BRPI0708524A2 - compostos de n-formil hidroxilamina - Google Patents

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Abstract

COMPOSTOS N-FORMIL HIDROXILAMINA. A presente invenção refere-se a novos compostos N-formil hidroxilamina e seus derivados são descritos. Estes compostos N-formil hidroxilamina inibem peptidil deformilase (PDF), uma enzima presente em procariotas. Os compostos são úteis como antimicrobianos e antibióticos. Os com- postos da invenção exibem inibição seletiva de peptidil deformilase versus outras metaloproteinases tais como MMPs. Métodos de preparação e utilização dos compostos são também descritos.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "COMPOS-TOS DE N-FORMIL HIDROXILAMINA".
A presente invenção refere-se a novos compostos de N-formilhidroxilamina, aos empregos destes compostos em várias aplicações medi-cinais, incluindo tratar distúrbios tratáveis com tratamento por inibidores depeptidil deformilase tal como tratamento de infecções bacterianas, e a com-posições farmacêuticas destes compostos.
O tratamento de infecção bacteriana em organismos hospedei-ros requer um método eficaz para matar o micróbio ao mesmo tempo quecausar pequeno dano ao hospedeiro tanto quanto possível. Conseqüente-mente, agentes com características-alvo únicas para um microorganismocausando patologia são desejáveis para o tratamento.
Deformilase de peptídeo é uma metalopeptidase encontrada emorganismos procarióticos tais como bactérias. A síntese de proteína em or-ganismos procarióticos inicia-se com N-formil metionina (fMet). Após o inícioda síntese de proteína, o grupo formila é removido pela enzima peptídeodeformilase (PDF); esta atividade é essencial para a maturação de proteí-nas.
Metaloproteinases são brutociais para muitos aspectos do meta-bolismo normal. Distúrbios envolvendo metaloproteinases implicaram emvárias doenças tais como câncer, artrite e doenças auto-imunes. Por causada importância de MMPs em processos fisiológicos normais, seria preferíveldesenvolver agentes que inibem PDF ao mesmo tempo que evitam a inibi-ção significante de MMPs. Alternativamente, os inibidores de PDF que tam-bém inibem MMPs podem ser de emprego onde os benefícios terapêuticosde inibir PDF são mais importantes que o risco dos efeitos colaterais da ini-bição de MMP.
Pesquisa sobre inibidores de PDF é muito menos extensiva doque para inibidores de MMPs. Os derivados de N- formil hidroxilamina sãodescritos no WO 99/39704 e WO 02/102790. Em vista da importância deidentificar novos antibióticos para tratar bactérias resistentes aos antibióticosexistentes, é desejável desenvolver novos inibidores de PDF para avaliaçãoe emprego como agentes antibactericidas e antimicrobianos. A presente in-venção satisfaz esta necessidade.
Em particular, a presente invenção fornece derivados de N-formilhidroxilamina referidos aqui coletivamente como "compostos da invenção"),um sal deste ou um pró-fármaco deste, por exemplo um composto da fórmula (I):
<formula>formula see original document page 3</formula>
em que R1 é hidrogênio, alquila, heteroalquila, heterocicloalquila, arila ouheteroarila.
R3 é hidrogênio, halogênio, ou alcóxi; e
R4 é arila, ou heteroarila; ou η é 0 a 3 um sal deste ou um pró-fármaco deste.
Em um aspecto, R4 é uma heteroarila da fórmula (II)
<formula>formula see original document page 3</formula>
em que cada R6, R7, Re e R9 independentemente é hidrogênio, alquila, alqui-la substituída, fenila, halogênio, hidróxi ou alcóxi, por exemplo, onde
a.) R6 e Re são hidrogênio, R9 é hidrogênio ou alquila e R7 é al-quila, fenila ou alquila substituída;
b.) R6, R7 e R8 são hidrogênio e Ra é halogênio, alquila ou alquilasubstituída;
c.) R7, R6 e R9 são hidrogênio e R6 é hidroxila.<formula>formula see original document page 4</formula>
Em um aspecto particularmente útil, a heteroarila é da fórmula(11.1)
em que R6, R7 e R9 são como definidos acima para a fórmula (II) e R8 é ha-logênio, por exemplo flúor.
Em ainda outro aspecto, R4 é da fórmula (II.2)
<formula>formula see original document page 4</formula>
em que R6, R7 e Rs são como definidos acima para a fórmula (II) acimaEm ainda outro aspecto, R4 é da fórmula (II.3)
em que R6, R7 e Re são como definidos acima para a fórmula (II)Em ainda outro aspecto, R4 é da fórmula (II.4)
<formula>formula see original document page 4</formula>
em que R6, R7 e R6 são como definidos acima para a fórmula (II)Em ainda outro aspecto, R4 é da fórmula (II.5)
<formula>formula see original document page 4</formula>
em que R6, R7 e R8 são como definidos acima para a fórmula (II)Em outro aspecto, R4 é uma heteroarila da fórmula (III)<formula>formula see original document page 5</formula>
d.) em que R6, R7, Re e R9 são como definidos acima na fórmula (II).
A não ser que de outro modo estabelecido, os seguintes termosquando empregados na especificação possuem o seguinte significado.
O termo "cicloalcano" ou cicloalquila" contém de 3 a 7 átomos decarbono de anel, e é, preferivelmente ciclopropila, ciclobutila, ciclopentila, ecicloexila.
O termo "grupo alifático" refere-se a grupos alifáticos saturadosou insaturados, tal como alquila, alquenila ou alquinila, cicloalquila ou alquilasubstituída incluindo grupos cíclicos de cadeia reta e de cadeia ramificadatendo de 1-10 átomos de carbono. O termo "alquila" ou "alqu", quando querque ocorra, é um grupo alifático de cadeia reta ou ramificada saturado de 1-10 átomos de carbono ou uma cicloalquila de 3-10 átomos de carbono, maispreferivelmente, grupos alquila são Ci - C7 alquila, particularmente, Ci - C4alquila. Exemplos de "alquila" ou "alqu" incluem, porém não são limitados a,metila, etila, n-propila, isopropila, n-butila, isobutila, sec-butila, t-butila, n-pentila, neopentila, n-hexila ou n-heptila, ciclopropila e, especialmente, n-butila.
O termo "alquila substituída" refere-se a um grupo alquila que ésubstituído com um ou mais substituintes preferivelmente de 1 a 3 substituin-tes incluindo, porém não-limitado a substituintes tais como halogênio, alcóxiinferior, hidróxi, mercapto, carbóxi, cicloalquila, arila, heteroarila, e simi-lar(es).
Exemplos de grupos alquila substituídos incluem, porém não sãolimitados a, -CF3, -CF2-CF3, hidroximetila, 1- ou 2-hidroxietila, metoximetila,1- ou 2-etoxietila, carboximetila, 1- ou 2-carboxietila, e similar(es).
O termo "arila" ou "Ar" refere-se a um grupo carbocíclico aromá-tico de 6 a 14 átomos de carbono tendo um anel único (incluindo, porém nãolimitado a, grupos tal como fenila) ou anéis condensados múltiplos (incluin-do, porém não limitado a, grupos tal como naftila ou antrila), e é especial-mente fenila.
O termo "heteroarila" ou "HetAr" refere-se a um heterociclo aro-mático monocíclico de 4 a 7 membros ou um biciclo que é composto de umheterociclo aromático monocíclico de 4 a 7 membros e um anel de benzenofundido. A heteroarila possui pelo menos um heteroátomo, preferivelmentepelo menos dois heteroátomos incluindo, porém não limitado a, heteroáto-mos tais como Ν, O e S, dentro do anel. Uma porção de heteroarila preferidaé um heterociclo monocíclico de 6 membros tendo 2, 3 ou 4 heteroátomosde nitrogênio no anel. Exemplos de grupos heteteroarila são piridinila, pirimi-dinila, pirazinila, piridazinila, N-óxido de piridazinila ou benzdioxolanila, tria-zina ou tetrazinas.
A arila ou heteroarila pode ser não-substituída ou substituída porum ou mais substituintes incluindo, porém não limitado a Cw alquila, particu-larmente C1.4 alquila tal como metila, hidróxi, alcóxi, acila, acilóxi, SCN, cia-no, nitro, tioalcóxi, fenila, heteroalquilarila, alquilsulfonila, halogênio, e formila.
O termo "heteroalquila" refere-se a Ci -8 alquila saturada ou insa-turada como acima definido, e especialmente heteroalquila que contém umou mais heteroátomos, como parte das cadeias cíclicas, principais ou ramifi-cadas, no grupo. Os heteroátomos podem independentemente ser selecio-nados do grupo consistindo em -NR- onde R é hidrogênio ou alquila, -S-, -O-e -P-; preferivelmente -NR- onde R é hidrogênio oü alquila, e/ou -O-. Osgrupos heteroalquila podem ser ligados ao resíduo da molécula em um hete-roátomo (se uma valência está disponível) ou em um átomo de carbono. E-xemplos de grupos heteroalquila incluem, porém não são limitados a, grupostais como -O-CH3, -CH2-O-CH3, -CH2-CH2-O-CH3, -S-CH2-CH2-CH3, -CH2-CH(CH3)-S-CH3, e-CH2-CH2-NH-CH2-CH2-.
O grupo heteroalquila pode ser não-substituído ou substituídocom um ou mais substituintes, preferivelmente de um a três substituintes,incluindo porém não limitado a, alquila, halogênio, alcóxi, hidroxila, mercap-to, carbóxi, e especialmente fenila. Os heteroátomo(s) bem como os átomosde carbono do grupo podem ser substituídos. Os heteroátomo(s) podemtambém ser na forma oxidada.
O termo "alcóxi" como empregado aqui refere-se a Cm0 alquilaligada a um átomo de oxigênio, ou preferivelmente C1.7 alcóxi, mais preferi-velmente Ci .4 alcóxi. Exemplos de grupos de alcóxi incluem, porém não sãolimitados a, grupos tais como metóxi, etóxi, n-butóxi, ferc-butóxi, e alilóxi.
O termo "halogênio" ou "halo" como empregado aqui refere-se acloro, bromo, flúor, iodo e é especialmente flúor.
"Grupo de proteção" refere-se a um grupo químico que exibe asseguintes características: 1 ) reage seletivamente com a funcionalidade de-sejada em bom rendimento para fornecer um substrato protegido que é es-tável às reações projetadas para a qual a proteção é desejada; 2) é seleti-vãmente removível do substrato protegido para produzir a funcionalidadedesejada; e 3) é removível em boa produção por reagentes compatíveis como outro grupo funcional presente ou gerado em tais reações projetadas. E-xemplos de grupos de proteção adequados podem ser encontrados em Gre-ene e outro, "Protective Groups in Organic Synthesis", 2- edição, John Wiley& Sons, Inc., Nova York (1991). Os grupos de proteção de amino preferidosincluem, porém não são limitados a, benziloxicarbonila (CBz), t-butil-oxicarbonila (Boc), t-butildimetilsilila (TBDMS), 9-fluorenilmetil-oxi-carbonila(Fmoc), ou grupos de proteção de fotolábil adequados tais como 6-nitroveratrilóxi carbonil (Nvoc), nitropiperonila, pirenilmetoxicarbonila, nitro-benzila, dimetil dimetóxi- benzila, 5-bromo-7-nitroindolinila, e similar(es). Osgrupos de proteção de hidróxi preferidos incluem Fmoc, TBDMS, grupos deproteção fotolábil (tal como éter de nitroveratril oximetil (Nvom)), Mom (éterde metóxi metila), e Mem (éter de metóxi etóxi metila). Grupos de proteçãoparticularmente preferidos incluem NPEOC (4-nitrofenotiloxicarbonil) eNPEOM (4- nitrofenotilóxi-metiloxicarbonil).
Será apreciado que os compostos da fórmula (I) podem existirna forma de isômeros ópticos, racematos ou diaestereoisômeros. Por exem-pio, um composto da fórmula (I) em que R3 pode ser na configuração R ouS. Deve ser entendido que a presente invenção abrange todos os enantiô-meros e suas misturas. Considerações similares aplicam-se em relação aosmateriais de partida exibindo átomos de carbono assimétricos quando men-cionados.
Os compostos da invenção podem existir na forma de sais cris-talinos sólidos. Preferivelmente os sais cristalinos são sais de metal, preferi-velmente de metais divalentes, embora para alguns compostos seja possívelformar sólidos cristalinos empregando-se contra-íons monovalentes, tal co-mo Na. O contra-íon é preferivelmente Mg, Ca ou Zn.
Os compostos da invenção podem tipicamente ser na forma deum hidrato ou um solvato/hidrato misturados. Tipicamente, o sal cristalino dainvenção contém cerca de 2 a 8 águas de hidratação, mais tipicamente cer-ca de 2 a 6 águas de hidratação, e ainda mais tipicamente cerca de 2 a 4águas de hidratação. Desse modo, o sal cristalino da invenção tipicamentecompreende mais do que 2% de água, mais tipicamente cerca de 4 a cercade 12% de água e ainda mais tipicamente cerca de 8 a cerca de 9% de á-gua. Os solvatos podem ser de um ou mais solventes orgânicos, tais comoálcoois de alquila inferior, tal como metanol, etanol, isopropanol, butanol oumisturas destes.
