BRPI0620946A2 - anticorpos anti-il-23 humanos, composições, métodos e uso - Google Patents

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Abstract

ANTICORPOS ANTI-IL-23 HUMANOS, COMPOSIçõES, MéTODOS E USO. A presente invenção refere-se a um anticorpo anti-IL-23p1 9, incluindo ácidos nuclélcos isolados que codificam pelo menos um anticorpo anti-IL-23p19, vetores, células hospedeiras, e métodos de produção e uso destes têm aplicações em composições, métodos e dispositivos de diagnóstico e/ou terapêutico.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "ANTICOR- POS ANTI-IL-23 HUMANOS, COMPOSIÇÕES, MÉTODOS E USO".
CAMPO DA INVENÇÃO
A presente invenção refere-se aos anticorpos, incluindo partes ou variantes específicas, específicas parpelo menos uma proteína IL-23 ou seu fragmento, assim como anticorpos antiidiótipos, e ácidos nucléicos que codificam os anticorpos anti-IL-23p19, ácidos nucléicos complementares, vetores, células hospedeiras, e os seus métodos de elaboração e de utiliza- ção, incluindo formulações terapêuticas, administração e dispositivos.
ANTECEDENTES DA INVENÇÃO
A interleucina (IL) 12 é uma citocina secretada heterodimérica composta de 2 subunidades de proteína glicosiladas ligadas a dissulfeto, designadas p35 e p40 com relação a seus pesos moleculares aproximados. A IL-12 é produzida principalmente por células que apresentam antígeno e impulsiona a imunidade mediada pela célula mediante a ligação a um com- plexo receptor de duas cadeias que é expresso na superfície das células T ou células exterminadoras naturais (NK). A cadeia beta-1 do receptor de IL- 12 (IL-12rpi) se liga à subunidade p40 da IL-12, proporcionando a interação primária entre IL-12 e seu receptor. No entanto, é a ligação de IL-12p35 da segunda cadeia de receptor, IL-12Γβ2, que confere a sinalização intracelular (por exemplo, fosforilação STAT4) e ativação da célula que carrega o recep- tor (Presky et al, 1996). A IL-12 sinalizando concorrente com a apresentação de antígeno é suposta de invocar a diferenciação de células Tem direção ao fenótipo ajudante T1 (Th1), caracterizado pela produção de interferon gama (IFNy) (Trinchieri, 2003). As células Th1 são supostas de promover a imuni- dade para alguns agentes patogênicos intracelulares, gerar isótipos de anti- corpo fixadores complementares, e contribuir com a imunovigilância de tu- mor. Assim, a IL-12 é suposta de ser um componente significativo para hos- pedar mecanismos imunológicos de defesa.
Foi descoberto que a subunidade de proteína p40 da IL-12 tam- bém pode se associar com uma subunidade de proteína separada, designa- da p19, para formar uma nova citocina, IL 23 (Oppman et al, 2000). A IL-23 também sinaliza através de um complexo de receptor de duas cadeias. Visto que a subunidade p40 é partilhada entre IL-12 e IL-23, segue-se que a ca- deia de IL-12rp1 também é partilhada entre IL-12 e IL-23. No entanto, é a ligação de IL-23p19 do segundo componente do complexo de receptor de IL- 23, IL-23R, que confere a sinalização intracelular específica de IL-23 (por exemplo, fosforilação STAT3) e subseqüente produção de IL-17 pelas célu- las T (Parham et al, 20.02; Aggarwal et al. 2003). Estudos recentes têm de- monstrado que as funções biológicas da IL-23 são distintas daquelas da IL- 12, apesar da semelhança estrutural entre as duas citocinas (Langrish et al, 2005).
A regulação anormal do IL-12 e as populações de célula Th1 têm sido associadas com muitas doenças mediadas imunológicas visto que a neutralização da IL-12 por anticorpos é eficaz no tratamento de modelos animais de psoríase, esclerose múltipla (MS), artrite reumatóide, doença in- flamatória intestinal, diabetes melito dependente de insulina (tipo 1), e uveíte (Leonard et al, 1995; Hong et al, 1999; Malfait et al, 1998; Davidson et al, 1998). No entanto, visto que estes estudos orientaram a subunidade p40 compartilhada, tanto IL-12 quanto IL-23 foram neutralizadas in vivo. Portan- to, não ficou claro se a IL-12 ou a IL-23 mediou a doença, ou se ambas as citocinas precisavam ser inibidas para alcançar a supressão da doença. Es- tudos recentes têm confirmado através de camundongos deficentes de IL- 23p19 ou a neutralização de anticorpos específicos de IL-23 que a inibição de IL-23 pode proporcionar benefícios equivalentes como estratégias de an- ti-IL-12p40 (Cua et al, 2003, Murphy et ai, 2003, Benson et al 2004). Portan- to, existe evidência crescente com relação ao papel específico da IL-23 na doença mediada imunológica. A neutralização de IL-23 sem a inibição das vias de IL-12 poderá fornecer terapia eficaz de doença mediada imunológica com impacto limitado no mecanismo imune de defesa hospedeiro importan- te. Isto representará uma melhora significativa sobre as opções terapêuticas correntes.
SUMÁRIO DA INVENÇÃO
A presente invenção fornece mamíferos isolados, incluindo, sem limitação, ser humano, anticorpos que se ligam à subunidade p19 da IL-23, anticorpos anti-IL-23p19 (também referidos como anticorpos IL-23p19), imu- noglobulinas, fragmentos, produtos de clivagem e outras partes específicas e suas variantes, assim como composições de anticorpo anti-IL-23p19, anti- corpos antiidiótipos IL-23p19, ácidos nucléicos de codificação ou comple- mentares, vetores, células hospedeiras, composições, combinações, formu- lações, dispositivos, animais transgênicos, plantas transgênicas, e métodos de sua produção e uso.
A presente invenção fornece, em um aspecto, moléculas de áci- do nucléico isoladas compreendendo, complementares, ou que hibridizam, um polinucleotídeo que codifica anticorpos anti-IL-23p19 específicos ou anti- corpos antiidiótipos, compreendendpelo menos uma seqüência específica, domínio, ou parte variante destes. A presente invenção ainda fornece veto- res recombinantes que compreendem ditas moléculas de ácido nucléico de anticorpos anti-IL-23p19, células hospedeiras que contendo tais ácidos nu- cléicos e/ou vetores recombinantes, assim como métodos de produção e/ou utilização de tais ácidos nucléicos de anticorpo, vetores e/ou células hospe- deiras.
A presente invenção fornece também pelo menos um método para expressar pelo menos um anticorpo anti-IL-23p19, ou anticorpo antiidió- tipo IL-23p19, em uma célula hospedeira, que compreende a cultura de uma célula hospedeira como aqui descrita sob condições em que pelo menos um anticorpo anti-IL-23p19 é expresso em quantidades detectáveis e/ou recupe- ráveis.
A presente invenção fornece também pelo menos uma composi- ção que compreende (a) um anticorpo anti-IL-23p19 isolado que codifica á- cido nucléico e/ou anticorpo como aqui descrito, e (b) um veículo ou diluente adequado e/ou farmaceuticamente aceitável.
A presente invenção ainda fornece pelo menos um método ou composição de anticorpo anti-IL-23p19, para administrar uma quantidade terapeuticamente eficaz para modular ou tratar pelo menos uma condição relacionada com a IL-23p19 em uma célula, tecido, órgão, animal ou pacien- te e/ou, antes de, subseqüente a, ou durante uma condição relacionada, como é conhecida na técnica e/ou como aqui descrita.
A presente invenção também fornece pelo menos uma composi- ção, dispositivo e/ou método de liberação de uma quantidade terapêutica ou profilaticamente eficaz de pelo menos um anticorpo anti-IL-23p19, de acordo com a presente invenção.
A presente invenção ainda fornece pelo menos um método ou composição de anticorpo anti-IL-23p19, para o diagnóstico de pelo menos uma condição relacionada com a IL-23 em uma célula, tecido, órgão, animal ou paciente e/ou, antes de, subseqüente a, ou durante uma condição rela- cionada, como conhecida na técnica e/ou como aqui descrita.
A presente invenção também fornece pelo menos uma composi- ção, dispositivo e/ou método de liberação para o diagnóstico de pelo menos um anticorpo anti-IL-23p19, de acordo com a presente invenção.
Também é fornecido um dispositivo médico, incluindpelo menos um anticorpo anti-IL-23p19 de mamífero isolado da invenção, em que o dis- positivo é adequado para colocar em contato ou administrar pelo menos um anticorpo anti-IL-23p19, anticorpo anti-idiotípico de IL-23p19, molécula de ácido nucléico, composto, proteína e/ou composição.
Também é fornecido um artigo de fabricação para uso humano farmacêutico ou diagnóstico, que compreende material de embalagem e um recipiente compreendendo uma solução ou uma forma Iiofilizada de pelo menos um anticorpo anti-IL-23p19 isolado da presente invenção. O artigo de fabricação pode opcionalmente ter o recipiente como um componente de um dispositivo ou sistema de liberação.
A presente invenção ainda fornece qualquer invenção aqui des- crita.
DESCRIÇÃO DAS FIGURAS
A figura 1A mostra que os anticorpos IL-23p19 humanos se Ii- gam especificamente ao monômero hrlL-23 e não hrlL-12 ou hrp40. Um an- ticorpo anti-IL-12/IL-23 p40 é mostrado se ligar ao monômero IL-23, IL-12 e o p40. A figura 1B mostra que os anticorpos IL-23p19 humanos se li- gam à IL-23 humana, mas não à IL-23 de murino ou suas subunidades.
A figura 2 mostra a IL-23 que se liga a dois dos anticorpos de IL- 23p19 imobilizádos na placa da invenção.
A figura 3A mostra que os anticorpos MOR04083 e MOR04190 bloqueiam a ligação de IL-23/IL-23R normal.
A figura 3B mostra que os anticorpos MOR04083 e MOR04190 não bloqueiam a ligação de IL-23/IL-12Rβ1 normal.
A figura 3C mostra que os anticorpos MOR04083, MOR04190 e MOR04217 não inibem a liação de IL-12 na ligação de IL-12Ρβ1 -Fe.
A figura 4 mostra que os anticorpos de IL-23p19 MOR04083 e MOR04190 da invenção inibem a fosforilação STAT 3 mediada por hrlL-23.
A figura 5A mostra que os anticorpos de IL-23p19 MOR04083 e MOR04190 da invenção inibem produção de IL-17 mediada por hrlL-23 re- combinante.
A figura 5B mostra que os anticorpos de IL-23p19 MOR04083 e MOR04190 da invenção inibem produção de IL-17 mediada por hrlL-23 nati- va.
A figura 5C mostra que os anticorpos de IL-23p19 MOR04083 e MOR04190 da invenção inibem a produção de IL-17 mediada por IL-23 de macaco cinomólogo nativo.
A figura 6 mostra que os anticorpos de IL-23p19 MOR04083 e MOR04190 da invenção não inibem a produção de IFNy mediada por hrlL- 12.
As figuras 7A-C mostram que os anticorpos de IL-23p19 MOR04083, MOR04190 e MOR04217 da invenção compete reciprocamente um com o outro para a ligação à hulL-23.
A figura 8 mostra que os anticorpos de IL-23p19 MOR05028, 05038, 05040, 05042, 05045, 05049 e 05053 da invenção inibem a produção de IL-17 mediada por hrlL-23 recombinante.
A figura 9 mostra que os anticorpos de IL-23p19 MOR05028, 05038, 05040, 05042, 05045, 05049 e 05053 da invenção bloqueiam a liga- ção de IL-23/IL-23R normal.
A figura 10 mostra que os anticorpos de IL-23p19 5040°^ e 3759eq/qs da invenção se ligam especificamente ao monômero de hrlL-23 e não hrlL-12 ou hrp40, comparáveis com o anticorpo monoclonal de murino anti-IL-23p19, mAb23A. O anticorpo de anti-IL-12/IL-23p40 mAb12A é mos- trado para se ligar a IL-23, IL-12 e ao monômero p40.
A figura 11A mostra que os anticorpos de IL-23p19 5040Q/EV e 3759eq/qs da invenção bloqueiam a ligação de IL-23/IL-23R normal.
A figura 11B mostra que os anticorpos de IL-23p19 5040Q/EV e 3759eq/qs da invenção não bloqueiam a ligação de IL-23/IL-12R normal.
A figura 11C mostra que os anticorpos de IL-23p19 5Õ40Q/EV e 3759eq/qs da invenção não inibem a ligação de IL-12 à ligação de IL-12RP1.
A figura 12 mostra que os anticorpos de IL-23p19 5040°^ e 3759eq/qs da invenção não inibem a produção de INFy induzida por IL-12 a partir das células NK92MI.
A figura 13 mostra que os anticorpos de IL-23p19 5040Q/EV e 3759eq/qs da invenção inibem a produção de IL-17 mediada por hrlL-23 re- combinante.
figura 14 mostra que os anticorpos de IL-23p19 5040°^ e 3759eq/qs da invenção inibem a produção de IL-17 mediada por hrlL-23 nativa.
A figura 15 mostra que os anticorpos de IL-23p19 5040Q/EV e 3759eq/qs da invenção inibem a produção de IL-17 mediada por IL-23 de macaco cinomólogo nativo.
A figura 16A mostra que os anticorpos de IL-23p19 5040Q/EV e 3759eq/qs da invenção e mAb23A competem com a ligação de IL-23 à mAb23A imobilizada.
A figura 16B mostra que os anticorpos de IL-23p19 5040Q/EV e 3759EQ/QS da invenção e, em uma menor extensão, mAb23A compete com a ligação de IL-23 com a 5040Q/EV mAb imobilizada.
A figura 16C mostra que os anticorpos de IL-23p19 5040Q/EV e 3759EQ/QS da invenção e mAb23A competem com a ligação de IL-23 com a 3759EQ/QS mAb imobilizada. DESCRIÇÃO DA INVENÇÃO
A presente invenção fornece anticorpos anti-IL-23p19 isolados, recombinantes e/ou sintéticos, incluindo, sem limitação, mamíferos (por e- xemplo, anticorpos humanos) e anticorpos de IL-23p19 antiidiótipos deste, assim como composições e moléculas de ácido nucléico de codificação compreendendpelo menos polinucleotídeos que codificam pelo menos um anticorpo anti-IL-23p19 ou anticorpo antiidiótipo. A presente invenção ainda inclui, mas não é limitada a eles, métodos de produção e uso de tais ácidos nucléicos e de anticorpos e anticorpos antiidiótipos, incluindo composições de diagnóstico e terapêuticas, métodos e dispositivos.
Como aqui utilizado, um "anticorpo anti-IL-23p19", "anticorpo de IL-23p19", "parte de anticorpo de anti-IL-23p19", ou "fragmento de anticorpo anti-IL-23p19" e/ou "variante de anticorpo anti-IL-23p19" e outros mais inclu- em qualquer proteína ou peptídeo contendo molécula que compreende pelo menos uma parte de uma molécula de imunoglobulina, tal como, mas não limitado a ela, pelo menos uma região determinante da complementaridade (CDR) de uma cadeia pesada ou leve ou uma parte de ligação ao ligando desta, uma região variável de cadeia pesada ou cadeia leve, uma região constante de cadeia pesada ou cadeia leve, um região estrutural, ou qual- quer parte destas, ou pelo menos uma parte de um receptor de IL-23 ou pro- teína de ligação, que pode ser incorporada em um anticorpo da presente invenção. Tal anticorpo opcionalmente ainda afeta um ligando específico, tal como, mas não limitado a este, onde tal anticorpo modula, diminui, aumenta, antagoniza, agoniza, atenua, alivia, bloqueia, inibe, revoga e/ou interfere com pelo menos uma atividade ou ligação de IL-23, ou com a atividade ou ligação do receptor de IL-23, in vitro, in situ e/ou in vivo. Como um exemplo não limitativo, um anticorpo anti-IL-23p19 adequado, porção ou variante es- pecífica da presente invenção pode vincular pelo menos uma molécula de IL-23, ou suas partes específicas, variantes ou domínios. Um anticorpo anti- IL-23p19 adequado, parte específica, ou variante também pode opcional- mente afetar pelo menos um da atividade ou função de IL-23p19, tal como, mas não limitado a estes, RNA, síntese de DNA ou proteína, liberação de IL- 23, sinalização do receptor de IL-23, clivagem de IL-23 na membrana, ativi- dade de IL-23, produção e/ou síntese de IL-23.
O termo "anticorpo" é ainda destinado a abranger anticorpos, fragmentos de digestão, partes específicas e variantes deste, incluindo, sem limitação, miméticos de anticorpo ou compreendendo partes de anticorpos que imitam a estrutura e/ou função de um anticorpo ou fragmento específico ou parte deste, incluindo, sem limitação, anticorpos de cadeia única, anticor- pos de domínio único, e os seus fragmentos. Os fragmentos funcionais in- cluem de fragmentos de ligação ao antígeno que se ligam a uma humana. Por exemplo, fragmentos de anticorpo capazes de ligação à IL-23p19 ou partes desta, incluindo, mas não limitado a eles, fragmentos de Fab (por e- xemplo, mediante a digestão de papaína), Fab1 (por exemplo, mediante a digestão de pepsina e redução parcial) e F(ab')2 (por exemplo, mediante a digestão de pepsina), facb (por exemplo, mediante a digestão de plasmina), pFc' (por exemplo, mediantem a digestão de pepsina ou plasmina), Fd (por exemplo, mediante a digestão de pepsina, redução e reagregação parciais), Fv ou scFv (por exemplo, por técnicas de biologia molecular), são incluídos pela invenção (vide, por exemplo, Colligan, Immunology, supra).
Tais fragmentos podem ser produzidos pela clivagem enzimáti- ca, técnicas sintéticas ou recombinantes, como são conhecidas na técnica e/ou como aqui descritas. Os anticorpos também podem ser produzidos em uma variedade de formas truncadas utilizando genes de anticorpo em que uma ou mais codons de interrupção foram introduzidos a montante do sítio de interrupção natural. Por exemplo, um gene de combinação que codifica uma parte de cadeia pesada de F(ab')2 pode ser designado a incluir seqüên- cias de DNA que codificam o domínio de CH1 e/ou região da dobradição da cadeia pesada. As várias partes de anticorpos podem ser unidas entre si quimicamente por técnicas convencionais, ou podem ser preparadas como uma proteína contígua utilizando técnicas de engenharia genética.
O termo "anticorpo humano", como aqui usado, destina-se a in- cluir anticorpos tendo regiões variáveis e constantes derivadas da ou inti- mamente em combinação com as seqüências de imunoglobulina da linha germinativa humana. Os anticorpos humanos da invenção podem incluir re- síduos de aminoácido não codificados pelas seqüências de imunoglobulina da linha germinativa humana (por exemplo, mutações introduzidas ao acaso ou mutagênesé específica do sítio in vitro ou em mutação somática in vivo).
Assim, como utilizado neste documento, o termo "anticorpo humano" refere- se a um anticorpo em que substancialmente cada parte da proteína (por e- xemplo, CDR, estrutura, CL, domínios de Ch (por exemplo, CH1, CH2, CH3), dobradiça, (VL) Vh)) é substancialmente semelhante a um anticorpo da linha germinativa humana. Os anticorpos humanos foram classificadas em agru- pamentos com base em suas similaridades de seqüência de aminoácido, por exemplo, vide http://people.crvst.bbk.ac.uk/~ubca07s/. Assim, usando uma pesquisa de similaridade de seqüência, um anticorpo análogo seqüência linear similar pode ser escolhido como um modelo para criar "anticorpos hu- manizado".
"Humanização" (também chamado Reshaping ou enxertia de CDR) é atualmente uma técnica bem estabelecida para reduzir a imunogenicidade de anticorpos monoclonais (mAbs) a partir de fontes xenogênicas (comumente roedores) e para a melhoria as funções efetoras (ADCC, ativação complemen- tar, ligação de C1q). O mAb planejado é construído utilizando as técnicas de biologia molecular, porém a enxertia de CDR simples do regiões determinantes da complementaridade de roedor (CDRs) nas estruturas humanas muitas vezes resulta em perda de afinidade e/ou especificidade de ligação do mAb original. A fim de humanizar um anticorpo, a concepção do anticorpo humanizado inclui variações tais como substituições de aminoácido conservadoras nos resíduos dos CDRs, e substituição de retorno dos resíduos do mAb de roedor nas regi- ões estruturais humanas (mutações retrógradas). As posições podem ser cons- tatadas ou identificadas pela comparação de seqüência para análise estrutural ou pela análise de um modelo de homologia da estrutura em 3D das regiões variáveis. O processo de maturação por afinidade tem mais recentemente utili- zado as bibliotecas fago para variar os aminoácidos nas posições escolhidas. Similarmente, muitas abordagens têm sido usadas para escolher as estruturas humanas mais apropriadas para enxertar os CDRs em roedor. Quando os da- dos dos parâmetros conhecidos para estruturas de anticorpo aumentam, o mesmo acontece com a sofisticação e o requinte destas técnicas. As seqüên- cias de consenso ou da linha germinativa de um anticorpo isolado ou fragmen- tos das seqüências estruturais dentro de cada região variável de cadeia leve ou pesada de diferentes mAbs humanos podem ser usadas. Uma outra aborda- gem para a humanização é modificar apenas os resíduos superficiais da se- qüência de roedor com os resíduos mais comuns observados nos mAbs huma- nos e foi denominado "recapeamento" ou "folheamento". As seqüências de Ig humanas conhecidas são descritas, por exemplo, www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/querv.fcgi;www.ncbi.nih.gov/iqblast; www.atcc.org/phage/hdb.html;www.kabatdatabase.com/top.html; www.antibodyresource.com/onlinecomp.html;www.appliedbiosvstems.com; www.biodesign.com;antibody.bath.ac.uk; www.unizh.ch; www.cryst.bbk.ac.uk/~ubcg07s; Kabat et al., Sequences of Proteins of Immuno- logical Interest, U.S. Dept. Health (1983), cada um aqui inteiramente incorpora- do por referência. Muitas vezes, o anticorpo humano ou humanizado é subs- tancialmente não-imunogêhicos em seres humanos.
Similarmente, os anticorpos designados primatas (macaco, ba- buíno, chimpanzé, etc.), roedores (camundongo, rato, coelho, porquinho-da- índia, hamster, e outros) e outros mamíferos designam tais espécies, subgê- neros, gêneros, subfamílias, anticorpos específicos familiares. Além disso, os anticorpos quiméricos podem incluir qualquer combinação dos acima. Tais mudanças ou variações opcional e preferivelmente retêm ou reduzem a imunogenicidade em seres humanos ou outras espécies em relação aos an- ticorpos não-modificados. Assim, um anticorpo humano é distinto de um an- ticorpo quimérico humanizado.
Observou-se que um anticorpo humano pode ser produzido por uma célula procariótica ou eucariótica animal não humano que é capaz de ex- pressar genes de imunoglobulina humana funcionalmente reorganizados (por exemplo, de cadeia pesada e/ou de cadeia leve). Por outro lado, quando um anticorpo humano for um anticorpo de cadeia única ou domínio único, pode compreender um peptídeo Iigador que não é encontrado em anticorpos huma- nos nativos. Por exemplo, um Fv pode compreender um peptídeo ligador, tal como de dois a cerca de oito resíduos de glicina ou outro aminoácido, que liga a região variável da cadeia pesada e da região variável da cadeia leve. Tais peptídeos ligadòres são considerados de ser de origem humana.
Os anticorpos biespecíficos, heteroespecíficos, heteroconjugados ou similares também podem ser usados os quais são monoclonais, preferi- velmente, humanos ou. humanizados, anticorpos que possuem especificida- des de ligação com relação pelo menos dois antígenos diferentes. No presen- te caso, uma das especificidades de ligação é com relação pelo menos uma subunidade de proteína de IL-23p19, o outro é com relação a qualquer outro antígeno. Métodos para a produção de anticorpos biespecíficos são conheci- dos na técnica. Tradicionalmente, a produção recombinante de anticorpos biespecíficos se baseia na co-expressão de dois pares de imunoglobulina de cadeia pesada-cadeia leve, onde as duas cadeias pesadas possuem diferen- tes especificidades (Milstein and Cuello, Nature 305:537 (1983)). Devido à variedade aleatória de cadeias pesadas e leves de imunoglobulina, estes hi- bridomas (quadromas) produzem uma mistura potencial de 10 diferentes mo- léculas de anticorpo, das quais apenas uma possui a estrutura biespecífica correta. A purificação da molécula correta é geralmente feita por etapas de cromatografia por afinidade. Os procedimentos similares são descritos, por exemplo, nas WO 93/08829, Patentes U.S. n25 6210668, 6193967, 6132992, 6106833, 6060285, 6037453, 6010902, 5989530, 5959084, 5959083, 5932448, 5833985, .5821333, 5807706, 5643759, 5601819, 5582996, 5496549, 4676980, WO 91/00360, WO 92/00373, EP 03089, Traunecker et al., EMBO J. 10:3655 (1991), Suresh et al., Methods in Enzymology 121:210 (1986), cada uma aqui totalmente incorporada por referência.
Os anticorpos anti-IL-23p19 úteis nos métodos e composições da presente invenção podem opcionalmente ser caracterizados pela ligação por afinidade elevada à IL-23p19 e, opcionalmente e preferivelmente, como tendo baixa toxicidade. Em particular, um anticorpo, fragmento específico ou variante da invenção, onde os componentes individuais, tais como a região variável, região constante e estrutura, individual e/ou coletivamente,,opcional e preferivelmente possuem baixa imunogenicidade, é útil na presente inven- ção. Os anticorpos que podem ser utilizados na invenção são opcionalmente caracterizados por sua capacidade de tratar pacientes durante longos perío- dos com alívio mensurável dos sintomas e toxicidade baixa e/ou aceitável. A imunogenicidade baixo ou aceitável e/ou afinidade elevada, assim como ou- tras propriedades adequadas, podem contribuir com os resultados terapêuti- cos alcançados. "Imunogenicidade baixa" é aqui definida como a incidência de níveis tituláveis de anticorpos com o anticorpo anti-IL-23p19 em pacientes tratados com anticorpo anti-IL-23p19 quando ocorre em menos de 25% dos pacientes tratados, preferivelmente, em menos de 10% dos pacientes trata- dos com a dose recomendada para o curso recomendada de terapia durante o período de tratamento.
Os ácidos nucléicos isolados da presente invenção podem ser usados para a produção de pelo menos um anticorpo anti-IL-23p19 ou vari- ante específica, que pode ser utilizada para medir o efeito em uma célula, tecido, órgão ou animal (incluindo mamíferos e seres humanos), para diag- nosticar, monitorar, modular, tratar, aliviar, ajudar a prevenir a incidência, ou reduzir os sintomas, de pelo menos uma condição relacionada com a IL-23, selecionada, mas não limitado a elas, de pelo menos um distúrbio ou doença imune, um distúrbio ou doença cardiovascular, um distúrbio ou doença infec- ciosa, maligna, e/ou neurológica, ou outra condição relacionada com a IL-23 conhecida ou especificada.
Um tal método pode compreender a administração de uma quantidade eficaz de uma composição ou de uma composição farmacêutica compreendendpelo menos um anticorpo anti-IL-23p19 em uma célula, teci- do, órgão, animal ou paciente com necessidade de tal modulação, tratamen- to, alívio, prevenção, ou redução nos sintomas, efeitos ou mecanismos. A quantidade efeicaz pode compreender uma quantidade de cerca de 0,001 a 500 mg/kg per administração única (por exemplo, bolo), múltipla ou contínua, ou para alcançar concentração no soro de 0,01 a 5000 μg/ml per administra- ção única, múltipla ou contínua, ou qualquer faixa ou valor nesse particular, como é feito e determinado usando métodos conhecidos, como aqui descrito ou conhecido nas técnicas relevantes.
Anticorpos da Presente Invenção - Produção e Geração
Pelo menos um anticorpo anti-IL-23p19 da presente invenção pode ser opcionalmente produzido por uma linhagem celular, uma linhagem celular misturada, uma célula imortalizada ou população clonal de células imortalizadas, assi como na técnica. Vide, por exemplo, Ausubel, et al., ed., Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, Inc., NY, NY (1987-2001); Sambrook, et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2nd Edition, Cold Spring Harbor, NY (1989); Harlow and Lane, Antibodies, a La- boratory Manual, Cold Spring Harbor, NY (1989); Colligan, et al., eds., Cur- rent Protocols in lmmunology, John Wiley & Sons, Inc., NY (1994-2001); Col- ligan et al., Current Protocols in Protein Science, John Wiley & Sons, NY, NY, (1997-2001).
Os anticorpos que são específicos para as proteínas de IL- 23p19 humanas ou fragmentos destas podem ser obtidos a partir de biblio- tecas de anticorpo humano recombinante utilizando um antígeno apropriado, tal como uma proteína de IL-23p19 isolada e/ou uma parte desta (incluindo as moléculas sintéticas, tais como peptídeos sintéticos). Outros anticorpos específicos ou gerais, incluindo, sem limitação, anticorpos de mamífero, po- dem ser similarmente promovidos. A preparação de antígenos, e isolamento de anticorpos das bibliotecas humanos, pode ser executada utilizando qual- quer técnica adequada.
Em uma abordagem, um anticorpo recombinante é obtido pela exposição fago utilizando bibliotecas de anticorpo (Hoogenboom HR. Over- view of antibody phage-display technology and its applications. Methods in Molecular Biology. 178:1-37, 2002). Em uma abordagem preferida, um Fab humano recombinante é isolado da HuCaI Gold® Library developed by Mor- phoSys, AG (Kretzschmar, 2002) e posteriormente melhorado em sua ativi- dade pela diversificação de cassete de CDR (Knappik et al., 2000; Krebs et al., 2001).
Os anticorpos humanos recombinantes recuperados a partir das bibliotecas de exibição fago podem ser planejados para substituir certos re- síduos com aminoácidos específicos que correspondem com as seqüências de anticorpo humanas de consenso ou específicas. Estas seqüências são identificadas por comparações com as bases de dados de anticorpos da li- nha germinativa ou reorganizados conhecidos.
As seqüências de Ig humanas conhecidas são descritas, por e- xemplo, www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi; www.ncbi.nih.gov/igblast; www.atcc.org/phage/hdb.html; www. mrc-cpe.cam.ac.uk/ALIGNMENTS.php; www.kabatdatabase.com/top.html; ftp. ncbi.nih.gov/repository/kabat; www. imgt.cines.fr.8104/; www. biochem.unizh.ch/antibody/index.html; www. sci- quest.com; www.abcam.com; www.antibodyresource.com/onlinecomp.html; www.public.iastate.edu/~pedro/research_tools.html; www. whfree- man.com/immunology/CH05/kuby05.htm; www. hh- mi.org/grants/lectures/1996/vlab; www.path.cam.ac.uk/~mrc7/mikeimages.html; mcb.harvard.edu/BioLinks/lmmunology.html; www.immunologylink.com; path- box. wustl.edu/~hcenter/index.html; www.appliedbiosystems.com; www. nal.usda.gov/awic/pubs/antibody; www. m.ehime-u.ac.jp/~yasuhito/Elisa.html; www.biodesign.com; www.cancerresearchuk.org; www.biotech.ufl.edu; www. isac-net.org; baserv. uci.kun.nl/~jraats/links1.html; www. recab.uni- hd.de/immuno.bme.nwu.edu; www. mrc-cpe.cam.ac.uk; www. ibt.unam.mx/vir/V_mice.html; http://www. bioinf.org.uk/abs; antibody.bath.ac.uk; www. unizh.ch; www.cryst.bbk.ac.uk/~ubcg07s; www. ni- mr.mrc.ac.uk/CC/ccaewg/ccaewg.html; www. pa- th.cam.ac.uk/~mrc7/humanisation/TAHHP.html; www. ibt.unam.mx/vir/structure/stat_aim.html; www. bios- ci.missouri.edu/smithgp/index.html; www.jerini.de; Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, U.S. Dept. Health (1983), cada uma aqui inteiramente incorporada por referência.
Tais aminoácidos substituídos podem ser usados para reduzir a imunogenicidade ou reduzir, intensificar ou modificar a ligação, afinidade, índice de associação, índice de desassociação, avidez, especificidade, meia- vida, ou qualquer outra característica adequada, como conhecido na técnica. Em geral, os resíduos de CDR estão diretamente e mais substancialmente envolvidos na influência da ligação ao antígeno.
Opcionalmente, os anticorpos humanos podem serplanejados com retenção de alta afinidade para o antigénio e outras propriedades bioló- gicas favoráveis. Para atingir este objetivo, os anticorpos humanos podem ser opcionalmente preparados por um processo de análise das seqüências parentais e vários produtos planejados conceituais utilizando modelos tridi- mensionais das seqüências parentais, planejadas e humanas. Os modelos de imunoglobulina tridimensionais são comumente disponíveis e são familia- res para aqueles versados na técnica, Os programas de computador são disponíveis os quais ilustram e apresentam estruturas conformacionais tridi- mensionais prováveis de seqüências de imunoglobulina candidatas selecio- nadas. A inspeção destas exposições permite a análise da provável função dos resíduos no funcionamento da seqüência de imunoglobulina candidato, ou seja, a análise dos resíduos que influenciam a capacidade da imunoglo- bulina candidato em se ligar ao seu antígeno. Desta forma, os resíduos po- dem ser selecionados e combinados das seqüências humanas de origem e de referência de modo que a característica de anticorpo desejada, tal como a afinidade para o(s) antígeno(s) alvo, seja alcançada. Alternativamente, ou além dos procedimentos acima, o planejamento pode ser executado empiri- camente pela diversificação do cassete de CDR e pela seleção da atividade desejada, tal como descrito com relação ao sistema MorphoSys HuCAL (Knappik et al., 2000; Krebs et al., 2001).
Além disso, o anticorpo de IL-23p19 da presente invenção pode compreender uma estrutura de cadeia leve da linha germinativa humana. Nas modalidades particulares, a seqüência da linha germinativa de cadeia leve é selecionada a partir das seqüências VK humanas incluindo, mas não limitado a elas, A1, A10, A11, A14, A17, A18, A19, A2, A20, A23, A26, A27, A3, A30, A5, A7, B2, B3, L1, L10, L11, L12, L14, L15, L16, L18, L19, L2, L20, L22, L23, L24, L25, L4/18a, L5, L6, L8, L9, 01, 011, 012, 014, 018, 02, 04 e 08. Em certas modalidades, esta estrutura da linha germinativa humana de cadeia leve é se- lecionada de V1-11, V1-13, V1-16, V1-17, V1-18, V1-19, V1-2, V1-20, V1-22, V1-3, V1-4, V1-5, V1-7, V1-9, V2-1, V2-11, V2-13, V2-14, V2-15, V2-17, V2-19, V2-6, V2-7, V2-8, V3-2, V3-3, V3-4, V4-1, V4-2, V4-3, V4-4, V4-6, V5-1, V5-2, V5-4 e V5-6. Vide PCT WO 2005/005604 para uma descrição das diferentes seqüências da linha germinativa.
Em outras modalidades, o anticorpo de IL-23 da presente inven- ção pode compreender uma estrutura de cadeia pesada da linha germinativa humana. Nas modalidades particulares, esta estrutura de cadeia pesada da linha germinativa humana é selecionada de VH1-18, VH1-2, VH1-24, VH1-3, VH1-45, VH1-46, VH1-58, VH1-69, VH1-8, VH2-26, VH2-5, VH2-70, VH3-11, VH3-13, VH3-15, VH3-16, VH3-20, VH3-21, VH3-23, VH3-30, VH3-33, VH3- 35, VH3-38, VH3-43, VH3-48, VH3-49, VH3-53, VH3-64, VH3-66, VH3-7, VH3-72, VH3-73, VH3-74, VH3-9, VH4-28, VH4-31, VH4-34, VH4-39, VH4-4, VH4-59, VH4-61, VH5-51, VH6-1 e VH7-81. Vide a PCT WO 2005/005604 para uma descrição das diferentes seqüências da linha germinativa.
Nas modalidades particulares, a região variável de cadeia leve e/ou a região variável de cadeia pesada compreende uma região estrutural ou pelo menos uma parte de uma região estrutural (por exemplo, contendo 2 ou 3 sub-regiões, tais como FR2 e FR3). Em certas modalidades, pelo me- nos FRL1, FRL2, FRL3 ou FRL4 é plenamente humana. Em outras modali- dades, pelo menos FRH1, FRH2, FRH3 ou FRH4 é plenamente humana. Em algumas modalidades, pelo menos FRL1, FRL2, FRL3 ou FRL4 é uma se- qüência da linha germinativa (por exemplo, linha germinativa humana) ou compreende seqüências de consenso humanas para a estrutura particular (prontamente disponíveis nas fontes de seqüências de Ig humanas conheci- das descritas acima). Em outras modalidades, pelo menos FRH1, FRH2, FRH3 ou FRH4 é uma seqüência da linha germinativa (por exemplo, linha germinativa humana) ou compreende seqüências de consenso humanas para a estrutura particular. Nas modalidades preferidas, a região estrutural é uma região estrutural humana.
O planejamento de anticorpos da presente invenção pode ser exe- cutado utilizando qualquer método conhecido, tal como, mas não limitado a a- queles descritos em, Winter (Jones et al., Nature 321:522 (1986); Riechmann et al., Nature 332:323 (1988); Verhoeyen et al., Science 239:1534 (1988)), Sims et al., J. Immunol. 151: 2296 (1993); Chothia and Lesk1 J. Mol. Biol. 196:901 (1987), Carter et al., Proc. Natl. Acad. Sei. U.S.A. 89:4285 (1992); Presta et al., J. Immunol. 151:2623 (1993), Patentes U.S. n^: 5723323, 5976862, 5824514, 5817483, 5814476, 5763192, 5723323, 5766886, 5714352, 6204023, 6180370, 5693762, 5530101, 5585089, 5225539; 4816567, PCT/: US 98/16280, US 96/18978, US 91/09630, US 91/05939, US 94/01234, GB 89/01334, GB 91/01134, GB 92/01755; WO 90/14443, WO 90/14424, WO 90/14430, EP 229246, cada um aqui totalmente incorporado por referência, incluídas as refe- rências citadas nesse particular.
Em certas modalidades, o anticorpo compreende uma região Fc alterada (por exemplo, modificada). Por exemplo, em algumas modalidades, a região Fc foi alterada para reduzir ou aumentar as funções efetoras do an- ticorpo. Em algumas modalidades, a região Fc é um isotipo selecionado de IgM, IgA, IgG, IgE, ou outro isotipo.
Alternativa ou adicionalmente, pode ser útil combinar as modifi- cações de aminoácido com uma ou mais outras modificações de aminoácido que alterem a ligação de C1q e/ou a função de citotoxicidade dependente complementar (CDC) da região Fc de uma molécula de ligação de IL-23p19. O polipeptídeo de ligação de interesse particular pode ser aquele que se liga ao C1q e apresenta citotoxicidade dependente complementar. Os polipeptí- deos com atividade de ligação de C1q preexistente, opcionalmente ainda tendo a capacidade de mediar a CDC, podem ser modificados tais que uma ou ambas destas atividades sejam reforçadas. As modificações de aminoá- cido que alteram o C1q e/ou modificam a sua função de citotoxicidade de- pendente complementar são descritas, por exemplo, na W0/0042072, que é por meio desta incorporada por referência.
Conforme descrito acima, pode-se projetar uma região Fc dos anticorpos de IL-23p19 da presente invenção com função efetora alterada, por exemplo, mediante a modificação da ligação de Clq e/ou ligação de FcyR e assim modificar a atividade de CDC e/ou atividade de ADCC. As "funções efetoras" são responsáveis pela ativação ou diminuição de uma atividade biológica (por exemplo, em um indivíduo). Exemplos de funções efetoras incluem, mas não estão limitados a estes: ligação de C1q; citotoxi- cidade dependente complementar (CDC); ligação ao receptor de Fc; citotoxi- cidade mediada pela célula dependente do anticorpo (ADCC); fagocitose; infra-regulação dos receptores da superfície celular (por exemplo, receptor da célula B; BCR), etc. Tais funções efetoras podem requerer a região Fc para ser combinada com um domínio de ligação (por exemplo, um domínio variável de anticorpos) e podem ser avaliadas utilizando vários ensaios (por exemplo, ensaios de ligação ao Fc, ensaios ADCC, ensaios CDC, etc).
Por exemplo, pode-se gerar uma região Fe variante do anticorpo de IL-23p19 corri uma ligação de C1q melhorada e ligação de FcyRIII melho- rada (por exemplo, tendo tanto atividade ADCC melhorada quanto atividade CDC melhorada). Alternativamente, se for desejável que a função efetora seja reduzida ou removida, uma região Fc variante pode ser planejada com a atividade CDC reduzida e/ou atividade ADCC reduzida. Em outras modali- dades, apenas uma destas atividades pode ser aumentada, e, opcionalmen- te, da mesma forma a outra atividade reduzida (por exemplo, para gerar uma região Fc variante com atividade ADCC melhorada, mas com atividade CDC reduzida e vice-versa).
As mutações de Fc também podem ser introduzidas e planeja- das para alterar a sua interação com o receptor de Fc neonatal (FcRn) e me- lhorar as suas propriedades farmacocinéticas. Uma coleção de variantes de Fc humanas com ligação melhorada com o FcRn foi descrita (Shields et al., (2001). O mapeamento de alta resolução do sítio de ligação em IgGI huma- na para FcyRI, FcyRII, FctRIII e FcRn e concepção de variantes de IgGI com ligação melhorada ao FcyR, (J. Biol. Chem. 276:6591-6604).
Um outro tipo de substituição de aminoácido serve para alterar o padrão de glicosilação da região Fc do anticorpo de IL-23p19. A glicosilação de uma região Fc é tipicamente N-ligada ou O-ligada. N-ligada refere-se à conexão do componente de carboidrato com a cadeia lateral de um resíduo de asparagina. A glicosilação O-ligada refere-se à conexão de um dos açú- cares N-aceilgalactosamina, galactose ou xilose a um ácido de hidroxiamino, mais comumente serina ou treonina, embora a 5-hidroxiprolina ou A 5- hidroxilisina também possa ser usada. As seqüências de reconhecimento para a conexão enzimática do componente de carboidrato com as seqüência de peptídeo da cadeia lateral de asparagina são asparagina-X-serina e as- paragina-X-treonina, onde X é qualquer aminoácido exceto prolina. Assim, a presença de cada uma destas seqüências de peptídeo em um polipeptídeo cria um sítio de glicosilação potencial.
O padrão de glicosilação pode ser alterado, por exemplo, pela anulação de um ou mais sítios de glicosilação observados no polipeptídeo, e/ou adição de um ou mais sítio de glicosilação que não estão presentes no polipeptídeo. A adição de sítios de glicosilação na região Fc de um anticorpo de IL-23p19 é convenientemente executada pela alteração da seqüência de aminoácido de modo que contenha uma ou mais das seqüências de tripeptí- deo acima descrita (com relação aos sítios de glicosilação N-ligados). Uma variante de glicosilação exemplar possui uma substituição de aminoácido resíduo Asn 297 da cadeia pesada. A alteração pode também ser feita por meio da adição, ou substituição, de um ou mais resíduos de serina ou treo- nina com a seqüência do polipeptídeo original (com relação aos sítios de glicosilação O-ligados). Adicionalmente, uma mudança de Asn 297 para Ala pode remover um dos sítios de glicosilação.
Em certas modalidades, o anticorpo de IL-23p19 da presente invenção é expresso em células que expressam beta (1,4)-N-acetilgli- cosaminiltransferase Ill (GnT III), de tal forma que a GnT Ill acrescenta Glc- NAc ao anticorpo de IL-23p19. Métodos para a produção de anticorpos em uma tal forma são fornecidos nas WO/9954342, WO/03011878, publicação de patente 20030003097A1, e Umana et al., Nature Biotechnology, 17:176- 180, Feb. 1999.
Os anticorpos de triagem para a ligação específica nas proteínas similares ou fragmentos podem ser convenientemente obtidos usando biblio- tecas de exibição de peptídeo. Este método envolve a triagem de grandes coleções de peptídeos para os membros individuais tendo a função ou estru- tura desejada. A triagem de anticorpos das bibliotecas de exibição de peptí- deo é bem-conhecida na técnica. As seqüências de peptídeo apresentadas podem ser de 3 a 5000 ou mais aminoácidos de comprimento, freqüente- mente de 5 a 100 aminoácidos de extensão, e freqüentemente de cerca de 8 a 25 aminoácidos de comprimento. Além de direcionar os métodos sintéticos químicos para á geração de bibliotecas de peptídeo, vários métodos de DNA recombinante foram descritos. Um tipo envolve a exibição de uma seqüência de peptídeo na superfície de um bacteriófago ou célula. Cada bacteriófago ou célula contém a seqüência nucleotídeo que codifica a seqüência de pep- tídeo apresentada particular. Tais métodos são descritos nas Publicações de Patente PCT nos. 91/17271, 91/18980, 91/19818 e 93/08278.
Outros sistemas para gerar bibliotecas de peptídeos possuem aspectos tanto da síntese química in vitro quanto métodos recombinantes. Vide, as Publicações de Patente PCT Nos. 92/05258, 92/14843 e 96/19256. Vide também, as Patentes U.S. n- 5.658.754 e 5.643.768. As bibliotecas de exibição de peptídeo, vetores, e kits de triagem são comercialmente disponí- veis de tais fornecedores como Invitrogen (Carlsbad, CA), e Cambridge Anti- body Technologies (Cambridgeshire, UK). Vide, por exemplo, as Patentes U.S. n— 4704692, 4939666, 4946778, 5260203, 5455030, 5518889, 5534621, 5656730, 5763733, 5767260, 5856456, atribuídas para Enzon; 5223409, 5403484, 5571698, 5837500, atribuídas para Dyax, 5427908, 5580717, atribuídas para Affymax; 5885793, atribuída para Cambridge Anti- body Technologies; 5750373, atribuída para Genentech, 5618920, 5595898, 5576195, 5698435, 5693493, 5698417, atribuídas para Xoma, Colligan, su- pra; Ausubel, supra, ou Sambrook, supra.
Os anticorpos da presente invenção também podem ser prepara- dos usandpelo menos um anticorpo anti-IL-23p19 que codifica ácido nucléico para fornecer animais ou mamíferos transgênicos, tais como cabras, vacas, cavalos, ovelhas, coelhos e outro mais, que produzem tais anticorpos em seu leite. Tais animais podem ser fornecidos usando métodos conhecidos. Vide, por exemplo, mas não limitado elas, Patentes U.S. n^-5.827.690, 5.849.992, 4.873.316, 5.849.992, 5.994.616, 5.565.362, 5.304.489, e outros mais, cada uma das quais é totalmente incorporada neste documento por referência.
Os anticorpos da presente invenção podem ser adicionalmente preparados utilizandpelo menos um anticorpo anti-IL-23p19 que codifica o ácido nucléico para fornecer plantas transgênicas e células de planta culti- vadas (por exemplo, mas não limitado a eles, tabaco e milho) que produzem tais anticorpos, partes específicas ou variantes nas partes da planta ou nas células cultivadas destas. Como um exemplo não limitativo, as folhas de ta- baco transgênico que expressam proteínas recombinantes foram utilizadas com êxito para fornecer grandes quantidades de proteínas recombinantes, por exemplo, usando um promotor indutível. Vide, por exemplo, Cramer et al., Curr. Top. Microbol. Immunol. 240:95-118 (1999) e as referências aí cita- das. Da mesma forma, o milho transgênico foi usado para expressar proteí- nas de mamífero em níveis de produção comercial, com atividades biológi- cas equivalentes a aqueles produzidos em outros sistemas recombinantes ou purificados a partir de fontes naturais. Vide, por exemplo, Hood et al., Adv. Exp. Med. Biol. 464:127-147 (1999) e as referências nele citadas. Os anticorpos também foram produzidos em grandes quantidades a partir de sementes de plantas transgênicas incluindo fragmentos de anticorpo, tais como anticorpos de cadeia única (scFv's), incluindo as sementes de tabaco e tubérculos de batata. Vide, por exemplo, Conrad et al., Plant Mol. Biol. 38:101-109 (1998) e as referências aí citadas. Assim, os anticorpos da pre- sente invenção também podem ser produzidos utilizando plantas transgêni- cas, de acordo com métodos conhecidos. Vide também, por exemplo, Fis- cher et al., Biotechnol. Appl. Biochem. 30:99-108 (Oct., 1999), Ma et al., Trends Biotechnol. 13:522-7 (1995); Ma et al., Plant Physiol. 109:341-6 (1995); Whitelam et al., Biochem. Soe. Trans. 22:940-944 (1994); e referên- cias citadas nestes documentos.
