BRPI0619331A2

BRPI0619331A2 - método para fazer um composto para preparar um análogo de cbi cc-1065, método para preparar um análogo de cbi cc-1065 e composto

Info

Publication number: BRPI0619331A2
Application number: BRPI0619331-5A
Authority: BR
Inventors: Sanjeev Gangwar; Qian Zhang
Original assignee: Medarex Inc
Priority date: 2005-10-26
Filing date: 2006-10-18
Publication date: 2011-09-27
Also published as: CN101365679A; EP1940789B1; CY1112533T1; EA200801176A1; HK1118549A1; US7847105B2; CA2627046C; JP2009513676A; PL1940789T3; JP5116686B2; WO2007051081A8; RS52100B; AU2006305842B2; US20080281102A1; KR20080068084A; ES2375843T3; CN101365679B; EA015324B1; IL190971A; ZA200804521B

Abstract

METODO PARA FAZER UM COMPOSTO PARA PREPARAR UM ANALOGO DE CBI CC-1065, MéTODO PARA PREPARAR UM ANALOGO DE CBI CC-1065 E COMPOSTO. Método para formar um análogo de CBI CC-1065 utilizando NH2 como material de partida, onde R3 é H ou alguila e R6 é H, alquila, ciano ou alcoxi inferior substituído ou não substituído.Intermediários (I) são utilizados e reivindicados.

Description

"MÉTODO PARA FAZER UM COMPOSTO PARA PREPARAR UM ANÁLOGO DE CBI CC-1065, MÉTODO PARA PREPARAR UM ANÁLOGO DE CBI CC-1065 E COMPOSTO". HISTÓRICO DA INVENÇÃO A CC-1065 é conhecida como uma citotoxina potente. A CC- 1065 foi isolada pela primeira vez a partir de Streptomyces zelensis em 1981 pela Upjohn Company (Hanka et al . , J". Antibiot. 31 :1211 (1978); Martin et al. , J.Antibiot.33:902 (1980) ; Martin et al. , J. Antibiot. 34:1119 (1981)) e demonstrou ter potente atividade antitumoral e antimicrobiana tanto in vitro como em animais experimentais (Li et al. , Câncer Res. 42:999(1982)). A CC-1065 liga-se ao B-DNA de fita dupla dentro do sulco menor (Swenson et al. , Câncer Res.42:2821 (1982)) com a preferência seqüencial de 5'-d(A/GNTTA)-3' e 5'-d (AAAAA)-3' e alquila a posição N3 de 3'-adenina através de sua unidade CPI esquerda presente na molécula (Hurley et al., Science, 226:843(1984)). Apesar de sua potente e ampla atividade antitumoral, a CC-1065 não pode ser usada em seres humanos, por causar morte prematura em animais experimentais.

Muitos análogos e derivados de CC-1065 são conhecidos no estado da técnica. A pesquisa da estrutura, síntese e propriedades de muitos dos compostos foi revista. Vide, por exemplo, Boger et al. ,

Angew. Chem. Int.Ed. Engl. 35 :1438 (1996) ; e Boger et al., Chem.Rev.97:787(1997).

Um grupo de Kyowa Hakko Kogya Co., Ltd. preparou diversos derivados de CC-1065. Vide, por exemplo, as patentes americanas Nos. 5.101.038; 5.641.780; 5.187.186; 5.070.092; 5.703.080; 5.070.092; 5.641.780; 5.101.038; e 5.084.468; e pedido PCT publicado, WO 96/10405 e pedido europeu publicado 0 537 575 Al.

A Upjohn Company (Pharmacia Upjohn) também está ativa na preparação de derivados de CC-1065. Vide, por exemplo, as patentes americanas Nos. 5.739.350; 4.978.757; 5.332.837 e 4.912.227. SUMÁRIO DA INVENÇÃO

Uma concretização consiste num método para preparar um composto (1) ou sal do mesmo,

<formula>formula see original document page 3</formula>

onde R1 e R2 são, cada qual, independentemente H, alquila, -C(O)OR', -C(O)NR'R" ou um grupo protetor, onde R' e R" são independentemente selecionados do grupo consistindo de H, alquila substituído, alquila não substituído, arila substituído, arila não substituído, heteroarila substituído, heteroarila não substituído, heterocicloalquila substituído, e heterocicloalquila não substituído; R6 é H, alquila, ciano ou alcoxi inferior substituído e não substituído; e X é halogênio. Neste método, os grupos protetores R1 e R2 são adicionados a um composto (II)

<formula>formula see original document page 3</formula>

para formar um composto (III)

<formula>formula see original document page 3</formula>

onde R3 é H ou alquila. Um anel de cinco membros é gerado, compreendendo o nitrogênio de amina do composto (III) · Outra concretização consiste num método para preparar um análogo de CBI CC-1065, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, tendo a seguinte fórmula:

<formula>formula see original document page 4</formula>

onde X é halo;

X1 e Z são, cada qual, independentemente selecionados de O, S e NR8, onde R8 é um membro selecionado de H, alquila substituído ou não substituído, heteroalquila substituído ou não substituído, e acila;

R4, R4', R5 e R5' são membros independentemente selecionados do grupo consistindo de H, alquila substituído, alquila não substituído, arila substituído, arila não substituído, heteroarila substituído, heteroarila não substituído, heterocicloalquíla substituído, heterocicloalquíla não substituído, halogênio, NO2, NR9R10, NC(O)R9, OC(O)NR9R10, OC(O)OR9, C(O)R9 , SR9, OR9, CR9=NR10 e O(CH2)nNR11R11';

onde R9 e R10 são independentemente selecionados de H, alquila substituído ou não substituído, heteroalquila substituído ou não substituído, arila substituído ou não substituído, heteroarila substituído ou não substituído, heterocicloalquíla substituído ou não substituído, e peptidila substituído ou não substituído, ou onde R9 e R10 juntamente com o átomo de nitrogênio ao qual estão ligados, são opcionalmente unidos para formar um sistema de anel de heterocicloalquíla substituído ou não substituído, tendo de 4 a 6 membros, opcionalmente contendo dois ou mais heteroátomos, e

R11 e R11' são cada qual independentemente H ou alquila inferior;

R6 é H, alquila, ciano ou alcoxi inferior substituído ou não substituído; e

R7 é um membro selecionado do grupo consistindo de H, alquila substituído, alquila não substituído, heteroalquila substituído, heteroalquila não substituído, difosfatos, trifosfatos, acila, C(O)R12R13, C(O)OR12, C(O)NR12R13, P(O) (OR12)2, C(O)CHR12R13, SR12 e SiR12R13R14, onde R12, R13 e R14 são membros independentemente selecionados de H, alquila substituído ou não substituído, heteroalquila substituído ou não substituído e arila substituído ou não substituído, ou onde R12 e R13 juntamente com o átomo de nitrogênio ou carbono ao qual estão ligados, são opcionalmente unidos para formar um sistema de anel de heterocicloalquila substituído ou não substituído tendo de 4 a 6 membros, opcionalmente contendo dois ou mais heteroátomos.

0 método inclui adicionar grupos protetores R1 e R2 a um composto (II)

<formula>formula see original document page 5</formula>

para formar um composto (III)

<formula>formula see original document page 5</formula>

onde R3 é H ou alquila. Um anel de cinco membros é gerado, compreendendo o nitrogênio de amina do composto (III). Uma unidade ligante é adicionada ao composto (III), e compreende: <formula>formula see original document page 6</formula>

Outra concretização consiste ainda num composto de fórmula (I) ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo:

<formula>formula see original document page 6</formula>

onde R1 e R2 são, cada qual, independentemente H, alquila, -C(O)OR', -C(0)NR'R", ou um grupo protetor, onde R' e R" são independentemente selecionados do grupo consistindo de H, alquila substituído, alquila não substituído, arila substituído, arila não substituído, heteroarila substituído, heteroarila não substituído, heterocicloalquila substituído, e heterocicloalquila não substituído.

BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS

Concretizações não restritivas e não exaustivas da presente invenção são descritas com referência aos desenhos a seguir mencionados. Nos desenhos, números de referência similares referem-se a partes similares em todas as diversas figuras, salvo se especificado de outra forma.

Para melhor compreender a presente invenção, faz-se referência à seguinte Descrição Detalhada, que deve ser lida em associação com os desenhos em anexo, onde:

A Figura 1 é um esquema sintético para uma concretização de um método para formar um análogo de CBI CC-1065;

A Figura 2 é um esquema sintético para outra concretização de um método para formar um análogo de CBI CC-1065; e

A Figura 3 é um esquema sintético para uma terceira concretização de um método para formar um análogo de CBI CC-1065.

DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO

Conforme aqui utilizado, o termo "Boc" refere-se a t- butiloxicarbonila.

"CPI" refere-se a ciclopropapirroloindol.

"CBI" refere-se a ciclopropabenzidol.

"Cbz" é carbobenzoxi.

"DCM" refere-se a diclorometano.

"DMF" é N,N-dimetilformamida.

"FMOC" refere-se a 9-fluorenilmetiloxicarbonila.

"TEA" refere-se a trietilamina.

"THF" refere-se a tetrahidrofurano.

"EDC" refere-se a cloridrato de 1-(3-dimetilaminopropil) - 3-etilcarbodiimida.

Salvo se definido de outra forma, todos os termos técnicos e científicos aqui citados geralmente têm o mesmo significado comumente entendido pelo habilitado na técnica à qual a presente invenção pertence. Geralmente, a nomenclatura aqui utilizada e os procedimentos laboratoriais em cultura celular, genética molecular, química orgânica, bem como química e hibridação de ácido nucleico descritos abaixo são conhecidos e comumente empregados no estado da técnica. As técnicas e procedimentos são geralmente conduzidos de acordo com os métodos convencionais do estado da técnica e em diversas referências gerais. A nomenclatura aqui utilizada e os procedimentos laboratoriais abaixo são bastante conhecidos e comumente empregados no estado da técnica. Técnicas padrão ou suas modificações, são utilizadas para sínteses e análises químicas.

O termo "agente terapêutico" pretende significar um composto que, quando presente numa quantidade terapeuticamente eficaz, produz um efeito terapêutico desejado num mamífero. Para tratar carcinomas, é desejável que o agente terapêutico também seja capaz de penetrar na célula alvo.

O termo "citotoxina" pretende significar um agente terapêutico com o efeito desejado de ser citotóxico para as células cancerosas. Citotóxico significa que o agente interrompe o crescimento de ou mata as células. Os termos "profármaco" e "conjugado de profármaco" são aqui utilizados reciprocamente. Ambos referem-se a um composto que é relativamente inócuo para as células enquanto na forma conjugada, mas que é seletivamente degradado para uma forma farmacologicamente ativa através de condições, como por exemplo, enzimas, localizadas dentro ou nas proximidades das células alvo.

O símbolo

<figure>figure see original document page 8</figure> , seja ele utilizado como uma ligação ou mostrado perpendicularmente a uma ligação indica o ponto no qual a porção apresentada é ligada ao restante da molécula, suporte sólido, substituinte, etc.

O termo "alquila", por si só ou como parte de outro substituinte, significa, salvo se estabelecido de outra forma, uma cadeia linear ou ramificada, ou radical de hidrocarboneto cíclico, ou uma combinação dos mesmos, que podem ser totalmente saturados, mono ou poliinsaturados e que podem incluir radicais di e multivalentes, tendo o número de átomos de carbono designados (ou seja, C1-C10 significa de um a dez carbonos) . Exemplos de radicais de hidrocarboneto saturado incluem, porém não se restringem a grupos tais como metila, etila, n-propila, isopropila, n-butila, t-butila, isobutila, sec-butila, ciclohexila, (ciclohexil) metila, ciclopropilmetila, homólogos e isômeros, por exemplo, de n-pentila, n-hexila, n-heptila, n-octila e similares. Um grupo alquila insaturado é um grupo que tem uma ou mais ligações duplas ou triplas. Exemplos de grupos alquila insaturado incluem, porém não se restringem a vinila, 2-propenila, crotila, 2- isopentenila, 2 -(butadienila) , 2,4-pentadienila, 3-(1,4- pentadienila), etinila, 1- e 3-propinila, 3-butinila, e os homólogos e isômeros superiores. O termo "alquila", salvo se anotado de outra forma, pretende também incluir os derivados de alquila definidos mais detalhadamente abaixo, tal como "heteroalquila". Os grupos alquila, que se limitam a grupos hidrocarboneto, são denominados "homoalquila".

