BRPI0520207A2

BRPI0520207A2 - uso de uma quantidade eficaz de um primeiro composto, e, medicamento sistemicamente formulado

Info

Publication number: BRPI0520207A2
Application number: BRPI0520207-8A
Authority: BR
Inventors: Jay Lichter; Kenneth Widder
Original assignee: Revision Therapeutics Inc
Priority date: 2004-12-08
Filing date: 2005-12-07
Publication date: 2012-09-25
Also published as: EP1930046A1; NO20075018L; GB2421433B; GB0525041D0; EA011154B1; EA200701218A1; JP4178281B2; BRPI0518616A; CN101129344A; EA010827B1; SG144145A1; EP2289500A1; EP1827407A2; US20120202885A1; CN101072555B; KR20070086074A; CN102240278A; AU2010200842A1; EP1827407A4; CA2584845A1

Abstract

USO DE UMA QUANTIDADE EFICAZ DE UM PRIMEIRO COMPOSTO, E, MEDICAMENTO SISTEMICAMENTE FORMULADO. São descritos aqui métodos e composições para tratar certas doenças e conições relacionadas com retinol, por modulação da disponibilidade da transtirretina (TTR) e proteína de ligação de retinol (RBP) no indivíduo. Por exemplo, os métodos e composições fornecem agentes terapêuticos para o tratamento e/ou prevenção da degeneração macular e/ou distrofias relacionadas com a idade, distúrbios metabólicos, hipertensão intracraniana idiopática, hiperostose e doenças do mal dobramento e agregação de proteína. As composições descritas podem ser usadas como terapia de um único agente com outros agentes ou terapias. Além disso, são descritos aqui métodos e ensaios para selecionar apropriados agentes, que possam modular a disponibilidade de TTR e RBP em um indivíduo.

Description

"USO DE UMA QUANTIDADE EFICAZ DE UM PRIMEIRO COMPOSTO, E, MEDICAMENTO SISTEMICAMENTE FORMULADO"

"Dividido do PI058616-1, depositado em 07/12/2005"

PEDIDOS RELACIONADOS

Este pedido de patente reivindica o benefício de (a) Pedido Provisório U.S. No. de Série 60/634.449, depositado em 8 de dezembro de 2004, (b) Pedido Provisório No. de Série 60/660.924, depositado em 10 de março de 2005, (c) Pedido Provisório U.S. número de série 60/660.904, depositado em 11 de março de 2005, (d) Pedido Provisório U.S. No. de Série 60/672.405, depositado em 18 de abril de 2005 e (e) Pedido Provisório U.S. número de série 60/698.512, depositado em 11 de julho de 2005; os pedidos de patente supracitados são aqui incorporados por referência em sua totalidade.

CAMPO DA INVENÇÃO

Os métodos e composições aqui descritos são dirigidos ao tratamento de doenças relacionadas com retinol em um indivíduo, pela modulação da atividade ou disponibilidade da proteína de ligação de retinol (RBP) e transtirretina (TTR) no indivíduo.

FUNDAMENTOS DA INVENÇÃO

Os retinóides são essenciais para manutenção dos processos normais de crescimento, desenvolvimento, imunidade, reprodução, visão e outros processos fisiológicos. Contrariamente, a produção ou processamento anormais dos retinóides correlaciona-se com a manifestação dos processos doentios.

Por exemplo, mais do que 100 milhões de crianças no mundo são deficientes da vitamina-A, causando cegueira e morte entre estas crianças. Os níveis de vitamina-A em excesso em órgãos e tecidos alvo, tais como os olhos, podem também causar cegueira em uma variedade de doenças retinais, incluindo degeneração macular. Uma grande variedade de condições, geralmente referidas como doenças vitreorretinais, pode afetar o vítreo e a retina que situam-se na parte de trás do olho, incluindo retinopatias e degenerações e distrofias maculares. A degeneração macular é um grupo de doenças do olho que é a causa líder da cegueira para aqueles com a idade de 55 anos ou mais nos Estados Unidos5 afetando mais do que 10 milhões de americanos. Alguns estudos predizem um aumento de seis-vezes no número de novos casos de degeneração macular durante a última década, assumindo características de uma epidemia. A degeneração ou distrofia macular relacionada com a idade, uma doença particularmente debilitante, resulta em gradual perda de visão e, eventualmente, severa avaria da visão central.

Os níveis anormais de vitamina A e/ou suas proteínas de transporte associadas (proteína de ligação de retinol (RBP) e transtirretina (TTR)) são também correlacionados com a manifestação de outras doenças, incluindo distúrbios metabólicos. Um exemplo é visto no diabetes, em que níveis anormais de retinol foram vistos em pacientes diabéticos tanto de tipo I como tipo II, porém não pacientes normais. Outras doenças incluem pseudotumor cerebral (PTC), hipertensão intracraniana idiopática (IIH) e distúrbios relacionados com os ossos, incluindo espondilite cervical, hiperostose espinhal e hiperostose esquelética idiopática difusa (DISH). Além disso, a vitamina A e/ou suas proteínas de transporte associadas, TTR em particular, podem representar um papel em doenças de mal dobramento e agregação de proteína, incluindo doença de Alzheimer e amiloidose sistêmica.

Distúrbios associados com manifestações fisiológicas relacionadas com os retinóides continuam a ser um problema por todo o mundo. Portanto, há necessidade de proverem-se métodos e composições para tratar estas doenças.

SUMÁRIO DA INVENÇÃO

São descritos aqui métodos e composições para identificar e detectar agentes que modulem os níveis ou a atividade da proteína de ligação de retinol (RBP) ou transtirretina (TTR) em um mamífero. São também descritos aqui ensaios para identificar compostos e agentes terapêuticos, bem como métodos e composições para tratar um indivíduo ou paciente com doenças relacionadas com retinol, pela administração de compostos ou agentes terapêuticos, em que dita administração resulta na modulação de níveis ou atividade de RBP ou TTR em dito paciente ou indivíduo. São também descritos aqui métodos e composições para tratar um paciente com doenças relacionadas com retinol, pela modulação dos níveis ou atividade de RBP ou TTR no paciente, pela administração de tais compostos.

Em uma forma de realização, os métodos e composições aqui fornecidos para a modulação dos níveis ou atividade de RBP ou TTR em um mamífero, compreendendo administrar ao mamífero pelo menos uma quantidade eficaz de um agente que module a transcrição de RBP ou TTR em dito mamífero, em que dita modulação dos níveis ou atividade de RBP ou TTR reduz a formação do trans-retinal no olho de um mamífero. Em uma forma de realização, o agente é escolhido do grupo consistindo de agonistas, RXR/RAR, antagonistas RXR/RAR, agonistas de estrogênio, antagonistas de estrogênio, agonistas da testosterona, antagonistas da testosterona, agonistas da progesterona, antagonistas da progesterona, agonistas da dexametasona, antagonistas da dexametasona, oligonucleotídeos antissentido, siRNA, antagonistas de proteína de ligação de ácido graxo, agonistas de C/EBP, antagonistas de C/EBP, agonistas de HNF-1, antagonistas de HNF-1, agonistas de HNF-3, antagonistas de HNF-3, agonistas de HNF-4, antagonistas de HNF-4, agonistas de HNF-6, antagonistas de HNF-6, aptâmeros, proteínas de ligação de Zn em dedo, ribozimas e anticorpos monoclonais.

Em ainda outra forma de realização, os métodos e composições aqui descritos fornecem níveis ou atividade de modulação RBP ou TTR em um mamífero, compreendendo administrar ao mamífero pelo menos uma vez uma quantidade eficaz de um inibidor de translação RBP ou TTR, em que dita modulação dos níveis ou atividade de RBP ou TTR reduz a formação de trans-retinal no olho de um mamífero. O agente pode ser escolhido do grupo consistindo de: agonistas RXR/RAR, antagonistas RXR/RAR, agonistas de estrogênio, antagonistas de estrogênio, agonistas de testosterona, antagonistas de testosterona, agonistas de progesterona, antagonistas de progesterona, agonistas da dexametasona, antagonistas da dexametasona, oligonucleotídeos antissentido, siRNA, antagonistas de proteína de ligação de ácido graxo, agonistas de C/EBP, antagonistas de C/EBP, agonistas de HNF-1, antagonistas de HNF-1, agonistas de HNF-3, antagonistas de HNF-3, agonistas de HNF-4, antagonistas de HNF-4, agonistas de HNF-6, antagonistas de HNF-6, aptâmeros, ribozimas e anticorpos monoclonais.

Em uma forma de realização, os métodos e composições aqui descritos provêem modulação dos níveis ou atividade de RBP ou TTR em um mamífero, compreendendo administrar ao mamífero pelo menos uma vez uma quantidade eficaz de um agente que module a ligação de RBP em TTR em dito mamífero, em que dita modulação dos níveis ou atividade de RBP ou TTR reduz a formação do trans-retinal no olho de um mamífero. O agente de modulação pode ligar-se a RBP ou TTR5 a fim de inibir a ligação da RBP em TTR no mamífero. O agente modulante pode também antagonizar a ligação de retinol na RBP, a fim de inibir a ligação da RBP ou do complexo de RBP- agente na TTR. O agente modulante pode ser escolhido do grupo consistindo de: um derivado de retinila, um hidrocarboneto aromático poli-halogenado, um agonista do hormônio da tiróide, um antagonistas do hormônio da tiróide, diclofenaco, um análogo de diclofenaco, um composto de molécula pequena, um análogo de hormônio endócrino, um flavonóide, uma droga anti- inflamatória não-esteróide, um inibidor bivalente, um agente cardíaco, um peptidomimético, um aptâmero e um anticorpo.

Em uma forma de realização, o derivado de retinila dos métodos e composições aqui descritos é um composto tendo a estrutura:

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em que

X1 é selecionado do grupo consistindo de NR², O, S, CHR²; R1 'é (CHR²)x-L -R², em que χ é 0, 1, 2, ou 3; L é uma ligação simples ou - C(O)-; R² é uma porção selecionada do grupo consistindo de H, (C1- C4)alquila, F, (C1-C4)Auoroalquila, (C1-C4)alcóxi, -C(O)OH, -C(O)-NH2, -(C1- C4)alquilamina, -C(0)-(C1-C4)alquila, -C(O)-(C1-C4)Auoralquila, -qOHd- GOalquilamina, e -C(0)-(C1-C4)alcóxi; e R é H ou um porção, opcionalmente substituído por 1-3 substituintes independentemente selecionados, selecionados do grupo consistindo de (C2A)alquenila, (C2- C7)alquinila, arila, (C3-C7)cicloalquila, (C5-C7)cicloalquenila, e um heterociclo; ou um metabólito ativo, ou uma sua pró-droga ou solvato farmaceuticamente aceitável.

<formula>formula see original document page 6</formula>

em que X é selecionado do grupo consistindo de NR², O, S, CHR2; R1 é (CHR2)x-L1-R³, em que χ é 0, 1, 2, ou 3; L é uma ligação simples ou -C(O)-; R² é uma porção selecionada do grupo consistindo de H, (C1-C4)alquila, F, (C1-C4)fluoroalquila, (C1-C4)alcóxi, -C(O)OH, -C(O)-NH2, -(C1- C4)alquilamina, -C(0)-(C1-C4 )alquila, -C(O)-(C1-C4)Auoroalquila, -C(0)-(C] - C4)alquilamina, e -C(0)-(C1-C4)alcóxi; e R3 é H ou uma porção, opcionalmente substituído por 1-3 substituintes independentemente selecionados, selecionados do grupo consistindo de (C2-C7)alquenila, (C2- C7)alquinila, arila, (C3-C7)cicloalquila, (C5-C7)cicloalquenila, e um heterociclo; ou um metabólito ativo, ou uma sua pró-droga ou solvato farmaceuticamente aceitável.

Em outras formas de realização (a) X é NR², em que R² é H ou (C1-C4 )alquila; (b) χ é 0; (c) χ é 1 e L1 é -C(O)-; (d) R3 é uma arila opcionalmente substituída; (e) R3 é uma heteroarila opcionalmente substituída; (f) X é NH e R é arila opcionalmente substituída, incluindo, contudo, outras formas de realização em que (i) o grupo arila tem um substituinte, (ii) o grupo arila tem um substituinte selecionado do grupo consistindo de halogênio, OH, 0(C1-C4)alquila, NH(C1-C4)alquila, 0(C1- C4)fluoroalquila, e N[(C1-C4)alquil]2, (iii) o grupo arila tem um substituinte, que é OH, (v) a arila é uma fenila, ou (vi) a arila é naftila; (g) o composto é

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ou um metabólito ativo, ou uma pró-droga ou um solvato farmaceuticamente aceitável do mesmo; (h) o composto é 4- hidroxifenilretinamida, ou um metabólito, ou uma pró-droga ou um solvato farmaceuticamente aceitável do mesmo; (i) o composto é 4- metoxifenilretinamida, ou (j) 4-oxo fenretinida, ou um metabólito, ou uma pró-droga ou um solvato farmaceuticamente aceitável do mesmo.

Em outras formas de realização, a administração de um composto de Fórmula (II) é usada para tratar condições oftálmicas diminuindo os níveis de retinol soro no corpo de um paciente. Em outras formas de realização (a) a quantidade eficaz do composto é sistemicamente administrada ao mamífero; (b) a quantidade eficaz do composto é administrada oralmente ao mamífero; (c) a quantidade eficaz do composto é intravenosamente administrada ao mamífero; (d) a quantidade eficaz do composto é oftalmicamente administrada ao mamífero; (e) a quantidade eficaz do composto é administrada por iontoforese; ou (f) a quantidade eficaz do composto é administrada por injeção ao mamífero.

Em outras formas de realização o mamífero é um humano, incluindo formas de realização em que (a) o humano é um veículo do geno ABCA4 mutante para Doença de Stargardt ou o humano tem um gene ELOV4 mutante para Doença de Stargardt, ou tem um variação genética em complemento ao fator H associado com degeneração macular relacionada com a idade, o (b) o humano tem uma condição oftálmica ou traço selecionado do grupo consistindo de Doença de Stargardt, retinite pigmentosa recessiva, atrofia geográfica (da qual escotoma é um exemplo não limitante), degeneração fotorreceptora, AMD forma seca, distrofia do bastonete-cônico recessiva, degeneração macular relacionada com a idade exsudativa (ou forma úmida), distrofia do bastonete-cônico e retinite pigmentosa. Em outras formas de realização o mamífero é um modelo animal para degeneração.

Em outras formas de realização, há métodos compreendendo múltiplas administrações da quantidade eficaz do agente que modula a ligação RBP à TTR em dito mamífero, incluindo dinda outras formas de realização em que (i) o tempo entre múltiplas administrações é de pelo menos uma semana; (ii) o tempo entre múltiplas administrações é de pelo menos um dia; e (iii) o composto é administrado ao mamífero em uma base diária; ou (iv) o composto é administrado ao mamífero cada 12 horas. Em outras formas de realização ou alternativas, o método compreende um descanso de droga, em que a administração do composto é temporariamente suspensa ou a dose do composto sendo administrado é temporariamente reduzida; no final do descanso de droga, a dose do composto é retomada. A extensão do descanso de droga pode variar de 2 dias a 1 ano.

Em outras formas de realização há métodos compreendendo administrar pelo menos um agente adicional, selecionado do grupo consistindo de um indutor da produção do óxido nítrico, um agente anti- inflamatório, um antioxidante fisiologicamente aceitável, um mineral fisiologicamente aceitável, um fosfolipídeo negativamente carregado, um carotenóide, uma estatina, uma droga anti-angiogênica, um inibidor da matriz metaloproteinase, ácido 13-cis-retinóico (incluindo derivados de ácido 13-cis- retinóico), ácido 11-cis-retinóico (incluindo derivados de ácido 11-cis- retinóico), ácido 9-cis-retinóico (incluindo derivados de ácido 9-cis- retinóico), e derivados de retinilamina. Em outras formas de realização:

(a) o agente adicional é um indutor da produção do óxido nítrico, incluindo formas de realização em que o indutor da produção do óxido nítrico é selecionado do grupo consistindo de Citrulina, ornitina, arginina-L nitrosada, arginina-L nitrosilada, N-hidróxi-arginina-L nitrosada, arginina-L nitrosilada N-hidróxi-arginina-L nitrosada, L-homoarginina nitrosada e L-homoarginina nitrosilada;

(b) o agente adicional é agente anti-inflamatório, incluindo formas de realização em que o agente anti-inflamatório é selecionado do grupo consistindo de uma droga anti-inflamatória não-esteróide, um inibidor da lipoxigenase, prednisona, dexametasona e um inibidor da ciclooxigenase;

(c) o agente adicional é pelo menos um antioxidante fisiologicamente aceitável, incluindo formas de realização em que o antioxidante fisiologicamente aceitável é selecionado do grupo consistindo de Vitamina C, Vitamina E, beta-caroteno, Coenzima Q, e 4-hidróxi-2,2,6,6- tetrametilpiperadino-N-oxila, ou formas de realização em que (i) o pelo menos um antioxidante fisiologicamente aceitável é administrado com o agente que modula a ligação de RBP à TTR em dito mamífero, ou (ii) pelo menos dois antioxidantes fisiologicamente aceitáveis sao administrados com o agente que modula a ligação de RBP à TTR em dito mamífero;

(d) o agente adicional é pelo menos um mineral fisiologicamente aceitável, incluindo formas de realização em que o mineral fisiologicamente aceitável é selecionado do grupo consistindo de um composto de zinco (II), um composto de Cu(II), e um composto de selênio (II), ou outras formas de realização compreendendo administrar ao mamífero pelo menos um antioxidante fisiologicamente aceitável;

(e) o agente adicional é fosfolipídeo negativamente carregado, incluindo formas de realização em que o fosfolipídeo negativamente carregado é fosfatidilglicerol;

(f) o agente adicional é um carotenóide, incluindo formas de realização em que o carotenóide é selecionado do grupo consistindo de luteína e zeaxantina

(g) o agente adicional é uma estatina, incluindo formas de realização em que a estatina é selecionada do grupo consistindo de rosuvastatina, pitivastatina, sinvastatina, pravastatina, cerivastatina, mevastatina, velostatina, fluvastatina, compactina, lovastatina, dalvastatina, fluindostatina, atorvastatina, atorvastatina cálcio, e diidrocompactina

(h) o agente adicional é uma droga anti-angiogênica, incluindo formas de realização em que a droga anti-angiogênico é Rhufab V2, Triptofanil-tRNA sintetase, um aptâmero peguilado Anti-VEGF, Esqualamina, acetato de anecortave, Pró-droga Combretastatina A4, Macugen™, mifepristona, subtenon triancinolono acetonida, triancinolona cristalina intravitreal, acetonida, AG3340, fluocinolono acetonida, e VEGF- Trap;

(i) o agente adicional é um inibidor da matriz metaloproteinase, incluindo formas de realização em que o inibidor da matriz metaloproteinase é um inibidor de tecido das metaloproteinases, α2- macroglobulina, uma tetraciclina, um hidroxamato, um quelador, um fragmento MMP sintético, uma succinil mercaptopurina, um fosfonamidato e um ácido hidroxamínico;

(j) o agente adicional é um inibidor complementar, incluindo, como exemplo somente, anticorpos contra Cl, C2, C3, C4, C5, C6, C7, C8, e C9, tais como aqueles descritos nas Patentes U.S. Nos. 5.635.178; 5.843.884; 5.847.082; 5,853,722; e em Rollins et al; Transplantation, 60:1284-1292 (1995) (cujos conteúdos são incorporados aqui por referência);

(k) o agente adicional é um óleo de peixe, incluindo, como exemplo somente, ácidos graxos omega 3;

(1) o agente adicional é ácido 13-cis-retinóico (incluindo derivados do ácido 13-cis-retinóico), ácido 11 -cis-retinóico (incluindo derivados de ácido 11-cis-retinóico), ou ácido 9-cis-retinóico (incluindo derivados de ácido 9-cis-retinóico);

(m) o agente adicional é um derivado da retinilamina, incluindo um derivado trans-retinilamina, um derivado 13-cis-retinilamina, um derivado 11 -cis-retinilamina ou um derivado 9-cis-retinilamina;

(η) o agente adicional é administrado (i) antes da administração do agente que modula a ligação de RBP à TTR em dito mamífero, (ii) subseqüente à administração do agente que modula a ligação de RBP à TTR em dito mamífero, (iii) simultaneamente com a administração do agente que modula a ligação de RBP à TTR em dito mamífero, ou (iv) tanto antes como subseqüente à administração do agente que modula a ligação de RBP a TTR em dito mamífero; ou

(o) o agente adicional e agente que modula a ligação de RBP à TTR em dito mamífero, são administrados na mesma composição farmacêutica.

Em outras formas de realização há métodos compreendendo administrar reoferese extracorporeal ao mamífero. Em outras formas de realização estão métodos compreendendo administrar ao mamífero uma terapia selecionada do grupo consistindo da translocação retinal limitada, terapia fotodinâmica, cirurgia com laser de gânglio, cirurgia de buraco macular, cirurgia de translocação macular, Movimento-Fi, Terapia de Feixe Protonico, Separação Retinal e Cirurgia Vítrea, Curvatura Escleral, Cirurgia Submacular5 Termoterapia Transpupilar, Terapia Fotossistema I, Estimulação de MicroCorrente, agentes anti-inflamatórios, interferência RNA, administração de medicações de olho, tais como iodeto de fosfolina ou ecotiofato ou inibidores da anidrase carbônica, implantação de microchip, terapia de célula tronco, terapia de substituição genética, terapia de gene de ribozima, transplante de células fotorreceptoras/retinais e acupuntura.

Em outras formas de realização há métodos compreendendo o uso de fotocoagulação a laser, para remover gânglios dos olhos do mamífero.

Em outras formas de realização há métodos compreendendo administrar ao mamífero pelo menos uma vez uma quantidade eficaz de um segundo agente que modula a ligação RBP a TTR em dito mamífero, em que o primeiro composto e diferente do segundo composto.

Em outras formas de realização, um aparelho capaz de detectar e/ou quantificar a formação do complexo retinol-RBP-TTR é provida, em que pelo menos uma parte da TTR é fluorescentemente rotulada.

Em uma forma de realização, o derivado de retinila é N-(4- hidroxifenil)retinamida (também referida aqui como "HPR" ou "fenretinida" ou n4-hidroxifenilretinamida" ou "hidroxifenil retinamida"), N-(4- metoxifenil)retinamida ("MPR"; o metabólito de HPR mais predominante), ou etilretinamida. Em outra forma de realização, o hidrocarboneto aromático poli-halogenado é um metabólito hidrocarbonado aromático poli-halogenado hidroxilado. O metabólito hidrocarbonado aromático poli-halogenado hidroxilado pode ser um metabólito de bifenila policlorada hidroxilada. Em ainda outra forma de realização, o análogo do diclofenaco dos métodos e composições aqui descritos pode ser escolhido do grupo consistindo de: ácido 2-[(2,6-diclorofenil)amino]benzóico; ácido 2-[(3,5-diclorofenil)amino] benzóico; ácido 3,5,-dicloro-4-[(4-nitrofenil)amino]benzóico; ácido 2-[(3,5- diclorofenil)amino]benzeno acético e ácido 2-[(2,6-dicloro-4-carboxílico- ácido fenil)amino]benzeno acético.

Em outras formas de realização, o agente anti-inflamatório não-esteróide dos métodos e composições aqui descritos pode ser ácido flufenâmico, diflunisal, um análogo de diflunisal, ácido diclofenâmico, indometacina, ácido niflúmico ou sulindac. Em uma forma de realização, o análogo de diflunisal pode ser 3',5'-difluorobifenil-3-ol; ácido 2',4- difiurobifenil-3-carboxílico; ácido 2,,4'-difluorobifenil-4-carboxílico; ácido T- fiuorobifenil-3-carboxílico; ácido 2'-fluorobifenil-4-carboxílico; ácido 3,5- difluorobifenil-3-carboxílico; ácido 3',5!-difluorobifenil-4-carboxílico; 2',6'- difluorobifenil-3-carboxílico; ácido 2,6,-difluorobifenil-4-carboxílico; ácido bifenil-4-carboxílico; ácido 4'-fluoro-4-hidroxibifenil-3-carboxílico; ácido 2- fluoro-4-hidroxibifenil-3-carboxílico; ácido 3,,5,-difluoro-4-hidroxibifenil-3- carboxílico; ácido 2,,4'-dicloro-4-hidroxibifenil-3-carboxílico; ácido 4- hidroxibifenil-3-carboxílico; ácido 3'5'-difluoro-4'hidroxibifenil-3- carboxílico; ácido 3',5'-difluoro-4,hidroxibifenil-4-carboxílico; ácido 3,,5'- dicloro-4'-hidroxibifenil-3-carboxílico; ácido 3,,5,-dicloro-4'-hidroxibifenil-4- carboxílico; 3',5'-dicloro-3 -formilbifenila; 3',5'-dicloro-2-formilbifenila; ácido 2,,4'-diclorobifenil-3-carboxílico; ácido 2',4'-diclorobifenil-4- carboxílico; ácido 3',5'-diclorobifenil-3-il-metanol; 3,,5'-diclorobifenil-4-il- metanol; ou 3,,5'-diclorobifenil-2-il-metanol.

Em outras formas de realização, o flavonóide dos métodos e composições aqui descritos pode ser 3-metil-4',6-düdróxi-3,,5'- dibromoflavona ou 3,,5,-dibromo-2!s4,4,,6-tetraidroxiaurona. Em ainda outra forma de realização, o agente cardíaco dos métodos e composições aqui descritos é milrinona.

Em outra forma de realização, a molécula pequena dos métodos e composições aqui descritos é ácido N-fenilantranílico, vermelho de metila, laranja mordente I, bisarilamina, ácido N-benzil-p-aminobenzóico, furosamida, apigenina, resveratrol, biarilamina ou dibenzofurano. Em uma forma de realização, o análogo do hormônio da tiróide pode ser ácido tiroxino-propiônico, ácido tiroxino-acético, ou SKF94901.

Os métodos e composições aqui descritos também fornecem níveis ou atividade de modulação RBP ou TTR em um mamífero, compreendendo administrar ao mamífero pelo menos uma vez uma quantidade eficaz de um agente que aumente a taxa de depuração de RBP ou TTR em dito mamífero, em que dita modulação de níveis ou atividade de RBP ou TTR reduz a formação de trans-retinal no olho de um mamífero. Em uma forma de realização, o agente pode ser escolhido do grupo consistindo de: derivado de retinila, um hidrocarbonetos aromático poli-haloganado, um agonista de hormônio da tiróide, um antagonista do hormônio da tiróide, diclofenaco, um análogo do diclofenaco, um composto de molécula pequena, um análogo do hormônio endócrino, um flavonóide, uma droga anti- inflamatória não-esteróide, um inibidor bivalente, um agente cardíaco, um peptidomimético, um aptâmero e um anticorpo.

Em uma forma de realização, o derivado de retinila é um composto tendo a estrutura:

<formula>formula see original document page 14</formula>

em que X é selecionado do grupo consistindo de NR², O, S, CHR2; R1 é (CHR2)x -Li-R3, em que χ é 0, 1, 2, ou 3; L1 é uma ligação simples ou -C(O)-; R2 é uma porção selecionada do grupo consistindo de H, (C1- C4)alquila, F, (C1-4)alcóxi (C1-C4)Auoroalquilas (QA)alcóxi, -C(O)OH, - C(O)-NH2, -(C1-C4) alquilamina, -C(0)-(C1-C4)alquila5 -C(O)-(C1-C4) fLuoralquila, -C(0)-(C1-C4)alquilamina, e -C(0)-(C1-C4)alcóxi; e R3 é H ou um porção, opcionalmente substituído por 1-3 substituintes independentemente selecionados, selecionados do grupo consistindo de (C2-C7)alquenila, (C2- C7)alquinila, arila, (C3A)Cicloalquilas (C5-C7)Cicloalquenila, e um heterociclo; ou um metabólito ativo, ou uma pró-droga ou um solvato farmaceuticamente aceitável do mesmo.

<formula>formula see original document page 15</formula>

em que X é selecionado do grupo consistindo de NR², O, S,

CHR2; R1 é (CHR2)x-Ll-R3s em que χ é O, 1, 2, ou 3; L1 é uma ligação simples ou -C(O)-; R é uma porção selecionada do grupo consistindo de H, (C1-C4)alquila, F, (C1Afiuoroalquila, (C1-C4)alcóxi, -C(O)OH, -C(O)-NH2s -(C1- 4) alquilamina, -C(0)-(C1-C4)alquila, -C(0)-(C1-C4)fluoroalquila, -C(0)-(Cr C4)alquilamina, e -C(0)-(C1-C4)alcóxi; e R3 é H ou um porção, opcionalmente substituído por 1-3 substituintes independentemente selecionados, selecionados do grupo consistindo de (C2-C7)alquenila, (C2- C7)alquinila, arila, (C3-C7)cicloalquila, (C5-C7)cicloalquenila, e um heterociclo; ou um metabólito ativo, ou uma pró-droga ou um solvato farmaceuticamente aceitável do mesmo.

Em outras formas de realização (a) X é NR², em que R² é H ou (C1-C4)alquila; (b) χ é 0; (c) χ é 1 e L1 é-C(O)-; (d) R3 é uma arila opcionalmente substituída; (e) R é uma heteroarila opcionalmente substituída; (f) X1 é NH e R3 é arila opcionalmente substituída, incluindo, contudo, outras formas de realização em que (i) o grupo arila tem um substituinte, (ii) o gmpo arila tem um substituinte selecionado do grupo consistindo de halogênio, OH5 0(C1-C4)alquila, NH(C1-C4)alquila, 0(C1- C4)fluoroalquila, e N[(C1-C4) alquil]2, (iii) o grupo arila tem um substituinte, que é OH, (v) a arila é uma fenila, ou (vi) a arila é naftila; (g) o composto é

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ou um metabólito ativo, ou uma sua pró-droga ou solvato farmaceuticamente aceitável; (h) o composto é 4-hidroxifenilretinamida, ou um metabólito, ou uma sua pró-droga ou solvato farmaceuticamente aceitável; (i) o composto é 4-metoxifenilretinamida, ou (j) 4-oxo fenretinida, ou um metabólito, ou uma sua pró-droga ou solvato farmaceuticamente aceitável.

Em outras formas de realização, a administração de um composto de Fórmula (II) é usada para tratar condições oftálmicas, baixando os níveis de retinol soro no corpo de um paciente. Em outras formas de realização (a) a quantidade eficaz do composto é sistemicamente administrada ao mamífero; (b) a quantidade eficaz do composto é administrada oralmente ao mamífero; (c) a quantidade eficaz do composto é intravenosamente administrada ao mamífero; (d) a quantidade eficaz do composto é oftalmicamente administrada ao mamífero; (e) a quantidade eficaz do composto é administrada por iontoforese; ou (f) a quantidade eficaz do composto é administrada por injeção ao mamífero.

Em outras formas de realização o mamífero é um humano, incluindo formas de realização em que (a) o humano é um veículo do gene ABCA4 mutante para Doença de Stargardt ou o humano tem um gene ELOV4 mutante para Doença de Stargardt, ou tem uma variação genética no fator complementar H associado com degeneração macular relacionada com a idade, ou (b) o humano tem uma condição ou traço oftálmico selecionado do grupo consistindo de Doença de Stargardt, retinite pigmentosa recessiva, atrofia geográfica (dos quais escotoma é um exemplo não-limitativo), degeneração fotorreceptora, AMD forma seca, distrofia de bastonete cônico recessivo, degeneração macular relacionada com a idade exsudativa (ou forma úmida), distrofia de bastonete cônico e retinite pigmentosa. Em outras formas de realização o mamífero é um modelo animal para degeneração retinal.

Em outras formas de realização, há métodos compreendendo múltiplas administrações da quantidade eficaz do agente que aumenta a taxa de depuração de RBP ou TTR em dito animal, incluindo outras formas de realização em que (i) o tempo entre múltiplas administrações é pelo menos uma semana; (ii) o tempo entre múltiplas administrações é pelo menos um dia; e (iii) o composto é administrado ao mamífero em um base diária; ou (iv) o composto é administrado ao mamífero cada 12 horas. Em outras formas ou alternativas de realização, o método compreende um descanso de droga, em que administração do composto é temporariamente suspensa ou a dose do composto sendo administrado é temporariamente reduzida; no fim do descanso de droga, a dosagem do composto é retomada. A extensão do descanso de droga pode variar de 2 dias a 1 ano.

