BRPI0610058A2

BRPI0610058A2 - uso de inibidor de tnf para tratamento da poliartrite erosiva

Info

Publication number: BRPI0610058A2
Application number: BRPI0610058-9A
Authority: BR
Inventors: Rebecca S Hoffman; Mark Weinberg
Original assignee: Abbott Biotech Ltd
Priority date: 2005-05-16
Filing date: 2006-05-16
Publication date: 2010-05-25
Also published as: WO2006125229A2; TW201100446A; KR20130086254A; US20150218268A1; CA2898009A1; KR20150055116A; JP2012211138A; TWI399384B; CN102961746B; JP2015157821A; EP1885397A2; JP5757495B2; AU2006246721B2; US8906373B2; IL239312A0; CA2903138A1; CN102961746A; CA2898009C; WO2006125229A8; US9090689B1

Abstract

USO DE INIBIDOR DE TNF PARA TRATAMENTO DA POLIARTRITE EROSIVA. A invenção descreve métodos de tratamento da poliartrite erosiva compreendendo a administração de um anticorpo de TNFcx, ou porção ligadora de antígeno do mesmo. A invenção também descreve um método para testar a eficácia de um anticorpo TNFa, ou porção ligadora de antígeno do mesmo, para o tratamento da poliartrite erosiva.

Description

"USO DE INIBIDOR DE TNF PARA TRATAMENTO DAPOLIARTRITE EROSIVA"

PEDIDOS RELACIONADOS

Este pedido reivindica prioridade para o PedidoProvisório dos EUA No. 60/681645, que foi depositado em 16de Maio de 2005.

Este pedido é relacionado às Patentes dos EUA Nos.6.090.382, 6.258.562, e 6.509.015. Este pedido é também re-lacionado ao Pedido Serial de Patente dos EUA No.09/801.185, depositado em 7 de Março de 2001; Pedido Seriadode Patente dos EUA No. 10/163657, depositado em 5 de Junhode 2002; e Pedido de Seriado de Patente dos EUA No.10/422287, depositado em 26 de Abril de 2002; Pedido Seriadode Patente dos EUA No. 10/525292, depositado em 26 de Agostode 2002; Pedido Seriado de Patente dos EUA No. 10/693233,depositado em 24 de Outubro de 2003; Pedido Seriado de Pa-tente dos EUA No. 10/622932, depositado em 18 de Julho de2003; Pedido Seriado de Patente dos EUA No. 10/623039, depo-sitado em 18 de Julho de 2003; Pedido Seriado de Patente dosEUA No. 10/623076, depositado em 18 de Julho de 2003; PedidoSeriado de Patente dos EUA No. 10/623065, depositado em 18de Julho de 2003; Pedido Seriado de Patente dos EUA No.10/622928, depositado em 18 de Julho de 2003; Pedido Seriadode Patente dos EUA No. 10/623075, depositado em 18 de Julhode 2003; Pedido Seriado de Patente dos EUA No. 10/622683,depositado em 18 de Julho de 2003; Pedido Seriado de Patentedos EUA No. 10/622205, depositado em 18 de Julho de 2003;Pedido Seriado de Patente dos EUA No. 10/622210, depositadoem 18 de Julho de 2003; e Pedido Seriado de Patente dos EUANo. 10/623318, depositado em 18 de Julho de 2003. Este pedi-do é também relacionado ao PCT/US05/12007 (WO 05/110452),depositado em 11 de Abril de 2005, e Appln. EUA 11/245.254,depositado em 6 de Outubro de 2005. O conteúdo inteiro des-sas patentes e pedidos de patentes é por meio desta aqui in-corporados por referência.

ANTECEDENTE DA INVENÇÃO

Poliartrite pode ser erosiva ou não erosiva. Naforma erosiva, o processo básico da doença erode a cartila-gem; na forma não erosiva, a cartilagem não é afetada. Poli-artrite erosiva é uma doença inflamatória das articulaçõesque resulta em destruição tecidual e erosão dentro da arti-culação afetada. Poliartrite erosiva ocorre em muitos paci-entes tendo distúrbios inflamatórios, incluindo artrite pso-riática, espondilartropatias, tais como espondilite, e ar-trite reumatóide juvenil. Muitos dos tratamentos correntesde distúrbios em que a poliartrite erosiva é uma manifesta-ção falha para focar na progressão radiqgráfica decrescenteda doença da articulação.

SUMÁRIO DA INVENÇÃO

Há a necessidade de tratar poliartrite erosiva emuma forma segura e efetiva. Enquanto tratamentos tradicio-nais de poliartrite erosiva, tal como administração deDMARDs, podem retardar a progressão da doença, tratamentostradicionais podem ser lentamente se tornar efetivo, podemperder a eficácia com o tempo, e podem ser associados comefeitos tóxicos potencialmente sérios. A presente invençãoprove um meio seguro e efetivo para tratar poliartrite ero-siva e atrasar a progressão da doença da articulação.

A presente invenção incluir métodos de tratamentoda poliatrite erosiva compreendendo administração de inibi-dores de TNF. A invenção também prove um método para trata-mento de um paciente humano sofrendo de poliartrite erosiva,compreendendo a administração ao paciente de um anticorpoanti-TNFa, tal que a poliartrite erosiva é tratada. Kits eartigos de fabricação compreendendo um inibidor de TNFa sãotambém incluídos na invenção.

Em uma modalidade, o inibidor de TNFa é seleciona-do do grupo consistindo de um anticorpo anti-TNFa, ou umaporção ligadora de antigeno do mesmo, uma proteína de fusãoTNF, ou uma proteína ligante de TNF recombinante. Em uma mo-dalidade, a proteína a fusão TNF é etanercept. Em outra mo-dalidade, o anticorpo anti-TNFa, ou uma porção ligadora deantigeno do mesmo, é um anticorpo selecionado do grupo con-sistindo de um anticorpo humanizado, um anticorpo quimérico,e um anticorpo multivalente. Em uma modalidade, o anticorpoanti-TNFa, ou uma porção ligadora do mesmo é infliximab, go-limumab, ou adalimumab. Em ainda outra modalidade, o anti-corpo anti-TNFa, ou porção ligadora do mesmo, é um anticorpohumano.

A invenção prove um método de tratamento de um pa-ciente humano sofrendo de poliartrite erosiva, compreendendoadministração ao paciente de um anticorpo anti-TNFa, ou por-ção ligadora de antigeno do mesmo,1 tal que poliartrite erosiva é tratada.Em uma modalidade, o anticorpo TNFa, ou porção li-gadora de antigeno do mesmo, é um anticorpo selecionado dogrupo consistindo de um anticorpo humanizado, um anticorpoquimérico, e um anticorpo multivalente. Em outra modalidade,o anticorpo TNFa, ou uma porção ligadora de antigeno do mes-mo, é infliximab ou golimumab.

Em uma modalidade, o anticorpo TNFa, ou porção li-gadora de antigeno do mesmo, é um anticorpo humano. Em umamodalidade, o anticorpo humano, ou uma porção ligadora deantigeno do mesmo, dissociada do TNFa humano com um Kd delxlO-8 M ou menor e uma taxa constante de Koff de lxlO"3 s"1 oumenos, ambos determinados por ressonância de plásmon de su-perfície, e neutralizar a citotoxicidade TNFa humana em umpadrão de ensaio L929 in vitro com um IC50 de lxlO-7 M oumenos. Em outra modalidade, o anticorpo humano, ou uma por-ção ligadora de antigeno do mesmo, tem as seguintes caracte-rísticas :

a) dissocia do TNFa humano com um Koff de taxaconstante de lxlO-3 s"1 ou menos, como determinado por resso-nância de plásmon de superfície;

b) tem um domínio CDR3 de cadeia leve compreenden-do a seqüência aminoácida de SEQ ID NO:3, ou modificado daSEQ ID NO:3 por uma substituição única de alanina na posição1, 4, 5, 7 ou 8 ou uma das cinco substituições aminoácidasconservativas nas posições 1, 3, 4, 6, 7, 8 e/ou 9;

c) tem um dominio CDR3 de cadeia pesada compreen-dendo a seqüência aminoácida1 de SEQ ID NO:4, ou modificadade SEQ ID NO:4 por uma substituição única de alanina na po-sição 2, 3, 4, 5, 6, 8, 9, 10 ou 11 ou por uma das cincosubstituições aminoácidas conservativas nas posições 2, 3,4, 5, 6, 8, 9, 10, 11 e/ou 12. Em ainda outra modalidade, oanticorpo humano, ou porção ligadora de antigeno do mesmo,compreende uma região variável de cadeia leve (RVCL) tendoum domínio CDR3 compreendendo a seqüência aminoácida de SEQID NO: 3 ou modificada de SEQ ID NO: 3 por uma substituiçãoúnica de alanina na posição 1, 4, 5, 7 ou 8, e compreendeuma região variável de cadeia pesada (RVCP) tendo um domínioCDR3 compreendendo a seqüência aminoácida de SEQ ID NO:4, oumodificado de SEQ ID NO: 4 por uma substituição alanina naposição 2, 3, 4, 5, 6, 8, 9, 10 ou 11. Em ainda outra moda-lidade, o anticorpo humano, ou porção ligadora antigeno domesmo, compreende uma região variável de cadeia leve (RVCL)compreendendo a seqüência aminoácida de SEQ ID NO:l e umaregião variável de cadeia pesada (RVCP) compreendendo a se-qüência aminoácida de SEQ ID NO:2. Em uma modalidade , o an-ticorpo humano, ou uma-porção ligadora de antigeno da mesma,é adalimumab. ;

Em uma modalidade, o anticorpo TNFa, ou porção li-gadora de antigeno do mesmo, é administrado ao paciente ouregime de doses quinzenais.

Em uma modalidade, o paciente tem um distúrbio emque a atividade de TNFa é prejudicial. Em uma modalidade, odistúrbio em que a atividade de TNFa é prejudicial é sele-cionado do grupo consistindo de artrite psoriática, espondi-lite anquilosante, e artrite reumatóide juvenil. Em outramodalidade, o distúrbio em que a atividade TNFa é prejudici-al é artrite psoriática. Em ainda outra modalidade, o dis-túrbio em que a atividade de TNFa é prejudicial é artrite reumatóide.

Em uma modalidade, a invenção inclui ainda compre-ender a administração de um agente terapêutico adicional dopaciente. Em uma modalidade, o agente terapêutico adicionalé metrotrexato. Em outra modalidade, o agente terapêuticoadicional é um Fármaco Anti-Reumático Modificador de Doença(DMARD) ou Fármaco Anti-Inflamatório Não-esteroidal (AINES)ou um esteróide, ou qualquer combinação dos mesmos.

A invenção inclui um método para testar a eficáciade um anticorpo TNFa, ou uma porção ligadora de antigeno domesmo, para diminuir a progressão radiográfica da doença daarticulação associada com a poliartrite erosiva. Em uma mo-dalidade, o método para teste da eficácia de um anticorpo deTNFa, ou porção ligadora de antigeno do mesmo, compreendedeterminar a eficácia do anticorpo TNFa, ou uma porção liga-dora de antigeno do mesmo, utilizando um índice Sharp Totalmodificado (mTSS) modificado de uma população de pacientetendo doença na .articulação associada com poliartrite erro-siva e um mTSS da população de paciente seguindo a adminis-tração do anticorpo de TNFa, ou uma porção ligadora de anti-geno do mesmo, em que nenhuma mudança ou uma diminuição domTSS indica que o anticorpo TNFa, ou uma porção ligadora deantigeno do mesmo, é eficaz para diminuir a progressão ra-diográfica da doença da articulação associada com poliartri-te erosiva. Em uma modalidade, a diminuição no mTSS é cerca de -0,2.Em uma modalidade, a população de paciente tambémtem um distúrbio em que o TNFa é prejudicial. Em uma modali-dade, o distúrbio em que a atividade de TNFa é prejudicial éselecionado do grupo consistindo de artrite psoriática, es-pondilite enquilosante, e artrite reumatóide juvenil.

Em uma modalidade, o anticorpo TNFa, a porção li-gadora de antigeno do mesmo, é um anticorpo selecionado dogrupo consistindo de um anticorpo humanizado, um anticorpoquimérico, e um anticorpo multivalente. Em uma modalidade, oanticorpo TNFa, ou uma porção ligadora de antigeno do mesmo,é infliximab ou golimumab. Em outra modalidade, o anticorpoTNFa, ou porção ligadora de antigeno do mesmo, é um anticor-po humano. Em uma modalidade, o anticorpo humano, ou umaporção ligadora de antigeno do mesmo, dissocia de TNFa huma-no com um Kd de lxlO-8 M ou menos e uma taxa constante Koffde lxlO-3 s_1 ou menos, ambos determinados por ressonância deplásmon de superfície, e neutraliza a citotoxicidade do TNFahumano em um ensaio de L92 9 in vitro padrão com um IC50 delxlO"7 M ou menos.

Em outra modalidade, o anticorpo humano, ou umaporção ligadora de antigeno do mesmo, tem as seguintes ca-racterísticas:

a) dissocia do TNFa humano com uma taxa constantede Koff de lxlO"3 s"1 ou menos, como determinado pela resso-nância de superfície de plasmon;

b) tem um dominio CDR3 de cadeia leve compreenden-do a seqüência aminoácida de SEQ ID NO:3, ou modificado daSEQ ID NO:3 por uma substituição única de alanina na posição1, 4, 5, 7 ou 8 ou or uma das cinco substituições aminoáci-das nas posições 1, 3, 4, 6, 7, 8 e/ou 9;

c) tem um domínio CDR3 de cadeia pesada compreen-dendo a seqüência aminoácida de SEQ ID NO:4, ou modificadada SEQ ID NO: 4 por uma substituição única da alanina na po-sição 2, 3, 4, 5, 6, 8, 9, 10 ou 11 ou por uma das cincosubstituições aminoácidas conservativas nas posições 2, 3,4, 5, 6, 8, 9, 10, 11 e/ou 12. Em ainda outra modalidade, oanticorpo humano, ou uma porção ligadora de antígeno do mes-mo, compreendendo uma região variável de cadeia leve (RVCL)tendo um domínio CDR3 compreendendo a seqüência aminoácidada SEQ ID NO:3, ou modificada da SEQ ID NO:3 por uma substi-tuição única de alanina na posição 1, 4, 5, 7 ou 8, e com-preende uma região variável de cadeia pesada (RVCP) tendo umdomínio CDR3 compreendendo a seqüência aminoácida de SEQ IDNO:4, ou modificada da SEQ ID NO:4 por uma substituição úni-ca de alanina na posição 2, 3, 4, 5, 6, 8, 9, 10 ou 11.

Em outra modalidade, o anticorpo humano, ou umaporção ligadora de antígeno do mesmo, compreendendo uma re-gião variável de cadeia leve (RVCL) compreendendo a seqüên-cia aminoácida da SEQ ID NO:l e uma região variável de ca-deia pesada (RVCP) compreendendo a seqüência aminoácida deSEQ ID NO:2. Emainda outra modalidade da invenção, o anti-corpo humano, ou uma porção ligadora de antígeno do mesmo, éadalimumab.

Em uma modalidade da invenção, o anticorpo TNFa,ou porção ligadora de antígeno do mesmo, é administrada aopaciente em um regime de dose de duas semanas. Em uma moda-lidade, anticorpo, ou porção ligadora de antigeno do mesmo,é administrado em combinação com um agente terapêutico adi-cional, incluindo, por exemplo, metotrexato.

A invenção descreve um método para monitorar a e-fetividade de um anticorpo TNFa, ou uma porção ligadora deantigeno do mesmo, para o tratamento da poliartrite erosivaem um paciente humano compreendendo a determinação da efeti-vidade do anticorpo TNFa, ou porção ligadora de antigeno domesmo, utilizando uma linha base índice Sharp Total modifi-cado (mTSS) de uma população de paciente tendo poliartriteerosiva e um Índice mTSS de uma população de paciente se-guindo a administração do anticorpo TNFa, ou uma porção li-gadora de antigeno, em que um resultado selecionado do grupoconsistindo de uma diminuição no mTSS em cerca de 9-27% dapopulação de paciente; nenhuma mudança na mTSS em cerca de65-73% da população de paciente; e um aumento no mTSS emcerca de 9-28% da população de paciente, indica que o anti-corpo TNFa, ou porção ligadora de antigeno do mesmo, é efe-tiva no tratamento da poliartrite erosiva.

Em uma modalidade da invenção, o anticorpo TNFa,ou porção ligadora de antigeno do mesmo, é um anticorpo se-lecionado do grupo consistindo de um anticorpo humanizado,um anticorpo quimérico, e um anticorpo multivalente. Em umamodalidade, o anticorpo TNFa, ou porção ligadora de antigenodo mesmo, é infliximab ou golimumab. Em outra modalidade, oanticorpo TNFa, ou porção ligadora de antigeno do mesmo, éum anticorpo humano.Em outra modalidade, o anticorpo humano, ou porçãoligadora de antigeno do mesmo, dissocia do TNFa humano comum Kd de lxlO-8 M ou menor e uma taxa constante de Koff delxlO"3 s"1 ou menos, ambas determinadas por ressonância deplásmon de superfície, e neutraliza a citotoxicidade do TNFahumano em um ensaio de L929 in vitro padrão com um IC50 delxlO"7 M ou menos. Em ainda outra modalidade, o anticorpohumano, ou uma porção ligadora de antigeno do mesmo, é ada-limumab.

A invenção também inclui um método para testar aeficácia de um anticorpo TNFa, ou porção ligadora de antige-no do mesmo, para tratar poliartrite erosiva associada comartrite psoriática, compreendendo a determinação da eficáciado anticorpo TNFa, ou porção ligadora de antigeno do mmesmo,utilizando uma linha base Total Sharp modificada (mTSS) e ouuma linha base de indice Área de Psoriase e índice de Seve-ridade (PASI) ou linha de indice ACR de uma população de pa-ciente tendo poliartrite erosiva em comparação com o mTSS eou o PASI ou o indice ACR da população de paciente seguindoadministração do anticorpo TNFa, ou porção ligadora de anti-geno do mesmo, em que nenhuma mudança ou uma diminuição nomTSS e ou uma resposta ACR20 alcançada em pelo menos cercade 57% ou uma resposta PASI 50 alcançada em pelo menos cercade 75% da população de paciente, indica que o anticorpoTNFa, ou porção ligadora do mesmo, é eficaz para o tratamen-to de poliartrite erosiva associada com artrite psoriática.Em uma modalidade, uma resposta ACR50 é alcançada em pelomenos cerca de 39% da população de paciente. Em outra moda-lidade, uma resposta ACR70 é alcançada em pelo menos cercade 23% da população de paciente. Em ainda outra modalidade,uma resposta PASE75 é alcançada em pelo menos cerca de 59%da população de paciente. Em ainda outra modalidade, umaresposta PASI90 é alcançada em pelo menos cerca de 42% dapopulação de paciente. Em uma modalidade, o anticorpo TNFa,ou porção ligadora de antigeno do mesmo, é adalimumab.

A invenção descreve um método para tratar poliar-trite erosiva compreendendo administração a um paciente ten-do poliartrite erosiva, adalimumab em um regime de dosequinzenal. Em uma modalidade, a dose de adalimumab é cercade 40 mg.

A invenção também inclui um kit compreendendo umacomposição farmacêutica compreendendo um anticorpo TNFa, ouuma porção ligadora de antigeno do mesmo, e um veiculo far-maceuticamente aceitável, e instruções para administração dacomposição farmacêutica para o tratamento de poliartrite e-rosiva. Em uma modalidade, a composição farmacêutica compre-ende o anticorpo TNFa, ou porção ligadora de antigeno domesmo, adalimumab. Em uma modalidade, composição farmacêuti-ca compreende cerca de 40 mg de adalimumab. Em outra modali-dade, o kit ainda compreende um agente terapêutico adicio-nal. Em uma modalidade, o agente terapêutico é metotrexato.

A invenção descreve um artigo de fabricação com-preendendo um material de embalagem; um anticorpo TNFa, ouporção ligadora de antigeno do mesmo; e um marcador ou emba-lagem de inserção contida dentro do material de embalagemindicando que o anticorpo TNFa, ou porção ligadora de anti-geno do mesmo, pode ser utilizado para o tratamento de poli-artrite erosiva.

A invenção também inclui um artigo de fabricaçãocompreendendo um material de embalagem; um anticorpo TNFa,ou porção ligadora do mesmo; e um marcador ou embalagem deinserção contida dentro do material de embalagem indicandoque o anticorpo TNFa, ou porção ligadora de antigeno do mes-mo, pode ser utilizado para inibir a progressão radiográficada doença da articulação.

Em uma modalidade, o artigo de fabricação compre-ende um anticorpo selecionado do grupo consistindo de um an-ticorpo humanizado, um anticorpo quimérico, e um anticorpomultivalente.

Em uma modalidade, o anticorpo TNFa, ou porção li-gadora de antigeno do mesmo, é infliximab ou golimumab. Emoutra modalidade, o anticorpo TNFa, ou porção ligadora deantigeno do mesmo, é um anticorpo humano. Em uma modalidade,o anticorpo humano, ou porção ligadora de antigeno do mesmo,dissocia do TNFa humano com um kd de lxlO-8 M ou menos e umataxa constante Koff de lxlO-3 s-1 ou menos, ambos determinadospor ressonância de plásmon de superfície, e neutraliza a ci-totoxicidade do TNFa humano em um ensaio L929 in vitro pa-drão com um IC50 de lxlO"7 M ou menos. Em outra modalidade,o anticorpo humano, ou uma porção ligadora de antigeno domesmo, é adalimumab.

FIGURASFiguras la e lb mostram um diagrama do indiceSharp total modificado (mTSS) (Figura la) e descobrimentosradiograficos associados com APs (Figura lb).

Figura 2 mostra um gráfico da função de distribui-ção cumulativa do índice Sharp Total modificado (mTSS). 0gráfico mostra a mudança na linha base para a Semana 24 parapacientes com ambos, filmes radiograficos na linha base eSemana 24.

Figuras 3a e 3b mostra gráficos de distribuiçãocumulativa de mTSS de paciente com (Figura 3a) e sem (Figura 3b) metotrexato (mtx).

Figura 4 mostra um gráfico da mudança média em mTSS na Semana 48.

DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO

I. Definições

A fim de que a presente invenção possa ser maisfacilmente entendida, certos termos são primeiro definidos.

0 termo "TNFa humano" (abreviado aqui como h TNFa,ou simplesmente hTNF), como aqui utilizado, é tencionado re-ferir a uma citocina humana que existe como uma forma secre-tada de 17kD e uma forma associada a membrana de 26 kD, aforma biologicamente ativa da qual é composta de um trimerode moléculas de 17 kD não covalentemente ligadas. A estrutu-ra do h TNFa é descrita ainda em, por exemplo, Pennica, D.,e colaboradores (1984) Nature 312:724-729; Davis, J.M. e co-laboradores (1987) Biochemistry 26:1322-1326; e Jones, E.Y.e colaboradores (1989) Nature 338:225-228.0 termo humanoTNFa é tencionado incluir TNFa humano recombinante (rhTNFct) , que pode ser preparado por métodos de expressão re-combinante padrão ou adquiridos comercialmente (R&D Systems,No. de Catálogo 210-TA, Mineápolis, MN). TNFa é também refe-rido como TNF.

