BRPI0413848B1 - Composto, processo para preparar o composto, composição terapêutica para prevenir inflamação e apoptose, processo para preparar a composição terapêutica e uso de composto, ou de seu sal, ou de seu estereoisômero - Google Patents

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Abstract

"composto, processo para preparar o composto, composição terapêutica para prevenir inflamação e apoptose, método para prevenir inflamação e apoptose, e, uso de composto inibidor de caspase, ou de seu sal, ou de seu estereoisômero". a presente invenção refere-se a um derivado de isoxazolina como um inibidor contra várias caspases, a um processo para preparar o mesmo, e a uma composição terapêutica para prevenir inflamação e apoptose compreendendo o mesmo.

Description

“COMPOSTO, PROCESSO PARA PREPARAR O COMPOSTO, COMPOSIÇÃO TERAPÊUTICA PARA PREVENIR INFLAMAÇÃO E APOPTOSE, PROCESSO PARA PREPARAR A COMPOSIÇÃO TERAPÊUTICA E USO DE COMPOSTO, OU DE SEU SAL, OU DE SEU 5 ESTEREOISÔMERO”
CAMPO TÉCNICO
A presente invenção refere-se a um derivado de isoxazolina como um inibidor contra várias caspases incluindo caspase-1 [enzima conversora de interleucina-1 β, ICE] e caspase-3 [apopaína/CPP-32], a um 10 processo para a preparação do mesmo, e a uma composição terapêutica para prevenir inflamação e apoptose compreendendo o mesmo.
FUNDAMENTOS
Caspase é um novo tipo de cisteína protease na forma de α2β2 descoberta durante os últimos 10 anos. Têm sido conhecidos até agora cerca 15 de 14 tipos. Caspase-1 (ICE), uma delas, é um tipo de citocinas e participa na conversão de prointerleucina-1 β para ativar interleucina-1 β. Interleucina-1 consiste de interleucina-1 α e interleucina-1 β, ambas as quais são sintetizadas em monócitos na forma de um precursor possuindo 31 kDa. Apenas prointerleucina-1 β é ativada por ICE. As posições hidrolisadas por caspase-1 20 são Asp27-Gly28 e Asp116-Ala117. A hidrólise da última posição dá interleucina1β. Tem sido relatado que interleucina-1 β atua como um mediador importante na provocação de inflamação (1, 3). Tem sido descoberto pela primeira vez em 1989, e em dois grupos de estudo independentes, a sua estrutura tridimensional que foi determinada pelo método cristalográfico de raios-X.
Caspase-3 (CPP-32) é amplamente estudada para seu papel ou mecanismo de ação, e sua estrutura tridimensional foi determinada em 1996 (2). Caspase-3 (apopaína) ativada de procaspase-3 hidrolisa o motivo (P4)Asp-X-X-Asp(P1), e os substratos conhecidos incluem poli(ADP-ribose) polimerase, ribonucleoproteína nuclear pequena U1 de 70.000 Mr e catalisa
Petição 870180062218, de 19/07/2018, pág. 9/17 subunidade de proteína cinase dependente de DNA de 460.000 Mr, etc. A estrutura por raios-X de caspase-7 tem sido relatada como sendo muito semelhante àquela de caspase-3 (4).
Caspases-8 e 9 estão presentes nas caspases-3,6,7 a montante, e sabe-se que estas caspases participam na cascata de apoptose. A estrutura por raios-X de caspase-8 foi determinada em 1999 (5), e particularmente os seus inibidores podem ser vantajosamente usados para tratar as doenças relacionadas com apoptose.
Inibidores de caspase significam aqueles compostos que inibem a atividade de caspase, e deste modo controlam tais sintomas como inflamação, apoptose, etc. causados pela atividade de caspase. Doenças e sintomas que podem ser tratados ou atenuados pela administração de inibidores incluem os seguintes: artrite reumatóide, síndrome inflamatória do intestino inflamado, doença de enxerto versus hospedeiro, sépsis, osteoartrite, osteoporose, leucemia mielógena aguda e crônica, meningite, salpingite, choque séptico, colangite, colete, encefalite, endocardite, glomerulonefrite, hepatite, miocardite, pancreatite, diabetes de tipo I, esclerose múltipla, mal de Alzheimer, doença de Parkinson, hepatocirrose (6).
Dentre os inibidores de caspase conhecidos até agora, os inibidores irreversíveis mais notáveis são os seguintes:
o o
IDN-1965 MX-1013
Ambos os inibidores acima exibem sua atividade baseado no mecanismo comum que eles irreversivelmente inativam a enzima para suprimir a apoptose celular (inibidor de amplo espectro, irreversível). Tem sido relatado que os inibidores irreversíveis possuem atividade inibitória muito mais efetiva quando se comparam os inibidores irreversíveis e reversíveis (7). E relatado que ambos • ··· · · · *··· · • · · · ··· · · · · ··· · · • · · · · · · · · · · · ··· · · · · · · · · ·
IDN-1965 de IDUN Co. e MX-1013 de Maxim Co. mostram atividade em modelo de apoptose celular para lesão hepática (8, 9). Estes compostos estão agora no estágio de teste pré -clínico. O inibidor irreversível IDN-6556, cuja estrutura tem sido recentemente relatada, está agora no estágio de teste clínico de fase II como um agente terapêutico para lesão hepática (10,11).
O F
IDN“ê556
Referências:
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• · · · ·· · (11) Canbay A et al. J. Pharmacol. Exp. Ther., 2004, 3C8(3),
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DESCRIÇÃO DA INVENÇÃO
Recentemente projetou-se e sintetizou-se alguns compostos que podem ser usados como um inibidor efetivo contra caspases e possuem uma estrutura distintiva e seletividade alta para enzimas semelhantes, e determinaram sua capacidade de ligação e atividade inibitória para caspases. Como um resultado, verificou-se que um composto de seguinte fórmula (1) atende a tais requerimentos, e completaram a invenção.
d)
na qual:
A, B, R, R1, R2, e X são como definidos abaixo.
Portanto, a presente invenção proporciona o novo derivado de isoxazolina de fórmula (1), seu sal, ou seu estereoisômero possuindo atividade inibitória contra caspases.
Outro objetivo da presente invenção é proporcionar um processo para preparar o composto de fórmula (1), seu sal, ou seu estereoisômero.
Também outro objetivo da presente invenção é proporcionar 20 uma composição, um uso, ou um método para inibir caspases, especificamente uma composição terapêutica, um uso, ou um método para prevenir inflamação e apoptose, compreendendo o composto de fórmula (1), seu sal, ou seu estereoisômero como um ingrediente ativo juntamente com o veículo farmaceuticamente aceitável.
BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS
Figura 1 mostra a atividade inibitória de Composto (Iii) contra ··«···· · ···· • · · · ··· · · · · ··· · · • ·· · · ···· ··* • · · · ···· · · · « fibrose hepática devido à estagnação biliar: (a)” na Figura 1 representa o caso de operação Simulada, ”b) representa o caso de operação BDL no qual apenas o veículo foi administrado após a ligação de duto biliar, (c) representa o caso no qual o Composto (Iii) foi administrado oralmente em 5 uma dosagem de 3 mg/kg duas vezes ao dia por 1 semana após 1 semana da ligação de duto biliar, e ”d)” representa o caso no qual o Composto (Iii) foi oralmente administrado em uma dosagem de 10 mg/kg duas vezes ao dia por 1 semana após 1 semana da ligação de duto biliar.
Figura 2 mostra a atividade inibitória de Composto (Iii) contra a apoptose celular hepática devido à estagnação biliar: (a) na Figura 2 representa o caso de operação Simulada, ”b)” representa o caso de operação BDL no qual apenas o veículo foi administrado após a ligação de duto biliar, (c) representa o caso no qual o Composto (Iii) foi administrado oralmente em uma dosagem de 3 mg/kg duas vezes ao dia por 1 semana após 1 semana da ligação de duto biliar, e d) representa o caso no qual o Composto (Iii) foi oralmente administrado em uma dosagem de 10 mg/kg duas vezes ao dia por 1 semana após 1 semana da ligação de duto biliar, e ”e) é um gráfico mostrando o número de células hepáticas submetidas à apoptose em cada grupo de tratamento.
MELHOR MODO DE REALIZAR A INVENÇÃO
Antes da ilustração da presente invenção em detalhe, os seguintes termos importantes são primeiro definidos:
a) Cadeia de Alquila Simples (SAC, abaixo) significa um hidrocarboneto possuindo 1 a 8 átomos de carbono em sua forma isomérica 25 linear ou ramificada.
b) Cadeia de Ciclo-Alquila Simples (SCAC, abaixo) significa uma radical cíclico possuindo 3 a 10 átomos de carbono.
c) Grupo Arila (Ar, abaixo) inclui grupos tanto aromáticos quanto heteroaromáticos. O grupo aromático significa um ciclo insaturado ♦·♦ · · · • ·« ·
único ou fusionado de 5 a 15 membros. Um ou mais hidrogênios podem estar substituídos por um grupo(s) selecionado(s) dos seguintes: grupo acila, amino, carboalcoxila, carboxila, carbóxi-amino, ciano, halo, hidroxila, nitro, tiol, alquila, ciclo-alquila, alcoxila, ariloxila, sulfoxila, e guanido. O grupo 5 heteroaromático significa o grupo aromático contendo 1 a 5 heteroátomos selecionados de um grupo consistindo de oxigênio, enxofre, e nitrogênio. Igualmente, um ou mais hidrogênios podem estar substituídos por um grupo(s) selecionado(s) dos seguintes: grupo acila, animo, carboalcoxila, carboxila, carbóxi-amino, ciano, halo, hidroxila, nitro, tiol, alquila, ciclo10 alquila, alcoxila, ariloxila, sulfoxila, e guanido. Ou, por exemplo, no caso de piridila, um grupo alquila pode ser adicionado no átomo de nitrogênio para converter o grupo piridila em um grupo piridínio possuindo carga-(+) no átomo de nitrogênio.
O grupo arila inclui fenila, bifenila, 1-naftila, 2-naftila, piridinila, N-alquil-piridínio, pirimidinila, quinolinila, benzotienila, indolila, pirazinila, isoindolila, isoquinolila, quinazolinila, quinoxalinila, ftalazinila, imidazolinila, isoxazolila, pirazolila, oxazolila, tiazolila, indolizinila, indazolila, benzotiazolila, benzimidazolila, benzofuranila, tienila, pirrolila, oxadiazolila, tiadiazolila, triazolila, tetrazolila, oxazolopiridinila, 20 imidazopiridinila, isotiazolila, cinolinila, carbazolila, isochromanila, cromanila, tetra-hidro-isoquinolinila, isoindolinila, isobenzotetra-hidrofuranila, isobenzotetra-hidro-tienila, isobenzotienila, benzoxazolila, piridopiridinila, benzotetra-hidro-furanila, benzotetra-hidro-tienila, purinila, benzodioxolila, triazinila, fenoxazinila, fenotiazinila, pteridinila, 25 benzotiazolila, imidazopiridinila, imidazotiazolila, di-hidro-benzisoxazinila, benzisoxazinila, benzoxazinila, di-hidro-benziso-tio-piranila, benzopiranila, benzo-tio-piranila, cumarinila, isocumarinila, cromonila, cromanonila, piridinil-N-óxido, tetra-hidro-quinolinil-N-óxido, di-hidro-quinolinila, dihidro-quinolinonila, di-hidro-isoquinolinonila, di-hidro-cumarinila, di-hidro9 * «·· * · ··· ♦ · · ♦ isocumarinila, isoindolinonila, benzodioxanila, benzoxazolinonila, N-alquilpiridínio, pirrolil-N-óxido, pirimidinil-N-óxido, pirazinil-N-óxido, quinolinilN-óxido, N-óxido, isoquinolil-N-óxido, quinazolinil-N-óxido, quinoxalinil-Nóxido, ftalazinil-N-óxido, imidazolinil-N-óxido, isoxazolil-N-óxido, oxazolil5 N-óxido, tiazolil-N-óxido, indolizinil-N-óxido, indazolil-N-óxido, benzotiazolil-N-óxido, benzimidazolil-N-óxido, pirrolil-N-óxido, oxadiazolilN-óxido, tiadiazolil-N-óxido, triazolil-N-óxido, tetrazolil-N-óxido, etc.
d) Cadeia Alquila Simples substituída com Arila (SAC-Ar, abaixo) significa uma cadeia alquila linear ou ramificada que possui 1 a 8 átomos de carbono e está substituída com o grupo arila mencionado acima.
e) Aminoácido natural inclui os seguintes: Glicina, Alanina, Valina, Leucina, Isoleucina, Serina, Treonina, Cisteína, Metionina, Prolina, Ácido Aspártico, Asparagina, Ácido Glutâmico, Glutamina, Lisina, Arginina, Histidina, Fenil-alanina, Tirosina, e Triptofano.
f) O grupo protetor de éster simples é um hidrocarboneto possuindo 1 a 8 átomos de carbono na forma isomérica quer linear quer ramificada.
Em adição, o presente relatório descritivo inclui as seguintes abreviações:
N-cloro-succinimida: NCS
N-metil-morfolina: NMM
Hexaflurofosfato de O-(7-azabenzotriazol-l-il)-N,N,N’,N'tetrametilurônio: HATU
Ν,Ν-dimetil-formamida: DMF l-(3-Dimetil-amino-propil)-3-etil-carbodiimida: EDC
1-Hhidróxi-benzotriazol hidratado: HOBt
Ácido trifluoroacético: TF A
t-Butóxi-carbonila: Boc
Benzil-óxi-carbonila: Cbz
Metila: Me
Etila: Et
Equivalente: Eq
Os substituintes incluídos na fórmula (I) acima são especificamente definidos como segue.
I) R representa H, cadeia alquila simples (-SAC), cadeia cicloalquila simples (-SCAC), grupo arila (-Ar), ou cadeia alquila simples substituída com arila (-SAC-Ar),
II) R1 representa -SAC, -SCAC, -Ar, -SAC-Ar, ou um resíduo de cadeia lateral de todos os aminoácidos naturais; e o composto de fórmula (1) poderá existir na forma diastereomérica específica, ou suas misturas quando o carbono no qual R1 estiver ligado se toma um estereocentro devido ao grupo R1; ou o composto de fórmula (1) poderá possuir um grupo protetor em uma forma de éster (-CO2R3 no qual R3 é -SAC) ou em uma forma de sulfonamida (-CONHSO2R4 no qual R4 é -SAC), ou poderá existir na forma de sal farmaceuticamente aceitável, quando R1 for um resíduo de cadeia lateral de um aminoácido contendo grupo carboxila; ou o composto de fórmula (1) também poderá existir na forma de sal farmaceuticamente aceitável quando R1 for um resíduo de cadeia lateral de um aminoácido contendo um grupo base.
III) R2 representa -SAC, -SCAC, -Ar, -SAC-Ar, ou um resíduo de cadeia lateral de aminoácidos naturais; e o composto de fórmula (1) poderá existir na forma diastereomérica específica, ou suas misturas quando o carbono no qual R2 estiver ligado se toma um estereocentro devido ao grupo R2; ou o composto de fórmula (1) poderá possuir um grupo protetor em uma forma de éster (-CO2R5 no qual R5 é -SAC) ou em uma forma de sulfonamida (-CONHSO2R5 no qual R5 é -SAC), ou poderá existir na forma de sal farmaceuticamente aceitável, quando R2 for um resíduo de cadeia lateral de um aminoácido contendo grupo carboxila; ou o composto de fórmula (1) também poderá existir na forma de sal farmaceuticamente aceitável quando R2 for um resíduo de cadeia lateral de um aminoácido contendo um grupo base; ou R2 representa adicionalmente H; -(CH2)nOR7 no qual R7 é -SAC, SCAC, -Ar, -SAC-Ar, e η = 1 ou 2; ou -(CH2)nOC(=O)R8 no qual R8 é -SAC, 5 -SCAC, -Ar, -SAC-Ar, e n = 1 ou 2.
IV) A representa -(CH2)n-(n = 0-4), -O-(CH2)n-(n = 0-4), ou -
NR9-(CH2)n-(n = 0-4) nos quais R9 é -SAC, -SCAC, -Ar, -SAC-Ar,
V) B representa H, -SAC, -SCAC, -Ar, -SAC-Ar, ou
VI) R e R1 podem formar um ciclo juntamente com o átomo de carbono no qual estão ligados, onde-R-R^é -(CH2)n-, -(CH2)n-O-(CH2)m-, ou (CH2)n-NR10-(CH2)m- nos quais n+m < 9 e R10 é -SAC, -SCAC, -Ar, -SACAr, -C(O)-SAC, -C(=O)-SCAC, -C(=O)-Ar, -C(=O)-SAC-Ar,
VII) X representa -C(=O)CH2ORn no qual R11 é -SAC, -
SCAC, -Ar, -SAC-Ar; -C(=O)CH2OC(=O)R12 no qual R12 é -SAC, -SCAC, 15 Ar, -SAC-Ar; -CH=CH-CO2R13 no qual R13 é -SAC, -SCAC, -Ar, -SAC-Ar; CH=CH-SO2R14 no qual R14 é -SAC, -SCAC, -Ar, -SAC-Ar; C(=O)CH=CH2; ou -COCH2-W no qual W é -N2, -F, -Cl, -Br, -I, -NRi5R16 (R15 e R16 são, cada um, -SAC, -SCAC, -Ar, -SAC-Ar, ou juntos podem formar grupo cíclico de 3 a 6 membros saturado ou insaturado), -SR17 (R17 é 20 SAC, -SCAC, -Ar, -SAC-Ar), ou é de seguinte fórmula:
nas quais:
Y é H, -OH, -OR18 (Rls =-SAC ou -SCAC), -C(=O)R19 (R19 =H, -SAC, ou -SCAC), -F, -Cl, -Br, -I, -CN, -N3, -CO2H, CF3, -CO2R20 (R20 =SAC ou -SCAC), -C(O)NHR21 (R21 =-SAC ou -SCAC), ou -C(=O)NR22R23 * 25 (R22 e R23 são, cada um, -SAC ou -SCAC, -Ar, ou -SCAC-Ar),
R24 é H, -SCAC, -SAC-Ar, ou -Ar.
Os compostos preferidos dentre o composto de fórmula (1)
acima são os seguintes nos quais:
R representa H;
R1 representa -CH2COOH, -CH2COOR3 (R3 = SAC), ou CH2CONHSO2R4 (R4 = SAC);
R2 representa H, -SAC, -Ar, ou -(CH2)„OR7 (R7 = -SAC, SCAC, -Ar, ou -SCAC-Ar, e η = 1 ou 2); ou
X representa -C(=0)CH2OAr, -C(=O)CH2OC(=O)Ar, ou OCH2-W no qual W é -N2, -F, -Cl, -Br, -I, -NRl5R16 (R15 e R16 são, cada um, SAC, -SCAC, -Ar, -SAC-Ar, ou juntos podem formar grupo cíclico de 3 a 6 membros saturado ou insaturado), ou -SR17 (R17 é -SAC, -SCAC, -Ar, -SACAr).
Compostos mais preferidos dentre o composto de fórmula (1) acima são os seguintes nos quais:
(I) R representa H, (II) R1 representa -CH2COOH, -CH2COOR3 (R3 = SAC), ou CH2CONHSO2R4 (R4 = SAC);
(III) R2 representa H, -SAC, -Ar, ou -(CH2)„OR7 (R7 = -SAC, SCAC, -Ar, ou -SCAC-Ar, e η = 1 ou 2); ou
IV) A representa -(CH2)n-(n = 0-4) ou -O-(CH2)n-(n = 0-4),
V) B representa H, -SAC, -SCAC, -Ar, ou -SAC-Ar,
VI) X representa -COCH2N2, -COCH2F, -COCH2C1, COCH2Br, -COCH2I, -COCH2OAr, -COCH2OCOAr ou -COCH2SR17 (R17 é SAC, -SCAC, -Ar ou -SAC-Ar).
