BRPI0707401A2 - inibidores de cinase e métodos de uso dos mesmos - Google Patents

Abstract

INIBIDORES DE CINASE E MéTODOS DE USO DOS MESMOS.Composto de Fórmula I e sais farmaceuticamente aceitáveis e prá-fármacos dos mesmos são úteis no tratamento e prevenção de vários distúrbios mediados por cinases.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "INIBIDORESDE CINASE E MÉTODOS DE USO DOS MESMOS".

Este pedido reivindica o benefício do pedido de patente provisó-rio dos Estados Unidos número 60/763.712 depositado no dia 31 de janeirode 2006, o qual está aqui incorporado em sua totalidade.

ANTECEDENTES DA INVENÇÃO

1. Campo da Invenção

A presente invenção refere-se a inibidores de cinase, composi-ções farmacêuticas que contêm os inibidores, e métodos para preparar estesinibidores. Os inibidores de cinase desta invenção são úteis para o tratamen-to de inflamação, osteoartrite, artrite reumatóide, câncer, doenças auto-imunes, e outras doenças mediadas por citocina.

2. Descrição do estado da técnica

Várias condições inflamatórias crônicas e agudas foram associ-adas com a superprodução de citocinas pró-inflamatórias. Tais citocinas in-cluem porém, não estão limitadas a fator de necrose de tumor alfa (TNF-a),interleucina 1 beta (IL-1 β), interleucina 8 (IL-8) e interleucina 6 (IL-6). Artritereumatóide (RA) é uma doença crônica onde TNF-α e IL-1 β são influencia-dos pelo início das doenças e pela progressão da destruição do osso e arti-culação observada com esta condição de debilitação. Os tratamentos tera-pêuticos recentemente aprovados para RA incluíram receptor de TNF-α so-lúvel (ENBREL®) e antagonista de receptor de IL-1 (ANAKINRA®). Estestratamentos funcionam bloqueando-se a capacidade de suas respectivascitocinas de ligarem-se aos seus receptores naturais. Métodos alternativospara tratar doenças mediadas por citocina estão atualmente sob investiga-ção. Um tal método envolve a inibição da série de reação de sinalização queregula a síntese e produção de citocinas pró-inflamatórias, tal como p38.

P38 (também conhecida como CSBP ou RK) é uma proteínacinase ativada por mitógeno de serina/treonina (MAPK) que mostrou regularcitocinas pró-inflamatórias. P38 MAPK foi identificada primeiro como umacinase que se torna tirosina fosforilada em monócitos de camundongo de-pois do tratamento com lipopolissacarídeo (LPS). Uma ligação entre p38MAPK e a resposta de células a citocinas, foram primeiro estabelecidas porSaklatvala e outros, (Cell, 1994, 78: 1039-1049), as quais mostraram que aIL-I ativa uma cascata de proteína cinase que resulta na fosforilação da pro-teína de pequeno choque térmico, Hsp27, provavelmente por proteína cina-se 2 ativada por proteína ativada por mitógeno (MAPKAP cinase-2). A análi-se de seqüências de peptídeo derivadas a partir da cinase purificada, indicouque foi relacionada à p38 MAPK ativada por LPS em monócitos de camun-dongo (Han, J., e outros, Science, 1994, 265:808-811). Ao mesmo tempo foimostrado que p38 MAPK foi ela própria ativada por uma cinase a montantecom respeito a uma variedade de estresses celulares, incluindo exposição àradiação UV e choque osmótico, e a identidade da cinase que diretamentefosforila Hsp27, foi confirmada como MAPKAP cinase-2 (Rouse, J., e outros,Cell, 1994, 78:1027-1037). Subseqüentemente, foi mostrado que p38 MAPKfoi o alvo molecular de uma série de compostos de piridinilimidazol que inibi-ram a produção de TNF a partir de monócitos humanos desafiados por LPL(Lee, J., e outros, Nature, 372:739-746). Esta foi uma descoberta fundamen-tal e conduziu ao desenvolvimento de vários inibidores seletivos de p38MAPK e a elucidação de seu papel na sinalização da citocina.

Sabe-se agora que as múltiplas formas de p38 MAPK (α, β, γ, δ),cada qual codificada por um gene separado, forma parte de uma cascata decinase envolvida na resposta de células a uma variedade de estímulos, in-cluindo estresse osmótico, luz UV e eventos mediados por citocina. Estasquatro isoformas de p38, acredita-se regular os diferentes aspectos de sina-lização intracelular. A ativação de p38 faz parte de uma cascata de eventosde sinalização que conduzem à síntese e produção de citocinas pró-inflamatórias tal como TNF-α. As funções de P38 por substratos a jusante defosforilação, que incluem outras cinases e fatores de transcrição. Os agentesque inibem p38 MAPK mostraram bloquear a produção de citocinas que in-cluem porém não limitadas a, modelos in vitro e in vivo de TNF-α, IL-6, IL-8 eIL-1 β (Adams, J. L., e outros, Progress in Medicinal Chemistry, 2001, 38:1-60).

Abl (também conhecida como Ableson) é uma tirosina cinaseque é expressa em células hematopoéticas e é influenciada pela progressãode vários tumores líquidos que incluem leucemia mielóide crônica (CML) eleucemia linfoblástica aguda (ALL). A transformação é um resultado de umatranslocação cromossômica, conhecida como o cromossomo Philadelphia.

Isto conduz a uma quimera constitutivamente ativada entre Ableson e a regi-ão de aglomeração de ponto de ruptura (BCR) -- a proteína AbI-BCR GLE-EVEC®, também conhecido como Imatinib (Novartis) é um potente inibidorde Abl e é atualmente utilizado para tratar os pacientes com CML (N. Engl. J.Med., 2001, 344:1031-1037). Este fármaco se tornou o padrão de cuidadopara esta doença mortal e também está sendo observado em uma variedadede outras fixações do câncer que incluem tumores estromais gastrointesti-nais (Gl ST).

Há evidência que fibroblastos respondem à proteína de fator decrescimento TGF-β estimulando-se as séries de reação de Abl e conduz amudanças morfológicas indicativas de fibrose; portanto, Abl pode desempe-nhar um papel na patogênese de doenças fibróticas semelhantes à fibrosepulmonar idiopática. Leof e outros, {J. Clin. Invista., 2004, 114(9) 1308-1316)demonstrou eficácia pré-clínica de GLEEVEC® em um modelo mediado porbleomicina de fibrose pulmonar em camundongos. GLEEVEC® está sendoavaliado em pacientes com fibrose pulmonar.

TEK (também conhecido como Tie-2) é outra tirosina cinase re-ceptora expressa apenas em células endoteliais que mostraram desempe-nhar um papel na angiogenênese. A ligação do fator angiopoetina-1 resultana autofosforilação do domínio de cinase de TEK e resulta em um processode transdução de sinal que parece mediar a interação de células endoteliaiscom células de sustentação periendoteliais, desse modo facilitando a matu-ração de vasos sangüíneos recentemente formados. Por outro lado, o fatorangiopoetina-2 parece antagonizar a ação de angiopoetina-1 em TEK eromper a angiogênese (Maisonpierre e outros, Science, 1997, 277:55-60).Tie2 é supra-regulado em vasos angiogênico de tumor (Trogan, E. Br. J.Câncer, 1998, 77:51-56) e há evidência que pode desempenhar um papelsustentador em cânceres de hematopoéticos (L. Naldini e outros, CâncerCell, 2005, 8:211-226; Suda1 Τ. e outros, Cell, 2004, 118:149-161). Além deseu possível papel em câncer, angiogenênese podem ter também implica-ções em doenças como artrite reumatóide (RA), psoríase e na progressão- de patologias direcionadas a inflamação. A formação de pano, a legião des-trutiva responsável pela progressão artrítica, é direcionada em parte por for-mação de vaso sangüíneo novo e um recente papel por Lin, C. e outros (Art-hritis and fíheumatism, 2005, 52(5):1585-1594) demonstra o papel patológi-co de Tie2 em um modelo de artrite induzido por colágeno de camundongode RA. Portanto, a inibição de Tie2 pode fornecer um efeito benéfico contradoenças proliferátivas e inflamatórias.

Várias outras cinases foram influenciadas pela progressão dedoenças proliferativas tal como câncer. Entre estas, numerosas proteínasmembros da família Src mostraram desempenhar um papel similar como Srce podem fornecer séries de reação de sinalização paralelas durante a proli-feração celular descontrolada. Exemplos primários incluem as tirosina cina-ses Lyn, Fyn, Lck e Hck. Lin e Hck foram influenciadas pela progressão deleucemia linfoblástica aguda de célula B(B-ALL), um câncer hematopoéticode células B (Li, S. e outros Nat Genet., 2004 36(5):453-461).

A família Eph (seqüência amplificada por hepatoma de produçãode eritropoetina) de receptores de tirosina cinase liga-se a efrinas que con-duzem a numerosos processos celulares. Ephs parecem desempenhar umpapel na modulação da adesão de célula de tumor e motilidade e invasivida-de, e alguma evidência demonstra um papel ativo de Ephs e efrinas em neo-vascularização durante processos patológicos. Os receptores de Eph A sãosuperexpressos no pulmão, vasculatura de tumor gástrico e rim, e proteínasEphA2 ou A3 solúveis, dominante-negativas, mostraram modular a angiogê-nese de tumor e progressão in vivo (Lackmann M. e outros, IUBMB Life,2005, 57(6):421-31).

Os fatores de crescimento endotelial vascular e seus receptorescognatos, por exemplo KDR (VEGFR2) e FLT1 (VEGFRR1) são reguladoresfundamentais de angiogênese. O fármaco terapêutico de proteína AVAS-TlN® tem mostrado promessas no câncer de cólon e funcionam através dasérie de reação de VEGFR. SUTENT/SU11248 (malato de sunitinib) (Pfizer)é um potente inibidor de KDR e tam mostrado resultados promissores contraGIST e carcinomas de célula renais.

Monócitos de sangue periférico (PBMCs) têm mostrado expres-sar e segregar citocinas pró-inflamatórias quando estimulados com Iipopolis-sacarídeo (LPS) in vitro. Inibidores de P38 eficazmente bloqueiam este efeitoquando PBMCs são prè-tratados com tais compostos antes da estimulaçãocom LPS (Lee, J.C., e outros, Int. J. Immunopharmacol., I988, 10:835-843).A eficácia de inibidores de p38 em modelos de animal de doença inflamató-ria incitou uma investigação do(s) mecanismo(s) subjacente(s) que podemresponder pelo efeito destes inibidores. O papel de p38 na resposta de célu-las a IL-1 e TNF1 foi investigado em vários sistemas de células releventes àresposta inflamatória utilizando-se um inibidor de piridinil imidazol: célulasendoteliais e IL-8 (Hashimoto, S., e outros, J. PharmacoL Exp. Ther., 2001,293:370-375), fibroblastos e IL-6/GM-CSF/PGE2 (Beyaert, R., e outros, EM-BOJ., 1996, 15:1914-1923), neutrófilos e macrófagos de IL-8 (Albanyan, E.A., e outros, Infect. Immun., 2000, 68:2053-2060) e IL-1 (Caivano, M. e Co-hen, P., J. Immunol., 2000, 164:3018-3025), e células do músculo liso eRANTES (Maruoka, S., e outros, Am. J. Respir. Crit. Care Med., 1999,161:659-668). Os efeitos destrutivos de muitos estados de doença, são cau-sados pela superprodução de citocinas pró-inflamatórias. A capacidade deinibidores de p38 para regular esta superprodução torna-os excelentes can-didatos para agentes modificadores de doença.

Inibidores conhecidos de p38 MAPK são ativos em uma varieda-de de modelos de doença amplamente reconhecidos. Inibidores de p38MAPK mostram efeitos positivos em vários modelos animais padrão de in-flamação, inclusive artrite induzida por colágeno de rato (Jackson, J.R., eoutros, J. Pharmacoi Exp. Ther., 1998, 284:687-692); artrite induzida poradjuvante de rato (Badger, A. M., e outros, Arthritis Rheum., 2000, 43:175-183; Badger, A. M., e outros, J. PharmacoL Exp. Ther., (1996) 279:1453-1461); e edema de pata induzido por carragenina no camundongo (Nishikori,T., e outros, Eur. J. Pharm., 2002, 451:327-333). As moléculas que bloquei-am a função de p38 mostraram ser eficazes na inibição da reabsorção ós-sea, inflamação, e outras patologias com base em inflamação e imunes nes-tes modelos animais.

Desse modo, um inibidor de cinase seguro e eficaz forneceriaum meio para tratar doenças debilitantes que podem ser reguladas por mo-dulação de uma ou mais cinases.

O pedido de patente internacional número de publicação WO2004/078116 descreve certos compostos como inibidores de cinase. Entreestes compostos, estão certos derivados de indazol substituídos por N1 quetêm um substituinte na posição 5, que contém um grupo pirazol-5-iluréia.

Exemplos de tais compostos incluem os compostos dos Exemplos 94 e 138,nos quais o substituinte de N1 é respectivamente um grupo metila e um gru-po 2-hidróxi-2-mètilpropila.

Constatou-se agora que compostos que têm propriedades parti-cularmente desejáveis podem ser obtidos selecionando-se o grupo álcoolprimário, -CH2CH2OH, como o substituinte de N1, e um substituinte particularna posição 5 que contém um grupo 3-terc-butil-1 -p-tolil-1 H-pirazol-5-ila.

SUMÁRIO DA INVENÇÃO

Esta invenção fornece compostos que inibem uma ou mais cina-ses e eventos mediados por cinase, tal como a inibição de produção de cito-cina, angiogênese ou proliferação celular. Tais compostos têm utilidade co-mo agentes terapêuticos para doenças que podem ser tratadas pela inibiçãode séries de reação de sinalização de cinase.

DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO

Em um aspecto, a invenção fornece um composto tendo a Fórmula I:<table>table see original document page 8</column></row><table>

ou um sal farmaceuticamente aceitável deste.

O composto também pode ser descrito pelo nome químico 1-(3-terc- butil-1 -p-tolil-1 H-pirazol-5-il)-3-(5-flúor-2-(1 -(2-hidroxietil)-1 H-indazol-5-ilóxi)benzil)uréia.

Foi constatado que o composto de fórmula I melhorou a potênciacontra certas cinases. Além disso, foi observado que a solubilidade do com-posto correspondente, no qual o substituinte de N1 é substituído com umgrupo éster de fosfato de fórmula -CH2CH2OPO3H, é várias ordens de mag-nitude maiores do que aquela do composto de fórmula I. Desse modo, ocomposto de Fórmula I possui uma única posição para criar pró-fármacossolúveis. Mais particularmente, como demonstrado com os dados teste maisadiante, o composto de fórmula I tem constatado ser um inibidor significati-vãmente mais potente de Abl e Tie2 do que os compostos dos Exemplos 94e 138 de WO 2004/078116. Além disso, os compostos dos Exemplos 94 e138 de WO 2004/078116 não possuem um grupo álcool primário que podeser derivado para proporcionar um pró-fármaco.

Além de composto de Fórmula I, a invenção também inclui saisfarmaceuticamente aceitáveis do composto, e solvatos do composto e seussais farmaceuticamente aceitáveis.

A expressão "farmaceuticamente aceitável" indica que a subs-tância ou composição é compatível química e/ou toxicologicamente com osoutros ingredientes que compreendem uma formulação, e/ou o mamíferoque é tratado com isto.Um "solvato" refere-se a uma associação ou complexo de umaou mais moléculas de solvente e um composto da invenção. Exemplos desolventes que formam solvatos incluem, porém não são limitados a, água,isopropanol, etanol, metanol, DMSO, acetato de etila, ácido acético e etano-lamina. O termo "hidrato" refere-se ao complexo onde a molécula de solven-te é água.

De acordo com outro aspecto, a presente invenção fornece ouso de um composto de Fórmula I na fabricação de um medicamento para otratamento de uma condição mediada por cinase em um mamífero.

Em òutro aspecto, a presente invenção fornece um método detratar ou prevenir uma condição mediada por cinase, compreendendo admi-nistrar um composto de Fórmula I em uma quantidade eficaz para tratar ouprevenir a referida condição mediada por cinase.

Também aqui fornecido, estão os pró-fármacos do composto deFormula I.

Um "pró-fármaco" é um composto que pode ser convertido sobcondições fisiológicas ou por solvólise para o composto especificado ou paraum sal de tal composto.

O grupo hidróxi livre do composto desta invenção, pode ser deri-vado como um pró-fármaco convertendo-se o grupo hidróxi em um grupo talcomo, porém não limitado a, um grupo éster de fosfato, hemissuccinato, di-metiIaminoacetato ou fosforiloximetiloxicarbonila, como esboçado em Ad-vanced Drug Delivery Reviews, 1996, 19, 115. Os pró-fármacos de carbama-to de grupos hidróxi também estão incluídos, assim como estão pró-fármacos de carbonato, ésteres de sulfonato e ésteres de sulfato de gruposhidróxi. A derivação de grupos hidróxi, assim como éteres de (acilóxi)metilae (acilóxi)etila, em que o grupo acila pode ser um alquil éster opcionalmentesubstituído com grupos incluindo, porém não limitados a, éter, amina e fun-cionalidades de ácido carboxílico, ou onde o grupo acila é um éster de ami-noácido como descrito acima, também é abrangida. Os pró-fármacos destetipo são descritos em J. Med. Chem., 1996, 39, 10. Exemplos mais específi-cos incluem substituição do átomo de hidrogênio do grupo álcool com umgrupo tal como (C1-C6)Hlcanoiloximetila, 1-((C1-C6)alcanoilóxi)etil, 1-metil-1-((C1-C6)alcanoilóxi)etila, (C1-C6)alcoxicarboniloximetila, N-(C1-C6)alcoxicarbonilaminometila, succinoíla, (C1-C6)alcanoíla, a-amino(C1-C-6alcanoíla, arilacila e α-aminoacila ou a-aminoacil-a-aminoacila, onde cadagrupo α-aminoacila é selecionado independentemente a partir dos L-aminoácidos de ocorrência natural, P(O)(OH)2, -P(0)(0(C1-C6)alquil)2 ou gli-cosila (o radical resultando da remoção de um grupo hidroxila da forma dehemiacetal de um carboidrato).

Portanto, de acordo com outro aspecto, a presente invenção for-nece o uso de um pró-fármaco de um composto de Fórmula I na fabricaçãode um medicamento para o tratamento com um composto de acordo comreivindicação 1 de uma condição mediada por cinase em um mamífero. Emuma modalidade, o pró-fármaco é um pró-fármaco de fosfato.

Em outro aspecto, a presente invenção fornece um método detratar ou prevenir uma condição mediada por cinase em um mamífero comum composto de Fórmula I, compreendendo administrar ao mamífero umpró-fármaco de um composto de Fórmula I em uma quantidade eficaz paratratar prevenir a referida condição mediada por cinase. Em uma modalidade,o pró-fármaco é um pró-fármaco de fosfato.

De acordo com outro aspecto, portanto, a presente invenção for-nece diidrogenofosfato de 2-(5-(2-((3-(3-fe/-c-butil-1-p-tolil-1H-pirazol-5-il)ureído)-metil)-4-flúor-fenóxi)-1H-indazol-lHl)etila, ou um sal farmaceutica-mente aceitável deste.

Sem desejar estar ligado por teoria, acredita-se que o compostode éster de fosfato funciona como um pró-fármaco para o álcool primáriocorrespondente.

Como descrito aqui, o éster de fosfato do composto de Fórmula Ifoi constatado possuir solubilidade particularmente boa.

