BRPI0708567A2

BRPI0708567A2 - composto, composição farmacêutica que compreende e seu uso

Info

Publication number: BRPI0708567A2
Application number: BRPI0708567-2A
Authority: BR
Inventors: Olivier Bezencon; Daniel Bur; Olivier Corminboeuf; Corinna Grisostomi; Lubos Remen; Sylvia Richard-Bildstein; Thomas Weller
Original assignee: Actelion Pharmaceuticals Ltd
Priority date: 2006-03-08
Filing date: 2007-03-07
Publication date: 2011-05-31
Also published as: MX2008011340A; TW200800897A; CA2642436A1; AR059886A1; NO20084186L; JP2009529033A; CL2007000595A1; IL193885A0; US20090062342A1; AU2007224368A1; CN101395149A; EP1994026A2; WO2007102127A3; ZA200808540B; NZ571595A; KR20090008211A; WO2007102127A2; MA30296B1

Abstract

COMPOSTO, COMPOSIçAO FARMACêUTICA QUE O COMPREENDE E SEU USO A invenção refere-se a novos derivados de amina e ao seu uso como ingredientes ativos na preparaçâo de composições farmacêuticas. A invenção também tem a ver com aspectos relacionados que incluem processos para a preparação dos compostos, composições farmacêuticas que contêm um ou mais de tais compostos e especialmente ao seu uso como inibidores de renina.

Description

COMPOSTO, COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA QUE O COMPREENDE

E SEU USO

A invenção refere-se a novos compostos dafórmula (I) . A invenção também tem a ver com aspectosrelacionados, incluindo processos para a preparação doscompostos, composições farmacêuticas que contêm um oumais compostos da fórmula (I) e especialmente ao seuuso como inibidores de renina em eventos cardiovascula-res e insuficiência renal.

No sistema renina-angiotensina (RAS), aangiotensina II biologicamente ativa (Ang II) é geradapor um mecanismo de duas etapas. A renina de enzimaaltamente especifica cliva angiotensinogênio para angi-otensina I (Ang I), a qual então é ainda processada pa-ra Ang II pela enzima conversora de angiotensina (ACE)menos especifica. É sabido que a Ang II trabalha empelo menos dois subtipos receptores que são chamados deATi e AT2. Enquanto a ATi parece transmitir a maior

parte das funções de Ang II conhecidas, ainda se desco-nhece a função da AT2.

A modulação do RAS representa um importan-te avanço no tratamento de enfermidades cardiovascula-res. Os inibidores de ACE e bloqueadores de ATi têmsido aceitos para tratar hipertensão (Waeber B. et al.r"The renina-angiotensin system: role in experimentaland human hypertension", in Birkenhager W. H., Reid J.L. (eds): Hypertension, Amsterdam, Elsevier Science Pu-blishing Co, 1986, 489-519; Weber Μ. A., Am. J. Hyper-tens., 1992, 5, 247S). Além disso, os inibidores deACE são usados para proteção renal (Rosenberg Μ. E. etal., Kidney International, 1994, 45, 403; Breyer J. A.et al., Kidney International, 1994, 45, S156), na pre-venção de deficiência cardíaca congestiva (Vaughan D.E. et al., Cardiovasc. Res., 1994, 28, 159; Fouad-Tarazi F. et al., Am. J. Med., 1988, 84 (Suppl. 3A) ,83) e infarto do miocárdio (Pfeffer M. A. et al., N.Engl. J. Med., 1992, 327, 669).

0 fundamento lógico para desenvolver ini-bidores de renina é a especificidade da renina (Klei-nert H. D., Cardiovasc. Drugs, 1995, 9, 645). O únicosubstrato conhecido para renina é o angiotensinogênio,que pode ser processado (sob condições fisiológicas)pela renina. Em contraste, o ACE também pode clivarbradiquinina além de Ang I, e pode ser contornada porquimase, uma protease de serina (Husain A., J. Hyper-tens., 1993, 11, 1155). Em pacientes a inibição de ACEconduz deste modo ao acúmulo de bradiquinina causandotosse (5-20%) e potencialmente edema angioneurótico comperigo de vida (0,1-0,2%) (Israili Ζ. H. et al., Annalsde Internai Medicine, 1992, 117, 234). Os inibidoresde ACE não inibem a quimase. Portanto, a formação deAng II é ainda possível em pacientes tratados com ini-bidores de ACE. Por outro lado, o bloqueio do receptorde ATi (por exemplo, por losartan) expõe demasiadamenteoutros subtipos de receptores AT (por exemplo, AT2) àAng II, cuja concentração é significativamente aumenta-da pelo bloqueio dos receptores de ATi. Em resumo, es-pera-se que os inibidores de renina demonstrem um per-fil farmacêutico diferente dos inibidores de ACE e blo-queadores de ΑΤχ com relação à eficácia no bloqueio doRAS e em aspectos de segurança.

Somente experiência clinica limitada (Azi-zi M. et al., J. Hypertens., 1994, 12, 419; Neutel J.M. et al., Am. Heartf 1991, 122, 1094) foi criada cominibidores de renina decorrente da sua atividade oualinsuficiente devida ao seu caráter peptidomimético(Kleinert H. D., Cardiovasc. Drugs, 1995, 9, 645). 0desenvolvimento clinico de vários compostos foi sustadopor causa deste problema juntamente com o alto custo deartigos. Somente um composto contendo quatro centrosquirais foi introduzido em testes clínicos (Rahuel J.et al., Chem. Biol., 2000, 7, 4 93; Mealy N. E., urugsde the Future, 2001, 26, 1139). Desta forma, são re-queridos inibidores de renina com boa biodisponibilida-de oual e longa duração de ação. Recentemente descre-veram-se os primeiros inibidores de renina não-peptídicos que mostram alta atividade in vitro (OefnerC. et al., Chem. Biol., 1999, 6, 127; Patent Applicati-on WO 97/09311; Márki Η. P. et al., Il Farmaco, 2001,56, 21). Entretanto, desconhece-se o estado de desen-volvimento destes compostos.

A presente invenção refere-se aos inibido-res de renina de uma natureza não-peptídica e de baixopeso molecular. Descrevem-se inibidores de renina o-ralmente ativos da fórmula (I) que são dotados de umalonga duração de ação e que são ativos em indicaçõesalém de regularização de pressão sangüínea onde o sis-tema de renina-quimase tissular pode ser ativado condu-zindo a funções locais patofisiologicamente alteradas,tais como remodelagem renal, cardíaca e vascular, ate-rosclerose, e possivelmente restenose. Desta forma, apresente invenção descreve estes inibidores de reninanão-peptídicos da fórmula (I).

Em particular, a presente invenção refere-se a novos compostos da fórmula (I)

<formula>formula see original document page 5</formula>

Formula (I)

em que

X representa CH, N, ou N+-O";

W representa um fenil para-substituído, um piridinilpara-substituído ou um tiazolil, tal como especialmentefenil para-substituído ou:

<formula>formula see original document page 5</formula>V representa -CH2CH2CH2-, -CH2CH2-A-, -CH2-A-CH2-, -A-CH2CH2-, -CH2CH2CH2CH2-, -A-CH2CH2CH2-, -CH2-A-CH2CH2-, -CH2CH2-A-CH2-, -CH2CH2CH2-A-, -A-CH2CH2-B- (preferred) , -CH2CH2CH2CH2CH2-, -A-CH2CH2CH2CH2-, -CH2-A-CH2CH2CH2-, -CH2CH2-A-CH2CH2-, -CH2CH2CH2-A-CH2-, -CH2CH2CH2CH2-A-, -A-CH2CH2CH2-B-, -CH2-A-CH2CH2-B-, -A-CH2CH2-B-CH2-, -A-CH2CH2CH2-B-CH2-, -CH2-A-CH2CH2CH2-B-, ou -O-CH2-Q- (tam-bém preferido), em que Q é ligado ao grupo U da fórmula(I), ou (também preferentemente) V representa um pir-rolidinil da fórmula:

<formula>formula see original document page 6</formula>

U representa aril não-substituido, especialmente fenil;aril mono—- di — ,· tri- ou tetra-substituí do (especial-mente fenil mono- di-, tri-, ou tetra-substituido) , emque os substituintes são selecionados independentemen-te a partir do grupo que consiste de Ci_7-alquila (talcomo especialmente metil), -CF3, halogênio, e hidroxil-Ci-7-alquila; ou heteroaril de cinco elementos com doisheteroátomos selecionados independentemente a partirdo nitrogênio, oxigênio e enxofre (preferentemente pi-razolil ou isoxazolil) , em que o dito radical de hete-roaril é opcionalmente mono-, di- ou tri-substituído,em que os substituintes são selecionados independente-mente a partir do grupo que consiste de Ci-7-alquila,Ci-7-alcoxila, -CF3, -OCF3, e halogênio;Q representa um heteroaril de cinco elementos com doisou três heteroátomos selecionados independentemente apartir do O e N, preferentemente um isoxazoil, especi-almente um isoxazolil que é conectado ao restante damolécula da fórmula (!) como se segue:

L representa -CH2-CH2-, -CH2-CH(R6)-CH2-, -CH2-N(R7)-CH2--CH2-O-CH2-, ou -CH2-S-CH2-;

AeB representam, independentemente um do outro, -Ο-ou -S-;

R1 representa Ci_7-alquila ou cicloalquila,preferentemente cicloalquila, tal como especialmenteciclopropila;

R2 representa halogênio ou Ci 7-alquil. a- preferentementecloro ou metil;

R3 representa hidrogênio, halogênio, Ci-7-alquila (talcomo especialmente metil) , Ci-7-alcoxila, ou -CF3;

R4 representa hidrogênio; Ci_7-alquila-0-(CH2) 0-4-CH2-;

CF3-O-(CH2) 0-4-CH2-; R'2N-(CH2) 0-4-CH2-, em que R' é sele-cionado independentemente a partir do grupo que con-siste de hidrogênio, Ci_7-alquila (opcionalmente, maspreferentemente substituído por um a três flúores), ci-clopropil (opcionalmente substituído por um a três flú-ores), ciclopropil-Ci-7-alquila (opcionalmente, maspreferentemente substituído por um a três flúores), e -C(O)-R'' em que R'' é Ci_4-alquila, Ci_4-alcoxila, -CF3,-CH2-CF3, ou ciclopropil; ou R13-C (=0) - (0) 0-i~ (CH2) 0-4-,em que R13 é Ci-4-alquila, Ci_4-alcoxila, ou ciclopropil;em que R' e R'' preferentemente os dois não representamsimultaneamente hidrogênio;

R5 representa hidroxila, Ci-7-alcoxila, hidroxila-Ci_7-alquila, diidroxila-Cx-7-alquila, Ci_7-alcoxila-Ci-7-alquila, Ci-7-alcoxila-Ci-7-alcoxila-Ci_7-alquila, hidro-xila-Ci_7-alcoxila-Ci-7-alquila, carbamoil-Ci-7-alcoxila,ou Ci_7-alquila-carboniloxila;

R6 representa -Hf -CH2OR9, -CH2NR8R9, -CH2NR8COR9, -CH2NR8SO2R9, -CO2R9, -CH2OCONR8R9, -CONR8R9,CH2NR8CONR8'R9, -CH2SO2NR8R9, -CH2SR9, -CH2SOR9, OU -CH2SO2R9 ;

R7 representa -R9, -COR9, -COOR11, -CONR8R9,C (NR8) NR8'R9, -CSNR8R9, -SO2R9, ou -SO2NR8R9; ou R7 repre-senta um radical da fórmula:

<formula>formula see original document page 8</formula>

em que T representa -CH2-, -NH- ou -0-, r é um inteirode 1 até 6 e s é um inteiro a partir de 1 até 4;

R8 e R8' independentemente representam hidrogênio, Ci_7-alquila, C2_7-alquenila, cicloalquila, ou cicloalquila-Ci_7-alquila, em que Ci_7-alquila, cicloalquila, e ciclo-alquila-Ci_7-alquila pode ser substituído por um, dois,ou três halogênios;

R9 representa hidrogênio, Ci-7-alquila, cicloalquila, oucicloalquila-Ci-7-alquila, em que Ci-7-alquila, cicloal-quila, e cicloalquila-Cx-7-alquila podem ser mono-, di-ou tri-substituídos, em que os substituintes são inde-pendentemente selecionados a partir do grupo que con-siste de halogênio, hidroxila, -OCOR12, -COOR12, C1-7-alcoxila, ciano, SO2R12, -CONR12R12', morf olin-4-il-C0-,( (4-Ci_7-alquila) piperazin-l-il) -CO-, -NHC(NH)NH2,NR10R10' e Ci-7-alquila, com a condição de que um átomode carbono esteja vinculado no máximo a um heteroátomono caso deste átomo de carbono ser sp3-hibridizado;

R10 e R10' independentemente representan hidrogênio, Ci-7-alquila, cicloalquila, cicloalquila-Ci-7-alquila, hi-droxila-Ci-7-alquila, -COOR8, ou -CONH2;

R11 representa halogênio, Ci-7-alquila, Ci-7-alcoxila, -CF3, ou hidrogênio;

R12 e R12' independentemente representam hidrogênio, Ci-7-alquila, C2-7-alquenila, cicloalquila, ou cicloalqui-la-Ci-7-alquila, em que Ci_7-alquila, cicloalquila, e ci-cloalquila-Ci_7-alquila pode ser substituído por um,dois, ou três halogênios;

η representa o inteiro 0 ou 1, especialmente 0; em representa o inteiro 0 ou 1, especialmente 1, com acondição de que m represente o inteiro 1 se η represen-tar o inteiro 1;

e os seus sais.

Os termos gerais usados anteriormente edoravante têm preferentemente, dentro deste relatório,os significados expostos em seguida, a não ser que deoutro modo indicados:

Onde a forma plural é usada para compos-tos, sais, composições farmacêuticas, enfermidades eassemelhados, ela destina-se a significar igualmente umúnico composto, sal ou assemelhado.

Qualquer referência a um composto da fór-mula (I) deve ser entendida como referindo-se também asais (especialmente sais farmaceuticamente aceitáveis)de um composto da fórmula (I), tal como apropriado eaconselhável.

O termo C1-7-alquila, isoladamente ou emcombinação com outros grupos, significa grupos de ca-deia saturada, normal ou ramificada, com um a sete áto-mos de carbono, preferentemente de um a quatro átomosde carbono, isto é, Ci_4-alquila. Exemplos de grupos deCi-7-alquila compreendem metila, etil, n-propila, iso-propila, n-butila, iso-butila, sec-butila, tert-butila,pentila, hexila e heptila. Os grupos de metila, etil eisopropila são preferidos, especialmente os grupos demetila e etila.

0 termo C1-7-alcoxila, isoladamente ou emcombinação com outros grupos, refere-se a um grupo R-O-, em que R é um grupo de Ci_7-alquila. Exemplos de gru-pos de Ci_7-alcoxila são metoxila, etoxila, propoxila,iso-propoxila, iso-butoxila, sec-butoxila e tert-butoxila.

0 termo hidroxila-Ci_7-alquila, isoladamen-te ou em combinação com outros grupos, refere-se a umgrupo HO-R-, em que R é a grupo Ci_7-alquila. Exemplosde grupos hidroxila-Ci-7-alquila são HO-CH2-, HO-CH2CH2-,HO-CH2CH2CH2- e CH3CH(OH)-.