O termo "alquileno" por si só ou como parte de outro substituinte significa um radical divalente derivado de um alcano, conforme exemplificado, porém não limitado por -CH2CH2CH2CH2-, e inclui também os grupos descritos abaixo como "heteroalquileno". Tipicamente, um grupo alquila (ou alquileno) terá de 1 a 24 átomos de carbono, sendo preferidos na presente invenção aqueles grupos que possuem 10 ou menos átomos de carbono. Um "alquila inferior" ou "alquileno inferior" é um grupo alquila ou alquileno de cadeia mais curta, geralmente tendo oito ou menos átomos de carbono.

O termo "heteroalquila" por si só ou em combinação com outro termo, significa, salvo se especificado de outra forma, uma cadeia linear ou ramificada estável, ou radical de hidrocarboneto cíclico, ou suas combinações, consistindo de diversos átomos de carbono e de pelo menos um heteroátomo selecionado do grupo consistindo de O, N, Si, e S e sendo que os átomos de nitrogênio, carbono e enxofre podem ser opcionalmente oxidados e o heteroátomo de nitrogênio pode ser opcionalmente quaternizado. O(s) heteroátomo (s) O, N, S e Si podem ser substituídos em qualquer posição interna do grupo heteroalquila ou na posição na qual o grupo alquila está ligado ao restante da molécula. Exemplos incluem, porém não se restringem a -CH2CH2-O-CH3, -CH2CH2-NH-CH3, -CH2CH2-N(CH3)-CH3, CH2-S-CH2- CH3, -CH2CH2-S(O)-CH3, -CH2CH2-S(O)-CH3, -CH=CH-O-CH3, Si(CH3)3, -CH2-CH=N-OCH3 e -CH=CH-N(CH3)-CH3. Até dois heteroátomos podem ser consecutivos, tal como, por exemplo, -CH2-NH-OCH3 e -CH2-O-Si(CH3)3. De forma similar, o termo "heteroalquileno" por si só ou como parte de outro substituinte significa um radical divalente derivado de heteroalquila, conforme exemplificado, porém não limitado por -CH2-CH2-S-CH2-CH2 e -CH2-S-CH2-CH2-NH-CH2- Para grupos heteroalquileno, os heteroátomos podem também ocupar qualquer um ou ambos os terminais de cadeia (ex: alquilenoxi, alquilenodioxi, alquilenoamino, alquilenodiamino e similares). Os termos "heteroalquila" e "heteroalquileno" abrangem poli(etileno glicol) e seus derivados (vide, por exemplo, Shearwater Polymers Catalog, 2001). Além disso também, para os substituintes alquileno e heteroalquileno, não está implícita nenhuma orientação do substituinte pelo sentido no qual a fórmula do substituinte é escrita. Por exemplo, a fórmula C(O)2R' representa tanto -C(O)2R' como -R'C (O)2-. O termo "inferior" em combinação com os termos "alquila" ou "heteroalquila" refere-se a uma porção que possui de 1 a 6 átomos de carbono.

Os termos "alcoxi", "alquilamino", "alquilssulfonila" e "alquiltio (ou tioalcoxi) são usados em seu sentido convencional, e referem-se aos grupos alquila ligados ao restante da molécula através de um átomo de oxigênio, um grupo amino, um grupo SO2 ou um átomo de enxofre, respectivamente. O termo "arilssulfonila" refere-se a um grupo arila ligado ao restante da molécula através de um grupo SO2, e o termo "sulfidrila" refere-se a um grupo SH.

Em geral, um substituinte "acila" é também selecionado do grupo acima citado. Conforme aqui utilizado, o termo substituinte "acila" refere-se a grupos ligados a e completando uma valência de um carbono de carbonila que está direta ou indiretamente ligado ao núcleo policíclico dos compostos da presente invenção.

Os termos "cicloalquila" e "heterocicloalquila" por si sós, ou em combinação com outros termos, representam, salvo se indicado de outra forma, versões de "alquila" substituído ou não substituído e "heteroalquila" substituído ou não substituído", respectivamente. Adicionalmente, para heterocicloalquila, um heteroátomo pode ocupar a posição na qual o heterociclo está ligado ao restante da molécula. Exemplos de cicloalquila incluem, porém não se restringem a ciclopentila, ciclohexila, 1-ciclohexenila, 3-ciclohexenila, cicloheptila e similares. Exemplos de heterocicloalquila incluem, porém não se restringem a 1-(1,2,5,6- tetrahidropiridila), 1-piperidinila, 2-piperidinila, 3- piperidinila, 4-morfolinila, 3-morfolinila, tetrahidrofuran-2-ila, tetrahidrofuran-3-ila, tetrahidrotien-2-ila, tetrahidrotien-3-ila, 1- piperazinila, 2-piperazinila e similares. Os heteroátomos e átomos de carbono das estruturas cíclicas são opcionalmente oxidados.

Os termos "halo" ou "halogênio" por si sós ou como parte de outro substituinte, salvo se estabelecido de outra forma, significam um átomo de flúor, cloro, bromo ou iodo. Adicionalmente, termos tais como "haloalquila" pretendem incluir monohaloalquila e polihaloalquila. Por exemplo, o termo "haloalquila (C1-C4)" pretende incluir, porém não se restringe a trifluorometila, 2,2,2- trifluoroetila, 4-clorobutila, 3-bromopropila e similares.

0 termo "arila" significa, salvo se indicado de outra forma, um substituinte de hidrocarboneto poliinsaturado, aromático, substituído ou não substituído, que pode ser um anel simples ou anéis múltiplos (preferivelmente de 1 a 3 anéis) que são fundidos ou ligados covalentemente. 0 termo "heteroarila" refere-se a grupos arila (ou anéis) que contém de um a quatro heteroátomos selecionados de N, 0 e S, onde os átomos de nitrogênio, carbono e enxofre são opcionalmente oxidados, e o(s) átomo(s) de nitrogênio são opcionalmente quaternizados. Um grupo heteroarila pode ser ligado ao restante da molécula através de um heteroátomo. Exemplos não restritivos de grupos arila e heteroarila incluem fenila, 1-naftila, 2-naftila, 4- bifenila, 1-pirrolila, 2-pirrolila, 3-pirrolila, 3- pirazolila, 2-imidazolila, 4-imidazolila, pirazinila, 2- oxazolila, 4-oxazolila, 2-fenil-4-oxazolila, 5-oxazolila, 3-isoxazolila, 4-isoxazolila, 5-isoxazolila, 2-tiazolila, 4-tiazolila, 5-tiazolila, 2-furila, 3-furila, 2-tienila, 3-tienila, 2-piridila, 3-piridila, 4-piridila, 2- pirimidila, 4-pirimidila, 5-benzotiazolila, purinila, 2- benzimidazolila, 5-indolila, 1-isoquinolila, 5- isoquinolila, 2-quinoxalinila, 5-quinoxalinila, 3- quinolila e 6-quinolila. Substituintes para cada um dos sistemas de anel de arila e heteroarila acima citados são selecionados do grupo de substituintes aceitáveis descritos abaixo. "Arila" e "heteroarila" também abrangem sistemas de anel nos quais um ou mais sistemas de anel não-aromáticos são fundidos, ou de outra forma ligados a um sistema de arila ou heteroarila.

Resumindo, o termo "arila" quando utilizado em combinação com outros termos (ex: ariloxi, ariltioxi, arilalquila) inclui tanto os anéis de arila como de heteroarila, conforme acima definido. Assim, o termo "arilalquila" pretende incluir aqueles radicais nos quais um grupo arila é ligado a um grupo alquila (ex: benzila, fenetila, piridilmetila e similares) inclusive os grupos alquila nos quais um átomo de carbono (ex: um grupo metileno) foi substituído, por exemplo, com um átomo de oxigênio (ex: fenoximetila, 2-piridiloximetila, 3 -(1-naftiloxi)propila e similares).

Cada um dos termos acima (ex: "alquila", "heteroalquila", "arila" e "heteroarila") incluem tanto as formas substituídas como as não substituídas do radical indicado. Substituintes preferidos para cada tipo de radical são apresentados abaixo.

Substituintes para os radicais alquila ou heteroalquila (incluindo os grupos freqüentemente denominados alquileno, alquenila, heteroalquileno, heteroalquenila, alquinila,cicloalquila, heterocicloalquila, cicloalquenila e heterocicloalquenila) são geralmente designados "substituintes alquila" e "substituintes heteroalquila", respectivamente, e podem ser um ou mais de uma variedade de grupos selecionados de, porém não restritos a:

-OR', =0, =NR', =N-OR', -NR'Rm, -SR', -halogênio, -SiR'R"R' ' ' , -OC(O)R' , -C(O)R', -CO2R' , -CONR'R" , -OC (O) NR'R" , -NRnC(O)R', -NR'-C (O) NR11R' " , -NRnC(O)2R', -NR-C(NR'R"R' ")=NR' '" , -NR-C(NR'Rn)=NR' " , -S(O)2R', -S(O)2R', -S (O) 2NR'R" , -NRSO2R', -CN e -NO2 num número variando de zero a (2m' +1) , onde m' é o número total de átomos de carbono em tal radical. R',R", R''', R'''' , cada qual, preferivelmente independentemente refere-se a hidrogênio, heteroalquila substituído ou não substituído, arila substituído ou não substituído, como por exemplo, arila substituído com 1-3 halogênios, grupos alquila, alcoxi ou tioalcoxi ou arilalquila substituídos ou não substituídos. Quando um composto da invenção inclui mais de um grupo R, por exemplo, cada um dos grupos R é independentemente selecionado, assim como são cada um dos grupos R', R", R''' e R'''' quando mais de um desses grupos está presente. Quando R' e R" são ligados ao mesmo átomo de nitrogênio, eles podem ser combinados com o átomo de nitrogênio para formar um anel de 5, 6 ou 7 membros. Por exemplo, -NR'R" pretende incluir, porém não se restringe a 1-pirrolidinila e 4-morfolinila. A partir da discussão acima de substituintes, um habilitado na técnica entenderá que o termo "alquila" pretende incluir grupos que incluem átomos de carbono ligados a grupos que não grupos hidrogênio, tais como haloalquila (ex: -CF3 e -CH2CF3) e acila (ex: -C(O)CH3, -C(O)CF3, -C(O)CH2OCH3 e similares).

Similares aos substituintes descritos para o radical alquila, os substituintes arila e os substituintes heteroarila são geralmente designados "substituintes arila" e "substituintes heteroarila", respectivamente, e são diversificados e selecionados,por exemplo, de: halogênio,

-OR', =O, =NR', =N-OR', -NR'R", -SR', -halogênio, -SiR'R"R''', -OC(O)R', -C(O)R', -CO2R', -CONR' R", -OC(O)NR'R", -NRmC(O)R', -NR'-C(O)NRmR'", -NRmC(O)2R', -NR-C (NR'RMR' ") =NR'", -S(O)R', -S(O)2R', -S(0)2NR'RM, -NRSO2R', -CN e -NO2, -R', -N3, -CH(Ph)2, fluoroalcoxi (C1-C4) e fluoroalquila (Ci-C4), num número variando de zero ao número total de valências abertas no sistema de anel aromático; e onde R',R", R"", R"" são preferivelmente independentemente selecionados de hidrogênio, alquila (C1-C8) e heteroalquila, arila e heteroarila não substituído, (aril)-alquila(C1-C4) não substituído, e (aril)oxi-(alquila C1-C4) nao substituído. Quando um composto da invenção inclui mais de um grupo R, por exemplo, cada um dos grupos R é independentemente selecionado assim como são cada um dos grupos R',R", R"", R"" quando mais de um desses grupos está presente.