Um "sal farmaceuticamente aceitável", a menos que de outramaneira indicado, inclui sais que mantêm a eficácia biológica da base ouácido livre correspondente do composto especificado e não são biologica-mente ou de outra maneira indesejáveis. Um composto da invenção podepossuir um grupo suficientemente ácido, um grupo suficientemente básico,ou ambos os grupos funcionais, e conseqüentemente reagir com quaisquerde vários ácidos ou bases inorgânicas ou orgânicas para formar um sal far-maceuticamente aceitável. Exemplos de sais farmaceuticamente aceitáveisincluem aqueles sais preparados por reação dos compostos desta invençãocom um ácido mineral ou orgânico ou uma base inorgânica, tais sais incluin-do, porém não limitados a, sulfatos, pirossulfatos, bissulfatos, sulfitos, bissul-fitos, fosfato, monoidrogenofosfatos, diidrogenofosfatos, metafosfatos, piro-fosfatos, cloreto, brometos, iodetos, acetato, propionatos, decanoatos, capri-latos, acrilatos, formatos, isobutiratos, caproatos, heptanoatos, propiolatos,oxalatos, malonatos, succinatos, suberatos, sebacatos, fumaratos, maleatos,butin-1,4-dioatos, hexina-1,6-dioatos, benzoatos, clorobenzoatos, metilben-zoatos, dinitrobenzoatos, hidroxibenzoatos, metoxibenzoatos, ftalatos, sulfo-natos, xilenossulfonatos, fenilacetatos, fenilpropionatos, fenilbutiratos, citra-tos, lactatos, γ-hidroxibutiratos, glicolatos, tartaratos, metanossulfonatos,propanossulfonatos, naftaleno-1 -sulfonatos, naftáleno-2-sulfonatos e mande-latos. Como um único composto desta invenção pode-se incluir mais de umaporção ácida ou básica, os compostos desta invenção podem incluir mono,di ou trissais em um único composto.

Se o composto inventivo é uma base, o sal farmaceuticamenteaceitável desejado pode ser preparado por qualquer método adequado dis-ponível na técnica, por exemplo, por tratamento da base livre com um com-posto ácido, por exemplo, um ácido inorgânico tal como ácido ácido clorídri-co, ácido bromídrico, ácido sulfúrico, ácido nítrico, ácido fosfórico e similares,ou com um ácido orgânico, tal como ácido acético, ácido maléico, ácido su-cínico, ácido mandélico, ácido fumárico, ácido malônico, ácido pirúvico, áci-do oxálico, ácido glicólico, ácido salicílico, um ácido de piranosidila tal comoácido glicurônico ou ácido galacturônico, um ácido alfa-hidróxi tal como ácidocítrico ou ácido tartárico, um aminoácido tal como ácido aspártico ou ácidoglutâmico, um ácido aromático tal como ácido benzóico ou ácido cinâmico,um ácido sulfônico tal como ácido p-toluenossulfônico ou ácido etanossulfô-nico ou similares.Se o composto inventivo é um ácido, o sal farmaceuticamenteaceitável desejado pode ser preparado por qualquer método adequado, porexemplo, por tratamento do ácido livre com uma base inorgânica ou orgâni-ca. Exemplos de sais inorgânicos adequados incluem aqueles formados commetais alcalino-terrosos e de álcali tais como lítio, sódio, potássio, bário ecálcio. Exemplos de sais de base orgânicos adequados incluem, por exem-plo, amônio, dibenzilamônio, benzilamônio, 2-hidroxietilamônio, bis(2-hidroxietil)amônio, feniletilbenzilamina, dibenziletilenodiamina, e similares.Outros sais de porções ácidas podem incluir, por exemplo, aqueles sais for-mados com procaína, quinina e N-metilglicosamina, mais sais formados comaminoácidos básicos tais como glicina, ornitina, histidina, fenilglicina, Iisina earginina.

Os compostos de Fórmula I da mesma forma incluem outros saisde tais compostos que não são necessariamente sais farmaceuticamenteaceitáveis, e que podem ser úteis como intermediários para preparar e/oupurificar compostos de Fórmula I e/ou para separar enantiômeros de com-postos de Fórmula I.

Esta invenção da mesma forma abrange compostos isotopica-mente rotulados desta invenção que são idênticos àqueles relacionados a-qui, a não ser pelo fato que um ou mais átomos são substituídos por um á-tomo que tem uma massa atômica ou número de massa diferente da massaatômica ou número de massa normalmente encontrado na natureza. Com-postos isotopicamente rotulados desta invenção podem geralmente ser pre-parados seguindo procedimentos análogos àqueles descritos nos Esquemase/ou nos Exemplos aqui abaixo, substituindo-se um reagente isotopicamenterotulado para um reagente não isotopicamente rotulado.

SÍNTESE DE COMPOSTOS DA INVENÇÃO

Os compostos desta invenção podem ser preparados por rotinassintéticas que incluem processos análogos àqueles conhecidos nas técnicasquímicas, ou como descrito no pedido de patente internacional, número depublicação WO 2004/078116, particularmente levando em conta a descriçãocontida aqui. Os materiais de partida estão geralmente disponíveis de fontescomerciais tais como Aldrich Chemicals (Milwaukee, Wl) ou são facilmentepreparados utilizando-se métodos bem-conhecidos por aqueles versados natécnica (por exemplo, preparados por métodos generalmente descritos emLouis F. Fieser e Mary Fieser, Reagents for Organic Synthesis, v. 1-19, Wi-ley, N.Y. (1967-1999 ed.), ou Beilsteins Handbuch der organischen Chemie,4, Aufl. ed. Springer-Verlag, Berlim, incluindo suplementos (da mesma formadisponíveis por meio da base de dados online de Beilstein).

De acordo com outro aspecto, a presente invenção fornece umprocesso para a preparação de um composto de Fórmula I ou um sal farma-ceuticamente aceitável deste, que compreende,:

(a) acoplar um composto de fórmula Il

<formula>formula see original document page 13</formula>

ou um sal deste, em que P1 representa um átomo de hidrogênio ou umagrupo protetor de hidroxila, com um composto de fórmula Ill

<formula>formula see original document page 13</formula>

em que Z representa um grupo de saída, ou o isocianato correspondente; ou

(b) reduzir um composto de fórmula IV

<formula>formula see original document page 13</formula><formula>formula see original document page 14</formula>

em que Re representa um átomo de hidrogênio ou um resíduo de um álcool;seguido por remoção de qualquer grupo protetor e, se desejado, por forma-ção de um sal farmaceuticamente aceitável.

Exemplos de grupos protetores de hidroxila convenientes repre-sentados por P1 incluem hemicetais cíclicos, tal como tetraidro-2H-piran-2-ila.

O grupo de saída representado por Z pode ser, por exemplo, umgrupo hidrocarbilóxi substituído ou não substituído, por exemplo, um grupohalo(1-6C)alcóxi, tal como 2,2,2-tricloroetóxi, um grupo alquenilóxi tal comoCH2=C(CH3)O-, ou um grupo arilóxi opcionalmente substituído, por exemplo,com um ou mais grupos selecionados a partir de F, Cl, Br, e NO2. Valoresparticulares para um grupo arilóxi opcionalmente substituído incluem fenóxi,4-clorofenóxi, 4-bromofenóxi, 4-fluorofenóxi, 4-nitrofenóxi, e 2-nitrofenóxi.Em uma modalidade particular, Z é fenóxi.

Foi constatado que o composto IV pode ser isolado vantajosa-mente em bom rendimento e pureza alta sem uma etapa de cromatografiaquando Z do composto Ill for um grupo arilóxi opcionalmente substituído, talcomo um grupo fenóxi.

O acoplamento de um composto de fórmula (II) com um compos-to de fórmula (III) quando Z for um grupo fenóxi opcionalmente substituídopode ser convenientemente realizado em uma temperatura entre 0 e 100 °C,e mais particularmente em temperatura ambiente. Solventes convenientesincluem solventes apróticos tais como éteres (por exemplo, tetraidrofuranoou p-dioxano), DMF1 DMSO, ou acetonitrila. A reação de acoplamento é rea-lizada convenientemente na presença de uma base tal como uma amina ter-ciária (por exemplo, trietilamina ou DMA).

Valores particulares de Re quando representados por um resíduode um álcool incluem grupos (1-6C)alcóxi, tal como etóxi.

Acredita-se que os compostos das fórmulas (II) e (IV) sejam no-vos e fornecidos como outros aspectos da invenção.

Acredita-se que os compostos de fórmula (III) quando Z é repre-sentado por um grupo arilóxi opcionalmente substituído sejam também no-vos e fornecidos como aspectos adicionais da invenção.

Em outro aspecto, a presente invenção fornece um processopara preparar um pró-fármaco de fosfato do composto de Fórmula I, isto é,diidrogenofosfato de 2-(5-(2-((3-(3-terc-butil-1-p-tolil-1H-pirazol-5-il)ureído)metil)-4-fluorofenóxi)-1H-indazol-1-il)etila, ou um sal farmaceutica-mente aceitável deste que compreende a fosforilação de 1-(3-terc-butil-1-p-tolil-1 H-pirazol-5-il)-3-(5-flúor-2-(1-(2-hidroxietil) -1 H-indazol-5-ilóxi)benzil)uréia, ou um sal deste.

A fosforilação conseqüentemente é realizada reagindo-se o ál-cool com uma dialquil ou diaril dialquilfosfinamidita, tal como di-terc-butil dii-sopropilfosfinamidita ou difenil diisopropilfosfinamidita, seguido por remoçãodos grupos alquila ou arila no produto de fosfato por hidrólise ou hidrogena-ção catai ítica.

Para propósitos ilustrativos, Esquemas 1 e 2 e os Exemplos ilus-tram métodos para preparar os compostos desta invenção bem como inter-mediários fundamentais. Aqueles versados na técnica apreciarão que outrasrotinas sintéticas podem ser utilizadas para sintetizar os compostos inventi-vos. Embora materiais de partida específicos e reagentes sejam descritosnos Esquemas e discutidos abaixo, outros materiais de partida e reagentespodem ser facilmente substituídos para fornecer uma variedade de deriva-dos e/ou condições de reação. Além disso, muitos compostos preparadospelos métodos descritos abaixo podem ser também modificados levando emconta esta descrição utilizando a química convencional bem-conhecida poraqueles versados na técnica.

<formula>formula see original document page 16</formula>

Esquema 1<formula>formula see original document page 17</formula>

Esquema 2

A redução de nitrila de composto 77 como mostrado em 2 requerconcentrações altas de ácido (por exemplo, HCI ou ácido acético) para mi-nimizar a formação de dímero. Entretanto, concentrações mais altas de áci-do podem da mesma forma causar hidrólise de algum dos compostos deéster 78 ao ácido correspondente. Esquema 3 ilustra um processo melhora-do para a preparação do composto de Fórmula I, que reduz a formação dodímero e impurezas de ácido.<formula>formula see original document page 18</formula>

Esquema 3

Esquema 3 ilustra um método de reduzir o grupo éster do com-posto 77 ao álcool correspondente antes da redução do grupo nitrila parafornecer composto 79A livre de impurezas ácidas e com formação mínimade impurezas de dímero.

Mais especificamente, o composto 77 pode ser reduzido em umaspecto em etapas, em que o grupo éster é reduzido com boroidreto de só-dio em um solvente adequado para fornecer o composto de álcool corres-pondente 78A. O grupo nitrila do composto 78A é, em seguida, reduzido sobcondições de hidrogenação catalítica padrão ou utilizando-se boreto de ní-quel em um solvente orgânico adequado para fornecer o composto metil a-mina correspondente 79A.

A rotina mostrada no Esquema 3 ofertas várias vantagens sobreas rotinas mostradas no Esquema 2 para a formação do composto de Fór-mula I. Utilizando-se as rotinas mostradas no Esquema 3, a redução do gru-po nitrila pode ser realizada com concentrações mais altas de HCI, que van-tajosamente diminui a quantidade de impureza de dímero que forma-se. A-lém disso, a rotina mostrada no Esquema 3 evita o uso de boroidreto de só-dio na etapa final, desse modo evitando as etapas de purificação adicionalpara remover as impurezas de boro residuais a partir do produto final. Por-tanto, incluindo-se a etapa de redução de boroidreto de sódio mais cedo naseqüência de reação, boro residual pode ser removido facilmente durante asetapas de seqüência intermediárias. Além disso, o acoplamento do compos-to amino álcool 79A com o composto 69A pode ser realizado em temperatu-ras mais baixas, desse modo, melhorando a pureza do produto 72. Adequa-damente, a rotina mostrada no Esquema 3 permite o processamento melho-rado para a síntese do composto de Fórmula I, e por conseguinte forneceuma rotina sintética eficiente para a produção do composto de Fórmula I queé mais amena ou adequada para fabricação em grande escala.

Conseqüentemente, da mesma forma fornecido é um processopara preparar um composto de fórmula (II), compreendendo:

(i) reduzir um composto de fórmula (V)

<formula>formula see original document page 19</formula>

em que P2 representa hidrogênio ou um grupo protetor hidroxila, sob condi-ções de hidrogenação catalíticas ou na presença de boreto de níquel.

Referindo-se a etapa (i), catalisadores de hidrogenação incluemqualquer catalisador de paládio adequado, tal como Pd(OH)2 ou paládio su-portado em carbono. A hidrogenação ocorre sob condições ácidas (tal comopela adição de um ácido, por exemplo HCI ou ácido acético) ou com a adi-ção de amônio. A hidrogenação catalítica pode ser realizada em qualquersistema de solvente adequado tal como um álcool (por exemplo, metanol,etanol, isopropanol), éster (por exemplo, acetato de etila) ou éter (por exem-pio, THF). Solventes mistos, por exemplo, álcool e THF, são da mesma for-ma adequados para a etapa de hidrogenação. Pressão de hidrogênio podeestar na faixa entre 1,76 kg/cm2 a 7,03 kg/cm (25 a 100 psi), por exemplo,2,81 kg/cm2 (40 psi) A redução é realizada tipicamente em uma temperaturaentre 20 - 100°C.

Referindo-se a etapa (i), o boreto de níquel pode ser preparadoin situ a partir de um sal de metal de transição, preferivelmente um sal deNi(II), e boroidreto de sódio. Em uma modalidade preferida, o boreto de ní-quel é preparado a partir de cloreto de níquel (II) e boroidreto de sódio. Areação é realizada convenientemente em um solvente adequado tal comoum álcool (por exemplo, metanol, etanol, isopropanol). A redução é realizadatipicamente em temperatura ambiente.

Um composto de fórmula (V) pode ser preparado reduzindo-seum composto de fórmula (VI)

<formula>formula see original document page 20</formula>

em que P3 é como definido para P2, utilizando-se quaisquer condições deredução de éster convenientes (por exemplo, boroidreto de sódio), em umsolvente adequado tal como um álcool (por exemplo, metanol, etanol, iso-propanol).

Na preparação de compostos desta invenção, a proteção defuncionalidades remotas (por exemplo, aminas primárias ou secundárias,álcoois, etc.) de intermediários pode ser necessária. A necessidade para talproteção variará dependendo da natureza da funcionalidade remota e dascondições dos métodos de preparação. Por exemplo, grupos protetores ami-no adequados (NH-Pg) incluem acetila, trifluoroacetila, t-butoxicarboniía(BOC), benziloxicarbonila (CBz) e 9-fluorenilmetilenooxicarbonila (Fmoc).Grupos protetores hidroxila convenientes incluem tetraidro-2H-piran-2-ila,benzila, trialquilsilila e acetal. A necessidade para tal proteção é facilmentedeterminada por alguém versado na técnica. Para uma descrição geral degrupos protetores e seu uso, veja T. W. Greene, Protective Groups in Orga-nic Synthesis, John Wiley & Sons, New York, 1991.

MÉTODOS DE TRATAMENTO

Os compostos da invenção podem ser utilizados para tratar do-enças mediadas por modulação ou regulação de proteína cinases. Adequa-damente, outro aspecto da invenção fornece métodos de tratar ou prevenirdoenças ou condições descritas aqui por administração a um mamífero, talcomo um ser humano, uma quantidade terapeuticamente eficaz de um com-posto desta invenção ou solvato, metabólito, ou sal farmaceuticamente acei-tável deste, em uma quantidade eficaz para tratar ou prevenir o referido dis-túrbio. Em uma modalidade, o método compreende administrar a um mamí-fero um composto desta invenção em uma quantidade eficaz para inibir umaou mais cinases.

Uma "quantidade eficaz" refere-se a uma quantidade de com-posto que, quando administrada a um mamífero em necessidade de tal tra-tamento, é suficiente para realizar o tratamento para uma doença mediadapela atividade de uma ou mais proteína cinases, tal como p38 MAPK, e oseventos mediados por cinase associados tal como produção de citocina. Porexemplo, uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto destainvenção ou um sal, metabólito ativo deste, é uma quantidade suficiente paramodular, regular, ou inibir a atividade de uma ou mais proteína cinases talque uma condição de doença que é mediada por essa atividade é reduzidaou aliviada.

"Tratando" é pretendido significar pelo menos a mitigação deuma condição de doença em um mamífero, tal como um ser humano, que éafetado, pelo menos em parte, pela atividade de um ou mais proteína cina-ses. Os termos "tratar" e "tratamento" refere-se ao tratamento terapêutico emedidas profiláticas ou preventivas, em que o objetivo é prevenir ou reduzir(diminuir) um distúrbio ou mudança fisiológica indesejada. Para propósitosdesta invenção, resultados benéficos ou clínicos desejados incluem, porémnão são limitados ao alívio de sintomas, diminuição da extensão da doença,estado estabilizado (isto é, não piorando) de doença, retardo ou redução doprogressão de doença, melhora ou mitigação do estado de doença, e remis-são (seja parcial ou total), seja detectável ou não detectável. "Tratamento"pode da mesma forma significar sobrevivência quando comparado à sobre-vivência esperada se não recebendo tratamento. Aqueles em necessidadede tratamento incluem aqueles já com a condição ou distúrbio bem comoaqueles propensos a ter a condição ou distúrbio ou aqueles em que a condi-ção ou distúrbio deve ser prevenido.

A quantidade de um composto desta invenção administrada aum mamífero variará dependendo de fatores tais como o composto particu-lar, condição de doença e sua gravidade, a identidade (por exemplo, peso)do mamífero em necessidade de tratamento, porém pode, todavia, ser roti-neiramente determinada por alguém versado na técnica.

Quando utilizado aqui, o termo "mamífero" refere-se a um animalhomeotérmico que tem ou está em risco de contrair uma doença descritaaqui e inclui, porém não está limitado a, cobaias, cachorros, gatos, ratos,camundongos, hamsters e primatas, incluindo humanos.

Em um aspecto desta invenção, os compostos desta invençãoou sais farmacêuticos destes podem ser formulados em composições farma-cêuticas para administração em animais ou seres humanos para tratar ouprevenir uma condição mediada por cinase. O termo "condição mediada porcinase" quando utilizado aqui significa qualquer doença ou outra condiçãodanosa em que p38 é conhecido por desempenhar um papel, e inclui condi-ções que são conhecidas por ser causadas por superprodução de IL-I, TNF,IL-6 ou IL-8. Tais condições incluem, porém não são limitadas a, doençasinflamatórias, doenças auto-imunes, distúrbios ósseos destrutivos, distúrbiosproliferativos, doenças infecciosas, doença viral, doença fibrótica e doençasneurodegenerativas.

Doenças inflamatórias que podem ser tratadas ou prevenidasincluem, porém não são limitadas a, pancreatite aguda, pancreatite crônica,asma, alergias, e síndrome da angústia respiratória de adulto.Doenças auto-imunes que podem ser tratadas ou prevenidasincluem, porém não são limitadas a, glomeralonefrite, artrite reumatóide, lú-pus eritematoso sistêmico, escleroderma, tireoidite crônica, doença de Gra-ve, gastrite auto-imune, diabetes melito insulino-dependente (Tipo I), anemiahemolítica auto-imune, neutropenia auto-imune, trombocitopenia, dermatiteatópica, hepatite ativa crônica, miastenia grave, esclerose múltipla, doençainflamatória do intestino, colite ulcerativa, doença de Crohn, psoríase, oudoença do enxerto vs. hospedeiro.

Distúrbios ósseos destrutivos que podem ser tratados ou preve-nidos incluem, porém não são limitados a, osteoporose, osteoartrite e distúr-bio ósseo relacionado ao mieloma múltiplo.

Doenças fibróticas que podem ser tratadas ou prevenidas inclu-em, porém não são limitadas a, fibrose pulmonar idiopática, rim e fibrose defígado.