Em outras formas de realização há métodos compreendendo administrar pelo menos um agente adicional selecionado do grupo consistindo de um indutor da produção do óxido nítrico, agente anti-inflamatório, um antioxidante fisiologicamente aceitável, um mineral fisiologicamente aceitável, fosfolipídeo negativamente carregado, um carotenóide, uma estatina, uma droga anti-angiogênica, um inibidor da matriz metaloproteinase, ácido 13-Cis-retinóico (incluindo derivados de ácido 11-cis-retinóico), ácido 9-cis-retinóico (incluindo derivados de ácido 9-cis-retinóico), e derivados de retinilamina. Em outras formas de realização:

(a) o agente adicional é um indutor da produção do óxido nítrico, incluindo formas de realização em que o indutor da produção do óxido nítrico é selecionado do grupo consistindo de citrullina, ornitina, arginina-L nitrosada, arginina-L nitrosilada, N-hidróxi-arginina-L nitrosada, N-hidróxi-arginina-L nitrosilada, L-homoarginina nitrosada e L-homoarginine nitrosilada;

(b) o agente adicional é agente anti-inflamatório, incluindo formas de realização em que o agente anti-inflamatório é selecionado do grupo consistindo de uma droga anti-inflamatória não-esteróide, um inibidor da lipoxigenase, prednisona, dexametasona, e um inibidor da ciclooxigenase;

(c) o agente adicional é pelo menos um antioxidante fisiologicamente aceitável, incluindo formas de realização em que o antioxidante fisiologicamente aceitável é selecionado do grupo consistindo de Vitamina C, Vitamina Es beta-caroteno, Coenzima Q, e 4-hidróxi-2,2,6,6- tetrametilpiperadino-N-oxila, ou formas de realização em que (i) o pelo menos um antioxidante fisiologicamente aceitável é administrado com o agente que aumenta a taxa de depuração de RBP ou TTR em dito mamífero, ou (ii) pelo menos dois antioxidantes fisiologicamente aceitáveis são administrados com o agente que aumenta a taxa de depuração de RBP ou TTR em dito mamífero;

(d) o agente adicional é pelo menos um mineral fisiologicamente aceitável, incluindo formas de realização em que o mineral fisiologicamente aceitável é selecionado do grupo consistindo de um composto de zinco (II), um composto de Cu(II), e um composto de selênio (II), ou formas de realização compreendendo ainda administrar ao mamífero pelo menos um antioxidante fisiologicamente aceitável; (e) o agente adicional é fosfolipídeo negativamente carregado, incluindo formas de realização em que o fosfolipídeo negativamente carregado é fosfatidilglicerol;

(f) o agente adicional é um carotenóide, incluindo formas de realização em que o carotenóide é selecionado do grupo consistindo de luteína e zeaxantina; (g) o agente adicional é uma estatina, incluindo formas de realização em que a estatina é selecionada do grupo consistindo de rosuvastatina, pitivastatina, sinvastatina, pravastatina, cerivastatina, mevastatina, velostatina, fluvastatina, compactina, lovastatina, dalvastatina, fluindostatina, atorvastatina, atorvastatina cálcio, e diidrocompactina;

(h) o agente adicional é uma droga anti-angiogênica, incluindo formas de realização em que a droga anti-angiogênico é Rhufab V2, Triptofanil-tRNA sintetase, um aptâmero peguilado Anti-VEGF, Esqualamina, acetato de anecortave, Combretastatina A4 Pró-droga, Macugen™, mifepristona, subtenon triancinolon acetonida, triancinolon acetonida cristalino intravitreal, AG3340, fluocinolono acetonida, e VEGF- Trap;

(i) o agente adicional é um inibidor da matriz metaloproteinase, incluindo formas de realização em que o inibidor da matriz metaloproteinase é um inibidor de tecido das metaloproteinases, a?- macroglobulina, a tetraciclina, um hidroxamato, um quelador, um fragmento MMP sintético, uma succinil mercaptopurina, um fosfonamidato e um ácido hidroxamínico;

(j) o agente adicional é um inibidor complementar, incluindo, somente como exemplo, anticorpos contra Cl, C2, C3, C4, C5, C6, C7, C8, e C9, tais como aqueles descritos nas Patentes U.S. Nos. 5.635.178; 5.843.884; 5.847.082; 5.853.722; e em Rollins et al.; Transplantation, 60:1284-1292 (1995) (o conteúdo de todos sendo incorporado aqui por referência);

(k) o agente adicional é um óleo de peixe, incluindo, somente como exemplo, ácidos graxos omega 3;

(1) o agente adicional é ácido 13-cis-retinóico (incluindo derivados de ácido 13 -cis-retinóico), ácido 11 -cis-retinóico (incluindo derivados de ácido 11-cis-retinóico), ou ácido 9-cis-retinóico (incluindo derivados de ácido 9-cis-retinóico); (m) o agente adicional é um derivado da retini lamina, incluindo um derivado trans-retilamina, um derivado 13-cis-retinalmina, um derivado 11-cis-retinilamina ou um derivado 9-cis-retinilamina;

(η) o agente adicional é administrado (i) antes da administração do agente que aumenta a taxa de depuração de RBP ou TTR em dito mamífero, (ii) subseqüente à administração do agente que aumenta a taxa de depuração de RBP ou TTR em dito mamífero, (iii) simultaneamente com a administração do agente que aumenta a taxa de depuração de RBP ou TTR em dito mamífero, ou (iv) tanto antes como subseqüente à administração do agente que aumenta a taxa de depuração de RBP ou TTR em dito mamífero; ou

(o) o agente adicional e agente que aumenta a taxa de depuração de RBP ou TTR em dito mamífero são administrados na mesma composição farmacêutica.

Em outras formas de realização há métodos compreendendo administrar reoferese extracorporeal ao mamífero. Em outras formas de realização há métodos compreendendo administrar ao mamífero uma terapia selecionada do grupo consistindo de translocação retinal limitada, terapia fotodinâmica, cirurgia com laser de gânglios, cirurgia de buraco macular, cirurgia de translocação macular, Movimento-Fin, terapia de feixe protônico, Separação Retinal e Cirurgia Vítrea, Curvatura Escleral, Cirurgia Submacular, Termoterapia Transpupilar, Terapia Fotossistema I, Estimulação de MicroCorrente, agentes anti-inflamatórios, interferência RNA, administração de medicações de olho, tais como iodeto de fosfolina ou ecotiofato ou inibidores da anidrase carbônica, implantação de microchip, terapia de célula tronco, terapia de substituição genética, terapia de gene de ribozima, transplante de células fotorreceptoras/retinais e acupuntura.

Em outras formas de realização há métodos compreendendo o uso de fotocoagulação a laser para remover gânglios do olho de um mamífero. Em outras formas de realização há métodos compreendendo administrar ao mamífero pelo menos uma fez um quantidade eficaz de um segundo agente que aumenta a taxa de depuração de RBP ou TTR em dito mamífero, em que o primeiro composto e diferente do segundo composto.

Em outras formas de realização, é provido um aparelho capaz de detectar e ou quantificar a formação de complexo de retinol-RBP-TTR em que pelo menos uma parte da TTR é fluorescentemente rotulada.

Em uma forma de realização, o derivado de retinila é N-(4- hidroxifenil)retinamida (também referida aqui como "HPRn ou "fenretinida" ou "4-hidroxifenilretinamida" ou "hidroxifenil retinamida"), N-(4- metoxifenil)retinamida ("MPR"; o metabólito mais domimante de HPR), ou etilretinamida. Em outra forma de realização, o hidrocarboneto aromático poli-halogenado é um metabólito hidrocarbonado aromático poli-halogenado hidroxilado. O metabólito hidrocarbonado aromático poli-halogenado hidroxilado pode ser um metabólito de bifenila policlorado hidroxilado.

Os métodos e composições aqui descritos também provêem níveis ou atividade de RBP ou TTR modulantes em um mamífero, compreendendo administrar ao mamífero pelo menos um vez uma quantidade eficaz de um Inibidor da transcrição de RBP ou TTR, em que dita modulção de níveis ou atividade de RBP ou TTR reduz a formação de N-retinilideno-N- retiniletanolamina no olho de um mamífero. Em algumas formas de realização, o agente pode ser escolhido do grupo consistindo de: agonistas RXR/RAR, antagonistas RXR/RAR, agonistas de estrogênio, antagonistas de estrogênio, agonistas de testosterona, antagonistas de testosterona, agonistas de progesterona, antagonistas de progesterona, agonistas da dexametasona, antagonistas da dexametasona, oligonucleotídeos antissentido, siRNA, antagonistas de proteína de ligação de ácido graxo, agonistas de C/EBP, antagonistas de C/EBP, agonistas de HNF-1, antagonistas de HNF-1, agonistas de HNF-3, antagonistas de HNF-3, agonistas de HNF-4, antagonistas de HNF-4, agonistas de HNF-6, antagonistas de HNF-6, aptâmeros, proteínas de ligação de Zn em dedo, ribozimas e anticorpos monoclonais.

Em ainda outra forma de realização, os métodos e composições descritos aqui provêem modulação dos níveis ou atividade de RBP ou TTR em um mamífero, compreendendo administrar ao mamífero pelo menos um vez uma quantidade eficaz de um inibidor da translação de RBP ou TTR, em que dita modulação de níveis ou atividade de RBP ou TTR reduz a formação de N-retinilideno-N-retiniletanolamina no olho de um mamífero. Em algumas formas de realização, o agente pode ser escolhido do grupo consistindo de: agonistas RXR/RAR, antagonistas RXR/RAR, agonistas de estrogênio, antagonistas de estrogênio, agonistas de testosterona, antagonistas de testosterona, agonistas de progesterona, antagonistas de progesterona, agonistas da dexametasona, antagonistas da dexametasona, oligonucleotídeos antissentido, siRNA, antagonistas de proteína de ligação de ácido graxo, agonistas de C/EBP, antagonistas de C/EBP, agonistas de HNF- 1, antagonistas de HNF-1, agonistas de HNF-3, antagonistas de HNF-3, agonistas de HNF-4, antagonistas de HNF-4, agonistas de HNF-6, antagonistas de HNF-6, aptâmeros, ribozimas e anticorpos monoclonais.

Em uma forma de realização, os métodos e composições aqui descritos provêem modulação dos níveis ou atividade de RBP ou TTR em um mamífero, compreendendo administrar ao mamífero pelo menos um vez uma quantidade eficaz de um agente que module a ligação de RBP à TTR em dito mamífero, em que dita modulação de níveis ou atividade de RBP ou TTR reduz a formação de N-retinilideno-N-retiniletanolamina no olho de um mamífero. O agente de modulação pode ligar-se a RBP ou TTR a fim de inibir a ligação de RBP a TTR em um mamífero. O agente de modulação pode também antagonizar a ligação de retinol em RBP, a fim de inibir a ligação de RBP ou do Complexo RBP-agente à TTR. The agente pode ser escolhido do grupo consistindo de um derivado de retinila, agonista de hormônio da tiróide, um antagonista do hormônio da tiróide, diclofenaco, um análogo do diclofenaco, um composto de molécula pequena, um análogo do hormônio endócrino, um flavonóide, uma droga anti-inflamatória não- esteróide, um inibidor bivalente, um agente cardíaco, um peptidomimético, um aptâmero e um anticorpo.

Em ainda outra forma de realização, os métodos e composições aqui descritos provêem modulação dos níveis ou atividade de RBP ou TTR em um mamífero, compreendendo administrar ao mamífero pelo menos um vez uma quantidade eficaz de um agente que aumenta a taxa de depuração de RBP ou TTR em dito mamífero, em que dita modulação de níveis ou atividade de RBP ou TTR reduz a formação de N-retinilideno-N- retiniletanolamina no olho de um mamífero. Em algumas formas de realização, o agente pode ser escolhido do grupo consistindo de um derivado de retinila, agonista de hormônio da tiróide, um antagonista do hormônio da tiróide, diclofenaco, um análogo do diclofenaco, um composto de molécula pequena, um análogo do hormônio endócrino, um flavonóide, uma droga anti- inflamatória não-esteróide, um inibidor bivalente, um agente cardíaco, um peptidomimético, um aptâmero e um anticorpo.

Em uma forma de realização, os métodos e composições aqui descritos provêem modulação dos níveis ou atividade de RBP ou TTR em um mamífero, compreendendo administrar ao mamífero pelo menos um vez uma quantidade eficaz de um Inibidor da transcrição de RBP ou TTR, em que dita modulação de níveis ou atividade de RBP ou TTR reduz a formação de lipofuscina no olho de um mamífero. O agente pode ser escolhido do grupo consistindo de agonistas RXR/RAR, antagonistas RXR/RAR, agonistas de estrogênio, antagonistas de estrogênio, agonistas de testosterona, antagonistas de testosterona, agonistas de progesterona, antagonistas de progesterona, agonistas da dexametasona, antagonistas da dexametasona, oligonucleotídeos antissentido, siRNA, antagonistas de proteína de ligação de ácido graxo, agonistas de C/EBP, antagonistas de C/EBP, agonistas de HNF-1, antagonistas de HNF-1, agonistas de HNF-3, antagonistas de HNF-3, agonistas de HNF-4, antagonistas de HNF-4, agonistas de HNF-6, antagonistas de HNF-6, aptâmeros, proteínas de ligação de Zn em dedo, ribozimas e anticorpos monoclonais.

Em ainda outra forma de realização, os métodos e composições aqui descritos provêem modulação dos níveis ou atividade de RBP ou TTR em um mamífero, compreendendo administrar ao mamífero pelo menos um vez uma quantidade eficaz de um inibidor de translação de RBP ou TTR, em que dita modulação de ditos níveis ou atividade de BP ou TTR reduz a formação de lipofuscina no olho de um mamífero. Em algumas formas de realização, o agente pode ser escolhido do grupo consistindo agonistas RXR/RAR, antagonistas RXR/RAR, agonistas de estrogênio, antagonistas de estrogênio, agonistas de testosterona, antagonistas de testosterona, agonistas de progesterona, antagonistas de progesterona, agonistas da dexametasona, antagonistas da dexametasona, oligonucleotídeos antissentido, siRNA, antagonistas de proteína de ligação de ácido graxo, agonistas de C/EBP, antagonistas de C/EBP, agonistas de HNF-1, antagonistas de HNF-1, agonistas de HNF-3, antagonistas de HNF-3, agonistas de HNF-4, antagonistas de HNF-4, agonistas de HNF-6, antagonistas de HNF-6, aptâmeros, ribozimas e anticorpos monoclonais.

Em outras formas de realização, os métodos e composições aqui descritos provêem modulação dos níveis ou atividade de RBP ou TTR em um mamífero compreendendo, administrar ao mamífero pelo menos um vez uma quantidade eficaz de um agente que modula a ligação de RBP à TTR em dito mamífero, em que dita modulação de níveis ou atividade de RBP ou TTR reduz a formação de lipofuscina no olho de um mamífero. O agente de modulação pode ligar-se a RBP ou TTR a fim de inibir a ligação de RBP à TTR em um mamífero. O agente de modulação pode também antagonizar a ligação de retinol a RBP, a fim de inibir a ligação de RBP ou o Complexo RBP-agente à TTR. Em uma forma de realização, o agente pode ser escolhido do grupo consistindo de um derivado de retinila, agonista de hormônio da tireóide, um antagonista do hormônio da tiróide, diclofenaco, um análogo do diclofenaco, um composto de molécula pequena, um análogo do hormônio endócrino, um flavonóide, uma droga anti-inflamatória não-esteróide, um inibidor bivalente, um agente cardíaco, um peptidomimético, um aptâmero e um anticorpo.

Em ainda outra forma de realização, os métodos e composições aqui descritos provêem modulação dos níveis ou atividade de RBP ou TTR em um mamífero compreendendo administrar ao mamífero pelo menos um vez uma quantidade eficaz de um agente que aumenta a taxa de depuração de RBP ou TTR em dito mamífero, em que dita modulação de níveis ou atividade de RBP ou TTR reduz a formação de lipofuscina no olho de um mamífero. O agente pode ser escolhido do grupo consistindo de um derivado de retinila, agonista de hormônio da tiróide, um antagonista do hormônio da tiróide, diclofenaco, um análogo do diclofenaco, um composto de molécula pequena, um análogo do hormônio endócrino, um flavonóide, uma droga anti-inflamatória não-esteróide, um inibidor bivalente, um agente cardíaco, um peptidomimético, um aptâmero e um anticorpo.

Em uma forma de realização, os métodos e composições aqui descritos provêem modulação dos níveis ou atividade de RBP ou TTR em um mamífero compreendendo administrar ao mamífero pelo menos um vez uma quantidade eficaz de um Inibidor da transcrição de RBP ou TTR, em que dita modulação de níveis ou atividade de RBP ou TTR reduz a formação de gânglios no olho de um mamífero. Em algumas formas de realização, o agente pode ser escolhido do grupo consistindo de agonistas RXR/RAR, antagonistas RXR/RAR, agonistas de estrogênio, antagonistas de estrogênio, agonistas de testosterona, antagonistas de testosterona, agonistas de progesterona, antagonistas de progesterona, agonistas da dexametasona, antagonistas da dexametasona, oligonucleotídeos antissentido, siRNA, antagonistas de proteína de ligação de ácido graxo, agonistas de C/EBP, antagonistas de C/EBP, agonistas de HNF-1, antagonistas de HNF-1, agonistas de HNF-3, antagonistas de HNF-3, agonistas de HNF-4, antagonistas de HNF-4, agonistas de HNF-6, antagonistas de HNF-6, aptâmeros, proteínas de ligação de Zn em dedo, ribozimas e anticorpos monoclonais.

Em ainda outra forma de realização, os métodos e composições aqui descritos para modulação dos níveis ou atividade de RBP ou TTR em um mamífero, compreendendo administrar ao mamífero pelo menos um vez uma quantidade eficaz de um Inibidor de translação de RBP ou TTR, em que dita modulação de níveis ou atividade de RBP ou TTR reduz a formação de gânglios no olho de um mamífero. Em algumas formas de realização, o agente pode ser escolhido do grupo consistindo de agonistas RXR/RAR, antagonistas RXR/RAR, agonistas de estrogênio, antagonistas de estrogênio, agonistas de testosterona, antagonistas de testosterona, agonistas de progesterona, antagonistas de progesterona, agonistas da dexametasona, antagonistas da dexametasona, oligonucleotídeos antissentido, siRNA, antagonistas de proteína de ligação de ácido graxo, agonistas de C/EBP, antagonistas de C/EBP, agonistas de HNF-1, antagonistas de HNF-1, agonistas de HNF-3, antagonistas de HNF-3, agonistas de HNF-4, antagonistas de HNF-4, agonistas de HNF-6, antagonistas de HNF-6, aptâmeros, ribozimas e anticorpos monoclonais.

Em uma forma de realização, os métodos e composições aqui descritos provêem modulação dos níveis ou atividade de RBP ou TTR em um mamífero compreendendo administrar ao mamífero pelo menos um vez uma quantidade eficaz de um agente que modula a ligação de RBP à TTR em dito mamífero, em que dita modulação de níveis ou atividade de RBP ou TTR reduz a formação de gânglios no olho de um mamífero. O agente de modulação pode ligar-se a RBP ou TTR a fim de inibir a ligação de RBP à TTR em um mamífero. O agente de modulação pode também antagonizar a ligação de retinol a RBP a fim de inibir a ligação de RBP ou o complexo RBP-agente à TTR. O agente pode ser escolhido do grupo consistindo de um derivado de retinila, um agonista do hormônio da tiróide, um antagonista do hormônio da tiróide, diclofenaco, um análogo de diclofenaco, um composto de molécula pequena, um análogo do hormônio endócrino, um flavonóide, uma droga anti-inflamatória, um inibidor bivalente, um agente cardíaco, um peptidomimético, um aptâmero e um anticorpo.

Em outra forma de realização, os métodos e composições aqui descritos provêem modulação dos níveis ou atividade de RBP ou TTR em um mamífero, compreendendo administrar ao mamífero pelo menos um vez uma quantidade eficaz de um agente que aumenta a taxa de depuração de RBP ou TTR em dito mamífero, em que dita modulação de níveis ou atividade de RBP ou TTR reduz a formação de gânglios no olho de um mamífero. Em algumas formas de realização, o agente pode ser escolhido do grupo consistindo de um derivado de retinila, um agonista do hormônio da tiróide, um antagonista do hormônio da tiróide, diclofenaco, um análogo de diclofenaco, um composto de molécula pequena, um análogo do hormônio endócrino, um flavonóide, uma droga anti-inflamatória não-esteróide, um inibidor bivalente, um agente cardíaco, um peptidomimético, um aptâmero e um anticorpo.

Em uma forma de realização, os métodos e composições aqui descritos provêem modulação dos níveis ou atividade de RBP ou TTR em um mamífero, compreendendo administrar ao mamífero pelo menos um vez uma quantidade eficaz de um inibidor da transcrição de RBP ou TTR, em que dita modulação de níveis ou atividade de RBP ou TTR evita degeneração macular relacionada com a idade ou distrofia no olho de um mamífero. O agente desta forma de realização pode ser escolhido de um grupo consistindo de agonistas RXR/RAR, antagonistas RXR/RAR, agonistas de estrogênio, antagonistas de estrogênio, agonistas de testosterona, antagonistas de testosterona, agonistas de progesterona, antagonistas de progesterona, agonistas da dexametasona, antagonistas da dexametasona, oligonucleotídeos antissentido, siRNA, antagonistas de proteína de ligação de ácido graxo, agonistas de C/EBP, antagonistas de C/EBP, agonistas de HNF-1, antagonistas de HNF-1, agonistas de HNF-3, antagonistas de HNF-3, agonistas de HNF-4, antagonistas de HNF-4, agonistas de HNF-6, antagonistas de HNF-6, aptâmeros, proteínas de ligação-Zn, ribozimas e anticorpos monoclonais.

Em outra forma de realização, os métodos e composições aqui descritos provêem modulação dos níveis ou atividade de RBP ou TTR em um mamífero, compreendendo administrar ao mamífero pelo menos um vez uma quantidade eficaz de um Inibidor de translação de RBP ou TTR, em que dita modulação de níveis ou atividade de RBP ou TTR evita degeneração macular relacionada com a idade ou distrofia no olho de um mamífero. Em uma forma de realização, o agente é escolhido de um grupo consistindo de Agonistas RXR/RAR, antagonistas RXR/RAR, agonistas de estrogênio, antagonistas de estrogênio, agonistas de testosterona, antagonistas de testosterona, agonistas de progesterona, antagonistas de progesterona, agonistas de dexametasona, antagonistas de dexametasona, oligonucleotídeos antissentido, siRNA, antagonistas de proteína de ligação de ácido graxo, agonistas de C/EBP, antagonistas de C/EBP, agonistas de HNF-1, antagonistas de HNF-1, agonistas de HNF-3, antagonistas de HNF-3, Agonistas de HNF-4, antagonistas de HNF-4, agonistas de HNF-6, antagonistas de HNF-6, aptâmeros, ribozimas e anticorpos monoclonais.

Em ainda outra forma de realização, os métodos e composições aqui descritos provêem modulação dos níveis ou atividade de RBP ou TTR em um mamífero, compreendendo administrar ao mamífero pelo menos um vez uma quantidade eficaz de um agente que modula a ligação de RBP à TTR em dito mamífero, em que dita modulação de níveis ou atividade de RBP ou TTR evita degeneração macular relacionada com a idade ou distrofia no olho de um mamífero. O agente de modulação pode ligar-se a RBP ou TTR a fim de inibir a ligação de RBP à TTR em um mamífero. O agente de modulação pode também antagonizar a ligação de retinol à RBP a fim de inibir a ligação de RBP ou o complexo RBP-agente à TTR. O agente pode ser escolhido do grupo consistindo de um derivado de retinila, um agonista do hormônio da tiróide, um antagonista do hormônio da tiróide, diclofenaco, um análogo do diclofenado, um composto de molécula pequena, um análogo do hormônio endócrino, um flavonóide, uma droga anti- inflamatória não-esteróide, um inibidor bi vai ente, um gente cardíaco, um peptidomimético, um aptâmero e um anticorpo.

Os métodos e composições aqui descritos também provêem níveis ou atividade de RBP ou TTR modulantes em um mamífero, compreendendo administrar ao mamífero pelo menos um vez uma quantidade eficaz de um agente que aumenta a taxa de depuração de RBP ou TTR em dito mamífero, em que dita modulação de níveis ou atividade de RBP ou TTR evita degeneração macular relacionada com a idade ou distrofia no olho de um mamífero. Nesta forma de realização, o agente pode ser escolhido do grupo consistindo de um derivado de retinila, agonista do hormônio da tiróide, antagonista do hormônio da tiróide, diclofenaco, um análogo de diclofenaco, um composto de molécula pequena, um análogo do hormônio endócrino, um flavonóide, uma droga anti-inflamatória não-esteróide, um inibidor bivalente, um agente cardíaco, um peptidomimético, um aptâmero e um anticorpo.

Em uma forma de realização, os métodos e composições aqui descritos provêem modulação dos níveis ou atividade de RBP ou TTR em um mamífero, compreendendo administrar ao mamífero pelo menos um vez uma quantidade eficaz de um inibidor da transcrição de RBP ou TTR, em que dita modulação de níveis ou atividade de RBP ou TTR protege o olho de um mamífero da luz. Em outra forma de realização, o agente é escolhido de um grupo consistindo de Agonistas RXR/RAR, antagonistas RXR/RAR, agonistas de estrogênio, antagonistas de estrogênio, agonistas de testosterona, antagonistas de testosterona, agonistas de progesterona, antagonistas de progesterona, agonistas de dexametasona, antagonistas de dexametasona, oligonucleotídeos antissentido, siRNA, antagonistas de proteína de ligação de ácido graxo, agonistas de C/EBP, antagonistas de C/EBP, agonistas de HNF- 1, antagonistas de HNF-I, agonistas de HNF-3, antagonistas de HNF-3, agonistas HNF-4, antagonistas HFN-4, agonistas HNF-6, antagonistas HNF- 6, aptâmeros, proteínas de ligação de Zn em dedo, ribozimas e anticorpos monoclonais.

Em outra forma de realização, os métodos e composições aqui descritos provêem modulação dos níveis ou atividade de RBP ou TTR em um mamífero, compreendendo administrar ao mamífero pelo menos um vez uma quantidade eficaz de um inibidor de translação de RBP ou TTRi em que dita modulação de níveis ou atividade de RBP ou TTR protege o olho de um mamífero da luz. Em algumas formas de realização, o agente pode ser escolhido do grupo consistindo de agonistas RXR/RAR, antagonistas RXR/RAR, agonistas de estrogênio, antagonistas de estrogênio, agonistas de testosterona, antagonistas de testosterona, agonistas de progesterona, antagonitas de progesterona, agonistas de dexametasona, antagonistas de dexametasona, oligonucleotídeos antissentido, siRNA, antagonistas de proteína de ligação de ácido graxo, agonistas de C/EBP, antagonistas de C/EBP, agonistas de HNF-1, antagonistas de HNF-1, agonistas de HNF-3, antagonistas de HNF-3, Agonistas de HNF-4, antagonistas de HNF-4, agonistas de HNF-6, antagonistas de HNF-6, aptâmeros, ribozimas e anticorpos monoclonais. Em ainda outra forma de realização, os métodos e composições aqui descritos provêem modulação dos níveis ou atividade de RBP ou TTR em um mamífero compreendendo administrar ao mamífero pelo menos um vez uma quantidade eficaz de um agente que modula a ligação de RBP à TTR em dito mamífero, em que dita modulação de níveis ou atividade de RBP ou TTR protege o olho de um mamífero da luz. O agente de modulação pode ligar-se a RBP ou TTR a fim de inibir a ligação de RBP à TTR em um mamífero. O agente de modulação pode também antagonizar a ligação de retinol to RBP a fim de inibir a ligação de RBP ou o complexo RBP-agente à TTR. Nesta forma de realização, o agente pode ser escolhido do grupo consistindo de um derivado de retinila, agonista do hormônio da tiróide, antagonista do hormônio da tiróide, diclofenaco, um análogo de diclofenaco, um composto de molécula pequena, um análogo do hormônio endócrino, um flavonóide, uma droga anti-inflamatória não-esteróide, um inibidor bivalente, um agente cardíaco, um peptidomimético, um aptâmero e um anticorpo.

Em outra forma de realização, os métodos e composições aqui descritos provêem modulação dos níveis ou atividade de RBP ou TTR em um mamífero compreendendo administrar ao mamífero pelo menos um vez uma quantidade eficaz de um agente que aumenta a taxa de depuração de RBP ou TTR em dito mamífero, em que dita modulação de níveis ou atividade de RBP ou TTR protege o olho de um mamífero da luz. Em algumas formas de realização, o agente é escolhido de um grupo consistindo de um derivado de retinila, um agonista do hormônio da tiróide, um antagonista do hormônio da tiróide, diclofenaco, um análogo do diclofenado, um composto de molécula pequena, um análogo do hormônio endócrino, um flavonóide, uma droga anti- inflamatória não-esteróide, um inibidor bivalente, um agente cardíaco, um peptidomimético, um aptâmero e um anticorpo.

Em uma forma de realização, os métodos e composições aqui descritos provêem a modulação dos níveis ou atividade da proteína de ligação de retinol (RBP) ou transtirretina em um mamífero, compreendendo administrar ao mamífero pelo menos um vez uma quantidade eficaz de pelo menos um dos compostos escolhidos de um grupo consistindo de um inibidor da transcrição de RBPj um inibidor da transcrição da TTR5 um inibidor da translação de RBP, um inibidor da translação de TTR5 um agente de depuração RBP5 um agente de depuração TTR, um antagonistas de RBP, um agonista RBP, um antagonista TTR e um agonista TTR.

Em algumas formas de realização, o inibidor de transcrição da RBP é escolhido de um grupo consistindo de Agonistas RXR/RAR, antagonistas RXR/RAR, agonistas de estrogênio, antagonistas de estrogênio, agonistas de testosterona, antagonistas de testosterona, agonistas de progesterona, antagonistas de progesterona, agonistas de dexametasona, antagonistas de dexametasona, oligonucleotídeos antissentido, siRNA, agonistas HNF-4, antagonistas HNF-4, aptâmeros, proteínas de ligação de Zn em dedo, ribozimas e anticorpos monoclonais. Em outras formas de realização, o inibidor de transcrição de TTR é escolhido de um grupo consistindo de antagonistas de proteína de ligação de ácido graxo, agonistas C/EBP, antagonistas C/EBP, oligonucleotídeos antissentido, siRNA, agonistas HNF-1, antagonistas HNF-1, agonistas HNF-3, antagonistas HNF- 35 agonistas HNF-4, antagonistas HFN-45 agonistas HNF-6, antagonistas HNF-6, aptâmeros, proteínas de ligação de Zn em dedo, ribozimas e anticorpos monoclonais.

Em ainda outras formas de realização, o inibidor de translação RBP é escolhido de um grupo consistindo de agonistas RXR/RAR, antagonistas RXR/RAR, agonistas de estrogênio, antagonistas de estrogênio, agonistas de testosterona, antagonistas de testosterona, agonistas de progesterona, antagonistas de progesterona, agonistas de dexametasona, antagonistas de dexametasona, oligonucleotídeos antissentido, siRNA, agonistas HNF-4, antagonistas HNF-4, aptâmeros, ribozimas e anticorpos monoclonais. Em outras formas de realização, o inibidor de translação TTR é escolhido de um grupo consistindo de antagonistas de proteína de ligação de ácido graxo, agonistas C/EBP, antagonistas C/EBP, oligonucleotídeos antissentido, siRNA, agonistas HNF-1, antagonistas HNF-1, agonistas HNF- 3, antagonistas HNF-3, Agonistas de HNF-4, antagonistas de HNF-4, agonistas de HNF-6, antagonistas de HNF-6, aptâmeros, ribozimas e anticorpos monoclonais.