Compostos particularmente preferidos são aqueles 25 selecionados do seguinte grupo:
(1) ácido (3S)-5-[(2,6-dicloro-benzoil)-óxi]-3-{[[5-metil-3fenil-4,5-di-hidro-5-isoxazolil)-carbonil]-amino}-4-oxo-pentanóico (Iaa);
(2) ácido (3S)-3-{[(5-metil-3-fenil-4,5-di-hidro-5-isoxazolil)“ carbonil]-amino}-4-oxo-5-fenóxi-pentanóico (Ibb);
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(3) ácido (3S)-3-{[(5-etil-3-fenil-4,5-di-hidro-5-isoxazolil)-
carbonil]-amino }-4-oxo-5-(2,3,5,6-tetrafluoro-fenóxi)-pentanóico (Icc);
(4) ácido (3S)-3-({[5-etil-3-(l-naftil)-4,5-di-hidro-5isoxazolil]-carbonil}-amino)-4-oxo-5-(2}3,5?6-tetrafluoro-fenóxi)-pentanóico (Idd);
(5) ácido (3S)-3-({[5-etil-3-(2-naftil)-4,5-di-hidro-5isoxazolil]-carbonil}-amino)-4-oxo-5-(2,3,5,6-tetrafluoro-fenóxi)-pentanóico (Iee);
(6) ácido (3S)-3-({[5-etil-3-(l-isoquinolinil)-4,5-di-hidro-5- isoxazolil]-carbonil}-amino)-4-oxo-5-(2,3,5,6-tetrafluoro-fenóxi)-pentanóico (Iff) (7) ácido 3-({[5-etil-3-(l-isoquinolinil)-4,5-di-hidro-5isoxazolil]-carbonil} -amino)-5-fluoro-4-oxo-pentanóico (Igg);
(8) 3-({[5-etil-3-(l“isoquinolinil)-4?5-di-hidro-5-isoxazolil]- carbonil} -amino)-5-fluoro-4-oxo-pentanoato de etila (Ihh);
(9) ácido 5-fluoro-3-({[(5R)-5-isopropil-3-(l-isoquinolinil)-
4,5-di-hidro-5-isoxazolil]-carbonil}-amino)-4-oxo-pentanóico (Iii);
(10) ácido 3-({[5-etil-3-(4-quinolinil)“4?5-di-hidro-5isoxazolil]-carbonil}-amino)-5-fluoro-4-oxo-pentanóico (Ijj), (11) ácido 3-({[3-(benzotiofen-2-il)-5-etil-4,5-di-hidro-5isoxazolil]-carbonil} -amino)-5-fluoro-4-oxo-pentanóico (Ikk);
(12) ácido (3S)-3-({[3-(l,3-dimetil-lH-indol-2-il)-5-etil-4,5di-hidro-5-isoxazolil]-carbonil}-amino)-4-oxo-5-(2,3,5,6-tetrafluoro-fenóxi)pentanóico (111);
(13) ácido 3-({[3-(l ,3-dimetil-lH-indol-2-il)-5-etil-4,5-dihidro-5-isoxazolil] carbonil}-amino)-5-fluoro»4-oxo-pentanóico (Imm);
(14) ácido (3S)-3-({[5-etil-3-(l-naftil-metil)-4,5-di-hidro-5isoxazolil]-carbonil}-amino)-4-oxO5-(2,3,5,6-tetrafluoro-fenóxi)-pentanóico (Inn);
(15)
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ácido (35)-5-[(2,6-dicloro-benzoil)-óxi]-3-[({5-etil-3-[2 (1-naftil)-etil]-4,5-di-hidro-5-isoxazolil}-carbonil)-amino]-4-oxo-pentanóico (loo);
(16) ácido (3S)-3[({5-etil-3-[(l-naftil-óxi)-metil]-4,5-di-hidro-
5-isoxazolil}-carbonil)-amino}-4-oxo-5-(2,3,5,6-tetrafluoro-fenóxi) pentanóico (Ipp);
(17) ácido (3S)-3-{[(3-{[(4-cloro-l-naftil-óxi]-metil}-5-etil-
4,5 -di-hidro-5 -isoxazolil)-carbonil]-amino} -4-oxo-5 -(2,3,5,6-tetrafluorofenóxi)-pentanóico (Iqq);
(18) ácido (3S,4E)-6-etóxi-3-({[(5R)-5-isopropil-3-(lisoqumolinil)-4,5-di-hidro-5-isoxazolil]-carbonil}-amino)-6-oxo-4-hexenóico (Irr);
(19) ácido (3S,4E)-3-({[(5R)-5-isopropil-3-(l-isoquinolinil)-
4,5-di-hidro-5-isoxazolil]-carbonil }-amino)-5-(metil-sulfonil)-4-pentenóico (Iss);
(20) ácido 5-fluoro-3-({[(5S)-3-(l-isoquinolinil)-5-propil-4,5di-hidro-5-isoxazolil]-carbonil}-amino)-4-oxo-pentanóico (Itt);
(21) ácido 3-({[(5S)-5-etil-3-(l-naftil)-4,5-di-hidro-5- i soxazolil]-carbonil }-amino)-5-fluoro-4-oxo-pentanóico (Iuu);
(22) ácido 3-({[(5 S)-5-etil-3-(2-quinolinil)-4,5-di-hidro-5- isoxazolil]-carbonil}-amino)-5-fluoro-4-oxo-pentanóico (Iw);
(23) ácido 3-({[(5R)-5-etil-3-(3-isoquinolinil)-4,5-di-hidro-5isoxazolil] -carbonil} -amino)-5 -fluoro-4-oxo-pentanóico (Iww);
(24) ácido 3-({[5-etil-3-(8-quinolinil)-4,5-di-hidrO5- isoxazolil]-carbonil} -amino)-5-fluoro-4-oxo-pentanóico (Ixx);
(25) ácido 3-({[5-etil-3-(3-quinolinil.)-4,5-di-hidro-5- isoxazold l-carbonil }-ammo)-5-fluoro-4-oxo-pemanóico (Iyy);
(26) ácido 5-fluoro-3-({[(5R)-5-isopropil-3-(2-quinolinil)-4,5- di-hidro-5-isoxazolil]-carbonil}-amino)-4-oxo-pentanóico (Izz);
(27) ácido
isoxazolil]-carbonil}-amino)-5-fluoro-4-oxo-pentanóico (Iaal);
(28) ácido 3-[({3-[3-(terc-butil)-fenil]-5-etil]-4,5-di-hidro-5isoxazolil}-carbonil)-amino]-5~fluoro-4-oxo-pentanóico (Iaa2);
(29) ácido 3-[({3-[4-(terc-butil)-fenil]-5»etil-4,5-di-hidro-5isoxazolil}-carbonil]-amino]-5-fluoro-4-oxo-pentanóico (Iaa3);
(30) ácido 5-fluoro-3-({[(5R )-5-isopropil-3-(2-isopropilfenil)-4?5-di-hidro-5-isoxazolil]-carbonil}-ammo)-4-oxo-pentanóico (Iaa4);
(31) ácido 3-[({(5R)-3-[3-(terC“butil)-fenil]-5-isopropil-4,5-di- hidro-5isoxazolil}-carbonil)-amino]-5-fluoro-4-oxo-pentanóico (Iaa5);
(32) ácido 3-{[[(3-[l,r-bifenil]-3-il-5“isopropil-4;5-di-hidro5-isoxazolil)-carbonil]-amino}-5-fluoro-4-oxo-pentanóico (Iaaó);
(33) ácido 3-({[5-etil-3-(2-piridinil)-4,5-di-hidro-5~isoxazolil]carbonil}-amino)-5-fluoro-4-oxo-pentanóico (Iaa7);
(34) ácido 3-[({3-[4-(terc-butil)“2-piridinil]-5-etil-4,5-di-hidro5-isoxazolil}-carbonil)-amino]-5-fluoro-4-oxo-pentanóico (Iaa8);
(35) ácido 3-[({(5R)-3-[4-(terc-butil)-2-piridinil]-5-isopropil4?5-di-hidro-5-isoxazolil}-carbonil)-amino]-5-fluoro-4-oxo-pentanóico (Iaa9);
(36) ácido 3-({[5-etil-3-(4-isobutil-2-piridinil)4,5-di-hidro-5- isoxazolil]-carbonil}-ammo)-5-fluoro-4-oxo-pentanóico (IaalO);
(37) ácido 3-({[3-(4-acetil-2-piridinil)-5-etil-4,5-di-hidro-5isoxazolil]-carbonil}-amino)-5-fluoro-4-oxo-pentanóico (Iaal 1);
(38) ácido 3-({[3-(4-ciclo-propil-2-piridinil)-5-etil-4,5-dihidro-5-isoxazolil]-carbonil}-amino)-5fluoro-4-oxo-pentanóico (Iaal2);
(39) ácido 3-({[3-(4-ciclo-pentil-2-piridmil)-5-etil-4,5-dihidro-5-isoxazolil]“Carbonil}-amino)-5fluoro-4-oxo-pentanóico (Iaal3);
(40) ácido 3-({[(5R)-3-(4-ciclo-pentil-2-piridinil)-5-isopropil-
4,5-di-hidro-5-isoxazolil]-carbonil}-amino)-5-fluoro-4-oxo-pentanóico (Iaal 4);
• · · · · · · · • · · · · • · · · · · · • · · · · (41) ácido 3 -({[3 -(4-ciclo-hexil-2-piridinil)-5 -etil-4,5-di-hidro-
5-isoxazolilj-carbonil }-amino)-5-fluoro-4-oxo-pentanóico (Iaal5);
(42) ácido 3-({[5-etil~3-(5,6,7,8-tetra-hidro-l-isoquinolinil)-
4,5-di-hidro-5-isoxazolil]-carbonil}-amino)-5-fluoro-4-oxo-pentanóico (Iaaló);
(43) ácido [5-fluoro-3-({[5-isopropil.3-(4-fenil-2-piridinil)-
4,5 -di-hidro-5 -isoxazolilj-carbonil} -amino)-4-oxo-pentanóico (laa 17);
(44) ácido (3S)-5-[(difenil-fosforil)-óxi]-3-({[(5R)-5-isopropil-
-(1 -isoquinolinil)-4,5 -di-hidro-5 -isoxazolilj-carbonil} -amino)-4-oxopentanóico (IaalS);
(45) ácido (3S)-3-({[(5R)-5-isopropil-3-(l-isoquinolinil)-4,5di -hidro-5 -isoxazolilj-carbonil}-amino)-4-oxo-5-([l-fenil-3-(trifluorometil)- lH-pirazol-5-ilj-óxi}-pentanóico (Iaal9);
(46) ácido (3S)“5-[(4-benzil-5-oxo-2,5-di-hidro-3-furanil)-óxi-
3-({[(5R)-5-isopropil-3-(l-isoquinolinil)-4,5-di-hidro-5-isoxazoliljcarbonil} amino)-4-oxo-pentanóico (Iaa20);
(47) ácido (3S)-5-(isobutiril-óxi)-3-({[(5R)-5-isopropil-3-(lisoqumolinil)-4,5-di-hidro-5-isoxazolil]-carbonil}-amino)-4-oxo-pentanóico (Iaa21);
(48) ácido (3S)-3-({[(5R)-5-isopropil-3-(l-isoquinolinil)-4,5- di-hidro-5-isoxazolilj-carbonil}-amino)-4-oxo-5-hexenóico (Iaa22);
(49) ácido (3S)-3-({[(5R)-5-isopropil-3-(l-isoquinolinil)-4,5- di-hidro-5-isoxazolilj-carbonil} -amino)-4-oxo-5-(2-piridinil-óxi)-pentanóico (Iaa23);
(50) ácido (3S)-3-({[5-etil-3-(2-isopropil-fenil)-4,5-di-hidrO5isoxazolilj-carbonil }-amino)-4-oxo-5-(2-piridinil-óxi)-pentanóico (Iaa24);
(51) trifluorometano-sulfonato de 2- {[(3 S)-4-carbóxi-3 - ({[(5R)-5-isopropil-3-(l-isoquinolil)-4,5-di-hidro-5-isoxazolil]-carbonil}amino)-2-oxo-butil]-óxi}-l-metil-piridínio (Iaa25);
(52) trifluorometano-sulfonato de 2-{[(3S)-4-carbóxi-3-({[5etil-3-(2-isopropil'fenil)-4,5-di-hidro-5-isoxazolil]~carbonil}-amino)-2-oxobutil]-óxi} -1 -metil-piridínio (Iaa26);
(53) ácido 3-({[3-(5-cloro-l-metil-lH-indol-2-il)-5-isopropil5 4,5-di-hidro-5-isoxazolil]-carbonil}-amino)-5-fluoro-4-oxo-pentanóico (Iaa27);
(54) ácido 3-({[3-(l,5-dimetil-lH-indol-2-il)-5-isopropil-4,5di-hidro-5-isoxazolil]-carbonil}animo)-5-fluoro-4-oxo-pentanóico (Iaa28); e (55) ácido (3S)-5-fluoro-3-({[(5R)-5-isopropil-3-(l10 isoquinolil)-4,5-di-hidro-5-isoxazolil]-carbonil}-amino)-4-oxo-pentanóico (Iii-1).
O composto de fórmula (I) de acordo com a presente invenção possui dois (2) átomos de carbono assimétricos, e portanto pode existir em sua forma estereoisomérica incluindo diastereômero. Compostos particularmente preferidos dentre os estereoisômeros são aqueles possuindo a fórmula (Ia):
(la) e portanto outro objetivo da presente invenção é proporcionar o composto de fórmula (la) na forma estereoisomérica.
Dentre o composto de fórmula (la), por exemplo, o composto ácido (3S)-5-fluoro-3-({[(5R)-5-isopropil-3-(l-isoquinolil)-4,5-di-hidrO5isoxazolil]~carbonil)-amino)-4-oxo-pentanóico (Iii-1) pode ser obtido por um processo compreendendo as etapas de dissolver uma mistura de (3S) e (3R) em metil-t-butil-éter, adicionar uma quantidade pequena de ácido (3S)-5fluoro-3-({[(5R)-fluoro-3-({[(5R)-5-isopropil-3-(l-isoquinolil)-4,5di-hidro25 5-isoxazolil]-carbonil)-amino)-4-oxo-pentanóico cristalino como um material de semente para dar um cristal, e recristalizar este cristal do sistema de
solventes de acetato de etila/n-hexano.
Os compostos mais preferidos dentre os compostos de fórmulas (1) e (la) são ácido 5-fluoro-3-({[(5R)-5-isopropil-3-(lisoquinolinil)’4,5-di-hidro-5-isoxazolil]-carbonil}-amino)-4-oxo-pentanóico (Iii); e ácido (3S)-5-fluoro-3-({[(5R)-5-isopropil-3-(l-isoquinolil)-4,5-dihidro-5-isoxazolil]-carbonil}-amino)-4-oxo-pentanóico (Iii-1).
Os processos para a preparação do novo derivado de isoxazolina de fórmula (1) mostrando uma atividade inibitória contra caspases são mostrados nos seguintes Esquemas de Reação 1 a 5. Contudo, aqueles 10 ilustrados nos seguintes Esquemas de Reação representam apenas os processos típicos utilizados na presente invenção. A ordem de manipulaçaõ pode ser mudada sem limitação, e portanto os processos não estão restringidos àqueles explicados abaixo.
Esquema de Reação 1 j-OH
Ο ΝΗ,ΟΗ.ΗΟ N NCS
NaXOj % H
II Π1
no qual
NaQH
A, B, e R2 são definidos como descrito acima, e
Pi representa cadeia alquila simples.
No Esquema de Reação 1 acima, um derivado de aldeido (II) é reagido com cloridrato de hidroxil-amina e carbonato de sódio em uma 20 mistura de solventes de álcool-água para dar um derivado de oxima (III) (uma mistura de sin e anti oximas). O derivado de oxima (III) resultante é tratado por NCS (N-cloro-succinimida) em solução de dimetil-formamida para dar um derivado de cloreto de hidroxamoíla (IV). O derivado de cloreto de hidroxamoíla (IV) assim obtido é reagido com um derivado de acrilato (V) para dar um derivado de isoxazolina (VI), que é então hidrolisado, se necessário, para dar um derivado de isoxazolina desprotegido (VII). Se apropriado, o derivado de oxima (III), o derivado de acrilato (V), e NaOCl 5 podem reagir juntos em um vaso de reação {in situ) para dar diretamente o derivado de isoxazolina (VI) (veja Preparações 16 e 17).
1) Dess-Martin
2) Desproteção se necessária
KX^COClhZf Z-OR'\OC(-Oj ou \yj na qual A, B, R, R1, R2, R11, R12, e W são definidos como descrito acima.
No Esquema de Reação 2 acima, um derivado de ácido carboxílico (VII) é copulado com um derivado de ácido aspártico (VIII) (veja o Esquema de Reação 3 seguinte) para dar um composto (IX), que é então submetido à reação de oxidação de periodinano de Dess-Martin, e à reação de desproteção, se necessária, para dar o composto de fórmula (1) desejado.
O grupo funcional Z no composto (I) do Esquema de Reação 2 pode ser formado por meio de várias etapas como exemplificadas nas seguintes Preparações 5 e 7 após o composto de ácido carboxílico (VII) no lado esquerdo se combinado com um metil-éster de ácido aspártico (β-t-Bu). De outro modo, como mostrado no Esquema de Reação 3 seguinte, o 20 composto (VIII) já possuindo o Z desejado é sintetizado primeiro e copulado com o composto VIII (Ref: WO 00/23421). Ainda mais, quando W for F, o
composto racêmico poderá ser preparado de acordo com um método conhecido em Tetrahedron Letters, 1994, 35(52), 9693-9696.
Esquema de Reação 3
CbzNH^^Jl^Br
XII
VIII no qual Z é definido como descrito acima.
O derivado de acrilato (V) usado como um reagente no
Esquema de Reação 1 pode ser preparado via duas (2) rotas. Isto é, um composto (XV) pode ser facilmente preparado a partir de um composto (XVI) conhecido (Synthesis, 1982, p. 924) como mostrado no Esquema de Reação 4 seguinte, ou 2-i-propil-acrilato de metila (etila), o composto (V), pode ser preparado a partir de malonato de dimetila (dietila) (J. Chemical Society Perkin Trans. 1 1997, 1559-1570).
Esquema de Reação 4
CuCN
QMgBr χ-
no qual Pi e R2 são definidos como descrito acima.
O seguinte Esquema de Reação 5 mostra um processo de * ··· • · ··· * · · ·······* • · * · · · * • · · * síntese para preparar um composto no qual éster α,,β-insaturado ou sulfona α,β-insaturada é introduzido(a) no sítio Pb De acordo com isto, o derivado de ácido carboxílico (VII) como preparado no Esquema de Reação 1 é reagido com um derivado de amino-álcool (XVII) para dar um composto (XVI), que é então submetido à oxidação de Dess-Martin e às reações de Wittig para dar o composto (I).
Esquema de Reação 5
1) Dess-Martíu 2) Phj^^^CO^Et ou (HtO)2roCH2SO2CH3/NaH
3) Desproteção se necessária
no qual
R, A, B, R1, e R2 são definidos como descrito acima, e
Q representa -CO2R13 ou SO2R14, no qual R13 e R14 são definidos como descrito acima.
O composto de fórmula (1) de acordo com a presente invenção possui um amplo espectro de atividade inibitória contra caspases como demonstrado pelos resultados dos Exemplos seguintes, e portanto possui um 15 efeito para prevenir inflamação e apoptose. Assim, a presente invenção proporciona uma composição para inibir caspases, especificamente uma composição terapêutica para prevenir inflamação e apoptose, compreendendo o composto de fórmula (1 como um ingrediente ativo juntamente com o veículo farmaceuticamente aceitável. Especificamente, a composição da • · · · · ·*··· · ·· presente invenção possui um efeito terapêutico para demência, derrame cerebral, enfraquecimento cerebral devido à AIDS, diabetes, úlcera gástrica, lesão cerebral por hepatite, doenças hepáticas induzidas por hepatite, hepatite aguda, insuficiência hepática fulminante, cirrose hepática, sépsis, rejeição de 5 transplante de órgão, artrite reumatóide, ou apoptose celular cardíaca devido às doenças cardíacas isquêmicas, particularmente especificamente para hepatite aguda, cirrose hepática, ou artrite reumatóide.
O inibidor de caspase, particularmente o composto de fórmula (1), pode ser formulado em várias formas farmacêuticas para propósito de administração. Para preparar a composição farmacêutica de acordo com a presente invenção, uma quantidade efetiva de inibidor de caspase, particularmente de composto de fórmula (1) ou de seu sal, é misturada com um veículo farmaceuticamente aceitável que pode tomar uma ampla variedade de formas dependendo da formulação a ser preparada.
O composto inibidor de caspase pode ser formulado como uma injeção parenteral, ou preparação percutânea ou oral dependendo de seu propósito de aplicação. É especialmente vantajoso formular a composição em uma forma de dosagem unitária devido à facilidade de administração e à uniformidade de dosagem.
Para a preparação oral, qualquer veículo farmacêutico normal pode ser usado. Por exemplo, água, glicóis, óleos, alcoóis e semelhantes podem ser utilizados para tais preparações líquidas orais como suspensões, xaropes, elixires e soluções; ou amidos, açúcares, caulim, lubrificantes, aglutinantes, agentes desintegrantes e semelhantes podem ser usados para tais preparações sólidas como pós, pílulas, cápsulas e tabletes. Devido à sua facilidade de administração, os tabletes e as cápsulas são as formas de dosagem unitária mais vantajosas. Também é desejável que os tabletes e as pílulas sejam formulados em preparação entericamente revestida.
Para preparação parenteral, água estéril é normalmente
empregada como o veiculo, embora outros ingredientes tais como auxiliares de solubilidade possam ser usados. Injeções, por exemplo, suspensão oleosa ou aquosa esterilizada para injeção, podem ser preparadas de acordo com o procedimento conhecido usando agente dispersante, agente umectante, ou agente de suspensão adequado. Solventes que podem ser utilizados para preparar injeções incluem água, fluido de Ringer, e solução de NaCI isotônica, e também óleo fixo esterilizado pode ser convenientemente usado como o solvente ou meio de suspensão. Qualquer óleo fixo não-estimulante incluindo mono-, diglicerídeo pode ser empregado para este propósito. Ácido graxo tal como ácido oleico também pode ser usado para injeções.
Para administração percutânea, o veículo pode incluir um agente intensificador de penetração e/ou um agente umectante adequado, opcionalmente combinado com aditivos apropriados não possuindo irritação significativa para a pele. Aditivos citados podem facilitar a administração através da pele e/ou podem ajudar na preparação de uma composição desejada. Estas preparações percutâneas são administradas via várias maneiras, por exemplo, como um remendo transdermal, uma mancha sobreposta, ou uma pomada.
Quando o inibidor de caspase, especificamente o composto de fórmula (1), for usado para propósito clínico, ele será preferivelmente administrado ao paciente individual em uma quantidade variando de 0,1 a 100 mg por kg de peso corpóreo por dia. A dosagem diária total pode ser administrada uma vez ou várias vezes. Contudo, dosagem de administração específica para um paciente individual pode ser variada com o composto específico utilizado, peso corpora, sexo, condições de higiene, ou dieta do paciente individual, tempo ou método de administração, velocidade de excreção, razão de misturação de agente, severidade da doença a ser tratada etc.
A presente invenção será agora explicada mais
especificamente pelos seguintes exemplos. Contudo, deve ser entendido que estes exemplos são intencionados para ilustrarem a presente invenção mas não em qualquer maneira para limitarem o escopo da presente invenção.
Preparação 1
Benzaldeído-oxima
Benzaldeído (5,31 g, 50,0 mmoles) foi dissolvido em etanol (60 mL)-água (30 mL), e cloridrato de hidroxii-amina 5,21 g, 1,5 Eq) e carbonato de sódio anidro (Na2CO3, 3,97 g, 0,75 Eq) foram adicionados no mesmo a 0°C. Quando uma quantidade grande de sólido foi formada após cerca de um minuto, água-etanol (1:1, 60 mL) foi adicionado, e a mistura foi agitada por uma hora. Solução aquosa saturada de cloreto de sódio (100 mL) foi adicionada, e a mistura foi extraída duas vezes com acetato de etila (300 mL). O extrato foi lavado com solução aquosa de bicarbonato de sódio (NaHCO3, 100 mL x 2), seco (Na2SO4 anidro), e concentrado sob pressão reduzida para dar o composto do título (6,06 g, rendimento de 99%) como um pó branco como uma mistura cis e trans, 'H-NMR (500 MHz, CDC13) δ 8,90 (br, 1H), 8,1 (s, 1H), 7,5 (m, 2H), 7,3 (m, 3H).
Preparação 2
Cloreto de benzaldeído-hidroxamoíla
A oxima preparada na Preparação 1 (3,00 g, 24,8 mmoles) foi dissolvida em dimetil-formamida (100 mL), e N-cloro-suscinimida (3,47 g, 1,05 Eq) foi adicionada. A solução resultante foi agitada por uma hora um banho de água de cerca de 40°C, e o solvente volátil foi removido por destilação sob pressão reduzida. O resíduo foi dissolvido em acetato de etilahexano (1:1, 150 mL), lavado com água (100 mL x 3), seco (Na2SO4 anidro), e concentrado sob pressão reduzida para dar o composto do título (3,86 g, rendimento de 99%). Este composto foi usado na reação seguinte sem qualquer purificação adicional.
Preparação 3 5-Metil-3-fenil-4,5-di-hidro-5-isoxazol-carboxilato de metila (Via)
O cloreto de hidroxamoíla na Preparação 2 (3,86 g, 24,8 mmoles) e metacrilato de metila (4,0 mL, 37,2 mmoles, 1,5 Eq) foram dissolvidos em dietil-éter seco (120 mL) sob atmosfera de nitrogênio, a mistura foi mantida a-78°C, e trietil-amina (6,9 mL, 2,0 Eq) foi adicionada. A mistura foi agitada durante a noite enquanto era aquecida lentamente para a temperatura ambiente. Água (100 mL) foi adicionado, e então a mistura foi 10 extraída com acetato de etila (100 mL x 2), lavada com água (100 mL), seca (Na2SO4 anidro), e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (acetato de etila 15%-hexano) para dar o composto do título (5,34 g, rendimento de 98%), que foi então identificado por ’Η-NMR como sendo mistura 1:1 de diastereômeros.
'H-NMR (400 MHz, CDC13) δ 6,7 (m, 2H), 6,5 (m, 3H), 3,0 (d, J= 16,7 Hz, 1H), 2,9 (s, 3H), 2,3 (d, J= 16,7 Hz, 1H), 0,8 (s, 3H).