Os compostos da invenção, por exemplo os compostos da fór-mula (I), podem existir na forma livre ou na forma de sal, por exemplo naforma de um sal farmaceuticamente aceitável. Um "sal farmaceuticamenteaceitável" de um composto significa um sal fisiologicamente e farmaceutica-mente aceitável que possui a atividade farmacológica desejada do compostode origem e não apresenta efeitos toxicológicos indesejados. Tais sais incluem:
(1) sais de adição de ácido, formados com ácidos inorgânicostais como ácido hidroclórico, ácido hidrobrômico, ácido sulfúrico, ácido nítri-co, ácido fosfórico, e similar(es); ou formados com ácidos orgânicos tais co-mo ácido acético, ácido propiônico, ácido hexanóico, ácido ciclopentanopro-piônico, ácido glicólico, ácido pirúvico, ácido lático, ácido malônico, ácidosucínico, ácido málico, ácido maléico, ácido fumárico, ácido tartárico, ácidocítrico, ácido benzóico, ácido 3-(4-hidroxibenzoil)benzóico, ácido cinâmico,ácido mandélico, ácido metanossulfônico, ácido etanossulfônico, ácido 1,2-etano-dissulfônico, ácido 2-hidroxietanossulfônico, ácido benzenossulfônico,ácido 4-clorobenzeno- sulfônico, ácido 2-naftalenossulfônico, ácido 4-toluenossulfônico, ácido canforsulfônico, ácido 3- fenilpropiônico, ácido tri-metilacético, ácido butilacético terciário, ácido Iauril sulfúrico, ácido glucôni-co, ácido glutâmico, ácido hidroxinaftóico, ácido salicílico, ácido esteárico,ácido mucônico e similar(es); ou(2) sais formados quando um próton acídico presente no composto de ori-gem é substituído por um íon de metal, por exemplo um íon de metal de ál-cali, um íon alcalino-terroso, ou um íon de alumínio; oucoordenados com uma base orgânica tais como etanolamina, dietanolamina,trietanol- amina, trometamina, N-metilglucamina, e similar(es).
Um composto da invenção, por exemplo os compostos da fórmu-la (l), podem agir como um pró-fármaco. "Pró-fármaco" significa qualquercomposto que libera um fármaco origem ativo de acordo com a fórmula (I) invivo quando tal fármaco é administrado a um indivíduo mamífero. Fármacosde um composto da fórmula (I) são preparados para modificar grupos fun-cionais presentes nos composto da fórmula (I) de uma forma tal que as mo-dificações possam ser clivadas in vivo para liberar o composto origem. Pró-fármacos incluem compostos da fórmula (I) em que um hidróxi, amino, ougrupo sulfidrila é ligado a qualquer grupo que possa ser clivado in vivo pararegenerar o hidróxi livre), grupo amino, ou sulfidrila, respectivamente. Exem-pios de pró-fármacos incluem, porém não são limitados a ésteres (por e-xemplo, acetato, formiato, e derivados de benzoato), carbamatos (por exem-plo N, N-dimetilamino-carbonila) de grupos funcionais de hidróxi nos com-postos da fórmula (I), e similar(es).
Nos compostos da fórmula (I), as seguintes significâncias sãopreferidas individualmente ou em qualquer subcombinação:
1. R4 é uma heteroarila da fórmula (11.1) onde R6, R7 e R9 são hidrogênio eR8 é flúor, R6, R7 e R9 são hidrogênio e R8 é metila ou triflúormetila; ou R6,V. R7 e R8 são hidrogênio e R9 é flúor; ou R6, Re e R9 são hidrogênio e R7 é eti-Ia ou metóxi; ou R7, Re e R9 são hidrogênio e R6 é hidróxi; ou R7 e R8 sãohidrogênio, R6 é metóxi e R9 é metila; ou R4 é uma heteroarila da fórmula(11.2) em que R6, R7 e R8 são hidrogênio, ou R4 é uma heteroarila da fórmula(11.3) em que R6, R7 e R8 são hidrogênio, ou R4 é uma heteroarila da fórmula(11.4) em que R6, R7 e R8 são hidrogênio ou R4 é uma heteroarila da fórmula(11.5) em que R6, R7 e R8 são hidrogênio.
2. R1 é alquila, preferivelmente n-butila ou cicloalquila, preferivelmente C3-7cicloalquila tal como cicloexila, ciclopropila, ou ciclopentila.
3. R3 é halogênio, preferivelmente flúor;
Utilidade da Invenção
Os compostos da presente invenção podem ser empregadospara o tratamento ou prevenção de distúrbios infecciosos causados por umavariedade de bactérias ou organismos procarióticos. Exemplos incluem, po-rém não são limitados a, bactérias aeróbicas e anaeróbicas Gram positivas eGram negativas, incluindo Staphylococci, por exemplo, S. aureus e S. epi-dermidis; Enterococci, por exemplo, E faecalis e E. faeciurrr, Streptococci,por exemplo, S. pneumoniae; Haemophilus, por exemplo, H. influenza;Moraxella, por exemplo, M. catarrhalis-, e Escherichia, por exemplo, E. coli.Outros exemplos incluem Mycobacteria, por exemplo, M. tuberculosis; mi-cróbios intercelulares, por exemplo, Chlamydia e Rickettsiae; e Mycoplasma,por exemplo, M. pneumoniae; e Pseudomonas, por exemplo, P. aeruginosa;H. pylori; e parasitas, por exemplo, Plasmodium falciparum.
Os compostos da presente invenção preferivelmente possuemmelhora substancial na eficácia microbiológica contra bactérias Gram positi-vas ou Gram negativas. Especificamente, os compostos da presente inven-ção possuem melhora significante em seu espectro microbiológico da ativi-dade tendo inibição melhorada de bactérias Gram negativas e/ou Gram posi-tivas tais como H. influenza e S pneumonia. Por exemplo onde, em um e-xemplo, o índice comparativo médio (ACI) seja maior do que 3 etapas dediluição para a inibição melhorada de H. influenza e adicionalmente exibaum ACI de 0,4 etapas de diluição para a inibição melhorada de S. pneumo-nia. Em outro exemplo, o ACI é de 3 etapas de diluição para a inibição me-lhorada de S. pneumonia e adicionalmente exibe um ACI de 1,2 etapas dediluição para a inibição melhorada de H. influenza.
Os compostos da invenção também preferivelmente possuem,toxicidade, propriedades farmacocinéticas e segurança melhorada, por e-xemplo uma diminuição ou eliminação de eventos adversos potenciais emhumano em relação aos compostos da técnica anterior.
Em um aspecto, as composições, para tratar ou prevenir distúr-bios infecciosos são fornecidas, compreendendo um composto da invenção,um sal farmaceuticamente aceitável deste ou um pró-fármaco deste, comodescrito aqui em combinação com um veículo farmaceuticamente aceitável.Em outra modalidade, tais composições também incluem outro agente tera-pêutico.
Em outro aspecto, é fornecido uma quantidade de dosagem deum composto da invenção, um sal farmaceuticamente aceitável deste ou umpró-fármaco deste, como descrito aqui em uma quantidade eficaz para o tra-tamento, prevenção ou alívio de um distúrbio, tal como um distúrbio infeccio-so. Estes compostos ou derivados destes podem ser avaliados para a ativi-dade contra agentes microbianos diferentes e as dosagens apropriadas po-dem ser determinadas empregando-se métodos disponíveis na técnica.
Os compostos da invenção podem ser empregados para tratarum indivíduo, para tratar, prevenir ou reduzir a severidade de uma infecção.Indivíduos incluem animais, plantas, produtos de sangue, culturas e superfí-cies tais como aquelas de equipamento de pesquisa ou médico, tal comovidro, agulhas, equipamento cirúrgico e tubagem, e objetos destinados paraimplantação temporária ou permanente em um organismo. Animais preferi-dos incluem mamíferos, por exemplo, camundongos, ratos, cães, gatos, va-cas, carneiro, porcos, cavalos, suínos, primatas, tais como macacos reso,chimpanzés, gorilas, e mais preferivelmente humanos. Tratar um indivíduoinclui, porém não é limitado a, prevenir, reduzir ou eliminar os sintomas clíni-cos causados por uma infecção de um indivíduo por um microorganismo;prevenir, reduzir, ou eliminar uma infecção de um indivíduo por um microor-ganismo; ou prevenir, reduzir ou eliminar a contaminação de um indivíduopor um microorganismo. O microorganismo envolvido é preferivelmente pro-cariota, mais preferivelmente uma bactéria.
Em um aspecto, os métodos de tratar ou prevenir um distúrbioinfeccioso em um indivíduo, tal como um humano ou outro indivíduo animal,os quais são responsáveis pela inibição de peptidil deformilase são forneci-dos, administrando-se ao indivíduo uma quantidade de inibição de peptidildeformilase efetiva de um composto da invenção, um sal farmaceuticamenteaceitável deste ou um pró-fármaco deste. Em uma modalidade, o compostoou seu derivado é administrado em uma forma farmaceuticamente aceitávelopcionalmente em um veículo farmaceuticamente aceitável. O composto dainvenção, sal farmaceuticamente aceitável deste ou pró-fármaco deste, podeser administrado sozinho ou em combinação com outro agente terapêutico.Exemplos de tais agentes terapêuticos incluem, porém não são limitados a,β-lactam, quinolona, macrolídeo, glicopeptídeo e oxazolidinona. Como em-pregado aqui, um "distúrbio infeccioso" é qualquer distúrbio caracterizadopela presença de uma infecção microbiana, tal como a presença de bacté-rias. Tais distúrbios infecciosos incluem, por exemplo, infecções do sistemanervoso central, infecções do ouvido externo, infecções do ouvido médio,tais como meios de otite aguda, infecções das cavidades craniais, infecçõesdo olho, infecções da cavidade oral, tais como infecções dos dentes, gengi-vas e mucosas, infecções do trato respiratório superior, infecções do tratorespiratório inferior, infecções genitourinárias, infecções gastrointestinais,infecções ginecológicas, septicemia, infecções das juntas e ossos, infecçõesna pele e na estrutura da pele, endocardite bacteriana, queimaduras, profila-xia antibacteriana da cirurgia, profilaxia antibacteriana em pacientes imunos-suprimidos, tais como pacientes recebendo quimioterapia de câncer, ou pa-cientes de transplante de órgão e doenças crônicas causadas por organis-mos infecciosos, por exemplo, arteriosclerose. Os compostos e composiçõescompreendendo os compostos podem ser administrados por rotas tal comotopicamente, localmente ou sistemicamente. Aplicação sistêmica inclui qual-quer métodos de introduzir o composto nos tecidos do corpo, por exemplo,administração intratecal, epidural, intramuscular, transdérmica, intravenosa,intraperitoneal, subcutânea, sublingüal, nasal, vaginal, retal, e oral. A dosa-gem específica de antimicrobiano a ser administrada, bem como a duraçãodo tratamento, podem ser ajustados como necessário.
Em outro aspecto da presente invenção, métodos são fornecidospara inibir peptidil deformilase. Em uma modalidade, o método compreendeadministrar a um indivíduo em necessidade deste uma quantidade de inibi-ção de peptidil deformilase efetiva de um composto da fórmula (I), um salfarmaceuticamente aceitável deste ou um pró-fármaco deste. Os termos "in-divíduo" e "quantidade de inibição de peptidil deformilase efetiva" são comodefinidos acima.
Em ainda outro aspecto da invenção, é também fornecido o em-prego de um composto da fórmula (I) como acima definido, um sal farmaceu-ticamente aceitável deste ou um pró-fármaco deste na preparação de ummedicamento para o emprego no tratamento de doenças mediadas por pep-tidil deformilase.
Administração e Composição Farmacêutica
A presente invenção também fornece composições farmacêuti-cas que compreendem um composto bioativo de N-formil hidroxilamina, umsal farmaceuticamente aceitável deste, ou um pró-fármaco deste e um veícu-lo farmaceuticamente aceitável. As composições da invenção incluem aque-las em uma forma adaptada para o emprego oral, tópica ou parenteral e po-dem ser empregadas para o tratamento de infecção bacteriana em um indi-víduo tais como animais, preferivelmente, mamíferos, mais preferivelmente,humanos. As composições farmacêuticas podem também incluir outro agen-te terapêutico como abaixo descrito.
Os compostos antibióticos, também referidos aqui como com-postos antimicrobianos, de acordo com a invenção podem ser formuladospara administração em qualquer forma conveniente para o emprego na me-dicina humana ou veterinária, por analogia com outros antibióticos. Tais mé-todos são conhecidos na técnica (vide, por exemplo, Remington1S Pharma-ceutical Sciences, Easton, PA: Mack Publishing Co.) e não são descritos emdetalhes aqui.
A composição pode ser formulada para administração por qual-quer rota conhecida na técnica, tal como subdérmica, inalação, oral, tópicaou parenteral. As composições podem ser em qualquer forma conhecida natécnica, incluindo porém não limitado a comprimidos, cápsulas, pastilhas,fusão rápida (sem pastilhas), pós, grânulos, losangos, cremes ou prepara-ções líquidas, tais como suspensões ou soluções parenterais estéreis ouorais. Os compostos podem também ser administrados em formulações Ii-possômicas, micelares ou microemulsões. Os compostos podem tambémser administrados como pró-fármacos, onde o pró-fármaco administradopassa por biotransformação no mamífero tratado para uma forma que é bio-Iogicamente ativa.
