BRPI0105509B1 - formulações do peptídeo angiotensina-(1-7) usando as ciclodextrinas, lipossomas e o polímero plga - Google Patents

Abstract

processo de preparação de formulações do peptídeo angiotensina-(1-7)e seus análogos, agonistas e antagonistas usando as ciclidextrinas, seus derivados, lipossomas e os polímeros biodegradáveis e/ou misturas desses sistemas e/ou dos produtos derivados. a presente invenção caracteriza-se pelo processo de preparação de formulações do heptapeptídeo angiotensina-(1-7) e seus análogos usando preferencialmente as ciclodextrinas, seus derivados, lipossomas e os polímeros biodegradáveis e/ou misturas destes. a presente invenção caracteriza-se pela combinação de tecnologias diferentes, a de inclusão em ciclodextrinas, encapsulamento em lipossomas e o encapsulamento molecular dos pepeptídeos angiotensina-(1-7) e/ou seus análogos e/ou derivados, agonistas e/ou dos seus análogos e/ou derivados e antagonistas e/ou dos seus análogos e/ou derivados. caracteriza-se ainda pelo aumento na biodisponibilidade, liberação controlada e estabilização nas formulações dos peptídeos angiotensina-(1-7) e/ou seus análogos e/ou derivados, agonistas e/ou dos seus análogos e/ou derivados e antagonistas e/ou dos seus análogos e/ou derivados e seus análogos da presente invenção.

Description

"FORMULAÇÕES DO PEPTIDEO ANGIOTENSINA-{1-7) USANDO AS CICLODEXTRINAS, LIPOSSOMAS E O POLÍMERO PLGA” A presente invenção caracteriza-se pela preparação de formulações do peptídeo Angiotensina-*(1-7) usando as ciclodextrinas, lipossomas e o polímero biodegradável PLGA e/ou misturas desses sistemas, Na maioria dos países do mundo, de 15% a 25 % da população adulta apresenta pressão arterial elevada (MacMahon, S. et, AL Bldod pressure, stroke, and coronary heart disease, Lancet 335:765-774, 1990). O' risco cardiüvascular aumenta com o nível de pressão arterial. Quanto mais alta a pressão arterial, maior o risco de acidente vascular cerebral e eventos coronarianos. Considerada a principal responsável por doenças coronarianas, cerebrais e vasculares renais, a hipertensão é a principal causa de morte e incapacidade entre adultos. A insuficiência cardíaca é em nível mundial a principal causa de hospitalização na faixa etária de 60 a 80 anos. Só o envelhecimento da população já é fator de aumento de sua incidência, enquanto 1 % dos indivíduos apresentam insuficiência cardíaca na faixa de 25 a 54 anos, entre os mais idosos a incidência é muito maior, atingindo cerce de 10% naqueles com mais de 75 anos (Kaannel, W. B, et. ai. Changing epidemiological features of cardiac faílure, Br, Hear J 1994; 72 (suppl); S3-S9). A insuficiência cardíaca pela sua característica clínica é doença limitante, que com o seu agravamento reduz a qualidade de vida, dos pacientes e, nas formas avançadas, tem características de doença maligna com mortalidade superior a 60% no primeiro ano, mesmo nos dias de hoje (Oliveira, MT. Características clínicas e prognóstico de pacientes com insuficiência cardíaca congestiva avançada, Faculdade de Medicina, USP 1999). Calcula-se que atualmente são afetados mais de 15 milhões de indivíduos só no mundo industrializado e que só nos EUA, por exemplo, o número de casos tenha aumentado 450% entre 1973-1990 (Kannel, W.B. et. El. Changing epidemiological features of cardiac faílure, Br. Hear J 1994; 72 (suppl 3): S3-S9). A hipertensão é complexa, muitifatorial, de alta prevalência, responsável por inúmeros efeitos deletérios e alta morbimortalidade (Kaplan, N. M. Blood pressure as a cardiovascular risk faclor: prevention ant treatment. JAMA. 275:1571-1576, 1996). Inúmeros estudos para avaliação da eficácia de seu controle na população em geral e em grupos especiais têm siso desenvolvidos, objetivando o seu melhor entendimento, O controle pressórico sem ampla intervenção não medicamentosa e/ou farmacêutica nos fatores de riscos associados (diabete, obesidade, tabagismo) pode reduzir ou mesmo desprover os benefícios do tratamento, a longo prazo de hipertensão arterial na redução da mortalidade, em geral, por doença coronariana (Wilson, P. W. et ai. Hypertension, the risk factors and the risk of cardiovascular disease. Raven Press. 94-114). A hipertensão é a patologia que mais contribui para a arterosclerose cardiovascular (The fifth Report of the Joint National Committee on detection, evaluation, and treatment of High Blood Pressure. National Instituto of Health (VJNC). Arch. Intern. Med. 153:154-181, 1994). Segundo estatísticas, de cada quatro americanos, um é ou será hipertenso, sendo que são estimados 4,78 milhões de pessoas com insuficiência cardíaca. Cada ano 400 mil novos casos sáo diagnosticados, provocando 800 mil hospitalizações, com um gasto de US$ 17,8 bilhões de dólares no tratamento.

No Brasil dados do Sistema Único de Saúde mostraram que, em 1997, a insuficiência cardíaca foi a principal causa de hospitalizações entre as doenças cardíacas, tendo o governo gasto R$ 150 milhões no tratamento, equivalente a 4,6% das despesas com a saúde (Filho, Albanesi F. Insuficiência cardíaca no Brasil. Arq. Bras. Cardiol, 71:561-562, 1998). O sistema reπina-angiotensina (SRA) é responsável pela regulação da pressão arterial, da homeostase cardiovascular e do equilíbrio hidroeletrolítico, tanto em condições fisiológicas quanto patológicas (Krieger, E. M.; Santos, R. A. S. Angiotensinas - aspectos fisiológicos. Hipertensão, 1:7-10,1998). A angiotensina II (Ang II) é o principal peptídeo efetor do SRA, possuindo ações vasopressora, estimuladora da síntese de esteróides adrenaís, proliferativa (fibroblastos, músculo liso vascular) e hipertróficas (miócitos cad íacos). Sua via de formação envolve a produção de angiotensinogênio pelo fígado e a produção de renina no aparelho justa glomerular. Essas substâncias são liberadas na corrente sanguínea onde, o angiotensinogênio é hidrolisado pela renina, formando a Ang I, que, no pulmão sofrerá ação da enzima conversora de angiotensina (EGA) e originará a Ang II. Essa por sua vez, exercerá suas ações em órgâos-alvo distantes do local de sua produção (Krieger, E. M.; Santos, R. A. S. Angiotensinas - aspectos fisiológicos. Hipertensão, 1:7-10, 1998).