Preparação 4
Ácido 5-metil-3-fenil-4?5-di-hidro-5-isoxazol-carboxílico (Vila)
O composto preparado na Preparação 3 (Via, 5,34 g) foi dissolvido em tetra-hidro-furano destilado (120 mL), e solução aquosa de hidróxido de sódio 1 N (36,5 mL, 1,5 Eq) foi adicionada. Após cerca de quatro horas, a mistura foi neutralizada por solução aquosa de ácido clorídrico 1 N e destilada sob pressão reduzida para remover a maior parte de tetra25 hidro-furano. O resíduo foi dissolvido em acetato de etila em excesso (> 700 mL), lavado com água, seco (Na2SO4 anidro), e concentrado sob pressão reduzida para dar o composto do título (4,77 g, rendimento de 95%) como um pó branco. Este composto foi usado na reação seguinte sem qualquer purificação adicional.
Preparação 5
2,5-Dicloro-benzoato de (3S)-3{[(benzil-óxi)-carbonil]- amino}-5-(t-butóxi)-2-hidróxi-5-oxo-pentila (Xlla)
Em ácido N-benzil-óxi-carbonil-p-t-butil-aspártico (5,03 g,
15,6 mmoles) e NMM (1,90 mL, 17,1 mmoles) foi adicionado tetra-hidrofurano seco (60 mL) sob atmosfera de nitrogênio, a mistura foi mantida a15°C, e cloro-formiato de isobutila (2,12 mL, 16,3 mmoles) foi adicionado na mesma. A mistura foi agitada por cerca de 20 minutos. Na mistura reacional sendo mantida a 0°C foi adicionada solução etérea de diazometano 10 (sintetizado a partir de 2,0 Eq de l-metil-3-nitro-l-nitroso-quanidina, 60 mL) para preparar o derivado de diazocetona (-30 minutos). HBr 30%/AcOH (6,42 mL, 2,0 Eq) foi adicionado na mesma a 0°C. A mistura resultante foi agitada (30-60 minutos), extraída com acetato de etila, lavada duas vezes com solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio e uma vez com solução 15 aquosa de cloreto de sódio, seco (Na2SO4 anidro), e concentrada sob pressão reduzida para dar o derivado de bromo-metil-cetona (X, 6,4 g).
O derivado de bromo-metil-cetona (X, 4,36 g) assim obtido e ácido 2,6-dicloro-benzóico (2,28 g, 1,1 Eq) foram dissolvidos em dimetilformamida (18 mL), KF (1,58 g, 2,5 Eq) foi adicionado, e a mistura foi 20 agitada por duas horas para dar o derivado de 2,6-dicloeo-benzoil-óxi-metilcetona (Xla). Este composto foi dissolvido em metanol (20 mL) e reagido com solução metanólica de NaBH4 (412 mg) (40 mL) (-10°C -temperatura ambiente, duas horas). A reação foi interrompida por ácido acético, e a solução reacional foi destilada sob pressão reduzida para remover metanol. O 25 resíduo foi extraído com acetato de etila (50 mL x 2), lavado com água e solução aquosa de cloreto de sódio, seco (Na2SO4 anidro), concentrado sob pressão reduzida, e separado-purificado por cromatografia em coluna (acetato de etila-hexano, 1:5) para dar o composto do título (4,80 g, rendimento de 86%) em uma forma diastereomérica.
5,2 (m, 4H), 4,7 (m, 1H), 2,9 (m, 1H), 2,7 (m, 1H), 1,4 (s, 9H).
Preparação 6
2,6-Dicloro-benzoato de (3S)-3-amino-5-(t-butóxi)-25 hidróxi-5-oxo-pentila (VHIa)
O grupo benzil-óxi-carbonila do composto preparado na Preparação 5 foi removido (Pd/C) sob hidrogênio de cilindro por 40 minutos para dar o composto do título (rendimento de 100%).
'H-NMR (400 MHz, CDC13) δ 8,2 (br, 2H), 7,6-7,5 (m, 3H), 10 6,1 (m, 1H), 4,4-3,9 (m, 3H), 3,0-2,6 (m, 2H), 1,4 (s, 9H).
Exemplo 1
2,6-Dicloro-benzoato de (3S)-5-(t-butóxi-(-3-{[(5-metil-3fenil-4,5-di-hidro-5-isoxazolil)-carboniI}-amino-2,5-dioxo-pentíla (Ia)
Uma mistura do derivado de ácido carboxílico preparado na 15 Preparação 4 (Vila, 300 mg, 1,46 mmoles), o derivado de amino-álcool preparado na Preparação 6 (VHIa, 667 mg, 1,1 Eq) foi adicionada em um solvente de DMF (5 mL), e a mistura resultante foi reagida por 5 horas. O solvente foi destilado sob pressão reduzida, e o resíduo foi extraído com acetato de etila (200 mL x 2), lavado com água, solução aquosa de 20 bicarbonato de sódio, solução aquosa de cloreto de sódio, seco (Na2SO4 anidro), concentrado sob pressão reduzida, e purificado por cromatografia em coluna para dar o Composto (IXa) (810 mg, rendimento d 98%). Neste composto e o reagente de Dess-Martin (1,70 g, 3,0 Eq) foi adicionado diclorometano seco (25 mL), e a mistura foi agitada por uma hora na temperatura 25 ambiente. A reação foi interrompida por isopropil-álcool (3 mL). O sólido foi removido por fíltração sob pressão reduzida através de Celite, e o filtrado foi extraído com acetato de etila (20 mL x 2), lavado com água, solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio e solução aquosa de cloreto de sódio, seco (Na2SO4 anidro), concentrado sob pressão reduzida, e preliminarmente
purificado por cromatografia em coluna (acetato de etila 36%-hexano) para dar o composto do título diastereomérico (780 mg).
'H-NMR (400 MHz, CDC13) δ 7,8 (m, NH, 1H), 7,6 (m, 2H),
7,3 (m, 3H), 7,2 (m, 3H), 5,1-5,0 (m, 2H), 4,8 (m, 1H), 3,8 (m, 1H), 3,2 (m,
1H), 2,9-2,8 (m, 2H), 1,7 (s, 3H), 1,4 (s, 9H).
Exemplo 2
Ácido (3S)-5-[(2,6-dicloro-benzoil)-óxi]-3-{[(5-metil-3-fenil-
4,5-di-hidro-5-isoxazolil)Carbonil]-amino}-4-oxo-pentanóico (Iaa)
O composto preparado no Exemplo 1 (44 mg) foi dissolvido em dicloro-metano (2 mL), e ácido trifluoro-acético (1 mL) foi adicionado a 0°C. A mistura foi agitada por duas horas enquanto era lentamente aquecida para a temperatura ambiente, e então foi concentrada sob pressão reduzida para dar o composto do título (Iaa) em uma quantidade estequiométrica.
'H-NMR (500 MHz, CDC13) δ 8,1 (m, 1H), 7,5 (m, 2H), 7,3 (m, 3H), 7,2 (m, 3H), 5,1-4,9 (m, 2H), 4,9-4,8 (m, 1H), 3,8 (m, 1H), 3,2 (m, 1H), 1,7 (m, 3H).
Preparação 7 (3S)-3-amino-4-hidróxi-5-fenóxi-pentanoato de t-butila (VlIIb)
Em ácido N-benzil-óxi-carbonil-p-t-butil~aspártico (10,0 g, 31,0 mmoles) e NMM (3,75 mL, 1,1 Eq) foi adicionado tetra-hidro-furano seco (120 mL) sob atmosfera de nitrogênio, a mistura foi mantida a-15°C. Cloro-formiato de isobutila (4,22 mL, 1,5 Eq) foi adicionado na mesma, e a mistura foi agitada por cerca de 20 minutos. Os reagentes foram mantidos a 0°C os quais foram então misturados com solução étera de diazometano (sintetizado a partir de 2,0 Eq de l-metil-3-nitro-l-nitroso-quanidina, 60 mL) para preparar o derivado de diazocetona (~30 minutos). HBr 30%/AcOH (12,83 mL, 2,0 Eq) foi adicionado na mesma para preparar o derivado de »* * · « · * · * 4 4 ·4 • * 4 3 ·« ♦ 4 · 44·« f« · · ··♦<
• · I» 44
4 4 · · 4 bromo-metil-cetona (30-60 minutos). O produto foi extraído com acetato de etila, lavado duas vezes com solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio e solução aquosa de cloreto de sódio, seco (Na2SO4 anidro), e concentrado sob pressão reduzida para dar o derivado de bromo-metil-cetona (12,9 g) em uma quantidade estequiométrica.
O derivado de bromo-metil-cetona (X, 12,9 g, 31,0 mmoles) assim obtido e fenol, (3,23 g, 1,2 Eq) foram dissolvidos em dimetil-formamida (30 mL), KF (4,53 g, 2,5 Eq) foi adicionado, e a mistura foi agitada por duas horas para dar o derivado de fenóxi-metil-cetona (Xlb). Este composto foi dissolvido em metanol (40 mL)-THF (100 mL) e foi reagido com solução metanólica de NaBH4 (2,35 g) (40 mL) (-10°C -temperatura ambiente, duas horas). A reação foi interrompida por ácido acético, e a mistura reacional foi destilada sob pressão reduzida para remover metanol. O resíduo foi extraído com acetato de etila (50 mL x 2), lavado com água e solução aquosa de cloreto de sódio, seco (Na2SO4 anidro), concentrado sob pressão reduzida, e separadopurifícado por cromatografia em coluna (acetato de etila-hexano, 1:7) para dar o composto do título (Xllb, 6,50 g, rendimento de 50%) em uma forma diastereomérica cujo grupo amino está protegido por benzil-óxi-carbonila.
'H-NMR (400 MHz, CDC13) δ 7,3-7,2 (m, 8H), 5,9 (m, 1H), 5,2 (m, 4H), 4,7 (m, 1H), 2,9 (m, 1H), 2,7 (m, 1H), 1,4 (s, 9H).
O grupo benzil-óxi-carbonila do composto obtido acima foi removido (Pd;C) sob hidrogênio de cilindro para dar o composto do título (4,16 g, rendimento de 95%).
^-NMR (400 MHz, CDC13) δ 8,1 (br, 2H), 7,3 (m, 5H), 5,6 (m, 1H), 4,1-4,0 (m, 3H), 2,6 (m, 2H), 1,4 (s, 9H).
Exemplo 3 (3S)-3-{[(5-metil-3-fenil-4,5-di-hidro-5-isoxazolil)carbonil]-amino}-4»oxo-5-fenóxi-pentanoato de t-butila (Ib)
Uma mistura do derivado de ácido carboxílico preparado na
Preparação 4 (Vila, 273 mg, 1,33 mmoles), o derivado de amino-álcool preparado na Preparação 7 (VlIIb, 412 mg, 1,1 Eq) e HATU (657 mg, 1,3 Eq) foi esfriada para 0°C, trietil-amina (0,74 mL, 4,0 Eq) foi adicionada em um solvente de DMF (5 mL), e a mistura resultante foi reagida por 5 horas. O solvente foi destilado sob pressão reduzida, e o resíduo foi extraído com acetato de etila (200 mL x 2), lavado com água, solução aquosa de bicarbonato de sódio, e solução aquosa de cloreto de sódio, seco (Na2SO4 anidro), concentrado sob pressão reduzida, e purificado por cromatografia em coluna (EA 30-40% /Hex) para dar o Composto (IXb) 10 (545 mg, rendimento de 88%). Neste composto e reagente de Dess-Martin (1,43 g, 3,0 Eq) foi adicionado dicloro-metano seco (25 mL), e a mistura foi agitada por uma hora na temperatura ambiente. A reação foi interrompida por isopropil-álcool (2 mL). O sólido foi removido por filtração sob pressão reduzida através de Celite, e o filtrado foi extraído 15 com acetato de etila (20 mL x 2), lavado com água, solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio e solução aquosa de cloreto de sódio, seco (Na2SO4 anidro), concentrado sob pressão reduzida, e preliminarmente purificado por cromatografia em coluna (acetato de etila 25%-hexano) para dar o composto do título diastereomérico (540 mg, 20 rendimento de 99%).
'H-NMR (400 MHz, CDC13) δ 7,8 (NH, 1H), 7,5 (m, 2H), 7,3 (m, 3H), 7,3 (m, 1H), 7,1 (m, 1H), 6,8 (m, 2H), 6,7 (m, 1H), 4,9 (s, 1H), 4,7-
4,6 (m, 2H), 3,7 (d, J = 17 Hz, 1H), 3,2 (d, J = 17 Hz, 1H), 2,9 (m, 1H), 2,8 (m, 1H), 1,7 (s, 3H), 1,4 (s, 9H).
Exemplo 4
Ácido (3S)-3-{[(5-metil-3-fenil-4,5-di-hidro-5-isoxazolil)carbonil]-amino}-4-oxo-5-fenóxi-pentanóico (Ibb)
O composto preparado na Preparação 3 (530 mg, 1,136 mmoles) foi dissolvido em dicloro-metano (6 mL), e ácido trifluoro-acético (3
Γ · ··· • » • ··· • · ·
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* • · ··· • • • * ··· · ·
• • · • • • · • · · « ·
··· * • ··· • • · *
mL) foi adicionado a 0°C. A mistura foi agitada por duas horas enquanto era
lentamente aquecida para a temperatura ambiente, e foi concentrado sob pressão reduzida para dar o composto do título (Ibb) (465 mg) com um rendimento estequiométrico.
'H-NMR (400 MHz, CDC13) δ 7,5 (m, 2H), 7,3 (m, 3H), 7,1 (NH, 1H), 6,7 (m, 5H), 5,0-4,6 (m, 2H), 4,2 (m, 1H), 3,8 (m, 1H), 3,2 (m, 1H), 3,0-2,7 (m, 2H), 1,6 (s, 3H).
Preparação 8
2-EtiLacrilato de etila (XVb)
Em CuCn (26,9 g, seco anteriormente sob vácuo) foram adicionados sob atmosfera de nitrogênio cerca de 500 mL de tetra-hidrofurano seco. A mistura foi mantida a-78°C e 100 L de brometo de metilmagnésio (3,0 M em solução de dietil-éter) foi lentamente adicionado na mesma sob agitação mecânica. A mistura espessa foi agitada por cerca de 30 minutos a-78°C. 2-Bromo-metil-acrilato de etila (28,9 g, 150 mmoles, método de síntese: Vilieras, J. e Rambaud, M. Synthesis, 1982, 914) dissolvido em cerca de 30 mL de tetra-hidro-furano seco foi lentamente adicionado na mesma. A temperatura da mistura reacional foi lentamente elevada para a temperatura ambiente durante duas horas. A reação foi completada pela 20 adição lenta de solução saturada de cloreto de amônio (~50 mL). A mistura reacional foi filtrada através de Celite para remover o precipitado, e então foi lavada com dietil-éter. A camada orgânica foi lavada com água e solução saturada de bicarbonato de sódio (300 mL x 2 ), seca (Na2SO4 anidro), e concentrada sob pressão reduzida para dar 26,7 g (rendimento 25 estequiométrico) de um líquido transparente. Este líquido foi identificado por 1 H-NMR (500 MHz, CDC13) e foi confirmado que é 0 composto do título possuindo uma pureza de cerca de 75% p/p.
'H-NMR (500 MHz, CDC13) δ 6,12 (1H, s), 5,50 (1H, s), 4,20 (2H, q, J = 7,3 Hz), 2,31 (2H, qt), 1,28 (3H, t, J = 7,3 Hz), 1,07 (3H, t, J = 7,8
Hz).
Preparação 9
5-Etil-3-fenil-4,5-di-hidro-5-isoxazol-carboxilato de etila (VHb)
O composto da Preparação 8 (XVa) foi reagido de acordo com o procedimento igual ao da Preparação 3 para dar o composto do título.
‘H-NMR(400MHz, CDCIj) δ 7,6 (m, 2H), 7,4-7,3 (m, 3H), 4,34,2 (m, 2H), 4,0 (d, J = 17,2 Hz, 1H), 3,4 (d, J=17,2Hz, 1H), 2,1-2,0 (m, 2H), 1,3 (t, 3H), 1,0 (t, 3H).
Preparação 10 (3S)-3-amino-4-hidróxi-5(2?3,5,6-tetrafluoro-fenóxi)pentanoato de t-butila (VIIIc)
2,3,5,6-Tetrafluoro-fenol foi reagido de acordo com o procedimento igual ao das Preparações 5 e 6 para dar o composto do título com um rendimento de 72%.
*H-NMR(400MHz, DMSO-d6) δ 8,2 (br, 2H), 7,6-7,5 (m, 1H),
5,9 (m, 1H), 4,3-4,1 (m, 3H), 3,6 (m, 1H), 2,7 (m, 1H), 1,4 (s, 9H)
Exemplo 5 (3S)-3-{[(5-etil-3-fenil-4,5-di-hidro-5-isoxazolil)-carbonil]amino}-4-oxo-5-(2,3j5,6-tetrafluoro-fenóxi)-pentanoato t-butila (Ic)
Os compostos das Preparações 9 e 10 foram preparados de acordo com o procedimento igual ao da Preparação 4 e do Exemplo 1 para dar o composto do título.
‘H-NMR(400MHz, CDC13) δ 7,6 (dd, J = 3,6, 1,6Hz, 1H),
7,6 (m, 2H), 7,4-7,3 (m, 3H), 6,7 (m, 1H), 5,1-4,9 (m, 2H), 4,9-4,8 (m,
Exemplo 6
Ácido (3S)-3-{[(5-etil-3-fenil-4,5-di-hidro-5-isoxazolil)carbonil]-amino}-4-oxo-5-(2,3?5,6-tetrafluoro-fenóxi)-pentanóico (Icc)
O composto do Exemplo 5 foi reagido de acordo com o procedimento igual ao do Exemplo 2 para dar o composto do título.
1H-NMR(400MHz, DMSO-dó) δ 7,6 (br, 1H), 7,6-7,5 (m, 2H),
7,4-7,3 (m, 3H), 6,8-6,7 (m, 1H), 4,9-4,8 (m, 1H), 4,5 (br, 2H), 3,7 (d, J = 16Hz, 1H), 3,3 (d, J = 16Hz, 1H), 3,3-3,0 (m, 1H), 2,8-2,7 (m, 1H), 2,1 (m, 1H), 2,0-1,9 (m, 1H), 1,0 (m, 3H).
MS [M+H]+ 497.
Preparação 11
5-Etil-3-(l-naftil)-4,5-di-hidro-5-isoxazol-carboxilato de etila (VIc)
1-Naftaldeído e 2-etil-acrilato de etila foram reagidos de acordo com o procedimento igual ao das Preparações 1, 2, e 3 para dar o composto do título.
'H-NMR(400MHz, CDC13 ) δ 8,9 (d, J = 8,8Hz, 1H), 7,9-7,8 (m, 2H), 7,6-7,4 (m, 4H), 4,3-4,2 (m, 2H), 4,0 (d, J = 17,2Hz, 1H), 3,4 (d, J = 17,2Hz, 1H), 2,1-2,0 (m, 2H), 1,3 (t, 3H), 1,0 (t, 3H).
Exemplo 7 (3S)-3-({[5-etil-3-(l-naftil)-4,5-di-hidro-5-isoxazolilJcarbonil}-amino)-4-oxo-5-(2,3>5,6-tetrafluoro-fenóxi)-pentanoato de tbutila (Id)
Os compostos das Preparações 11 e 10 foram, reagidos de acordo com o procedimento igual ao da Preparação 4 e do Exemplo 1 para dar o composto do título.
’H-NMR(400MHz, CDC13 )δ 8,9 (m, 1H), 7,9-7,8 (m, 3H),
7,6-7,4 (m, 4H), 6,5-6,9 (m, 1H), 5,1-4,9 (m, 2H), 4,9 (m, 1H), 3,9 (dd, 1H), 3,5 (d, J = 17,2Hz, 1H), 3,0-2,9 (m, 1H), 2,8 (m, 1H), 2,2 (m, 1H), 2,0 (m,
1Η), 1,4-1,3 (dois s, 9H), 1,1 (m, 3H)
Exemplo 8
Ácido (3S)-3-({[5-etil-3-(l-naftil)-4,5-di-hidro-5-isoxazolil]carbonil}-amino)-4-oxo-5-(2,3,5,6-tetrafluoro-fenóxi)-pentanóico (Idd)
O composto do Exemplo 7 foi reagido de acordo com o procedimento igual ao do Exemplo 2 para dar o composto do título.
'H-NMR(400MHz, CDC13 ) δ 8,8 (m, 1H), 7,9-7,7 (m, 3H),
7,6-7,4 (m, 4H), 6,7 (m, 1H), 4,9 (m, 1H), 4,5 (br, 2H), 3,9 (d, J = 17,2Hz,
1H), 3,5 (d, J = 17,2Hz, 1H), 3,1-2,9 (m, 1H), 2,8-2,7(m, 1H), 2,2 (m, 1H),
2,0 (m, 1H), 1,0 (m, 3H) MS [M+MeOH+Na]+ 601
Preparação 12
5-Etil-3-(2-naftil)-4,5-di-hidro-5-isoxazol-carboxilato de etila (VId)
2-Naftaldeído e 2-etil-acrilato de etila foram reagidos de acordo com o procedimento igual ao das Preparações 1, 2, e 3 para dar o composto do título.
'H-NMR(500MHz, CDC13) δ 8,7(d, J = 8,8Hz, 1H), 7,8-7,7 (m, 2H), 7,5-7,3 (m, 4H), 4,3-4,2 (m, 2H), 4,0 (d, J = 17,2Hz, 1H), 3,4 (d, J = 17,2Hz, 1H), 2,1-2,0 (m, 2H), 1,3 (t, 3H), 1,0 (t, 3H)
Exemplo 9 (3S)-3-({{5-etil-3-(2-naftil)-4,5-di-hidro-5-isoxazolil]carbonil}-amino)-4-oxo-5-(2,3?5,6-tetrafluoro-fenóxi)pentanoato de tbutila (Ie)
Os compostos das Preparações 12 e 10 foram reagidos de acordo com o procedimento igual ao da Preparação 4 e do Exemplo 1 para dar o composto do título.
'H-NMR(400MHz, CDC13) δ 7,8-7,7 (m, 6H), 7,5 (m, 2H),
6,7-6,5 (m, 1H), 5,1-4,9 (m, 2H), 4,9-4,8 (m, 2H), 3,8 (dd, J = 16Hz, 1H), 3,4 (d, J= 16Hz, 1H), 3,0 (m, 1H), 2,8 (m, 1H), 2,8-2,7 (m, 1H), 2,2-2,1 (m, 1H),
2,0 (m, 1H), 1,4-1,3 (dois s, 9H), 1,1-1,0 (m, 3H)
Exemplo 10
Ácido (3S)’3-({[5-etil-3-(2-naftil)-4,5-di-hidro-5-isoxazolilJcarboml}-amino)-4-oxo-5-(2,3?5,6-tetrafluoro-fenóxi)-pentanóico (lee);
O composto do Exemplo 9 foi desprotegido de acordo com o procedimento igual ao do Exemplo 2, e os isômeros foram resolvidos por TLC preparativa para dar os dois compostos.