Em outra forma de realização, o agente de depuração de RBP é escolhido de um grupo consistindo de: um derivado de retinila, agonista do hormônio da tiróide, antagonista do hormônio da tiróide, diclofenaco, um análogo de diclofenaco, um composto de molécula pequena, um análogo do hormônio endócrino, um flavonóide, uma droga anti-inflamatória não- esteróide, um inibidor bivalente, um agente cardíaco, um peptidomimético, um aptâmero e um anticorpo. Em ainda outra forma de realização, o agente de depuração TTR é escolhido de um grupo consistindo de: um agonista do hormônio da tiróide, antagonista do hormônio da tiróide, diclofenaco, um análogo de diclofenaco, um composto de molécula pequena, um análogo do hormônio endócrino, um flavonóide, uma droga anti-inflamatória não- esteróide, um inibidor bivalente, um agente cardíaco, um peptidomimético, um aptâmero e um anticorpo.

Em outra forma de realização, o agonista ou antagonista RBP é um derivado de retinila. Em ainda outra forma de realização, o agonista ou antagonista TTR é escolhido de um grupo consistindo de um agonista do hormônio da tiróide, um antagonista do hormônio da tiróide, diclofenaco, um análogo do diclofenado, um composto de molécula pequena, um análogo do hormônio endócrino, um flavonóide, uma droga anti-inflamatória não- esteróide, um inibidor bivalente, um agente cardíaco, um peptidomimético, um aptâmero e um anticorpo. Os métodos e composições aqui descritos também provêem o tratamento de degeneração macular relacionada com a idade ou distrofia, compreendendo administrar a um mamífero pelo menos um vez uma quantidade eficaz de um primeiro composto, em que dito primeiro composto modula níveis ou atividade de RBP ou TTR em um mamífero. Em uma forma de realização, o primeiro composto inibe a transcrição de RBP ou TTR em um mamífero. Em outra forma de realização, o primeiro composto inibe a translação de RBP ou TTR em um mamífero. Em ainda outra forma de realização, o primeiro composto aumenta a depuração de RBP ou TTR no mamífero. Em ainda outra forma de realização, o primeiro composto inibe uma ligação de RBP à TTR. Tal agente pode ligar-se a RBP ou TTR a fim de inibir a ligação de RBP à TTR em um mamífero. Além disso, tal agente pode também antagonizar a ligação de retinol a RBP, a fim de inibir a ligação de RBP ou do complexo RBP-agente à TTR.

Os métodos e composições aqui descritos também provêem a redução da formação de trans-retinal no olho de um mamífero, compreendendo administrar ao mamífero pelo menos um vez uma quantidade eficaz de um primeiro composto, em que o primeiro composto modula níveis ou atividade de RBP ou TTR em um mamífero. Em uma forma de realização, o primeiro composto inibe a transcrição de RBP ou TTR em um mamífero. Em outra forma de realização, o primeiro composto inibe a translação de RBP ou TTR em um mamífero. Em ainda outra forma de realização, o primeiro composto aumenta a depuração de RBP ou TTR no mamífero. Em ainda outra forma de realização, o primeiro composto inibe uma ligação de RBP à TTR. Tal agente pode ligar-se a RBP ou TTR a fim de inibir a ligação de RBP à TTR em um mamífero. Além disso, tal agente pode também antagonizar a ligação de retinol a RBP a fim de inibir a ligação de RBP ou o complexo RBP-agente à TTR.

Em uma forma de realização, os métodos e composições aqui descritos provêem a redução da formação de N-retinilideno-N- retiniletanolamina no olho de um mamífero, compreendendo administrar ao mamífero pelo menos um vez uma quantidade eficaz de um primeiro composto, em que dito primeiro composto modula níveis ou atividade de RBP ou TTR em um mamífero. Em uma forma de realização, o primeiro composto inibe a transcrição de RBP ou TTR em um mamífero. Em outra forma de realização, o primeiro composto inibe a translação de RBP ou TTR em um mamífero. Em ainda outra forma de realização, o primeiro composto aumenta a depuração de RBP ou TTR no mamífero. Em ainda outra forma de realização, o primeiro composto inibe uma ligação de RBP à TTR. Tal agente pode ligar-se a RBP ou TTR a fim de inibir a ligação de RBP à TTR em um mamífero. Além disso, tal agente pode também antagonizar a ligação de retinol a RBP a fim de inibir a ligação de RBP ou o complexo RBP-agente à TTR.

Em ainda outra forma de realização, os métodos e composições aqui descritos provêem a redução da formação de lipofuscina no olho de um mamífero compreendendo administrar ao mamífero pelo menos um vez uma quantidade eficaz de um primeiro composto, em que dito primeiro composto modula níveis ou atividade de RBP ou TTR em um mamífero. Em uma forma de realização, o primeiro composto inibe a transcrição de RBP ou TTR em um mamífero. Em outra forma de realização, o primeiro composto inibe a translação de RBP ou TTR em um mamífero. Em ainda outra forma de realização, o primeiro composto aumenta a depuração de RBP ou TTR no mamífero. Em ainda outra forma de realização, o primeiro composto inibe uma ligação de RBP à TTR. Tal agente pode ligar-se a RBP ou TTR a fim de inibir a ligação de RBP à TTR em um mamífero. Além disso, tal agente pode também antagonizar a ligação de retinol a RBP a fim de inibir a ligação de RBP ou o complexo RBP-agente à TTR.

Em outra forma de realização, os métodos e composições aqui descritos provêem a redução da formação de gânglios no olho de um mamífero, compreendendo administrar ao mamífero pelo menos um vez uma quantidade eficaz de um primeiro composto, em que dito primeiro composto modula níveis ou atividade de RBP ou TTR em um mamífero. Em uma forma de realização, o primeiro composto inibe a transcrição de RBP ou TTR em um mamífero. Em outra forma de realização, o primeiro composto inibe a translação de RBP ou TTR em um mamífero. Em ainda outra forma de realização, o primeiro composto aumenta a depuração de RBP ou TTR no mamífero. Em ainda outra forma de realização, o primeiro composto inibe uma ligação de RBP à TTR. Tal agente pode ligar-se a RBP ou TTR a fim de inibir a ligação de RBP à TTR em um mamífero. Além disso, tal agente pode também antagonizar a ligação de retinol a RBP a fim de inibir a ligação de RBP ou do complexo RBP-agente à TTR.

Em uma forma de realização, os métodos e composições aqui descritos provêem a proteção do olho de um mamífero da luz, compreendendo administrar ao mamífero pelo menos um vez uma quantidade eficaz de um primeiro composto, em que dito primeiro composto modula níveis ou atividade de RBP ou TTR em um mamífero. Em uma forma de realização, o primeiro composto inibe a transcrição de RBP ou TTR em um mamífero. Em outra forma de realização, o primeiro composto inibe a translação de RBP ou TTR em um mamífero. Em ainda outra forma de realização, o primeiro composto aumenta a depuração de RBP ou TTR no mamífero. Em ainda outra forma de realização, o primeiro composto inibe uma ligação de RBP à TTR. Tal agente pode ligar-se a RBP ou TTR a fim de inibir a ligação de RBP à TTR em um mamífero. Além disso, tal agente pode também antagonizar a ligação de retinol a RBP a fim de inibir a ligação de RBP ou o complexo RBP-agente à TTR.

Em outra forma de realização, os métodos e composições aqui descritos provêem o tratamento de doenças relacionadas com retinol, compreendendo administrar ao mamífero pelo menos uma vez uma quantidade eficaz de pelo menos um dos compostos escolhidos de um grupo consistindo de: um inibidor da transcrição de RBPs um inibidor da transcrição da TTR, um inibidor de translação de RBP, um inibidor de translação TTRs um agente de depuração de RBP, um agente de depuração TTR, um antagonista RBP, um agonista RBP, um antagonista TTR, um agonista TTR e um antagonista do receptor de ligação de retinol. Em uma forma de realização, o inibidor de transcrição da RBP é escolhido de um grupo consistindo de: Agonistas RXR/RAR, antagonistas RXR/RAR, agonistas de estrogênio, antagonistas de estrogênio, agonistas de testosterona, antagonistas de testosterona, agonistas de progesterona, antagonistas de progesterona, agonistas de dexametasona, antagonistas de dexametasona, oligonucleotídeos antissentido, siRNA, antagonistas de proteína de ligação de ácido graxo, agonistas de C/EBP, antagonistas de C/EBP, agonistas de HNF-I, antagonistas de HNF-I, agonistas de HNF-3, antagonistas de HNF-3, agonistas HNF-4, antagonistas HNF-4, HNF-6 agonistas, HNF-6 antagonistas, aptâmeros, proteínas de ligação de Zn em dedo, ribozimas e anticoipos monoclonais.

Em outra forma de realização, o inibidor de transcrição de TTR é escolhido de um grupo consistindo de Agonistas RXR/RAR, antagonistas RXR/RAR, agonistas de estrogênio, antagonistas de estrogênio, agonistas de testosterona, antagonistas de testosterona, agonistas de progesterona, antagonistas de progesterona, agonistas de dexametasona, antagonistas de dexametasona, oligonucleotídeos antissentido, siRNA, agonistas HNF-4, antagonistas HNF-4, aptâmeros, proteínas de ligação de Zn em dedo, ribozimas e anticorpos monoclonais. Em ainda uma outra forma de realização, o inibidor de translação RBP é escolhido de um grupo consistindo de: Agonistas RXR/RAR, antagonistas RXR/RAR, agonistas de estrogênio, antagonistas de estrogênio, agonistas de testosterona, antagonistas de testo sterona, agonistas de progesterona, antagonistas de progesterona, agonistas de dexametasona, antagonistas de dexametasona, oligonucleotídeos antissentido, siRNA, agonistas HNF-4, antagonistas HNF-4, aptâmeros, ribozimas e anticorpos monoclonais. Em ainda uma outra forma de realização, o inibidor de translação TTR é escolhido de um grupo consistindo de: oligonucleotídeos antissentido, siRNA, antagonistas de proteína de ligação de ácido graxo, agonistas C/EBP, antagonistas C/EBP, agonistas HNF-1, antagonistas HNF-1, agonistas HNF-3, antagonistas HNF-3, agonistas de HNF-4, antagonistas de HNF-4, agonistas de HNF-6, antagonistas de HNF-6, aptâmeros, ribozimas e anticorpos monoclonais.

Em uma forma de realização, o agente de depuração de RBP é escolhido de um grupo consistindo de: um derivado de retinila, um hidrocarboneto aromático poli-halogenado, agonista do hormônio da tireóide, antagonista do hormônio da tiróide, diclofenaco, um análogo de diclofenaco, um composto de molécula pequena, um análogo do hormônio endócrino, um flavonóide, uma droga anti-inflamatória não-esteróide, um inibidor bivalente, um agente cardíaco, um peptidomimético, um aptâmero e um anticorpo. Alternativamente, o derivado de retinila é N-(4-hidroxifenil)retinamida (também referido aqui como "HPR" ou "fenretinida" ou "4- hidroxifenilretinamida" ou "hidroxifenil retinamida"), N-(4- metoxifenil)retinamida ("MPR"; o metabólito mais dominante de HPR), ou etilretinamida. Em outra forma de realização, o hidrocarboneto aromático poli-halogenado pode ser um metabólito hidrocarbonado aromático poli- halogenado hidroxilado, especificamente, a metabólito de bifenila policlorado hidroxilado.

Em ainda uma outra forma de realização, o agente de depuração TTR é escolhido de um grupo consistindo de: a agonista do hormônio da tiróide, antagonista do hormônio da tiróide, diclofenaco, um análogo de diclofenaco, um composto de molécula pequena, um análogo do hormônio endócrino, um flavonóide, uma droga anti-inflamatória não- esteróide, um inibidor bivalente, um agente cardíaco, um peptidomimético, um aptâmero, um hidrocarboneto aromático poli-halogenado e um anticorpo.

Em ainda uma outra forma de realização, o agonista ou antagonista RBP pode ser um derivado de retinila, tal como N-(4- hidroxifenil)retinamida (também referido aqui como ltHPRn ou "fenretinida" ou "4-hidroxifenilretinamida" ou "hidroxifenila retinamida"), N-(4- metoxifenil)retinamida ("MPR"; o metabólito mais dominante de HPR), ou etilretinamida. Em ainda outra forma de realização, o agonista ou antagonista TTR é escolhido de um grupo consistindo de: a hidrocarboneto aromático poli-halogenado, um agonista do hormônio da tiróide, um antagonista do hormônio da tiróide, diclofenaco, um análogo do diclofenaco, um composto de molécula pequena, um análogo do hormônio endócrino, um flavonóide, uma droga anti-inflamatória não-esteróide, um inibidor bivalente, um agente cardíaco, um peptidomimético, um aptâmero, e um anticorpo. Em uma forma de realização, o composto de molécula pequena pode ser resveratrol ou biarilamina. Em ainda outra forma de realização, o antagonista do receptor da proteína de ligação de retinol pode ser um inibidor de palmitato de retinila hidrolase, mais especificamente o inibidor de palmitato de retinila hidrolase pode ser 3,4,3',4'-tetraclorobifenila.

Em ainda outra forma de realização, os métodos e composições aqui descritos provêem a administração de um segundo composto selecionado do grupo consistindo de um indutor da produção do óxido nítrico, um antioxidante, agente anti-inflamatório, um mineral, um anti- oxidante, um carotenóide, fosfolipídeo negativamente carregado e uma estatina. Em algumas formas de realização, a doença relacionada com retinol pode ser diabetes, hiperostose, hipertensão intracraniana idiopática, amiloidose, Doença de Alzheimer, e Síndrome de Alstron-Hallgren.

Os métodos e composições aqui descritos também provêem o tratamento de diabetes tipo I ou tipo II em um mamífero, compreendendo administrar ao mamífero pelo menos um vez uma quantidade eficaz de um primeiro composto, em que dito primeiro composto modula níveis ou atividade de RBP ou TTR em um mamífero. Em uma forma de realização, o primeiro composto pode modular a transcrição de RBP ou TTR em um mamífero. Em outra forma de realização, o primeiro composto pode modular a translação de RBP ou TTR em um mamífero. Em ainda outra forma de realização, o primeiro composto pode modular a depuração de RBP ou TTR no mamífero. Em ainda uma outra forma de realização, o primeiro composto pode modular a ligação de RBP à TTR. Tal agente pode ligar-se a RBP ou TTR a fim de inibir a ligação de RBP à TTR em um mamífero. Além disso, tal agente pode também antagonizar a ligação de retinol a RBP, a fim de inibir a ligação de RBP ou do complexo RBP-agente à TTR.

Em uma forma de realização, os métodos e composições aqui descritos compreendem ainda a administração de um segundo composto selecionado do grupo consistindo de (a) um hormônio ou mimético de hormônio diminuidor de glicose (e.g., insulina, análogo de GLP-I ou um análogo de GLP-1, exendina-4 ou liraglutida), (b) um sulfoniluréia diminuidora de glicose (e.g., acetoexamida, clorpropamida, tolbutamida, tolazamida, glimepirida, uma glipizida, gliburida, um gliburida micronizada, ou a gliclazida), (c) um biguarida diminuidora de glicose (metformina), (d) uma meglitinida diminuidora de glicose (p. ex., naeglinida ou repaglinida), (e) uma tiazolidinodiona diminuidora de glicose ou outro agonista PPAR-gama (p. ex., (e.g., pioglitazona, rosiglitazona, troglitazona, ou isagitazona), (f) um agonista PPAR de dupla ação diminuidor de glicose com afinidade para tanto PPAR-gama como PPAR-alfa (p. ex., BMS-298585 e tesaglitazar), (g) um inibidor da alfa-glicosidase diminuidor de glicose (e.g., acarbose ou miglitol), (h) um composto antissentido diminuidor de glicose não alvejado na glicose- 6-fosfatase translocase, (i) um supressor do apetite anti-obesidade (e.g. fentermina), (j) um inibidor da absorção de gordura anti-obesidade tal com orlistat, (k) uma forma modificada anti-obesidade of fator neurotrófico ciliar, que inibe os sinais de fome que estimulam o apetite, (1) uma resina seqüestrante de sal biliar diminuidora de lipídeo (e.g., cholestiramina, colestipol, e cloridreto de colesevelam), (m) um inibidor da HMGCoA- redutase diminuidora de lipídeo (e.g., lovastatina, cerivastatina, prevastatina, atorvastatina, sinvastatina, e fluvastatin), (n) um ácido nicotínico, (o) um derivado do ácido fíbrico diminuidor de lipídeo (e.g., clofibrato, genfibrozil, fenofibrato, bezafibrato, e ciprofibrato), (p) agentes incluindo probucol, neomicina, dextrotiroxina, (q) ésteres de estanol de plantas, (r) inibidores de absorção de colesterol (e.g., ezetimiba), (s) Inibidores de CETP (e.g. torcetrapib e JTT-705), (t) inibidores de MTP (eg, implitapida), (u) inibitores dos transportadores do ácido biliar (transportadores do ácido biliar dependentes do sódio apical), (v) reguladores de CYP7a hepático, (w) inibidores de ACAT (p. ex., Avasimibe), (x) terapêuticos de substituição de estrogênio diminuidor de lipídeo (p. ex., tamoxigênio), (y) HDL sintético (p. ex., ETC-216) ou (z) anti-inflamatórios diminuidores de lipídeo (p. ex., glicocorticóides). Quando o segundo composto tem um diferente alvo e/ou atua por um diferente modo de ação dos agentes aqui descritos (isto é, aqueles que modulam os níveis ou atividade de RBP ou TTR), a administração dos dois agentes em combinação (p. ex., administração simultânea, seqüencial ou separada) é esperada fornecer benefício terapêutico aditivo ou sinérgico a um paciente com diabetes. Pela mesma razão, a administração dos dois agentes em combinação (p. ex., administração simultânea, seqüencial ou separada) é esperada permitir doses mais baixas de cada um ou um ou outro agente em relação à dose de tal agente, na ausência da terapia de combinação, enquanto ainda obtendo um desejado benefício terapêutico, incluindo, como exemplo somente, redução da glicose do sangue e controle de HbA lc.

Em uma forma de realização, o primeiro composto é administrado a um mamífero com diabetes tipo II. Em ainda uma outra forma de realização, o primeiro composto aumenta a depuração de RBP ou TTR no mamífero. Em outra forma de realização, o primeiro composto inibe uma ligação de RBP à TTR. Em algumas formas de realização, o primeiro composto pode ser um derivado de retinila, em que o derivado de retinila é N- (4-hidroxifenil)retinamida (também referido aqui como "HPR" ou "fenretinida" ou "4-hidroxifenilretinamidaM ou "hidroxifenil retinamida"), N- (4-metoxifenil)retinamida ("MPR"; o metabólito mais dominante de HPR), ou etilretinamida.

Os métodos e composições aqui descritos também provêem o tratamento de hipertensão intracraniana idiopática em um mamífero, compreendendo administrar ao mamífero pelo menos um vez uma quantidade eficaz de um primeiro composto, em que dito primeiro composto modula níveis ou atividade de RBP ou TTR em um mamífero. Em uma forma de realização, o primeiro composto diminui a transcrição de RBP ou TTR em um mamífero. Em outra forma de realização, o primeiro composto diminui a translação de RBP ou TTR em um mamífero. Em ainda uma outra forma de realização, o primeiro composto aumenta a depuração de RBP ou TTR no mamífero. Em ainda uma outra forma de realização, o primeiro composto inibe uma ligação de RBP à TTR. Tal agente pode ligar-se a RBP ou TTR a fim de inibir a ligação de RBP à TTR em um mamífero. Além disso, tal agente pode também antagonizar a ligação de retinol a RBP, a fim de inibir a ligação de RBP ou o complexo RBP-agente à TTR. Em algumas formas de realização, o primeiro composto pode ser um derivado de retinila, em que o derivado de retinila é N-(4-hidroxifenil)retinamida (também referido aqui como "HPR" ou "fenretinida" ou "4-hidroxifenilretinamida" ou "hidroxifenila retinamida"), N-(4-metoxifenil)retinamida ("MPR"; o metabólito mais dominante de HPR), ou etilretinamida. Os métodos e composições aqui descritos podem também compreender ainda a administração de um segundo composto selecionado do grupo consistindo de um indutor da produção do óxido nítrico, um antioxidante, agente anti-inflamatório, um mineral, um antioxidante, um carotenóide, fosfolipídeo negativamente carregado e uma estatina.

Os métodos e composições aqui descritos também provêem o tratamento de hiperostose em um mamífero compreendendo administrar ao mamífero pelo menos um vez uma quantidade eficaz de um primeiro composto, em que dito primeiro composto modula níveis ou atividade de RBP ou TTR em um mamífero. Em uma forma de realização, o primeiro composto inibe a transcrição de RBP ou TTR em um mamífero. Em outra forma de realização, o primeiro composto inibe a translação de RBP ou TTR em um mamífero. Em ainda uma outra forma de realização, o primeiro composto aumenta a depuração de RBP ou TTR no mamífero. Em ainda uma outra forma de realização, o primeiro composto inibe uma ligação de RBP à TTR. Tal agente pode ligar-se a RBP ou TTR a fim de inibir a ligação de RBP à TTR em um mamífero. Além disso, tal agente pode também antagonizar a ligação de retinol a RBP a fim de inibir a ligação de RBP ou o complexo RBP-agente à TTR. Em algumas formas de realização, o primeiro composto pode ser um derivado de retinila, em que o derivado de retinila é N-(4- hidroxifenil)retinamida (também referido aqui como "HPR" ou "fenretinida" ou M-hidroxifenilretinamida" ou "hidroxifenil retinamida"), N-(4- metoxifenil)retinamida ("MPR"; o metabólito mais dominante de HPR), ou etilretinamida. Os métodos e composições aqui descritos podem também compreender ainda a administração de um segundo composto selecionado do grupo consistindo de um indutor da produção do óxido nítrico, um antioxidante, agente anti-inflamatório, um mineral, um anti-oxidante, um carotenóide, fosfolipídeo negativamente carregado e uma estatina.

Os métodos e composições aqui descritos também provêem o tratamento de amiloidose em um mamífero compreendendo administrar ao mamífero pelo menos um vez uma quantidade eficaz de um primeiro composto, em que dito primeiro composto modula níveis ou atividade de RBP ou TTR em um mamífero. Em uma forma de realização, o primeiro composto inibe a transcrição ou translação de TTR em um mamífero. Em outra forma de realização, o primeiro composto aumenta A depuração TTR no mamífero. Em ainda uma outra forma de realização, o primeiro composto inibe uma ligação de RBP à TTR. Tal agente pode ligar-se a RBP ou TTR a fim de inibir a ligação de RBP à TTR em um mamífero. Além disso, tal agente pode também antagonizar a ligação de retinol a RBP a fim de inibir a ligação de RBP ou do complexo RBP-agente à TTR. Em algumas formas de realização, o primeiro composto pode ser um derivado de retinila, em que o derivado de retinila é N- (4-hidroxifenil)retinamida (também referido aqui como "HPR" ou "fenretinida" ou "4-hidroxifenilretinamida" ou "hidroxifenil retinamida"), N- (4-metoxifenil)retinamida ("MPR"; o metabólito mais dominante de HPR), ou etilretinamida. Os métodos e composições aqui descritos podem também compreender ainda a administração de um segundo composto selecionado do grupo consistindo de um indutor da produção do óxido nítrico, um antioxidante, agente anti-inflamatório, um mineral, um antioxidante, um carotenóide, fosfolipídeo negativamente carregado e uma estatina.

Os métodos e composições aqui descritos também provêem o tratamento de Doença de Alzheimer em um mamífero, compreendendo administrar ao mamífero pelo menos um vez uma quantidade eficaz de um primeiro composto, em que dito primeiro composto modula níveis ou atividade de RBP ou TTR em um mamífero. Em uma forma de realização, o primeiro composto aumenta a transcrição de RBP ou TTR em um mamífero. Em outra forma de realização, o primeiro composto aumenta a translação de RBP ou TTR em um mamífero. Em ainda uma outra forma de realização, o primeiro composto diminui a depuração de RBP ou TTR no mamífero. Em ainda uma outra forma de realização, o primeiro composto promove a ligação de RBP à TTR. Tal agente pode ligar-se a RBP ou TTR a fim de inibir a ligação de RBP à TTR em um mamífero. Além disso, tal agente pode também antagonizar a ligação de retinol a RBP, a fim de inibir a ligação de RBP ou do complexo RBP-agente à TTR. Em algumas formas de realização, o primeiro composto pode ser um derivado de retinila, em que o derivado de retinila é N- (4-hidroxifenil)retinamida (também referido aqui como "HPR" ou "fenretinida" ou M4-hidroxifenilretinamida" ou "hidroxifenil retinamida"), N- (4-metoxifenil)retinamida ("MPR"; o metabólito mais dominante de HPR), ou etilretinamida. Os métodos e composições aqui descritos podem também compreender ainda a administração de um segundo composto selecionado do grupo consistindo de um indutor da produção do óxido nítrico, um antioxidante, agente anti-inflamatório, um mineral, um antioxidante, um carotenóide, fosfolipídeo negativamente carregado e uma estatina.

Os métodos e composições aqui descritos também provêem o tratamento da síndrome de Alstrom-Hallgren em um mamífero, compreendendo administrar ao mamífero pelo menos um vez uma quantidade eficaz de um primeiro composto, em que dito primeiro composto modula níveis ou atividade de RBP ou TTR em um mamífero. Em uma forma de realização, o primeiro composto modula a transcrição de RBP ou TTR em um mamífero. Em outra forma de realização, o primeiro composto modula a translação de RBP ou TTR em um mamífero. Em ainda uma outra forma de realização, o primeiro composto modula a depuração de RBP ou TTR no mamífero. Em ainda uma outra forma de realização, o primeiro composto modula a ligação de RBP à TTR. Tal agente pode ligar-se a RBP ou TTR a fim de inibir a ligação de RBP à TTR em um mamífero. Além disso, tal agente pode também antagonizar a ligação de retinol a RBP a fim de inibir a ligação de RBP ou do complexo RBP-agente à TTR. Em algumas formas de realização, o primeiro composto pode ser um derivado de retinila, em que o derivado de retinila é N-(4-hidroxifenil)retinamida (também referido aqui como "HPR" ou "fenretinida" ou "4-hidroxifenilretinamida" ou "hidroxifenil retinamida"), N-(4-metoxifenil)retinamida ("MPR"; o metabólito mais dominante de HPR), ou etilretinamida. Os métodos e composições aqui descritos podem também compreender ainda a administração de um segundo composto selecionado do grupo consistindo de um indutor da produção do óxido nítrico, um antioxidante, agente anti-inflamatório, um mineral, um antioxidante, um carotenóide, fosfolipídeo negativamente carregado e uma estatina.

Em ainda outras formas de realização, uma quantidade eficaz de um composto dos métodos e composições aqui descritos pode ser sistemicamente administrada ao mamífero. Em algumas formas de realização, o composto pode ser oftalmicamente administrado ao mamífero. Em outras formas de realização, o composto pode ser intravenosamente administrado ao mamífero. Em ainda outras formas de realização, o composto pode ser oftalmicamente administrado ao mamífero. Em outra forma de realização, o composto pode ser administrado por injeção ao mamífero.

Em qualquer uma das formas de realização supracitadas, o mamífero dos métodos e composições aqui descritos é um humano. Em ainda outras formas de realização, os métodos e composições aqui descritos podem compreender múltiplas administrações de uma quantidade eficaz do composto. Em algumas formas de realização, o tempo entre múltiplas administrações é pelo menos de uma semana. Em outras formas de realização, o tempo entre múltiplas administrações é pelo menos de um dia. Em ainda uma outra forma de realização, o composto é administrado ao mamífero em um base diária.

Os métodos e composições aqui descritos podem também compreender ainda administrar um indutor da produção do óxido nítrico ao mamífero. Em ainda outras formas de realização, os métodos e composições aqui descritos podem compreender ainda administrar um agente anti- inflamatório ao mamífero. Em uma forma de realização, os métodos e composições aqui descritos podem compreender ainda administrar ao mamífero pelo menos um antioxidante. O antioxidante dos métodos e composições aqui descritos pode ser selecionado do grupo consistindo de Vitamina C5 Vitamina E, beta-caroteno, Coenzima Q, e 4-hidróxi-2,2,6,6- tetrametilpiperadino-N-oxila.

Em outra forma de realização, os métodos e composições aqui descritos podem compreender ainda a administração de pelo menos um antioxidante com os compostos aqui descritos. Em ainda uma outra forma de realização, os métodos e composições aqui descritos podem compreender ainda administrar ao mamífero pelo menos um mineral. Nesta forma de realização, o mineral pode ser selecionado do grupo consistindo de um composto de zinco (II), um composto de Cu(II)5 e um composto de selênio (II). Em outra forma de realização, o mineral dos métodos e composições aqui descritos pode ser ainda administrado com pelo menos um antioxidante.

Em ainda uma outra forma de realização, os métodos e composições aqui descritos podem compreender ainda administrar ao mamífero um carotenóide. O carotenóide desta forma de realização pode ser selecionado do grupo consistindo de luteína e zeaxantina. Em uma forma de realização, os métodos e composições aqui descritos podem compreender ainda administrar ao mamífero fosfolipídeo negativamente carregado. Nesta forma de realização, o fosfolipídeo negativamente carregado pode ser fosfatidil glicerol. Em outra forma de realização, os métodos e composições aqui descritos podem compreender ainda administrar ao mamífero uma estatina. A estatina dos métodos e composições aqui descritos pode ser escolhida de um grupo consistindo de rosuvastatina, pravastatina, sinvastatina, pravastatina, cerivastatina, mevastatina, velostatina, fluvastatina, compactina, lovastatina, dalvastatina, fluindostatina, atorvastatina, atorvastatina cálcio, e diidrocompactina. Em outras formas de realização, o composto dos métodos e composições aqui descritos pode ser administrado ao mamífero cada 12 horas. Em algumas formas de realização, os métodos e composições aqui descritos compreendem ainda administrar reoforese ao mamífero. Em outra forma de realização, os métodos e composições aqui descritos compreendem ainda monitorar a formação de gânglios no olho de um mamífero. Em ainda uma outra forma de realização, os métodos e composições aqui descritos compreendem ainda medir os níveis de lipofuscina no olho de um mamífero. Em ainda uma outra forma de realização, os métodos e composições aqui descritos compreendem ainda medir a acuidade visual no olho de um mamífero. Em uma forma de realização, os métodos e composições aqui descritos compreendem ainda medir a auto-fluorescência de A2E e dos precursores de A2E.

Em algumas formas de realização, a degeneração macular é Doença de Stargardt Em outras formas de realização, a degeneração macular é degeneração macular em forma seca relacionada com a idade. Em uma forma de realização, o humano é um portador do gene para Doença de Stargardt. O método e composições descritos podem também compreender ainda determinar se o mamífero é um portador do gene para Doença de Stargardt.

Em algumas formas de realização, uma composição farmacêutica para o tratamento de degeneração macular pode compreender os compostos dos métodos e composições aqui descritos e um veículo farmaceuticamente aceitável. Em uma forma de realização, o veículo farmaceuticamente aceitável é adequado para administração oftálmica.

Outros objetivos, aspectos e vantagens dos métodos e composições aqui descritos tornar-se-ão evidentes pela seguinte descrição detalhada. Deve ser entendido, entretanto, que a descrição detalhada e os exemplos específicos, embora indicando formas de realização específicas, são dados somente como ilustração, uma vez que várias mudanças e modificações dentro do espírito e escopo da invenção tornar-se-ão evidentes para àqueles hábeis na arte por esta descrição de detalhada.

Todas as publicações e pedidos de patente mencionados neste relatório são aqui incorporados por referência, na mesma extensão como se cada publicação ou pedido de patente individual fosse especifica e individualmente indicado como sendo incorporado por referência.

BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS

Os novos aspectos dos métodos e composições aqui descritos são dados com particularidade nas reivindicações anexas. Um melhor entendimento dos aspectos e vantagens será obtido por referência à seguinte descrição detalhada, que expõe formas de realização ilustrativas, em que os princípios aqui descritos são utilizados e cujos desenhos anexos:

A Fig. 1 ilustra um fluxograma para o tratamento de doenças relacionadas com retinol e/ou vitreorretinais, empregando-se os métodos e composições aqui descritos.

