BRPI0709025A2 - terapia tumoral com um anticorpo para fator de crescimento endotelial vascular e um anticorpo para receptor tipo 2 de fator de crescimento epitelial humano - Google Patents

Abstract

TERAPIA TUMORAL COM UM ANTICORPO PARA FATOR DE CRESCIMENTO ENDOTELIAL VASCULAR E UM ANTICORPO PARA RECEPTOR TIPO 2 DE FATOR DE CRESCIMENTO EPITELIAL HUMANO. A presente invenção refere-se a um método para tratar uma doença de câncer de mama em um paciente que tenha fracassado o tratamento anterior com um anticorpo antiVEGF, compreendendo administrar ao paciente uma quantidade terapeuticamente eficaz de um anticorpo antiHER2 ao mesmo tempo que continuando a terapia com anticorpo antiVEGF referi- da. A invenção também proporciona artigos de fabricação e composições farmacêuticas correspondentes.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "terapiatumoral com um anticorpo para fator de crescimentoendotelial vascular e um anticorpo para receptor tipo 2de fator de crescimento epitelial humano".

Campo da Invenção

A presente invenção refere-se a terapia combinada com anticor-pos antiHER2 e antiVEGF. Em particular, a invenção refere-se ao uso desimilares anticorpos para tratar doença de câncer de mama em um pacienteque tenha falhado o tratamento anterior com um anticorpo antiVEGF.

Antecedentes da Invenção

A angiogênese está implicada na patogênese de uma variedadede distúrbios os quais incluem tumores sólidos, síndromes neovascularesintraoculares tais como retinopatias proliferativas ou degeneração macularrelacionada com a idade (AMD), artrite reumatóide, e psoríase (Folkman, J.,et al., J. Biol. Chem. 267 (1992) 10931- 10934; Klagsbrun, M., et al., Annu.Rev. Physiol. 53 (1991) 217-239; e Garner, A, Vascular diseases, In: Patho-biology of ocular disease, A dynamic approach, (eds.) Garner and A, Klint-worth, G K, 2nd Edition Mareei Dekker, New York, (1994), pp. 1625-1710).No caso de tumores sólidos, a neovascularização possibilita que as célulastumorais adquiram uma vantagem de crescimento e autonomia proliferativacomparadas com as células normais. Por conseguinte, foi observada umacorrelação entre a densidade de microvasos em seções tumorais e a sober-vida dos pacientes em câncer de mama bem como em vários outros tumores(Weidner, N., et al., N. Engl. J. Med. 324 (1991) 1-6; Horak, E.R., et al., Lan-cet 340 (1992) 1120-1124; e Macchiarini, P., et al., Lancet 340 (1992) 145-146).

O fator de crescimento endotelial vascular (VEGF) está envolvi-do na regulação de angiogênese normal e anormal e neovascularização as-sociada com tumores e distúrbios intraoculares Ferrara, N., et al., Endocr.Rev. 18 (1997) 4-25; Berkman, R. A., et al., J. Clin. Invest. 91 (1993) 153-159; Brown, L F., et al., Human Pathol. 26 (1995) 86-91; Brown, L. F., et al.,Câncer Res. 53 (1993) 4727-4735; Mattern, J., et al., Brit. J. Câncer 73(1996) 931-934; e Dvorak, Η. F., et ai., Am. J. Pathol. 146 (1995) 1029-1039).Anticorpos neutralizantes antiVEGF suprimem o crescimento de uma varie-dade de linhagens de células tumorais humanas em camundongos (Kim, K.J., et al., Nature 362 (1993) 841-844; Warren, R. S., et al., J. Clin. Invest. 95(1995) 1789-1797; Borgstrom1 P., et al., Câncer Res. 56 (1996) 4032-4039;and Melnyk, O., et al., Câncer Res. 56 (1996) 921-924). A Publicação de Pa-tente Internacional No. WO 94/10202, a Publicação de Patente InternacionalNo. WO 98/45332, a Publicação de Patente Internacional No. WO2005/00900 e a Publicação de Patente Internacional No. WO 00/35956 sereferem a anticorpos contra VEGF. O anticorpo monoclonal humanizado be-vacizumab (vendido sob o nome comercial Avastin®) é um anticorpo anti-VEGF usado em terapia tumoral e é o único agente antiangiogênico aprova-do para o tratamento de câncer (Publicação de Patente Internacional No.WO 98/45331).

HER2 é um membro da família de receptores de fator de cresci-mento epidérmico humano e possui atividade de proteína quinase em seudomínio citoplasmático. HER2 é superexpressado em células tumorais e secorrelaciona com mau prognóstico e sobrevida. Portanto HER2 é um alvovalioso de terapia contra câncer de mama. Anticorpos contra HER2 são co-nhecidos da Takai, N., et al., Câncer 104 (2005) 2701-2708; Yeon, C. H., etal., Invest. New Drugs 23 (2005) 391-409; Wong, W. M., et al., Câncer Pract.7 (1999) 48-50; Albanell, J., et al., Drugs Today (Barc). 35 (1999) 931-46.

Trastuzumab (vendido sob o nome comercial Herceptin®) é umanticorpo monoclonal antiHER2 humanizado recombinante usado para otratamento de câncer de mama metastático amplificado por gene HER2 /superexpressando HER2. Estudos pré-clínicos demonstraram que o anticor-po tem atividade antitumoral in vivo e in vitro. Além disso, foi observado re-forço aditivo ou sinérgico da atividade antitumoral de trastuzumab em com-binação com vários agentes antitumorais em modelos de camundongo. Emestudos clínicos, foi observada a extensão da sobrevida em pacientes comcâncer de mama metastático superexpressando HER2.

De acordo com a Publicação de Patente Internacional No. WO98/45331, a eficácia de um anticorpo antiVEGF na prevenção ou no trata-mento de doença pode ser aprimorada administrando o anticorpo serialmen-te ou em combinação com outro agente que é eficaz para estes fins, tal co-mo um anticorpo capaz de ligar a HER2 receptor. A Publicação de PatenteInternacional No. WO 2005/012531 descreve anticorpos que podem sercombinados com um anticorpo antiVEGF (por exemplo, Avastin®) e/ou anti-corpos antiErbB (por exemplo, Herceptin®) no tratamento de câncer colorre-tal, câncer de mama metastático e câncer renal. De acordo com a Publica-ção de Patente Internacional No. WO 2005/063816, anticorpos antiVEGFpodem ser combinados com anticorpos antiErbB em um tratamento de cân-cer de mama metastático. A Publicação de Patente Internacional No. WO2005/00090 e a Publicação de Patente Internacional No. WO 2003/077841também descrevem a combinação de anticorpos antiVEGF com anticorposantiErbB2 para terapia tumoral.

