BRPI0618894A2 - absorvedor de oxigênio microbiano - Google Patents

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BRPI0618894A2
BRPI0618894A2 BRPI0618894-0A BRPI0618894A BRPI0618894A2 BR PI0618894 A2 BRPI0618894 A2 BR PI0618894A2 BR PI0618894 A BRPI0618894 A BR PI0618894A BR PI0618894 A2 BRPI0618894 A2 BR PI0618894A2
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oxygen absorber
microbial oxygen
microbial
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BRPI0618894-0A
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Soren K Lillevang
Grith Mortensen
Mette Nortoft Kristensen
Henrik Skou Pedersen
Torben Lohse Friis
Niels Kristian Sorensen
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Chr Hansen As
Arla Foods Amba
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Abstract

ABSORVEDOR DE OXIGêNIO MICROBIANO A presente invenção refere-se a embalagem e método aperfeiçoados para prolongar a vida de útil e a qualidade de alimento embalado, compreendendo o uso de um absorvedor de oxigênio microbiano.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "ABSORVE- DOR DE OXIGÊNIO MICROBIANO".
CAMPO DA INVENÇÃO
A presente invenção refere-se aos campos de materiais de em- balagem, de microbiologia e métodos para a preservação de produtos ali- mentícios.
ANTECEDENTES DA INVENÇÃO
Um ampla faixa de métodos é usada para a preservação de pro- dutos alimentícios. Dentre esses métodos, estão a aplicação de preservan- tes antimicrobianos, por exemplo, produtos químicos, tais como nitrato, dió- xido de enxofre, ácido benzóico e proteínas, tais como nisina e pediocina. Outro método é a adição de um antioxidante, tal como ácido ascórbico, ácido cítrico e tocoferóis. Antioxidantes previnem a oxidação de alimentos, que, de outro modo, resultaria em rancidez e descoloração.
A patente européia de número O 092 183 B1 descreve um méto- do para preservação de alimento por fornecimento de uma cultura no alimen- to contendo lactose, que gera uma substância inibidora do estrago bacteria- no.
O documento WO 01/52668 descreve bactérias de ácido lático contendo porfirina e sua aplicação para a redução do teor em oxigênio em um produto alimentício.
O oxigênio é o principal fator de deterioração da qualidade com relação a muitos produtos alimentícios. O oxigênio pode causar o crescimen- to de bolores e o desenvolvimento de flavorizantees desagradáveis ranço- sos, que, subseqüentemente, reduzem a qualidade e a vida de útil de muito produtos alimentícios. Portanto, é desejável reduzir o teor em oxigênio no ar que entre em contato com o produto alimentício dentro da embalagem. A embalagem em atmosferas modificadas com baixo oxigênio residual foi in- troduzida, a fim de reduzir as mudanças de qualidades associadas com a presença de oxigênio.
Atualmente, o nível de oxigênio residual em alimentos embala- dos pode ser reduzida por meio das seguintes abordagem: • Repetição de ciclos de vácuos e de lavagem com gás, para reduzir o teor em oxigênio residual. Esse método é oneroso tanto com rela- ção às quantidades de gás usado e ao tempo usado para os ciclos de lava- gem com gás. Portanto, resultam em aumentos significativos em custos de embalagem.
• Uso de um absorvedor de oxigênio químico. Os sistemas atuais utilizam um ou mais dos seguintes conceitos: oxidação com pó de ferro, oxidação com ácido ascórbico, oxidação com corante foto-sensível, oxidação enzimática (por exemplo, glicose oxidase e álcool oxidase), ácidos graxos insaturados (por exemplo, ácido oléico ou ácido linolênico), ou leve- dura imobilizada em um material sólido (Vermeiren et al., 1999, 2003). A maioria dos absorvedores de oxigênio químico comercialmente comuns é baseada na oxidação do pó de ferro. Adicionalmente, a remoção enzimática do oxigênio foi proposta como uma técnica promissora (Vermeiren et al., 1999, 2003). Os materiais que absorvem oxigênio são incorporados em rótu- los, sachês ou no material de embalagem. As desvantagens desses siste- mas são que a eficiência de absorvedor é freqüentemente baixa e que o tempo usado antes que o sistema seja ativado é inaceitavelmente longo. Além disso, aspectos legislativos em relação aos produtos alimentícios, em alguns casos, impedem a aplicação desses sistemas.
Produtos alimentícios embalados a vácuo ou com uma atmosfe- ra modificada são suscetíveis a defeitos de embalagem, e o oxigênio entra na embalagem na abertura da embalagem, durante o uso. Além disso, a ob- tenção de baixo teor em oxigênio residual no processo de embalagem é consumidora de tempo e onerosa.
Portanto, existe uma demanda dentro da indústria de alimentos em se encontrar meios alternativos ou suplementares de se reduzir o teor em oxigênio residual em alimentos embalados. Tais meios alternativos de redução do teor em oxigênio residual têm que cumprir a legislação regulató- ria de alimentos, assim como, as preferências do consumidor.
SUMÁRIO DA INVENÇÃO
Conseqüentemente, a presente invenção fornece um método para a preservação de um produto alimentício por embalagem do dito produ- to em um material de embalagem, em conjunto com um absorvedor de oxi- gênio microbiano.
Portanto, em um aspecto, a invenção está relacionada a um produto alimentício embalado em um material de embalagem, em conjunto com um absorvedor de oxigênio microbiano.
A presente invenção também fornece meios de crescimento con- tendo microorganismos capazes de reduzir o teor em oxigênio na embala- gem. O absorvedor de oxigênio microbiano é, de preferência, microorganis- mos que consomem oxigênio, com pouca ou nenhuma produção concomi- tante de dióxido de carbono e ácidos orgânicos. Um exemplo de um tal mi- croorganismo é uma cepa de Lactococcus lactis, que usa oxigênio e produz quantidades limitadas de diacetila e de acetoína.