Doenças proliferativas que podem ser tratadas ou prevenidasincluem, porém não são limitadas a, leucemia mielogenosa aguda, leucemiamielogenosa crônica, melánoma metastático, sarcoma de Kaposi, síndromemielodisplástica, mieloma múltiplo, astrocitoma, câncer ósseo, câncer cere-bral, câncer de mama, câncer colorretal, câncer gástrico, glioma, glioblasto-ma, multiforme, câncer de cabeça e pescoço, câncer hematológico, distúr-bios de hematopoiese, doenças pulmonares intersticiais, sarcoma de kaposi,leucemia linfocítica, melanoma, leucemia mielóide, câncer de pulmão de cé-lula não pequena, câncer ovariano, câncer prostático, sarcoma, câncer depele, câncer de pulmão de célula pequena, e câncer de estômago. Outrospacientes que podem ser tratados incluem aqueles que submetem-se atransplante de medula óssea.

Doenças infecciosas que podem ser tratadas ou prevenidas in-cluem, porém não são limitadas a, sepse, choque séptico e Shigellosis.

Doenças virais que podem ser tratadas ou prevenidas incluem,porém não são limitadas a, infecção por hepatite aguda (incluindo hepatite A1hepatite B e hepatite C), infecção por HIV e retinite por CMV.

Condições degenerativas ou doenças que podem ser tratadasou prevenidas pelos compostos desta invenção incluem, porém não são limi-tadas a, mal de Alzheimer, mal de Parkinson, isquemia cerebral e outras do-enças neurodegenerativas.

O termo "condições mediadas por cinase" inclui isquemi-a/reperfusão em acidente vascular cerebral, ataques cardíacos, isquemiamiocárdica, hipoxia de órgão, hiperplasia vascular, hipertrofia cardíaco e a-gregação de plaquetas induzida por trombina.

Além disso, os inibidores de cinase desta invenção são da mes-ma forma úteis para inibir a expressão de proteínas pró-inflamatórias induzí-veis tal como prostaglandina endoperóxido sintase-2 (PGHS-2), da mesmaforma como ciclooxigenase-2 (COX-2). Portanto, outras "condições mediadapor cinases" incluem, porém não são limitados a, edema, analgesia, febre edor, tal como dor neuromuscular, dor de cabeça, dor do câncer, dor dental edor de artrite.

As condições e doenças que podem ser tratadas ou prevenidaspelos inibidores de cinase desta invenção podem da mesma forma ser con-venientemente agrupadas pela citocina (por exemplo, IL-1, TNF, IL-6, IL-8)que acredita-se ser responsável pela doença.

Desse modo, uma condição ou doença mediada por IL-1 incluiartrite reumatóide, osteoartrite, acidente vascular cerebral, endotoxemia e/ousíndrome de choque tóxico, reação inflamatória induzida por endotoxina,doença inflamatória do intestino, tuberculose, aterosclerose, degeneraçãomuscular, caquexia, artrite psoriática, síndrome de Reiter, gota, artrite trau-mática, artrite na rubéola, sinovite aguda, diabetes, doença de célula β pan-creática e mal de Alzheimer.

Condições ou doenças mediadas por TNF incluem, porém nãosão limitadas a, artrite reumatóide, espondilite reumatóide, osteoartrite, artri-te gotosa e outras condições artríticas, sepse, choque séptico, choque endo-tóxico, sepse gram-negativa, síndrome de choque tóxico, síndrome da an-gústia respiratória de adulto, malária cerebral, doença inflamatória pulmonarcrônica, silicose, sarcoidose pulmonar, doenças de reabsorção óssea, lesãode reperfusão, reação de enxerto vs. hospedeiro, rejeições ao aloenxerto,febre e mialgias devido à infecção, caquexia secundária à infecção, AIDS,ARC ou malignidade, formação de quelóide, formação do tecido de cicatriz,doença de Crohn, colite ulcerativa ou pirese. Doenças mediadas por TNF damesma forma incluem infecções virais, tal como HIV, CMV, gripe e herpes; einfecções virais veterinárias, tais como infecções por lentivírus, incluindo,porém não limitadas ao vírus da anemia infecciosa eqüina, vírus da artritecaprina, vírus visna ou vírus maedi; ou infecções por retrovírus, incluindovírus da imunodeficiência felina, vírus da imunodeficiência bovina, ou vírusda imunodeficiência canina.

Condições ou doenças mediadas por IL-8 incluem, porém nãosão limitadas a, doenças caracterizadas por infiltração maciça de de neutrófi-los, tais como psoríase, doença inflamatória do intestino, asma, lesão dereperfusão cardíaca e renal, síndrome da angústia respiratória de adulto,trombose e glomerulonefrite.

Além disso, os compostos desta infecção podem ser utilizadostopicamente para tratar ou prevenir condições causadas ou exacerbadas porIL-1 ou TNF. Tais condições incluem, porém não são limitadas à, articula-ções inflamadas, eczema, psoríase, condições de pele inflamatórias tal co-mo queimadura de sol, condições oculares inflamatórias tal como conjuntivi-te, pirese, dor e outras condições associadas com inflamação.

Embora os compostos desta invenção sejam principalmente devalor como agentes terapêuticos para uso dentro animais homeotérmicos(incluindo seres humanos), eles são da mesma forma úteis sempre que forrequerido para inibir os efeitos de citocinas. Desse modo, eles são úteis co-mo padrões farmacológicos para uso no desenvolvimento de novos testesbiológicos e na procura quanto a novos agentes farmacológicos.

O tamanho da dose para propósitos terapêuticos ou profiláticosde um composto desta invenção variará naturalmente de acordo com a natu-reza e gravidade das condições, a idade e sexo do animal ou paciente e arotina de administração, de acordo com princípios bem-conhecidos de medi-cina.

Outro aspecto desta invenção fornece um composto desta in-venção para uso como um medicamento no tratamento das doenças oucondições descritas aqui em um mamífero, por exemplo, um ser humano,sofrendo de tal doença ou condição. Da mesma forma fornecido é o uso deum composto desta invenção na preparação de um medicamento para o tra-tamento das doenças e condições descritas aqui em um animal homeotérmi-co, tal como um mamífero, por exemplo, um ser humano, sofrendo de taldistúrbio.

TERAPIA DE COMBINAÇÃO

Os compostos desta invenção podem ser utilizados em combi-nação com outros fármacos e terapias utilizadas no tratamento de estadosde doença que beneficiariam-se da inibição de cinases e as citocinas asso-ciadas, tal como IL-1, TNF, IL-6 ou IL-8. A dose do segundo fármaco podeser selecionada adequadamente com base em uma dose clinicamente em-pregada. A proporção do composto desta invenção e o segundo fármacopode ser determinada adequadamente de acordo com o indivíduo de admi-nistração, a rotina de administração, a doença-alvo, a condição clínica, acombinação e outros fatores. Em casos onde o indivíduo de administração éum ser humano, por exemplo, o segundo fármaco pode ser utilizado em umaquantidade de 0,01 a 100 partes em peso por parte em peso do compostodesta invenção.

O segundo fármaco da formulação de combinação farmacêuticaou regime de dosagem tem, por exemplo, atividades complementares para ocomposto desta invenção tal que eles não afetam adversamente um ao ou-tro. Tais fármacos estão apropriadamente presentes em combinação emquantidades que são eficazes para o propósito pretendido. Conseqüente-mente, outro aspecto desta invenção fornece uma composição que compre-ende um composto desta invenção em combinação com um segundo fárma-co, tal como descrito aqui.

O composto desta invenção e o(s) fármaco(s) farmaceuticamen-te ativo(s) adicional(ais) pode ser administrado junto em uma composiçãofarmacêutica unitária ou separadamente e, quando administrado separada-mente isto pode ocorrer simultaneamente ou seqüencialmente em qualquerordem. Tal administração seqüencial pode ser em tempo próximo ou emtempo remoto. As quantidades do composto desta invenção e do(s) segun-do(s) fármaco(s) e das distribuições relativas de administração serão sele-cionadas para obter o efeito terapêutico combinado desejado.

A terapia de combinação pode fornecer "sinergia" e revelar ser"sinergístico", isto é, o efeito obtido quando os ingredientes ativos utilizadosjuntos são maiores do que a soma dos efeitos que resulta da utilização doscompostos separadamente. Um efeito sinergístico pode ser atingido quandoum composto desta invenção e o segundo fármaco forem: (1) co-formuladosou administrados ou liberados simultaneamente em uma formulação de do-sagem unitária, combinada; (2) liberados por alternação ou em paralelo co-mo formulações separadas; ou (3) por algum outro regime. Quando libera-dos em terapia de alternação, um efeito sinergístico pode ser atingido quan-do um composto desta invenção e o segundo fármaco são administrados ouliberados seqüencialmente, por exemplo, por injeções diferentes em serin-gas separadas. Por exemplo, durante a terapia de alternação, uma dosagemeficaz de cada ingrediente ativo pode ser administrada seqüencialmente, istoé, serialmente, visto que na terapia de combinação, dosagens eficazes dedois ou mais ingredientes ativos são administradas juntas.

Por exemplo, em virtude de sua capacidade de inibir citocinas,os compostos desta invenção são de valor no tratamento de certas doençasinflamatórias e não inflamatórias que são tratadas atualmente com um fár-maco antiinflamatório não esteróide inibidor de ciclooxigenase (NSAID) talcomo cetorolaco de indometacina, ácido acetilsalicílico, ibuprofeno, sulinda-co, tolmetina e piroxicam. A co-administração de um composto desta inven-ção com um NSAID pode resultar em uma redução da quantidade do últimoagente necessário para produzir um efeito terapêutico, e desse modo a pro-babilidade de efeitos colaterais adversos do NSAID tais como efeitos gastro-intestinais são reduzidos. Desse modo, de acordo em uma outra característi-ca da invenção, é fornecido uma composição farmacêutica que compreendeum composto desta invenção, ou um sal farmaceuticamente aceitável des-tes, em conjunção ou mistura com um agente antiinflamatório não esteróideinibidor de ciclooxigenase, e um veículo ou diluente farmaceuticamente acei-tável.

Os compostos desta invenção podem ser utilizados no tratamen-to de condições tal como artrite reumatóide em combinação com agentesantiartríticos tais como ouro, metotrexato, esteróides e penicilinamina, e emcondições tal como osteoartrite em combinação com esteróides.

Os compostos desta invenção podem ser utilizados no tratamen-to de doenças degradativas, por exemplo, osteoartrite, em combinação comagentes condroprotetores, anti-degradativos e/ou reparadores tal como Dia-cerhein, formulações de ácido hialurônico tais como Hyalan, Rumalon, Arte-paron e sais de glicosamina tal como Antril.

Os compostos desta invenção podem da mesma forma ser utili-zados no tratamento de asma em combinação com agentes antiasmáticostais como broncodilatadores e antagonistas de leucotrieno.

ADMINISTRAÇÃO DE COMPOSTOS DA INVENÇÃO

Os compostos da invenção podem ser administrados por qual-quer rotina apropriada para a condição a ser tratada. Rotinas adequadasincluem oral, parenteral (incluindo subcutânea, intramuscular, intravenosa,intra-arterial, intradérmica, intratecal e epidural), transdérmica, retal, nasal,tópica (incluindo bucal e sublingual), vaginal, intraperitoneal, intrapulmonar eintranasal. Será evidenciado que a rotina utilizada pode variar com, por e-xemplo, a condição do recipiente. Onde o composto é administrado oralmen-te, ele pode ser formulado como uma pílula, cápsula, comprimido, etc. comum excipiente ou veículo farmaceuticamente aceitável. Onde o composto éadministrado parenteralmente, ele pode ser formulado com um veículo pa-renteral farmaceuticamente aceitável e em uma forma injetável de dosagemunitária, como detalhado abaixo.

FORMULAÇÕES FARMACÊUTICAS

Para utilizar um composto desta invenção para o tratamento te-rapêutico (incluindo tratamento profilático) de mamíferos incluindo seres hu-manos, é normalmente formulado de acordo com a prática farmacêutica pa-drão como uma composição farmacêutica. De acordo com este aspecto dainvenção, é fornecido uma composição farmacêutica compreendendo umcomposto desta invenção em associação com um veículo ou diluente farma-ceuticamente aceitável.

As composições farmacêuticas da invenção são formuladas, do-sadas e administradas de uma maneira, isto é, quantidades, concentrações,horários, curso, veículos e rotina de administração, consistente com boa prá-tica médica. Fatores para consideração neste contexto incluem o distúrbioparticular a ser tratado, o mamífero particular a ser tratado, a condição clíni-ca do paciente individual, a causa do distúrbio, o sítio de liberação do agen-te, o método de administração, o horário de administração, e outros fatoresconhecidos pelo médico especializado. A quantidade terapeuticamente efi-caz do composto a ser administrado será governada por tais considerações,e é a quantidade mínima necessária para prevenir, melhorar, ou tratar o dis-túrbio. O composto desta invenção é tipicamente formulado em formas dedosagem farmacêuticas para fornecer uma dosagem facilmente controláveldo fármaco e habilitar a concordância do paciente com o regime prescrito.

A composição para uso aqui é preferivelmente estéril. Em parti-cular, formulações a ser utilizadas para administração in vivo devem ser es-téreis. Tal esterilização é facilmente realizada, por exemplo, por filtração a-través de membranas de filtração estéreis. O composto ordinariamente podeser armazenado como uma composição sólida, uma formulação Iiofilizada oucomo uma solução aquosa.

Formulações farmacêuticas dos compostos desta invenção po-dem ser preparadas para várias rotinas e tipos de administração. Por exem-pio, um composto desta invenção tendo o grau desejado de pureza podeopcionalmente ser misturado com diluentes, veículos, excipientes ou estabi-lizadores farmaceuticamente aceitáveis (Remington's Pharmaceutical Scien-ce (1980) 165 edição, Osol, A. Ed.), na forma de uma formulação liofilizada,um pó moído, ou uma solução aquosa. Formulação pode ser conduzida mis-turando-se em temperatura ambiente ao pH apropriado, e ao grau desejadode pureza, com veículos fisiologicamente aceitáveis, isto é, veículos que sãonão tóxicos em recipientes nas dosagens e concentrações empregadas. OpH da formulação depende principalmente do uso particular e da concentra-ção de composto, porém, pode variar, por exemplo, de cerca de 3 a cerca de8. Formulação em um tampão de acetato em pH 5 é uma modalidade ade-quada. As formulações podem ser preparadas utilizando-se procedimentosde mistura e dissolução convencionais. Por exemplo, a substância de fárma-co em volume (isto é, composto desta invenção ou forma estabilizada docomposto (por exemplo, complexo com um derivado de ciclodextrina ou ou-tro agente de complexação conhecido) é dissolvido em um solvente adequa-do na presença de um ou mais excipientes.

O veículo, diluente ou excipiente particular utilizado dependerádos meios e propósitos para os quais o composto desta invenção está sendoaplicado. Solventes são geralmente selecionados com base em solventesreconhecidos por pessoas versadas na técnica como seguros (GRAS) a seradministrados a um mamífero. Em geral, solventes seguros são solventesaquosos não tóxicos tal como água e outros solventes não tóxicos que sãosolúveis ou miscíveis em água. Solventes aquosos adequados incluem á-gua, etanol, propileno glicol, polietileno glicóis (por exemplo, PEG 400, PEG300), etc. e misturas destes. Diluentes, veículos, excipientes e estabilizado-res aceitáveis são não tóxicos a recipientes nas dosagens e concentraçõesempregadas, e incluem tampões tais como fosfato, citrato e outros ácidosorgânicos; antioxidantes incluindo ácido ascórbico e metionina; conservantes(tal como cloreto de octadecildimetilbenzil amônio; cloreto de hexametônio;cloreto de benzalcônio, cloreto de benzetônio; fenol, álcool butílico ou benzí-lico; alquil parabenos tal como metil ou propil parabeno; catecol; resorcinol;cicloexanol; 3-pentanol; e m-cresol); polipeptídeos de baixo peso molecular(menor do que cerca de 10 resíduos); proteínas, tais como albumina de soro,gelatina, ou imunoglobulinas; polímeros hidrofílicos tais como polivinilpirroli-dona; aminoácidos tal como glicina, glutamina, asparagina, histidina, argini-na, ou lisina; monossacarídeos, dissacarídeos e outros carboidratos incluin-do glicose, manose ou dextrinas; agentes quelantes tal como EDTA; açúca-res tais como sacarose, manitol, trealose ou sorbitol; contra-íons de forma-ção de sal tal como sódio; complexos de metal (por exemplo, complexos deproteína de Zn); e/ou tensoativos não tônicos tais como TWEEN®, PLURO-NICS® ou polietileno glicol (PEG). As formulações podem da mesma formaincluir um ou mais agentes estabilizantes, tensoativos, agentes umectantes,agentes lubrificantes, emulsificantes, agentes de suspensão, conservantes,antioxidantes, agentes opacificantes, deslizantes, auxiliares de processa-mento, corantes, adoçantes, agentes perfumantes, agentes flavorizantes eoutros aditivos conhecidos para fornecer uma apresentação elegante dofármaco (isto é, um composto desta invenção ou composição farmacêuticadeste) ou ajudar na fabricação do produto farmacêutico (isto é, medicamen-to). Os ingredientes farmacêuticos ativos podem da mesma forma ser captu-rados em microcápsulas preparadas, por exemplo, por técnicas de co-acervação ou por polimerização interfacial, por exemplo, hidroximetilceluloseou microcápsulas de gelatina e microcápsulas de poli-(metilmetacrilato), res-pectivamente, em sistemas de liberação de fármaco coloidais (por exemplo,lipossomas, microesferas de albumina, microemulsões, nanopartículas e na-nocápsulas) ou em macroemulsões. Tais técnicas são descritas na Reming-ton's Pharmaceutical Science 16ã edição, Osol, A. Ed. (1980). Um "liposso-ma" é uma vesícula pequena composta de vários tipos de lipídios, fosfolipí-deos e/ou tensoativo que é útil para liberação de um fármaco em um mamí-fero. Os componentes do Iipossoma estão geralmente dispostos em umaformação de bicamada, similar à disposição de lipídio de membranas bioló-gicas.

Preparações de liberação prolongada de compostos desta in-venção podem ser preparadas. Exemplos adequados de preparações deliberação prolongada incluem matrizes semi-permeáveis de polímeros hidro-fóbicos sólidos contendo um composto desta invenção, cujas matrizes estãona forma de artigos moldados, por exemplo, películas ou microcápsulas. E-xemplos de matrizes de liberação prolongada incluem poliésteres, hidrogéis(por exemplo, poli (2-hidroxietil- metacrilato), ou álcool polivinílico), polilactí-deos (Patente U.S. No. 3.773.919), copolímeros de ácido L-glutâmico e ga-ma-etil-L-glutamato, acetato de etileno-vinila não degradável, copolímeros deácido glicólico - ácido lático degradáveis tal como o LUPRON DEPOT® (mi-croesferas injetáveis compostas de copolímero de ácido láctico - ácido glicó-Iico e acetato de leuprolida) e ácido poli-D-(-)-3-hidroxibutírico.

As composições farmacêuticas desta invenção podem ser naforma de uma preparação injetável estéril, tal como uma suspensão aquosaou oleaginosa injetável estéril. Esta suspensão pode ser formulada de acor-do com a técnica conhecida utilizando aqueles agentes dispersantes ou u-mectantes adequados e agentes de suspensão que foram mencionados a-cima. A preparação injetável estéril pode da mesma forma ser uma soluçãoinjetável estéril ou suspensão em um solvente ou diluente parenteralmenteaceitável não tóxico, tal como uma solução em 1,3-butanodiol ou preparadacomo um pó liofilizado. Entre os veículos aceitáveis e solventes que podemser empregados estão água, solução de Ringer e solução de cloreto de só-dio isotônica. Além disso, óleos fixos estéreis podem convencionalmente serempregados como um solvente ou meio de suspensão. Para este propósito,qualquer óleo fixo suave pode ser empregado incluindo mono ou diglicerí-deos sintéticos. Além disso, ácidos graxos tal como ácido oléico podem i-gualmente ser utilizados na preparação de injetáveis.

