BRPI0609869B1 - Anticorpo il-6 isolado, molécula e vetor de ácido nucléico isolado, célula hospedeira de microrganismo transgênico, método para produzir um anticorpo il-6, composição compreendendo o anticorpo il-6 isolado, dispositivo médico que compreende um anticorpo il-6 e artigo fabricado para uso farmacêutico ou diagnóstico humano - Google Patents

Anticorpo il-6 isolado, molécula e vetor de ácido nucléico isolado, célula hospedeira de microrganismo transgênico, método para produzir um anticorpo il-6, composição compreendendo o anticorpo il-6 isolado, dispositivo médico que compreende um anticorpo il-6 e artigo fabricado para uso farmacêutico ou diagnóstico humano Download PDF

Info

Publication number
BRPI0609869B1
BRPI0609869B1 BRPI0609869-0A BRPI0609869A BRPI0609869B1 BR PI0609869 B1 BRPI0609869 B1 BR PI0609869B1 BR PI0609869 A BRPI0609869 A BR PI0609869A BR PI0609869 B1 BRPI0609869 B1 BR PI0609869B1
Authority
BR
Brazil
Prior art keywords
antibody
human
drug
hydrochloride
seq
Prior art date
Application number
BRPI0609869-0A
Other languages
English (en)
Inventor
Yan Chen
Debra Gardner
David M. Knight
Michael W. Lark
Bailin Liang
David J. Shealy
Xiao-Yu R. Song
Susan H. Tam
Sheng-Jiun Wu
Jing Yang
Eric Michael Smith
Alain Philippe Vasserot
Raymond W. Sweet
David Matthew Marquis
Vedrana Stojanovic-Susulic
Original Assignee
Applied Molecular Evolution, Inc.
Johnson & Johnson
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Applied Molecular Evolution, Inc., Johnson & Johnson filed Critical Applied Molecular Evolution, Inc.
Publication of BRPI0609869A2 publication Critical patent/BRPI0609869A2/pt
Publication of BRPI0609869B1 publication Critical patent/BRPI0609869B1/pt

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/24—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against cytokines, lymphokines or interferons
    • C07K16/244—Interleukins [IL]
    • C07K16/248—IL-6
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/02—Stomatological preparations, e.g. drugs for caries, aphtae, periodontitis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/02—Nasal agents, e.g. decongestants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/04—Drugs for skeletal disorders for non-specific disorders of the connective tissue
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
    • A61P19/10—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease for osteoporosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/04—Anorexiants; Antiobesity agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/04—Immunostimulants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/08—Antiallergic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A61P5/48—Drugs for disorders of the endocrine system of the pancreatic hormones
    • A61P5/50—Drugs for disorders of the endocrine system of the pancreatic hormones for increasing or potentiating the activity of insulin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/12—Antihypertensives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/54—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the route of administration
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/21—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from primates, e.g. man
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/33—Crossreactivity, e.g. for species or epitope, or lack of said crossreactivity
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/34—Identification of a linear epitope shorter than 20 amino acid residues or of a conformational epitope defined by amino acid residues
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/567—Framework region [FR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Otolaryngology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)

Abstract

anticorpo il-6 isolado, anticorpo humano isolado projetado, anticorpo humano isolado ou humano projetado, molécula e vetor de ácido nucléico isolado, método para a produção de um anticorpo il-6, composição compreendendo o anticorpo il-6 isolado, anticorpo ou fragmento antiidiótipo, uso do referido anticorpo, dispositivo médico que compreende um anticorpo il-6 e artigo fabricado para uso farmacêutico ou diagnóstico humano. a presente invenção se refere a um anticorpo anti-il-6, incluindo ácidos nucléicos isolados que codificam pelo menos um anticorpo anti-il-6, vetores, células hospedeiras, animais ou plantas transgênicas e métodos de fabricação e utilização destes têm aplicações em composições, métodos e dispositivos diagnósticos e/ou terapêuticos.