Diastereômero fracamente polar:
'H-NMR(400MHz, DMSO-d6) δ 12,4 (br, 1H), 8,7 (br, 1H), 8,1 (s, 1H), 7,9-8,0 (m, 3H), 7,8-7,9 (m, 1H), 7,5-7,6 (m, 3H), 5,2 (br, 2H),
4,7 (br, 1H), 3,8 (d, J = 17,2Hz, 1H), 3,5 (d, J = 17,6Hz, 1H), 2,7 (m, 1H), 2,5 (m, 1H), 2,0 (m, 1H), 1,9 (m, 1H), 0,9-0,8 (m, 3H)
MS [M+H]+ 547
Diastereômero elevadamente polar:
‘H-NMR(400MHz, DMSO-d6) δ 8,6 (br, 1H), 8,2 (s, 1H), 8,0-
7.9 (m, 3H), 7,9 (m, 1H), 7,6 (m, 2H), 7,4 (m, 1H), 5,0 (br, 2H), 4,8 (m, 1H),
3.9 (d, J = 17,6Hz, 1H,), 3,6 (d, J = 17,6 Hz, 1H), 2,9-2,7 (m, 2H), 2,1-2,0 (m, 1H), 2,0-1,9 (m, 1H), 0,9 (m, 3H)
Preparação 13
5-etil-3-(l-isoquinolinil)-4,5-di-hidro-5-isoxazol-carboxilato de etila (VIe)
1-Isoquinolina-aldeído e 2-etil-acrilato de etila foram reagidos de acordo com o procedimento igual ao das Preparações 1, 2 e 3. O composto do título em uma forma isomérica quiral ativa foi separado por HPLC OD Quiral (Daicel Chemical Industries, 2,00cm x 25cm, OD00CJ-1C005, 3% iPrOH em Hexano, 220 nm), que foi então usado na reação seguinte.
'H-NMR (400 MHz, CDClj) δ 9,25 (m, 1H), 8,55 (d, 1H), 7,85 (d, 1H), 7,74-7,65 (m, 3H), 4,29 (m, 2H), 4,13 (d, 1H), 3,71 (d, 1H), 2,11 (m, 2H), 1,33 (t, 3H), 1,06 (t, 3H)
Exemplo 11 (3S)-3-({[5-etil-3-(l-isoquinolinil)-4,5-di-hidro-5-isoxazolil]carbonilJ-amino^-oxo-S-P^Sjó-tetrafluoro-fenóxO-pentanoato de tbutila (If)
Os compostos das Preparações 13 e 10 foram reagidos de acordo com o procedimento igual ao da Preparação 4 e do Exemplo 1 para dar o composto do título.
'H-NMR (400 MHz, CDC13) δ 9,14 (m, 1H), 8,53 (m, 1H), 7,91-7,85 (m, 2H), 7,74-7,64 (m, 3H), 6,73-6,62 (m, 1H), 5,30-4,91 (m, 3H), 4,09 (dois d, 1H), 3,72 (dois d, 11-1), 3,04-2,76 (m, 2H), 2,24 (m, 1H), 2,04 (m, 1H), 1,45 & 1,35 (dois s, 91-1), 1,08 (dois t, 3H)
Exemplo 12
Ácido (3S)-3-({[5-etil-3-(l-isoquinolinil)-4,5-di-hidro-5isoxazolil]-carbonil}-arnino)-4-oxo-5-(2,3,5,6-tetrafluoro-fenóxi)pentanóico (Iff)
O composto do Exemplo 11 foi reagido de acordo com o procedimento igual ao do Exemplo 2 para dar o composto do título.
'H-NMR(400MHz, DMSO-de) δ 9,02(m, 1H), 8,76(m, 1H), 8,59(m, 1H), 8,08-7,73(m, 4H), 7,61-7,32(m, 1H), 5,19-5,10(m, 2H), 4,934,65(m, 1H), 3,91 (dois d, 1H), 3,68 (dois d, 1H), 2,91-2,52 (m, 2H), 2,ΙΟΙ,94 (m, 2H), 0,94 (dois t, 3H)
Massa: M+H 548
Exemplo 13
3-({[5-Etil-3-(l-isoquinoliniI)-4,5-di-hidro-5-isoxazolil]carbonil}-amino)-5-fluoro-4-oxo-pentaiioato de t-butila (Ig)
O composto da Preparação 13 e 3-amino-5-fluoro-4-hidróxi~ pentanoato de t-butila foram reagidos de acordo com o procedimento igual ao da Preparação 4 e do Exemplo 1 para dar o composto do título.
'H-NMR (400 MHz, CDC1J δ 9,15 (m, 1H), 8,55 (d, 1H),
« · ♦ • · ·· • · ·· • · · ·· • « * ·· · • · · · • · 7,87-7,66 (m, 5H), 5,22-4,89 (m, 3H), 4,12 (dois d, 1H), 3,72 (dois d, 1H), 3,05-2,75 (m, 2H), 2,22 (m, 1H), 2,04 (m, 1H), 1,45 & 1,34 (dois s, 9H), 1,07 (dois t, 3H)
Exemplo 14
Ácido 3-({[5-etil-3-(l-isoquinolmil)-4,5-di-hidro-5isoxazoliI]“Carbonil}-amino)-5-fluoro-4-oxo-pentanóico (Igg)
O composto do Exemplo 13 foi reagido de acordo com o procedimento igual ao do Exemplo 2 para dar o composto do título.
'H-NMR(400MHz, DMSO-d6) δ 9,03 (m, 1H), 8,67-8,59 (m, 2H), 8,03 (d, 1H), H), 7,97-7,78 (m, 3H), 5,26-5,07 (m, 2H), 4,75 (m, 1H), 3,94 (dois d, 1H), 3,67 (dois d, 1H), 2,88-2,58 (m, 2H), 2,07-1,94 (m, 2H), 0,96 (dois t, 3H)
Massa: M+H 402
Exemplo 15
3-({[5-etil-3-(l-isoquinolinil)-4,5-di-hidro-5-isoxazolil]carbonil}-amino)-5-fluoro-4-oxo-pentanoato de etila (Ihh)
O composto do Exemplo 14 foi reagido de acordo com o método conhecido em Tetrahedron Letters, 1994, 35(52), 9693-9696 para dar o composto do título.
'H-NMR (400 MHz, CDC13) δ 9,15 (m, 1H), 8,55 (d, 1H), 7,89-7,67 (m, 5H),
5,23-4,94 (m, 3H), 4,18 (m, 2H), 4,11 (dois d, 1H), 3,72 (dois d, 1H), 3,08-2,82 (m, 2H), 2,22 (m, 1H), 2,05 (m, 1H), 1,29-1,04 (m, 6H)
Preparação 14 5-Isopropil-3-(l-isoquinolinil)-4,5-di-hidro-5-isoxazolcarboxilato de metila e resolução (Vlf)
1-Isoquinolina-aldeído e 2-isopropil-acrilato de metila foram reagidos de acordo com o procedimento igual ao das Preparações 1, 2 e 3 para dar o composto do título. Do composto assim obtido, (5R)-isômero quiral
ativo (9,7min-l l,7min) foi separado por HPLC preparativa usando coluna OD quiral (Daicel Chemical Industries, 2,00cm x 25cm, OD00CJ-1C005, 5% iPrOH em Hexano, 14 mL /min, 220 nm) (o outro (5S)-isômero foi eluído durante o tempo de retenção de 15,3-20,1 min), o qual foi então usado na reação seguinte (veja a Preparação 23 para a resolução após hidrólise).
'H-NMR (500 MHz, CDC13) δ 9,24 (m, 1H), 8,55 (d, 1H),
7,85 (d, 1H), 7,72 (t, 3H), 7,67 (m, 2H), 4,11 (d, 1H), 3,83 (s, 3H), 3,74 (d,
1H), 2,50 (septeto, 1H), l,07(d, 3H), l,02(d, 3H)
Exemplo 16
5-Fluoro-3-({[(5R)-5-isopropil-3-(l-isoquinolinil)-4,5-dihidro-5-isoxazolil]-carbonil}-amino)-4-oxo-pentanoato de t-butila (1H)
O composto da Preparação 14 e 3-amino-5-fluoro-4-hidróxipentanoato de t-butila foram reagidos de acordo com o procedimento igual ao da Preparação 4 e do Exemplo 1 para dar o composto do título.
'H-NMR(400MHz, CDCIj) δ 9,14(m, 1H), 8,55(d, 1H), 7,877,65(m, 5H), 5,23-4,93(m, 2H), 4,90(m, 1H), 4,05-4,00(dois d, 1H), 3,843,79(dois, 1H), 3,06-2,74(m, 2H), 2,40(m, 1H), 1,45 & l,34(dois s, 9H), 1,12l,07(m,6H)
Exemplo 17
Ácido 5-fluoro-3-({[(5R)-5-isopropil-3-(l-isoquinolinil)-4,5di-hidro-5-isoxazolil]-carbonil}“amino)-4-oxo-pentanóico (Iii)
O composto do Exemplo 16 foi reagido de acordo com o procedimento igual ao do Exemplo 2 para dar o composto do título (o composto do (5S)-isômero, Iii-u, foi obtido de acordo com procedimento igual).
’H-NMR(400MHz, DMSO-d6) δ 9,00 (m, 1H), 8,63-8,48 (m, 2H), 8,08 (d, 1H), 7,97 (m, 1H) 7,87-7,76 (m, 2H), 5,31-4,82 (br, 2H), 4,74 (m, 1H), 3,91 (dois d, 1H), 3,73 (dois d, 1H), 2,88-2,61 (m, 2H), 2,33 (m, 1H), 0,98 (m, 6H)
Massa: M+H 416
Preparação 15
5-Etil-3-(4-quinolinil)-4,5-di-hidro-5-isoxazol-carboxilato de etila (VIg)
4-Quinolina-aldeído e 2-etil-acrilato de etila foram reagidos de acordo com o procedimento igual ao das Preparações 1, 2, e 3 para dar o composto do título.
lH-NMR (400 MHz, CDC13) δ 8,95 (d, 1H), 8,89 (m, 1H), 8,11 (d, 1H), 7,83 (m, 1H), 7,71 (m, 1H), 7,65 (d, 1H), 4,27 (m, 2H), 4,01 (d, 10 1H), 3,67 (d, 1H), 2,10 (m, 2H), 1,31 (t, 3H), 1,02 (t,3H)
Exemplo 18
3-({[5-etil-3-(4-quinolinil)-4,5-di-hidro-5-isoxazolil]carbonil}-amino)-5-fluoro-4-oxo-pentanoato de t-butila (Ii)
O composto da Preparação 15 e 3-amino-5-fluoro-4-hidróxi15 pentanoato de t-butila foram reagidos de acordo com o procedimento igual ao da Preparação 4 e do Exemplo 1 para dar o composto do título.
^-NMR (400 MHz, CDC13) δ 8,97(d, 1H), 8,89 (m, 1H), 8,17 (d, 1H), 7,87-7,64 (m, 3H), 7,36 (d, 1H), 5,21-4,93 (m, 3H), 3,93 (dois d, 1H), 3,48 (dois d, 1H), 3,05-2,78 (m, 2H), 2,24 (m, 1H), 2,03 (m, 1H), 1,46 & 1,33 20 (dois OH), 1,06 (dois t,3H)
Exemplo 19
Ácido 3-({ [5-etil-3-(4-quinolinil)-4,5-di-hidro-5-isoxazolil] carbonil}-amino)-5-fluoro-4-oxo-pentanóico (Ijj)
O composto do Exemplo 18 foi reagido de acordo com o 25 procedimento igual ao do Exemplo 2 para dar o composto do título.
*H-NMR(400MHz, DMSO-d6) δ 9,16-9,10 (m, 2H), 8,25-7,86 (m, 5H), 5,20 (br, 2H), 4,75 (m, 1H), 4,00-3,89 (dois d, 1H), 3,73 (dois d, 1H), 2,87-2,71 (m, 2H), 2,26-2,05 (m, 2H), 1,07 (dois t, 3H)
Massa: M+H 402
Preparação 16 3-(Benzotiofen-2-il)-5-etil-4,5-di-hidro-5-isoxazolcarboxilato de etila (V1H)
Derivado de benzotiofeno-2-aldeído-oxima (400 mg, 2,26 mmoles) preparado de acordo com o procedimento igual ao da Preparação 1 foi dissolvido em THF (25 mL), e a mistura foi mantida a 0°C. 2-Etil-acrilato de etila (434 mg, 1,5 Eq) e trietil-amina (7 gotas) foram dissolvidos em THF (5 mL), a solução assim obtida foi lentamente adicionada na mistura acima, e solução de hipoclorito de sódio (6,0 mL ) foi adicionalmente adicionada. A solução reacional foi aquecida para a temperatura ambiente e agitada por 4 horas. Água (20 mL) foi adicionada, e a mistura foi extraída com acetato de etila (40 mL x 2), foi lavada com solução aquosa de cloreto de sódio (20 mL ), seca sobre sulfato de magnésio, filtrada, e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (acetato de etila 20%-hexano) para dar o composto do título (121 mg, rendimento de 18%).
‘H-NMR (400 MHz, CDC13) δ 7,82-7,75 (m, 2H), 7,40-7,32 (m, 3H), 4,28 (m, 2H),3,90 (d, 1H),3,31 (d, 1H), 2,07 (m, 2H), 1,33 (t, 3H), 1,01 (t, 3H)
Exemplo 20
3-({[3(benzotiofen-2-il)-5-etil-4,5-di-hidro-5-isoxazolil]carboniI}-amino)-5-fluoro-4-oxo-pentanoato de t-butila (Ij)
O composto da Preparação 16 e 3-amino-5-fluoro-4-hidróxi~ pentanoato de ethyl foram reagidos de acordo com o procedimento igual ao da Preparação 4 e do Exemplo 1 para dar o composto do título.
'H-NMR (400 MHz, CDCh) δ 7,83-7,68 (m, 3H), 7,42-7,35 (m, 3H), 5,21-4,88 (m, 3H), 3,80 (dois d, 1H), 3,38 (dois d, 1H), 3,03-2,78 (m, 2H), 2,17 (m, 1H), 2,01 (m, 1H), 1,46 & 1,38 (dois s, 9H), 1,03 (dois t, 3H)
Exemplo 21
Ácido
3-({[3-(benzotiofen-2-il)-5-etil-4,5-di-hidro-5isoxazolil]-carbonil}-amino)-5-fluoro-4-oxo-pentanóico
Ácido 3-({[3-(benzotiofen-2-il)-5-etil-4,5-di-hidro-5isoxazolil] -carbonil}-amino)-5-fluoro-4-oxo-pentanóico (Ikk)
O composto do Exemplo 20 foi reagido de acordo com o procedimento igual ao do Exemplo 2 para dar o composto do título.
'H-NMR(400MHz, DMSO-de) δ 8,63 (m, 1H), 8,11-7,79 (m, 3H), 7,47-7,36 (m, 2H), 5,24-5,06 (m, 2H), 4,73 (m, 1H), 3,79 (dois d, 1H), 3,53 (dois d, 1H), 2,83-2,58 (m, 2H), 2,03-1,86 (m, 2H), 0,91 (dois t, 3H)
Massa: M+H 407
Preparação 17
3-(l,3-Dimetil-lH-indol-2-il)-5-etil-4,5-di-hidro-5-isoxazolcarboxilato de etila (Vii)
Derivado de 1,3 -dimetil- lH-indol-2-aldeído-oxima (356 mg, 2,07 mmoles) foi dissolvido em dicloro-metano (20 mL), e a mistura foi mantida a 0°C. 2-Etil-acrilato de etila (345 mg, 1,3 Eq) e trietil-amina (6 gotas) foram dissolvidos em dicloro-metano (5 mL), a solução assim obtida foi lentamente adicionada na mistura acima, e solução de hipoclorito de sódio (5,5 mL) foi adicionalmente adicionada. A solução reacional foi aquecida para a temperatura ambiente e agitada por 4 horas. Água (20 mL) foi adicionada, e a mistura foi extraída com dicloro-metano (40 mL x 2), lavada com solução aquosa de cloreto de sódio (20 mL), seca sobre sulfato de magnésio, filtrada, e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (acetato de etila 15%-hexano) para dar o composto do título (230 mg, rendimento de 35%).
Ή-NMR (400 MHz, CDC13) δ 7,60 (d, 1H), 7,31 (m, 2H), 7,12 (m, 1H), 4,29 (m, 2H), 3,98 (d, 1H), 3,94 (s, 3H), 3,40 (d, 1H), 2,47 (s, 3H), 2,03 (m, 2H), 1,34 (t, 3H), 1,04 (t, 3H) • « · · *·· • · · · ♦ ·· • · · · ♦··· • · · · · • ·· · ····
Massa: M+H 315
Exemplo 22 (3S)-3-({[3-(l,3-dimetil-(lH-indol-2-il)-5-etil-4,5-di-hidro-5isoxazolil]-carbonil}-amino)-4-oxo-5-(2,3,5,6-tetrafluoro-fenóxi)pentanoato de t-butila (Ik)
Os compostos das Preparações 17 e 10 foram reagidos de acordo com o procedimento igual ao da Preparação 4 e do Exemplo 1 para dar o composto do título.
‘H-NMR (400 MHz, CDC13) δ 7,85-7,79 (m, 1H), 7,57 (m, 1H), 7,37-7,26 (m, 2H), 7,13 (m, 1H), 6,75-6,49 (m, 1H), 5,12-4,90 (m,3H), 3,95 (dois d,lH), 3,89 (dois s,3H), 3,45 (dois d ,1H), 3,03-2,79 (m, 2H), 2,44 (dois s, 3H), 2,22 (m, 1H), 2,01 (m, 1H), 1,58 & 1,37 (dois s, 9H), 1,05 (dois t, 3H)
Exemplo 23
Ácido (3S)-3-({[3-(l,3-dimetil-lH-indol-2-il)-5-etil-4,5-dihidro-5-isoxazolil]-carbonil}-amino)-4-oxo-5-(2,3?5,6-tetrafluoro-fenóxi)pentanóico (111)
O composto do Exemplo 22 foi reagido de acordo com o procedimento igual ao do Exemplo 22 para dar o composto do título.
‘H-NMR(400MHz, DMSO-de) δ 8,67 (br, 1H), 7,61-7,43 (m, 3H), 7,27 (m, 1H), 7,08 (m, 1H), 5,20 (br, 2H), 4,83 (m, 1H), 3,84 (dois s,3H), 3,76 (dois d, 1H), 3,59 (dois d ,1H), 2,91-2,60 (m, 2H), 2,50 (dois s, 3H), 2,07-1,91 (m, 2H), 0,95 (dois t, 3H)
Exemplo 24
3-({[3-(l,3-dimetil-lH-indol-2-il)-5-etil-4,5-di-hidro-5isoxazoIil]-carbonil}-amino)-5-fluoro-4-oxo-pentanoato de t-butila (II)
O composto da Preparação 17 e 3-amino-5-fluoro-4-hidróxipentanoato de t-butila foram reagidos de acordo com o procedimento igual ao da Preparação 4 e do Exemplo 1 para dar o composto do título.
‘H-NMR (400 MHz, CDC13) δ 7,79 (m, 1H), 7,60 (m, 1H), 7,32
« ···* ··♦·· · · (m, 2H), 7,13 (m,lH), 5,20-4,90 (m,3H), 3,97-3,89 (m, 4H), 3,46 (dois d, 1H), 3,032,77 (m, 2H), 2,21 (m, 1H), 2,01 (m, 1H), 1,46 & 1,38 (dois s, 9H), 1,05 (dois t, 3H)
Exemplo 25
Ácido 3-({[3-(l,3-dimetil-lH-indol-2-il)“5-etil-4,5-di-hidro5-isoxazolil]-carbonil}-amino)-5-fluoro-4-oxo-pentanóico (Imm)
O composto do Exemplo 24 foi reagido de acordo com o procedimento igual ao do Exemplo 2 para dar o composto do título.
'H-NMR(400MHz, DMSO-ds) δ 8,68 (br, 1H), 7,60 (m, 1H),
7,45 (m, 1H), 7,26 (m, 1H), 7,07 (m, 1H), 5,20 (br, 2H), 4,81 (m, 1H), 3,84 (dois s, 3H), 3,76 (dois d, 1H), 3,59 (dois d, 1H), 2,94-2,59 (m, 2H), 2,38 (dois s, 3H), 2,07-1,91 (m, 2H), 0,95 (dois t, 3H)
Massa: M+H418
Preparação 18
5-Etll-3-(l-naftil-metiI)-4,5-di-liídrO5-isoxazol-carboxilato de etila (VIj)
1-Naftil-acetaldeído e 2-etil-acrilato de etila foram reagidos de acordo com o procedimento igual ao das Preparações 1, 2, e 3 para dar o composto do título.
'H-NMR (500 MHz, CDC13) δ 8,1-8,0 (d, J = 8Hz, 1H), 7,8 (d, J = 7,6Hz, 1H,), 7,8-7,7 (d, J =1H), 7,5-7,4 (m, 2H), 7,4-7,3 (m, 2H), 4,1-4,0 (m, 4H), 3,1 (d, J = 17,6Hz, 1H), 2,6 (d, J = 17,6Hz, 1H), 1,8-1,7 (m, 2H), 1,2 (t, 3H), 0,7 (t, 3H)
Exemplo 26 (35)-3-({[5-etil-3-(l-naftil-metil)-4,5-di’hidro-5-isoxazolilJcarbonil}-amino)-4-oxo-5-(2,3,5,6-tetrafluoro-fenóxi)-pentanoato de tbutila (Im)
Os compostos das Preparações 18 e 10 foram reagidos de acordo com o procedimento igual ao da Preparação 4 e do Exemplo 1 para dar o composto do título.
(m, 1H), 7,7 (m, 1H), 7,5 (m, 2H), 7,4-7,3 (m, 2H), 6,7 (m, 1H), 5,0-4,9 (m,
2H), 4,9-4,8 (m, 1H), 4,2-4,0 (m, 2H), 3,1 (dd, J = 1H), 2,9-2,6 (m, 3H), 1,9 (m, 1H), 1,7 (m, 1H), 1,4 (dois s, 9H), 0,8 (m, 3H)
Exemplo 27
Ácido (3S)-3-({[5-etil-3-(l-naftil-metil)-4,5-di-hidro-5isoxazolil]-carbonil}-amino)-4-oxo-5-(2,3,5,6-tetrafluoro-fenóxi) pentanóico (Inn)
O composto do Exemplo 26 foi reagido de acordo com o procedimento igual ao do Exemplo 22 para dar o composto do título.
'H-NMR(400MHz, DMSO-de) δ 12,3 (br, 1H), 8,4 (br, 1H), 8,0 (m, 1H), 7,9 (m, 1H), 7,8 (m, 1H), 7,5-7,4 (m, 5H), 5,0 (br, 2H), 4,7 (m, 1H), 4,0 (s, 2H), 3,3 (m, 1H), 3,1 (m, 1H), 2,8 (m, 2H), 2,5 (m, 1H), 1,8 (m, 1H), 1,7 (m, 1H), 0,8 (m, 3H)
MS [M+H]+ 561
Exemplo 28
2,6-Dicloro-benzoato de (3S)-5-(t-butóxi)-3-[({5-etil-3-[2-(lnaftil)-etil]-4,5-di-hidro-5-isoxazolil}-carbonil)-amino]-2,5-dioxo-pentila (In)
1-Naftil-propionaldeído e o composto da Preparação 6 foram reagidos de acordo com o procedimento igual ao das Preparações 1, 2, 3, e 4, e do Exemplo 1 para dar o composto do título.