Composições farmacêuticas desta invenção adequadas paraadministração parenteral incluem soluções de injeção estéreis aquosas enão aquosas que podem conter antioxidantes, tampões, bacteriostatos esolutos que tornam a formulação isotônica com o sangue do recipiente des-tinado; e suspensões estéreis aquosas e não aquosas que podem incluiragentes de suspensão e espessantes.

As composições da invenção podem da mesma forma ser formu-25 Iadas em uma forma adequada para uso oral (por exemplo como comprimi-dos, pastilhas, cápsulas duras ou macias, suspensões aquosas ou oleosas,emulsões, pós dispersíveis ou grânulos, xaropes ou elixires), para uso tópico(por exemplo, como cremes, ungüentos, géis, ou soluções ou suspensõesaquosas ou oleosas), para administração através de inalação (por exemplo,como um pó finamente dividido ou um aerossol líquido), para administraçãopor insuflação (por exemplo, como um pó finamente dividido)

Excipientes farmaceuticamente aceitáveis adequados para umaformulação de comprimido incluem, por exemplo, diluentes inertes tais comolactose, carbonato de sódio, fosfato de cálcio ou carbonato de cálcio, agen-tes de granulação e desintegrantes tal como amido de milho ou ácido algêni-co; agentes de ligação tal como amido; agentes lubrificantes tal como estea-rato de magnésio, ácido esteárico ou talco; agentes conservantes tais comop-hidroxibenzoato de etila ou propila, e antioxidantes, tal como ácido ascór-bico. Formulações de comprimido podem ser não revestidas ou revestidaspara modificar sua desintegração e a absorção subseqüente do ingredienteativo dentro do trato gastrointestinal, ou para melhorar sua estabilidade e/ouaparência, em qualquer caso, utilizando-se agentes de revestimento con-vencionais e procedimentos conhecidos na técnica.

Composições para uso oral podem ser formuladas na forma decápsulas de gelatina duras em que o ingrediente ativo é misturado com umdiluente sólido inerte, por exemplo, carbonato de cálcio, fosfato de cálcio oucaulim, ou como cápsulas de gelatina macias em que o ingrediente ativo émisturado com água ou um óleo tal como óleo dè amendoim, óleo de parafi-na, ou azeite de oliva.

Suspensões aquosas geralmente contêm o ingrediente ativo emforma finamente pulverizada juntamente com um ou mais agentes de sus-pensão, tais como carboximetilcelulose sódica, metilcelulose, hidroxipropil-metilcelulose, alginato de sódio, polivinil-pirrolidona, goma tragacanto e go-ma acácia; agentes dispersantes ou umectantes tais como Iecitina ou produ-tos de condensação de um óxido de alquileno com ácidos graxos (por e-xemplo, estearato de polioxetileno), ou produtos de condensação de óxidode etileno com álcoois alifáticos de cadeia longa, por exemplo, heptadecaeti-lenooxicetanol, ou produtos de condensação de óxido de etileno com ésteresparciais derivados de ácidos graxos e um hexitol tal como monooleato desorbitol de polioxietileno, ou produtos de condensação de óxido de etilenocom ésteres parciais derivados de ácidos graxos e anidridos de hexitol, porexemplo, monooleato de sorbitano de polietileno. As suspensões aquosaspodem da mesma forma conter um ou mais conservantes (tal como p-hidroxibenzoato de etila ou propila, antioxidantes (tal como ácido ascórbico),agentes corantes, agentes flavorizantes, e/ou agentes adoçantes (tal comosacarose, saca riria ou aspartame).

Suspensões oleosas podem ser formuladas suspendendo-se oingrediente ativo em um óleo vegetal (tal como óleo de amendoim, azeite deoliva, óleo de gergelim ou óleo de coco) ou em um óleo mineral (tal comoparafina líquida). As suspensões oleosas podem da mesma forma conter umagente espessante tal como cera de abelha, parafina dura ou álcool cetílico.Agentes adoçantes tais como aqueles mencionados acima, e agentes flavo-rizantes podem ser adicionados para fornecer uma preparação oral saboro-sa. Estas composições podem ser preservadas pela adição de um antioxi-dante tal como ácido ascórbico.

Pós dispersíveis e grânulos adequados para preparação de umasuspensão aquosa pela adição de água geralmente contêm o ingredienteativo juntamente com um agente dispersante ou umectante, agente de sus-pensão e um ou mais conservantes. Agentes dispersantes ou umectantesadequados e agentes de suspensão são exemplificados por aqueles já men-cionados acima. Excipientes adicionais tais como agentes adoçantes, flavo-rizantes e corantes, podem da mesma forma estar presentes.

As composições farmacêuticas da invenção podem da mesmaforma ser na forma de emulsões de óleo-em-água. A fase oleosa pode serum óleo vegetal, tal como azeite de oliva ou óleo de amendoim, ou um óleomineral, tal como por exemplo, parafina líquida ou uma mistura de quaisquerdestes. Agentes emulsificantes adequados podem ser, por exemplo, gomasde ocorrência natural tal como goma acácia ou goma tragacanto, fosfatídeosde ocorrência natural tais como soja, Iecitina1 ésteres ou ésteres parciais de-rivados a partir de ácidos graxos e anidridos de hexitol (por exemplo, monoo-Ieato de sorbitano) e produtos de condensação dos referidos ésteres parciaiscom óxido de etileno tal como monooleato de sorbitano de polioxietileno. Asemulsões podem da mesma forma conter agentes adoçantes, flavorizantes econservantes.

Xaropes e elixires podem ser formulados com agentes adoçan-tes tais como glicerol, propileno glicol, sorbitol, aspartame ou sacarose, epodem da mesma forma conter um agente demulcente, conservante, flavori-zante e/ou corante.

Formulações de supositório podem ser preparadas misturando-se o ingrediente ativo com um excipiente não irritante adequado que é sólidoem temperaturas ordinárias, porém, líquido na temperatura retal e, portanto,derreterá no reto para Iiberaro fármaco. Excipientes adequados incluem, porexemplo, manteiga de cacau e polietileno glicóis. Formulações adequadaspara administração vaginal podem ser apresentadas como pessários, tam-pões, cremes, géis, pastas, espumas ou formulações em spray contendoalém do ingrediente ativo tais veículos como são conhecidos na técnica a serapropriada.

Formulações tópicas, tais como cremes, ungüentos, géis e sus-pensões ou soluções aquosas ou oleosas, podem geralmente ser obtidasformulando-se um ingrediente ativo com um veículo ou diluente convencio-nal, topicamente aceitável, utilizando procedimentos convencionais bem-conhecidos na técnica.

Composições para administração transdérmica podem ser naforma daqueles emplastros de pele transdérmicos que são bem-conhecidospor aqueles de experiência ordinária na técnica.

Composições para administração por insuflação podem ser naforma de um pó finamente dividido contendo partículas de diâmetro médiode, por exemplo, 30 μιτι ou muito menor, o próprio pó compreendendo ingre-diente ativo sozinho ou diluído com um ou mais veículos fisiologicamenteaceitáveis tal como lactose. O pó para insuflação é, em seguida, convenien-temente retido em uma cápsula contendo, por exemplo, 1 a 50 mg de ingre-diente ativo para uso com um dispositivo turboinalador, tal como é utilizadopara insuflação do agente conhecido, cromoglicato sódico.

Composições para administração por inalação podem ser naforma de um aerossol pressurizado convencional disposto para distribuir oingrediente ativo como um aerossol contendo gotículas sólidas ou líquidasfinamente divididas. Propelentes de aerossol convencionais tais como hidro-carboneto fluorados voláteis ou hidrocarbonetos podem ser utilizados e odispositivo de aerossol é convenientemente disposto para distribuir umaquantidade medida de ingrediente ativo.

A composição farmacêutica (ou formulação) para aplicação podeser empacotada em uma variedade de maneiras dependendo do métodoutilizado para administrar o fármaco. Por exemplo, um artigo para distribui-ção pode incluir um recipiente tendo depositado nele a formulação farmacêu-tica em uma forma apropriada. Recipientes adequados são bem-conhecidospor aqueles versados na técnica e incluem materiais tais como frascos (plás-ticos e vidro), sachês, ampolas, bolsas plásticas, cilindros de metal e simila-res. O recipiente pode, da mesma forma, incluir um dispositivo à prova deviolação para prevenir o acesso indiscreto aos conteúdos do pacote. Alémdisso, o recipiente tem depositado nele um rótulo que descreve os teores dorecipiente. O rótulo pode, da mesma forma, incluir advertências apropriadas.

As formulações podem, da mesma forma, ser empacotadas em recipientesde dose unitária ou múltiplas doses, por exemplo, ampolas seladas e frasco-netes, e podem ser armazenadas em uma condição secada por congela-mento (IiofiIizada) requerendo apenas a adição do veículo líquido estéril, porexemplo, água, para injeção imediatamente antes do uso. Suspensões esoluções de injeção extemporâneas são preparadas a partir de pós estéreis,grânulos e comprimidos do tipo previamente descritos. Formulações de do-sagem unitária preferidas são aquelas contendo uma dose diária ou subdoseunitária diária, como aqui acima referido, ou uma fração apropriada destas,do ingrediente ativo.

A invenção, portanto, também fornece composições veterináriascompreendendo pelo menos um ingrediente ativo como acima definido jun-tamente com um veículo veterinário. Os veículos veterinários são materiaisúteis para o propósito de administração da composição e podem ser materi-ais sólidos, líquidos ou gasosos que são de outra maneira inertes ou aceitá-veis na técnica veterinária e são compatíveis com o ingrediente ativo. Estascomposições veterinárias podem ser administradas parenteralmente, oral-mente ou por qualquer outra rotina desejada.

A quantidade de um composto desta invenção que é combinadacom um ou mais excipientes para produzir uma única forma de dosagemvariará necessariamente dependendo do indivíduo tratado, da gravidade dodistúrbio ou condição, da taxa de administração, da disposição do compostoe da discrição da prescrição médica. Em uma modalidade, uma quantidadeadequada de um composto desta invenção é administrada a um mamíferoem necessidade desta. Administração em uma modalidade ocorre em umaquantidade entre cerca de 0,001 mg/kg de peso corporal a cerca de 60mg/kg de peso corporal por dia. Em outra modalidade, administração ocorreem uma quantidade entre 0,5 mg/kg de peso corporal a cerca de 40 mg/kgde peso corporal por dia. Em alguns exemplos, níveis de dosagem abaixo dolimite inferior da faixa supracitada pode ser mais do que adequada, enquantoem outros casos doses ainda maiores podem ser empregadas sem causarqualquer efeito colateral prejudicial, contanto que tais doses maiores sejamprimeiro divididas em várias doses pequenas para administração ao longodo dia. Para outra informação sobre rotinas de administração e regimes dedosagem, veja Capítulo 25.3 no Volume 5 de Comprehensive MedicinalChemistry (Corwin Hansch; Chairman of Editorial Board), Pergamon Press1990, que está especificamente incorporado aqui por referência.

ARTIGOS DE FABRICAÇÃO

Em outra modalidade da invenção, um artigo de fabricação, ou"kit", contendo materiais úteis para o tratamento dos distúrbios descritos a-cima é fornecido. Em uma modalidade, o kit compreende um recipientecompreendendo um composto desta invenção. Por exemplo, recipientes a-dequados incluem frascos, frasconetes, seringas, embalagem de bolhas, etc.O recipiente pode ser formado a partir de uma variedade de materiais taiscomo vidro ou plástico. O recipiente pode sustentar um composto desta in-venção ou uma formulação deste que é eficaz para tratar a condição e podeter um orifício de acesso estéril (por exemplo, o recipiente pode ser uma bol-sa de solução intravenosa ou um frasconete tendo um tampão perfurável poruma agulha de injeção hipodérmica).

O kit pode também compreender um rótulo ou inserção de paco-te sobre ou associado com o recipiente. O termo "inserção de pacote" é utili-zado para referir-se às instruções habitualmente incluídas em pacotes co-merciais de produtos terapêuticos, que contêm informação sobre as indica-ções, uso, dosagem, administração, contra-indicações e/ou advertênciasrelativas ao uso de tais produtos terapêuticos. Em uma modalidade, as in-serções do rótulo ou pacote indicam que a composição compreendendo umcomposto desta invenção pode ser utilizada para tratar um distúrbio ou do-ença mediada por cinase. O rótulo ou inserção do pacote pode da mesmaforma indicar que a composição pode ser utilizada para tratar outros distúr-bios.

Em certas modalidades, os kits são adequados para a liberaçãode formas orais sólidas de um composto desta invenção, tais como compri-midos ou cápsulas. Um tal kit preferivelmente inclui várias dosagens unitá-rias. Tais kits podem incluir um cartão tendo as dosagens orientadas na or-dem de seu uso destinado. Um exemplo de um tal kité uma "embalagem dotipo blister". Embalagens do tipo blister são bem-conhecidas na indústria deembalagem e são amplamente empregadas para empacotar formas de do-sagem unitária farmacêuticas. Se desejado, um auxiliar de memória podeser fornecido, por exemplo, na forma de números, cartas, ou outras marca-ções ou com uma inserção de calendário, designando os dias no horário detratamento em que as dosagens podem ser administradas.

De acordo com outra modalidade, um kit pode compreender (a)um primeiro recipiente com um composto desta invenção contido nele; e (b)um segundo recipiente com uma segunda formulação farmacêutica contidanele, em que a segunda formulação farmacêutica compreende um segundocomposto útil para tratar um distúrbio ou doença mediada por cinase. Alter-nativamente, ou adicionalmente, o kit pode também compreender um tercei-ro recipiente compreendendo um tampão farmaceuticamente aceitável, talcomo água bacteriostática para injeção (BWFI), solução salina tamponadapor fosfato, solução de Ringer e solução de dextrose. O kit pode tambémincluir outros materiais desejáveis de um ponto de vista do usuário e comer-cial, incluindo outros tampões, diluentes, filtros, agulhas e seringas.

O kit pode também compreender direções para a administraçãodo composto desta invenção e, se presente, a segunda formulação farma-cêutica. Por exemplo, se o kit compreende uma primeira composição com-preendendo um composto desta invenção e uma segunda formulação far-macêutica, o kit pode também compreender direções para a administraçãosimultânea, seqüencial ou separada da primeira e segunda composiçõesfarmacêuticas a um paciente em necessidade deste.

Em certas outras modalidades em que o kit compreende umacomposição desta invenção e uma segunda formulação farmacêutica, o kitpode compreender um recipiente contendo as composições separadas talcomo um frasco dividido ou um pacote de folha metálica dividida, porém, ascomposições separadas podem da mesma forma estar contidas dentro deum único recipiente, não dividido. Em certas modalidades, o kit compreendedireções para a administração dos componentes separados. A forma de kitéparticularmente vantajosa quando os componentes separados são preferi-velmente administrados em formas de dosagem diferentes (por exemplo,orais e parenterais), são administrados em intervalos de dosagem diferentes,ou quando a titulação dos componentes individuais da combinação é dese-jada pela prescrição médica.

ATIVIDADE BIOLÓGICA

Inibicão de p38 MAPK

A atividade dos compostos desta invenção pode ser analisadaquanto a inibição de p38 MAPK in vitro, in vivo, ou em uma linhagem celular.Ensaios in vitro incluem ensaios que determinam a inibição de atividade decinase ou atividade de ATPase de p38 MAPK ativada. Ensaios in vivo alter-nados quantificam a capacidade do inibidor ligar-se a p38 MAPK e podemser medidos radiorrotulando-se o inibidor antes de ligar, isolando-se o com-plexo inibidor / p38 MAPK e determinando-se a quantidade de ligação radior-rotulada, ou condüzindo-se uma experiência de competição onde novos ini-bidores são incubados com ligação de p38 MAPK aos radioligantes conheci-dos. Estes e outros ensaios de cultura celular e in vitro úteis são bem-conhecidos por aqueles versados na técnica.

Ensaios de cultura celular do efeito inibidor dos compostos destainvenção podem ser utilizados para determinar as quantidades de TNF-α, IL-1, IL-6 ou IL-8 produzida no sangue total ou frações celulares deste em célu-las tratadas com inibidor quando comparado às células tratadas com contro-les negativos. Níveis destas citocinas podem ser determinados através douso de ELISAs comercialmente disponíveis ou como descrito na seção deExemplos Biológics abaixo.

EXEMPLOS

Para ilustrar a invenção, os exemplos seguintes são incluídos.Entretanto, deve ser entendido que estes exemplos não limitam a invenção esão apenas referidos para sugerir um método de praticar a invenção.

EXEMPLOS BIOLÓGICOS

As atividades biológicas dos compostos da invenção foram de-monstradas pelos seguintes ensaios in vitro. Compostos utilizados nos E-xemplos C-M foram: Composto 72: 1-(3-terc-butil-1-p-tolil-1H-pirazol-5-il)-3-(5-flúor-2-(1-(2-hidroxietil)-1H-indazol-5-ilóxi)benzil)uréia (Exemplos 1 e 3); eComposto 74: diidrogenofosfato de 2-(5-(2-((3-(3-terc-butil-1-p-tolil-1H-pirazol-5-il)ureído)metil)-4-fluorofenóxi)-1H-indazol-1-il)etila (Exemplos 2 e 4).

Exemplo A

Ensaio Bioquímico de p38

Atividade de p38 foi analisada em temperatura ambiente emuma reação de 100 μί que contém 5 nM de enzima de p38a ativada e 1 μΜde ATF-2 (proteína de fusão de Fator de Transcrição Ativador 2) como osubstrato em 25 mM de HEPES (pH 7,4), 100 μΜ de Vanadato, 1 mM deDTT, 10 mM de MgCI2 e 10 μΜ de [γ-33Ρ]-ΑΤΡ (-0,1 μα P33/reação). A rea-ção foi terminada depois de 30-40 minutos adicionando-se 25% de TCA,permitida repousar 5 minutos, e em seguida transferida diretamente parauma placa de filtro de membrana GF-B. O filtro foi lavado duas vezes duran-te 30 segundos com 0,5% de ácido fosfórico utilizando uma ColheitadeiraAutomatizada Tomtec Mach III. Depois da lavagem, o vácuo foi continuadodurante 30 segundos para secar o filtro. Aproximadamente 30 μί de cintilan-te foram adicionados por cavidade à placa de filtro e, em seguida, lida emuma Contadora de Cintilação Líquida (Packard TopCount HTS).

Exemplo B

Ensaio de PBMC

A capacidade dos compostos desta invenção inibir a produçãode TNF-α foi avaliada utilizando-se células mononucleares de sangue perifé-rico humano ("PBMC") que sintetizam e secrtam TNF-α quando estimuladocom lipopolissacarídeo.

Soluções teste de composto foram feitas preparando-se dilui-ções seriais de 5 vezes em DMSO, cujas diluições foram, em seguida, diluí-das em matérias-primas 5x diluindo-se com MEM, 2% de soro bovino fetalinativado por calor ("FBS"), 20 mM de HEPES, 2 mM de L-glutamina, e 1%de penicilina/estreptomicina.

PBMCs foram isolados a partir de sangue humano como segue.Amostras de sangue inteiras foram coletadas a partir de voluntários huma-nos em Vacutainer® CPT de Becton Dickinson. Os tubos foram misturados ecentrifugados em temperatura ambiente (18-25 °C) em um rotor horizontaldurante um mínimo de 15 minutos em 1500 - 1800 RCF (força centrífugarelativa). Para cada doador, as camadas de revestimento leucocitárias foramagrupadas em um único tubo e lavadas duas vezes com solução salina tam-ponada ("PBS"). O pélete de célula foi ressuspenso em MEM, 2% de sorobovino fetal inativado por calor ("FBS"), 20 mM de HEPES, 2 mM de L-glutamina, e 1% de penicilina/estreptomicina. Número de célula total foi de-terminado utilizando-se um hemocitômetro e a suspensão celular foi ajusta-do em 2 X 106 de células/mL.