Os oncologistas clínicos estão de acordo que o fracasso do tra-tamento de câncer não é necessariamente provocado pelo crescimento dotumor primário, o qual é geralmente tratado com o uso de cirurgia, porémmais exatamente pela disseminação metastática em diferentes órgãos. Aregressão de tumores primários por diferentes fármacos citotóxicos não ésempre indicativa para atividade antimetastática per se. Pelo contrário, temsido observado reforço da metástase em resposta a vários fármaco antican-ceríngenas (Geldof, Α. A., et al., Anticancer Res. 8 (1988) 1335-1339; Mur-phy, S. B., J. Clin. Oncol. 11 (1993) 199-201; and De Larco1J. E., et al., Cân-cer Res. 61 (2001) 2857-2861). Claramente existe a necessidade de desen- volver terapias de tratamento que tenham por alvo não somente o tumorprimário, mas também suprimam metástase.

Sumário da Invenção

A invenção compreende o uso de um anticorpo antiHER2 e umanticorpo antiVEGF para a fabricação de um medicamento para tratar umadoença de câncer de mama em um paciente que tenha fracassado terapiaanterior com um anticorpo antiVEGF, compreendendo administrar ao pacien-te uma quantidade terapeuticamente eficaz de um anticorpo antiHER2 e umanticorpo antiVEGF.

Em uma modalidade preferencial, a invenção compreende o usode trastuzumab e bevacizumab para a fabricação de um medicamento paratratar uma doença de câncer de mama caracterizada por uma superexpres-são da proteína receptora de HER2 em um paciente que tenha fracassadoterapia anterior com um anticorpo antiVEGF tal como bevacizumab, compre-endendo administrar ao paciente uma quantidade terapeuticamente eficazde trastuzumab e bevacizumab.

A invenção adicionalmente compreende um método para trataruma doença de câncer de mama em um paciente que tenha fracassado te-rapia anterior com um anticorpo antiVEGF, compreendendo administrar aopaciente uma quantidade terapeuticamente eficaz de um anticorpo antiHER2ao mesmo tempo que continuando a terapia com anticorpo antiVEGF referi-da.

A invenção adicionalmente compreende um método para tratar

* uma doença de câncer de mama, caracterizada por uma superexpressão daproteína receptora de HER2, em um paciente que tenha fracassado terapiaanterior com um anticorpo antiVEGF, compreendendo administrar ao pacien-te uma quantidade terapeuticamente eficaz de trastuzumab ao mesmo tem- po que continuando a terapia com bevacizumab.

A invenção adicionalmente compreende um método para au-mentar a duração da sobrevida de um paciente tendo doença de câncer demama que tenha fracassado terapia anterior com um anticorpo antiVEGF,compreendendo administrar ao paciente quantidades eficazes de um anti- corpo antiVEGF e um anticorpo antiHER2, por meio do qual a co-administração do anticorpo antiVEGF e do anticorpo antiHER2 aumenta demodo eficaz a duração da sobrevida.

A invenção adicionalmente compreende um método para au-mentar a sobrevida livre de progressão de um paciente tendo doença decâncer de mama que tenha fracassado terapia anterior com um anticorpoantiVEGF, compreendendo administrar ao paciente quantidades eficazes deum anticorpo antiVEGF e um anticorpo antiHER2, por meio do qual a co-administração do anticorpo antiVEGF e do anticorpo antiHER2 aumenta demodo eficaz a duração da sobrevida livre de progressão.

A invenção adicionalmente compreende um método para tratarum grupo de pacientes, tendo doença de câncer de mama e tendo fracassa-do terapia anterior, com um anticorpo antiVEGF, compreendendo administrarao paciente quantidades eficazes de um anticorpo antiVEGF e um anticorpoantiHER2, por meio do qual a co-administração do anticorpo antiVEGF e doanticorpo antiHER2 aumenta de modo eficaz a taxa de resposta no grupo depacientes.

A invenção adicionalmente compreende um método para au-mentar a duração da reação de um paciente tendo doença de câncer demama que tenha fracassado terapia anterior com um anticorpo antiVEGF,compreendendo administrar ao paciente quantidades eficazes de um anti-corpo antiVEGF e um anticorpo antiHER2, por meio do qual a co-administração do anticorpo antiVEGF e do anticorpo antiHER2 aumenta demodo eficaz a duração da resposta.

A invenção adicionalmente compreende um método para tratarum paciente tendo doença de câncer de mama que tenha fracassado terapiaanterior com um anticorpo antiVEGF, compreendendo administrar ao pacien-te quantidades eficazes de um anticorpo antiVEGF e um anticorpo antiHER2,por meio do qual a co-administração do anticorpo antiVEGF e do anticorpoantiHER2 resulta em aprimoramento estatisticamente significativo e clinica-mente expressivo do paciente tratado conforme medido pela duração da so-brevida, pela sobrevida livre de progressão, pela taxa de resposta ou peladuração da resposta.

Esta invenção adicionalmente compreende um método para re-duzir metástase em um paciente tendo doença de câncer de mama que te-nha fracassado terapia anterior com um anticorpo antiVEGF, compreenden-do administrar ao paciente quantidades eficazes de um anticorpo antiVEGFe um anticorpo antiHER2, por meio do qual a co-administração do anticorpoantiVEGF e do anticorpo antiHER2 reduz metástase de modo eficaz.

A invenção adicionalmente compreende um método para tratarum grupo de pacientes, tendo doença de câncer de mama e tendo fracassa-do terapia anterior, com um anticorpo antiVEGF, compreendendo administrarao paciente quantidades eficazes de um anticorpo antiVEGF e um anticorpoantiHER2, por meio do qual a co-administração do anticorpo antiVEGF e do anticorpo antiHER2 reduz metástase de modo eficaz no grupo de pacientes.

A invenção proporciona um artigo de fabricação compreendendoum recipiente, uma composição dentro do recipiente compreendendo umanticorpo antiVEGF e uma suplemento inserido no pacote instruindo o usuá-rio da composição a administrar a um paciente, tendo doença de câncer demama que tenha fracassado terapia anterior com um anticorpo antiVEGF, oanticorpo antiVEGF e um anticorpo antiHER2.

A invenção adicionalmente proporciona um artigo de fabricaçãocompreendendo um recipiente, uma composição dentro do recipiente com-preendendo um anticorpo antiHER2 e um suplemento inserido no pacoteinstruindo o usuário da composição a administrar a um paciente, tendo do-ença de câncer de mama que tenha fracassado terapia anterior com um an-ticorpo antiVEGF, o anticorpo antiHER2 e um anticorpo antiVEGF.

A invenção adicionalmente proporciona uma composição com-preendendo um anticorpo antiHER2 e um anticorpo antiVEGF útil no trata-mento de doença de câncer de mama em um paciente no qual tenha fracas-sado a terapia anterior com um anticorpo antiVEGF. Preferencialmente oanticorpo antiHER2 é trastuzumab. Também preferencialmente o anticorpoantiVEGF é bevacizumab.

Breve Descrição dos Desenhos

Figura 1 Atividade antitumoral de tratamento combinadode trastuzumab e bevacizumab sobre crescimento tumoral depois de fracas-so de tratamento com bevacizumab. Valores médios do volume tumoral(mm3) plotados sobre o eixo y; número de dias depois de injeção de célulastumorais plotado sobre o eixo x. Veículo (círculos), trastuzumab na dose decarga de 30 mg/kg e dose de manutenção de 15 mg/kg (quadrados), bevaci-zumab a 5 mg/kg até o 55 quando o tratamento também inclui trastuzumab a15 mg/kg (triângulos).Figura 2 Efeito de tratamento combinado de trastuzumab ebevacizumab sobre metástase pulmonar. Valores médios de seqüência deDNA Alu humana (ng/ml) quantificada a partir de tecido pulmonar usandoPCR em tempo real e plotados sobre o eixo y.