A Fig. 2 ilustra a relação dos níveis de HPR do soro para os níveis de retinol do soro e os níveis oculares dos retinóides e A2E.

A Fig. 3 ilustra o efeito da administração de HPR em camundongos tipo selvagem em (A) níveis de retinol do soro e (B) níveis de retinóide ocular.

A Fig. 4 ilustra um exemplo de um espectro FRET, tomado de um complexo RBP-TTR na ausência e presença de HPR, em que o TTR foi rotulado com uma porção de fluorescência.

A Fig. 5 ilustra um exemplo de inibição dependente da dose de formação de complexo de retinol-RBP-TTR por HPR, como determinado usando-se os métodos FRET aqui descritos.

A Fig. 6 ilustra uma comparação da inibição de formação de complexo retinol-RBP-TTR usando-se HPR, ácido 13-cis-retinóico e ácido trans-retinóico, como determinado usando-se os métodos FRET aqui descritos.

As Figs. 7a-7c ilustram várias análises LC de fase inversa de extratos de acetonitrila de soro. O soro foi obtido de camundongos administrados com DMSO (Fig. 7a), 10 mg/kg N-4-(hidroxifenil)retinamida (HPR) (FIG. 7b) ou 20 mg/kg HPR (Fig. 7c) por 14 dias.

A Fig. 8 ilustra a análise do retinol do soro, em função da concentração de fenretinida.

A Fig. 9a ilustra um ensaio de ligação de controle para a interação entre retinol e proteína de ligação de retinol (RBP), conforme medido por extinção de fluorescência.

A Fig. 9b ilustra um ensaio de ligação para a interação entre retinol e proteína de ligação de retinol, na presença de HPR (2 μΜ), conforme medido por extinção de fluorescência.

A Fig. 10a ilustra o efeito de HPR sobre a biossíntese de A2PE-H2 em camundongos mutantes nulos abca4.

A Fig. 10b ilustra o efeito de HPR sobre a biossíntese de A2E em camundongos mutantes nulos abca4.

A Fig. 11 ilustra a ligação de N-4-(metoxifenil)retinamida (MPR) em proteína de ligação de retinol (RBP), conforme medido por extinção de fluorescência.

A Fig. 12 ilustra a modulação da ligação de TTR em RBP- MPR, conforme medido por cromatografia de exclusão de tamanho e espectrofotometria UV/Visível.

A Fig. 13 ilustra a análise de níveis de A2PE-H2 e A2E, em função de dose de fenretinida e período de tratamento (painéis A-F) e autofluorescência de lipofuscina em RPE de camundongos mutantes nulos ABCA4, em função do tratamento de fenretinida (painéis G-I).

A Fig. 14 ilustra uma plotagem de correlação relativa à concentração de fenretinida para reduções de retinol, A2PE-H2 e A2E em camundongos mutantes nulos ABCA4.

A Fig. 15 ilustra composição de retinóide em camundongos tratados DMSO e HPR adaptados à luz (painel A); o efeito de HPR na regeneração de cromóforo visual (painel B); o efeito de HPR em reciclagem de cromóforo alvejado (painel C); e medições eletrofisiológicas da função das células em bastonete (painel D), função das células em bastonete e células cônicas (painel E) e recuperação de fotoalvejamento (painel F).

A Fig. 16 ilustra imagens de microscopia óptica das retinas de animais tratados DMSO e HPR.

A Fig. 17 ilustra cromatogramas de absorvência e fluorescência de extratos de cálice ocular de camundongos de controle (painel A) e de camundongos previamente mantidos em terapia HPR (painel B), em seguida a um descanso de droga de 12-dias; cromatogramas de absorvência e fluorescência de extratos de cálice ocular de camundongos de controle (painel C) e de camundongos previamente mantidos em terapia HPR (painel D) em seguida a um descanso de droga de 28 dias; o histograma apresenta os níveis A2E relativos para os camundongos descritos nos painéis A-D.

A Fig. 18 ilustra a concentração relativa de A2E, A2PE e A2PE-H2 em três linhagens de camundongos com três meses de idade.

DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO

Será feita referência agora em detalhes a formas de realização dos métodos e composições aqui descritos. Exemplos das formas de realização são ilustrados na seguinte seção Exemplos.

A menos que de outro modo definido, todos os termos técnicos e científicos usados aqui têm o mesmo significado que é comumente entendido por uma pessoa hábil na arte a que esta invenção pertence. Todas as patentes e publicações aqui referidas são incorporadas por referência.

Como aqui usado, o termo "Gene ABCA4" refere-se a um gene codificando a proteína de borda RmP. O Gene ABCA4 é também conhecido como o Gene AB CR.

Como aqui usado, a expressão "anti-oxidante" refere-se auma substância sinótica ou natural que pode evitar, retardar ou de outro modo inibir a oxidação de um composto ou substância biológica.

Como aqui usado, o termo "desconvolução" refere-se ao processo de converter dados, informações e/ou imagens em (pelo menos em parte) componentes constituintes. Por exemplo, um espectro de fluorescência ou absorvência que caracterize uma forma de onda complexa pode ser matematicamente desconvoluído em picos separados de absorvência ou fluorescência, que compreendem a forma de onda complexa. Procedimentos matemáticos e algoritmos adequados são bem conhecidos na arte e pacotes de software adequados para desconvoluir dados, informações e/ou imagens são comercialmente disponíveis.

Como aqui usado, o termo "rompimento do ciclo visual" ou similar refere-se a qualquer meio para modular a atividade, direta ou indiretamente, de pelo menos uma enzima envolvida em um ciclo visual.

Como aqui usado, o termo "dispersão" refere-se a suspensão de uma substância em outro meio. Dispersão pode incluir etapas de homogeneização, fracionamento, rompimento, fluidização ou diminuição do tamanho de uma substância, a fim de facilitar a etapa de suspensão.

Como aqui usado, um derivado de retinila refere-se a um composto que pode ser produzido reagindo-se um dos vários isômeros eis ou trans retinais com outro composto ou série de compostos.

Como aqui usado, o termo "degeneração macular relacionada com a idade ou distrofia" ou "ARMD" refere-se a uma doença debilitante que inclui formas úmidas e secas de ARMD. A forma seca de ARMD, que é responsável por cerca de 90 % de todos os casos, é também conhecida como degeneração macular atrófica, não-exsudativa ou ganglionar. Com a forma seca de ARMD, os gânglios tipicamente se acumulam no tecido do epitélio do pigmento retinal (RPE)j embaixo/dentro da membrana de Bruch. A perda de visão pode então ocorrer quando os gânglios interferem com a função dos fotorreceptores da mácula. A forma seca de ARMD resulta na perda gradual da visão durante muitos anos. A forma seca de ARMD pode resultar na forma úmida de ARMD. A forma úmida de ARMD pode progredir rapidamente e causar severa avaria à visão central. As distrofias maculares incluem Doença de Stargardt, também conhecida como Distrofia Macular de Stargardt ou Fundus Flavimaculatus, que é a forma inicial juvenil mais freqüentemente encontrada de distrofia macular.

Como aqui usado, o termo "mamífero" refere-se a todos os mamíferos, incluindo humanos. Mamíferos inclui, somente como exemplo, humanos, primatas não humanos, vacas, cães, gatos, cabras, carneiros, porcos, ratos, camundongos e coelhos. Como aqui usado, o termo "amostra biológica" refere-se a plasma, sangue, urina, fezes, tecido, muco, lágrimas ou saliva.

Como aqui usado, o termo "quantidade eficaz" refere-se à quantidade total de agente terapêutico em uma formulação farmacêutica ou método que é suficiente para apresentar um significativo benefício para o indivíduo ou paciente.

Como aqui usado, o termo "modulação" significa um aumento ou uma diminuição dos níveis ou expressão de um ácido nucléico ou polipeptídeo ou na ligação ou outras características funcionais do ácido nucléico ou polipeptídeo.

Como aqui usado, a expressão "doença ou condição oftálmica" refere-se a qualquer doença ou condição envolvendo o olho ou relacionada com os tecidos. Exemplos não-limitativos incluem doenças ou condições envolvendo degeneração da retina e/ou mácula, incluindo distrofias retinais e/ou maculares e as degenerações retinais e/ou maculares.

Como aqui usado, o termo "imobilizado" refere-se à ligação covalente ou não-covalente de uma espécie química ou biológica em um suporte.

Como aqui usado, o termo "primata" refere-se à mais elevada ordem de mamíferos; inclui homem, bugios e macacos.

Como aqui usado, o termo "doença vitreorretinal" refere-se a qualquer doença ou condição envolvendo o vítreo e retina, incluindo, somente como exemplo, retinopatia diabética, degeneração macular, retinopatia de prematuridade e retinite pigmentosa.

Como aqui usado, o termo "doença relacionada com retinol" refere-se a qualquer doença ou condição associada com níveis anormais de vitamina A, retinol e suas proteínas de transporte relacionadas, incluindo doenças associadas com níveis anormais de proteína de ligação de retinol e transtirretina, em um paciente.

Como aqui usado, o termo "risco" refere-se à probabilidade de que um evento ocorra.

O Ciclo Visual

A retina do vertebrado contém dois tipos de células fotorreceptoras. As células em bastonete são especializadas para visão sob baixas condições de luz. As células cônicas são menos sensíveis, fornecem visão em elevadas resoluções temporais e espaciais e propiciam percepção de cor. Sob condições de luz do dia, a resposta das células em bastonetes é saturada e a visão é mediada inteiramente pelas células cônicas. Ambos os tipos de célula contêm uma estrutura chamada o segmento externo, compreendendo uma pilha de discos membranosos. As reações de transdução visual ocorrem nas superfícies destes discos. A primeira etapa da visão é a absorção de um fóton por uma molécula de opsina-pigmento, que envolve 11- cis a trans isomerização do cromóforo retinal. Antes de a sensibilidade à luz poder ser recuperada, a trans-retinal resultante deve dissociar-se da opsina apoproteína e isomerizar em 11-cis-retinal. Trans-xQÚndX é um ciclo visual retinóide que, quando da condensação com fosfatidiletanolamina, produz a espécie dirretinal N- retinilideno-N-retiniletanolamina. 11-cis-retinal é a parte fotorreativa da rodopsina, que é convertida em trans-retinal, quando um fóton de luz da faixa de absorção ativa colide com a molécula. Este processo atravessa uma seqüência de reações químicas quando 11-cis-retinal isomeriza em trans- retinal. Durante esta série de etapas químicas, a fibra nervosa, que é ligada àquela célula em bastonete ou cônica, sofre um estímulo que é percebido no cérebro como um sinal visual.

Ciclo Visual para Regeneração da Rodopsina

A rodopsina, receptor acoplado à proteína-G, tem dois trajetos fisiológicos: fototransdução e/ou recuperação do branquiador (retorno dos componentes ativados para o estado escuro) e o ciclo retinóide (produção de 11-cis-retinal). A fototransdução vertebrada é iniciada por uma reação fotoquímica, por meio do que 11-cis-retinal se liga a sua porção opsina (rodopsina = opsina + 11-cis-retinal) e sofre isomerização para trans-retinal, produzindo mudanças conformacionais na opsina. Nos vertebrados, a restauração de uma conformação de receptor fotossensível (retorno para o estado escuro) requer a formação de 11-cis-retinal de trans-retinal, via o ciclo retinóide. O inteiro ciclo de isomerização e regeneração de pigmento em humanos ocorre em uma escala de tempo de minutos para rodopsina e significativamente mais rápido para os pigmentos das células cônicas. A redução da trans-retinal em trans-retinol ocorre nos segmentos externos do fotorreceptor, enquanto que todas as outras reações, incluindo isomerização, ocorre dentro das células epiteliais de pigmento retinal (RPE). A base Schiff trans-retinilideno hidrolisa e o trans-retinal dissocia-se da bolsa de ligação da opsina, embora as etapas moleculares resultando em sua liberação da bolsa de ligação da opsina permaneçam não totalmente explicadas. A remoção da trans-retinal dos discos pode ser facilitada por um transportador de cassete de ligação-ATP (ABCA4), mutações que são causativas de um conjunto de distúrbios retinais incluindo Doença de Stargardtj distrofia de células cônicas- células em bastonete, retinite pigmentosa e, possivelmente, degeneração macular.

Além disso, a trans-retinal é reduzida em trans-retinol por trans-retinol dependente de NADPH desidrogenase, uma enzima associada com membrana, que pertence à grande família de genes de desidrogenases de álcool de cadeia curta (SCAD). A trans-retinal transloca-se para as RPE via um processo pobremente definido, talvez envolvendo componentes como IRBP e RBPs presentes na matriz interreceptora (IPM), ou difusão passiva acionada por retinóides aprisionantes (p. ex., ésteres de retinila de ácido graxo insolúveis) das RPE. A esterificação das RPE envolve a transferência de um grupo acila da lecitina para retinol e é catalisada pela lecitina:retinol aciltransferase (LRAT). Estes ésteres podem ser substratos para uma enzima ainda desconhecida, denominada isomeroidrolase, que utilizaria a energia da hidrólise do éster de retinila para isomerizar trans-retinol em 11-cis-retinol e, assim, impulsionar a reação para a frente. Alternativamente, estas duas reações podem processar-se separadamente, isto é, o éster pode ser primeiro hidrolisado por uma hidrolase do éster de retinila e então isomerisado em 11- cis-retinol através de um intermediário. 11-cis-retinol seria então oxidado em 11-cis-retinal em uma reação catalisada por desidrogenases de 11-cis-retinol dependentes de NAD E NADP, que são outros membros da família da desidrogenase de cadeia curta. Finalmente, a 11-cis-retinal move-se de volta para os fotorreceptores das células em bastonetes, de modo dependente ou independente de IRBP, onde ela une-se com a opsina para regenerar o pigmento visual.

Mais informação referente à organização anatômica do olho do vertebrado, o ciclo visual para regeneração da rodopsina e a biogênese dos A2E-oxiranos é fornecida no Pedido de Patente US. No. 11/150.641, depositado em 10 de junho de 2005, Pedido de Patente PCT No. US 2005/29455, depositado em 17 de agosto de 2005 e Patente Provisória U.S. 60/622.213, depositada em 25 de outubro de 2004, cujos conteúdos são incorporados aqui por referência em sua totalidade.

Degenerações e Distrofias MacuIares ou Retinas.

A degeneração macular (também referida como degeneração retinal) é uma doença do olho que envolve deterioração da mácula, a parte central da retina. Aproximadamente 85% a 90% dos casos de degeneração macular são o tipo "seco" (atrófico ou não-neovascular). Na degeneração macular seca, a deterioração da retina é associada com a formação de pequenos depósitos amarelos, conhecidos como gânglios, sob a mácula; além disso, o acúmulo da lipofuscina nas RPE resulta em atrofia geográfica. Este fenômeno resulta em um afinamento e secagem da mácula. O local e quantidade de afinamento da retina, causados pelos gânglios, correlaciona-se diretamente com a quantidade de perda de visão central. A degeneração da camada pigmentada da retina e fotorreceptores sobrejacentes aos gânglios torna-se atrófica e pode causar uma lenta perda da visão central.

Na degeneração macular "úmida" formam-se novos vasos sangüíneos (isto é, neovascularização) para melhorar o suprimento sangüíneo para o tecido retinal, especificamente embaixo da mácula, uma parte da retina que é responsável por nossa visão central nítida. Os novos vasos são facilmente danificados e às vezes rompem, causando sangramento e lesão do tecido circundante. Embora a degeneração macular úmida somente ocorra em cerca de 10 por cento de todos os casos de degeneração macular, ela é responsável por aproximadamente 90% da cegueira relacionada com a degeneração macular. A neovascularização pode resultar em rápida perda da visão e eventual cicatrização dos tecidos retinais e sangramento do olho. Este tecido de cicatriz e o sangue produzem uma área escura distorcida na visão, com freqüência tornando o olho legalmente cego. A degeneração macular úmida usualmente começa com distorção no campo central da visão. As linhas retas tornam-se onduladas. Muitas pessoas com degeneração macular também informam terem visão embaçada e pontos brancos em seu campo visual. As proteínas promotoras do crescimento, chamadas fator de crescimento endotelial vascular, ou VEGF, foram estabelecidas como um alvo para acionar este crescimento anormal de vaso do olho. Esta descoberta resultou em pesquisa agressiva de drogas experimentais, que inibem ou bloqueiam o VEGF. Estudos mostraram que os agentes anti-VEGF podem ser usados para bloquear e evitar crescimento de vaso sangüíneo anormal. Tais agentes anti-VEGF param ou inibem o estímulo VEGF, de modo que há menos crescimento dos vasos sangüíneos. Tais agentes anti-VEGF podem também ser bem sucedidos na anti-angiogênese ou bloquear a capacidade dos VEGF de induzerem o crescimento de vasos sangüíneos embaixo da retina, bem como vazamento de vasos sangüíneos.

A Doença de Stargardt é uma distrofia macular que se manifesta como uma forma recessiva de degeneração macular, com início durante a infância. Vide, p. ex., Allikmets et ai., Science, 277:1805-07 (1997); Lewis et al., Am. J. Hum. Genet., 64:422-34 (1999); Stone et al., Nature Genetics, 20:328-29 (1998); Allikmets, Am. J. Hum. Gen., 67:793-799 (2000); Klevering5 et al, Ophtalmology, 111:546-553 (2004). A Doença de Stargardt é caracterizada clinicamente por perda progressiva da visão central e atrofia progressiva dos RPE sobrejazendo a mácula. As mutações do gene ABCA4 humano para Proteína de Borda (RmP) são responsáveis pela Doença de Stargardt. Cedo no curso da doença, os pacientes apresentam adaptação ao escuro retardada, porém por outro lado função de células em bastonete normal. Histologicamente, a Doença de Stargardt é associada com a deposição de grânulos de pigmento de lipofuscina em células RPE.

As mutações em ABCA4 têm também estado implicadas em retinite pigmentosa recessiva, vide, p. ex., Cremers et al., Hum. Mol. Genet., 7:355-62 (1998), distrofia de células cônicas-células em bastonetes, vide idem, e degeneração macular relacionada com a idade exsudativa, vide, p. ex., Allikmets et al., Science, 277:1805-07 (1997); Lewis et aL, Am. J. Hum. Genet., 64:422-34 (1999), embora a predominância das mutações ABCA4 em AMD seja ainda incerta. Vide Stona et al., Nature Genetics, 20:328-29 (1998); Allikmets, Am. J. Hum. Gen., 67:793-799 (2000); Klevering, et al, Ophtalmology, 111:546-553 (2004). Similar à Doença de Stargardt, estas doenças são associadas com a adaptação retardada ao escuro das células em bastonete.Vide Steinmetz et al., Brit. J. Ophtalm., 77:549-54 (1993). A deposição de lipofuscina em células RPE é também vista predominantemente em AMD, vide Kliffen et al., Microsc. Res. Tech., 36:106-22 (1997) e alguns casos de retinite pigmentosa. Vide Bergsma et al., Nature, 265:62-67 (1977).

Além disso, há diversos tipos de degenerações maculares que afetam crianças, adolescentes ou adultos que são comumente conhecidos como degeneração macular de início prematuro ou juvenil. Alguns exemplos de distrofias maculares incluem: Distrofia de células cônicas-células em bastonete, Distrofia Corneanas Distrofia de Fuch, Distrofia Macular de Sorsby, Doença de Best, Retinosquise Juvenil, bem como Doença de Stargardt.

Um médico examinando um paciente neste estágio pode observar a presença destes gânglios, mesmo embora a maior parte das pessoas não tenham sintomas. Quando os gânglios forem observados em exame, o monitoramento será necessário durante o tempo. Muitas pessoas acima da idade de 60 terá alguns gânglios.

Distúrbios Metabólicos

Os distúrbios metabólicos, incluindo diabetes melito tipo I e tipo II, têm também estado associados com níveis anormais de retinol.

Diabetes Tipo I (Diabetes Melito Dependente da Insulina) O diabetes tipo I é uma forma severa de diabetes. Se deixada não tratado, o diabetes tipo I resulta em cetose do paciente e rápida degeneraçao. Aproximadamente 10 - 20% de pacientes diabéticos são classificados como tipo I5 compreendendo principalmente indivíduos jovens. Adultos não-obesos também compreendem pacientes diabéticos tipo I, embora em números menores.

O diabetes tipo I é um distúrbio catabólico, em que os níveis circulantes de insulina são virtualmente ausentes e os níveis de glucagon do plasma elevados. O diabetes tipo I acredita-se ter origens auto-imunes, possivelmente resultando de um insulto ambiental infeccioso ou tóxico das células pancreáticas B de indivíduos afetados. Em suporte da teoria auto- imune, os auto-anticorpos para insulina e células das ilhotas foram detectados em pacientes com diabetes tipo I, em comparação com indivíduos não- diabéticos.

Níveis mais baixos de retinol, com diminuição observada dos níveis de proteína de ligação retinol (RBP) e excreção urinária aumentada de RBP, têm sido correlacionados com diabetes tipo I em jovens. Vide Basu, TK, et ai. Am. J. Clin. Nutr. 50:329-331 (1989); Durbey, SW et ai, Diabetes Care 20:84-89 (1997). Os níveis mais baixos de retinol e RBP são acompanhados por uma concomitante diminuição do metabolismo do zinco, um fator necessário para a síntese de RBP em células hepáticas. Vide Cunningham, JJ, et ai. Metabolism 42:1558-1562 (1994). Ao contrário, os níveis de tocoferol ou vitamina E são imutados em pacientes diabéticos tipo I. Vide Basu, TK et al (1989).

Níveis mais baixos de retinol são observados, apesar dos elevados níveis de vitamina A em células de armazenagem hepáticas. Vide Tuitoek PJ, et al., Br. J. Nutr. 75: 615-622 (1996). Estudos demonstrando a ligação entre o status da vitamina Aea secreção de insulina mostram que somente o tratamento com insulina pode aliviar os níveis suprimidos de vitamina A em indivíduos diabéticos tipo I. Tuitoek, PJ et al., J. Clin. Biochem. Nutr. 19:165-169 (1996). Ao contrário, suplementação dietética da vitamina A não normaliza a disponibilidade metabólica da vitamina A. Id.

Estes estudos demonstram a interconexão entre a vitamina A e a regulação da insulina do transporte de glicose pra dentro do músculo e células adipócitas. Outros estudos reforçaram esta interconexão demonstrando a necessidade de vitamina A para secreção normal da insulina. Vide Chertow, BSj et ai., J. Clin. Invest. 79: 163-169 (1987). O retinol mostrou ser necessário para liberação da insulina das células das ilhotas perfiindidas deficientes de vitamina A. Id. Experimentos in vivo demonstraram que os ratos deficientes de vitamina-A tinham liberação da insulina aguda induzida por glicose deteriorada, que somente melhoraram com repleção de vitamina A. Id. A vitamina A pode exercer seus efeitos sobre a secreção da insulina através da ativação da atividade de transglutaminase em células das ilhotas e secretoras de insulina, vide Driscoll HK, et al., Pancreas 15:69-77 (1997), e é necessária para desenvolvimento das ilhotas fetais e prevenção da intolerância à glicose em adultos, Vide Matows, KA et al., J. Nutr. 134:1958-1963 (2004), fortalecendo mais o papel da vitamina E e retinol na liberação liberação da insulina e regulação dos níveis de glicose do sangue em pacientes diabéticos.

Diabetes Tipo II (Diabetes Melito Não-Dependente da

Insulina)

O diabetes tipo II compreende um grupo heterogêneo de uma forma mas suave de diabetes. O diabetes tipo II usualmente ocorre em adultos, porém, ocasionalmente, pode ter seu início na infância.

Os diabéticos tipo II classicamente exibem insensibilidade à insulina, em resposta a elevados níveis de glicose plasmática. Até 85% dos diabéticos tipo II são obesos, tendo um a insensibilidade à insulina endógena que é positivamente correlacionada com a presença de uma distribuição abdominal de gordura. As causas da insensibilidade à insulina são ligadas com defeito do pós-receptor na ação da insulina. Isto é associado com os depósitos de armazenagem celular super distendidos (p. ex., adipócitos distendidos e fígado e células musculares supernutridas) e uma reduzida capacidade de remover os nutrientes da circulação após as refeições. O subseqüente superinsulismo pode também resultar em uma outra regulação descendente dos receptores celulares da insulina. Além disso, as proteínas do transportador da glicose (p. ex., GLUT4) são também regulados descendentemente quando da ativação contínua, resultando em uma agravação das condições hiperglicêmicas dos pacientes.

Ao contrário da diabetes tipo I, os pacientes diabéticos tipo II exibem elevados níveis de seletividade RBP5 com níveis normais a aumentados de retinol observados. Vide Sasaki, H et aL, "Am. J. Med. Sei. 310:177-82 (1995); Basualdo CG, et ai. J. Am ColL Nutr. 16:39-45 (1997); Abahausains MA et aL, Eur. J. Clin. Nutr. 53: 630-635 (1999). Os níveis do ácido retinóico (trans RA e 13-Cis RA) foram também diminuídos em pacientes com diabetes tipo II. Yamakoshi, Y et aL, Biol. Pharm. Bull 25:1268-1271 (2002). Os níveis de outras vitaminas, incluindo vitamina E (tocoferol) e carotenóides foram imutados nos grupos tanto de diabéticos como de controle, bem como os níveis de zinco, albumina e TTR, que são sabidos influenciarem o metabolismo da vitamina A. Id.

Este aumento seletivo dos níveis de RBP em diabéticos tipo II, combinado a diminuição seletiva de RBP em diabéticos tipo I, apóia o papel de RBP e da vitamina A no controle da insulina de níveis de glicose sangüínea. Os níveis de RBP aumentados foram atribuídos aos aumentados níveis da insulina (hiperinsulinemia) em pacientes diabéticos. Basualdo et ai. (1997). Os níveis de RBP também estiverem ligados à severidade da hiperglicemia em pacientes. Id. Os retinóides mostraram anteriormente aumentar a sensibilidade da insulina em humanos. Vide Hartmann, D. et ai. Eur. J. Clin. PharmacoL 42:523-8 (1992). A correlação inversa dos níveis de RBP com a sensibilidade da insulina em diabéticos tipo I e tipo I indica um meio terapêutico de controlar a sensibilidade da insulina em indivíduos mamíferos.

Hipertensão Intracraniana Idiopática (IIH)

A IIH, também conhecida como pseudotumor cerebral (PTC), é uma condição de alta pressão do fluido em torno do cérebro, sem um agente causativo identificável. A condição existe mais em mulheres em seus anos de gravidez. Os sintomas com freqüência começam ou pioram durante um período de ganho de peso. Sintomas típicos incluem dores de cabeça, tinido síncrono pulsante e problemas visuais (papiledema), que pode resultar em severa e permanente perda visual em casos não tratados.

Embora a etiologia da IIH seja desconhecida, os investigadores têm examinado os níveis de vitamina A em excesso como um candidato, porque os sintomas e sinais de hipervitaminose A imitam aqueles da IIH. Estudos mostraram que os níveis do retinol do solo são significativamente mais elevados em pacientes com IIH do que nos grupos de controle, apesar da aparência de diferenças não significativas na ingestão de vitamina A ou concentração de éster de retinila em ambos os grupos. Vide Jacobson, DM et al, Neurology, 54:2192-3 (1999).

Distúrbios Relacionados com os Ossos

A Hiperostose é uma condição em que um crescimento excessivo de osso ocorre. Esta condição pode resultar na formação de uma massa projetando-se de um osso normal, vista em numerosos distúrbios musculoesqueléticos. A hiperostose esquelética idiopática difusa (DISH) é uma forma de hiperostose, caracterizada por calcificação fluente e ossificação de corpos vertebrais. Anormalidades radiográficas em pacientes DISH são observadas mais comumente na espinha torácica, resultando na presença de uma proteção radiodensa em frente da coluna vertebral. A ossificação do ligamento longitudinal posterior (OPLL) é também associada com a aumentada freqüência em pacientes com DISH, além do comprometimento do cordão cervical, como resultado da hiperostose ou ossificação dos ligamentos espinhais. Outros distúrbios acompanhando os pacientes com hiperostose ou DISH incluem fratura aguda ou pseudoartrose da espinha.

Embora a patogênese de DISH e OPLL seja presentemente desconhecida, ambos os distúrbios têm sido associados com altos níveis de retinol do soro e RBP. Vide Kodama5 T et ai, In vivo 12:339-344 (1998); Kilcoyne, RFs J. Am. Acad. Dermatol. 19:212-216 (1988), sugerindo um possível papel para a vitamina A na patogênese de DISH e OPPL. Outros estudos mostraram a ocorrência de deficiência RBP funcional congênita, com níveis anormais de retinol e de RBP em um paciente de hiperostose. De Bandt5 M., et ai, J. Rheumatol. 22:1395-8 (1995). Relatos médicos também informam a ocorrência de hipervitaminose A com doença degenerativa das juntas em um paciente idoso. Vide Romero, JB et ai., Bull Hosp. Jt. Dis. 54:169-174(1996).

Mal-dobramento de Proteína e Doenças de Agregação

O mal dobramento e agregação de proteína têm estado ligados a diversas doenças, geralmente conhecidas como amiloidoses, incluindo doença de Alzheimer, doença de Parkinson e amiloidose sistêmica. Estas doenças ocorrem com mal-dobramento da estrutura protéica secundária, em que uma proteína normalmente solúvel forma depósitos de fibrila extracelulares insolúveis de estruturas ricas em folha-B, referidas como fibrilas amilóides, que causam disfunção orgânica. Vinte diferentes proteínas de fibrila, incluindo transtirretina (TTR) foram descritas em amiloidose humana, cada uma com um diferente quadro clínico.

As proteínas TTR tipo selvagem estão envolvidas no desenvolvimento de amiloidose sistêmica senil, um distúrbio esporádico resultante da deposição das fibrilas TTR em tecidos cardíacos. As proteínas TTR mutantes, ao contrário, são associadas com a polineuropatia e cardiomiopatia amiloidótica familiar, cujos depósitos principalmente afetam o sistema nervoso periférico e autonômico, e coração. Os mecanismos responsáveis pela deposição de seletividade do tecido são atualmente desconhecidos. Na formação da amiloidose, as TTR associa-se com a formação das fibrilas em sua forma monomérica. Os compostos que promovem a estabilização dos tetrâmeros de TTR5 tais como as moléculas pequenas resveratrol e biarilamina, inibem a formação das fibrilas amilóides in vitro. Vide Reixach, N. et al., PNAS 101:2817-2822 (2004).

A transtirretina está também implicada na doença de Alzheimer5 porém, ao contrário da formação das fibrilas amilóides da amiloidose, as TTR inibem a formação de proteína beta amilóide, tanto in vitro como in vivo. Vide Schwartzman5 AL et al., Amyloid. 11: 1-9 (2004); Stein5 TD e Johnson5 JA5 J. Neurosci. 22:7380-7388 (2002). A vitamina A também tem exibido efeitos desestabilizadores de fibrila anti-amiloidogênica e amilóide-beta in vitro. Vide Ono5 K., et al., Exp. Neurol. 189:380-392 (2004).

Síndrome de Alstrõn-Hallgren

A síndrome de Alstrõn-Hallgren (também conhecida como síndrome de Alstrõm) é um distúrbio recessivo autossomal raro, afetando crianças em uma idade muito prematura. Os sintomas incluem cegueira ou deterioração severa da visão na infância, associada com distrofia das células cônicas-células bastonete, surdez, início de obesidade durante o primeiro ano, desenvolvimento da diabetes melito tipo II e severa resistência à insulina, acantose nigricante (desenvolvimento de marcas escuras na pele), hipogonadismo hipergonadotrófico e deficiências da tiróide.