Description

CAMPO DA INVENÇÃO
[001] A presente invenção está relacionada a anticorpos,incluindo porções ou variantes especificadas, específicos para pelo menos uma proteína IL-6 ou fragmento desta, além de anticorpos antiidiótipo, e ácidos nucléicos que codificam esses anticorpos anti-IL- 6, ácidos nucléicos complementares, vetores, células hospedeiras e métodos de fabricação e utilização destes, incluindo formulações terapêuticas, administração e dispositivos.
ANTECEDENTES DA INVENÇÃO
[002] IL-6 é uma citocina pró-inflamatória pleiotrópica produzida esecretada por uma ampla variedade de tipos celulares, principalmente células de apresentação de antígeno, células T e B. IL-6 está envolvida em atividades tão diversas quanto crescimento e diferenciação de células B, ativação de células T, hematopoiese, ativação de osteoclastos, crescimento de queratinócitos, crescimento neuronal e ativação de hepatócitos. IL-6 se liga ao IL-6R transmembrana ou solúvel, e sinaliza através de gp130, que é compartilhada por várias outras citocinas.
[003] IL-6 tem uma participação importante em anormalidades decélulas B, como demonstrado no lúpus eritematoso sistêmico, mieloma múltiplo e distúrbios linfoproliferativos. Da mesma forma, IL-6 também está implicada na patogênese de doenças auto-imunes e inflamatórias, tais como artrite reumatóide e osteoartrite. Recentemente, evidências indiretas sugerem uma associação entre IL-6 e doença pulmonar obstrutiva crônica e resistência à insulina no diabetes do tipo 2. IL-6 tem efeitos tanto pró-inflamatórios quanto antiinflamatórios no sistema imunológico, indicando que essa citocina provavelmente tem um papel central na regulação da resposta fisiológica à doença. Portanto, o fato de se ter como objetivo a IL-6 pode potencialmente fornecer benefício terapêutico em várias áreas de doenças.
[004] Foi observado um aumento na produção de IL-6 emdiversas doenças, incluindo: doença de Alzheimer, doenças auto- imunes, tais como artrite reumatóide, inflamação, infarto do miocárdio, doença de Paget, osteoporose, tumores sólidos (carcinoma de células renais), cânceres de próstata e da bexiga, cânceres neurológicos e malignidades de células B (por exemplo, doença de Casteleman, certos linfomas, leucemia linfocítica crônica e mieloma múltiplo). Pesquisas indicaram que IL-6 está ligada à patogênese de muitas dessas doenças, particularmente ao câncer e, portanto, o bloqueio de IL-6 deve se traduzir em benefícios clínicos.
[005] Foram desenvolvidos anticorpos anti-IL-6 murídeos,quiméricos e outros anticorpos anti-IL-6 não-humanos; no entanto, eles podem ser limitados em sua potência e eficácia, podem freqüentemente desencadear uma resposta imunológica inaceitável (ou seja, imunogenicidade) e/ou necessitar de uma dosagem elevada (veja Trikha e al., Clin. Can. Res. 9, 4.653-4.665, outubro de 2003, aqui incorporado por referência). Por exemplo, anticorpos contendo porções não-humanas freqüentemente dão origem a uma resposta imunológica em seres humanos. Conseqüentemente, a administração repetida do anticorpo é inadequada como terapia, e a depuração de anticorpos mediada por complexo imune da circulação pode reduzir a potência/eficácia do anticorpo. A doença do soro e a anafilaxia são duas condições exemplares que podem ser causadas pela administração repetida de anticorpos que possuem porções não- humanas. A esse respeito, é necessário um anticorpo anti-IL-6 com menos potencial para imunogenicidade, ou seja, mais tolerável em seres humanos, e que seja mais potente de tal modo que necessite de uma dosagem menor quando comparado com os anticorpos anti-IL-6 usados previamente.
SUMÁRIO DA INVENÇÃO
[006] A presente invenção fornece anticorpos anti-IL-6 humanos,isolados e projetados (também denominados anticorpos IL-6), imunoglobulinas, fragmentos, produtos de clivagem e outras porções e variantes especificadas destes, além de composições de anticorpo anti-IL-6, anticorpo antiidiótipo IL-6, ácidos nucléicos codificadores ou complementares, vetores, células hospedeiras, composições, formulações, dispositivos, animais transgênicos, plantas transgênicas e seus métodos de fabricação e utilização.
[007] A presente invenção fornece, em um aspecto, moléculas deácido nucléico isolado que compreendem um polinucleotídeo codificador complementar ou que hibridiza para anticorpos anti-IL-6 ou anticorpos antiidiótipo específicos, que compreendem pelo menos uma seqüência, domínio, porção ou variante especificada destes. A presente invenção ainda fornece vetores recombinantes que compreendem as referidas moléculas de ácido nucléico de anticorpo anti-IL-6, células hospedeiras que contêm tais ácidos nucléicos e/ou vetores recombinantes, além de métodos de fabricação e/ou utilização desses referidos ácidos nucléicos de anticorpo, vetores e/ou células hospedeiras.
[008] A presente invenção também fornece pelo menos ummétodo para a expressão de pelo menos um anticorpo anti-IL-6, ou anticorpo antiidiótipo IL-6, em uma célula hospedeira, que compreende o cultivo de uma célula hospedeira, como aqui descrita, sob condições nas quais pelo menos um anticorpo anti-IL-6 seja expresso em quantidades detectáveis e/ou recuperáveis.
[009] A presente invenção também fornece pelo menos umacomposição que compreende: (a) um ácido nucléico isolado codificador de anticorpo anti-IL-6 e/ou anticorpo, como aqui descritos; e (b) um veículo ou diluente adequado e/ou farmaceuticamente aceitável.
[0010] A presente invenção ainda fornece pelo menos um métodoou composição de anticorpo anti-IL-6 para a administração de uma quantidade terapeuticamente eficaz para modular ou tratar pelo menos uma condição relacionada à IL-6 em uma célula, tecido, órgão, animal ou paciente e/ou antes, depois ou durante uma condição relacionada, como conhecido na técnica e/ou como aqui descrito.
[0011] A presente invenção também fornece pelo menos umacomposição, dispositivo e/ou método de liberação de uma quantidade terapêutica ou profilaticamente eficaz de pelo menos um anticorpo anti-IL-6, de acordo com a presente invenção.
[0012] A presente invenção ainda fornece pelo menos um métodoou composição de anticorpo anti-IL-6 para o diagnóstico de pelo menos uma condição relacionada à IL-6 em uma célula, tecido, órgão, animal ou paciente e/ou antes, depois ou durante uma condição relacionada, como conhecido na técnica e/ou como aqui descrito.
[0013] A presente invenção também fornece pelo menos umacomposição, dispositivo e/ou método de liberação para o diagnóstico de pelo menos um anticorpo anti-IL-6, de acordo com a presente invenção.
[0014] Também é fornecido um dispositivo médico quecompreende pelo menos um anticorpo anti-IL-6 isolado mamífero da invenção, em que o dispositivo é adequado para o contato ou administração daquele pelo menos um anticorpo anti-IL-6, anticorpo IL-6 antiidiotípico, molécula de ácido nucléico, composto, proteína e/ou composição.
[0015] Também é fornecido um artigo fabricado para usofarmacêutico ou diagnóstico humano, que compreende um material de embalagem e um recipiente que compreende uma solução ou uma forma liofilizada de pelo menos um anticorpo anti-IL-6 isolado da presente invenção. O artigo fabricado pode opcionalmente ter o recipiente como um componente de um dispositivo ou sistema de liberação.
[0016] A presente invenção ainda fornece qualquer invenção aquidescrita.
DESCRIÇÃO DAS FIGURAS
[0017] A figura 1 mostra a ligação de anticorpo anti-IL-6 humanoprojetado e quimérico ao complexo IL-6/IL-6R.
[0018] A figura 2 mostra o epítopo de ligação para o anticorpohumano projetado anti-IL-6 da presente invenção.
[0019] A figura 3 demonstra que o anticorpo humano projetadoanti-IL-6 inibe a secreção de MCP-1 estimulada por IL-6 por células U937 como medido por ELISA.
[0020] A figura 4 mostra que o anticorpo humano projetado anti-IL-6 inibe a secreção de SAA estimulada por IL-6 e IL-1β por células HepG2 como medido por ELISA.
[0021] As Figuras 5A e 5B mostram que o anticorpo humanoprojetado anti-IL-6 bloqueia a fosforilação de stat3 mediada por IL-6, como medido por análise Western Blot mostrada através de eletroforese em gel.
[0022] A figura 6 mostra a inibição por anticorpo anti-IL-6 humanoprojetado e quimérico da produção de SAA induzida por IL-6 humana em camundongos Balb/C.
[0023] A figura 7 mostra a inibição de produção de auto-anticorpoanti-dsDNA por mAb anti-IL-6 em camundongos NZB/W F1.
[0024] A figura 8A mostra o efeito de IL-6 na presença e ausênciade anticorpo humano projetado anti-IL-6 sobre a fosforilação de Akt induzida por insulina.
[0025] A figura 8B mostra uma análise western blot do efeito de IL-6 na presença e ausência de anticorpo humano projetado anti-IL-6 sobre a fosforilação de Akt induzida por insulina.
[0026] A figura 9 mostra os resultados do ensaio de ligação ELISAdescrito no Exemplo 3.
[0027] A figura 10 mostra os resultados de um ensaio deantiproliferação usando a linhagem germinativa dependente de IL-6 descrita no Exemplo 3.
[0028] A figura 11A mostra a ativação de PI3 quinase emhepatócitos de ratos tratados com insulina, proteína IL-6 e anticorpo anti-IL-6.
[0029] A figura 11B mostra o controle para o estudo da ativação dePI3 quinase em hepatócitos de ratos.
[0030] A figura 12A mostra o efeito de IL-6 sobre a sinalização emhepatócitos de ratos com relação à fosforilação de IR induzida por insulina.
[0031] A figura 12B mostra o efeito de IL-6 sobre a sinalização emhepatócitos de ratos com relação à fosforilação de Akt induzida por insulina.
[0032] A figura 13A mostra o nível de glicose em camundongosDIO após tratamento com anticorpo anti-IL-6.
[0033] A figura 13B mostra o nível de insulina em camundongosDIO após tratamento com anticorpo anti-IL-6.
[0034] A figura 13C mostra o índice de avaliação de modelohomeostático (HOMA) em camundongos DIO após tratamento com anticorpo anti-IL-6.
[0035] As Figuras 14A-F mostram níveis de lipídeos antes edepois de tratamento com anticorpo anti-IL-6.
[0036] A figura 15 mostra o esquema de tratamento decamundongos com mAb anti-IL-6 para um teste de tolerância à glicose intraperitoneal (ipGTT).
DESCRIÇÃO DA INVENÇÃO
[0037] A presente invenção fornece anticorpos humanosprojetados anti-IL-6 isolados, recombinantes e/ou sintéticos e anticorpos antiidiótipo IL-6 para eles, além de composições e moléculas codificadoras de ácido nucléico que compreendem pelo menos um polinucleotídeo que codifica pelo menos um anticorpo anti- IL-6 ou anticorpo antiidiótipo. A presente invenção ainda inclui, sem limitação, métodos de fabricação e utilização de tais ácidos nucléicos e anticorpos e anticorpos antiidiótipo, incluindo composições, métodos e dispositivos diagnósticos e terapêuticos.
[0038] Como aqui usado, um "anticorpo anti-IL-6", "anticorpo IL-6","porção de anticorpo anti-IL-6", ou "fragmento de anticorpo anti-IL-6" e/ou "variante de anticorpo anti-IL-6" e semelhante inclui qualquer molécula contendo proteína ou peptídeo que compreenda pelo menos uma porção de uma molécula de imunoglobulina como, por exemplo, sem limitação, pelo menos uma região determinante de complementaridade (CDR) de uma cadeia pesada ou leve ou uma porção de ligação de ligante desta, uma região variável da cadeia pesada ou da cadeia leve, uma região constante da cadeia pesada ou da cadeia leve, uma região estrutural ou qualquer porção destas, ou pelo menos uma porção de um receptor ou uma proteína de ligação de IL-6, que possam ser incorporados em um anticorpo da presente invenção. Opcionalmente, tal anticorpo ainda afeta um ligante específico como, por exemplo, sem limitação, quando tal anticorpo modula, diminui, aumenta, antagoniza, agoniza, reduz, alivia, bloqueia, inibe, interrompe e/ou interfere com pelo menos uma atividade ou ligação de IL-6, ou com a atividade ou ligação do receptor de IL-6, in vitro, in situ e/ou in vivo. Como exemplo não-limitante, um anticorpo anti-IL-6 adequado, porção ou variante especificada da presente invenção pode ligar pelo menos uma molécula de IL-6, ou porções, variantes especificadas ou domínios desta. Um anticorpo anti-IL-6 adequado, porção especificada ou variante opcionalmente também pode afetar pelo menos uma atividade ou função de IL-6 como, por exemplo, sem limitação, a síntese de RNA, DNA ou proteína, liberação de IL-6, sinalização do receptor de IL-6, clivagem de membrana IL-6, atividade de IL-6, produção e/ou síntese de IL-6.
[0039] O termo "anticorpo" visa ainda a englobar anticorpos,fragmentos de digestão, porções e variantes especificadas destes, incluindo miméticos de anticorpo ou que compreendem porções de anticorpos que mimetizam a estrutura e/ou função de um anticorpo ou de fragmento ou porção especificada deste, incluindo anticorpos de cadeia única e fragmentos destes. Fragmentos funcionais incluem fragmentos de ligação de antígeno que se ligam a uma IL-6 mamífera. Por exemplo, fragmentos de anticorpo capazes de ligação à IL-6 ou a porções desta, incluindo, sem limitação, fragmentos Fab (por exemplo, por digestão com papaína), Fab' (por exemplo, por digestão com pepsina e redução parcial) e F(ab')2 (por exemplo, por digestão com pepsina), facb (por exemplo, por digestão com plasmina), pFc' (por exemplo, por digestão com pepsina ou plasmina), Fd (por exemplo, por digestão com pepsina, redução parcial e reagregação), Fv ou scFv (por exemplo, por técnicas de biologia molecular), estão englobados pela invenção (veja, por exemplo, Colligan, "Immunology", supra).
[0040] Tais fragmentos podem ser produzidos por clivagemenzimática, técnicas sintéticas ou recombinantes, como conhecido na técnica e/ou como aqui descrito. Anticorpos também podem ser produzidos de diversas formas truncadas com a utilização de genes de anticorpo nos quais um ou mais códons de parada foram introduzidos acima do sítio de parada natural. Por exemplo, um gene de combinação que codifica uma porção da cadeia pesada F(ab')2 pode ser projetado para incluir seqüências de DNA que codificam o domínio CH1 e/ou a região de dobradiça da cadeia pesada. As várias porções de anticorpos podem ser reunidas quimicamente por técnicas convencionais, ou podem ser preparadas como uma proteína contígua com o uso de técnicas de engenharia genética.
[0041] Como aqui usado, o termo "anticorpo humano projetado" éum anticorpo com pelo menos estruturas centrais e regiões constantes totalmente humanas (domínios CL, CH (por exemplo, CH1, CH2, CH3) e de dobradiça), e CDRs derivadas de anticorpos de ligação de antígeno. Estruturas centrais totalmente humanas compreendem estruturas centrais que correspondem a seqüências de linhagem germinativa humana, bem como seqüências com mutações somáticas. CDRs podem ser derivadas de uma ou mais CDRs que se ligam à IL-6 no contexto de qualquer estrutura central de anticorpo. Por exemplo, as CDRs do anticorpo humano projetado da presente invenção podem ser derivadas de CDRs que se ligam à IL-6 no contexto de uma estrutura central de anticorpo de camundongo e depois são projetadas para se ligarem à IL-6 no contexto de uma estrutura central totalmente humana. Freqüentemente, o anticorpo humano projetado é substancialmente não imunogênico em seres humanos.
[0042] Da mesma forma, anticorpos designados primatas(macaco, babuíno, chimpanzé etc.), de roedor (camundongo, rato, coelho, porquinho-da-índia, hamster, e semelhantes) e outros mamíferos designam esses anticorpos específicos para espécies, subgênero, gênero, subfamília e família. Além disso, anticorpos quiméricos podem incluir qualquer combinação dos citados acima. Tais alterações ou variações opcionalmente e de preferência retêm ou reduzem a imunogenicidade em seres humanos ou em outras espécies em relação aos anticorpos não modificados. Dessa forma, um anticorpo humano projetado é diferente de um anticorpo quimérico ou humanizado.
[0043] Ressalta-se que um anticorpo humano projetado pode serproduzido por um animal não-humano ou por uma célula procariótica ou eucariótica que seja capaz de expressar genes funcionalmente rearranjados humanos ou humanos projetados de imunoglobulina (por exemplo, cadeia pesada e/ou cadeia leve). Além disso, quando um anticorpo humano projetado é um anticorpo de cadeia única, ele compreende um peptídeo vinculador que não é encontrado em anticorpos humanos nativos. Por exemplo, um Fv pode compreender um peptídeo vinculador, por exemplo, dois a cerca de oito resíduos de glicina ou de outro aminoácido, que conecta a região variável da cadeia pesada e a região variável da cadeia leve. Tais peptídeos vinculadores são considerados como sendo de origem humana.
[0044] Também podem ser usados anticorpos biespecíficos,heteroespecíficos, heteroconjugados ou similares que sejam monoclonais, de preferência, anticorpos humanos, humanos projetados ou humanizados, que tenham especificidades de ligação para pelo menos dois antígenos diferentes. No presente caso, uma das especificidades de ligação é para pelo menos uma proteína IL-6, e a outra é para qualquer outro antígeno. Métodos para a fabricação de anticorpos biespecíficos são conhecidos na técnica. Tradicionalmente, a produção recombinante de anticorpos biespecíficos se baseia na co- expressão de dois pares de cadeia pesada-cadeia leve de imunoglobulina, em que as duas cadeias pesadas possuem especificidades diferentes (Milstein e Cuello, Nature 305: 537 (1983)). Em função da distribuição aleatória de cadeias pesadas e leves de imunoglobulina, esses hibridomas (quadromas) produzem uma mistura potencial de 10 moléculas diferentes de anticorpo, das quais apenas uma tem a estrutura biespecífica correta. A purificação da molécula correta é normalmente feita por etapas de cromatografia por afinidade. Procedimentos similares são descritos, por exemplo, em WO 93/08829, Patentes U.S. Nos, 6.210.668, 6.193.967, 6.132.992,6.106.833, 6.060.285, 6.037.453, 6.010.902, 5.989.530, 5.959.084,5.959.083, 5.932.448, 5.833.985, 5.821.333, 5.807.706, 5.643.759,5.601.819, 5.582.996, 5.496.549, 4.676.980, WO 91/00360, WO92/00373, EP 03089, Traunecker e al., EMBO J. 10: 3.655 (1991), Suresh e al., Methods in Enzymology 121: 210 (1986), cada um deles aqui incorporado por referência em sua totalidade.
[0045] Anticorpos anti-IL-6 úteis nos métodos e nas composiçõesda presente invenção podem opcionalmente ser caracterizados por ligação de alta afinidade à IL-6 e, opcionalmente e de preferência como tendo baixa toxicidade. Em particular, um anticorpo, fragmento especificado ou variante da invenção, no qual componentes individuais, tais como a região variável, região constante e estrutural, individual e/ou coletivamente, opcionalmente e de preferência possuam baixa imunogenicidade, é útil na presente invenção. Os anticorpos que podem ser usados na invenção são opcionalmente caracterizados por sua habilidade para tratar pacientes por períodos prolongados com alívio mensurável de sintomas e toxicidade baixa e/ou aceitável. Imunogenicidade baixa ou aceitável e/ou alta afinidade, além de outras propriedades adequadas, podem contribuir para os resultados terapêuticos obtidos. "Baixa imunogenicidade" é aqui definida como a incidência de níveis tituláveis de anticorpos para o anticorpo anti-IL-6 em pacientes tratados com anticorpo anti-IL-6 que ocorre em menos de 25% dos pacientes tratados, de preferência, em menos de 10% dos pacientes tratados com a dose recomendada pelo período recomendado de terapia durante o período de tratamento.
[0046] Os ácidos nucléicos isolados da presente invenção podemser usados para a produção de pelo menos um anticorpo anti-IL-6 ou variante especificada deste, que podem ser usados para medir o efeito em uma célula, tecido, órgão ou animal (incluindo mamíferos e seres humanos), para diagnosticar, monitorar, modular, tratar, aliviar, ajudar a evitar a incidência, ou reduzir os sintomas de, pelo menos uma condição por IL-6, selecionada, sem limitação, de pelo menos um de um distúrbio ou uma doença imune, um distúrbio ou uma doença cardiovascular, um distúrbio ou uma doença infecciosa, maligna e/ou neurológica, ou outra condição relacionada à IL-6 conhecida ou especificada.
[0047] Um método como esse pode compreender a administraçãode uma quantidade eficaz de uma composição ou uma composição farmacêutica que compreende pelo menos um anticorpo anti-IL-6 a uma célula, tecido, órgão, animal ou paciente que necessita de tal modulação, tratamento, alívio, prevenção ou redução de sintomas, efeitos ou mecanismos. A quantidade eficaz pode compreender uma quantidade de cerca de 0,001 a 500 mg/kg por administração única (por exemplo, em bolo), múltipla ou contínua, ou para se obter uma concentração sérica de 0,01-5.000 μg/ml por administração única, múltipla ou contínua, ou qualquer faixa ou valor eficaz dela, da forma feita e determinada com a utilização de métodos conhecidos, como aqui descritos ou conhecidos nas técnicas relevantes.
Anticorpos da presente invenção — produção e geração
[0048] Pelo menos um anticorpo anti-IL-6 da presente invençãopode ser opcionalmente produzido por uma linhagem germinativa, uma linhagem germinativa mista, uma célula imortalizada ou população clonal de células imortalizadas, como conhecido na técnica. Veja, por exemplo, Ausubel, e al., ed., "Current Protocols in Molecular Biology", John Wiley & Sons, Inc., NY, NY (1987-2001); Sambrook, e al., "Molecular Cloning: A Laboratory Manual", 2a Edição, Cold Spring Harbor, NY (1989); Harlow e Lane, "Antibodies, a Laboratory Manual", Cold Spring Harbor, NY (1989); Colligan, e al., eds., "Current Protocols in Immunology", John Wiley & Sons, Inc., NY (1994-2001); Colligan e al., "Current Protocols in Protein Science", John Wiley & Sons, NY, NY, (1997-2001).
[0049] Anticorpos humanos projetados que são específicos paraproteínas IL-6 humanas ou fragmentos destas podem ser desenvolvidos contra um antígeno imunogênico apropriado como, por exemplo, uma proteína IL-6 isolada e/ou uma porção desta (incluindo moléculas sintéticas como, por exemplo, peptídeos sintéticos). Outros anticorpos mamíferos específicos ou gerais podem ser desenvolvidos de forma similar. A preparação de antígenos imunogênicos e a produção de anticorpo monoclonal podem ser realizadas com o uso de qualquer técnica adequada.
[0050] Em uma abordagem, é produzido um hibridoma pela fusãode uma linhagem germinativa imortal adequada (por exemplo, uma linhagem germinativa de mieloma como, sem limitação, Sp2/0, Sp2/0- AG14, NSO, NS1, NS2, AE-1, L.5, L243, P3X63Ag8.653, Sp2 SA3, Sp2 MAI, Sp2 SS1, Sp2 SA5, U937, MLA 144, ACT IV, MOLT4, DA-1, JURKAT, WEHI, K-562, COS, RAJI, NIH 3T3, HL-60, MLA 144,NAMALWA, NEURO 2A, ou semelhantes, ou heteromielomas, produtos de fusão destes, ou qualquer célula ou célula de fusão derivada delas, ou qualquer outra linhagem germinativa adequada conhecida na técnica) (veja, por exemplo, www.atcc.org, www.lifetech.com., e semelhantes), com células produtoras de anticorpos como, por exemplo, sem limitação, células esplênicas isoladas ou clonadas, do sangue periférico, linfáticas, da amígdala, ou outras células imunes ou que contêm células B, ou quaisquer outras células que expressam seqüências constantes ou variáveis ou estruturais ou de CDR de cadeia pesada ou leve, como ácido nucléico tanto endógeno quanto heterólogo, como DNA genômico, cDNA, rDNA, DNA ou RNA mitocondrial, DNA ou RNA de cloroplasto, hnRNA, mRNA, tRNA, recombinante ou endógeno, viral, bacteriano, de algas, procariótico, de anfíbios, de insetos, de répteis, de peixes, de mamíferos, de roedores, de eqüinos, ovinos, de cabras, carneiros, primatas, eucarióticos, de fita simples, dupla ou tripla, hibridizado, e semelhantes, ou qualquer combinação destes. Veja, por exemplo, Ausubel, supra, e Colligan, Immunology, supra, capítulo 2, aqui incorporado por referência em sua totalidade.
[0051] Células produtoras de anticorpos também podem serobtidas do sangue periférico ou, de preferência, do baço ou linfonodos, de seres humanos ou de outros animais adequados que tenham sido imunizados com o antígeno de interesse. Qualquer outra célula hospedeira adequada também pode ser utilizada para a expressão de ácido nucléico heterólogo ou endógeno que codifica um anticorpo, fragmento especificado ou variante deste, da presente invenção. As células fundidas (hibridomas) ou células recombinantes podem ser isoladas com o uso de condições de cultura seletivas ou outros métodos conhecidos adequados, e clonadas por limitação da diluição ou classificação de células, ou outros métodos conhecidos. Células que produzem anticorpos com a especificidade desejada podem ser selecionadas por um ensaio adequado (por exemplo, ELISA).
[0052] Métodos para o projeto ou humanização de anticorpos não-humanos ou humanos também podem ser usados e são bem- conhecidos na técnica. Um anticorpo humanizado ou projetado pode ter um ou mais resíduos de aminoácidos de uma fonte que seja não- humana, por exemplo, sem limitação, camundongo, rato, coelho, primata não-humano ou outro mamífero. Esses resíduos de aminoácidos não-humanos são substituídos por resíduos que são freqüentemente denominados resíduos "importados", que são tipicamente retirados de um domínio variável constante ou outro domínio "importado" de uma seqüência humana conhecida.
[0053] Seqüências conhecidas de Ig humana são reveladas, porexemplo, em www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi;www.ncbi.nih.gov/igblast; www.atcc.org/phage/hdb.html; www.mrc- cpe.cam.ac.uk/ALIGNMENTS.php; www.kabatdatabase.com/top.html; ftp.ncbi.nih.gov/repository/kabat; www.sciquest.com; www.abcam.com; www.anticorporesource.com/onlinecomp.html;www.public.iastate.edu/~pedro/research_tools.html;www.whfreeman.com/immunology/CH05/kuby05.htm; www.hhrni.org/grants/lectures/1996/vlab; www.path.cam.ac.uk/~mrc7/mikeimages.html;mcb.harvard.eduBioLinks/Immunology.html; www.immunologylink.com; pathbox.wustl.edu/~hcenter/index.html; www.appliedbiosystems.com; www. nal.usda.gov/awic/pubs/antibody; www.mehime-u.ac.jp/~yasuhito/Elisa.html; www.biodesign.com;www.cancerresearchuk.org; www.biotech.ufl.edu; www.isac-net.org; baserv.uci.kun.nl/~jraats/links1.html; www.recab.uni-hd.de/immuno.bme.nwu.edu; www.mrc-cpe.cam.ac.uk;www.ibt.unam.mx/vir/V_mice.html; http://www.bioinf.org.uk/abs;antibody.bath.ac.uk; www.unizh.ch; www.cryst.bbk.ac.uk/~ubcg07s; www.nimr.mrc.ac.uk/CC/ccaewg/ccaewg.html; www.path.cam.ac.uk/~mrc7/humanisation/TABBP.html; www.ibt.unam.mx/vir/structure/stat_aim.html; www.biosci.missouri.edu/smithgp/index.html; www.jerini.de; Kabat e al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, U.S. Dept. Health (1983), cada um deles aqui incorporado por referência em sua totalidade.
[0054] Essas seqüências importadas podem ser usadas parareduzir a imunogenicidade ou para reduzir, intensificar ou modificar a ligação, afinidade, a taxa de ligação, taxa de desligamento, avidez, especificidade, meia-vida, ou qualquer outra característica adequada, como é conhecido na técnica. Em geral, os resíduos da CDR estão diretamente e mais substancialmente envolvidos na influência sobre a ligação de antígeno. Conseqüentemente, parte de ou todas as seqüências de CDR não-humanas ou humanas são mantidas, enquanto as seqüências não-humanas das regiões variáveis e constantes podem ser substituídas por aminoácidos humanos ou outros aminoácidos.
[0055] Anticorpos opcionalmente também podem ser anticorposhumanizados ou projetados ou humanos projetados com retenção de afinidade elevada para o antígeno e de outras propriedades biológicas favoráveis. Para se atingir esse objetivo, anticorpos humanizados (ou humanos) ou projetados podem ser opcionalmente preparados por um processo de análise das seqüências parentes e vários produtos conceituais humanizados e projetados com a utilização de modelos tridimensionais das seqüências parentes, projetadas e humanizadas. Modelos tridimensionais de imunoglobulina são normalmente disponíveis e são familiares para aqueles versados na técnica. Estão disponíveis programas de computador que ilustram e exibem as estruturas tridimensionais conformacionais prováveis de seqüências de imunoglobulina candidatas selecionadas. A inspeção dessas exibições permite a análise do papel provável dos resíduos no funcionamento da seqüência de imunoglobulina candidata, ou seja, a análise de resíduos que influenciam a habilidade da imunoglobulina candidata para se ligar ao seu antígeno. Desse modo, resíduos estruturais (FR) podem ser selecionados e combinados a partir das seqüências de consenso e importadas, de tal forma que a característica desejada do anticorpo, por exemplo, afinidade aumentada pelo antígeno (s)-alvo, seja obtida.
[0056] Além disso, o anticorpo humano projetado IL-6 da presenteinvenção pode compreender uma estrutura central de cadeia leve de linhagem germinativa humana. Em modalidades específicas, a seqüência da cadeia leve da linhagem é selecionada de seqüências humanas VK que incluem, sem limitação, A1, A10, A11, A14, A17, A18, A19, A2, A20, A23, A26, A27, A3, A30, A5, A7, B2, B3, L1, L10, L11, L12, L14, L15, L16, L18, L19, L2, L20, L22, L23, L24, L25, L4/18a, L5, L6, L8, L9, O1, O11, O12, O14, O18, O2, O4 e O8. Em certas modalidades, essa estrutura central de cadeia leve de linhagem germinativa humana é selecionada de V1-11, V1-13, V1-16, V1-17, V1-18, V1-19, V1-2, V1-20, V1-22, V1-3, V1-4, V1-5, V1-7, Vl-9, V2-1, V2-11, V2-13, V2-14, V2-15, V2-17, V2-19, V2-6, V2-7, V2-8, V3-2, V33, V3-4, V4-1, V4-2, V4-3, V4-4, V4-6, V5-1, V5-2, V5-4 e V5-6. Veja PCT WO 2005/005604 para uma descrição das diferentes seqüências da linhagem germinativa.
[0057] Em outras modalidades, o anticorpo humano projetado IL-6da presente invenção pode compreender uma estrutura central de cadeia pesada de linhagem germinativa humana. Em modalidades específicas, essa estrutura central de cadeia pesada de linhagem germinativa humana é selecionada de VH1-18, VH1-2, VH1-24, VH1-3, VH1-45, VH1-46, VH1-58, VH1-69, VH1-8, VH2-26, VH2-5, VH2-70,VH3-11, VH3-13, VH3-15, VH3-16, VH3-20, VH3-21, VH3-23, VH3-30,VH3-33, VH3-35, VH3-38, VH3-43, VH3-48, VH3-49, VH3-53, VH3-64,VH3-66, VH3-7, VH3-72, VH3-73, VH3-74, VH3-9, VH4-28, VH4-31,VH4-34, VH4-39, VH4-4, VH4-59, VH4-61, VH5-51, VH6-1 e VH7-81. Veja PCT WO 2005/005604 para uma descrição das diferentes seqüências de linhagem germinativa.
[0058] Em modalidades específicas, a região variável da cadeialeve e/ou região variável da cadeia pesada compreende uma região estrutural ou pelo menos uma porção de uma região estrutural (por exemplo, contendo 2 ou 3 subregiões como, por exemplo, FR2 e FR3). Em certas modalidades, pelo menos FRL1, FRL2, FRL3 ou FRL4 é totalmente humana. Em outras modalidades, pelo menos FRH1, FRH2, FRH3 ou FRH4 é totalmente humana. Em algumasmodalidades, pelo menos FRL1, FRL2, FRL3 ou FRL4 é umaseqüência de linhagem germinativa (por exemplo, linhagemgerminativa humana) ou compreende seqüências humanas deconsenso para a estrutura central em particular (facilmente disponível nas fontes de seqüências conhecidas de Ig humana descritas acima). Em outras modalidades, pelo menos FRH1, FRH2, FRH3, ou FRH4 é uma seqüência de linhagem germinativa (por exemplo, linhagem germinativa humana) ou compreende seqüências humanas de consenso para a estrutura central em particular. Em modalidades preferidas, a região estrutural é uma região estrutural humana (por exemplo, as regiões estruturais humanas mostradas abaixo nas Tabelas 13 e 14). Em algumas modalidades, a região estrutural compreende os IDS. DE SEQ. Nos: 105, 106, 107, 108, 109, 110, 111, 112, ou combinações destes.
[0059] A humanização ou o projeto de anticorpos da presenteinvenção pode ser realizado com a utilização de qualquer método conhecido como, por exemplo, sem limitação, aqueles descritos em Winter (Jones e al., Nature 321: 522 (1986); Riechmann e al., Nature 332: 323 (1988); Verhoeyen e al., Science 239: 1.534 (1988)), Sims e al., J. Immunol. 151: 2.296 (1993); Chothia e Lesk, J. Mol. Biol. 196: 901 (1987), Carter e al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 89: 4.285 (1992); Presta e al., J. Immunol. 151: 2.623 (1993), Patentes U.S. Nos:5.723.323, 5.976.862, 5.824.514, 5.817.483, 5.814.476, 5.763.192, 5.723.323, 5.766.886, 5.714.352, 6.204.023, 6.180.370, 5.693.762,5.530..101, 5.585.089, 5.225.539; 4.816.567, PCT/: US98/16280, US96/18978, US91/09630, US91/05939, US94/01234, GB89/01334,GB91/01134, GB92/01755; WO90/14443, WO90/14424, WO90/14430, EP 229246, cada um deles aqui incorporado por referência em sua totalidade, inclusive as referências neles citadas.
[0060] Em certas modalidades, o anticorpo compreende umaregião Fc alterada (por exemplo, mutada). Por exemplo, em algumas modalidades, a região Fc foi alterada para reduzir ou intensificar as funções efetoras do anticorpo. Em algumas modalidades, a região Fc é um isótipo selecionado de IgM, IgA, IgG, IgE, ou outro isótipo.
[0061] Alternativa ou adicionalmente, pode ser útil combinarmodificações de aminoácidos com uma ou mais modificações de aminoácidos adicionais que alteram a ligação de C1q e/ou a função de citotoxicidade dependente de complemento (CDC) da região Fc de uma molécula de ligação de IL-6. O polipeptídeo de partida de interesse particular pode ser aquele que se liga a C1q e exibe citotoxicidade dependente de complemento. Polipeptídeos com atividade pré-existente de ligação de C1q, que opcionalmente ainda possui a habilidade para mediar CDC, podem ser modificados de tal modo que uma ou ambas essas atividades sejam intensificadas. Modificações de aminoácidos que alteram C1q e/ou que modificam sua função de citotoxicidade dependente de complemento são descritas, por exemplo, em WO0042072, que é aqui incorporada por referência.
[0062] Como descrito anteriormente, pode-se projetar uma regiãoFc do anticorpo IL-6 humano projetado da presente invenção com função efetora alterada, por exemplo, por modificação da ligação de C1q e/ou da ligação de FcyR e, dessa forma, alteração da atividade CDC e/ou da atividade ADCC. "Funções efetoras" são responsáveis por ativação ou diminuição de uma atividade biológica (por exemplo, em um indivíduo). Exemplos de funções efetoras incluem, sem limitação: ligação de C1q; citotoxicidade dependente de complemento (CDC); ligação do receptor Fc; citotoxicidade dependente de anticorpo mediada por células (ADCC); fagocitose; infra-regulação de receptores da superfície celular (por exemplo, receptor de célula B; BCR) etc. Tais funções efetoras podem necessitar que a região Fc seja combinada com um domínio de ligação (por exemplo, um domínio variável de anticorpo), e podem ser avaliadas com a utilização de vários ensaios (por exemplo, ensaios de ligação de Fc, ensaios de ADCC, ensaios de CDC etc.).
[0063] Por exemplo, pode-se gerar uma região Fc variante doanticorpo humano projetado IL-6 com ligação de C1q aprimorada e ligação de FcyRIII aprimorada (por exemplo, que possui tanto atividade ADCC aprimorada quanto atividade CDC aprimorada). Alternativamente, caso se deseje que a função efetora seja reduzida ou abolida, uma região Fc variante pode ser projetada com atividade reduzida CDC e/ou atividade ADCC reduzida. Em outras modalidades, apenas uma dessas atividades pode ser aumentada e, opcionalmente, também a outra atividade reduzida (por exemplo, para gerar uma região Fc variante com atividade ADCC aprimorada, mas atividade CDC reduzida, e vice-versa).
[0064] Também podem ser introduzidas mutações de Fc noprojeto para alterar sua interação com o receptor Fc neonatal (FcRn) e aprimorar suas propriedades farmacocinéticas. Foi descrita uma coleção de variantes Fc humanas com ligação aprimorada ao FcRn (Shields e al., (2001). O mapeamento de alta resolução do sítio de ligação em IgG1 humana para FcyRI, FcyRII, FcyRIII e FcRn, e o projeto de variantes de IgG1 com ligação aprimorada ao FcyR, J. Biol. Chem. 276: 6.591-6.604).
[0065] Outro tipo de substituição de aminoácidos serve paraalterar o padrão de glicosilação da região Fc do anticorpo humano projetado IL-6. A glicosilação de uma região Fc é tipicamente por ligação-N ou por ligação-O. Ligação-N refere-se à adesão da porção carboidrato à cadeia lateral de um resíduo de asparagina. Aglicosilação por ligação-O refere-se à adesão de um dos açúcares N- acetilgalactosamina, galactose, ou xilose a um hidroxiaminoácido, mais comumente serina ou treonina, embora 5-hidroxiprolina ou 5- hidroxilisina também possam ser usadas. As seqüências de reconhecimento para adesão enzimática da porção carboidrato às seqüências peptídicas da cadeia lateral de asparagina são asparagina- X-serina e asparagina-X-treonina, em que X é qualquer aminoácido, exceto prolina. Dessa forma, a presença de uma dessas seqüências peptídicas em um polipeptídeo cria um sítio de glicosilação potencial.
[0066] O padrão de glicosilação pode ser alterado, por exemplo,por eliminação de um ou mais sítios de glicosilação encontrados no polipeptídeo, e/ou por adição de um ou mais sítios de glicosilação que não-estejam presentes no polipeptídeo. A adição de sítios de glicosilação à região Fc de um anticorpo humano projetado IL-6 é convenientemente obtida através da alteração da seqüência de aminoácidos, de tal forma que ela contenha uma ou mais das seqüências tripeptídicas descritas acima (para sítios de glicosilação por ligação -N). Uma variante de glicosilação exemplar tem uma substituição de aminoácidos do resíduo Asn 297 da cadeia pesada. A alteração também pode ser feita pela adição, ou substituição, de um ou mais resíduos de serina ou treonina à seqüência do polipeptídeo original (para sítios de glicosilação por ligação-O). Adicionalmente, uma troca de Ala por Asn 297 pode remover um dos sítios de glicosilação.
[0067] Em certas modalidades, o anticorpo humano projetado IL-6 da presente invenção é expresso em células que expressam beta (1,4)-N-acetilglicosaminiltransferase III (GnT III), de forma que GnT III adicione GlcNAc ao anticorpo humano projetado IL-6. Métodos para a produção de anticorpos desse modo são fornecidos em WO/9954342, WO/03011878, publicação de patente 20030003097A1, e Umana e al., Nature Biotechnology, 17: 176-180, fevereiro de 1999.
[0068] Um anticorpo anti-IL-6 humano pode ser opcionalmentegerado por imunização de um animal transgênico (por exemplo, camundongo, rato, hamster, primata não-humano, e semelhantes) capaz de produzir um repertório de anticorpos humanos, como aqui descrito e/ou como conhecido na técnica. Células que produzem um anticorpo anti-IL-6 humano podem ser isoladas desses animais e imortalizadas com a utilização de métodos adequados, tais como os métodos aqui descritos.
[0069] Camundongos transgênicos que podem produzir umrepertório de anticorpos humanos que se ligam a antígenos humanos podem ser produzidos por métodos conhecidos (por exemplo, sem limitação, Patentes U.S. Nos: 5.770.428, 5.569.825, 5.545.806, 5.625.126, 5.625.825, 5.633.425, 5.661.016 e 5.789.650 concedidas para Lonberg e al.; Jakobovits e al. WO 98/50433, Jakobovits e al. WO 98/24893, Lonberg e al. WO 98/24884, Lonberg e al. WO 97/13852, Lonberg e al. WO 94/25585, Kucherlapate e al. WO 96/34096, Kucherlapate e al. EP 0463 151 B1, Kucherlapate e al. EP 0710 719 Al, Surani e al. Patente U.S. N° 5.545.807, Bruggemann e al. WO 90/04036, Bruggemann e al. EP 0438 474 Bi, Lonberg e al. EP 0814 259 A2, Lonberg e al. GB 2 272 440 A, Lonberg e al. Nature 368:856859 (1994), Taylor e al., Int. Inzmunol. 6(4)579-591 (1994), Green e al., Nature Genetics 7: 13-21 (1994), Mendez e al., Nature Genetics 15: 146-156 (1997), Taylor e al., Nucleic Acids Research 20(23): 6.2876.295 (1992), Tuaillon e al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90(8) 3.720- 3.724 (1993), Lonberg e al., Int. Ver. Immunol. 13(1): 65-93 (1995) e Fishwald e al., Nat. Biotechnol. 14(7): 845-851 (1996), cada um deles aqui incorporado por referência em sua totalidade). Geralmente, esses camundongos compreendem pelo menos um transgene que compreende DNA de pelo menos um lócus de imunoglobulina humana que é funcionalmente rearranjado, ou que pode ser submetido a rearranjo funcional. Os loci endógenos de imunoglobulina nesses camundongos podem ser rompidos ou eliminados para erradicar a capacidade do animal para produzir anticorpos codificados por genes endógenos.
[0070] A triagem de anticorpos quanto à ligação específica paraproteínas ou fragmentos similares pode ser convenientemente obtido com o uso de bibliotecas de exibição de peptídeos. Esse método envolve a triagem de grandes coleções de peptídeos quanto a membros individuais que possuem a função ou estrutura desejada. A triagem de anticorpos de bibliotecas de exibição de peptídeos é bem- conhecido na técnica. As seqüências peptídicas exibidas podem ter comprimento de 3 a 5.000 ou mais aminoácidos, freqüentemente com comprimento de 5-100 aminoácidos, e freqüentemente com comprimento de cerca de 8 a 25 aminoácidos. Além de métodos sintéticos químicos diretos para a geração de bibliotecas peptídicas, foram descritos vários métodos de DNA recombinante. Um tipo envolve a exibição de uma seqüência peptídica na superfície de um bacteriófago ou célula. Cada bacteriófago ou célula contém a seqüência de nucleotídeos que codifica a seqüência peptídica exibida em particular. Tais métodos são descritos na Publicação de Patente PCT Nos 91/17271, 91/18980, 91/19818, e 93/08278.
[0071] Outros sistemas para a geração de bibliotecas de peptídeostêm aspectos tanto de síntese química in vitro quanto de métodos recombinantes. Veja a Publicação de Patente PCT Nos 92/05258, 92/14843 e 96/19256. Veja também, Patentes U.S. Nos 5.658.754 e 5.643.768. Bibliotecas de exibição de peptídeos, vetores e kits de rastreamento são disponíveis comercialmente por fornecedores como Invitrogen (Carlsbad, CA) e Cambridge Antibody Technologies (Cambridgeshire, UK). Veja, por exemplo, Patentes U.S. Nos 4.704.692, 4.939.666, 4.946.778, 5.260.203, 5.455.030, 5.518.889,5.534.621, 5.656.730, 5.763.733, 5.767.260, 5.856.456, concedidas para Enzon; 5.223.409, 5.403.484, 5.571.698, 5.837.500, concedidas para Dyax, 5.427.908, 5.580.717, concedidas para Affymax;5.885.793, concedida para Cambridge Antibody Technologies; 5.750.373, concedida para Genentech, 5.618.920, 5.595.898, 5.576.195, 5.698.435, 5.693.493, 5.698.417, concedidas para Xoma, Colligan, supra; Ausubel, supra; ou Sambrook, supra. Os anticorpos da presente invenção também podem ser preparados com o uso de pelo menos um ácido nucléico codificador de anticorpo anti-IL-6 para fornecer animais ou mamíferos transgênicos, tais como cabras, vacas, cavalos, carneiros, coelhos e semelhantes, que produzem esses anticorpos em seu leite. Tais animais podem ser produzidos com a utilização de métodos conhecidos. Veja, por exemplo, sem limitação, Patentes U.S. Nos 5.827.690, 5.849.992, 4.873.316, 5.849.992,5.994.616, 5.565.362, 5.304.489, e semelhantes, cada um deles sendo aqui incorporado por referência em sua totalidade.
[0072] Os anticorpos da presente invenção podem adicionalmenteser preparados com o uso de pelo menos um ácido nucléico codificador de anticorpo anti-IL-6 para fornecer plantas transgênicas e células de plantas cultivadas (por exemplo, sem limitação, tabaco e milho) que produzem esses anticorpos, porções ou variantes especificadas nas partes de plantas ou em células cultivadas a partir delas. Como exemplo não-limitante, folhas de tabaco transgênico que expressam proteínas recombinantes foram usadas com sucesso para fornecer grandes quantidades de proteínas recombinantes, porexemplo, com a utilização de um promotor indutível. Veja, porexemplo, Cramer e al., Curr. Top. Microbol. Immunol. 240: 95-118 (1999) e referências nele citadas. Além disso, milho transgênico foi usado para expressar proteínas mamíferas em níveis comerciais de produção, com atividades biológicas equivalentes àquelas produzidas em outros sistemas recombinantes, ou purificadas a partir de fontes naturais. Veja, por exemplo, Hood e al., Adv. Exp. Med. Biol. 464: 127147 (1999) e referências nele citadas. Anticorpos também foramproduzidos em grandes quantidades a partir de sementes de plantas transgênicas, incluindo fragmentos de anticorpo, tais como anticorpos de cadeia única (scFv's), incluindo sementes de tabaco e tubérculos de batata. Veja, por exemplo, Conrad e al., Plant Mol. Biol. 38: 101109 (1998) e referências nele citadas. Dessa forma, os anticorpos da presente invenção também podem ser produzidos com o uso de plantas transgênicas, de acordo com métodos conhecidos. Veja também, por exemplo, Fischer e al., Biotechnol. Appl. Biochem. 30: 99108 (outubro de 1999), Ma e al., Trends Biotechnol. 13: 522-7 (1995); Ma e al., Plant Physiol. 109: 341-6 (1995); Whitelam e al., Biochem. Soc. Trans. 22: 940-944 (1994); e referências neles citadas.
[0073] Os anticorpos da invenção podem se ligar à IL-6 humanacom uma ampla gama de afinidades (KD). Em uma modalidade preferida, pelo menos um mAb humano da presente invenção pode opcionalmente se ligar à IL-6 humana com alta afinidade. Por exemplo, um mAb humano ou humano projetado pode se ligar à IL-6 humana com uma KD igual ou menor do que cerca de 10-7 M como, por exemplo, sem limitação, 0,1-9,9 (ou qualquer faixa ou valor nessa faixa) X 10-7, 10-8, 10-9, 10-10, 10-11, 10-12, 10-13, 10-14, 10-15 ou qualquer faixa ou valor nessa faixa, como determinado por ressonância de plasmônio de superfície ou pelo método Kinexa, como praticado por aqueles versados na técnica.
[0074] A afinidade ou avidez de um anticorpo por um antígenopode ser determinada experimentalmente com a utilização de qualquer método adequado. (veja, por exemplo, Berzofsky, e al., "AntibodyAntigen Interactions", Em Fundamental Immunology, Paul, W.E., Ed., Raven Press: Nova York, NY (1984); Kuby, Janis Immunology, W.H. Freeman e Company: Nova York, NY (1992); e métodos aqui descritos). A afinidade medida de uma interação antígeno-anticorpo específica pode variar caso seja medida sob condições diferentes (por exemplo, concentração de sal, pH). Dessa forma, as medidas da afinidade e de outros parâmetros de ligação de antígeno (por exemplo, KD, Kon, Kof) são feitas, de preferência, com soluções padronizadas de anticorpo e antígeno, e um tampão padronizado como, por exemplo, o tampão aqui descrito.
[0075] Podem ser realizados ensaios competitivos com o anticorpoda presente invenção a fim de determinar quais proteínas, anticorpos e outros antagonistas competem pela ligação à IL-6 com o anticorpo da presente invenção e/ou compartilham a região de epítopo. Esses ensaios, como é do conhecimento daqueles versados na técnica, avaliam a competição entre antagonistas ou ligantes por um número limitado de sítios de ligação em uma proteína. A proteína e/ou o anticorpo é imobilizado ou tornado insolúvel, antes ou depois da competição, e a amostra ligada à IL-6 é separada da amostra não ligada, por exemplo, por decantação (em que a proteína/anticorpo foi anteriormente tornada insolúvel) ou por centrifugação (em que a proteína/anticorpo foi precipitada depois da reação competitiva). Além disso, a ligação competitiva pode ser determinada definindo-se se a função é alterada pela ligação ou pela ausência de ligação do anticorpo à proteína, por exemplo, se a molécula de anticorpo inibe ou potencializa a atividade enzimática, por exemplo, um marcador. ELISA e outros ensaios funcionais podem ser usados, como é bem-conhecido na técnica.
[0076] Anticorpos anti-IL-6 preferidos da invenção possuem asseqüências mostradas nas Tabelas 1-5 e 12-14 abaixo. Por exemplo, um anticorpo anti-IL-6 da invenção tem uma das seqüências de CDR da cadeia leve mostradas na Tabela 1 (ou seja, CDRL1, CDRL2, e CDRL3) e uma das seqüências de CDR da cadeia pesada mostradas na Tabela 2 (ou seja, CDRH1, CDRH2, e CDRH3). Mais especificamente, um anticorpo anti-IL-6 (molécula AME-A9) tem a CDRL1 do ID. DE SEQ. N°: 15, CDRL2 do ID. DE SEQ. N°: 27, CDRL3 do ID. DE SEQ. N°: 35, CDRH1 do ID. DE SEQ. N°: 47, CDRH2 do ID. DE SEQ. N°: 61, CDRH3 do ID. DE SEQ. N°: 91.
Moléculas de ácido nucléico
[0077] Com o uso das informações aqui fornecidas, por exemplo,as seqüências de nucleotídeos que codificam pelo menos 70-100% dos aminoácidos contíguos de pelo menos uma das regiões variáveis da cadeia leve dos IDS. DE SEQ. Nos: 93, 97 e 101, entre outras seqüências aqui reveladas, e pelo menos uma das regiões variáveis da cadeia pesada dos IDS. DE SEQ. Nos: 95, 99 e 103, entre outras seqüências aqui reveladas, fragmentos especificados, variantes ou seqüências de consenso destas, ou um vetor depositado que compreende pelo menos uma dessas seqüências, uma molécula de ácido nucléico da presente invenção que codifica pelo menos um anticorpo anti-IL-6 podem ser obtida com a utilização dos métodos aqui descritos ou como é conhecido na técnica.
[0078] As moléculas de ácido nucléico da presente invençãopodem estar na forma de RNA, por exemplo, mRNA, hnRNA, tRNA ou qualquer outra forma, ou na forma de DNA, incluindo, sem limitação, cDNA e DNA genômico obtidos por clonagem ou produzidos sinteticamente, ou qualquer combinações destes. O DNA pode ser de filamento triplo, de filamento duplo ou de filamento único, ou qualquer combinação destas. Qualquer porção de pelo menos um filamento do DNA ou RNA pode ser a filamento codificadora, também conhecida como o filamento senso, ou ela pode ser o filamento não codificadora, também denominado filamento anti-sentido.
[0079] Moléculas de ácido nucléico isolado da presente invençãopodem incluir moléculas de ácido nucléico que compreendem um quadro aberto de leitura (ORF), opcionalmente, com um ou mais íntrons, por exemplo, sem limitação, pelo menos uma porção especificada de pelo menos uma CDR como, por exemplo, CDR1, CDR2 e/ou CDR3, de pelo menos uma cadeia pesada (por exemplo, IDS. DE SEQ. Nos: 38, 40, 42, 44 etc.) ou cadeia leve (por exemplo, IDS. DE SEQ. Nos: 2, 4, 6, 8 etc.); moléculas de ácido nucléico que compreendem a seqüência codificadora para um anticorpo anti-IL-6 ou região variável (por exemplo, regiões variáveis da cadeia leve dos IDS. DE SEQ. Nos: 94, 98, e 102, entre outras seqüências aqui reveladas, e regiões variáveis da cadeia pesada dos IDS. DE SEQ. Nos: 96, 100 e 104); e moléculas de ácido nucléico que compreendem uma seqüência de nucleotídeos substancialmente diferente daquelas descritas acima, mas que, em função da degeneração do código genético, ainda codifica pelo menos um anticorpo anti-IL-6 como aqui descrito e/ou como conhecido na técnica. Evidentemente, o código genético é bem- conhecido na técnica. Dessa forma, seria rotineiro para aqueles versados na técnica a geração dessas variantes de ácido nucléico degenerado que codificam os anticorpos anti-IL-6 específicos da presente invenção. Veja, por exemplo, Ausubel, e al., supra, e tais variantes de ácido nucléico estão incluídas na presente invenção.
[0080] Como aqui indicado, as moléculas de ácido nucléico dapresente invenção que compreendem um ácido nucléico que codifica um anticorpo anti-IL-6 podem incluir, sem limitação, aquelas que codificam a seqüência de aminoácidos de um fragmento de anticorpo, por ela própria; a seqüência codificadora para todo o anticorpo ou para uma porção deste; a seqüência codificadora para um anticorpo, fragmento ou porção, além de seqüências adicionais como, por exemplo, a seqüência codificadora de pelo menos um peptídeo sinalizador líder ou de fusão, com ou sem as seqüências codificadoras adicionais mencionadas anteriormente como, por exemplo, pelo menos um íntron, junto com seqüências não-codificadoras adicionais, incluindo, sem limitação, seqüências não codificadoras 5' e 3', tais como as seqüências transcritas, não-traduzidas, que participam da transcrição, processamento de mRNA, incluindo sinais de junção e de poliadenilação (por exemplo, ligação de ribossomo e estabilidade de mRNA); uma seqüência codificadora adicional que codifica aminoácidos adicionais como, por exemplo, aquelas que fornecem funcionalidades adicionais. Dessa forma, a seqüência que codifica um anticorpo pode ser fundida a uma seqüência marcadora, por exemplo, uma seqüência que codifica um peptídeo que facilita a purificação do anticorpo fundido que compreende um fragmento ou uma porção de anticorpo.Polinucleotídeos que hibridizam seletivamente para um polinucleotídeo como aqui descrito
[0081] A presente invenção fornece ácidos nucléicos isolados quehibridizam sob condições seletivas de hibridização para um polinucleotídeo aqui-revelado. Dessa forma, os polinucleotídeos desta modalidade podem ser usados para o isolamento, detecção e/ou quantificação de ácidos nucléicos que compreendem tais polinucleotídeos. Por exemplo, os polinucleotídeos da presente invenção podem ser usados para identificar, isolar ou amplificar clones parciais ou de comprimento total em uma biblioteca depositada. Em algumas modalidades, os polinucleotídeos são seqüências genômicas ou de cDNA isoladas, ou de alguma forma complementares a um cDNA de uma biblioteca de ácidos nucléicos humanos ou mamíferos.
[0082] De preferência, a biblioteca de cDNA compreende pelomenos 80% de seqüências de comprimento total, de preferência, pelo menos 85% ou 90% de seqüências de comprimento total e, mais preferivelmente, pelo menos 95% de seqüências de comprimento total. As bibliotecas de cDNA podem ser normalizadas para aumentar a representação de seqüências raras. Condições de hibridização de rigor baixo ou moderado são tipicamente, mas não exclusivamente, empregadas com seqüências que possuem uma identidade de seqüência reduzida em relação às seqüências complementares. Condições de rigor moderado e elevado podem opcionalmente ser empregadas para seqüências de identidade maior. Condições de baixo rigor permitem a hibridização seletiva de seqüências que possuem cerca de 70% de identidade de seqüência e podem ser empregadas para identificar seqüências ortólogas ou parálogas.
[0083] Opcionalmente, polinucleotídeos desta invenção codificarãopelo menos uma porção de um anticorpo codificado pelos polinucleotídeos aqui descritos. Os polinucleotídeos desta invenção englobam seqüências de ácidos nucléicos que podem ser empregadas para a hibridização seletiva para um polinucleotídeo que codifica um anticorpo da presente invenção. Veja, por exemplo, Ausubel, supra; Colligan, supra, cada um deles aqui incorporado por referência em sua totalidade.Construção de ácidos nucléicos
[0084] Os ácidos nucléicos isolados da presente invenção podemser feitos com a utilização de: (a) métodos recombinantes, (b) técnicas sintéticas, (c) técnicas de purificação e/ou (d) combinações destas, como é bem-conhecido na técnica.
[0085] Os ácidos nucléicos podem convenientemente compreender seqüências, além de um polinucleotídeo da presente invenção. Por exemplo, um sítio de clonagem múltipla que compreende um ou mais sítios de restrição de endonuclease pode ser inserido no ácido nucléico para ajudar no isolamento do polinucleotídeo. Além disso, podem ser inseridas seqüências traduzíveis para ajudar no isolamento do polinucleotídeo traduzido da presente invenção. Por exemplo, uma seqüência marcadora de hexa- histidina fornece um meio conveniente para a purificação de proteínas da presente invenção. O ácido nucléico da presente invenção, excluindo a seqüência codificadora, é opcionalmente um vetor, adaptador, ou vinculador para a clonagem e/ou expressão de um polinucleotídeo da presente invenção.
[0086] Seqüências adicionais podem ser acrescentadas a essasseqüências de clonagem e/ou expressão para otimizar sua função na clonagem e/ou expressão, para ajudar no isolamento do polinucleotídeo ou para aprimorar a introdução do polinucleotídeo em uma célula. O uso de vetores de clonagem, vetores de expressão, adaptadores e vinculadores é bem-conhecido na técnica (veja, por exemplo, Ausubel, supra; ou Sambrook, supra).Métodos recombinantes para a construção de ácidos nucléicos
[0087] As composições de ácido nucléico isolado desta invenção,tais como RNA, cDNA, DNA genômico, ou qualquer combinação destes, podem ser obtidas a partir de fontes biológicas com o uso de uma das várias metodologias de clonagem conhecidas por aqueles versados na técnica. Em algumas modalidades, são usadas sondas de oligonucleotídeos que hibridizam seletivamente, sob condições rigorosas, para os polinucleotídeos da presente invenção para identificar a seqüência desejada em uma biblioteca de cDNA ou de DNA genômico. O isolamento de RNA e a construção de cDNA e de bibliotecas genômicas são bem-conhecidos por aqueles versados na técnica (veja, por exemplo, Ausubel, supra; ou Sambrook, supra). Métodos de triagem e isolamento de ácidos nucléicos
[0088] Uma biblioteca de cDNA ou genômica pode ser rastreadacom a utilização de uma sonda com base na seqüência de um polinucleotídeo da presente invenção, tais como aquelas aqui descritos. Podem ser usadas sondas para hibridizar com DNA genômico ou seqüências de cDNA para isolar genes homólogos no mesmo organismo ou em organismos diferentes. Aqueles versados na técnica observarão que vários graus de rigor de hibridização podem ser empregados no ensaio; e tanto o meio de hibridização quanto o de lavagem podem ser rigorosos. À medida que as condições para a hibridização se tornam mais rigorosas, deve haver um grau maior de complementaridade entre a sonda e o alvo para que ocorra a formação de dúplex. O grau de rigor pode ser controlado por um ou mais de temperatura, força iônica, pH e a presença de um solvente parcialmente desnaturante como, por exemplo, formamida. Por exemplo, o rigor da hibridização é convenientemente diverso alterando-se a polaridade da solução de reagente através, por exemplo, da manipulação da concentração de formamida na faixa de 0% a 50%. O grau de complementaridade (identidade de seqüência) necessário para a ligação detectável irá variar de acordo com o rigor do meio de hibridização e/ou do meio de lavagem. O grau de complementaridade otimamente será de 100% ou 70-100%, ou qualquer faixa ou valor incluído nessa faixa. No entanto, deve-se entender que pequenas variações de seqüência nas sondas e nos iniciadores podem ser compensadas pela redução do rigor do meio de hibridização e/ou do meio de lavagem.
[0089] Métodos de amplificação de RNA ou DNA são bem-conhecidos na técnica e podem ser usados de acordo com a presente invenção, sem experimentação desnecessária, com base nos ensinamentos e nas diretrizes aqui apresentadas.
[0090] Métodos conhecidos de amplificação de DNA ou RNAincluem, sem limitação, reação em cadeia de polimerase (PCR) e processos de amplificação relacionados (veja, por exemplo, Patentes U.S. Nos 4.683.195, 4.683.202, 4.800.159, 4.965.188, para Mullis, e al.; 4.795.699 e 4.921.794 para Tabor, e al.; 5.142.033 para Innis; 5.122.464 para Wilson, e al.; 5.091.310 para Innis; 5.066.584 para Gyllensten, e al.; 4.889.818 para Gelfand, e al.; 4.994.370 para Silver, e al.; 4.766.067 para Biswas; 4.656.134 para Ringold) e amplificação mediada por RNA que utiliza RNA anti-senso para a seqüência-alvo como um modelo para a síntese de DNA de fita dupla (Patente U.S. N° 5.130.238 para Malek, e al., com o nome comercial NASBA), cujos conteúdos totais são aqui incorporados por referência (veja, por exemplo, Ausubel, supra; ou Sambrook, supra).
[0091] Por exemplo, a tecnologia de reação em cadeia depolimerase (PCR) pode ser usada para amplificar as seqüências de polinucleotídeos da presente invenção, e os genes relacionados, diretamente a partir de bibliotecas de DNA genômico ou de cDNA. PCR e outros métodos de amplificação in vitro também podem ser úteis, por exemplo, para clonar seqüências de ácidos nucléicos que codificam proteínas a serem expressas, para a fabricação de ácidos nucléicos para serem usados como sondas para a detecção da presença do mRNA de interesse em amostras, para seqüenciamento de ácido nucléico ou para outras finalidades. Exemplos de técnicas suficientes para guiarem aqueles versados na técnica através de métodos de amplificação in vitro são encontrados em Berger, supra, Sambrook, supra e Ausubel, supra, bem como em Mullis, e al., na Patente U.S. N° 4.683.202 (1987); e Innis, e al., "PCR Protocols A Guide to Methods and Applications", Eds., Academic Press Inc., San Diego, CA (1990). Kits disponíveis comercialmente para amplificação genômica por PCR são conhecidos na técnica. Veja, por exemplo, o Kit de PCR "Advantage-GC Genomic" (Clontech). Adicionalmente, por exemplo, a proteína 32 do gene T4 (Boehringer Mannheim) pode ser usada para aumentar o rendimento de produtos de PCR longos. Métodos sintéticos para a construção de ácidos nucléicos
[0092] Os ácidos nucléicos isolados da presente invenção podemser preparados por síntese química direta por métodos conhecidos (veja, por exemplo, Ausubel, e al., supra). A síntese química geralmente produz um oligonucleotídeo de fita única, que pode ser convertido em DNA de fita dupla por hibridização com uma seqüência complementar, ou por polimerização com uma DNA polimerase com o uso de uma fita única como modelo. Aqueles versados na técnica reconhecerão que, embora a síntese química de DNA possa se limitar a seqüências de cerca de 100 ou mais bases, seqüências mais longas podem ser obtidas pela ligação de seqüências mais curtas.Cassetes de expressão recombinante
[0093] A presente invenção ainda fornece cassetes de expressãorecombinante que compreendem um ácido nucléico da presente invenção. Uma seqüência de ácidos nucléicos da presente invenção, por exemplo, um cDNA ou uma seqüência genômica que codifica um anticorpo da presente invenção, pode ser usada para construir um cassete de expressão recombinante que pode ser introduzido em pelo menos uma célula hospedeira desejada. Um cassete de expressão recombinante compreenderá tipicamente um polinucleotídeo da presente invenção ligado operacionalmente a seqüências reguladoras da iniciação da transcrição que irão dirigir a transcrição do polinucleotídeo na célula hospedeira desejada. Podem ser empregados promotores tanto heterólogos quanto não-heterólogos (ou seja, endógenos) para dirigir a expressão dos ácidos nucléicos da presente invenção.
[0094] Em algumas modalidades, os ácidos nucléicos isolados queservem como promotor, intensificador ou outros elementos podem ser introduzidos na posição apropriada (acima, abaixo ou no íntron) de uma forma não heteróloga de um polinucleotídeo da presente invenção de modo a supra- ou infra-regular a expressão de um polinucleotídeo da presente invenção. Por exemplo, promotores endógenos podem ser alterados in vivo ou in vitro por mutação, eliminação e/ou substituição.
Vetores e células hospedeiras
[0095] A presente invenção também está relacionada aos vetoresque incluem moléculas de ácido nucléico isolado da presente invenção, células hospedeiras que são projetadas geneticamente com os vetores recombinantes, e à produção de pelo menos um anticorpo anti-IL-6 por técnicas recombinantes, como é bem-conhecido na técnica. Veja, por exemplo, Sambrook, e al., supra; Ausubel, e al., supra, cada um deles aqui incorporado por referência em sua totalidade.
[0096] Os polinucleotídeos podem opcionalmente ser unidos a umvetor que contém um marcador selecionável para a propagação em um hospedeiro. Geralmente, um vetor de plasmídeo é introduzido em um precipitado, por exemplo, um precipitado de fosfato de cálcio, ou em um complexo com um lipídeo com carga. Caso o vetor seja um vírus, ele pode ser compactado in vitro com o uso de uma linhagem germinativa de compactação apropriada, e depois transduzido em células hospedeiras.
[0097] A inserção de DNA deve estar ligada operacionalmente aum promotor apropriado. Os constructos de expressão conterão ainda sítios para a iniciação, terminação da transcrição e, na região transcrita, um sítio de ligação de ribossomo para tradução. A porção codificadora dos transcritos maduros expressos pelos constructos incluirá, de preferência, um códon de iniciação da tradução, no começo, e um códon de terminação de tradução (por exemplo, UAA, UGA ou UAG) posicionado adequadamente no final do mRNA a ser traduzido, com UAA e UAG sendo preferidos para expressão em células mamíferas ou eucarióticas.
[0098] Vetores de expressão incluirão, de preferência, masopcionalmente, pelo menos um marcador selecionável. Tais marcadores incluem, por exemplo, sem limitação, resistência ao metotrexato (MTX), diidrofolato redutase (DHFR, Patentes U.S. Nos 4.399.216, 4.634.665, 4.656.134, 4.956.288, 5.149.636, 5.179.017), ampicilina, neomicina (G418), ácido micofenólico ou glutamina sintetase (GS, Patentes U.S. Nos 5.122.464, 5.770.359, 5.827.739) para cultura de células eucarióticas, e genes de resistência à tetraciclina ou ampicilina para o cultivo em E. coli e outras bactérias ou procarióticos (as patentes acima são aqui incorporadas em sua totalidade por referência). Meios e condições de cultura apropriadas para as células hospedeiras descritas acima são conhecidos na técnica. Vetores adequados serão evidentes para aqueles versados na técnica. A introdução de um constructo de vetor em uma célula hospedeira pode ser efetuada por transfecção com fosfato de cálcio, transfecção mediada por DEAE-dextrana, transfecção mediada por lipídeo catiônico, eletroporação, transdução, infecção ou por outros métodos conhecidos. Tais métodos são descritos na técnica como, por exemplo, em Sambrook, supra, Capítulos 1-4 e 16-18; Ausubel, supra, Capítulos 1, 9, 13, 15, 16.
[0099] Pelo menos um anticorpo da presente invenção pode serexpresso em uma forma modificada, por exemplo, uma proteína de fusão, e pode incluir não somente sinais de secreção, mas também regiões funcionais heterólogas adicionais. Por exemplo, uma região adicional de aminoácidos, particularmente aminoácidos com carga, pode ser adicionada ao terminal N de um anticorpo para aumentar a estabilidade e a persistência na célula hospedeira durante a purificação, ou durante a manipulação e a estocagem subseqüentes. Além disso, porções peptídicas podem ser acrescentadas a um anticorpo da presente invenção para facilitar a purificação. Essas regiões podem ser removidas antes da preparação final de um anticorpo, ou pelo menos um fragmento deste. Tais métodos são descritos em muitos manuais de laboratório padronizados, por exemplo, Sambrook, supra, Capítulos 17.29-17.42 e 18.1-18.74; Ausubel, supra, Capítulos 16, 17 e 18.
[00100] Aqueles versados na técnica têm conhecimento dos numerosos sistemas de expressão disponíveis para a expressão de um ácido nucléico que codifica uma proteína da presente invenção. Alternativamente, os ácidos nucléicos da presente invenção podem ser expressos em uma célula hospedeira ligando-se (por manipulação) uma célula hospedeira que contém DNA endógeno que codifica um anticorpo da presente invenção. Tais métodos são bem-conhecidos na técnica, por exemplo, como descrito nas Patentes U.S. Nos 5.580.734, 5.641.670, 5.733.746 e 5.733.761, aqui incorporadas por referência em sua totalidade.
[00101] Células mamíferas são ilustrativas de culturas celulares úteis para a produção dos anticorpos, porções ou variantes especificadas destes. Sistemas de células mamíferas freqüentemente estarão na forma de monocamadas de células, embora suspensões de células mamíferas ou biorreatores também possam ser utilizados. Diversas linhagens de células hospedeiras adequadas capazes de expressar proteínas glicosiladas intactas foram desenvolvidas na técnica, e incluem as linhagens celulares COS-1 (por exemplo, ATCC CRL-1650), COS-7 (por exemplo, ATCC CRL-1651), HEK293, BBK21 (por exemplo, ATCC CRL-10), CHO (por exemplo, ATCC CRL-1610) e BSC-1 (por exemplo, ATCC CRL-26), Cos-7 células, CHO células, células hep G2, P3X63Ag8.653, SP2/0-Ag14, células 293, célulasHeLa e semelhantes, que são facilmente disponíveis, por exemplo, na "American Type Culture Collection", Manassas, Va (www.atcc.org). Células hospedeiras preferidas incluem células de origem linfóide como, por exemplo, células de mieloma e de linfoma. Células hospedeiras particularmente preferidas são células P3X63Ag8.653 (Número de Acesso ATCC CRL-1580) e células SP2/0-Ag14 (Número de Acesso ATCC CRL-1851). Em uma modalidade particularmente preferida, a célula recombinante é uma célula P3X63Ab8.653 ou uma célula SP2/0-Ag14.
[00102] Vetores de expressão para essas células podem incluir uma ou mais das seguintes seqüências de controle da expressão, por exemplo, sem limitação, uma origem de replicação; um promotor (por exemplo, promotores SV40 tardios ou precoces), o promotor de CMV (Patentes U.S. Nos 5.168.062; 5.385.839), um promotor HSV tk, um promotor pgk (fosfoglicerato quinase), um promotor EF-1 alfa (Patente U.S. N° 5.266.491), pelo menos um promotor de imunoglobulina humana; um intensificador e/ou sítios de processamento de informação, tais como sítios de ligação de ribossomo, sítios de junção de RNA, sítios de poliadenilação (por exemplo, um sítio de adição SV40 large T Ag poli A), e seqüências de terminação da transcrição. Veja, por exemplo, Ausubel e al., supra; Sambrook, e al., supra. Outras células úteis para a produção de ácidos nucléicos ou de proteínas da presente invenção são conhecidas e/ou disponíveis, por exemplo, no "American Type Culture Collection Catalogue of Cell Lines and Hybridomas" (www.atcc.org) ou outras fontes conhecidas ou comerciais.
[00103] Quando são empregadas células hospedeiras eucarióticas, seqüências de poliadenilação ou de terminação da transcrição são tipicamente incorporadas no vetor. Um exemplo de uma seqüência de terminação é a seqüência de poliadenilação do gene do hormônio do crescimento bovino. Seqüências para uma junção precisa do transcrito também podem ser incluídas. Um exemplo de uma seqüência de junção é o íntron VP1 de SV40 (Sprague, e al., J. Virol. 45: 773-781 (1983)). Adicionalmente, seqüências gênicas para o controle da replicação na célula hospedeira podem ser incorporadas no vetor, como é conhecido na técnica.
Purificação de um anticorpo
[00104] Um anticorpo anti-IL-6 pode ser recuperado e purificado de culturas de células recombinantes por métodos bem-conhecidos que incluem, sem limitação, purificação de proteína A, precipitação com sulfato de amônio ou etanol, extração de ácido, cromatografia por troca aniônica ou catiônica, cromatografia com fosfocelulose, cromatografia por interação hidrofóbica, cromatografia por afinidade, cromatografia com hidroxilapatita e cromatografia com lectina. A cromatografia líquida de alto rendimento ("HPLC") também pode ser empregada para purificação. Veja, por exemplo, Colligan, "Current Protocols in Immunology", ou "Current Protocols in Protein Science", John Wiley & Sons, NY, NY, (1997-2001), por exemplo, Capítulos 1, 4, 6, 8, 9, 10, cada um deles aqui incorporado por referência em sua totalidade.
[00105] Os anticorpos da presente invenção incluem produtos naturalmente purificados, produtos de procedimentos químicos sintéticos e produtos produzidos por técnicas recombinantes a partir de um hospedeiro eucariótico, incluindo, por exemplo, células de leveduras, de plantas superiores, de insetos e de mamíferos. Dependendo do hospedeiro empregado no procedimento de produção recombinante, o anticorpo da presente invenção pode ser glicosilado ou pode ser não-glicosilado, sendo preferido o anticorpo glicosilado. Tais métodos são descritos em muitos manuais de laboratório padronizados, por exemplo, em Sambrook, supra, Seções 17.3717.42; Ausubel, supra, Capítulos 10, 12, 13, 16, 18 e 20, Colligan, "Protein Science", supra, Capítulos 12-14, todos aqui incorporados por referência em sua totalidade.
Anticorpos anti-IL-6
[00106] Um anticorpo anti-IL-6 de acordo com a presente invenção inclui qualquer molécula que contenha proteína ou peptídeo que compreenda pelo menos uma porção de uma molécula de imunoglobulina como, por exemplo, sem limitação, pelo menos uma porção de ligação de ligante (LBP), por exemplo, sem limitação, uma região determinante de complementaridade (CDR) de uma cadeia pesada ou leve ou uma porção de ligação de ligante desta, uma região variável da cadeia pesada ou da cadeia leve, uma região estrutural (por exemplo, FR1, FR2, FR3, FR4 ou fragmento destas, ou como mostrados nos IDS. DE SEQ. Nos: 105-112, que opcionalmente ainda compreendem pelo menos uma substituição, inserção ou eliminação), uma região constante da cadeia pesada ou da cadeia leve (por exemplo, que compreende pelo menos uma CH1, hinge1, hinge2, hinge3, hinge4, CH2 ou CH3, ou fragmento destas, que ainda opcionalmente compreende pelo menos uma substituição, inserção ou eliminação), ou qualquer porção destas, que pode ser incorporada em um anticorpo da presente invenção. Um anticorpo da invenção pode incluir ou ser derivado de qualquer mamífero como, por exemplo, sem limitação, um ser humano, um camundongo, um coelho, um rato, um roedor, um primata, ou qualquer combinação destes, e semelhantes.
[00107] Os anticorpos isolados da presente invenção compreendem as seqüências de aminoácidos do anticorpo aqui descritas codificadas por qualquer polinucleotídeo adequado, ou qualquer anticorpo isolado ou preparado. De preferência, o anticorpo humano ou fragmento de ligação de antígeno se liga à IL-6 humana e, dessa forma, neutraliza parcial ou substancialmente pelo menos uma atividade biológica da proteína. Um anticorpo, ou porção especificada ou variante deste, que neutraliza parcialmente ou, de preferência, substancialmente pelo menos uma atividade biológica de pelo menos uma proteína ou fragmento de IL-6, pode se ligar à proteína ou ao fragmento e, dessa forma, inibir atividades mediadas através da ligação de IL-6 ao receptor de IL-6, ou através de outros mecanismos dependentes ou mediados por IL-6. Como aqui usado, o termo "anticorpo neutralizante" refere-se a um anticorpo que pode inibir uma atividade dependente de IL-6 em cerca de 20-120%, de preferência em pelo menos cerca de 10, 20, 30, 40, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100% ou mais, dependendo do ensaio. A capacidade de um anticorpo anti-IL-6 para inibir uma atividade dependente de IL-6 é avaliada, de preferência, por pelo menos um ensaio adequado de proteína ou receptor de IL-6, como aqui descrito e/ou como conhecido na técnica. Um anticorpo humano da invenção pode ser de qualquer classe (IgG, IgA, IgM, IgE, IgD etc.) ou isótipo, e pode compreender uma cadeia leve kapa ou lambda. Em uma modalidade, o anticorpo humano compreende uma cadeia pesada de IgG ou fragmento definido, por exemplo, pelo menos um dos isótipos, IgG1, IgG2, IgG3 ou IgG4 (por exemplo, y1, y2, y3 ou y4). Anticorpos desse tipo podem ser preparados com o emprego de um camundongo transgênico ou de outro mamífero não-humano transgênico que compreenda pelo menos um transgene de cadeia leve humana (por exemplo, IgG, IgA e IgM), como aqui descrito e/ou como conhecido na técnica. Em outra modalidade, o anticorpo humano anti-IL-6 humana compreende uma cadeia pesada de IgG1 e uma cadeia leve de IgG1.
[00108] Pelo menos um anticorpo da invenção se liga a pelo menos um epítopo especificado, específico para pelo menos uma proteína IL- 6, subunidade, fragmento, porção ou qualquer combinação destes. Esse pelo menos um epítopo pode compreender pelo menos uma região de ligação de anticorpo que compreende pelo menos uma porção da proteína, cujo epítopo é composto, de preferência, por pelo menos uma porção extracelular, solúvel, hidrofílica, externa ou citoplasmática da proteína. Esse pelo menos um epítopo especificado pode compreender qualquer combinação de pelo menos uma seqüência de aminoácidos de pelo menos 1-3 aminoácidos até toda a porção especificada de aminoácidos contíguos do ID. DE SEQ. N°: 115, por exemplo, resíduos dos aminoácidos 151-178, mais especificamente, os resíduos 171-182.