Os anticorpos da invenção podem se ligar à IL-23p19 humana com uma ampla faixa de afinidades (K0). Em uma modalidade preferida, pelo menos um mAb da presente invenção pode opcionalmente se ligar à IL-23p19 humana com alta afinidade. Por exemplo, um mAb humano ou outro pode se ligar à IL- 23p19 humana com uma Kd igual ou menor do que cerca de 10'7 M, tal como, mas não limitado a estes, de 0,1 a 9,9 (ou qualquer faixa ou valor nesse particu- lar) X 10"7, 10*8, 10-9, 10"10, 10'11, 10-12, 10-13, 10'14, 10'15 ou qualquer faixa ou valor nesse particular, tal como determinado pela ressonância de plásmon su- perficial ou o método Kinexa, como praticado por aqueles versados na técnica. Em uma modalidade, os anticorpos da invenção se ligam à IL-23p19 humana com uma K0 entre cerca de 4 e cerca de 4400 pM.
A afinidade ou avidez de um anticorpo para um antígeno pode ser determinada experimentalmente usando qualquer método adequado. (Vide, por exemplo, Berzofsky, et al., "Antibody-Antigen lnteractions," In Fundamental Immunology, Paul, W. E., Ed., Raven Press: New York, NY (1984); Kuby, Janis Immunology, W. H. Freeman and Company: New York, NY (1992); e métodos aqui descritos). A afinidade medida de uma interação anticorpo-antígeno particular pode variar se medido sob condições diferentes (por exemplo, concentração de sal, pH). Assim, as medições de afinidade e outros parâmetros de ligação ao antígeno (por exemplo, KD, Kon, Koff) são preferivelmente feitas com soluções padronizadas de anticorpo e antígeno, e um tampão padronizado, tal como o tampão aqui descrito.
Os ensaios competitivos podem ser executados com o anticorpo da presente invenção de modo a determinar quais proteínas, anticorpos, e outros antagonistas concorrem para ligação à IL-23p19 com o anticorpo da presente invenção e/ou compartilham a região de epítopo. Estes ensaios tão facilmente conhecidos para aqueles de habilidade usual na técnica avaliam a concorrência entre os antagonistas ou Iigandos para um número limitado de sítios de ligação em uma proteína, por exemplo, p19. A proteína e/ou anti- corpo é imobilizado ou insolubilizado antes ou após a competição e a amos- tra ligada à subunidade p19 é separada da amostra não ligada, por exemplo, por decantação (onde a proteína/anticorpo foi pré-insolubilizada) ou por cen- trifugação (onde a proteína/anticorpo foi precipitada após a reação competi- tiva). Da mesma forma, a ligação competitiva pode ser determinada por sa- ber se a função é alterada pela ligação ou pela falta de ligação do anticorpo com a proteína, por exemplo, quer a molécula de anticorpo iniba quer poten- cie a atividade enzimática, por exemplo, de um rótulo. O ELISA e outros en- saios funcionais podem ser utilizados, como bem-conhecidos na técnica.
Certas modalidades dos anticorpos anti-IL-23p19 da invenção possuem as seqüências mostradas nas Tabelas de Seqüência abaixo. Por exemplo, um anticorpo anti-IL-23p19 da invenção possui uma das seqüên- cias de CDR1 de cadeia leve das SEQ ID NOS: 46-51; uma das seqüências de CDR2 de cadeia leve das SEQ ID NOS: 52-57; uma das seqüências de CDR3 de cadeia leve das SEQ ID NOS: 58-79; uma das seqüências de C- DR1 de cadeia pesada das SEQ ID NOS: 1-6; uma das seqüências de C- DR2 de cadeia pesada das SEQ ID NOS: 7-39 e 146; e/ou um das seqüên- cias de CDR3 de pesada cadeia das SEQ ID NOS: 40-45.
Moléculas de Ácido Nucléico
Usando a informação aqui fornecida, por exemplo, as seqüên- cias de nucleótido que codificam pelo menos de 70 a 100% dos aminoácidos contíguos de pelo menos uma das regiões variáveis de cadeia leve dos anti- corpos da invenção (por exemplo, SEQ ID NOS: 136-138 e 142-144) e, pelo menos, uma das regiões variáveis de cadeia pesada dos anticorpos da in- venção (por exemplo, SEQ ID NOS: 133-135 e 139-141), fragmentos especí- ficos, variantes ou seqüências de consenso destes, ou um vetor depositado compreendendpelo menos uma destas seqüências, uma molécula de ácido nucléico da presente invenção que codificpelo menos um anticorpo anti-IL- 23p19 pode ser obtida usando os métodos aqui descritos ou como conheci- dos na técnica.
As moléculas de ácido nucléico da presente invenção podem estar na forma de RNA, tal como mRNA, hnRNA, tRNA ou qualquer outra forma, ou na forma de DNA, incluindo, mas não limitado a estes, cDNA e DNA genômico obtidos por clonagem ou produzidos sinteticamente, ou quaisquer combinações destes. O DNA pode ser de filamento triplo, de filamento duplo ou de filamento únnico, ou qualquer combinação destes. Qualquer parte de pelo menos um filamento do DNA ou RNA pode ser o filamento de codificação, também conhe- cido como o filamento sentido, ou pode ser o filamento de não condificação, também referido como o filamento anti-sentido.
As moléculas de ácido nucléico isoladas da presente invenção
podem incluir moléculas de ácidos nucléico compreendendo uma estrutura de leitura aberta (ORF)1 opcionalmente, com uma ou mais introns, por e- xemplo, mas não limitado a estes, pelo menos uma parte específica de pelo menos um CDR, tal como CDR1, CDR2 e/ou CDR3 de pelo menos cadeia leve (SEQ ID NOS: 46-51, 52-57, ou 58-79) ou pelo menos uma cadeia pe- sada (SEQ ID NOS: 1-6, 7-39, ou 40-45); moléculas de ácido nucléico com- preendendo a seqüência de codificação para um anticorpo anti-IL-23p19 ou região variável (por exemplo, regiões variáveis de cadeia leve SEQ ID NOS: 82-85, 93-98, 100, 102, 113-116 e 128-132 e regiões variáveis de cadeia pesada da SEQ ID NOS: 80, 81, 86-92, 99, 101, 103-112, 117-127 e 147); e moléculas de ácido nucléico que compreendem uma seqüência de nucleotí- deo substancialmente diferente daquelas descritas acima, mas que, devido à decadência do código genético, ainda codificam pelo menos um anticorpo anti-IL-23p19 como aqui descrito e/ou como conhecido na técnica. Eviden- temente, o código genético é bem-conhecido na técnica. Assim, deve ser rotineiro para uma pessoa versada na técnica gerar tais variantes de ácido nucléico degeneradas que codificam os anticorpos anti-IL-23p19 específicos da presente invenção. Vide, por exemplo, Ausubel, et al., supra, e tais vari- antes de ácido nucléico são incluídas na presente invenção.
Como aqui indicado, as moléculas de ácido nucléico da presente invenção que compreendem um ácido nucléico que codifica um anticorpo anti-IL-23p19 podem incluir, mas não são limitados a estes, aquelas que co- dificam a seqüência de aminoácido de um fragmento de anticorpo, por si mesmo; a seqüência de codificação para o anticorpo inteiro ou uma parte deste; a seqüência de codificação para um anticorpo, fragmento ou parte, assim como as seqüências adicionais, tais como a seqüência de codificação de pelo menos um condutor de sinal ou peptídeo de fusão, com ou sem as seqüências de codificação adicionais anteriormente mecnionadas, tais com- pelo menos um intron, juntamente com as seqüências de não codificação adicionais, incluindo, mas não limitado a estas, seqüências 5 'e 3' de não codificação, tais como as seqüências não traduzidas transcritas que desem- penham um papel na transcrição, processamento de mRNA, incluindo os sinais de recomposição e poliadenilação (por exemplo, ligação de ribossoma e estabilidade de mRNA); uma seqüência de codificação adicional que codi- fica os aminoácidos adicionais, tais como os aqueles que fornecem funciona- lidades adicionais. Assim, a seqüência que codifica um anticorpo pode ser fundida com uma seqüência marcadora, tal como uma seqüência que codifi- ca um peptídeo que facilita a purificação do anticorpo fundido compreenden- do um fragmento ou parte do anticorpo.
Hibridizacão Seletiva de Polinucleótideos em um Polinucleotídeo como aqui Descrito
A presente invenção fornece ácidos nucléicos isolados que hi- bridizam sob condições seletivas de hibridização em um polinucleotídeo aqui descrito. Assim, os polinucleotídeos desta modalidade podem ser usados para o isolamento, detecção e/ou quantificação de ácidos nucléicos compre- endendo tais polinucleotídeos. Por exemplo, os polinucleotídeos da presente invenção podem ser usados para identificar, isolar ou amplificar os clones de comprimento parcial ou total em uma biblioteca depositada. Em alguns mo- dalidades, os polinucleotídeos são seqüências genômicas ou de cDNA iso- ladas, ou de outra forma complementares com um cDNA de uma biblioteca de ácido nucléico humana ou de mamífero.
Preferivelmente, a biblioteca de cDNA compreende pelo menos 80% de seqüências de comprimento total, preferivelmente, pelo menos 85% ou 90% de seqüências de comprimento total, e, mais preferivelmente, pelo menos 95% de seqüências de comprimento total. As bibliotecas de cDNA podem ser normalizadas para aumentar a representação de seqüências ra- ras. Condições de hibridização com severidade baixa ou moderada são tipi- camente, mas não exclusivamente, empregadas com seqüências tendo uma identidade de seqüência reduzida em relação às seqüências complementa- res. As condições de severidade moderada e elevada podem opcionalmente ser empregadas para seqüências de maior identidade. As condições de se- veridade baixa permitem hibridização seletiva das seqüências tendo cerca de 70% de identidade de seqüência e podem ser empregadas para identifi- car as seqüências ortólogas e parálogas.
Opcionalmente, os polinucleotídeos desta invenção codificarãpe- lo menos uma parte de um anticorpo codificado pelos polinucleotídeos aqui descritos. Os polinucleotídeos desta invenção abrangem as seqüências de ácido nucléico que podem ser empregadas para a hibridização seletiva em um polinucleotídeo que codifica um anticorpo da presente invenção. Vide, por exemplo, Ausubel, supra; Colligan, supra, cada um aqui inteiramente incorporado por referência.
Construção de Ácidos Nucléicos
Os ácidos nucléicos isolados da presente invenção pode ser preparados utilizando
(a) métodos recombinantes, (b) técnicas sintéticas, (c) técnicas de purificação, e/ou (d) combinações destes, como bem-conhecidas na técnica.
Os ácidos nucléicos podem convenientemente compreender· se- qüências além de um polinucleotídeo da presente invenção. Por exemplo, um sítio de múltiplas clonagens compreendendo um ou mais sítios de restri- ção da endonuclease pode ser inserido no ácido nucléico para ájudar no iso- lamento do polinucleotídeo. Da mesma forma, as seqüências traduzíveis podem ser inseridas para ajudar no isolamento do polinucleotídeo trasladado da presente invenção. Por exemplo, uma seqüência marcadora de hexa- histidina proporciona um meio conveniente para purificar as proteínas da presente invenção. O ácido nucléico da presente invenção, excluindo a se- qüência de codificação, é opcionalmente um vetor, adaptador ou articulador para clonagem e/ou expressão de um polinucleotídeo da presente invenção.
As seqüências adicionais podem ser adicionadas a tais seqüên- cias de clonagem e/ou expressão para otimizar sua função na clonagem e/ou expressão, para auxiliar no isolamento do polinucleotídeo, ou para me- Ihorar a introdução do polinucleotídeo em uma célula. O uso vetores de clo- nagem, vetores de expressão, adaptadores, articuladores é bem-conhecido na técnica. (Vide, por exemplo, Ausubel, supra, ou Sambrook, supra)
Métodos Recombinante para a Construção de Ácidos Nucléicos
As composições de ácido nucléico isoladas desta invenção, tais como RNA, cDNA, DNA genômico, ou qualquer combinação destes, podem ser obtidas a partir de fontes biológicas utilizando qualquer número de meto- dologias de clonagem conhecidas por aqueles versados na técnica. Em al- gumas modalidades, as sondas de oligonucleótideo que seletivamente hibri- dizam, sob condições severas, nos polinucleotídeos da presente invenção são usadas para identificar a seqüência desejada em uma biblioteca de cD- NA ou DNA genômico. O isolamento de RNA, e a construção de bibliotecas de cDNA e genômicas, são bem-conhecidos daqueles de habilidade usual na técnica. (Vide, por exemplo, Ausubel, supra, ou Sambrook, supra) Triagem de Ácido Nucléico e Métodos de Isolamento
Uma biblioteca de cDNA ou genômica pode submetida a triagem usando uma sonda baseada na seqüência de uma polinucleotídeo da pre- sente invenção, tal como aquela aqui descrita. As sondas podem ser usadas para hibridizar com as seqüências de DNA genômico ou cDNA para isolar os genes homólogos nos mesmos ou diferentes organismos. Aqueles versados na técnica observarão vários graus de severidade de hibridação podem ser empregados no ensaio; e a hibridização ou o meio de lavagem pode ser se- vero. Quando as condições de hibridização se tornam mais rigorosas, deve haver um maior grau de complementaridade entre a sonda e o alvo para a formação dúplex ocorrer. O grau de severidade pode ser controlado por um ou mais de temperatura, força iônica, pH e a presença de um solvente parci- almente desnaturado, como formamida. Por exemplo, a severidade de hibri- dação é convenientemente variada pela mudança da polaridade da solução de reagente através da, por exemplo, manipulação da concentração de for- mamida dentro da faixa de 0% a 50%. O grau de complementaridade (iden- tidade de seqüência), necessário para a ligação detectável variará de acordo com a severidade do meio de hibridação e/ou meio de lavagem. O grau de complementaridade idealmente será 100%, ou de 70 a 100%, ou qualquer faixa ou o valor nesse particular. No entanto, deve ficar entendido que pe- quenas variações de seqüência nas sondas e iniciadores podem ser com- pensadas pela redução da severidade do meio de hibridação e/ou lavagem.
Métodos de amplificação de DNA ou RNA são bem-conhecidos na técnica e podem ser utilizados de acordo com a presente invenção sem experimentação indevida, com base no ensino e orientação apresentados neste documento. Métodos conhecidos de amplificação de DNA ou RNA incluem, mas não se limitando a estes, reação de cadeia polimerase (PCR) e proces- sos de amplificação relacionados (vide, por exemplo, as Patentes U.S. n— 4.683.195, 4.683.202, 4.800.159, 4.9651.88, de Mullis, et al.; 4.795.699 4.921.794 de Tabor, et al; 5.142.033 de Innis; 5.122.464 de Wilson, et al.; 5.091.310 de Innis; 5.066.584 de Gyllensten, et al; 4.889.818 de Gelfand, et al; 4.994.370 de Silver,! et al; 4.766.067 de Biswas, 4.656.134 de Ringold) e amplificação mediada por RNA que usa RNA anti-sentido para a seqüência alvo como um modelo para a síntese de DNA de filamento duplo (Patente U.S. n- 5.130.238 de Malek, et al, com o nome comercial NASBA), os conte- údos inteiros destas referências são aqui incorporados por referência. (Veja, por exemplo, Ausubel, supra, ou Sambrook, supra).
Por exemplo, a tecnologia de reação de cadeia polimerase (P- CR) pode ser utilizada para ampliar as seqüências de polinucleotídeos da presente invenção e os genes relacionados diretamente das bibliotecas de DNA genômico ou cDNA. A PCR e outros métodos de amplificação in vitro também podem ser úteis, por exemplo, para clonar as seqüências de ácido nucléico que codificam as proteínas para serem expressas, para preparar os ácidos nucléicos de serem usados como sondas para a detecção da presen- ça do mRNA desejado nas amostras, para o seqüenciamento de ácido nu- cléico, ou para outros propósitos. Exemplos de técnicas suficientes para di- recionar as pessoas habilidade através dos métodos de amplificação in vitro são encontradas em Berger, supra, Sambrook, supra, e Ausubel, supra, as- sim como Mullis, et al., Patente U.S. n2 4.683.202 (1987); e Innis, et al., PCR Protocols A Guide ofe Methods and Applications, Eds., Academic Press Inc., San Diego, CA (1990). Os kits comercialmente disponíveis para a amplifica- ção da PCR genômica são conhecidos na técnica. Vide, por exemplo, Ad- vantage-CG Genomic PCR Kit (Clontech). Adicionalmente, por exemplo, o gene T4 de 32 proteínas (Boehringer Mannheim) pode ser usado para me- lhorar o rendimento dos produtos de PCR durante muito tempo. Métodos Sintéticos para a Construção de Ácidos Nucléicos
Os ácidos nucléicos isolados da presente invenção também po- dem ser preparados pela síntese química direta por métodos conhecidos (vide, por exemplo, Ausubel, et al., Supra). A Síntese química geralmente produz um oligonucleótideo de filamento único, que pode ser convertido em DNA de filamento duplo mediante a hibridização com uma seqüência com- plementar, ou pela polimerização com uma DNA polimerase usando o fila- mento único como um modelo. Uma pessoa de habilidade na técnica irá re- conhecer que, embora a síntese química de DNA pode ser limitada às se- qüências de cerca de 100 ou mais bases, seqüências mais longas podem ser obtidas pela ligação das seqüências mais curtas.
Cassetes de Expressão Recombinantes
A presente invenção ainda fornece cassetes de expressão re- combinantes que compreendem um ácido nucléico da presente invenção. A seqüência de ácido nucléico da presente invenção, por exemplo, uma se- qüência de cDNA ou genômica que codifica um anticorpo da presente inven- ção, pode ser usada para construir um cassete de expressão recombinante que pode ser introduzido em pelo menos uma célula hospedeira desejada. Um cassete de expressão recombinante tipicamente compreenderá um poli- nucleotídeo da presente invenção operavelmente ligado às seqüências regu- ladoras do início transcricional que direcionarão a transcrição do polinucleo- tídeo na célula hospedeira destinada. Os promotores tanto heterólogos quanto não heterólogos (ou seja, endógenos) podem ser empregados para direcionar a expressão dos ácidos nucléicos da presente invenção.
Em algumas modalidades, os ácidos nucléicos isolados que ser- vem como promotores, intesificadores, ou outros elementos podem ser in- traduzidos na posição apropriada (a montante, a jusante ou no intron), de uma forma não heteróloga de uma polinucleotídeo da presente invenção de modo a supra ou infra regular a expressão de um polinucleotídeo da presen- te invenção. Por exemplo, os promotores endógenos podem ser alterados in vivo ou in vitro mediante mutação, eliminação e/ou substituição.
Vetores e Células Hospedeiras
A presente invenção também diz respeito aos vetores que inclu- em moléculas de ácido nucléico isoladas da presente invenção, células hos- pedeiras que são geneticamente planejadas com os vetores recombinantes, e a produção de pelo menos um anticorpo anti-IL-23p19 por técnicas recom- binantes, como é bem-conhecido na técnica. Vide, por exemplo, Sambrook, et al., supra; Ausubel, et al., supra, cada um totalmente incorporado neste documento por referência.
Os polinucleotídeos podem opcionalmente ser unidos em um vetor contendo um marcador selecionável de propagação em um hospedei- ro. Geralmente, um vector plasmídeo é introduzido em um precipitado, tal como um precipitado de fosfato de cálcio, ou em um complexo com um lipí- deo carregado. Se o vetor for um vírus, ele pode ser acondicionado in vitro usando uma linhagem celular acondicionadora apropriada e depois transdu- zida em células hospedeiras.
O suplemento de DNA deve ser operativamente ligado a um promotor apropriado. Os construtos de expressão ainda conterão sítios para o início da transcrição, término e, na região transcrita, um sítio de ligação ao ribossoma a translação. A parte de codificação dos transcritos maduros ex- pressos pelos construtos preferivelmente incluirá uma translação que inicia no começo e um códon de término (por exemplo, UAA, UGA ou UAG) apro- priadamente posicionado no final do mRNA a ser trasladado, com UAA e UAG preferíveis para a expressão celular de mamífero eucariótica.
Os vetores de expressão preferivelmente, mas opcionalmente, incluirãpelo menos um marcador selecionável. Tais marcadores incluem, por exemplo, mas não são limitados a estes, metotrexato (MTX), diidrofolato re- ductase (DHFR, Patentes U.S. n22 4.399.216, 4.634.665, 4.656.134, 4.956.288, 5.149.636, 5.179.017, ampicilina, neomicina (G418), ácido mico- fenólico, ou resistência de sintetase de glutamina (GS, Patentes U.S. n— 5.122.464, 5.770.359, 5.827.739) para a cultura de células eucarióticas, e genes de resistência a tetraciclina ou ampicilina para a cultura em E. coli e outras bactérias ou procarióticas (as patentes acima são inteiramente inte- gradas por meio desta por referência). Os meios e as condições de cultura apropriados para as células hospedeiras acima descritas são conhecidos na técnica. Os vetores adequados serão facilmente perceptíveis para o artífice versado. Introdução de um constructo de vetor em uma célula hospedeira pode ser efetuada pela transfecção de fosfato de cálcio, transfecção media- da por DEAE-dextrano, transfecção mediada por Iipfdeo catiônico, eletropo- ração, transdução, infecção ou outros métodos conhecidos. Tais métodos são descritos na técnica, tais como Sambrook, supra, capítulos 1-4 e 16-18; Ausubel, supra, capítulos 1, 9, 13, 15,16.
Pelo menos um anticorpo da presente invenção pode ser ex- presso de uma forma modificada, tal como uma proteína de fusão, e pode incluir não apenas os sinais de secreção, mas também as regiões funcionais heteróloga adicionais. Por exemplo, uma região de aminoácidos adicionais, particularmente aminoácidos carregados, pode ser adicionada ao N-terminal de um anticorpo para melhorar a estabilidade e persistência na célula hos- pedeira, durante a purificação, ou durante a subseqüente manipulação e ar- mazenagem. Da mesma forma, os componentes de peptídeo podem ser a - dicionados a um anticorpo da presente invenção para facilitar a purificação. Tais regiões podem ser removidas antes da preparação final de um anticor- po ou, pelo menos, um fragmento deste. Tais métodos são descritos em muitos manuais-padrão de laboratório, tais como Sambrook, supra, capítulos 17.29-17.42 e 18.1-18.74; Ausubel, supra, capítulos 16, 17 e 18.
Aqueles de habilidade usual na técnica são conhecedores dos números sistemas de expressão disponíveis para a expressão de um ácido nucléico que codifica uma proteína da presente invenção. Alternativamente, os ácidos nucléicos da presente invenção podem ser expressos em uma célula hospedeira mediante a ligação (por manipulação) em uma célula hos- pedeira que contém DNA endógeno que codifica um anticorpo da presente invenção. Tais métodos são bem-conhecidos na técnica, por exemplo, como descritos nas Patentes U.S. n°s 5.580.734, 5.641.670, 5.733.746, 5.733.761, totalmente incorporadas neste documento por referência.
Ilustrativo das culturas celulares úteis para a produção dos anticor- pos, partes específicas ou suas variantes, são as células de mamíferos. Os sis- temas celulares de mamífero freqüentemente estarão na forma de monocama- das de células embora as suspensões celulares ou biorreatores de mamífero também podem ser usadas. Várias linhagens celulares hospedeiras adequadas capazes de expressar proteínas glicosiladas intactas foram desenvolvidas na técnica, e incluem as linhagens celulares COS-1 (por exemplo, ATCC CRL 1650), COS-7 (por exemplo, ATCC CRL-1651), HEK293, BHK21 ( por exemplo, ATCC CRL-10), CHO (por exemplo, ATCC CRL 1610) e BSC-1 (por exemplo, ATCC CRL-26), células Cos-7, células CHO, células hep G2, P3X63Ag8.653, SP2/0-Ag14, células 293, células HeLa e outras mais, que são facilmente dis- poníveis da, por exemplo, American Type Cultura Collection, Manassas, Va (www.atcc.orq). As células hospedeiras preferidas incluem células de origem 10 linfóide, tais como células de mieloma e linfoma. As células hospedeiras parti- cularmente preferidas são células P3X63Ag8.653 (ATCC Accession Number CRL-1580) e células SP2/0-Ag14 (ATCC Accession Number CRL-1851). Em uma modalidade particularmente preferida, a célula recombinante é uma célula P3X63Ab8.653 ou SP2/0-Ag14.
Os vetores de expressão para estas células podem incluir uma ou mais das seguintes seqüências de controle de expressão, tais como, mas não limitado a estes, uma origem de replicação; um promotor (por exemplo, promotores SV40 tardios ou precoces, o promotor CMV (Patentes U.S. n— 5.168.062, 5.385.839), um promotor HSV tk, um promotor pgk (fosfoglicerato cinase), um promotor EF-1 alfa (Patente U.S. n- 5.266.491), pelo menos um • promotor de imunoglobulina humana; um intensificador, e/ou sítios de infor- mação de processamento, tais como sítios de ligação ao ribossoma, sítios de união de RNA, sítios poliadenilação (por exemplo, um sítio de adição T Ag poli A grande SV40), e seqüências terminadoras transcricionais. Vide, por exemplo, Ausubel et al., supra; Sambrook, et al., supra. Outras células úteis para a produção de ácidos nucléicos ou proteínas da presente invenção são conhecidas e/ou disponíveis, por exemplo, da American Type Culture Collec- tion Catalogue of Cell Lines and Hybridomas (www.atcc.org) ou de outras fontes conhecidas ou comerciais.
Quando as células hospedeiras eucarióticas forem empregadas, as seqüências terminadoras de poliadenilação ou transcrição são tipicamen- te incorporadas no vetor. Um exemplo de uma seqüência terminadora é a seqüência de poliadenilação do gene do hormônio de crescimento bovino. As seqüências para a recomposição acurada do transcrito também podem ser incluídas. Um exemplo de uma seqüência de recomposição é o intron VP1 de SV40 (Sprague, et al., J. Virol. 45:773-781 (1983)). Adicionalmente, as seqüências genéticas para controlar a replicação na célula hospedeira podem ser incorporadas no vetor, como é conhecido na técnica. Purificação de um Anticorpo
Um anticorpo anti-IL-23p19 pode ser recuperado e purificado a partir de culturas de células recombinantes por métodos bem-conhecidos incluindo, mas não limitado a eles, purificação de proteína A, precipitação de sulfato de amônio ou etanol, extração de ácido, cromatografia de troca de ânion ou cátion, cromatografia de fosfocelulose, cromatografia de interação hidrofóbica, cromatografia por afinidade, cromatografia de hidroxilapatita e cromatografia de lectina. A cromatografia líquida de alto desempenho ("H- PLC") também podem ser empregada para a purificação. Vide, por exemplo, Colligan, Current Protocols in Immunology, or Current Protocols in Protein Science, John Wiley & Sons, NY, NY, (1997-2001), e.g., Chapters 1, 4, 6, 8, 9, 10, cada um aqui inteiramente incorporado por referência.
Os anticorpos da presente invenção incluem os produtos natu- ralmente purificados, produtos de procedimentos sintéticos químicos, e os produtos produzidos por técnicas de recombinação a partir de um hospedei- ro eucariótico, incluindo, por exemplo, levedura, plantas superiores, insetos e células de mamífero. Dependendo do hospedeiro empregado em um proce- dimento de produção recombinante, o anticorpo da presente invenção pode ser glicosilado ou pode ser não glicosilado, com o glicosilado preferido. Tais métodos são descritos em muitos manuais de laboratório-padrão, tais como Sambrook, supra, Sections 17.37-17.42; Ausubel, supra, Chapters 10, 12, 13, 16, 18 and 20, Colligan, Protein Science, supra, Chapters 12-14, todos totalmente incorporadas neste documento por referência.
Anticorpos Anti-IL-23p19
Um anticorpo anti-IL-23p19 de acordo com a presente invenção inclui qualquer molécula contendo proteína ou peptídeo que compreende pelo menos uma parte de uma molécula de imunoglobulina, tal como, mas não limitado pelo menos uma parte de ligação ao ligando (LBP), tal como, mas não se limitando a uma região de determinação da complementaridade (CDR) de uma cadeia pesada ou leve ou uma parte de ligação ao ligando desta, uma variável região de cadeia pesada ou cadeia leve, uma região es- trutural (por exemplo, FR1, FR2, FR3, FR4 ou fragmento destes, mais op- cionalmente compreendendpelo menos uma substituição, inserção ou su- pressão), uma região constante de cadeia pesada ou cadeia leve, (por e- xemplo, compreendendpelo menos um CH1, dobradiça 1, dobradiça 2, do- bradiça 3, dobradiça 4, CH2 ou CH3, ou fragmento destes, ainda opcional- mente compreendendpelo menos uma substituição, inserção ou supressão), ou qualquer parte destas, que podem ser incorporados em um anticorpo da presente invenção. Um anticorpo da invenção pode incluir ou ser derivado de qualquer mamífero, tal como mas não limitado a eles, um ser humano, um camundongo, um coelho, um rato, um roedor, um primata, ou qualquer combinação destes e outros mais.
Os anticorpos isolados da presente invenção compreendem as seqüências de aminoácido de anticorpo neles codificados por qualquer poli- nucleotídeo adequado, ou de qualquer anticorpo isolado ou preparado. Pre- ferivelmente, o anticorpo de ser humano ou fragmento de ligação ao antíge- no se liga a IL-23p19 humana e, desse modo, parcial ou substancialmente neutralizpelo menos uma atividade biológica da proteína. Um anticorpo, ou parte ou variante especifica deste, que parcialmente ou de preferência subs- tancialmente neutralizpelo menos uma atividade biológica de pelo menos uma proteína IL-23 ou fragmento, pode se ligar à proteína ou fragmento e desse modo inibir as atividades mediadas através da ligação de IL-23 ao receptor de IL-23 ou através de outros mecanismos dependentes ou media- dos pela IL-23. Como aqui utilizado, o termo "anticorpo de neutralização" refere-se a um anticorpo que pode inibir uma atividade dependente da IL-23 por cerca de 20 a 120%, preferivelmente pelo menos por cerca de 10, 20, 30, 40, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100% ou mais dependendo do ensaio. A capacidade de um anticorpo anti-IL- 23p19 em inibir uma atividade dependente da IL-23 é preferivelmente avali- ada por pelo menos um ensaio de proteína ou receptor de IL-23 adequado, conforme descrito aqui e/ou como conhecido na técnica. Um anticorpo hu- mano da invenção pode ser de qualquer classe (IgG, IgA1 IgM, IgE, IgD, etc.)
ou isotipo e pode compreender uma cadeia leve kappa ou lambda. Em uma modalidade, o anticorpo de ser humano compreende um IgG de cadeia pe- sada ou fragmento definido, por exemplo, pelo menos um dos isótipos IgGI, lgG2, lgG3 ou lgG4 (por exemplo, γ1, γ2, γ3 ou γ4). Os anticorpos deste tipo podem ser preparados por empregar um camundongo transgênico ou outro mamífero não hümano transgênico compreendendpelo menos um transgeno de cadeia leve humano (por exemplo, IgG, IgA e IgM) como aqui descrito e/ou como conhecido na técnica. Em uma outra modalidade, o anticorpo de IL-23p19 anti-humano compreende uma cadeia pesada de IgGI e uma ca- deia leve de IgGI.
Pelo menos um anticorpo da invenção se liga pelo menos um de- terminado epítopo específico pelo menos uma proteína IL-23p19, subunidade, fragmento, parte ou qualquer combinação das mesmas. Pelo menos um epíto- po pode compreender pelo menos uma região de ligação ao anticorpo que compreende pelo menos uma parte da proteína, cujo epítopo é preferivelmente compreendido de pelo menos uma parte extracelular, solúvel, hidrófila, externa ou citoplasmática da proteína. Pelo menos um epítopo específico pode com- preender qualquer combinação de pelo menos uma seqüência de aminoácido de pelo menos 1 a 3 aminoácidos para a parte especifica inteira de aminoáci- dos contíguos de resíduos de aminoácido 93-105 da SEQ ID NO: 145 (que con- tém a seqüência sinal inicial de 19 aminoácidos para a subunidade de proteína p19) (ou resíduos de aminoácido 74-86 da seqüência de p19 sem a inclusão da seqüência de sinal), por exemplo, resíduos de aminoácido 93, 93-94, 93-95, 93 -96, 97-99, 100-102 da SEQ ID NO: 145, etc. que inclui quaisquer partes ou combinações destas seqüências.
Geralmente, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno da presente invenção compreenderá uma região de ligação ao antígeno que compreende pelo menos uma região variável de cadeia pesada e pelo me- nos uma região de determinação da complementaridade (CDR1, CDR2 e CDR3) ou variante de pelo menos uma região variável de cadeia pesada e pelo menos uma região de determinação da complementaridade (CDR1, CDR2 e CDR3) ou variante de pelo menos uma região variável de cadeia leve. Opcionalmente, as seqüências de CDR podem ser derivadas das se- qüências da linha germinativa humana ou seqüências da linha germinativa intimamente unida. Por exemplo, as CDRs de uma biblioteca sintética deri- vada das CDRs de camundongo originais podem ser usadas. Como um e- xemplo não limitativo, o anticorpo ou parte ou variante de ligação ao antíge- no pode compreender pelo menos uma CDR3 de cadeia pesada, por exem- plo, selecionada a partir de SEQ ID NOS: 1-6, 7-39 e 146, ou 40-45, e/ou uma CDR3 DE cadeia leve, por exemplo, selecionada da SEQ ID NOS: 46- 51, 52-57 ou 58-79. Em uma modalidade particular, o anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno pode ter uma região de ligação ao antígeno que compreende pelo menos uma parte de pelo menos uma CDRde pesada ca- deia (isto é, CDR1, CDR2 e/ou CDR3) (por exemplo, aquelas aqui descritas). Em outra modalidade particular, o anticorpo ou parte ou variante de ligação ao antígeno pode ter uma região de ligação ao antígeno que compreende pelo menos uma parte de pelo menos uma CDR de cadeia leve (ou seja, CDR1, CDR2 e/ou CDR3) (por exemplo, aquelas aqui descritas).
Em uma modalidade preferida, as três CDRs de cadeia pesada e as três CDRs de cadeia leve do anticorpo ou fragmento de ligação ao antíge- no podem ser preparadas por quimicamente juntar as várias partes (por e- xemplo, CDRs, estrutura) do anticorpo utilizando técnicas convencionais, me- diante a preparação e expressão de uma (isto é, uma ou mais) molécula de ácido nucléico que codifica o anticorpo usando técnicas convencionais de tec- nologia de ADN recombinante ou usando qualquer outro método adequado.
O anticorpo anti-IL-23p19 pode compreender pelo menos uma de uma região variável de cadeia pesada ou leve tendo uma seqüência de aminoácido definida. Por exemplo, em uma modalidade preferida, o anticor- po anti-IL-23p19 compreende pelo menos uma de pelo menos uma região variável de pesada cadeia opcionalmente selecionada das SEQ ID NOS: 80, 81, 86-92, 99, 101, 103-112, 117-127, e 147 e/ou pelo menos uma região variável de cadeia leve opcionalmente selecionada das SEQ ID NOS: 82-85, 93-98, 100, 102, 113-116 e 128-132. Os anticorpos que se ligam à IL-23p19 humana, e que compreendem uma região variável de cadeia pesada ou leve definida podem ser preparados utilizando métodos adequados. O anticorpo, parte ou variante específica pode ser expresso utilizando a codificação de ácido nucléico ou parte deste em uma célula hospedeira apropriada.
Códigos de Aminoácido
Os aminoácidos que compõem os anticorpos anti-IL-23p19 da presente invenção são muitas vezes abreviados. As designações de amino- ácido podem ser indicadas pela designação do aminoácido pelo seu código de letra único, seus três códigos letra de, nome, ou de três códons de nucle- otídeo, como é bem compreendido na técnica (vide Alberts, B., et ai-, Mole- cular Biology of The Cell, Third Ed., Garland Publishing, Inc., New York, 1994). Um anticorpo anti-IL-23p19 da presente invenção pode incluir uma ou mais substituições, supressões ou adições de aminoácido, a partir das mu- tações naturais ou manipulação humana, conforme especificado neste do- cumento. Os aminoácidos em um anticorpo anti-IL-23p19 da presente inven- ção que são essenciais para a função podem ser identificados por métodos conhecidos na técnica, tais como a mutagênese direcionada ao sítio ou mu- tagênese de varredura de alanina (por exemplo, Ausubel, supra, Chapters 8, 15; Cunningham and Wells, Science 244:1081-1085 (1989)). Este último procedimento introduz mutações de alanina em cada resíduo na molécula. As moléculas mutantes resultantes são depois testadas com relação à ativi- dade biológica, tal como, mas não limitado a ela, pelo menos uma atividade de neutralização de IL-23. Os sítios que são críticos para a ligação de anti- corpo também podem ser identificados pela análise estrutural, tal como cris- talização, ressonância magnética nuclear ou rotulação por fotoafinidade (Smith, et al., J. Mol. Biol. 224:899-904 (1992) e de Vos, et al., Science 255:306-312(1992)).
Os anticorpos anti-IL-23p19 da presente invenção podem incluir, mas não estão limitados a estes, pelo menos uma parte de seqüência ou combinação selecionada de 5 a todos os aminoácidos contíguos das se- qüências de região variável SEQ ID NOS: 82-85 , 93-98, 100, 102, 113-116 e 128-132 e SEQ ID NOS: 80, 81, 86-92, 99, 101, 103-112, 117-127 e 147.
Variantes não Iimitativas que podem aumentar ou manter pelo menos uma das atividades listadas incluem, mas não são limitadas a estas, qualquer um dos polipeptídeos acima, ainda compreendendpelo menos uma mutação que corresponde pelo menos uma substituição nos resíduos varia- dos entre as seqüências de aminoácido variantes.
Um anticorpo anti-IL-23p19 opcionalmente pode ainda compre- ender um polipeptídeo com uma seqüência de aminoácidos que varia entre as seqüências aqui descritas (por exemplo, uma ou mais substituições con- servadores a partir das seqüências aqui fornecidas). Da mesma forma, mais especificamente, a presente invenção compreende variantes da seqüência de aminoácido de uma região variável de cadeia leve das SEQ ID NOS: 82- 85, 93-98, 100, 102, 113-116 e 128-132 ou da seqüência de aminoácido de uma região variável da cadeia pesada das SEQ ID NOS: 80, 81, 86-92, 99, 101, 103-112, 117-127 e 147.
Como aqueles de habilidade observarão, a presente invenção in- clui pelo menos um anticorpo biologicamente ativo da presente invenção. Os anticorpos biologicamente ativos possuem uma atividade específica de pelo menos 20%, 30% ou 40%, e, de preferência, pelo menos 50%, 60%, ou 70%, e, mais preferivelmente pelo menos 80%, 90% ou 95% a 1000% ou mais do que a do anticorpo nativo (não sintético), endógeno ou relacionado e conhecido. Mé- todos de análise e quantificação da atividade enzimática e especificidade de substrato são bem-conhecidos para aqueles versados na técnica.
Em um outro aspecto, a invenção diz respeito aos anticorpos humanos e fragmentos de ligação ao antígeno, como aqui descrito, que são modificados pela ligação covalente de um componente orgânico. Tais modi- ficações podem produzir um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno com propriedades farmacocinéticas melhoradas (por exemplo, meia-vida no soro in vivo aumentada). O componente orgânico pode ser um grupo polimé- rico hidrófilo linear ou ramificado, grupo de ácido graxo, ou grupo de éster de ácido graxo. Nas modalidades particulares, o grupo polimérico hidrófilo pode ter um peso molecular de cerca de 800 a cerca de 120.000 Dáltons e pode ser uma polialcano glicol (por exemplo, polietileno glicol (PEG), polipropileno glicol (PPG)), polímero de carboidrato, polímero de aminoácidos ou polivinil pirrolidona, e o grupo de ácido graxo ou éster de ácido graxo pode compre- ender de cerca de oito a cerca de quarenta átomos de carbono.
Os anticorpos modificados e fragmentos de ligação ao antígeno da invenção podem compreender um ou mais componentes orgânicos que são covalentemente ligados, direta ou indiretamente, ao anticorpo. Cada componente orgânico que é ligado a um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno da invenção pode independentemente ser um grupo polimérico hidrófilo, um grupo de ácido graxo ou um grupo de éster de ácido graxo. Como aqui utilizado, o termo "ácido graxo" abrange ácidos monocarboxílicos e ácidos dicarboxílicos. Um "grupo polimérico hidrófilo" como o termo é utili- zado neste documento, refere-se a um polímero orgânico que é mais solúvel em água do que em octano. Por exemplo, a polilisina é mais solúvel em á- gua do que em octano. Assim, um anticorpo modificado pela ligação cova- lente de polilisina é enquadrado pela invenção. Os polímeros hidrófilos ade- quados para a modificação de anticorpos da invenção podem ser lineares ou ramificados e incluem, por exemplo, polialcano glicóis (por exemplo, PEG, monometóxi polietileno-glicol (mPEG), PPG e similares), carboidratos (por exemplo, dextrano, celulose, oligossacarídeos, polissacarídeos e similares), polímeros de aminoácidos hidrófilos (por exemplo, polilisina, poliarginina, poliaspartato e outros mais), óxidos de polialcano (por exemplo, óxido de polietileno, óxido de polipropileno e similares) e polivinil pirrolidona. Prefe- rencialmente, o polímero hidrofílico que modifica o anticorpo da invenção possui um peso molecular de cerca de 800 a cerca de 150.000 Dáltons co- mo uma entidade molecular separada. Por exemplo, PEG5000 e PEG20.000, em que o subscrito é o peso molecular médio do polímero em Dálton, podem ser usados. O grupo polimérico hidrófilo pode ser substituído com um a cer- ca de seis grupos de alquila, ácido graxo ou éster de ácido graxo. Os polí- meros hidrófilos que são substituídos com um grupo de ácido graxo ou éster de ácido graxo podem ser preparados pelo emprego de métodos adequa- dos. Por exemplo, um polímero que compreende um grupo de amina pode ser acoplado a um carboxilato do ácido graxo ou éster de ácido graxo, e um carboxilato ativado (por exemplo, ativado com diimidazol de N,N-carbonila) em um ácido graxo ou éster de ácido graxo pode ser acoplado a um grupo de hidroxila em um polímero.
Os ácidos graxos e os ésteres de ácido graxo adequados para modificar os anticorpos da invenção podem ser saturados ou podem conter uma ou mais unidades de insaturação. Os ácidos graxos que são adequados para modificar os anticorpos da invenção incluem, por exemplo, n-dodecanoato (C, laurato), n-tetradecanoato (Cu, miristato), n-octadecanoato (Cie, estearato), n-eicosanoato (C2o, araquidato), N-docosanoato (C22, beenato), n-triacontano- ato (C30), n-tetracontanoato (C40) cis-A9-octadecanoato (Ci8, oleato), cis- Δ5,8,11,14-eicosatetraenoato total (C20. araquidonato), ácido octanodióico, áci- do tetradecanodióico, ácido octadecanodióico, ácido docosanidióico, e outros mais. Os ésteres de ácido graxo adequados incluem monoésteres de ácidos dicarboxílicos que compreende um grupo de alquila inferior linear ou ramificado. O grupo de alquila inferior pode compreender de um a cerca de doze, preferi- velmente, de um a cerca de seis, átomos de carbono.
Os anticorpos humanos modificados e fragmentos de ligação ao antígeno podem ser preparados usando métodos adequados, tais como pela reação com um ou mais agentes de modificação. Um "agente de modificação" como o termo é aqui utilizado, refere-se a um grupo orgânico adequado (por exemplo, polímero hidrófilo, um ácido graxo, um éster de ácido graxo), que compreende um grupo de ativação. Um "grupo de ativação" é um componente químico ou grupo funcional que pode, sob condições apropriadas, reagir com um segundo grupo químico desse modo formando uma ligação covalente en- tre o agente de modificação e o segundo grupo químico. Por exemplo, os gru- pos de ativação reativos a amina incluem grupos eletrofílicos, tais como tosila- to, mesilato, halo (cloro, bromo, flúor, iodo), ésteres N-hidroxissuccinimidílicos (NHS), e outros mais. Os grupos de ativação que podem reagir com os tióis incluem, por exemplo, maleimida, iodoacetila, acrilolila, dissulfetos de piridila, tiol de ácido 5-tiol-2-nitrobenzóico (TNB-tiol), e outros mais. Um grupo funcio- nal de aldeído pode ser acoplado nas moléculas contendo amina ou hidrazida, e um grupo de azida pode reagir com o grupo de fósforo trivalente um para formar ligações de fosforamidato ou fosforimida. Métodos adequados para introduzir grupos de ativação nas moléculas são conhecidos na técnica (vide, por exemplo, Hermanson, G. T., Bioconjugate Techniques, Academic Press: San Diego, CA (1996)). Um grupo de ativação pode ser ligado diretamente ao grupo orgânico (por exemplo, polímero hidrofílica, ácido graxo, éster de ácido graxo), ou através de um componente ligador, por exemplo, um grupo C1-C12 divalente em quê um ou mais átomos de carbono podem ser substituídos por uma heteroátomo, tal como oxigênio, nitrogênio ou enxofre. Os componentes Iigadores adequados incluem, por exemplo, tetraetileno glicol, -(CH2)3-, -NH- (CH2)6-NH-, -(CH2)2-NH- and -CH2-0-CH2-CH2-0-CH2-CH2-0-CH-NH-. Os agentes de modificação que compreendem um componente ligador podem ser produzidos, por exemplo, mediante a reação de um mono-Bpc- alquildiamina (por exemplo, mono-Boc-étilenodiamina, mono-Boc- diaminoexano) com um ácido graxo, na presença de 1-etil-3-(3- dimetilaminopropil) carbodiimida (DCE) para formar uma ligação de amida entre a amina livre e o carboxilato de ácido graxo. O grupo de proteção Boc pode ser removido do produto mediante o tratamento com ácido trifluoroacéti- co (TFA) para expor uma amina primária que pode ser acoplada a um outro carboxilato, como descrito, ou pode ser reagido com anidrido maléico e o pro- duto resultante ciclizado para produzir um derivado de maleimido ativado do ácido graxo. (Vide, por exemplo, Thompson, et al., WO 92/16221, cujos ensi- namentos inteiros são aqui incorporados por referência).