Para cada cavidade de uma placa de cultura celular de 96 cavi-dades foi adicionado 0,1 mL de suspensão celular. Uma solução teste decomposto (30. L) foi adicionada, e as células foram incubadas em uma incu-badora de CO2 a 5%/37°C durante 1 hora, e em seguida 20 μί de 7,5 ng/mLde lipopolissacarídeo (LPS E. Coli K-235) foram adicionados cada cavidade,e as células foram retornadas para a incubadora de CO2 a 5%/37°C durante16-20 horas. As células foram centrifugadas durante 15 minutos em 1100RCF. Aproximadamente 0,12 mL do sobrenadante foi transferido em umaplaca de polipropileno de 96 cavidades limpa. As amostras foram analisadasimediatamente oú foram armazenadas a -80°C até que prontas para ensaio.Níveis de TNF-α foram determinados em cada amostra utilizando-se um en-saio ELISA de TNF-α humano tal como aqueles descritos abaixo.

Níveis de TNF-α foram determinados utilizando-se o ensaio se-guinte. Placas revestidas de anticorpo de TNF-α foram preparadas adicio-nando-se 150 μL de 2 μς/mL de IgG monoclonal de camundongo purificadocom anti-TNF-α em tampão de Carbonato-Bicarbonato (Pacote de Tampãode Carbonato-Bicarbonato BupH(D) em cavidades de uma placa Immulon 4de 96 cavidades (Placa de Base Plana ELISA Immulon 4; Dynex, número decatálogo 011-010-3855) e incubadas durante a noite a 2 - 8°C. Solução derevestimento foi removida e 200 μL de tampão de bloqueio (20 mM de HE-PES pH 7,4, 150 mM de NaCI, 2% de BSA) foram adicionados e as placasforam armazenados 2 - 8°C até que prontas para uso. Uma curva-padrão deTNF-α humano recombinante em ponto dez foi preparada por uma diluiçãoserial de 1:2 em diluente de amostra (20 mM de HEPES, pH 7,4, 150 mM deNaCI, 2 mM de MgCI2, 1% de BSA) com uma concentração de topo de 6000pg/mL.

Solução de bloqueio foi removida das placas de ELISA de TNF-αlavando-se cinco vezes com 300 μL de "tampão de lavagem" (20 mM de1 HEPES, pH 7,4, 150 mM de NaCI1 2 mM de MgCI2, 0,02% de Tween-20). 50μL de diluente de amostra foram adicionados a todas as cavidades, e emseguida 50 μL de uma curva de solução padrão de TNF-α ou sobrenadantede composto teste foram adicionados a todas as cavidades. A placa foi incu-bada em temperatura ambiente durante uma hora com agitação (300 rpm). Aplaca foi lavada cinco vezes com 300 μL de tampão de lavagem. 100 μL de0,2 μg/mL de TNF-α anti-humano de cabra biotinilado em "diluente de anti-corpo" (20 mM de HEPES, pH 7,4, 150 mM de NaCI, 2 mM de MgCI2, 1% deBSA, 0,02% de Tween-20) foram adicionados por cavidade, e a placa foiincubada em temperatura ambiente durante uma hora com agitação (300rpm). A placa foi lavada cinco vezes com 300 μL de tampão de lavagem porcavidade. 100 μL de 0,02 μg/mL de fosfatase alcalina de estreptavidina emdiluente de anticorpo foram adicionados por cavidade, e a placa foi incubadaem temperatura ambiente durante uma hora com agitação (300 rpm). A pla-ca foi lavada cinco vezes com 300 μΙ_ de tampão de lavagem por cavidade.200 μΙ_ de 1 mg/mL de pNPP (fosfato de p-nitrofenila) em tampão de dieta-nolamina com 0,5 mM de MgCk foram adicionados por cavidade, e a placafoi incubada durante 30 a 45 minutos em temperatura ambiente com agita-ção (300 rpm). O progresso da reação foi monitorado determinando-se adensidade óptica: quando o padrão de topo alcançou uma OD entre 2,0 e3,0, 50 μΙ_ de NaOH a 2N foram adicionados por cavidade. A densidade ópti-ca de cada cavidade foi determinada dentro de 30 minutos, utilizando-seuma leitora de placa de microtítulo fixada em 405 nm. Os dados foram anali-sados em ajuste XL utilizando-se ajustamento de curva de 4 parâmetros.

Os reagentes seguintes foram utilizados nos ensaios acima des-critos. A Solução Salina Tamponada por Fosfato de Dulbecco sem Cálcio ouMagnésio (Número de Catálogo de Gibco 14190); Meio essencial mínimoEagle (MEM; Número de Catálogo de Gibco 11090); penicilina-estreptomicina (Número dé Catálogo de Gibco 15140); L-glutamina, 200 mM(Número de Catálogo de Gibco 25030); HEPES, 1M (Número de Catálogode Gibco 15630); soro bovino fetal ("FBS"; Número de Catálogo de HyCloneSH30070.03); lipopolissacarídeos de Escherichia coli K-235 ("LPS"; Númerode Catálogo de Sigma L2018); anti-TNF-α, IgG Monoclonal Purificado deRato (Número de Catálogo de R&D Systems MAB210); Pacote de Tampãode Carbonato-Bicarbonato BupH® (Número de Catálogo de Pierce 28382);HEPES (FW 238.3; Número de Catálogo de Sigma H3575); NaCI (Númerode Catálogo de Sigma S7653); albumina de soro bovino ("BSA"; Número deCatálogo de Jackson ImmunoReseach 001-000-162); monolaurato de sorbi-tano de polioxietileno 20 (Número de Catálogo de Sigma P2287); cloreto demagnésio, hexaidrato (Número de Catálogo de Sigma M2670); TNF-α hu-mano recombinante (Número de Catálogo de R&D Systems 210TA010); IgGde cabra purificado por afinidade de TNF-α biotinilado (Número de Catálogode R&D Systems BAF210); fosfatase alcalina de estreptavidina (Número deCatálogo de Jackson ImmunoResearch 016-050-084); Tampão de Substratode dietanolamina (Número de Catálogo de Pierce 34064); fosfato de p-nitrofenila (Número de Catálogo de Sigma N2765).

Exemplo C

Atividade de Composto 72 versus várias cinases

A atividade de p38 do Composto 72 empregando-se um ensaiode cinase radioativo de p38 interno utilizando ATF-2 como um substrato foiexplorada. A seletividade do Composto 72 foi determinada analisando a ati-vidade de 202 proteína cinases na presença de 1 μΜ de Composto 72. De-terminações de IC5O foram subseqüentemente conduzidas para essas cina-ses inibidas por >80% na avaliação inicial (concentração de ATP em Km) porprotocolos estabelecidos.

Como mostrado na Tabela 1, Composto 72 é um inibidor potentede tirosina cinase citoplásmica de Abelson de p38a (Abi), gene relacionado aAbelson (Arg) e a a tirosina cinase do receptor de Tie-2. Além destas ativi-dades, Composto 72 é da mesma forma moderadamente potente contra aforma resistente a Imatinib de BCR-AbI T315I, as tirosina cinases da famíliade src Hck, Lyn e Fyn, e as tirosina cinases do receptor FGFR1 (receptor dofator de crescimento de fibroblasto 1; FGFR1) e VEGFR2 (receptor do fatorde crescimento endotelial vascular 2; KDR).

Tabela 1

<table>table see original document page 44</column></row><table>

Por meio de comparação, os compostos dos Exemplos 94 e 138de WO 2004/078116 foram da mesma forma testados.<formula>formula see original document page 45</formula>

Exemplo 138

Os resultados são fornecidos na Tabela 1 a abaixo.

Tabela 1a

<table>table see original document page 45</column></row><table>

Os resultados mostram que o composto 72 é um inibidor signifi-cativamente mais potente de Abl e Tie2 que os compostos dos Exemplos 94e 138 de WO 2004/078116.Exemplo D

Atividade de célula do Composto 72 contra a série de reação de d38

As células de HeLa foram tratadas com Composto 72 durante 60minutos antes da estimulação com 1 pg/mL de anisomicina durante 60 minu-tos para induzir a ativação da série de reação de p38. As células foram rotu-ladas com anticorpos contra a forma fosforilada de HSP27 (Ser78) e GAPDHcomo um controle de normalização. As células foram imageadas e quantifi-cadas utilizando-se um imageador LI-COR Aeriustm.

Os resultados demonstraram que Composto 72 é um inibidorpotente da série de reação de p38 em células, com uma IC50 aparente de 2nM. Em um ensaio celular funcional, este composto foi da mesma forma tes-tado quanto a sua capacidade de inibir a produção de TNF-α em sangue to-tal tratado com lipopolissacarídeo bacteriano (LPS) para induzir a produçãode citocina (como detectado por ELISA), gerando uma IC50 aparente de 30 nM.

Exemplo E

Atividade de célula do Composto 72 contra receptor de Tie2

Para a experiência de curso de tempo, HUVECs foram privadasde soro durante 2 horas, em seguida, estimulados com 200 ng/mL do ago-nista do receptor de Tie2 Angiopoietina-1 (Ang-1). As células foram colhidasnos pontos de tempo indicados e imunoblots com anticorpos contra fosfo-AKT, fosfo-Erk, fosfo-HSP27, fosfo-p38 e GAPDH. Sinais foram quantifica-dos e normalizados em GAPDH para avaliar a extensão da indução comoum resultado da ativação do receptor de Tie2. Os resultados foram demons-trados como uma imunomancha e gráfico mostrando o curso de tempo daativação da série de reação de Erk, AKT e p38 em resposta ao agonista dereceptor de Tie2 contra Ang-1 em células endoteliais vasculares umbilicaishumanas (HUVECs). Os resultados mostram que apenas os percursos AKTe Erk são ativados em resposta à ativação do receptor de Tie2.

Para o estudo de ativação de Tie2, HUVECs foram privadas desoro durante 2 horas, em seguida, tratados com concentrações variadas doComposto 72 durante 60 minutos antes da estimulação com 200 ng/mL deAng-1 durante 10 minutos. Tie2 foi, em seguida, imunopurificado (IP) e imu-noblotted com anticorpos antifosfotirosina (pTyr) e anti-Tie2 para avaliar ograu de autofosforilação de Tie2. Os Iisados foram imunoblotteds com anti-corpos anti-fosfo-Erk e anti-fosfo-AKT (Ser473), respectivamente. Sinais fo-ram quantificados θ normalizados em GAPDH como um controle de carre-gamento. Os resultados foram mostrados em um imunomancha e um gráfi-co. O tratamento do Composto 72 resulta em uma inibição dependente dedose igualmente da autofosforilação de Tie2 bem como seus efetores a ju-sante Erk e AKT com uma IC5o de < 33 nM para anterior e <11 nM para oposterior.

Exemplo F

Atividade de célula do Composto 72 contra BCR-AbI

A linhagem celular de leucemia mielogenosa crônica positiva deBCR-AbI K562 foi tratada com várias concentrações de Imatinib ou Compos-to 72 como indicado durante 72 horas a 37 °C, CO2 a 5%. A viabilidade dacélula foi subseqüentemente medida utilizando-se CeIITiter Blue (Promega)para determinar os valores de IC5o para cada composto. Os valores de IC50determinados foram 278 nM e 62 nM para Imatinib e Composto 72, respecti-vãmente.

Extratos de células K562 tratados com concentrações variadasde Imatinib ou Composto 72 durante 2 horas a 37°C, CO2 a 5% foram prepa-rados e imunoblotteds para substratos de Abl autofosforilados (p-Abl, T-yr245) e de Abl STAT5 (pSTAT5, Tyr694) e CrkL (pCrkL, Tir207). Os resul-tados mostram que o Composto 72 é mais que quatro vezes mais potente doque Imatinib na inibição da proliferação na linhagem celular direcionada aBCR-AbI K562. Os resultados do imunobloting de extratos de K562 tratadoscom pBCR-Abl, pSTAT5, pCrkL ou GAPDH nas concentrações 5000, 1000,333, 111, 37 e 0 nM de Imatinib ou Composto 72 foram medidos. Este en-saio mostra que tanto o Composto 72 quanto Imatinib são capazes de inibira autofosforilação da BCR-AbI bem como seus substratos STAT5 e CrkL.Composto 72, de acordo com os dados de proliferação, é mais potente nainibição da fosforilação destes substratos.

Exemplo G

Propriedades físicas, perfil Metabólico e perfil de Segurança dos Compostos72 e 741. Determinação da solubilidade

Os resultados da determinação da solubilidade são mostradosna Tabela 2.

Tabela 2: Solubilidade

<table>table see original document page 48</column></row><table>

Por meio de comparação, as solubilidades dos compostos dosExemplos 94 e 138 de WO 2004/078116 foram constatadas ser < 0,001mg/mL em pH 6,5 e 7,4.

2. Ensaios de Inibicão de CYP (Fluorescente. LC-MS)

Valores de IC50 para CYP3A4, CYP2C19 e CYP2C9 foram deri-vados medindo-se a relação da formação de metabólito de um substrato es-pecífico em padrão interno comparado ao controle por cromatografia líquida/espectrometria de massa (LC/MS) utilizando-se microssomas de fígado hu-mano agrupados (n = 1). Valores de IC5o para CYP2D6 e CYP1A2 foram de-rivados medindo-se a fluorescência relativa comparada ao controlar de son-das fluorescentes específicas de isoforma de P450 comercialmente disponí-veis e proteína recombinante (n = 1). Os resultados são mostrados na Tabela 3.

Tabela 3: perfil de Inibição de CYP (Composto 72)

<table>table see original document page 48</column></row><table>

3. Ensaios de toxicidade fora de alvo

Composto 72 foi analisado quanto a ligação (ensaio de deslo-camento de ligando) em 10 μΜ contra o painel seguinte de 28 receptores,canais de íon e transportadores.

Das 28 entidades moleculares avaliadas, apenas o canal de só-dio (sítio 2) mostrou interagir significativamente (>50% de deslocamento)com o composto.

4. Ensaios de Avaliação de Segurança

Ensaio de hERG foi realizado utilizando um protocolo de grampode emplastro-padrão. Ensaio de AMES (ensaio de mutação reversa bacteri-ano) foi realizado de acordo com o protocolo. Composto 72 foi testado em0,5-5000 Mg/placa teste com/sem ativação de S9. Ensaios de micronúcleo invitro e in vivo foram realizados de acordo com o protocolo. Os resultados sãomostrados na Tabela 4.

Tabela 4: Segurança

<table>table see original document page 49</column></row><table>

5. Estudo de tolerabilidade

Camundongos (cepa CD-1, η = 5 por grupo de dose) foram do-sados com Composto 72 (como Composto 74) em 10, 30 ou 100 mg/kg BIDdurante 14 dias. A perda de peso foi avaliada ao longo de estudo. Sangue foiremovido no dia final para químicas clínicas (albumina, fosfatase alcalina,ALT, Amilase, BUN, cálcio, colesterol, creatinina, glicose, fosfato, bilirrubinatotal, TP, Globulina). Os resultados são mostrados na Tabela 5. Nenhumamortalidade relacionada ao composto foi observada. Neste estudo, mesmoem 100 mg/kg, nenhuma toxicidade de limitação de dose (DLTs) foi vista e,portanto, uma dose tolerada máxima (MTD) não foi identificada.Tabela 5: Tolerabilidade (em vivo)

<table>table see original document page 50</column></row><table>

Exemplo H

Farmacocinéticas do Composto 72 em Roedores e Primatas

Métodos não comportamentais (independente de modelo) foramutilizados para analisar as curvas-tempo de concentração de plasma deriva-das de todas as espécies como descrito abaixo. Valores de depuração (Cl),percentual das relações de extração calculado (ER%), volume de distribui-ção (Vz), tempo para 1/2-concentração máxima (ti/2) e exposição (AUC, áreasob a curva) são fornecidos abaixo para camundongo, rato, e macaco, res-pectivamente.

1. Camundongo: as farmacocinéticas do Composto 72 foram examinadasseguindo administração de bolus intravenoso (IV, 1 mg/kg) ou oral (PO, 10mg/kg) em camundongos Balb/c fêmea (n = 3/ ponto de tempo). As amostrasde sangue foram obtidas em 15 e 30 minutos, e 1, 2, 4, 8 e 24 horas depoisda dosagem PO, e em 15 e 30 minutos, e 1, 2, 4, e 8 horas para administra-ção IV.IV: 1 mg/kg

Cl = 2,6 m L/mi n/kg

ER = 2,8%

Vz = 0,085 L/kg

Oral: 10mg/kg

AUC= 10,5 μg-h/kg

F =16%

Cmáx = 1,8 μg/mL

'max

t Vz = 3,9 h

AUC = 6,6 (pg-h/kg

2. Rato: As farmacocinéticas do Composto 72 foram examinadas em ratosSprague-Dawley machos (n = 3/ponto de tempo) seguindo administração debolus IV (2 mg/kg) ou PO (30 mg/kg). Sangue foi experimentado nos mes-mos tempos como listado para o estudo de PK de Camundongo.

3. Macaco: as farmacocinéticas do Composto 72 foram examinadas em ma-cacos Cinomólogos machos (n = 3/ponto de tempo) seguindo administraçãode bolus IV (2 mg/kg) ou PO (10 mg/kg). Sangue foi experimentado nosmesmos pontos de tempo para o estudo de PK de Camundongo.

IV: 1 mg/kg

Cl = 3,2 mL/min/kgER = 4,6%Vz = 0,048 Ukgt !/2 = 3,9 hAUC = 4,7 μg-h/kg

Oral: 30mg/kg

AUC = 35 μg-hr/kgF= 15%

Cmáx = 4,5 ^g/ml_

max

IV: 1 mg/kg

Cl = 8,8 mL/min/kg

Oral: 10mg/kg

AUC = 7,6 μg-h/kgF = 38%

Cmáx = 0,26 μg/mL

ER = 20%V2 = 3,2 Ukg11/2 = 4,6 h

AUC = 4,1 μg-h/kgExemplo I

Composto 72 em um modelo de rato de artrite induzida por coláaeno (CIA)

Composto 72 foi dosado na forma de pró-fármaco (Composto74) neste estudo. Ratos de Lewis fêmea (200 g); η = 8 por grupo de trata-mento foram injetados com adjuvante incompleto de Freund/colágeno tipo Il(300 μL de injeção de 0,6 mg de colágeno, superfície dorsal Dia 0 e Dia 6).Os animais foram dosados com: (1) Veículo: 5 mL/kg, PO, BID χ 7; (2) Com-posto 72: 0,3, 1, 3 ou 10 mg/kg, PO, BID χ 7; ou (3) ENBREL®: 10 mg/kg,SC, Dias 1 e 4. ENBREL® servido como um controle positivo. Compostosforam administrados nos dias 11-18. O diâmetro do tornozelo foi medido nodia 11 e diariamente depois disso (Figura 70). No final do estudo, o peso dapata e histologia microscópica foram determinados. Tanto as patas traseirasquanto os joelhos foram removidos, as patas traseiras pesadas e, em segui-da, colocadas, com os joelhos, em formalina. Depois de 1-2 dias em fixadore 4 - 5 dias em descalcificador, articulações do tornozelo e os joelhos foramprocessados, implantados, secionados e manchados com azul de toluidina.Os tornozelos e joelhos foram determinados com escores de 0-5 para infla-mação, formação de pano e reabsorção óssea.

Os resultados mostram que o Composto 72 dependentementede dose melhorou todos os parâmetros associados com este modelo de do-ença. Para diâmetro do tornozelo e histopatologia, o Composto 72 teve umaED50 aparente de 1,5 e 3,0 mg/kg, respectivamente. Em 10 mg/kg o Com-posto 72 induziu o regresso de doença pelo final do estudo.