Recentemente descobriu-se que além do sistema que gera Ang II circulante, diferentes tecidos contém SRA independentes que geram a Ang II, aparentemente para ação local. Os componentes do SRA tecidual são encontrados nas paredes dos vasos sanguíneos, no útero, na porção exócrina do pâncreas, olhos, coração, cortex adrenal, testículo, ovários, lobos anterior e intermediário da hipófise, pineal e cérebro. As funções desses SRA‘$ teciduais não estão muito bem esclarecidas. (Ardaillou, R.; Michel, J. B. The relative roles of circulating and tissue renin-angiotensin systems. Nephroi. Dia!, Transplant., 14:283-206,1999). As ações locais do SRA podem ocorrer em nível da célula que produz os peptídeos (funções íntrácrina e autócrina). sobre células adjacentes (função parácrina) ou em locais distantes da região de produção (função endócrina).

Observações recentes indicam que importantes ações periféricas e centrais do SRA podem ser mediadas por sequências menores de peptídeos angiotensinérgicos, incluindo Angiotensina-IH [Ang-(2-8)J, Angiotensina-IV [Ang-(3-8)3 e Angiotensina (1-7). Podemos considerar que tanto a Angiotensina-I [Ang-(1-10)], como a Angiotensina-II [Ang-(1-8J] podem sofrer um processo de biotransformação, gerando uma "família" de peptídeos de angiotensina biologicamente ativos. ( Santos, R, A, S.; Cãmpagnole-Santos, M. J.; Andrade, S. P. Angiotensin-(1-7): an update. fíegulatory Peptides , 91:45-62, 2000). A angiotensina-(1 -7) é um dos peptídeos da '‘família" das angiotensinas biologicamente ativos, sendo formada por uma via indenpendente da ECA. O processamento da Ang I por endopeptidades ou da Ang II por prolil-peptidases ou carboxi-peptidases geram o heptapeptídeo Ang-(1*7). Depois de formada, a Ang-(1-7) pode ser hidrolisada por amino-peptidases gerando Ang-(2-7) e Ang-(3-7). A hidrólise da Ang-(1-7) pela ECA origina Ang-(1-5). { Santos, R, A. S.; Campagnole-Santos, M. J.; Andrade, S. P. Angíotensin-(l-7): an update. fíegulatory Peptides , 91:45-62, 2000). A Ang-(1 -7) juntamente com a Ang II, são os principais efetores do SRA. Duas características importantes separam a Ang-(1-7) da Ang II: a primeira possui ações biológicas altamente específicas e sua via de formação é independente da ECA (Santos, R. A, S,; Cam pag no I e - Santos, M. J,; Andrade, S. P, Angiotensin-(1-7): an update. fíegulatory Peptides , 91:45-62, 2000), O objetivo primário do tratamento da hipertensão não só visa a queda dos gastos, como também a prevenção das lesões em orgáos-alvo, através das modificações da qualidade de vida e do uso de medicamentos, quando necessário (The Fífth Report of The Joint National Committee on detection, evaluation, and treatment of High Blood Pressure. National Inslituie of Health (VJNC). Arch, Intern, Med. 153:154-181, 1994). 0 tratamento medicamentoso tem indicação frente a não resposta ás mudanças de estilo de vida após um período de três a seis meses, e na vigência de lesões em órgãos-alvo (hipertrofia ventricular esquerda, isque mia do miocárdio, acidente vascular encefálico ou retinopatia hipertensiva). Todos os pacientes com pressão arterial sistólica superior a 1Θ0 mmHg ou pressão arterial diastólica maior que 110 mmHg devem ser submetidos a tratamento farmacológico, independente de outros fatores presentes ou não (Report the Canadian Hypertension Socíety. Consensus Conference. 3. Pharmacological treatment of essential hypertension. Xan, Med Assoe. J. 149 (3): 575-584, 1993), Durante os anos 70 e 80, entretanto, os anti-hipertensivos tornaram-se uma ferramenta importante no tratamento da pressão arterial elevada (Ménard, J, Anthology of renin-angiotensin systemi A one hundred refere π ce approach to angiotensin II antagonista, J. Hypertension 11 (suppl 3): S3-S11, 1993). Durante as últimas quarto décadas, a pesquisa farmacológica produziu novas classes de drogas para tratar a hipertensão: os diuréticos nos anos 60, os betabloqueadores nos anos 70, os bloqueadores do canal de cálcio, os antagonistas dos receptores da angiotensina II e os inibidores da enzima conversora da angiotensina (ECA).

Os diuréticos podem ser divididos em três categorias; tiazídicos, de alça e os poupadores de potássio. Os tiazídicos e similares incluem Clorotiazida e Hidroclotiazida, os quais apresentam nos primeiros dias de tratamento diminuição da pressão arterial em torno de 10 a 15 %, estando relacionada esta queda com a diminuição do volume extracelular secundário e aumento da diurese e natriurese. Após seis meses, o volume plasmático e o débito cardíaco retorna a valores normais e a diminuição da pressão arterial é relacionada com a diminuição da resistência vascular periférica (Frolich, E. Current Approaches in the treatment of Hypertension, 405-469). São habitualmenle utilizados em monoterapia, apresentando melhores respostas em pacientes de raça negra e, em baixas doses, nos idosos. Têm como efeitos colaterais: aumento da resistência periférica a insulina, aumento dos trigliceridios, aumento do LDL, hipo calce mia, hiperucemia. Entre os diuréticos de alça temos Furosemida, Bumetamída e Triantereno, sendo diuréticos muito mais potentes que os tiazídicos, Atuam predominantemente nas porções medulares e corticais da alça de henle. Apresentam os mesmos efeitos colaterais que os tiazídicos. Já os poupadores de potássio, incluindo a Amilorida, o Triatereno e a Espíronolactona, são drogas de ação diurética fraca, sendo raramente utilizados isoladamente.

Os betabloqueadores, entre eles o Atenoloi e Naolol, são classificados em beta-1 e beta-2. Têm como efeitos colaterais: alterarem a resposta à insulina, prolongarem o coma hipoglicêmico, aumentarem os triglicerídios e aumentarem a creatinina por diminuição do fluxo renal.

Os bloqueadores dos canais de cálcio sâo utilizadas há pelo menos 25 anos (Frolich, E, D, Current Approaches in the Treatment of Hypertension, 405-469, 1994), Podem ser reunidos em dois grandes grupos, de acordo com suas ações farmacológicas: os que exercem maior ação na condução do estímulo, como Verapamil e o Diltiazem e aqueles que apresentam ação predominante vasodilatadora, como os derivados diidropirínicos (Nifedipina e outros) (Frolich, E. D., Hypertension, Adult Clinica! Cardiology Self Assessment Program (ACCSAP), 6: 3-19, 1995). Têm como efeitos colaterais edema de membros inferiores e taquicardia.