Os anticorpos modificados da invenção podem ser produzidos pela reação de um anticorpo humano ou fragmento de ligação ao antígeno com um agente de modificação. Por exemplo, os componentes orgânicos podem ser ligados ao anticorpo em uma maneira não específica ao sítio me- diante o emprego de um agente de modificação reativo a amina, por exem- plo, um éster de NHS de PEG. Os anticorpos humanos modificados ou fragmentos de ligação ao antígeno também podem ser preparados pela re- dução das ligações de dissulfeto (por exemplo, ligações de dissulfeto intra- cadeia) de um anticorpo ou fragmento de ligação ao antígeno. O anticorpo reduzido ou fragmento de ligação ao antígeno pode então ser reagido com um agente de modificação reativo a tiol para produzir o anticorpo modificado da invenção. Os anticorpos humanos modificados e fragmentos de ligação ao antígeno compreendendo um componente orgânico que é ligado aos sí- tios específicos de um anticorpo da presente invenção podem ser prepara- dos utilizando métodos adequados, tais como proteólise reverso (Fisch et al., Bioconjugate Chem., 3:147-153 (1992); Werlen et al., Bioconjugate Chem., 5:411-417 (1994); Kumaran et al., Protein Sei. 6 (10):2233-2241 (1997); Itoh et al., Bioorg. Chem., 24(1):59-68 (1996); Capellas et al., Biotechnol. Bio- eng., 56(4):456-463 (1997)), e os métodos descritos em Hermanson, GT, Bioconjugate Techniques, Academic Press: San Diego, CA (1996).
Anticorpos Antiidiótipos para Composições de Anticorpo Anti-IL-23p19
Além dos anticorpos anti-IL-23p19 monoclonais, a presente in- venção também é direcionada a um anticorpo anti-idiotípico (anti-ld) especí- fico para tais anticorpos da invenção. Um anticorpo anti-ld é um anticorpo que reconhece determinantes únicos geralmente associados com a região de ligação ao antígeno de um outro anticorpo. O anti-ld pode ser preparado mediante a imunização de um animal da mesma espécie e tipo genético (por exemplo, cepa de camundongo) como a fonte do anticorpo Id com o anticor- po ou uma região contendo CDR deste. O animal imunizado reconhecerá e responderá aos determinantes idiotípicos do anticorpo de imunização e pro- duzirá um anticorpo anti-ld. O anticorpo anti-ld também pode ser usado co- mo um "imunógeno" para induzir uma resposta imuneem mais um outro a- nimal, produzindo uma assim chamado anti anticorpo anti-anti-ld.
A presente invenção fornece também pelo menos uma composi- ção de anticorpo anti-IL-23p19 compreendendpelo menos um, pelo menos dois, pelo menos três, pelo menos quatro, pelo menos cinco, pelo menos seis ou mais anticorpos anti-IL-23p19 desta, como aqui descrito e/ou como conhecido na técnica que são fornecidos em uma composição, mistura ou forma de ocorrência não natural. Tais composições compreendem composi- ções de ocorrência não natural compreendendpelo menos uma ou duas va- riantes, domínios, fragmentos ou variantes específicas de comprimento total C- e/ou N-terminalmente suprimidas, da seqüência de aminoácido de anti- corpo anti-IL-23p19 selecionada do grupo consistindo em 70 a 100% dos aminoácidos contíguos das SEQ ID NOS: 1-132, 146, e 147, ou fragmentos, domínios ou variantes específicos destes. As composições de anticorpo anti- IL-23p19 preferidas incluem pelo menos um ou dois fragmentos, domínios ou variantes de comprimento total de pelo menos uma parte contendo CDR ou LBP da seqüência de anticorpo anti-IL-23p19 aqui descrita, por exemplo, de 70 a 100% das SEQ do ID NOS: 1-132, 146, e 147, ou fragmentos, domí- nios ou variantes específicos destas. Outras composições preferidas com- preendem, por exemplo, de 40 a 99% de pelo menos um dos 70 a 100% das SEQ ID NOS: 1-132, 146, e 147, ou fragmentos, domínios ou variantes es- pecíficos destas. Tais percentagens de composição são em peso, volume, concentração, molaridade ou molalidade como soluções líquidas ou secas, misturas, suspensões, emulsões, partículas, pó ou colóides, como é conhe- cido na técnica ou como aqui descrito.
Composições de Anticorpo Compreendendo Outros Ingredientes Terapeuti- camente Ativos
As composições de anticorpo da invenção podem opcionalmente ainda compreender uma quantidade mais eficaz de pelo menos um composto ou proteína selecionado de pelo menos um de um fármaco antiinfeccioso, um fármaco do sistema cardiovascular (CV), um fármaco do sistema nervoso cen- tral (CNS), um fármaco do sistema nervoso autonômico (ANS), um fármaco do trato respiratório, um fármaco do trato gastrointestinal (Gl), um fármaco hormo- nal, um fármaco para o equilíbrio de fluido ou eletrólito, um fármaco hematoló- gico, um antineoplástico, um fármaco da imunomodulação, um fármaco oftálmi- co, ótico ou nasal, um fármaco tópico, um fármaco nutricional, ou similar. Tais fármacos são bem-conhecidos na técnica, incluindo formulações, indicações, posologia e administração para cada um aqui apresentado (vide, por exemplo, Nursing 2001 Handbook of Drugs, 21st edition, Springhouse Corp., Springhou- se, PA, 2001; Health Professional's Drug Guide 2001, ed., Shannon, Wilson, Stang, Prentice-Hall, lnc, Upper Saddle River, NJ; Pharmcotherapy Handbook, Wells et al., ed., Appleton & Lange, Stamford, CT1 cada um totalmente incorpo- rado neste documento por referência).
O fármaco antiinfeccioso pode ser selecionado de amebicidas ou pelo menos um de antiprotozoários, antelmínticos, antifúngicos, antimaláricos, antituberculóticos ou pelo menos um antilepróticos, aminoglicosídeos, penicili- nas, cefalosporinas, tetraciclinas, sulfonamidas, fluoroquinolonas, antivirais, antiinfecciosos macrólidos, e antiinfecciosos variados. O fármaco CV pode ser pelo menos um selecionado de inotrópicos, antiarrítmicos, antiangináis, anti- hipertensivos, antilipêmicos, e fármacos cardiovasculares variados. O fármaco do CNS pode ser pelo menos um selecionado de analgésicos não narcóticos ou pelo menos um selecionado de antipiréticos, fármacos antiinflamatórios não esteroidais, narcóticos ou pelo menos um analgésico opióide, sedativos- hipnóticos, anticonvulsivantes, antidepressivos, fármacos antiansiedade, antip- sicóticos, estimulantes do sistema nervoso central, antiparkinson, e fármacos do sistema nervoso central variados. O fármaco do ANS pode ser pelo menos um selecionado de colinérgicos (parassimpatomiméticos), anticolinérgicos, a - drenérgicos (simpaticomiméticos), bloqueadores adrenérgicos (simpatolíticos), relaxantes musculares esqueléticos, e bloqueadores neuromusculares. O fár- maco do trato respiratório pode ser pelo menos um selecionado de anti- histamínicos, broncodilatadores, expectorantes ou pelo menos um antitussivo, e fármacos respiratórios variados. O fármaco do trato Gl pode ser pelo menos um selecionado de antiácidos, ou pelo menos um adsorvente ou pelo menos um antiflatulência, enzimas digestivas ou pelo menos um solubilizante de cálculo biliar, antidiarréicos, laxantes, antieméticos, e fármaco antiúlcera. O fármaco hormonal pode ser pelo menos um selecionado de corticosteróides, andróge- nos ou pelo menos um esteróide anabolizante, estrogênio ou pelo menos uma progestina, gonadotropina, fármaco antidiabético ou pelo menos um glucagon, hormônio da tiróide, antagonista do hormônio da tiróide, hormônio da pituitária, e fármaco semelhante a paratireóide. O fármaco para equilíbrio de fluido e ele- trólito pode ser pelo menos um selecionado de diuréticos, eletrólitos ou pelo menos uma solução de substituição, acidificante ou pelo menos um alcalinizan- te. O fármaco hematológico pode ser pelo menos um selecionado de hematíni- cos, anticoagulantes, derivados de sangue, e enzimas trombolíticas. Os antine- oplásticos podem ser pelo menos um selecionado de fármacos alquilantes, an- timetabólitos, antineoplásticos antibióticos, antineoplásticos que alteram o equi- lfbrio hormonal, e antineoplásticos variados. O fármaco de imunomodulação pode ser pelo menos um selecionado de imunossupressores, vacinas ou pelo menos um toxóide, antitoxina ou pelo menos uma antivenina, imunossoro, e modificador da resposta biológica. Os fármacos oftálmicos, óticos, nasais po- dem ser pelo menos um selecionado de antiinfecciosos oftálmicos, antiinflama- tórios oftálmicos, mióticos, midriáticos, vasoconstritores oftálmicos, fármacos oftálmicos óticos e nasais variados. O fármaco tópico pode ser pelo menos um selecionado de antiinfecciosos locais, escabicidas ou pelo menos um pediculi- cida ou corticosteróide tópico. O fármaco nutricional pode ser pelo menos um selecionado de vitaminas, minerais ou calóricos. Vide, por exemplo, os conteú- dos de Nursing 2001 Drug Handbook, supra.
Pelo menos um analgésico ou antipirético não narcótico pode ser pelo menos um selecionado de acetaminofeno, aspirina, trisalicilato de colina magnésio, diflunisal, e salicilato de magnésio. Pelo menos um fárma- co anti-inflamatório não esteroidal pode ser pelo menos um selecionado de celecoxib, diclofenaco de potássio, diclofenaco de sódio, etodolac, fenopro- fen cálcio, flurbiprofen, ibuprofeno, indometacina, triidratado de indometacina sódica, cetoprofeno, cetorolac trometamina, nabumetona, naproxeno, napro- xeno sódico, oxaprozin, piroxicam, rofecoxib, e sulindac. Pelo menos um narcótico ou analgésico opióide pode ser pelo menos um selecionado de cloridreto de alfentanil, cloridreto de buprenorfina, tartarato de butorfanol, fosfato de codeína, sulfato de codeína, citrato de fentanila, sistema trans- dérmico de fentanil, transmucosa de fentanil, cloridreto de hidromorfona, clo- ridreto de meperidina, cloridreto de metadona, cloridreto de morfina, sulfato de morfina, tartrato de morfina, cloridreto de nalbufina, cloridreto de oxicodo- na, pectinato de oxicodona, cloridreto de oximorfona, cloridreto de pentazo- cina, cloridreto de pentazocina e cloridreto de naloxona, lactato de pentazo- cina, cloridreto de propoxifeno, napsilato de propoxifeno, cloridreto de remi- fentanil, citrato de sufentanil, e cloridreto de tramadol. Pelo menos um hipnó- tico sedativo pode ser pelo menos um selecionado de cloral hidratado, esta- zolam, cloridreto de flurazepam, pentobarbítal, pentobarbital sódico, feno- barbital sódico; secobarbital sódico, temazepam, triazolam, zaleplon e tarta- rato de zolpidem. Pelo menos um anticonvulsivante pode ser pelo menos um selecionado de acetazolamida sódica, carbamazepina, clonazepam, clora- zepate dipotássio, diazepam, divalproato sódico, etosuximida, fosfenitoína sódica, gabapentina, lamotrigina, sulfato de magnésio, fenobarbital, fenobar- bital sódico, fenitoína, fenitoína sódica, fenitoína sódica (ampliada), primido- na, cloridreto de tiagabina, topiramato, valproato sódico e ácido valpróico. Pelo menos um antidepressivo pode ser pelo menos um selecionado de clo- ridreto de amitriptilina, pamoato de amitriptilina, amoxapina, cloridreto de bupropiona, bromidreto de citalopram, cloridreto de clomipramina, cloridreto de desipramina, cloridreto de doxepina, cloridreto de fluoxetina, cloridreto de imipramina, pamoato de imipramina, mirtazapina, cloridreto de nefazodona, cloridreto de nortriptilina, cloridreto de paroxetina, sulfato de fenelzina, clori- dreto de sertralina, sulfato de tranilcipromina, maleato de trimipramina, e clo- ridreto de venlafaxina. Pelo menos um fármaco antiansiedade pode ser pelo menos um selecionado de alprazolam, cloridreto de buspirona, clordiazepó- xido, cloridreto de clordiazepóxido, clorazepato de dipotássio, diazepam, clo- 1 ridreto de doxepina, embonato de hidroxizina, cloridreto de hidroxizina, pa- moato de hidroxizina, lorazepam, mefrobamato, cloridreto de midazolam, e oxazepam. Pelo menos um fármaco antipsicótico pode ser pelo menos um selecionado de cloridreto de clorpromazina, clozapina, decanoato de flufena- zina, enantato de fluefenazina, cloridreto de flufenazina, haloperidol, deca- noato de haloperidol, Iactato de haloperidol, cloridreto de loxapina, succinato de loxapina, besilato de mesoridazina, cloridreto de molindona, olanzapina, perfenazina, pimozida, proclorperazina, fumarato de quetiapina, risperidona, cloridreto de tioridazina, tiotixeno, cloridreto de tiotixeno, e cloridreto de tri- fluoperazina. Pelo menos um estimulante do sistema nervoso central pode ser pelo menos um selecionado de sulfato de anfetamina, cafeína, sulfato de dextroanfetamina, cloridreto de doxapram, cloridreto de metanfetamina, cio- ridreto de metilfenidato, modafinil, pemolina e cloridreto de fentermina. Pelo menos um antiparkinson pode ser pelo menos um selecionado de cloridreto de amantadina, mesilato de benztropina, cloridreto de biperideno, lactato de biperideno, mesilato de bromocriptina, levodopa, carbidopa, entacapone, levodopa, mesilato de pergolide, dicloridreto de pramipexol, cloridreto de ro- pinirol, cloridreto de selegilina, tolcapone e cloridreto de triexifenidila. Pelo menos um fármaco do sistema nervoso central variado pode ser pelo menos um selecionado de cloridreto de bupropiona, cloridreto de donepezil, drope- ridol, maleato de fluvoxamina, carbonato de lítio, citrato de lítio, cloridreto de naratriptano, nicotina polacrilex, sistema transdérmico de nicotina, propofol, benzoato de rizatriptano, monoidrato cloridreto de sibutramina, succinato de sumatriptano, cloridreto de tacrina e zolmitriptano. (Vide, por exemplo, pp. 337-530 of Nursing 2001 Drug Handbook).
Pelo menos um colinérgico (por exemplo, parassimpaticomiméti- co) pode ser pelo menos um selecionado de cloreto de betanecol, cloreto de edrofônio, brometo de neostigmina, metilsulfato de neostigmina, salicilato de fisostigmina, e brometo de piridostigmina. Pelo menos um anticolinérgico pode ser pelo menos um selecionado de sulfato de atropina, cloridreto de diciclomina, glicopirrolato, hiosciamine, sulfato de hiosciamina, brometo de propantelina, escopolamina, butilbrometo de escopolamina, e bromidreto de escopolamina. Pelo menos um adrenérgico (simpaticomimético) pode ser pelo menos um selecionado de cloridreto de dobutamina, cloridreto de do- pamina, bitartrato de metaraminol, bitartrato de noradrenalina, cloridreto de fenilefrina, cloridreto de pseudoefedrina, e sulfato de pseudoefedrina. Pelo menos um bloqueador adrenérgico (simpatolítico) pode ser pelo menos um selecionado de mesilato de diidroergotamina, tartrato de ergotamina, malea- to de metisergide, e cloridreto de propranolol. Pelo menos um relaxante do músculo esquelético pode ser pelo menos um selecionado de baclofen, cari- soprodol, clorzoxazona, cloridreto de ciclobenzaprina, dantroleno sódico, metocarbamol, e cloridreto de tizanidina. Pelo menos um bloqueador neuro- muscular pode ser pelo menos um selecionado de besilato de atracúrio, be- silato de cisatracúrio, cloreto de doxacúrio, cloreto de mivacúrio, brometo de pancurônio, brometo de pipecurônio, brometo de rapacurônio, brometo de rocurônio, cloreto de succinilcolina, cloreto de tubocurarina, brometo de ve- curônio. (Vide, por exemplo, pp. 531-84 of Nursing 2001 Drug Handbook).
Pelo menos uma anti-histamina pode ser pelo menos uma sele- cionada de maleato de bromfeniramina, cloridreto de cetirizina, maleato de clorfeniramina, fumarato de clemastina, cloridreto de ciproeptadina, cloridreto de difenidramina, cloridreto de fexofenadina, loratadina, cloridreto de prome- tazina, teoclato de prometazina, e cloridreto de triprolidina. Pelo menos um broncodilatador pode ser pelo menos um selecionado de albuterol, sulfato de albuterol, aminofilina, sulfato de atropina, sulfato de efedrina, adrenalina, bitartrato de epinefrina, cloridreto de adrenalina, brometo de ipratrópio, iso- proterenol, cloridreto de isoproterenol, sulfato de isoproterenol, cloridreto de levalbuterol, sulfato de metaproterenol, oxtrifilina, acetato de pirbuterol, xina- foato de salmeterol, sulfato de terbutalina, e teofilina. Pelo menos um expec- torante ou antitússico pode ser pelo menos um selecionado de benzonatato, fosfato de codeína, sulfato de codeína, bromidreto de dextrametorfan, clori- dreto de difenidramina, guaifenesina, e cloridreto de hidromorfona. Pelo me- nos um fármaco respiratório variado pode ser pelo menos um fármaco sele- cionado de acetilcisteína, dipropionato de beclometasona, beractant, bude- sonida, calfactant, cromolina sódica, dornase-alfa, epoprostenol sódico, flu- nisolide, propionato de fluticasona, montelucast sódico, nedocromil sódico, palivizumab, triancinolona acetonide, zafirlucast, e zileuton. (Vide, por exem- plo, pp. 585-642 of Nursing 2001 Drug Handbook).
Pelo menos um antiácido, adsorvente ou antiflatulência pode ser pelo menos um selecionado de carbonato de alumínio, hidróxido de alumí- nio, carbonato de cálcio, magaldrate, hidróxido de magnésio, óxido de mag- nésio, simeticona, e bicarbonato de sódio. Pelo menos uma enzima digestiva ou solubilizante de cálculo biliar pode ser pelo menos uma selecionada de pancreatina, pancrelipase, e ursodiol. Pelo menos um antidiarréico pode ser pelo menos um selecionado de atapulgita, subsalicilato bismuto, cálcio poli- carbofil, cloridreto de difenoxilato e sulfato de atropina, loperamida, acetato de octretídeo , tintura ópio, e tintura de ópio (canforada). Pelo menos um laxante pode ser pelo menos um selecionado de bisocodil, policarbofil de cálcio, cascara sagrada, extrato fluido aromático de cascara sagrada, extrato fluido de cascara sagrada, óleo de castor, docusato cálcio, docusato sódico, glicerina, lactulose, citrato de magnésio, hidróxido de magnésio, sulfato de magnésio , metilcelulose, óleo mineral, polietileno glicol ou solução de eletró- lito, psílio, sena, e fosfatos de sódio. Pelo menos um antiemético pode ser pelo menos um selecionado de cloridreto de clorpromazina, dimenidrinato, mesilato de dolasetron, dronabinol, cloridreto de granisetron, cloridreto de meclizina, cloridreto de metocloproamida, cloridreto de ondansetron, perfe- nazina, proclorperazina, edisilato de proclorperazina, maleato de proclorpe- razina, cloridreto de prometazina, escopolamina, maleato de tietilperazina, e cloridreto de trimetobenzamida. Pelo menos um fármaco antiúlcera pode ser pelo menos um selecionado de cimetidina, cloridreto de cimetidina, famotidi- na, lansoprazol, misoprostol, nizatidina, omeprazol, rabeprozol sódico, citrato de rantidina bismuto, cloridreto de ranitidina, e sucralfato. (Vide, por exem- plo, pp. 643-95 of Nursing 2001 Drug Handbook).
Pelo menos um corticosteróide pode ser pelo menos um selecio- nado de betametasona, acetato de betametasona ou fosfato de betametasona, fosfato de betametasona sódica, acetato de Cortisonaf dexametasona, acetato de dexametasona, fosfato de dexametasona, acetato de fludrocortisona, hidro- cortisona, acetato de hidrocortisona, cipionato de hidrocortisona, fosfato de hi- drocortisona sódica, succinato de hidrocortisona sódica, metilprednisolona, ace- tato de metilprednisolona, succinato de metilprednisolona sódica, prednisolona, acetato de prednisolona, fosfato de prednisolona sódica, tebutato de predniso- lona, prednisona, triancinolona, acetonida de triancinolona, triancinolona e dia- cetato. Pelo menos um andrógeno ou esteróide anabolizante pode ser pelo menos um selecionado de danazol, fluoximesterona, metiltestosteroae, deca- noato de nandrolona, fenpropionato de nandrolona, testosterona, cipionato de testosterona, testosterona de enantato, propionato de testosterona, e sistema transdérmico de testosterona. Pelo menos um estrogênio ou progestina pode ser pelo menos um selecionado de estrógenos esterificados, estradiol, cipionato de estradiol, sistema transdérmico de acetato de estradiol/noretisterona, valera- to de estradiol, estrogênios (conjugados), estropipato, etinil estradiol, etinil es- tradiol e desogestrel, etinil estradiol e diacetato de etinodiol, etinil estradiol e desogestrel, etinil estradiol e diacetato de etinodiol, etinil estradiol e Ievonorges- trel, etinil estradiol e noretindrona, etinil estradiol e acetato de noretindrona, eti- nil estradiol e norgestimato, etinil estradiol e norgestrel, etinil estradiol e noretin- drona e acetato e fumarato terroso, levonorgestrel, acetato de medroxiprogeste- rona, mestranol e noretindron, noretindrona, acetato de noretindrona, norges- trel, e progesterona. Pelo menos uma gonadroptropina pode ser pelo menos uma selecionada de acetato de ganirelix, acetato de gonadorelina, acetato his- trelina e menotropinas. Pelo menos um antidiabético ou glucagon pode ser pelo menos um selecionado de acarbose, cloropropamida, glimepirida, glipizida, glu- cagon, gliburide, insulinas, cloridreto de metformina, miglitol, cloridreto de piogli- tazona, repaglinida, maleato de rosiglitazona, e troglitazona. Pelo menos um hormônio de tiróide pode ser pelo menos um selecionado de Ievotiroxina sódi- ca, liotironina sódica, Iiotrix e tiróide. Pelo menos um antagonista do hormônio da tiróide pode ser pelo menos um selecionado de metimazol, iodeto de potás- sio, iodeto de potássio (solução saturada), propiltiouracil, iodo radioativo (iodeto de sódio 131I), e solução de iodo forte. Pelo menos um hormônio da pituitária pode ser pelo menos um selecionado de corticotropina, cosintropina, acetato de desmofressina, acetato de leuprolide, corticotropina repositória, somatrem, so- matropina, e vasopressina. Pelo menos um fármacos semelhante a paratireóide pode ser pelo menos um selecionado de calcifediol, calcitonina (humana), calci- tonina (salmão), calcitriol, diidrotaquisterol, e etidronato dissódio. (Vide, por e- xemplo, pp. 696-796 of Nursong 2001 Drug Handbook).
Pelo menos um diurético pode ser pelo menos um selecionado de acetazolamida, acetazolamida sódica, cloridreto de amiloride, bumetani- de, clortalidona, etacrinato sódico, ácido etacrínico, furosemida, hidrocloroti- azida, indapamida, manitol, metolazona, espironolactona, torsemida, trian- treno, e uréia. Pelo menos um eletrólito ou solução de substituição pode ser pelo menos um selecionado de acetato de cálcio, carbonato de cálcio, clore- to de cálcio, citrato de cálcio, glubionato de cálcio, gluceptato de cálcio, glu- conato de cálcio, Iactato de cálcio, fosfato de cálcio (dibásico), fosfato de cálcio (tribásico), dextrano (peso molecular elevado), dextrano (peso molecu- lar baixo), hetaamido, cloreto de magnésio, sulfato de magnésio, acetato de potássio, bicarbonato de potássio, cloreto de potássio, gluconato de potás- sio, injeção de Ringer1 injeção de Ringer (submetido a lactato), e cloreto de sódio. Pelo menos um acidificante ou alcalinizante pode ser pelo menos um selecionado de bicarbonato de sódio, lactato de sódio, e trometamina. (Vide, por exemplo, pp. 797-833 of Nursing 2001 Drug Handbook).
Pelo menos um hematínico pode ser pelo menos um seleciona- do de fumarato terroso, gluconato terroso, sulfato ferroso, sulfato terroso (seco), dextrano de ferro, sorbitol de ferro, complexo de polissacarídeo-ferro, complexo de gluconato férrico sódico. Pelo menos um anticoagulante pode ser pelo menos um selecionado de ardeparina sódica, dalteparina sódica, danaparóide sódico, enoxaparina sódica, heparina cálcio, heparina sódica, varfarina sódica. Pelo menos um derivado de sangue pode ser pelo menos um selecionado de albumina 5%, albumina 25%, fator anti-hemopílico, com- plexo coagulante anti-inibidor, antitrombina Ill (humana), fator IX (humana), complexo do fator IX, e frações de proteína plasmática. Pelo menos uma enzima trombolítica pode ser pelo menos uma selecionada de alteplase, a- nistreplase, reteplase (recombinante), estreptoquinase, e uroquinase. (Vide, por exemplo, pp. 834-66 of Nursing 2001 Drug Handbook).
Pelo menos um fármaco de alquilação pode ser pelo menos um selecionado de busulfan, carboplatina, carmustina, clorambucil, cisplatina, ciclofosfamida, Ifosfamida, lomustina, cloridreto de mecloretamina, melfala- no, cloridreto de melfalano, estreptozocina, temozolomida e tiotepa. Pelo menos um antimetabólico pode ser pelo menos um selecionado de capecita- bina, cladribina, citarabina, floxuridina, fosfato de fludarabina, fluorouracila, hidroxiuréia, mercaptopurina, metotrexato, metotrexato sódico, e tioguanina. Pelo menos um antineoplásico antibiótico pode ser pelo menos um selecio- nado de sulfato de bleomicina, dactinomicina, citrato de daunorrubicina Ii- possômico, cloridreto de daunorrubicina, cloridreto de doxorrubicina, cloridre- to de doxorrubicina lipossômico, cloridreto de epirrubicina, cloridreto de idar- rubicina, mitomicina, pentostatina, plicamicina e valrubicina. Pelo menos um antineoplásico que altera o equilíbrio de hormônio pode ser pelo menos um selecionado de anastrozol, bicalutamida, fosfato de estramustina sódico, e- xemestano, flutamida, acetato de goserelina, letrozol, acetato de leuprolide, acetato de megestrol, nilutamida, citrato de tamoxifeno, testolactona, e citra- to de toremifeno. Pelo menos um antineoplásico variado pode ser pelo me- nos um selecionadas de asparaginase, bacilo Calmette-Guerin (BCG) (intra- vesical vivo), dacarbazina, docetaxel, etoposídeo, fosfato de etoposídeo, cloridreto de gencitabina, cloridreto de irinotecano, mitotano, cloridreto de mitoxantrona, paclitaxel, pegaspargase, porfímero sódico, cloridreto de pro- carbazina, rituximab, teniposídeo, cloridreto de topotecan, trastuzumab, treti- noína, sulfato de vinblastina, sulfato de vincristina, e tartrato de vinorrelbina. (Vide, por exemplo, pp. 867-963 of Nursing 2001 Drug Handbook).
Pelo menos um imunossupressor pode ser pelo menos um sele- cionado de azatioprina, basiliximab, ciclosporina, daclizumab, globulina imu- ne linfocítica, muromonab-CD3, micofenolato mofetil, cloridreto de micofeno- lato mofetil, sirolimus e tacrolimus. Pelo menos uma vacina ou toxóide pode ser uma selecionada de vacina BCG, vacina contra cólera, difteria e toxóides de tétano (adsorvidos), difteria e toxóides de tétano e vacina antipertússis acelular adsorvida, toxóides de difteria e tétano e vacina antipertússis de célula integral, vacinas conjugadas Haemophilius b, vacina contra a hepatite A (inativada), vacina hepatisis B (recombinante), tipos trivalentes 1999-2000 da vacina contra o vírus da gripe A & B (antígeno de superfície purificada), tipos trivalentes 1999-2000 da vacina contra o vírus da gripe A & B (subvirion ou subvirion purificada), purificada (virion inteiro), vacina do vírus da encefa- lite japonesa (inativada), vacina contraa doença de Lyme (recombinante Os- pA), vacina contra o vírus do sarampo e caxumba e rubéola (vivo), vacina contra o vírus do sarampo e caxumba e rubéola (vivo atenuado), vacina con- tra o vírus do sarampo (vivo atenuado), vacina meningocócica polissacarídi- ca, vacina contra o vírus da caxumba (vivo), vacina contra epidemias, vacina pneumocócica (polivalente), vacina contra poliomielite (inativada), vacina contra poliomielite (viva, oral, trivalente), vacina contra raiva (adsorvida), va- cina contra raiva (células humanas diplóides), vacina contra o vírus da ca- xumba e rubéola (vivo), vacina contra o vírus da rubéola (vivo, atenuado), toxóide tetânico (adsorvido), toxóide tetânico (fluido), vacina contra febre tifóide (oral), vacina contra febre tifóide (parenteral), vacina polissacarídeo contra febre tifóide Vi, vacina contra vírus da varicela, e a vacina contra a febre amarela. Pelo menos uma antitoxina ou antivenina pode ser pelo me- nos uma selecionada de uma antivenina de aranha viúva negra, Crotalidae antiveneno (polivalente), antitoxina de difteria (eqüina), e antivenina Micrurus fulvius. Pelo menos um soro imune pode ser pelo menos um selecionado de imunoglobulina citomegalovírus (intravenosa), imunoglobulina da hepatite B (ser humano), imunoglobulina intramuscular, imunoglobulina intravenosa, imunoglobulina da raiva (ser humano), imunoglobulina do vírus sincicial res- piratório intravenosa (ser humano), Rho(D) imunoglobulina (ser humano), Rho(D) imunoglobulina intravenosa (ser humano), imunoglobulina de tétano (ser humano), e imunoglobulina de varicela-zoster. Pelo menos um modifi- cador da resposta biológica pode ser pelo menos um selecionado de aldes- leucina, epoetina-alfa, filgrastim, acetato de glatiramero para a injecção, in- terferon alfacon-1, interferon alfa-2a (recombinante), interferon alfa-2b (re- combinante), interferon beta-1a, interferon beta-1b (recombinante), interferon gama-1b, cloridreto de levamisol, oprelvecina, e sargramostim. (Vide, por exemplo, pp. 964-1040 of Nursing 2001 Drug Handbook).
Pelo menos um antiinfeccioso oftálmico pode ser selecionado de bacitracina, cloranfenicol, cloridreto de ciprofloxacina, eritromicina, sulfato de gentamicina, ofloxacina 0,3%, sulfato de polimixina B, sulfacetamida sódica 10%, sulfacetamida sódica 15%, sulfacetamida sódica 30%, tobramicina, e vidarabina. Pelo menos um anti-inflamatório oftálmico pode ser pelo menos um selecionado de dexametasona, fosfato de dexametasona, diclofenaco sódico 0,1%, fluorometolona, flurbiprofen sódico, cetorolac trometamina, acetato de prednisolona (suspensão) e fosfato de prednisolona sódica (solu- ção). Pelo menos um miótico pode ser pelo menos um selecionado de clore- to de acetilcolina, carbacol (intraocular), carbacol (tópico), iodeto de ecotiofa- to, pilocarpina, cloridreto de pilocarpina, e nitrato de pilocarpina. Pelo menos um midriático pode ser pelo menos um selecionado de sulfato de atropina, cloridreto de ciclopentolato, cloridreto de epinefrina, borato de epinefrila, bromidreto de homatropina, cloridreto de fenilefrina, bromidreto de escopo- lamina, e tropicamida. Pelo menos um vasoconstritor oftálmico pode ser pelo menos um selecionado de cloridreto de nafazolina, cloridreto de oximetazoli- na, e cloridreto de tetraidrozolina. Pelo menos um oftálmico variado pode ser pelo menos um selecionado de cloridreto de apraclonidina, cloridreto de be- taxolol, tartrato de brimonidina, cloridreto de carteolol, cloridreto de dipivefri- na, cloridreto de dorzolamida, difumarato de emedastina, fluoresceína sódi- ca, fumarato de cetotifen, latanoprost, cloridreto de levobunolol, cloridreto de metipranolol, cloreto de sódio (hipertônico), e maleato de timolol. Pelo menos um ótico pode ser pelo menos um selecionado de ácido bórico, peróxido de carbamida, cloranfenicol, e condensado de trietanolamina polipeptídeo olea- to. Pelo menos um fármaco nasal pode ser pelo menos um selecionado de dipropionato de beclometasona, budesonida, sulfato de efedriria, cloridreto de adrenalina, flunisolide, propionato de fluticasona, cloridreto de nafazolina, cloridreto de oximetazolina, cloridreto de fenilefrina, cloridreto tetraidrozolina, triancinolona acetonida, e cloridreto de xilometazolina. (Vide, por exemplo, pp. 1041 -97 of Nursing 2001 Drug Handbook).
Pelo menos um antiinfeccioso local pode ser pelo menos um se- lecionado de aciclovir, anfotericina B, creme de ácido azeláico, bacitracina, nitrato de butoconazol, fosfato de clindamicina, clotrimazol, nitrato de econa- zol, eritromicina, sulfato de gentamicina, cetoconazol, acetato de mafenida, metronidazol (tópico),.nitrato de miconazol, mupirocin, cloridreto de naftifina, sulfato de neomicina, nitrofurazona, nistatina, sulfadiazina prata, cloridreto de terbinafina, terconazol, cloridreto de tetraciclina, tioconazol e tolnaftato. Pelo menos um escabicida ou pediculicida pode ser pelo menos um selecio- nado de crotamiton, lindano, permetrina, e piretrinas. Pelo menos um corti- costeróide tópico pode ser pelo menos um selecionado de dipropionato de betametasona, valerato de betametasona, propionato de clobetasol, desoni- de, desoximetasona, dexametasona, fosfato de sódio dexametasona, diace- tato de diflorasona, fluocinolona acetonide, fluocinonide, flurandrenolide, propionato de fluticasona, halcionide, hidrocortisona, acetato de hidrocorti- sona, butirato de hidrocortisona, valerato de hidrocortisona, furoato de mo- metasone, e triancinolona acetonide. (Vide, por exemplo, pp. 1098-1136 of Nursing 2001 Drug Handbook).
Pelo menos uma vitamina ou mineral pode ser pelo menos um se- lecionado de vitamina A, vitamina do complexo B, cianocobalamina, ácido fóli- co, hidroxocobalamina, cálcio leucovorina, niacina, niacinamida, cloridreto de piridoxina, riboflavina, cloridreto de tiamina, vitamina C, vitamina D, colecalcife- rol, ergocalciferol, vitamina D analógica, doxercalciferol, paricalcitol, vitamina E, vitamina K analógica, fitonadiona, fluoreto de sódio, fluoreto de sódio (tópico), oligoelementos, cromo, cobre, iodo, manganês, selênio e zinco. Pelo menos um calórico pode ser pelo menos um selecionado de infusões de aminoácido (cris- talino), infusões de aminoácido em dextrose, infusões de aminoácido com ele- trólitos, infusões de aminoácido com eletrólitos em dextrose, infusões de ami- noácidos para insuficiência hepática, infusões de aminoácido para estresse me- tabólico elevado, infusões de aminoácido para insuficiência renal, dextrose, emulsões de gordura, e triglicerídeos de cadeia média. (Vide, por exemplo, pp. 1137-63 of Nursing 2001 Drug Handbook).
As composições de anticorpo anti-IL-23p19 da presente inven- ção podem ainda compreender pelo menos uma de qualquer quantidade adequada e eficaz de uma composição ou composição farmacêutica que compreende pelo menos um anticorpo anti-IL-23p19 colocado em contato ou administrado a uma célula, tecido, órgão, animal ou paciente com necessi- dade de tal modulação, tratamento ou terapia, opcionalmente ainda compre- endendpelo menos um selecionado de pelo menos um antagonista TNF (por exemplo, mas não limitado a um antagonista químico ou de proteína TNF, anticorpo ou fragmento monoclonal ou policlonal de TNF, um receptor de TNF solúvel (por exemplo, p55, p70 ou P85) ou fragmento, polipeptídeos fusão destes, ou um antagonista de TNF de molécula pequena, por exemplo, proteína de ligação a TNF I ou Il (TBP-1 ou TBP-II), nerelimonmab, inflixi- mab, etanercept, CDP -571, CDP-870, afelimomab, lenercept, e outros mais), um anti-reumático (por exemplo, metotrexato, auranofin, aurotioglico- se, azatioprina, etanercept, tiomalato de ouro sódico, sulfato de hidroxicloro- quina, leflunomida, sulfasalzina), um relaxante muscular, um narcótico, um fármaco anti-inflamatório não esteróide (NSAID), um analgésico, um anesté- sico, um sedativo, um anestésico local, um bloqueador neuromuscular, um antimicrobiano' (por exemplo, aminoglicosídeos, um antifúngico, um antipa- rasitário, um antiviral, um carbapenem, cefalosporina, uma fluorquinolona, um macrólido, uma penicilina, uma sulfonamida, uma tetraciclina, um outro antimicrobiano), um antipsoriático, um corticosteróide, um esteróide anaboli- zante, um agente relacionado com diabetes, um mineral, uma nutricional, um agente da tiróide, uma vitamina, um hormônio relacionado com cálcio, uma antidiarréico, um antitussivo, um antiemético, uma antiúlcera, um laxante, um anticoagulante, uma eritropoietina (por exemplo, epoetina-alfa), um filgrastim (por exemplo, G-CSF, Neupogen), um sargramostim (GM-CSF, Leukine), uma imunização, uma imunoglobulina, um imunossupressor (por exemplo, basiliximab, ciclosporina, daclizumab), um hormônio do crescimento, um fármaco de reposição hormonal, um modulador do receptor de estrogênio, um midriático, um cicloplégico, um agente de alquilação, um antimetabólico, um inibidor da mitose, um radiofármaco, um antidepressivo, agente antima- níaco, um antipsicótico, um ansiolítico, um hipnótico, um simpaticomimético, um estimulante, donepezil, tacrina, uma medicação contra asma, um beta- agonista, um esteróide inalado, um inibidor de leucotrieno, uma metilxantina, uma cromolina, uma adrenalina ou análogo, dornase-alfa (Pulmozyme), uma citocina ou um antagonista de citocina. Exemplos não Iimitativos de tais cito- cinas incluem, mas não são limitados a estes, qualquer um de IL-1 a IL-28 (por exemplo, IL-1, IL-2, etc.)· As dosagens adequadas são bem-conhecidas na técnica. Vide, por exemplo, Wells et al., eds., Pharmacotherapy Handbo- ok, 2nd Edition, Appleton and Lange, Stamford, CT (2000); PDR Pharmaco- poeia, Tarascon Pocket Pharmacopoeia 2000, Deluxe Edition, Tarascon Pu- blishing, Loma Linda, CA (2000), cada uma destas referências são aqui intei- ramente incorporadas por referência.
Tais anticânceres ou antiinfecciosos podem também incluir mo- léculas de toxina que são associadas, ligadas, co-formuladas ou co- administradas com pelo menos um anticorpo da presente invenção. A toxina pode opcionalmente agir para seletivamente matar as células ou tecidos pa- tológicos. As células patológicas podem ser uma célula de câncer ou outra. Tais toxinas podem ser, mas não estão limitados a elas, toxina ou fragmento de toxina purificada ou recombinante compreendendpelo menos um domínio citotóxico funcional de toxina, por exemplo, selecionado de pelo menos um de rícino, toxina de difteria, uma toxina venenosa, ou uma toxina bacteriana. O termo toxina também inclui tanto endotoxinas quanto exotoxinas produzi- das por quaisquer bactérias ou vírus mutantes ou recombinantes de ocor- rência natural que possam causar qualquer condição patológica em seres humanos e outros mamíferos, incluindo choque tóxico, que pode resultar em morte. Tais toxinas podem incluir, mas não são limitadas a estas, enterotoxi- na lábil ao calor de E. coli enterotoxigênica (LT), enterotoxina estável ao ca- lor (ST), citotoxina Shigella, enterotoxinas Aeromonas, toxina-1 da síndrome de choque tóxico (TSST-1), enterotoxina Staphylococcal A (SEA), B (SEB) ou C (SEC), enterotoxinas Streptococcal e similares. Tais bactérias incluem, mas não são limitada a estas, cepas de uma espécie de E. coli enterotoxigê- nica (ETEC), E. coli enteroemorrágica (por exemplo, cepas do sorotipo 0157:H7), espécie Staphylococcus (por exemplo, Staphylococcus aureus, Staphylococcus pyogenes), espécie Shigella (por exemplo, Shigella dysente- riae, Shigella flexneri, Shigella boydii, e Shigella sonnei), espécie Salmonella (por exemplo, Salmonella typhimurium, Salmonella eólera-suis, Salmonella enteritidis), espécie Clostridium (por exemplo, Clostridium perfringens, Clos- tridium difieile, Clostridium botulinum), espécie Camphlobacter (por exemplo, Camphlobaeter jejuni, Camphlobaeter fetus), espécie Heliobacter (por exem- plo, Heliobaeter pylori), espécie Aeromonas (por exemplo, Aeromonas sobri- a, Aeromonas hydrophila, Aeromonas eaviae), espécie Pleisomonas shigel- loides, Yersina enterocolitica, vibrios (por exemplo, Vibrios eholerae, Vibrios parahemolytieus), espécie Klebsiellal Pseudomonas aeruginosa, e Strepto- eoeei. Vide, por exemplo, Stein, ed., INTERNAL MEDICINE, 3rd ed., pp 1-13, Little, Brown and Co., Boston, (1990); Evans et al., eds., Bacterial Infections of Humans: Epidemiology and Control, 2d. Ed., pp 239-254, Plenum Medicai Book Co., New York (1991); Mandell et al, Principies and Practice of Infecti- ous Diseases, 3d. Ed., Churchill Livingstone, New York (1990); Berkow et al, eds., The Merck Manual, 16th edition, Merck and Co., Rahway, N.J., 1992; Wood et al, FEMS Microbiology Immunology, 76:121-134 (1991); Marrack et al, Science, 248:705-711 (1990), os conteúdos destas referências são aqui incorporadas inteiramente por referência.
Compostos, composições ou combinações de anticorpo anti-IL- 23p19 da presente invenção podem ainda compreender pelo menos um de qualquer auxiliar adequado, tal como, mas não limitado a estes, diluente, aglutinante, estabilizante, tamponantes, sais, solventes lipofílicos, conser- vantes, adjuvantes ou similar. Os auxiliares farmaceuticamente aceitáveis são preferidos. Exemplos não Iimitativos e os métodos de preparação de tais soluções estéreis são bem-conhecidos na técnica, tais como, mas limitado a estes, Gennaro, Ed., Remington1S Pharmaceutical Sciences, 18111 Edition, Mack Publishing Co. (Easton, PA) 1990. Os veículos farmaceuticamente a- ceitáveis podem ser rotineiramente selecionados os quais são adequados para o modo de administração, solubilidade e/ou estabilidade da composição de anticorpo anti-IL-23p19, fragmento ou variante também conhecida na téc- nica ou como aqui descrito.
Os excipientes e aditivos farmacêuticos úteis na presente com- posição incluem, mas não são limitados a estes, proteínas, peptídeos, ami- noácidos, lipídeos e carboidratos (por exemplo, açúcares, incluindo monos- sacarídeos, di-, tri-, tetra-, e oligossacarídeos; açúcares derivados, tais como alditóis, ácidos aldôniGOS, açúcares esterificados e outros mais; e polissaca- rídeos ou polímeros de açúcar), que podem estar presentes isoladamente ou em combinação, compreendendo isoladamente ou em combinação de 1 a 99,99% em peso ou volume. Excipientes de proteína exemplares incluem albumina sérica, tais como albumina sérica humana (HSA), albumina huma- na recombinante (rHA), gelatina, caseína, e outras mais. Os componentes de aminoácido/anticorpo representativos, que também podem funcionar em uma capacidade de tampão, incluem alanina, glicina, arginina, betaína, histi- dina, ácido glutâmico, ácido aspártico, cisteína, lisina, leucina, isoleucina, valina, metionina, fenilalanina, aspartame, e outros mais. Um aminoácido preferido é glicina.
Os excipientes de carboidrato adequados para uso na invenção incluem, por exemplo, monossacarídios, tais como frutose, maltose, galacto- se, glicose, D-manose, sorbose, e outros mais; dissacarídeos, tais como Iac- tose, sacarose, trealose, celobiose, e outros mais; polissacarídeos, tais co- mo rafinose, melezitose, maltodextrinas, dextranos, amidos, e outros mais; e alditóis, tais como o manitol, xilitol, maltitol, lactitol, xilitol, sorbitol (glicose), mioinositol e similares. Os excipientes de carboidrato preferidos para uso na presente invenção são manitol, trealose e rafinose.
As composições de anticorpo anti-IL-23p19 também podem in- cluir um tampão ou um agente de ajuste do pH; tipicamente, o tampão é um sal preparado de um ácido orgânico ou base. Os tamponantes representati- vos incluem sais de ácido orgânico, tais como sais de ácido cítrico, ácido ascórbico, ácido glucónico, ácido carbônico, ácido tartárico, ácido succínico, ácido acético ou ácido ftálico; cloridreto de Tris, trometamina, ou tampões de fosfato. Os tamponantes preferidos para uso nas presentes composições são sais ácidos orgânicos, tais como citrato.
Adicionalmente, as composições de anticorpo anti-IL-23p19 da invenção podem incluir excipientes/aditivos poliméricos, tais como polivinil- pirrolidonas, ficolls (um açúcar polimérico), dextratos (por exemplo, ciclodex- trinas tais como 2-hidroxipropil-p-ciclodextrina), polietileno glicóis, agentes flavorizantes, agentes antimicrobianos, adoçantes, antioxidantes, agentes antiestáticos, tensoativos (por exemplo, polissorbatos, tais como "Tween 20" e "Tween 80"), lipídeos (por exemplo, fosfolipídeos, ácidos graxos), esterói- des (por exemplo, colesterol), e agentes quelantes (por exemplo, EDTA).
Estes e outros excipientes e/ou aditivos farmacêuticos conheci- dos adequados para uso nas composições de anticorpo anti-IL-23p19, parte ou variante de acordo com a invenção são conhecidos na técnica, por e- xemplo, como listados em "Remington: The Science & Practice of Phar- macy", 19th ed., Williams & Williams, (1995), and in the "Physician's Desk Reference", 52nd ed., Medicai Economics, Montvale, NJ (1998), cujas divul- gações são aqui inteiramente incorporadas por referência. Os materiais veí- culos ou excipientes preferidos são carboidratos (por exemplo, e sacarídeos e alditóis) e tampões (por exemplo, citrato) ou agentes poliméricos. Uma mo- lécula transportadora exemplar é o mucopolissacarídeo, ácido hialurônico, que podem ser úteis para a liberação intra-articular.
Formulações
Como observado acima, a invenção fornece formulações está- veis, que preferivelmente compreendem um tampão de fosfato com soro fisi- ológico ou um sal selecionado, assim como soluções e formulações conser- vadas contendo um conservante assim como formulações conservadas de múltiplos usos adequadas uso farmacêutico ou veterinário, compreendend- pelo menos um anticorpo anti-IL-23p19 em uma formulação farmaceutica- mente aceitável. As formulações conservadas contêm pelo menos um con- servante conhecido ou opcionalmente selecionado do grupo consistindo em pelo menos um fenol, m-cresol, p-cresol, o-cresol, clorocresol, álcool benzíli- co, nitrito fenilmercúrico, fenoxietanol, formaldeído, clorobutanol, cloreto de magnésio (por exemplo, hexaidrato), alquilparabeno (metila, etila, propila, butila e outros mais), cloreto de benzalcônio, cloreto de benzetônio, deidroa- cetato de sódio e timerosal, polímeros, ou misturas destes em um diluente aquoso. Qualquer concentração ou mistura adequada pode ser usada como conhecido na técnica, tal como cerca de 0,0015%, ou qualquer faixa, valor, ou fração. Exemplos não Iimitativos incluem, sem conservante, cerca de 0,1 a 2% de m-cresol (por exemplo, 0,2, 0,3, 0,4, 0,5, 0,9, 1,0%), cerca de 0,1 a 3% de álcool benzílico (por exemplo, 0,5, 0,9, 1,1, 1,5, 1,9, 2,0, 2,5%), cerca de 0,001 a 0,5% de tiomersal (por exemplo, 0,005, 0,01), cerca de 0,001 a 2,0% de fenol (por exemplo, 0,05, 0,25, 0,28, 0,5, 0,9, 1,0%), de 0,0005 a 1,0% de alquilparabeno(s) (por exemplo, 0,00075, 0,0009, 0,001, 0,002, 0,005, 0,0075, 0,009, 0,01, 0,02, 0,05, 0,075, 0,09, 0,1, 0,2, 0,3, 0,5, 0,75, 0,9, 1,0%), e outros mais.