Descrição Detalhada da Invenção

O termo "VEGF" de acordo com a invenção se refere ao fator decrescimento celular endotelial vascular (Swiss-Prot No. P 15692), formas dejunção alternativas (vide, por exemplo, Leung, D. W., et al., Science, 246(1989) 1306-1309; e Houck, Κ. A., et al., Mol. Endocrin. 5 (1991) 1806-1814)e fragmentos ativos, preferencialmente fragmentos de N-terminal dos mes-mos.

O termo "anticorpo antiVEGF" de acordo com a invenção é umanticorpo que liga especificamente a VEGF. O anticorpo antiVEGF humani-zado preferencial ou anticorpo antiVEGF variante aqui, neste requerimentode patente, liga VEGF humano com um valor Kd de não mais de cerca de1x10 8M e preferencialmente não mais de cerca de 5x10 9M. Preferencial-mente o anticorpo antiVEGF é um anticorpo monoclonal que liga ao mesmoepitopo como anticorpo monoclonal antiVEGF humanizado recombinantegerado de acordo com Presta, L. G., et al., Câncer Res. 57 (1997) 4593-4599. Um anticorpo preferencial é bevacizumab. Anticorpos antiVEGF e mé-todos para sua fabricação são descritos, por exemplo, na Patente dos Esta-dos Unidos No. 6.054.297, na Patente dos Estados Unidos No.2003/0190317, na Patente dos Estados Unidos No. 6.632.926, na Patentedos Estados Unidos No. 6.884.879, e na Patente dos Estados Unidos No.2005/0112126.

Bevacizumab compreende regiões de estrutura IgGI humanamutada e regiões determinantes de complementaridade de ligação de antí-geno de um anticorpo monoclonal antihVEGF de murino que bloqueia liga-ção de VEGF humano a seus receptores. Cerca de 93% da seqüência deaminoácidos de bevacizumab, incluindo a maioria das regiões de estrutura, éderivado de IgGI humana, e cerca de 7% da seqüência é derivado do anti-corpo murino A4.6.1. Bevacizumab tem uma massa molecular de cerca de149.000 Dáltons e é glicosilado. Bevacizumab e seu método de preparaçãosão descritos na Patente Européia No. EP 1 325 932.

HER2 é um receptor de fator de crescimento de 185 kDa tam-bém referido como neu e c-erbB-2 (Slamon, D. J., et a!., Science 235 (1987)177-182; Swiss-Prot P04626) cuja função está relacionada com transforma-ção neoplásica em células de câncer de mama humano. A superexpressãodesta proteína foi identificada em 20 a 30% dos pacientes com câncer demama onde se correlaciona com doença regionalmente avançaca, probabili-dade aumentada de recorrência tumoral, e reduzida sobrevida do paciente.Tanto quanto 30 a 40% dos pacientes tendo cânceres gástrico, endometrial,das glândulas salivares, pulmonar de células não pequenas, pancreático,ovariano, peritoneal, de próstata, ou colorretal também podem apresentarsuperexpressão desta proteína. Anticorpos antiHER2 e métodos para suafabricação são descritos, por exemplo, na Patente dos Estados Unidos No.6.054.297, na Publicação de Patente Internacional No. WO 89/06692, naPatente dos Estados Unidos No. 6.953.842, na Patente dos Estados UnidosNo. 6.949.245, na Patente dos Estados Unidos No. 6.399.063, na Patentedos Estados Unidos No. 6.165.464, na Patente dos Estados Unidos No.6.054.297, na Patente dos Estados Unidos No. 5.772.997, na Publicação dePatente Internacional No. WO 2003/087131, na Publicação de Patente Inter-nacional No. WO 01/00245, na Publicação de Patente Internacional No. WO01/00238, na Publicação de Patente Internacional No. WO 00/69460, na Pu-blicação de Patente Internacional No. WO 00/52054, na Publicação de Pa-tente Internacional No. WO 99/31140 e na Publicação de Patente Internacio-nal No. WO 98/17797. Em uma modalidade preferencial da invenção, o anti-corpo antiHER2 é trastuzumab. Trastuzumab e seu método de preparaçãosão descritos na Patente Européia No. EP 0 590 058.

O termo "superexpressão" da proteína receptora de HER2 pre-tende indicar um nível anormal de expressão da proteína receptora de HER2em uma célula de um tumor dentro de um tecido ou órgão específico do pa-ciente em relação so nível de expressão em uma células normal daqueletecido ou órgão. Pacientes tendo um câncer caracterizado por superexpres-são do HER2 receptor podem ser determinados por provas padrão na técni-ca. Preferencialmente superexpressão é medida em células fixas de seçõesde tecidos congelados ou embutidos em parafina usando detecção imuno-histoquímica (IHC). Quando acoplado com coloração histológica, a Iocaliza-ção da proteína-alvo pode ser determinada e a extensão de sua expressãodentro de um tumor pode ser medida tanto qualitativamente quanto semi-quantitativamente. Os ensaios de detecção IHC são conhecidos na técnica eincluem o ensaio de prova clínica (Clinicai Trial Assay, CTA), o teste Lab-Corp 4D5 disponível comercialmente, e o teste DAKO HercepTest® disponí-vel comercialmente (DAKO, Carpinteria1 Calif.). O último ensaio usa umafaixa específica de coloração celular de O a 3+ (O sendo expressão normal,3+ indicando a expressão mais forte positiva) para identificar cânceres tendosuperexpressão da proteína HER2 (vide as informações de prescrição deta-lhadas de Herceptin® (trastuzumab), setembro de 1998, Genentech Inc.,San Francisco, Calif.). Portanto, pacientes tendo um câncer caracterizadopor superexpressão da proteína HER2 na faixa de 1+, 2+, ou 3+, preferenci-almente 2+ ou 3+, mais preferencialmente 3+ se beneficiariam dos métodosde terapia da presente invenção.

O termo "doença de câncer de mama" se refere ao crescimentodescontrolado de células de mama anormais. Inclui carcinoma ductal in situ,carcinoma ductal invasivo, carcinoma Iobular in situ, carcinoma Iobular inva-sivo, carcinoma medular, doença de Paget do mamilo e câncer de mamametastático.