As formulações tópicas da presente invenção podem ser apre-sentadas como, por exemplo, ungüentos, cremes ou loções, soluções, po-madas, emulsões, emplastros, ungüentos de olho e gotas de olho ou ouvido,curativos impregnados, emplastros transdérmicos, sprays e aerossóis e po-dem conter aditivos convencionais apropriados tais como conservantes, sol-ventes para ajudar a penetração do fármaco e emolientes em ungüentos ecremes.
As formulações podem também conter veículoes convencionaiscompatíveis, tais como bases de creme ou ungüento e etanol ou álcool deoleíla para loções. Tais veículoes podem estar presentes, por exemplo, decerca de 1% até cerca de 99% da formulação. Por exemplo, eles podemformar até cerca de 80% da formulação.
Comprimidos e cápsulas para administração oral podem ser naforma de apresentação de dose unitária, e podem conter excipientes con-vencionais tais como agentes de ligação, por exemplo, xarope, acácia, gela-tina, sorbitol, tragacanto, ou polivinilpirolidona; cargas, por exemplo, lactose,açúcar, amido de milho, fosfato de cálcio, sorbitol ou glicina; lubrificantes detabletagem, por exemplo, estearato de magnésio, talco, polietileno glicol ousílica; desintegrantes, por exemplo, amido de batata; ou agentes umectantesaceitáveis, tal como Iauril sulfato de sódio. Os comprimidos podem ser re-vestidos de acordo com métodos bem-conhecidos na prática farmacêutica-padrão.
As preparações líquidas orais podem ser na forma de, por e-xemplo, suspensões aquosas ou oleosas, soluções, emulsões, xaropes ouelixires, ou podem ser apresentadas como um produto seco para reconstitui-ção com água ou outro veículo adequado antes do emprego. Tais prepara-ções líquidas podem conter aditivos convencionais, tais como agentes desuspensão, por exemplo, sorbitol, metil celulose, xarope de glicose, gelatina,hidroxietil celulose, carboximetil celulose, gel de estearato de alumínio ou gorduras comestíveis hidrogenadas; agentes emulsificantes, por exemplo,lecitina, monooleato de sorbitano ou acácia; veículos não-aquosos (os quaispodem incluir óleos comestíveis), por exemplo, óleo de amêndoa, ésteresoleosos tal como tal como glicerina, propileno glicol, ou álcool de etila; con-servantes, por exemplo, p-hidroxibenzoato de metila ou propila ou ácido sór-bico, e se desejado, agentes de coloração ou aromatizante convencionais.
Para administração parenteral, as formas de dosagem unitáriasfluidas são preparadas utilizando-se o composto e um veículo estéril, águasendo preferido. O composto , dependendo do veículo e da concentraçãoempregada, pode ser suspenso ou dissolvido no veículo ou outro solventeadequado. No preparo de soluções, o composto pode ser dissolvido em á-gua para injeção e filtro esterilizado antes do carregamento em um frascone-te adequado ou ampola e selagem. Vantajosamente, os agentes de tampo-namento e conservante anestético local podem ser dissolvidos no veículo.Para aumentar a estabilidade, a composição pode ser congelada após o car-regamento no frasconete e a água removida a vácuo. O pó Iiofilizado seco éem seguida selado no frasconete e um frasconete acompanhante de águapara injeção pode ser fornecido para reconstituir o líquido antes do uso. Assuspensões parenterais são preparadas substancialmente da mesma manei-ra, exceto que o composto é suspenso no veículo em vez de ser dissolvido ea esterilização não pode ser obtida por filtragem. O composto pode ser este-rilizado por exposição ao óxido de etileno antes da suspensão no veículoestéril. Vantajosamente, um tensoativo ou agente umectante é incluído nacomposição para facilitar a distribuição uniforme do composto.
As composições podem conter, por exemplo, de cerca de 0,1%em peso a cerca de 99% em peso, por exemplo, de cerca de 10-60% empeso, do material ativo, dependendo do método de administração. Onde ascomposições compreendem unidades de dosagem, cada unidade conterá,por exemplo, de cerca de 1-1000 mg do ingrediente ativo. A dosagem quan-do empregada para tratamento de ser humano adulto variará, por exemplo,de cerca de 1-3000 mg por dia, por exemplo, 1500 mg por dia dependendoda rota e freqüência de administração. Uma tal dosagem corresponde a cer-ca de 0,015-50 mg/kg por dia. Adequadamente a dosagem é, por exemplo,de cerca de 5-20 mg/kg por dia.
Formulações farmacêuticas representativas contendo um com-posto da fórmula (I) são descritas abaixo.
A presente invenção também fornece um processo para prepa-rar um composto da invenção, por exemplo um composto da fórmula (I) queo processo compreende reagir um composto da fórmula (V)
<formula>formula see original document page 16</formula>
em que Ri e R2 são como definidos acima e Y é um grupo de proteção dehidróxi, ou um derivado funcional deste, com um composto da fórmula (VI)
<formula>formula see original document page 16</formula>
Hem que R3 e R4 são como acima definidos, e η é igual a 1, e onde é requeri-do, converter os compostos resultantes obtidos na forma livre em formas desal ou vice-versa.
Os derivados funcionais dos compostos da fórmula (V) incluempor exemplo cloreto de ácido, anidrido de ácido ou um éster ativado.As reações acima podem ser realizadas de acordo com os mé-todos conhecidos na técnica ou como descritas nos exemplos abaixo. A rea-ção pode convenientemente ser realizada na presença de uma base e entãoseguida por hidrogenação, preferivelmente na presença de um catalisadorde hidrogenação. As bases adequadas incluem por exemplo base de Hunig(isto é diisopropiletilamina) e bases inorgânicas tal como bicarbonato de só-dio. O catalisador de hidrogenação, preferivelmente um catalisador de palá-dio, por exemplo paládio sobre carbono ou paládio preto, pode em seguidaser adicionado ao produto resultante, por exemplo após a concentração eagitado sob uma atmosfera de hidrogênio, por exemplo, durante cerca de 16a cerca de 24 horas. O catalisador de paládio pode ser adicionado preferi-velmente de cerca de 5% em mol a cerca de 10% em mol do produto con-centrado.
Os compostos da fórmula (V), empregados como materiais departida, podem ser preparados, por exemplo reagindo-se um composto dafórmula (VII)
<formula>formula see original document page 17</formula>
em que R1l R2, e Y são como acima definidos, por exemplo sobcondições básicas amenas por exemplo como conhecido na técnica. Tipica-mente, esta reação pode ser realizada dissolvendo-se o composto da fórmu-Ia (VII) por exemplo em uma mistura de um solvente inerte, tal como THF1DMF, tolueno, dioxano ou CH2CI2, e água, e adicionando-se peróxido de hi-drogênio e em seguida uma solução aquosa da base em água à mistura res-friada. Exemplos de base incluem, por exemplo bicarbonato de sódio, hidró-xido de lítio, hidróxido de sódio e similar(es). A base pode ser empregadapreferivelmente de cerca de 1,1 a cerca de 1,5 equivalentes ao composto dafórmula (VII).
Os compostos da fórmula (VII) podem ser produzidos por exem-pio, reagindo-se um composto da fórmula (VIII) em que Ri, R2, e Y são comoacima definidos, com ácido fórmico como conhecido na técnica. A reaçãopode tipicamente ser realizada, por exemplo a O0C1 adicionando-se uma so-lução de anidrido acético em ácido fórmico a uma solução de um compostoda fórmula (VIII) em ácido fórmico.
<formula>formula see original document page 18</formula>
Os compostos da fórmula (VIII) podem ser preparados por e-xemplo reagindo-se um composto da fórmula (IX) em que Ri, R2, e Y sãocomo acima definidos, com uma solução de ácido p-toluenossulfônico emum solvente orgânico inerte, e uma solução de Na2CO3l por exemplo 1M,como conhecido na técnica.
Os compostos da fórmula (IX) podem ser preparados por exem-plo, reagindo-se um composto da fórmula (X) em que Ri é como acima defi-nido, com um composto hidróxi protegido da fórmula (XI) em que Y é arila,alquila, aralquila ou silila, como conhecido na técnica.
O composto da fórmula (X) pode ser produzido por exemplo, re-agindo-se um composto da fórmula (XII) com cloreto de pivaloíla, em que R4é como acima definido, como conhecido na técnica.
A medida que a produção de materiais de partida não é particu-larmente descrita, os compostos são conhecidos ou podem ser preparadosanalogamente aos métodos conhecidos na técnica ou como descrito nosexemplos a seguir.
Todas as patentes, pedidos de patente e publicações citadasneste pedido são desse modo incorporados aqui por referência em sua tota-lidade para todos os propósitos na mesma medida como se cada patenteindividual, pedido de patente, ou publicação fosse assim individualmentedenotado.
As seguintes abreviações são empregadas:
AcOH1 HOAc = ácido acético;
AC2O = anidrido acético;
BOC, Boc = t-butiloxicarbonila;
DCM = diclorometano;
DIEA = diisopropiletilamina;
DMF = dimetilformamida;
DMSO = dimetilsulfóxido;
Et = etila;
EtOAc = acetato de etila;
Fmoc, FMOC = 9-fluorenilmetiloxicarbonila;
HATU = Hexaflúorfosfato de 0-(7-aza-benzotriazol-1-il)-Ν,Ν,Ν',Ν'-tetrametilurônio;
MCPBA = Ácido meta-cloroperoxi-benzóico;
Me = metila;
MeOH = metanol;
MMP = metaloproteinase matriz;
NVOM = nitroveratriloximetil éter;
p-TSA = ácido p-toluenossulfônico;
RT = Temperatura ambiente;
TFA = ácido triflúoracético;
tBu = t-butila;
THF = tetraidrofurano;
THP = 2-tetraidropiranila; e
TsOH ou p-TSA = ácido toluenossulfônico.
Esquema Sintético GeralOs compostos da invenção podem ser preparados pelos méto-dos descritos nos esquemas de reação mostrados abaixo.
Os matérias de partida e os reagentes empregados na prepara-ção destes compostos são disponíveis por fornecedores comerciais tal comoAldrich Chemical Co., (Milwaukee, Wisconsin, USA), Bachem (Torrance, Ca-lifórnia, USA), Emka-Chemie, ou Sigma (St. Louis, Missouri, USA) ou sãopreparados por métodos conhecidos por aqueles versados na técnica se-guindo-se os procedimentos apresentados na referências tais como Fieserand Fieser's Reagents for Organic Synthesis, Volumes 1-15 (John Wiley andSons, 1991); Rodd's Chemistry of Carbon Compounds, Volumes 1-5 e Sup-plementals (Elsevier Science Publishers, 1989), Organic Reactions, Volumes1-40 (John Wiley and Sons, 1991), March1S Advanced Organic Chemistry,(John Wiley and Sons, 4- Edição), e Larock1S Comprehensive Organic Trans-formations (VCH Publishers Inc., 1989). Estes esquemas são meramenteilustrativos de alguns métodos pelos quais os compostos desta invençãopodem ser sintetizados, e várias modificações destes esquemas podem serfeitas e será sugerido por alguém versado na técnica tendo referência estadescrição.
Os materiais de partida e os intermediários da reação podem serisolados e purificados se desejado empregando-se técnicas convencionais,incluindo porém não limitado uma filtração, destilação, cristalização, croma-tografia e similares. Tais materiais podem ser caracterizados empregando-semeios convencionais, incluindo constantes físicas e dados espectrais.Preparação dos Compostos da Fórmula (!)
Os compostos da fórmula (I) podem ser preparados por métodosbem-conhecidos na técnica de química orgânica. Procedimentos sintéticosrepresentativos para preparar os compostos da presente invenção são ilus-trados e descritos em detalhes abaixo. Por exemplo, os compostos da fór-mula (I) podem ser preparados como descrito nos Esquemas A-B abaixo.
Procedimento Geral A: Síntese de amida de ácido 1-{2(R)-t(formilhidroxiamino)-metil]-alcanoil}- pirrolidina-2(S)-carboxílico<formula>formula see original document page 21</formula>
Etapa 1: ácido 2-n-butil acrílico (Α-2)
A uma solução de ácido alquil malônico A-1 (R = n-butila (107,4mmols) em etanol (200 mL) é adicionado piperidina (12,7 mL, 128,8 mmols,1,2 equivalente) e 37% de formaldeído aquoso (40,0 mL, 536,9 mmols, 5equivalente). A solução é aquecida a 80 0C tempo durante o qual um precipi-tado aparece, e em seguida gradualmente redissolve durante 1 hora. A mis-tura reacional é agitada a 80 0C durante a noite em seguida resfriada à tem-peratura ambiente (TA). Os solventes são removidos sob pressão reduzida,e o resíduo é dissolvido em acetato de etila, lavado sucessivamente comHCI a 1 M e salmoura, secado sobre Na2SO4 anidroso, e filtrado. O filtrado éconcentrado para fornecer o composto do título A-2 como um óleo claro.