Como observado acima, a invenção fornece um artigo de fabri- cação, compreendendo material de embalagem e pelo menos um frasco compreendendo uma solução de pelo menos um anticorpo anti-IL-23p19 com os tamponantes e/ou conservantes prescritos, opcionalmente em um diluente aquoso, em que dito material de embalagem compreende um rótulo que indica que tal solução pode ser mantida durante um período de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 9, 12, 18, 20, 24, 30, 36, 40, 48, 54, 60 , 66, 72 horas ou mais. A in- venção ainda compreende um artigo de fabricação, compreendendo material de embalagem, um primeiro frasco que compreende Iiofilizadpelo menos um anticorpo anti-IL-23p19, e um segundo frasco que compreende um diluente aquoso de tamponante ou conservante prescrito, em que dito material de embalagem compreende um rótulo que instrui um paciente a reconstituir pe- lo menos um anticorpo anti-IL-23p19s no diluente aquoso para formar uma solução que pode ser mantida durante um período de vinte e quatro horas ou mais.
Pelo menos um anticorpo anti-IL-23p19s utilizado de acordo com a presente invenção pode ser produzido por meios recombinantes, incluindo de célula de mamífero ou preparações transgênicas, ou pode ser purificado a partir de outras fontes biológicas, como aqui descrito ou como conhecido na técnica.
A faixa de pelo menos um anticorpo anti-IL-23p19 no produto da presente invenção inclui quantidades que rendem após a reconstituição, se em um sistema úmido/seco, concentrações de cerca de 1,0 pg/ml a cerca de 1000 mg/ml, embora concentrações mais baixas e mais elevadas são operá- veis e são dependentes do veículo de liberação destinado, por exemplo, as formulações de solução serão diferentes dos métodos de emplastro trans- dérmico, pulmonar, transmucosal, ou bomba osmótica ou micro.
Preferivelmente, o diluente aquoso opcionalmente ainda com- preende um conservante farmaceuticamente aceitável. Os conservantes pre- feridos incluem aqueles selecionados do grupo consistindo em fenol, m- cresol, p-cresol, o-cresol, clorocresol, álcool benzílico, alquilparabeno (meti- la, etila, propila, butila e outros mais), cloreto de benzalcônio, cloreto de ben- zetônio, deidroacetato de sódio e timerosal, ou misturas destes. A concen- tração de conservante utilizado na formulação é uma concentração suficien- te para produzir um efeito anti-microbiano. Tais concentrações são depen- dentes do conservante selecionado e são facilmente determinadas pelo artí- fice qualificado.
Outros excipientes, por exemplo, agentes de isotonicidade, tam- ponantes, antioxidantes, e intensificadores de conservante, podem ser op- cional e preferívelmente adicionados ao diluente. Um agente de isotonicida- de, tal como glicerina, é comumente usado em concentrações conhecidas. Um tamponante fisiologicamente tolerado é preferivelmente adicionado para fornecer controle de pH melhorado. As formulações podem abranger uma faixa ampla de pHs, tais como de cerca de pH 4 a cerca de pH 10, e as fai- xas preferidas de cerca de pH 5 a cerca de pH 9, e uma faixa mais preferida de cerca de 6,0 a cerca de 8,0. Preferivelmente, as formulações da presente invenção possuem um pH entre cerca de 6,8 e cerca de 7,8. Os tamponan- tes preferidos incluem tamponantes de fosfato, mais preferivelmente, fosfato de sódio, em particular, salina tamponada de fosfato (PBS).
Outros aditivos, tais como um solubilizante farmaceuticamente aceitável como Tween 20 (monolaurato de polioxietileno sorbitano (20)), Tween 40 (monopalmitato de polioxietileno sorbitano (20)), Tween 80 (mo- nooleato de polioxietileno sorbitano (20)), Pluronic F68 (copolímeros de blo- co de polioxietileno polioxipropileno), e PEG (polietileno glicol) ou tensoati- vos não iônicos, tais como polissorbato 20 ou 80 ou poloxâmero 184 ou 188, polióis Pluronic®, outros co-polímeros de bloco, e quelantes, tais como ED- TA e EGTA, podem opcionalmente ser adicionados nas formulações ou composições para reduzir a agregação. Esses aditivos são particularmente úteis se uma bomba ou recipiente de plástico for utilizado para administrar a formulação. A presença de tensoativo farmaceuticamente aceitável atenua a propensão da proteína se agregar.
As formulações da presente invenção podem ser preparadas por um processo que compreende misturar pelo menos um anticorpo anti-IL- 23p19s e um conservante selecionado do grupo consistindo em fenol, m- cresol, p-cresol, o-cresol, clorocresol, álcool benzílico, alquilparabeno, (meti- la, etila, propila, butila e similares), cloreto de benzalcônio, cloreto de benze- tônio, deidroacetato de sódio e timerosal ou misturas destes em um diluente aquoso. A Mistura dpelo menos um anticorpo anti-IL-23p19s e conservante em um diluente aquoso é realizada utilizando procedimentos convencionais de dissolução e mistura. Para preparar uma formulação adequada, por e- xemplo, uma quantidade medida de pelo menos um anticorpo anti-IL-23p19 em solução tampão é combinada com o conservante desejado em uma so- lução tampão em quantidades suficientes para fornecer a proteína e o con- servante nas concentrações desejadas. Variações deste processo seriam reconhecidas por uma pessoa de habilidade usual na técnica. Por exemplo, a ordem dos componentes que são adicionados, se os aditivos adicionais foram usados, a temperatura e o pH em que a formulação é preparada, são todos fatores qúe podem ser otimizados para a concentração e meios de administração utilizados.
As formulações reivindicadas podem ser fornecidas aos pacien- tes como soluções límpidas ou como frascos duplos compreendendo um frasco de liofilizado de pelo menos um anticorpo anti-IL-23p19 que é recons- tituído com um segundo frasco contendo água, um conservante e/ou excipi- entes, preferivelmente, um tampão de fosfato e/ou soro fisiológico e um sal selecionado, em um diluente aquoso. Um frasco de solução único ou frasco duplo que requer reconstituição pode ser reutilizado várias vezes e pode ser suficiente para um único ou vários ciclos de tratamento do paciente e, assim, pode fornecer um regime de tratamento mais conveniente do que o atual- mente disponível.
Os presentes artigos reivindicados de fabricação são úteis para a administração durante um período que varia de imediato a vinte e quatro horas ou mais. Conseqüentemente, os artigos presentemente reivindicados de fabricação oferecem vantagens significativas para o paciente. As formu- lações da invenção podem opcionalmente ser armazenado com segurança em temperaturas de cerca de 2 °C a cerca de 40 °C e retêm a atividade bio- lógica da proteína por longos períodos de tempo, permitindo assim um rótulo de embalagem indicando que a solução pode ser mantida e/ou utilizada du- rante um período de 6,12, 18, 24, 36, 48, 72 ou 96 horas ou mais. Se o dilu- ente conservado for utilizado, tal rótulo pode incluir o uso de até 1 a 12 me- ses, meio ano, um ano e meio e/ou dois anos. As soluções de pelo menos um anticorpo anti-IL-23p19s da in- venção podem ser preparadas por um processo que compreende a mistura de pelo menos um anticorpo em um diluente aquoso. A mistura é realizada utilizando procedimentos convencionais de dissolução e mistura. Para pre- parar um diluente adequado, por exemplo, uma quantidade medida de pelo menos um anticorpo em água ou tampão é combinada em quantidades sufi- cientes para fornecer a proteína e, opcionalmente, um conservante ou tam- pão nas concentrações desejadas. Variações deste processo devem ser re- conhecidas por uma pessoa de habilidade usual na técnica. Por exemplo, a ordem dos componentes que são adicionados, se os aditivos adicionais são utilizados, a temperatura e o pH em que a formulação é preparada, são to- dos fatores que podem ser otimizados para a concentração e meios de ad- ministração utilizados.
Os produtos presentemente reivindicados podem ser fornecidos aos pacientes como soluções límpidas ou como frascos duplos compreen- dendo um frasco de Iiofilizado de pelo menos um anticorpo anti-IL-23p19 que é reconstituído com um segundo frasco contendo o diluente aquoso. Um frasco de solução único ou um frasco duplo que requer reconstituição pode ser reutilizado várias vezes e pode ser suficiente um único ou vários ciclos de tratamento do paciente e, assim, fornece um regime de tratamento mais conveniente do que o correntemente disponível.
Os produtos reivindicados podem ser fornecidos indiretamente aos pacientes através do fornecimento às farmácias, clínicas, ou outra tais instituições e instalações, soluções límpidas ou frascos duplos compreen- dendo um frasco de Iiofilizado de pelo menos um anticorpo anti-IL-23p19 que é reconstituído com um segundo frasco contendo o diluente aquoso. A solu- ção límpida neste caso pode ser de até um litro ou mesmo maior no tama- nho, proporcionando um grande cavidade do qual pequenas porções dpelo menos uma solução de anticorpo podem ser exibida uma ou várias vezes para a transferência em frascos menores e fornecidas pela farmácia ou clíni- ca para seus clientes e/ou pacientes.
Os dispositivos reconhecidos compreendendo sistemas de fras- co único incluem dispositivos de caneta-injetora para a liberação de uma solução tais como BD Pens, BD Autojector®, Humaject®' NovoPen®, B- D®Pen, AutoPen®, and OptiPen®, GenotropinPen®, Genotronorm Pen®, Hu- matro Pen®, Reco-Pen®, Roferon Pen®, Biojector®, Iject®, J-tip Needle-Free Injector®, Intraject®, Medi-Ject®, por exemplo, como produzidos ou desen- volvidos pela Becton Dickensen (Franklin Lakes, NJ, www.bectondickenson.com), Disetronic (Burgdorf, Switzerland, www.disetronic.com; Bioject, Portland, Oregon (www.bioject.com); National Medicai Products, Weston Medicai (Peterborough, UK1 www.weston- medical.com), Medi-Ject Corp (Minneapolis, MN, www.mediject.com), e dis- positivos similarmente adequados. Os dispositivos reconhecidos compreen- dendo um sistema de frasco duplo incluem aqueles sistemas de caneta- injetora para reconstituição de um fármaco Iiofilizado em um cartucho para a liberação da solução reconstituída, tal como a HumatroPen®. Exemplos de outros dispositivos adequados incluem seringas pré-carregadas, autoinjeto- res, injetores livres de agulha e conjuntos de infusão IV livres de agulhas.
Os produtos presentemente reivindicados incluem material de embalagem. O material de embalagem fornece, além da informação requeri- da pelas agências reguladoras, as condições sob as quais o produto pode ser utilizado. O material de embalagem da presente invenção fornece instru- ções para o paciente para reconstituir pelo menos um anticorpo anti-IL- 23p19s no diluente aquoso para formar uma solução e utilizar a solução du- rante um período de 2 a 24 horas ou maior para o produto de dois frascos, aguado/seco. Para o frasco único, produto de solução, o rótulo indica que tal solução pode ser utilizada durante um período de 2 a 24 horas ou maior. Os produtos presentemente reivindicados são úteis para uso de produto farma- cêutico humano.
As formulações da presente invenção podem ser preparadas por um processo que compreende a mistura de pelo menos um anticorpo anti-IL- 23p19s e um tamponante selecionado, preferivelmente, um tampão de fosfa- to contendo soro fisiológico ou um sal selecionado. A mistura dpelo menos um anticorpo anti-IL-23p19s e tamponante em um diluente aquoso é realiza- da utilizando procedimentos convencionais de dissolução e mistura. Para preparar uma formulação adequada, por exemplo, uma quantidade medida de pelo menos um anticorpo em água ou tampão é combinada com o agente tamponante desejado em água em quantidades suficientes para fornecer a proteína e tampão nas concentrações desejadas. Variações deste processo devem ser reconhecidas por uma pessoa de habilidade usual na técnica. Por exemplo, a ordem em que os componentes são adicionados, se aditivos adi- cionais são utilizados, a temperatura e o pH em que a formulação é prepara- da, são todos fatores que podem ser otimizados para a concentração e mei- os de administração utilizados.
As formulações estáveis ou conservadas reivindicadas podem ser fornecidas aos pacientes como soluções límpidas ou como frascos du- plos compreendendo um frasco de Iiofilizado de pelo menos um anticorpo anti-IL-23p19 que é reconstituído com um segundo frasco contendo um con- servante ou tamponante e excipientes em um diluente aquoso. Um frasco de solução único ou um frasco duplo que requer reconstituição pode ser reutili- zado várias vezes e pode ser suficiente para um único ou vários ciclos de tratamento do paciente e, assim, fornece um regime de tratamento mais conveniente do que o correntemente disponível.
Outras formulações ou métodos de estabilização do anticorpo anti-IL-23p19 podem resultar em uma solução límpida diferente de pó Iiofili- zado compreendendo o anticorpo. Entre as soluções não límpidas estão as formulações compreendendo suspensões particuladas, ditos particulados sendo uma composição contendo o anticorpo anti-IL-23p19 em uma estrutu- ra de dimensão variável e conhecidos diferentemente como uma microesfe- ra, micropartícula, nanopartícula, nanoesfera ou lipossoma. Tais formulações particuladas relativamente homogêneas, essencialmente esféricas contendo um agente ativo podem ser formadas mediante o contato de uma fase aquo- sa contendo o agente ativo e um polímero e uma fase não aquosa seguida por evaporação da fase não aquosa para provocar a coalescência de partí- culas a partir da fase aquosa como ensinado na U.S. 4.589.330. As micro- partículas porosas podem ser preparadas usando uma primeira fase conten- do o agente e um polímero disperso em um solvente contínuo e remoção de dito solvente da suspensão mediante a secagem por congelamento ou dilui- ção-extração-precipitação como ensinado na U.S. 4.818.542. Os polímeros preferidos para tais preparações são copolímeros ou polímeros naturais ou sintéticos selecionados do grupo consistindo em gelatina ágar, amido, arabi- nogalactana, albumina, colágeno, ácido poliglicólico, ácido poliláctico, glico- lídeo-L(-) lactídeo poli(epsílon-caprolactona), poli(epsílon-caprolactona-CO- ácido lático), poli(epsílon-caprolactona-CO-ácido glicólico), poli(3-ácido hi- dróxi butírico), oxido de polietileno, polietileno, poli(alquil-2-cianoacrilato), poli(hidroxietil metacrilato), poliamidas, poli(aminoácidos), poli(2-hidroxietil DL-aspartamida), poli(éster uréia), poli(L-fenilalanina/etileno glicol/1,6- diisocianatoexano) e poli(metacrilato de metila). Os polímeros particularmen- te preferidos são poliésteres, tais como o ácido poliglicólico, ácido poliláctico, glicolídeo-L(-) lactídeo poli(epsílon-caprolactona), poli(epsílon-caprolactona- CO-ácido lático) e poli(epsílon-caprolactone-CO-ácido glicólico). Os solven- tes úteis para dissolver o polímero e/ou o ativo incluem: água, hexafluoroiso- propanol, metilenocloreto, tetraidrofurano, hexano, benzeno ou hexafluoroa- cetona sesquiidrato. O processo de dispersar a fase contendo ingrediente ativo com uma segunda fase pode incluir pressão que força dita primeira fase através de um orifício em um bocal para afetar a formação de gotícula.
As formulações de pó seco podem resultar de processos diferentes da liofilização, tais como a secagem por pulverização ou extração de solvente por evaporação ou por precipitação de uma composição cristalina seguida por uma ou mais etapas para remover o solvente não aquoso ou aquoso. A prepa- ração de uma preparação de anticorpo secada por pulverização é ensinada na U.S. 6.019.968. As composições de pó seco com base em anticorpo podem ser produzidas por soluções ou pastas fluidas secadas por pulverização do anticor- po e, opcionalmente, excipientes, em um solvente sob condições de fornecer um pó seco respirável. Os solventes podem incluir compostos polares, tais co- mo água e etanol, que podem ser facilmente secados. A estabilidade de anti- corpos pode ser intensificada mediante a execução dos procedimentos de se- cagem por pulverização na ausência de oxigênio, tal como sob uma manta de nitrogênio ou mediante o uso de nitrogênio como o gás de secagem. Uma outra formulação relativamente seca é uma dispersão de uma pluralidade de micro- estruturas perfurada dispersas em um meio de suspensão que tipicamente compreende um propulsor de hidrofIuoroalcano como ensinado no WO 9916419. As dispersões estabilizadas podem ser administradas para o pulmão de um paciente usando um inalador de dose medida. Os equipamentos úteis na fabricação comercial de fármacos secados por pulverização são fabricados pela Buchi Ltd. ou Niro Corp.
Pelo menos um anticorpo anti-IL-23p19s nas formulações ou solu- ções estáveis ou conservadas aqui descritas, pode ser administrado a um paciente de acordo com a presente invenção através de uma variedade de métodos de liberação incluindo a injeção SC ou IM; transdérmica, pulmonar, transmucosal, implante, bomba osmótica, cartucho, microbomba, ou outros meios observados pelo artífice versado, também conhecidos na técnica.
Aplicações Terapêuticas
A presente invenção fornece também um método de modular ou tratar pelo menos uma doença relacionada com a IL-23, em uma célula, te- cido, órgão, animal ou paciente, tal como é conhecido na técnica ou como aqui descrito, usandpelo menos um anticorpo de IL-23p19 da presente in- venção, por exemplo, administração ou contato da célula, tecido, órgão, a- nimal ou paciente com uma quantidade eficaz terapêutica de anticorpo de IL- 23p19. A presente invenção também fornece um método para modular ou tratamentpelo menos .uma doença relacionada com a IL-23, em uma célula, tecido, órgão, animal ou paciente incluindo, mas não limitado a elas, pelo menos uma de obesidade, uma doença relacionada imunológica, uma doen- ça cardiovascular, uma doença infecciosa, uma doença maligna ou uma do- ença neurológica.
A presente invenção da mesma forma fornece um método para a modulação ou tratamento de pelo menos uma doença relacionada imunoló- gica relacionada com a IL-23, em uma célula, tecido, órgão, animal ou paci- ente incluindo, mas não limitado a elas, pelo menos uma de artrite reumatói- de, artrite reumatóide juvenil, artrite reumatóide juvenil de aparecimento sis- têmico, artrite psoriática, espondilite anquilosante, úlcera gástrica, artropatias soronegativas, osteoartrite, osteólise, flexibilização asséptica dos implantes ortopédicos, doença inflamatória intestinal, colite ulcerosa, lúpus eritematoso sistêmico, síndrome antifosfolipídica, iridociclite/uveíte/neurite ótica, fibrose pulmonar idiopática, vasculite sistêmica/granulomatose de Wegener, sarcoi- dose, procedimentos de inversão de orquite/vasectomia, doenças alérgi- cas/atópicas, asma, rinite alérgica, eczema, dermatite de contato alérgica, conjuntivite alérgica, hipersensibilidade pneumonite, transplantes, rejeição ,de órgãos transplantados, doença de enxerto versus hospedeiro, síndrome da resposta inflamatória sistêmica, síndrome de sepsia, sepsia gram- positivas, sepsia gram-negativa, sepsia negativa de cultura, sepsia fúngica, febre neutropênica, urosepsia, meningococcemia, trauma/hemorragia, quei- maduras, exposição às radiações ionizantes, pancreatite aguda, síndrome da angústia respiratória do adulto, artrite reumatóide, hepatite induzida por álcool, patologias inflamatórias crônicas, sarcoidose, patologia de Crohn, anemia falciforme, diabetes, nefrose, doenças atópicas, reações de hiper- sensibilidade, rinite alérgica, febre do feno, rinite perene, conjuntivite, endo- metriose, asma, urticária, anafalaxia sistêmica, dermatite, anemia perniciosa, doença hemolítica, trombocitopenia, rejeição de enxerto de qualquer órgão ou tecido, rejeição de transplante de rim, rejeição de transplante cardíaco, rejeição de transplante do fígado, rejeição de transplante do pâncreas, rejei- ção de transplante do pulmão, rejeição de transplante da medula óssea (BMT), rejeição de aloenxerto da pele, rejeição de transplante da cartilagem, rejeição de enxerto ósseo, rejeição de transplante do intestino delgado, re- jeição de implante do timo fetal, rejeição de transplante da paratireóide, re- jeição de xenoexerto de qualquer órgão ou tecido, rejeição de aloenxerto, reações de hipersensibilidade anti-receptora, doença de Graves, doença de Raynaud, diabetes resistente a insulina tipo B, asma, miastenia grave, cito- toxicidade meditada por anticorpo, reações de hipersensibilidade tipo III, sín- drome POEMS (polineuropatia, organomegalia, endocrinopatia, gamopatia monoclonal, e síndrome de alterações da pele), polineuropatia, organomega- lia, endocrinopatia, gamopatia monoclonal, síndrome de alterações cutâ- neas, síndrome antifosfolipídica, pênfigo, esclerodermia, doença do tecido conectivo misturado, doença de Addison idiopática, diabetes melito, hepatite ativa crônica, cirrose biliar primária, vitiligo, vasculite, síndrome pós-MI car- diotomia, hipersensibilidade do tipo IV, dermatite de contato, hipersensibili- dade pneumonite, rejeição de aloenxerto, granulomas devido aos organis- mos intracelulares, sensibilidade a fármaco, doença de Wilson metabóli- ca/idiopática, hemacromatose, deficiência de alfa-1 -antitripsina, retinopatia diabética, tiroidite de Hashimoto, osteoporose, avaliação do eixo hipotálamo- pituitária-adrenal, cirrose biliar primária, tireoidite, encefalomielite, caquexia, fibrose cística, doença pulmonar crônica neonatal, doença pulmonar obstru- tiva crônica (DPOC), Iinfoistiocitose hematofagocítica familiar, condições dermatológicas, psoríase, alopecia, síndrome nefrótica, nefrite, nefrite glo- merular, insuficiência renal aguda, hemodiálise, uremia, toxicidade, pré- eclampsia, terapia okt3, terapia anti-cd3, terapia de citocina, quimioterapia, radioterapia (por exemplo, incluindo, mas não limitado a estes, astenia, a- nemia, caquexia, e similares), intoxicação crônica por salicilato, e outros mais. Vide, por exemplo, o Merck Manual, 12th-17th Editions, Merck & Com- pany, Rahway, NJ (1972, 1977, 1982, 1987, 1992, 1999), Pharmacotherapy Handbook, Wells et al., eds., Second Edition, Appleton and Lange1 Stamford, Conn. (1998, 2000), cada um totalmente incorporado por referência.
A presente invenção também fornece um método para a modu- lação ou tratamento de pelo menos uma doença cardiovascular em uma cé- lula, tecido, órgão, animal ou paciente, incluindo, mas não limitado a estes, pelo menos um de síndrome imobilizadora cardíaca, enfarte do miocárdio, insuficiência cardíaca congestiva, acidente vascular cerebral, acidente vas- cular cerebral isquêmico, hemorragia, síndrome coronariana aguda, arterios- clerose, aterosclerose, restenose, doença ateriosclerótica diabética, hiper- tensão, hipertensão arterial, hipertensão renovascular, síncope, choque, sífi- lis do sistema cardiovascular, insuficiência cardíaca, cor pulmonale, hiper- tensão pulmonar primária, arritmia cardíaca, batimentos ectópicos atriais, taquicardia atrial, fibrilação atrial (sustentada ou paroxística), síndrome pós- perfusão, resposta de inflamação da cirurgia de revascularização cardiopul- monar, taquicardia atrial caótica ou multifocal, taquicardia QRS limitada re- gular, arritmias específicas, fibrilação ventricular, arritmias fusiformes His, bloqueio atrioventricular, bloco de ramificação fusiforme, distúrbios isquêmi- cos do miocárdio, doença arterial coronariana, angina de peito, enfarte do miocárdio, cardiomiopatia, cardiomiopatia congestiva dilatada, cardiomiopa- tia restritiva, doenças cardíacas valvulares, endocardite, doença pericárdica, tumores cardíacos, aneurismas aórticos e periféricos, dissecção aórtica, in- flamação da aorta, oclusão da aorta abdominal e seus ramos, distúrbios vasculares periféricos, distúrbios arteriais oclusivos, doença aterosclerótica periférica, tromboangeíte obliterante, distúrbios arteriais periféricos funcio- nais, fenômeno e doença de Raynaud, acrocianose, eritromelalgia, doenças venosas, trombose venosa, veias varicosas, fístula arteriovenosa, Iinfoder- ma, lipedema, angina instável, lesão por reperfusão, síndrome pós-bomba, lesão por isquemia e reperfusão, e outras mais. Um tal método pode opcio- nalmente compreender a administração de uma quantidade de uma compo- sição ou composição farmacêutica que compreende pelo menos um anticor- po anti-IL-23p19s para uma célula, tecido, órgão, animal ou paciente com necessidade de tal modulação, tratamento ou terapia.
A presente invenção da mesma forma fornece um método para a modulação ou tratamento de pelo menos uma doença infecciosa relacionada com a IL-23 em uma célula, tecido, órgão, animal ou paciente, incluindo, mas não limitado a estas, pelo menos uma de: infecção bacteriana aguda ou crônica, processos infecciosos ou parasíticos agudos e crônicos, incluindo infecções bacterianas, virais e fúngicas, infecção pelo HlV/neuropatia do HIV1 meningite, hepatite (por exemplo, A, B ou C, ou similar), artrite séptica, peritonite, pneumonia, epiglotite, e. coli 0157:h7, síndrome urêmica hemolíti- ca/púrpura trombocitopênica trombolítica, malária, febre hemorrágica da dengue, leishmaniose, hanseníase, síndrome de choque tóxico, miosite es- treptocócica, gangrena gasosa, tuberculose por micobactéria, mycobacteri- um avium intracellulare, pneumonia pneumocystis carinii, doença inflamató- ria pélvica, orquite/epididimite, legionelose, doença de lyme, gripe, vírus Eps- tein-Barr, síndrome hemafagocítica associada com vírus, meningite encefáli- ca/asséptica viral, e outras mais.
A presente invenção fornece também um método para a modu- lação ou tratamento de pelo menos uma doença maligna relacionada com a IL-23 em uma célula, tecido, órgão, animal ou paciente, incluindo, mas não limitado a estas, pelo menos uma de: leucemia, leucemia aguda, leucemia linfoblástica aguda (ALL), leucemia linfocítica aguda, ALL de células B, de células T ou FAB, leucemia mielóide aguda (AML), leucemia mielogênica aguda, leucemia mielocítica crônica (CML), leucemia linfocítica crônica (CLL), leucemia de células pilosas, síndrome mielodiplástica (MDS), um lin- foma, doença de Hodgkin, um linfoma maligno, linfoma não Hodgkin, linfoma de Burkitt, mieloma múltiplo, sarcoma de Kaposi, carcinoma colorretal, carci- noma pancreático, carcinoma nasofaríngeo, histiocitose maligna, síndrome paraneoplásica/hipercalcemia de malignidade, tumores sólidos, câncer da bexiga, câncer da mama, câncer colorretal, câncer endometrial, câncer da cabeça, câncer do pescoço, câncer hereditário não polipose, linfoma de Hodgkin, câncer do fígado, câncer do pulmão do pulmão de células não pe- quenas, câncer do ovário, câncer do pâncreas, câncer da próstata, carcino- ma de células renais, câncer testicular, adenocarcinomas, sarcomas, mela- noma maligno, hemangioma, doença metastática, câncer relacionado com a reabsorção óssea, câncer relacionado com a dor óssea, e outros mais.
A presente invenção também fornece um método para a modula- ção ou tratamento de pelo menos uma doença neurológica relacionada com a IL-23 em uma célula, tecido, órgão, animal ou paciente, incluindo, mas não limi- tado a esta, pelo menos uma de: doenças neurodegenerativas, esclerose múl- tipla, enxaqueca, complexo de demência da AIDS, doenças desmielinizantes, tais como a esclerose múltipla e mielite transversa aguda; transtornos extrapi- ramidais e cerebelares, tais como lesões do sistema corticoespinhal; distúrbios dos gânglios basais; distúrbios do movimento hipercinético, tais como coréia de Huntington e coréia senil; distúrbios de movimento induzidos por fármaco, tais como aqueles induzidos por fármacos que bloqueiam os receptores dopami- nérgicos do CNS; distúrbios do movimento hipocinético, tais como a mal-de- Parkinson; paralisia supranuclear progressiva; lesões estruturais do cerebelo; degenerações espinocerebelar, tais como ataxia espinhal, ataxia de Friedreich, degenerações corticais cerebelares, degenerações de múltiplos sistemas (Mencel, Dejerine-Thomas, Shi-Drager, e Machado-Joseph); distúrbios sistêmi- cos (doença de Refsum, abetalipoprotemia, ataxia, telangiectasia, e distúrbio de múltiplos sistemas mitocondrial); distúrbios de núcleo desmielinizante, tais co- mo a esclerose múltipla, mielite transversal aguda; e distúrbios do aparelho mo- tor, tais como atrofias musculares neurogênicas (degeneração das células do corno anteriores, tais como a esclerose lateral amiotrófica, atrofia muscular es- pinhal infantil e atrofia muscular espinhal juvenil); mal de Alzheimer; síndrome de Down na meia-idade; doença do corpo de Lewy difusa; demência senil do tipo corpo de Lewy; síndrome de Wernicke-Korsakoff; alcoolismo crônico, do- ença de Creutzfeldt-Jakob; panencefalite esclerosante subaguda, doença de Hallerrorden-Spatz; demência pugilística; lesão neurotraumática (por exemplo, lesão medular, lesão cerebral, concussão, concussão repetitiva); dor; dor infla- matória; autismo; depressão; acidente vascular cerebral, distúrbios cognitivos; epilepsia, e outros mais. Um tal método pode opcionalmente compreender a administração de uma quantidade eficaz de uma composição ou composição farmacêutica compreendendpelo menos um anticorpo de TNF ou parte ou vari- ante específica de uma célula, tecido, órgão, animal ou paciente com necessi- dade de tal modulação, tratamento ou terapia. Vide, por exemplo, o Merck Ma- nual, 16th Edition, Merck & Company, Rahway, NJ (1992).
A presente invenção também fornece um método para a modu- lação ou tratamento de pelo menos um ferimento, traumatismo ou lesão te- cidual relacionado com a IL-23, ou condição crônica relacionada, em uma célula, tecido, órgão, animal ou paciente, incluindo, mas não limitado a es- tes, pelo menos um de: lesão corporal ou um traumatismo associado com cirurgia oral incluindo cirurgia periodontal, extração(ões) dentária(s), trata- mento endodôntico, inserção de implantes dentários, aplicação e uso de pró- tese dentária; ou em que o ferimento é selecionada do grupo consistindo em ferimentos assépticos, ferimentos de contusão, ferimentos de incisão, feri- mentos dilacerados, ferimentos não penetrantes, ferimentos abertos, feri- mentos penetrantes, ferimentos perfurantes, ferimentos de punctura, feri- mentos sépticos, ferimentos de infartos e subcutâneos; ou em que o ferimen- tos é selecionada do grupo consistindo em úlceras isquêmicas, feridas de pressão, fístulas, mordidas graves, queimaduras térmicas e ferimentos locais de doador; ou èm que o ferimento é um ferimento aftoso, um ferimento trau- mático ou um ferida associada com herpes.
Os ferimentos e/ou úlceras são normalmente observados proje- tando-se sobre a pele ou sobre uma superfície mucosa ou como um resulta- do de um infarto em um órgão ("acidente vascular cerebral"). Um ferimento pode ser um resultado de um defeito do tecido macio ou uma lesão ou de uma condição subjacente. No presente contexto, o termo "pele" refere-se à superfície exterior do corpo de um animal, incluindo um ser humano, e a- brange a pele intacta ou quase intacta, assim como uma superfície da pele lesada. O termo "mucosa" refere-se à mucosa não danificada ou danificada de um animal, tal como um ser humano, e pode ser a mucosá oral, bucal, auricular, nasal, pulmonar, ocular, gastrointestinal, vaginal ou retal.
No presente contexto, o termo "ferimento" significa uma lesão corporal com a ruptura da integridade normal das estruturas do tecido. O termo também destinado a abranger os termos "ferida", "lesão", "necrose" e "úlcera". Normalmente, o termo "ferida" é um termo popular para quase to- das as lesões da pele ou membranas mucosas e o termo "úlcera" é um de- feito local, ou escavação, da superfície de um órgão ou tecido, que é produ- zido pela escara de tecido necrótico. A lesão geralmente diz respeito a qual- quer defeito do tecido. A necrose está relacionada com o tecido morto resul- tante de infecção, lesão, inflamação ou infartos.
O termo "ferimento" utilizado no presente contexto significa qualquer ferimento (veja abaixo para uma classificação de ferimentos) e em qualquer estágio particular no processo de cicatrização, incluindo o estágio antes de qualquer cicatrização tendo iniciada ou mesmo antes que um feri- mento específico como uma incisão cirúrgica seja feita (tratamento profiláti- co). Exemplos de ferimentos que podem ser prevenidos e/ou tratados de acordo com a presente invenção são, por exemplo, ferimentos assépticos, ferimentos de contusão, ferimentos por incisão, ferimentos dilacerados, feri- mentos não penetrante (isto é, ferimentos em que não existe nenhuma rup- tura da pele, mas há prejuízo para as estruturas subjacentes), ferimentos abertos, ferimentos penetrantes, ferimentos perfurantes, ferimentos de punc- tura, ferimentos sépticos, ferimentos subcutâneos, etc. Exemplos de feridas são úlceras do leito, estomatites, úlceras de cromo, herpes simples, ulceras de pressão, etc. Exemplos de úlceras são, por exemplo, uma úlcera péptica, úlcera duodenal, úlcera gástrica, úlcera gotosa, úlcera diabética, úlcera is- quêmica hipertensiva, úlcera de estase, úlcera da perna (úlcera venosa), úlcera sublingual, úlcera submucosa, úlcera sintomática, úlcera trófica, úlce- ra tropical, e úlcera venérea, por exemplo, causada por gonorréia (incluindo uretrite, endocervicite e proctite). Condições relacionadas com ferimentos ou feridas que podem ser tratadas com sucesso de acordo com a invenção são queimaduras, carbúnculo, tétano, gangrena gasosa, escarlatina, erisipela, barba sicose, foliculite, impetigo contagioso, ou impetigo bolhoso, etc. Há muitas vezes uma certa sobreposição entre o uso dos termos "ferimento" e "úlcera" e "ferimento" e "ferida" e, além disso, os termos são freqüentemente usados de forma aleatória. Portanto, como mencionado acima, no presente contexto o termo "ferimento" engloba os termos "úlcera", "lesão", "ferida" e "infarto", e os termos são usados indiscriminadamente a não ser que de ou- tra maneira indicado.
As espécies de ferimentos a serem tratadas de acordo com a invenção incluem também (i) ferimentos gerais, tais como, por exemplo, fe- rimentos cirúrgicos, traumáticos, infecciosos, isquêmicos, térmicos, químicos e bolhosos, (ii) ferimentos específicos para a cavidade oral, tais como, por exemplo, ferimentos pós-extração, ferimentos endodonticos especialmente em conexão com o tratamento de quistos e abscessos, úlceras e lesões de origem bacteriana, viral ou auto-imunológica, ferimentos mecânicos, quími- cos, térmicos, infecciosos e liquenóides; úlceras herpes, estomatite aftosa, gengivite ulcerativa aguda necrosante e síndrome da boca queimando são exemplos específicos, e (iii) ferimentos sobre a pele, tais como, por exemplo, neoplasias, queimaduras (por exemplo, químicas, térmicas), lesões (bacteri- anas, virais, autoimunologicas), mordidas e incisões cirúrgicas. Uma outra forma de classificar os ferimentos é como (i) perda do tecido secundário de- vido às incisões cirúrgicas, abrasões menores e mordidas menores, ou como (ii) perda significativa do tecido. O último grupo inclui úlceras isquêmicas, úlceras de pressão, fístulas, lacerações, mordidas graves, queimaduras tér- micas e ferimentos locais de doadores (em tecidos macios e rijos) e infartos.
Outros ferimentos que são de importância no contexto com a pre- sente invenção são ferimentos semelhantes a úlceras isquêmicas, úlceras de pressão, fístulas, mordidas grave, queimaduras térmicas e ferimentos locais de doadores. As úlceras isquêmicas e úlceras de pressão são ferimentos que normalmente só cicatrizam muito lentamente e especialmente em tais casos, um processo de cicatrização melhorado e mais rápido é obviamente de grande importância para o paciente. Além disso, os custos envolvidos no tratamento de pacientes que sofrem de tais ferimentos são marcantemente reduzidos quando a cicatrização é melhorada e ocorre mais rapidamente.
Os ferimentos locais de doador são ferimentos que, por exem- plo, ocorrem em conexão com a remoção de tecido rijo de uma parte do cor- po para outra parte do corpo, por exemplo, em conexão com transplante. Os ferimentos resultantes de tais operações são muito dolorosos e uma cicatri- zação melhorada é mais valiosa. O termo "pele" é usado em um sentido mui- to amplo que abrange a camada epidérmica da pele e - naqueles casos on- de a superfície da pele é mais ou menos ferida - também a camada dérmica da pele. À parte do estrato córneo, a camada epidérmica da pele é a cama- da exterior (epitelial) e a camada do tecido conectivo mais profundo da pele é chamada a derme.
A presente invenção fornece também um método para a modu- lação ou tratamento de psoríase, artrite psoriática, doença de Crohn, escle- rose múltipla e neurite ótica, entre as outras doenças acima listadas quando relacionadas com a IL-23, em uma célula, tecido, órgão, animal ou paciente, incluindo, mas não limitado a estas, pelo menos uma de doença relacionada com a imunodeficiência, doença cardiovascular, doença infecciosa, maligna e/ou neurológica. Um tal método pode opcionalmente compreender a admi- nistração de uma quantidade eficaz de pelo menos uma composição ou composição farmacêutica compreendendpelo menos um anticorpo anti-IL- 23p19s à uma célula, tecido, órgão, animal ou paciente com necessidade de tal modulação, tratamento ou terapia.
Qualquer método da presente invenção pode compreender a administração de uma quantidade eficaz de uma composição ou composição farmacêutica compreendendpelo menos um anticorpo anti-IL-23p19s à uma célula, tecido, órgão, animal ou paciente com necessidade de tal modulação, tratamento ou terapia. Um tal método pode ainda opcionalmente compreen- der a co-administração ou a terapia de combinação para o tratamento de tais doenças ou distúrbios, em que a administração de ditpelo menos um anti- corpo anti-IL-23p19, parte específica ou variante deste, ainda compreende'a administração, antes, concomitantemente e/ou após, de pelo menos um se- lecionado de pelo menos um antagonista de TNF (por exemplo, mas não limitado a estes, um antagonista químico ou de proteína TNF, anticorpo ou fragmento monoclonal ou policlonal de TNF, um receptor de TNF solúvel (por exemplo, p55, p70 ou P85) ou fragmento, polipeptídeos fusão destes, ou uma antagonista de TNF de molécula pequena, por exemplo, proteína de ligação a TNF I ou Il (TBP-1 ou TBP-II), nerelimonmab, infliximab, etanercept (Enbrel™), adalimulab (Humira®), CDP-571, CDP-870, afelimomab, Iener- cept, e outros mais), um antirreumático (por exemplo, metotrexato, aurano- fin, aurotioglicose, azatioprina, tiomalato sódico de ouro, sulfato de hidroxi- cloroquina, leflunomida, sulfasalzina), um relaxante muscular, um narcótico, um fármaco anti-inflamatório não esteróide (NSAID), um analgésico, um a- nestésico, um sedativo, um anestésico local, um bloqueador neuromuscular, um antimicrobiano (por exemplo, aminoglicosídeos, um antifúngico, um anti- parasitário, um antiviral, um carbapenem, cefalosporina, uma fluoroquinolo- na, um macrólido, uma penicilina, uma sulfonamida, uma tetraciclina, um outro antimicrobiano), um antipsoriático, um corticosteróide, um esteróide anabólico, um agente relacionado com diabetes, um mineral, uma nutricio- nal, um agente da tiróide, uma vitamina, um hormônio relacionado com cál- cio, um anti-diarréico, um antitussivo, um antiemético, uma antiúlcera, um laxante, um anticoagulante, uma eritropoietina (por exemplo, epoetina-alfa), um filgrastim (por exemplo, G-CSF1 Neupogen), um sargramostim (GM-CSF, Leucina), uma imunização, uma imunoglobulina, um imunossupressor (por exemplo, basiliximab, ciclosporina, daclizumab), uma hormônio do cresci- mento, um fármaco de reposição hormonal, um modulador do receptor es- trogênio, um midriático, um cicloplégico, um agente de alquilação, um anti- metabólito, um inibidor mitótico, um radiofármaco, um antidepressivo, agente antimaníaco, um antipsicótico, um ansiolítico, um hipnótico, um simpatico- mimético, um estimulante, donepezil, tacrina, uma medicação contra asma, um beta-agonista, um esteróide inalado, um inibidor de leucotrieno, uma me- tilxantina, uma cromolina, uma epinefrina ou análogo, dornase-alfa (Pul- mozyme), uma citocina ou um antagonista de citocina. As dosagens ade- quadas são bem-conhecidas na técnica. Vide, por exemplo, Wells et al., eds., Pharmacotherapy Handbook, 2nd Edition, Appleton and Lange, Stam- ford, CT (2000); PDR Pharmacopoeia, Tarascon Pocket Phàrmacopoeia 2000, Deluxe Edition, Tarascon Publishing, Loma Linda, CA (2000); Nursing 2001 Handbook of Drugs, 21st edition, Springhouse Corp., Sprínghouse, PA, 2001; Health Professional's Drug Guide 2001, ed., Shannon, Wilson, Stang, Prentice-Hall, lnc, Upper Saddle River, NJ, cada uma destas referências são inteiramente incorporadas neste documento por referência.
Os antagonistas TNF adequados para as composições, terapia de combinação, co-administração, dispositivos e/ou métodos da presente invenção (ainda compreendendpelo menos mais um anticorpo, parte especi- ficada e a variante destes, da presente invenção), incluem, mas não são limi- tados a eles, anticorpos anti-TNF (por exemplo, pelo menos um antagonista de TNF como definido acima), seus fragmentos de ligação ao antígeno, e moléculas receptoras que se ligam especificamente ao TNF; compostos que impedem e/ou inibem síntese de TNF, liberação de TNF ou a sua ação nas células-alvo, tais como talidomida, tenidap, inibidores da fosfodiesterase (por exemplo, pentoxifilina e rolipram), agonistas do receptor de A2b adenosina e intensificadores do receptor de A2b adenosina; compostos que impedem e/ou inibem a sinalização do receptor de TNF, tal como inibidores proteína cinase ativada por mitógeno (MAP); compostos que bloqueiam e/ou inibem a clivagem da membrana do TNF, tais como inibidores da metaloproteinase; compostos que bloqueiam e/ou inibem a atividade do TNF, tais como os ini- bidores da enzima de conversão da angiotensina (ACE) (por exemplo, cap- topril) e compostos que bloqueiam e/ou inibem a produção e/ou de síntese do TNF, tais como inibidores da MAP cinase.
Como aqui usado, um "anticorpo do fator de necrose tumoral", "anticorpo do TNF", "anticorpo do TNFoc", ou fragmento e outros mais dimi- nui, bloqueia, inibe, revoga ou interfere com a atividade de TNFa in vitro, in situi e/ou, preferivelmente, in vivo. Por exemplo, um anticorpo humano do TNF adequado da presente invenção pode ser ligar ao TNFa e inclui anti- corpos anti-TNF, fragmentos de ligação ao antígeno destes, e seus mutantes e domínios específicos que se ligam especificamente ao TNFa. Um anticor- po ou fragmento do TNF adequado pode também diminuir, bloquear, revo- gar, interferir, prevenir e/ou inibir a síntese de RNA1 DNA ou proteína do TNF, liberação de TNF, sinalização do receptor de TNF, clivagem do TNF na membrana, atividade do TNF, produção e/ou síntese de TNF.
Um exemplo de um anticorpo ou antagonista de TNF é o anticorpo quimérico cA2. Exemplos Adicional de anticorpos monoclonais anti-TNF que podem ser utilizados na presente invenção são descritos na técnica (vide, por exemplo, Patente U.S. n2 5.231.024; Mõller, A. et al., Cytokine 2(3):162-169 ( 1990); Pedido U.S. n5 07/943.852 (depositado em 11 de setembro de 1992); Rathjen et al., Publicação Internacional No. WO 91/02078 (publicada 21 de fe- vereiro de 1991); Rubin et al., Publicação de Patente EPO Ns 0 218 868 (publi- cada 22 de abril de 1987); Yone et al., Publicação de Patente EPO N5 0 288 088 (26 de outubro de 1988); Liang, et al., Biochem. Biophys. Res. Comm. 137:847-854 (1986); Meager1 et al., Hybridoma 6:305-311 (1987); Fendly et al., Hybridoma 6:359-369 (1987); Bringman, et al., Hybridoma 6:489-507 (1987); e Hirai1 et al., J. Immunol. Meth. 96:57-62 (1987). Moléculas Receptoras do TNF
As moléculas receptoras do TNF preferidas úteis na presente invenção são aquelas que se ligam ao TNFa com alta afinidade (vide, por exemplo, Feldmann et al., Publicação Internacional No. WO 92/07076 (publi- cada em 30 de abril de 1992); Schall et al., Cell 61:361-370 (1990); e Loets- cher et al., Cell 61:351-359 (1990), cujas referências são aqui inteiramente incorporadas referência) e opcionalmente possuem baixa imunogenicidade. Em particular, ós receptores da superfície celular do TNF 55 kDa (p55 TNF- R) e 75 kDa (p75 TNF-R) TNF são úteis na presente invenção. As formas truncadas destes receptores, compreendendo os domínios extracelulares (ECD) dos receptores ou suas partes funcionais (vide, por exemplo, Corco- ran et al., Eur. J. Biochem. 223:831-840 (1994)), também são úteis na pre- sente invenção. As formas truncadas dos receptores do TNF, compreenden- do os DCE, foram detectadas na urina e soro como proteínas de ligação ini- bidoras do TNFa de 30 kDa e 40 kDa (Engelmann, H. et al., J. Biol. Chem. 265:1531-1536 (1990)). As moléculas multiméricas do receptor de TNF e as moléculas de fusão imunorreceptoras do TNF, e derivados e fragmentos ou partes destes, são exemplos adicionais das moléculas receptoras do TNF que são úteis nos métodos e composições da presente invenção.