Dois dos substituintes arila nos átomos adjacentes do anel de arila ou heteroarila podem ser opcionalmente substituídos com um substituinte da fórmula -T-C(0)-(CRR')q-U-, onde TeU são independentemente -NR-, -O-, -CRR'- ou uma ligação simples, e q é um número inteiro de 0 a 3. Alternativamente, dois dos substituintes nos átomos adjacentes do anel de arila ou heteroarila podem opcionalmente ser substituídos com um substituinte da fórmula -A-(CH2)r-B-, onde A e B são independentemente -CRR'-, -0-, -NR-, -S-, -S(O)-, -S(O)2., -S(O)2NR'-, ou uma ligação simples, e r é um número inteiro de 1 a 4. Uma das ligações simples do novo anel assim formado pode ser opcionalmente substituída por uma ligação dupla. Alternativamente, dois dos substituintes nos átomos adjacentes do anel de arila ou heteroarila podem ser opcionalmente substituídos com um substituinte da fórmula - (CRR') S-X- (CR"R'") d", onde s e d são independentemente números inteiros de 0 a 3, e X é -O-, -NR'-, -S-, -S(O)-, -S(O)2, ou -S(O)2NR'-. Os substituintes R, R',R", R'" são preferivelmente independentemente selecionados de hidrogênio ou alquila (C1-C6) substituído ou não substituído. Conforme aqui utilizado, o termo "difosfato" inclui, porém não se restringe a um éster de ácido fosfórico contendo dois grupos fosfato. 0 termo "trifosfato" inclui, porém não se restringe a um éster de ácido fosfórico contendo três grupos fosfato. Por exemplo, fármacos específicos tendo um difosfato e um trifosfato incluem:

Trifosfato

Conforme aqui utilizado, o termo "heteroátomo" inclui oxigênio (O), nitrogênio (N) , enxofre (S) e silício (Si). 0 símbolo "R" é uma abreviação geral que representa um grupo substituinte que é selecionado de grupos alquila substituídos ou não substituídos, heteroalquila substituídos ou não substituídos, arila substituídos ou não substituídos, heteroarila substituídos ou não substituídos, e heterociclila substituídos e não substituídos.

Com referência ao termo "grupo protetor", os habilitados na técnica entenderão de que forma proteger um grupo funcional específico da interferência com um conjunto selecionado de condições de reação. Para exemplos de grupos protetores úteis, vide Greene et al. , PROTECTIVE GROUPS IN ORGANIC SYNTHESIS, John Wiley & Sons, New York, 1991. Exemplos de grupos protetores apropriados incluem, porém não se restringem a BOC, FMOC, 2- trimetilsililetoxicarbonila, aliloxicarbonila, 4-metil-l- piperazinocarbonila, 1-metil-l-(4-bifenilil)

etoxicarbonila, difeniloxicarbonila, benzila, t-butila, tetrahidropirano, trimetilsilila, t-butildimetilsilila, triisopropilsilila, t-butildifenilsilila, 2,2,2-

tricloroetil oxicarbonila, diisopropilmetil oxicarbonila, vinil oxicarbonila, metoxi benzil oxicarbonila, nitrobenzil oxicarbonila, ciclohexil oxicarbonila, ciclopentil oxicarbonila, benziloxicarbonila, formila, acetila, trihaloacetila, benzoíla, nitrofenilacetila, 2- nitrobenzenossulfonila, ftalimido e ditiasuccinoíIa. O termo "portador farmaceuticamente aceitável", conforme aqui utilizado, significa um material, composição ou veículo farmaceuticamente aceitável, tal como uma carga, diluente, excipiente, solvente ou material encapsulante líquido ou sólido, envolvido no transporte ou translado de um agente químico. Portadores farmaceuticamente aceitáveis incluem sais farmaceuticamente aceitáveis, onde o termo "sais farmaceuticamente aceitáveis" inclui sais dos compostos ativos que são preparados com ácidos ou bases relativamente atóxicos, dependendo dos substituintes específicos encontrados nos compostos aqui descritos. Quando os compostos da presente invenção contém funcionalidades relativamente ácidas, os sais de adição de base podem ser obtidos contatando-se a forma neutra de tais compostos com uma quantidade suficiente da base desejada, seja na forma pura ou num solvente inerte adequado. Exemplos de sais de adição de base farmaceuticamente aceitáveis incluem sal de sódio, potássio, cálcio, amônio, amino orgânico, sal de magnésio ou um sal similar. Quando os compostos da presente invenção contém funcionalidades relativamente básicas, sais de adição de ácido podem ser obtidos contatando-se a forma neutra de tais compostos com uma quantidade suficiente do ácido desejado, seja na forma pura ou num solvente inerte apropriado. Exemplos de sais de adição de ácido farmaceuticamente aceitáveis incluem os derivados de ácidos inorgânicos tais como ácido clorídrico, bromídrico, nítrico, carbônico, monohidrogenocarbônico, fosfórico, monohidrogenofosfórico, dihidrogenofosfórico, sulfúrico, monohidrogenosulfúrico, iodídrico, ou ácidos fosforosos, e similares, bem como os sais derivados de ácidos orgânicos relativamente atóxicos tais como acético, propiônico, isobutírico, maleico, malônico, benzóico, succínico, subérico, fumárico, láctico, mandélico, ftálico, benzenossulfônico, p-tolilssulfônico, cítrico, tartárico, metanossulfônico e similares. Estão também incluídos os sais de aminoácidos tais como arginato e similares, e os sais de ácidos orgânicos tais como ácidos glucurônicos ou galacturônicos e similares (vide, por exemplo, Berge et al., "Pharmaceutical Salts", Journal of Pharmaceutical Science, 1977, 66, 1-19). Certos compostos específicos da presente invenção contém funcionalidades tanto básicas como ácidas que permitem que os compostos sejam convertidos em sais de adição de base ou sais de adição de ácido.

As formas neutras dos compostos são preferivelmente regeneradas, contatando-se o sal com uma base ou ácido e isolando-se o composto original na forma convencional. A forma original do composto difere das diversas formas salinas em certas propriedades físicas, tais como solubilidade em solventes polares, mas por outro lado os sais são equivalentes à forma original do composto para fins da presente invenção.

Além das formas salinas, a presente invenção provê compostos na forma de profármaco. Profármacos dos compostos aqui descritos são os compostos que são prontamente submetidos a mudanças químicas sob condições fisiológicas para prover os compostos da presente invenção. Além disso, os profármacos podem ser convertidos nos compostos da presente invenção através de métodos químicos ou bioquímicos num ambiente ex vivo. Por exemplo, os profármacos podem ser lentamente convertidos nos compostos da presente invenção quando colocados num reservatório de adesivo transdérmico com uma enzima ou reagente químico apropriado.

Certos compostos da presente invenção podem existir nas formas não solvatadas, bem como nas formas solvatadas, incluindo as formas hidratadas. Em geral, as formas solvatadas são equivalentes às formas não solvatadas e são abrangidas pelo escopo da presente invenção. Certos compostos da presente invenção podem existir nas formas cristalinas ou amorfas múltiplas. Em geral, todas as formas físicas são equivalentes para os usos previstos na presente invenção e estão incluídas no escopo da presente invenção.

Certos compostos da presente invenção possuem átomos de carbono assimétricos (centro ópticos) ou ligações duplas; os racematos, diaestereômeros, isômeros geométricos e isômeros individuais são abrangidos pelo escopo da presente invenção.

Os compostos da presente invenção podem também conter proporções não naturais de isótopos atômicos em um ou mais átomos que constituem tais compostos. Por exemplo, os compostos podem ser radiomarcados com isótopos radioativos, tais como, por exemplo, trítio (3H), iodo- 125 (125I) ou carbono-14 (14C) . Todas as variações isotópicas dos compostos da presente invenção, sejam elas radioativas ou não, são abrangidas pelo escopo da presente invenção.

Os termos "polipeptídeo", "peptídeo" e "proteína" são aqui utilizados reciprocamente para referir-se a um polímero de resíduos aminoácido. Os termos aplicam-se a polímeros de aminoácido nos quais um ou mais resíduos aminoácido é um mimético químico artificial de um aminoácido correspondente de ocorrência natural, bem como a polímeros de aminoácido de ocorrência natural e polímeros de aminoácido de ocorrência não natural. Esses termos também abrangem o termo "anticorpo".

O termo "aminoácido" refere-se a aminoácidos de ocorrência natural e sintéticos, bem como a análogos de aminoácido e miméticos de aminoácido que funcionam de forma similar aos aminoácidos de ocorrência natural. Aminoácidos de ocorrência natural são codificados pelo código genético, bem como aqueles aminoácidos que são posteriormente modificados, como por exemplo, hidroxipropila, y-carboxiglutamato e O-fosfoserina. Análogos de aminoácido referem-se a compostos que possuem a mesma estrutura química básica como um aminoácido de ocorrência natural, ou seja, um α-carbono que é ligado a um hidrogênio, um grupo carboxila, um grupo amino e um grupo R, como por exemplo, homoserina, norleucina, metionina sulfóxido, metil metionina sulfônio. Tais análogos possuem grupos R modificados (ex: norleucina) ou cadeias peptídicas principais modificadas, mas mantém a mesma estrutura química básica do aminoácido de ocorrência natural. Um aminoácido que pode ser usado especificamente é a citrulina, precursora da arginina e que está envolvida na formação de uréia no fígado. Miméticos de aminoácido referem-se a compostos químicos que possuem uma estrutura diferente da estrutura química geral de um aminoácido, mas que funcionam de forma similar ao aminoácido de ocorrência natural. O termo "aminoácido não natural" pretende representar a forma estereoquímica "D" dos vinte aminoácidos de ocorrência natural descritos acima. Fica também entendido que o termo aminoácido natural inclui homólogos dos aminoácidos naturais, e as formas sinteticamente modificadas dos aminoácidos naturais. As formas sinteticamente modificadas incluem, porém não se restringem a aminoácidos que possuem cadeias alquileno encurtadas ou alongadas com até dois átomos de carbono, aminoácidos compreendendo grupos arila opcionalmente substituídos, e aminoácidos compreendendo grupos halogenados, preferivelmente grupos alquila e arila halogenados. Quando ligado a um ligante ou conjugado da invenção, o aminoácido está na forma de uma "cadeia lateral de aminoácido", onde o grupo ácido carboxílico do aminoácido foi substituído com um grupo ceto(C(O)). Assim, por exemplo, uma cadeia lateral de alanina é -C(O)-CH(NH2)- CH3 e assim por diante.

Aminoácidos e peptídeos podem ser protegidos por grupos bloqueadores. Um grupo bloqueador é um átomo ou uma porção química que protege o terminal N de um aminoácido ou de um peptídeo de reações indesejadas e que pode ser usado durante a síntese de um conjugado de substrato clivável com fármaco. Deve permanecer ligado ao terminal N durante toda a síntese, e pode ser removido após completada a síntese do conjugado de fármaco através de condições químicas ou outras condições que seletivamente executam sua remoção. Os grupos bloqueadores apropriados para proteção de terminal N são bastante conhecidos no estado da técnica de química de peptídeos. Grupos bloqueadores representativos incluem, porém não se restringem a hidrogênio, D-aminoácido, e cloreto de carbobenzoxi (Cbz).

O termo "anticorpo" conforme aqui citado, inclui anticorpos completos e qualquer fragmento ligante a antígeno (ou seja "porção ligante a antígeno") ou cadeias simples dos mesmos. Um "anticorpo" refere-se a uma glicoproteína que compreende pelo menos duas cadeias pesadas (H) e duas cadeias leves (L) interconectadas por ligações dissulfeto, ou uma porção ligante ao antígeno do mesmo. Cada cadeia pesada compreende uma região variável de cadeia pesada (Vh) e uma região constante de cadeia pesada. A região constante de cadeia pesada compreende três domínios, CH1, CH2 e CH3, e pode ser do isótipo mu, delta, gama, alfa ou épsilon. Cada cadeia leve compreende uma região variável de cadeia leve (Vl) e uma região constante de cadeia leve. A região constante de cadeia leve compreende um domínio, CL, que pode ser do isótipo kappa ou lambda. As regiões Vh e Vl podem ser ainda subdivididas em regiões de hipervariabilidade, denominadas regiões determinantes de complementaridade (CDR), intercaladas com regiões que são mais conservadas, denominadas regiões estruturais (FR) . Cada Vh e Vl é composta de três CDRs e quatro FRs, dispostas do terminal amino até o terminal carboxi na seguinte ordem: FRl, CDRl, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4. As regiões variáveis das cadeias pesada e leve contém um domínio de ligação que interage com um antígeno. As regiões constantes dos anticorpos podem mediar a ligação da imunoglobulina a tecidos ou fatores hospedeiros, inclusive diversas células do sistema imunológico (ex: células efetoras) e o primeiro componente (Clq) do sistema complemento clássico.