Exemplo J

Composto 72 inibe angioqênese in vivo

Composto 72 foi dosado na forma de pró-fármaco (Composto74) neste estudo. Camundongos CD-1 fêmeas (19 - 22 g), η = 4 grupos portratamento, foram implantados subcutaneamente com 500 pL de matrigelreduzido com fator de crescimento contendo 1500 ng/mL de bFGF ou 0ng/mL de bFGF como um controle negativo. Compostos teste foram adminis-trados por gavagem oral nos horários e doses indicadas. Os animais foramdosados com (1) Veículo: 30 mM de tampão de fosfato, 10 mL/kg, PO, BID χ7; (2) Composto 72: 10, 30 ou 100 mg/kg de fármaco ativo, PO1 BID χ 7; ou(3) SU11248: (Sutenf) 40 mg/kg, PO, QD χ 7. Sutent é um inibidor de KDR eservido como um controle de fármaco positivo neste estudo. Os animais fo-ram eutanizados no dia 7. Matrigel foi colhido, pesado e homogeneizado emsolução salina tamponada por fosfato, pH 7,4. As amostras foram centrifu-gadas e o Iisado resultante analisado quanto a concentração de hemoglobi-na por reação colorimétrica. Composto 72 inibiu a angiogênese induzida porbFGF de uma maneira dependente de dose. Em 100 mg/kg, angiogênese foiinibida significativamente por 72% (p < 0,05, teste de comparação múltiplade Dunnett).

Exemplo K

Composto 72 inibe Tumores direcionados a BCR-AbI74) neste estudo. Camundongos Scid-beige fêmeas (17-20 g), η = 8 por gru-po, foram implantados com 107 células K562 subcutaneamente no flancodireito. Os compostos teste foram administrados por gavagem oral nos horá-rios e doses indicados quando os tumores alcançaram 200 ± 50 mm3 no ta-manho. Os animais foram dosados com (1) Veículo: 20% de Trappsol, 10mLVkg, PO, BID χ 7; (2) Composto 74: 30 ou 100 mg/kg de fármaco ativo,PO, BID ou QD χ 7) ou (3) Imatinib (GLEEVEC®): 400 mg/kg, PO, BID χ 7.Imatinib é um inibidor conhecido de Abl e servido como um controle de fár-maco positivo neste estudo. O tamanho do tumor e peso corporal foram mo-nitorados ao longo do estudo. Os resultados são mostrados na Tabela 6.

Composto 72 foi dosado na forma de pró-fármaco (CompostoTabela 6

<table>table see original document page 53</column></row><table>Composto 74 foi eficaz neste modelo. A administração de 30mg/kg BID ou 100 mg/kg QD resultou na estase de tumor, e 94% de regres-são de tumor ocorreu e 5 ou 8 animais tiveram uma resposta completa(100% de regressão de tumor) quando a dose foi aumentada para 100mg/kg BID. O Composto 72 foi bem-tolerado causando menos que 10% deperda de peso corporal ao longo do curso de tratamento.

Exemplo L

Composto 72 em um modelo de mieloma múltiplo

Composto 72 foi dosado na forma de pró-fármaco (Composto74) neste estudo. Camundongos Scid-beige fêmeas (17-20 g), η = 8 por gru-po, foram implantados com 15 χ 106 de células RPMI 8226 subcutaneamen-te no flanco à direita com veículo (20% Trappsol, 10 mL/kg, PO1 BID χ 14) ouComposto 74 (100 mg/kg de fármaco ativo, PO, BID χ 14). Compostos testeforam administrados por gavagem oral nos horários e doses indicados quan-do os tumores alcançaram 200 ± 50 mm3 no tamanho. Tamanho de tumor epeso corporal foram monitorados ao longo do estudo e o Composto 72 foiavaliado quanto a capacidade de inibir o crescimento de tumor (% de TGI =(1-T/C) χ 100). Os resultados são mostrados na Tabela 7. Composto 72 (do-sado em sua forma de pró-fármaco como Composto 74) produziu um efeitoestatisticamente significante sobre o crescimento de tumor durante o cursodeste estudo. Estes dados sugerem que o efeito do Composto 72 observadoneste estudo seja além de ou independente de sua capacidade de inibir p38.Composto 72 foi bem tolerado causando menos de 10% de perda do pesocorporal ao longo do tratamento.

Tabela 7

<table>table see original document page 54</column></row><table>A linhagem celular de mieloma múltiplo RPMI 8226 foi tratadacom várias concentrações do inibidor de proteassoma MG-132 (para servircomo um controle positivo) ou Composto 72 durante 72 horas a 37 0C1 5%de CO2. Viabilidade da célula foi, em seguida, medida utilizando-se CeIITiterBlue (Promega) para determinar valores de IC50 para cada composto (Tabela8). O tratamento com Composto 72 não foi antiproliferativo sobre a faixa deconcentração indicada. MG-132 produziu uma IC50 que estava dentro dasfaixas históricas de teste interno (Tabela 8). Estes dados indicam fortementeque o efeito de TGI observado para o Composto 72 visto in vivo é prováveldevido aos efeitos extratumorais. Um tal papel é consistente com relatos pu-blicados que sugerem que a atividade de ambos p38 e Tie2 pode ser críticapara crescimento/sobrevivência deste tipo de tumor in vivo.

Tabela 8

<table>table see original document page 55</column></row><table>

Exemplo M

Atividade celular do composto 72 contra VEGFR2HUVECs foram privadas de soro durante 2 horas, em seguida,tratadas com concentrações variadas de Composto 72 ou o inibidor deVEG FR2 de controle ((Z)-3-[(2,4-Dimetil-3-(etoxicarbonil)pirrol-5-il)metilidenil]indolin-2-ona) durante 60 minutos antes da estimulação com 20ng/mL de VEGF durante 5 minutos. Os Iisados de vários tratamentos forampreparados e imunoblotteds com anticorpos específicos para VEGFR2 fosfo-rilado em Tyr1175. Mancha resultante para o Composto 72 e o inibidor decontrole VEGFR1 foram, em seguida, imageados e quantificados utilizando-se o imageador LI-COR Aeriustm. Sinal de Fosfo-VEGFR2 foi normalizadoem GAPDH como um controle de carregamento. Estes valores foram, emseguida, utilizados para gerar valores de IC50 para o Composto 72 e o inibi-dor de VEGFR2 de controle VEGFR1, empregando-se um protocolo de ajus-tamento de curva de 4-parâmetros.Composto 72 inibe a autofosforilação tipo Il do receptor endoteli-al vascular (VEGFR2) em HUVECs. Os resultados mostram que o tratamen-to do Composto 72 resulta em uma inibição dependente de dose de autofos-forilação de VEGFR2 no resíduo de Tirosina 1175 com uma IC50 de 48 nM

EXEMPLOS PREPARATIVOS

Nos exemplos descritos abaixo, a menos que de outra maneiraindicado, todas as temperaturas são mencionadas em graus Celsius. Os re-agentes foram adquiridos de fornecedores comerciais tal como Aldrich Che-mical Company, Lancaster, TCI ou Maybridge, e foram utilizados sem outrapurificação a menos que de outra maneira indicado. Tetraidrofurano (THF),Ν,Ν-dimetilformamida (DMF), diclorometano (DCM), tolueno, dioxano e 1,2-difluoroetano foram adquiridos a partir de Aldrich em frascos com selo Suree utilizados como recebido.

As reações mencionadas abaixo foram feitas geralmente sobuma pressão positiva de nitrogênio ou argônio ou com um tubo de secagem(a menos que de outra maneira indicado) em solventes anidrosos, e os fras-cos de reação foram tipicamente adaptados com septos de borracha para aintrodução de substratos e reagentes por meio de seringa. Artigos de vidroforam secados em forno e/ou secados no calor.

Cromatografia de coluna foi feita em um sistema Biotage (Fabri-cante: Dyax Corporation) tendo uma coluna de sílica-gel ou em um cartuchoSepPak de sílica (Waters).

Espectros de 1H-RMN foram registrados em um instrumento Va-rian que opera em 400 MHz. Espectros de 1H-RMN foram obtidos como so-luções de CDCI3 (relatado em ppm), utilizando-se clorofórmio como o padrãode referência (7,25 ppm). Outros solventes de RMN foram utilizados quandonecessário. Quando multiplicidades de pico são relatadas, as abreviaçõesseguintes são utilizadas: s (singleto), d (dubleto), t (tripleto), m (multipleto), br(ampliado), dd (dubleto de dubletos), dt (dubleto de tripletos). Constantes deacoplamento, quando determinadas, são relatadas em Hertz (Hz).Exemplo 1

Preparação de 1 -(3-terc-butil-1 -p-tolil-1 H-pirazol-5-il)-3-(5-flúor-2-(1 -(2-hidroxietil)-1 H-indazol-5-ilóxi)benzihuréia (72): Método 1

A síntese do composto (72) de acordo com o Método 1 é mos-trada no Esquema 1, etapas A a J.

Etapa A: preparação de 2-(benzilóxi)-5-fluorobenzonitrila 62: emum frasco de base arredondada de 4 gargalos de 12 L equipado com umagitador mecânico e sonda de temperatura, uma suspensão de hidreto desódio (74 g, 1,82 mol) em DMF (1,95 L) foi adicionada álcool benzílico (142g, 1,3 mol) através de um funil de gotejamento lentamente durante 30 minu-tos em um banho de gelo sob nitrogênio. A mistura foi agitada em um banhode gelo (0 °C) durante 120 minutos, uma solução de 2,5-difluorobenzonitrila(180 g, 1,3 mol) em DMF (650 mL) foi adicionada através de um funil de go-tejamento durante 35 minutos. A mistura resultante foi aquecida até à tempe-ratura ambiente. Depois de 2 horas, a mistura foi resfriada em um banho degelo (4 °C) e extinguida com NH4CI saturado (130 mL) seguido pela adiçãode água (2,6 L χ 3). A suspensão foi agitada durante a noite a temperaturaambiente e o precipitado foi filtrado e lavado com água (650 mL χ 3). O sóli-do foi secado em vácuo durante 2 dias para produzir 292 g (99,3%) do com-posto desejado. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 7,78 (dd, 1H,J= 3,2 Hz, J= 8,2 Hz), 7,5 - 7,76 (m, 1H), 7,35 - 7,48 (m, 6H), 5,28 (s, 2H).

Etapa B: preparação de 5-Flúor-2-hidroxibenzonitrila 63: 10% dePd/C seco (2,48 g) foram colocados em um frasco de 5 L sob N2. Uma solu-ção de 2-(benzilóxi)-5-fluorobenzonitrila (148 g, 651 mmols) em metanol(2,34 L) foi adicionada lentamente sob N2. O ar do frasco foi removido porvácuo e o frasco foi carregado com H2 (balão) três vezes. A mistura foi agi-tada em temperatura ambiente durante 1 hora. O processo anterior foi repe-tido mais duas mais para empurrar a reação até a conclusão. A mistura foiagitada em temperatura ambiente durante mais 2 horas. A mistura foi filtradaatravés de uma almofada de Celite sob N2 e lavada com EtOAc (150 mL χ2). O resíduo de paládio foi enxaguado com água (50 mL) e descartado. Osfiltrados foram concentrados para produzir (94,6 g, 106%) do composto de-sejado como um sólido amarelo. MS (APCI -) m/z 137 (M-1) foi detectada. 1HRMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 11,07 (br, 1H), 7,58 (dd, 1H, J = 3,2 Hz, J = 8,2Hz), 7,43 (m, 1H), 6,91 -7,03 (dd, 1H J = 4,5 Hz, J = 9,2 Hz).

Etapa C: preparação de 5-Flúor-2-(4-metil-3-nitrofenóxi) benzoni-trila 64: em um frasco de 5L de 3 gargalos equipado com um agitador mecâ-nico, um condensador e uma sonda de temperatura J-Kem, uma solução de5-flúor-2-nitrotolueno (158 g, 1,02 mol) em N,N-dimetilacetamida (500 ml_) foiadicionada a uma mistura de 5-flúor-2-hidroxibenzonitrila (147 g, 1,07 mol) ecarbonato de potássio (163 g, 1,2 mol) em N,N-dimetilacetamida (573 mL)em temperatura ambiente. A mistura foi aquecida a 100 °C. Depois de 8 ho-ras, a mistura de reação foi resfriada em temperatura ambiente e água (3400mL) foi adicionada em um banho de gelo. O precipitado foi filtrado, lavadocom água (1073 mL χ 2), e secado em vácuo (40 °C) para produzir (264 g,90%) do composto desejado como um sólido marrom. MS (APCI -) m/z 272M-1) foi detectada. 1H RMN (400. MHz, CDCI3) δ 8,10 (d, 1H, J = 9 Hz), 7,41- 7,48 (m, 1H), 7,38 (m, 1H), 7,07-7,14 (m, 1H), 6,88-7,10 (m, 1H), 2,63 (s, 3H).

Etapa D: preparação de 2-(3-amino-4-metilfenóxi)-5-benzonitrila65: em um frasco de base arredondada de 4 gargalos de 12000 mL equipa-do com um agitador mecânico, um condensador e uma sonda de temperatu-ra J-Kem, 2-(3-amino-4-metilfenóxi)-5-benzonitrila (247 g, 907 mmols) e póde Zn (297 g, 4,5 mois) foram colocados e suspensos em 1:1 de MeOH/THF(2,2 L). NH4CI aquoso saturado (1,6 L) foi adicionado lentamente durante 40minutos através de um funil de adição (mantendo a temperatura interna sob60 °C). A mistura de reação foi resfriada em temperatura ambiente e agitadaem temperatura ambiente durante 1 hora. Pó de zinco foi removido por filtra-ção e a massa foi lavada com EtOAc (450 mL χ 3). NH4OAc aquoso satura-do (1500 mL, preparado de 2 kg de NH4OAc e 4 L de H2O) e H2O (1500 mLχ 2) foi adicionado. Os filtrados foram concentrados por evaporação rotativaaté que quase toda a água permaneça. O sólido castanho foi filtrado e lava-do com H2O (1500 mL χ 4), e secado em vácuo para fornecer 211,5 g (96%)do composto desejado. MS (APCI +) m/z 243 (M+1) foi detectada. 1H RMN(400 MHz, CDCI3) δ 7,38 (m, 1Η), 7,18 (m, 1 Η), 6,65 - 6,85 (m, 5Η), 3,60 (br,2Η), 2,17 (s, 3Η).

Etapa Ε: preparação de 2-(1 H-indazol-5-ilóxi)-5-fluorobenzonitrila 66: em um frasco de base arredondada de 6 L equipadocom um agitador mecânico, sonda de temperatura J-KEM, uma solução fria(0 °C) de 2-(3-amino-4-metilfenóxi)-5-benzonitrila (209 g, 862 mmols) eNH4BF4 em ácido acético (1,75 L)/água (862 mL) foi tratada com HCI con-centrado (359 mL) gota a gota durante 2 minutos. A suspensão foi agitadaem um banho de gelo durante 30 minutos e nitrito de sódio foi adicionado. Amistura de reação foi agitada a 0 0C durante 1 hora e, em seguida, aquecidaem temperatura ambiente. Depois da agitação em temperatura ambientedurante 3 horas, os solventes foram removidos por evaporação rotativa eazeotropados com tolueno (200 m L χ 2). O resíduo foi secado em vácuo du-rante a noite. O sólido foi suspenso em acetona (200 mL) e EtOAc (200 mL)e os solventes foram removidos por evaporação rotativa. O resíduo foi sus-pensa em EtOAc (200 mL) e removido por evaporação rotativa. O resíduo foisuspenso em EtOAc (1145 mL) e acetato de potássio (254 g, 2,6 mol) foiadicionado em uma porção. A mistura foi agitada em temperatura ambientedurante 20 horas e filtrada. A massa foi lavada com EtOAc (500 mL χ 6). Osfiltrados combinados foram concentrados. O resíduo foi suspenso em EtOAc(500 mL) e heptano (500 mL). O sólido amarelo foi filtrado (141,3 g). O líqui-do-mãe foi concentrado e recristalizado a partir de MTBE/Hexano (100mL/100 mL) para proporcionar 20,1 g. O segundo líquido-mãe foi concentra-do e triturado com MTBE/heptano (100 mL/100 mL) para produzir um adicio-nal de 14,28 g. Colheitas combinadas produziram 176 g (81% de rendimen-to) do composto desejado. MS (APCI +) m/z 254 (M+1) detectada. 1H RMN(400 MHz, DMSO-de) δ 13,38 (br, 1H), 8,07 (s, 1H), 7,94 (dd, 1H, J = 3,1 Hz,J = 8,2 Hz), 7,64 (d, 1H, J = 9 Hz), 7,54 (m, 2H), 7,21 (dd, 1H, J = 9 Hz), 6,96(dd, 1H, J = 4,3 Hz, J = 9,3 Hz).

Etapa F: preparação de 2-(1-(2,2-dimetoxietil)-1H-indazol-5-ilóxi)-5-fluorobenzonitrila 67: 2-(1H-lndazol-5-ilóxi)-5-fluorobenzonitrila (5,000g, 19,7 mmols) foi suspensa em N,N-dimetilacetamida (50 mL) e hidreto desódio (0,684 g, 25,7 mmols) foi adicionado porção a porção em temperaturaambiente. 2-Bromo-1,1-dimetoxietano (3,49 mL, 29,6 mmols ) foi adicionadogota a gota em uma porção e a mistura de reação foi aquecida a 80 0C du-rante 18 horas. A mistura de reação foi resfriada em temperatura ambiente econcentrada sob pressão reduzida para proporcionar o material bruto, quefoi dividido entre EtOAc e NH4CI aquoso saturado. As camadas orgânicascombinadas foram lavadas com água (3x), salmoura e secadas (MgS04) e,em seguida, concentradas sob pressão reduzida para proporcionar o materi-al bruto. O produto bruto foi purificado por cromatografia de coluna instantâ-nea (eluente 25% de EtOAc/Hexanos) para fornecer 3,88 g (57,6%) do com-posto desejado. O isômero N-2 não foi isolado. MS (APCI +) m/z 342 (M+1)foi detectada. 1H RMN (400 MHz, CDCI3) δ 7,98 (s, 1H), 7,54 (d, 1H, J = 9Hz), 7,36 (m, 2H), 7,16 (m, 2H), 6,82 (dd, 1H, J = 4,3 Hz, J = 9,3 Hz), 4,76 (t,1H, J = 5,3 Hz), 4,49 (d, 2H, J = 5,3 Hz), 3,41 (s, 6H).

Etapa G: preparação de (2-(1-(2,2-dimetoxietil)-1H-indazol-5-ilóxi)-5-fluorofenil)metanamina 68: 2-(1-(2,2-Dimetoxietil)-1 H-indazol-5-ilóxi)-5-fluorobenzonitrila (3,80 g, 11,13 mmols ) em THF (100 mL) foi adicionadogota a gota a uma suspensão a 0°C agitada de hidreto de alumínio de lítio(0,6338 g, 16,70 mmols ) em THF (100 mL). A mistura de reação foi mantidaa 0°C até que a adição completa do material de partida fosse alcançada. Amistura de reação foi aquecida em temperatura ambiente e agitada até que oconsumo completo do material de partida fosse visto por análise de HPLC. Amistura de reação foi adicionada gota a gota a uma solução em temperaturaambiente agitada de sal de Rochelle aquoso saturado. A mistura de duasfases foi agitada rapidamente durante 30 minutos até que os sais de alumí-nio estejam na solução. As camadas foram separadas e a camada aquosaextraída com mais EtOAc. Os orgânicos combinados foram secados (Mg-SO4) e concentrados sob pressão reduzida para proporcionar 3,73 g (97%)do produto bruto que foi utilizado sem outra purificação. MS (APCI +) m/z346 (M+1) foi detectada. 1H RMN (400 MHz, CDCI3) δ 7,90 (s, 1H), 7,48 (d,1H, J = 9 Hz), 6,9 - 7,15 (m, 5H), 4,76 (t, 1H, J = 5,3 Hz), 4,49 (d, 2H, J = 5,3Hz), 3,88 (s, 2H), 3,36 (s, 6H).Etapa Η: preparação de 1-(3-terc-butil-1-p-tolil-1 H-pirazol-5-il)-3-(2-(1 -(2,2-dimetoxietil)-1 H-indazol-5-ilóxi)-5-fluorobenzil)uréia 70: (2-(1 -(2,2-dimetoxietil)-1 H-indazol-5-ilóxi)-5-fluorofenil)metanamina (2,00 g, 5,791mmols ), 2,2,2-ΐΝθΙθΓθθΙίΙ-3-ίθΓ£7-όυΙϊΙ-1 -p-tolil-1 H-pirazol-5-ilcarbamato (3,516g, 8,686 mmols ) e N,N-diisopropiletilamina (3,026 mL, 17,37 mmols ) foramsuspensos em N,N-dimetilacetamida (50 mL) e aquecidos a 80 pC durante anoite. A mistura de reação foi concentrada sob pressão reduzida e os resí-duos diluídos com EtOAc e NH4CI aquoso saturado. Os orgânicos foram la-vados com água (3x), salmoura, secados (MgSO4) e, em seguida, concen-trados sob pressão reduzida para proporcionar o material bruto que foi purifi-cado por cromatografia de coluna instantânea (eluente 35 - 45% de EtO-Ac/Hexanos). Depois da evaporação do solvente, o produto desejado foi ob-tido como uma espuma amarela pálida (2,57 g, 74%). MS (APCI +) m/z 602(M+1) foi detectada. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 7,88 (s, 1H), 7,43 (d,1H, J = 9 Hz), 6,72-7,30 (m, 9H), 6,18 (s, 1H), 6,01 (br, 1H), 5,47 (t, 1H, J =6,1 Hz), 4,76 (t, 1H, J = 5,3 Hz), 4,44 (t, 4H, J = 5,6 Hz), 3,38 (s, 6H), 2,37 (s,3H), 1,30 (s, 9H).

