用いて測
定した乳頭分泌液中のＣＥＡ濃度の関係を示すグラフで
ある。 第８図は、本発明の測定器具を用いて測定した乳頭分泌
液中のＣＥＡ濃度を、疾患毎に分けて表したグラフであ
る。 符号の説明 ｌ　多孔性部材 ２　器具本体 ３　測定器具 ４　検体測定部 ５　標品測定部 ６　対照用反応領域 １１　多孔性（ネット）部分 １２　支持体 ２１　　（シート状）固相 ２２　反応領域 ２３　境界部 ２４台 枠部材 非反応領域 フランジ 液性試料 除去部材 Ｆ　ｆ　Ｇ、　２ａ ＦＩＧ、２ｂ Ｆ　Ｉ　Ｇ、　７ エルモテンクー ＣＥＡ　（ｎｇ７ｍｌ

Claims (26)

    【特許請求の範囲】
  1. （１）所定の固相で構成される反応領域を有する器具を
    用いて液性試料中の特定物質量を測定するに際し、 前記液性試料を、多孔性部材を経て前記固相で構成され
    る前記反応領域に保持せしめ、実質的に一定量の前記液
    性試料を、前記反応領域で反応させることを特徴とする
    液性試料中の特定物質の測定方法。
  2. （２）所定の固相で構成される反応領域を有する器具を
    用いて液性試料中の特定物質量を測定するに際し、 前記液性試料を、多孔性部材を経て前記固相で構成され
    る前記反応領域に保持せしめた後、該多孔性部材を除去
    し、実質的に一定量の前記液性試料を前記反応領域で反
    応させることを特徴とする液性試料中の特定物質の測定
    方法。
  3. （３）前記多孔性部材を経て前記液性試料を前記固相で
    構成される前記反応領域に保持せしめた後、過剰の該液
    性試料を該多孔性部材上から除去する工程を有する請求
    項１または２に記載の液性試料中の特定物質の測定方法
    。
  4. （４）前記液性試料が乳頭分泌液である請求項１〜３の
    いずれかに記載の液性試料中の特定物質の測定方法。
  5. （５）前記液性試料が尿、血清、または血液である請求
    項１〜３のいずれかに記載の液性試料中の特定物質の測
    定方法。
  6. （６）前記特定物質が抗原である請求項１〜５のいずれ
    かに記載の液性試料中の特定物質の測定方法。
  7. （７）前記特定物質が抗体、核酸、受容体、またはリガ
    ンドである請求項１〜５のいずれかに記載の液性試料中
    の特定物質の測定方法。
  8. （８）前記抗原が腫瘍関連抗原である請求項６に記載の
    液性試料中の特定物質の測定方法。
  9. （９）前記腫瘍関連抗原がＣＥＡ（ｃａｒｃｉｎｏ−ｅ
    ｍｂｒｙｏｎｉｃ　ａｎｔｉｇｅｎ）である請求項８に
    記載の液性試料中の特定物質の測定方法。
  10. （１０）少なくとも一個の固相で構成される所定の反応
    領域を有する器具本体と、 該反応領域上に載置される液性試料透過性の多孔性部材
    とを有することを特徴とする液性試料中の特定物質の測
    定器具。
  11. （１１）前記器具本体が、台と、該台上に張設され、シ
    ート状固相で構成される反応領域とを有する請求項１０
    に記載の液性試料中の特定物質の測定器具。
  12. （１２）前記器具本体が、台と、該台上に張設され、シ
    ート状固相で構成される反応領域と、前記台の周囲に設
    けられ、前記シート状固相を固定する枠部材とを有する
    請求項１０に記載の液性試料中の特定物質の測定器具。
  13. （１３）前記枠部材が、前記反応領域と前記多孔性部材
    との間隔を全体にわたって均一にするための張力を前記
    多孔性部材に与える構成である請求項１２に記載の液性
    試料中の特定物質の測定器具。
  14. （１４）前記台が所定の開口を有し、該開口部にシート
    状固相を位置させてある請求項１１〜１３のいずれかに
    記載の液性試料中の特定物質の測定器具。
  15. （１５）前記多孔性部材が、前記反応領域との間に所定
    の間隔を保持して載置される請求項１０〜１４のいずれ
    かに記載の液性試料中の特定物質の測定器具。
  16. （１６）前記多孔性部材が前記器具本体と一体化されて
    いる請求項１０〜１５のいずれかに記載の液性試料中の
    特定物質の測定器具。
  17. （１７）前記多孔性部材が着脱自在である請求項１０〜
    １５のいずれかに記載の液性試料中の特定物質の測定器
    具。
  18. （１８）前記多孔性部材の多孔性部分がナイロン製ネッ
    トである請求項１０〜１７のいずれかに記載の液性試料
    中の特定物質の測定器具。
  19. （１９）前記多孔性部材上にある液性試料の過剰部分を
    除去する除去部材を有する請求項１０〜１８のいずれか
    に記載の液性試料中の特定物質の測定器具。
  20. （２０）前記反応領域に、前記液性試料中の特定物質に
    対する反応性物質または結合性物質が不溶化されている
    請求項１０〜１９のいずれかに記載の液性試料中の特定
    物質の測定器具。
  21. （２１）前記液性試料中の前記特定物質に対する前記反
    応性物質が酵素である請求項２０に記載の液性試料中の
    特定物質の測定器具。
  22. （２２）前記液性試料中の前記特定物質に対する前記結
    合性物質が抗体または抗体分画である請求項２０に記載
    の液性試料中の特定物質の測定器具。
  23. （２３）前記液性試料中の前記特定物質に対する前記結
    合性物質が抗原、核酸、受容体、リガンド、またはレク
    チンである請求項２０に記載の液性試料中の特定物質の
    測定器具。
  24. （２４）前記抗体または抗体分画が腫瘍関連抗原に対す
    る抗体または抗体分画である請求項２２に記載の液性試
    料中の特定物質の測定器具。
  25. （２５）前記腫瘍関連抗原に対する抗体または抗体分画
    が、ＣＥＡ（ｃａｒｃｉｎｏｅｍｂｒｙｏｎｉｃ　ａｎ
    ｔｉｇｅｎ）に対する抗体または抗体分画である請求項
    ２４に記載の液性試料中の特定物質の測定器具。
  26. （２６）対照用反応領域および／または標準物質反応領
    域を有する請求項１０〜２５のいずれかに記載の液性試
    料中の特定物質の測定器具。
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