Mutações ligadas a síndrome de Alstrõm foram localizadas em uma região de 14,9 cM no cromossoma 2p. Collin5 GB et al., Hum. Mol. Gen. 6:213-219 (1997). Exceto tratar as manifestações sintomáticas individuais da doença, não há atualmente tratamentos terapêuticos disponíveis para pacientes com síndrome de Alstrõm. Modulação dos níveis da Vitamina A

A Vitamina A (trans-retinol) é um nutriente celular vital, que não pode ser sintetizado sob nova forma e, portanto, deve ser obtido de fontes dietéticas. Vitamina A é um termo genérico que pode designar qualquer composto possuindo a atividade biológica, incluindo atividade de ligação, do retinol. Um equivalente do retinol (RE) é a atividade biológica específica de 1 μg de trans retinol (3,33 IU) ou 6 μg (10 IU) de beta-caroteno. O beta- caroteno, retinol e retinal (vitamina A aldeído) possuem todos atividade eficaz e confiável de vitamina A. Cada um destes compostos é derivado da molécula precursora vegetal, caroteno (um membro da família de moléculas conhecidas como carotenóides). Beta-caroteno, que consiste de duas moléculas de retinal ligadas em suas extremidades aldeído, é também referido como a forma pró- vitamina da vitamina A.

O β-caroteno ingerido é clivado no lúmen do intestino por β- caroteno dioxigenase para produzir retinal. O retinal é reduzido em retinol por retinaldeído redutase, uma enzima requerendo NADPH dentro dos intestinos e, em seguida, esterificada em ácido palmítico.

Em seguida à digestão, o retinol de material alimento é transportado para o fígado ligado a agregados de lipídeo. Vide Bellovino et aL, Mol. Aspects Med., 24:411-20 (2003). Uma vez no fígado, o retinol forma um complexo com a proteína de ligação de retinol (RBP) e é então secretada dentro da circulação sangüínea. Antes da holoproteína de retinol-RBP poder ser suprida a tecidos alvo hepáticos-extras, tais como, por exemplo, o olho, ela deve ligar-se com a transtirretina (TTR). Zanotti e Berni, Vitam. Horm., 69:271-95 (2004). E este complexo secundário que permite que o retinol permaneça na circulação por períodos prolongados. A associação com a TTR facilita a liberação da RBP dos hepatócitos e evita a filtragem renal do complexo RBP-retinol. O complexo de retinol-RBP-TTR é suprido aos tecidos alvo, onde o retinol é absorvido e utilizado para vários processos celulares. O suprimento de retinol às células, através da circulação pelo complexo RBP-TTR, é o principal caminho através do qual as células e tecido adquirem retinol.

A absorção de retinol de sua forma complexada de retinol- RBP-TTR para dentro das células ocorre pela ligação de RBP aos receptores celulares das células alvo. Esta interação resulta em endocitose do complexo de RBP-receptor e subseqüente liberação de retinol do complexo ou ligação de retinol para as proteínas de ligação de retinol celular (CRBP) e subseqüente liberação de apoRBP pelas células para dentro do plasma. Outros caminhos contemplam mecanismos alternativos para a entrada de retinol dentro das células, incluindo a absorção de retinol apenas para dentro da célula. Vide Blomhoff (1994) para recapitulação.

Os métodos e composições aqui descritos são úteis para a modulação dos níveis de vitamina A em um indivíduo mamífero. Em particular, a modulação dos níveis de vitamina A pode ocorrer através da regulação da disponibilidade ou atividade da proteína de ligação de retinol (RBP) e transtirretina (TTR) em um mamífero. Os métodos e composições aqui descritos fornecem os níveis ou atividade de modulação de RBP e TTR em um indivíduo mamífero e, subseqüentemente, modulação dos níveis de vitamina A. Aumentos ou diminuições dos níveis da vitamina A em um indivíduo podem ter efeitos sobre a disponibilidade do retinol em órgãos e tecidos alvo. Portanto, o fornecimento de um meio de modular disponibilidade de retinol ou derivado de retinol pode correspondentemente modular as condições de doença causadas por falta ou excesso de concentrações locais de retinol ou derivado de retinol nos órgãos e tecidos alvo.

Por exemplo, A2E, o principal fluoróforo da lipofuscina, é formado na degeneração ou distrofia macular ou retinal, incluindo degeneração macular relacionada com a idade e Doença de Stargardt, devido à produção em excesso do retinóide de ciclo visual, trans-retinaldeído, um precursor de A2E. A redução da vitamina A e trans retinaldeído na retina, portanto, seria benéfica na redução de acúmulo de A2E e lipofuscina e no tratamento da degeneração macular relacionada com a idade. Estudos confirmaram que a redução do retinol do soro pode ter um efeito benéfico na redução de A2E e lipofuscina em RPE. Por exemplo, os animais mantidos em uma dieta deficiente de vitamina A demonstraram significativas reduções de acúmulo e lipofuscina. Katz et al., Mech. Ageing Dev., 35:291-305 (1986); Katz et al., Mech. Ageing Dev., 39:81-90 (1987); Katz et al., Biochim. Biofis. Acta, 924:432-41 (1987). Mais evidência de que a redução dos níveis de vitamina A pode ser benéfica na progressão da degeneração e distrofia macular foi apresentada por Radu e colegas, em que a redução a redução dos níveis da vitamina A ocular resultou em reduções tanto da lipofuscina como de A2E. Radu et al, Proc. NatL Acad. Sei. USA, 100:4742-7 (2003); Radu et al, Proc. Natl. Acad. Sei. USA, 101:5928-33 (2004).

A administração do análogo do ácido retinóico, N-4- (hidroxifenil)retinamida (HPR ou fenretinida), tem mostrado causar reduções do retinol e RBP do soro. Formelli et al. Câncer Res. 49:6149-52 (1989); Formelli et al, J. Clin Oncol, 11:2036-42 (1993); Torrisi et al. Câncer Epidamiol. Biomarkers Prev, 3:507-10 (1994). Estudos in vitro demonstraram que HPR interfere com a interação normal de TTR com RBP. Malpeli et al, Biochim. Biofis. Acta 1294: 48-54 (1996); Holven et al, Int. J. Câncer 71:654-9 (1997).

Os moduladores (p. ex, HPR) que inibem o suprimento de retinol às células, através da interrupção da ligação de retinol com apo RBP ou holo RBP (rbp + retinol) com sua proteína de transporte, TTR, ou a excreção renal aumentada de RBP e TTR, portanto, seriam úteis na diminuição dos níveis de vitamina A do soro e acúmulo de retinol e seus derivados em tecidos alvo, tais como o olho. TTR, por exemplo, mostrou ser um componente dos constituintes dos Gânglios, sugerindo um envolvimento direto de TTR em degeneração macular relacionada com a idade. Mullins, RF, FASEB J. 14:835-846 (2000); Pfeffer BA, et ai, Molecular Vision 10:23-30 (2004).

Espera-se que a mesma abordagem para modulação de níveis ou atividade de RBP e/ou TTR em um mamífero encontre uso no tratamento de distúrbios metabólicos, tais como diabetes tipo I ou tipo II, IIH, distúrbios relacionados com os ossos, tais como hiperostose, doenças de mal dobramento e agregação de proteína, tais como amiloidoses sistêmicas e doença de Alzheimer e síndrome de Alstrõm-Hallgren.

Uma forma de realização dos métodos e composições aqui descritos, portanto, fornece a modulação dos níveis ou atividade de RBP ou TTR em um mamífero, pela administração a um mamífero pelo menos uma vez de uma quantidade eficaz de pelo menos um dos compostos escolhidos do grupo consistindo de um inibidor da transcrição RBP, um inibidor da transcrição de TTR, um inibidor da translação de RBP, um inibidor da translação de TTR, um agente de purificação de TTR, um antagonista de RBP, um agonista de RBP, um antagonista de TTR, um agonista de TTR e um antagonista do receptor da proteína de ligação de retinol.

Proteína de Ligação de Retinol (RBP) e Transtirretina

(TTR)

A proteína de ligação de retinol, ou RBP, é uma cadeia simples de polipeptídeo, com um peso molecular de aproximadamente 21 kD. A RBP foi clonada e seqüenciada e sua seqüência amino ácida determinada. Colantuni et aL, Nuc. Acids Res., 11:7769-7776 (1983). A estrutura tridimensional da RBP revela uma bolsa hidrofóbica especializada, projetada para ligar e proteger a vitamina retinol solúvel em gordura. Newcomer et al., EMBO J., 3:1451-1454 (1984). Em experimentos in vitro, hepatócitos cultivados mostraram sintetizar e secretar RBP. Blaner, W.S., Endocrine Rev., 10:308-316 (1989). Experimentos subseqüentes demonstraram que muitas células contêm mRNA para RBP, sugerindo uma distribuição muito difundida de síntese de RBP por todo o corpo. Vide Blaner (1989). A maioria da RBP secretada pelo fígado contém retinol em um relação molar de 1:1 e a ligação de retinol a RBP é necessária para secreção de RBP normal.

Nas células, a RBP liga-se estreitamente ao retinol no retículo endoplásmico, onde ela é encontrada em altas concentrações. A ligação de retinol em RBP inicia uma translocação de retinol-RBP do retículo endoplásmico para o complexo de Golgi, seguido por secreção de retinol-RBP das células. A RBP secretadas pelos hapatócitos também auxilia na transferência de retinol dos hepatócitos para as células estreladas, onde ocorre secreção direta de retinol-RBP para dentro do plasma.

No plasma, aproximadamente 95% da RBP do plasma são associados com a transtirretina (TTR) em uma relação de 1:1 mol/mol, em que essencialmente toda a vitamina A plasmática é ligada a RBP. TTR é uma proteína plasmática bem-caracterizada, consistindo de quatro subunidades idênticas com um peso molecular de 54.980. A estrutura tridimensional total, elucidada por difração de raios-X, revela extensas folhas-β dispostas tetraedricamente. Blake et al., J. Mol. Biol., 121:339-356 (1978). Um canal corre através do centro do tetrâmero, em que são localizados dois sítios de ligação para tiroxina. Entretanto, somente uma molécula de tiroxina parece ser ligada normalmente à TTR devido à cooperatividade negativa. Pensa-se que a complexação de TTR com RBP-retinol reduza a filtragem glomerular do retinol, desse modo aumentando a meia-vida do retinol e RBP no plasma em cerca de três vezes.

Modulação da Transcrição e Translação de TTR e RBP Os camundongos sem RBP têm uma função retinal deteriorada e disponibilidade de vitamina A. Quadro, L, et ai. EMBO J. 18:4633-4644 (1999), aqui incorporado por referência em sua totalidade. Embora os camundongos RJBP-/- possam adquirir e armazenar retinol nos hepatócitos, eles não têm a capacidade de mobilizar estes estoques de retinol hepático, provocando um tênue status da vitamina A e tornando os camundongos inteiramente dependentes de um ingestão dietética regular de vitamina A. Quadro (1999). Similarmente, os níveis de retinol são também diminuídos em camundongos deficientes da transtirretina, tendo dois níveis de retinol e RBP circulantes, Epiksopou, V., et ai. Proc. NatL Acad. Sci 90:2375-2379 (1993); van Bennekum, A.M., et ai, J. Biol. Chem. 276:1107-1113 (2001), demonstrando que a TTR mantém níveis normais de retinol e metabólitos de retinol no plasma.

Métodos e composições que modulam RBP ou TTR em um indivíduo, portanto, afetam diretamente a ligação de retinol e subseqüente suprimento de retinol ao olho. Se um agente diminuir o suprimento de retinol ao olho de uma pessoa com uma doença vitreorretinal, tal como as retinopatias e degenerações maculares, então mais baixas quantidades de trans-retinal serão geradas em tal olho, o que também diminui a quantidade de A2E gerado no mesmo olho. Em razão de A2E ser citotóxica para as células do olho, em particular para as células compreendendo a retina do olho, quantidades diminuídas de A2E no olho de um paciente com doença vitrorretinal são esperadas fornecerem benefício. Assim, espera-se que a modulação (em particular regulação descendente) dos níveis de soro de RBP e TTR forneça benefício aos pacientes com várias condições e doenças vitreorretinais, incluindo mas não limitado a retinopatias e degenerações maculares. Além disso, tal modulação espera-se também produzir benefícios para pacientes, por exemplo, em tratamento de distúrbios metabólicos, tais como diabetes tipo I ou tipo II, IIH, distúrbios relacionados com os ossos, tais como hiperostose, doenças de mau dobramento e agregação de proteína, tais como amiloidoses sistêmicas e doença de Alzheimer e síndrome de Alstrõm- Hallgren. Métodos de promover níveis de soro mais baixos de TTR e RBP incluem, como exemplo somente, regulação descendente de transcrição TTR e/ou RBPj regulação descendente de translação TTR e/ou RBP, inibição de modificação de pós-translação TTR e/ou RBP, promoção da degradação intracelular de RBP e/ou TTR, inibição da secreção extra-celular da RBP e/ou TTR e/ou aumento das taxas de TTR e/ou RBP de depuração do soro.

Uma forma de realização dos métodos e composições aqui descritos é a modulação dos níveis ou atividade de TTR ou RBP por qualquer meio que afete a transcrição da TTR ou RBP e, assim, a expressão da respectivo mRNA transcrito nas células. Assim5 a expressão do receptor de RBP ou TTR pode ser regulada descendentemente, por exemplo, oligonucleotídeos antissentido para um mRNA codificando RBP ou TTR ou por regulação descendente da transcrição de tal mRNA, ou por modulação do transporte de mRNA, processamento, degradação etc.. Tal regulação ou modulação descendente pode fazer uso de métodos conhecidos na arte, por exemplo, pelo uso de inibidores de transcrição.

A translação do receptor da proteína de ligação de retinol de mRNA RBP e TTR pode também ser regulada como um meio de regulação descendente da expressão desta proteína. Tal regulação ou modulação descendente pode fazer uso de métodos conhecidos na arte, por exemplo, pelo uso de inibidores não-específicos ou específicos da translação RBP ou TTR.

Por exemplo, a modulação da transcrição ou translação de RBP pode ocorrer através da administração de inibidores específicos ou não específicos da transcrição ou translação da RBP. A região regulatória transcricional 5' da RBP humana foi clonada e seqüenciada. Vide DOnofrio, C, et al. EMBO J. 4:1981-1989 (1985); Colontuoni, V., et al., EMBO J. 6:631-636 (1987), ambos sendo incorporados aqui por referência. A expressão de RBP do camundongo mostrou ser regulada pelo ácido retinóico, em que tanto o ácido trans-retinóico como 9-cis retinóico mostraram induzir a expressão de mRNA de RBP em uma maneira dependente da dose e do tempo. Jessenj ΚΑ, e Satrej MA5 Mol. Cell Biochem. 211:85-94 (2000). Portanto, uma forma de realização aqui descrita é o uso de agonistas e antagonistas do ácido retinóico, tais como antagonistas RXR e RAR ou retinil metil éter (Vide Sani, BP, et ai. Biochem. Biophys. Res. Commun., 223: 293- 298 (1996), aqui incorporado por referência em sua totalidade), para a modulação da transcrição ou translação de RBP em uma célula. Outros reguladores transcricionais e de translação de RBP incluem estrogênio, progesterona, testosterona e dexametasona (Vide Eberhardt, DM, et al., Biol. Reprod. 60:714-720 (1999); Bucco RA, et al., Endocrinology 37:3111-3122 (1996); McKearin, D.M., et al, J. Biol. Chem 263:3261-3265 (1988)). HNF- 4, um membro da família da proteína de ligação de Zn em dedo, também regula a expressão de RBP e TTR. Duncan, S.A, et al. Development 124:279- 287 (1997); Hayashi, Y, et al, J. Clin. Patol.: MoL Patol. 52:19-24 (1999), ambos sendo aqui incorporados por referência. Portanto, os agonistas e antagonistas de HNF-4 e as proteínas de ligação de Zn em dedo podem ser úteis na modulação da transcrição ou translação de RBP ou TTR.

A TTR é regulada por uma variedade de fatores de transcrição específicos hepáticos, incluindo fator nuclear hepático (HNF) 1, HNF-3, HNF-4 e HNF-6. Vide Hayashi, Y, et al, J. Clin. Patol.: Mol. Patol. 52:19-24 (1999); Samadani, U, et al, Mol. Cell Biol. 16:6273-6284 (1996), ambos sendo aqui incorporados por referência em sua totalidade. CCAAT/proteína de ligação intensificadora (C/EBP) e proteínas de ligação de ácido graxo têm também estado implicadas na representação de um papel na transativação da TTR em hepatócitos. Vide Hayashi (1999); Puskas, L.G, et al. Proc. Natl. Acad. Sei. 100:1580-1585 (2003), aqui incorporado por referência em sua totalidade.

Outros reguladores transcricionais e translacionais da transcrição ou translação de RBP ou TTR incluem siRNA, ribozimas, anticorpos, oligonucleotídeos antissentido ou aptâmeros. Em uma forma de realização, os RNAs de curta interferência (siRNAs) podem modular a transcrição ou translação de RBP ou TTR através da interferência do RNA (RNAi) ou silenciamento do gene pós-transcricional (PTGS) (vide, por exemplo, Ketting et ai. (2001) Genes Develop. 15:2654- 2659). As moléculas siRNA podem alvejar as moléculas de mRNA homólogas para destruição clivando a molécula mRNA dentro da região abarcada pela molécula siRNA. Por conseguinte, os siRNAs capazes de alvejar e clivar mRNa de TTR ou RBP homólogo são, portanto, úteis para a modulação dos níveis ou atividade de TTR ou RBP em um indivíduo. Em outra forma de realização, as ribozimas podem ser usadas na modulação da transcrição ou translação de RBP ou TTR. As ribozimas são moléculas de RNA enzimáticas, capazes de catalisar a clivagem especifica de RNA. O mecanismo de ação da ribozima envolve a hibridização específica de seqüência da molécula de ribozima para o RNA alvo complementar, seguido por um evento de clivagem endonucleolítico. A composição das moléculas da ribozima deve incluir uma ou mais seqüências complementares ao mRNA do gene alvo e deve incluir a bem conhecida seqüência catalítica, responsável pela clivagem de mRNA. Para esta seqüência, vide, p. ex., Patente U.S. No. 5.093.246. Embora as ribozimas que clivam mRNA em seqüências de reconhecimento específicas de sítio possam ser usadas para destruir mRNAs codificando RBP ou TTR, podem também ser usadas ribozimas cabeça de martelo. As ribozimas cabeça de martelo clivam os mRNAs em locais ditados pelas regiões flanqueantes, que formam pares bases complementares com o mRNA alvo. A única exigência é que o mRNA alvo tenha a seguinte seqüência de duas bases: 5'-UG-3’ A construção e produção de ribozimas cabeça de martelo é bem conhecida na arte. As ribozimas aqui descritas podem também incluir RNA endorribonucleases (a seguir "ribozimas tipo- Cech"), tais como a que ocorre naturalmente em Tetrahymena Thermophila (conhecida como a RNA IVS ou IVS L-19). As ribozimas tipo Cech têm um sítio ativo de oito pares bases, que hibridizam em uma seqüência de RNA alvo, em que, após a clivagem do alvo, o RNA ocorre. Os métodos e composições aqui abrangem aquelas ribozimas tipo Cech que alvejam seqüências de sítio ativo de oito pares bases, que estão presentes nos genes codificando RBP ou TTR.

Em ainda outra forma de realização, os anticorpos podem ser usados para modular a transcrição ou translação de TTR ou RBP em um indivíduo. O termo "anticorpo" como aqui usado refere-se a um polipeptídeo compreendendo uma região de estrutura de um gene da imunoglobulina ou seus fragmentos, que especificamente ligam-se e reconhecem um antígeno. Os genes da imunoglobulina reconhecidos incluem as regiões constantes capa, lambda, alfa, gama, delta, épsilon e mu, bem como os miríades genes da região variável da imunoglobulina. As cadeias leves são classificadas como capa ou lambda. As cadeias pesadas são classificadas como gama, mu, alfa, delta ou épsilon que, por sua vez, definem as classes de imunoglobulina IgG, IgM, IgA, IgD e IgE5 respectivamente. Dentro de cada classe IgG, há diferentes isótipos (p. ex., IgGi, IgG2 etc.). Tipicamente, a região da ligação de antígeno de um anticorpo será a mais crítica na determinação da especificidade e afinidade de ligação.

Uma unidade estrutural de imunoglobulina (anticorpo) exemplar compreende um tetrâmero. Cada tetrâmero é composto de dois pares idênticos de cadeias de polipeptídeo, cada par tendo uma cadeia leve (cerca de 25 kD) e uma cadeia pesada (cerca de 50 - 70 kD). O término-N de cada cadeia define uma região variável de cerca de 100 - 110 ou mais amino ácidos, principalmente responsáveis por reconhecimento do antígeno. As expressões "cadeia leve variável" (Vl) e "cadeia pesada variável (Vr)" referem-se a estas cadeias leves e pesadas respectivamente.

Os métodos para preparar os anticorpos são bem conhecidos na arte. Vide, por exemplo, Kohler & Milstein (1975) Nature 256:495-497; Harlow & Lane (1988) Antibodies: a Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Lab., Cold Spring Harbor, N.Y.). O genes codificando as cadeias pesadas e leves de um anticorpo de interesse podem ser clonados de uma célula, p. ex., os genes codificando um anticorpo monoclonal podem ser clonados de um hibridoma e usados para produzir um anticorpo monoclonal recombinante. As bibliotecas de gene codificando cadeias leves e pesadas de anticorpos monoclonais podem ser produzidas de células de hibridoma ou plasma. Combinações aleatórias dos produtos genéticos de cadeias pesada e leve geram um grande agrupamento de anticorpos com diferente especificidade antigênica. Técnicas para a produção de anticorpos de cadeia simples ou anticorpos recombinantes (Patente U.S. No. 4.946.778; Patente U.S. No. 4.816.567) podem ser adaptadas para produzir anticorpos usados nas proteínas de fusão e métodos da presente invenção. Também camundongos transgênicos ou outros organismos, tais como outros mamíferos, podem ser usados para expressar anticorpos humanos ou humanizados. Alternativamente, a tecnologia de exibição de fato pode ser usada para identificar anticorpos e fragmentos Fab heteroméricos, que especificamente se ligam a antígenos selecionados.

A avaliação e seleção de anticorpos preferidos podem ser conduzidas por uma variedade de métodos conhecidos na arte. A avaliação inicial quanto à presença de anticorpos monoclonais específicos para um antígeno alvo pode ser conduzida através do uso de métodos baseados em ELISA, por exemplo. Uma avaliação secundária é preferivelmente conduzida para identificar e selecionar um desejado anticorpo monoclonal para uso na construção das proteínas de fusão multi-específicas da invenção. A avaliação secundária pode ser conduzida com qualquer método adequado conhecido da arte.

O modulador aqui descrito pode também compreender um ou mais compostos antissentido, incluindo RNA antissentido e DNA antissentido, que são, por meio de exemplo somente, capaz de reduzir o nível endógeno de RBP ou TTR dentro de um indivíduo. Assim, é incluído um modulador capaz de diminuir o nível de expressão de RBP ou TTR em uma célula, de modo que os níveis ou atividade de TTR ou RBP endógenos sejam reduzidos. Preferivelmente, os compostos antissentido compreendem seqüências complementares aos ácidos nucléicos RBP ou TTR.

Em uma forma de realização, os compostos antissentido são compostos antissentido oligoméricos, particularmente oligonucleotídeos. Os compostos antissentido hibridizam especificamente com um ou mais ácidos nucléicos codificando RBP ou TTR. Como aqui usada, a expressão "ácido nucléico codificando RBP ou TTR" abrange DNA codificando RBP ou TTR, RNA (incluindo pré-mRNa e mRNA) transcrito de tal DNA e também cDNA derivado de tal RNA.

A hibridização específica de um composto oligomérico com seu ácido nucléico alvo interfere com a função normal do ácido nucléico. Esta modulação de função de um ácido nucléico alvo pelos compostos que especificamente hibridizam é geralmente referida como "antissentido". As funções do DNA com que é realizada a interferência incluem a replicação e transcrição. As funções do RNA com que é realizada a interferência incluem todas as funções vitais, tais como, por exemplo, translocação do RNA ao sítio de translação da proteína, translação da proteína do RNA, junção do RNA para produzir uma ou mais espécies de mRNA e atividade catalítica, que pode ser encaixada com ou facilitada pelo RNA. O efeito total de tal interferência com a função do ácido nucléico alvo é modulação da expressão do receptor da proteína de ligação de retinol ou uma enzima da síntese do ácido retinóico (incluindo desidrogenase do retinol e desidrogenase retinal). As construções antissentido são descritas em detalhe na Patente U.S. No. 6.100.090 (Monia et ai.) e Neckers et ai., 1992, Crit Rev Oncog 3 (1-2): 175 - 231, cujos ensinamentos são especificamente incorporados aqui por referência. Em outra forma de realização, os aptâmeros são usados para modular a transcrição ou translação de RBP ou TTR em um indivíduo. Aptâmeros referem-se a reagentes gerados em uma seleção de uma biblioteca combinatorial (tipicamente in vitro), em que uma molécula alvo, geralmente embora não exclusivamente uma proteína ou ácido nucléico, é usada para selecionar de um agrupamento combinatorial de moléculas, geralmente embora não exclusivamente oligonucleotídeos, aquelas que são capazes de ligarem-se à molécula alvo. Os reagentes selecionados podem ser identificados como aptâmeros primários. O termo "aptâmero" inclui não somente o aptâmero primário em sua forma original, mas também os aptâmeros secundários, derivados de (isto é, criados minimizando-se e/ou modificando-se o aptâmero primário. Os aptâmeros, portanto, devem comportar-se como ligandos, ligando-se a sua molécula alvo. Vide Stull e Szoka, Pharmaceutical Res. 12(4):465-483 (1995). Nos métodos e composições aqui descritos, os aptâmeros que se ligam a ácido nucléico ou proteínas envolvidos na transcrição ou translação, ou regulação de transcrição ou translação, podem ser usados para modular transcrição ou translação de RBP ou TTR em um indivíduo.

Uma combinação de dois ou mais moduladores pode ser usada, por exemplo, uma combinação de modulador RBP e um modulador de transcrição ou translação de TTR. Tais múltiplos tratamentos podem ser administrados simultânea ou seqüencialmente, por exemplo, em rotação.

Modulação de Ligação ou Depuração de RBP ou TTR em

um Indivíduo

Antes de o retinol ligado à RBP ser transportado na corrente sangüínea para suprimento ao olho, ele deve ser complexado com TTR. E ete complexo secundário que permite que o retinol permaneça na circulação por períodos prolongados. Na ausência de TTR, o complexo de retinol-RBP seria rapidamente excretado na urina. Similarmente, na ausência de RBP, o transporte de retinol na corrente sangüínea e absorção pelas células seriam diminuídos.

Outra forma de realização da invenção, portanto, é para modular a disponibilidade de RBP ou TTR para complexar com retinol ou retinol-RBP na corrente sangüínea pela modulação das características de ligação ou taxas de depuração de RBP ou TTR. Como mencionado acima, a ligação de TTR com a holoproteína RBP diminui a taxa de depuração da RBP e retinol. Portanto, modulando-se a disponibilidade ou atividade de RBP ou TTR, os níveis de retinol podem igualmente ser modulados em um indivíduo em necessidade.

Por exemplo, os antagonistas de retinol ligando-se a RBP podem ser usados nos métodos e composições aqui descritos. Um antagonista da ligação de retinol em RBP pode incluir derivados ou análogos de retinol que competem com a ligação de retinol com RBP. Alternativamente, um antagonista pode compreender um fragmento de uma RBP que compete com a RBP nativa para ligação de retinol, porém não permite o suprimento de retinol nas células. Isto pode incluir regiões importantes para ligação de RBP ao receptor da proteína de ligação de retinol das células. Alternativamente ou em adição, uma imunoglobulina capaz de ligar-se a RBP ou outra proteína, por exemplo, na superfície da célula pode ser usada, contanto que interfira com a capacidade de RBP de ligar-se com retinol e/ou a absorção de retinol pela ligação da RBP com o receptor da proteína de ligação de retinol. Como acima, a imunoglobulina pode ser um anticorpo monoclonal ou policlonal.

Como mencionado acima, um meio pelo qual a RBP ligando- se a retinol pode ser modulada é competitivamente ligar-se a agonistas ou antagonistas da RBP, tais como análogos de retinol. Portanto5 uma forma de realização dos métodos e composições aqui descritos provê agonistas de RBP ou antagonistas de RBP em níveis ou atividade de RBP modulantes. Por exemplo, a administração do análogo do ácido retinóico, N-4- (hidroxifenil)retinamida (HPR ou fenretinida) mostrou causar profundas reduções no retinol e RBP do soro. Formelli et al., Câncer Res. 49:6149-52 (1989); Formelli et al., J. Clin Oncol., 11:2036-42 (1993); Torrisi et al., Câncer Epidamiol. Biomarkers Prev., 3:507-10 (1994). Estudos in vitro demonstraram que HPR interfere com a interação normal de TTR com RBP. Vide Malpeli et al., Biochim. Biofis. Acta 1294: 48-54 (1996); Holven et al., Int. J. Câncer 71:654-9 (1997).

Outros exemplos de moduladores potenciais dos níveis ou atividade de RBP incluem derivados de vitamina A, tais como tretinoína (ácido trans-retinóico) e isotretinoína (ácido 13-cis-retinóico), que são usados no tratamento de acne e certos outros distúrbios da pela. Outros derivados incluem etilretinamida. Em alguns aspectos dos métodos e composições aqui descritos, contempla-se que os derivados de retinol, derivados de retinila e retinóides relacionados possam ser usados sozinhos ou em combinação com outros derivados de retinol ou retinóides relacionados.

Outros moduladores potenciais dos níveis de ou atividade de RBP incluem derivados de retinila tendo a estrutura de Fórmula (I) e Fórmula (II):

<formula>formula see original document page 80</formula> em que X é selecionado do grupo consistindo de NR2 , O, S,

CHR2; R1 é (CHR2)xL1-R3, em que χ é 1, 2, ou 3; L1 é uma ligação simples

ou -C(O)-; R2 é uma porção selecionada do grupo consistindo de H, (Ci-

C4)alquila, F, (C1-C4)fluoroalquila, (C1-C4)alcóxi, -C(O)OH, -C(O)-NH2, -

(C1-C4)alquilamina, -C(0)-(C1-C4 )alquila, -C(0)-(C1-C4 )fluoralquila, -C(O)-

(C1-C4 )alquilamina, e -C(0)-(C1-C4)alcóxi; e R3 é H ou um porção, opcionalmente substituído por 1-3 substituintes independentemente selecionados, selecionados do grupo consistindo de (C2-C7)alquenila, (C2- C7)alquinila, arila, (C3-C7)cicloalquila, (C5-C7)cicloalquenila, e um heterociclo; ou um metabólito ativo, ou uma pró-droga ou um solvato farmaceuticamente aceitável do mesmo; ou

<formula>formula see original document page 81</formula> em que X1 é seleicionado do grupo consistindo de NR2,O,S CHR2; R1 é (CHRz)x-L1-Rj5 em que χ é 0, 1, 2, ou 3; L é uma ligação simples ou -C(O)-; R é uma porção selecionada do grupo consistindo de H, (CrC4 )alquila, F, (CrC4)fluoroalquila, (CrC4)alcóxi, -C(O)OH, -C(O)-NH2, -(C1 C4) alquilamina, -C(0)-(C1-C4)alquila, -C(0)-(C1-C4)fluoroalquila, -C(O)- (C1 -C4)alquilamina, e -C(0)-(C 1 -C4)alcóxi; e R é H ou um porção, opcionalmente substituído por 1-3 substituintes independentemente selecionados, selecionados do grupo consistindo de (C2-C7)alquenila, (C2- C7)alquinila, arila, (C3-C7)cicloalquila, (C5-C7)cicloalquenila, e um heterociclo; ou um metabólito ativo, ou uma pró-droga ou um solvato farmaceuticamente aceitável do mesmo. A fenretinida(a seguir referida como retinamida de hidroxifenila) é um exemplo de um composto tendo a estrutura da Fórmula (II) e é particularmente útil nas composições e métodos aqui descritos. Como será explicado abaixo, a fenretinida pode ser usada como um modulador da ligação de retinol-RBP. Em alguns aspectos dos métodos e composições aqui descritos, os derivados de fenretinida podem ser usados em lugar de ou em combinação com fenretinida. Como aqui usado, um "derivado de fenretinida" refere-se a um composto cuja estrutura química é quimicamente derivada da fenretinida.