Os termos "fragmento de anticorpo" ou "porção ligante a antígeno" de um anticorpo (ou simplesmente "porção de anticorpo"), conforme aqui utilizados, referem-se a um ou mais fragmentos de um anticorpo que mantém a capacidade de ligar-se especificamente a um antígeno. Foi demonstrado que a função de ligação a antígeno de um anticorpo pode ser realizada através de fragmentos de um anticorpo de extensão completa. Exemplos de fragmentos de ligação abrangidos pelo termo "fragmento de anticorpo" ou

"porção ligante a antígeno" de um anticorpo incluem (i) um fragmento Fab, um fragmento monovalente consistindo dos domínios Vl, Vh, Cl e CHi; (ii) um fragmento F(ab')2, um fragmento bivalente compreendendo dois fragmentos Fab ligados por uma ponte dissulfeto na região de dobradiça;

(iii) um fragmento Fd consistindo dos domínios Vh e CHi;

(iv) um fragmento Fv consistindo dos domínios Vl e Vh de um braço simples de um anticorpo, (v) um fragmento dAb (Ward et al., (1989) Nature 341:544-546), que consiste de

um domínio Vh ; e (vi) uma região determinante de complementaridade isolada (CDR) . Além disso, embora os dois domínios do fragmento Fv, Vl e Vil sejam codificados por genes separados, eles podem ser unidos utilizando métodos recombinantes, através de um ligante sintético que permite que sejam preparados como cadeia de proteína única na qual o par de regiões Vl e Vh formam moléculas monovalentes (conhecida como cadeia única Fv(scFv); vide por exemplo Bird et al. , (1988) Science 242:423-426; e Huston et al.(1988) Proc. Natl.Acad.Sci.USA 85:5879- 5883) . Tais anticorpos de cadeia única também são abrangidos pelo termo "porção ligante a antígeno" de um anticorpo. Esses fragmentos de anticorpo são obtidos utilizando-se técnicas convencionais conhecidas no estado da técnica, e os fragmentos são identificados quanto à utilidade da mesma forma que os anticorpos intactos. Os termos "anticorpo monoclonal", conforme aqui utilizado, refere-se a uma preparação de moléculas de anticorpo de composição molecular única. Uma composição de anticorpo monoclonal exibe uma especificidade e afinidade de ligação única por um epítopo específico. "Suporte sólido", conforme aqui utilizado, refere-se a um material que é substancialmente insolúvel num sistema de solvente selecionado ou que pode ser prontamente separado (ex: por precipitação) de um sistema de solvente selecionado no qual é solúvel. Suportes sólidos úteis na prática da presente invenção podem incluir grupos que são ativados ou capazes de ativação para permitir que espécies selecionadas sejam ligadas ao suporte sólido. Um suporte sólido pode também ser um substrato, por exemplo, um chip, wafer ou cavidade, no/a qual um composto individual ou mais de um composto da invenção é ligado.

Os compostos da presente invenção são preparados na forma de isômero único (ex: enantiômero, diaestereômero cis- trans, positional) ou na forma de uma mistura de isômeros. Numa concretização preferida, os compostos são preparados substancialmente na forma de um isômero único.

Métodos para preparar compostos substancialmente isomericamente puros são conhecidos no estado da técnica. Por exemplo, misturas enantiomericamente enriquecidas e compostos enantioméricos puros podem ser preparados utilizando intermediários sintéticos que são enantiomericamente puros em combinação com reações que ou deixam inalterada a estereoquímica num centro quiral ou resultam em sua inversão completa. Alternativamente, o produto final ou os intermediários ao longo da via sintética podem ser dissolvidos num estereoisômero puro. Técnicas para inverter ou deixar inalterado um estereocentro específico, e técnicas para dissolver misturas de estereoisômeros são bastante conhecidos por um habilitado na técnica de selecionar um método apropriado para uma situação específica. Vide, geralmente, Furniss et al.(eds), VOGEL/S ENCYCLOPEDIA OF PRACTICAL ORGANIC CHEMISTRY 5TH. ED., Longman Scientific and Technical Ltd., Essex, 1991, p.809-816; e Heller, Acc. Chem.Res.23:128 (1990) .

Análogos citotóxicos de CC-1065 podem ser formados utilizando-se uma porção ciclopropabenzindol (CBI) como unidade alquilante em lugar da porção ciclopropapirroloindol (CPI) de CC-1065. Como exemplo, os análogos de CBI CC-1065 incluem, porém não se restringem a compostos tendo a fórmula (ou um sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos):

onde X é halo. Pref erivelmente, X é Cl ou Br e, mais preferivelmente, X é Br.

X1 e Z são, cada qual, independentemente selecionados de O, S e NR8, onde R8 é um membro selecionado de H, alquila substituído ou não substituído, heteroalquila substituído ou não substituído e acila.

R4, R4' , R5 e R5' são membros independentemente selecionados do grupo consistindo de H, alquila substituído, alquila não substituído, arila substituído, arila não substituído, heteroarila substituído, heteroarila não substituído, heterocicloalquila substituído, heterocicloalquila não substituído, halogênio, N02/ NR9R10i NC(O)R9f OC(O)NR9R10i OC(O)OR9, C(O)R9 , SR9, OR9, CR9=NR10 e O(CH2)nNR11R11'; onde R9 e R10 são independentemente selecionados de H, alquila substituído ou não substituído, heteroalquila substituído ou não substituído, arila substituído ou não substituído, heteroarila substituído ou não substituído, heterocicloalquila substituído ou não substituído, e peptidila substituído ou não substituído, ou onde R9 e R10 juntamente com o átomo de nitrogênio ao qual estão ligados, são opcionalmente unidos para formar um sistema de anel de heterocicloalquila substituído ou não substituído, tendo de 4 a 6 membros, opcionalmente contendo dois ou mais heteroátomos, e

R11 e R11 são cada qual independentemente H ou alquila inferior;

R6 é H, alquila, ciano ou alcoxi inferior substituído ou não substituído. Preferivelmente, R6 é metila, ciano ou H. Mais preferivelmente, R6 é H.

Exemplos de análogos de CBI CC-1065 são descrito nos Pedidos de Patente Americana Nos.série 10/160.972; 10/161.233; 10/161.234, 11/134.685 e 11/134.826, todas aqui incorporadas por referência. Essas referências também descrevem exemplos de sínteses e usos para esses compostos. Esses compostos podem ser usados como agentes terapêuticos (ex: fármacos) e como profármacos. Em pelo menos algumas concretizações, os análogos de CBI CC-1065 podem ser conjugados a agentes direcionadores, tais como um anticorpo, receptor, peptídeo, lectina, sacarídeo, ácido nucleico, ou uma combinação dos mesmos, para uso em composições farmacêuticas que seletivamente liberam os análogos de CBI CC-1065 para células alvo desejadas, tais como células de carcinoma.

Exemplos representativos de condições pré-cancerosas que podem ser direcionadas por esses compostos incluem, porém não se restringem a metaplasia, hiperplasia, displasia, pólipos colorretais, ceratose actínica, queilite actínica, papilomavírus humano, leucoplaquia, líquen plano, e doença de Bowen.

Exemplos representativos de cânceres ou tumores que podem ser direcionados por esses compostos incluem, porém não se restringem a câncer pulmonar, câncer de cólon, câncer de próstata, linfoma, melanoma, câncer de mama, câncer ovariano, câncer testicular, câncer do SNC, câncer renal, câncer do rim, câncer pancreático, câncer de estômago, câncer oral, câncer nasal, câncer cervical, e leucemias. Será evidente para um habilitado na técnica que o agente direcionador específico pode ser selecionado de forma tal que ele direcione o fármaco ao tecido tumoral a ser tratado com o fármaco (ou seja, um agente direcionador específico para um antígeno tumor-específico). Exemplos de tais agentes direcionadores são bastante conhecidos no estado da técnica, sendo que os exemplos não restritivos incluem anti-Her2 para o tratamento de câncer de mama, anti-CD20 para o tratamento de linfoma, anti-PSMA para o tratamento de câncer de próstata e anti-CD3 O para o tratamento de Iinfornas, inclusive o linfoma não-Hodgkins. Esses compostos provêem um método para matar uma célula.

O método inclui administrar à célula uma quantidade de um composto da invenção, suficiente para matar dita célula. Numa concretização representativa, o composto é administrado a um indivíduo portador da célula. Numa outra concretização representativa, a administração serve para retardar ou interromper o crescimento de um tumor que inclui a célula (ex: a célula pode ser uma célula tumoral). Para a administração destinada a retardar o crescimento, a taxa de crescimento da célula deve ser pelo menos 10% menor que a taxa de crescimento antes da administração. Preferivelmente, a taxa de crescimento será retardada em pelo menos 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, ou será completamente interrompida.

As composições farmacêuticas incluem composições nas quais o ingrediente ativo está contido numa quantidade terapeuticamente eficaz, ou seja, numa quantidade eficaz para atingir sua finalidade pretendida. A quantidade real efetiva para uma aplicação específica dependerá, inter alia, da condição a ser tratada. A determinação de uma quantidade eficaz é conhecida pelo habilitado na ténica, especialmente à luz da descrição aqui detalhada. Para qualquer composto aqui descrito, a quantidade terapeuticamente eficaz pode ser inicialmente determinada a partir de ensaios de cultura celular. As concentrações plasmáticas alvo serão as concentrações de composto(s) ativo(s) que são capazes de inibir o crescimento ou divisão da célula. Em concretizações preferidas, a atividade celular é inibida em pelo menos 25%. As concentrações plasmáticas alvo de composto(s) ativo(s) que são capazes de induzir em cerca de pelo menos 50%, 75%, ou ainda 90% ou mais a inibição da atividade celular são atualmente preferidas. A porcentagem de inibição da atividade celular no paciente pode ser monitorada para se avaliar a conveniência da concentração plasmática de fármaco obtida, e a dosagem pode ser ajustada para mais ou para menos para se obter a porcentagem de inibição desej ada.

Conforme é conhecido no estado da técnica, quantidades terapeuticamente eficazes para uso em seres humanos podem também ser determinadas a partir de modelos animais. Por exemplo, uma dose para seres humanos pode ser formulada para se obter uma concentração circulante que demonstrou ser eficaz em animais. A dosagem em humanos pode ser ajustada monitorando-se a inibição celular e ajustando-se a dose para mais ou para menos, conforme descrito acima. Uma dose terapeuticamente eficaz pode também ser determinada a partir de dados humanos para compostos que são conhecidos por exibirem atividades farmacológicas similares. A dose aplicada pode ser ajustada com base na biodisponibilidade e potência relativas do composto administrado, quando comparada com o composto conhecido. O ajuste da dose para obter eficácia máxima em humanos com base nos métodos descritos acima e outros métodos é bastante conhecido no estado da técnica, no escopo da experiência de um habilitado na técnica.

No caso de administração local, a concentração circulante sistêmica do composto administrado não será de particular importância. Em tais casos, o composto é administrado de forma a se obter uma concentração na área local eficaz para se obter o resultado pretendido.

Para uso na profilaxia e/ou tratamento de doenças relacionadas com proliferação celular anormal, uma concentração circulante do composto administrado de cerca de 0,001 μΜ a 20 μΜ é preferida, com cerca de 0,01 μΜ a 5 μΜ sendo preferida.