O termo "terapia fracassada anterior com um anticorpo anti-VEGF" or "fracasso do tratamento" conforme usado aqui, neste requerimentode patente, se refere a pacientes com tumores que falharam em responder àterapia prévia com um anticorpo antiVEGF ("não- respondentes") ou osquais inicialmente responderam à terapia prévia, mas nos quais a respostaterapêutica não foi mantida (referidos como "recidivantes"). Preferencialmen-te o termo "terapia anterior fracassada com um anticorpo antiVEGF" se refe-re a recidivantes. Fracasso de tratamento (respectivamente Resposta (RE) eNão-Resposta (NR)) é estabelecido com base no critério médico de um pro-fissional determinado pelos resultados de dados clínicos e laboratoriais quesão conhecidos de modo geral na técnica para avaliar o tratamento do paci-ente. Os dados referidos podem ser obtidos, a título de exemplo, a partir deexame clínico, técnicas citológicas e histológicas, endoscopia e laparoscopia,ultra-som, Varreduras CT, PET e MRI, radiografoa torácica e mamografia, emedindo a concentração de marcadores tumorais, tais como CEA, Cyfra,CA15-3, interleucina 8 e HER2 solúvel. Neste contexto "fracasso do trata-mento" é definido como a ausência de melhora clínica. Alternativamente,critérios de RECIST podem ser usados para determinar a resposta tumoral(Therasse, P., et al., J. Nat. Câncer Institute 92 (2000) 205-216) Neste con-texto "fracasso do tratamento" é definido como ou "resposta incompleta /doença estável" ou "doença progressiva".

De acordo com estes critérios RECIST a resposta tumoral paratumores sólidos (Therasse, P., et al., J. Nat. Câncer Institute 92 (2000) 205-216) é classificada em dependência da progressão do volume ou regressãodos tumores (por exemplo, medida através de CT) em quatro níveis: respos-ta completa (CR) ou resposta parcial (PR), doença estável (SD) e doençaprogressiva (PD) (vide a Tabela 1). Além disso a Organização Européia paraPesquisa e Tratamento de Câncer (EORTC) propôs uma classificação emquatro níveis em dependência do metabolismo dos tumores medidos atravésde tomografia por emissão de pósitrons de 2-[18F]-Flúor-2-deoxiglucose(FDG-PET) (Young H., et al., Eur. J. Câncer 35 (1999) 1773-1782 e Kellof, G.J., et al., Clin. Câncer Res. 11 (2005) 2785- 2808): resposta metabólicacompleta (CMR) ou resposta metabólica parcial (PMR), doença metabólicaestável (SMD) e doença metabólica progressiva (PMD) (vide a Tabela 2).

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Portanto, preferencialmente, "Resposta (RE)" e "Não-Resposta(NR)" de acordo com esta invenção são estabelecidaas com base em dadosadquiridos pela combinação de tomografia computadorizada (CT) e tomogra-fia por emissão de pósitrons de 2-[18F]-Flúor-2-deoxiglucose (FDG-PET)(KeIIof1 G. J., et al., Clin. Câncer Res. 11 (2005) 2785- 2808, e Young H., etal., Eur. J. Canc. 35 (1999) 1773-1782) usando tanto os critérios RECIST eFDG-PET descritos acima. Por conseguinte Resposta (RE) e Não-Resposta(NR) de acordo com esta invenção são determinadas preferencialmente co-mo se segue:

Resposta (RE): CR ou PR é estabelecido através de critérios CT-RECIST(Tabela 1) e ao mesmo tempo CMR ou PMR é estabelecido através de FDG-PET (Tabela 2). Portanto Resposta (RE) significa um dos quatro casos se-guintes para medição por CT e PET combinadas: CR e CMR1 PR e PMR1CRe PMR1 e PR e CMR.

Não-Resposta (NR): SD ou PD é estabelecido através de critérios CT-RECIST (Tabela 1) e ao mesmo tempo SMD ou PMD é estabelecido atravésde FDG-PET (Tabela 2). Portanto os quatro casos seguintes para mediçãopor CT e PET combinadas significam Não-Resposta (NR): SD e SMD1 SD ePMD1 PD e SMD1 e PD e PMD.

Geralmente a resposta é determinada em torno de 3 a 8 sema-nas, preferencialmente em torno de 6 semanas, depois do início do trata-mento. Esta determinação de resposta é geralmente repetida em intervalosde 4 a 8 semanas, preferencialmente de 6 a 8 semanas. Quando na primeiradeterminação uma resposta significativa (RE) foi identificada, então uma re-cidiva (que significa uma Não-Resposta (RE) depois da primeira determina-ção) pode ser determinada o mais cedo na segunda determinação de res-posta.

Neste contexto, o termo "paciente que tenha fracassado terapiaanterior com um anticorpo antiVEGF" se refere a um paciente, no qual ou naprimeira determinação de resposta é estabelecida Não-Resposta (NR)("Não-Respondente") ou na primeira determinação de resposta é estabeleci-da Resposta (RE), e na segunda ou uma determinação de resposta subse-qüente é estabelecida Não-Resposta (NR) ("Recidivante").

O termo "metástase" de acordo com a invenção se refere àtransmissão de células cancerosas do tumor primário para um ou mais sítiosalhures em um paciente causando tumores secundários. Um tumor formadopor células que se disseminaram é denominado um "tumor metastático" ouuma "metástase". O tumor metastático contém células que são como aque-las no tumor original (primário). Meios para determinar se um câncer metas-tizou são conhecidos na técnica e incluem testes de marcadores tumorais,varredura óssea, radiografia torácica, tomografia computadorizada (CT), to-mografia axial computadorizada (CAT), estudo por imagens de ressonânciamolecular (MRI), tomografia por emissão de pósitrons (PET), tomografiacomputadorizada por emissão de fóton único (SPECT), estudo por imagensde fluorescência (FI)1 e estudo por imagens bioluminescentes (BLI) e testesde marcadores tumorais (vide, por exemplo, Helms, M. W., et al., Contributi-ons to microbiology 13 (2006) 209-231, e Pantel, K., et al., J. Nat. CâncerInst. 91 (1999) 1113-1124).

Conforme usado aqui, neste requerimento de patente, o termo"paciente" preferencialmente se refere a um ser humano que necessite detratamento para tratar câncer, ou uma condição ou lesão pré-cancerosa. Noentanto, o termo "paciente" também pode ser referir a animais não-humanos,preferencialmente mamíferos tais como cães, gatos, cavalos, vacas, porcos,carneiro e primatas não-humanos, entre outros, que estejam necessitandode tratamento.

O termo "grupo" se refere a um grupo de pacientes bem comoum subgrupo de pacientes.

O termo "suplemento inserido no pacote" se refere a instruçõeshabitualmene incluídas em pacotes comerciais de produtos terapêuticos, osquais podem incluir informação sobre as indicações, uso, dosagem, adminis-tração, contra-indicações e/ou avisos referentes ao uso de similares produ-tos terapêuticos.