Os inibidores da enzima conversora têm como ação principal inibir a conversão da angiotensina II. Dessa forma, ações essencialmente vasoconstritora da angiotensina II são minimizadas. Estudos preliminares mostraram que o Teprotide, o primeiro inibidor usado clinicamente, exerce atividade anti-hipertensiva quando ministrado via intrevertosa, porém é inativo por via oral, o que limitou seu emprego, Sabe-se atualmente que a EGA é uma enzima com ações múltiplas, isto é, que atua em diversos substratos. Além de agir como uma dipeptidase na angiotensina I e na bradicina, é capaz também de ciivar as cadeias peptídicas do peptídeo natriurético, indicando que a enzima pode atuar em diversos tecidos, A EGA tem papel importante na inativação da Ang-(1-7) circulante e tecidual. A concentração desse peptídeo circulante é semelhante a concentração da Ang El e mostra-se aumentada após inibição da EGA, Esse aumento pode ser devido ao aumento do precursor (Ang I) e a diminuição da degradação pela EGA (Santos, R. A. S.; Campagnole-Santos, M. J.; Andrade, S. P, Angiotensin-(1-7): an update, Ftegulatory PeptidQS , 91:45-62, 2000). Os inibidores da EGA são excelentes quando ministrados em monoterapia, uma vez provocam queda relativamente rápida da pressão arterial em 60 a 70% dos pacientes com hipertensão arterial (Ganong, W. Neuropeptides in cardiovascular control. J. Hypertens 2 (suppl 3); 15-22, 1984). Além do mais, sâo em geral bem tolerados, mas seu uso pode acarretar efeitos colaterais e reações adversas, algumas das quais relativamente graves, entre elas edema angioneuróiico, erupções cutâneas e tosse seca (8 a 10%), As primeiras tentativas de desenvolver antagonistas da Ang II datam do início da década de 70 e concentraram-se no desenvolvimento de peptídeos análogos à Ang II. O primeiro» saralasina» 1 -sarcosina, 8-ísoleucina angiotensina II, e posteriormente outros. No entanto» não tiveram aceitação clínica, pois apresentavam atividade agonista parcial. Em 1982, foram desenvolvidos dois primeiros antagonistas dos receptores AT, e não peptidicos (S-8307 e S8308) que, embora fossem altamente específicos e sem atividade agonista, apresentavam fraca ligação aos receptores da Ang II. Com uma série de modificações na estrutura molecular desses dois precursores, para melhorar a potência, reter a seletividade e atingir as propriedades farmacocinéticas, um novo produto de uso oral, potente c de alta especificidade, foi desenvolvido o Losartan. Â partir de então» muitos outros antagonistas não-peptidicos foram desenvolvidos, tais como Candesartan, Irbesartan» Valsartan, Telmisartan, Eprosartan, Tasosartan e Zolasartan. A Angiotensina-(1-7), (Asp-Arg-Val-Tyr-iie-His-Pro) e seu derivativo Sar1 -Ang-(l-7) também antagonizam os efeitos pressores da Ang II no homem (Ueda S, Masumori-Maemoto S» Ashino K, Nagahara T, Gotoh E, Umemura S, ishii M. Angiotensin-(1-7) attenuates vasoconstríction evoked by angiotensin II but not by noradrenaline in man. Hypertension 2000; 35:998-1001) e ratos (Bovy PR, Trapani AJ, McMahon EG, Palomo Μ. A carboxy-terminus truncated anaiogue of angiotensin II [Sar1] angiotensin ll-(1-7)-amíde> provides an entry to a new class of angiotensin II antagonists. J Med Chem. 1989; 32:520-522), A contração produzida pela Ang II em artérias isoladas de coelhos e humanos também é reduzida pela angiotensina-(1-7) (Bovy PR, Trapani AJ, McMahon EG, Pafomo Μ. A carboxy-terminus truncated anaiogue of angiotensin II [Sar'J angiotensin il-(1-7)-amide, provides an entry to a new class of angiotensin II antagonists. J Med Chem. 1989; 32:520-522. Roks AJ, Van-Geel PP, Pinto YM, Buikema H, Henning RH, de Zeeuw D, van-Giist WH. Angiotensin-(1-7) is a moduiator of the human renín-angiotensín System. Hypertension 1999; 34(2):296-301).

Os receptores responsáveis pela transdução do sinal da Ang-(1-7) ainda permanecem sem definição, podendo existir várias possibilidades em relação a mediação do sinal, A primeira evidência da existência de receptores diferentes e/ou de mecanismos diferenciados da transdução do sinal para a Ang-{1-7), está baseado nas ações opostas e/ou diferentes entre a Ang II e a Ang-(1-7), Recentemente foi caracterizado o heptapeptídeo D-[Ala l-Ang-(1-7) (A-779), como um potente antagonista da Ang -(1-7)(Santos RAS, Campagnole-Santos MJ, Ba racho NCV, Fontes MAP, Silva LCS, Neves LAA, Oliveira DR, Caligiorne SM, Rodrigues ARV, Gropen Jr. C, Carvalho WS, Silva ACS, Khosia MC. Characterization of a new angiotensin antagonist selective for aogíotensin- ¢1-7): Evidence that the actions of angiotensin-(1 -7) are mediated by specific angiotensin receptors. Brain Res Buli. 1994;35:293-299). Os resultados desse estudo indicaram que esse peptídeo é um antagonista seletivo da Ang-(l-7) sem demonstrar atividade agonista em várias preparações biológicas. Esse peptídeo mostrou-se potente em antagonizar o efeito antidiurético da Ang-(1-7) em ratos com sobrecarga hídrica. A vasodilatação produzida pela Ang-(1-7) nas arteríolas aferentes de coelhos, seu efeito prossor na RVLM, a vasodilatação produzida na microcirculação mesentérica in vivo, sâo bloqueadas completamente pela administração de A-779, náo sendo modificadas petos antagonistas da Ang II. Outros estudos com culturas de células endotelíais bovinas, artérias coronárias de cães, aorta de SHR, fibroblastos epiteliais humanos, fibroblastos cardíacos humanos e cortes de rim, têm fornecido evidências da existência de receptores específicos da Ang-(1-7) bloqueados pelo A-779. (Santos, RAS; Campagnole-Santos, MJ.: Andrade, SP. Angiotensín-(1-7): an update. Regulatory Peptides , 91:45-62, 2000). O A-779 e seus análogos como a Sarcoisinal - D- Ala 7-Ang-(1 -7) (Bovy PR, Trapani Aj, McMahon EG, Palomo Μ. A carboxy-terminus truncated analogue of angiotensin li [Sar1] angiotensin 11-(1 -7)-amide. provides an entry to a new class of angiotensin II anlagonists. J Med Chem. 1989; 32:520-522.), e o D-Pro7-Ang-(1-7) (Naves-Santos, V,, Khosia, M, C., Oliveira, R. C., Campagnole-Santos, M. J„ Lima, D, X., Santos, RAS. Inibição seletiva do efeito pressor central da angiotensina-(1-7) pelo seu análogo [D-Pro?]-angiotensina-(1 -7). X! Reunião Annual da Federação de Sociedade de Biologia Experimentai, 1996, Caxambu, MG) e outros podem servir de ferramentas extremamente utéis para esclarecer efeitos biológicos da Ang- (1-7).