Em uma concretização preferida da invenção, o absorvedor de oxigênio microbiano é aplicado à superfície do alimento. Em outra concreti- zação preferida da invenção, o absorvedor de oxigênio microbiano é aplica- do a um sachê, rótulo, cápsula ou como péletes Iiofilizados colocados dentro da embalagem de uma maneira a minimizar a transferência do dito absorve- dor de oxigênio microbiano para o alimento. Em outra concretização, o ab- sorvedor de oxigênio microbiano é incorporado ao material de embalagem, por exemplo, em uma estrutura laminada ou um revestimento. Em outro as- pecto, a presente invenção fornece um produto alimentício, que tem um bai- xo teor em oxigênio dentro da embalagem, mesmo depois que o consumidor tiver aberto repetidamente a embalagem.
Uma vantagem da presente invenção é que pode ser usada ve- locidade de máquina de embalagem aumentadas porque o oxigênio residual, no momento da embalagem, pode estar aumentado. Outra vantagem é que o teor em oxigênio dentro da embalagem de alimento pode ser repetidamen- te diminuído depois da abertura e do fechamento da embalagem.
DESCRIÇÃO DOS DESENHOS
A Figura 1a é uma ilustração esquemática da incorporação de um absorvedor de oxigênio microbiano em uma material de embalagem para alimentos,
A Figura 1 b é uma ilustração esquemática do absorvedor de oxi- gênio microbiano sendo aspergido na superfície do material de embalagem voltado para o alimento,
A Figura 1c mostra uma aplicação alternativa de um absorvedor de oxigênio microbiano de acordo com a invenção,
A Figura 2 mostra o teor em oxigênio medido em amostras ar- mazenadas 0 - 20 dias, a 9°C. Linhas pontilhadas com pontos brancos são amostras sem o absorvedor de oxigênio microbiano. Linhas sólidas com pontos pretos são amostras com o absorvedor de oxigênio microbiano. De- terminações triplas. Medições consecutivas foram realizadas na mesma em- balagem ao longo do experimento, e
A Figura 3 mostra o teor em oxigênio medido em amostras ar- mazenadas 0 - 20 dias, a 20°C. Linhas pontilhadas com pontos brancos são amostras sem o absorvedor de oxigênio microbiano. Linhas sólidas com pontos pretos são amostras com o absorvedor de oxigênio microbiano. De- terminações triplas. Medições consecutivas foram realizadas na mesma em- balagem ao longo do experimento.
DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO
A Figura 1a mostra um produto alimentício perecível 10 armaze- nado dentro de uma embalagem 20 compreendendo uma parte superior con- formada 22 formada a partir de um material em camadas 22' e tendo um fil- me 28 ligado a uma borda periférica 26 do mesmo. Conforme mostrado, uma parte de fundo similar a bandeja 27 pode ser encaixada na borda 26.
O material em camadas 22' da parte superior 22 pode compre- ender três camadas 23, 24, 25 com uma camada superior ou exterior 23 de- finindo uma barreira adaptada para prevenir, de uma maneira convencional, a entrada na embalagem 20 de ar, que conduziria a um rápido decaimento do produto alimentício 10 e, portanto, reduziria o período no qual o produto 10 permanecerá fresco, antes da abertura da embalagem 20, por remoção do filme 28. A camada central ou interna 24 de material em camadas 22' é definida por ou inclui um material absorvente de oxigênio microbiológico, a ser discutido em maiores detalhes abaixo. Uma camada 25 adicional define uma superfície da embalagem 20 voltada para o produto alimentício 10, e a camada 25 é permeável para permitir a comunicação de gás entre a camada 24 e o lado de dentro da embalagem 20.
De preferência, o material para a camada superior 23 e para o filme 28 compreende uma camada de PE para assegurar a selagem. A ca- mada permeável 25 é feita, de preferência, a partir de uma rede de PE perfu- rada. Observa-se, entretanto, que a embalagem 20 pode ser feita a partir de vidro ou de um metal, com a camada 24 de absorvedor de oxigênio microbi- ano aplicada sobre a sua superfície voltada para dentro. O filme 28 também pode ser definido por um material em camadas tendo propriedades idênticas ou similares ao material em camadas 22'. Em uma concretização, a embala- gem 20 pode ter regiões, tais como os lados 21 da parte superior 22, onde nenhum absorvedor de oxigênio microbiano é fornecido.
Em uma concretização, mostrada na Figura 1a, a parte superior 22 é feita para reter um formato, onde um espaço vazio 15 relativamente grande é definida entre o produto alimentício 10 e a parte superior 22; a par- te superior 22 pode, entretanto, ser conformada tal que o produto alimentício 10 se ajuste firmemente nela.
Observa-se que o material em camadas 22' com o absorvedor de oxigênio microbiano é, de preferência, fabricado bem antes da prepara- ção da embalagem 20; no entanto, em alguns casos, tais como quando a vida útil ou atividade da camada de material de absorvedor de oxigênio mi- crobiológico 24 for curta ou crítica, pode se preferir fazer o material em ca- madas 22' imediatamente antes do momento em que a embalagem 20 é se- lada pelo filme 28, por meio do que se reduz o período de tempo em que a camada de material 24 é exposta ao ar atmosférico.
O material em camadas 22' pode, alternativamente, ser formado sem a camada permeável 25, onde nenhuma proteção ou controle da ativi- dade da camada absorvente de oxigênio microbiológico 24 seja necessária. A Figura 1b mostra um tal exemplo, em que o material em camadas 22' compreende uma camada superior 23, conforme descrita acima, e portando uma camada de um absorvedor de oxigênio microbiano aspergida ou de ou- tra maneira aplicada à camada 23. Um tal material em camadas 22', para a parte superior 22, pode ser fabricado logo antes que a parte superior 22 seja conformada, tal como por moldagem por injeção ou estampagem profunda.
