BRPI0613295A2

BRPI0613295A2 - produto oleoso contendo ácido graxo poliinsaturado e usos e produção do mesmo

Info

Publication number: BRPI0613295A2
Application number: BRPI0613295-2A
Authority: BR
Inventors: Jaquad Fichtali; Neil Francis Leininger; Jesus Ruben Abril; Nascer Ahmed; S P Janake Namal Senanayake
Original assignee: Martek Biosciences Corp
Priority date: 2005-07-01
Filing date: 2006-06-30
Publication date: 2010-12-28
Also published as: EA200800225A1; MX2008000177A; US20150018435A1; WO2007005725A3; SG163551A1; US20080107791A1; JP4819888B2; EP1903883A2; EP1903883A4; US8034391B2; EP2630869B1; AU2006265801B2; KR101358008B1; EP2630869A1; KR20080031045A; CA2614095A1; US8753707B2; WO2007005725A2; US20070003686A1; AU2006265801A1

Abstract

PRODUTO OLEOSO CONTENDO áCIDO GRAXO POLIINSATURADO E USOS E PRODUçãO DO MESMO. a presente invenção inclui uma composição de gordura sólida que inclui um óleo possuindo gordura saturada e um óleo microbiano possuindo um ácido graxo poliinsaturado de cadeia longa e um emulsificante. Em particular, a composição da gordura sólida pode apresentar níveis elevados de ácido graxo poliinsaturado de cadeia longa e baixas quantias de emulsificantes. Em configurações preferidas, o óleo poliinsaturado é um óleo microbiano não winterizado. A invenção também se relaciona aos métodos de realização das referidas composições e produtos alimentícios, nutricionais e farmacêuticos compreendendo as referidas composições. A presente invenção também inclui um produto oleoso microbiano preparado pela extração de uma fração contendo óleo, compreendendo pelo menos um LC-PUFA derivado da biomassa microbiana e o tratamento da fração por um processo de evaporação a vácuo, caracterizado pelo fato que o produto oleoso não foi exposto a uma ou mais das etapas de winterizaçáo de um solvente, um processo de refinamento cáustico, um processo de filtração por resfriamento ou um processo de branqueamento.

Description

"PRODUTO OLEOSO CONTENDO ÁCIDOGRAXO POLIINSATURADO E USOS E PRODUÇÃO DO MESMO"

CAMPO DA INVENÇÃO

A invenção refere-se a um produto oleosocontendo ácido graxo poliinsaturado e os usos do mesmo, taiscomo em uma composição de gordura sólida que inclui um ácidograxo poliinsaturado de cadeia longa derivada de micróbio e umespessante. A invenção também refere-se aos métodos defabricação dos referidos produtos e de produtos alimentícios,nutricionais e farmacêuticos compreendendo as referidascomposições.

HISTÓRICO DA INVENÇÃO

É desejável aumentar a ingestão alimentarde muitos nutrientes benéficos. Particulamente os nutrientesbenéficos incluem ácidos graxos, tais como os ácidos graxospoliinsaturados de cadeia longa ômega 3 e ômega 6 (LC-PUFA). OsPUFAs ômega 3 são reconhecidos como importantes compostosalimentícios para a prevenção da arteriosclerose e cardiopatiacoronária, para o alívio das condições inflamatórias e para o retardodo crescimento das células tumorais. Os PUFAs ômega 6 servemnão apenas como lipídeos estruturais no corpo humano, mastambém como precursores de diversos fatores de inflamação, comoas prostaglandinas e os leucotrienos. Uma classe importante dePUFAs ômega 3 e ômega 6 são os PUFAs ômega 3 e ômega 6 decadeia longa.

Os ácidos graxos são classificados com basenas características de extensão e saturação da cadeia de carbono.Os ácidos graxos de cadeia curta possuem 2 a aproximadamente δcarbonos e são tipicamente saturados. Os ácidos graxos de cadeiamédia possuem de aproximadamente 6 a aproximadamente 14carbonos e também são tipicamente saturados. Os ácidos graxosde cadeia longa possuem de 16 a 24 ou mais carbonos e podemser saturados ou insaturados. Nos ácidos graxos de cadeia maislonga pode haver um ou mais pontos de insaturação, dando origemaos termos "monoinsaturado" e "poliinsaturado", respectivamente.Os PUFAs de cadeia longa (LC-PUFAs) que possuem 20 ou maiscarbonos são de interesse particular na presente invenção.

Os LC-PUFAs são categorizados de acordocom o número e a posição das ligações duplas nos ácidos graxosde acordo com uma nomenclatura bem compreendida. Há duasséries principais ou famílias de LC-PUFAs, dependendo da posiçãoda ligação dupla mais próxima à extremidade de metila do ácidograxo: as séries de ômega 3 contêm uma ligação dupla no terceirocarbono, enquanto as séries de ômega 6 não possuem nenhumaligação dupla até o sexto carbono. Dessa forma, o ácidodocosahexaenóico ("DHA") possui uma extensão de cadeia de 22carbonos com 6 ligações duplas se iniciando no terceiro carbono apartir da extremidade de metila e é designado como "22:6 n-3".

Outros LC-PUFAs ômega 3 importantes incluem o ácidoeicosapentaenóico ("EPA"), o qual é designado como "20:5 n-3," e oácido docosapentaenóico ômega 3 ("DPA"), o qual é designadocomo "22:5 n-3." Os LC-PUFAs ômega 6 importantes incluem ácidoaraquidônico ("ARA"), o qual é designado como "20:4 n-6" e ácidodocosapentaenóico ômega 6 ("DPA"), o qual é designado como"22:5 n-6."

A síntese de novo ou uma "nova" síntese dosácidos graxos essenciais ômega 3 e ômega 6 não ocorrem nosseres humanos; no entanto, o corpo pode converter esses ácidosgraxos essenciais, quando obtidos na dieta, em LC-PUFAs, taiscomo DHA e ARA, embora com uma eficácia muito baixa. Osácidos graxos ômega 3 e ômega 6 devem fazer parte da ingestãonutricional, visto que o corpo humano não pode inserir ligaçõesduplas mais próximas à extremidade de ômega do que o sétimoátomo de carbono, contando a partir daquela extremidade damolécula. Dessa forma, todas as conversões metabólicas ocorremsem alteração da extremidade de ômega da molécula que contémas ligações duplas de ômega 3 e de ômega 6. Conseqüentemente,os ácidos ômega 3 e ômega 6 são duas famílias separadas deácidos graxos, visto que não são interconversíveis no corpohumano.

Ao longo dos últimos vinte anos, os peritosda saúde têm recomendado dietas com menos gorduras saturadase mais gorduras poliinsaturadas. Ao passo que este conselho vemsendo seguido por diversos consumidores, a incidência decardiopatias, câncer, diabetes e muitas outras doenças debilitantescontinuou a aumentar regularmente. Os cientistas concordam que otipo e fonte de gorduras poliinsaturadas é tão crítico quanto aquantidade total de gorduras. As gorduras poliinsaturadas maiscomuns são derivadas de matéria vegetal e são ausentes nosácidos graxos de cadeia longa (mais particularmente nos LC-PUFAsômega 3). Além disso, a hidrogenação das gorduras poliinsaturadaspara criar gorduras sintéticas contribuiu com o aumento dedeterminados distúrbios da saúde e exacerbou a deficiência dealguns ácidos graxos essenciais. De fato, muitas condiçõesmédicas foram identificadas como benéficas a partir dasuplementação do ômega 3. Elas incluem acne, alergias, mal deAlzheimer, artrite, aterosclerose, cistos mamários, câncer, fibrosecística, diabetes, eczema, hipertensão, hiperatividade, distúrbiosintestinais, disfunção renal, leucemia e esclerose múltipla. Deve-seobservar que a Organização Mundial da Saúde recomendou que oalimento substituto do leite materno para bebês fosse enriquecidocom ácidos graxos ômega 3.

Os poliinsaturados convencionalmenteutilizados são os derivados de óleos vegetais, que contêm quantiassignificativas de ômega 6 (C 18:2 n-6), mas pouco ou nenhumômega 3. Visto que os ácidos graxos ômega 6 e ômega 3 sãoambos necessários para uma boa saúde, é recomendado quesejam consumidos de forma equilibrada, em aproximadamente 4:1.As principais fontes de ômega 3 são óleo de semente de linhaça eóleos de peixe. Observou-se na década passada um rápidocrescimento na produção de óleos de semente de linhaça e depeixe. Ambos os tipos de óleo são considerados boas fontesalimentícias de gorduras poliinsaturadas ômega 3. O óleo dasemente de linhaça não contém EPA, DHA, DPA ou ARA, mas, aoinvés, contém ácido linoléico (C 18:3 n-3), um bloqueador deformação que possibilita ao corpo produzir EPA. Há, no entanto,uma evidência de que a taxa da conversão metabólica pode serlenta e instável, particularmente entre as pessoas com a saúdedebilitada.

Os óleos de peixe variam consideravelmenteno tipo e no nível de composição de ácido graxo, dependendo dasespécies em particular e de suas dietas. Por exemplo, um peixecriado em uma aquacultura tende a apresentar um nível menor deácidos graxos ômega 3 do que os que vivem no estado natural.Além disso, os óleos de peixe correm o risco de contercontaminantes ambientais comumente encontrados em peixes. Emconsideração aos benefícios à saúde dos referidos LC-PUFAsômega 3 e ômega 6 (extensão da cadeia superior a 20), seriadesejável suplementar os alimentos com os referidos ácidos graxos.

Os óleos líquidos, tais como os óleos depeixe e determinados óleos microbianos, são conhecidos por conterum grande conteúdo de LC-PUFAs. No entanto, devido à suanatureza poliinsaturada, esses óleos não são sólidos emtemperatura ambiente (ou seja, 20°C), ao invés de seapresentarem em uma forma líquida ou oleosa. No entanto, asformas sólidas dos óleos ricos em PUFA são desejáveis para o usoem determinadas aplicações de alimentos onde os óleos líquidosnão são aplicáveis. Para formar uma composição sólida, diversasabordagens foram testadas. Um processo comum utilizado parasolidificar os óleos insaturados consiste em uma hidrogenaçãoparcial ou completa dos referidos óleos, de forma a obter óleossemi-sólidos. Todavia, como resultado desta transformaçãoquímica, os óleos se tornam saturados e perdem suas propriedadesaudáveis. O processo de hidrogenação parcial também resulta naformação dos ácidos graxos "trans", os quais mostraram possuirdiversas propriedades adversas. Portanto, ao solidificar os óleosinsaturados utilizando um processo de hidrogenação, aspropriedades benéficas dos óleos insaturados são substituídaspelas propriedades adversas altamente indesejáveis dos óleossaturados e pela formação de ácidos graxos "trans". Outrosmétodos incluem a mistura de óleos insaturados com gorduras"duras" ou saturadas, de forma que a mistura seja um óleo semi-sólido. Novamente, os benefícios do óleo insaturado "saudável" sãopelo menos parcialmente compensados pela presença das gordurasendurecidas ou saturadas. Outros métodos para a formação de umacomposição de gordura maleável e semi-sólida compreendemníveis elevados de gorduras poliinsaturadas, incluindo a utilizaçãode níveis elevados de tipos particulares de emulsificantes ou outrosespessantes, como os álcoois graxos. Até a presente invenção,havia uma falta nas composições da técnica, compreendendo umagordura sólida ou semi-sólida ou um produto alimentício contendoníveis elevados de PUFAs, mas sem adicionar de forma exógena asgorduras saturadas, níveis elevados de emulsificantes adicionadosde forma exógena e/ou outros tipos de espessantes. Taiscomposições e métodos para formar as referidas composiçõesseriam altamente desejáveis. Seria ainda desejável fornecer ummétodo de baixo custo para realizar a referida composição, oreferido método envolvendo o uso de materiais não perigosos,etapas mínimas de processo e estoque mínimo de matéria-prima.

Os óleos líquidos como os óleosmicrobianos, são conhecidos por conter um elevado conteúdo deLC-PUFAs, são tipicamente processados para consumo porhumanos ou outros animais por etapas múltiplas, incluindo o pré-tratamento, dissolubilidade ou desodorização, winterização,refinamento cáustico (também conhecido como refinamentoquímico), filtração de resfriamento e branqueamento. Taisprocessos agregam tempo e custo à preparação dos produtos epodem introduzir produtos químicos no processo de refinamentoinaceitável para o mercado de produtos naturais ou orgânicos. Damesma forma, há necessidade de melhorar os métodos deprodução de óleos que sejam simplificados, menos dispendiosos eaceitáveis aos amplos mercados, ao mesmo tempo em que aindasejam eficazes para a produção de produtos possuindopropriedades organolépticas aceitáveis.RESUMO DA INVENÇÃO

A presente invenção fornece um métodopara a produção de uma composição de gordura sólida,compreendendo a mistura de um óleo, compreendendo gordurasaturada e um óleo microbiano, compreendendo pelo menos umLC-PUFA com pelo menos um emulsificante para formar umamistura; e solidificando a mistura para formar uma composição degordura sólida. A invenção também fornece uma composição degordura sólida compreendendo uma mistura de um óleo microbianonão winterizado, compreendendo um LC-PUFA e um emulsificante,caracterizado pelo fato que a mistura e uma composição sólida emtemperatura ambiente.

Em algumas configurações do método, oóleo compreende entre aproximadamente 5% do peso eaproximadamente 70% do peso de LC-PUFA e entreaproximadamente 20% do peso e aproximadamente 60% do pesoda gordura saturada.

Em algumas configurações, a composição degordura sólida compreende a gordura saturada.

Em algumas configurações, a gordurasaturada não é adicionada de forma exógena, e em outrasconfigurações, a gordura saturada é adicionada de forma exógena.

Em outras configurações ainda, o óleo microbiano não é winterizadoou não é hidrogenado.

Em algumas configurações, o óleomicrobiano é derivado de um microorganismo selecionado do grupoque consiste em microorganismos do gênero Thraustochytrium,microorganismos do gênero Schizochytrium, microorganismos dogênero Althornia, microorganismos do gênero Aplanochytrium,microorganismos do gênero Japonochytrium, microorganismos dogênero Labyrinthula1 microorganismos do gênero Labyrinthuloides,microorganismos do gênero Crypthecodinium e combinações dosmesmos. Em outras configurações ainda, o microorganismo éselecionado do grupo que consiste em microorganismos do gêneroThraustochytrium, microorganismos do gênero Schizochytrium,microorganismos do gênero Crypthecodinium e combinações dosmesmos.

Em algumas configurações, o óleomicrobiano compreende um LC-PUFA que possui uma extensão decadeia de carbono de pelo menos 20, ou pelo menos 22, ou possuipelo menos três ligações duplas ou possui pelo menos quatroligações duplas. Em algumas configurações, o LC-PUFAcompreende o ácido docosahexaenóico ou o ácidodocosapentaenóico ou o ácido araquidônico ou o ácidoeicosapentaenóico. Em outras configurações, o óleo compreendepelo menos aproximadamente 50 por cento do peso do ácidodocosahexaenóico ou pelo menos aproximadamente 60 por centodo peso do ácido docosahexaenóico.

Em algumas configurações, a composição degordura sólida possui uma textura homogênea ou é uma margarinaculinária.

Em algumas configurações, o emulsificante éum monoglicerídeo, um diglicerídeo, uma combinação demono/diglicerídeo, uma lecitina, um mono-diglicerídeo lactilato, uméster poliglicerol, um éster de ácido graxo de sacarose, um estearoillactilato sódico, um estearoil lactilato de cálcio ou combinações dosmesmos. Em outras configurações ainda, o emulsificante estápresente em uma quantia de entre aproximadamente 0,01 por centodo peso e aproximadamente 2,0 por cento do peso, e em outrasconfigurações ainda, entre aproximadamente 0,05 por cento dopeso e aproximadamente 0,2 por cento do peso.

Em algumas configurações do método, acomposição de gordura sólida possui uma temperatura de fusão depelo menos aproximadamente 20°C, pelo menos aproximadamente30°C ou pelo menos aproximadamente 35°C.

Em algumas configurações do método, aetapa de solidificação da mistura controla a formação dos cristais nacomposição da gordura sólida. Em configurações da composição dagordura sólida, a composição compreende cristais, e em algumasconfigurações, os cristais compreendem cristais β -prime. Em outrasconfigurações ainda do método ou na composição de gordurasólida, os cristais compreendem cristais β -prime, pelo menosaproximadamente 50% do peso das gorduras e/ou óleos nacomposição de gordura sólida estão na forma de cristal β -prime, oupelo menos 80 % do peso das gorduras e/ou óleos na composiçãoda gordura sólida estão na forma de cristal β -prime.

Em algumas configurações do método, oóleo e/ou o emulsificante é aquecido, aquecido antes da etapa demistura ou aquecido a pelo menos aproximadamente 40°C.

Em algumas configurações do método, aetapa de mistura compreende a agitação da mistura, e em outrasconfigurações ainda, a etapa de agitação forma uma misturacontínua.

Em algumas configurações do método, aetapa da solidificação da mistura compreende o resfriamento damistura, e em outras configurações ainda, a etapa de resfriamentocompreende o resfriamento da mistura a uma temperatura deaproximadamente 0°C a aproximadamente 3°C, ou a etapa desolidificação ainda compreende a mescla da mistura durante aetapa de resfriamento, ou a mistura é resfriada a uma taxa de entreaproximadamente 1°C/min e aproximadamente 20°C/min.

Em algumas configurações do método, aetapa da solidificação compreende a introdução do nitrogênio àmistura, e pode compreender a borbulhagem do nitrogênio por todaa mistura.

O método pode ainda compreender oacréscimo de pelo menos um ingrediente adicional à mistura,incluindo um líquido solúvel em água, incluindo a água. O líquidosolúvel em água pode ser acrescentado em uma quantia entreaproximadamente 1% do peso e aproximadamente 10% do peso.

A composição pode ainda compreender pelomenos um ingrediente adicional, incluindo um líquido solúvel emágua, incluindo a água. O líquido solúvel em água pode estarpresente em uma quantia de entre aproximadamente 1% do peso eaproximadamente 10% do peso.

O ingrediente adicional também pode serantioxidantes, sabores, melhorador de sabores, edulcorantes,pigmentos, vitaminas, minerais, compostos prebióticos, compostosprobióticos, ingredientes terapêuticos, ingredientes medicinais,ingredientes alimentícios funcionais, ingredientes de processamentoou combinações dos mesmos.

Em algumas configurações, o ingredienteadicional é ácido ascórbico ou um sal de ácido ascórbico, e emalgumas configurações é adicionado em uma quantia entreaproximadamente 0,5% do peso e aproximadamente 5% do peso.

Em algumas configurações, o ingredienteadicional é um antioxidante, e em algumas configurações é umascorbil palmitato, tocoferóis, ácido cítrico, ácido ascórbico, butilhidroquinona terciária, extrato de alecrim, Iecitina ou misturas dosmesmos.