[00109] Geralmente, o anticorpo humano ou fragmento de ligação de antígeno da presente invenção compreenderá uma região de ligação de antígeno que compreende pelo menos uma região determinante de complementaridade humana (CDR1, CDR2 e CDR3) ou variante de pelo menos uma região variável da cadeia pesada e pelo menos uma região determinante de complementaridade humana (CDR1, CDR2 e CDR3) ou variante de pelo menos uma região variável da cadeia leve. As seqüências de CDR podem ser derivadas de seqüências de linhagem germinativa humana ou podem combinar intimamente com as seqüências de linhagem germinativa. Por exemplo, as CDRs de uma biblioteca sintética derivada das CDRs de camundongo originais podem ser usadas. Essas CDRs podem ser formadas por incorporação de substituições conservadoras em relação à seqüência de camundongo original. Como exemplo não-limitante, o anticorpo ou a porção de ligação de antígeno ou variante pode compreender pelo menos uma entre uma CDR3 da cadeia pesada que possui uma seqüência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nos IDS. DE SEQ. Nos: 79, 81, 83, 85, 87, 89 e 91 e/ou uma CDR3 da cadeia leve que possui uma seqüência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nos IDS. DE SEQ. Nos: 29, 31, 33 e 35. Em uma modalidade particular, o anticorpo ou fragmento de ligação de antígeno pode ter uma região de ligação de antígeno que compreende pelo menos uma porção de pelo menos uma CDR da cadeia pesada (ou seja, CDR1, CDR2 e/ou CDR3) que possui a seqüência de aminoácidos das CDRs 1, 2 e/ou 3 correspondentes (por exemplo, IDS. DE SEQ. Nos :37, 49 e 79). Em outra modalidade particular, o anticorpo ou a porção de ligação de antígeno ou variante pode ter uma região de ligação de antígeno que compreende pelo menos uma porção de pelo menos uma CDR da cadeia leve (ou seja, CDR1, CDR2 e/ou CDR3) que possui a seqüência de aminoácidos das CDRs 1, 2 e/ou 3 correspondentes (por exemplo, IDS. DE SEQ. Nos: 1, 17 e 29).
[00110] Em uma modalidade preferida, as três CDRs da cadeia pesada e as três CDRs da cadeia leve do anticorpo ou fragmento de ligação de antígeno possuem a seqüência de aminoácidos da CDR correspondente de pelo menos um de mAb AME-A9, AME-1b, AME- 18a, AME-22a, AME-20b, AME-23a e AME-19a, como aqui descritos. Tais anticorpos podem ser preparados unindo-se quimicamente as várias porções (por exemplo, CDRs, estrutura central) do anticorpo através do uso de técnicas convencionais, preparando-se e expressando-se uma (ou seja, uma ou mais) molécula de ácido nucléico que codifica o anticorpo com o uso de técnicas convencionais de tecnologia de DNA recombinante, ou pela utilização de qualquer outro método adequado.
[00111] O anticorpo anti-IL-6 pode compreender pelo menos uma de uma região variável da cadeia pesada ou leve que possui uma seqüência de aminoácidos definida. Por exemplo, em uma modalidade preferida, o anticorpo anti-IL-6 compreende pelo menos um de pelo menos uma região variável da cadeia pesada, opcionalmente possuindo uma seqüência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nos IDS. DE SEQ. Nos: 95, 99, 103, 118, 122, 126 e 130, e/ou pelo menos uma região variável da cadeia leve, possuindo opcionalmente uma seqüência de aminoácidos selecionada do grupo que consiste nos IDS. DE SEQ. Nos: 93, 97, 101, 116, 120, 124 e 128. Anticorpos que se ligam à IL-6 humana e que compreendem uma região variável definida da cadeia pesada ou leve podem ser preparados com o uso de métodos adequados, tais como o método de exibição de fago (Katsube, Y., e al., Int. J. Mol. Med, 1(5): 863-868 (1998)) ou métodos que empregam animais transgênicos, como conhecidos na técnica e/ou como aqui descritos. Por exemplo, um camundongo transgênico que compreende um transgene funcionalmente rearranjado da cadeia pesada da imunoglobulina humana e um transgene que compreende DNA de um lócus da cadeia leve de imunoglobulina humana pode ser submetido a rearranjo funcional, pode ser imunizado com IL-6 humana ou um fragmento desta, para despertar a produção de anticorpos. Se desejado, as células produtoras de anticorpos podem ser isoladas, e hibridomas ou outras células imortalizadas produtoras de anticorpos podem ser preparadas como aqui descrito e/ou como conhecido na técnica. Alternativamente, o anticorpo, porção especificada ou variante pode ser expresso com a utilização do ácido nucléico codificador, ou porção deste, em uma célula hospedeira adequada.
Códigos de aminoácidos
[00112] Os aminoácidos que constituem os anticorpos anti-IL-6 da presente invenção são freqüentemente abreviados. As designações dos aminoácidos podem ser indicadas designando-se o aminoácido por seu código de uma letra, seu código de três letras, pelo nome, ou códon(s) de três nucleotídeos, como é conhecido na técnica (veja Alberts, B., e al., "Molecular Biology of The Cell", Terceira Ed., Garland Publishing, Inc., Nova York, 1994).
[00113] Um anticorpo anti-IL-6 da presente invenção pode incluir uma ou mais substituições, eliminações ou adições de aminoácidos, tanto de mutações naturais quanto por manipulação humana, como aqui especificado. Aminoácidos em um anticorpo anti-IL-6 da presente invenção que são essenciais para a função podem ser identificados por métodos conhecidos na técnica como, por exemplo, mutagênese sítio-dirigida ou mutagênese por varredura de alanina (por exemplo, Ausubel, supra, Capítulos 8, 15; Cunningham e Wells, Science 244: 1.081-.1085 (1989)). Esse último procedimento introduz mutaçõesúnicas de alanina em cada resíduo na molécula. As moléculas mutantes resultantes são então testadas quanto à atividade biológica como, por exemplo, sem limitação, pelo menos uma atividade neutralizante de IL-6. Sítios que são críticos para a ligação de anticorpo também podem ser identificados por análise estrutural, tais como cristalização, ressonância nuclear magnética ou marcação por fotoafinidade (Smith, e al., J. Mol. Biol. 224: 899-904 (1992) e de Vos, e al., Science 255: 306-312 (1992)).
[00114] Os anticorpos anti-IL-6 da presente invenção podem incluir, sem limitação, pelo menos uma porção, seqüência ou combinação selecionada de 5 a todos os aminoácidos contíguos de pelo menos um dos IDS. DE SEQ. Nos: 91, 93, 95, 97, 99 etc.
[00115] Variantes não-limitantes que podem intensificar ou manter pelo menos uma das atividades listadas incluem, sem limitação, qualquer um dos polipeptídeos acima, compreendendo ainda pelo menos uma mutação que corresponde a pelo menos uma substituição nos resíduos diversos entre as seqüências de aminoácidos variantes descritas.
[00116] Um anticorpo anti-IL-6 pode ainda opcionalmente compreender um polipeptídeo com uma seqüência de aminoácidos que varie em relação à seqüência dos aminoácidos contíguos de pelo menos um dos IDS. DE SEQ. Nos: 95, 99 e 103 etc. (por exemplo, uma ou mais substituições conservadoras em relação às seqüências aqui fornecidas). Além disso, a presente invenção compreende variantes da seqüência de aminoácidos de uma região variável da cadeia leve dos IDS. DE SEQ. Nos: 93, 97 ou 101, ou da seqüência de aminoácidos de uma cadeia pesada dos IDS. DE SEQ. Nos: 79, 81, 83, 85, 87, 89 ou 91.
[00117] Como observado por aqueles versados na técnica, a presente invenção inclui pelo menos um anticorpo biologicamente ativo da presente invenção. Anticorpos biologicamente ativos têm uma atividade específica de pelo menos 20%, 30% ou 40% e, depreferência, pelo menos 50%, 60%, ou 70% e, principalmente, pelo menos 80%, 90% ou 95%-1.000% ou mais daquela do anticorpo nativo (não-sintético), endógeno ou relacionado e conhecido. Métodos de avaliação e quantificação das medidas da atividade enzimática e especificidade de substrato são bem-conhecidos por aqueles versados na técnica.
[00118] Em outro aspecto, a invenção refere-se aos anticorpos humanos e fragmentos de ligação de antígeno, como aqui descritos, que são modificados pela adesão covalente de uma porção orgânica. Tal modificação pode produzir um anticorpo ou fragmento de ligação de antígeno com propriedades farmacocinéticas aprimoradas (por exemplo, meia-vida sérica in vivo aumentada). A porção orgânica pode ser um grupo polimérico hidrofílico linear ou ramificado, grupo ácido graxo ou grupo éster de ácido graxo. Em modalidades específicas, o grupo polimérico hidrofílico pode ter um peso molecular de cerca de 800 a cerca de 120.000 Dáltons, e pode ser um polialcano glicol (por exemplo, polietileno glicol (PEG), polipropileno glicol (PPG)), polímero de carboidrato, polímero de aminoácido ou polivinil pirrolidona, e o grupo ácido graxo ou de éster de ácido graxo pode compreender de cerca de oito a cerca de quarenta átomos de carbono.
[00119] Os anticorpos e fragmentos de ligação de antígeno modificados da invenção podem compreender uma ou mais porções orgânicas que são ligadas covalentemente, direta ou indiretamente, ao anticorpo. Cada porção orgânica que é ligada a um anticorpo ou fragmento de ligação de antígeno da invenção pode independentemente ser um grupo polimérico hidrofílico, um grupo ácido graxo ou um grupo éster de ácido graxo. Como aqui usado, o termo "ácido graxo" engloba ácidos monocarboxílicos e ácidos dicarboxílicos. Um "grupo polimérico hidrofílico", como o termo é aqui usado, refere-se a um polímero orgânico que é mais solúvel na água do que em octano. Por exemplo, polilisina é mais solúvel na água do que em octano. Dessa forma, um anticorpo modificado pela adesão covalente de polilisina é englobado pela invenção. Polímeros hidrofílicos adequados para a modificação de anticorpos da invenção podem ser lineares ou ramificados, e incluem, por exemplo, polialcano glicóis (por exemplo, PEG, monometóxi-polietileno glicol (mPEG), PPG e semelhantes), carboidratos (por exemplo, dextrana, celulose, oligossacarídeos, polissacarídeos e semelhantes), polímeros de aminoácidos hidrofílicos (por exemplo, polilisina, poliarginina, poliaspartato e semelhantes), óxidos de polialcano (por exemplo, óxido de polietileno, óxido de polipropileno e semelhantes) e polivinil pirrolidona. De preferência, o polímero hidrofílico que modifica o anticorpo da invenção tem um peso molecular de cerca de 800 a cerca de 150.000 Dáltons, como uma entidade molecular separada. Por exemplo, podem ser usados PEG5.000 e PEG20.000, em que o subscrito é o peso molecular médio do polímero em Dáltons. O grupo polimérico hidrofílico pode ser substituído com um a cerca de seis grupos alquila, ácido graxo ou éster de ácido graxo. Polímeros hidrofílicos que são substituídos por um grupo ácido graxo ou de éster de ácido graxo podem ser preparados com o emprego de métodos adequados. Por exemplo, um polímero que compreende um grupo amina pode ser acoplado a um carboxilato do ácido graxo ou éster de ácido graxo, e um carboxilato ativado (por exemplo, ativado com N,N-carbonil di- imidazol) em um ácido graxo ou éster de ácido graxo pode ser acoplado a um grupo hidroxil em um polímero.
[00120] Ácidos graxos e ésteres de ácido graxo adequados para a modificação de anticorpos da invenção podem ser saturados ou podem conter uma ou mais unidades de insaturação. Ácidos graxos que são adequados para a modificação de anticorpos da invenção incluem, por exemplo, n-dodecanoato (C12, laurato), n-tetradecanoato (C14, miristato), noctadecanoato (C18, estearato), n-eicosanoato (C20, araquidato), n-docosanoato (C22, behenato), n-triacontanoato (C30), n- tetracontanoato (C40), cis -Δ9-octadecanoato (C18, oleato), all cis - Δ,8,11,14-eicosatetraenoato (C20, araquidonato), ácido octanodióico, ácido tetradecanodióico, ácido octadecanodióico, ácidodocosanodióico, e semelhantes. Ésteres de ácido graxo adequados incluem monoésteres de ácidos dicarboxílicos que compreendem um grupo alquil inferior linear ou ramificado. O grupo alquil inferior pode compreender de um a cerca de doze, de preferência um a cerca de seis átomos de carbono.
[00121] Os anticorpos humanos e fragmentos de ligação de antígeno modificados podem ser preparados com a utilização de métodos adequados, tais como por reação com um ou mais agentes de modificação. Um "agente de modificação", como o termo é aqui usado, refere-se a um grupo orgânico adequado (por exemplo, polímero hidrofílico, um ácido graxo, um éster de ácido graxo) que compreende um grupo de ativação. Um "grupo de ativação" é uma porção química ou grupo funcional que pode, sob condições apropriadas, reagir com um segundo grupo químico, formando, dessa forma, uma ligação covalente entre o agente de modificação e o segundo grupo químico. Por exemplo, grupos de ativação reativos à amina incluem grupos eletrofílicos, tais como tosilato, mesilato, halo (cloro, bromo, flúor, iodo), ésteres de N-hidroxissuccinimidila (NHS), e semelhantes. Grupos de ativação que podem reagir com tióis incluem, por exemplo, maleimida, iodoacetila, acrilolila, bissulfetos de piridila, tiol de ácido 5-tiol-2-nitrobenzóico (TNB-tiol), e semelhantes. Um grupo funcional aldeído pode ser acoplado às moléculas contendo amina ou hidrazida, e um grupo azida pode reagir com um grupo de fósforo trivalente para formar ligações fosforamidato ou fosforimida. Métodos adequados para a introdução de grupos de ativação em moléculas são conhecidos na técnica (veja, por exemplo, Hermanson, G.T., Bioconjugate Techniques, Academic Press: San Diego, CA (1996)). Um grupo de ativação pode ser ligado diretamente ao grupo orgânico (por exemplo, polímero hidrofílico, ácido graxo, éster de ácido graxo), ou através de uma porção vinculadora, por exemplo, um grupo C1-C12 divalente, em que um ou mais átomos de carbono podem ser substituídos por um heteroátomo, por exemplo, oxigênio, nitrogênio ou enxofre. Porções vinculadoras adequadas incluem, por exemplo, tetraetileno glicol, -(CH2)3-, -NH-(CH2)6-NH-, -(CH2)2-NH- e -CH2-O-CH2-CH2-O-CH2-CH2-O-CH-NH-. Agentes de modificação que compreendem uma porção vinculadora podem ser produzidos, por exemplo, por reação de uma mono-Boc-alquildiamina (por exemplo, mono-Boc-etilenodiamina, mono-Boc-diaminohexano) com um ácido graxo na presença de 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil) carbodiimida (EDC) para formar uma ligação amida entre a amina livre e o carboxilato de ácido graxo. O grupo de proteção Boc pode ser removido do produto por tratamento com ácido trifluoracético (TFA) para expor uma amina primária que pode ser acoplada a outro carboxilato, como descrito, ou pode ser reagido com anidrido maléico e o produto resultante ciclizado para produzir um derivado maleimido ativado do ácido graxo (veja, por exemplo, Thompson, e al., WO 92/16221, cujos ensinamentos são aqui integralmente incorporados por referência).
[00122] Os anticorpos modificados da invenção podem ser produzidos reagindo-se um anticorpo humano ou um fragmento de ligação de antígeno com um agente de modificação. Por exemplo, as porções orgânicas podem ser ligadas ao anticorpo de uma forma não sítio-específica pelo emprego de um agente de modificação reativo à amina, por exemplo, um éster de NHS de PEG. Anticorpos humanos ou fragmentos de ligação de antígeno modificados também podem ser preparados pela redução de ligações bissulfeto (por exemplo, ligações bissulfeto intracadeia) de um anticorpo ou fragmento de ligação de antígeno. O anticorpo ou fragmento de ligação de antígeno reduzido pode então ser reagido com um agente de modificação reativo ao tiol para produzir o anticorpo modificado da invenção. Anticorpos humanos e fragmentos de ligação de antígeno modificados que compreendem uma porção orgânica que está ligada a sítios específicos de um anticorpo da presente invenção podem ser preparados com o uso de métodos adequados como, por exemplo, proteólise reversa (Fisch e al., Bioconjugate Chem., 3: 147-153 (1992); Werlen e al., Bioconjugate Chem., 5: 411-417 (1994); Kumaran e al., Protein Sci. 6(10): 2.2332.241 (1997); Itoh e al., Bioorg. Chem., 24(1): 59-68 (1996); Capellas e al., Biotechnol. Bioeng., 56(4): 456-463 (1997)) e os métodos descritos em Hermanson, G.T., Bioconjugate Techniques, Academic Press: San Diego, CA (1996).
Anticorpos antiidiótipo para as composições de anticorpo anti-IL- 6
[00123] Além dos anticorpos monoclonais anti-IL-6, a presente invenção também é dirigida a um anticorpo antiidiotípico (anti-Id) específico para os anticorpos da invenção. Um anticorpo anti-Id é um anticorpo que reconhece determinantes únicos geralmente associados à região de ligação de antígeno de outro anticorpo. O anti-Id pode ser preparado por imunização de um animal da mesma espécie e tipo genético (por exemplo, cepa de camundongo) que a fonte do anticorpo Id com o anticorpo, ou uma região que contém a CDR deste. O animal imunizado reconhecerá e responderá aos determinantes idiotípicos do anticorpo imunizante e produzirá um anticorpo anti-Id. O anticorpo anti- Id também pode ser usado como um "imunógeno" para induzir uma resposta imunológica ainda em outro animal, produzido o chamado anticorpo anti-anti-Id.
[00124] A presente invenção também fornece pelo menos uma composição de anticorpo anti-IL-6 que compreende pelo menos um, pelo menos dois, pelo menos três, pelo menos quatro, pelo menos cinco, pelo menos seis ou mais anticorpos anti-IL-6 deste, como aqui descrito e/ou como conhecido na técnica, que são fornecidos em uma composição, mistura ou forma de ocorrência não-natural. Tais composições compreendem composições de ocorrência não-natural compostas de pelo menos uma ou duas variantes, domínios, fragmentos ou variantes especificadas de comprimento total, eliminadas no terminal C e/ou N, da seqüência de aminoácidos do anticorpo anti-IL-6 selecionada do grupo que consiste em 70-100% dos aminoácidos contíguos dos IDS. DE SEQ. Nos: 1-114 e 116-138, ou fragmentos especificados, domínios ou variantes destas. Composições preferidas de anticorpo anti-IL-6 incluem pelo menos um ou dois fragmentos, domínios ou variantes de comprimento total, como pelo menos uma CDR ou porções contendo LBP da seqüência do anticorpo anti-IL-6 aqui descrita, por exemplo, 70-100% dos IDS. DE SEQ. Nos: 15, 27, 35, 47, 61 e 91, ou fragmentos especificados, domínios ou variantes desta. Composições adicionalmente preferidas compreendem, por exemplo, 40-99% de pelo menos um de 70-100% dos IDS. DE SEQ. Nos: 93, 95, 97, 99, 101, 103 etc., ou fragmentos especificados, domínios ou variantes destes. Essas percentagens da composição são por peso, volume, concentração, molaridade ou molalidade, como soluções líquidas ou secas, misturas, suspensão, emulsões, partículas, pó ou colóides, como conhecido na técnica ou como aqui descrito.Composições de anticorpos que compreendem ingredientes terapeuticamente ativos adicionais
[00125] As composições de anticorpo da invenção podem opcionalmente ainda compreender uma quantidade eficaz de pelo menos um composto ou uma proteína selecionada de pelo menos um entre um fármaco antiinfeccioso, um fármaco do sistema cardiovascular (CV), um fármaco do sistema nervoso central (SNC), um fármaco do sistema nervoso autônomo (SNA), um fármaco do trato respiratório, um fármaco do trato gastrointestinal (GI), um fármaco hormonal, um fármaco para o equilíbrio hidro-eletrolítico, um fármaco hematológico, um antineoplásico, um fármaco de imunomodulação, um fármaco oftálmico, óptico ou nasal, um fármaco tópico, um fármaco nutritivo, ou semelhantes. Esses fármacos são bem-conhecidos na técnica, incluindo formulações, indicações, dosagem e administração para cada um deles aqui apresentado (veja, por exemplo, "Nursing 2001 Handbook of Drugs", 21a edição, Springhouse Corp., Springhouse, PA, 2001; "Health Professional’s Drug Guide" 2001, ed., Shannon, Wilson, Stang, Prentice-Hall, Inc, Upper Saddle River, NJ; "Pharmacotherapy Handbook", Wells e al., ed., Appleton & Lange, Stamford, CT, cada um deles aqui incorporado por referência em sua totalidade).
[00126] O fármaco antiinfeccioso pode ser pelo menos um selecionado de amebicidas ou pelo menos um de antiprotozoários, anti-helmínticos, antifúngicos, antimaláricos, antituberculosos ou pelo menos um de antilepróticos, aminoglicosídeos, penicilinas,cefalosporinas, tetraciclinas, sulfonamidas, fluorquinolonas, antivirais, antiinfecciosos macrolídicos e antiinfecciosos diversos. O fármaco do CV pode ser pelo menos um selecionado de inotrópicos, antiarrítmicos, antianginosos, anti-hipertensivos, antilipêmicos, e fármacos cardiovasculares diversos. O fármaco do SNC pode ser pelo menos um selecionado de analgésicos não-narcóticos ou pelo menos um selecionado de antipiréticos, fármacos antiinflamatórios não- esteróides, narcótico ou pelo menos um de analgésico opióide, sedativos-hipnóticos, anticonvulsivantes, antidepressivos, fármacos ansiolíticos, antipsicóticos, estimulantes do sistema nervoso central, antiparkinsonianos e fármacos do sistema nervoso central diversos. O fármaco do SNA pode ser pelo menos um selecionado de colinérgicos (parassimpaticomiméticos), anticolinérgicos, adrenérgicos(simpaticomiméticos), bloqueadores adrenérgicos (simpaticolíticos), relaxantes de músculo esquelético e bloqueadores neuromusculares. O fármaco do trato respiratório pode ser pelo menos um selecionado de anti-histamínicos, broncodilatadores, expectorantes ou pelo menos um de antitussígeno, e fármacos respiratórios diversos. O fármaco do trato GI pode ser pelo menos um selecionado de antiácidos ou pelo menos um de adsorvente ou pelo menos um de fármacosantiflatulência, enzima digestiva ou pelo menos um de solubilizante de litíase biliar, antidiarréicos, laxantes, antieméticos e fármacosantiulcerosos. O fármaco hormonal pode ser pelo menos um selecionado de corticosteróides, androgênios ou pelo menos um de esteróide anabólico, estrogênio ou pelo menos um de progesterona, gonadotrofina, fármaco antidiabético ou pelo menos um de glucagon, hormônio tireoidiano, antagonista do hormônio tireoidiano, hormônio hipofisário e fármaco semelhante ao hormônio da paratireóide. O fármaco para equilíbrio hidro-eletrolítico pode ser pelo menos um selecionado de diuréticos, eletrólito ou pelo menos um de solução de reposição, acidificante ou pelo menos um alcalinizante. O fármaco hematológico pode ser pelo menos um selecionado de hematínicos, anticoagulantes, derivados do sangue e enzimas trombolíticas. Os antineoplásicos podem ser pelo menos um selecionado de fármacos alquilantes, antimetabólitos, antineoplásicos antibióticos,antineoplásicos que alteram o equilíbrio hormonal, e antineoplásicos diversos. O fármaco de imunomodulação pode ser pelo menos um selecionado de imunossupressores, vacinas ou pelo menos um de toxóide, antitoxina ou pelo menos um de antídoto, soro imune e modificador da resposta biológica. Os fármacos oftálmicos, ópticos e nasais podem ser pelo menos um selecionado de antiinfecciosos oftálmicos, antiinflamatórios oftálmicos, mióticos, midriáticos, vasoconstrictores oftálmicos, fármacos oftálmicos, ópticos e nasais diversos. O fármaco tópico pode ser pelo menos um selecionado de antiinfecciosos locais, escabicidas ou pelo menos um de pediculicida ou corticosteróide tópico. O fármaco nutritivo pode ser pelo menos um selecionado de vitaminas, minerais ou energéticos. Veja, por exemplo, o conteúdo de Nursing 2001 Drug Handbook, supra.
[00127] Aquele pelo menos um amebicida ou antiprotozoário pode ser pelo menos um selecionado de atovaquona, cloridrato de cloroquina, fosfato de cloroquina, metronidazol, cloridrato de metronidazol e isotionato de pentamidina. Aquele pelo menos um anti- helmíntico pode ser pelo menos um selecionado de mebendazol, pamoato de pirantel e tiabendazol. Aquele pelo menos um antifúngico pode ser pelo menos um selecionado de anfotericina B, complexo de colesteril sulfato de anfotericina B, complexo lipídico de anfotericina B, anfotericina B lipossômica, fluconazol, flucitosina, griseofulvina micronizada, griseofulvina ultramicronizada, itraconazol, cetoconazol, nistatina e cloridrato de terbinafina. Aquele pelo menos um antimalárico pode ser pelo menos um selecionado de cloridrato de cloroquina, fosfato de cloroquina, doxiciclina, sulfato de hidroxicloroquina, cloridrato de mefloquina, fosfato de primaquina, pirimetamina e pirimetamina com sulfadoxina. Aquele pelo menos um antituberculoso ou antileprótico pode ser pelo menos um selecionado de clofazimina, cicloserina, dapsona, cloridrato de etambutol, isoniazida, pirazinamida, rifabutina, rifampina, rifapentina, e sulfato de estreptomicina. Aquele pelo menos um aminoglicosídeo pode ser pelo menos um selecionado de sulfato de amicacina, sulfato de gentamicina, sulfato de neomicina, sulfato de estreptomicina e sulfato de tobramicina. Aquela pelo menos uma penicilina pode ser pelo menos uma selecionada de amoxicilina/clavulanato potássico, trihidrato de amoxicilina, ampicilina, ampicilina sódica, trihidrato de ampicilina, ampicilina sódica/sulbactam sódico, cloxacilina sódica, dicloxacilina sódica, mezlocilina sódica, nafcilina sódica, oxacilina sódica, penicilina G benzatina, penicilina G potássica, penicilina G procaína, penicilina G sódica, penicilina V potássica, piperacilina sódica, piperacilina sódica/tazobactam sódico, ticarcilina dissódica e ticarcilina dissódica/clavulanato potássico. Aquela pelo menos uma cefalosporina pode ser pelo menos uma selecionada de cefaclor, cefadroxil, cefazolina sódica, cefdinir, cloridrato de cefepima, cefixima, cefmetazol sódico, cefonicid sódico, cefoperazona sódica, cefotaxima sódica, cefotetan dissódico, cefoxitina sódica, cefpodoxima proxetil, cefprozil, ceftazidima, ceftibuteno, ceftizoxima sódica, ceftriaxona sódica, cefuroxima axetil, cefuroxima sódica, cloridrato de cefalexina, monohidrato de cefalexina, cefradina e loracarbef. Aquela pelo menos uma tetraciclina pode ser pelo menos uma selecionada de cloridrato de demeclociclina, doxiciclina cálcica, hiclato de doxiciclina, cloridrato de doxiciclina, monohidrato de doxiciclina, cloridrato de minociclina e cloridrato de tetraciclina. Aquela pelo menos uma sulfonamida pode ser pelo menos uma selecionada de co-trimoxazol, sulfadiazina, sulfametoxazol, sulfisoxazol e sulfisoxazol acetila. Aquela pelo menos uma fluorquinolona pode ser pelo menos uma selecionada de mesilato de alatrofloxacina, ciprofloxacina, enoxacina, levofloxacina, cloridrato de lomefloxacina, ácido nalidíxico, norfloxacina, ofloxacina, esparfloxacina e mesilato de trovafloxacina. Aquela pelo menos uma fluorquinolona pode ser pelo menos uma selecionada de mesilato de alatrofloxacina, ciprofloxacina, enoxacina, levofloxacina, cloridrato de lomefloxacina, ácido nalidíxico, norfloxacina, ofloxacina, esparfloxacina e mesilato de trovafloxacina. Aquele pelo menos um antiviral pode ser pelo menos um selecionado de sulfato de abacavir, aciclovir sódico, cloridrato de amantadina, amprenavir, cidofovir, mesilato de delavirdina, didanosina, efavirenz, famciclovir, fomivirsen sódico, foscarnet sódico, ganciclovir, sulfato de indinavir, lamivudina, lamivudina/zidovudina, mesilato de nelfinavir, nevirapina, fosfato de oseltamivir, ribavirina, cloridrato de rimantadina, ritonavir, saquinavir, mesilato de saquinavir, estavudina, cloridrato de valaciclovir, zalcitabina, zanamivir e zidovudina. Aquele pelo menos um antiinfeccioso macrolídico pode ser pelo menos um selecionado de azitromicina, claritromicina, diritromicina, base de eritromicina, estolato de eritromicina, etilsuccinato de eritromicina, lactobionato de eritromicina e estearato de eritromicina. Aquele pelo menos um antiinfeccioso diverso pode ser pelo menos um selecionado de aztreonam, bacitracina, cloranfenicol de succinato sódio, cloridrato de clindamicina, palmitato cloridrato de clindamicina, fosfato de clindamicina, imipenem e cilastatina sódica, meropenem, macrocristais de nitrofurantoína, microcristais de nitrofurantoína,quinupristina/dalfopristina, cloridrato de espectinomicina, trimetoprim e cloridrato de vancomicina (veja, por exemplo, pp. 24-214 de Nursing 2001 Drug Handbook).
[00128] Aquele pelo menos um inotrópico pode ser pelo menos um selecionado de lactato de amrinona, digoxina e lactato de milrinona. Aquele pelo menos um antiarrítmico pode ser pelo menos um selecionado de adenosina, cloridrato de amiodarona, sulfato de atropina, tosilato de bretílio, cloridrato de diltiazem, disopiramida, fosfato de disopiramida, cloridrato de esmolol, acetato de flecainida, fumarato de ibutilida, cloridrato lidocaína, cloridrato de mexiletina, cloridrato de moricizina, fenitoína, fenitoína sódica, cloridrato de procainamida, cloridrato de propafenona, cloridrato de propranolol, bissulfato de quinidina, gluconato de quinidina, poligalacturonato de quinidina, sulfato de quinidina, sotalol, cloridrato de tocainida e cloridrato de verapamil. Aquele pelo menos um antianginoso pode ser pelo menos um selecionado de besilato de amlodipidina, nitrito de amila, cloridrato de bepridil, cloridrato de diltiazem, dinitrato de isosorbida, mononitrato de isosorbida, nadolol, cloridrato de nicardipina, nifedipina, nitroglicerina, cloridrato de propranolol, verapamil e cloridrato de verapamil. Aquele pelo menos um anti- hipertensivo pode ser pelo menos um selecionado de cloridrato de acebutolol, besilato de amlodipina, atenolol, cloridrato de benazepril, cloridrato de betaxolol, fumarato de bisoprolol, candesartan cilexetil, captopril, cloridrato de carteolol, carvedilol, clonidina, cloridrato de clonidina, diazóxido, cloridrato de diltiazem, mesilato de doxazosina, enalaprilat, maleato de enalapril, mesilato de eprosartan, felodipina, mesilato de fenoldopam, fosinopril sódico, acetato de guanabenz, sulfato de guanadrel, cloridrato de guanfacina, cloridrato de hidralazina, irbesartan, Isradipina, cloridrato de labetalol, lisinopril, losartan potássico, metildopa, cloridrato de metildopato, succinato de metoprolol, tartarato de metoprolol, minoxidil, cloridrato de moexipril, nadolol, cloridrato de nicardipina, nifedipina, nisoldipina, nitroprussiato de sódio, sulfato de penbutolol, perindopril erbumina, mesilato de fentolamina, pindolol, cloridrato de prazosin, cloridrato de propranolol, cloridrato de quinapril, ramipril, telmisartan, cloridrato de terazosin, maleato de timolol, trandolapril, valsartan e cloridrato de verapamil. Aquele pelo menos um antilipêmico pode ser pelo menos um selecionado de atorvastatina cálcica, cerivastatina sódica, colestiramina, cloridrato de colestipol, fenofibrato (micronizado), fluvastatina sódica, gemfibrozil, lovastatina, niacina, pravastatina sódica e sinvastatina. Aquele pelo menos um fármaco do CV diverso pode ser pelo menos um selecionado de abciximab, alprostadil, cloridrato de arbutamina, cilostazol, bissulfato de clopidogrel, dipiridamol, eptifibatida, cloridrato de midodrina, pentoxifilina, cloridrato de ticlopidina e cloridrato de tirofiban (veja, por exemplo, pp. 215-336 de Nursing 2001 Drug Handbook).
[00129] Aquele pelo menos um analgésico não-narcótico ou antipirético pode ser pelo menos um selecionado de acetaminofeno, aspirina, trissalicilato de colina magnésio, diflunisal e salicilato de magnésio. Aquele pelo menos um fármaco antiinflamatório não- esteróide pode ser pelo menos um selecionado de celecoxib, diclofenaco potássico, diclofenaco sódico, etodolac, fenoprofeno cálcico, flurbiprofeno, ibuprofeno, indometacina, trihidrato de indometacina sódica, cetoprofeno, cetorolac de trometamina, nabumetona, naproxeno, naproxeno sódico, oxaprozina, piroxicam, rofecoxib e sulindac. Aquele pelo menos um narcótico ou analgésico opióide pode ser pelo menos um selecionado de cloridrato dealfentanila, cloridrato de buprenorfina, tartarato de butorfanol, fosfato de codeína, sulfato de codeína, citrato de fentanil, sistematransdérmico de fentanil, fentanil transmucoso, cloridrato dehidromorfona, cloridrato de meperidina, cloridrato de metadona, cloridrato de morfina, sulfato de morfina, tartarato de morfina, cloridrato de nalbufina, cloridrato de oxicodona, pectinato de oxicodona, cloridrato de oximorfona, cloridrato de pentazocina, cloridrato de pentazocina e cloridrato de naloxona, lactato de pentazocina, cloridrato de propoxifeno, napsilato de propoxifeno, cloridrato de remifentanil, citrato de sufentanil e cloridrato de tramadol. Aquele pelo menos um sedativo-hipnótico pode ser pelo menos um selecionado de hidrato de cloral, estazolam, cloridrato de flurazepam, pentobarbital, pentobarbital sódico, fenobarbital sódico, secobarbital sódico, temazepam, triazolam, zaleplon e tartarato de zolpidem. Aquele pelo menos um anticonvulsivante pode ser pelo menos um selecionado de acetazolamida sódica, carbamazepina, clonazepam, clorazepato dipotássico, diazepam, divalproex sódico, etossuximida, fosfenitoína sódica, gabapentina, lamotrigina, sulfato de magnésio, fenobarbital, fenobarbital sódico, fenitoína, fenitoína sódica, fenitoína sódica (prolongada), primidona, cloridrato de tiagabina, topiramato, valproato sódico e ácido valpróico. Aquele pelo menos um antidepressivo pode ser pelo menos um selecionado de cloridrato de amitriptilina, pamoato de amitriptilina, amoxapina, cloridrato de bupropion, bromidrato de citalopram, cloridrato de clomipramina, cloridrato de desipramina, cloridrato de doxepina, cloridrato de fluoxetina, cloridrato de imipramina, pamoato de imipramina, mirtazapina, cloridrato de nefazodona, cloridrato de nortriptilina, cloridrato de paroxetina, sulfato de fenelzina, cloridrato de sertralina, sulfato de tranilcipromina, maleato de trimipramina e cloridrato de venlafaxina. Aquele pelo menos um fármaco ansiolítico pode ser pelo menos um selecionado de alprazolam, cloridrato de buspirona, clordiazepóxido, cloridrato de clordiazepóxido, clorazepato dipotássico, diazepam, cloridrato de doxepina, embonato de hidroxizina, cloridrato de hidroxizina, pamoato de hidroxizina, lorazepam, meprobamato, cloridrato de midazolam e oxazepam. Aquele pelo menos um fármaco antipsicótico pode ser pelo menos um selecionado de cloridrato de clorpromazina, clozapina, decanoato de flufenazina, enantato de flufenazina, cloridrato de flufenazina, haloperidol, decanoato de haloperidol, lactato de haloperidol, cloridrato de loxapina, succinato de loxapina, besilato de mesoridazina, cloridrato de molindona, olanzapina, perfenazina, pimozida, proclorperazina, fumarato de quetiapina, risperidona, cloridrato de tioridazina, tiotixeno, cloridrato de tiotixeno e cloridrato de trifluoperazina. Aquele pelo menos um estimulante do sistema nervoso central pode ser pelo menos um selecionado de sulfato de anfetamina, cafeína, sulfato de dextroanfetamina, cloridrato de doxapram, cloridrato de metanfetamina, cloridrato de metilfenidato, modafinil, pemolina e cloridrato de fentermina. Aquele pelo menos um antiparkinsoniano pode ser pelo menos um selecionado de cloridrato de amantadina, mesilato de benztropina, cloridrato de biperideno, lactato de biperideno, mesilato de bromocriptina, carbidopa-levodopa, entacapona, levodopa, mesilato de pergolida, dicloridrato de pramipexol, cloridrato de ropinirol, cloridrato de selegilina, tolcapona e cloridrato trihexifenidil. Aquele pelo menos um fármaco do sistema nervoso central diverso pode ser pelo menos um selecionado de cloridrato de bupropiona, cloridrato de donepezil, droperidol, maleato de fluvoxamina, carbonato de lítio, citrato de lítio, cloridrato de naratriptano, poliacrilex de nicotina, sistema transdérmico de nicotina, propofol, benzoato de rizatriptano, cloridrato monohidrato de sibutramina, succinato sumatriptano, cloridrato de tacrina e zolmitriptano (veja, por exemplo, pp. 337-530 de Nursing 2001 Drug Handbook).
[00130] Aquele pelo menos um colinérgico (por exemplo, parassimpaticomimético) pode ser pelo menos um selecionado de cloreto de betanecol, cloreto de edrofônio, brometo de neostigmina, metilsulfato de neostigmina, salicilato de fisostigmina e brometo de piridostigmina. Aquele pelo menos um anticolinérgico pode ser pelo menos um selecionado de sulfato de atropina, cloridrato de diciclomina, glicopirrolato, hiosciamina, sulfato de hiosciamina, brometo de propantelina, escopolamina, butilbrometo de escopolamina e bromidrato de escopolamina. Aquele pelo menos um adrenérgico (simpaticomiméticos) pode ser pelo menos um selecionado de cloridrato de dobutamina, cloridrato de dopamina, bitartarato de metaraminol, bitartarato de norepinefrina, cloridrato de fenilefrina, cloridrato de pseudoefedrina e sulfato de pseudoefedrina. Aquele pelo menos um bloqueador adrenérgico (simpaticolítico) pode ser pelo menos um selecionado de mesilato de diidroergotamina, tartarato de ergotamina, maleato de metisergida e cloridrato de propranolol. Aquele pelo menos um relaxante de músculo esquelético pode ser pelo menos um selecionado de baclofeno, carisoprodol, clorzoxazona, cloridrato de ciclobenzaprina, dantroleno sódico, metocarbamol e cloridrato de tizanidina. Aquele pelo menos um bloqueador neuromuscular pode ser pelo menos um selecionado de besilato de atracúrio, besilato de cisatracúrio, cloreto de doxacúrio, cloreto de mivacúrio, brometo de pancurônio, brometo de pipecurônio, brometo de rapacurônio, brometo de rocurônio, cloreto de succinilcolina, cloreto de tubocurarina e brometo de vecurônio (veja, por exemplo, pp. 531-84 de Nursing 2001 Drug Handbook).
[00131] Aquele pelo menos um anti-histamínico pode ser pelo menos um selecionado de maleato de bronfeniramina, cloridrato de cetirizina, maleato de clorfeniramina, fumarato de clemastina, cloridrato de ciproheptadina, cloridrato de difenidramina, cloridrato de fexofenadina, loratadina, cloridrato de prometazina, teoclato de prometazina e cloridrato de triprolidina. Aquele pelo menos um broncodilatador pode ser pelo menos um selecionado de albuterol, sulfato de albuterol, aminofilina, sulfato de atropina, sulfato de efedrina, epinefrina, bitartarato de epinefrina, cloridrato de epinefrina, brometo de ipratrópio, isoproterenol, cloridrato de isoproterenol, sulfato de isoproterenol, cloridrato de levalbuterol, sulfato de metaproterenol, oxtrifilina, acetato de pirbuterol, xinafoato de salmeterol, sulfato de terbutalina e teofilina. Aquele pelo menos um expectorante ou antitussígeno pode ser pelo menos um selecionado de benzonatato, fosfato de codeína, sulfato de codeína, bromidrato de dexotrametorfano, cloridrato de difenhidramina, guaifenesina e cloridrato de hidromorfona. Aquele pelo menos um fármaco respiratório diverso pode ser pelo menos um selecionado de acetilcisteína, dipropionato de beclometasona, beractant, budesonida, calfactant, cromolina sódica, dornase alfa, epoprostenol sódico, flunisolida, propionato de fluticasona, montelucast sódico, nedocromil sódico, palivizumab, triamcinolona acetonida, zafirlucast e zileuton (veja, por exemplo, pp. 585-642 de Nursing 2001 Drug Handbook).
[00132] Aquele pelo menos um fármaco antiácido, adsorvente ou antiflatulência pode ser pelo menos um selecionado de carbonato de alumínio, hidróxido de alumínio, carbonato de cálcio, magaldrato, hidróxido de magnésio, óxido de magnésio, simeticona e bicarbonato de sódio. Aquela pelo menos uma enzima digestiva ou solubilizante de litíase biliar pode ser pelo menos uma selecionada de pancreatina, pancrelipase e ursodiol. Aquele pelo menos um antidiarréico pode ser pelo menos um selecionado de atapulgita, subsalicilato de bismuto, policarbofil de cálcio, difenoxilato cloridrato e sulfato de atropina, loperamida, acetato de octreotida, tintura de ópio e tintura de ópio (canforada). Aquele pelo menos um laxante pode ser pelo menos um selecionado de bisocodil, policarbofil de cálcio, cascara sagrada, extrato líquido aromático de cascara sagrada, extrato líquido de cascara sagrada, óleo de rícino, docusato de cálcio, docusato de sódio, glicerina, lactulose, citrato de magnésio, hidróxido de magnésio, sulfato de magnésio, metilcelulose, óleo mineral, polietileno glicol ou solução de eletrólitos, psílio, sena e fosfatos de sódio. Aquele pelo menos um antiemético pode ser pelo menos um selecionado de cloridrato de clorpromazina, dimenidrinato, mesilato de dolasetron, dronabinol, cloridrato de granisetron, cloridrato de meclizina, cloridrato de metoclopramida, cloridrato de ondansetron, perfenazina, proclorperazina, edisilato de proclorperazina, maleato de proclorperazina, cloridrato de prometazina, escopolamina, maleato de tietilperazina e cloridrato de trimetobenzamida. Aquele pelo menos um fármaco antiulceroso pode ser pelo menos um selecionado de cimetidina, cloridrato de cimetidina, famotidina, lansoprazol, misoprostol, nizatidina, omeprazol, rabeprozol sódico, citrato de ranitidina bismuto, cloridrato de ranitidina e sucralfato (veja, por exemplo, pp. 643-95 de Nursing 2001 Drug Handbook).
[00133] Aquele pelo menos um corticosteróide pode ser pelo menos um selecionado de betametasona, acetato de betametasona ou fosfato de betametasona sódica, fosfato de betametasona sódica, acetato de cortisona, dexametasona, acetato de dexametasona, fosfato de dexametasona sódica, acetato de fludrocortisona, hidrocortisona, acetato de hidrocortisona, cipionato de hidrocortisona, fosfato de hidrocortisona sódica, succinato de hidrocortisona sódica, metilprednisolona, acetato de metilprednisolona, succinato de metilprednisolona sódica, prednisolona, acetato de prednisolona, fosfato de prednisolona sódica, tebutato de prednisolona, prednisona, triamcinolona, triamcinolona acetonida e diacetato de triamcinolona. Aquele pelo menos um androgênio ou esteróide anabólico pode ser pelo menos um selecionado de danazol, fluoximesterona, metiltestosterona, decanoato de nandrolona, fenpropionato de nandrolona, testosterona, cipionato de testosterona, enantato de testosterona, propionato de testosterona e sistema transdérmico de testosterona. Aquele pelo menos um estrogênio ou progesterona pode ser pelo menos um selecionado de estrogênios esterificados, estradiol, cipionato de estradiol, sistema transdérmico de estradiol/acetato de noretindrona, valerato de estradiol, estrogênios (conjugados), estropipato, etinil estradiol, etinil estradiol e desogestrel, etinil estradiol e diacetato de etinodiol, etinil estradiol e desogestrel, etinil estradiol e diacetato de etinodiol, etinil estradiol e levonorgestrel, etinil estradiol e noretindrona, etinil estradiol e acetato de noretindrona, etinil estradiol e norgestimato, etinil estradiol e norgestrel, etinil estradiol e noretindrona e acetato e fumarato ferroso, levonorgestrel, acetato de medroxiprogesterona, mestranol e noretindrona, noretindrona, acetato de noretindrona, norgestrel e progesterona. Aquela pelo menos uma gonadotrofina pode ser pelo menos uma selecionada de acetato de ganirelix, acetato de gonadorelina, acetato de histrelina e menotropinas. Aquele pelo menos um antidiabético ou glucagon pode ser pelo menos um selecionado de acarbose, clorpropamida, glimepirida, glipizida, glucagon, gliburida, insulinas, cloridrato de metformin, miglitol, cloridrato de pioglitazona, repaglinida, maleato de rosiglitazona e troglitazona. Aquele pelo menos um hormônio tireoidiano pode ser pelo menos um selecionado de levotiroxina sódica, liotironina sódica, liotrix e tiróide. Aquele pelo menos um antagonista do hormônio tireoidiano pode ser pelo menos umselecionado de metimazol, iodeto de potássio, iodeto de potássio(solução saturada), propiltiouracil, iodo radioativo (iodeto de sódio I131) e solução forte de iodo. Aquele pelo menos um hormônio hipofisário pode ser pelo menos um selecionado de corticotropina, cosintropina, acetato de desmopressina, acetato de leuprolida, corticotropina de depósito, somatrem, somatropina e vasopressina. Aquele pelo menos um fármaco semelhante ao hormônio da paratireóide pode ser pelo menos um selecionado de calcifediol, calcitonina (humana), calcitonina (de salmão), calcitriol, diidrotaquisterol e etidronato dissódico (veja, por exemplo, pp. 696-796 de Nursing 2001 Drug Handbook).
[00134] Aquele pelo menos um diurético pode ser pelo menos um selecionado de acetazolamida, acetazolamida sódica, cloridrato de amilorida, bumetanida, clortalidona, etacrinato sódico, ácido etacrínico, furosemida, hidroclorotiazida, indapamida, manitol, metolazona, espironolactona, torsemida, triamtereno e uréia. Aquela pelo menos uma solução eletrolítica ou de reposição pode ser pelo menos uma selecionada de acetato de cálcio, carbonato de cálcio, cloreto de cálcio, citrato de cálcio, glubionato de cálcio, gluceptato de cálcio, gluconato de cálcio, cálcio lactato, fosfato de cálcio (dibásico), fosfato de cálcio (tribásico), dextrana (alto peso molecular), dextrana (baixo peso molecular), hetamido, cloreto de magnésio, sulfato de magnésio, acetato de potássio, bicarbonato de potássio, cloreto de potássio, gluconato de potássio, solução de Ringer, solução de Ringer (com lactato) e cloreto de sódio. Aquele pelo menos um acidificante ou alcalinizante pode ser pelo menos um selecionado de bicarbonato de sódio, lactato de sódio e trometamina (veja, por exemplo, pp. 797-833 de Nursing 2001 Drug Handbook).
[00135] Aquele pelo menos um hematínico pode ser pelo menos um selecionado de fumarato ferroso, gluconato ferroso, sulfato ferroso, sulfato ferroso (seco), dextrana férrica, sorbitol férrico, complexo polissacarídeo-ferro e complexo sódio-gluconato férrico. Aquele pelo menos um anticoagulante pode ser pelo menos um selecionado de ardeparina sódica, dalteparina sódica, danaparóide sódico, enoxaparina sódica, heparina cálcica, heparina sódica e warfarin sódico. Aquele pelo menos um derivado do sangue pode ser pelo menos um selecionado de albumina 5%, albumina 25%, fator anti- hemofílico, complexo coagulante antiinibidor, antitrombina III (humana), fator IX (humano), complexo do fator IX e frações de proteínas plasmáticas. Aquela pelo menos uma enzima trombolítica pode ser pelo menos uma selecionada de alteplase, anistreplase, reteplase (recombinante), estreptoquinase e uroquinase (veja, por exemplo, pp. 834-66 de Nursing 2001 Drug Handbook).
[00136] Aquele pelo menos um fármaco alquilante pode ser pelo menos um selecionado de bussulfan, carboplatina, carmustina, clorambucil, cisplatina, ciclofosfamida, ifosfamida, lomustina, cloridrato de mecloretamina, melfalan, cloridrato de melfalan, estreptozocina, temozolomida e tiotepa. Aquele pelo menos um antimetabólito pode ser pelo menos um selecionado de capecitabina, cladribina, citarabina, floxuridina, fosfato de fludarabina, fluoruracil, hidroxiuréia, mercaptopurina, metotrexato, metotrexato sódico e tioguanina. Aquele pelo menos um antineoplásico antibiótico pode ser pelo menos um selecionado de sulfato de bleomicina, dactinomicina, citrato de daunorrubicina lipossômica, cloridrato de daunorrubicina, cloridrato de doxorrubicina, cloridrato de doxorrubicina lipossômica, cloridrato de epirrubicina, cloridrato de idarrubicina, mitomicina, pentostatina, plicamicina e valrrubicina. Aquele pelo menos um antineoplásico que altera o equilíbrio hormonal pode ser pelo menos um selecionado de anastrozol, bicalutamida, fosfato sódico de estramustina, exemestano, flutamida, acetato de goserelina, letrozol, acetato de leuprolida, acetato de megestrol, nilutamida, citrato de tamoxifeno, testolactona e citrato de toremifeno. Aquele pelo menos um antineoplásico diverso pode ser pelo menos um selecionado de asparaginase, bacilo de Calmette-Guerin (BCG) (intravesical vivo), dacarbazina, docetaxel, etoposida, fosfato de etoposida, cloridrato de gemcitabina, cloridrato de irinotecan, mitotano, cloridrato de mitoxantrona, paclitaxel, pegaspargase, porfimer sódico, cloridrato de procarbazina, rituximab, teniposida, cloridrato de topotecan, trastuzumab, tretinoína, sulfato de vinblastina, sulfato de vincristina e tartarato de vinorelbina (veja, por exemplo, pp. 867-963 of Nursing 2001 Drug Handbook).
[00137] Aquele pelo menos um imunossupressor pode ser pelo menos um selecionado de azatioprina, basiliximab, ciclosporina, daclizumab, imunoglobulina linfocitária, muromonab-CD3, micofenolato mofetil, cloridrato de micofenolato mofetil, sirolimus e tacrolimus. Aquela pelo menos uma vacina ou toxóide pode ser pelo menos uma selecionada de vacina de BCG, vacina da cólera, toxóides diftérico e tetânico (adsorvidos), toxóides diftérico e tetânico e vacina adsorvida acelular de pertussis, toxóides diftérico e tetânico e vacina de pertussis de célula inteira, vacinas conjugadas de Haemophilus b, vacina de hepatite A (inativada), vacina de hepatite B (recombinante), vacina do vírus da influenza trivalente dos tipos A & B de 1999-2000 (antígeno de superfície purificado), vacina do vírus da influenza trivalente dos tipos A & B de 1999-2000 (subvírion ou subvírion purificado), vacina do vírus da influenza trivalente dos tipos A & B de 1999-2000 (vírion inteiro), vacina do vírus da encefalite japonesa (inativado), vacina da doença de Lyme (OspA recombinante), vacina do vírus do sarampo e caxumba e rubéola (vivo), vacina do vírus do sarampo e caxumba e rubéola (vivo atenuado), vacina do vírus do sarampo (vivo atenuado), vacina de polissacarídeo meningocócico, vacina do vírus caxumba (vivo), vacina da praga, vacina pneumocócica (polivalente), vacina do vírus da pólio (inativado), vacina do vírus da pólio (vivo, oral, trivalente), vacina da raiva (adsorvido), vacina da raiva (célula diplóide humana), vacina do vírus da rubéola e caxumba (vivo), vacina do vírus da rubéola (vivo, atenuado), toxóide tetânico (adsorvido), toxóide tetânico (líquido), vacina tifóide (oral), vacina tifóide (parenteral), vacina tifóide de polissacarídeo Vi, vacina do vírus da varicela e vacina da febre amarela. Aquela pelo menos uma antitoxina ou antídoto pode ser pelo menos uma selecionado de antídoto da aranha viúva negra, antídoto de Crotalidae (polivalente), antitoxina diftérica (eqüina) e antídoto de Micrurus fulvius. Aquele pelo menos um soro imune pode ser pelo menos um selecionado de imunoglobulina de citomegalovírus (intravenoso), imunoglobulina de hepatite B (humana), imunoglobulina intramuscular, imunoglobulina intravenosa, imunoglobulina da raiva (humana), imunoglobulina intravenosa do vírus sincicial respiratório (humana), imunoglobulina Rho(D) (humana), imunoglobulinaintravenosa Rh0(D) (humana), imunoglobulina tetânica (humana) e imunoglobulina da varicella-zoster. Aquele pelo menos um modificador da resposta biológica pode ser pelo menos um selecionado de aldesleucina, epoetina alfa, filgrastima, acetato de glatiramer para injeção, interferon alfacon-1, interferon alfa-2a (recombinante), interferon alfa-2b (recombinante), interferon beta-1a, interferon beta-1b (recombinante), interferon gama-1b, cloridrato de levamisol, oprelvecina e sargramostim (veja, por exemplo, pp. 964-1.040 de Nursing 2001 Drug Handbook).
[00138] Aquele pelo menos um antiinfeccioso oftálmico pode ser selecionado de bacitracina, cloranfenicol, cloridrato de ciprofloxacina, eritromicina, sulfato de gentamicina, ofloxacina 0,3%, sulfato de polimixina B, sulfacetamida sódica 10%, sulfacetamida sódica 15%, sulfacetamida sódica 30%, tobramicina e vidarabina. Aquele pelo menos um antiinflamatório oftálmico pode ser pelo menos um selecionado de dexametasona, fosfato de dexametasona sódica, diclofenaco sódico 0,1%, fluormetolona, flurbiprofeno sódico, cetorolac trometamina, acetato de prednisolona (suspensão) e fosfato de prednisolona sódica (solução). Aquele pelo menos um miótico pode ser pelo menos um selecionado de cloreto de acetilcolina, carbacol (intra-ocular), carbacol (tópico), iodeto de ecotiopato, pilocarpina, cloridrato de pilocarpina e nitrato de pilocarpina. Aquele pelo menos um midriático pode ser pelo menos um selecionado de sulfato de atropina, cloridrato de ciclopentolato, epinefrina cloridrato de, borato de epinefril, hidrobrometo de homatropina, cloridrato de fenilefrina, hidrobrometo de escopolamina e tropicamida. Aquele pelo menos um vasoconstrictor oftálmico pode ser pelo menos um selecionado de cloridrato de nafazolina, cloridrato de oximetazolina e cloridrato de tetrahidrozolina. Aquele pelo menos um fármaco oftálmico diverso pode ser pelo menos um selecionado de cloridrato de apraclonidina, cloridrato de betaxolol, tartarato de brimonidina, cloridrato de carteolol, cloridrato de dipivefrina, cloridrato de dorzolamida, difumarato de emedastina, fluoresceína sódica, fumarato de cetotifeno, latanoprost, cloridrato de levobunolol, cloridrato de metipranolol, cloreto de sódio (hipertônico) e maleato de timolol. Aquele pelo menos um fármaco óptico pode ser pelo menos um selecionado de ácido bórico, peróxido de carbamida, cloranfenicol e polipeptídeo oleato-condensado de trietanolamina. Aquele pelo menos um fármaco nasal pode ser pelo menos um selecionado de dipropionato de beclometasona, budesonida, sulfato de efedrina, cloridrato de epinefrina, flunisolida, propionato de fluticasona, cloridrato de nafazolina, cloridrato de oximetazolina, cloridrato de fenilefrina, cloridrato de tetrahidrozolina, triamcinolona acetonida e cloridrato de xilometazolina (veja, por exemplo, pp. 1.041-97 de Nursing 2001 Drug Handbook).
[00139] Aquele pelo menos um antiinfeccioso local pode ser pelo menos um selecionado de aciclovir, anfotericina B, creme de ácido azeláico, bacitracina, nitrato de butoconazol, fosfato de clindamicina, clotrimazol, nitrato de econazol, eritromicina, sulfato de gentamicina, cetoconazol, acetato de mafenida, metronidazol (tópico), nitrato de miconazol, mupirocina, cloridrato de naftifina, sulfato de neomicina, nitrofurazona, nistatina, sulfadiazina de prata, cloridrato de terbinafina, terconazol, cloridrato de tetraciclina, tioconazol e tolnaftato. Aquele pelo menos um escabicida ou pediculicida pode ser pelo menos um selecionado de crotamiton, lindano, permetrina e piretrinas. Aquele pelo menos um corticosteróide tópico pode ser pelo menos um selecionado de dipropionato de betametasona, valerato de betametasona, propionato de clobetasol, desonida, desoximetasona, dexametasona, fosfato de dexametasona sódica, diacetato de diflorasona, fluocinolona acetonida, fluocinonida, flurandrenolida, propionato de fluticasona, halcionida, hidrocortisona, acetato de hidrocortisona, butirato de hidrocortisona, valerato de hidrocortisona, furoato de mometasona e triamcinolona acetonida (veja, por exemplo, pp. 1.098-1.136 de Nursing 2001 Drug Handbook).
[00140] Aquela pelo menos uma vitamina ou mineral pode ser pelo menos uma selecionado de vitamina A, complexo vitamínico B, cianocobalamina, ácido fólico, hidroxocobalamina, leucovorin cálcico, niacina, niacinamida, cloridrato de piridoxina, riboflavina, cloridrato de tiamina, vitamina C, vitamina D, colecalciferol, ergocalciferol, análogo de vitamina D, doxercalciferol, paricalcitol, vitamina E, análogo de vitamina K, fitonadiona, fluoreto de sódio, fluoreto de sódio (tópico), microelementos, cromo, cobre, iodo, manganês, selênio e zinco. Aquele pelo menos um energético pode ser pelo menos um selecionado de infusões de aminoácidos (cristalinas), infusões de aminoácidos em dextrose, infusões de aminoácidos com eletrólitos, infusões de aminoácidos com eletrólitos em dextrose, infusões de aminoácidos para insuficiência hepática, infusões de aminoácidos para alto estresse metabólico, infusões de aminoácidos para insuficiência renal, dextrose, emulsões de gordura e triglicerídeos de cadeia média (veja, por exemplo, pp. 1.137-63 de Nursing 2001 Drug Handbook).
[00141] As composições de anticorpo anti-IL-6 da presente invenção podem ainda compreender pelo menos uma de qualquer quantidade adequada e eficaz de uma composição ou composição farmacêutica que compreende pelo menos um anticorpo anti-IL-6 em contato ou administrado a uma célula, tecido, órgão, animal ou paciente que necessita de tal modulação, tratamento ou terapia, opcionalmente ainda compreendendo pelo menos um selecionado de pelo menos um antagonista de TNF (por exemplo, sem limitação, um antagonista de TNF químico ou protéico, anticorpo TNF monoclonal ou policlonal ou fragmento, um receptor solúvel de TNF (por exemplo, p55, p70 ou p85) ou fragmento, polipeptídeos de fusão destes, ou um antagonista de TNF de pequena molécula, por exemplo, proteína de ligação de TNF I ou II (TBP-1 ou TBP-II), nerelimonmab, infliximab, etanercept, CDP-571, CDP-870, afelimomab, lenercept esemelhantes), um anti-reumático (por exemplo, metotrexato, auranofina, aurotioglicose, azatioprina, etanercept, tiomalato de ouro sódico, sulfato de hidroxicloroquina, leflunomida, sulfasalazina), um relaxante muscular, um narcótico, um fármaco antiinflamatório não- esteróide (NSAID), um analgésico, um anestésico, um sedativo, um anestésico local, um bloqueador neuromuscular, um antimicrobiano (por exemplo, aminoglicosídeo, um antifúngico, um antiparasitário, um antiviral, um carbapenem, uma cefalosporina, uma fluorquinolona, um macrolídeo, uma penicilina, uma sulfonamida, uma tetraciclina, outro antimicrobiano), um antipsoriático, um corticosteróide, um esteróide anabólico, um agente relacionado ao diabetes, um mineral, um nutritivo, um agente da tireóide, uma vitamina, um hormônio relacionado ao cálcio, um antidiarréico, um antitussígeno, umantiemético, um antiulceroso, um laxante, um anticoagulante, umaeritropoietina (por exemplo, epoetina alfa), uma filgrastima (por exemplo, G-CSF, Neupogen), uma sargramostima (GM-CSF, Leukine), uma imunização, uma imunoglobulina, um imunossupressor (por exemplo, basiliximab, ciclosporina, daclizumab), um hormônio do crescimento, um fármaco de reposição hormonal, um modulador do receptor de estrogênio, um midriático, um cicloplégico, um agente alquilante, um antimetabólito, um inibidor mitótico, uma substância farmacêutica radioativa, um antidepressivo, um agente antimaníaco, um antipsicótico, um ansiolítico, um hipnótico, um simpaticomimético, um estimulante, donepezil, tacrina, uma medicação para asma, um agonista beta, um esteróide inalado, um inibidor de leucotrieno, uma metilxantina, uma cromolina, uma epinefrina ou análogo, dornase alfa (Pulmozyme), uma citocina ou um antagonista de citocina. Exemplos não-limitantes dessas citocinas incluem, sem limitação, qualquer um de IL-1 a IL-23 (por exemplo, IL-1, IL-2 etc.). Dosagens adequadas são bem-conhecidas na técnica. Veja, por exemplo, Wells e al., eds., "Pharmacotherapy Handbook", 2a Edição, Appleton e Lange, Stamford, CT (2000); "PDR Pharmacopoeia", "Tarascon Pocket Pharmacopoeia 2000", Edição de luxo, Tarascon Publishing, Loma Linda, CA (2000), cada uma dessas referências sendo aqui incorporada por referência em sua totalidade.
[00142] Esses agentes anticâncer ou antiinfecciosos também podem incluir moléculas de toxina que estão associadas, ligadas, co- formuladas ou co-administradas com pelo menos um anticorpo da presente invenção. A toxina pode opcionalmente agir para matar seletivamente a célula ou tecido patológico. A célula patológica pode ser uma célula de câncer ou outra célula. Tais toxinas podem ser, sem limitação, toxina purificada ou recombinante ou fragmento de toxina que compreende pelo menos um domínio funcional citotóxico de toxina, por exemplo, selecionada de pelo menos uma de ricina, toxina diftérica, uma toxina de veneno ou uma toxina bacteriana. O termo toxina também inclui tanto endotoxinas quanto exotoxinas produzidas por qualquer bactéria ou vírus de ocorrência natural, mutante ou recombinante que possam causar qualquer condição patológica em seres humanos e em outros mamíferos, incluindo choque toxêmico, o que pode resultar em morte. Tais toxinas podem incluir, sem limitação, enterotoxina termolábil de E. coli enterotoxigênica (LT), enterotoxina termo-estável (ST), citotoxina de Shigella, enterotoxinas de Aeromonas, toxina-1 de síndrome de choque toxêmico (TSST-1), enterotoxina estafilocócica A (SEA), B (SEB) ou C (SEC), enterotoxinas estreptocócicas e semelhantes. Tais bactérias incluem, sem limitação, cepas de uma espécie de E. coli enterotoxigênica (ETEC), E. coli enterohemorrágica (por exemplo, cepas do sorotipo 0157:H7), espécies de Staphylococcus (por exemplo, Staphylococcus aureus, Staphylococcus pyogenes), espécies de Shigella (por exemplo, Shigella dysenteriae, Shigella flexneri, Shigella boydii e Shigella sonnei), espécies de Salmonella (por exemplo, Salmonella typhi, Salmonella cholera-suis, Salmonella enteritidis), espécies de Clostridium (por exemplo, Clostridium perfringens, Clostridium dificile, Clostridium botulinum), espécies de Camphlobacter (por exemplo, Camphlobacter jejuni, Camphlobacter fetus), espécies de Heliobacter, (por exemplo, Heliobacter pylori), espécies de Aeromonas (por exemplo, Aeromonas sobria, Aeromonas hidrophila, Aeromonas caviae), Pleisomonas shigelloides, Yersina enterocolitica, espécies de Vibrios (por exemplo, Vibrios cholerae, Vibrios parahemolyticus), espécies de Klebsiella, Pseudomonas aeruginosa e Streptococci. Veja, por exemplo, Stein, ed., "INTERNAL MEDICINE", 3a ed., pp 1-13, Little, Brown e Co., Boston, (1990); Evans e al., eds., "Bacterial Infections of Humans: Epidemiology and Control", 2a Ed., pp 239-254, Plenum Medical Book Co., Nova York (1991); Mandell e al., "Principles and Practice of Infectious Diseases", 3a Ed., Churchill Livingstone, Nova York (1990); Berkow e al., eds., The Merck Manual, 16a edição, Merck e Co., Rahway, N.J., 1992; Wood e al., FEMS Microbiology Immunology, 76: 121-134 (1991); Marrack e al., Science, 248: 705-711 (1990), cujos conteúdos são aqui incorporados por referência em sua totalidade.
[00143] Compostos, composições ou combinações de anticorpo anti-IL-6 da presente invenção podem ainda compreender pelo menos uma de qualquer substância auxiliar adequada como, por exemplo, sem limitação, diluentes, ligantes, estabilizantes, tampões, sais, solventes lipofílicos, conservantes, adjuvantes, ou semelhantes. Preferem-se auxiliares farmaceuticamente aceitáveis. Exemplos não- limitantes e métodos de preparação dessas soluções estéreis são bem-conhecidos na técnica como, por exemplo, sem limitação, Gennaro, Ed., Remington's Pharmaceutical Sciences, 18a Edição, Mack Publishing Co. (Easton, PA) 1990. Podem ser rotineiramente selecionados veículos farmaceuticamente aceitáveis que sejam adequados ao modo de administração, solubilidade e/ou estabilidade da composição de anticorpo anti-IL-6, fragmento ou variante, como são conhecidos na técnica ou como são aqui descritos.
[00144] Excipientes e aditivos farmacêuticos úteis na presente composição incluem, sem limitação, proteínas, peptídeos, aminoácidos, lipídeos e carboidratos (por exemplo, açúcares, incluindo monossacarídeos, di-, tri-, tetra- e oligossacarídeos; açúcares derivatizados, tais como alditóis, ácidos aldônicos, açúcares esterificados e semelhantes; e polissacarídeos ou polímeros de açúcar), que podem estar presentes isoladamente ou em combinação, que compreendem isoladamente ou em combinação 1-99,99% por peso ou volume. Excipientes protéicos exemplares incluem albumina sérica como, por exemplo, albumina sérica humana (HSA), albumina humana recombinante (rHA), gelatina, caseína, e semelhantes. Componentes de aminoácidos/anticorpos representativos que também podem funcionar em termos de tamponamento incluem alanina, glicina, arginina, betaína, histidina, ácido glutâmico, ácido aspártico, cisteína, lisina, leucina, isoleucina, valina, metionina, fenilalanina, aspartame, e semelhantes. Um aminoácido preferido é glicina.
[00145] Excipientes de carboidrato adequados para uso na invenção incluem, por exemplo, monossacarídeos, tais como frutose, maltose, galactose, glicose, D-manose, sorbose, e semelhantes; dissacarídeos, tais como lactose, sacarose, trehalose, celobiose, e semelhantes; polissacarídeos, tais como rafinose, melezitose, maltodextrinas, dextranas, amidos, e semelhantes; e alditóis, tais como manitol, xilitol, maltitol, lactitol, xilitol sorbitol (glucitol), mioinositol e semelhantes. Excipientes de carboidrato preferidos para uso na presente invenção são manitol, trehalose e rafinose.
[00146] As composições de anticorpo anti-IL-6 também podem incluir um tampão ou um agente para ajuste do pH; tipicamente, o tampão é um sal preparado a partir de um ácido ou base orgânica. Tampões representativos incluem sais de ácido orgânico, tais como sais de ácido cítrico, ácido ascórbico, ácido glucônico, ácido carbônico, ácido tartárico, ácido succínico, ácido acético ou ácido ftálico; Tris, cloridrato de trometamina ou tampões fosfato. Tampões preferidos para uso nas presentes composições são sais de ácido orgânico como, por exemplo, citrato.
[00147] Adicionalmente, as composições de anticorpo anti-IL-6 da invenção podem incluir excipientes/aditivos poliméricos, tais como polivinilpirrolidonas, ficóis (um açúcar polimérico), dextratos (por exemplo, ciclodextrinas como, por exemplo, 2-hidroxipropil-β - ciclodextrina), polietileno glicóis, agentes flavorizantes, agentes antimicrobianos, adoçantes, antioxidantes, agentes antiestáticos, tensoativos (por exemplo, polissorbatos, tais como "TWEEN 20" e "TWEEN 80"), lipídeos (por exemplo, fosfolipídeos, ácidos graxos), esteróides (por exemplo, colesterol) e agentes quelantes (por exemplo, EDTA).
[00148] Esses e adicionais excipientes e/ou aditivos farmacêuticos conhecidos adequados para uso nas composições de anticorpo anti IL-6, porção ou variante de acordo com a invenção são conhecidos na técnica, por exemplo, como listados em "Remington: The Science & Practice of Pharmacy", 19a ed., Williams & Williams, (1995) e em "Physician's Desk Reference", 52a ed., Medical Economics, Montvale, NJ (1998), cujas descritos são aqui incorporadas por referência em sua totalidade. Materiais transportadores ou excipientes preferidos são carboidratos (por exemplo, sacarídeos e alditóis) e tampões (por exemplo, citrato) ou agentes poliméricos. Uma molécula transportadora exemplar é o mucopolissacarídeo, ácido hialurônico, que pode ser útil para liberação intra-articular.
Formulações
[00149] Como observado anteriormente, a invenção fornece formulações estáveis, as quais, de preferência, compreendem um tampão fosfato com soro fisiológico ou um sal escolhido, além de soluções e formulações preservadas que contêm um conservante, bem como formulações preservadas multiuso adequadas para uso farmacêutico ou veterinário, que compreendem pelo menos um anticorpo anti-IL-6 em uma formulação farmaceuticamente aceitável. Formulações preservadas contêm pelo menos um conservante conhecido ou opcionalmente selecionado do grupo que consiste em pelo menos um de fenol, m-cresol, p-cresol, o-cresol, clorocresol, álcool benzílico, nitrito fenilmercúrico, fenoxietanol, formaldeído, clorobutanol, cloreto de magnésio (por exemplo, hexahidrato), alquilparabeno (metila, etila, propila, butila e semelhantes), cloreto de benzalcônio, cloreto de benzetônio, desidroacetato de sódio e timerosal, polímeros ou misturas destes em um diluente aquoso. Qualquer concentração ou mistura adequada pode ser usada, como conhecido na técnica como, por exemplo, cerca de 0,0015%, ou qualquer faixa, valor ou fração incluída. Exemplos não-limitantes incluem, sem conservante, cerca de 0,1-2% de m-cresol (por exemplo, 0,2, 0,3, 0,4, 0,5, 0,9, 1,0%), cerca de 0,1-3% de álcool benzílico (por exemplo, 0,5, 0,9, 1,1, 1,5, 1,9, 2,0, 2,5%), cerca de 0,001-0,5% de timerosal (por exemplo, 0,005, 0,01), cerca de 0,001-2,0% de fenol (por exemplo, 0,05, 0,25, 0,28, 0,5, 0,9, 1,0%), 0,0005-1,0% dealquilparabeno(s) (por exemplo, 0,00075, 0,0009, 0,001, 0,002, 0,005, 0,0075, 0,009, 0,01, 0,02, 0,05, 0,075, 0,09, 0,1, 0,2, 0,3, 0,5, 0,75, 0,9, 1,0%), e semelhantes.
[00150] Como observado anteriormente, a invenção fornece um artigo fabricado que compreende um material de embalagem e pelo menos um frasco que compreende uma solução de pelo menos um anticorpo anti-IL-6 com os tampões e/ou conservantes prescritos, opcionalmente em um diluente aquoso, em que o referido material de embalagem compreende um rótulo que indica que essa solução pode ser mantida por um período de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 9, 12, 18, 20, 24, 30, 36, 40, 48, 54, 60, 66, 72 horas ou mais. A invenção ainda compreende um artigo fabricado que compreende material de embalagem, um primeiro frasco que compreende, liofilizado, pelo menos um anticorpo anti-IL-6, e um segundo frasco que compreende um diluente aquoso de tampão ou conservante prescrito, em que o referido material de embalagem compreende um rótulo que instrui o paciente a reconstituir aquele pelo menos um anticorpo anti-IL-6 no diluente aquoso para formar uma solução que pode ser mantida por um período de vinte e quatro horas ou mais.
[00151] Aquele pelo menos um anticorpo anti-IL-6 usado de acordocom a presente invenção pode ser produzido por meios recombinantes, incluindo por preparações de células mamíferas ou transgênicas, ou pode ser purificado a partir de outras fontes biológicas, como aqui descrito ou como conhecido na técnica.
[00152] A faixa de pelo menos um anticorpo anti-IL-6 no produto da presente invenção inclui quantidades que geram, mediante reconstituição, caso em um sistema úmido/seco, concentrações de cerca de 1,0 μg/ml a cerca de 1.000 mg/ml, embora concentrações menores e maiores sejam operáveis e dependam do veículo de liberação desejado; por exemplo, formulações de solução diferirão de emplastro transdérmico, métodos pulmonar, transmucoso ou osmótico ou de microbomba.
[00153] De preferência, o diluente aquoso opcionalmente ainda compreende um conservante farmaceuticamente aceitável. Conservantes preferidos incluem aqueles selecionados do grupo que consiste em fenol, m-cresol, p-cresol, o-cresol, clorocresol, álcool benzílico, alquilparabeno (metila, etila, propila, butila e semelhantes), cloreto de benzalcônio, cloreto de benzetônio, desidroacetato de sódio e timerosal, ou misturas destes. A concentração de conservante usada na formulação é uma concentração suficiente para gerar um efeito antimicrobiano. Tais concentrações dependem do conservante selecionado e são facilmente determinadas por aqueles versados na técnica.
[00154] Outros excipientes, por exemplo, agentes de isotonicidade, tampões, antioxidantes e intensificadores de conservantes, podem ser opcionalmente e, de preferência, adicionados ao diluente. Um agente de isotonicidade como, por exemplo, glicerina, é comumente usado em concentrações conhecidas. De preferência, um tampão fisiologicamente tolerado é adicionado para fornecer um melhor controle do pH. As formulações podem cobrir uma ampla gama de pHs, por exemplo, pH de cerca de 4 a cerca de 10, e faixas preferidas de pH de cerca de 5 a cerca de 9 e, como a faixa mais preferida, pH de cerca de 6,0 a cerca de 8,0. De preferência, as formulações da presente invenção possuem um pH entre cerca de 6,8 e cerca de 7,8. Tampões preferidos incluem tampões fosfato, principalmente, fosfato de sódio, particularmente, soro fisiológico tamponado com fosfato (PBS).
[00155] Outros aditivos, tais como solubilizantes farmaceuticamente aceitáveis como Tween 20 (polioxietileno (20) sorbitano monolaurato), Tween 40 (polioxietileno (20) sorbitano monopalmitato), Tween 80 (polioxietileno (20) sorbitano monooleato), Pluronic F68 (copolímeros em bloco de polioxietileno polioxipropileno) e PEG (polietileno glicol) ou tensoativos não-iônicos, tais como polissorbato 20 ou 80 ou poloxâmero 184 ou 188, polióis Pluronic®, outros copolímeros em bloco e quelantes, tais como EDTA e EGTA, podem opcionalmente ser adicionados às formulações ou composições para reduzir a agregação. Esses aditivos são particularmente úteis caso seja usada uma bomba ou um recipiente plástico para administrar a formulação. A presença de um tensoativo farmaceuticamente aceitável reduz a propensão para que a proteína seja agregada.
[00156] As formulações da presente invenção podem ser preparadas por um processo que compreende a mistura de pelo menos um anticorpo anti-IL-6 e um conservante selecionado do grupo que consiste em fenol, m-cresol, p-cresol, o-cresol, clorocresol, álcool benzílico, alquilparabeno, (metila, etila, propila, butila e semelhantes), cloreto de benzalcônio, cloreto de benzetônio, desidroacetato de sódio e timerosal ou misturas destes em um diluente aquoso. A mistura de pelo menos um anticorpo anti-IL-6 e um conservante em um diluente aquoso é realizada com a utilização de procedimentos convencionais de dissolução e mistura. Para a preparação de uma formulação adequada, por exemplo, uma quantidade medida de pelo menos um anticorpo anti-IL-6 em solução tamponada é combinada com o conservante desejado em uma solução tamponada, em quantidades suficientes para fornecer a proteína e o conservante nas concentrações desejadas. Variações desse processo serão reconhecidas por aqueles versados na técnica. Por exemplo, a ordem em que os componentes são adicionados, se são ou não-utilizados aditivos adicionais, a temperatura e o pH nos quais a formulação é preparada, são todos fatores que podem ser otimizados para a concentração e o meio de administração usados.
[00157] As formulações reivindicadas podem ser fornecidas aospacientes como soluções transparentes ou como dois frascos que compreendem um frasco de pelo menos um anticorpo anti-IL-6 liofilizado que é reconstituído com um segundo frasco contendo água, um conservante e/ou excipientes, de preferência, um tampão fosfato e/ou soro fisiológico, e um sal escolhido, em um diluente aquoso. Tanto um frasco único de solução quanto um frasco duplo que exige reconstituição podem ser reutilizados várias vezes e podem ser suficientes para um único ciclo ou para múltiplos ciclos de tratamento do paciente e, dessa forma, podem permitir um regime de tratamento mais conveniente do que o disponível atualmente.
[00158] Os presentes artigos fabricados reivindicados são úteis para a administração por um período que varia do uso imediato até vinte e quatro horas ou mais. Conseqüentemente, os artigos fabricados presentemente reivindicados oferecem vantagens significativas para o paciente. As formulações da invenção podem opcionalmente ser estocadas com segurança em temperaturas de cerca de 2°C a cerca de 40°C, e retêm a atividade biológica da proteína por períodos de tempo prolongados permitindo, desse modo, um rótulo na embalagem que indica que a solução pode ser mantida e/ou usada por um período de 6, 12, 18, 24, 36, 48, 72, ou 96 horas ou mais. Caso seja usado um diluente preservado, esse rótulo pode incluir o uso por até 1-12 meses, 6 meses, 1 ano e meio e/ou dois anos.
[00159] As soluções de pelo menos um anticorpo anti-IL-6 da invenção podem ser preparadas por um processo que compreende a mistura de pelo menos um anticorpo em um diluente aquoso. A mistura é realizada com a utilização de procedimentos convencionais de dissolução e mistura. Para a preparação de um diluente adequado, por exemplo, uma quantidade medida de pelo menos um anticorpo em água ou tampão é combinada em quantidades suficientes para fornecer a proteína e, opcionalmente, um conservante ou um tampão nas concentrações desejadas. Variações desse processo serão reconhecidas por aqueles versados na técnica. Por exemplo, a ordem em que os componentes são adicionados, se são ou não usados aditivos adicionais, a temperatura e o pH nos quais a formulação é preparada, são todos fatores que podem ser otimizados para a concentração e para o meio de administração usados.
[00160] Os produtos reivindicados podem ser fornecidos aos pacientes como soluções transparentes ou como dois frascos que compreendem um frasco de pelo menos um anticorpo anti-IL-6 liofilizado que é reconstituído com um segundo frasco que contém o diluente aquoso. Tanto um frasco único de solução quanto um frasco duplo que exige reconstituição podem ser reutilizados várias vezes e podem ser suficientes para um único ciclo ou para múltiplos ciclos de tratamento do paciente e, dessa forma, podem permitir um regime de tratamento mais conveniente do que o disponível atualmente.