Etapa 2: 4-benzil-3-(2-butil-acriloil)-oxazolidin-2-ona (A-3)
Ácido 2-n-Butil acrílico (9,90 g, 77,2 mmols, e 1 equivalente) édissolvido em THF seco (260 ml) e resfriado a -78°C sob blnqueta blanquetade nitrogênio. Base de Hunig (17,5 mL, 100,4 mmol, 1,3 equivalente) e clore-to de pivaloíla (9,5 mL, 77,2 mmols, 1 equivalente) são adicionados em umarazão tal que a temperatura permaneceu abaixo de -60°C. A mistura é agita-da a -78°C durante 30 minutos, aquecida à temperatura ambiente durante 2horas, e finalmente novamente resfriada a -78°C.
Em um frasco separado, (S)-(-)-4-benzil-2-oxazolidinona (13,49g, 77,24 mmols) é dissolvido em THF seco (150 mL) e resfriado a -78°C sobuma blanqueta de nitrogênio. n-Butillítio (2,5 M de solução em hexanos, 30,9mL, 77,2 mmol, 1 equivalente) é vagarosamente adicionado a - 78°C, e amistura é agitada durante 30 minutos em temperatura ambiente. O ânionresultante é vagarosamente transferido por meio de uma cânula no vaso dereação original. A mistura é deixada aquecer à temperatura ambiente e éagitada durante a noite em temperatura ambiente. A reação é saciada comKHCO3 a 1 M, e os solventes são removidos sob pressão reduzida. O resí-duo é dividido entre acetato de etila e água. A camada orgânica é lavadacom salmoura, secada sobre Na2SO4 anidroso, filtrada, e concentrada parafornecer um óleo amarelo que é purificado por cromatografia instantânea(hexano: acetato de etila = 4:1) para produzir o composto do título A-3 comoum sólido amarelo (15,0 g, 52,2 mmols, 68%).
Etapa 3: 4-benzil-3-[2-(benziloxiamino-metil)-hexanoil]-oxazolidin-2-ona (salde ácido p-toluenossulfônico)
O composto A-3 (8,25 g, 28,7 mmols) é misturado com O-benzilidroxilamina (7,07 g, 57,4 mmols, 2 equivalentes) e agitado durante 40horas em temperatura ambiente sob nitrogênio. A mistura é dissolvida emacetato de etila e ácido p-toluenossulfônico (21,84 g, 114,8 mmols, e 4 equi-valentes) é adicionado para precipitar o excesso de O-benzilidroxilaminacomo um sólido branco. O sólido branco é filtrado, e o filtrado é concentradopara fornecer um óleo amarelo bruto (a análise de HPLC indicou um peque-no sinal de material de partida). Carregando ó óleo amarelo bruto com o ex-cesso de dietil éter e resfriando a O0C durante 30 minutos fornece um sólidoque é coletado por filtragem e secado a vácuo para fornecer o composto dotítulo como um sólido cristalino branco (diaestereômero único).
Etapa 4: 4-benzil-3-[2-(benziloxiamino-metil)-hexanoil-oxazolidin-2-ona (A-5)A uma solução de sal de p-TSA (22,9 g, 39,3 mmols) dissolvidaem acetato de etila (400 mL), foi adicionado Na2CO3 a 1 M (200 mL, 5 equi-valentes) e agitado em temperatura ambiente durante 30 minutos. As cama-das foram separadas, e a camada aquosa extraída com acetato de etila. Ascamadas orgânicas combinadas foram secadas sobre Na2SO4 anidroso, fil-tradas, e concentradas para fornecer o composto do título como um óleoopaco claro (15,8 g, 38,6 mmols, 98%).
Etapa 5: N-[2-(4-benzil-2-oxo-oxazolidina-3-carbonil)-hexil]-N-benzilóxi-formamida (A-6)
Uma solução do composto A-5 (5,38 g, 13,1 mmols, 1 equivalen-te) em ácido fórmico (7,4 ml_, 196,6 mmols, 15 equivalente) é resfriada a O0Csob uma blanqueta de nitrogênio. Em um frasco separado, ácido fórmico (7,4ml_, 196,6 mmols, 15 equivalentes) é resfriado a O0C sob uma blanqueta denitrogênio, e anidrido acético (2,47 mL, 26,2 mmol, 2 equivalentes) é adicio-nado gota a gota. A solução é agitada a 0°C durante 15 minutos. O anidridomisturado resultante é vagarosamente transferido por meio de uma seringano vaso de reação original. A mistura é agitada a O0C durante 1 hora, emseguida em temperatura ambiente durante 3 horas. A mistura é concentrada,absorvida em diclorometano, e lavada sucessivamente com NaHCOa satu-rado e salmoura. A camada orgânica è secada sobre Na2S04 anidroso, fil-trada e concentrada para fornecer um óleo opaco o qual é purificado porcromatografia instantânea (hexano: acetato de etila = 2:1 em seguida diclo-rometano: acetona = 9:1) para produzir o composto do título como um óleoincolor.
Etapa 6: ácido 2-[(benziloxi-formil-amino)-metil]-hexanóico (A-7)
O composto A-6 (0,163 g, 0,372 mmol, 1 equivalente) é dissolvi-do em THF (4,5 mL) e água (1,5 mL) e resfriado a O0C. Peróxido de hidrogê-nio (30% em água, 228 pL, 2,23 mmols, 6 equivalente) é adicionado gota agota seguido por adição lenta de uma solução de hidróxido de lítio (0,019 g,0,446 mmol, 1,2 equiv.) em água (350 pL). A mistura resultante é agitada a0°C durante 1,5 hora. A mistura reacional básica é saciada com resina Am-berlite IR-120 (H+) para pH 4-5 a O0C. A resina é filtrada e enxagüada comacetato de etila. A mistura é concentrada para remover o THF, e em seguidaabsorvida em acetato de etila. A camada aquosa é separada, e a camadaorgânica secada sobre Na2SO4 anidroso, filtrada, e concentrada para forne-cer um óleo opaco que foi purificado por cromatografia instantânea (dicloro-metano: acetona = 4:1 em seguida acetona: metanol = 99:1) para produzir ocomposto do título A-7 como um óleo incolor.
Etapa 7: amida de ácido 1-{2-[(benziloxi-formil-amino)-metil]-hexanoil}-pirrolidina-2-carboxílico
A uma solução do composto A-7 (0,190 g, 0,680 mmol, 1 equiva-lente) em dioxano seco (4 mL) em temperatura ambiente sob nitrogênio éadicionado sucessivamente base de Hunig (391 μΙ_, 2,24 mmols, 3,3 equiva-lentes), amina A-8 (0,748 mmol, 1,1 equivalentes) e HATU (0,284 g, 0,748mmol, 1,1 equivalente). A mistura resultante é agitada em temperatura am-biente durante 22 horas. A mistura é dividida entre acetato de etila e 10% deácido cítrico. A camada orgânica é lavada com salmoura e NaHCO3 satura-do, secada sobre Na2S04 anidroso, filtrada, e concentrada. O resíduo é puri-ficado por cromatografia instantânea (diclorometano:acetona = 3:1) para for-necer o composto do título como um óleo incolor.
Etapa 2: amida de ácido 1{2-[(formil-hidróxi-amino)-metil]-hexanoil}-pirrolidina-2-carboxíiico (A-9).
Pd-C (0,059 g, 0,1 equivalente) é adicionado a uma solução docomposto acima (0,550 mmol, 1 equivalente) em uma solução de acetato deetila/etanol a 1:1 (12 mL) sob uma blanqueta de nitrogênio. A mistura é agi-tada sob atmosfera de hidrogênio durante 36 horas. O catalisador é removi-do por filtração através de uma almofada de Celita. O filtrado é concentrado,e o resíduo foi purificado por TLC preparativa (diclorometano:acetona = 2:1)para fornecer o composto do título como um sólido amorfo (0,121 g, 0,334mmol, 61%).
Procedimento Geral B: Síntese de éster de l-{2(R)-[(formilhidroxiamino)-metil]-alcanoil}-pirrolidina-2(S)-carboxilato
<formula>formula see original document page 24</formula>
X = CH2, -S-, -CH(OH)-, -CH(OR)-, -CF2-, ou -CH(F)-; η = 0 a 3Etapa 1 : éster de ácido 1-{2-[(benzilóxi-formil-amino)-metil]-hexanoil}-pirrolidina-2-carboxílico
A uma solução do composto A-7 (0,680 mmol, 1 equivalente) emdioxano seco (4 mL) em temperatura ambiente sob nitrogênio são adiciona-dos sucessivamente base de Hunig (391 μΙ_, 2,24 mmols, 3,3 equivalentes),amina A-10 (0,748 mmol, 1,1 equivalente) e HATU (0,284 g, 0,748 mmol, 1,1equivalente). Preparação e purificação usuais fornecem o composto do títu-lo.
Etapa 2: éster de ácido 1{2-[(formil-hidróxi-amino)-metil]-hexanoil}-pirrolidina-2-carboxílico (A-11)
Pd-C (0,059 g, 0,1 equivalente) é adicionado a uma solução docomposto acima (0,550 mmol) em uma solução de acetato de etila/etanol a1:1 (12 mL) sob uma blanqueta de nitrogênio. A mistura é agitada sob at-mosfera de hidrogênio durante 36 horas. O catalisador é removido por filtra-ção através de uma almofada de Celita. O filtrado é concentrado, e o resíduoé purificado por TLC preparativa (diclorometano:acetona = 2:1) para fornecero composto do título.
Procedimento Geral C: preparação de piridin-2- ilamida de ácido pirro-lidina-2-S-carboxílico (A-8) (X = CH2, η = 1, R1 = 2-piridila)Etapa 1: éster benzílico de ácido 2-S-(piridin-2-ilcarbamoil)-pirrolidina-1-carboxílico
<formula>formula see original document page 25</formula>
Uma solução de Z-procloreto (5,0 g, 18,7 mmols, 1 equivalente)em piridina (40 mL) é resfriada para 0°C sob uma blanqueta de nitrogênio. 2-Aminopiridina (5,27 g, 56,0 mmols, 3 equivalentes) em piridina (10 mL) éadicionado gota a gota. A mistura resultante é agitada em temperatura am-biente durante 4 horas, em seguida concentrada. O óleo residual é dissolvi-do em acetato de etila e lavado sucessivamente com água, ácido cítrico a10%, NaHCO3 saturado, e salmoura. A camada orgânica é secada sobreNa2SO4 anidroso, filtrada, e concentrada para fornecer o composto do título(4,21 g, 13,0 mmol, 69%) como um sólido opaco.
Etapa 2: sal de ácido hidrobrômico de (piridin-2-il) amida de ácido pirro-lidina-2-S-carboxílico.
<formula>formula see original document page 26</formula>
Uma solução do composto acima (4,21 g, 13,0 mmols, 1 equiva-lente) em ácido acético (65 mL) em temperatura ambiente é tratada com HBr(33% em ácido acético a 5,7 M1 110 mL, 649 mmol, 50 equivalentes), e amistura é agitada em temperatura ambiente durante 2 horas. Carregamentoda mistura reacional com excesso de éter dietílico e resfriamento para O0Cdurante 30 minutos fornecem um sólido que é coletado por filtração e secadoa vácuo para fornecer o composto do título como um pó amarronzado.
Procedimento Geral D: (5-metil-piridina- 2-il)-amida de ácido 4-R-hidróxi-pirrolidina-2-S-carboxílico
<formula>formula see original document page 26</formula>
O acoplamento de prolina protegida por O-terc butila (1 mmol)com 5-picolina (1,5 mmol) em DMF (5 mL) sob condição de HATU (1,3mmol) e N,N-diisopropiletil amina (5 mmols) seguida por remoção de O-terc-butila com TFA-dicloroetano (1 :1) fornece o composto do título em 85% deprodução.
Procedimento Geral E: (5-metil-piridina-2- il)-amida de ácido 4-S-flúor-pirrolidina-2-S-carboxílico<formula>formula see original document page 27</formula>
O composto hidróxi acima (2 mmols) em metilenocloreto (20 mL)é tratado com trifluoreto de enxofre de Ν'Ν-dietilamino (DAST; 4 mmol) em -70°C. Em seguida, a mistura reacional é deixada agitar em temperatura am-biente durante 16 horas e lavada com solução de bicarbonato de sódio a-quosa resfriada, secada e concentrada sob pressão reduzida. Ela é purifica-da sobre cromatografia de coluna de sílica-gel para fornecer o derivado N-protegido que sobre tratamento com HBr-AcOH fornece um composto amino.
Procedimento Geral F: éster 2-metílico de éster 1-terc-butílico de ácido4-S-hidróxi-pirrolidina-1,2-dicarboxílico
<formula>formula see original document page 27</formula>
A uma solução de composto trans-4-hidróxi (1 mmol), trifenil fos-fina (1,5 mmol) e ácido benzóico (1,5 mmol) em THF (10 mL) é adicionadoΝ,Ν-diisopropil-azo dicarboxilato (1,5 mmol) em THF (5 mL) gota a gota emO0C. Ela é deixada agitar em temperatura ambiente durante 16 horas. O sol-vente é removido sob pressão reduzida e o resíduo é dissolvido em éter. Eleé congelado para precipitar óxido de fosfina que é removido por filtração e ofiltrado é concentrado sob pressão reduzida. O material bruto é tratado commetóxido de sódio metanólico durante 2 horas em O0C para fornecer o com-posto cis-hidróxido título.