Tem sido demonstrado que a Ang-(1-7) atua como um peptídeo contraregulador dentro do sistema renína-angiotensina, atuando em múltiplos pontos (Ferrario CM, Chappell MC, Dean RH, lyer SN. Novel angiotensin peptides regulate blood pressure, endothelial function, and natriuresis, J Am Soc Nephrot. 1998; 9: 1716-1722. Santos, R. AS, Campagnole-Santos, MJ, Andrade, SP, Angiotensin-(1-7); an update. Regulatory Peptides, 91:45-62, 2000. Henriger-Walther S, Batista EN, Walther T, Khosia MC, Santos RAS, Campagnole-Santos MJ, Baroreflex improvement in SHR afíer ACE ínhibitors involves angiotensin-(1-7).

Hypertension, 37: 1309-1313, 2001). A Ang-(1-7) estimula a angtogênese e a proliferação celular (Machado, RDP, Santos, RAS, Andrade, SP. Mechanisms of angiotensin-(1-7) induced inhibition of angiogenesis, Am J Physiol, 280: 994-1000, 2001. Rodgers K, Xiong S, Felix J, Roda N, Espinoza T, Maldonado S, Dizerega G. Development of angiotensin-(1-7) as an agent to acelerate dermal repair. Wound Repair Regen, 9: 238-247, 2001) e apresenta portanto um potencial para o tratamento de lesões. A Ang-(1-7) pode atuar como um inibidor da EGA tanto no domínio amino-terminai da enzima, no qual atua como substrato, como no domínio c-terminal no qual atua como um inibidor {Deddish PA, Mareie B, Jackman HL, Wang H2, Skidgel RA, Erdõs EG. N-domain-specific substrate and C-domain ínhibitors of angiotensin-converting enzyme: angiotensin-{1-7) and keto-ACE. Hypertension. 1998; 31:912-917. Tom B, De Vries R, Saxena PR, Danser AHJ. Bradykinin potentiation by angiotensin-(1-7) and ACE ínhibitors correlates with ACE C- and N-dcmain blockade. Hypertension, 38: 95-99, 2001). A ICS0 para inibição da ECA pela Ang-(1-7) é aproximadamente 1 micromolar (Chappell MC, Pirro NT, Sykes A, Ferrario CM. Metabolism of angiotensin-(1-7) by angiotensin-converting enzyme. Hypertension. 1998; 31 (part 2):362-367, Paula, RD, Uma, CV, Britto, RR, Campagnole-Santos, MJ, Khosla, MC, Santos, RAS. Potentiation of the hypotensive effect of bradykinin by angiotensin-(1 -7}-related peptides. Peptides, v.20, p.493-500, 1999. Deddish PA, Mareie B, Jackman HL, Wang HZ, Skidgel RA, Erdõs EG. N-domain-specific substrate and C-domain Ínhibitors of angiotensin-converting enzyme: angiotensin-(1-7) and keto-ACE, Hypertension, 31:912-917,1998).

Além de inibir a ECA a Ang-{1-7) inibe as ações a Ang II por dois mecanismos: 1) competindo pela ligação em receptores AT, (Bovy PR, Trapaní AJ, McMahon EG, Palomo Μ. A carboxy-terminus truncated analogue of angiotensín II (Sar'] angiotensín 11-(1-7)-amide, provides an entry to a new class of angiotensín II antagonists. J Med Chem. 1989; 32:520-522. - Ueda S, Masumori-Maemoto S, Ashino K, Nagahara T, Gotoh E, Umemura S, Ishii M, Angiotensin-(1-7) attenuates vasoconstriction evoked by angiotensín II but not by noradrenaline in man. Hypertension 2000; 35:998-1001. Roks AJ, Van-Geel PP, Pinto YM, Buikema H, Henning RH, deZeeuw D, van-Gilst WH, Angiotensín-(1-7) is a modulator of the human renin-angiotensin system, Hypertension 1999; 34(2):296-301. Rowe BP, Saylor DL, Speth RC, Absher DR. Angiotensín-(1-7) binding at angiotensín II receptors (n the rat brain, fíegul Pep. 1995; 56(2):139-146. Mahon JM, Carrr RD, Nicol AK, Hendersn IW. Angiotensin-(l-7) is ar» antagonist at the type 1 angiotensin II receptor. J Hypertension 1994; 12:1377-1381), e 2) alterando a sinalização dos efeitos da Ang II, possivelmente por alterar a disponibilidade de cálcio intracelular (Chansel D, Vandermeerch S, Andrzej O, Curat C. Ardaillou R. Effects of angiotensin IV and angiotensin-(1-7) on basal angiotensin ll-stimulated cytosolíc Ca'2 ín mesangial cells. Eur J Pharmacol. 2001; 414:165-175). Um terceiro mecanismo pelo qual a Ang-(1 -7) antagoniza os efeitos deletérios da Ang II sobre o aparelho cardiovascular é pela potenciação dos efeitos da bradicinina (Paula, RD; Uma, CV, Khosia, MC, Santos, RAS. Angiotensin-(1-7) potentiates the hypotensive effect of bradykinin in concious rata. Hypertension, 26: 1154-1159, 1995. Li P, Chappell MC, Ferrario CM, Brosnihan KB. Angiotensin-(1-7) augments bradykinin-induced vasodilation by competing with ACE and releasing nitric oxide. Hypertension. 1997; 29 (part 2):394-400), A bradicina é um peptídeo endógeno com potente ação vasodilatadora (Rocha e Silva, M, Beraldo, WT, Rosenfeld, G, Bradykinin, a hypotensive and smooth muscle stímulating factor releases from plasma globulin by snake venoms and by trypsin. Am. J. Physiol. 156, 261-273, 1949). Tem sido também descritos ações benéficas da bradicina no coração (Linz W, Wohlfart P, Scholkens BA, Malinski T, Wiemer G. Interactions among ACE, kinins and NO. Cardiovasc Res. 1999; 43:549-561). A Ang-(1-7) potência os efeitos da bradicinina, tanto em vasos (Paula, R. D.; Uma, C. V.; Khosia, M. C.; Santos, R. A. S. Angiotensin-(1-7) potentiates the hypotensive ffect of bradykinin in concious rats. Hypertension, 26: 1154-1159, 1995. Li P, Chappell MC, Ferrario CM, Brosnihan KB. Angiotensin-(1-7) augments bradykinin-induced vasodilation by competing with ACE and releasing nitric oxide. Hypertension. 1997; 29 (part 2):394-400), como no coração (Almeida, AP, Frábregas, BC, Madureira. MM, Santos, RJ S, Campagnole-Santos, MJ, Santos, RAS. Angiotensin-(í-7 potentiates the coronary vasodilatory effect of bradykinin in the isolated rat heart. Bmziiian Journal of Medicai and Biologicai Research, 33: 709-713, 2000). US5834432, (AU5990796, CA2221730, ΕΡ0828505, WO09639164, JP115073625), Rodgers, Katlen Elizabeth et. al, (1998), utilizaram agonistas dos receptores AT2 para acelerar a cicatrizaçáo de ferimentos.