0 termo halogênio refere-se a flúor, clo-ro, bromo ou iodo, preferentemente flúor, cloro ou bro-mo. Em uma concretização de maior preferência da in-venção o termo halogênio significa flúor ou cloro.

0 termo cicloalquila, isoladamente ou emcombinação com outros grupos, significa um sistema deanel de hidrocarboneto cíclico saturado com 3 até 7 á-tomos de carbono, isto é, ciclopropila, ciclobutila,ciclopentila, cicloexila ou cicloeptila, preferen-temente ciclopropila.

0 termo arila, isoladamente ou em combina-ção, refere-se a um grupo fenila, naftila ou indanila,preferentemente a grupo fenila.

0 termo sp3-hibridizado refere-se a um á-tomo de carbono e significa que este átomo de carbonoforma quatro ligações para quatro substituintes coloca-dos de uma maneira tetragonal em torno deste átomo decarbono.

A expressão sais farmaceuticamente aceitá-veis abrange seja os sais com ácidos inorgânicos ou á-cidos tais como ácido clorídrico, ácido bromídrico, á-cido hidroiócido, ácido sulfúrico, ácido sulfâmico, á-cido fosfórico, ácido nítrico, ácido fosforoso, ácidonitroso, ácido cítrico, ácido fórmico, ácido acético,ácido oxálico, ácido maléico, ácido láctico, ácido tar-tárico, ácido fumárico, ácido benzóico, ácido mandéli-co, ácido cinãmico, ácido palmóico, ácido esteárico,ácido glutãmico, ácido aspártico, ácido metanossulfôni-co, ácido etanossulfônico, ácido etanodissulfônico, á-cido p-toluenossulfônico, ácido salicilico, ácido suc-cinico, ácido trifluoroacético, e assemelhados, que sãonão tóxicos para os organismos vivos, ou no caso docomposto da fórmula (I) ser de natureza ácida com umabase inorgânica, tal como uma base alcalina ou alcali-no-terrosa, por exemplo, hidróxido de sódio, hidróxidode potássio, hidróxido de cálcio e assemelhados. Paraoutros exemplos de sais farmaceuticamente aceitáveis,pode fazer-se referência a "Salt selection for basicdrugs", Int. J. Pharm. (1986), 33, 201-217.

Os compostos da fórmula (I) podem conterátomos de carbono assimétricos. Substituintes em umaligação dupla ou um anel podem estar presentes em cis-(= Z-) ou trans (= E-) forma, a não ser que de outraforma indicado. Desta maneira, os compostos da fórmula(I) podem estar presentes como misturas de estereoisô-meros ou preferentemente como estereoisômeros puros.

Misturas de estereoisômeros podem ser separadas de umamaneira por si conhecida, por exemplo, por cromatogra-fia de coluna, cromatografia de camada fina, HPLC oucristalização.

Os compostos da invenção também incluemcompostos nitrosados de fórmula (I) que foram nitrosa-dos através de um ou mais locais, tais como oxigênio(condensação de hidroxila), enxofre (condensação desulfidril) e/ou nitrogênio. Os compostos nitrosados dapresente invenção podem ser preparados utilizando-semétodos convencionais conhecidos daqueles versados natécnica. Por exemplo, métodos conhecidos para nitrosarcompostos encontram-se descritos nas Pat. U.S. Nos.5.380.758, 5.703.073, 5.994.294, 6.242.432 e 6.218.417;WO 98/19672; e Oae et al., oug. Prep. Proc. Int.,15 (3) : 165-198 (1983) .

Uma concretização preferida da presenteinvenção refere-se a um composto de fórmula (I) , em queX representa CH ou N; e

R4 representa hidrogênio; Ci-7-alquila-0-(CH2) o-4_CH2-;CF3-0-(CH2)o-4-CH2-; ou R' 2N- (CH2) o-4-CH2-, em que R' é se-lecionado independentemente a partir do grupo que con-siste de hidrogênio, Ci_7-alqu±la (opcionalmente substi-tuído por de um a três flúores), ciclopropila (opcio-nalmente substituído por de um a três flúores), ciclo-propila-Ci-7-alquila (opcionalmente substituído por deum a três flúores), e -C(=0)-R" em que R" é Ci-4-alquila, -CF3, -CH2-CF3, ou ciclopropila.

Uma concretização preferida da presenteinvenção refere-se a um composto de fórmula (I), em queX representa CH ou N+-O".

Uma concretização preferida da presenteinvenção refere-se a um composto da fórmula (I), em queR7 representa -R9, -COR9, -COOR11, -CONR8R9,C (NR8) NR8'R9, -CSNR8R9, -SO2R9, ou -SO2NR8R9.Uma concretização preferida da presenteinvenção refere-se a um composto de fórmula (I), em queAeB representem, os dois, -O-.

Uma concretização preferida da presenteinvenção refere-se a um composto da fórmula (I), em queR6 representa -CO2CH3 ou -CO2H.

Uma concretização preferida da presenteinvenção refere-se a um composto da fórmula (I), em queR7 representa -H, -COCH3, -C(NH)NH2,CONHCH2C (CH3)2CONH2, -CONHCH(CH2)2, OU -CONHC(CH2)2CN.

Uma concretização preferida da presenteinvenção refere-se a um composto da fórmula (I), em queR7 representa -H.

Uma concretização preferida da presenteinvenção refere-se a um composto da fórmula (I), em queL representa -UH2-CH2- ou -CH2-NH-CH2-.

Uma concretização preferida da presenteinvenção refere-se a um composto da fórmula (I), em queR1 representa ciclopropila.

Uma concretização preferida da presenteinvenção refere-se a um composto da fórmula (I), em que

W representa um fenil para-substituido, ou

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Uma concretização preferida da presenteinvenção refere-se a um composto da fórmula (I), em queV representa -O-CH2CH2-O-, -O-CH2-Q-, -CH2-CH2-O- em quea parte -CH2 de -CH2-CH2-O- é ligada ao grupo W da fór-mula (I), ou

<formula>formula see original document page 15</formula>

Uma concretização preferida da presenteinvenção refere-se a um composto da fórmula (I), em queV representa -O-CH2CH2-O- ou -O-CH2-Q-.

Uma concretização preferida da presenteinvenção refere-se a um composto da fórmula (I), em queQ representa um isoxazolil ou um oxadiazolil.

Uma concretização preferida da presenteinvenção refere-se a um composto da fórmula (I), em queQ representa um isoxazolil, especialmente um isoxazolilque é conectado ao restante da molécula da fórmula (I)como se segue:

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Uma concretização preferida da presenteinvenção refere-se a um composto da fórmula (I), em queV-W representa:<formula>formula see original document page 16</formula>

Uma concretização preferida da presenteinvenção refere-se a um composto da fórmula (I), em queU representa:

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Uma concretização preferida da presenteinvenção refere-se a um composto de fórmula (I), em queU representa

<formula>formula see original document page 16</formula>

Uma concretização preferida da presenteinvenção refere-se a um composto da fórmula (I), em queR2 representa Cl, e R3 representa hidrogênio.

Uma concretização preferida da presenteinvenção refere-se a um composto da fórmula (I), em queR4 representa CH3-O-(CH2)2-S" ou CH3-C (=0)-NH-CH2-CH2-.

Uma concretização preferida da presenteinvenção refere-se a um composto da fórmula (I) , em queR4 representa -CH2CH2CH2-O-CH3 ou -CH2CH2-O-CH3.Uma concretização preferida da presenteinvenção refere-se a um composto da fórmula (I), em queR4 representa -CH2CH2-O-CH3.

Uma concretização preferida da presenteinvenção refere-se a um composto da fórmula (I) , em queR5 representa hidroxila.

Uma concretização preferida da presenteinvenção refere-se a um composto da fórmula (I), em queη representa o inteiro 0.

Uma concretização preferida da presenteinvenção refere-se a um composto da fórmula (I), em quea metade

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representa uma das seguintes possibilidades:

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Uma concretização especialmente preferidada presente invenção refere-se a um composto da fórmula(I), em que

X representa CH, N, ou N+-O";

W representa um fenil para-substituido ou um piridinilpara-substituído, em que o piridinil é especialmenteconectado ao restante da molécula da fórmula (I) como

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se segue:

V representa -A-CH2CH2-B- ou -O-CH2-Q-, em que Q é liga-do ao grupo U da fórmula (I), ou V representa um pirro-lidinil da fórmula:

<formula>formula see original document page 18</formula>

U representa fenil tri-substituido, em que os substitu-intes são selecionados independentemente a partir dogrupo que consiste de Ci-7-alquila (tal como especial-mente metil) e halogênio;

Q representa um isoxazolil, especialmente um isoxazolilque é conectado ao restante da molécula da fórmula (I)como se segue:

AeB representam, os dois, -O-;R1 representa ciclopropila;

R2 representa halogênio ou Ci_7-alquila, especialmentecloro ou metil;

R3 representa hidrogênio ou Ci_7-alquila, especialmentehidrogênio ou metil;

R4 representa Ci_7-alquila-0- (CH2) o-4"CH2-, especialmenteCH3-O- (CH2) i-2"CH2-;R5 representa hidroxila;η representa o inteiro 0; em representa o inteiro 1.

Uma concretização preferida da presenteinvenção refere-se a um composto da fórmula (I), em quea configuração absoluta de um composto da fórmula (I) étal como representada para a fórmula (I'):

<formula>formula see original document page 19</formula>

A presente invenção também se refere acompostos da fórmula (I) em que os significados de umou mais dos substituintes e símbolos tais como defini-dos para a fórmula (I), ou uma concretização preferidada fórmula (I), são substituídos por seus significadospreferidos tais como definidos neste contexto, tais co-mo aqueles definidos para as concretizações preferidosdadas anteriormente.

Uma concretização preferida da presenteinvenção refere-se a um composto da fórmula (I), que éciclopropil-(2,3-dimetil-benzil)-amida de ácido (3S*,4R*)— 4 —{4 —[2-(2,6-dicloro-4-metil-fenoxi)-etoxi]-fenil}-4-hidroxil-piperidina-3-carboxílico.

Uma outra concretização preferida da pre-sente invenção relaciona-se com um composto da fórmula(I) selecionado a partir de:

[2-cloro-5-(2-metoxi-etil)-benzil]-ciclopropil-amida deácido ( 3S, 4R)— 4 — {4 —[2-(2,6-dicloro-4-metil-fenoxi)-etoxi]-fenil}-4-hidroxi-piperidina-3-carboxílico,

[2-cloro-5-(2-metoxi-etil)-benzil]-ciclopropil-amida deácido (3'S, 4 'R)-6-[2-(2,6-dicloro-4-metil-fenoxi)-etoxi]-4'-hidroxi-1',2',3',4',5',6'-hexaidro-[3,4']bipiridinil-3'-carboxilico,

[2-cloro-5-(2-metoxi-etil)-benzil]-ciclopropil-amida deácido (3'S, 4 'R)-6-[3-(2-cloro-3,6-difluoro-fenil)-isoxazol-5-hilmetoxi]-4'-hidroxi-1',2',3',4',5',6'-hexaidro-[3,4']bipiridinil-3'-carboxilico,

[2-cloro-5-(2-metoxi-etil)-benzil]-ciclopropil-amida deácido (3'S, 4'R)-6-[(R)-3-(2,6-dicloro-4-metil-fenoxi)-pyrrolidin-l-il]-4'-hidroxi-1',2',3',4',5',6'-hexaidro-[3,4']bipiridinil-3'-carboxilico,

[5-cloro-2-(3-metoxi-propil)-piridin-4-ilmetil]-ciclopropil-amida de ácido (3'S, 4'R)-6-[2-(2,6-dicloro-4-metil-fenoxi)-etoxi]-41-hidroxi-1',2',3',4',5',6'-hexaidro-[3,4']bipiridinil-3'-carboxilico, e

[5-cloro-2-(3-metoxi-propil)-l-oxi-piridin-4-ilmetil]-ciclopropil-amida de ácido (3'Sr 4'R)-6-[2-(2,6-dicloro-4-metil-fenoxi)-etoxi]-41-hidroxi-1', 2 ' , 3 ' , 4 1 ,5', 61 -hexaidro-[3,4']bipiridinil-3'-carboxilico.

Os compostos da fórmula (I) são de utili-dade para o tratamento e/ou profilaxia de enfermidadestais como ou relacionadas a hipertensão, falha cardíacacongestiva, hipertensão pulmonar, insuficiência renal,isquemia renal, falha renal, fibrose renal, insuficiên-cia cardíaca, hipertrofia cardíaca, fibrose cardíaca,isquemia do miocárdio, cardiomiopatia, glomerulonefri-te, cólica renal, complicações resultantes de diabetes,tais como nefropatia, vasculopatia e neuropatia, glau-coma, pressão intra-ocular elevada, aterosclerose, res-tenose após angioplastia, complicações em seguida a ci-rurqia vascular ou cardíaca, disfunção erétil, hiperal-dosteronismo, fibrose pulmonar, esclerodermia, ansieda-de, distúrbios cognitivos, complicações de tratamentoscom agentes imunossupressores, e outras enfermidadesrelacionadas com o sistema renin-angiotensina.

Os compostos da fórmula (I) são especial-mente úteis para o tratamento e/ou profilaxia de hiper-tensão, falha cardíaca congestiva, hipertensão pulmo-nar, insuficiência renal, isquemia renal, falha renal,fibrose renal, insuficiência cardíaca, hipertrofia car-díaca, fibrose cardíaca, isquemia do miocárdio, cardio-miopatia, complicações resultantes de diabetes tais co-mo nefropatia, vasculopatia e neuropatia.De acordo com uma concretização, a inven-ção relaciona-se com um método para o tratamento e/ouprofilaxia de enfermidades que se encontram associadascom a desregulagem do sistema renin-angiotensina, emparticular com um método para o tratamento e/ou profi-laxia das enfermidades mencionadas anteriormente, osditos métodos compreendendo administrar a um pacienteuma quantidade farmaceuticamente ativa de um compostoda fórmula (I).

Outro aspecto da presente invenção refere-se a composições farmacêuticas que compreendem um com-posto da fórmula (I) e um material carreador farmaceu-ticamente aceitável. Estas composições farmacêuticaspodem ser usadas para o tratamento e/ou profilaxia dasenfermidades mencionadas anteriormente. As composiçõesfarmacêuticas podem ser usadas para administração enté-rica, parentérica ou tópica. Elas podem ser adminis-tradas, por exemplo, de forma peroral, por exemplo, naforma de comprimidos, comprimidos revestidos, drágeas,cápsulas de gelatina dura e macia, soluções, emulsõesou suspensões, retalmente, por exemplo, na forma de su-positórios, parenteralmente, por exemplo, na forma desoluções de injeção ou soluções de infusão, ou topica-mente, por exemplo, na forma de ungüentos, cremes ouóleos.

A invenção também se refere ao uso de umcomposto da fórmula (I) para a preparação de composi-ções farmacêuticas para o tratamento e/ou profilaxiadas enfermidades mencionadas anteriormente.

A produção das composições farmacêuticaspode ser realizada de uma maneira que será familiar aqualquer pessoa versada na técnica (vide, por exemplo,Mark Gibson, Editor, Pharmaceutical Prefórmulation andFórmulation, IHS Health Grupo, Englewood, CO, USA,2001; Remington, The Science and Practice of Pharmacy,20th Edition, Philadelphia College of Pharmacy and Sci-ence) ao trazer os compostos descritos da fórmula (I)ou seus sais farmaceuticamente aceitáveis, opcionalmen-te em combinação com outras substâncias terapeuticamen-te valiosas, para uma forma de administração galênicaem conjunto com materiais carreadores sólidos ou líqui-dos terapeuticamente compatíveis, inertes, não-tóxicos,adequados e, quando desejado, adjuvantes farmacêuticosusuais.