Em algumas configurações, a composição degordura sólida possui um valor OSI de pelo menosaproximadamente 20, pelo menos aproximadamente 40 ou pelomenos aproximadamente 60.

Em algumas configurações do método, acomposição de gordura sólida é selecionada do grupo que consisteem um produto alimentício, um produto nutricional e um produtofarmacêutico.

Em algumas configurações do método, ométodo ainda compreende o acréscimo da composição de gordurasólida a um produto selecionado do grupo que consiste em umproduto alimentício, um produto nutricional e um produtofarmacêutico.

A presente invenção também fornece umacomposição de gordura que compreende um óleo microbiano nãowinterizado, o qual compreende entre aproximadamente 5% dopeso e aproximadamente 70% do peso de LC-PUFA e entreaproximadamente 20% do peso e aproximadamente 60% do pesoda gordura saturada; e entre aproximadamente 0,01% do peso eaproximadamente 2,0% do peso de um emulsificante, caracterizadopelo fato que a composição compreende menos deaproximadamente 10% do peso da água e caracterizado pelo fatoque a composição é um composto sólido em temperatura ambiente.

Em uma configuração adicional, a invençãofornece um método de preparação um produto oleoso que éutilizado para o consumo, compreendendo a extração de umafração contendo óieo de uma biomassa microbiana, caracterizadopelo fato que a fração contendo óleo compreende pelo menos umLC-PUFA e ácidos graxos saturados pelo menos o suficiente paraafetar visualmente a fração contendo óleo; e tratar a fraçãocontendo óleo por evaporação a vácuo para produzir um produtooleoso compreendendo pelo menos um LC-PUFA1 caracterizadopelo fato que o produto oleoso não estava sujeito a uma etapa dewinterização. A presente invenção também fornece um produtooleoso produzido pelo método.

A invenção também fornece um produtooleoso microbiano, que é utilizado para o consumo, preparado pelaextração de uma fração, contendo óleo de uma biomassamicrobiana. Caracterizado pelo fato que a fração contendo óleocompreende pelo menos um LC-PUFA e ácidos graxos saturadossuficientes para afetar visualmente a fração contendo óleo, e tratara fração por um processo de evaporação a vácuo, caracterizadopelo fato que o produto oleoso não estava sujeito a uma etapa dewinterização.

Em algumas configurações do método, oproduto oleoso não estava sujeito a um processo de refinamentocáustico. Em outras configurações, o produto oleoso não estavasujeito a um processo de filtração por resfriamento, e em outrasconfigurações, o produto oleoso não estava sujeito a um processode branqueamento.

Em algumas configurações do método, afração contendo óleo pode compreender um LC-PUFA possuindouma extensão da cadeia de carbono de pelo menos 20, pelo menos22, possuindo pelo menos três ligações duplas, ou pelo menosquatro ligações duplas. Em algumas configurações, o LC-PUFApode compreender ácido docosahexaenóico, ácidodocosapentaenóico, ácido araquidônico ou ácidoeicosapentaenóico.

Em algumas configurações do método, aetapa de tratamento da fração contendo óleo compreende adissolubilidade. Em outras configurações ainda, a dissolubilidadepode compreender a exposição da fração contendo óleo extraído àscondições de vácuo em temperatura elevada, incluindo, entreoutras, temperaturas de aproximadamente 50°C aaproximadamente 70°C. A dissolubilidade também podecompreender a exposição da fração contendo óleo extraído a umvácuo superior ao vácuo de aproximadamente 100 mm Hg, aexposição da fração contendo óleo extraído a um vácuo superior aovácuo de aproximadamente 70 mm Hg ou a exposição da fraçãocontendo óleo extraído a um vácuo superior a um vácuo deaproximadamente 50 mm Hg.

Em algumas configurações do método, aetapa de tratar a fração contendo óleo compreende adesodorização. Em outras configurações ainda, a desodorizaçãocompreende a exposição da fração contendo óleo extraído àscondições de vácuo em uma temperatura elevada, ao passo queespalha a fração contendo óleo extraído com vapor. Em umaspecto, a temperatura elevada é de aproximadamente 190°C aaproximadamente 220°C. Nesta configuração, a dissolubilidadepode compreender a exposição da fração contendo óleo extraído aum vácuo superior ao vácuo de aproximadamente 25 mm Hg,expondo a fração contendo óleo extraído a um vácuo superior aovácuo de aproximadamente 12 mm Hg ou expondo a fraçãocontendo óleo extraído a um vácuo superior a um vácuo deaproximadamente 6 mm Hg.

Em algumas configurações do método, oproduto oleoso foi sujeito à etapa de branqueamento, tanto antesquanto depois da etapa de tratamento. Em outras configurações, ométodo compreende ainda o fracionamento do óleo em uma fraçãode oleína e uma fração de estearina. Em outras configurações, oproduto oleoso é utilizado para o consumo humano.

Em algumas configurações, o produto oleosonão esteve sujeito a um processo de refinamento cáustico, umprocesso de filtração por resfriamento ou a um processo debranqueamento.

Em algumas configurações, a biomassamicrobiana é originada de um microorganismo selecionado dogrupo que consiste em microorganismos do gêneroThraustochytrium, microorganismos do gênero Schizochytrium,microorganismos do gênero Althornia, microorganismos do gêneroAplanochytrium, microorganismos do gênero Japonochytrium,microorganismos do gênero Labyrinthula1 microorganismos dogênero Labyrinthuloides, microorganismos do gêneroCrypthecodinium e misturas dos mesmos. Em outras configurações,a biomassa microbiana é originada de um microorganismoselecionado do grupo que consiste nos microorganismos do gêneroSchizochytrium, microorganismos do gênero Crypthecodinium emisturas dos mesmos.

Em algumas configurações, o produtooleoso possui um conteúdo de ácido graxo livre de menos deaproximadamente 0,5% do peso, e em outras configurações, possuium conteúdo de ácido graxo livre de menos de aproximadamente0,3% do peso.

Em algumas configurações, o produto oleosopossui um valor fosforoso de menos de aproximadamente 10 ppm,e em outras configurações, possui um valor fosforoso de menos deaproximadamente 5 ppm.

Em algumas configurações, o produto oleosopossui um valor de peróxido de menos de aproximadamente 2meq/kg, e em outras configurações, um valor de peróxido de menosde aproximadamente 1 meq/kg.

Em algumas configurações, o produto oleosopossui um valor de anisidina de menos de aproximadamente 5, eem outras configurações, possui um valor de anisidina de menos deaproximadamente 3.

Em algumas configurações, o produto oleosopossui um conteúdo de sabão de menos de aproximadamente 5%do peso, e em outras configurações, possui um conteúdo de sabãode menos de aproximadamente 2,5% do peso.

Em algumas configurações, o produto oleosopossui uma concentração de Fe de menos de aproximadamente 1ppm, e em outras configurações, possui uma concentração de Fede aproximadamente 0,5 ppm.

Em algumas configurações, o produto oleosopossui uma concentração de Pb de menos de aproximadamente 1ppm, e em outras configurações, possui uma concentração de Pbde aproximadamente 0,2 ppm.

Em algumas configurações, o produto oleosopossui uma concentração de Hg de menos de aproximadamente 0,1ppm, e em outras configurações, possui uma concentração de Hgde aproximadamente 0,04 ppm.Em algumas configurações, o produto oleosopossui uma concentração de Ni de menos de aproximadamente 0,1ppm, e em outras configurações, o produto oleoso possui umaconcentração de Ni de aproximadamente 0,01 ppm.

Em algumas configurações, o produto oleosopossui uma concentração de Cu de menos de aproximadamente 1ppm, e em outras configurações, possui uma concentração de Cude aproximadamente 0,2 ppm.

A presente invenção também fornece umproduto nutricional que compreende o produto oleoso microbiano,um produto farmacêutico que compreende o produto oleosomicrobiano e um produto alimentício que compreende o produtooleoso microbiano e um componente alimentício ou líquido. Emalgumas configurações, o produto farmacêutico compreende aindaum excipiente farmaceuticamente aceitável. Em outrasconfigurações, o produto farmacêutico compreende ainda umagente farmaceuticamente ativo selecionado do grupo que consisteem estatinas, agentes anti-hipertensivos, agentes antidiabéticos,agentes antidemência, antidepressivos, agentes antiobesidade,supressores de apetite e agentes para melhorar a memória e/ou afunção cognitiva.

Em algumas configurações, o produtoalimentício é selecionado do grupo que consiste em massas parapão, massas para bolo, alimentos assados, produtos alimentícioslíquidos, produtos alimentícios semi-sólidos, alimentos em barras,carnes processadas, sorvetes, sobremesas congeladas, iogurtescongelados, misturas para waffle, molhos para salada, misturaspara substituição de ovos, salgadinhos, salgadinhos deespecialidades, aperitivos de frutas secas, salgadinhos de carne,torresmos, barrinhas de cereal, bolos de arroz / milho e doces deconfeitaria.

Em algumas configurações, o produto oleosomicrobiano é utilizado para o consumo humano.

A presente invenção também fornece umproduto oleoso microbiano que é utilizado para o consumopreparado por um processo, compreendendo a extração de umafração contendo óleo, compreendendo pelo menos um LC-PUFAoriginado de uma biomassa microbiana; e o tratamento da fraçãopor um processo de evaporação a vácuo, caracterizado pelo fatoque o produto oleoso não é sujeito à etapa de winterização, umprocesso de refinamento cáustico, um processo de filtração porresfriamento ou um processo de branqueamento; e caracterizadopelo fato que o produto oleoso possui uma característicaselecionada de grupo que consiste em um conteúdo de ácido graxolivre de menos de aproximadamente 0,5% do peso, um valorfosforoso de menos de aproximadamente 10 ppm, um valor deperóxido de menos de aproximadamente 2 meq/kg, um valor deanisidina de menos de aproximadamente 5, um conteúdo de sabãode menos de aproximadamente 5% do peso, uma concentração deFe de menos de aproximadamente 1 ppm, uma concentração de Pbde menos de aproximadamente 1 ppm, uma concentração de Hg demenos de aproximadamente 0,1 ppm, uma concentração de Ni demenos de aproximadamente 0,1 ppm e uma concentração de Cu demenos de aproximadamente 1 ppm.

Fornecido da mesma forma encontra-se umproduto alimentício compreendendo o produto oleoso microbiano eum componente alimentício ou líquido, um produto nutricionalcompreendendo o produto oleoso microbiano e um produtofarmacêutico compreendendo o produto oleoso microbiano.

A invenção também fornece um método depreparar um produto oleoso que é utilizado para o consumo,compreendendo a extração de uma fração contendo óleo de umabiomassa microbiana, caracterizado pelo fato que a fração contendoóleo compreende pelo menos um LC-PUFA; e tratar a fraçãocontendo óleo por evaporação a vácuo para produzir um produtooleoso compreendendo pelo menos um LC- PUFA, caracterizadopelo fato que o produto oleoso não foi sujeito a um processo derefinamento cáustico. A presénte invenção também fornece umproduto oleoso produzido por este método.

Em algumas configurações, omicroorganismo é um microorganismo do gênero Mortierella.

Em algumas configurações, a fraçãocontendo óleo compreende o ácido araquidônico.

A invenção também fornece um produtooleoso misturado, compreendendo: um produto oleoso produzidopor um método compreendendo a extração de uma fração contendoóleo originada de uma biomassa microbiana, caracterizado pelo fatoque a fração contendo óleo compreende pelo menos um LC-PUFAe ácidos graxos saturados, pelo menos o suficiente, para afetarvisualmente a fração contendo óleo; e tratar a fração contendo óleopor evaporação a vácuo para produzir um produto oleosocompreendendo pelo menos um LC-PUFA, caracterizado pelo fatoque o produto oleoso não foi sujeito a uma etapa de winterização; eum produto oleoso produzido por um método que compreende aextração de uma fração contendo óleo originada de uma biomassamicrobiana, caracterizado pelo fato que a fração contendo óleocompreende pelo menos um LC-PUFA e tratar a fração contendoóleo por evaporação a vácuo para produzir um produto oleosocompreendendo pelo menos um LC-PUFA, caracterizado pelo fatoque o produto oleoso não estava sujeito a um processo derefinamento cáustico.

Em algumas configurações, a biomassamicrobiana da qual o antigo produto oleoso foi produzido éoriginada de um microorganismo selecionado do grupo que consisteem microorganismos do gênero Thraustochytrium, microorganismosdo gênero Schizochytriwn, microorganismos do gênero Althornia,microorganismos do gênero Aplanochytrium1 microorganismos dogênero Japonochytrium, microorganismos do gênero Labyrinthula,microorganismos do gênero Labyrinthuloides, microorganismos dogênero Crypthecodinium e misturas dos mesmos. Em outraconfiguração ainda, o microorganismo é selecionado do grupo queconsiste em microorganismos do gênero Schizochytrium,microorganismos do gênero Crypthecodinium e misturas dosmesmos.

Em outra configuração do produto oleosomisturado, a biomassa microbiana da qual o produto oleoso anteriorfoi produzido é originada de um microorganismo do gêneroMortierella.

Em outra configuração ainda, o produtooleoso misturado compreende o ácido docosahexaenóico e o ácidoaraquidônico.

Em qualquer uma das configurações dapresente invenção, em um aspecto, um produto oleoso produzidopor um processo ou método da invenção é um sólido a 20°C.BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS

A Fig. 1 ilustra diversas configuraçõesalternativas da presente invenção para a produção de um óleocontendo PUFA da presente invenção.

A Fig. 2 ilustra diversas configuraçõesalternativas da presente invenção para a produção de um óleocontendo PUFA da presente invenção.

A Fig. 3 ilustra uma comparação do índice deestabilidade oxidativa de uma composição de gordura sólida,composição de gordura sólida com ácido ascórbico adicionado euma composição de gordura sólida com ácido ascórbico e ácidofólico adicionados.

DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO

As composições do produto alimentício,nutricional e farmacêutico e métodos para o preparo do mesmo,conforme instruído pela presente invenção, permitem o aumento daingestão de nutrientes, particularmente LC-PUFAs, particularmenteLC-PUFAs ômega 3 e ômega 6, os quais podem fornecer benefíciossaudáveis aos que consumirem os referidos produtos. A presenteinvenção é direcionada em partes em direção a um produto oleosocontendo PUFA de alta qualidade preparado com umprocessamento mínimo que melhorou a funcionalidade, melhorou aestabilidade e é compatível com uma ampla variação de aplicações,incluindo o setor de mercado natural e/ou orgânico. Um usoparticularmente preferido dos referidos produtos oleosos está naprodução de uma composição de gordura sólida compreendendoLC-PUFAs, que podem ser utilizados no produto nutricional, produtoalimentício e/ou produto farmacêutico, ou como um produtonutricional, alimentício e/ou farmacêutico (medicinal e/outerapêutico). Os óleos para a fabricação de produtos da invençãosão óleos microbianos contendo LC-PUFAs derivados de umabiomassa microbiana.

Uma primeira configuração da presenteinvenção é um processo para a produção de óleos microbianosminimamente processados que são produtos oleosos contendoPUFA de alta qualidade. O processo inclui a extração de umafração contendo óleo, compreendendo pelo menos um LC-PUFAderivado de uma biomassa microbiana para produzir um óleomicrobiano. A fontes e métodos microbianos para o crescimentodos microorganismos compreendendo nutrientes e/ou LC-PUFAspara a recuperação em óleos microbianos são conhecidos natécnica {Industrial Microbiology and Biotechnology, 2nd edition, 1999,American Society for Microbiology). Preferivelmente, osmicroorganismos são cultivados em um meio de fermentação emum fermentador. Os métodos e composições da presente invençãosão aplicáveis a qualquer microorganismo industrial que produzaLC-PUFA.

As fontes microbianas incluem ummicroorganismo, como uma alga, bactérias, fungos (incluindoleveduras) e/ou protista. Os organismos preferidos incluem aquelesselecionados do grupo que consistem em algas douradas (taiscomo microorganismos do reino Stramenopiles), algas verdes,diatoms, dinoflagelados (tais como microorganismos da ordemDinophyceae, incluindo membros do gênero Crypthecodinium taiscomo, por exemplo, Crypthecodinium cohnii), levedura e fungos dogênero Mucor e Mortierella, incluindo, entre outros, Mortierellaalpina e Mortierella sect, schmuckeri. Os membros do grupomicrobiano Stramenopiles incluem as microalgas e osmicroorganismos semelhantes às algas, incluindo os seguintesgrupos de microorganismos: Hamatores1 Proteromonads1 Opalines,Develpayella1 Diplophrys, Labrinthulids1 Thraustochytrids1 Biosecids1Oomycetes1 Hypochytridiomycetes, Commation1 Reticulosphaera,Pelagomonas1 Pelagococcus, Ollicola1 Aureococcus, Parmales1Diatoms1 Xanthophytes1 Phaeophytes (algas marrons),Eustigmatophytes1 Raphidophytes, Synurids, Axodines (incluindoRhizochromulinaales, Pedinellales, Dictyochales), Chrysomeridales,Sarcinochrysidales, Hydrurales, Hibberdiales e Chromulinales. OsThraustochytrids incluem os gêneros Schizochytrium (as espéciesincluem aggregatum, IimnaceMm1 mangrovei, menorúm,octosporum), Thraustochytrium (as espécies incluem arudimentale,aureum, benthicola, globosum, kinnei, motivum, multirudimentale,pachydermum, proliferum, roseum, striatum), Ulkenia (as espéciesincluem amoeboidea, kerguelensis, minuta, profunda, radiate,sailens, sarkariana, schizochytrops, visurgensis, yorkensis),Aplanochytrium (as espécies incluem haliotidis, kerguelensis,profunda, stocchinoi), Japonochytrium (as espécies incluemmarinum), Althornia (as espécies incluem crouchií) e Elina (asespécies incluem marisalba, sinorifica). Os Labrinthulids incluem osgêneros Labyrinthula (as espécies incluem algeriensis, coenocystis,chattonii, macrocystis, macrocystis atlantica, macrocystismacrocystis, marina, minuta, roscoffensis, valkanovii, vitellina,vitellina pacifica, vitellina vitellina, zopfi), Labyrinthomyxa (asespécies incluem marina), Labyrinthuloides (as espécies incluemhaliotidis, yorkensis), Diplophrys (as espécies incluem archeri),Pyrrhosorus* (as espécies incluem marinus), Sorodiplophrys* (asespécies incluem stercorea), Chlamydomyxa* (as espécies incluemlabyrinthuloides, montana). (* = não há um consenso geral atualsobre a colocação taxonômica exata desses gêneros). Enquanto osprocessos da presente invenção podem ser utilizados para produzirformas de nutrientes que podem ser produzidos em uma amplavariedade de microorganismos. Para maior sintetização,conveniência e ilustração esta descrição detalhada da invençãodiscutirá os processos para o crescimento de microorganismos quesão capazes de produzir lipídeos compreendendo ácidos graxospoliinsaturados ômega 3 e/ou ômega 6, em particularmicroorganismos que são capazes de produzir DHA1 DPA n-3, DPAn-6, EPA ou ARA. Microorganismos preferidos adicionais são algas,tais como Thraustochytrids da ordem de Thraustochytriales,incluindo Thraustochytrium (incluindo Ulkenia) e Schizochytrium eincluindo Thraustochytriales, que são revelados nas Patentes Norte-Americanas comumente atribuídas sob os números 5.340.594 e5.340.742, ambas emitidas para Barclay, das quais todas sãoincorporadas ao presente por referência em sua integridade. Deforma mais preferível, os microorganismos são selecionados de umgrupo que consiste em microorganismos que possuem ascaracterísticas de identificação de ATCC número 20888, ATCCnúmero 20889, ATCC número 20890, ATCC número 20891 e ATCCnúmero 20892. Visto que há uma certa controvérsia entre os peritoscom relação se a Ulkenia é um gênero separado do gêneroThraustochytrium, para os propósitos deste pedido, o gêneroThraustochytrium incluirá a Ulkenia. Também preferidas são ascepas das cepas de Mortierella sect, schmuckeri (por exemplo,incluindo microorganismos que possuem as características deidentificação de ATCC 74371) e Mortierella alpina (por exemplo,incluindo microorganismos que possuem as características deidentificação de ATCC 42430). Também preferidas são as cepas deCrypthecodinium cohnii, incluindo microorganismos que possuemas características de identificação de ATCC números 30021, 30334-30348, 30541-30543, 30555- 30557, 30571, 30572, 30772-30775,30812, 40750, 50050-50060 e 50297-50300. Também preferidassão as cepas mutantes derivadas de qualquer um dos precedentese as misturas dos mesmos. Os microorganismos oleaginosostambém são preferidos. Conforme utilizado no presente,"microorganismos oleaginosos" são definidos comomicroorganismos capazes de acumular mais de 20% do peso desuas células na forma de íipídeos. Microorganismos geneticamentemodificados que produzem LC-PUFAs são também adequados paraa presente invenção. Isto pode incluir naturalmentemicroorganismos produzindo LC-PUFA que foram geneticamentemodificados, assim como microorganismos que não produzemnaturalmente LC-PUFAs, mas que foram criados por engenhariagenética para assim o fazerem.