Nas partes acima, a embalagem 20 foi descrita acima como for- necendo um espaço vazio 15 pela embalagem 20, incluindo uma parte 22 adaptada para reter sua forma sob uso normal. Entretanto, o uso de um ma- terial de embalagem flexível, incluindo um material absorvente de oxigênio microbiológico e embrulhado em torno do produto alimentício 10, também recai dentro do conceito geral da presente invenção.
A Figura 1c mostra uma concretização alternativa da invenção, em que uma camada 24 de um material absorvente de oxigênio microbioló- gico foi aplicado à superfície do produto alimentício 10, a embalagem 20 sendo feita a partir de qualquer material impermeável a gás convencional adaptado para prevenir a entrada de ar na embalagem 20. O material absor- vente de oxigênio microbiano pode ser aplicado por aspersão de uma pasta fluida dele por sobre o produto alimentício 10, antes ou durante a embala- gem. Opcionalmente, a pasta fluida pode compreender um ou mais nutrien- tes para o absorvedor de oxigênio microbiano, por exemplo, uma fonte de carbono e/ou de nitrogênio. Quando o alimento for um queijo, a aplicação do absorvedor de oxigênio microbiano por sobre o queijo pode ser seguida pela aplicação sobre o produto alimentício 10 de um revestimento semiimperme- ável ao ar, por exemplo, revestimento de plástico holandês, cera de parafina ou outros revestimentos à base de lipídeos.
Em ainda outra concretização preferida (não mostrada), o absor- vedor de oxigênio microbiano pode ser aplicado a um sachê separado ou rótulo colocado dentro da embalagem 20 da Figura 1c, ou o absorvedor de oxigênio microbiano, de preferência, como péletes de pó liofilizado, pode ser introduzido na embalagem 20 antes de sua selagem. Quando em forma li- quida, o absorvedor de oxigênio microbiano pode ser injetado na embalagem 20 por perfuração da embalagem 20 e, então, resselagem.
Produtos alimentícios 10 embalados de acordo com métodos convencionais freqüentemente perecem rapidamente, devido ao oxigênio presente dentro da embalagem, isto é, ou em um espaço vazio entre a em- balagem e o produto alimentício ou dentro do próprio produto alimentício. Embora os produtos alimentícios possam ser embalados a vácuo ou em uma atmosfera modificada, obtendo-se teor em oxigênio residual baixo altamente reduzido nela, o processo de embalagem é consumidor de tempo e oneroso.
O uso de um material absorvedor de oxigênio microbiano, con- forme mencionado acima permite uma redução do teor em oxigênio residual pelo absorvedor de oxigênio microbiano assegurando-se que a concentração de oxigênio dentro da embalagem 20 diminua continuamente, de preferên- cia, até a exaustão, seguindo-se o fechamento da embalagem 20. A inven- ção é útil quando o produto alimentício 10 for embalado a vácuo ou em uma atmosfera modificada e mesmo quando o produto alimentício 10 for embala- do em ar atmosférico.
Além disso, uma vida útil prolongada do produto alimentício 10 pode ser assegurada através do efeito do material absorvedor de oxigênio microbiano depois da abertura da embalagem 20 pelo consumidor, quando o acesso de ar atmosférico ao interior da embalagem não mais for restrito.
Observa-se que, independentemente da embalagem 20 selecio- nada para o produto alimentício 10, o absorvedor de oxigênio microbiano discutido aqui pode ser incorporado ao próprio produto alimentício durante o processo de produção do produto alimentício, para a finalidade de se forne- cer uma vida útil prolongada do produto alimentício, portanto, permitindo o uso de qualquer embalagem convencional.
O absorvedor de oxigênio microbiano é, de preferência, selecio- nado a partir de microorganismos classificados como microorganismos GRAS (Geralmente Reconhecidos como Seguros). Dentre os microorganis- mos classificados como GRAS estão Lactococcus spp., Streptocoeeus spp., Lactobacillus spp., Leueonostoe spp., Brevibaeterium spp., Propionibaeteri- um spp., Bifidobaeterium spp., Saccharomyees spp. e Kluyveromyces spp.
Muitos microorganismos usam oxigênio durante o seu metabo- lismo. Entretanto, alguns produzem ácidos, álcoois, gases e compostos fia- vorizantes durante esse processo, que podem causar mudanças sensoriais e físicas indesejáveis nos alimentos. Em uma concretização da invenção, o absorvedor de oxigênio microbiano usa oxigênio sem reduzir subseqüente- mente o pH ou produzir quantidades significativas de gases. Em outra con- cretização, o absorvedor de oxigênio microbiano é um microorganismo que também produz uma mudança no flavorizante do produto alimentício. Essa mudança do flavorizante do produto alimentício pode ser desejável para al- gumas aplicações, por exemplo, em relação a alguns produtos de laticínios.
Em outra concretização da invenção, o absorvedor de oxigênio microbiano é selecionado a partir de cepas que absorvem oxigênio de Lac- tococcus spp., Streptococcus spp., Lactobacillus spp., Leueonostoe spp., Brevibacterium spp., Propionibacterium spp., Bifidobaeterium spp. e levedura spp. Em sua forma natural, essas espécies podem não absorver oxigênio rápido o bastante e, em baixas concentrações de oxigênio, conforme dese- jado quando as utiliza como absorvedoras de oxigênio microbiano de acordo com a presente invenção. A taxa de consumo de oxigênio de microorganis- mos pode ser aperfeiçoada por mudança dos microorganismos ou por modi- ficações culturais, modificações por introdução de mutações ou por outras modificações genéticas.