Os compostos da fórmula (I) ou as composi-ções farmacêuticas mencionadas anteriormente também sãode uso em combinação com outros compostos farmacologi-camente ativos, tais como inibidores de ACE, inibidoresde endopeptidase neutros, antagonistas de aldosterona,antagonistas de receptor angiotensina II, antagonistasreceptores de endotelina, vasodilatores, antagonistasde cálcio, ativadores de potássio, diuréticos, simpato-líticos, antagonistas beta-adrenérgicos, antagonistasalfa-adrenérgicos, inibidores de llbeta-hidroxieste-róides deidrogenase tipo 1, ativadores de ciclase deguanilato solúveis e/ou outras drogas benéficas para aprevenção ou tratamento das enfermidades mencionadasanteriormente.

A presente invenção também se refere àspró-drogas de um composto da fórmula (I) que se conver-te in vivo para o composto da fórmula (I) como tal.Qualquer referência a um composto da fórmula (I) é,portanto, para ser considerada como referindo-se tambémàs correspondentes pró-drogas do composto da fórmula(I), como apropriados e convenientes.

Os compostos da fórmula (I) podem ser ma-nufaturados por meio dos métodos salientados adiante,por meio dos métodos descritos nos exemplos ou por meiode métodos análogos.

Um composto do tipo A (vide pedidos de pa-tentes WO 2003/093267, WO 2004/002957, WO 2004/096769,WO 2004/096803, WO 2004/096799, e WO 2004/096366) taiscomo descritos no Esquema 1 pode ser transformado em umcomposto do tipo B, em que L' representa um precursordo grupo L tal como definido para a fórmula (I) , e Rapara um substituinte de éster típico, tal como metil,etil, ou benzil. PG representa um grupo de proteçãoadequado, tipicamente um carbamato, um benzil, ou ummetil. O Esquema 1 representa um composto da fórmula(I) em que m é o inteiro 1; o mesmo esquema pode serusado se m e η representarem os inteiros 0, mas m foiomitido no Esquema com o propósito de clareza. L' podeser modificado ao longo da síntese. A amina tem de serpreparada separadamente (vide infra para exemplos espe-cificos). Uma alquilação da cetona de um composto dotipo B conduz a um composto do tipo C, ou, se o segmen-to U-V-W já foi conseguido, a um composto do tipo D.Va representa um precursor de V tal como definido paraa fórmula (I), e pode ser transformado ao longo da sín-tese. AA obtenção do segmento U-V-W em um composto dotipo C conduz a um composto do tipo D. A alquilação ouacilação do álcool terciário em um composto do tipo Dconduz a um composto do tipo Ε. A obtenção final dosubstituinte L conduz a um composto do tipo F. Final-mente, a desproteção proporciona um composto da fórmula (I) ·

Esquema 1

<formula>formula see original document page 25</formula>

A alquilação de um composto do tipo B paraum composto do tipo C proporciona uma mistura de dias-tereoisômeros. Estes diastereoisômeros podem ser sepa-rados nesta etapa, ou em qualquer etapa posterior (com-postos do tipo D, E, F, ou o composto da fórmula (I)).

A preparação de diversos substituintes U-V-W- ou Va-W- encontra-se descrita nos pedidos de pa-tentes mencionados anteriormente. De outro modo, umsubstituinte de pirrolidina pode ser vinculado a um a-nel aromático por um acoplamento catalsiado por cobreou paládio tal como descrito no Esquema 2. Sob deter-minadas circunstâncias não há necessidade de um metalde transição para promover a catálise desta reação. Umcomposto do tipo G, em que PG' representa um grupo deproteção adequado, será transformado em um composto dotipo H, em que X' representa CH ou N. Se W na fórmula(I) representar um tiazolil, a mesma química poderá serigualmente aplicada.

Esquema 2

<formula>formula see original document page 26</formula>

Se V representa -O-CH2-Q-, a metade de i-soxazolil é preparada por cicloadição. Esta cicloadi-ção pode ser realizada no fragmento W-Va- em um compos-to do tipo C, conduzindo a um composto do tipo D talcomo descrito no Esquema 1. De outro modo, a cicloadi-ção pode ser realizada separadamente tal como descrito,por exemplo, no Esquema 3. A cicloadição de um compos-to do tipo J com um aldeido freqüentemente disponívelcomercialmente conduz a um composto do tipo K. Natu-ralmente, a metade de aldeido pode ser construída nofragmento W-Va, e poderá ser construído um composto daforma U-CCH, para proporcionar depois de cicloadiçãooutra metade de isoxazolil. Os mesmo princípios podemser usados para preparar metades de oxadiazolil, utili-zando-se metodologias descritas na literatura.

Esquema 3

<formula>formula see original document page 27</formula>

Também um hidroximetil isoxazol (Esquema4) pode ser preparado a partir do aldeido mencionado noEsquema 3 e álcool de propargil. 0 acoplamento a umderivado de fenil ou heteroaril, em que X'' tipicamenterepresenta -0H, -Br, ou -I, conduz a um composto do tipo K.

Esquema 4<formula>formula see original document page 28</formula>

Os exemplos seguintes servem para ilustrara presente invenção de maneira mais detalhada. Entre-tanto, os mesmos não pretendem limitar o seu escopo emhipótese alguma.

Parte Experimental

Abreviaturas (tais como usadas neste contexto):

AcOH ácido acético Ang angiotensina aq. aquoso Boc tert-butiloxicarbonil BSA albumina de soro bovino Bu butil BuLi n-butilitio Cy cicloexil dba acetone de dibenzilideno DIPEA diisopropiIetilamina DMAP 4-Ν,Ν-dimetilaminopiridina DMF Nr N-dimetilformamida DMPU 1,3-dimetil-3,4,5,6-tetraidro-2(1H)- piridiminona DMSO dimetilsulfóxidodppp 1,3-bis(difenylfosfino)propano

EDC-HCl cloridrato de eti-N,N-dimetilaminopropil-

carbodiimida

EIA imunoensaio de enzima

ELSD detecção por dispersão de luz de evapora-ção

eq. equivalente(s)

ES eletropulverização

ES+ eletropulverização, ionização positiva

Et etil

EtOAc etil acetato

EtOH etanol

FC cromatografia instantânea

h hora(s)

HOBt hidroxibenzotriazol

HPLC cromatografia de liquido de alto desempe-nho

LC-MS cromatografia de liquido - espectrometriade massa

Me metil

MeOH metanol

min minuto(s)

MS espectrometria de massa

NCS N-clorossuccinimida

org. orgânico

ρ para

PG grupo de proteção

rt temperatura ambientesat. saturado

sol. solução

TBAC cloreto de tetra-n-butilamônio

TBME tert-butil metil éter

tBu tert-butil

TFA ácido trifluoroacético

THF tetraidrofurano

TLC cromatografia de camada fina

tR tempo de retenção (em LC-MS ou HPLC) dado

em minutos

UV ultra violeta

Vis visível

xantfos 4,5-bis(difenilfosfino)-9,9-dimetilxanteno

Condições de HPLC- ou LC-MS (se não forem indicadas deoutro modo):

Analítico: Zorbax 59 SB Aqua column, 4.6 χ 50 mm prove-niente da Agilent Technologies. Eluentees: A: acetoni-trila; B: H2O + 0,5% TFA. Gradiente: 90% B -> 5% B du-rante 2 min. Fluxo: 1 ml/min. Detecção: UV/Vis + MS.

Preparativo: Zorbax SB Aqua column, 20 χ 500 mm prove-niente da Agilent Technologies. Eluentee: A: Acetoni-trila; B: H2O + 0,05% hidróxido de amônio (25% aq. ).

Gradiente: 80% B -» 10% B durante 6 min. Fluxo: 40ml/min. Detecção: UV + MS, ou UV + ELSD.

Quiral, analítico:

a) Coluna Regis Whelk, 4,6 χ 250 mm, 10 μπι. EluenteA: EtOH + 0,05% Et3N. Eluente B: hexano. Fluxo 1ml/min.

b) QuiralPak AD, 4, 6x250 mm, 5 μπι. Eluente A: EtOH +0,05% Et3N. Eluente B: hexano. Fluxo 1 ml/min.

c) QuiralCel OD, 4, 6x250 mm, 10 μπι. Eluente A: EtOH+0,1% Et3N. Eluente B: hexano. Fluxo 0,8 ml/min.Quiral, preparatório:

a) Coluna Regis Whelk 01, 50x250 mm e um fluxo de 100ml/min. Eluente A: EtOH + 0,05% Et3N. Eluente B: hexano.

b) QuiralCel OD, 20 μπι, 50 mm χ 250 mm, fluxo 100ml/min. Eluente A: EtOH + 0,1% Et3N. Eluente B: hexano.

5-Bromo-2-cloro-N-ciclopropilbenzamida

A um balão de vidro de fundo redondo seca-do por chama de 250 ml, equipado com barra de agitaçãomagnética e sob N2 foram adicionados ácido 5-bromo-2-clorobenzoico (10,0 g, 42,5 mmol) e DMF (3,9 ml, 51,0mmol) em tolueno (80 ml) . A sol. foi refrigerada para0°C, e cloreto de oxalil (4,4 ml, 51,0 mmol) foi adi-cionado gota a gota durante 1 h. A mistura resultantefoi submetida a agitação a O0C durante 2 h e então osvoláteis foram removidos. A mistura de reação brutaresultante foi dissolvida em CH2Cl2 (100 ml) e refrige-rada para 0°C em um banho de gelo. Ciclopropilamina(4,5 ml, 63,7 mmol) foi adicionada gota a gota durante1 h seguida por adição de DIPEA (11,8 ml, 85,0 mmol).A sol. resultante foi submetida a agitação sob tempera-tura ambiente durante 16 h. A mistura de reação foivazada em um funil separador de 1 1 que continha IM aq.HCl (600 ml). A mistura foi extraída com CH2Cl2 (6 χ250 ml). As camadas orgânicas combinadas foram lavadascom salmoura, submetidas a secagem sobre MgSO4, filtra-da e concentradas sob pressão reduzida. 0 produto foicristalizado a partir de hexanos/CH2Cl2 e isolado porfiltragem para proporcionar o composto do título (8,24g, 71%).

N-(5-bromo-2-clorobenzil)ciclopropilamina

Uma sol. de 5-bromo-2-cloro-W-ciclopro-pilbenzamida (12,0 g, 43,7 mmol) em THF (100 ml) foicolocada em um balão de vidro de fundo redondo de 250ml, equipado com uma barra de agitação magnética e sobN2. A sol. foi tratada com adição de BH3-Me2S gota agota (13,1 ml, 131 mmol), e a suspensão resultante foisubmetida a agitação sob temperatura ambiente for 1 h.

A mistura foi heated para refluxo durante 1 h, refrige-rada para a temperatura ambiente, e refrigerada lenta-mente com adição gota a gota de IM aq. HCl (25 ml). Asuspensão foi novamente submetida a refluxo durante 1h, refrigerada para a temperatura ambiente, e basifica-da para pH = 10-11 com NaOH IM aq.. A mistura foi va-zada em um funil de separação de 500 ml que continhaNaOH IM aq. (350 ml). A mistura foi extraída com EtOAc(3 χ 100 ml). As camadas orgânicas combinadas foramlavadas com salmoura, submetidas a secagem sobre MgSO4,filtradas e concentradas sob pressão reduzida. A aminabruta foi usada diretamente na etapa seguinte.

Procedimento geral para a aminação redutora de benzal-deídos substituídos com ciclopropilamina:

<formula>formula see original document page 33</formula>

Uma solução de benzaldeído substituído(17,8 mmol, 1,0 eq.), ciclopropilamina (3,13 ml, 44,5mmol, 2,5 eq.) e cianoboroidreto de sódio (1,34 g, 21,4raraol, 1,2 eq.) em MeOH (100 ml) foi tratada com adiçãogota a gota de AcOH glacial (3,06 ml, 53,4 mmol, 3,0eq. ) . A sol. resultante foi submetida a agitação sobtemperatura ambiente durante 16 h durante a noite. Amistura de reação foi resfriada rapidamente com adiçãogota a gota de NaHC03 aq. sat. e concentrada sob pres-são reduzida para remover o MeOH. 0 resíduo bruto foivazado em um funil separador de 250 ml que continhaNaHCO3 sat. aq. (150 ml), e extraído com EtOAc (3 χ 50ml) . As camadas orgânicas combinadas foram lavadas comsalmoura, submetidas a secagem sobre MgSO4, filtradas econcentradas sob pressão reduzida. Purificação por FCproporcionou o produto benzamina.

Procedimento geral para a Boc-proteção de ciclopropil-benzaminas:<formula>formula see original document page 34</formula>

Uma sol. da ciclopropilbenzamina (43,7nvmol, 1,0 eq.) em uma mistura bifásica de CH2Cl2 (50ml) e NaOH IM aq. (50 ml) foi tratada com Boc2O (15,1ml, 65,6 mmol, 1,5 eq.). A mistura foi submetida a a-gitação sob temperatura ambiente vigorosamente durante16 h. A mistura foi vazada em a funil separador de 500ml contendo H2O (300 ml), e extraída com CH2Cl2 (3 χ 100ml). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas comsalmoura, submetidas a secagem sobre MgSO4, filtradas econcentradas sob pressão reduzida. Purificação por FCproporcionou a amina Boc-protegida.

Procedimento geral para a alilação de ciclopropilbenza-minas Boc-protegidas:

<formula>formula see original document page 34</formula>

A um balão de vidro de fundo redondo outubo Schlenk secado por chama, sob N2 foi adicionadoPd[PCy3]2 (0,05 eq. ), CsF (2,0 eq. ) e o correspondentearil brometo (1,0 eq.). Se o aril cloreto estava sendousado como um material de partida, o dímero(Pd [PtBu3] Br) 2 (0, 025 eq. ) foi usado em vez do catali-sador Pd [PCy3] 2. 0 balão de vidro foi evacuado sobpressão reduzida (0,1 mm Hg) e atulhado com N2 (repeti-do 3 vezes). Os sólidos resultants foram dissolvidosin THF anidrico ou dioxana (0,15 M sol.) e adicionou-setri-n-butil alilestanho (1,5 eq.) e a mistura resultan-te foi submetida a refluxo durante 8-16 h, até TLC,ostrar o consumo completo do material de partida. Amistura de reação foi refrigerada para a temperaturaambiente, e filtrada através de um chumaço de silicagel em um funil de vidro sinterizado, lavagem com Et2O.o filtrado foi concentrado e purificado por FC paraproporcionar o correspondente derivado de alilbenzami-da.