0 termo "inibidor de TNFa" refere-se a um agenteque interfere com a atividade do TNFa. 0 termo também incluicada um dos anticorpos anti- TNFa humano e porções do anti-corpo descritas aqui bem como aquelas descritas nas Patentesdos EUA Nos. 6.090.382; 6.258.562; 6.509.015, e no Pedido dePatente Seriado dos EUA Nos. 09/801185 e 10/302356. Em umamodalidade, o inibidor de TNFa utilizado na invenção é umanticorpo anti- TNFa, ou fragmento do mesmo, incluindo in-fliximab (Remicade®, Johnson e Johnson; descrito na Patentedos EUA No. 5.656.272, incorporado aqui por referência),CDP571 (um anticorpo IgG4 anti-TNF-alfa monoclonal humaniza-do) , CDP870 (um fragmento de anticorpo anti-TNF-alfa mono-clonal humanizado), um dAb anti-TNF (Peptech), CNTO 148 (go-limumab; MEdarex e Centocor, ver WO 02/12502), e adalimumab(Humira® Abbott Laboratórios, um mAb anti-TNF humano, des-crito na EUA 6.090.382 como D2E7). Anticorpos TNF adicionaisque podem ser utilizados na invenção são descritos nas Pa-tentes dos EUS Nos. 6.593.458; 6.498.237; 6.451.983; e6.448.380, cada um dos quais é incorporado aqui por referên-cia. Em outra modalidade, o inibidor de TNFa é uma proteínade fusão TNF, por exemplo, etanercept (Enbrel®, Amgen; des-crito em WO91/03553 e WO 09/406476, incorporados aqui porreferência) . Em outra modalidade, o inibidor de TNFa é umaproteína ligadora de TNF recombinante (r-TBP-I) (Serono).O termo "anticorpo", como aqui utilizado, tencionase referir a moléculas de imunoglobulina compreendidas dequatro cadeias polipeptidicas, duas cadeias pesadas (H) eduas cadeias leves (L) interconectadas por pontes dissulfe-to. Cada cadeia pesada é compreendida de uma região variávelde cadeia pesada (abreviada aqui como RVCP ou VH) e uma re-gião constante de cadeia pesada. A região constante de ca-deia pesada é compreendida de três dominios, CHI, CH2 e CH3.Cada cadeia leve é compreendida de uma região variável decadeia leve (abreviada aqui como RVCL ou VL) e uma regiãoconstante de cadeia leve. A região constante de cadeia leveé compreendida de um dominio, CL. As regiões VH e VL podemser ainda subdivididas em regiões de hipervariabilidade, de-nominadas de regiões determinantes de complementariedade(CDR), interseptada com regiões que são mais conservadas,denominadas regiões esqueleto (FR). Cada VH e VL é compostade três CDRs e quatro FRs, arranjados do amino-terminal paracarbóxi-terminal da seguinte ordem: FR1, CDR1, FR2, CDR2,FR3, CDR3, FR4. Os anticorpos da invenção são descritos emdetalhe adicional nas Patentes dos EUA Nos. 6.090.382;6.258.562; e 6.509.015, cada um dos quais é aqui incorporadopor referência em sua totalidade.

O termo "porção ligadora de antigeno" de um anti-corpo (ou simplesmente "porção de anticorpo"), como aqui u-tilizado, refere-se a um ou mais fragmentos de um anticorpoque retém a habilidade de especificamente se ligar a um an-tigeno (por exemplo, h TNFa). Tem sido mostrado que a funçãoligadora de antigeno de um anticorpo pode ser feita porfragmentos de um anticorpo de comprimento completo. Exemplosde fragmentos ligadores compreendidos dentro do termo "por-ção ligadora de antigeno" de um anticorpo incluem (i) umfragmento Fab, um fragmento monovalente consistindo dos do-minios VL, VH, CL e CHI; (ii) um fragmento F(ab')2, um frag-mento bivalente compreendendo dois fragmentos Fab ligadospor uma ponte dissulfeto da região da dobradiça; (iii) umfragmento Fd consistindo dos domínios VH e CHI; (iv) umfragmento Fv consistindo dos dominios VL e VH de um braçoúnico de um anticorpo, (v) um fragmento dAb (Ward e colabo-radores (1989) Nature 341:544-546), que consistem de um do-mínio VH; e (vi) uma região determinante de complementarie-dade isolada (CDR) . Além disso, embora os dois dominios dofragmento Fv, VL e VH, são codificados por genes separados,eles podem ser juntados, utilizando métodos recombinantes,por um ligador sintético que permite aos mesmos serem feitoscomo uma cadeia de proteína única em que as regiões VL e VHpareiam para formar moléculas monovalentes (conhecidas comocadeia única Fv (scFv); ver, por exemplo, Bird e colaborado-res (1988) Science 242:423-426; e Huston e colaboradores(198-8) Proc. Natl. Acad. Sei. EUA 85:5879-5883). Tais anti-corpos de cadeia única são também tencionados serem compre-endidos dentro do termo "porção ligadora de antigeno" de umanticorpo. Outras formas de anticorpos de cadeia única, taiscomo dianticorpos são também compreendidas. Dianticorpos sãobivalentes, anticorpos biespecificos em que os dominios VH eVL são expressos em uma cadeia polipeptidica única, mas uti-lizando um ligador que é muito curto para permitir o parea-mento entre os dois dominios da mesma cadeia, dessa formaforçando os dominios a parearem com os dominios complementa-res de outra cadeia e criando dois locais de ligação de an-tigeno (ver, por exemplo, Holliger e colaboradores (1993)Proc. Natl. Acad. Sei. EUA 90:6444-6448; Poljak e colabora-dores (1994) Structure 2:1121-1123). As porções de anticorpoda invenção são descritas em detalhe adicional nas Patentesdos EUA Nos. 6.090.382, 6.258.562, 6.509.015, cada uma dasquais é incorporada aqui por referência em sua totalidade.

Fragmentos ligadores são produzidos por técnicasde DNA recombinante, ou por clivagem química ou enzimáticade imunoglobulinas intactas. Fragmentos ligadores incluemFab, Fab', F(ab')2, Fabc, Fv, cadeias únicas, e anticorposde cadeia única. Outraos que imunoglobulinas ou anticorpos"biespecificos" ou "bifuncionais", uma imunoglobulina ou an-ticorpo é entendido ter cada de seus sitios ligadores idên-ticos. Um "anticorpo bifuncional" ou "biespecifico" é um an-ticorpo hibrido artificial tendo dois pares de cadeia pesa-da/leve diferentes e dois sitios ligadores diferences. Anti-corpos biespecificos podem ser produzidos por uma- variedadede métodos incluindo fusão de hibridomas ou ligação de frag-mentos Fab'. Ver, por exemplo, Songsivilai & Lachmann, Clin.Exp. Immunol. 79:315-321 (1990); Kostelny e colaboradores,J. Immunol. 148, 1547-1553 (1992).

Uma "substituição aminoácida conservativa", comoaqui utilizado, é uma em que um residuo aminoácido' é substi-tuído com outro residuo aminoácido tendo uma cadela lateralsimilar. Famílias de resíduos aminoácidos tendo cadeias la-terais similares têm sido definidas na técnica, incluindocadeias laterais básicas (por exemplo, lisina, arginina,histidina), cadeias laterais acidicas (por exemplo, ácidoaspártico, ácido glutâmico), cadeias laterais polares nãocarregadas (por exemplo, glicina, asparagina, glutamina, se-rina, treonina, tirosina, cisteina), cadeias laterais nãopolares (por exemplo, alanina, valina, leucina, isoleucina,prolina, fenilalanina, metionina, triptofano), cadeias late-rais beta-ramifiçadas (por exemplo, treonina, valina, iso-leucina) e cadeias laterais aromáticas (por exemplo, tirosi-na, fenilalanina, triptofano, histidina).

0 termo "anticorpo humano", como aqui utilizado, étencionado incluir anticorpos tendo regiões variáveis econstantes derivados de seqüências de imunoglobulinas de li-nhagens germinativas. Os anticorpos humanos da invenção po-dem incluir resíduos aminoácidos não codificados por seqüên-cias de imunoglobulina de linhagem germinativa humana (porexemplo, mutações introduzidas por mutagênese sitio-especifica ou aleatória in vitro ou por mutação somática invivo), por exemplo, nos CDRs e um particular CDR3. Entretan-to, o termo "anticorpo humano", como aqui utilizado, nãotenciona incluir anticorpos nos quais as seqüências CDR de-rivadas de linhagem germinativa de outras espécies mamífe-ras, tal como camundongo, tem sido enxertado em seqüênciasesqueletos humanas.

0 termo "anticorpo humano recombinante", como aquiutilizado, é tencionado incluir todos os anticorpo humanosque são preparados, expressos, criados ou isolados por meiosrecombinantes tais como anticorpos expressos utilizando umvetor de expressão recombinante transfectado em uma célulahospedeira (descrita adicionalmente abaixo), anticorpos iso-lados de uma biblioteca de anticorpo humano combinatorial,recombinante (descrita adicionalmente abaixo), anticorposisolados de um animal (por exemplo, camundongo) que é trans-gênico para genes da imunoglobulina humana (ver, por exem-plo, Taylor e colaboradores (1992) Nucl. Acids. Res.20:6287) ou anticorpo preparados, expressos, criados ou iso-lados por qualquer outros meios que envolvam "splicing" deseqüências gênicas de imunoglobulina humana para outras se-qüências de DNA. Tais anticorpos humanos recombinantes têmregiões variáveis e constantes derivadas de seqüências deimunoglobulinas de linhagem germinativa humana. Em certasmodalidades, entretanto, tais anticorpos humanos recombinan-tes são sujeitos a mutagênese in vitro (ou, quando um animaltransgênico para seqüências Ig humana é utilizado, mutagêne-se somática in vivo) e então as seqüências aminoácidas dasregiões VH e VL dos anticorpos recombinantes são seqüênciasque, enquanto derivadas de e relacionadas as seqüências VH eVL de linhagem germinativa humana, pode não existir natural-mente dentro do repertório da linhagem germinativa do anti-corpo humano in vivo.

Um "anticorpo isolado", como aqui utilizado, étencionado referir a um anticorpo que é substancialmente li-vre de outros anticorpos tendo diferentes especificidadesantigênicas (por exemplo, um anticorpo' isolado que especifi-camente se liga a hTNFa pe substancialmente livre de anti-corpo que especificamente se ligam a outros antigenos que hTNFa). Um anticorpo isolado que se liga especificamente a hTNFa pode, entretanto, ter reatividade cruzada para outrosantigenos, tais como moléculas de TNFa de outras espécies(discutido em detalhes adicionais abaixo). Além disse, umanticorpo isolado por ser substancialmente livre de outromaterial celular e/ou quimico.

Um "anticorpo neutralizante", como aqui utilizado(ou um "anticorpo que neutralizou a atividade do h TNFa), étencionado se referir como um anticorpo que se liga aos re-sultados de h TNFa na inibição da atividade biológica do hTNFa. Esta inibição da atividade biológica do h TNFa podeser acessado por medir um ou mais indicadores da atividadebiológica do h TNFa, tais como citotoxicidade induzida por hTNFa (ou in vitro ou in vivo) , ativação celular induzida porh TNFa e ligação do h TNFa aos receptores h TNFa. Esses in-dicadores de atividade biológica do h TNFa podem ser acessa-dos por um ou mais dos ensaios in vitro ou in vivo padrõesconhecidos na técnica (ver Patente dos EUA No. 6.090.382).Preferivelmente, a habilidade de um anticorpo para neutrali-zar a atividade h TNFa é acessada or inibição da citotoxici-dade induzida por h TNFa de células L929. Como um parâmetroadicional ou alternativo da atividade de h TNFa, a habilida-de de um anticorpo para inibir a expressão induzida por hTNFa de ELAM-1 ou HUVEC, como uma medida da ativação celularinduzida por h TNFa, pode ser acessada.

O termo "ressonância' de plásmon de superfície",como aqui utilizado, refere-se a um fenômeno óptico que per-mite a análise de interações bioespecíficas em tempo realpor detecção de alterações nas concentrações de proteínadentro de uma matriz biosenssora, por exemplo, utilizando osistema BIAcore (Pharmacia Biosensor AB, Uppsala, Sweden ePiscataway, N.J.). Para descrições adicionais, ver Exemplo 1da Patente dos EUA 6.258.562 e Jonsson e colaboradores(1993) Ann. Biol. Clin. 51:19; Jonsson e colaboradores(1991) Biotechniques 11:620-627; Johnsson e colaboradores(1995) J. Mol. Recognit. 8:125; e Johnnson e colaboradores(1991) Anal. Biochem. 198:268.

O termo "Koff", como aqui utilizado, é tencionadoreferir a uma taxa constante off para dissociação de um an-ticorpo do complexo anticorpo/antígeno.

O termo "Kd", como aqui utilizado, é tencionadoreferir a constante de dissociação de uma interação anticor-po-antígeno particular.

O termo "IC50" como aqui utilizado é tencionadoreferir a concentração dp inibidor requerida para inibir oponto final biológico desinteresse, por exemplo, neutralizara atividade de citotoxicidade.

O termo "molécula de ácido nucléico", como aquiutilizado, é tencionado incluir moléculas de DNA e moléculasde RNA. Uma molécula de ácido nucléico pode ser de fita sim-ples ou de fita dupla, mas preferivelmente é DNA de fita dupia.

O termo "molécula de ácido nucléico isolado", comoaqui utilizado em referência aos ácidos nucléicos codifican-do anticorpos ou porções de anticorpo (por exemplo, VH, VL,CDR3) que se liga a h TNFa, é tencionado se referir a umamolécula de ácido nucleico em que as seqüências nucleotidi-cas codificando o anticorpo ou porção de anticorpo são li-vres ou outras seqüências nucleotidicas codificando anticor-pos ou porções de anticorpos que se ligam a antigenos outrosque h TNFa, que outras seqüências podem naturalmente ladearo ácido nucleico no DNA genômico humano. Então, por exemplo,um ácido nucleico isolado da invenção codificando uma regiãoVH de um anticorpo h TNFa não contém nenhuma das outras se-qüências codificando outras regiões VH que se liga a antige-nos outros que h TNFa.

0 termo "vetor", como aqui utilizado, é tencionadoreferir a uma molécula de ácido nucleico capaz de transpor-tar outro ácido nucleico ao qual ele tem sido ligado. Um ti-po de vetor é um "plasmideo", que se refere a um anel de DNAde fita dupla circular em que segmentos de DNA adicionaispodem ser ligados. Outro tipo de vetor é um vetor viral, emque segmentos de DNA adicionais podem ser ligados no genomaviral. Certos vetores são capazes de replicação autônoma emuma célula hospedeira em que eles são introduzidos (por e-xemplo, vetores bacterianos tendo uma origem bacteriana dereplicação e vetores mamíferos epissomais). Outros vetores(por exemplo, vetores mamíferos não epissomais) pode ser integrados no genoma de uma célula hospedeira sob introduçãoem uma célula hospedeira, e assim são replicados ao longocom o genoma do hospedeiro. Além disso, certos vetores sãocapazes de direcionar a expressão de genes ao qual eles sãooperativamente ligados. Tais vetores são referidos aqui como"vetores de expressão recombinante" (ou simplesmente, "veto-res de expressão"). Em geral, vetores de expressão de utili-dade em técnicas de DNA recombinante são sempre na forma deplasmideos. Na presente especificação, "plasmideo" e "vetor"podem ser utilizados de forma passível de mudança como oplasmideo é a mais comumente forma utilizada de vetor. En-tretanto, a invenção é tencionada incluir tais outras formasde vetores de expressão, tais como vetores virais (por exem-plo, replicação defeituosa de retrovirus, adenovirus e virusadeno-associado), que servem de funções equivalentes.

0 termo "células hospedeira recombinante" (ou sim-plesmente "célula hospedeira"), como aqui utilizado, é ten-cionado referir a uma célula em que um vetor de expressãorecombinante tenha sido introduzido. Deve ser entendido quetais termos são tencionados referir não somente a célula dopaciente particular, mas a progênie de tal célula. Porquecertas modificações podem ocorrer em sucessivas gerações de-vido ou a mutação ou influências no ambiente, tal progêniepode não, de; fato, ser idêntica à célula parental, mas é in-da incluida -dentro do objetivo do termo "célula hospedeira"como aqui utilizada.

O termo "dose", como aqui utilizado, refere-se auma quantidade de inibidor TNFa que é administrada a um pa-ciente.

0 termo "dose múltipla variável" inclui diferentesdoses de um inibidor TNFa que são administrados a um pacien-te para tratamento terapêutico. "Regime de dose múltipla-variável" ou "terapia de dose múltipla-variável" descreve umesquema de tratamento que é baseado na administração de di-ferentes quantidades de inibidor de TNFa em vários pontos detempo através do curso do tratamento. Em uma modalidade, ainvenção descreve um método de dose múltipla-variável dotratamento de poliartrite erosiva compreendendo uma fase deindução e uma fase de tratamento, em que um inibidor de TNFaé administrado em uma dose mais alta durante a fase de indu-ção que a fase de tratamento. Regimes de dose múltipla-variável são descritos no Pedido PCT No. PCT/EUS05/12007.

0 termo "doseamento", como aqui utilizado, refere-se a administração de uma substância (por exemplo, um anti-corpo anti- TNFa) para alcançar um objetivo terapêutico (porexemplo, o tratamento da poliartrite erosiva).

Os termos "regime de dose quinzenal", "doseamentoquinzenal", como aqui utilizado, refere-se ao tempo de cursode administração de uma substância (por exemplo, um anticor-po anti-TNFa) a um paciente para alcançar um objetivo tera-pêutico (por exemplo, o tratamento de poliartrite erosiva).0 regime de dose qiunzenal não tenciona incluir um regime dedose semanal. Preferivelmente, a substância é administrada acada 9-19 dias, mais preferivelmente, a cada 11-17 dias, eainda mais preferivelmente, a cada 13-15 dias, e mais prefe-rivelmente, a cada 14 dias.

0 termo "combinação" como na frase "um primeiro emcombinação com um segundo agente" inclui co-administração deum primeiro agente e um segundo agente, que, por exemplo,pode ser dissolvido ou intermisturado no mesmo veiculo far-maceuticamente aceitável, ou administração de um primeiroagente, seguida por um segundo agente, ou administração dosegundo agente, seguida pelo primeiro agente. A presente in-venção, assim inclui métodos de combinação de tratamento te-rapêutico e combinação de composições farmacêuticas. Em umamodalidade, a invenção prove uma terapia de combinação paratratamento da poliartrite erosiva compreendendo a adminis-tração de um anticorpo anti-TNFa.

O termo "concomitante" como na frase "tratamentoterapêutico concomitante" inclui administração de um agenteem presença de um segundo agente. Um método de tratamentoterapêutico concomitante inclui métodos em que o primeiro,segundo, terceiro ou agentes adicionais são co-administrados. Um método de tratamento terapêutico concomi-tante também inclui métodos em que o primeiro ou agentes a-dicionais são administrados em presença de um segundo ou a-gentes adicionais, em que o segundo ou agentes adicionais,por exemplo, pode ter sido previamente administrado. Um mé-todo de tratamento terapêutico concomitante pode ser execu-tado prudentemente por diferentes médicos. Por exemplo, ummédico pode administrar a um paciente um primeiro agente eum segundo médico pode administrar ao paciente um segundoagente, e os passos de administração podem ser executados aomesmo tempo, ou perto do mesmo tempo, ou em tempos distan-tes, de forma que o primeiro agente (e agentes adicionais) éapós a administração em presença do segundo agente (e agen-tes adicionais). O médico e o paciente podem ser a mesma en-tidade (por exemplo, humano).O termo "terapia de combinação", como aqui utili-zado, refere-se a administração de duas ou mais substânciasterapêuticas, por exemplo, um anticorpo anti- TNFa e outrofármaco. 0(s) outro(s) fármaco(s) pode(m) ser administra-do(s) concomitante(s) com, ante a, ou seguindo a administra-ção de um anticorpo anti-TNFcx.

0 termo "kit" como aqui utilizado refere-se a umproduto embalado ou artigo de fabricação compreendendo com-ponentes. 0 kit preferivelmente compreende uma caixa ou re-cipiente que abrange todos os componentes do kit. A caixa éafixada com uma etiqueta ou um protocolo aprovado pela "Foodand Drug Administration". A caixa ou recipiente abrange oscomponentes da invenção que são preferivelmente contidosdentro do plástico, ou vasilhas de polietileno, polipropi-letno, etileno ou propileno. As vasilhas podem ser tubostampados ou garrafas. O kit pode também incluir instruçõespara administração do anticorpo TNFa, ou porção ligadora deantigeno do mesmo. Em uma modalidade, o kit da invenção in-clui a formulação compreendendo o anticorpo humano D2E7, co-mo descrito em PCT/IB03/04502 e Aplicação EUA No. 10/222140.

Vários aspectos da invenção são descritos em detalhes adicionais aqui.

II. Inibidores de TNFa

Esta invenção prove um método de tratamento da po-liartrite erosiva em que a administração de um inibidor deTNFa, por exemplo, um anticorpo TNFa, ou porção ligadora deantigeno do mesmo, é benéfica. Em uma modalidade, esses mé-todos incluem administração de anticorpos humanos isolados,ou porções ligadoras de antígeno dos mesmos, que ligam aoTNFa humano com alta afinidade e uma baixa taxa off, e têmuma alta capacidade neutralizante. Preferivelmente, os anti-corpos humanos da invenção são recombinantes, neutralizandoos anticorpos anti-TNFa humanos.

Em uma modalidade, o inibidor de TNFa utilizado nainvenção é um anticorpo anti-TNFa, ou um fragmento do mesmo,incluindo infliximab (Remicade®, Johnson e Johnson; descritona Patente dos EUA No. 5.656.272, incorporado por referênciaaqui), CDP571 (um anticorpo IgG4 anti-TNF-alfa monoclonalhumanizado), CDP 870 (fragmento de anticorpo anti-TNF-alfamonoclonal humanizado), um anti-TNF dAb (Peptech), CNTO 148(golimumab; Medarex e Centocor, ver WO 02/12502), e adalimu-mab (Humira® Laboratórios Abbott, um anti-TNF mAb humano,descrito em EUA 6.090.382 como D2E7). Anticorpos TNF adicio-nais que podem ser utilizados na invenção são descritos naPatente dos EUA Nos. 6.593.458; 6.498.237; 6.451.983; e6.448.380, cada uma das quais é aqui incorporada por refe-rência .

O anticorpo neutralizante, recombinante mais pre-ferido utilizado na invenção é referida aqui como D2E7, tam-bém referido como HUMIRA® e adalimumab (a seqüência aminoá-cida da região D2E7 é mostrada na SEQ ID N0:1; a seqüênciaaminoácida da região D2E7 VH é mostrada na SEQ ID NO:2). Aspropriedades do D2E7 (HUMIRA®) têm sido descrita na Salfelde colaboradores, Patente dos EUA Nos. 6.090.382, 6.258.562,e 6.509.015, que são cada incorporado por referência aqui.

Outros exemplos dos inibidores de TNFa incluem anticorposanti-h TNFa murino humanizados que têm passado de testesclínicos para tratamento de artrite reumatóide (ver, por e-xemplo, Elliott e colaboradores (1994) Lancet 344 :1125-1127;Elliot e colaboradores (1994) Lancet 344:1105-1110; Rankin ecolaboradores (1995) Br. J. Rheumatol. 3_4: 334-343) . Em outramodalidade, o anticorpo anti-TNFa é multivalente.

Em uma modalidade, o método de tratamento da poli-artrite erosiva da invenção inclui a administração de anti-corpos D2E7 e porções do anticorpo, anticorpos relacionadosa D2E7 e porções do anticorpo, e outros anticorpos humanos eporções de anticorpos com propriedades equivalentes paraD2E7, tal como alta afinidade de ligação ao h TNFa com ciné-tica de baixa dissociação e alta capacidade de neutraliza-ção. Em uma modalidade, a invenção prove um método para tra-tamento de poliartrite erosiva com um anticorpo humano iso-lado, ou uma porção ligadora de antigeno do mesmo, que dis-socia do TNFa humano com um Kd de lxlO-8 M ou menos e uma ta-xa constante KCff de lxlO"3 s"1 ou menos, ambos determinadospor ressonância de plásmon de superfície, e neutraliza a ci-totoxicidade do TNFa humano em um ensaio L929 in vitro pa-drão com um IC50 de lxlO"7 M ou menos. Mais preferivelmente,o anticorpo humano isolado, ou porção ligadora de antigenodo mesmo, dissocia do TNFa humano com um Koff de 5xl0~4 s-1ou menos, ou ainda mais pref erivelmente, com um Koff delxlO'4 s_1 ou menos. Mais preferivelmente, o anticorpo humanoisolado, ou porção ligadora de antigeno do mesmo, neutralizaa citotoxicidade do TNFa humano em um ensaio L929 in vitropadrão com um IC50 de lxlO"8 M ou menos, ainda mais preferi-velmente com um IC50 de lxlCT9 M ou menos e ainda mais prefe-rivelmente com um IC50 de lxlO"10 M ou menos. Em uma modali-dade preferida, o anticorpo é um anticorpo recombinante hu-mano isolado, ou uma porção ligadora de antigeno do mesmo.