Um fármaco pode ser quimicamente modificado para alterar suas propriedades como biodistribuição, farmacocinética e solubilidade. Vários métodos têm sido usados para aumentar a solubiiidade e estabilidade das drogas, entre eles o uso de solventes orgânicos, emulsões, lipossomas, ajuste de pH, modificações químicas e complexaçâo dos fármacos com um agente encapsulante apropriado como as ciclodextrinas, lipossomas e o microencapsulamento em polímeros biodegradáveis.

As ciclodextrinas foram isoladas pela primeira vez em 1891 por Vilers, como produtos de degradação do amido pela ação da amilase do Bacillus macerans. Em 1904, Schardinger as caracterizou como oligossacarídeos cíclicos. Em 1938 Frudenberg et. al. relataram que as ciclodextrinas são constituídas de unidades de glicose unidas pela ligação «(1-4), Os pesos moleculares das ciclodextrinas «, p e γ foram determinados por Frend e colaboradores de 1942 a 1949, Em 1948 Freudenberg e colegas verificaram que as ciclodextrinas apresentam a capacidade de formar compostos ou complexos de inclusão e, mais tarde, assim como Prendí et, al,, elaboraram processos de sínteses de ciclodextrinas puras. Cramer e colaboradores, a partir de 1954, realizaram estudo sistemático da formação de complexos de ciclodextrinas com outros compostos. Entre 1955 e 1960 realizaram-se os primeiros estudos sobre a formação de complexos de inclusão de ciclodextrinas com fármacos. Esses estudos prosseguem intensamente no Japão, Hungria, França, Itália e outros países.

As ciclodextrinas são obtidas por degradação enzimática do amido. Os métodos constam das seguintes fases: produção e purificação da enzima, transformação enzimática do amido e recuperação e separação das ciclodextrinas. A enzima envolvida é uma cilodextrina-glicosillransferase (CGT). Sendo ela obtida de diversos microrganismos, mas principalmente Bacillus macerans, B. megatherium, B. stereothermoplhilus e Klebsiella pneumoníae. (Korolkovas, A. Incusão molecular e ciclodextrinas: propriedades e aplicações terapêuticas. ENLACE Parmaiab, 2/91, Ano 5, Vol. II , p,6-15).

As ciclodextrinas são oligossacarídeos cíclicos que incluem seis, sete ou oito unidades de glucopiranose. Devido a interações estéricas, as ciclodextrinas, CD s, formam uma estruturas cíclica na forma de cone truncado com uma cavidade interna apoiar. Trata-se de compostos química mente estáveis que podem ser modificados de maneira regíoseletiva. As ciclodextrinas (hospedeiros) formam complexos com várias moléculas hidrófobas (convidados) incluindo as mesmas de forma completa ou em parte na cavidade. As CD's têm sido usadas para a solublização e encapsulaçáo de drogas, perfumes e aromatizantes como descrito por Szejtli, J., Chemical Reviews, (1998), 98, 1743-1753. Szejtli, J., J. Mater. Cherrt,, (1997), 7, 575-587, Conforme estudos detalhados de toxicidade, mutagenecídade, te rato genicid ade e carciongenecídade sobre as ciclodextrinas, descritos em [Rajewski, R.A.. Stella, V,, J. Pharmaceutical Sciences, (1996), 85, 1142-1169], essas se apresentam com baixa toxicidade, em especial da hídroxipropil-(-ciclodextrinas, como relatado em Szejtli, J. Cyclodextrins: Properties and aplications. Drug Investig,, 2{suppl. 4): 11-21, 1990. Exceto para altas concentrações de alguns derivados, que provocam danos aos eritrócitos, esses produtos em geral não acarretam riscos à saúde. A utilização das ciclodextrinas como aditivos em alimentos já foi autorizada em países como Japão e a Hungria e para aplicações mais específicas, na França e na Dinamarca. Todas essas características são uma motivação crescente para a descoberta de novas aplicações, US459807Ü (CA1215359, DK356684, EP135044, ES8506757, GR82322, JP60025967), Mashiro, Kawahara et, al. (1986), desenvolveram uma invenção a qual relata a obtenção de compostos de inclusão entre Tripudie (anti- h i perten si vo) e ciclodextrinas (ci-ciclodextrína e β-dclodextrina). O Tripamide é pouco solúvel em água, portanto a utilização de ciclodextrinas fez com que fossem obtidos compostos mais solúveis. US5519G12, Fercej-Temeljoov, Darja et. al, (1996), desenvolveram uma invenção baseada na obtenção de um novo composto de inclusão de um anti-hipertensivo, o 1,4-diidropiridina, com metiI-(t-ciclodextrina e outros derivados como β-ciclodextrina hidroxilada. A administração de drogas na forma incorporada em uma matriz polimérica permite sua liberação no organismo em pequenas e controláveis doses diárias, durante dias, meses ou até anos. Vários polímeros já foram testados em sistemas de liberação controlada. Muitos em função de suas propriedades físicas, tais como: poli(uretanos) por sua elasticidade, poli(siloxanos) ou silicone por ser um bom isolante, poli(metil-metacrilato) por sua força física, poli(vinil álcool) por sua hidrofobicidade e resistência, poli(etileno) por sua dureza e impermeabilidade (Gilding, D. K. Biodegradable polymers. Biocompat. Gin. Implat, Mater. 2: 209-232,1981).

Entretanto, para uso em humanos, o material deve ser quimicamente inerte e livre de impurezas. Alguns dos materiais utilizados em sistemas de liberação são: poli (2-hidroxí-etiimetacrilato), poliacrilamida, polímeros na base de ácido láctico {PLA), na base de ácido glicólico (PGA), e os respectivos co-polí meros, (PLGA) e os poli (anidridos) tais como os polímeros na base de ácido sebásico PSA e os co-polímeros com polímeros hidroíóbicos. US4666705, De Crosta, Mark. T. et. al. (1987) relataram uma invenção baseada na liberação controlada de fármacos para hipertensão. For utilizado um inibidor da ECA, o Captopril, pois esse inibidor apresenta uma rápida absorção, com meia-vida de 2 horas. Para retardar essa liberação esta invenção baseou-se na obtenção de tabletes contendo o Captopril juntamente com um polímero ou co-polímero. O polímero utilizado foi o polivinil pirrolidone (PVP) e a técnica utilizada foi a granulação a seco. C resultado obtido foi o aumento do tempo de permanência do fármaco no organismo por um período de 4 a 16 horas, ainda um período muito curto quando comparado à presente invenção. US6087386 (W09749392A1) Chen, Tzyy-Show H. et. al. (2000) publicaram uma invenção que apresenta uma composição farmacêutica composta por Enalapril (inibidor da ECA) e Losartan (antagonista da All), sendo uma camada de Losartan Potássico e outra camada de Maleato de Enalapril. Essa invenção objetivou-se no melhoramento da ação farmacológica, diminuindo os efeitos colaterais e aumentando o tempo de absorção, porém caracteriza-se por ser um processo caro e complexo, quando comparado com a presente invenção.