Procedimento geral para a hidroboração/oxidação de a-lilbenzaminas:

<formula>formula see original document page 35</formula>

Em um balão de fundo Redondo secado porchama equipado com uma barra de agitação magnética foiadicionada a alilbenzamina (1,0 eq.) e THF anidrico(0,3 M sol.). A sol. foi refrigerada para O0C eBH3-Me2S (1,1 eq. ) foi adicionado gota a gota durante20 min. A sol. foi submetida a agitação a O0C durante1 h, então deixada aquecer para a temperatura ambiente,e submetida a agitação durante 2 h adicionais. A sol.foi refrigerada para a O0C e IM aq. NaOH foi adicionadogota a gota (CUIDADO - REAÇÃO EXOTÉRMICA), seguida poradição gota a gota de H2O2 30% aq. A mistura foi dei-xada aquecer para a temperatura ambiente, e submetida aagitação durante 2 h. A mistura foi vazada em um funilde separação contendo H2O e extraída com Et2O (3 ve-zes). As camadas orgânicas combinadas foram lavadascom salmoura, submetidas a secagem sobre MgSO4, filtra-das e concentradas sob pressão reduzida. Purificaçãopor FC proporcionou o produto de álcool desejado.

Procedimento geral para a clívagem/redução oxidante dealilbenzaminas:

<formula>formula see original document page 36</formula>

Uma sol. de alilbenzamina (1,0 eq. ) emCH2Cl2 (0,4 M sol.) foi refrigerada para -78°C e intro-duziu-se gás O3 na sol. utilizando-se um tubo de dis-persão de gás. 0 gás ozônio foi introduzido até todo omaterial de partida ter sido consumido, conforme deter-minado por TLC, e a mistura de reação manteve uma corlevemente azul. A reação foi submetida a agitação a -78°C durante 20 min, então adicionaram-se EtOH (0,5 Msol.) e NaBH4 (2,5 eq.). A mistura foi deixada aquecerpara a temperatura ambiente durante a noite (16 h). Amistura de reação foi resfriada rapidamente com adiçãogota a gota de NH4Cl sat. Aq. (5 ml), e vazada into afunil de separação contendo NH4Cl sat. aq. A misturafoi extraída com Et2O (3 vezes) . As camadas orgânicascombinadas foram lavadas com salmoura, submetidas a se-cagem sobre MgSO4, filtradas e concentradas sob pressãoreduzida. Purificação por FC proporcionou o álcool de-sej ado.

Procedimento geral para a eterificação de álcoois pri-mários aromáticos com iodeto de metila:

<formula>formula see original document page 37</formula>

Uma suspensão do álcool primário (1,0 eq.)em THF (0,25 M sol.) foi refrigerada para O0C e tratadacom NaH (60% em óleo, 2,0 eq.). A mistura resultantefoi submetida a agitação a O0C durante 30 min e entãosob temperatura ambiente durante outros 30 min. A sus-pensão foi novamente refrigerada para O0C e então MeI(8,0 eq.) foi adicionado em uma única parte. A misturade reação foi submetida a agitação a O0C durante 30min, sob temperatura ambiente durante 30 min, e entãoaquecida para refluxo durante 4 h até todo o materialde partida ser consumido conforme determinado por TLC.A mistura de reação refrigerada foi resfriada rapida-mente com adição gota a gota de sat. aq. NH4Cl e vazadaem um funil de separação contendo sat. aq. NH4Cl, e ex-traída com EtOAc (3 vezes). As camadas orgânicas com-binadas foram lavadas com salmoura, submetidas a seca-gem sobre MgSO4, filtradas e concentradas sob pressãoreduzida. Purificação por FC proporcionou o metil é-ter.

Procedimento geral para a desproteção de ciclopropil-benzaminas Boc-protegidas:

<formula>formula see original document page 38</formula>

A uma sol. de ciclopropilbenzamina Boc-protegida (1,0 eq.) em CH2Cl2 (0,1-0,5 M sol.) foi adi-cionado HCl 4 M em dioxana (5,0 eq.). A mistura resul-tante foi submetida a agitação sob temperatura ambientedurante 8-16 h until TLC mostrar completa conversão domaterial de partida. A reação foi vazada em um funilde separação contendo NaOH IM aq., e extraída comCH2Cl2 (3 vezes). Purificação por FC proporcionou aamina livre correspondente.

2-Bromo-5-cloro-piridina-4-carbaldeído

A uma sol. submetida a agitação de diiso-propilamina (20,9 ml, 148 mmol) em THF seco (350 ml) a-5°C foi adicionado gota a gota BuLi (1,6M em hexano,89,5 ml, 143 mmol), e a sol. resultante foi submetida aagitação durante 30 min a -5°C. A sol. foi deixada es-friar para -70°C, e uma sol. de 2-bromo-5-cloropiridina(25,0 g, 130 mmol) em THF (100 ml) foi adicionada gotaa gota a -70°C durante 15 min, de forma tal que a tem-peratura interna não excedeu -65°C. A mistura foi sub-metida a agitação a -70°C durante 30 min. DMF (10,52ml, 136 mmol) foi adicionado gota a gota durante 20 minde forma tal que a temperatura interna não excedeu -70°C. A mistura cor de laranja foi submetida a agita-ção a -70°C durante 40 min. A mistura foi deixada a-quecer para a temperatura ambiente, e foi vazada em umamistura de água (200 ml) e IM NaOH aq. (50 ml). A mis-tura foi extraida com EtOAc (2x), e os extratos orgâni-cos combinados foram lavados de volta com IM NaOH aq.(2x). Os extratos orgânicos foram submetida a secagemsobre MgSO4, filtrados, e os solvenets foram removidossob pressão reduzida. Purificação do bruto por FC (E-tOAc/heptano 1:9 -> 1:8 1:6 -» 1:4 1:2 1:1)proporcionou o composto do titulo (21,55 g, 72%). LC-MS: tR = 0,74 min; ES+: 295,01.

2-Bromo-5-cloro-4-dimetoximetil-piridina

A uma sol. de 2-bromo-5-cloro-piridina-4-carbaldeido (43,9 g, 199 mmol) em MeOH (800 ml) foramadicionados sucessivamente sob temperatura ambientetrimetil ortoformato (65,3 ml, 597 mmol) e monoidratode ácido p-toluenossulfônico (1,90 g, 10,0 mmol). Estamistura de reação foi então aquecida para refluxo du-rante 3 h. A mistura foi deixada esfriar para tempera-tura ambiente e foi concentrada sob pressão reduzida.

O resíduo foi dissolvido em CH2Cl2 e esta mistura foilavada com K2CO3 aq. a 10%. A camada orgânica foi sub-metida a secagem sobre MgSO4, filtrados, e os solventesforam removidos sob pressão reduzida. Secagem sob altovácuo proporcionou o composto do titulo (51,7 g, 97 %) .LC-MS: tR = 0,92 min; ES+: 309,06.

5-Cloro-4-dimetoximetil-2- (3-metoxi-propil) -piridina

A uma suspensão de Mg (911 mg, 37,5 mmol)e de iodo (um cristal) em THF seco (30 ml) foram adi-cionados gota a gota 5% da quantidade total de 1-bromo-3-metoxipropano (4,59 g, 30,0 mmol). A mistura foi a-quecida para refluxo com o auxilio de uma pistola tér-mica até ser iniciada a formação de Grignard. O res-tante do l-bromo-3-metoxipropano foi adicionado lenta-mente, enquanto prosseguia uma reação exotérmica. De-pois do final da adição, a mistura de reação foi subme-tid^ β agitação sob refluxo durante 20 min, e foi dei-xada esfriar para a temperatura ambiente. Esta sol. deGrignard (IM em THF, 23,5 ml, 23,5 mmol) foi adicionadagota a gota a uma mistura de 2-bromo-5-cloro-4-dimetoximetil-piridina (2,50 g, 9,38 mmol) eNi(dppp)CI2 (495 mg, 0,938 mmol) em THF (50 ml) a 0°C.

A mistura de reação foi submetida a agitação sob tempe-ratura ambiente durante 30 min, e foi então aquecidapara refluxo durante 2 h. A mistura foi deixada esfri-ar para a temperatura ambiente, e foi dissolvida comEtOAc. Esta mistura foi lavada com NaHC03 aq. sat. Acamada orgânica foi submetida a secagem sobre MgSO4,filtrados, e os solventes foram removidos sob pressãoreduzida. Purificação do resíduo por FC (heptano -»EtOAc/heptano 1:1) proporcionou o composto do título(1,51 g, 62%). LC-MS: tR = 0,80 min; ES+: 260,15.

5-Cloro-2- (3-metoxi-propil) -piridina-4-carbaldeído

Dissolveu-se 5-cloro-4-dimetoximetil-2-(3-metoxi-propil)-piridina (25,5 g, 98,2 mmol) em IM HClaq. (500 ml), e a mistura foi aquecida para 80°C duran-te 2 h. A mistura foi deixada esfriar para a tempera-tura ambiente, e EtOAc foi adicionado. A mistura foirefrigerada para 0°C, e foi basif içada com 2,5M NaOHaq. até ser alcançado um pH = 10. As camadas foram se-paradas, e a camada orgânica foi submetida a secagemsobre MgSO4, filtrados, e concentrada sob pressão redu-zida. Secagem do resíduo sob alto vácuo proporcionou ocomposto do título bruto (98,1 mmol, 99%) que foi usadosem qualquer outra purificação. LC-MS: tR = 0,62 min;ES+: 246,12.

[5-Cloro-2- (3-metoxi-propil) -piridin-4-ilmetil] -ciclopropil-amina

Uma mistura de 5-cloro-2-(3-metoxi-propil ) -piridina-4-carbaldeído (21,0 g, 98,2 mmol) eciclopropilamina (13,8 ml, 196 mmol) em MeOH (450 ml)foi submetida a agitação sob temperatura ambiente du-rante a noite. NaBH4 (4,83 g, 128 mmol) foi adicionadaa 0°C, e a mistura foi submetida a agitação sob tempe-ratura ambiente durante a noite. Gelo foi adicionado,e a mistura foi concentrada sob pressão reduzida. 0produto bruto foi dissolvido em EtOAc, e esta misturafoi lavada com IM NaOH aq. . A camada aq. foi extraídade volta com EtOAc. Os extratos orgânicos combinadosforam submetidos a secagem sobre MgS04, filtrados, e ossolventes foram removidos sob pressão reduzida. Puri-ficação do bruto por FC (EtOAc/heptano 1:5 -» 1:4 -»1:3 1:1 -» 3:1 -> EtOAc) proporcionou o composto dotítulo (11,8 g) e [5-cloro-2-(3-metoxi-propil)-piridin-4-ilmetileno]-ciclopropil-amina (10,7 g) . Esta iminanão reagida foi dissolvida em MeOH (20 ml), e esta sol.foi refrigerada para 0°C. Adicionou-se NaBH4 (3,20 g,84,6 mmol), e a mistura foi submetida a agitação sobtemperatura ambiente durante a noite. NaBH4 (3,20 g,84,6 mmol) foi adicionado novamente, e a mistura foisubmetida a agitação durante 3 dias. Adicionou-se geloà mistura de reação e a mistura foi concentradas sobpressão reduzida. 0 produto bruto foi dissolvido emEtOAc e a mistura resultante foi lavada com IM NaOH aq.

A fase aq. foi extraída de volta com EtOAc. Os extra-tos orgânicos combinados foram submetidos a secagem so-bre MgSO4, filtrados, e os solventes foram removidossob pressão reduzida. Purificação do bruto por FC (E-tOAc/heptano 1:3 -> 1:2 -» 1:1 -» EtOAc) proporcionou ocomposto do título (9,4 g) . As frações do composto dotítulo foram misturadas entre si (21,2 g, 85%). LC-MS:tR = 0,55 min; ES+: 296,16.

2-(4-Bromo-fenoxi)-etanolDissolveu-se 4-bromofenol (1003 g, 0,58mol) em xilenos (220 ml). Adicionaram-se [l,3]dioxo-lan-2-ona (53,7 g, 0,61 mol) e imidazol (592 mg, 8,70mmol). A mistura foi aquecida para 140°C durante 3 di-as. A mistura foi deixada esfriar para a temperaturaambiente, e os solventes foram removidos sob pressãoreduzida. Secagem do residuo sob alto vácuo proporcio-nou o composto do titulo (130 g, quantitativo). LC-MS:tR = 0,81 min.

2-(4-Bromo-fenoxi)-etil éster de ácido metanossulfônico

Dissolveu-se 2-(4-bromo-fenoxi)-etanol(125 g, 0,576 mol) em CH2Cl2 (650 ml), e a sol. foi re-frigerada para 0°C. Et3N (110 ml, 0, 864 mol), entãoadicionou-se gota a gota mesil cloreto (67,1 ml, 0,864mol) a uma velocidade tal que a temperatura não subiualém de 10°C (cerca de 60 min). A mistura foi submeti-da a agitação a 0°C durante 1 h, então sob temperaturaambiente durante a noite. A mistura foi diluída comCH2Cl2, e lavada com salmoura (2x). A fase aq. foi ex-traída de volta com CH2Cl2. Os extratos orgânicos com-binados foram submetidos a secagem sobre MgSO4, filtra-dos, e os solventes foram removidos sob pressão reduzi-da. Secagem do resíduo dob alto vácuo proporcionou ocomposto do título bruto (174 g, rendimento quantitati-vo) que foi usado sem qualquer outra purificação. LC-MS: tR = 0,92 min.

l-[2- (4-Bromo-fenoxi) -etoxi]-2, 6-dicloro-4-metil-benzenoDissolveu-se K2CO3 (29,3 g, 212 mmol) emágua (162 ml). Adicionou-se 1-propanol (150 ml). Adi-cionou-se umuma sol. de 2,6-dicloro-p-cresol (25 g, 141mmol) em 1-propanol (150 ml). Adicionou-se 2-(4-bromo-fenoxi)-etil éster de ácido metanossulfônico (41,6 g,141 mmol) . A mistura foi submetida a agitação a 85°Cdurante 6 h. 0 banho de oleo de aquecimento foi remo-vido, e adicionou-se água (330 ml) gota a gota quando atemperatura interna alcançou 78°C. A suspensão de corbege foi deixada esfriar para a temperatura ambiente.A mistura foi filtrada, e o precipitado foi lavado comágua. Secagem do precipitado sob alto vácuo a 30°C du-rante 48 h proporcionou o composto do titulo (43 g, 81%) . LC-MS: tR = 1,15 min.

2-(2,6-Dicloro-4-metil-fenoxi)-etanol

Em um balão de vidro de três gargalos e-quipado com um contagota de gás e um sistema de refri-geração eficiente, uma mistura de 2,6-dicloro-p-cresol(20,0 g, 113 mmol), [1,3] dioxolan-2-ona (9,95 g, 113mmol) e imidazol (115 mg, 1,70 mmol) foi aquecida para160°C durante 25 h. A mistura foi deixada esfriar paraa temperatura ambiente. Purificação por meio de FC(Et20/heptano 1:1) proporcionou o composto do titulo(18,7 g, 75%). LC-MS: tR = 0,88 min.5-Bromo-2- [2- (2 , 6-dicloro-4-metil-fenoxi) -etoxi] -piridina

Uma solução de 2-(2,6-dicloro-4-metil-fenoxi) -etanol (18,6 g, 84 mmol) em THF (360 ml) foirefrigerada para 0°C. NaH (cerca de 55% em óleo, 6,60g, cerca de 153 mmol) foi adicionada por partes, e amistura foi submetida a agitação sob temperatura ambi-ente durante 30 min. Umuma sol. de 2,5-dibromopiridina(18,0 g, 76,3 mmol) em THF (60 ml) foi adicionada gotaa gota, e a mistura foi aquecida para refluxo durante90 min. A mistura foi deixada esfriar para temperaturaambiente, e gelo foi adicionado cuidadosamente. Ossolventes foram parcialmente removidos sob pressão re-duzida, e o resíduo foi diluído com EtOAc. Esta mis-tura foi lavada com NH4Cl sat. aq. A camada aq. foiextraída de volta com EtOAc (2x). Os extratos orgâni-cos combinados foram lavados com salmoura, submetidos asecagem sobre MgSO4, filtrados, e os solventes foramremovidos sob pressão reduzida. Purificação do brutopor FC (EtOAc/heptano 3:97) proporcionou o composto dotítulo (22,7 g, 79%). LC-MS: tR = 1,13 min; ES+:378, 08 .