O câncer pode ser, por exemplo, câncer pulmonar, câncer pul-monar de células não pequenas (NSCL), câncer pulmonar de células bron-quíolo-alveolares, câncer ósseo, câncer pancreático, câncer de pele, câncerde cabeça e pescoço, melanoma cutâneo ou intraocular, câncer uterino,câncer ovariano, câncer retal, câncer da região anal, câncer de estômago,câncer gástrico, câncer de cólon, câncer de mama, câncer uterino, carcino-ma das tubas de falópio, carcinoma do endométrio, carcinoma do colo uteri-no, carcinoma da vagina, carcinoma da vulva, Doença de Hodgkin, câncerdo esôfago, câncer do intestino delgado, câncer do sistema endócrino, cân-cer da glândula tiróide, câncer da glândula paratiróide, câncer da glândulaadrenal, sarcoma de tecidos moles, câncer da uretra, câncer do pênis, cân-cer de próstata, câncer da bexiga, câncer do rim ou da uretra, carcinoma decélulas renais, carcinoma da pelve renal, mesotelioma, câncer hepatocelular,câncer biliar, leucemia aguda ou crônica, Iinfomas linfocíticos, neoplasmasdo sistema nervoso central (CNS), tumores do eixo espinhal, glioma do tron-co cerebral, glioblastoma multiforme, astrocitomas, schwanomas, ependi-mornas, meduloblastomas, meningiomas, carcinomas de células escamosas,adenomas da pituitária, incluindo versões refratárias de quaisquer dos cân-ceres acima, ou uma combinação de um ou mais dos cânceres acima. Acondição ou lesão pré-cancerosa inclui, por exemplo, o grupo consistindo emIeucoplasia oral, queratose actínica (queratose solar), pólipos pré-cancerosos do cólon ou do reto, displasia epitelial gástrica, displasia adeno-matosa, síndrome de câncer de cólon não-polipose hereditária (HNPCC),esôfago de Barrett, displasia de bexiga, e condições cervicais pré-cancerosas. Em uma modalidade preferencial, o câncer a ser tratado é umadoença de câncer de mama. Também em uma modalidade preferencial, ocâncer é caracterizado por uma superexpressão da proteína receptora deHER2.

A invenção compreende um método para tratar uma doença decâncer de mama em um paciente que tenha fracassado terapia anterior comum anticorpo antiVEGF, compreendendo administrar ao paciente uma quan-tidade terapeuticamente eficaz de um anticorpo antiHER2 ao mesmo tempoque continuando a terapia com anticorpo antiVEGF referida.

O termo "tratar" conforme usado aqui, neste requerimento depatente, a menos que indicado de modo diverso, significa reverter, aliviar,inibir o progresso de, ou prevenir, quer parcialmente ou completamente, ocrescimento de tumores, metástases tumorais, ou outras células causadoresde câncer ou neoplásicas em um paciente. O termo "tratamento" conformeusado aqui, neste requerimento de patente, a menos que indicado de mododiverso, se refere ao ato de tratar.

A expressão "um método para tratar" ou seu equivalente, quan-do aplicada a, por exemplo, câncer se refere a um procedimento ou curso deação que é designado para reduzir ou eliminar o número de células cancerí-genas em um paciente, ou para aliviar os sintomas de um câncer. "Um mé-todo para tratar" câncer ou outro distúrbio proliferativo não significa necessa-riamente que as células cancerígenas ou outro distúrbio serão, de fato, eli-minados, que o número de células ou distúrbio será, de fato, reduzido, ouque os sintomas de um câncer ou outro distúrbio serão, de fato, aliviados.Freqüentemente, um método para tratar câncer será realizado mesmo comuma baixa probabilidade de sucesso, mas o qual, dado o histórico médico ea expectativa de sobrevida de um paciente estimada, é não obstante consi-derada um curso de ação benéfico total.

O termo "quantidade terapeuticamente eficaz" ou "quantidadeeficaz" significa a quantidade do composto ou combinação em questão queprovocará a reação biológica ou médica de um tecido, sistema, animal ouser humano que está sendo buscado pelo pesquisador, veterinário, profis-sional médico ou outro clínico.

A invenção adicionalmente compreende o uso de um anticorpoantiHER2 e um anticorpo antiVEGF para a fabricação de um medicamentopara tratar uma doença de câncer de mama em um paciente que tenha fra-cassado terapia anterior com um anticorpo antiVEGF, compreendendo ad-ministrar ao paciente uma quantidade terapeuticamente eficaz de um anti-corpo antiHER2 ao mesmo tempo que continuando a terapia com anticorpoantiVEGF referida. Os anticorpos podem ser administrados separadamenteou simultaneamente.

O termo "método para fabricar um medicamento" se refere à fa-bricação de um medicamento para uso na indicação conforme especificadoaqui, neste requerimento de patente, e em particular para uso no tratamentode tumores, metástases tumorais, ou câncer em geral. O termo se refere aoformato de reivindicação "tipo Suíço" denominado na indicação especificada.

No contexto desta invenção, outros agentes citotóxicos, quimio-terápicos ou anticancerígenos adicionais, ou compostos que reforçam osefeitos de similares agentes podem ser usados na combinação de anticorpoantiVEGF mais anticorpo antiHER2. Os agentes referidos incluem, por e-xemplo: agentes alquilantes ou agentes com uma ação alquilante, tais comociclofosfamida (CTX; por exemplo, cytoxan®), clorambucil (CHL; por exem-pio, leukeran®), cisplatina (CisP; por exemplo, platinol®) bussulfan (por e-xemplo, myleran®), melfalan, carmustina (BCNU), estreptozotocina, trietile-nomelamina (TEM), mitomicina C, e similares; antimetabólitos, tais comometotrexato (MTX), etoposídeo (VP16; por exemplo, vepesid®), 6-mercaptopurina (6MP), 6-tiocguanina (6TG), citarabina (Ara-C), 5-fluorouracil(5-FU), capecitabina (por exemplo, Xeloda®), dacarbazina (DTIC), e simila-res; antibióticos, tais como actinomicina D, doxorubicina (DXR; por exemplo,adriamycin®), daunorubicina (daunomicina), bleomicina, mitramicina e simi-lares; alcalóides, tais como vinca alcalóides tais como vincristina (VCR), vin-blastina, e similares; e outros agentes antitumorais, tais como paclitaxel (porexemplo, taxol®) e derivados de pactitaxel, os agentes citostáticos, glucocor-ticóides tais como dexametasona (DEX; por exemplo, decadron®) e corticos-teróides tais como prednisona, inibidores enzimáticos de nucleosídeos taiscomo hidroxiuréia, enzimas de depleção de aminoácidos tais como aspara-ginase, Ieucovorin e outros derivados de ácido fólico, e similares, diversosagentes antitumorais. Os seguintes agentes também podem ser usados co-mo agentes adicionais: arnifostina (por exemplo, ethyol®), dactinomicina,mecloretamina (mostarda de nitrogênio), estreptozocin, ciclofosfamida, Io-mustina (CCNU), doxorubicina Iipo (por exemplo, doxil®), gencitabina (porexemplo, gemzar®), daunorubicina Iipo (por exemplo, daunoxome®), pro-carbazina, mitomicina, docetaxel (por exemplo, taxotere®), aldesleucina,carboplatina, oxaliplatina, cladribina, camptotecina, CPT 11 (irinotecan), 10-hidróxi 7-etil-camptotecina (SN38), floxuridina, fludarabina, ifosfamida, idaru-bicina, mesna, beta interferon, alfa-interferon, mitoxantrona, topoteçan, Ieu-prolida, megestrol, melfalan, mercaptopurina, plicamicina, mitotano, pegas-pargase, pentostatina, pipobroman, plicamicina, tamoxifeno, teniposídeo,testolactona, tioguanina, tiotepa, mostarda de uracila, vinorelbina, clorambu-cil.