A primeira opção é fabricar os microorganismos sob condições, nas quais eles adquiram ou aperfeiçoem sua capacidade de absorver (meta- bolizar) oxigênio. Uma maneira de se realizar isso é fabricar os microorga- nismos em um meio contendo porfirina, por exemplo, como hemina. Micro- organismos podem, desse modo, ser "carregados" com um compostos de porfirina, permitindo aos microorganismos que não contenham compostos de porfirina de maneira natural ou que contenham compostos de porfirina insu- ficientes, por exemplo, Laetococeus, absorverem oxigênio. Faz-se referência ao documento de número WO 01/52668, no qual uma cepa de Laetococeus Iactis subsp. Iactis (DSM 12015) foi cultivada em um meio contendo hemina, resultando, assim, em bactérias contendo pelo menos 0,1 ppm em uma base de matéria seca, de um composto de porfirina.
Outra opção para a modificação de um microorganismo, tal co- mo uma bactéria de ácido lático, é introduzir uma ou mais mutações que causem um deslocamento no metabolismo, tal que a absorção de oxigênio pelo metabolismo seja aumentada. Em uma concretização, uma bactéria de ácido lático é deficiente em Ldh, Ldh", isto é, foi introduzida uma mutação que causa uma atividade de Iactato desidrogenase deficiente. Cepas de Ldh" não podem regenerar NAD+ a partir de NADH por redução de piruvato a áci- do lático, e essas cepas têm que se basear em outras reações para regene- ração NAD+, por exemplo, NADH oxidase codificada pelo gene nox. A rege- neração de NAD+ por NADH oxidase causa o consumo concomitante de oxi- gênio. Portanto, em ainda outra concretização, o absorvedor de oxigênio microbiano é uma bactéria de ácido lático tendo fenótipo Ldh" e superex- pressão de NADH oxidase. Em ainda outra concretização, o absorvedor de oxigênio microbiano é uma bactéria de ácido lático tendo fenótipo de Ldh" e de Pfl", isto é, sendo deficiente em atividades tanto de Iactato desidrogenase e de piruvato formato liase. Métodos para produção de tais cepas Ldh" são revelados no documento de número WO 98/54337, nas patentes européias de números 0937774 e 0928333. Esses documentos também descrevem ensaios adequados para a quantificação da taxa de consumo de oxigênio por esses microorganismos. Tipicamente, um líquido, tal como leite desnata- do a 30°C é inoculado com uma quantidade apropriada de microorganismos, por exemplo, 107 CFU/mL, e a concentração e oxigênio no líquido é medido ao longo do tempo.
Em ainda outra concretização, o absorvedor de oxigênio micro- biano é Lactococcus lactis. Em ainda outra concretização, o absorvedor de oxigênio microbiano é um Lactococcus lactis que consome oxigênio e não produz ácido lático. Em ainda outra concretização, o absorvedor de oxigênio microbiano é uma cepa de Laetococeus lactis que é Ldh", por exemplo, DN- 224 (DSM 11037). Em ainda outra concretização, o absorvedor de oxigênio microbiano é uma cepa de Laetococeus lactis que é Ldh" e Pfl", por exemplo, DN-223 (DSM 11036). Em ainda outra concretização, o absorvedor de oxi- gênio microbiano é uma cepa de Laetococeus lactis, que é Ldh" e superex- pressa NADH oxidase. Em outras concretizações, o absorvedor de oxigênio microbiano não produz quantidades significativas de ácido orgânicos e de dióxido de carbono. Em ainda outra concretização, o absorvedor de oxigênio microbia- no é Lactococcus lactis subsp. diacetylactis. Em ainda outra concretização, o absorvedor de oxigênio microbiano é uma cepa de Lactococcus Iaetis subsp. diacetylactis que é Ldh". Em ainda outra concretização, o absorvedor de oxi- gênio microbiano é uma cepa de Lactococcus Iactis subsp. diacetylactis que é Ldh" e Pfl". Em ainda outra concretização, o absorvedor de oxigênio micro- biano é uma cepa de Lactococcus Iactis subsp. diacetylactis que é Ldh" e superexpressa NADH oxidase.
Em outra concretização da invenção, o absorvedor de oxigênio microbiano é capaz de diminuir a concentração de oxigênio em leite desna- tado, a 30°C, desde cerca de 8 mg/Kg a menos do que 1 mg/Kg em menos de 3 horas, depois de se inocular o leite desnatado com 106 CFU/mL do ab- sorvedor de oxigênio microbiano.
Em outra concretização da invenção, o absorvedor de oxigênio microbiano é capaz de diminuir a concentração de oxigênio em uma solução de peptona a 0,1%, NaCI a 0,85% e Iactose à 3%, a 30°C, desde cerca de 8 mg/Kg a menos do que 1 mg/Kg em menos de 3 horas, depois de se inocular o leite desnatado com 106 CFU/mL do absorvedor de oxigênio microbiano.
Uma ampla variedade de produtos alimentícios pode ser preser- vada de acordo com a presente invenção. Produtos de laticínios, tais como queijo, são particularmente preferidos. Em uma concretização da invenção, o produto alimentício é selecionado a partir do grupo consistindo em um pro- duto de carne fatiado, uma refeição pronta, incluindo um produto sous-vide, ou um produto de panificação.
A presente invenção é adicionalmente ilustrada pelos exemplos seguintes, que, contudo, não devem ser construídos como Iimitantes do es- copo de proteção. As características descritos na descrição anterior e nos exemplos seguintes podem, seja separadamente ou seja em qualquer de suas combinações, ser material de realização da invenção em suas diversas formas. REFERÊNCIAS
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EXEMPLOS
Exemplo 1.
O objetivo era avaliar o efeito do absorvedor de oxigênio micro- biano em queijos de baixo teor de gordura e de elevado teor de gordura.