[00161] Os produtos reivindicados podem ser fornecidos indiretamente aos pacientes através de farmácias, clínicas ou outras instituições e instalações, como soluções transparentes ou dois frascos que compreendem um frasco de pelo menos um anticorpo anti-IL-6 liofilizado que é reconstituído com um segundo frasco que contém o diluente aquoso. A solução transparente, nesse caso, pode ter um volume de até um litro ou mais, fornecendo um grande reservatório do qual porções menores da solução de pelo menos um anticorpo podem ser retiradas uma ou várias vezes para transferência para frascos menores e fornecidas pela farmácia ou clínica aos seus clientes e/ou pacientes.
[00162] Dispositivos reconhecidos que compreendem sistemas de frasco único incluem dispositivos com injetor em caneta para liberação de uma solução, tais como BD Pens, BD Autojector®, Humaject®, NovoPen®, B-D®Pen, AutoPen®, e OptiPen®, GenotropinPen®, Genotronorm Pen®, Humatro Pen®, Reco-Pen®, Roferon Pen®, Biojector®, Iject®, J-tip Needle- Free Injector®, Intraject®, Medi-Ject®, por exemplo, como feitos ou desenvolvidos por Becton Dickensen (Franklin Lakes, NJ, www.bectondickenson.com), Disetronic (Burgdorf, Suíça, www.disetronic.com; Bioject, Portland, Oregon(www.bioject.com); National Medical Products, Weston Medical (Peterborough, UK, www.westonmedical.com), Medi-Ject Corp (Minneapolis, MN, www. mediject.com), e dispositivos similarmente adequados. Dispositivos reconhecidos que compreendem um sistema de dois frascos incluem aqueles sistemas com injetor em caneta para reconstituição de um fármaco liofilizado em um cartucho para liberação da solução reconstituída como, por exemplo, o HumatroPen®. Exemplos de outros dispositivos adequados incluem seringas pré- preenchidas, auto-injetores, injetores sem agulha e conjuntos de infusão IV sem agulha.
[00163] Os produtos presentemente reivindicados incluem material de embalagem. O material de embalagem fornece, além das informações necessárias pelos órgãos reguladores, as condições sob as quais o produto pode ser usado. O material de embalagem da presente invenção fornece instruções para o paciente para reconstituir o pelo menos um anticorpo anti-IL-6 no diluente aquoso para formar uma solução e para usar a solução por um período de 2-24 horas ou mais para o produto de dois frascos, úmido/seco. Para o produto de solução de frasco único, o rótulo indica que essa solução pode ser usada por um período de 2-24 horas ou mais. Os produtos presentemente reivindicados são úteis para uso humano do produto farmacêutico.
[00164] As formulações da presente invenção podem ser preparadas por um processo que compreende a mistura de pelo menos um anticorpo anti-IL-6 e um tampão selecionado, de preferência, soro fisiológico contendo tampão fosfato ou um sal escolhido. A mistura de pelo menos um anticorpo anti-IL-6 e tampão em um diluente aquoso é realizada com a utilização de procedimentos convencionais de dissolução e mistura. Para a preparação de uma formulação adequada, por exemplo, uma quantidade medida de pelo menos um anticorpo em água ou tampão é combinada com o agente de tamponamento desejado em água, em quantidades suficientes para fornecer a proteína e o tampão nas concentrações desejadas.Variações desse processo serão reconhecidas por aqueles versados na técnica. Por exemplo, a ordem em que os componentes sãoadicionados, se são ou não usados aditivos adicionais, a temperatura e o pH nos quais a formulação é preparada, são todos fatores quepodem ser otimizados para a concentração e para o meio deadministração usados.
[00165] As formulações estáveis ou preservadas reivindicadas podem ser fornecidas aos pacientes como soluções transparentes ou como dois frascos que compreendem um frasco de pelo menos um anticorpo anti-IL-6 liofilizado que é reconstituído com um segundo frasco que contém um conservante ou tampão e excipientes em um diluente aquoso. Tanto um frasco único de solução quanto um frasco duplo que exige reconstituição podem ser reutilizados várias vezes e podem ser suficientes para um único ciclo ou para múltiplos ciclos de tratamento do paciente e, dessa forma, podem permitir um regime de tratamento mais conveniente do que o disponível atualmente.
[00166] Outras formulações ou métodos de estabilização do anticorpo anti-IL-6 podem resultar em algo diferente de uma solução transparente de pó liofilizado que compreende o anticorpo. Dentre as soluções não-transparentes estão formulações que compreendem suspensões particuladas, as referidas substâncias particuladas sendo uma composição que contém o anticorpo anti-IL-6 em uma estrutura de dimensão variável e conhecida diversamente como microesfera, micropartícula, nanopartícula, nanosfera ou lipossomo. Essas formulações particuladas relativamente homogêneas, essencialmente esféricas, contendo um agente ativo, podem ser formadas pelo contato de uma fase aquosa que contém o agente ativo e um polímero e uma fase não aquosa, seguida por evaporação da fase não aquosa até causar a coalescência de partículas da fase aquosa, como ensinado na Patente U.S. N° 4.589.330. Micropartículas porosas podem ser preparadas com o uso de uma primeira fase contendo agente ativo e um polímero disperso em um solvente contínuo, e remoção do referido solvente da suspensão por liofilização ou diluição-extração- precipitação, como ensinado na Patente U.S. N° 4.818.542. Polímeros preferidos para tais preparações são copolímeros ou polímeros naturais ou sintéticos selecionados do grupo que consiste em gelatina, ágar, amido, arabinogalactana, albumina, colágeno, ácido poliglicólico, ácido polilático, glicolida-L(-)lactida poli(épsilon-caprolactona),poli(épsilon-caprolactona-CO-ácido lático), poli(épsilon-caprolactona- CO-ácido glicólico), poli(ácido β-hidr0xi butírico), óxido de polietileno, polietileno, poli(alquil-2-cianoacrilato), poli(metacrilato de hidroxietila), poliamidas, poli(aminoácidos), poli(2-hidroxietil DLaspartamida), poli(éster uréia), poli(L-fenilalanina/etileno glicol/1,6--diisocianatohexano) e poli(metacrilato de metila). Polímeros particularmente preferidos são poliésteres, tais como ácido poliglicólico, ácido polilático, glicolideo-L(-)lactídeo, poli(épsilon- caprolactona), poli(épsilon-caprolactona-CO-ácido lático) epoli(épsilon-caprolactona-CO-ácido glicólico). Solventes úteis para a dissolução do polímero e/ou do agente ativo incluem: água, hexafluorisopropanol, cloreto de metileno, tetrahidrofurano, hexano, benzeno ou sesquihidrato de hexafluoracetona. O processo de dispersão da fase que contém o agente ativo com uma segunda fase pode incluir forçar sob pressão a referida primeira fase através de um orifício em um bocal para induzir a formação de gotículas.
[00167] Formulações de pó seco podem ser produzidas por outros processos que não a liofilização, por exemplo, por secagem por atomização ou extração de solvente por evaporação ou por precipitação de uma composição cristalina, seguida por uma ou mais etapas para a remoção de solvente aquoso ou não aquoso. A preparação de uma preparação de anticorpo por secagem por atomização é ensinada na Patente U.S. N° 6.019.968. As composições de pó seco baseadas em anticorpo podem ser produzidas pela secagem por atomização de soluções ou misturas do anticorpo e, opcionalmente, excipientes, em um solvente sob condições que forneçam um pó seco respirável. Os solventes podem incluir compostos polares, tais como água e etanol, que podem ser facilmente secos. A estabilidade do anticorpo pode ser aumentada realizando-se os procedimentos de secagem por atomização na ausência de oxigênio como, por exemplo, sob uma manta de nitrogênio ou com o uso de nitrogênio como o gás secante. Outra formulação relativamente seca é uma dispersão de diversas microestruturas perfuradas dispersas em um meio de suspensão que tipicamente compreende um propelente de hidrofluoralcano, como ensinado em WO 9916419. As dispersões estabilizadas podem ser administradas ao pulmão de um paciente com a utilização de um inalador de dose metrificada. Equipamentos úteis na fabricação comercial de medicamentos secos por vaporização são produzidos por Buchi Ltd. ou Niro Corp.
[00168] Pelo menos um anticorpo anti-IL-6 nas formulações ou soluções tanto estáveis quanto preservadas aqui descritas pode ser administrado a um paciente de acordo com a presente invenção através de diversos métodos de liberação incluindo injeção subcutânea (SC) ou intramuscular (IM); administração transdérmica, pulmonar, transmucosa, por implante, bomba osmótica, cartucho, microbomba ou por outros meios observados por aqueles versados na técnica, como é bem-conhecido na técnica.
Aplicações terapêuticas
[00169] A presente invenção também fornece um método para amodulação ou o tratamento de pelo menos uma doença relacionada à IL-6 em uma célula, tecido, órgão, animal, ou paciente, como é conhecido na técnica ou como aqui descrito, usando pelo menos um anticorpo IL-6 da presente invenção, por exemplo, por administração ou contato da célula, tecido, órgão, animal ou paciente com uma quantidade terapêutica eficaz de anticorpo IL-6. A presente invenção também fornece um método para a modulação ou o tratamento de pelo menos uma doença relacionada à IL-6 em uma célula, tecido, órgão, animal ou paciente incluindo, sem limitação, pelo menos um dentre obesidade, uma doença relacionada ao sistema imunológico, uma doença cardiovascular, uma doença infecciosa, uma doença maligna ou uma doença neurológica.
[00170] A presente invenção também fornece um método para a modulação ou o tratamento de pelo menos uma doença relacionada ao sistema imunológico relacionada à IL-6, em uma célula, tecido, órgão, animal ou paciente incluindo, sem limitação, pelo menos um de artrite reumatóide, artrite reumatóide juvenil, artrite reumatóide juvenil de surgimento sistêmico, artrite psoriática, espondilite anquilosante, úlcera gástrica, artropatias soro-negativas, osteoartrite, osteólise, deslocamento asséptico de implantes ortopédicos, doença inflamatória do intestino, colite ulcerativa, lúpus eritematoso sistêmico, lúpus eritematoso cutâneo, nefrite lúpica, síndrome antifosfolipídeo, iridociclite/uveíte/neurite óptica, fibrose pulmonar idiopática, vasculite sistêmica/granulomatose de Wegener, sarcoidose,orquite/procedimentos de reversão de vasectomia, doenças alérgicas/atópicas, asma, rinite alérgica, eczema, dermatite alérgica de contato, conjuntivite alérgica, pneumonite por hipersensibilidade, transplantas, rejeição órgãos transplantados, doença enxerto versus hospedeiro, síndrome de resposta inflamatória sistêmica, síndrome séptica, sépsis por gram-positivos, sépsis por gram-negativos, sépsis com cultura negativa, sépsis fúngica, febre neutropênica, urosépsis, meningococcemia, trauma/hemorragia, queimaduras, exposição à radiação ionizante, pancreatite aguda, síndrome do sofrimento respiratório do adulto, artrite reumatóide, hepatite induzida por álcool, patologias inflamatórias crônicas, sarcoidose, doença de Crohn, anemia falciforme, diabetes, nefrose, doenças atópicas, reações de hipersensibilidade, rinite alérgica, febre do feno, rinite perene, conjuntivite, endometriose, asma, urticária, anafilaxia sistêmica, dermatite, anemia perniciosa, doença hemolítica, trombocitopenia, rejeição a enxerto de qualquer órgão ou tecido, rejeição a transplante renal, rejeição a transplante cardíaco, rejeição a transplante hepático, rejeição a transplante do pâncreas, rejeição a transplante de pulmão, rejeição a transplante de medula óssea (BMT), rejeição a aloenxerto de pele, rejeição a transplante de cartilagem, rejeição a enxerto ósseo, rejeição a transplante do intestino delgado, rejeição ao implante de timo fetal, rejeição a transplante de paratireóide, rejeição de xenoenxerto de qualquer órgão ou tecido, rejeição de aloenxerto, reações de hipersensibilidade anti-receptor, doença de Graves, doença de Raynaud, diabetes do tipo B resistente à insulina, asma, miastenia gravis, citotoxicidade mediada por anticorpos, reações de hipersensibilidade do tipo III, síndrome POEMS (polineuropatia, visceromegalia, endocrinopatia, gamopatia monoclonal e síndrome de alterações cutâneas), polineuropatia, visceromegalia, endocrinopatia, gamopatia monoclonal, síndrome de alterações cutâneas, síndrome antifosfolipídeo, pênfigo, esclerodermia, doença mista do tecido conjuntivo, doença idiopática de Addison, diabetes melito, hepatite crônica ativa, cirrose biliar primária, vitiligo, vasculite, síndrome de cardiotomia pós-MI, hipersensibilidade do tipo IV, dermatite de contato, pneumonite por hipersensibilidade, rejeição a aloenxerto, granulomas causados por organismos intracelulares, sensibilidade a fármacos, metabólica/idiopática, doença de Wilson, hemocromatose, deficiência de anti-tripsina alfa-1, retinopatia diabética, tireoidite de Hashimoto, osteoporose, avaliação do eixo hipotalâmico-hipófise-adrenal, cirrose biliar primária, tireoidite, encefalomielite, caquexia, fibrose cística, doença pulmonar neonatal crônica, doença pulmonar obstrutiva crônica (DPOC), linfo-histiocitose hematofagocítica familiar, condições dermatológicas, psoríase, alopecia, síndrome nefrótica, nefrite, nefrite glomerular, insuficiência renal aguda, hemodiálise, uremia, toxicidade, pré-eclampsia, terapia com okt3, terapia anti-cd3, terapia com citocina, quimioterapia, radioterapia (por exemplo, incluindo, sem limitação, astenia, anemia, caquexia, e semelhantes), intoxicação crônica por salicilato, e semelhantes. Veja, por exemplo, "The Merck Manual", 12a- 17a Edições, Merck & Company, Rahway, NJ (1972, 1977, 1982, 1987, 1992, 1999), "Pharmacotherapy Handbook", Wells e al., eds., Segunda Edição, Appleton e Lange, Stamford, Conn. (1998, 2000), cada um deles aqui incorporado por referência em sua totalidade.
[00171] A presente invenção também fornece um método para a modulação ou o tratamento de pelo menos uma doença cardiovascular em uma célula, tecido, órgão, animal ou paciente, incluindo, sem limitação, pelo menos um de síndrome de parada cardíaca, infarto do miocárdio, insuficiência cardíaca congestiva, acidente vascular cerebral, acidente vascular cerebral isquêmico, hemorragia, síndrome coronária aguda, arteriosclerose, aterosclerose, re-estenose, doença aterosclerótica diabética, hipertensão, hipertensão arterial, hipertensão renovascular, síncope, choque, sífilis do sistema cardiovascular, insuficiência cardíaca, cor pulmonale, hipertensão pulmonar primária, arritmias cardíacas, batimentos atriais ectópicos, flutter atrial, fibrilação atrial (sustentada ou paroxística), síndrome pós-perfusão, resposta inflamatória ao desvio cardiopulmonar, taquicardia atrial caótica ou multifocal, taquicardia regular com QRS estreito, arritmias específicas, fibrilação ventricular, arritmias do feixe de His, bloqueio atrioventricular, bloqueio de ramo do feixe, distúrbios miocárdicos isquêmicos, doença arterial coronariana, angina do peito, infarto do miocárdio, cardiomiopatia, cardiomiopatia congestiva dilatada, cardiomiopatia restritiva, doenças cardíacas valvulares, endocardite, doença pericárdicas, tumores cardíacos, aneurismas aórticos e periféricos, dissecção aórtica, inflamação da aorta, oclusão da aorta abdominal e seus ramos, distúrbios vasculares periféricos, distúrbios arteriais oclusivos, doença aterosclerótica periférica, tromboangite obliterante, distúrbios arteriais funcionais periféricos, fenômeno e doença de Raynaud, acrocianose, eritromelalgia, doenças venosas, trombose venosa, veias varicosadas, fístula arteriovenosa, linfedema, lipedema, angina instável, lesão por reperfusão, síndrome pós-bomba, lesão por isquemia-reperfusão, e semelhantes. Um método como esse pode compreender a administração de uma quantidade eficaz de uma composição ou composição farmacêutica que compreende pelo menos um anticorpo anti-IL-6 a uma célula, tecido, órgão, animal ou paciente que necessita de tal modulação, tratamento ou terapia.
[00172] A presente invenção também fornece um método para a modulação ou o tratamento de pelo menos uma doença infecciosa relacionada à IL-6 em uma célula, tecido, órgão, animal ou paciente, incluindo, sem limitação, pelo menos um de: infecção bacteriana aguda ou crônica, processos parasitários ou infecciosos agudos e crônicos, incluindo infecções bacterianas, virais e fúngicas, infecção por HIV/neuropatia por HIV, meningite, hepatite (por exemplo, A, B ou C, ou semelhantes), artrite séptica, peritonite, pneumonia, epiglotite, E. coli 0157:h7, síndrome hemolítica urêmica/púrpura trombocitopênica trombolítica, malária, febre da dengue hemorrágica, leishmaniose, lepra, síndrome de choque toxêmico, miosite estreptocócica, gangrena gasosa, tuberculose por micobactéria, Mycobacterium avium intracelular, pneumonia por Pneumocystis carinii, doença inflamatória pélvica, orquite/epididimite, legionela, doença de Lyme, influenza A, vírus de Epstein-Barr, síndrome hemofagocítica com associação viral, encefalite viral/meningite asséptica, e semelhantes.
[00173] A presente invenção também fornece um método para a modulação ou o tratamento de pelo menos uma doença maligna relacionada à IL-6 em uma célula, tecido, órgão, animal ou paciente, incluindo, sem limitação, pelo menos um de: leucemia, leucemia aguda, leucemia linfoblástica aguda (ALL), leucemia linfocítica aguda, ALL de células B, células T ou FAB, leucemia mielóide aguda (AML), leucemia mielógena aguda, leucemia mielocítica crônica (CML), leucemia linfocítica crônica (CLL), leucemia de célula pilosa, síndrome mielodisplásica (MDS), um linfoma, doença de Hodgkin, um linfoma maligno, linfoma não-Hodgkin, linfoma de Burkitt, mieloma múltiplo, sarcoma de Kaposi, carcinoma cólon-retal, carcinoma pancreático, carcinoma nasofaríngeo, histiocitose maligna, síndromeparaneoplásica/hipercalcemia da malignidade, tumores sólidos, câncer de bexiga, câncer de mama, câncer cólon-retal, câncer endometrial, câncer da cabeça, câncer do pescoço, câncer não-polipose hereditário, linfoma de Hodgkin, câncer hepático, câncer do pulmão, câncer do pulmão de célula não pequena, câncer de ovário, câncer pancreático, câncer de próstata, carcinoma de células renais, câncer testicular, adenocarcinomas, sarcomas, melanoma maligno, hemangioma, doença metastática, reabsorção óssea relacionada ao câncer, dor óssea relacionada ao câncer, e semelhantes.
[00174] A presente invenção também fornece um método para a modulação ou o tratamento de pelo menos uma doença neurológica relacionada à IL-6 em uma célula, tecido, órgão, animal ou paciente, incluindo, sem limitação, pelo menos um de: doençasneurodegenerativas, esclerose múltipla, enxaqueca, complexo demencial da AIDS, doenças desmielinizantes, tais como esclerose múltipla e mielite transversa aguda; distúrbios extrapiramidal e cerebelares, tais como lesões do sistema corticospinal; distúrbios dos gânglios da base; distúrbios de movimentos hipercinéticos, tais como coréia de Huntington e coréia senil; distúrbios do movimento induzidos por fármacos, tais como aqueles induzidos por fármacos que bloqueiam os receptores de dopamina do SNC; distúrbios de movimentos hipocinéticos como, por exemplo, doença de Parkinson; paralisia supra-núcleo progressiva; lesões estruturais do cerebelo; degenerações espinocerebelares, tais como ataxia espinhal, ataxia de Friedreich, degenerações cerebelares corticais, degenerações de múltiplos sistemas (Mencel, Dejerine-Thomas, Shi-Drager e Machado- Joseph); distúrbios sistêmicos (doença de Refsum, abetalipoprotemia, ataxia, telangiectasia e distúrbio mitocondrial multissistêmico); distúrbios centrais desmielinizantes, tais como esclerose múltipla, mielite transversa aguda; e distúrbios da unidade motora, tais como atrofias musculares neurogênicas (degeneração da célula do corno anterior como, por exemplo, esclerose lateral amiotrófica, atrofia muscular espinhal infantil e atrofia muscular espinhal juvenil); doença de Alzheimer; síndrome de Down na meia idade; doença difusa do corpo de Lewy; demência senil do tipo corpo de Lewy; síndrome de Wernicke-Korsakoff; alcoolismo crônico; doença de Creutzfeldt-Jakob; panencefalite esclerosante subaguda, doença de Hallerrorden-Spatz; demência pugilística; lesão neurotraumática (por exemplo, lesão medular, lesão cerebral, concussão, concussão repetitiva); dor; dor inflamatória; autismo; depressão; acidente vascular cerebral; distúrbios cognitivos; epilepsia; e semelhantes. Um método como esse pode opcionalmente compreender a administração de uma quantidade eficaz de uma composição ou composição farmacêutica que compreende pelo menos um anticorpo TNF ou porção especificada ou variante a uma célula, tecido, órgão, animal ou paciente que necessita de tal modulação, tratamento ou terapia. Veja, por exemplo, "The Merck Manual", 16a Edição, Merck & Company, Rahway, NJ (1992).
[00175] A presente invenção também fornece um método para a modulação ou o tratamento de pelo menos uma ferida, trauma ou lesão tecidual ou condição crônica associada relacionadas à IL-6, em uma célula, tecido, órgão, animal ou paciente, incluindo, sem limitação, pelo menos um de: lesão corpórea ou um trauma associado à cirurgia oral incluindo cirurgia periodontal, extração(s) dentária, tratamento endodôntico, inserção de implantes dentários, aplicação e uso de próteses dentárias; ou em que a ferida é selecionada do grupo que consiste em feridas assépticas, feridas contusas, feridas incisas, feridas laceradas, feridas não penetrantes, feridas abertas, feridas penetrantes, feridas perfurantes, feridas puntiformes, feridas sépticas, infartos e feridas subcutâneas; ou em que a ferida é selecionada do grupo que consiste em úlceras isquêmicas, ulcerações por pressão, fístulas, mordidas graves, queimaduras térmicas e feridas do sítio doador; ou em que a ferida é uma ferida aftosa, uma ferida traumática ou uma ferida associada ao herpes.
[00176] Feridas e/ou úlceras são normalmente encontradas fazendo protrusão a partir da pele ou em uma superfície mucosa, ou como resultado de um infarto em um órgão ("acidente vascular cerebral"). Uma ferida pode ser resultado de um defeito de um tecido mole ou uma lesão de uma condição subjacente. No presente contexto, o termo "pele" relaciona-se à superfície mais externa do corpo de um animal, incluindo um ser humano, e engloba a pele intacta ou quase intacta, além de uma superfície cutânea lesionada. O termo "mucosa" relaciona-se à mucosa não danificada ou danificada de um animal, por exemplo, um ser humano, e pode ser a mucosa oral, bucal, aural, nasal, pulmonar, ocular, gastrointestinal, vaginal ou retal.
[00177] No presente contexto, o termo "ferida" denota uma lesão corpórea com ruptura da integridade normal de estruturas teciduais. O termo também visa a englobar os termos "ulceração", "lesão", "necrose" e "úlcera." Normalmente, o termo "ulceração" é um termo popular para quase todas as lesões da pele ou de membranas mucosas, e o termo "úlcera" é um defeito local, ou escavação, da superfície de um órgão ou tecido, que é produzido pela remoção de tecido necrótico. Lesão geralmente relaciona-se a qualquer defeito tecidual. Necrose está relacionada a tecido morto em conseqüência de infecção, lesão, inflamação ou infartos.
[00178] O termo "ferida" usado no presente contexto denota qualquer ferida (veja abaixo uma classificação de feridas) e em qualquer estágio em particular no processo de cicatrização, incluindo o estágio anterior ao início de qualquer cicatrização, ou até mesmo antes de uma ferida específica, por exemplo, uma incisão cirúrgica, ser feita (tratamento profilático). Exemplos de feridas que podem ser evitadas e/ou tratadas de acordo com a presente invenção são, por exemplo, feridas assépticas, feridas contusas, feridas incisas, feridas laceradas, feridas não penetrantes (ou seja, feridas nas quais não há ruptura da pele, mas há lesão às estruturas subjacentes), feridas abertas, feridas penetrantes, feridas perfurantes, feridas puntiformes, feridas sépticas, feridas subcutâneas etc. Exemplos de ulcerações são ulcerações de decúbito, ulcerações do câncer, ulcerações crômicas, ulcerações pelo frio, ulcerações por pressão etc. Exemplos de úlceras são, por exemplo, uma úlcera péptica, úlcera duodenal, úlcera gástrica, úlcera da gota, úlcera diabética, úlcera isquêmica hipertensiva, úlcera de estase, ulcus cruris (úlcera venosa), úlcera sublingual, úlcera submucosa, úlcera sintomática, úlcera trófica, úlcera tropical e úlcera venérea, por exemplo, causada por gonorréia (incluindo uretrite, endocervicite e proctite). Condições relacionadas às feridas ou ulcerações que podem ser tratadas com sucesso de acordo com a invenção são queimaduras, antraz, tétano, gangrena gasosa, escarlatina, erisipela, sicose da barba, foliculite, impetigo contagioso, ou impetigo bolhoso etc. Há freqüentemente a certa superposição entre o uso dos termos "ferida" e "úlcera" e "ferida" e "ulceração" e, além disso, os termos são usados freqüentemente de forma aleatória. Portanto, como mencionado anteriormente, no presente contexto, o termo "ferida" engloba os termos "úlcera", "lesão", "ulceração" e "infarto", e os termos são usados indiscriminadamente, a menos que seja indicado de forma diferente.
[00179] Os tipos de feridas a serem tratadas de acordo com a invenção também incluem: (i) feridas gerais, tais como, por exemplo, feridas cirúrgicas, traumáticas, infecciosas, isquêmicas, térmicas, químicas e bolhosas; (ii) feridas específicas para a cavidade oral, tais como, por exemplo, feridas pós-extração, feridas endodônticas, especialmente em relação ao tratamento de cistos e abscessos, úlceras e lesões de origem bacterianas, viral ou auto-imune, mecânicas, químicas, térmicas, infecciosas e liquenóides; úlceras herpéticas, estomatite aftosa, gengivite ulcerativa necrotizante aguda e síndrome da boca ardente são exemplos específicos; e (iii) feridas na pele, tais como, por exemplo, neoplasias, queimaduras (por exemplo químicas, térmicas), lesões (bacterianas, virais, auto-imunes), mordidas e incisões cirúrgicas. Outra forma de classificar as feridas é como: (i) pequena perda de tecido causada por incisões cirúrgicas, pequenas abrasões e pequenas mordidas, ou como (ii) perda significativa de tecido. Esse último grupo inclui úlceras isquêmicas, ulcerações por pressão, fístulas, lacerações, mordidas graves, queimaduras térmicas e feridas do sítio doador (em tecidos moles e sólidos) e infartos.
[00180] Outras feridas que são de importância em relação à presente invenção são feridas como úlceras isquêmicas, ulcerações por pressão, fístulas, mordidas graves, queimaduras térmicas e feridas do sítio doador. Úlceras isquêmicas e ulcerações por pressão são feridas que normalmente só cicatrizam muito lentamente e, especialmente nesses casos, um processo de cicatrização aprimorado e mais rápido é, evidentemente, de grande importância para o paciente. Além disso, os custos envolvidos no tratamento de pacientes que sofrem dessas feridas são acentuadamente reduzidos quando a cicatrização é aprimorada e ocorre mais rapidamente.
[00181] Feridas do sítio doador são feridas que ocorrem, por exemplo, em relação à remoção do tecido sólido de uma parte do corpo para outra parte do corpo, por exemplo, em relação aos transplantes. As feridas que resultam dessas operações são muito dolorosas e uma cicatrização aprimorada é, portanto, muito importante. O termo "pele" é usado em um sentido muito amplo, que engloba a camada epitelial da pele, nos casos onde a superfície da pele é mais ou menos danificada, e também a camada dérmica da pele. Com exceção do estrato córneo, a camada epidérmica da pele é a camada mais externa (epitelial) e a camada mais profunda de tecido conjuntivo da pele é chamada derme.
[00182] A presente invenção também fornece um método para a modulação ou o tratamento de osteoartrite, lúpus eritematoso sistêmico, lúpus eritematoso cutâneo, nefrite lúpica, diabetes melito do tipo II, e distúrbio pulmonar obstrutivo crônico, dentre outras doenças listadas acima como relacionadas à IL-6, em uma célula, tecido, órgão, animal ou paciente incluindo, sem limitação, pelo menos um entre uma doença relacionada ao sistema imunológico, doença cardiovascular, doença infecciosa, maligna e/ou neurológica. Um método como esse pode opcionalmente compreender a administração de uma quantidade eficaz de pelo menos uma composição ou composição farmacêutica que compreende pelo menos um anticorpo anti-IL-6 a uma célula, tecido, órgão, animal ou paciente que necessita de tal modulação, tratamento ou terapia.
[00183] Qualquer método da presente invenção pode compreender a administração de uma quantidade eficaz de uma composição ou composição farmacêutica que compreende pelo menos um anticorpo anti-IL-6 a uma célula, tecido, órgão, animal ou paciente que necessita de tal modulação, tratamento ou terapia. Um método como esse pode opcionalmente ainda compreender a co-administração ou terapia de combinação para o tratamento dessas doenças ou distúrbios, em que a administração do referido pelo menos um anticorpo anti-IL-6, porção especificada ou variante deste, ainda compreende a administração, antes, concomitantemente e/ou depois, de pelo menos um selecionado de pelo menos um antagonista de TNF (por exemplo, sem limitação, um antagonista de TNF químico ou protéico, anticorpo TNF monoclonal ou policlonal ou fragmento, um receptor solúvel de TNF (por exemplo, p55, p70 ou p85) ou fragmento, polipeptídeos de fusão destes, ou um antagonista de TNF de pequena molécula, por exemplo, proteína de ligação de TNF I ou II (TBP-I ou TBP-II), nerelimonmab, infliximab, etanercept (Enbrel®), adalimulab (Humira®), CDP-571, CDP- 870, afelimomab, lenercept, e semelhantes), um anti-reumático (por exemplo, metotrexato, auranofina, aurotioglicose, azatioprina, tiomalato de ouro sódico, sulfato de hidroxicloroquina, leflunomida, sulfasalazina), um relaxante muscular, um narcótico, um fármaco antiinflamatório não-esteróide (NSAID), um analgésico, um anestésico, um sedativo, um anestésico local, um bloqueador neuromuscular, um antimicrobiano (por exemplo, aminoglicosídeo, um antifúngico, um antiparasitário, um antiviral, um carbapenem, uma cefalosporina, uma fluorquinolona, um macrolídeo, uma penicilina, uma sulfonamida, uma tetraciclina, outro antimicrobiano), um antipsoriático, um corticosteróide, um esteróide anabólico, um agente relacionado ao diabetes, um mineral, um nutritivo, um agente da tireóide, uma vitamina, um hormônio relacionado ao cálcio, um antidiarréico, um antitussígeno, um antiemético, um antiulceroso, um laxante, um anticoagulante, uma eritropoietina (por exemplo, epoetina alfa), uma filgrastima (por exemplo, G-CSF, Neupogen), uma sargramostima (GM-CSF, Leukine), uma imunização, uma imunoglobulina, um imunossupressor (por exemplo, basiliximab, ciclosporina, daclizumab), um hormônio do crescimento, um fármaco de reposição hormonal, um modulador do receptor de estrogênio, um midriático, um cicloplégico, um agente alquilante, um antimetabólito, um inibidor mitótico, uma substância farmacêutica radioativa, um antidepressivo, agente antimaníaco, um antipsicótico, um ansiolítico, um hipnótico, um simpaticomimético, um estimulante, donepezil, tacrina, uma medicação para asma, um agonista beta, um esteróide inalado, um inibidor de leucotrieno, uma metilxantina, uma cromolina, uma epinefrina ou análogo, dornase alfa (Pulmozyme), uma citocina ou um antagonista de citocina. Dosagens adequadas são bem-conhecidas na técnica. Veja, por exemplo, Wells e al., eds., "Pharmacotherapy Handbook", 2a Edição, Appleton e Lange, Stamford, CT (2000); "PDR Pharmacopoeia", "Tarascon Pocket Pharmacopoeia 2000", Edição de luxo, Tarascon Publishing, Loma Linda, CA (2000); "Nursing 2001 Handbook of Drugs", 21a edição, Springhouse Corp., Springhouse, PA, 2001; "Health Professional’s Drug Guide" 2001, ed., Shannon, Wilson, Stang, Prentice-Hall, Inc, Upper Saddle River, NJ. Cada uma dessas referências é aqui incorporada por referência em sua totalidade.
[00184] Antagonistas de TNF adequados para as composições, terapia de combinação, co-administração, dispositivos e/ou métodos da presente invenção (que ainda compreendem pelo menos um anticorpo, porção especificada e variante deste, da presente invenção), incluem, sem limitação, anticorpos anti-TNF (por exemplo, pelo menos um antagonista de TNF como definido acima), fragmentos de ligação de antígeno destes, e moléculas de receptor que se ligam especificamente ao TNF; compostos que evitam e/ou inibem a síntese de TNF, liberação de TNF ou sua ação sobre células-alvo, tais como talidomida, tenidap, inibidores da fosfodiesterase (por exemplo, pentoxifilina e rolipram), agonistas do receptor de adenosina A2b e intensificadores do receptor de adenosina A2b; compostos que evitam e/ou inibem a sinalização do receptor de TNF, tais como inibidores da proteína (MAP) quinase ativados por mitógeno; compostos que bloqueiam e/ou inibem a clivagem de TNF da membrana como, por exemplo, inibidores da metaloproteinase; compostos que bloqueiam e/ou inibem a atividade de TNF como, por exemplo, inibidores da enzima conversora de angiotensina (ACE) (por exemplo, captopril); e compostos que bloqueiam e/ou inibem a produção e/ou síntese de TNF como, por exemplo, inibidores da MAP quinase.
[00185] Como aqui usado, um "anticorpo de fator de necrosetumoral", "anticorpo TNF", "anticorpo TNFa", ou fragmento e semelhantes, diminui, bloqueia, inibe, anula ou interfere com a atividade de TNFα in vitro, in situ e/ou, de preferência, in vivo. Por exemplo, um anticorpo TNF humano adequado da presente invenção pode se ligar ao TNFα e inclui anticorpos anti-TNF, fragmentos de ligação de antígeno destes, e mutantes ou domínios especificados destes que se ligam especificamente ao TNFα. Um anticorpo TNF ou fragmento adequado também pode diminuir, bloquear, anular, interferir, evitar e/ou inibir RNA de TNF, DNA ou síntese de proteína, liberação de TNF, receptor de sinalização de TNF, clivagem de TNF de membrana, atividade de TNF, produção e/ou síntese de TNF.
[00186] Um exemplo de um anticorpo ou antagonista de TNF é o anticorpo quimérico cA2. Exemplos adicionais de anticorpos monoclonais anti-TNF que podem ser usados na presente invenção são descritos na técnica (veja, por exemplo, Patente U.S. N° 5.231.024; Moller, A. e al., Cytokine 2(3): 162-169 (1990); Pedido U.S. N° 07/943.852 (depositado em 11 de setembro de 1992); Rathjen e al., Publicação Internacional N° WO 91/02078 (publicado em 21 de fevereiro de 1991); Rubin e al., Publicação de Patente EPO N° 0 218 868 (publicado em 22 de abril de 1987); Yone e al., Publicação de Patente EPO N° 0 288 088 (26 de outubro de 1988); Liang, e al., Biochem. Biophys. Res. Comm. 137: 847-854 (1986); Meager, e al., Hybridoma 6: 305-311 (1987); Fendly e al., Hybridoma 6: 359-369(1987); Bringman, e al., Hybridoma 6: 489-507 (1987); e Hirai, e al., J. Immunol. Meth. 96: 57-62 (1987)).
Moléculas receptoras de TNF
[00187] Moléculas receptoras de TNF preferidas úteis na presente invenção são aquelas que se ligam ao TNFα com alta afinidade (veja, por exemplo, Feldmann e al., Publicação Internacional N° WO 92/07076 (publicada em 30 de abril de 1992); Schall e al., Cell 61: 361370 (1990); e Loetscher e al., Cell 61: 351-359 (1990), cujas referências são aqui incorporadas por referência em sua totalidade) e opcionalmente possuem baixa imunogenicidade. Em particular, os receptores de TNF da superfície celular de 55 kDa (p55 TNF-R) e de 75 kDa (p75 TNF- R) são úteis na presente invenção. Formas truncadas desses receptores, que compreendem os domínios extracelulares (ECD) dos receptores ou porções funcionais destes (veja, por exemplo, Corcoran e al., Eur. J. Biochem. 223: 831-840 (1994)), também são úteis na presente invenção. Formas truncadas dos receptores de TNF, que compreendem os ECD, foram detectadas na urina e no soro como proteínas inibidoras da ligação de TNFa de 30 kDa e 40 kDa (Engelmann, H. e al., J. Biol. Chem. 265: 1.531-1.536 (1990)). Moléculas multiméricas receptoras de TNF e moléculas de fusão imunorreceptoras de TNF, e derivados e fragmentos ou porções destas, são exemplos adicionais de moléculas receptoras de TNF que são úteis nos métodos e nas composições da presente invenção.
[00188] Moléculas multiméricas receptoras de TNF úteis na presente invenção compreendem todo ou uma porção funcional do ECD de dois ou mais receptores de TNF ligados por meio de um ou mais vinculadores polipeptídicos ou de outros vinculadores não peptídicos, tais como polietileno glicol (PEG). Um exemplo de uma molécula de fusão imunorreceptora de TNF como essa é a proteína de fusão receptora de TNF/IgG. Moléculas de fusão imunorreceptoras de TNF e métodos para sua produção foram descritos na técnica (Lesslauer e al., Eur. J. Immunol. 21: 2.883-2.886 (1991); Ashkenazi e al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 88: 1.0535-1.0539 (1991); Peppel e al., J. Exp. Med. 174: 1.483-1.489 (1991); Kolls e al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 91: 215-219 (1994); Butler e al., Cytokine 6(6): 616-623 (1994); Baker e al., Eur. J. Immunol. 24: 2.040-2.048 (1994); Beutler e al., Patente U.S. N° 5.447.851; e Pedido U.S. N° 08/442,133 (depositado em 16 de maio de 1995), cada uma dessas referências é aqui incorporada por referência em sua totalidade). Métodos para a produção de moléculas de fusão imunoreceptoras podem ser encontrados em Capon e al., Patente U.S. N° 5.116.964; Capon e al., Patente U.S. N° 5.225.538; e Capon e al., Nature 337: 525-531 (1989), cujas referências são aqui incorporadas por referência em sua totalidade.
[00189] Citocinas incluem qualquer citocina conhecida. Veja, por exemplo, CopewithCytokines.com. Antagonistas de citocinas incluem, sem limitação, qualquer anticorpo, fragmento ou mimético, qualquer receptor solúvel, fragmento ou mimético, qualquer antagonista de pequena molécula, ou qualquer combinação destes.
Tratamentos terapêuticos
[00190] Qualquer método da presente invenção pode compreender um método para o tratamento de um distúrbio mediado por IL-6, que compreende a administração de uma quantidade eficaz de uma composição ou composição farmacêutica que compreende pelo menos um anticorpo anti-IL-6 a uma célula, tecido, órgão, animal ou paciente que necessita de tal modulação, tratamento ou terapia. Um método como esse pode opcionalmente ainda compreender a co- administração ou terapia de combinação para o tratamento de tais doenças ou distúrbios, em que a administração do referido pelo menos um anticorpo anti-IL-6, porção especificada ou variante deste, ainda compreende a administração antes, concomitantemente e/ou depois, de pelo menos um selecionado de um fármaco antiinfeccioso, um fármaco do sistema cardiovascular (CV), um fármaco do sistema nervoso central (SNC), um fármaco do sistema nervoso autônomo (SNA), um fármaco do trato respiratório, um fármaco do trato gastrointestinal (GI), um fármaco hormonal, um fármaco para o equilíbrio hidro-eletrolítico, um fármaco hematológico, umantineoplásico, um fármaco de imunomodulação, um fármaco oftálmico, óptico ou nasal, um fármaco tópico, um fármaco nutritivo ou semelhantes, pelo menos um antagonista de TNF (por exemplo, sem limitação, um anticorpo TNF ou fragmento, um receptor solúvel de TNF ou fragmento, proteínas de fusão destes, ou um antagonista de TNF de pequena molécula), um anti-reumático (por exemplo, metotrexato, auranofina, aurotioglicose, azatioprina, etanercept, tiomalato de ouro sódico, sulfato de hidroxicloroquina, leflunomida, sulfasalazina), um relaxante muscular, um narcótico, um fármaco antiinflamatório não- esteróide (NSAID), um analgésico, um anestésico, um sedativo, um anestésico local, um bloqueador neuromuscular, um antimicrobiano (por exemplo, aminoglicosídeo, um antifúngico, um antiparasitário, um antiviral, um carbapenem, uma cefalosporina, uma fluorquinolona, um macrolídeo, uma penicilina, uma sulfonamida, uma tetraciclina, outro antimicrobiano), um antipsoriático, um corticosteróide, um esteróide anabólico, um agente relacionado ao diabetes, um mineral, um nutritivo, um agente da tireóide, uma vitamina, um hormônio relacionado ao cálcio, um antidiarréico, um antitussígeno, um antiemético, um antiulceroso, um laxante, um anticoagulante, uma eritropoietina (por exemplo, epoetina alfa), uma filgrastima (por exemplo, G-CSF, Neupogen), uma sargramostima (GM-CSF, Leukine), uma imunização, uma imunoglobulina, um imunossupressor (por exemplo, basiliximab, ciclosporina, daclizumab), um hormônio do crescimento, um fármaco de reposição hormonal, um modulador do receptor de estrogênio, um midriático, um cicloplégico, um agente alquilante, um antimetabólito, um inibidor mitótico, uma substância farmacêutica radioativa, um antidepressivo, agente antimaníaco, um antipsicótico, um ansiolítico, um hipnótico, um simpaticomimético, um estimulante, donepezil, tacrina, uma medicação para asma, um agonista beta, um esteróide inalado, um inibidor de leucotrieno, uma metilxantina, uma cromolina, uma epinefrina ou análogo, dornase alfa (Pulmozyme), uma citocina ou um antagonista de citocina. Esses fármacos são bem-conhecidos na técnica, incluindo formulações, indicações, dosagem e administração para cada um dos fármacos aqui apresentados (veja, por exemplo, "Nursing 2001 Handbook of Drugs", 21a edição, Springhouse Corp., Springhouse, PA, 2001; "Health Professional’s Drug Guide" 2001, ed., Shannon, Wilson, Stang, Prentice-Hall, Inc., Upper Saddle River, NJ; "Pharmacotherapy Handbook", Wells e al., ed., Appleton & Lange, Stamford, CT, cada um deles aqui incorporado por referência em sua totalidade).
[00191] Tipicamente, o tratamento de condições patológicas é efetuado pela administração de uma quantidade eficaz ou dosagem de pelo menos uma composição de anticorpo anti-IL-6 que varia no total, na média, em uma faixa de pelo menos cerca de 0,01 a 500 miligramas de pelo menos um anticorpo anti-IL-6 por quilograma do paciente por dose e, de preferência, de pelo menos cerca de 0,1 a 100 miligramas de anticorpo/quilograma do paciente por administração única ou múltipla, dependendo da atividade específica do agente ativo contido na composição. Alternativamente, a concentração sérica eficaz pode compreender uma concentração sérica de 0,1-5.000 μg/ml por administração única ou múltipla. Dosagens adequadas são conhecidas pelos profissionais médicos e dependerão, evidentemente, do estado de doença específico, da atividade específica da composição que estiver sendo administrada e do paciente em particular submetido ao tratamento. Em alguns casos, a fim de se obter a quantidade terapêutica desejada, pode ser necessária a realização de administrações repetidas, ou seja, administrações individuais repetidas de uma dose monitorada ou metrificada em particular, em que as administrações individuais são repetidas até que a dose diária ou o efeito desejado seja obtido.
[00192] As doses preferidas podem opcionalmente incluir cerca de 0,1-99 e/ou 100-500 mg/kg/administração, ou qualquer intervalo, valor ou fração desta, ou para se obter uma concentração sérica de cerca de 0,1-5.000 μg/ml de concentração sérica por administração única ou múltipla, ou qualquer intervalo, valor ou fração desta. Uma faixa de dosagem preferida para o anticorpo anti-IL-6 da presente invenção é de cerca de 1 mg/kg, até cerca de 3, cerca de 6 ou cerca de 12 mg/kg de peso corporal do paciente.
[00193] Alternativamente, a dosagem administrada pode variar, dependendo de fatores conhecidos, tais como das características farmacodinâmicas do agente em particular, e de seu modo e via de administração; da idade, saúde e peso do receptor; da natureza e extensão dos sintomas, tipo de tratamento atual, freqüência de tratamento e do efeito desejado. Normalmente, uma dosagem de ingrediente ativo pode ser de cerca de 0,1 a 100 miligramas por quilograma de peso corporal. Comumente, 0,1 a 50 e, de preferência, 0,1 a 10 miligramas por quilograma por administração, ou em forma de liberação sustentada, é eficaz para obtenção dos resultados desejados.
[00194] Como exemplo não-limitante, o tratamento de seres humanos ou animais pode ser fornecido como uma dosagem única ou periódica de pelo menos um anticorpo da presente invenção de cerca de 0,1 a 100 mg/kg ou qualquer intervalo, valor ou fração desta, por dia, em pelo menos um de 1-40 dias ou, alternativa ou adicionalmente, pelo menos um de 1-52 semanas ou, alternativa ou adicionalmente, pelo menos um de 1-20 anos, ou qualquer combinação destes, usando dose única, infusão ou doses repetidas.
[00195] Formas de dosagem (composição) adequadas para administração interna geralmente contêm de cerca de 0,001 miligrama a cerca de 500 miligramas de ingrediente ativo por unidade ou recipiente. Nessas composições farmacêuticas, o ingrediente ativo normalmente estará presente em uma quantidade de cerca de 0,599,999% por peso, com base no peso total da composição.
[00196] Para administração parenteral, o anticorpo pode ser formulado como uma solução, suspensão, emulsão, partícula, pó ou pó liofilizado em associação, ou fornecido separadamente, com um veículo parenteral farmaceuticamente aceitável. Exemplos de tais veículos são água, soro fisiológico, solução de Ringer, solução de dextrose e cerca de 1-10% de albumina sérica humana. Lipossomos e veículos não aquosos como, por exemplo, óleos fixos, também podem ser utilizados. O veículo ou o pó liofilizado pode conter aditivos que mantêm a isotonicidade (por exemplo, cloreto de sódio, manitol) e estabilidade química (por exemplo, tampões e conservantes). A formulação é esterilizada por técnicas conhecidas ou adequadas.
[00197] Veículos farmacêuticos adequados são descritos na edição mais recente de "Remington's Pharmaceutical Sciences", A. Osol, um texto de referência-padrão nesse campo.
Administração alternativa
[00198] Muitos modos conhecidos e desenvolvidos podem ser usados de acordo com a presente invenção para a administração de quantidades farmaceuticamente eficazes de pelo menos um anticorpo anti-IL-6 de acordo com a presente invenção. Embora a administração pulmonar seja usada na descrição seguinte, outros modos de administração podem ser usados de acordo com a presente invenção com resultados adequados. Os anticorpos IL-6 da presente invenção podem ser liberados em um veículo, como uma solução, emulsão, colóide ou suspensão, ou como um pó seco, usando qualquer um dos diversos dispositivos e métodos adequados para administração por inalação ou por outros modos aqui descritos ou conhecidos na técnica. Formulações e administração parenteral
[00199] Formulações para administração parenteral podem conter, como excipientes comuns, água estéril ou soro fisiológico, polialquileno glicóis como, por exemplo, polietileno glicol, óleos de origem vegetal, naftalenos hidrogenados e semelhantes. Suspensões aquosas ou oleosas para injeção podem ser preparadas pela utilização de um emulsificante ou umidificante apropriado e um agente de suspensão, de acordo com métodos conhecidos. Agentes para injeção podem ser um agente diluente atóxico, administrável por via não oral, por exemplo, solução aquosa, uma solução ou suspensão injetável estéril, em um solvente. Como veículo ou solvente utilizáveis, água, solução de Ringer, soro fisiológico isotônico etc. são permitidos; como solvente ou solvente de suspensão comum, pode ser usado óleo não- volátil estéril. Para essas finalidades, qualquer tipo de óleo não-volátil e de ácido graxo pode ser usado, incluindo óleos graxos ou ácidos graxos naturais ou sintéticos ou semi-sintéticos; mono- ou di- ou triglicerídeos naturais ou sintéticos ou semi-sintéticos. A administração parental é conhecida na técnica e inclui, sem limitação, meios convencionais de injeções, um dispositivo de injeção sem agulha com gás pressurizado, como descrito na Patente U.S. N° 5.851.198, e um dispositivo perfurador a laser, como descrito na Patente U.S. N° 5.839.446, aqui incorporada por referência em sua totalidade.Liberação alternativa
[00200] A invenção ainda relaciona-se à administração de pelo menos um anticorpo anti-IL-6 por via parenteral, subcutânea, intramuscular, intravenosa, intra-articular, intrabrônquica, intraabdominal, intracapsular, intracartilaginosa, intracavitária, intracelíaca, intra-cerebelar, intracerebro-ventricular, intracólica, intracervical, intragástrica, intrahepática, intra-miocárdica, intra-óssea, intra-pélvica, intrapericárdica, intraperitoneal, intrapleural, intraprostática,intrapulmonar, intra-retal, intra-renal, intra-retiniana, intra-espinhal, intra-sinovial, intratorácica, intra-uterina, intravesical, intralesional, em bolo, vaginal, retal, bucal, sublingual, intranasal ou transdérmica. Pelo menos uma composição de anticorpo anti-IL-6 pode ser preparada para uso parenteral (subcutânea, intramuscular ou intravenosa) ou qualquer outra administração, particularmente na forma de soluções ou suspensões líquidas; para uso em administração vaginal ou retal, particularmente em formas semi-sólidas como, por exemplo, sem limitação, cremes e supositórios; para administração bucal, ou sublingual, por exemplo, sem limitação, na forma de comprimidos ou cápsulas; ou intranasal, por exemplo, sem limitação, na forma de pós, gotas nasais ou aerossóis nasais ou certos agentes; ou transdérmica como, por exemplo, sem limitação, um gel, pomada, loção, suspensão ou sistema de liberação por emplastro com intensificadores químicos como, por exemplo, sulfóxido de dimetila, tanto para modificar a estrutura da pele quanto para aumentar a concentração de fármaco no emplastro transdérmico (Junginger, e al.. Em "Drug Permeation Enhancement;" Hsieh, D.S., Eds., pp. 59-90 (Marcel Dekker, Inc. Nova York 1994, aqui incorporado por referência em sua totalidade)), ou com agentes oxidantes que permitem a aplicação de formulações que contêm proteínas e peptídeos sobre a pele (WO 98/53847), ou aplicações de campos elétricos para criar vias de transporte transitórias, por exemplo, eletroporação, ou para aumentar a mobilidade de fármacos com carga através da pele, por exemplo, iontoforese, ou aplicação de ultra-som, por exemplo, sonoforese (Patentes U.S. Nos 4.309.989 e 4.767.402) (as publicações e patentes acima são aqui incorporadas por referência em sua totalidade).
Administração pulmonar/nasal
[00201] Para administração pulmonar, de preferência, pelo menos uma composição de anticorpo anti-IL-6 é liberada em um tamanho de partícula eficaz para alcançar as vias aéreas inferiores dos pulmões ou seios. De acordo com a invenção, pelo menos um anticorpo anti-IL-6 pode ser liberado por qualquer um dentre diversos dispositivos de inalação ou nasais conhecidos na técnica para administração de um agente terapêutico por inalação. Esses dispositivos capazes de depositar formulações em aerossol na cavidade sinusal ou alvéolos de um paciente incluem inaladores de dose metrificada, nebulizadores, geradores de pó seco, vaporizadores, e semelhantes. Outros dispositivos adequados para direcionamento da administração pulmonar ou nasal de anticorpos também são conhecidos na técnica. Todos esses dispositivos podem usar formulações adequadas para a administração para a dispensa de anticorpos em um aerossol. Tais aerossóis podem ser compostos tanto por soluções (tanto aquosas quanto não aquosas) quanto por partículas sólidas.
[00202] Inaladores de dose metrificada como o inalador de dose metrificada Ventolin® tipicamente utilizam um gás propelente e exigem a ativação durante a inspiração (veja, por exemplo, WO 94/16970, WO 98/35888). Inaladores de pó seco como Turbuhaler® (Astra), Rotahaler® (Glaxo), Diskus® (Glaxo), inalador Spiros® (Dura), dispositivos comercializados por Inhale Therapeutics, e o inalador de pó Spinalador® (Fisons), usam ativação pela respiração de um pó misto (US 4668218 Astra, EP 237507 Astra, WO 97/25086 Glaxo, WO 94/08552 Dura, US 5458135 Inhale, WO 94/06498 Fisons, aqui incorporados por referência em sua totalidade). Nebulizadores como AERxTM Aradigm, o nebulizador Ultravent® (Mallinckrodt) e o nebulizador Acorn II® (Marquest Medical Products) (US 5404871 Aradigm, WO 97/22376), as referências acima são aqui incorporadas por referência em sua totalidade, produzem aerossóis a partir de soluções, enquanto inaladores de dose metrificada, inaladores de pó seco etc. geram aerossóis de partícula pequena. Esses exemplos específicos de dispositivos de inalação disponíveis comercialmente visam a ser representativos de dispositivos específicos adequados para a prática desta invenção, e não visam a limitar o escopo da invenção.
[00203] De preferência, uma composição que compreende pelo menos um anticorpo anti-IL-6 é liberada por um vaporizador ou inalador de pó seco. Há várias características desejadas de um dispositivo de inalação para a administração de pelo menos um anticorpo da presente invenção. Por exemplo, a liberação pelo dispositivo de inalação é vantajosamente confiável, reprodutível e precisa. O dispositivo de inalação pode opcionalmente liberar pequenas partículas secas, por exemplo, menores do que cerca de 10 μm, de preferência, cerca de 1-5 μm, para uma boa respirabilidade.Administração de composições de anticorpo IL-6 como um spray
[00204] Um spray que inclui a composição de anticorpo IL-6 pode ser produzido forçando-se uma suspensão ou solução de pelo menos um anticorpo anti-IL-6 através de um bocal sob pressão. O tamanho e a configuração do bocal, a pressão aplicada e a taxa de alimentação de líquido podem ser escolhidos para se obter o rendimento e o tamanho de partícula desejados. Um eletrospray pode ser produzido, por exemplo, por um campo elétrico em conexão com uma alimentação capilar ou do bocal. Vantajosamente, partículas de pelo menos uma composição de anticorpo anti-IL-6 liberadas por um vaporizador têm um tamanho de partícula menor do que cerca de 10 μm, de preferência, na faixa de cerca de 1 μm a cerca de 5 μm e, principalmente, cerca de 2 μm a cerca de 3 μm.
[00205] As formulações de pelo menos uma composição de anticorpo anti-IL-6 adequadas para uso com um vaporizador tipicamente incluem a composição de anticorpo em uma solução aquosa em uma concentração de cerca de 0,1 mg a cerca de 100 mg de pelo menos uma composição de anticorpo anti-IL-6 por ml de solução ou mg/g, ou qualquer faixa, valor ou fração incluída. A formulação pode incluir agentes, tais como um excipiente, um tampão, um agente de isotonicidade, um conservante, um tensoativo e, de preferência, zinco. A formulação também pode incluir um excipiente ou agente para a estabilização da composição de anticorpo, por exemplo, um tampão, um agente redutor, uma proteína de volume ou um carboidrato. Proteínas de volume úteis na formulação de composições de anticorpo incluem albumina, protamina ou semelhantes. Carboidratos típicos úteis na formulação de composições de anticorpo incluem sacarose, manitol, lactose, trehalose, glicose, ou semelhantes. A formulação da composição de anticorpo também pode incluir um tensoativo, que pode reduzir ou evitar a agregação induzida na superfície da composição de anticorpo causada pela atomização da solução na formação de um aerossol. Podem ser empregados vários tensoativos convencionais, tais como ésteres e alcoóis de ácido graxo de polioxietileno e sorbitol ésteres de ácido graxo de polioxietileno. As quantidades geralmente variarão entre 0,001 e 14% por peso da formulação. Tensoativos especialmente preferidos para as finalidades desta invenção são polioxietileno sorbitano monooleato, polissorbato 80, polissorbato 20, ou semelhantes. Agentes adicionais conhecidos na técnica para a formulação de uma proteína, tais como os anticorpos IL-6, ou porções ou variantes especificadas destes, também podem ser incluídos na formulação.Administração de composições de anticorpo IL-6 por um nebulizador
[00206] As composições de anticorpo da invenção podem ser administradas por um nebulizador como, por exemplo, um nebulizador de jato ou um nebulizador ultra-sônico. Tipicamente, em um nebulizador de jato, uma fonte de ar comprimido é usada para criar um jato de ar de alta velocidade através de um orifício. À medida que o gás se expande além do bocal, é criada uma região de baixa pressão, que puxa uma solução da composição de anticorpo através de um tubo capilar conectado a um reservatório de líquido. O jato de líquido proveniente do tubo capilar é dividido em filamentos e gotículas instáveis à medida que sai do tubo, criando o aerossol. Uma gama de configurações, taxas de fluxo e tipos de defletor pode ser empregada para se obter as características de desempenho desejadas para certo nebulizador de jato. Em um nebulizador ultra-sônico, é usada energia elétrica de alta freqüência para criar energia mecânica vibracional, tipicamente com o emprego de um transdutor piezelétrico. Essa energia é transmitida à formulação da composição de anticorpo, diretamente ou através de um líquido de acoplamento, criando um aerossol que inclui a composição de anticorpo. Vantajosamente, as partículas da composição de anticorpo liberadas por um nebulizador têm um tamanho de partícula menor do que cerca de 10 μm, de preferência, na faixa de cerca de 1 μm a cerca de 5 μm e, principalmente, cerca de 2 μm a cerca de 3 μm.
[00207] Formulações de pelo menos um anticorpo anti-IL-6 adequadas para uso com um nebulizador, tanto de jato quanto ultra- sônico, tipicamente incluem uma concentração de cerca de 0,1 mg a cerca de 100 mg de pelo menos uma proteína de anticorpo anti-IL-6 por ml de solução. A formulação pode incluir agentes, tais como um excipiente, um tampão, um agente de isotonicidade, um conservante, um tensoativo e, de preferência, zinco. A formulação também pode incluir um excipiente ou agente para a estabilização da composição de pelo menos um anticorpo anti-IL-6 como, por exemplo, um tampão, um agente redutor, uma proteína de volume, ou um carboidrato. Proteínas de volume úteis na formulação de composições de pelo menos um anticorpo anti-IL-6 incluem albumina, protamina, ou semelhantes. Carboidratos típicos úteis na formulação de pelo menos um anticorpo anti-IL-6 incluem sacarose, manitol, lactose, trehalose, glicose, ou semelhantes. A formulação de pelo menos um anticorpo anti-IL-6 também pode incluir um tensoativo, que pode reduzir ou evitar a agregação induzida na superfície do pelo menos um anticorpo anti-IL-6 causada pela atomização da solução na formação de um aerossol. Podem ser empregados vários tensoativos convencionais, tais como ésteres e alcoóis de ácido graxo de polioxietileno e sorbitol ésteres de ácido graxo de polioxietileno. As quantidades geralmente variarão entre cerca de 0,001 e 4% por peso da formulação. Tensoativos especialmente preferidos para as finalidades desta invenção são polioxietileno sorbitano monooleato, polissorbato 80, polissorbato 20, ou semelhantes. Agentes adicionais conhecidos na técnica para a formulação de uma proteína como, por exemplo, uma proteína de anticorpo, também podem ser incluídos na formulação.Administração de composições de anticorpo IL-6 por um inalador de dose metrificada
[00208] Em um inalador de dose metrificada (NIDI), um propelente, pelo menos um anticorpo anti-IL-6 e quaisquer excipientes ou outros aditivos são contidos em uma lata como uma mistura que inclui um gás comprimido liquefeito. A ativação da válvula de metrificação libera a mistura como um aerossol, de preferência, contendo partículas na faixa de tamanho de menos do que cerca de 10 μm, de preferência, cerca de 1 μm a cerca de 5 μm e, principalmente, cerca de 2 μm a cerca de 3 μm. O tamanho de partícula do aerossol desejado pode ser obtido com o emprego de uma formulação da composição de anticorpo produzida por vários métodos conhecidos por aqueles versados na técnica, incluindo trituração por jato, secagem por atomização, condensação de ponto crítico, ou semelhantes. Inaladores de dose metrificada preferidos incluem aqueles fabricados por 3M ou Glaxo e que empregam um propelente hidrofluorcarbono. Formulações de pelo menos um anticorpo anti-IL-6 para uso com um dispositivo inalador de dose metrificada incluirão geralmente um pó finamente dividido contendo pelo menos um anticorpo anti-IL-6 como uma suspensão em um meio não aquoso, por exemplo, suspenso em um propelente com o auxílio de um tensoativo. O propelente pode ser qualquer material convencional empregado para essa finalidade, por exemplo, um clorofluorcarbono, um hidroclorofluorcarbono, um hidrofluorcarbono ou um hidrocarboneto, incluindo triclorofluormetano, diclorodifluormetano, diclorotetrafluoretanol e 1,1,1,2-tetrafluoretano, HFA-134a(hidrofluoralcano-134a), HFA-227 (hidrofluoralcano-227), ou semelhantes. De preferência, o propelente é um hidrofluorcarbono. O tensoativo pode ser escolhido para estabilizar o pelo menos um anticorpo anti-IL-6 como uma suspensão no propelente, para proteger o agente ativo contra degradação química, e semelhantes. Tensoativos adequados incluem sorbitano trioleato, lecitina de soja, ácido oléico, ou semelhantes. Em alguns casos, são preferidos aerossóis em solução com o uso de solventes, por exemplo, etanol. Agentes adicionais conhecidos na técnica para formulação de uma proteína também podem ser incluídos na formulação. Aqueles versados na técnica reconhecerão que os métodos da presente invenção podem ser obtidos por administração pulmonar de uma composição de pelo menos um anticorpo anti-IL-6 através de dispositivos não descritos nesta especificação.
Formulações e administração oral
[00209] As formulações para administração oral se baseiam na co- administração de adjuvantes (por exemplo, resorcinóis e tensoativos não-iônicos, tais como oleil éter de polioxietileno e n- hexadecilpolietileno éter) para aumentar artificialmente a permeabilidade das paredes intestinais, bem como a co-administração de inibidores enzimáticos (por exemplo, inibidores da tripsina pancreática, diisopropilfluorfosfato (DFF) e trasilol) para inibir a degradação enzimática. Formulações para liberação de agentes hidrofílicos, incluindo proteínas e anticorpos e uma combinação de pelo menos dois tensoativos destinados à administração oral, bucal, mucosa, nasal, pulmonar, vaginal transmembrana ou retal, são ensinadas na Patente U.S. 6.309.663. O composto do constituinte ativo da forma de dosagem do tipo sólida para administração oral pode ser misturado com pelo menos um aditivo, incluindo sacarose, lactose, celulose, manitol, trehalose, rafinose, maltitol, dextrana, amidos, ágar, arginatos, quitinas, quitosanas, pectinas, goma tragacanto, goma arábica, gelatina, colágeno, caseína, albumina, polímero sintético ou semi-sintético e glicerídeo. Essas formas de dosagem também podem conter outro(s) tipo(s) de aditivos, por exemplo, agentes diluentes inativos, lubrificantes como, por exemplo, estearato de magnésio, parabeno, agentes conservantes como, por exemplo, ácido sórbico, ácido ascórbico, alfa-tocoferol, antioxidantes como, por exemplo, cisteína, desintegrante, ligantes, espessantes, agentes de tamponamento, agentes adoçantes, agentes flavorizantes, agentes perfumantes etc.
[00210] Comprimidos e pílulas podem ainda ser processados em preparações com revestimento entérico. As preparações líquidas para administração oral incluem preparações de emulsão, xarope, elixir, suspensão e solução adequadas ao uso médico. Essas preparações podem conter agentes diluentes inativos normalmente usados no referido campo, por exemplo, água. Lipossomos também foram descritos como sistemas de liberação de fármacos para insulina e heparina (Patente U.S. N° 4.239.754). Mais recentemente, microesferas de polímeros artificiais de aminoácidos misturados (proteinóides) foram usadas para liberar substâncias farmacêuticas (Patente U.S. N° 4.925.673). Além disso, compostos transportadores descritos na Patente U.S. N° 5.879.681 e na Patente U.S. N° 5.871.753 e usados para liberar agentes biologicamente ativos oralmente são conhecidos na técnica.
Formulações e administração mucosas
[00211] Uma formulação para a administração oral de um agente bioativo encapsulado em um ou mais excipientes de polímero ou copolímero biocompatível, de preferência, um polímero ou copolímero biodegradável, gerando microcápsulas que, em função do tamanho adequado das microcápsulas resultantes, fazem com que o agente alcance e seja captado pelos agregados de folículos linfáticos, também conhecidos como "placa de Peyer" ou "GALT" do animal sem perda de eficácia, já que o agente já ultrapassou o trato gastrointestinal. Agregados de folículos linfáticos similares podem ser encontrados nos tubos brônquicos (BALT) e no intestino grosso. Os tecidos mencionados acima são denominados, de forma geral, tecidos linforreticulares associados às mucosas (MALT). Para a absorção através de superfícies mucosas, as composições e os métodos de administração de pelo menos um anticorpo anti-IL-6 incluem uma emulsão que compreende diversas partículas submícron, uma macromolécula mucoadesiva, um peptídeo bioativo e uma fase aquosa contínua, o que promove a absorção através de superfícies mucosas pela obtenção de mucoadesão das partículas da emulsão (Patente U.S. N° 5.514.670). Superfícies mucosas adequadas para a aplicação das emulsões da presente invenção podem incluir vias de administração corneana, conjuntival, bucal, sublingual, nasal, vaginal, pulmonar, estomacal, intestinal e retal. As formulações para administração vaginal ou retal, por exemplo, supositórios, podem conter como excipientes, por exemplo, polialquilenoglicóis, vaselina, manteiga de cacau, e semelhantes. Formulações para administração intranasal podem ser sólidas e conter como excipientes, por exemplo, lactose, ou podem ser soluções aquosas ou oleosas de gotas nasais. Para administração bucal, excipientes incluem açúcares, estearato de cálcio, estearato de magnésio, amido pré-gelatinizado, e semelhantes (Patente U.S. N° 5.849.695).
Formulações e administração transdérmica
[00212] Para administração transdérmica, pelo menos um anticorpo anti-IL-6 é encapsulado em um dispositivo de liberação, por exemplo, um lipossomo ou nanopartículas, micropartículas, microcápsulas, ou microesferas poliméricas (citadas coletivamente micropartículas, a menos que definido de forma diferente). Diversos dispositivos adequados são conhecidos, incluindo micropartículas feitas de polímeros sintéticos, tais como ácidos polihidróxi, por exemplo, ácido polilático, ácido poliglicólico e copolímeros destes, poliortoésteres, polianidridos e polifosfazenos, e polímeros naturais, tais como colágeno, poliaminoácidos, albumina e outras proteínas, alginato e outros polissacarídeos, e combinações destes (Patente U.S. N° 5.814.599).
Administração e formulações prolongadas
[00213] Pode ser desejável liberar os compostos da presente invenção ao indivíduo ao longo de períodos de tempo prolongados, por exemplo, por períodos de uma semana a um ano por uma administração única. Várias formas de dosagem de liberação lenta, de depósito ou por implante podem ser utilizadas. Por exemplo, uma forma de dosagem pode conter um sal atóxico farmaceuticamente aceitável dos compostos que têm um grau de solubilidade baixo nos fluidos corpóreos, por exemplo, (a) um sal de adição ácido com um ácido polibásico, por exemplo, ácido fosfórico, ácido sulfúrico, ácido cítrico, ácido tartárico, ácido tânico, ácido pamóico, ácido algínico, ácido poliglutâmico, ácidos naftaleno mono- ou dissulfônicos, ácido poligalacturônico, e semelhantes; (b) um sal com um cátion de metal polivalente como, por exemplo, zinco, cálcio, bismuto, bário, magnésio, alumínio, cobre, cobalto, níquel, cádmio e semelhantes, ou com um cátion orgânico formado, por exemplo, por N,N'-dibenzil-etilenodiamina ou etilenodiamina; ou (c) combinações de (a) e (b), por exemplo, um sal de tanato de zinco. Adicionalmente, os compostos da presente invenção ou, de preferência, um sal relativamente insolúvel, tais como aqueles mencionados anteriormente, podem ser formulados em um gel, por exemplo, um gel de monoestearato de alumínio com, por exemplo, óleo de gergelim, adequado para injeção. Sais particularmente preferidos são sais de zinco, sais de tanato de zinco, sais de pamoato, e semelhantes. Outro tipo de formulação de depósito de liberação lenta para injeção conteria o composto ou sal disperso para encapsulação em um polímero não antigênico, de degradação lenta, atóxico como, por exemplo, um polímero de ácido polilático/ácido poliglicólico, por exemplo, como descrito na Patente U.S. N° 3.773.919. Os compostos ou, de preferência, sais relativamente insolúveis, tais como aqueles descritos acima, também podem ser formulados em péletes de silastic com matriz de colesterol, particularmente para uso em animais. Formulações de liberação lenta adicionais, de depósito ou para implante, por exemplo, lipossomos de gás ou líquido, são conhecidas na literatura (Patente U.S. N° 5.770.222 e "Sustained and Controlled Release Drug Delivery Systems", J.R. Robinson ed., Marcel Dekker, Inc., N.Y., 1978).
[00214] Após a invenção ter sido descrita de forma geral, a mesma será mais facilmente compreendida por referência aos exemplos seguintes, os quais são fornecidos como forma de ilustração, e não como limitantes da invenção.
IndicaçõesArtrite reumatóide (AR)
[00215] A artrite reumatóide (AR) é uma doença inflamatória sistêmica crônica com características auto-imunes. Várias das características da AR podem ser explicadas através da ação da IL-6 desregulada.
[00216] As ações da IL-6 potencialmente relevantes na AR incluem a indução de hipergamaglobulinemia policlonal e a produção de auto- anticorpo (fator reumatóide), através das ações de IL-6 como um fator de diferenciação de células B; a promoção do desenvolvimento de células T citotóxicas, relacionado à IL-2; a produção de proteínas da fase aguda (CRP, SAA, fibrinogênio), através da atividade deestimulação de hepatócitos; ativação de osteoclastos, levando à osteoporose periarticular e destruição óssea; a indução detrombocitose, através da ação como fator de diferenciação de megacariócitos; e a regulação de VEGF e, portanto, potencialmente da angiogênese, relacionada à IL-β e TNFa.
[00217] IL-6 é produzida por fibroblastos sinoviais da ARestimulados por TNFa ou IL-1, e está presente em alta concentração tanto no líquido sinovial (LS) quanto no soro na AR. Existem correlações entre os níveis séricos e os índices clínicos/laboratoriais de atividade da doença.mAbs anti-IL-6/IL-6R foram estudados em vários estudos clínicos em pacientes com AR ativa. Os resultados até hoje são descritos resumidamente abaixo.
Estudos de fase I/II
[00218] No primeiro desses estudos, um mAb anti-IL-6 murídeo (BE-8) foi administrado diariamente por 10 dias consecutivos em 5 pacientes com AR, e foi associado a uma melhora clínica e laboratorial transitória (9) (Wendling, D.; e al. 1993 J. Rheumatol. 20: 259). O mAb humanizado anti-IL-6R (80 kDa) (MRA; Chugai) foi testado em vários estudos de fase I/II em pacientes com AR. No primeiro desses estudos, MRA foi administrado por infusão IV em doses de 1-50 mg uma vez ou duas vezes por semana, com tratamento de manutenção de 50 mg por semana por até 6 meses. Isso resultou em diminuições rápidas nas medidas da fase aguda, proteína C-reativa (CRP) e fibrinogênio, e em febre de grau baixo, fadiga e classificações clínicas, tais como rigidez matinal e contagens de edema e sensibilidade articulares. Também foram observadas melhoras na anemia, trombocitose e hipergamaglobulinemia. Em um estudo subseqüente, 45 pacientes foram tratados com a infusão IV única de MRA em uma dose de 0,1-10 mg/kg, e resultou em uma tendência de melhora nas classificações clínicas em níveis de dose mais elevados, mais reduções nos reagentes da fase aguda.
Estudos de fase II
[00219] No primeiro desses estudos, 15 pacientes foram tratados com MRA (níveis de dose de 2, 4 ou 8 mg/kg quinzenalmente por 24 semanas), e mostraram respostas de ACR20 em 13/15 na 24a semana, com normalização de CRP/Amilóide sérico A (SAA). Embora não tenha havido preocupações agudas de segurança, até dois terços dos pacientes apresentaram aumento acentuado dos níveis de colesterol LDL. Em um segundo estudo de fase II, 164 pacientes com AR resistente aos DMARDs foram tratados com placebo ou MRA por infusão IV (níveis de dose de 4 ou 8 mg/kg, dados a cada 4 semanas por 3 meses), e mostraram taxas de resposta de ACR20 na 12a semana de 11%, 57% e 78% para placebo, 4 e 8 mg/kg, respectivamente. Finalmente, 359 pacientes com AR ativa receberam MTX isoladamente (10-25 mg/semana), MRA isoladamente (níveis de dose de 2, 4 ou 8 mg/kg, administrados mensalmente por infusão IV) ou MTX mais MRA. MRA e MRA + MTX foram mais eficazes do que MTX isoladamente, como determinado pela resposta de ACR20.Lúpus eritematoso sistêmico (LES)
[00220] O lúpus eritematoso sistêmico é uma doença auto-imune crônica, potencialmente fatal, com múltiplas manifestações multiformes. A etiologia é desconhecida. Um ponto marcante da doença envolve hiperproliferação de células B, ativação e produção de auto-anticorpos contra diversos auto-antígenos.
[00221] IL-6 induz a diferenciação de células B em células produtoras de anticorpos. No LES, há uma produção aumentada de auto-anticorpos (ANA, anti-dsDNA) por essas células produtoras de anticorpos e deposição de complexo imune. IL-6 promove o desenvolvimento de células T citotóxicas, aumenta os reagentes hepáticos da fase aguda, a proliferação de células mesangiais, o crescimento de queratinócitos, a diferenciação megacariocítica e trombose.
[00222] Os níveis de IL-6 estão elevados tanto em pacientes com LES quanto em modelos murídeos de LES. Foi demonstrado que a ligação do receptor de IL-6 em células B induz a diferenciação terminal de células B em células produtoras de auto-anticorpos. Linker-Israeli e al. (Linker-Israeli M. e al., 1991 J. Immunol. 147: 117-123)demonstraram diminuições na produção espontânea de anticorpo policlonal quando eram utilizados anticorpos neutralizantes contra IL-6. Kitani e outros (Kitani A., e al., 1992 Clin. Exp. Immunol. 88: 75-83) apoiaram esses achados ao demonstrarem que a produção in vitro de células T de IL-6 dobrou em culturas de LES, e que células B do LES tinham uma produção de IL-6 cinco vezes maior do que células B de controle. No entanto, a produção patológica de auto-anticorpos no LES não se limita apenas aos efeitos da IL-6. O papel do receptor de IL-6 também foi estudado. Nagafuchi e outros demonstraram a supra- regulação do receptor de IL-6 na maioria das células B do LES versus células B normais. O anticorpo anti-receptor de IL-6 inibiu a diferenciação terminal dessas células B em células produtoras de anticorpos. O papel do receptor solúvel de IL-6 no LES ainda está para ser determinado.
Diabetes melito do Tipo II (DMT2)
[00223] A resistência à insulina (deficiência da ação da insulina) e a deficiência da função de células β (déficit funcional de células β pancreáticas para secretar insulina) são consideradas como sendo as causas principais do desenvolvimento do DMT2. A resistência à insulina manifesta-se como uma incapacidade dos tecidos periféricos para responderem adequadamente ao ataque da insulina causando, dessa forma, um aumento nos níveis sangüíneos de glicose. O aumento da resistência à insulina e dos níveis sangüíneos de glicose é seguido por uma hiper-secreção compensatória de insulina por células β pancreáticas nos estágios iniciais da doença. À medida que a DMT2 progride, a habilidade das células β para secretar insulina se deteriora.