É bem conhecido na técnica que os dominios CDR3 decadeia pesada e leve do anticorpo desempenham um papel im-portante na especificidade/afinidade de ligação de um anti-corpo para um antigeno. De acordo, em outro aspecto, a in-venção pertence aos métodos de tratamento da poliartrite e-rosiva por administração de anticorpos humanos que têm lentacinética de dissociação para associação com h TNFa e que têmdominios CDR3 de cadeia leve e pesada que estruturalmentesão idênticos ao ou relacionados àqueles D2E7. A posição 9do D2E7 VL CDR3 pode ser ocupada por Ala ou Thr sem substan-cialmente afetar o Koff. De acordo, um motivo consenso paraD2E7 VL CDR3 compreende a seqüência aminoácida: Q-R-Y-N-R-A-P-Y-(TVA) (SEQ ID NO: 3). Adicionalmente, a posição 12 doD2E7 VH CDR3 pode ser ocupada por Tyr ou Asn, sem substanci-almente afetar o K0ff. De acordo, um motivo consenso para oD2E7 VH CDR3 compreende a seqüência aminoácida: V-S-Y-L-S-T-A-S-S-L-D-(Y/N) (SEQ ID NO:4). Além disso, como demonstradono Exemplo 2 da Patente dos EUA No. 6.090.382, o dominioCDR3 das cadeias leve e pesada D2E7 é receptivo para substi-tuição com um residuo alanina único (na posição 1, 4, 5, 7,ou 8 dentro do VL CDR3 ou na posição 2, 3, 4, 5, 6, 8, 9, 10ou 11 dentro de VH CDR3) sem substancialmente afetar o Koff.Ainda adicionalmente, o versado na técnica apreciará que,dado a receptividade dos dominios D2E7 VL e VH CDR3 parasubstituições por alanina, substituição de outros aminoáci-dos dentro dos domínios CDR3 pode ser possível enquanto ain-da retém a taxa de constante off baixa do anticorpo, emsubstituições particulares com aminoácidos conservativos.Preferivelmente, não mais que uma ou cinco substituições a-minoácidas são feitas dentro dos domínios D2E7 VL e/ou VHCDR3. Mais preferivelmente, não mais que um a três das subs-tituições aminoácidas são feitas dentro dos domínios D2E7e/ou VH CDR3. Adicionalmente, substituições aminoácidas con-servativas não devem ser feitas nas posições aminoácidascríticas para ligação ao h TNFa. As posições 2 e 5 do D2E7VL CDR3 e posições 1 e 7 do D2E7 VH CDR3 parece ser críticopara interação com h TNFa e então, substituições aminoácidasconservativas preferivelmente não são feitas nestas posições(embora uma substituição alanina na posição 5 do D2E7 VLCDR3 é aceitável, como descrito acima) (ver Patente dos EUANo. 6.090.382).

Consequentemente, em outra modalidade, a invençãoprove métodos de tratamento da poliartrite erosiva por admi-nistração de um anticorpo humano isolado, ou porção ligadorade antígeno do mesmo. 0 anticorpo ou porção ligadora de an-tígeno do mesmo preferivelmente contém as seguintes caracte-rísticas :

a) dissocia do TNFa humano com uma taxa constanteKoff de lxlO"3 s"1 ou menos, como determinado pela ressonân-cia de plásmon de superfície;

b) tem um domínio CDR3 da cadeia leve compreenden-do a seqüência aminoácida da SEQ ID NO:3, ou modificada daSEQ ID NO:3 por uma substituição alanina única na posição 1,4, 5, 7 ou 8 ou por uma a cinco substituições aminoácidasnas posições 1, 3, 4, 6, 7, 8 e/ou 9;

c) tem um dominio CDR3 de cadeia pesada compreen-dendo a seqüência aminoácida da SEQ ID NO:4, ou modificadada SEQ ID NO:4 por uma substituição alanina única na posição2, 3, 4, 5, 6, 8, 9, 10 ou 11 ou por uma a cinco substitui-ções aminoácidas conservativas nas posições 2, 3, 4, 5, 6,8, 9, 10, 11 e/ou 12.

Mais preferivelmente, o anticorpo, ou porção liga-dora de antigeno do mesmo, dissocia do TNFa humano com umK0ff de 5xl0~4 s"1 ou menos. Ainda mais pref erivelmente, o an-ticorpo, ou porção ligadora de antigeno do mesmo, dissociado TNFa humano com um Koff de lxlO"4 s"1 ou menos.

Em ainda outra modalidade, a invenção prove um mé-todo de tratamento de poliartrite erosiva por administraçãode um anticorpo humano isolado, ou porção ligadora do mesmo.O anticorpo ou porção ligadora de antigeno do mesmo preferi-velmente contém uma região variável de cadeia leve (RVCL)tendo um dominio CDR3 compreendendo a seqüência aminoácidada SEQ ID NO:3, ou modificada da SEQ ID NO:3 por substitui-ções alanina única na posição 1, 4, 5, 7 ou 8, e com uma re-gião variável de cadeia pesada (RVCP) tendo um dominio CDR3compreendendo a seqüência aminoácida da SEQ ID NO:4, ou mo-dificado da SEQ ID NO: 4 por uma substituição alanina únicana posição 2, 3, 4, 5, 6, 8, 9, 10 ou 11. Pref erivelmente, aRVCL ainda tem um dominio CDR2 compreendendo a seqüência a-minoácida da SEQ ID NO: 5 (isto é, a D2E7 VL CDR2) e a RVCPainda tem um dominio CDR2 compreendendo a seqüência aminoá-cida da SEQ ID NO: 6 (isto é, o D2E7 VH CDR2). Ainda maispreferivelmente, a RVCL ainda tem um dominio CDR1 compreen-dendo a seqüência aminoácida da SEQ ID NO:7 (isto é, o D2E7VL CDR1) e a RVCP tem um dominio CDR1 compreendendo a se-qüência aminoácida da SEQ ID N0:8 (isto é, o D2E7 VH CDR1).

As regiões esqueleto para VL preferivelmente são da familiade linhagem germinativa humana VkI, mais preferivelmente dogene Vk da linhagem germinativa humana A20 e mais preferi-velmente das seqüências esqueleto D2E7 VL mostrada nas Figu-ras IA e 1B da Patente dos EUA No. 6.090.382. As regiões es-queleto para VH pref erivelmente são da familia da linhagemgerminativa VH3 humana, mais preferivelmente do gene VH dalinhagem germinativa humana DP-31 e mais preferivelmente dasseqüências esqueleto D2E7 VH mostrada nas Figuras 2A e 2B daPatente dos EUA No. 6.090.382.

Consequentemente, em outra modalidade, a invençãoprove um método de tratamento da poliartrite erosiva por ad-ministração de um anticorpo humano isolado, ou porção ligardora de antigeno do mesmo. O anticorpo ou porção ligadora deantigeno do mesmo preferivelmente contém uma região variávelde cadeia leve (RVCL) compreendendo a seqüência aminoácidada SEQ ID NO:l (isto é, o D2E7 VL) e uma região variável decadeia pesada (RVCP) compreendendo a seqüência aminoácida daSEQ ID NO:2 (isto é, o D2E7 VH) . Em certas modalidades, oanticorpo compreende uma região constante de cadeia pesadatal como uma região constante IgGl, IgG2, IgG3, IgG4, IgA,IgE, IgM ou IgD. Preferivelmente, a região constante de ca-deia pesada é uma região constante de cadeia pesada IgGl ouuma região constante de cadeia pesada IgG4. Além disso, oanticorpo pode compreender uma região constante de cadeialeve, ou uma região constante de cadeia leve kappa ou umaregião constante de cadeia leve lambda. Preferivelmente, oanticorpo compreende uma região constante de cadeia levekappa. Alternativamente, a porção do anticorpo pode ser, porexemplo, um fragmento Fab ou um fragmento Fv de cadeia úni-ca .

Em ainda outras modalidades, a invenção descreveum método de tratamento da poliartrite erosiva em que a ad-ministração de um anticorpo anti- TNFa em que o anticorpo éum anticorpo humano isolado, ou uma porção ligadora de anti-geno do mesmo. O anticorpo ou porção ligadora de antigeno domesmo preferivelmente contém dominios VL e VH CDR3 relacio-nado a D2E7, por exemplo, anticorpos, ou porções ligadorasde antigenos dos mesmos, com uma região variável de cadeialeve (RVCL) tendo um dominio CDR3 compreendendo uma seqüên-cia aminoácida selecionada do grupo consistindo da ; SEQ IDN0:3, SEQ ID NO:ll, SEQ ID NO:12, SEQ ID N0:13, SEQ IDNO:14, SEQ ID NO:15, SEQ ID NO:16, SEQ ID N0:17, SEQ IDN0:18, SEQ ID NO:19, SEQ ID NO:20, SEQ ID N0:21, SEQ IDNO:22, SEQ ID NO:23, SEQ ID NO:24, SEQ ID NO:25 e SEQ IDNO: 26 ou com uma região variável de cadeia pesada (RVCP)tendo um dominio CDR3 compreendendo uma seqüência aminoácidaselecionada do grupo consistindo de SEQ ID NO:4, SEQ IDNO:27, SEQ ID NO:28, SEQ ID NO:29, SEQ ID NO:30, SEQ IDN0:31, SEQ ID NO:32, SEQ ID NO:33, SEQ ID NO:34 e SEQ ID NO:35.

O anticorpo TNFa utilizado na invenção pode tambémser modificado. Em algumas modalidades, o anticorpo TNFa oufragmento ligador de antigeno do mesmo, é quimicamente modi-ficado para prover um efeito desejado. Por exemplo, peguila-ção de anticorpos e fragmentos de anticorpo da invenção podeser realizado por qualquer das reações de peguilação conhe-cida na técnica, como descrito, por exemplo, nas seguintesreferências: Focus on Growth Factors 3:4-10 (1992); EP 0 154316; e EP 0 401 384 (cada um dos quais é aqui incorporadopor referência em sua totalidade). Preferivelmente, a pegui-lação é realizado através de uma reação de acilação ou umareação de alquilação com uma molécula de polietileno glicolreativa (ou um polimero análogo reativo solúvel em água). Umpolimero solúvel em água preferido para peguilação dos anti-corpos e fragmentos de anticorpos da invenção é polietilenoglicol (PEG). Como aqui utilizado, "polietileno glicol" cujopropósito é compreender qualquer das formas de PEG que têmsido utilizadas para derivatizar outras proteínas, tais comomono (Cl-CLO) alcóxi- ou arilóxi-polietileno glicol.

Métodos para preparar anticorpos peguilados efragmentos de anticorpos da invenção geralmente compreende-rão os passos de (a) reação do anticorpo ou fragmento de an-ticorpo com polietileno glicol, tal como um éster reativo ouderivado de aldeido de PEG, sob condições em que o anticorpoou fragmento de anticorpos se torna ligado a um ou mais gru-pos PEG, e (b) obtendo os produtos de reação. Será aparentea um versado na técnica selecionar as condições ótimas dereação ou reações de acilação baseadas em parâmetros conhe-cidos e o resultado desejado.

Anticorpos peguilados e fragmentos de anticorpospodem geralmente ser utilizados para tratar poliartrite ero-siva e distúrbios relacionados a TNFa da invenção por admi-nistração de anticorpos TNFa e fragmentos anticorpos descri-tos aqui. Geralmente os anticorpos peguilados e fragmentosde anticorpo têm meia vida aumentada, como comparado aos an-ticorpos não peguilados e fragmentos de anticorpo. Os anti-corpos peguilados e fragmentos de anticorpos podem ser em-pregados sozinhos, juntos, ou em combinação com outras com-binações farmacêuticas.

Em ainda outra modalidade da invenção, anticorposTNFa ou fragmentos dos mesmos podem ser alterados em que aregião constante do anticorpo é modificada para reduzir pelomenos uma função biológica efetora mediada pela região cons-tante relativa a um anticorpo não modificado. Para modificarum anticorpo da invenção tal que ele exiba ligação reduzidapara o receptor Fc, o segmento da região- constante da imuno-globulina do anticorpo pode ser mutado em regiões particula-res necessárias para interações do receptor Fc (FcR) (ver,por exemplo, Canfield e Morrison (1991) J. Exp. Med.173:1483-1491; e Lund e colaboradores (1991) J. of Immunol.147:2657-2662). Redução na habilidade de ligação do FcR doanticorpo pode também reduzir outras funções efetoras queconta com as interações FcR, tal como opsonização e fagoci-tose e citotoxicidade celular dependente de antigeno.Um anticorpo ou porção de anticorpo da invençãopode ser derivatizado ou ligado a outra molécula funcional(por exemplo, outro peptideo ou proteína). Consequentemente,os anticorpos e porções de anticorpos da invenção são ten-cionados para incluir derivatizados e de outra maneira for-mas modificadas dos anticorpos anti-h TNFa humanos descritosaqui, incluindo moléculas de imunoadesão. Por exemplo, umanticorpo ou porção de anticorpo da invenção pode ser fun-cionalmente ligada (por acoplamento quimico, fusão genética,associação não covalente ou de outra forma) para uma ou maisoutras entidades moleculares, tais como outro anticorpo (porexemplo, um anticorpo bi-especifico ou um dianticorpo), umagente detectável, um agente citotóxico, um agente farmacêu-tico, e/ou uma proteína ou peptideo que pode mediar a asso-ciação do anticorpo ou porção do anticorpo com outra molécu-la (tal como uma região do núcleo estreptavidina ou um marcador poli-histidina).

Um tipo de anticorpo derivatizado é produzido porligação cruzada de dois ou mais anticorpos (do mesmo tipo oude tipos diferentes, por exemplo,- para criar anticorpos bi-especificos). Ligantes cruzados adequados incluem aquelesque são heterobifuncionais, tendo dois grupos distintamentereativos separados por um espaçador apropriado (por exemplo,éster m-maleimidobenzoil-N-hidroxisuccinimida) ou homobifun-cional (por exemplo, suberato de disuccinimidil). Tais li-gantes são disponíveis da Pierce Chemical Company, Rockford,Agentes detectáveis úteis com os quais um anticor-po ou porção de anticorpo da invenção pode ser derivatizadaincluem compostos fluorescentes. Agentes fluorescentes de-tectáveis exemplares incluem fluoresceina, isotiocianato defluoresceina, rodamina, cloreto de 5-dimetilamina-l-naftalenosulfonil, ficoeritrina e semelhantes. Um anticorpopode também ser derivatizado com enzimas detectáveis, taiscomo fosfatase alcalina, peroxidase de rábano silvestre,glicose oxidase e semelhantes. Quando um anticorpo é deriva-tizado com uma enzima detectável, ele é detectável por adi-ção de reagentes adicionais que a enzima usa para produzirum produto de reação detectável. Por exemplo, quando o agen-te peroxidase de rábano silvestre está presente, a adição deperóxido de hidrogênio e diaminobenzidina levam a um produtode reação colorido, que é detectável. UM anticorpo pode tam-bém ser derivatizado com biotina, e detectado através de me-dida indireta de ligação de avidina ou estreptavidina.

Um anticorpo, ou porção de anticorpo, da invençãopode ser preparada por expressão recombinante dos genes decadeia leve e pesada da imunoglobulina em uma célula hospe-deira. Para expressar um anticorpo recombinantemente, umacélula hospedeira transfectada com um ou mais vetores de ex-pressão recombinante carreando fragmentos de DNA codificandoas cadeias leve e pesada da imunoglobulina do anticorpo talque as cadeias leves e pesadas são expressas na célula hos-pedeira e, preferivelmente, secretadas no meio em que as cé-lulas hospedeiras são cultivadas, de qual meio os anticorpospodem ser recuperados. Metodologias de DNA recombinante pa-drões são utilizadas para obter os genes de cadeia pesada eleve do anticorpo, incorporar esses genes nos vetores de ex-pressão recombinante e introduzir os vetores nas célulashospedeiras, tal como esses descritos em Sambrook, Fritsch eManiatis (eds), Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Se-gunda Edição, Cold Spring Harbor, N.I., (1989), Ausubel ecolaboradores (eds.) Current Protocols in Molecular Biology,Greene Publishing Associates, (1989) e na Patente dos EUANo. 4.816.397 por Boss e colaboradores.

Para expressar D2E7 ou um anticorpo relacionado aD2E7, fragmentos de DNA codificando as regiões variáveis decadeia leve e pesada são primeiro obtidas. Esses DNAs podemser obtidos por amplificação e modificação ddas seqüênciasvariáveis de cadeia leve e pesada da linhagem germinativautilizando a reação de polimerase em cadeia (PCR) . Seqüên-cias de DNA da linhagem germinativa para genes da região va-riável de cadeia pesada e leve são conhecidos na técnica(ver, por exemplo, a base de dados de seqüência de linhagemgerminativa humana "Vbase"; ver também Kabat e colaboradores(1991) Seguences of■ Proteins of Immunological Interest,Quinta Edição, Departamento de Saúde e Serviços Humanos dosEUA, Publicação do NIH No. 91-3242; Tomlinson e colaborado-res (1992) "The Repertoire of Human Germline VH SequencesReveals about Fifty Groups of VH Segments with Different Hy-pervariable Loops" J. Mol. Biol. 227:776-798; e Cox e co-laboradores (1994) "A' Directory of Human Germ-line V78 Seg-ments Reveals a Strong Bias in their Usage" Eur. J. Immunol.24:827-836; o conteúdo de cada um dos quais são expressamen-te incorporados aqui por referência). Para obter um fragmen-to de DNA codificando a região variável de cadeia pesada doD2E7, ou um anticorpo relacionado ao D2E7, um membro da fa-mília VH3 dos genes VH da linhagem germinativa DP-31 VH éamplificado por PCR padrão. Mais preferivelmente, a seqüên-cia da linhagem germinativa DP-31 VH é amplificada. Para ob-ter um fragmento de DNA codificando a região variável de ca-deia leve do D2E7, ou um anticorpo relacionado ao D2E7, ummembro da familia VkI dos genes VL da linhagem germinativahumana é amplificado por PCR padrão. Mais preferivelmente, aseqüência da linhagem germinativa A20 VL é amplificada. Ini-ciadores PCR adequados para uso na amplificação das seqüên-cias VL da linhagem germinativa A20 e VH da linhagem germi-nativa DP-31 podem ser desenhados baseados nas seqüênciasnucleotidicas reveladas nas referências citadas acima, uti-lizando métodos padrões.

Uma vez os fragmentos VH e VL da linhagem germina-tiva são obtidos, essas seqüências podem ser mutadas paracodificar D2E7;ou as seqüências aminoácidas relacionadas re-veladas aqui. -As seqüências aminoácidas codificadas pelasseqüências de DNA VH e VL da linhagem germinativa são pri-meiro comparadas ao D2E7 ou seqüências aminoácidas VH e VLrelacionadas D2E7 para identificar residuos aminoácidos emD2E7 ou seqüência relacionada a D2E7 que difere da linhagemgerminativa. Então, os nucleotideos apropriados das seqüên-cias de DNA da linhagem germinativa são mutados tal que aseqüência da linhagem germinativa mutada codifica o D2E7 oua seqüência aminoácida relacionada a D2E7, utilizando o có-digo genético para determinar que mudanças nucleotidicas de-vem ser feitas. Mutagenese das seqüências de linhagem germi-nativa é realizada por métodos padrões, tal como mutagenesemediada por PCR (em que os nucleotideos mutados são incorpo-rados nos iniciadores de PCR tal que o produto PCR contém asmutações) ou mutagenese sitio-direcionada.

Uma vez os fragmentos de DNA codificando D2E7 ousegmentos VH e VL relacionados a D2E7 são obtidos (por am-plificação e mutagenese dos genes VH e VL da linhagem germi-antiva, como descrito acima), esses fragmentos de DNA podemser ainda manipulados por técnicas de DNA recombinante pa-drões, por exemplo, para converter os genes da região variá-vel para genes de cadeia de anticorpo de comprimento intei-ro, para genes do fragmento Fab ou para um gene scFv. Nessasmanipulações, um fragmento codificanto VL- ou VH é operacio-nalmente ligado a outro fragmento de DNA codificando outraproteína, tal como uma região constante do anticorpo ou umligador flexível. O termo "operacionalmente ligado", comoutilizado neste contexto, tenciona significar que os doisfragmentos de DNA são juntados tal que as seqüências aminoá-cidas codificadas pelos dois fragmentos de DNA permanecem emforma.

O DNA isolado codificando a região VH pode serconvertido a um gene de cadeia pesada de comprimento comple-to por operacionalmente ligar o DNA codificante VH a outramolécula'de DNA codificando regiões constante de cadeia pe-sada (CHI, CH2 e CH3) . As seqüências dos genes da regiãoconstante de cadeia pesada humana são conhecidas na técnica(ver, por exemplo, Kabat e colaboradores (1991) Sequences ofProteins of Immunological Interest, Quinta Edição, Departa-mento de Saúde e Serviços Humanos dos EUA, Publicação do NIHNO. 91-3242) e fragmentos de DNA compreendendo essas regiõespodem ser obtidas por amplificação por PCR padrão. A regiãoconstante de cadeia pesada pode ser uma região constanteIgGl, IgG2, IgG3, IgG4, IgA, IgE, IgM ou IgD, mas mais pre-ferivelmente é uma região constante IgGl ou IgG4. Para umgene de cadeia pesada de fragmento Fab, o DNA codificando VHpode ser operacionalmente ligado a outra molécula de DNA co-dificando somente a região constante CHI da cadeia pesada.

O DNA isolado codificando a região VL pode serconvertido a um gene de cadeia leve de comprimento completo(bem como um gene de cadeia leve Fab) por operacionalmenteligar o DNA codificando VL a outra molécula de DNA modifi-cando a região constante de cadeia leve, CL. As seqüênciasdos genes da região constante da cadeia leve humana são co-nhecidas na técnica (ver, por exemplo, Kabat e colaboradores(1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest,Quinta Edição, Departamento de Saúde e Serviços Humanos dosEUA, Publicação do NIH No. 91-3242) e fragmentos de DNA com-preendendo essas regiões podem ser obtidos por amplificaçãopor PCR padrão. A região constante de cadeia leve pode seruma região constante kappa ou lambda, mas mais preferivel-mente é uma região constante kappa.

Para criar um gene scFv, os fragmentos de DNA co-dificando VH- e VL são operacionalmente ligados a outrofragmento codificando um ligador flexivel, por exemplo, co-dificando a seqüência aminoácida (Gly4-Ser)3, tal que as se-qüências VH e VL podem ser expressas como uma proteina decadeia única contigua, com as regiões VL e VH articulaçõespelo ligador flexivel (ver, por exemplo, Bird e colaborado-res (1988) Science 242:423-426; Huston e colaboradores(1988) Proc. Natl. Acad. Sei. EUA 85:5879-5883; McCafferty ecolaboradores, Nature (1990) 348:552-554).

Para expressar os anticorpos, ou porções de anti-corpos da invenção, DNAs codificando cadeias leve e pesadade comprimento completo, obtidos como descrito acima, sãoinseridos em vetores de expressão tal que o genes são opera-cionalmente ligados as seqüências controle transcricional etraducional. Neste contexto, o termo "operacionalmente liga-do" tenciona significar que um gene de anticorpo é ligado emum vetor tal que as seqüências controle transcricional etraducional dentro do vetor servem a sua função tencionadade regular a transcrição e tradução do gene do anticorpo. Ovetor de expressão e as seqüências controle de expressão sãoescolhidos serem compatíveis com a célula de expressão dohospedeiro utilizada. O gene de cadê leve do anticorpo e ogene de cadeia pesada do anticorpo pode ser inserido em ve-tor separado ou, mais tipicamente, ambos os genes são inse-ridos no mesmo vetor de expressão. Os genes do anticorpo sãoinseridos no vetor de expressão por métodos padrões (por e-xemplo, ligação de sitios de restrição complementar no frag-mento do gene do anticorpo e vetor, ou ligação a extremidadecega se nenhum sitio de restrição está presente). Antes dainserção das seqüências de cadeia leve e pesada de D2E7 erelacionadas a D2E7, o vetor de expressão pode já carrearseqüências da região constante do anticorpo. Por exemplo,uma abordagem para converter o D2E7 ou seqüências VH e VLrelacionadas a D2E7 para genes do anticorpo de comprimentocompleto é para inserir os mesmo nos vetores de expressão jácodificando regiões constantes de cadeia pesada e de cadeialeve, respectivamente, tal que o segmento VH é operacional-mente ligado ao(s) segmento(s) CH dentro do vetor e o seg-mento VL é operacionalmente ligado ao segmento CL dentro dovetor. Adicionalmente ou alternativamente, o vetor de ex-pressão recombinante pode codificar um peptideo sinal quefacilita a secreção da cadeia de anticorpo de uma célulahospedeira. O gene da cadeia de anticorpo pode ser clonadoem um vetor tal que o peptideo sinal é ligado em forma aoamino terminal do gene da cadeia do anticorpo. O peptideosinal pode ser um peptideo sinal da imunoglobulina ou umpeptideo sinal heterólogo (isto é, um peptideo sinal de umaproteína não imunoglobulina).