O absorvedor de oxigênio microbiano Lactococcus lactis foi obti- do a partir de Chr. Hansen (F-DVS DN-224, depositado sob o número de acesso DSM 11037). Os seguintes meios de crescimento contendo Iactose e peptona de protease foram produzidos:
Peptona a 0,25%
1,0 g de peptona 8,5 de NaCl 2,5 g de lactose 1.000 de mL de água desmineralizada
Peptona a 0,50%
1,0 g de peptona 8,5 de NaCl 5,0 g de Iactose 1.000 de mL de água desmineralizada
Peptona a 0,75%
1,0 g de peptona 8,5 de NaCl 7,5 g de Iactose 1.000 de mL de água desmineralizada
Os meios de crescimento foram autoclavados, resfriados para 30°C e 100 g de F-DVS DN-224 foram adicionados. Isso deu uma concen- tração de 108 CFU/mL de bactérias.
Dois tipos de queijo foram avaliados: um queijo semiduro de bai- xo teor em gordura (5% de gordura na matéria seca) e um queijo semi-duro de elevado teor em gordura (60% de gordura na matéria seca). Os produtos foram fatiados, e a superfície foi aspergida com a suspensão de bactérias. Os queijos foram subseqüentemente embalados em uma embalagem co- mercial feita de APET/PE e com uma tampa consistindo em OPA/PE. Foi utilizada uma atmosfera modificada contendo 30 - 3% de CO2 e um máximo de 0,5% em O2, e com N2 como gás de enchimento. Os produtos foram ar- mazenados a 5°C, no escuro, até o momento da amostragem.
Os produtos foram avaliados depois de 9, 11, 13 e 15 semanas, para o queijo de baixo teor em gordura, e depois de 15, 17, 19 e 21 sema- nas, com relação ao queijo de elevado teor em gordura. As seguintes avalia- ções foram realizadas: teor em gases (O2 e CO2) e avaliações sensoriais. Além disso, pH, mapeamento de peptídeos e compostos de aroma voláteis foram avaliados depois de 13 e 15 semanas, para o queijo com baixo teor em gordura, e depois de 19 e 21 semanas, com relação ao queijo de eleva- do teor em gordura.
Os resultados são listados na Tabela 1. Por clareza, somente os resultados depois de 13 e 15 semanas, para os queijos de baixo teor em gordura, e os resultados depois de 19 e 21 semanas, com relação ao queijo de elevado teor em gordura, estão listados. A bateria de testes completa foi aplicada nesses momentos de retirada. Tabela 1
<table>table see original document page 14</column></row><table> Nenhum efeito do absorvedor de oxigênio microbiano sobre o pH foi observado, ou no queijo de baixo teor em gordura ou nos queijos de ele- vado teor em gordura. O absorvedor pode ter uma leve efeito sobre a matu- ração de queijos de elevado teor em gordura. Níveis aumentados de diaceti- la e de acetoína (exemplificados por diacetila na Tabela 1) foram observados nos queijos. Esses compostos têm um efeito positivo sobre o flavorizante de produtos de laticínios. Avaliações sensoriais simples descreveram um efeito positivo do absorvedor de oxigênio microbiano.
Exemplo 2.
O objetivo foi avaliar o efeito do absorvedor de oxigênio microbi- ano em diferentes níveis de oxigênio residual.
O absorvedor de oxigênio microbiano Lactococcus Iactis foi obti- do a partir de Chr. Hansen (F-DVS DN-224). O seguinte meio de crescimen- to contendo Iactose e peptona de protease foi produzido:
Lactose a 3%
1,0 g de peptona
8,5 de NaCI
30 g de Iactose
1.000 de mL de água desmineralizada
O meio de crescimento foi autoclavado, resfriado 20°C e 10 g de F-DVS DN-224 foram adicionados. Isso deu uma concentração de 47 χ 107 CFU/mL de bactérias. Uma referência contendo somente a solução de pep- tona foi usada para comparação.
40 mL de 3% de lactose/peptona em água ou peptona em água com/sem o absorvedor de oxigênio microbiano foram colocados em uma bandeja consistindo em APET/PE e com uma tampa consistindo em Ο- ΡΑ/ΡΕ. Três combinações de gás de embalagem foram aplicadas objetivan- do as seguintes concentrações de oxigênio residuais: 0,3%, 1% e 21% (ar atmosférico). CO2 era constante em aproximadamente 25% para os gases com oxigênio reduzido e de aproximadamente 0% para o ar atmosférico. N2 foi usado como um gás de enchimento.
As embalagens foram armazenadas a 9°C e a 20°C durante 0, 7, 12 e 20 dias.
No momento da amostragem, foram medidos o teor em gases (O2 e CO2) e o crescimento de Lactococcus Iaetis (ágar M17). O teor em Iac- tose e o pH foram medidos no início e no final do experimento. Medições consecutivas foram realizadas na mesma embalagem ao longo do experi- mento. Os resultados tiveram suas médias obtidas e se basearam em de- terminações em triplicata. Os resultados das medições de oxigênio estão listadas nas Figuras 2 e 3.
O absorvedor de oxigênio microbiano reduziu o nível de oxigê- nio, comparado a um controle sem o absorvedor de oxigênio microbiano. Esse efeito foi observado tanto a 9°C quanto a 20°C.
Exemplo 3.
Foram realizados testes em produtos com o absorvedor de oxi- gênio microbiano e queijo Cheddar.
O objetivo era avaliar o efeito do absorvedor de oxigênio micro- biano em diferentes níveis de oxigênio residual, e com e sem inoculação de Penicillium eamemberti.