[00224] Os mecanismos subjacentes responsáveis pelo desenvolvimento de resistência à insulina não-estão claros. A condição mais comumente associada ao desenvolvimento do DMT2 é a obesidade, e até mesmo uma pequena perda de peso melhora significativamente os níveis de glicose em pacientes com DMT2.
[00225] Tanto a obesidade quanto a resistência à insulina/hiperinsulinemia, em combinação com dislipidemia, tolerância alterada à glicose e hipertensão, caracterizam a condição denominada Síndrome Metabólica. A progressão natural da Síndrome Metabólica até o DMT2 predispõe os indivíduos ao desenvolvimento de alterações micro- e macrovasculares que podem levar à doença cardiovascular (CV) e, por fim, à morte. Sugeriu-se que a obesidade, a resistência à insulina e a hiperinsulinemia são as ligações mais prováveis entre DMT2 e doença CV.
[00226] O tecido adiposo foi identificado como um dos órgãos principais que regulam o metabolismo, sendo tanto um depósito de estocagem de energia quanto um órgão endócrino que secreta várias moléculas envolvidas na regulação da sensibilidade à insulina. Além de leptina, resistina, adiponectina e TNFα, o tecido adiposo secreta IL- 6, o que foi sugerido como representando a ligação entre obesidade, inflamação, DMT2 e doença cardiovascular (CV).
[00227] Uma correlação positiva entre adiposidade e níveis de IL-6 foi documentada. É possível que o tecido adiposo aumentado na obesidade possa fornecer aumentos sustentados da IL-6 circulante, o que poderia diminuir a sensibilidade à insulina ao promover a inflamação em tecidos que respondem à insulina ou causar resistência à insulina ao interferir com a atividade e a expressão de proteínas envolvidas na cascata de sinalização da insulina. Existem dados tanto in vitro quanto in vivo que apóiam ou se opõem ao papel potencial da IL-6 no desenvolvimento de resistência à insulina.
[00228] Dados in vitro com o uso de sistemas celulares bem definidos, incluindo células hepáticas (HepG2)(44), de gordura (3T3L1) ou isoladas de ilhota pancreática de rato, mostram um efeito negativo direto de IL-6 sobre a sinalização de insulina, captação de glicose e secreção de insulina, respectivamente. Por outro lado, dados obtidos de experimentos feitos em biópsias de músculo esquelético sugerem que IL-6 pode aumentar a captação de glicose no músculo em exercício.
[00229] Dados in vivo sobre a associação entre os níveis de IL-6 e a sensibilidade à insulina são igualmente confusos. Modelos de superexpressão ou ablação completa de IL-6 sugerem que a inibição completa da atividade de IL-6 talvez não tenha um efeito benéfico. Por exemplo, em camundongos transgênicos diabéticos não obesos (NOD), a superexpressão de IL-6 humana retarda o surgimento do diabetes e prolonga a sobrevida. Além disso, dados de camundongos null para IL-6 sugerem que IL-6 pode ter uma participação na regulação do equilíbrio energético, uma vez que esses animais desenvolvem obesidade de surgimento tardio e níveis de glicose mais elevados.
[00230] Em seres humanos, uma mutação de ocorrência natural dentro da região do promotor de IL-6 leva a um aumento na taxa de secreção de IL-6. Essa mutação foi associada tanto a um aumento quanto a uma diminuição da sensibilidade à insulina.
[00231] Em outro conjunto de experimentos, foi avaliado o efeito de IL-6 exógena. Em indivíduos normais, a administração de IL-6 produz aumentos dos níveis de glicose, sem afetar concentrações plasmáticas de insulina, enquanto, em pacientes com câncer, a adição de IL-6 aumentou a disponibilidade de glicose. Além disso, foi examinada a correlação entre os níveis de IL-6 e a resistência à insulina. Dados desses experimentos sugerem que, tanto em homens quanto em mulheres, níveis circulantes mais elevados de IL-6 foram correlacionados com uma maior resistência à insulina, embora um relacionamento de causa e efeito ainda não tenha sido determinado.
[00232] Foi indicado que IL-6 tem uma participação importante no desenvolvimento de resistência à insulina associada à obesidade. No entanto, existem dados in vitro e in vivo conflitantes que tanto apóiam quanto se opõem à sua participação potencial na resistência à insulina.
Osteoartrite (OA)
[00233] A osteoartrite é um distúrbio articular degenerativo crônico caracterizado por perda de cartilagem articular e alterações relacionadas no osso subcondral. Embora sejam observados graus variáveis de inflamação sob artroscopia ou em amostras de biópsia sinovial, a doença não é primariamente inflamatória. Em vez disso, acredita-se que se origine de alterações no metabolismo de condrócitos e/ou osteoblastos. TNF, IL-1 e IL-6 são as citocinas mais fortemente associadas a essas alterações.
[00234] IL-6 é detectável no líquido sinovial de pacientes com OA, embora em níveis substancialmente abaixo daqueles observados em artropatias inflamatórias (Bertazzolo, N. e al. 1994 Agents and Actions 41: 90-92). IL-6 é reconhecida como sendo um estímulo primário para a síntese da proteína hepática da fase aguda, e os níveis de CRP estão associados à presença de AO do joelho, mesmo levando-se em conta a associação conhecida entre CRP e obesidade (Mohtai, M. e al. 1996 J. Orthopedic Research 14: 67-73).
[00235] IL-6 é expressa em condrócitos da cartilagem da OA, mas não na cartilagem normal (Sowers, M. e al. 2002 Osteoarthritis and Cartilage 10: 595-601). Em experimentos que testam os efeitos do estresse mecânico sobre a expressão in vitro de citocina por condrócito, o estresse de cisalhamento induzido por líquidos supra- regulou acentuadamente o mRNA e a proteína de IL-6. Isso sugere que a expressão de IL-6 em cartilagem da OA pode ser resultado de sobrecarga mecânica. IL-6 também foi produzida em resposta à ação de IL-1 sobre condrócitos (Dozin, B. e al. 2002 Matrix Biology 21: 449-459).
[00236] Em outros experimentos, a IL-6, em combinação com sIL- 6R, leva à inibição da síntese de proteoglicano por condrócitos articulares humanos cultivados ex vivo, embora o efeito fosse modesto, comparado com IL-1 (Guerne, P. e al. 1999 Matrix Biology 18: 253-260).
Doença pulmonar obstrutiva crônica (DPOC)
[00237] A doença pulmonar obstrutiva crônica é um estado de doença caracterizado por limitação do fluxo de ar que não é totalmente reversível. A limitação do fluxo de ar é normalmente progressiva e associada a uma resposta inflamatória anormal dos pulmões às partículas e aos gases nocivos (Pauwels R.A. e al. 2001 Am. J. Respir. Crit. Care Med 163: 1.256-1.276). A DPOC é caracterizada poraceleração no declínio normal da função pulmonar observada com o envelhecimento. A limitação lentamente progressiva do fluxo de ar leva à invalidez e à morte prematura. A DPOC é uma causa importante de morte e invalidez, mas apenas recentemente foi intensamente explorada por uma perspectiva celular e molecular (Barnes P.J. e al. 2003 Eur. Respir. J. 22: 672-688). Na DPOC, há uma inflamação crônica que leva a um estreitamento fixo das pequenas vias aéreas e à destruição alveolar (enfisema). A resposta inflamatória é caracterizada por um número aumentado de macrófagos, neutrófilos e linfócitos T citotóxicos alveolares e pela liberação de vários mediadores inflamatórios (quimiocinas, citocinas, fatores de crescimento e lipídeos). Um nível elevado de estresse oxidativo pode amplificar a inflamação. Também há aumento da elastólise e evidências de envolvimento de várias enzimas elastolíticas. A inflamação e a proteólise na DPOC é uma amplificação da resposta inflamatória normal ao tabagismo. Ao contrário da asma, a inflamação parece ser resistente aos corticosteróides (Barnes P.J. e al. 2003).
[00238] Em modelos animais, endotoxinas ou lipopolissacarídeosbacterianos (LPS) e a exposição à fumaça do cigarro induzem neutrofilia e produção aumentada de IL-6 no líquido do lavado brônquio-alveolar (BAL) (Underwood D.C. e al. 2000 AJPLCMP 279: L895-902). A superexpressão de IL-6 nos pulmões de camundongo induz enfisema (Kuhn III Ch. e al. 2000 AJRCMB 22: 289-295). Em seres humanos, o volume expiratório forçado em um segundo (FFV1) está inversamente relacionado aos níveis de IL-6, IL-8 e às contagens de células polimorfonucleares no BAL (Soler N. e al. 1999 Eur. Respir. J. 14: 1.015-1.022). Os níveis plasmáticos de TNFα, IL-6 e CRP estão aumentados em indivíduos com DPOC de leve a grave (Yasuda N. e al. 1998 Respir. Med. 92: 993-999).
[00239] A exacerbação aguda da DPOC é definida como uma piora mantida da condição do paciente, a partir de um estado estável e além das variações normais do dia-a-dia, que é aguda em seu surgimento e necessita de uma mudança da medicação regular (Burge S. e al. 2003 Eur. Respir. J. 21: Supl. 41, 46s-53s). Embora o agravamento dos sintomas e a piora da função pulmonar sejam uma causa comum de internação hospitalar (aproximadamente 500.000 por ano nos EUA), os mecanismos celulares e moleculares subjacentes ainda não foram amplamente investigados e são pouco compreendidos (Wedzicha, J.A. 2002 Chest 121: 136S-141S). As exacerbações agudas podem ser prolongadas e têm um efeito profundo sobre a qualidade de vida e podem acelerar a progressão da DPOC (Soto F.J. e al. 2003 Pulm. Med. 9: 117-124). As infecções respiratórias são as causas mais comuns de exacerbações da DPOC. A maioria dessas infecções é causada por bactérias, mas muitas delas são produzidas por infecções virais, particularmente rinovírus (Soto F.J. e al. 2003). Fatores ambientais, poluentes do ar e temperatura também podem ter uma participação.
[00240] Durante a exacerbação, há um aumento dos neutrófilos e das concentrações de IL-6, IL-8, TNFα e LTB4 no escarro de pacientes com DPOC. Alguns pacientes com DPOC de moderada a grave têm uma tendência a apresentar exacerbações freqüentes (três ou mais exacerbações por ano). Esse grupo de pacientes ("com exacerbações freqüentes") tem um nível mais elevado de IL-6 e um nível menor de inibidor de protease de leucócito secretor, mesmo quando a DPOC está estável (Bhowmik A. e al. 2000 Thorax 55: 114-120; Gompertz S. e al. 2001 Thorax 56: 36-41; Gompertz S. e al. 2001 Eur. Respir. J. 17: 1.112-1.119).
[00241] Vários outros mecanismos, tais como o estresse oxidativo e a colonização bacteriana, também foram implicados na fisiopatologia da exacerbação da DPOC.Exemplo 1: Clonagem e expressão de anticorpo IL-6 em células mamíferas
[00242] Um vetor de expressão mamífero típico contém pelo menos um elemento promotor, que medeia a iniciação da transcrição de mRNA, a seqüência codificadora do anticorpo e sinais necessários para a terminação da transcrição e poliadenilação do transcrito. Elementos adicionais incluem intensificadores, seqüências de Kozak e seqüências intervenientes flanqueadas por sítios doadores e receptores para junção de RNA. Uma transcrição altamente eficiente pode ser obtida com os promotores precoces e tardios de SV40, as repetições terminais longas (LTRS) de retrovírus, por exemplo, RSV, HTLVI, HIVI, e o promotor precoce do citomegalovírus (CMV). No entanto, elementos celulares também podem ser usados (por exemplo, o promotor humano de actina). Vetores de expressão adequados para uso na prática da presente invenção incluem, por exemplo, vetores, tais como pIRES1neo, pRetro-Off, pRetro-On, PLXSN ou pLNCX (Clonetech Labs, Palo Alto, CA), pcDNA3.1 (+/-), pcDNA/Zeo (+/-) ou pcDNA3.1/Higro (+/-) (Invitrogen), PSVL e PMSG (Pharmacia, Uppsala, Suécia), pRSVcat (ATCC 37152), pSV2dhfr (ATCC 37146) e pBC12MI (ATCC 67109). Células hospedeiras mamíferas e outras adequadas incluem células humanas Hela, 293, H9 e Jurkat, células de camundongo NIH3T3 e C127, Cos 1, Cos 7 e CV 1, células de codorna QC1-3, células de camundongo L e células de ovário de hamster chinês (CHO). Alternativamente, o gene pode ser expresso em linhagens celulares estáveis que contêm o gene integrado em um cromossomo. A co-transfecção com um marcador selecionável como, por exemplo, dhfr, gpt, neomicina ou higromicina, permite a identificação e o isolamento das células transfectadas.
[00243] O gene transfectado também pode ser amplificado para expressar grandes quantidades do anticorpo codificado. O marcador DHFR (diidrofolato redutase) é útil para o desenvolvimento de linhagens celulares que portam várias centenas ou mesmo vários milhares de cópias do gene de interesse. Outro marcador de seleção útil é a enzima glutamina sintase (GS) (Murphy, e al., Biochem. J. 227: 277-279 (1991); Bebbington, e al., Bio/Technology 10: 169-175(1992)). Com o uso desses marcadores, as células mamíferas crescem em meio seletivo e as células com a maior resistência são selecionadas. Essas linhagens celulares contêm o gene(s)amplificado(s) integrado em um cromossomo. Células de ovário dehamster chinês (CHO) e NSO são usadas freqüentemente para a produção de anticorpos.
[00244] Os vetores de expressão pC1 e pC4 contêm o promotor forte (LTR) do vírus do sarcoma de Rous (Cullen, e al., Mol. Cell. Biol. 5: 438-447 (1985)), mais um fragmento do intensificador de CMV (Boshart, e al., Cell 41: 521-530 (1985)). Sítios de clonagem múltipla, por exemplo, com os sítios de clivagem por enzima de restrição BamiHI, XbaI e Asp718, facilitam a clonagem do gene de interesse. Os vetores contêm, além do íntron 3', o sinal de poliadenilação e de terminação do gene de pré-proinsulina de rato.
Clonagem e expressão em células CHO.
[00245] O vetor pC4 pode ser usado para a expressão do anticorpo IL-6. O plasmídeo pC4 é um derivado do plasmídeo pSV2-dhfr (N° de Acesso ATCC 37146). O plasmídeo contém o gene de DHFR de camundongo sob controle do promotor precoce SV40. Células de ovário de hamster chinês ou outras células desprovidas de atividade de diidrofolato que são transfectadas com esses plasmídeos podem ser selecionadas por crescimento das células em um meio seletivo (por exemplo, alfa menos MEM, Life Technologies, Gaithersburg, MD) suplementado com o agente quimioterápico metotrexato. A amplificação dos genes de DHFR em células resistentes ao metotrexato (MTX) foi bem documentada (veja, por exemplo, F.W. Alt, e al., J. Biol. Chem. 253: 1.357-1.370 (1978); J.L. Hamlin e C. Ma, Biochem. et Biophys. Acta 1.097: 107-143 (1990); e M.J. Page e M.A. Sydenham, Biotechnology 9: 64-68 (1991)). Células crescidas emconcentrações crescentes de MTX desenvolvem resistência ao fármaco por superprodução da enzima-alvo, DHFR, como resultado da amplificação do gene de DHFR. Se um segundo gene estiver ligado ao gene de DHFR, ele será normalmente co-amplificado e superexpresso. Sabe-se na técnica que essa abordagem pode ser usada para o desenvolvimento de linhagens celulares que portam mais de 1.000 cópias do gene(s) amplificado(s). Subseqüentemente, quando o metotrexato é retirado, são obtidas linhagens celulares que contêm o gene amplificado integrado em um ou mais cromossomos da célula hospedeira.
[00246] Promotores de alta eficiência diferentes do promotor forte da repetição terminal longa (LTR) do vírus do sarcoma de Rous também podem ser usados para a expressão, por exemplo, o promotor humano de β-actina, os promotores precoces ou tardios de SV40 ou as repetições terminais longas de outros retrovírus, por exemplo, HIV e HTLVI. Os sistemas de expressão gênica Tet-Off e Tet-On da Clontech e sistemas similares podem ser usados para a expressão do anticorpo IL-6 de forma regulada em células mamíferas (M. Gossen, e H. Bujard, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89: 5.547-5.551 (1992)). Para a poliadenilação do mRNA, outros sinais, por exemplo, dos genes do hormônio do crescimento humano ou de globina, também podem ser utilizados. Linhagens celulares estáveis que portam um gene de interesse integrado nos cromossomos também podem ser selecionadas mediante co-transfecção com um marcador selecionável como, por exemplo, gpt, G418 ou higromicina. É vantajosa a utilização de mais de um marcador selecionável no começo, por exemplo, G418 mais metotrexato. O plasmídeo pC4 é digerido com enzimas de restrição e depois desfosforilado com o uso de fosfatase intestinal de bezerro por procedimentos conhecidos na técnica. O vetor é então isolado de um gel de agarose 1%.
[00247] A seqüência de DNA que codifica o anticorpo IL-6 completo é usada, por exemplo, como apresentada nos IDS. DE SEQ. Nos: 98 e 96, que correspondem às regiões variáveis da HC e LC de um anticorpo IL-6 da presente invenção, respectivamente, de acordo com etapas conhecidas do método. O ácido nucléico isolado que codifica uma região constante humana adequada (ou seja, regiões da HC e LC) também é usado nessa construção.
[00248] As regiões variável e constante isoladas que codificam o DNA e o vetor desfosforilado são então ligadas com T4 DNA ligase. Células de E. coli HB 101 ou XL-1 Blue são transformadas, e são identificadas as bactérias que contêm o fragmento inserido no plasmídeo pC4 com o uso, por exemplo, de análise de enzima de restrição.
[00249] Células de ovário de hamster chinês (CHO) desprovidas de um gene de DHFR ativo são usadas para transfecção. Cinco microgramas do plasmídeo de expressão pC4 são co-transfectados com 0,5 micrograma do plasmídeo pSV2-neo usando lipofectina. O plasmídeo pSV2neo contém um marcador selecionável dominante, o gene neo de Tn5 que codifica uma enzima que confere resistência a um grupo de antibióticos que inclui G418. As células são semeadas em alfa menos MEM suplementado com 1 micrograma/ml de G418. Após 2 dias, as células são tripsinizadas e semeadas em placas de clonagem de hibridoma (Greiner, Alemanha) em alfa menos MEM suplementado com 10, 25 ou 50 ng/ml de metotrexato mais 1micrograma/ml de G418. Após cerca de 10-14 dias, clones únicos são tripsinizados e depois semeados em placas de Petri de 6 cavidades ou frascos de 10 ml com o uso de diferentes concentrações de metotrexato (50 nM, 100 nM, 200 nM, 400 nM, 800 nM). Os clones que crescem nas maiores concentrações de metotrexato são então transferidos para novas placas de 6 cavidades contendo concentrações ainda maiores de metotrexato (1 mM, 2 mM, 5 mM, 10 mM, 20 mM). O mesmo procedimento é repetido, até que sejam obtidos clones que cresçam em uma concentração de 100-200 mM. A expressão do produto gênico desejado é analisada, por exemplo, por SDS-PAGE e Western blot, ou por análise HPLC de fase reversa.Exemplo 2 - Construção e rastreamento de anticorpos anti-IL-6
[00250] Variantes do anticorpo IL-6 (clone AME-A9) foram construídas e rastreadas quanto à atividade. Neste exemplo e em outras seções desta especificação, as CDRs são como definidas por Kabat, com a exceção de CDRH1, que é a soma das definições de Kabat e Chotia. O comprimento de CDRH2 tornou necessária a construção de duas bibliotecas separadas para cobrir toda a região. Os clones de interesse foram seqüenciados e adicionalmente caracterizados por ELISA e em um ensaio baseado em célula, e as constantes cinéticas foram determinadas.
[00251] Um exemplo de um ELISA feito com as IgGs purificadas é mostrado na Figura 9. O ELISA geralmente utilizou placas de microtitulação Costar 3366 revestidas com um anticorpo kapa anti-humano de cabra. As diluições de Fab (ou IgG) foram incubadas nas cavidades revestidas por 1 hora a 22°C. As cavidades foram então lavadas com PBS, Tween 20 0,1% e IL-6 biotinilada a 200 ng/ml foi adicionada por 1 hora. Após lavagem, um conjugado de fosfatase alcalina de NeutrAvidin foi adicionado e incubado por 1 hora a 22°C. Foi acrescentado um substrato colorimétrico após lavagem intensa, e a IL-6 ligada foi determinada. Uma variação desse ELISA incluiu uma etapa de lavagem prolongada em um béquer de PBS, BSA 0,01% a 37°C, após a incubação da IL-6 biotinilada, por exemplo, uma etapa de lavagem prolongada de 18 horas.
[00252] Vários dos anticorpos monoclonais IgG humanos projetados reativos à IL-6 gerados da invenção possuem constantes de afinidade entre 1 x 109 e 9 x 1012. As afinidades mais elevadas desses anticorpos monoclonais humanos projetados os tornam adequados para aplicações terapêuticas em doenças, patologias ou condições relacionadas dependentes da IL-6.
[00253] Foram obtidas múltiplas variantes diferentes do anticorpo humano projetado anti-IL-6 alterando-se uma ou mais das regiões CDR do anticorpo. A Tabela 3 abaixo mostra um resumo das mutações benéficas que foram encontradas nas bibliotecas de CDR individuais (mudanças de aminoácidos são relativas à variante AME- A9). Além disso, a Tabela 13 abaixo mostra as seqüências de aminoácidos para as CDRs da cadeia leve e da cadeia pesada, com as possíveis posições de substituição (marcadas como "X").
[00254] Foi construída uma biblioteca "combinatória" com base nos melhores clones (ou seja, variantes) encontrados nas bibliotecas de CDR individuais. A Tabela 4 lista as mutações que foram incluídas na biblioteca "combinatória". A biblioteca combinatória foi rastreada e caracterizada como descrito acima. As mutações encontradas em seis dos melhores clones são mostradas na Tabela 5A abaixo, enquanto os números do ID. de seqüência para as CDRs nesses clones são mostrados na Tabela 5B.Testes de IgGs anti-IL-6 em um ensaio com base em células
[00255] Os anticorpos quiméricos anti-IL-6 e humanos projetados anti-IL-6 (clone AME-19a) foram testados quanto à habilidade para evitar o crescimento de uma linhagem celular dependente de IL-6. Células 7TD1 foram plaqueadas em uma placa Costar 3610 de 96 cavidades a 200 células por poço. Os anticorpos, diluídos em meio IMDM, foram adicionados às cavidades, seguido pela adição de IL-6 humana, até uma concentração final de 500 pg/ml, e as placas foram incubadas em uma incubadora de cultura de tecido por 64-72 horas. Nesse momento, 50 μl de tampão de lise celular do kit ATPlite (Packard Bioscience) foram adicionados a todos as cavidades, e as placas foram agitadas por 3 minutos. Foram acrescentados 50 μl de substrato ATPlite, e as placas revestidas foram agitadas por 1 minuto. A quimioluminescência foi determinada em um luminômetro.
[00256] Os resultados de um ensaio baseado em células são mostrados na Figura 10, com os valores da EC50 calculados mostrados na Tabela 6 abaixo. O valor da EC50 do anticorpo quimérico anti-IL-6 é de 2,7 x 10-11 M (4,09 ng/ml) e o do anticorpo humano projetado anti- IL-6 (clone AME-19a) é de 2,7 x 10-12 M (0,41 ng/ml). O valor da EC50 do anticorpo humano projetado mostra um aumento de cerca de 10 vezes, embora seja possível obter um aumento de cerca de 10 vezes a cerca de 60 vezes, incluindo valores intermediários, no valor da EC50.Exemplo 3 - Cinética de ligação de anticorpos humanosprojetados anti-IL-6 humana.
[00257] A análise por ELISA confirma que o anticorpo purificado a partir dessas células hospedeiras se liga à IL-6 de uma forma dependente da concentração. Nesse caso, é medida a afinidade do anticorpo por seu antígeno (epítopo) cognato. As constantes de ligação quantitativa são obtidas com o uso de análise BIAcore e do instrumento KinExA 3000. Os resultados indicam que vários dos anticorpos monoclonais humanos projetados têm afinidade muito elevada, com KD na faixa de 1 x 10-9 a 3 x 10-14.
[00258] Foi realizado um imunoensaio enzimático (EIA) que utiliza anticorpos monoclonais anti-IL-6 humana (AME-A9, AME-A16, AME- 18a, AME-20b, AME-22a e AME-23a) e CNTO 328 usados como controle positivo para detectar a IL-6 ligada ao receptor solúvel de IL-6, sIL-6R. O receptor solúvel humano de IL-6, sIL-6R, e IL-6 humana recombinante foram obtidos de R&D Systems (Minneapolis, MN) (N° do Catálogo 227-SR-025 e 206-IL-010, respectivamente). IgG antihumana de cabra ligada à peroxidase de rábano silvestre (cadeia H+L) foi obtida de Jackson Immunoresearch (West Grove, PA) (N° do Catálogo 109-035-003). Peróxido de hidrogênio e comprimidos OPD foram obtidos de Sigma (St. Louis, MO) (N° do Catálogo H-1009 e P8287, respectivamente).Imunoensaio ligado à enzima para formação do complexo mAb sgp80/IL-6/anti-IL-6
[00259] Placas de EIA Costar (Corning/Costar, Acton, MA) (N° do Catálogo 9018) foram revestidas com sIL-6R (10 μg/ml em PBS, 100 μl/poço) de um dia para o outro a 4°C. As placas foram lavadas com 0,15 M de soro fisiológico contendo Tween 200,02% (v/v), e as cavidades foram bloqueadas com BSA 1% (p/v) em PBS, 200 μl/poço por uma hora em temperatura ambiente. As cavidades foram lavadas novamente, e depois, no formato seqüencial, incubados com 200 ng/ml de IL-6 humana (100 μl/poço) em PBS por uma hora em temperatura ambiente. Foi adicionado anticorpo a todas as cavidades em diluições seriais de 10 vezes a partir de uma concentração de partida de 10 μg/ml em 100 μl/poço por uma hora em temperatura ambiente. Após lavagem, as cavidades foram incubadas com IgG de cabra anti-humana ligada a (H+L)-HRP, (10 μg/ml em PBS) por 30 minutos em temperatura ambiente. As cavidades foram lavados, e 100 μl/poço de solução de substratos citrato-fosfato (0,1 M de ácido cítrico e 0,2 M de fosfato de sódio, H2O2 0,01% e 1 mg/ml de OPD) foram adicionados por 15 minutos em temperatura ambiente. A reação foi interrompida por adição de 25 μl/poço de 4 N de ácido sulfúrico, e a OD490 foi lida por meio de uma leitora automatizada de placa ELISA (Molecular Devices Spectromax Plus, Sunnyvale, CA).
[00260] Para testar o efeito da pré-incubação de IL-6 comanticorpos monoclonais anti-hIL-6 ou CNTO 328, 200 ng/ml de IL-6 (100 μl) foram incubados com diluições seriais de 10 vezes de anticorpo (100 μl), começando com 10 pg/ml por uma hora em temperatura ambiente. Essa mistura pré-incubada foi então incubada com sIL-6R por uma hora em temperatura ambiente, e a detecção do complexo sIL-6R/IL-6/anti IL-6-humana foi realizada com a utilização de IgG de cabra anti-humana ligada a (H+L)-HRP (10 pg/ml em PBS) por 30 minutos em temperatura ambiente. O restante das condições do ensaio foi igual ao descrito no parágrafo anterior.
[00261] Estudos anteriores mostraram que CNTO 328 pode detectar IL-6 quando ele é capturado por sIL-6R que é revestido em informes técnicos de EIA. Além disso, AME-A9, AME-A16, AME-18a, AME-20b, AME-22a e AME-23a podem detectar IL-6 ligada a sgp80 (sIL-6R) de forma dose-dependente com o uso de EIA. Cada anticorpo humano projetado anti-IL-6 foi avaliado em relação a CNTO 328. No entanto, a pré-incubação de IL-6 e qualquer um desses anticorpos monoclonais anti-hIL-6 elimina a habilidade de sIL-6R para se ligar à IL-6.Medidas das constantes cinéticas para IgGs anti-IL-6
[00262] O instrumento KinExA 3000, fabricado por Sapidyne, foi usado para medir a cinética de ligação. Resumidamente, IL-6 humana foi acoplada covalentemente a glóbulos de alzactona, e a ligação de IgG livre aos glóbulos foi detectada no instrumento. Para medir a KD, tubos individuais contendo uma concentração constante de 0,5, 1 ou 5 pM de IgG com IL-6 humana diluída serialmente de forma decrescente foram incubados por 3-4 dias a 20°C em BSA 0,1%, PBS. Um total de 13 tubos foi usado para cada determinação da KD. Por exemplo, o anticorpo quimérico anti-IL-6 foi usado em uma concentração constante de 5 pM, e os tubos individuais foram incubados com 0-200 pM de IL-6. As incubações para as outras IgGs foram ajustadas de forma similar. Após a incubação, a IgG livre em cada amostra equilibrada foi determinada no instrumento KinExA 3000 de acordo com as instruções do fabricante. Os valores da KD foram determinados pelo programa de computador KinExA 3000 com a utilização do instrumento KinExA 3000, como descrito com mais detalhe abaixo.
[00263] Para medir a kon, IgGs individuais a 200 pM forammisturadas com 100-200 pM de IL-6 humana e a IgG não ligada foi detectada por ligação à IL-6 humana acoplada covalentemente a glóbulos de alzactona no instrumento KinExA 3000. Foi feita uma série de medidas ao longo do tempo. Os dados resultantes foram usados para calcular a kon com o programa de computador KinExA 3000. A koff foi calculada com o uso da fórmula KD = koff/kon. Um resumo das constantes cinéticas para as IgGs anti-IL-6 é mostrado na Tabela 7.Exemplo 4: Caracterização in vitro do anticorpo anti-IL-6
[00264] Foram realizados estudos in vitro para caracterizar a seqüência, a especificidade do epítopo, a afinidade e a atividade biológica do anticorpo anti-IL-6.mAb humano projetado
[00265] A análise de seqüência confirma que o anticorpo anti-IL-6 da presente invenção (exemplificado em diferentes variantes/clones) contém estruturas centrais totalmente humanas. A Tabela 5a mostra um total de 10 resíduos de aminoácidos alterados tanto na cadeia pesada quanto na cadeia leve de CDR1, 2 e 3 no anticorpo anti-IL-6 da presente invenção (em diferentes variantes do anticorpo), como comparado com o anticorpo quimérico anti-IL-6 (descrito em PCT WO 04/039826).Especificidade do epítopo
[00266] O anticorpo anti-IL-6 da presente invenção e o anticorpo quimérico anti-IL-6 reconhecem um epítopo similar na IL-6 humana. Esses anticorpos não competem com o mAb de camundongo anti-IL-6 humana comercial de R&D Systems #MAB-206, o que sugere que eles reconhecem um epítopo que é singularmente diferente daquele do mAb anti-IL-6 de R&D. O anticorpo anti-IL-6 da presente invenção e o anticorpo quimérico anti-IL-6 não competem com mAb de rato anti-IL-6 humana da R&D.
[00267] IL-6 humana (200 ng/ml) foi capturada por mAb anti-IL-6 ligado às placas (mAb de camundongo anti-IL-6 humana, MAB-206, que foi usado apenas como mAb ligado às placas para a captura de IL-6 humana) (10 μg/ml), e diluições seriais do anticorpo anti-IL-6 da presente invenção e do anticorpo quimérico anti-IL-6, como indicado ao longo do eixo X, foram então adicionadas à placa. A ligação à IL-6 foi medida como aumento da OD490 ao longo do eixo Y. Tanto o anticorpo anti-IL-6 da presente invenção quanto o anticorpo quimérico anti-IL-6 mostram ligação dose-dependente à IL-6.
[00268] Inversamente, o anticorpo anti-IL-6 da presente invenção e o anticorpo quimérico anti-IL-6 se ligam competitivamente à IL-6 humana, o que sugere que as duas moléculas compartilham um epítopo de ligação similar na IL-6. IL-6 humana (200 ng/ml) foi capturada por MAB-206 ligado às placas (10 μg/ml). Diluições seriais do anticorpo anti-IL-6 da presente invenção, como indicado ao longo do eixo X, e 50 ng/ml de anticorpo quimérico anti-IL-6 biotinilado, foram então adicionadas à placa. A ligação do anticorpo quimérico anti-IL-6 biotinilado à IL-6 foi detectada por estreptavidina-HRP e medida como leituras da OD490 ao longo do eixo Y.
[00269] Além disso, os anticorpos humanos projetados e os anticorpos quiméricos exibem propriedades similares para ligação ao complexo sIL-6/sIL-6R (Figura 1). O anticorpo anti-IL-6 da presente invenção se liga ao complexo sIL-6/SIL-6R. O receptor solúvel de IL-6 (sIL-6R) foi revestido na placa em uma concentração de 10 μg/ml. IL-6 humana foi então acrescentada à placa em uma concentração de 200 ng/ml. Diluições seriais do anticorpo anti-IL-6 da presente invenção ou do anticorpo quimérico anti-IL-6, como indicado ao longo do eixo X, foram então adicionadas à placa, e a ligação ao complexo IL-6/sIL-6R foi detectada com o uso de IgG HRP-anti-humana e medida como leituras da OD490 ao longo do eixo Y.
[00270] Para confirmar ainda mais os achados acima, foi realizado um teste de reatividade entre espécies com o uso de sobrenadante condicionado contendo IL-6 gerado por PBMCs estimulados por LPS e IFNy de espécies diferentes em um ensaio de proliferação baseado em células 7TD1 (linhagem celular murídea de hibridoma dependente de IL-6). Demonstrou-se que o anticorpo humano projetado da invenção neutraliza a atividade dos sobrenadantes condicionados na estimulação de proliferação de células 7TD1 de diversas espécies de primatas, incluindo humano, mico, macaco cinomolgo, chimpanzé, macaco rhesus, babuíno, macaca menestrina (pigtail monkey) e macaco de cabeça branca (cotton top monkey), e exibiu um padrão de reatividade entre espécies similar, comparado com o anticorpo quimérico (Tabela 8).
[00271] Finalmente, quando o mapeamento de epítopo foi realizado com o uso de um método de digestão tríptica, foi observado o mesmo epítopo de ligação para os anticorpos humanos projetados e os anticorpos quiméricos em IL-6 humana, e está localizado nos resíduos de aminoácidos 168-184 que transpõem a Hélice D (Figura 3). Uma análise mutacional recente confirmou que os resíduos 179 e 182 são essenciais para que o anticorpo da invenção se ligue à IL-6. O epítopo (resíduos de aminoácidos 168-184) foi identificado como a superfície de IL-6 que retinham deutério na presença de anticorpo humano projetado anti-IL-6.
Atividade biológica
[00272] A potência de neutralização de IL-6 do anticorpo humano projetado anti-IL-6 foi determinada por um bioensaio baseado em células 7TD1. O anticorpo humano projetado anti-IL-6 demonstrou uma potência de neutralização 10 vezes maior, comparado com o anticorpo quimérico anti-IL-6 no ensaio de proliferação células 7TD1. As células 7TD1 foram estimuladas com 500 pg/ml de hIL-6 na presença de diluições seriais de anticorpo humano projetado anti-IL-6 ou de anticorpo quimérico anti-IL-6 ou mAb de controle de isótipo por 72 horas. A proliferação celular foi medida como contagens por segundo, como indicado no eixo Y. As barras de erro indicam o desvio padrão (DP) de amostras em duplicata. Um círculo fechado indica células sem IL-6; um círculo aberto indica células estimuladas com 500 pg/ml de hIL-6.
[00273] O anticorpo humano projetado anti-IL-6 também inibe a produção de proteína-1 de quimioatração de monócitos (MCP-1) induzida por IL-6 por células U937 (Figura 3) e a produção de amilóide A sérico induzida por IL6/IL-1β (SAA) por células de hepatoma humano HepG2 (Figura 4). A figura 3 demonstra que o anticorpo humano projetado anti-IL-6 inibe a secreção de MCP-1 estimulada por IL-6 por células U937. Foram tratadas 5 x 105 células/poço com 1 ng/ml de hIL-6 e diluições seriais de anticorpo humano projetado anti- IL-6 por 72 horas. Os sobrenadantes da cultura de células foram analisados em triplicatas por ELISA quanto à presença de MCP-1.
[00274] A figura 4 mostra que o anticorpo humano projetado anti-IL- 6 inibe a secreção de SAA estimulada por IL-6 e 1L-1β por células HepG2. Foram estimuladas 2,25 x 105 células com 100 ng/ml de hIL-6, 200 ng/ml de sIL-6R e 1 ng/ml de IL-1β na presença de diluições seriais de anticorpo humano projetado anti-IL-6 por 24 horas. Os sobrenadantes da cultura de células foram então analisados em duplicatas por ELISA quanto à presença de SAA.Fosforilação de Stat3 dependente de IL-6
[00275] Para avaliar a habilidade do anticorpo humano projetado anti-IL-6 para bloquear a cascata de sinalização resultante da ligação de IL-6 ao IL-6R e gp130, foi realizado um ensaio de imunoprecipitação para testar o efeito sobre a fosforilação de STAT3 dependente de IL-6 em células THP-1, que expressam gp130 na superfície celular.
[00276] Os mAbs são filtrados de forma estéril e esterilizados por filtro e estocados em PBS a 4°C. Foram usadas IL-6 humana recombinante (206-IL-010) e sIL-6R (227-SR-025) de R&D Systems (Minneapolis, MN). Meio RPMI (11875-085), soro fetal bovino inativado por aquecimento (16000-069), L-Glutamina (25030-081), aminoácidos não essenciais (11140-050) e piruvato de sódio (11360-070) foram obtidos de Invitrogen (Carlsbad, CA). TBS (10 mM de Tris, pH 7,5, 100 mM de NaCl) também foi usado.
[00277] Células THP-1, uma linhagem celular de leucemia monocítica aguda humana, recebidas de bancos de pesquisas de células, foram testadas para serem negativas para micoplasma e livres de bactérias. Essas células foram cultivadas em meio RPMI contendo soro bovino fetal 10%, 2 mM de glutamina e 1 mM de piruvato de sódio. As células foram subcultivadas ou coletadas quando as culturas alcançavam aproximadamente 85% de confluência. As células foram rotineiramente divididas 1:5 a cada três dias.
[00278] Para fosforilação de tirosina, as células cresceram até 8090% de confluência em frascos T225. O meio foi removido e substituído por meio fresco sem soro, e incubado de um dia para o outro. Após ficarem desprovidas de soro, as células foram coletadas de cada frasco, peletizadas, e uma concentração final de 20 x 106 células por condição foi ressuspensa em 0,5 ml de meio sem soro.
[00279] RhIL-6 (0,1 μg/ml) foi pré-incubada a 37°C por 15 minutos com os seguintes reagentes: 0,5 ml somente de meio, Ab anti-IL-6 (10 μg/ml); e sIL-6R (0,2 μg/ml). SIL-6R (0,2 μg/ml) e Ab anti-IL-6 (10 μg/ml) foram então adicionados às células pré-incubadas com Ab anti- IL-6 e sIL-6R, respectivamente, para incubação a 37°C por 15 minutos. As células foram então combinadas com meio como controle negativo, e o complexo IL-6/Ab/sIL-6R, e incubadas a 37°C por 6 minutos. As células foram lavadas duas vezes em TBS gelado e os péletes celulares foram processados como descrito na Seção 5.4 ou estocados a -70°C.
[00280] Para imunoprecipitação, os péletes celulares foram lisados em 1 ml de tampão de lise (50 mM de Tris, pH 7,5, 300 mM de NaCl, Triton-X-1000,5%) (T-9284, Sigma, St. Louis, MO) contendo comprimido de coquetel inibidor completo de protease (1697498, Roche, Basel, Suíça). As células foram turbilhonadas por 30 segundos e incubadas a -70°C por 20-60 minutos. Os restos celulares foram removidos por centrifugação a 13.000 rpm por 20 minutos. Para reduzir a coloração inespecífica de fundo, as amostras foram pré- clareadas por incubação com 2 μg de IgG de coelho (I5006, Sigma, St. Louis, MO) mais 50 μl de agarose de Proteína A (SC-2001, Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA) por 1 hora a 4°C em um misturador orbital. Os glóbulos de agarose foram removidos por centrifugação a 2.500 rpm por 5 minutos. Os lisados clareados foram transferidos para tubos de microcentrífuga e incubados com anti-STAT3 (2 μg/ml) (SC- 7179, Santa Cruz Biotechnology) de um dia para o outro a 4°C em um misturador orbital, seguido por adição de 50 μg de glóbulos de agarose de Proteína A, e incubados por 2 horas a 4°C em um agitador orbital. Os glóbulos de agarose foram coletados por centrifugação a 2.500 rpm por 5 minutos e lavados 5 vezes em TBS gelado a 4°C. Os glóbulos de agarose foram então ressuspensos em 40 μl de tampão de amostra Laemmli mais DTT (NP0007-465030, Invitrogen, Carlsbad, CA) e aquecidos a 95°Cpor 5 minutos.
[00281] As amostras foram resolvidas em um gel NuPage Bis-Tris 3-8% (EA0375BOX, Invitrogen, Carlsbad, CA) com tampão deexecução (NP0002-465026, Invitrogen, Carlsbad, CA) a 100 V por 1 hora. As proteínas foram transferidas para uma membrana de nitrocelulose (LC2001, Invitrogen, Carlsbad, CA) usando tampão de transferência (NP0006465029, Invitrogen, Carlsbad, CA) a 30 V por 1 hora. As membranas foram bloqueadas em leite em pó sem gordura 10% (Nestle, Glendale, Califórnia) em TBS-T de um dia para o outro a 4°C. Após várias lavagens em TBS-T em temperatura ambiente, as membranas foram incubadas com Ab monoclonal de camundongo anti-p-STAT3 (SC-8059, Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA), que foi diluído 1:1.000 em TBS-T por 4 horas a 4°C em um agitador orbital. Após várias lavagens, as membranas foram então incubadas com IgG-HRP de asno anti-camundongo (1:1.000) (SC-2318, Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA) em temperatura ambiente por 2 horas em um misturador orbital. Após várias lavagens, as amostras foram detectadas com a utilização do kit de reagentes e análise de detecção western blot ECLplus (RPN2108, Amersham Biosciences, Piscataway, NJ) seguindo o protocolo do fabricante, e visualizadas por exposição à película ECL. As membranas tiveram então o Ab removido ao serem submergidas em 100 mM de DTT, SDS 2%, 62,5% mM de Tris-HCI, pH 6,7 a 100°C por 30 minutos com agitação. As membranas foram então lavadas em TBS-T e bloqueadas de um dia para o outro com o leite em pó sem gordura 10%. As membranas foram lavadas e incubadas com anti-STAT3 (1:1.000) (SC-7179, Santa Cruz Biotechnology) em TBS-T por 2 horas a 4°C, lavadas 5 vezes, seguido por uma incubação de 1 hora com IgG-HRP de cabra anticoelho (1:1.000) (SC2030, Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA), e detectadas com o uso de ECLplus. Todas as membranas foram rotineiramente raspadas e resondadas com STAT3 para demonstrar a presença da proteína STAT3.
[00282] Os resultados mostraram que o anticorpo humano projetado anti-IL-6 bloqueou a fosforilação de stat3 mediada por IL-6, um componente crucial na via de sinalização de IL-6 (Figuras 5A e 5B). O anticorpo humano projetado anti-IL-6 (AME-19A) inibe a fosforilação de stat3 induzida por IL6/sIL-6R. A fosforilação de stat3 induzida por IL-6 humana recombinante/sIL-6R foi detectada em células THP-1 (Figura 5B). A adição de 10 μg/ml de anticorpo humano projetado anti-IL-6 (AME-19A) ou de anticorpo quimérico anti-IL-6 inibiu completamente a fosforilação de stat3 (Figura 5B). A figura 5A mostra a presença de uma quantidade similar de proteína stat3 não fosforilada em todas as amostras que correspondem aos diferentes clones humanos projetados anti-IL-6. Como aqui usado, CNTO328 (ou 328) designa o anticorpo quimérico humano-murídeo (também denominado do tipo selvagem (WT)), 150 designa o clone AME-22a, 143 designa o clone AME- 23a, 140 designa o clone AME-20b, 136 designa o clone AME-19a, 130 designa o clone AME-18a, 106 designa o clone AME-A16, 104 designa o clone AME-A9.Eficácia in vivo do anticorpo humano projetado anti-IL-6
[00283] A eficácia do anticorpo humano projetado anti-IL-6 foi avaliada em dois modelos in vivo diferentes. Primeiro, os efeitos do anticorpo anti-IL-6 humano projetado e do quimérico foram testados e comparados em um ensaio de angiogênese induzida por IL-6 humana em Matrigel em camundongos. Duzentos ng/ml de IL-6 humana foram incluídos no plug de Matrigel. Dois plugs de Matrigel foram injetados em cada camundongo atímico (nude). Grupos de seis camundongos receberam uma injeção i.v. de 1, 3, ou 6 mg/kg de anticorpo anti-IL-6 humano projetado ou quimérico. Também foi injetado PBS ou um mAb de controle de isótipo para os grupos de controle. Os plugs foram removidos no 7° dia e a angiogênese foi medida por teor de hemoglobina, comprimento do microvaso, e número de microvasos nos plugs. Os resultados mostraram que IL-6 humana (grupo de PBS) estimulou angiogênese no modelo de plug de Matrigel, como medido por todos os três parâmetros.
[00284] O anticorpo humano projetado anti-IL-6 (AME-19A) inibe o número médio de microvasos nos plugs de Matrigel. Além disso, o anticorpo humano projetado anti-IL-6 (AME-19A) inibe o comprimento médio dos microvasos em plugs de Matrigel. Além disso, o anticorpo humano projetado anti-IL-6 (AME-19A) inibe o nível de hemoglobina em plugs de Matrigel.
[00285] Além disso, o anticorpo anti-IL-6 tanto humano projetado (AME-19A) quanto quimérico inibiram de forma dose-dependente a angiogênese mediada por IL-6 em camundongos atímicos. Finalmente, os anticorpos anti-IL-6 humano projetado e quimérico exibiram atividade comparável na inibição da angiogênese induzida por IL-6 a 6 mg/kg, a maior dose testada. Embora o anticorpo quimérico anti-IL-6 tenha inibido significativamente a angiogênese induzida por IL-6 humana a 3 mg/kg, como medido pelo comprimento dos vasos e pelo número de vasos, não foram detectadas diferenças estatisticamente significativas entre o anticorpo anti-IL-6 humano projetado e o quimérico nessas doses.
[00286] Foi desenvolvido um modelo in vivo adicional para avaliar ainda mais o efeito do anticorpo humano projetado anti-IL-6 sobre a produção do reagente da fase aguda induzido por IL-6 humana, a proteína sérica amilóide A (SAA) em camundongos Balb/C. Os camundongos receberam uma administração i.p. de 0,01, 0,5 ou 5 mg/kg de anticorpo humano projetado anti-IL-6, 4 horas antes de uma administração i.v. de 5 μg/kg de IL-6 humana (Figura 6). Foram usados PBS e mAb de controle de isótipo como controles. Os níveis séricos de SAA foram determinados em 16 horas após a injeção de IL-6. Tanto o anticorpo anti-IL-6 humano projetado quanto o quimérico inibiram significativamente a produção de SAA induzida por IL-6 humana em camundongos Balb/C a 0,5 e 5 mg/kg, e o anticorpo humano projetado anti-IL-6 inibiu significativamente a produção de SAA na menor dose testada. No entanto, não foram observadas diferenças estatisticamente significativas entre o anticorpo anti-IL-6 humano projetado e quimérico em todas as três doses testadas (Figura 6).
[00287] A figura 6 mostra que o anticorpo humano projetado anti-IL- 6 inibe produção de SAA induzida por IL6 humana. Cada ponto representa o valor médio de SAA para cada animal, e a linha representa a média de todos os pontos de dados em cada grupo. Foi realizada comparação pareada e foram utilizados intervalos de confiança simultâneos de Tukey de 95% a fim de controlar o erro global do tipo I. (** p<0,001, *p<0,05).Exemplo 5 - Lógica terapêutica para mAb anti-IL-6Artrite reumatóide: efeito de mAb anti-IL-6 sobre a artrite induzida por colágeno (CIA)- um modelo animal de artrite reumatóide Modelos in vivo de doença pré-clínica
[00288] A IL-6 tem sido alvo de vários modelos in vivo. Anticorpo anti-IL-6 de camundongo de rato foi usado em modelos murínos padronizados ou mAb humanizado anti-IL-6R (80 kDa) (MRA; Chugai) foi usado em modelos de primatas e em um modelo de SCID (imunodeficiência combinada severa) humana/de camundongo. Na artrite murídea induzida por colágeno (CIA), anti-IL-6 foi eficaz na prevenção da doença, se usada precocemente (dia 0 ou 3° dia pós- imunização com colágeno), mas não em pontos do tempo posteriores. No modelo de transplante em SCID humana/de camundongo, no qual tecido sinovial humano é transplantado em camundongos imunodeficientes, o tratamento com MRA levou a um encolhimento dos implantes de tecido e à redução de células inflamatórias e osteoclastos. Na CIA em macacos cinomolgos, MRA inibiu o desenvolvimento de artrite e melhorou as medidas da fase aguda.
[00289] O efeito de um mAb anti-IL-6 de camundongo substituto sobre o desenvolvimento da doença foi avaliado em um modelo de CIA. Os resultados indicam que a administração i.p. de anti-IL-6 de camundongo a 1 mg/camundongo/semana, antes da indução da doença, suprimiu significativamente o desenvolvimento de artrite induzida por colágeno, o que se reflete na redução acentuada da gravidade da doença. A artrite foi induzida em camundongos DBA/1 LacJ com 8 semanas de idade com 100 μg de colágeno bovino do tipo II em adjuvante completo de Freund (FCA) por via intradérmica na base do rabo. Os camundongos foram monitorados clinicamente diariamente quanto ao surgimento de doença. mAb anti-IL-6 ou mAb de controle de isótipo foi administrado i.p. 2 dias antes da indução de CIA e depois semanalmente, a 1 mg/camundongo. A classificação da artrite foi determinada com base no edema, eritema e desfiguração da articulação.
[00290] Os dados histopatológicos confirmaram a observaçãoclínica de que a injeção i.p. semanal de mAb anti-IL-6 de camundongo melhorou significativamente os parâmetros da artrite induzida por colágeno. Todos os parâmetros de artrite examinados, incluindo a resposta inflamatória (sinovite e formação de pano) e as alterações erosivas (erosões e arquitetura articular global), foram significativamente melhorados nos camundongos tratados com anti-IL- 6 de camundongo, como comparados com animais de controle tratados com mAb. O mAb anti-IL-6 suprimiu a artrite no nível histopatológico. A sinovite foi classificada com base na espessura da membrana sinovial; a formação de pano foi classificada com base na extensão do pano em relação ao espaço articular; e as erosões foram classificadas com base na extensão na cartilagem e no osso subcondral.
[00291] A perda de proteínas da matriz de cartilagem foi significativamente reduzida em camundongos tratados com mAb anti- IL-6 de camundongo. Cortes articulares representativos obtidos dos animais de controle e dos animais tratados com mAb anti-IL-6 ao final do estudo (53° dia) foram examinados por coloração com azul de toluidina para a matriz da cartilagem.
[00292] A análise por Micro-TC apoiou a observação clínica de que o efeito da terapia com anti-IL-6 de camundongo era exercida no nível da progressão da doença dentro da articulação individual. A inspeção visual de imagens típicas por TC tridimensional indica o grau acentuado de alterações erosivas que ocorrem no grupo tratado com mAb de controle de isótipo, quando comparados com as alterações inflamatórias predominantemente leves de tecidos moles nas articulações dos animais tratados com anti-IL-6 de camundongo. Os experimentos foram realizados com animais representativos tratados com mAb de controle e animais tratados com mAb anti-IL-6 de camundongo.Lúpus. Efeito de anti-IL-6 em camundongos NZB/W F1
Modelos in vivo de doença pré-clínica
[00293] Existem modelos murídeos para o LES e eles possuem grandes semelhanças com a doença humana. Estudos de cepas MRL/lpr e NZB/W F1 demonstraram a hiperproliferação de células B, produção de auto-anticorpo e deposição de complexo imune que são muito parecidos com a doença humana. Demonstrou-se que mAb anti- IL-6 era eficaz na inibição da produção de auto-anticorpo, redução de proteinúria e aumento da sobrevida animal em camundongos NZB/W F1.
[00294] O efeito de um mAb anti-IL-6 de camundongo substituto sobre o desenvolvimento da doença do lúpus foi avaliado em camundongos NZB/W F1. Os resultados preliminares demonstraram que a administração i.p. de mAb anti-IL-6 de camundongo a 1 mg/camundongo/semana por 22 semanas suprimiu a produção de auto-anticorpo anti-dsDNA, um auto-anticorpo patogênico importante nesse modelo de doença (Figura 7). Os níveis de auto-anticorpo anti- dsDNA em animais tratados com mAb anti-IL-6 foramconsistentemente menores por todo o estudo, quando comparados com aqueles nos animais tratados com soro fisiológico e Ab de controle.
[00295] Como discutido anteriormente, a Figura 7 mostra a inibição da produção de auto-anticorpo anti-dsDNA por mAb anti-IL-6 em camundongos NZB/W F1. Um valor O.D. individual para cada amostra foi normalizado até um soro de controle positivo e apresentado como % do controle positivo. Cada ponto representa o % do controle positivo de cada amostra e a linha representa a média de todos os pontos de dados em cada grupo. Uma diferença significativa é indicada como *p<0,01.
[00296] Além disso, mAb anti-IL-6 inibiu a proliferação de células B e reduziu o dano renal quando um pequeno subconjunto dos animais foi examinado. Embora não haja diferenças significativas na proliferação de células T entre os diferentes grupos de tratamento ao final do estudo, a proliferação de células B induzida por anti-IgM e anti- CD40 foi mais lenta nos camundongos tratados com mAb anti-IL-6 comparada com a dos camundongos tratados com soro fisiológico ao longo do tempo, especificamente, após 34 semanas. Esse resultado é consistente com a produção reduzida de auto-anticorpo anti-dsDNA relatada acima e sugere que células B auto-reativas possam ser os alvos diretos e dominantes para o tratamento com mAb anti-IL-6.
[00297] A análise histopatológica indicou que os animais no estudo podiam ser categorizados em 3 grupos quanto à gravidade da doença renal (leve, moderada e severa) (Tabela 9). A patologia da doença renal em camundongos NZB/W F1 indica hiperplasia linfóide mista e deposição de complexo imune na membrana basal glomerular.
[00298] Os animais tratados com mAb anti-IL-6 desenvolveram doença renal menos severa. A hiperplasia linfóide mista perivascular e a deposição de proteína estavam ausentes nos animais tratados com mAb anti-IL-6, enquanto os animais tratados com soro fisiológico e Ab de controle desenvolveram hiperplasia linfóide mista perivascular moderada e severa e deposição de proteína. Além disso, a deposição de complexo imune na membrana basal glomerular foi leve nos animais tratados com mAb anti-IL-6, comparada com a ocorrida nos outros dois grupos de tratamento. É realizado um detalhamento adicional do mecanismo de ação de mAb anti-IL-6 sobre as funções de células B, T e macrófagos, uma vez que essas células têm uma participação crucial na patogênese do LES.
Diabetes melito do Tipo II
[00299] Foi indicado que a IL-6 tem uma participação importante no desenvolvimento de resistência à insulina associada à obesidade. No entanto, os dados in vitro e in vivo gerados até hoje tanto apóiam quanto se opõem à sua participação potencial na resistência à insulina.Experimentos in vitro
[00300] Foram realizados experimentos para melhor compreender os efeitos que IL-6 possa ter sobre a sinalização de insulina e sobre os efeitos e a função biológica da insulina, tais como captação de glicose, regulação gênica e mecanismos relacionados, com o uso de modelos in vitro de tecidos que respondem à insulina (células 3T3 L1 para tecido adiposo, células HepG2 para células hepáticas, células C2C12 para músculo esquelético) e modelos in vivo de resistência à insulina e DMT2, tais como camundongos db/db.
[00301] Os dados in vitro sugerem que IL-6 exerce seu efeito primário sobre a sinalização de insulina no fígado. O tratamento de células HepG2 com IL-6 leva à inibição da fosforilação de Akt induzida por insulina. Esse efeito inibidor da IL-6 sobre a sinalização de insulina é bloqueado por um anticorpo anti-IL-6. Foi sugerido que alterações no metabolismo da glicose e nos efeitos da insulina no fígado são as causas principais do desenvolvimento de resistência à insulina e T2D. São examinados os efeitos de IL-6 sobre a sinalização de insulina em células 3T3 L1 (linhagem celular de adipócitos) e C2C12 (linhagem celular de músculo esquelético) para determinar os mecanismos de IL- 6 no T2D.
[00302] 3T3 L1. Foram realizados experimentos com o uso dalinhagem celular de adipócitos de camundongo 3T3 L1. Em células 3T3 L1 90% diferenciadas, foi avaliado o efeito de IL-6 sobre a captação de glicose induzida por insulina. Nesses experimentos, o tratamento com 10 ng/ml de TNFα por 24 horas inibiuconsistentemente a captação de glicose induzida por insulina,enquanto 20 ng/ml de IL-6 não tiveram nenhum efeito. Esses dados sugerem que a atividade de IL-6 sobre o tecido adiposo não é o mecanismo primário da resistência à insulina mediada por IL-6, mas, em vez disso, o tecido adiposo pode ter uma fonte principal de IL-6 que então interfere com a sensibilidade à insulina no fígado e músculo. Os mesmos dados foram obtidos usando adipócitos humanos primários diferenciados de depósito subcutâneo. Foram testados os efeitos da IL-6 sobre a captação de glicose com o uso de adipócitos humanos primários de um depósito de gordura visceral, já que aquele depósito poderia ser mais relevante para a resistência à insulina associada à obesidade.
[00303] HepG2. As células HepG2 foram escolhidas como ummodelo in vitro representativo do tecido hepático. As células HepG2 são células da linhagem celular de hepatoma humano nas quais o efeito de IL-6 sobre a sinalização de insulina foi previamente demonstrado. Nos experimentos, 20 ng/ml de IL-6 bloquearam a fosforilação de Akt induzida por insulina, uma quinase crucial na via de sinalização de insulina, com o efeito máximo sendo observado após 60 minutos de incubação; esse dado é consistente com os resultados relatados na literatura científica.
[00304] A fosforilação de Akt em células HepG2 subconfluentes em placas de 10 cm foi medida após incubação de rh IL-6 (20 ng/ml) por 30, 60, 90 e 120 minutos. Durante os últimos 5 minutos de incubação, 0,5 nM, 1 nM e 5 nM de insulina foram adicionados para induzir a fosforilação de Akt. As células foram lisadas com o uso de tampão de lise RIPA modificado e a fosforilação de Akt foi medida com a utilização de ELISA Ser-Phospho-Akt. Os resultados foram obtidos usando kits ELISA pAkt e Akt (BioSource). Em 60 minutos de tratamento com IL-6, na presença de uma concentração fisiológica de insulina (0,5-1 nM), a fosforilação de Akt foi inibida em ~50%, comparada com o grupo de controle. As concentrações de proteína foram quantificadas com o kit de ensaio de proteína Pierce BCA.Efeito do anticorpo IL-6
[00305] Foi medida a habilidade do anticorpo humano projetadoanti-IL-6 para inibir os efeitos da IL-6 sobre a fosforilação de Akt induzida por insulina. Vinte μg/ml de anticorpo humano projetado anti- IL-6 foram capazes de inibir os efeitos da IL-6 em células HepG2. As Figuras 8A e 8B mostram o efeito de IL-6 na presença e ausência de anticorpo humano projetado anti-IL-6 sobre a fosforilação de Akt induzida por insulina.
[00306] Na imagem superior (Figura 8A), os dados representam a média +/- SEM. (*significativo comparado com (+) insulina, IL-6, P = 0,029; ** significativo comparado com (+) insulina +IL-6, P = 0,02). Células HepG2 subconfluentes foram tratadas com 20 ng/ml de IL-6 por 60 minutos. Durante os últimos 5 minutos de tratamento, 1 nM de insulina foi adicionado e as células foram lisadas com o uso de tampão RIPA modificado. As amostras foram analisadas por ELISA que detecta a fosforilação em Ser 473 de Akt. Todos os dados foram normalizados até a Akt total medida por ELISA. O tratamento com AME-19a foi capaz de restaurar a sinalização normal de Akt.
[00307] Na imagem inferior (Figura 8B), é mostrado um western blot representativo. As bandas superiores incluem amostras tratadas com IL-6 (20 ng/ml, 60 minutos, 5 minutos com 1 nM de insulina), AME-19a (20 μg/ml +/- IL-6 a 20 ng/ml por 60 minutos, 5 minutos com 1 nM de insulina) ou tampão. O blot foi sondado com anticorpo antifosfo Ser/Akt (apinel superior) (pS473, Biosource). As bandas inferiores (o mesmo blot foi raspado e ressondado com anti-Akt de BioSource) demonstram que proteína equivalente foi carregada por raia.
[00308] Método: Células HEPG2 cresceram em placas de cultura de tecido de 100 mm até a confluência. As células foram mantidas subalimentadas de um dia para o outro em DMEM-BSA 1%. AME-19a (20 μg/ml) foi incubado nas células por aproximadamente 30 minutos, antes da adição de IL-6. IL-6 (20 ng/ml) +/- AME-19a (20 μg/ml) foram incubadas por aproximadamente 30 minutos, antes da adição às células. As amostras foram incubadas nas células por 60 minutos, a 37°C; a seguir, 1 nM de insulina (concentração final) foi adicionado às células por 5 minutos, em temperatura ambiente. As células foram lavadas imediatamente com 3 enxágües de PBS gelado. As placas foram congeladas até a lise. Fosfo Akt e Akt total foram determinados com a utilização de kits ELISA (BioSource e Sigma). Referência: J.J. Senn, P.J. Kover, I.A. Nowak e R.A. Mooney. "Interleukin 6 induces cellular resistence to insulin in hepatocytes". Diabetes. 51: 3.3913.399, 2002.Hepatócitos primários de ratos
[00309] Hepatócitos primários representam um sistema in vitro adequado mais relevante para o teste do efeito de IL-6 e anticorpos anti-IL-6 (ou outros antagonistas de IL-6) sobre a sinalização de insulina e o efeito da insulina sobre a produção hepática de glicose. Para determinar a ativação de PI3 quinase (PI3K) em hepatócitos de ratos tratados por insulina, IL-6 e/ou mAb IL-6, células isoladas foram tratadas com insulina na presença e ausência de 5 ng/ml de IL-6, e a fosforilação do receptor de insulina, IRS-1 (Figura 12A) e Akt (Figura 12B) foi determinada usando ensaios ELISA e análise Western blot. Além disso, os efeitos de IL-6 sobre a associação IRS1/p85 estimulada por insulina foram examinados (Figuras 11A e B). Os experimentos foram realizados da seguinte forma:
[00310] Hepatócitos primários de ratos (aproximadamente com 2 meses de idade) em placas de 6 cavidades revestidas com colágeno foram equilibradas de um dia para o outro em meio Hepatoczyme. No dia seguinte, as células foram subalimentadas por 6 horas em DMEM- BSA 1%-penn strep; a seguir, incubadas com hIL-6 (5 ng/ml); anticorpo anti-IL-6 (AME-19a) (20 ng/ml) ou anticorpo anti-IL-6 (AME- 19a) + hIL-6 por 90 minutos a 37°C. As células foram pré-tratadas por 1 hora com anticorpo anti-IL-6 (AME-19a), antes da adição da combinação. A combinação também foi pré-incubada antes da adição às células. Cinco nM de insulina (de BioSource) foram adicionados às células por 5 minutos; depois, as células foram aspiradas e lisadas imediatamente com tampão de extração BioSource + inibidores de protease. Os lisados foram centrifugados e os sobrenadantes foram diluídos a 1:10 e testados em ELISAs (de Biosource).Associação IRS1/p85:
[00311] Quantidades iguais de proteína (45 μg) foram incubadas de um dia para o outro com 2 μg de anticorpo policlonal anti-IRS-1 (de Upstate, Item # 06-248). As amostras foram então imunoprecipitadas com glóbulos de proteína A por 1 hora, e eluídas com tampão de amostra 3x para SDS-PAGE. As amostras de IP foram então processadas em SDS-Page gel 4-12% e depois transferidas para membrana para análise Western blot. As membranas foram sondadas com: (1) mAb p85 diluído 1:100 (de Upstate, Item # 05-217) para IRS-1 associado a p85, ou seja, a PI3K ativa (como mostrado na FIG. 11A); e (2) mAb IRS-1 diluído 1:600 (de BD Biosciences, Item # 611395) para IRS-1 total como controle de carga (como mostrado na FIG. 11B).
[00312] Os dados indicam que o tratamento com IL-6 leva a uma diminuição da fosforilação induzida por insulina de IR, IRS-1 e Akt. Esse efeito da IL-6 era abolido quando as células foram pré-tratadas com anticorpo anti-IL-6 (clone AME-19a). Além disso, IL-6 inibiu a associação induzida por insulina de p85 (subunidades de PI3K) com IRS-1. Novamente, esse efeito da IL-6 era inibido por pré-tratamento com anticorpo anti-IL-6.Experimentos in vivo
[00313] Os efeitos de IL-6 sobre a sensibilidade à insulina ainda não foram testados intensamente em animais. A fim de avaliar se a terapia com anti-IL-6 melhoraria a sensibilidade à insulina e DMT2, camundongos db/db e C57/B16 machos em uma dieta rica em gordura foram tratados com anticorpo anti-IL-6 de camundongo comercial (obtido de R&D Systems).Camundongos db/dB
[00314] Os efeitos do tratamento com anti-IL-6 foram testados usando camundongos db/db de idades diferentes. Camundongos entre 8-10 semanas de idade são caracterizados por hiperinsulinemia e resistência à insulina e, dessa forma, representam os estágios iniciais da doença, enquanto os camundongos com 12-14 semanas de idade são caracterizados por níveis de glicose elevados, além de hiperinsulinemia e, desse modo, representam estágios avançados do DMT2. Ambos os grupos etários de camundongos são usados para testar a habilidade da terapia com anti-IL-6 para aumentar a sensibilidade à insulina e o controle glicêmico no teste de tolerância à glicose intraperitoneal (ipGTT).
[00315] Os camundongos db/db possuem uma sinalização de leptina não funcional em conseqüência da mutação dentro do receptor de leptina. Esses camundongos desenvolvem obesidade, hiperinsulinemia e resistência à insulina à medida que os camundongos envelhecem, com os primeiros sintomas sendo detectados quando os camundongos estão com 6-8 semanas de idade. Dois grupos de camundongos de idades diferentes — 8 e 12 semanas de idade — foram tratados com 5 mg/kg de mAb anti-IL-6 e foi realizado um teste de tolerância à glicose intraperitoneal (ipGTT) 1 dia e 7 dias pós-tratamento. O esquema de tratamento é mostrado na Figura 15.
[00316] Em animais com 8 semanas de idade, o tratamento com mAb anti-IL-6 não teve efeito sobre a depuração de glicose durante GTT. O tratamento com mAb anti-IL-6 produziu uma melhora da tolerância à glicose (GT) nos animais com 12 semanas de idade, embora o efeito não fosse estatisticamente significativo (p = 0,063). Essa melhora da GTT foi observada no 7° dia pós-tratamento. Além disso, amostras de soro coletadas antes e depois do término do estudo foram analisadas quanto aos seus perfis de adipocina e adiponectina. Os níveis de IL-6, TNFα e MCP-1 estavam abaixo dos níveis de detecção. Esses dados, considerados em conjunto com os resultados do ipGTT, podem sugerir que: animais db/db não são um bom modelo para estudar os efeitos de anti-IL-6 sobre a resistência à insulina; e os níveis teciduais de IL-6 são mais relevantes para um possível papel que IL-6 possa ter no desenvolvimento de resistência à insulina e DMT2.Obesidade induzida por dieta (DIO) — modelo animal para obesidade e resistência à insulina
[00317] Camundongos C57/B1 machos foram alimentados com uma dieta que compreende 60% de gordura por 20-35 semanas. Eles desenvolveram obesidade (o peso corporal médio foi de 50,5 gramas) e um aumento nos níveis sangüíneos de jejum de glicose (FBG > 145 mg/dl). Além disso, eles têm uma GT alterada. Os animais DIO foram tratados com 10 mg/kg de Ab anti-IL-6 murídeo (R&D Systems). No geral, eles receberam 50 mg/kg de mAb anti-IL-6 ao longo do período de 3 semanas. O ipGTT foi realizado após as primeiras 2 doses (5° dia), após a 4a dose (12° e 16° dias) e após a 5a dose (23° dia). Ao mesmo tempo, foi coletado sangue para medidas de adipocitocinas e adiponectina.
[00318] O tratamento com anti-IL-6 não melhorou a tolerância à glicose no 5° e 12° dias; no entanto, quando realizado no 16° e 23° dias, foi observado um aumento da depuração de glicose e também na evolução dos níveis de glicose. Essa melhora alcançou significância estatística em 39, 60 e 90 minutos durante GTT.
[00319] Em outro conjunto de experimentos, animais DIO foram tratados semanalmente (2 doses durante a primeira semana e 1 dose por semana pelas 4 semanas subseqüentes) com 10 e 20 mg/kg de Ab anti-IL-6 e 20 mg/kg de isótipo de IgG de controle por via i.p. Foram realizados HOMA-IR (após 2, 4 e 6 semanas de tratamento), ipGTT, ipITT e perfil de adipocina (em 6 semanas de tratamento).Análise HOMA-IR em animais DIO tratados com Ab Anti-IL-6:
[00320] Nesses estudos, houve uma diminuição na glicemia de jejum e nos níveis de insulina em animais DIO tratados com 10 e 20 mg/kg de Ab anti-IL-6 murídeo e controle de isótipo. Os animais tiveram seu sangue coletado e foi feita a determinação da glicemia de jejum e dos níveis de insulina com o uso de glicose Trace/DMA (ox) (thermo Electron Corp) e "Ultra Sensitive Rat Insulin Elisa" (Crystal Chem), respectivamente. Esses valores foram usados para determinar HOMA-IR. O índice HOMA-IR reflete o status de sensibilidade à insulina e apresenta boa correlação com o achado do estudo da pinça. HOMA-IR é calculado pela fórmula: (glicose de jejum (mM) X insulina de jejum (mIU/l))/22,5 (Figuras 13A, B e C).
[00321] As melhoras de HOMA—IR foram observadas após 2, 4 e 6 semanas de tratamento (as Figuras 13A-C mostram os dados após 6 semanas de tratamento). Ao final do estudo foram realizados ipGTT e ipITT. Em ambos os testes, o tratamento com anti-IL-6 (20 mg/ml) melhorou significativamente tanto a evolução quanto a depuração da glicose, quando comparado com os animais tratados com isótipo.
[00322] A análise de adipocina e citocina de amostras de soro de animais de controle e tratados com anti-IL-6 indicou que a neutralização de IL-6 leva a uma diminuição na IL-6 circulante e nos níveis de TNFa, junto com uma tendência de diminuição dos níveis de MCP-1 e resistina. Em outro conjunto de dados, os níveis de adiponectina foram aumentados com o tratamento com anti-IL-6.
[00323] Foi realizada a análise histológica de amostras hepáticas dos grupos de tratamento e de controle. As amostras foram coradas com coloração "Oil Red O" para determinar o teor lipídico no parênquima hepático. O teor lipídico do fígado nos animais DIO era reduzido em resposta ao tratamento pelo anticorpo anti-IL-6 muri.
[00324] A coloração revela que 34% das amostras hepáticas tratadas com veículo eram relacionadas aos lipídeos em animais não tratados, e apenas 8% nos animais tratados com 20 mg/kg de anti-IL-6 (Figuras 14A-F). As Figuras 14A e D representam o grupo de controle; as Figuras 14B e E representam os animais DIO não tratados; e as Figuras 14C e F representam os animais tratados com anti-IL-6. O teor lipídico aumentado do fígado foi associado ao desenvolvimento de resistência à insulina e ao diabetes melito do Tipo 2. Dessa forma, é concebível que a neutralização de IL-6 leve a uma melhora da sensibilidade à insulina e do DMT2 ao afetar o metabolismo hepático de lipídeos. Esses dados em conjunto sugerem fortemente o papel de IL-6 na patologia do diabetes do Tipo 2 e que a neutralização de IL-6 poderia aumentar a sensibilidade à insulina.Estudos adicionais
[00325] Os efeitos de IL-6 na presença ou ausência de anticorpo humano projetado anti-IL-6 sobre a fosforilação de IRS1 estimulada por insulina, associação com p85/PI3K, fosforilação do receptor de insulina (IR), síntese de glicogênio e o envolvimento da sinalização de SOCS3 e STAT em células HepG2 foram monitorados. Experimentos adicionais examinaram o efeito de IL-6 sobre a secreção de insulina induzida por glicose por ilhotas pancreáticas. Os dados publicados até hoje descrevem efeitos tanto inibidores quanto estimuladores de IL-6 sobre a secreção de insulina por ilhotas de ratos. Ilhotas de rato recém-isoladas (de Liefscann) são tratadas com IL-6 e anticorpo humano projetado anti-IL-6 (AME- 19a) na presença ou ausência de glicose. Foram medidos os níveis de insulina secretados pelas ilhotas sob vários tratamentos.C2C12. Células C2C12 foram usadas para o estudo do efeito da insulina sobre o músculo esquelético. Foram realizados experimentos para examinar a expressão de IRS1 e Glut4, a fosforilação de IRS1 induzida por insulina e os efeitos de IL-6 sobre a ação de adiponectina. Vantagens:
[00326] A inibição da atividade de IL-6 pelo anticorpo IL-6 da presente invenção poderia representar um avanço terapêutico significativo, uma vez que ela será capaz de aumentar a sensibilidade à insulina e o controle metabólico, sem os efeitos colaterais dos agentes existentes. Além disso, as terapias atuais pouco fazem para o controle da inflamação sistêmica, a qual sugere-se seja a causa subjacente do DMT2 e das complicações diabéticas associadas. Espera-se que uma substância terapêutica como o anticorpo IL-6 da presente invenção, além de aumentar a sensibilidade à insulina, inibiria a inflamação sistêmica e evitaria o desenvolvimento de complicações diabéticas.
[00327] O número de pacientes afetados por DMT2 está em crescimento e estima-se que chegue a 300 milhões de pessoas por volta de 2025. Um anticorpo anti-IL-6 poderia ser usado como monoterapia ou em combinação com outros antidiabéticos orais já existentes, tais como sulfoniluréias, biguanidas (por exemplo, Metphormin), tiazolidinadionas, meglitinida (por exemplo, repaglinida), inibidores da alfa-glicosidase (por exemplo, acarbose). Além disso, ele poderia ser usado em combinação com insulina ou outras substâncias terapêuticas, de forma a aumentar a sensibilidade à insulina e melhorar o controle glicêmico e evitar eventos hipoglicêmicos que estão associados ao tratamento com insulina. Espera-se também que, além do aumento da sensibilidade à insulina e da regulação dos níveis de glicose em pacientes com DMT2 e Síndrome Metabólica, a terapia com anti-IL-6 teria um efeito benéfico sobre as alterações cardiovasculares freqüentemente observadas nesses pacientes. See Saltiel, A.R., e Kahn, C.R. 2001. Nature 414: 799-806; Hansen, B.C., 1995. Diabetes Care 18: A2-A9; "Diabetes Prevention Programresearch group". 2002. New Engl. J. Med., 346: 393-403; Hansen, B.C., 2000, Ann. New York Academy of Science,892: 1-24; Hsueh, W.A., e Quinones, M.J., 2003, Am. J. Cardiology, 93: 10J-17J; Resnick, H.E. e Howard, B.V., 2002, Ann. Rev. Med., 53: 245-267; Korner, J. e Aronne, L., 2003, J Clin. Invest., 111(5): 565-570; Skoog, T., e al., 2001. Diabetologia, 44: 654:655; Fernandez-Real, J.M., e Ricart W., 2003, Endocrine Reviews, 24(3): 278-301; Fernandez-Real, J.M., e al., 2001, J. Clin. Endocrinol. Metab., 86: 1.154-1.159.; 10a. Fried, S., e al., 1998. J. Clin. Endocrinol. Metab., 83: 847-850; Senn, J.J., e al., 2002, Diabetes, 51: 3.391-3.399; Rotter, V., e al., 2003, JBC em impressão, Manus. #301977200; 12a. Stouthard, J.M., e al., 1996, BBRC, 220: 241-245; Southern, C., e al., 1990, Biochem J., 272: 243245; Sandler, S., e al., 1990, Endocrinology, 126: 1.288-1.294; Pedersen, B.K., e al., 2001, J Physiol., 536: 329-337; DiCosmo, B.F., e al., 1994, Int. Immunol., 6: 1.829-1.837; Wallenius, V., e al., 2002, Nature Medicine, 8: 75-79; Vozarova, B., e al., 2003, Human Genetic, 112: 409-413; Kubaszek, A., e al., 2003, Diabetes, 52: 558-461; Tsigos, C., e al., 1997, J. Clin. Endocrinol. Metab, 82: 4.167-4.170; Stoutharad, J.M., e al., 1995, Am. J. Physiol., 268; E813-E819; Kern, P.A., e al., 2001, Am. J. Physiol. Endocrinol. Metab., 280: E745-E751; Bastard, J.P., e al., 2000, J. Clon. Endocrinol. Metab., 85: 3.338-3.342; e Bastard, J.P., e al., 2002, J. Clin. Endocrinol. Metab., 87: 2.0842.089.
[00328] Ficará evidente que a invenção pode ser praticada de uma forma diferente da forma particularmente descrita na descrição e nos exemplos apresentados anteriormente. Várias modificações e variações da presente invenção são possíveis à luz dos ensinamentos acima e, portanto, estão dentro do escopo das reivindicações e anexo. TABELA 1 - CDRs de cadeia leve
Figure img0001
Figure img0002
Figure img0003
Figure img0004
Figure img0005
Figure img0006
Figure img0007
Figure img0008
Figure img0009
Figure img0010
[00329] Reatividade entre espécies de anticorpo humanoprojetado e anticorpo quimérico. Os anticorpos humanos projetados e os anticorpos quiméricos são capazes de neutralizar a proliferação de células 7TD1 que foram estimuladas por sobrenadantes condicionados de PBMCs de humanos, micos, macaco cinomolgos, chimpanzé, macaco rhesus, babuíno, macaca menestrina e macacos de cabeça branca. "+" positivo no ensaio de neutralização; "-" negativo no ensaio de neutralização; N/D, não determinado.Tabela 9 - Impacto do tratamento com mAb anti-IL-6 sobre a patologia renal em camundongos NZB/W F1* Severo - A hiperplasia linfóide mista perivascular, hipercelularidade mesangial, deposição de proteína, deposição de complexo imune na membrana basal glomerularModerado - Moderada hiperplasia linfóide mista perivascular, moderada hipercelularidade mesangial, deposição de complexo imune na membrana basal glomerular, nenhuma deposição de proteína
Figure img0011
Figure img0012
Figure img0013
Figure img0014
Figure img0015
Tabela 11 - Seqüência de aminoácidos de uma região estruturalL6 de cadeia leve humana com seqüências de CDR rotuladas intercaladas(FRL1 - ID. DE SEQ. N°: 105) CDRL1 (FRL2 - ID. DE SEQ. N°: 106) CDRL2EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCXXXXXXXXXXWYQQKPGQAPRLLIYXXXX XXX(FRL3 - ID. DE SEQ. N°: 107) CDRL3 (FRL4 - ID. DE SEQ. N°: 108) GIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCXXXXXXXXXFGGGTKVEIKTabela 12 - Seqüência de aminoácidos de uma região estrutural VH3-7 de cadeia pesada humana com seqüências de CDR rotuladas intercaladas (FRH1 - ID. DE SEQ. N°: 109) CDRH1 (FRH2 - ID. DE SEQ. N°: 110)EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASXXXXXXXXXXWVRQAPGKGLEWVACDRH2 (FRH3 - ID. DE SEQ. N°: 111)XXXXXXXXXXXXXXXXXRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAE DTAVYYCARCDRH3 (FRH4 - ID. DE SEQ. N°: 112)XXXXXXXXXXWGQGTTVTVSSTabela 13 — Seqüências de CDR
Figure img0016
X1= A ou GX2 = S ou RX3 = H, I, S, ou YX4 = S ou YX5 = S ou FX6 = F, L, M, ou TX7 = N ou EX8 = A ou TX9 = M, C ou SX10= Q ou CX11 = T ou QX12 = F, S ou TX13 = S ou PX14 = L ou MX15 = A ou IX16 = S ou PX17 = Y ou WX18 = T, E, ou YX19 = Y ou FX20 = P, S, D, ou FX21 = V ou DX22 = T ou AX23 = G ou PX24 = S, Y, T, ou NX25 = Y, T, F, ou IID. DE SEQ. N°: 115 - SEQÜÊNCIA DE AMINOÁCIDO DAPROTEÍNA DE IL-6
[00330] MNSFSTSAFGPVAFSLGLLLVLPAAFPAPVPPGEDSKDVA APHRQPLTSSERIDKQIRYILDGISALRKETCNKSNMCESSKEALAEN NLNLPKMAEKDGCFQSGFNEETCLVKIITGLLEFEVYLEYLQNRFESS EEQARAVQMSTKVLIQFLQKKAKNLDAITTPDPTTNASLLTKLQAQNQ WLQDMTTHLILRSFKEFLQSSLRALRQM