As moléculas multiméricas do receptor de TNF na presente in- venção compreendem todo ou uma parte funcional do ECD de dois ou mais receptores do TNF ligados através de um ou mais ligadores de polipeptídeo ou outros Iigadores não peptídeos, tais como o polietileno glicol (PEG). Um exemplo de um tal tipo de molécula de fusão imunorreceptora é o receptor de TNF/proteína de fusão IgG. As moléculas de fusão de imunorreceptor do TNF e métodos para a sua produção foram descritos na técnica (Lesslauer et al., Eur. J. Immunol. 21:2883-2886 (1991); Ashkenazi et al., Proc. Natl. Acad. Sei. USA 88:10535-10539 (1991); Peppel et al., J. Exp. Med. 174:1483-1489 (1991); Kolls et al., Proc. Natl. Acad. Sei. USA 91:215-219 (1994); Butler et al., Cytokine 6(6):616-623 (1994); Baker et al., Eur. J. Im- munol. 24:2040-2048 (1994); Beutler et al., Patente U.S. n° 5.447.851; e Pe- dido U.S. No. 08/442.133 (depositado em 16 de maio de 1995), cada uma destas referências são aqui inteiramente incorporadas por referência. Os métodos para a produção de moléculas de fusão imunorreceptoras podem também ser observados em Capon et al., Patente U.S. n° 5.116.964; Capon et al., Patente U.S. n° 5.225.538; e Capon et al., Nature 337:525-531 (1989), cujas referências são aqui inteiramente incorporadas por referência.
As citocinas incluem qualquer citocina conhecida. Vide, por e- xemplo, CopewithCytokines.com. Os antagonistas de citocina incluem, mas não são limitados a estes, qualquer anticorpo, fragmento ou mimético, qual- quer receptor solúvel, fragmento ou mimético, qualquer antagonista de mo- lécula pequena, ou qualquer combinação destes. Tratamentos Terapêuticos
Qualquer método da presente invenção pode compreender um método para tratar um distúrbio mediado pela IL-23, que compreende uma quantidade eficaz de uma composição ou composição farmacêutica compre- endendpelo menos um anticorpo anti-IL-23p19s em uma célula, tecido, ór- gão, animal ou paciente com necessidade de tal modulação, tratamento ou terapia. Um tal método pode opcionalmente ainda compreender a co- administração ou terapia de combinação para o tratamento de tais doenças ou distúrbios, em que a administração de ditpelo menos um anticorpo anti-IL- 23p19, parte específica ou variante deste, ainda compreende a administra- ção antes, concomitantemente e/ou após pelo menos um selecionado de um fármaco antiinfeccioso, um fármaco do sistema cardiovascular (CV), um fár- maco do sistema nervoso central (CNS), um fármaco do sistema nervoso autônomo (ANS), um fármaco do trato respiratório, um fármaco do trato gas- trointestinal (GI)1 um fármaco hormonal, um fármaco para o equilíbrio de flui- do ou eletrólito, um fármaco hematológico, um antineoplástico, um fármaco para a imunomodulação, um fármaco oftálmico, ótico ou nasal, um fármaco tópico, um fármaco nutricional ou similar, pelo menos um antagonista do TNF (por exemplo, mas não limitado a um anticorpo ou fragmento do TNF, um receptor ou fragmento de TNF solúvel, proteínas de fusão destes, ou um antagonista de TNF de molécula pequena), um antirreumático (por exemplo, metotrexato, auranofin, aurotioglicose, azatioprina, etanercept, tiomalato só- dico de ouro, sulfato de hidroxicloroquina, leflunomida, sulfasalzina), um re- laxante muscular, um narcótico, um fármaco anti-inflamatório não esteróide (NSAID), um analgésico, um anestésico, um sedativo, um anestésico local, um bloqueador neuromuscular, um antimicrobiano (por exemplo, aminoglico- sídeos, um antifúngico, um antiparasitário, um antiviral, um carbapenem, cefalosporina, uma fluoroquinolona, um macrólido, uma penicilina, uma sul- fonamida, uma tetraciclina, um outro antimicrobiano), um antipsoriático, um corticosteróide,' um esteróide anabólico, um agente relacionado com diabe- tes, um mineral, uma nutricional, um agente da tiróide, uma vitamina, um hormônio relacionado com cálcio, um anti-diarréico, um antitussivo, um anti- emético, uma antiúlcera, um laxante, um anticoagulante, uma eritropoietina (por exemplo, epoetina-alfa), um filgrastim (por exemplo, G-CSF, Neupo- gen), um sargramostim (GM-CSF, Leucina), uma imunização, uma imuno- globulina, um imunossupressor (por exemplo, basiliximab, ciclosporina, da- clizumab), uma hormônio do crescimento, um fármaco de reposição hormo- nal, um modulador do receptor estrogênio, um midriático, um cicloplégico, um agente de alquilação, um anti-metabólito, um inibidor mitótico, um radio- fármaco, um antidepressivo, agente antimaníaco, um antipsicótico, um an- siolítico, um hipnótico, um simpaticomimético, um estimulante, donepezil, tacrina, uma medicação contra asma, um beta-agonista, um esteróide inala- do, um inibidor de leucotrieno, uma metilxantina, uma cromolina, uma epine- frina ou análogo, dornase-alfa (Pulmozyme), uma citocina ou um antagonista de citocina. Tais fármacos são bem-conhecidos na técnica, incluindo as for- mulações, indicações, dosagem e administração de cada um aqui apresen- tado (vide, por exemplo, Nursing 2001 Handbook of Drugs, 21st edition, S- pringhouse Corp., Springhouse, PA, 2001; Health ProfessionaPs Drug Guide 2001, ed., Shannon, Wilson, Stang, Prentice-Hall, Inc, Upper Saddle River, NJ; Pharmcotherapy Handbook, Wells et al., ed., Appleton & Lange, Stam- ford, CT, cada um aqui inteiramente incorporado por referência).
Tipicamente, o tratamento das condições patológicas é efetuada mediante a administração de uma quantidade ou dosagem eficaz de pelo me- nos uma composição de anticorpo anti-IL-23p19 em que o total, na média, um faixa de pelo menos cerca de 0,01 a 500 miligramas de pelo menos um anticor- po anti-IL-23p19 por quilograma do paciente per dose, e, de preferência, de pelo menos cerca de 0,1 a 100 miligramas anticorpo/quilograma do paciente por administração única ou múltipla, dependendo da atividade específica do agente ativo contido na composição. Alternativamente, a concentração no soro efetiva pode compreender de 0,1 a 5000 μρ/ηιΙ de concentração no soro por administração única ou múltipla. As dosagens adequadas são conhecidas pelos médicos, obviamente, dependerão do estado doentio particular, da atividade específica da composição sendo administrada, e do paciente particular que passa pelo tratamento. Em alguns exemplos, para atingir a quantidade terapêu- tica desejada, pode ser necessário fornecer administração repetida, isto é, ad- ministrações individuais repetidas de uma dose monitorada ou medida particu- lar, onde as administrações individuais são repetidas até que a dose diária de- sejada ou efeito seja alcançado.
As doses preferidas podem opcionalmente incluir cerca de 0,1 a 99 e/ou de 100 a 500 mg/kg/administração, ou qualquer faixa, valor ou fra- ção destas, ou para alcançar uma concentração no soro de cerca de 0,1 a 5000 μg/ml de concentração no soro per administração única ou múltipla, ou qualquer faixa, valor ou fração destas. Uma faixa de dosagem preferida para o anticorpo anti-IL-23p19s da presente invenção é de cerca de 1 mg/kg, até cerca de 3, cerca de 6 ou cerca de 12 mg/kg de peso corporal do paciente.
Alternativamente, a dosagem administrada pode variar depen- dendo dos fatores conhecidos, tais como as características farmacodinâmi- cas do agente particular, e seu modo e via de administração; idade, saúde, e peso do recebedor; natureza e extensão dos sintomas, espécie do tratamen- to concomitante, freqüência de tratamento, e o efeito desejado. Geralmente uma dosagem de ingrediente ativo pode ser de cerca de 0,1 a 100 miligra- mas por quilograma de peso corporal. Geralmente de 0,1 a 50, e, preferivel- mente, de 0,1 a 10 miligramas por quilograma por administração na forma de liberação controlada são eficazes para obter os resultados desejados.
Como um exemplo não limitativo, o tratamento de seres humanos ou animais pode ser fornecido como uma dosagem única ou periódica de pelo menos um anticorpo da presente invenção de cerca de 0,1 a 100 mg/kg ou qualquer faixa, valor ou fração deste por dia, em pelo menos um de 1 a 40 dias, ou, alternativa ou adicionalmente, pelo menos uma de 1 a 52 semanas, ou, al- ternativa ou adicionalmente, pelo menos um de 1 a 20 anos, ou qualquer com- binação destes, utilizando doses únicas, de infusão ou repetidas.
As formas de dosagem (composição) adequadas para adminis- tração interna geralmente contêm cerca de 0,001 miligrama a cerca de 500 miligramas de ingrediente ativo por unidade ou recipiente. Nestas composi- ções farmacêuticas o ingrediente ativo geralmente estará presente em uma quantidade de cerca de 0,5 a 99,999% em peso com base no peso total da composição.
Para a administração parenteral, o anticorpo pode ser formulado como uma solução, suspensão, emulsão, partícula, pó ou pó Iiofilizado em associação, ou separadamente fornecido, com um veículo parenteral farma- ceuticamente aceitável. Exemplos de tais veículos são água, soro fisiológico, solução de Ringer, solução de dextrose, e cerca de 1 a 10% de albumina no soro humana. Lipossomas e veículos não aquosos, tais como óleos fixos, também podem ser usados. O veículo ou pó Iiofilizado pode conter aditivos que mantêm a isotonicidade (por exemplo, cloreto de sódio, manitol) e esta- bilidade química (por exemplo, tampões e conservantes). A formulação é esterilizada por técnicas conhecidas ou adequadas.
Os veículos farmacêuticos adequados são descritos na edição mais recente da Remington1S Pharmaceutical Sciences, A. Osol, um texto- padrão de referência neste campo. • Administração Alternativa
Muitosmodosconhecidosedesenvolvidospodemserusadosde acordo com a presente invenção para a administração de quantidades far- maceuticamente eficazes de pelo menos um anticorpo anti-IL-23p19 de a- cordo com a presente invenção. Embora a administração pulmonar seja utili- zada na seguinte descrição, outros modos de administração pode ser utiliza- dos de acordo com a presente invenção, com resultados adequados. Os an- ticorpos de IL-23p19 da presente invenção podem ser liberados em um veí- culo, como uma solução, emulsão, colóide ou suspensão, ou como um pó seco, usando qualquer uma de uma variedade de dispositivos e métodos adequados para a administração por inalação ou outros modos aqui descri- tos dentro ou conhecidos na técnica. Formulações Parenterais e Administração
As formulações para administração parenteral podem conter como excipientes comuns água ou soro fisiológico estéril, polialquileno glicol, tal como o polietileno glicol, óleos de origem vegetal, naftalenos hidrogena- dos e similares. As suspensões aquosas ou oleosas para injeção podem ser preparadas mediante a utilização de um emulsificante ou umificante apropri- ado e um agente de suspensão, de acordo com os métodos conhecidos. Os agentes para a injeção podem ser um agente de diluição não tóxico e não oralmente administrável, tal como solução aquosa, uma solução ou suspen- são injetável estéril em um solvente. Como o veículo ou solvente usável, á- gua, solução Ringer, salina isotônica, etc. são permitidos; como um solvente ou solvente de suspensão usual, óleo não volátil estéril pode ser usado. Pa- ra estes propósitos, qualquer espécie de óleo não volátil e ácido graxo pode ser usado, incluindo os óleos graxos ou ácidos graxos naturais ou sintéticos ou semi-sintéticos; mono- di- ou triglicerídeos naturais ou sintéticos ou semi- sintéticos. A administração parental é conhecida na técnica e inclui, mas não é limitado a estes, meios convencionais de injeções, um dispositivo de inje- ção sem agulha de gás pressurizado, tal como descrito na Patente U.S. n2 5.851.198, e um dispositivo perfurador a laser como descrito na Patente U.S. n- 5.839.446 totalmente incorporadas neste documento por referência.
Liberação Alternativa
A invenção ainda refere-se à administração de pelo menos um anticorpo anti-IL-23p19 por meio parenteral, subcutâneo, intramuscular, intra- venosa, intrarticular, intrabronquial, intra-abdominal, intracapsular, intracartila- gem, intracavitário, intracelial, intracerebelar, intracerebroventricular, intracólico, intracervical, intragástrico, intraepático, intramiocárdico, intraosteal, intrapélvico, intrapericardíaco, intraperitoneal, intrapleural, intraprostático, intrapulmonar, intrarretal, intrarrenal, intrarretinal, intraespinhal, intrasinovial, intratorácico, in- trauterino, intravesical, intralesional, de bolo, vaginal, rétal, bucal, sublingual, intranasal, ou transdérmico. Pelo menos uma composição de anticorpo anti-IL- 23p19 pode ser preparada para utilização parenteral (subcutânea, intramuscu- lar ou intravenosa) ou qualquer outra administração particularmente na forma de soluções ou suspensões líquidas; para uso na administração vaginal ou retal particularmente nas formas semi-sólidas, tais como, mas não limitado a eles, cremes e supositórios; para administração bucal ou sublingual, tal como, mas não limitado a éstas, na forma de comprimidos ou cápsulas; ou intranasalmen- te, tal como, mas não limitado a estas, na forma de pós, gotas nasais ou aeros- sóis ou certos agentes; ou transdermicamente, tal como, mas não limitado a um gel, pomada, loção, suspensão ou sistema de liberação de emplastro com in- tensificadores químicos tais como sulfóxido de dimetila para modificar a estrutu- ra da pele ou para aumentar a concentração de fármaco emplastro transdérmi- co (Junginger, et ai. In "Drug Permeation Enhancement;" Hsieh, D. S., Eds., pp. 59-90 (Mareei Dekker, Inc. New York 1994, totalmente incorporado neste do- cumento por referência), ou com agentes oxidantes que facilitam a aplicação de formulações contendo proteínas e peptídeos na pele (WO 98/53847), ou apli- cações de campos elétricos para criar vias de transportes transitórios, tais como eletroporação, ou para aumentar a mobilidade dos fármacos carregados atra- vés da pele, tais como iontoforese, ou aplicação de ultra-som, tal como sonofo- rese (Patentes U.S. n25 4.309.989 e 4.767.402) (cujas publicações e patentes acima sendo aqui totalmente incorporadas por referência).
Administração Pulmonar/Nasal
Para a administração pulmonar, preferivelmente, pelo menos uma composição de anticorpo anti-IL-23p19 é liberada em um tamanho de partícula eficaz para atingir as vias aéreas inferiores dos pulmões ou seios. De acordo com a invenção, pelo menos um anticorpo anti-IL-23p19 pode ser liberado por qualquer uma de uma variedade de dispositivos de inalação ou nasais conhecidos na técnica para a administração de um agente terapêuti- co por inalação. Estes dispositivos capazes de depositar formulações aeros- solizadas na cavidade sinusal ou alvéolos de um paciente incluem inalado- res de dose medida, nebulizadores, geradores de pó seco, pulverizadores, e outros mais. Outros dispositivos adequados para direcionar a administração pulmonar ou nasal de anticorpos são também conhecidos na técnica. Todos estes dispositivos podem utilizar formulações adequadas para a administra- ção para a dispensa de anticorpos em um aerossol. Tais aerossóis podem ser compreendidos de soluções (tanto aquosas quanto não aquosas) ou par- tículas sólidas.
Os inaladores de dose medida como o inalador de dose medida Ventolin®, tipicamente usam um gás propulsor e requerem inspiração duran- te a atuação (Vide, por exemplo, WO 94/16970, WO 98/35888). Os inalado- res de pó seco como Turbuhaler® (Astra), Rotahaler® (Glaxo), Diskus® (Gla- xo), Spiros® inhaler (Dura), dispositivos negociados pela Inhale Therapeu- tics, e o inalador de pó Spinhaler® (Fisons), utilizam a atuação por respiração de um pó misturado (US 4668218 Astra, EP 237507 Astra, WO 97/25086 Glaxo, WO 94/08552 Dura, US 5458135 lnhale, WO 94/06498 Fisons, intei- ramente aqui incorporados por referência). Os nebulizadores como AERx® Aradigm, o Ultravent® nebulizer (Mallinckrodt), e o Acorn II® nebulizer (Mar- quest Medicai Products) (US 5404871 Aradigm, WO 97/22376), as referên- cias acima inteiramente incorporadas neste documento por referência, pro- duzem aerossóis de soluções, ao mesmo tempo inaladores de dose medida, inaladores de pó seco, etc. geram aerossóis de pequenas partículas. Estes exemplos específicos de dispositivos de inalação comercialmente disponí- veis são destinados a serem um representante de dispositivos específicos adequados para a prática desta invenção, e não são destinados como Iimita- tivos do escopo da invenção.
Preferivelmente, uma composição que compreende pelo menos um anticorpo anti-IL-23p19 é liberada por um inalador de pó seco ou um pul- verizador. Existem vários aspectos desejáveis de um dispositivo de inalação para a administração de pelo menos um anticorpo da presente invenção. Por exemplo, a liberação pelo dispositivo de inalação é vantajosamente segura, reprodutível e precisa. O dispositivo de inalação pode opcionalmente liberar pequenas partículas secas, por exemplo, menores do que cerca de 10 μιτι, preferivelmente cerca de 1 a 5 μιτι, para a boa capacidade de respiração. Administração de Composições de Anticorpo de IL-23p19 como uma Pulve- rização
Uma pulverização incluindo composição de anticorpo de IL-23p19 pode ser produzida por forçar uma suspensão ou solução de pelo menos um anticorpo anti-IL-23p19 através de um bocal sob pressão. A dimensão e con- figuração do bocal, a pressão aplicada, e a taxa de alimentação de líquido podem ser selecionadas para obter a saída desejada e o tamanho das partí- culas. Uma eletropulverização pode ser produzida, por exemplo, por um cam- po elétrico em conexão com uma alimentação capilar ou bocal. Vantajosa- mente, as partículas de pelo menos uma composição de anticorpo anti-lL- 23p19 liberadas por um pulverizador possuem um tamanho de partícula me- nor do que cerca de 10 μm, preferivelmente.na faixa de cerca de 1 μm a cerca de 5 μm, e, mais preferivelmente, cerca de 2 μm a cerca de 3μ.
As formulações de pelo menos uma composição de anticorpo anti-IL-23p19 adequada para uso com um pulverizador tipicamente incluem a composição de anticorpo em uma solução aquosa em uma concentração de cerca de 0,1 mg a cerca de 100 mg de pelo menos uma composição de anticorpo anti-IL-23p19 por ml de solução ou mg/gm, ou qualquer faixa, valor ou fração nesse particular. A formulação pode incluir agentes, tais como um excipiente, um tamponante, um agente de isotonicidade, um conservante, um tensoativo, e, de preferência, zinco. A formulação também pode incluir um excipiente ou agente para a estabilização da composição de anticorpo, tal como um tampão, um agente redutor, uma proteína encorpante ou um carboidrato. As proteínas encorpantes úteis na formulação de composições de anticorpos incluem albumina, protamina, ou similar. Os carboidratos típi- cos úteis na formulação de composições de anticorpos incluem sacarose, manitol, lactose, trealose, glicose, ou similar. A formulação de composição de anticorpo também pode incluir um tensoativo, o que pode reduzir ou evi- tar a agregação induzida pela superfície da composição de anticorpo causa- da pela atomização da solução na formação de um aerossol. Vários tensoa- tivos convencionais podem ser empregados, tais como ésteres e álcoois de ácido graxo de polioxietileno, e ésteres de ácido graxo de polioxietileno sor- bitol. As quantidades geralmente variam entre 0,001 e 14% em peso da for- mulação. Os tensoativos especialmente preferidos para os propósitos desta invenção são monooleato de polioxietileno sorbitano, polissorbato 80, polis- sorbato 20, ou similar. Os agentes adicionais conhecidos na técnica para a formulação de uma proteína, tais como os anticorpos de IL-23p19, ou partes ou variantes especificadas, também podem ser incluídos na formulação. Administração de Composições de Anticorpo de IL-23p19 por um Nebulizador As composições de anticorpo da invenção podem ser adminis- tradas por um nebulizador, tais como nebulizador a jato ou um nebulizador ultra-sônico. Tipicamente, em um nebulizador a jato, uma fonte de ar com- primido é usada para criar um jato de ar de alta velocidade através de um orifício. Quando o gás se expande além do bocal, uma região de baixa pres- são é criada, que puxa uma solução de composição de anticorpo através de um tubo capilar conectado a um cavidade líquido. A corrente líquida do tubo capilar é cisalhada em filamentos instáveis em gotículas quando sai do tubo, criando o aerosol. Uma faixa de configurações, taxas de fluxo, e tipos defle- tores pode ser empregada para alcançar as características de desempenho desejadas de um determinado nebulizador a jato. Em um nebulizador ultra- sônico, energia elétrica de alta freqüência é utilizada para criar energia me- cânica vibracional, tipicamente empregando um transdutor piezoelétrico. Es- ta energia é transmitida para a formulação de composição de anticorpos di- retamente ou através de um fluido de acoplamento, criando um aerossol in- cluindo a composição de anticorpo. Vantajosamente, as partículas da com- posição de anticorpos liberadas por um nebulizador possuem um tamanho de partícula menor do que cerca 10 μm, preferivelmente na faixa de 1 μm a cerca de 5 μm, e, mis preferivelmente, cerca de 2 μm a cerca de 3 μm.
As formulações de pelo menos um anticorpo anti-IL-23p19 ade- quadas para uso com um nebulizador, a jato ou ultra-sônico, tipicamente incluem uma concentração de cerca de 0,1 mg a cerca de 100 mg de pelo menos uma proteína de anticorpo anti-IL-23p19 por ml de solução. A formu- lação pode incluir agentes, tais como um excipiente, um tamponante, um agente de isotonicidade, um conservante, um tensoativo, e, de preferência, zinco. A formulação também pode incluir um excipiente ou agente para a estabilização dpelo menos uma composição de anticorpo anti-IL-23p19, tal como um tamponante, um agente redutor, uma proteína encorpante, ou um carboidrato. As proteínas encorpantes úteis na formulação de pelo menos uma composição de anticorpo anti-IL-23p19s incluem albumina, protamina, ou similar. Os carboidratos típicos úteis na formulação de pelo menos um anticorpo anti-IL-23p19s incluem sacarose, manitol, lactose, trealose, glico- se, ou similar. Pelo menos uma formulação de anticorpo anti-IL-23p19 tam- bém pode incluir um tensoativo, que pode reduzir ou prevenir a agregação induzida pela superfície dpelo menos um anticorpo anti-IL-23p19 causada pela atomização da solução na formação de um aerossol. Vários tensoativos convencionais podem ser empregados, tais como ésteres e álcoois de ácido graxo de polioxietileno, e ésteres de ácido graxo de polioxietileno sorbital. As quantidades geralmente variarão entre cerca de 0,001 e 4% em peso da formulação. Os tensoativos especialmente preferidos para propósitos desta invenção são monooleato de polioxietileno sorbitano, polissorbato 80, polis- sorbato 20, ou similar. Os agentes adicionais conhecidos na técnica para a formulação de uma proteína, tal como proteína de anticorpos, também po- dem ser incluídos na formulação.
Administração de Composições de Anticorpo de IL-23p19 por um Inalador de Dose Medida
Em um inalador de dose medida (MDI), um propulsor, pelo menos um anticorpo anti-IL-23p19s, e quaisquer excipientes ou outros aditivos estão contidos em uma vasilha como uma mistura incluindo um gás comprimido Iique- feito. O acionamento da válvula medidora libera a mistura como um aerossol, de preferência contendo partículas na faixa de tamanho menor do que cerca de 10 μ/η, preferivelmente, cerca de 5 μm, e, mais preferivelmente, cerca de 2 μm a cerca de 3 mμ. O tamanho de partícula do aerossol desejado pode ser obtido mediante o emprego de uma formulação de composição de anticorpos produzi- da por vários métodos conhecidos por aqueles versados na técnica, incluindo moagem a jato, secagem por pulverização, condensação de ponto crítico, ou similar. Os inaladores de dose medida preferidos incluem aqueles fabricados pela 3M ou Glaxo e que empregam um propulsor de hidrofluorocarbono. As formulações de pelo menos um anticorpo anti-IL-23p19s para uso com um dis- positivo inalador de dose medida geralmente incluirão um pó finamente dividido contendpelo menos um anticorpo anti-IL-23p19 como uma suspensão em um meio não aquoso, por exemplo, colocado em suspensão em um propulsor com o auxílio de um tensoativo. O propulsor pode ser qualquer material convencio- nal empregado para este propósito, tal como clorofluorocarbono, um hidrocloro- fluorocarbono, um hidrofluorocarbono, ou um hidrocarboneto, incluindo tricloro- fluorometano, diclorodifluorometano, diclorotetraf Iuoroetanol e 1,1,1,2- tetrafluoroetano, HFA-134a (hidrofiuroalcano-134a), HFA-227 (hidrofluroalcano- 227), ou similar. Preferencialmente, o propulsor é um hidrofluorocarbono. O tensoativo pode ser selecionado para estabilizar pelo menos um anticorpo anti- IL-23p19 como uma suspensão no propulsor, para proteger o agente ativo con- tra a degradação química, e outros mais. Os tensoativos adequados incluem trioleato de sorbitano, Iecitina de soja, ácido oléico, ou similar. Em alguns casos, os aerossóis em solução são preferidos usando solventes, tais como etanol. Agentes adicionais conhecidos na técnica para a formulação de uma proteína também podem ser incluídos na formulação. Uma pessoa de habilidade usual na técnica reconhecerá que os métodos da invenção corrente podem ser al- cançados pela administração pulmonar de pelo menos uma composição de anticorpo anti-IL-23p19 através de dispositivos não descritos neste documento.
Formulações Orais e Administração
As formulações para administração oral contam com a co- administração de adjuvantes (por exemplo, resorcinóis e tensoativos não tônicos, tais como éter polioxietileno oleílico e éter de n-hexadecilpolietileno) para aumentar artificialmente a permeabilidade das paredes intestinais, as- sim como a co-administração de inibidores enzimáticos (por exemplo, inibi- dores de tripsina pancreáticos, diisopropilfluorofosfato (DFF) e trasilol) para inibir a degradação enzimática. As formulações para a liberação de agentes hidrófilos incluindo proteínas e anticorpos e uma combinação de pelo menos dois tensoativos destinados para administração oral, bucal, mucosal, nasal, pulmonar, transmembrana vaginal ou retal são ensinadas na U.S. 6.309.663. O composto constituinte ativo da forma de dosagem tipo sólida para adminis- tração oral pode ser misturado com pelo menos um aditivo, incluindo saca- rose, lactose, celulose, manitol, trealose, rafinose, maltitol, dextrano, amidos, ágar, arginatos, quitinas, quitosanos, pectinas, goma tragacanto, goma ará- bica, gelatina, colágeno, caseína, albumina ou polímero sintético ou semi- sintético e glicerídeo. Estas formas de dosagem também podem conter ou- tro(s) tipo(s) de aditivos, por exemplo, agente de diluição inativo, lubrificante, tal como esteárato de magnésio, parabeno, agente conservante, tal como ácido sórbico, ácido ascórbico, .Alfa.-tocoferol, antioxidante tal como cisteí- na, desintegrante, aglutinante, espessante, agentes tamponizantes, agente adoçante, agente flavorjznate, agente perfumante, etc.
Os comprimidos e pílulas ainda podem ser processados nas preparações revestidas. As preparações líquidas para a administração oral incluem preparações de emulsão, xarope, elixir, suspensão e solução ad- missível para uso médico. Estas preparações podem conter agentes diluen- tes inativos normalmente utilizados em dito campo, por exemplo, água. Os lipossomas também foram descritos como sistemas de liberação de fárma- cos para insulina e heparina (Patente U.S. n° 4.239.754). Mais recentemen- te, microesferas de polímeros artificiais de aminoácidos misturados (protei- nóides) foram usadas para liberar produtos farmacêuticos (Patente U.S. n° 4.925.673). Além disso, os compostos veículos descritos na Patente U.S. n° 5.879.681 e na Patente U.S. n° 5.5.871.753 e utilizados para liberar agentes biologicamente ativos oralmente são conhecidos na técnica.
Formulações Mucosas e Administração
Uma formulação para administração oral de um agente bioativo encapsulado em uma ou mais excipientes poliméricos ou copoliméricos bio- compatíveis, preferivelmente, um polímero ou copolímero biodegradável, que proporciona microcápsulas que devido ao tamanho apropriado das microcápsu- las resultantes resulta no agente que alcança e que é absorvido pelo agregado linfático folicular, também conhecido como a "emplastro de Peyer", ou "GALT" do animal sem perda de eficácia devido ao agente tendo passado através do trato gastrointestinal. Os agregados linfático foliculares similares podem ser ob- servados nos tubos brônquicos (BALT) e no intestino grosso. Os tecidos descri- tos acima são referidos em geral como tecidos linforreticulares mucosamente associados (MALT). Para a absorção através das superfícies mucosas, as composições e métodos de administração de pelo menos um anticorpo anti-IL- 23p19s incluem uma emulsão que compreende uma pluralidade de partículas submícrons, uma macromolécula mucoadesiva, um peptídeo bioativo e uma fase contínua aquosa, que promove a absorção através das superfícies muco- sas mediante a conclusão da mucoaderência das partículas de emulsão (Pa- tente U.S. n2 5.514.670). As superfícies mucosas adequadas para aplicação da emulsão da presente invenção podem incluir vias de administração corneais, conjuntivas, bucais, sublinguais, nasais, vaginais, pulmonares, estomacais, in- testinais, e retais. As formulações para a administração vaginal ou retal, por exemplo, supositórios, podem conter como excipientes, por exemplo, polialqui- lenoglicóis, vaselina, manteiga de cacau, e outros mais. As formulações para a administração intranasal podem ser sólidas e conter como excipientes, por e- xemplo, Iactose ou podem ser soluções aquosas ou oleosas de gotas nasais. Para a administração bucal, os excipientes incluem açúcares, estearato de cál- cio, estearato de magnésio, amido pré-gelatinado, e outros mais (Patente U.S. n2 5.849.695).
Formulações Transdérmicas e Administração
Para a administração transdérmica, pelo menos um anticorpo anti- IL-23p19 é encapsulado em um dispositivo de liberação, tal como um Iipossoma ou nanopartículas poliméricas, micropartículas, microcápsulas, ou microesferas (referidos coletivamente como micropartículas, a não ser que de outra maneira mencionada). Vários dispositivos adequados são conhecidos, incluindo micro- partículas produzidas de polímeros sintéticos, como ácidos de poliidróxi, tal co- mo ácido poliláctico, ácido poliglicólico e copolímeros destes, poliortoésteres, polianidridos, e polifosfazenos, e polímeros naturais, tais como colágeno, áci- dos de poliamino, albumina e outras proteínas, alginato e outros polissacarí- deos, e suas combinações (Patente U.S. n- 5.814.599). Administração Prolongada e Formulações
Pode ser desejável liberar os compostos da presente invenção ao indivíduo durante longos períodos de tempo, por exemplo, por períodos de uma semana a um ano a partir de uma única administração. Várias for- mas de dosagem de liberação lenta, depósito ou implante podem ser utiliza- das. Por exemplo, uma forma de dosagem pode conter um sal não tóxico farmaceuticamente aceitável dos compostos que possuem um baixo grau de solubilidade nos fluidos corporais, por exemplo, (a) um sal de adição de áci- do com uma ácido polibásico, tal como o ácido fosfórico, sulfúrico ácido, áci- do cítrico, ácido tartárico, ácido tânico, ácido pamóico, ácido algínico, ácido poliglutâmico, ácidos naftaleno mono- ou dissulfônicos, ácido poligalacturô- nico, e outros mais; (b) um sal com um cátion de metal polivalente, tal como zinco, cálcio, bismuto, bário, magnésio, alumínio, cobre, cobalto, níquel, cádmio e similares, ou com um cátion orgânico formado de, por exemplo, Ν,Ν'-dibenzil-etilenodiamina ou etilenodiamina; ou (c) combinações de (a) e (b), por exemplo, um sal de tanato de zinco. Adicionalmente, os compostos da presente invenção ou, preferivelmente, um sal relativamente insolúvel, tal como aqueles há pouco descritos, podem ser formulados em um gel, por exemplo, um gel de monoestearato de alumínio com, por exemplo, óleo de gergelim, adequado para injeção. Os sais particularmente preferidos são sais de zinco, sais de zinco tanato, sais de pamoato, e outros mais. Um ou- tro tipo de formulação de depósito de liberação lenta para injeção deve con- ter o composto ou de sal disperso para encapsulamento em um polímero não tóxico e não antigênico de degradação lenta, tal como um polímero de ácido poliláctico/ácido poliglicólico, por exemplo, como descrito na Patente U.S. nº 3.773.919. Os compostos ou, preferivelmente, os sais relativamente insolúveis, tais como aqueles acima descritos, podem também ser formula- das em grânulos silásticos da matriz de colesterol, particularmente para uso em animais. As formulações de depósito ou implante de liberação lenta, por exemplo, Iipossomas gasosos ou líquidos, são conhecidas na literatura (Pa- tente U.S. nº 5.770.222 e "Sustained and Controlled Release Drug Delivery Systems", J. R. Robinson ed., Mareei Dekker, Inc., N.Y., 1978).
Tendo descrito a invenção de uma forma geral, a mesma será mais facilmente compreendida por referência aos exemplos que seguem, que são fornecidos por meio de ilustração e não se destinam como limitativos. Exemplos
Exemplo 1 - Isolamento dos anticorpos específicos anti-humano de IL-23 humanos pela exibição fago Métodos gerais têm sido descritos para a seleção dos anticorpos específicos do antígeno a partir das bibliotecas HuCAL® preparadas em MorphoSys (Knappik et al., 2000; Krebs et al., 2001; Rauchenberger et al, 2003). Sub-misturas específicas da região VH da biblioteca HuCAL Gold® Fab (Kretzschmar & von Ruden, 2002) foram utilizadas para a seleção de anticorpos contra a IL-23 humana recombinante (hrIL-23). Várias estratégias de seleção diferentes foram utilizadas e incluem:
1. Seleção contra a proteína hIL-23 recombinante que foi imobili- zada diretamente em plástico, com ou sem pré-adsorção da biblioteca sobre a proteína IL-12 humana recombinante (hrIL-12) também adsorvida direta- mente em plástico. As proteínas hlL-23 e hIL-12 recombinantes foram pro- duzidas em Centocor.
2. Seleção com proteína IL-23 humana recombinante em solu- ção, seguida pela recuperação do fago ligado mediante a captura da proteí- na hIL-23 em uma hrIL-12p40 mAb imobilizada. As seleções foram realiza- das com ou sem pré-adsorção da biblioteca nas proteínas hrIL-12 recombi- nantes capturadas com o mesmo mAb.
3. Seleção com proteína hrIL-23 quimicamente biotinilada em solução, seguida pela captura do fago ligado com glóbulos magnéticos re- vestidos de SA. As seleções foram realizadas com ou sem a proteína hrIL-12 com excesso molar como um concorrente.
O DNA fagomid recuperado foi convertido en massa em um ve- tor de expressão Fab e clones individuais seguinte a transformação foram submetidos a triagem para ligação à hrIL-23 e não à hrIL-12. O seqüência dos clones positivos identificados 76 Fabs únicos.
Exemplo 2 - Caracterização de Fabs
Os Fabs positivos foram produzidos e purificados como anteri- ormente descritos (Knappik et al., 2000; Krebs et al., 2001; Rauchenberger et al, 2003) e confirmados para especificidade de ligação à hrIL-23, mas não à hrIL-12 ou para a subunidade p40 de hrIL-12 (hrp40) nos ensaios similares a aqueles descritos no Exemplo 3 abaixo. Os Fabs confirmados foram testa- dos com relação a (1) inibição da ligação de hrIL-23 ao receptor de IL-23 humano (hlL-23R) ou ao receptor de IL-12 humano β1 (hlL-12Rp1), (2) falta de inibição da ligação de hrlL-12 ao IL-12RII_pi, (3) inibição da ligação de hrlL-23 nas células TALL-104 naturalmente expressando IL-23R e IL-12RP1 e (4) afinidade de ligação à hrlL-23, hrlL-12 e subunidade hrp40. A especifi- 5 cidade e afinidade de ligação são resumidas na Tabela 1 e a inibição da li- gação de hrlL-23 à hlL-23R é listada na Tabela 2. O Fab12A na Tabela 1 é um padrão de referência que é derivado de um mAb específico de IL-12p40. A IL-23R-Fc na Tabela 2 é um padrão de referência correspondente ao do- . mínio extracelular da IL-23R humana fundida em um Fc humano.
Em geral, os ensaios de inibição do receptor foram similares a a - queles descritos abaixo no Exemplo 4 para os derivados de mAb destes Fabs. Um ensaio adicional foi medir a inibição da ligação de rhlL-23 às células TALL 104. Estas células expressam os receptores humanos tanto IL-23 quanto IL-12 R beta 1.10 dos 13 Fabs candidatos tinham o perfil de atividade desejado de nenhuma reatividade com a IL-12 humana ou proteínas p40 em qualquer en- saio e pelo menos inibição parcial da ligação de hrlL-23 ao receptor de IL-23. As seqüências de CDR de seis dos Fabs (4083, 4190, 4205, 4217, 4649 e 4658) são apresentadas na Tabela 4 (negrito). As seqüências da região V completas para estes Fabs são apresentadas na Tabela 8.
Produção de Fabs em um formato IqGI humano • Os Fabs candidatos foram clonados em vetores de formato lgG1/kappa ou Iambda mAb humanos e produzidos pela transfecção transi- tória em células HEK293 para outra análise como mAbs. No total, onze dos 13 Fabs ativos apresentam um perfil desejado como mAbs. Eles são especí- ficos para a IL-23 e pelo menos parcialmente inibiram a ligação de IL-23 hu- mana à proteína de fusão IL-23R-Fc humana (Tabela 3). Os ensaios e resul- tados são citados nos Exemplos que se seguem.
Exemplo 3 - Especificidade da Subunidade de hlL-23p19 mAbs derivados da exibição fago de anticorpos.
mAbs anti-LIS-23 de camundongo purificados foram avaliados no ELISA de captura de citocina para determinar a sua especificidade de subunidade do antígeno. Resumidamente, IL-23 mAbs foram revestidos em placas e incubados com 100 ng/ml) hrlL-23, hrlL-12 e hrp40, respectivamen- te. Após incubação com anti-p40 mAb biotinilado, a ligação foi detectado utilizando estreptavidina conjugada com HRP. Um anti-p40 mAb e um anti- IL-12 mAb (20C2, Catalog No. 555065, BD Pharmingen1 San Diego1 CA) com especificidade conhecida foram utilizadas como controle.
As figuras 1A e 1B demonstram a especificidade de ligação para dois destes mAbs, MOR04083 (o mesmo como 4083) e MOR04190 (o mes- mo como 4190). A figura 1A mostra que os mAbs se ligam especificamente à hrlL-23 e não à hrlL-12 ou monômero hrp40. Devido ao fato que a subunida- de de IL-23p19 deve covalentemente se associar com p40 para ser secreta- da a partir das células de mamífero, os IL-23 mAbs que não reconhecem o monômero p40 devem se ligar à subunidade de IL-23p19 isoladamente ou um epítopo de união do heterodímero p19-p40. Portanto, estes IL-23 mAbs são referidos como IL-23p19 mAbs. Em comparação, todas as 3 proteínas (hrlL-23, hrlL-12 e hrp40) se ligam ao mAb 12A, um anticorpo específico da p40 anti-humano de neutralização. A figura 1B mostra que o mesmo mAb não se liga à IL-23 de murino ou à p40 de murino. Em um formato inverso, os mAbs imobilizados possuem curvas de ligação similares à hrlL-23 em solução (figura 2), coerente com a sua afinidade de ligação comparável co- mo Fabs (Tabela 1). A especificidade de ligação destes e outros mAbs can- didatos é resumida na Tabela 3.
Exemplo 4 - Inibição da Ligação do Receptor de IL-23 pelo IL-23p19 mAbs
Para demonstrar que os IL-23p19 mAbs são anticorpos de neu- tralização contra a subunidade p19, os mAbs foram testadas com relação a sua inibição de ligação de IL-23 e IL-23R. Nesta experiência, uma proteína de fusão IL-23R-Fc humana foi imobilizada sobre uma placa. Esta proteína de fusão consiste no domínio extracelular do receptor de IL-23 humano fun- dido a um segmento Fc humano. A hrlL-23 submetida a biotina foi adiciona-. da à placa isoladamente ou após a pré-incubação com IL-23p19 mAbs indi- viduais. A IL-23R (IL-23R-Fc) solúvel foi usado como um controle positivo. A ligação de IL-23 foi detectada com estreptavidina conjugada com HRP. Co- mo mostrado na figura 3A, os mAbs MOR04083 e MOR04190 impedem a ligação de IL-23/IL-23R com uma potência de cerca de 3 vezes mais fraca do que a IL-23R-FC solúvel. Não houve qualquer inibição por B21M, um mAb com especificidade não relacionada. Ao contrário, quando a IL-12Rpi foi imobilizada em uma placa, estes mAbs não inibiram a ligação de IL-23/IL- 12R (figura 3B)). A ligação de IL23 foi inibida pelo mAb de neutralização de p40 CNTO 1275 (o mesmo que mAb 12A), como esperado. Do mesmo mo- do, estes mAbs não bloquearam a ligação de IL-12/IL-12Rp1 (figura 3C). O CNTO 1275 novamente serviu como um controle positivo. A inibição seletiva da ligação de IL-23/IL-23R e a falta de interferência com a ligação de IL-12 ou IL-23 à IL-12RP1 ainda demonstram que estes IL-23p19 mAbs não se ligam à subunidade de p40 e assim são anticorpos de IL-23p19s anti- humanos de neutralização. Os estudos de inibição do receptor com estes mAbs são resumidos na Tabela 3.
Exemplo 5 - Neutralização da Função Biológica de IL-23 por IL-23p19 mAbs
A IL-23 é conhecida de induzir a fosforilação STAT3 intracelular e a produção de IL-17 por células T. Portanto, os IL-23p19 mAbs foram tes- tados com relação a sua capacidade de inibir estas funções biológicas de IL- 23 humana.
Em um experiência, células exterminadoras naturais (NKL) foram estimuladas com hrlL-23 isoladamente ou após pré-incubação com os mAbs MOR04083 e MOR0190 em 20 ug/ml e 10 ug/ml, respectivamente. O MAb 12A (1 ug/ml) foi o controle positivo e C8.3 (10 ug/ml), um p40 mAb anti-humano de não neutralização, foi o controle negativo. As células tratadas foram manchadas com anticorpos anti-fosfo-STAT3 conjugados com fluorocromo e analisadas por citometria de fluxo intracelular (figura 4). Estes mAbs completamente inibiram a fosforilação STAT3, embora com potência mais baixa do que o anti-p40 mAb 12A de neutralização. A potência mais baixa dos IL-23p19 mAbs provavelmen- te reflete sua afinidade relativamente fraca.
Em outra experiência, esplenócitos de murino recentemente iso- lados foram tratados com hrlL-23 pré-incubada com IL-23p19 mAbs titulados ou mAbs de controle. A hrlL-23 sem pré-incubação de anticorpo foi utilizada como o controlo positivo. Após 3 dias na cultura, os sobrenadantes celulares foram coletados e analisados por ELISA utilizando uma série de par de ELI- SA de IL-17 (R & D Systems). Como mostrado na figura 5A, os IL-23p19 mAbs MOR04083 e MOR04190 inibiram a produção de IL-17 mediada por hrlL-23. Estes mAbs também inibiram a produção de IL-17 induzida pela IL- 23 nativa produzida por PBMCs humanos (figura 5B) e de macaco cinomó- logo (figura 5C).
Em comparação, os IL-23p19 mAbs foram testados com relação a sua capacidade de inibir a produção de IFNy induzida por hrlL-12. Resu- midamente, as células de NK92MI foram tratadas com IL-12 pré-incubada com IL-23p19 mAbs titulados ou mAbs de controle (figura 6). A IL-12 sem a pré-incubação de anticorpo foi utilizada como o controle negativo e o CNTO 1275 como o controlo positivo. A análise ELISA realizada 24 horas após a estimulação não mostrou nenhum efeito de IL-23p19 mAbs MOR04083 e 4190 sobre a produção de IFNy induzida por IL-12 demonstrando que os an- ticorpos não se ligam e neutralizam a subunidade p40 compartilhada em IL- 12 e IL-23. Os resultados destes ensaios são resumidos na Tabela 3. Exemplo 6 - Identificação de epítopo de IL-23p19 mAbs
A análise de ligação competitiva foi executada para determinar se os IL-23p19 mAbs de neutralização se ligam aos epítopos de IL-23p19 similares ou diferentes. Os resultados para mAbs, MOR04083, MOR04190 e MOR04217, são mostrados na figura 7. os IL-23 mAbs foram individualmen- te revestidos sobre as placas de ELISA. Os mAbs competitivos foram adicio- nados, seguidos pela adição de hrlL-23 biotinilada. Para o controle positivo, o mesmo mAb para revestimento foi usado como o mAb competitivo ("auto- competição"). A ligação de IL-23 foi detectada utilizando estreptavidina. To- dos os três mAbs apresentam competição cruzada em graus variáveis, indi- cando a ligação aos sítios espacialmente relacionados. Exemplo 7 - Maturação por afinidade dos Fabs de neutralização candidatos Os Fabs MOR04083, 04190, 04649 e 04658 foram selecionados para a maturação por afinidade independente com base na caracterização aci- ma nos formatos tanto Fab quanto mAb. Utilizando a característica de cassete do sistema HuCal® (Knappik et al., 2000), duas bibliotecas fago variantes foram construídas para cada Fab, uma para CDR3 da região variável de cadeia leve (VL) e outra para CDR2 da região variável de cadeia pesada (VH). Estas biblio- tecas foram selecionadas contra a hrlL-23 biotinilada em solução sob severida- des variáveis de lavagem e de concentração de antígeno. 35 Fabs únicos fo- ram recuperados, cada um apresentando atividade de ligação melhorada em relação ao Fab parental de partida. Subseqüentemente, três Fabs adicionais (5267, 5268 e 5269; todas variantes de VL-CDR3 de 4083) foram selecionados em uma segunda rodada de triagem. As seqüências de CDR dos Fabs paren- tais, os derivados maduros das bibliotecas VL-CDR3 ou VH-CDR2, e variantes destas seqüências são mostrados nas Tabelas 4A e B. As seqüências região V completas são apresentadas na Tabela 8.
Exemplo 8 - Produção e caracterização de Fabs maduros por afinidade
Os 38 Fabs selecionados foram produzidos, purificados e caracte- rizados essencialmente como descrito nos Exemplos de 2 a 4 acima. Dez dos Fabs forneceram rendimentos fracos e/ou apresentaram padrões heterogêneos na cromatografia de exclusão por tamanho e foram excluídos de outra análise. Os 28 Fabs restantes foram analisados com relação a especificidade de liga- ção, afinidade, e inibição da ligação de receptor. Todos os Fabs foram específi- cos para a IL-23p19 e tinham afinidades de 10 a 500 vezes mais elevadas para hrlL-23 do que o Fab parental correspondente (Tabelas 5 e 6). Todos apresen- taram valores IC50 melhorados para inibição da ligação de hrlL-23à proteína de fusão IL-23R Fc e, como os Fabs parentais, não inibiram a ligação de IL-23 ou IL-12 na proteína de fusão Fc do receptor de IL-12Rb1 (Tabelas 5 e 6). Como esperado a partir destes resultados, nenhum dos Fabs inibiram a ligação de hrlL-23 às células TALL-104 quando medido por citometria de fluxo, consistente com falta de inibição similar pelos Fabs parentais.
Exemplo 9 - Produção e caracterização do Abs amadurecido por afinidade em um formato mAb
34 dos 35 Fabs selecionados foram clonados em vetores de formato lgG1/kappa ou Iambda mAb humanos e produzidos pela transfecção transitória em células HEK293 para outra análise. Todos os anticorpos foram avaliados para a inibição da produção de IL-17 como descrito no Exemplo 5, acima (Tabela 7). Na maioria dos casos, cada um dos derivados maduros foi mais potente do que o seu parente correspondente, com melhoras na IC50 até 200 vezes. As propriedades bioquímicas dos 34 mAbs foram avaliadas por SDS-PAGE e cromatografia de exclusão por tamanho para indicações de agregação, heterogeneidade da cadeia, e formação de ligação de dissul- feto incompleta entre as cadeias pesadas e leves na região da dobradiça.