Os organismos adequados podem serobtidos de diversas fontes disponíveis, incluindo por coleta deambiente natural. A American Type Culture Collection [Coleta deCultura do Tipo Americano] lista atualmente diversas cepaspublicamente disponíveis dos microorganismos identificados acima.Conforme utilizado no presente, qualquer microorganismo ouqualquer tipo específico de organismo, inclui cepas de tipo natural,mutante ou recombinante. As condições de crescimento nas quais ocultivo desses organismos é conhecido na técnica, e as condiçõesde crescimento apropriado para pelo menos alguns dessesorganismos são reveladas, por exemplo, na Patente Norte-Americana número 5.130.242, Patente Norte-Americana número5.407.957, Patente Norte-Americana número 5.397.591, PatenteNorte-Americana número 5.492.938, Patente Norte-Americananumero 5.711.983, Patente Norte-Americana número 5.882.703,Patente Norte-Amerieana número 6.245.365 e Patente Norte-Amerieana número 6.607.900, das quais todas são incorporadas nopresente por referência em sua integralidade.

Os óleos microbianos úteis na presenteinvenção podem ser recuperados a partir de fontes microbianas porqualquer meio adequado conhecido àqueles com conhecimento datécnica. Por exemplo, os óleos podem ser recuperados por extraçãocom solventes, tais como clorofórmio, hexano, cloreto de metileno,metanol e similares ou por extração de fluido supercrítico. De formaalternativa, os óleos podem ser extraídos utilizando técnicas deextração, conforme descritas na Patente Norte-Americana número6.750.048 e Pedido de Patente PCT Serial N0 US01/01806, ambosdepositados em 19 de janeiro de 2001, e intitulados "Processo deExtração de Solventes", dos quais ambos são incorporados aopresente por referência em sua integridade. As técnicas de extraçãoadicional e/ou purificação são ensinadas no Pedido de Patente PCTSerial N0 PCT/IB01/00841 intitulado "Método para o Fracionamentodas Matérias-Primas Nativas Contendo Lipídeo Oleoso e Polar",depositado em 12 de abril de 2001; Pedido de Patente PCT SerialN0 PCT/IB01/00963 intitulado "Método para o Fracionamento deMatérias-Primas Nativas Contendo Lipídeo Oleoso e PolarUtilizando Solvente Orgânico Solúvel em Água e Centrifugação",depositado em 12 de abril de 2001; Pedido de Patente ProvisóriaNorte-Americana Serial N0 60/291.484 intitulado "Produção e Usode uma Fração Rica em Lipídeo Polar Contendo ÁcidoEstearidônico e Ácido Linoléico Gama de Sementes de Planta eMicróbios, depositado em 14 de maio de 2001; Pedido de PatenteProvisória Norte-Americana Serial N0 60/290.899 intitulado"Produção e Uso de uma Fração de Lipídeo Polar Contendo ÁcidosGraxos Ômega 3 e/ou Ômega 6 Altamente Insaturados deMicróbios, Sementes de Planta Geneticamente Modificadas eOrganismos Marinhos", depositado em 14 de maio de 2001;Patente Norte-Americana N0 6.399.803 intitulada "Processo para aSeparação dos Filtração Compreendendo um Resíduo de ÁcidoDocosahexaenóico derivado de uma Mistura de Filtração", emitidaem 04 de junho de 2002, depositada em 17 de fevereiro de 2000; ePedido de Patente PCT Serial N0 USOI/01010 intitulado "Processopara Fazer uma Mistura Enriquecida de Esteres de Ácido GraxoPoliinsaturado", depositado em 11 de janeiro de 2001; dos quaistodos são incorporados ao presente por referência em suaintegralidade. Os óleos extraídos podem ser evaporados sobpressão reduzida para produzir uma amostra de material oleosoconcentrado. Os processos para o tratamento da enzima dabiomassa para a recuperação dos lipídeos são revelados no Pedidode Patente Provisória Norte-Americana N0 60/377.550, intitulado"LIPÍDEOS DE ALTA QUALIDADE E MÉTODOS PARA APRODUÇÃO POR LIBERAÇÃO ENZIMÁTICA DA BIOMASSA",depositado em 03 de maio de 2002; Pedido de Patente PCT SerialN0 PCT/US03/14177 intitulado "LIPÍDEOS DE ALTA QUALIDADE EMÉTODOS PARA A PRODUÇÃO POR LIBERAÇÃO ENZIMÁTICADA BIOMASSA", depositado em 05 de maio de 2003; Pedido dePatente Co-Pendente Norte-Americana N0 10/971.723, intitulado"LIPÍDEOS DE ALTA QUALIDADE E MÉTODOS PARA APRODUÇÃO POR LIBERAÇÃO DA BIOMASSA", depositado em 22de outubro de 2004; Publicação da Patente EP 0776356 e PatenteNorte-Americana N0 5.928.696, ambas intituladas "Processo para aextração de produtos nativos que não são solúveis em água,derivados de misturas de substância nativa por força centrífuga",cujas revelações são incorporadas ao presente por referência aopresente em sua integralidade.

Em configurações preferidas, os óleosmicrobianos crus da invenção são óleos microbianos crus de altaqualidade preparados por processos, conforme descrito acima. Osreferidos óleos da presente invenção possuem vantagenssignificativas sobre, por exemplo, óleos de peixe que fornecemtipicamente óleos crus de baixa qualidade, por exemplo, porque arecuperação da biomassa do peixe tipicamente envolve o cozimentoe a extração do hexano e porque o óleo pode conter contaminantese/ou outros componentes indesejáveis e/ou perfis de ácido graxoindesejáveis.

A fração microbiana contendo óleo, a qualcompreende pelo menos um LC-PUFA extraído de uma biomassamicrobiana conforme descrito acima, inclui pelo menos um LC-PUFA (ou seja, PUFAs possuindo 20 ou mais carbonos). Os PUFAspreferidos da presente invenção incluem C20, C22 ou C24 PUFAsômega 3 ou ômega 6. Preferivelmente, o PUFA é um PUFA decadeia longa (LC-PUFA)1 compreendendo um ácido graxopoliinsaturado C20 ou C22 ômega 3 ou C20 ou C22 ômega 6. UmLC-PUFA da presente invenção contém pelo menos duas ligaçõesduplas e preferivelmente três ligações duplas, e ainda maispreferivelmente pelo menos quatro ligações duplas. Os PUFAspossuindo 4 ou mais ligações de carbono-carbono insaturadastambém são comumente referidos como ácidos graxos altamenteinsaturados ou HUFAs. Em particular, o LC-PUFA pode incluir ácidodocosahexaenóico (pelo menos aproximadamente 10,aproximadamente 20, aproximadamente 30, aproximadamente 40,aproximadamente 50, aproximadamente 60, aproximadamente 70ou aproximadamente 80 por cento do peso dos ácidos graxostotais), ácido docosapentaenóico n-3 (pelo menosaproximadamente 10, aproximadamente 20, aproximadamente 30,aproximadamente 40, aproximadamente 50, aproximadamente 60,aproximadamente 70 ou aproximadamente 80 por cento do pesodos ácidos graxos totais), ácido docosapentaenóico n-6 (pelomenos aproximadamente 10, aproximadamente 20,aproximadamente 30, aproximadamente 40, aproximadamente 50,aproximadamente 60, aproximadamente 70 ou aproximadamente80 por cento do peso dos ácidos graxos totais), ácido araquidônico(pelo menos aproximadamente 10, aproximadamente 20,aproximadamente 30, aproximadamente 40, aproximadamente 50,aproximadamente 60, aproximadamente 70 ou aproximadamente80 por cento do peso dos ácidos graxos totais) e/ou ácidoeicosapentaenóico (pelo menos aproximadamente 10,aproximadamente 20, aproximadamente 30, aproximadamente 40,aproximadamente 50, aproximadamente 60, aproximadamente 70ou aproximadamente 80 por cento do peso dos ácidos graxostotais). Os PUFAs podem se apresentar em qualquer uma dasformas comuns nos lipídeos naturais, incluindo, entre outros, ostriacilgliceróis, diacilgliceróis, monoacilgliceróis, fosfolipídios, ácidosgraxos livres, ácidos graxos esterificados ou formas derivadas innatura ou sintéticas desses ácidos graxos (por exemplo, sais decálcio dos ácidos graxos, ésteres de etila, etc); em configuraçõespreferidas, a fração contendo óleo microbiano compreende pelomenos aproximadamente 70% do peso dos PUFAs na fração naforma de filtração, pelo menos aproximadamente 80% do peso, pelomenos aproximadamente 90% do peso e pelo menosaproximadamente 95% do peso.

O termo LC-PUFA, conforme utilizado napresente invenção, pode se referir a qualquer óleo compreendendoum único LC-PUFA ômega 3, como um DHA, um óleocompreendendo um único LC-PUFA ômega 6, como um ARA ouDPA n-6 ou um óleo compreendendo uma mistura dos dois ou maisLC-PUFAs1 como um DHA, DPA n-6, ARA e EPA. Emconfigurações preferidas, o produto compreende um LC-PUFA emcombinação com pelo menos um outro nutriente.

Além da utilização de uma biomassamicrobiana para a extração dos óleos, a presente invenção tambéminclui o uso de sementes oleosas como uma biomassa para aextração ou recuperação de LC-PUFAs. Tais óleos extraídos deuma biomassa de semente oleosa podem ser processados etratados conforme revelado no presente para produzir produtosoleosos. Por exemplo, as sementes oleosas de qualquer plantasuperior, e particularmente plantas consumíveis, incluindo plantasde colheita e especialmente plantas utilizadas para seus óleos. Taisplantas podem incluir, por exemplo: canola, soja, colza, linhaça,milho, açafroa, girassol e tabaco. Outras plantas preferidas incluemaquelas plantas que são conhecidas por produzir compostosutilizados como agentes farmacêuticos, agentes aromatizantes,agentes nutracêuticos, ingredientes alimentícios funcionais ouagentes cosmeticamente ativos ou plantas que são criadas porengenharia genética para produzir esses compostos/agentes. Asplantas preferidas particularmente incluem plantas que foramgeneticamente modificadas para produzir LC-PUFAs, tais comoplantas em cujos genes para um sistema de síntese policetídeaforam introduzidos. Por exemplo, tais genes e métodos detransformação de planta são revelados na Publicação PCT N0 WO02/083870 A2, Publicação PCT N0 WO 2004/087879 A2,Publicação PCT N0 WO 2000/42195 A2, Publicação de PatenteNorte-Americana N0 US-2005-0100995- Al, Pedido de PatenteProvisória Norte-Americana Serial N0 60/671.656, depositado em 15de abril de 2005, e Publicação de Patente Norte-Americana N0 US-2005-0014231-Al, dos quais todos são incorporados ao presentepor referência.

Tais sementes são tratadas por métodosconvencionais para a recuperação de óleos, tais como por limpeza,descascamento e moagem. As sementes podem ser entãoprensadas para produzir um óleo ou entrar em contato com umsolvente, como após o descascamento, para extrair um óleo. Ossolventes adequados podem incluir solventes orgânicos, solventesmiscíveis em água e água. Um solvente preferido é o hexano.

Uma outra característica dos produtosoleosos contendo PUFA em diversas configurações da invenção éque eles contêm ácidos graxos saturados que são pelo menossuficientes para afetar visualmente a fração contendo óleo. Muitosprodutos oleosos contendo PUFA contêm quantias suficientes deácidos graxos saturados em formas que, em temperatura ambiente(ou seja, 20°C), afetam visualmente o óleo, como ao causaropacidade no óleo. Alguns dos referidos produtos são semelhantesa uma pasta uniforme, devido à presença de ácidos graxossaturados, por exemplo porque contêm ácidos graxos saturadossuficientes na forma de filtração. Enquanto se encontram em umprocessamento convencional, os referidos produtos oleosos sãowinterizados para remover os ácidos graxos saturados, a presenteinvenção reconhece que os produtos comercialmente valiosospodem ser preparados a partir dos referidos produtos oleosos sema winterização, conforme discutido com mais detalhes abaixo.

Nas configurações preferidas da presenteinvenção, os óleos possuem um perfil de lipídeo particularmenteadequado para a produção de composições sólidas ou semi-sólidas, compreendendo LC PUFAs. De forma mais particular, osreferidos óleos são relativamente concentrados em compostosaltamente insaturados (por exemplo, 4, 5 ou mais pontos deinsaturação), relativamente concentrados em compostos saturadose/ou relativamente não concentrados em compostos mono, di e tri-saturados. Tais composições podem ser caracterizadas comopossuindo uma distribuição bimodal de compostos em termos desaturação, ou seja, grandes quantias de compostos saturados egrandes quantias de compostos altamente insaturados, com poucasquantias de compostos com quantias intermediárias de insaturação.Por exemplo, os referidos óleos podem possuir mais deaproximadamente 20% por peso, mais de aproximadamente 25%por peso, mais de aproximadamente 30% por peso, mais deaproximadamente 35% por peso, mais de aproximadamente 40%por peso, mais de aproximadamente 45% por peso ou mais deaproximadamente 50% por peso de compostos altamenteinsaturados possuindo 4 ou mais pontos de insaturação. Em outrasconfigurações, os referidos óleos podem apresentar mais deaproximadamente 20% por peso, mais de aproximadamente 25%por peso, mais de aproximadamente 30% por peso, mais deaproximadamente 35% por peso, mais de aproximadamente 40%por peso, mais de aproximadamente 45% por peso ou mais deaproximadamente 50% por peso de compostos altamenteinsaturados possuindo 5 ou mais pontos de insaturação. De formaalternativa ou além disso, os referidos óleos podem apresentar maisde aproximadamente 30% por peso, mais de aproximadamente35% por peso, mais de aproximadamente 40% por peso, mais deaproximadamente 45% por peso ou mais de aproximadamente 50%por peso de compostos saturados. De forma alternativa ou alémdisso, os referidos óleos podem apresentar menos deaproximadamente 25% por peso, menos de aproximadamente 20%por peso, menos de aproximadamente 15% por peso, menos deaproximadamente 10% por peso ou menos de aproximadamente5% por peso de compostos mono, di ou tri-saturados.

Um processo da invenção para a produçãode produtos oleosos contendo PUFA de alta qualidademinimamente processado, compreendendo pelo menos um LC-PUFA ainda inclui o tratamento da fração contendo óleo extraído,produzido conforme descrito acima. Outro tratamento ainda incluium processo de evaporação a vácuo para produzir um produtooleoso que compreende pelo menos um LC-PUFA.

O processo de dissolubilidade ou secagempor evaporação a vácuo elevado é geralmente conhecido na técnicae inclui a exposição de um óleo extraído às condições de vácuo,preferivelmente em temperaturas elevadas (por exemplo, deaproximadamente 50°C para aproximadamente 70°C). Por exemplo,o óleo pode ser exposto a um vácuo superior a um vácuo deaproximadamente 100 mm Hg, superior a um vácuo deaproximadamente 70 mm Hg e superior a um vácuo deaproximadamente 50 mm Hg. Conforme utilizado no presente, porexemplo, a referência a "a um vácuo superior a um vácuo deaproximadamente 100 mm Hg" significa um vácuo mais forte como,por exemplo, um vácuo de 90 mm Hg ou de 80 mm Hg. De acordocom essas condições, quaisquer solventes, água ou outroscomponentes no óleo extraído possuindo um ponto de ebuliçãoabaixo do óleo serão descartados.

O processo da desodorização é geralmenteconhecido na técnica e inclui a exposição de um óleo extraído àscondições de vácuo para remover quaisquer componentes depouco peso molecular que possam estar presentes. Tipicamente,esses componentes são removidos ao se espalhar com vapor emtemperaturas elevadas, sob um vácuo elevado. Por exemplo, o óleoé geralmente exposto a vácuos superiores aos observados acimapara a dissolubilidade. Especificamente, o vácuo pode ser umvácuo superior a um vácuo de aproximadamente 50 mm Hg,superior a um vácuo de aproximadamente 25 mm Hg, superior a umvácuo de aproximadamente 12 mm Hg, superior a um vácuo deaproximadamente 6 mm Hg e tipicamente pode estar entre umvácuo de aproximadamente 12 mm Hg e um vácuo deaproximadamente 6 mm Hg ou estar entre um vácuo deaproximadamente 6 mm Hg e um vácuo de aproximadamente 1 mmHg. Este processo também destrói muitas ligações de peróxido quepodem estar presentes e reduz ou remove os odores e ajuda amelhorar a estabilidade do óleo. Além disso, sob essas condições,os solventes, água ou outros componentes do óleo extraídopossuindo um ponto de ebulição abaixo do óleo serão descartados.A desodorização é tipicamente realizada em temperaturaselevadas, tais como temperaturas entre aproximadamente 190°C eaproximadamente 220°C.