Claims (14)

1. Anticorpo IL-6 isolado, caracterizado pelo fato de que compreende(i) uma sequência de aminoácidos da região variável da cadeia leve da SEQ ID NO: 101 e uma sequência de aminoácidos da região variável da cadeia pesada da SEQ ID NO: 103;(ii) uma sequência de aminoácidos da região variável da cadeia leve da SEQ ID NO: 124 e uma sequência de aminoácidos da região variável da cadeia pesada da SEQ ID NO: 126;(iii) uma sequência de aminoácidos da região variável da cadeia leve da SEQ ID NO: 116 e uma sequência de aminoácidos da região variável da cadeia pesada da SEQ ID NO: 118;(iv) uma sequência de aminoácidos da região variável da cadeia leve da SEQ ID NO: 120 e uma sequência de aminoácidos da região variável da cadeia pesada da SEQ ID NO: 122;(v) uma sequência de aminoácidos da região variável de cadeia leve da SEQ ID NO: 128 e uma sequência de aminoácidos da região variável da cadeia pesada da SEQ ID NO: 130; ou(vi) uma sequência de aminoácidos da região variável de cadeia leve da SEQ ID NO: 97 e uma sequência de aminoácidos da região variável da cadeia pesada da SEQ ID NO: 99.
2. Anticorpo IL-6 de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que o valor de EC50 é cerca de 2,7 x 10-11 ou menos.
3. Anticorpo IL-6 de acordo com a reivindicação 2, caracterizada pelo fato de que o valor de EC50 é cerca de 2,7 x 10-12 ou menos.
4. Molécula de ácido nucléico isolado, caracterizada pelo fato de que codifica pelo menos um anticorpo IL-6 isolado como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 3, em que a referida molécula de ácido nucleico compreende as SEQ ID NOs: 94, 98, 102, 96, 100 e 104, e sequências de nucleotídeos degeneradas quecodificam as mesmas proteínas.
5. Vetor de ácido nucléico isolado, caracterizado pelo fato de que compreende a molécula de ácido nucléico isolado, como definida na reivindicação 4.
6. Célula hospedeira de microrganismo transgênico, caracterizada pelo fato de que compreende a molécula de ácido nucléico isolado, como definida na reivindicação 4.
7. Método para a produção de pelo menos um anticorpo IL- 6, caracterizado pelo fato de que compreende a tradução da molécula de ácido nucléico, como definido na reivindicação 4, sob condições in vitro, in vivo ou in situ em não humanos, de tal forma que o anticorpo IL-6 seja expresso em quantidades detectáveis ou recuperáveis.
8. Composição, caracterizada pelo fato de que compreende pelo menos um anticorpo IL-6 isolado, como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 3, e pelo menos um veículo ou diluente farmaceuticamente aceitável.
9. Composição de acordo com a reivindicação 8, caracterizada pelo fato de que compreende ainda pelo menos um composto ou polipeptídeo selecionado de um rótulo ou repórter detectável, um antagonista de TNF, um fármaco antiinfeccioso, um fármaco para o sistema cardiovascular (CV), um fármaco para o sistema nervoso central (SNC), um fármaco para o sistema nervoso autônomo (SNA), um fármaco para o trato respiratório, um fármaco para o trato gastrointestinal (GI), um fármaco hormonal, um fármaco para o equilíbrio hídrico ou eletrolítico, um fármaco hematológico, um antineoplásico, um fármaco para imunomodulação, um fármaco oftálmico, óptico ou nasal, um fármaco tópico, um fármaco nutricional, uma citocina, e um antagonista de citocina.
10. Composição, caracterizada pelo fato de que compreende pelo menos um anticorpo IL-6 isolado, como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 3, para uso em terapia.
11. Dispositivo médico que compreende um anticorpo IL-6, como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizado pelo fato de que o referido dispositivo é adequado para o contato ou administração do referido anticorpo IL-6 por pelo menos um modo selecionado da administração parenteral, subcutânea, intramuscular, intravenosa, intra-articular, intrabrônquica, intraabdominal, intracapsular, intracartilaginosa, intracavitária, intracelíaca, intracerebelar, intracerebroventricular, intracólica, intracervical, intragástrica, intra-hepática, intramiocárdica, intra-óssea, intrapélvica, intrapericárdica, intraperitoneal, intrapleural, intraprostática,intrapulmonar, intra-retal, intra-renal, intra-retiniana, intramedular, intra- sinovial, intratorácica, intra-uterina, intravesical, intralesional, em bolo, vaginal, retal, bucal, sublingual, intranasal e transdérmica.
12. Artigo fabricado para uso farmacêutico ou diagnóstico humano, caracterizado pelo fato de que compreende material de embalagem e um recipiente que compreende uma solução ou uma forma liofilizada de anticorpo IL-6, como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 3.
13. Artigo fabricado de acordo com a reivindicação 12, caracterizado pelo fato de que o referido recipiente é um componente de um dispositivo ou sistema de liberação parenteral, subcutânea, intramuscular, intravenosa, intra-articular, intrabrônquica, intraabdominal, intracapsular, intracartilaginosa, intracavitária, intracelíaca, intracerebelar, intracerebroventricular, intracólica, intracervical, intragástrica, intra-hepática, intramiocárdica, intra-óssea, intrapélvica, intrapericárdica, intraperitoneal, intrapleural, intraprostática,intrapulmonar, intra-retal, intra-renal, intra-retiniana, intramedular, intra- sinovial, intratorácica, intra-uterina, intravesical, intralesional, em bolo, vaginal, retal, bucal, sublingual, intranasal ou transdérmica.
14. Anticorpo IL-6 isolado de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que compreende uma sequência de aminoácidos da região variável da cadeia leve codificada por uma das sequências de nucleotídeos das SEQ ID Nos: 98, 102, 117, 121, 125 e 129 e uma sequência de aminoácidos da região variável da cadeia pesada codificada por uma das sequências de nucleotídeos das SEQ ID NOs: 100, 104, 119, 123, 127 e 131.
BRPI0609869-0A 2005-04-29 2006-04-28 Anticorpo il-6 isolado, molécula e vetor de ácido nucléico isolado, célula hospedeira de microrganismo transgênico, método para produzir um anticorpo il-6, composição compreendendo o anticorpo il-6 isolado, dispositivo médico que compreende um anticorpo il-6 e artigo fabricado para uso farmacêutico ou diagnóstico humano BRPI0609869B1 (pt)