Etapa I: preparação de 1-(3-terc-butil-1 -p-tolil-1 H-pirazol-5-il)-3-(5-flúor-2-(1 -(2-oxoetil)-1 H-indazol-5-ilóxi)benzil)uréia 71: 1 -(3-ferc-Butil-1 -p-toiil-1 H-pirazol-5-il)-3-((2-(1 -(2,2-dimetoxietil)-1 H-indazol-5-ilóxi)-5-fluorofenil)metil)uréia (0,500 g, 0,8324 mmol) foi dissolvida em diclorometanoem temperatura ambiente e iodotrimetilsilano (0,3554 mL, 2,497 mmols ) a-dicionado gota a gota à solução agitada. A mistura de reação foi monitoradapor análise de HPLC e quando nenhum material de partida foi detectado, amistura foi diluída com diclorometano e lavada com 10% de Na2S2O4 aquo-so, NaHCO3 aquoso saturado, salmoura, secada (MgSO4) e concentradasob pressão reduzida para proporcionar 536 mg (rendimento quant.) do pro-duto bruto, que foi utilizado sem outra purificação. 1H RMN (400 MHz, DM-SO-d6) δ 9,76 (s, 1H), 7,97 (s, 1H), 6,78 - 7,30 (m, 10H), 6,17 (s, 1H), 5,99(br, 1H), 5,44 (q, 1H1 J = 6,1 Hz), 4,46 (m, 4H), H 2,35 (s, 3H), 1,34 (s, 9H).

Etapa J: preparação de 1 -(3-terc-butil-1 -p-tolil-1 H-pirazol-5-il)-3-(5-flúor-2-(1 -(2-hidroxietil)-1 H-indazol-5-ilóxi)benzil)uréia 72: 1 -(3-ferc-Butil-1 -p-tolil-1 H-pirazol-5-il)-3-((5-flúor-2-(1 -(2-oxoetil)-1 H-indazol-5-ilóxi)fenil)metil)uréia (2,179 g, 3,929 mmols ) foi suspensa em MeOH (40 mL)e tratado com boroidreto de sódio (0,7432 g, 19,64 mmols ) porção a porçãoem temperatura ambiente. A mistura de reação foi agitada em temperaturaambiente até que a conversão completa do material de partida para produtofosse observada por análise de HPLC. A mistura de reação foi concentradasob pressão reduzida e, em seguida, diluída com NH4CI aquoso saturado eextraída em diclorometano. Os materiais orgânicos foram secados (MgSO4)e concentrados sob pressão reduzida para proporcionar o material bruto quefoi purificado por cromatografia de coluna instantânea (eluente 2-6% de i-PrOH/DCM) para fornecer 1,21 g (55%) do composto desejado. MS (APCI +)m/z 557 (M+1) foi detectada. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,29 (s, 1H),7,97 (s, 1H), 7,68 (d, 1H, J = 9,1 Hz), 7,35 (s, 1H), 6,85-7,4 (m, 8H), 6,24 (s,1H), 4,87 (t, 1H1 J = 5,4 Hz), 4,43 (t, 1H, J = 5,6 Hz), 4,28 (d, 1H, J = 5,9 Hz),3,80 (q, 1H, J = 5,5 Hz), 2,35 (s, 3H), 1,25 (s, 9H).

Exemplo 2

Preparação de Diidroaenofosfato de 2-(5-(2-((3-(3-terc-butil-1-p-tolil-1H-pirazol-5-il)ureído)metih-4-fluorofenóxi)-1H-indazol-1-il)etila (74): Método 1

A síntese do composto (74) de acordo com o Método 1 é mos-trada no Esquema 1, etapa KaL.

Etapa K: preparação de 2-(5-(2-((3-(3-íerc-butil-1 -p-tolil-1 H-pirazol-5-il)ureído)metil)-4-fluorofenóxi)-1 H-indazol-5-il)etilfosfato de dibenzi-Ia 73: 1 -(3-ferc-Butil-1 -p-tolil-1 H-pirazol-5-il)-3-((5-flúor-2-(1 -(2-hidroxietil)-1 H-indazol-5-ilóxi)fenil)metil)uréia (0,357 g, 0,6414 mmol), diisopropilfosforamidi-ta de difenila (0,2970 ml, 0,9620 mmol) e 2H-tetrazol (0,07189 g, 1,026mmol) foram suspensos em DMF (10 mL) e agitados em temperatura ambi-ente até que a análise de TLC (10:1 de DCM-Et2O) mostrasse o consumocompleto do material de partida. Peróxido de hidrogênio de t-butila (0,4439mL, 3,207 mmols ) foi adicionado e, em seguida, a reação monitorada poranálise de HPLC. Na conclusão da reação, 10% de Na2S2O3 aquoso foramadicionados e a mistura de reação foi agitada durante 10 minutos. A misturade reação foi vertida em NaHCO3 aquoso saturado e extraída em EtOAc. Osmateriais orgânicos combinados foram lavados com água (2x) e salmoura.Os orgânicos foram secados (MgSO4) e concentrados sob pressão reduzidapara proporcionar o material bruto, que foi purificado por cromatografia decoluna instantânea (eluente 30 - 40% de EtOAc/Hexanos) para fornecer 458mg (87%) do composto desejado. MS (APCI +) m/z 817 (M+1) foi detectada.1H RMN (400 MHzl CDCI3) δ 7,85 (s, 1H), 6,7 - 7,35 (m, 10H), 6,18 (s, 1H),6,16 (s, 1H), 4,62 (s, 1H), 5,36 (t, 1H, J = 6 Hz), 4,81 (d, 4H, J = 8,2 Hz), 4,54(t, 2H, J = 5,1 Hz), 4,39 (m, 4H), 2,35 (s, 3H), 1,25 (s, 9H).

Etapa L: preparação de diidrogenofosfato de 2-(5-(2-((3-(3-ferc-butil-1 -p-tolil-1 H-pirazol-5-il)ureído)metil)-4-fluorofenóxi)-1 H-indazol-1 -il)etila74: fosfato de 2-(5-(2-((3-(3-íerc-butil-1-p-tolil-1H-pirazol-5-il)ureído)metil)-4-fluorofenóxi)-1 H-indazol-1-il)etila (1,920 g, 2,35 mmols ) foi suspenso emEtOH (0,05M, 50 ml_) e cicloexa-1,4-dieno (3,56 ml, 82,14 mmols ) e 10% dePd/C (20%/peso, 0,384 g) foram adicionados. A mistura de reação foi reflu-xada durante a noite. A mistura de reação foi filtrada através de papel GF elavada com MeOH. As camadas orgânicas foram concentradas sob pressãoreduzida para proporcionar o material bruto, que foi dissolvido em MeOH epassado através de um filtro Gellman acrodisk (0,45 μιη) para remover sinalde contaminação de paládio. Depois da evaporação do solvente, a gomaresultante foi triturada em CH3CN e os sólidos formados foram coletados porfiltração e secados sob alto vácuo durante 3 horas para fornecer 1,21 g(89%) do composto desejado. MS (APCI +) m/z 637 (M+1) foi detectada. 1HRMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,30 (s, 1H), 8,00 (s, 1H), 7,71 (d, 1H, J = 9Hz), 6,88-7,37 (m, 10H), 6,24 (s, 1H), 4,61 (br, 1H), 4,28 (d, 2H, J = 5,7 Hz),4,19 (dd, 2H, J = 5,2 Hz), 2,35 (s, 3H), 1,25 (s, 9H).

Exemplo 3

Preparação de 1 -(3-terc-Butil-1 -p-tolil-1 H-pirazol-5-il)-3-((5-flúor-2-(1 -(2-hidroxietil)-1 H-indazol-5-ilóxi)fenil)metil)uréia (72): Método 2

Um método alternativo para a síntese do composto (72), de a-cordo com o Método 2, é mostrado no Esquema 2, etapas AaF.

Etapa A: preparação de 2-(4-amino-3-metilfenóxi)-5-fluorobenzonitrila 65: em um frasco de 4 gargalos de 3 L que foi evacuado epreenchido novamente com argônio, 2,5-difluorobenzonitrila (295,3 ml, 812,0mmols ) e 4-amino-3-metilfenol (100,0 g, 812,0 mmols ) foram dissolvidosem DMSO seco (2,75 M) com agitação rápida em temperatura ambiente. Asolução foi evacuada/preenchida novamente com argônio (3x). Carbonato depotássio (185,2 g, 1340 mmols ) (malha-325) foi adicionado. A mistura dereação foi evacuada/preenchida novamente com argônio (3x) e aquecida a80°C (sonda interna) durante 16 horas. TLC indicou conversão completa. Amistura de reação foi resfriada em temperatura ambiente e vertida lentamen-te em 2 L de água gelada com agitação rápida. O resíduo no frasco de basearredondada foi apreendido em água repetidamente e vertido na água gela-da até que um volume total de 3 L fosse alcançado e todos os sólidos ficas-sem na água gelada. A suspensão foi agitada rapidamente durante 2 horasquando alcançou a temperatura ambiente. Os sólidos marrons foram coleta-dos por filtração, lavados com água (3 L), secados a ar, secados com barra-gem de látex, e secados sob alto vácuo a 40 0C durante 44 horas para for-necer 194 g (99%) do produto desejado como um sólido bronzeado. MS(APCI +) m/z 243 (M+1) foi detectada. 1H RMN (400 MHz, CDCI3) δ 7,38 (m,1H), 7,18 (m, 1H), 6,65 - 6,85 (m, 5H), 3,60 (br, 2H), 2,17 (s, 3H).

Etapa B: preparação de 2-(1H-lndazol-5-ilóxi)-5-fluoro-benzonitrila 66: em um frasco de um gargalo de 500 ml_ contendo uma barra/ de agitação magnética grande, 2-(4-amino-3-metilfenóxi)-5-fluorobenzonitrila(274,5 ml, 219,6 mmols) foi apreendida em clorofórmio (0,8 M) e tratada comacetato de potássio (25,86 g, 263,5 mmols ) em temperatura ambiente. Amistura de reação foi resfriada a O0C e tratada com anidrido acético (62,28mL, 658,8 mmols ) por funil de adição durante 5 minutos. A reação foi adap-tada com um condensador de refluxo, tratada com 100 mL de clorofórmioadicional, e aquecida a 40 °C. Nitrito de isoamila (58,74 mL, 439,2 mmols )foi adicionada gota a gota por um funil de adição. O funil de adição foi enxa-guado com 60 mL + 40 mL de clorofórmio, removido, e substituído com umtampão de vidro. A reação foi aquecida em refluxo durante 20 horas, resfria-da em temperatura ambiente, e concentrada em vácuo em um sólido mar-rom. Depois de ser secado sob alto vácuo durante 30 minutos, o sólido mar-rom foi suspenso em 1 L de água, agitado vigorosamente durante 15 minu-tos, e filtrado. O sólido marrom alaranjado resultante (83 g) foi apreendidoem 400 mL de MeOH e tratado com 1,0 M de ácido clorídrico (241,6 mL,241.6 mmols ) em temperatura ambiente. A mistura foi adaptada com umcondensador de refluxo e aquecida a 70 0C durante 20 horas. A reação foiresfriada a 0 0C e 1,0 M de hidróxido de sódio (252,6 mL, 252,6 mmols ) foiadicionado, seguido por água (250 mL). A suspensão amarela resultante foiagitada no banho de gelo durante 10 minutos e em seguida permitida assen-tar. A suspensão foi filtrada, lavada com água (1 L), secada a ar, secadacom barragem de látex, e secada sob alto vácuo a 40 0C durante 36 horas,para fornecer 50,7 g (91%) do produto desejado como um sólido castanhode fluxo livre. MS (APCI +) m/z 254 (M+1) detectada. 1H RMN (400 MHz,DMSO-de) δ 13,38 (br, 1H), 8,07 (s, 1H), 7,94 (dd, 1H, J = 3,1 Hz, J = 8,2Hz), 7,64 (d, 1H, J = 9 Hz), 7,54 (m, 2H), 7,21 (dd, 1H, J = 9 Hz), 6,96 (dd,1H, J = 4,3 Hz, J = 9,3 Hz).

Etapa C: preparação de 2-(5-(2-ciano-4-fluorofenóxi)-1H-indazol-1-il)acetato de metila 77: 2-(1H-lndazol-5-ilóxi)-5-fluorobenzonitrila (40,7 g,160.7 mmols ) foi dissolvida em 400 mL de DMF e a solução foi colocada emum banho de água (temperatura ambiente). Carbonato de césio (157,1 g,482,2 mmols ) foi adicionado. Depois de 30 minutos em um banho de água,2-bromoacetato de metila (33,47 ml, 353,6 mmols ) foi adicionada gota a go-ta. A mistura foi agitada em temperatura ambiente durante 4 horas. À mistu-ra foi adicionada água (400 mL, ligeiramente exotérmica) e a mistura inteirafoi transferida para um funil separador de 2 L (continha 400 mL de EtOAc).

As camadas foram separadas, e a camada aquosa foi extraída com EtOAc(3 X 200 mL). Os extratos combinados foram lavados com água e salmourae as camadas foram separadas. A camada orgânica foi secada em MgSO4,filtrada através de uma almofada de Celite, concentrada sob pressão reduzi-da, e secada sob alto vácuo durante 1 hora para fornecer 66,3 g de sólidocastanho. O sólido foi dissolvido em 400 mL de EtOAc quente e tratado comcarvão durante 10 minutos sob refluxo. A mistura foi filtrada através de umaalmofada de Celite e concentrada sob pressão reduzida. Materiais insolúveisforam removidos por filtração. O sólido foi dissolvido em 300 mL de EtOAcquente e 300 mL de hexanos foram adicionados. A mistura foi resfriada emtemperatura ambiente. Sólido marrom claro foi coletado por filtração, 32,24 g(61,7%). MS (APCI +) m/z 326 (M+1) foi detectada. 1H RMN (400 MHz, CD-CI3), 8,03, 1H), 7,41, 7,36 (m, 3H), 7,22, 7,16 (m, 2H), 6,81 (dd, J = 4,29 Hz,9,37 Hz, 1H), 5,19 (s, 2H), 3,79 (s, 3H)

Etapa D: preparação de dicloridrato de 2-(5-(2-(aminometil)-4-fluorofenóxi)-1H-indazol-1-il)acetato de metila 78: 2-(5-(2-ciano-4-fluorofenóxi)-1H-indazol-1-il)acetato de metila (10,00 g, 30,74 mmols ) foicolocado em um vaso de hidrogenação Parr de 2500 mL. Metanol (0,1 M,310 mL) e HCI concentrado (25,62 ml, 307,4 mmols ) foram adicionados.10% de Pd/C (2,0g, tipo Degussa) foram adicionados e o vaso foi purgadocom gás hidrogênio (três vezes, nenhuma evacuação de vácuo foi feita). Ovaso foi carregado com gás hidrogênio em 2,81 kg/cm2 e foi deixado no agi-tador durante 18 horas. À mistura foi adicionado 1,0g adicional de 10% dePd/C e a mistura foi colocada outra vez no hidrogenador Parr durante umadicional de 18 horas. A mistura foi filtrada através de uma almofada de Celi-te e concentrada sob pressão reduzida (temperatura de banho mantida abai-xo de 20 °C). O resíduo foi azeotropado com MeOH (3 X 100 mL). A tempe-ratura do banho foi elevada para 40°C depois do terceiro azeótropo. O resí-duo (óleo) foi secado sob alto vácuo durante 2 horas para fornecer o produtodesejado como um sólido amarelo (11,6g, 93,8%). MS (APCI +) m/z 330(M+1) foi detectada. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,08 (s, 1H), 6,84 -7,76 (m, 6H), 5,43 (s, 2H), 4,8 (br, 2H), 4,105 (q, 2H, J = 5,6 Hz), 3,68 (s,3H).

Etapa E: preparação de 2-(5-(2-((3-(3-terc-butil-1-p-tolil-1H-pirazol-5-il)ureído)metil)-4-fluorofenóxi)-1H-indazol-1-il)acetato de metila 79:

Uma solução de dicloridrato de 2-(5-(2-(aminometil)-4-fluorofenóxi)-1H-indazol-1-il)acetato de metila (17,5 g, 43,51 mmols ) em dimetilacetamida(0,5M, 88 mL) foi tratada com 2,2,2-tricloroetil-3-terc-butil-1 -p-tolil-1 H-pirazol-5-ilcarbamato (17,96 g, 44,38 mmols ), seguido por diisopropiletilamina (30,3mL, 174 mmols ) em temperatura ambiente. A mistura foi aquecida durante anoite a 80 °C. A mistura foi concentrada em vácuo e o resíduo distribuídoentre EtOAc e NH4CI aquoso saturado. A camada orgânica foi separada elavada com salmoura, filtrada através de papel 1PS, evaporada em vácuoem uma espuma marrom. A espuma foi triturada em éter, e os sólidos preci-pitados foram coletados por filtração para fornecer 22,55 g (89%) do com-posto desejado. MS (APCI +) m/z 585 (M+1) detectada. 1H RMN (400 MHz,DMSO-de) δ 8,3 (s, 1H), 8,07 (s, 1H), 7,68 (d, 1H, J = 8,9 Hz), 6,85-7,37 (m,8H), 6,24 (s, 1H), 5,4 (S, 2H), 4,28 (d, 2H, J = 5,8 Hz), 3,68 (s, 3H), 2,35 (s,3H), 1,25 (s, 9H).

Etapa F: preparação de 1-(3-terc-Butil-1-p-tolil-1H-pirazol-5-il)-3-((5-flúor-2-(1-(2-hidroxietil)-1H-indazol-5-ilóxi)fenil)metil)uréia 72: Uma solu-ção de 2-(5-(2-((3-(3-terc-butil-1 -p-tolil-1 H-pirazol-5-il)ureído)metil)-4-fluorofenóxi)-1H-índazol-1-il)acetato de metila (4,6 g, 7,87 mmols ) em meta-nol (0,1 M, 80 mL) foi tratada com boroidreto de sódio (893 mg, 23,6 mmols)em porções em temperatura ambiente. A mistura foi agitada em temperaturaambiente durante 18 horas, e o solvente evaporado em vácuo em um resí-duo amarelo escuro. O resíduo foi distribuído entre diclorometano e NH4CIaquoso saturado. A camada orgânica foi filtrada através de papel 1 PS, eva-porada em vácuo e purificada em Biotage eluindo com 2-10% de i-PrOH/DCM. As frações desejadas foram evaporadas em vácuo em uma es-puma branca, 2,97 g (68%). MS (APCI +) m/z 557 (M+1) foi detectada. 1HRMN (400 MHz, DMSO-de) δ 8,29 (s, 1H), 7,97 (s, 1H), 7,68 (d, 1H, J = 9,1Hz), 7,35 (s, 1H), 6,85-7,4 (m, 8H), 6,24 (s, 1H), 4,87 (t, 1H, J = 5,4 Hz), 4,43(t, 1H, J = 5,6 Hz), 4,28 (d, 1H, J = 5,9 Hz), 3,80 (q, 1H, J = 5,5 Hz), 2,35 (s,3H), 1,25 (s, 9H).