'H-NMR (400 MHz, CDC13) δ 8,00 (d, 1H), 7,85 (m, 1H), 7,76 (m, 2H), 7,57-7,28 (m, 7H), 7,34-7,27 (m, 3H), 5,20-5,05 (m, 2H), 4,94 & 4,88 (dois m, 1H), 3,39-3,27 (m, 3H), 2,97-2,72 (m,-5H), 2,07 (m, 1H), 1,86 (m, 1H), 1,46 & 1,45 (dois s, 9H), 1,00 & 0,96 (dois OH)
Exemplo 29
Ácido (35)-5-((2,6-dicloro-benzoil)-óxi]-3-[({5-etil-3-[2-(lnaftil)-etil]-4,5-di-hidro-5-isoxazolil}-carbonil)-amino]-4-oxo-pentanóico (Ioo)
O composto do Exemplo 28 foi reagido de acordo com o
procedimento igual ao do Exemplo 22 para dar o composto do título.
'H-NMR(400MHz, DMSO-dg) δ 8,45 (bd, 1H), 8,06 (d, 1H), 7,90 (d, 1H), 7,77 (d, 1H), 7,60-7,37 (m, 7H), 5,21-5,03 (m, 2H), 4,73 (m, 1H), 3,06 (m, 2H), 2,65 (bd, 4H), 1,91 & 1,74 (dois m, 2H), 0,84 (m, 3H)
Preparação 19
5-etil-3-|(1-naftil-óxi)-metil|-4,5-di-hidro-5-isoxazo[carboxilato de etila (VII)
Derivado de 2-nitro-etanol-piranil (veja Synthesis, 1993, 12, 1206-1208) e 2-etil-acrilato de etila foram reagidos e o produto resultante foi desprotegido para dar 5 - etil - (3 -hidróxi-metil)-4,5 -di-hidro-5 -isoxazolcarboxilato de etila (23%). Este composto foi submetido à bromação (CBr4, PPh3, 94%) e depois reagido com 1-naftol (NaH, DMF, 82%) para dar o composto do título.
'H-NMR (500 MHz, CDClj) δ 8,20 (m, 1H), 7,81 (d, 1H), 7,55-7,42 (m, 3H), 7,36 (m, 1H), 6,88 (d, 1H), 5,01 (dd, 2H), 4,22 (m, 2H), 3,61 (d, 1H), 3,07 (d, 1H), 1,97 (m, 2H), 1,27 (t, 3H), 0,93 (t, 3H)
Exemplo 30
Ácido (3S)-3[({5-etil-3-[(l-naftil-óxi)-metil]-4,5-di-hidro-5isoxazolil}-carbonil)-amino}-4-oxo-5-(2,395,6-tetrafluoro-fenóxi)pentanóico (Ipp)
Os compostos das Preparações 19 e 10 foram reagidos de acordo com o procedimento igual ao da Preparação 4 e dos Exemplos 1 e 2 para dar o composto do título.
1H-NMR(400MHz, DMSO-d6) δ 8,51 (br, 1H), 8,13 (m, 1H), 7,87 (m, 1H), 7,54-7,38 (m, 5H), 7,02 (m, 1H), 5,18-4,97 (m, 4H), 4,71 (m, 1H), 3,58 (dois d, 1H), 3,21 (dois d, 1H), 2,68 (m, 2H), 1,97 (m, 1H), 1,81 (m, 1H), 0,86 (dois t, 3H)
Massa: M+H 577
Μ* ···
Exemplo 31
Ácido (3S)-3-{[(3-{[(4-cloro-l-naftil-óxi]-metil}-5-etil-4,5di-hidrO“5-isoxazolil)-carbonil]-amino}-4-oxo-5-(2,3j>5,6-tetrafluoro fenóxi)-pentanóíco (Iqq)
O derivado bromado obtido como um intermediário durante o processo da Preparação 19 e 4-cloro-l-naftol foram reagidos de acordo com o procedimento igual ao da Preparação 19 para dar 5-etil-3-[(4-cloro-l-naftilóxi)-metil]-4,5-di-hidro-5-isoxazol-carboxilato de etila, que foi então reagido de acordo com o procedimento igual ao da Preparação 4 e dos Exemplos 1 e 2 para dar o composto do título.
’1H-NMR(400MHz, DMSO-d6) δ 8,65 (m, 1H), 8,24-8,09 (m, 2H), 7,78-7,35 (m, 4H), 7,06 (m, 1H), 5,17-5,07 (m, 4H), 4,82-4,69 (m, 1H), 3,45 (dois d, 1H), 3,23 (dois d, 1H), 2,83-2,52 (m, 2H), 1,96-1,79 (m, 2H),
0,86 (dois t, 3H)
Massa: M+H 611
Preparação 20 (3S)-3-Amino-4-hidróxi-butanoato de terc-butila
Em ácido N-benzil-óxi-carbonil-p-t-butil-aspártico (3,0 g, 9,28 mmoles) e NMM (1,12 mL, 1,1 Eq) foi adicionado tetra-hidro-furano seco (20 mL) sob atmosfera de nitrogênio. A solução reacional foi mantida a 0°C. Cloro-formiato de isobutila (1,26 mL, 1,05 Eq) foi adicionado, e a mistura foi agitada por cerca de 40 minutos. A lama assim obtida foi filtrada sob nitrogênio, e a solução resultante foi adicionada em solução de NaBH4 (702 mg, 2,0 Eq) [metanol (10 mL)-tetra-hidro-furano seco (20 mL)] a-78°C. A mistura resultante foi lentamente aquecida para a temperatura ambiente (duas horas). A reação foi interrompida por ácido acético (2,3 mL ), e a solução reacional foi destilada sob pressão reduzida para remover metanol. O resíduo foi extraído com acetato de etila (50 mL x 2), lavado com água e solução aquosa de cloreto de sódio, seco (Na2SO4
• · ·· • • • ··· • • •
* · * · • ·· • • · • ♦ 1
• • · • · • • • · •
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• • « • * • · • · • •
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anidro), concentrado sob pressão reduzida, e separado-purificado por
cromatografia em coluna (acetato de etila-hexano, 1:5) para dar um composto de álcool (2,52 g, rendimento de 88%).
O grupo benzil-óxi-carbonila do composto obtido acima foi removido (Pd/C) sob hidrogênio de cilindro por uma hora para dar o composto do título (rendimento de 100%). iH-NMR(400MHz, DMSO-dó) δ 4,60 (bs, 1H), 3,21 (m, 2H),
2,96 (m, 1H), 2,41 (dd, 1H), 2,03 (dd, 1H), 1,40 (s, 9H).
Preparação 21 (3S)-4-hidróxi-3’({[(5R)-5-isopropil-3-(l-ísoquinolil)-
4,5-di-hidro-5-isoxazolil]-carboniI}-amino)-butanoato de terc-butila (xvi)
O composto da Preparação 14 foi reagido de acordo com o procedimento igual ao da Preparação 4 para dar um derivado de ácido carboxílico ativo (Vllf). Uma mistura de citado derivado de ácido carboxílico ativo (Vllf, 224 mg, 0,79 mmol), e derivado de amino-álcoll preparado na Preparação 20 (166 mg, 1,2 Eq) e HATU (390 mg, 1,3 Eq) foi esfriada para 0°C, trietil-amina (0,33 mL, 3,0 Eq) foi adicionada em um solvente de DMF (5 mL), e a mistura resultante foi reagida por duas horas. O solvente foi destilado sob pressão reduzida, e o resíduo foi extraído com acetato de etila (50 mL x 2), lavado com água, solução aquosa de bicarbonato de sódio, e solução aquosa de cloreto de sódio, seco (Na2SO4 anidro), concentrado sob pressão reduzida, e purificado por cromatografia em coluna (EA 60-70%/Hex) para dar o composto do título (330 mg, rendimento de 95%).
^-NMR (400 MHz, CDC13) δ 9,16 (d, 1H), 8,55 (d, 1H), 7,85 (d, 1H), 7,73-7,70 (m, 3H), 7,56 (NH, d, 1H), 4,26 (m, 1H), 4,12 (d, 1H), 4,04 (d, 1H), 3,79 (d, 1H), 3,75 (t, 2H), 2,94 (bs, 1H), 2,57 (m, 2H), 2,41 (m, 1H), 1,10 & 1,07 (dois d, 6H)
Exemplo 32
l-Etil-(2E,4S)-4-({[(5R)-5-isopropil-3-(l-isoquinolinil)-4,5- di-hidro-5-isoxazolil]-carbonil}-amino-2-hexenodioato de 6-(terc-butila) (Iq)
No composto da Preparação 21 (107 mg, 0,24 mmol) e reagente de Dess-Martin (153 mg, 1,5 Eq) foi adicionado dicloro-metano seco (4 mL), e a mistura foi agitada por uma hora na temperatura ambiente e concentrada sob pressão reduzida. No resíduo foram adicionados THF seco (3 mL) e (carboetóxi-metileno)-trifenil-fosforano) (108 mL, 1,3 Eq), e a mistura foi refluxada por duas horas. A mistura reacional foi extraída com acetato de etila (20 mL x 2 ), lavada com água, solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio e solução aquosa de cloreto de sódio, seca (Na2SC>4 anidro), concentrada sob pressão reduzida, e preliminarmente purificada por cromatografia preparativa (acetato de etila 40%-hexano) para dar o composto do título (98 mg, 80%) com a razão de diastereômero de 3:1.
'H-NMR (500 MHz, CDCls) de isômero maior Ô 9,15 (d, 1H), 8,54 (d, 1H), 7,86 (d, 1H), 7,74-7,62 (m, 4H), 6,93 (dd, 1H), 6,00 (dd, 1H), 4,98 (m, 1H), 4,19 (qt, 2H), 4,02 (d, 1H), 3,81 (d, 1H), 2,58 (m, 2H), 2,43 (m, 1H), 1,36 (s, 9H), 1,27 (t, 3H), 1,07 & 1,06 (dois d, 6H)
Exemplo 33
Ácido (3S?4E)-6-etóxi-3-({[(5R)-5-isopropil-3-(lisoquinolinil)-4,5-di-hidro-5-isoxazolil]-carbonil}-amino)-6-oxo-4hexenóico (Irr)
O composto do Exemplo 32 foi reagido de acordo com o procedimento igual ao do Exemplo 2 para dar o composto do título.
^-NMRÍóOOMHz, MeOD-d3) de isômero maior δ 9,04 (d, 1H), 8,61 (d, 1H), 8,52 (d, 1H), 7,95 (d, 1H), 7,81-7,68 (m, 3H), 6,94 (dd, 1H), 6,00 (dd, 1H), 5,01 (m, 1H), 4,17 (qt, 2H), 3,90 (d, 1H), 3,82 (d, 1H), 2,71 (d, 2H), 2,39 (septeto, 1H), 1,26 (t, 3H), 1,07 & 1,06 (dois d, 6H)
Exemplo 34 (3S,4E)-3-({[(5R)-5-isopropil-3-(l-isoquinolinil)-4,5-dihidro-5-isoxazoIil]-carbonil}-amino)-5-(metil-sulfonil)-4-pentenoato de 5 terc-butila (Ir)
Dicloro-metano anidro (4 mL) foi adicionado no composto do Exemplo 21 (109 mg, 0,25 mmol) e reagente de Dess-Martin (157 mg, 1,5 Eq), e a mistura foi agitada por uma hora na temperatura ambiente e concentrada sob pressão reduzida. A reação foi interrompida por 10 isopropil-álcool (0,5 mL). O sólido foi removido por filtração sob pressão reduzida usando Celite. O filtrado foi extraído com acetato de etila (20 mL x 2), lavado com água, solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio, e solução aquosa de cloreto de sódio, seco (Na2SO4 anidro), e concentrado sob pressão reduzida para dar um composto de aldeído (540 15 mg, rendimento de 99%).
Metil-sulfono-metano-fosfonato de dietila (113 mg, 2,0 Eq, Synthesis, 1969, 170) foi dissolvido em THF (3 mL), NaH (60% em óleo mineral, 20 mg, 2,0 Eq) e o composto de aldeído obtido acima foram adicionados, e a mistura foi refluxada por duas horas. Após extração por 20 acetato de etila (20 mL x 2), o extrato foi lavado com água, solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio, e solução aquosa de cloreto de sódio, seco (Na2SO4 anidro), concentrado sob pressão reduzida, e purificado por cromatografia preparativa (acetato de etila 60%/hexano) para dar o composto do título (52 mg, 41%) com a razão de diastereômero 25 de 4:1.
^-NMR (500 MHz, CDC13) de diastereômero maior δ 9,14 (d, 1H), 8,55 (d, 1H), 7,86 (d, 1H), 7,76-7,65 (m, 4H), 6,92 (dd, 1H), 6,57 (dd, 1H), 5,03 (m, 1H), 4,02 (d, 1H), 3,81 (d, 1H), 2,94 (s, 3H), 2,61 (m, 2H), 2,41 (septeto, 1H), 1,36 (s, 9H), 1,10 & 1,08 (dois conjuntos de d, 6H)
Exemplo 35
Ácido (3S?4E)-3-({[(5R)-5-isopropil-3-(l-isoquinoIinil)-4,5-dihidro-5-isoxazolil]-carbonil}-amino)-5-(metil-sulfonil)-4-pentenóico (Iss)
O composto do Exemplo 34 foi reagido de acordo com o procedimento igual ao do Exemplo 2 para dar o composto do título.
^-NMR^OOMHz, MeOD-d3) de isômero maior δ 9,04 (d,
1H), 8,52 (d, 1H), 7,95 (d, 1H), 7,82-7,69 (m, 3H), 6,90 (dd, 1H), 6,71 (dd,
1H), 5,06 (m, 1H), 3,86 (m, 2H), 2,98 (s, 3H), 2,76 (d, 2H), 2,39 (m, 1H),
1,C8 & 1,06 (dois conjuntos de d, 6H)
MS:M+H 460
Método de preparação dos Exemplos 36-42
Os compostos que foram obtidos pela reação de (iso)quinolinoaldeído (ou 1-ou 2-naftaldeído) e 2-etil-acrilato de etila (ou 2-propíl-acrilato de etila) de acordo com o procedimento igual ao das Preparações 1, 2, e 3 (ou Preparações 1 e 16) foram purificados, se necessário, por HPLC preparativa usando coluna OD quiral para isolar os isômeros quirais ativos.
Os isômeros quirais ativos isolados ou os isômeros quirais inativos isolados foram hidrolisados de acordo com o procedimento igual ao da Preparação 4, e os compostos resultantes foram reagidos com 3-amino-5-fluoro4-hidróxi-pentanoato de t-butila de acordo com o procedimento igual ao dos Exemplos 1 e 2 para dar os compostos do título de seguintes Exemplos 36-42.
Exemplo 36
Ácido 5-fluoro-3-({[(5S)-3-(l-isoquinolinil)-5-propil-4,5-dihidro-5-isoxazolil]-carbonil}-amino)-4-oxo-pentanóico (Itt);
lH-NMR(500MHz, DMSO-d6) δ 9,02 (t, 1H), 8,61 (m, 2H), 8,03 (d, 1H), 7,96 (m, 1H), 7,85 (t, 1H), 7,78 (m, 1H), 5,05 (bs, 2H), 4,73 (m, 1H), 3,97-3,92 (dd, 1H), 3,70-3,65 (dois d, 1H), 2,90-2,70 (dois m, 2H), 2,03 (m, 1H), 1,91 (m, 1H), 1,48 (m, 1H), 1,32 (m, 1H), 0,93 (m, 3H)
Massa; M+H 416
Exemplo 37
Ácido 3-({[(5S)-5-etil-3-(l-naftiI)-4J5-di-hidro-5-isoxazolil]carbonil}-amino)-5-fluoro-4-oxo-pentanóico (Iuu) 'H-NMR(500MHz, DMSO-d6) δ 8,84 (s, 1H), 8,59 (bs, I FL), 8,02 (m, 2H), 7,75 (s, 1H), 7,60 (m, 3H), 5,01 (bs, 2H), 4,73 (m, 1H), 3,873,82 (dd, 1H), 3,70-3,65 (dois d, 1H), 2,82-2,73 (dois m, 2H), 2,05 (m, 1H), 1,95 (m, 1H), 0,96 (m, 3H)
Massa: M+H 401
Exemplo 38
Ácido 3-({ [(5S)-5-etil-3-(2-quinolinil)-4,5-di-hidro-5isoxazolil]-carbonil}-amino)-5-fluoro-4-oxo-pentanóico (Ivv) ‘H-NMR (500MHz, DMSO-d6) δ 8,61 (dd, 1H), 8,41 (m, 1H), 8,02 (m, 3H), 7,79 (t, 1H), 7,65 (t, 1H), 5,22-5,06 (m, 1H), 4,72 (m, 1H), 4,49-4,28 (m, 1H), 3,84 (m, 1H), 3,54 (m, 1H), 2,99-2,54 (dois m, 2H), 2,01 (m, 1H), 1,91 (m, 1H), 0,91 (m, 3H)
Massa: M+H 402
Exemplo 39
Ácido 3-({[(5R)-5-etil-3-(3-isoquinolinil)-4,5-di-hidro-5isoxazolil]-carbonil}-amino)-5-fluoro-4-oxo-pentanóico (Iww) ‘H-NMR (400MHz, CDC13) δ (9,25 & 9,16 (dois s, 1H), 8,03-7,64 (m, 5H), 4,90-4,84 (m, 1H), 4,79-4,54 (m, 2H), 4,01-3,93 (dois d, 1H), 3,54 (d, 1H), 3,03-2,87 (m, 2H), 2,27-2,19 & 2,10-2,01 (dois m, 2H), 1,10-1,06 (m, 3H)
Massa: M+H 402
Exemplo 40
Ácido 3-({[5-etil-3-(8-quinolinil)-4?5-di-hidro-5-isoxazolil]carbonil}-amino)-5-fluoro-4-oxo-pentanóico (Ixx) 'H-NMR (500MHz, CDClj) δ 8,98 & 8,93 (dois m, 1H), 8,568,21 (m, 11-1), 8,03-7,94 (m, 2H), 7,73 (bs, 1H), 7,60 (m, 1H), 7,53-7,48 (dois m, 1H), 4,94-4,64 (m, 3H), 4,27-4,22 (dois-d, 1H), 3,77 (d, 1H), 3,07 &
2,92 (dois m, 2H), 2,31-2,22 (m, 1H), 2,12-2,05 (m, 1H), 1,10 (t, 3H)
Massa: M+H 402
Exemplo 41
Ácido 3-({[5-etil-3-(3-quinolinil)-4,5-di-hidro-5-isoxazolilJcarbonil}-amino)-5-fluoro-4-oxo-pentanóico (Iyy) ‘H-NMR (400MHz, CDClj ) δ 9,32 & 9,25 (dois d, ÍH), 8,168,03 (m, 2H), 7,83-7,73 (m, 3H), 7,62-7,55 (m, 1H), 4,95-4,76 (m, 3H), 3,86 (dois d, 1H), 3,45-3,39 (dois d, 1H), 3,17-3,01 (dois m, 1H), 2,90-2,82 (m, 1H), 2,27-2,20 (m, 1H), 2,09-2,00 (m, 1H), 1,10-1,05 (m, 3H)
Massa: M+H 402
Exemplo 42
Ácido 5-Fluoro-3-({[(5R)-5-isopropil-3-(2-quinolinil)-4,5di-hidro-5-isoxazolil}-carbonil}-amíno)-4-oxo-pentanóico) (Izz) 'H-NMR (400MHz, CDClj) δ8,24 (m, 1H), 8,14 (m, 1H), 8,04 (d, 1H), 7,88 (d, 1H), 7,79 (m, 1H), 7,65 (m, 1H), 7,51 (bs, 1H), 5,13-4,35 (m, 3H), 4,05-4,00 (dois d, 1H), 3,73 (d, 1H), 3,05-2,82 (m, 2H), 2,42 (m, 1H), 1,10 (m,6H)
Massa: M+H 416.
Método de preparação dos Exemplos 43-48
Os compostos obtidos pela reação de um aldeído aromático (Bioorg. Med. Chem. Lett., 1996, 6, p.2173, J. Org. Chem., 1978, 43, 1372) e
2-etil-acrilato de etila (ou 2-propil-acrilato de etila) de acordo com o procedimento igual ao das Preparações 1, 2, e 3 (ou Preparações 1 e 16) foram purificados, se necessário, por HPLC preparativa usando coluna OD quiral para isolar os isômeros quirais ativos. Os isômeros quirais ativos isolados ou os isômeros quirais inativos isolados foram hidrolisados de acordo com o procedimento igual ao da Preparação 4, e os compostos resultantes foram reagidos com 3-amino-5-fluoro-4-hidróxi-pentanoato de t-butila de acordo com o procedimento igual ao dos Exemplos 1 e 2 para dar os compostos do
título de seguintes Exemplos 43-48.
Exemplo 43
Ácido 3-({[5-etil-3-(24sopropildOnil)-4,5-di-hidro-5isoxazolil]-carbonil}-amino)-5-fluoro-4-oxO’pentanóico (laal) ^-NMR^OOMHz, DMSO-d6) δ 8,53 (bs, 1H), 7,40 (m, 2H), 7,32 (m, 1H), 7,25 (m, 1H), 5,02 (bs, 2H), 4,72 (m, 1H), 3,60-3,54 (dois d, 1H), 3,46-3,43 (dois d, 1H), 3,40 (m, 1H), 2,78-2,60 (dois m, 2H), 1,95 (m, 1H), 1,85 (m, 1H), 1,14 (s, 6H), 0,88 (m, 3H)
Massa: M+H 393
Exemplo 44
Ácido 3-[({3-[3-(terc-butil)-fenil]-5-etil]-4,5-di-hidro-5isoxazolil}-carbonil)-amino]-5-fluoro-4-oxo-pentanóico (Iaa2) 1NMR(400MHz, DMSO-d6) δ 8,56 (dd, 1H), 7,67 (s, 1H), 7,48 (m, 1H), 7,38 (d, 2H), 5,24-5,12 (q, 1H), 4,76-4,69 (m, 1H), 4,59-4,26 (m, 1H), 3,68 (m, 1H), 3,49-3,43 (dois d, 1H), 2,96-2,56 (dois m, 2H), 1,98 (m, 1H), 1,85 (m, 1H), 1,29 (s, 9H), 0,89 (d, 3H)
Massa: M+H 407
Exemplo 45
Ácido 3-[({3-[4-(terc-butil)-fenil]-5-etil-4?5-di-hidro-5isoxazolil}-carbonil]-amino]-5-fluoro-4-oxo-pentanóico (Iaa3) !H-NMR(500MHz, DMSO-d6) δ 8,52 (bs, 1H), 7,58 (m; 2H), 7,43 (dd, 2H), 5,10 (bs, 2H), 4,71-4,65 (m, 1H), 3,65-3,59 (dois d, 1H), 3,403,35 (dois d, 1H), 2,86-2,60 (dois m, 2H), 1,94 (m, 1H), 1,82 (m, 1H), 1,24 (s, 9H), 0,86 (m, 3H)
Massa: M+H 407
Exemplo 46
Ácido 5-fluoro-3-({[(5R )-5-isopropil-3-(2-isopropil-fenil)-
4,5-di-hidro-5-isoxazolil]-carbonil}-amino)-4-oxo-pentanóico (Iaa4) 'H-NMR(500MHz, CDC13) δ 7,60-7,53 (m, 1H), 7,41 (m, 2H),
7,27-7,23 (m, 2H), 5,20-4,91 (m, 1H), 4,71 (m, 1H), 4,54-4,42 (m, 1H), 3,693,64 (dois d, 1H), 3,45-3,38 (m, 2H), 3,12-2,77 (m, 2H), 2,32 (m, 1H), 1,22 (d, 6H), 1,05 (d, 6H)
Massa: M+H 407
Exemplo 47
Ácido 3-[({(5R)-3-[3-(terc-butil)-feml]-5-isopropil-4,5-dihidro-5-isoxazolil}-carbonil)-amino]-5-fluoro-4-oxo-pentanóico (Iaa5) ‘H-NMR(500MHz, CDC13) δ 7,69 (s, 1H), 7,48 (d, 1H), 7,41 (d, 1H), 7,35 (1, 1H),4,74-4,50 (m, 3H), 3,69 (d, 1H), 3,40 (d, 1H), 3,06-2,77 (m, 2H), 2,32 (m, 1H), 1,33 (s, 9H), 1,04 (m, 6H)
Massa: M+H 421
Exemplo 48
Ácido 3-{[[(3-[l,l’-bifenil]-3-il-5-isopropil-4,5-di-hidro-5isoxazolil)-carbonil]-amino}-5-fluoro-4-oxo-pentanóico (Iaa6)
3- Bifenil-carboxaldeído (veja Synthesis, 2003, 337) foi usado como um material inicial para dar o composto do título.