O produto oleoso resultante deste processo éum óleo contendo PUFA de alta qualidade que é utilizado ouadequado para o consumo por humanos e animais não humanos.Ou seja, as propriedades organolépticas do óleo são de tal formaque o consumo do produto é aceitável para humanos e animais nãohumanos. De forma específica, o produto oleoso pode conter baixasconcentrações de ácidos graxos livres, valores fosforosos, valoresde peróxido, valores de anisidina, sabões e metais pesados. Aprodução deste óleo pela presente invenção minimiza a quantia deprocessamento posterior necessário para trazer um óleo microbianoem condições comerciais aceitáveis. As modificações específicasincluem a eliminação da etapa de winterização de um solvente, aeliminação de um processo de refinamento cáustico, a eliminaçãode um processo de filtração por resfriamento e a possíveleliminação de um processo de branqueamento. Além disso, umprocesso de evaporação a vácuo elevado pode ser substituído porum processo de desodorização. A descrição do processoprecedente facilita a produção de um produto sólido ou semi-sólidoao reter a presença de compostos saturados suficientes para evitarque a composição se torne líquida em temperatura ambiente (ouseja, aproximadamente 20°C). A invenção permite a produção deóleos comestíveis a partir de óleos microbianos crus comrecuperações excepcionalmente elevadas (95-100%), as quais sãocompatíveis com o setor natural e/ou orgânico do mercado.

Em diversas configurações, os produtosoleosos da presente invenção, tais como óleos produzidos semserem expostos a uma ou mais das etapas de processamentoconvencional de winterização do solvente, processo de refinamentocáustico, processo de filtração por resfriamento e um processo debranqueamento, possuem baixas concentrações de ácidos graxoslivres. A medição das concentrações de ácidos graxos livres dosóleos é bem conhecida na técnica. Mais particularmente, os óleosda invenção podem apresentar um conteúdo de ácido graxo livre demenos de aproximadamente 0,5% do peso, menos deaproximadamente 0,1% do peso e menos de aproximadamente0,05% do peso.

Em diversas configurações, os produtosoleosos da presente invenção, tais como os óleos produzidos semestarem expostos a uma ou mais etapas do processamentoconvencional de winterização do solvente, processo de refinamentocáustico, processo de filtração por resfriamento e um processo debranqueamento, possuem valores fosforosos baixos. A medição dosvalores fosforosos dos óleos é bem conhecida na técnica. Maisparticularmente, os óleos da invenção podem apresentar um valorfosforoso de menos de aproximadamente 10 ppm, menos deaproximadamente 5 ppm e aproximadamente 0 ppm.

Em diversas configurações, os produtosoleosos da presente invenção, tais como os óleos produzidos semestarem expostos a uma ou mais etapas de processamentoconvencional da winterização do solvente, processo de refinamentocáustico, processo de filtração por resfriamento e um processo debranqueamento, possuem valores baixos de peróxido. A mediçãodos valores de peróxido dos óleos é bem conhecida na técnica.Mais particularmente, os óleos da invenção podem apresentar umvalor de peróxido de menos de aproximadamente 2 meq/kg, menosde aproximadamente 1 meq/kg e aproximadamente 0 meq/kg.

Em diversas configurações, os produtosoleosos da presente invenção, tais como os óleos produzidos semestarem expostos a uma ou mais das etapas de processamentoconvencional da winterização do solvente, processo de refinamentocáustico, processo de filtração por resfriamento e um processo debranqueamento, possuem valores de anisidina baixos. A mediçãodos valores de anisidina dos óleos é bem conhecida na técnica.Mais particularmente, os óleos da invenção podem apresentar umvalor de anisidina de menos de aproximadamente 5, menos deaproximadamente 3, menos de aproximadamente 2, menos deaproximadamente 1, menos de aproximadamente 0,5, menos deaproximadamente 0,3, menos de aproximadamente 0,1 e abaixo dadetecção.

Em diversas configurações, os produtosoleosos da presente invenção, tais como óleos produzidos semestarem expostos a uma ou mais etapas de processamentoconvencional de winterização de solvente, processo de refinamentocáustico, processo de filtração por resfriamento e um processo debranqueamento, possuem baixas concentrações de sabões. Amedição das concentrações de sabão dos óleos é bem conhecidana técnica. Mais particularmente, os óleos da invenção podemapresentar conteúdos de sabão de menos de aproximadamente 5%do peso, menos de aproximadamente 2,5% do peso e de 0% dopeso.

Em diversas configurações, os produtosoleosos da presente invenção, tais como os óleos produzidos semestarem expostos a uma ou mais etapas de processamentoconvencional da winterização do solvente, processo de refinamentocáustico, processo de filtração por resfriamento e um processo debranqueamento, possuem valores baixos de metal pesado. Amedição dos valores de metal pesado dos óleos é bem conhecidana técnica. Mais particularmente, os óleos da invenção podemapresentar concentrações de Fe de menos de aproximadamente 1ppm, menos de aproximadamente 0,5 ppm e preferivelmenteaproximadamente 0 ppm; as concentrações de Pb de menos deaproximadamente 1 ppm, menos de aproximadamente 0,2 ppm epreferivelmente aproximadamente 0 ppm; as concentrações de Hgde menos de aproximadamente 0,1 ppm, menos deaproximadamente 0,04 ppm e preferivelmente aproximadamente 0ppm; as concentrações de Ni de menos de aproximadamente 0,1ppm, menos de aproximadamente 0,01 ppm e preferivelmenteaproximadamente 0 ppm; as concentrações de Cu de menos deaproximadamente 1 ppm, menos de aproximadamente 0,2 ppm epreferivelmente aproximadamente 0 ppm.

Os processos da presente invenção paraproduzir produtos oleosos contendo PUFA de alta qualidademinimamente processados, possuindo pelo menos um LC-PUFA,podem incluir de forma opcional uma etapa de branqueamento doproduto oleoso tanto antes quanto depois da etapa dedesodorização ou da etapa de fracionamento a alto vácuo, emborasejam mais comumente conduzidos antes da etapa dedesodorização. O branqueamento dos óleos é bem conhecido natécnica e pode ser realizado por processos convencionais. De formaespecífica, por exemplo, um adsorvente de sílica (tais como, Trysil600 (Grace Chemicals) para a remoção do sabão remanescente euma argila utilizada para o clareamento pode ser introduzido aoóleo e depois descartado. De forma típica, o adsorbente de sílica éadicionado antes da argila para clareamento.

Os processos da presente invenção paraproduzir produtos oleosos contendo PUFA de alta qualidadepossuindo pelo menos um LC-PUFA podem incluir um processopara produzir uma fração de óleo líquido contendo LC PUFA e umproduto de gordura sólida contendo LC PUFA. O referido processoinclui uma etapa de fracionamento de um óleo microbiano cru dealta qualidade, conforme revelado no presente, em um produtooleoso e produto de gordura sólida relacionada. Os referidosprodutos oleosos crus podem ser preparados ao extrair uma fraçãocontendo óleo, contendo pelo menos um LC-PUFA e ácidos graxossaturados de uma biomassa microbiana. A fração contendo óleopode ser tratada por winterização, filtração por resfriamento,evaporação a vácuo e/ou outros meios para produzir um produtooleoso líquido, compreendendo pelo menos um LC-PUFA e umproduto sólido compreendendo pelo menos um LC-PUFA. Taisoutros meios podem incluir a filtração para separar a fração de óleolíquido de uma composição sólida.

Os componentes de fração sólida(possivelmente incluindo adsorbentes) podem ser recuperados portécnicas de separação de sólido / líquido. Quaisquer adsorbentespodem ser separados da fração sólida ao aquecer os adsorbentes eo material de gordura sólida para derreter o material de gordurasólida. Os adsorbentes podem então ser separados dos sólidosderretidos, por filtração, por exemplo, e os sólidos derretidos podementão ser resolidificados por resfriamento.

A fração de sólido recuperado conterá umnível elevado de LC PUFA. Em configurações preferidas, a fraçãosólida compreenderá pelo menos aproximadamente 20%, pelomenos aproximadamente 25%, pelo menos aproximadamente 30%por peso de LC PUFA e em particular DHA. Cada um dos óleosclaros e o sólido poderá ser utilizado como um alimento ou umsuplemento alimentar, por exemplo.

Os produtos oleosos produzidos emconformidade com a presente invenção podem ser materiais sólidosou semi-sólidos. Conforme utilizado no presente, o termo "óleo"incluirá os materiais que são sólidos ou semi-sólidos emtemperatura ambiente, assim como os materiais que são líquidosem temperatura ambiente.

Os processos da presente invenção paraproduzir produtos oleosos contendo PUFA de alta qualidademinimamente processados possuindo pelo menos um LC-PUFApodem incluir de forma opcional uma etapa de fracionamento doóleo em uma fração de oleína e uma fração de estearina após aetapa de desodorização ou a etapa de fracionamento a vácuoelevado. O fracionamento dos óleos em oleína e frações deestearina pode ser aplicado em qualquer óleo cru ou clareado oudesodorizado para produzir uma fração de oleína clara e umafração de estearina dura. Devido às diferenças em suaspropriedades físicas, a oleína e a estearina podem ser utilizadas emdiferentes aplicações alimentícias. Em processos convencionais, aestearina é um subproduto de winterização de miscella e filtraçãopor resfriamento e tende a resultar em perdas de -30%. Ofracionamento permite a produção de uma fração de estearinapossível de ser vendida. Um exemplo deste fracionamento émostrado abaixo, no Exemplo 5.

Com referência à Figura 1, diversasconfigurações alternativas da presente invenção são ilustradas.Uma matéria-prima, como uma biomassa, tal como uma biomassaseca por pulverização pode estar sujeita ao tratamento por umsolvente para a extração de um óleo cru. Os referidos óleos crusincluirão ácidos graxos poliinsaturados de cadeia longa. O óleo crupode estar sujeito à evaporação a vácuo elevado, que removerá aextração de solventes, água e outros componentes no óleo crupossuindo um menor ponto de ebulição do que os componentesdesejados do óleo. De forma alternativa, o óleo cru pode estarsujeito a uma etapa opcional de branqueamento, tal como pararernover os carotenóides. O óleo cru tratado de forma opcional é,então, sujeito à desodorização ao espalhar o óleo com vapor emtemperaturas elevadas, sob vácuo elevado. O produto oleoso finalproduzido pela evaporação a vácuo elevado ou pela desodorizaçãopode então ser tratado de forma opcional ao fracionar em umafração de oleína e uma fração de estearina.

Com referência à Figura 2, diversasconfigurações alternativas da presente invenção são ilustradas poruma planilha. Em sua forma mais básica, o processo deve incluir asetapas de se iniciar com um caldo de fermentação pasteurizadacontendo biomassa microbiana. O caldo é pré-tratado para liberaróleo das células por dissolução, tal como pelo tratamentoenzimático ou rompimento mecânico. O caldo com fermentação pré-tratada é então exposto a uma etapa de extração para produzir umóleo microbiano. No mínimo, o processo então inclui uma etapa dedesodorização conforme descrito no presente. Em um processoalternativo, o processo inclui uma etapa de branqueamento atravésda qual o óleo microbiano extraído é exposto ao branqueamentoantes da etapa de desodorização. Em outras configuraçõesalternativas, as etapas de winterização (ou seja, filtração porresfriamento) podem ser conduzidas no óleo microbiano extraídoantes da etapa de branqueamento e/ou entre a etapa debranqueamento e desodorização.

Os processos para a produção de óleosminimamente processados da presente invenção e os produtosresultantes possuem diversas vantagens significativas. Emcomparação aos métodos convencionais de produção dos produtosoleosos contendo PUFA, a presente invenção possui um customenor, exigências reduzidas de processamento, aumento dorendimento de fabricação, aumento da segurança das etapas doprocessamento e eliminação do desperdício / fluxos desubprodutos. Além disso, o processo atual é consistente com osetor de mercado natural e/ou orgânico. Os métodos convencionaisde processamento de óleo utilizam tipicamente todas as facetas doprocessamento posterior, incluindo o refinamento químico. Osmétodos de refinamento físico (ou seja, métodos que não envolvemrefinamento cáustico) não foram estendidos ao óleo de peixe eóleos similares contendo PUFA, possivelmente por causa dasdificuldades conhecidas no processamento dos referidos óleos.Além disso, muitos dos métodos de processamento físicoconhecidos ou produtos menos refinados são limitados por causadas limitações de odor e sabor. De forma surpreendente, oprocesso da invenção produz óleos com sabor mais agradávelutilizando métodos físicos e etapas mínimas.

Conforme descrito de forma mais completaabaixo, os produtos oleosos contendo PUFA de alta qualidade dapresente invenção podem ser utilizados em diversos produtosalimentícios e aplicações. Os produtos oleosos podem serconsumidos diretamente por humanos como um produto nutricional,alimentício, medicinal ou farmacêutico. Além disso, os produtosoleosos podem ser combinados com qualquer alimento ou líquidoconhecido para o consumo por humanos para melhorar a nutrição.Os produtos oleosos também podem servir de alimentação aosanimais diretamente como uma alimentação ou como umcomplemento à alimentação animal. Desta forma, quaisquerprodutos alimentícios com base em animais podem possuir umaqualidade melhorada ao serem consumidos por humanos.

Nesta configuração, os produtos oleosos dapresente invenção podem ser utilizados para complementar oalimento substituto do leite materno para bebês. O alimentosubstituto do leite materno para bebês pode ser complementadocom, por exemplo, um óleo fisicamente refinado derivado de ummicroorganismo que produz ARA, como Mortierella alpina ouMortierella sect. schmuckeri, tanto sozinho como em combinaçãocom outros óleos, tais como óleo de peixe ou óleos adicionais ricosem DHA1 tais como óleos microbianos, incluindo óleos DHA-S™ eDHA-T™ (Martek Biosciences, Columbia, MD). Tais óleos contendoARA fisicamente refinados não teriam sido quimicamente refinados.De forma alternativa, o alimento substituto do leite materno parabebês pode ser complementado com, por exemplo, um óleominimamente processado derivado de um microorganismo queproduz DHA, tais como Crypthecodinium cohnii, tanto sozinhoquanto em combinação com outros óleos ricos em ARA, incluindoARASCO® (Martek Biosciences, Columbia, MD). Em umaconfiguração adicional, o alimento substituto do leite materno parabebês pode ser complementado com diversos óleos da presenteinvenção que são derivados de mais de uma fonte como, porexemplo, um óleo minimamente processado contendo DHA (porexemplo, de Crypthecodinium cohnii) e um óleo fisicamente refinadocontendo ARA (por exemplo, de Mortierella alpina).

Em outras configurações, os produtosoleosos da presente invenção podem ser combinados para produziruma mistura. Por exemplo, um óleo minimamente processado deCrypthecodinium cohnii pode ser misturado com um óleofisicamente refinado de Mortierella alpina e a mistura resultantepode ser utilizada para complementar o alimento substituto do leitematerno para bebês. As misturas de óleos contendo ARA e deóleos contendo DHA utilizando óleos da presente invenção podemser produzidas em uma variedade de razões diferentes de ARA aDHA. Tais misturas podem incluir razões de ARA:DHA deaproximadamente 1:1a aproximadamente 2:1. De forma maisparticular, as misturas podem ser produzidas possuindo razões deARA:DHA de aproximadamente 1:1, 1,25:1, 1,5:1, 1,75:1 ou 2:1.

Em uma configuração particularmentepreferida, os produtos oleosos contendo PUFA de alta qualidade, dapresente invenção, podem ser utilizados como uma matéria-primapara as composições de gordura sólida que são descritas comdetalhes abaixo. Deve ser apreciado, no entanto, que o uso dosprodutos oleosos minimamente processados da invenção não élimitado a uma matéria-prima para a composição de gordura sólidaque é descrita no presente.

Os inventores descobriram de formasurpreendente que nas configurações preferidas da composição degordura sólida da presente invenção, uma forma não winterizada deum óleo rico LC-PUFA, incluindo um óleo contendo ácidodocosahexaenóico derivado de micróbio não winterizado (óleoDHA), pode ser utilizado como uma matéria-prima para ascomposições de gordura sólida da presente invenção.

Os processos para a fabricação das referidascomposições podem evitar, com isso, a necessidade dehidrogenação dos óleos, a mistura desses óleos com gordurasduras ou saturadas ou outros agentes do tipo espessante.Tipicamente, os óleos refinados, ou seja, óleos líquidos de peixe ouóleos microbianos, são produzidos como um óleo cru inicial quedepois é exposto às etapas de refinamento (que remove osfosfolipídios e os ácidos graxos livres) e de branqueamento (pararemover os pigmentos). O óleo é então tipicamente winterizado pararemover gorduras saturadas.

Os inventores descobriram de formasurpreendente que, por exemplo, um óleo microbiano nãowinterizado, ou seja, onde a etapa de winterização não foi realizada,fornece uma matéria-prima que não requer os tratamentosdemonstrados na técnica anterior para formar uma composiçãosólida. Além disso, os óleos de semente oleosa não winterizados,conforme descrito acima, podem ser utilizados como umaalternativa aos óleos microbianos conforme descrito abaixo. Sem selimitar à teoria, os inventores acreditam que as gorduras saturadaspresentes no óleo winterizado fornecem uma consistência maissólida ao óleo (conforme comparado ao óleo líquido winterizado).Os métodos da presente invenção para a produção de umacomposição de gordura sólida também superam a tendência de umóleo winterizado parecer granuloso (devido à cristalização dostriglicerídeos) fazendo com que os referidos óleos não winterizadospareçam como um óleo líquido espesso com partículas. Aopermanecer em temperatura ambiente, o óleo winterizado sesepara, produzindo um produto que parece como um óleo líquidoespesso com sólidos nele. A presente invenção pode superar estacaracterística do óleo não winterizado. Os processos da presenteinvenção produzem um produto suave de aparência uniforme que éestável (sem nenhuma separação aparente) quando deixado emtemperatura ambiente. O produto resultante pode ter a consistênciade margarina culinária.

Em uma outra configuração, a presenteinvenção inclui um método para a produção de uma composição degordura sólida. O método inclui a etapa de mistura de um óleo queinclui gordura saturada e um óleo microbiano com pelo menos umLC-PUFA com pelo menos um emulsificante para formar umamistura. A mistura é então solidificada para formar uma composiçãode gordura sólida.