Em adição aos genes da cadeia do anticorpo, os ve-tores de expressão recombinante da invenção carreiam seqüên-cias regulatórias que controlam a expressão dos genes da ca-deia do anticorpo em uma célula hospedeira. O termo "seqüên-cia regulatória" é tencionado incluir promotores, intensifi-cadores e outros elementos controle de expressão (por exem-pio, sinais de poliadenilação) que controlam a transcrição etradução dos genes da cadeia de anticorpo. Tais seqüênciasregulatórias são descritas, por exemplo, em Goeddel; GeneExpression Technology: Methods in Enzymology 185, AcademicPress, São Diego, CA (1990). Será apreciado pelos versadosna técnica que o desenho do vetor de expressão, incluindo aseleção das seqüências regulatórias pode depender de taisfatores como a escolha da célula hospedeira a ser transfor-mada, o nivel de expressão da proteína desejada etc. Seqüên-cias regulatórias preferidas para expressão em célula hospe-deira mamífera inclui elementos virais que direcionam altosniveis de expressão de proteína em células mamíferas, talcomo promotores e/ou intensificadores derivados de citomega-lovirus (CMV) (tal como o promotor/intensificador CMV), Ví-rus Simian 40 (SV40) (tal como o pormotor/intensificadorSV40), adenovírus, (por exemplo, o promotor tardio principaladenovírus (AdPTP)) e polioma. Para descrição adicional doselementos regulatórios virais, e seqüências dos mesmos, ver,por exemplo, Patente dos EUA No. 5.168.062 por Stinski, Pa-tente dos EUA No. 4.510.245 por Bell e colaboradores, e Pa-tente dos EUA No. 4.968.615 por Schaffner e colaboradores.

Em adição aos genes de cadeia de anticorpo e se-qüências regulatórias, os vetores de expressão recombinanteda invenção carreiam seqüências adicionais, tal como seqüên-cias que regulam a replicação do vetor nas células hospedei-ras (por exemplo, origens de replicação) e genes marcadoresselecionáveis. O gene marcador selecionável facilita a sele-ção das células hospedeiras na qual o vetor tem sido intro-duzido (ver, por exemplo, Patentes dos EUA Nos. 4.399.216,4.634.665 e 5.179.017, todas por Axel e colaboradores). Porexemplo, tipicamente o gene marcador selecionável confereresistência à drogas, tal como G418, higromicina ou metotre-xato, em uma célula hospedeira em que o vetor tem sido in-troduzido. Genes marcadores selecionáveis preferidos incluemo gene diidrofolato redutase (DHRF) (para uso em célulashospederias dhfr com seleção/amplificação metotrexato) e ogene neo (para seleção G418).

Para expressão das cadeias leve e pesada, o(s) ve-tor (s) de expressão codificando as cadeias pesada e leve étransfectado em uma célula hospedeira por técnicas padrões.As várias formas do termo "transfecção" são tencionadas com-preender uma ampla variedade de técnicas comumente utiliza-das para a introdução de DNA exógeno em uma célula hospedei-ra procariótica ou eucariótica, por exemplo, eletroporação,precipitação cálcio-fosfato, transfecção DEAE-dextrano e se-melhantes. Embora seja teoricamente possível expressar osanticorpos da invenção em ou células hospedeiras procarióti-cas ou eucarióticas, a expressão de anticorpos em célulaseucarióticas, e mais preferivelmente células hospedeiras ma-míferas, em suas maiorias preferidas porque tais células eu-carióticas, e em particular células mamíferas, são mais pro-vavelmente que células procarióticas para unir e secretar umanticorpo propriamente pregueado e imunologicamente ativo. Aexpressão procariótica de genes de anticorpos tem sido rela-tada ser sem efeito para produzir altas produções de anti-corpo ativo (Boss e Wood (1985) Immunology Today 6:12-13).

Células hospedeiras de mamífero preferidas paraexpressar os anticorpos recombinantes da invenção incluemOvário de Hamster Chinês (células CHO) (incluindo célulasdhfr-CHO, descrita em Urlaub e Chasin (1980) Proc. Natl. A-cad. Sei. EUA 77^ 4216-4220, utilizado com um marcador sele-cionável DHFR, por exemplo, como descrito em Kaufman e Sharp(1982) Mol. Biol. 159:601-621), células de mieloma NSO, cé-lulas COS e células SP2. Quando vetores de expressão recom-binante codificando genes de anticorpo são introduzidos emcélulas de hospedeiro mamifero, os anticorpos são produzidospor cultura de células hospedeiras pó rum periodo de temposuficiente para permitir a expressão do anticorpo nas célu-las hospedeiras ou, mais preferivelmente, secreção do anti-corpo no meio de cultura em que as células hospedeiras sãocrescidas. Anticorpos podem ser recuperados do meio de cul-tura utilizando métodos de purificação de proteína padrões.

Células hospedeiras também podem ser utilizadaspara produzir porções de anticorpos intactos, tais comofragmentos Fab ou moléculas scFv. É entendido que variaçõesno procedimento acima estão dentro do objetivo da presenteinvenção. Por exemplo, pode ser desejável transfectar umacélula hospedeira com DNA codificando ou a cadeia leve ou acadeia pesada (mas não ambas) de um anticorpo desta inven-ção. A tecnologia de DNA recombinante pode também ser utili-zada para remover algum ou todo do DNA codificando uma ouambas das cadeias leve e pesada que não seja necessária paraligar a hTNFa. As moléculas expressas de tais moléculas deDNA truncadas são também compreendidas por anticorpos da in-venção. Em adição, anticorpos bifuncionais podem ser produ-zidos em que uma cadeia pesada e uma leve sejam um anticorpoda invenção e a outra cadeia pesada e leve são especificaspara um antigeno outro que h TNFa por ligação cruzada de umanticorpo da invenção para um segundo anticorpo por métodosde ligação cruzada quimica padrões.

Em um sistema preferido para expressão recombinan-te de um anticorpo, ou porção ligadora de antigeno do mesmo,da invenção, um vetor de expressão recombinante codificandoambas, a cadeia pesada do anticorpo e a cadeia leve do anti-corpo é introduzida em células dhfr-CHO por transfecção me-diada por fosfato de cálcio. Dentro do vetor de expressãorecombinante, os genes de cadeia pesada e leve de anticorposão cada operacionalmente ligados aos elementos regulatóriosintensificador CMV/promotor AdMLP para dirigir altos niveisde transcrição dos genes. O vetor de expressão recombinantetambém realiza um gene DHFR, que permite para seleção de cé-lulas CHO que tenham sido transfectadas com o vetor utili-zando seleção/amplificação por metotrexato. As células hos-pedeiras transformantes selecionadas são cultivadas parapermitir a expressão das cadeias pesada e leve do anticorpoe anticorpo intacto é recuperado do meio de cultura. Técni-cas de biologia molecular padrões são utilizadas para prepa-rar o vetor de expressão recombinante, transfecta as célulashospedeiras, selecionadas para transformantes, cultivam ascélulas hospedeiras e recupera o anticorpo do meio de cultu-ra.

Anticorpos humanos recombinantes da invenção emadição do D2E7 ou uma porção ligadora de antigeno do mesmo,ou anticorpos relacionados a D2E7 revelados aqui podem serisolados por seleção de uma biblioteca de anticorpo combina-torial recombinante, preferivelmente uma biblioteca que re-vela bacteriófagos dcFv, preparada utilizando cDNAs VL e VHpreparada de mRNA derivado de linfócitos humanos. Metodolo-gias para preparar e selecionar tais bibliotecas são conhe-cidas na técnica. Em adição aos kits disponíveis comercial-mente para gerar bibliotecas que revelam bacteriófagos (porexemplo, a Pharmacia Recombinant Phage Antibody System, n°catálogo. 27-9400-01; e o kit que revela bacteriófago Stra-tagene SurfZAP®, n° de catálogo 240612), exemplos de métodose reagentes particularmente receptivel para uso na geração eseleção de bibliotecas que revelam anticorpo podem ser en-contrados em, por exemplo, Ladner e colaboradores Patentedos EUA No 5.223.409; Kang e colaboradores Publicação PCTNo. WO 92/18619; Dower e colaboradores Publicação PCT No. WO91/17271; Winter e colaaboradores Publicação PCT No. WO92/20791; Markland e colaboradores Publicação PCT No.92/15679; Breitling e colaboradores Publicação PCT No. WO93/01288; McCafferty e colaboradores Publicação PCT No. WO92/01047; Garrard e colaboradores Publicação PCT No. WO92/09690; Fuchs e colaboradores (1991) Bio/Technology9:1370-1372; Hay e colaboradores (1992) Hum Antibod Hybrido-mas 3:81-85; Huse e colaboradores (1989) Science 246:1275-1281; McCafferty e colaboradores, Nature (1990) 348:552-554;Griffiths e colaboradores (1993) EMBO J 12:725-734; Hawkinse colaboradores (1992) J Mol Biol 226:889-896; Clackson ecolaboradores (1991) Nature 352:624-628; Gram e colaborado-res (1992) PNAS 89:3576-3580; Garrard e colaboradores,(1991) Bio/Technology 9:1373-1377; Hoogenboom e colaborado-res (1991) Nuc Acid Res 19:4133-4137; e Barbas e colaborado-res (1991) PNAS 88:7978-7982.

Em uma modalidade preferida, para isolar anticor-pos humanos com alta afinidade e uma taxa constante off parah TNFct, um anticorpo anti-h TNFa murino tendo alta afinidadee uma baixa taxa constante off para h TNFa (por exemplo, MAK195, o hibridoma para o qual tem número de depósito BCACC 87050801) é primeiro utilizado para selecionar as seqüênciasda cadeia pesada e leve humana tendo atividade de ligaçãosimilar ao h TNFa, utilizando o epitopo impressão nos méto-dos descritos em Hoogenboom e colaboradores, Publicação PCTNo. WO 93/06213. As bibliotecas de anticorpo utilizadas nes-te método são preferivelmente bibliotecas scFv preparadas eselecionadas como descrito em McCafferty e colaboradores,Publicação PCT No. WO 92/01047, McCafferty e colaboradores,Nature (1990) 348:552-554; e Griffths e colaboradores,(1993) EMBO J 12:725-734. As bibliotecas de anticorpo scFvpreferivelmente são selecionados utilizando TNFa humano re-combinante como o antigeno. :

Uma vez os segmentos VL e VH humanos iniciais sãoselecionados, experimentos "mistura e compete", em que paresdiferentes dos segmentos VL e VH selecionados inicialmentesão selecionados para ligação de h TNFa, são feitos para se-lecionar combinações pares VL/VH preferidos. Adicionalmente,para ainda aumentar a afinidade e/ou diminuir a taxa cons-tante off para a ligação do h TNFa, os segmentos VL è VHdo(s) par(es) VL/VH preferido(s) pode ser aleatoriamente mu-tado, pref erivelmente dentro da região CDR3 de VH e/ou VL,em um processo análogo para o processo de mutação somáticoin vivo responsável para afinidade da maturação de anticor-pos durante uma resposta imune natural. Esta afinidade dematuração in vitro pode ser acompanhada por amplificação deregiões VH e VL utilizando iniciadores PCR complementarespara o VH CDR3 ou VL CDR3, respectivamente, cujos iniciado-res tem sido "pregados" com uma mistura aleatória de quatrobases nucleotidicas em certas posições tal que os produtosPCR resultantes codificam segmentos VH e VL nos quais muta-ções aleatórias têm sido introduzidas nas regiões VH e/ou VLCDR3. Esses segmentos VH e VL mutados aleatoriamente podemser re-selecionados para ligação ao h TNFa, e seqüências queexibem alta afinidade e uma baixa taxa off para ligação hTNFa podem ser selecionadas.

Seguindo a seleção e isolamento de um anticorpoanti-h TNFa da invenção de uma imunoglobulina recombinanterevelado na biblioteca, ácido nucléico codificando o anti-corpo selecionado pode ser recuperado do pacote revelado(por exemplo, do genoma do bacteriófago) e subclqnado em ou-tros vetores de expressão por técnicas de DNA recombinantepadrões. Se desejado, o ácido nucléico pode ser ainda mani-pulado para criar outras formas de anticorpo da invenção(por exemplo, ligado ao ácido nucléico codificando domíniosde imunoglobulina adicionais, tais como regiões constantesadicionais). Para expressar um anticorpo humano recombinanteisolado por seleção de uma biblioteca combinatofial, o DNAcodificante o anticorpo é clonado em um vetor dè expressãorecombinante e introduzido em uma célula hospedeira mamífe-ra, como descrita em detalhes adicionais acima.

Métodos de isolamento de anticorpos humanos comalta afinidade e uma baixa taxa constante off para h TNFasão também descritos na Patente dos EUA Nos 6.090.382,6.258.562, e 6.509.015, cada um dos quais é incorporado aquipor referência.

O inibidor de TNFa pode também ser uma proteína defusão TNF, por exemplo, etanercept (Enbrel®, Amgen; descritoem WO 91/03553 e WO 09/406476, incorporado aqui por referên-cia) . Em outra modalidade, o inibidor TNFa é uma proteina deligação de TNF recombinante (r-TBP-I) (Serono).

III. Tratamento de Poliartrite Erosiva

A invenção prove métodos para tratar poliartriteerosiva compreendendo administração de um inibidor de TNFa,incluindo, por exemplo, um anticorpo TNFa, para um pacientetendo poliartrite erosiva. A invenção também descreve méto-dos para determinar a eficácia de um inibidor de TNFa para otratamento de poliartrite erosiva. Preferiyelmente, o TNFa éTNFa humano e o paciente é um paciente humano. Em uma moda-lidade, o inibidor de TNFa é adalimumab, também referido co-mo um HUMIRA® ou D2E7. O uso de inibidores de TNFa, incluin-do anticorpos e porções de anticorpos, no tratamento de po-liartrite erosiva, bem como para determinar a eficácia de uminibidor de TNFa para o tratamento de poliartrite erosiva, édiscutida adicionalmente abaixo:O termo "poliartrite" geralmente refere-se à in-flamação, isto é, inchaço, sensibilidade, ou calor, em duasou mais articulações de um paciente.

Como aqui utilizado, o termo "poliartrite erosiva"refere-se a um paciente que tem poliartrite que danifica aarticulação.

A invenção prove um método para tratar poliartriteerosiva compreendendo a administração de um inibidor deTNFa, incluindo, por exemplo, um anticorpo TNFa. A invençãotambém prove um método para inibição da progressão radiográ-fica da doença da articulação associada com poliartrite ero-siva. Métodos para administração de um anticorpo TNFa, ouuma porção.ligadora de antigeno do mesmo, para o tratamentode poliartrite erosiva são descritos em mais detalhes abai-xo .

A invenção prove um método para determinação daeficácia de um tratamento anti-TNFa para poliartrite erosi-va. Medidas para determinar tal eficácia incluem testes quedeterminam se a destruição da articulação ou erosão é aumen-tada seguindo o tratamento. Por exemplo, o índice Sharp To-tal Modificado (mTSS) de um paciente pode ser utilizado paradeterminar melhoramentos na poliartrite erosiva em um paci-ente. 0 mTSS pode também ser utilizado como um ensaio paradeterminar a eficácia de um tratamento para poliartrite ero-siva.

0 indice Sharp é uma medida de raio X em mudançasno dano da articulação total como visto pode erosões óssease Estreitamento do Espaço Articular (Sharp e colaboradores(1971) Arthritis & Rheumatism 14:706; Sharp e colaboradores(1985) Arthritis & Rheumatism 28:16). O mTSS é uma medida daextensão e severidade do dano da articulação baseada nas a-valiações de raios x de mãos e pés de pacientes. Articula-ções são Índices para ambas, erosões da articulação e es-treitamento do espaço articular. O mTSS é a soma do índicede erosão (IE) e índice Estreitamento do Espaço Articular(JSN) e tem, por exemplo, uma variação de cerca de 0 a cercade 398, onde 0 = nenhum dano. O IE é a soma dos índices dasarticulações coletadas por 48 articulações e tem uma varia-ção, por exemplo, de cerca de 0 a cerca de 230. O JSN é asoma dos índices das articulações coletadas por 42 articula-ções e tem uma variação, por exemplo, de cerca de 0 a cercade 168. Um índice de 0 pode indicar nenhuma mudança. Em umamodalidade da invenção, o mTSS é determinado por combinaçãodo índice Estreitamento do Espaço Articular tendo uma varia-ção de cerca de 0-192 e um índice de erosão tendo uma varia-ção de cerca de 0-378.

Um mTSS melhorado ou constante demonstra que o i-nibidor de TNFa é efetivo para tratar poliartrite erosiva.Em uma modalidade, eficácia de um inibidor de TNFa para otratamento de poliartrite erosiva é evidenciada pela ausên-cia de progressão da doença de articulação, por exemplo, ne-nhuma mudança no índice Sharp, em mTSS ao longo do tempo emum paciente tendo poliartrite erosiva. Em outra modalidade,eficácia de um inibidor de TNFa para o tratamento da poliar-trite erosiva é evidenciada por uma diminuição na progressãoradiográfica da doença da articulação, por exemplo, diminui-ção do indice Sharp, no mTSS ao longo do tempo em um paciente tendo poliartrite erosiva.

Em uma modalidade, a mudança geral no mTSS entrelinha base e um período de tempo seguindo o tratamento comum inibidor de TNFa está entre cerca de 0,9 e cerca de 0,2.Em outra modalidade, a mudança geral no mTSS entre a linhabase e um período de tempo seguindo o tratamento como um i-nibidor de TNFa está entre cerca de 0,5 a cerca de -0,2. Emainda outra modalidade, a mudança geral no mTSS entre a li-nha base e um período de tempo seguindo o tratamento com uminibidor de TNFa está entre cerca de 0,2 a cerca de -0,2.

Deve ser notado que variações intermediárias dosíndices acima citados, por exemplo, cerca de -0,1 a cerca de0,3, são também tencionados serem parte desta invenção. Porexemplo, variações de valores utilizando uma combinação dequalquer dos valores citados acima como limites superiore/ou inferior são tencionados serem incluídos.

Enquanto o tratamento de uma doença inflamatóriacom um agente antiinflamatório pode resultar em melhoramen-tos clínicos seguindo o- tratamento, pode ser ainda dano daarticulação progressivo resultando de poliartrite erosiva(Gladman e colaboradores (1990) J Rheumatol 17:809; Hanly ecolaboradores (1988) Ann Rheum Dis 47:386). Então, é uma ca-racterística desta invenção para prover um método para tra-tar poliartrite erosiva que pode ser associada com outrodistúrbio. Em uma modalidade preferida, a invenção incluitratamento de poliartrite erosiva associada com um distúrbioem que a atividade TNFa é prejudicial, incluindo, mas nãolimitado a, artrite reumatóide (incluindo artrite reumatóidejuvenil), doença de Crohn, psoriase, artrite psoriática, eespondilite anquilosante. Poliartrite erosiva pode tambémser associada com reticulohistiocitose multicêntrico (RHM)(Santilli e colaboradores (2002) Ann Relium Dis 61:485).

Como aqui utilizado, o termo "um distúrbio em quea atividade TNFa é prejudicial" é tencionado incluir doençase outros distúrbios em que a presença de TNFa em um pacientesofrendo do distúrbio tem sido mostrada ser ou é suspeito deser ou responsável pela patofisiologia do distúrbio ou umfator que contribui para uma deterioração do distúrbio. Con-sequentemente, um distúrbio em que a atividade TNFa é preju-dicial é um distúrbio em que a inibição da atividade TNFa éesperada aliviar os sintomas e/ou progressão do distúrbio.Tais distúrbios podem ser evidenciados, por exemplo, por umaumento na concentração de TNFa em um fluido biológico de umpaciente sofrendo do distúrbio (por exemplo, um aumento naconcentração de TNF- no soro, plasma, fluido sinivial etc,do paciente), que. pode ser detectado, por exemplo, utilizan-do um anticorpo anti- TNFa como acima descrito. Existem nu-merosos exemplos de distúrbios em que a atividade de TNFa éprejudicial. O uso de inibidores de TNFa para o tratamentode poliartrite erosiva associada com distúrbios específicosé discutido adicionalmente abaixo:

A. Doenças Autoimunes

Em uma modalidade, a invenção inclui tratamento depoliartrite erosiva associado com uma doença auto-imune. Po-liartrite erosiva pode ser encontrada em paciente sofrendode doenças auto-imunes incluindo formas de artrite tais comoartrite reumatóide e artrite reumatóide juvenil (Verloes(1998) Med Genet. 35:943). Anticorpos TNFa, tal como adali-mumab, podem ser utilizados para tratat doenças auto-imunes,em particular, aquelas associadas com poliartrite erosiva.Exemplos de tais condições auto-imunes incluem artrite reu-matóide, espondilite reumatóide, osteoartrite e artrite go-tosa, alergia, esclerose múltipla, diabetes auto-imune, u-veite auto-imune e sindrome nefrótica. Outros exemplos decondições auto-imunes incluem doenças auto-imunes multi-sistemas e perda de audição auto-imune. Outros exemplos dedoença auto-imune são descritos no Pedido dos EUA No.10/622932, incorporado por referência aqui.

Artrite Reumatóide Juvenil

Fator de necrose tumoral tem sido implicado na pa-tofisiologia da artrite juvenil, incluindo artrite reumatói-de juvenil (Grom e colaboradores (1996) Arthritis Rheum.39:1703; Mangge e colabo radores (1995) Arthritis Rheum.8:211). Em ;uma modalidade, o anticorpo TNFa da invenção éutilizado para tratar artrite reumatóide juvenil.

O termo "artrite reumatóide juvenil" ou "ARJ" comoaqui utilizado refere-se a uma doença inflamatória crônicaque ocorre antes da idade de 16 que pode causar dano tissu-lar da articulação ou conectivo. ARJ é também referido comouma poliartrite crônica juvenil e doença de Still.

ARJ causa inflamação da articulação e rigidez pormais que 6 semanas em uma criança de 16 anos de idade ou me-nos. Inflamação causa vermelhidão, calor, e dor nas articu-lações. Qualquer articulação pode ser afetada e inflamaçãopode limitar a mobilidade das articulações afetadas. Um tipode ARJ pode também afetar os órgãos internos.

ARJ é sempre classificada em três tipos pelo núme-ro de articulações envolvidas, os sintomas, e a presença ouausência de certos anticorpos encontrados por um teste san-güíneo. Essas classificações ajudam o médico a determinarcomo a doença irá progredir e se os órgãos internos ou peleserão afetados. As classificações da ARJ incluem as seguintes:

a. ARJ pauciarticular, em que o paciente tem qua-tro ou menos articulações são afetadas. Pauciarticular é aforma mais comum de ARJ, e tipicamente afeta grandes articu-lações, tal como os joelhos.

b. ARH poliarticular, em que cinco ou mais articu-lações são afetadas. As pequenas articulações, tal como a-quelas nas mãos e pés, são mais comumente envolvidas, mas adoença pode também afetar grandes articulações.

; c. ARJ sistêmica é caracterizada por inchaço daarticulação, febre, um rash cutâneo leve, e pode também afe-tar órgãos internos tal como coração, figado, baço, e linfo-nodos. ARJ sistêmica é também referida como doença de Still.Uma pequena porcentagem dessas crianças desenvolve artriteem muitas articulações e podem ter artrite severa que conti-nua na fase adulta.

B. Espondiloartropatias

Em uma modalidade, a invenção inclui tratamento depoliartrite erosiva associada com uma espondilartropatia.Poliartrite erosiva pode ser encontrada em pacientes sofren-do de doenças inflamatórias, tais como espondiloartropatias,associadas com atividade TNFa prejudicial (ver, por exemplo,Moeller e colaboradores (1990) Cytokine 2:162; Patente dosEUA No. 5.231.024; Pedido de Patente Europeu No. 260 610).