O absorvedor de oxigênio microbiano Laetococeus Iaetis foi obti- do a partir de Chr. Hansen (F-DVS DN-224). O seguinte meio de crescimen- to contendo Iactose e peptona de protease foi produzido: Peptona a 3%
1,0 g de peptona
8,5 de NaCI
30 g de Iactose
1.000 de mL de água desmineralizada
O meio de crescimento foi autoclavado, resfriado 20°C e 0,5 g de F-DVS DN-224 foram adicionados. Isso deu uma concentração de 27 x 106 CFU/mL de bactérias. Uma referência contendo somente a solução de peptona/lactose foi usada para comparação.
A cepa de Penicillium eamemberti estava localizada em Kvibille Dairy e foi cultivada em ágar com DYES (sacarose com extrato de levedura e diclorano). Os esporos foram ressuspensos em água esterilizada para se obter 106 esporos/mL de solução. A solução de Penicillium camemberti tinha uma concentração de 12 χ 105 esporos/mL.
40 mL de 3% de lactose/peptona em água com/sem o absorve- dor de oxigênio microbiano foram colocados em uma bandeja consistindo em APET/PE e com uma tampa consistindo em OPA/PE. Pedaços de Ched- dar pesando aproximadamente 100 g foram mergulhados em parafina e se- cados. O Cheddar foi colocado na bandeja, e metade das amostras foram inoculadas com 10 pL da suspensão de Penicillium camemberti.
Três combinações de gás de embalagem foram aplicadas dire- cionando as seguintes concentrações de oxigênio residuais: 0,3%, 1% e 21% (ar atmosférico). CO2 era constante em aproximadamente 25% para os gases com oxigênio reduzido e de aproximadamente 0% para o ar atmosfé- rico. N2 foi usado como um gás de enchimento.
As embalagens foram armazenadas a 9°C e a 20°C durante 0, 5, 10 e 20 dias.
No momento da amostragem, foram medidos o teor em gases (O2 e CO2) e o crescimento de Lactococcus Iactis (agar M17). O teor em Iac- tose e o pH foram medidos no início e no final do experimento. Medições consecutivas foram realizadas na mesma embalagem ao longo do experi- mento. Os resultados tiveram suas médias obtidas e se basearam em de- terminações em duplicata.
Nas amostras somente contendo o absorvedor de oxigênio mi- crobiano, isto é, sem a inoculação de Penicillium camemberti, um claro efeito da presença do absorvedor sobre o teor em oxigênio residual foi observado. Quando se compara as amostras tanto com o absorvedor microbiano quanto com o Penicillium camemberti, pareceu que o bolor aparentemente usou o oxigênio presente e que os níveis de oxigênio foram reduzidos de maneira significativa nos produtos contendo tanto o absorvedor de oxigênio microbia- no quanto o Penicilium camemberti, quando comparado a amostras conten- do somente o absorvedor de oxigênio microbiano.
Exemplo 4.
O objetivo do experimento é avaliar o efeito do absorvedor mi- crobiano sobre as mudanças de qualidade causadas por exposição à luz.
Níveis de oxigênio residuais diferentes são testados (entre 0 - 5%). Os queijos são embalados em materiais de embalagem comerciais, o absorvedor de oxigênio microbiano é aspergido sobre as superfícies do quei- jo, e, subseqüentemente, os queijos são embalados em atmosferas modifi- cadas e armazenados em temperaturas refrigeradas, no escuro ou expostos à luz (mimetizando as condições de exposição no varejo). No momento de retirada, o teor em gases (O2 e CO2) é avaliado, e avaliações físico- químicas, microbianas e sensoriais relevantes são realizadas.
Exemplo 5.
O objetivo do experimento é otimizar o sistema de absorvedor de oxigênio microbiano.
Os seguintes parâmetros são avaliados:
• Diferentes substratos de crescimento (leite, água com pepto- na, hidrolisados de leite e água)
• Diferentes temperaturas de crescimento (5°C, 9°C e 20°C)
• Concentração ótima de material de absorvedor microbiano (percentagem de inoculação)
• Método de aplicação.
Exemplo 6.
O objetivo do experimento é avaliar a combinação ótima de con- centração de absorvedor de oxigênio microbiano e teor em oxigênio residual, que pode resultar subseqüentemente em velocidades de máquina de emba- lagem crescentes. O experimento envolve técnicas de aspersão e avaliações de diferentes concentrações de oxigênio (por exemplo, 0,1; 0,3; 1 e 5% de O2). Finalmente, ocorrem experimentos de aumento de escala com diferen- tes produtos de laticínios. Outros produtos alimentícios estão também incluí- dos nas avaliações.
Exemplo 7.
Queijo fatiado Delite 5% é colocado em bandejas plásticas e Lactococcus Iaetis subsp. Iaetis DN224, em uma solução de lactose/peptona, é aspergido sobre o queijo. As bandejas plásticas são embaladas com um gás tendo a se- guinte composição: 0,4% de O2 e 43,5% de CO2.
As concentrações de O2 e de CO2 no espaço vazio do queijo embalado são medidas depois da embalagem, assim como depois do expe- rimento.
São usados os seguintes materiais:
Bandejas Nr. Vium (GL440, 400 mu APET / 40 mu PE) e tampas (15 mu OPA/40 mu PE)
Queijo fatiado Delite 5% a partir de laticínio Ne. Vium.
Composição de gás usado para embalagem: 43,5% de dióxido de carbono e 0,4% de oxigênio.
A solução de lactose/peptiona contém: NaCI 8,5 g
Peptona 1,0 g
Lactose 30,0 g
Água 1 litro
Autoclavado a 1210C durante 45 minutos O queijo é inoculado com a seguinte quantidade de Lactococcus lactis DN-224: 10 g de Le. Iaetis congelado é adicionado por litro de solução de lacto- se/peptona. Por cada queijo para embalagem em uma bandeja plástica adi- ciona-se 1 mL da lactose/peptona por aspersão.