Os lipossomas são vesículas lipídicas que incluem compartimentos internos aquosos em qual moléculas, por exemplo, drogas, podem ser encapsuladas com objetivo de alcançar uma liberação lenta da droga depois de administração dos lipossomas em um indivíduo, São relatados no estado da técnica muitas patentes para a preparação de lipossomas [Pat US 4,552,803, Lenk; Pat US 4,310,506, Baldeschwieler; Pat ÜS 4,235,871, Papahadjopoulos; Pat US 4,224,179, Schneider; Pat US 4,078,052, Papahadjopoulos; Pat US 4,394,372, Alfaiate; Pat US 4,308,166, Marchettí; Pat US 4,485,054, Mezei; e Pat US 4,508,703, Redziniak; Woodle e Papahadjopoulos, Methods Enzymol. 171:193-215 (1989)], Lipossomas unilamelares têm uma única membrana que inclui um volume aquoso [Huang, Biochemístry 8:334-352 (1969)] enquanto lipossomas multilamelares têm numerosas membranas concêntricas [Bangham etCol., J. Mol. Biol. 13:238-252 (1965)1- O procedimento de Bangham [J. Mol, Biol. 13:238-252 (1965)1 produz lipossomas multilamelares ordinários' (MLVs). MLVs “ordinários" podem ter distribuição de soluto desigual entre os compartimentos aquosos e, assim, apresentar diferença de pressão osmótica entre compartimentos. Lenk et Col. (Pat US 4,522,803; US 5,030,453 e US 5,169,637), Fountain et ai. (Pat US 4,588,578), Cuilis et al. (Pat US 4,975,282) e Gregoriadis et al. (Pat, W.O. 99/65465) descobriram métodos para preparação de lipossomas multilamelares que têm distribuição de soluto substancialmente igual entre os compartimentos. Uma distribuição igual de soluto entre os diferentes compartimentos significa uma maior eficiência de encapsulação do medicamento assim como uma diferença de pressão osmotica menor o que torna esses MLVs mais estáveis que os MLVs ordinários.

Podem ser produzidos lipossomas unilamelares por sonicação dos MLVs [veja Paphadjopoulos et al. (1968)] ou por extrusão através de membranas de policarbonato [Cuilis et Col. (Pat US 5,008,050) e Loughrey et Col. (Pat US 5,059,421)].

Lipídeos satisfatórios incluem, por exemplo, fosfatídilcolína, fosfatidilserina, fosfatidilglicerol, cardioüpin, colesterol, ácido fosfatidico, esfingolipideos, glicolipídeos, ácidos graxas, esterois, fosphatidiletanolamina. fosfolipídeos polimerizáveis na sua forma polimerizada ou não-polimerizada declara, e misturas desses lipídeos. A composição dos lipossomas pode ser manipulada de forma a conferi-lhes uma especificidade para órgãos ou para células. O direcionamento dos lipossomas foi classificado, baseando-se em fatores anatômicos e nos mecanismos envolvidos, A classificação anatômica está baseada no nível de seletividade, por exemplo, orgáo-específico, célula-específico ou organeIa-específico. Do ponto de vista dos mecanismos, o direcionamento pode ser considerado como passivo ou ativo. O direcionamento passivo utiliza a tendência natural dos lipossomas convencionais serem capturados pelas células do sistema de reticuIo-endothelial em órgãos que contém capilares sinusoidais. Os lipossomas podem ser estabilizados esteticamente (também conhecido como “lipossomas-PEG"), que são caracterizados por uma velocidade de eliminação reduzida da circulação sanguínea [Lasic e Martin, Stealth Liposomes, CRC Press, Inc., Boca Raton, Fia. (1995)]. Os lipossomas-PEG, tem a superfície recoberta por um polímero, preferencialmente, polietileno glicol (PEG), que é conjugado covalentemente a um dos fosfolipídeos e cria uma nuvem hídrófila fora da bícamada da vesícula. Essa barreira estérica atrasa o reconhecimento dos lipossomas pelas opsoninas e permite que os lipossomas permaneçam mais tempo na circulação que os lipossomas convencionais [Lasic e Martin, Stealth Liposomes, CRC Press, Inc,, Boca Raton, Fia. (1995); Woodle et Col,, Biochim, Bíophys, Acta 1105:193-200 (1992); Litzinger et Col., Biochim. Bíophys. Acta 1190:99-107 (1994); Bedu Addo, et Col.» Pharm. Res. 13:718-724 (1996)] e aumentam a eficácia farmacológica dos agentes encapsulados, como foi demonstrado para alguns quimioterapêuticos (Lasic e Martin, Stealth liposomes, CRC Press, Inc,, Boca Raton, Fia. (1995)] e peptídeos bioativos [Allen T.M. In: Liposomes, New Systems, New Trends in their Applications (F. Puisieux, P. Couvreur, J, Delattre, J.-P. Devíssaguet Ed,), Editions de Ia Santé, França, 1995, pp. 125], Estudos nesta área demonstraram que diferentes fatores afetam a meia-vida de circulação dos lipossomas-PEG, e idealmente, o diâmetro das vesículas deveria ser abaixo de 200 nm, com PEG de peso molecular de aproximadamente 2,000 Da, em uma proporção de 3% [Lasic e Martin, Cautela ü posso mas, CRC Press, Inc., Boca Raton» Fia. (1995); Woodle et Col., Biochim, Bíophys. Acta 1105:193-200 (1992); Litzinger et Col,, Biochim, Bíophys. Acta 1190:99-107 (1994); Bedu Addo et Col.» Pharm. Res. 13:718-724 (1996)]. O direcionamento ativo envolve alteração dos íipossomas através da sua associação com um ligante como um anticorpo monoclonal, açúcar, glicolipídeo, proteína, polímero ou mudando a composição ou o tamanho dos íipossomas para direcioná-los para órgãos e células diferentes dos locais onde se acumulam os íipossomas convencionais.

Veículos a base de íipossomas foram propostos para uma variedade de substâncias farmacologicamente ativas, inclusive antibióticos, hormônios e agentes anti-tumorais [Medicai applications of liposomes (D.D. Lasic, D. Papahadjopoulos Ed.), Elsevier Science B.V., Holanda, 1998], A Ang-(1-7) e seus análogos tem grande potencial para tratamentos de doenças cardiovasculares. Outro aspecto importante relacionado ao SRA está relacionado à clara necessidade de ampliação dos conhecimentos sobre suas ações fisiológicas, que poderão propiciar o desenvolvimento de novas estratégias terapêuticas. Contudo, o modo convencional de administração da maioria das drogas anti-hipertensivas e especialmente de peptídeos biologicamente ativos, como as angiotensinas e derivados, sofre limitações devido a sua curta meia-vida e quando procura-se obter informações sobre as suas ações crônicas.