2-Cloro-3,6-difluoro-benzaldeido oxima

Dissolveu-se 2-cloro-3,6-difluoro-benzal-deido (25,0 g, 142 mmol) em CH3CN (175 ml). A esta so-lução adicionou-se NaHCO3 (35,7 g, 424 mmol), e a mis-tura foi submetida a agitação vigorosamente durante 5min. Adicionou-se água (350 ml), e a mistura foi sub-metida a agitação durante 10 min. Adicionaram-seNH2OH-HCl (19,7 g, 283 mmol) e TBAC (1,97 g, 7,08mmol), e a mistura de reação foi submetida a agitaçãosob temperatura ambiente durante 1 h. Adicionou-se A-cOH (20 ml) gota a gota até pH 6-7. A mistura foi ex-traída com Et2O (3x). Os extratos orgânicos combinadosforam lavados com salmoura, submetidos a secagem sobreNa2SO4, filtrados, e os solventes foram removidos sobpressão reduzida. Secagem sob alto vácuo proporcionouo composto do título (25,0 g, 92%). LC-MS: tR = 0,93min.

(S)-1-(5-Bromo-piridin-2-il)-pirrolidin-3-ol

Uma mistura de 2,5-dibromopiridina (12,2g, 51,5 mmol) e (S) -hidroxipirrolidina (2,80 g, 32,1mmol) em tolueno (50 ml) foi aquecida para refluxo du-rante a noite. A mistura foi deixada esfriar para atemperatura ambiente, e os solventes foram removidossob pressão reduzida. O resíduo foi dissolvido com E-tOAc (150 ml), e a mistura foi lavada com K2CO3 aq. a10%. A camada orgânica foi submetida a secagem sobreMgSO4, filtrada, e os solventes foram removidos sobpressão reduzida. Purificação do resíduo por FC (hep-tano -» heptano/EtOAc 1:2) proporcionou o composto dotítulo (3,62 g, 46%). LC-MS: tR = 0,48 min; ES+:243,15.

(R) -5-Bromo-2- [3- (2 , 6-dicloro-4-metil-fenoxi) -pirrolidin-l-il]-piridina

Azodicarboxilato dipiperidida (11,7 g,4 5,4 mmol) foi adicionado a umuma sol. de (S)-I-(5-bromo-piridin-2-il)-pirrolidin-3-ol (8,82 g, 36,3 mmol)e 2,6-dicloro-p-cresol (7,37 g, 40,0 mmol) em tolueno(200 ml). A mistura foi desgaseifiçada com nitrogêniodurante 5 min, e adicionou-se PBu3 (85%, 15,8 ml, 46,2mmol). A mistura foi aquecida rapidamente para 100°C,e submetida a agitação sob esta temperatura durante 2h. A mistura foi deixada esfriar para a temperaturaambiente, e foi diluída com heptano (200 ml). A mistu-ra foi filtrados, e o filtrado foi evaporado sob pres-são reduzida. Purificação do resíduo por FC (EtO-Ac/heptano 1:7) proporcionou um composto do título bru-to que foi diluído com CH2Cl2. Esta mistura foi lavadacom NaOH IM aq.. A camada orgânica foi submetida a se-cagem sobre MgSO4, filtrada, e os solventes foram remo-vidos sob pressão reduzida. Secagem do resíduo sob al-to vácuo proporcionou o composto do titulo puro (13,5g, 93%). LC-MS: tR = 0,92 min; ES+: 402,98.

tert-Butil éster de ácido (rac.)-3-[ciclopropil-(2,3-dimetil-benzil) -carbamoil] -4-oxo-piperidina-l-carboxilico (Bl)

Umuma sol. de 1-tert-butil éster de ácido4-hidroxil-5, 6-diidro-2fí-piridina-l, 3-dicarboxílico (WO2004/105738, 1,00 g, 3,89 mmol), ciclopropil-(2, 3-dimetil-benzil)-amina (681 mg, 3,89 mmol) e monoidratode ácido p-toluenossulfônico (92,4 mg, 0,486 mmol) emtolueno anídrico (40 ml) foi submetida a agitação sobrefluxo durante a noite em um balão de vidro equipadocom purgador Dean-Stark. A mistura de reação foi dei-xada esfriar para a temperatura ambiente. Adicionou-seEtOAc (120 ml), e a mistura resultante foi lavada su-cessivamente com NaHCO3 sat. aq. (2x), HCl (1M aq. lx),e finalmente com NaHCO3 sat. aq. (Ix) . A camada orgâ-nica foi submetida a secagem sobre MgSO4, filtrada, eos solventes foram removidos sob pressão reduzida. Pu-rificação do resíduo por FC (heptano -» heptano/EtOAc50:50) proporcionou o composto do titulo (566 mg, 36%).LC-MS: tR = 1,02 min; ES+: 401,02.

tert-Butil éster de ácido (rac.)-3-{[2-cloro-5-(2-metoxi-etil) -benzil] -ciclopropil-carbamoil)-4-oxo-piperidina-l-carboxilico (B2)

Umuma sol. de 1-tert-butil éster 3-metil éster de ácido 4-hidroxi-5, 6-diidro-2íí-piridina-l, 3-dicarboxílico (WO 2004/105738, 4, 83 g, 18,8 mmol) , [2-cloro-5-(2-metoxi-etil)-benzil]-ciclopropil-amina (3,00g, 12,5 mmol) e monoidrato de ácido p-toluenossulfônico(298 mg, 1,56 mmol) em tolueno anídrico (188 ml) foisubmetida a agitação sob refluxo (banho de óleo a130°C) durante 24 h em um balão de vidro equipado compurgador Dean-Stark. A mistura foi deixada esfriar pa-ra temperatura ambiente e deixada durante o fim de se-mana. Adicionou-se EtOAc (100 ml), e a mistura resul- tante foi lavada successivamente com NaHCO3 sat. aq.,HCl IM aq. (2x), e com salmoura. A camada orgânica foisubmetida a secagem sobre MgSO4, filtrada, e os solven-tes foram removidos sob pressão reduzida. Purificaçãodo resíduo por FC (heptano heptano/EtOAc 40:60) pro-porcionou o composto do título (2,39 g, 41%). LC-MS:tR = 1,03 min; ES+: 465,43.

tert-Butil éster de ácido(rac.)-3-{[5-cloro-2-(3-metoxi-propil) -pi.ridin-4-ilmetil] -ciclopropil-carbamo-il}-4-oxo-piperidina-l-carboxílico (B3)

Uma solução de 1-tert-butil éster 3-metiléster de ácido 4-hidroxi-5,6-diidro-2íí-piridina-l, 3-dicarboxílico (WO 2004/105738, 2,00 g, 7,77 mmol), [5-cloro-2-(3-metoxi-propil)-piridin-4-ilmetil] -ciclopropil-amina (1,98 g, 7,77 mmol) e monoidrato deácido p-toluenossulfônico (185 mg, 0,972 mmol) emtolueno anídrico (78 ml) foi submetida a agitação sobrefluxo durante a noite em um balão de vidro equipadocom purgador Dean-Stark. Adicionou-se 1-tert-butil és-ter 3-metil éster de ácido 4-hidroxi-5,6-diidro-2H-piridina-1,3-dicarboxíIico (500 mg, 1,94 mmol), e amistura foi aquecida para refluxo durante 4 h. A mis-tura foi deixada esfriar para a temperatura ambiente.

Adicionou-se EtOAc, e a mistura foi lavada com NaHCO3sat. aq., IM HCl aq., e NaHCO3 sat. aq. A camada orgâ-nica foi submetida a secagem sobre MgSO4, filtrada, eos solventes foram removidos sob pressão reduzida. Pu-rificação do bruto por FC (EtOAc/heptano 7:3) propor-cionou o composto do título (1,70 g, 46%). LC-MS: tR =0,90 min; ES+: 480,39.tert-Butil éster de ácido (rac.)-(3S*f 4R*)-3-[ciclopropil- (2 ,3-dimetil-benzil) -carbamoil] -4-{4- [2-(2 , 6-dicloro-4-metil-fenoxi) -etoxi] -fenil}-4-hidroxi-piperidina-l-carboxílico (Dl)

ümuma sol. de l-[2-(4-bromo-fenoxi)-etoxi]-2, 6-dicloro-4-metil-benzeno (537 mg, 1,43 mmol) em THFseco (15 ml) a -78°C foi tratada com BuLi (1,6M em he-xano, 0,428 ml, 1,56 mmol). Depois de 30 min esta so-lução foi canulada em umuma sol. de composto Bl (520mg, 1,30 mmol) em THF seco (15 ml) a -78°C. Depois de1 h, a mistura foi vazada em NH4Cl sat. aq., extraídacom EtOAc (2x) , submetida a secagem sobre Na2SC>4, fil-trada, e os solventes foram removidos sob pressão redu-zida. Purificação do resíduo por FC (heptano —» hepta- no/EtOAc 70:30) proporcionou o composto do título (89mg, 10%). LC-MS: tR = 1,23 min; ES+: 697,16. ·

tert-Butil éster de ácido (rac.)-(3R*, 4S*)-3-{[2-cloro-5- (2-metoxi-etil) -benzil] -ciclopropil-carbamoil}-4-{4- [2- (2 , 6-dicloro-4-metil-fenoxi) -etoxi] -fenil}-4- hidroxi-piperidina-l-carboxilico (D2)

umuma sol. de l-[2-(4-bromo-fenoxi)-etoxi]-2,6-dicloro-4-metil-benzeno (4,04 g, 10,8 mmol) em THF(107 ml) a -78°C foi tratada com BuLi (1,6M em hexano,7,38 ml, 11,8 mmol). Depois de 30 min, adicionou-seDMPU (2,85 ml, 23,7 mmol), e a mistura foi submetida aagitação durante 5 min. Umuma sol. de composto B2(2,00 g, 4,30 mmol) em THF (14 ml) foi adicionada Ien-tamente. A mistura foi submetida a agitação durante 15min a -78°C, e adicionou-se NH4Cl sat. aq. (100 ml) . Amistura foi deixada aquecer para a temperatura ambien-te, e os solventes foram parcialmente removidos sobpressão reduzida. 0 resíduo aquoso foi diluído comNH4Cl aq. sat. (50 ml), e a mistura foi extraída comEtOAc (3x). Os extratos orgânicos combinados foramsubmetidos a secagem sobre MgSO4, filtrados, e os sol-ventes foram removidos sob pressão reduzida. Purifica-ção do bruto por FC (heptano -» EtOAc/heptano 40:60)proporcionou o composto do título (380 mg, 12%) . LC-MS: tR = 1,27 min; ES+: 763,22.

tert-Butil éster de ácido (rac.)-(3R*, 4S*)-3'-{[2-cloro-5- (2-metoxi-etil) -benzil] -ciclopropil-carbamoil}-6- [2- (2 , 6-dicloro-4-metil-fenoxi) -etoxi] -4 ' -hidroxi3 ' , 4 ' , 5',6'-tetraidro-2 »H-[3,4']bipiridinil-11 -carboxilico (D3)

Colocaram-se aparas de Mg (535 mg, 22,0mmol) e LiCl anídrico (848 mg, 20,0 mmol) em um balãode vidro seco em um banho de óleo a 1200C durante anoite sob alto vácuo. Uma vez que este foi refrigeradosob N2, sem abertura do balão de vidro, adicionou-seTHF (10 ml) . Adicionou-se lentamente umuma sol. decloreto de iso-propil em THF (10 ml) sob temperaturaambiente, e a mistura foi submetida a agitação durante12 h sob temperatura ambiente. A sol, IM cinza resul-tante está pronta para ser usada mas não deverá serguardada por mais que 24 h. Tratou-se 5-bromo-2-[2-(2, 6-dicloro-4-metil-fenoxi)-etoxi]-piridina (3040 mg,8,07 mmol) em THF seco (80,6 ml) com a sol. Grignardpreviamente preparada (1M, 8,48 ml, 8,48 mmol). A mis-tura foi submetida a agitação durante 4 h sob tempera-tura ambiente. A sol. Grignard de iso-propil (1M ,8,00 ml, 8,00 mmol) foi adicionada novamente, e a mis-tura foi submetida a agitação durante 2 h. Uma sol. decomposto B2 (1500 mg, 3,226 mmol) em THF seco (15 ml)foi adicionada, e a mistura foi submetida a agitaçãosob temperatura ambiente durante 15 min. A mistura foivazada sobre NH4Cl aq. sat., e extraída com EtOAc. Osextratos orgânicos combinados foram submetidos a seca-gem sobre Na2SO4, filtrados, e os solventes foram remo-vidos sob pressão reduzida. Purificação do resíduo porFC (heptano heptano/EtOAc 70:30) proporcionou o com-posto do título (1,74 g, 71%). LC-MS: tR = 1,23 min;ES+: 764,49.

tert-Butil éster de ácido (rac.)-(3R*, 4S*)-6-[3-(2-cloro-3,6-difluoro-fenil)-isoxazol-5-ilmetoxi]-3'-{[2-cloro-5- (2-metoxi-etil) -benzil] -ciclopropil-carbamoil}-4 ' -hidroxi-3 ' , 4 ' , 5 ' , 6 ' -tetraidro-2 ■ H- [3 , 4 ' ] bipiridinil-1'-carboxilico (D4)

Aparas de Mg (535 mg, 22,0 mmol) e LiClanídrico (848 mg, 20,0 mmol) foram colocadas em umbalão de vidro seco disposto em um banho de óleo a120 0C durante a noite sob alto vácuo. Uma vez queestas foram refrigeradas sob N2, sem abertura do balãode vidro, adicionou-se THF (10 ml). Adicionu-se lenta-mente umuma sol. de cloreto de iso-propil em THF (10ml) sob temperatura ambiente, e a mistura foi submetidaa agitação durante 12 h sob temperatura ambiente. Asol,-IM cinza resultante está pronta para ser usada,mas não deverá ser guardada mais do que 24 h. Umumasol. de composto Kl (1,08 g, 2,69 mmol) em THF seco (27ml) foi tratada sob temperatura ambiente com a sol.Grignard previamente preparada. (1M, 3,76 ml, 3,76mmol). A mistura foi submetida a agitação sob tempera-tura ambiente e a formação de Grignard foi verificada acada uma hora. Depois de 5 h, umuma sol. de compostoB2 (500 mg, 1,08 mmol) em THF seco (10 ml) foi adicio-nada, e a reação foi submetida a agitação sob tempera-tura ambiente durante 1 h. A mistura foi vazada emNH4Cl aq. sat., e a mistura foi extraída com EtOAc. Osextratos orgânicos combinados foram submetidos a seca-gem sobre Na2SO4, filtrados, e os solventes foram remo-vidos sob pressão reduzida. Purificação do resíduo porFC (heptano -» EtOAc/heptano 30:70) proporcionou o com-posto do título (275 mg, 33%). LC-MS: tR = 1,20 min;ES+: 787,64.

