BR9914773A - Conjunto de elementos genéricos, método para a produção de dna de cordão único, transcrição de mrna, construção de ácido nucléico, transcrição de ssdna, vetor, sistema vetor, célula hospedeira, conjunto para a produção de uma sequência de ácido nucléico de cordão único, método para a produção in vivo ou in vitro de uma sequência de ácido nucléico de cordão único, transcrição de cdna de cordão único, ácido nucléico inibidor, molécula heteroduplex, e composição farmacêutica - Google Patents

Abstract

"CONJUNTO DE ELEMENTOS GENéTICOS, MéTODO PARA A PRODUçãO DE DNA DE CORDãO úNICO, TRANSCRIçãO DE mRNA, CONSTRUçãO DE áCIDO NUCLéICO, TRANSCRIçãO DE ssDNA, VETOR, SISTEMA VETOR, CéLULA HOSPEDEIRA, CONJUNTO PARA A PRODUçãO DE UMA SEQuêNCIA DE áCIDO NUCLéICO DE CORDãO úNICO, MéTODO PARA A PRODUçãO IN VIVO OU IN VITRO DE UMA SEQuêNCIA DE áCIDO NUCLéICO DE CORDãO úNICO, TRANSCRIçãO DE CDNA DE CORDãO úNICO, áCIDO NUCLéICO INIBIDOR, MOLéCULA HETERODUPLEX E COMPOSIçãO FARMACêUTICA". Métodos e composições para a produção de cDNA de um único filamento (ss-cDNA) em células eucarióticas, especificamente um cassete de DNA que produz s-cDNA in vivo O cassete contém o gene de codificação de transcriptase/Rnase H reversa do vírus de leucemia de murinos de Moloney, um gene de endonuclease de restrição de bactérias, e uma seq³ência de interesse que produz um modelo de RNA a partir do qual a transcriptase reversa sintetiza o ss-cDNA de uma seq³ência específica. O ss-cDNA é então modificado para remover todas as seq³ências de vetores de flanqueamento ao tirar vantagem da estrutura de "haste-laço" do ss-cDNA, que se forma como resultado da inclusão de uma repetição em tandem invertida que permite que o ss-cDNA de dobre de volta sobre si mesmo, formando uma haste de DNA de filamento duplo, na seq³ência de interesse. A haste de filamento duplo contém um ou mais elementos genéticos funcionais, tais como um sítio de reconhecimento de endonuclease de restrição e o laço, que continua como ss-cDNA, compreende qualquer seq³ência de nucleotídeos desejada. Esse desenho permite que a haste de filamento duplo do intermediário de haste-laço a ser clivada pela(s) endonuclease(s) de restrição correspondente(s) desejada(s) específica(s) para o sítio na haste e na porção do laço, ou seq³ência de interesse, seja então liberada como um pedaço de DNA de um único filamento linearizado. Esse pedaço de ss-DNA liberado (ou clivado) contém informações mínimas, caso haja alguma, sobre a seq³ência tanto a montante da posição 51 quanto a jusante da posição 3' em relação à porção da haste de filamento duplo anterior que contém o sítio de corte de endonuclease de restrição. As transfecções in vivo utilizando o sistema de vetores de DNA aqui descrito demonstram o uso desse sistema para produzir ss-DNA em células hospedeiras.