Procedimento Geral G: (5-metil-piridina-2- il)-amida de ácido 4-R-flúor-pirrolidina-2-S-carboxílico<formula>formula see original document page 28</formula>
A fluorinação do cis-hidróxi acima fornece o derivado trans-4-flúor que sobre saponificação fornece o ácido correspondente. A amina épreparada de éster ferc-butílico de ácido 4-R-flúor-pirrolidina-1-carboxílico e5-metil-piridin-2-ilamina sob condição de HATU para fornecer o derivado pro-Iina amida que sobre tratamento com HCI a 4 M em dioxano fornece a aminadesejada.
Exemplo 1: (5-flúor-1-óxi-piridin-2-il)-amida de ácido 1-[2-Ciclopentilmetil-3-(formil-hidróxi-amino)-propionil]-pirrolidina-2-carboxílico
<formula>formula see original document page 28</formula>
O composto do título é preparado de acordo com o Procedimen-to Geral A de ácido 3-(benzilóxi-formil-amino)-2-ciclopentilmetil-propiônico A-7 (R = ciclopentilmetila) e piridin-2-ilamida de ácido pirrolidina-2-carboxílico A-8 (X = CH2, η = 1 , Ri = 5-Flúor 2-piridila).
Ácido 2-ciclopentilmetil-3-[formil-(tetraidro-piran-2-ilóxi)-amino]-propiônico é preparado de ácido ciclopentilmetil malônico comodescrito abaixo.
Bromometil-ciclopentano
<formula>formula see original document page 28</formula>
Uma solução de metanol de ciclopentano (48,5 g, 484 mmols),Et3N (88,0 mL, 631 mmols), e THF anidroso (1 L) é resfriada para 4°C, e agi-tada sob nitrogênio. Cloreto de metanossulfonila (45,0 mL, 581 mmols) élentamente adicionado à solução em agitação, ao mesmo tempo que man-tendo a 10°C. A mistura é agitada durante mais uma hora em 10°C, e LiBr(300,0 g, 3454 mmols) é lentamente adicionado (exotérmica). A mistura rea-cional é agitada durante mais 16 horas em temperatura ambiente. Água éadicionada para dissolver o sal, e a mistura é extraída com Et2O. As cama-das de Et2O são combinadas, secadas sobre Na2SO4, e são cuidadosamen-te concentradas (25°C em 13 KPa (100 torr)). O produto bruto é purificadopor destilação a vácuo (35°C em 0,13 KPa (1 torr)), o composto desejado é aprimeira fração a ser coletada). Isto fornece bromometil-ciclopentano (31,4 g,40% de produção) como um óleo incolor.
Ácido 2-Ciclopentilmetil-malônico
<formula>formula see original document page 29</formula>
Uma solução de malonato de dietila (36,91 g, 230,4 mmols), me-tanol anidroso (400 mL), e NaOMe (25% em metanol, 49,79 g, 230,4 mmols)é agitada ao refluxo durante uma hora sob nitrogênio. Bromometil-ciclopentano (31,31 g, 192,0 mmol) é adicionado à mistura, e agitado duran-te mais 3 horas. Uma solução de NaOH (23,04 g, 576,0 mmols) em água(400 mL) é adicionada, e a mistura é agitada durante mais 1 hora ao refluxo.
A mistura é resfriada, diluída com água, e extraída com éter. A camada deéter é descartada, e a camada aquosa é acidificada com HCI a 1 N para pH= 1. A camada aquosa é extraída com EtOAc. As camadas de EtOAc sãocombinadas, secadas sobre Na2SO4, e concentradas. Isto fornece ácido 2-ciclopentilmetil-malônico (21,0 g, 59% de produção) como um sólido branco.
Ácido 2-Ciclopentilmetil-acrílico<formula>formula see original document page 30</formula>
Uma mistura de ácido 2-ciclopentilmetil-malônico (24,90 g, 133,7mmols), piperidina (15,9 ml_, 160,8 mmols), formaldeído aquoso a 37% (51,0mL, 647,2 mmols), e EtOH (250 mL) é agitada ao refluxo durante 16 horas. Areação é saciada com HCI a 1 N para um pH = 1, e a mistura é extraída comEtOAc. As camadas de EtOAc são combinadas, secadas sobre Na2SO4, econcentradas. O produto bruto é purificado por cromatografia instantânea(SiO2, 10% de acetona em DCM), que fornece ácido 2-ciclopentilmetil-acrílico (17,65 g, 86% de produção) como um óleo.
4-Benzil-3-(2-ciclopentilmetil-acriloil)-oxazolidin-2-ona
<formula>formula see original document page 30</formula>
Ácido 2-Ciclopentilmetil-acrílico (17,65 g, 114,5 mmols) é dissol-vido em THF anidroso (200 mL) e resfriado para -78°C sob nitrogênio. N1N-Diisopropiletilamina (25,9 mL, 148,7 mmols) e cloreto de trimetilacetila (14,1mL, 114,5 mmols) são adicionados consecutivamente em uma tal taxa que atemperatura permaneceu abaixo de -60°C e que a evolução de gás é contro-lada. A mistura é agitada em -78°C durante 30 minutos, agitada em tempera-tura ambiente durante 2 horas, e resfriada novamente até -78°C.
Em um frasco separado, (S)-(-)-4-benzil-2-oxazolidinona (20,30g, 114,6 mmols) é dissolvido em THF anidroso (400 mL) e resfriado para -78°C sob nitrogênio. BuLi (45,8 mL a 2,5 M, 114,5 mmols) é lentamente adi-cionado em -78°C, e a mistura é agitada durante 30 minutos em temperaturaambiente. O ânion resultante é lentamente transferido por meio de uma câ-nula no vaso de reação original. A mistura é deixada aquecer para a tempe-ratura ambiente, e é agitada durante a noite em temperatura ambiente (16horas). A mistura reacional é saciada com KHCO3 a 1 M, e é extraída comEtOAc. As camadas orgânicas são combinadas, lavadas com salmoura, se-cadas sobre Na2SO4, e concentradas para fornecer um óleo amarelo. O pro-duto bruto é purificado por cromatografia instantânea (SiO2, 20% de EtOAcem hexano) para fornecer 4-benzil-3-(2-ciclopentilmetil-acriloil)-oxazolidin-2-ona (22,9 g, 64%) como um óleo.
4-Benzil-3-[2-ciclopentilmetil-3-(tetraidro-piran-2-iloxiamino)-propionil]-oxazolidin-2-ona.
<formula>formula see original document page 31</formula>
4-Benzil-3-(2-ciclopentilmetil-acriloil)-oxazolidin-2-ona (22,90 g73,1 mmols) e 0-(tetraidro-2H-piran-2-il)-hidroxilamina (34,24 g, 292,3mmols) são combinados em agitação em 45°C durante 48 horas sob nitro-gênio. O produto bruto é purificado por cromatografia instantânea (SiO2, 0-30% de EtOAc em hexano), que fornece 4-benzil-3-[2-ciclopentilmetil-3-(tetraidro-piran-2-iloxiamino)-propionil]-oxazolidin-2-ona (21,65 g, 69% de produção) como um óleo.
/S/-[3-(4-Benzil-2-oxo-oxazolidin-3-il)-2-ciclopentilmetil-3-oxo-propil]-/V·(tetraidropiran-2-ilóxi)-formamida
<formula>formula see original document page 31</formula>
Uma mistura de ácido fórmico (45,0 mL, 1193 mmols) e anidridoacético (90,0 mL, 952 mmols) é agitada em 50°C durante uma hora sob ni-trogênio. Um segundo frasco é carregado com 4-benzil-3-[2-ciclopentilmetil-3-(tetraidro-piran-2-iloxiamino)-propionil]-oxazolidin-2-ona (21,62 g, 50,2mmols), Et3N (170,0 mL, 1220 mmols), e DCM anidroso (450 mL). Esta se-gunda mistura é resfriada para 4°C sob nitrogênio, e a solução ácida mistu-rada é lentamente adicionada ao segundo frasco, ao mesmo tempo quemantendo a 10°C. A mistura combinada é agitada durante 30 minutos em10°C, saciada com saturado, lavada com solução de NaHCO3 aquosa, e ex-traída com DCM. As camadas de DCM são combinadas, secadas sobreNa2SO4, e concentradas. O produto bruto é purificado por cromatografia ins-tantânea (SiO2, 50% de EtOAc em hexano), que fornece /\/-[3-(4-benzil-2-oxo-oxazolidin-3-il)-2-ciclopentilmetil-3-oxo-propil]-A/-(tetraidro-piran-2-ilóxi)-formamida (20,10 g, 87% de produção) como um óleo.
Ácido 2-ΟϊοΙορΘηΙϊΐΓηΘΐίΙ-3-[ίθΓΓηϊΙ-(ΐΘΐΓ3ίάΓθ-ρΪΓ3η-2-Ηόχϊ)-3Γηϊηο]-propiônico
<formula>formula see original document page 32</formula>
É preparado de ácido 2-Ciclopentilmetil-acrílico e O-benzil hidro-propil]-A/-(tetraidro-piran-2-ilóxi)-formamida (3,65 g, 7,96 mmol), THF (125mL), e água (40 mL) são resfriados para 4°C. A esta mistura, são adiciona-dos H2O2 a 30% (5,2 mL, 50,90 mmol) e monoidráto de LiOH (0,40 g, 9,53mmol), respectivamente. A mistura reacional é agitada durante 1,5 hora. Amistura é lentamente saciada com Na2SO3 a 0,5 M, ao mesmo tempo quemantendo a temperatura abaixo de 15°C com um banho gelado. A misturasaciada é agitada durante mais 30 minutos, concentrada a vácuo até o sol-vente THF ser removido, e lavada com EtOAc. A mistura reacional básica éacidificada com resina Amberlite IR-120 (H+) para pH = 4,5. Salmoura é adi-cionada à solução acídica, e a mistura combinada é extraída com EtOAc. Ascamadas orgânicas da lavagem de solução acídica são combinadas, seca-das sobre Na2SO4, e concentradas a vácuo. Isto forneceu ácido 2-ciclopentilmetil-3-[formil-(tetraidro-piran-2-ilóxi)-amino]-propiônico (1,20 g,50% de produção) como um óleo.
Ácido 3-(Benzilóxi-formil-amino)-2-ciclopentilmetil-propiônicoxamina como descrito para a síntese do bloco de construção protegido por
<formula>formula see original document page 32</formula>
N-[3-(4-Benzil-2-oxo-oxazolidin-3-il)-2-ciclopentilmetil-3-oxo-O-THp correspondente.
4-Benzil-3-(3-benziloxiamino-2-ciclopentilmetil-propionil)-oxazolidin-2-ona
<formula>formula see original document page 33</formula>
N-[3-(4-Benzil-2-oxo-oxazolidin-3-il)-2-ciclopentilmetil-3-oxo-propil]-/V-benzilóxi-formamida (composto A-G, onde: Ri = ciclopentilmetil, PGi =benzila).
<formula>formula see original document page 33</formula>
Ácido 3-(Benzilóxi-formil-amino)-2-ciclopentilmetil-propiônico
<formula>formula see original document page 33</formula>
(5-Flúor-1-óxi-piridin-2-il)-amida de ácido l-[3-Benzilóxi-formil-amino)-2-ciclopentilmetil-propionil]-pirrolidina-2-carboxílico
<formula>formula see original document page 33</formula>
Exemplo 2: (5-Flúor-l-óxi-piridin-2-yl)-amida de ácido 4-flúor-l-{2-[(formil-hidróxi-amino)-metil]-hexanoil}-pirrolidina-2-carboxílico<formula>formula see original document page 34</formula>
O composto do título é preparado de acordo com o Procedimen-to Geral A de ácido 2-[(benzilóxi-formil-amino)-metil]-hexanóico A-7 (R = n-butila) e piridin-2-ilamida de ácido pirrolidinà-2-carboxílico A-8 (X = CHF η =1, Ri = 5-Flúor 2-piridila).
[2-amino-5-flúor-piridin-2-il]amida de ácido 4-fra/7S-flúor-pirrolidina-2-carboxílico
<formula>formula see original document page 34</formula>
A uma solução de DMF (15 mL) de Boc-L-Pro-4-F-OH (2,5 g,10,73 mmols, 1 equivalente), base de Hunig (Diisopropiletilamina, abrevia-ção DlEA) (6,73 mL, 38,61 mmols, 3,6 eq) é adicionada e a mistura resfriadapara 0°C. Isto é seguido pela adição de 2-Amino-5-flúor piridina (1,44 g,12,87 mmols, 1,2 equivalente), e HATU (4,89 g, 12,87 mmols, 1,2 equivalen-te) em O0C. A mistura resultante é agitada em temperatura ambiente durante16 horas. A mistura é dividida entre acetato de etila em excesso e ácido cí-trico a 10%. A camada orgânica é lavada com salmoura e NaHCO3 saturado,secada sobre Na2SO4 anidroso, filtrada, e concentrada. O resíduo é purifica-do por cromatografia de sílica-gel (Hexanos:Acetato de etila = 1:0 - 7:3) parafornecer o composto do título como um xarope incolor (2,5 g, 71 %).[2-amino-5-flúor-piridin-2-il]amida de ácido 4-írans-flúor-pirrolidina-2-carboxílico (sal de ácido hidroclórico)<formula>formula see original document page 35</formula>
A amida de Boc-prolina-4-flúor-piridina (1 g, 3,06 mmols, 1 equi-valente) é tratada com HCI/dioxano a 4 N (30 mL, 120 mmols, 40 equivalen-te) em temperatura ambiente e deixada agitar durante 16 horas. A mistura éconcentrada, e o resíduo foi coevaporado com tolueno 2X, e concentradopara fornecer um sólido cor-de-rosa arroxeado (1 g).