A partir da atividade combinada e análise bioquímica, 7 mAbs foram selecionados para análise mais detalhada, pelo menos um de cada anticorpo parental original. Os anticorpos MOR05058 e 05059, derivados das bibliotecas de diversidade VL CDR3 de MOR04649, foram excluídis des- te conjunto (vide exemplos 10 e 11). Todos os candidatos selecionados inibi- ram a produção de IL-17 induzida pela IL-23 nativa de ser humano (figura 8) e macaco cinomólogo PBMCs (não mostrados). Como esperado, todos inibi- ram a ligação de hrlL-23 à proteína de fusão hrlL-23R Fc com uma potência maior do que a da mAb IL-23A de controle (figura 9). Com a possível exce- ção de MOR05053, estes mAbs selecionados não inibiram a bioatividade de IL-12 nativa (não mostrada), consistente com a falta de ligação daqueles disponíveis como Fabs com a proteína hrlL-12.
Exemplo 10 - Produção e caracterização dos mAbs de combinação de ca- deia cruzada
Os Fabs de origem MOR04190, 04649, 4658 e deram origem aos Fabs melhorados das bibliotecas de diversidade tanto VH CDR2 quanto VL CDR3. Os Fabs derivados de MOR04649 foram de particular interesse devido à sua atividade relativamente potente de ambos os tipos de bibliote- cas. No entanto, o Fab MOR04649 de origem contém um previsível, mas potencialmente desfavorável, sítio de glicosilação N-Iigado em VH CDR2 que não está presente em qualquer uma das 6 Fabs melhoradas derivadas da biblioteca VH CDR2. Para eliminar este sítio de glicosilação e teste com re- lação atividade melhorada potencial, as cadeias pesadas de MOR05042 e 05045 foram expressas com as cadeias leves de MOR05058 e 5059 nas células HEK293 (Tabela 4C - mAbs 42-58, 42-59, 45-58, e 45-59). Nenhuma das combinações foram antagonistas mais potente (produção de IL-17 e ini- bição da ligação de IL-23 à IL-23R) do que os respectivos mAbs de cadeia doadora e cada um mostrou uma maior tendência para agregação mediante a cromatografia de exclusão por tamanho (não mostrada).
Exemplo 11 - Mutaqênese de substituição de mAbs maduros selecionados e a sua caracterização
As substituições de aminoácido foram introduzidas em mAbs selecionados para eliminar o sítio de glicosilação N-Iigado prognosticado e/ou conformar os terminais de amino das regiões variáveis com sua se- qüência da região V da linha germinativa humana. O sítio de glicosilação N- ligado prognosticado na Vh de 5058 e 5059 ("NYS" em CDR2, mesmo como no Vh de origem de MOR04649 VH) foi eliminado por substituição de argini- na (4649r) ou ácido aspártico (4649d) para asparagina na posição 59 (nume- ração direta). As seqüências de CDR destas regiões VH são apresentadas na Tabela 4A e as seqüências da região V total são apresentadas na Tabela 8. Estas variantes foram produzidas pela expressão transitória nas células HEK 293 e purificadas pela cromatografia de afinidade da Proteína A. Estes mAbs mostraram potência melhorada em relação aos anticorpos de origem em sua inibição da produção de IL-17. A substituição de arginina em MOR05059 tinha o melhor perfil baseado na atividade e caracterização bio- química e foi nomeada mAb 3759 Tabela 4C).
Os MAbs5040 e 3759 foram selecionados como exemplos má- ximos com base em uma de suas atividades e caracterização bioquímica. As substituições de aminoácido foram introduzidas para a conformidade com a seqüência de anticorpo da linha germinativa humana e uma substituição de aminoácido única foi feita na região = 5040 VL para reverter uma mutação estrutural de volta à linha germinativa, substituindo uma valina para treonina na posição 86.
As seqüências de aminoácido alteradas do formato mAb original foram as seguintes:
<table>table see original document page 103</column></row><table> A mudança de E3 para Q em VH de ambos os anticorpos é a reversão de uma substituição E introduzida após a clonagem do Fab no ve- tor de formato mAb. Q estava presente nesta posição nos Fabs originais e pode ser usado como uma variante para a substituição E em vários mAbs.
Estas variantes são designados 5040Q/EV e 3759EQ/QS. As regi- ões do componente V de 5040°^ são 5040 VH e 4190EV VL (Tabela 4C). As regiões do componente V de 3759EQ/QS são 4649rE VH e 5059QS VL (Ta- bela 4C). As seqüências dos CDRs e regiões V completas das cadeias de componente de ambos os anticorpos são mostradas nas Tabelas 4 e 8, res- pectivamente. Substituições similares podem ser identificadas por qualquer um dos candidatos em comparação com as suas seqüências da linha germi- nativa humana prognosticada.
Os mAbs 5040q/ev e 3759EQ/QS foram produzidos pela expressão transitória em células HEK 293 e purificados pela cromatografia de afinidade da Proteína A. Estes mAbs retêm a especificidade completa para a IL-23 humana em relação às IL-12 e p40, como mostrado na figura 10. Estes mAbs inibem a ligação da IL-23 humana recombinante à IL-23R-Fc e são mais potentes do que a referência, mAb23A (figura 11 A).Como esperado de seu perfil de especificidade, eles não inibem a IL-23 (figura 11B) ou a ligação IL-12 (figura 11C) à IL-12Rpi. Consistente com este padrão de inibição do receptor, estes mAbs não inibem a produção de IFNy induzida por L-12 a partir das células NK92M1 (figura 12), mas inibem a produção induzida por IL-23 tanto recombinante (figura 13) quanto nativa (figura 14) de IL-17 de esplenócitos de murino. Estes mAbs também mostram inibição muito forte de indução de IL-17 por IL-23 nativa de macaco cinomólogo (figura 15), de- monstrando um elevado grau de reatividade cruzada com IL-23 de macaco cinomólogo. Estes mAbs também inibiram a fosforilação STAT3 induzida em células NK humanas pela IL-23 humana recombinante (não mostrada).
Os mAbs 5040Q/EV e 3759EQ/QS reconhecem os epítopos intima- mente posicionados na IL-23 como demonstrado pela sua inibição de ligação mAB23A (figura 16A) e sua competição recíproca uns com os outros (figuras 16B e 16-C). O epítopo de mAb23A foi mapeado em p19 humano na região ao redor de I93-G105:
I93HQGLIFYEKLLG105.
Os resultados de competição mostram que os epítopos para mAbs 5040Q/EV'e 3759EQ/QS se situam na mesma região.
Exemplo 12 - Variantes da seqüência de codificação de mAbs 5040Q/EV e 3759EQ/QS e sua caracterização
A seqüência de codificação das regiões variáveis dos anticorpos foi projetada em três variantes de seqüência de codificação diferentes para avaliar o impacto sobre a expressão destas proteínas. A primeira variante usou os códons como obtidos a partir da biblioteca original, com algumas substituições de nucleotídeo para remover os sítios de união do mRNA de consenso. A segunda variante, troca de códon da linha germinativa (GCE), foi designada pelo alinhamento das seqüências de aminoácido região variá- vel com os genes da linha germinativa, identificação do gene da linha germi- nativa de combinação mais próximo e substituição dos códons na seqüência de codificação original com os códons sinônimos que são usados no gene da linha germinativa. Nas posições onde o resíduo de aminoácido não teve uma combinação com os genes da linha germinativa, o códon que é usado na freqüência mais elevada nas proteínas humanas altamente expressas foi substituído pelo códon original. A terceira variante de códon foi designada pela substituição dos códons de anticorpo de partida com o códon que é u- sado na freqüência mais elevada nas proteínas humanas altamente expres- sas. Cada variante de códon expressado como medido pela transfecção transitória em células HEK 293 e células CHO. Este resultado mostra que os transfectantes da linhagem celular estáveis podem ser estabelecidos nestas, e provavelmente outras células hospedeiras e a variante de expressão mais elevada podem ser usadas para o desenvolvimento de uma linhagem celular de produção. Os mAbs são avaliados como descrito no Exemplo 11, além de outras análises das propriedades funcionais e bioquímicas e biofísicas. A Tabela 9 mostra as seqüências de nucleótidos de cadeia pesada e leve vari- áveis para as variantes de mAb 5040Q/EV e 3759EQ/QS.
Para os propósitos da presente invenção, de 70 a 100% de iden- tidade da seqüência de aminoácido ou de nucleotídeo (isto é, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100 ou qualquer faixa ou valor nesse particular) é de- terminado usando um algoritmo de computador adequado, como conhecido na técnica.
Exemplo 13 - Anticorpo Anti-IL23p19 em Modelo de Camundongo com Pso- ríase
A variante de mAb 3759EQ/QS foi avaliada no que diz respeito à sua capacidade de suprimir os aspectos da psoríase em um modelo de ca- mundongo humanizado. A pele não Iesionada de pacientes com psoríase foi transplantada em camundongos imunodeficientes, e, após a aceitação dos enxertos, o processo psoriático foi desencadeado pela injecção intradérmica de células T ativadas autólogas. Os camundongos foram tratados intraperi- tonealmente uma vez por semana mediante a administração de 10 mg/kg de anticorpo. Os camundongos de controle foram tratados com veículo ou com ciclosporina A. Os pesos corporais dos camundongos foram avaliados em uma base semanal.
Após 3 semanas de tratamento, os camundongos foram sacrifi- cados e a biópsias da pele transplantada foram avaliadas com relação à es- pessura epidérmica, citoqueratina-16 e os números de células positivas HLA-DR e Ki-67 na epiderme.
Este estudo mostra que o anticorpo anti-IL23p19 foi eficaz na inibi- ção da proliferação de espessamento e ceratinócito epidérmico (por exemplo, manchamento Ki-67), em uma dosagem de 10 mg/kg. O grau de inibição foi comparável a aquele obtido com a ciclosporina A. O tratamento de anticorpo não foi associado com a supressão significativa de HLA-DR ou citoqueratina- 16. O tratamento com ciclosporina A também não teve nenhum efeito significa- tivo sobre HLA-DR e citoqueratina-16. Estes dados sugerem que o anticorpo pode ser eficaz na supressão de hiperplasia epidérmica na psoríase.
O modelo de camundongo humanizado de psoríase se baseia em experiências descritas por Wrone-Smith et al. 1996 Dermal injection of immunocytes induces psoriasis. J. Clin. Invest. 98:1878-1887. É o único mo- delo pré-clínico disponível em que os efeitos dos fármacos sobre o desen- volvimento de uma lesão psoriática humana podem ser monitorados in vivo. Para executar o modelo, biópsias de pele não Iesionada (5 mm) de pacien- tes com psoríase voluntários são transplantadas para camundongos recebe- dores imunodéficientes. Simultaneamente, os pacientes doam sangue a par- tir do qual as células mononucleares do sangue periférico (PBMC) são isola- das e crioconservadas. As PBMC são estimuladas com o superantígeno por um período de 48 horas antes da injeção intradérmica na pele transplantada autólogo (3 semanas após o transplante). As células ativadas injetadas rea- gem com a pele humana resultando em hiperproliferação da epiderme. A lesão é caracterizada por sulcos alongados (irregulares e regulares) e hiper- plasia epidérmica marcante de ceratinócitos com diferenciação alterada.
Material e Métodos
Substância de teste
Peso molecular de Ab: 150.000 dáltons Solubilidade em água: >20 mg/ml Controle de companhia: PBS Composto de referência: Ciclosporina A Peso molecular: 1202,63 Dáltons Fornecedor: Wako GmbH Número do lote: EWP5926 Número de Cat.: 039-16301
Condições de armazenagem: 2 a 10°C
Veículo para o composto de referência: Hidroxipropilcelulose (HPC) Fornecedor: Nippon Soda Co., Ltd, Japan Número do lote: HPC-L 9004-64-2 Número Cat.: NDA-1011 Condições de armazenagem: ± 21°C
A substância de teste foi testada no modelo de camundongo hu- manizado de psoríase em um agente de formulação. Os compostos foram ar- mazenados a 4 0C até à utilização. A ciclosporina Aea solução de hidroxipro- pilcelulose (veículo de CsA) foram fornecidas e preparadas por TNO. Hidroxi- propilcelulose 0,5% foi preparada em água destilada e esterilizada em uma temperatura de 120°C durante 25 minutos. Após esterilização, a HPC foi arma- zenada em 4°C até à sua utilização. Imediatamente antes do tratamento intra- peritoneal, a quantidade requerida de CsA foi pesada e misturada com o veícu- lo com a utilização de um pilão. A suspensão homogênea estável foi preparada mediante a mistura de uma quantidade requerida pulverizada do CsA com o veículo de HPC para um volume total de 200 μl por camundongo (colocado em suspensão novamente segundos antes do tratamento).
Camundonqos
Nomenclatura: NIH-Iystbg 9 Foxnlnu Btkxid, cepa código 201 (ho- mozigótica) Origem: A maioria comumente chamada de NIH-III, foi desen- volvida no National Institutes of Health, Bethesda. Além do gene nu, que re- sulta na ausência de timo e de função celular T, este camundongo possui duas outras mutações importantes na regulação da função do sistema imu- nológico. Estas são designadas como defeito imunológico ligado a χ (xid) e bege (bg). Os camundongos beges possuem uma grave deficiência de célu- las exterminadoras naturais (NK) (Roder et al, 1979). Os camundongos com a mutação xid possuem defeitos funcionais de linfócitos B (Scher et al, 1980). Esta tripla deficiência possui o efeito de que estes camundongos po- dem servir como hospedeiros para linhagens tumorais, que não crescerão ou crescem muito lentamente em camundongos nus. A enxertia de camun- dongos bg-nu-xid com células troncos hematopoéticas humanas foi descrita por Kamel-Reid and Dick (1988). A extensão das deficiências de linfócito B independente T e célula NK no NIH Ill não foi estabelecida. Cor: sem pêlos, pele pigmentada cinza-claro e escuro.
Camundongos BNX machos (NIH Ill homozigóticos), 8 semanas de idade, foram fornecidos pela Charles River (US) e liberados em TNO. E- Ies foram aclimatizados nas condições de laboratório durante pelo menos 7 dias antes do transplante. Os camundongos foram mantidos em ambientes ventilados com 9 a 11 mudanças de ar por hora e mantidos a uma tempera- tura de 22 ± 39C e uma umidade média relativa de 55% (40 a 70%). A ilumi- nação foi artificial com uma seqüência de 12 horas luz e 12 horas escuro. Antes do transplante, os camundongos foram individualmente alojados em gaiolas macrolon tipo 2 com serragem. Após o transplante os camundongos foram individualmente alojados em gaiolas ventiladas. O relatório de saúde destes camundongos recebido do fornecedor não mostrou nenhum agente patológico nestes animais.
Antes que os camundongos fossem transplantados, eles foram aclimatizados durante 1 semana. Após o transplante, os camundongos com transplantes aceitos (como avaliado por exame macroscópico no que diz respeito à aparência geral, danos, feridas, integração e vermelhidão) foram escolhidos a esmo ao longo dos grupos de tratamento. Os critérios de esco- lha a esmo aplicados foram a prevenção da:
1. União de biópsias igualadas com o doador em um grupo.
2. A distribuição de biópsias igualadas com o doador em grupos de dose escalonadas tanto quanto possível.
Sessenta e um camundongos transplantados (de um total de 72 camundongos transplantados) foram considerados adequados para inclusão no estudo e isto permitiu 9 grupos de camundongos (6 a 7 camundongos por grupo).
Subseqüentemente, PBMC ativados dos pacientes (0,5 χ 106/transplante), foram injetados nos transplantes autólogos (dia 0). Em ge- ral, os fenótipos de PBMC ativados (após cultura por 48 horas e antes da • injeção), conforme determinado regularmente pela citometria de fluxo (não avaliada neste estudo) apresentam células CD3+ (20 a 85% da população celular total), células CD4+ (20 a 60% da população total de CD3), células CD8+ (20 a 55% da população total de CD3), CD4+CD8+ (5 a 20% da popu- lação total de CD3), células CD25+ (30 a 65% da população de CD3 total), células HLA-DR+ (5 a 20% da população total de CD3), células CD69+HLA- DR+ combinadas (10 a 55% da população total de CD3), células CD54+ (50 a 85% da população de CD3 total), e células CD49d+ (10 a 60% do popula- ção de CD3 total). Além disso, a maioria dos marcadores de ativação e mi- gração acima mencionados são supra-regulados quando comparado com o dia 0 ou 1 após a ativação in vitro pela SEB.
Os camundongos foram tratados a partir do dia 1 até o dia 21 por administração intraperitoneal de 200 μl de composto ou veículo. Um gru- po controle foi oralmente tratado com CsA. O efeito do tratamento com anti- corpo anti-IL23p19 foi avaliado em um estudo de 21 dias em uma dosagem IP semanal de 10 mg/kg. Os camundongos tratados com veículo (PBS) ser- viram como controle negativo. A ciclosporina A (20 mg/kg, por os) foi admi- nistrada uma vez por dia durante um período de 21 dias e serviu como con- trole positivo. O peso corporal foi medido semanalmente, com início três dias antes do início do tratamento.
Parâmetros do resultado
• Espessura epidérmico (µm).
• HLA-DR (epiderme)
• Ki-67 (epiderme)
• Citoqueeratina-16 (epiderme)
Preparação das biópsias de pele e transplante
Consentimento informado foi obtido de todos Os doadores de pele. Todos os pacientes adultos foram clinicamente diagnosticados por um dermatologista como pacientes que sofrem de psoriasis vulgaris. Os pacien- tes não sofriam de psoríase extensa e não excederam a uma pontuação PASI de 6. Os pacientes não passaram por terapia de luz ou qualquer tera- pia sistêmica (por exemplo, metotrexato, ciclosporina ou qualquer terapia dirigida a TNF-α). Os pacientes foram aceitos como doadores se eles utiliza- rem corticosteróides localmente, quando necessário, ou cremes básicos pa- ra evitar a secura da pele. Sexo, idade, ou duração/passado histórico da do- ença não faziam parte dos critérios de inclusão ou exclusão.
Três biópsias pele não lesionada (5 mm de diâmetro) e aproxi- madamente 30 ml de sangue foram obtidos de cada paciente com psoríase. Após tomar as biópsias da pele e remoção de gordura subcutânea, as bióp- sias da pele foram armazenadas em tubos estéreis contendo ligaduras cirúr- gicas estéreis umedecidas com salina em uma temperatura de aproximada- mente +4°C. O transporte da pele e sangue até o laboratório foi realizado dentro de 7 horas após a coleta. As células mononucleares do sangue peri- férico (PBMC) foram isoladas do sangue pela centrifugação de da densidade e crioconservadas a -140°C.
As biópsias de pele foram transplantadas em camundongos BNX imunodeficientes no nível do panniculus carnosus (região atrás do pescoço), após a remoção cirúrgica da espessura total da pele dos camundongos. As biópsias de pele humanas substituíram a pele de camundongo parcialmente removida e foram cobertas com fita cirúrgica Op-site (Smith and Nephew, Hoofddorp, Países Baixos), seguido pela fita cirúrgica regular. Os camun- dongos foram verificados uma vez por dia no que diz respeito à integridade das ligaduras. Em caso de perda ou dano da bandagem, uma nova banda- gem foi imediatamente aplicada.
Três semanas após o transplante, as biópsias foram bem inte- gradas no tecido de camundongo; elas mantiveram todas as características humanas e não foram excessivas por tecido de camundongo. Antes que os camundongos fossem escolhidos a esmo ao longo dos diferentes grupos de tratamento as biópsias foram submetidas a triagem e registradas em relação a sua aparência geral, dano ou feridas e diferenças de cor da pele das bióp- sias pertencentes a um doador. Subseqüentemente, as únicas biópsias in- tactas foram incluídas e escolhidas a esmo no estudo como descrito acima. As biópsias não foram incluídas no caso de danos de enxerto/feridas ou no caso de uma biópsia que pertence a um doador extensivamente distinguido no que diz respeito à cor da pele. Subseqüentemente, estes transplantes integrados e incluídos foram injetados com PBMC ativado por superantígeno autólogo (vide abaixo).
Doador de células mononucleares do sangue periférico.
As PBMC dos doadores foram cultivadas por um período de 48 horas em IMDM (Biowhitaker, Lot. Não. 2MB0103) suplementadas com soro fetal de vitelo (10%) e estimuladas com 1 Mg/ml de Staphylococcus Entero- toxin B (SEB; Toxin Technology, Florida, USA; Lot. No. 51497B), na presen- ça de 40 U/ml de IL-2 recombinante humana (Preprotech Inc, fornecido por Tebu-bio cat.no. 200-02). As células foram cultivadas em placas de cultura de fundo chato com 24 cavidades (Costar). Após o cultivo por 48 horas, as células foram colhidas e lavadas duas vezes com PBS contendo 0,5% de Albumina de Soro Bovino e apenas uma vez com PBS. As PBMC foram co- locadas em suspensão novamente com PBS em 5 x 106 células viáveis por ml e 100 μΙ foram injetados intradermicamente nos transplantes de pele au- tólogos para iniciar a diferenciação psoriática anormal.
Crioconservação de tecidos de biópsia e coleta de soro
Para obter os tecidos de biópsia humanos, os camundongos fo- ram sacrificados por asfixia de CO2. As biópsias foram extirpadas mantendo uma pequena ponta da pele do camundongo anexada. Imediatamente após a dissecação, as biópsias foram incorporadas no Tissue-Tec e congeladas em nitrogênio líquido a ser armazenado em recipientes de alumínio rotula- dos. Logo após o sacrifício, o sangue foi coletado em tubos não coagulados através de punção cardíaca. As amostras de sangue foram deixadas coagu- lar em temperatura ambiente durante 45 minutos. Antes da centrifugação (1400 rpm durante 10 minutos em 4 °C), as amostras foram colocadas em gelo de fusão durante uma hora. Imediatamente após a centrifugação os sobrenadantes do soro foram coletados e armazenados a -80°C.
Avaliação histolóqica
O manchamento histológico foi realizado em tecidos crioconser- vados. Secções transversais Diagonais (10 pm), cobrindo todas as camadas da pele, foram preparadas (não mostradas: localizadas na parte de cima são o estrato córneo e epiderme da biópsia humana transplantada; o tecido de murino forma o fundamento para a pele humana transplantada).
Manchamento com hematoxilina para espessura epidérmica
Três seções selecionadas do centro da biópsia foram mancha- das com hematoxilina-eosina e avaliadas em uma ampliação de 200 vezes. As medições de espessura foram realizadas utilizando o processamento de imagem e sistema de análise LeicaQWin (Leica Imaging Systems Ltd, ver- sion 2.2a, Cambridge, England). A espessura de aresta foi medida como um parâmetro representativo para o desenvolvimento das lesões. Se nenhuma aresta clara (ou inter-arestas) estiver presente, um valor médio é fornecido sobre a suposição de que a epiderme é uma aresta longa. A partir de cada seção o resultado de um mínimo de 4 observações microscópicas foi incluí- do na espessura média. A partir disto, a espessura epidérmica média da ("corrigido") é calculada pela correção da amplificação microscópica.
Manchamento de HLA-DR
Duas secções por biópsia foram manchadas com HLA-DR anti- humano de camundongo (antígeno NCL-LN3 Nova Castra, lote 109207) e avaliadas em uma ampliação microscópica de 400. O número total de célu- las positivas na epiderme em seções representativas foram determinadas e apresentadas como o número de células positivas HLA-DR per observação. A partir de cada seção o resultado de um mínimo de 4 observações micros- cópicas foi incluído no valor médio. [Epidermal and dermal immunohisto- chemical stainings of Iesional plaque psoriasis patients show increased ex- pression of HLA-DR providing further support for the hypothesis that immu- nological mechanisms play an important role in the pathogenesis of psoria- sis, see also Gotlieb et al, J.Exp.Med, 1986\.
Manchamento Ki-67 (proliferação de ceratinócito)
Duas seções foram manchadas com Ki-67 anti-humano de ca- mundongo (BD Biosciences 556003) e avaliadas em uma ampliação micros- cópica de 400 x. O número total de células positivas na epiderme nas se- ções representativas foi determinado e apresentado como o número de célu- las positivas Ki-67 por mm2. Para cada seção os resultados de um mínimo de 4 observações microscópicas foram incluídos no valor médio. [KI-67 is a cell cycle-specific protein which can detect actively dividing cells. In psoriatic skin Iesions Ki-67 is a very specific marker for keratinocyte or epidermal hy- per proliferation which is a key feature of psoriasis, see also Wraight et al, J.
Invest. Dermatol, 1997].
Manchamento CK-16 (expressão de 16 citoaueratinas)
Uma seção representativa foi manchada com Cytokeratin-16 an- ti-humano de camundongo (Chemicon, cat. no. CBL273, exp date Feb 2007) e avaliada em uma ampliação microscópica de 400x. A expressão de cito- queratina-16 na epiderme foi determinada de acordo com um método de pontuação da avaliação da distribuição de CK-16 em um escala de 3 pontos descrita por de Jongh et al; J. Invest Dermatol 125:1163-1173, 2005. De a- cordo com escala de pontuação, uma pontuação de 0 representa ausência de CK-16, uma pontuação de 1 representa distribuição desigual de CK-16 e uma pontuação 2 representa uma distribuição contínua de CK-16. Para cada seção de biópsia o comprimento total da epiderme foi avaliado. As pontua- ções cumulativas e a incidência por grupo foram determinadas e apresenta- das. [The regulation of keratinocyte differentiation is particularly important in psoriasis and one of the important markers for hyperproliferative and differen- tiating psoriatic skin is cytokeratin-16, see also Bigiiardi et al, J. Invest. Der- matol, 2000\.
Análises estatísticas
As análises estatísticas básicas foram realizadas como se seguem: a importância das diferenças entre todos os grupos de tratamento foi testada usando análise de variância (ANOVA). Cada ANOVA significativa foi seguida por testes post hoc LSD (Diferença Significativa Mínima) para determinar a im- portância da diferença entre cada grupo de tratamento e o grupo controle. To- das as análises estatísticas foram realizadas utilizando programa de software estatístico SPSS 11.5 para Windows (SPSS Inc., Chicago, IL, USA).
Interpretação dos valores p:
• ρ < 0,05 indica diferenças estatisticamente significativas 0,05 < ρ < 0,10 é considerado como uma tendência
• ρ > 0,10 foi considerado não significativa
Os camundongos tratados com PBS são apresentados como "Veículo". Os camundongos tratados com 20 mg/kg de ciclosporina A são apresentados como "CsA (20 mg/kg)".
Transplante
Para este estudo, 24 pacientes com psoríase, cada um doou três biópsias de pele não Iesionada e 26 a 30 ml de sangue. Assim, um total de 72 biópsias foi transplantado. Três semanas após o transplante 11 transplan- tes foram considerados inadequados para inclusão no estudo. Portanto, um total de 61 camundongos (85%) pode ser incluído neste estudo. Para a es- colha a esmo e critérios de inclusão vide também "2.2 study design" e "2.5 preparations of the skin biopsies and transplantation". Devido ao manchamento de fundo (mesmo após repouso nas se- ções de tecido novo recém-extraído), algumas das lâminas manchadas para HLA-DR não puderam ser avaliadas. Os controles de manchamento não mos- traram nenhuma irregularidade (vide abaixo) e, infelizmente, não há qualquer explicação para este fato. Os controles que foram utilizados eram uma seção de tecido de referência que mostrou resultados similares como nas experiên- cias anteriores, uma seção de tecido de referência de pele Iesionada que apre- sentou expressão de HLA-DR correspondente como nas experiências anterio- res e finalmente, por lâmina histológica, uma seção de tecido com um controle de anticorpo de isotipo lgG2b foi incluída a qual não apresentou nenhum resul- tado positivo falsos ou manchamento de fundo elevado. Características do modelo de teste
A avaliação histológica de camundongos tratados com veículo, 21 dias após a injecção de PBMC ativadas com SEB, mostrou unia espessura média da epiderme de 176,8 ± 28,1, 29,7 ± 8,0 células positivas Ki-67 por mm2 na epiderme, 14,9 + 7,1 células positivas de HLA-DR por mm2 na epiderme e uma pontuação cumulativa de 6 para a expressão de CK-16 na epiderme.
O tratamento com CsA resultou em uma redução significativa da espessura de epiderme em 105,5 ± 11,3 pm (p = 0,003) em comparação com os camundongos tratados com veículo. Estes resultados correspondem a uma redução de 40% em comparação com o veículo. O número de células positivas Ki-67 diminuíram significativamente em 15,6 ± 4,3 per mm2; p = 0,027.
O número de células positivas HLA-DR diminuíram em 9,6 ± 4,6 per mm2, mas este efeito não chegou a a alcançar significado estatístico. A expressão de CK-16 diminuiu para uma pontuação cumulativa de 3, mas esta não atingiu significância. Nenhum dos tratamentos mostrou uma mu- dança significativa no peso corporal comparado com o veículo. Efeito do tratamento com anticorpo Espessura Epidérmica
O tratamento de anticorpo anti-IL23p19 apresentou supressão significativa do espessamento epidérmico (120,0 ± 17,4 pm) em uma dosa- gem de 10 mg/kg (p = 0,020). Ki-67
O tratamento IP com anticorpo anti-IL23p19 em uma dosagem de 10 mg/kg resultou em uma supressão significativa da proliferação de ce- ratinócito (p = 0,010).
HLA-DR
O tratamento não foi associado com a supressão significativa de HLA-DR.
CK-16
Embora a expressão de CK-16 tenha sido claramente associada com um efeito inibidor seguinte ao tratamento com CsA e o anticorpo anti- IL23p19, o tratamento não atingiu significância estatística. Conclusões
Neste estudo, o anticorpo anti-IL23p19 administrado intraperito- nealmente, uma vez por semana, em uma dose de 10 mg/kg foi avaliado com relação aos seus efeitos sobre o desenvolvimento da psoríase na pele não Iesionada de pacientes com psoríase transplantados para camundongos imunodeficientes.
O tratamento foi iniciado 1 dia antes da injeção das células T ati- vadas autólogas e continuou até dia 21 pós injeção de PBMC. O tratamento com PBS (veículo) serviu como controle negativo. A ciclosporina A (20 mg/kg, oral) serviu como o controlo positivo. O peso corporal, espessura epidérmica, proliferação de ceratinócito (células positivas Ki-67), pontuação de citoquerati- na-16 e o número de células positivas HLA-DR foram avaliados.
O tratamento com CsA significativamente suprimiu o espessa- mento epidérmico e proliferação de ceratinócito (células positivas Ki-67) em 40% (p = 0,007) e 53% (p = 0,027), respectivamente, em comparação com o controlo de veículo. O tratamento com o anticorpo anti-IL23p19 em 10 mg/kg apresentou um efeito significativo sobre a supressão do espessamento da epiderme em 32% e proliferação de ceratinócito (Ki-67) em 41%, em compa- ração com o controlo de veículo.
Nenhum dos tratamentos apresentou inibição significativa de expressão HLA-DR ou CK-16. A falta de eficácia do CsA ou a qualquer um dos compostos na expressão HLA-DR poderia ser associada com uma ativi- dade imunológica insuficiente em geral como determinado pela expressão HLA-DR no momento em que os camundongos foram sacrificados, 21 dias após a injeção' de PBMC. Comparados com os estudos anteriormente reali- zados, os resultados mostram menos expressão HLA-DR sem uma explica- ção substancial. Além disso, nenhum dos compostos mostrou um efeito so- bre o peso corporal. Q peso corporal foi avaliado na perspectiva do bem- estar do animal. A perda de peso ou inibição do crescimento é um efeito co- lateral comum de tratamento de murino com CsA ou agentes imunossupres- sores, em geral. De modo geral, o tratamento com o anticorpo anti-IL23p19 parece ser uma abordagem promissora no tratamento da psoríase.
Tabela 11
<table>table see original document page 117</column></row><table>
1. Número de células positivas per mm2 de epiderme 2. Siste- ma de pontuação histológica de acordo com de Jongh et al; J. Invest Derma- tol 125:1163-1173, 2005.
Espessura da Epiderme: ANOVA P=0.010 Testes post hoc LSD: $ p = 0,003 comparado com o Veículo * p = 0,001 comparado com o Veículo ** p = 0,025 comparado com o Veículo # ρ < 0,001 comparado com o Veículo ## ρ = 0,063 comparado com o Veículo & ρ = 0,020 comparado com o Veículo Ki-67:
ANOVA P = 0,009
Testes post hoc LSD:
$ ρ = 0,027 comparado com o Veículo * ρ = 0,008 comparado com o Veículo ** ρ = 0,048 comparado com o Veículo
# ρ = 0,007 comparado com o Veículo ## ρ = 0,031 comparado com o Veículo & ρ = 0,010 comparado com o Veículo HLA-DR:
ANOVA P = 0,768 CK-16:
ANOVA P = 0,573 PESO CORPORAL: ANOVA P = 0,691
Ficará claro que a invenção pode ser praticada de outra maneira do que como particularmente descrita na descrição anterior e exemplos. Numerosas modificações e variações da presente invenção são possíveis na compreensão dos ensinamentos acima e, portanto, estão dentro do escopo das reivindicações anexas.
Tabela 1: Especificidade de Ligação dos Fabs Candidatos
<table>table see original document page 118</column></row><table> <table>table see original document page 119</column></row><table>
Tabela 2: IC50 de Fabs Candidatos no Ensaio de hrlL-23/hIL-23R
<table>table see original document page 119</column></row><table> Tabela 3: Caracterizacao dos Anticorpos Parentais em um Formato mAb
<table>table see original document page 120</column></row><table> <table>table see original document page 121</column></row><table>
Tabela 4A: Seqüências CDR da Região Hc V de Anticorpos Candidatos
<table>table see original document page 121</column></row><table> <table>table see original document page 122</column></row><table>
Todos os anticorpos expressos como Fabs possuem Q no rsíduo 3 em Vh, enquanto quando expressos como mAbs, a maioria tinha E no re- síduo 3.
** X1 é D or S; X2 é S, V, D, ou T; X3 é, S, ou G; X4 é Y, W, T, Η, V, S, ou A; X5 é N, D, R, K, ou W
!! Z1 é G, I, ou L; Z2 é I ou S; Z3 é I, Ρ, N, ou D; Z4 é P1 G, ou A; Z5 é I, Μ, P, Τ, Η, N, ou V; Z6é F, I, G, ou L; Z7G ou I; Z8é Η, Υ, N, ou G; Z9é A ou T; Z10 é Ν, W,ou Y
++ ai é S ou A; a2 é T ou G; a3 é P ou L; a4 é S ou N; a5 é S, M, ou L; a6 é I ou V
## bi é T, F, D,' ou S; b2é S, I, A, T, R, ou L; b3é Ν, T, L, S1 ou G; b4é Τ, Y, S.ou-I;
b5 é P ou L; b6 é F ou P
Tabela 4B: Seqüências CDR da Região Lc V de Anticorpos Candidatos
<table>table see original document page 123</column></row><table> <table>table see original document page 124</column></row><table> <table>table see original document page 125</column></row><table>
* Exceto como indicado nos na caixa de "comentários", a posição 3 na ca- deia pesada foi Q nos Fabs e E nas mAbs.
** As cadeias leves kappa maduras por afinidade de 4083 e 4190 contêm uma substituição de T para V em relação às origens em FW3 (FAVYYC). V é um resíduo da linha gèrminativa nesta posição.
# Vários Fabs listados como "maduros por afinidade" apresentaram alguama agregação durante a purificação e assim não foram avaliados. Eles foram anteriormente avaliados em tantos impactos quanto amostras brutas. Tabela 5: Caracterização de Fabs Maduros por Afinidade: especificidade, neutralização de receptor, e afinidade.
<table>table see original document page 125</column></row><table> <table>table see original document page 126</column></row><table>
Tabela 6: Caracterizacao de Fabs MAduros por Afinidade: especificidade, neutralizacao de receptor, e afinidade.
<table>table see original document page 126</column></row><table>
Table 7: Caracterização de Anticorpos Maduros por Afinidade em Formato mAb: Inibição da produção de IL-17.
Inibição da ligação de hrlL-23 à proteína de fusão IL-23R-Fc i- mobilizada. Valores IC50 das curvas de titulação.
Os mAbs (vide Tabela 4C) são listados em ordem de potência decrescente. Os anticorpos maduros são agrupados de acordo com suas respectivas origens: rosa (5028 é de 4083); (5040, 5038, 5029, 5030, 5057, 5036, 5032, 5034, 5033, e 5037 são com 4190); (5042, 5045, 5058, 5041, 5059, 5044, 5043, 5046, e 4083 são com 4649); (5054, 5053, 5049, 5048, 5052, 5047, 5050, 5051, 5055, 5056, 5039, 5063, 5062, e 5061 são com 4658). MAb 23A é um IL-23 mAb anti-humano de murino de referência.
<table>table see original document page 127</column></row><table> <table>table see original document page 128</column></row><table>
Tabela 8 - Seqüências de IL-23p19 mAbs iniciais e seus derivados maduros e planejados, família MOR04083.