Mistura de tert-butil éster de ácido (3'R, 4'S)-3'-{ [2-Cloro-5- (2-metoxi-etil) -benzil] -ciclopropil-carbamoil}-6- [ (R) -3- (2 , 6-dicloro-4-metil-fenoxi) -pirrolidin-l-il] -4 1 -hidroxi-3 ' ,4' ,5' , 6 '-tetraidro-2 ' H-[3, 4 ' Jbipiridinil-1'-carboxilico e de tert-butil éster de ácido (3'S,4 rR) -3'-{[2-Cloro-5-(2-metoxi-etil)-benzil]-ciclopropil-carbamoil}-6- [ (R) -3- (2 , 6-dicloro-4-metil-fenoxi)-pirrolidin-l-il]-4'-hidroxi-31,4 ' ,5 ' , 6' -tetraidro-2' H- [3,4' ]bipiridinil-l1 -carboxilico (D5)

Aparas de Mg (535 mg, 22,0 mmol) e LiClanidrico (848 mg, 20,0 mmol) foram colocados em um ba-lão de vidro seco em um banho de óleo a 1200C durante anoite sob alto vácuo. Uma vez que este foi refrigeradosob N2, sem abertura do balão de vidro, adicionou-seTHF (10 ml). Umuma sol. de cloreto de iso-propil emTHF (10 ml) foi adicionada lentamente sob temperaturaambiente, e a mistura foi submetida a agitação durante12 h sob temperatura ambiente. A ΙΜ-sol. cinza resul-tante está pronta para ser usada, mas não deverá serguardada durante mais do que 24 h. (R)-5-Bromo-2-[3-(2, 6-dicloro-4-metil-fenoxi)-pirrolidin-l-il]-piridina(2,16 g, 5,38 mmol) em THF seco (61 ml) foi tratado sobtemperatura ambiente com uma sol. de Grignard previa-mente preparada (1M, 8,47 ml, 8,47 mmol). A misturafoi submetida a agitação sob temperatura ambiente e aformação da Grignard foi verificada a cada uma hora.Depois de 8 h, adicionou-se umuma sol. do composto B2(1,13 g, 2,42 mmol) em THF seco (11 ml) e a reação foisubmetida a agitação sob temperatura ambiente durante 1h. A mistura foi vazada em NH4Cl aq. sat., e a misturafoi extraída com EtOAc. Os extratos orgânicos combina-dos foram submetidosa a secagem sobre Na2SO4, filtra-dos, e os solventes foram removidos sob pressão reduzi-da. Purificação do resíduo por FC (heptano EtO-Ac/heptano 30:70) proporcionou a mistura dos compostosdo título (1,29 g, 68%). LC-MS: tR = 1,03 min; ES+:787,77.

tert-Butil éster de ácido(rac.) -(3'R*r 4fS*)-3'-{[5-cloro-2- (3-metoxi-propil) -piridin-4-ilmetil] -ciclopropil-carbamoil}-6- [2- (2, 6-dicloro-4-metil-fenoxi) -etoxi] -4 ' -hidroxi-3 ' , 4 ' , 5 ' , 6' -tetraidro-2 ' H-[3,4']bipiridinil-l'-carboxilico (D6)

Aparas de Mg (535 mg, 22,0 mmol) e LiClanídrico (848 mg, 20,0 mmol) foram colocados em um ba-lão de vidro seco em um banho de óleo a 1200C durante anoite sob alto vácuo. Uma vez que este foi refrigeradosob N2, sem abertura do balão rip vidro,- adicionou-seTHF (10 ml). Umuma sol. de cloreto de iso-propil emTHF (10 ml) foi adicionada lentamente sob temperaturaambiente, e a mistura foi submetida a agitação durante12 h sob temperatura ambiente. A ΙΜ-sol. cinza resul-tante está pronta para ser usada, mas não deverá serguardada durante mais do que 24 h. Tratou-se 5-bromo-2-[2-(2, 6-dicloro-4-metil-fenoxi)-etoxi]-piridina (2,02g, 5,37 mmol) em THF seco (54 ml) sob temperatura am-biente com uma sol. de Grignard previamente preparada(1M, 7,51 ml, 7,51 mmol). A mistura foi submetida aagitação sob temperatura ambiente e a formação da Grig-nard foi verificada a cada uma hora. Depois de 5 h,adicionou-se umuma sol. do composto B2 (1,03 g, 2,15mmol) em THF seco (10 ml) e a reação foi submetida aagitação sob temperatura ambiente durante 1 h. A mis-tura foi vazada em NH4Cl aq. sat., e a mistura foi ex-traída com EtOAc. Os extratos orgânicos combinados fo-ram submetidos a secagem sobre Na2SO4, filtrados, e ossolventes foram removidos sob pressão reduzida. Puri-ficação do resíduo por FC (heptano -> EtOAc/heptano2:7) proporcionou o composto do título (921 mg, 55%).LC-MS: tR = 1,19 min; ES+: 779,64.

tert-Butil éster de ácido (rac.) -(3'R*, 4'S*)-3'-{[5-cloro-2- (3-metoxi-propil) -l-oxi-piridin-4-ilmetil] -ciclopropil-carbamoil}-6- [2- (2, 6-dicloro-4-metil-feno-xi) -etoxi]-4'-hidroxi-3',4',5',6'-tetraidro-2'H-[3,4']bipiridinil-11-carboxilico (D7)

Uma sol. de composto D6 (4 6 mg, 0,603mmol) em CH2Cl2 seco (6,00 ml) foi tratada sob tempera-tura ambiente com ácido 3-cloroperbenzóico (70%, 166mg, 0,675 mmol), e a mistura foi submetida a agitaçãosob temperatura ambiente durante 2 h. A mistura foivazada sobre NaHCO3 aq. sat. e extraída com EtOAc. 0extrato orgânico foi lavado com NaHCO3 aq. sat. (2x) ,foi submetido a secagem sobre Na2SO4, filtrado, e ossolventes foram removidos sob pressão reduzida. Puri-ficação do resíduo por FC (heptano heptano/EtOAc50:50) proporcionou o composto do título (347 mg, 73%).

5-Bromo-2- [3- (2-cloro-3, 6-difluoro-fenil) -isoxazol-5-ilmetoxi]-piridina (Kl)

Dissolveram-se 2,5-dibromopiridina (31,4g, 132 mmol) e o composto Ll (25,0 g, 102 mmol) em to-lueno seco (1,00 L) sob nitrogênio. Adicionaram-se àmistura tert-BuONa (14,7 g, 153 mmol), xantfos (3,54 g,6,12 mmol) e Pd2 (dba)3·CHCl3 (1,83 g, 2,00 mmol). Amistura foi aquecida para refluxo durante a noite, efoi deixada refrigerar para a temperatura ambiente. Amistura foi lavada com NaHCO3 aq. sat.e salmoura. Acamada orgânica foi submetida a secagem sobre MgSO4,filtrada, e os solventes foram removidos sob pressãoreduzida. Purificação do resíduo por FC (EtOAc/heptano10:90) proporcionou o composto do título (17,4 g, 43%).LC-MS: tR = 1,08 min.

[3- (2-Cloro-3 , 6-difluoro-fenil) -isoxazol-5-il] -metanol (Ll)

Uma sol. de 2-cloro-3,6-difluoro-benzal-deido oxima (21,3 g, 111 mmol) em DMF (66,7 ml) foi a-dicionada gota a gota a uma sol. de NCS (14,9 g, 111mmol) e piridina (1,78 ml) em DMF (222 ml). A misturafoi submetida a agitação durante 1 h sob temperaturaambiente, e uma sol. de álcool de propargil (4,99 g,8 9,1 mmol) em DMF (71 ml) foi adicionada gota a gota.

A mistura de reação foi heated até 85°C, e uma sol. deEt3N (15,5 ml, 111 mmol) em DMF (89,3 ml) foi adiciona-da lentamente. A mistura de reação foi submetida a a-gitação a 85°C durante 60 min, e foi deixada esfriarpara a temperatura ambiente. A mistura foi diluída comágua (533 ml), e foi extraída com EtOAc (2x) . Os ex-tratos orgânicos combinados foram lavados com água esalmoura, foram submetidos a secagem sobre Na2SO4, fil-trados, e os solventes foram removidos sob pressão re-duzida. Purificação do resíduo por FC (EtOAc/heptano40:60) proporcionou o composto do título (17,0 g, 78%).LC-MS: tR = 0,84 min; ES+: 287,12.

Etil éster de ácido 3-(Benzil-tert-butoxicarbonil-amino)-propiônico (Ml)

Adicionou-se Boc2O (5,53 g, 25,3 mmol) auma sol. de etil éster de N-benzil-p-alanina (3,40 ml,16,9 mmol) e DIPEA (11,6 ml, 67,6 mmol) em CH2Cl2 (200ml) a O0C. A mistura foi submetida a agitação durantea noite enquanto se aquecia para a temperatura ambien-te. A mistura foi refrigerada para 0°C, e foi divididacom HCl IM aq.. A camada orgânica foi lavada novamen-te com HCl IM aq.e com NaHCO3 aq. sat. A camada orgâ-nica foi submetida a secagem sobre MgSO4, filtrada, eos solventes foram removidos sob pressão reduzida. Pu-rificação do bruto por FC (EtOAc/heptano 3:20) propor-cionou o composto do título (5,16 g, 99%). LC-MS: tR =1,02 min.

Ácido 3- (benzil-tert-butoxicarbonil-amino)-propiônico(Nl)

Uma mistura de composto Ml (838 mg, 2,73mmol) em EtOH (34 ml) e NaOH IM aq. (13,7 ml) foi sub-metida a agitação a 70°C durante 2 h. A mistura foideixada esfriar para a temperatura ambiente, e adicio-nou-se HCl IM aq. até ser alcançado um pH = 4. Ossolventes foram parcialmente removidos sob pressão re-duzida, e o resíduo aquoso foi extraído com EtOAc. Osextratos orgânicos combinados foram lavados com salmou-ra, submetidos a secagem sobre MgSO4, filtrados, e ossolventes foram removidos sob pressão reduzida. Seca-gem sob alto vácuo proporcionou o composto do títulobruto (769 mg, rendimento quantitativo) que foi usadosem qualquer outra purificação. LC-MS: tR = 0,8 9 min;ES+: 280,33.

tert-Butil éster de ácido benzil-(2-{[2-cloro-5-(2-metoxi-etil)-benzil]-ciclopropil-carbamoil}-etil) -carbâmico (Ol)

Uma mistura de composto Nl (769 mg, 2,75mmol), DMAP (84,1 mg, 0,688 mmol), HOBt (446 mg, 3,30mmol), DIPEA (1,78 g, 2,36 mmol) e EDC-HCl (1,32 g,6,88 mmol) em CH2Cl2 (65 ml) foi submetida a agitaçãosob temperatura ambiente durante 45 min. Adicionou-se[2-cloro-5-(2-metoxi-etil)-benzil]-ciclopropil-amina(1,14 g, 4,13 mmol), e a mistura foi submetida a agita-ção durante a noite. Adicionou-se CH2Cl2, e a misturafoi lavada com HCl IM aq. (2x). A camada orgânica foisubmetida a secagem sobre MgSO4, filtrada e os solven-tes foram removidos sob pressão reduzida. Purificaçãodo bruto por FC (MeOH/CH2Cl2 1:99) proporcionou o com-posto do titulo (1,12 g, 76%). LC-MS: tR = 1,11 min;ES+: 501,30.

4- [2- (2 , 6-Dicloro-4-metil-fenoxi) -etoxi] -benzaldeido(Ql)

Adicionou-se BuLi (1,6M em hexano, 17,0

ml, 26,9 mmol) a uma sol. l-[2-(4-bromo-fenoxi)-etoxi]-2,6-dicloro-4-metil-benzeno (8,81 g, 23,4 mmol) em THF(91 ml) a -78°C. A mistura foi submetida a agitaçãodurante 10 min a -78 °C, e adicionou-se DMF (2,72 ml,35, 1 mmol) . A mistura foi submetida a agitação a -78°Cdurante 2,5 h, e adicionou-se NH4Cl aq. sat. A misturafoi deixada aquecer para a temperatura ambiente, e foiextraída com TBME (2x). Os extratos orgânicos combina-dos foram lavados com salmoura, submetidos a secagemsobre MaSOiI, filtrados, e os solventes foram removidossob pressão reduzida. Purificação do bruto por FC (E-tOAc/heptano 1:4) proporcionou o composto do título(3,64 g, 48%). LC-MS: tR = 1,07 min; ES+: 325,03.

Exemplos

Exemplo 1

Ciclopropil- (2,3-dimetil-benzil) -amida de ácido (rac.) -(3S*, 4R*)-4-{4-[2-(2,6-dicloro-4-metil-fenoxi)-etoxi]-fenil}-4-hidroxi-piperidina-3-carboxílico

Uma sol. de composto Dl (51 mg, 0,073mmol) in dioxane (1 ml) a O0C foi tratada com HCl (4Mem dioxana, 0,5 ml), e a mistura foi submetida a agita-ção a 0°C durante 2 h. A mistura de reação foi concen-trada para secagem. Purificação por FC (CH2CI2CH2Cl2/MeOH 90:10) proporcionou o composto do titulo(18 mg, 39%). LC-MS: tR = 0,96 min; ES+: 597,16.

Exemplo 2

[2-cloro-5- (2-metoxi-etil) -benzil] -ciclopropil-amida deácido (3S, 4R) -4-{4-[2- (2,6-dicloro-4-metil-fenoxi)-etoxi] -fenil} -4-hidroxi-piperidina-3-carboxilico

Adicionou-se HCl (4M em dioxana, 2,40 ml)a uma sol. de composto D2 (380 mg, 0, 499 mmol) emCH2Cl2 (2.40 ml) a 0°C. A mistura foi submetida a agi-tação durante 2 h enquanto se aquecia para a temperatu-ra ambiente, e os solventes foram então removidos sobpressão reduzida. Purificação do bruto por FC(CH2Cl2ZMeOH 90:10) proporcionou o composto do tituloracêmico (249 mg, 75%) . Esta mistura foi separada porHPLC de preparação, quiral (Regis Whelk, eluente iso-crático B 85%). Obteve-se o composto do titulo (42 mg,19%). LC-MS: tR = 0,96 min; ES+: 663,56. Quiral, HPLCanalítico (Regis Whelk, eluente isocrático B 85%): tR =33,0 min.

Exemplo 3

[2-cloro-5- (2-metoxi-etil) -benzil] -ciclopropil-amida deácido (3'Sf 4 'R) -6-[2-(2,6-dicloro-4-metil-fenoxi)-etoxi]-4·-hidroxi-1',2',3',4',5',6'-hexaidro-[3,4']bipiridinil-3'-carboxilicoDissolveu-se o composto D3 (1,132 g, 1,485mmol) em CH2Cl2 (7,40 ml). A sol. foi refrigerada para0°C. Adicionou-se HCl (4M em dioxana, 7,40 ml) gota agota à mistura. A mistura foi submetida a agitação du-rante 1 h sob temperatura ambiente, e foi vazada cuida-dosamente em uma mistura de NaHCO3 aq. sat.e EtOAc. Amistura foi extraída com EtOAc. Os extratos orgânicoscombinados foram submetidos a secagem sobre Na2SO4,filtrados, e os solventes foram removidos sob pressãoreduzida. Purificação do bruto por FC (CH2Cl2 paraCH2Cl2/MeOH 90:10) proporcionou o composto do títuloracêmico ainda misturado com pouco gel de sílica. Estamistura foi diluída com CH2Cl2, e filtrada sobre algo-dão. Os solventes foram removidos sob pressão reduzidapara proporcionarem o composto do título racêmico, puro(904 mg, 92%) . Este racemato foi separado por HPLC a-nalítico, quiral (Chiralpack AD, eluente isocrático B45%) . Obeteve-se o composto do título (350 mg, 42%) .LC-MS: tR = 0,94 min; ES+: 662,43. Quiral, HPLC analí- tico (Chiralpack AD, eluente isocrático B 65%) : tR =11,4 min.