As doses do paciente para administração oral dos compostos aqui descritos, tipicamente variam de cerca de lmg/dia a cerca de 10.000 mg/dia, mais tipicamente de cerca de 10 mg/dia a cerca de 1.000 mg/dia, e o mais tipicamente de cerca de 50 mg/dia a cerca de 500 mg/dia.

Estipuladas em termos do peso corporal do paciente, as dosagens típicas variam de cerca de 0,01 a cerca de 150 mg/kg/dia, mais tipicamente de cerca de 0,1 a cerca de 15 mg/kg/dia, e o mais tipicamente de cerca de 1 a cerca de 10 mg/kg/dia, por exemplo, 5 mg/kg/dia ou 3 mg/kg/dia.

Em pelo menos algumas concretizações, as doses do paciente que retardam ou inibem o crescimento tumoral podem ser de Ιμιτιοί/kg/dia ou menos. Por exemplo, as doses do paciente podem ser de 0,9, 0,6, 0,5, 0,45, 0,3, 0,2, 0,15, ou 0,1 μΓηοΙ/kg/dia ou menos (referindo-se a moles do fármaco) do fármaco ou conjugado de fármaco, tal como um conjugado anticorpo-fármaco. Preferivelmente, o fármaco ou conjugado de fármaco retardam ou inibem o crescimento do tumor quando administrado na quantidade de dosagem diária durante um período de pelo menos cinco dias. Em pelo menos algumas concretizações, o tumor é um tumor tipo humano num camundongo SCID. Como exemplo, o camundongo SCID pode ser um camundongo CB17.SCID (da Taconic, Germantown, NY) .

Para outros modos de administração, a quantidade e intervalo de dosagem podem ser ajustados individualmente para prover níveis plasmáticos do composto administrado eficaz para a indicação clínica específica a ser tratada. Por exemplo, em uma concretização, um composto de acordo com a invenção pode ser administrado em concentrações relativamente altas em horários múltiplos por dia.

Alternativamente, pode ser mais desejável administrar um composto da invenção a concentrações eficazes mínimas e utilizar um esquema de administração menos freqüente, o que proverá um esquema terapêutico proporcional à gravidade da doença do indivíduo. Utilizando os ensinamentos aqui fornecidos, um esquema de tratamento terapêutico eficaz pode ser planejado de forma a não causar toxicidade substancial, sendo ao mesmo tempo totalmente eficaz para tratar os sintomas clínicos apresentados pelo paciente específico. Esse planejamento deve envolver uma escolha criteriosa do composto ativo, levando em consideração fatores tais como a potência do composto, a biodisponibilidade relativa, o peso corporal do paciente, a presença e severidade de efeitos colaterais adversos, o modo preferido de administração e o perfil de toxicidade do agente selecionado. Geralmente a porção CBI tem a seguinte fórmula: <formula>formula see original document page 29</formula>

onde substituintes podem ser ligados aos átomos de oxigênio e nitrogênio. X é halo, e R6 é H, alquila, ciano ou alcoxi inferior substituído ou não substituído. Preferivelmente, R6 é H, metila ou ciano. Mais preferivelmente, R6 é H. Além disso, X é preferivelmente Cl ou Br e, mais pref erivelmente, X é Br. Geralmente, uma unidade ligante pode ser ligada ao substituinte de amina da porção CBI. Exemplos de unidades ligantes apropriadas incluem, porém não se restringem a:

<formula>formula see original document page 29</formula>

onde X1, Z, R4, R4' , R5 e R5' são conforme acima definido. Exemplos de unidades ligantes apropriadas são ilustrados e descritos nas patentes americanas Nos. Série 10/160.972; 10/161.233; 10/161.234; 11/134.685 e 11/134.826; bem como na patente americana No. 6.534.660, aqui incorporada por referência. Unidades ligantes apropriadas nesta fórmula também incluem unidades ligantes com anéis fundidos múltiplos, tais como:

<formula>formula see original document page 29</formula>

onde Z' é independentemente selecionado de 0, Se NR8, onde R8 é um membro selecionado de H, alquila substituído ou não substituído, heteroalquila substituído ou não substituído, e acila.

R4", R4'", R5" e R5'" são membros independentemente selecionados do grupo consistindo de H, alquila substituído, alquila não substituído, arila substituído, arila não substituído, heteroarila substituído, heteroarila não substituído, heterocicloalquila substituído, heterocicloalquila não substituído, halogênio, NO2, NR9R10, NC(O)R97 OC(O)NR9R10, OC(O)OR97 C(O)R9 , SR97 OR97 CR9=NR10 e O(CH2)nNR11R11';

onde R9 e R10 são independentemente selecionados de H7 alquila substituído ou não substituído, heteroalquila substituído ou não substituído, arila substituído ou não substituído, heteroarila substituído ou não substituído, heterocicloalquila substituído ou não substituído, e peptidila substituído ou não substituído, ou onde R9 e R10 juntamente com o átomo de nitrogênio ao qual estão ligados, são opcionalmente unidos para formar um sistema de anel de heterocicloalquila substituído ou não substituído, tendo de 4 a 6 membros, opcionalmente contendo dois ou mais heteroátomos, e

R11 e R11' são cada qual independentemente H ou alquila inferior.

R15 pode ser H, alquila substituído ou não substituído, ou R15 e R4 ou R5 podem ser combinados para formar um anel (ex: um anel de cinco ou seis membros). Um composto intermediário útil na formação de análogos de onde R1 e R2 são, cada qual, independentemente H, alquila, -C(O)OR', -C(O)NR'R" ou um grupo protetor, onde R' e R" são independentemente selecionados do grupo consistindo de H, alquila substituído, alquila não substituído, arila substituído, arila não substituído, heteroarila substituído, heteroarila não substituído, heterocicloalquila substituído, e heterocicloalquila não substituído, e X é halogênio.

Num método sintético convencional para o composto (I), o material de partida é o 1,3-dihidroxinaftaleno que é então reagido com amônia numa câmara pressurizada (ex: uma bomba) para substituir o grupo hidroxi na posição 3 do naftaleno com uma amina. Exemplos deste método sintético podem ser encontrados na patente americana No. 6.534.660 e D.L.Boger et al., J.Org.Chem.57.2873- 2876(1992), ambos aqui incorporados por referência. A reação de aminação é seguida pela adição de grupos protetores para as porções tanto hidroxi como amina. Embora a reação de aminação possa ter rendimento aceitável em pequena escala, poderá ser difícil aumentar a escala da reação devido ao uso de uma bomba para conter essa reação pressurizada que tipicamente ocorre a uma pressão substancialmente superior a 1 atmosfera (cerca de 1,01 χ 10^5 Pa) e geralmente a uma pressão de pelo menos 1,5 atmosferas (1,52 χ 10^5 Pa). Esse método sintético demonstrou resultar num rendimento substancialmente inferior quando a escala é aumentada.

Ao contrário dos métodos convencionais, o material de partida pode ser o composto (II), conforme ilustrado nos esquemas sintéticos das Figuras 1 e 2:

onde R3 é H ou alquila. Preferivelmente, R3 é alquila C1-5 e, mais preferivelmente, metila. Por exemplo, 4-metoxi-2- naftilamina é comercializado pela Aldrich Chemical Company, Inc.Milwaukee, WI. É relativamente fácil hidrolisar o composto, se R3 for alquila e adicionar grupos protetores, R1 , às porções tanto hidroxi como amina para formar o composto (III).

<formula>formula see original document page 32</formula>

Em algumas concretizações, conforme ilustram as Figuras 1 e 2, é desejável prover grupos protetores diferentes nas funcionalidades amina e hidroxi. Conseqüentemente, o grupo protetor inicial, R1 , pode ser removido de uma dessas porções (ex: da porção hidroxi) e substituído com um segundo grupo protetor diferente, composto (IV).

<formula>formula see original document page 32</formula>

Um exemplo específico de composto (IV) possui a fórmula:

<formula>formula see original document page 32</formula>

Ter grupos protetores diferentes nos substituintes hidroxila e amina pode facilitar as etapas posteriores de reação quando um dos grupos protetores pode ser seletivamente removido, permanecendo o outro grupo protetor. Alternativamente, grupos protetores diferentes podem ser inicialmente adicionados aos substituintes hidroxila e amina. Os Esquemas 1 e 2 (Figs. 1 e 2) ilustram uma concretização das etapas restantes para formar o composto (I) a partir do composto (IV) . Essas etapas podem incluir, por exemplo, formar um anel utilizando o nitrogênio do grupo amina. Isso pode ser realizado, por exemplo, através da alquilação do anel de arila adjacente ao nitrogênio seguido de uma etapa de fechamento de anel. Em uma concretização, a iodação do composto (IV) com N- iodosuccinimida produz um composto que pode então ser alquila utilizando-se 1,3-dibromopropeno ou 1,3- dicloropropeno.

O fechamento de anel pode então ser realizado utilizando hidreto de tributilestanho na presença de 2,2'- azobisisobutironitrila (AIBN) para dar o derivado-CBI racêmico, composto (V):

<formula>formula see original document page 33</formula>

Se desejado, os grupos protetores podem ser removidos para formar CBI. Fica entendido que reagentes e catalisadores diferentes podem ser usados nessas etapas de reação. Exemplos podem ser encontrados em Boger, Chemical Reviews, 97, 787-828(1997), aqui incorporado por referência.

O derivado-CBI racêmico pode ser separado utilizando técnicas conhecidas da separação de enantiômeros, inclusive o uso de métodos cromatográficos. Uma técnica particularmente útil é a cromatografia líquida a alta pressão (HPLC) utilizando uma coluna quiral. Por exemplo, a separação de tais enantiômeros foi realizada utilizando-se uma coluna HPLC Chiralcel e eluente de hexano/isopropanol (99:1) para dar o composto (I).

Exemplos específicos do Composto (I) incluem, porém nãos e restringem a:

O composto (I) pode ser usado para formar análogos de CBI CC-1065 conforme descrito, por exemplo, nos pedidos de patente americana Nos. Série 10/160.972; 10/161.233;

10/161.234, 11/134.685 e 11/134.826, todos aqui incorporados por referência. Por exemplo, uma unidade ligante pode ser adicionada ao Composto (I) desprotegendo-se o substituinte amina e reagindo-se um composto compreendendo a unidade ligante com a amina desprotegida. Substituintes adicionais podem ser adicionados ao átomo de oxigênio do composto CBI desprotegendo-se o oxigênio e reagindo-o com o(s) reagente(s) apropriado(s).

EXEMPLOS

Sem mais elaboração, acredita-se que o habilitado na técnica possa, utilizando a descrição precedente, utilizar a presente invenção da forma mais ampla possível. As concretizações específicas preferidas a seguir devem, portanto, ser interpretadas como meramente ilustrativas, e não restritivas do restante do relatório. Nos exemplos anteriores e seguintes, todas as temperaturas são mostradas na forma não corrigida em graus Celsius, e todas as partes e porcentagens são em peso, salvo se indicado de outra forma. EXEMPLO 1 - Esquema 1 (Fig. 1) Síntese de N-(ter-butiloxicarbonil)-4-O-(ter- butiloxicarbonil)-2-naftilamina (2).

Uma solução de 4-metoxi-2-naftilamina (23 0 mg, 1,33 mmol) em ácido acético glacial (9,6 mL) e ácido bromídrico em água (16 ml, 4 8%) foi refluxada sob N2 durante 4 horas. Uma pequena quantidade da amostra (0,1 mL) foi diluída com acetato de etila (0,5 ml) e então água (0,5 ml) e TEA (0,1 ml) foram adicionados. TLC (cromatografia em camada delgada) (20:1 DCM/metanol) da camada orgânica demonstrou não haver material de partida e detectou um novo ponto muito mais baixo (Rf = 0,1). O solvente foi removido sob pressão reduzida e o produto secado sob vácuo para dar o intermediário 4-hidroxi-2-naftilamina que foi usado na etapa seguinte sem qualquer purificação. A uma solução de 4-hidroxi-2-naftilamina em dioxano (10 ml) adicionou-se TEA (1 ml) e dicarbonato de di-ter-butila (1,149 g, 5,27 mmol). A mistura de reação foi ref luxada sob N2 durante 4 horas. A TLC (4:1 hexano/acetato de etila) demonstrou não haver material de partida e detectou um novo ponto mais alto (Rf = 0,55). A mistura de reação foi diluída com acetato de etila (50 ml) e lavada com água. A camada aquosa foi extraída com acetato de etila (2 χ 50 ml) e os orgânicos combinados e lavados com salmoura. Os orgânicos foram secados sobre Na2SO4 anidro, filtrados e concentrados sob pressão reduzida para dar N-(ter- butiloxicarbonil)-4-0-(ter-butiloxicarbonil)2-naftilamina (rendimento 2,80%) na forma de óleo.