Applications Claiming Priority (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US67649805P 2005-04-29 2005-04-29
US60/676,498 2005-04-29
US67731905P 2005-05-03 2005-05-03
US60/677,319 2005-05-03
PCT/US2006/016457 WO2006119115A2 (en) 2005-04-29 2006-04-28 Anti-il-6 antibodies, compositions, methods and uses

Publications (2)

Publication Number Publication Date
BRPI0609869A2 BRPI0609869A2 (pt) 2010-05-11
BRPI0609869B1 true BRPI0609869B1 (pt) 2021-08-24

Family

ID=37308556

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
BRPI0609869-0A BRPI0609869B1 (pt) 2005-04-29 2006-04-28 Anticorpo il-6 isolado, molécula e vetor de ácido nucléico isolado, célula hospedeira de microrganismo transgênico, método para produzir um anticorpo il-6, composição compreendendo o anticorpo il-6 isolado, dispositivo médico que compreende um anticorpo il-6 e artigo fabricado para uso farmacêutico ou diagnóstico humano

Country Status (37)

Country Link
US (11) US7560112B2 (pt)
EP (3) EP1874351B1 (pt)
JP (4) JP4763043B2 (pt)
KR (1) KR101340950B1 (pt)
CN (2) CN102924596B (pt)
AR (1) AR053370A1 (pt)
AU (1) AU2006242347B2 (pt)
BR (1) BRPI0609869B1 (pt)
CA (1) CA2606348C (pt)
CR (1) CR9551A (pt)
CY (1) CY1120739T1 (pt)
DK (2) DK1874351T3 (pt)
EA (1) EA015262B1 (pt)
EC (1) ECSP077888A (pt)
ES (2) ES2676732T3 (pt)
HN (1) HN2006016512A (pt)
HR (2) HRP20150740T1 (pt)
HU (2) HUE025376T2 (pt)
IL (3) IL186965A0 (pt)
JO (1) JO3058B1 (pt)
LT (1) LT2842968T (pt)
ME (1) ME02185B (pt)
MY (2) MY142835A (pt)
NI (1) NI200700278A (pt)
NO (1) NO342898B1 (pt)
NZ (3) NZ589820A (pt)
PA (1) PA8672101A1 (pt)
PE (1) PE20061324A1 (pt)
PL (2) PL2842968T3 (pt)
PT (2) PT1874351E (pt)
RS (2) RS57474B1 (pt)
SI (2) SI2842968T1 (pt)
SV (1) SV2006002513A (pt)
TR (1) TR201809676T4 (pt)
TW (1) TWI445546B (pt)
WO (1) WO2006119115A2 (pt)
ZA (1) ZA200710264B (pt)