'H-NMR(500MHz, DMSO-de) δ 8,42 (bs, 1H), 7,87 (d, 1H), 7,73-7,69 (m, 4H), 7,52 (m, 1H), 7,45 (m, 2H), 7,38 (m, 1H), 5,03 (bs, 2H), 4,63 (m, 1H), 3,73-3,57 (m, 2H), 2,67-2,63 (dois m, 2H), 2,22 (m, 1H), 0,89 (m, 6H)
Massa: M+H 441
Método de preparação dos Exemplos 49-59
4- Substituída-piridina-2-carboxaldeídos foram obtidos por um método conhecido em US 6043248, JOC 1982, 47, p4315, e foram reagidos de acordo com o procedimento igual ao das Preparações 1, 2, e 3 (ou Preparações 1 e 16). Os compostos resultantes foram purificados, se necessário, por HPLC preparativa usando coluna OD quiral para isolar os isômeros quirais ativos. Os isômeros quirais ativos isolados ou os isômeros quirais inativos isolados foram hidrolisados de acordo com o procedimento
igual ao da Preparação 4, e os compostos resultantes foram reagidos com 3amino-5-fluoro-4-hidróxi-pentanoato de t-butila de acordo com o procedimento igual ao dos Exemplos 1 e 2 para dar os compostos do título de seguintes Exemplos 49-59.
Exemplo 49
Ácido 3-({[5-etil-3-(2-piridinil)-4,5-di-hidro-5-isoxazolil]carbonil}-amino)-5-fluoro-4-oxo-pentanóico (Iaa7) ‘H-NMR (500MHz, DMSO-d6) δ 12,41 (bs, 1H), 8,61 (s, 1H),
8.59- 8,53 (dd, 1H), 7,87 (m, 1H), 7,44 (m, 1H), 5,19-5,04 (dois d, 1H), 4,70 (m, 1H), 4,45-4,27 (m, 1H), 3,67 (m, 1H), 3,42 (m, 1H), 2,95-2,53 (dois m, 2H), 1,96 (m, 1H), 1,86 (m, 1H), 0,85 (m, 3H)
Massa: M+H 352
Exemplo 50
Ácido 3- [({3- [4-(terc-butil)-2-piridinil] -5-etil-4,5-di-hidro5-isoxazolil}-carbonil)-amino]~5-fluoro-4-oxo-pentanóico (Iaa8) ’Η-NMR (400MHz, CDCI3) δ 8,58 (d, 1H), 7,90 (s, 1H), 7,65 (bs, 1H), 7,45-7,39 (m, 1H), 4,98-4,68 (m, 3H), 3,92 & 3,88 (dois d, 1H), 3,52 & 3,47 (dois d, 1H), 3,05-2,86 (m, 2H), 2,23-2,18 (m, 1H), 2,08-2,00 (m, 1H), 1,38 (s, 9H), 1,05 (t, 3H)
Massa: M+H 403
Exemplo 51
Ácido 3-[({(5R)-3-[4-(terc-butil)-2-piridinil]-5-isopropil4?5-di-hidro-5-isoxazolil}-carbonil)-amino]-5-fluoro-4-oxo-pentanóico (Iaa9) 'η-NMR (400MHz, CDC13) δ 8,58 (d, 1H), 7,88 (d, 1H), 7,61 (bs, 1H), 7,43 (m, 1H), 4,84 (m, 1H), 4,60 (bs, 2H), 3,89-3,82 (dois d, 1H),
3.60- 3,55 (dois d, 1H), 3,04-2,86 (m, 2H), 2,38 (m, 1H), 1,38 (s, 9H), 1,07 (m, 6H)
Massa: M+H 422
Exemplo 52
Ácido 3-({[5-etil-3-(4-isobutil-2-piridiniI)-4?5-di-hidro-5isoxazolil]-carbonil}-amino)-5-fluoro-4-oxo-pentanóico (IaalO) 'H-NMR (500MHz, DMSO-d6) δ 8,58-8,52 (dd, 1H), 8,49 (s, 1H), 7,68 (s, 1H), 7,27 (s, 1H), 5,19-5,04 (m, 1H), 4,69 (m, 1H), 4,46-4,29 (m, 1H), 3,68 (m, 1H), 3,41-3,37 (dd, 1H), 2,93-2,46 (m, 4H), 1,95-1,85 (dois m, 3H), 0,86-0,82 (m, 9H)
Massa: M+H 403
Exemplo 53
Ácido 3-({[3-(4-acetil-2-piridinil)-5-etil-4,5-di-hidro-5isoxazoiil]-carbonil}-amino)-5-fluoro-4-oxo-pentanóico (Iaall) 'H-NMR (500MHz, CDC13) δ,79 (d, 1H), 8,35 (s, 1H), 7,76 (d, 1H), 7,46 (bs, 1H), 4,84-4,40 (m, 3H), 3,90-3,85 (dois d, 1H), 3,51-3,46 (dois d, 1H), 3,04-2,84 (m, 2H), 2:65 (s, 3H), HHHkdkdk2,16 (m, 1H), 2,02 (m, 1H), 1,03 (m, 3H)
Massa: M+H 394
Exemplo 54
Ácido 3-({[3-(4-ciclo-propil-2-piridinil)-5-etil-4,5-di-hidro5-isoxazolil]-carbonil}-amino)-5-fluoro-4-oxo-pentanóico (Iaal2) 'H-NMR (500MHz, DMSO-d6) δ 12,39 (bs, 1H), 8,41 (t, 1H), 7,56 (d, 1H), 7,12 (m, 1H), 5,19-5,04 (m, 1H), 4,72-4,66 (m, 1H), 4,46-4,27 (m, 1H), 3,69-3,63 (m, 1H), 3,39-3,35 (dois d, 1H), 2,80-2,74 (m, 1H), 2,632,52 (m, 1H), 2,00-1,80 (m, 3H), 1,06 (m, 2H), 0,86-0,80 (m, 5H)
Massa: M-i-H 392
Exemplo 55
Ácido 3-({[3-(4-ciclo-pentil-2-piridinil)-5-etil-4,5-di-hidro5-isoxazolil]-carbonil}-amino)-5-fluoro-4-oxo-pentanóico (Iaal3) 'H-NMR (500MHz, CDC13) δ 8,50 (d, 1H), 7,67 (m, 2H), 7,26 (m, 1H), 4,88-4,82 (m, 1H), 4,65 (bs, 2H), 3,88-3,81 (dois d, 1H), 3,45-3,41
(dois d, 1H), 3,05 (m, 1H), 2,96-2,80 (m, 2H), 2,20-2,12 (m, 3H), 2,02-1,96 (m, 1H), 1,83 (m, 2H), 1,72 (m, 2H), 1,60 (m, 2H), 1,01 (t, 3H)
Massa: M41 420
Exemplo 56
Ácido 3-({[(5R)-3-(4-ciclo-pentil-2-piridinil)-5-isopropil-
4,5-di-hidro-5-isoxazolil]-carbonil}-amino)-5-fluoro-4-oxo-pentanóico (Iaal4) ’Η-NMR (400MHz, CDC13) δ 8,58 (m, 1H), 7,74 (d, 1H), 7,63 (bs, 1H),7,38-7,32 (dd, 1H), 4,88-4,81 (m, 1H), 4,53 (bs, 2H), 3,87-3,79 (dois d, 1H),
3,56-3,53 (dois d, 1H), 3,12-3,04 (m, 1H), 3,02-2,85 (m, 2H), 2,38 (m, 1H), 2,16 (m, 2H), 1,88 (m, 2H), 1,78 (m; 2H), 1,65 (m, 2H), 1,07 (m, 6H)
Massa: M+H 434
Exemplo 57
Ácido 3-({[3-(4-ciclo-hexil-2piridinil)-5-etii-4?5-di-hidro-5isoxazolil]-carbonil}-amino)-5-fluoro-4-oxo-pentanóico (Iaal5) ’Η-NMR (400MHz, CDClj) δ 8,61 (m, 1H), 7,75 (d, 1H), 7,64 (bs, 1H), 7,39-7,33 (dd, 1H), 4,86-4,53 (dois m, 3H), 3,87 (t, 1H), 3,503,45 (dd, 1H), 3,05-2,85 (dois m, 2H), 2,63 (m, 1H), 2,22 (m, 1H), 2,03 (m, 1H), 1,93-1,80 (dois m, 5H), 1,44 (m, 5H), 1,05 (t, 3H)
Massa: M+H 434
Exemplo 58
Ácido 3-({[5-etil-3-(5,6,7?8-tetra-hidro-l-isoquinolinil)-4,5di-hidro-5isoxazolil]-carbonil}-amino)-5-fluoro-4-oxo-pentanóico (Iaaló) 'H-NMR (500MHz, DMSO-d6) δ 8,60-8,53 (dd, 1H), 8,30 (d,
1H), 7,15 (d, 1H), 5,20-5,05 (m, 1H), 4,74-4,66 (m, 1H), 4,45-4,25 (m, 1H),
3,75-3,68 (m, 1H), 3,47-3,41 (m, 1H), 2,94-2,88 (m, 2H), 2,80-2,72 (m, 3H),
2,62-2,53 (m, 1H), 1,99-1,93 (m, 1H), 1,88-1,80 (m, 1H), 1,71-1,69 (m, 4H),
0,88-0,84 (m, 3H)
Massa: M-FH 406
Exemplo 59
Ácido [5-fluoro-3-({[5-isopropiL3-(4-fenil-2-piridinil)-4,5- di-hidro-5-isoxazolil] -carbonil}-amino)-4-oxo-pentanóico (laal 7) ^-NMR (400MHz, CDC13) δ 8,68 (d, 1H), 8,14 (s, 1H), 7,68 (m, 1H), 7,58 (m, 1H), 7,54-7,43 (m, 5H), 4,86-4,60 (m, 3H), 3,92-3,87 (dois d, 1H), 3,62 (d, 1H), 3,09-2,86 (m, 2H), 2,39 (m, 1H), 1,11-1,06 (m, 6H) Massa: M+H 442
Método de preparação dos Exemplos 60-63
Ácido (2S)-4-(terc-butóxi)-2-({[(5R)-5-isopropil-3-(lisoquinolinil)-4,5-di-hidro-5-isoxazolil]-carbonil-amino)-4-oxo-butanóico [obtido por reação de copulação de Composto (VIII) com Asp (O-t-Bu)-OMe e hidrólise] foi reagido de acordo com o procedimento igual ao da Preparação 15 5 para dar o derivado de bromo-metil-cetona ((3S )-5-bromo-3-({[(5R)-5isopropil-3-(l-isoquinolinil)-4,5-di-hidro-5-isoxazolil]-carbonil}-amino)-4oxo-pentanoato de terc-butila), Este derivado de bromo-metil-cetona foi reagido com ácido difenil-fosfínico em KF/DMF (veja a Preparação 5) para dar o derivado de difenil-fosforil-óxi-metil-cetona, que foi então reagido de 20 acordo com o procedimento igual ao do Exemplo 2 para dar o composto do título (Composto do Exemplo 60).
Os compostos dos seguintes Exemplos 61-63 foram obtidos a partir de l-fenil-3-(trifluorometil)-lH-pirazol-5-ol, 3-benzil-4-hidróxi-2(5H)furanona, ou ácido butírico de acordo com o procedimento igual ao acima.
Exemplo 60
Ácido (3S)-5-[(difenil-fosforil)-óxi]-3-({[(5R)-5-isopropil-3(l-isoquinolinil)-4,5-di-hidro-5-isoxazolil]-carbonil}-amino)-4-oxopentanóico (Iaal8) 'H-NMR (500MHz, DMSO-d6) δ 8,92 (m, 1H), 8,58 (m, 1H),
8,05 (m, 1H), 7,94 (m, 1H), 7,81 (m, 1H), 7,75-7,72 (m, 3H), 7,57 (m, 3H), 7,49 (m, 4H), 7,35 (m, 2H), 4,90-4,65 (dois m, 3H), 3,79-3,75 (dois d, 1H), 3,69-3,67 (dois d, 1H), 2,65 (dois m, 2H), 2,22 (m, 1H), 0,84 (m, 6H)
Massa: M+H 614 • * ♦ * · · · · · » ·
Exemplo 61
Ácido (3S)-3-({[(5R)-5-isopropil-3-(l-isoquinolinil)-4,5-dihidro-5-isoxazolil]-carbonil}-amino)-4-oxo-5-([l-fenil-3-(trifluorometil)lH-pirazol-5-il]-óxi}-pentanóico (Iaal9) ’Η-NMR (500MHz, DMSO-d6) δ 8,95 (m, 1H), 8,83 (d, 1H), 10 8,57 (m, 1H), 8,03 (d, 1H), 7,92 (d, 1H), 7,80 (m, 1H), 7,74 (m, 1H), 7,65 (d,
1H), 7,57 (m, 1H), 7,51-7,34 (m, 3H), 6,27 (s, 1H), 5,29-5,15 (m, 2H), 4,76 (m, 1H), 3,92-3,88 (m, 1H), 3,75-3,69 (m, 1H), 2,84-2,60 (m, 2H), 2,33 (m, 1H), 0,96 (m, 6H)
Massa: M+H 624
Exemplo 62
Ácido (3S)-5-[(4-benzil-5-oxo-2,5-di-hidro-3-furanil)-óxi-3({[(5R)-5-isopropil-3-(l-isoquinolinil)-4,5-di-hidro-5-isoxazolil]-carbonil} amino)-4-oxo-pentanóico (Iaa20) 'H-NMR (500MHz, DMSO-d6) δ 8,97 (t, 1H), 8,58 (d, 1H),
8,04 (d, 1H), 7,92 (d, 1H), 7,81 (m, 1H), 7,73 (m, 1H), 7,23-7,07 (m, 6H),
7,51 (m, 1H), 4,79-4,65 (m, 3H), 3,92-3,87 (dois d, 1H), 3,74-3,68 (dois d, 1H), 2,82-2,58 (m, 2H), 2,31 (m, 1H), 0,95 (m, 6H)
Massa: M+H 586
Exemplo 63
Ácido (3S)-5-(isobutiril-óxi)-3-({[(5R)-54sopropil-3-(lisoquinolinil)-4,5-di-hidro-54soxazolil]-carbonil}-amino)-4-oxopentanóico (Iaa21) ‘H-NMR (500MHz, DMSO-dó) δ 12,39 (bs, 1H), 8,96 (t, 1H),
8,73 (m, 1H), 8,58 (dd, 1H), 8,04 (d, 1H), 7,92 (d, 1H), 7,81 (t, 1H), 7,73 (m,
1Η), 4,78 (m, 2H), 4,68 (m, 1H), 3,87 (t, 1H), 3,73-3,68 (dois d, 1H), 2,792,60 (dois m, 2H), 2,56 (m, 1H), 2,31 (m, 1H), 1,05 (d, 3H), 0,95 (m, 9H)
Massa: M+H 484
Exemplo 64
Ácido (3S)-3-({[(5R)-5-isopropil-3-(l-isoquinolinil)-4,5-dihidro-5-isoxazolil] Carbonil}-amino)-4-oxo-5-hexenóico (Iaa22)
Derivado de amida de Weinreb de ácido (2S)-4-(terc-butóxi)2-({[(5R)-5-isopropil-3-(l-isoquinolinil)-4,5-di-hidro-5-isoxazolil]-carbonil}amino)-4-oxo-butanóico (derivado condensado com N,O-dimetil-hidroxil10 amina) e brometo de vinil-magnésio foram reagidos, e o composto resultante foi reagido de acordo com o procedimento igual ao do Exemplo 2 para dar o composto do título.
*H-NMR(400MHz, DMSO-d6) δ 12,27 (bs, 1H), 8,95 (t, H), 8,74-8,67 (dois d, 1H), 8,58 (m, 1H), 8,04 (d, 1H), 7,92 (d, 1H), 7,83-7,72 15 (m, 2H), 6,47 (m, 1H), 6,22-6,11 (dois dd, 1H), 5,71-5,62 (dois dd, 1H), 4,77 (m, 1H), 3,90-3,79 (m, 1H), 3,72-3,64 (m, H), 2,82 (m, H), 2,62-2,49 (m, 1H), 2,30 (m, 1H), 0,94 (m, 6H)
Massa: M+H 410
Preparação 22 (3S)-3-Amino-4-hidróxi-5-(2-piridinil-óxi)-pentanoato de tbutila (VlIIf)
O derivado de bromo-metil-cetona X (3,2 g, 7,93 mmoles), um intermediário na Preparação 5, foi dissolvido em benzeno (30 mL), Ag2CO3 (2,62 g, 1,2 Eq) e 2-hidróxi-piridina (0,93 g, 1,2 Eq) foram adicionados, e a 25 mistura foi agitada sob refluxo a 80°C por 3 dias. A mistura reacional foi filtrada através de Celite, concentrada sob pressão reduzida, e purificado por cromatografia em coluna para dar o derivado de 2-piridinil-óxi-metil-cetona (Xlf) (466 mg, rendimento de 14%).
O derivado de 2-piridinil-óxi-metil-cetona (Xlf) (227 mg,
0?548 mmol) assim obtido foi dissolvido em um solvente de tetra-hidrofurano/metanol (3:2 v/v) (10 mL), NaBH4 (43 mg, 2,0 Eq) foi adicionado a 0°C, e a mistura foi agitada por 30 minutos na temperatura ambiente. A reação foi interrompida pela adição de solução saturada de cloreto de amônio, e a solução reacional foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi extraído com acetato de etila, lavado com água e solução aquosa de cloreto de sódio, seco (Na2SO4 anidro), e concentrado sob pressão reduzida para dar o Composto (Xllf) (230 mg) no qual o grupo cetona foi reduzido para grupo hidroxila.
O grupo benzil-óxi-carbonila do composto preparado acima foi removido (Pd/C) sob hidrogênio de cilindro por 40 minutos para dar o composto do título (155 mg, 99%).
Método de preparação dos Exemplos 65-66
Composto VHf (ou VIIu) e VHIf foram reagidos de acordo 15 com o procedimento igual ao dos Exemplos 1 e 2 para dar os compostos do título dos Exemplos 65-66. Aqui, VIIu representa ácido 5-etil-3-(2-isopropilfenil)-4,5-di-hidro-5-isoxazol-carboxílico.
Exemplo 65
Ácido (3S)-3-({[(5J?)-5-isopropil-3-(l-isoquinoliniI)-4,5-diidro
5-isoxazolil]-carboml}-arnmo)-4-oxo-5-(2-piridinilóxi)-pentanóico (Iaa23) 'H-NMR (500MHz, MeOH-d,) δ 9,04 (d, 1H), 8,50 (d, 1H),
(m, 2H), 6,67 (bs, 1H), 5,07 (bs, 1H), 4,95 (t, 1H), 4,84 (m, 1H), 3,94-3,79 (Abq, 2H), 2,92-2,80 (m, 2H), 2,39 (m, 1H), 1,09 (m, 6H)
Massa: M+H 491
Exemplo 66
Ácido (3S)-3-({[5-etil-3-(2-isopropil-feniI)-4,5-di-hidro-5isoxazolil]-carbonil}-arnino)-4-oxo-5-(2-piridil)-pentanóico (Iaa24) 'H-NMR (500MHz, DMSO-d6) δ 8,71 (bs, 1H), 8,02-7,94
··· * · ··· « · · · (dois bs, 1H), 7,71-7,64 (m, 1H), 7,42-7,18 (m, 4H), 6,96-6,90 (dois t, 1H),
6,85-6,80 (dois d, 1H), 4,99 (bs, 2H), 4,86-4,78 (m, 1H), 3,58 (dois d, 1H),
3,48 (dois d, 1H), 3,36 (m, 1H), 2,81-2,61 (m, 2H), 2,05-1,80 (dois m, 2H), 1,14-1,03 (m, 6H), 0,93-0,88 (m, 3H)
Massa: M+H 468,21
Exemplo 67
Trifluorometano-sulfonato de 2-{[(3S)-4-carbóxi-3-({[(5R)5-isopropil“3(l-isoquinolil)-4,5-di-hidro-5-isoxazolil]-carbonil}-amino)-2oxo-butil]-óxi}-l-metil-piridínio (Iaa25)
O intermediário ((3S)-3-({[(5R)-5-isopropil-3-(lisoquinolinil)-4,5-di-hidro-5-isoxazolil]-carbonil}-amino)-4-oxo-5-(2piridinil-óxi)-pentanoato de t-butila (49 mg, 90 pmoles) obtido após a reação de oxidação de Dess-Martin no Exemplo 65 foi dissolvido em dicloro-metano (2 mL), trifluorometil-sulfonato de metila (1,1 Eq, 10,1 pL) foi adicionado, e 15 a mistura foi agitada por um dia na temperatura ambiente. Após concentrado sob pressão reduzida, o resíduo foi submetido ao procedimento igual ao do Exemplo 2 para dar o composto do título (60 mg).