Em algumas formas de realização, os derivados de fenretinida que podem ser usados incluem mas não são limitados a análogos de C- glicosídeo e arilamida de N-(4-hidroxifenil) retinamida-O-glicuronídeo, i incluindo mas não limitado a 4-(retinamido)fenil-C-glicuronídeo, 4- (retinamido)fenil-C-glicosídeo, 4-(retinamido)fenil-C-xÍlosídeo, 4- (retinamido)benzil-C-glicuronídeo, 4-(retinamido)benzil-C-glicosídeo, 4- (retinamido)benzil-C-xilosídeo; e análogos de retinoíla [beta]-glicuronídeo, tais como, por exemplo, l-(p-D-glicopiranosil) retinamida e 1-(D- glicopiranosiluronosil) retinamida, descritos nas U.S. Pat. Nos. 5.516.792. 5.663.377, 5.599.953, 5.574.177 e Bhatnagar et al, Biochem. Pharmacol., 41:1471-7 (1991), incorporadas aqui por referência.

Em outras formas de realização, outros derivados da vitamina A podem ser usados, incluindo aqueles descritos na Patente U.S. No. 4.743.400, incorporada aqui por referência. Estes retinóides incluem, por exemplo, cloreto de trans retinoíla, tans-4-(metoxifenil)retinamida (metoxifenil retinamida), 13-Cis-4-(hidroxifenil) retinamida e trans-4- (etoxifenil) retinamida. A Patente U.S. No. 4.310.546, incorporada aqui por referência, descreve N-(4-aciloxifenil)-trans-retinamidas, tais como, por exemplo, N-(4-acetoxifenil)-trans-retinamida, N-(4-propioniloxifenil)-trans- retinamida e N-(4-n-butiriloxifenil-)-trans-retinamida, todas sendo contempladas para uso em certas formas de realização.

Outros derivados ou metabólitos da vitamina A, tais como N- (1 H-tetrazol-5-il)retinamida, N-etilretinarnida, 13 -Cis-N-etilretinamida, N- butilretinamida, etretina (acitretina), etretinato, tretinoína (ácido trans- retinóico) ou isotretinoína (ácido 13-cis-retinóico), podem ser contemplados para uso em certas formas de realização. Vide Pedidos de Patente Provisória U.S. Nos. 60/582.293 e 60/602.675; Vide também Turton et al., Int. J. Exp. PatoL, 73:551-63 (1992), todos incorporados aqui por referência.

Similarmente, a modulação da ligação de TTR pode ocorrer com aglutinantes competitivos com a ligação do ligando TTR, tal como tiroxina ou tri-iodotironina ou seus análogos respectivos, ou com a ligação de RBP em TTR. A TTR é uma proteína tetramérica consistindo de idênticas subunidades intercaladas de folha-β de 127 amino ácidos e sua configuração tridimensional é conhecida. Blakes Cs et al., J. MoL Biol. 61:217-224 (1971); Blake, C. et al., J. MoL Biol. 121:339-356 (1978). TTR complexa com holo- RBP e aumenta as meias-vidas de RBP ao evitar a filtragem glomerular de RBP e retinol. A modulação da ligação TTR à holo RBP, portanto, pode modular os níveis de RBP e retinol pela diminuição da meia-vida destas composições.

A estrutura tridimensional de TTR complexada com holo RBP mostra que o ligando natural das TTRs, tiroxina, não interfere com a ligação da holoproteína RBP. Monacoj H.L., et al. Science, 268:1039-1041 (1995). Entretanto, estudos envolvendo inibidores competitivos da ligação da tiroxina mostraram que o rompimento do complexo de holoproteína TTR-RBP pode ocorrer, resultando na diminuição dos níveis do retinol do plasma no indivíduo. Por exemplo, os metabólitos para 3,4,3',4'-tetraclorobifenila reduz os sítios de ligação de RBP em TTR e inibe a formação do complexo de holoproteína TTR-RBP. Vide Brouwers A., et al. Chem. Biol. Interact., 68:203-17 (1988); Brouwer, A., et aL, ToxicoL Appl. Farmacol. 85:310-312 (1986). Portanto, uma forma de realização dos métodos e composições aqui descritos inclui o uso de metabólicos de hidrocarboneto aromáticos poli- halogenados hidroxilados para a modulação da estabilidade da TTR ou RBP.

Somente como exemplo, outros moduladores da TTR incluem diclofenaco, um análogo de diclofenaco, um composto de molécula pequena, um análogo do hormônio endócrino, um flavonóide, uma droga anti- inflamatória não-esteróide, um inibidor bivalente, um agente cardíaco, um peptidomimético, um aptâmero e um anticorpo.

Em uma forma de realização, agentes inflamatórios não- esteróides podem ser usados como moduladores TTR, incluindo mas não limitado a ácido flufenâmico, ácido mefenâmico, ácido meclofenâmico, diflunisal, diclofenaco, ácido diclofenâmico, sulindac e indometacina. Vide Petersonj S.A., et al.; Proc. Natl. Acad. Sei. 95:12956-12960 (1998); Purkey, H.E., et al., Proc. Natl. Acad. Sei. 98:5566-5571 (2001), ambas incorporadas aqui por referência em sua totalidade.

Análogos de diclofenaco podem também ser usados em conjunto com os métodos e composições aqui descritos. Alguns exemplos incluem ácido 2-[(2,6-diclorofenil)amino]benzóico; ácido 2-[(3,5- diclorofenil)amino]benzóico; ácido 3,5,-dicloro-4-[(4-nitrofenil)amino] benzóico; ácido 2-[(3,5-diclorofenil)amino]benzeno acético; e ácido 2-[(2,6- dicloro-4-carboxílico ácido-fenil)amino]benzeno acético. Vide Oza, V.B. et al., J. Med. Chem. 45:321-332 (2002), por este meio incorporado por referência em sua totalidade. Similarmente, análogos de diflunisal podem também ser usados em conjunto com os métodos e composições aqui descritos. Alguns exemplos incluem 3',5'-difluorobifenil-3-ol; ácido 2',4- diflurobifenil-3-carboxílico; ácido 2,,4'-difluorobifenil-4-carboxílico; ácido 2'- fluorobifenil-3-carboxílico; ácido 2'-fluorobifenil-4-carboxílico; ácido 3',5'- difluorobifenil-3-carboxílico; ácido 3',5,-difluorobifenil-4-carboxílico; ácido 2',6'-difluorobifenil-3-carboxílico; ácido 2'6,-difluorobifenil-4-carboxílico; ácido bifenil-4-carboxílico; ácido 4'fluoro-4-hidroxibifenil-3-carboxílico; ácido 2!-fluoro-4-hidroxibifenil-3-carboxílico; ácido 3',5'-difluoro-4- hidroxibifenil-3-carboxílico; ácido 2',4'-dicloro-4-hidroxibifenil-3- carboxílico; ácido 4-hidroxibifenil-3-carboxílico; ácido 3'5'-difluoro- 4'hidroxibifenil-3-carboxílico; ácido 3',5,-difluoro-4,hidroxibifenil-4- carboxílico; ácido 3',5,-dicloro-4'hidroxibifenil-3-carboxílico; ácido 3',5'- dicloro-4'hidroxibifenil-4-carboxílico; 3' ,5 '-dicloro-3 -formilbifenila; 3' ,5' - dicloro-2-formilbifenila; ácido 2',4'-diclorobifenil-3-carboxílico; ácido 2',4'- diclorobifenil-4-carboxílico; 3',5'-diclorobifenil-3-il-metanol; 3',5'- diclorobifenil-4-il-metanol; ou 3,,5'-diclorobifenil-2-il-metanol. Vide Adamski-Werner, S.L., et al., J. Med. Chem. 47:355-374 (2004), cujos ensinamentos são por este meio incorporados por referência em sua totalidade. Inibidores bivalentes que se ligam a análogos de molécula pequena em um composto, podem também ser usados em conjunto com os métodos e composições aqui descritos. Green, N.S. et al., J. Am. Chem. Soc., 125: 13404- 13414(2003).

Flavonóides e compostos relacionados mostraram também competir com a tiroxina para ligação a TTR. Como exemplo somente, alguns flavonóides que podem ser usados em conjunto com os métodos e composições aqui descritos, incluem 3-metil-4',6-diidróxi-3',5'- dibromoflavona ou 3,,5,-dibromo-2',4,4,,6-tetraidroxiaurona. Os flavonóides e flavonóides, que são relacionados com flavonóides, podem também ser usados como moduladores da ligação TTR. Vide Pedraza, P., et al., Endocrinology 137:4902-4914 (1996), aqui incorporado por referência. Estes agentes incluem, por exemplo somente, milrinona e amrinona. Vide Davis, PJ, et al., Biochem. Pharmacol. 36:3635-3640 (1987); Cody, V., Clin. Chem. Lab. Med. 40: 1237-1243 (2002).

Adicionalmente, análogos, agonistas e antagonistas de hormônio foram mostrados serem inibidores competitivos eficazes para hormônio da tiróide, incluindo tiroxina e tri-iodotironina. Por exemplo, dietilestilbestrol, um antagonista do estrogênio, foi mostrado ligar-se a e inibir a ligação da tiroxina. Vide Morais-de-Sa, E., et al., J. Biol. Chem. Epub. (6 de outubro de 2004), incorporado aqui por referência em sua totalidade. O ácido tiroxina-propiônico, ácido tiroxina acético e SKF-94901 são alguns exemplos de análogos da tiroxina, que podem atuar como moduladores da ligação de TTR. Vide Cody, V. (2002). Além disso, o ácido retinóico foi também mostrado inibir a ligação da tiroxina na transtirretina humana. Smith, TJ, et al., Biochim. Biofis. Acta, 1199:76 (1994).

Outras formas de realização incluem o uso inibidores de molécula pequena como moduladores da ligação de TTR. Alguns exemplos incluem ácido N-fenilantranílico, vermelho de metila, laranja mordente I9 bisarilamina, ácido N-benzil-p-aminobenzóico, furosamida, apigenina, resveratrol, dibenzofurano, ácido niflúmico ou sulindac. Vide Bauresj P.W., et ai. Bioorg. & Med. Chem. 6: 1389-1401 (1998), incorporado aqui por referência.

Moduladores para uso aqui são também destinados a incluir uma proteína, polipeptídeo ou peptídeo, incluindo mas não limitado a uma proteína estrutural, uma enzima, uma citocina (tal como um interferon e/ou uma interleucina), um antibiótico, um anticorpo policlonal ou monoclonal ou uma sua parte eficaz, tal como um fragmento Fv, cujo anticorpo ou parte dele pode ser natural, sintético ou humanizado, uma hormônio de peptídeo, um receptor, uma molécula de sinalização ou outra proteína; um ácido nucléico, como definido abaixo, incluindo mas não limitado a um oligonucleotídeo ou oligonucleotídeo modificado, um oligonucleotídeo antissentido ou oligonucleotídeo antissentido modificado, cDNA, DNA genômico, um cromossoma artificial ou natural (p. ex., um cromossoma artificial de levedura) ou uma parte dele, RNA, incluindo mRNA, tRNA, rRNA ou uma ribozima, ou um ácido nucléico de peptídeo (PNA); um vírus ou partículas semelhantes a vírus; um nucleotídeo ou ribonucleotídeo ou seu análogo sintético, que podem ser modificados ou não modificados; um amino ácido ou seu análogo, que pode ser modificado ou não modificado; um hormônio não- peptídeo (p. ex., esteróide); um proteoglicano; um lipídeo; ou um carboidrato. Moléculas pequenas, incluindo produtos químicos inorgânicos e orgânicos, que se ligam ao e ocupam o sítio ativo do polipeptídeo, desse modo tornando o sítio catalítico inacessível a substrato, de modo que atividade biológica normal seja evitada, são também incluídos. Exemplos de moléculas pequenas incluem mas não são limitados a peptídeos pequenos ou moléculas semelhantes a peptídeos.

Detecção da atividade moduladora Os compostos e composições aqui descritos podem também ser usados para detectar perturbações da disponibilidade de RBP ou TTR, através de meios convencionais. Por exemplo, um indivíduo pode ser tratado com qualquer um dos compostos ou composições aqui descritos e os níveis de RBP ou TTR quantificados usando-se técnicas de ensaio convencionais. Vide Sundaramj M., et ai, Biochem. J. 362:265-271 (2002). Por exemplo, um ensaio sanduíche não-competitivo típico é um ensaio descrito na Patente U.S. No. 4.486.530, incorporada aqui por referência. Neste método, um complexo de sanduíche, por exemplo, um complexo imune, é formado em um meio de ensaio. O complexo compreende o analisado, um primeiro anticorpo ou membro de ligação que se liga ao analisado e um segundo anticorpo, ou membro de ligação que se liga ao analisado ou um complexo do analisado e o primeiro anticorpo, ou membro de ligação. Subseqüentemente, o complexo sanduíche é detectado e é relacionado com a presença e/ou quantidade de analisado da amostra. O complexo sanduíche é detectado e é relacionado com a presença e/ou quantidade de analisado da amostra. O complexo sanduíche é detectado em virtude da presença no complexo de um rótulo em que um ou outro ou ambos dos primeiro anticorpo e segundo anticorpo, ou membros de ligação, contêm rótulos ou substituintes capazes de combinar com os rótulos. A amostra pode ser plasma, sangue, fezes, tecido, muco, lágrimas, saliva ou urina, por exemplo, para detectar a modulação das taxas de depuração para RBP ou TTR. Para um exame mais detalhado desta abordagem, vide Patentes U.S. Nos. Re 29.169 e 4.474.878, cujas descrições são incorporadas aqui por referência.

Em uma variação do ensaio de sanduíche acima, a amostra em um meio adequado é contatada com anticorpo ou membro de ligação rotulado para o analisado e incubada por um período de tempo. Em seguida, o meio é contatado com um suporte a que é ligado um segundo anticorpo ou membro de ligação para o analisado. Após um período de incubação, o suporte é separado do meio e lavado para remover reagentes não ligados. O suporte ou o meio é examinado quanto à presença do rótulo, que é relacionado com a presença ou quantidade de analisado. Para um exame mais detalhado desta abordagem, vide Patente U.S. No. 4.098.876, cuja descrição é incorporada aqui por referência.

Os moduladores descritos aqui pode também ser usados em ensaios in vitro para detectar perturbações da atividade de RBP ou TTR. Por exemplo, o modulador pode ser adicionado a uma amostra compreendendo RBP, TTR e retinol para detectar rompimento do complexo. Um componente, por exemplo, RBP, TTR, retinol ou o modulador, pode ser rotulado para determinar se o rompimento da formação de complexo ocorre. A formação de complexo e subseqüente rompimento podem ser detectados e/ou medidos através de meios convencionais, tais como os ensaios de sanduíche descritos acima. Outros sistemas de detecção podem também ser usados para detectar a modulação da ligação de RBP ou TTR, por exemplo, detecção FRET de formação de complexo de RBP-TTR-retinol. Vide Pedido de Patente Provisória No. 60/625.532 "Fluorescence Assay for Modulators of Retinol Binding," aqui incorporado por referência em sua totalidade.

Ensaios de expressão de gene in vitro podem também ser usados para detectar modulação da transcrição ou translação de RBP ou TTR pelos moduladores aqui descritos. Por exemplo, como descrito em Wodicka et al., Nature Biotechnology 15 (1997), (aqui incorporada por referência em sua totalidade), em razão de a hibridização de mRNA correlacionar-se com o nível de expressão genética, os padrões de hibridização podem ser comparados para determinar a expressão genética diferencial. Como um exemplo não limitativo, os padrões de hibridização das amostras tratadas com os moduladores podem ser comparados com os padrões de hibridização das amostras que não foram tratadas ou que foram tratadas com um diferente composto ou com diferentes quantidades do mesmo composto. As amostras podem ser analisadas utilizando-se tecnologia de formação de DNA, vide Patente U.S. No. 6.040.138, aqui incorporada por referência em sua totalidade. A análise da expressão genética da atividade de RBP ou TTR pode também ser analisada usando-se tecnologia de DNA recombinante, analisando-se a expressão das proteínas repórter acionadas pelas regiões promotoras de RBP ou TTR em um ensaio in vitro. Vide, p. ex., Rapley e Walquerj Molecular Biomethods Handbook (1998); Wilson e Walquer, Principais and Techniques of Practical Biochemistry (2000), aqui incorporados por referência em sua totalidade.

Ensaios de translação in vitro podem também ser usados para detectar a modulação ou translação de RBP ou TTR pelos moduladores aqui descritos. Como exemplo somente, a modulação da translação pelos moduladores pode ser detectada através do uso de sistemas de translação de proteína de célula livre, tais como extrato de E. coli, lisado de reticulócito de coelho e extrato de germe de trigo, vide Spirin, A. S., biorreator de síntese de proteína de livre de célula (1991), aqui incorporado por referência em sua totalidade, comparando-se a translação das proteínas na presença e ausência dos moduladores aqui descritos. Os efeitos dos moduladores sobre a translação da proteína podem também ser monitorados usando-se análise de complexo eletroforético de gel de proteína ou imune, para determinar as diferenças qualitativas e quantitativas após a adição dos moduladores.

Além disso, outros moduladores potenciais, que incluem mas não são limitados a pequenas moléculas, polipeptídeos, ácidos nucléicos e anticorpos, podem também ser selecionados empregando-se os métodos de detecção in vitro descritos acima. Por exemplo, os métodos e composições descritos aqui podem ser usados para selecionar bibliotecas de moléculas pequenas, bibliotecas de ácido nucléico, bibliotecas de peptídeo ou bibliotecas de anticorpos, em conjunto com os ensinamentos aqui descritos. Métodos para selecionar bibliotecas, tais como bibliotecas combinatoriais e outras bibliotecas descritas acima, podem ser encontrados nas Patentes U.S. Nos. 5.591.646; 5.866.341 e 6.343.257, que são por este meio incorporadas aqui por referência em sua totalidade.

Detecção in vivo da atividade do modulador

Além dos métodos in vitro descritos acima, os métodos e composições aqui descritos podem também ser usados em conjunto com detecção in vivo e/ou quantificação da atividade moduladora da disponibilidade de TTR ou RBP. Por exemplo, a TTR ou RBP rotulada pode ser injetada em um indivíduo, em que um modulador candidato é adicionado antes, durante ou após a injeção da TTR ou RBP rotulada. O indivíduo pode ser um mamífero, por exemplo, um humano; entretanto outros mamíferos, tais como primatas, cavalo, cão, carneiro, cabra, coelho, camundongos ou ratos podem também ser usados. Uma amostra biológica é então removida do indivíduo e o rótulo detectado para determinar a disponibilidade de TTR ou RBP. Uma amostra biológica pode compreender mas não é limitada a plasma, sangue, urina, fezes, muco, tecido, lágrimas ou saliva. A detecção dos reagentes rotulados aqui descritos pode ocorrer usando-se qualquer um dos meios convencionais conhecidos daqueles de habilidade comum na arte, dependendo da natureza do rótulo. Exemplos de dispositivos de monitoramento para quimiluminescência, radiorótulos e outros compostos de rotulação podem ser encontrados nas Patentes U.S. Nos. 4.618.485; 5.981.202, cujas descrições pertinentes são aqui incorporadas por referência.

Métodos, Dosagens e Terapias de Combinação de

Tratamento

As composições contendo o(s) composto(s) aqui descritos podem ser administradas para tratamentos profiláticos e/ou terapêuticos. O termo "tratar" é usado para referir-se a tratamentos profiláticos e/ou terapêuticos. Em aplicações terapêuticas, as composições são administradas a um paciente já sofrendo de uma doença, condição ou distúrbio, em uma quantidade suficiente para curar ou pelo menos parcialmente deter os sintomas da doença, distúrbio ou condição. Quantidades eficazes para este uso dependerão da severidade e curso da doença, distúrbio ou condição, terapia anterior, condição da saúde do paciente e resposta às drogas, e do julgamento do médico tratamento. E considerado bem dentro da habilidade da arte a determinação de tais quantidades terapeuticamente eficazes por experimentação de rotina (p. ex., um experimento clínico de escalação de dose).

Em aplicações profiláticas, as composições contendo os compostos aqui descritos são administradas a um paciente susceptível ou de outro modo sob risco de uma doença, distúrbio ou condição particular. Tal quantidade é definida como sendo uma "quantidade ou dose profilaticamente eficaz". Neste uso, as quantidades precisas também dependem do estado de saúde, peso e similares do paciente. E considerado bem dentro da habilidade da arte uma pessoa determinar tais quantidades profilaticamente eficazes por experimentação de rotina (p. ex., um experimento clínico de escalação de dose).

Os termos "intensificar" ou "intensificação" significa aumentar ou prolongar a potência ou duração de um efeito desejado. Assim, com respeito a intensificar o efeito dos agentes terapêuticos, o termo "intensificação" refere-se à capacidade de aumentar ou prolongar, em potência ou duração, o efeito de outros agentes terapêuticos em um sistema. Uma "quantidade intensificadora eficaz", como aqui usada, refere-se a uma quantidade adequada para intensificar o efeito de outro agente terapêutico em um sistema desejado. Quando usadas em um paciente, quantidades eficazes para este uso dependerão da severidade e curso da doença, distúrbio ou condição, terapia anterior, a condição de saúde do paciente, resposta às drogas e julgamento do médico tratando.

No caso em que a condição do paciente não melhore, sob a discrição do médico a administração dos compostos pode ser feita cronicamente, isto é, por um período prolongado de tempo, incluindo por toda a duração da vida do paciente, em fim de melhorar ou de outro modo controlar ou limitar os sintomas da doença ou condição do paciente.

No caso em que a condição do paciente não melhore, sob a discrição do médico, a administração dos compostos pode ser feita continuamente ou temporariamente suspensa por uma certa extensão de tempo (isto é, um "descanso de droga").

Uma vez tenha ocorrido a condição do paciente, uma dose de manutenção é administrada se necessário. Subseqüentemente, a dosagem ou a freqüência da administração, ou ambas, pode ser reduzida, em função dos sintomas, a um nível em que a doença, distúrbio ou condição melhorado é retido. Os pacientes podem, entretanto, requerer tratamento intermitente em uma base de longo termo sob qualquer recorrência de sintomas.

A quantidade de um dado agente que corresponda a tal quantidade variará, dependendo de fatores tais como do composto, doença ou condição particular e de sua severidade, da identidade (p. ex., peso) do indivíduo ou hospedeiro em necessidade de tratamento, mas pode, contudo, ser determinada rotineiramente de uma maneira conhecida na arte, de acordo com as circunstâncias particulares circundando o caso, incluindo, p. ex., o agente específico sendo administrado, a via de administração, a condição sendo tratada e o indivíduo ou hospedeiro sendo tratado. Em geral, entretanto, as doses empregadas para tratamento de humano adulto tipicamente será na faixa de 0,02 - 5000 mg por dia, preferivelmente 1 - 1500 mg por dia. A dose desejada pode convenientemente ser apresentada em uma única dose ou como doses divididas, administradas simultaneamente (ou durante um curto período de tempo) ou em intervalos apropriados, por exemplo, como duas, três, quatro ou mais sub-doses por dia.

Em certos exemplos, pode ser apropriado administrar pelo menos um dos compostos aqui descritos (ou um seu sal, éster, amida, pró- droga ou solvato farmaceuticamente aceitável) em combinação com outro agente terapêutico. Somente como exemplo, se um dos efeitos colaterais experimentados por um paciente, ao receber um dos compostos aqui, for inflamação, então pode ser apropriado administrar um agente anti- inflamatório em combinação com o agente terapêutico inicial. Ou, somente como exemplo, a eficácia terapêutica de um dos compostos aqui descritos pode ser intensificada pela administração de um adjuvante (isto é, sozinho o adjuvante pode somente ter mínimo efeito terapêutico, porém, em combinação com outro agente terapêutico, o benefício terapêutico total para o paciente é aumentado). Ou, somente como exemplo, o benefício experimentado por um paciente pode ser aumentado administrando-se um dos compostos aqui descritos com outro agente terapêutico (que também inclui um regime terapêutico) que também tenha benefício terapêutico. Somente como exemplo, em um tratamento para degeneração macular envolvendo a administração de um dos compostos aqui descritos, pode resultar benefício terapêutico provendo-se também o paciente com outros agentes terapêuticos ou terapias para degeneração macular. Em qualquer caso, independente da doença, distúrbio ou condição sendo tratado, o benefício total experimentado pelo paciente pode simplesmente ser aditivo dos dois agentes terapêuticos ou o paciente pode experimentar um benefício sinérgico.

Exemplos específicos, não limitadores de possíveis terapias de combinação, incluem o uso de pelo menos um composto que module os níveis ou atividade de RBP ou TTR com indutores de óxido nítrico (NO), estainas, fosfolipídeos negativamente carregados, anti-oxidantes, minerais, agentes anti-inflamatórios, agentes anti-angiogênicos, inibidores da matriz metaloproteinase e carotenóides. Em diversos exemplos, agentes de combinação adequados podem situar-se dentro de múltiplas categorias (somente como exemplo, luteína é um anti-oxidante e um carotenóide). Outrossim, os compostos que modulam os níveis ou atividade de RBP ou TTR podem também ser administrados com agentes adicionais que possam fornecer benefício ao paciente, incluindo, somente como exemplo, ciclosporina A.

Além disso, os compostos que modulam os níveis ou atividade de RBP ou TTR podem também ser usados em combinação com procedimentos que possam fornecer benefício adicional ou sinérgico ao paciente, incluindo, somente como exemplo, o uso de reoferese extracorporeal (também conhecida como filtragem diferencial de membrana), o uso de telescópios miniatura implantáveis, fotocoagulação a laser de gânglios e terapia de microestimulação.

O uso de anti-oxidantes tem mostrado beneficiar pacientes com degenerações e distrofias maculares. Vide, p. ex., Arch. Oftalmol., 119: 1417-36 (2001); Sparrow, et al, J. BioL Chem, 278:18207-13 (2003). Exemplos de anti-oxidantes adequados, que poderiam ser usados em combinação com pelo menos um composto que module os níveis ou atividade de RBP ou TTR incluem vitamina C, vitamina E, beta-caroteno e outros carotenóides, coenzima Q, 4-hidróxi-2,2,6,6-tetrametilpiperidino-N-oxila (também conhecida como Tempol), luteína, hidroxitolueno butilado, resveratrol, um análogo de trolox (PNU-83836-E) e extrato de mirtilo.

O uso de certos minerais foi também mostrado beneficiar pacientes com degenerações e distrofias maculares. Vide, e.g., Arch. Oftalmol., 119: 1417-36 (2001). Exemplos de minerais adequados que poderiam ser usados em combinação com menos um composto que module os níveis ou atividade de RBP ou TTR incluem minerais contendo cobre, tais como óxido cúprico (somente como exemplo); minerais contendo zinco, tais como óxido de zinco (somente como exemplo); e compostos contendo selênio.

O uso de certos fosfolipídeos negativamente carregados foi também mostrado beneficiar pacientes com degenerações e distrofias maculares. Vide, e.g., Shaban & Richter, BioL Chem., 383:537-45 (2002); Shaban, et aL, Exp. Eye Res., 75:99-108 (2002). Exemplos de fosfolipídeos negativamente carregados, que poderiam ser usados em combinação com pelo menos um composto que module os níveis ou atividade de RBP ou TTR, incluem cardiolipina e fosfatidilglicerol. Fosfolipídeos positivamente carregados e/ou neutros podem também fornecer benefício para pacientes com degenerações e distrofias maculares, quando usados em combinação com compostos que modulam os níveis ou atividade de RBP ou TTR.

O uso de certos carotenóides tem sido correlacionado com a manutenção de fotoproteção necessária em células fotorreceptoras. Os carotenóides são pigmentos amarelos a vermelhos naturalmente ocorrentes do grupo terpenóide, que podem ser encontrados em plantas, algas, bactérias e certos animais, tais como pássaros e mariscos. Os carotenóides são uma grande classe de moléculas em que mais do que 600 carotenóides naturalmente ocorrentes foram identificados. Os carotenóides incluem hidrocarbonetos (carotenos) e seus derivados alcoólicos oxigenados (xantofilas). Eles incluem actinioeritrol, astaxantina, cantaxantina, capsantina, capsorubina, β-δ'-apo-carotenal (apo-carotenal), β-12'-apo-carotenal, a- caroteno, β-caroteno, "caroteno" (uma mistura de α e β-carotenos), γ- carotenos, β-cirptoxantina, luteína, licopeno, violerritrina, zeaxantina e ésteres de seus membros contendo hidroxila ou carboxila. Muitos dos carotenóides ocorrem na natureza como formas eis e trans-isoméricas, enquanto os compostos sintéticos são freqüentemente misturas racêmicas.

Em humanos, a retina acumula seletivamente principalmente dois carotenóides: zeaxantina e luteína. Estes dois carotenóides imagina-se auxiliar na proteção da retina porque eles são poderosos antioxidantes e absorvem a luz azul. Estudos com codornas estabeleceram que grupos criados sob dietas deficientes de carotenóide tinham retinas com baixas concentrações de zeaxantina e sofriam de severa avaria de luz, como evidenciado por um número muito elevado de células fotorreceptoras apoptóticas, enquanto o grupo com elevadas concentrações de zeaxantina tinham mínima avaria. Exemplos de carotenóides adequados para combinação com pelo menos um composto que module níveis ou atividade de RBP ou TTR incluem luteína e zeaxantina, bem como quaisquer dos supracitados carotenóides.

Indutores de óxido nítrico adequados incluem compostos que estimulam o NO endógeno ou níveis elevados de fator de relaxamento derivado de endotélio endógeno (EDRF) in vivo ou são substratos para óxido nítrico sintase. Tais compostos incluem, por exemplo, L-arginina, L- homoarginina e N-hidróxi-L-arginina, incluindo seus análogos nitrosados e nitrosilados (p. ex., L-arginina nitrosada, L-arginina nitrosilada, N-hidróxi-L- arginina nitrosada, N-hidróxi-L-arginina nitrosilada, L-homoarginina nitrosada e L-homoarginina nitrisolada), precursores de L-arginina e/ou seus sais fisiologicamente aceitáveis, incluindo, por exemplo, citrulina, ornitina, glutamina, lisina, polipeptídeos compreendendo pelo menos um destes amino ácidos, inibidores da enzima arginase (p. ex., N-hidróxi-Z-arginina e ácido 2(S)-amino-6-boronoexanóico) e os substratos para óxido nítrico sintase, citocinas, adenosina, bradicinina, calreticulina, bisacodila e fenolftaleína. O EDRF é um fator relaxante vascular, secretado pelo endotélio, e foi identificado como óxido nítrico ou um seu derivado estreitamente relacionado (Palmer et al, Nature, 327:524-526 (1987); Ignarro et al, Proc. NatL Acad. Sei. USA, 84:9265-9269 (1987)).

As estatinas servem como agentes de diminuição de lipídeo e/ou indutores do óxido nítrico adequados. Além disso, uma relação foi demonstrada entre o uso de estatina e início ou desenvolvimento retardado de degeneração macular. G. McGwin, et al., British Journal of Oftalmology, 87: 1121-25 (2003). As estatinas podem, assim, fornecer benefício a um paciente sofrendo de uma condição oftálmica (tal como as degenerações e distrofias maculares e as distrofias retinais), quando administradas em combinação com compostos que modulam os níveis ou atividade de RBP ou TTR. Estatinas adequadas incluem, somente como exemplo, rosuvastatina, pitivastatina, sinvastatina, pravastatina, cerivastatina, mevastatina, velostatina, fluvastatina, compactina, lovastatina, dalvastatina, fluindostatina, atorvastatina, atorvastatina cálcio (que é o sal hemicálcico de atorvastatina) e diidrocompactina.

Agentes anti-inflamatórios adequados com que os compostos que modulam os níveis ou atividade de RBP ou TTR podem ser usados incluem, somente como exemplo, aspirina e outros salicilatos, cromolina, nedocromila, teofilina, zileutona, zafirlucast, montelucast, pranlucast, indometacina e inibidores de lipxogenase; drogas anti-inflamatórias não- esteróides (NSAIDs) (tais como ibuprofeno e naproxina); predinisona, dexametasona, inibidores da ciclooxigenase (isto é, inibidores COX-I e/ou

COX-2, tais como Narproxen , ou Celebrex ; estatinas (somente como exemplo, resovastatina, pitivastatina, sinvastatina, pravastatina, cerivastatina, mevastatina, velostatina, fluvastatina, compactina, lovastatina, dalvastatina, fluindostatina, atorvastatina, atorvastatina cálcio (que é o sal hemicálcico da atorvastatina) e diidrocompactina); e esteróides disassociados.