Como aqui utilizado, o termo "espondiloartropatia"ou "espondiloartropatias" é utilizado para referir qualqueruma das doenças severas afetando as articulações da coluna,em que tais doenças dividem características clinicas, radio-lógicas e histológicas comuns. Um número de espondiliartro-patias divide características genéticas, isto é, eles sãoassociados com o alelo HLA-B27. Em uma modalidade, o termoespondiloartropatia é utilizado para referir qualqer uma dasvárias doenças que afetam as articulações da coluna, exclu-indo espondilite anquilosante, em que tais doenças dividemcaracterísticas clinicas, radiológicas e histológicas em co-mum. Exemplos de espondiloartropatias incluem espondiliteanquilosante, artrite/espondilite psoriática, artrite ente-ropática, artrite reativa ou sindrome de Reiter, e espondi-loartropatias não diferenciadas. Exemplos de modelos animaisutilizados para estudar espondiloartropatias incluem camun-dongos ank/ank transgênicos, ratos transgênico HLA-B27 (ver,Taurog e colaboradores (1998) The Spondylarthritides. Ox-ford:Oxford University Press).

Exemplos de pacientes que estão em risco de terespondiloartropatias incluem humanos sofrendo de artrite.Espondiloartropatias podem ser associadas com formas artri-te, incluindo artrite reumatóide, Em uma modalidade da in-venção, um inibidor de TNFa é utilizado para tratar um paci-ente que sofre de uma espondiloartropatia associada com po-liartrite erosiva. Exemplos de espondiloartropatias que po-dem ser tratadas com um inibidor de TNFa são descritos abai-xo:

Espondilite Anquilosante (EA)

Em uma modalidade, a invenção inclui tratamento depoliartrite erosiva associada com espondilite anquilosanteutilizando um anticorpo TNFa, ou porção ligadora de antigenodo mesmo. Fator de necrose tumoral tem sido implicado na pa-tofisiologia da espondilite anquilosante (ver Verjans e co-laboradores (1991) Arthritis Rheum. 34:486; Verjans e cola-boradores (1994) Clin Exp Immunol. 97:45; Kaijtzel e colabo-radores (1999) Hum Immunol. 60:140). Espondilite anquilosan-te (EA) é um distúrbio inflamatório envolvendo inflamação deuma ou mais vértebras. EA é uma doença inflamatória crônicaque afeta o esqueleto axial e/ou articulações periféricas,incluindo articulações entre as vértebras da coluna e arti-culações sacrociliacas e as articulações entre a coluna e apelve. EA pode eventualmente causar a vértebra afetada parafundir ou crescer junto. Espondiartropatias, incluindo EA,pode ser associada com artrite psoriática (APs) e/ou doençainflamatória do intestino (DII), incluindo colite ulcerativae doença de Crohn.

Manifestações iniciais de EA podem ser determina-das por testes radiográficos, incluindo mapeamento CT e ma-peamento MRI. Manifestações iniciais de EA sempre incluemescroilite e mudanças nas articulações sacroliacas como evi-denciado por turvação das margens corticais do osso subcon-dral, seguido por erosão e esclerose. Fadiga tem também sidonotada como um sintoma comum de EA (Duffy e colaboradores(2002) Resumo da ACR 66a Reunião Cientifica Anual).

Artrite Psoriática

Em uma modalidade, a invenção inclui tratamento depoliartrite erosiva associada com artrite psoriática utili-zando um anticorpo TNFa, ou porção ligadora de antigeno domesmo. Fator de necrose tumoral tem sido implicado na pato-fisiologia da artrite psoriática (APs) (Partsch e colabora-dores (1998) Ann Rheum Dis. 57:691; Ritchlin e colaboradores(1998) J Rheumatol. 25:1544). Como referido aqui, TNFa pso-riático tem sido implicado na atividade da inflamação tissu-lar e causar destruição da articulação em artrite reumatóide(ver, por exemplo, Moeller, A. e colaboradores (1990) Cyto-kine 2:162-169; Patente dis EUA No. 5.231.024 para Moeller ecolaboradores; Pedido de Patente Européia No. 260 610 BI porMoeller, A.; Tracey e Cerami, acima; Arend, W. P. e Dayer,J-M. (1995) Arth. Rheum. 38:151-160; Fava, R.A., e colabora-dores (1993) Clin. Exp. Immunol. 94:261-266). TNFa tambémtem sido implicado em promover a morte de células ilhotas eem mediar a resistência a insulina em diabetes (ver, por e-xemplo, Tracey e Cerami; acima; Pedido PCT No. WO 94/08609).TNFa também tem sido implicado em mediar a citotoxicidade aoligodendrócitos e indução de placas inflamatórias em escle-rose múltipla (ver, por exemplo, Tracey e Cerami, acima).Anticorpos anti-TNFa murinos humanizados e quiméricos têmpassados testes clinicos para tratamento da artrite reuma-tóide (ver, por exemplo, Elliott, M.J., e colaboradores(1994) Lancet 344:1125-1127; Elliot, M.J. e colaboradores(1994) Lancet 344:1105-1110; Rankin, E.C. e colaboradores(1995) Br. J. Rheumatol. 34:334-342).

Artrite psoriática refere-se a artrite inflamató-ria crônica que é associada com psoriase, uma condição dapele crônica comum que causa manchas vermelhos no corpo.Cerca de 1 em 20 indivíduos com psoriase desenvolverá artri-te ao longo com a condição da pele, e em cerca de 75% doscasos, psoriase precede a artrite. APs exibe ela mesma emuma variedade de formas, variando de branda a artrite seve-ra, em que a artrite usualmente afeta os dedos e a coluna.Quando a coluna é afetada, os sintomas são similares àquelesda espondilite anquilosante, como descrito acima. Um anti-corpo TNFa, ou fragmento ligador de antigeno do mesmo, podeser utilizado para tratamento de poliartrite erosiva associ-ada com APs.

APs é algumas vezes associado com artrite mutilan-te. Artrite mutilante refere-se a um distúrbio que é carac-terizado por erosão óssea excessiva resultando em uma defor-midade erosiva macroscópica que mutila a articulação.

Achados radiográficos características de APs in-cluem erosões da articulação, estreitamento do espaço arti-cular, proliferação óssea incluindo periarticular e perios-tite de coluna, osteolise incluindo deformidade "lápis nataça" e acro-esteolise, anquilose, formação esporão, e es-pondilite (Wassenberg e colaboradores (2001) Z Rheumatol60:156). Ao contrário da artrite reumatóide (AR), envolvi-mento da articulação em APs é freqüentemente assimétrica epode ser oligoarticular; osteoporose é atipica. Embora ero-siva mudanças em APs precoce seja marginal como na AR, elesse tornam irregulares e doença definida com progressão dadoença por causa da formação óssea periosteal adjacente paraas erosões. Em casos severos, mudanças erosivas podem pro-gredir para desenvolvimento de deformidade lápis em taça ouosteólise macroscópica (Gold e colaboradores (1988) RadiolClin North Am 26:1195; Resnick e colaboradores (1977) J CanSsoc Radiol 28:187). Erosões assimétricas podem ser visiveisradiograficamente no carpo e articulações das mãos metacar-pofalangeal (MCF), interfalangeana proximal (IFP), e inter-falangeana distai (IFD), mas as articulações IFD são fre-qüentemente as primeiras a serem afetadas. Anormalidades sãovistas na borla falangeal nos sitios de ligações de tendõese ligamentos ao osso. A presença de mudanças na IFD erosivapode prover ambos, achados radiograficos sensitivos e espe-cíficos para suportar os diagnósticos de APs. Também, asmãos tendem ser envolvidas muito mais freqüentemente que ospés com a proporção de perto de 2:1.

Outros exemplos de espondiloartropatias são des-critos no Pedido dos EUA No. 10/622932, aqui incorporado porreferência.

C. Distúrbios da Unha e Pele

Em uma modalidade, a invenção inclui tratamento depoliartrite erosiva associada com distúrbios da pele e unha.Como aqui utilizado, o termo "distúrbio da pele e unha emque a atividade TNFa é prejudicial" é tencionada incluirdistúrbios pele e/ou unha e outros distúrbios em que a pre-sença de TNFa em um paciente sofrendo do distúrbio tem sidomostrada ser ou em suspeita de ser ou responsável pela pato-fisiologia do distúrbio ou um fator que contribui a um dete-rioramento do distúrbio, por exemplo, psoriase. Consequente-mente, distúrbios da pele e unha em que a atividade TNFa éprejudicial são distúrbios em que a inibição da atividadeTNFa é esperada aliviar os sintomas e/ou progressão do dis-túrbio. 0 uso de anticorpos, porções de anticorpo, e outrosinibidores de TNFa para o tratamento de distúrbios da pele eunha são discutidos ainda abaixo. Em certas modalidades, oanticorpo, porção de anticorpo ou outro inibidor de TNFa dainvenção é administrado ao paciente em combinação com outroagente terapêutico, como descrito abaixo. Em uma modalidade,o anticorpo TNFa é administrado ao paciente em combinaçãocom outro agente terapêutico para o tratamento de poliartri-te erosiva associado com psoriase e o tratamento de psoriaseassociada com artrite.

Psoriase

Fator de necrose tumoral tem sido implicado na pa-tofisiologia da psoriase (Takematsu e colaboradores (1989)Arch Dermatol Res 281:398; Victor e Gottlieb (2002) J DrugsDermatol. 1(3):264). Psoriase é descrito como uma inflamaçãoda pele (irritação e vermelhidão) caracterizada por episó-dios freqüentes de vermelhidão, irritação, e espessamento,secura, escalas prateadas na pele. Em particular, lesões sãoformadas, as quais envolvem alterações primárias e secundá-rias em proliferação epidermal, respostas inflamatórias dapele, e uma expressão de moléculas regulatórias tais comolinfocinas e fatores inflamatórios. Pele psoriática é morfo-logicamente caracterizada por uma modificação aumentada decélulas epidermais, epiderme espessada, queratinização anor-mal, infiltrados celulares inflamatórios na epiderme e leu-cócito polimorfonuclear e infiltração linfocitária na camadaepidermal resultante em um aumento no ciclo celular basal.Psoriase sempre envolve as unhas, que freqüentemente exibemarcações com sinais, separação da unha, espessamento, edescoloração. Psoriase é sempre associada com outros distúr-bios inflamatórios, por exemplo, artrite, incluindo artritereumatóide, doença inflamatória do intestino (DII), e doençade Crohn.

Evidência de psoriase é mais comumente vista notronco, cotovelo, joelhos, couro cabeludo, pregas da pele,ou unha, mas ela pode afetar qualquer ou todas as partes dapele. Normalmente, ela leva cerca de um mês para novas célu-las da pele se movam das camadas inferiores para a superfí-cie. Na psoriase, este processo leva somente uns poucos di-as, resultando em um elevado de células da pele mortas eformação de escalas espessas. Sintomas de psoriase incluem:manchas da pele, que são secas ou vermelhas, recobertas comescalas prateadas, manchas em relevo da pele, acompanhadaspor bordas vermelhas, que podem fender e se tornarem doloro-sas, e que são usualmente localizadas nos cotovelos, joe-lhos, tronco, couro cabeludo, e mãos; lesões da pele, inclu-indo pústulas, ruptura da pele, e vermelhidão da pele; dorou padecimento da articulação que pode ser associada com ar-trite, por exemplo, artrite psoriática.

Tratamento para psoriase freqüentemente inclui umcorticosteróide tópico, análogos da vitamina D, um retinóidetópico ou oral, ou combinações dos mesmos. Em uma modalida-de, o inibidor do TNFa da invenção é administrado em combi-nação com ou a presença desses tratamentos comuns. Agentesterapêuticos adicionais que podem também ser combinados como inibidor de TNFa para tratamento de psoriase são descritosem maiores detalhes abaixo.

O diagnóstico da psoriase é usualmente baseado naaparência da pele. Adicionalmente uma biópsia da pele, ouraspagem e cultura de manchas da pele podem ser necessáriaspara tirar qualquer possibilidade de outros distúrbios dapele. Um raio X pode ser utilizado para checar para artritepsoriática se a dor na articulação está presente e persis-tente .

Em uma modalidade da invenção, um inibidor de TNFaé utilizado para tratar psoriase, incluindo placa de psoráa-se crônica, psoriase gotosa, psoriase inversa, psoriase pus-tular, pemphigus vulgaris, psoriase eritrodérmica, psoriaseassociada com doença inflamatória do intestino (DII), e pso-riase associada com artrite reumatóide (AR). Tipos específi-cos de psoriase incluídos nos métodos de tratamento da in-venção incluem placa de psoriase crônica, psoriase gotosa,psoriase inversa, e psoriase pustular. Outros exemplos depsoriase e outros tipos de distúrbios da pele e unha sãodescritos no Pedido dos EUA No. 10/622932, aqui incorporadopor referência.

Métodos para determinar a eficácia de um inibidorde TNFa para o tratamento da poliartrite erosiva em associa-ção a um distúrbio em que a atividade do TNFa é prejudicialincluem qualquer ensaio que mede o grau de destruição da ar-ticulação, incluindo Estreitamento do Espaço Articulare/ouerosão da articulação. Em uma modalidade, a destruição daarticulação é medida utilizando radiografia. Tais ensaiospodem ser utilizados para examinar a eficácia do inibidorTNFa por determinação se um melhoramento ocorre em um paci-ente ou população de paciente tratamento com o inibidorTNFa. Geralmente, melhoramentos são determinados por compa-ração de um Índice da linha base determinado antes do trata-mento, e um indica determinado no tempo seguindo o tratamen-to com o inibidor TNFa.

Melhoramentos adicionais nas condições artríticas,tais como, AR, APs, e ARJ, podem ser determinados por medira resposta ACR. Limiar ACR, por exemplo, ACR20,j ACR50,ACR70, podem ser utilizados para definir o melhoramento naAR e APs, e indica a porcentagem de melhoramento em sete me-didas da atividade da doença. Critério inclui melhoramentoda porcentagem em sensibilidade e contagem de articulaçõesedemacionadas e melhoramento de pelo menos 3 dos seguintescritérios: assessement da dor do paciente, assessment globaldo paciente, avaliação global do médico, avaliação de defi-ciência pelo próprio paciente, ou medidas laboratoriais daatividade da doença (isto é, taxa de sedimentação eritroci-tária ou nivel de proteína reativa C) (Felson e colaborado-res (1993) Arthritis Rheum. 36(6):729).

Outros ensaios utilizados para determinar o melho-ramento para uma dada terapia para o tratamento da AR, ARJ,e APs, incluem a reposta EULAR, índice DAS, FACIT-F, índiceHAQ, e SJC e/ou contador TJC.

0 critério EULAR usa um DAS para definir resposta.Resposta é definida como ambos: (a) mudança na atividade dadoença da linha base e (b) o nível da atividade da doençaalcançado durante o acompanhamento. Critério utilizado paradefinir DAS inclui: índice articular Ritchie, contagem dearticulação edemacionada (contagem da articulação:44), taxade sedimentação eritrocitária, e Questionário de Avaliaçãode Saúde. Uma versão modificada do critério DAS, DAS28, usauma contagem das 28articulações para articulações edemacia-das e sensíveis. A resposta é definida como uma combinaçãode uma mudança significante da linha base e o nível da ati-vidade da doença alcançada. Boa resposta é definida como umadiminuição significante em DAS (>1,2) e um baixo nível deatividade de doença (< ou - 2,4). A não resposta é definidacomo uma diminuição < ou = 0,6, ou uma diminuição >0,6 e <ou = 1,2 com um alcançado DAS > 3,7. Quaisquer outros índices são estimados como respostas moderadas.

O DAS é um índice baseado no índice articular Rit-chie, uma contagem das 44 articulações edemaciadas, ESR, euma avaliação da saúde geral em um VAS. Oscilação varia de 1a 9. Medidas seriadas de DAS e DAS28 são fortes preditoresda desabilidade física e progressão radiológica, e ambos osÍndices são discriminadores sensíveis entre pacientes comalta e baixa de atividade da doença e entre grupos de paci-entes tratados com ativo e placebo.

FACIT-F (Terapia de Doença Crônica e AvaliaçãoFuncional - Fadiga) é um questionário validado designado pa-ra medir a avaliação de pacientes de fatores relacionados afadiga em doenças crônicas (ver Cella e Webster (1997) Onco-logy (Huntingt) 11:232 e Lai e colaboradores (2003) Qual Li-fe Res. 12 (5) :485) .

O Questionário de Avalição da Saúde (HAQ) é umquestionário validado designado para avaliar a habilidadedos pacientes em fazer atividades da vida diária, particu-larmente na artrite adulta. O instrumento consiste do índicede Deficiência HAQ (20 itens), Escala de Dor (item 1), e Es-tado da Saúde Global (item 1) que mede a desabilidade/ fun-cionamento físico e qualidade de vida (Fries e colaboradores(1982) J Rheumatol. 9(5):789).

Articulações edemacionadas e doloridas (SJC e TJC)são os achados mais característicos da AR, e a severidade dadoença é diretamente relacionada ao número de articulaçõesedemaciadas e doloridas. Contagem das articulações edemacia-das e doloridas é um componente chave da avalição clínica daAR.

Melhoramentos no APs é psoríase podem ser tambémdeterminados utilizando a resposta PASI, DLQI, e o índiceBSA. DLQI (índice de Qualidade de Vida de Dermatologia) éuma medida da qualidade de vida relacionada a saúde ampla-mente utilizada para uma variedade de doenças dermatológi-cas, incluindo APs e psoriase. 0 indice da Área de Superfí-cie corporal (BSA) prove uma medida da área da superfíciebaseada na altura e peso e expressa em m2. 0 PASI (índice deSeveridade e Área de Psoriase) é uma medida composta de eri-tema, induração, descamação e área de superfícies corporalque é afetada por psoriase para um paciente particular. Pa-cientes são avaliados para envolvimento na cabeça, tronco,membro superior e inferior. OS Índices variam de 0 (limpo) a72 (severidade máxima).

Melhoramentos no tratamento para APs pode tembémser medido utilizando o APsRC (Critério de Resposta a Artri-te Psoriática), que prove uma medida clinica da mudança emÍndices de articulações edemaciadas e doloridas, adiante comuma série de avaliações globais da atividade da doença.

Melhoramentos na EA podem ser medidos utilizandoqualquer número de instrumentos para avaliar vários sintomasda EA. Algumas das escalas comumente utilizadas incluem oAssessment em Espondilite Anquilosante (ASAS), o índice deAtividade do Banho da Doença Espondilite Anquilosante(BASDAI) (Garrett e colaboradores (1994) J Rheumatol21:2286), o índice de Metrologia do Banho de Espondilite An-quilosante (BASMI) (Jenkinson e colaboradores (1994) J Rheu-matol 21:1694), e o índice Funcional do Banho EspondiliteAnquilosante (BASFI) (Calin e colaboradores (1994) J Rheuma-tol 21:2281). Esses índices podem ser utilizados para moni-torar um paciente ao longo do tempo e para determinar o me-lhoramento. Medidas de descrição adicionais para avaliar me-lhoramentos em EA são descritas no Pedido dos EUA No.10/622932, aqui incorporado por referência.

IV. Composições Farmacêuticas e Administração Farmacêutica

A.Composições e Administração

Anticorpos, porções de anticorpos, e outros inibi-dores de TNFa para uso nos métodos da invenção, podem serincorporados em composições farmacêuticas adequadas para ad-ministração a um paciente tendo poliartrite erosiva. Tipica-mente, a composição farmacêutica compreende um anticorpo,porção de anticorpo, ou outro inibidor TNFa da invenção e umveiculo farmaceuticamente aceitável. Como aqui utilizado,"veiculo farmaceuticamente aceitável" inclui qualquer e to-dos solventes, meio de dispersão, revestimentos, agentes an-tibacterianos e antifúngicos, isotônicos e agentes de retar-damento da absorção, e semelhantes que são fisiologicamentecompativeis. Exemplos de veiculos farmaceuticamente aceitá-veis incluem um ou mais de água, salina, salina tamponadacom fosfato, dextrose, glicerol, etanol e semelhantes, bemcomo combinações dos mesmos. Em muitos casos, é preferivelincluir agentes isotônicos, por exemplo, açúcares, polialco-óis tais como manitol, sorbitol, ou cloreto de sódio na com-posição. Veiculos farmaceuticamente aceitáveis podem aindacompreender quantidadades menores de substências auxiliarestais como agentes umidificantes ou emulsificantes, preserva-tivos ou tampões, que aumentam a meia vida ou efetividade doanticorpo, porção de anticorpo, ou outro inibidor de TNFa.As composições para uso nos métodos da invençãopodem ser em uma variedade de formas. Essas incluem, por e-xemplo, formas de dosagem liquida, semi-sólida e sólida,tais como soluções liquidas (por exemplo, injeções injetá-veis e infusiveis), dispersões ou suspensões, comprimidos,pilulas, pós, lipossomas e supositórios. A forma preferidadepende do modo tencionado de administração e aplicação te-rapêutica. Composições preferidas tipicas estão na forma desoluções injetáveis ou infundiveis, tais como composiçõessimilares àquelas utilizadas para imunização passiva de hu-manos com outros anticorpos ou outros inibidores de TNFa. 0modo preferido de administração é parenteral (por exemplo,intravenoso, subcutâneo, intraperitoneal, intramuscular). Emuma modalidade, o anticorpo ou outro inibidor de TNFa é ad-ministrado por infusão intravenosa ou injeção. Em outra mo-dalidade, o anticorpo ou outro inibidor de TNFa é adminis-trado por injeção intramuscular ou subcutânea.

Composições terapêuticas tipicamente devem ser es-téreis e estáveis sob as condições de fabricação e estoca-gem. A composição pode ser formulada como uma solução, mi-croemulsão, dispersão, lipossoma, ou outra estrutura deseja-da adequada para alta concentração do fármaco. Soluções in-jetáveis estéreis podem ser preparadas por incorporação docomposto ativo (isto é, anticorpo, porção de anticorpo, ououtro inibidor de TNFa) na quantidade desejada em um solven-te apropriado com um ou uma combinação de ingredientes enu-merados acima, como requerido, seguido por esterilização porfiltração. Geralmente, dispersões são preparadas por incor-poração do composto ativo em um veiculo estéril que contémum meio de dispersão básico e requer outros ingredientesdesses enumerados acima. No caso de pós estéreis para a pre-paração de soluções injetáveis estéreis, os métodos preferi-dos da preparação são secagem a vácuo e secagem por congela-mento que produzem um pó do ingrediente ativo mais qualqueringrediente desejado adicional de uma solução previamenteestéril por filtração do mesmo. A propriedade de fluidez deuma solução pode ser mantida, por exemplo, pelo uso de umrevestimento tal como lecitina, pela manutenção de um tama-nho de partícula requerido no caso da dispersão e pelo usode tensoativos. Absorção prolongada de composições injetá-veis pode ser obtida por incluir na composição um agente queatrase a absorção, por exemplo, sais monoestearato e gelati-na.

Compostos ativos suplementares podem também serincorporados nas composições. Em certas modalidades, um an-ticorpo ou porção de anticorpo para uso nos métodos da in-venção é co-formulado com e/ou co-administrado com um oumais agentes terapêuticos adicionais, incluindo um inibidorda poliartrite erosiva ou antagonista. Por exemplo, um anti-corpo anti- TNFa ou porção de anticorpo da invenção pode serco-formulado e/ou co-administrado com um ou mais anticorposque se ligam a outros alvos associados com poliartrite ero-siva (por exemplo, anticorpos que se ligam a outras citoci-nas ou que se ligam a moléculas de superfície celular), umaou mais citocinas, receptor de TNFa solúvel (ver, por exem-plo, Pedido PCT No. WO 94/06476) e/ou um ou mais agentesquímicos que inibem a produção ou atividade de h TNFa (talcomo derivados de cicloexano-ilideno como descrito no PedidoPCT No. WO 93/19751) ou qualquer combinação do mesmo. Alémdisso, um ou mais anticorpos da invenção podem ser utiliza-dos em combinação com dois ou mais dos agentes terapêuticosprecedentes. Tais terapias de combinação podem vantajosamen-te utilizar dosagens inferiores dos agentes terapêuticos ad-ministrados, assim evitando possíveis efeitos colaterais,complicações ou baixo nível de resposta por um paciente as-sociado com as várias monoterapias.