(2-amino-5-flúor-piridin-2-il)-amida de ácido 1-{2-[(Benzilóxi-formil-amino)-metil]-hexanoil}-4-frans-flúor-pirrolidina-2-carboxílico.
<formula>formula see original document page 35</formula>
A uma solução de DMF (10 mL) de sal de HCI de amida defrans-flúor-prolina-5-flúor-aminopiridina (644 mg, 2,15 mmols, 1,2 equivalen-te), são sucessivamente adicionados base de Hunig (2 mL, 10,8 mmols, 5equivalente), Versiacid VRI 172 (500 mg, 1,79 mmols, 1 equivalente), e HA-TU (818 mg, 2,15 mmols, 1,2 equivalente) em O0C. A mistura resultante éagitada em temperatura ambiente durante 16 horas. A mistura é dividida en-tre acetato de etila em excesso e ácido cítrico a 10%. A camada orgânica élavada com salmoura e NaHCO3 saturado, secada sobre Na2SO4 anidroso,filtrada, e concentrada. O composto é purificado por cromatografia de sílica-gel em DCM:acetona (1:0 - 86:14) para fornecer o composto do título comoum pó branco (630 mg, 72%). ES-MS: calculada para C25H3OF2N4O5(504,53); encontrado: 505,4 [M+H].
(2-Amino-5-flúor-piridin-N-óxido-2-il)-amida de ácido l-{2-[(benzilóxi-formil-amino)-metil]-hexanoil}-4-írans-flúor-pirrolidina-2-carboxílico<formula>formula see original document page 36</formula>
A uma solução de DCM do composto (1,25 g, 2,56 mmols, 1 eq),MCPBA (1,32 g, 7,68 mmols, 3 eq) foi bem-sucedidamente adicionado emOqC e a reação foi agitada durante 16 horas. A mistura reacional é divididaentre NaHC03 e a camada de DCM. A camada orgânica é secada sobreNa2S04 e concentrada. O resíduo é purificado por cromatografia de sílica-gel utilizando-se DCM:Acetona (1:0 - 9:1 ) para produzir o composto do título
Exemplo 3: pirazin-2-ilamida de ácido 1-{2-[(formil-hidróxi-amino)-metil]-hexanoil}-pirrolidina-2-carboxílico.
<formula>formula see original document page 36</formula>
O composto do título é preparado de acordo com o Procedimen-to Geral A de ácido 2-[(benzilóxi-formil-amino)-metil]-hexanóico A-7 (R = n-butila) e pirazin-2-amida de ácido pirrolidina-2-carboxílico A-8 (X = CH2, η =1 , R1 = 2-pirazinila).
Exemplo 4: Piridazin-3-ilamida de ácido 1-{2-[(Formil-hidróxi-amino)-metil]-hexanoil}-pirrolidina-2-carboxílico
<formula>formula see original document page 36</formula>O composto do título é preparado de acordo com o Procedimen-to Geral A de ácido 2-{[formil-(tetraidro-piran-2-ilóxi)-amino]-metil}-hexanóicoA-7 (R = n-butila) e piridazin-3-amida de ácido pirrolidina-2-carboxílico A-8(X = CH2, η = 1, R1 = 3-piridazinila).Etapa 1: Piridazin-3-ilamina
<formula>formula see original document page 37</formula>
A uma solução de 6-cloro-2-amino-piridiazina (4 g) e NaOH (empó, 1,4 g) em etanol (150 ml), Pd/C a 10% (0,6 g) é adicionado. A misturareacional é agitada sob atmosfera de hidrogênio durante 16 horas. Ela é fil-trada através de celita e o solvente foi concentrado. O resíduo resultante étriturado com éter para fornecer o composto amino conhecido.
Etapa 2: éster terc-butílico de ácido 2-(Piridazin-3-ilcarbamoil)-pirrolidina-1 -carboxílico.
<formula>formula see original document page 37</formula>
A uma solução de Boc-Pro-OH (1 equivalente) em DCM em O0C,Reagente Ghosez (1,1 equivalente) é adicionado e a mistura reacional foiagitada em O0C durante 1 hora. A esta a amina (1,1 equivalente) em piridinaé adicionada e a mistura reacional é agitada em temperatura ambiente du-rante 16 horas. Ela é em seguida concentrada para remover todos os volá-teis e redissolvida em DCM em excesso. A camada orgânica é lavada comácido cítrico a 10%, salmoura e NaHCO3, secada sobre Na2S04 e concen-trada. O resíduo resultante é purificado por cromatografia instantânea utili-zando-se 10 - 40% de acetato de etila em hexanos para fornecer o compostodo título. HPLC: YMC-Pak Pro C18, S-3 m, 120A, Coluna de 50 χ 4,6 mmI.D.; eluente gradiente 0% - 90% de MeCN durante 8,5 min, 1,5 mL/min;Tempo de retenção = 4,14 min.
ES-MS: calculada para Ci4H20N4O3 (292); encontrado 293 [M+H].Etapa 2: Piridazin-3-ilamida de ácido pirrolidina-2-carboxílico<formula>formula see original document page 38</formula>
HPLC: YMC-Pak Pro C18, S-3 μηι, 120A, Coluna de 50 χ 4,6 mm I.D.; eluen-te gradiente 0% - 90% de MeCN durante 8,5 min, 1,5 mL/min; Tempo de re-tenção = 2,398 min.
ES-MS: calculada para C9H12N4O (192,1); encontrado 193,2 [M+H],
Etapa 3 : Piridazin-3-ilamida de ácido 1-(2-{[formil-(tetraidro-piran-2-ilóxi)-amino]-metil}-hexanoil)-pirrolidina-2-carboxílico
<formula>formula see original document page 38</formula>
O composto do título é preparado sob condição de HATU comodescrito no Procedimento Geral A.
HPLC: YMC-Pak Pro C18, S-3 μηι, 120A, Coluna de 50 χ 4,6 mm I.D.; eluen-te gradiente 20% - 90% de MeCN durante 8,5 min, 1,5 mUmin; Tempo deretenção = 3,655 min.
ES-MS: calculada para C22H33N5O5 (447); encontrado 448 [M+H].Exemplo 5: (5-Flúor-1-óxi-piridin-2-il)-amida de ácido 1-[2-Ciclopentilmetil-3-(formil-hidróxi-amino)^ropionil]-4-flúor-pirrolidina-2-carboxílico
<formula>formula see original document page 38</formula>
O composto do título é preparado de acordo com o Procedimen-to Geral A de ácido 2-ciclopentilmetil-3-[formil-(tetraidro-piran-2-ilóxi)-amino]-η = 1, R1 = 5-Flúor 2-piridila).
(5-Flúor-l-óxi-piridin-2-il)-amida de ácido l-{2-Ciclopentilmetil-3-[formil-(tetraidro-piran-2-ilóxi)-amino)-propionil}-4-flúor-pirrolidina-2-carboxílico
<formula>formula see original document page 39</formula>
Exemplo 6: Piridazin-3-ilamida de ácido 1-[2-Ciclobutilmetil-3-(formil-hidróxi-amino)-propionil]-pirrolidina-2-carboxílico
<formula>formula see original document page 39</formula>
O composto do título é preparado de acordo com o Procedimen-to Geral A de ácido 2-ciclobutilmetil-3-[formil-(tetraidro-piran-2-ilóxi)-amino]-propiônico A-7 (R = ciclobutilmetila) e piridazin-2-amida de ácido pirrolidina-2-carboxílico A-8 (X = CH2, η = 1, R1 = 3-piridazinila).
Exemplo 7: Pirazin-2-ilamida de ácido 1-[2-ciclobutilmetil-3-(formil-hidróxi-amino)-propionil]-pirrolidina-2-carboxílico.
<formula>formula see original document page 39</formula>
O composto do título é preparado de acordo com o Procedimen-to Geral A de ácido 2-ciclobutilmetil-3-[formil-(tetraidro-piran-2-ilóxi)-amino]-propiônico A-7 (R = ciclobutilmetila) e pirazin-2-amida de ácido pirrolidina-2-carboxílico A-8 (X = CH2, η = 1, R1 = 2-pirazinila).
Exemplo 8: Pirazin-2-ilamida de ácido 1-[2-ciclopentilmetil-3-(formil-hidróxi-amino)-propionil]-pirrolidina-2-carboxílico
<formula>formula see original document page 40</formula>
O composto do título é preparado de acordo com o Procedimen-to Geral A de ácido 2-ciclopentilmetil-3-[formil-(tetraidro-piran-2-ilóxi)-amino]-propiônico A-7 (R = ciclopentilmetila) e pirazin-2-amida de ácido pirrolidina-2-carboxílico A-8 (X = CH2, η = 1, Ri = 2-pirazinila).
Exemplo 9: Pirazin-2-ilamida de ácido 4-flúor-1-{2-[(formil-hidróxi-amino)-metil]-hexanoil}-pirrolidina-2-carboxílico
<formula>formula see original document page 40</formula>
O composto do título é preparado de acordo com o Procedimen-to Geral A de ácido 2-[(benzilóxi-formil-amino)-metil]-hexanóico A-7 (R = n-butila) e pirazin-2-amida de ácido pirrolidina-2-carboxílico A-8 (X = CHF, η =1, R1 = 2-pirazinila).
Exemplo 10: Pirazin-2-ilamida de ácido 1-[2-ciclopentilmetil-3-(formil-hidróxi-amino)-propionil]-4-flúor-pirrolidina-2-carboxílico<formula>formula see original document page 41</formula>
O composto do título é preparado de acordo com o Procedimen-to Geral A de ácido 2- ciclopentilmetil-3-(formil-hidróxi-amino)-propiônico A-7(R = ciclopentil metila) e pirazin-2-amida de ácido pirrolidina-2-carboxílico A-8 (X = CHF1 η = 1, Ri = 2-pirazinila).
Exemplo 11: Pirazin-2-ilamida de ácido 1-[2-ciclobutilmetil-3-(formil-hidróxi-amino)-propionil]-4-flúor-pirrolidina-2-carboxílico
<formula>formula see original document page 41</formula>
O composto do título é preparado de acordo com o Procedimen-to Geral A de ácido 2-ciclobutilmetil-3-[formil-(tetraidro-piran-2-ilóxi)-amino]-propiônico A-7 (R = ciclobutil metila) e pirazin-2-amida de ácido pirrolidina-2-carboxílico A-8 (X = CHF1 η = 1, Ri = 2-pirazinila).
Ácido 2-ciclobutilmetil-3-[formil-(tetraidro-piran-2-ilóxi)-amino]-propiônico é preparado de ácido 2-ciclobutilmetil malônico como descritopara a síntese do derivado ciclopentilmetila correspondente no Exemplo 1.
Ácido 2-Ciclobutilmetil-malônico
<formula>formula see original document page 41</formula>
O composto do título é preparado de (bromometil)ciclobutano.Ácido 2-ciclobutilmetil-acrílico
<formula>formula see original document page 42</formula>
4-Benzil-3-(2-ciclobutilmetil-acriloil)-oxazolidin-2-ona
<formula>formula see original document page 42</formula>
4-Benzil-3-[2-ciclobutilmetil-3-(tetraidro-piran-2-iloxiamino)-propionil]-oxazolidin-2-ona
<formula>formula see original document page 42</formula>
N-[3-(4-Benzil-2-oxo-oxazolidin-3-il)-2-ciclobutilmetil-3-oxo-propil]-N-(tetraidro-piran-2-ilóxi)-formamida
<formula>formula see original document page 42</formula>
Ácido 2-ciclobutilmetil-3-[formil-(tetraidro-piran-2-ilóxi)-amino]propiônico
<formula>formula see original document page 42</formula>
Pirazin-2-ilamida de ácido 1-{2-ciclobutilmetil-3-[formil-(tetraidro-piran2-ilóxi)-amino]-propionil}-4-flúor-pirrolidina-2-carboxílico
<formula>formula see original document page43</formula>
Exemplo 12: Pirimidin-4-ilamida de ácido 1-[2-ciclobutilmetil-3-(formil-hidróxi-amino)-propionil]-4-flúor-pirrolidina-2-carboxílico.
<formula>formula see original document page 43</formula>
O composto do título é preparado de acordo com o Procedimen-to Geral A de ácido 2- ciclobutilmetil-3-[formil-(tetraidro-piran-2-ilóxi)-amino]-propiônico A-7 (R = ciclobutil metila) e pirimadin-4-amida de ácido pirrolidina-2-carboxílico A-8 (X = CHF1 η = 1, Ri = 2-pirimidinila).Exemplo 13: Piridazin-3-ilamida de ácido 1-[2-ciclobutilmetil-3-(formil-hidróxi-amino)-propionil]-4-flúor-pirrolidina-2-carboxílico.