Inibidores da matriz metaloproteinases (MMPs) adequadas podem também ser administrados em combinação com compostos que modulam os níveis ou atividade de RBP ou TTR, a fim de tratar condições ou sintomas oftálmicos associados com degeneraçoes maculares ou retinais. As MMPs são sabidas hidrolizarem a maior parte dos componentes da matriz extracelular. Estas proteinases representam um papel central em muitos processos biológicos, tais como remodelação de tecido normal, embriogênese, cura de ferimento e angiogênese. Entretanto, expressão excessiva de MMP foi observada em muitos estados doentios, incluindo degeneração macular. Muitas MMPs foram identificadas, a maioria das quais sendo endopeptidases de zinco de multi-domínios. Numerosos inibidores da metaloproteinase são conhecidos (vide, por exemplo, a recapitulação dos inibidores da MMP por Whittaker M. et al., Chemical Reviews 99(9): 2735 - 2776 (1999)). Exemplos representativos de inibidores da MMP incluem Inibidores de Tecido das Metaloproteinases (TIMPs) (p. ex., TIMP-I, TIMP-2, TIMP-3 ou TIMP-4), a2-macroglobulina, tetraciclinas (p. ex., tetraciclina, minociclina e doxiciclina), hidroxamatos (p. ex., BATIMASTAT, MARIMISTAT e TROCADE), queladores (p. ex., EDTA, cisteína, acetilcisteína, D- penicilamina e sais de ouro), fragmentos MMP sintéticos, succinil mercaptopurinas, fosfonamidatos e ácidos hidroxamínicos. Exemplos de inibidores de MMP, que podem ser usados em combinação com compostos que modulam os níveis ou atividade de RBP ou TTR, incluem, somente como exemplo, quaisquer dos inibidores supracitados.

O uso de drogas antiangiogênicos ou anti-VEGF foi também mostrado fornecer benefício para pacientes com degenerações e distrofias maculares. Exemplos de drogas antiangiogênicos ou anti-VEGF, que poderiam ser usados em combinação com pelo menos um composto que module níveis ou atividade de RBP ou TTR incluem Rhufab V2 (Lucentis™), Triptofanil-tRNA sintase (TrpRS), EyeOOl (Aptâmero Peguilado Anti- VEGF), esqualamina, Retaane™ 15 mg (acetato de anecortave para suspensão de depósito; Alcon, Inc.), Pró-droga Combretastina A4 (CA4P), Macugen™, Mifeprex™ (mifepristona - ru486), subtenon triancinolona acetonida, triancinolona acetonida cristalina intravitral, Prinomastat (AG3340 - inibidor da matriz metaloproteinase sintética, Pfizer), fluocinolona acetonida (incluindo implante intraocular de fluocinolona, Bausch & Lomb/Control Delivery Systems), inibidores do VEGFR (Sugen) e VEGF-Trap (Regeneron/Aventis).

Outras terapias farmacêuticas que foram usadas para aliviar deterioração visual podem ser usadas em combinação com pelo menos um composto que module os níveis ou atividade de RBP ou TTR. Tais tratamentos incluem mas não são limitados a agentes tais como Visudyne™ com o uso de um laser não-térmico, PKC 412, Endovion (NeuroSearch A/S), fatores neurotróficos, incluindo como exemplo Fator Neutrófico Derivado Glial e Fator Neurotrófico Ciliar, diatazem, dorzolamida, Phototrop, 9-cis- retinal, medicação de olho (incluindo Terapia Eco), incluindo iodeto de fosfolina ou inibidores de ecotiofato ou anidrase carbônica, AE-941 (AEterna Laboratories, Inc.), Sirna-027 (Sirna Therapeutics5 Inc.), pegaptanib (NeXstar Pharmaceuticals/Gilead Sciences), neurotrofinas (incluindo, somente como exemplo, NT-4/5, Genentech), Cand5 (Acuity Pharmaceuticals), ranibizumab (Genentech), INS-37217 (Inspire Pharmaceuticals), antagonistas da integrina (incluindo aqueles da Jerini AG e Abbott Laboratories), EG-3306 (Ark Therapeutics Ltd.), BDM-E (BioDiem Ltd.), talidomida (como usado, por exemplo, por EntreMed, Inc.), cardiotrofina-1 (Genentech), 2-metoxiestradiol (Allergan/Oculex), DL-8234 (Toray Industries), NTC-200 (Neurotech), tetratiomolibdato (Universidade de Michigan), LYN-002 (Lynkeus Biotech), composto microalgal ( Aquasearch/Albany, Mera Pharmaceuticals), D-9120 (Celltech Group plc), ATX-SlO (Hamamatsu Photonics), TGF-beta 2 (Genzyme/Celtrix), inibidores da tirosina cinase (Allergan, SUGEN, Pfizer), NX-278-L (NeXstar Pharmaceuticals/Gilead Sciences), Opt-24 (OPTIS France SA), neuroprotetores de gânglios de célula retinal (Cogent Neurosciences), derivados de N-nitropirazol (Texas A & M University System), K-102 (Krenitsky Pharmaceuticals) e ciclosporina A. Vide Publicação de Pedido de Patente U.S. No. 20040092435. Para o tratamento da diabetes, os métodos e composições aqui descritos compreendem ainda a administração de um segundo composto selecionado do grupo consistindo de (a) um hormônio diminuidor da glicose ou mimético de hormônio (p. ex., insulina, GLP-I ou um análogo de GLP-1, exendin-4 ou liraglutídeo), (b) uma sulfoniluréia diminuidora da glicose (p. ex., acetoexamida, clorpropamida, tolbutamida, tolazamida, glimepirida, uma glipizida, gliburida, uma filburída micronizada ou uma glicazida), (c) uma biguanida diminuidora de glicose (metformina), (d) uma meglitinida diminuidora de glicose (p. ex., nateglinida ou rapaglinida), (e) uma tiazolidinodiona diminuidora de glicose ou outro agonista PPAR-gama (p. ex., pioglitazona, rosiglitazona, troglitazona ou isagitazona), (f) um agonista PPAR de dupla ação diminuidor de glicose, com afinidade para tanto PPAR- gama como PPAR-alfa (p. ex., BMS-298585 e tesaglitazar), (g) um inibidor da alfa-glicosidase diminuidor de glicose (p. ex., acarbose ou miglitol), (h) um composto antissentido diminuidor de glicose não alvejado na glicose-6- fosfatase translocase, (i) um supressor do apetite anti-obesidade (p. ex., fentermina), (J) um inibidor da absorção de gordura anti-obesidade, tal como orlistat, (k) uma forma modificada anti-obesidade de fator neurotrófico ciliar que inibe os sinais de fome que estimulam o apetite, (1) uma resina seqüestrante de sal biliar diminuidora de lipídeo (p. ex., colestilarimian, colestipol e cloridreto de colesevelam), (m) um inibidor da HMGCoA- redutase diminuidor de lipídeo (p. ex., lovastatina, cerivastatina, prevastatina, atorvastatina, sinvastatina e fluvastatina), (n) um ácido nicotínico, (o) um derivado do ácido fíbrico diminuidor de lipídeo (p. ex., clofibrato, genfibrozila, fenofibrato, bezafibrato e ciprofibrato), (p) agentes incluindo probucol, neomicina, dextrotiroxina, (q) ésteres de estanol de plantas, (r) inibidores MTP (p. ex., implitapida), (u) inbidores dos transportadores do ácido biliar (transportadores do ácido biliar dependentes de sódio apical), (v) reguladores de CYP7a hepático, (w) inibidores de ACAT (p. ex., Avasimibe), (x) terapêuticos de substituição de estrogênio diminuidor de lipídeos (p. ex., taxoxigen), (y) HDL sintético (p. ex., ETC-216), ou (z) anti-inflamatórios diminuidores de lipídeo (p. ex., glicocorticóides). Quando o segundo composto tem um diferente alvo e/ou atua por um diferente modo de ação do dos agentes aqui descritos (isto é, aqueles que modulam os níveis ou atividade de RBP ou TTR), a administração dos dois agentes em combinação (p. ex., administração simultânea, seqüencial ou separada) é esperada fornecer benefício aditivo ou sinérgico terapêutico a um paciente com diabetes. Pela mesma razão, a administração dos dois agentes em combinação (p. ex., administração simultânea, seqüencial ou separada) é esperada permitir doses mais baixas de cada um ou de um ou outro agente em relação à dose de tal agente, na ausência da terapia de combinação, enquanto ainda obtendo um desejado efeito terapêutico, incluindo, somente como exemplo, redução da glicose sangüínea e controle de HbAl c. Em qualquer caso, os múltiplos agentes terapêuticos (um dos quais é um dos compostos descritos aqui) podem ser administrados em qualquer ordem ou mesmo simultaneamente. Se simultaneamente, os múltiplos agentes terapêuticos podem ser fornecidos em uma única forma, unificada, ou em múltiplas formas (somente como exemplo, como uma pílula única ou como duas pílulas separadas). Um dos agentes terapêuticos pode ser dado em múltiplas doses, ou ambos podem ser dados como doses múltiplas. Se não simultâneas, o tempo entre as múltiplas doses pode variar de mais do que zero semana a menos do que quatro semanas. Além disso, os métodos de combinação, composições e formulações não devem ser limitados ao uso de somente dois agentes; consideramos o uso de múltiplas combinações terapêuticas. Somente como exemplo, um composto que module os níveis ou atividade de RBP ou TTR pode ser provido com pelo menos um antioxidante e pelo menos um fosfolipídeo negativamente carregado; ou um composto que module os níveis ou atividade de RBP ou TTR pode ser provido com película um antioxidante e pelo menos um indutor da produção do óxido nítrico; ou um composto que module os níveis ou atividade de RBP ou TTR pode ser provido com pelo menos um indutor de produção de óxido nítrico e pelo menos um fosfolipídeo negativamente carregado; e assim em diante.

Além disso, os compostos que modulam os níveis ou atividade de RBP ou TTR podem também ser usados em combinação com procedimentos que possam fornecer benefício adicional ou sinérgico ao paciente. Procedimentos conhecidos, propostos ou considerados para aliviar a deterioração visual, incluem mas não são limitados a "translocação retinal limitada', terapia fotodinâmica (incluindo, somente como exemplo, PDT alvejado-receptor, Bristol-Myers Squibb, Co.; porfímero sódio para injeção com PDT; verteporfina, QLT Inc.: rostaporfina com PDT, Miravent Medicai Technologies; talaporfína sódio com PDT, Nippon Petroleum; motexafina lutétio, Pharmacyclis, Inc.), oligonucleotídeos antissentido (incluindo, como exemplo, produtos testados por Novagali Pharma SA e ISIS-13650, Isis Pharmaceuticals), fotocoagulação a laser, cirurgia com laser de gânglios, cirurgia de furo macular, cirurgia de translocação macular, telescópios miniatura implantáveis, Angiografia de Movimento-Fi (também conhecida como Terapia de Micro-Iaser e Tratamento de Vaso Alimentador), Terapia de Feixe Protônico, terapia de microestimulação, Separação Retinal e Cirurgia Vítrea, curvatura escleral, Cirurgia Submacular, Termoterapia Transpupilar, Terapia de fotossistema I, uso de interferência RNA (RNAi), reoferese extracorporeal (também conhecida como filtragem diferencial da membrana e Reoterapia), implante de microchip, terapia de célula tronco, terapia de substituição genética, terapia de gene de ribozima (incluindo terapia genética para elemento de resposta de hipoxia, Oxford Biomédica; Lentipak, Genetix; terapia de gene PDEF, Gen Vec), transplante de células fotorreceptoras/retinais (incluindo células epiteliais retinais transplantáveis, Diacrin, Inc.; transplante de célula retinal, Cell Genesys, Inc.) e acumpuntura. Outras combinações que podem ser usadas para beneficiar um indivíduo incluem o uso de teste genético para determinar se aquela indivíduo é um portador de um gene mutante, que é sabido ser correlacionado com certas condições oftálmicas. Somente como exemplo, defeitos no gene ABCA4 humano pensa-se serem associados com cinco distintos fenótipos retinais, incluindo Doença de Stargardt, distrofia de células cônicas-células bastonete, degeneração macular relacionada com a idade e retinite pigmentosa. Vide e.g., Allikmets et aL, Science, 277: 1805-07 (1997); Lewis et aL, Am. J. Hum. Genet., 64:422-34 (1999); Stona et aL, Nature Genetics, 20:328-29 (1998); Allikmets, Am. J. Hum. Gen., 67:793-799 (2000); Klevering, et al, OftalmoIogy, 111:546-553 (2004). Espera-se que tais pacientes encontrem benefício terapêutico e/ou profilático nos métodos aqui descritos.

Além dos ingredientes supracitados, as formulações aqui descritas podem ainda incluir um ou mais ingrediente(s) acessório(s) opcional(ais) utilizados na arte de formulações farmacêuticas, isto é, diluentes, tampões, agentes aromatizantes, colorantes, aglutinantes, agentes tensoativos, espessantes, lubrificantes, agentes de suspensão, preservativos (incluindo antioxidantes) e similares.

O composto pode também ser administrado multiplamente ao indivíduo, com o tempo entre as múltiplas aplicações compreendendo pelo menos diversas horas ou um dia ou até uma semana ou mais. O composto pode também ser administrado doze horas, em uma base diária, cada dois dias, cada três dias, em uma base semanal ou qualquer outro período adequado que seria eficaz para modulação dos níveis de vitamina A.

O indivíduo, em conjunto com a administração dos compostos acima, pode também ser monitorado quanto às manifestações fisiológicas de processos doentios relacionados com retinol. Por exemplo, o indivíduo pode ser monitorado quanto a manifestações fisiológicas de degenerações ou distrofias maculares relacionadas com a idade, incluindo a formação de gânglios no olho do indivíduo, medindo-se os níveis de lipofuscina no olho do indivíduo, medindo-se a auto-fluorescência de A2E e precursores de A2E e medindo-se os níveis de n-retinilideno-N-reiniletanolamina no olho do indivíduo. Além disso, o indivíduo também será monitorado quanto a mudanças ou perturbações nos níveis da vitamina A5 bem como nos níveis ou atividade de RBP ou TTR em uma amostra biológica. EXEMPLOS

Os seguintes ingredientes, processos e procedimentos para praticar os métodos aqui descritos correspondem àqueles descritos acima, os procedimentos abaixo descrevem com particularidade uma forma de realização presentemente preferida do processo para a detecção e seleção de moduladores para ligação de retinol. Quaisquer métodos, materiais, reagentes ou excipientes que não seja particularmente descritos serão geralmente conhecidos e disponíveis por àqueles hábeis nas artes de ensaio e seleção.

Exemplo 1: Identificação dos compostos que inibem a expressão genética de TTR

O composto de teste identificado pode ser administrado a uma cultura de células humanas transfectadas com uma construção de expressão TTR e incubadas a 37°C por 10 a 45 minutos. Uma cultura do mesmo tipo de células que não foi transfectada é incubada durante o mesmo tempo sem o composto de teste para prover um controle negativo.

O RNA é então isolado das duas culturas, como descrito em Chirgwin et al., Biochem. 18, 5294-99, 1969). Manchas do Norte são preparadas usando-se 20 a 30 μg de RNA total e hibridizadas com uma sonda específica-TTR rotulada 31P. As sondas para detectar transcritos mRNA TTR foram descritas anteriormente. Um composto de teste que diminui o sinal específico-TTR relativo ao sinal obtido na ausência do composto de teste é identificado como um inibidor da expressão genética de TTR. Exemplo 2: Identificação dos compostos que se ligam a RBP e/ou inibem a expressão genética de RBP O composto de teste identificado pode ser administrado a uma cultura de células humanas transfectadas com uma construção de expressão de RBP e incubadas a 37°C por 10 a 45 minutos. Uma cultura do mesmo tipo de células que não foram transfectadas é incubada pelo mesmo tempo, sem o composto de teste, para fornecer um controle negativo.

O RNA é então isolado das duas culturas como descrito em Chirgwin et ai., Biochem. 18, 5294 - 99, 1979). As manchas do Norte preparadas utilizando-se 20 a 30 μg de RNA total e hibridizadas com uma sonda específica-RBP rotulada P. Um composto de teste, que diminui o sinal específico de RBP, relativo ao sinal obtido na ausência do composto de teste, é identificado como um inibidor da expressão genética de RBP.

Exemplo 3: Detecção da presença de A2E e/ou Precursores.

Em camundongos abcfí e tipo selvagem, os níveis de A2E de RPE são determinados por HPLC e os níveis de A2E podem ser determinados utilizando-se um oftalmoscópio a laser de varredura confocal e medindo-se sua absorção a 430 nm.

Exemplo 4: Teste para Proteção de Avaria de Luz

O seguinte estudo é adaptado de Sieving, P.A., et al, Proc. Natl. Acad. Sci., 98: 1835-40 (2001). Para estudos de exposição à luz crônica, ratos albinos com a idade de 7 semanas, machos, Sprague-Dawley, são alojados em um ciclo de luz/escuridão de 12:12 h de luz branca fluorescente de 5 lux. Para estudos de exposição à luz agudos, os ratos são adptados ao escuro durante a noite e antes de serem expostos à luz alvejante antes das medições ERG. Os ratos são expostos à luz fluorescente branca de 2000 lux por 48 h. ERGs são registrados 7 dias mais tarde e histologia é realizada imediatamente.

Os ratos são eutanasiados e os olhos são removidos e fatiados. E feita a contagem de células da coluna de espessura de camada e a medição comprimento do segmento externo dos bastonetes (ROS) e feita a cada 200 μηι através de ambos os hemisférios, e é feita uma média dos números para obter-se uma medida das mudanças celulares através da inteira retina. Os níveis de A2E dos RPE são determinados por HPLC e os níveis de A2E podem ser determinados utilizando-se um oftalmoscópio a laser de varredura confocal e medindo-se sua absorção a 430 nm.

Exemplo 5: Monitoramento da Eficácia do Tratamento Oftálmico, Terapias ou Drogas

A avaliação da eficácia dos tratamentos, terapias ou drogas que têm um efeito sobre as degenerações e distrofías maculares ou retinais pode ser um processo de três etapas, que envolve 1) fazer medições iniciais de um indivíduo, tal como a formação de gânglios no olho do indivíduo, tamanho e número de atrofias geográficas no olho do indivíduo, medição dos níveis se lipofuscina no olho do indivíduo medindo-se a auto-fluorescência de A2E ou lipofuscina e precursores de A2E, ou medindo-se os níveis de retinilideno-N-reiniletanolamina no olho do indivíduo. 2) prover tratamento, terapia ou droga para o indivíduo, 3) fazer medições da formação dos gânglios no olho do indivíduo, tamanho e número de atrofia geográfica no olho do indivíduo, medição dos níveis de lipofuscina no olho do indivíduo, medindo-se a auto-fluorescência de A2E ou lipofuscina e precursores de A2E, ou medindo-se os níveis de N-retinilideno-N-reiniletanolamina no olho do indivíduo após a etapa (2) e avaliando-se os resultados que indicariam que o tratamento, terapia ou droga pode ter um desejado efeito. Um desejado resultado pode incluir uma diminuição ou suspensão na formação de gânglios, dos níveis de lipofuscina no olho do indivíduo sujeito à auto-fluorescência de A2E e precursores de A2E, ou níveis de N-retinildeno-N-reiniletanolamina no(s) olho(s) do indivíduo. A reiteração das etapas 2-3 pode ser administrada com ou sem intervalos de não-tratamento. Os indivíduos podem incluir mas não são limitados a camundongos e/ou ratos e/ou pacientes humanos.

Exemplo 6: Monitoramento da Eficácia de Moduladores de TTR ou RBP em Pacientes Diabéticos

Os moduladores de TTR ou RBP podem ser testados em modelos de camundongo bem estabelecidos, incluindo camundongo NOD (diabético não-obeso), bem como Biobreeding (BB) e camundongos diabéticos induzidos pela estreptozotocina. Vide Patente U.S. No. 6.770.272, incorporada aqui por referência em sua totalidade, e Tuitoeki PJ, et al., Int. J. Vitam. Nutr. Res. 66:101-5 (1996). Os compostos podem ser testados contra a formação de diabetes em camundongos ou ratos, ou administrados em camundongos com sintomas diabéticos bem estabelecidos.

Resumidamente, TTR ou RBP pode ser administrado por injeção intraperitoneal em camundongos com a idade de 6 semanas antes da formação da sintomatologia diabética. Os camundongos podem ser verificados a 25 semanas de idade, em que uma diminuição da incidência diabética nos animais de controle versus grupos de tratamento indicam um candidato terapêutico potencial no tratamento da diabetes.

Os moduladores de TTR ou RBP podem também ser administrados a pacientes humanos para inibir o desenvolvimento da diabetes. Os compostos podem ser formulados para administração oral, intravenosa, subcutânea, intramuscular, transdérmica ou inalação em um veículo farmaceuticamente aceitável (p. ex., solução salina). As composições terapêuticas podem ser administradas ao paciente quando da descoberta de mudanças de autoimunidade de células anti-beta e/ou pré-diabéticas sutis no metabolismo da glicose (isto é, teste de tolerância a glicose i.v. prematura embotada) e a administração é repetida todo dia ou em uma freqüência tão baixa quanto uma vez por semana, dependendo da resposta do paciente. A dosagem preferida dos moduladores pode ser determinada utilizando-se técnicas padrão para monitorar os níveis de glicose, nível de anticorpos de células anti-beta ou anormalidades nos testes de tolerância a glicose do ser humano tratado.

Exemplo 7: Análises in-vivo da Relação dos Níveis de HPR do Soro para os Níveis de Retinol do Soro, e Retinóides Oculares e A2E

A fim de explorar o papel da HPR no ciclo visual, os efeitos in vivo de HPR em camundongos foram examinados. Assim, a HPR foi administrada em camundongos mutantes nulos ABCA4 (5 - 20 mg/kg, i. p. em DMSO) por períodos de 28 dias. Os camundongos de controle receberam somente o veículo DMSO. No final do período de tratamento, as concentrações de retinol e HPR no soro e o teor de retinóide nos tecidos oculares foram medidos. Reduções profundas do retinol do soro, em função da crescente HPR do soro, foi observada. Este efeito foi associado com reduções comensuráveis de retinóides oculares e A2E (um fluoróforo baseado em retinóide tóxico). Assim, a redução percentual calculada para cada um dos retinóides medidos e A2E foi quase idêntica (vide Fig. 2). Estes resultados indicam que a redução dos retinóides oculares e A2E, resultante da administração sistêmica de HPR, resulta das reduções dos níveis de retinol do soro.

A fim de assegurar que os efeitos observados de HPR em camundongos nulos ABCA4 não foram devidos à mutação genética, HPR foi administrada (20 mg/kg, i.p. em DMSO) em camundongos tipo selvagem por 5 dias. Os camundongos de controle receberam somente o veículo DMSO. No dia final do tratamento com HPR, os camundongos foram expostos a constante iluminação (1000 Iux por 10 min) a fim de "estimular" o ciclo visual, para gerar cromóforo visual. Imediatamente em seguida ao período de iluminação, os animais foram sacrificados e a concentração de retinóides no soro e tecido ocular foi determinada. Os dados (vide Fig. 3) não revelam inibição significativa na síntese de ésteres de retinila ou cromóforo visual, como no estudo anterior, a HPR causou uma significativa redução do retinol do soro (-55%), retinol ocular (-40%) e retinal ocular (-30%). Embora a HPR não se acumulasse dentro dos tecidos oculares durante o período de tratamento (—5 mM), nenhum efeito sobre as atividades de LRAT ou Rpe65/isomerase foi observado.

Cruzamentos genéticos de camundongos RBP4-/- com camundongos ABCA4-/- foram realizados para examinar o papel da RBP na mediação dos níveis de retinol no soro e tecido ocular. Os camundongos fa primeira geração deste cruzamento (isto é, RBP4/ABCA4_/") mostram níveis comparáveis de redução de RBP-retinol, como observado no estudo de HPRj quando a dose administrada roi de 10 mg/kg (~50 - 60% de redução do RBP- retinol do soro). Além disso, os camundongos RBP4/ABCA4+/" apresentam reduções comensuráveis de retinol ocular (-60% de redução). Estes achados são consistentes com dados obtidos durante a modulação farmacológica de RBP-retinol com HPR e, portanto, fortemente sugerem que os fluoróforos baseados em A2E serão reduzidos proporcionalmente. A inibição da atividade LRAT não foi observada em camundongos recebendo doses agudas e crônicas de HPR.

Exemplo 8: Ensaio de alta-produção para detecção de interação RBP/TTR

A redução de retinol e RBP do soro é correlacionada com as reduções concomitantes de fluoróforos de lipofuscina tóxicos. Em razão de os compostos que afetam a interação de RBP-TTR afetarem diretamente os níveis de fluoróforo no olho, uma seleção de alta produção para moléculas pequenas, que evita a interação de RBP com TTR, foi desenvolvida. Esta seleção emprega formas rotuladas de sonda de RBP e TTR5 que participam de um único evento de transferência de energia de ressonância de fluorescência (FRET), quando complexados. Os compostos que interferem com a interação de RBP-TTR evita FRET. Os espectros de amostras tiradas durante o curso deste tipo de ensaio são mostrados na Fig. 4. Estes dados mostram a interação de RBP-TTR (0,5 μΜ RBP não rotulado + 0,5 μΜ Alexa430-TTR) na ausência (linha cheia) e presença (linha tracejada) de HPR (1 μΜ). A amostra é incubada a 37°C por 30 min e então iluminada com luz de 330 nm. Os espectros de emissão são mostrados na faixa de 400 - 600 nm. HPR liga-se a RBP e evita a interação com TTR e, aqui, esta propriedade de HPR é utilizada para validar a capacidade desta seleção em detectar a inibição da interação RBP-TTR. A presença de HPR é associada com fluorescência de sonda de retinol e TTR significativamente reduzida, indicando perda de complexação. Adicionalmente, o projeto deste ensaio permite a discriminação entre compostos que interagem com RBP versus aqueles que interagem com TTR. Assim, utilizando-se duas energias de excitação distintas (280 nm e 330 nm, para proteína e retinol, respectivamente) e implementando-se monitoração simultânea da fluorescência da sonda-TTR e de retinol, o "alvo" de uma molécula pequena presuntiva pode ser facilmente determinado.

Exemplo 9: Validação e Comparação de Ensaios com Técnicas convencionais

A HPR é um inibidor eficaz da interação de RBP-TTR, como mostrado por técnicas de medição cromatográficas e espectrofotométricas (vide, p. ex., Radu RA, Han Y, Bui TV, Nusinowitz S, Bok D, Lichter J, Widder K, Travis GH e Mata NL: Reductions in Serum Vitamina A Arrest Accumulation of Toxic Retinal Fluorofores: A Potential Therapy for Treatment of Lipofuscina-based Retinal Diseases, Invest Oftalmol. Vis Sei, em impressão (2005)). Assim, a HPR pode ser usada como um controle positivo para validar a capacidade do ensaio de alta produção para detectar inibidores da interação RBP-TTR. Por conseguinte, a HPR foi empregada em concentrações variadas (de 0-40 μΜ), utilizando-se as condições especificadas no Exemplo 7, para avaliar o ensaio de alta produção. Como mostrado na Fig. 5, o ensaio de alta produção é eficaz para detectar compostos que, como HPR, inibem a interação RBP-TTR.

Fisiologicamente, o RBP-retinol deve complexar com TTR a fim de obter uma elevada concentração de estado constante de RBP-retinol. Esta interação cria um complexo de grande tamanho molecular, que resiste à filtragem glomerular e permite suprimento de retinol a tecidos alvo extra- hepáticos. A inibiçao da interação RBP-TTR resulta em uma redução da RBP circulante, visto que o complexo de RBP-Iigando de tamanho relativamente pequeno seria perdido através da filtragem glomerular. A redução da RBP circulante causa então uma redução do retinol circulante. Este efeito foi estabelecido in vivo pra HPR por diversos investigadores. Este efeito também foi observado in vivo usando-se ácidos trans e 13-cis retinóicos (Vide, e.g., Berni R, Clerici M, Malpeli G, Cleris L5 Formelli F; Retinoids: in vitro interaction with retinol-binding protein and influence on plasma retinol, FASEB J. (1993)7: 1179-84).

O mecanismo de ação subjacente a este efeito pode ser explicado pelo rompimento das interações de RBP-TTR. A fim de explorar esta possibilidade e validar mais a seleção de RBP-TTR, os efeitos do ácido trans retinóico e 13-cis retinóico, empregando as condições especificadas para análise de HPR, foram examinados. Os dados obtidos (vide Fig. 6) são inteiramente consistentes com os dados in vivo. Este achado valida mais a capacidade deste ensaio de detectar inibidores fisiológicos conhecidos de interação RBP-TTR.

Exemplo 10: Teste Quanto à Eficácia dos Compostos Que Modulam os Níveis ou Atividade de RBP ou TTR, para tratar Degeneração Macular - Fenretinida Como IJm Composto Ilustrativo

Para pré-teste, todos os pacientes humanos sofrem um exame oftalmológico de rotina, incluindo angiografia de fluoresceína, medição de acuidade visual, parâmetros eletrofisiológicos e parâmetros bioquímicos e reológicos. Critérios de inclusão são como seguem: acuidade visual entre 20/160 e 20/32 em pelo menos um olho e sinais de AMD, tais como atrofia areolar de gânglios, aglutinação de pigmentos, separação do epitélio pigmentar ou neovascularização subretinal. As pacientes que estão grávidas ou ativamente alimentando no peito crianças são excluídas do estudo.

Duas centenas de pacientes humanos, diagnosticados com degeneração macular, ou que têm formações progressivas de A2E, lipofuscina, ou gânglios em seus olhos, são divididas em um grupo de controle de cerca de 100 pacientes e um grupo experimental de 100 pacientes. A fenretinida é administrada ao grupo experimental em um base diária. Um placebo, administrado ao grupo de controle no mesmo regime que fenretinida, é administrado ao grupo experimental.

A administração de fenretinida ou placebo a um paciente pode ser feita oral ou parenteralmente, em quantidades eficazes para inibir o desenvolvimento ou recorrência de degeneração macular. Quantidades de dosagem eficaz são na faixa de cerca de 1 - 4000 mg/m até três vezes por dia.

Um método para medir a progressão da degeneração macular em grupos tanto de controle como experimentais é a melhor acuidade visual corrigida, conforme medido pelas cartas de Estudo de Retinopatia Diabética de Tratamento Prematuro (ETDRS) (Lighthouse, Long Island, NY), empregando-se avaliação em linha e o método de escolha forçada (Ferris et al. Am J Oftalmol, 94:97-98 (1982)). A acuidade visual é registrada em logMAR. A mudança de uma linha da carta ETDRS é equivalente a 0,1 logMAR. Outros métodos típicos para medir a progressão da degeneração macular em grupos tanto de controle e experimentais incluem o uso de exames de campo visual, incluindo mas não limitado a um exame de campo visual de Humphrey, e medindo-se/monitorando-se a autofluorescência ou espectro de absorção de N-retinilideno-fosfatidil etanolamina, diidro-N- retinilideno-N-retinil-fosfatidil etanolamina, N-retinilideno-N-retinil-fosfatidil etanolamina, diidro-N-retinilideno-N-retinil-etanolamina, e/ou N-retinilideno- fosfatidil etanolamina no olho do paciente. A autofluorescência é medida usando-se uma variedade de equipamentos, incluindo mas não limitado a um oftalmoscópio a laser de varredura confocal. Vide Bindewald, et al, Am. J. Ophtalmol., 137:556-8 (2004).