No contexto desta invenção, um agente antihormonal pode serusado na combinação de anticorpo antiVEGF mais anticorpo antiHER2. Con-forme usado aqui, o termo "agente antihormonal" inclui compostos orgânicosou peptídicos naturais ou sintéticos que agem para regular ou inibir a açãohormonal sobre tumores. Agentes antihormonais incluem, por exemplo: an-tagonistas de receptores esteróides, antiestrogênios tais como tamoxifen,raloxifeno, 4(5)-imidazóis inibidores de aromatase, outros inibidores de aro-matase, 42-hidroxitamoxifen, trioxifeno, ceoxifeno, LY 117018, onapristona,e toremifeno (por exemplo, Fareston®); antiandrogênios tais como flutamida,nilutamida, bicalutamida, leuprolida, e goserelin; e sais farmaceuticamenteaceitáveis, ácidos ou derivados de quaisquer dos acima; agonistas e/ou an-tagonistas de hormônios de glicoproteína tais como hormônio folículo esti-mulante (FSH), hormônio tiróide estimulante (TSH), e hormônio Iuteinizante(LH) e LHRH (hormônio de liberação de hormônio luteinizante); o LHRH a-gonista acetato de goserelin, disponível comercialmente como Zoladex®(AstraZeneca); o LHRH antagonista D-alaninamida N-acetil-3-(2-naftalenil)-D-alanil-4-cloro-D-fenilalanil-3-(3-piridinil)-D-alanil-L-seril-N6-(3-piridinilcarbonil)-L-lisil-N6-(3-piridinil-carbonil)-D-lisil-L-leucil-N6-(1 -metilethil)-L-lisil -L-prolina (por exemplo, Antide®, Ares-Serono); o LHRHantagonista acetato de ganirelix; os antiandrogênios esteróides acetato deciproterona (CPA) e acetato de megestrol, disponível comercialmente comoMegace® (Bristol-Myers Oncology); o antiandrogênio não-esteróide flutami-da (2-metil-N-[4, 20-nitro-3-(trifluorometil) fenilpropanamida), disponível co-mercialmente como Eulexin® (Schering Corp.); o antiandrogênio não-esteróide nilutamida, (5,5-dimetil-3-[4-nitro-3-(trifluorometil-4'-nitrofenil)-4,4-dimetil-imidazolidina-diona); e antagonistas para outros receptores não-permissivos, tais como antagonistas para RAR (receptor de ácido retinóico),RXR (receptor de X retinóide), TR (receptor tiroidiano), VDR (receptor devitamina D), e similares.

O uso dos agentes citotóxicos e outros anticancerígenos descri-tos acima em regimes quimioterápicos é geralmente bem caracterizadas natécnica da terapia anticancerígena, e seu uso aqui, neste requerimento depatente, está sob as mesmas considerações para tolerância de monitora-mento e eficácia e para controlar vias e dosagens de administração, comalguns ajustes. Por exemplo, as dosagens reais dos agentes citotóxicos po-de variar dependendo da resposta celular cultivada do paciente determinadausando métodos de histocultura. De modo geral, a dosagem será reduzidacomparada com a quantidade usada na ausência de outros agentes adicio-nais.

Dosagens típicas de um agente citotóxico eficaz podem estarnas faixas recomendadas pelo fabricante, e onde indicado por respostas invitro ou respostas em modelos animais, podem ser reduzidas por até cercade uma concentração de ordem de magnitude ou quantidade. Portanto, adosagem real dependerá do critério do médico, da condição do paciente, eda eficácia do método terapêutico baseado na responsividade in vitro dascélulas malignas cultivadas primárias ou amostra de tecido histocultivada, oudas respostas observadas nos modelos animais apropriados.

No contexto desta invenção, agentes antiproliferativos adicionaispodem ser usados na combinação de anticorpo antiVEGF mais anticorpoantiHER2, incluindo, por exemplo: Inibidores da enzima farnesil proteínatransferase e inibidores da tirosina quinase receptora PDGFR, incluindo oscompostos revelados e reivindicados na Patente dos Estados Unidos No.6.080.769; na Patente dos Estados Unidos No. 6.194.438; na Patente dosEstados Unidos No. 6.258.824; na Patente dos Estados Unidos No.6.586.447; na Patente dos Estados Unidos No. 6.071.935; na Patente dosEstados Unidos No. 6.495.564; na Patente dos Estados Unidos No.6.150.377; na Patente dos Estados Unidos No. 6.596.735, na Patente dosEstados Unidos No. 6.479.513, e a Publicação de Patente Internacional No.WO 01/40217.

No contexto desta invenção, uma quantidade eficaz de radiaçãoionizante pode ser realizada e/ou um radiofármaco pode ser usado além dacombinação de anticorpo antiVEGF mais anticorpo antiHER2. A fonte deradiação pode ser ou externa ou interna ao paciente sendo tratado. Quandoa fonte é externa ao paciente, a terapia é conhecida como terapia de radia-ção de feixe externo (EBRT). Quando a fonte de radiação é interna ao paci-ente, o tratamento é denominado braquiterapia (BT). Átomos radioativos pa-ra uso no contexto desta invenção podem ser selecionados entre o grupoincluindo, mas não limitados a, rádio, césio-137, irídio-192, amerício-241,ouro-198, cobalto-57, cobre-67, tecnécio-99, iodo-123, iodo-131, e índio-111.Onde o inibidor de quinase EGFR de acordo com esta invenção é um anti-corpo, também é possível marcar o anticorpo com os isótopos radioativosreferidos.

Terapia de radiação é um tratamento padrão para controlar tu-mores não ressecáveis ou inoperáveis e/ou metástases tumorais. Resulta-dos aprimorados foram vistos quando terapia de radiação foi combinada comquimioterapia. A terapia de radiação se baseia no princípio de que alta dosede radiação liberada em uma área alvo resultará na morte de células repro-dutivas tanto em tecidos tumorais quanto normais. O regime da dosagem deradiação é geralmente definido em termos de dose de radiação absorvida(Gy), momento e fracionamento, e deve ser cuidadosamente definido pelooncologista. A quantidade de radiação que um paciente recebe dependeráde várias consideraçõss, mas as duas mais importantes são a localização dotumor em relação a outras estruturas ou órgãos críticos do corpo, e à exten-são na qual o tumor se disseminou. Um curso de tratamento típico para umpaciente submetido a terapia de radiação será um esquema de tratamentodurante um período de 1 a 6 semanas, com uma dose total de entre 10 e 80Gy administrada ao paciente em uma única fração diária de cerca de 1,8 a2,0 Gy, 5 dias por semana. Em uma modalidade preferencial desta invençãohá sinergia quando tumores em pacientes humanos são tratados com o tra-tamento de combinação da invenção e radiação. Em outras palavras, a inibi-ção do crescimento tumoral por meio dos agentes compreendendo a combi-nação da invenção é reforçada quando combinada com radiação, opcional-mente com agentes quimioterápicos ou anticancerígenos adicionais. Parâ-metros de terapias de radiação adjuvantes são, por exemplo, contidas naPublicação de Patente Internacional No. WO 99/60023.