Families Citing this family (125)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US9453251B2 (en) 2002-10-08 2016-09-27 Pfenex Inc. Expression of mammalian proteins in Pseudomonas fluorescens
BRPI0513826A2 (pt) 2004-07-26 2010-06-22 Dow Global Technologies Inc processo para expressão de proteìna melhorada através de engenharia de cepa
JO3058B1 (ar) * 2005-04-29 2017-03-15 Applied Molecular Evolution Inc الاجسام المضادة لمضادات -اي ال-6,تركيباتها طرقها واستعمالاتها
WO2007043641A1 (ja) 2005-10-14 2007-04-19 Fukuoka University 膵島移植における移植膵島障害抑制剤
AR058135A1 (es) 2005-10-21 2008-01-23 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Agentes para el tratamiento de cardiopatias
AR057582A1 (es) 2005-11-15 2007-12-05 Nat Hospital Organization Agentes para suprimir la induccion de linfocitos t citotoxicos
AR057227A1 (es) * 2005-12-09 2007-11-21 Centocor Inc Metodo para usar antagonistas de il6 con inhibidores del proteasoma
SI1960430T1 (sl) 2005-12-09 2015-01-30 Ucb Pharma, S.A. Molekule protiteles s specifiäśnostjo za äśloveĺ ki il-6
ATE550353T1 (de) * 2005-12-30 2012-04-15 Merck Patent Gmbh Die bindung von mit il-6ralpha komplexiertem il-6 an gp130 verhindernde anti-il-6-antikörper
AU2007208678B2 (en) 2006-01-27 2013-01-10 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Therapeutic agents for diseases involving choroidal neovascularization
CN104761637B (zh) 2006-03-31 2021-10-15 中外制药株式会社 调控抗体血液动力学的方法
JP5754875B2 (ja) 2006-04-07 2015-07-29 国立大学法人大阪大学 筋再生促進剤
AU2007239679B2 (en) 2006-04-13 2012-10-11 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Taurine transporter gene
EP2021463B1 (en) * 2006-05-19 2016-11-23 Alder Biopharmaceuticals, Inc. Culture method for obtaining a clonal population of antigen-specific b cells
EP2043603A4 (en) * 2006-07-11 2010-10-27 Arubor Corp PREVENTION AND THERAPY OF RHINOSINUSITIS WITH PROINFLAMMATORY CYTOKINHERMERS
CN101563365B (zh) * 2006-08-03 2012-10-31 瓦西尼斯公司 抗-il-6单克隆抗体及其用途
WO2008042611A2 (en) * 2006-09-29 2008-04-10 Centocor, Inc. Method of using il6 antagonists with mitoxantrone for prostate cancer
TW200831528A (en) * 2006-11-30 2008-08-01 Astrazeneca Ab Compounds
TWI438208B (zh) 2007-01-23 2014-05-21 中外製藥股份有限公司 抑制慢性排斥反應之藥劑
JP5635260B2 (ja) 2007-03-15 2014-12-03 中外製薬株式会社 ポリペプチドの製造方法
US9580719B2 (en) 2007-04-27 2017-02-28 Pfenex, Inc. Method for rapidly screening microbial hosts to identify certain strains with improved yield and/or quality in the expression of heterologous proteins
US9394571B2 (en) 2007-04-27 2016-07-19 Pfenex Inc. Method for rapidly screening microbial hosts to identify certain strains with improved yield and/or quality in the expression of heterologous proteins
US7906117B2 (en) 2007-05-21 2011-03-15 Alderbio Holdings Llc Antagonists of IL-6 to prevent or treat cachexia, weakness, fatigue, and/or fever
US8404235B2 (en) 2007-05-21 2013-03-26 Alderbio Holdings Llc Antagonists of IL-6 to raise albumin and/or lower CRP
US20090238825A1 (en) * 2007-05-21 2009-09-24 Kovacevich Brian R Novel rabbit antibody humanization methods and humanized rabbit antibodies
DK2164514T3 (en) * 2007-05-21 2017-02-27 Alderbio Holdings Llc Antibodies to IL-6 and its use
US9701747B2 (en) 2007-05-21 2017-07-11 Alderbio Holdings Llc Method of improving patient survivability and quality of life by anti-IL-6 antibody administration
US8062864B2 (en) 2007-05-21 2011-11-22 Alderbio Holdings Llc Nucleic acids encoding antibodies to IL-6, and recombinant production of anti-IL-6 antibodies
US8252286B2 (en) 2007-05-21 2012-08-28 Alderbio Holdings Llc Antagonists of IL-6 to prevent or treat thrombosis
KR20170036814A (ko) * 2007-05-21 2017-04-03 앨더바이오 홀딩스 엘엘씨 신규한 래빗 항체 인간화 방법 및 인간화된 래빗 항체
TW201531484A (zh) 2007-05-21 2015-08-16 Alder Biopharmaceuticals Inc 抗ＴＮＦ-α之抗體及其用途
US8178101B2 (en) 2007-05-21 2012-05-15 Alderbio Holdings Inc. Use of anti-IL-6 antibodies having specific binding properties to treat cachexia
US20100303813A1 (en) 2007-06-08 2010-12-02 Biogen Idec Ma Inc. Biomarkers for predicting anti-tnf responsiveness or non-responsiveness
AU2008276451A1 (en) * 2007-07-17 2009-01-22 Zalicus Inc. Treatments of B-cell proliferative disorders
TW200914048A (en) * 2007-07-17 2009-04-01 Combinatorx Inc Combinations for the treatment of B-cell proliferative disorders
EP2174667B1 (en) * 2007-07-26 2017-01-04 Osaka University Agent for treatment of ophthalmia containing interleukin-6 receptor inhibitor as active ingredient
US8790714B2 (en) * 2007-08-03 2014-07-29 Nucitec, S.A. De C.V. Compositions and methods for treatment and prevention of osteoarthritis
KR101577839B1 (ko) * 2007-08-07 2015-12-15 추가이 세이야쿠 가부시키가이샤 이종 단백질의 제조 방법
ES2595638T3 (es) 2007-09-26 2017-01-02 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Método para modificar el punto isoeléctrico de un anticuerpo mediante la sustitución de aminoácidos en una CDR
KR101680906B1 (ko) 2007-09-26 2016-11-30 추가이 세이야쿠 가부시키가이샤 항체 정상영역 개변체
WO2009051109A1 (ja) 2007-10-15 2009-04-23 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha 異種タンパク質を高生産する細胞の作製方法
ES2548294T3 (es) 2007-10-24 2015-10-15 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Célula para su uso en la producción de proteína exógena, y procedimiento de producción usando la célula
KR102057826B1 (ko) 2008-04-11 2019-12-20 추가이 세이야쿠 가부시키가이샤 복수 분자의 항원에 반복 결합하는 항원 결합 분자
MX2010012031A (es) 2008-05-13 2011-01-20 Novimmune Sa Anticuerpos anti-il-6/il-6r y metodos de uso de los mismos.
US8277804B2 (en) * 2008-05-21 2012-10-02 Alderbio Holdings Llc Antagonists of IL-6 to prevent or treat thrombosis
CA2728243C (en) 2008-06-05 2020-03-10 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Il-6 inhibitor for suppressing neuroinvasion in pancreatic cancer
US20100009934A1 (en) * 2008-06-09 2010-01-14 Combinatorx, Incorporated Beta adrenergic receptor agonists for the treatment of b-cell proliferative disorders
US8188235B2 (en) * 2008-06-18 2012-05-29 Pfizer Inc. Antibodies to IL-6 and their uses
TWI440469B (zh) 2008-09-26 2014-06-11 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Improved antibody molecules
AU2009313958B2 (en) * 2008-11-13 2015-09-10 Femta Pharmaceuticals, Inc. Humanized anti-IL-6 antibodies
US8420089B2 (en) 2008-11-25 2013-04-16 Alderbio Holdings Llc Antagonists of IL-6 to raise albumin and/or lower CRP
US8323649B2 (en) 2008-11-25 2012-12-04 Alderbio Holdings Llc Antibodies to IL-6 and use thereof
KR20110112307A (ko) * 2008-11-25 2011-10-12 앨더 바이오파마슈티컬즈, 인코포레이티드 알부민을 상승시키고 및／또는 ｃｒｐ를 낮추는 ｉｌ­６의 길항제
US8992920B2 (en) 2008-11-25 2015-03-31 Alderbio Holdings Llc Anti-IL-6 antibodies for the treatment of arthritis
US9452227B2 (en) 2008-11-25 2016-09-27 Alderbio Holdings Llc Methods of treating or diagnosing conditions associated with elevated IL-6 using anti-IL-6 antibodies or fragments
US9212223B2 (en) 2008-11-25 2015-12-15 Alderbio Holdings Llc Antagonists of IL-6 to prevent or treat thrombosis
US8337847B2 (en) * 2008-11-25 2012-12-25 Alderbio Holdings Llc Methods of treating anemia using anti-IL-6 antibodies
CN104119438A (zh) * 2009-01-29 2014-10-29 米迪缪尼有限公司 延长体内半衰期的人抗il-6抗体及其在治疗肿瘤、自身免疫性疾病和炎症性疾病中的应用
JP5717624B2 (ja) 2009-03-19 2015-05-13 中外製薬株式会社 抗体定常領域改変体
EP2826789A1 (en) 2009-03-19 2015-01-21 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Antibody constant region variant
EP2423309B1 (en) 2009-04-22 2018-01-03 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha A method for producing a cell capable of high-yield production of heteroproteins
WO2011013786A1 (ja) * 2009-07-31 2011-02-03 Maeda Shin 癌の転移抑制剤
US9775921B2 (en) 2009-11-24 2017-10-03 Alderbio Holdings Llc Subcutaneously administrable composition containing anti-IL-6 antibody
CN102740888B (zh) * 2009-11-24 2016-10-12 奥尔德生物制药公司 Il-6抗体及其用途
BR112012026545A2 (pt) * 2010-04-16 2019-09-24 Univ Mcmaster composições e métodos para tratar exacerbação de copd
WO2011149051A1 (ja) 2010-05-28 2011-12-01 中外製薬株式会社 抗腫瘍t細胞応答増強剤
US8524215B2 (en) 2010-08-02 2013-09-03 Janssen Biotech, Inc. Absorbable PEG-based hydrogels
CN101993152B (zh) * 2010-09-21 2012-06-20 浙江大学 一种增强油脂降解菌降解能力的激活剂及其用途和使用方法
CA2818813C (en) 2010-11-23 2020-10-06 Alder Biopharmaceuticals, Inc. Anti-il-6 antibodies for the treatment of oral mucositis
EP2647706B1 (en) 2010-11-30 2023-05-17 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Antigen-binding molecule capable of binding to plurality of antigen molecules repeatedly
CN103620032B (zh) 2010-12-31 2016-02-24 生物蛋白有限公司 抗体的快速人源化
JP6211931B2 (ja) 2011-03-09 2017-10-11 セル・シグナリング・テクノロジー・インコーポレイテツド モノクローナル抗体を作製するための方法および試薬
CN107233569B (zh) 2011-10-25 2021-08-31 普罗西纳生物科学有限公司 抗体制剂和方法
WO2013175276A1 (en) * 2012-05-23 2013-11-28 Argen-X B.V Il-6 binding molecules
RU2656162C2 (ru) 2012-10-22 2018-05-31 Фоунтейн Биофарма Инк. Антитела к интерлейкину 6 и их применение
CN104768578A (zh) * 2012-10-25 2015-07-08 米迪缪尼有限公司 稳定的低粘度抗体配制品
US10782290B2 (en) 2013-06-11 2020-09-22 National Center Of Neurology And Psychiatry Method for predicting post-therapy prognosis of relapsing-remitting multiple sclerosis (RRMS) patient, and method for determining applicability of novel therapy
RU2545724C1 (ru) * 2013-10-08 2015-04-10 Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Дагестанская государственная медицинская академия" Министерства здравоохранения РФ Способ лечения трофических язв и длительно незаживающих гнойных ран
MX384984B (es) 2013-10-10 2025-03-14 Beth Israel Deaconess Medical Ct Inc Proteinas de union del miembro 1 de la familia de transmembrana 4 l-seis (tm4sf1) y metodos de uso de las mismas.
US8916341B1 (en) * 2013-11-04 2014-12-23 Allied Innovative Systems, Llc Methods for improving analyte detection using photochemical reactions
RU2550262C1 (ru) * 2014-02-28 2015-05-10 Федеральное государственное унитарное предприятие "Государственный научно-исследовательский институт особо чистых биопрепаратов" Федерального медико-биологического агентства Моноклональное антитело против интерлейкина-6 человека и гибридома, продуцирующая данное моноклональное антитело
DK3143134T3 (da) 2014-05-15 2021-01-04 Nat Univ Singapore Modificerede, naturlige dræberceller og anvendelser deraf
TWI713453B (zh) 2014-06-23 2020-12-21 美商健生生物科技公司 干擾素α及ω抗體拮抗劑
US9840553B2 (en) 2014-06-28 2017-12-12 Kodiak Sciences Inc. Dual PDGF/VEGF antagonists
CN106794363A (zh) * 2014-08-04 2017-05-31 法布里齐奥·德西尔韦斯特里 在单一丸剂/片剂/胶囊中米诺环素、氟康唑和阿托伐他汀在治疗多发性硬化中的用途
KR20210013299A (ko) 2014-10-17 2021-02-03 코디악 사이언시스 인코포레이티드 부티릴콜린에스테라제 양성이온성 중합체 컨쥬게이트
IL308212A (en) 2015-01-20 2024-01-01 Igm Biosciences Inc Tumor necrosis factor-α receptor binding molecules and their uses
CA2972393A1 (en) 2015-02-27 2016-09-01 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Composition for treating il-6-related diseases
US10697883B2 (en) 2015-05-19 2020-06-30 National Center Of Neurology And Psychiatry Method for determining application of therapy to multiple sclerosis (MS) patient
CA2991637C (en) 2015-07-31 2022-07-05 Medimmune Limited Methods for treating hepcidin-mediated disorders
US11254744B2 (en) 2015-08-07 2022-02-22 Imaginab, Inc. Antigen binding constructs to target molecules
KR20250057128A (ko) 2015-12-30 2025-04-28 코디악 사이언시스 인코포레이티드 항체 및 이의 접합체
MA44631A (fr) * 2016-04-07 2019-02-13 Janssen Biotech Inc Traitement de la dépression à l'aide d'agents qui bloquent la liaison de l'il-6 au récepteur de l'il-6
KR20250011241A (ko) * 2016-05-05 2025-01-21 더 트러스티스 오브 더 유니버시티 오브 펜실바니아 Il-6 및 cd126을 표적으로하는 dna 단일 클론 항체
KR20200012823A (ko) 2017-02-01 2020-02-05 예일 유니버시티 이뇨제 내성의 치료
CA3056591A1 (en) 2017-03-27 2018-10-04 National University Of Singapore Stimulatory cell lines for ex vivo expansion and activation of natural killer cells
BR112019019917A2 (pt) 2017-03-27 2020-04-22 Nat Univ Singapore receptores quiméricos nkg2d truncados e seus usos em imunoterapia de células exterminadoras naturais
WO2018203545A1 (ja) 2017-05-02 2018-11-08 国立研究開発法人国立精神・神経医療研究センター Ｉｌ－６及び好中球の関連する疾患の治療効果の予測及び判定方法
JP7235249B2 (ja) 2017-10-20 2023-03-08 学校法人兵庫医科大学 抗ｉｌ－６受容体抗体を含有する術後の癒着を抑制するための医薬組成物
EP3735421A4 (en) 2018-01-05 2021-09-22 Corvidia Therapeutics, Inc. METHOD OF TREATMENT OF IL-6 MEDIATED INFLAMMATION WITHOUT IMMUNSUPPRESSION
WO2019151418A1 (ja) 2018-01-31 2019-08-08 元一 加藤 Ｉｌ－６阻害剤を含有する喘息の治療剤
EP3749685A4 (en) 2018-02-09 2021-12-22 National University of Singapore ACTIVATOR CHEMERIC RECEPTORS AND THEIR USES IN NATURAL KILLING CELL IMMUNOTHERAPY
EP3758737A4 (en) * 2018-03-02 2022-10-12 Kodiak Sciences Inc. IL-6 ANTIBODIES AND FUSION CONSTRUCTS AND CONJUGATES THEREOF
CN108588030B (zh) * 2018-03-30 2020-07-14 四川迈克生物新材料技术有限公司 抗人IgM单克隆抗体、其杂交瘤细胞株及应用
JP7334985B2 (ja) 2018-04-02 2023-08-29 ナショナル ユニヴァーシティー オブ シンガポール 免疫細胞で発現される膜結合抗サイトカイン非シグナル伝達バインダーによるヒトサイトカインの中和
WO2019236684A1 (en) * 2018-06-08 2019-12-12 Imaginab, Inc. Antigen binding constructs to cd4
EP3844186A4 (en) 2018-08-29 2022-08-17 National University of Singapore METHOD OF SPECIFIC STIMULATION OF SURVIVAL AND EXPANSION OF GENETICALLY MODIFIED IMMUNE CELLS
CA3120563A1 (en) 2018-11-26 2020-06-04 Nkarta, Inc. Methods for the simultaneous expansion of multiple immune cell types, related compositions and uses of same in cancer immunotherapy
WO2020178193A1 (en) 2019-03-01 2020-09-10 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Method of treatment of sarcoidosis
EP3773918A4 (en) 2019-03-05 2022-01-05 Nkarta, Inc. CD19 DIRECTED CHIMERIC ANTIGEN RECEPTORS AND THEIR USES IN IMMUNOTHERAPY
CN109946129A (zh) * 2019-03-12 2019-06-28 江苏中济万泰生物医药有限公司 五分类血细胞分析仪用质控品制备方法
EP3957324A4 (en) 2019-04-17 2023-02-08 Hiroshima University THERAPEUTIC FOR UROLOGICAL ONCOLOGY CHARACTERIZED BY BEING ADMINISTRATED IN COMBINATION WITH IL-6 INHIBITOR AND CCR2 INHIBITOR
JP7701273B2 (ja) 2019-05-01 2025-07-01 ノヴォ ノルディスク アー／エス 抗ｉｌ－６抗体製剤
CN114375205A (zh) 2019-06-20 2022-04-19 武田药品工业株式会社 用基于病毒的基因疗法进行治疗的方法
CA3157509A1 (en) 2019-10-10 2021-04-15 Kodiak Sciences Inc. Methods of treating an eye disorder
WO2021119669A1 (en) * 2019-12-12 2021-06-17 Loma Linda University Pathology Medical Group, Inc. Methods and compositions for treatment of acute myeloid leukemia
WO2021198929A1 (en) * 2020-03-31 2021-10-07 Janssen Biotech, Inc. Anti-il6 agent for treating coronavirus infection
WO2021236840A1 (en) * 2020-05-20 2021-11-25 The Regents Of The University Of California Rapid index for sab mortality kinetics ("risk") test
EP4159236A4 (en) 2020-05-29 2024-08-21 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Antibody-containing formulation
RU2745814C1 (ru) * 2020-06-05 2021-04-01 Закрытое Акционерное Общество "Биокад" Водная фармацевтическая композиция левилимаба и ее применение
WO2022005321A1 (en) * 2020-06-29 2022-01-06 Federal State Budgetary Institution Scientific center of biomedical technologies of Federal Medical and Biological Agency Inhaled tocilizumab for treating interleukin-6 related respiratory diseases
WO2022155404A1 (en) * 2021-01-14 2022-07-21 Translate Bio, Inc. Methods and compositions for delivering mrna coded antibodies
CN113409232B (zh) * 2021-06-16 2023-11-10 吉林大学 基于响尾蛇视觉成像的仿生假彩色图像融合模型及方法
CN113552116B (zh) * 2021-07-14 2023-08-18 四川农业大学 基于Ag@UiO-66-NH2/CsPbBr3的电致化学发光分子印迹传感器及应用
CN117949646B (zh) * 2023-12-31 2025-03-07 深圳市新产业生物医学工程股份有限公司 试剂组合以及免离心的全血中目标免疫抑制剂的检测方法

Family Cites Families (192)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3773919A (en) 1969-10-23 1973-11-20 Du Pont Polylactide-drug mixtures
US4309989A (en) 1976-02-09 1982-01-12 The Curators Of The University Of Missouri Topical application of medication by ultrasound with coupling agent
FR2374910A1 (fr) 1976-10-23 1978-07-21 Choay Sa Preparation a base d'heparine, comprenant des liposomes, procede pour l'obtenir et medicaments contenant de telles preparations
FR2413974A1 (fr) 1978-01-06 1979-08-03 David Bernard Sechoir pour feuilles imprimees par serigraphie
US5326859A (en) 1979-10-30 1994-07-05 Juridical Foundation, Japanese Foundation For Cancer Research DNA and recombinant plasmid
IL58765A (en) 1979-11-21 1986-09-30 Yeda Res & Dev Process for the production of essentially pure messenger rna of human fibroblast interferon and process for the production of interferon beta
US5554513A (en) 1979-11-21 1996-09-10 Yeda Research & Development Co. Ltd. Production of recombinant human interferon-beta2
US4399216A (en) 1980-02-25 1983-08-16 The Trustees Of Columbia University Processes for inserting DNA into eucaryotic cells and for producing proteinaceous materials
US4634665A (en) 1980-02-25 1987-01-06 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Processes for inserting DNA into eucaryotic cells and for producing proteinaceous materials
US5179017A (en) 1980-02-25 1993-01-12 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Processes for inserting DNA into eucaryotic cells and for producing proteinaceous materials
GB2097032B (en) 1981-04-22 1984-09-19 Teron International Urban Dev A combined ceiling air and services distribution system mechanical chasse and structural roof member
US4656134A (en) 1982-01-11 1987-04-07 Board Of Trustees Of Leland Stanford Jr. University Gene amplification in eukaryotic cells
US5149636A (en) 1982-03-15 1992-09-22 Trustees Of Columbia University In The City Of New York Method for introducing cloned, amplifiable genes into eucaryotic cells and for producing proteinaceous products
US5001116A (en) 1982-12-20 1991-03-19 The Children's Medical Center Corporation Inhibition of angiogenesis
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
US4818542A (en) 1983-11-14 1989-04-04 The University Of Kentucky Research Foundation Porous microspheres for drug delivery and methods for making same
US5807715A (en) 1984-08-27 1998-09-15 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Methods and transformed mammalian lymphocyte cells for producing functional antigen-binding protein including chimeric immunoglobulin
US5168062A (en) 1985-01-30 1992-12-01 University Of Iowa Research Foundation Transfer vectors and microorganisms containing human cytomegalovirus immediate-early promoter-regulatory DNA sequence
US4683195A (en) 1986-01-30 1987-07-28 Cetus Corporation Process for amplifying, detecting, and/or-cloning nucleic acid sequences
US4965188A (en) 1986-08-22 1990-10-23 Cetus Corporation Process for amplifying, detecting, and/or cloning nucleic acid sequences using a thermostable enzyme
US4683202A (en) 1985-03-28 1987-07-28 Cetus Corporation Process for amplifying nucleic acid sequences
US6492107B1 (en) 1986-11-20 2002-12-10 Stuart Kauffman Process for obtaining DNA, RNA, peptides, polypeptides, or protein, by recombinant DNA technique
DE229046T1 (de) 1985-03-30 1987-12-17 Marc Genf/Geneve Ballivet Verfahren zum erhalten von dns, rns, peptiden, polypeptiden oder proteinen durch dns-rekombinant-verfahren.
SE448277B (sv) 1985-04-12 1987-02-09 Draco Ab Indikeringsanordning vid en doseringsanordning for lekemedel
US4766067A (en) 1985-05-31 1988-08-23 President And Fellows Of Harvard College Gene amplification
US4870163A (en) 1985-08-29 1989-09-26 New York Blood Center, Inc. Preparation of pure human tumor necrosis factor and hybridomas producing monoclonal antibodies to human tumor necrosis factor
US4676980A (en) 1985-09-23 1987-06-30 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Target specific cross-linked heteroantibodies
US5618920A (en) 1985-11-01 1997-04-08 Xoma Corporation Modular assembly of antibody genes, antibodies prepared thereby and use
US5576195A (en) 1985-11-01 1996-11-19 Xoma Corporation Vectors with pectate lyase signal sequence
DE3600905A1 (de) 1986-01-15 1987-07-16 Ant Nachrichtentech Verfahren zum dekodieren von binaersignalen sowie viterbi-dekoder und anwendungen
GB8601597D0 (en) 1986-01-23 1986-02-26 Wilson R H Nucleotide sequences
US4800159A (en) 1986-02-07 1989-01-24 Cetus Corporation Process for amplifying, detecting, and/or cloning nucleic acid sequences
SE453566B (sv) 1986-03-07 1988-02-15 Draco Ab Anordning vid pulverinhalatorer
US5225539A (en) 1986-03-27 1993-07-06 Medical Research Council Recombinant altered antibodies and methods of making altered antibodies
US4767402A (en) 1986-07-08 1988-08-30 Massachusetts Institute Of Technology Ultrasound enhancement of transdermal drug delivery
AU610083B2 (en) 1986-08-18 1991-05-16 Clinical Technologies Associates, Inc. Delivery systems for pharmacological agents
US4889818A (en) 1986-08-22 1989-12-26 Cetus Corporation Purified thermostable enzyme
US4946778A (en) 1987-09-21 1990-08-07 Genex Corporation Single polypeptide chain binding molecules
US4704692A (en) 1986-09-02 1987-11-03 Ladner Robert C Computer based system and method for determining and displaying possible chemical structures for converting double- or multiple-chain polypeptides to single-chain polypeptides
US5260203A (en) 1986-09-02 1993-11-09 Enzon, Inc. Single polypeptide chain binding molecules
DE3631229A1 (de) 1986-09-13 1988-03-24 Basf Ag Monoklonale antikoerper gegen humanen tumornekrosefaktor (tnf) und deren verwendung
US4921794A (en) 1987-01-14 1990-05-01 President And Fellows Of Harvard College T7 DNA polymerase
US4795699A (en) 1987-01-14 1989-01-03 President And Fellows Of Harvard College T7 DNA polymerase
EP0832981A1 (en) 1987-02-17 1998-04-01 Pharming B.V. DNA sequences to target proteins to the mammary gland for efficient secretion
JP2647427B2 (ja) 1987-04-24 1997-08-27 帝人株式会社 被検者の病態の判定のための検出方法、モノクロ−ナル抗体および検出キット
US4873316A (en) 1987-06-23 1989-10-10 Biogen, Inc. Isolation of exogenous recombinant proteins from the milk of transgenic mammals
US4939666A (en) 1987-09-02 1990-07-03 Genex Corporation Incremental macromolecule construction methods
IL88375A (en) 1988-11-14 1995-07-31 Yeda Res & Dev Monoclonal antibodies that specifically bind interferon-bia 2 natural and recombinant and a natural and recombinant interferon-beta 2 purification method and method
US6010902A (en) 1988-04-04 2000-01-04 Bristol-Meyers Squibb Company Antibody heteroconjugates and bispecific antibodies for use in regulation of lymphocyte activity
US4956288A (en) 1988-04-22 1990-09-11 Biogen, Inc. Method for producing cells containing stably integrated foreign DNA at a high copy number, the cells produced by this method, and the use of these cells to produce the polypeptides coded for by the foreign DNA
US5130238A (en) 1988-06-24 1992-07-14 Cangene Corporation Enhanced nucleic acid amplification process
US5601819A (en) 1988-08-11 1997-02-11 The General Hospital Corporation Bispecific antibodies for selective immune regulation and for selective immune cell binding
US5223409A (en) 1988-09-02 1993-06-29 Protein Engineering Corp. Directed evolution of novel binding proteins
US5066584A (en) 1988-09-23 1991-11-19 Cetus Corporation Methods for generating single stranded dna by the polymerase chain reaction
US5142033A (en) 1988-09-23 1992-08-25 Hoffmann-La Roche Inc. Structure-independent DNA amplification by the polymerase chain reaction
US5091310A (en) 1988-09-23 1992-02-25 Cetus Corporation Structure-independent dna amplification by the polymerase chain reaction
GB8823869D0 (en) 1988-10-12 1988-11-16 Medical Res Council Production of antibodies
US6682896B1 (en) 1988-10-14 2004-01-27 Schering Aktiengesellschaft Peptides representing epitopic sites on r-IFN-β, antibodies thereto and uses thereof
US5530101A (en) 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
US4994370A (en) 1989-01-03 1991-02-19 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services DNA amplification technique
US5116964A (en) 1989-02-23 1992-05-26 Genentech, Inc. Hybrid immunoglobulins
US5225538A (en) 1989-02-23 1993-07-06 Genentech, Inc. Lymphocyte homing receptor/immunoglobulin fusion proteins
US5266491A (en) 1989-03-14 1993-11-30 Mochida Pharmaceutical Co., Ltd. DNA fragment and expression plasmid containing the DNA fragment
DE3909708A1 (de) 1989-03-23 1990-09-27 Boehringer Mannheim Gmbh Verfahren zur herstellung bispezifischer antikoerper
CA2016841C (en) 1989-05-16 1999-09-21 William D. Huse A method for producing polymers having a preselected activity
CA2016842A1 (en) 1989-05-16 1990-11-16 Richard A. Lerner Method for tapping the immunological repertoire
AU652539B2 (en) 1989-05-16 1994-09-01 Medical Research Council Co-expression of heteromeric receptors
EP0399429A1 (en) 1989-05-22 1990-11-28 Toray Industries, Inc. Anti-human interleukin-6 monoclonal antibody
ES2096590T3 (es) 1989-06-29 1997-03-16 Medarex Inc Reactivos biespecificos para la terapia del sida.
JP3443119B2 (ja) 1989-08-07 2003-09-02 ペプテック リミテッド 腫瘍壊死因子結合リガンド
AU638762B2 (en) 1989-10-05 1993-07-08 Optein Inc Cell-free synthesis and isolation of novel genes and polypeptides
JPH05503098A (ja) 1989-12-15 1993-05-27 カイロン　コーポレイション セプシスの処理のためのサイトカイン抗体
US5580575A (en) 1989-12-22 1996-12-03 Imarx Pharmaceutical Corp. Therapeutic drug delivery systems
DE69120146T2 (de) 1990-01-12 1996-12-12 Cell Genesys Inc Erzeugung xenogener antikörper
US5942220A (en) 1990-03-16 1999-08-24 Chiron Corporation Inhibitor of cytokine activity and applications thereof
US5210075A (en) 1990-02-16 1993-05-11 Tanabe Seiyaku Co., Ltd. Interleukin 6 antagonist peptides
TW212184B (pt) 1990-04-02 1993-09-01 Takeda Pharm Industry Co Ltd
US5427908A (en) 1990-05-01 1995-06-27 Affymax Technologies N.V. Recombinant library screening methods
DK0600866T3 (da) 1990-06-01 1998-03-09 Chiron Corp Præparater og fremgangsmåder til identifikation af biologisk aktive molekyler
US5723286A (en) 1990-06-20 1998-03-03 Affymax Technologies N.V. Peptide library and screening systems
WO1992000373A1 (en) 1990-06-29 1992-01-09 Biosource Genetics Corporation Melanin production by transformed microorganisms
US5580734A (en) 1990-07-13 1996-12-03 Transkaryotic Therapies, Inc. Method of producing a physical map contigous DNA sequences
US5633425A (en) 1990-08-29 1997-05-27 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
US5545806A (en) 1990-08-29 1996-08-13 Genpharm International, Inc. Ransgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5625126A (en) 1990-08-29 1997-04-29 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US6300129B1 (en) 1990-08-29 2001-10-09 Genpharm International Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5789650A (en) 1990-08-29 1998-08-04 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5661016A (en) 1990-08-29 1997-08-26 Genpharm International Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies of various isotypes
ATE158021T1 (de) 1990-08-29 1997-09-15 Genpharm Int Produktion und nützung nicht-menschliche transgentiere zur produktion heterologe antikörper
US5770429A (en) 1990-08-29 1998-06-23 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
WO1992005258A1 (en) 1990-09-20 1992-04-02 La Trobe University Gene encoding barley enzyme
GB9022648D0 (en) 1990-10-18 1990-11-28 Charing Cross Sunley Research Polypeptide and its use
WO1992008802A1 (en) 1990-10-29 1992-05-29 Cetus Oncology Corporation Bispecific antibodies, method of production, and uses thereof
CA2095633C (en) 1990-12-03 2003-02-04 Lisa J. Garrard Enrichment method for variant proteins with altered binding properties
US5582996A (en) 1990-12-04 1996-12-10 The Wistar Institute Of Anatomy & Biology Bifunctional antibodies and method of preparing same
JPH06508022A (ja) 1991-02-21 1994-09-14 ギリアド　サイエンシズ，インコーポレイテッド 生体分子に特異的なアプタマーおよび生産方法
US5404871A (en) 1991-03-05 1995-04-11 Aradigm Delivery of aerosol medications for inspiration
ATE240740T1 (de) 1991-03-15 2003-06-15 Amgen Inc Pegylation von polypeptiden
US5795965A (en) 1991-04-25 1998-08-18 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Reshaped human to human interleukin-6 receptor
DE4118120A1 (de) 1991-06-03 1992-12-10 Behringwerke Ag Tetravalente bispezifische rezeptoren, ihre herstellung und verwendung
US5637481A (en) 1993-02-01 1997-06-10 Bristol-Myers Squibb Company Expression vectors encoding bispecific fusion proteins and methods of producing biologically active bispecific fusion proteins in a mammalian cell
DE69230613T2 (de) 1991-07-02 2000-12-28 Inhale Inc Verfahren und vorrichtung zum abgeben von medikamenten in aerosolform
US5270170A (en) 1991-10-16 1993-12-14 Affymax Technologies N.V. Peptide library and screening method
WO1993008829A1 (en) 1991-11-04 1993-05-13 The Regents Of The University Of California Compositions that mediate killing of hiv-infected cells
US5641670A (en) 1991-11-05 1997-06-24 Transkaryotic Therapies, Inc. Protein production and protein delivery
US5733761A (en) 1991-11-05 1998-03-31 Transkaryotic Therapies, Inc. Protein production and protein delivery
US5932448A (en) 1991-11-29 1999-08-03 Protein Design Labs., Inc. Bispecific antibody heterodimers
PT1024191E (pt) 1991-12-02 2008-12-22 Medical Res Council Produção de auto-anticorpos a partir de reportórios de segmentos de anticorpo e exibidos em fagos
EP0571613B1 (en) 1991-12-13 2003-09-17 Xoma Corporation Methods and materials for preparation of modified antibody variable domains and therapeutic uses thereof
DE4207475A1 (de) 1992-03-10 1993-09-16 Goldwell Ag Mittel zum blondieren von menschlichen haaren und verfahren zu dessen herstellung
US5447851B1 (en) 1992-04-02 1999-07-06 Univ Texas System Board Of Dna encoding a chimeric polypeptide comprising the extracellular domain of tnf receptor fused to igg vectors and host cells
JPH05304986A (ja) 1992-04-28 1993-11-19 Tosoh Corp ｇｐ１３０蛋白質に対するモノクロ−ナル抗体
AU4829593A (en) 1992-09-23 1994-04-12 Fisons Plc Inhalation device
WO1994008038A1 (en) 1992-10-02 1994-04-14 Trustees Of Dartmouth College Bispecific reagents for redirected targeting of low density lipoprotein
SK51695A3 (en) 1992-10-19 1995-11-08 Dura Pharma Inc Dry powder medicament inhaler
WO1994009138A1 (en) 1992-10-20 1994-04-28 Cetus Oncology Corporation Interleukin-6 receptor antagonists
US5643252A (en) 1992-10-28 1997-07-01 Venisect, Inc. Laser perforator
WO1994012520A1 (en) 1992-11-20 1994-06-09 Enzon, Inc. Linker for linked fusion polypeptides
US5849695A (en) 1993-01-13 1998-12-15 The Regents Of The University Of California Parathyroid hormone analogues useful for treatment of osteoporosis and disorders of calcium meatabolism in mammals
WO1994016970A1 (en) 1993-01-19 1994-08-04 Glaxo Group Limited Device
EP0804561B1 (en) 1993-02-12 2009-12-30 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Regulated transcription of targeted genes and other biological events
US5770428A (en) 1993-02-17 1998-06-23 Wisconsin Alumni Research Foundation Chimeric retrovial expression vectors and particles containing a simple retroviral long terminal repeat, BLV or HIV coding regions and cis-acting regulatory sequences, and an RNA translational enhancer with internal ribsome entry site
JP3525221B2 (ja) 1993-02-17 2004-05-10 味の素株式会社 免疫抑制剤
US5888511A (en) 1993-02-26 1999-03-30 Advanced Biotherapy Concepts, Inc. Treatment of autoimmune diseases, including AIDS
JPH08509612A (ja) 1993-04-26 1996-10-15 ジェンファーム インターナショナル インコーポレイテッド 異種抗体を産生することができるトランスジェニック非ヒト動物
AU6808194A (en) 1993-05-31 1994-12-20 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Reconstructed human antibody against human interleukin-6
US5891998A (en) 1993-06-23 1999-04-06 Istituto Di Ricerche Di Biologica Molecolare P. Angeletti S.P.A. Interleukin-6 receptor agonists
CA2472404A1 (en) 1993-07-19 1995-02-02 Angiotech Pharmaceuticals, Inc. Combination of stent and anti-angiogenic factor
US5888510A (en) 1993-07-21 1999-03-30 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Chronic rheumatoid arthritis therapy containing IL-6 antagonist as effective component
FR2707882B1 (fr) 1993-07-23 1997-08-01 Immunotech Sa Nouveaux kits thérapeutiques anti-médiateurs protéiques, procédé de préparation et compositions pharmaceutiques les renfermant.
US5514670A (en) 1993-08-13 1996-05-07 Pharmos Corporation Submicron emulsions for delivery of peptides
US5625825A (en) 1993-10-21 1997-04-29 Lsi Logic Corporation Random number generating apparatus for an interface unit of a carrier sense with multiple access and collision detect (CSMA/CD) ethernet data network
DE4337197C1 (de) 1993-10-30 1994-08-25 Biotest Pharma Gmbh Verfahren zur selektiven Herstellung von Hybridomazellinien, die monoklonale Antikörper mit hoher Zytotoxizität gegen humanes CD16-Antigen produzieren, sowie Herstellung bispezifischer monoklonaler Antikörper unter Verwendung derartiger monoklonaler Antikörper und des CD30-HRS-3-Antikörpers zur Therapie menschlicher Tumore
US5814599A (en) 1995-08-04 1998-09-29 Massachusetts Insitiute Of Technology Transdermal delivery of encapsulated drugs
US5827690A (en) 1993-12-20 1998-10-27 Genzyme Transgenics Corporatiion Transgenic production of antibodies in milk
AU692239B2 (en) 1994-03-07 1998-06-04 Medarex, Inc. Bispecific molecules having clinical utilities
US5641657A (en) 1994-05-19 1997-06-24 Human Genome Sciences, Inc. DNA encoding an interleukin-6 splice variant
US8017121B2 (en) 1994-06-30 2011-09-13 Chugai Seiyaku Kabushika Kaisha Chronic rheumatoid arthritis therapy containing IL-6 antagonist as effective component
US5738931A (en) 1994-09-16 1998-04-14 Kabushiki Kaisha Toshiba Electronic device and magnetic device
ES2384222T3 (es) * 1994-10-07 2012-07-02 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Inhibición del crecimiento anómalo de células sinoviales utilizando un antagonista de IL-6 como principio activo
US5763733A (en) 1994-10-13 1998-06-09 Enzon, Inc. Antigen-binding fusion proteins
IT1274782B (it) 1994-12-14 1997-07-24 Angeletti P Ist Richerche Bio Metodo per selezionare superagonisti, antagonisti e superantagonisti di ormoni del cui complesso recettoriale fa parte gp 130
US5549551A (en) 1994-12-22 1996-08-27 Advanced Cardiovascular Systems, Inc. Adjustable length balloon catheter
EP0800829B2 (en) 1994-12-29 2012-07-25 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Use of a pm-1 antibody or of a mh 166 antibody for enhancing the anti-tumor effect of cisplatin or carboplatin
EP0811384B1 (en) 1995-02-13 2006-06-21 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Muscle protein decomposition inhibitor containing il-6 receptor antibody
US5731168A (en) 1995-03-01 1998-03-24 Genentech, Inc. Method for making heteromultimeric polypeptides
US6037453A (en) 1995-03-15 2000-03-14 Genentech, Inc. Immunoglobulin variants
US5656730A (en) 1995-04-07 1997-08-12 Enzon, Inc. Stabilized monomeric protein compositions
US6019968A (en) 1995-04-14 2000-02-01 Inhale Therapeutic Systems, Inc. Dispersible antibody compositions and methods for their preparation and use
IT1276555B1 (it) 1995-04-28 1997-11-03 Angeletti P Ist Richerche Bio Antagonisti di interluchina-6 umana del tutto incapaci di formare un legame con gp 130, e loro uso per la preparazione di composizioni
WO1996034096A1 (en) 1995-04-28 1996-10-31 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
US5730723A (en) 1995-10-10 1998-03-24 Visionary Medical Products Corporation, Inc. Gas pressured needle-less injection device and method
US5871723A (en) 1995-06-06 1999-02-16 The Regent Of The University Of Michigan CXC chemokines as regulators of angiogenesis
GB9526100D0 (en) 1995-12-20 1996-02-21 Intersurgical Ltd Nebulizer
EP0938907B1 (en) 1996-01-03 2001-12-05 Glaxo Group Limited Inhalation device
US5714352A (en) 1996-03-20 1998-02-03 Xenotech Incorporated Directed switch-mediated DNA recombination
DE19624387C2 (de) 1996-06-19 1999-08-19 Hatz Motoren Kaltstartvorrichtung
US5854398A (en) 1996-07-25 1998-12-29 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Kaposi's sarcoma-associated herpesvirus (KSHV) interleukin 6 (IL-6) and uses thereof
US6461604B1 (en) 1996-08-16 2002-10-08 Genetics Institute, Llc Crystalline IL-6 and models of the molecular structure of IL-6
DK0826695T3 (da) 1996-09-03 2002-04-15 Gsf Forschungszentrum Umwelt Tilintetgørelse af kontaminerende tumorceller i stamcelletransplantater med bispecifikke antistoffer
CA2722378C (en) 1996-12-03 2015-02-03 Amgen Fremont Inc. Human antibodies that bind tnf.alpha.
US5879681A (en) 1997-02-07 1999-03-09 Emisphere Technolgies Inc. Compounds and compositions for delivering active agents
US5921447A (en) 1997-02-13 1999-07-13 Glaxo Wellcome Inc. Flow-through metered aerosol dispensing apparatus and method of use thereof
EP2322216A1 (en) * 1997-03-21 2011-05-18 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha A preventive or therapeutic agent for sensitized T cell-mediated diseases comprising IL-6 antagonist as an active ingredient
US6235883B1 (en) 1997-05-05 2001-05-22 Abgenix, Inc. Human monoclonal antibodies to epidermal growth factor receptor
IL120943A (en) 1997-05-29 2004-03-28 Univ Ben Gurion A system for administering drugs through the skin
AU756693B2 (en) 1997-09-29 2003-01-23 Novartis Ag Stabilized bioactive preparations and methods of use
DK1071700T3 (da) 1998-04-20 2010-06-07 Glycart Biotechnology Ag Glykosylerings-modifikation af antistoffer til forbedring af antistofafhængig cellulær cytotoksicitet
PL209392B1 (pl) 1999-01-15 2011-08-31 Genentech Inc Przeciwciało, komórka gospodarza, sposób wytwarzania przeciwciała oraz zastosowanie przeciwciała
US6309663B1 (en) 1999-08-17 2001-10-30 Lipocine Inc. Triglyceride-free compositions and methods for enhanced absorption of hydrophilic therapeutic agents
AU6934600A (en) 1999-08-27 2001-03-26 Board Of Regents, The University Of Texas System Cd40 ligand and cd40 agonist compositions and methods of use
GB0001448D0 (en) * 2000-01-21 2000-03-08 Novartis Ag Organic compounds
CA2399148A1 (en) 2000-02-10 2001-08-16 Abbott Laboratories Antibodies that bind human interleukin-18 and methods of making and using
JP5485489B2 (ja) 2000-08-11 2014-05-07 中外製薬株式会社 抗体含有安定化製剤
CN1259973C (zh) 2000-10-25 2006-06-21 中外制药株式会社 含有il－6拮抗剂作为有效成分的牛皮癣的预防或治疗剂
ITPD20010108A1 (it) 2001-05-08 2002-11-08 Fidia Advanced Biopolymers Srl Biomateriali polimerici elettricamente conduttori, loro processo di preparazione ed impiego nel settore biomedico sanitario.
NZ571596A (en) 2001-08-03 2010-11-26 Glycart Biotechnology Ag Antibody glycosylation variants having increased antibody-dependent cellular cytotoxicity
DE10146643C1 (de) 2001-09-21 2003-08-14 Eads Deutschland Gmbh Verfahren zur Kalibrierung der Radarsignale an den Subaperturen der Antenne eines zweikanaligen SAR/MTI Radarsystems
PT2308888T (pt) 2001-11-14 2017-05-03 Janssen Biotech Inc Anticorpos anti-il-6, composições, métodos e utilizações
AU2003225976A1 (en) 2002-03-26 2003-10-13 Centocor, Inc. Anti-tnf antibodies, compositions, methods and uses
WO2003086458A1 (en) 2002-04-12 2003-10-23 Medimmune, Inc. Recombinant anti-interleukin-9 antibodies
US7482436B2 (en) * 2002-08-30 2009-01-27 Juridical Foundation The Chemo-Sero-Therapeutic Research Institute Human antihuman interleukin-6 antibody and fragment of antibody
GB2401040A (en) 2003-04-28 2004-11-03 Chugai Pharmaceutical Co Ltd Method for treating interleukin-6 related diseases
WO2005005604A2 (en) 2003-06-30 2005-01-20 Centocor, Inc. Engineered anti-target immunoglobulin derived proteins, compositions, methods and uses
JP4960096B2 (ja) 2003-09-22 2012-06-27 ペントラコール ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング Ｉｌ−６の生物学的効果を減じる化合物の使用
JO3058B1 (ar) * 2005-04-29 2017-03-15 Applied Molecular Evolution Inc الاجسام المضادة لمضادات -اي ال-6,تركيباتها طرقها واستعمالاتها
JP5470817B2 (ja) 2008-03-10 2014-04-16 日産自動車株式会社 電池用電極およびこれを用いた電池、並びにその製造方法
KR20190120439A (ko) 2010-11-08 2019-10-23 제넨테크, 인크. 피하 투여용 항―ｉｌ―6 수용체 항체
JP6136279B2 (ja) 2013-01-15 2017-05-31 株式会社ジェイテクト 転がり軸受装置
TWI503850B (zh) 2013-03-22 2015-10-11 Polytronics Technology Corp 過電流保護元件
TWI510996B (zh) 2013-10-03 2015-12-01 Acer Inc 控制觸控面板的方法以及使用該方法的可攜式電腦
US9816280B1 (en) 2016-11-02 2017-11-14 Matthew Reitnauer Portable floor

Also Published As

Publication number Publication date
US20200115445A1 (en) 2020-04-16
US20060257407A1 (en) 2006-11-16
RS54133B1 (sr) 2015-12-31
EP3421492A1 (en) 2019-01-02
ZA200710264B (en) 2010-05-26
IL211133A0 (en) 2011-04-28
EP1874351A2 (en) 2008-01-09
HRP20181218T1 (hr) 2018-10-05
MY143374A (en) 2011-04-29
DK1874351T3 (en) 2015-04-20
JP2008538931A (ja) 2008-11-13
US8226611B2 (en) 2012-07-24
HK1116398A1 (en) 2008-12-24
US20220048985A1 (en) 2022-02-17
ECSP077888A (es) 2008-03-26
US20140099311A1 (en) 2014-04-10
MY142835A (en) 2011-01-14
US9340613B2 (en) 2016-05-17
IL186965A0 (en) 2008-02-09
NO342898B1 (no) 2018-08-27
PA8672101A1 (es) 2006-12-07
PL1874351T3 (pl) 2015-10-30
HUE025376T2 (en) 2016-02-29
PL2842968T3 (pl) 2019-05-31
CN101415819A (zh) 2009-04-22
US20090239258A1 (en) 2009-09-24
HUE039116T2 (hu) 2018-12-28
BRPI0609869A2 (pt) 2010-05-11
EP2842968A1 (en) 2015-03-04
NI200700278A (es) 2013-01-29
CN101415819B (zh) 2012-10-10
ES2551985T3 (es) 2015-11-24
AR053370A1 (es) 2007-05-02
AU2006242347B2 (en) 2012-07-12
EA015262B1 (ru) 2011-06-30
JP2014080427A (ja) 2014-05-08
HK1208035A1 (en) 2016-02-19
US12065488B2 (en) 2024-08-20
US20110081355A1 (en) 2011-04-07
PT2842968T (pt) 2018-09-28
US9631016B2 (en) 2017-04-25
NZ589820A (en) 2012-04-27
HN2006016512A (es) 2010-06-08
US20120045453A1 (en) 2012-02-23
TR201809676T4 (tr) 2018-07-23
EP2842968B1 (en) 2018-05-23
SI2842968T1 (sl) 2018-10-30
RS57474B1 (sr) 2018-09-28
NO20076024L (no) 2008-01-18
WO2006119115A2 (en) 2006-11-09
LT2842968T (lt) 2018-09-25
EP1874351A4 (en) 2010-07-28
CN102924596B (zh) 2016-01-20
AU2006242347A1 (en) 2006-11-09
JO3058B1 (ar) 2017-03-15
US8067003B2 (en) 2011-11-29
CN102924596A (zh) 2013-02-13
US20160222104A1 (en) 2016-08-04
DK2842968T3 (en) 2018-08-06
EA200702374A1 (ru) 2008-10-30
US7833755B2 (en) 2010-11-16
NZ562771A (en) 2011-03-31
CR9551A (es) 2009-07-30
US7560112B2 (en) 2009-07-14
SI1874351T1 (sl) 2015-10-30
PT1874351E (pt) 2015-06-16
US8623362B2 (en) 2014-01-07
USRE43672E1 (en) 2012-09-18
KR101340950B1 (ko) 2013-12-31
ME02185B (me) 2016-02-20
SV2006002513A (es) 2008-12-05
JP4763043B2 (ja) 2011-08-31
KR20080017014A (ko) 2008-02-25
US20130017208A1 (en) 2013-01-17
IL211133A (en) 2015-03-31
JP5898413B2 (ja) 2016-04-06
JP5940565B2 (ja) 2016-06-29
NZ598657A (en) 2013-06-28
US11180549B2 (en) 2021-11-23
EP1874351B1 (en) 2015-04-08
PE20061324A1 (es) 2007-01-15
HRP20150740T1 (hr) 2015-08-14
IL211132A0 (en) 2011-04-28
TW200716173A (en) 2007-05-01
CY1120739T1 (el) 2019-12-11
ES2676732T3 (es) 2018-07-24
TWI445546B (zh) 2014-07-21
US20170253651A1 (en) 2017-09-07
JP2011201888A (ja) 2011-10-13
WO2006119115A3 (en) 2008-01-03
JP2016117769A (ja) 2016-06-30
CA2606348C (en) 2012-12-11
CA2606348A1 (en) 2006-11-09

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US12065488B2 (en) Anti-IL-6 antibody
AU2012238199A1 (en) Anti-IL-6 antibodies, compositions, methods and uses
HK1208035B (en) Humanized anti-il-6 antibodies, compositions, methods and uses
HK1116398B (en) Anti-il-6 antibodies, compositions, methods and uses
BRPI0612728B1 (pt) Anticorpos de il-23p19 isolados

Legal Events

Date Code Title Description
B25A Requested transfer of rights approved

Owner name: APPLIED MOLECULAR EVOLUTION, INC. (US) , JOHNSON A

Free format text: TRANSFERIDO DE: CENTOCOR, INC.

B06F Objections, documents and/or translations needed after an examination request according [chapter 6.6 patent gazette]
B06H Technical and formal requirements: requirement cancelled [chapter 6.8 patent gazette]

Free format text: REF. A RPI NO 2150 DE 20/03/2012. ANULACAO DA EXIGENCIA 6.6 POR TER SIDO INDEVIDA. REQUERENTE NAO APRESENTOU RESPOSTA A EXIGENCIA CONFORME DISPOE A RESOLUCAO 207 DE 24/04/2009, ENTRETANTO, A RESPOSTA CONSTA NO FORMULARIO DE DEPOSITO.

B07D Technical examination (opinion) related to article 229 of industrial property law [chapter 7.4 patent gazette]

Free format text: DE ACORDO COM O ARTIGO 229-C DA LEI NO 10196/2001, QUE MODIFICOU A LEI NO 9279/96, A CONCESSAO DA PATENTE ESTA CONDICIONADA A ANUENCIA PREVIA DA ANVISA. CONSIDERANDO A APROVACAO DOS TERMOS DO PARECER NO 337/PGF/EA/2010, BEM COMO A PORTARIA INTERMINISTERIAL NO 1065 DE 24/05/2012, ENCAMINHA-SE O PRESENTE PEDIDO PARA AS PROVIDENCIAS CABIVEIS.

B07E Notification of approval relating to section 229 industrial property law [chapter 7.5 patent gazette]
B06U Preliminary requirement: requests with searches performed by other patent offices: procedure suspended [chapter 6.21 patent gazette]
B07A Application suspended after technical examination (opinion) [chapter 7.1 patent gazette]
B06A Patent application procedure suspended [chapter 6.1 patent gazette]
B09A Decision: intention to grant [chapter 9.1 patent gazette]
B16A Patent or certificate of addition of invention granted [chapter 16.1 patent gazette]

Free format text: PRAZO DE VALIDADE: 20 (VINTE) ANOS CONTADOS A PARTIR DE 28/04/2006, OBSERVADAS AS CONDICOES LEGAIS. PATENTE CONCEDIDA CONFORME ADI 5.529/DF, QUE DETERMINA A ALTERACAO DO PRAZO DE CONCESSAO.