Em uma modalidade, a invenção inclui composiçõesfarmacêuticas compreendendo uma quantidade efetiva de um i-nibidor de TNFa e um veículo farmaceuticamente aceitável, emque a quantidade efetiva do inibidor de TNFa pode ser efeti-va para tratar poliartrite erosiva. Em uma modalidade, o an-ticorpo ou porção de anticorpo para uso nos métodos da in-venção é incorporado em uma formulação farmacêutica comodescrito em PCT/IB03/04502 e Pedido dos EUA No. 10/222140,aqui incorporado por referência. Esta formulação inclui umaconcentração de 50 mg/mL do anticorpo D2E7, em que uma se-ringa pré-enchida contém 40 mg de anticorpo para injeçãosubcutânea. Em outra modalidade, a formulação da invenção inclui D2E7.

Os anticorpos, porções de anticorpos, e outros inibidores de TNFa da presente invenção podem ser administra-dos por- uma variedade de métodos conhecidos na técnica, em-bora para muitas aplicações terapêuticas, a via/modo de ad-ministração preferido é injeção subcutânea. Em outra modali-dade, administração é através de injeção intravenosa ou in-fusão. Como será apreciado pelo versado na técnica, a viae/ou modo de administração variará dependendo dos resultadosdesejados. Em certas modalidades, o composto ativo pode serpreparado com um veiculo que protegerá o composto contra aliberação rápida, tal como uma formulação de liberação con-trolada, incluindo implantes, adesivos transdérmicos, e sis-temas de distribuição microencapsulados. Polimeros biodegra-dáveis e biocompativeis podem ser utilizados, tais como ace-tato de etileno vinil, polianidretos, ácido poliglicólico,colágeno, poliortoésteres, e ácido polilático. Muitos méto-dos para a preparação de tais formulações são patenteados ougeralmente conhecidos pelos versados na técnica. Ver, porexemplo, Sustained and Controlled Release Drug Delivery Sys-tems, Robinson, ed., Dekker, Inc., Nova Iorque, 1978.

Anticorpos TNFa podem também ser administrados naforma de formulações de proteína cristal que incluem umacombinação de proteínas cristais encapsuladas dentro de umveiculo polimérico para formar partículas revestidas. Aspartículas revestidas da formulação de proteína cristal po-dem ter uma morfologia esférica e ser microesferas de maisde 500 micrômetros no diâmetro ou elas podem ter alguma ou-tra morfologia e ser microparticuladas. A concentração au-mentada de proteínas de cristais permite o anticorpo de ainvenção ser distribuído subcutaneamente. Em uma modalidade,os anticorpos TNFa da invenção são distribuídos através deum sistema de distribuição de proteína, em que uma ou maisformulações ou composições de proteína cristal, é adminis-trada a um paciente com um distúrbio relacionado à TNFa.

Composições e métodos de preparação de formulaçõesestabilizadas de anticorpos inteiros cristais ou fragmentosde anticorpos cristais são também descritos em WO 02/072363,que é aqui incorporado por referência. Em uma modalidade,uma formulação compreendendo fragmentos de anticorpo crista-lizado descrito em PCT/IB03/04502 e Pedido dos EUA10/222140, aqui incorporado por referência, são utilizadospara tratar poliartrite erosiva utilizando métodos de trata-mento da invenção.

Em certas modalidades, um anticorpo, uma porção deanticorpo, ou outro inibidor de TNFa da invenção podem seradministrados oralmente, por exemplo, com um diluente inerteou um veiculo comestível assimilável. O composto (e outrosingredientes, se desejado) pode também ser fechado em umacápsula de gelatina dura ou de envoltório suave, compressoem comprimidos, ou incorporado diretamente na dieta do paci-ente. Para administração terapêutica oral, os compostos po-dem ser incorporados com excipientes e utilizados na formade comprimidos ingeriveis, comprimidos bucais, pastilhas,cápsulas, elixires, suspensões, xaropes, wafer, e semelhan-tes. Para administrar um composto da invenção por outra quea administração parenteral, pode ser necessária revestir ocomposto com, ou co-administrar o composto com um materialpara prevenir sua inativação.

As composições farmacêuticas da invenção podem in-cluir uma "quantidade terapeuticamente efetiva" ou "quanti-dade profilaticamente efetiva" de um anticorpo ou porção deanticorpo da invenção. Uma "quantidade terapeuticamente efe-tiva" refere-se a uma quantidade efetiva, em dosagens e porperiodos de tempo necessários, para alcançar o resultado te-rapêutico desejado. Uma quantidade terapeuticamente efetivado anticorpo, porção do anticorpo, ou outro inibidor de TNFapode variar de acordo com fatores tais como estado da doen-ça, idade, sexo, e peso do indivíduo, e a habilidade do an-ticorpo, porção de anticorpo, outro inibidor do TNFa paraelicitar a resposta desejada no indivíduo. Uma quantidadeterapeuticamente efetiva é também uma em que qualquer efeitotóxico ou em detrimento do anticorpo, porção de anticorpo,ou outro inibidor de TNFa é em excesso pelos efeitos tera-peuticamente benéficos. Uma "quantidade profilaticamente e-fetiva" refere-se a uma quantidade efetiva, em dosagens epor periodos de tempo necessário, para alcançar o resultadoprofilático desejado. Tipicamente, desde que a dose profilá-tica é utilizada em pacientes antes ou no estágio inicial dadoença, a quantidade profilaticamente efetiva será menor quea quantidade terapeuticamente efetiva.

Regimes de dosagem podem ser ajustados para provera resposta ótima desejada (por exemplo, uma resposta tera-pêutica ou profilática). Por exemplo, uma injeção única podeser administrada, várias doses divididas podem ser adminis-tradas ao longo do tempo ou a dose pode ser proporcionalmen-te reduzida ou aumentada como indicado pelas exigências dasituação terapêutica. É especialmente vantajoso formularcomposições parenterais na forma de dosagem unitária parafácil administração e uniformidade da dosagem. Forma de do-sagem unitária como aqui utilizado refere-se a unidades fi-sicamente discretas como dosagens unitárias para pacientesmamíferos a serem tratados; cada unidade contendo uma quan-tidade pré-determinada de composto ativo calculada para pro-duzir o efeito terapêutico desejado em associação com o vei-culo farmacêutico requerido. A especificação para as formasde dosagens unitárias da invenção é ditada por e diretamentedependentes de (a) características únicas do composto ativoe o efeito terapêutico ou profilático particular a ser al-cançado, e (b) as limitações inerentes na técnica de compo-sição tal um composto ativo para o tratamento da sensibili-dade em indivíduos.

Em uma modalidade, a invenção prove um método dedose única para tratamento da poliartrite erosiva, compreen-dendo administração a um paciente em necessidade do mesmo deuma dose única de um inibidor de TNFa, tal como um anticorpohumano. Em uma modalidade, o inibidor de TNFa é o anticorpoanti- TNFa adalimumab. A dose única do inibidor de TNFa podeser qualquer quantidade terapeuticamente ou profilaticamenteefetiva. Em uma modalidade, um paciente é administrado oucom uma dose única de 20 mg, 40 mg, ou 80 mg de adalimumab(também referido como D2E7). A dose única pode ser adminis-trada através de qualquer rota, incluindo, por exemplo, ad-ministração subcutânea. Regimes de dose qunzenal podem serutilizados para tratar poliartrite erosiva e são ainda des-critos no Pedido dos EUA No. 10/163657. Métodos de tratamen-to ou prevenção de doses variáveis múltiplas podem tambémser utilizados para tratar poliartrite erosiva, e são aindadescritos no Pedido PCT no. PCT/US05/012007.

É para ser notado que valores de dosagem podemvariar com o tipo e severidade da condição a ser aliviada. Épara ser ainda entendido que para qualquer paciente particu-lar, regimes de dosagem específicos devem ser ajustados aolongo do tempo de acordo com a necessidade do indivíduo e ojulgamento profissional da pessoa administrando ou supervi-sionando a administração das composições, e que a dosagemexposta aqui varia são exemplos somente e não tenciona limi-tar o objetivo ou prática da composição reivindicada. Deveser também notado que a invenção pertence aos métodos detratamento da poliartrite erosiva incluindo administraçãoaguda e administração crônica da doença.

A invenção também pertence as composições farma-cêuticas embaladas ou kits para administração dos anticorposanti-TNF da invenção para o tratamento da poliartrite erosi-va. Em uma modalidade da invenção, o kit compreende um ini-bidor de TNFa, tal como um anticorpo, uma segunda composiçãofarmacêutica compreendendo um agente terapêutico adicional,e instruções para administração para tratamento da poliar-trite erosiva. As instruções podem descrever como, por exem-plo, subcutaneamente, e quando, por exemplo, na semana 0 esemana 2, as diferentes doses de inibidor de TNFa e/ou agen-te terapêutico adicional deve ser administrado a um pacientepara tratamento.

Outro aspecto da invenção pertence aos kits con-tendo uma composição farmacêutica compreendendo um anticorpoanti-TNFa e um veiculo farmaceuticamente aceitável e uma oumais composições farmacêuticas cada uma compreendendo umfármaco útil para tratar poliartrite erosiva e um veiculofarmaceuticamente aceitável. Alternativamente, o kit compre-ende uma composição farmacêutica única compreendendo um an-ticorpo anti-TNFa, um ou mais fármacos úteis para tratar po-liartrite erosiva e um veiculo farmaceuticamente aceitável.Esses kits contêm instruções para dosar as composições far-macêuticas para o tratamento de poliartrite erosiva.

A embalagem ou kit alternativamente contém o ini-bidor de TNFa e ele pode ser promovido para uso, ou dentroda embalagem ou através de informação acompanhante, para usoou tratamento dos distúrbios aqui descritos. As embalagensfarmacêuticas ou kits ainda podem incluir um segundo agente(como aqui descrito) embalado com ou co-promovido com ins-truções para uso do segundo agente com um primeiro agente (como aqui descrito).

B. Agentes terapêuticos adicionais

A invenção também descreve métodos de tratamentoda poliartrite erosiva compreendendo administração de um i-nibidor de TNFa em combinação com um agente terapêutico adi-cional. A invenção também pertence a composições farmacêuti-cas e métodos de uso das mesmas para o tratamento de poliar-trite erosiva em combinação com um agente terapêutico adi-cional. As composições farmacêuticas compreendem um primeiroagente que trata poliartrite erosiva. A composição farmacêu-tica também pode compreender um segundo agente que é um in-grediente farmacêutico ativo; que é, o segundo agente é te-rapêutico e sua função é mais longe que de um ingredienteativo, tal como um veiculo farmacêutico, preservativo, dilu-ente, ou tampão. Em uma modalidade, o segundo agente podeser útil no tratamento ou prevenção da poliartrite erosiva.Em outra modalidade, o segundo agente pode diminuir ou tra-tar pelo menos um(s) sintoma(s) associado(s) com o distúrbioque é associado com poliartrite erosiva, por exemplo, artri-te psoriática. Em ainda outra modalidade, o agente adicionalé útil para o tratamento de ambos, poliartrite erosiva e odistúrbio adicional. O primeiro e segundo agentes podem e-xercer seus efeitos biológicos por mecanismos de ação simi-lares ou não relacionados; ou um ou ambos dos primeiro e se-gundo agentes podem exercer seus efeitos biológicos por umamultiplicidade de mecanismos de ação. Uma composição farma-cêutica pode também compreender um terceiro composto, ou a-inda mais, em que um terceiro (e quarto etc) composto tem asmesmas características de um segundo agente.

Deve ser entendido que as composições farmacêuti-cas descritas aqui podem ter o primeiro e segundo, terceiro,ou agentes adicionais no mesmo veiculo farmaceuticamente a-ceitáveis ou em um veiculo farmaceuticamente diferente paracada modalidade. Deve ser ainda entendido que o primeiro,segundo, terceiro ou agente adicional pode ser administradosimultaneamente ou seqüencialmente dentro das modalidadesdescritas. Alternativamente, um primeiro e segundo agentepode ser administrado simultaneamente, e um terceiro ou a-gente adicional pode ser administrado antes ou após os pri-meiros dois agentes.A combinação dos agentes utilizados dentro dos mé-todos e composições farmacêuticas descritas aqui pode ter umaditivo terapêutico ou efeito sinergistico na(s) condição(s)ou doença(s) alvejadas para tratamento. A combinação dos a-gentes utilizados dentro dos métodos ou composições farma-cêuticas descritos aqui pode reduzir um efeito prejudicialassociado com pelo menos um dos agentes quando administradosozinho ou sem outro(s) agente(s) da composição farmacêuticaparticular. Por exemplo, a toxicidade dos efeitos colateraisde um agente pode ser atenuada por outro agente da composi-ção, então permitindo uma dosagem mais alta, aumentado asubmissão do paciente, e aumentando o resultado terapêutico.Os efeitos aditivos ou sinergisticos, benefícios, e vanta-gens das composições aplica a classes de agentes terapêuti-cos, ou classes estruturais ou funcionais, ou para compostosindividuais pode eles mesmos.

Compostos ativos suplementares podem também serincorporados nas composições. Em certas modalidades, um an-'ticorpo ou porção de anticorpo da invenção é co-formulado;com e/ou co-administrado com um ou mais agentes terapêuticos-adicionais que são úteis para tratar poliartrite erosiva.Por exemplo, um anticorpo anti-TNFa, porção do anticorpo ououtro inibidor de TNFa da invenção pode ser co-formuladoe/ou co-administrado com um ou mais anticorpos adicionaisque se ligam a outros agentes (por exemplo, anticorpos queligam a outras citocinas ou que se ligam a moléculas de su-perfície celular), uma ou mais citocinas, receptor de TNFasolúvel (ver, por exemplo, Pedido PCT No. WO 94/06476) e/ouum ou mais agentes químicos que inibem a produção ou ativi-dade de hTNFa (tal como derivados cicloexano-ilideno comodescrito no Pedido PCT No. WO 93/19751) . Além disso, um oumais anticorpos ou outros inibidores TNFa da invenção podemser utilizados em combinação com dois ou mais dos agentesterapêuticos precedente. Tais terapias de combinação podemvantajosamente utilizar dosagens inferiores dos agentes te-rapêuticos administrados, então evitando possíveis toxicida-des ou complicações associadas com as várias monoterapias.

Inibidores de TNFa, por exemplo, um anticorpoTNFa, ou porção ligadora de antigeno do mesmo, descrito aquipode ser utilizado em combinação com agentes terapêuticosadicionais para o tratamento da poliartrite erosiva. Prefe-rivelmente o outro fármaco é um Fármaco Anti-reumáatico Mo-dificador de Doença (DMARD) ou Fármaco Antiinflamatório NãoEsteroidal (AINES) ou um esteróide ou qualquer combinaçãodos mesmos. Exemplos preferidos de um DMARD são hidroxiclo-roquina, leflunomida, metotrexato, ouro parenteral, ouro oral e sulfasalazina. :

Agentes adicionais não limitantes que podem -tambémser utilizados em combinação com um inibidor de TNFa, porexemplo, um anticorpo TNFa, ou porção ligadora de antigenodo mesmo, para tratar poliartrite erosiva inclui, mas nãosão limitados aos seguintes: fármaco(s) antiinflamatório(s)não esteroidal(s) (AINEs); fármaco(s) antiinflamatório(s)supressivo(s) de citocina(s) (CSAIDs); CDP-571/BAY-10-3356(anticorpo anti- TNFa humanizado; Celltech/Báyer);cA2/infliximab (anticorpo anti- TNFa quimérico; Centocor) ;75 kdTNFR-IgG/etanercept (75 kD receptor TNF - proteína defusão IgG; Immunex; ver, por exemplo, Arthritis & Rheumatisra(1994) Vol. 37, S295; J. Invest. Med. (1996) Vol. 44, 235A);55 kdTNF-IgG (55 kD receptor TNF - proteína de fusão IgG;Hoffmann-LaRoche); IDEC-CE9.1/SB 210396 (anticorpo anti-CD4primatizado não depletado; IDEC/SmithKline; ver, por exem-plo, Arthritis & Rheumatism (1995) Vol. 38:S185); DAB 486-IL-2 e/ou DAB 389-IL-2 (proteínas de fusão IL-2; Seragen;ver, por exemplo, Arthritis & Rheumatism (1993) Vol. 36,1223); Anti-Tac (anti-IL-2Ra humanizado; Protein DesignLabs/Roche); IL-4 (citocina antiinflamatória;

DNAX/Schering); IL-10 (SCH 52000; IL-10 recombinante, cito-cina antiinflamatória; DNAX/Schering); IL-4; IL-10 e/ou ago-nistas IL-4 (por exemplo, anticorpos agonistas); IL-1RA (an-tagonista do receptor IL-1; Synergen/Amgen); anakinra (Kine-ret®/Amgen); TNF-bp/s-TNF (proteína ligadora de TNF solúvel;ver, por exemplo, Arthritis & Rheumatism (1996) Vol. 39, No.9 (suplemento). S284; Amer. J. Physiol. - Hear and Circula-tory Physiology (1995) Vol. 268, pp. 37-42); R97;3401 (inibi-dor da fosfodiesterase do Tipo IV; ver, por exemplo, Arthri-tis & Rheumatism (1996) Vol. 39, No. 9 (suplemento), S282);MK-966 (inibidor da COX-2; ver, por exemplo, Arthritis &Rheumatism (1996) Vol. 3_9. No. 9 (suplemento), S81) ; Ilo-prost (ver, por exemplo, Arthritis & Rheumatism (1996) Vol.39. No. 9 (suplemento), S82); metotrexato; talidomida (ver,por exemplo, Arthritis & Rheumatism (1996) Vol'. 3_9. No. 9(suplemento), S281) e fármacos relacionados a talidomida(por exemplo, Celgen); leflunomida (antiinflamatório e ini-bidor de citocina; ver, por exemplo, Arthritis & Rheumatism(1996) Vol. 39. No. 9 (suplemento), S131; Inflammation Rese-arch (1996) Vol. 4_5; pp 103-107); ácido tranexâmico (inibi-dor da ativação do plasminogênio; ver, por exemplo, Arthri-tis & Rheumatism (1996) Vol. 39. No. 9 (suplemento), S284);T-614 (inibidor de citocina; ver, por exemplo, Arthritis &Rheumatism (1996) Vol. 39. No. 9 (suplemento), S282) ; pros-taglandina El (ver, por exemplo, Arthritis & Rheumatism(1996) Vol. 39. No. 9 (suplemento), S282); Tenidap (fármacoantiinflamatório não esteroidal; ver, por exemplo, Arthritis& Rheumatism (1996) Vol. _39. No. 9 (suplemento), S280); Na-proxeno (fármaco antiinflamatório não esteroidal; ver, porexemplo, Neuro Report (1996) Vol. 7, pp. 1209-1213); Meloxi-cam (fármaco antiinflamatório não esteroidal); Ibuprofeno(fármaco antiinflamatório não esteroidal); Piroxicam (fárma-co antiinflamatório não esteroidal); Diclofenaco (fármacoantiinflamatório não esteroidal); Indometacina (fármaco an-tiinf lamatório não esteroidal); Sulfasalazina (ver, por e-xemplo, Arthritis & Rheumatism (1996) Vol< ^9. No. 9 (suple-mento), S281); Azatioprina (ver, por exemplo, Arthritis &Rheumatism (1996) Vol. 39. No. 9 (suplemento), S281); Inibi-dor ICE (inibidor da enzima interleucina -10 conversora deenzima); zap-70 e/ou inibidor lck (inibidor da tirosina qui-nase zap-70 ou lck); inibidor VEGF e/ou inibidor VEGF-R (i-nibidores do fator de crescimento celular endotelial vascu-lar ou receptor do fator de crescimento celular endotelialvascular; inibidores de angiogênese); fármacos antiinflama-tórios corticosteróides (por exemplo, SB203580); inibidoresda TNF-convertase; anticorpos anti-IL-12; anticorpos anti-IL-18; interleucina-11 (ver, por exemplo, Arthritis & Rheu-matism (1996) Vol. 39. No. 9 (suplemento), S296); interleu-cina-13 (ver, por exemplo, Arthritis & Rheumatism (1996)Vol. 39. No. 9 (suplemento), S308); inibidores da interleu-cina-17 (ver, por exemplo, Arthritis & Rheumatism (1996)Vol. _39. No. 9 (suplemento), S120) ; ouro; penicilamina; clo-roquina; clorambucil; hidroxicloroquina; ciclosporina; ci-clofosfamida; irradiação linfóide total; globulina anti-timócito; anticorpos anti-CD4; toxinas CD5; peptideos admi-nistrados oralmente e colágeno; lobenzarit disódico; AgentesRegulantes de Citocina (ARCs) HP228 e HP466 (Houghten Phar-maceuticals, Inc.); oligodeoxinucleotidases fosfototioatoanti-senso ICAM-1 (ISIS 2302; Isis Pharmaceuticals, Inc.);receptor 1 do complemento solúvel (TP10; T Cell Sciences.Inc.); prednisona; orgoteina; glicosaminoglicana polissulfa-to; minociclina; anticorpos anti-IL2R; lipideos marinhos ebotânicos (aminoácidos de peixe e' semente de planta; ver,por exemplo, DeLuca e colaraboradores (!995) Rheum. Dis.Clin. North. Am. 2_1: 759-777) ; auranofina; fenilbutazona; á-cido meclofenâmico; ácido flufenâmico; globulina imune in-travenosa; zileuton; azaribina; ácido micofenólico (RS-61443); tacrolimus (FK-506); sirolimus (rapamicina); amipri-lose (terafectina); cladribina (2-clorodeoxiadenosina); me-totrexato; antivirais; e agentes moduladores imunes. Quais-quer dos agentes acima mencionados' podem ser administradosem combinação com o inibidor de TNFa, incluindo um anticorpoTNFa, para tratar poliartrite erosiva ou para inibir pro-gressão radiográfica da doença da articulação.

Em uma modalidde, o inibidor TNFa, por exemplo, umanticorpo TNFa, ou porção ligadora do mesmo, é administradoem combinação com um dos seguintes agentes para o tratamentoda artrite reumatóide: pequena molécula inibitória de KDR(ABT-123), pequena molécula inibitória de Tie-2; metotrexa-to; prednisona; celecoxib; ácido fólico; sulfato de hidroxi-cloroquina; rofecoxib; etanercept; infliximab; leflunomida;naproxeno; valdecoxib; sulfasalazina; metilprednosolona; i-buprofeno; meloxicam; acetato de metilprednisolona; ouro ti-omalato de sódio; aspirina; azatioprina; acetonida triamci-nolona; napsilato de propxifeno/apap; folato; nabumetona;diclofenaco; piroxicam; etodolac; diclofenaco sódico; oxa-prozin; oxicodona hcl; hidrocodona bitartarato/apa; diclofe-naco sódico/misoprostol; fentanil/ anakinra, recombinantehumano; tramadol hcl; salsalato; sulindac; cianocobalami-na/fa/piridoxina; acetaminofeno; alendronato de sódio; pred-nisolona; sulfato de morfina,' hidrocloreto de lidocaina; in-dometacina; sulfato de glicosamina/condroitina; ciclospori-na; amitriptilina hcl; sulfadiazina; oxicodona h-cl/acetaminofeno; oloparadina hcl; misoprostol; naproxenosódico; omeprazol; micofenolato mofetil; ciclofosfamida; ri-tuximab; IL-1 TRAP; MRA; CTLA4-IG IL-18 BP; ABT-874; ABT-325(anti-IL 18); anti-IL 15; BIRB-796; SCIO-469; VX-702; AMG-548; VX-740; Roflumilast; IC-485; CDC-801; e mesopram. Emoutra modalidade, o anticorpo- TNFa da invenção é administra-do para o tratamento de um distúrbio relacionado a TNFa emcombinação com um dos agentes acima mencionados para o tra-tamento de artrite reumatóide.