Nesse sentido, a presente invenção é caracterizada pelo uso de íipossomas, ciclodextrinas e polímeros biodegradáveis como sistemas de liberação controlada das angiotensinas e derivados para aumentar a biodisponibüidade, a duração e a intensidade de seus efeitos biológicos. A formulação da presente invenção caracteriza-se pelo uso da mistura de exci pi entes aceitáveis farmaceuticamente combinados a Ang-(1-7) e/ou análogos da Ang-(1-7), Podem ser preparadas formulações com um excipiente ou misturas desses. Exemplos de excipientes incluem água, solução salina, soluções tampo nadas com fosfato, a solução de Ringer, solução de dextrose, a solução de Hank, soluções salinas biocompativeis contendo ou não polietileno glicol. Veículos não aquosos, como óleos fixos, óleo de sesame, etil-oleato, ou triglicerídeo também podem ser usados. Outras formulações úteis incluem agentes capazes de aumentar a viscosidade, como carboximetilcelulose de sódio, sorbitol, ou dextran.

Os excipientes também podem conter quantidades menores de aditivos, como substâncias que aumentam isotonicidade e estabilidade química de substância ou tampões. Exemplos de tampões incluem tampão fosfato, tampão bicarbonato e tampão Tris, enquanto exemplos de preservativos incluem timerosal, m - ou o-cresol, formalin e benzil-álcool. As formulações padrão podem ser líquidos ou sólidos. Desta forma, uma formulação não-líquída, o excipiente pode incluir dextrose, albumina de soro humano, preservativos, etc. para qual água ou solução salina estéril pode ser acrescentada antes da administração. A presente invenção caracteríza-se ainda pela preparação de sistemas de liberação controlada contendo Ang-(1-7) e/ou análogos da Ang-(t-7), Os sistemas de liberação controlada satisfatórios incluem, mas não são limitados às ciclodextrinas, polímeros biocompativeis, polímeros biodegradáveis, outras matrizes poiiméricas, cápsulas, micro- e na no-cápsulas, micro- e nano-partículas, preparações de bolus, bombas osmóticas, dispositivos de difusão, lipossomas, lipoesferas, e sistemas de administração transdérmicos. Outras composições de liberação controlada da presente invenção incluem líquidos que, quando submetidos a mudanças de temperatura, formam um sólido ou um gel in situ, A presente invenção caracteriza-se pela obtenção de sistemas de liberação controlada do heptapeptídeo Angiotensina ~{1 -7) e/ou dos seus derivados, usando as ciclodextrinas e/ou seus derivados, que diminuem a degradação do peptídeo no trato gastrointestinal (TGl), significando maior biodisponibilidade do peptídeo no sistema biológico, A presente invenção caracteriza-se pela obtenção de sistemas de liberação controlada do heptapeptídeo Angiotensina.....(1-7) e/ou dos seus derivados, usando polímeros biodegradáveis, lípossomas ou misturas desses sistemas com ciclodextrinas, os quais aumentam a biodisponibilidade dos peptídeos.

Até o presente, nenhuma aplicação usando o heptapeptídeo Angiotensina-(1-7) ou seus análogos, agonistas e antagonistas associados às ciclodextrinas ou seus derivados, aos polímeros biodegradáveis ou aos lípossomas foi descrita, A presente invenção pode ser melhor entendida através dos seguintes exemplos mas não limitantes: Exemplo 1 Este exemplo descreve a preparação de Ang-(1 -7) na forma encapsulada em lípossomas estabilizados estericamente e a melhoria da biodisponibilidade da Ang-{1-7) quando administrada nessa forma. A preparação da Ang-{1-7) na forma encapsulada em lípossomas foi realizada de acordo com o método de Kirby e Gregoriadis (Biotechnology 2:979* 984, 1984) e seguida por extrusão da suspensão de DRV através de membranas de policarbonato de poro de diâmetro de 200 nm [Nayar et al. Biochim. Biophys. Acta. 986:200-206 (1989)). Os lípossomas contendo o peptídeo encapsulado foram separados de peptídeo não encapsulado através de diálise e foram esterilizados através de filtração em membranas estéreis de 0,22 micrometros. Uma composição lípidica de diestearoil-fosfatidilcoIina, colestero! e d iestearoil -f osf ati d iletanolamína-polietilenoglicol (P.M. 2.000) e uma relação molar de 5:4:0,3 foram escolhidos. A quantidade de peptídeo encapsulado foi determinada usando o fluorescência intrínseco da Ang-(1-7). A eficiência de encapsulação foi de 12% e uma relação peptídeo/lipídeo de 0,03 (p/p). O tamanho dos lípossomas foi determinado através da técnica por difusão quasi-elástica da luz, O diâmetro médio das vesículas foi de 0,19 micrometros. Lípossomas contendo Ang-(1-7) (Lang) foram micro-injetados unrlateralmente (35 ng de Ang-(1-7) em 200 nL) no bulbo rostro ventrolateral (BRVL) com uma agulha (30 G) que foi inserida lentamente no tecido cerebral pela superfície dorsal, usando as coordenadas estereotaxis; 1,8 mm anterior, 1,8 lateral ao obex, e só sobre o pia-mater. Lípossomas vazios (Lvaz) foram micro-injetados semelhantemente na mesma dose de lipídeo, A pressão arterial foi registrada por telemetria durante 10 segundos, a cada 10 minutos, começando 4 dias antes e terminando 12 dias depois, em ratos não perturbados com liberdade de movimento. A micro-injeção de LAng produziu um efeito pressor significativo durante o período diurno que foi mantido durante 5 dias, A PAM mais alta foi obtida no dia 3 (114 ± 4 mmHg) que diferiu significativamente daquela registrada no dia O (100 ± 3 mmHg). Como esperado, Lvaz não produziu alteração significativa na PAM (94 ± 5 mmHg em dia 3 vs 90 ± 5 mmHg em dia 0). Além disso, a PAM diurna foi significativamente mais alta no grupo Lang que no grupo Lvaz nos dias 1, 2 e 3. A PAM noturna, em contraste da PAM diurna, não foi afetada significativamente pela micro-injeção de LAng, Estudos prévios estabeleceram que a micro-injeção de Ang-(1 -7) livre (não encapsulada) no BRVL, em uma dose semelhante (25-50 ng), produz um aumenta de 15 mmHg por aproximadamente 10 min, A curta duração desse efeito foi atribuída ao metabolismo elevado do peptídeo in vivo.

Portanto, a presente tecnologia caracteriza-se por permitir estabelecer, em condições crônicas, o efeito pressor de Ang-(1-7) ao níve! do BRVL, Caracteriza-se ainda pela capacidade de aumentar a biodisponibilidade do peptídeo.