Exemplo 4

Preparação de diidroaenofosfato de 2-(5-(2-((3-(3-terc-butil-1 -p-tolil-1 H-pirazol-5-il)ureído)metil)-4-fluorofenóxi)-1H-indazol-1-il)etila (74): Método 2

Um método alternativo para a síntese do composto (72), de a-cordo com o Método 2, é mostrado no Esquema 2, etapas GaH.

Etapa G: preparação de fosfato de di-terc-butil 2-(5-(2-((3-(3-terc-butil-1 -p-tolil-1 H-pirazol-5-il)ureído)metil)-4-fluorofenóxi)-1 H-indazol-1 -il)etila 80: uma solução de 1 -(3-ferc-butil-1 -p-tolil-1 H-pirazol-5-il)-3-((5-flúor-2-(1-(2-hidroxietil)-1H-indazol-5-ilóxi)fenil)metil)uréia (1,5 g, 2,69 mmols ) emDMF (0,2M, 15 mL) foi tratada com imidazol (183 mg, 2,69 mmols ), e clori-drato de imidazol (423 mg, 4,04 mmols ) em temperatura ambiente. Depoisque a dissolução completa foi observada, diisopropilfosforamidita de di-terc-butila (1,28 mL, 4,04 mmols ) foi adicionada. A agitação foi continuada emtemperatura ambiente durante 18 horas. Peróxido de hidrogênio (50% aquo-so, 0,535 mL 9,43 mmols ) foi adicionado lentamente em temperatura ambi-ente, e a agitação foi continuada durante 1 hora. A reação foi completadacomo detectado por LC e TLC. O resíduo foi distribuído entre diclorometanoe 10% de Na2S2O3 aquoso. A camada aquosa foi extraída com EtOAc (2x).

Os extratos orgânicos combinados foram lavados com salmoura, filtradosatravés de papel 1 PS, evaporados em vácuo até um óleo amarelo. O óleo foipurificado por um tampão de sílica-gel eluindo com DCM, 3 - 5% de Me-OH/DCM. As frações desejadas foram evaporadas em vácuo para fornecer oproduto desejado como uma espuma branca, 1,59 g (79%). MS (APCI +) m/z749 (M+) foi detectada. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,29 (s, 1H), 8,01 (s,1H), 7,73 (d, 1H, J = 9,1 Hz), 6,79-7,35 (m, 8H), 6,23 (s, 1H), 4,62 (t, 2H, J =4,7 Hz), 4,26 (m, 4H), 2,35 (s, 3H), 1,43, s, 9H), 1,25 (s, 18H).

Etapa H: preparação de diidrogenofosfato de 2-(5-(2-((3-(3-terc-butil-1 -p-tolil-1 H-pirazol-5-il)ureído)metil)-4-fluorofenóxi)-1 H-indazol-1 -il)etila74: uma solução de di-terc-butil fosfato de 2-(5-(2-((3-(3-terc-butil-1-p-tolil-1H-pirazol-5-il)ureído)metil)-4-fluorofenóxi)-1 H-indazol-1-il)etila de (3,66 g,4,89 mmols ) em EtOH (0,2M, 24 mL) foi tratada com HCI a 5N /iPrOH (2,93mL, 14,7 mmols ) em temperatura ambiente. A agitação em temperaturaambiente foi continuada durante a noite. O solvente foi evaporado em vácuo,e o resíduo foi co-evaporado a partir de tolueno, e éter (2x). A espuma begefoi apreendida em MeOH e vertida lentamente em um béquer contendo á-gua. Os sólidos precipitados foram coletados por filtração para fornecer 2,83g (91%) do produto desejado. MS (APCI +) m/z 637 (M+1) foi detectada. 1HRMN (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,30 (s, 1H), 8,00 (s, 1H), 7,71 (d, 1H, J = 9Hz), 6,88-7,37 (m, 10H), 6,24 (s, 1H), 4,61 (br, 1H), 4,28 (d, 2H, J = 5,7 Hz),4,19 (dd, 2Η, J = 5,2 Hz), 2,35 (s, 3Η), 1,25 (s, 9Η),

Exemplo 5

<formula>formula see original document page 69</formula>

5-flúor-2-(1 -(2-hidroxietil)-1 H-indazol-5-ilóxi)benzonitrila (78A)

Em uma solução de 2-(5-(2-ciano-4-fluorofenóxi)-1H-indazol-1-il)acetato de metila 77 (preparado como no Exemplo 3) (60,0 g, 184,4 mmolsem MeOH (370 mL) foi adicionado NaBH4 (24,42 g) em cinco porções de 5gramas durante 90 minutos. A temperatura subiu de 25 sC para 44,7 eC naadição final de NaBH4. A mistura foi concentrada sob vácuo. Ao concentradofoi adicionado NH4CI saturado (600 mL) e EtOAc (600 mL) e a mistura foiagitada vigorosamente durante 1 hora. As camadas foram separadas e acamada aquosa foi extraída com EtOAc (2 X 100 mL). Os orgânicos combi-nados foram lavados com NH4CI saturado (2 X 100 mL), água (200 mL),salmoura (500 mL), secados em MgSO4, filtrados através de papel GF/F econcentrados em um sólido laranja brilhante. O sólido bruto foi dissolvido emCH2CI2 (1 L) e hexanos (2,25 L) foram adicionados com agitação. Um sólidomarrom claro formou-se e depois da agitação durante 30 min, o sólido foicoletado e secado sob alto vácuo para produzir 45,5 g. O filtrado foi concen-trado sob pressão reduzida. Este material foi re-dissolvido em CH2CI2 (100mL) e hexanos foram adicionados (200 mL). O sólido resultante (6,2 g) foicoletado por meio de filtração. As duas colheitas foram combinadas paraproduzir 51,7 g (94,3%) de 78A. 1H RMN (400 MHz, CDCI3) δ 7,99 (s, 1H),7,49 (d, 1H), 7,39, 7,36 (m, 2H), 7,21, 7,16 (m, 2H), 6,90 (dd, 1H), 4,49 (t,2H), 4,17, 4,13 (m, 2H), 2,81 (t, 1H).Exemplo 6

<formula>formula see original document page 70</formula>

2-(5-(2-(aminometil)-4-fluorofenóxi)-1 H-indazol-1 -iDetanol (79A)(Método A)

Em um agitador Parr de 250 ml_ foi adicionado 5-flúor-2-(1-(2-hidroxietil)-1 H-indazol-5-ilóxi)benzonitrila 78A (preparado como no Exemplo5) (80,0 g, 269,1 mmols ), Pd(OH)2 (32 g, 40% de carregamento), EtOH (5L) e HCI concentrado (224 mL, 2691 mmols ). O vaso foi selado, purgadocom hidrogênio, descarregado e carregado com hidrogênio em 12,65kg/cm2. A temperatura interna foi diminuída a 18 eC e depois da agitaçãodurante 23 horas, a reação foi julgada completa por HPLC. A mistura de rea-ção anterior foi removida e a seqüência inteira foi repetida duas vezes com80 g de material de partida, e em seguida com 53,2 g de material de partida.

As misturas de reação combinadas (4 reações) foram filtradas através deGF/F e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida. O resíduo foi dissol-vido em HCI a 1 N (3,0 L) e lavado com EtOAc (3 X 2L). À camada aquosafoi adicionado EtOAc (2 L) e as fases foram agitadas vigorosamente duranteminutos e, em seguida, a camada orgânica foi removida. Esta etapa foimais 2 vezes repetida e a camada aquosa foi transferida para um frasco res-friado (banho de gelo). À mistura aquosa ácida foi adicionado péletes deNaOH (40 g χ 11) de uma maneira tal que a temperatura não subiu acima de35 QC. Logo que o pH foi -14, a mistura foi transferida para um funil separa-dor e extraída com CH2CI2 (4 X 1L). Os extratos combinados foram lavadoscom água (2X1 L) e salmoura (2 X 1 L). O extrato foi secado em MgSO4(-250 g), filtrado através de GF/F e concentrado sob pressão reduzida. Oconcentrado foi dissolvido em CH2CI2 (3,5 L) e hexanos foram adicionados (4L). Depois que os primeiros 2 L de hexanos foram adicionados, um sólidomarrom formou-se. Depois de agitar durante 1 hora, o sólido foi coletado pormeio de filtração e a massa foi lavada com 1:2 de CH2CI2/hexanos (500 mL).A massa foi secada sob vácuo para produzir 165,1 g (55,6%) de 79A. 1HRMN (400 MHz, CDCI3) δ 7,90 (s, 1H), 7,42 (d, 1H), 7,17-7,12 (m, 3H), 6,87(td, 1H), 6,80 (dd, 1H), 4,46 (t, 2H), 4,12 (t, 2H), 3,86 s (2H), 1,87 (brs, 1H).

Exemplo 7

<formula>formula see original document page 71</formula>

2-(5-(2-(Aminometil)-4-fluorofenóxi)-1 H-indazol-1 -iDetanol (79A)

(Método B)

A uma solução de (5-flúor-2-(1-(2-hidroxietil)-1H-indazol-5-ilóxi)benzonitrila (1,0 g, 3,36 mmols ) e NiCI2.6H20: (148 mg, 0,336 mmol)em MeOH (30 mL) foi adicionado NaBH4 (636 mg, 16,8 mmols ) em porções(2-3), e a reação foi agitada durante 3 horas. Uma solução de Na2CO3 satu-rado (15 mL) foi adicionada lentamente e a mistura foi agitada durante 75minutos, durante os quais um sólido fino formou-se. A mistura de reação foifiltrada através de GF/F e a massa foi lavada com MeOH (20 mL). O filtradofoi concentrado em cerca de 15 mL sob vácuo, acetato de isopropila (20 mL)foi adicionado, e a mistura foi concentrada. Ao concentrado foi adicionadoacetato de isopropila (20 mL) e a mistura foi agitada durante 5 minutos. Asfases foram separadas, e a camada orgânica foi lavada com 10% de sal-moura (20 mL). Ácido cítrico (0,1 M, 20 mL) foi adicionado e as fases foramvigorosamente misturadas. A camada orgânica foi removida e o aquoso foilavado com acetato de isopropila (20 mL) e EtOAc (20 mL). À camada aquo-sa foi adicionado acetato de isopropila (20 mL) e 50% de NaOH (1 mL) fo-ram adicionados. As fases foram vigorosamente misturadas e o aquoso foiremovido. Ό orgânico foi lavado com 10% de salmoura (20 mL), secado emNa2SO4 e concentrado em 850 mg (85%).Exemplo 8

<formula>formula see original document page 72</formula>

3-terc-Butil-1 -p-tolil-1 H-pirazol-5-ilcarbamato de fenila

A uma solução de 3-terc-butil-1 -p-tolil-1 H-pirazol-5-amina (102,9g, 448,9 mmols ) em EtOAc (1 L) a 10,9 9C foi adicionado uma solução deNaOH (2,5 M, 269 mL), e a mistura de reação bifásica aquecida em 15,9 e,em seguida, estabilizada. Cloroformato de fenila (98,4 g, 156,5 mmols ) foiadicionado em uma porção e a temperatura elevada para 25,5 e, em segui-da, estabilizada. O banho de gelo foi removido e a reação foi monitorada porHPLC. Depois de 1 hora, um adicional de 25 mL de 2,5 M de NaOH foi adi-cionado. A mistura de reação foi agitada durante a noite, e em seguida diluí-da com EtOAc (200 mL). A camada orgânica foi lavada com salmoura (1 L),secada em Na2SO4 (200 g) e concentrada em cerca de 400 a 500 mL deEtOAc. A solução concentrada foi aquecida a 60 9C. Depois que os sólidosdissolveram, heptano (2 L) foi adicionado lentamente, durante o qual os sóli-dos formaram. Depois da agitação durante 30 minutos, o sólido foi coletadopor meio de filtração e a massa foi lavada com 400-500 mL de heptano. Amassa foi secada em um forno à vácuo em temperatura ambiente para pro-duizir 156,9 g (95,0%) do composto do título. 1H RMN (400 MHz, CDCI3),7,39, 7,31 (m, 6H), 7,26-7,225 (m, 2H), 7,13 (br s, 2H), 6,96 (br s, 1H), 6,47(br s, 1H), 2,42 (s, 3H), 1,34 (s, 9H).Exemplo 9

<formula>formula see original document page 73</formula>

1 -(3-terc-butil-1 -p-tolil-1 H-pirazol-5-il)-3-(5-flúor-2-(1 -(2-hidroxietil)-1 H-indazol-5-ilóxi)bénzil)uréia (72):

Em uma solução a 4,1 qC de 2-(5-(2-(aminometil)-4-fluorofenóxi)-1 H-indazol-1 -il)etanol (71,55 g, 237 mmols ) em DMA (350 mL) foi adiciona-da uma solução de DMA (350 mL) de 3-íerc-butil-1 -p-tolil-1 H-pirazol-5-ilcarbamato de fenila (80,5 g, 230 mmols ). A temperatura elevou-se para18,4 0C e estabilizou-se. O banho de gelo foi removido e a reação foi agitadadurante 2 horas. Uma porção adicional de 2-(5-(2-(aminometil)-4-fluorofenóxi)-1 H-indazol-1-il) etanol foi adicionada e a reação foi agitada du-rante 2 horas. A mistura de reação foi dividida entre acetato de isopropila(1,6 L) e água (2,4 L). A camada aquosa foi removida e a camada orgânicafoi lavada com NaOH a 0,5 N (2 X 2,4 L) e, em seguida, salmoura saturada(1 X 2,4 L). A camada orgânica foi secada em Na2SO4 (300 g) e concentradapara produzir 110,8 g (86,6%).

A descrição anterior é considerada como ilustrativa apenas dosprincípios da invenção. Além disso, uma vez que mudanças de modificaçõesnumerosas e mudanças ficarão facilmente evidentes para aqueles versadosna técnica, não é desejado limitar a invenção à construção exata e processomostrado como descrito acima. Conseqüentemente, todas as modificaçõesadequadas e equivalentes podem ser referidos para incluir-se no escopo dainvenção como definido pelas reivindicações que seguem.

As palavras "compreende", "compreendendo", "inclui", "incluindo" e "incluem" quando empregadas nesta especificação e nas reivindicações se-guintes são pretendidas especificar a presença de aspectos declarados, nú-meros inteiros, componentes, ou etapas, porém, eles não impedem a pre-sença ou adição de um ou mais outros aspectos, números inteiros, compo-nentes, etapas, ou grupos destes.

Claims (22)

1. Composto tendo a Fórmula I:<formula>formula see original document page 75</formula>ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

2. Processo para a preparação de um composto como definidona reivindicação 1, que compreende:(a) acoplar um composto de fórmula II<formula>formula see original document page 75</formula>ou um sal do mesmo, no qual P1 representa um átomo de hidrogênio ou umgrupo protetor hidroxila, com um composto de fórmula III<formula>formula see original document page 75</formula>em que Z representa um grupo de saída, ou o isocianato correspondente; ou(b) reduzir um composto de fórmula IV <formula>formula see original document page 76</formula> em que Re representa um átomo de hidrogênio de um resíduo de um álcool;seguido removendo-se qualquer grupo protetor e, se desejado, formando-seum sal farmaceuticamente aceitável.

3. Composição farmacêutica, compreendendo um compostocomo definido na reivindicação 1 e um diluente ou veículo farmaceuticamen-te aceitável.

4. Composto como definido na reivindicação 1, para uso comoum medicamento.

5. Uso de um composto de acordo com a reivindicação 1, na fa-bricação de um medicamento para o tratamento de uma condição mediadapor cinase em um mamífero.

6. Uso de acordo com a reivindicação 5, em que a referida con-dição mediada por cinase é doença inflamatória, doença auto-imune, distúr-bio ósseo destrutivo, distúrbio proliferativo, doença infecciosa, doença viral,ou doença neurodegenerativa.

7. Método de tratar uma condição mediada por cinase em ummamífero, compreendendo administrar a um mamífero um composto comodefinido na reivindicação 1, em uma quantidade eficaz para tratar a referidacondição mediada por cinase.

8. Método de acordo com a reivindicação 7, em que a referidacondição mediada por cinase é doença inflamatória, doença auto-imune,distúrbio ósseo destrutivo, distúrbio proliferativo, doença infecciosa, doençaviral, ou doença neurodegenerativa.

9. Composto de fórmula II<formula>formula see original document page 77</formula>ou um sal do mesmo, no qual P1 representa um átomo de hidrogênio ou umgrupo protetor hidroxila.

10. Composto de fórmula IV<formula>formula see original document page 77</formula>em que Re representa um átomo de hidrogênio ou um resíduo de um álcool.

11. Uso de um pró-fármaco de um composto como definido nareivindicação 1, na fabricação de um medicamento para o tratamento comum composto como definido na reivindicação 1 de uma condição mediadapor cinase em um mamífero.

12. Uso de acordo com a reivindicação 11, em que o pró-fármaco é diidrogenofosfato de 2-(5-(2-((3-(3-terc-butil-1-p-tolil-1H-pirazol-5-il)ureído)metil)-4-fluorofenóxi)-1H-indazol-1-il)etila, ou um sal farmacêutica-mente aceitável do mesmo.

13. Uso de acordo com a reivindicação 11 ou 12, em que a refe-rida condição mediada por cinase é doença inflamatória, doença auto-imune,distúrbio ósseo destrutivo, distúrbio proliferativo, doença infecciosa, doençaviral ou doença neurodegenerativa.

14. Método de tratar uma condição mediada por cinase em ummamífero com um composto como definida na reivindicação 1, compreen-dendo administrar a um mamífero um pró-fármaco de um composto comodefinido na reivindicação 1 em uma quantidade eficaz para tratar a referidacondição mediada por cinase.

15. Método de acordo com a reivindicação 14, em que a referidacondição mediada por cinase é doença inflamatória, doença auto-imune,distúrbio ósseo destrutivo, distúrbio proliferativo, doença infecciosa, doençaviral, ou doença neurodegenerativa.

16. Método de acordo com a reivindicação 14 ou 15, em que opró-fármaco é diidrogenofosfato de 2-(5-(2-((3-(3-ferc-butil-1 -p-tolil-1 H-pirazol-5-il)ureído)metil)-4-fluorofenóxi)-1H-indazol-1-il)etila, ou um sal far-maceuticamente aceitável do mesmo.

17. Diidrogenofosfato de 2-(5-(2-((3-(3-Tert-butil-1-p-tolil-1 H-pirazol-5-il)ureído)metil)-4-fluorofenóxi)-1H-indazol-1-il)etila, ou um sal far-maceuticamente aceitável deste.

18. Processo para a preparação de um composto como definidona reivindicação 17, que compreende fosforilar um composto como definidode acordo com a reivindicação 1.

19. Composição farmacêutica, compreendendo um composto deacordo com a reivindicação 17 e um diluente ou veículo farmaceuticamenteaceitável.

20. Processo de acordo com a reivindicação 2, em que Z é umgrupo arilóxi opcionalmente substituído com um ou mais grupos seleciona-dos a partir de F, Cl, Br, e NO2.

21. Processo de acordo com a reivindicação 2, em que o referidocomposto de fórmula (II) foi preparado pelo método compreendendo:(i) reduzir um composto de fórmula (V)<formula>formula see original document page 79</formula>em qual P2 representa hidrogênio ou um grupo protetor hidroxila, sob condi-ções de hidrogenação catalíticas ou na presença de boreto de níquel.

22. Composto de fórmula III<formula>formula see original document page 79</formula>em que Z representa um grupo arilóxi substituído ou não substituído.