Exemplo 4

[2-Cloro-5- (2-metoxi-etil) -benzil] -ciclopropil-amida deácido (3'Sr 4 'R)-6-[3-(2-cloro-3,6-difluoro-fenil)-isoxazol-5-ilmetoxi] -4 ' -hidroxi-1' ,2·,3',4',5',6'-hexaidro-[3,4']bipiridinil-31-carboxilico

Dissolveu-se o composto D4 (275 mg, 0,349mmol) em CH2Cl2 (1,75 ml). A sol. foi refrigerada para0°C. Adicionou-se HCl (4M em dioxana, 1,75 ml) gota agota à mistura. A mistura foi submetida a agitação du-rante 1 h sob temperatura ambiente, e foi cuidadosamen-te vazada em uma mistura de aq. sat., NaHCC>3 e EtOAc.

A mistura foi extraída com EtOAc. Os extratos orgâni-cos combinados foram submetidos a secagem sobre Na2SO1J,filtrados, e os solventes foram removidos sob pressãoreduzida. Purificação do bruto por FC (CH2Cl2 —>CH2Cl2/MeOH 90:10) proporcionou o composto do títuloracêmico (162 mg, 67%). Este racemato foi separado porHPLC analítico, quiral (Chiralpack AD, eluente isocrá-tico B 50%). Obteve-se o composto do título (45 mg,30%). LC-MS: tR = 0,92 min; ES+: 687, 63. HPLC analí-tico, quiral (Chiralpack AD, eluente isocrático B 50%):tR = 11,5 min.

Exemplo 5

[2-Cloro-5- (2-metoxi-etil) -benzil] -ciclopropil-amida deácido (3'S, 4 'R)-6-[(R) -3- (2,6-Dicloro-4-metil-fenoxi)-pirrolidin-l-il] -4 ' -hidroxi-1' ,2',3',4',5· ,6'-hexaidro-[3,4']b±p±rid±n±l-3'-carboxilico

Dissolveram-se os compostos D5 (1,29 g,1,64 mmol) em CH2Cl2 (8,2 ml). A sol. foi refrigeradapara 0°C. Adicionou-se à mistura HCl (4M em dioxana,8, 2 ml) gota a gota. A mistura foi submetida a agita-ção durante 1 h sob temperatura ambiente, e foi vazadacuidadosamente em uma mistura de NaHC03 aq. sat.e EtO-Ac. A mistura foi extraída com EtOAc. Os extratos or-gânicos combinados foram submetidos a secagem sobreNa2SO4, filtrados, e os solventes foram removidos sobpressão reduzida. Purificação do bruto por FC (CH2Cl2para CH2Cl2/MeOH 90:10) proporcionou o composto do tí-tulo ainda misturado com o seu correspondente estereoi-sômero e com pequena quantidade de sílica gel. Estamistura foi diluída com CH2Cl2, e filtrada sobre algo-dão. Os solventes foram removidos sob pressão reduzidapara proporcionarem o composto do título puro misturadocom seu correspondente diastereoisômero (904 mg, 80%) .Parte desta mistura (150 mg) foi separada por HPLC ana-lítico, quiral (Chiralpack AD, eluente isocrático B50%) . Obteve-se o composto do título (50 mg, 33%) . LC-MS: tR = 0,81 min; ES+: 689, 66. HPLC analítico,quiral (Chiralpack AD, eluente isocrático B 50%): tR =10,7 min.

Exemplo 6

[5-Cloro-2- (3-metoxi-propil) -piridin-4-ilmetil] -ciclopropil-amida de ácido (3'Sr 4 'R) -6- [2-(2,6-Dicloro-4-metil-fenoxi) -etoxi] -4 ' -hidroxi-1 * , 2 ' , 3 ' , 4 ' ,5 1 , 6 ' -hexahydro-[3,4']bipiridinil-3'-carboxilico

Dissolveu-se o composto D6 (920 mg, 1,18ramol) em CH2Cl2 (5,9 ml). A sol. foi refrigerada para0°C. Adicionou-se HCl (4M em dioxana, 5,9 ml) gota agota à mistura. A mistura foi submetida a agitação du-rante 1 h sob temperatura ambiente, e foi vazada cuida-dosamente em uma mistura de. NaHCC>3 aq. sat e EtOAc. Amistura foi extraída com EtOAc. Os extratos orgânicoscombinados foram submetidos a secagem sobre Na2SO4,filtrados, e os solventes foram removidos sob pressãoreduzida. Purificação do bruto por FC (CH2Cl2 paraCH2Cl2/MeOH 90:10) proporcionou o composto do títuloainda misturado em seus correspondente estereoisômero ecom pequena quantidade de sílica gel. Esta mistura foidiluída com CH2Cl2, e filtrada sobre algodão. Os sol-ventes foram removidos sob pressão reduzida para pro-porcionarem o composto do título puro, misturado comseu correspondente diastereoisômero (682 mg, 85%).

Parte desta mistura (80 mg) foi separada por HPLC ana-lítico, quiral (Chiralpack AD, eluente isocrático B50%). Obeteve-se o composto do título (31 mg, 39%).LC-MS: tR = 0,88 min; ES+: 679,23. HPLC analítico,quiral (Chiralpack AD, eluente isocrático B 50%) : tR =16,4 min.

Exemplo 7

[5-Cloro-2- (3-metoxi-propil) -l-oxi-piridin-4-ilmetil] -ciclopropil-amida de ácido (3'Sr 4'R)-6-[2-(2,6-dicloro-4-metil-fenoxi) -etoxi] -4' -hidroxi-1' , 2 1 ,3' , 4' ,5 ' ,6 *-hexaidro-[3,4']bipiridinil-3'-carboxilico

Dissolveu-se o composto D7 (347 mg, 0,500mmol) em CH2Cl2 (2,5 ml). Adicionou-se HCl (4M em dio-xana, 2,50 ml) gota a gota à solução. A mistura foisubmetida a agitação sob temperatura ambiente durante 1h, e foi vazada cuidadosamente sobre uma mistura deNaHCO3 e EtOAc aq. sat. A mistura foi extraída com E-tOAc, submetida a secagem sobre Na2SO4, filtrada, e ossolventes foram removidos sob pressão reduzida. Puri-ficação do bruto por FC (CH2Cl2 CH2Cl2/MeOH 9:1) pro-porcionou o composto do título ainda misturado com sí-Iica gel. Esta mistura foi recolhida em CH2Cl2, e fil-trada sobre algodão, a qual proporcionou o composto dotítulo racêmico (266 mg, 77%). Parte deste racemato(83 mg) foi separado por HPLC analítico, quiral (Chi-ralpack AD, eluente isocrático B 50%) . Obeteve-se ocomposto do título (29 mg, 35%) . HPLC analítico, qui-ral (Chiralpack AD, eluente isocrático B 50%) : tR =31,1 min.

Ensaios Biológicos

1. Ensaio imunológico enzimático (EIA) para avaliar oacúmulo de AngI e inibição de renina1.1 Preparação de conjugado AngI-BSA

Dissolveram-se 1,3 mg (1 μπιοί) de AngI [1-10 (Bachem, H-1680)] e 17 mg (0,26 μπιοί) de BSA (Fluka,05475) em 4 ml de tampão de fosfato 0,1M, pH 7,4, de-pois do que se adicionaram 2 ml de uma diluição 1:100de glutaraldeído em H2O (Sigma G-5882) gota a gota. Amistura foi incubada durante a noite a 4°C, então dia-lisada contra 2 litros de NaCl 0,9%, duas vezes durante4 h sob temperatura ambiente, seguida por diálise con-tra 2 litros de PBS IX durante a noite sob temperaturaambiente. A solução foi então filtrada com um filtrode seringa, 0,45 μπι (Nalgene, Cat. No. 194-2545). Oconjugado pode ser então armazenado em tubos de poli-propileno em azida de sódio a 0,05% a 4°C durante pelomenos 12 meses.

1.2 Preparação de MTP revestido de BSA-AngI

Incubaram-se placas de microtitulação(MPT384, MaxiSorp™, Nunc) durante a noite a 4°C com 80μΐ de conjugado AngI (1-10)/BSA, diluído 1:100'000 emPBS IX em um béquer de teflon (a diluição exata depen-dente do lote do conjugado), esvaziou-se, preencheu-secom 90 μΐ de solução de bloqueio [0,5% BSA (Sigma A-2153) em PBS IX, 0,02% NaN3], e incubou-se durante pelomenos 2 h sob temperatura ambiente, ou durante a noitea 40C. Revestiram-se MTP de 96 cavidades (MaxiSorp ,Nunc) com 200 μΐ de conjugado e bloquearam-se com 250μΐ de solução de bloqueio como anteriormente, excetoque a solução de bloqueio continha BSA a 3%. As placaspodem ser armazenadas em solução de bloqueio a 40C du-rante 1 mês.

1.3 AngI-EIA em MTP de 384 cavidades

As MTP revestidas com AngI (1-10)/BSA fo-ram lavadas 3 vezes com tampão de lavagem (PBS IX,0,01% Tween 20) e preenchidas com 75 μΐ de solução deanticorpo primária (anti-soro anti-Angl, pré-diluído1:10 em soro de cavalo), diluído para uma concentraçãofinal de 1:100'000 em tampão de ensaio (PBS IX, ImM ED-TA, 0,1% BSA, pH 7,4). Adicionaram-se 5 μΐ de da rea-ção de renina (ou padrões em tampão de ensaio) (videadiante) à solução anticorpo primária e as placas foramincubadas durante a noite a 4°C. Depois da incubaçãoas placas foram lavadas 3 vezes com tampão de lavagem eincubadas com anticorpo secundário [anti-coelho IgG,encadeado a peroxidase de raiz-forte (Amersham Biosci-ence, NA 934V), diluído 1:2'000 em tampão de lavagem]durante 2 h sob temperatura ambiente. As placas foramlavadas 3 vezes com tampão de lavagem e então incubadasdurante 1 h sob temperatura ambiente com solução desubstrato [l,89mM ABTS (2.2'-azino-di-(3-etil-benztiazolinsulfonato)] (Roche Diagnostics, 102 946) e2,36mM H2O2 [30%, (Fluka, 95300] em tampão de substrato(acetato de sódio a 0,1M, 0,05M fosfato diidrogênio de sódio, pH 4,2). 0 OD da placa foi lido a 405 nm em umaleitora de microplacas (FLUOStar Optima, proveniente daBMG) . A produção de AngI durante a reação de reninafoi quantificada por meio de comparação do OD da amos-tra com o OD de uma curva padrão de AngI (1-10), medidaem paralelo.

2. Ensaio de inibição de renina primário: IC5o em tam-pão, MTP de 384 cavidades

o ensaio de renina foi adaptado a partirde um ensaio descrito anteriormente (Fischli W. et al.,Hypertension, 1991, 18:22-31) e consiste de duas eta-pas: na primeira etapa, renina humana recombinante éincubada com seu substrato (substrato de renina de te-tradecapeptídio humano comercial) para criar o produtoAngiotensin I (AngI) . Na segunda etapa, o AngI acumu-lado é medido por um ensaio imunológico (ensaio imuno-lógico enzimático, EIA) . A descrição detalhada desteensaio encontra-se exposta adiante. O EIA é muito sen-sivel e bem adequado para medições de.atividade de re-nina em tampão ou no plasma. Devido à baixa concentra-ção de renina usada neste ensaio (2 fmol por tubo deensaio ou 10 pM) é possível medir afinidades inibidorasneste ensaio primário taé baixa concentração de pM.

2.1 Metodologia

Renina humana recombinante (3 pg/μΐ) emtampão de ensaio (PBS IX, ImM EDTA, 0,1% BSA, pH 7,4),substrato de tetradecapeptídio humano (1-14) (Bachem,M-1120) [5 μΜ em 10 mM HCl], sulfato de hidroxiquinoli-na (Fluka, 55100) [30 mM em H2O] e tampão de ensaio fo-ram pré-misturados a 4 0C sob uma proporção de100:30:10:145. Transferiram-se 47,5 μΐ por cavidadedesta pré-mistura para placas de polipropileno (MTP384,Nunc) . Dissolveram-se compostos de teste e diluiram-seem 100% DMSO e adicionaram-se 2,5 μΐ à pré-mistura, en-tão incubaram-se a 37°C durante 3 h. Ao final do perí-odo de incubação, transferiram-se 5 μΐ da reação de re-nina (ou padrões de tampão de ensaio) para ensaios EIA(tais como descritos anteriormente) e quantificou-se aAngI produzida por renina. A percentagem de inibiçãode renina (diminuição de AngI) foi calculada para cadaconcentração de composto e determinou-se a concentraçãode inibição de renina que inibiu a atividade enzimáticaem 50% (IC50). Os valores IC50 dos compostos dos Exem-plos estão abaixo de 100 nM. Além disso, os compostosexibem uma biodisponibilidade muito boa e são metaboli-camente mais estáveis do que os compostos da técnicaanterior.