Exemplo 2 Este exemplo descreve a preparação de Ang-(1-7) em microsferas de PLGA e a liberação prolongada do peptídeo da formulação resultante Partículas poliméricas foram preparadas, a partir de co-polímeros do ácido lático e glicólico (PLGA 50:50), pelo método da emulsão múltipla A(0/A com posterior evaporação do solvente [Jeffery et al. Int. J. Pharm. 77:169-175 (1991)], Tal método foi empregado para o encapsu Ia mento de Ang-(1-7) com as seguintes etapas. 100 mg de polímero PLGA (50:50 p/p) foi dissolvido em 1 mL de diclorometano. Em seguida, foi adicionado 1,8 mg de Ang-(1-7), previamente dissolvido em 200 uL de água deionizada, e a mistura foi submetida à sonicagão para obtenção de uma emulsão água/óleo (A/O). A emulsão A/O resultante foi adicionada à 50 mL de uma solução de PVA 1 % (p/v) em água deionizada, A mistura foi submetida à sonicação (5000 rotações/minuto) por aproximadamente 1 minuto. Deste modo é formada a segunda emulsão água/óleo/água (A/O/A). A emulsão foi mantida em agitação constante por 2 horas em temperatura ambiente para evaporar o diclorometano, Em seguida, as micro esferas formadas foram submetidas à 3 ciclos de c entrif u gação/l avag e m com água deionizada. As mícroesferas foram então liofilizadas e armazenadas em -20°C, Para se determinar a quantidade de peptídeo incorporada, o peptídeo foi extraído das partículas poliméricas depois da dissolução do polímero em diclorometano. A dosagem do peptídeo foi realizada por radioimunoensaio [Neves et al., Biochem, Pharmacol. 50:1451-1459 (1995)]. A quantidade incorporada foi de 1,9 mg peptídeo por g de mícroesferas o que representa um percentual de incorporação de 15 %. A cinética de liberação do peptídeo foi avaliada após resuspensão das mícroesferas em solução salina tamponada (pH 7,2) e incubação em 37°C. Essas condições experimentais representam condições fisiológicas modelo. O peptídeo liberado foi dosado por radioimunoensaio nos intervalos de 8 h, 24 h e 48 h. A percentagem de peptídeo liberado das mícroesferas em condições fisiológicas modelo foi aproximadamente 60% em 8 h e cerca de 90% em 48 h.

Portanto, esse exemplo ilustra a capacidade de mícroesferas poliméricas incorporarem o peptídeo e promoverem uma liberação prolongada do mesmo. Exemplo 3 Preparação do composto de inclusão entre a (Vciclodextrina e seus derivados e a Ang-(1 -7) e ou análogos. A preparação é feita em proporções eq ui molares de fl-ciclodextrina e seus derivados e a Ang-(1-7) e ou análogos em soluções aquosas. A mistura de soluções é submetida a agitação constante até a completa dissolução da fl-ciclodextrina, Poste rio rmente a mistura é congelada a temperatura de nitrogênio líquido e submetida ao processo de liofilização por 24 horas, O sólido assim obtido foi caracterizado através das técnicas íísico-químicas de análise. A técnica que forneceu características importantes da interação hospedeiro:convidado foi a fluorescência e a espectroscopia de absorção na região do ultravioleta-vísivel.

Os testes de absorção e estabilidade biológica foram feitos com soluções do composto de inclusão peptídeo-ciclodextrina, Para a realização dos experimentos, foram utilizados 12 ratos Wistar normais, que tiveram previamente canuladas a artéria femoral esquerda. Os animais foram divididos em 3 grupos experimentais, e submetidos a gavagem utilizando-se solução salina (0,9%/50ul), Ang-(1-7) (1 ΟΟμ0/5ΟιιΙ) e Aog-(1-7)[tCD (100ug/5Gul). Foram realizadas 4 coletas de sangue (1 ml), sento a primeira antes da gavagem, e as três outras com 2, 6 e 24 horas após a gavagem.

Os resultados obtidos demonstraram que a Ang-(1-7)|1CD é amplamente absorvida no TGÍ, alcançando sua concentração máxima sanguínea por volta de 6 horas (620 ± 194 pg/ml), retornando a valores próximos do basal após 24 horas da realização da gavagem (30 ±.8 pg/ml vs 25 ± 10 antes da gavagem ). A administração de Ang-(1-7) isoladamente, também aumentou a concentração plasmática desse peptídeo 6 horas após sua administração {86 * 13 pg/ml), porém esse aumento foi cerca de 8 vezes menor do que o observado com a Ang-(1-7)|1CD, A administração de salina não alterou os níveis plasmãticos de Ang-(1-7). Esses resultados mostram que a Ang-(1-7)f>CD pode ser utilizada para administração de Ang-{1-7), e provavelmente seus análogos, por via oral, Portanto, a presente tecnologia, baseada na associação do peptídeo à ciclodextrina, permite aumentar a biodisponibilídade do peptídeo por via oral.

Claims (7)

1. Formulações do peptídeo Angíotensina-(1 -7), caracterizadas por compreenderem compostos de inclusão da Angiotensina-(1-7) com ciclodextrinas; ou encapsulamento da Angiotensina- {1 -7) em lipossomas e/ou polímeros biodegradáveis e/ou misturas desses sistemas.

2. Formulações do peptídeo Angiotensína-(1-7), de acordo com a reivindicação 1, caracterizadas por compreenderem mistura de soluções organo-aquosas de ciclodextrinas, sendo as ciclodextrinas selecionadas do grupo da a, ft e γ com solução aquosa do peptídeo Angiotensina-(1-7),

3. Formulações do peptídeo Angiotenstna-(1-7), de acordo com as reivindicações 1 e 2, caracterizadas por compreender mistura de excipientes aceitáveis farmaceuticamente, incluindo água, solução salina, soluções tamponadas com fosfato, a solução de Ringer, solução de dextrose, a solução de Hank, soluções salinas bíocompatíveis, contendo ou não polietileno glicol, veículos não aquosos, como óleos fixos, óleo de sesame, etil-oleato, ou triglicerídeo, carboximetilceIuIose de sódio, sorbitol, ou dextran, timerosal, m- ou o-cresol, formalin e benzil-álcoot, albumina de soro humano.

4. Formulações do peptídeo Angíotensina-( 1 -7), de acordo com as reivindicações 1, 2 e 3, caracterizadas pelo uso da formulação de Angiotensina-(1-7), ser no estudo da hipertensão arterial, outras doenças cardiovasculares e suas complicações, feridas, queimaduras, eritemas, tumores, Diabetes Mellitus, motilidade espermática, nefropatias, desordens gastrointestinais e gin eco lógicas, angiogênese e angioplastia em animais de sangue quente.

5. Formulações do peptídeo Angiotensina-{1 -7), de acordo com as reivindicações 1, 2, e 3, caracterizadas pelo uso das formulações ser pelas vias de aplicação oral, intramuscular, intravenosa, subcutânea, tópica, inalação (pulmonar, intranasal, intrabucaí) ou como dispositivos que possam ser implantados ou injetados.

6.

Formulações do peptídec Angiotensina-(1-7), de acordo com a reivindicação 1, 2 e 3, caracterizadas pela liberação controlada do peptídeo Angíotensina-(1 -7) ser usando as ciclodextrinas, lipossomas e os polímeros biodegradáveis e/ou misturas desses sistemas.