Síntese do Composto 3

A uma solução do Composto 2 em acetona (10 ml) adicionou- solução de NaOH em água (10 ml, 1 Μ). A mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente da noite para o dia. TLC (hexano/acetato de etila 4:1) demonstrou não haver material de partida e detectou um novo ponto mais baixo. A mistura de reação foi extraída com acetato de etila (50 ml) e lavada com água. A camada aquosa foi extraída com acetato de etila (2 χ 50 ml) e os orgânicos lavados com salmoura, secados sobre Na2SO4 anidro e concentrados. 0 resíduo foi purificado em coluna de sílica gel a 10% com 10-20% acetato de etila em hexano para dar o composto 3 (181 mg, 53%) na forma de um óleo. Síntese do composto 4

Uma solução do composto 3 (5g, 19,3 mmol) em DMF anidro (50 ml) sob atmosfera de nitrogênio foi tratada com brometo de benzila (4g, 23,1 moles), carbonato de potássio (3,7g, 27 moles) e iodeto de tetrabutilamônio (70 mg, 0,01 mmoles) . A mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante 8 horas. A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida. A separação cromatográfica (4 χ 10 cm SiO2, eluição de gradiente 10- 2 0% EtOAc-hexano) proveu um composto puro 4 (5,48 g, 83%) na forma de um pó cremoso. 1H NMR(CDCl3), 400 MHz, ppm) , 8,22 (d, 1H, J=8,1 Hz, C5-H), 7,68 (d, 1H, J=8,2 Hz, C-8- Η) , 7,3-7,5 (m, 8H, Cl-H7 C6-H, C7-H, CH2C6H5), 7,06 (d, 1H, J=Iml Hz, C3-H) , 6, 62 (br s, 1H, NH), 5,23 (S, 2H, OCH2(C6H5), 1,55 (s, 9H, OC(CH3)3)- Síntese do Composto 5:

A um frasco de fundo redondo de 100 0 ml equipado com uma haste de agitação e uma membrana de borracha combinou-se o composto 4 (13g, 0,0372 moles) e THF (300 ml). A solução amarela límpida foi resfriada até -20°C com um banho de gelo seco sob atmosfera de nitrogênio. Ácido p- toluenossulfônico (0,10g, 0,0005 moles) foi adicionado à mistura de reação e a solução agitada durante 10 minutos. N-iodosuccinimida (lOg, 0,0446 moles) foi dissolvida em THF (50 ml) e adicionada à reação através de cânula (aprox. 1 hora). A solução foi agitada no banho gelado durante 2hs e tornou-se acastanhada. A solução foi então removida do banho gelado e deixada aquecer até temperatura ambiente sob nitrogênio durante 1,5 h. TLC (2:1 hexano/DCM) mostrou não haver material de partida e detectou a presença de um ponto mais alto. A reação foi rapidamente resfriada com NaHCO3 (200 ml) com a formação de um sólido branco. Após agitar a solução durante 10 minutos, adicionou-se EtOAc (200 ml) e água (100 ml) à reação. A camada aquosa foi extraída com EtOAc (2 χ 100 ml) e os orgânicos combinados e extraídos com salmoura (100 ml). Os orgânicos foram secados sobre MgSO4, filtrados e concentrados sob vácuo até tornar-se um sólido marrom-avermelhado. 0 sólido foi purificado através de cromatografia de coluna utilizando hexano/DCM 2:1 como eluente para dar o composto 5 (14 g, 79%) na forma de um sólido marrom.

Síntese do Composto 6

A um frasco de fundo redondo de 50 0 ml equipado com haste de agitação e entrada de nitrogênio combinou-se o composto 5 (22,5 g, 0,0473 moles) e DMF anidro (250 ml). A solução amarelo-alaranjada foi resfriada até 0°C com banho gelado/salino sob atmosfera de nitrogênio. NaH (60%, 5,6g, 0,14 6 moles) foi adicionado à reação numa única porção. A solução tornou-se turva e um gás se formou. A reação foi agitada no banho gelado durante 15 minutos e então o banho gelado foi removido e a solução agitada por mais 15 minutos, cis/trabs-1,3-dibromopropeno (14 ml, 0,14 moles) foi adicionado à reação em porções através de seringa. A reação foi agitada sob nitrogênio à temperatura ambiente durante 1 hora e adquiriu uma cor marrom turva. A temperatura subiu para 40°C. As reações foram deixadas resfriar até temperatura ambiente. TLC (4:1 hexano/EtOAc) demonstrou não haver material de partida e detectou a presença de um novo ponto mais baixo. A reação foi rapidamente resfriada com água (500 ml). A camada aquosa foi extraída com EtOAc(4 χ 100 ml) e os orgânicos lavados com salmoura (2x75 ml). Os orgânicos foram secados sobre MgSO4, filtrados e concentrados sob vácuo até obtenção de um óleo marrom. 0 produto foi purificado através de cromatografia de coluna utilizando 1:1 DCM/hexano como eluente para dar o composto 6 (25g, 8 9%) na forma de um óleo marrom.

Síntese do Composto 7:

A um frasco de fundo redondo de três bocas com capacidade para 1000 ml equipado com uma haste de agitação, sonda de temperatura, condensador de refluxo e entrada de nitrogênio foi combinado o composto 6 (25g, 0,0421 mol), tolueno (500 ml), 2,2'-azobis(2-metilpropionitrila)(0,15 g, 0,0009 moles) e hidreto de tributilestanho (3,4 ml. 0,0126 moles)[através de seringa]. Nitrogênio foi borbulhado por toda a solução durante 15 minutos e então a reação foi aquecida até 80°C sob nitrogênio. Após aquecimento a 80°C durante 15 minutos, hidreto de tributilestanho (3,4 ml, 0,0126 moles) foi adicionado à reação através de seringa. Após aquecimento por mais 15 minutos, hidreto de tributilestanho (3,4 ml, 0,0126 mol) foi adicionado à reação através de seringa. Após mais 15 minutos, hidreto de tributilestanho (3,4 ml, 0,0126 mol) foi adicionado à reação através de seringa. A quantidade total de hidreto de tributilestanho adicionada foi de 13,6 ml, 0,0505 moles. A reação foi aquecida a 80°C durante 3 0 minutos e então deixada resfriar até temperatura ambiente. TLC (10% EtOAc/hexano) mostrou não haver material de partida e detectou a presença de um novo ponto mais alto. A solução foi concentrada sob vácuo até se tornar um sólido amarelo. 0 sólido foi purificado através de cromatografia de coluna utilizando um eluente 1:1 diclorometano/hexano para dar um sólido amarelo. 0 (60%, 2,22 g, 0,0554 moles) foi adicionado à reação numa única porção. A solução tornou-se turva, com a formação de um gás. A reação foi agitada no banho gelado durante 15 minutos e então o banho gelado foi removido e a solução agitada por mais 15 minutos. cis/trans-1,3 - dicloropropeno (5,3 ml, 0,0571 moles) foi adicionado à reação em porções através de seringa. A reação foi agitada sob nitrogênio à temperatura ambiente durante 3 horas e tornou-se marrom turva. TLC (4:1 hexano/EtOAc) mostrou não haver material de partida e detectou a presença de um novo ponto mais baixo. A reação foi rapidamente resfriada com água (250 ml).A camada aquosa foi extraída com EtOAc (3 x 100 ml) e os orgânicos lavados com salmoura (2 x 50 m 1). Os orgânicos foram secados sobre MgSO4, filtrados e concentrados sob vácuo até se tornar um óleo marrom. 0 produto foi purificado através de cromatografia de coluna utilizando 1:1 DCM/hexano na forma de eluente para dar (E/Z)4- (benziloxi)-1-iodonaftaleno-2-il(3-cloroalil)carbamato de ter-butila (8) (9g, 93%) na forma de um óleo amarelo.

Síntese do Composto 9:

A um frasco de fundo redondo de três bocas com capacidade para 500 ml equipado com haste de agitação, sonda de temperatura, condensador de refluxo e entrada de nitrogênio combinou-se o composto 8(9g, 0,0164 mol), tolueno (200 ml), 2,2 "-azobis(2-metilpropionitrila) (0,15g, 0,0009 mol) e hidreto de tributilestanho (1,5 ml, 0,0056 moles) [através de seringa]. Nitrogênio foi borbulhado por toda a solução durante 15 minutos e a mistura foi então aquecida até 80°C sob nitrogênio. Após aquecimento a 80°C durante 15 minutos, hidreto de tributilestanho (1,5 ml, 0,0056 mol) foi adicionado à reação através de seringa. Após aquecimento por mais 15 minutos hidreto de tributilestanho (1,5 ml, 0,0056 mol) foi adicionado â reação através de seringa. Após mais 15 minutos, hidreto de tributilestanho (1,0 ml, 0,0037 mol) foi adicionado à reação através de seringa. A quantidade total de hidreto de tributilestanho adicionada foi de 5,5 ml, 0,02 04 moles. A reação foi aquecida a 80°C durante 30 minutos e então deixada esfriar até temperatura ambiente. TLC (10% EtOAc/hexano) mostrou não haver material de partida e detectou a presença de um novo ponto mais alto.

A solução foi concentrada sob vácuo até um óleo amarelo. O óleo foi purificado através de cromatografia de coluna utilizando um eluente 100% hexano a 5% EtOAc/hexano a 10% EtOAc/hexano para dar um sólido amarelo-pálido. O sólido foi recristalizado de hexano (100 ml, 45°C durante 30 minutos, resfriado em refrigerador por 2hs, coletado por filtração, secado sob vácuo) para dar o composto 9 (4,16 g, 60% rendimento) na forma de um sólido branco.

Dissolução do Composto 9:

O composto racêmico 9 foi dissolvido em DCM (50 mg, 1 ml) . A solução foi então diluída com hexano (9 ml). A solução foi então carregada numa coluna prep. Chiralcel OD (10 mícrons, 2 0x250 mm) e separada utilizando hexano/isopropanol (99:1, 15 ml/min). O primeiro enantiômero (9a) elui de 11,5 a 15 min e o segundo enantiômero (9b) elui de 17,5 a 25 min. A coluna analítica (Chiralcel OD, 0,46 χ 25 cm, 20 mícrons) dá um tempo de retenção de 6,5 min para 9a e de 10,6 min para 9b (99:1 hexano/lPA, 1 ml/min, operação 15 minutos). NMR (1H, CDCl3, 400 MHz) : d 1,61 (9H, s, C-(CH3)3); 3,44 (1H, t, J=2 5 Hz, CH-CH2-N); 3,9-4,0 (2H, m, C1-CH2-CH); 4,12 (1H, t, J=26 Hz), CH-CH2, N) ; 4,25 (1H, m, CH2CH-CH2); 5,26 (2H, s, O-CH2CeH5); 7,2-7,5 (8H, m, O-CH2C6H5, Ci0H5); 7,63 (1H, d, J=21 Hz, Ci0H5); 8,3 (1H, d, J=21 Hz, Ci0H5).

EXEMPLO 3 - Esquema 3 (Fig. 3).

O procedimento do método sintético é conforme descrito acima no Exemplo 1, através de síntese do composto 3.