Em uma modalidade, o inibidor de TNFoc, por exem-plo, um anticorpo TNFct, a porção ligadora de antigeno domesmo, é utilizado em combinação com um fármaco utilizadopara tratar doença de Chron ou um distúrbio relacionado aCrohn. Exemplos de agentes terapêuticos que podem ser utili-zados para tratar Crohn incluem mesalamina, prednisona, aza-tioprina, mercaptopurina, infliximab, budesonida, sulfasala-zina, metilprednisolona sod succ, difenoxilato/atrp sulf,hidrocloreto de loperamida, metotrexato, omeprazol, folato,ciprofloxacin/dextrose-água, bitartarato de hidrocodo-na/apap, hidrocloreto de tetraciclina, fluocionida, metroni-dazol, timerosal/ácido bórico, colestiramina/sacarose, hi-drocloreto de ciprofloxacin, sulfato de hiosciamina, hidro-cloreto de meperidina, hidrocloreto de midazolam, oxicodonahcl/acetaminofeno, hidrocloreto de prometazina, fosfato desódio, sulfametoxazol/trimetoprim, celecoxib, policarbofil,napsilato de propoxifeno, hidrocortisona, multi-vitaminas,balsalazida disódica,■ fosfato de codeina/apap, colesevelamhcl, cianocobalamina, ácido fólico, levofloxacin, metilpred-nisolona, natalizumab, e interferon gama.

Em uma modalidade, o inibidor de TNFa, por exem-plo, um anticorpo TNFa, ou porção ligadora de antigeno domesmo, é administrado em combinação com um agente que é co-mumente utilizado para' tratar espondiloartropatias, tal comoEA. Exemplos de tais agentes incluem fármacos antiinflamató-rios não estereodais (AINES), inibidores da C0X2, incluindoCelebrex®, Vioxx®, e Bextra©, e etoricoxib. Fisioterapia étambém comumente utilizada para tratar espondiloartropatias,usualmente em conjunção com fármacos antiinflamatórios nãoesteroidais.

Em uma modalidade, o inibidor TNFa, por exemplo,anticorpo TNFa, o porção ligadora de antigeno do mesmo, éadministrado em combinação com um agente terapêutico adicio-nal para tratar espondilite anquilosante. Exemplos de agen-tes que pode ser utilizados para reduzir ou inibir os sinto-mas de espondilite anquilosante incluem ibuprofeno, diclofe-naco e misoprostol, naproxeno, meloxicam, indometacina, di-clofenaco, celecoxib, rofecoxib, sulfasalazina, prednisona,metotrexatom azatioprina, minociclina, prednisona, etaner-cept, e infliximab.

Em uma modalidade, o inibidor de TNFa, por exem-plo, um anticorpo TNFa, ou porção ligadora de antigeno domesmo, é administrado em combinação com um agente terapêuti-co para tratar artrite psoriática. Exemplos de agentes quepodem ser utilizados para reduzir o inibir os sintomas daartrite psoriática incluem metotrexaro; etanercept; rofeco-xib; celecoxib; ácido fólico; sulfasalazina; naproxeno; le-flunomida; acetato de metilprednisolona; indometacina; sul-fato de hidroxicloroquina; sulindac; prednisona; betametaso-na diprop aumentada; infliximab; metotrexato; folato; aceto-nida triamcinolona; diclofenaco; dimetilsulfoxido; piroxi-cam; diclofenaco- de sódio; cetoprofeno, mexicam; prednisona;metilprednisolona; nabumetona; tolmetin de sódio; calcipo-trieno; ciclosporina; diclofenaco; sódio/misoprostol; fluo-cionida; sulfato de glicosamina; ouro tiomalato de sódio;hidrocodona; bitartarato/apap; ibuprofeno; risedronato desódio; sulfadiazina; tioguanina; valdecoxib; alefacept; eefalizumab.

Em uma modalidade, o inibidor de TNFa, por exem-plo, um anticorpo de TNFa, ou porção ligadora de antige.no domesmo, é administrado em combinação com corticosterideos tó-picos, análogos de vitamina D, e retinóides tópicos e orais,ou combinações dos mesmos, para o tratamento de psoriase. Emadição, o anticorpo TNFa da invenção é administrado em com-binação com um dos seguintes agentes para o tratamento depsoriase: pequena molécula inibidora de KDR (ABT-123), pe-quena molécula inibidora de Tie-2, calcipotrieno, propionatode clobetasol, triamcinolona acetonida, propionato de halo-betasol, tazaroteno, metotrexato, fluocinonida, betametasonadiprop aumentada, fluocinolona, acetonida, acitretin, sham-poo de alcatrão, valerato de betametasona, furoato de mome-tasona, cetoconazol, pramoxina/fluocinolona, valerato de hi-drocortisona, flurandrenolida, uréia, betametasona, propio-nato de clobetasol/emoll, propionato de fluticasona, azitro-micina, hidrocortisona, fórmula hidratante, ácido fólico,desonida, carvão mineral de alcatrão, diacetato de diflora-sona, etanercept, folato, ácido lático, metoxsalen,hc/subgal bismutado/znox/resor, acetato de metilprednisolo-na, prednisona, filtro solar, ácido salicilico, halcinonida,antralin, pivalato de clocortolona, extrato de carvão mine-ral, carvão mineral de alcatrão/ácido salicilico, carvão mi-neral de alcatrão /ácido salicilico/enxofre, desoximetasona,diazepam, emoliente, emoliente pimecrolimus, fluocinoni-da/emoliente, óleo mineral/óleo de rícino/ na lact, óleo mi-neral/óleo de amendoim, petróleo/miristato de isopropil,psoraleno, ácido salicilico, sabão/tribromsalan, timero-sal/ácido bórico, celecoxib, infliximab, alefacept, efalizu-mab, tacrolimus, pimecrolimus, PUVA, UVB, e sulfasalazina.

Um anticorpo, porção de anticorpo, ou outro inibi-dor de TNFa, por exemplo, um anticorpo TNFa, ou porção liga-dora de antigeno do mesmo, pode ser utilizado em combinaçãocom outros agentes para tratar condições da pele. Por exem-plo, um anticorpo, porção de anticorpo, ou outro inibidor deTNFa da invenção é combinado com terapia PUVA. PUVA é umacombinação de psoraleno (P) e radiação ultravioleta de longaonda (UVA) que é utilizado para tratar muitas condições depele diferentes. Os anticorpos, porções de anticorpos, ououtros inibidores de TNFa da invenção podem também ser com-binados com pimecrolimus. Em outra modalidade, os anticorposda invenção são utilizados para tratar psoriase, em que osanticorpos são administrados em combinação com tacrolimus.Em .uma modalidade adicional, tacrolimus e inibidores de TNFasão administrados em combinação com metotrexato e/ou ciclos-porina. Em ainda outra modalidade, o inibidor de TNFa da in-venção é administrado com excimero tratamento a laser paratratar psoriase.

Exemplos não limitantes de outros agentes terapêu-ticos com os quais um inibidor de TNFa, por exemplo, um an-ticorpo TNFa, ou porção ligadora de antigeno do mesmo, podeser combinado para tratar um distúribio da pele ou unha in-cluem fototerapia UVA e UVB. Outros exemplos não limitantesque podem ser utilizados em combinação com um inibidor deTNFa incluem agentes terapêuticos anti-ILl2 e anti- IL18,incluindo anticorpos.

Qualquer um dos agentes terapêuticos acima mencio-nados, sozinhos ou em combinação com isto, pode ser adminis-trado a um paciente sofrendo de poliartrite erosiva, em com-binação com o inibidor de TNFa, incluindo anticorpo TNFa, ouuma porção ligadora do mesmo. Um anticorpo TNFa, ou porçãoligadora de antigeno do mesmo, pode ser utilizado em combi-nação com agentes terapêuticos adicionais conhecidos por se-rem efetivos na administração aguda dos pacientes com poli-artrite erosiva. Um anticorpo TNFa, ou porção ligadora deantigeno do mesmo, pode também ser utilizado em combinaçãocom agentes terapêuticos adicionais conhecidos por serem e-fetivos na administração de pacientes com poliartrite erosi-va .

Esta invenção é ainda ilustrada pelo seguinte e-xemplo que não deve ser construído como limitante. Os conte-údos de todas as referências, patentes e pedidos de patentescitados ao longo deste pedido são aqui incorporados por re-ferência .

EXEMPLO

Tratamento de Poliartrite Erosiva em Pacientes comArtrite Psoriática Utilizando um Inibidor TNF

Poliartrite erosiva ocorre em uma proporção subs-tancial de pacientes com artrite psoriática (APs). DMARDsnão biológicos tradicionais não tem sido mostrados eficaz-mente inibir a progressão radiográfica dos danos da articulação nesta doença.

0 seguinte estudo foi feito para avaliar a eficá-cia de um inibidor de TNF, mais especificamente o anticorpoanti-TNF adalimumab, para o tratamento da poliartrite erosi-va. 0 estudo foi feito para avaliar se adalimumab foi efeti-vo na inibição da progressão radiográfica da doença da arti-culação associada com poliartrite erosiva em pacientes comAPs de moderada a severa.

Uma triagem de 24 semanas, duplo-cega, aleatoriza-da, controlada com placebo de pacientes adultos com APs mo-derada a severamente ativa (> 3 de edema e > 3 de Área deSuperfície do Corpo [BSA]). Em adição tendo articulações > 3de edema e > 3 de dor, inclusão do critério incluiu uma res-posta inadequada a terapia de AINES, uma história de psoria-se, e idade > 18 anos. Critérios de exclusão incluíram osseguintes: terapia anterior com anti-TNF, alefacept dentrode 12 semanas antes do começo do estudo, outros biológicosdentro de 6 semanas antes do começo do estudo, terapias sis-têmicas para psoriase dentro de 4 semanas antes do começo doestudo, e fototerapia e tópicos dentro de 2 semanas antes docomeço do estudo.

Pacientes de forma aleatória receberam ou adalimu-mab 40 mg ou placebo subcutaneamente a cada outra semana(cos) por 24 semanas. Pacientes que completaram as 24 sema-nas de triagem foram eleitos para alistar em um estudo deextensão de marcação aberta (EMA), no qual todos os pacien-tes receberam cos adalimumab. Após 12 semanas de tratamentocom terapia de marcação aberta, pacientes falhando em encon-trar critérios pré-especifiçados foram eleitos para receber40 mg semanalmente.

Avaliações radiográficas foram feitas durante am-bos, a porção cega (Semanas 0 e 24) e a porção marcação a-berta (Semana 48). Radiografias das mãos e pés foram asses-sed por um índice de Sharp total modificado (mTSS) em que asarticulações adicionais tipicamente envolvidos em APs foramadicionados, e, para melhor quantificar a osteólise signifi-cante que ocorre em APs, as escalas numéricas foram expandi-das. O mTSS foi determinado por combinação do índice de Es-treitamento do Espaço Articular(0-192) e o índice de erosão(0-378), como mostrado na Figura la. Achados clínicos asso-ciados com APs, por exemplo, mudanças lápis na taça, foramtambém avaliados. Diagramas do mTSS e os achados radiográfi-cos associados com APs utilizados neste estudo são mostradosnas Figuras la e lb, respectivamente.

O procedimento de leitura radiográfica inclui oseguinte. Todos os filmes foram lidos por dois leitores in-dependentes que foram cegos para o tratamento e ordem dofilme. A leitura número 1 foi uma avaliação de filmes da li-nha base e da semana 24. A leitura número 2 foi uma avalia-ção de filmes da linha base, semana 24 e semana 48.

Várias análises de sensibilidade foram utilizadaspara assess o impacto das radiografias perdidas (imputaçãode nenhuma mudança, pior classificação de mudança, 50a/75aporcentil de mudança baseada em pacientes com índices de li-nha base similares, e extrapolação linear quando múltiplasradiografias foram disponíveis).

Análise da semana 24 incluiu o seguinte: inclusãona análise da semana 24 requerida de ambos, filmes da linhabase e semana 24, onde pelo menos 50% das articulações foramavaliadas. A análise da semana 48 inclui o seguinte: todosos pacientes da análise da semana 24 foram incluídos na aná-lise da semana 48. Se o filme da semana 48 não foi disponí-vel (ou <50% das articulações disponíveis) , então a seguinteatribuição foi feita: se originalmente aleatório para o pla-cebo, uma mudança de 0 foi imputada; e se originalmente ale-atório para adalimumab, extrapolação linear utilizando osprimeiros dois filmes foi conduzida.

Características da severidade da doença e demográ-ficas da linha base foram consistentes com APs moderada asevera e foram bem marcadas entre braços tratados (adalimu-mab N=151, placebo N=162; média±DP) : idade 49,0±11,8 anos;duração de APs 9,5±8,5 anos; SJC (76) 14±12; TJC (78) 25±18;HAQ 1,0±0,6; mTSS 20,8±40,9; 51% foram tomados concomitanteao metotrexato. Do total, 296 pacientes tiveram raios X nalinha base e na semana 24, e 265 pacientes também tiveram oraio X na semana 48.

Como relatado em estudos prévios, as respostasACR20, 50, e 70 e as respostas PASI 50, 75, e 90 para paci-entes tratados com adalimumab na semana 24 foram significan-temente melhores que o placebo. Respostas ACR e PASI na se-mana 24 são mostradas abaixo nas tabelas 1 a 2 (todos os re-sultados p<0,001 placebo versus adalimumab):Tabela 1: resposta ACR: % de pacientes

<table>table see original document page 96</column></row><table>

Tabela 2: resposta PASI: % de pacientes

<table>table see original document page 96</column></row><table>

Durante o período de estudo cego (24 semanas), pa-cientes adalimumab tem significativamente menor progressãono mTSS que pacientes placebo (média de mudança em mTSS -0,2vs. 1,0, p>0,001, classificado por ANCOVA). Significânciaestatistica foi mantida em todas as análises de sensibilida-de. A Figura 2 mostra a distribuição os Índices mTSS que de-monstram que poucos pacientes tratados com adalimumab tive-ram um aumento nos danos estruturais durante 24 semanas detratamento comparado com placebo. A diferença na distribui-ção foi observada por olhar as médias dos índices na semana24 e o número e porcentagem de pacientes que tiveram um au-mento no índice Sharp durante o estudo (ver Tabela 3). Apro-ximadamente três vezes como muitos pacientes tratados complacebo tiveram um aumento no mTSS (>0,5 unidades) que ospacientes tratados adalimumab durante as primeiras 24 semanas de tratamento.Tabela 3: Mudança* no índice Sharp Total Modifica-do na Semana 24

<table>table see original document page 97</column></row><table>

p< 0,001 placebo vs. Adalimumab utilizando teste CMH

*Mudança definida como >0,5 unidades no índice mTSS

Diferenças estatisticamente significante foram ob-servadas entre pacientes tratados com adalimumab e placebopor ambos, indice de erosão e Índices de estreitamento daarticulação (p<0,001 utilizando uma classificação ANACOVA).

Na semana 24, a mudança nos índices de erosão (mudança dalinha base) foram 0,6 para pacientes placebo e 0,0 para pa-cientes adalimumab (p<0,001, classificado por ANCOVA), e amudança nos índices Estreitamento do Espaço Articu-lar(mudança da linha base) foram 0,4 para pacientes placeboe -0,2 para pacientes adalimumab (p<0,001, classificado porANCOVA).

Análises de sensibilidade para contar para filmesde pacientes perdidos foram feitos e resultaram na manuten-ção da significância estatística com todas as análises. Aná-lises de sensibilidade pós-hoc excluindo pés e DIPs foramcomo segue: uma análise foi corrida excluindo pés e DIPs euma segunda análise foi corrida excluindo todas as articula-ções DIP. Significância estatistica foi mantida em ambas asanálises.

Diferenças estatisticamente significante foram ob-servadas entre pacientes tratados com adalimumab e placebosem levar em consideração se MTX concomitante foi sendo uti-lizado. A média de diferenças foi levemente maior para paci-entes tomando MTX concomitante. Pacientes na monoterapiamostraram uma mudança da linha base de -0,1 em adalimumab(n=68) vs. 0,9 para placebo (n=74) (p<0,001 utilizando umaclassificação ANACOVA). Pacientes com MTX concomitante mos-traram uma mudança da linha base de -0,3 em adalimumab(n=76) vs. 1,2 para placebo (n=78) (p<0,001 utilizando umaclassificação ANACOVA). As figuras 3a e 3b mostram gráficosda função da distribuição cumulativa de mTSS de pacientescom ou sem MTX.

Análises de radiografias de 48 semanas demonstraram que a ausência de progressão (ausência de mudanças emmTSS) observadas na Semana 24 foi mantida para a Semana 48em pacientes adalimumab (ver Figura 4). Pacientes tratadoscom placebo por 24 semanas não tiveram progressão radiográ-fica da doença durante o período marcação aberta. Nem o tra-tamento braço demonstrou progressão significante dos achadosassociados com APs. A prevalência dos achados associados aAPs são mostrados na Tabela 4. Nehuma diferença significantefoi encontrada entre os grupos na linha base, e nenhuma pro-gressão significante foi encontrada em ambos os grupos durante o estudo na semana 24.Tabela 4: Prevalência de achados associados a APsTodos os pacientes (N=313) n (%)

<table>table see original document page 99</column></row><table>

Além disso, adalimumab foi geralmente bem toleradocomo previamente relatado.

Adalimumab foi mais efetivo comparado com placebona inibição da progressão radiográfica da doença ao longo doperíodo de 24 semanas. Adalimumab mostrou diferenças versusplacebo em ambos os pacientes tomando concomitante o meto-trexato e naqueles tomando adalimumab como monoterapia. Ainibição da progressão dos danos estruturais observada empacientes tratados com adalimumab nas 24 semanas foi mantidaem um ano. Em conclusão, este estudo demonstrou que adalimu-mab foi eficaz no tratamento da poliartrite erosiva e pro-gressão radiográfica da doença por um ano em pacientes quetambém tinham APs moderado a severamente ativo.

EQUIVALENTES

Aqueles versados na técnica reconhecerão, ou serãocapazes de apurar utilizando não mais que experimentação derotina, muitos equivalentes para as modalidades especificasda invenção aqui descrita. Tais equivalentes são tencionadosserem compreendidos pelas seguintes reivindicações. Os con-teúdos de todas as referências, patentes e pedidos de paten-tes publicados citados ao longo deste pedido são aqui incor-porados por referência.Seqüência de Listagem

<110> Abbott Biotechnology Ltd.

<120> Uso de inibidor de TNFa para tratamento de poliartríte erosiva

<130> BBI-224CPPC

<140>

<141>

<150> 60/681.645

<151> 2005-05-16

<160> 37

<170> FastSEQ para Windows Versão 4.0

<210> 1

<211> 107

<212> PRT

<213> Seqüência Artificial

<220>

<223> D2E7 região variável de cadeia leve

<400> 1

Asp ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Vai Gly

1 5 10 15

Asp Arg Vai Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Asn Tyr

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Vai Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Vai Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Arg Tyr Asn Arg Ala Pro Tyr

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Vai Glu Ile Lys

100 105

<210> 2<211> 121<212> PRT

<213> Seqüência Artificial<220>

<223> D2E7 região variável de cadeia pesada

<400> 2

Glu Vai Gln Leu Vai Glu Ser Gly

1 5Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala20

Ala Met His Trp Vai Arg Gln Ala

35 40Ser Ala Ile Thr Trp Asn Ser Gly50 55

Gly Gly Leu Vai Gln Pro Gly Arg

10 15

Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr

25 30

Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Vai

45

His Ile Asp Tyr Ala Asp Ser Vai

60Glu Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg65 70Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala85

Ala Lys Vai Ser Tyr Leu Ser Thr100

Gln Gly Thr Leu Vai Thr Vai Ser115 120

Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr

75 80Glu Asp Thr Ala Vai Tyr Tyr Cys

90 95Ala Ser Ser Leu Asp Tyr Trp Gly105 110Ser

<210> 3<211> 9<212> PRT

<213> Seqüência Artificial

<220>

<223> D2E7 região CDR3 variável de cadeia leve

<22i> Variante<222>)9

<223> Xaa = Qualquer Aminoácido

<400> 3

Gln Arg Tyr Asn Arg Ala Pro Tyr Xaa15

<210> 4

<211> 12

<212> PRT

<213> Seqüência Artificial

<220>

<223> D2E7 região CDR3 variável de cadeia pesada<22l> Variante

<222> 12

<223> Xaa = Qualquer Aminoácido

<400> 4

Vai Ser Tyr Leu Ser Thr Ala Ser Ser Leu Asp Xaa1 5 10

<210> 5<211> 7<212> PRT

<213> Seqüência Artificial

<220>

<223> D2E7 região CDR2 variável de cadeia leve

<400> 5

Ala Ala Ser Thr Leu Gln Ser1 5

<210> 6<211> 17<212> PRT

<213> Seqüência Artificial<220>

<223> D2E7 região CDR2 variável de cadeia pesada

<400> 6

Ala lie Thr Trp Asn Ser Gly His lie Asp Tyr Ala Asp Ser Vai Glu

15 10 15

Gly

<210> 7<211> 11<212> PRT

<213> Seqüência Artificial<220>

<223> D2E7 região CDR1 variável de cadeia leve<400> 7

Arg Ala Ser Gln Gly lie Arg Asn Tyr Leu Ala1 5 10

<210> B<211> 5<212> PRT

<213> Seqüência Artificial

<220>

<223> D2E7 região CDR1 variável de cadeia pesada 1<400> 8

Asp Tyr Ala Met His1 5

<210> 9<211> 107<212> PRT

<213> Seqüência Artificial

<220>

<223 > 2SD4 região variável de cadeia leve

<400> 9

Asp lie Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser lie Gly

1 5 10 15

Asp Arg Vai Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly lie Arg Asn Tyr

20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie

35 40 45

Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Vai Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gln Pro

65 70 75 80

Glu Asp Vai Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Lys Tyr Asn Ser Ala Pro Tyr

85 90 95

Ala Phe Gly Gln Gly Thr Lys Vai Glu lie Lys

100 105

<210> 10<211> 121<212> PRT

<213> Seqüência Artificial

<220>

<223> 2SD4 região variável de cadeia pesada<400> 10

Gln Vai Gln Leu Vai Glu Ser Gly Gly Gly Leu Vai Gln Pro Gly Arg

5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr

20 25 30

Ala Met Hls Trp Vai Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Asp Trp Vai

35 40 45

Ser Ala lie Thr Trp Asn Ser Gly Hls lie Asp Tyr Ala Asp Ser Vai

50 55 60

Glu'Gly Arg Phe Ala Vai Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ala Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Pro Glu Asp Thr Ala Vai Tyr Tyr Cys