Uma "composição de gordura sólida" serefere a uma composição que é sólida ou semi-sólida emtemperatura ambiente (ou seja, 20°C). As propriedades físico-químicas das gorduras e óleos incluem sua viscosidade etemperatura de fusão. De forma preferível, uma composição degordura sólida terá uma temperatura de fusão de pelo menosaproximadamente 20°C, pelo menos aproximadamente 25°C, pelomenos aproximadamente 30°C e preferível mente pelo menosaproximadamente 35°C. As temperaturas de fusão irão variar emsua exatidão dependendo do número de diferentes entidadesquímicas que estiverem presentes. Tipicamente, a mistura dediversos triglicerídeos possui um ponto de fusão inferior ao queseria previsto com base nos pontos de fusão dos triglicerídeosindividuais. A mistura também terá uma variação de fusão maisampla do que a dos componentes individuais. Os monoglicerídeos eos diglicerídeos possuem pontos de fusão superiores aostriglicerídeos da composição de ácido graxo similar. Emconfigurações preferidas, a composição de gordura sólidapermanecerá macia o suficiente para se espalhar em produtosalimentícios. De forma preferível, em temperaturas ambiente, acomposição será viscosa, terá retardado as propriedades do fluxoe/ou será mais aderente às superfícies que as matérias-primas dasquais o produto é feito.

O óleo utilizado nos métodos da invençãopara produzir uma composição de gordura sólida inclui um óleomicrobiano com pelo menos um LC-PUFA. As fontes e métodosmicrobianos para o crescimento de microorganismos quecompreendem nutrientes e/ou LC-PUFAs para a recuperação emóleos microbianos são conhecidos na técnica conforme descrito nodetalhe acima na descrição dos óleos minimamente processados dapresente invenção. Tais fontes e métodos microbianos sãoadequados da mesma forma para a produção de óleos microbianose para a matéria-prima para as composições de gordura sólida dapresente invenção. De fato, os óleos minimamente processadosconforme descrito acima são uma matéria-prima preferida para aprodução de composições de gordura sólida. Deve ser apreciado,no entanto, que uma ampla variedade de outras matérias-primas deóleo microbiano, conforme descrito abaixo, pode ser utilizada comomatérias-primas para as composições de gordura sólida dapresente invenção. Em uma configuração particularmente preferida,o óleo microbiano é um óleo produzido de acordo com asrevelações no Pedido de Patente PCT Serial N0 PCT/IBOI/00841intitulado "Método para o Fracionamento de Óleo e Matérias-PrimasNativas Contendo Lipídeos Polares", depositado em 12 de abril de2001, publicado como WO 01/76715, e Pedido de Patente PCTSerial N0 PCT/IBO 1/00963 intitulado "Método para oFracionamento de Óleo e Matérias-Primas Nativas ContendoLipídeos Polares Utilizando Solvente Orgânico Solúvel em Água eCentrifugação", depositado em 12 de abril de 2001, publicado comoWO 01/76385. As revelações nesses dois pedidos PCT descrevemum processo de recuperação de óleo microbiano que pode sergeralmente mencionado como o processo de Friolex.

O óleo microbiano da invenção inclui pelomenos um LC-PUFA (ou seja, PUFAs possuindo 20 ou maiscarbonos). Os PUFAs preferidos da presente invenção incluemC20, C22 ou C24 PUFAs ômega 3 ou ômega 6. Preferivelmente, oPUFA é um PUFA de cadeia longa (LC-PUFA), compreendendo umácido graxo poliinsaturado C20 ou C22 ômega 3 ou C20 ou C22ômega 6. Um LC-PUFA da presente invenção contém pelo menosduas ligações duplas e preferivelmente três ligações duplas, e aindamais preferivelmente pelo menos quatro ligações duplas. Os PUFAspossuindo 4 ou mais ligações de carbono-carbono insaturadastambém são comumente referidos como ácidos graxos altamenteinsaturados ou HUFAs. Em particular, o LC-PUFA pode incluir ácidodocosahexaenóico (pelo menos aproximadamente 10,aproximadamente 20, aproximadamente 30, aproximadamente 40,aproximadamente 50, aproximadamente 60, aproximadamente 70ou aproximadamente 80 por cento do peso dos ácidos graxostotais), ácido docosapentaenóico n-3 (pelo menosaproximadamente 10, aproximadamente 20, aproximadamente 30,aproximadamente 40, aproximadamente 50, aproximadamente 60,aproximadamente 70 ou aproximadamente 80 por cento do pesodos ácidos graxos totais), ácido docosapentaenóico n-6 (pelomenos aproximadamente 10, aproximadamente 20,aproximadamente 30, aproximadamente 40, aproximadamente 50,aproximadamente 60, aproximadamente 70 ou aproximadamente80 por cento do peso dos ácidos graxos totais), ácido araquidônico(pelo menos aproximadamente 10, aproximadamente 20,aproximadamente 30, aproximadamente 40, aproximadamente 50,aproximadamente 60, aproximadamente 70 ou aproximadamente80 por cento do peso dos ácidos graxos totais) e/ou ácidoeicosapentaenóico (pelo menos aproximadamente 10,aproximadamente 20, aproximadamente 30, aproximadamente 40,aproximadamente 50, aproximadamente 60, aproximadamente 70ou aproximadamente 80 por cento do peso dos ácidos graxostotais). Os PUFAs podem se encontrar em qualquer uma dasformas comuns encontradas nos lipídeos naturais incluindo, entreoutros, os triacilgliceróis, diacilgliceróis, monoacilgliceróis,fosfolipídios, ácidos graxos livres, ácidos graxos esterificados ouformas derivadas in natura ou sintéticas desses ácidos graxos (porexemplo, sais de cálcio dos ácidos graxos, ésteres de etila, etc).Nas configurações preferidas, o óleo microbiano compreende pelomenos aproximadamente 70% do peso dos PUFAs no óleo naforma de triglicerídeo, pelo menos aproximadamente 80% do peso,pelo menos aproximadamente 90% do peso e pelo menosaproximadamente 95% do peso. O termo LC- PUFA1 conformeutilizado na presente invenção, pode se referir a um óleocompreendendo um único LC-PUFA ômega-3, como um DHA, umóleo compreendendo um único LC-PUFA ômega 6, como um ARAou DPA n-6 ou um óleo compreendendo uma mistura de dois oumais LC-PUFAs, como DHA, DPA n-6, ARA e EPA. Emconfigurações preferidas, o produto compreende um LC-PUFA emcombinação com pelo menos um outro nutriente.

Nas configurações preferidas da invenção, oóleo utilizado nos métodos da invenção para produzir umacomposição de gordura sólida pode incluir pelo menosaproximadamente 5% do peso, pelo menos aproximadamente 10%do peso, pelo menos aproximadamente 15% do peso, pelo menosaproximadamente 20% do peso de LC-PUFA, pelo menosaproximadamente 25% do peso, pelo menos aproximadamente30% do peso, pelo menos aproximadamente 35% do peso de LC-PUFA, pelo menos aproximadamente 40% do peso, pelo menosaproximadamente 45% do peso e pelo menos aproximadamente50% do peso de LC-PUFA. As referidas configurações tambémpodem apresentar menos de aproximadamente 30% do peso,menos de aproximadamente 35% do peso, menos deaproximadamente 40% do peso menos de aproximadamente 45%do peso de LC-PUFA, menos de aproximadamente 50% do peso,menos de aproximadamente 55% do peso, menos deaproximadamente 60% do peso, menos de aproximadamente 65%do peso de LC-PUFA e menos de aproximadamente 70% do pesode LC-PUFA.

O óleo utilizado nos métodos da invençãopara produzir uma composição de gordura sólida, além de um óleomicrobiano com pelo menos um LC-PUFA, inclui gordura saturada.As gorduras saturadas terão tipicamente um ponto de fusãosuperior ao LC-PUFA ou mistura de LC-PUFAs. A referida gordurasaturada pode ser adicionada ao óleo de forma exógena. Asgorduras saturadas preferidas adicionadas de forma exógena paraacrescentar incluem "gorduras duras", tais como óleos vegetaisparcialmente hidrogenados, óleos completamente hidrogenados,banhas de porco parcialmente hidrogenadas e óleos tropicais não-trans. Por exemplo, azeite de dendê e óleo de palmiste e fraçõesdos mesmos (oleína de dendê e oleína de palmiste e estearina dedendê e estearina de palmiste) podem ser utilizados. Quando acomposição inclui uma gordura adicionada de forma exógena, oóleo LC-PUFA pode ou não ser winterizado. Uma quantia preferidade gordura adicionada de forma exógena pode ser determinada poruma pessoa habilidosa na técnica, dependendo do grau de solideze/ou viscosidade da matéria-prima e do grau desejado de solideze/ou viscosidade e/ou consistência de distribuição da composição.

As gorduras adicionadas de forma exógena podem ser adicionadasem quantias de aproximadamente 20% do peso a aproximadamente60% do peso, de aproximadamente 30% do peso aaproximadamente 50% do peso e de aproximadamente 35% dopeso a aproximadamente 45% do peso.

Nas configurações preferidas, a gordurasaturada não é adicionada de forma exógena, mas ocorrenaturalmente no óleo microbiano. Por exemplo, óleos microbianoscompreendendo LC-PUFAs podem ser óleos não processadosextraídos por qualquer meio conhecido na técnica. Nos referidosóleos, a quantia de gorduras saturadas no óleo microbiano pode serde aproximadamente 20% do peso a aproximadamente 60% dopeso, de aproximadamente 30% do peso a aproximadamente 50%do peso e de aproximadamente 35% do peso a aproximadamente45% do peso.

Nas configurações preferidas da presenteinvenção, o óleo microbiano não é winterizado (ou seja, nãofracionado) e conterá, portanto, gorduras saturadas. A winterizaçãose refere ao processo de remoção de sedimentos (tipicamente,gorduras saturadas sólidas altamente derretidas) que aparecem emmuitos óleos, incluindo óleos vegetais, em baixa temperatura, maistipicamente envolvendo a remoção da quantidade de materialcristalizado por filtração para evitar a opacidade das fraçõeslíquidas em temperaturas de refrigerador. Tais técnicas incluem aseparação de óleos em duas ou mais frações com pontos de fusãodiferentes. O líquido separado e as frações sólidas exibemdiferenças significativas nas propriedades físicas e químicas. Astécnicas adequadas são conhecidas na técnica e incluemtipicamente as seguintes três etapas: (i) resfriamento do óleo líquidopara supersaturação, resultando na formação dos núcleos para acristalização, (ii) crescimento progressivo dos cristais porresfriamento gradual e (iii) separação das fases líquida e cristalina.Essas técnicas podem incluir, por exemplo, a winterizaçãoconvencional, o fracionamento de detergente e a winterização desolvente. A winterização convencional inclui a cristalizaçãofracionada seca, caracterizado pelo fato que os triglicerídeos com atemperatura de fusão mais elevada se cristalizam preferivelmentedurante o resfriamento da gordura pura líquida ou derretida. Oprincípio do processo de fracionamento seco é baseado noresfriamento do óleo sob condições controladas sem a adição deprodutos químicos. As fases líquida e sólida são separadas pormeios mecânicos. O princípio do fracionamento de detergente ésimilar ao fracionamento seco com base no resfriamento do óleosob condições controladas sem a adição de um solvente.

Subseqüentemente, as fases líquida e sólida são separadas porcentrifugação após uma solução de detergente aquoso ter sidoadicionada. A winterização do solvente (tipicamente a acetona) éutilizada para promover a formação do cristal de triglicerídeos,porque os triglicerídeos em baixas temperaturas geralmente formamcristais mais estáveis com solvente do que sem solvente. Nofracionamento auxiliado por solvente, os solventes polar ou nãopolar podem ser utilizados para reduzir a viscosidade do sistemadurante a filtração. As frações obtidas são então liberadas dosolvente por destilação. Dessa forma, os óleos microbianos nãowinterizados são os que não estavam expostos a um processo dewinterização ou fracionamento.

Em outras configurações ainda preferidas, oóleo microbiano não é hidrogenado, nem parcialmente hidrogenado.

A hidrogenação é conhecida na técnica, e inclui processos de gásde hidrogênio quimicamente adicionados a uma gordura líquida napresença de um catalisador. Este processo converte pelo menosalgumas das ligações duplas de ácidos graxos não saturados nasmoléculas de gordura em ligações simples, com isso aumentando ograu de saturação da gordura. O grau de hidrogenação, que é onúmero total de ligações duplas que são convertidas, determina aspropriedades físicas e químicas da gordura hidrogenada. Um óleoque foi parcialmente hidrogenado geralmente retém um grausignificativo de insaturação em seus ácidos graxos. A hidrogenaçãotambém resulta na conversão de algumas ligações duplas àconfiguração trans na qual uma ou mais ligações duplas migrou auma nova posição na cadeia de ácido graxo. Os estudos atuaisindicam que os ácidos graxos trans podem elevar o colesterol totale o risco de cardiopatia para aproximadamente a mesma extensãocomo os ácidos graxos saturados e são, portanto, indesejáveis nadieta. A presente invenção permite a formação de um produto sólidoou semi-sólido sem a necessidade de hidrogenação ouhidrogenação parcial.O presente método inclui a mistura de pelomenos um emulsificante com o óleo, incluindo um óleo microbianopossuindo pelo menos um LC-PUFA. Os emulsificantes preferidospara serem utilizados com a presente invenção são ummonoglicerídeo, um diglicerídeo, uma combinação demono/diglicerídeo, uma lecitina, um mono-diglicerídeo lactilato, uméster poliglicerol, um éster de ácido graxo de sacarose, estearoillactilato sódico, um estearoil Iactilato de cálcio e combinações dosmesmos; em uma configuração preferida, o emulsificante é umacombinação de mono/diglicerídeo. Em uma configuração preferida,o emulsificante está presente na mistura em uma quantia de entreaproximadamente 0,01 por cento do peso e aproximadamente 2,0por cento do peso, em uma quantia de entre aproximadamente0,025 por cento do peso e aproximadamente 1,0 por cento do pesoe em uma quantia de entre aproximadamente 0,05 por cento dopeso e aproximadamente 0,2 por cento do peso. Sem se limitar àteoria, acredita-se que um emulsificante pode agir para fornecerestabilidade entre diversos componentes na mistura para manteruma composição homogênea. A ausência de estabilidade poderesultar na separação dos óleos ou separação do óleo e uma fasede água. Os emulsificantes também podem fornecer atributosfuncionais além da emulsificação, que inclui aeração, complexo deamido e proteína, hidratação, modificação de cristal, solubilização edispersão.

A etapa física da mistura do emulsificantecom o óleo é conduzida de qualquer forma convencional de misturaconhecida na técnica. As composições são misturadas para atingira mistura, tais como para atingir uma solução líquida homogênea.Por exemplo, pode ser necessário aquecer o óleo microbiano e/ou oemulsificante, por exemplo, a pelo menos aproximadamente 40°C,de forma que as composições sejam completamente líquidas emiscíveis entre si. Em uma configuração preferida, o óleo é um óleorico LC- PUFA não winterizado e é aquecido a pelo menosaproximadamente 40° C para solubilizar todos os componentes doóleo. O emulsificante é, em uma configuração preferida, umamistura de emulsificantes mono e diglicerídeos que são aquecidospara formar um líquido em um recipiente separado do óleo. O óleo eemulsificante derretidos são então misturados juntamente por ummétodo conhecido, preferivelmente por agitação para formar umamistura contínua.

O presente método também inclui asolidificação da mistura do óleo e do emulsificante para formar umacomposição de gordura sólida. Por exemplo, em uma configuraçãopreferida na qual a mistura encontra-se acima da temperaturaambiente, a mistura pode conseguir se resfriar em uma temperaturaambiente. De forma alternativa, a mistura pode ser resfriada deforma ativa em temperatura ambiente ou, por exemplo, abaixo datemperatura ambiente. Por exemplo, a composição pode serresfriada a entre aproximadamente O0C a aproximadamente 3o Cpara se solidificar. Durante a etapa de resfriamento, independentede ser ativo ou passivo, a mistura pode ser misturada ou agitada.Desta maneira, o resfriamento pode ser controlado de forma que oresfriamento uniforme seja atingido sem a criação de umacomposição estratificada. Preferivelmente, as referidas condiçõesde resfriamento são ajustadas de forma a permitir o ajuste parapossibilitar que a estrutura do cristal da gordura (ou seja, a maneirapela qual as moléculas se orientam no estágio sólido) para atingiros níveis desejados resultando na plasticidade, funcionalidade eestabilidade desejada do produto. Em geral, os cristais β-primeresultam em uma consistência suave e cremosa. Os cristais β sãotipicamente maiores, mais ásperos e mais granulosos que oscristais β -prime e, da mesma forma, são tipicamente menosdesejáveis. Da mesma forma, nas configurações preferidas, oprocesso de resfriamento é controlado de forma a permitir que ostriglicerídeos na mistura atinjam as configurações estáveis de β -prime para produzir um produto apresentando uma consistênciasuave. Os métodos para resfriar que permitem as referidas formasde cristalização preferidas incluem o resfriamento da mistura emuma taxa de entre aproximadamente PC/min e aproximadamente20°C/min, entre aproximadamente 5°C/min e aproximadamente15°C/min e aproximadamente 10°C/min. Sem se limitar à teoria, osinventores acreditam que alguns emulsificantes adequados para ouso na presente invenção, tais como os mono e diglicerídeos, agempara pelo menos influenciar parcialmente e/ou controlar acristalização de triglicerídeos na composição do resultado noscristais β -prime. De forma preferível, pelo menos aproximadamente50% do peso das gorduras e/ou óleos na composição de gordurasólida, pelo menos aproximadamente 55% do peso, pelo menosaproximadamente 60% do peso, pelo menos aproximadamente65% do peso, pelo menos aproximadamente 70% do peso, pelomenos aproximadamente 75% do peso, pelo menosaproximadamente 80% do peso, pelo menos aproximadamente85% do peso, pelo menos aproximadamente 90% do peso, pelomenos aproximadamente 95% do peso ou aproximadamente 100%do peso estão na configuração de cristal β -prime.

Em outras configurações, a etapa dasolidificação da mistura do óleo e do emulsificante para formar umacomposição de gordura sólida pode incluir a introdução donitrogênio durante toda a mistura. Por exemplo, o nitrogênio podeser borbulhado na composição. De forma alternativa, o nitrogêniopode ser introduzido juntamente com a emulsão em um cristalizadorde baixa temperatura.

A introdução do nitrogênio durante asolidificação pode aumentar a estabilidade oxidativa do produto epode melhorar a aparência do produto ao fornecer uma aparênciabrilhante.

Em configurações preferidas, a composiçãoda gordura sólida da presente invenção possui uma texturahomogênea e, portanto, possui uma aparência e consistênciauniforme. Outra característica dessas configurações é que acomposição é estável, e não se separa em estado estável ou deoutra forma perde sua textura homogênea, preferivelmente porperíodos prolongados de tempo. Dessa forma, a composição nãodesenvolve uma aparência ou consistência não-uniforme ou emestado estável. Nas configurações preferidas, a composição dapresente invenção pode permanecer pelo menos aproximadamenteum dia, pelo menos aproximadamente uma semana, pelo menosaproximadamente duas semanas, pelo menos aproximadamentetrês semanas e pelo menos aproximadamente quatro semanas emtemperatura ambiente sem se separar ou de outra forma perder suatextura homogênea.