Métodos adicionais para medir a progressão da degeneração macular em grupos tanto de controle como experimentais incluem tirar fotografias de fundo, observar mudanças da autofluorescência durante o tempo usando-se um angiográfico de retina Heidelberg (ou, alternativamente, técnicas descritas em M. Mammer et al. Ophtalmologe 7 de abril de 2004 [Epub à frente da patente]), fazendo-se angiogramas de fluoresceína da linha de referência, três, seis, nove e doze meses em visitas de acompanhamento. A documentação das mudanças morfológicas inclui mudanças em (a) tamanho, caráter e distribuição dos gânglios; (b) desenvolvimento e progressão de neovascularização coroidal; (c) outras mudanças ou anormalidades do fundo do intervalo; (d) velocidade de leitura e/ou acuidade de leitura; (e) tamanho do escotoma; ou (f) o tamanho e número das lesões de atrofia geográfica. Além disso, o Amsler Grid Test e o teste de cor são opcionalmente administrados.

Para avaliar estatisticamente a melhoria visual durante a administração de droga, os examinadores utilizam a carta ETDRS (LogMAR) e uma refração padronizada e protocolo de acuidade visual. A avaliação das ETDRS (LogMAR) médias com acuidade visual melhor corrigida (BCVA) pela linha de referência, através das visitas de intervalo pós-tratamento disponíveis, pode auxiliar na determinação da melhoria visual estatística.

Para avaliar a ANOVA (análise de variação entre grupos) entre o grupo de controle e experimental, as mudanças médias da acuidade visual das ETDRS (LogMAR) da linha de referência, através das visitas de intervalo pós-tratamento disponíveis, são comparadas usando-se ANOVA de dois grupos com repetidas análises de medidas com covariação desestruturada usando-se Software SAS/STAT (SAS Institutes Inc, Cary North Carolina).

A avaliação da toxicidade após o início do estudo inclui verificações de cada três meses durante o ano subseqüente, cada quatro meses, o ano após e subseqüentemente cada seis meses. Os níveis de plasma da fenretinida e seu metabólito N-(4-metoxifenil)-retinamida podem também ser avaliados durante estas visitas. A avaliação de toxicidade inclui pacientes utilizando fenretinida, bem como pacientes no grupo de controle.

Exemplo 11: Teste quanto à Eficácia dos Compostos Que Modulam os Níveis ou Atividade de RBP ou TTR, para Reduzir a Produção de A2E - Fenretinida Como um Composto Ilustrativo

O mesmo projeto de protocolo, incluindo protocolos de avaliação de pré-teste, administração, dosagem e toxicidade, que são descritos no Exemplo 1, é também usado para testar quanto a eficácia dos compostos que modulam os níveis ou atividade de RBP ou TTR na redução ou de outro modo limitação da produção de A2E no olho de um paciente.

Métodos para medir ou monitorar a formação de A2E incluem o uso de medições de autofluorescência de N-retinilideno- fosfatidiletanolamina, diidro-N-retinilideno-N-retinil-fosfatidiletanolamina, N-retinilideno-N-retinil-fosfatidiletanolamina, diidro-N-retinilideno-N-retinil- etanolamina e/ou N-retinilideno-fosfatidiletanolamina no olho do paciente. A autofluorescência é medida usando-se uma variedade de equipamentos, incluindo mas não limitado a um oítalmoscópio a laser de varredura confocal, Vide Bindewald, et al, Am. J. Ophtalmol, 137:556-8 (2004), ou as técnicas de medição dos espectros de autofluorescência ou absorção citadas no Exemplo 1. Outros testes que podem ser usados como marcadores substitutos para a eficácia de um tratamento particular incluem o uso de exames de acuidade visual e campo visual, exames de velocidade de leitura e/ou acuidade de leitura, medições do tamanho e número de escotoma e/ou lesões atróficas geográficas, como descrito no Exemplo 1. A análise estatística descrita no Exemplo 1 é empregada.

Exemplo 12: Teste quanto à Eficácia dos Compostos Que Modulam os Níveis ou Atividade de RBP ou TTR para Reduzir a Produção de Lipofuscina - Fenretinida Como um Composto Ilustrativo

O mesmo projeto de protocolo, incluindo protocolos de avaliação pré-teste, administração, dosagem e toxicidade, que é descrito no Exemplo 1, é também usado para testar quanto à eficácia dos compostos que modulam os níveis ou atividade de RBP ou TTR na redução ou por outro lado limitação da produção da lipofuscina no olho de um paciente. As análises estatísticas descritas no Exemplo 1 podem também ser empregadas.

Os testes que podem ser usados como marcadores substitutos da eficácia de um tratamento particular incluem o uso de exames de acuidade visual e campo visual, exames de velocidade de leitura e/ou acuidade de leitura, medições do tamanho e número de lesões atróficas de escotoma e/ou geográficas e a medição/monitoramento de autufluorescência de certos compostos no olho do paciente, como descrito no Exemplo 1.

Exemplo 13: Teste Quanto à Eficácia dos Compostos Que Modulam os Níveis ou Atividade de RBP ou TTR, para Reduzir a Produção de Gânglios - Fenretinida Como um Composto Ilustrativo

O mesmo projeto de protocolo, incluindo protocolos de avaliação de pré-teste, administração, dosagem e toxicidade, que são descritos no Exemplo 1, é também usado para testar quanto à eficácia dos compostos que modulam os níveis ou atividade de RBP ou TTR na redução ou por outro lado limitação da produção ou formação de gânglios no olho de um paciente. A análise estatística empregada no Exemplo 1 pode também ser empregada.

Métodos para medir as formações progressivas de gânglios em grupos tanto de controle como experimentais incluem fazer fotografias e angiogramas de fluoresceína do fundo na linha de referência, três, seis, nove e doze meses em visitas de acompanhamento. A documentação de mudanças morfológicas pode incluir mudanças em (a) tamanho, caráter e distribuição dos gânglios (b) desenvolvimento e progressão da neovascularização coroidal e (c) outras mudanças ou anormalidades de fundo de intervalo. Outros testes que podem ser usados como marcadores substitutos para a eficácia de um tratamento particular incluem o uso de exames de acuidade visual e campo visual, exames de velocidade de leitura e/ou acuidade de leitura, medições do tamanho e número das lesões atróficas de escotoma e/ou geográficas e a medição/monitoramento da autofluorescência de certos compostos do olho do paciente, como descrito no Exemplo 1.

Exemplo 14: Eficácia da Fenretinida na Acumulação de Lipofuscina (e/ou Α2Έ) em Camundongos Mutantes Nulos abca4\ Fase I - Resposta e Efeito da Dose sobre o Retinol do Soro.

O efeito da HPR sobre a redução do retinol, em indivíduos animais e humanos, conduz-nos a explorar a possibilidade de que as reduções de lipofuscina e do conjugado de bis-retinóide tóxico, A2E, podem também ser realizadas. A base lógica para esta abordagem é baseada em duas linhas independentes de evidência científica: 1) a redução da concentração da vitamina A ocular, via inibição de uma enzima de ciclo visual conhecido (11- cis retinol desidrogenase), resulta em profundas reduções dalipofuscina e A2E; 2) os animais mantidos sob uma dieta deficiente de vitamina A demonstram dramáticas reduções do acúmulo de lipofuscina. Assim, o objetivo deste exemplo foi examinar o efeito da HPR em um modelo animal que demonstre acumulação maciça de lipofuscina e A2E no tecido ocular, o camundongo mutante nulo abca4.

Estudos animais começaram pelo exame do efeito da HPR no retinol do soro. Os animais foram divididos em três grupos e foi-lhes dado DMSO, 10 mg/kg HPR ou 20 mg/kg HPR por 14 dias. No final do período de estudo, o sangue foi coletado dos animais, soros foram preparados e um extrato de acetonitrila do soro foi analisado pro LC/MS de fase inversa. Análises espectrais de UV-visível e de massa/carga foram realizadas para confirmar a identidade dos picos eluídos. Cromatogramas de amostras, obtidos destas análises, são mostrados: Fig. 7a - extrato de um camundongo mutante nulo abca4 recebendo veículo HPR, DMSO; Fig. 7b - 10 mg/kg de HPR; Fig. 7c. - 20 mg/kg HPR. Os dados claramente mostram uma redução dependente da dose no retinol do soro. Dados quantitativos indicam que, a 10 mg/kg HPR, o trans retinol é diminuído 40%, vide Fig. 8. Para 20 mg/kg HPR, o retinol do solo é diminuído 72%, vide Fig. 8. As concentrações de estado constante de retinol e HPR do soro (a 20 mg/kg HPR) foram determinadas como sendo 2,11 μΜ e 1,75 μΜ, respectivamente.

Com base nestes achados, procuramos explorar mais o(s) mecanismo(s) da redução do retinol durante o tratamento HPR. Uma hipótese sustentável é que a HPR pode deslocar retinol por competição no sítio de ligação de retinol em RBP. Como o retinol, a HPR absorve (extingue) energia de luz na região de fluorescência da proteína; entretanto, diferente de retinol, a HPR não emite fluorescência. Portanto, pode-se medir o deslocamento do retinol da holoproteína de RBP observando-se a diminuição da fluorescência tanto na proteína (340 nm) como no retinol (470 nm). Realizamos um ensaio de ligação de competição usando concentrações de RB-retinol/HPR que eram similares àquelas determinadas pelo experimento de 14 dias a 20 mg/kg HPR descrito acima. Os dados obtidos por estas análises revelam que HPR desloca eficientemente o retinol da holoproteína de RBP-retinol em temperatura fisiológica, vide Fig. 9b. A ligação competitiva de HPR em RBP foi dependente da dose e saturável. Nos ensaios de controle, diminuições da fluorescência de retinol foram associadas com concomitantes aumentos da fluorescência da proteína, vide Fig. 9a. Este efeito foi determinado como sendo devido aos efeitos de temperatura quando a constante de dissociação de RBP-retinol aumenta (afinidade diminuída) com tempo aumentado a 37°C. Em resumo, estes dados sugerem que aumentos de HPR além dos equivalentes eqüimolares, em relação a holoproteína RBP (p. ex., 10 μΜ HPR, 0,5 μΜ RBP), farão com que uma significativa fração de retinol seja deslocada da RBP in vivo.

Exemplo 15: Eficácia da Fenretinida sobre o Acúmulo da Lipofuscina (e/ou A2E) em Camundongos Mutantes nulos abca4\ Fase II - Tratamento Crônico de Camundongos Mutantes Nulos abca4.

Iniciamos um estudo de um mês para avaliar os efeitos de HPR sobre a redução de A2E e precursores de A2E em camundongos mutantes nulos abca4. A HPR foi administrada em DMSO (20 mg/kg, ip) em camundongos mutantes nulos abca4 (BL6/129, envelhecidos 2 meses) diariamente por um período de 28 dias. Camundongos de controle igualados em idade/cepa receberam somente o veículo DMSO. Os camundongos foram amostrados a 0, 14 e 28 dias (n = 3 por grupo), os olhos foram enucleados e os constituintes solúveis em clorofórmio (lipídeos, retinóides e conjugados de lipídeo-retinóide) foram extraídos. Os camundongos foram sacrificados por deslocamento cervical, os olhos foram enucleados e individualmente congelados instantaneamente em crio-frascos. Os extratos de amostra foram então analisados pro HPLC com detecção de fluorescência em linha. Os resultados deste estudo mostram reduções notáveis e prematuras do precursor de A2E, A2PE-H2, vide Fig. IOa e subseqüente reduções em A2E, vide Fig. 10b. Análise quantitativa revelou uma redução de 70% de A2PE-H2 e 55% de redução de A2E, em seguida tratamento de 28 dias de HPR. Um estudo similar pode ser realizado para verificar os efeitos do tratamento de HPR sobre os fenótipos eletrorretinográficos e morfológicos.

Exemplo 16: Estudo de Extinção de Fluorescência de Ligação de MPR em Proteína de Ligação de Retinol (RBP)

Apo-RBP a 0,5 μΜ foi incubada a 0,5 μΜ com 0, 0,25 0,25, 1 e 2 μΜ de MPR em PBS em temperatura ambiente por 1 hora, respectivamente. Como controles, a mesma concentração de Apo-RBP foi também incubada com 1 μΜ de HPR ou 1 μΜ de atROL. Todas as misturas continha, 0,2 de etanol (v/v). Os espectros de emissão foram medidos entre 290 nm a 550 nm com comprimento de onda de excitação em bandas de passagem de 280 nm e 3 nm.

Como mostrado na Fig. 11, a MPR exibiu extinção dependente de concentração da fluorescência de RBP e a extinção saturada a 1 μΜ de MPR para 0,5 μΜ de RBP. Em razão de a extinção da fluorescência observada ser provavelmente devida à transferência de energia de ressonância de fluorescência entre os resíduos aromáticos da proteína e a molécula de MPR ligada, a MPR é sugerida ligar-se à RBP. O grau de extinção por MPR é menor do que aquele por atROL e HPR, dois outros ligandos que se ligam a RBP.

Exemplo 17: Estudo de Exclusão de Tamanho da Ligação de Transtirretina (TTR) a RBP

Apo-RBP a 10 μΜ foi incubada com 50 μΜ de MPR em PBS em temperatura ambiente por 1 hora. 10 μΜ de TTR foram então adicionados à solução e a mistura foi incubada por outra hora em temperatura ambiente. 50 μΐ das misturas de amostra come sem adição de TTR foram analisados por Coluna de Filtragem Gel Bio-Sil SEC125 (300 χ 7,8 mm). Em experimentos de controle, mistura de atROL-RBP e atROL-RBP-TTR foram analisadas da mesma maneira.

Como mostrado na Fig. 12a, a amostra MPR-RBP exibiram pico de eluição RBP (ali ml) com forte absorvência a 360 nm, indicando que RBP liga-se a MPR; após incubação com TTR, esta absorvência de 360 nm permaneceu com o pico de eluição RBP, enquanto o pico de eluição TTR (a 8,6 ml) não continha qualquer absorvência aparente a 360 nm (vide Fig. 12b), indicando que MPR-RBP não se ligaram a TTR. Em um experimento de controle de atROL-RBP, o pico de eluição de RBP mostrou forte absorvência a 330 nm (vide Fig. 12c); após incubação com TTR, mais do que metade desta absorvência a 330 nm mudou para pico de eluição TTR (vide Fig. 12d), indicando ligação atROL-RBP em TTR. Assim, a MPR inibe a ligação de TTR em RBP.

Exemplo 18: Análise de retinol do soro em função da concentração de HPR Camundongos mutantes nulos ABCA4 receberam a dose indicada de HPR em DMSO (i.p.) diariamente por 28 dias (n = 4 camundongos por grupo de dosagem). No final do período de estudo, amostras de sangue foram tiradas e o soro preparado. Em seguida precipitação de acetonitrila de proteínas do soro, as concentrações de retinol e HPR foram determinadas pela fase solúvel por LC/MS (vide Fig. 8). Identidade dos compostos eluídos foi confirmada por espectroscopia de absorção UV-vis e coeluição de picos de amostra com padrões autênticos.

Exemplo 19: Correlação da concentração de HPR com reduções de retinol, A2PE-H2 e A2E em camundongos mutantes nulos abca4

As médias de grupo dos dados mostrados nos painéis A - G da Fig. 13 do Exemplo 25 (pontos de tempo de 28 dias) são plotadas para ilustrar a forte correlação entre aumentos da HPR do soro e diminuições do retinol do soro (vide Fig. 14). As reduções do retinol do soro são altamente correlacionadas com as reduções de compostos A2E e precursores (A2PE- H2). Uma redução pronunciada em A2PE-H2 no grupo de dosagem de 2,5 mg/kg (-47%) é observada quando a redução do retinol do soro é somente de 20%. A razão para esta redução desproporcionada é relacionada com o teor de retinóide ocular inerentemente mais baixo neste grupo de animais com a idade de 2 meses, em comparação com os outros grupos. É provável que, se estes animais tivessem sido mantidos sob a dose de 2,5 mg/kg por um período mais prolongado, uma maior redução de A2E também seria realizada.

Exemplo 20: Efeitos de HPR sobre as Concentrações de Estado Constante dos Retinóides, fluoróforos A2E e Fisiologia Retinal

Análise da composição do retinóide em camundongos tratados com DMSO e HPR, adaptados à luz (Fig. 15, painel A) mostrou aproximadamente 50% de redução dos retinóides do ciclo visual, como resultado do tratamento com HPR (10 mg/kg diariamente por 28 dias). Os painéis B e C da Fig. 15 mostram que a HPR não afeta a regeneração do cromóforo visual nestes camundongos (painel B é a biossíntese de cromóforo visual, o painel C é a reciclagem de cromóforo alvejado). Os painéis D - F da Fig. 15 são medições eletrofisiológicas da função das células em bastonete (painel D), função das células em bastonete e cônicas (painel E) e recuperação do fotoalvejamento (painel F). A única diferença notável é adaptação retardada ao escuro nos camundongos tratados com HPR (painel F).

Os camundongos mutantes nulos ABCA4 receberam a dose indicada de HPR em DMSO ou DMSO sozinho diariamente por 28 dias (n = 16 camundongos por grupo de tratamento). No início do estudo, os camundongos do grupo de 2,5 mg/kg tinham a idade de 2 meses, os camundongos dos outros grupos de tratamento tinham a idade de 3 meses. Nos tempos indicados, camundongos representativos foram retirados de cada grupo (n = 4) para análise dos compostos precursores de A2E (vide Fig. 13, A2PE-H2, painéis A, C e E) e A2E (vide Figura 13, painéis B5 D e F). Os olhos foram enucleados, semi-sectados e os componentes solúveis em lipídeo foram extraídos do pólo posterior por separação de fase de clorofórmio/metanol-água. Extratos de amostra foram analisados por LC. A identidade dos compostos eluídos foi confirmada por espectroscopia de absorção de UV-vis. e co-eluição de picos de amostra com padrões autênticos.

Nota: limitações em camundongos apropriadamente igualados em idade e cepa do grupo de 10 mg/kg evitaram análise no intervalo de 14 dias. Os dados mostram reduções dependentes da dose de A2PE-H2 e A2E durante o período de estudo.

Os painéis G - I da Fig. 13 mostram evidência morfológica/histológica de que HPR reduz significativamente a autofluorescência da lipofuscina no RPE de camundongos mutantes nulos abcr (modelo animal de Stargardt). As condições de tratamento são como descritas acima. O nível de autofluorescência no animal tratado com HPR é comparável àquele de um animal tipo selvagem igualado em idade. A Fig. 16 mostra imagens de microscopia óptica das retinas de animais tratados com DMSO e HPR. Não foi observada morfologia aberrante ou compromisso da integridade da citoestrutura retinal.

O acúmulo da lipofuscina no epitélio do pigmento retinal (RPE) é um aspecto patológico comum observado em várias doenças degenerativas da retina. Um fluoróforo baseado em vitamina A tóxica (A2E), presente dentro de grânulos de lipofuscina, tem estado implicado na morte do RPE e células fotorreceptoras. Nestes experimentos, empregamos um modelo animal que manifesta acúmulo de lipofuscina acelerado, para avaliar a eficácia de uma abordagem terapêutica baseada na redução da vitamina A do soro (retinol). A fenretinida potencialmente e reversivelmente reduz o retinol do soro. A administração de HPR em camundongos, abrigando uma mutação nula do gene da Doença de Stargardt (ABCA4'), produziu profundas reduções em retinol do soro/proteína de ligação de retinol e deteve o acúmulo de autofluorescência de A2E e lipofuscina nas RPE. Fisiologicamente as reduções induzidas por HPR de cromóforo visual foram manifestas como modestos retardos da adaptação ao escuro; a cinética de regeneração de cromóforo era normal. Importantemente, efeitos específicos intracelulares de HPR sobre a esterificação da vitamina A e mobilização de cromóforo foram também identificados. Estes achados demonstram a natureza dependente da vitamina-A da biossíntese de A2E e validam uma abordagem terapêutica que é prontamente transferível para pacientes humanos sofrendo de doenças retinais baseadas em lipofuscina.

Exemplo 21: Benefícios da Terapia de HPR Persiste Durante Descanso de droga

A HPR (10 mg/kg em DMSO) foi administrada em camundongos ABCA4-/- diariamente por um período de 28 dias. Os camundongos ABCA4-/- de controle receberam somente DMSO pelo mesmo período. Análise bioquímica (HPLC) do precursor A2E (A2PE-H2) e A2E, em seguida a um período de tratamento de 28 dias, revelou uma redução destes fluoróforos nos olhos dos camundongos tratados com HPR (Fig. 13). Outra análise por microscopia de fluorescência corroborou os dados bioquímicos e revelou que os níveis de autofluorescência da lipofuscina de camundongos ABCA4-/- tratados com HPR eram comparáveis aos níveis observados em camundongos tipo selvagem não-tratados (Fig. 13). Exames histológicos por microscopia óptica não mostraram alteração da citoestrutura ou morfologia da retina (Fig. 16). Importantemente, as reduções observadas na autofluorescência da lipofuscina persistem por muito tempo após a cessação de terapia por HPR. A administração de HPR (10 mg/kg) ou DMSO foi descontinuada em seguida aos 28 dias de tratamento e os níveis de A2E e precursor reavaliados após 2 semanas e após 4 semanas.

Examinamos os extratos do cálice ocular por HPLC e empregamos detecção por absorvência e fluorimetria. Identidade dos picos indicados foi confirmada por análise espectral em linha e por co-eluição com padrões autênticos. Os dados mostram que, em animais que tinham sido anteriormente mantidos em terapia de HPR (Fig. 17, painel A), os níveis de A2E e precursor (A2PE-H2 e A2PE) permaneceram significativamente reduzidos em relação aos camundongos de controle (Fig. 17, painel B), mesmo após 12 dias sem receber uma dose de HPR (isto é, um descanso de droga de 12 dias). Resultados similares foram observados em camundongos em seguida ao descanso de droga de 28 dias: os níveis de A2E e precursor (A2PE-H2 e A2PE) permanecem significativamente reduzidos em relação aos camundongos de controle (compare a Fig. 17, painel C, camundongos tratados, com a Fig. 17, painel D, camundongos de controle). Além disso, os níveis de A2E e precursor (A2PE-H2 e A2PE), após um descanso de droga de 12 ou 28 dias, permaneceram nos ou próximo dos níveis, imediatamente em seguida aos 28 dias de tratamento (isto é, ca. de 50% de redução em relação ao controle), embora, após o descanso de droga de 28 dias, a quantidade de A2E e precursor (A2PE-H2 e A2PE) tenha aumentado em alguns pontos percentuais em relação aos níveis de descanso de droga de 12 dias. Apesar da redução persistente nos níveis de A2E e precursor (A2PE-H2 e A2PE) nos olhos de animais em um descanso de droga de HPR, fomos incapazes de detectar HPR ou metabólitos de HPR (p. ex., MPR) nos olhos dos animais em um descanso de droga de 28 dias. O traço da Fig. 17, painéis CeD, mostra a intensidade da autofluorescência associada com os picos indicados. E óbvio que a fluorescência pico rastreia a abundância de A2E, A2PE e A2PE-H2.

Estes dados relacionam-se com a toxicidade durante os experimentos clínicos, pela manutenção dos pacientes em uma dose de HPR reduzida, em seguida a prova de eficácia clínica em uma dose mais elevada. Esta análise pode obviar a necessidade de corroboração adicional por microscopia. Que saibamos, este efeito não tem sido observado com outros métodos para tratar uma condição oftálmica ou traço selecionado do grupo consistindo de Doença de Stargardtj degeneração macular relacionada com a idade de forma seca, uma degeneração retinal baseada em lipofuscina, degeneração de fotorreceptor e atrofia geográfica. Nem foi este efeito observado com métodos para reduzir a formação de N-retinilideno-N- retiniletanolamina no olho de um mamífero, ou métodos para reduzir a formação de lipofuscina no olho de um mamífero. A HPR reduz os níveis de retinol do soro, o que resulta em uma redução no nível de retinol nos olhos de animais tratados. Uma vez o nível de retinol tenha sido reduzido no olho, há um atraso de tempo no subseqüente aumento dos níveis de retinol no olho. Sozinha ou em combinação, a produção de A2E, A2PE e A2PE-H2 no olho permanece baixa apesar da ausência de HPR no soro ou no olho.

Exemplo 22: Validação de RBP como um alvo terapêutico para deter o acúmulo de Α2Έ

Exploramos um meio não-farmacológico de reduzir os fluoróforos da lipofuscina, a fim de validar nossa abordagem terapêutica com base na redução dos níveis de RBP em um paciente. Neste estudo, os níveis de proteína de RBP foram reduzidos através de manipulação genética. Duas novas linhagens de camundongos, expressando mutações heterozigoto na proteína de ligação de retinol (RBP4), foram geradas. A primeira linhagem contém uma mutação heterozigoto somente no local RPB (RBP+/-). A segunda linhagem contém mutações heterozigoto nos locais ABCA4 e RBP (ÁBCA4+/-/RBPA +/-). Assim, ambas as linhagens demonstram uma redução de -50% na expressão RBP e no retinol do soro. Os camundongos RBP+/- serão do tipo selvagem no local ABCAA e, portanto, não acumulam quantidades excessivas de fluoróforos A2E. Entretanto, os camundongos ABCAAjTi- acumularão fluoróforos A2E em níveis que são de aproximadamente 50% daqueles observados em camundongos ABCAA-I- (homozigoto nulo). Em questão é se a expressão reduzida de RBP nos camundongos ABCAA+/-/RBP+/- terão um efeito sobre o acúmulo de fluoróforos A2E.

Os níveis de fluoróforos A2E e precursores (A2PE e A2PE- H2) nestes camundongos foram monitorados mensalmente durante um período de três meses e comparados com os níveis de fluoróforo de camundongos ABCA4+!-. Os dados fornecem níveis de fluoróforos nas três linhagens de camundongos a três meses de idade (Fig. 18). No total, os camundongos ABCA4+I-IRBP+I- demonstram uma redução de -70% no nível de fluoróforo total, em relação aos níveis presentes em camundongos ABCA4H-. De fato, os níveis de fluoróforos medidos nos camundongos ABCA4+/-/RBP+/- aproximam-se daqueles observados em camundongos RBP+/". Estes dados validam a RBP como um alvo terapêutico para reduzir os níveis de fluoróforo no olho. Além disso, estes dados demonstram que os agentes ou métodos que inibem a transcrição ou translação da RPB em um paciente também (a) reduzirão os níveis de retinol do soro naquele paciente e (b) fornecerão um benefício terapêutico nas doenças relacionadas com retinol aqui descritas. Além disso, os agentes ou métodos que aumentam a depuração da RBP em um paciente também produzirão tais efeitos e benefícios.

Todos os métodos descritos e reivindicados aqui podem ser realizados e executados sem indevida experimentação, à luz da presente descrição. Será evidente para àqueles hábeis na arte que variações podem ser aplicadas sem desvio da concepção, espírito e escopo da invenção. Mais especificamente, será evidente que certos agentes que se relacionam tanto química como fisiologicamente podem substituir os agentes aqui descritos, enquanto resultados iguais ou similares seriam conseguidos. Todos tais substituintes e modificações similares, evidentes para àqueles hábeis na arte, são julgados situarem-se dentro do espírito, escopo e concepção da invenção, como definida pelas reivindicações anexas.

Claims

REIVINDICAÇÕES

1. Uso de uma quantidade eficaz de um primeiro composto, em que dito primeiro composto é capaz de modular níveis ou atividade de RBP ou TTR sérica em um mamífero, caracterizado pelo fato de ser para a manufatura de um medicamento sistemicamente formulado para tratar diabetes tipo I ou tipo II no mamífero.

2. Uso de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o primeiro composto inibe a ligação de retinol à RBP.

3. Uso de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o primeiro composto é capaz de inibir a transcrição de RBP ou TTR no mamífero.

4. Uso de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o primeiro composto é capaz de inibir a tradução de RBP ou TTR no mamífero.

5. Uso de acordo com a reivindicação I5 caracterizado pelo fato de que o primeiro composto é capaz de aumentar a depuração de RBP ou TTR no mamífero.

6. Uso de acordo com a reivindicação Is caracterizado pelo fato de que o primeiro composto inibe a ligação de RBP à TTR.

7. Uso de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o medicamento adicionalmente compreende um segundo composto selecionado do grupo consistindo de (a) um hormônio ou mimético de hormônio diminuidor de glicose, (b) uma sulfoniluréia diminuidora de glicose, (c) um biguanida diminuidora de glicose, (d) uma meglitinida diminuidora de glicose, (e) uma tiazolidinodiona diminuidora de glicose ou outro agonista PPAR-gama, (f) um agonista de PPAR de dupla ação diminuidor de glicose com afinidade tanto para PPAR-gama como para PPAR-alfa, (g) um inibidor da alfa-glicosidase diminuidora de glicose, (h) um composto antissentido diminuidor de glicose não alvejado na glicose-6- fosfatase translocase, (i) um supressor de apetite anti-obesidade, (j) um inibidor da absorção de gordura anti-obesidade, (k) uma forma modificada anti-obesidade de fator neurotrófico ciliar, que inibe os sinais de fome que estimulam o apetite, (1) uma resina seqüestrante de sal biliar diminuidora de lipídeo, (m) um inibidor da HMGCoA-redutase diminuidor de lipídeo, (n) um ácido nicotínico, (o) um derivado do ácido fíbrico diminuidor de lipídeo, (p) um agente selecionado de probucol, neomicina, e dextrotiroxina, (q) um éster de estanol de planta, (r) um inibidor da absorção de colesterol, (s) um inibidor de CETP, (t) um inibidor da MTP, (u) um inibidor dos transportadores do ácido biliar, (v) um regulador de CYP7a hepática, (w) um inibidor de ACAT, (x) um terapêutico de substituição de estrogênio de diminuição de lipídeo, (y) um HDL sintético e (z) um agente anti-inflamatório diminuidor de lipídeo, o segundo composto sendo adaptado para administração simultânea, seqüencial ou separada com o primeiro composto como definido na reivindicação 1.

8. Uso de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o dito medicamento é sistemicamente formulado para administração oral, intravenosa, iontoforética ou administração por injeção.

9. Uso de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o mamífero é um ser humano.

10. Uso de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o primeiro composto tem a estrutura da Fórmula (II): <formula>formula see original document page 128</formula> em que X é selecionado do grupo consistindo de Ml, O, S, CHR ; R é (CHR² )x-L -R³ , em que χ é 0, 1, 2, ou 3; L é uma ligação simples ou -C(O)-; R² é uma porção selecionada do grupo consistindo de H, (Ci-C4)alquila, F, (Ci-C4)fluoroalquila, (C-C4)alcóxi, -C(O)OH, -C(O)-NH2, -(Ci_ C4)alquilamina, -C(0)-(Ci-C4)alquila, -C(0)-(Ci_C4)fluoroalquila, -C(0)-(C!_ C4)alquilamina, e -C(0)-(Ci-C4)alcóxi; e R³ é H ou um porção, opcionalmente substituída com 1-3 substituintes independentemente selecionados, selecionados do grupo consistindo de (C2-C7)alquenila, (C2-C7)alquinila, arila, (C3_C7)cicloalquila, (C5_C7)cicloalquenila, e um heterociclo; ou um metabólito ativo, ou uma sua pró-droga ou solvato farmaceuticamente aceitável.

11. Uso de acordo com a reivindicação 10, caracterizado pelo fato de que o primeiro composto tema a estrutura de Fórmula (II) e X é NR , e R2 é H ou (c1-c4)alquila.

12. Uso de acordo com a reivindicação 10, caracterizado pelo fato de que o primeiro composto tema a estrutura de Fórmula (II) e χ é 0.

13. Uso de acordo com a reivindicação 10, caracterizado pelo fato de que o primeiro composto tema a estrutura de Fórmula (II) e R é arila opcionalmente substituída.

14. Uso de acordo com a reivindicação 10, caracterizado pelo fato de que o primeiro composto tem a estrutura de Fórmula (II) e X1 é NH, e R3 é arila opcionalmente substituída.

15. Uso de acordo com a reivindicação 14, caracterizado pelo fato de que o grupo arila tem um substituinte selecionado do grupo consistindo de halogênio, OH, 0(C1-C4)alquila, NH(Ci-C4)alquila, 0(Cr C4)fluoroalquila, e N[(Ci-C4)alquila]2-

16. Uso de acordo com a reivindicação 10, caracterizado pelo fato de que o primeiro composto é N-(4-hidroxifenil)retinamida ou N-(4- metoxifenil)retinamida.

17. Medicamento sistemicamente formulado, caracterizado pelo fato de compreender um composto como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 16.