<formula>formula see original document page 43</formula>
O composto do título é preparado de acordo com o Procedimen-to Geral A de ácido 2- ciclobutilmetil-3-[formil-(tetraidro-piran-2-ilóxi)-amino]-propiônico A-7 (R = ciclobutil metila) e piridazin-3-amida de ácido pirrolidina-2-carboxílico A-8 (X = CHF1 η = 1, Ri = 3-piridazinila).
4-Flúor-2-(piridazin-3-ilcarbamoil)pirrolidina-1 -carboxilato de (2S,4R)-terc-butila
<formula>formula see original document page 44</formula>
A uma solução de Boc-Pro(F)-OH (5 g, 21,46 mmols, 1 equiva-lente) em DCM em O0C1 Reagente Ghosez (3,1 ml, 23,61 mmols, 1,1 equiva-lente) é adicionado e a mistura reacional foi agitada em O0C durante 1 hora.
A esta a amina (2,65 g, 27,9 mmols, 1,3 equivalente) em piridina é adiciona-da em O0C e a mistura reacional é agitada em temperatura ambiente durante16 horas. Ela é em seguida concentrada para remover todos os voláteis eredissolvida em DCM em excesso. A camada orgânica é lavada com ácidocítrico a 10%, NaCI (saturado) e NaHCO3(Saturado), secada sobre Na2SO4 econcentrada. O resíduo resultante é purificado por cromatografia instantâneautilizando-se 10 a 15% de acetona em diclorometano para fornecer o com-posto do título.
(2S,4R)-4-flúor-N-(piridazin-3-il)pirrolidina-2-carboxamida
<formula>formula see original document page 44</formula>
A amida protegida por Boc é apreendida em HCI/Dioxano a 4 Me a reação é agitada em temperatura ambiente durante 5 horas. O solventeé removido sob pressão reduzida e o resíduo é triturado com éter para for-necer os compostos títulos.
(2S,4R)-1-((2R)-3-ciclobutil-2-((N-(tetraidro-2H-piran-2-xi)formamido)metil)propanoil)-4-flúor-N-(piridazin-3-il)pirrolidina-2-ilocarboxamida<formula>formula see original document page 45</formula>
A uma solução de DMF resfriada (15 mL) do Versiacid, (500 mg,1,77 mmol, 1 equivalente), DIEA (1,7 ml, 9,72 mmols, 5,5 equivalente), Ami-na.sal de HCI (550 mg, 1,943 mmols, 1,1 equivalente) e HATU (739 mg,1,943 mmol, 1,2 equivalente) são adicionados. A mistura reacional resultante5 é agitada durante 16 horas em temperatura ambiente. A mistura é divididaentre acetato de etila em excesso e ácido cítrico a 10%. A camada orgânicaé lavada com NaCI saturado e NaHCO3 saturado, secada sobre Na2SO4 ani-drosq, filtrada, e concentrada. O resíduo é purificado por cromatografia desílica-gel utilizando-se 10 - 25% de Acetona em DCM para fornecer o com-10 posto do título (53%).
Exemplo 14: (2-Óxi-piridazin-3-il)-amida de ácido 1-[2-ciclobutilmetil-3-(formil-hidróxi-amino)-propionil]-4-flúor-pirrolidina-2-carboxílico
<formula>formula see original document page 45</formula>
O composto do título é preparado de acordo com o Procedimen-to Geral A de ácido 2-ciclobutilmetil-3-[formil-(tetraidro-piran-2-ilóxi)-amino]-15 propiônico A-7 (R = ciclobutil metila) e piridazin-1-oxo-3-amida de ácido pir-rolidina-2-carboxílico A-8 (X = CHF, η = 1, Ri = 3-piridazinil N-óxido).1 -Óxido de 6-((2S,4R)-1 -(ferc-butoxicarbonil)-4-flúorpirrolidina-2-carboxamido)piridazina<formula>formula see original document page 46</formula>
A uma solução de Boc-Pro(F)-OH (2,047 g, 8,154 mmols, 1 e-quivalente) em DCM em 0°C, Reagente Ghosez (1,2 ml, 8,97 mmols, 1,1equivalente) é adicionado e a mistura reacional é agitada em O0C durante 1hora. A esta a amina (1,27 g, 11,42 mmols, 1,4 equivalente) em piridina éadicionada em 0°C e a mistura reacional é agitada em temperatura ambientedurante 16 horas. Ela é em seguida concentrada para remover todos os vo-láteis e o resíduo é dissolvido em DCM em excesso. A camada orgânica élavada com ácido cítrico a 10%, NaCI (saturado) e NaHCO3 (saturado), se-cada sobre Na2SO4 e concentrada. O resíduo resultante é purificado porcromatografia instantânea utilizando-se 2-15% de Acetona em Diclorometa-no para fornecer o composto do título (61%).
1 -Óxido de 6-((2S,4R)-4-flúorpirrolidina-2-carboxamido)piridazina
<formula>formula see original document page 46</formula>
A amida protegida por Boc é apreendida em HCI/Dioxana a 4 Me a reação é agitada em temperatura ambiente durante 5 horas. Todos osvoláteis são removidos e o resíduo é triturado com éter para fornecer oscompostos títulos.
1-Óxido de 6-((2S,4R)-l-((2R)-3-ciclobutil-2-((N-(tetraidro-2H-piran-2-ilóxi)formamido)metil)propanoil)-4-flúorpirrolidina-2-carboxamido)piridazina<formula>formula see original document page 47</formula>
A uma solução de DMF resfriada (20 ml) do Versiacid1 (571 mg,2 mmols, 1 equivalente), DIEA (2,51 ml, 14,4 mmols, 6 equivalente), ami-na.sal de HCI (718 mg, 2,4 mmols, 1,2 equivalente) e HATU (913 mg, 2,4mmols, 1,2 equivalente) são adicionados. A mistura reacional resultante éagitada durante 16 horas em temperatura ambiente. A mistura é dividida en-tre acetato de etila em excesso e ácido cítrico a 10%. A camada orgânica élavada com NaCI saturado e NaHCO3 saturado, secada sobre Na2SO4 ani-droso, filtrada, e concentrada. O resíduo é purificado por cromatografia desílica-gel utilizando-se 10 - 20% de acetona em DCM e em seguida utilizan-do-se 2 - 8% de metanol em DCM pára fornecer o composto do título (44%).1H NMR (DMSO-d6):
Exemplo 15: Piridazin-3-ilamida de ácido 1-[2-ciclopentilmetil-3-(formil-hidróxi-amino)-propionil]-4-flúor-pirrolidina-2-carboxílico
<formula>formula see original document page 47</formula>
O composto do título é preparado de acordo com o Procedimen-to Geral A de ácido 2-ciclopentilmetil-3-[formil-(tetraidro-piran-2-ilóxi)-amino]-propionílico A-7 (R = ciclopentil metila) e piridazin-2-amida de ácido pirrolidi-na-2-carboxílico A-8 (X = CHF, η = 1, Ri = 3-piridazinila).
(2S,4R)-1-((2R)-3-ciclopentil-2-((N-(tetraidro-2H-piran-2-ilóxi)formamido)metil)propanoil)-4-flúor-N-(piridazin-3-il)pirrolidina-2-carboxamida<formula>formula see original document page 48</formula>
Exemplo 16: (2-oxi-piridazin-3-il)-amida de ácido 1-[2-ciclopentilmetil-3-(formil-hidróxi-amino)-propionil]-4-flúor- pirrolidina-2-carboxílico
<formula>formula see original document page 48</formula>
O composto do título é preparado de acordo com o Procedimen-to Geral A de ácido 2-ciclopentilmetil-3-[formil-(tetraidro-piran-2-ilóxi)-amino]-propionílico A-7 (R = ciclopentil metila) e piridazin-2-amida de ácido pirrolidi-na-2-carboxílico A-8 (X = CHF1 η = 1, R1 = N-óxido de 3-piridazinila).1-Óxido de 6-aminopiridazina
<formula>formula see original document page 48</formula>
A uma solução de 6-Aminopiridazina em acetona é adicionadauma solução de MCPBA (1 equivalente) em acetona em uma porção. A mis-tura reacional é deixada agitar em temperatura ambiente durante 1 hora. Osolvente é removido e éter é adicionado ao resíduo. O sólido é filtrado e se-cado para produzir o composto do título. Este é utilizado como tal na próximaetapa.
1-Óxido de 6-((2S,4R)-l-(terc-butoxicarbonil)-4-flúorpirrolidina-2-carboxamido)piridazina.<formula>formula see original document page 49</formula>
A uma solução de Boc-Pro(F)-OH (2,047 g, 8,154 mmols, 1 e-quivate) em DCM em O0C, Reagente Ghosez (1,2 ml, 8,97 mmols, 1,1 equi-valente) é adicionado e a mistura reacional é agitada em O0C durante 1 hora.A esta a amina (1,27 g, 11,42 mmols, 1,4 equivalente) em piridina é adicio-nada em OqC e a mistura reacional é agitada em temperatura ambiente du-rante 16 horas. Ela é em seguida concentrada para remover todos os volá-teis e o resíduo é dissolvido em DCM em excesso. A camada orgânica é la-vada com ácido cítrico a 10%, NaCI (saturado) e NaHCO3(Saturado), secadasobre Na2S04 e concentrada. O resíduo resultante é purificado por cromato-grafia instantânea utilizando-se 2-15% de acetona em diclorometano parafornecer o composto do título (61 %).
1-Óxido de 6-((2S,4R)-4-flúorpirrolidina-2-carboxamido)piridazina.
<formula>formula see original document page 49</formula>
A amida protegida por Boc foi apreendida em HCI/Dioxano a 4 Me a reação foi agitada em temperatura ambiente durante 5 horas. Todos os15 voláteis foram removidos e o resíduo foi triturado com éter para fornecer oscompostos títulos.
1- Óxido de 6-((2S,4R)-1-((2R)-3-ciclopentil-2-((N-(tetraidro-2H-piran-2-ilóxi)formamido)metil)propanoil)-4-flúorpirrolidina-2-carboxamido)piridazina
<formula>formula see original document page 49</formula>Exemplo 17: Piridazin-3-ilamida de ácido 1-[2-cicloexilmetil-3-(formil-hidróxi-amino)-propionil]-4-flúor-pirrolidina-2-carboxílico.
<formula>formula see original document page 50</formula>
O composto do título é preparado de acordo com o Procedimen-to Geral A de ácido 2-cicloexilmetil-3-[formil-(tetraidro-piran-2-ilóxi)-amino]-propionílico A-7 (R = cicloexil metila) e piridazin-3-amida de ácido pirrolidina-2-carboxílico A-8 (X = CHF1 η = 1, Ri = 3-piridazinila).
Bloco de construção de ácido 2-cicloexilmetil-3-(formil-hidróxi-amino)-propiônico é preparado de ácido 2-cicloexilmetilmalônico como des-crito para a síntese do ácido cicloexilmetilmalônico correspondente no E-xemplo 1.
Ácido 2-cicloexilmetil-malônico
<formula>formula see original document page 50</formula>
O composto do título é preparado de (bromometil)cicloexano.
Ácido 2-Cicloexilmetil-acrílico
<formula>formula see original document page 50</formula>
4-Benzil-3-(2-cicloexilmetil-acriloil)-oxazolidin-2-ona<formula>formula see original document page 51</formula>
4-Benzil-3-[2-cicloexilmetil-3-(tetraidro-piran-2-iloxiamino)-propionil]-oxazolidin-2-ona).
<formula>formula see original document page 51</formula>
N-[3-(4-Benzil-2-oxo-oxazolidin-3-il)-2-cicloexilmetil-3-oxo-propil]-N-(tetraidro-piran-2-ilóxi)-formamida
Exemplo 18: Pirazin-2-ilamida de ácido 1-{4-ciclopropil-2-[(formil-hidróxi-amino)-metil]-butiril}-4-flúor-pirrolidina-2-carboxílico.
<formula>formula see original document page 51</formula>
O composto do título é preparado de acordo com o Procedimen-to Geral A de ácido 2- ciclopropiletil-3-[formil-(tetraidro-piran-2-ilóxi)-amino]-propiônico A-7
(R = ciclopropil etila) e pirazin-2-amida de ácido pirrolidina-2-carboxílico A-8(Χ = CHF, η = 1, Ri = 2-pirazinila).
Bloco de construção de ácido 2-ciclopropiletil-3-(formil-hidróxi-amino)-propiônico é preparado de ácido 2-ciclopropiletilmalônico como des-crito para a síntese do ácido ciclopentilmetilmetil malônico correspondenteno Exemplo 1.
(Bromoetil)ciclopropano
<formula>formula see original document page 52</formula>
O composto do título é preparado de 2-ciclopropiletanol.
Ácido 2-ciclopropiletil-malônico
<formula>formula see original document page 52</formula>
Ácido 2-ciclopropiletil-acrílico.
<formula>formula see original document page 52</formula>
4-Benzil-3-(2-ciclopropiletil-acriloil)-oxazolidin-2-ona.
<formula>formula see original document page 52</formula>N-[3-(4-Benzil-2-oxo-oxazolidin-3-il)-2-ciclopropiletil-3-oxo-propil]-N-(tetraidro-piran-2-ilóxi)-formamida.