Os anticorpos são administrados a um paciente de acordo commétodos conhecidos, por administração intravenosa como um bolus ou porinfusão contínua durante um período de tempo, por vias intramuscular, intra-peritoneal, intracerobrospinal, subcutânea, intra-articular, intrassinovial, ouintratecal. É preferencial administração intravenosa ou subcutânea dos anti-corpos.

A quantidade de administração de anticorpo antiVEGF e anti-HER2 e o momento da administração dependerá do tipo (espécie, seco, ida-de, peso, e etc.) e da condição do paciente sendo tratado e da gravidade dadoença ou condição sendo tratada.

Dosagens para administração dos anticorpos de acordo com ainvenção são cerca de 1 pg/kg a 50 mg/kg (por exemplo, 0,1 a 20 mg/kg) deanticorpo por uma ou mais administrações separadas, ou por infusão contí-nua. Uma dosagem diária típica pode variar a partir de cerca de 1 pg/kg acerca de 100 mg/kg. Em um aspecto preferencial, os anticorpos são adminis-trados a cada duas a três semanas, em uma dose variada a partir de cercade 1 mg/kg a cerca de 15 mg/kg. Uma dose preferencial para bevacizumab é5 mg/kg uma vez a cada 14 dias como uma infusão IV até ser detectadaprogressão da doença. Uma dose preferencial para trastuzumab é uma dosede carga de 4 mg/kg administrada durante um período de 90 minutos e infu-sões semanais subseqüentes de 2 mg/kg administradas durante um períodode 30 minutos.

A presente invenção adicionalmente proporciona um kit compre-endendo um anticorpo antiVEGF e um suplemento inserido no pacote instru-indo o usuário da composição a administrar a um paciente, tendo doença decâncer de mama que tenha fracassado terapia anterior com um anticorpoantiVEGF, o anticorpo antiVEGF e o anticorpo antiHER2. Em uma modalida-de preferencial, os recipientes do kit podem incluir adicionalmente um veícu-lo farmaceuticamente aceitável. O kit pode incluir adicionalmente um diluenteestéril, o qual é preferencialmente armazenado em um recipiente separadoadicional. O kit pode incluir adicionalmente um suplemento inserido no paco-te compreendendo instruções impressas orientando o uso do tratamentocombinado como um método para uma doença de câncer de mama.

A presente invenção adicionalmente proporciona uma composi-ção farmacêutica, em particular para uso no tratamento de uma doença decâncer de mama em que tenha falhado terapia anterior com anticorpo anti-VEGF, compreendendo um anticorpo antiHER2 e um anticorpo antiVEGF. Acomposição referida opcionalmente compreende veículos e / ou excipientesfarmaceuticamente aceitáveis. Em uma modalidade preferencial o anticorpoantiVEGF é bevacizumab e o anticorpo antiHER2 é trastuzumab.

Os seguintes detalhes Experimentais são proporcionados paraajudar no entendimento da presente invenção, cujo verdadeiro escopo é de-terminado nas reivindicações anexadas. Deve ser entendido que os métodose resultados específicos discutidos são meramente ilustrativos da invenção eesta não deve ser considerada em qualquer modo limitada aos mesmos.

Introdução

O estudo corrente examinou a atividade antitumoral da combina-ção de bevacizumab e trastuzumab depois do fracsso do tratamento combevacizumab somente em modelo de xenoenxerto de mama humano. Obje-tivos adicionais do estudo foram examinar os efeitos do tratamento sobremetástase.

Agentes de teste

Trastuzumab foi proporcionado como uma solução de matéria-prima a 25 mg/ml em HCI de Histidina, alfa-alfa Trehalose (60 mM), 0.01%Polysorb1 pH 6.0 (Herceptin®). Bevacizumab was provided como uma solu-ção de matéria-prima a 25 mg/ml em fosfato de Na, alfa-alfa Trehalose (6020 mM), Polysorb a 0,01%, pH 6.0 (Avastin®). Ambas as soluções foram diluí-das apropriadamente em PBS para injeções.

Linhagens celulares e condições de cultura

A linhagem de células de câncer de mama humano KPL-4 foiestabelecida a partir da efusão pleural maligna de um paciente com câncerde mama com uma metástase de pele inflamatória e superexpressão de re-ceptores da família ErbB. (Kurebayashi, J., et al., Br. J. Câncer 79 (1999)707-17) Células tumorais são rotineiramente culivados em meio DMEM (PAALaboratories, Áustria) suplementado com soro fetal bovino a 10 % (PAA) e L-glutamina a 2 mM (Gibco) a 37 0C em uma atmosfera saturada de água a5 % de C02. A passagem da cultura é realizada com tripsina / EDTA 1x(PAA) dividindo duas vezes por semana. A passagem da cultura P6 foi usa-da para estudo in vivo.Animais

Camundongos SCID beige (C.B.-17); idade de 10 a 12 semanas;peso corporal de 18 a 20 g (Charles River, Sulzfeld, Alemanha) são manti-dos sob condição livre de patógeno específico com ciclos diários de 12 h deluz /12 h de escuridão de acordo com diretrizes internacionais (GV-Solas;Felasa; TierschG). Depois da chegada, os animais são alojados na parte dequarentena das instalações para animais por uma semana para se acostu-marem ao novo ambiente e para observação. Foi realizado monitoramentode saúde contínuo em base regular. São proporcionados alimento de dieta(AIItromin) e água (acidificada pH 2.5 a 3) à vontade.

Estudos de inibição do crescimento tumoral in vivo

Células tumorais foram colhidas (tripsina-EDTA) dos frascos decultura (Greiner TriFIask) e transferidas para 50 ml de meio de cultura, lava-das uma vez e ressuspendidas em PBS. Depois de uma etapa de lavagemadicional com PBS e filtração (filtro celular; Falcon 100μιη) o título celularfinal foi ajustado para 0,75 χ 108 / ml. A suspensão de células tumorais foicuidadosamente misturada com pipeta de transferência para evitar agrega-ção celular. Foi realizada anestesia usando uma unidade de inalação Ste-phens para pequenos animais com câmara de pré-incubação (plexiglas),máscara para focinho de camundongo individual (silício) e Isoflurano (Phar-macia-Upjohn, Alemanha) em um sistema de circulação fechada. Dois diasantes da injeção o pelo dos animais foi raspado. Para injeção intra bloco degordura mamária (i.f.m.p.), as células foram injetadas ortotopicamente emum volume de 20 μΙ no penúltimo bloco de gordura mamária inguinal direitode cada camundongo anestesiado. Para a implantação ortotópica, a suspen-são celular foi injetada através da pele sob o mamilo. A injeção de célulastumorais corresponde ao dia 1 do experimento.

Monitoramento

Os animais foram controlados diarimente para detecção de sin-tomas clínicos de efeitos adversos. Para monitoramento por todo o experi-mento, o peso corporal dos animais foi documentado duas vezes por sema-na e o volume do tumor foi medido por compassos duas vezes por semana.O volume do tumor primário foi calculado de acordo com o protocolo NCI(TW = 1/2ab2, onde a e b são diâmetros longo e curto do tamanho do tumorem mm, Teicher, B., Anticancer drug development guide, Humana Press 5(1997) 92). Os valores de cálculo foram documentados como média e des-vio-padrão.