]H-NMR (500MHz, DMSO-d6) δ 9,00-8,91 (m, 2H), 8,76-8,57 (m, 2H), 8,42 (m, 1H), 8,04 (m, 1H), 7,93 (m, 1H), 7,80 (m, 1H), 7,75 (m, 20 1H), 7,54 (m, 1H), 5,77-5,48 (m, 2H), 4,85-4,81 (m, 1H), 4,00 (s, 3H), 3,94‘ 3,69 (m, 2H), 2,87-2,60 (m, 2H), 2,33 (m, 1H), 0,98 & 0,94 (dois d, 6H)
Massa: M+ 505,20
Exemplo 68
Trifluorometano-sulfonato de 2-{[(3S)-4-carbóxi-3-({[525 etil-3-(2-isopropil-fenil)-4,5-di-hidro-5-isoxazolil]-carbonil}-amino)-2oxo-butil]-óxi}-l-metil-piridínio (Iaa26)
O intermediário ((3S)-3-({[(5R)-5-etil-3-(2-isopropil-fenil)-
4,5-di-hidro-5-isoxazolil]-carbonil}-amino)-4-oxo-5-(2-piridinil-óxi)pentanoato de t-butila (55 mg, 0,105 mmoles) obtido após a reação de ♦ · ·
oxidação de Dess-Martin no Exemplo 66 foi dissolvido em dicloro-metano (2 mL), trifluorometil-sulfonato de metila (1,1 Eq, 13 pL) foi adicionado, e a mistura foi agitada por um dia na temperatura ambiente. Após concentrado sob pressão reduzida, o resíduo foi submetido ao procedimento igual ao do 5 Exemplo 2 para dar o composto do título (59 mg, rendimento de 94%).
H-NMR (500MHz, DMSO-d6) δ 8,80-8,73 (dois d,lH), 8,65 (m, 1H), 8,45-8,38 (m, 1H), 7,56- 7,51 (m, 2H), 7,43-7,31 (m, 3H), 7,24-7,12 (m, H), 5,72-5,48 (m, 2H), 4,91 (m, 1H), 4,01 & 3,99 (dois s, 3H), 3,64 (dois d, 1H), 3,48 (dois d, 1H), 3,42 (m, 1H), 2,90-2,62 (m, 2H), 2,05-1,80 (dois m, 2H), 1,15-1,03 (m, 6H), 0,93-0,88 (m,3H).
Massa: M+ 482,17
Método de preparação dos Exemplos 69-70
Derivado de oxima de 5-cloro-1-metil-lH-indol-2-aldeído ou 1,5dimetil-lH-indol-2-aldeído foi reagido com 3-amino-5-fluoro-4-hidróxi15 pentanoato de t-butila de acordo com o procedimento igual ao das Preparações 1,
17,4 e dos Exemplos 1,2 para dar o composto do título dos Exemplos 69-70.
Exemplo 69
Ácido 3-({[3-(5-cloro-l-metil-lH-indol-2-il)-5-isopropil-4,5di-hidro-5-isoxazolil]-carbonil}-amino)-5-fluoro-4-oxo-pentanóico (Iaa27)
H-NMR (500MHz, CDC13) δ 7,59 (s, 1H), 7,46-7,39 (dois d,
1H), 7,30-7,23 (m, 3H), 5,01 (m, 1H), 4,75-4,46 (m, 2H), 4,02 (d, 1H), 3,95 (s, 3H), 3,71 (d, 1H), 2,95 (m, 1H), 2,77 (m, 1H), 2,35 (m, 1H), 1,04 (m, 6H)
Massa: M+H 452
Exemplo 70
Ácido 3-({[3-(l?5-dimetil-lH-indol-2-il)-5-isopropil-4,5-dihidro-5-isoxazolil]-carbonil}-amino)-5-fluoro-4-oxo-pentanóico (Iaa28) ‘H-NMR (500MHz, CCDCIj) δ 7,48 (bs, 1H), 7,39 (d, 1H),
7,23-7,14 (m, 3H),
4,76 (m, 1H), 4,70-4,50 (m, 2H), 4,07-4,02 (dois d, IH), 3,99,
(dois s, 3H), 2,34 (m, 1H), 1,05 (m, 6H)
Massa: M+H 432
Preparação 23
Resolução de ácido (5R)-5-isopropil-3-(l-isoquinolinil)-4,5di-hidro-5-isoxazol-carboxílico
Ácido 5-isopropil-3-(l-isoquinolmil)-4,5-dihidro-5-isoxazol“ carboxílico foi dissolvido em acetona (190 mL) por aquecimento a 60°C, e (S)-a-metil-benzil-amina (14,5 mL , 112 mL) foi adicionada. A mistura reacional foi esfriada para a temperatura ambiente e agitada por 4 horas. O precipitado resultante foi filtrado e lavado três vezes com acetona (40 mL).
O sal de (S)-a-metil-benzil-amina de ácido (5R)-5-isopropil-3(l-isoquinolinil)-4,5-di-hidro-5-isoxazol-carboxílico foi dissolvido na mistura (150 mL) de acetona e água (4:1) por aquecimento a 90°C, esfriado para a temperatura ambiente, e agitado por 3 horas. O precipitado resultante foi filtrado e lavado com acetona (40 mL) três vezes para dar o sal de (S)-a-metilbenzil-amina de ácido (5R)-5-isopropil-3-(l-isoquinolinil)-4,5-di-hidro-5isoxazol-carboxílico puro (12,8 g, 24,3%, e.e. de 99,8%).
A pureza óptica de ácido (5R)-5-isopropiL3-(l-isoquinolinil)-
4,5-di-hidro-5-isoxazol-carboxílico foi estimada pelo uso de coluna ChiralCel OD (4,6 mm x 250 mm x 5 mm). A mistura de n-hexano/isopropanol/ácido trifluoro-acético (92/8/0,1) foi usada como a fase móvel na vazão de fluxo de 1 mL/min, a temperatura da coluna foi 40°C, e o comprimento de onda de detecção foi 225 nm. Os dois isômeros ópticos foram observados em tempos de retenção de 7,8 min (isômero R) e 21,1 min (isômero S), respectivamente.
Exemplo 71
Resolução de composto (Iiil)
1) Isolamento de composto SEMENTE
Os dois diastereômeros do Exemplo 16 foram separados pelo
uso de coluna de sílica de cromatografia líquida preparativa (diâmetro de 40 mm, DYNAMAX-100Â). A mistura de n-hexano/etanol/ácido trifluoroacético (4000/32/2) foi usada como a fase móvel na vazão de fluxo de 50 mL/min, e o diastereômero desejado foi coletado com a razão de 99:1 durante 5 o tempo de retenção de 62-66 min no comprimento de detecção de 227 nm (os dois diastereômeros foram amplamente eluídos com vazão modificada até 86 min). O diastereômero assim obtido de razão de 99:1 foi desprotegido e usado como a semente para a resolução.
A pureza óptica foi estimada pelo uso de coluna Atlantis Cig (4,6 mm x 250 mm x 5 mm). A mistura de acetonitrila/água/ácido trifluoroacético foi utilizada como a fase móvel na vazão de fluxo de 1 mL/min de acordo com o seguinte gradiente:
t = 0 min, 0:100:0,1 min, 20:80:0,1 min, 100:0:0,1
Sob o comprimento de onda de detecção de 227 nm, os dois isômeros ópticos foram observados nos tempos de retenção de 36,6 min (3R,5R-isômero) e 37,1 min (3S,5S- isômero), respectivamente.
(3S,5Risômero): (3S)-5-fluoro-3-({[(5R)-5-isopropil-3-(l20 isoquinolinil)-4,5-di-hidro-5-ísoxazolil]-carbonil}amino)-4-oxopentanoato de t-butila
H-NMR(500MHz, CDC13) δ 9,13 (d, 1H), 8,55 (d, 1H), 7,85 (d, 1H), 7,78-7,65 (m, 4H), 5,22-5,02 (dois m, 2H), 4,90 (m, 1H), 4,02 (d,
1H), 3,80 (d, 1H), 2,92-2,88 (dd, 1H), 2,79-2,75 (dd, 1H), 2,41 (m, 1H), 1,34 (s, 9H), 1,09 (m, 6H)
Massa: M+H 472 (3R,5R-isômero): (3R)-5-fluoro-3-({[(5R)-5-isopropil-3-(lisoquinolinil)-4,5-di-hidro-5-isoxazolil]-carbonil}-amino)-4-oxopentanoato de t-butila • · · • ·· · • · · • · · · · • · · · • · · *« · · • · · · · · · ’H-NMR(400MHz, CDCIj) δ 9,14 (d, 1H), 8,56 (d, 1H), 7,87 (d, 1H), 7,77-7,64 (m, 4H), 5,25-5,00 (dois q, 2H), 4,90 (m, 1H), 4,03 (d, 1H), 3,82 (d, 1H), 2,93 (dd, 1H), 2,77 (dd, 1H), 2,42 (m, IH), 1,35 (s, 9H), 1,11 (m, 6H)
r
Massa: M+H 472
Ácido (3S)-5-fluoro-3-({[(5R)-5-isopropil-3-(lisoquinolinil)-4,5-di-hidro-5-isoxazolil]-carbonil}-amino)-4-oxopentanóico (Iii-1) *H-NMR(400MHz, CDC13) δ 9,07 (d, 1H), 8,57 (d, 1H), 7,89 (d, IH), 7,78-7,69 (m, 3H), 7,69 (d, 1H), 4,88-4,79 (m, 2H), 4,67 (bs, 1H), 4,07 (d, 1H), 3,81 (d, 1H), 3,03-2,93 (m, 1H), 2,91-2,82 (m, 1H), 2,43 (m, 1H), 1,12 (m, 6H)
Massa: M+H 416
Ácido (3R)-5-fluoro-3-({[(5R)-5-isopropil-3-(lisoquinolinil)-4,5-di-hidro-5-isoxazolil]-carbonil}-ammo)-4-oxopentanóico (Iii-2) 'H-NMRCSOOMHz, CDCla) δ 9.07(d, 1H), 8.55(d, 1H), 7.87(d,
1H), 7.75-7.68(m, 3H), 7,52 (bs, 1H), 5,20-4,35 (m, 3H), 4,02 (d, 1H), 3,80 (d, IH), 3,13-2,90 (m, 2H), 2,39 (m, 1H), 1,08 (m, 6H).
Massa: M+H 416
2) Recristalização
Ácido (3S)-5-fluoro-3-({[(5R)-5-isopropil-3-(l-isoquinolil)-
4,5-di-hidro-5-isoxazolil]-carbonii}-amino)-4-oxo-pentanóico (Iii-1)
5-Fluoro-3-({[(5R)-5-isopropil-3-(l-isoquinolil)-4)5-di-hidro5-isoxazolil]-carbonil}-amino)-4-oxo-pentanoato de t-butila bruto (366 g) foi dissolvido em cloreto de metileno (1,9 kg) e esfriado para 0°C. Trietil-silano (235 g) e ácido trifluoro-acético (1,88 kg) foram adicionados e agitados por uma hora a 0°C. A mistura reacional foi destilada sob pressão reduzida, redissolvida em acetato de etila (2,4 kg), e o pH foi ajustado para 5,2 pela
adição de solução aquosa de hidróxido de sódio 2 N (3,1 L). A camada orgânica foi separada e a camada aquosa foi extraída uma vez com acetato de etila (2,4 kg). A camada orgânica combinada foi destilada sob pressão reduzida para remover o solvente, o resíduo resultante foi dissolvido em metil-t-butil-éter (530 g), e quantidade pequena de ácido (3S)-5-fluoro-3({[(5R)-5-isopropil-3-(l-isoquinolil)-4,5-di-hidro-5-isoxazolil]-carbonil}amino)-4-oxo-pentanóico cristalino foi adicionada. Após agitação por 16 horas na temperatura ambiente, o precipitado resultante foi filtrado e lavado com a mistura 9:1 de metil-t-butil-éter e n-hexano (210 mL).
O ácido (3S)-5-fluoro-3-({[(5R)-5-isopropil-3-(l-isoquinolil)-
4,5-di-hidro-5-isoxazolil]-carbonil}-amino)-4-oxo-pentanóico assim obtido foi dissolvido em acetato de etila (240 mL) por aquecimento a 50°C, n-hexano (240 mL) foi lentamente adicionado, e gradialmente esfriado para a temperatura ambiente. Após agitação por 24 horas na temperatura ambiente, o precipitado resultante foi filtrado e lavado com a mistura 1:1 de acetato de etila e n-hexano (30 mL) para dar o composto do título (Iii-1, 46,0 g, 3S/3R = 94/6). A pureza óptica foi estimada usando coluna Luna (4,6 mm x 250 mm, 5 mm, Ci8). A mistura de acetonitrila/NH4OAc 20 mM (pH 6) (30/70) foi usada como a fase móvel na vazão de fluxo de 1 mL/min. Sob o comprimento de onda de detecção de 227 nm, os dois isômeros ópticos foram observados em tempos de retenção de 8,0 min (isômero 3R) e 9,0 min (isômero 3S), respectivamente.
Experimento 1
Determinação do efeito inibitório de caspase
Caspase-1 e caspase-8 conhecidas como cisteína proteases na forma de α2β2 foram expressadas, purificadas, e ativadas por modificação de um método conhecido em Thomberry, N. A. et al., Nature, 1992, 356, 768. Thomberry, N. A. Methods in Enzymology, 1994, 244, 615. Walker, N. P. C. et al., Cell, 1994, 78, 343, e caspase-9 também foi purificada por um método
semelhante, e a atividade inibitória contra elas foi testada. Descrevendo resumidamente, subunitades plO e p20 (Thomberry, N. A. et al., Nature, 1992, 356, 768) foram expressadas emE. coli e purificadas por cromatografía de troca aniônica e em coluna de níquel para dar caspase-1, caspase-8 e 5 caspase-9. O substrato fluorescente AcYVAD-AFC para a caspase-1,
AcDEVD-AFC para a caspase-8, e AcLEHF-AFC para a caspase-9 assim obtidas foram usados para determinar a atividade específica dos inibidores sintetizados. A reação enzimática foi realizada a 25°C com várias concentrações de inibidores em uma solução tampão contendo HEPES 50 10 mM (pH 7,50), 10% (p/v) de sacarose, 0,1% (p/v) de CHAPS, NaCI 100 mM,
EDTA 1 mM, e DTT 10 mM na presença de AcYVAD-AFC a 50 μΜ para a caspase-1 a 10 nM, AcDEVD-AFC a 50 μΜ para a caspase-8 a 2,1 nM, e AcLEHF-AFC a 150 μΜ para a caspase-9a 200 nM. As constantes inibitórias Kí e Kobs dos inibidores foram determinadas pela medição da velocidade de reação com o lapso de tempo usando um espectrômetro fluorescente e pela obtenção da constante de velocidade inicial. Kj foi calculada da Plotagem de Linewaver Burk, e Kobs da seguinte Equação 1.
Equação 1
Kobs = -ln (l-At/A00)/t *
na qual
At significa a taxa de divagem (%) no tempo t, e
Aoo significa a taxa de divagem (%) máxima.
Espectrômetro Fluorescente Spectra MAX GeminiXS de Molecular Device Co. foi usado no comprimento de onda de excitação de 405 nm e no comprimento de onda de emissão de 505 nm.
r 25 A atividade inibitória in vivo dos inibidores foi determinada ao se submeter a célula Jurkat (ATCC TIB-152) à apoptose usando anticorpos Farmaceuticamente aceitáveis (Upstate Biotech 05-021) e pela detecção da mudança de cor de acordo com o método WST-1 conhecido em Francoeur A.
• · · · · • · ·· · · • ♦ · · · • · · · · * · • · · · · · • · · * · ♦ ♦ • ·
M. e Assalian A. (1996) Biochemica 3, 19-25 para observar a quantidade de células Jurkat vivas quando as células foram tratadas pelo inibidor. Espectrômetro Spectra MAX 340 de Molecular Device Co. foi utilizado no comprimento de onda de absorbância de 440 nm.
Tabela 1
Com. No. Caspase-I Kobs /[I] (M’1 min'1) Caspase-S K<*s/[T| (M'1 min') Caspase-9 Kobs/nj(M-IminI) Célula Jurkat IC50 (μΜ)
Icc 1,9 ES 3,3 E4 22,5
Idd 3,1 ES 1,9 E5 4,25
Iee 1,8 E5 32,6
Iff 5,0 E5 1,2
Igg 2,7 E6 1,5 E6 3,2 E5 0,17
Iii 1,1 E6 1,3 E7 2,0 E5 0,1
Iii-u 1,9 E5 0,71
Iii-1 2,3 E7
Iii-2 4,7 E5
Ijj 1,9 E5 4,7
Ikk 1,2 E5 1,1
111 1,3 ES 39,2
Imm 1,6 ES 2,0
Iim 2,6 E5 6,5
Ioo 2,0 E4 50
Ipp 2,3 E6 1,7 ES 3,5
Iqq 3,3 E6 1,4 E5 37
Irr Sem atividade
Iss Sem atividade
Itt 4,3E5 0,16
Iuu 2,9E5 0,98
Ivv 1,SE6 0,15
Iww 1 AE6 1,9
Ixx 4,0E4 26,5
Iyy 3,1 ES 31,2
Izz 4,2E5 1,25
Iaal 1,8E5 0,33
Iaa2 3,2E5 0,56
Iaa3 1,4E5 2,65
Iaa4 5,OE5 0,67
Iaa5 10E5 0,3
Iaaó 2,0E5 2,45
Iaa7 4,4E4 2,27
Iaa8 4,5E5 0,70
Iaa9 2,3E5 1,24
IaalO 1,5E5 1,02
Iaal 1 6,4E4 31
Iaal2 1,9E5 0,70
·«··· · ··· • * ··« · · · · ··· • · »····· ·
Iaal3 ME5 0,35
Iaal4 4,1E5 0,79
Iaal5 4,3E5 0,72
Iaa 16 6,2E5 0,73
Iaal7 1,8E5 1,14
Iaal8 5,2E5 1,5
Iaal9 1,6E4 Sem atividade
Iaa20 3,7E4 Sem atividade
Iaa21 Sem atividade Sem atividade
Iaa22 Sem atividade
Iaa23 2,9E4 Sem atividade
Iaa24 Sem atividade
Iaa25 1,7E5 Sem atividade
Iaa26 3,1E4 Sem atividade
Iaa27 8,2E5 1,3
Iaa28 1,8E6 0,6
* Composto Iii-u é a forma (5S) do Composto Iii.
Experimento 2
Efeito terapêutico para hepatite aguda induzida por LPS em camundongo
Etapa 1) Preparação de amostra de sangue
Camundongos fêmeas Balb/c (6 semanas, Charles River
Laboratory, Osaka, Japão) foram mantidos sob as condições de 22°C, umidade relativa de 55%, e ciclo de luz-escuridão de 12 horas. Alimento e água foram fornecidos ad libitum. Em solução salina livre de pirogênio foram dissolvidos LPS (lipopolissacarídeo) e D-galactosamina em concentrações de 10 0,4 mg/mL e 280 mg/mL, respectivamente, e sua mistura 1:1 foi injetada em camundongos na quantidade de 5 mL/kg. Imediatamente após a injeção de LPS e galactosamina, veículo (uma mistura de PEG400 : etanol : Twenn 80 = 15:75:2,5 diluída cinco vezes com solução salina) no qual o composto de teste estava dissolvido ou o veículo sozinho ou injetado intraperitonealmente nos 15 camundongos. Após 8 horas da injeção de droga, amostras de sangue foram obtidas de seus corações.
Etapa 2: Determinação da atividade de aminotransferase de plasma
A atividade de ATL de plasma foi determinada para as
• · · ♦ · ·· • · • · ·· • ·· • · • · · • · e · • · ·· · • · · * · amostras de sangue obtidas na Etapa 1 usando o kit de ensaio de ATL (Asan Pharm. Co., Seul, Coréia) de acordo com a instrução do fabricante. Como um resultado, pareceu que a injeção de LPS e de D-galactosamina aumenta rapidamente a atividade de ATL em plasma, e os compostos de teste inibem a atividade enzimática aumentada em uma maneira dependente de dose. Baseado nestes resultados, valores de ED50 dos compostos de teste foram calculados usando o programa de computador Prism de GraphPad Co. para dar 0,01-10 mg/kg.
Experimento 3
Efeito inibitório contra fibrose hepática em ratos SD
Etapa 1) Indução de fibrose hepática e administração
Ratos machos Sprague-Dawley (6 semanas, Korea Biolink) foram mantidos sob as condições de 22°C, umidade relativa de 55%, e ciclo de luz-escuridão dc 12 horas. Alimento e água foram fornecidos ad libitum. 15 Para a ligação de duto biliar, os ratos foram anestesiados por inalação de halotano 1 %, o abdome dos ratos foi aberto, os ditos biliares distai e proximal foram ligados, e a parte entre os sítios de ligação foi cortada, 2 mL de solução salina foram injetados, e o abdome foi suturado.
Composto de teste (Iii) foi oralmente administrado em uma 20 dosagem de 3 mg/kg ou de 10 mg/kg duas vezes ao dia. Isto é, o composto foi dissolvido em um co-solvente (PEG400 : etanol : Tween 80 = 15:7,5, 2,5), diluído cinco vezes com tampão fosfato (pH 7,4), e administrado. Ao grupo de controle foi administrada a solução sem o composto de teste. A administração foi feita por 1 semana após 1 semana da ligação do duto biliar.
Etapa 2): Preparação de seção de tecido e coloração com vermelho Sirius
Após a administração, os ratos foram mortos. Os fígados foram fixados por formalina neutra a 10% e uma seção de parafina de espessura de 5 pm foi preparada e corada por vermelho Sirius a 0,1% (Direc
red 80, Sigma). A seção de tecido foi investigada por um microscópio óptico para observar as fibras de colágeno coradas de vermelho, e os resultados são representados na Figura 1.
Experimento 4
Teste inibitório contra apoptose durante a estagnação biliar em ratos SD
O composto de teste (Iii) foi administrado aos ratos SD cujos dutos biliares foram ligados de acordo com o procedimento da Etapa 1 do Experimento 3. Após 2 semanas da operação, os ratos foram mortos. Os fígados foram fixados por formalina neutra a 10% e uma seção de parafina de espessura de 5 μιη foi preparada. Coloração com TUNEL foi realizada usando o Kit de Detecção In Situ de ApopTag Peroxidase (Chemicon) de acordo com a instrução do fabricante. Mais do que 10 sítios do tecido de fígado corado com TUNEL foram fotografados em magnificações de 200 sem qualquer recobrimento, cujo resultado foi mostrado na Figura 2. O número de células sofrendo de apoptose em cada grupo de teste foi contado e representado na seguinte Tabela 2. Na seguinte tabela, a operação Simulada significa o caso no qual o duto biliar foi exposto mas não ligado, e a operação BDL significa o caso no qual apenas o veículo foi administrado após a ligação do duto biliar.
Tabela 2
Efeito inibitório do composto (Iii) contra apoptose de célula hepática durante a estagnação biliar (unidade: células positivas para TUNEL/campo)
Operação Simulada Operação BDL BDL+Composto (Iiii) 3 mg/kg BDL+Composto (Iiii) 10 mg/kg
0,76 + 0,15 16,7 ±2,75 4,12 ± 1,3 5,66 ± 1,34
Conclusão
A inibição efetiva de apoptose (inibição de 75%) pelo
Composto (Iii) foi mostrada pela coloração com TUNEL em um modelo
estabelecido pela indução de fibrose hepática por intermédio de estagnação biliar. Em adição, a coloração com Vermelho Sirius mostrou uma fibrose severa no grupo de controle, mas quase nenhuma fibrose no grupo tratado com o Composto (Iii). Este resultado demonstra o efeito inibitório do Composto (Iii) contra fibrose hepática em ratos, e assim é esperado que o Composto (Iii) possa exibir a atividade farmacológica de suprimir a cirrose hepática pela inibição da apoptose de célula hepática em aplicação clínica. A aplicação pode ser expandida não apenas à cirrose hepática por estagnação biliar, mas também a várias doenças hepáticas nas quais está incluída a cirrose hepática devido à apoptose.