<formula>formula see original document page 53</formula>
Ácido 2-ciclopropiletil-3-[formil-(tetraidro-piran-2-ilóxi)-amino]-propiônico
<formula>formula see original document page 53</formula>
Pirazin-2-ilamida de ácido 1-{2-ciclopropiletil-3-[formil-(tetraidro-piran-2-ilóxi)-amino]-propionil}-4-flúor-pirrolidina-2-carboxílico
<formula>formula see original document page 53</formula>
Exemplo 19: Inibição da Atividade de Peptídeo Deformilase
Um ensaio acoplado de PDF/FDH (Lazennec e outro, Anal. Bio-chem., Vol. 224, páginas 180-182 (1997)) é utilizado. Neste ensaio acoplado,o formiato liberado por PDF de seu substrato fMAS é oxidado pela enzimade acoplamento FDH, reduzindo uma molécula de NAD+ a NADH, que causaum aumento na absorção em 340 nM. Todos os ensaios são realizados emtemperatura ambiente em um tampão de HEPES a 50 mM, pH 7,2, de NaCIa 10 mM, 0,2 mg/mL de BSA, em placas de microtítulo de 96 cavidades demeia-área (Corning). A reação é iniciada por adição de uma mistura de 0,5Unidade/mL de FDH, de NAD+ a 1 mM, e fMAS na concentração desejada.Para determinar valores de IC50 (a concentração necessária para inibir 50%da atividade da enzima), PDF é pré-incubado durante 10 minutos com con-centrações variantes do inibidor, e a reação de desformilação é iniciada pelaadição da mistura reacional contendo fMAS a 4 mM. A velocidade da reaçãoinicial, y, é medida como a taxa inicial de aumento de absorção em 340 nMutilizando-se uma leitora de placa SpectraMax (Molecular Devices, Sunnyva-le, CA). A concentração inibidora [In] na qual 50% da atividade da enzima éinibida, IC50, é calculada utilizando-se a seguinte fórmula:
y = yo/(1 + [ln]/IC50)
onde y0 é a velocidade da reação na ausência de inibidor. A resolução destaequação para IC50 na [In] quando y = yJ2 produz IC50. A IC50 é calculadacom base em um ajuste de regressão mínimo-quadrado não linear utilizan-do-se um pacote de software comercial (Deltapoint, Inc., Chicago, IL.).
Utilizando-se este ensaio, as IC50 de vários compostos são de-terminadas. A IC50 para os vários compostos é determinada contra a enzimadeformilase contendo níquel e zinco como o íon de metal. Os valores de IC50de compostos preferidos de fórmula (I) determinados para a deformilasecontendo zinco varia de cerca de 0,001 μΜ a cerca de 0,2 μΜ. Os valores deIC50 de compostos preferidos de fórmula (I) determinados para a deformilasecontendo níquel varia de cerca de 0,005 μΜ a cerca de 3 μΜ.
Exemplo 20: Ensaio para Testar a Atividade Antimicrobiana
Concentrações inibitórias mínimas (MICs) são determinadas uti-lizando-se o método de microdiluição em placas de formato de 96 cavidades.Os compostos são suspensos em DMSO em 5 ou 10 mg/mL e armazenadosem 4°C até serem utilizados. Eles são diluídos em Caldo Mueller-Hinton25 (MHB) ou Caldo de Soja de Tripticase (TSB) e utilizados para determinaçãoda MIC. A faixa de concentrações testada é 64-0,0625 μg/ml de concentra-ção final utilizando-se um sistema de diluição de duas vezes.
O inóculo é preparado de células cultivadas em Ágar de Soja deTripticase (TSA) e incubados durante a noite em 35°C, 5 a 10 colônias sãoutilizadas para inocular caldos de MHB ou TSB, e a cultura é incubada du-rante a noite em 35°C. A cultura durante a noite é diluída 1:10, incubada du-rante 1 hora em 35°C, diluída para o tamanho de inóculo apropriado e apli-cada às cavidades contendo o caldo e composto teste. Tamanhos de inóculosão 2 χ 104 CFU/mL.
As placas são incubadas em 35°C durante 48 horas e MIC é re-gistrada após 18 horas de incubação para bactérias. MIC é definida como amenor concentração de composto que não produz desenvolvimento visívelapós incubação.
Concentração inibitória mínima para vários compostos preferidosde fórmula (I) varia de cerca de 0,25 pg/mL a cerca de 32 pg/mL contra H.influenza (quatro cepas), de cerca de 0,001 pg/mL a maior do que 8 pg/mLcontra S. aureus (quatro cepas), de cerca de 0,016 pg/mL a cerca de 16pg/mL contra S. pneumonia (quatro cepas), e de cerca de 0,008 pg/mL acerca de 16 pg/mL contra M. catarrhalis. A enzima deformilase é obtida deE. coli.
As seguintes são formulações farmacêuticas representativascontendo um composto de fórmula (I).
Exemplo 21: Formulação de Comprimido
Os seguintes ingredientes são misturados intimamente e pren-sados em comprimidos marcados simples:
<table>table see original document page 55</column></row><table>
Exemplo 22: Formulação da Cápsula
Os seguintes ingredientes são misturados intimamente e carre-gados em uma cápsula de gelatina de casca dura:
<table>table see original document page 55</column></row><table>Exemplo 23: Formulação da Suspensão
Os seguintes ingredientes são misturados para formar uma sus-pensão para administração oral:
<table>table see original document page 56</column></row><table>
Exemplo 24: Formulação Injetável Os seguintes ingredientes são misturados para formar uma for- mulação injetável:
<table>table see original document page 56</column></row><table>
Exemplo 25: Formulação de Supositório
Um supositório de peso total de 2,5 g é preparado misturando-seo composto da invenção com Witepsol® H-5 (triglicerídeos de ácido graxo10 vegetal saturado; Riches-Nelson, Inc., Nova Iorque), e tem a seguinte com-posição:<table>table see original document page 57</column></row><table>
Exemplo 26: (5-Flúor-piridin-2il)-amida de ácido Í2S.4F0-1 -f(R)-2- [(formil-hidróxi-amino)-metil1-hexanoil)-4-isopropil-pirrolidina-2-carboxílico.
O composto do título é preparado de acordo com o Procedimen-to Geral A de ácido 2-n-butil-3-[formil-N-benzilóxi]-amino-propiônico A-7 e [2-amino-5-flúorpiridina]
de ácido 4-isopropil-pirrolidina-2-carboxílico.
Exemplo 27: (5-Flúor-piridin-2il)-amida de ácido (2S,4R)-1-((R)-2-r(formil-hidróxi-amino)-metill-hexanoil)-4-isopropil-pirrolidina-2-carboxílico.
O composto do título é preparado de acordo com o Procedimen-to Geral A de ácido 2-n-butil-3-[formil-N-benzilóxi]-amino-propiônico A-7 e [2-amino-5-flúorpiridina-N-óxido] de ácido 4-isopropil-pirrolidina-2-carboxílico.Exemplo 28: Caracterização bioquímica e estrutural de mutantesG70V/D de peptídeo deformilase de Streptococcus pneumoniae.
Atividade de peptídeo deformilase é essencial para desenvolvi-mento de S pneumoniae. Os mutantes que são selecionados em NVP-LBM415 não foram comprometidos para desenvolvimento in vitro, portantoas mutações em defB que conferem resistência a estes compostos não seri-am esperadas dramaticamente alterar a atividade enzimática. Para testaresta hipótese, os cinéticos de atividade de peptídeo deformilase são deter-minados utilizando-se o substrato f-Met-Ala-Ser.
Tabela 1: Atividade enzimática de peptídeo deformilase de Streptococ-eus pneumoniae mutante e tipo selvagem.
<table>table see original document page 57</column></row><table>Os dados na Tabela 1 sustentam a hipótese de que as altera-ções selecionadas nas enzimas mutantes dramaticamente não alteram aatividade de peptídeo deformilase. É evidente que as enzimas mutantes sãocapazes de suportar desenvolvimento normal de S. pneumoniae ao mesmotempo que fornecer um nível de proteção de certos inibidores de PDF.
Teste de MIC preliminar utilizando-se os mutantes PDF G70V/Dsugeriu que estes mutantes são menos sensíveis a um subgrupo de inibido-res de PDF relacionados contendo um componente N-óxido de P3 do que acompostos altamente relacionados carecendo deste grupo. Para investigartambém, os IC50S e MICs de pares específicos de compostos diferindo ape-nas neste aspecto são determinados. A Tabela 2 mostra as estruturas edescreve as IC50S e MICs médias de três pares de compostos similares,mais o composto de seleção original NVP-LB M-415.
Tabela 2: Efeito de constituinte N-óxido de anel P3 sobre a inibição daatividade de peptídeo deformilase de Streptococcus pneumoniae e de-senvolvimento de cultura.<table>table see original document page 59</column></row><table>
*Significância de IC50 aumentada de N-óxido contendo membrodo par de composto contra as enzimas mutantes (G70V/D) é expressa comovantagem de que a alteração é aleatória, em intervalo de confidência de 95%.Análises estatísticas que são designadas remover a variabilida-de na inibição de enzima que deriva de aspectos de cada composto de outramaneira o substituinte N-óxido de P3 são realizadas para cada par de inibi-dores. Em todos os casos, o aumento na IC5o média para o parceiro conten-do N- oxido em cada par é estatisticamente significante, e correlaciona-secom uma MIC aumentada para aquele agente.

Claims (17)

1. Composto, caracterizado pelo fato de que apresenta fórmula <formula>formula see original document page 61</formula> em que R1 é hidrogênio, alquila, heteroalquila, heterocicloalquila, arila ouheteroarila;R3 é alquila ou heteroalquila;R4 é arila, ou heteroarila; ouη é O a 3 econtanto que R1 seja cicloalquila e/ou R4 seja um anel de heteroarila mono-cíclico, de 6 membros opcionalmente substituído tendo 2, 3 ou 4 heteroáto-mos de nitrogênio no anel em que um ou mais dos heteroátomos de nitrogê-nio de anel são opcionalmente oxidados ou um sal dos mesmos ou um pró-fármaco dos mesmos.
2. Composto de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pe-lo fato de que R3 é isopropila.
3. Composto de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pe-lo fato de que R1 é cicloalquila.
4. Composto de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pe-lo fato de que R4 é uma heteroarila de fórmula (II) <formula>formula see original document page 61</formula> em que cada de R6, R7, Re e R9 independentemente é hidrogê-nio, alquila, alquila substituída, fenila, halogênio, hidroxila, alcóxi ou um saldestes ou um pró-fármaco dos mesmos.
5. Composto de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pe-lo fato de que R4 é uma heteroarila de fórmula (11.1) e<formula>formula see original document page 62</formula>em que R6, R7 e R8 são hidrogênio e R8 é flúor, um sal dos mesmos ou umpró-fármaco dos mesmos.
6. Composto de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pe-lo fato de que R4 é uma heteroarila de fórmula (II.2) e(II.2)<formula>formula see original document page 62</formula>em que R6, R7 e R8 são hidrogênio, um sal dos mesmos ou um pró-fármacodos mesmos.
7. Composto de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pe-lo fato de que R4 é uma heteroarila de fórmula (II.3) e<formula>formula see original document page 62</formula>em que R6, R7 e R8 são hidrogênio, um sal dos mesmos ou um pró-fármacodos mesmos.
8. Composto de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pe-lo fato de que R4 é uma heteroarila de fórmula (II.4) e<formula>formula see original document page 62</formula>em que R8, R7 e R8 são hidrogênio, um sal destes ou um pró-fármaco des-tes.
9. Composto de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pe-lo fato de que R4 é uma heteroarila da fórmula (II.5)<formula>formula see original document page 63</formula> em que R6, R7 e Rs são hidrogênio, um sal dos mesmos ou um pró-fármacodos mesmos.
10. Composto de acordo com a reivindicação 1, caracterizadopelo fato de que R1 é selecionado de cicloexila, ciclopentila, ciclobutila ouciclopropila.
11. Composto de acordo com a reivindicação 1, caracterizadopelo fato de que R1 é uma n-butila.
12. Composto de acordo com a reivindicação 10, caracterizadopelo fato de que R4 é selecionado de 2-amino, N-óxido de 5- flúorpiridina, 2-pirazina, 3-piridazina, 3-pirimidina, 4-pirimidina, N-óxido de 3-piridazina, ou-2-amino, 5-flúorpiridina.
13. Composto de acordo com a reivindicação 11, caracterizadopelo fato de que R4 é selecionado de 2-amino, N-óxido de 5-flúorpiridina, 2-pirazina, 3-piridazina, 3-pirimidina, 4-pirimidina, N-óxido de 3-piridazina ou 2-amino, 5-flúorpiridina.
14. Composto de acordo com a reivindicação 10, caracterizadopelo fato de que R3 é isopropila.
15. Composto de acordo com a reivindicação 11, caracterizadopelo fato de que R3 é isopropila.
16. Composto de acordo com a reivindicação 1, caracterizadopelo fato de que R4 é uma heteroarila de fórmula (III) <formula>formula see original document page 63</formula>
17. Composto de acordo com a reivindicação 1, caracterizadopelo fato de que R4 é uma heteroarila de fórmula (III. 1)<formula>formula see original document page 64</formula>em que R6, R7, Rg são hidrogênio e R8 é flúor, um sal dos mesmos, ou umpró-fármaco dos mesmos.
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