As bandejas plásticas são embaladas (seladas) usando-se um Multivac T200 a partir de Multivac.
Os queijos embalados são incubados a 20°C e a 9°C.
Os seguintes produtos de queijo embalados são preparados:
1. 9 bandejas com queijo, Le. Iaetis e solução de lactose/peptona.
2. 9 bandejas com queijo e solução de lactose/peptona.
3. 9 bandejas com queijo e água estéril.
4. 9 bandejas com Le. lactis e solução de lactose/peptona.
5. 9 bandejas com solução de lactose/peptona.

Claims (49)

1. Produto alimentício embalado em um material de embalagem em conjunto com um absorvedor de oxigênio microbiano.
2. Produto alimentício, de acordo com a reivindicação 1, em que qualquer gás dentro da embalagem tem um teor de oxigênio reduzido ou igual quando comparado ao ar atmosférico, tal como menor do que 1% de oxigênio, menor do que 0,05% de oxigênio ou menor do que 0,01% de oxi- gênio.
3. Produto alimentício, de acordo com qualquer uma das reivin- dicações de 1 a 2, em que o absorvedor de oxigênio microbiano é bactéria.
4. Produto alimentício, de acordo com qualquer uma das reivin- dicações de 1 a 3, em que o absorvedor de oxigênio microbiano é selecio- nado a partir de cepas que absorvem oxigênio de Lactococcus spp., Strepto- coceus spp., Lactobacillus spp., Leuconostoc spp., Brevibacterium spp., Pro- pionibacterium spp., Bifidobacterium spp. e levedura spp.
5. Produto alimentício, de acordo com qualquer uma das reivin- dicações de 1 a 4, em que o absorvedor de oxigênio microbiano é Lactoba- cillus lactis.
6. Produto alimentício, de acordo com a reivindicação 5, em que o Lactobacillus lactis consome oxigênio e não produz ácido lático.
7. Produto alimentício, de acordo com qualquer uma das reivin- dicações de 1 a 6, em que o absorvedor de oxigênio microbiano não produz quantidades significativas de ácidos orgânicos e de dióxido de carbono.
8. Produto alimentício, de acordo com qualquer uma das reivin- dicações de 1 a 7, em que o absorvedor de oxigênio microbiano é uma cepa tendo o fenótipo Ldh", por exemplo, Lactococcus lactis subsp. lactis DN-224, depositado como DSM 11037.
9. Produto alimentício, de acordo com a reivindicação 8, em que o absorvedor de oxigênio microbiano é uma cepa tendo o fenótipo Pfl", por exemplo, Lactococcus lactis subsp. lactis DN-223, depositado como DSM 11036.
10. Produto alimentício, de acordo com qualquer uma das reivin- dicações de 1 a 8, em que o absorvedor de oxigênio microbiano é uma cepa que super-expressa NADH oxidase, por exemplo, uma cepa de Lactococcus lactis subsp. laetis.
11. Produto alimentício, de acordo com qualquer uma das reivin- dicações de 1 a 10, em que o absorvedor de oxigênio microbiano é uma bac- téria de ácido láctico, que tenha sido cultivada na presença de pelo menos um composto de porfirina.
12. Produto alimentício, de acordo com qualquer uma das reivin- dicações de 1 a 11, em que o absorvedor de oxigênio microbiano é Lacto- coccus lactis subsp. diacetylactis.
13. Produto alimentício, de acordo com qualquer uma das reivin- dicações anteriores, o material de embalagem sendo embrulhado em torno do produto alimentício.
14. Produto alimentício, de acordo com qualquer uma das reivin- dicações anteriores, a embalagem incluindo um espaço entre o material de embalagem e o produto alimentício.
15. Produto alimentício, de acordo com a reivindicação 14, em que o volume do espaço vazio é desde 10 mL a 200 mL, e o peso do produ- to alimentício é desde 100 gramas a 1.000 gramas, e a quantidade de ab- sorvedor de oxigênio microbiano aplicada ao produto alimentício é desde 10"3 a 10"9 CFU.
16. Produto alimentício, de acordo com qualquer uma das reivin- dicações anteriores, em que o absorvedor de oxigênio microbiano é aplicado à superfície do alimento.
17. Produto alimentício, de acordo com qualquer uma das reivin- dicações anteriores, em que o absorvedor de oxigênio microbiano é incorpo- rado ao produto alimentício.
18. Produto alimentício, de acordo com qualquer uma das reivin- dicações de 1 a 10, em que o material de embalagem é um revestimento, por exemplo, revestimento de plástico holandês, cera de parafina ou outros revestimentos à base de lipídeo, aplicado diretamente por sobre a superfície do produto alimentício com o absorvedor de oxigênio microbiano entre o produto alimentício e o revestimento, ou com o absorvedor de oxigênio mi- crobiano incorporado no revestimento.
19. Produto alimentício, de acordo com a reivindicação 14, em que o absorvedor de oxigênio microbiano é aplicado a um sachê, rótulo, cápsula ou como péletes de pó Iiofilizado colocado dentro do espaço.
20. Produto alimentício, de acordo com qualquer uma das reivin- dicações anteriores, em que o absorvedor de oxigênio microbiano é disposto sobre uma superfície do material de embalagem voltada para o produto ali- mentício.
21. Produto alimentício, de acordo com qualquer uma das reivin- dicações de 1 a 20, o qual é um produto alimentício sólido.
22. Produto alimentício, de acordo com qualquer uma das reivin- dicações de 1 a 21, o qual é um produto de laticínio.
23. Produto alimentício, de acordo com a reivindicação 22, o qual é um produto alimentício fermentado, tal como um queijo.
24. Produto alimentício, de acordo com qualquer uma das reivin- dicações de 1 a 21, o qual é selecionado a partir do grupo consistindo em um produto de carne fatiado, uma refeição pronta, incluindo um produto sous-vide, e um produto de panificação.