Exemplos de inibição:

<table>table see original document page 70</column></row><table>

Claims

1. - Composto, caracterizado por compreen-der a fórmula (I)<formula>formula see original document page 71</formula>em queX representa CH, N, ou N+-O";W representa um fenil para-substituído, um piridinilpara-substituido ou um tiazolil,V representa -CH2CH2CH2-, -CH2CH2-A-, -CH2-A-CH2-, -A-CH2CH2-, -CH2CH2CH2CH2-, -A-CH2CH2CH2-, -CH2-A-CH2CH2-, -CH2CH2-A-CH2-, -CH2CH2CH2-A-, -A-CH2CH2-B- (preferred) , -CH2CH2CH2CH2CH2-, -A-CH2CH2CH2CH2-, -CH2-A-CH2CH2CH2-,CH2CH2-A-CH2CH2-, -CH2CH2CH2-A-CH2-, -CH2CH2CH2CH2-A-, -A-CH2CH2CH2-B-, -CH2-A-CH2CH2-B-, -A-CH2CH2-B-CH2-, -A- CH2CH2CH2-B-CH2-, -CH2-A-CH2CH2CH2-B-, ou -O-CH2-Q-, emque Q é ligado ao grupo U da fórmula (I), ou V repre-senta um pirrolidinil da fórmula:<formula>formula see original document page 71</formula>U representa aril não-substituido, especialmente fenil;aril mono-, di-, tri- ou tetra-substituido, em que ossubstituintes são selecionados independentemente apartir do grupo que consiste de Ci-7-alquila, -CF3, ha-logênio, e hidroxil-Ci_7-alquila; ou heteroarila de cin-co elementos com dois heteroátomos selecionados inde-pendentemente a partir do nitrogênio, oxigênio e enxo-fre, em que o dito radical de heteroaril é opcionalmen-te mono-, di- ou tri-substituido, em que os substitu-intes são selecionados independentemente a partir dogrupo que consiste de Ci-7-alquila, Ci-7-alcoxila, -CF3,-OCF3, e halogênio;Q representa um heteroaril de cinco elementos com doisou três heteroátomos selecionados independentemente apartir do 0 e N,;L representa -CH2-CH2-, -CH2-CH (Rs)-CH2-, -CH2-N(R7)-CH2--CH2-O-CH2-, ou -CH2-S-CH2-;AeB representam independentemente um do outro -0- ou -S-;R1 representa Ci-7-alquila ou cicloalquila;R2 representa halogênio ou Ci_7-alquila;R3 representa hidrogênio, halogênio, Ci-7-alquila, Ci_7-alcoxila, ou -CF3;R4 representa hidrogênio; Ci-7-alquila-0- (CH2) 0-4~CH2-;CF3-O-(CH2) o-4-CH2-; R'2N-(CH2) 0-4"CH2-, em que R' é sele-cionado independentemente a partir do grupo que con-siste de hidrogênio, Ci-7-alquila (opcionalmente substi-tuído por um a três flúores), ciclopropil (opcionalmen-te substituído por um a três flúores), ciclopropil-Ci-7-alquila (opcionalmente substituído por um a três flúo-res) , e -C (=0) -R' ' em que R'' é Ci-4-alquila, Ci-4-alcoxila, -CF3, -CH2-CF3, ou ciclopropil; ou R13-C (=0)-(O) o-i-(CH2) 0-4", em que R13 é Ci_4-alquila, Ci-4-alcoxila,ou ciclopropil; em que R' e R'' preferentemente os doisnão representam simultaneamente hidrogênio;R5 representa hidroxila, Cx-7-alcoxila, hidroxila-Ci_7-alquila, diidroxila-Ci-7-alquila, Ci_7-alcoxila-Ci-7-alquila, Ci-7-alcoxila-Ci-7-alcoxila-Ci-7-alquila, hidro-xila-Ci-7-alcoxila-Ci_7-alquila, carbamoil-Ci-7-alcoxila,ou Ci_7-alquila-carboniloxila;R6 representa -H, -CH2OR9, -CH2NR8R9, -CH2NR8COR9, -CH2NR8SO2R9, -CO2R9, -CH2OCONR8R9, -CONR8R9,CH2NR8CONR8'R9, -CH2SO2NR8R9, -CH2SR9, -CH2SOR9, ou -CH2SO2R3 ;R7 representa -R9, -COR9, -COOR11, -CONR8R9,C (NR8) NR8'R9, -CSNR8R9, -SO2R9, ou -SO2NR8R9; ou R7 repre-senta um radical da fórmula:<formula>formula see original document page 73</formula>em que T representa -CH2-, -NH- ou -0-, r é um inteirode 1 até 6 e s é um inteiro a partir de 1 até 4;R8 e R8' independentemente representam hidrogênio, Ci-7-alquila, C2.7-alquenila, cicloalquila, ou cicloalquila-Ci_7-alquila, em que Ci_7-alquila, cicloalquila, e ciclo-alquila-Ci-v-alquila pode ser substituído por um, dois,ou três halogênios;R9 representa hidrogênio, Ci-7-alquila, cicloalquila, oucicloalquila-Ci-7-alquila, em que Cx-7-alquila, cicloal-quila, e cicloalquila-Ci-7-alquila podem ser mono-, di-ou tri-substituídos, em que os substituintes são inde-pendentemente selecionados a partir do grupo que con-siste de halogênio, hidroxila, -OCOR12, -COOR12, C1-7-alcoxila, ciano, SO2R12, -CONR12R12', morfolin-4-il-C0-,( ( 4-Ci_7-alquila) piperazin-l-il) -CO-, -NHC(NH)NH2,NR10R10' e Ci-7-alquila, com a condição de que um átomode carbono esteja vinculado no máximo a um heteroátomono caso deste átomo de carbono ser sp3-hibridizado;R10 e R10' independentemente representam hidrogênio, Ci-7-alquila, cicloalquila, cicloalquila-Ci_7-alquila, hi-droxila-Ci_7-alquila, -COOR9, ou -CONH2;R11 representa halogênio, Ci-7-alquila, Ci_7-alcoxila, -CF3, ou hidrogênio;R12 e R12' independentemente representam hidrogênio, Ci-7-alquila, C2_7-alquenila, cicloalquila, ou cicloalqui-la-Ci-7-alquila, em que Ci_7-alquila, cicloalquila, e ci-cloalquila-Ci-7-alquila pode ser substituído por um,dois, ou três halogênios;η representa o inteiro 0 ou 1; em representa o inteiro 0 ou 1, com a condição de que mrepresente o inteiro 1 se η representar o inteiro 1;e os seus sais.

2. - Composto, de acordo com a reivindica-ção 1, caracterizado por X representar N+-O" e R4 repre-sentar Ci_4-alcoxila-C(=0)-NH-(CH2) o-4-CH2- ou R13-C (=0)-(O) 0-1-(CH2) 0-4-, em que R13 é Ci_4-alquila, Ci-4-alcoxila,ou ciclopropila, ou um sal de tal composto.

3. - Composto, de acordo com a reivindica-ção 1, caracterizado por X representar CH ou N; eR4 representar hidrogênio; Ci_7-alquila-0-(CH2) o-4~CH2-;CF3-O-(CH2) 0-4-CH2-; ou R'2N-(CH2) o-4-CH2-, em que R' é se-lecionado independentemente a partir do grupo que con-siste de hidrogênio, Ci-7-alquila (opcionalmente substi-tuído por de um a três flúores), ciclopropila (opcio-nalmente substituído por de um a três flúores) , ciclo-propila— Ci-7-alquila (opcionalmente substituído por deum a três flúores), e -C(=0)-R'' em que R'' é C1-4-alquila, -CF3, -CH2-CF3, ou ciclopropila;ou um sal de tal composto.

4 .- Composto, de acordo com a reivindica-ção 1, caracterizado por X representar CH ou N+-O", ouum sal de tal composto.

5. - Composto, de acordo com qualquer umadas reivindicações 1 a 4, caracterizado por R7 repre-sentar -R9, -COR9, -COOR11, -CONR8R9, -C(NR8)NR8-R9, -CSNR8R9, -SO2R9, ou -SO2NR8R9, ou um sal de tal composto.

6. - Composto, de acordo com qualquer umadas reivindicações 1 a 5, caracterizado por AeB re-presentarem, os dois, -0-, ou um sal de tal composto.

7. - Composto, de acordo com qualquer umadas reivindicações 1 a 6, caracterizado por R6 repre-sentar -CO2CH3 ou -CO2H, ou um sal de tal composto.

8. - Composto de acordo com qualquer umadas reivindicações 1 a 7, caracterizado por R7 repre-senta -H, -COCH3, -C(NH)NH2, -CONHCH2C (CH3) 2CONH2, -CONHCH(CH2)2, ou -CONHC(CH2)2CN, ou um sal de tal com-posto.

9. - Composto, de acordo com a reivindica-ção 8, caracterizado por R7 representar -H, ou um salde tal composto.

10. - Composto, de acordo com qualquer umadas reivindicações 1 a 6, caracterizado por L represen-tar -CH2-CH2- ou -CH2-NH-CH2-, ou um sal de tal composto.

11. - Composto, de acordo com qualquer umadas reivindicações 1 a 10, caracterizado por R1 repre-sentar ciclopropila, ou um sal de tal composto.

12. - Composto, de acordo com as reivin-dicações 1 a 11, caracterizado por W representar um fe-nil para-substituido, ouou um sal de tal composto.

13. - Composto, de acordo com qualquer umadas reivindicações 1 a 13, caracterizado por V repre-sentar -O-CH2CH2-O-, -O-CH2-Q-, -CH2-CH2-O- em que aparte -CH2 de -CH2-CH2-O- é ligada ao grupo W da fórmula (I), ou<formula>formula see original document page 77</formula>w , ou um sal de tal composto .

14. - Composto, de acordo com a reivindica-ção 13, caracterizado por V representar -O-CH2CH2-O- ou-O-CH2-Q-, ou um sal de tal composto.

15. - Composição, de acordo com qualqueruma das reivindicações 1 a 14, caracterizado por Q re-presentar um isoxazolil ou um oxadiazolil, ou um sal detal composto.

16. - Composto, de acordo com a reivindica-ção 15, caracterizado por Q representar um isoxazolil,ou um sal de tal composto.

17. - Composto, de acordo com qualquer umadas reivindicações 1 a 11, caracterizado porV-W representar:<formula>formula see original document page 77</formula>, ou um sal de tal composto.

18. - Composto, de acordo com qualquer umadas reivindicações 1 a 17, caracterizado por U repre-sentar :<formula>formula see original document page 78</formula> ou um salde tal composto.

19. - Composto, de acordo com a reivindica-ção 18, caracterizado por U representar<formula>formula see original document page 78</formula> ou um sal de tal composto.

20. - Composto, de acordo com qualquer umadas reivindicações 1 a 19, caracterizado por R2 repre-sentar Cl, e R3 representa hidrogênio, ou um sal de talcomposto.

21. - Composto, de acordo com qualquer umadas reivindicações 1 e 3 a 20, caracterizado por R4 re-presentar CH3-O-(CH2) 2-3- ou CH3-C (=0)-NH-CH2-CH2-, ou umsal de tal composto.

22. - Composto, de acordo com a reivindica-ção 21, caracterizado por R4 representar -CH2CH2CH2-O-CH3 ou -CH2CH2-O-CH3.

23. - Composto, de acordo com a reivindica-ção 22, caracterizado por R4 representar -CH2CH2-O-CH3,ou um sal de tal composto.

24. - Composto, de acordo com qualquer umadas reivindicações 1 a 23, caracterizado por R5 repre-sentar hidroxila, ou um sal de tal composto.

25 - Composto, de acordo com qualquer umadas reivindicações 1 a 24, caracterizado por η repre-sentar o inteiro 0, ou um sal de tal composto.

26 - Composto, de acordo com qualquer umadas reivindicações 1, 5 a 19 e 24 a 25, caracterizadopor a metade<formula>formula see original document page 79</formula>representar uma das seguintes possibilidades:<formula>formula see original document page 79</formula>ou um sal de tal composto.

27 - Composto, de acordo com a reivindica-ção 1, caracterizado porX representar CH, N, ou N+-O";W representar um fenil para-substituido ou um piridinilpara-substituido,V representar -A-CH2CH2-B- ou -O-CH2-Q-, em que Q é li-gado ao grupo U da fórmula (I), ou V representar umpirrolidinil da fórmula:<formula>formula see original document page 80</formula> U representar fenil tri-substituido, em que os substi-tuintes são selecionados independentemente a partir dogrupo que consiste de Ci-7-alquila e halogênio;Q representa um isoxazolil;AeB representarem, os dois, -O-;R1 representa ciclopropila;R2 representar halogênio ou Ci-7-alquila;R3 representar hidrogênio ou Ci-7-alquila;R4 representar Ci-7-alquila-0- (CH2) 0-4"CH2-;R5 representar hidroxila;η representar o inteiro 0; ern representar o inteiro 1ou um sal de tal composto.

28. - Composto, de acordo com qualquer umadas reivindicações 1 a 27, ou um sal do mesmo, caracte-rizado por a configuração absoluta de um composto dafórmula (!) ser tal como representada para a fórmula<formula>formula see original document page 80</formula>

29. - Composto, de acordo com a reivindica-ção 1, caracterizado por ser ciclopropil-(2,3-dimetil-benzil)-amida de ácido (3S*, 4R*)-4-{4-[2-(2, 6-dicloro--4-metil-fenoxi)-etoxi]-fenil}-4-hidroxil-piperidina-3-carboxilico, ou um sal de tal composto.

30. - Composto, de acordo com a reivindica-ção 1, caracterizado por ser selecionado a partir de:[2-cloro-5-(2-metoxi-etil)-benzil]-ciclopropil-amida deácido (3S, 4R)— 4 — {4 —[2-(2,6-dicloro-4-metil-fenoxi)-etoxi]-fenil}-4-hidroxi-piperidina-3-carboxílico,[2-cloro-5-(2-metoxi-etil)-benzil]-ciclopropil-amida deácido [3 'Sr 4 'R)-6-[2- (2,6-dicloro-4-metil-fenoxi)-etoxi]-4'-hidroxi-11,2',3',4',5*,6»-hexaidro-[3,4']bipiridinil-31-carboxilico,[2-cloro-5-(2-metoxi-etil)-benzil]-ciclopropil-amida deácido (3'Sf 4'R)-6-[3-(2-cloro-3,6-difluoro-fenil)-isoxazol-5-hilmetoxi]-4'-hidroxi-1',2',3',4',5',6'-hexaidro-[3,4']bipiridinil-31-carboxilico,[2-cloro-5-(2-metoxi-etil)-benzil]-ciclopropil-amida deácido {3'Sr 4'R)-6-[(R)-3-(2,6-dicloro-4-metil-fenoxi)-pyrrolidin-l-il]-4'-hidroxi-1',2',3',4',5',6'-hexaidro-[3,4']bipiridinil-3'-carboxilico,[5-cloro-2-(3-metoxi-propil)-piridin-4-ilmetil]-ciclopropil-amida de ácido (3'Sr 4 'R)-6-[2-(2, 6-dicloro-4-metil-fenoxi)-etoxi]-4'-hidroxi--1',2',3',4',5',61-hexaidro-[3,41]bipiridinil-3 ' -carboxilico, e[5-cloro-2-(3-metoxi-propil)-l-oxi-piridin-4-ilmetil] -ciclopropil-amida de ácido (3'Sf 4'R)-6-[2-(2,6-dicloro-4-metil-fenoxi)-etoxi]-4'-hidroxi-1', 2 1 , 3 1 , 4 1 ,-5 1 , 6 1 -hexaidro-[3,4']bipiridinil-31-carboxilico,ou sais de tais compostos.

31. - Composição farmacêutica, caracteriza-da por compreender um composto conforme descrito emqualquer uma das reivindicações 1 a 30, ou um sal far-maceuticamente aceitável do mesmo, e um material carre-ador farmaceuticamente aceitável.

32. - Composto conforme descrito em qual-quer uma das reivindicações 1 a 30, ou um sal farmaceu-ticamente aceitável do mesmo, ou uma composição farma-êu-t-ica r*-frM~rno descrita na reivindicação 31, csrscts-rizados por serem para o uso como um medicamento.

33. - Uso de um composto, conforme descritoem qualquer uma das reivindicações 1 a 30, ou um salfarmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado porser para a preparação de uma composição farmacêuticapara o tratamento e/ou profilaxia de enfermidades sele-cionadas a partir de hipertensão, falha cardíaca con-gestiva, hipertensão pulmonar, insuficiência renal, is-quemia renal, falha renal, fibrose renal, insuficiênciacardíaca, hipertrofia cardíaca, fibrose cardíaca, is-quemia do miocárdio, cardiomiopatia, glomerulonefrite,cólica renal, complicações resultantes de diabetes,tais como nefropatia, vasculopatia e neuropatia, glau-coma, pressão intra-ocular elevada, aterosclerose, res-tenose após angioplastia, complicações em seguida a ci-rurgia vascular ou cardíaca, disfunção erétil, hiperal-dosteronismo, fibrose pulmonar, esclerodermia, ansieda-de, distúrbios cognitivos, complicações de tratamentoscom agentes imunossupressores, e outras enfermidadesrelacionadas com o sistema renin-angiotensina.