Experimento 5
Efeito antiflogístico em ratos
Ratos machos SD (6 semanas, Oriente), foram mantidos sob as condições de 22°C, umidade relativa de 55%, e ciclo de luz-escuridão de 12 horas. Alimento e água foram fornecidos ad libitum. Antes da indução de edema, o volume de pata de cada rato foi medido por pletismômetro. Antes da indução de edema, veículo (uma mistura de PEG400 : etanol : Tween 80 = 15:7,5, 2,5), diluído dez vezes com tampão fosfato) no qual o composto de teste está dissolvido ou o veículo sozinho foi oralmente administrado aos ratos. Carragenano (gama) foi dissolvida na concentração de 1% em solução salina e subcutaneamente injetada no pata traseira direita dos ratos na dosagem de 100 pL. Após 3 horas, o volume da pata direita foi medido novamente por pletismômetro. O efeito do composto de teste foi mostrado pela inibição de edema (%) (veja a Tabela 3). A inibição de edema (%) foi calculada de acordo com a seguinte Equação 2.
Equação 2
Inibição de edema (%) = 100 x (média de volume de pata aumentado no grupo administrado com veículo - Volume de pata aumentado
* • ·· • · ·· * *»·♦ • Λ * • · · · » * · « · · ·* e ♦ · * * • t * ··· · * * · « · · · < · · · no grupo tratado com composto de teste)/(Média do volume de pata aumentado no grupo administrado com veículo).
Tabela 3
Efeito de inibição de edema do Composto (lii)
Efeito de inibição de edema (%)
Dosagem (mg/kg) Média SEM
3 2,3 7,7
30 20,7 9,7
100 22,7 2,6
Experimento 6
Efeito terapêutico para artrite reumática em ratos
Ratos fêmeas Lewis (7 semanas, Charles Ri ver, Japão) foram mantidos sob as condições de 22°C, umidade relativa de 55%, e ciclo de luzescuridão de 12 horas. Alimento e água foram fornecidos ad libitum. Colágeno de tipo II (bovino) foi dissolvido em ácido acético 0,05 M em uma concentração de 2 mg/mL a 4°C. 0,1 mL da solução assim emulsificada foi subcutaneamente injetado na cauda dos ratos Lewis. Após 7 dias, a solução emulsificada foi novamente injetada na mesma maneira. Da data na qual o segunda solução emulsificada foi injetada, veículo (uma mistura de PEG400 : etanol : Tween 80 = 15:7,5, 2,5), diluído dez vezes com tampão fosfato) no qual o composto de teste está dissolvido ou o veículo sozinho foi oralmente administrado aos ratos todos os dias. No Dia 14 da primeira injeção de solução emulsificada contendo colágeno, o volume de pata traseira direita foi medido novamente por pletismômetro (veja a Tabela 4). A inibição de edema (%) foi determinada pela seguinte Equação 3.
Equação 3
Inibição de edema (%) = 100 x (média de volume de pata aumentado no grupo administrado com veículo no Dia 14 - Volume de pata aumentado no grupo tratado com composto de teste no Dia 14)/(Média do volume de pata aumentado no grupo administrado com veículo no Dia 14).
Em adição, o valor p foi calculado pelo teste t de Student a partir do volume de pata aumentado no Dia 14 para confirmar a significância.
Tabela 4
Efeito de inibição de edema de pata
Dosagem de Composto (Ei) (mg/kg) Volume de pata (mL) Efeito de inibição de edema (%)
Dia 0 Dia 14 Dia : 14
Média SEM Média SEM Média SEM
0 1,115 0,036 1,975 0,257 -
10 1,134 0,032 1,394* 0,089 69,8 10,8
vapor de p = 0,032
No teste de edema de pata em ratos, o Composto (Iii) mostrou um efeito de inibição de edema dependente de dose de cerca de 2%, 21%, e 23% em uma dosagem de 3 mg/kg, 30 mg/kg, e 100 mg/kg, respectivamente. No modelo de artrite reumatóide, o edema de pata foi diminuído significativamente (decréscimo de cerca de 70%) no grupo 10 administrado com Composto (Iii) no Dia 14 quando o grupo de controle negativo mostrou o edema máximo. Portanto, é considerado que o Composto (Iii) possui um efeito inibitório contra o progresso de inflamação em um modelo de doença inflamatória, e assim pode tratar as doenças inflamatórias auto-imunes.
Experimento 7
Comparação de efeito com o composto conhecido
Composto (Iii) de acordo com a presente invenção e LB84068MP (Composto 68) conhecido em PCT/KR00/01047 (WO 01/21600) foram testados e os resultados são mostrados na seguinte 20 Tabela 5.
Tabela 5
LB84068MP Iii
Kobs/[I] contra caspase-8 1,02 E6 (nVmin'1) 1,30 E7 (mW)
IC50 (célula Jurkat) 1,6 μΜ 0,1 μΜ ou menor
ED50 (LPS + Gal) 0,99 mg/kg 0,01 mg/kg
Solubilidade (pH = 7,44 fosfato) 0,93 mg/mL ou menor 7,8 g/mL
Como pode ser visto da Tabela 5 acima, o Composto (Iii) de
acordo com a presente invenção mostrou uma atividade inibitória aumentada em 10 vezes ou mais contra caspase-8 e célula Jurkat comparado com
LB84068MP, e em cerca de 100 vezes contra modelo de hepatite aguda fisico-quimicamente induzida (camundongo). Também, em relação às propriedades físico-químicas, o composto mostrou solubilidade aumentada, e assim pode ser facilmente usado como uma injeção. Isto é, o composto da presente invenção mostra efeitos elevadamente mais melhorados do que o composto de comparação LB84068MP em ambos os aspectos de atividade e de propriedades fisico-químicos.

Claims (11)

1 H-pirazol-5-il]-óxi} -pentanóico (Iaa 19);
(46) ácido (3S)-5-[(4-benzil-5-oxo-2,5-di-hidro-3-furanil)-óxi3-({[(5R)-5-isopropil-3-(1-isoquinolinil)-4,5-di-hidro-5-isoxazolil]carbonil}amino)-4-oxo-pentanóico (Iaa20);
(47) ácido (3S)-5-(isobutiril-óxi)-3-({[(5R)-5-isopropil-3-(1isoquinolinil)-4,5-di-hidro-5-isoxazolil]-carbonil}-amino)-4-oxo-pentanóico (Iaa21);
(48) ácido (3S)-3-({[(5R)-5-isopropil-3-(1-isoquinolinil)-4,5di-hidro-5-isoxazolil]-carbonil}-amino)-4-oxo-5-hexenóico (Iaa22);
(49) ácido (3S)-3-({[(5R)-5-isopropil-3-(1-isoquinolinil)-4,5di-hidro-5-isoxazolil]-carbonil}-amino)-4-oxo-5-(2-piridinil-óxi)-pentanóico (Iaa23);
(50) ácido (3S)-3-({[5-etil-3-(2-isopropil-fenil)-4,5-di-hidro-5isoxazolil]-carbonil}-arnino)-4-oxo-5-(2-piridinil-óxi)-pentanóico (Iaa24);
(51) trifluorometano-sulfonato de 2-{[(3S)-4-carbóxi-3({[(5R)-5-isopropil-3-(1-isoquinolil)-4,5-di-hidro-5-isoxazolil]-carbonil}amino)-2-oxo-butil]-óxi}-1-metil-piridínio (Iaa25);
(52) trifluorometano-sulfonato de 2-{[(3S)-4-carbóxi-3-({[5etil-3-(2-isopropil-fenil)-4,5-di-hidro-5-isoxazolil]-carbonil}-amino)-2-oxobutil]-óxi} -1 -metil-piridínio (Iaa26);
(53) ácido 3-({[3-(5-cloro-1-metil-1H-indol-2-il)-5-isopropil-
(1) ácido (3S)-5-[(2,6-dicloro-benzoil)-óxi]-3-{[[5-metil-3fenil-4,5-di-hidro-5-isoxazolil)-carbonil]-amino}-4-oxo-pentanóico (Iaa);
1. Composto, caracterizado pelo fato de ser de seguinte fórmula (1):
N—O H (D em que I) R representa H,
II) R1 representa -CH2COOH ou -CH2COOR3 (R3 = SAC), ou -CH2CONHSO2R4 (R4 = SAC),
III) R2 representa H, ou -SAC, -Ar, ou -(CH2)nOR7 (R7 = SAC, -SCAC, -Ar, ou -SCAC-Ar, e η = 1 ou 2),
IV) A representa -(CH2)n- (n = 0-4), -O-(CH2)n- (n = 0-4),
V) B representa H, -SAC, -SCAC, -Ar, -SAC-Ar,
VI) X representa X representa -COCH2N2, -COCH2F, COCH2C1, -COCH2Br, -COCH2I, -COCH2OAr, -COCH2OCOAr ou COCH2SR17 (R17 é -SAC, -SCAC, -Ar ou -SAC-Ar).
(2) ácido (3S)-3-{[(5-metil-3-fenil-4,5-di-hidro-5-isoxazolil)carbonil]-amino }-4-oxo-5-fenóxi-pentanóico (Ibb);
2. Composto de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de ser selecionado do seguinte grupo:
3. Composto de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de ser ácido (3S)-5-fluoro-3-({[(5R)-5-isopropil-3-(l-isoquinolil)-
3-(1 -isoquinolinil)-4,5-di-hidro-5-isoxazolil] -carbonil} -amino)-4-oxopentanóico (Iaa18);
(45) ácido (3S)-3-({[(5R)-5-isopropil-3-(1-isoquinolinil)-4,5di-hidro-5-isoxazolil]-carbonil}-amino)-4-oxo-5-([1-fenil-3-(trifluorometil)-
(3) ácido (3S)-3-{[(5-etil-3-fenil-4,5-di-hidro-5-isoxazolil)carbonil]-amino}-4-oxo-5-(2,3,5,6-tetrafluoro-fenóxi)-pentanóico (Icc);
4,5-di-hidro-5-isoxazolil]-carbonil}-amino)-4-oxo-pentanóico e ácido (3R)-5fluoro-3-({[(5R)-5-isopropil-3-(l-isoquinolil)-4,5-di-hidro-5-isoxazolil]carbonil}-amino)-4-oxo-pentanóico em metil-t-butil-éter, adicionar uma quantidade pequena de ácido (3S)-5-fluoro-3-({[(5R)-fluoro-3-({[(5R)-5isopropil-3-(l-isoquinolil)-4,5-di-hidro-5-isoxazolil]-carbonil)-amino)-4-oxopentanóico cristalino como um material de semente para dar um cristal, e recristalizar este cristal do sistema de solventes de acetato de etila/n-hexano.
4,5-di-hidro-5-isoxazolil]-carbonil}-amino)-4-oxo-pentanóico (Iii-1).
4. Composto, caracterizado pelo fato de ser de seguinte fórmula (la):
(Ia) na qual A, B, R, R1, R2, e X são definidos como descrito na reivindicação 1.
4,5-di-hidro-5-isoxazolil]-carbonil}-amino)-4-oxo-pentanóico (Iii).
4.5- di-hidro-5-isoxazolil]-carbonil}-amino)-5-fluoro-4-oxo-pentanóico (Iaa27);
Petição 870180062218, de 19/07/2018, pág. 14/17 (54) ácido 3-({[3-(l,5-dimetil-lH-indol-2-il)-5-isopropil-4,5di-hidro-5-isoxazolil]-carbonil}-amino)-5-fluoro-4-oxo-pentanóico (Iaa28); e (55) ácido (3S)-5-fluoro-3-({[(5R)-5-isopropil-3-(lisoquinolil)-4,5-di-hidro-5-isoxazolil]-carbonil}-amino)-4-oxo-pentanóico (Iii-1).
4.5- di-hidro-5-isoxazolil]-carbonil}-amino)-4-oxo-pentanóico (Iaa17);
(44) ácido (3S)-5-[(difenil-fosforil)-óxi]-3-({ [(5R)-5-isopropil-
4,5-di-hidro-5-isoxazolil]-carbonil}-amino)-5-fluoro-4-oxo-pentanóico (Iaa16);
(43) ácido [5-fluoro-3-({[5-isopropil.3-(4-fenil-2-piridinil)Petição 870180062218, de 19/07/2018, pág. 13/17
4.5- di-hidro-5-isoxazolil]-carbonil}-amino)-5-fluoro-4-oxo-pentanóico (Iaa14);
(41) ácido 3-({ [3-(4-ciclo-hexil-2-piridinil)-5-etil-4,5-di-hidro5-isoxazolil]-carbonil}-amino)-5-fluoro-4-oxo-pentanóico (Iaa15);
(42) ácido 3-({[5-etil-3-(5,6,7,8-tetra-hidro-l-isoquinolinil)-
4.5- di-hidro-5-isoxazolil}-carbonil)-amino]-5-fluoro-4-oxo-pentanóico (Iaa9);
(36) ácido 3-({[5-etil-3-(4-isobutil-2-piridinil)-4,5-di-hidro-5isoxazolil]-carbonil}-amino)-5-fluoro-4-oxo-pentanóico (Iaa10);
(37) ácido 3-({[3-(4-acetil-2-piridinil)-5-etil-4,5-di-hidro-5isoxazolil]-carbonil}-amino)-5-fluoro-4-oxo-pentanóico (Iaa11);
(38) ácido 3-({[3-(4-ciclo-propil-2-piridinil)-5-etil-4,5-di- hidro-5-isoxazolil] -carbonil} -amino)-5-fluoro-4-oxo-pentanóico (Iaa12);
(39) ácido 3-({[3-(4-ciclo-pentil-2-piridinil)-5-etil-4,5-di- hidro-5-isoxazolil]-carbonil}-amino)-5-fluoro-4-oxo-pentanóico (Iaa13);
(40) ácido 3-({[(5R)-3-(4-ciclo-pentil-2-piridinil)-5-isopropil-
4.5- di-hidro-5-isoxazolil]-carbonil}-amino)-5-(metil-sulfonil)-4-pentenóico (Iss);
(20) ácido 5-fluoro-3-({[(5S)-3-(1-isoquinolinil)-5-propil-4,5di-hidro-5-isoxazolil]-carbonil}-amino)-4-oxo-pentanóico (Itt);
(21) ácido 3-({ [(5S)-5-etil-3-(1-naftil)-4,5-di-hidro-5isoxazolil]-carbonil}-amino)-5-fluoro-4-oxo-pentanóico (Iuu);
(22) ácido 3-({[(5S)-5-etil-3-(2-quinolinil)-4,5-di-hidro-5isoxazolil]-carbonil}-amino)-5-fluoro-4-oxo-pentanóico (Ivv);
(23) ácido 3-({[(5R)-5-etil-3-(3-isoquinolinil)-4,5-di-hidro-5isoxazolil]-carbonil}-amino)-5-fluoro-4-oxo-pentanóico (Iww);
(24) ácido 3-({[5-etil-3-(8-quinolinil)-4,5-di-hidro-5- isoxazolil]-carbonil}-amino)-5-fluoro-4-oxo-pentanóico (Ixx);
(25) ácido 3-({[5-etil-3-(3-quinolinil.)-4,5-di-hidro-5- isoxazolil]-carbonil}-amino)-5-fluoro-4-oxo-pentanóico (Iyy);
(26) ácido 5-fluoro-3-({[(5R)-5-isopropil-3-(2-quinolinil)-4,5di-hidro-5-isoxazolil]-carbonil}-amino)-4-oxo-pentanóico (Izz);
(27) ácido 3-({[5-etil-3-(2-isopropil-fenil)-4,5-di-hidro-5isoxazolil]-carbonil}-amino)-5-fluoro-4-oxo-pentanóico (Iaa1);
(28) ácido 3-[({3-[3-(terc-butil)-fenil]-5-etil]-4,5-di-hidro-5- isoxazolil}-carbonil)-amino]-5-fluoro-4-oxo-pentanóico (Iaa2);
(29) ácido 3-[({3-[4-(terc-butil)-fenil]-5-etil-4,5-di-hidro-5- isoxazolil}-carbonil]-amino]-5-fluoro-4-oxo-pentanóico (Iaa3);
Petição 870180062218, de 19/07/2018, pág. 12/17
(30) ácido 5-fluoro-3-({[(5R )-5-isopropil-3-(2-isopropilfenil)-4,5-di-hidro-5-isoxazolil]-carbonil}-amino)-4-oxo-pentanóico (Iaa4);
(31) ácido 3-[({ (5R)-3 - [3-(terc-butil)-fenil] -5-isopropil-4,5-dihidro-5-isoxazolil}-carbonil)-amino]-5-fluoro-4-oxo-pentanóico (Iaa5);
(32) ácido 3-{[[(3-[1,1'-bifeni1]-3-il-5-isopropil-4,5-di-hidro5-isoxazolil)-carbonil]-amino}-5-fluoro-4-oxo-pentanóico (Iaa6);
(33) ácido 3-({ [5-etil-3-(2-piridinil)-4,5-di-hidro-5-isoxazolil]carbonil}-amino)-5-fluoro-4-oxo-pentanóico (Iaa7);
(34) ácido 3-[({3-[4-(terc-butil)-2-piridinil]-5-etil-4,5-di-hidro5-isoxazolil}-carbonil)-amino]-5-fluoro-4-oxo-pentanóico (Iaa8);
(35) ácido 3-[({(5R)-3-[4-(terc-butil)-2-piridinil]-5-isopropil-
4.5- di-hidro-5-isoxazolil)-carbonil]-amino}-4-oxo-5-(2,3,5,6-tetrafluorofenóxi)-pentanóico (Iqq);
(18) ácido (3S,4E)-6-etóxi-3-({[(5R)-5-isopropil-3-(1isoquinolinil)-4,5-di-hidro-5-isoxazolil]-carbonil}-amino)-6-oxo-4-hexenóico (Irr);
(19) ácido (3S,4E)-3-({[(5R)-5-isopropil-3-(1-isoquinolinil)-
4,5-di-hidro-5-isoxazolil]-carbonil}-amino)-4-oxo-pentanóico (Iii);
(4) ácido (3S)-3-({ [5-etil-3-(l-naftil)-4,5-di-hidro-5isoxazolil]-carbonil}-amino)-4-oxo-5-(2,3,5,6-tetrafluoro-fenóxi)-pentanóico (Idd);
5. Composto de acordo com a reivindicação 4, caracterizado pelo fato de ser ácido (3S)-5-fluoro-3-({[(5R)-5-isopropil-3-(l-isoquinolil)-
5-isoxazolil}-carbonil)-amino}-4-oxo-5-(2,3,5,6-tetrafluoro-fenóxi)pentanóico (Ipp);
Petição 870180062218, de 19/07/2018, pág. 11/17
(17) ácido (3S)-3-{[(3-{[(4-cloro-1-naftil-óxi]-metil}-5-etil-
(5) ácido (3S)-3-({ [5-etil-3-(2-naftil)-4,5-di-hidro-5Petição 870180062218, de 19/07/2018, pág. 10/17 isoxazolil]-carbonil}-amino)-4-oxo-5-(2,3,5,6-tetrafluoro-fenóxi)-pentanóico (Iee);
6. Processo para preparar o composto (Iii-1) como definido na reivindicação 5, caracterizado pelo fato de compreender as etapas de dissolver uma mistura de ácido (3S)-5-fluoro-3-({[(5R)-5-isopropil-3-(l-isoquinolil)-
(6) ácido (3S)-3-({[5-etil-3-(1-isoquinolinil)-4,5-di-hidro-5isoxazolil]-carbonil}-arnino)-4-oxo-5-(2,3,5,6-tetrafluoro-fenóxi)-pentanóico (Iff)
7. Composição terapêutica para prevenir inflamação e
Petição 870180062218, de 19/07/2018, pág. 15/17 apoptose, caracterizada pelo fato de compreender o composto de fórmula (1) inibidor de caspase, ou seu sal, ou seu estereoisômero como definido na reivindicação 1 como um ingrediente ativo juntamente com o veículo farmaceuticamente aceitável.
(7) ácido 3-({[5-etil-3-(1-isoquinolinil)-4,5-di-hidro-5isoxazolil]-carbonil}-amino)-5-fluoro-4-oxo-pentanóico (Igg);
8. Composição de acordo com a reivindicação 7, caracterizada pelo fato de compreender o composto (Iii) de acordo com a reivindicação 3 como um ingrediente ativo.
(8) 3-({[5-etil-3-(1-isoquinolinil)-4,5-di-hidro-5-isoxazolil]carbonil}-amino)-5-fluoro-4-oxo-pentanoato de etila (Ihh);
9. Composição de acordo com a reivindicação 7, caracterizada pelo fato de compreender o composto (Iii-1) de acordo com a reivindicação 5 como um ingrediente ativo.
(9) ácido 5-fluoro-3-({[(5R)-5-isopropil-3-(1-isoquinolinil)-
10. Processo para preparar a composição terapêutica para prevenir inflamação e apoptose como definida na reivindicação 7, caracterizado pelo fato de compreender misturar o composto de fórmula (1) inibidor de caspase, seu sal, ou seu estereoisômero como definido na reivindicação 1 com veículo farmaceuticamente aceitável.
(10) ácido 3-({[5-etil-3-(4-quinolinil)-4,5-di-hidro-5isoxazolil]-carbonil}-amino)-5-fluoro-4-oxo-pentanóico (Ijj),
(11) ácido 3-({[3-(benzotiofen-2-il)-5-etil-4,5-di-hidro-5isoxazolil]-carbonil}-amino)-5-fluoro-4-oxo-pentanóico (Ikk);
(12) ácido (3S)-3-({[3-(1,3-dimetil-1H-indol-2-il)-5-etil-4,5di-hidro-5-isoxazolil]-carbonil}-amino)-4-oxo-5-(2,3,5,6-tetrafluoro-fenóxi)pentanóico (Ill);
(13) ácido 3-({[3-(1,3-dimetil-1H-indol-2-il)-5-etil-4,5-dihidro-5-isoxazolil] carbonil}-amino)-5-fluoro-4-oxo-pentanóico (Imm);
(14) ácido (3S)-3-({[5-etil-3-(1-naftil-metil)-4,5-di-hidro-5isoxazolil]-carbonil}-amino)-4-oxo-5-(2,3,5,6-tetrafluoro-fenóxi)-pentanóico (Inn);
(15) ácido (35)-5-[(2,6-dicloro-benzoil)-óxi]-3-[({5-etil-3-[2(1-naftil)-etil]-4,5-di-hidro-5-isoxazolil}-carbonil)-amino]-4-oxo-pentanóico (Ioo);
(16) ácido (3S)-3[({ 5-etil-3 -[(1 -naftil-óxi)-metil] -4,5-di-hidro-
11. Uso do composto de fórmula (1), ou de seu sal, ou de seu estereoisômero, como definido na reivindicação 1, caracterizado pelo fato de ser para o preparo de um medicamento para prevenir inflamação e apoptose.
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