A composição da presente invenção tambémpode incluir diversos ingredientes funcionais adicionais. Porexemplo, as composições da presente invenção podem ainda incluirmicroencapsulantes incluindo, por exemplo, proteínas, carboidratossimples e complexos, sólidos e particulados. Osmicroencapsulantes preferidos incluem particulados celulares, gomaacácia, maltodextrina, amido hidrofobicamente modificado,polissacarídeos, incluindo alginato, carboximetilcelulose e Agar-Agar, polissacarídeos hidrofobicamente modificados, tais comoamidos substituídos por octila, proteínas, incluindo proteína do sorode leite isolado, proteínas da soja e caseinato sódico ecombinações dos mesmos. Além disso, as composições dainvenção podem incluir surfactantes, incluindo, por exemplo,agentes aniônicos, agentes catiônicos, agentes noniônicos, agentesanfotéricos, agentes emulsificantes insolúveis em água, partículasfinamente divididas e materiais que ocorrem naturalmente. Osagentes aniônicos incluem ácidos carboxílicos, ésteres sulfúricos,ácidos sulfônicos de alcano, ácidos sulfônicos aromáticos dealquila, diversos grupos hidrofílicos aniônicos; os agentes catiônicosincluem os sais, os compostos de amônia, outras bases denitrogênio, bases não-nitrogenadas; os agentes noniônicos incluemuma ligação de éter ao grupo de solubilização, ligação de éster,ligação de amido, ligações misturadas, ligações múltiplas; osagentes anfotéricos incluem amino e carbóxi, amino e ésteressulfúricos, amino e ácidos sulfônicos de alcano, amino e ácidossulfônicos aromáticos, combinações misturadas de grupos básicose acídicos; os agentes de emulsificação insolúvel na água incluemgrupos hidrofílicos iônicos, grupos hidrofílicos não-iônicos; aspartículas finamente divididas incluem qualquer partícula finamentedividida não solubilizada incluindo argilas e carbono; os materiaisque ocorrem naturalmente incluem alginatos, gomas solúveis naágua derivadas da celulose, lipídeos e esteróis, fosfolipídios, ácidosgraxos, álcoois, proteínas, aminoácidos, detergentes; e colóideshidrofílicos. Outros ingredientes opcionais incluem os agentes deespessamento que incluem os polissacarídeos. Os espessantes sãoingredientes que são utilizados para aumentar a viscosidade dacomposição. Em tais configurações, o(s) ingrediente(s) funcional(is)adicional(is) é/são tipicamente adicionado(s) durante a etapa damistura.

Em uma configuração, a composição degordura sólida é uma margarina culinária. As gorduras paraculinária tipicamente possuem pouca ou nenhuma água adicionadaou componente aquoso e compreendem níveis elevados degorduras. De forma alternativa, a composição da gordura sólidapode ser um produto como uma margarina, patê, maionese oumolho para salada. Os referidos produtos são preparados comgorduras e/ou óleo misturados com outros ingredientes, como águae/ou produtos derivados do leite, proteínas comestíveis adequadas,sal, aromatizante e materiais para coloração e Vitaminas A e D. Amargarina tipicamente contém pelo menos 80% de gordura. Amaionese e o molho para salada são alimentos gordurosos semi-sólidos que tipicamente contêm não menos de 65% e 30% de óleovegetal, respectivamente, e ovos inteiros secos ou gemas de ovo.Sal, açúcar, especiarias, temperos, vinagre, suco de limão e outrosingredientes completam esses produtos.

Da mesma forma, as composições dapresente invenção podem ainda incluir a presença ou a adição deum líquido solúvel em água à mistura. Preferivelmente, o líquidosolúvel em água é água e é adicionado em uma quantia de menosde aproximadamente 10% do peso, entre aproximadamente 1% dopeso e aproximadamente 10% do peso, entre aproximadamente 2%do peso e aproximadamente 8% do peso, entre aproximadamente4% do peso e aproximadamente 6% do peso. A presença de umlíquido solúvel em água permite o acréscimo de um ou maisingredientes solúveis em água adicionais. Qualquer ingredientesolúvel em água é adequado para a presente invenção. Umingrediente adicional preferido inclui antioxidantes, aromatizantes,melhoradores de sabor, edulcorantes, pigmentos, vitaminas,minerais, compostos prebióticos, compostos probióticos,ingredientes terapêuticos, ingredientes medicinais, ingredientesalimentícios funcionais, ingredientes de processamento ecombinações dos mesmos.

Em uma configuração particularmentepreferida, o ingrediente adicional é um antioxidante. Osantioxidantes são conhecidos na técnica, e podem ser adicionadosa qualquer ponto da produção do óleo microbiano por fermentaçãoou processamento de lipídeo ou durante os processos da presenteinvenção. Os antioxidantes podem ajudar a preservar os produtosresultantes da deterioração oxidativa. Os antioxidantes adequadospodem ser escolhidos pelo técnico. Os antioxidantes preferidosincluem ascorbil palmitato, tocoferóis, ácido cítrico, ácido ascórbico,butil hidroquinona terciária (TBHQ), extrato de alecrim, Iecitina emisturas dos mesmos. Os antioxidantes podem ser incluídos emprodutos em quantias que são convencionais na técnica. Osantioxidantes particularmente preferidos incluem ácido ascórbico ouum sal de ácido ascórbico. Em configurações preferidas, quando oantioxidante é ácido ascórbico ou um sal de ácido ascórbico, elepode ser adicionado em quantias de até aproximadamente 5% dopeso, incluindo quantias que variam de aproximadamente 0,5% dopeso a aproximadamente 5% do peso, de aproximadamente 1,5%do peso a aproximadamente 5% do peso e de aproximadamente3% do peso a aproximadamente 5% do peso. Deve-se observarque, quando um antioxidante solúvel em água, como o ácidoascórbico, ácido cítrico ou sais do mesmo são adicionados, eledeve ser acrescentado com água, de forma que seja bemdispersado na composição. De forma surpreendente, descobriu-seque o nível de aumento na estabilidade oxidativa dos produtos dapresente invenção é superior ao esperado para a quantia deantioxidante utilizado e, em particular, quando o antioxidante éácido ascórbico ou um sal de ácido ascórbico. Por exemplo, oacréscimo de aproximadamente 5% do peso de ácido ascórbico ouseu sal aumenta o OSI (índice de estabilidade oxidativa) de umacomposição da presente invenção em três vezes.

O estado e estabilidade oxidativa de umacomposição, incluindo um lipídeo, pode ser medido de diversasformas conhecidas na técnica e as descrições de muitas dessastécnicas encontram-se disponíveis na American Oil ChemisfsSociety [Sociedade Norte-Americana de Químicos e Óleo], assimcomo em outras fontes. Um método de quantificar a estabilidadeoxidativa de um produto é pela medição do índice de EstabilidadeOxidativa (OSI)1 como pelo uso do instrumento de Rancimat1 quemede a quantia de espécies condutoras (produtos de decomposiçãovolátil) que são envolvidas a partir de uma amostra conforme éexposta à decomposição térmica. Nas configurações preferidas, ascomposições da presente invenção possuem valores de OSI depelo menos aproximadamente 10, pelo menos aproximadamente20, pelo menos aproximadamente 30, pelo menosaproximadamente 40, pelo menos aproximadamente 50 e pelomenos aproximadamente 60.

Nas configurações preferidas, os produtos dapresente invenção (incluindo os produtos oleosos contendo PUFAde alta qualidade e as composições de gordura sólida) sãoarmazenados sob condições apropriadas para minimizar adegradação oxidativa. Muitos métodos para afetar as referidascondições de armazenagem são conhecidos na técnica e sãoadequados para o uso com a presente invenção, como, porexemplo, a substituição do ar ambiente com uma atmosfera de gásinerte. Um método preferido através do qual reduzir ou minimizar adegradação oxidativa é armazenar os produtos em uma atmosferade nitrogênio (N2) ou nitrogênio misturado e atmosfera de dióxido decarbono. Preferivelmente, os produtos embalados são embaladossob nitrogênio. Os métodos para a produção de uma atmosfera comgás nitrogênio em um recipiente compreendendo um produto sãoconhecidos na técnica. Em outras configurações preferidas, aestabilidade oxidativa e/ou química deste produto também pode seraumentada ao borbulhar nitrogênio à mistura conforme foresfriando, para fornecer uma proteção extra contra a oxidação.

Em outra configuração preferida, os produtosda presente invenção podem compreender um excipientefarmaceuticamente aceitável e/ou um agente adicionadofarmaceuticamente ativo (ou seja, um ingrediente terapêutico ouclinicamente ativo ou combinações do mesmo). Esta configuração éparticularmente vantajosa para os agentes farmaceuticamenteativos que possuem baixa solubilidade em água. Os referidosprodutos farmacêuticos possuem a vantagem de forneceringredientes terapeuticamente ativos juntamente com os nutrientesbenéficos, como os LC-PUFAs. Exemplos de excipientesfarmaceuticamente aceitáveis incluem, entre outros, água, soluçãosalina tamponada de fosfato, solução de Ringer1 solução dedextrose, soluções contendo soro, solução de Hank, outrassoluções aquosas fisiologicamente balanceadas, óleos, ésteres eglicóis. Os agentes farmaceuticamente ativos da presente invençãoincluem, sem limitação, estatinas, agentes anti-hipertensivos,agentes antidiabéticos, agentes antidemência, antidepressivos,agentes antiobesidade, supressores de apetite e agentes paramelhorar a memória e/ou a função cognitiva. Em outra configuraçãopreferida, os produtos da presente invenção podem compreenderingredientes alimentícios tais como ingredientes alimentíciosfuncionais, aditivos alimentícios ou outros ingredientes.

Os produtos da presente invenção podemser utilizados sozinhos como um produto alimentício, produtonutricional ou produto farmacêutico ou podem ser incorporados ouadicionados a um produto alimentício, nutricional ou farmacêutico.Em uma primeira configuração, o produto da invenção é um produtoalimentício que inclui um produto oleoso da presente invenção e umcomponente alimentício. Os produtos podem ser utilizadosdiretamente como um ingrediente alimentício, como um óleo e/oumargarina culinária e/ou patê e/ou outro ingrediente gorduroso embebidas, molhos, laticínios (como leite, iogurte, queijo e sorvete) eassados; ou alternativamente utilizados como produto nutricional,por exemplo, como um suplemento nutricional (em forma decápsula ou comprimido); alimento ou suplemento alimentar paraqualquer animal cuja carne ou produtos sejam consumidos porhumanos; alimento ou suplemento alimentar para qualquer animalde estimação, incluindo, entre outros, cães, gatos e cavalos;suplemento alimentar, incluindo alimentos para bebês e alimentosubstituto do leite materno para bebês. O termo "animal" significaqualquer organismo que pertença ao reino Animalia e inclui, entreoutros, qualquer animal cuja carne de ave, de peixe, de vaca, deporco ou de carneiro é derivada. Os frutos do mar são derivados de,entre outros, peixe, camarão e mariscos. O termo "produtos" incluiqualquer produto exceto a carne derivada dos referidos animais,incluindo, entre outros, ovos, leite ou outros produtos. Ao alimentaros referidos animais, os nutrientes como os LC-PUFAs podem serincorporados à carne, ao leite, aos ovos ou a outros produtos dosreferidos animais para aumentar seu conteúdo desses nutrientes.Além disso, ao alimentar os referidos animais, os nutrientes comoos LC-PUFAs podem melhorar a saúde geral do animal.

As composições da presente invençãopodem ser adicionadas a uma ampla variação de produtos comoprodutos assados, suplementos vitamínicos, suplementosalimentares, bebidas em pó, etc. em diversos estágios de produção.Diversos produtos alimentícios em pós acabados ou semi-acabadospodem ser produzidos utilizando as composições da presenteinvenção.

Uma lista parcial de produtos alimentícioscompreendendo os produtos da presente invenção inclui massaspara pão, massas para bolo, alimentos assados incluindo, porexemplo, os referidos itens como bolos, cheesecakes, tortas,bolinhos, biscoitos, barras, pães, pãezinhos, bolachas, muffins,folhados, broinhas e croutons; produtos alimentícios líquidos, porexemplo, bebidas, energéticos, alimento substituto do leite maternopara bebês, alimentos líquidos, sucos de frutas, xaropesmultivitamínicos, substitutos de refeição, alimentos medicinais exaropes; produtos alimentícios semi-sólidos, como alimentos parabebês, iogurte, queijo, cereal, mistura para panqueca; alimentos embarras, incluindo barrinhas energéticas; carnes processadas;sorvetes; sobremesas congeladas; iogurtes congelados; misturaspara waffle; molhos para salada; e misturas para substituição deovos. Também incluídos estão os produtos assados como biscoitos,biscoitos finos, doces, salgadinhos ricos em cálcio, tortas, barras degranola e torradinhas; salgadinhos como batatinhas, salgadinhos demilho, salgadinhos de milho do tipo tortilhas, pipoca, pretzels, batatafrita e nozes; salgadinhos de especialidades como com molhos,frutas secas, salgadinhos de carne, torremos, barrinhas de cereal ebolos de arroz / milho; e doces de confeitaria como balas.

Outra configuração do produto da presenteinvenção é um alimento medicinal. Um alimento medicinal inclui umalimento que se encontra em uma formulação a ser consumida ouadministrada externamente sob a supervisão de um médico e que édestinada para o controle alimentar específico de uma doença oucondição para a qual as exigências nutricionais distintas, com basenos princípios científicos reconhecidos, são estabelecidas poravaliação médica.

Toda a revelação de cada um dos Pedidosde Patentes Provisórias Norte-Americanas Seriais N0 60/695.996 ePedido de Patente Provisória Norte-Americana Serial N0 60/738.304é incorporada ao presente em sua integralidade por esta referência.

A presente invenção, cuja revelação emtermos de métodos específicos, produtos e organismos, destina-sea incluir todos os referidos métodos, produtos e organismos viáveise úteis de acordo com os ensinamentos revelados no presente,incluindo todas as referidas substituições, modificações eotimizações conforme estariam disponíveis aos com uma habilidadecomum na técnica. Os seguintes exemplos e resultados do testesão fornecidos para fins de ilustração e não se destinam a limitar oescopo da invenção.

EXEMPLOS

Exemplo 1 : Preparação de um Óleo Cru de Alta Qualidade

Os microorganismos Schizochytrium DHAricos em óleo foram cultivados em um fermento para produzir umcaldo de fermentação. O caldo de fermentação foi colhido econtatado com Alcalase®2.4, uma protease que dissolve as célulasde Schizochytrium. A mistura de célula dissolvida resultante foi umaemulsão e foi contatada com uma solução de 27% de isopropanolem água. Esta mistura foi misturada por agitação e depois expostaà centrifugação para produzir um produto substancialmente não-emulsificado possuindo duas fases. A fase pesada continhacomponentes do caldo de fermentação gasto e a fase leve continhaóleo rico em DHA com algum isopropanol e água. A fase leve foisecada para produzir um óleo cru de alta qualidade.

Exemplo 2: Processamento Mínimo do Óleode Alga

Este exemplo ilustra a produção de óleosminimamente processados de acordo com a presente invenção.

Os óleos minimamente processados foramproduzidos em uma grande escala. Duzentos quilos de óleo cru dealta qualidade (produzidos conforme descrito no Exemplo 1)produzidos por um microorganismo Schizochytrium contendo DHA1foram aquecidos em 65°C a 70°C sob nitrogênio. Aproximadamente0,2% (por peso do óleo) de uma solução de 50% de ácido cítrico foientão adicionada ao óleo e misturada por 30 a 45 minutos sobnitrogênio. Subseqüentemente, 0,2 a 0,5% (por peso do óleo) deauxílio de filtro foi adicionado ao óleo e filtrado para removerquaisquer impurezas presentes no óleo. O óleo foi entãodesodorizado a 2100C com uma taxa de alimentação de 180 kg porhora. O óleo desodorizado foi então suplementado com tocoferóis,ascorbil palmitato e extrato de alecrim. As características dos óleosem cada etapa do processo são fornecidas na Tabela 1. O termo"PV" significa valor de peróxido; o termo "FFA" significa ácido graxolivre; e "p-AV" significa valor de p- anisidina. A recuperação desteprocesso foi superior a 98%.<table>table see original document page 67</column></row><table>

Aproximadamente 600 kg do óleo cru de altaqualidade (produzido conforme descrito no Exemplo 1) (FFA <0,3%, Fósforo < 10 ppm, PV < 2 meq/kg) foi tomado e aquecido a50-55°C sob nitrogênio e/ou vácuo. Aproximadamente 0,2 % (w/w)de 50 % de ácido cítrico foi adicionado e o óleo foi mantido a 50-55°C sob nitrogênio e/ou vácuo por 15 minutos. Trisyl 600 (0,1% -3% w/w, geralmente 0,25%) foi adicionado e a temperatura foimantida entre 50-55°C sob nitrogênio e/ou vácuo por 15 minutos.

Tonsil Supreme FF argila para branqueamento (0,1% - 4% w/w,geralmente menos de 0,5%) foi adicionada e o óleo foi aquecido a90-95°C e mantido sob vácuo (> 24" Hg) por 30 minutos. Celite (0,1- 0,5% w/w, geralmente 0,2%) foi então adicionado e o óleo foifiltrado por todo o filtro Sparkler. O óleo foi então desodorizado a210-225°C e a taxa de fluxo de 180-225 kg/lir. Após adesodorização, os antioxidantes foram acrescentados. Este

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Exemplo 3 a: Refinamento físicoprocesso rendeu um óleo que é um semi-sólido em temperaturaambiente.

Os rendimentos do óleo deste processovariaram de ~92-97%. Os dados de qualidade para essasexecuções com antioxidantes são exibidos na Tabela 2.

Tabela 2

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FFAs dos óleos desodorizados forammedidos antes e depois do acréscimo dos antioxidantes. Umaumento significativo em FFAs (aproximadamente 2x) foi observadoapós o acréscimo de antioxidantes.

Exemplo 3b: O refinamento físico do (ÓleoClaro)

Este exemplo ilustra a produção de óleoslíquidos minimamente processados e produtos oleosos sólidosrelacionados de acordo com a presente invenção.