Síntese do Composto 10

Uma solução de 4-hidroxinaftalen-2-ilcarbamato de ter- butila (3) (500 mg, 2,89 mmol) , cloridrato de cloreto de 4-metil-1-piperazinocarbonila (858 mg, 4,34 mmol), piridina anidra (4,98 ml, 57,8 mmol) e álcool alílico (4,98 ml, 73,2 mmol) em DCM anidro (2 0 ml) foi agitada à temperatura ambiente da noite para o dia. TLC (9:1 DCM/MeOH) mostrou não existir material de partida, e detectou a presença de um ponto muito mais baixo. A mistura de ração foi rapidamente resfriada com água. A camada aquosa foi extraída com EtOAc (3x50 ml) e os orgânicos foram lavados com salmoura (2x50 ml). Os orgânicos foram secados sobre Na2SO4, filtrados e concentrados sob vácuo até um óleo marrom. 0 produto bruto foi purificado através de cromatografia de coluna com metanol 1-5% em DCM para dar 10 (602 mg, 82%) na forma de um sólido amarelo.

1HNMR (DMSO-d6) δ 9,68 (s, 1H) , 7,91 (s, 1H) , 7,80 (d, 1H) , 7,69 (s, 1H) , 7,47 (t, 1H) , 7,42 (s, 1H) , 7,39 (t, 1H) , 3,78 (s, 2H) , 3,42 (s, 2H) , 2,44 (s, 2H) , 2,39 (s, 2H) , 2,21 (s, 3H) , 1,50 (s, 9H).

Síntese do Composto 11

O composto 10 (82 mg, 0,21 mmol), ácido p- toluenossulfônico (10 mg, 0,05 mmol), e N-iodosuccinimida (96 mg, 0,43 mmol) em THF anidro (5 ml) foi agitado à temperatura ambiente da noite para o dia. TLC (9:1 DCM/MeOH) mostrou uma pequena quantidade de material de partida e detectou um ponto mais alto. A mistura de reação foi rapidamente resfriada com NaHCO3 saturado (10 ml). Após agitação à temperatura ambiente durante 10 minutos, a mistura de reação foi extraída com EtOAc (3 χ ml) e os orgânicos lavados com salmoura (2 χ 2 0 ml). Os orgânicos foram secados sobre Na2SO4, filtrados e concentrados sob vácuo até um óleo marrom. O produto bruto foi purificado através de cromatografia de coluna com metanol a 1-5% em DCM para dar 11 (52 mg, 48%) na forma de um óleo amarelo.

1HNMR (DMS0-d6) δ 8,81 (s, 1H) , 8,14 (d, 1H) , 7,79 (d, 1H), 7,65 (t, 1H) , 7,58 (t, 1H) , 7,45 (t, 1H) , 3,78 (s, 2H), 3,42 (s, 2H) , 2,44(s, 2H) , 2,39 (s, 2H) , 2,21 (s, 3H), 1,50 (s, 9H).

Síntese do Composto 12 Uma solução do composto 11 (102 mg, 0,2 mmol) em DMF anidro (5 ml) foi resfriada em banho gelado. Hidreto de sódio (60% em óleo mineral, 32mg, 0,8 mmol) foi adicionado à reação. A mistura de reação foi agitada a 0°C durante 15 minutos e à temperatura ambiente durante 15 minutos, eis-trans-1,3-dicloropropeno (83,36 μl, 0,9 mmol) foi adicionado ã reação. A mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante 1 hora. TLC (9:1 DCM/MeOH) não mostrou a presença de material de partida. A mistura de reação foi rapidamente resfriada com água. A camada aquosa foi extraída com EtOAc (3 x 10 ml) e os orgânicos foram lavados com salmoura (2 x 10 ml). Os orgânicos foram secados sobre Na2SO4, filtrados e concentrados sob vácuo até um óleo marrom. 0 produto bruto foi purificado através de cromatografia de coluna com 1-5% metanol em DCM para dar 12 (82 mg, 70%) na forma de um sólido amarelo.

1HNMRiDMSO-d6) δ 8,20 (d, 1H) , 7,82 (d, 1H) , 7,62 (m, 2H), 7,38 (d, 1H) , 6,38 (m, 1H) , 6,18 (m, 1H) , 3,98-4,46 (dd, 2H) , 3,78 (s, 2H) , 3,42 (s, 2H) , 2,44 (s, 2H) , 2,39 (s, 2H), 2,21 (s, 3H), 1,50 (s, 9H). Síntese do Composto 13:

A uma solução de 12 (82 mg, 0,14 mmol) em tolueno anidro (3 ml), nitrogênio seco foi borbulhado durante 15 min. Hidreto de tributilestanho (47,1 μl, 0,18 mmol) e 2,2'- azobisisobutironitrila (10 mg, 0,06 mmol) foram adicionados à reação. A mistura de reação foi aquecida a 80°C durante 15 min sob nitrogênio. TLC (9:1 DCM/MeOH) mostrou um novo ponto azul e nenhum material de partida. A mistura de reação foi concentrada sob vácuo até um óleo amarelo. 0 produto bruto foi purificado através de cromatografia de coluna com 1-5% metanol em DCM para dar 13 (52 mg, 82%) na forma de um sólido branco. 1HNMR (DMS0-d6) δ 7,92 (d, 1H), 7,83 (m, 1H), 7,78 (d,lH), 7,58 (t, 1H), 7,42 (t, 1H), 4,20 (m, 2H), 4,04 (m, 2H) , 3,92 (m, 1H), 3,78 (s, 2H), 3,42 (s, 2H), 2,44 (s, 2H) , 2,39 (s, 2H), 2,21 (s, 3H), 1,50 (s, 9H). Dissolução de Composto 13:

O composto racêmico 13 é dissolvido em metanol. A solução é então carregada sobre coluna prep CHIRALPAK AD (2 0 mícrons, 2 0 χ 250 mm) e separada utilizando metanol (15 ml/min). 0 primeiro enantiômero (13a) elui a partir de 5,1 min e o segundo enantiômero (13b) elui a partir de 7,1 min. 1HNNR (DMSO-d6)ô 7,92 (d, 1H) , 7,83 (m, 1H) , 7,78 (d, 1H) , 7,58 (t, 1H) , 7,42 (t, 1H) , 4,20 (m, 2H) 4,04 (m, 2H) , 3,92 (m, 1H) , 3,78 (s, 2H) , 3,42 (s, 2H) , 2,44 (s, 2H) , 2,44 (s, 2H) , 2,39 (s, 2H) , 2,21 (s, 3H) , 1,50 (s, 9H).

Exemplo 4 - Síntese de Análogo CBI CC-1065

<formula>formula see original document page 43</formula>

Síntese do Composto (14). Uma solução de 9b (100 mg, 0,24 mmol) e Pd-C 10% (35 mg) em MeOH/CH2Cl2 (1/2, 10 ml) foi degasifiçada em vácuo durante 40 s. A mistura resultante foi colocada sob uma atmosfera de hidrogênio e agitada a 2 5°C durante 7h. A mistura de reação foi filtrada em placa de celite (lavagem com CH2Cl2) . 0 solvente foi removido em vácuo. A cromatografia sobre sílica gel eluída com EtOAc/Hex (2/8) deu 14 (77 mg, 98%). 1NMR DMSO-de δ 10,36 (s, 1H) , 8,04 (d, 1H, J=8,2 Hz), 7,72 (d, 1H, J=8, 2 Hz), 7,61 (br s, 1H) , 7,45 (t, 1H, J=8, 4 Hz), 7,261 (t, 1H, J=8,4 Hz), 4,06 (m, 4H) , 3,73 (m, 1H) , 1, 52 (s, 9H) .

Síntese do Composto (16). Uma solução de 14 (35 mg, 0,1 mmol) em 4M Hcl-EtOAc (5 ml) foi agitada a 25°C sob Ar durante 3 0 minutos. 0 solvente foi removido em vácuo. Ao resíduo adicionou-se ácido 5-acetilindono-2-carboxílico (24,4 mg, 0,12 mmol). Uma solução de EDC (22,9 mg, 0,12 mmol) em DMF (3 ml) foi adicionada e a mistura de reação agitada a 25°C durante 5 horas. 0 solvente foi removido. O produto bruto foi cromatografado sobre sílica gel eluído com MeOH 10% em CH2Cl2 para dar 16 (40,7 mg, 93%). 1HNMR DMS0-d6) δ 12,13 (s, 1H) , 10,47 (s, 1H) , 8,45 (s, 1H), 8,10(d, 1H, J=8,4 Hz), 7,96 (br s, 1H), 7,85 (d, 2H, J=8,4 Hz), 7,54 (d, 1H, J=8,4 Hz), 7,51 (t, 1H, J=8,2 Hz), 7,36 (t, 1H, J=7,6), 7,35 (s, 1H), 4,81 (t, 1H, 11,2 Hz), 4,54 (dd, 1H, 8,8 Hz), 4,23 (m, 1H) , 4,01 (dd, 1H, J=10,2 Hz), 3,86 (dd, 1H, J=10,7 Hz), 2,61 (s, 3H). Síntese do Composto (17) . Cloridrato de cloreto de 4- metil-l-piperazinocarbila (19,9 mg, 0,1 mmol) foi adicionado a uma solução de 16(2 0 mg, 0,05 mmol) e piridina anidra (25 μιτιΐ, 0,3 mmol) em álcool alílico a 3% em cloreto de metileno seco (4 ml) e a mistura foi agitada durante 16 h. A purificação do produto bruto sobre sílica gel deu 17 (23,6 mg, 91%). 1NMR DMS0-d6)ô 12, 03 (S, 1H) , 8,41 (s, 1H) , 8,21 (s, 1H) , 8,01 (d, 1H, J=8,4 Hz), 7,88 (d, 1H, J=8,4 Hz), 7,82 (dd, 1H, J=8,4 Hz), 7,58 (t, 1H, J=8,1 Hz), 7,51 (d, 1H, J=8,4 Hz), 7,46 (t, 1H, J=7,6 Hz), 7,37 (s, 1H), 4,86 (t, 1H, J=10,8 Hz), 4,57 (dd, 1H, J=10,8 Hz), 4,38 (m, 1H) , 4,06 (dd, 1H, J=IO,8 Hz), 3,86 (dd, 1H, J=Il Hz), 3,41 (br, 4H) , 3,29 (br, 4H), 2,82 (s, 3H), 2,57 (s, 3H).

Síntese do Composto (19) . Uma solução de 17(13 mg, 24 umol) e ligante 18 (16,9 mg, 31 umol) em ácido acético a 5% em cloreto de metileno seco (1 ml) foi agitada durante 30 minutos a 25°C. O solvente foi completamente removido em vácuo e purificado através de HPLC (coluna SymmetryPrep Ci8, Ίμτη, 19 χ 150 mm) para dar 19 (18,5 mg, 81%). MS: calc. C48H57ClN8On (M+H) m/z 958,38, encontrado 958,10 .

EXEMPLO 5 : Ensaios de Proliferação

A atividade biológica dos compostos citotóxicos da invenção pode ser testada utilizando o ensaio de proliferação de 3H-timidina. Trata-se de um método conveniente para quantificar a proliferação celular, já que avalia a síntese de DNA medindo a incorporação de 3H- timidina exógena radiomarcada. Esse ensaio é altamente reproduzível e pode acomodar grande número de compostos. Para conduzir o ensaio, células de leucemia promielocítica, HL-60, foram cultivadas em meios RPMI contendo 10% de soro bovino fetal inativado por calor (FCS) . No dia do estudo, as células foram coletadas, lavadas e resuspensas a uma concentração de 0,5 χ IO6 células/ml em RPMI contendo FCS a 10%. 100 μΐ de suspensão celular foram adicionados a placas de 96 cavidades. Diluições seriais (incrementos triplos) de doxorubicina (como controle positivo) ou compostos de teste foram preparados e 100 μΐ de compostos foram adicionados por cavidade. Finalmente, 10μ1 de 100 μα/ml 3H-timidina foram adicionados por cavidade e as placas incubadas durante 24 horas. As placas foram coletadas utilizando um Coletor de 96 cavidades (Packard Instruments) e contadas num contador Packard Top Count. Quatro curvas logísticas de parâmetro são adaptadas à incorporação de 3H-timidina como função de molaridade de fármaco utilizando software Prism para determinar os valores IC50.