Tratamento de animais

Camundongos portando tumor foram randomizados quando ovolume do tumor foi a grosso modo de 100 mm3 (n = 10 para cada grupo).Cada grupo foi combinado estritamente antes do tratamento, o qual se ini-ciou 20 dias depois de injeção de células tumorais. O grupo de veículo (gru-po 1) recebeu 10 ml/kg de tampão de PBS por via intraperitoneal (i.p.) umavez por semana. Trastuzumab (grupo 2) foi administrado i.p. em uma dosede carga de 30 mg/kg, seguido por doses de 15 mg/kg uma vez por semana(dose de manutenção). O anticorpo antiVEGF bevacizumab foi administradoi.p. em uma dosagem de 5 mg/kg duas vezes por semena (grupo 3). No dia40, o tratamento para o grupo 3 foi alterado para um tratamento de combina-ção de bevacizumab (5 mg/kg duas vezes por semana i.p.) com trastuzumab(15 mg/kg uma vez por semana i.p.).

Avaliação de metástase

A disseminação de células tumorais no pulmão foi determinadaem animais sacrificados. Metástase foiu medida de acordo com Schneider,T., et al., Clin. Exp. Metastasis 19 (2002) 571-582. Em resumo, o tecido pul-monar foi colhido e seqüências Alu humanas foram quantificadas por PCRem tempo real. Maiores níveis de DNA humano, quantificado por PCR em25 tempo real, correspondem a maiores níveis de metástase.

Resultados

O efeito do tratamento sobre crescimento tumoral primário émostrado na Figura 1 e na Tabela 3. Tumores no grupo de veículo (grupo 1)crescem rapidamente e camundongos foram sacrificados 38 dias depois deinjeção de células tumorais devido à ulceração de tumores e ao desenvolvi-mento de sintomas clínicos. Monoterapia com trastuzumab (grupo 2) nãoexerceu efeito significativo sobre o volume tumoral e portanto os camundon-gos foram sacrificcados no dia 44. Tratamento com bevacizumab suprimiu ocrescimento tumoral significativamente; no entanto, os tumores começarama crescer de novo por volta do dia 44. Tratamento de combinação de bevaci-zumab e trastuzumab se iniciando no dia 55 resultou em completa inibiçãodo crescimento tumoral durante a duração do experimento (dia 99) e o tra-tamento foi bem tolerado.

Tabela 3: Atividade antitumoral de tratamento combinado de trastuzu-mab e bevacizumab sobre crescimento tumoral depois de fracasso dotratamento com bevacizumab (dados para figura 1). O volume tumoralmédio em mm3 é reportado e o desvio-padrão (SD).

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O efeito do tratamento sobre metástase pulmonar é mostrado nafigura 2 e na Tabela 4. A combinação de trastuzumab e bevacizumab depoisde fracasso do tratamento com bevacizumab resultou em uma redução agu-da na metástase. Os níveis de seqüências Alu humanas (se correlacionandocom invasão de células tumorais em tecido secundário) são significativamen-te menores em animais tratados com terapia de combinação em 99 dias emrelação a animais tratados com veículo que foram sacrificados em 28 dias eem relação a animais tratados com trastuzumab sacrificados no dia 44. Estesurpreendente efeito sobre metástase está em contraste com o efeito vistocom outras drogas citotóxicas (Geldof, Α. A., et al., Anticancer Res. 8 (1988)1335-1339; Murphy, J. Clin. Oncol. 11 (1993) 199-201, e De Larco1 J. E., etal., Câncer Res. 61 (2001) 2857-2861).

Tabela 4: Efeito do tratamento sobre metástase pulmonar. Alu DNA foiquantificado por PCR em tempo rea e é reportado para cada animal.

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Importância estatística de tratamento de combinação*p = 0,001 ** ρ = <0,001

Claims (18)

1. Uso de um anticorpo antiHER2 e um anticorpo antiVEGF paraa fabricação de um medicamento para tratar uma doença de câncer de ma-ma em um paciente que tenha fracassado terapia anterior com um anticorpoantiVEGF, compreendendo administrar ao paciente uma quantidade terapeu-ticamente eficaz de um anticorpo antiHER2 e um anticorpo antiVEGF.

2. Uso de acordo com reivindicação 1 em que o anticorpo anti-VEGF usado no medicamento é bevacizumab.

3. Uso de acordo com reivindicação 1 ou 2 em que o paciente éhumano.

4. Uso de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3 emque o anticorpo antiHER2 é trastuzumab.

5. Uso de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4 emque a doença de câncer de mama é caracterizada por uma superexpressãoda proteína receptora de HER2.

6. Método para tratar uma doença de câncer de mama em umpaciente que tenha fracassado terapia anterior com um anticorpo antiVEGF,compreendendo administrar ao paciente uma quantidade terapeuticamenteeficaz de um anticorpo antiHER2 e um anticorpo antiVEGF.

7. Método de acordo com a reivindicação 6 em que o anticorpoantiVEGF é bevacizumab.

8. Método de acordo com a reivindicação 7 ou 8 em que o paci-ente é humano.

9. Método de acordo com a qualquer uma das reivindicações 6 a-8 em que o anticorpo antiHER2 é trastuzumab.

10. Método de acordo com a qualquer uma das reivindicações 6a 9 em que a doença de câncer de mama é caracterizada por uma superex-pressão dâ proteína receptora de HER2.

11. Artigo de acordo com a fabricação compreendendo um reci-piente, uma composição dentro do recipiente compreendendo um anticorpoantiVEGF, e um suplemento inserido no pacote instruindo o usuário da com-posição a administrar a um paciente tendo doença de câncer de mama, quetenha fracassado terapia anterior com um anticorpo antiVEGF, o anticorpoantiVEGF e um anticorpo antiHER2.

12. Artigo de acordo com a fabricação da reivindicação 11 emque o anticorpo antiVEGF é bevacizumab.

13. Artigo de acordo com a fabricação da reivindicação 11 ou 12em que o anticorpo antiHER2 é trastuzumab.

14. Artigo de acordo com a fabricação compreendendo um reci-piente, uma composição dentro do recipiente compreendendo um anticorpoantiHER2, e um suplemento inserido no pacote instruindo o usuário da com-posição a administrar a um paciente tendo doença de câncer de mama, quetenha fracassado terapia anterior com um anticorpo antiVEGF, o anticorpoantiHER2 e um anticorpo antiVEGF.

15. Artigo de fabricação de acordo com a reivindicação 14 emque o anticorpo antiVEGF é bevacizumab.

16. Artigo de fabricação de acordo com a reivindicação 14 ou 15em que o anticorpo antiHER2 é trastuzumab.

17. Composição farmacêutica compreendendo um anticorpo an-tiHER2 e um anticorpo antiVEGF útil no tratamento de uma doença de cân-cer de mama a qual tenha fracassado terapia anterior com um anticorpo an-tiVEGF.

18. Composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 17,em que o anticorpo antiVEGF é bevacizumab e o anticorpo antiHER2 é tras-tuzumab.