Aproximadamente 1.200 kg do óleo cru dealta qualidade (produzido conforme descrito no Exemplo 1) (FFA <0,3%, Fósforo < 12 ppm, PV < 2 meq/kg) foi tomado e aquecido a50-55°C sob nitrogênio e/ou vácuo. Aproximadamente 0,2 % (w/w)dos 50% do peso de ácido cítrico foi acrescentado e o óleo foimantido a 50-55°C sob nitrogênio e/ou vácuo por 15 minutos. Oóleo foi então resfriado de ~55°C a ~35°C sob nitrogênio e/ou vácuoutilizando diversos períodos de parada (0-12 hrs.) e velocidades doagitador (4-16 rpm). Neste momento, o celite (0,1 - 0,5% w/w,geralmente 0,2%) foi adicionado e o óleo foi filtrado por todo o filtroSparkler. A etapa de filtração por resfriamento foi repetida com oóleo sendo aquecido sob nitrogênio e/ou vácuo e resfriado de~50°C a ~30°C utilizando diversos períodos de parada (0-12 hrs.) evelocidades do agitador (4-16 rpm). Celite (0,1 - 0,5% w/w,geralmente 0,2%) foi adicionado novamente e o óleo foi filtrado portodo o filtro Sparkler. Em seguida, Trisyl 600 (0,1% - 3% w/w,geralmente 0,25%) foi adicionado e a temperatura foi mantida entre50-55°C sob nitrogênio e/ou vácuo por 15 minutos. Tonsil SupremeFF argila de clareamento (0,1% - 4% w/w, geralmente 0,5% oumenos) foi adicionada e o óleo foi aquecido a 90-95°C e mantidosob vácuo (> 24" Hg) por 30 minutos. Celite (0,1 - 0,5% w/w,geralmente 0,2%) foi acrescentado e o óleo foi filtrado por todo umfiltro Sparkler. O óleo foi então resfriado novamente sob nitrogênioe/ou vácuo de -40°C a ~20°C utilizando diversos períodos deparada (0-12 lirs.) e velocidades do agitador (4-16 rpm). Celite (0,1- 0,5% w/w, geralmente 0,2%) foi acrescentado e o óleo foi filtradopor todo um filtro Sparkler. O óleo foi então desodorizado a 210-225°C e a taxa de fluxo de 180-225 kg/lir. Após a desodorização, osantioxidantes foram acrescentados. Isto rende um óleo que é claroem temperatura ambiente. Os rendimentos do óleo deste processovariam de ~55-60%. Os dados da qualidade para essas execuçõescom antioxidantes são mostrados na Tabela 3.Tabela 3

<table>table see original document page 70</column></row><table>

O material retido pelo filtro pode ser tratado,por exemplo, através de aquecimento e filtração, para separar omaterial sólido da argila de branqueamento. Aquecer o materialretido pelo filtro derreterá os sólidos. Os sólidos derretidos podementão ser separados da argila, por filtração, por exemplo, e depoisresolidificados por resfriamento. O sólido recuperado conterá cercade 20-30% PUFA, dos quais a maioria é DHA. O óleo claro e osólido podem ser utilizados como alimento ou aditivo alimentício,por exemplo.

Exemplo 3c: Refinamento físico /

Refinamento de Sílica

Aproximadamente IOOg do óleo cru de altaqualidade (produzido conforme descrito no Exemplo 1) (FFA <0,8%, Fosforo < 10 ppm, PV < 2 meq/kg) foi tomado e aquecido a50-55°C sob nitrogênio. Aproximadamente 0,2 % (w/w) dos 50% dopeso de ácido cítrico foi adicionado e o óleo foi mantido a 50-55°Csob nitrogênio e/ou vácuo por 15 minutos. Subseqüentemente,0,5% - 1,25% w/w de sílica (Brightsorb FIOO) foi adicionado e oóleo foi aquecido a 85°C sob vácuo. Após 30 minutos de tempo deparada, Tonsil Supreme FF argila de branqueamento (0,5% w/w) foiadicionado, o óleo foi aquecido a 90-95°C e mantido sob vácuo (>24" Hg) por 30 minutos. Celite (0,1 - 0,5% w/w, geralmente 0,2%)foi então adicionado e o óleo foi filtrado a vácuo utilizando um funilBuchner após o resfriamento a 60-65°C. Os rendimentos paraesses testes estavam entre 95-96%. Os resultados de qualidadepara esses testes são exibidos na Tabela 4. O produto final foi umóleo semi-sólido. Este produto poderia também ser desodorizadoe/ou branqueado e permaneceria um óleo semi-sólido.

Tabela 4

<table>table see original document page 71</column></row><table>

Modificado

Aproximadamente 600 kg do óleo cru de altaqualidade (produzido conforme descrito no Exemplo 1) com FFA até0,8% (Fósforo < 12 ppm, PV < 2 meq/kg) foi tomado e aquecido a50-55°C sob nitrogênio e/ou vácuo. Aproximadamente 0,2 % (w/w)dos 50% do peso de ácido cítrico foi adicionado e o óleo é mantidoa 50-55°C sob nitrogênio e/ou vácuo por 15 minutos. Nestemomento, 0,1% - 0,5% w/w dos 50% cáusticos foi adicionado aoóleo e mantido a 60-65°C por 15-30 minutos (este é -2-10 vezesmenos cáustico que a quantia padrão utilizada). O óleo foi entãocentrifugado para remover os sabões do óleo. Trisyl 600 (0,1% - 3%w/w, geralmente 0,25%) foi adicionado e a temperatura foi mantidaentre 50-55°C sob nitrogênio e/ou vácuo por 15 minutos. TonsilSupreme FF argila de clareamento (0,1% - 4% w/w, geralmente0,5% ou menos) foi adicionada e o óleo foi aquecido a 90-95°C emantido sob vácuo (> 24" Hg) por 30 minutos. Celite (0,1 - 0,5%w/w, geralmente 0,2%) foi acrescentado e o óleo foi filtrado por todoum filtro Sparkler. O óleo foi então desodorizado a 210- 225°C euma taxa de fluxo de 180-225 kg/hr. Após a desodorização, osantioxidantes foram acrescentados. Este processo rendeu umlíquido semi-sólido.

Os rendimentos de óleo deste processovariam de -81-91%. Os dados da qualidade para essas execuçõescom antioxidantes são mostrados na Tabela 5.

Tabela 5

<table>table see original document page 72</column></row><table>

Modificado / Sem Centrifuqacão

Aproximadamente 100 g do óleo cru de altaqualidade (produzido conforme descrito no Exemplo 1) (FFA <0,3%, Fósforo < 10 ppm, PV < 2 meq/kg) foi tomado e aquecido a50-55°C sob nitrogênio e/ou vácuo. Aproximadamente 0,2 % (w/w)dos 50% do peso de ácido cítrico foi acrescentado e o óleo foimantido a 50-55°C sob nitrogênio e/ou vácuo por 15 minutos. Nestemomento, 0,4% w/w dos 50% cáusticos foi adicionado ao óleo emantido a 60-65°C por 15-30 minutos (isto é ~2-10 vezes menoscáustico que a quantia padrão utilizada). Em seguida, Trisyl 600(1,5% w/w) foi adicionado e a temperatura foi mantida entre 50-55°C sob nitrogênio e/ou vácuo por 15 minutos. Celite (0,2% w/w)foi adicionado ao óleo e foi filtrado a vácuo utilizando um funilBuchner. Tonsil Supreme FF argila para branqueador (1,0% w/w) foiadicionada ao óleo filtrado e foi aquecida a 90- 95°C e mantida sobvácuo (> 24" Hg) por 30 minutos. Celite (0,2% w/w) foi adicionado eo óleo foi filtrado a vácuo utilizando um funil Buchner. Os resultadosde qualidade para este teste são exibidos na Tabela 6. O produtofinal foi um óleo semi-sólido. Este produto poderia também serdesodorizado e/ou branqueado e permaneceria um óleo semi-sólido.

Tabela 6

<table>table see original document page 73</column></row><table>

Exemplo 4: Fracionamento a Seco do Óleo

Cru de Alga

Este exemplo ilustra o fracionamento a secodo óleo cru de alga produzido por um microorganismoSchizochytrium contendo DHA em frações de oleína e estearina deacordo com a presente invenção.

Trezentos e cinqüenta quilos de óleo cruforam expostos ao processo de fracionamento a seco de acordocom a invenção para produzir frações de oleína líquida e deestearina sólida. O derretimento de todas as fases cristalinas dentrodo óleo cru de alga foi garantido pelo aquecimento do mesmo a 60-70°C em um recipiente com agitação. O material foi então resfriadorapidamente a 20-30°C durante a fase pré-resfriamento, com avelocidade do agitador aumentada para 40 rotações por minuto.Para obter o maior coeficiente possível de transferência de calornesta fase, um líquido de resfriamento foi empregado e era águaneste exemplo. Não foi permitido que a temperatura do líquido deresfriamento caísse de forma significativa abaixo da temperatura denucleação.

A fase de nucleação subseqüente foiconduzida dentro do recipiente para agitação e foi iniciada por umaredução da velocidade do agitador a 20 rotações por minuto. Outroresfriamento do óleo foi realizado ao regular a diferença detemperatura existente entre o líquido para resfriamento e o óleo, apartir da temperatura de óleo inicial de 20-30°C, para baixo datemperatura de cristalização de aproximadamente 12- 14°C. Umavez atingida a temperatura de cristalização, a velocidade doagitador foi reduzida para 15 rotações por minuto. O término dacristalização foi obtido ao transferir a suspensão em uma unidadede filtração imediatamente após o ponto de opacidade desejado tersido atingido para o óleo remanescente, a assim chamada fração deoleína que ainda estava presente entre os cristais. Para monitorar oponto de opacidade da fração de oleína, as filtrações de teste dasamostras de suspensão foram realizadas durante a fase decristalização.

Após a suspensão de cristal ter sidotransferida à unidade de filtração, a fase líquida foi prensada portoda a lona do filtro. A câmara do filtro foi carregada com umapressão de compressão que ia aumentando levemente, que foigerada por uma redução do mecanismo do volume da câmara dofiltro, e foi levemente aumentada. A pressão de filtração final atingiu10 bar. Após a filtração, as frações separadas foram pesadas. Orendimento da oleína é o peso do filtrado. O rendimento daestearina é o peso da massa de cristal remanescente no filtro. Osrendimentos das frações de oleína e estearina medidas sãofornecidos na Tabela 7. As composições dos materiais dealimentação, frações de oleína e de estearina são fornecidas naTabela 8.

Tabela 7

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Tabela 8

<table>table see original document page 75</column></row><table><table>table see original document page 76</column></row><table>

As frações de oleína (líquida) e estearina(sólida ou semi-sólida) poderiam ainda ser processadas paraproduzir óleo desodorizado por qualquer um dos métodos deprocessamento mínimo descritos no presente e ilustrados nosexemplos acima ou por qualquer método conhecido na técnicaanterior.

Exemplo 5

O Exemplo a seguir mostra um processo deescala de bancada para a formação de um produto oleoso sólido dainvenção.Um óleo não winterizado extraído por hexanoda biomassa de um microorganismo Schizochytrium foi aquecido a40°C até que todo o material sólido tivesse derretido e um líquidohomogêneo fosse formado. Em um recipiente separado, osemulsificantes de monoglicerídeos e diglicerídeos (DIMODANPTKA1 disponíveis de DANISCO) foram derretidos na mesmatemperatura (4O0C) até completamente líquido. Os emulsificantesderretidos foram então adicionados ao óleo derretido e misturadosem conjunto. A mistura de óleo/emulsificante foi então transferida aum banho com gelo e misturada constantemente enquantoresfriava. O produto resfriado ficou sólido com a consistência deuma margarina culinária. O produto foi então transferido pararecipientes e armazenado.

Exemplo 6

Exemplo a seguir mostra um processo deescala de bancada para a formação de um produto de gordurasólida com a introdução do nitrogênio durante a etapa dasolidificação do produto.

O procedimento foi o mesmo conformediscutido acima no Exemplo 5, exceto que o nitrogênio foiborbulhado em uma taxa de aproximadamente 10 eaproximadamente 50 ml/min na composição conforme resfriava,fornecendo uma estabilidade extra ao produto e alterando ascaracterísticas de cor/físicas do produto de uma aparênciaembaçada a uma aparência de um amarelo brilhante. O produtoresfriado ficou sólido com a consistência de uma margarinaculinária. Após o resfriamento, o produto foi transferido pararecipientes e armazenado.

Exemplo 7O Exemplo a seguir mostra um piloto ou umprocesso em grande escala para a formação de um produto degordura sólida.

Um óleo não winterizado extraído por hexanoda biomassa de um microorganismo Schizochytrium foi aquecido a40°C até que todos os materiais sólidos se derretessem e umlíquido homogêneo fosse formado. Em um recipiente separado, osemulsificantes, conforme o Exemplo 5, foram derretidos na mesmatemperatura (40°C) até ficarem completamente líquidos. Osemulsificantes derretidos foram então adicionados ao óleo derretido(HM) e misturados juntamente. A emulsão de líquido quente foiintroduzida a uma proveta com gelo com agitação para imitar umcomutador de aquecimento de uma superfície raspada para resfriar.A composição foi resfriada de aproximadamente 40°C paraaproximadamente 0°C em cerca de quatro minutos. Durante esteprocesso, o nitrogênio foi introduzido à composição em uma taxa deentre aproximadamente 10 e aproximadamente 50 ml/min. Após oresfriamento, a gordura cristalizada resultante foi então transferidaaos recipientes e armazenada.

Exemplo 8

O Exemplo a seguir mostra um processopiloto ou de grande escala para a formação de um produto degordura sólida com óleo e nutrientes adicionados.

A mistura do emulsificante e do óleo foipreparada conforme descrito no Exemplo 7. Conforme a misturaesfriava, ela foi constantemente misturada e a água foiacrescentada a 5% por peso, resultando em um produto com umaconsistência levemente diferente. O ácido ascórbico como um ácidolivre foi então adicionado à mistura em aproximadamente 5% porpeso. O ácido fólico foi então adicionado à mistura poraproximadamente 0,0008% por peso. A gordura cristalizadaresultante foi então transferida aos recipientes e armazenada.

Exemplo 9

O Exemplo a seguir mostra o aumento naestabilidade oxidativa para as composições da presente invençãocontendo ácido ascórbico e contendo ácido ascórbico e ácido fólico.

Uma composição de gordura sólida dainvenção foi preparada em conformidade com o Exemplo 5. Ascomposições de gordura sólida adicionalmente contendo ácidoascórbico (5% do peso) e água (5% do peso) e contendo ácidoascórbico (5% do peso), ácido fólico (0,0008% do peso) e água (5%do peso) foram preparadas em conformidade com o Exemplo 1 pelaintrodução de ingredientes adicionais durante a etapa deresfriamento. As composições resultantes foram avaliadas comrelação à estabilidade oxidativa e os resultados são apresentadosna Figura 3. Como pode ser observado, o acréscimo de ácidoascórbico e água mais que triplicou o valor de OSI da composiçãoda base. Além disso, o acréscimo de ácido fólico à composição comácido ascórbico e água aumentou a estabilidade oxidativa dacomposição.

Exemplo 10: Composições misturadascontendo óleos minimamente processados

O óleo rico em DHA do Exemplo 3a e 3dacima foram misturados com ARASCO® (Martek Biosciences,Columbia, MD) em uma razão de 2: 1 para produzir misturas deóleo contendo ARA e DHA.

As Características de Qualidade dacomposição misturada feitas com DHA e ARASCO® minimamenteprocessados

<table>table see original document page 80</column></row><table><table>table see original document page 81</column></row><table>

Exemplo 11

O exemplo a seguir mostra um processo emescala reduzida para a formação de um produto de gordura sólidacom óleo de Schizochytrium e estearina de dendê.

Um óleo não winterizado plenamenterefinado produzido da biomassa de um microorganismoSchizochytrium foi aquecido a 40-50°C sob nitrogênio até que todoo material sólido fosse derretido e um líquido homogêneo fosseformado. Em um recipiente separado, a estearina de dendê(disponível pela Ciranda Inc., Hudson1 Wl) foi derretida na mesmatemperatura (40-50°C) até ficar completamente líquida. A razão doóleo não winterizado à estearina de dendê utilizada foi de 75 a 25(%, w/w). Subseqüentemente, a estearina de dendê derretida foimisturada com o óleo não winterizado de Schizochytrium. Em outrorecipiente, os emulsificantes de monoglicerídeo e diglicerídeo(sendo Dimodan 930-KA ou Grindsted PS 219/B K- A1 disponívelpela Danisco1 Dinamarca) foram aquecidos a 70-75°C até que umlíquido homogêneo fosse formado. A mistura do óleo derretido (óleonão winterizado e estearina de dendê) foi então adicionada aoemulsificante derretido e misturado juntamente. A formulaçãolíquida quente foi resfriada a 15°C em um lote refrigerante sobnitrogênio e com agitação. Uma vez atingida a temperatura decristalização, a formulação foi mantida por 1 hora a 15°C comagitação. A formulação da gordura cristalizada resultante foi entãotransferida para recipientes e armazenada. Os resultados sãoexibidos abaixo na Tabela 9.

Tabela 9

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Exemplo 12

O exemplo a seguir mostra um processo emescala reduzida para a formação de um produto de gordura sólidacom óleo de Schizochytrium e estearina de palmiste.

Um óleo não winterizado plenamenterefinado produzido da biomassa de um microorganismoSchizochytrium foi aquecido a 40-50°C sob nitrogênio até que todoo material sólido fosse derretido e um líquido homogêneo fosseformado. Em um recipiente separado, a estearina de palmiste(disponível pela Ciranda Inc., Hudson, Wl) foi derretida na mesmatemperatura (40-50°C) até ficar completamente líquida. As razõesdo óleo não winterizado à estearina de palmiste variaram de 75: 25a 80:20 (%, w/w). Subseqüentemente, a estearina de palmistederretida foi misturada com um óleo não winterizado deSchizochytrium. Em outro recipiente, os emulsificantes demonoglicerídeo e diglicerídeo (sendo Dimodan 930-KA ou GrindstedPS 219/B K- A, disponível pela Danisco, Dinamarca) foramaquecidos a 70-75°C até que um líquido homogêneo fosse formado.

A mistura oleosa derretida (óleo não winterizado e estearina depalmiste) foi então adicionada ao emulsificante derretido emisturada em conjunto. A formulação líquida quente foi resfriada a15°C em um lote resfriador sob nitrogênio e com agitação. Uma vezatingida a temperatura de cristalização, a formulação foi mantidapor 1 hora a 15°C com agitação. A formulação da gorduracristalizada resultante foi então transferida para recipientes earmazenada. Os resultados são exibidos abaixo na Tabela 10.

Tabela 10

<table>table see original document page 83</column></row><table><table>table see original document page 84</column></row><table>

Exemplo 13

O exemplo a seguir mostra um processo emescala reduzida para a formação de um produto de gordura sólidacontendo óleo Schizochytrium e estearina de palmiste comantioxidantes adicionados.