(SEQ ID NOS: 80 & 81) 1
117
4083 Vh (1)
Qvqlvqsgaevkkpgssvkvsckasggtfsnyaiswvrqapgqglewmggiipmfgyanyaqctqgrvtitadest
staymelsslrsedtavyycardiyagmdvwgqgtlvtvss 5028 Vh (1)
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSNYAISWVRQAPGQGLEWMGGIIPvFGf thYAQKFQGRVTITADEST STAYMELSSLRSEDTAVYYCARDIYAGMDVWGQGTLVTVSS
(SEQ ID NOS: 82-85) 1
108
4083 Vk (1)
DIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVLGNYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGVPARFSGSGSGTDFTLTI SSLEPEDFAVYYCHQYGSISTTFGQGTKVEIK 5268 Vk (1)
DIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVLGNYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGVPARFSGSGSGTDFTLTI SSLEPEDFAVYYCqQYshI SLTFGQGTKVEIK 5267 Vk (1)
DIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVLGNYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGVPARFSGSGSGTDFTLTI SSLEPEDFAVYYCqQYshl ÍITFGQGTKVEIK
5269
Vk
(1)
DIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVLGNYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGVPARFSGSGSGTDF TLTISSLEPEDFAVYYCqQf ahlllTFGQGTKVEIK
família MOR04190
(SEQ ID NOS: 86-92) 1
127
4190 Vh (1)
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSNYISWVRQAPGQGLEWMGGIIPIFGHANYAQKFQGRVTITADEST STAYMELSSLRSEDTAVYYCARSKKGMYGGWTYPLMMFDLWGQGTLVTVSS
5033 Vh (1)
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSNYISWVRQAPGQGLEWMGi IlPpiGnAwYAQKFQGRVTITADEST STAYMELSSLRSEDTAVYYCARSKKGMYGGWTYPLMMFDLWGQGTLVTVSS 5040 Vh (1)
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSNYISWVRQAPGQGLEWMGispgtginAyYAQKFQGRVTITADEST STAYMELSSLRSEDTAVYYCARSKKGMYGGWTYPLMMFDLWGQGTLVTVSS 5038 Vh (1) QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSNYISWVRQAPGQGLEWMG- InahlGgtwYAQKFQGRVTITADESTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARSKKGMYGGWTYPLMMFDLWGQGTLVTVSS
5034 Vh (1)
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSNYISWVRQAPGQGLEWMGlIdPnFGgAyYAQKFQGRVTITADEST STAYMELSSLRSEDTAVYYCARSKKGMYGGWTYPLMMFDLWGQGTLVTVSS
5036 Vh (1)
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSNYISWVRQAPGQGLEWMG1 IdPvFGgAyYAQKFQGRVTITADEST STAYMELSSLRSEDTAVYYCARSKKGMYGGWTYPLMMFDLWGQGTLVTVSS
5037 Vh (1)
QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGGTFSSNYISWVRQAPGQGLEWMG1 IdPmFGgAyYAQKFQGRVTITADEST STAYMELSSLRSEDTAVYYCARSKKGMYGGWTYPLMMFDLWGQGTLVTVSS
(SEQ ID NOS: 93-98)
108 4190 Vk (1)
DivltqspatlslspgeratlscrasqsvssnylawyqqkpgqaprlliyyasrratgvparfsgsgsgtDftlti sslepedfatyycqqtsntpftfgqgtkveik 4190evVk (1)
EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSNYLAWYQQKPGQAPRLLIYYASRRATGVPARFSGSGSGTDFTLTI SSLEPEDFAvYYCQQTSNTPFTFGQGTKVEIK
5029 Vk (1)
DIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSNYLAWYQQKPGQAPRLLIYYASRRATGVPARFSGSGSGTDFTLTI SSLEPEDFAvYYCQQtylpTFGQGTKVEIK
5030 Vk (1)
DIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSNYLAWYQQKPGQAPRLLIYYASRRATGVPARFSGSGSGTDFTLTI SSLEPEDFAvYYCQQdalsPFTFGQGTKVEIK
5031 Vk (1)
DIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSNYLAWYQQKPGQAPRLLIYYASRRATGVPARFSGSGSGTDFTLTI SSLEPEDFAvYYCQQdrgTPFTFGQGTKVEIK
5032 Vk (1)
DIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSNYLAWYQQKPGQAPRLLIYYASRRATGVPARFSGSGSGTDFTLTI SSLEPEDFAvYYCQQslNiPFTFGQGTKVEIK
MOR04205
(SEQ ID NO: 99)
1
116
4205 Vh (1)
QVQLVQSGAEVKKPGESLKISCKGSGYSFTNYWISWVRQAPGKGLEWMGWIRPGDSDTRYSPSFEGQVTISADKSI STA YLQWSSLKASDTAMYYCARH YYGMD YWGQGTLVTVSS
(SEQ ID NO: 100) 1
110
4205 Vl (1)
DIVLTQPPSVSGAPGQRVTISCSGSSSNIGSYYVNWYQQLPGTAPKLLIYGNTHRPSGVPDRFSGSKSGTSASLAI TGLQSEDEADYYCffTYASLGPGEVF GGGTKLTrVL
MOR04217
(SEQ ID NO:.101) 1
121
4217 Vh (1)
QVQLVESGGGL VQ PGGSLRLSCAASGFTFSSYWITWVRQAPGKGLEWVS YISSSGSSTYYADSVKGRFTISRDNSK NTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGTFWSFGNYFANWGQGTLVTVSS
(SEQ ID NO: 102) 1
107
4217 Vk (1)
DIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSIFYNLAWYQQKPGQAPRLLIYGASNRATGVPARFSGSGSGTDFTLTIS SLEPEDFATYYCQQYSSEPVTFGQGTKVEIK
família MOR04649
(SEQ ID NOS: 103-112)
117
4649 Vh (1)
QVQLVQSGAE VKKPGESLKI SCKGSGYSFSNYWIGWVRQMPGKGLEWMGI IDPSNS YTNYSPSFQGQVTISADKSI STA YLQWS SLKASDTAMYYCARWYYKPFDVWGQGTLVTVS S 4649d Vh (1)
QVQLVQSGAEVKKPGESLKI SCKGSGYSFSNYWIGWVRQMPGKGLEWMGI IDPSNS YTdYSPSFQGQVTI SADKSI STAYLQWSSLKASDTAMYYCARWYYKPFDVWGQGTLVTVSS 4649r Vh (1)
QVQLVQSGAEVKKPGESLKISCKGSGYSFSNYWIGWVRQMPGKGLEWMGIIDPSNSYTrYSPSFQGQVTISADKSI STAYLQWS SLKASDTAMYYCARWYYKPFDVWGQGTLVTVS S 4649rE Vh (1)
eVQLVQSGAEVKKPGESLKISCKGSGYSFSNYWIGWVRQMPGKGLEWMGIIDPSNSYTrYSPSFQGQVTISADKSI STAYLQWS SLKASDTAMYYCARWYYKPFDVWGQGTLVTVS S 5046 Vh (1)
QVQLVQSGAEVKKPGESLKISCKGSGYSFSNYWIGWVRQMPGKGLEWMGIIDPvsSwTkYSPSFQGQVTISADKSI STAYLQWSSLKASDTAMYYCARWYYKPFDVWGQGTLVTVSS 5044 Vh (1)
QVQLVQSGAEVKKPGESLKI SCKGSGYSFSNYWIGWVRQMPGKGLEWMGI I sPSgS tTwYSPSFQGQVTI SADKSI STAYLQWS SLKASDTAMYYCARWYYKPFDVWGQGTLVTVS S 5043 Vh (1)
QVQLVQSGAEVKKPGESLKI SCKGSGYSFSNYWI GWVRQMPGKGLEWMGf IsPdgShTwYSPSFQGQ VTISADKSI STAYLQWSSLKASDTAMYYCARWYYKPFDVWGQGTLVTVSS 5041 Vh (1)
QVQLVQSGAEVKKPGESLKISCKGSGYSFSNYWIGWWQMPGKGLEWMGIIsPtgSvTwYSPSFQGQVTISADKSI STAYLQWSSLKASDTAMYYCARWYYKPFDVWGQGTLVTVSS
5042 Vh (1)
QVQLVQSGAEVKKPGESLKISCKGSGYSFSNyWIGWVRQMPGKGLEWMGIIsPtgSsTwYSPSFQGQVTISADKSI STAYLQWS SLKASDTAMYYCARWYYKPFDVWGQGTLVTVS S 5045 Vh (1) '
QVQLVQSGAEVKKPGESLKISCKGSGYSFSNYWIGWVRQMPGKGLEWMGIIS PtgSaTwYSPSFQGQVTI SADKSI STAYLQWS SLKASDTAMYYCARWYYKPFDVWGQGTLVTVS S
* Consensus N-Iinked glycosylation site in 4649 Vh (SEQ ID NOS: 113-116) 1
111
4649 VL (1)
DIVLTQPPSVSGAPGQRVTISCTGSSSNIGSGYDVHWYQQLPGT APKLLIYGNSKRPSGVPDRFSGSKSGTSASLA ITGLQSEDEADYYCSSWT- - PSSWFGGGTKLTVL
5058 VL (1)
DIVLTQPPSVSGAPGQRVTISCTGSSSNIGSGYDVHWYQQLPGTAPKLLI YGNSKRPSGVPDRFSGSKSGTSASLA ITGLQSEDEADYYCSSWTdtPnmiVFGGGTKLTVL
5059 VL (1)
DIVLTQPPSVSGAPGQRVTISCTGSSSNIGSGYDVHWYQQLPGTAPKLLIYGNSKRPSGVPDRFSGSKSGTSASLA ITGLQSEDEADYYCaSWTdglSlWFGGGTKLTVL
5059°^ (1)
qsVLTQPPSVSGAPGQRVTISCTGSSSNIGSGYDVHWYQQLPGTAPKLLIYGNSKRPSGVPDRFSGSKSGTS ASLAITGLQSEDEAD YYCaSWTdglSl WFGGGTKLTVL
família MOR04658
(SEQ ID NOS: 117-127) 1
123
4658 Vh (1) QVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSFGMSWVRQAPGKGLEWVSNISSS-- GSSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARYWGTPYLMQFDNWGQGTLVTVSS
5048 Vh (1)
QVQLVE SGGGLVQ PGGSLRLSCAASGFTFSSFGMSWVRQAPGKGLEWVSNIehkfmGytTYYAagVKGRFTISRDN SKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARYWGTPYLMQFDNWGQGTLVTVSS
5050 Vh (1)
QVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSFGMSWVRQAPGKGLEWVSsIehkytGytTYYAapVKGRFTISRDN SKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARYWGTPYLMQFDNWGQGTLVTVSS
5053 Vh (1)
QVQLVE SGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSFGMSWVRQAPGKGLEWVSNIehkytsytTYYAaSVKGRFTISRDN SKNTL YLQMNSLRAEDTAVYYCARYWGTPYLMQFDNWGQGTLVTVSS 5039 Vh (1)
QVQLVE SGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSFGMSWVRQAPGKGLEWVSNIehkylnyaTYYAaSVKGRFTISRDN SKNTL YLQMNSLRAEDTAVYYCARYWGTPYLMQFDNWGQGTLVTVSS
5055 Vh (1)
QVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSFGMSWVRQAPGKGLEWVSNIehkylGyaTvYAaSVKGRFTISRDN SKNTL YLQMNSLRAEDTAVYYCARYWGTPYLMQFDNWGQGTLVTVSS
5056 Vh (1)
QVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSFGMSWVRQAPGKGLEWVSSIehkylsyaTYYAagVKGRFTISRDN SKNTL YLQMNSLRAEDTAVYYCARYWGTPYLMQFDNWGQGTLVTVSS 5052 Vh (1)
QVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSFGMSWVRQAPGKGLEWVSsIehkylsytTf YAaSVKGRFTISRDN SKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARYWGTPYLMQFDNWGQGTLVTVSS
5049 Vh (1)
QVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSFGMSWVRQAPGKGLEWVSglehkylsytThYAaSVKGRFTISRDN SKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARYWGTPYLMQFDNWGQGTLVTVSS
5051 Vh (1)
QVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSFGMSWVRQAPGKGLEWVSqlehkylsytTl YAaSVKGRFTI SRDN SKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARYWGTPYLMQFDNWGQGTLVTVSS
5054 Vh (1)
QVQLVE SGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSFGMSWVRQAPGKGLEWVSglehkylSyaTl YAaSVKGRFTISRDN SKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARYWGTPYLMQFDNWGQGTLVTVSS
(SEQ ID NO: 147) 5047 Vh (1)
QVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSFGMSWVRQAPGKGLEWVSNIehkylGyaTs YAaSVKGRFTISRDNSKNTLYLQM NSLRAEDTAVYYCAR YWGTPYLMQFDNWGQGTLVTVSS
(SEQ ID NOS: 128-132) 1
111
4658 VI. (1)
DIALTQPASVSGSPGQSITISCTGTSSDVGGYNSVSWYQQHPGKAPKLMIYSVSSRPSGVSNRFSGSKSGNTASLT ISGLQ AEDEAD YYCSSYDTNKPLWFGGGTKLTVL
5061 VL (1)
DIALTQPASVSGSPGQSITISCTGTSSDVGGYNSVSWYQQHPGKAPKLMIYSVSSRPSGVSNRFSGSKSGNTASLT ISGLQAEDEADYYCSSYyfylqriVFGGGTKLTVL
5062 VL (1)
DIALTQPASVSGSPGQSITISCTGTSSDVGGYNSVSWYQQHPGKAPKLMIYSVSSRPSGVSNRFSGSKSGNTASLT ISGLQAEDEADYYCqtYyfsysgpVFGGGTKLTVL 5060 VL (1)
DIALTQPASVSGSPGQSITISCTGTSSDVGGYNSVSWYQQHPGKAPKLMIYSVSSRPSGVSNRFSGSKSGNTASLT ISGLQAEDEADYYCgSYDvygrfyVFGGGTKLTVL
5063 VL (1)
DIALTQPASVSGSPGQSITISCTGTSSDVGGYNSVSWYQQHPGKAPKLMIYSVSSRPSGVSNRFSGSKSGNT ASLTISGLQAEDEADYYCgSwDpi f SyeVFGGGTKLTVL
Tabela 9 - Seqüências de Nucleotídeo
IL-23 pl9 5040Q/EV
VH-GCE (SEQ ID NO: 133): (seqüência de aminoácido VH é 5040 Vh)
QVQL VQS GAE VKKP GSS-
1 CAGGTGCAGC TGGTGCAGTC TGGGGCTGAG GTGAAGAAGC CTGGGTCCTC GTCCACGTCG ACCACGTCAG ACCCCGACTC CACTTCTTCG GACCCAGGAG
cdrl
•VKV SCKA SGG T FS SNYI- 51 GGTGAAGGTC TCCTGCAAGG CTTCTGGAGG CACCTTCAGC AGCAACTACA CCACTTCCAG AGGAÇGTTCC GAAGACCTCC GTGGAAGTCG TCGTTGATGT
• SWV RQA PGQG LEW MGI 101 TCAGCTGGGT GCGACAGGCC CCTGGACAAG GGCTTGAGTG GATGGGGATC
AGTCGACCCA CGCTGTCCGG GGACCTGTTC CCGAACTCAC CTACCCCTAG
CDR2
SPGT GIN AYY AQKF QGR- 151 AGCCCTGGCA CCGGTATCAA CGCATACTAC GCACAGAAGT TCCAGGGCAG TCGGGACCGT GGCCATAGTT GCGTATGATG CGTGTCTTCA AGGTCCCGTC
-VTI TADE STS TAY MELS 201 AGTCACGATT ACCGCGGACG AATCCACGAG CACAGCCTAC ATGGAGCTGA TCAGTGCTAA TGtaCGCCTGC TTAGGTGCTC GTGTCGGATG TACCTCGACT
CDR3
• SLR SED TAV Y YCA RSK 251 GCAGCCTGAG ATCTGAGGAC ACGGCCGTGT ATTACTGTGC GAGAAGCAAG
CGTCGGACTC TAGACTCCTG TGCCGGCACA TAATGACACG CTCTTCGTTC
CDR3
KGMY GGW TYP LMMF DLW- 301 AAGGGCATGT ACGGCGGCTG GACCTACCCC CTGATGATGT TCGACCTGTG TTCCCGTACA TGCCGCCGAC CTGGATGGGG GACTACTACA AGCTGGACAC
-GQ G TLV T VS S 351 GGGCCAGGGC ACCCTGGTGA CCGTGAGCAG C CCCGGTCCCG TGGGACCACT GGCACTCGTC G IL-23 pl9 5040q/ev VH-HCO (SEQ ID NO:134): (Seqüência de aminoácido VH é 5040 Vh)
Q V Q Li VQS GAE VKKP GSS- 1 CAGGTGCAGC TGGTGCAGAG CGGCGCCGAG GTGAAGAAGC CCGGCAGCAG GTCCACGTCG ACCACGTCTC GCCGCGGCTC CACTTCTTCG GGCCGTCGTC
CDRl
•VKV SCKA SGG TFS SNYI 51 CGTGAAGGTG AGCTGCAAGG CCAGCGGCGG CACCTTCAGC AGCAACTACA GCACTTCCAC TCGACGTTCC GGTCGCCGCC GTGGAAGTCG TCGTTGATGT
• SWV RQA PGQG LEW M , G I 101 TCAGCTGGGT GCGCCAGGCC CCCGGCCAGG GCCTGGAGTG GATGGGCATC AGTCGACCCA CGCGGTCCGG GGGCCGGTCC CGGACCTCAC CTACCCGTAG
CDR2
SPGT GIN AYY AQ KF QGR- 151 AGCCCCGGCA CCGGCATCAA CGCCTACTAC GCCCAGAAGT TCCAGGGCCG TCGGGGCCGT GGCCGTAGTT GCGGATGATG CGGGTCTTCA AGGTCCCGGC
-VT I TADE STS TAY MELS 201 CGTGACCATC ACCGCCGACG AGAGCACCAG CACCGCCTAC ATGGAGCTGA GCACTGGTAG TGGCGGCTGC TCTCGTGGTC GTGGCGGATG TACCTCGACT
• SLR SED TAVY YCA RSK 251 GCAGCCTGCG CAGCGAGGAC ACCGCCGTGT ACTACTGCGC CCGCAGCAAG CGTCGGACGC GTCGCTCCTG TGGCGGCACA TGATGACGCG GGCGTCGTTC
CDR3
KGMYGGW TYP LMMF DLW- 301 AAGGGCATGT ACGGCGGCTG GACCTACCCC CTGATGATGT TCGACCTGTG TTCCCGTACA TGCCGCCGAC CTGGATGGGG GACTACTACA AGCTGGACAC
-GQ G TLVT VSS 351 GGGCCAGGGC ACCCTGGTGA CCGTGAGCAG C CCCGGTCCCG TGGGACCACT GGCACTCGTC G IL-23 pl9 5040Q/EV VH-MOR (SEQ ID NO: 135): (Seqüência de aminoácido VH é 5040 Vh)
QVQL VQS GAE VKKP GSS- 1 CAGGTGCAAT TGGTTCAGTC TGGCGCGGAA GTGAAAAAAC CGGGCAGCAG GTCCACGTTÁ ACCAAGTCAG ACGGCGCCTT CACTTTTTTG GCCCGTCGTC
CDRl
•VKV SCKA SG G TFS SNYI 51 CGTGAAAGTG AGCTGCAAAG CCTCCGGAGG CACTTTTTCT TCTAATTATA GCACTTTCAC TCGACGTTTC GGAGGCCTCC GTGAAAAAGA AGATTAATAT
• SWV RQA PGQG LEW MGI 101 TTTCTTGGGT GCGCCAAGCC CCTGGGCAGG GTCTCGAGTG GATGGGCATT AAAGAACCCA CGCGGTTCGG GGACCCGTCC CAGAGCTCAC CTACCCGTAA
CDR2
SPGT GIN AYY AQKF QGR- 151 TCTCCTGGTA CTGGTATTAA TGCTTATTAT GCTCAGAAGT TTCAGGGTCG AGAGGACCAT GACCATAATT ACGAATAATÁ CGAGTCTTCA AAGTCCCAGC
-VTI TADE STS TAY MELS 201 GGTGACCATT ACCGCGGATG AAAGCACCAG CACCGCGTAT ATGGAACTGA CCACTGGTAA TGGCGCCTAC TTTCGTGGTC GTGGCGCATA TACCTTGACT ,
• SL R SED TAVY YCA RSK 251 GCAGCCTGCG TAGCGAAGAT ACGGCCGTGT ATTATTGCGC GCGTTCTAAG CGTCGGACGC ATCGCTTCTA TGCCGGCACA TAATAACGCG CGCAAGATTC
CDR3
KGMY GGW TYP LMMF DLW- 301 AAGGGTATGT ATGGTGGTTG GACTTATCCT CTTATGATGT TTGATCTTTG TTCCCATACA TACCACCAAC CTGAATAGGA GAATACTACA AACTAGAAAC
-GQG TLVT VSS 351 GGGCCAAGGC ACCCTGGTGA CGGTTAGCTC A CCCGGTTCCG TGGGACCACT GCCAATCGAG T IL-23 pl9 5040q/ev VK-HCO (SEQ ID NO:136): (Seqüência de aminoácido VK é 4190sv
EIVL TQS PAT LSLS PGE 1 GAGATCGTGC TGACCCAGAG CCCCGCCACC GTGAGCCTGA GCCCCGGCGA CTCTAGCACG ACTGGGTCTC GGGGCGGTGG GACTCGGACT CGGGGCCGCT
CDRl
•RAT LS CR ASQ SVS SNYL 1 GCGCGCCACC CTGAGCTGCC GCGCCAGCCA GAGCGTGAGC AGCAACTACC CGCGCGGTGG GACTCGACGG CGCGGTCGGT CTCGCACTCG TCGTTGATGG
• AWY QQK PGQA PRL L1IY 1 TGGCCTGGTA CCAGCAGAAG CCCGGCCAGG CCCCCCGCCT GCTGATCTAC ACCGGACCAT GGTCGTCTTC GGGCCGGTCC GGGGGGCGGA CGACTAGATG
CDR2
YASR RAT GVP AR FS GSG 1 TACGCCAGCC GCCGCGCCAC CGGCGTGCCC GCCCGCTTCA GCGGCAGCGG ATGCGGTCGG CGGCGCGGTG GCCGCACGGG CGGGCGAAGT CGCCGTCGCC
• S G T DFTL TIS SLE PEDF 1 CAGCGGCACC GACTTCACCC TGACCATCAG CAGCCTGGAG CCCGAGGACT GTCGCCGTGG CTGAAGTGGG ACTGGTAGTC GTCGGACCTC GGGCTCCTGA
CDR3
• AVY YCQ QTSN TPF TF G 1 TCGCCGTGTA CTACTGCCAG CAGACCAGCA ACACCCCCTT CACCTTCGGC AGCGGCACAT GATGACGGTC GTCTGGTCGT TGTGGGGGAA GTGGAAGCCG
QGTK V EI K 1 CAGGGCACCA AGGTGGAGAT CAAG GTCCCGTGGT TCCACCTCTA GTTC IL-23 pl9 5040q/ev VK-HCO (SEQ ID NO:137): (Seqüência de aminoácido VK é 4190^)
EIVL TQS PAT LSLS PGE- 1 GAAATTGTGT TGACACAGTC TCCAGCCACC CTGTCTTTGT CTCCAGGGGA CTTTAACACA ACTGTGTCAG AGGTCGGTGG GACAGAAACA GAGGTCCCCT
CDRl
•RAT LSCR ASQ SVS SNYL 51 AAGAGCCACC CTCTCCTGCA GGGCCAGTCA GAGTGTTAGC AGCAACTACT TTCTCGGTGG GAGAGGACGT CCCGGTCAGT CTCACAATCG TCGTTGATGA
• AWY Q QK PGQA PRL LIY 101 TAGCCTGGTA CCAACAGAAA CCTGGCCAGG CTCCCAGGCT CCTCATCTAT ATCGGACCAT GGTTGTCTTT GGACCGGTCC GAGGGTCCGA GGAGTAGATA
CDR2
YASR RAT GVP ARFS GSG- 151 TACGCATCCC GCAGGGCCAC TGGCGTGCCA GCCAGGTTCA GTGGCAGTGG ATGCGTAGGG CGTCCCGGTG ACCGCACGGT CGGTCCAAGT CACCGTCACC
-SGT DFTL TIS SLE PEDF 201 GTCTGGGACA GACTTCACTC TCACCATCAG CAGCCTAGAG CCTGAAGATT CAGACCCTGT CTGAAGTGAG AGTGGTAGTC GTCGGATCTC GGACTTCTAA
CDR3
• AVY YCQ QTSN TPF TFG 251 TTGCAGTTTA TTACTGTCAG CAGACTTCTA ATACTCCTTT TACCTTTGGC AACGTCAAAT AATGACAGTC GTCTGAAGAT TATGAGGAAA ATGGAAACCG
QGTK VEI K 301 CAGGGTACGA AAGTTGAAAT TAAA GTCCCATGCT TTCAACTTTA ATTT IL-23 pl9 5040q/ev
VK-HCO (SEQ ID NO:138): (Seqüência de aminoácido VK é 4190EV)
EIVL TQS PAT LSLS PGE- 1 GAGATCGTGC TGACCCAGAG CCCGGCGACC ÇTGAGCCTGT CTCCGGGCGA CTCTAGCACG ACTGGGTCTC GGGCCGCTGG GACTCGGACA GAGGCCCGCT
CDRl
•RAT LSCR ASQ SVS SNYL 51 ACGTGCGACC CTGAGCTGCA GAGCGAGCCA GTCTGTTTCT TCTAATTATC TGCACGCTGG GACTCGACGT CTCGCTCGGT CAGACAAAGA AGATTAATAG
• AWY QQK PGQA PRL LIY 101 TGGCTTGGTA CCAGCAGAAA CCAGGTCAAG CACCGCGTCT ATTAATTTAT ACCGAACCAT GGTCGTCTTT GGTCCAGTTC GTGGCGCAGA TAATTAAATA
CDR2
YASR RAT GVP AR FS GSG- 151 TATGCTTCTC GTCGTGCAAC TGGGGTCCCG GCGCGTTTTA GCGGCTCTGG ATACGAAGAG CAGCACGTTG ACCCCAGGGC CGCGCAAAAT CGCCGAGACC
-SG T DFTL TIS SLE PEDF 201 ATCCGGCACG GATTTTACCC TGACCATTAG CAGCCTGGAA CCTGAAGACT TAGGCCGTGC CTAAAATGGG ACTGGTAATC GTCGGACCTT GGACTTCTGA
CDR3
• AVY YCQ QTSN TPF TFG 251 TTGCGGTGTA TTATTGCCAG CAGACTTCTA ATACTCCTTT TACCTTTGGC AACGCCACAT AATAACGGTC GTCTGAAGAT TATGAGGAAA ATGGAAACCG
QGTK V EI K 301 CAGGGTACGA AAGTTGAAAT TAAA GTCCCATGCT TTCAACTTTA ATTT IL-23 pl9 3159EQ/QS
VH-GCE (SEQ ID NO:139): (Seqüência de aminoácido VH é 4649rE)
E V Q L V Q S G A E V K K P G E S • 1 GAGGTGCAGC TGGTGCAGTC TGGAGCAGAG GTGAAAAAGC CCGGGGAGTC CTCCACGTCG ACCACGTCAG ACCTCGTCTC CACTTTTTCG GGCCCCTCAG
CDR1
• L K I S C K G S G Y S F S N Y W I • 51 TCTGAAGATC TCCTGTAAGG GTTCTGGATA CAGCTTTAGC AACTACTGGA AGACTTCTAG AGGACATTCC CAAGACCTAT GTCGAAATCG TTGATGACCT
-----
• G W V R Q M P G K G L E W M G I 101 TCGGCTGGGT GCGCCAGATG CCCGGGAAAG GCCTGGAGTG GATGGGGATC AGCCGACCCA CGCGGTCTAC GGGCCCTTTC CGGACCTCAC CTACCCCTAG
CDR2
IDPS NSY TRY SPSF QGQ- 151 ATCGACCCTÀ GCAACTCTTA CACCAGATAC AGCCCGTCCT TCCAAGGCCA TAGCTGGGAT CGTTGAGAAT GTGGTCTATG TCGGGCAGGA AGGTTCCGGT
-VTI SADK SIS TAY LQWS 201 GGTCACCATC TCAGCCGACA AGTCCATCAG CACCGCCTAC CTGCAGTGGA CCAGTGGTAG AGTCGGCTGT TCAGGTAGTC GTGGCGGATG GACGTCACCT
-SLK ASD TAMY YCA RWY
251 GCAGCCTGAA GGCCTCGGAC ACCGCCATGT ATTACTGTGC GAGATGGTAC CGTCGGACTT CCGGAGCCTG TGGCGGTACA TAATGACACG CTCTACCATG
CDR3
YKP F DVW GQG TLVT VSS- TACAAGCCCT TCGACGTGTG GGGCCAGGGC ACCCTGGTGA CCGTGAGCAG ATGTTCGGGA AGCTGCACAC CCCGGTCCCG TGGGACCACT GGCACTCGTC IL-23 pl9 375EQ/0S VH-HCO (SEQ ID N0:140): (Seqüência de aminoácido VH é 4649rE)
EVQL VQS GAE VKKP GES- 1 GAGGTGCAGC TGGTGCAGAG CGGCGCCGAG GTGAAGAAGC CCGGCGAGAG CTCCACGTCG ACCACGTCTC GCCGCGGCTC CACTTCTTCG GGCCGCTCTC
CDRl
• L K I SCKG SGY SFS NYWI- 51 CCTGAAGATC AGCTGCAAGG GCAGCGGCTA CAGCTTCAGC AACTACTGGA GGACTTCTAG TCGACGTTCC CGTCGCCGAT GTCGAAGTCG TTGATGACCT GWV RQM PGKG LEW MGI
101 TCGGCTGGGT GCGCCAGATG CCCGGCAAGG GCCTGGAGTG GATGGGCATC AGCCGACCCA CGCGGTCTAC GGGCCGTTCC CGGACCTCAC CTACCCGTAG
CDR2
IDPS NSY TRY SPSF QGQ 151 ATCGACCCCA GCAACAGCTA CACCCGCTAC AGCCCCAGCT TCCAGGGCCA TAGCTGGGGT CGTTGTCGAT GTGGGCGATG TCGGGGTCGA. AGGTCCCGGT
-VTI SADK SIS TAY LQWS
201 GGTGACCATC AGCGCCGACA AGAGCATCAG CACCGCCTAC CTGCAGTGGA CCACTGGTAG TCGCGGCTGT TCTCGTAGTC GTGGCGGATG GACGTCACCT
• SLK ASD TAMY YCA RWY 251 GCAGCCTGAA GGCCAGCGAC ACCGCCATGT ACTACTGCGC CCGCTGGTAC CGTCGGACTT CCGGTCGCTG TGGCGGTACA TGATGACGCG GGCGACCATG
CDR3
YKPF D VW GQG TLVT VSS 301 TACAAGCCCT TCGACGTGTG GGGCCAGGGC ACCCTGGTGA CCGTGAGCAG ATGTTCGGGA AGCTGCACAC CCCGGTCCCG TGGGACCACT GGCACTCGTC
-S
351 C G IL-23 pl9 3759EQ/QS VH-MOR (SEQ ID NO:141): (Seqüência de aminoácido VH é 4649rE)
EVQL VQS GAE VKKP GES- 1 GAGGTGCAAT TGGTTCAGAG CGGCGCGGAA GTGAAAAAAC CGGGCGAAAG CTCCACGTTA ACCAAGTCTC GCCGCGCCTT CACTTTTTTG GCCGGCTTTC
CDRl
• L K I SCKG SGY SFS NYWI- 51 CCTGAAAATT AGCTGCAAAG GTTCCGGATA TTCCTTTTCT AATTATTGGA GGACTTTTAA TCGACGTTTC CAAGGCCTAT AAGGAAAAGA TTAATAACCT
• GWV RQM PGKG LEW MGI 101 TTGGTTGGGT GCGCCAGATG CCTGGGAAGG GTCTCGAGTG GATGGGCATT AACCAACCCA CGCGGTCTAC GGACCCTTCC CAGAGCTCAC CTACCCGTAA
CDR2
IDPS NSY TRY SPSF QGQ- 151 ATCGATCCGT CTAATAGCTA TACCCGCTAT TCTCCGAGCT TTCAGGGCCA TAGCTAGGCA GATTATCGAT ATGGGCGATA AGAGGCTCGA AAGTCCCGGT
• V T I SADK SIS TAY LQWS 201 GGTGACCATT AGCGCGGATA AAAGCATTAG CACCGCGTAT CTTCAATGGA CCACTGGTAA TCGCGCCTAT TTTCGTAATC GTGGCGCATA GAAGTTACCT
• SLK ASD T AMY YC A R WY 251 GCAGCCTGAA AGCGAGCGAT ACGGCCATGT ATTATTGCGC GCGTTGGTAT CGTCGGACTT TCGCTCGCTA TGCCGGTACA TAATAACGCG CGCAACCATA
CDR3
YKPF DVW GQ G TLVT VSS 301 TATAAGCCTT TTGATGTTTG GGGCCAAGGC ACCCTGGTGA CGGTTAGCTC ATATTCGGAA AACTACAAAC CCCGGTTCCG TGGGACCACT GCCAATCGAG
• S 351 A T IL-23 pl9 3759EQ/QS VL-GCE (SEQ ID NO:142): (Seqüência de aminoácido VL é 5059M)
QSVL TQP PSV SGAP GQR- 1 CAGTCTGTGC TGACGCAGCC GCCCTCAGTG TCTGGGGCCC CAGGGCAGAG GTCAGACACG ACTGCGTCGG CGGGAGTCAC AGACCCCGGG GTCCCGTCTC
CDRl
VTI SCTG SSS NIG SGYD
51 GGTCACCATC TCCTGCACTG GGAGCAGCTC CAACATCGGG AGCGGTTATG CCAGTGGTAG AGGACGTGAC CCTCGTCGAG GTTGTAGCCC TCGCCAATAC
VHW YQQ LPGT APK LLI 101 ATGTACACTG GTACCAGCAG CTTCCAGGAA CAGCCCCCAA ACTCCTCATC TACATGTGAC CATGGTCGTC GAAGGTCCTT GTCGGGGGTT TGAGGAGTAG
CDR2
YGNS KRP SGV PDRF SGS- 151 TATGGTAACA GCAAGCGGCC CTCAGGGGTC CCTGACCGAT TCTCTGGCTC ATACCATTGT CGTTCGCCGG GAGTCCCCAG GGACTGGCTA AGAGACCGAG
-KSG TSAS LAI TGL QSED 201 CAAGTCTGGC ACCTCAGCCT CCCTGGCCAT CACTGGGCTC CAGAGCGAGG GTTCAGACCG TGGAGTCGGA GGGACCGGTA GTGACCCGAG GTCTCGCTCC
CDR3
EAD YYC A SWT DGL SLV 251 ATGAGGCTGA TTATTACTGC GCCAGCTGGA CCGACGGCCT GAGCCTGGTG TACTCCGACT AATAATGACG CGGTCGACCT GGCTGCCGGA CTCGGACCAC
VFGG G TK LTV LG 301 GTGTTCGGCG GCGGCACCAA GCTGACCGTG CTGGGC CACAAGCCGC CGCCGTGGTT CGACTGGCAC GACCCG IL-23 pl9 3759™'°' VL-HCO (SEQ ID NO-.143): (Seqüência de aminoácido VL é 505903)
QSVL TQP PSV SGAP GQR- 1 CAGAGCGTGC TGACCCAGCC CCCCAGCGTG AGCGGCGCCC CCGGCCAGCG GTCTCGCACG ACTGGGTCGG GGGGTCGCAC TCGCCGCGGG GGCCGGTCGC
CDRl
•VTI SCTG SSS NIG SGYD 51 CGTGACCATC AGCTGCACCG GCAGCAGCAG CAACATCGGC AGCGGCTACG GCACTGGTAG TCGACGTGGC CGTCGTCGTC GTTGTAGCCG TCGCCGATGC
-Vhwyqqlpgtapklli
101 ACGTGCACTG GTACCAGCAG CTGCCCGGCA CCGCCCCCAA GCTGCTGATC TGCACGTGAC CATGGTCGTC GACGGGCCGT GGCGGGGGTT CGACGACTAG
CDR2
YGNS KRP SGV PDRF SGS- 151 TACGGCAACÀ GCAAGCGCCC CAGCGGCGTG CCCGACCGCT TCAGCGGCAG ATGCCGTTGT CGTTCGCGGG GTCGCCGCAC GGGCTGGCGA AGTCGCCGTC -KSG TSAS LAI TGL QSED CAAGAGCGGC ACCAGCGCCA GCCTGGCCAT CACCGGCCTC CAGAGCGAGG GTTCTCGCCG TGGTCGCGGT CGGACCGGTA GTGGCCGGAG GTCTCGCTCC
CDR3
-EAD YYC ASWT DGL SLV
251 ACGAGGCCGA CTACTACTGT GCCAGCTGGA CCGACGGCCT GAGCCTGGTG TGCTCCGGCT GATGATGACA CGGTCGACCT GGCTGCCGGA CTCGGACCAC
VFGG GTK LTV LG
301 GTGTTCGGCG GCGGCACCAA GCTGACCGTG CTGGGC CACAAGCCGC CGCCGTGGTT CGACTGGÇAC GACCCG IL-23 p19 3759EQ/QS VL-MOR (SEQ ID NO:144): (Seqüência de aminoácido VL é 5059QS)
QSVL TQP PSV SGAP GQR- 1 CAGAGCGTGC TGACCCAGCC GCCTTCAGTG AGTGGCGCAC CAGGTCAGCG GTCTCGCACG ACTGGGTCGG CGGAAGTCAC TCACCGCGTG GTCCAGTCGC
CDRl
-VTI SCTG SSS NI G SGYD 51 TGTGACCATC TCGTGTACGG GCAGCAGCAG CAACATTGGT TCTGGTTATG ACACTGGTAG AGCACATGCC CGTCGTCGTC GTTGTAACCA AGACCAATAC
• VHW YQQ LPGT APK LLI 101 ATGTGCATTG GTACCAGCAG TTGCCCGGGA CGGCGCCGAA ACTTCTGATT TACACGTAAC CATGGTCGTC AACGGGCCCT GCCGCGGCTT TGAAGACTAA
CDR2
YGNS KRP SGV PDRF SGS- 151 TATGGTAATT CTAAGCGTCC CTCAGGCGTG CCGGATCGTT TTAGCGGATC ATACCATTAA GATTCGCAGG GAGTCCGCAC GGCCTAGCAA AATCGCCTAG -KSG T SAS LAI TG L QSED 201 CAAAAGCGGC ACCAGCGCGA GCCTTGCGAT TACGGGCCTG CAAAGCGAAG GTTTTCGCCG TGGTCGCGCT CGGAACGCTA ATGCCCGGAC GTTTCGCTTC
CDR3
• EAD YYC ASWT DGL SLV 251 ACGAAGCGGA TTATTATTGC GCTTCTTGGA CTGATGGTCT TTCTCTTGTT TGCTTCGCCT AATAATAACG CGAAGAACCT GACTACCAGA AAGAGAACAA
VFGG GTK LTV LG 301 GTGTTTGGCG GCGGCACGAA GTTAACCGTT CTTGGC
CACAAACCGC CGCCGTGCTT CAATTGGCAA GAACCG
Tabela 10
SEQ ID NO: 145 (subunidade de IL-23p19 humana)
Met Leu Gly Ser Arg Ala Val Met Leu Leu Leu Leu Leu Pro Trp Thr 1 5 10 15
Ala Gln Gly Arg Ala Val Pro Gly Gly Ser Ser Pro Ala Trp Thr Gln 20 25 30
Cys Gln Gln Leu Ser Gln Lys Leu Cys Thr Leu Ala Trp Ser Ala His
35 40 45
Pro Leu Val Gly His Met Asp Leu Arg Glu Glu Gly Asp Glu Glu Thr
50 55 60
Thr Asn Asp Val Pro His Ile Gln Cys Gly Asp Gly Cys Asp Pro Gln
65 70 75 80
Gly Leu Arg Asp Asn Ser Gln Phe Cys Leu Gln Arg Ile His Gln Gly
85 90 95
Leu Ile Phe Tyr Glu Lys Leu Leu Gly Ser Asp Ile Phe Thr Gly Glu 100 105 110
Pro Ser Leu Leu Pro Asp Ser Pro Val Ala Gln Leu His Ala Ser Leu
115 120 125
Leu Gly Leu Ser Gln Leu Leu Gln Pro Glu Gly His His Trp Glu Thr 130 135 140
Gln Gln Ile Pro Ser Leu Ser Pro Ser Gln Pro Trp Gln Arg Leu Leu 145 150 155 160
Leu Arg Phe Lys Ile Leu Arg Ser Leu Gln Ala Phe Val Ala Val Ala
165 170 175
Ala Arg Val Phe Ala His Gly Ala Ala Thr Leu Ser Pro 180 185 Listagem de Seqüência
<110> CENTOCOR, INC.
<120> ANTICORPOS ANTI-IL-23 HUMANOS, COMPOSIÇÕES, MÉTODOS E USO
<130> CEN5117PCT <140> PCT/US2006/062674 <141> 2006-12-28 <150> 60/754,889 <151> 2005-12-29 <160> 147
<170> FastSEQ para Windows Versão 4.0 <210> 1 <211> 5 <212> PRT
<213> Homo sapiens <400> 1
Asn Tyr Ala Ile Ser 1 5
<210> 2 <211> 5 <212> PRT <213> Homo sapiens <400>2 Ser Asn Tyr Ile Ser 15 <210> 3 <211> 5 <212> PRT <213> Homo sapiens <400>3
Asn Tyr Trp Ile Ser 1 5
<210>4 <211> 5 <212> PRT <213> Homo sapiens <400>4
Ser Tyr Trp Ile Thr 1 5
<210>5 <211> 5 <212> PRT <213> Homo sapiens <400>5
Asn Tyr Trp Ile Gly 1 5
<210> 6 <211> 5 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 6
Ser Phe Gly Met Ser 15 <210> 7 <211> 17 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 7
Gly Ile Ile Pro Met Phe Gly Tyr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe Gln 1 5 10 15
Gly <210>8 <211> 17 <212> PRT <213> Homo sapiens <400>8
Gly Ile Ile Pro Val Phe Gly Phe Thr His Tyr Ala Gln Lys Phe Gln 1 5 10 15
Gly
<210> 9 <211> 17 <212> PRT <213> Homo sapiens <400>9
Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly His Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe Gln 1 5 10 15
Gly
<210> 10 <211> 17 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 10
Ile Ile Ile Pro Pro Ile Gly Asn Ala Trp Tyr Ala Gln Lys Phe Gln 15 10 15
Gly <210> 11 <211> 17 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 11
Leu Ile Asp Pro Asn Phe Gly Gly Ala Tyr Tyr Ala Gln Lys Phe Gln 1 5 10 15
Gly <210> 12 <211> 17 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 12
Leu Ile Asp Pro Val Phe Gly Gly Ala Tyr Tyr Ala Gln Lys Phe Gln 1 5 10 15
Gly
<210> 13 <211> 17 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 13
Leu Ile Asp Pro Met Phe Gly Gly Ala Tyr Tyr Ala Gln Lys Phe Gln 15 10 15
Gly
<210> 14 <211> 16 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 14
Ile Asn Ala His Leu Gly Gly Thr Trp Tyr Ala Gln Lys Phe Gln Gly 1 5 10 15
<210> 15 <211> 17 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 15
Ile Ser Pro Gly Thr Gly Ile Asn Ala Tyr Tyr Ala Gln Lys Phe Gln 1 5 10 15
Gly <210> 16 <211> 17 <212> PRT
<213> Seqüência Artificial <220>
<223> Seqüência Humana Sintetizada <220>
<221> inseguro <222> (1)
<223> Onde Xaa pode ser G, I, ou L <220> <221> inseguro <222> (2)
<223> Onde Xaa pode ser I ou S <220>
<221> inseguro <222> (3)
<223> Onde Xaa pode ser I, Ρ, N, ou D <220>
<221> inseguro <222> (4) <223> Onde Xaa pode ser Ρ, G, ou A <220>
<221> inseguro <222> (5) <223> Onde Xaa pode ser I, Μ, P, <223> Τ, Η, N, óu V <220>
<221> inseguro <222> (6)
<223> Onde Xaa pode ser F, I, G; ou L <220>
<221> inseguro <222> (7)
<223> Onde Xaa pode ser G ou I <220>
<221> inseguro <222> (8)
<223> Onde Xaa pode ser Η, Υ, N, ou G <220> <221> inseguro <222> (9)
<223> Onde Xaa pode ser A ou T <220>
<221> inseguro <222> (10)
<223> Onde Xaa pode ser N, W, ou Y <400> 16
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Tyr Ala Gln Lys Phe Gln 15 10 15
Gly
<210> 17 <211> 17 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 17
Trp Ile Arg Pro Gly Asp Ser Asp Thr Arg Tyr Ser Pro Ser Phe Glu 1 5 10 15
Gly <210> 18 <211> 19 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 18
Val Ser Tyr Ile Ser Ser Ser Gly Ser Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser 1 5 10 15
ValLysGly <210> 19 <211> 17 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 19
Ile Ile Asp Pro Ser Asn Ser Tyr Thr Asn Tyr Ser Pro Ser Phe Gln 1 5 10 15
Gly
<210> 20 <211> 17 <212> PRT
<213> Homo sapiens <400> 20
Ile Ile Asp Pro Ser Asn Ser Tyr Thr Arg Tyr Ser Pro Ser Phe Gln 1 5 10 15
Gly
<210> 21 <211> 17 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 21
Ile Ue Asp Pro Ser Asn Ser Tyr Thr Asp Tyr Ser Pro Ser Phe Gln 1 5 10 15
Gly <210> 22 <211> 17 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 22
Ile Ile Ser Pro Thr Gly Ser Val Thr Trp Tyr Ser Pro Ser Phe Gln 1 5 10 15
Gly
<210> 23 <211> 17 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 23
Ile Ile Ser Pro Thr Gly Ser Ser Thr Trp Tyr Ser Pro Ser Phe Gln 1 5 10 15
Gly
<210> 24 <211> 17 <212> PRT
<213> Homo sapiens <400> 24
Phe Ile Ser Pro Asp Gly Ser His Thr Trp Tyr Ser Pro Ser Phe Gln 1 5 10 15
Gly
<210> 25 <211> 17 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 25
Ile Ile Ser Pro Ser Gly Ser Thr Thr Trp Tyr Ser Pro Ser Phe Gln 15 10 15
Gly <210> 26 <211> 17 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 26
Ile Ile Ser Pro Thr Gly Ser Ala Thr Trp Tyr Ser Pro Ser Phe Gln 1 5 10 15
Gly
<210> 27 <211> 17 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 27
Ile Ile Asp Pro Val Ser Ser Trp Thr Lys Tyr Ser Pro Ser Phe Gln 15 10 15
Gly
<210> 28 <211> 17 <212> PRT
<213> Seqüência Artificial <220>
<223> Seqüência Humana Sintetizada <220>
<221> inseguro <222> (3) <223> Onde Xaa pode ser D ou S <220> <221> inseguro <222> (5)
<223> Onde Xaa pode ser S, V, D, ou T <220>
<221> inseguro <222> (6)
<223> Onde Xaa pode ser N, S, ou G <220> <221> inseguro <222> (8)
<223> Onde Xaa pode ser Y, W, Τ, Η, V, S, ou A <220>
<221> inseguro <222> (10)
<223> Onde Xaa pode ser N, D, R, K, ou W <400> 28
Ile Ile Xaa Pro Xaa Xaa Ser Xaa Thr Xaa Tyr Ser Pro Ser Phe Gln 1 5 10 15 Gly
<210> 29 <211> 17 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 29
Asn Ile Ser Ser Ser Gly Ser Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15
Gly
<210> 30 <211> 19 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 30
Asn Ile Glu His Lys Tyr Leu Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Ala Ser 15 10 15
Val Lys Gly <210> 31 <211> 19 <212> PRT
<213> Homo sapiens <400> 31
Asn Ile Glu His Lys Phe Met Gly Tyr Thr Thr Tyr Tyr Ala Ala Gly 1 5 10 15
Val Lys Gly <210> 32 <211> 19 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 32
Gly Ile Glu His Lys Tyr Leu Ser Tyr Thr Thr His Tyr Ala Ala Ser 1 5 10 15
Val Lys Gly <210> 33 <211> 19 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 33
Ser De Glu His Lys Tyr Thr Gly Tyr Thr Thr Tyr Tyr Ala Ala Pro 1 5 10 15
Val Lys Gly <210> 34 <211> 19 <212> PRT <213 > Homo sapiens <400> 34
Gln De Glu His Lys Tyr Leu Ser Tyr Thr Thr Leu Tyr Ala Ala Ser 1 5 10 15
Val Lys Gly <210> 35 <211> 19 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 35
Ser Ile Glu His Lys Tyr Leu Ser Tyr Thr Thr Phe Tyr Ala Ala Ser 15 10 15
Val Lys Gly <210> 36 <211> 19 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 36
Asn Ile Glu Gly Lys Tyr Thr Ser Tyr Thr Thr Tyr Tyr Ala Ala Ser 1 5 10 15
Val Lys Gly <210> 37 <211> 19 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 37
Gly Ile Glu His Lys Tyr Leu Ser Tyr Ala Thr Leu Tyr Ala Ala Ser 1 5 10 15
Val Lys Gly <210> 38 <211> 19 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 38
Asn Ile Glu His Lys Tyr Leu Gly Tyr Ala Thr Val Tyr Ala Ala Ser 1 5 10 15
Val Lys Gly <210> 39 <211> 19 <212> PRT
<213> Homo sapiens <400> 39
Ser Ile Glu His Lys Tyr Leu Ser Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Ala Gly 1 5 10 15
Val Lys Gly <210> 40 <211> 8 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 40
Asp He Tyr Ala Gly Met Asp Val 1 5
<210> 41 <211> 18 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 41
Ser Lys Lys Gly Met Tyr Gly Gly Trp Thr Tyr Pro Leu Met Met Phe 15 10 15
Asp Leu
<210> 42 <211> 7 <212> PRT
<213> Homo sapiens <400> 42
His Tyr Tyr Gly Met Asp Tyr 1 5
<210> 43 <211> 12 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 43
Gly Thr Phe Trp Ser Phe Gly Asn Tyr Phe Ala Asn 1 5 10
<210> 44 <211> 8 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 44
Trp Tyr Tyr Lys Pro Phe Asp Val 1 5
<210> 45 <211> 12 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 45
Tyr Trp Gly Thr Pro Tyr Leu Met Gln Phe Asp Asn 1 5 10
<210> 46 <211> 12 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 46
Arg Ala Ser Gln Ser Val Leu Gly Asn Tyr Leu Ala 1 5 10
<210> 47 <211> 12 <212> PRT
<213> Homo sapiens <400> 47
Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Asn Tyr Leu Ala 1 5 10 <210> 48 <211> 13 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 48
Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Tyr Tyr Val Asn 1 5 10
<210> 49 <211> 11 <212> PRT
<213> Homo sapiens <400> 49
Arg Ala Ser Gln Ser Ile Phe Tyr Asn Leu Ala 1 5 10
<210> 50 <211> 14 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 50
Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Gly Tyr Asp Val His 15 10
<210> 51 <211> 14 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 51
Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Gly Tyr Asn Ser Val Ser 1 5 10
<210> 52 <211> 7 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 52
Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr 1 5
<210> 53 <211> 7 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 53
Tyr Ala Ser Arg Arg Ala Thr 1 5
<210> 54 <211> 7 <212> PRT
<213> Homo sapiens <400> 54
Gly Asn Thr His Arg Pro Ser 1 5 <210> 55 <211> 7 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 55
Gly Ala Ser Asn Arg Ala Thr 1 5
<210> 56 <211> 7 <212> PRT
<213> Homo sapiens <400> 56
Gly Asn Ser Lys Arg Pro Ser 1 5
<210> 57 <211> 7 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 57 Ser Val Ser Ser Arg Pro Ser 1 5
<210> 58 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 58
His Gln Tyr Gly Ser Ile Ser Thr Thr 1 5
<210> 59 <211> 9 <212> PRT 1 <213> Homo sapiens <400> 59
Gln Gln Tyr Ser His Leu Leu Ile Thr 1 5
<210> 60 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 60
Gln Gln Tyr Ser His Ile Ser Leu Thr 1 5
<210> 61 <211> 9 <212> PRT
<213> Homo sapiens <400> 61
Gln Gln Phe Ala His De Leu Leu Thr 1 5 <210> 62 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 62
Gln Gln Thr Ser Asn Thr Pro Phe Thr 1 5
<210> 63 <211> 9 <212> PRT
<213> Homo sapiens <400> 63
Gln Gln Phe Ile Thr Tyr Leu Pro Thr 1 5
<210> 64 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 64
Gln Gln Asp Ala Leu Ser Pro Phe Thr 15 <210> 65 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 65
Gln Gln Asp Arg Gly Thr Pro Phe Thr 1 5
<210> 66 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 66
Gln Gln Ser Leu Asn Ile Pro Phe Thr 1 5
<210> 67 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 67
Gln Gln Asp Thr Ser Ser Pro Phe Thr 1 5
<210> 68 <211> 10 <212> PRT
<213> Seqüência Artificial <220>
<223> Seqüência Humana Sintetizada <220> <221> inseguro
<222> (3)
<223> Onde Xaa pode ser Τ, F, D, ou S
<220>
<221> inseguro
<222> (4)
<223> Onde Xaa pode ser S, I, A, T, R, ou L
<220>
<221> inseguro
<222> (5)
<223> Onde Xaa pode serN, T, L, S, ou G
<220>
<221> inseguro
<222> (6)
<223> Onde Xaa pode ser Τ, Y, S, ou I
<220>
<221> inseguro
<222> (7)
<223> Onde Xaa pode ser P ou L
<220>
<221> inseguro
<222> (8)
<223> Onde Xaa pode ser F ou P
<400> 68
Gln Gln Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Phe Thr 1 5 10
<210> 69
<211> 11
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 69
Gln Thr Tyr Ala Ser Leu Gly Pro Gly Glu Val 1 5 10
<210> 70
<211> 9
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 70
Gln Gln Tyr Ser Ser Glu Pro Val Thr 1 5
<210> 71
<211>9
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 71
Ser Ser Trp Thr Pro Ser Ser Val Val 1 5
<210> 72
<211> 11 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 72
Ser Ser Trp Thr Asp Thr Pro Asn Met Ile Val 1 5 10
<210> 73 <211> 11 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 73
Ala Ser Trp Thr Asp Gly Leu Ser Leu Val Val 1 5 10
<210> 74 <211> 11 <212> PRT
<213> Seqüência Artificial <220>
<223> Seqüência Humana Sintetizada <220> <221> inseguro <222> (1)
<223> Onde Xaa pode ser S ou A <220>
<221> inseguro <222> (6)
<223> Onde Xaa pode ser T ou G <220>
<221> inseguro <222> (7) <223> Onde Xaa pode ser P ou L <220>
<221> inseguro <222> (8)
<223> Onde Xaa pode ser S ou N <220>
<221> inseguro <222> (9)
<223> Onde Xaa pode ser S, Μ, ou L <220> <221> inseguro <222> (10)
<223> Onde Xaa pode ser I ou V <400> 74
Xaa Ser Trp Thr Asp Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Val 1 5 10
<210> 75 <211> 11 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 75
Ser Ser Tyr Asp Thr Asn Lys Pro Leu Val Val 1 5 10
<210> 76 <211> 11 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 76
Gly Ser Tyr Asp Val Tyr Gly Arg Phe Tyr Val 15 10
<210> 77 <211> 11 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 77
Ser Ser Tyr Tyr Phe Tyr Leu Gln Arg Ile Val 1 5 10
<210> 78 <211> 11 <212> PRT
<213> Homo sapiens <400> 78
Gln Thr Tyr Tyr Phe Ser Tyr Ser Gly Pro Val 1 5 10
<210> 79 <211> 11 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 79
Gly Ser Trp Asp Pro Ile Phe Ser Tyr Glu Val 1 5 10
<210> 80 <211> 117 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 80
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Asn Tyr 20 25 30
Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Gly Ile Ile Pro Met Phe Gly Tyr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60
GlnGlyArgvalThrlleThrAlaAspGluSerThrSerThrAlaTyr 65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Ile Tyr Ala Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115 <210> 81 <211>117 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 81
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45
Gly Gly Ile Ile Pro Val Phe Gly Phe Thr His Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Arg Asp Ile Tyr Ala Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
ValThrValSerSer 115
<210> 82 <211> 108 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 82
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 15 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Leu Gly Asn
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu 35 40 45
Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu 65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys His Gln Tyr Gly Ser Ile Ser 85 90 95
Thr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 83 <211> 108 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 83
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 15 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Leu Gly Asn
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu 35 40 45
Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu 65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ser His Ile Ser 85 90 95
Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 84 <211> 108 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 84
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Leu Gly Asn
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu 35 40 45
Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser 50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu 65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ser His Leu Ile 85 90 95
Ile Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 85 <211> 108 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 85
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Leu Gly Asn 20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser 50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu 65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Ala His Ile Leu 85 90 95 Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105
<210> 86 <211> 127 <212> PRT
<213> Homo sapiens <400> 86
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 15 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Asn 20 25 30
Tyr Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly His Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Arg Ser Lys Lys Gly Met Tyr Gly Gly Trp Thr Tyr Pro Leu Met 100 105 110
Met Phe Asp Leu Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 87 <211> 127 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 87
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Asn 20 25 30
Tyr Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45
Gly Ile Ile Ile Pro Pro Ile Gly Asn Ala Trp Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Arg Ser Lys Lys Gly Met Tyr Gly Gly Trp Thr Tyr Pro Leu Met
100 105 110
Met Phe Asp Leu Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 125
<210> 88 <211> 127 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 88 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Asn 20 25 30
Tyr Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45
Gly Ile Ser Pro Gly Thr Gly Ile Asn Ala Tyr Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ser Lys Lys Gly Met Tyr Gly Gly Trp Thr Tyr Pro Leu Met 100 105 110
Met Phe Asp Leu Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 125
<210> 89 <211> 126 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 89
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Asn 20 25 30
Tyr Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Ile Asn Ala His Leu Gly Gly Thr Trp Tyr Ala Gln Lys Phe Gln 50 55 60
Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Met 65 70 75 80
Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95
Arg Ser Lys Lys Gly Met Tyr Gly Gly Trp Thr Tyr Pro Leu Met Met 100 105 110
Phe Asp Leu Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 90 <211> 127 <212> PRT
<213> Homo sapiens <400> 90
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 15 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Asn 20 25 30
Tyr Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Leu Ile Asp Pro Asn Phe Gly Gly Ala Tyr Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Arg Ser Lys Lys Gly Met Tyr Gly Gly Trp Thr Tyr Pro Leu Met
100 105 110
Met Phe Asp Leu Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 125
<210> 91 <211> 127 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 91
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Asn
20 25 30
Tyr Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45
Gly Leu Ile Asp Pro Val Phe Gly Gly Ala Tyr Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Arg Ser Lys Lys Gly Met Tyr Gly Gly Trp Thr Tyr Pro Leu Met
100 105 110
Met Phe Asp Leu Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 125
<210> 92 <211> 127 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 92
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Asn 20 25 30
Tyr Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45
Gly Leu Ile Asp Pro Met Phe Gly Gly Ala Tyr Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ser Lys Lys Gly Met Tyr Gly Gly Trp Thr Tyr Pro Leu Met 100 105 110 Met Phe Asp Leu Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Yal Ser Ser
115 120 125
<210> 93 <211> 108 <212> PRT
<213> Homo sapiens <400> 93
Asp De Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 15 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Asn 20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Tyr Ala Ser Arg Arg Ala Thr Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser 50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu 65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Thr Ser Asn Thr Pro 85 90 95
Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105
<210> 94 <211> 108 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 94
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Asn 20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Tyr Ala Ser Arg Arg Ala Thr Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser 50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr. Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu 65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Thr Ser Asn Thr Pro
85 90 95
Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105
<210> 95 <211> 108 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 95
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 15 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Asn 20 25 30 Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
35 40 45
Ile Tyr Tyr Ala Ser Arg Arg Ala Thr Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser 50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu 65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Ile Thr Tyr Leu
85 90 95
Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105
<210> 96 <211> 108 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 96
Asp De Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Asn 25 30
20 Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu 35 40 45
Ile Tyr Tyr Ala Ser Arg Arg Ala Thr Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu 65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Asp Ala Leu Ser Pro
85 90 95
Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105
<210> 97 <211> 108 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 97
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Asn
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu 35 40 45
Ile Tyr Tyr Ala Ser Arg Arg Ala Thr Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu 65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Asp Arg Gly Thr Pro 85 90 95
Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 98 <211> 108 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 98
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Asn
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu 35 40 45
Ile Tyr Tyr Ala Ser Arg Arg Ala Thr Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu 65 70 , 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Leu Asn Ile Pro 85 90 95
Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 99 <211> 116 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 99
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu 1 5 10 15
Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Trp Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45
Gly Trp Ile Arg Pro Gly Asp Ser Asp Thr Arg Tyr Ser Pro Ser Phe 50 55 60
• Glu Gly Gln Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80
Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Arg His Tyr Tyr Gly Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser 115
<210> 100 <211>110 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 100
Asp Ile Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Gly Ala Pro Gly Gln 1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Tyr
20 25 30
Tyr Val Asn Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu 35 40 45
De Tyr Gly Asn Thr His Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Thr Gly Leu Gln 65 70 75 80
Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Thr Tyr Ala Ser Leu Gly
85 90 95
Pro Gly Glu Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105 110
<210> 101 <211> 121 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 101
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Trp Ile Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45
Ser Tyr Ile Ser Ser Ser Gly Ser Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Arg Gly Thr Phe Trp Ser Phe Gly Asn Tyr Phe Ala Asn Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120
<210> 102 <211> 107 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 102
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly 15 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Phe Tyr Asn 20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile 35 40 45