85 90 95

Thr Lys Ala Ser Tyr Leu Ser Thr Ser Ser Ser Leu Aap Asn Trp Gly

100 105 110

Gln Gly Thr Leu Vai Thr Vai Ser Ser

115 120

<210> 11<211> 9.c212> PRT

<213> Seqüência Artificial<220>

<223> 2SD4 região CDR3 variável de cadeia leve<400> 11

Gln Lys Tyr Asn Ser Ala Pro Tyr Ala1 5

<210> 12<211> 9<212> PRT

<213> Seqüência Artificial

<220>

<223 > EP B12 região CDR3 variável de cadeia leve<400> 12

Gln Lys Tyr Asn Arg Ala Pro Tyr Ala1 5

<210> 13

<211:> 9

<212> PRT

<213> Seqüência Artificial<220>

<223 > VL10E4 região CDR3 variável de cadeia leve

<400> 13Gln Lys Tyr Gln Arg Ala Pro Tyr Thr1 5

<210> 14<211> 9<212> PRT

<213> Seqüência Artificial

<220>

<223> VL100A9 região CDR3 variável de cadeia leve<400> 14

Gln Lys Tyr Ser Ser Ala Pro Tyr Thr1 5

<210> 15<211> 9<212> PRT

<2i3> Seqüência Artificial

<220>

<223 > VLL100D2 região CDR3 variável de cadeia leve<400> 15

Gln Lys Tyr Asn Ser Ala Pro Tyr Thr1 5

<210> 16<211> 9<212> PRT

<213> Seqüência Artificial

<220>

<223 > VLL0F4 região CDR3 variável de cadeia leve<400> 16

Gln Lys Tyr Asn Arg Ala Pro Tyr Thr1 5

<210> 17<211> 9<212> PRT

<213> Seqüência Artificial

<220>

<223> LOE5 região CDR3 variável de cadeia leve

<400> 17

Gln Lys Tyr Asn Ser Ala Pro Tyr Tyr1 5

<210> 18<211> 9<212> PRT<213> Seqüência Artificial<220>

<223> VLLOG7 região CDR3 variável de cadeia leve<400> 18

Gln Lys Tyr Asn Ser Ala Pro Tyr Asn1 5

<210> 19<211> 9<212> PRT

<213> Seqüência Artificial<220>

<223 > VLLOG9 região CDR3 variável de cadeia leve<400> 19

Gln Lys Tyr Thr Ser Ala Pro Tyr Thr1 5

<210> 20

<211> 9

<212> PRT

<213> Seqüência Artificial

<220>

<223> VLLOH1 região CDR3 variável de cadeia leve

«s400> 20

Gln Lys Tyr Asn Arg Ala Pro Tyr Asn1 5

<:210> 21

<211> 9

<212> PRT

<213> Seqüência Artificial<220>

<223> VLLOH10 região CDR3 variável de cadeia leve

<400> 21

Gln Lys Tyr Asn Ser Ala Ala Tyr Ser1 5

<210> 22<211> 9<212> PRT

<213> Seqüência Artificial

<220>

<223 > VL1B7 região CDR3 variável de cadeia leve<400> 22

Gln Gln Tyr Asn Ser Ala Pro Asp Thr1 5<210> 23<211> 9<212> PRT

<213> Seqüência Artificial<220>

<223> VL1C1 região CDR3 variável de cadeia leve<400> 23

Gln Lys Tyr Asn Ser Asp Pro Tyr Thr1 5

<210> 24<211> 9<212> PRT

<213> Seqüência Artificial

<220>

<223> VL0.1F4 região CDR3 variável de cadeia leve<400> 24

Gln Lys Tyr lie Ser Ala Pro Tyr Thr1 5

<210> 25

<211> 9

<212> PRT

<213> Seqüência Artificial

<220>

<22 3 > VL0.1H8 região CDR3 variável de cadeia leve<400> 25

Gln Lys Tyr Asn Arg Pro Pro Tyr Thr1 5

<210> 26<211> 9<212> PRT

<213> Seqüência Artificial<220>

<223> LOE7.A região CDR3 variável de cadeia leve<400> 26

Gln Arg Tyr Asn Arg Ala Pro Tyr Ala1 5

<210> 27

<211> 12

<212> PRT

<213> Seqüência Artificial

<220>

<223> 2SD4 região CDR3 variável de cadeia pesada<400> 27

Ala Ser Tyr Leu Ser Thr1 5

Ser Ser Ser Leu Asp Asn10

<210> 28<211> 12<212> PRT

<213> Seqüência Artificial

<220>

<223> VH1B11 região CDR3 variável de cadeia pesada<400> 2B

Ala Ser Tyr Leu Ser Thr Ser Ser Ser Leu Asp Lys1 5 10

<210> 29

<211> 12

<212> PRT

<213> Seqüência Artificial

<220>

<223> VH1D8 região CDR3 variável de cadeia pesada<400> 29

Ala Ser Tyr Leu Ser Thr Ser Ser Ser Leu Asp Tyr15 10

<210> 30<211> 12<212> PRT

<213> Seqüência Artificial<220>

<223 > VH1A11 região CDR3 variável de cadeia pesada<400> 30

Ala Ser Tyr Leu Ser Thr Ser Ser Ser Leu Asp Asp1 5 10

<210> 31<211> 12<212> PRT

<213 > Seqüência Artificial

<220>

<223 > VH1B12 região CDR3 variável de cadeia pesada<400> 31

Ala Ser Tyr Leu Ser Thr Ser Phe Ser Leu Asp Tyr1 5 10

<210> 32<211> 12<2X2> PRT

<213> Seqüência Artificial

<220>

<223> VH1E4 região CDR3 variável de cadeia pesada<400> 32

Ala Ser Tyr Leu Ser Thr Ser Ser Ser Leu His Tyr15 10

<210> 33<211> 12<212> PRT

<213> Seqüência Artificial<220>

<223 > VH1F6 região CDR3 variável de cadeia pesada<400> 33

Ala Ser Phe Leu Ser Thr Ser Ser Ser Leu Glu Tyr15 10

<210> 34<211> 12<212> PRT

<213> Seqüência Artificial<220>

<223> 3C-H2 região CDR3 variável de cadeia pesada<400> 34

Ala Ser Tyr Leu Ser Thr Ala Ser Ser Leu Glu Tyr1 5 10

<210> 35<211> 12<212> PRT

<213> Seqüência Artificial<220>

<223> VH1-D2.N região CDR3 variável de cadeia pesada<400> 35

Vai Ser Tyr Leu Ser Thr Ala Ser Ser Leu Asp Asn1 5 10

<210> 36<211> 321<212> DNA

<213> Seqüência Artificial<220>

<223> D2E7 região variável de cadeia leve<400> 36

gacatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtagggga cagagtcacc 60atcacttgtc gggcaagtca gggcatcaga aattacttag cctggtatca gcaaaaacca 120gggaaagccc ctaagctcct gatctatgct gcatccactt tgcaatcagg ggtcccatct 180cggttcagtg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctacagcct 240gaagatgttg caacttatta ctgtcaaagg tataaccgtg caccgtatac ttttggccag 3 00gggaccaagg tggaaatcaa a 321

<210> 37<211> 363<212> DNA

<213> Seqüência Artificial<220>

<223> D2E7 região variável de cadeia pesada<400> 37

gaggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc ttggtacagc ccggcaggtc cctgagacto 60tcctgtgcgg cctctggatt cacctttgat gattatgcca tgcactgggt ccggcaagct 120ccagggaagg gcctggaatg ggtctcagct atcacttgga atagtggtca catagactat 180gcggactctg tggagggccg attcaccatc tccagagaca acgccaagaa ctccctgtat 240ctgcaaatga acagtctgag agctgaggat acggccgtat attactgtgc gaaagtctcg 300taccttagca ccgcgtcctc ccttgactat tggggccaag gtaccctggt caccgtctcg 360agt 363 1

Claims

1. Método para tratamento de um paciente humanosofrendo de poliartrite erosiva, CARACTERIZADO pelo fato decompreender a administração ao paciente de um anticorpo TN-Fa, ou porção ligadora de antigeno do mesmo, tal que a poli-artrite erosiva seja tratada.

2. Método, de acordo com a reivindicação 1,CARACTERIZADO pelo fato de que o anticorpo TNFa, ou porçãoligadora de antigeno do mesmo, é um anticorpo selecionado dogrupo consistindo de um anticorpo humanizado, um anticorpoquimérico, e um anticorpo multivalente.

3. Método, de acordo com a reivindicação 1,CARACTERIZADO pelo fato de que o anticorpo TNFa, ou porçãoligadora de antigeno do mesmo, é infliximab ou golimumab.

4. Método, de acordo com a reivindicação 1,CARACTERIZADO pelo fato de que o anticorpo TNFa, ou porçãoligadora de antigeno do mesmo, é um anticorpo humano.

5. Método, de acordo com reivindicação 4,CARACTERIZADO pelo fato de que o anticorpo humano, ou umaporção ligadora de antigeno do mesmo, dissocia do TNFa huma-no com Kd de lxlO-8 M ou menor e uma taxa constante Koff de-lxlO-3 s-1 ou menor, ambos determinados por ressonância deplasmon de superfície, e neutraliza a citotoxicidade do TNFahumano em um ensaio L92 9 in vitro padrão com um IC50 de 1x10"-7 M ou menor.

6. Método, de acordo com a reivindicação 4,CARACTERIZADO pelo fato de que o anticorpo humano, ou porçãoligadora de antigeno do mesmo, tem as seguintes características :a) dissocia do TNFa humano com uma taxa constanteK0ff de lxlO-3 s"1 ou menor, como determinado por ressonânciade plasmon de superfície;b) tem um dominio CDR3 de cadeia leve compreenden-do a seqüência aminoácida da SEQ ID NO:3, ou modificado daSEQ ID NO:3 por uma única substituição alanina na posição 1, 4, 5, 7 ou 8 ou por uma a cinco substituições aminiácidasconservativas nas posições 1, 3, 4, 6, 7, 8 e/ou 9;c) tem um dominio CDR3 de cadeia pesada compreen-dendo a seqüência aminoácida da SEQ ID NO:4, ou modificadada SEQ ID NO:4 por uma substituição única alanina na posição 2, 3, 4, 5, 6, 8, 9, 10 ou 11 ou por uma a cinco substitui-ções aminoácidas conservativas nas posições 2, 3, 4, 5, 6, 8, 9, 10, 11 e/ou 12.

7. Método, de acordo com a reivindicação 4,CARACTERIZADO pelo fato de que o anticorpo humano, ou umaporção ligadora de antigeno do mesmo,; compreende uma regiãovariável de cadeia leve (RVCL) tendo um dominio CDR3 compre-endendo a seqüência aminoácida da SEQ ID NO:3, ou modificadada SEQ ID NO:3 por uma substituição alanina única na posição 1, 4, 5, 7 ou 8, e compreende uma região variável de cadeiapesada (RVCP) tendo um dominio CDR3 compreendendo a seqüên-cia aminoácida da SEQ ID NO:4, ou modificada da SEQ ID NO:4por uma substituição única alanina na posição 2, 3, 4, 5, 6, 8, 9, 10 ou 11.

8. Método, de acordo com a reivindicação 4,CARACTERIZADO pelo fato de que o anticorpo humano, ou umaporção ligadora de antigeno do mesmo, compreendo uma regiãovariável de cadeia leve (RVCL) compreendendo a seqüência a-minoácida da SEQ ID N0:1 e uma região variável de cadeia pe-sada (RVCP) compreendendo a seqüência aminoácida da SEQ IDNO: 2.

9. Método, de acordo com a reivindicação 4,CARACTERIZADO pelo fato de que o anticorpo humano, ou porçãoligadora de antigeno do mesmo, é adalimumab.

10. Método, de acordo com qualquer uma das reivin-dicações 1-9, CARACTERIZADO pelo fato de que o anticorpo TN-Fa, ou porção ligadora de antigeno do mesmo, é administradoao paciente e um regime de dose quinzenal.

11. Método, de acordo qualquer uma das reivindica-ções de 1-9, CARACTERIZADO pelo fato de que o paciente temum distúrbio em que a atividade TNFa é prejudicial.

12. Método, de acordo com a reivindicação 11,CARACTERIZADO pelo fato de que p distúrbio em que a ativida-de TNFa é prejudicial é selecionado do grupo consistindo deartrite psoriática, espondilite anquilosante, e artrite reu-matóide juvenil.

13. Método, de acordo com a reivindicação 11,CARACTERIZADO pelo fato de que o distúrbio em que a ativida-de TNFa é prejudicial é artrite psoriática.

14. Método, de acordo com qualquer uma das reivin-dicações 1-9, CARACTERIZADO ainda pelo fato de compreender aadministração de um agente terapêutico adicional ao paciente.

15. Método, de acordo com a reivindicação 14,CARACTERIZADO pelo fato de que o agente terapêutico adicional é metotrexato.

16. Método para testar a eficácia de um anticorpoTNFa, ou porção ligadora de antigeno do mesmo, para diminuira progressão radiográfica de uma doença da articulação asso-ciada com a poliartrite erosiva CARACTERIZADO pelo fato decompreender a determinação da eficácia do anticorpo TNFa, ouporção ligadora de antigeno do mesmo, utilizando um índiceSharp total modificado (mTSS) de uma população de pacientetendo doença da articulação associada com poliartrite erosi-va e um mTSS da população de paciente seguindo administraçãodo anticorpo TNFa, ou porção ligadora de antigeno do mesmo,em que nenhuma mudança ou diminuição no mTSS indica que oanticorpo TNFa, ou porção ligadora de antigeno do mesmo, éeficaz para diminuir a progressão radiográfica da doença daarticulação associada com poliartrite erosiva.

17. Método, de acordo com a reivindicação 16.CARACTERIZADO pelo fato de que a população de paciente adi-cionalmente tem um distúrbio em que TNFa é prejudicial.

18. Método, de acordo com a reivindicação 17,CARACTERIZADO pelo fato de que o distúrbio em que a ativida-de TNFa é prejudicial é selecionado do grupo consistindo deartrite psoriática, espondilite anquilosante, e artrite reu-matóide juvenil.

19. Método, de acordo com qualquer uma das reivin-dicações 16-18, CARACTERIZADO pelo fato de que a diminuiçãono mTSS é cerca de -0,2.

20. Método, de acordo com qualquer uma das reivin-dicações 16-18, CARACTERIZADO pelo fato de que o anticorpoTNFa, ou porção ligadora de antigeno do mesmo, é um anticor-po selecionado do grupo consistindo de um anticorpo humani-zado, um anticorpo quimérico, e um anticorpo multivalente.

21. Método, de acordo com qualquer uma das reivin-dicações 16-18, CARACTERIZADO pelo fato de que o anticorpoTNFa, ou porção ligadora de antigeno do mesmo, é infliximabou golimumab.

22. Método, de acordo com qualquer uma das reivin-dicações 16-18, CARACTERIZADO pelo fato de que o anticorpoTNFa, ou porção ligadora de antigeno do mesmo, é um anticor-po humano.

23. Método, de acordo com a reivindicação 22,CARACTERIZADO pelo■fato de que o anticorpo humano, ou porçãoligadora de antigeno do mesmo, dissocia do TNFa humano comum Kd de lxlO-8 M ou menor e uma taxa constante Koff de lxlO"3s"1 ou menor, ambos determinados por ressonância de plasmonde superfície, e neutraliza a citotoxicidade do TNFa humanoem um ensaio de L929 in vitro padrão com um IC50 de lxlO-7 Mou menor.

24. Método, de acordo com a reivindicação 22,CARACTERIZADO pelo ■ fato de que o anticorpo humano, ou umaporção ligadora de-antigeno do mesmo, tem as seguintes ca-racterísticas :a) dissocia do TNFa humano com uma taxa constanteKoff de lxlO"3 s-1 ou menor, como determinado por ressonânciade plasmon de superfície;b) tem um dominio CDR3 de cadeia leve compreenden-do a seqüência aminoácida da SEQ ID NO:3, ou modificada daSEQ ID NO:3 por uma substituição alanina única na posição 1, 4,5, 7 ou 8 ou por uma a cinco substituições aminoácidasconservativas nas posições 1, 3, 4, 6, 7, 8 e/ou 9;c) tem um dominio CDR3 de cadeia pesada compreen-dendo a seqüência aminoácida da SEQ ID NO:4, ou modificadada SEQ ID NO:4 por uma substituição alanina única na posição 2, 3, 4, 5, 6, 8, 9, 10 ou 11 ou por uma a cinco substitui-ções aminoácidas conservativas nas posições 2, 3, 4, 5, 6, 8, 9, 10, 11 e/ou 12.

25. Método, de acordo com a reivindicação 22,CARACTERIZADO pelo fato de que o anticorpo humano, ou porçãoligadora de antigeno do mesmo, compreende uma região variá-vel da cadeia leve (RVCL) tendo um dominio CDR3 compreenden-do a seqüência aminoácida da SEQ ID NO:3, ou modificada daSEQ ID NO:3 por uma substituição alanina única na posição 1, 4, 5, 7 ou 8, e compreende uma região variável de cadeia pe-sada (RVCP) tendo um dominio CDR3 compreendendo a seqüênciaaminoácida da SEQ ID NO:4, ou modificado da SEQ ID NO:4 poruma substituição alanina única na posição 2, 3, 4, 5, 6, 8, 9, 10 ou 11.

26. - Método, de acordo com a reivindicação 22,CARACTERIZADO pelo fato de que o anticorpo humano, ou porçãoligadora de antigeno do mesmo, compreende uma região varia-vel de cadeia leve (RVCL) compreendendo a seqüência aminoá-cida da SEQ ID N0:1 e uma região variável de cadeia pesada(RVCP) compreendendo a seqüência aminoácida da SEQ ID NO:2.

27. Método, de acordo com a reivindicação 22,CARACTERIZADO pelo fato de que o anticorpo humano, ou porçãoligadora de antigeno do mesmo, é adalimumab.

28. Método, de acordo com qualquer uma das reivin-dicações 16-18, CARACTERIZADO pelo fato de que o anticorpoTNFa, ou porção ligadora de antigeno do mesmo, é administra-do ao paciente em um regime de dose quinzenal.

29. Método, de acordo com qualquer uma das reivin-dicações 16-18, CARACTERIZADO pelo fato de que o anticorpo,ou porção ligadora de antigeno do mesmo, é administrado emcombinação com um agente terapêutico adicional.

30. Método, de acordo com a reivindicação 29,CARACTERIZADO pelo fato de que o agente terapêutico adicio-nal é metotrexato.

31. Método para monitoramento da efetividade de umanticorpo TNFa, ou porção ligadora de antigeno do mesmo, pa-ra o tratamento da poliartrite erosiva em um paciente humanoCARACTERIZADO pelo fato de compreender a determinação da e-fetividade do anticorpo TNFa, ou porção ligadora de antigenodo mesmo, utilizando uma linha base no índice Sharp Totalmodificado (mTSS) de uma população de paciente tendo poliar-trite erosiva e um Índice mTSS de uma população de pacienteseguindo a administração do anticorpo TNFa, ou porção liga-dora de antigeno do mesmo, em que um resultado selecionadodo grupo consistindo dei) uma diminuição no mTSS em cerca de 9-27% da po-pulação de paciente;ii) nenhuma mudança no mTSS em cerca de 65-73% dapopulação de paciente; eiii) um aumento no mTSS em cerca de 9-28% da popu-lação de pacienteindica que o anticorpo TNFa, ou porção ligadora deantigeno do mesmo, é efetivo no tratamento da poliartriteerosiva.

32. Método, de acordo com a reivindicação 31,CARACTERIZADO pelo fato de que o anticorpo TNFa, ou porçãoligadora de antigeno do mesmo, é um anticorpo selecionado dogrupo consistindo de um anticorpo humanizado, um anticorpoquimérico, e um anticorpo multivalente.

33. Método, de acordo com a reivindicação 31,CARACTERIZADO pelo fato de que o anticorpo TNFa, ou porçãoligadora de antigeno do mesmo, é infliximab ou golimumab.

34. Método, de acordo com a reivindicação 31,CARACTERIZADO pelo fato de que o anticorpo TNFa, ou porçãoligadora de antigeno do mesmo, é um anticorpo humano.

35. Método, de acordo com a reivindicação 34,CARACTERIZADO pelo fato de que o anticorpo humano, ou porçãoligadora de antigeno do mesmo, dissocia do TNFa humano comum Kd de lxlO"8 M ou menor e uma taxa constante Koff de lxlO-3s"1 ou menor, ambos determinados por ressonância de plásmonde superfície, e neutraliza a citotoxicidade do TNFa humanoem um ensaio de L929 in vitro padrão com um ICso de lxlO-7 Mou menos.

36. Método, de acordo com a reivindicação 34,CARACTERIZADO pelo fato de que o anticorpo humano, ou umaporção ligadora de antigeno do mesmo, é adalimumab.

37. Método para testar a eficácia de um anticorpoTNFa, ou porção ligadora de antigeno do mesmo, para tratarpoliartrite erosiva associada com artrite psoriáticaCARACTERIZADO pelo fato de compreender a determinação da e-ficácia do anticorpo TNFa, ou porção ligadora de antigeno domesmo, utilizando uma linha base no índice Sharp Total modi-ficado (mTSS) e ou uma linha base do índice de Severidade eÁrea de Psoriase (PASI) ou uma linha base no Índice ACR deuma população de paciente tendo poliartrite erosiva em com-paração com o Índice mTSS e ou o PASI ou o ACR da populaçãode paciente seguindo a administração do anticorpo TNFa, ouporção ligadora de antigeno do mesmo, em que nenhuma mudançaou uma diminuição no mTSS e ou uma resposta ACR20 alcançadaem pelo menos cerca de 57% ou uma resposta PASI 50 alcançadaem pelo menos cerca de 75% da população de paciente, indicaque o anticorpo TNFa, ou porção ligadora de antigeno do mes-mo, é eficaz para o tratamento da poliartrite erosiva asso-ciada com artrite psoriática.

38. Método, de acordo com a reivindicação 37,CARACTERIZADO pelo fato de ainda alcançar uma resposta ACR50em pelo menos cerca de 39% da população de paciente.

39. Método, de acordo com a reivindicação 38,CARACTERIZADO pelo fato de ainda alcançar uma resposta ACR70em pelo menos cerca de 23% da população de paciente.

40. Método, de acordo com a reivindicação 37,CARACTERIZADO pelo fato de ainda alcançar uma respostaPASI75 em pelo menos cerca de 59% da população de paciente.

41. Método, de acordo com a reivindicação 40,CARACTERIZADO pelo fato de ainda alcançar uma respostaPASI90 em pelo menos cerca de 42% da população de paciente.

42. Método, de acordo qualquer uma das reivindica-ções 37-41, CARACTERIZADO pelo fato de que o anticorpo TNFct,ou porção ligadora de antigeno do mesmo, é adalimumab.

43. Método para tratar poliartrite erosivaCARACTERIZADO pelo fato de compreender administração a umpaciente tendo poliartrite erosiva, adalimumab em um regimede dose quinzenal.

44. Método, de acordo com a reivindicação 43,CARACTERIZADO pelo fato de que a dose de adalimumab é cercade 40 mg.

45. Kit CARACTERIZADO pelo fato de compreenderuma composição farmacêutica compreendendo um anti-corpo TNFa, ou uma porção ligadora de antigeno do mesmo, eum veiculo farmaceuticamente aceitável, einstruções para administração da composição farma-cêutica para o tratamento da poliartrite erosiva.

46. Kit, de acordo com a reivindicação 45,CARACTERIZADO pelo fato de que a composição farmacêuticacompreende o anticorpo TNFa, ou porção ligadora de antigenodo mesmo, adalimumab.

47. Kit, de acordo com a reivindicação 46,CARACTERIZADO pelo fato de que a composição farmacêuticacompreende cerca de 4 0 mg de adalimumab.

48. Kit, de acordo com qualquer uma das reivindi-cações 45-47, CARACTERIZADO ainda pelo fato de compreenderum agente terapêutico adicional.

49. Kit, d acordo com a reivindicação 48,CARACTERIZADO pelo fato de que o agente terapêutico adicio-nal é metotrexato.

50. Artigo de fabricação, CARACTERIZADO pelo fatode compreendera) um material de embalagem;b) um anticorpo TNFa, ou porção ligadora de anti-geno do mesmo; ec) uma etiqueta ou inserto de embalagem contidodentro do material de embalagem indicando que o anticorpoTNFa, ou porção ligadora de antigeno do mesmo, pode ser uti-lizado para o tratamento de poliartrite erosiva.

51. Artigo de fabricação, CARACTERIZADO pelo fatode compreendera) um material de embalagem;b) um anticorpo TNFa, ou porção ligadora de anti-geno do mesmo; ec) uma etiqueta ou inserto de embalagem contidodentro do material de embalagem indicando que o anticorpoTNFa, ou porção ligadora de antigeno do mesmo, pode ser uti-lizado para inibir a progressão radiográfica da doença daarticulação.

52. Artigo, de acordo ou com a reivindicação 50 ou-51, CARACTERIZADO pelo fato de que o anticorpo anti-TNFa, ouporção ligadora de antigeno do mesmo, é um anticorpo sele-cionado do grupo consistindo de um anticorpo humanizado, umanticorpo quimérico, e um anticorpo multivalente.

53. Artigo, de acordo com a reivindicação 50 ou-51, CARACTERIZADO pelo fato de que o anticorpo TNFa, ou por-ção ligadora de antigeno do mesmo, é infliximab ou golimu-mab.

54. Artigo, de acordo com a reivindicação 50 ou-51, CARACTERIZADO pelo fato de que o anticorpo TNFa, ou por-ção ligadora de antigeno do mesmo, é um anticorpo humano.

55. Artigo, de acordo com a reivindicação 54,CARACTERIZADO pelo fato de que o anticorpo humano, ou porçãoligadora de antigeno do mesmo, dissocia do TNFa humano comum Kd de lxlO"8 M ou menor e uma taxa constante Koff de lxlO"3s"1 ou menor, ambos determinados por ressonância de plasmonde superfície, e neutraliza a citotoxicidade do TNFa humanoem um ensaio L929 in vitro padrão com um IC50 de lxlO-7 M oumenor.

56. Artigo, de acordo com a reivindicação 54,CARACTERIZADO pelo fato de que o anticorpo humano, ou porçãoligadora de antigeno do mesmo, é adalimumab.