25. Produto alimentício, de acordo com qualquer uma das reivin- dicações anteriores, embalado em uma atmosfera modificada.
26. Produto alimentício, de acordo com qualquer uma das reivin- dicações anteriores, embalado em ar atmosférico.
27. Produto alimentício, de acordo com qualquer uma das reivin- dicações anteriores, em que a quantidade do produto alimentício dentro da embalagem está na faixa desde 100 gramas a 1.000 gramas, tal como des- de 100 gramas a 700 gramas, ou desde 200 gramas a 500 gramas, e sendo que a quantidade de absorvedor de oxigênio microbiano, que é adicionado ao produto alimentício durante a fabricação, é desde IO3 a 1010 CFU.
28. Método para a preservação de um produto alimentício por embalagem do alimento em um material de embalagem, de preferência, um material definindo uma barreira adaptada para prevenir ou para minimizar, de uma maneira convencional, a entrada na embalagem de ar, em conjunto com um absorvedor de oxigênio microbiano.
29. Método, de acordo com a reivindicação precedente, em que o absorvedor de oxigênio microbiano é aplicado à superfície do alimento ou é incorporado ao material de embalagem.
30. Método, de acordo com a reivindicação 29, em que o absor- vedor de oxigênio microbiano é aplicado em uma quantidade desde 102 CFU/cm2 a 107 CFU/cm2, tal como 103 CFU/cm2 a 106 CFU/cm2, ou desde 104 CFU/cm2 a 105 CFU/cm2.
31. Método, de acordo com a reivindicação precedente, em que o absorvedor de oxigênio microbiano é aplicado por aspersão de uma pasta fluida contendo o absorvedor de oxigênio microbiano sobre o produto ali- mentício e por sobre o material de embalagem, a pasta fluida opcionalmente compreendendo um ou mais nutrientes para o absorvedor de oxigênio mi- crobiano, por exemplo, uma fonte de carbono e/ou de nitrogênio.
32. Método, de acordo com a reivindicação 28, em que o absor- vedor de oxigênio microbiano é aplicado a um sachê, rótulo, cápsula ou co- mo péletes de pó Iiofilizado colocados em um espaço entre o produto ali- mentício e o material de embalagem.
33. Sachê, rótulo, cápsula ou péletes de pó Iiofilizado compreen- dendo um absorvedor de oxigênio microbiano e substratos necessários para o absorvedor de oxigênio microbiano assimilar oxigênio quando da exposi- ção a vapor d'água.
34. Embalagem para alimento, compreendendo um material de embalagem e um absorvedor de oxigênio microbiano.
35. Embalagem, de acordo com a reivindicação 34, o dito absor- vedor de oxigênio microbiano sendo aplicado, tal como por uma operação de aspersão, sobre uma superfície do material de embalagem adaptado a estar voltado para um compartimento de armazenamento de alimento da embala- gem.
36. Embalagem, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções de 34 a 35, em que o material de embalagem compreende pelo menos duas camadas, uma definindo uma barreira e outra camada compreendendo o absorvedor de oxigênio microbiano.
37. Embalagem, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções anteriores, o material de embalagem compreendendo uma camada permeável a gás, a camada compreendendo o absorvedor de oxigênio mi- crobiano estando disposta entre a barreira e a camada permeável a gás.
38. Embalagem, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções de 34 a 37, o material de embalagem sendo conformado, tal como por moldagem por injeção ou estampagem profunda.
39. Embalagem, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções de 34 a 37, o material de embalagem sendo flexível.
40. Material de embalagem, de acordo com a reivindicação 37, a dita camada impermeável a gás sendo vidro ou metal.
41. Embalagem ou material de embalagem, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 34 a 40, em que o absorvedor de oxigê- nio microbiano é selecionado a partir de cepas que absorvem oxigênio de Lactococcus spp., Streptococcus spp., Lactobacillus spp., Leueonostoe spp., Brevibacterium spp., Propionibaeterium spp., Bifidobaeterium spp. e levedura spp.
42. Embalagem, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções de 34 a 41, em que o absorvedor de oxigênio microbiano é Lactococ- eus laetis.
43. Embalagem, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções anteriores, em que o Laetococeus laetis consome oxigênio e não pro- duz ácido lático.
44. Embalagem, de acordo com qualquer uma das reivindica- ções de 34 a 43, em que o absorvedor de oxigênio microbiano não produz quantidades significativas de ácido orgânicos e de dióxido de carbono.
45. Material de embalagem, como definido em qualquer uma das reivindicações de 34 a 44, em que o absorvedor de oxigênio microbiano é uma cepa tendo o fenótipo Ldh", por exemplo, Laetococeus laetis subsp. lae- tis DN-224, depositado como DSM 11037.
46. Material de embalagem, de acordo com a reivindicação 45, em que o absorvedor de oxigênio microbiano é uma cepa tendo o fenótipo Pfl", por exemplo, Lactococcus Iaetis subsp. Iaetis DN-223, depositado como DSM 11036.
47. Material de embalagem, como definido em qualquer uma das reivindicações de 34 a 46, em que o absorvedor de oxigênio microbiano é uma cepa que super-expressa NADH oxidase, por exemplo, uma cepa de Lactoeoceus Iaetis subsp. lactis.
48. Material de embalagem, como definido em qualquer uma das reivindicações de 34 a 47, em que o absorvedor de oxigênio microbiano é uma bactéria de ácido lático que tenha sido cultivada na presença de pelo menos um composto de porfirina.
49. Material de embalagem, como definido em qualquer uma das reivindicações de 34 a 44, em que o absorvedor de oxigênio microbiano é Lactoeoceus lactis subsp. diacetylactis.
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