Tyr Gly Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro 65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ser Ser Glu Pro Val
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 103 <211> 117 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 103
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu 1 5 10 15
Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe Ser Asn Tyr 20 25 30
10 Trp Ile Gly Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45
Gly Ile Ile Asp Pro Ser Asn Ser Tyr Thr Asn Tyr Ser Pro Ser Phe
50 55 60
Gln Gly Gln Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80
Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Trp Tyr Tyr Lys Pro Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110
Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 104 <211> 117 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 104
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu 1 5 10 15
Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe Ser Asn Tyr 30 20 25 30
Trp Ile Gly Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Ile Ile Asp Pro Ser Asn Ser Tyr Thr Asp Tyr Ser Pro Ser Phe 50 55 60
35 Gln Gly Gln Val Thr Ile ,Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80
Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Trp Tyr Tyr Lys Pro Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Leu 40 100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115 <210> 105 <211> 117 <212> PRT
<213> Homo sapiens <400> 105
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu 1 5 10 15 Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Trp Ile Gly Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45
Gly Ile Ile Asp Pro Ser Asn Ser Tyr Thr Arg Tyr Ser Pro Ser Phe 50 55 60
Gln Gly Gln Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80
Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Arg Trp Tyr Tyr Lys Pro Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser 115
<210> 106 <211>117 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 106
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu 15 10 15
Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Trp Ile Gly Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45
Gly Ile Ile Asp Pro Ser Asn Ser Tyr Thr Arg Tyr Ser Pro Ser Phe
50 55 60
Gln Gly Gln Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80
Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Arg Trp Tyr Tyr Lys Pro Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser 115
<210> 107 <211>117 <212> PRT <213> Homo sapiens 40 <400> 107
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu 1 5 10 15
Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe Ser Asn Tyr 20 25 30
45 Trp Ile Gly Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met 40 45
Gly Ile Ile Asp Pro Val Ser Ser Trp Thr Lys Tyr Ser Pro Ser Phe
50 55 60
Gln Gly Gln Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80
Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Trp Tyr Tyr Lys Pro Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115 <210> 108 <211> 117 <212> PRT
<213> Homo sapiens <400> 108
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu 1 5 10 15
15 Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe Ser Asn Tyr 20 25 30
Trp Ile Gly Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Ile Ile Ser Pro Ser Gly Ser Thr Thr Trp Tyr Ser Pro Ser Phe 50 55 60
Gln Gly Gln Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80
Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Arg Trp Tyr Tyr Lys Pro Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115 <210> 109 <211> 117 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 109
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu 1 5 10 15
Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Trp Ile Gly Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45
40 Gly Phe Ile Ser Pro Asp Gly Ser His Thr Trp Tyr Ser Pro Ser Phe 50 55 60
Gln Gly Gln Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80
Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys 45 85 90 95
Ala Arg Trp Tyr Tyr Lys Pro Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 110 <211> 117 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 110
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu 1 5 10 15
Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe Ser Asn Tyr 20 25 30
Trp Ile Gly Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45
Gly Ile Ile Ser Pro Thr Gly Ser Val Thr Trp Tyr Ser Pro Ser Phe
50 55 60
Gln Gly Gln Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80
Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Trp Tyr Tyr Lys Pro Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110
Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 111 <211>117 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 111
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu 1 5 10 15
Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe Ser Asn Tyr 20 25 30
Trp Ile Gly Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Ile Ile Ser Pro Thr Gly Ser Ser Thr Trp Tyr Ser Pro Ser Phe 50 55 60
Gln Gly Gln Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80
Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Trp Tyr Tyr Lys Pro Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Leu 100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115 <210> 112 <211> 117 <212> PRT
<213> Homo sapiens <400> 112
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu 1 5 10 15 Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Trp Ile Gly Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45
Gly Ile Ile Ser Pro Thr Gly Ser Ala Thr Trp Tyr Ser Pro Ser Phe 50 55 60
Gln Gly Gln Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80
Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Arg Trp Tyr Tyr Lys Pro Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser 115
<210> 113 <211> 109 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 113
Asp Ile Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Gly Ala Pro Gly Gln 15 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Gly
20 25 30
Tyr Asp Val His Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu 35 40 45
Leu Ile Tyr Gly Asn Ser Lys Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Thr Gly Leu 65 70 75 80
Gln Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Trp Thr Pro Ser 85 90 95
• Ser Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105
<210> 114 <211> 111 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 114
Asp Ile Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Gly Ala Pro Gly Gln 1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Gly
20 25 30
Tyr Asp Val His Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu 35 40 45
45 Leu Ile Tyr Gly Asn Ser Lys Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe 50 55 60
Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Thr Gly Leu 65 70 75 80
Gln Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Trp Thr Asp Thr 85 90 95
Pro Asn Met He Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100 105 110
<210> 115 <211> 111 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 115
Asp Ile Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Gly Ala Pro Gly Gln 1 5 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Gly
20 25 30
Tyr Asp Val His Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu 35 40 45
Leu Ile Tyr Gly Asn Ser Lys Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe 50 55 60
Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Thr Gly Leu 65 70 75 80
Gln Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ser Trp Thr Asp Gly 85 90 95
Leu Ser Leu Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
100 105 110
<210> 116 <211> 111 <212> PRT
<213> Homo sapiens <400> 116
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Gly Ala Pro Gly Gln 15 10 15
Arg Val Thr Ile Ser Cys Thr Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Gly 20 25 30
Tyr Asp Val His Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu
35 40 45
Leu Ile Tyr Gly Asn Ser Lys Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe 50 55 60
Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Thr Gly Leu 65 70 75 80
Gln Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ala Ser Trp Thr Asp Gly 85 90 95
Leu Ser Leu Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105 110
<210> 117 <211> 121 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 117
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 15 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Phe 20 25 30
Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45
Ser Asn Ile Ser Ser Ser Gly Ser Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60
Lys Gly Arg Phé Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Arg Tyr Trp Gly Thr Pro Tyr Leu Met Gln Phe Asp Asn Trp Gly 100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120
<210> 118 <211> 123 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 118
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Phe
20 25 30
Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45
Ser Asn Ile Glu His Lys Phe Met Gly Tyr Thr Thr Tyr Tyr Ala Ala 50 55 60
Gly Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr 65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr 85 90 95
Tyr Cys Ala Arg Tyr Trp Gly Thr Pro Tyr Leu Met Gln Phe Asp Asn
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120
<210> 119 <211> 123 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 119
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 15 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Phe
20 25 30
Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45
Ser Ser Ile Glu His Lys Tyr Thr Gly Tyr Thr Thr Tyr Tyr Ala Ala
50 55 60
Pro Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr 65 70 75 80 Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Ala Arg Tyr Trp Gly Thr Pro Tyr Leu Met Gln Phe Asp Asn 100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120
<210> 120 <211> 123 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 120
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Phe 20 25 30
Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Asn Ile Glu His Lys Tyr Thr Ser Tyr Thr Thr Tyr Tyr Ala Ala 50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ue Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr 65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Ala Arg Tyr Trp Gly Thr Pro Tyr Leu Met Gln Phe Asp Asn 100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 121 <211> 123 <212> PRT
<2l3> Homo sapiens <400> 121
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Phe 20 25 30
Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Asn Ile Glu His Lys Tyr Leu Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Ala 50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr 65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr 85 90 95
Tyr Cys Ala Arg Tyr Trp Gly Thr Pro Tyr Leu Met Gln Phe Asp Asn 100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 122 <211> 123 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 122
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Phe
20 25 30
Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45
Ser Asn Ile Glu His Lys Tyr Leu Gly Tyr Ala Thr Val Tyr Ala Ala
50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr 65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr 85 90 95
Tyr Cys Ala Arg Tyr Trp Gly Thr Pro Tyr Leu Met Gln Phe Asp Asn
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120
<210> 123 <211> 123 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 123
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Phe 20 25 30
Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45
Ser Ser Ile Glu His Lys Tyr Leu Ser Tyr Ala Thr Tyr Tyr Ala Ala 50 55 60
Gly Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr 65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Ala Arg Tyr Trp Gly Thr Pro Tyr Leu Met Gln Phe Asp Asn 100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120
<210> 124 <211> 123 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 124
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Phe 20 25 30
Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ser Ile Glu His Lys Tyr Leu Ser Tyr Thr Thr Phe Tyr Ala Ala 50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr 65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr 85 90 95
Tyr Cys Ala Arg Tyr Trp Gly Thr Pro Tyr Leu Met Gln Phe Asp Asn 100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 125 <211> 123 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 125
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Phe
20 25 30
Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45
Ser Gly Ile Glu His Lys Tyr Leu Ser Tyr Thr Thr His Tyr Ala Ala 50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr 65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr 85 90 95
Tyr Cys Ala Arg Tyr Trp Gly Thr Pro Tyr Leu Met Gln Phe Asp Asn
100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120
<210> 126 <211> 123 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 126
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Phe
20 25 30
Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45
Ser Gln Ile Glu His Lys Tyr Leu Ser Tyr Thr Thr Leu Tyr Ala Ala
50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr 65 70 75 80 Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Ala Arg Tyr Trp Gly Thr Pro Tyr Leu Met Gln Phe Asp Asn 100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120
<210> 127
<211> 123
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 127
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Phe 15 20 25 30
Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Gly Ile Glu His Lys Tyr Leu Ser Tyr Ala Thr Leu Tyr Ala Ala 50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr 65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Ala Arg Tyr Trp Gly Thr Pro Tyr Leu Met Gln Phe Asp Asn 100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 128
<211>111
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<400> 128
Asp Ile Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln 1 5 10 15
35 Ser Ile Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Gly Tyr 20 25 30
Asn Ser Val Ser Trp Tyr Gln Gln His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu
35 40 45
Met Ile Tyr Ser Val Ser Ser Arg Pro Ser Gly Val Ser Asn Arg Phe 50 55 60
Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu 65 70 75 80
Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Tyr Asp Thr Asn 85 90 95
Lys Pro Leu Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105 110
<210> 129
<211> 111
<212> PRT <213> Homo sapiens <400> 129
Asp Ile Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln 1 5 10 15
Ser Ile Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Gly Tyr 20 25 30
Asn Ser Val Ser Trp Tyr Gln Gln His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu
35 40 45
Met De Tyr Ser Val Ser Ser Arg Pro Ser Gly Val Ser Asn Arg Phe 50 55 60
Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu 65 70 75 80
Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Ser Ser Tyr Tyr Phe Tyr 85 90 95
Leu Gln Arg Ile Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105 110
<210> 130 <211>111 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 130
Asp Ile Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln 1 5 10 15
Ser De Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Gly Tyr 20 25 30
Asn Ser Val Ser Trp Tyr Gln Gln His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu
35 40 45
Met De Tyr Ser Val Ser Ser Arg Pro Ser Gly Val Ser Asn Arg Phe 50 55 60
Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu 65 70 75 80
Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Thr Tyr Tyr Phe Ser
85 90 95
Tyr Ser Gly Pro Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105 110
<210> 131 <211> 111 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 131
Asp Ile Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln 15 10 15
Ser Ile Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Gly Tyr 20 25 30
Asn Ser Val Ser Trp Tyr Gln Gln His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu 35 40 45
Met Ile Tyr Ser Val Ser Ser Arg Pro Ser Gly Val Ser Asn Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu 65 70 75 80
Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gly Ser Tyr Asp Val Tyr
85 90 95
Gly Arg Phe Tyr Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 5 100 105 110
<210> 132 <211>111 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 132
Asp Ile Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln 1 5 10 15
Ser Ile Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Gly Tyr 20 25 30
Asn Ser Val Ser Trp Tyr Gln Gln His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu 35 40 45
Met Ile Tyr Ser Val Ser Ser Arg Pro Ser Gly Val Ser Asn Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu 65 70 75 80
Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gly Ser Trp Asp Pro Ile 85 90 95
Phe Ser Tyr Glu Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105 110
<210> 133 <211> 381 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 133
caggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgaaggtc 60 tcctgcaagg cttctggagg caccttcagc agcaactaca tcagctgggt gcgacaggcc 120 cctggacaag ggcttgagtg gatggggatc agccctggca ccggtatcaa cgcatactac 180 gcacagaagt tccagggcag agtcacgatt accgcggacg aatccacgag cacagcctac 240 atggagctga gcagcctgag atctgaggac acggccgtgt attactgtgc gagaagcaag 300 aagggcatgt acggcggctg gacctacccc ctgatgatgt tcgacctgtg gggccagggc 360 accctggtga ccgtgagcag c 381
<210> 134 <211> 381 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 134
caggtgcagc tggtgcagag cggcgccgag gtgaagaagc ccggcagcag cgtgaaggtg 60 agctgcaagg ccagcggcgg caccttcagc agcaactaca tcagctgggt gcgccaggcc 120 cccggccagg gcctggagtg gatgggcatc agccccggca ccggcatcaa cgcctactac 180 gcccagaagt tccagggccg cgtgaccatc accgccgacg agagcaccag caccgcctac 240 atggagctga gcagcctgcg cagcgaggac accgccgtgt actactgcgc ccgcagcaag 300 aagggcatgt acggcggctg gacctacccc ctgatgatgt tcgacctgtg gggccagggc 360 accctggtga ccgtgagcag c 381
<210> 135 <211> 381 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 135
caggtgcaat tggttcagtc tggcgcggaa gtgaaaaaac cgggcagcag cgtgaaagtg 60 agctgcaaag cctccggagg cactttttct tctaattata tttcttgggt gcgccaagcc 120 cctgggcagg gtctcgagtg gatgggcatt tctcctggta ctggtattaa tgcttattat 180 gctcagaagt ttcagggtcg ggtgaccatt accgcggatg aaagcaccag caccgcgtat 240 atggaactga gcagcctgcg tagcgaagat acggccgtgt attattgcgc gcgttctaag 300 aagggtatgt atggtggttg gacttatcct cttatgatgt ttgatctttg gggccaaggc 360 accctggtga cggttagctc a 381
<210> 136 <211> 324 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 136
gagatcgtgc tgacccagag ccccgccacc ctgagcctga gccccggcga gcgcgccacc 60 ctgagctgcc gcgccagcca gagcgtgagc agcaactacc tggcctggta ccagcagaag 120 cccggccagg ccccccgcct gctgatctac tacgccagcc gccgcgccac cggcgtgccc 180 gcccgcttca gcggcagcgg cagcggcacc gacttcaccc tgaccatcag cagcctggag 240 cccgaggact tcgccgtgta ctactgccag cagaccagca acaccccctt caccttcggc 300 cagggcacca aggtggagat caag 324
<210> 137 <211> 324 <212> DNA
<213> Homo sapiens <400> 137
gaaattgtgt tgacacagtc tccagccacc ctgtctttgt ctccagggga aagagccacc 60 ctctcctgca gggccagtca gagtgttagc agcaactact tagcctggta ccaacagaaa 120 cctggccagg ctcccaggct cctcatctat tacgcatccc gcagggccac tggcgtgcca 180 gccaggttca gtggcagtgg gtctgggaca gacttcactc tcaccatcag cagcctagag 240 cctgaagatt ttgcagttta ttactgtcag cagacttcta atactccttt tacctttggc 300 cagggtacga aagttgaaat taaa 324
<210> 138 <211> 324 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 138
gagatcgtgc tgacccagag cccggcgacc ctgagcctgt ctccgggcga acgtgcgacc 60 ctgagctgca gagcgagcca gtctgtttct tctaattatc tggcttggta ccagcagaaa 120 ccaggtcaag caccgcgtct attaatttat tatgcttctc gtcgtgcaac tggggtcccg 180 gcgcgtttta gcggctctgg atccggcacg gattttaccc tgaccattag cagcctggaa 240 cctgaagact ttgcggtgta ttattgccag cagacttcta atactccttt tacctttggc 300 cagggtacga aagttgaaat taaa 324
<210> 139 <211> 351 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 139 gaggtgcagc tggtgcagtc tggagcagag gtgaaaaagc ccggggagtc tctgaagatc 60 tcctgtaagg gttctggata cagctttagc aactactgga tcggctgggt gcgccagatg 120 cccgggaaag gcctggagtg gatggggatc atcgacccta gcaactctta caccagatac 180 agcccgtcct tccaaggcca ggtcaccatc tcagccgaca agtccatcag caccgcctac 240 ctgcagtgga gcagcctgaa ggcctcggac accgccatgt attactgtgc gagatggtac 300 tacaagccct tcgac^tgtg gggccagggc accctggtga ccgtgagcag c 351 <210> 140 <211> 351 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 140
gaggtgcagc tggtgcagag cggcgccgag gtgaagaagc ccggcgagag cctgaagatc 60 agctgcaagg gcagcggcta cagcttcagc aactactgga tcggctgggt gcgccagatg 120 cccggcaagg gcctggagtg gatgggcatc atcgacccca gcaacagcta cacccgctac 180 agccccagct tccagggcca ggtgaccatc agcgccgaca agagcatcag caccgcctac 240 ctgcagtgga gcagcctgaa ggccagcgac accgccatgt actactgcgc ccgctggtac 300 tacaagccct tcgacgtgtg gggccagggc accctggtga. ccgtgagcag c 351 <210> 141 <211> 351 <212> DNA
<213> Homo sapiens <400> 141
gaggtgcaat tggttcagag cggcgcggaa gtgaaaaaac cgggcgaaag cctgaaaatt 60 agctgcaaag gttccggata ttccttttct aattattgga ttggttgggt gcgccagatg 120 cctgggaagg gtctcgagtg gatgggcatt atcgaitccgt ctaatagcta tacccgctat 180 tctccgagct ttcagggcca ggtgaccatt agcgcggata aaagcattag caccgcgtat 240 cttcaatgga gcagcctgaa agcgagcgat acggccatgt attattgcgc gcgttggtat 300 tataagcctt ttgatgtttg gggccaaggc accctggtga cggttagctc a 351 <210> 142 <211> 336 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 142
cagtctgtgc tgacgcagcc gccctcagtg tctggggccc cagggcagag ggtcaccatc 60 tcctgcactg ggagcagctc caacatcggg agcggttatg atgtacactg gtaccagcag 120 cttccaggaa cagcccccaa actcctcatc tatggtaaca gcaagcggcc ctcaggggtc 180 cctgaccgat tctctggctc caagtctggc acctcagcct ccctggccat cactgggctc 240 cagagcgagg atgaggctga ttattactgc gccagctgga ccgacggcct gagcctggtg 300 gtgttcggcg gcggcaccaa gctgaccgtg ctgggc 336
<210> 143 <211> 336 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 143
cagagcgtgc tgacccagcc ccccagcgtg agcggcgccc ccggccagcg cgtgaccatc 60 agctgcaccg gcagcagcag caacatcggc agcggctacg acgtgcactg gtaccagcag 120 ctgcccggca ccgcccccaa gctgctgatc tacggcaaca gcaagcgccc cagcggcgtg 180 cccgaccgct tcagcggcag caagagcggc accagcgcca gcctggccat caccggcctc 240 cagagcgagg acgaggccga ctactactgt gccagctgga ccgacggcct gagcctggtg 300 gtgttcggcg gcggcaccaa gctgaccgtg ctgggc 336
<210> 144 <211> 336 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 144
cagagcgtgc tgacccagcc gccttcagtg agtggcgcac caggtcagcg tgtgaccatc 60 tcgtgtacgg gcagcagcag caacattggt tctggttatg atgtgcattg gtaccagcag 120 ttgcccggga cggcgccgaa acttctgatt tatggtaatt ctaagcgtcc ctcaggcgtg 180 ccggatcgtt ttagcggatc caaaagcggc accagcgcga gccttgcgat tacgggcctg 240 caaagcgaag acgaagcgga ttattattgc gcttcttgga ctgatggtct ttctcttgtt 300 gtgtttggcg gcggcacgaa gttaaccgtt cttggc 336
<210> 145 <211> 189 <212> PRT
<213> Homo sapiens <400> 145
Met Leu Gly Ser Arg Ala Val Met Leu Leu Leu Leu Leu Pro Trp Thr 1 5 10 15
Ala Gln Gly Arg Ala Val Pro Gly Gly Ser Ser Pro Ala Trp Thr Gln 20 25 30
Cys Gln Gln Leu Ser Gln Lys Leu Cys Thr Leu Ala Trp Ser Ala His
35 40 45
Pro Leu Val Gly His Met Asp Leu Arg Glu Glu Gly Asp Glu Glu Thr 50 55 60
Thr Asn Asp Val Pro His Ile Gln Cys Gly Asp Gly Cys Asp Pro Gln 65 70 75 80
Gly Leu Arg Asp Asn Ser Gln Phe Cys Leu Gln Arg Ile His Gln Gly 85 90 95
Leu Ile Phe Tyr Glu Lys Leu Leu Gly Ser Asp Ile Phe Thr Gly Glu 100 105 110
Pro Ser Leu Leu Pro Asp Ser Pro Val Ala Gln Leu His Ala Ser Leu
115 120 125
Leu Gly Leu Ser Gln Leu Leu Gln Pro Glu Gly His His Trp Glu Thr 130 135 140
Gln Gln Ile Pro Ser Leu Ser Pro Ser Gln Pro Trp Gln Arg Leu Leu 145 150 155 160
Leu Arg Phe Lys Ile Leu Arg Ser Leu Gln Ala Phe Val Ala Val Ala 165 170 175
Ala Arg Val Phe Ala His Gly Ala Ala Thr Leu Ser Pro 180 185
<210> 146 <211> 19 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 146
Asn Ile Glu His Lys Tyr Leu Gly Tyr Ala Thr Ser Tyr Ala Ala Ser 15 10 15
Val Lys Gly <210> 147 <211> 123 <212> PRT <213 > Homo sapiens <400> 147
Gln Val Gln Leu' Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 15 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Phe 20 25 30
Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45
Ser Asn Ile Glu His Lys Tyr Leu Gly Tyr Ala Thr Ser Tyr Ala Ala
50 55 60
Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr 65 70 75 80
Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr
85 90 95
Tyr Cys Ala Arg Tyr Trp Gly Thr Pro Tyr Leu Met Gln Phe Asp Asn 100 105 110
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120

Claims (65)

1. Anticorpo IL-23p19 isolado, em que dito anticorpo é comple- tamente humano gerado a partir da imagem fago e se liga ao IL-23p19 hu- mano ou um fragmento deste.
2. Anticorpo isolado de acordo com a reivindicação 1, em que dito anticorpo se liga ao IL-23p19 humano em um ou mais dos resíduos de aminoácido 93-105 da SEQ ID NO:145.
3. Anticorpo IL-23p19 isolado, compreendendpelo menos uma região variável de cadeia leve, dita região variável de cadeia leve compreen- dendpelo menos um membro do grupo consistindo em: uma seqüência de aminoácido de cadeia leve da região determi- nante da complementaridade 1 (CDRL1) selecionada do grupo consistindo nas SEQ ID NOS: 46-51; uma seqüência de aminoácido CDRL2 selecionada do grupo consistindo nas SEQ ID NOS: 52-57; e uma seqüência de aminoácido CDRL3 selecionada do grupo consistindo nas SEQ ID NOS: 58-79.
4. Anticorpo IL-23p19 isolado, compreendendpelo menos uma região variável de cadeia pesada, dita região variável de cadeia pesada compreendendpelo menos um membro do grupo consistindo em: uma seqüência de aminoácido de cadeia pesada da região de- terminante da complementaridade 1 (CDRH1) selecionada do grupo consis- tindo nas SEQ ID NOS: 1-6; uma seqüência de aminoácido de CDRH2 selecionada do grupo consistindo nas SEQ ID NOS: 7-39 e 146; e uma seqüência de aminoácido de CDRH3 selecionada do grupo consistindo nas SEQ ID NOS: 40-45.
5. Anticorpo IL-23p19 isolado, compreendendo a região variável de cadeia leve de acordo com a reivindicação 3 e a região variável de cadeia pesada de acordo com a reivindicação 4.
6. Anticorpo IL-23p19 isolado de acordo com a reivindicação 5, ainda compreendendpelo menos uma região estrutural humana adjacente à pelo menos uma região determinante da complementaridade.
7. Anticorpo IL-23p19 isolado, compreendendpelo menos uma região variável de cadeia leve, dita região variável de cadeia leve compreen- dendo: uma seqüência de aminoácido de cadeia leve da região determi- nante da complementaridade 1 (CDRL1) selecionada do grupo consistindo nas SEQ ID NOS: 46-51; uma seqüência de aminoácido CDRL2 selecionada do grupo consistindo nas SEQ ID NOS: 52-57; e uma seqüência de aminoácido CDRL3 selecionada do grupo consistindo nas SEQ ID NOS: 58-79.
8. Anticorpo IL-23p19 isolado, compreendendpelo menos uma região variável de cadeia pesada, dita região variável de cadeia pesada compreendendo: uma seqüência de aminoácido de cadeia pesada da região de- terminante da complementaridade 1 (CDRH1) selecionada do grupo consis- tindo nas SEQ ID NOS: 1-6; uma seqüência de aminoácido de CDRH2 selecionada do grupo consistindo nas SEQ ID NOS: 7-39 e 146; e uma seqüência de aminoácido de CDRH3 selecionada do grupo consistindo nas SEQ ID NOS: 40-45.
9. Anticorpo IL-23p19 isolado, compreendendo a região variável de cadeia leve de acordo com a reivindicação 7 e a região variável de cadeia pesada de acordo com a reivindicação 8.
10. Anticorpo IL-23p19 isolado, compreendendo uma seqüência de aminoácido da região variável de cadeia leve selecionada do grupo con- sistindo nas SEQ ID NOS: 82-85, 93-98, 100, 102, 113-116, e 128-132.
11. Anticorpo IL-23p19 isolado, compreendendo uma seqüência de aminoácido da região variável de cadeia pesada selecionada do grupo consistindo nas SEQ ID NOS: 80, 81, 86-92, 99, 101, 103-112, 117-127, e -147.
12. Anticorpo IL-23p19 isolado, compreendendo a região variá- vel de cadeia leve de acordo com a reivindicação 10 e a região variável de cadeia pesada de acordo com a reivindicação 11.
13. Anticorpo IL-23p19 isolado, compreendendo uma seqüência de aminoácido da região variável de cadeia leve tendpelo menos 95% de identidade com qualquer uma das seqüências de aminoácido selecionadas do grupo consistindo nas SEQ ID NOS: 82-85, 93-98, 100, 102, 113-116, e -128-132.
14. Anticorpo IL-23p19 isolado, compreendendo uma seqüência de aminoácido da região variável de cadeia pesada tendpelo menos 95% de identidade com qualquer uma das seqüências de aminoácido selecionadas do grupo consistindo nas SEQ ID NOS: 80, 81, 86-92, 99, 101, 103-112, -117-127, e 147.
15. Anticorpo IL-23p19 isolado, compreendendo a região variá- vel de cadeia leve de acordo com a reivindicação 13 e a região variável de cadeia pesada de acordo com a reivindicação 14.
16. Anticorpo que competitivamenté se liga ao IL-23p19 com o anticorpo IL-23p19 isolado de acordo com qualquer das reivindicações de 1 a 15.
17. Anticorpo IL-23p19 de acordo com qualquer uma das reivin- dicações de 1 a 16, em que dito anticorpo liga o IL-23p19 com pelo menos uma afinidade selecionada de pelo menos 10"9 M, pelo menos 10"10 M1 pelo menos 10"11 M, e pelo menos 10"12 M, pelo menos 10"13 M, pelo menos 10'14 M, e pelo menos 10"15 M, como determinado pela ressonância de plásmon superficial ou o método Kinexa.
18. Anticorpo IL-23p19 de acordo com qualquer uma das reivin- dicações de 1 a 15, em que o dito anticorpo substancialmente modulpelo menos uma atividade de pelo menos um polipeptídeo IL-23.
19. Molécula de ácido nucléico isolada que codificpelo menos um anticorpo IL-23p19 isolado como definido em qualquer uma das reivindi- cações de 1 a 15.
20. Molécula de ácido nucléico isolada compreendendpelo me- nos uma de: uma seqüência de nucleotídeo da região variável de cadeia leve selecionada do grupo consistindo nas SEQ ID NOS: 136-138 e 142-144; e uma seqüência de nucleotídeo da região variável de cadeia pe- sada selecionáda do grupo consistindo nas SEQ ID NOS: 133-135 e 139- -141.
21. Vetor de ácido nucléico isolado compreendendo a molécula de ácido nucléico isolada como definido nas reivindicações 19 ou 20.
22. Célula hospedeira procariótica ou eucariótica compreenden- do a molécula de ácido nucléico isolada como definido nas reivindicações 19 ou 20.
23. Célula hospedeira de acordo com a reivindicação 22, em que dita célula hospedeira é pelo menos aquela selecionada de células COS-1, COS-7, HEK293, BHK21, CHO, BSC-1, Hep G2, 653, SP2/0, 293, HeLa, mieloma ou linfoma, ou qualquer célula derivada, imortalizada ou transfor- mada destas.
24. Método para a produção de pelo menos um anticorpo IL- -23p19, compreendendo a translação da molécula de ácido nucléico como definido nas reivindicações 19 ou 20 sob as condições in vitro, in vivo ou in situ, tal que o anticorpo IL-23p19 é expresso em quantidades detectáveis ou recuperável.
25. Composição compreendendpelo menos um anticorpo IL- -23p19 isolado de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 15 e pelo menos um veículo ou diluente farmaceuticamente aceitável.
26. Composição de acordo com a reivindicação 25, ainda com- preendendpelo menos um composto ou polipeptídeo selecionado de um ró- tulo detectável ou repórter, um antagonista TNF, um fármaco antiinfectivo, um fármaco do sistema cardiovascular (CV), um fármaco do sistema nervoso central (CNS), um fármaco do sistema nervoso autonômico (ANS), um fár- maco do trato respiratório, um fármaco do trato gastrointestinal (GI)1 um fár- maco hormonal, um fármaco para o equilíbrio de fluido ou eletrólito, um fár- maco hematológico, um antineoplástico, um fármaco da imunomodulação, um fármaco oftálmico, ótico ou nasal, um fármaco tópico, um fármaco nutri- cional, uma citocina, e um antagonista de citocina.
27. Anticorpo antiidiótipo ou fragmento que especificamente se Iigpelo menos a um anticorpo IL-23p19 como definido em qualquer uma das reivindicações de 1 a 15.
28. Método para o diagnóstico ou tratamento de uma condição relacionada com IL-23 em uma célula, tecido, órgão ou animal, que compre- ende o contato ou a administração de uma composição compreen- dendo uma quantidade eficaz de pelo menos um anticorpo como definido em qualquer uma das reivindicações de 1 a 5, com, ou em, dita célula, tecido, órgão ou animal.
29. Método de acordo com a reivindicação 28, em que a condi- ção relacionada com IL-23 é selecionada do grupo consistindo em psoríase, artrite psoriática, doença de Crohn, esclerose múltipla, neurite ótica, e sín- drome clinicamente isolada.
30. Método de acordo com a reivindicação 29, em que dita quan- tidade eficaz é de cerca de 0,001 a 50 mg/quilograma de ditas células, teci- do, órgão ou animal.
31. Método de acordo com a reivindicação 29, em que dito con- tato ou dita administração seja por pelo menos uma maneira selecionada de parenteral, subcutânea, intramuscular, intravenosa, intra-articular, intrabron- quial, intra-abdominal, intracapsular, intracartilaginoso, intracavitário, intrace- líaco, intracerebelar, intracerebroventricular, intracolônico, intracervical, in- tragástrico, intra-hepático, intramiocárdico, intra-ósseo, intrapélvico, intrape- ricárdico, intraperitoneal, intrapleural, intraprostático, intrapulmonar, intra- retal, intra-renal, intra-retiniano, intra-espinhal, intra-sinovial, intratorácico, intra-uterino, intravesical, intralesional, bolo, vaginal, retal, bucal, sublingual, intranasal e transdérmico.
32. Método de acordo com a reivindicação 29, ainda compreen- dendo a administração, antes, concorrentemente ou após dito contato ou administração, de pelo menos uma composição compreendendo uma quan- tidade eficaz de pelo menos um composto ou polipeptídeo selecionado de um rótulo detectável ou repórter, um fármaco antiinfectivo, um fármaco do sistema cardiovascular (CV), um fármaco do sistema nervoso central (CNS), um fármaco do sistema nervoso autonômico (ANS), um fármaco do trato respiratório, uni fármaco do trato gastrointestinal (Gl), um fármaco hormonal, um fármaco para o equilíbrio de fluido ou eletrólito, um fármaco hematológi- co, um antineoplástico, um fármaco para imunomodulação, um fármaco of- tálmico, ótico ou nasal, um fármaco tópico, um fármaco nutricional, uma cito- cina, e um antagonista da citocina.
33. Dispositivo médico, compreendendo um anticorpo IL-23p19 como definido em qualquer uma das reivindicações de 1 a 15, em que dito dispositivo é adequado para o contato ou a administração de dito anticorpo IL-23p19 por pelo menos uma maneira selecionada de parenteral, subcutâ- nea, intramuscular, intravenosa, intra-articular, intrabronquial, intra- abdominal, intracapsular, intracartilaginoso, intracavitário, intracelíaco, intra- cerebelar, intracerebroventricular, intracolônico, intracervical, intragástrico, intra-hepático, intramiocárdico, intra-ósseo, intrapélvico, intrapericárdico, in- traperitoneal, intrapleural, intraprostático, intrapulmonar, intra-retal, intra- renal, intra-retiniano, intra-espinhal, intra-sinovial, intratorácico, intra-uterino, intravesical, intralesional, bolo, vaginal, retal, bucal, sublingual, intranasal e transdérmico.
34. Artigo de fabricação para uso farmacêutico ou diagnóstico humano, que compreende material acondicionado e um recipiente compre- endendo uma solução ou uma forma Iiofilizada de um anticorpo IL-23p19 como definido em qualquer uma das reivindicações de 1 a 15.
35. Artigo de fabricação de acordo com a reivindicação 34, em que dito recipiente é um componente de um dispositivo ou sistema de libera- ção parenteral, subcutânea, intramuscular, intravenosa, intra-articular, intra- bronquial, intra-abdominal, intracapsular, intracartilaginoso, intracavitário, intracelíaco, intracerebelar, intracerebroventricular, intracolônico, intracervi- cal, intragástrico, intra-hepático, intramiocárdico, intra-ósseo, intrapélvico, intrapericárdico, intraperitoneal, intrapleural, intraprostático, intrapulmonar, intra-retal, intra-renal, intra-retiniano, intra-espinhal, intra-sinovial, intratoráci- co, intra-uterino, intravesícal, intralesional, bolo, vaginal, retal, bucal, sublin- gual, intranasal e transdérmico.
36. Método para a produção de um anticorpo IL-23p19 isolado co- mo definido em qualquer uma das reivindicações de 1 a 15, compreendendo fornecer uma célula hospedeira ou animal transgênico ou célula de planta ca- paz de se expressar em quantidades recuperáveis de dito anticorpo.
37. Anticorpo IL-23p19 produzido pelo método como definido na reivindicação 36.
38. Anticorpo IL-23p19 isolado, compreendendo uma seqüência de aminoácido da região variável de cadeia leve codificada pela seqüência de nucleotídeo selecionada do grupo consistindo nas SEQ ID NOS: 136-138 e 142-144.
39. Anticorpo IL-23p19 isolado, compreendendo uma seqüência de aminoácido da região variável de cadeia pesada codificada pela seqüên- cia de nucleotídeo selecionada do grupo consistindo nas SEQ ID NOS: 133-135 e 139-141.
40. Anticorpo IL-23p19 isolado, compreendendo a seqüência da região variável de cadeia leve de acordo com a reivindicação 38 e a seqüên- cia da região variável de cadeia pesada de acordo com a reivindicação 39.
41. Anticorpo IL-23p19 isolado, compreendendo uma seqüência da região variável de cadeia leve codificada por uma seqüência de nucleotí- deo tendpelo menos 95% de identidade em qualquer uma das seqüências de nucleotídeo selecionadas do grupo consistindo nas SEQ ID NOS: 136-138 e 142-144.
42. Anticorpo IL-23p19 isolado, compreendendo uma seqüência da região variável de cadeia pesada codificada por uma seqüência de nucle- otídeo tendpelo menos 95% de identidade em qualquer uma das seqüências de nucleotídeo selecionadas do grupo consistindo nas SEQ ID NOS: 133-135 e 139-141.
43. Anticorpo IL-23p19 isolado, compreendendo a seqüência da região variável de cadeia leve de acordo com a reivindicação 41 e a seqüên- cia da região variável de cadeia pesada de acordo com a reivindicação 42.
44. Anticorpo que competitivamente se liga ao IL-23p19 com o anticorpo IL-23p19 isolado de acordo com qualquer uma das reivindicações de 38 a 43.
45. Anticorpo IL-23p19 de acordo com qualquer uma das reivin- dicações de 38 a 43, em que dito anticorpo se liga ao IL-23p19 com pelo menos uma afinidade selecionada de pelo menos 10"9 M, pelo menos 10"10 M, pelo menos 10"11 M, e pelo menos 10'12 M, pelo menos 10"13 M, pelo me- nos 10"14 M, e pelo menos 10"15 M, como determinado pela ressonância de plásmon superficial ou o método Kinexa.
46. Anticorpo IL-23p19 de acordo com qualquer uma das reivin- dicações de 38 a 43, em que dito anticorpo substancialmente modulpelo menos uma atividade de pelo menos um polipeptídeo IL-23.
47. Molécula de ácido nucléico isolada compreendendpelo me- nos uma seqüência de nucleotídeo como definido em qualquer uma das rei- vindicações 38, 39, 41 e 42.
48. Vetor de ácido nucléico isolado que compreende a molécula de ácido nucléico isolada como definido na reivindicação 47.
49. Célula hospedeira procariótica ou eucariótica que compreen- de a molécula de ácido nucléico isolada como definido na reivindicação 47.
50. Célula hospedeira de acordo com a reivindicação 49, em que dita célula hospedeira é pelo menos aquela selecionada das células COS-1, COS-7, HEK293, BHK21, CHO, BSC-1, Hep G2, 653, SP2/0, 293, HeLa, de mieloma ou de linfoma, ou qualquer célula derivada, imortalizada ou trans- formada destas.
51. Método para a produção de pelo menos um anticorpo IL- -23p19, que compreende a translação da molécula de ácido nucléico como definida na reivindicação 47, sob as condições in vitro, in vivo ou in situ, tal que o anticorpo IL-23p19 é expresso em quantidades detectáveis ou recupe- ráveis.
52. Composição que compreende pelo menos um anticorpo IL- -23p19 isolado como definido em qualquer uma das reivindicações de 38 a -43 e pelo menos um veículo ou diluente farmaceuticamente aceitável.
53. Composição de acordo com a reivindicação 52, ainda com- preendendpelo menos um composto ou polipeptídeo selecionado de um ró- tulo detectável ou repórter, um antagonista de TNF, um fármaco antiinfetivo, um fármaco do sistema cardiovascular (CV), um fármaco do sistema nervoso central (CNS), um fármaco do sistema nervoso autonômico (ANS), um fár- maco do trato respiratório, um fármaco do trato gastrointestinal (Gl), um fár- maco hormonal, um fármaco para o equilíbrio fluido ou eletrólito, um fármaco hematológico, um antineoplástico, um fármaco da imunomodulação, um fár- maco oftálmico, ótico ou nasal, um fármaco tópico, um fármaco nutricional, uma citocina e üm antagonista da citocina.
54. Anticorpo antiidiótipo ou fragmento que especificamente se ligpelo menos a um anticorpo IL-23p19 de acordo com qualquer uma das reivindicações de 38 a 43.
55. Método para o diagnóstico ou tratamento de uma condição relacionada com IL-23 em uma célula, tecido, órgão ou animal, que compre- ende o contato ou a administração de uma composição compreen- dendo uma quantidade eficaz de pelo menos um anticorpo de acordo como definido em uma das reivindicações de 38 a 43, com, ou em, dita célula, te- cido, órgão ou animal.
56. Método de acordo com a reivindicação 55, em que a condi- ção relacionada com IL-23 é selecionada do grupo consistindo em psoríase, artrite psoriática, doença de Crohn, esclerose múltipla, neurite ótica, e sín- drome clinicamente isolada.
57. Método de acordo com a reivindicação 55, em que dita quan- tidade eficaz é de cerca de 0,001 a 50 mg/quilograma de ditas células, teci- do, órgão ou animal.
58. Método de acordo com a reivindicação 55, em que dito con- tato ou dita administração seja por pelo menos uma maneira selecionada de parenteral, subcutânea, intramuscular, intravenosa, intra-articular, intrabron- quial, intra-abdominal, intracapsular, intracartilaginoso, intracavitário, intrace- líaco, intracerebelar, intracerebroventricular, intracolônico, intracervical, in- tragástrico, intra-hepático, intramiocárdico, intra-ósseo, intrapélvico, intrape- ricárdico, intraperitoneal, intrapleural, intraprostático, intrapulmonar, intra- retal, intra-renal, intra-retiniano, intra-espinhal, intra-sinovial, intratorácico, intra-uterino, iritravesical, intralesional, bolo, vaginal, retal, bucal, sublingual, intranasal e transdérmico.
59. Método de acordo com a reivindicação 55, ainda compreen- dendo a administração, antes, concorrentemente ou após dito contato ou administração, de pelo menos uma composição compreendendo uma quan- tidade eficaz de pelo menos um composto ou polipeptídeo selecionado de um rótulo detectável ou repórter, um fármaco antiinfectivo, um fármaco do sistema cardiovascular (CV), um fármaco do sistema nervoso central (CNS), um fármaco do sistema nervoso autonômico (ANS), um fármaco do trato respiratório, um fármaco do trato gastrointestinal (Gl), um fármaco hormonal, um fármaco para o equilíbrio de fluido ou eletrólito, um fármaco hematológi- co, um antineoplástico, um fármaco para imunomodulação, um fármaco of- tálmico, ótico ou nasal, um fármaco tópico, um fármaco nutricional, uma cito- cina, e um antagonista da citocina.
60. Dispositivo médico, compreendendo um anticorpo IL-23p19 como definido em qualquer uma das reivindicações de 38 a 43, em que dito dispositivo é adequado para o contato ou a administração de dito anticorpo IL-23p19 por pelo menos uma maneira selecionada de parenteral, subcutâ- nea, intrãmuscular, intravenosa, intra-articular, intrabronquial, intra- abdominal, intracapsular, intracartilaginoso, intracavitário, intracelíaco, intra- cerebelar, intracerebroventricular, intracolônico, intracervical, intragástrico, intra-hepático, intramiocárdico, intra-ósseo, intrapélvico, intrapericárdico, in- traperitoneal, intrapleural, intraprostático, intrapulmonar, intra-retal, intra- renal, intra-retiniano, intra-espinhal, intra-sinovial, intratorácico, intra-uterino, intravesical, intralesional, bolo, vaginal, retal, bucal, sublingual, intranasal e transdérmico.
61. Artigo de fabricação para uso farmacêutico ou diagnóstico humano, que compreende material acondicionado e um recipiente compre- endendo uma solução ou uma forma Iiofilizada de um anticorpo IL-23p19 como definido em qualquer uma das reivindicações de 38 a 43.
62. Artigo de fabricação de acordo com a reivindicação 61, em que dito recipiente é um componente de um dispositivo ou sistema de libera- ção parenteral, subcutânea, intramuscular, intravenosa, intra-articular, intra- bronquial, intra-abdominal, intracapsular, intracartilaginoso, intracavitário, intracelíaco, intracerebelar, intracerebroventricular, intracolônico, intracervi- cal, intragástrico, intra-hepático, intramiocárdico, intra-ósseo, intrapélvico, intrapericárdico, intraperitoneal, intrapleural, intraprostático, intrapulmonar, intra-retal, intra-renal, intra-retiniano, intra-espinhal, intra-sinovial, intratoráci- co, intra-uterino, intravesical, intralesional, bolo, vaginal, retal, bucal, sublin- gual, intranasal e transdérmico.
63. Método para a produção de um anticorpo IL-23p19 isolado de acordo com qualquer uma das reivindicações de 38 a 43, compreenden- do fornecer uma célula hospedeira ou animal transgênico ou célula de planta capaz de se expressar em quantidades recuperáveis de dito anticorpo.
64. Anticorpo IL-23p19 produzido pelo método como definido na reivindicação 63.
65. Qualquer invenção aqui descrita.
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