Um óleo não winterizado plenamenterefinado produzido pela biomassa de um microorganismoSchizochytrium foi misturado com 0,2% (w/w) de antioxidantes(contendo 10% de tocoferol e 10% de ascorbil palmitato) e aquecidoa 40-50°C sob nitrogênio até que todo o material sólido fossederretido e um líquido homogêneo fosse formado. Em um recipienteseparado, a estearina de palmiste (disponível pela Ciranda Inc.,Hudson, Wl) foi derretida na mesma temperatura (40-50°C) até ficarcompletamente líquida. A razão de óleo não winterizado à estearinade palmiste foi utilizada em 75: 25 (%, w/w). Subseqüentemente, aestearina de palmiste derretida foi misturada com um óleo nãowinterizado de Schizochytrium. Em outro recipiente, osemulsificantes de monoglicerídeo e diglicerídeo (sendo Dimodan930-KA ou Grindsted PS 219/B K- A, disponível pela Danisco,Dinamarca) foram aquecidos a 70-75°C até que um líquidohomogêneo fosse formado. A mistura oleosa derretida (óleo nãowinterizado e estearina de palmiste) foi então adicionada aoemulsificante derretido e misturada em conjunto. A formulaçãolíquida quente foi resfriada a 15°C em um lote refrigerador sobnitrogênio e com agitação. Uma vez atingida a temperatura decristalização, a formulação foi mantida por 1 hora a 15°C comagitação. A formulação da gordura cristalizada resultante foi entãotransferida para recipientes e armazenada. Os resultados sãoexibidos abaixo na Tabela 11.

Tabela 11

<table>table see original document page 85</column></row><table>

Exemplo 14

O exemplo a seguir mostra um processo emescala reduzida para a formação de um produto de gordura sólidacom óleo Schizochytrium e estearina de palmiste contendo 10-20%(w/w) de DHA.

Um óleo não winterizado plenamenterefinado produzido pela biomassa de um microorganismoSchizochytrium foi misturado com 0,2% (w/w)de antioxidantes(contendo 10% de tocoferol e 10% de ascorbil palmitato) e aquecidoa 40-50°C sob nitrogênio até que todo o material sólido fossederretido e um líquido homogêneo fosse formado. Em um recipienteseparado, a estearina de palmiste (disponível pela Ciranda Inc.,Hudson, Wl) foi derretida na mesma temperatura (40-50°C) até ficarcompletamente líquida. A razão de óleo não winterizado à estearinade palmiste foi utilizada em 60: 40 (%, w/w). Subseqüentemente, aestearina de palmiste derretida foi misturada com óleo nãowinterizado de Schizochytrium. Em outro recipiente, osemulsificantes de monoglicerídeos e diglicerídeos (tanto Dimodan930-KA quanto Grindsted PS 219/B K-A, disponíveis pela Danisco,Dinamarca) foram aquecidos a 70-75°C até que um líquidohomogêneo fosse formado. A mistura oleosa derretida (óleo nãowinterizado e estearina de palmiste) foi então adicionada aoemulsificante derretido e misturada em conjunto. A formulaçãolíquida quente foi resfriada a 15°C em um lote refrigerador sobnitrogênio e com agitação. Uma vez atingida a temperatura decristalização, a formulação foi mantida por 1 hora a 15°C comagitação. A formulação da gordura cristalizada resultante foi entãotransferida para recipientes e armazenada. Os resultados sãoexibidos abaixo na Tabela 12.

Tabela 12

<table>table see original document page 86</column></row><table><table>table see original document page 87</column></row><table>

Exemplo 15

O exemplo a seguir mostra um processo emescala reduzida para a formação de um produto de gordura sólidacom óleo Schizochytrium e estearina de palmiste contendo 20-30%(w/w) de DHA.

Um óleo não winterizado plenamenterefinado produzido pela biomassa de um microorganismoSchizochytrium foi misturado com 0,2% (w/w) de antioxidantes(consiste em 10% de tocoferol e 10% de ascorbil palmitato) eaquecido a 40-50°C sob nitrogênio até que todo o material sólidofosse derretido e um líquido homogêneo fosse formado. Em umrecipiente separado, a estearina de palmiste (disponível pelaCiranda Inc., Hudson1 Wl) foi derretida na mesma temperatura (40-50°C) até ficar completamente líquida. As razões do óleo nãowinterizado à estearina de palmiste variaram de 75:25 a 85:15 (%,w/w). Subseqüentemente, a estearina de palmiste derretida foimisturada com um óleo não winterizado de Schizochytrium. Emoutro recipiente, os emulsificantes de monoglicerídeo e diglicerídeo(sendo Dimodan 930-KA ou Grindsted PS 219/B K- A, disponívelpela Danisco1 Dinamarca) foram aquecidos a 70-75°C até que umlíquido homogêneo fosse formado. A mistura oleosa derretida (óleonão winterizado e estearina de palmiste) foi então adicionada aoemulsificante derretido e misturada em conjunto. A formulaçãolíquida quente foi resfriada a 15°C em um lote refrigerador sobnitrogênio e com agitação. Uma vez atingida a temperatura decristalização, a formulação foi mantida por 1 hora a 15°C comagitação. A formulação da gordura cristalizada resultante foi entãotransferida para recipientes e armazenada. Os resultados sãoexibidos abaixo na Tabela 13.

Tabela 13

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Exemplo 16

O exemplo a seguir mostra um processo deescala reduzida para a formação de um produto de gordura sólidacontendo óleo de Schizochytrium e estearina de palmiste com>30% (w/w) de DHA:

Um óleo não winterizado plenamenterefinado produzido pela biomassa de um microorganismo deSchizochytiium foi misturado com 0,2% (w/w) de antioxidantes (10%de tocoferol e 10% de ascorbil palmitato) e aquecido a 40-50°C sobnitrogênio até que todo o material sólido fosse derretido e umlíquido homogêneo fosse formado. Em um recipiente separado, aestearina de palmiste (disponível pela Ciranda Inc., Hudson1 Wl) foiderretida na mesma temperatura (40-50°C) até que ficassecompletamente líquida. A razão de óleo não winterizado à estearinade palmiste utilizada foi de 80:20 (%, w/w). Subseqüentemente, aestearina de palmiste derretida foi misturada com óleo nãowinterizado de Schizochytrium. Em outro recipiente, osemulsificantes de monoglicerídeo e diglicerídeo (tanto da Dimodan930-KA quanto da Grindsted PS 219/B K-A1 disponível pelaDanisco1 Dinamarca) foram aquecidos a 70-75°C até que um líquidohomogêneo fosse formado. A mistura oleosa derretida (óleo nãowinterizado e estearina de palmiste) foi então adicionada aoemulsificante derretido e misturada em conjunto. A formulaçãolíquida quente foi resfriada a 15°C em um lote refrigerador sobnitrogênio e com agitação. Uma vez atingida a temperatura decristalização, a formulação foi mantida por 1 hora a 15°C comagitação. A formulação da gordura cristalizada resultante foi entãotransferida para recipientes e armazenada. Os resultados sãoexibidos abaixo na Tabela 14.

Tabela 14

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Exemplo 17O exemplo a seguir mostra um processo emescala reduzida para a formação de um produto de gordura sólidacontendo óleo de Schizochytrium e estearina de palmiste comSabor Natural de Manteiga e Máscara de Amargor acrescentada.

Um óleo não winterizado plenamenterefinado produzido pela biomassa de um microorganismo deSchizochytrium foi misturado com 0,2% (w/w) de antioxidantes (10%de tocoferol e 10% de ascorbil palmitato), 0,1-0,15% (w/w) de sabornatural de manteiga (disponível pela Danisco) e 0,03-0,05% (w/w)de máscara de amargor natural (disponível pela Firmenich Inc.). Elefoi então aquecido a 40-50°C sob nitrogênio até que todo o materialsólido fosse derretido e um líquido homogêneo fosse formado. Emum recipiente separado, a estearina de palmiste (disponível pelaCiranda Inc., Hudson, Wl) foi derretida na mesma temperatura (40-50°C) até ficar completamente líquida. A razão de óleo nãowinterizado à estearina de palmiste utilizada foi de 80:20 (%, w/w).Subseqüentemente, a estearina de palmiste derretida foi misturadacom óleo não winterizado de Schizochytrium. Em outro recipiente,os emulsificantes de monoglicerídeo e diglicerídeo (Dimodan 930-KA, disponível pela Danisco, Dinamarca) foram aquecidos a 70-75°C até que um líquido homogêneo fosse formado. A misturaoleosa derretida (óleo não winterizado e estearina de palmiste) foientão adicionada ao emulsificante derretido e misturada emconjunto. A formulação líquida quente foi resfriada a 15°C em umlote refrigerador sob nitrogênio e com agitação. Uma vez atingida atemperatura de cristalização, a formulação foi mantida por 1 hora a15°C com agitação. A formulação da gordura cristalizada resultantefoi então transferida para recipientes e armazenada. Os resultadossão mostrados abaixo na Tabela 15.TABELA 15

<table>table see original document page 91</column></row><table>

Os princípios, configurações preferidas emodos de operação da presente invenção foram descritos naespecificação precedente. A invenção que é destinada a serprotegida no presente não deveria, no entanto, ser interpretadacomo limitada às formas particulares reveladas, já que devem serconsideradas como ilustrativas ao invés de restritivas. As variaçõese alterações podem ser feitas por pessoas especialista na técnicasem se afastar do espírito da presente invenção. Da mesma forma,a melhor forma precedente de conduzir a invenção deve serconsiderada exemplar no gênero e não como Iimitante ao escopo eespírito da invenção conforme estabelecido nas reivindicações emanexo.

Claims

1. "MÉTODO" para a produção de umacomposição de gordura sólida, caracterizado por compreender: a)a mistura de um óleo compreendendo gordura saturada e um óleomicrobiano compreendendo pelo menos um LC-PUFA com pelomenos um emulsificante para formar uma mistura; e b) asolidificação da mistura para formar uma composição de gordurasólida.

2. "MÉTODO", de acordo com areivindicação 1, caracterizado pelo fato que o óleo compreendeentre aproximadamente 5% do peso e aproximadamente 70% dopeso LC-PUFA e entre aproximadamente 20% do peso eaproximadamente 60% do peso de gordura saturada.

3. "MÉTODO", . de acordo com areivindicação 2, caracterizado pelo fato de que o óleo é aquecidoantes do passo de mistura.

4. "MÉTODO", de acordo com areivindicação 2, caracterizado pelo fato de que o óleo é aquecidoaté, pelo menos, cerca de 40°C.

5. "MÉTODO", de acordo com areivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o emulsificador éaquecido até, pelo menos, cerca de 40°C.

6. "MÉTODO", de acordo com areivindicação 1, caracterizado pelo fato de o passo de misturainclui o agito da mistura.

7. "MÉTODO", de acordo com areivindicação 1, caracterizado pelo fato de o passo de solidificaçãoda mistura incluir o resfriamento da mistura.

8. "MÉTODO", de acordo com areivindicação 7, caracterizado pelo fato de o passo de solidificaçãoincluir, também, mexer a mistura durante o passo de resfriamento.

9. "MÉTODO", de acordo com areivindicação 7, caracterizado pelo fato de que a mistura éresfriada a uma razão de entre cerca de 1°C/min e cerca de-20°C/min.

10. "MÉTODO", de acordo com areivindicação 1, caracterizado pelo fato de o passo de solidificaçãoincluir a introdução de nitrogênio na mistura.

11. "MÉTODO", de acordo com areivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o óleo microbianonão ser "invernizado" ou "winterizado".

12. "UMA COMPOSIÇÃO" graxo sólidoincluindo uma mistura de óleo microbiano "não-invernizado" ou"winterizado", incluindo uma LC-PUFA e um emulsificador,caracterizado pelo fato de que a mistura é uma composição sólidaem temperatura ambiente.

13. "A COMPOSIÇÃO" graxo sólido deacordo com a reivindicação 12, caracterizado pelo fato de que oóleo inclui gordura saturada.

14. "MÉTODO", de acordo com areivindicação 1 ou a composição da reivindicação 12,caracterizados pelo fato de que o óleo não é hidrogenado.

15. "MÉTODO", de acordo com areivindicação 1 ou a composição da reivindicação 12,caracterizados pelo fato de que o óleo microbiano é um tipo demicroorganismo selecionado de um grupo constituído demicroorganismos do gênero Thraustochytrium, de microorganismosdo gênero Schizochytrium, de microorganismos do gêneroAlthornia, de microorganismos do gênero Aplanochytrium, demicroorganismos do gênero Japonochytrium, de microorganismosdo gênero Elina, de microorganismos do gênero Crypthecodinium, edas suas misturas.

16. "MÉTODO", de acordo com areivindicação 1 ou a composição da reivindicação 12,caracterizados pelo fato de que o óleo inclui, pelo menos cerca de 50% de peso em ácido docosahexanoico.

17. "MÉTODO", de acordo com areivindicação 1 ou o composto da reivindicação 12, caracterizadospelo fato de que a LC-PUFA inclui um ácido selecionado do grupoconstituído pelos ácidos docosapentanoico, aracdônico eeicosapentanoico.

18. "MÉTODO", de acordo com areivindicação 1 ou o composto da reivindicação 12, caracterizadospelo fato de que a composição graxo sólido tem texturahomogênea.

19. "MÉTODO", de acordo com areivindicação 1 ou o composto da reivindicação 12, caracterizadospelo fato de que o emulsificador é selecionado do grupo constituídopor um monoglicerídeo, por um diglicerídeo, por uma combinaçãomono/diglicerídeo, uma lecitina, um mono-diglicerídeo lactilado, uméster poliglicerol, um éster de ácido graxo de sacarose, um estearoillactato de sódio, um estearoil Iactato de cálcio e as suascombinações.

20. "MÉTODO", de acordo com areivindicação 1 ou a composição da reivindicação 12,caracterizados pelo fato de que o emulsificador está presente emquantidade entre cerca de 0.01% do peso e cerca de 2.0 % dopeso.

21. "MÉTODO", de acordo com areivindicação 1 ou a composição da reivindicação 12,caracterizados pelo fato de que o emulsificador está presente emquantidade entre cerca de 0.05 % do peso e cerca de 0.2 % dopeso.

22. "MÉTODO", de acordo com areivindicação 1 ou a composição da reivindicação 12,caracterizados pelo fato de que a composição graxo sólido temtemperatura de fusão de, pelo menos, cerca de 20°C.

23. "MÉTODO", de acordo com areivindicação 1 ou a composição da reivindicação 12,caracterizados pelo fato de que a composição graxo sólido temtemperatura de fusão de, pelo menos, cerca de 35°C.

24. "MÉTODO", de acordo com areivindicação 1 ou a composição da reivindicação 12,caracterizados pelo fato de que a composição graxo sólido incluicristais.

25. "MÉTODO OU A COMPOSIÇÃO",de acordo com a reivindicação 24, caracterizados pelo fato de queos cristais incluem cristais β-primo.

26. "O MÉTODO OU A COMPOSIÇÃO",de acordo com a reivindicação 25, caracterizados pelo fato deque, pelo menos, cerca de 80 % do peso das gorduras e/ou dosóleos na composição graxo sólido estão sob a forma de cristais β-primo.

27. "MÉTODO", de acordo com areivindicação 1 ou a composição da reivindicação 12, incluindotambém a adição de, pelo menos, mais um ingrediente à mistura,caracterizado pelo fato de tal ingrediente adicional ser selecionadodo grupo constituído por um líquido solúvel em água, um ácidoascórbico ou um dos seus respectivos sais, antioxidantes, sabor,realçadores de sabor, adoçantes, pigmentos, vitaminas, minerais,compostos prébióticos, compostos probióticos, ingredientesterapêuticos, ingredientes medicinais, ingredientes de alimentosfuncionais, ingredientes processadores e das suas combinações.

28. "O MÉTODO OU A COMPOSIÇÃO",de acordo com a reivindicação 27, caracterizados pelo fato de queo líquido solúvel em água é adicionado em quantidades entre cercade 1 % do peso e cerca de 10 % do peso.

29. Ό MÉTODO OU A COMPOSIÇÃO",de acordo com a reivindicação 27, caracterizados pelo fato de queo ácido ou o sal ascórbico de um ácido ascórbico é adicionado emquantidades entre cerca de 0.5 % do peso e cerca de 5 % do peso.

30. "O MÉTODO OU A COMPOSIÇÃO",de acordo com a reivindicação 27, caracterizados pelo fato de queo antioxidante é selecionado do grupo constituído de palmitato deascorbil, tocoferol, ácido cítrico, ácido ascórbico, butilhidroquinonaterciária, extrato de alecrim, Iecitina e as suas misturas.

31. "MÉTODO", de acordo com areivindicação 1 ou a composição da reivindicação 12,caracterizados pelo fato de que a composição graxo sólido temvalor de OSI de, pelo menos, cerca de 20.

32. "MÉTODO", de acordo com areivindicação 1 ou a composição da reivindicação 12,caracterizados pelo fato de que o composto graxo sólido tem valorde OSI de, pelo menos, cerca de 60.

33. "MÉTODO", de acordo com areivindicação 1 ou a composição da reivindicação 12,caracterizados pelo fato de que a composição graxo sólido éselecionado entre os grupos constituídos de um produto alimentar,um produto nutricional e um produto farmacêutico.

34. "MÉTODO", de acordo com areivindicação 1 ou a composição da reivindicação 12,caracterizados pelo fato de que a composição graxo sólido éadicionado ao produto selecionado entre os grupos constituídos porum produto alimentar, um produto nutricional e um produtofarmacêutico.

35. "UMA COMPOSIÇÃO" graxo écaracterizada por ser constituída de: a) um óleo microbiano "não-invernizado" ou "winterizado", incluindo entre cerca de 5 % do pesoe cerca de 70 % do peso de LC-PUFA e entre cerca de 20 % dopeso e cerca de 60 % do peso de gordura saturada; e b) entre cercade 0.01 % do peso e cerca de 2.0 % do peso de um emulsificador;sendo que a composição inclui menos do que cerca de 10 % dopeso de água e a composição é um composto sólido natemperatura ambiente.

36. "UM MÉTODO" de preparação de umproduto de óleo que é usado para o consumo, tal métodocaracterizado por compreender: a) a extração de uma fraçãocontendo óleo de uma biomassa microbiana, sendo que a fraçãocontendo óleo é constituída de, pelo menos, uma LC-PUFA e deácidos graxos saturados suficientes para, pelo menos, visualmenteafetar a fração contendo óleo; e b) o tratamento da fração contendoóleo por evaporação a vácuo para produzir um produto de óleoconstituído de, pelo menos, uma LC-PUFA; desde que o produto deóleo não tenha sido sujeito ao passo de invernagem.

37. "UM PROCESSO" para produzir umaLC-PUFA líquida contendo uma fração de óleo e uma LC-PUFAcontendo um produto graxo sólido, tal processo incluindo ofracionamento de óleo microbiano cru em um produto de óleo e umproduto graxo sólido, caracterizado pelo fato de que um produtograxo sólido tenha um conteúdo de LC-PUFA de, pelo menos cercade 20% por peso.