Os análogos de CBI CC-1065 (ex: composto 19 do Exemplo 4) geralmente possuem um valor IC50 no ensaio acima de cerca de 1 pM a cerca de 100 nM, preferivelmente de cerca de 10 pM a cerca de 10 nM. EXEMPLO 6: Conjugação de Moléculas de Fármaco a Anticorpos

Este exemplo descreve as condições e as metodologias de reação para conjugar uma molécula de fármaco da invenção (opcionalmente incluindo outros grupos, tais como espaçadores, grupos funcionais reativos e similares) a um anticorpo como agente direcionador. As condições e metodologias têm caráter ilustrativo apenas e não restritivo. Outros métodos para conjugar moléculas de fármaco a anticorpos são conhecidos no estado da técnica. O método de conjugação descrito na presente invenção baseia-se na introdução de grupos tiol livres no anticorpo mediante reação de lisinas do anticorpo com 2- iminotiolano, seguido de reação da molécula fármaco- ligante com um grupo maleimida ativo. Inicialmente, o anticorpo a ser conjugado tem o tampão trocado por tampão fosfato 0, IM pH 8,0 contendo 50 mM NaCl, 2 mM DTPA, pH 8,0 e concentrado até 5-10 mg/ml. A tiolação é obtida mediante adição de 2 -iminotiolano ao anticorpo. A quantidade de 2-imunotiolano a ser adicionada é determinada em experimentos preliminares e varia de anticorpo para anticorpo. Nos experimentos preliminares, uma titulação de quantidades crescentes de 2-imunotiolano é adicionada ao anticorpo e após incubação com o anticorpo durante 1 hora à temperatura ambiente, o anticorpo é dessalinizado em 50 mM tampão HEPES pH 6,0 utilizando coluna Sephadex G-25 e o número de grupos tiol introduzido rapidamente determinado através de reação com ditiodipiridina (DTDP) . A reação de grupos tiol com DTDP resulta na liberação de tiopiridina que é monitorada a 324 nm. Podem ser usadas amostras a uma concentração de proteína de 0,5-1,0 mg/ml. A absorbância a 280 nm é usada para determinar com precisão a concentração de proteína nas amostras, e então uma alíquota de cada amostra (0,9 ml) é incubada com 0,1 ml de DTDP (5mM solução concentrada em etanol) durante 10 minutos à temperatura ambiente. Amostras em branco somente de tampão mais DTDP são também incubadas. Após 10 minutos, a absorbância a 324 nm é medida e o número de tióis presentes quantificados utilizando um coeficiente de extinção para tiopiridina de 19800 M"1.

Tipicamente, é desejável um nível de tiolação de três grupos tiol por anticorpo.Por exemplo, com um anticorpo específico, isso pode ser obtido mediante adição de 15x um excesso molar de 2 -iminotiolano seguido de incubação à temperatura ambiente durante 1 hora. O anticorpo a ser conjugado é, portanto, incubado com 2 -imunotiolano à razão molar desejada e então dessalinizado no tampão de conjugação (50mM tampão HEPES pH 6,0 contendo 5mM glicina, 3% glicerol e 2 mM DTPA). O material tiolado é mantido em gelo enquanto o número de tióis introduzido é quantificado, conforme acima descrito.

Após verificação do número de tióis introduzidos, a molécula de fármaco contendo um grupo maleimida ativo (ex: composto 15 do Exemplo 3) é adicionada num excesso molar triplo por tiol. A reação de conjugação é conduzida em tampão de conjugação também contendo uma concentração final de 5% etileno glicol dimetil éter (ou um solvente alternativo apropriado). Geralmente, a solução concentrada de fármaco é dissolvida em 90% etileno glicol dimetil éter, 10% dimetil sulfóxido. Para adição ao anticorpo, a solução concentrada é adicionada diretamente ao anticorpo tiolado, que tem suficiente etileno glicol dimetil éter adicionado para trazer a concentração final até 5%, ou pré-diluída em tampão de conjugação contendo uma concentração final de 10% etileno glicol dimetil éter, seguido da adição até um volume igual de anticorpo tiolado.

A reação de conjugação é incubada à temperatura ambiente durante 2 horas com mistura. Após incubação, a mistura de reação é centrifugada a 14 000 rpm durante 15 minutos e o pH pode ser ajustado para 7,2 se a purificação não for imediata. A purificação de conjugado pode ser obtida através de cromatografia utilizando diversos métodos. O conjugado pode ser purificado utilizando cromatografia por exclusão de dimensão numa coluna Sephacryl S2 00 pré- equilibrada com 50 mM tampão HEPES pH 7,2 contendo 5mM glicina, 50 mM NaCl e 3% glicerol. A cromatograf ia pode ser conduzida a uma taxa de escoamento linear de 28 cm/h. Frações contendo conjugado podem ser coletadas, agrupadas e concentradas. Alternativamente, a purificação pode ser executada através de cromatografia de troca iônica. As condições variam de anticorpo para anticorpo e precisam ser otimizadas em cada um dos casos. Por exemplo, a mistura de reação de conjugado anticorpo-fármaco pode ser aplicada a uma coluna SP-Sepharose pré-equilibrada em 50 mM HEPES, 5 mM glicina, 3% glicerol, pH 6,0. 0 conjugado de anticorpo pode ser eluído utilizando um gradiente de 0-1M NaCl em tampão de equilíbrio. Frações contendo o conjugado podem ser agrupadas, o pH ajustado para 7,2 e a amostra concentrada, conforme necessário.

As descrições completas de todos os pedidos, patentes e publicações aqui citadas são incorporadas por referência.

Os exemplos anteriormente citados podem ser repetidos com o mesmo êxito, substituindo-se os reagentes e/ou as condições de operação genérica e especificamente descritos na presente invenção pelos utilizados nos exemplos precedentes.

Com base na descrição acima, um habilitado na técnica pode facilmente determinar as características essenciais da presente invenção e, sem fugir de seu escopo e espírito, pode ainda efetuar alterações e modificações da invenção para adaptá-la aos diversos usos e condições.

Claims

1. Método para fazer um composto para preparar um análogo de CBI CC-1065, de fórmula (I), ou um sal do mesmo <formula>formula see original document page 49</formula> onde Ralquila, R' e R consistindo substituído, e R2 são, cada qual, independentemente H, C(O)OR', -C(O)NR'R" ou um grupo protetor, onde são independentemente selecionados do grupo de H, alquila substituído, alquila não arila substituído, arila não substituído, heteroarila substituído, heteroarila não substituído, heterocicloalquila substituído e heterocicloalquila não substituído; R6 é H, alquila inferior substituído ou não substituído, ciano ou alcoxi; e X é halogênio, caracterizado pelo fato de compreender: adicionar grupos protetores R1 e R2 a um composto (II) <formula>formula see original document page 49</formula> para formar um composto (III) <formula>formula see original document page 50</formula> onde R3 é H ou alquila; e gerar um anel de cinco membros compreendendo o nitrogênio de amina do composto (III).

2. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de R3 ser metila.

3. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de X ser Cl ou Br.

4. Método, de acordo com a reivindicação 3, caracterizado pelo fato de X ser Br.

5. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de R1 e R2 serem grupos protetores diferentes.

6. Método, de acordo com a reivindicação 5, caracterizado pelo fato de a etapa de adicionar R1 e R2 compreender adicionar R1 ao composto (II) para formar o composto (III') <formula>formula see original document page 50</formula> e substituir o grupo protetor R1 no substituinte hidroxila com o grupo protetor R2.

7. Método, de acordo com a reivindicação 5, caracterizado pelo fato de R1 ser ter-butiloxicarbonila.

8. Método, de acordo com a reivindicação 7, caracterizado pelo fato de R2' ser -CH2Ph.

9. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de R1 e R2 serem iguais.

10. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de compreender ainda substituir R1 e R2 com hidrogênio após gerar o anel de cinco membros.

11. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de R1 e R1 serem iguais e R2 e R2 serem iguais.

12. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de a etapa de gerar o anel de cinco membros compreender a iodação de um carbono adjacente ao substituinte amina do composto (III) seguido de alquilação utilizando 1,3-dihalopropeno.

13. Método para preparar um análogo de CBI CC-1065, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, tendo a seguinte formula: <formula>formula see original document page 51</formula> onde X é halo; X1 e Z são, cada qual, independentemente selecionados de O, S e NR8, onde R8 é um membro selecionado de H, alquila substituído ou não substituído, heteroalquila substituído ou não substituído, e acila; R4, R4', R5 e R5' são membros independentemente selecionados do grupo consistindo de H, alquila substituído, alquila não substituído, arila substituído, arila não substituído, heteroarila substituído, heteroarila não substituído, heterocicloalquila substituído, heterocicloalquila não substituído, halogênio, NO2, NR9R10, NC(O)R9, OC(O)NR9R10, OC(O)OR9, C(O)R9 , SR9, OR9, CR9=NR10 e O(CH2)nNR11R11'; onde R9 e R10 são independentemente selecionados de H, alquila substituído ou não substituído, heteroalquila substituído ou não substituído, arila substituído ou não substituído, heteroarila substituído ou não substituído, heterocicloalquila substituído ou não substituído, e peptidila substituído ou não substituído, ou onde R9 e R10 juntamente com o átomo de nitrogênio ao qual estão ligados, são opcionalmente unidos para formar um sistema de anel de heterocicloalquila substituído ou não substituído, tendo de 4 a 6 membros, opcionalmente contendo dois ou mais heteroátomos, e R11 e R11 são cada qual independentemente H ou alquila inferior; R6 é H, alquila inferior substituído ou não substituído, ciano ou alcoxi; e R7 é um membro selecionado do grupo consistindo de H, alquila substituído, alquila não substituído, heteroalquila substituído, heteroalquila não substituído, difosfatos, trifosfatos, acila, C(O)R12R13, C(O)OR12, C(O)NR12R13, P(O) (OR12)2, C(O)CHR12R13, SR12 e SiR12R13R14, onde R12, R13 e R14 são membros independentemente selecionados de H, alquila substituído ou não substituído, heteroalquila substituído ou não substituído e arila substituído ou não substituído, ou onde R12 e R13 juntamente com o átomo de nitrogênio ou carbono ao qual estão ligados, são opcionalmente unidos para formar um sistema de anel de heterocicloalquila substituído ou não substituído tendo de 4 a 6 membros, opcionalmente contendo dois ou mais heteroátomos, caracterizado pelo fato de compreender: adicionar os grupos protetores R1 e R2 a um composto <formula>formula see original document page 52</formula> para formar um composto (III) <formula>formula see original document page 53</formula> (III) onde R3 é H ou alquila; e gerar um anel de cinco membros compreendendo o nitrogênio de amina do composto (III); e adicionar uma unidade ligante ao composto (III), sendo que a unidade ligante compreende <formula>formula see original document page 53</formula>

14. Método, de acordo com a reivindicação 13, caracterizado pelo fato de a etapa de gerar o anel de cinco membros compreender a iodação de um carbono adjacente ao substituinte amina do composto (III) seguido de alquilação utilizando 1,3-dihalopropeno antes de gerar o anel de cinco membros.

15. Método, de acordo com a reivindicação 13, caracterizado pelo fato de a etapa de adicionar a unidade ligante compreender remover o grupo protetor R1.

16. Método, de acordo com a reivindicação 15, caracterizado pelo fato de a etapa de adicionar a unidade ligante compreender ainda adicionar a unidade ligante ao substituinte amina.

17. Método, de acordo com a reivindicação 13, caracterizado pelo fato de R6 ser H.

18. Composto, caracterizado pelo fato de apresentar a fórmula (I) , ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo: <formula>formula see original document page 54</formula> onde R1 e R2 são, cada qual, independentemente H, alquila, -C(O)OR', -C(0)NR'R", ou um grupo protetor, onde R' e R" são independentemente selecionados do grupo consistindo de H, alquila substituído, alquila não substituído, arila substituído, arila não substituído, heteroarila substituído, heteroarila não substituído, heterocicloalquila substituído, e heterocicloalquila não substituído.

19. Composto, de acordo com a reivindicação 18, caracterizado pelo fato de R1 e R2 serem grupos protetores diferentes.

20. Composto, de acordo com a reivindicação 18, caracterizado pelo fato de o composto ser: <formula>formula see original document page 55</formula>